PT1278763E

PT1278763E - Esteróides 3-nitrogénio-6, 7-dioxigenados e usos relacionados com os mesmos.

Info

Publication number: PT1278763E
Application number: PT01925262T
Authority: PT
Inventors: Yaping Shen; Jeffery R Raymond; Claudia E Kasserra
Original assignee: Inflazyme Pharm Ltd
Priority date: 2000-04-28
Filing date: 2001-04-30
Publication date: 2007-05-31
Also published as: US6635629B2; YU88102A; CA2418748A1; AP2002002659A0; EE200200613A; SK15692002A3; US20050215534A9; ES2282247T3; HRP20020944A2; AU5208401A; DZ3355A1; NO20025106L; US20070060553A1; DE60126597T2; UA79229C2; RU2291873C2; PL365798A1; IL152448A0; ATE353909T1; US20040034216A1

Description

DESCRIÇÃO EPÍGRAFE: "ESTERÓIDES 3-NITROGÉNIO-6,7-DIOXIGENADOS E USOS RELACIONADOS COM OS MESMOS"

CAMPO TÉCNICO

Esta invenção está direccionada para esteróides 3-amino-6,7-dioxigenados, composições que incluem estes esteróides, e usos terapêuticos com eles relacionados. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A Resposta Inflamatória (Inflamação) A inflamação é uma resposta do hospedeiro localizada essencial aos microrganismos invasores ou tecido lesionado que envolve células do sistema imunitário. Os sinais clássicos da inflamação incluem vermelhidão (eritema), inchaço (edema), dor e aumento da produção de calor (pirema) no local da lesão. A resposta inflamatória permite o corpo, especificamente, reconhecer e eliminar um organismo invasor e/ou reparar tecido lesionado. Muitas destas variações agudas no local da inflamação estão directamente ou indirectamente atribuídas ao influxo massivo de leucócitos (por exemplo, neutrófilos, eosinófilos, linfócitos, monócitos) que é intrínseco a esta resposta. A infiltração e acumulação de leucócitos no tecido resulta na sua activação e subsequente libertação de mediadores inflamatórios tais como LTB4, prostaglandinas, TNF-a, IL-Ιβ, IL-8, IL-5, IL-4, 1 histamina, proteases e espécies reactivas ao oxigénio, por exemplo. A inflamação normal é um processo altamente regulado que é apertadamente controlado a vários niveis para cada tipo de célula envolvido na resposta. Por exemplo, a expressão da citoquina pro-inflamatória TNF-α é controlada ao nivel da expressão do gene, tradução, modificação e libertação pós-translacional da forma madura a partir da membrana celular. Muitas das proteínas reguladas a montante durante a inflamação são controladas pelo factor de transcrição, NF-κΒ. As respostas pró-inflamatórias são rebatidas em alguns casos por mecanismos anti-inflamatórios endógenos tais como geração de IL-10. Uma característica duma resposta normal inflamatória é que é de natureza temporária e é seguida por uma fase de resolução que traz o estado do tecido de volta à sua condição anterior. Pensa-se que a fase de resolução envolve a regulação a montante dos mecanismos anti-inflamatórios, tais como IL-10, bem como regulação a jusante dos processos pró-inflamatórios .

Doença Inflamatória A doença inflamatória ocorre quando uma resposta inflamatória é iniciada a qual é inapropriada e/ou não resolve duma maneira normal mas antes persiste e resulta num estado inflamatório crónico. Uma doença inflamatória pode ser sistémica (por exemplo, lúpus) ou localizada num tecido ou órgãos particulares e exerce encargos pessoais e económicos enormes na sociedade. Exemplos de algumas das doenças inflamatórias mais comuns e problemáticas incluem asma, alergia, artrite reumatóide, doença intestinal inflamatória, psoríase, enfisema, colite, reacção enxerto vs hospedeiro, dermatite de contacto, e lesões de 2 reperfusão isquémica. Outros estados de doença tais como doenças de imunodeficiência são conhecidas como estando associadas com regulação alterada da rede quimiocina/citoquina e seus receptores, que podem alterar a replicação virai e patogénese da SIDA.

Muitos dos processos de tecidos, celulares e bioquímicos que são perturbados nas doenças inflamatórias têm sido elucidados e isto tem permitido o desenvolvimento de modelos ou ensaios experimentais para mimetizar o estado da doença. Estes ensaios in vitro e in vivo permitem a selecção e pesquisa de compostos com uma probabilidade elevada de eficácia terapêutica nas doenças inflamatórias relevantes. Por exemplo, a capacidade de um composto para inibir a acumulação induzida por alergénios de células inflamatórias tais como eosinófilos e linfócitos no fluido de lavagem obtido a partir de animais sensibilizados é indicativo desses compostos com actividade anti-asma. Em particular, este sistema de modelo é útil na avaliação dos efeitos dos compostos no tratamento da fase tardia da resposta e hiper-sensibilidade que é característica da asma, quando a inflamação do pulmão é evidente.

Asma e Alergia A asma e a alergia estão estreitamente relacionadas com boa evidência a partir de estudos clínicos que demonstram uma forte correlação entre a gravidade da asma e o grau de atopia (alergia). Acredita-se que a sensibilização aos alergénios seja o factor de risco mais importante para a asma tanto em crianças como em adultos, com aproximadamente 90% dos casos de asma exibindo atopia. 3 A alergia é caracterizada por um aumento do nível de IgE (anticorpo) no soro sanguíneo. A exposição repetida a alergénios, num processo denominado sensibilização, é normalmente necessária para desencadear atopia e a resposta asmática ou alérgica subsequente. Uma vez estando as células B expostas aos alergénios, estas produzem anticorpos que se ligam à superfície das células de mastócitos. A ligação cruzada de dois anticorpos pelo antigénio causa uma série de reacções que resultam na desgranulação e a libertação de vários mediadores que modulam a resposta inflamatória. Os mediadores que são libertados ou gerados durante a resposta asmática e alérgica incluem histamina, leucotrienos, prostaglandinas, citoquinas e triptase. A asma é caracterizada por hiper-sensibilidade das vias respiratórias, períodos episódicos de broncoespasmos e inflamação crónica dos pulmões. A obstrução das vias respiratórias é reversível com o tempo ou em resposta a terapias com fármacos. Os pacientes que exibem um fluxo respiratório normal podem ser hiperreactivos a uma variedade de estímulos que ocorrem naturalmente, por exemplo, ar frio, exercício, químicos e alergénios. 0 evento mais comum que inicia uma resposta asmática é uma hipersensibilidade imediata aos alergénios comuns incluindo pólen de tasneira, pólen de gramíneas, vários fungos, pó, ácaros, baratas e animais domésticos. Os sintomas da doença incluem opressão do peito, respiração sibilante, ofegante e tosse. A incidência e mortalidade da asma tem aumentado no mundo, tendo duplicado nos últimos 20 anos apesar das terapias modernas.

As respostas das vias respiratórias aos alergénios é complexa e consiste na resposta asmática precoce (EAR) que tem um pico 20-30 min após a exposição ao estímulo, é caracterizada por broncoconstrição e normalmente resolve após 1 b a 2 horas. A 4 resposta asmática tardia (LAR) geralmente ocorre 3-8 horas após a exposição inicial, e envolve a broncoconstrição e o desenvolvimento de inflamação e edema nos tecidos pulmonares. Esta inflamação geralmente torna-se crónica, com danos epiteliais que ocorrem e infiltração dos pulmões com células inflamatórias tais como eosinófilos e neutrófilos.

Tratamentos Correntes para a Asma

Os glucocorticóides (esteróides) são os mais eficazes para a terapia de longo termo para o tratamento da asma. Por exemplo, devido à presença de inflamação das vias respiratórias mesmo na asma suave, os esteróides inalados são usados mesmo na terapia com fármacos no estágio precoce. Apesar dos esteróides serem anti-inflamatórios eficazes, estes não são muito úteis para o controlo de ataques agudos de asma. Os esteróides de fornecimento oral estão associados com efeitos colaterais significativos e consequentemente o seu uso crónico no controlo da asma é minimizado. É geralmente empregue a terapia de combinação para esteróides de fornecimento oral, onde a terapia de combinação pode ser dividida nas seguintes áreas: fármacos anti-inf lamatórios (por exemplo, esteróides inalados e orais), broncodilatadores, (por exemplo, P2-agonistas, xantinas, anticolinérgicos), e inibidores da mediação (por exemplo, antagonistas leucotrieno e cromolinas). Geralmente, os pacientes com asma de moderada a grave estão fracamente servidos pelo presente arsenal de fármacos. Os fármacos seguros são apenas marginalmente eficazes, enquanto que os fármacos eficazes têm efeitos colaterais inaceitáveis com a necessidade de monitorização extensa dos pacientes. Os produtos em desenvolvimento continuam a enfrentar desafios relacionados com 5 os efeitos colaterais (por exemplo, a emese, efeito colateral caracteristico de determinados inibidores da fosfodiesterase 4) e fracos parâmetros farmacocinéticos e de metabolismo. Existe uma necessidade significativa para agentes terapêuticos que consigam fazer um tratamento seguro e eficaz das doenças inflamatórias tais como a asma e alergia. A presente invenção fornece este e benefícios relacionados como aqui descritos. A WO-A-98/02450 e WO-A-94/14451 constituem o estado mais próximo da arte e ambas revelam os compostos esteróis 6,7-dioxigenados com a mesma actividade biológica, mas sem terem o átomo de nitrogénio ligado à posição 3 do esqueleto do esteróide.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Num aspecto, a presente invenção fornece compostos de acordo com a fórmula (1) e seus sais, solvatos, e estereoisómeros farmaceuticamente aceitáveis, isolados ou em misturas,

0) em que, independentemente de cada ocorrência: R1 e R2 são seleccionados a partir de hidrogénio, oxigénio de modo a formar grupos orgânicos nitro ou oxima, amino, -SO3-R, e tendo 1-30 carbonos e, opcionalmente, com 1-6 heteroátomos seleccionados a partir de nitrogénio, oxigénio, fósforo, silício, e enxofre, onde R2 pode estar numa ligação directa ao numeral 3, ou R1 e R2 podem, em conjunto com o N ao qual estão ambos 6 ligados, formar uma estrutura heterocíclica que pode ser parte de um grupo orgânico com 1-30 carbonos e, opcionalmente, com 1-6 heteroátomos seleccionados a partir de nitrogénio, oxigénio, silício; ou R1 pode ser uma cadeia de 2 ou 3 átomos do numeral 2 de modo que -N-R1- forma parte duma estrutura bicíclica fundida ao anel A; R3 e R4 são seleccionados a partir de ligações directas a 6 e 7 respectivamente de modo a formar grupos carbonilo, hidrogénio, ou um grupo de protecção de modo a que R3 e/ou R4 são parte do grupo de protecção hidroxilo ou carbonilo; numerais 1 até 17 cada representa um carbono, onde os carbonos com numerais 1, 2, 4, 11, 12, 15, 16 e 17 podem ser independentemente substituídos com (a) um de: =0, =C(R5)(R5), =C=C (R5) (R5), C(R5) (R5) (C(R5) (R5) )n- e - (0 (C (R5) (R5)) n0) - em que n tem um intervalo de 1 a 6 ; ou (b) dois dos seguintes, que são independentemente seleccionados: -X, -N(R1)(R2), -R5 e -0R6; e onde os carbonos com os numerais 5, 8, 9, 10, 13 e 14 podem ser independentemente substituídos com um de -X, -R5, - N(RX) (R2) ou -0R6; adicionalmente aos grupos -0R3 e -0R4 como apresentados, cada carbono 6 e 7 pode ser independentemente substituído com um de -X, -N^MR2), -R5 ou -OR6; cada um dos anéis A, B, C e D é independentemente completamente saturado, parcialmente saturado ou completamente insaturado; R5 em cada ocorrência é independentemente seleccionado a partir de Η, X, e os radicais orgânicos C1-30 que podem opcionalmente conter pelo menos um heteroátomo seleccionado a 7 partir do grupo que consiste em boro, halogéneo, nitrogénio, oxigénio, silício e enxofre; onde dois grupos R5 geminais podem em conjunto formar um anel com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados; R6 é H ou um grupo de protecção de modo que -0R6 é um grupo hidroxilo protegido, onde os grupos -0R6 vicinais podem em conjunto formar uma estrutura cíclica que protege os grupos hidroxilo vicinais, e onde os grupos -0R6 geminais podem em conjunto formar uma estrutura cíclica que protege um grupo carbonilo; e X representa fluoreto, cloreto, brometo e iodeto; mas não inclui pregnan-6,7-diol-3-ona, 3-oxima, 6,7-diacetato(6α,7β); ácido 3-semicarbazonil helvólico; 2,4-dinitrofenilhidrazona de helvonato de metilo; ácido 2,4-dinitrofenilhidrazona helvólico; 2,4-dinitrofenilhidrazona de helvolinato de metilo. Estes compostos reivindicados são revelados na WO-A-98/02450 exemplo 26, produto intermediário 357 e J. Am. Chem. Soc. vol 78, 5275-5284 (1956).

Noutro aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um composto esteróide como apresentado acima, e um transportador, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável.

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar a inflamação que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima.

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar a inflamação profilaticamente que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade profilaticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima. 8

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar a asma que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima.

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar a doença alérgica incluindo mas limitada a, indicações dérmicas e oculares que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima.

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar a doença pulmonar obstrutiva crónica que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima.

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar a dermatite atópica que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima.

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar tumores sólidos que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima.

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar a SIDA que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima.

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar lesões de reperfusão isquémica que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima. 9

Noutro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar arritmias cardíacas que compreende administrar a um sujeito que dela necessite uma quantidade terapeuticamente eficaz dum composto esteróide como apresentado acima.

Estes e os aspectos relacionados da presente invenção estão descritos em maior detalhe abaixo.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

As Figuras IA e 1B representam resumos de transformações sintéticas que podem ser usadas para converter um esteróide 3-amino num esteróide 3-nitrogénio da presente invenção.

As Figuras 2A, 2B e 2C são um conjunto de gráficos de barras que apresentam o efeito do composto 89 (dose resposta, 4 doses qd, p.o.) na acumulação induzida por ovalbumina de células inflamatórias no fluido de lavagem do pulmão obtido a partir de ratos Brown Norway sensibilizados. A Figura 2A apresenta a acumulação de eosinófilos, a Figura 2B apresenta a acumulação de neutrófilos, a Figura 2C apresenta a acumulação de linfócitos.

As Figuras 3A, 3B e 3C são um conjunto de gráficos de barras que apresentam o efeito do composto 28 (dose resposta, 4 doses qd, p.o.) na acumulação induzida por ovalbumina de células inflamatórias no fluido de lavagem do pulmão obtido a partir de ratos Brown Norway sensibilizados. A Figura 3A apresenta a acumulação de eosinófilos, a Figura 3B apresenta a acumulação de neutrófilos, e a Figura 3C apresenta a acumulação de linfócitos. A Figura 4 é um gráfico que apresenta o efeito de compostos de teste 28 e 89, administrados oralmente uma vez por dia durante 4 dias antes do teste, em variações induzidas por alergénios na resistência pulmonar em porquinhos-da-índia sensibilizados. 10 A Figura 5 é um gráfico que apresenta o efeito de compostos de teste 28 e 89, administrados oralmente uma vez por dia durante 4 dias antes do teste, em variações induzidas por alergénios na elastância pulmonar em porquinhos-da-índia sensibilizados. A Figura 6 é um gráfico que apresenta a duração da actividade anti-broncoespástica do composto de teste 89, administrado oralmente a 1 mg/kg uma vez por dia durante 4 dias antes do teste, em variações induzidas por alergénios na resistência pulmonar em porquinhos-da-índia sensibilizados. A Figura 7 é um gráfico que apresenta a duração da actividade anti-broncoespástica do composto de teste 89, administrado oralmente a 1 mg/kg uma vez por dia durante 4 dias antes do teste, em variações induzidas por alergénios na elastância pulmonar em porquinhos-da-índia sensibilizados.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção fornece compostos, composições úteis no tratamento e/ou prevenção de várias condições de doença. A presente aplicação revela um método para tratar e/ou prevenir uma doença inflamatória. 0 método inclui a administração a um sujeito que dela necessite duma quantidade eficaz de um composto da fórmula (1) ou um seu sal, solvato, estereoisómero ou profármaco farmaceuticamente aceitável, ou uma quantidade eficaz duma composição que contém um composto da fórmula (1) ou um seu sal, solvato, estereoisómero ou profármaco farmaceuticamente aceitável.

Antes da descrição da invenção em maior detalhe, determinadas definições como aqui usadas são fornecidas com as seguintes definições, e determinadas convenções aqui usadas também são apresentadas. 11 A. Definição dos termos

Como aqui usados, os seguintes termos têm o significado indicado, a menos que claramente indicado de outro modo. "Alquilo" é um grupo hidrocarboneto alifático (i.e., não aromático) monovalente, linear saturado ou ramificado. Nas várias modalidades, o grupo alquilo tem 1-20 átomos de carbono, i.e., é um grupo C1-C20 (ou C1-C20), ou é um grupo C1-C18, um grupo Cl-C12, um grupo C1-C6, ou um grupo C1-C4. Independentemente, em várias modalidades, 0 grupo alquilo: tem zero ramificações (i.e., é uma cadeia linear), uma ramificação, duas ramificações, ou mais de duas ramificações; é saturado; é insaturado (onde um grupo alquilo insaturado pode ter uma ligação dupla, duas ligações duplas, mais de duas ligações duplas, e/ou uma ligação tripla, duas ligações triplas, ou mais de duas ligações triplas) ; é, ou inclui, uma estrutura cíclica; é acíclico. Os grupos alquilo de exemplo incluem alquilo Ci (i.e., -CH3 (metilo)), alquilo C2 (i.e., -CH2CH3 (etilo), -CH=CH2 (etenilo) e -C=CH (etinilo)) e alquilo C3 (i.e., -CH2CH2CH3 (n-propilo), -CH(CH3)2 (i-propilo), -CH=CH-CH3 (1-propenilo) , -C=C-CH3 (1-propinilo) , -CH2-CH=CH2 (2-propenilo), -CH2-C=CH (2-propinilo), -C(CH3)=CH2 (1-metiletenilo) , e -CH(CH2)2 (ciclopropilo) ) . "Arilo" é um sistema de anel hidrocarboneto, aromático, monovalente. O sistema de anel pode ser monocíclico ou policíclico fundido (por exemplo, bicíclico, tricíclico, etc.). Em várias modalidades, o anel arilo monocíclico é C5-C10, ou C5-C7, ou C5-C6, onde estes números de carbono se referem ao número de átomos de carbono que forma 0 sistema de anel. Um sistema de anel C6, i.e., um anel fenilo, é um grupo arilo preferido. Em várias modalidades, o anel policíclico é um grupo arilo 12 bicíclico, onde os grupos arilo bicíclicos preferidos são C8-C12, ou C9-C10. Um anel naftilo, que tem 10 átomos de carbono, é um grupo arilo policíclico preferido. "Heteroalquilo" é um grupo alquilo (como aqui definido) em que pelo menos um dos átomos carbono é trocado por um heteroátomo. Os heteroátomos preferidos são nitrogénio, oxigénio, enxofre, e halogéneo. Um heteroátomo pode, mas tipicamente não, ter o mesmo número de locais de valência como carbono. Deste modo, quando um carbono é trocado com um heteroátomo, o número de hidrogénios ligados ao heteroátomo pode precisar de ser aumentado ou diminuído para se adaptar ao número dos locais de valência do heteroátomo. Por exemplo, se o carbono (valência de quatro) é trocado por nitrogénio (valência de três), depois um dos hidrogénios anteriormente ligado ao carbono trocado tem que ser retirado. Do mesmo modo, se o carbono é trocado por halogéneo (valência de um), então três (i.e., todos) dos hidrogénios inicialmente ligados ao carbono trocado deve ser retirado. "Heteroarilo" é um sistema aromático monovalente contendo carbono e pelo menos um heteroátomo no anel. O grupo heteroarilo pode, em várias modalidades, tem um heteroátomo, ou 1-2 heteroátomos, ou 1-3 heteroátomos, ou 1-4 heteroátomos no anel. Os anéis heteroarilo podem ser monocíclicos ou policíclico, onde o anel policíclico pode conter uniões fundidas, spiro ou por pontes. Numa modalidade, o heteroarilo é seleccionado a partir de monocíclico e bicíclico. Os anéis heteroarilo monocíclico podem conter desde cerca de 5 a cerca de 10 átomos membros (carbono e heteroátomos), preferivelmente desde 5-7, e mais preferivelmente desde 5-6 átomos membros no anel. Os anéis heteroarilo bicíclicos podem conter desde cerca de 8-12 átomos membros, ou 9-10 átomos membros no anel. O anel heteroarilo pode ser não substituído ou 13 substituído. Numa modalidade, o anel heteroarilo é não substituído. Noutra modalidade, o anel heteroarilo é substituído. Os grupos heteroarilo de exemplo incluem benzofurano, benzotiofeno, furano, imidazole, índole, isotiazole, oxazole, piperazina, pirazina, pirazole, piridazina, piridina, pirimidina, pirrole, quinolina, tiazole e tiofeno. "Heteroátomo" é um átomo halogéneo, nitrogénio, oxigénio, fósforo, silício ou enxofre. Grupos com mais do que um heteroátomo podem conter diferentes heteroátomos. "Hidrocarbonetos" são grupos químicos formados exclusivamente por hidrogénio e carbono; "Halocarbonetos" são grupos químicos formados exclusivamente por halogéneo e carbono; e "Hidrohalocarbonetos" são grupos químicos formados exclusivamente por hidrogénio, halogéneo e carbono. "Grupos orgânicos" e "radicais orgânicos" são usados como sinónimos, e referem-se a estruturas estáveis com o indicado número e tipo de átomos. "Sal farmaceuticamente aceitável" e "seus sais" nos compostos da presente invenção refere-se a sais de adição ácida e sais de adição alcalina.

Os sais de adição ácida referem-se àqueles sais formados a partir de compostos da presente invenção e ácidos inorgânicos tais como ácido hidroclórico, ácido hidrobrómico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares, e/ou ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinnâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido salicílico e similares. 14

Os sais de adição alcalina referem-se àqueles sais formados a partir dos compostos da presente invenção e bases inorgânicas tais como sódio, potássio, litio, amónio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, sais de alumínio e similares. Os sais adequados incluem os sais de amónio, potássio, sódio, cálcio e magnésio derivados a partir de bases orgânicas farmaceuticamente aceitáveis não tóxicas incluindo sais de aminas primárias, secundárias, e terciárias, aminas substituídas incluindo as aminas substituídas que ocorrem naturalmente, aminas cíclicas e resinas troca iónica alcalina, tais como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, trimetamina, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaínas, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, e similares.

Quando qualquer variável ocorre mais do que uma vez em qualquer constituinte ou nos compostos da fórmula (1), a sua definição em cada ocorrência é independente da sua definição em todas as outras ocorrências. As combinações dos substituintes e/ou variáveis são permitidas apenas se tais combinações resultam em compostos estáveis. Os compostos úteis nos métodos e composições da presente invenção, bem como os compostos da presente invenção, podem ter centros assimétricos e ocorrem como racematos, misturas racémicas e como diastereómeros individuais, ou enantiómeros com todas as formas isoméricas sendo incluídas na presente invenção. Uma mistura racémica ou racemato não implica uma mistura 50:50 de estereoisómeros.

Noutra modalidade, a presente invenção fornece composições farmacêuticas com um composto da fórmula (1) como apresentado 15 acima, em combinação com um transportador, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis. Estas composições podem ser usadas para o tratamento da inflamação ou outras condições como aqui reveladas. Estas composições também podem ser formadas num medicamento, que pode ser usado no tratamento de, por exemplo, inflamação.

Estas composições são úteis em, por exemplo, ensaios padrão, meios convenientes para fazer transferências volumes, ou composições farmacêuticas. Uma quantidade ensaiável de um composto da invenção é uma quantidade que é prontamente mensurável através de procedimentos e técnicas de ensaio padrão, como são bem conhecidos e apreciados pelos especialistas na arte. Quantidades ensaiáveis de um composto da invenção irá, geralmente, variar desde cerca de 0.001 % em massa a cerca de 100 % em massa do peso total da composição. Os transportadores inertes incluem qualquer material que não degrada ou, não reage covalentemente com um composto da fórmula (1) . Exemplos de transportadores inertes adequados são água; tampões aquosos, tais como aqueles que são geralmente úteis em análise por Cromatografia Liquida de Alta Resolução (HPLC); solventes orgânicos, tais como acetonitrilo, acetato de etilo, hexano e similares; e transportadores farmaceuticamente aceitáveis. "Transportadores farmaceuticamente aceitáveis" para uso terapêutico são bem conhecidos na arte farmacêutica, e estão descritos, por exemplo, em Remingtons Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro edit. 1985). Por exemplo, pode ser usada solução salina estéril e solução salina tamponada fosfatada ao pH fisiológico. Conservantes, estabilizadores, corantes e mesmos agentes aromatizantes podem ser fornecidos na composição farmacêutica. Por exemplo, podem ser adicionados 16 benzoato de sódio, ácido sórbico e esteres do ácido p-hidroxibenzóico como conservantes. Id. a 1449. Adicionalmente, podem ser usados antioxidantes e agentes de suspensão. Id.

Os compostos esteróides da invenção têm pelo menos quatro anéis, comummente designados como A, B, C e D como apresentado abaixo, onde o anel A pode ser fundido a um anel adicional:

B. Compostos A presente invenção fornece compostos de acordo com a fórmula (1) e sais farmacêuticamente aceitáveis, os seus solvatos e estereoisómeros, isolados ou em misturas,

U) em que, independentemente a cada ocorrência:

R1 e R2 são seleccionados entre o hidrogénio e o oxigénio de modo a formar grupos nitro ou oxima, amina, -SO3-R, e orgânicos contendo 1-30 carbonos e contendo opcionalmente 1-6 heteroátomos seleccionados entre o nitrogénio, oxigénio, fósforo, silício, e enxofre, onde R pode ser uma ligação directa a posição 3, ou R 17 e R2 podem, em conjunto com o N a que ambos estão ligados, formar uma estrutura heterocíclica que pode fazer parte de um grupo orgânico com 1-30 carbonos e opcionalmente contendo 1-6 heteroátomos seleccionados entre o nitrogénio, oxigénio e silício, e onde R1 pode ser uma cadeia de 2, ou 3 átomos na posição 2 de modo a que -N-R1- forme parte de uma estrutura bicíclica fundida ligada ao anel A; R3 e R4 são seleccionados a partir de ligações directas ao 6 e 7 respectivamente, de modo a formar grupos carbonilo, hidrogénio, ou um grupo de protecção de modo a que R3 e/ou R4 sejam parte de um grupo de protecção hidroxilo ou carbonilo; numerais 1 até 17 representam um carbono cada um, onde os carbonos que se encontram nos numerais 1, 2,4, 11, 12, 15, 16 e 17 podem ser substituídos independentemente por: (a) um dos seguintes: =0, =C(R5)(R5), =C=C (R5) (R5), C (R5) (R5) (C (R5) (R5)) n- e - (O (C (R5) (R5) ) nO) - e em que n varia de 1 a 6; ou (b) dois dos seguintes, seleccionados independentemente: -X, -N (R1) (R2), -R5 e -OR6; e onde os carbonos nas posições 5, 8, 9, 10, 13 e 14 podem ser substituídos independentemente por um dos grupos -X, -R5, - N (R1) (R2) ou -OR6; adicionalmente aos grupos -OR3 e -OR4 tal como se pode ver, cada um dos carbonos 6 e 7 pode ser substituído independentemente por um dos grupos -X, -N(R4) (R2), -R5 ou -OR6; cada um dos anéis A, B, C e D está totalmente saturado, parcialmente saturado ou totalmente insaturado independentemente; R5 em cada ocorrência é seleccionado independentemente a partir de Η, X, e do meio orgânico C1-30 que pode opcionalmente conter 18 pelo menos um heteroátomo seleccionado dentro do grupo do boro, halogénio, nitrogénio, oxigénio, silício e enxofre;

Onde dois grupos R5 geminais podem formar juntos um anel com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados; R6 é H ou um grupo protector de forma a que -0R6 seja um grupo hidróxilo protegido, onde os grupos -0R6 vicinais podem formar juntos uma estrutura cíclica que protege os grupos hidroxilo vicinais, e onde os grupos -0R6 geminais podem formar juntos uma estrutura cíclica que protege um grupo carbonilo; e X representa fluoreto, cloreto, brometo e iodeto. R3 e R4 são seleccionados a partir das ligações directas aos carbonos 6 e 7 respectivamente, de modo a formar grupos carbonilo, hidrogénio ou um grupo protector, de forma a que R3 e/ou R4 sejam parte de um grupo protector hidroxilo ou carbonilo.

