[go: up one dir, main page]

KR20120044941A - 적응 면역의 측정방법 - Google Patents

적응 면역의 측정방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20120044941A
KR20120044941A KR1020117030953A KR20117030953A KR20120044941A KR 20120044941 A KR20120044941 A KR 20120044941A KR 1020117030953 A KR1020117030953 A KR 1020117030953A KR 20117030953 A KR20117030953 A KR 20117030953A KR 20120044941 A KR20120044941 A KR 20120044941A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
segment
dna
sequence
artificial sequence
primers
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
KR1020117030953A
Other languages
English (en)
Inventor
할란 에스. 로빈스
에두스 에이치. 워런
크리스토퍼 스캇 칼손
Original Assignee
프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 filed Critical 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터
Publication of KR20120044941A publication Critical patent/KR20120044941A/ko
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
    • C12N15/1065—Preparation or screening of tagged libraries, e.g. tagged microorganisms by STM-mutagenesis, tagged polynucleotides, gene tags
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • C12Q1/6874—Methods for sequencing involving nucleic acid arrays, e.g. sequencing by hybridisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G06—COMPUTING OR CALCULATING; COUNTING
    • G06F—ELECTRIC DIGITAL DATA PROCESSING
    • G06F17/00—Digital computing or data processing equipment or methods, specially adapted for specific functions
    • G06F17/10—Complex mathematical operations
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B40/00—ICT specially adapted for biostatistics; ICT specially adapted for bioinformatics-related machine learning or data mining, e.g. knowledge discovery or pattern finding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Data Mining & Analysis (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Databases & Information Systems (AREA)
  • Software Systems (AREA)
  • Bioethics (AREA)
  • Evolutionary Biology (AREA)
  • Computer Vision & Pattern Recognition (AREA)
  • Evolutionary Computation (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Artificial Intelligence (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)

Abstract

면역경쟁의 측정방법이 기재되어 있다. 본 발명의 방법은 면역계를 손상시키는 질환 또는 상태, 및 재구성을 목적으로 하는 치료법의 효과를 평가하는 수단을 제공한다. 본 발명의 방법은 혈액 세포로부터 다양한 T 세포 수용체(TCR) 베타 쇄 가변 영역의 수를 계산함으로써 T 세포 다양성의 정량화에 기반한다.

Description

적응 면역의 측정방법{METHOD OF MEASURING ADAPTIVE IMMUNITY}
본원은 2009년 6월 25일자로 출원되고 전체가 본원에서 참조로서 도입되는 미국 가출원 제61/220,344호의 이익을 우선권으로 청구한다.
적응 면역계 세포로부터 추출한 핵산의 대규모 서열분석을 사용하여 T 세포 수용체 유전자 또는 항체 유전자의 다양성을 분석함으로써 환자의 적응 면역을 측정하는 방법이 기재되어 있다.
면역경쟁 (immunocompetence)은, 살아 있는 생물체(예: 박테리아 또는 진균), 바이러스, 또는 병원체로부터 분리되어 백신에 도입된 특정한 항원성 성분일 수 있는 병원체에 대한 노출 후에 정상 면역 반응(즉, 항체 생성 및/또는 세포 매개 면역성)을 생성하는 신체의 능력이다. 면역경쟁은 면역결핍(immunodeficient) 또는 면역-비경쟁(immuno-incompetent) 또는 면역손상(immunocompromised)과 반대이다. 몇몇 예는 완전 작용성 면역계를 아직 갖지 않지만 모계 전달된 항체를 가질 수 있는 신생아(면역결핍); 면역계가 약화되었거나 약화되고 있는 말기 AIDS 환자(면역-비경쟁); 수용체 신체가 공여된 기관을 거부할 수 없도록 약물을 투약한 이식 수용체(면역손상); 중장년층에서 T 세포 기능의 연령 관련 감쇠; 또는 방사선 또는 화학요법 약물에 노출된 개체일 수 있다. 이들 용어는 중복되는 경우도 있지만 모두 이상 면역계의 지표이다. 림프구와 관련하여, 면역경쟁은 B 세포 또는 T 세포가 성숙 상태이고 항원을 인식하여 사람에게 면역 반응을 갖게 하는 것을 의미한다.
면역경쟁은 B 세포(면역글로불린, Ig) 및 T 세포 (T-세포 수용체, TCR)에 의해 코딩된 고도의 다형태 수용체를 사용하여 임의의 잠재적 외래 항원에 특이적인 면역 반응을 갖게 하는 적응 면역계의 능력에 의존한다.
B 세포에 의해 발현된 Ig는 4개의 폴리펩티드 쇄, 즉 2개의 중쇄 (H 쇄)와 2개의 경쇄(L 쇄)로 구성되어 H2L2 구조를 형성하는 단백질이다. H 및 L 쇄의 쌍 각각은 VL 및 VH 영역으로 이루어진 초가변성 도메인 및 불변 도메인을 함유한다. Ig의 H 쇄에는 몇개의 형태, μ, δ, γ, α 및 β가 있다. 개체 내에서 Ig의 다양성은 주로 초가변성 도메인에 의해 결정된다. H 쇄의 V 도메인은 3개 형태의 생식세포주 유전자 세그먼트, 즉 VH, DH 및 JH 세그먼트의 조합 연결에 의해 생성된다. 초가변성 도메인 서열 다양성은 Ig 유전자 재배열의 공정 동안 VH-DH, DH-JH 및 VH-JH 결합부에서 뉴클레오티드의 독립적인 부가 및 결실에 의해 추가로 증가된다. 이러한 측면에서, 면역경쟁은 Ig의 다양성에 반영된다.
αβ T 세포에 의해 발현된 TCR은 각각 TCRA 및 TCRB 유전자에 의해 발현된 2개의 통막(transmembrane) 폴리펩티드 쇄(α 및 β)로 구성된 단백질이다. 유사한 TCR 단백질은 TCRD 및 TCRG 부위로부터 감마-델타 T 세포에서 발현된다. 각각의 TCR 펩티드는 프레임워크 영역(FR) 및 불변 영역 뿐만 아니라 가변 상보성 결정 영역(CDR)을 함유한다. αβ T 세포의 서열 다양성은 α 및 β쇄 가변 도메인의 제3 상보성 결정 영역(CDR3) 루프의 아미노산 서열에 의해 주로 결정되며, 다양성은 각각 β쇄 부위에서 가변(Vβ), 다양성(Dβ) 및 결합(Jβ) 유전자 세그먼트 사이, 및 α 쇄 부위에서 유사한 Vα 및 Jα 유전자 세그먼트 사이의 재조합 결과이다. TCR α 및 β 쇄 부위에서 이러한 다수의 유전자 세그먼트의 존재는 다수의 특이적 CDR3 서열을 코딩하게 한다. CDR3 서열 다양성은 TCR 유전자 재배열 공정 동안 Vβ-Dβ, Dβ-Jβ 및 Vα-Jα 결합부에서 뉴클레오티드의 독립적인 부가 및 결실에 의해 추가로 증가된다. 이러한 측면에서, 면역경쟁은 TCR의 다양성에 반영된다.
자가면역 질환에 있어서 면역손상된 적응 면역 또는 이상조절된 적응 면역의 면역경쟁이든지, 다양한 세팅에서 환자의 적응 면역 면역계를 평가 또는 측정하는 방법이 오랫동안 요구되어 왔다. 환자의 면역경쟁을 평가하여 질환 상태 또는 노화 효과를 진단하는 방법에 대한 요구가 존재한다. 동일한 방식으로, 면역계를 변형시키는 치료 결과는 치료를 받는 동안 환자의 면역경쟁을 평가함으로써 모니터링되어야 한다. 반대로, 치료 반응을 모니터링하기 위해 자가면역 질환 격발 및 경감의 맥락에서 적응 면역계를 모니터링하는 방법이 요구되거나 예방학적 치료를 증상 전에 개시할 필요가 있다.
본 발명의 한 가지 양태는,
단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V-세그먼트 프라이머 및
(b) J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J-세그먼트 프라이머를 포함하는 조성물로서,
상기 V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머는 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 TCR CDR3 영역을 증폭시켜 TCR 유전자의 다양성을 정량화하기에 충분한 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는, 조성물이다. 본 발명의 한 가지 양태는, 각각의 V 세그먼트 프라이머가 단일 Vβ 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하고 각각의 J 세그먼트 프라이머가 Jβ 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하며, V 세그먼트 및 J 세그먼트가 TCRβ CDR3 영역을 증폭시키는 조성물이다. 또 다른 양태는, 각각의 V 세그먼트 프라이머가 단일 작용성 Vα 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하고 각각의 J 세그먼트 프라이머가 Jα 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하며, V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머가 TCRα CDR3 영역을 증폭시키는 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는, V 세그먼트 프라이머가 보존된 세그먼트와 하이브리드화하고 유사한 어닐링 강도를 갖는 조성물이다. 또 다른 양태는 V 세그먼트 프라이머가 재조합 시그날 서열(RSS)에 대해 Vβ 세그먼트 내의 위치 -43에 고정되어 있는 조성물이다. 또 다른 양태는 다수의 V 세그먼트 프라이머가 45개의 상이한 Vβ 유전자에 특이적인 적어도 45개 프라이머로 구성되어 있다. 또 다른 양태는 V 세그먼트 프라이머가 서열번호: 1 내지 45로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열을 갖는다. 또 다른 양태는 V 세그먼트 프라이머가 서열번호: 58 내지 102로 이루어진 그룹으로부터 선택된 서열을 갖는다. 또 다른 양태는 각각의 Vβ 세그먼트에 대해 V 세그먼트 프라이머가 존재한다.
본 발명의 또 다른 양태는 J 세그먼트 프라이머가 Jβ 세그먼트의 보존된 프레임워크 영역 요소와 하이브리드화하고 유사한 어닐링 강도를 갖는 조성물이다. 청구항 제2항의 조성물은 다수의 J 세그먼트 프라이머가 13개의 상이한 Jβ 유전자에 특이적인 적어도 13개의 프라이머로 구성된다. 또 다른 양태는 청구항 제2항의 조성물은 J 세그먼트 프라이머가 서열번호: 46 내지 57로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열을 갖는다. 또 다른 양태는 J 세그먼트 프라이머가 서열번호: 102 내지 113으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열을 갖는다. 또 다른 양태는 각각의 Jβ 세그먼트에 대해 J 세그먼트 프라이머가 존재한다. 또 다른 양태는 모든 J 세그먼트 프라이머가 동일한 보존 모티프에 어닐링되어 있다.
본 발명의 또 다른 양태는, 증폭된 DNA 분자가 상기 보존된 모티프로부터 출발하고, 적절한 서열을 증폭시켜 J 세그먼트를 진단학적으로 동정하며, CDR3 결합부를 포함하고 V 세그먼트로 확장하는 조성물이다. 또 다른 양태는 증폭된 Jβ 유전자 세그먼트가 각각 RSS 부위 하류의 위치 +11 내지 +14에서 4개의 유니크(unique) 염기 태그를 갖는다.
본 발명의 또 다른 양태는 서열분석 올리고뉴클레오티드 세트를 추가로 포함하는 조성물이고, 서열분석 올리고뉴클레오티드는 증폭된 DNA 분자 내의 영역에 하이브리드화한다. 소정 양태는 서열분석 올리고뉴클레오티드가 RSS 부위 하류의 위치 +11 내지 +14에서 증폭된 Jβ 유전자 세그먼트 내의 4개 염기 태그에 인접하여 하이브리드화한다. 또 다른 양태는 서열분석 올리고뉴클레오티드는 서열번호: 58 내지 70으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 또 다른 양태는 V 세그먼트 또는 J 세그먼트가 밀접하게 관련된 서열의 병합에 의해 서열 에러-보정을 함유하도록 선택된다. 또 다른 양태는 mRNA로부터 cDNA를 생성하는 범용 C 세그먼트 프라이머를 추가로 포함하는 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는,
단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V-세그먼트 프라이머 및
J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J-세그먼트 프라이머를 포함하는 조성물로서,
상기 V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머는 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 TCRG CDR3 영역을 증폭시켜 항체 중쇄 유전자의 다양성을 정량화하기에 충분한 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는, 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는,
단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V-세그먼트 프라이머 및
J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J-세그먼트 프라이머를 포함하는 조성물로서,
상기 V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머는 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 항체 중쇄(IGH) CDR3 영역을 증폭시켜 항체 중쇄 유전자의 다양성을 정량화하기에 충분한 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는, 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는,
단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V-세그먼트 프라이머 및
J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J-세그먼트 프라이머를 포함하는 조성물로서,
상기 V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머는 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 항체 경쇄(IGL) VL 영역을 증폭시켜 항체 경쇄 유전자의 다양성을 정량화하기에 충분한 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는, 조성물이다.
본 발명의 또 다른 양태는,
단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V 세그먼트 프라이머를 선택하는 단계;
J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J 세그먼트 프라이머를 선택하는 단계; 및
V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머를 게놈 DNA 샘플과 조합하여 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 CDR3 영역을 증폭시킴으로써 TCR 유전자의 다양성을 정량화하기에 충분한 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는 단계를 포함하는 방법이다.
본 발명의 한 가지 양태는 각각의 V 세그먼트 프라이머가 단일 작용성 Vβ 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하고, 각각의 J 세그먼트 프라이머가 Jβ 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하며, V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머와 게놈 DNA 샘플의 조합이 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 TCR CDR3 영역을 증폭시켜 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는 방법이다. 또 다른 양태는 각각의 V 세그먼트 프라이머가 단일 작용성 Vα 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하고, 각각의 J 세그먼트 프라이머가 Jα 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하며, V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머와 게놈 DNA 샘플의 조합이 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 TCR CDR3 영역을 증폭시켜 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는 방법이다.
본 발명의 또 다른 양태는 증폭된 DNA 분자를 서열분석하는 단계를 추가로 포함하는 방법이다. 또 다른 양태는 서열분석 단계가, 증폭된 DNA 분자 내의 영역과 하이브리드화하는 서열분석 올리고뉴클레오티드 세트를 사용하는 방법이다. 또 다른 양태는 증폭된 DNA 분자 중에서 TCRβ CDR3 서열의 전체 다양성을 계산하는 단계를 추가로 포함하는 방법이다. 또 다른 양태는 정상 사람 피검체의 전체 다양성이 1*106 초과의 서열, 2*106 초과의 서열 또는 3*106 초과의 서열임을 나타내는 방법이다.
본 발명의 또 다른 양태는, 환자의 TCR CDR3 서열의 다양성을 측정하는 단계 및 피검체의 다양성을 정상 피검체로부터 수득한 다양성과 비교하는 단계를 포함하는, 사람 환자에서 면역결핍을 진단하는 방법이다. 본 발명의 양태는, TCR 서열의 다양성을 측정하는 단계가
단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V 세그먼트 프라이머를 선택하는 단계;
J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J 세그먼트 프라이머를 선택하는 단계;
V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머를 게놈 DNA 샘플과 조합하여 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 TCR CDR3 영역을 증폭시킴으로써 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는 단계;
증폭된 DNA 분자를 서열분석하는 단계; 및
증폭된 DNA 분자 중에서 TCR CDR3 서열의 전체 다양성을 계산하는 단계를 포함하는 방법이다.
본 발명의 양태는 다양성의 비교는 하기 수학식을 사용하여 계산함으로써 측정하는 방법이다:
Figure pct00001
상기 수학식에서,
G(λ)는 파라미터 λ1, ···, λs의 경험적 분포 함수이고,
nx는 정확하게 x배 서열분석된 클론형 수이고,
Figure pct00002
이다.
본 발명의 또 다른 양태는 게놈 DNA의 적어도 2개 샘플의 다양성이 비교되는 방법이다. 또 다른 양태는 게놈 DNA의 하나의 샘플이 환자의 것이고 다른 샘플이 정상 피검체의 것이다. 또 다른 양태는 게놈 DNA의 하나의 샘플이 치료학적 치료 전의 환자의 것이고 다른 샘플이 치료 후의 환자의 것이다. 또 다른 양태는 게놈 DNA의 2개의 샘플이 치료 동안 상이한 시간에서 동일한 환자의 것이다. 또 다른 양태는 질환이 게놈 DNA의 샘플 중에서 다양성의 비교에 기초하여 진단된다. 또 다른 양태는 사람 환자의 면역경쟁이 비교에 의해 평가된다.
TCR 및 Ig 유전자는 체세포 돌연변이를 통해 수백만의 특이적 단백질을 생성할 수 있다. 이들의 다양성 생성 메카니즘에 기인하여, 이들 유전자의 초가변성 상보성 결정 영역은 수백만의 리간드와 상호작용할 수 있는 서열을 코딩할 수 있고, 이들 영역은 단백질의 코그네이트(cognate) 리간드의 결합을 나타내는 세포에 시그날을 전달할 수 있는 불변 영역에 연결된다.
적응 면역계는 다양성이 충분한 T 세포 및 B 세포 항원 수용체의 레퍼터리를 생성하여 다수의 잠재적 병원체를 인지하는 몇몇 전략을 사용한다. MHC 분자에 의해 제공된 펩티드 항원을 주로 인지하는 αβ 및 γδ T 세포에 있어서, 대부분의 이러한 수용체 다양성은 T 세포 수용체(TCR) α 및 β 쇄(또는 γ 및 δ 쇄)의 제3 상보성 결정 영역(CDR3) 내에 함유되어 있다. 적응 면역계가 1018개 이하의 특이적 TCR αβ 쌍을 형성할 수 있는 것으로 평가되고 있지만, TCR CDR3 다양성의 직접 실험 평가는 가능하지 않았다.
본원에 기재된 것은 단일 분자 DNA 서열분석에 기반하여 TCR CDR3 다양성을 측정하고, 이러한 접근법을 2명의 건강한 성인의 말초혈 T 세포로부터 분리된 수백만의 재배열된 TCRβ 유전자에서 CDR3 영역을 서열분석하는데 사용하는 신규한 방법이다.
개체가 노출될 수 있는 임의의 대다수의 잠재적 외래 항원에 특이적인 면역 반응을 갖게 하는 적응 면역계의 능력은 B 세포(면역글로불린) 및 T 세포(T 세포 수용체; TCR)에 의해 코딩된 고도의 다형태 수용체에 의존한다. 주요 조직접합성 복합체(MHC) 부류 I 및 II 분자에 의해 제공된 펩티드 항원을 주로 인지하는 αβ T 세포에 의해 발현된 TCR은 2개의 통막 폴리펩티드 쇄(α 및 β)로 구성된 헤테로이합체 단백질이고, 각각의 폴리펩티드 쇄는 하나의 가변 도메인과 하나의 불변 도메인을 함유한다. αβ T 세포의 펩티드 특이성은 α 및 β 쇄 가변 도메인의 제3 상보성 결정 영역(CDR3) 루프에서 코딩된 아미노산 서열에 의해 대부분 결정된다. β 및 α 쇄의 CDR3 영역은 각각 β 쇄 부위에서 불연속 가변(Vβ), 다양성(Dβ) 및 결합(Jβ) 유전자 세그먼트 사이의 재조합 및 α 쇄 부위에서 유사한 Vα 및 Jα 유전자 세그먼트 사이의 재조합에 의해 형성된다. TCR α 및 β 쇄 부위에서 이러한 다중 유전자 세그먼트의 존재는 다수의 특이적 CDR3 서열을 코딩하게 한다. CDR3 서열 다양성은 TCR 유전자 재배열의 공정 동안 Vβ-Dβ, Dβ-Jβ 및 Vα-Jα 결합부에서 뉴클레오티드의 주형 독립적 부가 및 결실에 의해 추가로 증가된다.
성인 사람 αβ T 세포 레퍼토리에서 수용체의 다양성을 평가하는 이전의 시도는 당해 레퍼토리의 잘 규정된 소형 서브세트(subset)에서 발현된 재배열된 TCR α 및 β 쇄 유전자를 검사한 다음, 이들 서브세트에 존재하는 다양성을 전체 레퍼토리에 대해 외삽하여, 개체당 대략 106개의 유니크 TCRβ 쇄 CDR3 서열(이들 유니크 TCRβ CDR3 서열의 10 내지 20%는 항원 경험된 CD45RO+ 구획에서 세포에 의해 발현된다)을 평가하는 것에 의존한다. 이들 평가의 정확도 및 정밀도는 수백개 서열에서 관찰된 다양성을 전체 레퍼토리에 대해 외삽할 필요성에 의해 심각하게 제한되며, αβ T 세포 레퍼토리에서 유니크 TCRβ 쇄 CDR3 서열의 실제 수는 1×106개보다 현저히 많다.
고처리량의 DNA 서열분석 기술에 있어서의 최근 발전은 모세관 기반 기술보다 현저히 난해한 서열분석을 가능하게 했다. 각 말단에 범용 PCR 적응 서열을 포함하는 주형 분자의 복합체 라이브러리는 고체 표면 상에 고정된 상보성 올리고뉴클레오티드 론(lawn)에 하이브리드화된다. 고체상 PCR은 하이브리드화된 라이브러리를 증폭시켜 표면 상에 수백만의 주형 클러스터를 생성하기 위해 사용된다(라이브러리 각각은 본래 라이브러리와 동일한 단일 DNA 분자의 다중(약 1,000) 복제를 포함한다). 각 클러스터 내의 분자내의 30 내지 54 bp 간격은 가역적 염료-종결 화학을 사용하여 서열분석되어, 수백만의 T 세포에 포함된 재배열된 TCRβ 쇄 CDR3 영역의 게놈 DNA로부터 동시에 서열분석된다. 이러한 접근법은 αβ T 세포의 모집단에서 유니크하게 재배열된 TCRβ CDR3 영역의 상당한 분획을 직접 서열분석할 수 있게 하고, 이에 의해 모집단에서 각 CDR3 서열의 상대 도수를 평가할 수 있게 한다.
T 세포의 한정된 샘플에서 측정된 다양성으로부터 전체 αβ T 세포 레퍼토리 중의 TCRβ CDR3 서열의 다양성에 대한 정확한 평가는 샘플에서 관찰되지 않은 레퍼토리에 존재하는 CDR3 서열의 수에 대한 평가를 필요로 한다. 전체 αβ T 세포 레퍼토리에서 TCRβ 쇄 CDR3 다양성은 수백만의 αβ T 세포를 함유하는 혈액 샘플에서 관찰된 유니크 TCRβ CDR3 서열의 수에 대한 직접 측정을 사용하여 평가되었다. 본원에서의 결과는 이전 평가보다 몇배 높은 CD4+ 및 CD8+ T 세포 구획에서 TCRβ CDR3 다양성에 대한 하한을 동정한다. 또한, 본원의 결과는 항원 경험한 T 세포의 CD45RO+ 구획에서 적어도 1.5×106개의 유니크 TCRβ CDR 3 서열이 존재하고, 이들 중의 대부분은 상대적으로 낮은 도수로 존재함을 입증한다. 항원 경험한 세포에서 TCRβ CDR3 서열의 이러한 다양한 모집단의 존재는 이전에는 입증되지 않았다.
각각의 건강한 개체에서 TCRβ 쇄의 다양한 풀은 평가된 이론적 공간으로부터 1011개 초과의 가능한 서열의 샘플이다. 그러나, 재배열된 TCR의 실현된 세트는 이러한 이론적 공간으로부터 균일하게 샘플링되지 않았다. Vβ의 차이 및 Jβ의 차이는 천배 이상의 도수 차이로 발견된다. 추가로, 뉴클레오티드의 삽입 비율은 강력하게 바이어스(biased)되어 있다. 실현된 TCRβ 서열의 이러한 감소된 공간은 사람 사이의 공유된 β 쇄의 가능성을 유도한다. 본원에 기재된 방법으로 생성된 서열 데이타와 함께, 생체내 J 유용성, V 유용성, 모노뉴클레오티드 및 디뉴클레오티드 바이어스, 및 위치 의존적 아미노산 유용성은 컴퓨터화할 수 있다. 이들 바이어스는 TCRβ가 선택되는 서열 공간의 크기를 현저히 좁게 하고, 이는 상이한 개체가 동일한 아미노산 서열을 갖는 TCRβ 쇄를 공유함을 시사한다. 본원의 결과는 수천개의 이러한 동일한 서열의 개개 사람 게놈 사이에서 쌍으로 공유되어 있음을 나타낸다.
분석 기술은 프라이머의 2개 풀을 사용하여 고도의 다중화 PCR 반응을 제공한다. "정방향" 풀은 유전자 내에 각각의 V 세그먼트에 특이적인 프라이머를 갖는다(고도 보존된 영역을 표적화하는 수개의 프라이머가 사용되어, 다수의 V 세그먼트를 동시에 포획한다). "역방향" 풀 프라이머는 결합("J") 세그먼트에서 보존된 서열에 어닐링된다. 증폭된 세그먼트 풀은 적절한 서열을 포함하여 각각의 J 세그먼트를 동정하고, J 세그먼트 특이적 프라이머가 재서열분석을 위해 어닐링되도록 한다. 이는 개체에 존재하는 체세포 재배열의 다수 분획을 직접 관찰할 수 있게 한다. 이는 또한 개체 중의 TCR 레퍼토리를 대조군의 TCR 레퍼토리에 대해 자가면역 질환(또는 표적 질환 지표)과 신속하게 비교할 수 있게 한다.
