[go: up one dir, main page]

RS60910B1 - Kompozicije koje sadrže bakterijski soj roda megasphaera i njihove upotrebe - Google Patents

Kompozicije koje sadrže bakterijski soj roda megasphaera i njihove upotrebe

Info

Publication number
RS60910B1
RS60910B1 RS20201219A RSP20201219A RS60910B1 RS 60910 B1 RS60910 B1 RS 60910B1 RS 20201219 A RS20201219 A RS 20201219A RS P20201219 A RSP20201219 A RS P20201219A RS 60910 B1 RS60910 B1 RS 60910B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compositions
certain embodiments
composition
treatment
disease
Prior art date
Application number
RS20201219A
Other languages
English (en)
Inventor
Imke Elisabeth MULDER
Samantha Yuille
Anna Ettorre
Suaad Ahmed
Parthena Fotiadou
Joseph Roby Iringan Urcia
Helene Savignac
Original Assignee
4D Pharma Res Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB1709468.1A external-priority patent/GB201709468D0/en
Priority claimed from GBGB1709534.0A external-priority patent/GB201709534D0/en
Priority claimed from GBGB1712851.3A external-priority patent/GB201712851D0/en
Priority claimed from GBGB1803826.5A external-priority patent/GB201803826D0/en
Priority claimed from GBGB1805991.5A external-priority patent/GB201805991D0/en
Priority claimed from GBGB1805990.7A external-priority patent/GB201805990D0/en
Priority claimed from GBGB1805989.9A external-priority patent/GB201805989D0/en
Priority claimed from GBGB1806780.1A external-priority patent/GB201806780D0/en
Priority claimed from GBGB1806779.3A external-priority patent/GB201806779D0/en
Application filed by 4D Pharma Res Ltd filed Critical 4D Pharma Res Ltd
Publication of RS60910B1 publication Critical patent/RS60910B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0031—Rectum, anus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/006—Oral mucosa, e.g. mucoadhesive forms, sublingual droplets; Buccal patches or films; Buccal sprays
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis
OBLAST TEHNIKE
[0001] Ovaj pronalazak je iz oblasti tehnike koja se odnosi na kompozicije koje sadrže bakterijske sojeve izolovane iz digestivnog trakta sisara i upotrebu takvih kompozicija u lečenju oboljenja.
STANJE TEHNIKE PRONALASKA
[0002] Smatra se da je humano crevo sterilno in utero, ali i da je izloženo velikoj raznovrsnosti materinskih i sredinskih mikroba neposredno po rođenju. Nakon toga, nastupa dinamičan period mikrobne kolonizacije i smene populacija, na koje utiču faktori poput načina isporuke, sredinskih faktora, načina ishrane i genotipa; svi navedeni faktori utiču na sastav crevne mikrobiote, posebno tokom ranog životnog doba. Mikrobiota se zatim stabilizuje i postaje sličan mikrobioti odrasle osobe [1]. Humana crevna mikrobiota sadrži više od 500-1000 različitih filotipova koji se suštinski mogu klasifikovati u dva glavna razdela bakterija, Bacteroidetes i Firmicutes [2]. Uspešni simbiotski odnosi koji proističu iz kolonizacije humanog creva bakterijama, dovode do širokog spektra metaboličkih, strukturnih, protektivnih i drugih korisnih funkcija. Poboljšane metaboličke aktivnosti kolonizovanog creva obezbeđuju da se inače nesvarljive komponente hrane razlože, uz oslobađanje sporednih proizvoda koji predstavljaju važan izvor hranljivih materija za domaćina. Slično navedenom, imunološki značaj crevne mikrobiote je dobro poznat i može se uočiti kod životinja koje su oslobođene od mikroba i sa poremećenim imunim sistemom („germ-free” životinje), do čije funkcionalne rekonstitucije dolazi nakon uvođenja komensalnih bakterija [3-5].
[0003] Dramatične promene u sastavu mikrobiote su dokumentovane u gastrointestinalnim poremećajima poput inflamatorne bolesti creva (IBD od engl. inflammatory bowel disease). Na primer, nivoi Clostridium bakterija klastera XIVa su smanjeni kod IBD pacijenata, dok je broj E. coli povećan, što ukazuje na promenu u ravnoteži simbionata i patobionata unutar creva [6-9].
[0004] U cilju prepoznavanja potencijalno pozitivnog efekta koji određeni bakterijski sojevi mogu imati na creva životinja, predložena je upotreba raznih sojeva u lečenju raznih oboljenja (pogledati, na primer, [10-13]). Takođe, određeni sojevi, uključujući uglavnom sojeve Lactobacillus i Bifidobacterium bakterija, predloženi su za upotrebu u lečenju raznih inflamatornih i autoimunih oboljenja koja nisu direktno povezana sa crevima (pogledati revijske publikacije [14] i [15]). Ipak, odnos između različitih oboljenja i različitih bakterijskih sojeva, kao i precizni efekti određenih bakterijskih sojeva na creva, sistemski nivo ili na bilo koji određen tip oboljenja, slabo su okarakterisani, posebno kod neurodegenerativnih oboljenja.
[0005] Nedavno, u ovoj oblasti tehnike se pojavilo povećano interesovanje u pogledu izmena mikrobioma creva koje mogu imati patofiziološku ulogu u oboljenjima mozga čoveka [16]. Pretklinički i klinički dokazi snažno ukazuju na vezu između razvoja mozga i mikrobiote [17]. Rastući broj pretkliničke literature je tako pokazao dvosmernu signalizaciju između mozga i mikrobioma creva, uključujući višestruke neurokrine i endokrine signalne sisteme. Zaista, povećani nivoi Clostridium vrsta u mikrobiomu su povezani sa poremećajima mozga [18] i neravnotežom razdela Bacteroidetes i Firmicutes, za koju je takođe pokazano da je uključena u poremećaje razvoja mozga [19]. Pretpostavke koje ukazuju da su izmenjeni nivoi komensala creva, uključujući one iz rodova Bifidobacterium, Lactobacillus, Sutterella, Prevotella i Ruminococcus, kao i iz familije Alcaligenaceae, uključeni u poremećaje centralnog nervnog sistema (CNS) posredovane imunitetom, ispitivane su u studijama koje su ukazale na nedostatak izmena u mikrobioti između pacijenata i zdravih subjekata [19]. Pokazano je takođe da primena probiotika može biti korisna u lečenju neuroloških poremećaja. Ipak, ove studije nisu uspele da zaključe da li probiotske kompozicije same po sebi mogu dovesti do terapijskih koristi u pogledu lečenja neurodegeneracije, a nisu ukazale ni na bilo kakave korisne efekte, čak ni za jednu određenu bakteriju [20, 21]. Navedeno ukazuje da je u ovom momentu praktično dejstvo veze između mikrobioma i oboljenja mozga čoveka slabo okarakterisano. Shodno tome, potrebne su direktnije analitičke studije kojima bi se identifikovao terapijski uticaj izmene mikrobioma na neurodegenerativne poremećaje.
[0006] U oblasti tehnike postoji potreba za novim postupcima lečenja neurodegenerativnih poremećaja. Postoji takođe potreba da se okarakterišu potencijalni efekti crevnih bakterija da bi se mogle razviti nove terapije u kojima bi se upotrebljavale crevne bakterije.
[0007] US 2004/005304 opisuje kompoziciju za lečenje neurološkog poremećaja i pratećeg gastrointestinalnog stanja. US 2004/170617 opisuje postupak lečenja ili prevencije oboljenja povezanog sa abnormalnom gastrointestinalnom florom. US 2004/120963 opisuje ishranu ili hranu za životinje koji sadrže kompoziciju koja kao aktivni sastojak sadrži bakterije ili njihov prerađen proizvod, a koji je u stanju da prevede mlečnu kiselinu u buternu kiselinu. Padmanabhan R. i saradnici, Standards in Genomic Sciences 8(3) (str.525-538), opisuju Megasphaera massiliensis soja NP3. Nallabelli N. i saradnici, Scientific Reports 6(1), opisuju analize genomske sekvence Megasphaera sp. soja DISK18. US 2016/271188 opisuje probiotske kompozicije za lečenje gastrointestinalnih poremećaja.
SUŠTINA PRONALASKA
[0008] Pronalazači su razvili nove terapije za lečenje i prevenciju neurodegenerativnih poremećaja. Pronalazači su utvrdili da bakterijski sojevi iz roda Megasphaera mogu biti efektivni za lečenje neurodegenerativnih oboljenja. Kao što je opisano u primerima, primena kompozicija koje sadrže Megasphaera massiliensis može biti protektivna u pogledu reaktivnih vrsta kiseonika i sprečiti inflamaciju, delujući tako kao neuroprotektivni agens. Pronalazači su takođe utvrdili da lečenje sa Megasphaera massiliensis može smanjiti aktivaciju proinflamatornih molekula poput NFκB i IL-6 do koje dolazi usled dejstva LPS-a i mutiranog α-sinukleina. Pronalazači su utvdili i da tretman sa Megasphaera massiliensis može smanjiti aktivnost histonske deacetilacije i lipidne peroksidacije in vitro, što može pomoći u smanjenju ćelijske smrti i apoptoze. Pronalazači su takođe utvrdili da Megasphaera massiliensis može proizvoditi indol koji može ublažiti inflamaciju i oksidativni stres. Štaviše, pronalazači su pokazali da lečenje sa Megasphaera massiliensis može povećati nivo kinurenina.
[0009] Pronalazači su takođe utvrdili da Megasphaera massiliensis proizvodi određene organske kiseline, uključujući heksansku kiselinu, valerinsku kiselinu i 4-hidroksifenilsirćetnu kiselinu. Pronalazači su pronašli da Megasphaera massiliensis može povećati aktivaciju pro-inflamatornog citokina IL-8, što može pomoći u pospešivanju neuronske mijelinizacije. Pronalazači su takođe utvrdili da lečenje sa kombinacijom Megasphaera massiliensis i retinoične kiseline može povećati izlučivanje neurotrofnog faktora poreklom iz mozga (BDNF-a), što može pomoći u pospešivanju neurogeneze i neuritogeneze i/ili prevenciji ćelijske smrti. Pronalazači su takođe utvrdili da lečenje sa Megasphaera massiliensis, koja može proizvoditi valerinsku kiselinu, može smanjiti deacetilaciju histona, što može pomoći u smanjenju ćelijske smrti i apoptoze. Štaviše, pronalazači su pronašli i da Megasphaera massiliensis može proizvoditi heksansku kiselinu, koja može biti neuroprotektivna ili neurorestorativna, na primer, pospešivanjem izrastanja neurita. Pronalazači su pronašli i da Megasphaera massiliensis koja može proizvoditi heksansku kiselinu, povećava ekspresiju MAP2 (proteina udruženog sa mikrotubulama, tipa 2), za koga se smatra da je od suštinske važnosti za obrazovanje mikrotubula u neuritogenezi. Pronalazači su stoga utvrdili da Megasphaera massiliensis koja može proizvoditi heksansku kiselinu, može biti upotrebljena u pospešivanju izrastanja neurita. Megasphaera massiliensis i druge bakterije koje proizvode organske kiseline poput heksanske kiseline, valerinske kiseline i 4-hidroksifenilsirćetne kiseline, mogu stoga biti korisne za lečenje neurodegenerativnih poremećaja.
[0010] Pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Megasphaera, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije neurodegenerativnog poremećaja, pri čemu je bakterijski soj sa sekvencom 16s rRNK koja je najmanje 95% identična sa SEQ ID NO: 2.
[0011] U posebnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži prethodno navedeni bakterijski soj roda Megasphaera, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije oboljenja ili stanja izabranog iz grupe koju čine: Parkinsonova bolest, uključujući progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivna supranuklearna paraliza, Steele-Richardson-Olszewski sindrom, hidrocefalus normalnog pritiska, vaskularni ili arteriosklerotski parkinsonizam i parkinsonizam indukovan lekovima; Alchajmerova bolest, uključujući Bensonov sindrom; multipla skleroza; Hantingtonova bolest; amiotrofična lateralna skleroza; Lu-Gerigova bolest; bolest motornih neurona; prionska bolest; spinocerebelarna ataksija; spinalna mišićna atrofija; demencija, uključujući demenciju sa Levijevim telima, vaskularnu i frontotemporalna demenciju; primarna progresivna afazija; blago kognitivno oštećenje; kognitivno oštećenje povezano sa HIV infekcijom i kortikobazalna degeneracija.
[0012] U poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži prethodno navedeni bakterijski soj roda Megasphaera, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti, kao što je sredinska, familijarna ili Parkinsonova bolest, a koja je udružena sa opštim inflamatornim statusom. Pronalazači su utvrdili da lečenje sa Megasphaera sojevima može smanjiti aktivaciju proinflamatornih molekula, poput NFκB i IL-6, do koje dolazi dejstvom LPS-a i mutiranog α-sinukleina u in vitro modelima sredinske i familijarne Parkinsonove bolesti. U poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrsta Megasphaera massiliensis, za upotrebu u lečenju Parkinsonove bolesti. Kompozicije u kojima se upotrebljava Megasphaera massiliensis mogu biti posebno efektivne za lečenje Parkinsonove bolesti.
[0013] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije neurodegenerativnog oboljenja sa ranim početkom. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u postupku prevencije ili odlaganja početka ili progresije neurodegenerativnog poremećaja.
[0014] U poželjnim primerima izvođenja pronalaska, bakterijski soj u kompoziciji je Megasphaera massiliensis. Mogu biti upotrebljeni i blisko srodni sojevi, kao što su bakterijski sojevi koji sadrže sekvencu 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sa 16S rRNK sekvencom bakterijskog soja Megasphaera massiliensis. Bakterijski soj je sa sekvencom 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sa SEQ ID NO: 2. Poželjno je da bakterijski soj za upotrebu u pronalasku bude sa sekvencom 16S rRNK koja je predstavljena kao SEQ ID NO: 2.
[0015] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska je za oralnu primenu. Oralna primena sojeva pronalaska može biti efektivna kod neurodegenerativnih poremećaja. Takođe, oralna primena je pogodna za pacijente i praktičare i omogućava isporuku i / ili delimičnu ili potpunu kolonizaciju creva.
[0016] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih eksipijenasa ili nosača.
[0017] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska sadrži bakterijski soj koji je bio liofilizovan. Liofilizacija je efektivna i pogodna tehnika za pripremu stabilnih kompozicija koje omogućavaju isporuku bakterija.
[0018] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prehrambeni proizvod koji sadrži kompoziciju koja je prethodno opisana.
[0019] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju vakcine koja sadrži kompoziciju koja je prethodno opisana.
[0020] U razvoju prethodno navedenog pronalaska, pronalazači su identifikovali i okarakterisali bakterijski soj koji je posebno koristan za terapiju. Pokazalo se da je soj Megasphaera massiliensis pronalaska efektivan za lečenja oboljenja koja su ovde opisana, kao što su neurodegenerativna oboljenja. Stoga, prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje ćeliju soja Megasphaera massiliensis koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42787. Pronalazak takođe obezbeđuje kompozicije koje sadrže takve ćelije ili biološki čiste kulture takvih ćelija. Pronalazak takođe obezbeđuje ćeliju Megasphaera massiliensis soja koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42787, za upotrebu u terapiji, posebno terapiji oboljenja koja su ovde opisana.
[0021] U određenim primerima izvođenja pronalaska, kompozicija je za upotrebu u lečenju povrede mozga. Neuroprotektivna aktivnost kompozicija pronalaska, kao i njihova sposobnost da smanje nivoe aktivnosti histonske deacetilaze (HDAC), mogu ih učiniti korisnima za lečenje povrede mozga. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju moždanog udara, kao što je lečenje povrede mozga koja je posledica moždanog udara.
KRATAK OPIS SLIKA NACRTA
[0022]
Slika 1: Ćelijska vijabilnost neuroblastomskih ćelija
Slika 2: Negativna regulacija sekrecije IL-6
Slika 3 Sekrecija IL-8
Slika 4: Inhibicija sekrecije IL-6 i IL-8 koja je indukovana sa α-sinukleinom
Slika 5: Inhibicija aktivacije NFκB promotora koja je indukovana sa α-sinukleinom
Slika 6: Inhibicija aktivacije NFκB promotora koja je indukovana sa LPS-om
Slika 7: Promena u antioksidativnom kapacitetu
Figura 8: Promena u ukupnom antioksidativnom kapacitetu (lipidnoj oksidaciji)
Slika 9: Promena u aktivnosti histonske deacetilaze (HDAC)
Slika 10: Nivo proizvodnje indola
Slika 11: Nivo proizvodnje kirunenina
Slika 12: Srednja vrednost nivoa dopamina (DA) (Slika 12A), nivoa DOPAC (Slika 12B) i nivoa HVA (Slika 12C) u strijatumu. Podaci su prikazani kao srednja vrednost SEM.
Slika 13: Pospešivanje izrastanja neurita: svetlosna mikroskopija i genska ekspresija MAP2 (Slika 13A), imunofluorescentna mikroskopija Faloidina (Slika 13B)
Slika 14: Promena u nivoima ROS u (a) U373 ćelijama i (b) SHSY-5Y ćelijama
Slika 15: Neuroprotekcija - vijabilnost ćelija. Slika 15 prikazuje iste podatke kao Slika 1.
Slika 16 Promene u aktivnosti histonske deacetilaze indukovane sojem, u celokupnim ćelijama i ćelijskim lizatima (Slika 16A), promene u aktivnosti histonske deacetilaze indukovane kiselinom (Slika 16B), proizvodnja metabolita od strane sojeva (Slika 16C)
Slika 17 Inhibicija HDAC1 (Slika 17A), inhibicija HDAC2 (Slika 17B), inhibicija HDAC3 (Slika 17C)
Slika 18 Inhibicija HDAC klase I (Slika 18A); inhibicija HDAC1 (Slika 18B); inhibicija HDAC2 (Slika 18C); inhibicija HDAC3 (Slika 18D)
Slika 19: Nivo proizvodnje BDNF-a
Slika 20: Nivoi proizvodnje metabolita - neurotransmiteri u mozgu
Slika 21: Nivoi proizvodnje metabolita - organske kiseline u supernatantu
Slika 22: Uticaj na funkciju crevne barijere.
Slika 23: Proizvodnja neurotransmitera u mozgu
Slika 24: Promene u hipokampalnoj ekspresiji receptora - A) Oksitocinskog receptora, B) Vazopresinskog receptora, C) Glukokortikoidnog receptora i D) Mineralokortikoidnog receptora
Slika 25: Promene u hipokampalnoj ekspresiji A) Hormona oslobađanja kortikotropina (CRH), B) BDNF ekspresiji i C) TLR4
Slika 26: A) Promene u hipokampalnoj ekspresiji receptora hormona oslobađanja kortikotropina tipa 1 (CRFR1) i B) ekspresiji receptora hormona oslobađanja kortikotropina tipa 2 (CRFR2)
Slika 27: Promene u hipokampalnoj ekspresiji A) Faktora nekroze tumora, B) Interleukina 1b i C) IL-6
Slika 28: A) Promene u hipokampalnoj ekspresiji Integrina alfa M (CD11b) i B) Promene u u hipokampalnoj ekspresiji serotoninskog receptora 1A (5-HT1A receptora)
Slika 29: A) Promene u hipokampalnoj ekspresiji Glutamatnog jonotropnog NMDA receptora sa subjedinicom tipa 2A (Grin2A) i B) Glutamatnog jonotropnog NMDA receptora sa subjedinicom tipa 2B (Grin2B)
Slika 30: Promene u hipokampalnoj ekspresiji A) Receptora gama-aminobuterne kiseline A tipa 2 (GABA A2), B) Receptora gama-aminobuterne kiseline B tipa 1 (GABA BR1) i C) Dopaminskog receptora tipa 1 (DRD1)
Slika 31: Promene u ekspresiji receptora u amigdalama - A) Oksitocinskog receptora, B) Vazopresinskog receptora, C) Glukokortikoidnog receptora i D) Mineralokortikoidnog receptora
Slika 32: Promene u ekspresiji u amigdalama A) Neurotrofnog faktora poreklom iz mozga (BDNF), B) Receptora sličnog Toll receptoru tipa 4 (TLR-4), C) Receptora hormona oslobađanja kortikotropina tipa 1 (CRFR1) i D) Receptora hormona oslobađanja kortikotropina tipa 2 (CRFR2)
Slika 33: Promene u ekspresiji u amigdalama A) Integrina alfa M (CD11b), B) Interleukina-6 (IL-6), C) Glutamatnog jonotropnog NMDA receptora sa subjedinicom tipa 2A (Grin2A) i D) Glutamatnog jonotropnog NMDA receptora sa subjedinicom tipa 2B (Grin2B)
Slika 34: Promene u ekspresiji u amigdalama A) GABA-A receptora sa alfa 2 subjedinicom (GABRA2), B) GABA-A receptora tipa B sa subjedinicom tipa 1 (GABBR1) i C) Dopaminskog receptora tipa 1 (DRD1)
Slika 35: Promene u ekspresiji u prefrontalnoj kori velikog mozga A) Oksitocinskog receptora, B) Neurotrofnog faktora poreklom iz mozga (BDNF-a), C) Mineralokortikoidnog receptora i D) Glukokortikoidnog receptora
Slika 36: Promene u ekspresiji u prefrontalnoj kori velikog mozga A) Receptora sličnog Toll receptoru, tipa 4 (TLR-4), B) Receptora hormona oslobađanja kortikotropina tipa 1 (CRFR1), C) Receptor hormona oslobađanja kortikotropina tipa 2 (CRFR2) i D) Integrina alfa M (CD11b)
Slika 37: Promene u ekspresiji u prefrontalnoj kori velikog mozga A) Interleukina-6 (IL-6), B) Glutamatnog jonotropnog NMDA receptora sa subjedinicom tipa 2A (Grin2A), C) Glutamatnog jonotropnog NMDA receptora sa subjedinicom tipa 2B (Grin2B) i D) GABA-A receptora sa alfa 2 subjedinicom (GABRA2)
Slika 38: Promene u ekspresiji u prefrontalnoj kori velikog mozga A) GABA-A receptora Tipa B sa receptorskom subjedinicom 1 (GABBR1) i B) Dopaminskog receptora tipa 1 (DRD1)
Slika 39: Promene u ekspresiji u debelom crevu A) Triptofan hidroksilaze-1 (Tph1) i B) Indoleamin2,3-dioksigenaze-1 (IDO1)
Slika 40: Promene u ekspresiji u ileumu A) Triptofan hidroksilaze-1 (Tph1) i B) Indoleamin2,3-dioksigenaze-1 (IDO1)
Slika 41: Promene u cirkulišućim nivoima metabolita triptofana A) Kinurenina, B) Triptofana i C) Indeks metabolizma kinurenina/triptofana
Slika 42: Uticaj na proizvodnju interferona-y u mišjim splenocitima kod miševa hranjenih sa MRx0029
Slika 43: Uticaj na proizvodnju interleukin-1β iz splenocita
Slika 44: Uticaj na proizvodnju interleukina-6 iz splenocita
Slika 45: Uticaj na proizvodnju faktora nekroze tumora iz splenocita
Slika 46: Uticaj na proizvodnju interleukina-10 iz splenocita
Slika 47: Uticaj na proizvodnju hemoatraktanta CXCL1 iz splenocita
Slika 48: Promene nivoa masnih kiselina kraktog lanca u cekumu
Slika 49: Promene u nivoima genske ekspresije Aktina, Vilina, Okludina TJP1, TJP2, MAP2, DRD2, GABRB3, SYP, PINK1, PARK7 i NSE, koje su indukovane sa MRx0029 i MRX005.
Slika 50: Ćelijska diferencijacija SHSY5Y indukovana sa MRx0005 i MRx0029. (A-C) Reprezentativne slike imuno-obeleženih ćelija sa Faloidinom i MAP2. (D-F) Slike A-C koje su preklopljene sa slikama dobijenim nakon DAPI bojenja. (G-I) Ćelije koje su imuno-obeležene sa β3 tubulinom. (J-L) preklopljene sa slikama DAPI bojenja. Uvećanje x630. Imunoblot analiza efekata tretmana SHSY5Y ćelija sa MRx0005 i MRx0029. Membrane imunoblot postupka su inkubirane sa antitelima na MAP2 (M) i b3 tubulin (N). Kao kontrola za nanošenje, upotrebljen je aktin. Donji paneli: reprezentativne trake iz jednog od šest odvojenih eksperimenata; gornji paneli: relativan denzitometrijski intenzitet.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Bakterijski sojevi
[0023] Kompozicije pronalaska sadrže bakterijski soj roda Megasphaera, pri čemu je bakterijski soj sa sekvencom 16s rRNK koja je najmanje 95% identična SEQ ID NO: 2. Primeri pokazuju da su bakterije ovog roda korisne za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja. Poželjni bakterijski sojevi su vrste Megasphaera massiliensis.
[0024] Primeri vrsta Megasphaera za upotrebu u pronalasku obuhvataju Megasphaera elsdenii, Megasphaera cerevisiae, Megasphaera massiliensis, Megasphaera indica, Megasphaera paucivorans, Megasphaera sueciensis i Megasphaera micronuciformis. Dodatni primer vrsta Megasphaera za upotrebu u pronalasku je Megasphaera hexanoica. Megasphaera su obligatni anaerobni, gastrointestinalni mikrobi koji fermentišu laktat kod sisara i to kako kod preživara, tako i kod onih koji nisu preživari, uključujući ljude.
[0025] Tip soja M. massiliensis je NP3 (=CSUR P245=DSM 26228) [22]. Pristupni broj u GenBank bazi podataka za gensku sekvencu 16S rRNK iz M. massiliensis soja NP3 je JX424772.1 (ovde je opisana kao SEQ ID NO: 1).
[0026] Bakterija Megasphaera massiliensis koja je ispitivana u Primerima, ovde je označena kao soj MRx0029. Sekvenca 16S rRNK soja MRx0029 koji je ispitivan, obezbeđena je u SEQ ID NO: 2.
[0027] Soj MRx0029 je deponovan kod Međunarnodnog organa za deponovanje NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB219YA, Škotska) od strane kompanije 4D Pharma Research Ltd. (Life Sciences Innovation Building, Cornhill Road, Aberdeen, AB252ZS, Škotska), 13. jula 2017. godine, kao „Megasphaera massiliensis MRx0029" i dodeljen mu je pristupni broj NCIMB 42787.
[0028] Očekuje se i da će bakterijski sojevi koji su blisko srodni sojevima ispitivanim u primerima, biti efektivni za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja. U određenim primerima izvođenja, bakterijski soj koji je ovde opisan je sa sekvencom 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sekvenci 16S rRNK iz bakterijskog soja Megasphaera massiliensis. Bakterijski soj za upotrebu u pronalasku je sa sekvencom 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična SEQ ID NO: 2. Poželjno je da je bakterijski soj koji je za upotrebu u pronalasku, sa sekvencom 16S rRNK koja je predstavljena kao SEQ ID NO: 2.
[0029] Očekuje se i da će bakterijski sojevi koji su biotipovi sojeva MRx0029 ili NP3 biti efektivni za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja. Biotip je soj koji je bisko srodan i koji je sa sličnim ili veoma sličnim fiziološkim i biohemijskim karakteristikama.
[0030] Sojevi koji su biotipovi sojeva MRx0029 ili NP3 i koji su pogodni za upotrebu u pronalasku, mogu biti identifikovani sekvenciranjem drugih nukleotidnih sekvenci za sojeve MRx0029 ili NP3. Na primer, može biti sekvenciran suštinski celokupan genom, a biotip soja za upotrebu u pronalasku može biti najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identičan toj sekvenci duž najmanje 80% njegovog celokupnog genoma (npr. duž najmanje 85%, 90%, 95% ili 99%, ili duž njegovog celokupnog genoma). Ostale pogodne sekvence za upotrebu u identifikovanju biotipskih sojeva mogu obuhvatati hsp60 ili ponavljajuće sekvence kao što su BOX, ERIC, (GTG)5ili REP ili [23]. Biotipovi sojeva mogu imati sekvence koje su najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identične odgovarajućim sekvencam iz sojeva MRx0029 ili NP3.
[0031] Alternativno, sojevi koji su biotipovi sojeva MRx0029 ili NP3 i koji su pogodni za upotrebu u pronalasku mogu biti identifikovani upotrebom sojeva MRx0029 ili NP3 i analize restrikcionih fragmenata i/ili PCR analize, na primer, upotrebom polimorfizma u dužini umnoženih fragmenata obeleženih fluorescencijom (FAFLP) i PCR fingerprintiga sa repetitivnim DNK elementima (rep), ili pak upotrebom profilisanja proteina, ili delimičnim sekvenciranjem 16S ili 23S rDNK. U poželjnim primerima izvođenja, takve tehnike mogu biti upotrebljene za identifikaciju drugih sojeva Megasphaera massiliensis.
[0032] U određenim primerima izvođenja, sojevi koji su biotipovi sojeva MRx0029 ili NP3 i koji su pogodni za upotrebu u pronalasku, predstavljaju sojeve koji obezbeđuju isti obrazac kao sojevi MRx0029 ili NP3, kada se analiziraju restrikcionom analizom umnožene ribozomalne DNK (ARDRA), na primer, kada se upotrebljava restrikcioni enzim Sau3AI (za posupke i smernice za primer, pogledati, na primer, [24]). Alternativno, biotipovi sojeva su identifikovani kao sojevi koji imaju isti obrazac fermentacije ugljenih hidrata kao sojevi MRx0029 ili NP3.
[0033] Ostali sojevi Megasphaera koji su korisni u kompozicijama i postupcima pronalaska, kao što su biotipovi sojeva MRx0029 ili NP3, mogu biti identifikovani upotrebom bilo kog odgovarajućeg postupka ili strategije, uključujući analize opisane u primerima. Na primer, sojevi za upotrebu u pronalasku mogu biti identifikovani kultivisanjem neuroblastomskih ćelija i zatim procenom nivoa citokina i nivoa neuroprotekcije ili neuroproliferacije. Preciznije, u pronalasku mogu biti korisni bakterijski sojevi sa sličnim obrascima rasta, metaboličkim tipom i/ili površinskim antigenima poput onih koji su prisutni kod sojeva MRx0029 ili NP3. Korisan soj će biti sa imunomodulatornom aktivnošću koja je uporediva sa aktivnošću sojeva MRx0029 ili NP3. Preciznije, biotipski soj će izazvati efekte u modelima neurodegenerativnih oboljenja koji su uporedivi, kao i efekte na nivoe citokina koji su uporedivi sa efektima prikazanim u Primerima, a koji mogu biti identifikovani upotrebom protokola kultivisanja i primene koji su opisani u Primerima.
[0034] Posebno poželjan soj pronalaska je soj Megasphaera massiliensis MRx0029. Ovo je primer soja koji je ispitivan u primerima i za koga je pokazano da je efektivan u lečenju oboljenja. Prema tome, pronalazak obezbeđuje ćeliju, kao što je izolovana ćelija, soja Megasphaera massiliensis MRx0029. Pronalazak takođe obezbeđuje kompoziciju koja sadrži ćeliju soja Megasphaera massiliensis MRx0029. Pronalazak obezbeđuje i biološki čistu kulturu soja Megasphaera massiliensis MRx0029. Pronalazak takođe obezbeđuje ćeliju soja Megasphaera massiliensis MRx0029 za upotrebu u terapiji, posebno kod oboljenja koja su ovde opisana.
[0035] Posebno poželjan soj pronalaska je soj Megasphaera massiliensis koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42787. Ovo je primer MRx0029 soja koji je ispitivan u primerima i za koga je pokazano da je efektivan u lečenju oboljenja. Prema tome, pronalazak obezbeđuje ćeliju, kao što je izolovana ćelija, soja Megasphaera massiliensis koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42787. Pronalazak takođe obezbeđuje kompoziciju koja sadrži ćeliju soja Megasphaera massiliensis deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42787. Pronalazak obezbeđuje i biološki čistu kulturu soja Megasphaera massiliensis deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42787. Pronalazak takođe obezbeđuje ćeliju soja Megasphaera massiliensis koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42787, za upotrebu u terapiji, posebno kod oboljenja koja su ovde opisana.
[0036] Derivat soja pronalaska može biti "ćerka" soj (potomstvo) ili soj kultivisan (subkloniran) iz originala. Izvedeni soja pronalaska može biti modifikovan, na primer, na genetičkom nivou, bez narušavanja biološke aktivnosti. Preciznije, izvedeni soj pronalaska je terapijski aktivan. Izvedeni soj će biti sa terapijskom aktivnošću koja je uporediva sa aktivnošću soja MRx0029. Preciznije, izvedeni soj će izazvati efekte u modelima neurodegenerativnih oboljenja koji su uporedivi sa, kao i efekte na nivoima citokina koji su uporedivi sa, efektima prikazanim u Primerima, a koji mogu biti utvrđeni upotrebom protokola kultivisanja i primene koji su opisani u Primerima. Derivat soja MRx0029 će generalno predstavljati biotip soja MRx0029.
[0037] Upućivanje na ćelije soja Megasphaera massiliensis MRx0029 obuhvata sve ćelije koje su sa istim karakteristikama bezbednosti i terapijske efektivnosti kao soj MRx0029 i takve ćelije su obuhvaćene pronalaskom.
[0038] U poželjnim primerima izvođenja, bakterijski sojevi u kompozicijama pronalaska su vijabilni i sposobni da delimično ili u potpunosti kolonizuju creva.
[0039] Pronalazači su utvrdili da sojevi Megasphaera massiliensis smanjuju aktivaciju inflamatornih citokina poput IL-6, kao i da povećavaju aktivaciju inflamatornog citokina IL-8. Za IL-8 se pretpostavlja da je uključen u obrazovanje mijelinskog omotača [25]. Hronična inflamacija indukovana sa IL-6 na kraju može dovesti do ćelijske smrti. Prema tome, bakterijski sojevi pronalaska su posebno korisni u lečenju ili prevenciji neurodegenerativnih poremećaja. U pojedinim primerima izvođenja, bakterijski sojevi su korisni u lečenju stanja koje karakteriše pojačana aktivacija IL-6. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neurodegenerativnih oboljenja koje karakteriše demijelinizacija. Mnoga neurodegenerativna oboljenja karakteriše demijelinizacija. Demijelinizacija ometa propagaciju akcionih potencijala unutar neurona, čime se remeti efektivna komunikacija u nervnom sistemu. Pokazano je i da IL-8 pozitivno doprinosi obrazovanju i obnovi mijelinskih omotača. Kompozicije pronalaska su stoga posebno korisne u lečenju ili prevenciji neurodegenerativnih poremećaja koje karakteriše demijelinizacija, kao što je to multipla skleroza.
[0040] Pronalazači su otkrili da sojevi Megasphaera massiliensis pronalaska ublažavaju simptome neurodegenerativnih oboljenja u modelima oboljenja. Na primer, pronalazači su pronašli da sojevi Megasphaera massiliensis pospešuju izrastanje neurita in vitro i da stoga mogu biti upotrebljeni u pospešivanju obnove neurona u svrhe lečenja ili prevencije neurodegenerativnih oboljenja. Prema tome, bakterijski sojevi pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neurodegenerativnih oboljenja.
[0041] Pronalazači su takođe utvrdili da bakterijski sojevi pronalaska povećavaju aktivaciju BDNF-a. BDNF je neurotrofni faktor rasta za koga je pokazano da pojačava diferencijaciju i preživljavanje neurona. Prema tome, kompozicije pronalaska mogu biti upotrebljene u postupku poboljšavanja preživljavanja nervnih ćelija prilikom lečenja ili prevencije neurodegenerativnih oboljenja.
[0042] Dodatna bakterija koje može biti upotrebljena u kompozicijama pronalaska je vrsta Parabacteroides distasonis. Primeri pokazuju da su i Parabacteroides distasonis i Megasphaera massiliensis sa neuroprotektivnim aktivnostima, ali i da proizvode različite metabolite i da mogu imati različite mehanizme delovanja i specifične neuroprotektivne aktivnosti. Ove vrste stoga mogu biti posebno efektivne kada se upotrebljavaju u kombinaciji. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicija sadrži soj vrsta Parabacteroides distasonis i soj vrsta Megasphaera massiliensis.
[0043] Bakterija Parabacteroides distasonis, koja je deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42382, ispitivana je u Primerima i ovde je takođe označena kao soj MRx0005. Ovde se naizmenično upotrebljavaju i oznake MRX0005, MRX005, MRx005 i MRx0005. Sekvenca 16S rRNK za soj MRx0005 koji je ispitivan, obezbeđena je u SEQ ID NO: 17. Soj MRx0005 je deponovan kod Međunarodnog organa za deponovanje NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB21 9YA, Škotska) od strane kompanije GT Biologics Ltd. (Life Sciences Innovation Building, Aberdeen, AB25 2ZS, Škotska), 12. marta 2015. godine, kao "Parabacteroides sp 755" i dodeljen mu je pristupni broj NCIMB 42382. Kompanija GT Biologics Ltd. je naknadno promenila svoj naziv u 4D Pharma Research Limited.
[0044] U poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži soj deponovan u NCIMB pod pristupnim brojem NCIMB 42787, ili njegov derivat ili biotip, kao i soj deponovan u NCIMB pod pristupnim brojem NCIMB 42382, ili njegov derivat ili biotip, poželjno za upotrebu u terapiji, a poželjno i za upotrebu u lečenju neurodegenerativnog oboljenja kao što je Parkinsonova bolest.
Terapijske upotrebe
[0045] Kao što je prikazano u primerima, bakterijske kompozicije pronalaska su efektivne za lečenje neurodegenerativnih poremećaja. Preciznije, lečenje sa kompozicijama pronalaska povećava neuroproliferaciju i deluje kao neuroprotektivni agens u odnosu na agense koja uništavaju dopaminergične neurone.
[0046] Prema tome, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja koji su rezultat neuronske smrti.
[0047] Kompozicije pronalaska mogu smanjivati aktivaciju NFκB promotora, koji aktivira proizvodnju citokina, na primer, IL-1β, IL-1α, IL-18, TNFα i IL-6. Tretiranje ćelija sa mutiranim α-sinukleinom je model familijarne Parkinsonove bolesti. Tačkasta mutacija na poziciji 53, tipa izmene adenina u treonin, dovodi do nepravnilnog uvijanja α-sinukleina. Nepravilno uvijen α-sinuklein naknadno agregira u nesolubilne fibrile koji obrazuju Levijeva tela. Prema tome, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja koji su rezultat neuroinflamacije, nepravilnog uvijanja proteina i/ili izloženosti sredinskim faktorima. Kompozicije pronalaska mogu biti upotrebljene za lečenje familijarne Parkinsonove bolesti. Aktivacija NFκB promotora je posredovana TLR4 ligandom. Poznato je da TLR4 posreduje u ćelijskoj smrti u mišjem MPTP modelu koji oponaša Parkinsonovu bolest. Kompozicije pronalaska mogu biti upotrebljene da bi se inhibirala sposobnost TLR4 signalizacije da aktivira NFκB promotor. Od posebnog značaja za PD je i nalaz da su TLR2 i TLR4 povećani u mozgu pacijenata sa PD [26]. Štaviše, α-syn je opisan kao ligand za TLR2 [27], a mi smo pokazali, upotrebom HEK-TLR4 ćelija, da je α-syn ligand i za TLR4 [28].
[0048] Kompozicije pronalaska smanjuju sekreciju pro-inflamatornih citokina poput IL-6, koja može biti indukovana sa lipopolisaharidom (LPS). Tretman ćelija sa LPS-om oponaša Parkinsonovu bolest prouzrokovanu sredinskim faktorima. Kompozicije pronalaska mogu biti upotrebljene za smanjenje sekrecije IL-6. Kompozicije pronalaska mogu biti upotrebljene za lečenje Parkinsonove bolesti koja je prouzrokovana sredinskih faktorima.
[0049] Primeri neurodegenerativnih oboljenja koja se leče kompozicijama pronalaska obuhvataju: Parkinsonovu bolest, uključujući progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivnu supranuklearnu paralizu, Steele-Richardson-Olszewski sindrom, hidrocefalus normalnog pritiska, vaskularni ili arteriosklerotski parkinsonizam i parkinsonizam indukovan lekovima; Alchajmerovu bolest, uključujući Bensonov sindrom; multiplu sklerozu; Hantingtonovu bolest; amiotrofičnu lateralnu sklerozu; Lu-Gerigovu bolest; bolest motornih neurona; prionsku bolest; spinocerebelarnu ataksiju; spinalnu mišićnu atrofiju; demenciju, uključujući demenciju sa Levijevim telima, vaskularnu i frontotemporalnu demenciju; primarnu progresivnu afaziju; blago kognitivno oštećenje; kognitivno oštećenje povezano sa HIV infekcijom i kortikobazalnu degeneraciju. Dodatna bolest koja se leči kompozicijama pronalaska je progresivna inflamatorna neuropatija.
[0050] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju neuronske smrti, posebno u lečenju neurodegenerativnih poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u protekciji neurona, posebno u lečenju neurodegenerativnih poremećaja.
[0051] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju ili prevenciji gubitka dopaminergičnih ćelija u substanciji nigri. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju ili prevenciji degeneracije dopaminergičnih neurona u substanciji nigra pars compacta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju ili prevenciji degeneracije dopaminergičnih neurona u substanciji nigra pars compacta, kao i posledičnog gubitka njihovih projekcionih nervnih vlakana u strijatumu. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju ili prevenciji gubitka nigrostrijatalnih dopaminergičnih neurona.
[0052] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u povećanju nivoa dopamina. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u povećanju nivoa DOPAC (3,4-dihidroksifenilsirćetne kiseline). U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u povećanju nivoa dopamina i DOPAC. U određenim primerima izvođenja, nivoi dopamina i/ili DOPAC su povećani u strijatumu. Nivoi dopamina i DOPAC mogu biti izmereni upotrebom bilo kog odgovarajućeg postupka koji je poznat u oblasti tehnike, kao što je radioenzimski postupak, na primer, u plazmi ili likvoru (na primer, kao što je opisano u [29]), ili reverzno-fazni HPLC postupak, možda sa postupkom elektrohemijske detekcije, na primer, u plazmi ili likvoru (na primer, kao što je opisano u [30]).
[0053] Neuroprotektivne osobine kompozicija pronalaska, kao što je to pokazano u primerima, podrazumevaju da kompozicije mogu biti posebno efektivne za prevenciju ili odlaganje početka ili progresije neurodegenerativnih poremećaja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u odlaganju početka ili progresije neurodegenerativnih poremećaja.
[0054] Kompozicije pronalaska mogu povećati sekreciju IL-8. Pokazano je da IL-8 ima ulogu u mijelinizaciji neurona. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu biti upotrebljene za povećanje sekrecije IL-8.