Num aspecto da invenção, R1 e R2 são seleccionados a partir dos grupos hidrogénio e grupos orgânicos possuindo 1-30 átomos de carbono e opcionalmente contendo 1-6 heteroátomos seleccionados a partir do nitrogénio, oxigénio, fósforo, silício e enxofre. Opcionalmente, R2 é uma ligação directa à posição 3. Num outro aspecto, R1, R2, e o N ao qual se encontram ambos ligados, formam uma estrutura heterocíclica que pode fazer parte de um grupo orgânico contendo 1-30 átomos de carbono e opcionalmente contendo 1-6 heteroátomos seleccionados entre o nitrogénio, oxigénio e silício. Num outro aspecto, R1 é uma cadeia de 2 ou 3 átomos ligada à posição 2 de forma a que -N- R1- faça parte de uma estrutura bicíclica fundida ao anel A, e os 2 ou 3 átomos são seleccionados entre o C, N e O, desde que daí resulte uma estrutura estável. Opcionalmente, nestes e noutros aspectos da presente invenção, o grupo orgânico contém 1-20 átomos de 19 carbono, enquanto que noutra modalidade opcional o grupo orgânico possui 1-10 átomos de carbono.

Num aspecto preferido da invenção, cada um dos R e R e hidrogénio. Estes esteróides não só tem actividade biológica desejável como servem como compostos percursores convenientes na preparação se outros esteróides da invenção em que R1 e/ou R2 não são hidrogénio.

Por exemplo, numa das modalidades, a invenção fornece um composto da formula (1) em que: R1 e R2 são hidrogénio; R3 e R4 são seleccionados a partir das ligações directas aos átomos 6 e 7, respectivamente, de modo a formar grupos carbonilo, hidrogénio, ou um grupo protector de forma a que R3 e/ou R4 faça parte de um grupo protector hidroxilo ou carbonilo; e adicionalmente aos grupos -OR3 e -OR4 que são mostrados, cada um dos carbonos 6 e 7 seja substituído por hidrogénio, a não ser que bloqueado por causa de -OR3 ou -OR4 representarem um grupo carbonilo; os átomos de carbono nas posições 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 são substituídos, cada um deles, por dois hidrogénios; Os átomos de carbono nas posições 5, 8, 9 e 14 são cada um substituído por um hidrogénio; o átomo de carbono na posição 10 é substituído por metilo; o átomo de carbono na posição 13 é substituído por metilo, a não ser que faça parte de uma ligação insaturada; o átomo de carbono na posição 17 é substituído por (a) um de: =0, =C(R5)(R5), =C=C (R5) (R5) , -C (R5) (R5) (C (R5) (R5)) n- e -(0(C(R5) (R5))nO)- onde n varia de 1 a 6 ; ou (b) dois dos seguintes, seleccionados de forma independente: -X, -N(R3) (R2), -R5 e -OR6; cada um dos anéis A, B, C e D está totalmente saturado, parcialmente saturado ou totalmente insaturado independentemente; R5 em cada ocorrência é seleccionado independentemente a partir de Η, X, e do meio orgânico C1-30 que 20 pode opcionalmente conter pelo menos um heteroátomo seleccionado dentro do grupo do boro, halogénio, nitrogénio, oxigénio, silício e enxofre; onde dois grupos R5 geminais podem formar juntos um anel com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados; R6 é H ou um grupo protector de forma a que -0R6 seja um grupo hidróxilo protegido, onde os grupos -0R6 vicinais podem formar juntos uma estrutura cíclica que protege os grupos hidroxilo vicinais, e onde os grupos -0R6 geminais podem formar juntos uma estrutura cíclica que protege um grupo carbonilo; e X representa fluoreto, cloreto, brometo e iodeto.

Numa outra modalidade, a invenção fornece um composto de fórmula (1), onde R1 e R2 são hidrogénio; R3 e R4 são seleccionados a partir do hidrogénio e dos grupos protectores de modo a que R3 e/ou R4 sejam parte do grupo hidróxilo protector; os átomos de carbono nas posições 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 são substituídos com dois hidrogénios; os átomos de carbono nas posições 5, 8, 9 e 14 são substituídos cada um com um hidrogénio; o átomo de carbono na posição 10 é substituído por metilo; o átomo de carbono na posição 13 é substituído por metilo, a não ser que faça parte de uma ligação insaturada; o átomo de carbono na posição 17 é substituído por (a) um de: =C (R5) (R5) e =C=C (R5) (R5) ; ou (b) dois dos seguintes, os quais são seleccionados independentemente: -X, -N(R1) (R2), e -R5; cada um dos anéis A, B, C e D está totalmente saturado ou parcialmente saturado independentemente; R5 em cada ocorrência é seleccionado independentemente a partir de Η, X, e dos hidrocarbonetos, halocarbonetos e halohidrocarbonetos C1-30; e X representa fluoreto, cloreto, brometo e iodeto.

Numa outra modalidade, a invenção fornece um composto de formula (1) onde: R1 e R2 são hidrogénio; R3 e R4 são 21 seleccionados a partir do hidrogénio e de grupos protectores de modo a que R3 e/ou R4 fazem parte do grupo protector hidroxilo; Os átomos de carbono nas posições 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 são substituídos cada um deles com dois hidrogénios; os átomos de carbono nas posições 5, 8, 9 e 14 são substituídos cada um deles por um hidrogénio; o átomo de carbono na posição 10 é substituído com metilo; o átomo de carbono na posição 13 é substituído com metilo, a não ser que faça parte de uma ligação insaturada; o átomo de carbono na posição 17 é substituído com (a) um de: =C (R5) (R5) e =C=C (R5) (R5) ; ou (b) dois -R5; cada um dos anéis A, B, C e D está totalmente saturado ou parcialmente saturado independentemente; R5 em cada ocorrência é seleccionado independentemente a partir de H e hidrocarbonetos Ci-io.

Compostos específicos da presente invenção onde R1 e R2 são hidrogénio incluem: 22

Num outro aspecto, a invenção fornece esteróides com substituições no átomo de nitrogénio 3, em que o átomo de nitrogénio 3 é substituído com um grupo orgânico. Por exemplo, a invenção fornece compostos esteróides onde R1 é seleccionado a partir de -C(=0)-R7, -C(=0)NH-R7; e -S02-R7; onde R7 é seleccionado a partir dos grupos alquilo, heteroalquilo, arilo e heteroarilo. Numa modalidade relacionada, R1 é hidrogénio e R2 é -CH2-R7 onde R7 é seleccionado a partir dos grupos alquilo, heteroalquilo, arilo e heteroarilo. Numa modalidade, R7 é seleccionado a partir do hidrocarbilo C1-10. Numa outra 23 modalidade, -C(=0)-R7 compreende biotina. Numa outra modalidade, R7 é seleccionado a partir do fenilo substituído por alquilo; do fenilo substituído por halogénio; do fenilo substituído por alcóxilo; do fenilo substituído por ariloxilo e do fenilo nitro substituído.

Num outro aspecto, (R1) (R2)N- é um heterocíclico, isto é, N de (R1) (R2)N- pode fazer parte de um anel heterocíclico.

Exemplos incluem:

H

Num outro aspecto, tanto R1 como R2 ou ambos compreendem um anel heterocíclico ou carbocíclico. Um anel heterocíclico preferido é

e um anel carbocíclico preferido é o fenilo, o qual inclui um fenilo substituído, tal como o 3-metilfenil; 4-hidroxyfenilo; e 4-fenilsulfonamida.

Num outro aspecto, R1 pode ser uma cadeia de 2 ou 3 átomos na posição 2 de modo a que -N-R1- faça parte de uma estrutura bicíclica fundida do anel A. Portanto, a presente invenção fornece compostos da fórmula que se apresenta abaixo, onde Z representa 2 ou 3 átomos, seleccionados a partir de C, N e 0. 0 anel que inclui Z pode ser saturado ou insaturado. 24

Exemplos destes compostos de anéis fundidos incluem:

Num outro aspecto, R1 é hidrogénio e R2 compreende um hidrocarbilo Ci-io·

Num outro aspecto, R1 é hidrogénio e R2 é um heteroalquilo. Heteroalquilos convenientes incluem, sem limitação, Ci-io alquilo-W-Ci-ioalquileno- onde W é seleccionado a partir de 0 e NH; HO-Ci-loalquileno-; e HO-Ci-ioalquileno-W-Ci_ioalquileno- onde W é seleccionado a partir de 0 e NH.

Num outro aspecto, cada R1 e R2 é independentemente seleccionado a partir de hidrogénio e de grupos orgânicos com 1-20 átomos de carbono e opcionalmente contendo 1-5 heteroátomos seleccionados a partir de nitrogénio, oxigénio, silicio e enxofre.

Num outro aspecto, cada um de R1 e R2 é independentemente seleccionado a partir de hidrogénio, R8, R9, R10, R11 e R12 onde R8 é seleccionado a partir do Ci_io de alquilo ou de heteroalquilo compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, do Cs-io de arilo e C3-15 de heteroarilo compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos; R9 é seleccionado a partir do (R8) r-alquileno C1-10, (R8)r- 25 heteroalquileno Ci-io compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, do (R8) r-arileno C6_i0 e do (R8) r-heteroarileno C3-15 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos; R10 é seleccionado a partir do (R9) r-alquileno Ci-10, (R9) r-heteroalquileno C1-10 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, do (R9) r-arileno Ce-io e (R8) r-heteroarileno C3-15 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos; R11 é seleccionado a partir do (R10) r-alquileno C1-10, (R10) r-heteroalquileno C1-10 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, do (R10) r-arileno C6-10/ e (R10)r- heteroarileno C3-15 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, R12 é seleccionado a partir do (R11) r-alquileno C1-10, (Rn)r_ heteroalquileno C1-10 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, do (R11) r-arileno Ce-w, e do (R11) r-heteroarileno C3-15 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, e r é seleccionado a partir de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, com a reserva de que R1 e R2 podem juntar-se num átomo comum de modo a formar um anel com 0 átomo comum.

Num outro aspecto, a presente invenção fornece compostos esteróides da estrutura apresentada acima, onde: R1 e R2 são seleccionados independentemente a partir do hidrogénio, R8, R9, R10, R11 e R12 onde R8 é seleccionado a partir do alquilo, heteroalquilo, arilo e heteroarilo; R9 é seleccionado a partir do (R8) r_alquileno, (R8) r-heteroalquileno, (R8) r-arileno e (R8) r-heteroarileno; R10 é seleccionado a partir do (R9)r_ alquileno, (R9) r-heteroalquileno, (R9) r-arileno, e (R9)r_ heteroarileno; R11 é seleccionado a partir de (R10) r-alquileno, (R10) r-heteroalquileno, (R10) r-arileno, e (R10) r-heteroarileno, R12 é seleccionado a partir de (R11) r-alquileno, (R11) r- heteroalquileno, (R11) r-arileno, e (R11) r-heteroarileno, e r é seleccionado a partir de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, com a reserva de que R1 e R2 podem juntar-se num átomo comum de modo a formar um anel com 0 átomo comum; R3 e R4 são seleccionados a partir do 26 hidrogénio e grupos protectores de modo a gue R3 e/ou R4 faça parte do grupo protector hidróxilo; os átomos de carbono nas posições 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 são cada um deles substituídos por dois hidrogénios; os átomos de carbono nas posições 5, 8, 9 e 14 são cada um deles substituídos por um hidrogénio; o átomo de carbono na posição 10 é substituído por metilo; o átomo de carbono na posição 13 é substituído com metilo, a não ser que faça parte de uma ligação insaturada; o átomo de carbono na posição 17 é substituído com (a) um de: =C(R5) (R5) e =C=C(R5) (R5) ; ou (b) dois de -R5; cada um dos anéis A, B, C e D está totalmente saturado ou parcialmente saturado independentemente; R5 em cada ocorrência é seleccionado independentemente a partir de H e hidrocarbonetos Ci-io·

Por exemplo, R1 e R2 são seleccionados a partir de hidrogénio, CH3-, CH3(CH2)2-, CH3(CH2)4-, CH3CO-, C6H5CO- (CH3) 2CHS02- , c6h5so2-, c6h5nhco-, CH3 (CH2)2NHCO-, CH3 (CH2)2NH(CH2)2-, (CH3)2N(CH2)2-, hoch2ch2-, hoch2 (CH2)4-, hoch2ch2nhch2ch2-, 3- (CH3)C6H4-, 4-(HO)C6H4-, 4-(H2NS02)C6H4-, 4-( (CH3) 2CH) C6H4-CH2-, 2- (F)C6H4-CH2-, 3-(CF3)C6H4-CH2-, 2-(CH30)C6H4-CH2-, 4-(CF30) C6H4-CH2-, 3- (C6H50)C6H4-CH2-, 3-(N02)C6H4-CH2-,

27 ou R1 e R2 podem juntar-se com o nitrogénio ao qual se encontram ambos ligados e formar um heterociclico seleccionado a partir de:

1,N, V- ^VíjW· O"

..K

M

N $

Compostos específicos da presente invenção onde R1 é hidrogénio mas R2 não é hidrogénio incluem: \/·

H,R

>r H

a.

w H

Assim, um conjunto de compostos preferidos da invenção têm R1 igual a hidrogénio mas R2 não é igual a hidrogénio.

Nos compostos esteróides da invenção, tal como revelado acima, num dos aspectos, cada R3 e R4 são hidrogénio, i.e., o esteróide tem um substituinte hidroxilo em cada um dos átomos de carbono das posições 6 e 7. Num aspecto relacionado, um ou ambos os grupos hidroxilo nos carbonos 6 e 7 estão numa forma protegida, i.e., encontram-se ligados a um grupo hidroxilo protector. Estes grupos protectores são bem conhecidos na arte e 28 são revelados, por exemplo, em Greene e Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1999). Um grupo protector conveniente é um acetal, de modo a que a presente invenção forneça compostos de estrutura: 12 Π \ 16 A 9 14 / 2/ ΑξΑ Ά5

A I I \ Άδ A \ \ o- 0

Tal como se afirma acima, a presente invenção fornece compostos esteróides que incluem compostos de estereoquímica definida. Um composto deste tipo tem a estereoquímica apresentada na seguinte estrutura para R30- e R40-: 12 17 16 1K 13^ \

í I 1 Q 14 / 2^Sc15 1 3 5 7

R

Na iy* ív 0

R

Tal como também é afirmado acima, a presente invenção fornece formas salinas dos esteróides da presente invenção, preferencialmente sais farmacologicamente aceitáveis. Numa modalidade, -N^MR2) encontra-se na forma salina. Por outras palavras, -NÍR1) (R2) encontra-se protonado de forma a que 0 N tenha carga positiva. Neste caso, 0 composto esteróide da presente invenção é um sal de adição ácida, tal como aqui definido. Num aspecto preferido, a presente invenção fornece sais 29 de hidrocloreto dos esteróides das estruturas apresentadas acima. Num outro aspecto preferido, a presente invenção fornece sais de acetato dos esteróides de estruturas apresentadas aqui.

Nos compostos esteróides da invenção, tal como estipulado acima, numa modalidade preferida, 17 tem um substituinte =C(R5) (R5) e R5 é seleccionado a partir de hidrogénio, halogénio, Ci-6 de alquilo, Ci-β de hidroxialquilo, e -C02- Ci_6 de alquilo. Numa outra modalidade preferida, 17 tem um substituinte Ci_6 de alquilo ou Ci-6 de haloalquilo; ou 17 tem um substituinte -OR6 ou =0, onde R6 é hidrogénio.

Nos compostos esteróides da invenção, tal como aqui estipulado, numa modalidade preferida, pelo menos um dos átomos 10 e 13 tem um substituinte metilo.

Nos compostos esteróides da invenção, tal como estipulado aqui, numa modalidade preferida, cada uma das posições 1 até 16 representa um átomo de carbono, onde os átomos de carbono nas posições 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 podem ser independentemente substituídos com: (a) um entre: =0, =C(R5) (R5), =C=C(R5) (R5), C (R5) (R5) (C (R5) (R5)) n- e - (0 (C (R5) (R5)) nO) - onde n varia de 1 a 6 ; ou (b) dois dos seguintes, os quais são seleccionados independentemente: -X, -N(R1) (R2), -R5 e -OR6/ e a posição 17 representa um átomo de carbono substituído com: (a) um entre: =C (R5a) (R5a), =C=C (R5a) (R5a), e -C (R5a) (R5a) (C (R5a) (R5a) )n- onde n varia de 1 a 6 / ou (b) dois dos seguintes, os quais são seleccionados independentemente : -X, -NfR1) (R2), e -R5a; onde R5a em cada ocorrência é independentemente seleccionado a partir de Η, X, e do meio orgânico C1-30 que pode opcionalmente conter pelo memos um heteroátomo seleccionado a partir do grupo que consiste em boro, halogénio, nitrogénio, silício e enxofre, onde dois grupos R5 geminais podem juntar-se formando um anel com o átomo 30 de carbono ao qual estão ambos ligados. Opcionalmente, R5a em cada ocorrência é seleccionado independentemente a partir de hidrocarboneto C1-30, halocarboneto Ci_30, hidrohalocarboneto C1-30, H, e X. Numa modalidade opcional alternativa, R5a em cada ocorrência é independentemente seleccionado a partir de hidrocarboneto C1-10, halocarboneto C1-10, hidrohalocarboneto C1-10, H, e X. Opcionalmente, em cada uma das modalidades listadas, a presente invenção fornece uma outra modalidade onde R e R são seleccionados a partir de hidrogénio, oxigénio de modo a formar grupos nitro ou oxima, amina, -SO3-R, e orgânicos com 1-30 átomos de carbono e opcionalmente contendo 1-6 heteroátomos seleccionados a partir de oxigénio, fósforo, silicio, e enxofre, onde R2 pode ser uma ligação directa à posição 3, ou R1 e R2 podem, em conjunto com 0 N ao qual se encontram ambos ligados, formar uma estrutura heterociclica que pode fazer parte de um grupo orgânico com 1-30 átomos de carbono e opcionalmente contendo 1-6 heteroátomos seleccionados a partir do oxigénio e silício; ou R pode ser uma cadeia de 2 ou 3 átomos na posição 2 de modo a que -N-R1- faça parte de uma estrutura biciclica fundida ao anel A. Opcionalmente, em cada uma das modalidades listadas, a presente invenção fornece uma outra modalidade onde cada um dos átomos de carbono nas posições 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 são substituídos com dois hidrogénios, a não ser que 0 dito carbono faça parte de uma ligação insaturada; cada um dos átomos de carbono nas posições 5, 8, 9 e 14 é substituído com um hidrogénio, a não ser que o dito carbono faça parte de uma ligação insaturada; o átomo de carbono na posição 10 é substituído com metilo; e o átomo de carbono na posição 13 é substituído com metilo a não ser que faça parte de uma ligação insaturada. Opcionalmente, em cada uma das modalidades listadas, a presente invenção fornece uma outra 31 modalidade onde cada um dos átomos de carbono nas posições 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 é substituído com dois hidrogénios; cada um dos átomos de carbono nas posições 5, 8, 9 e 14 é substituído com um hidrogénio; o átomo de carbono na posição 10 é substituído com metilo; e o átomo de carbono na posição 13 é substituído com metilo a não ser gue faça parte de uma ligação insaturada.

Nos compostos esteróides da invenção, tal estipulado agui, numa modalidade preferida, cada R1 e R2 é hidrogénio; e/ou cada R3 e R4 é hidrogénio; e/ou o átomo de carbono na posição 17 é substituído com (a) um dos seguintes: C(R5a)(R5a), =C=C (R5a) (R5a), e -C (R5a) (R5a) (C(R5a) (R5a) ) n- onde n varia de 1 a 6 ; ou (b) dois dos seguintes, os quais são independentemente seleccionados: -X, -N(R4) (R2), e -R5a; onde R5a em cada ocorrência é independentemente seleccionado a partir de Η, X, e do meio orgânico C1-30 que pode opcionalmente conter pelo menos um heteroátomo seleccionado a partir do grupo constituído por boro, halogéneo, nitrogénio, silício e enxofre; onde dois grupos geminais R5 podem juntos formar um anel com o átomo de carbono ao qual se encontram ambos ligados.

Nos esteróides da presente invenção, salvo indicação em contrário, cada um dos anéis A, B, C e D está independentemente completamente saturado, parcialmente saturado ou completamente insaturado. Isto é, os hidrogénios ligados a qualquer dos átomos de carbono nas posições 1-17 podem ser omitidos de modo a permitir insaturação do anel A, B, C e/ou D. Por exemplo, quando os átomos de carbono nas posições 5, 8, 9 e 14 são referidos como sendo substituídos com um hidrogénio, e também se indica que cada um dos anéis A, B, C e D está independentemente completamente saturado, parcialmente saturado ou completamente insaturado, então qualquer um ou mais dos hidrogénios ligados aos átomos de 32 carbono nas posições 5, 8, 9 e 14 pode ser omitido de forma a permitir a insaturação do átomo de carbono.

Pretende-se que os compostos da presente invenção sejam agentes farmacêuticos. Preferencialmente, o peso molecular de um composto da invenção é relativamente baixo, isto é, menor do que cerca de 5000 g/mole, tipicamente menor do que 4000 g/mole, mais tipicamente menor do que 3000 g/mole, e ainda mais tipicamente menor do que 2000 g/mole, e ainda mais tipicamente, menor do que 1000 g/mole, onde o peso molecular minimo de um composto da invenção é de cerca de 300 g/mole, e cada uma das variações tipicas constitui uma modalidade separada da presente invenção.

Os compostos esteróides da presente invenção incluem sais farmacêuticamente aceitáveis, solvatos, estereoisómeros e pro-medicamentos das estruturas 3-nitrogénio-6,7-desoxigenadas dos esteróides descritos acima, isolados ou em misturas uns com os outros.

Os compostos esteróides da invenção podem existir, e tipicamente existem, como sólidos, incluindo sólidos cristalinos, os quais podem ser cristalizados a partir dos solventes vulgares tais como o etanol, N,N-dimetil-formamida, água, ou similares. O processo de cristalização pode fornecer várias estruturas polimórficas, dependendo das condições de cristalização. Tipicamente, um polimorfo termodinamicamente mais estável é vantajoso para o fabrico à escala comercial de um composto esteróide da invenção e é a forma preferida do composto.

Frequentemente, as cristalizações produzem um solvato do composto esteróide com a estrutura apresentada acima. Tal como é aqui utilizado, o termo "solvato" refere-se a um agregado que compreende um ou mais compostos esteróides 3-nitrogénio-6,7-desoxigenados da invenção, com uma ou mais moléculas de solvente. 33 0 solvente pode ser água, caso em que o solvato pode ser um hidrato. Alternativamente, o solvente pode ser orgânico. Portanto, os compostos da presente invenção podem existir como hidratos, incluindo monohidratos, dihidratos, hemihidratos, sesquihidratos, trihidratos, tetrahidratos e similares, tal como nas correspondentes formas solvatadas. Os compostos esteróides podem ser solvatos verdadeiros, enquanto que, noutros casos, o esteróide pode limitar-se meramente a reter a água adventícia ou encontrar-se numa mistura de água e de outro solvente adventício.

Tal como aqui utilizado, o termo "solvato farmacêuticamente aceitável" refere-se a um solvato que retém a eficácia biológica e as propriedades dos compostos esteróides 3-nitrogénio-6,7-desoxigenados biologicamente activos da invenção. Exemplos de solvatos farmacêuticamente aceitáveis incluem, mas não se limitam a, água, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético e etanolamina. Deve ser levado em conta pelos entendidos na arte que as formas solvatadas são equivalentes às formas não solvatadas e que se pretende que estejam enquadradas no âmbito da presente invenção. Sykes, P. A., Guidebook to Mechanism in Organic Chemistry, 6th Ed (1986, John Wiley & Sons, N.Y.) é uma referência exemplar que descreve solvatos.

Os compostos inventivos podem existir como estereoisómeros simples, misturas racémicas e/ou misturas de enantiómeros e/ou diastereómeros. Todos estes estereoisómeros simples, misturas racémicas e afins fazem parte do âmbito da presente invenção. Num aspecto preferido, os compostos inventivos são utilizados na sua forma óptica pura.

Os esteróides da presente invenção com um substituinte nitrogénio em C3 e oxigénio nas posições 6 e 7 apresentam propriedades inesperadas que melhoram a eficácia destes 34 compostos. Por exemplo, o esteróide da presente invenção tem uma excelente estabilidade metabólica em fracções S9 extraídas a partir de fígado humano. Por exemplo, 100% dos compostos 28, 89, 139, e 143 não sofre modificações após 15 minutos e até 30 minutos de incubação com fracções S9 humanas. Foi uma descoberta inesperada, o facto das substituições do nitrogénio em C3 provocarem decréscimos significativos da glucoronidação das moléculas do plasma. Para além disso, os esteróides da presente invenção com substituintes nitrogénio em C3, tais como os compostos 28, 89 e 83 são altamente solúveis em solução aquosa, apresentando uma solubilidade >100 mg/ml em água. Além disso, a potencialidade e o perfil farmacocinético dos esteróides da presente invenção com substituintes nitrogénio em C3 são altamente convenientes para aplicação terapêutica. Doses de <1.0 mg/kg uma vez ao dia demonstram reprodutivelmente uma actividade anti-inflamatória significativa em modelos de inflamação in vivo. No rato, os compostos 28 e 89 têm um tempo de meia vida médio de 7.5 horas e uma biodisponibilidade oral de ~100%, enquanto que no macaco o tempo de meia vida é de 15 horas em media e a biodisponibilidade oral é de 25-30%. A concentração máxima no plasma de ambas as espécies é previsível e linear. C. Preparação de Compostos

Os compostos de acordo com apresente invenção podem ser preparados por métodos que empregam passos conhecidos dos peritos na arte ou passos análogos a estes. Os métodos gerais para as reacções de esteróides podem encontrar-se em "Esteróide Reactions", C. Djerassi, Ed. Holden Day, San Francisco, Calif., 1963 e nas referências aí citadas. Os métodos gerais de síntese podem encontrar-se em "Comprehensive Organic Transformations", 35 R.C. Larock, VCH Publishers, New York, N.Y., 1989 e nas referências aí citadas. As referências da literatura adicionais úteis para a síntese dos compostos da invenção são as que se seguem: T. Reichstein; C.H. Meystre, Helv. Chim. Acta, 1932, 22, 728; H. Westmijze; H. Kleyn; P. Vermeer; L.A. van Dijck, Tet. Lett. 1980, 21, 2665; K. Prezewowsky; R Wiechert, US Pat. No. 3,682,983; P. Kaspar; H. Witzel, J. Esteróide Biochem. 1985, 23, 259; W.G. Dauben; T. Brookhart, J. Am. Chem. Soc. 1981, 103, 237; A.J. Manson et al., J. Med. Chem. 1963, 6, 1; R.O. Clinton et ai, J. Am. Chem. Soc. 1961, 83, 1478; e J.A. Zderic et al. Chem. e

Ind. 1960, 1625.

