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PT2013175T - Inibidores de map-quinase p38 - Google Patents

Inibidores de map-quinase p38 Download PDF

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Publication number
PT2013175T
PT2013175T PT77326296T PT07732629T PT2013175T PT 2013175 T PT2013175 T PT 2013175T PT 77326296 T PT77326296 T PT 77326296T PT 07732629 T PT07732629 T PT 07732629T PT 2013175 T PT2013175 T PT 2013175T
Authority
PT
Portugal
Prior art keywords
amino
alkyl
phenyl
hydrogen
cyclopentyl
Prior art date
Application number
PT77326296T
Other languages
English (en)
Inventor
Charles Festus Moffat David
Pintat Stéphane
Davies Stephen
Original Assignee
Chroma Therapeutics Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB0608855A external-priority patent/GB0608855D0/en
Priority claimed from GB0613914A external-priority patent/GB0613914D0/en
Application filed by Chroma Therapeutics Ltd filed Critical Chroma Therapeutics Ltd
Publication of PT2013175T publication Critical patent/PT2013175T/pt

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Description

DESCRIÇÃO "Inibidores de MAP-quinase p38"
Esta invenção refere-se a uma série de compostos de aminoácido e éster de aminoácido, a composições contendo os mesmos, a processos para a sua preparação e à sua utilização em medicina como inibidores de MAP-quinase p38 para o tratamento de doenças autoimunes e inflamatórias, incluindo artrite reumatoide, psoríase, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, colite ulcerosa, doença pulmonar obstrutiva crónica, asma, esclerose múltipla, diabetes, dermatite atópica, doença de enxerto versus hospedeiro, lúpus eritematoso sistémico e outras.
Antecedentes da invenção A ativação inapropriada de leucócitos, incluindo monócitos, macrófagos e neutrófilos, conduzindo à produção de níveis elevados de citoquinas tais como TNF-a, ILl-β e IL-8, é uma particularidade da patogénese de várias doenças inflamatórias incluindo artrite reumatoide, colite ulcerosa, doença de Crohn, doença pulmonar obstrutiva crónica (DPOC), asma e psoríase. A produção de citoquinas por células inflamatórias é um resultado da resposta a uma variedade de estímulos externos, conduzindo à ativação de vários mecanismos de sinalização intracelular. Entre estes, destaca-se a superfamilia de proteína-quinases ativadas por mitogénio (MAPK, mitogen activated protein kinase) consistindo de quinases de sinalização altamente conservadas que regulam o crescimento, a diferenciação e as respostas das células ao stress. As células de mamífero contêm pelo menos três famílias de MAPKs: as MAPKs quinase reguladas por sinal extracelular (ERK) p42/44, as quinases de terminal NH2 c-Jun (JNKs) e também a MAPK p38 (também denominada p38a/Mpk2/RK/SAPK2a/CSBPl/2). A MAPK p38 foi primeiro clonada após a sua identificação como uma quinase que é fosforilada na tirosina após estimulação de monócitos por lipopolissacárido (LPS) [Han et al., Science 1994, 265, 808]. Têm sido descritos homólogos adicionais de p38 de mamífero e incluem ρ38β [Jiang et al., J. Biol. Chem, IQQfi. 271. 1 79201. r>3Rv ΓT.i et al. . Biochem. Rioohvs. Res.
Commun., 1996, 228, 334] e ρ38δ [Jiang et al. , J. Biol. Chem. 1997, 272, 30122]. Enquanto a p38a e a ρ38β são expressas ubiquamente, a ρ38γ está restringida principalmente ao músculo esquelético e a ρ38δ é predominantemente expressa no pulmão e no rim. A libertação de citoquinas por células de defesa do hospedeiro e a resposta de leucócitos a citoquinas e a outros fatores de stress pró-inflamatórios são reguladas, numa extensão variável, por MAPK p38 [Cuenda et al. , FEBS Lett, 1995, 364, 229-233]. Noutros tipos de células, a MAPK p38 controla respostas a stress, tais como a produção de IL-8 por células epiteliais brônquicas estimulada por TNF-α e a regulação ascendente da molécula de adesão celular ICAM-1 em células endoteliais estimuladas por LPS. Após ativação, através da fosforilação dual de um motivo TGY pelas quinases de especificidade dual MKK3 e MKK6, a MAPK p38 exerce os seus efeitos através da fosforilação de fatores de transcrição e outras quinases. A proteína-quinase-2 ativada por quinase MAP (MAPKAPK-2) foi identificada como um alvo para fosforilação por p38. Foi demonstrado [Kotlyarov et al., Nat. Cell Biol. 1999, 1, 94-97] que ratinhos desprovidos de MAPKAPK-2 libertam níveis reduzidos de TNF-a, IL-Ιβ, IL-6, IL-10 e IFN-γ em resposta a choque endotóxico mediado por LPS/galactosamina. A regulação dos níveis destas citoquinas, bem como de COX-2, está ao nível do ARNm. Os níveis de TNF-α são regulados através de controlo de tradução, através de elementos ricos em AU, da 3'-UTR de ARNm de TNF-α, com a sinalização de MAPKAPK-2 aumentando a tradução de ARNm de TNF-α. A sinalização de MAPKAPK-2 conduz ao aumento da estabilidade de ARNm em relação a COX-2, IL-6 e proteína inflamatória de macrófago. A MAPKAPK-2 determina a localização celular de MAPK p38 bem como a transdução da sinalização de MAPK p38, possuindo um sinal de localização nuclear no seu terminal carboxílico e um sinal de exportação nuclear como parte do seu domínio autoinibidor [Engel et al. , EMBO J. 1998, 17, 3363-3371]. Em células sob stress, MAPKAPK-2 e MAPK p38 migram para o citoplasma a partir do núcleo, esta migração ocorrendo apenas quando a MAPK p38 é cataliticamente ativa. Crê-se que este evento é conduzido pela exposição do sinal de exportação nuclear de MAPKAPK-2, como resultado de fosforilação por MAPK p38 [Meng et al., J. Biol. Chem. 2002, 277, 37401-37405]. Adicionalmente, a MAPK p38 quer diretamente quer indiretamente conduz à fosforilação de vários fatores de transcrição que se crê mediarem a inflamação, incluindo ATFl/2 (fatores de transcrição de ativação 1/2), CHOP-10/GADD-153 (gene induzível 153 de paragem de crescimento e danificação de ADN), SAP-1 (proteína 1 acessória de fator de resposta sérico) e MEF2C (fator 2 intensificador de miócito) [Foster et al. , Drug News Perspect. 2000, 13, 488-497].
Em várias situações, foi demonstrado que a inibição da atividade de MAPK p38 por moléculas pequenas é útil para o tratamento de vários estados de doença mediados por produção inapropriada de citoquina incluindo artrite reumatoide, DPOC, asma e isquemia cerebral. Esta modalidade tem sido o tema de vários artigos de revisão [Salituro et al., Current Medicinal Chemistry, 1999, 6, 807-823 e Kumar et al., Nature Reviews Drug Discovery 2003, 2, 717-726].
Inibidores de MAPK p38 têm mostrado ser eficazes em modelos animais de artrite reumatoide, tais como artrite induzida por colagénio no rato [Revesz et al. , Biorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10, 1261-1364] e artrite induzida por adjuvante no rato [Wadsworth et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1999, 291, 1685-1691]. Em modelos murinos de lesão do pulmão induzida por pancreatite, o pré-tratamento com um inibidor de MAPK p38 reduziu a libertação de TNF-α nas vias aéreas e edema pulmonar [Denham et al., Crit. Care Med., 2000, 29, 628 e Yang et al., Surgery, 1999, 126, 216]. A inibição de MAPK p38 antes do desafio com ovalbumina (OVA) em ratinhos sensibilizados com OVA diminuiu a acumulação de citoquina e células inflamatórias nas vias aéreas num modelo de inflamação alérgica das vias aéreas [Underwood et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2000, 293, 281] . A atividade aumentada de MAP-quinase p38 tem sido observada em pacientes padecendo de doença inflamatória do intestino [Waetzig et al., J. Immunol, 2002,168, 5432-5351]. Inibidores de MAPK p38 têm mostrado ser eficazes em modelos de rato de hipertrofia cardíaca [Behr et al., Circulation, 2001, 104, 1292-1298] e isquemia focal cerebral [Barone et al. , J. Pharmacol. Exp. Ther., 2001, 296, 312-321].
Identificámos agora um grupo de compostos que são inibidores potentes e seletivos de MAPK p38 (ρ38α, β, γ e δ) e das isoformas e variantes de montagem (splice) da mesma especialmente ρ38α, ρ38β e ρ38β2. Os compostos são assim úteis em medicina, por exemplo no tratamento e profilaxia de distúrbios imunitários e inflamatórios aqui descritos. Os compostos são caraterizados pela presença na molécula de um motivo de aminoácido ou de um motivo de éster de aminoácido que é hidrolisável por uma carboxilesterase intracelular. Compostos da invenção possuindo o motivo éster de aminoácido lipófilo atravessam a membrana celular e são hidrolisados no ácido pelas carboxilesterases intracelulares. 0 produto de hidrólise polar acumula-se na célula uma vez que não atravessa facilmente a membrana celular. Por isso, a atividade de MAP-quinase p38 do composto é prolongada e aumentada no interior da célula. Os compostos da invenção estão relacionados com os inibidores de MAP-quinase p38 abrangidos pelas divulgações no Pedido de Patente Internacional W003076405 mas diferem destes pelo facto de os presentes compostos possuírem o motivo éster de aminoácido referido acima. WO 2003/076905 discute aroilpiridinas monociclicas, processos para a sua produção e a sua utilização como medicamentos, especialmente no tratamento de DPOC.
Descrição Detalhada da Invenção
De acordo com a invenção é proporcionado um composto de fórmula (I):
(D onde: G é -CH=; D é um anel fenilo opcionalmente substituído; R.6 é hidrogénio; P representa hidrogénio e U representa um radical de fórmula (IA); ou U representa hidrogénio e P representa um radical de fórmula (IA); -A- (CH2) z-X1-L1-Y-NH-CHRiR2 (IA) onde A representa um anel fenilo ou ciclo-hexilo opcionalmente substituído; z é 0 ou 1; Y é uma ligação, -C (=0)-, -S(=0)2-, -C(=0)NR3-, -C(=S)-NR3, -C(=NH)NR3- ou -S (=0) 2NR3- onde R3 é hidrogénio ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído; L1 é um radical divalente de fórmula - (Alk1) m (Q) n (Alk2) p- onde m, n e p são independentemente 0 ou 1, Q é (i) um radical carbocíclico ou heterocíclico mono ou bicíclico divalente opcionalmente substituído possuindo 5-13 membros de anel, ou (ii) , no caso onde m e p são ambos 0, um radical divalente de fórmula -X2-Q1- ou -Q1-X2- onde X2 é -0-, S- ou NRA- onde RA é hidrogénio ou alquilo C1-C3 opcionalmente substituído, e Q1 é um radical carbocíclico ou heterocíclico mono ou bicíclico divalente opcionalmente substituído possuindo 5-13 membros de anel,
Alk1 e Alk2 independentemente representam radicais cicloalquilo C3-C7 divalentes opcionalmente substituídos ou radicais alquileno C1-C6, alcenileno C2-C6 ou alcinileno C2-C6 lineares ou ramificados opcionalmente substituídos que podem opcionalmente conter ou terminar num elemento de ligação éter (-0-), tioéter (-S-) ou amino (-NRA-) onde RA é hidrogénio ou alquilo C1-C3 opcionalmente substituído; e X1 representa uma ligação; -C (=0); ou -S(=0)2-; -NR4C(=0)-, -C(=0)NR4-, -NR4C (=0)NR5-, -NR4S (=0)2- ou -S (=0) 2NR4- onde R4 e R5 são independentemente hidrogénio ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído;
Ri é um grupo éster que é hidrolisável por uma ou mais enzimas carboxilesterase intracelulares num grupo ácido carboxílico; e R2 é selecionado entre: (i) grupos alquilo Ci-Cõ, fenilo, 2-, 3- ou 4-hidroxifenilo, 2-, 3- ou 4-metoxifenilo, 2-, 3- ou 4-piridilmetilo, benzilo, feniletilo, 2-, 3- ou 4-hidroxibenzilo, 2-, 3- ou 4-benziloxibenzilo, 2-, 3-ou 4-alcoxi(C1-C6)benzilo e benziloxi(alquilo(Ci-Ce))-; (ii) o grupo caraterizador de um α-aminoácido natural, no qual qualquer grupo funcional pode estar protegido; (iii) grupos -[Alk]nR6 onde Alk é um grupo alquilo (Ci-Cõ) ou alcenilo(C2-C6) opcionalmente interrompido por um ou mais átomos -0- ou -S- ou grupos -N (R7) - [onde R7 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo(C1-C6) ] , n é 0 ou 1, e Rô é um grupo cicloalquilo ou cicloalcenilo opcionalmente substituído; (iv) um grupo benzilo substituído no anel fenilo por um grupo de fórmula -OCH2COR15 onde R15 é hidroxilo, amino, alcoxi (Ci-Ce) , fenilalcoxi (Ci-Ce) , alquil (Ci-Ce) amino, di ( (alquil (Ci-Cô) ) amino, fenilalquil (Ci-Cõ) amino, o resíduo de um aminoácido ou seu derivado halogeneto de ácido, éster ou amida, estando o referido resíduo ligado através de uma ligação amida, sendo o referido aminoácido selecionado entre glicina, a ou β alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisina, histidina, arginina, ácido glutâmico e ácido aspártico; (v) um grupo heterocíclico(alquilo(Ci-Cô) ), estando quer não substituído quer mono ou dissubstituído no anel heterocíclico com halo, nitro, carboxi, alcoxi (Ci-Cô) , ciano, alcanoílo (Ci-Cô) , trifluorometilo alquilo (Ci-Cô) , hidroxi, formilo, amino, alquil (Ci-Cô) amino, di (alquil (Ci-Cô) ) amino, mercapto, alquil (Ci —Ce) tio, hidroxialquilo (Ci-Cõ) , mercaptoalquilo (Ci-Cô) ou alquil (Ci-Cô) fenilmetilo; e (vi) um grupo -CRaRbRc no qual: cada um de Ra, Rb e Rc é independentemente hidrogénio, alquilo (Ci-Cô) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-Cô) , cicloalquilo (C3-C8) ; ou Rc é hidrogénio e Ra e Rb são independentemente fenilo ou heteroarilo tal como piridilo; ou
Rc é hidrogénio, alquilo (Ci-Cõ) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-Cô) ou cicloalquilo (C3-C8) , e Ra e Rb em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um cicloalquilo de 3 a 8 membros ou um anel heterocíclico de 5 a 6 membros; ou
Ra, Rb e Rc em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel tricíclico (por exemplo adamantilo); ou
Ra e Rb são cada um independentemente alquilo (Ci-Cô) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-Cô) ou um grupo como definido para Rc abaixo que não hidrogénio, ou Ra e Rb em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um cicloalquilo ou um anel heterociclico, e Rc é hidrogénio, -OH, -SH, halogéneo, -CN, -CO2H, perfluoroalquilo (C1-C4) , -CH2OH, -C02alquilo (Ci-Cô) , -Oalquilo (Ci-Cô) , -Oalcenilo (C2-C6) , -Salquilo (Ci-Cõ) , -SOalquilo (Ci-Cô) , -S02alquilo (Ci-Cõ) , -Salcenilo (C2-C6) , -SOalcenilo (C2-C6) , -S02alcenilo (C2-C6) ou um grupo -Q2-W onde Q2 representa uma ligação ou -0-, -S-, -SO- ou -SO2- e W representa um grupo fenilo, fenilalquilo, cicloalquilo(C3-C8) , cicloalquil(C3-Ce) alquilo, cicloalcenilo (C4-C8) , cicloalcenil (C4-Cs)alquilo, heteroarilo ou heteroarilalquilo, grupo W que pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados independentemente entre hidroxilo, halogéneo, -CN, -CO2H, -C02alquilo (C1-C6) , -CONH2, -CONH (alquilo (Ci-Ce) ) , -CONH (alquilo (Ci-Ce) ) 2, -CHO, -CH2OH, perf luoroalquilo (C1-C4) , -Oalquilo (Ci-Cô) , -Salquilo (Ci-Cô) , -SOalquilo (Ci-Cõ) , -S02alquilo (Ci-Cô) , -NO2, -NH2, -NHalquilo (Ci-Cô) , -N (alquilo (Ci-Cõ) ) 2, -NHCOalquilo (Ci-Cô) , alquilo (Ci-Cõ) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , cicloalquilo (C3-C8) , cicloalcenilo(C4-C8), fenilo ou benzilo; a não ser que especificado de outro modo no contexto no qual ocorre, o termo "substituído" como aqui aplicado a qualquer porção significa substituído com até quatro substituintes compatíveis, cada um dos quais selecionado independentemente entre alquilo (Ci-Cô) , alcoxi (Ci-Cô) , hidroxi, hidroxialquilo(Ci-Cõ) , mercapto, mercaptoalquilo (Ci-Cô) , alquil (Ci-Cô) tio, fenilo, halo incluindo fluoro, bromo e cloro, trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN), oxo, -C00H, -C00RA, -C0RA, -S02RA, -C0NH2, -SO2NH2, -C0NHRA, -S02NHRA, -C0NRARB, -S02NRaRb, -NH2, -NHRa, -NRaRb, -OCONH2, -0C0NHRA, -0C0NRARB, -NHC0RA, -NHC00RA, -NRBC00RA, -NHS020RA, -NRBS020H, -NRbS020Ra, -NHCONH2, -NRaC0NH2, -NHC0NHRb, -NRaC0NHRb, -NHC0NRaRb ou -NRAC0NRARB, onde RA e RB são independentemente um alquilo (Ci-Cô) , cicloalquilo (C3-C6) , fenilo ou heteroarilo monocíclico possuindo 5 ou 6 átomos de anel.
Compostos de fórmula (I) acima podem ser preparados na forma de sais, especialmente sais farmaceuticamente aceitáveis, N-óxidos, hidratos e solvatos dos mesmos. Qualquer reivindicação aqui de um composto, ou qualquer referência aqui a "compostos da invenção", "compostos com os quais a invenção está relacionada", "compostos de fórmula (1)" e similares, incluem sais, N-óxidos, hidratos e solvatos destes compostos.
Ainda que a definição acima inclua potencialmente moléculas de peso molecular elevado, em linha com princípios gerais de prática de química médica, é preferível que os compostos com os quais a invenção está relacionada tenham pesos moleculares não superiores a 600. A presente invenção proporciona também uma composição farmacêutica compreendendo compostos definidos acima em conjunto com um transportador farmaceuticamente aceitável.
Os compostos com os quais a invenção está relacionada podem ser utilizados para a inibição da atividade da enzima MAP-quinase p38 in vitro ou in vivo.
Num aspeto da invenção, a invenção proporciona um composto definido acima para o tratamento de doenças autoimunes ou inflamatórias, particularmente as mencionadas acima nas quais a atividade de MAP-quinase p38 desempenha um papel.
Terminologia O termo "éster" ou "grupo carboxilo esterifiçado" significa um grupo RxO (C=0) - no qual Rx é o grupo que carateriza o éster, teoricamente derivado do álcool RxOH.
Como aqui utilizado, o termo "alquilo(Ca-Cb)" onde a e b são inteiros refere-se a um radical alquilo de cadeia linear ou ramificada possuindo de a a b átomos de carbono. Assim quando a é 1 e b é 6, por exemplo, o termo inclui metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo e n-hexilo.
Como aqui utilizado o termo "radical alquileno (Ca-Cb) divalente" onde a e b são inteiros refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto saturada possuindo de a a b átomos de carbono e duas valências não satisfeitas.
Como aqui utilizado o termo "alcenilo(Ca-Cb)" onde a e b são inteiros refere-se a uma porção alcenilo de cadeia linear ou ramificada possuindo de a a b átomos de carbono possuindo pelo menos uma liqação dupla de qualquer das estereoquimicas E ou Z onde aplicável. 0 termo inclui, por exemplo, vinilo, alilo, 1- e 2-butenilo e 2-metil-2-propenilo.
Como aqui utilizado o termo "radical alcenileno (Ca-Cb) divalente" siqnifica uma cadeia de hidrocarboneto possuindo de a a b átomos de carbono, pelo menos uma liqação dupla, e duas valências não satisfeitas.
Como aqui utilizado o termo "alcinilo Ca-Cb" onde a e b são inteiros refere-se a qrupos hidrocarboneto de cadeia linear ou de cadeia ramificada possuindo de a a b átomos de carbono e possuindo adicionalmente uma ligação tripla. Este termo inclui por exemplo, etinilo, 1-propinilo, 1- e 2-butinilo, 2-metil-2-propinilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 4-pentinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 4-hexinilo e 5-hexinilo.
Como aqui utilizado o termo "radical alcinileno (Ca-Cb) divalente" onde a e b são inteiros refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto divalente possuindo de a a b átomos de carbono, e pelo menos uma ligação tripla.
Como aqui utilizado o termo "carbocíclico" refere-se a um radical mono-, bi- ou triciclico possuindo até 16 átomos de anel, dos quais todos são carbono, e inclui arilo e cicloalquilo.
Como aqui utilizado o termo "cicloalquilo" refere-se a um radical carbocíclico saturado monociclico possuindo de 3-8 átomos de carbono e inclui, por exemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo e ciclooctilo.
Como aqui utilizado o termo não qualificado "arilo" refere-se a um radical aromático carbociclico, mono-, bi- ou triciclico, e inclui radicais possuindo dois anéis aromáticos carbocíclicos monocíclicos que estão ligados diretamente por uma ligação covalente. Ilustrativos destes radicais são fenilo, bifenilo e naftilo.
Como aqui utilizado o termo não qualificado "heteroarilo" refere-se a um radical aromático mono-, bi- ou triciclico contendo um ou mais heteroátomos selecionados entre S, N e 0, e inclui radicais possuindo dois destes anéis monocíclicos, ou um destes anéis monocíclicos e um anel arilo monocíclico, que estão ligados diretamente por uma ligação covalente. Ilustrativos destes radicais são tienilo, benzotienilo, furilo, benzofurilo, pirrolilo, imidazolilo, benzimidazolilo, tiazolilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, benzisotiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, benzisoxazolilo, isotiazolilo, triazolilo, benzotriazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, triazinilo, indolilo e indazolilo.
Como aqui utilizado o termo não qualificado "heterociclilo" ou "heterocíclico" inclui "heteroarilo" como definido acima, e no seu significado não aromático refere-se a um radical não aromático mono-, bi- ou triciclico contendo um ou mais heteroátomos selecionados entre S, N e 0, e a grupos consistindo de um radical não aromático monocíclico contendo um ou mais destes heteroátomos que está ligado covalentemente a outro destes radicais ou a um radical carbociclico monocíclico. Ilustrativos destes radicais são grupos pirrolilo, furanilo, tienilo, piperidinilo, imidazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirimidinilo, piperazinilo, indolilo, morfolinilo, benzofuranilo, piranilo, isoxazolilo, benzimidazolilo, metilenodioxifenilo, etilenodioxifenilo, maleimido e succinimido.
Um "radical fenileno, piridinileno, pirimidinileno ou pirazinileno divalente" é um anel benzeno, piridina, pirimidina ou pirazina, com duas valências não satisfeitas, e inclui 1,3-fenileno, 1,4-fenileno e os seguintes:
A não ser que especificado de outro modo no contexto no qual ocorre, o termo "substituído" como aqui aplicado a qualquer porção significa substituído com até quatro substituintes compatíveis, cada um dos quais independentemente pode ser, por exemplo, alquilo (Ci-Cõ) , alcoxi (Ci-Cô) , hidroxi, hidroxialquilo(C1-C6) , mercapto, mercaptoalquilo (Ci-Cô) , alquil(Ci-Cõ)tio, fenilo, halo (incluindo fluoro, bromo e cloro), trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN), oxo, -COOH, -COORA, -CORA, -S02RA, -CONH2, -SO2NH2, -CONHRA, -S02NHRa, -CONRaRb, -S02NRaRb, -NH2, -NHRa, -NRARB, -OCONH2, -OCONHRA, -OCONRARB, -NHCORA, -NHCOORA, -NRBCOORA, -NHS020Ra, -NRbS020H, -NRbS020Ra, -NHCONH2, -NRaCONH2, -NHCONHRB, -NRACONHRB, -NHCONRARB ou -NRACONRARB onde RA e RB são independentemente um alquilo(Ci-Cô) , cicloalquilo (C3-C6) , fenilo ou heteroarilo monocíclico possuindo 5 ou 6 átomos de anel. Um "substituinte opcional" pode ser um dos grupos substituintes anteriores. O termo "cadeia lateral de um alfa-aminoácido natural ou não natural" refere-se ao grupo RY num aminoácido natural ou não natural de fórmula NH2-CH (RY)-COOH.
Exemplos de cadeias laterais de alfa-aminoácidos naturais incluem aquelas de alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, cistina, ácido glutâmico, histidina, 5-hidroxilisina, 4-hidroxiprolina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptofano, tirosina, valina, ácido α-amino-adípico, ácido a-amino-n-butírico, 3,4-di-hidroxifenilalanina, homosserina, a-metilserina, ornitina, ácido pipecólico e tiroxina.