[0055] Terapijske kompozicije pronalaska mogu povećati aktivaciju BDNF-a. BDNF deluje na određene neurone centralnog nervnog sistema da bi podržao preživljavanje postojećih neurona i potpomogao rast i razvoj novih neurona i sinapsi. BDNF je aktivan u hipokampusu, kori velikog mozga i bazalnom prednjem mozgu, a važan je i za dugoročno pamćenje. Prema tome, kompozicije pronalaska se mogu upotrebljavati za povećanje sekrecije BDNF-a. Kompozicije se stioga mogu upotrebljavati za lečenje neurodegenerativnih oboljenja povezanih sa oštećenjem dugotrajne memorije. Kompozicije pronalaska mogu biti upotrebljene i za poboljšanje dugotrajne memorije, posebno za poboljšanje dugotrajne memorije koja je oštećena neurodegenerativnom bolešću.
[0056] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska povećavaju metaboličku aktivnost mitohondrija u neuronskim ćelijama.
Modulacija osovine mikrobiota-crevo-mozak
[0057] Komunikacija između creva i mozga (osovina mikrobiota-crevo-mozak) odvija se dvosmernim neurohumoralnim sistemom komunikacije. Skorašnji dokazi pokazuju da mikrobiota koja se nalazi u crevima, može modulisati razvoj mozga i proizvoditi fenotipove u ponašanju posredstvom osovine mikrobiota-crevo-mozak. Zaista, brojni revijski pregledi ukazuju na ulogu osovine mikrobiota-crevomozak u održavanju funkcionalnosti centralnog nervnog sistema, kao i na disfunkciju osovine mikrobiota-crevo-mozak u razvoju poremećaja i stanja centralnog nervnog sistema [16], [19], [31].
[0058] Dvosmerna komunikacija između mozga i creva (tj. osovina creva-mozak) uključuje centralni nervni sistem, neuroendokrini i neuroimuni sistem, uključujući hipotalamo-hipofizno-adrenalnu (HPA) osovinu, simpatički i parasimpatički krak autonomnog nervnog sistema (ANS), zajedno sa enteričkim nervnim sistemom (ENS) i vagusnim nervom, kao i mikrobiotu creva.
[0059] Kao što je prikazano u primerima, kompozicije predmetnog pronalaska mogu modulisati osovinu mikrobiota-crevo-mozak i smanjiti ćelijsku smrt koja je udružena sa neurodegenerativnim poremećajima. Shodno navedenom, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja, posebno onih poremećaja i stanja koja su povezana sa disfunkcijom osovine mikrobiota-crevo-mozak.
[0060] U posebnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju oboljenja ili stanja izabranih iz grupe koja se sastoji od: Parkinsonove bolesti, uključujući progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivne supranuklearne paralize, Steele-Richardson-Olszewski sindroma, hidrocefalusa normalnog pritiska, vaskularnog ili arteriosklerotskog parkinsonizama i parkinsonizama izazvanog lekovima; Alchajmerove bolesti, uključujući Bensonov sindrom; multiple skleroze; Hantingtonove bolesti; amiotrofične lateralne skleroze; Lu-Gerigove bolesti; bolesti motornih neurona; prionske bolesti; spinocerebelarne ataksije; spinalne mišićne atrofije; demencije; uključujući demenciju sa Levijevim telima; vaskularnu i frontotemporalnu demenciju; primarne progresivne afazije; blagog kognitivnog oštećenja; kognitivnog oštećenja povezanog sa HIV infekcijom i kortikobazalne degeneracije.
[0061] Kompozicije pronalaska mogu biti posebno korisne za lečenje ili prevenciju hroničnog oboljenja, za lečenje ili prevenciju oboljenja kod pacijenata koji nisu reagovali na druge terapije (kao što je lečenje sa levodopom, agonistima dopamina, MAO-B inhibitorima, COMT inhibitorima, antagonistima glutamata i/ili antiholinergicima) i/ili za lečenje ili prevenciju oštećenja tkiva i simptoma povezanih sa disfunkcijom osovine mikrobiota-crevo-mozak.
[0062] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu CNS. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu autonomni nervni sistem (ANS). U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu enterički nervni sistem (ENS). U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu hipotalamo, hipofizno, adrenalnu (HPA) osovinu. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu neuroendokrini put. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu neuroimuni put. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu CNS, ANS, ENS, HPA osovinu i/ili neuroendokrine i neuroimune puteve. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivoe komensalnih metabolita i/ili gastrointestinalnu propustljivost kod subjekta.
[0063] Signalizacija osovine mikrobiota-crevo-mozak se moduliše neuronskim sistemima. Shodno tome, u pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u neuronskim sistemima. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju centralnog nervnog sistema. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u senzornim neuronima. U drugim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u motornim neuronima. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u ANS. U pojedinim primerima izvođenja, ANS je parasimpatički nervni sistem. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju vagusnog nerva. U drugim primerima izvođenja, ANS je simpatički nervni sistem. U ostalim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u enteričkom nervnom sistemu. U određenim primerima izvođenja, signalizacija ANS i ENS neurona reaguje direktno na sadržaj lumena gastrointestinalnog trakta. U drugim primerima izvođenja, signalizacija ANS i ENS neurona indirektno reaguje na neurohemikalije koje proizvode bakterije u lumenu. U drugim primerima izvođenja, signalizacija ANS i ENS neurona reaguje na neurohemikalije koje proizvode bakterije u lumenu ili enteroendokrine ćelije. U određenim poželjnim primerima izvođenja, neuroni ENS aktiviraju vagusne aferente koji utiču na funkcije CNS-a. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska regulišu aktivnost enterohromafinih ćelija.
Neurodegenerativne oboljenja
Parkinsonova bolest
[0064] Parkinsonova bolest je česta neurodegenerativna bolest koja je neuropatološki okarakterisana degeneracijom heterogenih populacija nervnih ćelija (ćelija koje proizvode dopamin). Za kliničku dijagnozu Parkinsonove bolesti je potrebna bradikineziju i najmanje jedan od sledećih osnovnih simptoma: tremor u mirovanju; rigidnost mišića i oštećenje posturalnog refleksa. Ostali znaci i simptomi koji mogu biti prisutni ili se razviti tokom progresije oboljenja su autonomne smetnje (sijaloreja, seboreja, konstipacija, poremećaji mokrenja, seksualnog funkcionisanja, ortostatska hipotenzija, hiperhidroza), poremećaji spavanja i poremećaji osećaja mirisa ili osećaja temperature. Parkinsonova bolest je neurodegenerativno oboljenje koje se može razviti ili trajati usled disfunkcije osovine mikrobiota-crevo-mozak. Prema tome, u poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji Parkinsonove bolesti kod subjekta.
[0065] U daljim poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Megasphaera, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti, pri čemu je bakterijski soj sa sekvencom 16s rRNK koja je najmanje 95% identična sa SEQ ID NO: 2. Kompozicije koji sadrže bakterijski soj roda Megasphaera mogu poboljšati motorne i kognitivne funkcije u modelima Parkinsonove bolesti. Lečenje sa sojevima Megasphaera može modulisati signalizaciju u centralnom, autonomnom i enteričkom nervnom sistemu; može modulisati aktivnost puta HPA osovine; može modulisati neuroendokrine i/ili neuroimune puteve; i može modulisati nivoe komensalnih metabolita, inflamatornih markera i/ili gastrointestinalne propustljivosti kod subjekta, pri čemu se za sve od navedenih pretpostavlja da su uključeni u neuropatologiju Parkinsonove bolesti. U poželjnim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrsta Megasphaera massiliensis za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti. Kompozicije u kojima se upotrebljava Megasphaera massiliensis mogu biti posebno efektivne za lečenje Parkinsonove bolesti.
[0066] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više do simptoma Parkinsonove bolesti kod subjekta. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više osnovnih simptoma Parkinsonove bolesti kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju bradikineziju kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju tremor u mirovanju; krutost mišića i/ili oštećenje posturalnog refleksa kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više od simptoma povezanih sa progresijom Parkinsonove bolesti koji su izabrani od autonomnih poremećaja (sijaloreja, seboreje, konstipacije, poremećaja mokrenja, seksualnog funkcionisanja, ortostatske hipotenzije, hiperhidroze), poremećaja spavanja i poremećaja u osećaju mirisa ili osećaju temperature.
[0067] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju depresivne simptome koji predstavljaju komorbiditet Parkinsonove bolesti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju verbalno pamćenje i/ili izvršne funkcije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju pažnju, radnu memoriju, verbalnu tečnost i/ili anksioznost.
[0068] U drugim poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju kognitivne disfunkcije koji predstavljaju komorbiditet Parkinsonove bolesti.
[0069] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju progresiju Parkinsonove bolesti. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju kasnije motorne komplikacije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju kasne motorne fluktuacije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju gubitak neurona. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju simptome demencije Parkinsonove bolesti (PDD). U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju oštećenje izvršnih funkcija, pažnje i/ili radne memorije. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju dopaminergičku neurotransmisiju. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju oštećenu dopaminergičku neurotransmisiju.
[0070] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju simptome Parkinsonove bolesti prema simptomatskoj ili dijagnostičkoj skali. U određenim primerima izvođenja, testovi za procenu simptomatskog poboljšanja motorne funkcije kod Parkinsonove bolesti predstavljaju Objedinjenu skalu za ocenu Parkinsonove bolesti. Preciznije, UPDRS II razmatra aktivnost svakodnevnog života, dok se UPDRS III bavi pregledo motornih funkcija.
[0071] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju simptome povezane sa PDD prema simptomatskom ili dijagnostičkom testu i/ili skali. U određenim primerima izvođenja, test ili skala su izabrani od Hopkinsovog verbalnog testa učenja - revidiranog (HVLT-R); Delis-Kaplanovog testa sistema za izvršne funcije (D-KEFS) sa interferencijom boja i reči; Hamiltonove skale za procenu depresije (HAM-D 17; depresija); Hamiltonove skale za procenu anksioznosti (HAM-A; anksioznost) i Objedinjene skale za ocenu Parkinsonove bolesti (UPDRS; za ozbiljnost PD simptoma).
[0072] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju skalu Kliničkog globalnog utiska - globalnog poboljšanja (CGI-I) za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska pokazuju pozitivan efekat na globalno socijalno i profesionalno oštećenje kod subjekta sa Parkinsonovom bolešću.
[0073] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neuroloških poremećaja kod subjekta, kao što je Parkinsonova bolest, pri čemu navedena upotreba obuhvata smanjenje ili sprečavanje gubitka dopaminergičnih ćelija u supstanciji nigra. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neuroloških poremećaja kao što je Parkinsonova bolest kod subjekta, pri čemu navedena upotreba podrazumeva smanjenje ili sprečavanje degeneracije dopaminergičnih neurona u substanciji nigri pars compacta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neuroloških poremećaja kao što je Parkinsonova bolest kod subjekta, pri čemu navedena upotreba uključuje smanjenje ili sprečavanje degeneracije dopaminergičnih neurona u supstanciji nigra pars compacta i posledičan gubitak njihovih projekcionih nervnih vlakana u strijatumu. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neuroloških poremećaja kao što je Parkinsonova bolest kod subjekta, pri čemu navedena upotreba uključuje smanjenje ili sprečavanje gubitka nigrostrijatalnih dopaminergičnih neurona.
[0074] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neuroloških poremećaja kao što je Parkinsonova bolest kod subjekta, pri čemu navedena upotreba podrazumeva povećanje nivoa dopamina. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neuroloških poremećaja kao što je Parkinsonova bolest kod subjekta, pri čemu navedena upotreba uključuje povećanje nivoa DOPAC. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neuroloških poremećaja kao što je Parkinsonova bolest kod subjekta, pri čemu navedena upotreba uključuje povećanje nivoa dopamina i DOPAC. U određenim primerima izvođenja, nivoi dopamina i/ili DOPAC su povećani u strijatumu.
Alchajmerova bolest i demencija
[0075] U DSM-5, termin demencija je zamenjen sa terminima glavni neurokognitivni poremećaj i blagi neurokognitivni poremećaj. Neurokognitivni poremećaj je heterogena klasa psihijatrijskih oboljenja. Najčešći neurokognitivni poremećaj je Alchajmerova bolest, a prate je vaskularna demencija ili mešoviti oblik ova dva poremećaja. Drugi oblici neurodegenerativnih poremećaja (npr. bolest Levijevih tela, frontotemporalna demencija, Parkinsonova demencija, Krojcfeld-Jakobova bolest, Hantingtonova bolest i Vernike-Korsakovljev sindrom) su udruženi sa demencijom.
[0076] Alchajmerovu bolest i demenciju takođe karakteriše gubitak neurona, tako da neuroprotektivni i neuroproliferativni efekti koji su prikazani u primerima za kompozicije pronalaska, ukazuju da one mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju ovih stanja.
[0077] Simptomatski kriterijumi za demenciju u okviru DSM-5 predstavljaju dokaz značajnog kognitivnog pada u odnosu na prethodni nivo performansi u jednom ili u više kognitivnih domena izabranih od: učenja i pamćenja; jezika; izvršnih funkcija; složene pažnje; perceptivno-motorne i socijalne kognicije. Kognitivni deficiti moraju ometati nezavisnost u svakodnevnim aktivnostima. Dodatno, kognitivni deficiti se ne javljaju isključivo u kontekstu delirijuma i ne mogu se bolje objasniti drugim mentalnim poremećajem (na primer, sa MDD ili šizofrenijom).
[0078] Pored primarnog simptoma, subjekte sa neurodegenerativnim poremećajima karakterišu ponašajni i psihijatrijski simptomi, uključujući agitaciju, agresiju, depresiju, anksioznost, apatiju, psihozu i poremećaje ciklusa spavanja i budnosti.
[0079] Neurodegenerativni poremećaji se mogu razviti ili trajati usled disfunkcije osovine mikrobiotacrevo-mozak. Prema tome, u poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neurodegenerativnih poremećaja kod subjekta. U poželjnim primerima izvođenja, neurodegenerativni poremećaj je Alchajmerova bolest. U drugim primerima izvođenja, neurodegenerativni poremećaj je izabran od vaskularnih demencija; mešovitog oblika Alchajmerove bolesti i vaskularne demencije; bolesti Levijevih tela; frontotemporalne demencije; Parkinsonove demencije; Krojcfeld-Jakobove bolesti; Hantingtonove bolesti; i Vernike-Korsakovljevog sindroma.
[0080] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma neurodegenerativnih poremećaja kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu kognitivnog pada kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju nivo performansi subjekta sa neurodegenerativnim poremećajima, u jednom ili u više kognitivnih domena izabranih od: učenja i pamćenja; jezika; izvršnih funkcija; složene pažnje; perceptivno-motorne i socijalne kognicije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu jednog ili više od ponašajnih i psihijatrijskih simptoma koji su povezani sa neurodegenerativnim poremećajima i izabrani su od agitacije, agresije, depresije, anksioznosti, apatije, psihoze i poremećaja ciklusa spavanja i budnosti.
[0081] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju simptomatsku bolest, intervencijom u pretkliničkoj fazi, u okviru patogenog mehanizma za koji se sumnja da je prisutan. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju modifikaciju oboljenja, sa usporavanjem ili zaustavljanjem progresije simptoma. U pojedinim primerima izvođenja, usporavanje ili zaustavljanje progresije simptoma je u korelaciji sa dokazima o odlaganju osnovnog neuropatološkog procesa. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju simptome neurodegenerativnih poremećaja koji podrazuevaju pojačano kognitivno i funkcionalno poboljšanje. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju ponašajne i psihijatrijske simptome demencije (BPSD). U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju sposobnost subjekta sa neurodegenerativnim poremećajem da preduzima svakodnevne aktivnosti.
[0082] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju kogniciju i funkcionisanje kod subjekta sa Alchajmerovom bolešću. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska poboljšava krajnji kognitivan ishod kod subjekta sa Alchajmerovom bolešću. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju krajnji funkcionalni ishod kod subjekta sa Alchajmerovom bolešću. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju krajnje kognitivne i funkcionalne ishode kod subjekta sa Alchajmerovom bolešću. U još daljim poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju ukupan klinički odgovor (krajnji globalni ishod) kod subjekta sa Alchajmerovom bolešću.
[0083] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju simptome neurodegenerativnih poremećaja shodno simptomatskom ili dijagnostičkom testu. U određenim primerima izvođenja, testovi za procenu simptomatskog poboljšanja kod Alchajmerove bolesti (i drugih neurodegenerativnih poremećaja) izabrani su od objektivnih kognitivnih, testova svakodnevnih aktivnosti, globalne procene promena, testova kvaliteta života povezanih sa zdravljem i testova za procenu ponašajnih i psihijatrijskih simptoma kod neurodegenerativnih poremećaja.
[0084] U određenim primerima izvođenja, objektivni kognitivni testovi za procenu simptomatskog poboljšanja upotrebljavaju Kognitivnu podskalu skale za procenu Alchajmerove bolesti (ADAS-cog) i klasičnu ADAS skalu. U određenim primerima izvođenja, simptomatsko poboljšanje kognicije se procenjuje upotrebom Neurofiziološke baterije testova za upotrebu kod Alchajmerove bolesti (NTB).
[0085] U pojedinim primerima izvođenja, test globalne procene promena upotrebljava skalu Kliničkog globalnog utiska - globalnog poboljšanja (CGI-I), skale za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U pojedinim primerima izvođenja, globalna skala je Utisak kliničara na osnovu intervjua za tzv. promenu u plusu (CIBIC-plus). U pojedinim primerima izvođenja, globalna skala promene je Globani utisak kliničara o promeni osmišljen od strane Jedinice za kooperativno istraživanje Alchajmerove bolesti (ADCS-CGIC).
[0086] U određenim primerima izvođenja, mere kvaliteta života povezanog sa zdravljem predstavljaju QOL povezan sa Alchajmerovom bolešću (ADRQL) i QOL za Alchajmerovu bolest (QOL-AD).
[0087] U određenim primerima izvođenja, testovi za procenu ponašajnih i psihijatrijskih simptoma kod neurodegenerativnih poremećaja su izabrani od Skale procene patologije ponašanja u Alchajmerovoj bolesti (BEHAVE-AD); skale procene ponašanja kod demencije (BRSD); Neuropsihijatrijskog inventara (NPI); i Koen-Mansfieldovog inventara agitacija (CMAI).
[0088] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su posebno efektivne u prevenciji, smanjenju ili ublažavanju neurodegenerativnih poremećaja kada se upotrebljavaju u kombinaciji sa drugom terapijom za lečenje neurodegenerativnih poremećaja. U određenim primerima izvođenja, takve terapije obuhvataju inhibitore acetilholinesteraze, uključujući donepezil (Aricept®), galantamin (Razadyne®) i rivastigmin (Exelon®), kao i memantin.
Multipla skleroza
[0089] Multipla skleroza (MS) je demijelinizaciona bolest u kojoj dolazi do oštećenja mijelinskog omotača koji obmotava neurone u mozgu i kičmenoj moždini. Tačni uzroci u osnovi MS nisu poznati, ali se smatra da se razlikuju među pojedincima. Određeni oblici MS su nasledni. Smatra se da i srediski faktori doprinose MS. Kod pojedinih osoba, kombinacija i genetičkih i sredinskih faktora može pokrenuti početak MS.
[0090] Postoji širok spektar simptoma povezanih sa MS. Subjekte može karakterisati skoro bilo koji neurološki simptom povezan sa oštećenjem autonomne, vizuelne, motorne ili senzorne kontrole. Tačni simptomi će se razlikovati u zavisnosti od mesta oštećenja/demijelinizacije neurona.
[0091] Ukazano je da je IL-8 verovatno uključen u obrazovanje mijelinskih omotača. Kompozicije pronalaska mogu stoga biti za upotrebu u remijelinizaciji neurona kod subjekata sa MS. Kompozicije pronalaska mogu takođe biti upotrebljene da bi se zaštitili neuroni od demijelinizacije. Drugim rečima, kompozicije pronalaska mogu biti za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije multiple skleroze, obnavljanjem ili sprečavanjem gubitka mijelinskih omotača neurona.
[0092] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma MS kod subjekta. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju umor kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju tremor u mirovanju, slabost mišiće, grčeve mišića, ukočenost mišića, paresteziju i/ili ataksiju kod subjekta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više od simptoma koji su povezani sa progresijom MS i izabrani iz liste koja se sastoji od autonomnih poremećaja: konstipacije, poremećaja mokrenja, seksualnog funkcionisanja, disfagije, dizartrije, sinkope, vertiga i/ili vrtoglavice; poremećaja spavanja; i poremećaja u osećaju mirisa ili osećaju temperature. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više od očnih simptoma povezanih sa MS. U pojedinim primerima izvođenja, očni simptom je izabran iz liste koja se sastoji od gubitka vida, bola u očima, slepila za boje, duplog vida i/ili nevoljnih pokreta očiju kod subjekta.
[0093] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju vrtoglavicu, vetigo, neuropatski bol, mišićno-skeletni bol, kognitivnu disfunkciju, inkontinenciju creva, disfagiju, dizartriju ili bilo koju od njihovu kombinaciju.
[0094] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju simptome depresije ili anksioznost koji predstavljaju komorbiditet MS.
[0095] U pojedinim primerima izvođenja, poboljšanje simptoma se određuje upotrebom McDonaldovih kriterijuma za dijagnozu MS iz 2017. godine.
[0096] U određenim primerima izvođenja, lečenje kompozicijama pronalaska rezultuje smanjenjem incidence MS ili ozbiljnosti MS. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju incidence recidiva ili ozbiljnosti relapsa. U određenim primerima izvođenja, lečenje kompozicijama pronalaska sprečava pad motorne funkcije ili rezultuje u poboljšanoj motornoj funkciji koja prati MS. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u prevenciji pada motorne funkcije ili su za upotrebu u poboljšanju motorne funkcije u lečenju MS. U određenim primerima izvođenja, lečenje sa kompozicijama pronalaska sprečava razvoj paralize u MS. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u prevenciji paralize u lečenju MS.
[0097] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u prevenciji multiple skleroze kod pacijenta za kojeg je utvrđeno da je sa rizikom za multiplu sklerozu ili kome je postavljena dijagnoza multiple skleroze u ranoj fazi ili "relapsno-remitentna" multipla skleroza. Kompozicije pronalaska mogu biti korisne za sprečavanje razvoja MS. Kompozicije pronalaska mogu biti korisne za sprečavanje progresije MS. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu kod pacijenta za koga je utvrđeno da je sa genetičkom predispozicijom za MS, kao što je to slučaj sa fenotipom glavnog kompleksa histokompatibilnosti (MHC) klase II, humanim leukocitnim antigenom (HLA)-DR2 ili HLA-DR4.
[0098] Kompozicije pronalaska mogu biti korisne za kontrolu ili ublažavanje multiple skleroze. Kompozicije pronalaska mogu biti posebno korisne za smanjenje simptoma povezanih sa multiplom sklerozom. Lečenje ili prevencija multiple skleroze se može odnositi, na primer, na ublažavanje ozbiljnosti simptoma ili na smanjenje u učestalosti pogoršanja ili opsega okidača koji predstavljaju problem za pacijenta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska usporavaju ili zaustavljaju napredovanje oboljenja.
[0099] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju relapsnoremitentne MS. U alternativnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju progresivne MS, kao što je to sekundarna progresivna MS (SPMS) koja se razvija tokom vremena nakon dijagnoze RRMS, primarna progresivna MS (PPMS) koju karakteriše postepeno kontinuirano neurološko pogoršanje i MS sa progresivnom pojavom recidiva (PRMS) koja je slična PPMS, ali je sa relapsima koji se preklapaju.
[0100] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju jednog ili više simptoma MS izabranih iz grupe koja se sastoji od: umora, problema sa vidom, utrnutosti, peckanja, grčeva mišića, ukočenosti mišića, slabosti mišića, problema sa pokretljivošću, bolom, problema sa razmišljanjem, učenjem i planiranjem, depresije i anksioznosti, seksualnih problema, problema sa bešikom, problema sa crevima, govorom i poteškoća sa gutanjem.
Neurohemijski faktori, neuropeptidi i neurotransmiteri i osovina mikrobiota-crevo-mozak
[0101] Kao što je prethodno opisano u glavnim crtama, osovina mikrobiota-crevo-mozak se moduliše brojnim od različitih fizioloških sistema. Osovina mikrobiota-crevo-mozak se moduliše brojnim signalnim molekulima. Rezultat izmena u nivoima ovih signalnih molekula su neurodegenerativna oboljenja. Eksperimenti koje su pronalazači izvodili, ukazuju da primena vrsta Megasphaera, a posebno Megasphaera massiliensis, može modulisati nivoe indola i kinurenina. Disregulacija ovih metabolita može dovesti do neurodegenerativnih oboljenja poput Parkinsonove bolesti.
[0102] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivoe monoamina u mozgu i njihovih metabolita. U poželjnim primerima izvođenja, metabolit je kinurenin. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu kinurenin, koji je deo glavnog puta metabolizma triptofana, a koji služi kao put za proizvodnju nikotinamid adeninskog dinukleotida (NAD+). Kinurenin može biti metabolisan u neuroaktivna jedinjenja poput kinurenske kiseline (KYNA) i 3-hidroksi-1-kinurenina (3-OH-1-KYN), a u daljim koracima i u hinolinsku kiselinu (QUIN). Disregulacija kinureinskog puta može dovesti do aktivacije imunskog sistema i nakupljanja potencijalno neurotoksičnih jedinjenja. Izmene u metabolizmu kinurenina mogu biti uključene u razvoj Parkinsonove bolesti. Pokazano je tako da su nivoi kinurenina smanjeni u frontalnom korteksu, putamenu i substanciji nigra pars compacta pacijenata sa PD [32]. Prema tome, u određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u povećanju nivoa kinurenina u lečenju Parkinsonove bolesti.
[0103] U određenim primerima izvođenja pronalaska, kompozicije pronalaska mogu povećati nivoe kinurenina. Pokazano je da povećani nivoi kinurenina umanjuju smrt neuronskih ćelija indukovanu sa MPP+ in vitro, u humanoj dopaminergičnoj ćelijskoj liniji neuroblastoma [33]. U određenim primerima izvođenja, kinurenin i kinurenska kiselina mogu aktivirati receptore aril ugljovodonika (Ahr) i GPR35 receptore u GI. Aktivacija Ahr receptora indukuje proizvodnju IL-22, što može inhibirati lokalnu inflamaciju. Aktivacija GPR35 indukuje proizvodnju inozitol trifosfata i mobilizaciju Ca2+.
[0104] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivoe indola. U poželjnim primerima izvođenja, metabolit je kinurenin. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu kinurenin, što je glavni put metabolizma triptofana.
[0105] Signalizacija osovine mikrobiota-crevo-mozak se moduliše nivoima neurohemijskih faktora, neuropeptida i neurotransmitera. Shodno tome, u određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivoe neurohemijskih faktora, neuropeptida i neurotransmitera. Shodno navedenom, u određenim poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska direktno menjaju biohemiju CNS-a.
[0106] Signalizacija osovine mikrobiota-crevo-mozak se moduliše nivoima γ-aminobuterne kiseline (GABA). Shodno tome, u poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivoe GABA. GABA je inhibitorni neurotransmiter koji smanjuje ekscitabilnost neurona. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska povećavaju nivoe GABA. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju nivoe GABA. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska menjaju GABAergičku neurotransmisiju. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivo GABA transkripcije u različitim regionima centralnog nervnog sistema. U određenim primerima izvođenja, GABA poreklom od komensala prolazi kroz krvnomoždanu barijeru i direktno utiče na neurotransmisiju. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska dovode do smanjenja GABA u hipokampusu, amigdalama i/ili locus coeruleusu. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska dovode do povećanja GABA u kortikalnim regionima.
Imunski odgovor
[0107] Signalizacija osovine mikrobiota-crevo-mozak se moduliše izmenama u imunskom odgovoru i inflamatornim faktorima i markerima. Shodno tome, u određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu modulisati imunski odgovor. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu sistemske nivoe cirkulišućih neuroimunih signalnih molekula. U određenim poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu proizvodnju proinflamatornih citokina i inflamaciju. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu inflamatorno stanje. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju proizvodnju i sekreciju IL-6. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju aktivaciju NFκB promotora. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su u stanju da modulišu aktivaciju proizvodnje IL-6, snažnim proinflamatornim endotoksinom, lipopolisaharidom (LPS-om). U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su u stanju da modulišu aktivaciju NFκB promotora sa LPS-om i mutiranim α-sinukleinskim proteinom, kao što je α-sinuklein sa A53T. Povećani nivoi citokina u cirkulaciji su usko povezani sa raznim neurodegenerativnim poremećajima, uključujući Parkinsonovu bolest, demenciju i Alchajmerovu bolest. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju nivoa IL-6 i/ili nivoa NFκB u lečenju neurodegenerativnog poremećaja.
[0108] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska povećavaju sekreciju IL-8. Pokazano je da IL-8 indukuje obrazovanje mijelinskog omotača i da obnavlja ili doprinosi očuvanju efektivne neuronske komunikacije. Prema tome, u pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u indukovanju obrazovanja mijelinskog omotača u lečenju neurodegenerativnih oboljenja. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u obnavi neuronske komunikacije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u očuvanju neuronske komunikacije.
[0109] Signalizacija osovine mikrobiota-crevo-mozak se moduliše nivoom komensalnih metabolita. Shodno tome, u određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu sistemske nivoe metabolita mikrobiote. U određenim poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivo masnih kiselina kratkog lanca (SCFA). U određenim primerima izvođenja, nivo SCFA se povećava ili smanjuje. U pojedinim primerima izvođenja, SCFA je buterna kiselina (BA) (ili butirat). U pojedinim primerima izvođenja, SCFA je propionska kiselina (PPA). U pojedinim primerima izvođenja, SCFA je sirćetna kiselina. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu sposobnost SCFA da prođu kroz krvno-moždanu barijeru.
[0110] Acetilacija i deacetilacija histona su važni epigenetski regulatori ekspresije gena. Neuravnoteženost u acetilaciji i deacetilaciji histona može dovesti do apoptoze. Pretpostavlja se da je diseregulacija takvih histonskih acetiltransferaza uključena u patogenezu povezanu sa neurodegenerativnim oboljenjama koja se javljaju sa starenjem, kao što su to Parkinsonova bolest, Hantingtonova bolest, Alchajmerova bolest, amiotrofična lateralna skleroza i pad kognitivnih sposobnosti [34]. Shodno tome, u određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu modulisati aktivnost histonske deacetilaze. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu smanjiti aktivnost histonske deacetilaze. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu smanjiti aktivnost histonske acetilaze.
[0111] Pacijente sa neurodegenerativnim oboljenjama, uključujući Parkinsonovu bolest, Hantingtonovu bolest, Alchajmerovu bolest i amiotrofičnu lateralnu sklerozu, karakteriše visok nivo lipidne peroksidacije. Lipidi su osetljivi na oksidaciju sa reaktivnim vrstama kiseonika, a mozak je bogat polinezasićenim masnim kiselinama. Shodno tome, u određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu modulisati lipidnu peroksidaciju. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu smanjiti lipidnu peroksidaciju. Smanjivanje oksidativnih oštećenja prouzrokovanih reaktivnim vrstama kiseonika može biti upotrebljeno za ciljano dejstvo na neurodegenerativna oboljenja u ranoj fazi. Shodno navedenom, u određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju neurodegeneracije u ranoj fazi. Takođe, shodno navedenom, u određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u prevenciji razvoja neurodegenerativnog poremećaja. U takvim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu biti za upotrebu kod pacijenta za koga je utvrđeno da je sa rizikom da razvije neurodegenerativni poremećaj.
[0112] Signalizacija osovine mikrobiota-crevo-mozak se moduliše nivoima gastrointestinalne propustljivosti. Shodno tome, u pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska menjaju integritet epitela gastrointestinalnog trakta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu propustljivost gastrointestinalnog trakta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu funkciju i integritet barijere gastrointestinalnog trakta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu motilitet gastrointestinalnog trakta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu translokaciju komensalnih metabolita i inflamatornih signalnih molekula u krvotok iz lumena gastrointestinalnog trakta.
[0113] Signalizacija osovine mikrobiota-crevo-mozak se moduliše sastavom mikrobioma u gastrointestinalnom traktu. Shodno tome, u određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu sastav mikrobioma gastrointestinalnog trakta. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju mikrobiomsku disbiozu i porast u toksičnim metabolitima koji to prati (npr. LPS). U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivoe Clostridium-a u gastrointestinalnom traktu. U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju nivo Clostridium-a u gastrointestinalnom traktu. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju nivo Campylobacter jejuni. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu proliferaciju štetnih anaerobnih bakterija i proizvodnju neurotoksina koje ove bakterije proizvode. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivoe Lactobacillus-a i/ili Bifidobacterium-a u mikrobiomu. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska modulišu nivoe rodova Sutterella, Prevotella, Ruminococcus i/ili familije Alcaligenaceae u mikrobiomu. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska povećavaju nivo Lactobacillus plantarum i/ili Saccharomices boulardii.
Povreda mozga
[0114] Primeri pokazuju da su kompozicije pronalaska neuroprotektivne i da ih karakteriše HDAC inhibitorna aktivnost. HDAC2 je ključni ciljni molekul za funkcionalni oporavak od moždanog udara [35], a inhibicija HDAC može sprečiti povredu bele mase [36], tako da kompozicije pronalaska mogu biti korisne i u lečenju povrede mozga.
[0115] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga. U pojedinim primerima izvođenja, povreda mozga je traumatska povreda mozga. U pojedinim primerima izvođenja, povreda mozga je stečena povreda mozga. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica traume. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica tumora. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica moždanog udara. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica krvarenja u mozgu. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica encefalitisa. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica cerebralne hipoksije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica cerebralne anoksije.
[0116] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju moždanog udara. Efekti prikazani u primerima su posebno relevantni za lečenje moždanog udara. Moždani udar nastaje kada se prekine protok krvi u najmanje jednom delu mozga. Bez adekvatnog snabdevanja sa krvlju, da bi se obezbedili kiseonik i hranljive materije moždanom tkivu i da bi se uklonili otpadni proizvodi iz moždanog tkiva, moždane ćelije brzo počinju da umiru. Simptomi moždanog udara zavise od regiona mozga koji je zahvaćen neadekvatnim protokom krvi. Simptomi obuhvataju paralizu, ukočenost ili slabost mišića, gubitak ravnoteže, vrtoglavicu, iznenadne jake glavobolje, oštećenje govora, gubitak pamćenja, gubitak sposobnosti rasuđivanja, iznenadnu zbunjenost, oštećenje vida, komu ili čak smrt. Moždani udar se označava i kao moždani napad ili cerebrovaskularni štetan događaj (CVA). Simptomi moždanog udara mogu biti kratkotrajni, ukoliko se odgovarajući protok krvi obnovi unutar kratkog vremenskog perioda. Međutim, ukoliko se neadekvatan protok krvi nastavi tokom značajnog vremenskog perioda, simptomi mogu biti trajni.
[0117] U pojedinim primerima izvođenja, moždani udar je cerebralna ishemija. Cerebralna ishemija je rezultat nedovoljnog protoka krvi u tkivima mozga kojim bi se zadovoljile metaboličke potrebe. U pojedinim primerima izvođenja, cerebralna ishemija je fokalna cerebralna ishemija, tj. ograničena je na određeni region mozga. U pojedinim primerima izvođenja, cerebralna ishemija je globalna cerebralna ishemija, tj. obuhvata široko područje moždanog tkiva. Fokalna cerebralna ishemija se često javlja kada je cerebralni kvrni sud blokiran, bilo delimično ili u potpunosti, čime se smanjuje protok krvi u određeni region mozga. U pojedinim primerima izvođenja, fokalna cerebralna ishemija je ishemijski moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, ishemijski moždani udar je trombotičan, tj. prouzrokovan je trombom ili krvnim ugruškom koji se razvija u cerebralnom krvnom sudu i ograničava ili blokira protok krvi. U pojedinim primerima izvođenja, ishemijski moždani udar je trombotičan moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, ishemijski moždani udar je embolijski, tj. izazvan je embolijom ili nevezanom masom koja putuje kroz krvotok i ograničava ili blokira protok krvi na mestu koje je udaljeno od njegove tačke porekla. U pojedinim primerima izvođenja, ishemijski moždani udar je embolijski moždani udar. Globalna cerebralna ishemija se često javlja kada je protok krvi u mozak u celosti blokiran ili smanjen. U pojedinim primerima izvođenja, globalna cerebralna ishemija je prouzrokovana hipoperfuzijom, tj. nastala je usled šoka. U pojedinim primerima izvođenja, globalna cerebralna ishemija je rezultat srčanog zastoja.