Num método preferido, esteróides polioxigenados C3, C6, C7 e C17 são utilizados como materiais de partida ou intermediários. Métodos para introduzir oxigénios em C6 e C7 de materiais de partida comercialmente disponíveis são descritos na patente U.S. 6,046,185. Esta Patente U.S. também revela muitas maneiras para introduzir os substituintes e a estereoquímica preferidos nas posições Cl, C2, C4, C5, C8, C9, CIO, Cll, C12, C13, C14, C15, C16 e C17. Na presente invenção, os oxigénios C6 e C7 podem estar presentes como hidroxilos ou como hidroxilos protegidos. Os hidroxilos 6- e 7- podem ser protegidos individualmente ou podem juntos fazer parte de um anel. Grupos protectores adequados são descritos em Greene e Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1999).

Referindo-nos ao Esquema A, as cetonas do composto 2, ou compostos análogos, podem ser alquiladas com uma variedade de grupos alquilantes, para formar os esteróides de invenção, tendo, mas não limitados a substituição de alquilos, cicloalquilos, arilos, e heteroarilos. Por exemplo, a alquilação da 17-cetona 2, com o anião do acetileno gera o intermediário 17α-θίίηί1ο-17β- 36 hidroxilo 3. A reversão da estereoquímica dos substituintes em C17 pode ser levada a cabo formando em primeiro lugar o sulfonato de metilo, seguido de tratamento com nitrato de prata (I) em tetrahidrofurano (THF) e água. A desidratação do composto 3 utilizando POCI3 em 2,4-lutidina dá 0 composto 4. 0 fluoreto de tetrabutiloamónio em THF remove 0 grupo protector tert-butilodimetilosililo (TBS) protegendo o grupo do 3-hidroxilo para dar 0 composto 5. 0 tratamento do composto 5 3a-hidroxilo com

ZnN6-2py, trifenilfosfina e azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD) em tolueno dá 0 composto 6, 3p-azido. 0 ZnN6.2py é preparado pela reacção de Zn(N03)2 e NaN3 seguido de tratamento com piridina, segundo o procedimento de M.C. Viaud e P. Rollin in Synthesis 1990, 130. A redução do hidreto de alumino litio da azide em dietil eter (Et20) dá a amina 7. O tratamento com HC1 em THF e água remove 0 grupo acetonido e forma 0 sal do cloreto de amónio 8. 37

OH 8 i) KCCH; ii) P0C13, 2,4-lutidina; iii) Bu4NF, THF; iv) ZnN6.2py, Ph3P, DIAD, tolueno; iii) LiAlH4, Et20; iv) HC1, água, MeCN.

Fazendo referência ao esquema B, os esteróides da invenção com funcionalidade de alenos podem ser preparados a partir de intermediários análogos ao composto 3. A reacção do composto 3 com LÍAIH4 e AICI3 em THF para dar o aleno 9 é exemplificativa. 0 fluoreto de amónio de tetrabutilo em THF remove o grupo protector do 3-hidroxilo para dar o composto 10. O tratamento do composto 10 3a-hidroxilo com ZnN6-2py, trifenilfosfina e DIAD em tolueno dá ο 3β-3ζίάο, composto 11. A redução do hidreto lítio alumínio do azido 11 em Et20 dá a amina 12. Tratamento com HC1 em THF e 38 água remove o grupo acetonido e forma o sal de cloreto de amónia 13.

Esquema B

i) LiAlH4, AlCl3, THF; ii) BU4NF, THF; iii) ZnN6.2pyf Ph3P, DIAD, tolueno; iv) LiAlH4, Et20; v) HC1, água, MeCN.

Fazendo referência ao esquema C, compostos da invenção com funcionalidade de alquinilos podem ser preparados a partir de intermediários alenos. 0 tratamento do composto 9 com n-BuLi em THF dando 0 composto 14, 17p-etinilo é exemplificativo. O fluoreto de amónio de tetrabutilo em THF remove o grupo protector do 3-hidroxilo para dar 0 composto 15. 0 tratamento do composto 15 3a-hidroxilo com ΖηΝβ·2ργ, trifenilfosfina e DIAD em tolueno dá ο 3β-3ζίόο, composto 16. A redução do hidreto litio aluminio do azido 16 em Et20 dá a amina 17. Tratamento com HC1 em THF e água remove 0 grupo acetonido e forma o sal de cloreto de amónio 18. 39

Esquema C

i) n-BuLi, THF; ii) Bu4NF, THF; iii) ZnN6.2py, Ph3P, DIAD, toluene; ív) LiAlH4, Et20; v)HCl, água, MeCN.

Fazendo referência ao esquema D, esteróides da invenção com funcionalidade de alcenilos podem ser preparados a partir de intermediários alcinos. A hidrogenação controlada do composto 14 utilizando como catalizador Pd-CaCCq para obter 0 alceno 19 é exemplificativa. 0 fluoreto de amónio de tetrabutilo em THF remove o grupo protector do 3-hidroxilo para dar o composto 20. O tratamento do composto 20 3a-hidroxilo com ZnN6-2py, trifenilfosfina e DIAD em tolueno dá 0 3p-azido, composto 21. A redução do hidreto litio aluminio do azido 21 em Et20 dá a amina 22. Tratamento com HC1 em THF e água remove o grupo acetonido e forma o sal de cloreto de amónia 23. 40

Esquema P

i) H2, Pd-CaC03; ii) Bu4NF, THF; iii) ZnN6-2py, Ph3P, DIAD, tolueno; iv) LiAlH4, Et20; v) HC1, água, MeCN. O composto 2 pode ser utilizado numa multiplicidade de reacções de olefinação, incluindo reacções do tipo Wittig para fornecer compostos da invenção com uma olefina exociclica em C17. Por exemplo, tal como ilustrado no esquema E, o composto 2 pode ser tratado com brometo de etilo trifenilo fosfónio e com tert-butoxido de potássio (KOtBu) para fornecer 0 composto 24 com Ri=metilo e R2= hidrogénio. 0 fluoreto de amónio de tetrabutilo em THF remove o grupo protector do 3-hidroxilo para dar o composto 25. 0 tratamento do composto 25 3a-hidroxilo com

ZnN6*2py, trifenilfosfina e DIAD em tolueno dá o 3p-azido, composto 26. A redução do hidreto lítio alumínio do azido 26 em Et20 dá a amina 27. Tratamento com HC1 em THF e água remove o 41 grupo acetonido e forma o sal de cloreto de amónio 28 com Rx= metilo e R2=hidrogénio.

Em analogia com a síntese apresentada no esquema E, as cetonas, tal como o composto 2 podem fazer-se reagir com outros reagentes do tipo Wittig, tais como, mas não limitados a, metilo-, propilo-, butilo-, pentilo-, ou brometo de hexitrifenilfosfónio para dar esteróides da invenção análogos ao composto 28 com R2 = hidrogénio e Rx = hidrogénio, etilo, propilo, butilo ou pentilo.

Esquema K

i) EtPPh3Br, KOfcBu, Tolueno; ii) Bu4NF, THF; iii) ZnN6-2py, Ph3P, DIAD, tolueno; iv) LiAlH4, Et20; v) HC1, água, MeCN.

Esteróides da invenção podem conter ligações duplas exocíclicas de geometria E e/ou Z. Por exemplo, tal como ilustrado no esquema F, a Z - olefina 24 em ciclohexano pode ser tratada com luz UV na presença de dissulfito de difenilo, 42 resultando na isomerização para a E - olefina 29. 0 fluoreto de amónio de terbutilo em THF remove o grupo protector do 3-hidroxilo para dar o composto 30. 0 tratamento do composto 30 3a-hidroxilo com ZnN6-2py, trifenilfosfina e DIAD em tolueno dá o 3£-azido, composto 31. A redução do hidreto lítio alumínio do azido 31 em Et20 dá a amina 32. Tratamento com HC1 em THF e água remove o grupo acetonido e forma o sal de cloreto de amónio 33.

Esquema F

i) (PhS)2, ho, ciclohexano; ii) Bu4NF, THF; iii) ZnN6.2py, Ph3P, DIAD, tolueno; iv) LíA1H4j Et20; v) HC1, água, MeCN.

Uma multiplicidade de esteróides da invenção com cadeias laterais funcionalizadas pode ser preparada usando métodos tais como promoção de acoplamentos/emparelhamentos promovidos por ácido de Lewis a alqueídos e a aceitadores de Michael. Por exemplo, tal como ilustrado no Esquema G, o composto 24 pode 43 fazer-se reagir com propriolato de metilo, na presença de cloreto de dietilo alumínio para dar o composto 34. A dupla ligação pode ser hidrogenada usando um catalizador tal como a platina para dar o composto 35. 0 fluoreto de amónio de tetrabutilo em THF remove o grupo protector do 3-hidroxilo para dar o composto 36. 0 tratamento do composto 36 com 3a-hidroxilo com ZnN6*2py, trifenilfosfina e DIAD em tolueno dá o 3β-azido, composto 37. Hidrogenização da azida 37 usando um catalizador de paládio dá a amina 38. Tratamento com HC1 em THF e água remove o grupo acetonido e forma o sal de cloreto de amónio 39.

Esquema G

44 i) HCCC02Me, Et2AlCl; ii) H2, Pt; iii) Bu4NF, THF; iv) ZnN6.2py,

Ph3P, DIAD, tolueno; v) H2, Pd, EtOAc; vi)80% de ácido acético.

Com um esteróide 3-amino, tal como os preparados por meio de qualquer um dos esquemas A-G acima, pode preparar-se uma grande variedade de compostos aminas secundárias e terciárias da invenção. As Figuras IA e 1B delineiam vários mecanismos sintéticos que podem ser empregues para preparar os compostos 3-amino da presente invenção. Por exemplo, podem usar-se métodos de aminação redutora para acoplar as aminas primárias (ver Figura IA) e secundárias (ver Figura 1B) aos aldeidos (RC(=0)H) e cetonas (RC(=0)R')· Apesar de não se mostrar em qualquer das Figuras IA ou 1B, os compostos com dois grupos aldeido, i.e., dialdeidos de fórmula geral HC(=0)-R-C(=0)H, podem fazer-se reagir com esteróides 3-amino para fornecer esteróides com estruturas heterociclicas na posição 3. Adicionalmente (ou alternativamente), podem usar-se métodos de aminação redutora para acoplar esteróides 3-cetona com aminas secundárias heterociclicas. Através destas abordagens, a presente invenção fornece compostos onde R1 e R2 podem, juntamente com o N ao qual se encontram ambos ligados, formar uma estrutura heterociclica que pode fazer parte de um grupo orgânico contendo 1-30 átomos de carbono e opcionalmente contendo 1-6 heteroátomos seleccionados a partir do nitrogénio, oxigénio e silicio. As fontes comerciais e referências na literatura química são fornecidas correntemente na arte com acesso a uma multiplicidade de aldeídos (incluindo dialdeidos) e cetonas que podem ser utilizados para preparar os compostos esteróides da presente invenção. Métodos de aminação redutora são descritos, por exemplo em, Synthesis 1975, 135; J.Am. Chem. Soc. 1971, 93, 2897; M. Freifelder in "Catalytic 45

Hidrogenation in Organic Synthesis" J. Wiley & Sons 1978, Ch. 10/ Russ. Chem. Rev. 1980, 49, 14, e referências aí citadas. Ver também, J. Chem. Soc. Perkin Trans 1 1998, 2527; e Synlett 1999, 1781, assim como as referências aí citadas.

As aminas primárias (ver Figura IA) e secundárias (ver Figura 1B) podem ser acopladas a compostos de arilo (ArX) para gerar uma variedade de compostos amina da invenção com substituintes arilo. As fontes comerciais e referências na literatura química são fornecidas correntemente na arte com acesso a uma multiplicidade de compostos de arilo que podem ser usados para preparar os compostos esteróides da presente invenção. Exemplos de métodos para a aminação de compostos de arilo podem encontrar-se em J. Org. Chem. 2000, 65, 1158 e na the review Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, 2046 e nas referências aí citadas.

Os métodos para fazer reagir as aminas primárias (ver Figura IA) e secundárias (ver Figura 1B) com cloretos de acilo (RC(=0)C1) e cloretos de sulfonilo (RSO2CI) para gerar os compostos de amida e sulfonamida da invenção, respectivamente, são bem conhecidos dos que trabalham na arte da química orgânica, no contexto de outros compostos de amina, e estas mesmas técnicas podem ser aplicadas aos compostos amina da presente invenção. As fontes comerciais e referências na literatura química são fornecidas correntemente na arte com acesso a uma multiplicidade de compostos de cloretos de acilo e de sulfonilo que podem ser usados para preparar os compostos esteróides da presente invenção.

Os métodos para fazer reagir as aminas primárias (ver Figura IA) e secundárias (ver Figura 1B) com isocianatos (RN=C=0) e isotiocianatos (RN=C=S) para gerar ureias e tioureias, 46 respectivamente, também são bem conhecidos dos que trabalham na arte da química orgânica, no contexto de outros compostos de amina, e estas mesmas técnicas podem ser aplicadas aos compostos amina da presente invenção. As fontes comerciais e referências na literatura química são fornecidas correntemente na arte com acesso a uma multiplicidade de compostos de isocianatos e isotiocianatos que podem ser usados para preparar os compostos esteróides da presente invenção. 0 artigo de revisão Russ. Chem. Rev. 1985, 54, 249 e as referências nele citadas descrevem exemplos da variedade de ureias e tioureias substituídas que pode ser enquadrada pela invenção.

Assim, ao usar aldeídos, cetonas, compostos de arilo, cloretos de acilo, cloretos de sulfonilo, isocianatos e/ou isotiocianatos apropriadamente seleccionados, um vulgar entendido na arte pode preparar compostos esteróides onde R1 e R2 são seleccionados a partir de hidrogénio e grupos orgânicos contendo 1-30 átomos de carbono e opcionalmente contendo 1-6 heteroátomos seleccionados a partir de nitrogénio, oxigénio, fósforo, silício, e enxofre.

Os esteróides da invenção podem ter anéis heterocíclicos fundidos tais como, mas não limitados a, pirazol, isoxazol e pirimidina. Tal como ilustrado no esquema Η, o composto 43 é um exemplo de um pirazol fundido da invenção, para o qual a síntese do seu material de partida, composto 40, se encontra descrita na patente U.S. 6,046,185. O tratamento do composto 40 com formato de etilo em piridina na presença de NaOMe dá origem ao intermediário hidroximetileno 41. A reacção do composto 41 com hidrato de hidrazina em EtOH forma o composto pirazol 42, o qual, após tratamento com fluoreto de tetrabutilamónio em THF dá o composto 43. 47

Esquema Η

i) Et02CH, NaOMe, piridina; ii) N2H4, EtOH; iii)Bu4NF, THF.

Tal como ilustrado no esquema I, os intermediários como o composto 41 podem ser convertidos em isoxazoles dos quais é exemplificativo o composto 44. 0 tratamento do intermediário hidroximetileno 41 com hidróxido de amónio em piridina, seguido de desprotecção dos hidroxilos 6- e 7-, usando fluoreto de tetrabutilamónia em THF, dá o isoxazol 44.

Esquema I

i) HONH2.HC1, piridina; ii) Bu4NF, THF. 48

Tal como ilustrado no esquema J, os intermediários como o composto 41 podem ser convertidos em pirimidinas dos quais é exemplificativo o composto 44a. 0 tratamento do intermediário hidroximetileno 41 com hidrocloreto de benzamidina e hidróxido de potássio em etanol, seguido de desprotecção dos hidroxilos 6- e 7-, usando fluoreto de tetrabutilamónia em THF, dá a pirimidina 44a.

Esquema 1

i) Hidrocloreto de benzamidina, KOH, EtOH; ii)Bu4NF, THF.

Assim, ao proceder através de compostos com substituintes cetona no carbono 3 e =CHOH no carbono 2, a presente invenção fornece acesso a uma multiplicidade de compostos onde R1 pode ser uma cadeia de 2 ou 3 átomos na posição 2 de modo a que -N-R1-faça parte de uma estrutura biciclica fundida ao anel A. A reacçao dos esteróides 3-cetonas com hidroxilamina e piridina pode ser empregada para produzir oximas esteróides da invenção. Uma oxima esteróide tem R2 como uma ligação directa à posição 3, providenciando assim uma ligação dupla entre o carbono na posição 3 e o N, e R1 é OH. As aminas primárias podem ser oxidadas a compostos nitro, por exemplo, pelo dimetildioxirano. Assim, R1 e R2 podem ser oxigénio. Os métodos para gerar a função nitro são descritos em J. Org. Chem. 1989, 54, 5783. A reacção de 3-cetonas com dimetilohidrazina dá origem a esteróides N,N- 49 dimetilohidrazona da invenção, nos quais R2 é uma ligação directa à posição 3 e R1 é NMe2. 0 tratamento dos esteróides de dimetilohidrazona com hidrazina gera os esteróides hidrazona da invenção. A descrição dos métodos para gerar N, N-dimetilhidrazonas e hidrazonas pode ser encontrada em J. Org. Chem. 1966, 31r 677. As aminas primárias também podem fazer-se reagir pela metodologia conhecida na arte com ácidos e ésteres sulfúricos/sulfónicos, para fornecer compostos sulfamatos, i.e., esteróides onde a posição 3 está ligada a -N-SO3-R e R é H ou um grupo orgânico com 1-30 átomos de carbono e opcionalmente contendo 1-6 heteroátomos seleccionados a partir de nitrogénio, oxigénio, fósforo, silicio, e enxofre. D. Composições Farmacêuticas A presente invenção fornece uma composição farmacêutica ou veterinária (a partir daqui simplesmente designada por composição farmacêutica) contendo um composto da fórmula (1) tal como descrito acima, misturado com um transportador farmaceuticamente aceitável. A invenção fornece ainda uma composição, preferencialmente uma composição farmacêutica, contendo uma quantidade efectiva de um composto tal como descrito acima, em associação com um transportador farmaceuticamente aceitável.

As composições farmacêuticas da presente invenção podem apresentar-se em qualquer forma que permita a administração da composição a um paciente. Por exemplo, a composição pode estar na forma de um sólido, liquido ou gás (aerossol) . As vias de administração típicas incluem, sem se limitarem a, oral, tópica, parenteral, sublingual, rectal, vaginal, ocular, e intranasal. O termo parenteral, tal como aqui utilizado, inclui as injecções 50 subcutâneas, intravenosas, intramusculares, intraexternas ou as técnicas de infusão. As composições farmacêuticas da invenção são formuladas de modo a permitir que os ingredientes activos nelas contidos estejam biodisponíveis na altura da administração da composição a um paciente. A composição que será administrada a um paciente toma a forma de uma ou mais doses unitárias onde, por exemplo, uma cápsula pode ser uma dosagem única e um recipiente de um composto de fórmula (1) na forma de aerossol pode conter uma pluralidade de doses unitárias.

Os materiais usados na preparação das composições farmacêuticas devem ser farmaceuticamente puros e não tóxicos nas quantidades utilizadas. Será evidente para os vulgares entendidos na arte que a dosagem óptima do(s) ingrediente(s) activo(s) na composição farmacêutica irá depender de uma variedade de factores. Factores relevantes incluem, sem limitação, o tipo de sujeito (e.g., humano), a forma particular do ingrediente activo, a forma de administração e a composição empregue.

Em geral, a composição farmacêutica inclui um (onde "um" e "uma" referem-se aqui, e nesta especificação, daqui em diante, a um ou mais) composto activo de fórmula (1) tal como aqui descrito, em mistura com um ou mais transportadores. 0(s) transportador(es) pode(m) ser particulado(s), de modo a que a(s) composição(ões) seja(m), por exemplo, na forma de cápsula ou de pó. 0(s) transportador(res) pode(m) ser liquido(s), sendo a(s) composição(ões), por exemplo, um xarope oral ou um liquido injectável. Adicionalmente, o(s) transportador (res) pode(m) ser gasoso(s) de modo a fornecer uma composição em aerossol útil na, e.g., administração por inalação. 51

Quando se pretender a administração oral, a composição é preferencialmente apresentada na forma sólida ou liquida, onde se incluem aqui as formas semisólida, semilíquida, suspensão e gel.

Como uma composição sólida para administração oral, a composição pode ser formulada em pó, grânulos, tabletes comprimidas, pilula, cápsula, pastilha, bolacha ou outra forma similar. Uma tal composição sólida contém tipicamente um ou mais diluentes inertes ou transportadores digeríveis. Adicionalmente, um ou mais dos seguintes adjuvantes pode estar presente: ligantes tais como a carboximetilcelulose, etilcelulose, celulose microcristalina, ou gelatina; excipientes tais como o amido, lactose ou dextrinas, agentes desintegrantes tais como o ácido alginico, alginato de sódio, Primogel, amido de milho e similares; lubrificantes tais como estearato de magnésio ou Sterotex; antiaderentes tais como o dióxido de silício coloidal; agentes adoçantes tais como a sacarose ou a sacarina, um agente de sabor tal como a menta, salicilato de metilo ou sabor a laranja, e um agente corante.

Quando a composição está na forma de uma cápsula, e.g., uma cápsula de gelatina, pode conter, para além dos materiais do tipo acima, um transportador liquido tal como o polietilenoglicol, ciclodextrina ou um óleo gordo. A composição pode estar na forma de um líquido, por exemplo, um elixir, xarope, solução, emulsão ou suspensão. 0 líquido pode ser para administração oral ou para injecção, como dois exemplos. Quando pretender para administração oral, a composição preferida contém, para além dos presentes compostos, um ou mais agentes adoçantes, conservantes, corantes e intensificadores de sabor. Numa composição para administração por injecção, um ou mais agentes surfactantes, conservantes, humidificantes, dispersantes, 52 de suspensão, tampões, estabilizadores e agentes isotónicos podem ser incluídos. A composição farmacêutica líquida da invenção, quer seja em solução, suspensão ou outra forma similar, pode incluir um ou mais dos seguintes adjuvantes: diluentes estéreis tais como água para injecção, solução salina, preferencialmente soro fisiológico, Solução Ringer, cloreto de sódio isotónico, óleos fixos, tais como os mono ou diglicéridos sintéticos, que podem servir como solventes ou meios de suspensão, glicóis de polietileno, glicerina, ciclodextrina, propilenoglicol, ou outros solventes; agentes antibacterianos tais como álcool benzílico ou o metilparabeno; antioxidantes tais como o ácido ascórbico ou o bissulfito de sódio; agentes de quelação, tal como o ácido etilenodiaminatetraacético; tampões tais como acetatos, citratos ou fosfatos e agentes para ajuste da tonicidade como o cloreto de sódio ou a dextrose. A preparação parenteral pode ser encapsulada em ampolas, recipientes descartáveis ou frascos de doses múltiplas em vidro ou plástico. 0 soro fisiológico é o adjuvante preferido. Uma composição farmacêutica injectável é preferencialmente estéril.

Uma composição líquida para administração oral ou parenteral deve conter uma quantidade de um composto de fórmula (1) de modo a que se obtenha uma dosagem conveniente. Tipicamente, esta quantidade é pelo menos 0.01% de um composto da invenção na composição. Quando se pretende para administração oral, esta quantidade pode variar entre 0.1% e cerca de 80% de peso da composição. As composições preferidas para administração oral contêm entre cerca de 4% e cerca de 50% do composto activo da fórmula (1) . As composições e preparações preferidas segundo a 53 presente invenção são preparadas de modo a que uma dose unitária parenteral contenha entre 0.01% a 2% por peso do composto activo. A composição farmacêutica pode ser destinada à administração tópica, e neste caso o meio de transporte pode compreender convenientemente, uma solução, emulsão, um unguento ou uma base de gel. A base, por exemplo, pode compreender uma ou mais entre as seguintes: derivados de petróleo, lanolina, glicóis de polietileno, cera de abelha, óleo mineral, diluentes tais como água e álcool, e emulsionantes e estabilizantes. Podem estar presentes agentes de espessamento numa composição farmacêutica para administração tópica. Se se pretender a administração transdérmica, a composição pode incluir um penso transdérmico ou um dispositivo de iontoforese. As formulações tópicas podem conter uma concentração do composto da fórmula (1) desde cerca de 0.1% até cerca de 10% p/v (peso por unidade de volume). A composição pode destinar-se a administração rectal, sob a forma, e.g., de um supositório, o qual se derreterá no recto, libertando o fármaco. A composição para administração rectal pode conter uma base oleaginosa como um excipiente não irritante conveniente. Tais bases incluem, sem limitação, lanolina, manteiga de coco e polietilenoglicol. A composição pode incluir vários materiais que modificam a forma fisica de uma dose unitária sólida ou liquida. Por exemplo, a composição pode incluir materiais que formem um invólucro à volta dos ingredientes activos. Os materiais que formam o invólucro são tipicamente inertes e podem ser seleccionados, por exemplo, a partir do açúcar, goma-laca, e outros agentes de revestimento entérico. Alternativamente, os ingredientes activos podem ser envolvidos numa cápsula de gelatina. 54 A composição na forma sólida ou liquida pode incluir um agente que se liga aos compostos activos, para apoiar assim a entrega dos compostos activos. Os agentes convenientes que podem agir com esta capacidade incluem um anticorpo mono ou policlonal, uma proteína ou um lipossoma. A composição farmacêutica da presente invenção pode consistir em doses unitárias gasosas, e.g., pode estar na forma de aerossol. 0 termo aerossol é utilizado para designar uma variedade de sistemas que vai desde os de natureza coloidal aos sistemas que consistem em embalagens pressurizadas. A dose pode ser aplicada por um gás liquefeito ou comprimido ou por uma bomba conveniente, que doseia os ingredientes activos. Os aerossóis dos compostos da invenção podem aplicar os ingredientes activos através de sistemas uni, bi ou trifásicos. A entrega do aerossol inclui o recipiente necessário, activadores, válvulas, subcontentores, separadores e afins, os quais, em conjunto podem formar um kit. Os aerossóis preferidos podem ser determinados por um entendido na arte sem necessidade de experimentação.

Quer esteja na forma sólida, líquida ou gasosa, a composição farmacêutica da presente invenção pode conter um ou mais agentes farmacológicos conhecidos usados no tratamento da inflamação (incluindo asma, alergia, artrite reumatóide, esclerose múltipla, etc.), desordens proliferativas (cancros), doenças tratáveis através da regulação do cálcio (incluindo hipertensão, arritmias cardíacas, etc.), e Síndroma de Imuno Deficiência Adquirida (SIDA).