Alfa-aminoácidos naturais que contêm substituintes funcionais, por exemplo grupos amino, carboxilo, hidroxi, mercapto, guanidilo, imidazolilo ou indolilo nas suas cadeias laterais caracteristicas incluem arginina, lisina, ácido glutâmico, ácido aspártico, triptofano, histidina, serina, treonina, tirosina e cisteina. Quando R2 nos compostos da invenção é uma daquelas cadeias laterais, o substituinte funcional pode ser opcionalmente protegido. 0 termo "protegido" quando utilizado em relação a um substituinte funcional numa cadeia lateral de um alfa-aminoácido natural significa um derivado de um tal substituinte que é substancialmente não funcional. Por exemplo, grupos carboxilo podem ser esterifiçados (por exemplo como um éster de alquilo(Ci-Cõ) ) , grupos amino podem ser convertidos em amidas (por exemplo como uma NHCOalquil(Ci-Cô)amida) ou carbamatos (por exemplo como um carbamato NHC(=0)Oalquilo (Ci-Cõ) ou NHC (=0)0CH2Ph) , grupos hidroxilo podem ser convertidos em éteres (por exemplo um éter de 0-alquilo (Ci-Cô) ou um éter de 0 (alquil (Ci-Cô) ) fenilo) ou ésteres (por exemplo um éster OC(=0)alquilo (Ci—C6) ) e grupos tiol podem ser convertidos em tioéteres (por exemplo um tioéter de terc-butilo ou benzilo) ou tioésteres (por exemplo um tioéster SC(=0)alquilo (Ci-Cô) · Exemplos de cadeias laterais de alfa-aminoácidos não naturais incluem aqueles referidos abaixo na discussão de grupos R2 adequados para utilização em compostos da presente invenção.
Como aqui utilizado o termo "sal" inclui sais de adição de base, sais de adição de ácido e sais quaternários. Compostos da invenção que são ácidos podem formar sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, com bases tais como hidróxidos de metal alcalino, e.g. hidróxidos de sódio e potássio; hidróxidos de metal alcalinoterroso e.g. hidróxidos de cálcio, bário e magnésio; com bases orgânicas e.g. N-metil-D-glucamina, colina tris(hidroximetil)aminometano, L-arginina, L-lisina, N-etilpiperidina, dibenzilamina e outras. Aqueles compostos (I) que são básicos podem formar sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, com ácidos inorgânicos, e.g. com ácidos hídricos tais como ácidos clorídrico ou bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou ácido fosfórico e outros, e com ácidos orgânicos e.g. com ácidos acético, tartárico, sucínico, fumárico, maleico, málico, salicílico, cítrico, metanossulfónico, p-toluenossulfónico, benzóico, benzenossulfónico, glutâmico, láctico e mandélico e outros. Para uma revisão sobre sais adequados, ver "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemanha, 2002). O termo "solvato" é aqui utilizado para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da invenção e uma quantidade estequiométrica de uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitável, por exemplo, etanol. O termo "hidrato" é utilizado quando o referido solvente é água.
Compostos da invenção que contêm um ou mais centros quirais reais ou potenciais, por causa da presença de átomos de carbono assimétricos, podem existir como enantiómeros ou como um certo número de diastereoisómeros com estereoquímica R ou S em cada centro quiral. A invenção inclui todos estes enantiómeros e diastereoisómeros e suas misturas.
Como mencionado, os ésteres da invenção são convertidos por esterases intracelulares nos ácidos carboxílicos. Os ésteres e os ácidos carboxílicos podem ambos ter atividade inibidora de MAP-quinase p38 por mérito próprio.
Nos compostos com os quais a invenção está relacionada:
O grupo D D é um anel fenilo opcionalmente substituído. O substituinte R6 R6 é hidrogénio.
Regioisómeros P/U
Presentemente prefere-se que P seja hidrogénio e U seja um radical de fórmula (IA) como definido acima.
0 radical A
No radical de fórmula (IA), correntemente prefere-se que A seja 1,4-fenileno opcionalmente substituído. Nesse caso substituintes opcionais preferidos incluem fluoro e cloro. A pode também ser um anel ciclo-hexilo, que está opcionalmente substituído.
Um subgrupo de compostos da invenção particularmente preferido consiste naqueles de fórmulas (IIA), (IIB) e (IIC):
(IIA) (IIB) (IIC) onde Rn = F, R12 = H, R13 = H e Rn = H; ou R11 = F, Ri2 = F, R13 = H e R14 = H; ou R11 = F, Ri2 = H, R13 = F e R14 = F; ou
R11 = F, Ri2 = F, R13 = F e R14 = F; OU
Rn = F, R12 = F, R13 = F e Rn = H e onde z, X1, L1, Y, Ri e R2 são como definidos acima com referência à fórmula (I), e como descrito adicionalmente abaixo. 0 radical -Y-I^-X1-[CH2] z-
Este radical (ou ligação) resulta da estratégia química particular escolhida para ligar o motivo éster de aminoácido RiCH (R2) NH- ao sistema de anel A. Obviamente a estratégia química para esse acoplamento pode variar grandemente, e assim são possíveis muitas combinações das variáveis Y, L1, X1 e z. A combinação exata de variáveis que constituem a química de ligação entre o motivo éster de aminoácido e o sistema de anel A será muitas vezes irrelevante para o modo de ligação principal do composto como um todo. Por outro lado, essa química de ligação irá captar em alguns casos interações de ligação adicionais com a enzima. Será também de notar que os benefícios do motivo éster de aminoácido (entrada fácil na células, hidrólise por esterase no interior da célula e acumulação do produto de hidrólise ácido carboxílico ativo no interior da célula) são melhor conseguidos quando o elemento de ligação entre o motivo éster de aminoácido e o sistema de anel A não é um substrato para a atividade de peptidase no interior da célula, o que pode resultar em clivagem do aminoácido da molécula. Obviamente, a estabilidade a peptidases intracelulares é facilmente testada por incubação do composto com os conteúdos de células lisadas, e análise para identificação de qualquer destas clivagens.
Com as observações gerais anteriores em mente, considerando por sua vez as variáveis que constituem o radical -Y-L1-X1-[CH2]z-: z pode ser 0 ou 1, pelo que um radical metileno ligado ao sistema de anel A é opcional; exemplos específicos preferidos de Y quando a seletividade de macrófago não é requerida incluem -(C=0)-e -(C=0)NH-; onde a seletividade de macrófago é requerida quaisquer das outras opções para Y, incluindo o caso onde Y é uma ligação, são apropriadas.
No radical L1, exemplos de radicais Alk1 e Alk2, quando presentes, incluem -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -ch=ch-, -ch=chch2-, -ch2ch=ch-, -ch2ch=chch2-, -c=c-, -c=cch2-, -ch2c=c- e -ch2c=cch2-.
Exemplos adicionais de Alk1 e Alk2 incluem -CH2W-, -ch2ch2w-, -ch2ch2wch2-, -ch2ch2wch (ch3)-, -ch2wch2ch2-, -CH2WCH2CH2WCH2- e -WCH2CH2- onde W é -0-, -S-, -NH-, -N (CH3) - ou -CH2CH2N (CH2CH2OH) CH2-. Exemplos adicionais de Alk1 e Alk2 incluem radicais ciclopropilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo divalentes.
Em L1, quando n é 0, o radical é uma cadeia de hidrocarboneto (opcionalmente substituído e talvez possuindo um elemento de ligação éter, tioéter ou amino).
Presentemente, prefere-se que não existam quaisquer substituintes opcionais em L1. Quando m e p são ambos 0, L1 é um radical carbociclico ou heterociclico mono ou biciclico divalente com 5-13 átomos de anel (opcionalmente substituído). Quando n é 1 e pelo menos um de m e p é 1, L1 é um radical divalente incluindo uma cadeia ou cadeias de hidrocarboneto e um radical carbociclico ou heterociclico mono ou biciclico com 5-13 átomos de anel (opcionalmente substituído). Quando presente, Q pode ser, por exemplo, um radical divalente fenilo, naftilo, ciclopropilo, ciclopentilo ou ciclo-hexilo, ou um radical heterociclico mono ou biciclico possuindo 5 a 13 membros de anel, tal como um radical piperidinilo, piperazinilo, indolilo, piridilo, tienilo ou pirrolilo, mas o 1,4-fenileno é presentemente preferido. Especificamente, em algumas concretizações da invenção, L1, m e p podem ser 0 com n sendo 1. Noutras concretizações, n e p podem ser 0 com m sendo 1. Em concretizações adicionais, m, n e p podem ser todos 0. Ainda em concretizações adicionais m pode ser 0, n pode ser 1 com Q sendo um radical heterociclico monocíclico, e p pode ser 0 ou 1. Alk1 e Alk2, quando presentes, podem ser selecionados entre -CH2-, -CH2CH2- e -CH2CH2CH2- e Q pode ser 1,4-fenileno.
Exemplos específicos do radical -Y-L1-X1- [CH2]z- incluem -C (=0) - e -C(=0)NH- bem como -(CEbK-, -(CH2)vO-, -c (=0) - (CH2) v-, -c (=0) - (CH2) vO-, -c (=0)-NH-(CH2)w-, -C (=0) -NH- (CH2)w0-
e , onde v é 1, 2, 3 ou 4 e w é 1, 2 ou 3, tal como -Y-L1-X1- [CH2] z- é -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -CH2O-, -CH2CH2O-, -CH2CH2CH2O-, -CH2CH2CH2CH2O-, -C(=0)-CH2-, -c (=0)-CH2O-, -c(=0)-NH-CH2- ou -c(=0)-NH-CH2O-. O grupo Ri 0 grupo éster Ri tem de ser um que, no composto da invenção, seja hidrolisável por uma ou mais enzimas carboxilesterase intracelulares num grupo ácido carboxílico. Enzimas carboxilesterase intracelulares capazes de hidrolisar o grupo éster de um composto da invenção no ácido correspondente incluem os três isótipos de enzima humana conhecidos hCE-1, hCE-2 e hCE-3. Ainda que estas sejam consideradas as principais enzimas, outras enzimas tais como bifenil-hidrolase (BPH) podem também ter um papel na hidrólise do éster. Em geral, se a carboxilesterase hidrolisa o éster de aminoácido livre no ácido parental irá também hidrolisar o motivo éster quando conjugado covalentemente com o inibidor. Por isso, o ensaio de célula quebrada e/ou o ensaio de carboxilesterase isolada aqui descritos proporcionam um primeiro rastreio direto, rápido e simples para ésteres que têm o perfil de hidrólise requerido. Motivos éster selecionados desse modo podem depois ser reensaiados no mesmo ensaio de carboxilesterase quando conjugados com o inibidor através da química de conjugação escolhida, para confirmar que é ainda um substrato de carboxilesterase nesse contexto.
Sujeito ao requisito de estes serem hidrolisáveis por enzimas carboxilesterase intracelulares, exemplos de grupos éster particulares Ri incluem aqueles de fórmula -(C=0)0Ri4 onde R14 é R8R9R10C- onde (i) Re é hidrogénio ou alquil (C1-C3) - (Z1) a- [alquil (C1-C3) ] t>-ou alcenil (C2-C3) - (Z1) a-[alquil (C1-C3) ] b~ opcionalmente substituídos onde a e b são independentemente 0 ou 1 e Z1 é -0-, -S- ou -NR11- onde R11 é hidrogénio ou alquilo (C1-C3) ; e R9 e Rio são independentemente hidrogénio ou alquilo (C1-C3) -; (ii) Re é hidrogénio ou RnRnN-alquilo (C1-C3) -opcionalmente substituído onde R12 é hidrogénio ou alquilo (C1-C3) e R13 é hidrogénio ou alquilo (C1-C3) ; ou R12 e R13 em conjunto com o azoto ao qual estão ligados formam um anel heterocíclico monocíclico de 5 ou 6 átomos de anel ou um sistema de anel heterocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos de anel opcionalmente substituídos, e R9 e Rio são independentemente hidrogénio ou alquilo(C1-C3)ou (iii) Re e R9 considerados em conjunto com o carbono ao qual estão ligados formam um anel carbocíclico monocíclico de 3 a 7 átomos de anel ou um sistema de anel carbocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos de anel opcionalmente substituídos, e Rio é hidrogénio.
Dentro destas classes, Rio é frequentemente hidrogénio. Exemplos de R14 incluem metilo, etilo, n-propilo ou isopropilo, n-butilo, sec-butilo ou terc-butilo, ciclo-hexilo, alilo, fenilo, benzilo, 2-, 3- ou 4-piridilmetilo, N-metilpiperidin-4-ilo, tetra-hidrofuran-3-ilo ou metoxietilo. Correntemente prefere-se que R14 seja ciclopentilo. É conhecido que os macrófagos desempenham um papel chave em distúrbios inflamatórios através da libertação de citoquinas em particular TNFoí e IL-1 (van Roon et al., Arthritis and Rheumatism, 2003, 1229-1238). Na artrite reumatoide são contribuintes importantes para a manutenção da inflamação da articulação e destruição da inflamação. Os macrófagos estão também envolvidos no crescimento e desenvolvimento de tumores (Naldini e Carraro, Curr. Drug Targets Inflamm. Allergy, 2005, 3-8). Por isso agentes dirigidos seletivamente à proliferação de células de macrófagos poderão ser valiosos no tratamento do cancro e de doenças autoimunes. Será de esperar que o direcionamento a tipos específicos de células conduza a efeitos secundários reduzidos. Os inventores identificaram um método para direcionar inibidores de quinase p38 a macrófagos que é baseado na observação de que o modo pelo qual o motivo esterase é ligado ao inibidor de quinase p38 determina se este é ou não hidrolisado, e por isso se se acumula ou não em diferentes tipos de células. Especificamente, constatou-se que os macrófagos contêm a carboxilesterase de humano hCE-1 enquanto outros tipos de células não. Na fórmula geral (I), quando o azoto do motivo de esterase RiCH(R2)NH- não está ligado diretamente a um carbonilo (—C(=0)—), i.e. quando Y não é um radical -C(=0)-, -C(=0)0- ou -C(=0)NR3-, o éster apenas será hidrolisado por hCE-1 e por isso os inibidores apenas se irão acumular em macrófagos. Aqui, a não ser que sejam especificados "monócito" ou "monócitos", o termo macrófago ou macrófagos será utilizado para designar macrófagos (incluindo macrófagos associados a tumor) e/ou monócitos. Ά cadeia lateral de aminoácido R2
Sujeita ao requisito de o grupo éster Ri ser hidrolisável por enzimas carboxilesterase intracelulares, a identidade do grupo de cadeia lateral R2 não é critica.
Cadeias laterais de aminoácido são: grupos alquilo(C1-C6), fenilo, 2-, 3- ou 4-hidroxifenilo, 2-, 3- ou 4-metoxifenilo, 2-, 3- ou 4-piridilmetilo, benzilo, feniletilo, 2-, 3- ou 4-hidroxibenzilo, 2-, 3- ou 4- benziloxibenzilo, 2-, 3- ou 4-alcoxi (Ci-Cõ) benzilo e benziloxialquilo (Ci-Cô) ; o grupo que carateriza um α-aminoácido natural, no qual qualquer grupo funcional pode estar protegido; grupos -[Alk]nR6 onde Alk é um grupo alquilo (Ci-Cõ) ou alcenilo (C2-C6) opcionalmente interrompido por um ou mais átomos -0- ou -S- ou grupos -N (R7) - [onde R7 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo(Ci—Ce)], n é 0 ou 1, e Rô é um grupo cicloalquilo ou cicloalcenilo opcionalmente substituído; um grupo benzilo substituído no anel fenilo por um grupo de fórmula -OCH2COR15 onde R15 é hidroxilo, amino, alcoxi (Ci—Ce) , fenilalcoxi (Ci-Cõ) , alquil (Ci-Cô) amino, di (alquil (Ci-Cõ) ) amino, fenilalquil (Ci-Cõ) amino, o resíduo de um aminoácido ou seu derivado de halogeneto de ácido, éster ou amida, estando o referido resíduo ligado através de uma ligação amida, sendo o referido aminoácido selecionado entre glicina, α ou β alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisina, histidina, arginina, ácido glutâmico e ácido aspártico; um grupo heterocíclico(alquilo(Ci-Cô)), estando quer não substituído quer mono ou dissubstituído no anel heterocíclico com halo, nitro, carboxi, alcoxi(Ci-Cô) , ciano, alcanoílo(C1-C6), trifluorometilo, alquilo(C1-C6) , hidroxi, formilo, amino, alquil (Ci-Cõ) amino, di(alquil (C1-C6) ) amino, mercapto, alquil (Ci-Cõ) tio, hidroxialquilo (Ci-Cô) , mercaptoalquilo (Ci-Cô) ou alquil (Ci-Cô) fenilmetilo; e um grupo -CRaRbRc no qual: cada um de Ra, Rb e Rc é independentemente hidrogénio, alquilo (Ci-Cô) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-Cõ) , cicloalquilo (C3-C8) ; ou
Rc é hidroqénio e Ra e Rb são independentemente fenilo ou heteroarilo tal como piridilo; ou
Rc é hidrogénio, alquilo (Ci-Cô) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-Cô) ou cicloalquilo (C3-C8) , e Ra e Rb em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um cicloalquilo de 3 a 8 membros ou um anel heterociclico de 5 a 6 membros; ou
Ra, Rb e Rc em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel triciclico (por exemplo adamantilo); ou
Ra e Rb são cada um independentemente alquilo (Ci-Cô) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , fenilalquilo (C1-C6) ou um grupo como definido para Rc abaixo que não hidrogénio, ou Ra e Rb em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um cicloalquilo ou um anel heterociclico, e Rc é hidrogénio, -OH, -SH, halogéneo, -CN, -CO2H, perfluoroalquilo (C1-C4) , -CH2OH, -C02alquilo (Οι-Οε) , -Oalquilo (Ci-Cô) , -Oalcenilo (C2-C6) , -Salquilo (Ci-Cõ) , -SOalquilo (Ci-Cô) , -S02alquilo (Ci-Cõ) , -Salcenilo (C2-C6) , -SOalcenilo (C2-C6) , -S02alcenilo (C2-C6) ou um grupo -Q2-W onde Q2 representa uma ligação ou -0-, -S-, -SO- ou -SO2-e W representa um grupo fenilo, fenilalquilo, cicloalquilo (C3-C8) , cicloalquil (C3-C8) alquilo, cicloalcenilo (C4-C8) , cicloalcenil (04-Cs) alquilo, heteroarilo ou heteroarilalquilo, grupo W que pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados independentemente entre, hidroxilo, halogéneo, -CN, -CO2H, -C02alquilo (C1-C6) , -CONH2, -CONHalquilo (Ci-c6) , -CONH (alquil (Ci-Ce) ) 2, -CHO, -CH20H, perf luoroalquilo (C1-C4) , -Oalquilo (C1-C6) , -Salquilo (Ci-Cõ) , -SOalquilo (Ci-Cõ) , -S02alquilo (C1-C6) , -Νθ2, —ΝΗ2, -NHalquilo (Ci-Cô) / -N (alquil (Ci-Cô) ) 2, -NHCOalquilo (Ci-Cõ) , alquilo (Ci-Cõ) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , cicloalquilo (C3-C8) , cicloalcenilo(C4-C8) , fenilo ou benzilo.
Exemplos de grupos R2 particulares incluem hidrogénio (a "cadeia lateral" de glicina), benzilo, fenilo, ciclo-hexilmetilo, ciclo-hexilo, piridin-3-ilmetilo, terc-butoximetilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, 1-benziltio-1-metiletilo, 1-metiltio-l-metiletilo, 1-mercapto-l-metiletilo e feniletilo. Grupos R2 presentemente preferidos incluem fenilo, benzilo, isobutilo, ciclo-hexilo e t-butoximetilo.
Para compostos da invenção a administrar sistemicamente, preferem-se ésteres com uma velocidade lenta de clivagem de carboxilesterase, uma vez que estes são menos suscetíveis a metabolismo pré-sistémico. A sua capacidade para atingir intacto o seu tecido alvo é por conseguinte aumentada, e o éster pode ser convertido no produto ácido no interior das células do tecido alvo. No entanto, para administração local, onde o éster ou é aplicado diretamente ao tecido alvo ou é para aí dirigido, por exemplo, por inalação, será frequentemente desejável que o éster tenha uma velocidade de clivagem por esterase rápida, para minimizar a exposição sistémica e os consequentes efeitos secundários indesejados. Nos compostos desta invenção, se o carbono adjacente ao carbono alfa do éster de alfa-aminoácido estiver monossubstituído, i.e. R2 é CH2Rz (Rz sendo o monossubstituinte) , então os ésteres tendem a ser clivados mais rapidamente do que se esse carbono estiver di ou tri-substituído, como no caso onde R2 é, por exemplo, fenilo ou ciclo-hexilo.
Como mencionado acima, os compostos com os quais a invenção está relacionada são inibidores da atividade de MAP-quinase p38, e deste modo são úteis no tratamento de doenças tais como psoríase, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, colite ulcerosa, doença pulmonar obstrutiva crónica, asma, esclerose múltipla, diabetes, dermatite atópica, doença de enxerto versus hospedeiro ou lúpus eritematoso sistémico e artrite reumatoide, nas quais a atividade de MAP-quinase p38 desempenha um papel.
Deverá ser entendido que o nível de dose específico para qualquer paciente particular dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico utilizado, a idade, peso corporal, estado de saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração, velocidade de excreção, combinação de fármacos e a severidade da doença particular que está a ser sujeita a tratamento. Os níveis de dose ótimos e a frequência de dosagem serão determinados por ensaio clínico.
Os compostos com os quais a invenção está relacionada podem ser preparados para administração por qualquer via consistente com as suas propriedades farmacocinéticas. As composições administráveis oralmente podem estar na forma de comprimidos, cápsulas, pós, grânulos, pastilhas, preparações líquidas ou em gel, tais como soluções ou suspensões orais, tópicas ou parentéricas estéreis. Comprimidos e cápsulas para administração oral podem estar numa forma de apresentação de dose unitária, e podem conter excipientes convencionais tais como agentes ligantes, por exemplo xarope, goma-arábica, gelatina, sorbitol, goma adragante ou polivinilpirrolidona; cargas por exemplo lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicina; lubrificante de compressão, por exemplo estearato de magnésio, talco, polietilenoglicol ou sílica; desintegrantes, por exemplo amido de batata, ou agentes molhantes aceitáveis tais como laurilsulfato de sódio. Os comprimidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos da prática farmacêutica normal. Preparações líquidas orais podem estar na forma, por exemplo, de suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xaropes ou elixires, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes do uso. Estas preparações líquidas podem conter aditivos convencionais tais como agentes de suspensão, por exemplo sorbitol, xarope, metilcelulose, xarope de glucose, gelatina, gorduras alimentares hidrogenadas; agentes emulsionantes, por exemplo lecitina, mono-oleato de sorbitano ou goma-arábica; veículos não aquosos (que podem incluir óleos alimentares), por exemplo óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos tais como glicerina, propilenoglicol ou álcool etílico; conservantes, por exemplo p-hidroxibenzoato de metilo ou propilo ou ácido sórbico, e, se desejado, agentes aromatizantes ou corantes convencionais.
Para aplicação tópica à pele, o fármaco pode ser formulado num creme, loção ou pomada. As formulações de creme ou pomada que podem ser utilizadas para o fármaco são formulações convencionais bem conhecidas na especialidade, por exemplo como descrito em livros de texto padrão de farmácia tais como a British Pharmacopoeia.
Para aplicação tópica por inalação, o fármaco pode ser formulado para entrega por aerossol por exemplo, por atomizadores de jato atuados por pressão ou atomizadores ultrassónicos, ou preferivelmente por aerossóis de dose medida atuados por propulsor ou administração de pós micronizados isenta de propulsor, por exemplo, cápsulas de inalação ou outros sistemas de entrega de "pó seco". Nestas formulações inaladas podem estar presentes excipientes, tais como, por exemplo, propulsores (e.g. Frigen no caso de aerossóis de dose medida), substâncias tensioativas, emulsionantes, estabilizadores, conservantes, aromatizantes e cargas (e.g. lactose no caso de inaladores de pó) . Para os propósitos de inalação, está disponível um grande número de dispositivos com os quais podem ser gerados e administrados aerossóis de tamanho de partícula ótimo, utilizando uma técnica de inalação que é apropriada para o paciente. Para além da utilização de adaptadores (espaçadores, expansores) e recipientes em forma de pera (e.g. Nebulator®, Volumatic®), e dispositivos automáticos que emitem uma pulverização por sopro (Autohaler®), para aerossóis de dose media, em particular no caso de inaladores de pó, estão disponíveis várias soluções técnicas (e.g. Diskhaler®, Rotadisk®, Turbohaler® ou os inaladores por exemplo como descritos no Pedido de Patente Europeia EP 0 505 321).
Para aplicação tópica ao olho, o fármaco pode ser formulado numa solução ou suspensão num veículo aquoso ou não aquoso estéril adequado. Podem também ser incluídos aditivos, por exemplo, tampões tais como metabissulfito de sódio ou edetato dissódico; conservantes incluindo agentes bactericidas e fungicidas tais como acetato ou nitrato fenilmercúrico, cloreto de benzalcónio ou clorexidina, e agentes espessantes tais como hipromelose. 0 ingrediente ativo pode também ser administrado parentericamente num meio estéril. Dependendo do veiculo e da concentração utilizada, o fármaco pode ser quer suspenso quer dissolvido no veiculo. Vantajosamente, podem-se dissolver no veiculo adjuvantes tais como um agente anestésico local, conservante e tampão.