[0118] U pojedinim primerima izvođenja, subjekt kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo cerebralnu ishemiju. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo fokalnu cerebralnu ishemiju. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo ishemijski moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo trombotičan moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo embolijski moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo globalnu cerebralnu ishemiju. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat sa dijagnozom povrede mozga je pretrpeo hipoperfuziju. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt sa dijagnozom povrede mozga je pretrpeo srčani zastoj.
[0119] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju cerebralne ishemije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju fokalne cerebralne ishemije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ishemijskog moždanog udara. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju trombotičnog moždanog udara. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju embolijskog moždanog udara. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju globalne cerebralne ishemije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju hipoperfuzije.
[0120] U pojedinim primerima izvođenja, moždani udar je hemoragijski moždani udar. Hemoragijski moždani udar je prouzrokovan krvarenjem unutar ili oko mozga, što rezultuje otokom, pritiskom i oštećenjem ćelija i tkiva mozga. Hemoragijski moždani udar je obično rezultat oslabljenog krvnog suda koji puca i krvari u okolni mozak. U pojedinim primerima izvođenja, hemoragijski moždani udar je intracerebralna hemoragija (krvarenje), tj. prozrokovan je krvarenjem unutar samog moždanog tkiva. U pojedinim primerima izvođenja, intracerebralno krvarenje je prouzrokovano intraparenhimskim krvarenjem. U pojedinim primerima izvođenja, intracerebralno krvarenje je prouzrokovano intraventrikularnim krvarenjem. U pojedinim primerima izvođenja, hemoragijski moždani udar je subarahnoidno krvarenje, tj. krvarenje koje se javlja izvan moždanog tkiva, ali je još uvek unutar lobanje. U pojedinim primerima izvođenja, hemoragijski moždani udar je rezultat cerebralne amiloidne angiopatije. U pojedinim primerima izvođenja, hemoragijski moždani udar je rezultat aneurizme mozga. U pojedinim primerima izvođenja, hemoragijski moždani udar je rezultat cerebralne arteriovenske malformacije (AVM).
[0121] U pojedinim primerima izvođenja, subjekt kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo hemoragijski moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo intracerebralno krvarenje. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo krvarenje unutar parenhima. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo intraventrikularno krvarenje. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo subarahnoidno krvarenje. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo cerebralnu amiloidnu angiopatiju. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo moždanu aneurizmu. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo cerebralni AVM.
[0122] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju hemoragijskog moždanog udara. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju intracerebralne hemoragije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju intraparenhimske hemoragije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju intraventrikularne hemoragije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju subarahnoidne hemoragije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju cerebralne amiloidne angiopatije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju aneurizme mozga. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju cerebralne AVM.
[0123] Ponovno uspostavljanje adekvatnog protka krvi u mozgu nakon perioda prekida, iako je efektivno u ublažavanju simptoma povezanih sa moždanim udarom, paradoksalno može rezultovati u daljem oštećenju moždanog tkiva. Tokom perioda prekida, zahvaćeno tkivo pati od nedostatka kiseonika i hranljivih materija, a naglo obnavljanje protoka krvi može dovesti do inflamacije i oksidativnog oštećenja usled indukcije oksidativnog stresa. Navedeno je poznato kao reperfuziona povreda i dobro je dokumentovano, ne samo nakon moždanog udara, već i nakon srčanog udara ili drugog oštećenja tkiva, a kada se snabdevanje krvlju vraća u tkivo nakon perioda ishemije ili nedostatka kiseonika. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo reperfuzionu povredu kao rezultat moždanog udara. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju reperfuzne povrede koja je posledica moždanog udara.
[0124] Privremeni ishemijski napad (TIA), koji se često označava i kao mini-moždani udar, prepoznati je znak upozorenja za ozbiljniji moždani udar. Subjekti koji su pretrpeli jedan ili više TIA su stoga sa većim rizikom za moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt kome je dijagnostikovana povreda mozga je pretrpeo TIA. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju TIA. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga kod subjekta koji je pretrpeo TIA.
[0125] Visok krvni pritisak, povišen holesterol u krvi, porodična istorija moždanog udara, oboljenje srca, dijabetes, aneurizme mozga, arteriovenske malformacije, bolest srpastih ćelija, vaskulitis, poremećaji krvarenja, upotreba nesteroidnih antiinflamatornih lekova (NSAIL), pušenje duvana, konzumacija velikih količina alkohola, ilegalna upotreba droga, gojaznost, nedostatak fizičke aktivnosti i nezdrava ishrana se svi smatraju faktorima rizika za moždani udar. Preciznije, za snižavanje krvnog pritiska je definitivno dokazano da sprečava i ishemijske i hemoragijske moždane udare [37, 38]. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga kod subjekta kod koga je prisutan najmanje jedan faktor rizika za moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, kod subjekta su prisutna dva faktora rizika za moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, kod subjekta su prisutna tri faktora rizika za moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, kod subjekta su prisutna četiri faktora rizika za moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, kod subjekta je prisutno više od četiri faktora rizika za moždani udar. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt ima visok krvni pritisak. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt ima visok holesterol u krvi. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt ima porodičnu istoriju moždanog udara. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt boluje od srčanog oboljenja. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt ima dijabetes. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt ima moždanu aneurizmu. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt ima arteriovenske malformacije. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt ima vaskulitis. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt ima bolest srpastih ćelija. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt ima poremećaj krvarenja. U pojedinim primerima izvođenja, subjekat ima istoriju upotrebe nesteroidnih antiinflamatornih lekova (NSAID). U pojedinim primerima izvođenja, subjekt puši duvan. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt pije velike količine alkohola. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt koristi ilegalne droge. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt je gojazan. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt je sa prekomernom težinom. U pojedinim primerima izvođenja, kod subjekta nedostaje fizička aktivnost. U pojedinim primerima izvođenja, subjekt se nezdravo hrani.
[0126] Primeri ukazuju da kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje povrede mozga, kao i da potpomažu u oporavku, kada se primenjuju pre nego što se povreda dogodi. Prema tome, kompozicije pronalaska mogu biti posebno korisne za lečenje povrede mozga kada se primenjuju osobama sa rizikom od povrede mozga, kao što je to pre moždanog udara.
[0127] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju oštećenja prozrokovanog mogućom povredom mozga, poželjno moždanim udarom. Kompozicije mogu smanjiti prouzrokovano oštećenje, kada se primenjuju pre nego što se dogodi potencijalna povreda mozga, posebno kada se primenjuju pacijentu za koga je utvrđeno da je sa rizikom od povrede mozga.
[0128] Primeri ukazuju da kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje povrede mozga i da pomažu u oporavku, kada se primenjuju nakon što se povreda dogodi. Prema tome, kompozicije pronalaska mogu biti posebno korisne za lečenje povrede mozga kada se primenjuju osobama nakon povrede mozga, kao što je to nakon moždanog udara.
[0129] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska leče povredu mozga smanjenjem motornih oštećenja. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska leče povredu mozga poboljšanjem motorne funkcije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska leče povredu mozga poboljšanjem snage mišića. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska leče povredu mozga poboljšanjem memorije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska leče povredu mozga poboljšanjem socijalnog prepoznavanja. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska leče povredu mozga poboljšanjem neurološke funkcije.
[0130] Lečenje povrede mozga se može odnositi, na primer, na ublažavanje ozbiljnosti simptoma. Lečenje povrede mozga se može takođe odnositi na smanjenje neuroloških oštećenja nakon moždanog udara. Kompozicije pronalaska za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu biti primenjene subjektu unapred, pre početka moždanog udara, na primer, kod pacijenta za kojeg je utvrđeno da je sa rizikom za moždani udar. Kompozicije pronalaska za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu biti obezbeđene nakon što se moždani udar desi, na primer, tokom oporavka. Kompozicije pronalaska za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu biti obezbeđene tokom akutne faze oporavka (tj. do jedne nedelje nakon moždanog udara). Kompozicije pronalaska za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu biti obezbeđene tokom subakutne faze oporavka (tj. od jedne nedelje do tri meseca nakon moždanog udara). Kompozicije pronalaska za upotrebu u lečenju moždanog udara mogu biti obezbeđene tokom hronične faze oporavka (peroid od tri meseca nakon moždanog udara).
[0131] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u kombinaciji sa sekundarnim aktivnim agensom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u kombinaciji sa aspirinom ili aktivatorom tkivnog plazminogena (tPA). Ostali sekundarni agensi obuhvataju druge antitrombocitine (poput klopidogrela), antikoagulanse (poput heparina, varfarina, apiksabana, dabigatrana, edoksabana ili rivaroksabana), antihipertenzive (kao što su diuretici, ACE inhibitori, blokatori kalcijumskih kanala, beta-blokatori ili alfa-blokatori) ili statini. Kompozicije pronalaska mogu poboljšati pacijentov odgovor na sekundarni aktivan agens.
[0132] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju efekat ishemije na tkiva. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju količinu oštećenja tkiva prouzrokovanog ishemijom. U određenim primerima izvođenja, tkiva oštećena ishemijom su cerebralna tkiva. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju nekrozu ili broj nekrotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju apoptozu ili broj apoptotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska smanjuju broj nekrotičnih i apoptotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju ćelijsku smrt nekrozom i/ili apoptozom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sprečavaju ćelijsku smrt nekrozom i/ili apoptozom, a koja je prouzrokovana ishemijom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju oporavak tkiva oštećenog ishemijom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju brzinu klirensa nekrotičnih ćelija i/ili apoptotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju efektivnost klirensa nekrotičnih ćelija i/ili apoptotičnih ćelija. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju zamenu i/ili regeneraciju ćelija unutar tkiva. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju zamenu i/ili regeneraciju ćelija unutar tkiva oštećenih ishemijom. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska poboljšavaju sveukupnu histologiju tkiva (na primer, nakon biopsije).
Načini primene
[0133] Poželjno je da se kompozicije pronalaska primenjuju u gastrointestinalni trakt, da bi se omogućila isporuka u i / ili delimična ili potpuna kolonizacija creva sa bakterijskim sojem pronalaska. U principu, kompozicije pronalaska se primenjuju oralno, ali se mogu primenjivati i rektalno, intranazalno ili bukalnim ili sublingvalnim načinima primene.
[0134] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu biti primenjivane u vidu pene, spreja ili gela.
[0135] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu biti primenjene u vidu supozitorija, kao što su to rektalne supozitorije, na primer, u obliku kompozicije sa uljem teobroma (kakao puterom), sintetskom tvrdom mašću (npr. sa supocirom, vitepsolom), glicero-želatinom, polietilen glikolom ili glicerinskim sapunom.
[0136] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska se primenjuje u gastrointestinalni trakt putem sonde, kao što je to nazogastrična sonda, orogastrična sonda, želudačna sonda, jejunostomska sonda (J sonda), perkutana endoskopska gastrostomija (PEG), ili kroz otvor, poput otvora u zidu grudnog koša koji omogućava pristup stomaku, jejunumu, kao i kroz druge pogodne otvore za pristup.
[0137] Kompozicije pronalaska mogu biti primenjivane jednom ili se mogu primenjivati sekvencijalno, kao deo režima lečenja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska bi trebalo primenjivati svakodnevno.
[0138] U određenim primerima izvođenja pronalaska, lečenje prema pronalasku je praćeno procenom mikrobiote creva pacijenta. Lečenje može biti ponovljeno ukoliko se ne postigne isporuka i / ili delimična ili potpuna kolonizacija sojem pronalaska, odnosno ukoliko se ne uoči efektivnost, ili se tretman može prekinuti ukoliko je isporuka i / ili delimična ili potpuna kolonizacija uspešna i efektivnost se uočava.
[0139] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska može biti primenjene trudnoj životinji, na primer, sisaru kao što je čovek, da bi se sprečilo da se kod njenog deteta razvije inflamatorna ili autoimuna bolest in utero i / ili nakon što se dete rodi.
[0140] Kompozicije pronalaska mogu biti primenjivane pacijentu kod koga je postavljena dijagnoza neurodegenerativnog oboljenja ili za koga je utvrđeno da je sa rizikom da oboli od neurodegenerativnog oboljenja. Kompozicije takođe mogu biti primenjivane kao profilaktička mera, da bi se sprečio razvoj neurodegenerativnog oboljenja kod zdravog pacijenta.
[0141] Kompozicije pronalaska mogu biti primenjivane kod pacijenta za kojeg je utvrđeno da je sa abnormalnom mikrobiotom u crevima. Na primer, kod pacijenta može biti prisutna smanjena ili može nedostajati kolonizacija sa Megasphaera bakterijama, a posebno sa Megasphaera massiliensis.
[0142] Kompozicije pronalaska mogu biti primenjivane u vidu prehrambenog proizvoda, kao što je dodatak ishrani.
[0143] U principu, kompozicije pronalaska su za lečenje ljudi, mada mogu biti upotrebljene i za lečenje životinja, uključujući monogastrične sisare kao što su živina, svinje, mačke, psi, konji ili zečevi. Kompozicije pronalaska mogu biti korisne za poboljšanje rasta i performansi životinja. Ukoliko se primenjuju životinjama, može biti upotrebljena oralna gavaža.
Kompozicije
[0144] Generalno, kompozicija pronalaska sadrži bakterije. U poželjnim primerima izvođenja pronalaska, kompozicija je formulisana kao liofilizovan oblik. Na primer, kompozicija pronalaska može biti sastavni deo granula ili želatinskih kapsula, na primer, tvrdih želatinskih kapsula koje sadrže bakterijski soj pronalaska.
[0145] Poželjno je da kompozicija pronalaska sadrži liofilizovane bakterije. Liofilizacija bakterija je dobro uspostavljena procedura i relevantne smernice su dostupne u, na primer, referencama [39], [], [41]].
[0146] Alternativno, kompozicija pronalaska može sadržavati živu, aktivnu bakterijsku kulturu.
[0147] U pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska nije bio inaktiviran, na primer, nije bio inaktiviran toplotom. U pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska nije bio ubijen, na primer, nije bio ubijen toplotom. U pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska nije bio oslabljen, na primer, nije bio oslabljen toplotom. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska nije bio ubijen, inaktiviran i/ili oslabljen. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska je živ. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska je vijabilan. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska je u stanju da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska je vijabilan i u stanju da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva.
[0148] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicija sadrži smešu živih bakterijskih sojeva i bakterijskih sojeva koji su ubijeni.
[0149] U poželjnim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska je inkapsulirana, da bi se omogućila isporuka bakterijskog soja u crevo. Inapsulacija štiti kompoziciju od razgradnje do isporuke na ciljno mesto, na primer, pucanjem pod dejstvom hemijskih ili fizičkih stimulusa poput pritiska, enzimske aktivnosti ili fizičkog razlaganja koje može biti pokrenuto promenama u pH. Može biti upotrebljen bilo koji od odgovarajućih postupak inkapsulacije. Tehnike inkapsulacije za primer obuhvataju zarobljavanje unutar porozne matrice, vezivanje ili adsorpciju na površinama čvrstih nosača, samoagregaciju flokulacijom ili agensima za umrežavanje, kao i mehaničko zadržavanje iza mikroporozne membrane ili mikrokapsule. Smernice za inkapsulaciju koje mogu biti korisne za pripremu kompozicija pronalaska su dostupne u, na primer, referencama [42] i [43].
[0150] Kompozicija može biti primenjena oralno i može biti u obliku tablete, kapsule ili praška. Inkapsulirani proizvodi su poželjniji, pošto su Megasphaera anaerobi. Ostali sastojci (kao što je, na primer, vitamin C) mogu biti uključeni kao agensi za uklanjanje kiseonika i prebiotski supstrati, da bi se poboljšala isporuka i / ili delimična ili potpuna kolonizacija i preživljavanje in vivo. Alternativno, probiotska kompozicija pronalaska može biti primenjena oralno, kao prehrambeni ili nutritivni proizvod, kao što je fermentisan mlečni proizvod na bazi mleka ili surutke, ili kao farmaceutski proizvod.
[0151] Kompozicija može biti formulisana kao probiotik.
[0152] Kompozicija pronalaska uključuje terapijski efektivnu količinu bakterijskog soja pronalaska. Terapijski efektivna količina bakterijskog soja je dovoljna da se ostvari blagotvorno dejstvo kod pacijenta. Terapijski efektivna količina bakterijskog soja može biti dovoljna da rezultat bude isporuka i / ili delimična ili potpuna kolonizacija creva pacijenta.
[0153] Pogodna dnevna doza bakterija, na primer, za odraslog čoveka, može biti od oko 1 x 10<3>do oko 1 x 10<11>jedinica formiranja kolonija (CFU); na primer, od oko 1 x 10<7>do oko 1 x 10<10>CFU; u drugom primeru od oko 1 x 10<6>do oko 1 x 10<10>CFU.
[0154] U određenim primerima izvođenja, kompozicija sadrži bakterijski soj u količini od oko 1 x 10<6>do oko 1 x 10<11>CFU/g, u odnosu na težinu kompozicije; na primer, od oko 1 x 10<8>do oko 1 x 10<10>CFU/g. Doza može biti, na primer, 1 g, 3g, 5g i 10g.
[0155] Uobičajeno je da se probiotik, kao što je kompozicija pronalaska, opciono kombinuje sa najmanje jednim pogodnim prebiotskim jedinjenjem. Prebiotsko jedinjenje je obično nesvarljivi ugljeni hidrat, kao što je oligo- ili polisaharid, ili šećerni alkohol, koji se ne razgrađuje ili apsorbuje u gornjem delu digestivnog trakta. Poznati prebiotici obuhvataju komercijalne proizvode kao što su inulin i transgalakto-oligosaharidi.
[0156] U određenim primerima izvođenja, probiotska kompozicija predmetnog pronalaska obuhvata prebiotsko jedinjenje u količini od oko 1 do oko 30 težinskih%, u odnosu na ukupnu težinsku kompoziciju (npr. od 5 do 20 težinskih%). Ugljeni hidrati mogu biti izabrani iz grupe koja se sastoji od: frukto-oligosaharida (ili FOS), frukto-oligosaharida kratkog lanca, inulina, izomalt-oligosaharida, pektina, ksilo-oligosaharida (ili XOS), hitozan-oligosaharida (ili COS), beta-glukana, modifikovane gume arabike i rezistentnih skrobova, polidekstroze, D-tagatoze, vlakana akacije, rogača, ovsa i citrusnih vlakna. Prema jednom aspektu, prebiotici su frukto-oligosaharidi kratkog lanca (radi jednostavnosti, ovde su u nastavku teksta prikazani kao FOS-c.c); navedeni FOS-c.c. nisu svarljivi ugljeni hidrati i generalno se dobijaju prevođenjem šećera repe, uključujući molekul saharoze za koji su vezana tri molekula glukoze.
[0157] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska se upotrebljavaju u kombinaciji sa drugim terapijskim jedinjenjem za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnog poremećaja. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska se primenjuju sa dodacima ishrani koji modulišu neuroprotekciju ili neuroproliferaciju. U poželjnim primerima izvođenja, dodaci ishrani sadrže ili se sastoje od nutritivnih vitamina. U određenim primerima izvođenja, vitamini su vitamin B6, magnezijum, dimetilglicin (vitamin B16) i vitamin C. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska se primenjuju u kombinaciji sa drugim probiotikom.
[0158] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u pojačavanju dejstva drugog agensa na neurodegenerativno oboljenje. Imunomodulatorni efekti kompozicija pronalaska mogu učiniti mozak podložnijim konvencionalnim terapijama kao što su terapije Levodopom, agonistima dopamina, MAO-B inhibitorima, COMT inhibitorima, antagonistima glutamata ili antiholinergicima, koji predstavljaju sekundarne agense za primer koji se primenjuju u kombinaciji (sekvencijalno ili istovremeno) sa kompozicijama pronalaska.
[0159] Kompozicije pronalaska mogu sadržavati farmaceutski prihvatljive eksipijese ili nosače. Primeri takvih pogodnih eksipijenasa se mogu naći u referenci [44]. Prihvatljivi nosači ili razblaživači za terapijsku upotrebu su dobro poznati u farmaceutskoj struci i opisani su, na primer, u referenci [45]. Primeri pogodnih nosača obuhvataju laktozu, skrob, glukozu, metil celulozu, magnezijum stearat, manitol, sorbitol i slično. Primeri pogodnih razblaživača obuhvataju etanol, glicerol i vodu. Odabir farmaceutskog nosača, eksipijensa ili razblaživača može biti odabran imajući u vidu predviđeni način primene i standardnu farmaceutsku praksu. Farmaceutske kompozicije mogu sadržavati, ili im može biti kao dodatak, nosač, eksipijens ili razblaživač tipa bilo kog od vezujućeg agensa (vezujućih agenasa), lubrikanta (lubrikanata), resuspendujućeg agensa (agenasa), agens (agenasa) za resuspendovanje, agens (agenasa) za solubilizaciju. Primeri pogodnih povezujućih agenasa obuhvataju skrob, želatin, prirodne šećere kao što su glukoza, anhidrovana laktoza, laktoza sa dobrim protokom, beta-laktoza, zaslađivači iz kukuruza, prirodne i sintetske gume, kao što su guma akacije, tragakant ili natrijum alginat, karboksimetil celuloza i polietilen glikol. Primeri pogodnih lubrikanata obuhvataju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i slično. U farmaceutskoj kompoziciji mogu biti obezbeđeni i konzervansi, stabilizatori, boje, pa čak i arome. Primeri konzervansa obuhvataju natrijum benzoat, sorbinsku kiselinu i estre p-hidroksibenzoeve kiseline. Mogu biti upotrebljeni i antioksidansi i agensi za resuspendovanje.
[0160] Kompozicije pronalaska mogu biti formulisane kao prehrambeni proizvod. Na primer, prehrambeni proizvod može obezbeđivati nutritivnu korist pored terapijskog efekta pronalaska, kao što je to slučaj sa dodatkom ishrani. Slično tome, prehrambeni proizvod može biti formulisan tako da se poboljša ukus kompozicije pronalaska ili da bi se kompozicija učinila privlačnijom za konzumiranje time što je sličnija uobičajenom prehrambenom proizvodu nego farmaceutskoj kompoziciji. U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska je formulisana kao proizvod na bazi mleka. Izraz „proizvod na bazi mleka“ označava bilo koji tečni ili polučvrsti proizvod na bazi mleka ili surutke, koji je sa različitim sadržajem masti. Proizvod na bazi mleka može biti, na primer, kravlje mleko, kozje mleko, ovčje mleko, obrano mleko, punomasno mleko, mleko rekombinovano iz mleka u prahu i surutka koja nije prerađena na bilo koji način, ili to može biti prerađeni proizvod poput jogurta, usirenog mleka, surutke, kiselog mleka, punomasnog kiselog mleka, pavlake ili ostalih proizvoda koji se dobijaju kišeljenjem mleka. Druga važna grupa obuhvata pića na bazi mleka, kao što su to napitci od surutke, fermentisana mleka, kondenzovana mleka, mleka za odojčad ili bebe; aromatizovana mleka, sladoled; i hrana koja sadrži mleko, poput slatkiša.
[0161] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva roda Megasphaera i ne sadrže bakterije iz bilo kog drugog roda, ili su to kompozicije koje sadrže samo minimalne ili biološki nerelevantne količine bakterija iz drugih rodova. Tako, u pojedinim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva roda Megasphaera i koja ne sadrži bakterije iz bilo kog drugog roda, ili koja sadrži samo minimalne ili biološki nerelevantne količine bakterija iz drugih rodova, za upotrebu u terapiji.
[0162] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Megasphaera massiliensis i ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste, ili sadrže samo minimalne ili biološki nerelevantne količine bakterija drugih vrsta. Tako, u pojedinim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Megasphaera massiliensis, a koja ne sadrži bakterije bilo koje druge vrste, ili koja sadrži samo samo minimalne ili biološki nerelevantne količine bakterija iz druge vrste, za upotrebu u terapiji.
[0163] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Megasphaera massiliensis i ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste Megasphaera, ili su to kopozicije koje sadrže samo minimalne ili biološki nerelevantne količine bakterija iz drugih vrsta Megasphaera. Tako, u pojedinim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Megasphaera massiliensis i koja ne sadrži bakterije bilo koje druge od vrsta Megasphaera, ili koja sadrži samo minimalne ili biološki nerelevantne količine bakterija iz drugih vrsta Megasphaera, za upotrebu u terapiji.
[0164] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sadrže jedan bakterijski soj ili vrstu i ne sadrže nijedan drugi bakterijski soj ili vrstu. Takve kompozicije mogu sadržavati samo minimalne ili biološki nerelevantne količine bakterija iz drugih sojeva ili vrsta bakterija. Takve kompozicije mogu predstavljati kulturu koja suštinski oslobođena od drugih vrsta organizama.
[0165] U pojedinim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži jedan bakterijski soj roda Megasphaera i koja ne sadrži bakterije iz bilo kog drugog soja, ili koja sadrži samo minimalne ili biološki nerelevantne količine bakterija iz drugog soja, za upotrebu u terapiji.
[0166] U pojedinim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži jedan bakterijski soj vrste Megasphaera massiliensis i koja ne sadrži bakterije iz bilo kog drugog soja, ili koja sadrži samo minimalne ili biološki nerelevantne količine bakterija iz drugog soja za upotrebu u terapiji.
[0167] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sadrže više od jednog bakterijskog soja. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sadrže više od jednog soja unutar iste vrste (npr. više od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 ili 45 sojeva) i, opciono, ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sadrže manje od 50 sojeva unutar iste vrste (npr. manje od 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5 , 4 ili 3 soja) i, opciono, ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sadrže 1-40, 1-30, 1-20, 1-19, 1-18, 1-15, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-50, 2-40, 2-30, 2-20, 2-15, 2-10, 2-5, 6-30, 6-15, 16-25 ili 31-50 sojeva unutar iste vrste i, opciono, ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste. Pronalazak obuhvata bilo koju kombinaciju prethodno navedenog.
[0168] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicija sadrži mikrobni konzorcijum. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, kompozicija sadrži bakterijski soj Megasphaera kao deo mikrobnog konzorcijuma. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, Megasphaera bakterijski soj je prisutan u kombinaciji sa jednim ili sa više (npr. najmanje 2, 3, 4, 5, 10, 15 ili 20) drugih bakterijskih sojeva iz drugih rodova sa kojima može da živi u simbiozi u crevima in vivo. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, kompozicija sadrži bakterijski soj Megasphaera u kombinaciji sa bakterijskim sojem iz drugog roda. U pojedinim primerima izvođenja, mikrobni konzorcijum sadrži dva ili više bakterijskih sojeva koji su dobijeni iz uzorka fecesa jednog organizma, npr. čoveka. U pojedinim primerima izvođenja, mikrobni konzorcijum se ne može naći zajedno u prirodi. Na primer, u pojedinim primerima izvođenja, mikrobni konzorcijum sadrži bakterijske sojeve koji su dobijeni iz uzoraka fecesa najmanje dva različita organizma. U pojedinim primerima izvođenja, dva različita organizma su iz iste vrste, npr. dva različita čoveka. U pojedinim primerima izvođenja, dva različita organizma su dete i odrasli čovek. U pojedinim primerima izvođenja, dva različita organizma su čovek i sisar različit od čoveka.
[0169] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska dodatno sadrži bakterijski soj koga karakterišu ista bezbednost i terapijska efikasnost kao soj MRx0029, ali koji nije MRx0029, ili soj koji nije Megasphaera massiliensis.
[0170] U pojedinim primerima izvođenja u kojima kompozicija pronalaska sadrži više od jednog bakterijskog soja, vrste ili roda, pojedinačni sojevi, vrste ili rodovi bakterija mogu biti za odvojenu, istovremenu ili sekvencijalnu primenu. Na primer, kompozicija može sadržavati sve od više od jednog bakterijskog soja, vrste ili roda, ili se bakterijski sojevi, vrste ili rodovi mogu skladištiti odvojeno i zatim primenjivati odvojeno, istovremeno ili sekvencijalno. U pojedinim primerima izvođenja, više od jednog bakterijskog soja, vrste ili roda se skladišite odvojeno, ali se mešaju pre upotrebe.
[0171] U pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku se dobija iz fecesa odraslih ljudi. U pojedinim primerima izvođenja u kojima kompozicija pronalaska sadrži više od jednog bakterijskog soja, svi bakterijski sojevi su dobijeni iz fecesa odraslih ljudi ili, ukoliko su prisutni drugi sojevi bakterija, oni su prisutni u minimalnim količinama. Bakterije mogu biti kultivisane nakon što su dobijene iz fecesa odraslih ljudi i zatim upotrebljene u kompoziciji pronalaska.
[0172] Kao što je prethodno pomenuto, u pojedinim primerima izvođenja, jedan ili više od Megasphaera bakterijskih sojeva je/su jedini terapijski aktivni agens u kompoziciji pronalaska. U pojedinim primerima izvođenja, bakterijski soj(evi) u kompoziciji je/su jedini terapijski aktivni agens u kompoziciji pronalaska.
[0173] Kompozicije za upotrebu prema pronalasku mogu ili ne moraju zahtevati odobrenje za stavljanje u promet.
[0174] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, gde je navedeni bakterijski soj liofilizovan. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je navedeni bakterijski soj osušen raspršivanjem. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, gde je bakterijski soj liofilizovan ili osušen raspršivanjem i gde je živ. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, gde je bakterijski soj liofilizovan ili osušen raspršivanjem i gde je vijabilan. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, gde je bakterijski soj liofilizovan ili osušen raspršivanjem i pri čemu je sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva. U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, gde je bakterijski soj liofilizovan ili osušen raspršivanjem i pri čemu je vijabilan i sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva.
[0175] U pojedinim slučajevima, liofilizovan bakterijski soj se rekonstituiše pre primene. U pojedinim slučajevima, rekonstitucija se vrši upotrebom razblaživača koji je ovde opisan.
[0176] Kompozicije pronalaska mogu sadržavati farmaceutski prihvatljive ekscipijense, razblaživače ili nosače.
[0177] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj pronalaska; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili razblaživač; pri čemu je bakterijski soj u količini koja je dovoljna za lečenje neurodegenerativnog poremećaja kada se primenjuje subjektu kome je to potrebno.
[0178] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj pronalaska; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili razblaživač; pri čemu je bakterijski soj u količini koja je dovoljna za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnog poremećaja.
[0179] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, gde je količina bakterijskog soja od oko 1 × 10<3>do oko 1 × 10<11>jedinica formiranja kolonija po gramu u odnosu na težinu kompozicije.
[0180] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija primenjuje u dozi od 1 g, 3 g, 5 g ili 10 g.
[0181] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija primenjuje postupkom izabranim iz grupe koja se sastoji od oralne, rektalna, supkuatne, nazalne, bukalne i sublingvalne primene.
[0182] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži nosač izabran iz grupe koja se sastoji od laktoze, skroba, glukoze, metil celuloze, magnezijum stearata, manitola i sorbitola.
[0183] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži razblaživač izabran iz grupe koja se sastoji od etanola, glicerola i vode.
[0184] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži eksipijens izabran iz grupe koja se sastoji od skroba, želatina, glukoze, anhidrovane laktoze, laktoze sa dobrim protokom, beta-laktoze, zaslađivača iz kukuruza, gume akacije, tragakanta, natrijum alginata, karboksimetil celuloze, polietilen glikola, natrijum oleata, natrijum stearata, magnezijum stearata, natrijum benzoata, natrijum acetata i natrijum hlorida.
[0185] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži najmanje jedno od konzervansa, antioksidansa i stabilizatora.
[0186] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži konzervans izabran iz grupe koja se sastoji od natrijum benzoata, sorbinske kiseline i esatra p-hidroksibenzoeve kiseline.
[0187] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, gde je navedeni bakterijski soj liofilizovan.
[0188] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu kada se kompozicija čuva u hermetički zatvorenoj posudi na oko 4°C ili oko 25°C i kada se posuda postavi u atmosferu sa relativnom vlažnošću od 50%, ostaje najmanje 80% bakterijskog soja, što se meri u jedinicama formiranja kolonija, nakon perioda od najmanje oko: 1 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1,5 godine, 2 godine, 2,5 godine ili 3 godine.
[0189] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska je obezbeđena u hermetički zatvorenoj posudi koja sadrži kompoziciju, kao što je ovde opisano. U pojedinim primerima izvođenja, hermetički zatvorena posuda je kesica ili boca. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska je obezbeđena u špricu koji sadrži kompoziciju koja je ovde opisana.
[0190] Kompozicija predmetnog pronalaska može, u pojedinim primerima izvođenja, biti obezbeđena kao farmaceutska formulacija. Na primer, kompozicija može biti obezbeđena kao tableta ili kapsula. U pojedinim primerima izvođenja, kapsula je želatinska kapsula ("gel-kapsula").
[0191] U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska se primenjuju oralno. Oralna primena može uključivati gutanje, tako da jedinjenje ulazi u gastrointestinalni trakt, i/ili bukalnu, lingvalnu ili sublinvalnu primenu, kojom jedinjenje iz usta direktno ulazi u krvotok.
[0192] Farmaceutske formulacije pogodne za oralnu primenu obuhvataju čvrste čepove, čvrste mikročestice, polučvrste i tečne (uključujući višefazne ili dispergovane sisteme) kao što su tablete; meke ili tvrde kapsule koje sadrže višestruke ili nanočestice, tečnosti (npr. vodene rastvore), emulzije ili praškove; pastile (uključujući one ispunjene tečnošću); formulacije za žvakanje; gelove; dozne oblike koji se brzo disperguju; filmove; ovule; sprejeve; i bukalne/mukoadhezivne flastere.
[0193] U pojedinim primerima izvođenja, farmaceutska formulacija je enterička formulacija, tj. gastrorezistentna formulacija (na primer, otporna na pH želuca), a koja je pogodna za isporuku kompozicije pronalaska u creva oralnom primenom. Enteričke formulacije mogu biti posebno korisne kada su bakterije ili druge komponente kompozicije osetljive na kiseline, npr. sklone degradaciji u uslovima u želucu.
[0194] U pojedinim primerima izvođenja, enterička formulacija sadrži enteričku oblogu. U pojedinim primerima izvođenja, formulacija je dozni oblik koji je sa enteričkim oblogom. Na primer, formulacija može biti enterički obložena tableta ili enterički obložena kapsula ili slično. Enterička obloga može biti konvencionalna enterička obloga, na primer, uobičajena obloga za tabletu, kapsulu ili slično, za oralnu primenu. Formulacija može sadržavati oblogu u vidu filma, na primer, tanak sloj enteričkog polimera, npr. polimera koji je nerastvorljiv u kiselini.
[0195] U pojedinim primerima izvođenja, enterička formulacija je suštinski enterička, na primer, gastrorezistentna i bez potrebe za enteričkom oblogom. Prema tome, u pojedinim primerima izvođenja, formulacija je enterička formulacija koja ne sadrži enteričku oblogu. U pojedinim primerima izvođenja, formulacija je kapsula napravljena od termoželatinizirajućeg materijala. U pojedinim primerima izvođenja, termoželatinizirajući materijal je celulozni materijal, kao što je metilceluloza, hidroksimetilceluloza ili hidroksipropilmetilceluloza (HPMC). U pojedinim primerima izvođenja, kapsula sadrži omotač koji ne sadrži polimer koji obrazuje film. U pojedinim primerima izvođenja, kapsula sadrži omotač, a omotač sadrži hidroksipropilmetilcelulozu i ne sadrži bilo koji polimer koji obrazuje film (npr. pogledati [46]). U pojedinim primerima izvođenja, formulacija je intrinzična enterička kapsula (na primer, Vcaps® od kompanije Capsugel).
[0196] U pojedinim primerima izvođenja, formulacija je meka kapsula. Meke kapsule su kapsule koje mogu, zahvaljujući dodavanju omekšivača, kao što su, na primer, glicerol, sorbitol, maltitol i polietilen glikoli, a koji su prisutni u omotaču kapsule, imati određenu elastičnost i mekoću. Meke kapsule se mogu proizvoditi, na primer, na bazi želatina ili skroba. Meke kapsule na bazi želatina su komercijalno dostupne kod raznih dobavljača. U zavisnosti od načina primene, kao što je, na primer, oralna ili rektalna primena, meke kapsule mogu biti raznih oblika, odnosno mogu biti, na primer, okrugle, ovalne, duguljaste ili oblika torpeda. Meke kapsule mogu biti proizvedene konvencionalnim postupcima, kao što su, na primer, Scherer-ov postupak, Accogel postupak ili postupak obrazovanja kapljica ili duvanja.