As composições farmacêuticas podem ser preparadas por metodologia bem conhecida na arte farmacêutica. A composição que se destina a ser administrada por injecção pode ser preparada combinando o composto da fórmula (1) com água, 55 para formar uma solução. Pode adicionar-se um surfactante para facilitar a formação de uma solução ou suspensão homogéneas. Os surfactantes são compostos que interagem não covalentemente com o composto da fórmula (1) de modo a facilitar a dissolução ou a suspensão homogéneas do composto activo no sistema aquoso de aplicação. E. Actividade Biológica

Os compostos revelados aqui de fórmula 1, ou composições compreendendo um ou mais destes compostos e um meio de transporte farmacêuticamente aceitável, o diluente ou excipiente, podem ser utilizados num método para o tratamento ou prevenção de uma condição inflamatória ou doença inflamatória num paciente, onde o método compreende a administração ao paciente em sofrimento de uma quantidade do composto ou composição de acordo com a presente invenção, onde a quantidade é eficaz para tratar ou prevenir a condição ou doença inflamatória do paciente. A condição ou doença inflamatória pode envolver inflamação respiratória (e.g., quando a doença respiratória é asma, ou quando a doença respiratória é a doença obstrutiva pulmonar crónica; ou quando a doença respiratória é enfisema); a condição inflamatória pode ser a condição ou a doença autoimune; a condição inflamatória pode ser a doença eritematose lúpus; a condição ou doença inflamatória pode envolver a inflamação aguda ou crónica do osso e/ou das cartilagens dos compartimentos das juntas; a condição ou doença inflamatória pode ser uma artrite, seleccionada entre a artrite reumatóide, gota ou artrite reumatóide juvenil; a condição ou doença inflamatória pode ser uma doença do sistema nervoso central; a condição ou doença pode estar associada à infiltração de leucócitos; a condição ou doença 56 pode estar associada ao edema; a condição ou doença pode estar associada a lesão de reperfusão da isquémia; a condição ou doença pode estar associada a níveis elevados de citoquinas inflamatórias (por exemplo, quando a citoquina inflamatória é a interleucina (IL)-4, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-5, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-10, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-13, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-9, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-1, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-2, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-β, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-18, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-3, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-8, ou quando a citoquina inflamatória é a IL-12, ou quando a citoquina inflamatória é a TNF-α, ou quando a citoquina inflamatória é a TGF-β ou quando a citoquina inflamatória é a GM-CSF, ou quando a citoquina inflamatória é a IFN-γ ou quando a citoquina inflamatória é a LTB4, ou quando a citoquina inflamatória é membro da família da cysteinyl leukotriene, ou quando a citoquina inflamatória é uma célula T normal expressa e secretada de activação regulada (RANTES), ou quando a citoquina inflamatória é a eotaxina-1, 2, ou 3, ou onde a citoquina inflamatória é a proteína inflamatória do macrófago (MlP)-la, ou quando a citoquina inflamatória é a proteína -1, 2, 3 ou 4 quimioatractora do monócito); a condição ou doença pode estar associada com níveis alterados de moléculas de adesão inflamatórias (e.g., onde a molécula de adesão é uma molécula de adesão vascular (VCAM-1 ou 2) , onde a molécula de adesão é uma molécula de adesão intercelular (ICAM-1 ou 2), onde a molécula de adesão é antigénio-4 (VLA-4) muito retardado, onde a molécula de adesão é antigénio-1 (LFA-1) associado à função leucócito; onde a molécula 57 de adesão é uma selectina); a condição ou doença inflamatória pode ser a esclerose múltipla; a condição ou doença inflamatória pode ser a sarcadose pulmonar; a condição ou doença inflamatória pode ser inflamação ocular ou alergia; a condição ou doença inflamatória pode ser a rinite alérgica; a condição ou doença inflamatória pode ser a doença inflamatória do intestino (e.g., doença de Crohn ou colite ulcerativa); a condição ou doença inflamatória pode ser a doença inflamatória cutânea (e.g., psoriase ou dermatite); a condição ou doença inflamatória pode ser a rejeição de excertos pelo hospedeiro; a condição ou doença inflamatória pode ser vascular (por exemplo, vasculite); a condição ou doença inflamatória pode ser a doença ateroesclerótica.

Adicionalmente, a presente invenção fornece compostos que podem ser usados num método para tratar ou prevenir uma doença ou condição num paciente, onde a doença ou condição está associada a condições patológicas que envolvem a infiltração de leucócitos, compreendendo o método a administração ao paciente em carência de uma quantidade do composto ou da composição da presente invenção, onde a quantidade é eficaz para tratar ou prevenir a doença ou condições patológicas que envolvem a infiltração de leucócitos.

Adicionalmente, a presente invenção fornece compostos que podem ser usados num método para tratar ou prevenir asma num paciente, compreendendo a administração ao paciente em carência de uma quantidade de um composto ou composição da presente invenção, em que a quantidade é eficaz para tratar ou prevenir a asma no paciente.

Adicionalmente, a presente invenção fornece compostos que podem ser usados num método para tratar ou prevenir alergia num paciente, compreendendo a administração ao paciente em carência 58 de uma quantidade de um composto ou composição da presente invenção, em que a quantidade é eficaz para tratar ou prevenir a alergia no paciente.

Um composto de fórmula (1), ou a composição compreendendo um ou mais compostos de fórmula (1) e um meio de transporte farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente, pode conseguir, embora não necessite, um ou mais dos seguintes resultados desejáveis no sujeito ao qual se administrou o composto de fórmula (1) tal como definido acima, ou a composição contendo um desses compostos e um meio de transporte farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente: 1. Inibição da infiltração de leucócitos (e.g., neutrófilos, eosinófilos, etc.) 2. Inibição da activação de leucócitos 3. Alteração da proporção de linfócitos (e.g., células TH1 vs TH2) 4. Inibição 5. Inibição 6. Inibição (e.g., eotaxina, 7. Inibição de adesão (e.g., 8. Inibição 9. Inibição interleucina por 9, IL-10, IL-12, da quimiotaxia dos leucócitos; da produção e/ou libertação de TNF-a; da produção e/ou libertação de quimiocinas etc.); da produção, libertação e/ou função da molécula VCAM, VLA-4, etc.); do edema; da produção e/ou libertação de citoquina exemplo, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-IL-13, IL-18); 10. Inibição da libertação de mediador inflamatório (e.g., leucotrienos, triptase, adenosina etc.); 11. Inibição da libertação de histamina; 12. Inibição dos parâmetros da asma; e 59 13. Inibição dos parâmetros da alergia.

Os compostos de formula (1) aqui revelados (i.e., compostos de fórmulas (1), ou compostos da presente invenção), ou composições compreendendo um ou mais destes compostos e um meio de transporte farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente, pode ser usado num método para tratar ou prevenir uma desordem proliferativa num paciente, compreendendo o método a administração ao paciente em carência de uma quantidade de um composto ou composição de acordo com a presente invenção, em que a quantidade é eficaz para tratar ou prevenir a desordem proliferativa do paciente. Tal como é aqui utilizado, o termo desordem proliferativa inclui, sem limitação, todas as leucemias e tumores sólidos susceptíveis de sofrer diferenciação ou apoptose ao ser interrompido o seu ciclo celular.

Os compostos de formula (1) aqui revelados (i.e., compostos de fórmulas (1), ou compostos da presente invenção), ou composições compreendendo um ou mais destes compostos e um meio de transporte farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente, podem ser usados num método para tratar ou prevenir doenças tratáveis através da regulação do cálcio num paciente, compreendendo o método a administração ao paciente em carência de uma quantidade de um composto ou composição de acordo com a presente invenção, em que a quantidade é eficaz para tratar ou prevenir a doença do paciente. Tal como é aqui utilizado, doenças tratáveis através da regulação de cálcio incluem, sem limitação arritmia cardíaca, fibrilação atrial, síndromas coronários agudos, hipertensão, lesão da reperfusão da isquémia, ataque cardíaco, epilepsia, doenças de desmielinação tais como a esclerose múltipla, dor, estado epiléptico, arteriosclerose e diabetes. 60

Os compostos de formula (1) aqui revelados (r.e., compostos de fórmulas (1), ou compostos da presente invenção), ou composições compreendendo um ou mais destes compostos e um meio de transporte farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente, podem ser usados num método para tratar ou prevenir o Sindroma de Imunodeficiência Adquirida (SIDA) num paciente, compreendendo o método a administração ao paciente em carência de uma quantidade de um composto ou composição de acordo com a presente invenção, em que a quantidade é eficaz para tratar ou prevenir o Sindroma da Imunodeficiência Adquirida. Tal como é aqui utilizado, Sindromas de Imunodeficiência Adquirida através de infecção com o virus humano da imunodeficiência do tipo 1 inclui, sem limitação, as complicações associadas, tais como o Complexo de Demência do Sindroma de Imunodeficiência Adquirida e Dementia Complex, e os neuro-Sindromas de Imunodeficiência Adquirida.

Assim, os compostos inventivos podem ser usados para tratar a inflamação, tanto a crónica como a aguda, assim como algumas desordens proliferativas (cancros), doenças tratáveis através da regulação de cálcio e SIDA. Tal como aqui utilizado, inflamação inclui, sem limitação, espandilose anquilosante, artrites (onde este termo engloba mais de 100 tipos de doenças reumáticas), asma, doença obstrutiva pulmonar crónica, alergias, rinite alérgica, doença de Crohn, sindroma de fibromialgia, gota, inflamações do cérebro (incluindo esclerose múltipla, demência da SIDA, encefalopatia de Lyme, herpes encefalite, doença de Creutzfeld-Jakob, e toxoplasmose cerebral) , enfisema, doença inflamatória do intestino, sindroma da irritação do intestino, lesão da reperfusão da isquémia, dermatite atópica, eritematose juvenil, sarcoidose pulmonar, doença de Kawasaki, osteoartrite, 61 doença inflamatória da pélvis, artrite psoriática (psoríase), artrite reumatóide, psoríase, transplante de tecido/órgãos, rejeição de excertos pelo hospedeiro; escleroderme, espandiloarteropatias, lúpus eritematoso sistémico, vasculite sarcoidose pulmonar, vasculite, arterosclerose, cardiomiopatia, miocardite autoimune e colite ulcerativa.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (1), incluindo os sais, composições, etc. é administrada. Tal como aqui usada, a quantidade real que o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" engloba irá depender da via de administração, do tipo de animal de sangue quente a ser tratado, e das características físicas do animal de sangue quente específico em consideração. Estes factores e as suas relações para determinar esta quantidade são bem conhecidos pelos praticantes entendidos na arte médica. Esta quantidade e método de administração podem ser ajustados para atingir uma eficácia óptima, mas dependem de factores como peso, dieta alimentar, medicamentação concorrente e de outros factores que os entendidos na arte são capazes de identificar.

Uma quantidade eficaz de um composto ou composição da presente invenção será suficiente para tratar a inflamação, doenças proliferativas, doenças tratáveis pela regulação de cálcio ou SIDA num animal de sangue quente, tal como um ser humano. Os métodos de administração das quantidades eficazes de agentes anti-inflamatórios são bem conhecidos na arte e incluem a administração sob as formas parenteral, oral ou por inalação. Estas formas de dosagem incluem, mas não se limitam a, soluções parenterais, comprimidos, cápsulas, implantes de libertação controlada e sistemas de entrega transdérmicos ou sistemas de 62 dosagem por inalação empregando inaladores de pó seco ou dispositivos pressurizados de inalação de doses múltiplas. A quantidade e frequência da dosagem são seleccionadas para criar um nivel efectivo do agente, sem provocar efeitos adversos. A dosagem varia geralmente entre cerca de 0.001 a 100 mg/Kg/dia, e tipicamente desde cerca de 0.01 até 10 mg/Kg/dia, em que a administração é oral ou intravenosa. Os limites de dosagem típicos para a administração intranasal ou por inalação situam-se entre os 0.0001 a 10 mg/Kg/dia.

Os compostos de fórmula (1) incluindo os compostos usados nos métodos e composições estabelecidos acima podem ser preparados segundo os esquemas estabelecidos nos exemplos que se seguem. Os exemplos que se seguem entendem-se como meio de ilustração e não como meio de limitação.

Salvo indicação em contrário, a cromatografia de flash e a cromatografia de coluna podem ser efectuadas usando sílica gel 60 (230-400 mesh) da Merck. A cromatografia de Flash pode ser levada a cabo de acordo com o procedimento estipulado em: "Purification of Laboratory Chemicals", 3rd. edition, Butterworth-Heinemann Ltd., Oxford (1988), Eds. D. D. Perrin e W. L. F. Armarego, página 23. A cromatografia de coluna refere-se ao processo pelo qual a taxa de fluxo de um eluente através de um material empacotado é determinada por gravidade. Em todos os casos podem usar-se alternativamente as cromatografias de flash e radial. A cromatografia radial é executada usando sílica gel num Chromatotron Model # 7924T (Harrison Research, Paio Alto, Califórnia). Salvo indicação em contrário, os valores Rf são obtidos por cromatografia de camada fina utilizando Sílica Gel 60 F254 (Merck KGaA, 64271, Darmstadt, Germany). Solução salina refere-se a uma solução saturada de cloreto de sódio. 63

Também, salvo indicação e contrário, os produtos químicos e reagentes foram obtidos a partir de fornecedores bem credenciados tais como a Aldrich (Milwaukee, WI; www.aldrich.sial.com); EM Industries, Inc. (Hawthorne, NY; www.emscience.com); Fisher Scientific Co. (Hampton, NH; www.fischerl.com); e Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, NH; www.lancaster.co.uk). A Sulfo-NHS-biotina foi obtida de Pierce (Rockford, IL, www.piercenet.com). As resinas MP-TsOH , PS-DIEA, PS-Trisamine e PS-Benzaldehyde foram obtidas de Argonaut Technologies (San Carlos, CA, www.argotech.com). Os Gases foram obtidos da Praxair (Vancorver, B.C.). As linhas celulares, salvo indicação em contrário, foram obtidas de fontes comerciais ou públicas, e.g., American Tissue Culture Collection (ATCC, Rockville, MD).

EXEMPLOS DE SÍNTESES EXEMPLO 1

ESTERÓIDE 3-AMINO-6,7-DIHIDROXI-17-ETILIDENO 0 composto 49, um composto representativo da invenção, é preparado de acordo com o Esquema 1. Qualquer número de compostos relacionados com o composto 49 pode ser produzido usando metodologia similar. 0 composto 45, material de partida, pode ser preparado de acordo com a metodologia descrita na Patente U.S. 6,046,185. A olefinação da cetona 45 é realizada usando o brometo de etiltrifenilfosfónio e KO^u em tolueno. 0 tratamento do composto 46 3p-hidroxilo com ZnNg.2py, trifenilfosfina e DIAD em tolueno produziu o composto 47 3a-azido. A redução, com hidreto de lítio alumínio, da azida em Et20 forneceu a amina 48. 0 tratamento com HC1 em THF e água remove o grupo acetonido e forma o sal cloreto de amónio 49. 64

Esquema ί

i) CH3CH2PPh3Br, KC^Bu, Tolueno; ii) ZnN6.2py, ph3p' DIAD' tolueno; iii) LiAlH4, Et20; iv) HCl, THF, água Síntese do Composto 46

Uma solução de KOfcBu (0.24 g, 2.0 mmol) / EtPPhsBr (0.75 g, 2.0 mmol) e tolueno (2.5 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob árgon. Após 1 hora a solução vermelho profundo foi arrefecida em gelo e foi adicionada a cetona 45 (184 mg, 0.508 mmol) e a solução resultante foi deixada aguecer até à temperatura ambiente. Após agitação durante a noite a reacção foi temperada com 10 ml de água, diluída com 60 ml de acetato de etilo (EtOAc), separada e lavada com 2 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia em coluna com eluição de 1:1 EtOAc/hexanos proporcionou 171 mg (90%) do composto 46 como um filme incolor. Síntese do Composto 47

Foi adicionado DIAD (0.44 ml, 2.14 mmol) gota-a-gota durante 10 minutos a uma solução a temperatura ambiente de composto 65 3p-hidroxi 46 (400 mg, 1.07 mmol), ZnN6.2py (246 mg, 0.80 mmol), Ph3P (560 mg, 2.14 mmol) e tolueno (10.7 ml) sob árgon. Após 4 horas a mistura reaccional foi carregada numa coluna de silica gel empacotada em 10% de acetato de etilo/hexanos e eluida com 20% de acetato de etilo/hexanos para proporcionar 422 mg (99%) do composto 47 como um sólido branco. Síntese do Composto 48

Foi adicionado hidreto de lítio alumínio (42 mg, 1.04 mmol) a uma solução de azida 47 arrefecida em gelo (415 mg, 1.04 mmol) em 5.2 ml de Et20 sob árgon. A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 2 horas a solução foi arrefecida em gelo, diluída com 25 ml de éter dietílico e temperada lentamente com 2ml de solução de Na2S04 saturada. Após 10 minutos formou-se um precipitado branco e a solução foi diluída com 50 ml de acetato de etilo, lavada com 3 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. O material em bruto foi purificado usando uma coluna de sílica gel preparada por empacotamento em 1% Et3N/CH2Cl2 e lavagem com 5% de MeOH/CH2Cl2. O material em bruto foi carregado em CH2CI2, eluído com 5% de MeOH/CH2Cl2 e depois com 95:5:2 CH2CI2 :MeOH:Et3N para dar uma espuma branca que o 1R RMN mostrou conter vestígios de Et3N. O material foi recuperado em 50 ml de hexanos, lavado com 2 x 20 ml de solução salina, seco sobre MgS04, filtrado e concentrado para dar 322 mg (83%) do composto 48 como uma espuma branca. Síntese do Composto 49

Uma solução do composto 3a-amino 48 (317 mg, 0.850 mmol), HC1 4M em dioxano (255 μΐ, 1.02 mmol), THF (13.6 ml) e água (3.4 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A solução 66 foi concentrada até à secura, triturada com 3 x 10 ml porções de acetona, com a evaporação da acetona após cada trituração. A concentração deu 301 mg (96%) do composto 49 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 334.16; C2iH36N02. EXEMPLO 2

ESTERÓIDE 3-AMINO-6,7-DIHIDROXI-17-METILIDENO

Um outro exemplo de alcenos relacionados com o composto 49 é apresentado no Esquema 2. A olefinação da cetona 45 usando brometo de metiltrifenilfosfónio e KOfcBu em THF deu o composto 17-metilideno 50. A azidação usando ZnN6.2py, PPh3 e DIAD em tolueno deu o composto 3a-azido 51. A redução com hidreto de lítio alumínio em THF deu o composto 3a-amino 52. O tratamento com ácido acético a 80% removeu o grupo de protecção acetonido e formou o sal de acetato de amónio 53. Alternativamente, o composto 52 foi tratado com ácido hidroclórico em acetonitrilo e água para dar o sal hidrocloreto 54. 67

Esquema 2

i) CH3PPh3Br, KOtBu, THF; ii) ZnN6.2py, Ph3P, DIAD, tolueno; iii) LiAlH4, Et20; iv) ácido acético ou HC1, água, MeCN Síntese do Composto 50

Uma solução de KC^Bu (2,0 g, 16,9 mmol), MePPh3Br (6,0 g, 16,8 mmol) e 27 ml THF foi agitada à temperatura ambiente sob árgon. Após 1 hora foi adicionada a cetona 45 (2.00 g, 5.52 mmol) à solução amarela e a solução resultante foi aquecida em refluxo durante 1 hora. A reacção foi temperada com 50 ml de solução salina, diluída com 100 ml de EtOAc, separada e lavada com 25 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia em coluna com eluição de 1:1

EtOAc/hexanos proporcionou 1,90 g (95%) do composto 50 como um sólido branco. Síntese do Composto 51

Foi adicionado DIAD (0,85 ml, 4,10 mmol) gota-a-gota durante 15 minutos a uma solução à temperatura ambiente de composto 3β-hidroxilo 50 (739 mg, 2,05 mmol), ZnN6.2py (473 mg, 1,54 mmol), 68

Ph3P (1,075 g, 4,10 mmol) e tolueno (20 ml) sob árgon. Após 4 horas a mistura reaccional foi carregada numa coluna de silica gel empacotada em 10% de acetato de etilo/hexanos e eluida com 20% de acetato de etilo/hexanos para proporcionar 743 mg (94%) do composto 51 com uma espuma branca. Síntese do Composto 52

Foi adicionado hidreto de lítio alumínio (77 mg, 1,93 mmol) a uma solução de 3a-azida 51 arrefecida em gelo em 5 ml de THF e 5 ml de éter dietílico sob árgon. A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 4 horas a solução foi arrefecida em gelo, diluída com 25 ml de éter dietílico e temperada lentamente com 5ml de solução de Na2S04 saturada. Após 10 minutos formou-se um precipitado branco e a solução foi diluída com 50 ml de acetato de etilo, lavada com 3 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgSCh, filtrada e concentrada. O material em bruto foi purificado usando uma coluna de sílica gel preparada por empacotamento em 1% Et3N/CH2Cl2 e lavagem com 5% de MeOH/CH2Cl2. O material em bruto foi carregado em CH2C12, eluído com 5% de MeOH/CH2Cl2 e depois 95:5:2 CH2Cl2:MeOH:Et3N para dar 636 mg (92%) do composto 52 como um sólido branco. Síntese do Composto 53

Uma solução de 3a-amina 52 (287 mg, 0.799 mmol) e 10 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 1 hora. A mistura reaccional foi concentrada para dar uma espuma branca. Foi adicionada acetona (lOml) e a solução foi sonicada para dissolver 0 material e depois evaporada. Foi adicionada outra porção de 10 ml de acetona, sonicada e evaporada para dar 301 mg (99%) do composto 53 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, 69 electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 320.19; C20H34NO2. Síntese do Composto 54

Foi adicionada uma solução de HC1 4M em dioxano a uma solução da amina 52 em 1 ml de acetonitrilo e 50 μΐ de água. O sólido pegajoso resultante foi diluído com 2 ml de acetonitrilo e agitado vigorosamente até se formar 0 sólido. 0 sólido foi filtrado e seco para dar 50 mg (63%) do composto 54. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e

MeCN) 320.19; C20H34NO2. EXEMPLO 3

ESTERÓIDE 3-AMINO-6,7-DIHIDROXI-17-METILIDENO (SÍNTESE ALTERNATIVA) O intermediário 52 também foi sintetizado por uma via alternativa apresentada no Esquema 3. A azidação do álcool 45 usando ZnNg.2py, PPI13 e DIAD em tolueno deu o composto 3a-azido 55. A hidrogenação da azida, usando Pd em carbono como catalisador deu a amina 56. A olefinação do composto 56 usando brometo de metiltrifenilfosfónio e KOtBu em THF deu o composto 17-metilideno 52. 70

i) ZnN6.2py, Ph3P, DIAD, tolueno; ii) H2, Pd, EtOAc; iii) CH3PPh3Br, KCÓBu, THF. Síntese do Composto 55

Foi adicionado DIAD (2,4 ml, 11,6 mmol) gota-a-gota durante 20 minutos a uma solução à temperatura ambiente de composto 3β-hidroxilo 45 (2,108 g, 5,81 mmol), ZnN6.2py (1,34 g, 4,36 mmol), Ph3P (3,05 g, 11,6 mmol) e tolueno (58 ml) sob árgon. Após ter sido deixada a reagir durante a noite, a mistura reaccional foi carregada numa coluna de sílica gel e eluída com 20% de acetato de etilo/hexanos para proporcionar 1.14 g (50%) do composto 55 como uma espuma branca. Síntese do Composto 56

Uma solução de azida 55 (1.10 g, 2.84 mmol), Pd a 10% em carbono (60 mg, 0.057 mmol) e 28 ml de acetato de etilo foi agitada à temperatura ambiente durante a noite sob hidrogénio. A solução foi filtrada através de Celite com eluição com acetato de etilo. A purificação por cromatografia radial com eluição de 71 95:5:2 CH2CI2:MeOH:Et3N deu 892 mg (81%) do composto 56 como um sólido branco. Síntese do Composto 52

Uma solução de KC^Bu (175 mg, 1,48 mmol), MePPh3Br (528 mg, 1,48 mmol) e 3 ml de THF foi agitada à temperatura ambiente sob árgon. Após 1 hora foi adicionada a cetona 56 (100 mg, 0,277 mmol) à solução amarela e a solução resultante foi deixada em agitação à temperatura ambiente durante a noite. A reacção foi temperada com 5 ml de água, diluída com 50 ml de EtOAc, separada e lavada com 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia radial com eluição de 95:5:2 CH2CI2:MeOH:Et3N proporcionou 96 mg (97%) do composto 52 como um sólido branco. EXEMPLO 4

ESTERÓIDE 3-AMINO-6,7-DIHIDROXI-17-FLUORETILIDENO

Os análogos halogenados relacionados com o composto 49 podem ser preparados usando reagentes de olefinação halogenados. O Esquema 4 esboça a síntese do análogo 20-fluor 64. O hidroxilo no composto 45 foi protegido por tratamento com cloreto de ter-butildimetilsilil e imidazole em dimetilformamida (DMF). A olefinação da cetona 57 usando o anião de trietil 2-fluor-2-fosfonoacetato dá uma mistura do composto 58 e seu isómero geométrico. Os compostos são separáveis usando cromatografia em sílica gel. A redução com hidreto de lítio alumínio do éster em Et20 deu 0 álcool alílico 59. O tratamento com o complexo trióxido de piridina enxofre em THF seguida por adição de hidreto de lítio alumínio proporciona o composto desidroxilado 60. O fluoreto de tetrabutilamónio em THF remove o grupo de protecção a 72 partir de 3-hidroxil para dar o composto 61. A azidação usando ZnN6.2py, PPh3 e DIAD em tolueno deu o composto 3a-azido 62. A redução com hidreto de lítio alumínio em THF deu a 3a-amina 63. 0 tratamento com HC1 em THF e água desprotege os 6- e 7-hidroxilos e forma o sal cloreto de amónio 64.

i) TBSC1, imidazole, DMF; ii) (EtO) 2P (O) CHFC02Et, LiN(TMS)2, THF; iii) LiAlH4, Et20; iv) S03.Py, THF' LÍAIH4; v) Bu4NF, THF; vi)

ZnN6.2py, Ph3P, DIAD, tolueno; vii) LiAlH4, Et20; viii) HC1, THF, água Síntese do Composto 57

Uma solução da cetona 45 (4.73 g, 13.1 mmol), TBSC1 (3.01 g, 19.6 mmol), imidazole (2.67 g, 39.2 mmol) e DMF (52 ml) foi 73 agitada à temperatura ambiente durante a noite. A pasta branca foi diluída com 250 ml de EtOAc, lavada com 2 x 50 ml de água e 50 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 5.97 g (96%) do composto 57 como um sólido branco. Síntese do Composto 58

Foi adicionada bis(trimetilsilil)amida de lítio (10.0 ml duma solução 1.0M em THF, 10.0 mmol) a uma solução à temperatura ambiente de (EtO) 2P (O) CHFC02Et (2.65 g, 10.5 mmol) em THF (22 ml) sob árgon. Após 1 hora uma solução da cetona 57 (2.50 g, 5.25 mmol) em THF (20 ml) foi adicionada e a solução resultante foi aquecida em refluxo durante 4.5 horas e depois agitada à temperatura ambiente durante a noite. A reacção foi temperada com 1.5 ml da solução de NaHC03 saturada e depois parcialmente concentrada para remover a maior parte do THF. O resíduo foi diluído com 200 ml de EtOAc, lavado com 3 x 20 ml de solução salina, seco sobre MgS04, filtrado e concentrado. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna, com eluição com 2.5% e depois 5% de EtOAc/hexanos para dar 1.50 g (50%) do composto 58 como um sólido branco. Síntese do Composto 59

Foi adicionado hidreto de lítio alumínio (106 mg, 2,66 mmol) a uma solução do éster 58 arrefecida em gelo (1,50 g, 2,66 mmol) em Et20 (13 ml) sob árgon. A solução foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 3 horas a solução foi arrefecida em gelo e foram adicionados lentamente 20 ml de solução de Na2S04 saturada. Após 10 minutos a solução foi diluída com 150 ml de

EtOAc, lavada com água e solução salina, seca sobre MgS04, 74 filtrada e concentrada para dar 1.44 g (quantitativa) do composto 59 como uma espuma branca. Síntese do Composto 60 O complexo de trióxido de piridina enxofre (69.5 mg, 0.428 mmol) foi adicionado a uma solução de álcool alílico 59 arrefecida em gelo (149 mg, 0.285 mmol) em THF (2.8 ml) sob árgon. Após 6 horas foi adicionado hidreto de lítio alumínio (68 mg, 1.71 mmol) e a solução foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. A solução foi arrefecida em gelo e foram adicionados lentamente 5 ml de solução de Na2SC>4 saturada. Após 10 minutos a solução foi diluída com 75 ml de EtOAc, lavada com água e solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 109 mg (76%) do composto 60 como um sólido branco. Síntese do Composto 61

Uma solução do composto 60 (410 mg, 0.810 mmol), BU4NF (0.89 ml duma solução 1.0M em THF, 0.89 mmol) e THF (5 ml) foi aquecida em refluxo sob árgon. Após 1.5 horas a solução foi arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com 75 ml de EtOAc, lavada com 20 ml de água e 2 x 20 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. O resíduo foi filtrado através de sílica gel com eluição de EtOAc e concentrado para dar 318 mg (100%) do composto 61 como um sólido branco. Síntese do Composto 62

Foi adicionado DIAD (0,33 ml, 1,59 mmol) gota-a-gota durante 10 minutos a uma solução à temperatura ambiente do composto 3β-álcool 61 (312 mg, 0,796 mmol), ZnN6.2py (183 mg, 0,597 mmol), 75

Ph3P (417 mg, 1,59 mmol) e tolueno (8,0 ml) sob árgon. Após 3 horas a mistura reaccional foi carregada numa coluna de silica gel empacotada em 10% de EtOAc/hexanos e eluida com 20% de EtOAc/hexanos para proporcionar 322 mg (97%) do composto 62 como um sólido branco.