적응 면역계는 이론적으로 다양성이 큰 T 세포 수용체 CDR3 서열을 생성할 수 있다(임의의 하나의 개체에서 임의의 한번의 시간에 발현되는 것 이상으로). 그러나, 이러한 이론적 다양성의 분획이 실제로 성인 αβ T 세포 레퍼토리에서 사용되는 것을 측정하는 종래의 시도는 다양성의 정확한 평가를 허용하지 않았다. 본원에 기재된 것은 한정된 샘플에서 다양성 측정을 사용하는 레퍼토리 다양성의 평가에 대한 단일 분자 DNA 서열분석 및 분석적 컴퓨터 접근법에 기초하는, 당해 문제에 대한 새로운 접근법을 개발하는 것이다. 당해 분석은 성인 레퍼토리에서 유니크 TCRβ CDR3 서열의 수가 당해 레퍼토리 작은 세그먼트의 소모적인 모세관 서열분석에 기반한 종래의 평가치를 현저히 초과하는 것을 증명했다. 본원에 기재된 방법을 사용하여 관찰된 CD45RO- 모집단(천연 T 세포가 풍부함)에서 TCRβ 쇄 다양성은 종래 보고된 것보다 5배 크다. 중요한 발견은 항원 경험한 CD45RO+ T 세포에서 발현된 유니크 TCRβ CDR3 서열의 수이다. 본원의 결과는 당해 수가 종래의 다른 결과에 기반하여 예상된 것보다 10 내지 20배 많음을 나타낸다. CD45RO+ 세포에서 CDR3 서열의 도수 분포는 T 세포 레퍼토리가 작은 클론 크기를 갖는 다수의 클론을 함유함을 시사한다.
본원의 결과는 TCRβ 쇄의 실현된 세트가 서열의 거대 잠재적 공간으로부터 균일하지 않게 샘플링됨을 나타낸다. 특히, 생식 세포주에 보다 유사한 β 쇄 서열(V-D 및 D-J 경계에서 소수의 삽입 및 결실)은 비교적 높은 도수로 생성되는 것처럼 보인다. 생식 세포주에 유사한 TCR 서열은 V의, D의 및 J의 생식 세포주 서열이, 소수의 다형태를 원칙으로 하여, 사람 모집단 중에서 공유되어 있기 때문에 상이한 사람 사이에서 공유되어 있다.
성숙 αβ T 세포에 의해 발현된 T 세포 수용체는 2개의 구성 쇄가 TCR α 및 β 쇄 가변 부위의 독립적 재배열 사건에 의해 생성되는 헤테로이합체이다. α 쇄는 β 쇄보다 다양성이 작고, 따라서 α의 보다 높은 분획이 개체 사이에서 공유되어 있고, 수백개의 정확한 TCR αβ 수용체가 개체 쌍 사이에서 공유되어 있다.
세포
B 세포 및 T 세포는 골수, 흉선, 임파선, 말초 조직 및 혈액을 포함하는 다양한 조직 샘플로부터 수득할 수 있지만, 말초혈이 가장 용이하게 수득된다. 말초혈 샘플은 피검체로부터 정맥절개에 의해 수득된다. 말초혈 단핵 세포(PBMC)는 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 공지된 기술, 예를 들면, 피콜-하이파크(Ficoll-HypaqueR) 밀도 구배 분리에 의해 분리된다. 바람직하게는, 전체 PBMC가 분석에 사용된다. 대신에, B 및/또는 T 림파구는 각 피검체를 위해 다수 구획으로 유동 분류될 수 있다: 예를 들면, 형광 표지된 항-사람 항체, 예를 들면, CD4 FITC (클론 M-T466, Miltenyi Biotec), CD8 PE (클론 RPA-T8, BD Biosciences), CD45RO ECD (클론 UCHL-1, Beckman Coulter) 및 CD45RO APC (클론 UCHL-1, BD Biosciences)를 사용하는 CD8+CD45RO+/- 및 CD4+CD45RO+/-. 전체 PBMC의 염색은 항체의 적절한 조합으로 수행할 수 있고, 이어서 세포를 분석 전에 세척한다. 림파구 서브세트는 FACS 분류, 예를 들면, BD FACSAriaTM 세포 분류 시스템 (BD Biosciences)에 의해 및 결과를 FlowJo 소프트웨어 (Treestar Inc.)로 분석함으로써 및 표면 또는 비드에 고정된 특이적 항체를 수반하는 개념상 유사한 방법에 의해 분리할 수 있다.
핵산 추출
전체 게놈 DNA는 세포로부터, 예를 들면, QIAamp® DNA 혈액 미니 키트 (QIAGEN®)를 사용하여 추출한다. 단일 반수체 게놈의 대략적 질량은 3 pg이다. 바람직하게는 적어도 100,000 내지 200,000개 세포를 다양성 분석에 사용한다(즉, 이배체 T 세포로부터 약 0.6 내지 1.2 ㎍ DNA). PBMC를 공급원으로 사용하면, T 세포의 수는 전체 세포의 약 30%인 것으로 평가될 수 있다.
또는, 게놈 DNA 및 mRNA 둘 다를 포함하는 세포로부터 전체 핵산을 분리할 수 있다. 다양성이 핵산 추출물 중의 mRNA로부터 측정되어야 하는 경우, mRNA는 측정 전에 cDNA로 전환되어야 한다. 이는 당업자의 방법에 의해 용이하게 수행할 수 있다.
DNA 증폭
다중 PCR 시스템을 사용하여 게놈 DNA, 바람직하게는 CDR3 영역, 보다 바람직하게는 TCRα, TCRγ 또는 TCRδ CDR3 영역, 가장 바람직하게는 TCRβ CDR3 영역으로부터 재배열된 TCR 부위를 증폭시킨다.
일반적으로, 다중 PCR 시스템은 적어도 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개, 바람직하게는 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38 또는 39개, 가장 바람직하게는 40, 41, 42, 43, 44 또는 45개 정방향 프라이머(여기서, 각각의 정방향 프라이머는 서열번호: 114 내지 248에 나타낸 하나 이상의 TRB V 영역 세그먼트에 상응하는 서열에 특이적이다) 및 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7개, 바람직하게는 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개 역방향 프라이머(여기서, 각각의 역방향 프라이머는 서열번호: 249 내지 261에 나타낸 하나 이상의 TRB J 영역 프라이머에 상응하는 서열에 특이적이다)를 사용할 수 있다. 가장 바람직하게는 모든 J 세그먼트에 대해 J 세그먼트 프라이머가 존재한다.
바람직하게는, 인트론/엑손 경계를 교차하지 않도록 프라이머가 설계된다. 정방향 프라이머는 바람직하게는, 이들 프라이머 중에서 서열 보존을 최대화하기 위해, V 세그먼트 사이의 비교적 강력한 서열 보존 영역에서 V 세그먼트에 어닐링되어야 한다. 따라서, 이는 각 프라이머의 상이한 어닐링 특성에 대한 가능성을 최소화하고, 따라서 V 및 J 프라이머 사이의 증폭된 영역은 충분한 TCR V 서열 정보를 함유하여 사용된 특이적 V 유전자 세그먼트를 동정한다.
바람직하게는, J 세그먼트 프라이머는 J 세그먼트의 보존된 요소와 하이브리드화하고, 유사한 어닐링 강도를 갖는다. 가장 바람직하게는, 모든 J 세그먼트 프라이머는 동일한 보존된 프레임워크 영역 모티프에 어닐링된다. 정방향 및 역방향 프라이머는 둘 다 바람직하게는 DNA 서열분석기에 적합한 범용 정방향 프라이머 서열로 5' 말단에서 변형된다.
예를 들면, 다중 PCR 시스템은 각각 작용성 TCR Vβ 세그먼트에 특이적인 45개 정방향 프라이머(표 1), 및 각각 TCR Jβ 세그먼트에 특이적인 13개 역방향 프라이머(표 2)을 사용할 수 있다. Xn 및 Yn은 각각 길이 n 및 m의 폴리뉴클레오티드에 상응하고, 이는 분석의 판독에 사용되는 단일 분자 서열분석 기술에 특이적일 수 있다.
TCR-Vβ 정방향 프라이머 서열
TRBV 유전자 세그먼트(s) SEQ ID NO: 프라이머 서열*
TRBV2 1 XnTCAAATTTCACTCTGAAGATCCGGTCCACAA
TRBV3-1 2 XnGCTCACTTAAATCTTCACATCAATTCCCTGG
TRBV4-1 3 XnCTTAAACCTTCACCTACACGCCCTGC
TRBV(4-2, 4-3) 4 XnCTTATTCCTTCACCTACACACCCTGC
TRBV5-1 5 XnGCTCTGAGATGAATGTGAGCACCTTG
TRBV5-3 6 XnGCTCTGAGATGAATGTGAGTGCCTTG
TRBV(5-4, 5-5, 5-6, 5-7, 5-8) 7 XnGCTCTGAGCTGAATGTGAACGCCTTG
TRBV6-1 8 XnTCGCTCAGGCTGGAGTCGGCTG
TRBV(6-2, 6-3) 9 XnGCTGGGGTTGGAGTCGGCTG
TRBV6-4 10 XnCCCTCACGTTGGCGTCTGCTG
TRBV6-5 11 XnGCTCAGGCTGCTGTCGGCTG
TRBV6-6 12 XnCGCTCAGGCTGGAGTTGGCTG
TRBV6-7 13 XnCCCCTCAAGCTGGAGTCAGCTG
TRBV6-8 14 XnCACTCAGGCTGGTGTCGGCTG
TRBV6-9 15 XnCGCTCAGGCTGGAGTCAGCTG
TRBV7-1 16 XnCCACTCTGAAGTTCCAGCGCACAC
TRBV7-2 17 XnCACTCTGACGATCCAGCGCACAC
TRBV7-3 18 XnCTCTACTCTGAAGATCCAGCGCACAG
TRBV7-4 19 XnCCACTCTGAAGATCCAGCGCACAG
TRBV7-6 20 XnCACTCTGACGATCCAGCGCACAG
TRBV7-7 21 XnCCACTCTGACGATTCAGCGCACAG
TRBV7-8 22 XnCCACTCTGAAGATCCAGCGCACAC
TRBV7-9 23 XnCACCTTGGAGATCCAGCGCACAG
TRBV9 24 XnGCACTCTGAACTAAACCTGAGCTCTCTG
TRBV10-1 25 XnCCCCTCACTCTGGAGTCTGCTG
TRBV10-2 26 XnCCCCCTCACTCTGGAGTCAGCTA
TRBV10-3 27 XnCCTCCTCACTCTGGAGTCCGCTA
TRBV(11-1, 11-3) 28 XnCCACTCTCAAGATCCAGCCTGCAG
TRBV11-2 29 XnCTCCACTCTCAAGATCCAGCCTGCAA
TRBV(12-3, 12-4, 12-5) 30 XnCCACTCTGAAGATCCAGCCCTCAG
TRBV13 31 XnCATTCTGAACTGAACATGAGCTCCTTGG
TRBV14 32 XnCTACTCTGAAGGTGCAGCCTGCAG
TRBV15 33 XnGATAACTTCCAATCCAGGAGGCCGAACA
TRBV16 34 XnCTGTAGCCTTGAGATCCAGGCTACGA
TRBV17 35 XnCTTCCACGCTGAAGATCCATCCCG
TRBV18 36 XnGCATCCTGAGGATCCAGCAGGTAG
TRBV19 37 XnCCTCTCACTGTGACATCGGCCC
TRBV20-1 38 XnCTTGTCCACTCTGACAGTGACCAGTG
TRBV23-1 39 XnCAGCCTGGCAATCCTGTCCTCAG
TRBV24-1 40 XnCTCCCTGTCCCTAGAGTCTGCCAT
TRBV25-1 41 XnCCCTGACCCTGGAGTCTGCCA
TRBV27 42 XnCCCTGATCCTGGAGTCGCCCA
TRBV28 43 XnCTCCCTGATTCTGGAGTCCGCCA
TRBV29-1 44 XnCTAACATTCTCAACTCTGACTGTGAGCAACA
TRBV30 45 XnCGGCAGTTCATCCTGAGTTCTAAGAAGC
TCR-Jβ 역방향 프라이머 서열
TRBJ 유전자 세그먼트 SEQ ID NO: 프라이머 서열*
TRBJ1-1 46 YmTTACCTACAACTGTGAGTCTGGTGCCTTGTCCAAA
TRBJ1-2 47 YmACCTACAACGGTTAACCTGGTCCCCGAACCGAA
TRBJ1-3 48 YmACCTACAACAGTGAGCCAACTTCCCTCTCCAAA
TRBJ1-4 49 YmCCAAGACAGAGAGCTGGGTTCCACTGCCAAA
TRBJ1-5 483 YmACCTAGGATGGAGAGTCGAGTCCCATCACCAAA
TRBJ1-6 50 YmCTGTCACAGTGAGCCTGGTCCCGTTCCCAAA
TRBJ2-1 51 YmCGGTGAGCCGTGTCCCTGGCCCGAA
TRBJ2-2 52 YmCCAGTACGGTCAGCCTAGAGCCTTCTCCAAA
TRBJ2-3 53 YmACTGTCAGCCGGGTGCCTGGGCCAAA
TRBJ2-4 54 YmAGAGCCGGGTCCCGGCGCCGAA
TRBJ2-5 55 YmGGAGCCGCGTGCCTGGCCCGAA
TRBJ2-6 56 YmGTCAGCCTGCTGCCGGCCCCGAA
TRBJ2-7 57 YmGTGAGCCTGGTGCCCGGCCCGAA
표 1의 45개 정방향 PCR 프라이머는 48개 작용성 가변 세그먼트 각각에 상보성이고, 표 2의 13개 역방향 PCR 프라이머는 TRB 부위(TRBJ)로부터의 작용성 결합(J) 유전자 세그먼트 각각에 상보성이다. TRB V 영역 세그먼트는 서열번호: 114 내지 248의 서열목록에서 동정되고, TRB J 영역 세그먼트는 서열번호: 249 내지 261에서 동정된다. 프라이머는 적절한 정보가 증폭된 서열 내에 존재하여 V 및 J 유전자를 유니크하게 동정하도록 설계되었다(V 유전자 재조합 시그날 서열(RSS) 상류의 서열의 > 40개 염기 쌍 및 J 유전자 RSS 하류의 > 30개 염기 쌍). 대체 프라이머는 각 TCR 아단위 유전자의 V 및 J 영역으로부터 당업자에 의해 선택될 수 있다.
정방향 프라이머는 DNA 서열분석기(표 1의 Xn)에 적합한 범용 정방향 프라이머 서열로 5' 말단에서 변형된다. 유사하게는, 모든 역방향 프라이머는 범용 역방향 프라이머 서열(표 2의 Ym)로 변형된다. 이러한 범용 프라이머의 한 가지 예는 일루미나 GAII 단일 말단 판독 서열분석 시스템의 경우에 표 3 및 4에 제시되어 있다. 45개 TCR Vβ 정방향 프라이머는, 이들 프라이머 중에서 서열 보존을 최대화하도록, Vβ 세그먼트 사이의 비교적 강력한 서열 보존 영역에서 Vβ 세그먼트에 어닐링된다.
TCR-Vβ 정방향 프라이머 서열
TRBV 유전자 세그먼트(s) SEQ ID NO: 프라이머 서열*
TRBV2 58 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTTCAAATTTCACTCTGAAGATCCGGTCCACAA
TRBV3-1 59 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTGCTCACTTAAATCTTCACATCAATTCCCTGG
TRBV4-1 60 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTTAAACCTTCACCTACACGCCCTGC
TRBV(4-2, 4-3) 61 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTTATTCCTTCACCTACACACCCTGC
TRBV5-1 62 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTGCTCTGAGATGAATGTGAGCACCTTG
TRBV5-3 63 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTGCTCTGAGATGAATGTGAGTGCCTTG
TRBV(5-4, 5-5, 5-6, 5-7, 5-8) 64 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTGCTCTGAGCTGAATGTGAACGCCTTG
TRBV6-1 65 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTTCGCTCAGGCTGGAGTCGGCTG
TRBV(6-2, 6-3) 66 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTGCTGGGGTTGGAGTCGGCTG
TRBV6-4 67 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCCTCACGTTGGCGTCTGCTG
TRBV6-5 68 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTGCTCAGGCTGCTGTCGGCTG
TRBV6-6 69 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCGCTCAGGCTGGAGTTGGCTG
TRBV6-7 70 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCCCTCAAGCTGGAGTCAGCTG
TRBV6-8 71 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCACTCAGGCTGGTGTCGGCTG
TRBV6-9 72 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCGCTCAGGCTGGAGTCAGCTG
TRBV7-1 73 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCACTCTGAAGTTCCAGCGCACAC
TRBV7-2 74 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCACTCTGACGATCCAGCGCACAC
TRBV7-3 75 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTCTACTCTGAAGATCCAGCGCACAG
TRBV7-4 76 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCACTCTGAAGATCCAGCGCACAG
TRBV7-6 77 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCACTCTGACGATCCAGCGCACAG
TRBV7-7 78 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCACTCTGACGATTCAGCGCACAG
TRBV7-8 79 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCACTCTGAAGATCCAGCGCACAC
TRBV7-9 80 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCACCTTGGAGATCCAGCGCACAG
TRBV9 81 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTGCACTCTGAACTAAACCTGAGCTCTCTG
TRBV10-1 82 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCCCTCACTCTGGAGTCTGCTG
TRBV10-2 83 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCCCCTCACTCTGGAGTCAGCTA
TRBV10-3 84 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCTCCTCACTCTGGAGTCCGCTA
TRBV(11-1, 11-3) 85 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCACTCTCAAGATCCAGCCTGCAG
TRBV11-2 86 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTCCACTCTCAAGATCCAGCCTGCAA
TRBV(12-3, 12-4, 12-5) 87 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCACTCTGAAGATCCAGCCCTCAG
TRBV13 88 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCATTCTGAACTGAACATGAGCTCCTTGG
TRBV14 89 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTACTCTGAAGGTGCAGCCTGCAG
TRBV15 90 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTGATAACTTCCAATCCAGGAGGCCGAACA
TRBV16 91 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTGTAGCCTTGAGATCCAGGCTACGA
TRBV17 92 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTTCCACGCTGAAGATCCATCCCG
TRBV18 93 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTGCATCCTGAGGATCCAGCAGGTAG
TRBV19 94 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCTCTCACTGTGACATCGGCCC
TRBV20-1 95 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTTGTCCACTCTGACAGTGACCAGTG
TRBV23-1 96 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCAGCCTGGCAATCCTGTCCTCAG
TRBV24-1 97 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTCCCTGTCCCTAGAGTCTGCCAT
TRBV25-1 98 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCCTGACCCTGGAGTCTGCCA
TRBV27 99 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCCCTGATCCTGGAGTCGCCCA
TRBV28 100 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTCCCTGATTCTGGAGTCCGCCA
TRBV29-1 101 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCTAACATTCTCAACTCTGACTGTGAGCAACA
TRBV30 102 CAAGCAGAAGACGGCATACGAGCTCTTCCGATCTCGGCAGTTCATCCTGAGTTCTAAGAAGC
TCR-Jβ 역방향 프라이머 서열
TRBJ 유전자 세그먼트 SEQ ID NO: 프라이머 서열*
TRBJ1-1 103 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTTTACCTACAACTGTGAGTCTGGTGCCTTGTCCAAA
TRBJ1-2 468 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACCTACAACGGTTAACCTGGTCCCCGAACCGAA
TRBJ1-3 104 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACCTACAACAGTGAGCCAACTTCCCTCTCCAAA
TRBJ1-4 105 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTCCAAGACAGAGAGCTGGGTTCCACTGCCAAA
TRBJ1-5 484 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACCTAGGATGGAGAGTCGAGTCCCATCACCAAA
TRBJ1-6 106 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTCTGTCACAGTGAGCCTGGTCCCGTTCCCAAA
TRBJ2-1 107 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTCGGTGAGCCGTGTCCCTGGCCCGAA
TRBJ2-2 108 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTCCAGTACGGTCAGCCTAGAGCCTTCTCCAAA
TRBJ2-3 109 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACTGTCAGCCGGGTGCCTGGGCCAAA
TRBJ2-4 110 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTAGAGCCGGGTCCCGGCGCCGAA
TRBJ2-5 111 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTGGAGCCGCGTGCCTGGCCCGAA
TRBJ2-6 112 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTGTCAGCCTGCTGCCGGCCCCGAA
TRBJ2-7 113 AATGATACGGCGACCACCGAGATCTGTGAGCCTGGTGCCCGGCCCGAA
* 볼드체 서열은 서열 분석을 위한 범용 R 올리고뉴클레오티드를 나타낸다.
이 시스템을 사용하여 재배열된 TCRβ CDR3 영역에 애한 전체 PCR 생성물은 대략 200 bp 길이일 것으로 예상된다. 게놈 주형은 45개 TCR Vβ F 프라이머의 풀("VF 풀") 및 12개 TCR Jβ R 프라이머의 풀("JR 풀")을 사용하여 PCR 증폭시킨다. 예를 들면, 50 ㎕ PCR 반응물을 1.0 μM VF 풀(각각의 유니크 TCR Vβ F 프라이머에 대해 22 nM), 1.0 μM JR 풀(각각의 유니크 TCRBJR 프라이머에 대해 77 nM), IX QIAGEN 다중 PCR 마스터 혼합물(QIAGEN 파트 넘버 206145), 10% Q-용액(QIAGEN) 및 16 ng/㎕ gDNA와 함께 사용할 수 있다.
IGH 프라이머 세트는, 천연 B 세포의 초기 자극 후에 관찰되는 바와 같이, 재배열된 IGH 유전자 내의 체세포 초돌연변이에 대한 가능성을 조절하기 위해 설계되었다. 결과적으로, 모든 프라이머는 정상보다 약간 길게 설계되었고, 작용성 및 비작용성 체세포 돌연변이체 둘 다에 대해 내성이 있는 3개 이상의 뉴클레오티드의 고도 보존된 서열 내로 각 프라이머의 3' 말단을 고정하도록 설계되었다.
IGHJ 역방향 프라이머는 IGHJ 세그먼트 내의 고도 보존된 GGGG 서열 모티프 상에 각각의 PCR 프라이머의 3' 말단을 고정하도록 설계되었다. 이들 서열은 표 5에 제시되어 있다. 밑줄친 서열은 결실될 수 있는 RSS 내의 10개 염기 쌍이다. 이들은 바코드 설계로부터 제외되었다. 볼드체 서열은 IGH J 역방향 PCR 프라이머의 역방향 보체이다. 이탤릭체 서열은 J 동정을 위한 바코드이다(8개 바코드는 6개 유전자 및 유전자 내의 2개 대립유전자를 나타낸다). 밑줄친 세그먼트 내의 추가의 서열은 추가의 대립유전자 동정을 나타낼 수 있다.
Figure pct00003
IGHJ 역방향 PCR 프라이머의 서열은 표 6에 제시되어 있다.
Figure pct00004
V 프라이머는 2개의 보존된 트립토판(W) 코돈 사이의 FR2 보존 영역에 설계되었다.
프라이머 서열은 당해 코돈을 보존하는 모든 IGHV 부류에 있어서 트립토판 코돈 상의 3' 말단에 고정되어 있고, 마지막 3개 뉴클레오티드(트립토판의 TGG)는 체세포 초돌연변이에 대해 내성이 있는 것으로 예상되는 서열 상에 고정되고, 이는 각 프라이머에 있어서 6개 뉴클레오티드 중의 5개 뉴클레오티드의 3' 고정을 제공한다. 상류 서열은 정상보다 추가로 연장되고, 디제너레이트(degenerate) 뉴클레오티드를 포함하여, 표 7에 제시된 바와 같이, 프라이머의 어닐링 특성을 현저하게 변화시키지 않고서 미스매치가 초돌연변이(또는 밀접하게 관련된 IGH V 부류 사이)에 의해 유도되도록 한다. V 유전자 세그먼트의 서열은 서열번호: 262 내지 420이다.