Sintese
Para a sintese dos compostos (I) existem múltiplas estratégias de sintese relacionadas com a presente invenção, mas todas se baseiam em química conhecida, conhecida do químico de síntese orgânica. Assim, compostos de acordo com a fórmula (I) podem ser sintetizados de acordo com procedimentos descritos na literatura padrão e são bem conhecidos dos peritos na especialidade. Fontes típicas da literatura são "Advanced organic chemistry", 4.a Edição (Wiley), J. March, "Comprehensive Organic Transformation", 2.a Edition (Wiley), R.C. Larock, "Handbook of Heterocyclic Chemistry", 2.a Edição (Pergamon), A.R. Katritzky), artigos de revisão tais como se podem encontrar em "Synthesis", "Acc. Chem. Res.", "Chem. Rev", ou fontes primárias da literatura identificadas por pesquisas online à literatura padrão ou a partir de fontes secundárias tais como "Chemical Abstracts" ou "Beilstein".
Os compostos da invenção podem ser preparados por um certo número de processos descritos em geral abaixo e mais especificamente aqui depois nos Exemplos. Nas reações descritas abaixo, pode ser necessário proteger grupos funcionais reativos, por exemplo grupos hidroxilo, amino e carboxilo, onde estes são desejados no produto final, para evitar a sua participação indesejada nas reações [ver por exemplo Greene, T.W., "Protecting Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, 1999]. Grupos protetores convencionais podem ser utilizados conjuntamente com a prática padrão. Em alguns casos a desproteção pode ser o passo final na síntese de um composto de fórmula geral (I) e os processes de acordo com a invenção aqui depois descritos são entendidos para se estenderem a esta remoção de grupos protetores.
Apresentam-se exemplos destes métodos que podem ser utilizados para a síntese de compostos de fórmula geral (I), mas não estão limitados às reações que se mostram no Esquema 1 abaixo.
Esquema 1
Assim, aminoésteres de fórmula geral (A) podem ser preparados por tratamento do carbamato de terc-butilo de fórmula geral (2a) com ácido trifluoroacético em diclorometano. Intermediários de fórmula geral (2) podem ser preparados por métodos descritos na WO 03/076405 e referências ai citadas. Aminoésteres de fórmula geral (2b) podem ser formados como um subproduto na síntese de compostos de fórmula (2a) e tratados com ácido trifluoroacético para dar compostos de fórmula geral (B). Ésteres intermediários de fórmula geral (5) podem ser preparados pelos procedimentos que se mostram no Esquema 2.
Esquema 2
A hidrogenação do intermediário de nitrobenzilo (6) sobre catalisador de paládio sobre carbono em THF proporciona aminas de fórmula geral (5). Intermediários de fórmula (6) podem ser preparados pela reação da amina correspondente com di-terc-butoxicarbonato num solvente inerte tal como THF à temperatura ambiente. Intermediários de fórmula geral (7) podem ser produzidos pela alquilação de aminoésteres de fórmula (8) com brometo de 4-nitrobenzilo. A reação pode ser realizada num solvente de dialquilamida tal como DMF na presença de uma base inorgânica tal como carbonato de potássio ou de césio. Estas reações estão descritas em March's Advanced Organic Chemistry [John Wiley and Sons, 1992].
Um método geral alternativo para a síntese de ésteres de N-benzilaminoácido de fórmula geral (9), onde é requerida funcionalização adicional no anel arilo do substituinte benzilo, é apresentado no Esquema 3.
Esquema 3
Num aspeto adicional da invenção, aminoésteres de fórmula geral (9) podem ser preparados pelas reações apresentadas no Esquema 3, mas não limitadas a estas. Assim benzonitrilos de fórmula geral (11), que estão disponíveis comercialmente ou podem ser prontamente sintetizados pelos métodos conhecidos dos peritos na especialidade, podem ser convertidos no benzaldeído correspondente de fórmula geral (10) por redução com um hidreto de metal apropriado tal como DIBAL-H e hidrólise ácida da imina intermediária [ver por exemplo LeBel J. Am. Chem. Soc., 1964, 86, 3759]. O éster de N-benzilaminoácido de fórmula geral (9) pode ser preparado por reação com o referido benzaldeído sob condições de alquilação redutiva, utilizando reagentes de boro-hidreto tais como NaBIHhCN ou NaBH(OAc)3 sob condições ácidas num solvente prótico tal como metanol [ver por exemplo Borsch et al., J. Am. Chem. Soc., 1971, 93, 2897].
Esquema 4
Num aspeto adicional da invenção, compostos de fórmula geral (C) podem ser preparados por métodos apresentados no Esquema 4, a partir da alquilação de intermediários de fórmula geral (8) com mesilatos de fórmula geral (12) . A alquilação pode ser realizada num solvente de éter inerte tal como THF, na presença de iodeto de sódio e bases inorgânicas tais como carbonato de potássio. Será reconhecido pelos peritos na especialidade que os brometos de alquilo ou cloretos de alquilo correspondentes serão de utilidade neste processo. A preparação de mesilato (12) pode ser realizada por tratamento do álcool primário (13) com cloreto de metanossulfonilo num solvente inerte tal como diclorometano e na presença de uma base orgânica tal como trietilamina. Compostos de fórmula geral (14) podem ser preparados por métodos descritos na WO 03/076405 e referências ai citadas.
Num aspeto adicional da invenção, compostos de fórmula geral (D) podem ser preparados pelas reações no Esquema 5, mas não limitadas a estas.
Esquema 5
Assim, álcoois de fórmula geral (14) podem ser alquilados com um derivado de cicloalcanol apropriadamente protegido tal como 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ol utilizando trifenilfosfina e um azodicarboxilato de dialquilo tal como DEAD num solvente etéreo inerte [ver por exemplo Mitsunobu et al., Buli. Chem. Soc. Jpn., 1967, 40, 2380]. Cetais de fórmula geral (16) podem ser desprotegidos na cetona correspondente sob condições aquosas ácidas. A aminação redutiva de compostos de fórmula (16) pode ser conseguida por tratamento com ésteres de aminoácido de fórmula geral (8) na presença de reagentes de boro-hidreto tais como cianoboro-hidreto de sódio e triacetoxiboro-hidreto de sódio sob condições ácidas para dar compostos de fórmula geral (D).
Num aspeto adicional da invenção, compostos de fórmula geral (E) podem ser preparados pelas reações no Esquema 6, mas não limitadas a estas.
Esquema 6
A aminação redutiva de compostos de fórmula (22) pode ser conseguida por tratamento com dibenzilamina na presença de reagentes de boro-hidreto tais como cianoboro-hidreto de sódio e triacetoxiboro-hidreto de sódio sob condições ácidas para dar compostos de fórmula geral (21). A hidrogenação de (21) e a reação subsequente com tiofosgénio pode dar o isocianato de fórmula geral (20). Compostos de fórmula geral (19) podem ser preparados por reação de (20) com a acetofenona correspondente utilizando terc-butóxido de sódio. A alquilação de (19) com iodoetano pode ser realizada utilizando uma base inorgânica tal como carbonato de potássio num solvente tal como acetona. Compostos de fórmula geral (18) podem ser submetidos a ciclização, oxidação e depois deslocamento de amoniaco subsequente para dar cetais de fórmula geral (17) . Assim cetais de fórmula geral (17) podem ser desprotegidos no intermediário de ciclo-hexanona correspondente sob condições aquosas ácidas, faz-se depois reagir ciclo-hexanona com ésteres de aminoácido de fórmula geral (8) sob condições de aminação redutiva utilizando reagentes de boro-hidreto tais como cianoboro-hidreto de sódio e triacetoxiboro-hidreto de sódio. , . , - de formula geral
Noutro aspeto da invenção, aminoacido» , . _ esquema 7, mas não (F) podem ser preparados pelas reações no & limitadas a estas.
Esquema 7
Assim, por exemplo, ésteres de aminoácido de formula geral (C) podem ser hidrolisados nos aminoácidos correspondentes (F) por tratamento com hidróxido de sódio ou potássio aquoso, ou qualquer base apropriada, à temperatura ambiente num co-solvente tal como metanol ou etanol.
Noutro aspeto da invenção, aminoácidos de fórmula geral (G) podem ser preparados pelas reações no Esquema 8, mas não limitadas a estas.
Esquema 8
Assim, aminoésteres de fórmula geral G podem ser preparados pela alquilação de intermediários de fórmula geral (8) com mesilatos de fórmula geral (23). A alquilação pode ser realizada num solvente de éter inerte tal como THF, na presença de iodeto de sódio e bases inorgânicas tais como carbonato de potássio. A preparação de mesilato (23) pode ser realizada por tratamento do álcool primário (24) com cloreto de metanossulfonilo num solvente inerte tal como diclorometano e na presença de uma base orgânica tal como trietilamina. 0 álcool (24) pode ser preparado por desproteção do grupo acetilo do intermediário (25) sob condições ácidas tais como HC1. Intermediários de fórmula geral (4) , (25) e (26) podem ser preparados por métodos similares descritos na WO 03/076405 e referências ai citadas.
Os exemplos seguintes ilustram a invenção. Todas as temperaturas são em °C. Utilizam-se as abreviaturas seguintes:
MeOH = metanol
EtOH = etanol
EtOAc = acetato de etilo
Boc = terc-butoxicarbonilo CDI = 1,1'-carbonildi-imidazole DCM = diclorometano DMF = dimetilformamida DMSO = dimetilsulfóxido TFA = ácido trifluoroacético THF = tetra-hidrofurano
Na2C03 = carbonato de sódio HC1 = ácido clorídrico DIPEA = di-isopropiletilamina
NaH = hidreto de sódio
NaOH = hidróxido de sódio
NaHC03 = hidrogenocarbonato de sódio
Pd/C = paládio sobre carbono TME = terc-butilmetiléter N2 = azoto
Na2S04 = sulfato de sódio Et3N = trietilamina NH3 = amoníaco TMSCl = trimetilclorossilano TBME = terc-butilmetiléter NH4CI = cloreto de amónio L1AIH4 = alumino-hidreto de lítio MgS04 = sulfato de magnésio nBuLi = n-butil-lítio CO2 = dióxido de carbono EDC1 = cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodi-imida
Et20 = dietiléter
LiOH = hidróxido de litio HOBt = 1-hidroxibenzotriazole ELS = Espalhamento de luz evaporativo TLC = cromatografia de camada fina ml = mililitro(s) g = grama(s) mg = miligrama(s) mol = moles mmol = milimole(s) LCMS = cromatografia liquida de alta eficiência/espetrometria de massa RMN = ressonância magnética nuclear TAmb = Temperatura ambiente A irradiação de micro-ondas foi realizada utilizando um reator de micro-ondas focadas CEM Discover. Os solventes foram removidos utilizando um GeneVac Series I sem aquecimento ou um Genevac Series II com VacRamp a 30°C ou um evaporador rotativo Buchi. A purificação de compostos por coluna de cromatografia flash foi realizada utilizando sílica gel, tamanho de partícula 40-63 pm (230-400 mesh) obtida na Silicycle. A purificação de compostos por HPLC preparativa foi realizada num sistema Gilson utilizando colunas ThermoHypersil-Keystone Hyperprep HS C18 de fase reversa (12 pm, 100 χ 21,2 mm), gradiente 20-100% de B (A = água/0,1% de TFA, B = acetonitrilo/0,1% de TFA) durante 9,5 min, caudal = 30 ml/min, solvente de injeção DMSO/acetonitrilo 2:1 (1,6 ml), deteção UV a 215 nm.
Os espectros de RMN-1]! foram registados num espectrómetro Bruker 400 MHz AV ou Bruker 300 MHz AV em solventes deuterados. Os desvios químicos (δ) são em partes por milhão. A análise por cromatografia de camada fina (TLC) foi realizada com placas Kieselgel 60 F254 (Merck) e visualizadas utilizando luz UV. A HPLC-MS analítica foi realizada em sistemas de LC Agilent HP1100, Waters 600 ou Waters 1525 utilizando colunas Hypersil BDS C18 de fase reversa (5 ym, 2,1 χ 50 mm), gradiente 0-95% de B (A = água/0,1% de TFA, B = acetonitrilo/0, 1% de TFA) durante 2,10 min, caudal =1,0 ml/min. Os espectros de UV foram registados a 215 nm utilizando um detetor de arranjo de díodos Gilson G1315A, um detetor UV de comprimento de onda simples G1214A, um detetor UV de comprimento de onda dual Waters 2487, um detetor UV de comprimento de onda dual Waters 2488, ou um detetor UV de arranjo de díodos Waters 2996. Os espectros de massa foram obtidos num intervalo m/z de 150 a 850 a uma velocidade de amostragem de 2 varrimentos por segundo ou 1 varrimento por 1,2 segundos utilizando um Micromass LCT com interface Z-spray ou Micromass LCT com interface Z-spray ou interface MUX. Os dados foram integrados e reportados utilizando software OpenLynx e OpenLynx Browser.
Intermediários
Intermediário IA (S)-2-[(4-aminobenzil)-terc-butoxicarbonilamino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo
Dissolveu-se (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(4- nitrobenzil)amino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo (3,8 g, 8,74 mmol) em EtOH (100 ml) antes da adição de catalisador Pd/C (10% húmido) (100 mg) e hidrogenou-se sob pressão de balão à temperatura ambiente durante 18 h. Filtrou-se a mistura reacional através de um leito de Celite e evaporou-se até à secura para dar um sólido cor-de-rosa (3,15 g, 89% de rendimento). Pureza por LCMS 100%, m/z 405 [M+H]+. O material de partida de carbamato de nitrobenzilo para este procedimento foi preparado como se segue:
Dissolveu-se (S)- (4-nitrobenzil)amino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo (15,8 g, 47,4 mmol) em THF (250 ml) antes da adição de carbonato de potássio (7,58 g, 56,9 mmol) e água (150 ml). Adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (15,5 g, 71,1 mmol) e aqueceu-se a mistura reacional a 50°C durante 18 h. Concentrou-se a mistura reacional sob pressão reduzida para remover os voláteis obtendo-se um resíduo aquoso que foi extraído com EtOAc (200 ml). Lavou-se a fase de EtOAc consecutivamente com HC1 0,1 M (150 ml), NaHCCh aq. sat. e água (150 ml). Secou-se a fase orgânica (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se até à secura. Após purificação por cromatografia de coluna flash (10% de EtOAc/hexano) isolou-se o produto (9,36 g, 46% de rendimento). Pureza por LC 94%, m/z 435 [M+H]+. O material de partida de nitrobenzilamino utilizado neste procedimento foi preparado como se segue
Dissolveu-se brometo de 4-nitrobenzilo (11 g, 50 mmol) em DMF (180 ml) e adicionou-se carbonato de potássio (13,6 g, 99 mmol) seguido de éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8) (16 g, 43 mmol). Agitou-se a mistura reacional durante 18 h à TAmb. Diluiu-se o resíduo com EtOAc (500 ml) e lavou-se com água (3 x 100 ml) , secou-se (Na2S04) filtrou-se e concentrou-se até à secura para dar o produto em bruto (15,8 g) que foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação adicional. Pureza por LCMS 60%, m/z 335 [M+H]+.
Os compostos seguintes foram preparados de um modo similar:
Intermediário IB (S)-2-[(4-aminobenzil)-terc-butoxicarbonilamino]-3-fenilpropionato de ciclopentilo
Pureza por LCMS 75%, m/z 439 [M+H]+.
Intermediário 1C (S)-[(4-aminobenzil)-terc-butoxicarbonilamino]fenilacetato de ciclopentilo
Pureza por LCMS 100%, m/z 425 [M+H]+.
Intermediário ID (S)-2-[(4-amino-3,5-difluorobenzil)-terc-butoxicarbonilamino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo
Dissolveu-se 2 (S)- (4-amino-3,5-difluorobenzil) amino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo (2,54 g em bruto, assumir 5,73 mmol) numa mistura de THF (25 ml) e água (25 ml). Adicionaram-se K2CO3 (5,15 g, 37,3 mmol) e B0C2O (8,14 g, 37,2 mmol) e continuou-se a agitação à TAmb durante 18 h. Removeram-se os voláteis sob pressão reduzida e extraiu-se a fase aquosa residual com EtOAc (50 ml) . Secou-se a fase orgânica (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia flash (5% de EtOAc/heptano) deu o produto N-Boc-protegido (1,0 g, 40%). Pureza por LCMS 89% m/z 441 [M+H]+. O carbamato de benzilamino utilizado como material de partida foi preparado como se segue
A uma solução de 4-amino-3,5-difluorobenzaldeido (0,90 g, 5,73 mmol) em MeOH/DMF 1:1 (16 ml), adicionou-se éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8) (3,19 g, 8,59 mmol) e K2CO3 (1,19 g, 8,59 mmol). Ajustou-se a mistura reacional a pH 5-6 utilizando ácido acético glacial (gota a gota) e agitou-se durante 1 h antes da adição de NaCNBfb (0,72 g, 11,46 mmol). Continuou-se a agitação à temperatura ambiente durante 18 h. Concentrou-se a mistura reacional para remover o MeOH, diluiu-se com EtOAc (20 ml), lavou-se com NaHC03 (5 ml) seguido de água (10 ml). Secou-se a fase orgânica (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se in vacuo para dar o produto em bruto (2,54 g) que se fez reagir no passo seguinte sem purificação. Pureza por LC 68%. O benzaldeido utilizado como material de partida foi preparado como se segue
A uma solução agitada de 4-amino-3,5-difluorobenzonitrilo (2,0 g, 12,98 mmol) em tolueno (16 ml) adicionou-se gota a gota DIBAL (1,5 M em tolueno) a 0°C. Aqueceu-se a mistura reacional até à TAmb e continuou-se a agitação durante 2 h. Extinguiu-se a mistura reacional pela adição gota a gota a ácido cítrico a 10% aq (10 ml) . Adicionaram-se EtOAc (50 ml) e tartarato de sódio e potássio aq saturado (sal de Rochelle) (30 ml) e agitou-se a mistura vigorosamente durante 20 min. Isolou-se a fase orgânica e lavou-se com água (10 ml), secou-se (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se até à secura para dar um sólido amarelo pálido (1,9 g, 93%). Pureza por LCMS 92%, m/z 158 [M+H] +.
Os compostos seguintes foram preparados de um modo similar:
Intermediário IE (S)-2-[(4-amino-3,5-difluorobenzil)-terc-butoxicarbonilamino]-3-fenilpropionato de ciclopentilo
Pureza por LCMS 86%, m/z 475 [M+H]+.
Intermediário IF (S)-2-[(4-amino-3,5-difluorobenzil)-terc-butoxicarbonilamino]fenilacetato de ciclopentilo
Pureza por LCMS 86%, m/z 461 [M+H]+.
Intermediário 2A (S)-[terc-butoxicarbonil-(~4{Γ3-(4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]aminobenzil)-aminofenilacetato de ciclopentilo
Agitou-se uma mistura de éster de 4-clorofenilo de ácido 3-(4-fluorofenil)-3-oxotiopropionimidico [WO 03/076405] (300 mg, 0,874 mmol), Intermediário 1C (0,41 g, 0,961 mmol) e ácido acético glacial (3 ml) à 80°C durante 2 h. Evaporou-se a mistura reacional até à secura sob pressão reduzida para dar um resíduo espesso que foi triturado com éter (3 ml). Recolheu-se o sólido resultante por filtração com sucção. Neutralizou-se o produto por repartição entre EtOAc (20 ml) e NaHCCb aq sat (10 ml) . Secou-se a fase orgânica (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Rendimento = 305 mg (59%) . Pureza por LCMS = 75%, m/z 588 [M+H] + . Utilizou-se o produto no passo seguinte sem qualquer purificação adicional.
Os materiais de partida seguintes foram preparados de um modo análogo:
Intermediário 2B (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(4-{[3-(4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil)amino]-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 1B, Pureza por LCMS 7 6%, m/z 602 [M+H]+.
Intermediário 2C (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(4-{[3-(4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil)amino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário IA, Pureza por LCMS 55%, m/z 568 [M+H]+.
Intermediário 2D (S)-[terc-butoxicarbonil-(-4-[3-(2,4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]aminobenzil)-aminofenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 1C, Pureza por LCMS 7 6%, m/z 60 6 [M+H]+.
Intermediário 2E (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(4-{ [3-(2,4-difluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil)amino]-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 1B, Pureza por LCMS 78%, m/z 620 [M+H]+.
Intermediário 2F (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(4-{[3-(2,4-difluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil)amino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário IA, Pureza por LCMS 7 6%, m/z 58 6 [M+H]+.
Intermediário 2G (S)-[terc-butoxicarbonil-(-4-[3-(3-metil-4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]aminobenzil)-aminofenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 1C, Pureza por LCMS 77%, m/z 602 [M+H]+.
Intermediário 2H (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(4-{[3-(3-metil- 4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil)amino]-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 1B, Pureza por LCMS 77%, m/z 616 [M+H]+.
Intermediário 21 (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(4-{[3-(3-metil-4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil)amino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário IA, Pureza por LCMS 77%, m/z 582 [M+H]+.
Intermediário 2J (S)-[terc-butoxicarbonil-(3,5-difluoro-4-{[3-(4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil)amino]-fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 1F, Pureza por LCMS %, m/z 624 [M+H] + .
Intermediário 2K (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(3,5-difluoro-4-{[3-(4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil)amino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 1D, Pureza por LCMS %, m/z 604 [M+H] + .
Intermediário 2L (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(3,5-difluoro-4-{[3-(4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil) amino]-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário IE, Pureza por LCMS 100%, m/z 638 [M+H]+.
Intermediário 2M (S)-2-[terc-butoxicarbonil-(3,5-difluoro-4-{[3-(2,4-difluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}benzil)-amino]-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 1D, Pureza por LCMS 86%, m/z 622 [M+H]+.
Intermediário 3A (S)-({4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridinil-l-il]benzil}-terc-butoxicarbonilamino)-fenilacetato de ciclopentilo
A uma solução de Intermediário 2A (305 mg, 0,52 mmol) em MeOH (5 ml) adicionou-se propiolato de metilo (70 μΐ, 0,78 mmol). Aqueceu-se a mistura a 80°C durante 3 h. Concentrou-se a mistura reacional in vacuo e purificou-se o resíduo por cromatografia de coluna (30% de EtOAc/heptano). Rendimento = 200 mg (60%). Pureza por LCMS 80%, m/z 640 [M+H]+.
Os compostos seguintes foram produzidos de um modo similar:
Intermediário 3B (S)-({4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridinil-l-il]benzil}-terc-butoxicarbonilamino)-fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 2D, Pureza por LCMS 71%, m/z 658 [M+H]+.
Intermediário 3C (S) -({4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridinil-l-il]benzil}-terc-butoxicarbonilamino) fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 2G, Pureza por LCMS 73%, m/z 654 [M+H] +.
Intermediário 3D (S)-2-({4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-1-il]benzil}-terc-butoxicarbonilamino)-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 2B, Pureza por LCMS 64%, m/z 654 [M+H]+.
Intermediário 3E (S)-2-({4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzil}-terc-butoxicarbonilamino)-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 2E, Pureza por LCMS 59%, m/z 672 [M+H]+.
Intermediário 3F (S)-2-({4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzil}-terc-butoxicarbonilamino) -3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 2H, Pureza por LCMS 87%, m/z 668 [M+H]+.
Intermediário 3G (S)-2-({4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzil}-terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 2C, Pureza por LCMS 82%, m/z 620 [M+H]+.
Intermediário 31 (S)-2-({4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzil}-terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 2F, Pureza por LCMS 84%, m/z 638 [M+H]+.
Intermediário 3J (S)-2-({4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzil}-terc-butoxicarbonilamino) -4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 21, Pureza por LCMS 90%, m/z 634 [M+H]+.
Intermediário 3K (S)-2-({4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorobenzil}-terc-butoxicarbonilamino) -3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 2L, Pureza por LCMS 92%, m/z 690 [M+H]+.
Intermediário 3L (S)-2-({4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorobenzil}-terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 2M, Pureza por LCMS 92%, m/z 674 [M+H]+.
Intermediário 4A Éster de 3-{4-[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilo de ácido metanossulfónico
A uma suspensão de 6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)- 1-[4-(3-hidroxipropoxi)fenil]-lH-piridin-2-ona (100 mg, 0,25 mmol) em DCM seco (1 ml) a 0°C adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (21,5 μΐ, 0,28 mmol) seguido de Et3N (70 μΐ, 0,50 mmol). Deixou-se a mistura reacional aguecer até à TAmb e agitou-se durante 10-20 min até a reação estar completa, monitorizada por TLC (5% de MeOH/DCM). Diluiu-se a mistura reacional com DCM (10 ml), lavou-se com ácido cítrico a 10% (5 ml) , seguido de NaHCCh ag sat (5 ml) e água (5 ml) . Secou-se a fase de DCM (Na2SCU) , filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Rendimento = 105 mg (88%) . Pureza por LCMS = 79% m/z = 475 [M+H]+. Este material foi utilizado no passo seguinte sem gualguer purificação adicional. 0 álcool utilizado como material de partida foi preparado como se segue: A 6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-1-[4-(3- hidroxipropoxi)fenil]-lH-piridin-2-ona foi preparada como se mostra abaixo.