Postupci kultivisanja
[0197] Bakterijski sojevi za upotrebu u predmetnom pronalasku mogu biti gajeni upotrebom standardnih mikrobioloških tehnika, kao što je to detaljno opisano u, na primer, referencama [47], [] i [49].
[0198] Čvrsti ili tečni medijum koji se upotrebljava za kulturu može biti YCFA agar ili YCFA medijum. YCFA medijum može sadržavati (na 100 ml, približne vrednosti): Casitone (1,0 g), ekstrakt kvasca (0,25 g), NaHCO3(0,4 g), cistein (0,1 g), K2HPO4(0,045 g), KH2PO4(0,045 g), NaCl (0,09 g), (NH4)2SO4(0,09 g), MgSO4· 7H2O (0,009 g), CaCl2(0,009 g), resazurin (0,1 mg), hemin (1 mg), biotin (1 µg), kobalamin (1 µg), p-aminobenzoevu kiselinu (3 µg), folnu kiselinu (5 µg) i piridoksamin (15 µg).
Bakterijski sojevi za upotrebu u kompozicijama vakcina
[0199] Pronalazači su utvrdili da su bakterijski sojevi pronalaska korisni za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja. Navedeno je verovatno rezultat efekta koji bakterijski sojevi pronalaska imaju na imuni sistem domaćina. Prema tome, kompozicije pronalaska mogu takođe biti korisne za sprečavanje neurodegenerativnih poremećaja, kada se primenjuju kao kompozicije u vidu vakcina. U određenim takvim primerima izvođenja, bakterijski sojevi pronalaska mogu biti ubijeni, inaktivirani ili oslabljeni. U određenim takvim primerima izvođenja, kompozicije mogu sadržavati adjuvans za vakcine. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za primenu injekcijom, kao što je supkutana injekcija.
Opšte napomene
[0200] U praksi predmetnog pronalaska će biti upotrebljeni, ukoliko nije drugačije naznačeno, uobičajeni postupci hemije, biohemije, molekularne biologije, imunologije i farmakologije, koji su poznati u oblasti tehnike. Takve tehnike su u potpunosti objašnjene u literaturi. Pogledati, npr. reference [50] i [51, 57], itd.
[0201] Termin "sadrži" obuhvata "uključujući", kao i "sastoji se", npr. kompozicija „koja sadrži“ X se može sastojati isključivo od X ili može sadržavati i nešto dodatno, npr. sadržavati X Y.
[0202] Pojam „oko“ u odnosu na numeričku vrednost x je opcion i označava, na primer, x±10%.
[0203] Reč „suštinski“ ne isključuje „potpuno“, npr. kompozicija koja je „suštinski oslobođena“ od Y može biti potpuno oslobođena od Y. Tamo gde je to potrebno, reč „suštinski“ može biti izostavljena iz definicije pronalaska.
[0204] Upućivanje na procenat identičnosti sekvenci između dve nukleotidne sekvence podrazumeva da je, kada se iste poravnaju, taj procenat nukleotida isti pri poređenju dve sekvence. Ovakvo poravnavanje i procenat homologije ili identičnosti sekvenci može biti određen upotrebom kompjuterskih programa koji su poznati u oblasti tehnike, na primer, onih koji su opisani u odeljku 7.7.18 iz ref. [58]. Poželjno je da se poravnavanje vrši Smith-Waterman-ovim algoritam za pretraživanje homologije, upotrebom afinantne pretrage razmaka (praznine, engl. gap), sa ograničenjem za početak praznine od 12 i ograničenjem dužine praznine od 2, kao i u okviru BLOSUM matrice od 62. Smith-Waterman-ov algoritam za pretraživanje je opisan u ref. [59].
[0205] Ukoliko nije izričito navedeno, proces ili postupak koji sadrži brojne korake, može sadržati dodatne korake na početku ili na kraju postupka, ili može sadržavati dodatne korake za intervencije. Takođe, koraci se mogu kombinovati, izostavljati ili izvoditi po alternativnom redosledu, ukoliko je tako pogodno.
[0206] Ovde su opisani razni primeri izvođenja pronalaska. Potrebno je ipak napomenuti da se karakteristike koje su specifično navedene u svakom primeru izvođenja, mogu kombinovati sa drugim specifično opisanim karakteristikama, da bi se obezbedili dalji primeri izvođenja. Preciznije, primeri izvođenja koji su ovde istaknti kao pogodni, uobičajeni ili poželjni, mogu se kombinovati jedni sa drugima (osim kada se međusobno isključuju).
NAČINI IZVOĐENJA PRONALASKA
Primer 1 - Efikasnost bakterijskih inokuluma da deluju kao neuroprotektivni agens
Kratak pregled
[0207] Neuroblastomske ćelije su tretirane kompozicijama koje su sadržavale bakterijske sojeve prema pronalasku. Upotrebljene SH-SY5Y neuroblastomske ćelije proizvode dopamin i dobro su uspostavljen in vitro model za proučavanje neurodegenerativnih oboljenja. Uočena je sposobnost bakterijskih sojeva da povećaju neuroproliferaciju. Neuroblastomske ćelije su takođe tretirane dopaminergičkim neurotoksinom 1-metil-4-fenilpiridinijumom (MPP), koji indukuje trajne simptome Parkinsonove bolesti u neuroblastomskim ćelijama. Ispitivana je sposobnost bakterijskih sojeva da deluju kao neuroprotektanti u odnosu na MPP.
Materijal i postupci
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRx0029; Parabacteroides distasonis MRX0005
Ćelijska linija
[0208] SH-SY5Y neuroblastomske ćelije su nabavljene od ECCACC (kat. br. 94030304) i gajene su u MEM-u (Sigma Aldrich, kat. br. M2279) u koji je bila dodata hranjive smeša F-12 Ham (Sigma Aldrich, kat. br. N4888).
Postupak
[0209] Kada su se SH-SY5Y neuroblastomske ćelije umnožile, zasejane su u mikrotitar ploče sa 96 bunarića, u gustini od 11.000 ćelija po bunariću, pa su inkubirane 2 dana. Ćelije su zatim prenete u medijum za diferencijaciju (koji je sadržavao FBS u koncentraciji od 1%) sa 10 uM retinoičnom kiselinom (Sigma Aldrich, kat. br. R2625-100MG). Medijum za diferencijaciju je menjan svakog drugog dana i nakon 7 dana diferencijacije, ćelije su sakupljene. Ćelije su prethodno tretirane sa ili bez MPP-a (Sigma Aldrich, kat. br. D048-1G) tokom 8 sati. Nakon toga, ćelije su tretirane sa 10% bakterijskim supernatantom i inkubirane su preko noći. Vijabilnost ćelija je merena upotrebom CCK-8 reagensa (Sigma Aldrich, Kit za brojanje ćelija - 8, kat. br. 96992-3000TESTS-F) i očitavanjem apsorbancije na talasnoj dužini od 450 nm.
Rezultati
[0210] Rezultati ovih eksperimenata su prikazani na Slici 1. Tretiranje neuroblastomskih ćelija sa MRx0029 ili MRX0005 je dovelo do povećanja u proliferaciji neurona. Neuroblastomske ćelije koje su bile tretirane sa MPP-om zajedno sa bakterijskim sojem, imale su povećanu ćelijsku vijabilnost u poređenju sa ćelijama tretiranim samo sa MPP-om (koje su imale smanjenu vijabilnost). Ovi podaci pokazuju da bakterijski soj može delovati kao neuroprotektivni agens. Protektivni efekat je bio veći kod ćelija tretiranih sa MRX0029, kod kojih je pošteda vijabilnosti bila veća nego kod ćelija pozitivne kontrole tretirane Kvercetinom. Navedeni podaci pokazuju da bakterijski sojevi mogu delovati kao neuroprotektivni agensi.
Primer 2 - Efikasnost bakterijskih inokuluma da smanje sekreciju IL-6.
Kratak pregled
[0211] Aktivacija proinflamatornih citokina je povezana sa oštećenjem neurona u neurodegenerativnom oboljenju. Lipopolisaharid (LPS) je poznati stimulator proinflamatornog citokina IL-6. Ćelije humanog glioblastomskog astrocitoma su tretirane kompozicijama koje sadrže bakterijske sojeve pronalaska u kombinaciji sa LPS-om, da bi se ispitala njihova sposobnost sa modulišu nivoe IL-6.
Materijal i postupci
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRx0029
Ćelijska linija
[0212] MG U373 je humani glioblastomski astrocitom izveden iz malignog tumora i nabavljen je od kompanije Sigma-Aldrich (kat. br. 08061901-1VL). MG U373 ćelije humanog glioblastomskog astrocitoma su gajene u MEM-u (Sigma Aldrich, kat. br. M-2279) u koji su bili dodati 10% FBS, 1% Pen/Strep, 4mM L-Glutamin, IX MEM rastvor neesencijalnih aminokiselina i IX natrijum piruvat.
Postupak
[0213] Kada su se MG U373 ćelije umnožile, zasejane su u mikrotitar sa 24 bunarića, u gustini od 100,000 ćelija/bunariću. Ćelije su zatim tretirane sa samo LPS-om (lug/mL) ili i sa 10% bakterijskim supernatantom iz MRx0029, tokom 24 sata. Uvedena je i kontrola u kojoj su ćelije inkubirane u medijumu bez tretmana. Nakon toga, prikupljeni su supernatanti bez ćelija i centrifugirani su na 10 000 g tokom 3 min, na 4°C. IL-6 je meren upotrebom humanog IL-6 ELISA kompleta kompanije Peprotech (kat. br.900-K16), prema uputstvima proizvođača.
Rezultati
[0214] Rezultati ovih eksperimenata su prikazani na Slici 2. Tretiranje neuroblastomskih ćelija sa LPS-om i bakterijskim sojem je dovelo do smanjenja nivoa izlučenog IL-6.
Primer 2b - Efikasnost bakterijskih inokuluma da modulišu sekreciju IL-8.
Kratak pregled
[0215] Kako neuroinflamacija ima ključnu ulogu u neurodegenerativnim oboljenjama i kako je pokazano da IL-8 ima pozitivne efekte na nervni sistem, ispitivan je efekat kompozicija koje sadrže bakterijske sojeve prema pronalasku i LPS, na aktivaciju IL-8. Ćelije humanog glioblastomskog astrocitoma su tretirane kompozicijama koje sadrže bakterijske sojeve prema pronalasku u kombinaciji sa LPS-om, da bi se utvrdila njihova sposobnost da modulišu nivoe IL-8.
Materijal i postupci
Bakterijski sojevi
Megasphaera massiliensis MRX0029; Parabacteroides distasonis MRX0005
Ćelijska linija
[0216] MG U373 je humani glioblastomski astrocitom izveden iz malignog tumora i nabavljen je od kompanije Sigma-Aldrich (kat. br. 08061901-1VL). MG U373 ćelije humanog glioblastomskog astrocitoma su gajene u MEM-u (Sigma Aldrich, kat. br. M-2279) u koji su bili dodati 10% FBS, 1% Pen/Strep, 4mM L-Glutamin, IX MEM rastvor neesencijalnih aminokiselina i IX natrijum piruvat.
Postupak
[0217] Kada su se MG U373 ćelije umnožile, zasejane su u mikrotitar sa 24 bunarića, u gustini od 100,000 ćelija/bunariću. Ćelije su zatim tretirane sa samo LPS-om (lug/mL) ili i sa 10% bakterijskim supernatantom iz MRx0029, tokom 24 sata. Nakon toga, supernatanti bez ćelija su sakupljeni i centrifugirani na na 10000 g tokom 3 min, na 4°C. IL-8 je meren upotrebom humanog IL-8 ELISA kompleta kompanije Peprotech (kat. br.900-K18), prema uputstvu proizvođača.
Rezultati
[0218] Rezultati ovih eksperimenata su prikazani na Slici 3. Tretiranje neuroblastomskih ćelija sa bakterijskim sojevima je dovelo do povećanja sekrecije IL-8 nezavisno od prisustva LPS-a.
Primer 2C - Efikasnost bakterijskih inokuluma da smanje inflamaciju indukovanu sa α-sinukleinom.
Kratak pregled
[0219] Neuroinflamacija ima ključnu ulogu u Parkinsonovoj bolesti i pokazano je da α-sinuklein indukuje neuroinflamaciju in vivo. Ispitana je stoga sposobnost bakterijskih sojeva pronalaska da inhibiraju neuroinflamaciju indukovanu sa α-sinukleinom. Kokultura humanih glioblastomskih astrocitomskih ćelija i neuroblastomskih ćelija je bila izložena α-sinukleinu divljeg tipa i mutiranim izofomama sa E46K i A53T, nakon čega je tretirana kompozicijama koje su sadržavale bakterijske sojeve pronalaska. Ispitana je zatim sposobnost bakterijskih sojeva da inhibiraju sekreciju IL-6 koja je indukovana sa α-sinukleinom.
Materijal i postupci
Bakterijski sojevi
Megasphaera massiliensis MRX0029; Parabacteroides distasonis MRX0005
Ćelijska linija
[0220] MG U373 je humani glioblastomski astrocitom izveden iz malignog tumora i nabavljen je od kompanije Sigma-Aldrich (kat. br. 08061901-1VL). MG U373 ćelije humanog glioblastomskog astrocitoma su gajene u MEM-u (Sigma Aldrich, kat. br. M-2279) u koji su bili dodati 10% FBS, 1% Pen/Strep, 4mM L-Glutamin, IX MEM rastvor neesencijalnih aminokiselina i IX natrijum piruvat.
[0221] SH-SY5Y je ćelijska linija humanog neurobastoma izvedena iz malignog neuroblastoma i može biti nabavljena od kompanije Sigma-Aldrich (kat. br.94030304-1VL). Ćelije su gajene u 50% MEM-u i 50% mešavini hranljivih sastojaka, F-12 Ham medijumu, u koji su bili dodati 2mM L-glutamin, 10% toplotom inaktiviran FBS, kao i 100 U/ml penicilina, 100 µg/ml streptomicina. Ćelije su zasejane u mikrotitarske ploče sa 96 bunarića u medijumu za rast, u gustini od 11000 ćelija po bunariću, pa su stavljene u inkubator. Nakon 2 dana, medijumi su zamenjeni sa medijumom za diferencijaciju (medijumom za rast koji je sadržavao 1% FBS) koji je sadržavao i 10 μM retinoičnu kiselinu. Medijum za diferencijaciju je menjan svaki drugi dan, pa su ćelije upotrebljene nakon 7 dana diferencijacije.
Postupak
[0222] SHSY5Y ćelije su zasejane u ploče sa 12 bunarića, u gustini od 50000 ćelija/bunariću. Ćelije su dalje gajene u 50% MEM i 50% mešavini hranljivih sastojaka, F-12 Ham medijumu, u koji su bili dodati 2mM L-glutamin, 10% toplotom inaktiviran FBS, kao i 100 U/ml penicilina, 100 µg/ml streptomicina. Ćelije su zasejane u mikrotitarske ploče sa 96 bunarića u medijumu za rast, u gustini od 11000 ćelija po bunariću, pa su stavljene u inkubator. Nakon 2 dana, medijumi su zamenjeni sa medijumom za diferencijaciju (medijumom za rast koji je sadržavao 1% FBS), a koji je sadržavao i 10 μM retinoične kiseline. Medijum za diferencijaciju je menjan svaki drugi dan, pa su ćelije upotrebljene nakon 7 dana diferencijacije. U373 su zasejane u transparentne mikrotitarske ploče sa 12 bunarića (0,4 μm poliesterska membrana, Costar), u gustini od 50000 ćelija/bunariću, nakon čega su inkubirane tokom 72 sata. Ćelije su zatim kokultivisane tokom 24 sata, a pre tretmana u medijumu za diferencijaciju (medijumu za rast koji je sadržavao 1% FBS bez retinoične kiseline).
[0223] Ćelije su potom tretirane sa 25 μg/ml α-sinukleina (Wt, A53T, E46K) u prisustvu ili odsustvu 10% bakterijskog supernatanta, tokom 48 sati. Supernatanti bez ćelija su prikupljeni, centrifugirani na 10000 g tokom 3 min na 4°C, nakon čega su alikvotirani i čuvani na -80 OC. Humani IL-6 i IL-8 su mereni kao što je prethodno opisano.
Rezultati
[0224] Rezultati ovih eksperimenata su prikazani na Slici 4. Tretman ćelija sa α-sinukleinom divljeg tipa i sa mutiranim izoformama E46K i A53T, indukovao je umerenu sekreciju IL-6 (Slika 4A). Izlučivanje IL-6 koje je bilo indukovano sa α-syn, bilo je i inhibirano u ćelijama tretiranim sa bakterijskim sojevima (Slika 4A). Smanjenje sekrecije IL-6 je bilo najveće prilikom primene MRX0029.
Primer 3 - Efikasnost bakterijskih inokuluma da smanje aktivaciju NFκB
Kratak pregled
[0225] Aktivacija NFκB promotora dovodi do proizvodnje proinflamatornih citokina uključujući IL-1β, IL-1α, IL-18, TNFα i IL-6. NFκB promotor može biti aktiviran sa α-sinukleinom i LPS-om, odnosno stimulisanjem TLR4 liganda. Pokazano je da mutacije u α-sinukleinu, kao što je α-sinuklein A53T, mogu biti uključene u familijarnu Parkinsonovu bolest. Tretman neuronskih ćelija sa LPS-om oponaša Parkinsonovu bolest prouzrokovanu sredinskim faktorima. Ispitana je stoga sposobnost kompozicija koje sadrže bakterijske sojeve prema pronalasku da inhibiraju aktivaciju NFκB promotora.
Materijal i postupci
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRx0029
Ćelijska linija
[0226] Humane reporterske ćelie sa TLR4 obeležene Hek plavim su nabavljene od kompanije InvivoGen (kat. br. hkb-htlr4). Humane reporterske ćelie sa TLR4 obeležene Hek plavim su gajene u DMEM-u sa visokim sadržajem glukoze (Sigma Aldrich, kat. br. D-6171) u koji su bili dodati 10% FBS, 1% Pen/Strep, 4mM L-Glut, Normocin i IX selekcioni rastvor za HEK plavo.
Postupak
[0227] Kada su humane Hek plave ćelije umnožene, zasejane su u mikrotitarske ploče sa 96 bunarića, u gustini od 25.000 ćelija po bunariću, u 4 replikata. Jedan set ćelija je tretiran samo sa α-sinukleinom A53T (lug/mL) ili i sa 10% bakterijskim supernatantom iz MRx0029, tokom 22 sata. Drugi set ćelija je tretiran samo sa LPS-om (10 ng/ml, iz Salmonella enterica serotipa Typhimurium, Sigma Aldrich, kat. br. L6143) ili i sa 10% bakterijskim supernatantom iz MR029, tokom 22 sata. Ćelije su zatim spuštene i po 20 ul supernatanta je pomešano sa 200 ul Quanti Blue reagensa (InvivoGen, kat. br. rep-qb2), nakon čega je smeša inkubirana 2 sata i zatim je očitana apsorbancija na 655 nm.
Rezultati
[0228] Rezultati ovih eksperimenata su prikazani na Slikama 5 i 6. Slika 5 pokazuje da MRx0029 inhibira aktivaciju NFκB promotora od strane α-sinukleina. Slika 6 pokazuje da je aktivacije NFκB promotora sa LPS-om inhibirana sa MRx0029.
Primer 4 - Efikasnost bakterijskih inokuluma da izmene antioksidativni kapacitet
Kratak pregled
[0229] Sposobnost kompozicija koje sadrže bakterijske sojeve prema pronalasku da izmene antioksidativni kapacitet. Antioksidativni kapacitet bakterijskog soja je utvrđen upotrebom dobro poznatog ABTS testa (sa 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonskom kiselinom).
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRx0029
Postupak
[0230] Bakterijske ćelije (10<6>ili više) su prikupljene i centrifugirane. Ćelije su zatim resuspendovane u puferu za analizu (upotrebom zapremine koja je bila tri puta veća od taloga). Suspenzija je sonikovana na ledu tokom 5 minuta, pa je centrifugirana na 12000 x g tokom 10 minuta. Supernatant je uklonjen i izmeren upotrebom ABTS kompleta za analizu, a koga proizvodi kompanija Sigma Aldrich (kod CS0790), prema uputstvima proizvođača.
Rezultati
[0231] Rezultati ovih eksperimenata su prikazani na Slici 7. Slika 7 pokazuje da MRx0029 ima antioksidativni kapacitet od približno 2 mM u poređenju sa Troloksom.
Primer 5 - Efikasnost bakterijskih inokuluma da izmene nivoe lipidne peroksidacije
Kratak pregled
[0232] Ispitana je sposobnost kompozicija koje su sadržavale bakterijske sojeve prema pronalasku da menjaju nivoe peroksidacije lipida. Za merenje nusproizvoda lipidne peroksidacije je upotrebljena analiza tiobarbiturnih reaktivnih supstanci (TBAR).
Materijal i postupci
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRx0029
Postupak
[0233] Bakterijske ćelije (10<6>ili više) su prikupljene i centrifugirane, pa je urađen korak ispiranja sa izotoničnim fiziološkim rastvorom pre nego što je talog resuspendovan u puferu za ispitivanje sa kalijum hloridom. Suspenzija je sonikovana na ledu tokom 10 minuta, nakon čega je centrifugirana na 10 000 x g tokom 10 minuta. Supernatant je uklonjen, pa je određen nivo peroksidacije lipida upotrebom analize tiobarbiturnih reaktivnih supstanci.
Rezultati
[0234] Rezultati eksperimenata su prikazani na Slici 8. Slika 8 pokazuje da je MRx029 sposoban da inhibira lipidnu peroksidaciju za približno 20%, što je veći antioksidativni kapacitet u odnosu na pozitivnu kontrolu, tretiranu sa butilovanim hidroksitoluenom (1% w/v).
Primer 6 - Efikasnost bakterijskih inokuluma na aktivnost histonske deacetilaze
Kratak pregled
[0235] Ispitana je i sposobnost kompozicija koje sadrže bakterijske sojeve prema pronalasku da menjaju aktivnost histonske deacetilaze. Pokazano je da je moguće da je disregulacija histonske deacetilaze uključena u patogenezu povezanu sa neurodegenerativnim oboljenjama koja se javljaju sa starenjem.
Materijal i postupci
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRx0029
Ćelijska linija
[0236] Upotrebljena je ćelijska linija HT-29, pošto je u njoj prisutna histonska deacetilaza.
Postupak
[0237] Supernatanti bez ćelija, u okviru stacionarne faze bakterijskih kultura, izolovani su centrifugiranjem i potom filtriranjem kroz filter od 0,22 uM. HT-29 ćelije su upotrebljene 3 dana nakon postizanja konfluentnosti, a oborene su u 1 mL DTS-a, 24 sata pre početka eksperimenta. HT-29 ćelijama su zatim izlagane 10%-tnom supernatantu oslobođenom od ćelija koji je bio u DTS-u, pa su ostavljane da se inkubiraju tokom 48 sati. Nukleazni proteini su potom ekstrahovani upotrebom Kompleta za ekstrakciju nukleaza kompanije Sigma Aldrich, pa su uzorci brzo zamrznuti pre merenja aktivnosti HDAC. Aktivnost HDAC je ispitana fluorometrijski, upotrebom kompleta kompanije Sigma Aldrich (Velika Britanija).
Rezultati
[0238] Rezultati eksperimenata su prikazani na Slici 9. Slika 9 pokazuje da je MRx0029 u stanju da smanji nivoe aktivnosti histonske deacetilaze.
Primer 7 - Nivo proizvodnje indola u bakterijama
Kratak pregled
[0239] Ispitana je dalje sposobnost bakterija pronalaska da proizvode indol. Za indol se pretpostavlja da je uključen u ublažavanje inflamacije i oksidativnog stresa.
Materijal i postupci
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRx0029
[0240] ATCC 11775 je bakterijski referentni soj za koji je poznato da proizvodi indol.
Postupak
[0241] Intaktne bakterijske ćelije u stacionarnoj fazi su inkubirane sa 6 mM triptofanom tokom 48 sati. Bakterijske vrste koje poseduju enzim triptofanazu koristiće triptofan kao supstrat za proizvodnju indola. Nakon perioda inkubacije od 48 sati, supernatant je uklonjen i zatim je dodat Kovačev reagens za kvantifikaciju indola. Standardi, osnovni rastvori i reagensi su pripremani upotrebom standardizovanih postupaka koji su potvrđeni unutar interne laboratorije.
Rezultati
[0242] Rezultati eksperimenata su prikazani na Slici 10. Slika 10 pokazuje da je MRx0029 sa kapacitetom da proizvodi indol iz triptofana, u koncentracijama od približno 0,2 mM.
Primer 8 - Nivo proizvodnje kinurenina u bakterijama
Kratak pregled
[0243] Dalje je ispitana sposobnost bakterija pronalaska da proizvode kinurenin. Disregulacija kinureninskog puta može dovesti do aktivacije imunskog sistema i akumulacije potencijalno neurotoksičnih jedinjenja. Izmene u metabolizmu kinurenina mogu biti uključene u razvoj Parkinsonove bolesti.
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRx0029
[0244] DSM 17136 je soj Bacteroides copricola za koga je poznato da proizvodi kinurenin.
Postupak
[0245] Supernatanti bez ćelija iz stacionarnih faza bakterijskih kultura su izolovani centrifugiranjem i zatim su profiltrirani kroz 0,22 uM filter, pa zamrznuti do upotrebe. Standardi kinurenina, osnovni rastvori i reagensi su pripremani upotrebom standardizovanih postupaka koji su potvrđeni unutar interne laboratorije. Uzorci su naime tretirani sa trihlorosirćetnom kiselinom, nakon čega su centrifugirani na 10000xg tokom 10 minuta, na 4°C. Supernatant je dalje prikupljen i raspodeljen u ploču sa 96 bunarića. Za detekciju kinurenina je upotrebljen Erlihov reagens koji je dodavan u odnosu od 1:1.
Rezultati
[0246] Rezultati eksperimenata su prikazani na Slici 11. Slika 11 pokazuje da je MRx0029 sa kapacitetom da proizvodi kinurenin u koncentraciji od približno 40 µM.
Primer 9 - Nivoi dopamina, DOPAC i HVA u strijatumu MPTP miševa tretiranih bakterijama
[0247] Parkinsonova bolest je čest neurodegenerativni poremećaj čije kardinalne kliničke karakteristike podrazumevaju tremor, sporost pokreta, ukočenost i posturalnu nestabilnost. Ovi simptomi se pre svega mogu pripisati degeneraciji dopaminergičkih neurona u substancija nigra pars compacta i posledičnom gubitku njihovih projekcionih nervnih vlakana u strijatumu [60]. Miševi tretirani sa MPTP-om (1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridinom) selektivno gube značajan broj nigrostrijatalnih dopaminergičkih neurona [61]. Gubitak dopaminergičnih ćelija u substanciji nigra koji je indukovan sa MPTP oponaša kliničko stanje u Parkinsonovoj bolesti i stoga je koristan model za ispitivanje anti-parkinsonskih lekova.
[0248] Cilj ove studije je bio da se utvrde efekti MRX0029 anaerobnih bakterija upotrebom miševa sa MPTP lezijama.
[0249] 48 mužjaka miševa je raspoređeno u 4 različite grupe tretmana (grupe A, B, E i I, sa n=12 životinja u svakoj grupi). Grupe za lečenje su prikazane ispod, u Tabeli 1, a vremenski tok projekta je naveden u glavnim crtama u nastavku teksta.
ana
tretpe 1:Grula beTa
[0250] Grupe A, B, E i I su tretirane svakodnevno tokom 18 dana, oralnom gavažom, bilo sa bakterijama (MRx0029 - grupa E) ili sa nosačem (PBS). Oralni tretman je započet 14 dana pre lezije sa MPTP-om. Životinje grupe I su primale svakodnevno nosač (PBS), p.o. (per oral) tretmanom, nakon čega im je i.p. (intraperitonealno) injeciran referentnim lek, 30 minuta pre i 90 minuta nakon prve primene MPTP-a na Dan 0. Primenjena zapremina za p.o. i treman nosačem je iznosila 200 µl po mišu. Bakterijski soj za grupu E je uziman iz osnovnog rastvora u glicerolu (gly). Za oralni tretman, gavaže za primenu su čuvane u vajlicama koje su sadržavale 70% etanol i koje su ispirane pre i nakon svake upotrebe, sa destilovanom vodom. Za svaku tretiranu grupu je postojala posebna sonda za gavažu i vajlica za etanol i desetilovanu vodu. Cevi i sonde za gavažu nisu menjane među grupama. Neposredno pre tretmana, svaki špric je ispran sa N2.
[0251] Na Dan 0, životinjama iz grupa B, E i I je 4 puta injeciran MPTP (20 mg/kg telesne težine (b.w.), sa intervalom između tretmana od 2 sata). Jedna grupu životinja (A) je bila za prividne (sham) lezije i njoj je i.p. primenjen nosač za MPTP (0,9% fiziološki rastvor). Primenjena zapremina je iznosila 10 µl po g telesne težine. Merenje telesne težine životinja je vršeno pre tretmana sa MPTP-om, da bi se odredila doza za svaku od životinja shodno njenoj stvarnoj telesnoj težini. Nakon toga, životinje su p.o. svakodnevno primale tretman.
Za tretman grupe E (MRx0029)
[0252]
1.) Iz zamrzivača na -80°C, uzet je jedan osnovni rastvor u glicerolu, pa je smešten pod anaerobne uslove (anaerobna tegla sa kesicom) na 37°C, da bi se otopio (navedeno je trajalo 30-40 minuta).
2.) Potpuno odmrznut osnovni rastvor u glicerolu je centrifugiran na 6000 x g tokom 10 minuta, na sobnoj temperaturi.
3.) Supernatant je odbačen bez ometanja taloga (npr. upotrebom pipete).
4.) Dodato je 4,22 ml sterilnog, prethodno zagrejanog (37°C) 1 x PBS-a i rastvor je blago promešan upotrebom pipete.
5.) Miševima je primenjena doza od 200 µL rastvora bakterija. Životinjama su doze primenjivane u roku od 15 minuta nakon resuspendovanja taloga sa PBS-om.
Formulacija za grupu tretiranu referentnim lekom
[0253]
[0254] Odgovarajuća količina 7-Nitroindazola je rastvorena u ulju kikirikija, da bi se postigla finalna koncentracija od 50 mg/kg.
Materijali i postupci
Životinje
[0255]
Specifično rukovanje životinjama i randomizacija
[0256] Rukavice su menjane između svake grupe tretmana i prskane su sa 70% rastvorom etanola između svakog kaveza iz iste grupe, da bi se rizik od kontaminacije smanjio na minimum kad god se rukovalo životinjama (npr. pri tretmanu, ispitivanju ponašanja, čišćenju i uzimanju uzoraka tkiva).
[0257] Tretman je bio nasumičan i menjan je svakodnevno, da bi se sprečilo da ista grupa bude tretirana svakog dana u isto vreme. Životinje su randomizovane i po kavezima prilikom uzorkovanja tkiva.
Uzorkovanje i obrada tkiva
[0258] Životinje iz svih grupa su četvrtog dana žrtvovane i izolovan je njihov mozak. Miševima je stoga primenjivana duboka anestezija, injeciranjem Pentobarbitala (600 mg/kg).
[0259] Krv (oko 500 µl) je prikupljena punkcijom srca. Miševi su zatim transkardijalno perfundovani sa 0,9% fiziološkim rastvorom, nakon čega je mozak izolovan i urađena je hemisekcija. Leva hemisfera je podeljena na strijatalno tkivo (za HPLC), tkivo supstancije nigre i na ostatak mozga, koji su izmereni i odmah zamrznuti, pa dalje čuvani na -80°C. Instrumenti i površine koji su bili u kontaktu sa životinjama su morali biti očišćeni sa 70% etanolom pre seciranja sledeće životinje.
Biohemijska analiza nivoa dopamina, DOPAC i HVA u strijatumu upotrebom HPLC postupka
[0260] Uzorci strijatuma (n=6 iz svake tretirane grupe; ukupno 24 uzorka) su pomešani, u odnosu od 1:10 (w/v), sa 0,2 M perhlornom kiselinom koja je sadržavala 100 µM EDTA-2Na, nakon čega su homogenizovani na 0°C u staklenom homogenizeru sa tučkom. Nakon stajanja od 30 minuta na ledu, homogenati su centrifugirani na 10000 o/min u trajanju od 10 minuta, u centrifugi sa hlađenjem tipa Biofuge Fresco (Heraeus Instruments, Nemačka). Supernatanti su zatim pažljivo aspirirani i pomešani sa 0,4 M Na-acetatnim puferom, pH 3, u odnosu od 1:2 (v/v), nakon čega su profiltrirani upotrebom filtera za centrifugiranje sa porama od 0,22 µm (Merck Millipore, Nemačka), tokom 4 min na 14000 g, na 4°C. Filtrati su čuvani na -80°C do HPLC analize.
HPLC analiza
[0261] Koncentracije DA, DOPAC i HVA u uzorcima strijatuma su utvrđene tečnom hromatografijom na koloni sa elektrohemijskom detekcijom [62; 63]. Upotrebljen je HPLC sistem (HTEC-500, Eicom Corp., Kjoto, Japan) sa bespulsnom pumpom za mikroinjeciranje, degaserom i amperometrijskim detektorom opremljenim elektrodom od staklastog ugljenika koja je funkcionisala na 0,45 V u odnosu na Ag/AgCl ref. elektrodu. Uzorci su injecirani upotrebom CMA/200 injektora za uzorke u mikrolitarskim zapreminama sa hlađenjem (CMA/Microdialysis, Stockholm, Švedska). Hromatogrami su snimani i integrisani upotrebom kompjuterizovanog sistema za prikupljanje podataka (DataApex, Prag, Češka). DA, DOPAC i HVA su razdvajani na 150 x 2,1 i.d. mm koloni (CA5-ODS, Eicom Corp., Kjoto, Japan). Mobilna faza se sastojala od 0,1 M fosfatnog pufera pH 6,0; 0,13 mM EDTA, 2,3 mM natrijum 1-oktansulfonata i 20% (v/v) metanola. Granica detekcije (odnos signala i šuma = 3) za DA je procenjena na 0,5 fmol za 15 µl (0,03 nM) rastvora koji je injeciran na kolonu.
Rezultati
[0262] Životinje su dobro podnosile primenu bakterijskih sojeva. Na dan lezije sa MPTP-om, a ukoliko je bilo potrebno i dan kasnije, upotrebljavano je crveno svetlo da bi se životinje grejale. Ukoliko su životinje bile u lošem stanju (bilo im je hladno, bile su dehidrirane, nisu se normalno ponašale), bila im je obezbeđena vlažna hrana i primenjen im je supkutano tretman sa fiziološki rastvorom, ukoliko je to bilo potrebno.
[0263] Za analizu nivoa dopamina, DOPAC i HVA je upotrebljeno tkivo strijatuma iz 6 životinja po grupi tretmana. Podaci su analizirani upotrebom Kruskal-Wallis-ovog testa praćenog Dunn-ovim post hoc testom za višestruka poređenja ili sa Jednofaktorskom analizom varijase praćenom Bonferroni-jevim post hoc testom (A u odnosu na sve(*), B u odnosu na sve, I u odnosu na sve (#)). */# = p<0,05; ** = p<0,01; *** = p<0,001.
[0264] Zdrave životinje iz grupe A su imale visoke nivoe dopamina, DOPAC-a i HVA, dok je tretman sa MPTP-om u grupi B to smanjio, dok je kod pozitivne kontrole (grupa I) bila prisutna obnobljena proizvodnje u određenom stepenu (Slika 12). Životinje iz grupe I su bile sa tendenciom da imaju više nivoe dopamina u odnosu na grupu koja je bila tretirana bakterijama, kao i u odnosu na grupu B. Nivoi DOPAC (metabolita dopamina) su uglavnom bili značajno niži kod životinja iz B grupe u poređenju sa nivoima DOPAC kod nelediranih životinja iz grupe A (Slika 12B).
[0265] Značajno je da je utvrđeno da tretman sa MRx0029 (grupa E) dovodi do oporavka proizvodnje dopamina i DOPAC (Slike 12A i 12B, tim redom). Tretman sa MRx0029 može stoga biti koristan za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja.
Primer 10 - Efikasnost bakterija da izmene izrastaje neurita
Kratak pregled
[0266] Izrastanje neurita je važan proces za razvoj veza između neurona. Sposobnost bakterijskih sojeva i organskih kiselina da indukuju izrastanje neurita je stoga ispitivano merenjem transkripcionih nivoa proteina povezanog sa mikrotubulama, MAP2, koji predstavlja specifičan marker diferencijacije neurona.
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRX0029.
Postupak
[0267] SHSY5Y su zasejane u Petrijeve posude od 10 cm, u gustini od 2x10<6>ćelije. Nakon 24 sata, ćelije su tretirane u medijumu za diferencijaciju (medijum za rast koji je sadržavao 1% FBS bez RA) sa 10% bakterijskim supernatantom ili YCFA+, 10uM RA, 200uM heksanskom kiselinom ili 200uM valproičnom kiselinom, u trajanju od 17 sati. Nakon toga, snimljene su reprezentativne slike, upotrebom faznokontrastnog EVOS XL core mikroskopa, uz uvećanje od 40X/0,65. Ćelije su zatim prikupljene i izolovana je ukupna RNK upotrebom RNeasy mini kompleta (Qiagen), prema protokolu proizvođača. cDNK su sintetisane upotrebom High capacity cDNA kompleta za reverznu transkripciju (Applied Biosystems). Genska ekspresija je merena upotrebom qPCR postupka. Kao interna kontrola je upotrebljen GAPDH. Stepen promene je izračunavan prema 2<(-ΔΔct)>postupku.
Imunofluorescencija i konfokalna mikroskopija
[0268] Po 5x10<4>ćelija je zasejano u svaki bunarić pločice sa 8 komora (Marienfeld Laboratory Glassware), nakon čega su ćelije inkubirane preko noći, pa su tretirane sa 10% bakterijskim supernatantom tokom 24 sata. Da bi se postigla diferencijacija, ćelije su tretirane sa 10 nM retinoičnom kiselinom tokom 5 dana, pre tretmana sa bakterijskim supernatantom. Ćelije su zatim fiksirane sa 4% paraformaldehidom u PBS-u tokom 20 minuta, na sobnoj temperaturi (ST). Fiksirane ćelije su isprane sa PBS-om, pa su permeabilizovane sa 1% Triton X-100 u PBS-u, tokom 10 minuta. Nakon pranja sa PBS-om, pločice su inkubirane sa puferom za blokiranje (4% BSA/PBS) tokom 1 sata na sobnoj temperaturi, a pre dodavanja anti-MAP2 antitela (sc-74421, Santa Cruz Biotechnology Inc) razblaženog u 1% BSA/PBS, koje je dalje inkubirano tokom 12 sati na 4°C. Pločice su potom isprane dva puta sa PBS-om, nakon čega je sledila inkubacija sa anti-mišjim antitelom konjugovanim sa Alexa Flour 488 (Molecular Probes Inc) i Faloidinom konjugovanim sa Alexa Flour 594 bojom (ab176757, Abcam) tokom 1 sata, na ST. Nakon 3X pranja sa PBS-om, pročice su montirane upotrebom Vectorshield medijuma koji je sadržavao DAPI (Sigma, Aldrich). Pločice su pregledane upotrebom Axioscope mikroskopa kompanije Zeiss, koji je bio opremljen sa 63x/1,2 W Korr objektivnom i setom filtera koji je bio pogodan za detekciju upotrebljenih fluorohroma. Vremena ekspozicije za digitalna snimanja slika sa imuno-obeležnim MAP-2 su podešavana manuelno i držana su konstantnima da bi se omogućilo poređenje između različitih bunarića i tretmana. Vremena izlaganja za faloidin (F-aktin) i DAPI su varirala shodno poziciji vidnog polja. Nasumično odabrana vidna polja su snimana upotrebom kamere tipa Qlmaging, koja je bila pod kontrolom kompjuterskog programa Image Pro Plus. Slike su sačuvane u TIF formatu i otvarane su u programu Adobe Photoshop CC 2015.1.2, gde su urađena i preklapanja i spajanja slika za MAP-2, DAPI i Faloidin. Odabrane su zatim reprezentativne slike, da bi se ilustrovale razlike u zastupljenosti i lokaciji ispitivanih proteina.
Rezultati
[0269] Rezultati su prikazani na Slici 13. Slika 13A prikazuje reprezentativne mikrografije nediferenciranih SHSY-5Y ćelija koje su bile inkubirane sa svakom od kiselina i sa svakim od bakterijskih supernatanata. Tretman ćelija sa MRX0029 je indukovao fenotip sličan fenotipu neurona, pokazujući naime slične osobine sa ćelijama koje su bile tretirane sa retinoičnom kiselinom (koja je upotrebljavana za terminalnu diferencijaciju neuroblastomskih ćelija), odnosno da su ćelijska tela bila veća i piramidalnog oblika, sa neuritima i nastavcima koji su se granali i obrazovali mrežu sa susednim ćelijama. Slika 13B pokazuje da MRx0029 značajno povećava MAP2 u nediferenciranim neuroblastomskim ćelijama. Bojenje faloidinom (agensom koji se vezuje za aktinski citoskelet) je dodatno dokazalo drugačiji raspored citoskeletne strukture u ćelijama tretiranim sa MRx0029, što je dalje podržalo i hipotezu o diferencijaciji neurona prilikom tretmana sa MRx0029 (Sl.13B).
Primer 11 - Efikasnost bakterijskih inokuluma da smanje nivoe oksidacije u ćelijama
Uvod
[0270] Stvaranje reaktivnih vrsta kiseonika doprinosi patologiji neurodegenerativnih oboljenja. Ispitana je stoga i sposobnost bakterijskih sojeva da zaštite diferencirane SHSY-5Y i U373 ćelije od reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) koje su generisane tretmanom sa terc-butil hidrogen peroksidom (TBHP).
Materijal i postupci
Bakterijski soj
Megasphaera massiliensis MRX0029
Postupak
[0271] SHSY-5Y ćelije su zasejane u crnu ploču sa 96 bunarića i sa ravnim dnom, u gustini od 5000 ćelija/bunariću, pa su stavljene u inkubator sa CO2. Nakon 24 sata, medijum je zamenjen medijumom za diferencijaciju (medijum za rast koji je sadržavao 1% FBS) u kom je bila prisutna 10 uM retinoična kiselina. Medijum za diferencijaciju je menjan svaki drugi dan. Desetog dana, medijum za diferencijaciju je uklonjen, pa su ćelije isprane sa prethodno zagrejanim PBS-om i bojene sa 10 uM DCFDA molekulskom probom, tokom 20 minuta, u medijumu za rast koji je sadržavao 1% FBS. Ćelije su zatim ponovo isprane sa prethodno zagrejanim PBS-om i tokom 2 sata su tretirane sa 100 uM TBHP u prisustvu ili odsustvu 10% bakterijskog supernatanta. Intenzitet fluorescencije je meren upotrebom TECAN čitača ploča, na Ex/Em 485/530 nm.
Rezultati
[0272] Rezultati eksperimenata su prikazani na Slici 14. Slika 14b prikazuje da je MRX0029 bio u stanju da inhibira proizvodnju ROS u diferenciranim SHSY-5Y neuroblastomskim ćelijama. MRX0029 nije imao efekta na stvaranje ROS-a u U373 ćelijama astroglioblastoma (Slika 14a). Navedeno pokazuje da je ovaj aspekt antioksidativnog dejstva specifičan za neurone.
Primer 12 - neuroprotekcija
[0273] SHSY-5Y ćelije diferencirane sa RA, tretirane su sa MPP+, aktivnim metabolitom MPTP-a, hemikalijom koja se široko koristi za imitiranje pojedinih karakteristika PD patologije in vitro i in vivo. Ćelijska vijabilnost je merana kao stopa respiracije u mitohondrijama (Slika 15). I MRx0005 i MRx0029 su ispoljili značajne efekte i sami po sebi pospešili povećanje metaboličke aktivnosti mitohondrija u SHSY-5Y ćelijama. Za MRX0029 je pokazano da je u potpunosti bio protektivan u odnosu na MPP+, pošto je očuvao ćelijsku vijabilnost tako da je bila na gotovo istom nivou kao kod netretiranih ćelija i viša nego u pozitivnoj kontroli tretiranoj kvercitinom. Protektivna aktivnost MRx0005 je iznosila oko 20% u poređenju sa uzorkom tretiranim sa YCFA-MPP+, što je približno isto onome što je uočeno kod pozitivne kontrole tretirane kvercitinom (Slika 15).
Primer 13 - Dalja analiza mehanizma inhibicije deacetilacije histona
Uvod
[0274] Mikrobiota creva, sa svojom ogromnom raznolikošću i metaboličkim kapacitetom, predstavlja ogroman metabolički rezervoar za proizvodnju velikog broja molekula koji su sa potencijalom da utiču na aktivnost HDAC. Nekoliko studija je ispitivalo inhibitornu aktivnost metabolita izvedenih iz mikroba, i drugačijih od butirata, na HDAC, a za koje je pokazano da inhibiraju HDAC i da su povezani sa poboljšanjem motorne funkcije u Hantingtonovoj bolesti [64]. Pronalazači su stoga pokušali da utvrde koji su metaboliti odgovorni za inhibiciju HDAC, kao i da dalje razjasne mehanizme kojima se ova inhibicija postiže.
Materijal i postupci
Kultura bakterija i prikupljanje supernatanta bez ćelija
[0275] Čiste kulture bakterija su gajene anaerobno, u YCFA tečnoj podlozi, dok nisu dostigle stacionarnu fazu rasta. Kulture su zatim centrifugirane na 5000 x g tokom 5 minuta, nakon čega je supernatant bez ćelija (CFS) profiltriran upotrebom 0,2 μM filtera (Millipore, Velika Britanija). Alikvoti CFL od 1 ml su čuvani na -80°C do upotrebe. Natrijum-butirat, heksanska i valerinska kiselina su nabavljeni od kompanije Sigme Aldrich (Velika Britanija), a suspenzije su pripremane u YCFA tečnom medijumu.
Kvantifikacija SCFA i MCFA u bakterijskim supernatantima