Sintese do Composto 63

Foi adicionado hidreto de litio aluminio (29 mg, 0,75 mmol) a uma solução de azida 62 arrefecida em gelo (314 mg, 0,753 mmol) em 7,5 ml de Et20 sob árgon. A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente enquanto era agitada durante a noite. A solução foi arrefecida em gelo e foi temperada por adição lenta de 10 ml de solução de Na2S04 saturada. Após 10 minutos formou-se um precipitado branco e a solução foi diluída com 75 ml de EtOAc, lavado com 20 ml de água e 2 x 20 ml de solução salina, seco sobre MgS04, filtrado e concentrado. O material em bruto foi purificado usando uma coluna de sílica gel preparada por empacotamento em 1% Et3N/CH2Cl2 e lavagem com 5% de MeOH/CH2Cl2. O material em bruto foi carregado em CH2CI2, eluído com 5% de

MeOH/CH2Cl2 e depois 95:5:2 CH2CI2:MeOH:Et3N para dar um sólido branco. A análise 1R RMN indicou o material com um vestígio de

Et3N e por isso o material foi recuperado em 75 ml de CH2CI2 e lavado com 2 x 25 ml de água, seco sobre MgS04, filtrado e concentrado para dar 137 mg (47%) do composto 63 como um filme incolor. Síntese do Composto 64

Uma solução do composto 3a-amino 63 (137 mg, 0,35 mmol), HCl 4M em dioxano (105 μΐ, 0,42 mmol), THF (5,6 ml) e água (1,4 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A solução foi 76 concentrada, o resíduo foi recuperado duas vezes em 3 ml de metanol e concentrado para dar 130 mg (96%) do composto 64 como um sólido creme esbranquiçado. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 352,14; C21H35FNO2. EXEMPLO 5

ESTERÓIDE 3-AMINO-6,7-DIHIDROXI-17-CARBOMETOXIETILIDENO A olefinação de compostos relacionados com o composto 57 também pode ser feita para gerar análogos 21-carboalcoxi substituídos. O Esquema 5 apresenta a síntese do composto exemplo 21-carbometoxi substituído 69. A olefinação da cetona 57 usando o anião do trimetil 2-fosfonoacetato dá uma mistura do composto 65 e seu isómero geométrico. Os compostos são separáveis usando cromatografia em sílica gel. O fluoreto de tetrabutilamónio em THF remove o grupo de protecção a partir do 3-hidroxil para dar composto 66. A azidação usando ZnNg.2py, PPh3 e DIAD em tolueno deu 0 composto 3a-azido 67. A hidrogenação da azida, usando Pd em carbono como catalisador deu a 3a-amina 68. O tratamento com ácido acético a 80% desprotegeu os 6- e 7-hidroxilos e formou o sal de acetato de amónio 69. 77

Esquema 5

ii) Bu4NF, THF; iii) ZnN6.2py, Ph3P, DIAD, tolueno; iv) H2,Pd,EtOAc; v) ácido acético a 80%. Síntese do Composto 65

Foi adicionada bis(trimetilsilil)amida de lítio (2,00 ml duma solução 1.0M em THF, 2,00 mmol) a uma solução à temperatura ambiente de (MeO) 2P (0) CH2C02Et (390 mg, 2,10 mmol) em THF (22 ml) sob árgon. Após 3 horas uma solução da cetona 57 (509 mg, 1,07 mmol) em THF (2 ml) foi adicionada e a solução resultante foi aquecida em refluxo durante 3 dias. A reacção foi temperada com 5ml de água, diluída com 75 ml de EtOAc, lavada com 2 x 15 ml de solução salina, seca sobre MgSCg, filtrada e concentrada. O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna, com eluição com 5% de EtOAc/hexanos para dar 307 mg (54%) do composto 65 como um filme incolor. Também foram isolados 119 mg (21%) do isómero Z. 78

Sintese do Composto 66

Uma solução do 65 (2 96 mg, 0,550 mmol), BU4NF (0,61 ml duma solução 1.0M em THF, 0,61 mmol) e THF (3 ml) foi aquecida em refluxo sob árgon. Após 1 hora a solução foi arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com 20 ml de EtOAc, lavada com 10 ml de água e 2 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 230 mg (100%) do composto 66 como um sólido branco. Síntese do Composto 67

Foi adicionado DIAD (252 μΐ, 1/28 mmol) gota-a-gota a uma solução à temperatura ambiente do composto 3β-έ1οοο1 66 (230 mg, 0,55 mmol), ZnNg.2py (147 mg, 0,48 mmol), PIL3P (335 mg, 1,28 mmol) e tolueno (6,4 ml) sob árgon. Após 2 horas a mistura reaccional foi purificada por cromatografia radial, com eluição de 15% de EtOAc/hexanos para proporcionar 203 mg (84%) do composto 67. Síntese do Composto 68

Uma solução de azida 67 (203 mg, 0,45 mmol), Pd a 10% em carbono (48 mg, 0,045 mmol) e 4,5 ml de EtOAc foi agitada à temperatura ambiente sob hidrogénio durante 3 dias. A solução foi filtrada através de Celite com eluição de EtOAc e MeOH para dar 165 mg (88%) do composto 68. Síntese do Composto 69

Uma solução da amina 68 (165 mg, 0.40 mmol) e 2 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 1 hora. A mistura reaccional foi diluída com 10 ml de tolueno e depois concentrada para remover o ácido acético residual. A trituração do resíduo em 79 10 ml de ciclohexano, seguida de filtração e secagem deu 117 mg (67%) do composto 69 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 378,17; C22H36NO4. EXEMPLO 6

SAL DE ÁCIDO 3α-ΑΜΙΝΟ-6α, 7p-DIHIDROXIANDROSTAN-17-ONA ACÉTICO A metodologia de análogos pode ser usada para obter compostos com diferentes funcionalidades em C17. Por exemplo, é obtido um composto de 17-cetona substituído por tratamento do composto 56 com ácido acético a 80% para dar 0 sal do ácido 3a-amino-6a, 7β-dihidroxiandrostan-17-ona acético (70) (consultar a Tabela 2) .

Sintese do Composto 70

Uma solução da cetona 56 (67 mg, 0,16 mmol) e 1 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 1 hora. A mistura reaccional foi diluída com 10 ml de tolueno depois concentrada para dar 63 mg (100%) do composto 70. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 322,18; C19H32NO3. EXEMPLO 7

ESTERÓIDE 3-AMINO-6,7-DIHIDROXI-17-HIDROXI

Os análogos 17-hidroxil substituídos podem ser preparados a partir de cetonas relacionadas com 0 composto 56 como apresentado no Esquema 6. O carbonilo no composto 56 foi reduzido com NaBH4 em metanol para dar exclusivamente 0 isómero 17p-hidroxil 71. O tratamento com ácido acético a 80% removeu o grupo de protecção acetonido e formou o sal de acetato de amónio 72. 80

Síntese do Composto 71

Uma solução arrefecida em gelo da cetona 56 (100 mg, 0.28 mmol) , NaBH4 (16 mg, 0.41 mmol) e 1.4 ml de MeOH foi deixada a reagir durante 2.5 horas. A reacção foi temperada pela adição de 1 ml de água e concentrada para remover a maior parte do MeOH. O resíduo foi diluído com 40 ml de CH2CI2 e lavado com 2 x 10 ml de solução salina, seco sobre MgS04, filtrado e concentrado para dar 90 mg (90%) do composto 71. Síntese do Composto 72

Uma solução da amina 71 (90 mg, 0,25 mmol) e 2 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 2 horas. A mistura reaccional foi diluída duas vezes com 10 ml de tolueno e concentrada para remover o ácido acético residual. O resíduo foi dissolvido em 1 ml de MeOH e 5 ml de hexanos, concentrado e seco para dar 86 mg (90%) do composto 72 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 324,19; Ci9H34N03. 81 EXEMPLO 8

SAIS DO ESTERÓIDE 3a-AMINO-6,7-DIHIDROXI-17-METILIDENO

Os 6- e 7-hidroxilos podem ser protegidos usando uma variedade de grupos de protecção. Os grupos de protecção adequados estão listados em Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1999) . 0 Esquema 7 apresenta exemplos de análogos que têm sido sintetizados com o 6- e 7-hidroxilos protegidos como metil éteres. 0 material de partida, o composto 73, para a síntese está descrito na Patente U.S. 6,046,185. A geração do dianião do composto 73 usando NaH em dimetilformamida seguida pela alquilação com iodeto de metilo deu o composto 74. O tratamento com ácido acético de 80% removeu os grupos protecção, o cetal cíclico e o ter-butildimetilsilil éter. A olefinação do composto 75 usando o brometo de metiltrifenilfosfónio e KC^Bu em THF deu o composto 17-metilideno 76. A azidação usando ZnN6.2py, PPh3 e DIAD em tolueno deu o composto 3a-azido 77. A redução com hidreto de lítio alumínio em THF deu a 3a-amina 78. O tratamento com HC1 em Et20 e MeOH formou o sal de cloreto de amónio 79. O tratamento do composto 78 com ácido acético formou sal acetato de amónio 80. 82

Esquema 7

KOcBu, HC1, .. . . . . ηΛη . - η ) CH3PPh3Br, i) NaH, Mel, DMF; n) acido acético a 80%; i1-1' Et0· ') THF; iv) ZnN6.2py, Ph3P, DIAD, tolueno; v) LíAI Ar 2 , vi

Et20, MeOH; ou ácido acético Síntese do Composto 74

Foi adicionado hidreto de sódio (0.50 g, 12.4 mmol) a uma solução à temperatura ambiente do diol 73 (1.49 g, 3.10 mmol) em 15 ml de DMF sob nitrogénio. Após 2 horas a solução foi arrefecida em gelo e foi adicionado Mel (1.93 ml, 30.9 mmol) gota-a-gota durante 30 segundos. A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente enquanto era agitada durante a noite. A mistura de reacção foi diluída com 100 ml de Εό20, lavada com 10 ml de água e 2 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 1,73 g do composto em bruto 74 como um óleo amarelo pálido. 83

Sintese do Composto 75

Uma solução do composto em bruto 74 (1,73 g, 3,10 mmol) e 15 ml de ácido acético a 80% foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. A solução foi concentrada, o resíduo recuperado em 50 ml de EtOAc, lavado com 2 x 20 ml de solução de NaHC03 saturada e 2 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 1.18 g do composto em bruto 75 como uma espuma branca. Síntese do Composto 76

Uma solução de KOfcBu (1,09 g, 9,20 mmol), MePPhsBr (3,30 g, 9,20 mmol) e 15 ml THF foi agitada à temperatura ambiente sob nitrogénio. Após 2 horas foi adicionada a cetona em bruto 75 (1.17 mg, 3.08 mmol) à solução amarela e a solução resultante foi deixada em agitação a temperatura ambiente durante a noite. A reacção foi temperada com 2 ml de água, diluída com 100 ml de EtOAc, lavada com 3 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. A cromatografia em coluna com eluição com 80% de EtOAc/hexanos proporcionou 890 mg do composto impuro 76 como um sólido branco. Síntese do Composto 77

Foi adicionado DIAD (1,05 ml, 5,08 mmol) gota-a-gota durante 10 minutos a uma solução à temperatura ambiente do composto 3β-álcool 76 (885 mg, 2,54 mmol), ΖηΝδ.2ργ (585 mg, 1,90 mmol), Ph3P (1,33 g, 5,08 mmol) e tolueno (25 ml) sob árgon. Após 11 horas a mistura reaccional foi purificada por cromatografia em coluna, com eluição de 15% de EtOAc/hexanos para proporcionar 594 mg (63%) do composto 77 como um sólido cristalino. 84

Sintese do Composto 78

Foi adicionado hidreto de litio alumínio (0,79 ml de uma solução 1M em Et20, 0.79 mmol) a uma solução de azida 77 arrefecida em gelo (588 mg, 1,57 mmol) em 15,7 ml de Et20 sob árgon. Após 10 minutos a reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente enquanto era agitada durante a noite. Após 1 hora a mistura reaccional foi arrefecida em gelo e lentamente temperada com 10 ml de solução de Na2S04 saturada. Após 10 minutos formou-se um precipitado branco e o líquido foi decantado. O resíduo foi lavado com 2 x 25 ml de EtOAc e as lavagens foram combinadas com a solução de éter previamente decantada. A solução foi lavada com 3 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia em coluna com eluição de 95:5:2 CH2CI2:MeOH:Et3N deu 434 mg (79%) do composto 78 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 348,20; C22H38NO2. Síntese do Composto 79

Foi adicionado cloreto de hidrogénio (0.26 ml duma solução 1.0 M em Et20, 0.26 mmol) a uma solução da amina 78 (60 mg, 0.17 mmol) em 2 ml de Et20. O material resultante na forma de gel foi dissolvido em 5 ml de metanol e concentrado. O resíduo foi dissolvido em 1 ml de metanol, diluído com 5 ml de ciclohexano e concentrado para dar 66 mg (100%) do composto 79 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 348,20; C22H38NO2. 85 Síntese do Composto 80

Uma solução da amina 78 (61 mg, 0.17 mmol) e lml de ácido acético foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 30 minutos. A solução foi diluída com 5 ml de tolueno e concentrada. O resíduo foi recuperado em 5 ml de hexanos, concentrado e o resíduo foi seco durante 2 horas usando um aparelho de secagem Abderhalden com refluxo de acetona para dar 71 mg (100%) do composto 80 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 348,20; C22H38NO2. EXEMPLO 9

SAIS DO ESTERÓIDE 3β-ΑΜΙΝΟ-6,7-DIHIDROXI-17-METILIDENO A estereoquímica em C3 pode ser invertida para dar os derivados do sal 3p-amónio de qualquer número de compostos relacionados com 0 composto 49. A estereoquímica em C3 pode ser invertido em 3 passos sintéticos como apresentado no Esquema 8 para a síntese dos compostos 28 e 83. O composto 3p-hidroxil 46 é convertido no 3p-mesilato 81 usando cloreto de metanossulfonil e piridina. O aquecimento do composto 81 e acetato de césio em DMF a 100°C dá o composto 3a-acetato 82. A sequência de inversão é completada por metanólise do acetato no composto 82 usando metóxido de sódio para dar 0 composto 3a-hidroxil 25. O tratamento do composto 25 com ZnN6.2py, trifenilfosfina e DIAD em tolueno produziu o composto 3β-3ζίάο 26. A redução com hidreto de lítio alumínio da azida em Et20 forneceu 0 composto 3β-3ΐηίηο 27. O tratamento com HC1 em THF e água remove o grupo acetonido e forma 0 sal de cloreto de amónio 28. Do mesmo modo, 0 tratamento do composto 27 com ácido acético a 80% remove o grupo acetonido e forma 0 sal de acetato de amónio 83. Usando os métodos delineados 86 no Esquema 8, o composto 50 é convertido no composto 89 e o composto 61 é convertido no composto 95 (consultar a Tabela 1) . Os compostos 26, 21, 87, 88, 89, 93, 94 e 95 são exemplos de compostos da invenção com estereoquímica 3β.

Esquema 8

i) MsCl, piridina; ii) CsOAc, DMF, 100°C; iii) NaOMe, MeOH; iv) ZnN6.2py, Ph3P, DIAD, tolueno; v) LiAlH4, Et20; vi) HC1 4M em dioxano, THF, água ou ácido acético a 80%. Síntese do Composto 81 O cloreto de metanossulfonil (1.2 ml, 16 mmol) foi adicionado a uma solução arrefecida em gelo do composto 3β- 87 hidroxil 46 (3.0 g, 8.0 irnnol) em piridina (20 ml) sob árgon. Após 4 horas a solução foi arrefecida em gelo e foram adicionados 20 ml de solução de NaHC03 saturada. Após 15 minutos a solução foi diluída com 150 ml de EtOAc e lavada com 3 x 25 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 3,6 g (100%) do composto 81 como uma espuma creme esbranquiçada. Síntese do Composto 82

Uma solução do mesilato 81 (3.6 g, 8.0 mmol), acetato de césio (4.6 g, 24 mmol) e 40 ml de DMF foi aquecida a 100°C durante 24 horas. A solução foi diluída com 100 ml de água, extraída com 2 x 100 ml de Et20, lavada com 2 x 50 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar aproximadamente 3 g do composto em bruto 82.

Sintese do Composto 25

Uma solução de Na (398 mg, 17.3 mmol) em MeOH (21.5 ml) foi adicionada ao 3a-acetato 82 (1.8 g, 4.3 mmol) em THF (10 ml).

Após 2 horas, foram adicionados 20 ml de água e a solução resultante foi diluída com 100 ml de EtOAc, lavada consecutivamente com solução de NaHC03 saturada, água e solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 1.58 g (98%) do composto em bruto 25 como uma espuma amarela. Síntese do Composto 26

Foi adicionado DIAD (1,70 ml, 8,24 mmol) gota-a-gota durante 10 minutos a uma solução à temperatura ambiente do composto 3a-álcool 25 (1,54 g, 4,12 mmol), ZnN6.2py (0,94 g, 3,09 mmol), Ph3P (2,16 g, 8,24 mmol) e tolueno (44 ml) sob árgon. Após agitação durante a noite, a mistura reaccional foi carregada numa coluna 88 de sílica gel empacotada em 10% de acetato de etilo/hexanos e eluída com 10% de acetato de etilo/hexanos para proporcionar 0,89 g (61%) do composto 26 como um sólido branco. Síntese do Composto 27

Foi adicionado hidreto de lítio alumínio (146 mg, 3,66 mmol) a uma solução arrefecida em gelo de azida 26 (1,46 g, 3,66 mmol) em 18,3 ml de Et20 sob árgon. A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 1,5 horas a solução foi arrefecida em gelo, diluída com 25 ml de Et20 e temperada lentamente com 20 ml de solução de Na2S04 saturada. Após 10 minutos formou-se um precipitado branco e a solução foi diluída com 50 ml de EtOAc, lavada com 3 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 1,31 g (96%) do composto 27 como uma espuma branca. Síntese do Composto 28

Uma solução do composto 3p-amino 27 (227 mg, 0,609 mmol), HC1 4M em dioxano (183 μΐ, 0,73 mmol), THF (9,7 ml) e água (2,4 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Evaporada do THF e água, o resíduo recuperado em 5 ml de metanol e concentrado, triturado com 5 ml de acetona, concentrado para dar 224 mg (100%) do composto 28 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 334,10/ C2iH36N02. Síntese do Composto 83

Uma solução da amina 27 (412 mg, 1,10 mmol) e 5 ml de ácido acético a 80% foram agitados à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reaccional foi diluída com 5 ml de tolueno e 89 depois concentrada. 0 resíduo foi recuperado por duas vezes em 5 ml de tolueno e concentrado para remover o ácido acético residual. 0 resíduo foi triturado duas vezes em 10 ml de CH2CI2 e concentrado para dar 430 mg (99%) do composto 83 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 334,19; C2iH36N02. Síntese do Composto 84 O cloreto de metanossulfonil (0,33 ml, 4,2 mmol) foi adicionado a uma solução arrefecida em gelo do composto 3β-hidroxil 50 (754 mg, 2,09 mmol) em piridina (5,3 ml) sob árgon. Após 4 horas a solução foi arrefecida em gelo e foram adicionados 5ml de solução de NaHCCU saturada. Após 15 minutos a solução foi diluída com 60 ml de acetato de etilo e lavada 3 vezes com solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 860 mg (94%) do composto 84 como um sólido de cor creme. Síntese do Composto 85

Uma solução do mesilato 84 (860 mg, 1,96 mmol), acetato de césio (1,13 g, 5,88 mmol) e 10 ml de DMF foi aquecida a 95°C durante 32 horas. A solução foi diluída com 50 ml de água, extraída com 2 x 100 ml de Et20, lavada com 2 x 30 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia em coluna com eluição de 5% e 8% de EtOAc/hexanos proporcionou 558 mg (71%) do composto 85 como um sólido branco. Síntese do Composto 86

Uma solução de Na (128 mg, 5,56 mmol) em MeOH (7 ml) foi adicionada ao 3a-acetato 85 (558 mg, 1,38 mmol). Após 2 horas, 90 foram adicionados 5 ml de solução de NaHC03 saturada e a solução resultante foi diluida com 100 ml de EtOAc. A solução lavada com 2 x 20 ml de água e 2 x 20 ml de solução salina, seca sobre

MgS04, filtrada e concentrada para dar 491 mg (99%) do composto 86 como um sólido branco. Síntese do Composto 87

Foi adicionado DIAD (0,57 ml, 2,74 mmol) gota-a-gota durante 15 minutos a uma solução à temperatura ambiente do composto 3a-hidroxilo 86 (493 mg, 1,37 mmol), ZnN6.2py (315 mg, 1,03 mmol), Ph3P (718 mg, 2,74 mmol) e tolueno (13,7 ml) sob árgon. Após 3,5 horas a mistura reaccional foi carregada numa coluna de sílica gel empacotada em 10% de acetato de etilo/hexanos e eluída com 10% de acetato de etilo/hexanos para proporcionar 390 mg (74%) do composto 87 como um óleo viscoso. Síntese do Composto 88

Foi adicionado hidreto de lítio alumínio (40 mg, 1,01 mmol) a uma solução arrefecida em gelo do composto da azida 87 (390 mg, 1,01 mmol) em 5 ml de dietil éter sob árgon. A reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 2 horas a solução foi arrefecida em gelo, diluída com 25 ml de éter dietílico e temperada lentamente com 2 ml de solução de Na2S04 saturada. Após 10 minutos formou-se um precipitado branco e a solução foi diluída com 40 ml de acetato de etilo, lavada com 3 x 15 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. O material em bruto foi purificado usando uma coluna de sílica gel preparada por empacotamento em 1% Et3N/CH2Cl2 e lavagem com 5% de MeOH/CH2Cl2. O material em bruto foi carregado em CH2C12, eluído com 5% de MeOH/CH2Cl2 e depois 95:5:2 91 CH2CI2:MeOH:EtsN para dar 277 mg (76%) do composto 88 como um sólido branco. Síntese do Composto 89

Uma solução do composto amina 88 (270 mg, 0,752 mmol) e 10 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 1 hora. A mistura reaccional foi concentrada para dar uma espuma branca. Foi adicionada acetona (lOml) e a solução foi sonicada para dissolver 0 material e depois evaporada. Foi adicionada outra porção de 10 ml de acetona, sonicada e evaporada para dar 285 mg (100%) do composto 89 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 320,2 6; C20H34NO2. Síntese do Composto 90 O cloreto de metanossulfonil (0,20 ml, 2,56 mmol) foi adicionado a uma solução arrefecida em gelo do composto 3β-hidroxil 61 (501 mg, 1,28 mmol) em piridina (3,2 ml) sob árgon. Após 4 horas a solução foi arrefecida em gelo e foram adicionados 5ml de solução de NaHCCb saturada. Após 15 minutos a solução foi diluída com 50 ml de EtOAc e lavada 3 vezes com solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 590 mg (98%) do composto 90 como uma espuma branca. Síntese do Composto 91

Uma solução do mesilato 90 (590 mg, 1,25 mmol), acetato de césio (722 mg, 3,76 mmol) e 6,2 ml de DMF foi aquecida a 100°C durante 24 horas. A solução foi diluída com 50 ml de água, extraída com 2 x 50 ml de Et20, lavada com 2 x 30 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. A purificação 92 por cromatografia em coluna com eluição de 8% de EtOAc/hexanos proporcionou 297 mg (55%) do composto 91 como um sólido branco. Síntese do Composto 92

Uma solução de Na (63 mg, 2,7 mmol) em MeOH (3,4 ml) foi

adicionada ao 3a-acetato 91 (297 mg, 0,684 mmol) em THF (1 ml). A solução foi agitada durante a noite, foram adicionados 5 ml de água e 80 ml de EtOAc e lavada duas vezes com água e duas vezes com solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada para dar 251 mg (94%) do composto 92 como um sólido branco. Síntese do Composto 93

Foi adicionado DIAD (0,26 ml, 1,24 mmol) gota-a-gota durante 10 minutos a uma solução à temperatura ambiente do composto 3a-álcool 92 (243 mg, 0, 620 mmol), ZnN6.2py (143 mg, 0,465 mmol),

Ph3P (325 mg, 1,24 mmol) e tolueno (6,2 ml) sob árgon. Após 4 horas a mistura reaccional foi carregada numa coluna de sílica gel empacotada em 10% de EtOAc/hexanos e eluída com 20% de EtOAc/hexanos para proporcionar 209 mg do composto 93 impuro como um óleo amarelo. Síntese do Composto 94

Foi adicionado hidreto de lítio alumínio (20 mg, 0,50 mmol) a uma solução arrefecida em gelo de azida 93 impura (209 mg, 0,50 mmol) em 5 ml de Et20 sob árgon. A reacção foi deixada aguecer até à temperatura ambiente. Após 4 horas a solução foi arrefecida em gelo, diluída com 25 ml de Et20 e temperada lentamente com 2 ml de solução de Na2S04 saturada. Após 10 minutos formou-se um precipitado branco e a solução foi diluída com 50 ml de EtOAc, lavada com 3 x 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, 93 filtrada e concentrada. Foi feita uma cromatografia ao material em bruto usando uma coluna de silica gel preparada por empacotamento em 1% Et3N/CH2Cl2 e lavagem com 5% de MeOH/CH2Cl2. 0 material em bruto foi carregado em CH2C12, eluido com 5% de MeOH/CH2Cl2 e depois 95:5:2 CH2C12 :MeOH:Et3N para dar 97 mg do composto 94 impuro como um sólido branco. Síntese do Composto 95

Uma solução do composto 3β-3ΐηίηο 94 impuro (97 mg, 0,25 mmol), HC1 4M em dioxano (74 μΐ, 0,30 mmol), THF (4 ml) e água (1 ml) foi agitada à temperatura ambiente. Após 4 horas a solução foi concentrada, o resíduo foi recuperado em 5ml de metanol e concentrado. O resíduo foi triturado duas vezes com 5ml de acetona e concentrado. O sólido branco foi dissolvido em aproximadamente 0.5 ml de água e foi adicionada lentamente acetona (5 ml) até ao aparecimento de cristais. Os cristais foram filtrados, enxaguados com acetona e secos para dar 66 mg do composto 95 como agulhas finas incolores. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 352,09; C2iH35FN02. EXEMPLO 10

ESTERÓIDE 3-AMINO-6,7-DIHIDROXI-17-ALQUIL

Quaisquer compostos com a funcionalidade 17(20)-alcenilo podem ter a ligação dupla hidrogenada usando H2 na presença dum catalisador tal como Pd a 10% em carbono. Por exemplo, o composto 96 foi preparado a partir do composto 28 como apresentado no Esquema 9. Do mesmo modo, o composto 97 foi preparado a partir do composto 49 usando a mesma metodologia como apresentada no Esquema 9 (consultar a Tabela 2). 94

Esquema 9

i) H2, Pd sobre carbono, metanol

Síntese do Composto 96

Uma solução da olefina 28 (52 mg, 0,14 mmol), Pd a 10% em carbono (15 mg, 0,014 mmol) e metanol (3 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite sob hidrogénio. A solução foi filtrada através de Celite com eluição de 50 ml de metanol e concentrada para dar 50 mg (96%) do composto 96 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 336,24; C21H38NO2. Síntese do Composto 97

Uma solução da olefina 49 (844 mg, 2,28 mmol), Pd a 10% em carbono (243 mg, 0,228 mmol) e metanol (11 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite sob hidrogénio. A solução foi filtrada através de Celite e eluição com 50 ml de metanol e concentrada. O resíduo foi triturado em 10 ml de acetona, filtrado e seco para dar 801 mg (94%) do composto 97 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 336,21; C21H38NO2. 95 EXEMPLO 11

ESTERÓIDE 3-ΔΜΙΝΟ SECUNDÁRIO-6,7-DIHIDROXI-17-METILIDENO

Qualquer amina relacionada com o composto 52 pode ser acoplada a um aldeído ou cetona para preparar aminas secundárias ou terciárias. A reacção do composto 52 com uma solução de 4-isopropilbenzaldeído e isopropóxido de titânio em THF seguida por redução com borohidreto de sódio dá o composto 99. 0 tratamento com ácido acético a 80% remove o grupo acetonido e forma o sal de acetato de amónio 100. Os compostos de exemplo 101-107 foram sintetizados usando os métodos delineados no Esquema 10 (consultar a Tabela 6).