Aqueceu-se uma mistura de 6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-1-[4-hidroxifenil]-lH-piridin-2-ona [WO 03/076405] (0,80 g, 2,37 mmol), 3-bromo-l-propanol (0,23 ml, 2,60 mmol), K2CO3 (1,37 g, 9,46 mmol), Nal (0,73 g, 4,86 mmol) em acetona (20 ml) a 70°C durante 18 h sob N2. Concentrou-se a mistura reacional sob pressão reduzida, suspendeu-se em água (20 ml) e filtrou-se o sólido resultante e lavou-se com éter (0,5 ml). Rendimento = 0,8 g (85%). Pureza por LCMS = 96%, m/z 397 [M+H]+
Os intermediários de metanossulfonato foram preparados de um modo similar ao Intermediário 4A utilizando métodos descritos em WO 03/076405 para a síntese dos intermediários de 4-hidroxifenilo correspondentes.
Intermediário 4B Éster de 3-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)- 2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilo de ácido metanossulfónico
Pureza por LCMS 66%, m/z 461 [M+H]+.
Intermediário 4C Éster de 3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilo de ácido metanossulfónico
Pureza por LCMS 88%, m/z 479 [M+H]+.
Intermediário 4D Éster de 3-{4-[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilo de ácido metanossulfónico
Pureza por LCMS 51%, m/z 511 [M+H]+.
Intermediário 4E Éster de 3-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilo de ácido metanossulfónico
Pureza por LCMS 72%, m/z 497 [M+H]+.
Intermediário 4F Éster de 3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilo de ácido metanossulfónico
Pureza por LCMS 81%, m/z 515 [M+H]+.
Os intermediários seguintes foram preparados por alquilação direta dos intermediários de 4-hidroxifenilo descritos na W003/076405 com l-bromo-5-cloropentano.
Intermediário 4G 6-amino-l-{4-[(5-cloropentil)oxi]-2,6-difluorofenil}-5-(2,4-difluorobenzoil)piridin-2(1H)-ona
A uma solução de 6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-1-(2,6-difluoro-4-hidroxifenil) -piridin-2 (líí) -ona (300 mg, 0,79 mmol) em acetona (6 ml) sob uma atmosfera de azoto adicionaram-se 1-bromo-5-cloropentano (0,115 ml, 0,87 mmol, 1,1 eq), iodeto de sódio (238 mg, 1,59 mmol, 2 eq) e carbonato de potássio (438 mg, 3,17 mmol, 4 eq). Aqueceu-se a mistura a 70°C durante 16 horas, antes de se deixar arrefecer até à temperatura ambiente e repartiu-se entre EtOAc (50 ml) e água (50 ml) . Secou-se a fase orgânica sobre MgSCh, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de coluna (30% de EtOAc em heptano) proporcionou uma mistura 3:2 do composto do titulo e de 6-amino-l-{4-[(5-iodopentil)oxi]-2,6-dif luorofenil} -5- (2,4-dif luorobenzoil) piridin-2 (líí) -ona (142 mg) que foi utilizado sem qualquer purificação adicional. LC/MS: m/z 483, 575 [M+H]+.
Intermediário 4H 6-amino-l-{4-[(5-cloropentil)oxi]-2,6-difluorofenil}-5-(4-fluorobenzoil)piridin-2(1H)-ona
A uma solução de 6-amino-5-(2,4-fluorobenzoil)-1-(2, 6-difluoro-4-hidroxifenil)piridin-2(1H)-ona (200 mg, 0,56 mmol) em DMF seca (6 ml) sob uma atmosfera de azoto adicionaram-se l-bromo-5-cloropentano (0,088 ml, 0,67 mmol, 1,2 eq) e carbonato de potássio (115 mg, 0,83 mmol, 1,5 eq). Aqueceu-se a mistura a 40°C durante 19 horas, antes de se deixar arrefecer até à temperatura ambiente e diluiu-se com EtOAc (20 ml). Lavou-se a solução com água (3 x 20 ml) e salmoura (20 ml) . Secou-se a fase orgânica sobre MgS04, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de coluna (20-40% de EtOAc em heptano) proporcionou o composto do titulo como um sólido amarelo (104 mg) que foi utilizado sem qualquer purificação adicional. LC/MS: m/z 465 [M+H] + . RMN-iH (300 MHz, CD3OD) δ: 7,60 (2H, m) , 7,53 (1H, d, J = 9,4 Hz), 7,33 (2H, m) , 7,05 (2H, m) , 5,72 (1H, d, J = 9,8 Hz), 4,11 (2H, t, J = 6,3 Hz), 3,68 (2H, t, J = 6,5 Hz), 1,84-1,77 (4H, m) , 1,56 (2H, m) .
Intermediário 4J Éster de 2-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenil}etilo de ácido metanossulfónico
A uma suspensão de 6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)- 1- [ 4-(2-hidroxietil)fenil]-lH-piridin-2-ona (150 mg, 0,43 mmol) em DCM seco (3 ml) a 0°C adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (34 μΐ, 0,47 mmol) seguido de Et3N (120 μΐ, 0,85 mmol). Deixou-se a mistura reacional aquecer até à TAmb e agitou-se durante 24 horas até a reação estar completa. Diluiu-se a mistura reacional com DCM (10 ml) , lavou-se com ácido cítrico a 10% (5 ml), seguido de NaHCCh aq sat (5 ml) e água (5 ml). Secou-se a fase de DCM (MgSCU), filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Rendimento = 183 mg (em bruto). Pureza por LCMS = 85% m/z = 431 [M+H]+. Este material foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação adicional. O álcool utilizado como material de partida foi preparado como se segue:
Dissolveu-se éster de 2-{4-[ 6-amino-5-(4-fluorobenzoil)- 2- oxo-2H-piridin-l-il]fenil}etilo de ácido acético (300 mg) em água (5 ml) e HC1 conc. (5 ml) e aqueceu-se a 100°C durante 1 hora. Arrefeceu-se depois a mistura reacional, diluiu-se com 10 ml de água e filtrou-se. Secou-se depois o sólido resultante sob pressão reduzida para dar 264 mg de produto, m/z = 353 [M+H]+. O éster de 2-{ 4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenil}etilo de ácido acético utilizado como material de partida foi preparado como se segue:
Aqueceu-se uma solução de ácido propiólico (270 μΐ, 4,39 mmol) e CDI (712 mg, 4,34 mmol) em THF (13 ml) desde 0°C até à TAmb e agitou-se durante 1,5 horas. A esta solução adicionou-se éster de 2-(4-{[3-(4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}fenil)etilo de ácido acético (1 g, 2,92 mmol) em THF (6 ml) e aqueceu-se a mistura reacional a 80°C durante um período máximo de 2 horas. Após arrefecimento e evaporação sob pressão reduzida, submeteu-se o resíduo em bruto a ultrassons com metanol (7 ml) antes da filtração, lavando com uma quantidade mínima de metanol. Recolheu-se um sólido esbranquiçado (350 mg em bruto). 0 éster de 2-(4-{[3-(4-fluorofenil)-3-oxopropionimidoil]amino}fenil) etilo de ácido acético utilizado como material de partida foi preparado como se segue:
Dissolveram-se éster de 4-clorofenilo de ácido 3-(4-fluorofenil)-3-oxo-tiopropionimídico (1 g, 2,9 mmol) e álcool 4-aminofenetílico (418 mg, 3,08 mmol) em ácido acético (5 ml) e aqueceu-se a 80°C durante um período de 24 horas. Arrefeceu-se a mistura reacional à TAmb e evaporou-se sob pressão reduzida. Repartiu-se o resíduo em bruto entre DCM e NazCCh. Lavou-se adicionalmente a fase de DCM com salmoura e secou-se sobre MgSCh antes da evaporação sob pressão reduzida. Isolou-se o produto (1 g em bruto) como uma mistura 3:1 do produto acetilado/álcool. Este foi utilizado não purificado na reação de ciclização acima. Produto m/z = 343 [M+H]+, álcool m/z = 301 [M+H]+.
Intermediário 5 6-amino-l-[2,6-difluoro-4-(4-oxo-ciclo-hexiloxi)fenil]-5-(4-fluorobenzoil)-lH-piridin-2-ona
A uma solução de 6-amino-l-[4-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-iloxi)-2,6-difluorofenil]-5-(4-fluorobenzoil)-lH-piridin-2-ona (0,55 g, 1,10 mmol) em 1,4-dioxano (10 ml) adicionou-se HC1 aq 2 M (5 ml) à temperatura ambiente. Continuou-se a agitação durante 18 h. Após a reação estar completa diluiu-se a mistura reacional com água (10 ml) antes da evaporação do dioxano sob pressão reduzida. Extraiu-se a solução aquosa residual com EtOAc (2 x 10 ml). Secaram-se as fases orgânicas combinadas (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se até à secura sob pressão reduzida para dar a cetona desejada como um sólido branco (0,43 g, 86%). Pureza por LCMS 98%, m/z 457 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, CDC13) , δ: 2,05-2,15 (2H, m) , 2,25-2,45 (4H, m) , 2,55-2,70 (2H, m), 4, 65-4,75 (1H, m) , 5,85 (1H, d), 6,70- 6,75 (2H, m) , 7,05-7,15 (2H, m) , 7,50-7,65 (3H, m) . O cetal utilizado como material de partida foi preparado como se segue:
A uma solução agitada de 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ol (0,5 g, 1,45 mmol) em THF (1,5 ml) adicionaram-se 6-amino-l-(2,6-difluoro-4-hidroxifenil)-5-(4-fluorobenzoil)-lH-piridin-2-ona (preparada por métodos descritos na WO 03/076405) (0,5 g, 1,39 mmol) e trifenilfosfina (0,38 g, 1,45 mmol) à TAmb. Adicionou-se azodicarboxilato de di-isopropilo (0,29 ml, 1,45 mmol) gota a gota e continuou-se a agitação durante 18 h. Evaporou-se a mistura reacional até à secura e purificou-se por cromatografia de coluna para proporcionar o material desejado como um sólido branco (0,55 g, 79%). Pureza por LCMS 99%, m/z 501 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, CDCI3) , δ: 1,55-1, 65 (2H, m), 1,75-2,00 (6H, m) , 3, 85-3, 90 (4H, m), 4,35-4,40 (1H, m) , 5,85 (1H, d), 6,10-6,20 (2H, m) , 7,05-7,15 (2H, m) , 7,45-7,60 (3H, m).
Intermediário 6 6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-1-(4-oxociclo-hexil)-lH-piridin-2-ona
Adicionou-se HC1 2 M (14 ml) a uma solução amarela de 6-amino-1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)-5-(4 — fluorobenzoil)-lH-piridin-2-ona (664 mg, 1,78 mmol) em 1,4-dioxano (60 ml) à TAmb. Agitou-se a solução amarela resultante à TAmb durante 24 h e depois diluiu-se com H2O (30 ml) e concentrou-se in vacuo para remover o 1,4-dioxano obtendo-se um sólido cristalino amarelo. Isolou-se o sólido por filtração, lavou-se com H2O e secou-se ao ar obtendo-se um sólido cristalino amarelo. Rendimento = 479 mg, 82%. Pureza por LCMS 92%, m/z 329 [M+H]+, RMl^H (400 MHz, CDCI3) , δ: 1, 90-2,30 (8H, m) , 5,35 (1H, m) , 5,65 (1H, d), 7,05-7,15 (2H, m) , 7,30 (1H, d), 7,35-7,45 (2H, m), 11,45 (1H, s). O acetal de piridona utilizado como material de partida no procedimento acima foi preparado como se segue:
Adicionou-se trietilamina (0,74 ml, 5,31 mmol) a uma solução de 1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)-6-etanossulfinil- 5-(4-fluorobenzoil)-lH-piridin-2-ona (1,046 g, 2,42 mmol) em NH3 0,5 M em 1,4-dioxano (30 ml) à TAmb sob N2. Agitou-se a solução amarela resultante à TAmb de um dia para o outro e depois concentrou-se in vacuo obtendo-se um sólido amarelo, que foi triturado com TBME, isolou-se por filtração e lavou-se com TBME obtendo-se um sólido amarelo pálido. Rendimento = 802 mg, 89%. Pureza por LCMS 100%, m/z 373 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, CDCI3) , δ: 1, 90-2,00 (6H, m) , 2,60 (2H, m) , 4,15 (4H, m) , 5,90 (1H, d), 7,25 (2H, m) , 7,55 (1H, d), 7,65 (2H, m) . O sulfóxido utilizado no procedimento acima foi preparado como se segue:
Adicionou-se ácido m-cloroperbenzóico (583 mg, 2,60 mmol) numa porção a uma solução amarela de 1-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)-6-etilsulfanil-5-(4 — fluorobenzoil)-lH-piridin-2-ona (986 mg, 2,36 mmol) em CH2CI2 (30 ml) à TAmb sob N2. Agitou-se a solução amarela resultante à TAmb de um dia para o outro e depois diluiu-se com CH2CI2 (25 ml) e lavou-se com Na2S03 sat. (2 x 30 ml), NaHC03 sat. (2 x 30 ml), H2O (30 ml), secou-se (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se in vacuo obtendo-se um óleo amarelo-claro. Rendimento = 1,046 g, 102%. Pureza por LCMS 96%, m/z 434 [M+H]+. O sulfureto utilizado no procedimento acima foi preparado como se segue:
Adicionou-se 1-cloro-N,N-2-trimetilpropenilamina (2,03 ml, 15,34 mmol) a uma solução incolor de ácido propiólico (0,94 ml, 15,34 mmol) em THF seco (50 ml) a 0°C sob N2. Agitou-se a solução incolor resultante a 0°C durante 2 h tempo após o qual se adicionou uma solução amarela do ácido N-(l,4- dioxaespiro[4.5]dec-8-il)-3-(4-fluorofenil)-3-oxo-tiopropionimídico (4, 667 g, 12,79 mmol) em THF seco (50 ml) durante 5 min a 0°C. Depois deixou-se a solução amarela resultante aquecer até à TAmb e agitou-se durante 24 h. Concentrou-se a mistura reacional in vacuo obtendo-se um óleo castanho-escuro, que foi diluído com EtOAc (20 ml), e deixou-se em repouso à TAmb de um dia para o outro obtendo-se um sólido cristalino que foi isolado por filtração e lavado com heptano e TBME. Rendimento = 216 mg. Concentrou-se o filtrado in vacuo obtendo-se um sólido castanho que foi dissolvido em CH2CI2 (100 ml) e lavou-se com Na2C03 sat. (3 x 100 ml), H2O (2 x 100 ml) , secou-se (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se in vacuo obtendo-se um óleo castanho. A purificação por cromatografia de coluna flash (sílica, 100% de CH2CI2 a 30% de EtOAc/CH2Cl2) deu o produto ciclizado após trituração com TBME. Rendimento = 770 mg. Rendimento global = 986 mg, 19%. Pureza por LCMS 100%, m/z 418 [M+H]+. O ácido tiopropionimídico utilizado no procedimento acima foi preparado como se segue:
Adicionou-se K2CO3 (16,1 g, 117 mmol) a uma solução de N-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-il)-3-(4-fluorofenil)-3-oxo-tiopropionamida (18,8 g, 55,7 mmol) em acetona (200 ml) à TAmb/N2 seguido de iodeto de etilo (6,68 ml, 83,6 mmol). Agitou-se a mistura reacional à TAmb/N2 durante 2 h e depois concentrou-se in vacuo obtendo-se uma pasta castanha que foi retomada em EtOAc (300 ml) e lavou-se com H2O (250 ml) . Separou-se a fase orgânica e extraiu-se a fase aquosa com EtOAc (2 x 150 ml) . Secaram-se as fases orgânicas combinadas (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se in vacuo até se obter um óleo castanho. A purificação por cromatografia de coluna flash (silica, 15% de EtOAc/heptano) deu um óleo amarelo. Rendimento = 9,94 g, 49%. Pureza por LCMS 94%, m/z 366 [M+H]+. A tiopropionamida utilizada no processo acima foi preparada como se segue:
Adicionou-se uma solução de 4-fluoroacetofenona (6,76 ml, 55,7 mmol) em THF (50 ml) lentamente durante 5 min a uma suspensão agitada de KCbBu (6,56 g, 58,5 mmol) em THF (40 ml) a 0°C. Adicionou-se uma solução de 8-isotiocianato-l,4-dioxaespiro [4.5] decano (11,1 g, 55,7 mmol) em THF (30 ml) a 0°C durante 5 min e agitou-se a mistura resultante a 0°C durante 90 min. Evaporou-se a mistura reacional até à secura obtendo-se um sólido castanho-escuro que foi utilizado em bruto na etapa seguinte. Rendimento = 18,8 g, 100%. Pureza por LCMS 55%, m/z 338 [M+H]+. 0 isotiocianato utilizado no procedimento acima foi preparado como se segue:
Adicionou-se carbonato de cálcio (13,75 g, 137,4 mmol) a uma solução de 1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-ilamina (13,5 g, 85,9 mmol) em CH2CI2 (675 ml) e H2O (330 ml) com agitação vigorosa à TAmb. Adicionou-se o tiofosgénio (8,5 ml, 111,6 mmol) gota a gota durante 5 min e, após a adição estar completa, agitou-se a mistura reacional à TAmb durante 2 h. Diluiu-se a mistura reacional com H2O (600 ml) e extraiu-se para CH2CI2 (300 ml) . Secou-se a fase orgânica (Na2S04), filtrou-se e concentrou-se in vacuo obtendo-se o produto. Rendimento = 8,5 g, 50%. Pureza por LCMS 47%, m/z 200 [M+H]+. A ciclo-hexilamina utilizada no processo acima foi preparada como se segue:
Adicionou-se 10% de Pd(OH)2/C (1 g) a uma suspensão fina de N,N-dibenzil-N-1,4-dioxaespiro[4.5]dec-8-ilamina (21,13 g, 62,7 mmol) em EtOH (400 ml) à TAmb. Colocou-se a mistura resultante sob vácuo e purgou-se três vezes sob H2 e depois manteve-se sob uma atmosfera de H2 (balão) de um dia para o outro. Colocou-se a mistura reacional sob vácuo e purgou-se três vezes com N2 e depois removeu-se o catalisador por filtração. Concentrou-se o filtrado in vacuo obtendo-se a amina como um óleo incolor. Rendimento = 14,34 g, 99%. Pureza por LC/MS (deteção ELS) 100%, m/z 158 [M+H]+. A dibenzilamina utilizada no processo acima foi preparada como se segue:
Adicionou-se dibenzilamina (27,8 ml, 145 mmol) a uma solução de 1,4-dioxaespiro[4.5]decan-8-ona (21,5 g, 138 mmol) em DCE (350 ml) à TAmb sob N2 e agitou-se durante 1 h. Adicionou-se triacetoxiboro-hidreto de sódio (46,7 g, 220 mmol) em porções durante 10 min e, após a adição estar completa, agitou-se a mistura reacional à TAmb/N2 de um dia para o outro. Adicionou-se NaHCCb saturado (300 ml) seguido de DCM (300 ml) e agitou-se a mistura reacional durante 30 min. Separou-se a fase orgânica e lavou-se com NaHCCb (300 ml) , salmoura (300 ml), secou-se (NazSCb) , filtrou-se e concentrou-se in vacuo obtendo-se um óleo que, após trituração com heptano, deu um sólido branco que foi isolado por filtração. Rendimento = 30, 95 g, 67%. Pureza por LCMS 100%, m/z 338 [M+H] + .
Intermediário 7 (S)-2-(terc-butoxicarbonil-{3,5-difluoro-4-[3-(4-fluorobenzoil)-6-oxo-l,6-di-hidropiridin-2-ilamino]benzil}amino)-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A piridona foi formada como um produto secundário do procedimento descrito para a sintese de Intermediário 3K. Pureza por LCMS 80%, m/z 690 [M+H]+.
Preparação de ésteres de aminoácido (Intermediários 8 a 16)
Percurso I. Utilizado para a preparação de Intermediários 8, 9, 13, 14 e 15
Percurso II. Utilizado para a preparação de Intermediário 10, 11, 12 e 16
Intermediários preparados:
Intermediário 8 Intermediário 9
Figura 1 Síntese de compostos indicados na Figura 1 Percurso I (exemplificado para o Intermediário 9)
Etapa 1 - Formação de éster
A uma solução de ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-ciclo-hexilpropiónico (5 g, 19,4 mmol) em DMF (50 ml) a 0°C adicionaram-se ciclopentanol (8,8 ml, 97,15 mmol), EDCI (4,09 g, 21,37 mmol) e finalmente DMAP (237 mg, 1,94 mmol). Aqueceu-se a mistura reacional até à TAmb e agitou-se durante 18 h. Removeu-se a DMF in vacuo para dar um óleo claro. Separou-se este entre água e EtOAc. Secou-se a fase orgânica (MgSCb) e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o extrato em bruto por cromatografia de coluna (25% de EtOAC em heptano) para dar o produto desejado como um óleo claro (14,87 g, 55%). RMN-1]! (300 MHz, de-DMSO) δ: 7,09 (1H, d), 5,08 (1H, t) , 3,76 (1H, t) , 1,50-1, 85 (10H, m largo), 1,39 (9 H, s) , 1, 00-1,25 (9H, m largo).
Etapa 2 - Desproteção de Boc para proporcionar cloridrato de (2S)-amino(ciclo-hexil)acetato de ciclopentilo (Intermediário 9)
Dissolveu-se produto da Etapa 1 (14,87 g, 45,69 mmol) em DCM (100 ml) e tratou-se com HC1 4 M/dioxano (22,8 ml, 91,38 mmol) e agitou-se a mistura reacional à TAmb durante 24 h. Concentrou-se a mistura em bruto sob pressão reduzida para dar um óleo cor-de-laranja. Triturou-se este com Et20 para dar um precipitado branco. Lavou-se este adicionalmente com Et20 para dar o produto desejado como um pó branco (7,78 g, 65%). RMN-1H (300 MHz, de-DMSO) δ: 8,45 (3H, s largo), 5,22 (1H, t), 3,28 (1H, d), 1, 95-1,50 (10H, m largo), 1,30-0, 90 (9H, m largo).
Percurso II (exemplificado para o Intermediário 10)
Etapa 1 - Formação de éster para proporcionar 4-metilbenzenossulfonato de (IS)-2-(ciclopentiloxi)-2-oxo-l-feniletanamínio (Intermediário 10)
A uma suspensão de (S)-fenilglicina (5 g, 33,1 mmol) em ciclo-hexano (150 ml) adicionou-se ciclopentanol (29,84 ml, 331 mmol) e ácido p-toluenossulfónico (6,92 g, 36,4 mmol). O vaso reacional foi provido com uma ratoeira de Dean-Stark e aqueceu-se a 135°C até à dissolução completa. Após 12 h, arrefeceu-se a mistura reacional à TAmb conduzindo à precipitação de um sólido branco. Filtrou-se o sólido e lavou-se com EtOAc antes da secagem sob pressão reduzida para dar o produto requerido como um pó branco (11,01 g, 85%) . ΚΜΝ^Η (300 MHz, d6-DMSO) δ: 8,82 (2H, s largo), 8,73 (1H, s largo), 7,47 (7H, m), 7,11 (2H, d), 5,25 (1H, s largo), 5,18 (1H, m), 2,29 (3H, s), 1,87-1,36 (8H, m).
Os intermediários 11 e 12 foram preparados utilizando 2-indanol e α-norborneol respetivamente, em vez de ciclopentanol (via Percurso II). De um modo similar, intermediários 13 e 14 foram preparados utilizando dimetilaminoetanol e 4-(2-hidroxietil)morfolina respetivamente (via Percurso I). O Intermediário 15 foi preparado via Percurso I utilizando Z-Dab(Boc)-OH (ácido N-a-Z-N-Y-Boc-L-2,4-diaminobutirico) disponível comercialmente.
Os ésteres de (R)-aminoácido correspondentes dos intermediários acima podem ser preparados de um modo similar ao apresentado acima, a partir dos (R)-aminoácidos relevantes disponíveis comercialmente. Adicionalmente, os ésteres de terc-butilo de leucina e fenilglicina correspondentes estão disponíveis comercialmente e são utilizados diretamente onde apropriado.
Exemplos
Exemplo 1 (S)-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}fenilacetato de ciclopentilo
Deixou-se uma mistura de Intermediário 3A (80 mg, 0,125 mmol) em solução de 20% de TFA/DCM (5 ml) agitar à TAmb durante 1 h. Evaporou-se a mistura reacional até à secura e purificou-se por HPLC preparativa para dar o produto desejado, rendimento = 33 mg (40%), pureza por LCMS = 100% m/z 540 [M+H]+, RMN-1H (400MHz, DMSO), δ: 1,21-1,82 (8H, m), 4,01-4,14 (2H, m), 5,11- 5,21 (2H, m) , 5,64 (1H, d) , 7,21-7,54 (13H, m) , 7,62 (1H, d) , 10,16 (2H, s largo).
Os exemplos seguintes foram preparados de um modo similar ao Exemplo 1.