[0276] Masne kiseline kratkog lanca (SCFA) i masne kiseline srednjeg lanca (MCFA) iz bakterijskih supernatanata su analizirane i kvantifikovane od strane kompanije MS Omics APS, na način koji sledi. Uzorci su zakišeljeni upotrebom hidrohloridne kiseline, pa su dodati interni standardi obeleženi deuterijumom. Svi uzorci su analizirani po nasumičnom redosledu. Analiza je vršena upotrebom kolone visoke polarnosti (Zebron™ ZB-FFAP, GC Cap. Dimenzije kolone 30 m x 0,25 mm x 0,25 µm) koja je bila postavljena u GC sistem (7890B, Agilent) kupovan sa kvadripolnim detektorom (59977B, Agilent). Sistemom je upravljano posredstvom ChemStation kontrolnog sistema (Agilent). Sirovi podaci su konvertovani u netCDF format, upotrebom Chemstation sistema (Agilent), pre nego što su podaci unošeni i obrađivani u Matlab R2014b programu (Mathworks, Inc.), upotrebom kompjuterskog programa PARADISe koji je opisan u [65].
Analiza specifične aktivnosti HDAC
[0277] Specifična aktivnost inhibicije HDAC je analizirana za HDAC1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, upotrebom fluorogenih kompleta za analizu, za svaki od tipova HDAC (BPS Bioscience, CA). Analize su rađene prema uputstvima proizvođača i svaki uzorak je ispitivan u replikatima. Supernatanti bez ćelija su razblaživani u odnosu od 1 prema 10, pa su izlagani specifičnim HDAC proteinima koji su bili obezbeđeni u kompletu, da bi se zadržala doslednost između postupaka.
Rezultati
Metaboliti komensalnih mikroba creva koji inhibiraju histonsku deacetilazu su buterna i valerinska kiselina
[0278] MRx0029, čiji je supernatant karakterisala snažna inhibicija HDAC i u celokupnim HT29 ćelijama i u lizatama HT29 ćelija, proizveo je valerinsku kiselinu i heksansku kiselinu u umerenim koncentracijama od 5,08 mM, odnosno 1,60 mM, tim redom (Slika 16A i C).
[0279] Da bi se istražilo koji su metaboliti odgovorni za inhibiciju HDAC koja je indukovana sojem, izmerene su različite koncentracije heksanske kiseline, valerinske kiseline i natrijum butirata, pa je ispitana njihova inhibitorna aktivnost na HDAC u celokupnim HT-29 ćelijama, kao i u lizatu HT-29 ćelija. Rezultati na Slici 16B pokazuju značajnu (P<0,05) inhibiciju aktivnosti HDAC sa natrijum butiratom na celokupnim ćelijama, kao i na ćelijskom lizatu, dok heksanska kiselina nije pokazala značajnu inhibitornu aktivnost. Valerijska kiselina je inhibirala ukupnu HDAC aktivnost (* (p<0,05), ** (p<0,005), *** (P<0,001), **** (p<0,0001)).
Ciljni molekuli HDAC klase I su ispitivani upotrebom potentnih inhibitora ukupne HDAC.
[0280] Istražen je zatim i specifičan profil inhibicije HDAC za soj bakterija koji je ispitivan. Urađene su specifične analize inhibicije HDAC (BPS Bioscience, CA) za HDAC klase I i klase II. Sposobnost bakterijskog soja da inhibira HDAC enzime je upoređivana sa aktivnostima butirata, heksanske i valerinske kiseline. Naši rezultati pokazuju da je MRX0029 veoma potentan inhibitor HDAC enzima klase 1 (HDAC 1, 2 i 3). Inhibicija HDAC klase II nije bila toliko značajna (podaci nisu prikazani).
Diskusija
[0281] Soj sa inhibitornom aktivnošću za HDAC je proizveo značajne količine valerinske kiseline i heksanske kiseline, kao i značajne količine natrijum butirata (Slika 16C). Kada su ispitivani kao čiste supstance, valerinska kiselina i natrijum butirat su doveli do značajne inhibicije HDAC (p<0,0001).
[0282] Zanimljivo je da rezultati za specifičnu aktivnost HDAC pokazuju da je ispitivan soj moćan inhibitor HDAC klase I, a posebno HDAC2 (Slike 17 i 18). HDAC klase I (HDAC1, 2, 3 i 8) se nalaze u jedru i široko su eksprimirani u nekoliko tipova ljudskih ćelija. HDAC 1-3 su sa homologijom koja je veća od 50%, ali su sa jasno različitim strukturama i ćelijskim funkcijama [66]. One su prvenstveno uključene u preživljavanje ćelija, njihovu proliferaciju i diferencijaciju i stoga njihova inhibicija može biti korisna za širok spektar oboljenja [67]; [68]; [69]; [70]; [71].
Primer 14 - Nivo sekreciju BDNF-a u SHSY-5Y ćelijama
Uvod
[0283] Neurotrofni faktor poreklom iz mozga (BDNF) je molekul koji je u mozgu široko prisutan i koji je povezan sa razvićem nervnog sistema, neuroprotekcijom i neuroregeneracijom. BDNF ne štiti samo od neurodegeneracije, već i od mentalnih poremećaja poput depresije i anksioznosti, a koji su prilično česti kod pacijenata sa dijagnozom PD ili AD.
Postupci
[0284] SH-SY5-SY su zasejane u ploče sa 24 bunarića, u gustini od 60,000 ćelija/bunariću, pa su ploče smeštene u inkubator. Nakon 24 sata, medijum je zamenjen medijumom za diferencijaciju (medijum za rast koji je sadržavao 1% FBS) sa 10 μM retinoičnom kiselinom. Medijum za diferencijaciju je menjan svakog drugog dan, a ćelije su dalje upotrebljavane nakon 10 dana diferencijacije. U svrhu tretmana, najpre je uklonjen medijum za diferencijaciju i isti je zamenjen sa 450ul kompletnog medijuma za rast, nakon čega je u bunariće za tretman dodato 50 μl bakterijskog SN ili YCFA+ koji je služio kao negativna kontrola.
Rezultati
[0285] Rezultati su prikazani na Slici 19, koja pokazuje da primena MRX0029 u kombinaciji sa retinoičnom kiselinom povećava sekreciju BDNF-a iz diferenciranih neuroblastomskih ćelija. Kompozicije koje sadrže komensalne bakterije i organske kiseline mogu stoga biti korisne u terapiji.
Primer 15 - Proizvodnja metabolita - metaboliti u mozgu
Uvod
[0286] Metaboliti prisutni u bakterijskim supernatantima mogu direktno uticati na odgovor domaćina na oksidativni stres, kao i na komunikaciju između ćelija i na neuroprotekciju. Metaboliti koji imaju ključnu ulogu u neurološkim procesima su mereni tokom ex vivo skrininga u moždanom tkivu miševa koji su hranjeni sa MRx0005 i MRx0029.
Postupci
Životinje
[0287] Odrasli mužjaci BALBc miševa (Envigo, Velika Britanija) su gajeni u grupama, u uslovima sa ciklusom svetlost-mrak od 12 sati; standardni briketi za ishranu glodara i voda su bili dostupni ad libitum. Svi eksperimenti su izvođeni u skladu sa Evropskim smernicama i nakon odobrenja Etičkog komiteta za eksperimente na životinjama Univerzitetu u Korku. Životinje su na početku eksperimenta bile stare 8 nedelja.
Dizajn studije
[0288] Životinjama je bilo dozvoljeno da se prilagode na sobu u kojoj su gajene tokom jedne nedelje nakon pristizanja u vivarijum. Dobijale su zatim žive bioterapeutike u dozi od 1 X 10<9>CFU tokom 6 uzastopnih dana, oralnom gavažom (doza u 200 µL), između 15:00 i 17:00 h. Sedmog dana, životinje su dekapitovane i izolovana su tkiva za eksperimente.
Prikupljanje tkiva
[0289] Životinje su žrtvovane na nasumičan način u pogledu uslova tretiranja i testiranja; uzorkovanje je vršeno između 9:00 i 13:00 h. Krv iz trupa je prikupljana u epruvete sa kalijum EDTA (etilen diamin tetrasirćetnom kiselinom), koje su dalje centrifugirane tokom 15 minuta na 4000 g. Izdvojena je zatim plazma koja je čuvana na -80°C radi dalje analize. Mozak je brzo izvađen i disekovan, nakon čega je svaki region mozga trenutno zamrznut na suvom ledu i dalje uskladišten na -80°C radi dalje analize. Izolovana je i slezina koja je odmah nakon uklanjanja obrađena za ex-vivo imunsku stimulaciju. Tkivo creva je montirano u Komore za ispitivanje propusnosti creva (isečeni su segmenti ileuma i debelog creva od 2-3 cm koji su bili najbliži cekumu, pa su upotrebljena tkiva koja su bila najdalje 1 cm od cekuma). Cekum je uklonjen, izmeren i sačuvan na -80°C za analizu SCFA.
Analiza monoamina
[0290] Koncentracija neurotransmitera je analizirana upotrebom HPLC postupka, na uzorcima iz moždanog stabla. Ukratko, tkivo moždanog stabla je sonikovano u 500 µl ohlađene mobilne faze u koju je kao interni standard spajkovanjem dodat 4 ng/40 µl N-metil 5-HT (Sigma Chemical Co., Velika Britanija). Mobilna faza je sadržavala 0,1 M limunsku kiselinu, 5,6 mM oktan-1-sulfonsku kiselinu (Sigma), 0,1 M natrijum dihidrogen fosfat, 0,01 mM EDTA (Alkem/Reagecon, Cork) i 9% (v/v) metanol (Alkem/Reagecon) i podešena joj je pH na 2,8 upotrebom 4 N natrijum hidroksida (Alkem/Reagecon). Homogenati su zatim centrifugirani na 4°C tokom 15 minuta, na 22000 × g, pa je po 40 µl supernatanta injecirano u HPLC sistem koji se sastojao od SCL 10-Avp sistemskog kontrolera, LECD 6A elektrohemijskog detektora (Shimadzu), LC-10AS pumpe, CTO-10A pećnice, SIL-10A autoinjektora (sa hlađenjem za uzorke koji je održavano na 40 C) i Gastorr degaserom sistema (ISS, Velika Britanija). Za razdvajanje je korišćena revezno-fazna kolona (Kinetex 2,6 u C18100 × 4,6 mm, Phenomenex) koja je održavana na 30°C (brzina protoka 0,9 ml/min). Radna elektroda od staklastog ugljenika u kombinaciji sa Ag/AgCl referentnom elektrodom (Shimdazu) radila je na 0,8 V, a generisani hromatogrami su analizirani upotrebom Class-VP 5 kompjuterskog programa (Shimadzu). Neurotransmiteri su identifikovani na osnovu njihovog karakterističnog vremena zadržavanja koje je utvrđivano injeciranjem standarda i njegovim propuštanjem u pravilnim razmacima tokom analize uzoraka.
Odnosi visina pikova analita u odnosu na interni standard su mereni i upoređivani sa standardnim injeciranjem. Rezultati su izraženi kao ng neurotransmitera po g težine svežeg tkiva.
Analiza metabolita
[0291] Za analizu metabolita GC postupkom, uzorci bakterijskih supernatanata su derivatizovani sa metil hloroformatom, upotrebom neznatno izmenjene verzije protokola koji je opisan u [72]. Svi uzorci su analizirani po nasumičnom redosledu. Analiza je rađena upotrebom GC instrumenta (7890B, Agilent), kupovanog sa kvadripolnim detektorom (59977B, Agilent). Sistemom je upravljano posredstvom ChemStation kontrolnog sistema (Agilent). Sirovi podaci su konvertovani u netCDF format, upotrebom Chemstation sistema (Agilent), pre nego što su podaci unošeni i obrađivani u Matlab R2014b programu (Mathworks, Inc.), upotrebom kompjuterskog programa PARADISe koji je opisan u [65].
[0292] Za analizu masnih kiselina, uzorci su zakišeljeni upotrebom hidrohloridne kiseline, pa su dodati interni standardi obeleženi deuterijumom. Svi uzorci su analizirani po nasumičnom redosledu. Analiza je vršena upotrebom kolone visoke polarnosti (Zebron™ ZB-FFAP, GC Cap. Dimenzije kolone 30 m x 0,25 mm x 0,25 µm) koja je bila postavljena u GC sistem (7890B, Agilent) kupovan sa kvadripolnim detektorom (59977B, Agilent). Sistemom je upravljano posredstvom ChemStation kontrolnog sistema (Agilent). Sirovi podaci su konvertovani u netCDF format, upotrebom Chemstation sistema (Agilent), pre nego što su podaci unošeni i obrađivani u Matlab R2014b programu (Mathworks, Inc.), upotrebom kompjuterskog programa PARADISe koji je opisan u [65].
Rezultati - proizvodnja neurotransmitera
[0293] Rezultati su prikazani na Slici 20, koja pokazuje da su u mozgu miševa hranjenih sa MRx0029 nivoi noradrenalina povećani (p=0,0507), što je bilo praćeno blagim porastom serotonina i 5-HIAA. Ovi podaci podržavaju analizu metabolita koja je navedena u nastavku teksta, što dalje ukazuje da je MRx00029 glavni proizvođač 4-hidroksifenilsirćetne kiseline, poznatog antioksidansa [73]. Još važnije, 4-hidroksifenilsirćetna kiselina je intermedijer u sintezi dopamina i norepinefrina i važan je bioaktivni molekul [74]. Zapravo, u PD se degenerativne promene šire i izvan dopaminergičnog sistema, utičući podjednako na serotonergički i noradrenergički sistem, što zauzvrat dovodi do smanjenog nivoa serotonina (5-hidroksitriptamina, 5-HT) i noradrenalina (norepinefrina) i u strijatalnim i strukturama izvan strijatuma [75]. L-DOPA uglavnom ciljano deluje na karakteristike PD koje su povezane sa dopaminom, ali ne utiče na pad i 5-HT i noradrenalina. Ovome se pridodaje i da što je duže trajanje lečenja sa L-DOPA, to je vidljiviji niz motornih i nemotornih komplikacija (npr. javljaju se diskinezija, psihijatrijski simptomi) [76]. Prema tome, navedeni podaci pokazuju da bakterije koje proizvode organske kiseline, kao što je to 4-hidroksifenilsirćetna kiselina, mogu biti korisne u terapiji, posebno u lečenju neurodegenerativnih oboljenja.
Rezultati - proizvodnja metabolita
[0294] Metaboliti prisutni u bakterijskim supernatantima mogu direktno uticati na reakciju domaćina na oksidativni stres, kao i na komunikaciju između ćelija i prevashodno na neuroprotekciju. Metaboliti su analizirani u supernatantu kultura MRX0029 i MRX0005, a rezultati su prikazani na Slici 21.
[0295] Nekoliko metabolita je pokazalo zapanjujuću razliku između dva analizirana soja. Koncentracija ćilibarne kiseline je bila posebno povišena u MRx0005. Zanimljivo je da je odnos uzorak/medijum za 4-hidroksifenilsirćetnenu kiselinu bio značajno veći u MRx0029 (Slika 21A).
[0296] Analiza masnih kiselina u supernatantima je otkrila zanimljivu dihotomiju u dva soja: MRx0005 je proizvodio uglavnom sirćetnu i propansku kiselinu, dok je MRx0029 proizvodio butansku, pentansku i heksansku kiselinu, kako u linearnom, tako i u razgranatom obliku (Slika 21B). Dva soja su izgledala veoma različito, a posebno je bila uočljiva razlika u proizvodnji ćilibarne kiseline i 4-hidroksifenilsirćetne kiseline od strane MRx0005 i MRx0029, tim redom (Slika 21A). Dodatno, deluje da MRx0005 proizvodi više C2 i C3 masnih kiselina kratkog lanca, dok MRx00029 proizvodi više C4 (butirata) i masnih kiselina srednje dužine lanca, kako lineranih tako i razgranatih, uključujući i heksansku kiselinu.
[0297] Ćilibarna kiselina je metabolit Krebsovog ciklusa koji je uključen u oksidativnu fosforilaciju. Kompleks oksidativne fosforilacije je ključni korak za sinaptički transport proteina i vezikula do proksimalnih i distalnih regiona [77]. Njegova disfunkcija je prijavljena kod neurodegenerativnih poremećaja, uključujući Alchajmerovu bolest, Parkinsonovu bolest i spinocerebelarnu ataksiju tipa 1 [78]. Navedeni nalazi su posebno interesantni pošto ćilibarna kiselina može povećati aktivnost mitohondrija i podržati osetljive neurone u neurodegenerativnom oboljenju u kome dolazi do pogrešnog uvijanja proteina, uključujući PD [79]. BDNF i ćilibarna kiselina imaju sličnu protektivnu aktivnost, ne samo u neurodegeneraciji, već i u mentalnim poremećajima poput depresije i anksioznosti, koji su prilično česti među pacijentima kojima je postavljena dijagnoza PD ili AD.
[0298] Slika 21B takođe pokazuje da je MRX0029 proizvođač butirata (butanske kiseline). Ovo može biti značajno pošto je poznata uloga butirata u smanjenju nepropusnosti krvno-moždane barijere, a što ima neuroprotektivni efekat [80]. Ovo svojstvo MRx0029 (i drugih neuroprotektivnih bakterija) može doprineti njegovoj efikasnosti.
Primer 16 - Modulacija ekspresije iRNK za protein tesnih veza od strane MRx0029
[0299] Pošto skorašnji dokazi ukazuju da disfunkcija i inflamacja creva predstavlja nemotorni simptom povezan sa PD, ispitivana je dalje sposobnost bakterijskih sojeva pronalaska da prouzrokuju bilo kakvu disfunkciju crevne barijere. Kao in vitro model za procenu poremećaja crevne barijere i imunske stimulacije nakon tretmana sa MRx0005 i MRx0029, upotrebljene su epitelne HT29-mtx ćelije u monosloju koje proizvode mucin [81]. Diferencirane HT29-mtx ćelije koje su bile izlagane forbol 12-miristatu-13-acetatu (PMA) su izlučivale značajnu količinu IL-8; nasuprot tome, tretman od 24 sata sa MRx005 i MRx0029 bakterijskim supernatantima je indukovano još nižu sekreciju IL-8 u poređenju sa netretiranim i ćelijama tretiranim sa YCFA (Slika 22A).
[0300] Dalje je ispitana sposobnost MRx0005 i MRx0029 da regulišu propusnost epitela, modifikovanjem unutarćelijske signalne transdukcije uključene u ekspresiju i lokalizaciju proteina koji učestvuju u formiranju crevne barijere.
[0301] RNK je izolovana, pa je urađena kvantitativna RT-PCR (qRT-PCR) analiza, da bi se okarakterisale promene u genskoj ekspresiji proteina ćelijskih tesnih veza tokom inkubacije sa MRx0005 i MRx0029. Primena MRx0029 je pojačala ekspresiju iRNK za Okludin, Vilin, Protein tesnih veza tipa 1 i 2 (odnosno TJP1 i TJP2), nakon 2h inkubacije (Slika 22B). Nasuprot tome, izlaganje MRx0005 nije izmenilo gensku ekspresiju proteina tesnih veza, što ukazuje da dva soja deluju različito na crevnu barijeru.
[0302] In vitro rezultati su zatim upoređeni sa podacima iz paralelnih ex vivo analiza creva kod miševa koji su hranjeni sa MRx0005 i MRx0029. Genska ekspresija TJP2 i okludina je kvantifikovana u debelom crevu i ileumu. Podaci ex vivo analize su savršeno odražavali in vitro podatke, pošto je MRx0029 bio u stanju da značajno poveća ekspresiju TJP1 i Okludina (p=0,073) u regionu debelog creva miša (Slika 22C+ 22D). MRx0029 je takođe bio u stanju da smanji funkciju propustljivosti u debelom crevu istih miševa (Slika 22E+ 22F).
Materijali i postuci - Ekstrakcija RNK i qPCR analiza
[0303] Ukupna RNK je ekstrahovana upotrebom RNeasy mini kompleta (Qiagen, Manchester, Velika Britanija) prema uputstvima proizvođača, a koncentracija RNK je određena apsorbancijom na 260/280nm, upotrebom spektrofotometra (nano-Drop ND-1000; Thermo Scientific, Wilmington, DE). Za analizu ekspresije iRNK, cDNK je pripremljena od ukupne RNK, upotrebom High-Capacity kompleta za reveznu transkripciju u cDNK (Applied Biosystems, Velika Britanija), prema uputstvima proizvođača. Reakcije reverzne transkripcije je rađena u termosajkleru (Biometra, Nemačka) na 25°C tokom 10 minuta, 37°C tokom 120 minuta i 85°C tokom 5 minuta, uz temperaturu održavanja po završetku od 4°C. Dobijena cDNK je umnožena u duplikatima upotrebom SYBR-Green PCR kompleta, a proizvodi su detektovani upotrebom QuantStudio 6 flex mašine za PCR u realnom vremenu (Applied Biosystems, Velika Britanija), upotrebom standardizovanog profila ciklusa (početna denaturacija od 95°C tokom 10 minuta, praćena sa 40 ciklusa od 15 sekundi denaturacije na 95°C i sa 60 sekundi anilinga/elongacije na 60/65°C, u zavisnosti od prajmera. Faza disocijacije je dodata nakon 40. ciklusa, da bi se dobila kriva topljenja. Analiza je rađena upotrebom QuantStudio programa za PCR u realnom vremenu kompanije Applied Biosystems, v1.2. Sekvence prajmera za Aktin, Villin, Okludin TJP1 i TJP2 su navedene u listi sekvenci.
Primer 16 - Ispitivanje stabilnosti
[0304] Kompozicija koja je ovde opisana, a koja sadrži najmanje jedan bakterijski soj koji je ovde opisan, čuvana je u zaptivenoj posudi na 25°C ili 4°C, pa je posuda smeštana u atmosferu sa relativnom vlažnošću od 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% ili 95%. Nakon 1 meseca, 2 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1,5 godine, 2 godine, 2,5 godine ili 3 godine, trebalo bi da preostane najmanje 50%, 60%, 70%, 80% ili 90% bakterijskog soja, što se meri u jedinicama formiranja kolonija, upotrebom utvrđenih standardnih protokola.
Primer 17
Postupci
Životinje
[0305] Životinje i dizajn studije koji su upotrebljavani, bili su isti kao u Primeru 15.
Bakterijski sojevi
[0306]
● 755: Parabacteroides distasonis (MRX005)
● Megasphaera massiliensis (MRX0029)
Prikupljanje tkiva
[0307] Životinje su žrtvovane po nasumičnom rasporedu u pogledu uslova tretmana i testiranja; uzorkovanje je vršeno između 9:00 i 14:30 h. Krv iz trupa je prikupljana u epruvete sa kalijum EDTA (etilen diamin tetrasirćetnom kiselinom), koje su dalje centrifugirane tokom 15 minuta na 4000 g. Izdvojena je zatim plazma koja je čuvana na -80°C za dalje analize. Mozak je brzo izvađen i disekovan, nakon čega je svaki region mozga trenutno zamrznut na suvom ledu i dalje uskladišten na -80°C za dalje analize. Izolovana je i slezina koja je odmah prebačena u 5 ml RPMI medijuma (sa L-glutaminom i natrijum bikarbonatom, R8758 Sigma 10% FBS (F7524, Sigma) 1% Pen/Strep (P4333, Sigma)) i dalje obrađena za ex-vivo imunsku stimulaciju. Tkivo creva je montirano u Komore za ispitivanje propusnosti creva (isečeni su segmenti ileuma i debelog creva od 2-3 cm koji su bili najbliži cekumu, pa su upotrebljena tkiva koja su bila najdalje 1 cm od cekuma). Cekum je uklonjen, izmeren i sačuvan na -80°C za analizu SCFA.
Analiza monoamina
[0308] Koncentracija neurotransmitera je analizirana kao što je opisano u Primeru 10
Analiza citokina u slezini
[0309] Slezine su neposredno nakon žrtvovanja prebačene u 5 ml RPMI medijuma i odmah su kultivisane. Ćelije slezine su najpre homogenizovane u ovom RPMI medijumu, nakon čega je usledila inkubacija od 5 minuta sa 1 ml pufera za lizu RBC (11814389001 ROCHE, Sigma). Dalje je dodato 10 ml RPMI medijuma, nakon čega je sledilo centrifugiranje na 200G tokom 5 minuta. Supernatant je zatim profiltriran kroz sita od 40um. Ćelije su prebrojane i zasejane (4.000,000/mL medijuma). Nakon 2,5 sata adaptacije, ćelije su stimulisane lipopolisaharidom (LPS-2 μg/ml) ili konkanavalinom A (ConA-2,5 μg/ml) tokom 24 sata. Nakon stimulacije, supernatanti su prikupljeni da bi se ispitalo oslobađanje citokina, upotrebom Proinflamatornog panela 1 (mišji) V-PLEX kompleta (Meso Scale Discovery, Maryland, SAD) za TNFα, IL-10, IL-1β, Interferon y, CXCL2 i IL6. Analize su urađene upotrebom MESO QuickPlex SQ 120, SECTOR Imager 2400, SECTOR Imager 6000, SECTOR S 600.
Analiza genske ekspresije
[0310] Ukupna RNK je ekstrahovana upotrebom mirVana™ kompleta za izolaciju miRNK (Ambion/Llife technologies, Paisley, Velika Britanija), nakon čega je tretirana DNazom (Turbo DNA-free, Ambion/life technologies) u skladu sa preporukama proizvođača. RNK je kvantifikovana upotrebom NanoDrop™ spektrofotometra (Thermo Fisher Scientific Inc., Wilmington, Delavare, SAD) prema uputstvima proizvođača. Kvalitet RNK je procenjivan upotrebom Bioanalizatora kompanije Agilent (Agilent, Stockport, Velika Britanija) prema proceduri proizvođa i time je izračunat broj integriteta RNK (RIN).
Za naredne eksperimente je upotrebljavana RNK sa RIN vrednošću >7. RNK je revezno transkribovana u cDNK upotrebom High Capacity kompleta za sintezu cDNK kompanije Applied Biosystems (Applied Biosystems, Warrington, Velika Britanija) prema uputstvima proizvođača. Ukratko, kao deo master miksa za reverznu transkripciju, dodavana je Multiscribe reverzna transkriptaza (50 U/µL) (1) (2) (1) (10) i smeša je inkubirana na 25°C tokom 10 minuta, na 37°C tokom 2 h, na 85°C tokom 5 minuta, uz temperaturu održavanja po završetku od 4°C. Kvantitativni PCR postupak je urađen upotrebom proba (sa 6 karboksi fluoresceinom - FAM) koje je dizajnirala kompanija Applied Biosystems za specifične ciljne gene miša, dok je β-aktin iskorišćen kao endogena kontrola. Reakciona smeša za amplifikaciju je sadržavala 1 μl cDNK, 5 μl 2X master miksa za PCR (Roche), 900 nM svakog prajmera, a voda oslobođene od RNaze je konačno dodata do ukupne zapremine od 10 μl. Sve reakcije su rađene u triplikatima, upotrebom ploča sa 96 bunarića i LightCycler®480 sistema. Temperature tokom 55 ciklusa su bile kao što je to bilo preporučeno od strane proizvođača (Roche). Da bi se proverila kontaminacija amplikona, svaka analiza je sadržavala i triplikat kontrole bez matrice, za svaku od upotrebljenih proba. Vrednosti ciklusa koji je predstavljao prag za analizu (Ct) su snimljene. Podaci su normalizovani upotrebom β-aktina, nakon čega su transformisani upotrebom 2-ΔΔCT postupka i prestavljeni kao stepen promene u odnosu na kontrolnu grupu.
Analiza masnih kiselina kratkog lanca u sadržaju cekuma
[0311] Sadržaj cekuma je pomešan i vorteksovan sa MilliQ vodom, nakon čega je inkubiran na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Supernatanti su zatim dobijeni centrifugiranjem (10000 g, 5 min, 4°C) koje je rađeno da bi se istaložile bakterije i druge čvrste supstance, a zatim i filtriranjem kroz 0,2 µm filter. Supernatant je dalje prebačen u prozirnu GC bočicu, a kao interni standard je upotrebljena 2-etilbuterna kiselina (Sigma). Koncentracija SCFA je analizirana upotrebom Varian 3500 GC plamenojonizacionog sistema, opremljenog sa ZB-FFAP kolonom (30 m x 0,32 mm x 0,25 mm; Phenomenex). Konstruisana je i standardna kriva sa različitim koncentracijama standardne smeše koja je sadržavala acetat, propionat, izo-butirat, n-butirat, izovalerat i valerat (Sigma). Pikovi su integrisani upotrebom kompjuterskog programa Varian Star Chromatography Workstation, verzije 6.0. Svi SCFA podaci su izraženi u µmol/g.
Statistička analiza
[0312] Podaci sa normalnom raspodelom su predstavljani kao srednja vrednost ± SEM; Neparametarski skupovi podataka su predstavljani kao medijana sa interkvartilnim opsegom. Da bi se analizirali parametrijski podaci, primenjivan je dvostrani t-test za nezavisne uzorke, dok je Mann-Whitney test upotrebljen za neparametarsku analizu. Za analizu korelacija u objedinjenim skupovima podataka, korišćen je Spearman-ov koeficijent korelacije ranga. U svim slučajevima, značajnom je smatrana vrednost odo p<0,05.
Rezultati - Proizvodnja neurotransmitera
[0313] Rezultati na Slici 23 pokazuju efekat tretmana sa MRx005 na koncentraciju neurotransmitera u mozgu miševa. Najuočljivije je da tretman sa MRx005 dovodi do smanjenja u dopaminu.
Rezultati – Genska ekspresija
[0314] Ekspresija gena za receptore neurotransmitera [serotoninski receptor 1a(5-HTR1a), dopaminski D1 receptor, GABA receptor sa B1 subjedinicom, GABAA receptor, NMDA2A (Grin2A) i NMDA2B (Grin2b) receptor], inflamatorne markere [IL-1β, IL6, CD11b, TNFα i TLR4], kao i endokrine markere [faktor oslobađanja kortikosterona (CRF), receptore faktora oslobađanja kortikosterona tipa 1 i 2 (CRFR1, CRFR2), neurotrofni faktor poreklom iz mozga (BDNF), vazopresinski receptor, oksitocinski receptor, glukokortikoidni receptor i mineralokortikoidni receptor] analizirani su u moždanom tkivu hipokampusa, amigdala i prefrontalnog korteksa.
[0315] Slike 24-38 prikazuju promene u genskoj ekspresiji nakon tretmana sa MRX005 ili MRX0029 u hipokampusu, amigdalama i prefrontalnom korteksu. Tretman sa MRx0029 je doveo do povećanja ekspresije glukokortikoidnih receptora u amigdalama (Slika 31C). Slika 32A pokazuje da je MRx005 značajno povećao ekspresiju BDNF-a u amigdalama, dok je tretman sa MRx0029 značajno povećao ekspresiju TLR4 u amigdalama (Slika 32).
[0316] I MRx005 i MRx0029 mogu povećati ekspresiju CDllb u amigdalama (Slika 33A), dok je ekspresija IL-6, Grin2a i Grin2b bila smanjena nakon tretmana sa MRx005 (Slike 33B-D). Pored toga, MRx005 i MRx0029 su značajno povećali ekspresiju GABRA2, a povećali su i ekspresiju GABBR1 u amigdalama.
[0317] Tretman sa MRx005 je doveo do značajnog povećanja ekspresije BDNF-a u prefrontalnom korteksu (Slika 35B).
Diskusija
[0318] Primena MRx005 i MRx0029 je prouzrokovala promene u genskoj ekspresiji, posebno u amigdalama.
Rezultati - Efekat na ekspresiju Tph1 i IDO-1
[0319] Slika 39 pokazuje da MRx0029 može značajno povećati ekspresiju triptofan hidroksilaze-1 (Tph1) u debelom crevu i da tretman sa MRX005 može povećati ekspresiju IDO-1 u debelom crevu. Tretman sa MRX005 je povećao ekspresiju Tph1 i IDOl u ileumu (Slika 40).
[0320] Indoleamin-pirol-2,3-dioksigenaza-1 (IDO-1) je prvi i enzim koji je ograničavajući za brzinu obrade u triptofan/kinureninskom putu, dok je triptofan hidroksilaza 1 (Tph1) izoforma enzima triptofan hidroksilaze, odgovorna za sintezu serotonina. Navedeni podaci ukazuju da MRx0029 i MRx005 mogu uticati na nivoe serotonina i na triptofan/kinureninski put.
Rezultati - Uticaj na nivo metabolita triptofana
[0321] Slika 41 prikazuje efekat tretmana sa MRx005 na nivoe kinurenina i triptofana u cirkulaciji.
Rezultati - Uticaj na ekspresiju citokina u splenocitima
[0322] Ex-vivo analiza splenocita uključuje indukciju reaktivnosti splenocita (ćelija izolovanih iz slezine - glavnog organa uključenog u imunsku odbranu), stimulacijom koja imitira aktivaciju prouzrokovanu sa bakterijama ili virusima.
[0323] MRX005 je značajno smanjio nivoe interferona-γ u splenocitima nakon izlaganja LPS-u (Slika 42). Dodantno, MRX005 je smanjio nivo interleukina-6 i faktora nekroze tumora nakon izlaganja LPS-u (Slike 44 i 45, tim redom). Tretman sa MRx0029 je doveo do smanjenja interferona-y, interleukina-1β i interleukina-6 nakon izlaganja LPS-u (Slike 42, 43 i 44, tim redom).
[0324] Tretman sa MRx005 i MRx0029 je doveo do povećanja nivoa hemoatraktanta CXCL1 (Slika 47).
Rezultati - Uticaj na nivoe masne kiseline kratkog lanca u cekumu
[0325] Masne kiseline kratkog lanca (SCFA) nastaju kada bakterije u crevima fermentišu nesvarljiva vlakna iz hrane. Efekti primene MRX005 su prikazani na Slici 48.
Primer 18 - Dodatna analiza promena u nivoima genske ekspresije koje su indukovane sa MRX029 i MRX005
Postupci
[0326] Ćelijska linija
SH-SY5Y ćelije
[0327] Bakterijski sojevi
● 755: Parabacteroides distasonis (MRX005)
● Megasphaera massiliensis (MRX0029)
qPCR
[0328] SHSY5Y su zasejane u Petrijeve posude od 10 cm, u gustini od 2x10<6>ćelije. Nakon 24 sata, ćelije su tretirane u medijumu za diferencijaciju (medijum za rast koji je sadržavao 1% FBS bez RA) sa 10% bakterijskim supernatantom ili YCFA+, 10uM RA, 200uM heksanskom kiselinom ili 200uM valproičnom kiselinom, u trajanju od 17 sati. Nakon toga, snimljene su reprezentativne slike, upotrebom faznokontrastnog EVOS XL core mikroskopa, uz uvećanje od 40X/0,65. Ćelije su potom prikupljene i izolovana je ukupna RNK upotrebom RNeasy mini kompleta (Qiagen), prema protokolu proizvođača. cDNK su sintetisane upotrebom High capacity cDNA kompleta za reverznu transkripciju (Applied Biosystems). Genska ekspresija je merena upotrebom qPCR postupka. Kao interna kontrola je upotrebljen GAPDH. Stepen promene je izračunat shodno 2<(-ΔΔct)>postupku. Sekvence prajmera za MAP2, DRD2, GABRB3, SYP, PINK1, PARK7 i NSE su navedene u listi sekvenci.
Imuno-obeležavanje i slikanje ćelija
[0329] Po 5x10<4>ćelija je zasejano u svaki bunarić pločice sa 8 komora (Marienfeld Laboratory Glassware), nakon čega su ćelije inkubirane preko noći, pa su tretirane sa 10% bakterijskim supernatantom tokom 24 sata. U svrhu diferencijacije, ćelije su tretirane sa 10 nM RA tokom 5 dana, pre tretmana sa bakterijskim supernatantom oslobođenim od ćelija u trajanju od 24 h. Ćelije su zatim fiksirane sa 4% paraformaldehidom u PBS-u tokom 20 minuta, na sobnoj temperaturi (ST). Fiksirane ćelije su isprane sa PBS-om, pa su permeabilizovane sa 1% Triton X-100 u PBS-u tokom 10 minuta. Nakon pranja sa PBS-om, pločice su inkubirane sa puferom za blokiranje (4% BSA/PBS) tokom 1 sata na sobnoj temperaturi, pre dodavanja anti-MAP2 antitela ili ili β3-tubulina (sc-74421 i sc-80005, tim redom, Santa Cruz Biotechnology Inc) koji su bili razblaženi u 1% BSA/PBS, nakon čega je ploča inkubirana tokom 12 sati na 4°C. Pločice su potom isprane dva puta sa PBS-om, nakon čega je sledila inkubacija sa anti-mišjim antitelom konjugovanim sa Alexa Flour 488 (Molecular Probes Inc) i Faloidinom konjugovanim sa Alexa Flour 594 bojom (ab176757, Abcam) tokom 1 sata na ST. Nakon 3X pranja sa PBS-om, pročice su montirane upotrebom Vectorshield® medijuma (Vector Laboratories). Pločice su pregledane upotrebom Axioskop 50 mikroskopa (Zeiss), koji je bio opremljen sa 63x/1,2 W Korr objektivnom i setom filtera koji je pogodan za detekciju upotrebljenih fluorohroma. Vremena ekspozicije za digitalna snimanja slika sa imuno-obeležnim MAP-2 su podešavana manuelno i držana su konstantnima da bi se omogućilo poređenje između različitih bunarića i tretmana. Vremena izlaganja za faloidin (F-aktin) i DAPI su varirala shodno poziciji vidnog polja. Nasumično odabrana vidna polja su snimana upotrebom kamere tipa Qlmaging, koja je bila pod kontrolom kompjuterskog programa Image Pro Plus. Slike su sačuvane u TIF formatu i otvarane su u programu Adobe Photoshop CC 2015.1.2. Slike za MAP-2, DAPI i Faloidin su zatim preklopljene i spojene. Konačno su odabrane reprezentativne slike, da bi se ilustrovale razlike u zastupljenosti i lokaciji ispitivanih proteina.
Imunoblotovanje
[0330] SH-SY5Y ćelije su kultivisane pod prethodno naznačenim uslovima, nakon čegaa su tretirane sa MRx0005 i MRx0029 tokom 24 sata, pa lizirane u RIPA puferu koji je sadržavao koktel proteaznih inhibitora (Roche Diagnostics, Velika Britanija). Koncentracija proteina je određivana upotrebom BCA kompleta za analizu proteina (Pierce Biotechnology, Rockford, IL), nakon čega su proteini razdvojeni SDS-PAGE postupkom i transferom su preneti na PVDF membranu. Membrane su dalje blokirane sa 5% nemasnim mlekom u prahu ili sa 5% BSA, nakon čega su inkubirane preko noći na 4°C sa primarnim antitelima (sa MAP2 i β3-tubulinom, tim redom). Blotovi su zatim inkubirani sa odgovarajućim sekundarnim antitelom koje je bilo konjugovano sa peroksidazom rena (HRP), a proteini su konačno detektovani kompletom za detekciju hemiluminescencije (Pierce Biotechnology, Rockford, IL). I za MAP2 i za β3-tubulin, β-aktin je služio kao kontrola za praćenje varijabilnosti nanošenja između uzoraka.
Rezultati i diskusija
Genska ekspresija
[0331] Slike 13a (ubačen grafik) i 49 pokazuju promene u nivoima ekspresije Aktina, Villina, Okludina TJP1, TJP2, MAP2, DRD2, GABRB3, SYP, PINK1, PARK7 i NSE, a koje su indukovane sa MRx0029 i MRX005.
Mikroskopija i imunoblotovanje
[0332] Slika 50 prikazuje promenu u nivou ekspresije MAP2 u SHSY5Y ćelijama koja je utvrđena konfokalnom mikroskopijom. Ekspresioni nivoi MAP2 i B3-tubulina su kvantifikovani i imunoblot analizom. Rezultati prikazani na Slici 50M i N ukazuju da MRX029 indukuje povećanje nivoa ekspresije MAP2
Sekvence
[0333]
SEQ ID NO:1 (gen za 16S ribozomalnu RNK Megasphaera massiliensis, parcijalna sekvenca, soj: NP3 – JX424772.1)
SEQ ID NO:2 (konsenzusna sekvenca 16S rRNK Megasphaera massiliensis soja: MRx0029)
[0334] Prajmeri upotrebljeni za qPCR (sa SEQ ID NO u zagradama)
SEQ ID NO:17 (konsenzusna sekvenca 16S rRNK za Parabacterodies distasonis, soj MRx0005)
[0335] Prajmeri i probe upotrebljeni za ex vivo qPCR (sa SEQ ID NO u zagradama)
Ex vivo:
[0336]
[0337] Dodatni prajmeri upotrebljeni za qPCR (sa SEQ ID NO u zagradama)
ID gena Sekvenca uzvodnog prajmera Sekvenca nizvodnog prajmera
NSE CCCTGTATCGTAAGAACGGT (30) GCCACCATTGATCACGTTGA (31)
PINK1 CCCAAGCAACTAGCCCCTC (32) GGCAGCACATCAGGGTAGTC (33)
PARK7 GTAGCCGTGATGTGGTCATTT (34) CTGTGCGCCCAGATTACCT (35)
SYP CTCGGCTTTGTGAAGGTGCT (36) GGCTTCA TGGCA TCAACTTCA (37) REFERENCE
[0338]
[1] Spor i saradnici (2011) Nat Rev Microbiol.9(4):279-90.
[2] Eckburg i saradnici (2005) Science.10;308(5728):1635-8.
[3] Macpherson i saradnici (2001) Microbes Infect.3(12):1021-35
[4] Macpherson i saradnici (2002) Cell Mol Life Sci.59(12):2088-96.
[5] Mazmanian i saradnici (2005) Cell 15;122(1):107-18.
[6] Frank i saradnici (2007) PNAS 104(34):13780-5.
[7] Scanlan i saradnici (2006) J Clin Microbiol.44(11):3980-8.
[8] Kang i saradnici (2010) Inflamm Bowel Dis.16(12):2034-42.
[9] Machiels i saradnici (2013) Gut.63(8):1275-83.
[10] WO 2013/050792
[11] WO 03/046580
[12] WO 2013/008039
[13] WO 2014/167338
[14] Goldin i Gorbach (2008) Clin Infect Dis.46 Supl 2:S96-100.
[15] Azad i saradnici (2013) BMJ.347:f6471.
[16] Mayer i saradnici (2014) The Journal of Neuroscience 34(46):15490 -15496
[17] Cryan i Dinan (2015) Neuropsychopharmacology, 40: 241-2.
[18] Zhou i Foster (2015) Neuropsychiatric Disease and Treatment 11: 715-723.
[19] Wang i Kasper (2014) Brain Behav Immun.38: 1-12.
[20] US2004/005304
[21] US2004/170617
[22] Padmanabhan i saradnici (2013) Standards in Genomic Sciences 8:525-538
[23] Masco i saradnici (2003) Systematic and Applied Microbiology, 26:557-563.
[24] Srůtková i saradnici (2011) J. Microbiol. Methods, 87(1):10-6.
[25] Kadi i saradnici (2006) J Neuroimmunol 174: 133-46
[26] Pal R i saradnici (2016) Neurol Res.38(12):1111-1122
[27] Daniele i saradnici (2015) Sci Signal 8(376):ra45
[28] Ahmed i saradnici, manuskript u pripremi
[29] Baraczka i saradnici (1983) J Neural Transm.58(3-4):299-304.
[30] Eldrup i saradnici (1995) Acta Neurol Scand.92(2):116-21.
[31] Wang i saradnici (2016) J Neurogastroenterol Motil 22: 589-605.
[32] Zadori i saradnici (2012) Journal of Neural Transmission, 119, 2, 275-283
[33] Lee i saradnici (2008) European J. Cell Biology 87:389-397
[34] Pirooznia i Elefant (2013) Front Cell Neurosci.7: 30.
[35] Tang i saradnici (2017) J Am Heart Assoc, 6(10).
[36] Wang i saradnici (2015) PNAS, 112(9):2583-2858
[37] Psaty i saradnici (2003) JAMA, 289(19):2534-44
[38] Lancet. (1995) 346(8991-8992):1647-53
[39] Miyamoto-Shinohara i saradnici (2008) J. Gen. Appl. Microbiol., 54, 9-24.
[40] Cryopreservation i Freeze-Drying Protocols, ur. Day i McLellan, Humana Press.
[41] Leslie i saradnici (1995) Appl. Environ. Microbiol.61, 3592-3597.
[42] Mitropoulou i saradnici (2013) J Nutr Metab. (2013) 716861.
[43] Kailasapathy i saradnici (2002) Curr Issues Intest Microbiol.3(2):39-48.
[44] Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd Edition, (1994), ur. A Wade i PJ Weller [45] Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (ur.A. R. Gennaro, 1985) [46] US 2016/0067188
[47] Handbook of Microbiological Media, 4. izdanje (2010) Ronald Atlas, CRC Press.
[48] Maintaining Cultures for Biotechnology and Industry (1996) Jennie C. Hunter-Cevera, Academic Press
[49] Strobel (2009) Methods Mol Biol.581:247-61.
[50] Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy.20. izdanje, ISBN:
0683306472.
[51] Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course, (Ream i saradnici., ur., 1998, Academic Press).
[52] Methods In Enzymology (S. Colowick i N. Kaplan, ur., Academic Press, Inc.)
[53] Handbook of Experimental Immunology, tomovi I-IV (D.M. Weir i C.C. Blackwell, ur., 1986, Blackwell Scientific Publications)
[54] Sambrook i saradnici (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3. izdanje (Cold Spring Harbor Laboratory Press).
[55] Handbook of Surface and Colloidal Chemistry (Birdi, K.S. ur., CRC Press, 1997)
[56] Ausubel i saradnici (ur.) (2002) Short protocols in molecular biology, 5. izdanje (Current Protocols).
[57] PCR (Introduction to Biotechniques Series), 2. izdanje (Newton & Graham ur., 1997, Springer Verlag)
[58] Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel i saradnici., ur., 1987) Suplement 30 [59] Smith i Waterman (1981) Adv. Appl. Math.2: 482-489.
[60] Pakkenberg i saradnici (1991) J Neurol Neurosurg Psychiatry, 54(1):30-3.
[61] Przedborski i saradnici (2000). Restor Neurol Neurosci.16(2):135-142.
[62] Kehr J. (1999) Monitoring chemistry of brain microenvironment: biosensors, microdialysis and related techniques. Poglavlje 41. U: Modern techniques in neuroscience research. (ur. U. Windhorst i H. Johansson) Springer-Verlag GmbH., Heidelberg, Nemačka.1149-1198.
[63] Kehr J. i Yoshitake T. (2006) Monitoring brain chemical signals by microdialysis. U:
Encyclopedia of Sensors, Vol.6. (ur. C.A. Grimes, E.C. Dickey i M.V. Pishko) American Scientific Publishers, SAD.287-312.
[64]Abel i Zukin (2008) Curr Opin Pharmacol, 2008.8(1): 57-64
[65] Johnsen i saradnici (2017) Journal of Chromatography A.1503: 57-64
[66] West i Johnstone (2014) J Clin Invest.124, 30-39
[67] Glauben i saradnici (2006) J Immunol, 176: 5015-5022
[68] Angiolilli i saradnici (2017) Ann Rheum Dis, 76: 277-285
[69] Gonneaud i saradnici (2014) J Inflamm, 11: 43
[70] Alenghat i saradnici (2013) Nature, 504: 153-157
[71] Felice i saradnici (2015) Ailment Pharmacol Ther, 41: 26-38
[72] Smart i saradnici (2010) Nature Protocols.10:1709-29
[73] Weon i saradnici (2016)
[74] Huot i saradnici, (2015) Parkinson's Disease
[75] Scatton i saradnici (1983) Brain Res, 275(2): 321-8
[76] Hely i saradnici (2005) Mov Disord.20(2): 190-9
[77] Budd i Nicholls (1998) Essays Biochem.33:43-52
[78] Ebadi i saradnici (2001) Biol Signals Recept.10(3-4):224-253
[79] Ferro i saradnici (2017) PLoS One 2017, 12(12):e0188425
[80] Michel i Prat (2016) Ann Transl Med.4(1): 15.
[81] Gagnon i saradnici (2013) J Microbiological Methods.94: 274-279
SAMO ZA UPOTREBU KANCELARIJE KOJA PRIMA MATERIJAL [0339]
SAMO ZA UPOTREBU MEĐUNARODNOG ZAVODA
[0340]