IgH V 세그먼트 SEQ ID NO: 서열
>IGHV1 443 TGGGTGCACCAGGTCCANGNACAAGGGCTTGAGTGG
>IGHV2 444 TGGGTGCGACAGGCTCGNGNACAACGCCTTGAGTGG
>IGHV3 445 TGGGTGCGCCAGATGCCNGNGAAAGGCCTGGAGTGG
>IGHV4 446 TGGGTCCGCCAGSCYCCNGNGAAGGGGCTGGAGTGG
>IGHV5 447 TGGGTCCGCCAGGCTCCNGNAAAGGGGCTGGAGTGG
>IGHV6 448 TGGGTCTGCCAGGCTCCNGNGAAGGGGCAGGAGTGG
>IGH7_3.25p 449 TGTGTCCGCCAGGCTCCAGGGAATGGGCTGGAGTTGG
>IGH8_3.54p 450 TCAGATTCCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGAG
>IGH9_3.63p 451 TGGGTCAATGAGACTCTAGGGAAGGGGCTGGAGGGAG
열 사이클 조건은 당업자의 방법을 따를 수 있다. 예를 들면, PCR 발현 열 사이클러(Hybaid, Ashford,UK)를 사용하면, 하기 사이클 조건이 사용될 수 있다: 95℃에서 15분 동안 1회 사이클, 94℃에서 30초 동안, 59℃에서 30초 동안 및 72℃에서 1분 동안 25 내지 40회 사이클, 이어서 72℃에서 10분 동안 1회 사이클.
서열분석
서열분석은 증폭된 DNA 분자 내의 규정된 영역에 하이브리드화하는 서열분석 올리고뉴클레오티드 세트를 사용하여 달성된다.
바람직하게는, 증폭된 J 유전자 세그먼트는 각각 RSS 부위로부터 하류의 위치 +11 내지 +14에 유니크한 4개 염기 태그를 갖는다. 따라서, 서열분석 올리고뉴클레오티드는 RSS 부위 하류의 위치 +11 내지 +14에서 증폭된 Jβ 유전자 세그먼트 내에 4개 염기 태그에 인접하여 하이브리드화한다.
예를 들면, TCRB에 대한 서열분석 올리고뉴클레오티드는 당해 "태그"의 하류에서 관찰된 컨센서스 뉴클레오티드 모티프에 어닐링하도록 설계되어, 판독된 서열의 처음 4개 염기는 J 세그먼트를 유니크하게 동정할 것이다(표 8).
서열분석 올리고뉴클레오티드
서열분석 올리고뉴클레오티드 SEQ ID NO: 올리고뉴클레오티드 서열
Jseq 1-1 470 ACAACTGTGAGTCTGGTGCCTTGTCCAAAGAAA
Jseq 1-2 471 ACAACGGTTAACCTGGTCCCCGAACCGAAGGTG
Jseq 1-3 472 ACAACAGTGAGCCAACTTCCCTCTCCAAAATAT
Jseq 1-4 473 AAGACAGAGAGCTGGGTTCCACTGCCAAAAAAC
Jseq 1-5 474 AGGATGGAGAGTCGAGTCCCATCACCAAAATGC
Jseq 1-6 475 GTCACAGTGAGCCTGGTCCCGTTCCCAAAGTGG
Jseq 2-1 476 AGCACGGTGAGCCGTGTCCCTGGCCCGAAGAAC
Jseq 2-2 477 AGTACGGTCAGCCTAGAGCCTTCTCCAAAAAAC
Jseq 2-3 478 AGCACTGTCAGCCGGGTGCCTGGGCCAAAATAC
Jseq 2-4 479 AGCACTGAGAGCCGGGTCCCGGCGCCGAAGTAC
Jseq 2-5 480 AGCACCAGGAGCCGCGTGCCTGGCCCGAAGTAC
Jseq 2-6 481 AGCACGGTCAGCCTGCTGCCGGCCCCGAAAGTC
Jseq 2-7 482 GTGACCGTGAGCCTGGTGCCCGGCCCGAAGTAC
판독된 서열의 J 및 V 세그먼트의 지정에 사용된 정보는 증폭된 서열 내에 전적으로 함유되어 있고, PCR 프라이머의 속성에 의존하지 않는다. 이들 서열분석 올리고뉴클레오티드를 선택하고, 이에 의해 또 다른 J 세그먼트에 특이적인 올리고뉴클레오티드에 의한 하나의 J 세그먼트에 대한 서열분석 반응의 혼잡 프라이밍은 올바른 서열분석 올리고뉴클레오티드로부터의 서열 데이타와 동일한 뉴클레오티드를 정확하게 개시하는 서열 데이타를 생성할 수 있다. 이러한 방식으로, 서열분석 올리고뉴클레오티드의 혼잡 어닐링은 생성된 서열 데이타의 품질에 영향을 미치지 않았다.
V 세그먼트의 제2 보존된 시스테인과 J 세그먼트의 보존된 페닐알라닌 사이의 뉴클레오티드로서 규정된 CDR3 영역의 평균 길이는 35±3이고, 따라서 Jβ 세그먼트 태그로부터 개시하는 서열은 판독된 50개 염기 쌍에서 완벽한 V-D-J 결합을 거의 언제나 포획할 것이다.
TCR βJ 유전자 세그먼트는 길이가 대략 50개 염기쌍이다. 미스매치된 서열을 어닐링하고 연장시키는 PCR 프라이머는 혼잡 프라이머로서 지칭된다. TCR Jβ 역방향 PCR 프라이머는 서열분석 올리고뉴클레오티드와의 중첩을 최소화하여 다중 PCR과 관련하여 혼잡 프라이밍을 최소화하도록 설계된다. 13개 TCR Jβ 역방향 프라이머는 서열분석 프라이머와의 최소 중첩과 함께 컨센서스 스플라이스 부위 모티프의 3' 말단에 고정된다. TCR Jβ 프라이머는 디폴트 파라미터하에 서열분석 프로그램을 사용하는 일정 어닐링 온도를 제공한다.
서열분석 반응에 있어서, IGHJ 서열분석 프라이머는 표 9에 제시된 바와 같이 보존된 CAG 서열까지 3개 뉴클레오티드가 이어져있다.
Figure pct00005
서열 데이타의 처리
서열분석 결과의 신속한 분석을 위해, 알고리즘이 당업자에 의해 개발될 수 있다. 바람직한 방법은 다음과 같다.
서열분석 전에 TCRβ CDR3 영역을 증폭시키는 PCR 단계의 사용은, 상이한 Vβ 및 Jβ 유전자 세그먼트를 사용하는 CDR3 영역의 PCR 증폭 효율에 있어서의 차이에 기인하여, 당해 서열의 추정된 상대적 풍부함(abundance)에서 조직적인 바이어스를 잠재적으로 도입할 수 있다. 각각의 PCR 증폭 사이클은 평균 크기 1.51/15=1.027의 바이어스를 잠재적으로 도입한다. 따라서, 25회 사이클의 PCR은 독특한 CDR3 영역 서열의 추정된 상대적 풍부함에서 평균 크기 1.02725=1.95의 전체 바이어스를 도입한다.
서열분석된 판독치를 CDR3 서열을 포함하는 것들에 대해 여과한다. 서열분석기 데이타 처리는 각 판독치의 1차 서열에서 에러를 제거하고 당해 데이타를 압축하는 일련의 단계를 수반한다. 복잡성 여과기는 서열분석기로부터 잘목 판독한 서열의 대략 20%를 제거한다. 이어서, 서열은 13개 TCRB J-영역 중의 하나 및 54 V-영역 중의 하나 둘 다에 대해 최소의 6개 염기 매치를 갖도록 하는 것이 필요하다. 파지(phage) 서열을 함유하는 대조군 레인에 필터를 적용하면, 7백만 내지 8백만개 서열 중의 단지 하나의 서열만이 이들 단계를 통과했다. 마지막으로, 가장 인접한 알고리즘을 사용하여, PCR 에러 및 서열분석 에러 둘 다를 제거하기 위해, 밀접하게 관련된 서열의 병합에 의해 당해 데이타를 유니크 서열로 정리한다.
당해 데이타를 분석하면, PCR 생성물 중의 서열 비율은 혈액에서 클론형의 진정한 분포를 평가하기 전에 서열 데이타로부터 역방향으로 유도된 작업이어야 한다. 관찰된 각 서열에 있어서, 본원의 데이타에서 소정 수의 시간, 즉 당해 서열이 특정 크기의 PCR 풀로부터 샘플링되는 가능성이 평가된다. 서열분석된 CDR3 영역이 PCR 생성물의 대규모 풀로부터 무작위로 샘플링되기 때문에, 각 서열에 대한 관찰 수는 푸아송(Poisson) 분포로부터 수득했다. 푸아송 파라미터는 PCR용 주형을 제공한 T 세포 게놈의 수에 따라 정량화된다. 단순한 푸아송 혼합물 모델은 둘 다 이들 파라미터를 평가하고 각 분포로부터 수득되는 각 서열에 대한 쌍대 확률(pairwise probability)을 제공한다. 이는 혈액으로부터 수득한 각 서열의 풍부함을 재구성하는 기대 최대화 방법이다.
다양성을 평가하기 위해, "미지 종(unseen species)" 공식이 사용된다. 당해 공식을 적용하기 위해, 유니크한 적응 면역 수용체(예: TCRB) 클론형을 종 대신에 취한다. 수학적 해결책은 TCRβ"종" 또는 클론형의 전체 수, S에 대해, 서열분석 실험이 서열 s의 x s 복제를 관찰함을 제공한다. 모든 관찰되지 않은 클론형에 있어서, x s 는 0이고, 각각 TCR 클론형은 파라미터 λs를 갖는 푸아송 방법에 따라 채혈로 "포획된다". T 세포 게놈의 수는 제1 측정 1 및 제2 측정에서 서열분석된다. 다수의 유니크 서열이 존재하기 때문에, 적분은 합을 나타낸다. G(λ)가 파라미터 λ1, ···, λs의 경험적 분포 함수이고, nx이 정확하게 x배 서열분석된 클론형의 수이면, 클론형의 전체 수, 즉 다양성 E의 측정치는 다음 수학식에 의해 제공된다:
Figure pct00006
소정 실험에 있어서, T 세포가 몇몇 임의 공급원(채혈)으로부터 샘플링되는 경우, 당해 수학식을 사용하여 전체 공급원 중의 종의 전체 다양성을 평가한다. 당해 아이디어는 각 크기에서 클론형의 샘플링된 수가 전체 공급원 내의 클론형의 근본적인 분포를 평가하기에 충분한 정보를 함유한다는 것이다. 당해 수학식을 유도하기 위해, 정확한 측정을 반복하는 경우에 예상되는 새로운 종의 수를 평가했다. 수학식의 한계는 측정을 무한대로 반복해도 존재한다. 당해 결과는 전체 근본적인 공급원 모집단에서 종의 기대 수이다. 값 △(t), 즉 제2 측정으로 관찰된 신규 클론형의 수는 바람직하게는 하기 수학식을 사용하여 측정되어야 한다:
Figure pct00007
상기 수학식에서, msmt1 및 msmt2는 각각 측정 1 및 2로부터 클론형의 수이다. 1-e - λt의 테일러 팽창은 △(t)= E(x 1 )t-E(x 2 )t 2 +E(x 3 )t 3 -....을 제공하고, 이는 기대치 E( n x )를 제1 측정에서 관찰된 수로 치환함으로써 접근할 수 있다. 제1 측정에서 관찰된 수에 사용하여, 이 수학식은 1.6*105 신규한 유니크 서열이 제2 측정에서 관찰되어야 한다는 것을 예상한다. 제2 측정의 실제 값은 1.8*105 신규 TCRβ 서열이었고, 이는 예상이 전체 다양성에 대한 유효한 하한을 제공한다는 것을 암시한다. 오일러 변형(Euler's transformation)이 △(∞)을 위한 하한을 생성하기 위해 △(t)를 조정하는데 사용되었다.
다양성 측정을 사용한 질환의 진단
다양성의 측정을 하기와 같이 질환 또는 치료 효과 진단에 사용할 수 있다. T 세포 및/또는 B 세포 수용체 레퍼토리를, 예를 들면, 백혈병에 대한 조혈 간세포 이식(HSCT) 치료 후에 다양한 시점에서 측정할 수 있다. TCRB 레퍼토리의 다양성의 변화 및 전체 다양성의 변화 둘 다를 사용하여 면역경쟁을 측정할 수 있다. 이식 후의 면역 재구성의 예상 속도에 대한 기준이 사용된다. 임의의 두 시점 사이의 다양성의 변화 속도를 사용하여 치료를 적극적으로 변형시킬 수 있다. 고정된 시점에서의 전체 다양성이 또한 중요한 척도이고, 이는 당해 기준을 사용하여 상이한 환자를 비교할 수 있기 때문이다. 특히, 전체 다양성은 면역 재구성의 임상적 정의와 상호관련되어야 하는 척도이다. 이 정보를 사용하여, 예를 들면, HSCT 후에 항생제, 항바이러스제 및 항균제의 예방적 약물 섭생을 변형시킬 수 있다.
동종이계 조혈 세포 이식 후의 면역 재구성의 평가는 다양성의 변화를 측정하여 결정할 수 있다. 이들 기술은 또한, 백신접종에 대한 T 세포 반응의 분석에 의해 측정한 바와 같이, 노화에 따르는 임파구 다양성 감퇴의 분석을 향상시킬 수 있다. 추가로, 본 발명의 방법은 αβ T 세포의 생성, 성장 및 발달에 대해 직접 효과를 갖는 조사 치료제(예: 인터류킨-7(IL-7))를 평가하는 수단을 제공한다. 더욱이, 이들 기술을 흉선 T 세포 모집단의 연구에 적용하는 것은 흉선세포의 포지티브 및 네가티브 선택 뿐만 아니라 T 세포 수용체 유전자 재배열의 과정을 통찰할 것이다.
충분한 작용성 면역계를 갖지 않지만 모계 전달된 항체를 가질 수 있는 신생아는 면역결핍 상태이다. 신생아는 이의 면역계가 자동적으로 발달할 때까지 다수의 질병에 감수성이고, 본 발명의 적응 면역계의 측정은 신생아 환자에서 유용성을 입증할 것이다.
임파구 다양성은 기타 선천적 또는 후천적 면역결핍 상태에서 평가될 수 있다. 면역계가 약화되었거나 약화되고 있는 AIDS 환자를 모니터링하여, 질환 단계를 측정하고 면역경쟁의 재구성을 목적으로 하는 요법에 대한 환자의 반응을 측정할 수 있다.
본 발명의 방법의 또 다른 적용은 수용체 신체가 공여된 기관을 거부하지 않도록 약물 치료 중인 고체 기관 이식 수용체를 위한 진단적 측정법을 제공하는 것이다. 일반적으로, 이들 환자는 면역억제 요법하에 있다. 숙주의 면역경쟁의 모니터링은 이식 전후에 보조할 수 있다.
방사선 또는 화학요법 약물에 노출된 개체는 골수 이식을 하거나, 달리는 관련된 면역경쟁과 함께 T 세포 모집단의 보충을 필요로 한다. 본 발명의 방법은 골수 이식 또는 이들 치료 과정에서 림프구의 재구성을 정성적 및 정량적으로 평가하는 수단을 제공한다.
다양성을 측정하는 한 가지 방식은, 게놈 DNA의 적어도 2개 샘플을 비교하는 것이며, 바람직하게는 게놈 DNA 중의 하나의 샘플은 환자의 것이고 다른 샘플은 정상 피검체의 것이거나, 달리는 게놈 DNA의 하나의 샘플은 치료학적 처리 전의 환자의 것이고 다른 샘플은 치료 후의 환자의 것이거나, 게놈 DNA의 2개 샘플이 치료 동안 상이한 시점에서의 동일한 환자의 것이다. 또 다른 진단 방식은, 예를 들면, 사람 환자의 면역경쟁이 비교에 의해 평가되는, 게놈 DNA의 샘플 중에서 다양성의 비교에 기반할 수 있다.
바이오마커
개체 사이의 공유된 TCR 서열은 암, 자가면역 질환 및 감염성 질환을 포함하는 다양한 질병에 대한 새로운 부류의 잠재적 바이오마커를 나타낸다. 이들은 다수의 사람 질환에 대해 보고된 공공 T 세포이다. TCR은 T 세포가 클론 연장의 결과이기 때문에 바이오마커로서 유용하며, 이에 의해 면역계는 신속한 세포 분열을 통해 이들 바이오마커를 증폭시킨다. 증폭 후에, TCR은 표적이 작은 경우(예: 초기 단계 종양)에도 용이하게 검출된다. TCR은 또한, 다수의 경우에 T 세포가 추가로 원인이 되어 질환에 관여할 수 있고 따라서 약물 표적을 구성할 수 있기 때문에 바이오마커로서 유용하다. T 세포 자가 상호작용은 자가면역과 관련된 몇몇 질환, 예를 들면, 다발성 경화증, I형 당뇨병 및 류마티스성 관절염에서 중요 역할을 담당하는 것으로 생각된다.
적응 면역계 세포로부터 추출한 핵산의 대규모 서열분석을 사용하여 T 세포 수용체 유전자 또는 항체 유전자의 다양성을 분석함으로써 환자의 적응 면역을 측정 할 수 있다. 그로 인해 본 발명의 방법은 면역계를 손상시키는 질환 또는 상태, 및 재구성을 목적으로 하는 치료법의 효과를 평가하는 수단을 제공할 수 있다.
실시예
실시예 1: 샘플 획득, PBMC 분리, FACS 분류 및 게놈 DNA 추출
35세 및 37세의 2명의 건강한 남성 공여체로부터의 말초 혈액 샘플은 프레드 허친슨 암 연구 센터(FHCRC)의 임상 심사 위원회로부터 승인된 형식을 사용하여 서면 고지에 입각한 동의와 함께 수득했다. 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 Ficoll-Hypaque® 밀도 구배 분리로 분리했다. T-림프구는 각 대상 CD8+CD45RO+/- 및 CD4+CD45RO+/-에 대해 4개의 구획으로 유동 분류했다. 림프구의 특성화를 위해, 다음과 같이 접합된 항-사람 항체를 사용했다: CD4 FITC(클론 M-T466, Miltenyi Biotec), CD8 PE(클론 RPA-T8, BD Biosciences), CD45RO ECD(클론 UCHL-1, Beckman Coulter) 및 CD45RO APC(클론 UCHL-1, BD Biosciences). 전체 PBMC의 염색은 4℃에서 20분 동안 적합한 항체의 조합으로 수행하고, 염색된 세포를 분석 전에 1회 세척했다. 림프구 아집단을 BD FACSAriaTM 세포-분류 시스템(BD Biosciences)으로 FACS 분류로 분리했다. 데이타는 FlowJo 소프트웨어(Treestar Inc.)를 사용하여 분석했다.
전체 게놈 DNA를 분류된 세포로부터 QIAamp®DNA 혈액 미니 키트(QIAGEN®)를 사용하여 추출시켰다. 단일 반수체 게놈의 대략적인 질량은 3 pg이다. 각 T 세포 구획에서 수백만개의 재배열된 TCRB를 샘플링하기 위해, 6 내지 27 ㎍의 주형 DNA를 각 구획으로부터 수득했다(참조: 표 10).
CD8+/CD45RO- CD8+/CD45RO+ CD4+/CD45RO- CD4+/CD45RO+ 　공여체
세포(x106) 9.9 6.3 6.3 10 2
DNA (ug) 27 13 19 25
PCR 사이클 25 25 30 30
클러스터 (K/tile) 29.3 27 102.3* 118.3*
VJ 서열 (x106) 3.0 2.0 4.4 4.2
세포 4.9 4.8 3.3 9 1
DNA 12 13 6.6 19
PCR 사이클 30 30 30 30
클러스터 116.3 121 119.5 124.6
VJ 서열 3.2 3.7 4.0 3.8
세포 NA NA NA 0.03 PCR
바이어스 평가
DNA NA NA NA 0.015
PCR 사이클 NA NA NA 25 + 15
클러스터 NA NA NA 1.4 / 23.8
VJ 서열 NA NA NA 1.6
실시예 2: 실질적 T 세포 수용체 β 쇄 스펙트라타이핑
실질적 TCR β 쇄 스펙트라타이핑은 다음과 같이 수행했다. 상보성 DNA는 분류된 T 세포 집단으로부터 추출된 RNA로부터 합성했고, 재배열된 TCR β 쇄 CDR3 영역의 다중 PCR 증폭용 주형으로서 사용했다. 각 다중 반응은 TCR β 쇄 불변 영역에 특이적인 6-FAM-표지된 안티센스 프라이머, 및 2 내지 5개의 TCR β 쇄 가변(TRBV) 유전자 특이적 센스 프라이머를 함유한다. 모든 23개의 작용성 Vβ 부류를 연구했다. PCR 반응은 다음 사이클 조건하에 하이바이드 (Hybaid) PCR 고속 열 사이클러(Hybaid, Ashford, UK) 상에서 수행했다: 95℃에서 6분 동안 1 사이클, 94℃에서 30초 동안, 58℃에서 30초 동안 및 72℃에서 40초 동안 40 사이클, 이어서 72℃에서 10분 동안 1 사이클. 각 반응은 최종 용적 20 ㎕로 cDNA 주형, 500 uM dNTP, 2 mM MgCl2 및 AmpliTaq 골드 완충제 중의 AmpliTaq 골드 DNA 폴리머라제(Perkin Elmer) 1 유닛을 함유한다. 완료 후, PCR 생성물의 분획을 1:50으로 희석하고, DNA 분석기를 사용하여 분석했다. DNA 분석기의 아웃풋은 공지된 크기 표준을 함유하는 참조 샘플의 형광 강도 자취를 비교하여 형광 강도 대 길이의 분포로 전환시켰다.
실시예 3: TCRβ CDR3 영역의 다중 PCR 증폭
CDR3 결합(junction) 영역은 다음과 같이 조작적으로 규정된다. 결합은 V-영역의 제2 보존된 시스테인으로 개시하여 J-영역의 보존된 페닐알라닌으로 종결된다. 관찰된 서열의 역방향 보충물을 취하고 플랭킹 영역을 해독하여, 결합 경계를 정의하는 아미노산을 동정했다. 이들 경계 사이의 뉴클레오티드의 수는 길이를 결정하고, 따라서 CDR3 영역의 프레임을 결정한다. 서열분석을 위한 주형 라이브러리를 생성하기 위해, 다중 PCR 시스템을 선택하여 게놈 DNA로부터 재배열된 TCRβ 부위를 증폭시켰다. 다중 PCR 시스템은 각각 작용성 TCR Vβ 세그먼트에 특이적인 45개의 정방향 프라이머(표 3), 및 각각 TCR Jβ 세그먼트에 특이적인 13개의 역방향 프라이머(표 4)를 사용한다. 프라이머를 선택하여, 적당한 정보가 증폭된 서열 내에 존재하여 V 및 J 유전자를 유니크하게 동정하는 것을 제공한다(V 유전자 재조합 시그날 서열(RSS)의 서열 상류의 40개 초과 염기 쌍, 및 J 유전자 RSS의 하류의 30개 초과 염기 쌍).
정방향 프라이머는 5' 말단에서 일루미나 GA2 클러스터 스테이션 고체-상 PCR과 상용성인 범용 정방향 프라이머 서열로 변형된다. 유사하게는, 역방향 프라이머 모두는 GA2 범용 역방향 프라이머 서열로 변형된다. 각 정방향 프라이머의 3' 말단은 재조합 시그날 서열(RSS)에 비해 Vβ 세그먼트 중의 위치 -43에서 고정되어 증폭된 영역 내에서 유니크한 Vβ 태그 서열을 제공한다. 각 Jβ 세그먼트에 특이적인 13개의 역방향 프라이머를, 각 프라이머의 3' 말단을 인트론/엑손 접합을 교차시키면서, 3' 인트론에 고정시켰다. Jβ 세그먼트의 증폭된 부분에 상보성인 Jβ 세그먼트에 상보성인 13개의 서열분석 프라이머를 설계하여, 서열의 처음 소수의 염기가 유니크한 Jβ 태그 서열을 포획하도록 한다.
평균 J 결실은 4bp +/- 2.5bp 이고, 이는 10개 초과의 뉴클레오티드의 J 결실이 1% 미만의 서열에서 발생한다는 것을 의미한다. 13개의 상이한 TCR Jβ 유전자 세그먼트는 각각 RSS 부위 하류의 위치 +11 내지 +14에서 유니크한 4개의 염기 태그를 가졌다. 따라서, 올리고뉴클레오티드의 서열분석은 이 "태그"의 바로 하류에서 관찰된 컨센서스 뉴클레오티드 모티프에 어닐링되도록 설계되어, 서열 판독의 처음 4개 염기가 J 세그먼트를 유니크하게 동정하도록 했다(표 5).
서열 판독의 J 및 V 세그먼트를 지정하는데 사용되는 정보는 증폭된 서열에 완전히 함유되고, PCR 프라이머의 동일성에 의존하지 않는다. 이러한 서열분석 올리고뉴클레오티드를 선택하여, 다른 J 세그먼트에 특이적인 올리고뉴클레오티드에 의한 하나의 J 세그먼트에 대한 서열분석 반응의 혼잡 프라이밍이 올바른 서열분석 올리고뉴클레오티드로부터의 서열 데이타로서 동일한 뉴클레오티드에서 정확하게 개시하는 서열 데이타를 생성할 수 있다. 이러한 방식으로, 서열분석 올리고뉴클레오티드의 혼잡 어닐링은 생성된 서열 데이타의 품질에 영향을 미치지 않았다.