Exemplo 2 (S)-2-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 3D. Pureza por LCMS 100%, m/z 554 [M+H]+ , RMN-1H (400 MHz, DMSO), δ: 1,22-1,83 (8H, m) , 3,10 (1H, m) , 4,45 (3H, m) , 5,19 (1H, m) , 5,85 (1H, d), 7,35-7,74 (14H, m), 7,82 (1H, s largo), 9,96 (1H, s largo).
Exemplo 3 (S)-2-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 3G. Pureza por LCMS 100%, m/z 520 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, DMSO), δ: 1,10 (6H, m) , 1,70-2,11 (11H, m), 4,14-4,53 (3H, m) , 5,42 (1H, m, CH), 5,90 (1H, d), 7,49-7,91 (9H, m) , 9,83 (2H, s largo).
Exemplo 4 (S)-{4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 3C. Pureza por LCMS 97%, m/z 554 [M+H]\ RMN-iH (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,30-1,81 (8H, m) , 2,25 (3H, s), 3,72 (2H, s), 4,34 (1H, s) , 5,08 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 7,03-7,38 (10H, m), 7,46-7,61 (3H, m).
Exemplo 5 (S)-2-{4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 3F. Pureza por LCMS 100%, m/z 568 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, DMSO), δ: 1,09-1,77 (8H, m) , 2,30 (3H, s), 2,95 (1H, m) , 3,14 (2H, s) , 4,19-4,42 (3H, m) , 5,02 (1H, m), 5,69 (1H, d), 7,19-7,51 (11 H, m) , 7,68 (2H, m) , 9,79 (2H, s largo).
Exemplo 6 (S)-2-{4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 3J. Pureza por LCMS 100%, m/z 534 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, DMSO), δ: 0,71 (6H, m) , 1,32-1,70 (11 H, m), 2,09 (3Η, s), 3,72-4,14 (3Η, m), 5,03 (1H, m), 5,50 (1H, d) , 7, 00-7,29 (6H, m) , 7,46 (2H, m) , 9,40 (2H, s largo).
Exemplo 7 (S)-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 3B. Pureza por LCMS 100%, m/z 558 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, DMSO), δ: 1,33-1, 89 (8H, m) , 3,71 (2H, m) , 4,28 (1H, s), 5,04 (1H, m) , 5,61 (1H, d) , 6,91 (1H, s largo), 7,18-7,60 (13H, m), 10,05 (1H, s largo).
Exemplo 8 (S)-2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 3E. Pureza por LCMS 100%, m/z 572 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, DMSO), δ: 1,08-1,76 (8H, m), 2,95 (1H, t), 4,11-4,40 (3H, m) , 4,98 (1H, m) , 5,68 (1H, d) , 6,89 (1H, s largo), 7,13-7,50 (12H, m) , 7,65 (1H, m) , 9,64-10,12 (2H, s largo).
Exemplo 9 (S)-2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 31.Pureza por LCMS 100%, m/z 538 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, DMSO), δ: 0,79 (6H, m), 1,39-1,78 (11H, m) , 3, 84-4,22 (3H, m) , 5,10 (1H, m) , 5,59 (1H, d), 6,79 (1H, s largo), 7,03-7,18 (2H, m), 7,21-7,42 (4H, m), 7,56 (2H, m) , 9,54 (1H, s largo), 9,92 (1H, s largo).
Exemplo 10 (S)-2-{4-[6-amino-5-(2,4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorobenzilamino}-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 3K. Pureza por LCMS 94%, m/z 591 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, de-DMSO) , δ: 1,20-1, 90 (10H, m) , 3,10 (1H, m) , 3,50-3, 60 (2H, m) , 4,40-4,50 (4H, m) , 5,20 (1H, m) , 5,90 (1H, d), 7,35-7,50 (7H, m) , 7, 65-7,70 (5H, m) , 9,50 (1H, largo)
Exemplo 11 (S)-2-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorobenzilamino}-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 3L. Pureza por LCMS 96%, m/z 574 [M+H]+, RMN-íH (400 MHz, CD3OD) , δ: 0,95-1,15 (6H, m) , 1,65- 2,05 (11H, m) , 4,15-4,25 (1H, m) , 4,35-4,45 (2H, m) , 5,35-5,45 (1H, m) , 5,85 (1H, d), 7,10-7,20 (2H, m) , 7,45-7,55 (4H, m) .
Exemplo 12 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A uma mistura de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilalanina (Intermediário 16) (218 mg, 0,54 mmol), K2CO3 (192 mg, 1,39 mmol), Nal (108 mg, 0,72 mmol) adicionou-se uma solução de mesilato Intermediário 4A (170 mg, 0,35 mmol) em THF (2 ml) . Diluiu-se a mistura reacional com DMF (2 ml) e aqueceu-se a 70°C durante 18 h com agitação. Arrefeceu-se a mistura reacional até à TAmb, removeu-se o THF por concentração sob pressão reduzida. Diluiu-se o resíduo com EtOAc (20 ml) e lavou-se com água (10 ml) , secou-se (Na2S04) , filtrou-se e evaporou-se até à secura. A purificação por HPLC preparativa proporcionou o produto desejado, rendimento = 57 mg, 15%.
Pureza por LCMS 97%, m/z 612 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,30-2,00 (8H, m) , 2,30 (2H, m) , 3,10 (1H, m) , 3,40 (1H, m) , 4,25 (2 H, m) , 4,40 (1H, m) , 5,20 (1H, m) , 5,85 (1H, d), 6,90 (2H, m) , 7,10 (2H, d), 7,20-7,45 (7H, m) , 7,65 (2H, m) , 7,75 (1H, m).
Os compostos seguintes foram preparados de um modo similar
Exemplo 13 (S)-(3 — {4 —[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4E e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilglicina (Intermediário 10). Pureza por LCMS 96%, m/z 620 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, CD3OD), δ: 1,ΙΟΙ,65 (5H, m) , 1,80 (2H, m) , 1,95 (1H, m) , 2,30 (2H, m) , 3,15 (1H, m) , 3,30 (1H, m) , 4,25 (2H, m) , 5,25 (1H, s) , 5,40 (1H, m) , 5,90 (1H, d), 6,90 (2H, d), 7,30 (2H, t) , 7,55-7, 60 (5H, m) , 7,65 (2H, m) 7,75 (1H, d).
Exemplo 14 (S)-(3 — {4 —[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi>ProPilamino)fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4E e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilalanina (Intermediário 16), Pureza por LCMS 97%, m/z 634 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, CD3OD), δ: 1,30- 2,00 (8H, m) , 2,30 (2H, m) , 3,10 (1H, m) , 3,40 (1H, m) , 4,25 (2H, m) , 4,40 (1H, m) , 5,20 (1H, m) , 5,85 (1H, d), 6,90 (2H, m) , 7,10 (2H, d), 7,20-7,45 (7H, m) , 7,65 (2H, m) , 7,75 (1H, m) .
Exemplo 15 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxifenoxi}propilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4E e de éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8). Pureza por LCMS 96%, m/z 600 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, CD3OD) , δ: 1/10 (6H, m) , 1,70-2,0 (12H, m) , 2,30 (2 H, m) , 4,10 (1H, m) , 4,25 (2H, m) , 4,40 (1H, m) , 5,40 (1H, m) , 5,85 (1H, d), 6,90 (2H, m) . 7,10 (2H, d), 7,60, (2H, m) , 7,65 (2H, m) , 7,75 (1H, m) .
Exemplo 16 N- (3-{4- [6-amino-5- (4-fluor°benzc>il) -2-oxopiridin-1 (2ff) -il] -3,5-difluorofenoxi}propil) -L-leTioinato de etilo
A partir do Intermediário 4E e de éster de etilo de L-leucina. Pureza por LCMS 98%, m/z 560 [M+H]+, RMN-i-H (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,10-1,20 (6H, m) , 1,45-1,55 (3H, t) , 1, 65-1, 85 (2H, m) , 1, 90-2,00 (1H, m) , 2,15-2,30 (2H, m) , 2,85-3, 05 (2H, m) , 3,55 (1H, m) , 4,35-4,50 (4H, m) , 6,00 (1H, d), 7,10 (1H, d), 7,45-7,55 (1H, m) , 7, 80-7,85 (1H, m) , 7,95 (1H, d).
Exemplo 17 (S)-(3-{[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4D e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilglicina (Intermediário 10). Pureza por LCMS 100%, m/z 634 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 1,20-1, 80 (8Η, m) , 2,0 (2H, m) , 2,20 (3H, m) , 2,80-3, 00 (2H, m) , 4,10 (2H, m) , 5,10 (1H, m) , 5,30 (1H, s) , 5,60 (1H, d), 6,95 (1H, d), 7,20 (1H, m) , 7,30 (1H, m) , 7,40-7,50 (8H, m) , 9, 65 (1H, m) .
Exemplo 18 (S)-2-(3 —{4 —[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4D e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilalanina (Intermediário 16). Pureza por LCMS 97%, m/z 648 [M+H]+, RMN-íH (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,20- 1,90 (9H, m), 2,25 (2H, m), 2,35 (3H, s), 3,15 (1H, m), 3,45 (1H, m) , 4,25 (2H, m) , 4,40 (1H, d), 5,20 (2H, m) , 5,82 (1H, d), 6,95 (2H, m) , 7,20 (1H, m) , 7,30-7,50 (7H, m) , 7,75 (1H, d) .
Exemplo 19 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4D e de éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8). Pureza por LCMS 100%, m/z 614 [M+H]+, RMN-1]! (400 MHz, de-DMSO) , δ: 0,90 (6H, m) , 1,60-1,70 (10H, m) , 1,90 (2H, m) , 2,15 (2H, m) , 2,30 (3H, s) , 3,00-3,20 (2H, m) , 4,10 (1H, s) , 4,20 (2H, m) , 5,25 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 7,05 (1H, d), 7,25 (1H, m) , 7,40 (1H, m) , 7,50 (1H, m) , 7, 60 (1H, d) .
Exemplo 20 (S)-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo- 2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4F e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilglicina (Intermediário 10). Pureza por LCMS 91%, m/z 638 [M+H]+, RMN-i-H (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 1,50-2,10 (8H, m) , 2,30 (2H, m) , 3,10-3,25 (2H, m) , 4,33 (2H, m) , 5,40 (1H, m) , 5,56 (1H, m) , 5,90 (1H, d), 7,20 (1H, d) 7,40-7,75 (9H, m) , 9,85 (2H, m) .
Exemplo 21 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-3-fenilpropionato de ciclopentilo A partir do Intermediário 4F e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilalanina (Intermediário 16).Pureza por LCMS 100%, m/z 652 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, d6-DMSO) , δ:
1,10-1,80 (9H, m) , 2,15 (2H, m) , 2, 95-3,20 (2H, m) , 4,20 (2H, m) , 4,40 (1H, m) , 5,10 (1H, m) , 5,75 (1H, d), 7,06 (2H, d), 7,25-7,58 (9H, m) , 9,34 (2H, m) .
Exemplo 22 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8). Pureza por LCMS 87%, m/z 618 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 1,0 (6H, m) , 1,75 (9H, m) , 1,95 (2H, m) , 2,20 (2H, m) , 3,10-3,30 (2H, m) , 4,16 (1H, m) , 4,26 (2H, m) , 5,33 (1H, m) , 5,80 (1H, d), 7,15 (2H, d), 7,40-7, 65 (4H, m) , 9,13-9,25 (2H, m) .
Exemplo 23 (S)-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4B e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilglicina (Intermediário 10). Pureza por LCMS 95%, m/z 584 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, CD3OD), δ: 1,25- 1,55 (5H, m) , 1, 60-1,85 (3H, m) , 2,15 (2H, m) , 3,00 (1H, m) , 3,15 (1H, m) , 4,05 (2H, m) , 5,10 (1H, s) , 5,25 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 7,00 (2H, m) , 7,15 (4H, m) , 7,40-7,50 (7H, m) , 7,55 (1H, d).
Exemplo 24 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4B e de éster de ciclopentilo de L-fenilalanina (Intermediário 16). Pureza por LCMS 93%, m/z 598 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,50-2,10 (8H, m) , 2,50 (2H, m) , 3, 35-3,40 (1H, m) , 3, 55-3, 70 (2H, m) , 4,40-4, 50 (2H, m) , 4,60 (1H, m) , 5,40-5, 45 (1H, m) , 6,05-6,10 (1H, d) , 7,40- 7,65 (11H, m) , 7,85 (2H, m) , 7,90 (1H, m) .
Exemplo 25 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4B de éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8) . Pureza por LCMS 97%, m/z 564 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 0,90 (6H, m) , 1,60-1,75 (10H, m) , 1,90 (2H, m) , 2,15 (2H, m) , 3,10-3,30 (2H, m) , 4,10 (1H, m) , 4,15 (2H, m) , 5,30 (1H, m) , 5,70 (1H, d) . 7,15 (2H, d) , 7,30 (2H, d) , 7,35 (2H, t) , 7,50 (1H, d) , 7,55 (1H, m) 9,05-30 (2H, m).
Exemplo 26 (S)-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)fenilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4A e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilglicina (Intermediário 10) . Pureza por LCMS 95%, m/z 598 [M+H]+, RMN-^ (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 1,30-2,20 (1 OH, m) , 2,30 (3H, m) , 2,90-3,10 (2H, m) , 4,15 (2H, m) , 5,20 (1H, m) , 5,30 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 7,10 (2H, d), 7,25-7,40 (5H, m), 7,40-7,50 (3H, m), 7,55 (5H, m) , 9,70 (2H, m) .
Exemplo 27 (S)-2-(3-{4-r6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il] fenoxilprop^5111^110) -4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4A e de éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8). Pureza por LCMS 89%, m/z 578 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 0,95 (6H, m) , 1,55-2,25 (12H, m), 2,30 (3H, m), 2,75-3,30 (2H, m), 4,15 (3H, m), 5,25 (1H, m), 5,70 (1H, d), 7,15 (2H, d). 7,30-7,40 (4H, m), 7,40-7,50 (2H, m) .
Exemplo 28 (S)-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)fsnilacetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4C e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilglicina (Intermediário 10). Pureza por LCMS 99%, m/z 602 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, de-DMSO) , δ: 1,35-2,15 (1 OH, m) , 2,90-3,10 (2H, m) , 4,10 (2H, m) , 5,25 (1H, m) , 5,40 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 7,10 (2H, d), 7,25-7,30 (4H, m) , 7,40-7,50 (2H, m), 7,55 (5H, m), 9,70 (2H, m) .
Exemplo 29 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)-3-fenilpropionato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4C e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilalanina (Intermediário 16). Pureza por LCMS 99%, m/z 616 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, de-DMSO), δ: 1,10-1,80 (8H, m) , 2,20 (2H, m) , 2,95 (1H, m) , 3,10-3,30 (2H, m) , 3,40 (2H, m) , 4,20 (2H, m) , 4,40 (1H, m) , 5,05 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 7,15 (2H, d), 7,20-7,55 (11H, m), 9,70 (2H, m).
Exemplo 30 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4C e de éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8). Pureza por LCMS 99%, m/z 582 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 0,95 (6H, m) , 1,65-2,15 (13H, m) , 3,10-3,20 (2H, m) , 4,15 (3H, m) , 5,30 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 7,15 (2H, d), 7,25-7,55 (6H, m) , 9,24 (2H, m) .
Exemplo 31 (S)-2-(4 —{4 —[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-ilj-3,5-difluorofenoxi}ciclo-hexilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo, trifluoroacetato
Deixou-se uma suspensão de Intermediário 5 (120 mg, 0,263 mmol) e de sal de tosilato de éster de ciclopentilo de L-fenilalanina (Intermediário 16) (98 mg, 0,2 63 mmol) em MeOH (1,2 ml) agitar à TAmb durante 1 h antes da adição de NaCNBH3 (66 mg, 1,05 mmol). Continuou-se a agitação à TAmb durante 18 h. Após a reação estar completa concentrou-se a mistura reacional até à secura e repartiu-se entre EtOAc (10 ml) e água (10 ml) . Secou-se a fase orgânica (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se até à secura sob pressão reduzida e purificou-se por HPLC preparativa. Isto deu o produto desejado como um sal de TFA. Rendimento = 37 mg (18%) .
Pureza por LCMS 97%, m/z 674 [M+H]+, RMN-i-H (400 MHz, CD30D) , δ: 1,10-2,20 (16H, m), 2,35-2,45 (1H, m), 2,70-3,00 (2H, m), 3,50-3,55 (1H, m), 4,25-4,35 (1H, m), 4,95-5,05 (1H, m), 5,70 (1H, d), 6,75 (2H, dd), 7,05-7,25 (7H, m), 7,45-7,55 (2H, m) , 7,65 (1H, d) .
Os exemplos seguintes foram preparados de um modo similar:
Exemplo 32 (2S)-[(4-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H) -il]-3,5-difluorofenoxi}ciclo-hexil)amino](fenil)acetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 5 (120 mg, 0,263 mmol) e de éster de ciclopentilo de L-fenilglicina (Intermediário 10) . Pureza por LCMS 97%, m/z 660 [M+H]+, RMN-íH (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,30-1, 80 (14H, m) , 1, 90-2, 05 (2H, m), 2,35-2,50 (1H, m) , 4,35-4, 45 (1H, m), 4,50-4, 60 (1H, m), 5,05-5,10 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 6, 75-6, 85 (2H, m) , 7,10-7,15 (2H, m) , 7,20-7,35 (5H, m), 7,45-7,55 (2H, m), 7,55-7, 60 (1H, m) .
Exemplo 33 (S)-2-(4-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}ciclo-hexilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo A partir do Intermediário 5 (120 mg, 0,263 mmol) e de
éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8). Pureza por LCMS 100%, m/z 640 [M+H]+, RMN-1]! (400 MHz, CD3OD) , δ: 0,95- 1,05 (6H, m), 1,50-2,00 (16H, m), 2,10-2,35 (3H, m), 3,15-3,20 (1H, m), 4,00-4,15 (1H, m), 4,40 e 4,75 (0,5H cada, m), 5,25- 5,35 (1H, m) , 5,75 (1H, d) , 6, 85-6, 95 (2H, m) , 7,15-7,25 (2H, m) , 7,55-7, 65 (2H, m) , 7, 65-7,70 (1H, m) .
Exemplos 34 e 35 (S)-2-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]ciclo-hexilamino}-3-fenilpropionato de ciclopentilo
Adicionou-se Intermediário 6 (50 mg, 0,15 mmol) a uma solução incolor de éster de ciclopentilo de L-fenilalanina (89 mg, 0,38 mmol) em MeOH (10 ml) à TAmb/N2 e agitou-se à TAmb durante 1 h. Adicionou-se AcOH glacial gota a gota para ajustar 0 pH a 6 seguido do NaCNBH3 (38 mg, 0,61 mmol). Agitou-se a solução incolor resultante à TAmb de um dia para o outro e depois extinguiu-se cuidadosamente com NaHCCh sat. (20 ml) e extraiu-se para CH2CI2 (3 x 15 ml) . Lavaram-se as fases orgânicas combinadas com HC1 2 M (2x20 ml) , salmoura (20 ml) , secou-se (Na2S04) , filtrou-se e concentrou-se in vacuo obtendo-se um sólido de cor creme. A purificação por cromatografia de coluna flash (silica, eluição em gradiente de 40-100% de EtOAc/heptano) deu o material desejado, separável como dois isómeros, isómero 1 (Exemplo 34) como um sólido branco (Rendimento = 39 mg, 47%) Pureza por LCMS 100%, m/z 546 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,40-2,05 (16H, m) , 2,85- 3,10 (3H, m) , 3, 60-3,70 (1H, m) , 4,55-4, 65 (1H, m) , 5,10-5,20 (1H, m), 5,70 (1H, d), 7,15-7,40 (7H, m) , 7,45-7,50 (1H, m) ,
7,50-7, 60 (2H, m) e isómero 2 (Exemplo 35) Pureza por LCMS 97%, m/z 546 [M+H]+, RMN^H (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,25-1, 85 (12H, m), 1,95-2,20 (2H, m), 2,45-2,95 (4H, m), 3,00-3,10 (1H, m), 3, 65-3, 75 (1H, m) , 4,55-4, 65 (1H, m) , 5,05-5,15 (1H, m) , 5,65 (1H, d), 7,20-7,35 (7H, m) , 7,40-7,50 (1H, m) , 7,50-7, 60 (2H, m) como uma película incolor (Rendimento = 15 mg, 18%).
Exemplo 36 (S)-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacetato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de terc-butilo de L-fenilglicina. Pureza por LCMS 93%, m/z 626 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,30 (9H, s) , 2,15 (2H, m) , 3,00-3,15 (2H, m) , 4,06 (2H, m) , 5,02 (1H, s) , 5,70 (1H, d), 6,75 (2H, d), 7,02 (2H, m) , 7,30-7,50 (7H, m) .
Exemplo 37 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-3-fenilpropionato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de terc-butilo de L-fenilalanina. Pureza por LCMS 97%, m/z 640 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, CD3OD), δ: 1,25 (9Η, s), 2,16 (2Η, m), 3,00 (1H, dd), 3,15-3,25 (2H, m) , 3,35 (1H, dd) , 4,10 (2H, m) , 4,20 (1H, m) , 5,71 (1H, d) , 6,79 (2H, d) , 7,02 (2H, t) , 7,20-7,30 (5H, m) , 2H (2H, m) .
Exemplo 38 (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-4-metilpentanoato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de terc-butilo de L-leucina. Pureza por LCMS 97%, m/z 606 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, CD3OD) , δ: 0,95 (6H, m) , 1,41 (9H, s) , 1,61 (1H, m) , 1,75 (2H, m) , 2,15 (2H, m) , 3,22-3,25 (2H, m) , 3,88 (1H, m) , 4,13 (2H, m) , 4,20 (1H, m) , 5,40 (1H, s) , 5,75 (1H, d), 6,85 (2H, d) , 7,00 (2H, t) , 7,40 (2H, m) .
Exemplo 39 (S)-2-(3 —{4 —[6-amino-5~(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il] fenoxijpropilarcino) -4-metilpentanoato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4C e de éster de terc-butilo de L-leucina. Pureza por LCMS 91%, m/z 570 [M+H]+, RMN-1!! (400 MHz, CD3OD) , δ: 0,95 (6H, m) , 1,45 (9H, s), 1,65 (1H, m) , 2,15 (2H, m) , 3,15-3,30 (2H, m) , 3,85 (1H, m) , 4,15 (2H, m) , 5,75 (1H, d), 7, 00-7,20 (6H, m) , 7,35 (2H, m) .
Exemplo 40 (2S)-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2ff) -il]-3,5-difluorofenoxi}propil)amino] (fenil)-acetato de 2,3-di-hidro-lH-inden-2-ilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de indanilo de L-fenilglicina (Intermediário 11). Pureza por LCMS 96%, m/z 686 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, CD3OD) , δ: 7,55-7,47 (2H, m) , 7,46- 7,31 (5H, m) , 7,22-7,10 (6H, m) , 6,85 (2H, d, J = 9,6 Hz), 5,82 (1H, d, J = 9,6 Hz), 5,57-5,51 (1H, m) , 4,37 (1H, s) , 4.13 (1H, t, J = 6,0 Hz), 3,32-3,21 (2H, m) , 3, 05-2, 98 (1H, m) , 2,80-2, 63 (3H, m) , 2,05-1, 97 (2H, m) .
Exemplo 41 (2R)-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H) -il]-3,5-difluorofenoxi}propil)amino]-(fenil)acetato de 2,3-di-hidro-lH-inden-2-ilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de indanilo de D-fenilglicina. Pureza por LCMS 94%, m/z 686 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, CD3OD) , δ: 7,56-7,47 (2H, m) , 7,38-7,31 (5H, m) , 7,28- 7.14 (6H, m) , 6,85 (2H, d, J = 9,6 Hz), 5,82 (1H, d, J = 9,6
Hz), 5,57-5,52 (1H, m) , 4,37 (1H, s) , 4,13 (1H, t, J = 6,0
Hz), 3,31-3,21 (2H, m) , 3,09-2, 99 (1H, m) , 2,78-2,64 (3H, m) , 2,06-1,99 (2H, m).
Exemplo 42 (2R)-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H) -il]-3,5-difluorofenoxi}propil)amino]-(fenil)acetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de ciclopentilo de D-fenilglicina. Pureza por LCMS 95%, m/z 638 [M+H]+.
Exemplo 43 (2S)-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil}-2-oxopiridin-1(2H) -il]-3,5-difluorofenoxi}propil)amino] (fenil)-acetato de biciclo[2.2.1]hept-2-ilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de norborneilo de L-fenilglicina (Intermediário 12) . Pureza por LCMS 97%, m/z 664 [Μ+Η]+, RMN-íH (300 MHz, CD3OD) , δ: 7,50-7,21 (7H, m) , 7,02 (2H, t, J = 8,6 Hz), 6,75 (2H, d, J = 9,6 Hz), 5,70 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,50 (1H, d, J = 6,6 Hz), 4,32-4,26 (1H, m) , 4,05 (2H, t, J = 5,9 Hz), 2,71-2,56 (2H, m) , 2,24-1, 90 (4H, m) , 1, 64-1, 06 (8 H, m) .