Claims (15)

Patentni zahtevi
1. Kompozicija koji sadrži bakterijski soj roda Megasphaera, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije neurodegenerativnog poremećaja, pri čemu je bakterijski soj sa sekvencom 16s rRNK koja je najmanje 95% identična SEQ ID NO: 2.
2. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je postupak za lečenje ili prevenciju oboljenja ili stanja izabranog iz grupe koja se sastoji od Parkinsonove bolesti, uključujući progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivne supranuklearne paralize, Steele-Richardson-Olszewski sindroma, hidrocefalusa normalnog pritiska, vaskularnog ili arteriosklerotskog parkinsonizma i parkinsonizma indukovanog lekovima; Alchajmerove bolesti, uključujući Bensonov sindrom; multiple skleroze; Hantingtonove bolesti; amiotrofične lateralne skleroze; Lu Gerigove bolesti; bolesti motornih neurona; prionske bolesti; spinocerebelarne ataksije; spinalne mišićne atrofije; demencije, uključujući demenciju sa Levijevim telima, vaskularnu i frontotemporalnu demenciju; primarne progresivne afazije; blagog kognitivnog oštećenja; kognitivnog oštećenja povezanog sa HIV infekcijom i kortikobazalne degeneracije.
3. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 2, pri čemu je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti.
4. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, pri čemu je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije neurodegenerativnog oboljenja sa ranim početkom; i/ili pri čemu je kompozicija za upotrebu u postupku prevencije ili odlaganja početka ili progresije neurodegenerativnog poremećaja.
5. Kompozicija koji sadrži bakterijski soj roda Megasphaera, za upotrebu u postupku lečenja povrede mozga, pri čemu je bakterijski soj sa sekvencom 16s rRNK koja je najmanje 95%, identična SEQ ID NO: 2.
6. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, pri čemu je povreda mozga moždani udar, kao što je cerebralna ishemija, fokalna cerebralna ishemija, ishemijski moždani udar ili hemoragijski moždani udar.
7. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde je bakterijski soj Megasphaera massiliensis.
8. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde je bakterijski soj sa sekvencom 16s rRNK koja je najmanje 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sa SEQ ID NO: 2, ili gde je bakterijski soj sa sekvencom 16s rRNK koja je predstavljena kao SEQ ID NO: 2.
9. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu kompozicija sadrži bakterijski soj vrste Megasphaera massiliensis u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti.
10. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, pri čemu kompozicija sadrži bakterijski soj vrste Megasphaera massiliensis u postupku lečenja povrede mozga koja je posledica moždanog udara.
11. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je kompozicija za oralnu primenu i/ili pri čemu kompozicija sadrži jedan ili više do farmaceutski prihvatljivih ekscipijensa ili nosača, i/ili gde je bakterijski soj liofilizovan; ili prehrambeni proizvod koji sadrži navedenu kompoziciju, za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva.
12. Ćelija soja Megasphaera massiliensis, deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42787.
13. Kompozicija koja sadrži ćeliju prema patentnom zahtevu 12, poželjno ona koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač ili eksipijens.
14. Biološki čista kultura Megasphaera massiliensis soja deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42787.
15. Ćelija Megasphaera massiliensis soja deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42787 za upotrebu u terapiji, poželjno pri čemu je ćelija za upotrebu u postupku definisanom u bilo kom od patentnih zahteva 1-6.
RS20201219A 2017-06-14 2018-06-14 Kompozicije koje sadrže bakterijski soj roda megasphaera i njihove upotrebe RS60910B1 (sr)