V 세그먼트의 제2 보존된 시스테인과 J 세그먼트의 보존된 페닐알라닌 사이의 뉴클레오티드로서 관례에 따라 정의된 CDR3 영역의 평균 길이는 35+/-3이고, 따라서 Jβ 세그먼트 태그로부터 개시하는 서열은 거의 항상 50 bp 판독에서 완전한 VNDNJ 결합을 포획한다.
TCR βJ 유전자 세그먼트는 길이가 대략 50 bp이다. 미스매치 서열에 어닐링되어 연장되는 PCR 프라이머는 혼잡 프라이머로서 칭명된다. 다중 PCR의 맥락에서, 특히 유전자 부류 맥락에서 혼잡 프라이밍의 위험 때문에, TCR Jβ 역방향 PCR 프라이머를 서열분석 올리고뉴클레오티드와의 중첩을 최소화하도록 설계했다. 따라서, 13개 TCR Jβ 역방향 프라이머를 서열분석 프라이머와의 최소 중첩으로 컨센서스 스플라이싱 부위 모티프 상의 3' 말단에 고정시킨다.
TCR Jβ 프라이머를 디폴트 파라미터하에 OligoCalc 프로그램 (http://www.basic.northwestern.edu/biotools/oligocalc.html)을 사용하여 일정한 어닐링 온도 (50 mM 염 중 58°)를 위해 설계했다 .
45개의 TCR Vβ 정방향 프라이머는, 두가지 명시적 목적을 위해, Vβ 세그먼트 사이의 비교적 강력한 서열 보존 영역에서 Vβ 세그먼트에 어닐링하도록 설계했다. 첫째, 이들 프라이머 사이의 서열 보존의 최대화는 각 프라이머의 차별(differential) 어닐링 특성에 대한 가능성을 최소화한다. 둘째, 프라이머는 V 및 J 프라이머 사이의 증폭된 영역이 사용된 특이적 Vβ유전자 세그먼트를 동정하기에 충분한 TCR Vβ 서열 정보를 함유하도록 선택했다. 이는 TCR Vβ 프라이머에 의한 혼잡 프라이밍의 경우에, 잘못된 TCR Vβ유전자 세그먼트 지정 위험을 제거한다. TCR Vβ 정방향 프라이머는 TCRβ 부위에서 모든 공지된 비-위유전자용 (non-pseudogene)으로 설계되었다.
이러한 시스템을 사용하여 성공적으로 재배열된 TCRβ CDR3 영역을 위한 전체 PCR 생성물은 길이가 약 200 bp일 것으로 기대된다. 게놈 주형은 45개 TCR Vβ F 프라이머의 등몰량 풀("VF 풀") 및 13개 TCR Jβ R 프라이머의 등몰량 풀("JR 풀")을 사용하여 PCR 증폭시켰다. 50 ㎕ PCR 반응을 1.0 μM VF 풀(각각의 유니크한 TCR Vβ F 프라이머에 대해 22 nM), 1.0 μM JR 풀(각각의 유니크한 TCRBJR 프라이머에 대해 77 nM), 1X QIAGEN 다중 PCR 마스터 혼합물(QIAGEN 파트 번호 206145), 10% Q-용액(QIAGEN) 및 16 ng/ul gDNA로 설정했다. 하기 열 사이클 조건을 다음 사이클 조건하에 PCR 고속 열 사이클러(Hybaid, Ashford, UK)에 사용했다: 95℃에서 15분 동안 1 사이클, 94℃에서 30초 동안, 59℃에서 30초 동안 및 72℃에서 1분 동안 25 내지 40사이클, 이어서 72℃에서 10분 동안 1 사이클. PCR의 12 내지 20개 웰을, 재배열된 TCRβ CDR3 부위의 수천 내지 수백만 중의 수백을 샘플링하기 위해 각 라이브러리에 대해 수행했다.
실시예 4: 서열 데이타의 전처리
서열분석기 데이타 처리는 각 판독의 1차 서열에서 에러를 제거하고, 데이타를 압축하는 일련의 단계를 포함한다. 첫째, 복합성 필터는 서열분석기로부터 잘못 판독된 서열의 약 20%를 제거한다. 이어서, 서열은 13개 J-영역 중의 하나 및 54개 V-영역 중의 하나 모두에 대한 최소 6개의 염기 매치를 가질 것을 필요로 했다. 파지 서열을 함유하는 대조군 레인에 필터를 적용한 후, 평균 7백만 내지 8백만 중의 단지 하나의 서열만이 펄스 (false) 포지티브 없이 이들 단계를 통과했다. 최종적으로, 가장 근접한 알고리즘을 사용하여 밀접하게 관련된 서열의 병합에 의해 데이타를 유니크한 서열로 정리함으로써 PCR 에러 및 서열분석 에러 둘 다를 제거했다(참조: 표 10).
실시예 5: PCR 풀 및 혈액 샘플 중의 상대적 CDR3 서열 풍부함 평가
데이타 정리 후, 혈액 재구성에서 T-세포 서열의 근본적 분포는 서열 데이타로부터 유도했다. 과정은 다음 3단계를 사용한다: 1) 말초 혈액으로부터 채취한 T-세포 유동 분류, 2) PCR 증폭 및 3) 서열분석. 데이타를 분석하여, PCR 생성물 중의 서열 비율은, 혈액 중의 클론형의 진정한 분포를 평가하기 전에, 서열 데이타로부터 역방향 작업으로 유도되어야 한다.
본원의 데이타에서 소정의 시간에 관찰된 각 서열에 있어서, 당해 서열이 특정 크기의 PCR 풀로부터 샘플링되는 확률을 평가한다. 서열분석된 CDR3 영역은 PCR 생성물의 대규모 풀로부터 무작위로 샘플링되기 때문에, 각 서열에 대한 관찰 수는 푸아송 분포(Poisson distributions)로부터 수득된다. 푸아송 변수는 PCR용 주형을 제공한 T 세포 게놈의 수에 따라 정량화된다. 단순한 푸아송 혼합물 모델은 이들 파라미터를 평가하고, 각 분포로부터 수득된 각 서열에 대한 쌍대 확률을 제공한다. 이는 혈액으로부터 수득된 각 서열의 풍부함을 재구성하는 기대 최대화 방법이다.
실시예 6: 진정한 다양성 평가를 위한 미지 종 모델
혼합물 모델은 혈액으로부터 수득한 각 TCRβ CDR3 종의 도수를 재구성할 수 있지만, 더 큰 문제는 얼마나 많은 유니크한 CDR3 종이 공여체에 존재하는지의 여부이다. 이는 이용가능한 샘플이 각 공여체 중에서 제한되고, 이들 기술이 치료를 받는 환자에게서 합리적으로 수득될 수 있는 보다 작은 용적의 혈액으로 외삽됨에 따라 장래에 보다 중요해지기 때문에 대답할 필요가 있는 기본적인 질문이다.
수학적인 해결책은 TCRβ"종" 또는 클론형의 전체 수, S에 대해, 서열분석 실험은 서열 s의 x s 복제를 관찰한다. 모든 관찰되지 않은 클론형에 있어서, x s 는 0이고, 각 TCR 클론형은 변수 λs를 갖는 푸아송 방법에 따라 채혈로 "포획된다". T 세포 게놈의 수는 제1 측정 1, 및 제2 측정에서 서열분석된다. 다수의 유니크 서열이 존재하기 때문에, 적분은 합을 나타낸다. G(λ)가 변수 λ1, ···, λs의 경험적 분포 함수이고, nx가 정확하게 x배 서열분석된 클론형의 수이면, 다음과 같다:
Figure pct00008
값 △(t)는 제2 서열분석 실험에서 관찰된 신규 클론형의 수이다.
Figure pct00009
1-e - λt의 테일러 팽창은 △(t)= E(x 1 )t-E(x 2 )t 2 +E(x 3 )t 3 -....을 제공하고, 이는 기대치 E( n x )를 제1 측정에서 관찰된 수로 치환함으로써 접근할 수 있다. 제1 측정에서 관찰된 수에 사용하여, 이 수학식은 1.6*105개 신규 유니크 서열이 제2 측정에서 관찰되어야 한다는 것을 예측한다. 제2 측정의 실제 값은 1.8*105개 신규 TCRβ 서열이었고, 이는 예측이 전체 다양성에 대한 유효한 하한을 제공한다는 것을 암시한다. 오일러 변형(Euler's transformation)이 △(∞)을 위한 하한을 생성하기 위해 △(t)를 조정하는데 사용되었다.
실시예 7: 에러 보정 및 바이어스 평가
1차 서열 데이타에서 서열 에러는 다음 2개의 공급원으로부터 주로 유도한다: (1) TCRβ CDR3 주형 서열의 PCR에 의한 증폭 동안 발생하는 뉴클레오티드 오편입, 및 (2) CDR3 서열의 PCR-증폭된 라이브러리의 서열분석 동안 도입된 기본 호출의 에러. 대량의 데이타는 이러한 2개의 공급원에 기인하는 1차 서열 데이타에서 대부분의 에러를 보정하는 올바른 에러 보정 방식을 실행하도록 한다. 에러 보정 후, 프레임내 유니크 CDR3 서열의 수 및 각 유니크 서열의 관찰 수는 두 공여체로부터 4개의 유동 분류된 T 세포 모집단 각각에 대해 표로 만들었다. 4개의 유동 혈구계산에 의해 정의된 모집단에서 CDR3 서열의 상대 도수 분포는 항원-경험 CD45RO+ 모집단이 CD45RO- 모집단보다 높은 상대 도수로 상당히 많은 유니크 CDR3 서열을 함유한다는 것을 증명한다. CD4, CD8 및 CD45RO의 발현에 의해 구별되고, 혈액에 존재하는 4개의 상이한 T 세포 아집단에서 관찰된 TCRβ CDR3 서열의 도수 막대그래프는 10개의 유니크 서열이 각각 CD4+CD45RO+(항원 경험) T 세포 샘플에서 200회 관찰되었고, 이는 CD4+CD45RO- 모집단에서 관찰된 도수의 2배 이상이었다는 것을 보여주었다.
서열분석 직전에 TCRβCDR3 영역을 증폭시키는 PCR 단계의 사용은 상이한 Vβ 및 Jβ 유전자 세그먼트를 사용하는 CDR3 영역의 PCR 증폭 효율의 차이에 기인하여 서열의 추정된 상대적 풍부함에 조직적 바이어스를 잠재적으로 도입할 수 있다. 이러한 임의의 바이어스의 크기를 평가하기 위해, 약 30,000개의 유니크 CD4+CD45RO+ T 림프구 게놈 샘플로부터 TCRβCDR3 영역을 PCR의 25 사이클을 통해 증폭시켰고, 이 때 PCR 생성물을 절반으로 갈랐다. PCR 생성물의 절반은 비축하고, 나머지 절반은 PCR의 추가 15 사이클 동안, 전체 40 사이클 증폭 동안 증폭시켰다. 이어서, 25 사이클 및 40 사이클 동안 증폭된 PCR 생성물을 서열분석하고 비교했다. 25 사이클 서열의 95% 이상이 또한 40 사이클 샘플에서 발견되었고, 이들 샘플 사이의 서열의 도수를 비교할 경우, 선형 상관(linear correlation)이 관찰된다. 25 사이클 레인에서 소정수 관찰된 서열에 있어서, PCR 바이어스 및 추출 변동(sampling variance)의 조합은 40 사이클에서 관찰수의 평균에 대한 변동을 설명한다. 보존적으로 선에 대한 평균 변동(1.5배)이 전적으로 PCR 바이어스에 있다고 간주하여, PCR 증폭의 각 사이클은 평균 크기 1.51/15 = 1.027의 바이어스를 잠재적으로 도입한다. 따라서, PCR의 25 사이클은 명백한 CDR3 영역 서열의 추정된 상대적 풍부함에서 평균 크기 1.02725 = 1.95의 전체 바이어스를 도입한다.
실시예 8: Jβ 유전자 세그먼트 사용
각 TCR β 쇄 중의 CDR3 영역은 13개의 Jβ 유전자 세그먼트 중의 하나로부터 유도된 서열을 포함한다. 2개 공여체로부터의 4개의 상이한 T 세포 모집단에서 CDR3 서열의 분석은 13개의 상이한 Jβ 유전자 세그먼트로부터 유도된 서열을 도입한 전체 서열의 분획이 20배 이상 변한다는 것을 증명한다. 단일 공여체로부터 4개의 상이한 T 유동 혈구계산에 의해 정의된 T 세포 중 Jβ 사용은 소정의 공여체 내에서 비교적 일정했다. 또한, 2개 공여체 중에서 관찰되고, GA를 사용하여 서열분석된 T 세포로부터 게놈 DNA의 분석에 의해 추정된 Jβ 사용 패턴은 제대혈로부터 및 건강한 성인 공여체로부터의 T 세포에서 관찰된 것과 정성적으로 유사하고, 이들 둘 다는 소모적 모세관 기반 기술을 사용하여 서열분석된 T 세포로부터 cDNA의 분석으로부터 추정되었다.
실시예 9: 뉴클레오티드 삽입 바이어스
TCR α 및 β 쇄 중의 CDR3 결합부에서 다량의 다양성은 효소 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제(TdT)에 의한 비-주형화 뉴클레오티드 삽입에 의해 생성된다. 그러나, 생체내에서, 선택은 예측불가성을 초래하는 TCR 레퍼토리의 형상화에 중요한 역할을 한다. TdT 뉴클레오티드 삽입 도수는, 선택과 무관하게, 프레임 외 TCR 서열을 사용하여 계산했다. 이러한 서열은 제2 대립유전자가 기능적 재배열을 갖는 T 세포 중의 1개의 대립유전자 상에서 수행된 비-기능적 재배열이다. TdT의 모노-뉴클레오티드 삽입 바이어스는 C 및 G를 지지한다(표 11).
프레임 외 데이타 중의 모노-뉴클레오티드 바이어스
A C G T
레인 1 0.24 0.294 0.247 0.216
레인 2 0.247 0.284 0.256 0.211
레인 3 0.25 0.27 0.268 0.209
레인 4 0.255 0.293 0.24 0.21
유사한 뉴클레오티드 도수가 프레임 서열에서 관찰된다(표 12).
프레임 내 데이타 중의 모노-뉴클레오티드 바이어스
A C G T
레인 1 0.21 0.285 0.275 0.228
레인 2 0.216 0.281 0.266 0.235
레인 3 0.222 0.266 0.288 0.221
레인 4 0.206 0.294 0.228 0.27
프레임 외 TCR 서열로부터 N 영역을 사용하여 디-뉴클레오티드 바이어스를 측정했다. 디-뉴클레오티드 바이어스의 난외(marginal) 기여도를 분리하기 위해, 디-뉴클레오티드 도수를 두 염기 각각의 모노뉴클레오티드 도수로 나누었다. 측정은 다음과 같다:
Figure pct00010
m에 대한 매트릭스는 표 13에서 발견된다.
프레임 외 데이타의 디-뉴클레오티드 승산비(odd-ratio)
A C G T
A 1.198 0.938 0.945 0.919
C 0.988 1.172 0.88 0.931
G 0.993 0.701 1.352 0.964
T 0.784 1.232 0.767 1.23
다수의 디뉴클레오티드는 제시된 바의 상하에 있다. 예를 들면, GG 쌍을 발견할 승산 (odd)은 매우 높다. 코돈 GGN이 글리신으로 해독되기 때문에, 다수의 글리신이 CDR3 영역에서 기대된다.
실시예 10: CDR3 영역 중의 아미노산 분포
TCRβ 쇄의 CDR3 영역 중의 아미노산의 분포는 V, D 및 J 영역을 위한 생식세포 서열, TdT의 삽입 바이어스 및 선택에 의해 형상화된다. 4개의 상이한 T 세포 하위-구획에 대한 당해 영역에서의 아미노산의 분포는 상이한 세포 아형태 사이에 매우 유사하다. 고정 길이(아미노산 중의 위치 의존 분포)의 β 쇄로 서열의 분리는 6개의 화학적 성질: 작은, 특별한 및 큰 소수성, 중간 극성, 산성 및 염기성으로 분류된다. 분포는, 특히 위치 5에서 고비율의 산성 염기를 갖는 CD8+ 항원 경험 T 세포 이외에, 실질적으로 동일하다.
특히 흥미로운 것은 이들이 부류 I 및 부류 II HLA 분자 각각에 의해 제공된 펩티드에 결합함에 따르는 CD8+ 및 CD4+ TCR 서열의 비교이다. CD8+ 항원 경험 T 세포는 고비율의 산성 아미노산을 갖는 소수의 위치를 갖는다. 이는 부류 II에서가 아니라 HLA 부류 I 분자 상에서 발견된 염기성 잔기와의 결합을 수행할 수 있다.
실시예 11: 상이한 사람에게서 발견된 동일한 아미노산 서열을 갖는 TCR β 쇄
TCR β 쇄 서열을 아미노산으로 해독한 후, 2개 공여체 사이의 쌍을 비교했다. 수천의 정확한 서열 매치가 관찰되었다. 예를 들면, CD4+ CD45RO- 하위 구획을 비교하면, 공여체 1로부터의 250,000개의 유니크 아미노산 서열 중 약 8,000개가 공여체 2와 정확하게 매치했다. 아미노산 수준에서 이러한 매치 서열 중의 다수는 제3 코돈 위치에서 다수의 뉴클레오티드 차이를 갖는다. 상기 언급한 실시예에 따라, 1,500/8,000 동일한 아미노산 매치가 5 초과의 뉴클레오티드 미스매치를 가졌다. 임의의 2개 T 세포 아형태 사이에는 유니크 TCRβ 서열의 4 내지 5%가 동일한 아미노산 매치를 갖는 것으로 밝혀졌다.
1) TCR 발달 동안의 선택이 이러한 통상적 서열을 생성하는지, 그리고 2) TdT에 의한 뉴클레오티드 삽입 도수에서의 큰 바이어스가 유사한 뉴클레오티드 서열을 창출하는지의 두가지 가능성을 시험했다. 프레임내 쌍 매치를 프레임외 쌍 매치와 비교했다(참조: 상기 실시예 1 내지 4). 프레임을 변경하면 유전자 코드의 특징 모두가 보존되고, 따라서 서열 바이어스가 전체 관찰의 원인이면, 동일한 수의 매치가 발견되어야 한다. 그러나, 프레임외 매치의 거의 2배 가량 많은 프레임내 매치가 발견되고, 이는 단백질 수준에서의 선택이 중요한 역할을 한다는 것을 제시한다.
수천개의 동일한 TCR β 쇄 아미노산 서열에 대한 이러한 발견을 확인하기 위해, 2개 공여체를 제3 공여체인 44세 CMV+ 백인 여성으로부터의 CD8+ CD62L+ CD45RA+ (천연 유사) TCR에 대하여 비교했다. 제3 공여체와 각각의 본래 2개의 공여체 사이의 아미노산 수준에서 수천개 서열의 많은 동일한 쌍 매치가 발견되었다. 대조적으로, 460개 서열이 모든 3개 공여체 사이에 공유되었다. 공여체 사이의 유니크 서열의 전체 수에서의 큰 변화는 출발 물질 및 서열분석기 상으로 적재량 변화의 산물이고, 공여체의 혈액 중의 진정한 다양성에 대한 변화를 나타내는 것은 아니다.
실시예 12: 고도수 클론형은 생식 세포주에 보다 유사하다.
모든 T세포 아구획 내에서 상이한 서열 사이의 복제 수의 변화는 10,000배 이상의 계수 범위였다. 복제 수와 상관되는 유일한 특성은 (삽입 수 + 결실 수)이고, 이는 역으로 상관된다. 분석 결과는 결실이 복제 수와 역상관 관계로 삽입보다 작은 역할을 함을 나타낸다.
삽입 및 결실이 보다 적은 서열은 생식 세포주에 보다 유사한 수용체 서열을 갖는다. 생식 세포주에 유사한 서열의 수 증가에 대한 한 가지 가능성은 이들이 T 세포 발달 동안 다수의 형성이다. 생식 세포주 서열은 사람 사이에 공유되기 때문에, 공유된 TCRβ 쇄는 소수의 삽입 및 결실을 갖는 TCR에 의해 생성된다.
실시예 13: V 유전자 세그먼트 사용 및 CDR3 길이에 의한 TCRβ CDR3 서열의 "스펙트라타입" 분석
TCR 다양성은 통상 TCR 스펙트라타이핑 기술을 사용하여 평가되었고, 이는 서열 수준에서 TCR CDR3 다양성을 평가하는 것이 아니라, 동일한 Vα 또는 Vβ 유전자 세그먼트를 사용하는 αβ T 세포의 서브세트에서 mRNA로서 발현된 TCRα 또는 TCRβ CDR3 길이의 다양성을 평가하는 RT-PCR 기반 기술이다. 건강한 젊은 성인의 제대혈 또는 말초혈에서 발견되는 바와 같이, TCR CDR3 서열의 다양한 레퍼토리를 갖는 폴리클로날 T 세포 모집단의 스펙트라타입은 다수의 3개 뉴클레오티드인 8 내지 10개의 상이한 길이의 CDR3 서열을 통상 함유하고, 이는 프레임내 전사체에 대한 선택을 반영한다. 스펙트라타이핑은 또한 각각의 특정한 길이를 갖는 CDR3 서열의 상대 도수에 대한 개략적인 정량적 정보를 제공한다. 서열분석기를 사용하여 T 세포 게놈 DNA로부터 TCRβ CDR3 영역의 직접 서열분석이 스펙트라타이핑에 의해 동정된 CDR3 길이 다양성을 정확하게 포획할 수 있는지의 여부를 평가하기 위해, "실질적" TCRβ 스펙트라타입(하기 실시예 참조)을 서열 데이타로부터 생성하고 통상의 PCR 기술을 사용하여 생성한 TCRβ 스펙트라타입과 비교했다. 실질적 스펙트라타입은 통상의 스펙트라타입에 존재하는 모든 CDR3 길이 및 상대 도수 정보를 함유했다. 직접 TCRβ CDR3 서열분석은 통상의 스펙트라타입에 존재하는 TCR 다양성 정보 모두를 포획한다. 표준 TCRβ 스펙트라타입 데이타와 서열에 대한 계산된 TCRβ CDR3 길이 분포의 비교는 공여체 1로부터 CD4+CD45RO+ 세포에 존재하는 대표적인 TCR Vβ 유전자 세그먼트를 사용한다. 각각의 Vβ 부류 내에 상이한 길이를 갖는 특이적 CDR3 서열의 도수 막대그래프와 비교하여 서열 데이타 내에 함유된 정보의 감소는 스펙트라타입 데이타에 함유된 모든 정보를 용이하게 재생한다. 또한, 실질적 스펙트라타입은 통상의 PCR 기반 스펙트라타이핑에 의해 검출되지 않는 CDR3 길이가 매우 짧고 매우 긴 희귀한 CDR3 서열의 각 Vβ 부류 내의 존재를 나타냈다.
실시예 14: 전체 CDR 서열 다양성의 평가
에러 보정 후, 서열분석기 유동 세포 (flow cell)의 각 레인에서 관찰된 특이적 CDR3 서열의 수는 통상 1×105개를 초과했다. 각 레인에서 서열분석된 PCR 생성물이 2개의 공여체 각각에 존재하는 T 세포 게놈의 소분획으로부터 반드시 유도되는 경우, 각 개체의 전체 T 세포 레퍼토리에서 특이적 TCRβ CDR3 서열의 전체 수는 훨씬 높은 것처럼 보인다. 따라서, 전체 레퍼토리에서 유니크 서열 수의 평가는 혈액 내에 존재하지만 샘플에서 관찰되지 않는 추가의 특이적 CDR3 서열 수의 평가를 필요로 한다. 무한 샘플에 존재하는 종 다양성의 측정을 사용하여 거대하고 복잡한 모집단에서 전체 종 다양성의 평가는 조직학적으로 "미지 종 문제"로 지칭했다(상기 실시예 참조). 해결책은 새로운 종 수의 측정, 또는 실험이 반복되는 경우, 즉 서열분석이 반복적으로 말초혈 T 세포의 동일한 샘플, 예를 들면, 서열분석기 유동 세포의 상이한 레인에서 TCRβ CDR3 PCR 생성물의 동일하게 제조된 라이브러리에서 관찰되는 TCRβ CDR3 서열 수의 측정 및 신규 CDR3 서열 수의 계수로 개시한다. 공여체 2로부터 CD8+CD45RO- 세포에 있어서, 제2 레인에서 신규 CDR3 서열의 예상 및 관찰된 수는 5% 이내이고(상기 실시예 참조), 이는 당해 분석적 해결책이 사실 전체 레퍼토리에서 특이적 TCRβ CDR3 서열의 전체 수를 평가하는 데 사용될 수 있음을 시사한다.