Exemplo 44 (2R)-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}propil)amino](fenil)-acetato de biciclo[2.2.1]hept-2-ilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de norborneilo de D-fenilglicina. Pureza por LCMS 98%, m/z 664 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, CD3OD) , δ: 7,42-7,17 (7H, m) , 7,00 (2H, t, J = 8, 6
Hz), 6,74 (2H, d, J = 9,1 Hz), 5,69 (1H, d, J = 9,8 Hz), 4,49 (1H, d, J = 6,8 Hz), 4,32-4,26 (1H, m) , 4,03 (2H, t, J = 6,0
Hz), 2,70-2,52 (2H, m) , 2,18-1,86 (4H, m) , 1, 63-0,92 (8H, m) .
Exemplo 45 (S)-(3-{4-[6-amino-5-(4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacetato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4E e de éster de terc-butilo de L-fenilglicina. Pureza por LCMS 100%, m/z 608 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, CD3OD) , δ: 7,55-7,47 (3H, m), 7,30-7,21 (6H, m), 7,09 (1H, t, J = 8,7 Hz), 6,61 (2H, d, J = 9,3 Hz), 5,81 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,18 (1H, s) , 4,03 (2H, t, J = 6,0 Hz), 2,75-2,69 (1H, m) , 2, 65-2,58 (1H, m) , 1, 96-1, 88 (1H, m) , 1, 96-1, 88 (2H, m); 1,32 (9H, s).
Exemplo 46 N- (3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}propil)-L-leucinato de 2-(dimetilamino)etilo
A partir do Intermediário 4F e de Intermediário 13. Pureza por LCMS 90%, m/z 621 [M+H]+, RMN_1H (300 MHz, DMSO), δ: 10,18 (1H, s largo), 9,50 (1H, s largo)> 7,57 (1H, q, J = 7,8 Hz), 7,39 (2H, m),7,37-7,15 (3H, m) , 7,04 (2H, m) , 5,73 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,59-4,46 (2H, m) , 4,21 (2h, t, J = 9,0 Hz), 4,11 (1H, m) , 3,14 (2H, m) , 2,86 (6H, s) , 2,14 (2H, m) , 1,74 (2H, m), 0,92 (8H, m).
Exemplo 47 N- (3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2ff) -il]-3,5-difluorofgnoxi}propil)-L-leucinato de 2-morfolin-4-iletilo
A partir do Intermediário 4F e de Intermediário 14. Pureza por LCMS 90%, m/z 621 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, DMSO), δ: 7,57 (1H, q, J = 7,5 Hz), 7,40 (2H, m) , 7,26-7,17 (3H, m) , 7,06 (2H, d, J = 10,8 Hz), 5,74 (1H, d, J = 9,9 Hz), 4,53 (2H, m) , 4,21 (4H, m) , 3,80 (4H, m) , 3,37 (2H, m) , 3,17 (4H, m) , 2,15 (2H, m), 1,75 (3H, m), 0,94 (6H, s largo).
Exemplo 48 (2S)-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2ff) -il]-3,5-difluorofenoxilpropil) amino] (ciclo-hexil)acetato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de ciclopentilo L-ciclo-hexilglicina (Intermediário 9). Pureza por LCMS 95%, m/z 664 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, DMSO), δ: 9,15 (1H, s largo), 8,95 (1H, s largo), 7,62-7,52 (1H, m), 7,46-7,31 (2H, m), 7,27- 7,20 (1H, m) , 7,05 (2H, d, J = 10,2 Hz), 5,74 (1H, d, J = 9,6 Hz), 5,30-5,25 (1H, m), 4,20 (2H, t, j = 5,7 Hz), 4,10-3,95 (1H, m) , 3,25-2, 95 (2H, m) , 2,20-2, 07 (2h, m) , 2,00-1,50 (15H, m) , 1,30-1, 00 (4Η, m), 0, 95-0,75 (1H, m) .
Exemplo 49 (2S)-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H) -il]-3,5-difluorofenoxi>propil)amino] (ciclo-hexil)acetato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de terc-butilo de L-ciclo-hexilglicina. Pureza por LCMS 95%, m/z 632 [M+H]+, RMN-χΗ (300 MHz, DMSO), δ: 9,10 (1Η, s largo), 8,85 (1Η, s largo), 7, 62-7,52 (1Η, m), 7,45-7,31 (2H, m) , 7,28-7,20 (1Η, m), 7,06 (2Η, d, J = 10,2 Hz), 5,74 (1Η, d, J = 9,6 Hz), 4,20 (2Η, t, J = 5,9 Hz), 3, 95-3, 85 (1H, m) , 3, 25-2, 95 (2Η, m) , 2,20-2,07 (2Η, m) , 2,00-1, 60 (6Η, m) , 1,51 OH, s) , 1,35-1,07 (4H, m) , 1,00-0,85 (1H, m).
Exemplo 50 N- (3 — {4—[6-amino-5-12,4-difiuorobenzoil}-2-oxopiridin-1 (2H) -il] -3,S-diflucrofsnoxilpropil) -D-leucinato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4g e de éster de ciclopentilo de D-leucina. Pureza por LCMS 95%/ m/z 618 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, DMSO), δ: 10,10 (1H, s largo)/ 9,40-9,10 (2H, m), 8,15 (1H, s largo), 7, 62-7,52 (1H, m) , 7/47-7,31 (2H, m) , 7,28-7,12 (1H, m) , 7,07 (2H, d, J = 10,5 Hz), 5,73 (1H, d, J = 9,6 Hz), 5, 30-5, 20 (1H, m) , 4,25-4, 00 (3H, ™) , 3, 30-3, 00 (2H, m), 2,20- 2,00 (2H, m) , 1, 95-1,80 (2H, m) , 1/75~1,55 (10H, m) , 1,00-0,90 (6H, m) .
Exemplo 51 N- (3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H) -il]-3,5-difluorofenoxi}propil)-D-leucinato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4F e de éster de terc-butilo de D-leucina. Pureza por LCMS 95%, m/z 606 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, DMSO) , δ: 9, 30-9, 00 (2H, m) , 7, 62-7,52 (1H, m) , 7,47-7,32 (2H, m) , 7,28-7,12 (1H, m) , 7,06 (2H, d, J = 10,2 Hz), 5,73 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,20 (2H, t, J = 5,7 Hz), 3,99 (1H, s largo), 3,25-2, 95 (2H, m) , 2,20-2,05 (2H, m) , 1, 80-1, 60 (3H, m), 1,49 (9H, s), 0,95 (6H, d, J = 4.8 Hz).
Exemplo 52 (2S)-4-amino-2-[(3-f4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}propil)aminolbutanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4F e de Intermediário 15. Pureza por LCMS 90%, m/z 605 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, CD3OD) , δ: 7,46 - 7,55 (2H, m) , 7,12 (2H, t, J = 8,7 Hz), 6,93 (2H, d, J = 9,6 Hz), 5,81 (1H, d, J = 9,6 Hz), 5, 37-5, 44 (1H, m) , 4,20-4,31 (4H, m) , 3, 33-3,42 (1H, m) , 2,25-2,49 (4H, m) , 1,91-2,08 (2H, m), 1,65-1,89 (7H, m).
Exemplo 53 N- (5-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2ff)-il]-3,5-difluorofenoxj)pentil)-L-leucinato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4G. A uma solução de 6-amino-1-{4-[(5-cloropentil)oxi]-2,6-difluorofenil}—5—(2,4 — dif luorobenzoil) piridin-2 (líí)-ona (138 mg, 0,29 mmol) em DMF seca (3 ml) sob uma atmosfera de azoto adicionaram-se L-leucinato de ciclopentilo (Intermediário 8) (284 mg, 1,43 mmol, 5 eq) , iodeto de sódio (86 mg, 0,57 mmol, 2 eq) e N,N-di-isopropiletilamina (0,052 ml, 0,29 mmol, 1 eq). Aqueceu-se a mistura a 90°C durante 16 horas, antes de se deixar arrefecer até à temperatura ambiente e diluiu-se com EtOAc (25 ml). Lavou-se a solução com água (2 x 25 ml) e salmoura (25 ml) . Secou-se a fase orgânica sobre MgSO-j, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de coluna (3-4% de MeOH em DCM) seguida por HPLC preparativa proporcionou o composto do titulo como um sólido de cor creme (96 mg, 52% de rendimento). LC/MS: m/z 646 [M+H] + . RMN-íH (300 MHz, CD3OD) δ: 7,56-7,47 (2H, m) , 7,13 (2H, m) , 6,88 (2H, m) , 5,82 (1H, d, J = 9,8 Hz), 5,23 (1H, t, J = 4,1 Hz), 4,11 (2H, t, J = 6,3 Hz), 3,28 (1H, m) , 2,61-2,51 (2H, m) , 1,95-1,41, (17H, m largo), 0,98-0,93 (6H, m).
Exemplo 54 N- (5-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H) -il]-3,5-difluorofenoxi}pentil)-L-leucinato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4G. A uma solução de 6-amino-1-{4 - [ (5-cloropentil)oxi]-2,6-difluorofenil)-5-(2,4-difluorobenzoil)piridin-2(1H)-ona (96 mg, 0,20 mmol) em DMF seca (3 ml) sob uma atmosfera de azoto adicionaram-se cloridrato de L-leucinato de terc-butilo (198 mg, 0,99 mmol, 5 eq) , iodeto de sódio (60 mg, 0,40 mmol, 2 eq) e N,N-di-isopropiletilamina (0,072 ml, 0,40 mmol, 2 eq). Aqueceu-se a mistura a 90°C durante 20 horas, antes de se deixar arrefecer até à temperatura ambiente e diluiu-se com EtOAc (20 ml). Lavou-se a solução com água (2 x 20 ml) e salmoura (20 ml). Secou-se a fase orgânica sobre MgS04, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de coluna (1-3% de MeOH em DCM) seguida por HPLC preparativa proporcionou o composto do título como um sólido branco (23 mg, 18% de rendimento). LC/MS: m/z 634 [M+H] + . RMN-i-H (300 MHz, CD3OD) δ: 7,56-7,47 (2H, m) , 7,14 (2H, m) , 6,89 (2H, m) , 5,81 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,11 (2H, t, J = 6,2 Hz), 3,19 (1H, m) , 2, 60-2,53 (2H, m) , 1, 89-1, 84 (2H, m) , 1,72-1,41 (16H, m) , 0,96 (6H, m) .
Exemplo 55 N- (5 — {4—[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}pentil)-L-leucinato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4H. A uma solução de 6-amino-1—{4 —[(5-cloropentil)oxi]-2,6-difluorofenil}-5-(4-fluorobenzoil)piridin-2(1H)-ona (99 mg, 0,21 mmol) em DMF seca (3 ml) sob uma atmosfera de azoto adicionaram-se L-leucinato de ciclopentilo (Intermediário 8) (212 mg, 1,06 mmol, 5 eq), iodeto de sódio (64 mg, 0,43 mmol, 2 eq) e N,N-di- isopropiletilamina (0,039 ml, 0,21 mmol, 1 eq). Aqueceu-se a mistura a 90°C durante 20 horas, antes de se deixar arrefecer até à temperatura ambiente e diluiu-se com EtOAc (25 ml).
Lavou-se a solução com água (2 x 25 ml) e salmoura (25 ml) .
Secou-se a fase orgânica sobre MgSCh, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de coluna (2% de MeOH em DCM) seguida por HPLC preparativa proporcionou o composto do título como um sólido amarelo (64 mg, 48% de rendimento). LC/MS: m/z 628 [M+H]+. RMN-iH (300 MHz, CD3OD) δ: 7,71 (1H, d, J = 9,6 Hz), 7,62 (2H, m) , 7,26 (2H, m) , 6,89 (2H, m) , 5,81
(1H, d, J = 9,6 Hz), 5,23 (1H, t, J = 5,3 Hz), 4,11 (2H, t, J = 6,4 Hz), 3,28 (1H, m) , 2,55 (2H, m) , 1,91-1,48 (17H, m) , 0, 98-0, 93 (6H, m) .
Exemplo 56 J7-({4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2ff)-il]fenoxi}acetil)-L-leucinato de ciclopentilo
LC/MS: m/z 564 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, DMSO-de) δ: 8,47 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,56 (2H, m) , 7,45 (1H, d, J = 9,6 Hz), 7,38-7,24 (4H, m) , 7,15 (2H, m) , 5,69 (1H, d, J = 9,8 Hz), 5,09 (1H, t, J = 5,3 Hz), 4,63 (2H, m) , 4,31 (1H, m) , 1,84- 1,79 (2H, m) , 1, 66-1,53 (9H, m) , 0, 92-0,86 (6H, m) . A uma solução de 6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-l-(4-hidroxifenil)piridin-2(lHj-ona [WO 03/076405] (100 mg, 0,31 mmol) em DMF seca (3 ml) sob uma atmosfera de azoto adicionaram-se N- (bromoacetil)-L-leucinato de ciclopentilo (109 ml, 0,34 mmol, 1,1 eq) e carbonato de potássio (51 mg, 0,37 mmol, 1,2 eq) . Aqueceu-se a mistura a 40°C durante 16 horas, antes de se deixar arrefecer até à temperatura ambiente e adicionou-se a água (20 ml). Extraiu-se a mistura com EtOAc (3 x 15 ml) , e lavaram-se os extratos combinados com água (2 x 40 ml) e salmoura (40 ml) . Secou-se a fase orgânica sobre MgSCh, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de coluna (2-3% de MeOH em DCM) seguida por trituração com um mínimo de MeOH proporcionou o composto do título como um sólido branco (91 mg, 52% de rendimento). O N-(bromoacetil)-L-leucinato de ciclopentilo foi sintetizado a partir de L-leucinato de ciclopentilo num só passo, cujos detalhes são delineados abaixo.
A uma solução de L-leucinato de ciclopentilo (Intermediário 8) (568 mg, 2,84 mmol) em DCM (6 ml) adicionaram-se trietilamina (0,24 ml, 2,84 mmol, 1 eq) e cloreto de bromoacetilo (1,44 ml, 3,13 mmol, 1,1 eq) gota a gota. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 20 horas, diluiu-se com DCM (50 ml) e lavou-se com água (50 ml) e salmoura (50 ml) . Secou-se a fase orgânica sobre MgSCg, filtrou-se e concentrou-se sob pressão reduzida para proporcionar uma mistura em bruto contendo o composto do titulo (902 mg) que foi utilizado sem purificação adicional. LC/MS: m/z 320/322 [M+H]+.
Exemplo 57 N-[2-(4-{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H) -il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4J e de éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8) . LC/MS: m/z 534 [M+H] + . RMN-1!! (300 MHz, DMSO-dõ) δ: 8,47 (1H, d, J = 7,7 Hz), 7,56 (2H, m) , 7,45 (1H, d, J = 9,6 Hz), 7,38-7,24 (4H, m) , 7,15 (2H, m) , 5,69 (1H, d, J = 9,8 Hz), 5,09 (1H, t, J = 5,3 Hz), 4,63 (2H, m) , 4,31 (1H, m) , 1, 84-1,79 (2H, m) , 1, 66-1,53 (9H, m) , 0,92-0,86 (6H, m).
Os exemplos seguintes foram sintetizados de um modo similar.
Exemplo 58 N- [2-(4-{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2ff) -il}fenil)etil]-L-leucinato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4J e de éster de terc-butilo de L-leucina. LC/MS: m/z 522 [M+H] + . RMN-1H (300 MHz, DMSO-de) δ: 9,40-9,10 (2H, m) , 7,59-7,44 (5H, m) , 7,38-7,30 (4H, m) , 5,71 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,00 (1H, s largo), 3,40-3,28 (1H, m), 3,25-3,15 (1H, m) , 3,10-3,00 (2H, m) , 1, 80-1,70 (3H, m) , 0,96 (6H, d, J = 5, 1 Hz) .
Exemplo 59 37-[2-(4-{6-amino-5-[ (2,4-difluorofenil) carbonil] -2-oxopiridin-l(2H) -il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo
0 produto do Exemplo 59 foi sintetizado através de um percurso similar ao produto do Exemplo 57 utilizando éster de 4-clorofenilo de ácido 3-(2,4-difluorofenil)-3-oxo- tiopropionimídico. LC/MS: m/z 552 [M+H] + . RMN-1!! (300 MHz, DMSO-dô) δ: 10,07 (1H, s largo), 9,35 (2H, s largo), 7,55-6,95 (8H, m) , 5,72 (1H, d, J = 9,9 Hz), 5,27 (1H, t, J = 5,7 Hz), 4,15-4,00 (1H, m) , 3,41-3,15 (2H, m) , 3,10-3,00 (2H, m) , 1,96- 1,80 (2H, m) , 1,78-1,55 (9 H, m) , 0,95 (6H, d, J = 5,1 Hz).
Exemplo 60 37-[2-(4-{6-amino-5-[(2,4-difluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2H)-il}fenil)etil]-L-leucinato de terc-butilo
O produto do Exemplo 60 foi sintetizado através de um percurso similar ao produto do Exemplo 57 utilizando éster de 4-clorofenilo de ácido 3-(2,4-difluorofenil)-3-oxo- tiopropionimídico. LC/MS: m/z 540 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 10,07 (1H, s largo), 9,30 (2H, s largo), 7,55-6,94 (8H, m) , 5,72 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4, 05-3, 93 (1H, m) , 3,40- 3,10 (2H, m) , 3, 08-3, 00 (2H, m) , 1,80-1, 65 (3H, m) , 1,50 (9H, s), 0,96 (6H, d, J = 5,1 Hz).
Exemplo 61 (2S)-{[2-(4-{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2H) -il}fenil)etil]amino}(fenil)etanoato de ciclopentilo
A partir do Intermediário 4J e de éster de ciclopentilo de L-fenilglicina (Intermediário 10). LC/MS: m/z 554 [M+H]+, RMN-iH (300 MHz, CDC13) δ: 10,35 (1H, s largo), 7,60-7,13 (14H, m), 5,91 (1H, d, J = 10,2 Hz), 5,22-5,14 (1H, m), 4,36 (1H, s), 3,00-2,85 (4H, m), 2,16 (1H, s largo), 1,99-1,43 (8H, m).
Exemplo 62 (2S)-{[2-(4-{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2H)-il}fenil)etil]amino}(fenil)etanoato de terc-butilo
A partir do Intermediário 4J e de éster de terc-butilo de L-fenilglicina. LC/MS: m/z 542 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, CDCI3) δ: 10,30 (1H, s largo), 7,51-7,45 (3H, m), 7,38 (2H, d, J = 6,9 Hz), 7,27-7, 04 (9H, m) , 5,82 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,20 (1H, s), 2,86-2,75 (4H, m), 2,04 (1H, s largo), 1,31 (9H, s).
Exemplo 63 N- [2-(4-{6-amino-5-[(4-metilfenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H) -il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo
O produto do Exemplo 63 foi preparado por uma metodologia similar ao produto do Exemplo 5 9 utilizando éster de 4-clorofenilo de ácido 3-(4-metilfenil)-3-oxo- tiopropionimídico, preparado por um método similar ao utilizado para o Intermediário 4J. LC/MS: m/z 530 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, CDCI3) δ: 7,65 (1H, d, J = 9, 9 Hz), 7,47 (4H, m) , 7,26 (4H, m) , 5,89 (1H, d, J = 9,9 Hz), 5,20 (1H, m) , 3,25 (1H, t, J = 7,2 Hz), 2,87 (4H, m) , 2,44 (3H, s) , 1,99-1,53 (9H, m), 1,42 (2H, t, J = 6,3 Hz), 0,91 (6H, m).
Exemplo 64 flí-[2-(4-{6-amino-5-[(4-metoxifenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H) -il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo
0 produto do Exemplo 64 foi preparado por uma metodologia similar ao produto do Exemplo 59 utilizando éster de 4-clorofenilo de ácido 3-(4-metoxifenil)-3-oxo- tiopropionimídico, preparado por um método similar ao utilizado para o Intermediário 4J. LC/MS: m/z 546 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, CDCls) δ: 7,67 (1H, d, J = 9,9 Hz), 7,55 (2H, d), 7,46 (2H, d), 7,24 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,98 (2H, d, J = 6,9
Hz), 5,90 (1H, d, J = 9,6 Hz), 5,18 (1H, m) , 3,88 (3H, s) , 3,24 (1H, t, J = 7,2 Hz), 2,87 (4H, m) , 1, 97-1,53 (9H, m) , 1,43 (2H, t) , 0,90 (6H, m) .
Exemplo 65 N- [2-(4-{6-amino-5-[(4-clorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2ff) -il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo
O produto do Exemplo 65 foi preparado por uma metodologia similar ao produto do Exemplo 59 utilizando éster de 4-clorofenilo de ácido 3-(4-clorofenil)-3-oxo- tiopropionimídico, preparado por um método similar ao utilizado para o Intermediário 4J. LC/MS: m/z 551 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, CDCls) δ: 7,40 (7H, m) , 7,16 (2H, d, J = 8,4 Hz), 5,82 (1H, d, J = 9,9 Hz), 5,11 (1H, m) , 3,17 (1H, t, J = 7,5 Hz), 2,78 (4H, m), 1,92-1,43 (9H, m), 1,35 (2H, t), 0,82 (6H, dd) .
Exemplo 66 N- [3-(4-{6-amino-5-Γ(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H)-il>-3-fluorofenoxi)Propil]-L-leucinato de ciclopentilo
0 produto do Exemplo 66 foi preparado por uma metodologia similar ao produto do Exemplo 25 utilizando 6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-1-[2—fluoro-4-hidroxifenil]-1H-piridin-2-ona [WO 03/076405] . Pureza por LCMS 97%, m/z 582 [M+H]+, ΪΙΜΙΝΜΗ (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 7,57 (2H, m) , 7,48 (1H, d, J = 9,6 Hz), 7,34 (3H, m) , 7,10 (1H, dd, J = 11,9, 2,3 Hz), 7,00 (1H, dd, J = 9,7, 2,3 Hz), 5,70 (1H, d, J = 9,6 Hz), 5,12 (1H, m) , 4,11 (2H, t, J = 6,2 Hz), 3,14 (1H, m) , 2,68 (1H, m) , 1,98 (1H, m) , 1, 88-1,82 (4H, m) , 1, 67-1,57 (7H, m) , 0,88 (6H, t, J = 7,2 Hz).
Exemplo 67 N-[3-(4-{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2ff) -il}fenil)propil]-L-leucinato de ciclopentilo
O produto do Exemplo 61 foi sintetizado através de um percurso similar ao produto do Exemplo 57 utilizando 3 — (4 — aminofenil)-propan-l-ol. LC/MS: m/z 548 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, DMSO-dõ) δ: 9,13 (2H, s largo), 7,59-7,52 (2H, m) , 7,50-7,42 (3H, m) , 7, 39-7,25 (4H, m) , 5,70 (1H, d, J = 9,6 Hz), 5,28-5,24 (1H, m), 4,04 (1H, s largo), 3,35-2,85 (2H, m), 2,80- 2,70 (2H, m) , 2,10-1,80 (4H, m) , 1,75-1,55 (10H, m) , 0,93 (6H, d, J = 3,4 Hz) . O 3-(4-aminofenil)-propan-l-ol foi sintetizado por um processo de um só passo a partir de álcool 4-nitrocinamílico como se mostra abaixo: A uma solução de álcool 4-nitrocinamí lico (2 g, 11, 1 mmol) em metanol (30 ml) sob uma atmosfera de azoto adicionou-se Níquel de Raney (2 ml de suspensão em água). Depois expôs-se a mistura reacional a hidrogénio gasoso e agitou-se sob uma atmosfera de hidrogénio durante 12 horas para uma reação completa. Filtrou-se a mistura reacional através de Celite, lavando com metanol e acetato de etilo. Concentrou-se depois o filtrado sob pressão reduzida antes da purificação por cromatografia de coluna (EtOAc/hexano 8:2) para dar o produto requerido (1,68 g, 95%) como um sólido amarelo.
Exemplo 68 M2-[3-(4-{6-amino-5-[(2,4-difluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2H) -il}-3,5-difluorofenoxi)propil]-L-lisinato de ciclopentilo
0 produto do Exemplo 68 foi sintetizado através de um percurso similar ao produto do Exemplo 52 utilizando éster de ciclopentilo de L-lisina(Z). LC/MS: m/z 633 [M+H] + . RMN-1!! (300 MHz, CDsOD) δ: 7, 45-7,54 (2H, m) , 7,12 (2H, t, J = 8,6 Hz), 6,93 (2H, d, J = 9,8 Hz), 5,81 (1H, d, J = 9,8 Hz), 5,33-5,40 (1H, m) , 4,25 (2H, t, J = 5,1 Hz), 4,10-4,16 (1H, m) , 2,96 (2H, t), 2,27-2,35 (2H, m), 1,63-2,12 (16H, m).
Exemplo 69 N2-[3-(4-{6-amino-5-[(2,4-difluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2H) -il}-3,5-difluorofenoxi)propil]-L-lisinato de terc-butilo
0 produto do Exemplo 69 foi sintetizado através de um
percurso similar ao produto do Exemplo 52 utilizando éster de terc-butilo de L-lisina(Z). LC/MS: m/z 621 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, CDsOD) δ: 7,48 (2H, dd, J = 9,7, 2,7 Hz), 7,12 (2H, t, J = 8, 6Hz) , 6,88 (2H, d, J = 9,2 Hz), 5,81 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,18 (2H, t, J = 6,2 Hz), 3,15 (H, t, J = 6,6 Hz), 2,76-2,87 (3H, m) , 2,68 (1H, dt, J = 11,5, 6,9 Hz), 1, 97-2,05 (4H, m) , 1,64 (4H, dt, J = 6,1 Hz), 1,01 (9H, s) .