Esquema 10

i) 4-isopropilbenzaldeido, Ti(01Pr)4, THF; NaBH4, MeOH; ii) ácido acético a 80%.

Sintese do Composto 99 O isopropóxido de titânio (IV) (120 μΐ, 0.42 mmol) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente da amina 52 (100 mg, 0.28 mmol), 4-isopropilbenzaldeído (46 μΐ, 0.31 mmol) e 1.4 ml de THF sob nitrogénio. Após 12 horas, foi adicionada uma solução de NaBH4 (29 mg, 0.78 mmol) em 1 ml de EtOH e a reacção foi continuada durante mais 8 horas. A reacção foi temperada pela adição de 3 ml de solução salina, diluída com 30 ml de EtOAc, separada, lavada com 10 ml de solução salina, seca sobre MgS04, 96 filtrada e concentrada. A purificação usando cromatografia radial proporcionou 50 mg (36%) do composto 99. Síntese do Composto 100

Uma solução da amina 99 (50 mg, 0,10 mmol) e 1 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 3 horas. A mistura reaccional foi recuperada duas vezes com partes de 5 ml de tolueno e concentrada e depois uma vez com acetona e hexanos para dar 25 mg (51%) do composto 100. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 452,27/ C30H46NO2. Síntese do Composto 101

Usando 0 procedimento descrito para a síntese do composto 99, a amina 52 (100 mg, 0.28 mmol) foi posta em reacção com 2- f luorobenzaldeído (32 μΐ, 0.32 mmol) para dar 43 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 1 ml de ácido acético a 80% a 40°C durante 3 horas. A mistura reaccional foi diluída com 5 ml de tolueno e concentrada. O resíduo foi dissolvido em 1 ml de acetona, diluído com 5 ml de hexanos e concentrado para dar 49 mg (37%) do composto 101 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 428,22; C27H39FNO2. Síntese do Composto 102

Usando o procedimento descrito para a síntese do composto 99 , a amina 52 (100 mg, 0.28 mmol) foi posta em reacção com 3- (trifluorometil)benzaldeído (41 μΐ, 0, 31 mmol) para dar 61 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 1 ml de ácido acético a 80% a 40°C durante 3 horas. A mistura 97 reaccional foi diluída com 5 ml de tolueno e concentrada. 0 resíduo foi dissolvido em 1 ml de acetona, diluído com 5 ml de hexanos e concentrado para dar 64 mg (45%) do composto 102 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 478, 18; C28H39F3NO2. Síntese do Composto 103

Usando 0 procedimento descrito para a síntese do composto 99, a amina 52 (100 mg, 0.28 mmol) foi posta em reacção com o-anisaldeído (42 mg, 0.32 mmol) para dar 30 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 1 ml de ácido acético a 80% a 40°C durante 3 horas. A mistura reaccional foi diluída com 5 ml de tolueno e concentrada. O resíduo foi dissolvido em 1 ml de acetona, diluído com 5 ml de hexanos e concentrado para dar 18 mg (14%) do composto 103. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 440,23; C28H42NO3. Síntese do Composto 104

Usando o procedimento descrito para a síntese do composto 99, a amina 52 (100 mg, 0.28 mmol) foi posta em reacção com 4- (trifluorometoxil)benzaldeído (44 μΐ, 0,31 mmol) para dar 86 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 1,5 ml de ácido acético a 80% a 40°C durante 3 horas. A mistura reaccional foi diluída com 5 ml de tolueno e concentrada. O resíduo foi dissolvido em lml de acetona, diluído com 5ml de hexanos e concentrado para dar 84 mg (57%) do composto 104 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 494.15; C28H39F3NO3. 98

Sintese do Composto 105

Usando o procedimento descrito para a síntese do composto 99, a amina 52 (100 mg, 0.28 mmol) foi posta em reacção com 3- fenoxibenzaldeído (60 mg, 0.32 mmol) para dar 73 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 1 ml de ácido acético a 80% a 40°C durante 3 horas. A mistura reaccional foi diluída com 5 ml de tolueno e concentrada. O resíduo foi dissolvido em 1 ml de acetona, diluído com 5 ml de hexanos e concentrado para dar 87 mg (58%) do composto 105 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 502,20; C33H44NO3.

Sintese do Composto 106

Usando 0 procedimento descrito para a síntese do composto 99, a amina 52 (100 mg, 0.28 mmol) foi posta em reacção com 3- nitrobenzaldeído (46 mg, 0,31 mmol) para dar 18 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 1 ml de ácido acético a 80% a 40°C durante 3 horas. A mistura reaccional foi diluída com 5 ml de tolueno e concentrada. O resíduo foi dissolvido em 1 ml de acetona, diluído com 5 ml de hexanos e concentrado para dar 18 mg (14%) do composto 106 como um sólido creme. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 455,20; C27H39N2O4. Síntese do Composto 107

Usando o procedimento descrito para a síntese do composto 99, a amina 52 (200 mg, 0,55 mmol) foi posta em reacção com 3-piridilcarboxaldeído (82 μΐ, 0,61 mmol) para dar 100 mg da amina intermediária. Uma suspensão da amina intermediária, HC1 4M em dioxano (65 μΐ, 0.26 mmol), 110 ml de água e 2.2 ml de 99 acetonitrilo foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A solução foi filtrada e o sólido foi seco para proporcionar 77 mg (30%) do composto 107 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 411,21; C26H39N2O2. EXEMPLO 12

ESTERÓIDE 3-CICLOAMINO-6,7-DIHIDROXI-17-ETILIDENO

Qualquer cetona relacionada com composto 108 pode ser acoplado a uma amina usando a metodologia apresentada no Esquema 11. O material de partida, o composto 108, para a sintese está descrito na Patente U.S. 6,046,185. A reacção do composto 108 com piperidina e cianoborohidreto de sódio em metanol deu o composto 109 como uma mistura de isómeros em C3. O tratamento com ácido acético a 80% removeu o grupo de protecção acetonido e formou 0 sal de acetato de amónio 110. O composto de exemplo 111 foi sintetizado usando os métodos delineados no Esquema 11, excepto o ácido hidroclórico que é usado no lugar do ácido acético (consultar a Tabela 5). Um grupo 3-cicloamino é um grupo ligado à 3-posição, onde o carbono na 3-posição está ligado directamente a um nitrogénio e este nitrogénio é parte de um anel heterociclico.

i) piperidina, Ti (0^)4, THF; NaBH4, MeOH; ii) ácido acético a 80%. 100 Síntese do Composto 109

Uma solução da cetona 108 (200 mg, 0.54 mmol) , piperidina (266 μΐ, 2.68 mmol), 100 mg de peneiros moleculares de 3Ã, NaBH3CN (24 mg, 0.38 mmol) e 5.4 ml de MeOH foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. A mistura reaccional foi diluída com 20 ml de água e extraída com 2 x 20 ml de CH2CI2. As extracções combinadas foram lavadas com 10 ml de solução salina, secas sobre MgS04, filtradas e concentradas. O material em bruto foi purificado usando cromatografia radial e eluição com 20% de MeOH/CH2Cl2 para proporcionar 112 mg (47%) do composto 109 como um sólido branco. Síntese do Composto 110

Uma solução das aminas 109 (102 mg, 0,23 mmol) e 5 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 1 hora. A solução foi concentrada, o resíduo foi recuperado em 2ml de MeOH, diluída com 15 ml de tolueno e concentrada. O resíduo foi triturado em 5 ml de acetona, filtrado e seco para dar 44 mg (42%) do composto 110 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 402,31; C26H44NO2. Síntese do Composto 111

Usando o procedimento descrito para a síntese do composto 109, a cetona 108 (200 mg, 0,54 mmol) foi posta em reacção com morfolina (234 μΐ, 2.68 mmol) para dar 56 mg da amina

intermediária. A amina intermediária foi tratada com 5 ml de ácido acético a 80% a 40°C durante 1 hora. A solução foi concentrada, dissolvida em 5 ml de MeOH e concentrada. As análises de XH e 13C RMN indicaram que o grupo de protecção acetonido foi removido mas pouco ou nenhum sal se formou. O 101 material foi tratado com HC1 4M em dioxano (32 μΐ, 0.13 mmol) e 2 ml de acetona dando um precipitado branco. A suspensão foi diluída em 2 ml de acetona, filtrada e seca para dar 48 mg (20%) do composto 111 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 404,20; C25H42NO3. EXEMPLO 13

CONVERSÃO DE 3-OXO EM 3-AMINO SECUNDÁRIA EM ESTERÓIDE

Qualquer cetona relacionada com 0 composto 108 pode ser acoplada a uma amina usando a metodologia apresentada no Esquema 12. A metilamina é adicionada a uma solução do composto 108 e isopropóxido de titânio em THF, seguida por redução com borohidreto de sódio. A solução é filtrada e eluída através da resina MP-TsOH para dar 0 composto 112, como uma mistura de isómeros em C3. 0 tratamento com HC1 em acetonitrilo e água formou 0 sal de cloreto de amónio 113. Os compostos de exemplo 114-129 foram sintetizados usando os métodos delineados no Esquema 12, excepto que foi usado ácido acético em vez de ácido hidroclórico nos exemplos em que se formaram os sais de acetato de amónio (consultar a Tabela 5).

i) hidrocloreto de metilamina, Ti(0IPr)4, THF, NaBH4, MeOH; ii) HC1, água, acetonetrilo. 102 Síntese do Composto 112 0 isopropóxido de titânio (IV) (270 μΐ, 0,92 mmol) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente da cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol), hidrocloreto de metilamina (41 mg, 0.61 mmol) e 1,5 ml de THF sob nitrogénio. Após 12 horas, foi adicionada uma solução de NaBH4 (65 mg, 1,7 mmol) em 2,3 ml de EtOH e a reacção foi continuada durante mais 10 horas. A reacção foi temperada pela adição de 0,5 ml de água e filtrada para remover um precipitado branco. A solução foi carregada numa coluna de 600 mg da resina MP-TsOH e eluída com 3 ml de MeOH e depois 4 ml de NH3 2M em MeOH. A fracção de NH3/MeOH foi concentrada para dar 76 mg (32%) do composto 112. Síntese do Composto 113

Uma suspensão do composto 112 (76 mg, 0.21 mmol), HC1 4 M em dioxano (75 μΐ, o .30 mmol), 50 μΐ de água e 1 ml de acetonitrilo foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A solução foi filtrada e o sólido foi seco para proporcionar 38 mg (13%) do composto 113 como um sólido cinzento. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 348,19/ C22H38N02 . Síntese do Composto 114

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (200 mg, 0,53 mmol) foi posta em reacção com hidrocloreto de propilamina (47 mg, 0,49 mmol) para dar 72 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HC1 para dar 34 mg (17%) do composto 114. LC/MS 103 (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 37 6,22; C24H42NO2. Síntese do Composto 115

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com amilamina (70 μΐ, 0,61 mmol) para dar 82 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HC1 para dar 75 mg (28%) do composto 115 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 404,28; C26H46NO2. Síntese do Composto 116

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com ciclopentilamina (60 μΐ, 0,61 mmol) para dar 99 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 200 μΐ de ácido acético durante 1 hora e foi recuperada duas vezes e concentrada a partir de porções de 1 ml de tolueno. O resíduo foi triturado em 1 ml de ciclohexano, filtrado e seco para dar 98 mg (35%) do composto 116. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 402,27; C26H44NO2. Síntese do Composto 117

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com ciclohexilamina (70 μΐ, 0,61 mmol) para dar 120 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 0,5 ml de ácido acético durante 1 hora e foi recuperada duas vezes e concentrada a partir de porções de 1 ml de tolueno. O resíduo foi 104 triturado em 1 ml de ciclohexano, filtrado e seco para dar 101 mg (32%) do composto 117. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 416,25/ C27H46NO2. Síntese do Composto 118

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com pirrolidina (51 μΐ, 0,61 mmol) para dar 70 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 50 μΐ de ácido acético durante 1 hora e foi adicionado 1 ml de ciclohexano para dar um sólido, que foi filtrado e seco para proporcionar 65 mg (22%) do composto 118. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 388.28; C25H42NO2. Síntese do Composto 119

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (200 mg, 0,53 mmol) foi posta em reacção com N- propiletilenodiamina (60 μΐ, 0,49 mmol) para dar 99 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HC1 para dar 47 mg (20%) do composto 119. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 419,32; ¢26^7^(¾. Síntese do Composto 120

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com N,N-dimetiletilenodiamina (65 μΐ, 0,61 mmol) para dar 93 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HC1 para dar 77 mg (2 9%) do composto 120 como um 105 sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 405,28; C25H45N2O2. Síntese do Composto 121

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com piperazina (52 mg, 0,61 mmol) para dar 33 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 200 μΐ de ácido acético durante 1 hora e foi recuperada duas vezes e concentrada a partir de porções de 1 ml de tolueno. O resíduo foi triturado em 1 ml de ciclohexano, filtrado e seco para dar 39 mg (14%) do composto 121. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 4 03,23; C25H43N2O2. Síntese do Composto 122

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com etanolamina (33 μΐ, 0,61 mmol) para dar 136 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HC1 para dar 124 mg (50%) do composto 122 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 378,19; C23H40NO3. Síntese do Composto 123

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com 5-amino-l-pentanol (63 mg, 0,61 mmol) para dar 129 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HC1 para dar 65 mg (24%) do composto 123 como um 106 sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 420,25; C26H46NO3. Síntese do Composto 124

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com 2-(2-aminoetilamino) etanol (62 μΐ, 0,61 mmol) para dar 90 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HC1 para dar 7 9 mg (28%) do composto 124 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 421,24; C25H45N2O3. Síntese do Composto 125

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (200 mg, 0,53 mmol) foi posta em reacção com m-toluidina (52 μΐ, 0,49 mmol) para dar 95 mg da amina

intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HCl para dar 43 mg (19%) do composto 125. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 424,23; C28H42N02. Síntese do Composto 126

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com 4-aminofenol (67 mg, 0,61 mmol) para dar 138 mg da amina

intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HCl para dar 41 mg (14%) do composto 126. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 426, 18; C27H4oN03. 107 Síntese do Composto 127

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com sulfanilamida (105 mg, 0,61 mmol) para dar, após purificação usando cromatografia radial, 24 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi tratada com 75 μΐ da solução de HC1 para dar 23 mg (7%) do composto 127. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 489,17; C27H41N2O4S.

Sintese do Composto 128

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com 3-aminometilpiridina (62 μΐ, 0,61 mmol) para dar 108 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi posta em reacção com 1 ml de ácido acético a 80% a 40°C durante 1 hora. A mistura reaccional foi concentrada e recuperada duas vezes e concentrada a partir de porções de 1 ml de tolueno. O resíduo foi triturado em 1 ml de ciclohexano, filtrado e seco para dar 117 mg (41%) do composto 128. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH40Ac 10 mM em 4:1 água e MeCN) 425,24; C27H41N2O2. Síntese do Composto 129

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 112, a cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol) foi posta em reacção com histamina (68 mg, 0,61 mmol) para dar 120 mg da amina intermediária. A amina intermediária foi posta em reacção com 1 ml de ácido acético a 80% a 40°C durante 1 hora. A mistura reaccional foi concentrada e recuperada duas vezes e concentrada a partir de porções de 1 ml de tolueno. O resíduo foi triturado 108 em 1 ml de ciclohexano, filtrado e seco para dar 128 mg (38%) do composto 129. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 428,23; C26H42N3O2. EXEMPLO 14

CONVERSÃO DE 3-AMINO EM 3-ACILAMINO EM ESTERÓIDE

Os análogos da amida e sulfonamida podem ser preparados a partir de qualquer amina relacionada com o composto 52. O Esquema 13 apresenta a síntese da amida 131. A acetilação da amina 52 em CH2CI2, usando cloreto de acetilo e resina ligada a dietilamina deu a amida 130. O tratamento com ácido acético a 80% removeu o grupo acetonido dando a dihidroxiamida 131.

Esquema 13

i) cloreto de acetilo, PS-DIEA, CH2C12; PS-Trisamina; ii) ácido acético a 80%.

Sintese do Composto 130

Uma solução da amina 52 (100 mg, 0.28 mmol) , cloreto de acetilo (50 μΐ, 0.70 mmol), 440 mg da resina PS-DIEA e 2.4 ml de CH2CI2 foi agitada a temperatura ambiente durante 16 horas. A resina foi filtrada e 0 filtrado foi incubado durante 2 horas com 260 mg da resina PS-Trisamina. A resina foi filtrada e 0 filtrado foi concentrado. A purificação usando cromatografia radial proporcionou 69 mg (62%) do composto 130. 109 Síntese do Composto 131

Uma solução da amida 130 (69 mg, 0,17 mmol) e 1 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 1 hora. A mistura reaccional foi recuperada duas vezes e concentrada a partir de 5 ml de tolueno, uma vez a partir de 5 ml de MeOH e uma vez a partir de 1 ml de acetona e 5 ml de hexanos para dar 62 mg (62%) do composto 131 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 384.16; C22H35NNa03, 362.20; C22H36N03, 344.18, C22H34N02. Síntese do Composto 132

Usando o procedimento descrito para a síntese do composto 130, a amina 52 (88 mg, 0,24 mmol) foi posta em reacção com cloreto de benzoílo (65 μΐ, 0.56 mmol) para dar 64 mg da amida intermediária. Uma solução da amida intermediária e 2 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 1 hora. A mistura reaccional foi recuperada duas vezes e concentrada a partir de 5 ml de tolueno, uma vez a partir de 5 ml de MeOH e uma vez a partir de 1 ml de acetona e 5 ml de hexanos para dar 55 mg (55%) do composto 132 como um sólido branco (consultar a tabela 3) . LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 446, 18; C27H37NNa03, 424,29; C27H38NO3, 406, 19, C27H36N02 . Síntese do Composto 133

Usando 0 procedimento descrito para a síntese do composto 130 , a amina 52 (100 mg, 0,28 mmol) foi posta em reacçao com cloreto de isopropilsulfonilo (63 μΐ, 0.56 mmol) para dar 38 mg da sulfonamida intermediária. Uma solução da sulfonamida intermediária e 1,5 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40 110 °c durante 1 hora. A mistura reaccional foi recuperada duas vezes e concentrada a partir de 5 ml de tolueno, uma vez a partir de 5 ml de Me OH e uma vez a partir de 1 ml de acetona e 5 ml de hexanos para dar 35 mg (29%) do composto 133 como um sólido creme (consultar a tabela 3). LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 426, 14; C23H40NO4S. Síntese do Composto 134

Usando 0 procedimento descrito para a síntese do composto 130, a amina 52 (100 mg, 0,28 mmol) foi posta em reacção com cloreto de benzenossulfonilo (90 μΐ, 0.70 mmol) para dar 105 mg da sulfonamida intermediária. Uma solução da sulfonamida intermediária e 2 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 40°C durante 5 horas. A mistura reaccional foi recuperada duas vezes e concentrada a partir de 5 ml de tolueno, uma vez a partir de 5 ml de MeOH e uma vez a partir de 1 ml de acetona e 5 ml de hexanos para dar 83 mg (65%) do composto 134 como um sólido branco (consultar a tabela 3). LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 482,11; C26H37NNa04S, 477,17; C26H41N2O4S, 460,15, C26H38N04S. EXEMPLO 15

ESTERÓIDE 3-ACILMIOBIOTINA-6,7-HIDROXI-17-ETILIDENO O Esquema 14 apresenta a síntese da amida 135. A reacção da amina 83 com trietilamina e uma versão solúvel em água do éster de biotina N-hidroxisuccinimida em metanol e água deu 0 análogo da amida biotinilada 135. 111

Esquema 14

Jl AcO»«

OH ÔH m i) Sulfo-NHS-biotina, Et3N, MeOH, água Síntese do Composto 135

Uma solução do composto 83 (97 mg, 0.25 mmol), EtsN (104 μΐ, 0.75 mmol), sulfo-NHS-biotina (120 mg, 0.27 mmol), 2.5 ml de MeOH e 2.5 ml de água foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi concentrada e purificada usando cromatografia de coluna de fase reversa com 5% de água/MeOH para proporcionar 89 mg (64%) do composto 135 como um sólido creme. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAC 10 mM em 4:1 água e MeCN) 560,30/ C31H50N3O4S. EXEMPLO 16

ESTERÓIDE 3-UREIA-6,7-HIDROXI-17-METILIDENO

Qualquer uma das aminas relacionadas com o composto 52 pode ser posta em reacção com isocianatos ou isotiocianatos para dar compostos com as funcionalidades ureia ou tioureia. Os compostos 136, 137 e 138 são exemplos de ureias que foram sintetizados usando os métodos apresentados no Esquema 15 (consultar a Tabela 3) . 112

Esquema 15

i) isocianato de fenilo, PS-Trisamina, CH2Ci ; ii) ácido acético a 80%. Síntese do Composto 136

Uma solução da amina 52 (100 mg, 0.28 mmol), isocianato de fenilo (76 μΐ, 0.70 iranol) e 2.4 ml de CH2C12 foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A solução foi incubada durante 2 horas com 260 mg da resina PS-Trisamina. A resina foi filtrada e o filtrado foi concentrado, a purificação usando cromatografia radial deu 95 mg (71%) do composto 136. Síntese do Composto 137

Uma solução da ureia 136 (95 mg, 0,20 mmol) e 2 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 80°C durante 2 horas. A mistura reaccional foi recuperada e concentrada a partir de 5 ml de tolueno, a partir de 5 ml de MeOH e a partir de 5 ml de hexanos. A purificação usando cromatografia radial com eluição com 95:5:2 CH2C12:MeOH:Et3N proporcionou 40 mg (33%) do composto 137. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 461.18; C27H38N2Na03, 439.22; C27H39N203, 421.25; C27H37N202 . Síntese do Composto 138

Usando o procedimento descrito para a síntese do composto 137, a amina 52 (100 mg, 0,28 mmol) foi posta em reacção com isocianato de propilo (52 μΐ, 0.56 mmol) para dar 72 mg da ureia 113 intermediária. Uma solução da ureia intermediária e 2 ml de ácido acético a 80% foi aquecida a 80°C durante 2 horas. A mistura reaccional foi recuperada duas vezes e concentrada a partir de 5 ml de tolueno, uma vez a partir de 5 ml de MeOH e 5 ml de hexanos para proporcionar 51 mg (45%) do composto 138 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 427.21; C24H4oN2Na03, 405.25; C24H41N2O3. EXEMPLO 17

ESTERÓIDE 3-AMINO-6,7-HIDROXI-17-DIMETIL INSATURADO

Qualquer um dos compostos relacionado com os compostos 88 ou 89 pode sofrer rearranjo usando 0 método apresentado no Esquema 16. O tratamento do composto 88 com uma solução a 50°C de ácido hidroclórico em metanol e água removeu 0 grupo de protecção acetonido, facilitou a migração do grupo 18-metil para C17 e formou 0 sal de cloreto de amónio 139. O tratamento do composto 89 com as mesmas condições também deu o composto 139. Os compostos de exemplo 140-148 foram sintetizados usando o método apresentado no Esquema 16 (consultar a Tabela 4).