Applications Claiming Priority (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1709468.1A GB201709468D0 (en) 2017-06-14 2017-06-14 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1709534.0A GB201709534D0 (en) 2017-06-15 2017-06-15 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1712851.3A GB201712851D0 (en) 2017-08-10 2017-08-10 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1803826.5A GB201803826D0 (en) 2018-03-09 2018-03-09 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1805991.5A GB201805991D0 (en) 2018-04-11 2018-04-11 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1805990.7A GB201805990D0 (en) 2018-04-11 2018-04-11 Compostions comprising bacterial strains
GBGB1805989.9A GB201805989D0 (en) 2018-04-11 2018-04-11 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1806780.1A GB201806780D0 (en) 2018-04-25 2018-04-25 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1806779.3A GB201806779D0 (en) 2018-04-25 2018-04-25 Compositions comprising bacterial strains
EP18735196.0A EP3600364B1 (en) 2017-06-14 2018-06-14 Compositions comprising a bacterial strain of the genus megasphaera and uses thereof
PCT/EP2018/065858 WO2018229216A1 (en) 2017-06-14 2018-06-14 Compositions comprising a bacterial strain of the genus megasphera and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS60910B1 true RS60910B1 (sr) 2020-11-30

Family

ID=62784100

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220613A RS63393B1 (sr) 2017-06-14 2018-06-14 Kompozicije koje sadrže bakterijske sojeve
RS20201219A RS60910B1 (sr) 2017-06-14 2018-06-14 Kompozicije koje sadrže bakterijski soj roda megasphaera i njihove upotrebe

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220613A RS63393B1 (sr) 2017-06-14 2018-06-14 Kompozicije koje sadrže bakterijske sojeve

Country Status (26)

Country Link
US (3) US11660319B2 (sr)
EP (4) EP3804737B1 (sr)
JP (4) JP6837581B2 (sr)
KR (2) KR102519483B1 (sr)
CN (2) CN111032061A (sr)
AU (4) AU2018285453B2 (sr)
BR (2) BR112019026667A2 (sr)
CA (3) CA3066557A1 (sr)
CY (2) CY1123565T1 (sr)
DK (2) DK3804737T3 (sr)
ES (2) ES2917415T3 (sr)
HR (2) HRP20201629T1 (sr)
HU (2) HUE052258T2 (sr)
IL (3) IL292373A (sr)
LT (2) LT3600364T (sr)
MA (3) MA49010B1 (sr)
MD (2) MD3600364T2 (sr)
MX (2) MX383130B (sr)
PL (2) PL3600364T3 (sr)
PT (2) PT3804737T (sr)
RS (2) RS63393B1 (sr)
SG (2) SG11201912156QA (sr)
SI (2) SI3804737T1 (sr)
SM (2) SMT202200272T1 (sr)
TW (2) TW201919668A (sr)
WO (2) WO2018229236A2 (sr)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018229236A2 (en) 2017-06-14 2018-12-20 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
KR20210008393A (ko) * 2018-05-11 2021-01-21 4디 파마 리서치 리미티드 세균 균주를 포함하는 조성물
SG11202106230XA (en) * 2018-12-12 2021-07-29 4D Pharma Res Ltd Compositions comprising bacterial strains
EP3979830B1 (en) * 2019-06-03 2025-11-26 Research Institute at Nationwide Children's Hospital Formulations for the treatment of neurodevelopmental deficiencies induced by necrotizing enterocolitis
JP2022540576A (ja) 2019-07-05 2022-09-16 フォーディー ファーマ リサーチ リミテッド 細菌株を含む組成物
CN110420228A (zh) * 2019-09-16 2019-11-08 山东大学齐鲁医院 脆弱拟杆菌ych46在制备治疗或辅助治疗高血压的药物中的应用
EP4034096B1 (en) * 2019-09-25 2025-12-31 Philipps-Universität Marburg SHORT-CHAIN FATTY ACID PENTANOATE AS AN ACTIVATOR FOR CELL THERAPY AND ANTITUMOR THERAPY
WO2022061094A1 (en) 2020-09-18 2022-03-24 Evelo Biosciences, Inc. Solid dosage forms of bacteria
JP2022053525A (ja) * 2020-09-24 2022-04-05 森下仁丹株式会社 乳酸産生菌叢の保持剤ならびにそれを用いた経口組成物および乳酸産生菌叢の保持方法
CN112239741B (zh) * 2020-12-10 2022-05-27 慕恩（广州）生物科技有限公司 一种Megasphaera属的细菌MNC-992及其培养方法和应用
KR20230145050A (ko) 2020-12-14 2023-10-17 에벨로 바이오사이언시즈, 인크. 세포외 소포체 제제
US20240417674A1 (en) * 2021-02-10 2024-12-19 Wisbiom (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. Bifidobacterium animalis subsp. lactis and use thereof
TW202302125A (zh) 2021-03-05 2023-01-16 美商艾弗洛生物科技股份有限公司 固體劑型
KR20240006543A (ko) 2021-04-08 2024-01-15 에벨로 바이오사이언시즈, 인크. 박테리아를 함유하는 약학적 조성물
WO2022239013A1 (en) * 2021-05-12 2022-11-17 Biomica Ltd. Microbiome microorganism and uses thereof
WO2023049268A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Evelo Biosciences, Inc. Solid dosage forms containing bacteria and microbial extracellular vesicles
CN114276948B (zh) * 2021-11-08 2023-06-20 泸州老窖股份有限公司 产己酸的赖氨酸芽孢杆菌及其用途
WO2023107537A1 (en) 2021-12-07 2023-06-15 Evelo Biosciences, Inc. Antibody compositions and methods for utilizing with extracellular vesicles and microbes
WO2023114293A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 Evelo Biosciences, Inc. Extracellular vesicle assays
CN116731894B (zh) * 2021-12-31 2025-05-20 深圳未知君生物科技有限公司 一种巨球形菌菌株及其应用
WO2024015522A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Evelo Biosciences, Inc. Methods for analyzing extracellular vesicles and microbes
WO2024076723A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Evelo Biosciences, Inc. Processing extracellular vesicles
WO2024102226A1 (en) 2022-10-14 2024-05-16 Evelo Biosciences, Inc. Methods for assaying drug substances and drug products by using cell lines with nf-kb- inducible reporter genes
WO2024229110A1 (en) * 2023-05-01 2024-11-07 The Johns Hopkins University Indole lactate for the treatment of multiple sclerosis
CN117821621B (zh) * 2023-12-15 2024-08-13 深圳未知君生物科技有限公司 一种马氏巨球菌的分子标记及其应用
CN118526523B (zh) * 2024-07-26 2025-01-28 山东大学齐鲁医院 一种治疗脑胶质母细胞瘤的药物组合物