Exemplo 70 N- [2-(3-{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H) -il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo
O produto do Exemplo 70 foi sintetizado utilizando uma metodologia similar à do Intermediário 4J (em vez disso utilizando álcool 3-aminofenetílico) e éster de ciclopentilo de L-leucina (Intermediário 8). LC/MS: m/z 534 [M+H]+. RMN-iH (300 MHz, DMSO-de) δ: 9,40-9, 00 (2Η, m) , 7, 65-7,44 (5Η, m) , 7,38-7,11 (4Η, m) , 5,72 (1Η, d, J = 9,9 Hz), 5, 30-5,20 (1Η, m) , 4,10-4,00 (1H, m) , 3,45-3,15 (2H, m) , 3,10-3,00 (2H, m) , 1, 95-1, 80 (2H, m) , 1,75-1,55 (9H, m) , 9,93 (6H, d, J = 4,8
Hz) .
Exemplo 71 (S)-2-{3,5-difluoro-4-[3-(4-fluorobenzoil)-6-oxo-1,6-di-hidropiridin-2-ilamino]benzilamino}-3-fenilpropionato de ciclopentilo
Deixou-se uma solução de Intermediário 7 (20 mg) em 20% de TFA/DCM (0,5 ml) em repouso à TAmb durante 1 h. Após a reação estar completa, evaporou-se a mistura até à secura soprando um fluxo suave de N2. Adicionou-se DCM (0,5 ml) e soprou-se sob N2. Continuou-se a secagem sob N2 de um dia para o outro. Rendimento = 20 mg, 98%.
Pureza por LCMS 96%, m/z 590 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, d6~DMSO) , δ: 0,75-1,33 (8H, m) , 2,90 (1H, m) , 3,50 (2H, m) , 4,25 (3H, m) , 4,93 (1H, m) , 5,70 (1H, m) , 5,98 (1H, m) , 7,15-7,62 (11 H, m), 9,7 (1H, s largo), 10,42 (0,5H, s largo).
Exemplo de referência 72 ácido (S)-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}fenilacético
A uma solução do produto do Exemplo 7 (100 mg, 0,179 mmol) em THF (1 ml) e MeOH (0,5 ml) adicionou-se NaOH 2 M (aq, 1 ml). Deixou-se a mistura agitar à TAmb durante 3 h, evaporou-se até próximo da secura, acidificou-se utilizando adição gota a gota de HC1 1 M e extraiu-se com EtOAc (5 ml) . Concentrou-
se a fase de EtOAc in vacuo para dar o ácido em bruto. A LCMS mostra 80% de produto m/z = 490 [M+H]+ e 20% de impureza m/z 470 [M+H]+. A purificação por HPLC preparativa proporcionou o produto desejado. Rendimento = 34 mg, 31%). Pureza por LCMS 100%, m/z 490 [M+H]+, ΚΜΝ^Η (400 MHz, DMSO) , δ: 3,64 (2H, m, CH2), 4,06 (1H, s, CH) , 5,50 (1H, d, Ar), 6,75 (1H, s largo, NH), 6,96 (13H, m, Ar), 9,84 (1H, s largo, NH).
Os compostos seguintes foram preparados de um modo similar:
Exemplo de Referência 73 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(2,4— difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 8. Pureza por LCMS 99%, m/z 504 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, DMSO), δ: 2, 96-3, 09 (3H, m) , 3,81 (1H, d), 3,98 (1H, d), 5,76 (1H, d), 7,00 (1H, s largo), 7,22-7,40 (9H, m) , 7,41-7,61 (4H, m), 10,11 (1H, s largo).
Exemplo de Referência 74 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 9. Pureza por LCMS 91%, m/z 470 [M+H]+ , RMl^H (400 MHz, DMSO) , δ: 0,71 (6H, m) , 1,40 (2H, m) , 1,60 (1H, m) , 3,44 (1H, m) , 3,89 (2H, s) , 5,49 (1H, d) , 6,70 (1H, s largo), 6, 94-7, 08 (2H, m) , 7,14-7,33 (4H, m) , 7,46 (2H, m) , 9,86 (1H, s largo).
Exemplo de Referência 75 ácido (S)-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}fenilacético
A partir do produto do Exemplo 1. Pureza por LCMS 100%, m/z 472 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, DMSO), δ: 4,13 (1H, d) , 4,22 (1H, d) , 5,18 (1H, s), 5,73 (1H, d) , 7,30-7,61 (13H, m) , 7,73 (1H, d) , 10,09 (2H, s largo).
Exemplo de Referência 76 ácido (S)-{4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}fenilacético
A partir do produto do Exemplo 4. Pureza por LCMS 86%, m/z 486 [M+H]+, RMN-íH (400 MHz, DMSO) , δ: 2,20 (3H, s), 3,98 (1H, d), 4,06 (1H, d), 5,07 (1H, s) , 5,62 (1H, d), 7,12-7,50 (12H, m) , 7,61 (1H, d), 9,90 (2H, s largo).
Exemplo de Referência 77 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 9. Pureza por LCMS 91%, m/z 470 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, DMSO), δ: 0,71 (6H, m) , 1,40 (2H, m) , 1,60 (1H, m) , 3,44 (1H, m) , 3,89 (2H, s) , 5,49 (1H, d), 6,70 (1H, s largo), 6, 94-7, 08 (2H, m) , 7,14-7,33 (4H, m) , 7,46 (2H, m) , 9,86 (1H, s largo).
Exemplo de Referência 78 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 2. Pureza por LCMS 100%, m/z 486 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, DMSO), δ: 3,00 (2H, m) , 3,98 (3H, m) , 5,65 (1H, d), 7,15-7,34 (11 H, m) , 7,40 (1H, d), 7,51 (2H, m).
Exemplo de Referência 79 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 3. Pureza por LCMS 100%, m/z 452 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, DMSO) , δ: 0,81 (6H, m) , 1,51 (2H, m) , 1,72 (1H, m) , 3,95 (2H, m) , 5,61 (1H, d), 7,21-7,30 (4H, m) , 7,39 (1H, d), 7,48 (2H, m) , 7,52 (2H, m) .
Exemplo de Referência 80 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 5. Pureza por LCMS 100%, m/z 500 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, DMSO), δ: 2,33 (3H, s), 2,90- 3,07 (3H, m) , 3,76 (1H, d), 3,92 (1H, d), 5,72 (1H, d), 7,20-7,42 (9H, m), 7,49 (4H, m).
Exemplo de Referência 81 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]benzilamino}-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 6. Pureza por LCMS 98%, m/z 500 [M+H]+.
Exemplo de Referência 82 ciclopentilo ácido (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)-3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 24. Pureza por LCMS 93%, m/z 530 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 1,90 (2H, m) , 2,80-2, 90 (2H, m) , 3,00 (2H, m) , 3,40 (1H, m) , 4,05 (2H, m) , 5,70 (1H, d), 7,10 (1H, d), 7,20 (2H, d). 7,30 (5H, m) , 7,35 (1H, d), 7,45 (1H, d), 7,60 (1H, d).
Exemplo de Referência 83 ácido (S)-2-(3 — {4-[6-amino-5-(3-metil-4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)-3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 12. Pureza por LCMS 96%, m/z 544 [M+H]+, RMN-i-H (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 2,30 (2H, m) , 2,40 (3H, s) , 3,30 (1H, m), 4,30 (2H, m), 4,45 (1H, m), 5,85 (1H, d), 5,40 (1H, m) , 5,85 (1H, d), 7,25 (2H, d), 7,40-7,55 (9H, m) , 7, 60-7,70 (2H, m) .
Exemplo de Referência 84 ácido (S)-(3-{4-[6-amino-5-(2,4— difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-fenoxi}propilamino)fenilacético
A partir do produto do Exemplo 28. Pureza por LCMS 82%, m/z 534 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, CD3OD) , δ: 2,25 (2H, m) , 3,10 (1H, m) , 3,25 (1H, m) , 4,20 (1H, ^ ' 5'83 (1H' d> ' 7,15-7,60 (13H, d).
Exemplo de Referência 85 ácido (3—{4—[6—amino—5—(4— fluorobenzoil) -2-oxo-2H-piridin-lij:'^ fenoxi}Propilainino) -4-metilpentanóico
A partir do produto do ExemplS—^· Pureza por LCMS 100%, m/z 496 [M+H]+, ΪΙΜΝ^Η (400 MHz, de-DMSO), δ: 1,00 (6H, m) , 1,75-1, 90 (3H, m) , 2,30 (2H, m) , 3a10~3,30 (2H, m) , 4,00 (1H, m) , 4,25 (2H, m) , 5,85 (1H, d) , 5,40 (1H, m) , 5,85 (1H, d) , 7,20 (2H, d) , 7,30 (2H, d) , 7,40 (2H' / 7,55 (1H, m) , 7,65 (2H, m).
Exemplo de Referência 86 ácido (3-{4-[6-amino-5-(2,4- difluorobenzoil) -2-oxo-2H-piridini-*r''^'^^ fenoxi}propilamino) -3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 29. pureza por lCMS 100%, m/z 548 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, de-DMSO), δ: 2,15 (2H, m) , 3,15-3,30 (3H, m), 3,35 (1H, m), 4,10 (2H, m), 4,20 (1H, m), 5,65 (1H, d), 7,15 (2H, d) , 7,20-7,35 (u Hf m) #
Exemplo de Referência 87 ácido (S) - (3-{4- [-g-am-i no-5-fluoro-3-metilbenzoil) -2-oxo-2H-piridin-i Ί -j _ fenoxi}propilamino)fenilacético
A partir do produto do Exemplo 26. Pureza por LCMS 95%, m/z 530 [M+H]+, RMLMH (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 2,15 (3H, s), 2.35 (2H, m) , 2,85 (2H, m) , 3,05 (2H, m) , 4,10 (2H, m) , 5,25 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 4,25 (2H, m) , 5,85 (1H, d), 5,40 (1H, m) , 5,85 (1H, d), 7,10 (2H, d), 7,25 (2H, d), 7,3 (1H, d), 7.35 (1H, m) , 7,40-7,55 (5H, m) , 7,60 (2H, m) .
Exemplo de Referência 88 ácido (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 27. Pureza por LCMS 94%, m/z 510 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 0,90 (6H, s largo), 1,65-1,80 (3H, m), 2,1-2,30 (3H, s + 2H, m), 3,0-3,20 (2H, m) , 3,90 (1H, m) , 4,15 (2H, m) , 5,65 (1H, d), 7,15 (2H, d), 7,20-7,30 (3H, m) , 7,30 (1H, m), 7,40 (1H, d), 7,45 (2H, s) .
Exemplo de Referência 89 ácido (S)-(3—{4—[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacético
A partir do produto do Exemplo 13. Pureza por LCMS 91%, m/z 552 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 2,10-2,25 (2H, m largo), 2,80 (1H, m) , 3,00 (1H, m) , 4,15 (2H, d), 5,20 (1H, s) , 5,70 (1H, d), 5,65 (1H, d), 6,95 (2H, d), 7,30 (2H, t) , 7,30 (1H, m) , 7,40-7, 60 (8H, m) .
Exemplo de Referência 90 ácido (S)-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacético
A partir do produto do Exemplo 14. Pureza por LCMS 98%, m/z 566 [M+H]+, RMN-íH (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 2,35 (2H, m) , 3,1-3,3 (3H, m) , 3,50 (1H, m) , 4,25-4,40 (3H, m) , 5,80 (1H, d), 5,70 (1H, d), 7,10 (2H, d), 7, 30-7,45 (7H, m) , 7,60-7,70 (3H, m).
Exemplo de Referência 91 ácido (S)-2-(3 — {4 —[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxifenoxi}propilamino)-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 15. Pureza por LCMS 92%, m/z 532 [M+H]+, RMN-íH (400 MHz, d6-DMS0) , δ: 0,95 (6H, m) , 1,8 (3H, m) , 2,30 (2H, m) , 3,10-3,25 (2H, m) , 3,95 (1H, m) , 4,25 (2H, m) , 5,80 (1H, d), 7,10 (2H, m) , 7,40 (2H, m) , 7,60 (1H, m) , 7,65 (2H, m) .
Exemplo de Referência 92 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(2,4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorobenzilamino}-3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 10. Pureza por LCMS 95%, m/z 522 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, CD3OD) , δ: 3,30 (2H, m) , 4,15 (1H, m) , 4,25 (2H, m) , 5,75 (1H, d), 7,15-7,35 (9H, m) , 5,20 (1H, m) , 5,90 (1H, d), 7,35-7,50 (9H, m) , 7,55 (2H, m) , 7,65 (1H, d).
Exemplo de Referência 93 ácido (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 18. Pureza por LCMS 92%, m/z 580 [M+H]+, RMN-1]! (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 2,30 (2H, m) , 2,40 (3H, s), 3,15-3,35 (4H, m) , 3,50 (1H, m) , 4,30 (2H, m) , 4,35 (1H, m) , 5,80 (1H, d), 7,10 (2H, m) , 7,35-7,50 (7H, m) , 7,55 (1H, m) , 7,65 (1H, m) .
Exemplo de Referência 94 ácido (S)-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-fenoxi}propilamino)fenilacético
A partir do produto do Exemplo 23. Pureza por LCMS 87%, m/z 516 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, de-DMSO) , δ: 2,25 (2H, m) , 2,80 (1H, m) , 3,10 (1H, m) , 4,15 (2H, m) , 5,30 (1H, s), 5,75 (2H, d), 7,15 (2H, d), 7,25 (2H, d), 7,40 (2H, t) , 7,50-7,70 (7H, m).
Exemplo de Referência 95 ácido (S)-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacético
A partir do produto do Exemplo 20. Pureza por LCMS 84%, m/z 570 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, d6-DMS0) , δ: 2,30 (2H, m) , 2,90 (1H, m) , 3,15 (1H, m) , 4,23 (2H, m) , 5,32 (1H, s), 5,85 (1H, d), 7,10 (2H, d), 7,50 (3H, m) , 7, 60-7, 65 (6H, m) .
Exemplo de Referência 96 ácido (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]fenoxi}propilamino)-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 30. Pureza por LCMS 93%, m/z 514 [M+H]+, RMN-i-H (400 MHz, d6-DMSO) , δ: 0,95 (6H, m) , 1,85 (3H, m) , 2,30 (2H, m) , 3,15-3,22 (2H, m) , 3,99 (1H, m) , 4,21 (2H, m) , 5,77 (1H, d), 7,20 (2H, d), 7,30 (4H, m) , 7,45 (1H, m), 7,55 (1H, m).
Exemplo de Referência 97 ácido (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(2,4— difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 22. Pureza por LCMS 88%, m/z 550 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, de-DMSO) , δ: 0, 80-0, 95 (6H, m), 1,50-1, 85 (3H, m) , 1,95-2,10 (2H, m) , 2, 95-3, 05 (2H, m) , 3,75-3, 85 (1H, m) , 4,05-4,15 (2H, m) , 5,65 (1H, d), 7,00 (1H, d), 7,10-7,20 (1H, m), 7,25-7,30 (1H, m), 7,30-7,40 (1H, m), 7,45-7,55 (1H, m) , 7, 80-8,25 (1H, s largo), 9, 90-10,20 (1H, s largo).
Exemplo de Referência 98 ácido (S)-2-(3-{4-[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)-4-metilPer*tanóieo
A partir do produto do Exemplo 19. Pureza por LCMS 93%, m/z 546 [M+H]+, RMN-i-H (400 MHz, de'DMSO) , δ: 0, 95-1,05 (6H, m) , 1,55-1,75 (2H, m) , 1,80-1, 90 (1H, m) , 2,10-2,25 (2H, m) , 2,35 (3H, s), 3,00-3,15 (2H, m) , 3,70 (1h, m) , 4,15-4,30 (2H, m) , 5,80 (1H, d), 7,10 (1H, d), 7, 25-7,35 (1H, m), 7,40-7,45 (1H, m) , 7,50-7,55 (1H, m) , 7, 55-7, 65 (1H, m) , 8, 90-10, 70 (2H, s largo).
Exemplo de Referência 99 ácido (S)~(3-{4-[6-amino-5-(4-fluoro-3-metilbenzoil) -2-oxo-2H-piridin-l-in -3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacético
A partir do produto do Exemplo 17. Pureza por LCMS 100%, m/z 566 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, de-DMSO), δ: 2,05-2,20 (2H, m) , 2,30 (3H, s), 2,75-3, 05 (2H, m) , 4, 05-4,20 (2H, m) , 4,65- 4,85 (1H, m) , 5,70 (1H, d), 7,00 (1H, d), 7,25-7,35 (1H, m) , 7,35-7,60 (8H, m).
Exemplo de Referência 100 ácido (S)-2-(3-{4-r6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]~3,5-difluorofenoxi}-propilamino)-3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 21. Pureza por LCMS 100%, m/z 584 [M+H]+, RMN-iH (400 MHz, DMSO), δ: 2,05-2,15 (2H, m) , 3,00-3,10 (3H, m) , 4, 00-4,25 (4H, m) , 5,75 (1H, d), 7,05 (1H, d), 7,25-7,50 (8H, m) , 7,55-7, 65 (1H, m) .
Exemplo de Referência 101 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorobenzilamino}-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 11. Pureza por LCMS 92%, m/z 506 [M+H]+, RMN-1H (400 MHz, MeOD), δ: 0,85-1,05 (6H, m), 1, 65-1, 85 (3H, m) , 3, 95-4, 05 (1H, m) , 4,25-4,35 (2H, m) , 5,75 (1H, d), 6,90 (1H, d), 7,00-7,10 (2H, m) , 7,35-7,45 (4H, m) .
Exemplo de Referência 102 ácido (S)-2-(4 —{4 —[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}ciclo-hexilamino)-4-metilpentanóico
A partir do produto do Exemplo 31. Pureza por LCMS 91%, m/z 606 [M++H], RMN-iH (400 MHz, CD30D), δ: 1,55-2,55 (8H, m) , 3,20-3, 40 (2H, m) , 4,25-4,35 (1H, m) , 4,45-4,55 (1H, m), 4,85- 4,95 (1H, m) , 5,95 (1H, d), 6,95-7,10 (2H, m) , 7,35-7, 55 (6H, m) , 7,70-7, 80 (2H, m) , 7, 80-7,85 (1H, d).
Exemplo de Referência 103 ácido (2S)-[(4 —{4 —[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2ff)-il]-3,5-difluorofenoxi}ciclo-hexil)amino](fenil)acético
A partir do produto do Exemplo 32. Pureza por LCMS 89%, m/z 592 [M+H]+, RMN-íH (400 MHz, CD3OD) , δ: 1, 60-1,75 (2H, m) , 1, 80-1, 95 (2H, m) , 2,00-2,15 (2H, m) , 2,15-2,30 (2H, m) , 3,05- 3,20 (1H, m), 4, 65-4,75 (1H, m), 4,75-4,80 (1H, m) , 5,80 (1H, d), 6, 85-6, 95 (2H, m) , 7,20-7,30 (2H, m) , 7,40-7,50 (3H, m) , 7,55-7, 65 (4H, m) , 7, 65-7,70 (1H, m) .
Exemplo de Referência 104 N- (4-{4-[6-amino-5-(4 -fluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2fl)-il]-3,5-difluorofenoxi}ciclo-hexil)-L-leucina
A partir do produto do Exemplo 33. Pureza por LCMS 93%, m/z 572 [M+H]+, RMN-1]! (400 MHz, CD3OD) , δ: 0,85-1, 00 (6H, m) , 1,45-2, 00 (9H, m), 2,05-2,25 (3H, m), 3,05-3,15 (1H, m) , 3,60- 3,75 (1H, m) , 4,30 e 4,65 (0,5H cada, m) , 5,70 (1H, d), 6,75- 6,85 (2H, m) , 7,10-7,15 (2H, m) , 7,45-7,55 (2H, m) , 7,55-7,65 (1H, m).
Exemplo de Referência 105 ácido (S)-2-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]ciclo-hexilamino}-3-fenilpropiónico
A partir do produto do Exemplo 34. Pureza por LCMS 98%, m/z 478 [M+H]+, RMLMH (400 MHz, CD3OD) , δ: 1,55-1,85 (4H, m) , 1, 95-2,20 (2H, m) , 2,30-2,75 (2H, m), 3,15-3,20 (1H, m) , 3,25- 3,35 (2H, m) , 4,05-4,15 (1H, m) , 5,60 (1H, d), 7,05-7,15 (2H, m) , 7,15-7,35 (5H, m), 7,35-7,45 (3H, m) .
Exemplo de Referência 106 ácido (R)-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacético
A partir do produto do Exemplo 42. Pureza por LCMS 88%, m/z 570 [M+H]+, RMN-i-H (400 MHz, DMSO), δ: 2,05-2,20 (2H, m) , 2,75-2,95 (2H, m), 4,10-4,20 (2H, m), 4,30-4,50 (1H, m), 5,75 (1H, d), 7,00-7,10 (2H, m) , 7,20-7,30 (1H, m) , 7,35-7,50 (7H, m), 7,55-7,65 (1H, m).
Exemplo de Referência 107 ácido (2S)-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}propil)amino](ciclo-hexil)acético
A partir do produto do Exemplo 48. Pureza por LCMS 95%, m/z 576 [M+H]+, RMN-lH (300 MHz, DMSO), δ: 10,16 (1H, s largo), 8,78 (1H, s largo), 8,12 (1H, s largo), 7, 62-7,53 (1H, m) , 7,47-7,32 (2H, m), 7,27-7,21 (1H, m), 7,07 (2H, d, J = 10,2
Hz), 5,74 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,19 (2H, t, J = 5,7 Hz), 3,85- 3,75 (1H, m) , 3,15-3,00 (2H, m) , 2,20-2,05 (2H, m) , 1,95-1,60 (6H, m), 1,40-0,90 (5H, m).
Exemplo de Referência 108 N- (3-{4-[6-amino-5-(2,4 — difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}propil)-D-leucina
A partir do produto do Exemplo 50. Pureza por LCMS 90%, m/z 550 [M+H]+, RMN-lH (300 MHz, DMSO), δ: 7, 63-7,52 (1H, m) , 7,46-7, 32 (2H, m) , 7,28-7,10 (1H, m) , 7,06 (2H, d, J = 10,2
Hz), 5,73 (1H, d, J = 9,9 Hz), 4,25-4,15 (2H, m) , 3,90-3,80 (1H, m) , 3,20-3,00 (2H, m) , 2,20-2, 05 (2H, m) , 1, 80-1, 55 (3H, m), 0,98-0,90 (6H, m).
Exemplo de Referência 109 N- (5-{4-[6-amino-5-(4 -fluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}pentil)-L-leucina
A partir do produto do Exemplo 55. A uma solução de N-(5-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H) - il]-3,5-difluorofenoxiJpentil)-L-leucinato de ciclopentilo (33 mg, 0,05 mmol) em THF (1 ml) e água (1 ml) adicionou-se LiOH (25 mg, 1,05 mmol, 20 eq) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas, antes de se aquecer a 80°C durante 10 horas. Concentrou-se a mistura sob pressão reduzida e adicionou-se água (5 ml). Ajustou-se o pH a 7 utilizando HC1 1 M e extraiu-se a fase aquosa com 1-butanol (3x5 ml) . Concentraram-se os extratos orgânicos combinados sob pressão reduzida. Triturou-se o resíduo sólido com Et20, recolheu-se por filtração e purificou-se por HPLC preparativa para proporcionar o composto do titulo como um sólido branco como o sal de mono-TFA (7 mg, 24% de rendimento). LC/MS: m/z 560 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, DMSO-de) δ: 7,62-7,51 (3H, m) , 7,34 (2H, m) , 7,05 (2H, m) , 5,72 (1H, d, J = 9,8 Hz), 4,09 (2H, t, J = 5,7 Hz), 3,23 (1H, m) , 2,80 (2H, m) , 1,79-1,43 (9H, m) , 0,89 (6H, t, J = 6, 7 Hz) .
Exemplo de Referência 110 N- ({4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H) -il]fenoxi}acetil)-L-leucina
A partir do produto do Exemplo 56. A uma solução de N-({4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H) -il]fenoxi}acetil)-L-leucinato de ciclopentilo (35 mg, 0,06 mmol) em THF (1 ml) e água (1 ml) adicionou-se LiOH (30 mg, 1,24 mmol, 20 eq). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 16 horas, concentrou-se sob pressão reduzida e adicionou-se água (5 ml). Ajustou-se o pH a 7 utilizando HC1 1 M e extraiu-se a fase aquosa com 1-butanol (3x5 ml) . Concentraram-se os extratos orgânicos combinados sob pressão reduzida. Triturou-se o residuo sólido com Et2<0, filtrou-se e secou-se sob pressão reduzida para proporcionar o composto do titulo como um sólido creme (11 mg, 36% de rendimento). LC/MS: m/z 496 [M+H]+. RMN-i-H (300 MHz, DMSO-de) δ: 7,58-7,53 (3Η, m) , 7,43 (1Η, d, J = 9,6 Hz), 7,36-6, 98 (6Η, m) , 5,68 (1Η, d, J = 9,6 Hz), 4,58 (2H, s) , 3,90 (1H, m) , 1,67-1,31 (3H, m) , 0,86 (6H, m) .