Esquema 16

i) HC1, água, metanol, 50°C. 114

Sintese do Composto 139

Uma solução do composto 88 (300 mg, 0.834 mmol), 4 gotas de HC1 concentrado, 2 ml de metanol e 2 ml de água foi aquecida a 50°C durante 72 horas. A mistura reaccional foi concentrada e o resíduo foi recuperado duas vezes em 5 ml de metanol e concentrado. O resíduo foi recuperado em 2 ml de metanol, diluído com 15 ml de acetona e concentrado. O resíduo foi triturado em 5 ml de acetona, filtrado e seco para dar 286 mg (96%) do composto 139 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 320,20/ C20H34NO2. Síntese do Composto 139

Usando o mesmo procedimento como descrito para a síntese do composto 139 a partir do composto 88, 0 composto 89 foi posto a reagir para dar 145 mg (77%) do composto 139 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 320,20/ C20H34NO2. Síntese do Composto 140

Usando 0 procedimento descrito para a síntese do composto 99, a amina 88 (200 mg, 0,55 mmol) foi posta em reacção com m- tolualdeído (90 μΐ, 0,61 mmol). A purificação usando cromatografia radial com eluição com 5% de MeOH/EtOAc deu 127 mg da amina intermediária. Uma solução da amina intermediária, 4 gotas de HC1 concentrado, 1 ml de MeOH e 1 ml de água foi aquecida a 50 °C durante 20 horas. A mistura reaccional foi recuperada e concentrada três vezes a partir de 5 ml de MeOH e uma vez a partir de 5 ml de acetona para dar 74 mg (30%) do composto 140 como uma espuma creme. LC/MS (infusão directa, 115 electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 424,24; C28H42NO2. Síntese do Composto 141

Usando 0 procedimento descrito para a síntese do composto 99, a amina 88 (200 mg, 0,55 mmol) foi posta em reacção com 3,4-difluorobenzaldeído (67 μΐ, 0, 61 mmol). A purificação usando cromatografia radial com eluição com 30% de EtOAc/hexanos deu 88 mg da amina intermediária. Uma solução da amina intermediária, 4 gotas de HC1 concentrado, 1 ml de MeOH e 1 ml de água foi aquecida a 50°C durante 20 horas. A mistura reaccional foi recuperada e concentrada três vezes a partir de 5 ml de MeOH e uma vez a partir de 5 ml de acetona para dar 73 mg (28%) do composto 141 como uma espuma creme. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH40Ac 10 mM em 4:1 água e MeCN) 446, 42; C27H38F2NO2. Síntese do Composto 142

Usando 0 procedimento descrito para a síntese do composto 59, a amina 49 (200 mg, 0,55 mmol) foi posta em reacção com 3,4- dimetoxibenzaldeído (70 μΐ, 0,61 mmol). A purificação usando cromatografia radial com eluição com 40% de EtOAc/hexanos deu 67 mg da amina intermediária. Uma solução da amina intermediária, 4 gotas de HC1 concentrado, 1 ml de MeOH e 1 ml de água foi aquecida a 50°C durante 20 horas. A mistura reaccional foi recuperada e concentrada três vezes a partir de 5 ml de MeOH e uma vez a partir de 5 ml de acetona para dar 43 mg (16%) do composto 142 como um sólido amarelo. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 470,27; C29H44N04. 116 Síntese do Composto 143

Uma solução do composto 28 (200 mg, 0,540 mmol) , 4 gotas de HC1 concentrado e 3 ml de água foi aquecida a 50°C durante 72 horas. A mistura reaccional foi concentrada e o resíduo foi recuperado duas vezes em 5 ml de metanol e concentrado. O resíduo foi recuperado em 3 ml de metanol, diluído com 20 ml de acetona e concentrado. O resíduo foi triturado em 10 ml de acetona, filtrado e seco para dar 17 9 mg (90%) do composto 143 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 334,20; C21H36NO2. Síntese do Composto 144 O isopropóxido de titânio (IV) (270 μΐ, 0,92 mmol) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente da cetona 108 (250 mg, 0,67 mmol), anilina (56 μΐ, 0.61 mmol) e 1,5 ml de THF sob árgon. Após 12 horas, foi adicionada uma solução de NaBH4 (65 mg, 1,7 mmol) em 2,3 ml de EtOH e a reacção foi continuada durante mais 8 horas. A reacção foi temperada pela adição de 0,5 ml de água e filtrada para remover um precipitado branco. A solução foi carregada numa coluna de 600 mg da resina MP-TsOH e eluída com 9 ml de MeOH e depois 9 ml de NH3 2M em MeOH. A fracção NH3/MeOH foi concentrada e o resíduo foi recuperado em 4 ml de THF e tratado com 500 mg da resina PS-benzaldeído e filtrada para remover qualquer anilina residual. A solução foi concentrada e 0 resíduo foi recuperado em 2 ml de 9:1 THF e água e 100 μΐ de HC1 concentrado. Após agitação à temperatura ambiente durante a noite a mistura reaccional foi concentrada. O resíduo foi triturado em 1 ml de ciclohexano, filtrado e seco para dar 62 mg do composto 144 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, 117 electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 410,03; C27H40NO2. Síntese do Composto 145

Usando os procedimentos descritos para a síntese do composto 144, 0 composto 108 (250 mg, 0.67 mmol) foi posto a reagir com 3-(trifluorometil)anilina. O produto intermediário foi purificado usando cromatografia radial e depois posto a reagir com 100 μΐ de HC1 concentrado em 2 ml de 9:1 THF e água. Após agitação à temperatura ambiente durante a noite a mistura reaccional foi concentrada e 0 resíduo foi triturado em 1 ml de ciclohexano, filtrado e seco para proporcionar 23 mg do composto 145 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 477, 94; C28H39F3NO2.

Sintese do Composto 146 O isopropóxido de titânio (IV) (216 μΐ, 0,73 mmol) foi adicionado a uma solução à temperatura ambiente da cetona 108 (200 mg, 0,54 mmol), benzilamina (53 μΐ, 0,49 mmol) e 1,2 ml de THF sob árgon. Após 12 horas, foi adicionada uma solução de NaBH4 (52 mg, 1,4 mmol) em 1,7 ml de EtOH e a reacção foi continuada durante mais 6 horas. A reacção foi temperada pela adição de 1 ml de água e filtrada para remover um precipitado branco. A solução foi diluída com 70 μΐ de CH2CI2, lavada com 10 ml de água e 20 ml de solução salina, seca sobre MgS04, filtrada e concentrada. A purificação usando cromatografia radial com eluição consecutivamente com 20% de EtOAc/hexanos, EtOAc e 95:5:2 CH2Cl2/MeOH/EtsN proporcionou 127 mg da 3a-amina intermediária e 26 mg da 3P~amina intermediária. Uma solução de 127 mg da 3a-amina intermediária, 1 ml de 9:1 THF e água e 0.1 ml de HC1 118 concentrado foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi concentrada, o resíduo foi recuperado em 5 ml de MeOH e concentrado. 0 resíduo foi triturado em 1 ml de ciclohexano, filtrado e seco para dar 118 mg (95%) do composto 146 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 424,20/ C28H42NO2. Síntese do Composto 147

Uma solução de 2 6 mg da 3p-amina intermediária, cuja a síntese foi descrita na síntese do composto 146, 1 ml de 9:1 THF e água e 0.1 ml de HC1 concentrado foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi concentrada, o resíduo recuperado em 5 ml de MeOH e concentrado. O resíduo foi triturado em 1 ml de ciclohexano, filtrado e seco para dar 26 mg (100%) do composto 147 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 424,21; C28H42N02. Síntese do Composto 148

Uma solução do composto 78 (63 mg, 0,18 mmol) , 4 gotas de HC1 concentrado, 1 ml de metanol e 1 ml de água foi aquecida a 50 °C durante 48 horas. A mistura reaccional foi concentrada e 0 resíduo foi recuperado duas vezes em 5 ml de metanol e concentrado. 0 resíduo foi recuperado em 2 ml de hexanos, concentrado e seco durante 2 horas usando um aparelho de secagem Abderhalden com refluxo da acetona para dar 69 mg (100%) do composto 148 como um sólido branco. LC/MS (infusão directa, electrospray +ve, NH4OAc 10 mM em 4:1 água e MeCN) 348,20; C22H38NO2. 119

Tabela 1

Composto 3a- ou 3 β-NH2 Ri r2 r3 HA Hex IC50 (μΜ) Cálcio (% inibição a 20 μΜ) 49 a ch3 H H HCI 11,0 26,8 53 a H H H AcOH 17,6 -0,8 54 a H H H HCI 16,1 19,8 64 a ch3 F H HCI 14,4 6,7 69 a H co2ch3 H AcOH 21,2 11,2 28 β ch3 H H HCI 6,8 29,0 83 β ch3 H H AcOH 7,7 30,3 89 β H H H AcOH 11,5 15,0 95 β ch3 F H HCI 13,5 11,2 78 a H H ch3 nenhum 20,1 5,3 79 a H H ch3 HCI 18,4 9,1 80 a H H ch3 AcOH 10,7 7,4

Tabela 2 HA f'"" ÕH Ri ι\λ *OE Composto 3a- ou 3β-nh2 Ri r2 HA Hex IC5o (μΜ) Cálcio(% inibição a 20 μΜ) 70 a 0 0 AcOH ND 7.0 72 a OH H AcOH ND 10.3 96 β CH3CH2 H HCI 7.8 47.9 97 a CH3CH2 H HCI 9.3 43.0 120

Tabela 3 K (V i rh ÕH Composto 3a-ou 3β-ΝΗ2 Ri r2 Rs Hex IC50 (μΜ) Cálcio (% inibição a 20μΜ) 131 α Η Η ch3co 14.1 9.9 132 α Η Η c6H5co 10.0 19.6 133 α Η Η (ch3)2chso2 15.9 13.8 134 α Η Η CgH5S02 16.7 25.1 135 β ch3 Η _ H „ 0 •"sO 15.1 37.3 137 α Η Η C6H5NHCO 14.8 13.0 138 α Η Η CH3 (CH2)2NHCO 15.0 9.0

Tabela 4 HC! HH" R; 0¾ Composto 3a-ou 3β- nm2 Ri r2 r3 r4 Hex IC50 (μΜ) Cálcio (% Inibição a 20 μΜ) 139 β ch3 ch3 H H 10.3 26.3 140 α ch3 ch3 H 3- (CH3)C6H4CH2 10.2 21.5 141 α ch3 ch3 H 3,4-(F)2C6H3CH2 9.4 36.3 142 α ch3 ch3 H 3,4- (CH30) 2C6H3CH2 15.9 13.8 143 β ch3 ch3ch2 H H 8.6 22.6 144 α e β ch3 ch3ch2 H c6h5 6.9 13.0 145 α e β ch3 ch3ch2 H 3- (CF3) C6H4 22.0 -0.2 146 α ch3 ch3ch2 H c6h5ch2 9.0 41.7 147 β ch3 ch3ch2 H c6h5ch2 18.1 36.3 148 α ch3 ch3 ch3 H 29.2 6.6 121

Tabela 5 - ,rH »A/\A , Κ* ^ : ’ΟΗ ÔH Composto R HA Hex IC50 (μΜ) cálcio (% inibição a 20 μΜ) 110 ( Η V_y AcOH 10.9 39.7 111 7”“\ Q_/N HC1 9.3 53.1 113 ch3nh HC1 9.8 45.0 114 CH3(CH2)2NH HC1 10.2 37.9 115 ch3 (ch2) 4nh HC1 11.1 40.0 116 C5H9NH AcOH 9.6 60.9 117 CeHnNH AcOH 6.6 42.2 118 rX ,N X AcOH 11.0 41.8 119 ch3 (ch2) 2nh (ch2) 2nh 2HC1 6.1 54.5 120 (CH3)2N(CH2)2NH 2HC1 9.1 44.0 121 r\ HN N N_1 AcOH 14.4 42.3 122 HOCH2CH2NH HC1 12.3 31.4 123 hoch2 (CH2) 4nh HC1 16.7 12.8 124 hoch2ch2nhch2ch2nh 2HC1 ND 21.0 125 3- (CH3) C6H4NH2 HC1 39.4 5.7 126 4-(HO)C6H4NH HC1 9.7 45.0 127 4- (H2NS02) C6H4NH HC1 10.1 29.4 128 rrm N AcOH 10.5 41.0 129 2AcOH N/A 13.8 122

Tabela 6 HA , der _ÔH_ Composto R HA Hex IC5o (μΜ) cálcio (% inibição a 20 μΜ) 100 4-( (CH3)2CH)C6H4 AcOH 18.2 33.2 101 2-(F)C6H4 AcOH 10.3 16.3 102 3-(CF3)C6H4 AcOH 10.0 9.5 103 2-(CH30)C6H4 AcOH 11.1 23.7 104 4-(CF30)C6H4 AcOH 9.5 30.3 105 3- (C6H50)C6H4 AcOH 22.5 10.2 106 3-(N02)C6H4 nenhum 8.8 8.1 107 3-C5H4N 2HC1 17.2 11.6

EXEMPLOS VANTAJOSOS EXEMPLO A

EFEITO DOS COMPOSTOS SELECIONADOS NA INFLAMAÇÃO DO PULMÃO INDUZIDA POR ALERGÉNIOS A capacidade de um composto para inibir a acumulação induzida por alergénios de células inflamatórias tais como eosinófilos e neutrófilos no fluido de lavagem obtido a partir de animais sensibilizados é indicativo desses compostos com actividade anti-asma. Em particular, este sistema modelo é útil na avaliação dos efeitos de um composto de teste no tratamento da resposta na fase tardia da asma, quando a inflamação do pulmão e a segunda fase da broncoconstrição é evidente. 0 teste é conduzido como se segue.

Ratos machos Brown Norway são sensibilizados para ovalbumina por injecção intraperitoneal única de 1 mg de ovalbumina adsorvida em 100 mg AI(OH)3 (alum) em 1 ml solução salina estéril 123 (ratos como controlo salino recebem apenas solução salina estéril) no dia 1 e deixados a sensibilizar até ao dia 21. Os compostos de teste são dados oralmente q.d. durante três dias antes de testar (dias 19, 20, 21), e um dia após testar (dia 22), com a terceira dose dada 2 horas antes de testar, e a dose do quarto dia dada 24 horas após testar (volume = 300 μΐ/dose) . Os ratos são testados com ovalbumina a 0.5% em solução salina qerada usando um nebulizador Devillbis durante 60 min no dia 21. 48 h após o teste, os animais são sacrificados com uma overdose de pentobarbitol sódio introduzido intraperitonealmente e os pulmões são lavados com 2x7 ml solução salina fosfatada tamponada fria. O fluido de lavaqem recuperado é colocado em qelo. O fluido de lavagem broncoalveolar é centrifugado e o sobrenadante removido. O depósito é ressuspendido em solução salina fosfatada tamponada a 4°C. São preparadas e coradas citospinas para a diferenciação e enumeração dos tipos células.

Os efeitos de protecção dos vários compostos de teste sobre os alergénios que induzem inflamação pulmonar estão resumidos nas Tabelas 7 e 8. A actividade da dose resposta dos compostos seleccionados é apresentada na Tabela 9. O composto de teste foi administrado em 300 μΐ de óleo de milho (Tabelas 7 e 8) ou água (Tabela 9), que foram usados como veiculos. Os animais de controlo receberam 300 μΐ de óleo de milho ou apenas água, i.e., sem fármaco. Os valores nas Tabelas 7, 8 e 9 representam a percentagem de inibição da acumulação relativa de leucócitos dos animais de controlo. Um valor negativo nas Tabelas 7, 8, ou 9 indica uma exacerbação dos efeitos sobre o animal de controlo. 124

Tabela 7 EFEITO DOS COMPOSTOS DE TESTE (5 MG/KG/DIA DURANTE 4 DIAS, P.O.) NA ACUMULAÇÃO INDUZIDA POR OVALBUMINA NAS CÉLULAS INFLAMATÓRIAS NO FLUIDO DE LAVAGEM DO PULMÃO OBTIDO A PARTIR DE RATOS BROWN NORWAY SENSIBILIZADOS Composto % inibição de eosinófilos % inibição de neutrófilos % inibição de linfócitos 83 67 34 38 97 40 52 56 96 -9 40 19 64 62 70 81 89 57 60 64 28 85 87 124 53 24 57 13 95 14 45 30 49 52 36 73 135 20 58 107

Tabela 8 EFEITO DOS COMPOSTOS SELECCIONADOS (1 MG/KG/DIA DURANTE 4 DIAS, P.O.) NA ACUMULAÇÃO INDUZIDA POR OVALBUMINA NAS CÉLULAS INFLAMATÓRIAS NO FLUIDO DE LAVAGEM DO PULMÃO OBTIDO A PARTIR DE RATOS BROWN NORWAY SENSIBILIZADOS Composto % inibição de eosinófilos % inibição de neutrófilos % inibição de linfócitos 142 -131 -1 -42 54 -82 -19 -7 107 -122 23 -28 124 -55 -76 -26 129 -296 -114 -71 146 8 24 -27 147 40 58 36 131 16 57 21 138 -52 35 33 133 -43 40 28 125

Tabela 9 EFEITO DEPENDENTE DA DOSE DOS COMPOSTOS SELECCIONADOS (DOSAGEM MÚLTIPLA, L DIAS QUANDO, P .0.) NA ACUMULAÇÃO INDUZIDA POR OVALBUMINA NAS CÉLULAS INFLAMATÓRIAS NO FLUIDO DE LAVAGEM DO PULMÃO OBTIDO A PARTIR DE RATOS BROWN NORWAY SENSIBILIZADOS Análogo \ inibição de % inibição de \ inibição de eosinófilos neutrófilos linfócitos mg/kg 1 0.3 0.1 0.03 1 0.3 0.1 0.03 1 0.3 0.1 0.03 89 71 80 35 - 66 72 25 - 6 70 2 - 28 60 71 29 5 41 66 -10 -26 70 85 50 -5 139 42 41 46 - 63 62 42 - 56 34 19 - 143 48 29 28 - 64 25 57 - -22 -37 -43 -

EXEMPLO B

EFEITO DO COMPOSTO 83 NO EDEMA. DA ORELHA DE RATINHO INDUZIDO POR IRRITANTE

Diversos ratinhos são identificados apenas pela colocação duma marca com um marcador indelével na sua cauda. Os ratinhos são doseados oralmente com 15 mg/kg do composto de teste em 100 μΐ de β-ciclodextrina a 45% em solução salina. Os ratinhos são anestesiados brevemente com halotano a 2%, e é aplicado 2 μρ de 13-acetato de 12-miristato de forbol em 25 μΐ de acetona ao lado interno e externo da orelha esquerda do ratinho. É aplicada acetona à orelha direita do ratinho do mesmo modo para servir como um veiculo de controlo. Os animais de controlo receberam o mesmo tratamento mas sem qualquer composto de teste. Após 3 horas, os ratinhos são sacrificados por deslocação cervical, e uma biopsia de tamanho padrão é excisada a partir das orelhas e pesada para o mais próximo de 1/10 de um mg. Os dados são analisados tomando a diferença de cada orelha esquerda a partir da orelha direita, e depois calculado a % de inibição do edema por (((Rx médio/irritante médio))xlOO)-100.

Os compostos da presente invenção demonstram efeitos de protecção sobre irritantes no edema induzido na orelha do 126 ratinho. Por exemplo, o composto 83 inibe o edema na orelha do ratinho induzido por irritante em 38% quando comparado com os animais de controlo.

EXEMPLO C EFEITO DOS COMPOSTOS NA LIBERTAÇÃO DE HEXOSAMINIDASE A PARTIR DUMA LINHA CELULAR DE MASTÓCITOS DE RATOS (RBL-2H3)

Os efeitos anti-alérgicos dum composto da presente invenção foi avaliado por medição dos seus efeitos na secreção induzida pelo antigénio de hexosaminidase a partir da linha celular de mastócitos de ratos sensibilizados passivamente. A capacidade dum composto de teste para inibir a libertação de conteúdos granulares de células de mastócitos, por exemplo, histamina e hexosaminidase, é indicativo da actividade anti-alérgica e/ou anti-asma do composto. A hexosaminidase é libertada a partir de grânulos de células de mastócitos juntamente com histamina e outros mediadores durante o teste de antigénio. 0 teste é realizado como se segue.

As células RBL-2H3 são crescidas em cultura e sensibilizadas passivamente durante 1 hora a 37°C para dinitrofenol (DNP) usando anti-humano-DNP (IgE). As células são incubadas com o composto de teste durante 30 minutos a 37°C e estimuladas com 0.5 μρ/ιηΐ DNP-HSA (antigénio) durante 30 minutos. São removidas aliquotas do sobrenadante e usadas para medir a quantidade de hexosaminidase libertada durante o teste com o antigénio. A quantidade da hexosaminidase presente no sobrenadante é determinada colorimetricamente por monitorização do metabolismo enzimático de p-nitrofenil-N-acetil-p-D-glucosaminida (p-NAG) durante um período de 60 minutos a 405 nm. O efeito de cada composto de teste é determinado como uma percentagem da resposta induzida por 127 antigénio (menos libertação anterior) obtida na presença de apenas DMSO. Estes valores são usados para determinar os graus de inibição da libertação da hexosaminidase induzida por antigénio a partir das células.

Os compostos da presente invenção demonstram a capacidade para inibir a libertação da hexosaminidase em resposta à estimulação por antigénio. Os compostos foram testados a 0.3, 3, 10 e 30 μΜ, e o IC50 foi calculado. Este dado está resumido nas Tabelas 1-6. Por exemplo, o composto 119 a 6.1 μΜ inibe a libertação da hexosaminidase em 50% como resposta ao estimulo do antigénio.

EXEMPLO D

ESTABILIDADE METABÓLICA DOS COMPOSTOS SELECCIONADOS EM FRACÇÕES S9 HUMANAS A eficácia terapêutica dum composto de teste pode estar geralmente directamente relacionada com a sua estabilidade metabólica in vivo. A maioria dos fármacos marcados conhecidos é metabolizada por um grupo de enzimas conhecido como enzimas P450. A fracção S9 de fígado humano contém todas as enzimas P450 e também enzimas citoplasmáticas que podem estar envolvidas no metabolismo de novas entidades químicas. O metabolismo in vitro que usa fracções S9 humanas é um ensaio padrão para avaliar a estabilidade metabólica relativa de novos compostos. O teste é realizado como se segue.

Os reagentes são descongelados em gelo e combinados para fazer uma Mistura Principal como se segue: Fosfato de potássio (100 mM, pH 7), G6P (0.25 mM) , G6PDH (2 U/ml) , NADPH (1 mM), UDP (0.25 mM), APPS (0.25 mM), e fracção S9 (2 mg/ml). Um volume de 498 μΐ da Mistura Principal foi dispensada em cada tubo de 128 microcentrifuga. Um volume de 2 μΐ de 2.5 mM do composto de teste (concentração final de ΙΟμΜ) é dispensada no centro da tampa do tubo apropriado, e as tampas gentilmente fechadas para prevenir misturas. A combinação sincronizada do composto de teste e da mistura principal é conseguida pela inversão simultânea dos tubos de dez vezes, que são depois incubados a 37°C e agitados a 150 rpm durante o tempo de incubação apropriado. Enquanto a incubação está a decorrer, todas as amostras dos tempos 0 são misturadas individualmente com inversão por três vezes seguida pela adição imediata de 500 μΐ de acetonitrilo arrefecido em gelo com inversão por três vezes para parar a reacção. Imediatamente após cada 15 minutos e 30 minutos de incubação completada, é adicionado acetonitrilo arrefecido em gelo a cada tubo e os tubos misturados três vezes por inversão. Todos os tubos de amostra são incubados a -80°C durante um minimo de 15 minutos, descongelados e novamente misturados por inversão. São transferidas alíquotas de 650 μΐ tubos com sistema de filtro Chromatographic Specialties micro-spin (membrana de nylon 0.2 pm, C618505) e centrifugados a 13000 rpm durante 48 segundos. Os filtrados das amostras são armazenados a -80°C.

Os filtrados das amostras são analisados em LCMS, e a percentagem remanescente após 15 e 30 minutos de incubação é calculada relativamente ao tempo 0 de incubação. A estabilidade metabólica dos vários compostos está resumida na Tabela 10 com a percentagem remanescente após 15 ou 30 minutos de incubação com fracções de S9 de figado humana. 129

Tabela 10 ESTABILIDADE METABÓLICA DOS COMPOSTOS SELECCIONADOS APÓS 15 E 30 MINUTOS DE INCUBAÇÃO COM FRACÇÕES S9 DE FÍGADO HUMANO APRESENTADA COMO A PERCENTAGEM REMANESCENTE DA CONCENTRAÇÃO I NICIAL APÓS 0 MINUTOS DE INCUBAÇÃO Composto % que resta após % que resta após 15 min 30 min 83 92±19 91+21 97 94±10 89+12 96 92±19 94+21 89 100+17 98 + 16 28 100 + 6 104+12 49 93+6 85+8 64 104+4 88 + 5 139 109+26 100+10 143 100+3 99+10 146 82 + 6 63+9 107 84+5 62 + 6 142 80 + 11 55+2 69 73+24 63+6 104 53+10 56+18 141 100 + 9 26+4 134 85+54 36+15 137 93 + 31 71 + 17 138 71 + 4 65+65 132 60 + 17 40 + 9 79 67 + 6 61 + 14

EXEMPLO E

SOLUBILIDADE DOS COMPOSTOS SELECCIONADOS NAS FORMULAÇÕES FISIOLOGICAMENTE COMPATÍVEIS

Os compostos da presente invenção exibem boa solubilidade em água. Por exemplo, o composto 83 é solúvel em água a 225 mg/ml. O composto 83 substituído com um hidroxilo em C3 tem uma solubilidade em água de menos de 60 μg/ml. Os compostos 28 e 89 têm solubilidades à temperatura ambiente de ~30 mg/ml, que pode ser significativamente aumentada por aquecimento. Estas 130 descobertas inesperadas indicam que estes compostos 3-amino podem ser prontamente formulados em composições terapêuticas.

EXEMPLO F

EFEITO DOS COMPOSTOS DE TESTE SELECCIONADOS NO FLUXO DE CÁLCIO INDUZIDO POR ANTIGÉNIO O aumento da concentração citoplasmática de cálcio é um acontecimento comum e crucial que segue a activação de muitos tipos de receptores da superfície celular. Aumentos do cálcio intracelular que ocorrem depois da activação agonista da hidrólise lipídica do inositol são os resultados da libertação de cálcio a partir do retículo endoplasmático e do influxo de cálcio através da membrana plasmática. Os aumentos da concentração de cálcio citosólico estão envolvidos em muitas respostas celulares importantes nos processos inflamatórios incluindo adesão, mobilidade, expressão de genes, proliferação e desgranulação. As variações nas concentrações de cálcio intracelular podem afectar as respostas celulares tanto as de curto prazo como as de longo prazo. Um método de ensaio para avaliar o impacto dum composto de teste no fluxo de cálcio é fornecido como se segue.

As células Jurkat clone E6.1 crescidas no meio RPMI suplementado com 10% de FBS e L-Glutamina 2mM são transferidas para tubos cónicos de 50mL e centrifugadas durante 5 minutos a 900 RPM para formar um depósito celular. Os sobrenadantes resultantes são descartados e cada depósito é lavado em lOmL de HBSS. As suspensões de células são acumuladas e centrifugadas durante 5 minutos a 900 RPM para formar um depósito de células. O sobrenadante resultante é descartado e o depósito é ressuspendido em HBSS para lxlO7 células/mL. A suspensão celular é transferida 131 para uma placa de petri de 20mm e incubada a 31° C, C02 a 5% durante 20 minutos.

Um volume de Fura 2AM é misturado com um volume de detergente Pluronic F127. As células são marcadas com 4μΙ, da solução de sonda para cada mL da suspensão de células. A placa de petri é embrulhada em papel de aluminio para proteger da luz e colocada num agitador de placas durante 30 minutos à temperatura ambiente.

Os passos seguintes são feitos na câmara de fluxo laminar com as luzes fluorescentes desligadas. A placa de petri é removida do agitador e a suspensão celular marcada é transferida para um tubo cónico de 15mL e lavada duas vezes com HBSS como acima. O depósito celular é ressuspendido em 12mL de HBSS e deixado embrulhado em papel de aluminio durante 30 minutos à temperatura ambiente. A suspensão celular marcada é colocada por aliquotas (100 μΗ/poço) numa placa Dynex de cultura de tecidos opaca branca de 96 poços. São adicionados 50μΗ de cada amostra de teste aos poços apropriados e são incubados em conjunto durante 10 minutos a 37°C no leitor de placas Wallac 1920 Victor™ (as amostras de teste são preparadas em HBSS a 20mM, a concentração final é 20μΜ). Os compostos seleccionados foram testados quanto à actividade relacionada com a dose. As amostras de teste e o activador (anti-CD3 mAb com a concentração final de 4μg/mL,

PharMingen) são adicionados manualmente (50μ]1), de modo que o tempo minimo para adquirir o ponto dos primeiros dados após estimulação é aproximadamente 30 segundos. A resposta do influxo de cálcio ao anti-CD3 mAb é medida como ensaio "terminal". A placa total é lida em 100 segundos usando uma cinética de 1 segundo por poço. 132 A placa é lida antes da adição de anti-CD3 para monitorizar o efeito não especifico de amostras/fármacos. A emissão fluorescente é medida a 510nm com excitação alternada entre 340 e 380 a cada segundo usando um par de filtros de excitação/emissão. Os dados a partir destes comprimentos de onda duais estão representados como uma taxa de 2 comprimentos de onda de excitações. Esta taxa é independente do corante intracelular e concentrações celulares, permitindo a comparação real entre experiências. O efeito dos compostos seleccionados sobre o fluxo de cálcio nas células Jurkat clone E6.1 para o teste de antigénio está resumido nas Tabelas 1-6. Por exemplo, o composto 116 inibiu o cálcio em 60.9% a 20 μΜ. O IC50 para o composto 119 é menor ou igual a 10 μΜ quando a actividade da dose resposta foi examinada. Isto demonstrou que o efeito substancial no fluxo cálcio será benéfico em qualquer patologia de doença para a qual o cálcio é um segundo mensageiro significativo ou molécula efectora, incluindo, mas não limitado a, isquémia/reperfusão lesões tais como AVC ou enfarte do miocárdio, doenças inflamatórias tais como asma ou alergia, distúrbios neurológicos ou musculares tais como as doença de Parkinson ou epilepsia, arritmias cardíacas, ou hipertensão.