4개의 유동 세포 분석학적 규정된 T 세포 구획에서 특이적 TCRβ CDR3 서열의 전체 수에 대한 수득 평가치는 표 14에 제시되어 있다.
TCR 레퍼토리 다양성
공여체 CD8 CD4 CD45RO 다양성
1 + - + 6.3*105
+ - - 1.24*106
- + + 8.2*105
- + - 1.28*106
총 T 세포 다양성 3.97*106
2 + - + 4.4*105
+ - - 9.7*105
- + + 8.7*105
- + - 1.03*106
총 T 세포 다양성 3.31*106
흥미롭게, 이들 모집단에서 전체 TCRβ 다양성은 말초혈에서 3 내지 4백만개의 유니크 서열 사이에 존재한다. 놀랍게도, CD45RO+ 또는 항원 경험한 구획은 대략 150만개의 이들 서열을 구성한다. 이는 예상된 것보다 적어도 큰 정도이다. 이러한 불일치는 낮은 상대 도수에서 관찰된 다수의 이들 서열에 기인하는 것 같고, 이는 심층 서열분석을 통해 유일하게 검출될 수 있다. 2개 공여체에서 각 구획의 평가된 TCRβ CDR3 레퍼토리 크기는 서로 20% 이내이다.
본원의 결과는 달성된 TCRβ 수용체 다양성이 이전의 평가치(약 4*106개 독특한 CDR3 서열)보다 적어도 5배 높음을 증명하고, 특히 종래 보고된 것(약 1.5*106개 독특한 CDR3 서열)보다 CD45RO+ 항원 경험 αβ T 세포 중에서 훨씬 큰 TCRβ 다양성을 시사한다. 그러나, TCR 서열 데이타의 생물정보 분석은 모노뉴클레오티드 및 디뉴클레오티드 함량에서 강력한 바이어스를 나타내고, 이는 사용된 TCR 서열이 이론적 크기보다 훨씬 적은 분포로부터 샘플링됨을 암시한다. 서열의 심각하게 제한된 공간으로부터 샘플링된 각 개인에서 TCRβ 쇄의 거대 다양성과 함께 TCR 서열 풀의 중첩이 각 개인 사이에서 예상될 수 있다. 사실, 당해 결과는 정확한 아미노산 매치를 갖는 약 5%의 CD8+ 천연 TCRβ 쇄가 3명의 상이한 개체의 각 쌍 사이에서 공유됨을 나타냈다. TCRα 풀이 이미 이론적 TCRβ 다양성보다 실질적으로(substantially) 작은 것으로 측정되었기 때문에, 이들 결과는 수백 내지 수천개의 진정한 공공 αβ TCR이 발견될 수 있음을 나타낸다.
<110> FRED HUTCHINSON CANCER RESEARCH CENTER <120> METHOD OF MEASURING ADAPTIVE IMMUNITY <130> IPA110921 <150> US 61/220,344 <151> 2009-06-25 <160> 484 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV2 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 1 ntcaaatttc actctgaaga tccggtccac aa 32 <210> 2 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV3-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 2 ngctcactta aatcttcaca tcaattccct gg 32 <210> 3 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 3 ncttaaacct tcacctacac gccctgc 27 <210> 4 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(4-2, 4-3) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 4 ncttattcct tcacctacac accctgc 27 <210> 5 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 5 ngctctgaga tgaatgtgag caccttg 27 <210> 6 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-3 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 6 ngctctgaga tgaatgtgag tgccttg 27 <210> 7 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(5-4, 5-5, 5-6, 5-7, 5-8) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 7 ngctctgagc tgaatgtgaa cgccttg 27 <210> 8 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 8 ntcgctcagg ctggagtcgg ctg 23 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(6-2, 6-3) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 9 ngctggggtt ggagtcggct g 21 <210> 10 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-4 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 10 nccctcacgt tggcgtctgc tg 22 <210> 11 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-5 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 11 ngctcaggct gctgtcggct g 21 <210> 12 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-6 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 12 ncgctcaggc tggagttggc tg 22 <210> 13 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-7 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 13 ncccctcaag ctggagtcag ctg 23 <210> 14 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-8 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 14 ncactcaggc tggtgtcggc tg 22 <210> 15 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-9 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 15 ncgctcaggc tggagtcagc tg 22 <210> 16 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 16 nccactctga agttccagcg cacac 25 <210> 17 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-2 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 17 ncactctgac gatccagcgc acac 24 <210> 18 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-3 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 18 nctctactct gaagatccag cgcacag 27 <210> 19 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-4 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 19 nccactctga agatccagcg cacag 25 <210> 20 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-6 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 20 ncactctgac gatccagcgc acag 24 <210> 21 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-7 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 21 nccactctga cgattcagcg cacag 25 <210> 22 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-8 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 22 nccactctga agatccagcg cacac 25 <210> 23 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-9 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 23 ncaccttgga gatccagcgc acag 24 <210> 24 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV9 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 24 ngcactctga actaaacctg agctctctg 29 <210> 25 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 25 ncccctcact ctggagtctg ctg 23 <210> 26 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-2 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 26 nccccctcac tctggagtca gcta 24 <210> 27 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-3 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 27 ncctcctcac tctggagtcc gcta 24 <210> 28 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(11-1, 11-3) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 28 nccactctca agatccagcc tgcag 25 <210> 29 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV11-2 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 29 nctccactct caagatccag cctgcaa 27 <210> 30 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(12-3, 12-4, 12-5) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 30 nccactctga agatccagcc ctcag 25 <210> 31 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV13 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 31 ncattctgaa ctgaacatga gctccttgg 29 <210> 32 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV14 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 32 nctactctga aggtgcagcc tgcag 25 <210> 33 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV15 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 33 ngataacttc caatccagga ggccgaaca 29 <210> 34 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV16 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 34 nctgtagcct tgagatccag gctacga 27 <210> 35 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV17 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 35 ncttccacgc tgaagatcca tcccg 25 <210> 36 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV18 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 36 ngcatcctga ggatccagca ggtag 25 <210> 37 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV19 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 37 ncctctcact gtgacatcgg ccc 23 <210> 38 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV20-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 38 ncttgtccac tctgacagtg accagtg 27 <210> 39 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV23-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 39 ncagcctggc aatcctgtcc tcag 24 <210> 40 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV24-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 40 nctccctgtc cctagagtct gccat 25 <210> 41 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV25-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 41 nccctgaccc tggagtctgc ca 22 <210> 42 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV27 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 42 nccctgatcc tggagtcgcc ca 22 <210> 43 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV28 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 43 nctccctgat tctggagtcc gcca 24 <210> 44 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV29-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 44 nctaacattc tcaactctga ctgtgagcaa ca 32 <210> 45 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV30 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal forward primer <400> 45 ncggcagttc atcctgagtt ctaagaagc 29 <210> 46 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 46 nttacctaca actgtgagtc tggtgccttg tccaaa 36 <210> 47 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-2 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 47 nacctacaac ggttaacctg gtccccgaac cgaa 34 <210> 48 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-3 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 48 nacctacaac agtgagccaa cttccctctc caaa 34 <210> 49 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-4 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 49 nccaagacag agagctgggt tccactgcca aa 32 <210> 50 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-6 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 50 nctgtcacag tgagcctggt cccgttccca aa 32 <210> 51 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-1 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 51 ncggtgagcc gtgtccctgg cccgaa 26 <210> 52 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-2 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 52 nccagtacgg tcagcctaga gccttctcca aa 32 <210> 53 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-3 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 53 nactgtcagc cgggtgcctg ggccaaa 27 <210> 54 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-4 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 54 nagagccggg tcccggcgcc gaa 23 <210> 55 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-5 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 55 nggagccgcg tgcctggccc gaa 23 <210> 56 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-6 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 56 ngtcagcctg ctgccggccc cgaa 24 <210> 57 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-7 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 57 ngtgagcctg gtgcccggcc cgaa 24 <210> 58 <211> 65 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV2 <400> 58 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atcttcaaat ttcactctga agatccggtc 60 cacaa 65 <210> 59 <211> 65 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV3-1 <400> 59 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctgctcac ttaaatcttc acatcaattc 60 cctgg 65 <210> 60 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-1 <400> 60 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcttaaa ccttcaccta cacgccctgc 60 <210> 61 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(4-2, 4-3) <400> 61 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcttatt ccttcaccta cacaccctgc 60 <210> 62 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-1 <400> 62 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctgctctg agatgaatgt gagcaccttg 60 <210> 63 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-3 <400> 63 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctgctctg agatgaatgt gagtgccttg 60 <210> 64 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(5-4, 5-5, 5-6, 5-7, 5-8) <400> 64 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctgctctg agctgaatgt gaacgccttg 60 <210> 65 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-1 <400> 65 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atcttcgctc aggctggagt cggctg 56 <210> 66 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(6-2, 6-3) <400> 66 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctgctggg gttggagtcg gctg 54 <210> 67 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-4 <400> 67 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccctca cgttggcgtc tgctg 55 <210> 68 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-5 <400> 68 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctgctcag gctgctgtcg gctg 54 <210> 69 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-6 <400> 69 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcgctca ggctggagtt ggctg 55 <210> 70 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-7 <400> 70 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcccctc aagctggagt cagctg 56 <210> 71 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-8 <400> 71 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcactca ggctggtgtc ggctg 55 <210> 72 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-9 <400> 72 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcgctca ggctggagtc agctg 55 <210> 73 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-1 <400> 73 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccactc tgaagttcca gcgcacac 58 <210> 74 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-2 <400> 74 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcactct gacgatccag cgcacac 57 <210> 75 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-3 <400> 75 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctctctac tctgaagatc cagcgcacag 60 <210> 76 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-4 <400> 76 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccactc tgaagatcca gcgcacag 58 <210> 77 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-6 <400> 77 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcactct gacgatccag cgcacag 57 <210> 78 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-7 <400> 78 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccactc tgacgattca gcgcacag 58 <210> 79 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-8 <400> 79 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccactc tgaagatcca gcgcacac 58 <210> 80 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-9 <400> 80 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcacctt ggagatccag cgcacag 57 <210> 81 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV9 <400> 81 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctgcactc tgaactaaac ctgagctctc 60 tg 62 <210> 82 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-1 <400> 82 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcccctc actctggagt ctgctg 56 <210> 83 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-2 <400> 83 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccccct cactctggag tcagcta 57 <210> 84 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-3 <400> 84 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcctcct cactctggag tccgcta 57 <210> 85 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(11-1, 11-3) <400> 85 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccactc tcaagatcca gcctgcag 58 <210> 86 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV11-2 <400> 86 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctctccac tctcaagatc cagcctgcaa 60 <210> 87 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV(12-3, 12-4, 12-5) <400> 87 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccactc tgaagatcca gccctcag 58 <210> 88 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV13 <400> 88 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcattct gaactgaaca tgagctcctt 60 gg 62 <210> 89 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV14 <400> 89 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctctactc tgaaggtgca gcctgcag 58 <210> 90 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV15 <400> 90 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctgataac ttccaatcca ggaggccgaa 60 ca 62 <210> 91 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV16 <400> 91 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctctgtag ccttgagatc caggctacga 60 <210> 92 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV17 <400> 92 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcttcca cgctgaagat ccatcccg 58 <210> 93 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV18 <400> 93 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctgcatcc tgaggatcca gcaggtag 58 <210> 94 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV19 <400> 94 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcctctc actgtgacat cggccc 56 <210> 95 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV20-1 <400> 95 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcttgtc cactctgaca gtgaccagtg 60 <210> 96 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV23-1 <400> 96 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcagcct ggcaatcctg tcctcag 57 <210> 97 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV24-1 <400> 97 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctctccct gtccctagag tctgccat 58 <210> 98 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV25-1 <400> 98 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccctga ccctggagtc tgcca 55 <210> 99 <211> 55 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV27 <400> 99 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctccctga tcctggagtc gccca 55 <210> 100 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV28 <400> 100 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctctccct gattctggag tccgcca 57 <210> 101 <211> 65 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV29-1 <400> 101 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctctaaca ttctcaactc tgactgtgag 60 caaca 65 <210> 102 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV30 <400> 102 caagcagaag acggcatacg agctcttccg atctcggcag ttcatcctga gttctaagaa 60 gc 62 <210> 103 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-1 <400> 103 aatgatacgg cgaccaccga gatctttacc tacaactgtg agtctggtgc cttgtccaaa 60 <210> 104 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-3 <400> 104 aatgatacgg cgaccaccga gatctaccta caacagtgag ccaacttccc tctccaaa 58 <210> 105 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-4 <400> 105 aatgatacgg cgaccaccga gatctccaag acagagagct gggttccact gccaaa 56 <210> 106 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-6 <400> 106 aatgatacgg cgaccaccga gatctctgtc acagtgagcc tggtcccgtt cccaaa 56 <210> 107 <211> 50 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-1 <400> 107 aatgatacgg cgaccaccga gatctcggtg agccgtgtcc ctggcccgaa 50 <210> 108 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-2 <400> 108 aatgatacgg cgaccaccga gatctccagt acggtcagcc tagagccttc tccaaa 56 <210> 109 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-3 <400> 109 aatgatacgg cgaccaccga gatctactgt cagccgggtg cctgggccaa a 51 <210> 110 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-4 <400> 110 aatgatacgg cgaccaccga gatctagagc cgggtcccgg cgccgaa 47 <210> 111 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-5 <400> 111 aatgatacgg cgaccaccga gatctggagc cgcgtgcctg gcccgaa 47 <210> 112 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-6 <400> 112 aatgatacgg cgaccaccga gatctgtcag cctgctgccg gccccgaa 48 <210> 113 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ2-7 <400> 113 aatgatacgg cgaccaccga gatctgtgag cctggtgccc ggcccgaa 48 <210> 114 <211> 284 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV1*01 <400> 114 gatactggaa ttacccagac accaaaatac ctggtcacag caatggggag taaaaggaca 60 atgaaacgtg agcatctggg acatgattct atgtattggt acagacagaa agctaagaaa 120 tccctggagt tcatgtttta ctacaactgt aaggaattca ttgaaaacaa gactgtgcca 180 aatcacttca cacctgaatg ccctgacagc tctcgcttat accttcatgt ggtcgcactg 240 cagcaagaag actcagctgc gtatctctgc accagcagcc aaga 284 <210> 115 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV2*01 <400> 115 gaacctgaag tcacccagac tcccagccat caggtcacac agatgggaca ggaagtgatc 60 ttgcgctgtg tccccatctc taatcactta tacttctatt ggtacagaca aatcttgggg 120 cagaaagtcg agtttctggt ttccttttat aataatgaaa tctcagagaa gtctgaaata 180 ttcgatgatc aattctcagt tgaaaggcct gatggatcaa atttcactct gaagatccgg 240 tccacaaagc tggaggactc agccatgtac ttctgtgcca gcagtgaagc 290 <210> 116 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV2*03 <400> 116 gaacctgaag tcacccagac tcccagccat caggtcacac agatgggaca ggaagtgatc 60 ttgcgctgtg tccccatctc taatcactta tacttctatt ggtacagaca aatcttgggg 120 cagaaagtcg agtttctggt ttccttttat aataatgaaa tctcagagaa gtctgaaata 180 ttcgatgatc aattctcagt tgagaggcct gatggatcaa atttcactct gaagatccgg 240 tccacaaagc tggaggactc agccatgtac ttctgtgcca gcagtgaa 288 <210> 117 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV3-1*01 <400> 117 gacacagctg tttcccagac tccaaaatac ctggtcacac agatgggaaa cgacaagtcc 60 attaaatgtg aacaaaatct gggccatgat actatgtatt ggtataaaca ggactctaag 120 aaatttctga agataatgtt tagctacaat aataaggagc tcattataaa tgaaacagtt 180 ccaaatcgct tctcacctaa atctccagac aaagctcact taaatcttca catcaattcc 240 ctggagcttg gtgactctgc tgtgtatttc tgtgccagca gccaaga 287 <210> 118 <211> 279 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV3-1*02 <400> 118 gacacagctg tttcccagac tccaaaatac ctggtcacac agatgggaaa cgacaagtcc 60 attaaatgtg aacaaaatct gggccatgat actatgtatt ggtataaaca ggactctaag 120 aaatttctga agataatgtt tagctacaat aacaaggaga tcattataaa tgaaacagtt 180 ccaaatcgat tctcacctaa atctccagac aaagctaaat taaatcttca catcaattcc 240 ctggagcttg gtgactctgc tgtgtatttc tgtgccagc 279 <210> 119 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV3-2*01 <400> 119 gacacagccg tttcccagac tccaaaatac ctggtcacac agatgggaaa aaaggagtct 60 cttaaatgag aacaaaatct gggccataat gctatgtatt ggtataaaca ggactctaag 120 aaatttctga agacaatgtt tatctacagt aacaaggagc caattttaaa tgaaacagtt 180 ccaaatcgct tctcacctga ctctccagac aaagctcatt taaatcttca catcaattcc 240 ctggagcttg gtgactctgc tgtgtatttc tgtgccagca gccaaga 287 <210> 120 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV3-2*02 <400> 120 gacacagccg tttcccagac tccaaaatac ctggtcacac agatgggaaa aaaggagtct 60 cttaaatgag aacaaaatct gggccataat gctatgtatt ggtataaaca ggactctaag 120 aaatttctga agacaatgtt tatctacagt aacaaggagc caattttaaa tgaaacagtt 