Exemplo de Referência 111 N- [2-(4-{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2H)-il}fenil)etil]-L-leucina
A partir do produto do Exemplo 58. LC/MS: m/z 466 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, DMSO-de) δ: 8,21 (1H, s largo), 7, 60-7, 44 (4H, m) , 7,39-7,30 (4H, m) , 5,76-5, 69 (1H, m) , 4, 00-3, 85 (1H, m) , 3,10-2,95 (2H, m) , 1,85-1, 60 (3H, m) , 1,30-1,10 (2H, m) , 0,95 (6H, d, J = 6 Hz) .
Exemplo de Referência 112 N- [2-(4-{6-amino-5-[(4-metilfenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2H)-11}fenil)etil]-L-leucina
A partir do produto do Exemplo 63. LC/MS: m/z 462 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, CD3OD) δ: 7,69 (1H, d, J = 9, 6 Hz), 7,53 (2H, d, J = 7,2 Hz), 7,45 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,34 (2H, d, J = 7,8
Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,4 Hz), 5,80 (1H, d, J = 9,6 Hz), 3,15 (1H, m), 3,02-2,75 (4H, m), 2,45 (3H, s), 1,73 (1H, m), 1,56- 1,22 (2H, m) , 0,96 (6H, dd) .
Exemplo de Referência 113 N- [2-(4-{6-amino-5-[(4-metoxifenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2ff)-11}fenil)etil]-L-leucina
A partir do produto do Exemplo 64. LC/MS: m/z 478 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, DMSO-de) δ: 7,28 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,15 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,04 (1H, d, J = 9,3 Hz), 6,89 (4H, m) , 4,87 (1H, d, J = 9,3 Hz), 3,78 (1H, m) , 3,41 (3H, s) , 2,75 (2H, m), 1,78 (1H, m), 1,24 (2H, m), 0,86 (6H, t).
Exemplo de Referência 114 N- [2-(4-{6-amino-5-[(4-clorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2ff)-il}fenil)etil] -L-leucina
A partir do produto do Exemplo 65. LC/MS: m/z 482 [M+H]+. RMN-iH (300 MHz, CD3OD) δ: 7,16 (1H, d), 7,52 (6H, m) , 7,23 (2H, d), 6,82 (1H, d), 3,15 (1H, t) , 1,74 (1H, m) , 1,44 (2H, m) , 0,93 (6H, dd) .
Exemplo de Referência 115 (2S)-4-amino-2-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}propil)amino]butanoato
A partir do produto do Exemplo 52. LC/MS: m/z 537 [M+H]+. ΪΙΜΝ^Η (300 MHz, DMSO-de) δ: 7,52-7,75 (2Η, m) , 7,30-7, 48 (2Η, m), 7,20-7,29 (1Η, m), 7,09 (2 H, d, J = 9,7 Hz), 4,23 (1H, t, J = 6,1 Hz), 4,07-4,17 (2H, m) , 2,14-2,32 (2H, m) , 1,22-1,41 (6H, m), 0,88 (4H, t, J = 7,3 Hz).
Exemplo de Referência 116 N- (5-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il] -3,5-difluorofenoxi}pentil)-L-leucina
A partir do produto do Exemplo 54. A uma solução de 77-(5-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}pentil)-L-leucinato de terc-butilo (21 mg, 0,04 mmol) em DCM (2,5 ml) adicionou-se TFA (2,5 ml). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 20 horas, antes de se concentrar sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo num mínimo de MeOH e evaporou-se azeotropicamente com tolueno/DCM 1:1 três vezes. 0 composto do título foi proporcionado como um sólido de cor creme como o sal de mono-TFA (21 mg, 92% de rendimento). LC/MS: m/z 634 [M+H]+. RMN-1H (300 MHz, DMSO-dô) δ: 10,14 (1H, s largo), 8,21 (1H, s largo), 7,57 (1H, m), 7,46 (1H, m) , 7,34 (1H, dd, J = 9,6, 2,4 Hz), 7,21 (1H, m) , 7,06 (2H, d, J = 10,2 Hz), 5,73 (1H, d, J = 9,9 Hz), 4,10 (2H, t, J = 5,7 Hz), 3,40 (1H, m) , 2,84 (2H, t, J = 6,6 Hz), 1,79-1,48 (9H, m), 0,90 (6H, t, J = 6,3 Hz).
Os produtos exemplos seguintes foram preparados de um modo similar:
Exemplo de Referência 117 N- [2-(4 — {6—amino- 5 - [ (2,4 - difluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2H) -il}fenil)etil]-L- leucina
A partir do produto do Exemplo 60. LC/MS: m/z 484 [M+H]+: RMN-3H (300 MHz, DMSO-de) δ: 10,06 (1Η, s largo), 9,17 (2H, s largo), 7,55-6, 94 (8H, m) , 5,72 (1H, d, J = 9,6 Hz), 4,05-3,93 (1H, m) , 3,40-3,10 (3H, m) , 1,85-1, 65 (4H, m) , 0,95 (6H, d, J = 5,7 Hz).
Exemplo de Referência 118 ácido (2S)-{[2-(4-{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-l(2H)-il)fenil)etil]amino}(fenil)etanóico
A partir do produto do Exemplo 62. LC/MS: m/z 486 [M+H]+, RMN-1H (300 MHz, DMSO-de) δ: 9,80 (2H, s largo), 7,70-7,20 (14H, m) , 5,70 (1H, d, J = 9,6 Hz), 5,24 (1H, s) , 3,20-2,90 (4H, m).
Medição de atividades biológicas Atividade de MAP-quinase p38 A capacidade de compostos para inibir a atividade de MAP-quinase p38a foi medida num ensaio realizado pela Upstate (Dundee UK). Num volume reacional final de 25 pL, MAP-quinase p38a (5-10 mU) é incubada com Tris 25 mM pH 7,5, EGTA 0,002 mM, 0,33 mg/mL de proteína básica mielina, MgAcetato 10 mM e [g-33P-ATP] (atividade específica aprox. 500 cpm/pmol, concentração conforme requerido). A reação é iniciada pela adição da mistura MgATP. Após incubação durante 40 minutos à temperatura ambiente, a reação é parada pela adição de 5 yL de uma solução de ácido fosfórico a 3%. Depositam-se depois pontos de 1 yL da mistura reacional sobre um Filtermat P30 e lavam-se três vezes durante 5 minutos em ácido fosfórico 75 mM e uma vez em metanol antes da secagem e contagem de cintilação. São gerados pontos de dados em duplicado a partir de uma série de diluições 1/3 log de uma solução de reserva em DMSO. São realizados nove passos de diluição a partir de uma concentração de topo de 10 μΜ, e inclui-se um branco "sem composto". O ensaio padrão radiométrico de ligação ao filtro é realizado para uma concentração de ATP igual ou próxima do Km. Recolhem-se os dados das contagens de cintilação e submetem-se a análise de ajuste livre pelo software Prism. A partir da curva gerada, determina-se e relata-se a concentração que dá uma inibição de 50%.
Estimulação por LPS de células THP-1 Células THP-1 foram plaqueadas em 100 μΐ com uma densidade de 4 x 104 células/poço em placas tratadas de cultura de tecidos de 96 poços de fundo em V e incubaram-se a 37 °C em 5% de CO2 durante 16 h. 2 h após a adição do inibidor em 100 μΐ de meio de cultura de tecidos, estimularam-se as células com LPS (E coli estirpe 005:B5, Sigma) numa concentração final de 1 yg/ml e incubaram-se a 37°C em 5% de CO2 durante 6 h. Mediram-se os níveis de TNF-α a partir de sobrenadantes isentos de células por ELISA de sanduíche (R&amp;D Systems #QTA00B).
Estimulação por LPS de sangue inteiro humano
Colheu-se sangue inteiro por punção venoso utilizando Vacutainers heparinizados (Becton Dickinson) e diluiu-se num volume igual de meio de cultura de tecidos RPMI 1640 (Sigma). Plaquearam-se 100 μΐ em placas tratadas de cultura de tecidos de 96 poços de fundo em V. 2 h após a adição do inibidor em 100 μΐ de meio RPMI 1640, estimulou-se o sangue com LPS (E coli estirpe 005:B5, Sigma) numa concentração final de 100 ng/ml e incubou-se a 37°C em 5% de CO2 durante 6 h. Mediram-se os níveis de TNF-α a partir de sobrenadantes isentos de células por ELISA de sanduíche (R&amp;D Systems #QTA00B)
Os valores de CI50 foram alocados a um dos três intervalos como se segue:
Intervalo A: CI50 < 100 nM Intervalo B: 100 nM < CI50 <1000 nM Intervalo C: CI50 >1000 nM
Tabela de resultados
Ensaio de carboxilesterase de células quebradas
Um qualquer composto determinado da presente invenção onde Ri é um grupo éster pode ser testado para determinar se satisfaz ou não o requisito de ser hidrolisado por esterases intracelulares, por realização do teste no ensaio seguinte.
Preparação de extrato celular Células tumorais U937 ou Hut78 (~109) foram lavadas em 4 volumes de PBS de Dulbecco (~1 litro) e sedimentadas a 525 x g durante 10 min a 4°C. Repetiu-se isto duas vezes e ressuspendeu-se o sedimento celular final em 35 ml de tampão de homogeneização frio (Trizma 10 mM, NaCl 130 mM, CaCl2 0,5 mM pH 7,0 a 25°C). Prepararam-se homogeneizados por cavitação em azoto (700 psi durante 50 min a 4°C). O homogeneizado foi mantido em gelo e suplementado com um cocktail de inibidores em concentrações finais de:
Após clarificação do homogeneizado celular por centrifugação a 525 x g durante 10 min, utilizou-se o sobrenadante resultante como fonte de atividade de esterase e armazenou-se a -80°C até ser necessário.
Medição da clivagem de éster A hidrólise de ésteres nos ácidos carboxilicos correspondentes pode ser medida utilizando o extrato celular, preparado como acima. Para este efeito incubou-se extrato celular (—30 pg/volume de ensaio total de 0,5 ml) a 37°C num tampão Tris-HCl 25 mM, NaCl 125 mM, pH 7,5 a 25°C. No instante zero adicionou-se então o éster (substrato) numa concentração final de 2,5 μΜ e incubaram-se as amostras a 37°C durante o tempo apropriado (usualmente 0 ou 80 min) . Pararam-se as reações pela adição de 3 x volumes de acetonitrilo. Para as amostras no instante zero adicionou-se o acetonitrilo antes do composto de éster. Após centrifugação de 12000 x g durante 5 min, analisaram-se as amostras quanto ao éster e ao seu ácido carboxilico correspondente à temperatura ambiente por LCMS (Sciex API 3000, bomba binária HP1100, CTC PAL). A cromatografia foi baseada numa coluna AceCN (75 x 2,1 mm) e numa fase móvel de 5-95% de acetonitrilo em água/0,1% de ácido fórmico.
As velocidades de hidrólise são expressas em pg/mL/min. A Tabela 1 apresenta dados mostrando que vários motivos de éster de aminoácido, conjugados a vários inibidores de enzima intracelular por várias químicas de ligador diferentes, são todos hidrolisados por carboxilesterases intracelulares no ácido correspondente.
Tabela 1

Claims (13)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (I):
    O) onde: G é -CH=; D é um anel fenilo opcionalmente substituído; R6 é hidrogénio; P representa hidrogénio e U representa um radical de fórmula (IA); ou U representa hidrogénio e P representa um radical de fórmula (IA); -A- (CH2) z-X1-L1-Y-NH-CHRiR2 (IA) onde A representa um anel fenilo ou ciclo-hexilo opcionalmente substituído; z é 0 ou 1; Y é uma ligação, -C(=0)-, -S(=0)2-, -C(=0)NR3-, -C(=S)-NR3, -C (=NH) NR3 ou -S (=0) 2NR3- onde R3 é hidrogénio ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído; L1 é um radical divalente de fórmula - (Alk1) m (Q) n (Alk2) p- onde m, n e p são independentemente 0 ou 1, Q é (i) um radical carbocíclico ou heterocíclico mono ou bicíclico divalente opcionalmente substituído possuindo 5-13 membros de anel, ou (ii) , no caso onde m e p são ambos 0, um radical divalente de fórmula -X2-Q1- ou -Q1-X2- onde X2 é -0-, S- ou NRA- onde RA é hidrogénio ou alquilo C1-C3 opcionalmente substituído, e Q1 é um radical carbocíclico ou heterocíclico mono ou bicíclico divalente opcionalmente substituído possuindo 5-13 membros de anel, Alk1 e Alk2 independentemente representam radicais cicloalquilo C3-C7 divalentes opcionalmente substituídos ou radicais alquileno C1-C6, alcenileno C2-C6 ou alcinileno C2-C6 lineares ou ramificados opcionalmente substituídos que podem opcionalmente conter ou terminar num elemento de ligação éter (-0-), tioéter (-S-) ou amino (-NRA-) onde RA é hidrogénio ou alquilo C1-C3 opcionalmente substituído; e X1 representa uma ligação; -C (=0); ou -S(=0)2-; -NR4C(=0)-, -C (=0) NR4-, -NR4C (=0)NR5-, -NR4S (=0) 2- ou -S(=0)2NR4- onde R4 e R5 são independentemente hidrogénio ou alquilo C1-C6 opcionalmente substituído; Ri é um grupo éster que é hidrolisável por uma ou mais enzimas carboxilesterase intracelulares num grupo ácido carboxílico; r2 é a cadeia lateral de um alfa-aminoácido natural ou não natural selecionado entre: (i) grupos alquilo C1-C6, fenilo, 2-, 3- ou 4-hidroxifenilo, 2-, 3- ou 4-metoxifenilo, 2-, 3- ou 4-piridilmetilo, benzilo, feniletilo, 2-, 3- ou 4-hidroxibenzilo, 2-, 3- ou 4-benziloxibenzilo, 2-, 3-ou 4-alcoxi (Ci-C6)benzilo e benziloxi (alquilo (Ci-Cô) )-; (ii) o grupo caraterizador de um α-aminoácido natural, no qual qualquer grupo funcional pode estar protegido; (iii) grupos -[Alk]nR6 onde Alk é um grupo alquilo (Ci-Cô) ou alcenilo(C2-C6) opcionalmente interrompido por um ou mais átomos -0- ou -S- ou grupos -N (R7) - [onde R7 é um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo(Ci-Ce) ] , n é 0 ou 1, e R6 é um grupo cicloalquilo ou cicloalcenilo opcionalmente substituído; (iv) um grupo benzilo substituído no anel fenilo por um grupo de fórmula -OCH2COR15 onde R15 é hidroxilo, amino, alcoxi (Ci-Cô) , fenilalcoxi (Ci-Cõ) , alquil (Ci-Cõ) amino, di ( (alquil (Ci-Cô) ) amino, fenilalquil (Ci-Cõ) amino, o resíduo de um aminoácido ou seu derivado halogeneto de ácido, éster ou amida, estando o referido resíduo ligado através de uma ligação amida, sendo o referido aminoácido selecionado entre glicina, α ou β alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisina, histidina, arginina, ácido glutâmico e ácido aspártico; (v) um grupo heterocíclico(alquilo(Ci-Cô) ), estando quer não substituído quer mono ou dissubstituído no anel heterocíclico com halo, nitro, carboxi, alcoxi (C1-C6) , ciano, alcanoílo (Ci-Cô) , trifluorometilo alquilo (C1-C6) , hidroxi, formilo, amino, alquil (Οι-Οε) amino, di (alquil (C1-C6) ) amino, mercapto, alquil (Οι-Οε) tio, hidroxialquilo (Ci-Cõ) , mercaptoalquilo (Ci-Cô) ou alquil (C1-C6) fenilmetilo; e (vi) um grupo -CRaRbRc no qual: cada um de Ra, Rb e Rc é independentemente hidrogénio, alquilo (Ci-Cô) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-Cô) , cicloalquilo (C3-C8) ; ou Rc é hidrogénio e Ra e Rb são independentemente fenilo ou heteroarilo tal como piridilo; ou Rc é hidrogénio, alquilo (C1-C6) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-Cõ) ou cicloalquilo (C3-C8) , e Ra e Rb em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um cicloalquilo de 3 a 8 membros ou um anel heterociclico de 5 a 6 membros; ou Ra, Rb e Rc em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um anel triciclico (por exemplo adamantilo); ou Ra e Rb são cada um independentemente alquilo (Ci-Cô) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , fenilalquilo (Ci-Cô) ou um grupo como definido para Rc abaixo que não hidrogénio, ou Ra e Rb em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados formam um cicloalquilo ou um anel heterociclico, e Rc é hidrogénio, -OH, -SH, halogéneo, -CN, -CO2H, perfluoroalquilo (C1-C4) , -CH2OH, -C02alquilo (Ci-Cô) , -Oalquilo (Ci-Cõ) , -Oalcenilo (C2-C6) , -Salquilo (Ci-Cô) , -SOalquilo (Ci-Cõ) , -S02alquilo (Ci-Cõ) , -Salcenilo (C2-C6) , -SOalcenilo (C2-C6) , -S02alcenilo (C2-C6) ou um grupo -Q2-W onde Q2 representa uma ligação ou -0-, -S-, -SO- ou -SO2- e W representa um grupo fenilo, fenilalquilo, cicloalquilo(C3-C8) , cicloalquil(C3-Cs) alquilo, cicloalcenilo (C4-C8) , cicloalcenil (C4-Cs)alquilo, heteroarilo ou heteroarilalquilo, grupo W que pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados independentemente entre hidroxilo, halogéneo, -CN, -CO2H, -C02alquilo (C1-C2) , -CONH2, -CONH (alquilo (Ci-Ce) ) , -CONH (alquilo (Ci-C6) ) 2, -CHO, -CH2OH, perf luoroalquilo (C1-C4) , -Oalquilo (Ci-Cõ) , -Salquilo (Ci-Cô) , -SOalquilo (Ci-Cô) , -S02alquilo (Ci-Cô) , -NO2, -NH2, -NHalquilo (Ci-Cõ) , -N (alquilo (Ci-Cõ) ) 2, -NHCOalquilo (Ci-Cõ) , alquilo (Ci-Cô) , alcenilo (C2-C6) , alcinilo (C2-C6) , cicloalquilo (C3-C8) , cicloalcenilo(C4-C8) , fenilo ou benzilo; e a não ser que especificado de outro modo no contexto no qual ocorre, o termo "substituído" como aqui aplicado a qualquer porção significa substituído com até quatro substituintes compatíveis, cada um dos quais selecionado independentemente entre alquilo (Ci-Cô) , alcoxi (Ci-Cô) , hidroxi, hidroxialquilo(Ci-Cõ) , mercapto, mercaptoalquilo (Ci-Cõ) , alquil(Ci-Cô)tio, fenilo, halo incluindo fluoro, bromo e cloro, trifluorometilo, trifluorometoxi, nitro, nitrilo (-CN), oxo, -COOH, -COORA, -CORA, -S02RA, -CONH2, -SO2NH2, -CONHRA, -S02NHRA, -CONRARB, -S02NRaRb, -NH2, -NHRa, -NRaRb, -OCONH2, -OCONHRA, -OCONRARB, -NHCORA, -NHCOORA, -NRBCOORA, -NHS020RA, -NRBS020H, -NRBS020RA, -NHCONH2, -NRaCONH2, -NHCONHRb, -NRaCONHRb, -NHCONRaRb ou -NRACONRARB, onde RA e RB são independentemente um alquilo (Ci-Cõ) , cicloalquilo (C3-C6) , fenilo ou heteroarilo monocíclico possuindo 5 ou 6 átomos de anel.
  2. 2. Composto como reivindicado na reivindicação 1 onde P é hidrogénio e U é um radical de fórmula (IA) como definido na reivindicação 1.
  3. 3. Composto como reivindicado em qualquer das reivindicações precedentes onde A é 1,4-fenileno opcionalmente substituído.
  4. 4. Composto como reivindicado na reivindicação 1 que tem a fórmula (IIA), (IIB) e (IIC):
    (IIA) (IIB) (IIC) onde Rn = F, R12 = H, R13 = H e R14 = H; ou Rn = F, Ri2 = F, R13 = H e R14 = H; ou R11 = F, Ri2 = H, R13 = F e R14 = F; ou R11 = F, Ri2 = F, R13 = F e R14 = F; ou R11 = F, R12 = F, R13 = F e R14 = H e onde z, X1, L1, Y, Ri e R2 são como definidos na reivindicação 1.
  5. 5. Composto como reivindicado em qualquer das reivindicações 1 a 4 onde o radical -Y-Id-X1-[CH2] z- é -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -CH2O-, -CH2CH2O-, -CH2CH2CH2O-, -CH2CH2CH2CH2O-, -C(=0)-CH2-, -C (=0)-CH2O-, -C(=0)-NH-CH2- ou -C(=0)-NH-CH2O-.
  6. 6. Composto como reivindicado em qualquer das reivindicações precedentes onde Ri é um grupo éster de fórmula -(C=0)0Ri4 onde R14 é R8R9R10C- onde (i) Re é hidrogénio ou alquil (C1-C3) - (Z1) a- [alquil (C1-C3) ] b- ou alcenil (C2-C3) - (Z1) a-[alquil (C1-C3) ] b- opcionalmente substituído onde a e b são independentemente 0 ou 1 e Z1 é -0-, -S- ou -NRn- onde Rn é hidrogénio ou alquilo (C1-C3) ; e R9 e Rio são independentemente hidrogénio ou alquilo (C1-C3) -; (ii) Re é hidrogénio ou RnRnN-alquilo (C1-C3) -opcionalmente substituído onde R12 é hidrogénio ou alquilo (C1-C3) e R13 é hidrogénio ou alquilo (C1-C3) ; ou R12 e R13 em conjunto com o azoto ao qual estão ligados formam um anel heterocíclico monocíclico 5 ou 6 átomos de anel ou um sistema de anel heterocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos de anel opcionalmente substituídos, e Rg e Rio são independentemente hidrogénio ou alquilo(C1-C3)ou (iii) Re e R9 considerados em conjunto com o carbono ao qual estão ligados formam um anel carbocíclico monocíclico de 3 a 7 átomos de anel ou um sistema de anel carbocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos de anel opcionalmente substituídos, e Rio é hidrogénio.
  7. 7. Composto como reivindicado na reivindicação 6 onde R14 é metilo, etilo, n-propilo ou isopropilo, n-butilo, sec-butilo ou terc-butilo, ciclo-hexilo, alilo, fenilo, benzilo, 2-, 3- ou 4-piridilmetilo, N-metilpiperidin-4-ilo, tetra-hidrofuran- 3-ilo ou metoxietilo.
  8. 8. Composto como reivindicado em qualquer das reivindicações precedentes onde R2 é fenilo, benzilo, isobutilo, ciclo-hexilo ou t-butoximetilo.
  9. 9. Composto como reivindicado em qualquer das reivindicações 1 a 5 onde Ri é um grupo éster de fórmula -(C=0)0Ri4 onde R14 é ciclopentilo, e R2 é fenilo, benzilo, isobutilo, ciclo-hexilo ou t-butoximetilo.
  10. 10. Composto como reivindicado na reivindicação 1 selecionado entre o grupo consistindo de (S)-(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-1 — i1]-3,5-difluorofenoxi}propilamino)fenilacetato de ciclopentilo (S)-2-(3 —{4 —[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxo-2H-piridin-l-il]-3,5-difluorofenoxi Jpropilamino)-4-metilpentanoato de ciclopentilo Exemplo 42 (2R)-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H) —il]-3,5-difluorofenoxi}propil)amino] (fenil)-acetato de ciclopentilo N- (3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l-(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}propil)-L-leucinato de 2-morfolin-4-iletilo N- (3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il]-3,5-difluorofenoxiIpropil)-L-leucinato de 2-(dimetilamino)etilo N- [2-(4-{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H)-il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo N- (5-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H) -il]-3,5-difluorofenoxi}pentil)-L-leucinato de ciclopentilo N-[3-(4-{6-amino-5-[(4 — fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1{2H)-il}fenil)propil]-L-leucinato de ciclopentilo (2S)-4-amino-2-[(3-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoil)-2-oxopiridin-1(2H-il] - 3,5-difluorofenoxi}propil)amino]butanoato de ciclopentilo N- (5-{4-[6-amino-5-(4-fluorobenzoil)-2-oxopiridin-l(2H)-il]-3,5-difluorofenoxi}pentil)-L-leucinato de ciclopentilo N- [2-(4-{6-amino-5-[(2,4-difluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H)-il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo N- [2-(4-{6-amino-5-[(2,4-difluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H)-il}fenil)etil]-L-leucinato de terc-butilo (2S)-{[2 — (4 —{6-amino-5-[(4-fluorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H) - il}fenil)etil]amino}(fenil)etanoato de ciclopentilo N-[2-(4-{6-amino-5-[(4-metilfenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H)-il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo N- [2-(4-{6-amino-5-[(4-clorofenil)carbonil]-2-oxopiridin-1(2H)-il}fenil)etil]-L-leucinato de ciclopentilo.
  11. 11. Composto como reivindicado em qualquer das reivindicações precedentes que está na forma de um sal farmaceuticamente aceitável.
  12. 12. Composição farmacêutica compreendendo um composto como reivindicado em qualquer das reivindicações precedentes, em conjunto com um transportador farmaceuticamente aceitável.
  13. 13. Composto como reivindicado em qualquer das reivindicações 1 a 10 para o tratamento de doenças autoimunes ou inflamatórias.
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