Family Cites Families (407)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
JPS5031249B1 (sr) 1970-12-17 1975-10-08
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
JPS5710876B2 (sr) 1974-04-08 1982-03-01
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4138498A (en) * 1976-12-07 1979-02-06 W. R. Grace & Co. Ruminant feed additive
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
JPS5557520A (en) 1978-10-26 1980-04-28 Nisshin Flour Milling Co Ltd Preparation of carcinostatic substance
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
NL8300698A (nl) 1983-02-24 1984-09-17 Univ Leiden Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
DK122686D0 (da) 1986-03-17 1986-03-17 Novo Industri As Fremstilling af proteiner
FR2613624B1 (fr) 1987-04-10 1990-11-23 Roussy Inst Gustave Composition pharmaceutique, administrable par voie orale, destinee a reduire les effets des b-lactamines
US5443826A (en) 1988-08-02 1995-08-22 Borody; Thomas J. Treatment of gastro-intestinal disorders with a fecal composition or a composition of bacteroides and E. Coli
WO1990001335A1 (en) 1988-08-02 1990-02-22 Borody Thomas J Treatment of gastro-intestinal disorders
KR100225087B1 (ko) 1990-03-23 1999-10-15 한스 발터라벤 피타아제의 식물내 발현
DK0531372T4 (da) 1990-05-09 2004-08-09 Novozymes As Cellulasepræparat omfattende et endoglucanaseenzym
GB9107305D0 (en) 1991-04-08 1991-05-22 Unilever Plc Probiotic
EP0581171B1 (en) 1992-07-20 1998-02-04 Kabushiki Kaisha Yakult Honsha Species-specific oligonucleotides for bifidobacteria and a method of detection using the same
CA2151154C (en) 1992-12-10 1999-01-26 William E. Hintz Production of heterologous proteins in filamentous fungi
US5741665A (en) 1994-05-10 1998-04-21 University Of Hawaii Light-regulated promoters for production of heterologous proteins in filamentous fungi
US5599795A (en) 1994-08-19 1997-02-04 Mccann; Michael Method for treatment of idiopathic inflammatory bowel disease (IIBD)
AUPM823094A0 (en) 1994-09-16 1994-10-13 Goodman Fielder Limited Probiotic compositions
AUPM864894A0 (en) 1994-10-07 1994-11-03 Borody, Thomas Julius Treatment of bowel-dependent neurological disorders
RU2078815C1 (ru) 1995-01-17 1997-05-10 Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского Штамм бактерий bifidobacterium breve, используемый для получения бактерийных лечебно-профилактических бифидосодержащих препаратов
JPH08259450A (ja) 1995-03-17 1996-10-08 Nichinichi Seiyaku Kk インターフェロン産生増強剤
US6861053B1 (en) 1999-08-11 2005-03-01 Cedars-Sinai Medical Center Methods of diagnosing or treating irritable bowel syndrome and other disorders caused by small intestinal bacterial overgrowth
AU7362096A (en) * 1995-09-15 1997-04-01 Dale N. Gerding M.D. Methods and compositions for prevention and treatment of clostridium difficile-associated diseases
AUPN698495A0 (en) 1995-12-06 1996-01-04 Pharma Pacific Pty Ltd Improved therapeutic formulation and method
SE508045C2 (sv) 1996-02-26 1998-08-17 Arla Ekonomisk Foerening Adhesionsinhibitorer, preparat innehållande desamma och förfarande för framställning därav
EP0901371B1 (en) 1996-03-20 2008-09-10 The University Of New South Wales Alteration of microbial populations in the gastrointestinal tract
AUPN881396A0 (en) 1996-03-20 1996-04-18 Arnott's Biscuits Limited Enhancement of microbial colonization of the gastrointestinal tract
JP4263241B2 (ja) 1996-03-27 2009-05-13 ノボザイムス アクティーゼルスカブ アルカリプロテアーゼを欠失した糸状真菌
US6033864A (en) 1996-04-12 2000-03-07 The Regents Of The University Of California Diagnosis, prevention and treatment of ulcerative colitis, and clinical subtypes thereof, using microbial UC pANCA antigens
WO1998043081A1 (en) 1997-03-26 1998-10-01 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Treatment of gastrointestinal disease with ppar modulators
SE511524C2 (sv) 1997-06-02 1999-10-11 Essum Ab Lactobacillus casei rhamnosus-stam samt farmaceutisk beredning för bekämpning av patogena tarmbakterier
US5925657A (en) 1997-06-18 1999-07-20 The General Hospital Corporation Use of PPARγ agonists for inhibition of inflammatory cytokine production
AUPO758297A0 (en) 1997-06-27 1997-07-24 Rowe, James Baber Control of acidic gut syndrome
US6652866B1 (en) 1997-10-14 2003-11-25 David W. Hertha Method for treating diseases of fungal, yeast, and prion protein etiology
US5951977A (en) 1997-10-14 1999-09-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Competitive exclusion culture for swine
IT1298918B1 (it) 1998-02-20 2000-02-07 Mendes Srl Uso di batteri dotati di arginina deiminasi per indurre apoptosi e/o ridurre una reazione infiammatoria e composizioni farmaceutiche
DE19826928A1 (de) 1998-06-17 1999-12-23 Novartis Consumer Health Gmbh Arzneimittel, lebensfähige anaerobe Bakterien enthaltend, die die Sulfatreduktion sulfatreduzierender Bakterien hemmen
ID29150A (id) 1999-01-15 2001-08-02 Entpr Ireland Cs Penggunaan lactobacillus salivarius
US7090973B1 (en) 1999-04-09 2006-08-15 Oscient Pharmaceuticals Corporation Nucleic acid sequences relating to Bacteroides fragilis for diagnostics and therapeutics
AUPQ137699A0 (en) * 1999-07-02 1999-07-22 University Of New England, The Control of acidosis
ATE252091T1 (de) 1999-08-27 2003-11-15 Lilly Co Eli Biaryl-oxa(thia)zolderivate und ihre verwendung als ppars modulatoren
KR20020077421A (ko) 2000-02-08 2002-10-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 동물 사료에서 산-안정성 서브틸리신 프로테아제의 사용
FR2808689B1 (fr) 2000-05-11 2004-09-03 Agronomique Inst Nat Rech Utilisation de souches acetogenes hydrogenotrophes pour la prevention ou le traitement de troubles digestifs
US20040170617A1 (en) * 2000-06-05 2004-09-02 Finegold Sydney M. Method of treating diseases associated with abnormal gastrointestinal flora
US20020013270A1 (en) * 2000-06-05 2002-01-31 Bolte Ellen R. Method for treating a mental disorder
AUPQ899700A0 (en) 2000-07-25 2000-08-17 Borody, Thomas Julius Probiotic recolonisation therapy
EP1414853A2 (en) 2000-11-27 2004-05-06 Washington University Method for studying the effects of commensal microflora on mammalian intestine and treatments of gastrointestinal-associated disease based thereon
EP1346025A2 (en) * 2000-12-21 2003-09-24 Société des Produits Nestlé S.A. Lactobacillus strain producing levan and its use in human or pet food products
DE10101793A1 (de) 2001-01-17 2002-08-01 Manfred Nilius Verwendung von SLPI zur Behandlung chronisch-entzündlicher Darmerkrankungen
EP1227152A1 (en) 2001-01-30 2002-07-31 Société des Produits Nestlé S.A. Bacterial strain and genome of bifidobacterium
KR100437497B1 (ko) 2001-03-07 2004-06-25 주식회사 프로바이오닉 로타바이러스 및 유해 미생물 억제 활성을 가지는 신규내산성 락토바실러스 루테리 프로바이오-16 및 이를함유하는 생균활성제
EP1243273A1 (en) 2001-03-22 2002-09-25 Societe Des Produits Nestle S.A. Composition comprising a prebiotic for decreasing infammatory process and abnormal activation of non-specific immune parameters
WO2002080947A1 (fr) * 2001-04-06 2002-10-17 Kyodoken Institute For Animal Science Research & Development Compositions contenant une bacterie pouvant convertir de l'acide lactique en acide butyrique, et methode utilisant ces compositions pour prevenir ou traiter l'hyperlactacidemie dans le systeme digestif ou le cancer du colon
WO2002085933A1 (en) 2001-04-20 2002-10-31 The Institute For Systems Biology Toll-like receptor 5 ligands and methods of use
EP1260227A1 (en) 2001-05-23 2002-11-27 Societe Des Produits Nestle S.A. Lipoteichoic acid from lactic acid bacteria and its use to modulate immune responses mediated by gram-negative bacteria, potential pathogenic gram-positive bacteria
PE20030284A1 (es) 2001-07-26 2003-05-01 Alimentary Health Ltd Cepas de bifidobacterium
EP1432426A2 (en) 2001-09-05 2004-06-30 ACTIAL Farmaceutica Lda. USE OF UNMETHYLATED CpG
GB0127916D0 (en) 2001-11-21 2002-01-16 Rowett Res Inst Method
US20050037955A1 (en) 2001-11-27 2005-02-17 Hooper Laura Virginia Therapeutic protein and treatments
CA2476755C (en) 2001-12-17 2014-08-26 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of inflammatory bowel disease
US7101565B2 (en) 2002-02-05 2006-09-05 Corpak Medsystems, Inc. Probiotic/prebiotic composition and delivery method
DE10206995B4 (de) 2002-02-19 2014-01-02 Orthomol Pharmazeutische Vertriebs Gmbh Mikronährstoffkombinationsprodukt mit Pro- und Prebiotika
JP2003261453A (ja) 2002-03-11 2003-09-16 Nippon Berumu Kk Ｅ．フェカリスからなる抗腫瘍剤及び放射線防護剤
WO2004003235A2 (en) 2002-06-28 2004-01-08 Puleva Biotech, S.A. Probiotic strains, a process for the selection of them, compositions thereof, and their use
US20040005304A1 (en) * 2002-07-08 2004-01-08 Mak Wood, Inc. Novel compositions and methods for treating neurological disorders and associated gastrointestinal conditions
GB0307026D0 (en) 2003-03-27 2003-04-30 Rowett Res Inst Bacterial supplement
US20040230963A1 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Rothman Michael A. Method for updating firmware in an operating system agnostic manner
EP1481681A1 (en) 2003-05-30 2004-12-01 Claudio De Simone Lactic acid bacteria combination and compositions thereof
GB0316915D0 (en) 2003-07-18 2003-08-20 Glaxo Group Ltd Compounds
AU2003247193A1 (en) 2003-07-23 2005-02-04 M.D.Lab Corp. Acid tolerant probiotic lactobacillus plantarum probio-38 that can suppress the growth of pathogenic microorganism and tge coronavirus
US7485325B2 (en) 2003-08-06 2009-02-03 Gayle Dorothy Swain Animal food supplement compositions and methods of use
JP4683881B2 (ja) 2003-08-27 2011-05-18 有限会社アーク技研 抗腫瘍活性剤
EP1667680A4 (en) * 2003-08-29 2008-10-08 Aton Pharma Inc COMBINATION PROCEDURE FOR THE TREATMENT OF CANCER
US8192733B2 (en) 2003-08-29 2012-06-05 Cobb & Associates Probiotic composition useful for dietary augmentation and/or combating disease states and adverse physiological conditions
WO2005030133A2 (en) 2003-09-22 2005-04-07 Yale University Treatment with agonists of toll-like receptors
GB0323039D0 (en) 2003-10-01 2003-11-05 Danisco Method
EP2033529B1 (en) 2003-10-24 2019-12-11 N.V. Nutricia Synbiotic composition for infants
US20050239706A1 (en) 2003-10-31 2005-10-27 Washington University In St. Louis Modulation of fiaf and the gastrointestinal microbiota as a means to control energy storage in a subject
CA2550106A1 (en) 2003-12-17 2005-06-30 N.V. Nutricia Lactic acid producing bacteria and lung function
ES2235642B2 (es) 2003-12-18 2006-03-01 Gat Formulation Gmbh Proceso de multi-microencapsulacion continuo para la mejora de la estabilidad y almacenamiento de ingredientes biologicamente activos.
WO2005093049A1 (en) 2004-03-22 2005-10-06 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Cellular and viral inactivation
EP1755668A2 (en) 2004-05-07 2007-02-28 Hans-Gustaf Ljunggren Adjuvants
US7638513B2 (en) 2004-06-02 2009-12-29 Schering Corporation Compounds for the treatment of inflammatory disorders
PE20060426A1 (es) 2004-06-02 2006-06-28 Schering Corp DERIVADOS DE ACIDO TARTARICO COMO INHIBIDORES DE MMPs, ADAMs, TACE Y TNF-alfa
EP1765391B1 (en) 2004-06-07 2013-03-06 Qu Biologics Inc Bacterial compositions for the treatment of cancer
UA86984C2 (ru) 2004-06-30 2009-06-10 Нутришн Саенсис Нв Среднецепочные жирные кислоты как противомикробные средства
DK1629850T4 (da) 2004-08-24 2013-07-01 Nutricia Nv Næringssammensætning indeholdende ufordøjelige oligosaccharider
US20060062773A1 (en) 2004-09-21 2006-03-23 The Procter & Gamble Company Compositions for maintaining and restoring normal gastrointestinal flora
JP5371169B2 (ja) 2004-09-24 2013-12-18 コンビ株式会社 薬剤耐性菌感染防除剤
KR100468522B1 (ko) 2004-10-12 2005-01-31 주식회사 프로바이오닉 코로나바이러스와 돼지 써코바이러스 2형의 생육을 억제하는 신규한 내산성 프로바이오틱 엔테로코커스훼시움 프로바이오-63
US20060115465A1 (en) 2004-10-29 2006-06-01 Macfarlane George Treatment of gastrointestinal disorders
ITMI20042189A1 (it) 2004-11-16 2005-02-16 Anidral Srl Composizione a base di batteri probiotici e suo uso nella prevenzione e-o nel trattamento di patologie e-o infezioni respiratorie e nel miglioramento della funzionalita' intestinale
PT2351492E (pt) 2005-02-28 2014-12-02 Nutricia Nv Composição nutricional com probióticos
US20100048595A1 (en) 2005-03-23 2010-02-25 Washington University In St. Louis Use of archaea to modulate the nutrient harvesting functions of the gastrointestinal microbiota
US20090233888A1 (en) 2005-03-23 2009-09-17 Usc Stevens, University Of Southern California Treatment of disease conditions through modulation of hydrogen sulfide produced by small intestinal bacterial overgrowth
JP2006265212A (ja) 2005-03-25 2006-10-05 Institute Of Physical & Chemical Research Ｉｌ−２１産生誘導剤
US20100233312A9 (en) 2005-04-11 2010-09-16 The Procter & Gamble Company Compositions comprising probiotic and sweetener components
EP1714660A1 (en) 2005-04-21 2006-10-25 N.V. Nutricia Uronic acid and probiotics
PL1874917T3 (pl) 2005-04-26 2012-07-31 Teagasc The Agriculture And Food Dev Authority Kompozycja probiotyczna odpowiednia dla zwierząt
MX2007013978A (es) 2005-05-09 2008-02-22 Ono Pharmaceutical Co Anticuerpos monoclonales humanos a muerte programada 1 (pd-1) y metodos para tratamiento de cancer utilizando anticuerpos anti-pd-1 solos o en combinacion con otros inmunoterapeuticos.
US7572474B2 (en) 2005-06-01 2009-08-11 Mead Johnson Nutrition Company Method for simulating the functional attributes of human milk oligosaccharides in formula-fed infants
US8075934B2 (en) 2008-10-24 2011-12-13 Mead Johnson Nutrition Company Nutritional composition with improved digestibility
JP2007084533A (ja) 2005-08-24 2007-04-05 Prima Meat Packers Ltd 免疫応答調節組成物及び該組成物を有効成分とする食品
US7625704B2 (en) 2005-08-31 2009-12-01 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions for identifying bacteria associated with bacteria vaginosis
DE602006009834D1 (de) 2005-09-01 2009-11-26 Schering Corp Verwendung von il-23 und il-17-antagonisten zur behandlung von autoimmuner entzündlicher augenerkrankung
WO2007035057A1 (en) 2005-09-23 2007-03-29 Gwangju Institute Of Science And Technology Composition for preventing or treating artritis comprising lactic acid bacteria and collangen as active ingredients
EP1776877A1 (en) 2005-10-21 2007-04-25 N.V. Nutricia Method for stimulating the intestinal flora
AU2006306241B9 (en) 2005-10-24 2012-03-08 Nestec S.A. Dietary fiber formulation and method of administration
JP2007116991A (ja) 2005-10-28 2007-05-17 Eternal Light General Institute Inc 機能性食品
US7767420B2 (en) 2005-11-03 2010-08-03 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Heparan sulfate glycosaminoglycan lyase and uses thereof
JP2009520689A (ja) 2005-12-01 2009-05-28 シェーリング コーポレイション 炎症障害および微生物性疾患を処置するための化合物
US8889149B2 (en) 2006-02-16 2014-11-18 Wayne State University Use of flagellin to prevent and treat gram negative bacterial infection
US20080260906A1 (en) 2006-03-17 2008-10-23 Marko Stojanovic Compositions comprising probiotic and sweetener components
JP5031249B2 (ja) 2006-03-22 2012-09-19 学校法人北里研究所 炎症抑制作用のある菌体含有組成物
WO2007136719A2 (en) 2006-05-18 2007-11-29 Biobalance Llc Biotherapeutic compositions comprising probiotic escherichia coli and uses thereof
JP2009538342A (ja) 2006-05-26 2009-11-05 ネステク ソシエテ アノニム トウチ抽出物の使用方法及び栄養組成物
WO2007140613A1 (en) 2006-06-06 2007-12-13 Mcgill University Fermented milk product and use thereof
TW200819540A (en) 2006-07-11 2008-05-01 Genelux Corp Methods and compositions for detection of microorganisms and cells and treatment of diseases and disorders
BRPI0721827B8 (pt) 2006-08-04 2021-05-25 Shs Int Ltd uso de uma composição, e, composição
WO2008031438A2 (en) 2006-09-13 2008-03-20 Region Hovedstaden V/Gentofte Hospital Treatment of asthma, eczema and/or allergy using non-pathogenic organisms
US20080069861A1 (en) 2006-09-19 2008-03-20 National Starch And Chemical Investment Holding Corporation Probiotic/Non-Probiotic Combinations
US20100168410A1 (en) 2006-10-27 2010-07-01 Pfizer Products Inc. Hydroxypropyl Methyl Cellulose Hard Capsules and Process of Manufacture
US20080118473A1 (en) 2006-11-01 2008-05-22 The Procter & Gamble Company Methods of treating a respiratory condition comprising probiotic treatment
EP1920782A1 (en) 2006-11-10 2008-05-14 Glycotope Gmbh Carboyhdrate specific cellular immunity inducing microorganisms and fractions thereof
WO2008064489A1 (en) 2006-12-01 2008-06-05 Mcmaster University Probiotics to inhibit inflammation
US20100172874A1 (en) 2006-12-18 2010-07-08 The Washington University Gut microbiome as a biomarker and therapeutic target for treating obesity or an obesity related disorder
DE102006062250A1 (de) 2006-12-22 2008-06-26 Roland Saur-Brosch Verwendung einer Zusammensetzung aus Mineralstoffen und/oder Vitaminen und gegebenenfalls acetogenen und/oder butyrogenen Bakterien zur oralen oder rektalen Verabreichung für die Behandlung und Vorbeugung von abdominalen Beschwerden
WO2008083157A2 (en) 2006-12-29 2008-07-10 Washington University In St. Louis Altering pgc-1alapha, ampk, fiaf, or the gastrointestinal microbiota as a means to modulate body fat and/or weight loss in a subject
JP2008195635A (ja) 2007-02-09 2008-08-28 Crossfield Bio Inc 馬用乳酸菌製剤
ES2381232T3 (es) 2007-02-28 2012-05-24 Mead Johnson Nutrition Company Procedimiento para el tratamiento o la prevención de la inflamación sistémica
GB2465051B (en) 2007-03-28 2012-01-25 Alimentary Health Ltd Probiotic bifidobacterium strains
KR20090127180A (ko) 2007-03-28 2009-12-09 앨러멘터리 헬스 리미티드 프로바이오틱 비피도박테리움 스트레인
JP5185996B2 (ja) 2007-04-24 2013-04-17 ケミン、インダストリーズ、インコーポレーテッド ラクトバシラス・ジョンソニイｄ１１５の広いスペクトルの抗菌および抗真菌活性
EP1997499A1 (en) 2007-05-31 2008-12-03 Puleva Biotech, S.A. Mammalian milk microorganisms, compositions containing them and their use for the treatment of mastitis
EP1997906A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 Friesland Brands B.V. Lactobacillus
EP1997907A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 Friesland Brands B.V. Bifidobacteria
EP1997905A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 Friesland Brands B.V. Nucleic acid amplification
WO2008153377A1 (en) 2007-06-15 2008-12-18 N.V. Nutricia Nutrition with non-viable bifidobacterium and non-digestible oligosaccharide
WO2009002145A1 (en) 2007-06-26 2008-12-31 N.V. Nutricia Lipid composition for improving function of brain functioning
ES2611277T3 (es) 2007-06-27 2017-05-08 Laboratorios Ordesa, S.L. Péptidos contra una infección por rotavirus
HUP0700552A2 (en) 2007-08-27 2009-03-30 Janos Dr Feher Method and composition inhibiting inflammation
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
EP2192909A2 (en) 2007-10-01 2010-06-09 University College Cork-National University of Ireland, Cork Modulation of tissue fatty acid composition of a host by human gut bacteria
DK2203551T3 (da) 2007-10-20 2013-10-28 Univ Liege Bifidobakterieart
NZ585210A (en) 2007-10-26 2012-07-27 Brenda e moore Probiotic compositions comprising bacteroides and methods for inducing and supporting weight loss
EP2205642B1 (en) 2007-11-02 2016-01-27 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Non-anticoagulant polysaccharide compositions
EP2065048A1 (en) 2007-11-30 2009-06-03 Institut Pasteur Use of a L. casei strain, for the preparation of a composition for inhibiting mast cell activation
EP2898889B1 (en) 2007-12-07 2017-03-22 N.V. Nutricia Bifidobacterium for dust mite allergy
US20100330190A1 (en) 2007-12-17 2010-12-30 Compans Richard W Immunogenic compositions and methods of use thereof
ES2343499B1 (es) 2007-12-24 2011-06-10 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas Microorganismos para mejorar el estado de salud de individuos con desordenes relacionados con la ingesta de gluten.
US20090196921A1 (en) 2008-02-06 2009-08-06 The Procter & Gamble Company Compositions Methods and Kits For Enhancing Immune Response To A Respiratory Condition
EP2103226A1 (en) 2008-03-18 2009-09-23 Friesland Brands B.V. Long-life probiotic food product
EP2110028A1 (en) * 2008-04-15 2009-10-21 Nestec S.A. Bifidobacterium longum and hippocampal BDNF expression
JP2011519828A (ja) 2008-04-18 2011-07-14 バクシネート コーポレーション フラジェリンの欠失変異体と使用方法
CA2722738C (en) 2008-05-13 2017-04-25 Glycotope Gmbh Fermentation process
MX2008006546A (es) 2008-05-21 2009-11-23 Sigma Alimentos Sa De Cv Bifidobacteria productora de ácido fólico, composición alimenticia y uso de la bifidobacteria.
CN102940652B (zh) 2008-05-28 2015-03-25 青岛东海药业有限公司 两形真杆菌制剂及其应用
CN101590081A (zh) 2008-05-28 2009-12-02 青岛东海药业有限公司 凸腹真杆菌和两形真杆菌制剂及其应用
US8586029B2 (en) 2008-06-04 2013-11-19 Trustees Of Dartmouth College Prevention or treatment of immune-relevant disease by modification of microfloral populations
CN101596216A (zh) * 2008-06-06 2009-12-09 萧湘 预防或治疗糖尿病和相关病症的微生物制剂
EP2133088A3 (en) 2008-06-09 2010-01-27 Nestec S.A. Rooibos and inflammation
WO2009151315A1 (en) 2008-06-13 2009-12-17 N.V. Nutricia Nutritional composition for infants delivered via caesarean section
WO2009154463A2 (en) 2008-06-20 2009-12-23 Stichting Top Institute Food And Nutrition Butyrate as a medicament to improve visceral perception in humans
EP2138186A1 (en) 2008-06-24 2009-12-30 Nestec S.A. Probiotics, secretory IgA and inflammation
WO2010002241A1 (en) 2008-06-30 2010-01-07 N.V. Nutricia Nutritional composition for infants delivered via caesarean section
KR101017448B1 (ko) 2008-09-18 2011-02-23 주식회사한국야쿠르트 대장의 건강 증진 효능을 갖는 비피도박테리움 롱검 에이취와이8004 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품
US20100074870A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Probiotic infant products
US8137718B2 (en) 2008-09-19 2012-03-20 Mead Johnson Nutrition Company Probiotic infant products
KR101057357B1 (ko) 2008-09-22 2011-08-17 광주과학기술원 유산균 및 콜라겐을 유효성분으로 포함하는 관절염 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 식품 조성물
EP2337569A4 (en) 2008-09-25 2013-04-03 Univ New York COMPOSITIONS AND METHODS FOR CHARACTERIZING AND RESTORING THE STOMACH DARM, SKIN AND NOSE MICROBIOTA
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
US10369204B2 (en) 2008-10-02 2019-08-06 Dako Denmark A/S Molecular vaccines for infectious disease
BRPI0922296A2 (pt) 2008-12-05 2015-08-11 Nestec Sa Composições para o uso em recém-nascidos com baixo peso no nascimento.
US20120107279A1 (en) 2008-12-19 2012-05-03 Nestec S.A. Prevention and treatment of rotavirus diarrhoea
IT1392672B1 (it) 2009-01-12 2012-03-16 Wyeth Consumer Healthcare S P A Composizioni comprendenti componenti probiotici e prebiotici e sali minerali, con lactoferrina
RU2011140335A (ru) 2009-03-05 2013-04-10 Эбботт Лэборетриз Связывающие il-17 белки
JP5710876B2 (ja) 2009-03-26 2015-04-30 クロスフィールドバイオ株式会社 新規ビフィドバクテリウム属微生物およびその利用
JP6077303B2 (ja) 2009-05-07 2017-02-08 タト エ リル アングルディアント フランス ソシエテ パ アクシオンス シンプリフィエ アルファ−（１，２）−分岐アルファ−（１，６）オリゴデキストランを含有する組成物及びアルファ−（１，２）−分岐アルファ−（１，６）オリゴデキストランの製造方法
MY159273A (en) 2009-05-11 2016-12-30 Nestec Sa Bifidobacterium longum ncc2705 (cncm i-2618) and immune disorders
EP2251022A1 (en) 2009-05-11 2010-11-17 Nestec S.A. Non-replicating micro-organisms and their immune boosting effect
EP2251020A1 (en) 2009-05-11 2010-11-17 Nestec S.A. Short-time high temperature treatment generates microbial preparations with anti-inflammatory profiles
KR20100128168A (ko) 2009-05-27 2010-12-07 중앙대학교 산학협력단 공액 리놀레산 생산능이 우수한 신규한 균주
US20100311686A1 (en) 2009-06-03 2010-12-09 Kasper Lloyd H Nutraceutical composition and methods for preventing or treating multiple sclerosis
WO2010143940A1 (en) 2009-06-12 2010-12-16 N.V. Nutricia Synergistic mixture of beta-galacto-oligosaccharides with beta-1,3 and beta-1,4/1,6 linkages
EP2443259A4 (en) 2009-06-16 2012-10-10 Univ Columbia BIOMARKERS ASSOCIATED WITH AUTISM AND USES THEREOF
US9050276B2 (en) * 2009-06-16 2015-06-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Autism-associated biomarkers and uses thereof
KR101087973B1 (ko) * 2009-06-30 2011-12-01 일동제약주식회사 신규한 락토바실루스 헬베티쿠스, 이의 배양 방법 및 용도
WO2011005756A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Puretech Ventures, Llc Delivery of agents targeted to microbiota niches
EP2456891A4 (en) 2009-07-24 2013-04-03 Southwest Regional Pcr Llc DIAGNOSIS, DETECTION, QUANTIFICATION UNIVERSAL MICROBIENS, AND TARGETED THERAPY ON A SAMPLE
EP2467032B1 (en) 2009-08-18 2018-02-21 Nestec S.A. A nutritional composition comprising bifidobacterium longum strains and reducing food allergy symptoms, especially in infants and children
US20110053829A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
GB2473294B (en) 2009-09-08 2014-07-09 Mclaren Automotive Ltd Dynamics control
AU2010299552A1 (en) 2009-09-23 2012-04-05 Thomas Julius Borody Therapy for enteric infections
EP2308498A1 (en) 2009-09-30 2011-04-13 Nestec S.A. Administration of Bifidobacterium breve during infancy to prevent inflammation later in life
US20120238468A1 (en) 2009-10-05 2012-09-20 Aak Patent B.V. Methods for diagnosing irritable bowel syndrome
EP2485742A4 (en) 2009-10-06 2013-03-20 Scott Dorfner ANTIBIOTIC FORMULATIONS WITH REDUCED SIDE EFFECTS ON STOMACH AND DARM
RU2546251C2 (ru) 2009-11-11 2015-04-10 Алиментари Хелс Лимитед Пробиотический штамм бифидобактерий
MY162183A (en) 2009-12-01 2017-05-31 Univ Putra Malaysia Probiotic composition for nutraceutical product
WO2011075138A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Hill's Pet Nutrition, Inc. Pet food compositions including probiotics and methods of manufacture and use thereof
JP5557520B2 (ja) 2009-12-22 2014-07-23 京楽産業．株式会社 遊技機の演出用動力伝達機構及びこれを備える遊技機
US20150104418A1 (en) 2014-12-18 2015-04-16 Microbios, Inc. Bacterial composition
FR2955774A1 (fr) 2010-02-02 2011-08-05 Aragan Preparation destinee a traiter l'exces ponderal et les desordres associes et applications de ladite preparation
NL2004201C2 (en) 2010-02-05 2011-08-08 Friesland Brands Bv Use of sialyl oligosaccharides to modulate the immune system.
NL2004200C2 (en) 2010-02-05 2011-08-08 Friesland Brands Bv Use of sialyl oligosaccharides in weight management.
IT1398553B1 (it) 2010-03-08 2013-03-01 Probiotical Spa Composizione comprendente batteri probiotici per il trattamento di patologie associate con le alterazioni del sistema immunitario.
JP5737646B2 (ja) 2010-03-24 2015-06-17 森下仁丹株式会社 抗アレルギー剤
EP2552464B1 (en) 2010-03-30 2018-02-28 Assistance Publique - Hôpitaux de Paris Use of bifidobacteria for preventing allergy in breastfed infants
US8951512B2 (en) 2010-05-04 2015-02-10 New York University Methods for treating bone disorders by characterizing and restoring mammalian bacterial microbiota
WO2011149335A1 (en) 2010-05-25 2011-12-01 N.V. Nutricia Immune imprinting nutritional composition
EP2585583A4 (en) 2010-06-01 2014-01-15 Moore Res Entpr Llc CELLULAR CONSTITUENTS FROM BACTEROID GENE BACTERIA, COMPOSITIONS CONTAINING SAME, AND THERAPEUTIC METHODS USING BACTEROID BACTERIA OR CELLULAR COMPONENTS THEREOF
WO2011151941A1 (ja) 2010-06-04 2011-12-08 国立大学法人東京大学 制御性ｔ細胞の増殖または集積を誘導する作用を有する組成物
TWI417054B (zh) 2010-06-15 2013-12-01 Jen Shine Biotechnology Co Ltd 新穎糞腸球菌ｌｊｓ－０１及其益生用途
EP2397145A1 (en) 2010-06-18 2011-12-21 Nestec S.A. L. johnsonii La1, B. longum NCC2705 and immune disorders
FR2962045B1 (fr) 2010-07-05 2012-08-17 Bifinove Complexe macromoleculaire d'origine bacterienne et utilisation dudit complexe moleculaire pour prevenir et traiter les rhumatismes inflammatoires
CN101914452B (zh) * 2010-07-14 2011-12-07 洪亚辉 石杉碱甲高产菌株tcm-01
TWI401086B (zh) 2010-07-20 2013-07-11 Univ China Medical 胚芽乳酸桿菌及其用途
KR102157718B1 (ko) 2010-07-26 2020-09-18 큐 바이올로직스 인코포레이티드 면역원성 소염 조성물
BR112013002667B1 (pt) 2010-08-04 2020-02-04 Thomas Julius Borody composições para transplante da flora intestinal e métodos para fazê-las e usá-las e dispositivos para administrá-las
US9386793B2 (en) 2010-08-20 2016-07-12 New York University Compositions and methods for treating obesity and related disorders by characterizing and restoring mammalian bacterial microbiota
KR101250463B1 (ko) 2010-10-12 2013-04-15 대한민국 신생아 분변에서 분리한 내산소성 비피도박테리움 롱검 비피더스 유산균 및 이를 이용한 프로바이오틱 조성물
US20130230856A1 (en) 2010-10-27 2013-09-05 Quantibact A/S Capture of target dna and rna by probes comprising intercalator molecules
CN102031235B (zh) 2010-11-09 2012-07-25 中国农业大学 一种粪肠球菌anse228及其应用
EP2455092A1 (en) 2010-11-11 2012-05-23 Nestec S.A. Non-replicating probiotic micro-organisms protect against upper respiratory tract infections
US20120128644A1 (en) 2010-11-24 2012-05-24 Oragenics, Inc. Use of Bacteria to Treat and Prevent Respiratory Infections
CN102093967B (zh) 2010-12-02 2013-01-30 中国农业科学院特产研究所 一株水貂源屎肠球菌及其应用
ES2389547B1 (es) 2010-12-07 2013-08-08 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Bifidobacterium cect 7765 y su uso en la prevención y/o tratamiento del sobrepeso, la obesidad y patologías asociadas.
US9376473B2 (en) 2011-01-10 2016-06-28 Cleveland Biolabs, Inc. Use of Toll-Like Receptor agonist for treating cancer
PT2481299T (pt) 2011-01-31 2017-03-08 Synformulas Gmbh Estirpes de bifidobacterium bifidum para aplicação em doenças gastrointestinais
JP5840368B2 (ja) 2011-02-02 2016-01-06 カルピス株式会社 関節炎予防改善用物質
AP2013007097A0 (en) 2011-02-09 2013-09-30 Lavivo Ab Synbiotic compositions for restoration and reconstitution of gut microbiota
EP3135291A1 (en) 2011-03-09 2017-03-01 Regents Of The University Of Minnesota Compositions and methods for transplantation of colon microbiota
BRPI1100857A2 (pt) 2011-03-18 2013-05-21 Alexandre Eduardo Nowill agente imunomodulador e suas combinaÇÕes, seu uso e mÉtodo imunoterÁpico para a recontextualizaÇço, reprogramaÇço e reconduÇço do sistema imune em tempo real
WO2012140636A1 (en) 2011-04-11 2012-10-18 Alimentary Health Limited A probiotic formulation
WO2012142605A1 (en) 2011-04-15 2012-10-18 Samaritan Health Services Rapid recolonization deployment agent
CA2833633A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Jason Fisher Composition and method for enhancing an immune response
US9567361B2 (en) 2011-05-13 2017-02-14 Glycosyn LLC Use of purified 2′-fucosyllactose, 3-fucosyllactose and lactodifucotetraose as prebiotics
KR20120133133A (ko) 2011-05-30 2012-12-10 한국 한의학 연구원 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2012170478A2 (en) 2011-06-06 2012-12-13 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and kits for detecting adenomas, colorectal cancer, and uses thereof
GB201110095D0 (en) 2011-06-15 2011-07-27 Danisco Method of treatment
US9579353B2 (en) * 2011-06-10 2017-02-28 Prothera, Inc. Pharmaceutical compositions containing pediococcus and methods for reducing the symptoms of gastroenterological syndromes
JP2013005759A (ja) 2011-06-24 2013-01-10 Kyodo Milk Industry Co Ltd マウス腸内菌叢の推測方法
CN102408998B (zh) * 2011-06-28 2013-06-05 深圳大学 一种具有神经退行性疾病防治活性的海洋红树耐盐性内生真菌
WO2013005836A1 (ja) 2011-07-07 2013-01-10 長岡香料株式会社 フルクトース吸収阻害剤
WO2013008102A2 (en) 2011-07-14 2013-01-17 R.E.D. Laboratories N.V../ S.A. Methods and compositions for evaluating and/or treating chronic immune diseases
GB201112091D0 (en) 2011-07-14 2011-08-31 Gt Biolog Ltd Bacterial strains isolated from pigs
US20130022575A1 (en) 2011-07-19 2013-01-24 Microbial Rx Systems and methods of replacing intestinal flora
CN102304483A (zh) 2011-08-12 2012-01-04 北京金泰得生物科技股份有限公司 一株饲用屎肠球菌及其应用
KR101261872B1 (ko) 2011-08-23 2013-05-14 대한민국 (식품의약품안전처장) 장내 미생물 효소복합체 및 이의 제조방법
US20140342438A1 (en) 2011-09-14 2014-11-20 University Of Guelph Media supplements and methods to culture human gastrointestinal anaerobic microorganisms
GB201117313D0 (en) 2011-10-07 2011-11-16 Gt Biolog Ltd Bacterium for use in medicine
EP2750682B1 (en) 2011-10-11 2016-05-18 Achim Biotherapeutics AB Composition comprising anaerobically cultivated human intestinal microbiota
FI126711B (fi) 2011-10-12 2017-04-13 Gut Guide Oy Serotoniinivajeeseen liittyvän terveysriskin arvioiminen
CN103082292B (zh) 2011-11-02 2015-03-04 深圳华大基因研究院 罗斯氏菌(Roseburia)在治疗和预防肥胖相关疾病中的应用
CN102373172B (zh) 2011-11-03 2013-03-20 北京龙科方舟生物工程技术有限公司 一株屎肠球菌及其应用
DK3569690T3 (da) 2011-12-01 2024-11-11 Univ Tokyo Human-afledte bakterier som inducerer proliferation eller akkumulation af regulatoriske t-celler
ES2408279B1 (es) 2011-12-15 2014-09-09 Universidad De Las Palmas De Gran Canaria Bacteria acido láctica probiótica
ITBG20120010A1 (it) 2012-02-24 2013-08-25 Milano Politecnico Dispositivo per l'addestramento chirurgico
ITMI20120471A1 (it) 2012-03-26 2013-09-27 Giovanni Mogna Composizione a base di ceppi di batteri bifidobacterium longum in grado di aiutare il prolungamento della vita
JP5792105B2 (ja) 2012-03-27 2015-10-07 森永乳業株式会社 ラクト−ｎ−ビオースｉの製造方法
JP6201982B2 (ja) 2012-03-30 2017-09-27 味の素株式会社 糖尿病誘起細菌
US20130280724A1 (en) 2012-04-11 2013-10-24 Nestec Sa Methods for diagnosing impending diarrhea
GB201206599D0 (en) 2012-04-13 2012-05-30 Univ Manchester Probiotic bacteria
WO2013154725A1 (en) 2012-04-13 2013-10-17 Trustees Of Boston College Prebiotic compositions and methods of use
ES2792106T3 (es) 2012-05-18 2020-11-10 Genome Res Ltd Métodos y grupos
ES2436251B1 (es) 2012-05-25 2014-10-08 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas.
AU2013271336B2 (en) 2012-06-04 2017-11-30 Centre For Digestive Diseases Compositions and methods for treating Crohn's Disease and related conditions and infections
CN102743420A (zh) 2012-06-06 2012-10-24 上海交通大学 改善肠道菌群结构的方法及应用
US9676847B2 (en) 2012-06-25 2017-06-13 Orega Biotech IL-17 antagonist antibodies
DK2879523T3 (da) 2012-07-31 2017-01-16 Nestec Sa Ernæringssammensætning til fremme af muskuloskeletalt helbred hos patienter med inflammatorisk tarmsygdom (ibd)
WO2014019271A1 (en) 2012-08-01 2014-02-06 Bgi Shenzhen Biomarkers for diabetes and usages thereof
KR101426276B1 (ko) * 2012-08-16 2014-08-05 주식회사한국야쿠르트 심장질환 및 뇌졸중을 유발하는 거품세포 형성 억제 및 혈관 병변 형성을 억제하는 활성을 가지는 락토바실러스 플란타룸 ｈｙ７７１２를 유효성분으로 함유하는 제품
US10874701B2 (en) 2012-08-16 2020-12-29 University-Industry Cooperation Group Of Kyung Hee University Lactic acid bacteria capable of preventing and/or treating senescence and dementia
CN104768560A (zh) 2012-08-29 2015-07-08 加州理工学院 孤独症谱系障碍的诊断和治疗
CN104936581A (zh) 2012-08-29 2015-09-23 萨利克斯药品有限公司 用于治疗便秘和相关胃肠道疾病和疾病状态的泻药组合物和方法
WO2014043593A2 (en) 2012-09-13 2014-03-20 Massachusetts Institute Of Technology Programmable drug delivery profiles of tumor-targeted bacteria
KR101473058B1 (ko) 2012-09-19 2014-12-16 주식회사 쎌바이오텍 과민성 대장 증후군 예방 또는 치료용 조성물
CN103652322B (zh) 2012-09-21 2016-02-10 临沂思科生物科技有限公司 一种含乳酸菌的复合益生菌饲料添加剂的制备方法
EP2904096A1 (en) 2012-10-03 2015-08-12 Metabogen AB Identification of a person having risk for atherosclerosis and associated diseases by the person's gut microbiome and the prevention of such diseases
FR2997091B1 (fr) 2012-10-22 2016-05-06 Fond Mediterranee Infection Utilisation d'un compose antioxydant pour la culture de bacteries sensibles a la tension en oxygene
CN104755092A (zh) 2012-10-30 2015-07-01 雀巢产品技术援助有限公司 用于递送协同免疫作用的包含微粒和益生菌的组合物
US9839657B2 (en) 2012-10-30 2017-12-12 Deerland Enzymes, Inc. Prebiotic compositions comprising one or more types of bacteriophage
BR112015009975A2 (pt) 2012-11-01 2017-07-11 Academisch Ziekenhuis Groningen métodos e composições para a estimulação das bactérias benéficas no trato gastrointestinal
WO2014075745A1 (en) 2012-11-19 2014-05-22 Université Catholique de Louvain Use of akkermansia for treating metabolic disorders
SG11201503966PA (en) 2012-11-23 2015-06-29 Seres Health Inc Synergistic bacterial compositions and methods of production and use thereof
US8906668B2 (en) 2012-11-23 2014-12-09 Seres Health, Inc. Synergistic bacterial compositions and methods of production and use thereof
CA2896795A1 (en) 2012-11-26 2014-05-30 Thomas Julius Borody Compositions for the restoration of a fecal microbiota and methods for making and using them
US8993233B2 (en) 2012-12-12 2015-03-31 The Broad Institute Inc. Engineering and optimization of systems, methods and compositions for sequence manipulation with functional domains
RU2721275C2 (ru) 2012-12-12 2020-05-18 Те Брод Инститьют, Инк. Доставка, конструирование и оптимизация систем, способов и композиций для манипуляции с последовательностями и применения в терапии
IL300461A (en) 2012-12-12 2023-04-01 Harvard College Engineering and optimization of improved systems, methods and enzyme compositions for sequence manipulation
US20140193464A1 (en) 2013-01-08 2014-07-10 Imagilin Technology, Llc Effects of probiotics on humans and animals under environmental or biological changes
WO2014121298A2 (en) 2013-02-04 2014-08-07 Seres Health, Inc. Methods of populating a gastrointestinal tract
EP3904502A3 (en) 2013-02-04 2022-02-23 Seres Therapeutics, Inc. Compositions and methods
CA2940226A1 (en) 2013-02-22 2014-08-28 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for promoting growth of beneficial microbes to treat or prevent disease or prolong life
MX2015011700A (es) 2013-03-05 2016-07-20 Univ Groningen Uso de la bacteria faecalibacterium prausnitzii htf-f (dsm 26943) para suprimir la inflamacion.
US20160040215A1 (en) 2013-03-14 2016-02-11 Seres Therapeutics, Inc. Methods for Pathogen Detection and Enrichment from Materials and Compositions
CA2904389C (en) 2013-03-14 2018-09-18 Jerome J. Schentag Targeted gastrointestinal tract delivery of probiotic organisms and/or therapeutic agents
JP2016519664A (ja) 2013-03-15 2016-07-07 セレス セラピューティクス インコーポレイテッド ネットワークを基にした微生物組成物及び方法
WO2014150094A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 University Of Florida Research Foundation, Inc. Butyrogenic bacteria as probiotics to treat clostridium difficile
CA2902248A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Microbiome Therapeutics, Llc Activated soy pod fiber
CN103156888A (zh) 2013-03-18 2013-06-19 广州知光生物科技有限公司 脆弱拟杆菌在制备治疗炎症性肠病组合物中的应用
CN103142656A (zh) 2013-03-18 2013-06-12 广州知光生物科技有限公司 脆弱拟杆菌在制备防治结肠癌组合物中的应用
CN103146620A (zh) 2013-03-25 2013-06-12 广州知光生物科技有限公司 具有益生菌特性的脆弱拟杆菌
JP2014196260A (ja) 2013-03-29 2014-10-16 公立大学法人奈良県立医科大学 慢性閉塞性肺疾患の予防又は治療用組成物
GB201306536D0 (en) 2013-04-10 2013-05-22 Gt Biolog Ltd Polypeptide and immune modulation
EP2994161B1 (en) 2013-05-10 2020-10-28 California Institute of Technology Probiotic prevention and treatment of colon cancer
US10284649B2 (en) 2013-05-31 2019-05-07 Nec Corporation Distributed processing system
LT3003330T (lt) 2013-06-05 2018-10-25 Rebiotix, Inc. Mikrobiotos atstatymo terapija (mat), kompozicijos ir gamybos būdai
US9511099B2 (en) 2013-06-05 2016-12-06 Rebiotix, Inc. Microbiota restoration therapy (MRT), compositions and methods of manufacture
US20160120915A1 (en) 2013-06-10 2016-05-05 New York University Methods for manipulating immune responses by altering microbiota
WO2014200334A1 (en) 2013-06-14 2014-12-18 N.V. Nutricia Synbiotic composition for treatment of infections in allergic patients
WO2015003001A1 (en) 2013-07-01 2015-01-08 The Washington University Methods for identifying supplements that increase gut colonization by an isolated bacterial species, and compositions derived therefrom
WO2015003305A1 (zh) 2013-07-08 2015-01-15 吉瑞高新科技股份有限公司 电子烟盒
WO2015006355A2 (en) 2013-07-09 2015-01-15 Puretech Ventures, Llc Compositions containing combinations of bioactive molecules derived from microbiota for treatment of disease
US10633714B2 (en) 2013-07-21 2020-04-28 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and systems for microbiome characterization, monitoring and treatment
US20160192689A1 (en) 2013-07-31 2016-07-07 Wikifoods, Inc. Encapsulated functional food compositions
EP3033091B1 (en) 2013-08-16 2022-09-07 Versitech Limited Probiotic composition and use thereof in the prevention and treatment of hepatocellular carcinoma
CN103509741B (zh) 2013-08-22 2015-02-18 河北农业大学 布劳特菌auh-jld56及其在牛蒡苷元转化中的应用
CN104415060A (zh) 2013-08-30 2015-03-18 深圳华大基因科技有限公司 可食用组合物及其制备方法和用途
ITMI20131467A1 (it) 2013-09-06 2015-03-07 Sofar Spa Uso di una composizione comprendente microrganismi per aumentare la produzione intestinale di acido butirrico, di acido folico o di niacina e/o per diminuire la produzione intestinale di acido succinico
US10203329B2 (en) 2013-09-12 2019-02-12 The Johns Hopkins University Biofilm formation to define risk for colon cancer
US10058576B2 (en) 2013-10-03 2018-08-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods comprising a defined microbiome and methods of use thereof
WO2015057151A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Innovafood Ab A nutritionally balanced composite meal for infants and small children and a method of producing said meal
PL229020B1 (pl) 2013-11-13 2018-05-30 Inst Biotechnologii Surowic I Szczepionek Biomed Spolka Akcyjna Nowy szczep Bifidobacterium breve
BR112016011830A2 (pt) 2013-11-25 2017-09-26 Seres Therapeutics Inc composições bacterianas sinergísticas e métodos para produção e uso das mesmas.
EP3082431A4 (en) 2013-12-16 2017-11-15 Seres Therapeutics, Inc. Bacterial compositions and methods of use thereof for treatment of immune system disorders
CN103981117B (zh) 2013-12-24 2018-10-26 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用
CN103981115B (zh) 2013-12-24 2018-10-26 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 一株高抗逆性屎肠球菌及其应用
CN103820363B (zh) 2014-01-27 2016-02-24 福建省农业科学院生物技术研究所 一种屎肠球菌菌粉的制备与应用
CN103865846B (zh) 2014-02-27 2016-03-30 扬州绿保生物科技有限公司 一种屎肠球菌及其制备方法
CN103849590B (zh) 2014-03-25 2016-07-06 上海交通大学 一株耐酸短双歧杆菌BB8dpH及其应用
KR101683474B1 (ko) 2014-03-26 2016-12-08 주식회사 쎌바이오텍 과민성 대장 증후군 예방 또는 치료용 조성물
US9783858B2 (en) 2014-04-02 2017-10-10 Northwestern University Altered microbiome of chronic pelvic pain
KR101583546B1 (ko) 2014-04-09 2016-01-11 국립암센터 유전자 다형성을 이용한 소라페닙 치료에 대한 반응성 예측방법
MX387331B (es) 2014-04-10 2025-03-18 Riken Composiciones y metodos para induccion de celulas th17.
CN104195075B (zh) 2014-08-14 2017-04-19 生合生物科技股份有限公司 一种屎肠球菌ef08及包含它的饲料添加物和饲料
WO2015168534A1 (en) 2014-05-02 2015-11-05 Novogy, Inc. Therapeutic treatment of gastrointestinal microbial imbalances through competitive microbe displacement
CA2947067C (en) 2014-05-08 2023-02-14 Panoptes Pharma Ges.M.B.H. Compounds for treating ophthalmic diseases and disorders
CN106573044B (zh) 2014-08-05 2020-01-21 深圳华大基因科技有限公司 真杆菌属在预防和治疗结直肠癌相关疾病中的用途
CN106687130B (zh) 2014-08-05 2020-01-21 深圳华大基因科技有限公司 真杆菌属在预防和治疗结直肠癌相关疾病中的用途
EP3453396A1 (en) 2014-08-28 2019-03-13 Yale University Compositions and methods for treating an inflammatory disease or disorder
US20160058808A1 (en) 2014-09-03 2016-03-03 California Institute Of Technology Microbe-based modulation of serotonin biosynthesis
CN104546933A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 粪拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546935A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 多形拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546940A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 平常拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546942A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 多氏拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546934B (zh) 2014-09-30 2019-04-09 深圳华大基因科技有限公司 粪副拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546932A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 卵形拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
US10046030B2 (en) 2014-10-07 2018-08-14 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for preventing and treating infection
DK3209308T3 (da) 2014-10-24 2022-10-03 Evolve Biosystems Inc Aktiverede bifidobakterier og fremgangsmåder til anvendelse deraf
WO2016069801A1 (en) 2014-10-30 2016-05-06 California Institute Of Technology Compositions and methods comprising bacteria for improving behavior in neurodecelopmental disorders
KR20170086492A (ko) 2014-10-30 2017-07-26 캘리포니아 인스티튜트 오브 테크놀로지 신경발달 장애에서의 행동을 개선시키기 위한 박테리아를 포함하는 조성물 및 방법
EP3212001A4 (en) 2014-10-31 2018-04-25 Whole Biome Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of disorders
CN104435000A (zh) 2014-11-12 2015-03-25 江南大学 乳酸菌对支气管哮喘治疗中的应用
FI3223835T3 (fi) 2014-11-25 2025-06-16 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Suolen mikrobisto ja gvhd
MA41020A (fr) 2014-11-25 2017-10-03 Evelo Biosciences Inc Compositions probiotiques et prébiotiques, et leurs procédés d'utilisation pour la modulation du microbiome
SI3193901T1 (en) 2014-12-23 2018-06-29 4D Pharma Research Limited Pirin polypeptide and immune modulation
SI3065748T1 (en) 2014-12-23 2018-05-31 4D Pharma Research Limited Severe bacteroid tethethioomycron and its use in reducing inflammation
CN104560820B (zh) 2014-12-30 2017-10-20 杭州师范大学 屎肠球菌kq2.6及应用
US20160199425A1 (en) * 2015-01-08 2016-07-14 Nubiome, Inc. Treatment and Prophylaxis for Parkinson's Disease
US10231941B2 (en) 2015-01-23 2019-03-19 Temple University—Of The Commonwealth System of Higher Educaton Use of short chain fatty acids in cancer prevention
CN105982919A (zh) 2015-02-26 2016-10-05 王汉成 生物减速剂抗癌技术
WO2016139217A1 (en) 2015-03-04 2016-09-09 Ab-Biotics, S.A. Composition comprising anaerobically cultivated human intestinal microbiota
US20180078587A1 (en) 2015-03-18 2018-03-22 Trustees Of Tufts College Compositions and methods for preventing colorectal cancer
SG11201707657UA (en) 2015-03-18 2017-10-30 Whole Biome Inc Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of skin disorders
KR20160131237A (ko) * 2015-05-06 2016-11-16 한양대학교 산학협력단 C5-c8 유기산을 생산하는 신규 균주 및 이를 이용하여 c5-c8 유기산을 생산하는 방법
KR101745084B1 (ko) 2015-05-06 2017-06-09 한양대학교 산학협력단 메가스페라 헥사노이카 균주를 이용하여 헥사노익산을 생산하는 방법
HK1253064A1 (zh) 2015-06-01 2019-06-06 The University Of Chicago 通过操纵共生微生物菌群对癌症的治疗
SI3360559T1 (sl) 2015-06-15 2020-02-28 4D Pharma Research Limited Sestavki, ki vsebujejo bakterijske seve
SG10201912326QA (en) 2015-06-15 2020-02-27 4D Pharma Res Ltd Compositions comprising bacterial strains
HRP20191949T1 (hr) 2015-06-15 2020-01-24 4D Pharma Research Limited Blautia stercosis i wexlerae za upotrebu u liječenju upalnih i autoimunih bolesti
MA41060B1 (fr) 2015-06-15 2019-11-29 4D Pharma Res Ltd Compositions comprenant des souches bactériennes
MA41010B1 (fr) 2015-06-15 2020-01-31 4D Pharma Res Ltd Compositions comprenant des souches bactériennes
WO2017031371A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 Api Holdings, Llc Formulations and methods for promoting honeybee health
CN105112333A (zh) 2015-08-31 2015-12-02 江南大学 一种具有良好肠道定殖能力的长双歧杆菌及筛选方法和应用
WO2017079450A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 The Brigham And Women's Hospital Therapeutic microbiota for the treatment and/or prevention of food allergy
EP3209310B1 (en) 2015-11-20 2018-01-31 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
GB201520497D0 (en) 2015-11-20 2016-01-06 4D Pharma Res Ltd Compositions comprising bacterial strains
GB201520631D0 (en) 2015-11-23 2016-01-06 4D Pharma Res Ltd Compositions comprising bacterial strains
GB201520638D0 (en) 2015-11-23 2016-01-06 4D Pharma Res Ltd Compositions comprising bacterial strains
DK3380108T3 (da) 2015-11-24 2023-02-06 Seres Therapeutics Inc Udformede bakterielle sammensætninger
EP3379935A4 (en) 2015-11-25 2019-08-28 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center METHOD AND COMPOSITIONS FOR REDUCING VANCOMYCIN RESISTANT ENTEROKOKKEN
WO2017122197A1 (en) 2016-01-11 2017-07-20 3Plw Ltd. Lactic acid-utilizing bacteria genetically modified to secrete polysaccharide-degrading enzymes
EP3313423B1 (en) 2016-03-04 2019-04-24 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial blautia strains for treating visceral hypersensitivity
EP4368254A3 (en) 2016-03-14 2024-08-14 Holobiome, Inc. Modulation of the gut microbiome to treat mental disorders or diseases of the central nervous system
US9999641B2 (en) 2016-06-14 2018-06-19 Vedanta Biosciences, Inc. Treatment of clostridium difficile infection
JP6898628B2 (ja) 2016-06-15 2021-07-07 国立大学法人広島大学 神経変性疾患治療剤
TW201821093A (zh) 2016-07-13 2018-06-16 英商４Ｄ製藥有限公司 包含細菌菌株之組合物
IT201600091033A1 (it) 2016-09-08 2018-03-08 Bioimmunizer Sagl Ceppi di batteri probiotici appartenenti al genere Bifidobacterium e loro estratti di cellule probiotiche (ECP) aventi proprietà immunostimolanti.
WO2018094190A2 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute Gut microbiota and treatment of cancer
GB201621123D0 (en) 2016-12-12 2017-01-25 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
WO2018112363A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Evelo Biosciences, Inc. Methods of treating cancer using parabacteroides
WO2018112365A2 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Evelo Biosciences, Inc. Methods of treating colorectal cancer and melanoma using parabacteroides goldsteinii
CN106890196A (zh) 2017-04-07 2017-06-27 青岛东海药业有限公司 酪酸梭菌在制备预防或治疗帕金森病制剂中的应用
EP3630942B1 (en) 2017-05-24 2022-11-30 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strain
WO2018229236A2 (en) 2017-06-14 2018-12-20 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
MD3600363T2 (ro) 2017-06-14 2021-05-31 4D Pharma Res Ltd Compoziții cuprinzând tulpini bacteriene
AR112328A1 (es) 2017-07-05 2019-10-16 Evelo Biosciences Inc Composiciones y métodos para tratamiento de cáncer usando bifidobacterium animalis ssp. lactis
KR20210008393A (ko) 2018-05-11 2021-01-21 4디 파마 리서치 리미티드 세균 균주를 포함하는 조성물
SG11202106230XA (en) 2018-12-12 2021-07-29 4D Pharma Res Ltd Compositions comprising bacterial strains

Also Published As

Publication number Publication date
MD3600364T2 (ro) 2020-12-31
IL292373A (en) 2022-06-01
PL3600364T3 (pl) 2021-01-11
TWI812624B (zh) 2023-08-21
WO2018229236A2 (en) 2018-12-20
US20200215126A1 (en) 2020-07-09
MX383130B (es) 2025-03-13
MA53937A (fr) 2021-04-14
DK3600364T3 (da) 2020-08-31
TW201919668A (zh) 2019-06-01
AU2021203891A1 (en) 2021-07-08
AU2018283994A1 (en) 2020-02-06
HUE052258T2 (hu) 2021-04-28
US20200206280A1 (en) 2020-07-02
RS63393B1 (sr) 2022-08-31
NZ760654A (en) 2021-03-26
TW201919667A (zh) 2019-06-01
MA49425A (fr) 2020-04-22
DK3804737T3 (da) 2022-07-25
NZ773323A (en) 2022-03-25
PT3804737T (pt) 2022-08-29
CA3066561A1 (en) 2018-12-20
JP2020523326A (ja) 2020-08-06
PT3600364T (pt) 2020-10-19
US20210315943A1 (en) 2021-10-14
SG11201912156QA (en) 2020-01-30
SI3600364T1 (sl) 2020-10-30
BR112019026677A2 (pt) 2020-06-30
EP3804737A1 (en) 2021-04-14
EP4104843A1 (en) 2022-12-21
MA53937B1 (fr) 2022-05-31
IL271265B (en) 2022-06-01
SI3804737T1 (sl) 2022-07-29
CN111032061A (zh) 2020-04-17
LT3804737T (lt) 2022-07-11
HRP20201629T1 (hr) 2020-12-25
KR20200018463A (ko) 2020-02-19
EP3600364B1 (en) 2020-08-05
US11007233B2 (en) 2021-05-18
AU2018283994B2 (en) 2021-03-18
CA3066561C (en) 2022-07-19
MX2021006456A (es) 2021-07-02
MA49010A (fr) 2020-02-05
CN110913876A (zh) 2020-03-24
WO2018229236A3 (en) 2019-03-07
LT3600364T (lt) 2020-10-26
PL3804737T3 (pl) 2022-09-12
MA49010B1 (fr) 2020-11-30
WO2018229216A1 (en) 2018-12-20
CY1125659T1 (el) 2024-02-16
AU2020204099A1 (en) 2020-07-09
ES2823053T3 (es) 2021-05-07
IL271265A (en) 2020-01-30
JP2021075556A (ja) 2021-05-20
SMT202200272T1 (it) 2022-07-21
CY1123565T1 (el) 2022-03-24
US11660319B2 (en) 2023-05-30
EP3804737B1 (en) 2022-05-18
IL271319A (en) 2020-01-30
EP3638273A2 (en) 2020-04-22
JP6837581B2 (ja) 2021-03-03
SMT202000555T1 (it) 2020-11-10
KR20200015575A (ko) 2020-02-12
MD3804737T2 (ro) 2022-10-31
AU2018285453A1 (en) 2020-02-06
NZ760605A (en) 2022-03-25
US11779613B2 (en) 2023-10-10
AU2018285453B2 (en) 2020-03-19
CA3160116A1 (en) 2018-12-20
KR102519483B1 (ko) 2023-04-10
HRP20220747T1 (hr) 2022-10-14
CA3066557A1 (en) 2018-12-20
JP2020523313A (ja) 2020-08-06
ES2917415T3 (es) 2022-07-08
SG11201912153VA (en) 2020-01-30
EP3600364A1 (en) 2020-02-05
HUE059249T2 (hu) 2022-11-28
JP2022088641A (ja) 2022-06-14
BR112019026667A2 (pt) 2020-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11779613B2 (en) Compositions comprising a bacterial strain of the genus Megasphera and uses thereof
US12048720B2 (en) Compositions comprising bacterial strains
HK40048780B (en) Compositions comprising bacterial strains
HK40048780A (en) Compositions comprising bacterial strains
HK40054566A (en) Compositions comprising bacterial strains
HK40020569A (en) Compositions comprising a bacterial strain of the genus megasphaera and uses thereof
HK40020569B (en) Compositions comprising a bacterial strain of the genus megasphaera and uses thereof
HK40021854A (en) Compositions comprising bacterial strains
HK40021854B (en) Compositions comprising bacterial strains
EA037000B1 (ru) Композиции, содержащие бактериальный штамм рода megasphera, и их применение
NZ760654B2 (en) Compositions comprising a bacterial strain of the genus megaspahera and uses thereof
OA21082A (en) Compositions comprising a bacterial strain of the genus megasphera and uses thereof.