180 ccaaatcgct tctcacctga ctctccagac aaagttcatt taaatcttca catcaattcc 240 ctggagcttg gtgactctgc tgtgtatttc tgtgccagca gccaaga 287 <210> 121 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV3-2*03 <400> 121 gacacagccg tttcccagac tccaaaatac ctggtcacac agacgggaaa aaaggagtct 60 cttaaatgag aacaaaatct gggccataat gctatgtatt ggtataaaca ggactctaag 120 aaatttctga agacaatgtt tatctacagt aacaaggagc caattttaaa tgaaacagtt 180 ccaaatcgct tctcacctga ctctccagac aaagttcatt taaatcttca catcaattcc 240 ctggagcttg gtgactctgc tgtgtatttc tgtgccagca gccaa 285 <210> 122 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-1*01 <400> 122 gacactgaag ttacccagac accaaaacac ctggtcatgg gaatgacaaa taagaagtct 60 ttgaaatgtg aacaacatat ggggcacagg gctatgtatt ggtacaagca gaaagctaag 120 aagccaccgg agctcatgtt tgtctacagc tatgagaaac tctctataaa tgaaagtgtg 180 ccaagtcgct tctcacctga atgccccaac agctctctct taaaccttca cctacacgcc 240 ctgcagccag aagactcagc cctgtatctc tgcgccagca gccaaga 287 <210> 123 <211> 258 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-1*02 <400> 123 cacctggtca tgggaatgac aaataagaag tctttgaaat gtgaacaaca tatggggcac 60 agggcaatgt attggtacaa gcagaaagct aagaagccac cggagctcat gtttgtctac 120 agctatgaga aactctctat aaatgaaagt gtgccaagtc gcttctcacc tgaatgcccc 180 aacagctctc tcttaaacct tcacctacac gccctgcagc cagaagactc agccctgtat 240 ctctgcgcca gcagccaa 258 <210> 124 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-2*01 <400> 124 gaaacgggag ttacgcagac accaagacac ctggtcatgg gaatgacaaa taagaagtct 60 ttgaaatgtg aacaacatct ggggcataac gctatgtatt ggtacaagca aagtgctaag 120 aagccactgg agctcatgtt tgtctacaac tttaaagaac agactgaaaa caacagtgtg 180 ccaagtcgct tctcacctga atgccccaac agctctcact tattccttca cctacacacc 240 ctgcagccag aagactcggc cctgtatctc tgtgccagca gccaaga 287 <210> 125 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-2*02 <400> 125 gaaacgggag ttacgcagac accaagacac ctggtcatgg gaatgacaaa taagaagtct 60 ttgaaatgtg aacaacatct ggggcataac gctatgtatt ggtacaagca aagtgctaag 120 aagccactgg agctcatgtt tgtctacaac tttaaagaac agactgaaaa caacagtgtg 180 ccaagtcgct tctcacctga atgccccaac agctctcact tatgccttca cctacacacc 240 ctgcagccag aagactcggc cctgtatctc tgtgccagca cc 282 <210> 126 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-3*01 <400> 126 gaaacgggag ttacgcagac accaagacac ctggtcatgg gaatgacaaa taagaagtct 60 ttgaaatgtg aacaacatct gggtcataac gctatgtatt ggtacaagca aagtgctaag 120 aagccactgg agctcatgtt tgtctacagt cttgaagaac gggttgaaaa caacagtgtg 180 ccaagtcgct tctcacctga atgccccaac agctctcact tattccttca cctacacacc 240 ctgcagccag aagactcggc cctgtatctc tgcgccagca gccaaga 287 <210> 127 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-3*02 <400> 127 gaaacgggag ttacgcagac accaagacac ctggtcatgg gaatgacaaa taagaagtct 60 ttgaaatgtg aacaacatct gggtcataac gctatgtatt ggtacaagca aagtgctaag 120 aagccactgg agctcatgtt tgtctacagt cttgaagaac gggttgaaaa caacagtgtg 180 ccaagtcgct tctcacctga atgccccaac agctctcact tatcccttca cctacacacc 240 ctgcagccag aagactcggc cctgtatctc tgcgccagca gc 282 <210> 128 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-3*03 <400> 128 gaaacgggag ttacgcagac accaagacac ctggtcatgg gaatgacaaa taagaagtct 60 ttgaaatgtg aacaacatct gggtcataac gctatgtatt ggtacaagca aagtgctaag 120 aagccactgg agctcatgtt tgtctacagt cttgaagaac gtgttgaaaa caacagtgtg 180 ccaagtcgct tctcacctga atgccccaac agctctcact tattccttca cctacacacc 240 ctgcagccag aagactcggc cctgtatctc tgcgccagca gc 282 <210> 129 <211> 231 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV4-3*04 <400> 129 aagaagtctt tgaaatgtga acaacatctg gggcataacg ctatgtattg gtacaagcaa 60 agtgctaaga agccactgga gctcatgttt gtctacagtc ttgaagaacg ggttgaaaac 120 aacagtgtgc caagtcgctt ctcacctgaa tgccccaaca gctctcactt attccttcac 180 ctacacaccc tgcagccaga agactcggcc ctgtatctct gcgccagcag c 231 <210> 130 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-1*01 <400> 130 aaggctggag tcactcaaac tccaagatat ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagtgaca 60 ctgagctgct cccctatctc tgggcatagg agtgtatcct ggtaccaaca gaccccagga 120 cagggccttc agttcctctt tgaatacttc agtgagacac agagaaacaa aggaaacttc 180 cctggtcgat tctcagggcg ccagttctct aactctcgct ctgagatgaa tgtgagcacc 240 ttggagctgg gggactcggc cctttatctt tgcgccagca gcttgg 286 <210> 131 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-1*02 <400> 131 agggctgggg tcactcaaac tccaagacat ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagtgaca 60 ctgggctgct cccctatctc tgggcatagg agtgtatcct ggtaccaaca gaccctagga 120 cagggccttc agttcctctt tgaatacttc agtgagacac agagaaacaa aggaaacttc 180 cttggtcgat tctcagggcg ccagttctct aactctcgct ctgagatgaa tgtgagcacc 240 ttggagctgg gggactcggc cctttatctt tgcgccagcg cttgc 285 <210> 132 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-3*01 <400> 132 gaggctggag tcacccaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagtgact 60 ctgagatgct ctcctatctc tgggcacagc agtgtgtcct ggtaccaaca ggccccgggt 120 caggggcccc agtttatctt tgaatatgct aatgagttaa ggagatcaga aggaaacttc 180 cctaatcgat tctcagggcg ccagttccat gactgttgct ctgagatgaa tgtgagtgcc 240 ttggagctgg gggactcggc cctgtatctc tgtgccagaa gcttgg 286 <210> 133 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-3*02 <400> 133 gaggctggag tcacccaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagtgact 60 ctgagatgct ctcctatctc tgggcacagc agtgtgtcct ggtaccaaca ggccccgggt 120 caggggcccc agtttatctt tgaatatgct aatgagttaa ggagatcaga aggaaacttc 180 cctaatcgat tctcagggcg ccagttccat gactattgct ctgagatgaa tgtgagtgcc 240 ttggagctgg gggactcggc cctgtatctc tgtgccagaa gcttgg 286 <210> 134 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-4*01 <400> 134 gagactggag tcacccaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagtgact 60 ctgagatgct cttctcagtc tgggcacaac actgtgtcct ggtaccaaca ggccctgggt 120 caggggcccc agtttatctt tcagtattat agggaggaag agaatggcag aggaaacttc 180 cctcctagat tctcaggtct ccagttccct aattatagct ctgagctgaa tgtgaacgcc 240 ttggagctgg acgactcggc cctgtatctc tgtgccagca gcttgg 286 <210> 135 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-4*02 <400> 135 gagactggag tcacccaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagtgact 60 ctgagatgct cttctcagtc tgggcacaac actgtgtcct ggtaccaaca ggccctgggt 120 caggggcccc agtttatctt tcagtattat agggaggaag agaatggcag aggaaacttc 180 cctcctagat tctcaggtct ccagttccct aattataact ctgagctgaa tgtgaacgcc 240 ttggagctgg acgactcggc cctgtatctc tgtgccagca gc 282 <210> 136 <211> 234 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-4*03 <400> 136 cagcaagtga cactgagatg ctcttctcag tctgggcaca acactgtgtc ctggtaccaa 60 caggccctgg gtcaggggcc ccagtttatc tttcagtatt atagggagga agagaatggc 120 agaggaaact tccctcctag attctcaggt ctccagttcc ctaattatag ctctgagctg 180 aatgtgaacg ccttggagct ggacgactcg gccctgtatc tctgtgccag cagc 234 <210> 137 <211> 192 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-4*04 <400> 137 actgtgtcct ggtaccaaca ggccctgggt caggggcccc agtttatctt tcagtattat 60 agggaggaag agaatggcag aggaaactcc cctcctagat tctcaggtct ccagttccct 120 aattatagct ctgagctgaa tgtgaacgcc ttggagctgg acgactcggc cctgtatctc 180 tgtgccagca gc 192 <210> 138 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-5*01 <400> 138 gacgctggag tcacccaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagtgact 60 ctgagatgct ctcctatctc tgggcacaag agtgtgtcct ggtaccaaca ggtcctgggt 120 caggggcccc agtttatctt tcagtattat gagaaagaag agagaggaag aggaaacttc 180 cctgatcgat tctcagctcg ccagttccct aactatagct ctgagctgaa tgtgaacgcc 240 ttgttgctgg gggactcggc cctgtatctc tgtgccagca gcttgg 286 <210> 139 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-5*02 <400> 139 gacgctggag tcacccaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcacgtgact 60 ctgagatgct ctcctatctc tgggcacaag agtgtgtcct ggtaccaaca ggtcctgggt 120 caggggcccc agtttatctt tcagtattat gagaaagaag agagaggaag aggaaacttc 180 cctgatcgat tctcagctcg ccagttccct aactatagct ctgagctgaa tgtgaacgcc 240 ttgttgctgg gggactcggc cctgtatctc tgtgccagca gc 282 <210> 140 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-5*03 <400> 140 gacgctggag tcacccaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagtgact 60 ctgagatgct ctcctatctc tgagcacaag agtgtgtcct ggtaccaaca ggtcctgggt 120 caggggcccc agtttatctt tcagtattat gagaaagaag agagaggaag aggaaacttc 180 cctgatcgat tctcagctcg ccagttccct aactatagct ctgagctgaa tgtgaacgcc 240 ttgttgctgg gggactcggc cctgtatctc tgtgccagca gc 282 <210> 141 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-6*01 <400> 141 gacgctggag tcacccaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagtgact 60 ctgagatgct ctcctaagtc tgggcatgac actgtgtcct ggtaccaaca ggccctgggt 120 caggggcccc agtttatctt tcagtattat gaggaggaag agagacagag aggcaacttc 180 cctgatcgat tctcaggtca ccagttccct aactatagct ctgagctgaa tgtgaacgcc 240 ttgttgctgg gggactcggc cctctatctc tgtgccagca gcttgg 286 <210> 142 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-7*01 <400> 142 gacgctggag tcacccaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcacgtgact 60 ctgagatgct ctcctatctc tgggcacacc agtgtgtcct cgtaccaaca ggccctgggt 120 caggggcccc agtttatctt tcagtattat gagaaagaag agagaggaag aggaaacttc 180 cctgatcaat tctcaggtca ccagttccct aactatagct ctgagctgaa tgtgaacgcc 240 ttgttgctag gggactcggc cctctatctc tgtgccagca gcttgg 286 <210> 143 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-8*01 <400> 143 gaggctggag tcacacaaag tcccacacac ctgatcaaaa cgagaggaca gcaagcgact 60 ctgagatgct ctcctatctc tgggcacacc agtgtgtact ggtaccaaca ggccctgggt 120 ctgggcctcc agttcctcct ttggtatgac gagggtgaag agagaaacag aggaaacttc 180 cctcctagat tttcaggtcg ccagttccct aattatagct ctgagctgaa tgtgaacgcc 240 ttggagctgg aggactcggc cctgtatctc tgtgccagca gcttgg 286 <210> 144 <211> 238 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV5-8*02 <400> 144 aggacagcaa gcgactctga gatgctctcc tatctctggg cacaccagtg tgtactggta 60 ccaacaggcc ctgggtctgg gcctccagct cctcctttgg tatgacgagg gtgaagagag 120 aaacagagga aacttccctc ctagattttc aggtcgccag ttccctaatt atagctctga 180 gctgaatgtg aacgccttgg agctggagga ctcggccctg tatctctgtg ccagcagc 238 <210> 145 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-1*01 <400> 145 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc caggtcctga agacaggaca gagcatgaca 60 ctgcagtgtg cccaggatat gaaccataac tccatgtact ggtatcgaca agacccaggc 120 atgggactga ggctgattta ttactcagct tctgagggta ccactgacaa aggagaagtc 180 cccaatggct acaatgtctc cagattaaac aaacgggagt tctcgctcag gctggagtcg 240 gctgctccct cccagacatc tgtgtacttc tgtgccagca gtgaagc 287 <210> 146 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-2*01 <400> 146 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cgggtcctga agacaggaca gagcatgaca 60 ctgctgtgtg cccaggatat gaaccatgaa tacatgtact ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga ggctgattca ttactcagtt ggtgagggta caactgccaa aggagaggtc 180 cctgatggct acaatgtctc cagattaaaa aaacagaatt tcctgctggg gttggagtcg 240 gctgctccct cccaaacatc tgtgtacttc tgtgccagca gttactc 287 <210> 147 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-3*01 <400> 147 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cgggtcctga agacaggaca gagcatgaca 60 ctgctgtgtg cccaggatat gaaccatgaa tacatgtact ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga ggctgattca ttactcagtt ggtgagggta caactgccaa aggagaggtc 180 cctgatggct acaatgtctc cagattaaaa aaacagaatt tcctgctggg gttggagtcg 240 gctgctccct cccaaacatc tgtgtacttc tgtgccagca gttactc 287 <210> 148 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-4*01 <400> 148 attgctggga tcacccaggc accaacatct cagatcctgg cagcaggacg gcgcatgaca 60 ctgagatgta cccaggatat gagacataat gccatgtact ggtatagaca agatctagga 120 ctggggctaa ggctcatcca ttattcaaat actgcaggta ccactggcaa aggagaagtc 180 cctgatggtt atagtgtctc cagagcaaac acagatgatt tccccctcac gttggcgtct 240 gctgtaccct ctcagacatc tgtgtacttc tgtgccagca gtgactc 287 <210> 149 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-4*02 <400> 149 actgctggga tcacccaggc accaacatct cagatcctgg cagcaggacg gagcatgaca 60 ctgagatgta cccaggatat gagacataat gccatgtact ggtatagaca agatctagga 120 ctggggctaa ggctcatcca ttattcaaat actgcaggta ccactggcaa aggagaagtc 180 cctgatggtt atagtgtctc cagagcaaac acagatgatt tccccctcac gttggcgtct 240 gctgtaccct ctcagacatc tgtgtacttc tgtgccagca gtgactc 287 <210> 150 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-5*01 <400> 150 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc caggtcctga agacaggaca gagcatgaca 60 ctgcagtgtg cccaggatat gaaccatgaa tacatgtcct ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga ggctgattca ttactcagtt ggtgctggta tcactgacca aggagaagtc 180 cccaatggct acaatgtctc cagatcaacc acagaggatt tcccgctcag gctgctgtcg 240 gctgctccct cccagacatc tgtgtacttc tgtgccagca gttactc 287 <210> 151 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-6*01 <400> 151 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cgcatcctga agataggaca gagcatgaca 60 ctgcagtgta cccaggatat gaaccataac tacatgtact ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga agctgattta ttattcagtt ggtgctggta tcactgataa aggagaagtc 180 ccgaatggct acaacgtctc cagatcaacc acagaggatt tcccgctcag gctggagttg 240 gctgctccct cccagacatc tgtgtacttc tgtgccagca gttactc 287 <210> 152 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-6*02 <400> 152 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cgcatcctga agataggaca gagcatgaca 60 ctgcagtgtg cccaggatat gaaccataac tacatgtact ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga agctgattta ttattcagtt ggtgctggta tcactgacaa aggagaagtc 180 ccgaatggct acaacgtctc cagatcaacc acagaggatt tcccgctcag gctggagttg 240 gctgctccct cccagacatc tgtgtacttc tgtgccagca gt 282 <210> 153 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-6*03 <400> 153 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cgcatcctga agataggaca gagcatgaca 60 ctgcagtgtg cccaggatat gaaccataac tacatgtact ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga agctgattta ttattcagtt ggtgctggta tcactgataa aggagaagtc 180 ccgaatggct acaacgtctc cagatcaacc acagaggatt tcccgctcag gctggagttg 240 gctgctccct cccagacatc tgtgtacttc tgtgccagca gt 282 <210> 154 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-6*04 <400> 154 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cgcatcctga agataggaca gagcatgaca 60 ctgcagtgta cccaggatat gaaccatgaa tacatgtact ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga agctgattta ttattcagtt ggtgctggta tcactgataa aggagaagtc 180 ccgaatggct acaatgtctc cagatcaacc acagaggatt tcccgctcag gctggagttg 240 gctgctccct cccagacatc tgtgtacttc tgtgccagca gtcga 285 <210> 155 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-6*05 <400> 155 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cgcatcctga agataggaca gagcatgaca 60 ctgcagtgtg cccaggatat gaaccataac tacatgtact ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga agctgattta ttattcagtt ggtgctggta tcactgacaa aggagaagtc 180 ccgaatggct acaacgtctc cagatcaacc acagaggatt tcccgctcag gctggagttg 240 gctgctgcct cccagacatc tgtgtacttc tgtgccagca gc 282 <210> 156 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-7*01 <400> 156 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cacgtcctga agacaggaca gagcatgact 60 ctgctgtgtg cccaggatat gaaccatgaa tacatgtatc ggtatcgaca agacccaggc 120 aaggggctga ggctgattta ctactcagtt gctgctgctc tcactgacaa aggagaagtt 180 cccaatggct acaatgtctc cagatcaaac acagaggatt tccccctcaa gctggagtca 240 gctgctccct ctcagacttc tgtttacttc tgtgccagca gttactc 287 <210> 157 <211> 284 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-8*01 <400> 157 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cacatcctga agacaggaca gagcatgaca 60 ctgcagtgtg cccaggatat gaaccatgga tacatgtcct ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga gactgattta ctactcagct gctgctggta ctactgacaa agaagtcccc 180 aatggctaca atgtctctag attaaacaca gaggatttcc cactcaggct ggtgtcggct 240 gctccctccc agacatctgt gtacttgtgt gccagcagtt actc 284 <210> 158 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV6-9*01 <400> 158 aatgctggtg tcactcagac cccaaaattc cacatcctga agacaggaca gagcatgaca 60 ctgcagtgtg cccaggatat gaaccatgga tacttgtcct ggtatcgaca agacccaggc 120 atggggctga ggcgcattca ttactcagtt gctgctggta tcactgacaa aggagaagtc 180 cccgatggct acaatgtatc cagatcaaac acagaggatt tcccgctcag gctggagtca 240 gctgctccct cccagacatc tgtatacttc tgtgccagca gttattc 287 <210> 159 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-1*01 <400> 159 ggtgctggag tctcccagtc cctgagacac aaggtagcaa agaagggaaa ggatgtagct 60 ctcagatatg atccaatttc aggtcataat gccctttatt ggtaccgaca gagcctgggg 120 cagggcctgg agtttccaat ttacttccaa ggcaaggatg cagcagacaa atcggggctt 180 ccccgtgatc ggttctctgc acagaggtct gagggatcca tctccactct gaagttccag 240 cgcacacagc agggggactt ggctgtgtat ctctgtgcca gcagctcagc 290 <210> 160 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-2*01 <400> 160 ggagctggag tctcccagtc ccccagtaac aaggtcacag agaagggaaa ggatgtagag 60 ctcaggtgtg atccaatttc aggtcatact gccctttact ggtaccgaca gagcctgggg 120 cagggcctgg agtttttaat ttacttccaa ggcaacagtg caccagacaa atcagggctg 180 cccagtgatc gcttctctgc agagaggact gggggatccg tctccactct gacgatccag 240 cgcacacagc aggaggactc ggccgtgtat ctctgtgcca gcagcttagc 290 <210> 161 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-2*02 <400> 161 ggagctggag tctcccagtc ccccagtaac aaggtcacag agaagggaaa ggatgtagag 60 ctcaggtgtg atccaatttc aggtcatact gccctttact ggtaccgaca gaggctgggg 120 cagggcctgg agtttttaat ttacttccaa ggcaacagtg caccagacaa atcagggctg 180 cccagtgatc gcttctctgc agagaggact ggggaatccg tctccactct gacgatccag 240 cgcacacagc aggaggactc ggccgtgtat ctctgtgcca gcagcttagc 290 <210> 162 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-2*03 <400> 162 ggagctggag tctcccagtc ccccagtaac aaggtcacag agaagggaaa ggatgtagag 60 ctcaggtgtg atccaatttc aggtcatact gccctttact ggtaccgaca gaggctgggg 120 cagggcctgg agtttttaat ttacttccaa ggcaacagtg caccagacaa atcagggctg 180 cccagtgatc gcttctctgc agagaggact ggggaatccg tctccactct gacgatccag 240 cgcacacagc aggaggactc ggccgtgtat ctctgtacca gcagcttagc 290 <210> 163 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-2*04 <400> 163 ggagctggag tttcccagtc ccccagtaac aaggtcacag agaagggaaa ggatgtagag 60 ctcaggtgtg atccaatttc aggtcatact gccctttact ggtaccgaca gagcctgggg 120 cagggcctgg agtttttaat ttacttccaa ggcaacagtg caccagacaa atcagggctg 180 cccagtgatc gcttctctgc agagaggact gggggatccg tctccactct gacgatccag 240 cgcacacagc aggaggactc ggccgtgtat ctctgtgcca gcagctta 288 <210> 164 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-3*01 <400> 164 ggtgctggag tctcccagac ccccagtaac aaggtcacag agaagggaaa atatgtagag 60 ctcaggtgtg atccaatttc aggtcatact gccctttact ggtaccgaca aagcctgggg 120 cagggcccag agtttctaat ttacttccaa ggcacgggtg cggcagatga ctcagggctg 180 cccaacgatc ggttctttgc agtcaggcct gagggatccg tctctactct gaagatccag 240 cgcacagagc ggggggactc agccgtgtat ctctgtgcca gcagcttaac 290 <210> 165 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-3*02 <400> 165 ggtgctggag tctcccagac ccccagtaac aaggtcacag agaagggaaa agatgtagag 60 ctcaggtgtg atccaatttc aggtcatact gccctttact ggtaccgaca aagcctgggg 120 cagggcccag agtttctaat ttacttccaa ggcacgggtg cggcagatga ctcagggctg 180 cccaaagatc ggttctttgc agtcaggcct gagggatccg tctctactct gaagatccag 240 cgcacagagc agggggactc agccgtgtat ctccgtgcca gcagcttaac 290 <210> 166 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-3*03 <400> 166 ggtgctggag tctcccagac ccccagtaac aaggtcacag agaagggaaa agatgtagag 60 ctcaggtgtg atccaatttc aggtcatact gccctttact ggtaccgaca aagcctgggg 120 cagggcccag agtttctaat ttacttccaa ggcacgggtg cggcagatga ctcagggctg 180 cccaaagatc ggttctttgc agtcaggcct gagggatccg tctctactct gaagatccag 240 cgcacagagc agggggactc agccgcgtat ctccgtgcca gcagctta 288 <210> 167 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-3*04 <400> 167 ggtgctggag tctcccagac ccccagtaac aaggtcacag agaagggaaa atatgtagag 60 ctcaggtgtg atccaatttc aggtcatact gccctttact ggtaccgaca aagcctgggg 120 cagggcccag agtttctaat ttacttccaa ggcacgggtg cggcagatga ctcagggctg 180 cccaacgatc ggttctttgc agtcaggcct gagggatccg tctctactct gaagatccag 240 cgcacagagc ggggggactc tgccgtgtat ctctgtgcca gcagc 285 <210> 168 <211> 231 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-3*05 <400> 168 tgggagctca ggtgtgatcc aatttcaggt catactgccc tttactggta ccgacaaagc 60 ctggggcagg gcccagagct tctaatttac ttccaaggca cgggtgcggc agatgactca 120 gggctgccca acgatcggtt ctttgcagtc aggcctgagg gatccgtctc tactctgaag 180 atccagcgca cagagcgggg ggactcagcc gtgtatctct gtgccagcag c 231 <210> 169 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-4*01 <400> 169 ggtgctggag tctcccagtc cccaaggtac aaagtcgcaa agaggggacg ggatgtagct 60 ctcaggtgtg attcaatttc gggtcatgta accctttatt ggtaccgaca gaccctgggg 120 cagggctcag aggttctgac ttactcccag agtgatgctc aacgagacaa atcagggcgg 180 cccagtggtc ggttctctgc agagaggcct gagagatccg tctccactct gaagatccag 240 cgcacagagc agggggactc agctgtgtat ctctgtgcca gcagcttagc 290 <210> 170 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-5*01 <400> 170 ggtgctggag tctcccagtc cccaaggtac gaagtcacac agaggggaca ggatgtagct 60 cccaggtgtg atccaatttc gggtcaggta accctttatt ggtaccgaca gaccctgggg 120 cagggccaag agtttctgac ttccttccag gatgaaactc aacaagataa atcagggctg 180 ctcagtgatc aattctccac agagaggtct gaggatcttt ctccacctga agatccagcg 240 cacagagcaa gggcgactcg gctgtgtatc tctgtgccag aagcttag 288 <210> 171 <211> 289 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-5*02 <400> 171 ggtgctggag tctcccagtc cccaaggtac gaagtcacac agaggggaca ggatgtagct 60 cccaggtgtg atccaatttc gggtcaggta accctttatt ggtaccgaca gaccctgggg 120 cagggccaag agtttctgac ttccttccag gatgaaactc aacaagataa atcagggctg 