EXEMPLO G

EFEITO DOS COMPOSTOS SELECIONADOS NAS VARIAÇÕES DA FUNÇÃO DO PULMÃO INDUZIDAS POR ALERGÉNIOS

Na asma, a resposta precoce no teste dos alergénios aéreos é caracterizada por uma broncoconstrição imediata cujos picos são 20-30 min após a exposição do estímulo e que, normalmente, se resolve após aproximadamente 2 horas. Os anti-inflamatórios não 133 são, geralmente, broncodilatadores activos e não são muito eficazes no controlo da broncoconstrição asmática aguda. Isto resulta no auxilio para a terapia de combinação para tratar tanto a broncoconstrição como a inflamação.

Os porquinhos-da-índia Cam-Hartley foram sensibilizados para a ovalbumina (OA) em grupos de 5-6 por exposição a uma solução na forma de aerossol de AO a 1% em solução salina durante 15 min em 2 dias consecutivos através dum nebulizador DeVilbiss, com uma injecção intradérmica única adicional de 3 μg de OA em solução salina no Dia 1. Os animais tiveram um pico de sensibilidade para o antigénio aproximadamente 14 dias após a exposição inicial. No Dia 14, os animais foram inicialmente anestesiados com cetamina (50 mg/kg i.p.) e xilazina (10 mg/kg i.p.), por peso, e depois mantidos com halotano a 1% administrado através dum cone nasal. A artéria carótida esquerda foi cateterizada com um tubo PE90 com 200 U/ml de heparina em solução salina. Foi feita uma traqueotomia e foi inserida uma cânula, cheia de fluido (PE 160), aproximadamente 7 cm para dentro do esófago. O animal foi posicionado num pletismografo e a traqueia ligada a um tubo traqueal de aço inox fixo na caixa do corpo. A cânula na carótida foi ligada a um transdutor de pressão para monitorizar a pressão sanguínea e taxa cardíaca. Os porquinhos-da-índia foram paralisados com brometo de pancurónio (0.8 mg/kg) e ventilados com ar numa frequência de 60 Hz e volume de respiração de 3 ml usando um ventilador Harvard para animais pequenos.

Os dados foram recolhidos por períodos de 20 segundos numa taxa de amostragem de 100 Hz num sistema de gravação fisiológico ligado a um computador que usa software fisiológico DIREC e analisados usando software ANADAT. Os valores concordância da resistência e dinâmica pulmonar foram obtidos a partir de sinais 134 de volume, fluxo e pressão de acordo com o método de Von Neeguard & Wirz (1927), usando um modelo de regressão de multi-pontos isovolumétrico para análise (Ludwig, Robatto, et al. 1991), e calculados como variações absolutas na resistência pulmonar (RL; cm H20/ml/s) ou concordância pulmonar (CDYN; ml/cm H20) . Os sinais de volume e pressão foram calibrados antes de cada conjunto de experiências seguindo-se os procedimentos padrão. Várias medições das funções pulmonares foram obtidas por um periodo de mais de 5-10 minutos para garantir uma linha de base estável, e depois os animais foram testados com OA (2% em solução salina) administrados em 6 volumes de respiração com um nebulizador aerossol com uma taxa de fluxo de 5 L/min. A função pulmonar e cardiovascular foi continuamente monitorizada ao longo da experiência, embora os dados tenham sido recolhidos em pontos de tempo específicos após o teste do antigénio (10 s, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, e 30 min).

Os compostos de teste foram administrados sob ligeira anestesia com halotano oralmente por sonda esofágica (0.1-1.0 mg/kg/dia q.d.) em 300 μΐ de polietilenoglicol-200 durante 4 dias antes do teste com a dose final administrada 2 horas antes do teste com o antigénio.

Os efeitos de protecção dos compostos de teste seleccionados na broncoconstrição induzida por alergénios estão resumidos nas Figuras 4 e 5. A duração da actividade do Composto 89 está apresentada nas Figuras 6 e 7. Os dados são apresentados como a média ± erro padrão da média. A inibição da broncoconstrição pelos compostos de teste será benéfica em qualquer doença onde a constrição aguda dos músculos lisos, em resposta ao teste com alergénios, se manifesta, tal como asma e alergia. 135

Lisboa, 14 de Maio de 2007 136

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Um composto da fórmula u 16 VX e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos, estereoisómeros, isolados ou em mistura, caracterizado por, independentemente, de cada ocorrência: R1 e R2 serem seleccionados a partir de hidrogénio, oxigénio de modo a formar grupos orgânicos nitro ou oxima, amino, -SO3-R, e tendo 1-30 carbonos e, opcionalmente, com 1-6 heteroátomos seleccionados a partir de nitrogénio, oxigénio, fósforo, silicio, r\ e enxofre, onde R pode estar numa ligação directa ao numeral 3, ou R1 e R2 podem, em conjunto com o N ao qual estão ambos ligados, formar uma estrutura heterociclica que pode ser parte de um grupo orgânico com 1-30 carbonos e, opcionalmente, com 1-6 heteroátomos seleccionados a partir de nitrogénio, oxigénio, silicio; ou R1 pode ser uma cadeia de 2 ou 3 átomos do numeral 2 de modo que -N-R1- forma parte duma estrutura bicíclica fundida ao anel A; R3 e R4 serem seleccionados a partir de ligações directas a 6 e 7 respectivamente de modo a formar grupos carbonilo, hidrogénio, ou um grupo de protecção de modo a que R3 e/ou R4 são parte do grupo de protecção hidroxilo ou carbonilo; numerais 1 até 17 cada um representa um carbono, onde os carbonos com numerais 1, 2, 4, 11, 12, 15, 16 e 17 podem ser independentemente substituídos com 1 (a) um de: =0, =C(R5)(R5), =C=C (R5) (R5), C(R5) (R5) (C(R5) (R5) )n- e - (0 (C (R5) (R5)) n0) - em que n tem um intervalo de 1 a 6 ; ou (b) dois dos seguintes, que são independentemente seleccionados: -X, -N^MR2), -R5 e -0R6; e onde os carbonos com os numerais 5, 8, 9, 10, 13 e 14 podem ser independentemente substituídos com um de -X, -R5, N(R2) (R2) ou -0R6; adicionalmente aos grupos -0R3 e -0R4 como apresentados, cada carbono 6 e 7 pode ser independentemente substituído com um de -X, -N (R1) (R2) , -R5 ou -0R6; cada anel A, B, C e D é independentemente completamente saturado, parcialmente saturado ou completamente insaturado; R5 em cada ocorrência é independentemente seleccionado a partir de radicais orgânicos Η, X, e C1-30 que podem opcionalmente conter pelo menos um heteroátomo seleccionado a partir do grupo que consiste em boro, halogéneo, nitrogénio, oxigénio, silício e enxofre; onde dois grupos R5 geminais podem em conjunto formar um anel com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados; R6 é H ou um grupo de protecção de modo que -0R6 é um grupo hidroxilo protegido, onde os grupos -OR6 vicinais podem em conjunto formar uma estrutura cíclica que protege os grupos hidroxilo vicinais, e onde os grupos 1 0 sa cr. geminais podem em conjunto formar uma estrutura cíclica que protege um grupo carbonilo; e X representa fluoreto, cloreto, brometo e iodeto; mas não inclui pregnan-β,7-diol-3-ona, 3-oxima, 6,7-diacetato (6α,7β); ácido 3-semicarbazonil helvólico; 2,4-dinitrofenil-hidrazona de helvonato de metilo; ácido 2,4-dinitrofenilhidrazona helvólico; 2,4-dinitrofenilhidrazona de helvolinato de metilo. 2
2. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por os numerais 1 até 16, cada um, representar um carbono, onde os carbonos com numerais 1, 2, 4, 11, 12, 15, e 16 podem ser independentemente substituídos com (a) um de: =0, =C(R5)(R5), =C=C (R5) (R5), C(R5) (R5) (C(R5) (R5))n- e - (0 (C (R5) (R5)) n0) - em que n tem um intervalo de 1 a 6 ; ou (b) dois dos seguintes, que são independentemente seleccionados: -X, -N(R1)(R2), -R5 e -0R6; e o numeral 17 representa um carbono substituído com (a) um de: =C (R5a) (R5a), =C=C (R5a) (R5a) , e C(R5a) (R5a) (C(R5a) (R5a))n_ em que n é um intervalo de 1 a 6 / ou (b) dois dos seguintes, que são independentemente seleccionados: -X, -N(R1)(R2), e -R5a; onde R5a em cada ocorrência é independentemente seleccionado a partir de Η, X, e os radicais orgânicos C1-30 que podem opcionalmente conter pelo menos um heteroátomo seleccionado a partir do grupo que consiste em boro, halogéneo, nitrogénio, silício e enxofre; onde dois grupos R5 geminais podem em conjunto formar um anel com 0 átomo de carbono ao qual estão ambos ligados.
3. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.2, caracterizado por R5a em cada ocorrência ser independentemente seleccionado a partir hidrocarboneto C1-30, halocarboneto C1-30/ hidrohalocarboneto C1-30, H, e X.
4. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.2, caracterizado por R5a em cada ocorrência ser independentemente seleccionado a partir de hidrocarboneto C1-10, halocarboneto C1-10, hidrohalocarboneto C1-10, H, e X. 3
5. Um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.1-N°.4, caracterizado pot R1 e R2 serem seleccionados a partir de hidrogénio, oxigénio, de modo a formar grupos orgânicos nitro ou oxima, amino, -SO3-R, e tendo 1-30 carbonos e, opcionalmente, com 1-6 heteroátomos seleccionados a partir de oxigénio, fósforo, silício, e enxofre, onde R pode estar numa ligação directa ao numeral 3, ou R e R podem, em conjunto com o N ao qual estão ambos ligados, formar uma estrutura heterocíclica que pode ser parte de um grupo orgânico com 1-30 carbonos e, opcionalmente, com 1-6 heteroátomos seleccionados a partir de oxigénio e silício; ou R1 pode ser uma cadeia de 2 ou 3 átomos do numeral 2 de modo que -N-R1- forma parte duma estrutura bicíclica fundida ao anel A.
6. Um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.5, caracterizado por os carbonos com os numerais 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 serem cada um substituídos com dois hidrogénios a menos que o referido carbono seja parte de uma ligação insaturada; os carbonos com os numerais 5, 8, 9 e 14 são cada um substituídos com um hidrogénio a menos que 0 referido carbono seja parte de uma ligação insaturada; 0 carbono com 0 numeral 10 é substituído com metil; e 0 carbono com o número 13 é substituído com metilo a menos que seja parte de uma ligação insaturada.
7. Um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.6, caracterizado por os carbonos com os numerais 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 serem cada um substituídos com dois hidrogénios; os carbonos com os numerais 5, 8, 9 e 14 serem cada um substituídos com um hidrogénio; 0 carbono com 0 numeral 10 ser substituído com metil; e 0 carbono com 0 número 13 ser 4 substituído com metilo a menos que seja parte de uma ligação insaturada. 8. um composto da reivindicação N°.l, caracterizado por R1 e R2 serem hidrogénio; R3 e R4 serem seleccionados a partir das ligações directas a 6 e 7 respectivamente de modo a formar grupos carbonilo, hidrogénio, ou um grupo de protecção de modo que R3 e/ou R4 seja parte do grupo de protecção hidroxilo ou carbonilo; e, adicionalmente, aos grupos -0R3 e -0R4 como apresentado, cada um dos carbonos 6 e 7 é substituído com hidrogénio a menos que impedido porque -OR3 ou -0R4 representem um grupo carbonilo; os carbonos com os numerais 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 são cada um substituídos com dois hidrogénios a menos que o referido carbono seja parte de uma ligação insaturada; os carbonos com os numerais 5, 8, 9 e 14 são cada um substituídos com um hidrogénio a menos que o referido carbono seja parte de uma ligação insaturada; o carbono com o numeral 10 é substituído com metilo; o carbono com o número 13 é substituído com metilo a menos que seja parte de uma ligação insaturada; o carbono com o numeral 17 é substituído com (a) um de: =0, =C(R5)(R5), =C=C (R5) (R5), C (R5) (R5) (C (R5) (R5) ) n- e - (0 (C (R5) (R5) ) n0) - em que n tem um intervalo de 1 a 6 ; ou (b) dois dos seguintes, que são independentemente seleccionados: -X, -N(R4)(R2), -R5 e -OR6; cada um dos anéis A, B, C e D é independentemente completamente saturado, parcialmente saturado ou completamente insaturado; R5 em cada ocorrência é independentemente seleccionado a partir de Η, X, e os radicais orgânicos C1-30 que podem opcionalmente conter pelo menos um heteroátomo seleccionado a 5 partir do grupo que consiste em boro, halogéneo, nitrogénio, oxigénio, silício e enxofre; onde dois grupos R5 geminais podem em conjunto formar um anel com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados; R6 é H ou um grupo de protecção de modo que -0R6 é um grupo hidroxilo protegido, onde os grupos 1 o ΟΊ vicinais podem em conjunto formar uma estrutura cíclica que protege os grupos hidroxilo vicinais, e onde os grupos 1 O *3 geminais podem em conjunto formar uma estrutura cíclica que protege um grupo carbonilo; e X representa fluoreto, cloreto, brometo e iodeto.
9. Um composto, conforme reivindicado na reivindicação N°.8, caracterizado por: R1 e R2 serem hidrogénio; R3 e R4 serem seleccionados a partir de hidrogénio e grupos de protecção e de modo que R3 e/ou R4 é parte do grupo de protecção hidroxilo; os carbonos com os numerais 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 são cada um substituídos com dois hidrogénios; os carbonos com os numerais 5, 8, 9 e 14 serem cada um substituídos com um hidrogénio; o carbono com o numeral 10 ser substituído com metilo; o carbono com o número 13 ser substituído com metilo a menos que seja parte de uma ligação insaturada; o carbono com o numeral 17 ser substituído com (a) um de: =C(R5) (R5) e =C=C(R5) (R5) ; ou (b) dois dos seguintes, que são independentemente seleccionados: -X, -N(R1)(R2), e -R5; cada um dos anéis A, B, C e D ser independentemente completamente saturado ou parcialmente saturado; 6 R5 em cada ocorrência ser independentemente seleccionado a partir de Η, X, e hidrocarbonetos, halocarbonetos e halohidrocarbonetos Ci_30; e X representar fluoreto, cloreto, brometo e iodeto.
10. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.9, caracterizado por R1 e R2 serem hidrogénio; R3 e R4 serem seleccionados a partir de hidrogénio e grupos de protecção e de modo que R3 e/ou R4 é parte do grupo de protecção hidroxilo; os carbonos com os numerais 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 serem cada um substituídos com dois hidrogénios; os carbonos com os numerais 5, 8, 9 e 14 serem cada um substituídos com um hidrogénio; o carbono com o numeral 10 ser substituído com metilo; o carbono com o número 13 ser substituído com metilo a menos que seja parte de uma ligação insaturada; o carbono com o numeral 17 ser substituído com (a) um de: =C(R5) (R5) ; ou (b) dois de -R5; cada um dos anéis A, B, C e D ser independentemente completamente saturado ou parcialmente saturado; e R5 em cada ocorrência ser independentemente seleccionado a partir de H e hidrocarbonetos Ci_i0.
11. Um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.10 caracterizado pela fórmula 7 ÕH das
12. Um composto, de acordo com qualquer uma reivindicações N°.1-N°.10 caracterizado pela fórmula

das
13. Um composto, de acordo com qualquer uma reivindicações N°.l-N°.10 caracterizado pela fórmula

das
14. Um composto, de acordo com qualquer uma reivindicações 1-10 caracterizado pela fórmula

das
15. Um composto, de acordo com qualquer uma reivindicações N°.l-N°.10 caracterizado pela fórmula 8 QH
16. Um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.10 caracterizado pela fórmula
17. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por 17 estar substituído com =C(R5)(R5) e R5 ser seleccionado a partir de hidrogénio, halogéneo, alquil Ci_6, hidroxialquil Ci_6, e alquil -COz-Ci.g. 18. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por 17 estar substituído com alquil Ci-6 ou haloalquil Ci_ 6 · 19. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por 17 estar substituído com - -OR6 ou =0, em que R6 é hidrogénio. 20. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por R1 ser seleccionado a partir de -C(=0)-R7, - C (=0) NH-R7; -S02-R7; em que R7 é seleccionado a partir de alquil, heteroalquil, aril e heteroaril. 21. Um composto, de acordo com a : reivindicação N°.20, caracterizado por R7 ser seleccionado a partir de hidrocarbil Ci_ 9 10 ·
22. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.20, caractericado por R7 compreender biotina.
23. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por (R1) (R2)N- ser seleccionado a partir de
24. Um composto, de acordo com a reivindicação N °.i, caracterizado por R1 ser hidrogénio e R2 compreender um carbociclo. 25. Um composto, de acordo com a reivindicação N° .24, caracterizado por o carbociclo ser fenilo. 26. Um composto, de acordo com a reivindicação N° .25, caracterizado por R2 ser seleccionado a partir de 3-metilfenil; 4-hidroxifenil; e 4-sulfonamidafenil. 27. Um composto, de acordo com a reivindicação N °.l, caracterizado por R1 ser hidrogénio e R2 compreender um hidrocarbil Ci -10 · 28. Um composto, de acordo com a reivindicação N °.i, caracterizado por R1 ser hidrogénio e R2 ser um heteroalquilo. 29. Um composto, de acordo com a reivindicação N° .28, caracterizado por R2 ser seleccionado a partir de alquil Ci-io-W- alquileno Ci-u j- em que W é seleccionado a partir de 0 e NH; HO- alquileno Ci-io_; e HO- alquileno Ci-io-W-alquileno Ci-io- onde W é seleccionado partir de 0 e NH. 30. Um composto, de acordo com a reivindicação N °.i, caracterizado por o R1 ser hidrogénio e R2 ser -CH2-R7 em que R7 é seleccionado a partir de alquil, heteroalquil, aril e heteroaril. 10
31. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.30, caracterizado por R7 ser seleccionado a partir de fenilo com alquil substituinte; fenilo com halogéneo substituinte; fenilo com alcoxi substituinte; fenilo com ariloxi substituinte; e fenilo com nitro substituinte.
32. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por cada um de R1 e R2 ser hidrogénio.
33. Um composto, de acordo com as reivindicações N°.l ou N°.32, caracterizado por R3 e R4 ser hidrogénio.
34. Um composto, de acordo com as reivindicações N°.32 ou N°.33, caracterizado por o carbono no numeral 17 ser substituído com (a) um dos seguintes: C (R5a) (R5a) , =C=C (R5a) (R5a) , e C(R5a) (R5a) (C(R5a) (R5a))n“ em que n é um intervalo de 1 a 6 ; ou (b) dois dos seguintes, que são independentemente seleccionados: -X, -NÍR1)^2), e -R5a; Em que R5a em cada ocorrência é independentemente seleccionado a partir de Η, X, e os radicais orgânicos C1-30 que podem opcionalmente conter pelo menos um heteroátomo seleccionado a partir do grupo que consiste em boro, halogéneo, nitrogénio, silício e enxofre; onde dois grupos R5 geminais podem em conjunto formar um anel com 0 átomo de carbono ao qual estão ambos ligados.
35. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por R3 e R4 em conjunto formam um cetal com a estrutura 11 16 2^R! R2 32 j7 il/ 14 \l/
36. Um caracterizado composto, de acordo com a reivindicação N°.l, por -0R3 e -0R4 terem a estereoquimica apresentada 11 17ík Kir v A 14. 16 R' 'N k κ VR4
37. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por -N(R4) (R2) estar na forma de sal.
38. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por -N(R1)(R2) estar na forma de sal e o sal ser um halogéneo ou sal de acetato.
39. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por, pelo menos, um dos carbonos nos numerais 10 e 13 estarem substituídos com metilo.
40. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por cada um de R1 e R2 serem independentemente seleccionados a partir de hidrogénio e grupos orgânicos com 1-20 carbonos e, opcionalmente, com 1-5 heteroátomos seleccionados a partir de nitrogénio, oxigénio, silício, e enxofre.
41. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por 12 R1 e R2 serem independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, R8, R9, R10, R11 e R12 onde R8 é seleccionado a partir de alquil, heteroalquil, aril e heteroaril; R9 é seleccionado a partir de (R8) r-alquileno, (R8) r-heteroalquileno, (R8) r-arileno e (R8) r-heteroarileno; R10 é seleccionado a partir de (R9)r-alquileno, (R9) r-heteroalquileno, (R9) r-arileno, e (R9)r-heteroarileno; R11 é seleccionado a partir de (R10) r-alquileno, (R10) r-heteroalquileno, (R10) r-arileno, e (R10) r-heteroarileno, R12 é seleccionado a partir de (R11) r-alquileno, (Ru)r- heteroalquileno, (Ru) r-arileno, e (R11) r-heteroarileno, e r é seleccionado a partir de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, com a condição que R1 e R2 podem estar associados a um átomo comum de modo a formar um anel com o átomo comum.
42. Um composto, de acordo com as reivindicações N°.l ou N°.41, caracterizado por R3 e R4 serem seleccionados a partir de hidrogénio e grupos de protecção e de modo que R3 e/ou R4 é parte do grupo de protecção hidroxilo; os carbonos com os numerais 1, 2, 4, 11, 12, 15 e 16 serem cada um substituídos com dois hidrogénios a menos que o referido carbono seja parte de uma ligação insaturada; os carbonos com os numerais 5, 8, 9 e 14, serem cada um substituídos com um hidrogénio a menos que o referido carbono seja parte de uma ligação insaturada; o carbono com o numeral 10 ser substituído com metilo; o carbono com o número 13 ser substituído com metilo a menos que seja parte de uma ligação insaturada; o carbono com o numeral 17 ser substituído com (a) um de: =C(R5)(R5) e =C=C (R5) (R5) ; ou (b) dois de -R5; 13 cada um dos anéis A, B, C e D ser independentemente completamente saturado, parcialmente saturado; e R5, em cada ocorrência, ser independentemente seleccionado a partir de H e hidrocarbonetos Ci_io.
43. Um composto, de acordo com as reivindicações N°.l, N°.41 ou N°.42, caracterizado por R1 e R2 serem independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, R8, R9, R10, R11 e R12 onde R8 é seleccionado a partir de alquil Ci-io, heteroalquil Ci-io compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, aril Cô-io e heteroaril C3-15 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos; R9 é seleccionado a partir de (R8) r-alquileno C1-10, (R8) r-heteroalquileno C1-10 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, (R8) r-arileno C6-io e (R8) r-heteroarileno C3-15 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos; R10 é seleccionado a partir de (R9) r-alquileno C1-10, (R9) r-heteroalquileno C1-10 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, (R9) r-arileno C6-10/ e (R9)r_ heteroarileno C3-15 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos; R11 é seleccionado a partir de (R10) r-alquileno C1-10, (R10)r- heteroalquileno C1-10 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, (R ) r-arileno C6-10, e (R10) r-heteroarileno C3-15 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, R12 é seleccionado a partir de (R11) r-alquileno C1-10, (R11) r-heteroalquileno C1-10 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, (R11) r-arileno C6-10/ e (R11) r-heteroarileno C3-15 compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos, e r é seleccionado a partir de 0, 1, 2, 3, 4 e 5, com a condição que R1 e R2 podem estar associados a um átomo comum de modo a formar um anel com 0 átomo comum.
44. Um composto, de acordo com as reivindicações N°.l, N°.41 ou N°.42, caracterizado por R1 e R2 serem seleccionados a partir de hidrogénio, CH3-, CH3(CH2)2-, CH3(CH2)4-, CH3CO-, C6H5CO- (CH3)2CHS02-, c6h5so2-, C6H5NHCO-, CH3 (CH2)2NHCO-, CH3 (CH2)2NH(CH2)2-, (CH3)2N (CH2)2-, hoch2ch2-, hoch2 (CH2)4-, hoch2ch2nhch2ch2-, 3- 14 (CH3)C6H4-, 4-(HO)C6H4-, 4-(H2NS02)C6H4-, 4-( (CH3) 2CH) C6H4-CH2-, 2- (F)C6H4-CH2-, 3- (CF3) C6H4-CH2-, 2-(CH30)C6H4-CH2-, 4-(CF30)C6H4-CH2-, 3-(C6H50)C6H4-CH2-, 3- (N02)C6H4-CH2-,

e

ou Rl e R2 podem se juntar com o nitrogénio ao que estão ambos ligados e formam um heterociclo seleccionado a partir de:
45. Um composto, de acordo com as reivindicações N°.l ou N°.41 caracterizado pela fórmula
46. Um composto, de acordo com as reivindicações N°.l ou N°.41 caracterizado pela fórmula 15 ÔH
47. Um composto, de acordo com as reivindicações N°.l ou N°.41 caracterizado pela fórmula
48. Um composto, de acordo com as reivindicações N°.l ou N°.41 caracterizado pela fórmula
49. Um composto, de acordo com a reivindicação N°.l, caracterizado por R1 ser uma cadeia com 2 ou 3 átomos no numeral 2 de modo que -N-R1- forma parte duma estrutura biciclica fundida no anel A, o composto tendo a fórmula: Λ2 x. ^-11 13 \ lê Em que Z seleccionados representa 2 ou 3 átomos, independentemente a partir de C, N e 0 tanto quanto permite que 16 resulte numa estrutura estável, e o anel que inclui Z pode saturado ou insaturado.
50. Um composto, de acordo com a reivindicação N° caracterizado por ser seleccionado a partir de ser 49,
51. Um hidrocloreto ou sal de acetato dos compostos, acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.50.
52. Uma composição farmacêutica, caracterizada compreender um composto, de acordo com qualquer uma reivindicações N°.l-N°.50 e um transportador, excipiente diluente farmaceuticamente aceitáveis.
53. O composto, de acordo com qualquer uma reivindicações N°.l-N°.51, caracterizado por se destinar a usado num método para tratar terapeuticamente uma inflamação.
54. O composto, de acordo com qualquer uma reivindicações N°.l-N°.51, caracterizado por se destinar a usado num método para tratar profilaticamente uma inflamação.
55. O composto, de acordo com qualquer uma reivindicações N°.l-N°.51, caracterizado por se destinar a usado para tratar a asma.
56. O composto, de acordo com qualquer uma reivindicações N°.l-N°.51, caracterizado por se destinar a usado num método para tratar uma doença alérgica incluindo, não limitada a, sintomas dérmicos e oculares. de por das ou das ser das ser das ser das ser mas 17 57. 0 composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.1-N°.51, caracterizado por se destinar a ser usado num método para tratar a doença pulmonar obstrutiva crónica. 58. 0 composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.51, caracterizado por se destinar a ser usado para tratar a dermatite atópica. 59. 0 composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.51, caracterizado por se destinar a ser usado para tratar tumores sólidos.
60. O composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.51, caracterizado por se destinar a ser usado no tratamento da SIDA.
61. O composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.51, caracterizado por se destinar a ser usado para tratar lesões de reperfusão isquémica.
62. O composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações N°.l-N°.51, caracterizado por se destinar a ser usado para tratar arritmias cardíacas. Lisboa, 14 de Maio de 2007 18