180 ctcagtgatc aattctccac agagaggtct gaggatcttt ctccacctga agatccagcg 240 cacagagcaa gggcgactcg gctgtgtatc tctgtgtcag aagcttagc 289 <210> 172 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-6*01 <400> 172 ggtgctggag tctcccagtc tcccaggtac aaagtcacaa agaggggaca ggatgtagct 60 ctcaggtgtg atccaatttc gggtcatgta tccctttatt ggtaccgaca ggccctgggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttcaat tatgaagccc aacaagacaa atcagggctg 180 cccaatgatc ggttctctgc agagaggcct gagggatcca tctccactct gacgatccag 240 cgcacagagc agcgggactc ggccatgtat cgctgtgcca gcagcttagc 290 <210> 173 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-6*02 <400> 173 ggtgctggag tctcccagtc tcccaggtac aaagtcacaa agaggggaca ggatgtagct 60 ctcaggtgtg atccaatctc gggtcatgta tccctttatt ggtaccgaca ggccctgggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttcaat tatgaagccc aacaagacaa atcagggctg 180 cccaatgatc ggttctctgc agagaggcct gagggatcca tctccactct gacgatccag 240 cgcacagagc agcgggactc ggccatgtat cgctgtgcca gcagc 285 <210> 174 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-7*01 <400> 174 ggtgctggag tctcccagtc tcccaggtac aaagtcacaa agaggggaca ggatgtaact 60 ctcaggtgtg atccaatttc gagtcatgca accctttatt ggtatcaaca ggccctgggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttcaat tatgaagctc aaccagacaa atcagggctg 180 cccagtgatc ggttctctgc agagaggcct gagggatcca tctccactct gacgattcag 240 cgcacagagc agcgggactc agccatgtat cgctgtgcca gcagcttagc 290 <210> 175 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-7*02 <400> 175 ggtgctggag tctcccagtc tcccaggtac aaagtcacaa agaggggaca ggatgtaact 60 ctcaggtgtg atccaatttc gagtcatgta accctttatt ggtatcaaca ggccctgggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttcaat tatgaagctc aaccagacaa atcagggctg 180 cccagtgatc ggttctctgc agagaggcct gagggatcca tctccactct gacgattcag 240 cgcacagagc agcgggactc agccatgtat cgctgtgcca gcagc 285 <210> 176 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-8*01 <400> 176 ggtgctggag tctcccagtc ccctaggtac aaagtcgcaa agagaggaca ggatgtagct 60 ctcaggtgtg atccaatttc gggtcatgta tccctttttt ggtaccaaca ggccctgggg 120 caggggccag agtttctgac ttatttccag aatgaagctc aactagacaa atcggggctg 180 cccagtgatc gcttctttgc agaaaggcct gagggatccg tctccactct gaagatccag 240 cgcacacagc aggaggactc cgccgtgtat ctctgtgcca gcagcttagc 290 <210> 177 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-8*02 <400> 177 ggtgctggag tctcccagtc ccctaggtac aaagtcgcaa agagaggaca ggatgtagct 60 ctcaggtgtg atccaatttc gggtcatgta tccctttttt ggtaccaaca ggccctgggg 120 caggggccag agtttctgac ttatttccag aatgaagctc aactagacaa atcggggctg 180 cccagtgatc gcttctttgc agaaaggcct gagggatccg tctccactct gaagatccag 240 cgcacacaga aggaggactc cgccgtgtat ctctgtgcca gcagcttagc 290 <210> 178 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-8*03 <400> 178 ggtgctggag tctcccagtc ccctaggtac aaagtcgcaa agagaggaca ggatgtagct 60 ctcaggtgtg atccaatttc gggtcatgta tccctttttt ggtaccaaca ggccctcggg 120 caggggccag agtttctgac ttatttccag aatgaagctc aactagacaa atcggggctg 180 cccagtgatc gcttctttgc agaaaggcct gagggatccg tctccactct gaagatccag 240 cgcacacagc aggaggactc cgccgtgtat ctctgtgcca gcagccga 288 <210> 179 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-9*05 <400> 179 gatactggag tctcccagaa ccccagacac aagatcacaa agaggggaca gaatgtaact 60 ttcaggtgtg atccaatttc tgaacacaac cgcctttatt ggtaccgaca gaccctgggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttccag aatgaagctc aactagaaaa atcaaggctg 180 ctcagtgatc ggttctctgc agagaggcct aagggatctc tctccacctt ggagatccag 240 cgcacagagc agggggactc ggccatgtat ctctgtgcca gcaccaaa 288 <210> 180 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-9*06 <400> 180 gatactggag tctcccagaa ccccagacac aagatcacaa agaggggaca gaatgtaact 60 ttcaggtgtg atccaatttc tgaacacaac cgcctttatt ggtaccgaca gaccctgggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttccag aatgaagctc aactagaaaa atcaaggctg 180 ctcagtgatc ggttctctgc agagaggcct aagggatctc tttccacctt ggagatccag 240 cgcacagagc agggggactc ggccatgtat ctctgtgcca gcacgttg 288 <210> 181 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-9*03 <400> 181 gatactggag tctcccagga ccccagacac aagatcacaa agaggggaca gaatgtaact 60 ttcaggtgtg atccaatttc tgaacacaac cgcctttatt ggtaccgaca gaccctgggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttccag aatgaagctc aactagaaaa atcaaggctg 180 ctcagtgatc ggttctctgc agagaggcct aagggatctt tctccacctt ggagatccag 240 cgcacagagc agggggactc ggccatgtat ctctgtgcca gcagc 285 <210> 182 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-9*01 <400> 182 gatactggag tctcccagaa ccccagacac aagatcacaa agaggggaca gaatgtaact 60 ttcaggtgtg atccaatttc tgaacacaac cgcctttatt ggtaccgaca gaccctgggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttccag aatgaagctc aactagaaaa atcaaggctg 180 ctcagtgatc ggttctctgc agagaggcct aagggatctt tctccacctt ggagatccag 240 cgcacagagc agggggactc ggccatgtat ctctgtgcca gcagcttagc 290 <210> 183 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-9*02 <400> 183 gatactggag tctcccagaa ccccagacac aacatcacaa agaggggaca gaatgtaact 60 ttcaggtgtg atccaatttc tgaacacaac cgcctttatt ggtaccgaca gaccctgggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttccag aatgaagctc aactagaaaa atcaaggctg 180 ctcagtgatc ggttctctgc agagaggcct aagggatctt tctccacctt ggagatccag 240 cgcacagagc agggggactc ggccatgtat ctctgtgcca gcagctta 288 <210> 184 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-9*07 <400> 184 cacaaccgcc tttattggta ccgacagacc ctggggcagg gcccagagtt tctgacttac 60 ttccagaatg aagctcaact agaaaaatca aggctgctca gtgatcggtt ctctgcagag 120 aggcctaagg gatctttctc caccttggag atccagcgca cagaggaggg ggactcggcc 180 atgtatctct gtgccagcag cagcagt 207 <210> 185 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV7-9*04 <400> 185 atatctggag tctcccacaa ccccagacac aagatcacaa agaggggaca gaatgtaact 60 ttcaggtgtg atccaatttc tgaacacaac cgcctttatt ggtaccgaca gaaccctggg 120 cagggcccag agtttctgac ttacttccag aatgaagctc aactggaaaa atcagggctg 180 ctcagtgatc ggatctctgc agagaggcct aagggatctt tctccacctt ggagatccag 240 cgcacagagc agggggactc ggccatgtat ctctgtgcca gcagctct 288 <210> 186 <211> 279 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV8-1*01 <400> 186 gaggcaggga tcagccagat accaagatat cacagacaca cagggaaaaa gatcatcctg 60 aaatatgctc agattaggaa ccattattca gtgttctgtt atcaataaga ccaagaatag 120 gggctgaggc tgatccatta ttcaggtagt attggcagca tgaccaaagg cggtgccaag 180 gaagggtaca atgtctctgg aaacaagctc aagcattttc cctcaaccct ggagtctact 240 agcaccagcc agacctctgt acctctgtgg cagtgcatc 279 <210> 187 <211> 271 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV8-2*01 <400> 187 gatgctggga tcacccagat gccaagatat cacattgtac agaagaaaga gatgatcctg 60 gaatgtgctc aggttaggaa cagtgttctg atatcgacag gacccaagac gggggctgaa 120 gcttatccac tattcaggca gtggtcacag caggaccaaa gttgatgtca cagaggggta 180 ctgtgtttct tgaaacaagc ttgagcattt ccccaatcct ggcatccacc agcaccagcc 240 agacctatct gtaccactgt ggcagcacat c 271 <210> 188 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV9*01 <400> 188 gattctggag tcacacaaac cccaaagcac ctgatcacag caactggaca gcgagtgacg 60 ctgagatgct cccctaggtc tggagacctc tctgtgtact ggtaccaaca gagcctggac 120 cagggcctcc agttcctcat tcagtattat aatggagaag agagagcaaa aggaaacatt 180 cttgaacgat tctccgcaca acagttccct gacttgcact ctgaactaaa cctgagctct 240 ctggagctgg gggactcagc tttgtatttc tgtgccagca gcgtag 286 <210> 189 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV9*03 <400> 189 gattctggag tcacacaaac cccaaagcac ctgatcacag caactggaca gcgagtgacg 60 ctgagatgct cccctaggtc tggagacctc tctgtgtact ggtaccaaca gagcctggac 120 cagggcctcc agttcctcat tcaatattat aatggagaag agagagcaaa aggaaacatt 180 cttgaacgat tctccgcaca acagttccct gacttgcact ctgaactaaa cctgagctct 240 ctggagctgg gggactcagc tttgtatttc tgtgccagca gc 282 <210> 190 <211> 286 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV9*02 <400> 190 gattctggag tcacacaaac cccaaagcac ctgatcacag caactggaca gcgagtgacg 60 ctgagatgct cccctaggtc tggagacctc tctgtgtact ggtaccaaca gagcctggac 120 cagggcctcc agttcctcat tcactattat aatggagaag agagagcaaa aggaaacatt 180 cttgaacgat tctccgcaca acagttccct gacttgcact ctgaactaaa cctgagctct 240 ctggagctgg gggactcagc tttgtatttc tgtgccagca gcgtag 286 <210> 191 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-1*01 <400> 191 gatgctgaaa tcacccagag cccaagacac aagatcacag agacaggaag gcaggtgacc 60 ttggcgtgtc accagacttg gaaccacaac aatatgttct ggtatcgaca agacctggga 120 catgggctga ggctgatcca ttactcatat ggtgttcaag acactaacaa aggagaagtc 180 tcagatggct acagtgtctc tagatcaaac acagaggacc tccccctcac tctggagtct 240 gctgcctcct cccagacatc tgtatatttc tgcgccagca gtgagtc 287 <210> 192 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-1*02 <400> 192 gatgctgaaa tcacccagag cccaagacac aagatcacag agacaggaag gcaggtgacc 60 ttggcgtgtc accagacttg gaaccacaac aatatgttct ggtatcgaca agacctggga 120 catgggctga ggctgatcca ttactcatat ggtgttcacg acactaacaa aggagaagtc 180 tcagatggct acagtgtctc tagatcaaac acagaggacc tccccctcac tctggagtct 240 gctgcctcct cccagacatc tgtatatttc tgcgccagca gt 282 <210> 193 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-2*01 <400> 193 gatgctggaa tcacccagag cccaagatac aagatcacag agacaggaag gcaggtgacc 60 ttgatgtgtc accagacttg gagccacagc tatatgttct ggtatcgaca agacctggga 120 catgggctga ggctgatcta ttactcagca gctgctgata ttacagataa aggagaagtc 180 cccgatggct atgttgtctc cagatccaag acagagaatt tccccctcac tctggagtca 240 gctacccgct cccagacatc tgtgtatttc tgcgccagca gtgagtc 287 <210> 194 <211> 217 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-2*02 <400> 194 aaggcaggtg accttgatgt gtcaccagac ttggagccac agctatatgt tctggtatcg 60 acaagacctg ggacatgggc tgaggctgat ctattactca gcagctgctg atattacaga 120 taaaggagaa gtccccgatg gctacgttgt ctccagatcc aagacagaga atttccccct 180 cactctggag tcagctaccc gctcccagac atctgtg 217 <210> 195 <211> 273 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-3*03 <400> 195 gatgctggaa tcacccagag cccaagacac aaggtcacag agacaggaac accagtgact 60 ctgagatgtc accagactga gaaccaccgc tacatgtact ggtatcgaca agacccgggg 120 catgggctga ggctaatcca ttactcatat ggtgttaaag atactgacaa aggagaagtc 180 tcagatggct atagtgtctc tagatcaaag acagaggatt tcctcctcac tctggagtcc 240 gctaccagct cccagacatc tgtgtacttc tgt 273 <210> 196 <211> 273 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-3*04 <400> 196 gatgctggaa tcacccagag cccaagacac aaggtcacag agacaggaac accagtgact 60 ctgagatgtc accagactga gaaccaccgc tacatgtact ggtatcgaca agacccgggg 120 catgggctga ggctgatcca ttactcatat ggtgttaaag atactgacaa aggagaagtc 180 tcagatggct atagtgtctc tagatcaaag acagaggatt tcctcctcac tctggagtcc 240 gctaccagct cccagacatc tgtgtacttc tgt 273 <210> 197 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-3*01 <400> 197 gatgctggaa tcacccagag cccaagacac aaggtcacag agacaggaac accagtgact 60 ctgagatgtc accagactga gaaccaccgc tatatgtact ggtatcgaca agacccgggg 120 catgggctga ggctgatcca ttactcatat ggtgttaaag atactgacaa aggagaagtc 180 tcagatggct atagtgtctc tagatcaaag acagaggatt tcctcctcac tctggagtcc 240 gctaccagct cccagacatc tgtgtacttc tgtgccatca gtgagtc 287 <210> 198 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV10-3*02 <400> 198 gatgctggaa tcacccagag cccaagacac aaggtcacag agacaggaac accagtgact 60 ctgagatgtc atcagactga gaaccaccgc tatatgtact ggtatcgaca agacccgggg 120 catgggctga ggctgatcca ttactcatat ggtgttaaag atactgacaa aggagaagtc 180 tcagatggct atagtgtctc tagatcaaag acagaggatt tcctcctcac tctggagtcc 240 gctaccagct cccagacatc tgtgtacttc tgtgccatca gtgagtc 287 <210> 199 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV11-1*01 <400> 199 gaagctgaag ttgcccagtc ccccagatat aagattacag agaaaagcca ggctgtggct 60 ttttggtgtg atcctatttc tggccatgct accctttact ggtaccggca gatcctggga 120 cagggcccgg agcttctggt tcaatttcag gatgagagtg tagtagatga ttcacagttg 180 cctaaggatc gattttctgc agagaggctc aaaggagtag actccactct caagatccag 240 cctgcagagc ttggggactc ggccatgtat ctctgtgcca gcagcttagc 290 <210> 200 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV11-3*01 <400> 200 gaagctggag tggttcagtc tcccagatat aagattatag agaaaaaaca gcctgtggct 60 ttttggtgca atcctatttc tggccacaat accctttact ggtacctgca gaacttggga 120 cagggcccgg agcttctgat tcgatatgag aatgaggaag cagtagacga ttcacagttg 180 cctaaggatc gattttctgc agagaggctc aaaggagtag actccactct caagatccag 240 cctgcagagc ttggggactc ggccgtgtat ctctgtgcca gcagcttaga 290 <210> 201 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV11-3*02 <400> 201 gaagctggag tggttcagtc tcccagatat aagattatag agaaaaagca gcctgtggct 60 ttttggtgca atcctatttc tggccacaat accctttact ggtaccggca gaacttggga 120 cagggcccgg agcttctgat tcgatatgag aatgaggaag cagtagacga ttcacagttg 180 cctaaggatc gattttctgc agagaggctc aaaggagtag actccactct caagatccag 240 cctgcagagc ttggggactc ggccgtgtat ctctgtgcca gcagc 285 <210> 202 <211> 269 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV11-3*03 <400> 202 ggtctcccag atataagatt atagagaaga aacagcctgt ggctttttgg tgcaatccaa 60 tttctggcca caataccctt tactggtacc tgcagaactt gggacagggc ccggagcttc 120 tgattcgata tgagaatgag gaagcagtag acgattcaca gttgcctaag gatcgatttt 180 ctgcagagag gctcaaagga gtagactcca ctctcaagat ccagccagca gagcttgggg 240 actcggccat gtatctctgt gccagcagc 269 <210> 203 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV11-2*01 <400> 203 gaagctggag ttgcccagtc tcccagatat aagattatag agaaaaggca gagtgtggct 60 ttttggtgca atcctatatc tggccatgct accctttact ggtaccagca gatcctggga 120 cagggcccaa agcttctgat tcagtttcag aataacggtg tagtggatga ttcacagttg 180 cctaaggatc gattttctgc agagaggctc aaaggagtag actccactct caagatccag 240 cctgcaaagc ttgaggactc ggccgtgtat ctctgtgcca gcagcttaga 290 <210> 204 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV11-2*03 <400> 204 gaagctggag ttgcccagtc tcccagatat aagattatag agaaaaggca gagtgtggct 60 ttttggtgca atcctatatc tggccatgct accctttact ggtaccagca gatcctggga 120 cagggcccaa agcttctgat tcagtttcag aataacggtg tagtggatga ttcacagttg 180 cctaaggatc gattttctgc agagaggctc aaaggagtag actccactct caagatccaa 240 cctgcaaagc ttgaggactc ggccgtgtat ctctgtgcca gcagc 285 <210> 205 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV11-2*02 <400> 205 gaagctggag ttgcccagtc tcccagatat aagattatag agaaaaggca gagtgtggct 60 ttttggtgca atcctatatc tggccatgct accctttact ggtaccagca gatcctggga 120 cagggcccaa agcttctgat tcagtttcag aataacggtg tagtggatga ttcacagttg 180 cctaaggatc gattttctgc agagaggctc aaaggagtag actccactct caagatccag 240 cctgcaaagc ttgagaactc ggccgtgtat ctctgtgcca gcagt 285 <210> 206 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV12-1*01 <400> 206 gatgctggtg ttatccagtc acccaggcac aaagtgacag agatgggaca atcagtaact 60 ctgagatgcg aaccaatttc aggccacaat gatcttctct ggtacagaca gacctttgtg 120 cagggactgg aattgctgaa ttacttctgc agctggaccc tcgtagatga ctcaggagtg 180 tccaaggatt gattctcagc acagatgcct gatgtatcat tctccactct gaggatccag 240 cccatggaac ccagggactt gggcctatat ttctgtgcca gcagctttgc 290 <210> 207 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV12-2*01 <400> 207 gatgctggca ttatccagtc acccaagcat gaggtgacag aaatgggaca aacagtgact 60 ctgagatgtg agccaatttt tggccacaat ttccttttct ggtacagaga taccttcgtg 120 cagggactgg aattgctgag ttacttccgg agctgatcta ttatagataa tgcaggtatg 180 cccacagagc gattctcagc tgagaggcct gatggatcat tctctactct gaagatccag 240 cctgcagagc agggggactc ggccgtgtat gtctgtgcaa gtcgcttagc 290 <210> 208 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV12-4*01 <400> 208 gatgctggag ttatccagtc accccggcac gaggtgacag agatgggaca agaagtgact 60 ctgagatgta aaccaatttc aggacacgac taccttttct ggtacagaca gaccatgatg 120 cggggactgg agttgctcat ttactttaac aacaacgttc cgatagatga ttcagggatg 180 cccgaggatc gattctcagc taagatgcct aatgcatcat tctccactct gaagatccag 240 ccctcagaac ccagggactc agctgtgtac ttctgtgcca gcagtttagc 290 <210> 209 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV12-4*02 <400> 209 gatgctggag ttatccagtc accccggcac gaggtgacag agatgggaca agaagtgact 60 ctgagatgta aaccaatttc aggacatgac taccttttct ggtacagaca gaccatgatg 120 cggggactgg agttgctcat ttactttaac aacaacgttc cgatagatga ttcagggatg 180 cccgaggatc gattctcagc taagatgcct aatgcatcat tctccactct gaggatccag 240 ccctcagaac ccagggactc agctgtgtac ttctgtgcca gcagttta 288 <210> 210 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV12-3*01 <400> 210 gatgctggag ttatccagtc accccgccat gaggtgacag agatgggaca agaagtgact 60 ctgagatgta aaccaatttc aggccacaac tcccttttct ggtacagaca gaccatgatg 120 cggggactgg agttgctcat ttactttaac aacaacgttc cgatagatga ttcagggatg 180 cccgaggatc gattctcagc taagatgcct aatgcatcat tctccactct gaagatccag 240 ccctcagaac ccagggactc agctgtgtac ttctgtgcca gcagtttagc 290 <210> 211 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV12-5*01 <400> 211 gatgctagag tcacccagac accaaggcac aaggtgacag agatgggaca agaagtaaca 60 atgagatgtc agccaatttt aggccacaat actgttttct ggtacagaca gaccatgatg 120 caaggactgg agttgctggc ttacttccgc aaccgggctc ctctagatga ttcggggatg 180 ccgaaggatc gattctcagc agagatgcct gatgcaactt tagccactct gaagatccag 240 ccctcagaac ccagggactc agctgtgtat ttttgtgcta gtggtttggt 290 <210> 212 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV13*01 <400> 212 gctgctggag tcatccagtc cccaagacat ctgatcaaag aaaagaggga aacagccact 60 ctgaaatgct atcctatccc tagacacgac actgtctact ggtaccagca gggtccaggt 120 caggaccccc agttcctcat ttcgttttat gaaaagatgc agagcgataa aggaagcatc 180 cctgatcgat tctcagctca acagttcagt gactatcatt ctgaactgaa catgagctcc 240 ttggagctgg gggactcagc cctgtacttc tgtgccagca gcttagg 287 <210> 213 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV13*02 <400> 213 gctgctggag tcatccagtc cccaagacat ctgatcagag aaaagaggga aacagccact 60 ctgaaatgct atcctatccc tagacacgac actgtctact ggtaccagca gggcccaggt 120 caggaccccc agttcttcat ttcgttttat gaaaagatgc agagcgataa aggaagcatc 180 cctgatcgat tctcagctca acagttcagt gactatcatt ctgaactgaa catgagctcc 240 ttggagctgg gggactcagc cctgtacttc tgtgccagca gc 282 <210> 214 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV14*01 <400> 214 gaagctggag ttactcagtt ccccagccac agcgtaatag agaagggcca gactgtgact 60 ctgagatgtg acccaatttc tggacatgat aatctttatt ggtatcgacg tgttatggga 120 aaagaaataa aatttctgtt acattttgtg aaagagtcta aacaggatga gtccggtatg 180 cccaacaatc gattcttagc tgaaaggact ggagggacgt attctactct gaaggtgcag 240 cctgcagaac tggaggattc tggagtttat ttctgtgcca gcagccaaga 290 <210> 215 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV14*02 <400> 215 gaagctggag ttactcagtt ccccagccac agcgtaatag agaagggcca gactgtgact 60 ctgagatgtg acccaatttc tggacatgat aatctttatt ggtatcgacg tgttatggga 120 aaagaaataa aatttctgtt acattttgtg aaagagtcta aacaggatga atccggtatg 180 cccaacaatc gattcttagc tgaaaggact ggagggacgt attctactct gaaggtgcag 240 cctgcagaac tggaggattc tggagtttat ttctgtgcca gcagc 285 <210> 216 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV15*01 <400> 216 gatgccatgg tcatccagaa cccaagatac caggttaccc agtttggaaa gccagtgacc 60 ctgagttgtt ctcagacttt gaaccataac gtcatgtact ggtaccagca gaagtcaagt 120 caggccccaa agctgctgtt ccactactat gacaaagatt ttaacaatga agcagacacc 180 cctgataact tccaatccag gaggccgaac acttctttct gctttcttga catccgctca 240 ccaggcctgg gggacacagc catgtacctg tgtgccacca gcagaga 287 <210> 217 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV15*03 <400> 217 gatgccatgg tcatccagaa cccaagatac cgggttaccc agtttggaaa gccagtgacc 60 ctgagttgtt ctcagacttt gaaccataac gtcatgtact ggtaccagca gaagtcaagt 120 caggccccaa agctgctgtt ccactactat aacaaagatt ttaacaatga agcagacacc 180 cctgataact tccaatccag gaggccgaac acttctttct gctttctaga catccgctca 240 ccaggcctgg gggacgcagc catgtaccag tgtgccacca gc 282 <210> 218 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV15*02 <400> 218 gatgccatgg tcatccagaa cccaagatac caggttaccc agtttggaaa gccagtgacc 60 ctgagttgtt ctcagacttt gaaccataac gtcatgtact ggtaccagca gaagtcaagt 120 caggccccaa agctgctgtt ccactactat gacaaagatt ttaacaatga agcagacacc 180 cctgataact tccaatccag gaggccgaac acttctttct gctttcttga catccgctca 240 ccaggcctgg gggacgcagc catgtacctg tgtgccacca gc 282 <210> 219 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV16*01 <400> 219 ggtgaagaag tcgcccagac tccaaaacat cttgtcagag gggaaggaca gaaagcaaaa 60 ttatattgtg ccccaataaa aggacacagt tatgtttttt ggtaccaaca ggtcctgaaa 120 aacgagttca agttcttgat ttccttccag aatgaaaatg tctttgatga aacaggtatg 180 cccaaggaaa gattttcagc taagtgcctc ccaaattcac cctgtagcct tgagatccag 240 gctacgaagc ttgaggattc agcagtgtat ttttgtgcca gcagccaatc 290 <210> 220 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV16*02 <400> 220 ggtgaagaag tcgcccagac tccaaaacat cttgtcagag gggaaggaca gaaagcaaaa 60 ttatattgtg ccccaataaa aggacacagt taggtttttt ggtaccaaca ggtcctgaaa 120 aacgagttca agttcttgat ttccttccag aatgaaaatg tctttgatga aacaggtatg 180 cccaaggaaa gattttcagc taagtgcctc ccaaattcac cctgtagcct tgagatccag 240 gctacgaagc ttgaggattc agcagtgtat ttttgtgcca gcagccaatc 290 <210> 221 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV16*03 <400> 221 ggtgaagaag tcgcccagac tccaaaacat cttgtcagag gggaaggaca gaaagcaaaa 60 ttatattgtg ccccaataaa aggacacagt tatgtttttt ggtaccaaca ggtcctgaaa 120 aacgagttca agttcttggt ttccttccag aatgaaaatg tctttgatga aacaggtatg 180 cccaaggaaa gattttcagc taagtgcctc ccaaattcac cctgtagcct tgagatccag 240 gctacgaagc ttgaggattc agcagtgtat ttttgtgcca gcagc 285 <210> 222 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV17*01 <400> 222 gagcctggag tcagccagac ccccagacac aaggtcacca acatgggaca ggaggtgatt 60 ctgaggtgcg atccatcttc tggtcacatg tttgttcact ggtaccgaca gaatctgagg 120 caagaaatga agttgctgat ttccttccag taccaaaaca ttgcagttga ttcagggatg 180 cccaaggaac gattcacagc tgaaagacct aacggaacgt cttccacgct gaagatccat 240 cccgcagagc cgagggactc agccgtgtat ctctacagta gcggtgg 287 <210> 223 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV18*01 <400> 223 aatgccggcg tcatgcagaa cccaagacac ctggtcagga ggaggggaca ggaggcaaga 60 ctgagatgca gcccaatgaa aggacacagt catgtttact ggtatcggca gctcccagag 120 gaaggtctga aattcatggt ttatctccag aaagaaaata tcatagatga gtcaggaatg 180 ccaaaggaac gattttctgc tgaatttccc aaagagggcc ccagcatcct gaggatccag 240 caggtagtgc gaggagattc ggcagcttat ttctgtgcca gctcaccacc 290 <210> 224 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV19*01 <400> 224 gatggtggaa tcactcagtc cccaaagtac ctgttcagaa aggaaggaca gaatgtgacc 60 ctgagttgtg aacagaattt gaaccacgat gccatgtact ggtaccgaca ggacccaggg 120 caagggctga gattgatcta ctactcacag atagtaaatg actttcagaa aggagatata 180 gctgaagggt acagcgtctc tcgggagaag aaggaatcct ttcctctcac tgtgacatcg 240 gcccaaaaga acccgacagc tttctatctc tgtgccagta gtataga 287 <210> 225 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV19*02 <400> 225 gatggtggaa tcactcagtc cccaaagtac ctgttcagaa aggaaggaca gaatgtgacc 60 ctgagttgtg aacagaattt gaaccacgat gccatgtact ggtaccgaca ggtcccaggg 120 caagggctga gattgatcta ctactcacac atagtaaatg actttcagaa aggagatata 180 gctgaagggt acagcgtctc tcgggagaag aaggaatcct ttcctctcac tgtgacatcg 240 gcccaaaaga acccgacagc tttctatctc tgtgccagta gtataga 287 <210> 226 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV19*03 <400> 226 gatggtggaa tcactcagtc cccaaagtac ctgttcagaa aggaaggaca gaatgtgacc 60 ctgagttgtg aacagaattt gaaccacgat gccatgtact ggtaccgaca ggacccaggg 120 caagggctga gattgatcta ctactcacac atagtaaatg actttcagaa aggagatata 180 gctgaagggt acagcgtctc tcgggagaag aaggaatcct ttcctctcac tgtgacatcg 240 gcccaaaaga acccgacagc tttctatctc tgtgccagta gc 282 <210> 227 <211> 291 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV20-1*05 <400> 227 ggtgctgtcg tctctcaaca tccgagcagg gttatctgta agagtggaac ctctgtgaag 60 atcgagtgcc gttccctgga ctttcaggcc acaactatgt tttggtatcg tcagttcccg 120 aaaaagagtc tcatgctgat ggcaacttcc aatgagggct ccaaggccac atacgagcaa 180 ggcgtcgaga aggacaagtt tctcatcaac catgcaagcc tgaccttgtc cactctgaca 240 gtgaccagtg cccatcctga agacagcagc ttctacatct gcagtgctag a 291 <210> 228 <211> 291 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV20-1*07 <400> 228 ggtgctgtcg tctctcaaca tccgagcagg gttatctgta agagtggaac ctctgtgaag 60 atcgagtgcc gttccctgga ctttcaggcc acaactatgt tttggtatcg tcagttcccg 120 aaaaagagtc tcatgcagat cgcaacttcc aatgagggct ccaaggccac atacgagcaa 180 ggcgtcgaga aggacaagtt tctcatcaac catgcaagcc tgaccttgtc cactctgaca 240 gtgaccagtg cccatcctga agacagcagc ttctacatct gcagtgctag a 291 <210> 229 <211> 291 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV20-1*04 <400> 229 ggtgctgtcg tctctcaaca tccgagcagg gttatctgta agagtggaac ctctgtgaag 60 atcgagtgcc gttccttgga ctttcaggcc acaactatgt tttggtatcg tcagttcccg 120 aaaaagagtc tcatgctgat ggcaacttcc aatgagggct ccaaggccac atacgagcaa 180 ggcgtcgaga aggacaagtt tctcatcaac catgcaagcc tgaccttgtc cactctgaca 240 gtgaccagtg cccatcctga agacagcagc ttctacatct gcagtgctag t 291 <210> 230 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV20-1*06 <400> 230 ggtgctgtcg tctctcaaca tccgagtagg gttatctgta agagtggaac ctctgtgaag 60 atcgagtgcc gttccctgga ctttcaggcc acaactatgt tttggtatcg tcagttcccg 120 aaaaagagtc tcatgctgat ggcaacttcc aatgagggct ccaaggccac atacgagcaa 180 ggcgtcgaga aggacaagtt tctcatcaac catgcaagcc tgaccttgtc cactctgaca 240 gtgaccagtg cccatcctga agacagcagc ttctacatct gcagtgct 288 <210> 231 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV20-1*02 <400> 231 ggtgctgtcg tctctcaaca tccgagcagg gttatctgta agagtggaac ctctgtgaag 60 atcgagtgcc gttccctgga ctttcaggcc acaactatgt tttggtatcg tcagttcccg 120 aaacagagtc tcatgctgat ggcaacttcc aatgagggct ccaaggccac atacgagcaa 180 ggcgtcgaga aggacaagtt tctcatcaac catgcaagcc tgaccttgtc cactctgaca 240 gtgaccagtg cccatcctga agacagcagc ttctacatct gcagtgct 288 <210> 232 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV20-1*01 <400> 232 ggtgctgtcg tctctcaaca tccgagctgg gttatctgta agagtggaac ctctgtgaag 60 atcgagtgcc gttccctgga ctttcaggcc acaactatgt tttggtatcg tcagttcccg 120 aaacagagtc tcatgctgat ggcaacttcc aatgagggct ccaaggccac atacgagcaa 180 ggcgtcgaga aggacaagtt tctcatcaac catgcaagcc tgaccttgtc cactctgaca 240 gtgaccagtg cccatcctga agacagcagc ttctacatct gcagtgctag aga 293 <210> 233 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV20-1*03 <400> 233 ggtgctgtcg tctctcaaca tccgagctgg gttatctgta agagtggaac ctctgtgaag 60 atcgagtgcc gttccctgga ctttcaggcc acaactatgt tttggtatcg tcagttcccg 120 aaacagagtc tcatgctgat ggcaacttcc aatgagggct gcaaggccac atacgagcaa 180 ggcgtcgaga aggacaagtt tctcatcaac catgcaagcc tgaccttgtc cactctgaca 240 gtgaccagtg cccatcctga agacagcagc ttctacatct gcagtgct 288 <210> 234 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV21-1*01 <400> 234 gacaccaagg tcacccagag acctagactt ctggtcaaag caagtgaaca gaaagcaaag 60 atggattgtg ttcctataaa agcacatagt tatgtttact ggtatcgtaa gaagctggaa 120 gaagagctca agtttttggt ttactttcag aatgaagaac ttattcagaa agcagaaata 180 atcaatgagc gatttttagc ccaatgctcc aaaaactcat cctgtacctt ggagatccag 240 tccacggagt caggggacac agcactgtat ttctgtgcca gcagcaaagc 290 <210> 235 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV22-1*01 <400> 235 gatgctgaca tctatcagat gccattccag ctcactgggg ctggatggga tgtgactctg 60 gagtggaaac ggaatttgag acacaatgac atgtactgct actggtactg gcaggaccca 120 aagcaaaatc tgagactgat ctattactca agggttgaaa aggatattca gagaggagat 180 ctaactgaag gctacgtgtc tgccaagagg agaaggggct atttcttctc agggtgaagt 240 tggcccacac cagccaaaca gctttgtact tctgtcctgg gagcgcac 288 <210> 236 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV23-1*01 <400> 236 catgccaaag tcacacagac tccaggacat ttggtcaaag gaaaaggaca gaaaacaaag 60 atggattgta cccccgaaaa aggacatact tttgtttatt ggtatcaaca gaatcagaat 120 aaagagttta tgcttttgat ttcctttcag aatgaacaag ttcttcaaga aacggagatg 180 cacaagaagc gattctcatc tcaatgcccc aagaacgcac cctgcagcct ggcaatcctg 240 tcctcagaac cgggagacac ggcactgtat ctctgcgcca gcagtcaatc 290 <210> 237 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV24-1*01 <400> 237 gatgctgatg ttacccagac cccaaggaat aggatcacaa agacaggaaa gaggattatg 60 ctggaatgtt ctcagactaa gggtcatgat agaatgtact ggtatcgaca agacccagga 120 ctgggcctac ggttgatcta ttactccttt gatgtcaaag atataaacaa aggagagatc 180 tctgatggat acagtgtctc tcgacaggca caggctaaat tctccctgtc cctagagtct 240 gccatcccca accagacagc tctttacttc tgtgccacca gtgatttg 288 <210> 238 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV25-1*01 <400> 238 gaagctgaca tctaccagac cccaagatac cttgttatag ggacaggaaa gaagatcact 60 ctggaatgtt ctcaaaccat gggccatgac aaaatgtact ggtatcaaca agatccagga 120 atggaactac acctcatcca ctattcctat ggagttaatt ccacagagaa gggagatctt 180 tcctctgagt caacagtctc cagaataagg acggagcatt ttcccctgac cctggagtct 240 gccaggccct cacatacctc tcagtacctc tgtgccagca gtgaata 287 <210> 239 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV26*01 <400> 239 gatgctgtag ttacacaatt cccaagacac agaatcattg ggacaggaaa ggaattcatt 60 ctacagtgtt cccagaatat gaatcatgtt acaatgtact ggtatcgaca ggacccagga 120 cttggactga agctggtcta ttattcacct ggcactggga gcactgaaaa aggagatatc 180 tctgaggggt atcatgtttc ttgaaatact atagcatctt ttcccctgac cctgaagtct 240 gccagcacca accagacatc tgtgtatctc tatgccagca gttcatc 287 <210> 240 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV27*01 <400> 240 gaagcccaag tgacccagaa cccaagatac ctcatcacag tgactggaaa gaagttaaca 60 gtgacttgtt ctcagaatat gaaccatgag tatatgtcct ggtatcgaca agacccaggg 120 ctgggcttaa ggcagatcta ctattcaatg aatgttgagg tgactgataa gggagatgtt 180 cctgaagggt acaaagtctc tcgaaaagag aagaggaatt tccccctgat cctggagtcg 240 cccagcccca accagacctc tctgtacttc tgtgccagca gtttatc 287 <210> 241 <211> 287 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV28*01 <400> 241 gatgtgaaag taacccagag ctcgagatat ctagtcaaaa ggacgggaga gaaagttttt 60 ctggaatgtg tccaggatat ggaccatgaa aatatgttct ggtatcgaca agacccaggt 120 ctggggctac ggctgatcta tttctcatat gatgttaaaa tgaaagaaaa aggagatatt 180 cctgaggggt acagtgtctc tagagagaag aaggagcgct tctccctgat tctggagtcc 240 gccagcacca accagacatc tatgtacctc tgtgccagca gtttatg 287 <210> 242 <211> 290 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV29-1*01 <400> 242 agtgctgtca tctctcaaaa gccaagcagg gatatctgtc aacgtggaac ctccctgacg 60 atccagtgtc aagtcgatag ccaagtcacc atgatgttct ggtaccgtca gcaacctgga 120 cagagcctga cactgatcgc aactgcaaat cagggctctg aggccacata tgagagtgga 180 tttgtcattg acaagtttcc catcagccgc ccaaacctaa cattctcaac tctgactgtg 240 agcaacatga gccctgaaga cagcagcata tatctctgca gcgttgaaga 290 <210> 243 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV29-1*02 <400> 243 agtgctgtca tctctcaaaa gccaagcagg gatatctgtc aacgtggaac ctccctgacg 60 atccagtgtc aagtcgatag ccaagtcacc atgatgttct ggtaccgtca gcaacctgga 120 cagagcctga cactgatcgc aactgcaaat cagggctctg aggccacata tgagagtgga 180 tttgtcattg acaagtttcc catcagccgc ccaaacctaa cattctcaag tctgactgtg 240 agcaacatga gccctgaaga cagcagcata tatctctgca gcgttgaa 288 <210> 244 <211> 231 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV29-1*03 <400> 244 acgatccagt gtcaagtcga tagccaagtc accatgatat tctggtaccg tcagcaacct 60 ggacagagcc tgacactgat cgcaactgca aatcagggct ctgaggccac atatgagagt 120 ggatttgtca ttgacaagtt tcccatcagc cgcccaaacc taacattctc aactctgact 180 gtgagcaaca tgagccctga agacagcagc atatatctct gcagcgcggg c 231 <210> 245 <211> 284 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV30*02 <400> 245 tctcagacta ttcatcaatg gccagcgacc ctggtgcagc ctgtgggcag cccgctctct 60 ctggagtgca ctgtggaggg aacatcaaac cccaacctat actggtaccg acaggctgca 120 ggcaggggcc tccagctgct cttctactcc gttggtattg gccagatcag ctctgaggtg 180 ccccagaatc tctcagcctc cagaccccag gaccggcagt tcatcctgag ttctaagaag 240 ctcctcctca gtgactctgg cttctatctc tgtgcctgga gtgt 284 <210> 246 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV30*05 <400> 246 tctcagacta ttcatcaatg gccagcgacc ctggtgcagc ctgtgggcag cccgctctcc 60 ctggagtgca ctgtggaggg aacatcaaac cccaacctat actggtaccg acaggctgca 120 ggacggggcc tccagctgct cttctactcc gttggtattg gccagatcag ctctgaggtg 180 ccccagaatc tctcagcctc cagaccccag gaccggcagt tcatcctgag ttctaagaag 240 ctccttctca gtgactctgg cttctatctc tgtgcctggg ga 282 <210> 247 <211> 284 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV30*01 <400> 247 tctcagacta ttcatcaatg gccagcgacc ctggtgcagc ctgtgggcag cccgctctct 60 ctggagtgca ctgtggaggg aacatcaaac cccaacctat actggtaccg acaggctgca 120 ggcaggggcc tccagctgct cttctactcc gttggtattg gccagatcag ctctgaggtg 180 ccccagaatc tctcagcctc cagaccccag gaccggcagt tcatcctgag ttctaagaag 240 ctccttctca gtgactctgg cttctatctc tgtgcctgga gtgt 284 <210> 248 <211> 276 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV30*04 <400> 248 actattcatc aatggccagc gaccctggtg cagcctgtgg gcagcccgct ctctctggag 60 tgcactgtgg agggaacatc aaaccccaac ctatactggt accgacaggc tgcaggcagg 120 ggcctccagc tgctcttcta ctccattggt attgaccaga tcagctctga ggtgccccag 180 aatctctcag cctccagacc ccaggaccgg cagttcattc tgagttctaa gaagctcctc 240 ctcagtgact ctggcttcta tctctgtgcc tggagt 276 <210> 249 <211> 448 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ1S1 <400> 249 ttgaaaaagg aacctaggac cctgtggatg gactctgtca ttctccatgg tcctaaaaag 60 caaaagtcaa agtgttcttc tgtgtaatac ccataaagca caggaggaga tttcttagct 120 cactgtcctc catcctagcc agggccctct cccctctcta tgccttcaat gtgattttca 180 ccttgacccc tgtcactgtg tgaacactga agctttcttt ggacaaggca ccagactcac 240 agttgtaggt aagacatttt tcaggttctt ttgcagatcc gtcacaggga aaagtgggtc 300 cacagtgtcc cttttagagt ggctatattc ttatgtgcta actatggcta caccttcggt 360 tcggggacca ggttaaccgt tgtaggtaag gctgggggtc tctaggaggg gtgcgatgag 420 ggaggactct gtcctgggaa atgtcaaa 448 <210> 250 <211> 448 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ1S2 <400> 250 gccagggccc tctcccctct ctatgccttc aatgtgattt tcaccttgac ccctgtcact 60 gtgtgaacac tgaagctttc tttggacaag gcaccagact cacagttgta ggtaagacat 120 ttttcaggtt cttttgcaga tccgtcacag ggaaaagtgg gtccacagtg tcccttttag 180 agtggctata ttcttatgtg ctaactatgg ctacaccttc ggttcgggga ccaggttaac 240 cgttgtaggt aaggctgggg gtctctagga ggggtgcgat gagggaggac tctgtcctgg 300 gaaatgtcaa agagaacaga gatcccagct cccggagcca gactgaggga gacgtcatgt 360 catgtcccgg gattgagttc aggggaggct ccctgtgagg gcgaatccac ccaggcttcc 420 cagaggctct gagcagtcac agctgagc 448 <210> 251 <211> 450 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ1S3 <400> 251 gattttatag gaggccactc tgtgtctctt tttgtcacct gcctgagtct tgggcaagct 60 ctggaaggga acacagagta ctggaagcag agctgctgtc cctgtgaggg aagagttccc 120 atgaactccc aacctctgcc tgaatcccag ctgtgctcag cagagactgg ggggttttga 180 agtggccctg ggaggctgtg ctctggaaac accatatatt ttggagaggg aagttggctc 240 actgttgtag gtgagtaagt caaggctgga cagctgggaa cttgcaaaaa ggggctggaa 300 tccagacgga gcctttgtct ctagtgctta ggtgaaagtg tatttttgtc aggaaggcct 360 atgaggcaga tgaggagggg atagcctccc tctcctctcg actattttgt agactgcctg 420 tgccaagtta ggttccccta ctgagagatg 450 <210> 252 <211> 451 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ1S4 <400> 252 cagaagaggg aacttggggg atcacacggg gcctaattgg tctgctgacc accgcatttt 60 gggttgtacc attgtctacc cctctaccca ccagggttaa aattctacta aggaacagga 120 gaggacctgg caggtggact tggggaggca ggagtggaag gcagcaggtc gcggttttcc 180 ttccagtctt taatgttgtg caactaatga aaaactgttt tttggcagtg gaacccagct 240 ctctgtcttg ggtatgtaaa agacttcttt cgggatagtg tatcataagg tcggagttcc 300 aggaggaccc cttgcgggag ggcagaaact gagaacacag ccaagaaaag ctcataaaat 360 gtgggtcagt ggagtgtgtg gtggggcccc aagagttctg tgtgtaagca gcttctggaa 420 ggaagggccc acaccagctc ctctggggtt t 451 <210> 253 <211> 450 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ1S5 <400> 253 gatagtgtat cataaggtcg gagttccagg aggacccctt gcgggagggc agaaactgag 60 aacacagcca agaaaagctc ataaaatgtg ggtcagtgga gtgtgtggtg gggccccaag 120 agttctgtgt gtaagcagct tctggaagga agggcccaca ccagctcctc tggggtttgc 180 cacactcatg atgcactgtg tagcaatcag ccccagcatt ttggtgatgg gactcgactc 240 tccatcctag gtaagttgca gaatcagggt ggtatggcca ttgtcccttg aaggcagagt 300 tctctgcttc tcctcccggt gctggtgagg cagattgagt aaaatctctt accccatggg 360 gtaagagctg tgcctgtgcc tgcgttccct ttggtgtgtc ttggttgact cctctatttc 420 tcttctctaa gtcttcagtc cataatctgc 450 <210> 254 <211> 453 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ1S6 <400> 254 atggctctgc ctctcctaag cctcttcctc ttgcgcctta tgctgcacag tatgcttagg 60 cctttttcct aacagaatcc ctttggtcca gagccatgaa tccaggcaga gaaaggcagc 120 catcctgctg tcagggagct aagacttgcc ctctgactgg agatcgccgg gtgggtttta 180 tctaagcctc tgcagctgtg ctcctataat tcacccctcc actttgggaa cgggaccagg 240 ctcactgtga caggtatggg ggctccactc ttgactcggg ggtgcctggg tttgactgca 300 atgatcagtt gctgggaagg gaattgagtg taagaacgga ggtcagggtc accccttctt 360 acctggagca ctgtgccctc tcctcccctc cctggagctc ttccagcttg ttgctctgct 420 gtgttgcctg cagttcctca gctgtagagc tcc 453 <210> 255 <211> 449 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ2S1 <400> 255 aatccactgt gttgtccccc agccaagtgg attctcctct gcaaattggt ggtggcctca 60 tgcaagatcc agttaccgtg tccagctaac tcgagacagg aaaagatagg ctcaggaaag 120 agaggaaggg tgtgccctct gtctgtgcta agggaggtgg ggaaggagaa ggaattctgg 180 gcagcccctt cccactgtgc tcctacaatg agcagttctt cgggccaggg acacggctca 240 ccgtgctagg taagaagggg gctccaggtg ggagagaggg tgagcagccc agcctgcacg 300 accccagaac cctgttctta ggggagtgga cactgggcaa tccagggccc tcctcgaggg 360 aagcggggtt tgcgccaggg tccccagggc tgtgcgaaca ccggggagct gttttttgga 420 gaaggctcta ggctgaccgt actgggtaa 449 <210> 256 <211> 451 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ2S2 <400> 256 ctgtgctcct acaatgagca gttcttcggg ccagggacac ggctcaccgt gctaggtaag 60 aagggggctc caggtgggag agagggtgag cagcccagcc tgcacgaccc cagaaccctg 120 ttcttagggg agtggacact gggcaatcca gggccctcct cgagggaagc ggggtttgcg 180 ccagggtccc cagggctgtg cgaacaccgg ggagctgttt tttggagaag gctctaggct 240 gaccgtactg ggtaaggagg cggttggggc tccggagagc tccgagaggg cgggatgggc 300 agaggtaagc agctgcccca ctctgagagg ggctgtgctg agaggcgctg ctgggcgtct 360 gggcggagga ctcctggttc tgggtgctgg gagagcgatg gggctctcag cggtgggaag 420 gacccgagct gagtctggga cagcagagcg g 451 <210> 257 <211> 449 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ2S3 <400> 257 gggcgggatg ggcagaggta agcagctgcc ccactctgag aggggctgtg ctgagaggcg 60 ctgctgggcg tctgggcgga ggactcctgg ttctgggtgc tgggagagcg atggggctct 120 cagcggtggg aaggacccga gctgagtctg ggacagcaga gcgggcagca ccggtttttg 180 tcctgggcct ccaggctgtg agcacagata cgcagtattt tggcccaggc acccggctga 240 cagtgctcgg taagcggggg ctcccgctga agccccggaa ctggggaggg ggcgccccgg 300 gacgccgggg gcgtcgcagg gccagtttct gtgccgcgtc tcggggctgt gagccaaaaa 360 cattcagtac ttcggcgccg ggacccggct ctcagtgctg ggtaagctgg ggccgccggg 420 ggaccgggga cgagactgcg ctcgggttt 449 <210> 258 <211> 450 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ2S4 <400> 258 gacagcagag cgggcagcac cggtttttgt cctgggcctc caggctgtga gcacagatac 60 gcagtatttt ggcccaggca cccggctgac agtgctcggt aagcgggggc tcccgctgaa 120 gccccggaac tggggagggg gcgccccggg acgccggggg cgtcgcaggg ccagtttctg 180 tgccgcgtct cggggctgtg agccaaaaac attcagtact tcggcgccgg gacccggctc 240 tcagtgctgg gtaagctggg gccgccgggg gaccggggac gagactgcgc tcgggttttt 300 gtgcggggct cgggggccgt gaccaagaga cccagtactt cgggccaggc acgcggctcc 360 tggtgctcgg tgagcgcggg ctgctggggc gcgggcgcgg gcggcttggg tctggttttt 420 gcggggagtc cccgggctgt gctctggggc 450 <210> 259 <211> 448 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ2S5 <400> 259 ccccggaact ggggaggggg cgccccggga cgccgggggc gtcgcagggc cagtttctgt 60 gccgcgtctc ggggctgtga gccaaaaaca ttcagtactt cggcgccggg acccggctct 120 cagtgctggg taagctgggg ccgccggggg accggggacg agactgcgct cgggtttttg 180 tgcggggctc gggggccgtg accaagagac ccagtacttc gggccaggca cgcggctcct 240 ggtgctcggt gagcgcgggc tgctggggcg cgggcgcggg cggcttgggt ctggtttttg 300 cggggagtcc ccgggctgtg ctctggggcc aacgtcctga ctttcggggc cggcagcagg 360 ctgaccgtgc tgggtgagtt ttcgcgggac cacccgggcg gcgggattca ggtggaaggc 420 ggcggctgct tcgcggcacc cggtccgg 448 <210> 260 <211> 453 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ2S6 <400> 260 cagtgctggg taagctgggg ccgccggggg accggggacg agactgcgct cgggtttttg 60 tgcggggctc gggggccgtg accaagagac ccagtacttc gggccaggca cgcggctcct 120 ggtgctcggt gagcgcgggc tgctggggcg cgggcgcggg cggcttgggt ctggtttttg 180 cggggagtcc ccgggctgtg ctctggggcc aacgtcctga ctttcggggc cggcagcagg 240 ctgaccgtgc tgggtgagtt ttcgcgggac cacccgggcg gcgggattca ggtggaaggc 300 ggcggctgct tcgcggcacc cggtccggcc ctgtgctggg agacctgggc tgggtcccca 360 gggtgggcag gagctcgggg agccttagag gtttgcatgc gggggtgcac ctccgtgctc 420 ctacgagcag tacttcgggc cgggcaccag gct 453 <210> 261 <211> 447 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TCRBJ2S7 <400> 261 tgactttcgg ggccggcagc aggctgaccg tgctgggtga gttttcgcgg gaccacccgg 60 gcggcgggat tcaggtggaa ggcggcggct gcttcgcggc acccggtccg gccctgtgct 120 gggagacctg ggctgggtcc ccagggtggg caggagctcg gggagcctta gaggtttgca 180 tgcgggggtg cacctccgtg ctcctacgag cagtacttcg ggccgggcac caggctcacg 240 gtcacaggtg agattcgggc gtctccccac cttccagccc ctcggtcccc ggagtcggag 300 ggtggaccgg agctggagga gctgggtgtc cggggtcagc tctgcaaggt cacctccccg 360 ctcctgggga aagactgggg aagagggagg gggtggggag gtgctcagag tccggaaagc 420 tgagcagagg gcgaggccac ttttaat 447 <210> 262 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-46*02 <400> 262 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata caccttcaac agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 263 <211> 260 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1/OR15-5*01 <400> 263 agaagcctgg ggcctcagtg aaggtctcct gcaaggcttc tggatacacc ttcaccagct 60 actgtatgca ctgggtgcac caggtccatg cacaagggct tgagtggatg ggattggtgt 120 gccctagtga tggcagcaca agctatgcac agaagttcca ggccagagtc accataacca 180 gggacacatc catgagcaca gcctacatgg agctaagcag tctgagatct gaggacacgg 240 ccatgtatta ctgtgtgaga 260 <210> 264 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1/OR15-5*03 <400> 264 caggtacagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc aactactgta tgcactgggt gcgccaggtc 120 catgcacaag ggcttgagtg gatgggattg gtgtgcccta gtgatggcag cacaagctat 180 gcacaaaagt tccaggccag agtcaccata accagggaca catccatgag cacagcctac 240 atggagctaa gcagtctgag atctgaggac acggccatgt attactgtgt gaga 294 <210> 265 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1/OR15-9*01 <400> 265 caggtacagc tgatgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaggatc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agctactgta tgcactgggt gtgccaggcc 120 catgcacaag ggcttgagtg gatgggattg gtgtgcccta gtgatggcag cacaagctat 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccata accagggaca catccatggg cacagcctac 240 atggagctaa gcagcctgag atctgaggac acggccatgt attactgtgt gagaga 296 <210> 266 <211> 260 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-c*01 <400> 266 ggaagtctgg ggcctcagtg aaagtctcct gtagtttttc tgggtttacc atcaccagct 60 acggtataca ttgggtgcaa cagtcccctg gacaagggct tgagtggatg ggatggatca 120 accctggcaa tggtagccca agctatgcca agaagtttca gggcagattc accatgacca 180 gggacatgtc cacaaccaca gcctacacag acctgagcag cctgacatct gaggacatgg 240 ctgtgtatta ctatgcaaga 260 <210> 267 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-NL1*01 <220> <221> misc_feature <222> (136)..(136) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (253)..(253) <223> n is a, c, g, or t <400> 267 caggttcagc tgttgcagcc tggggtccag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtc 60 tcctgctagg cttccagata caccttcacc aaatacttta cacggtgggt gtgacaaagc 120 cctggacaag ggcatnagtg gatgggatga atcaaccctt acaacgataa cacacactac 180 gcacagacgt tctggggcag agtcaccatt accagtgaca ggtccatgag cacagcctac 240 atggagctga gcngcctgag atccgaagac atggtcgtgt attactgtgt gagaga 296 <210> 268 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-58*01 <400> 268 caaatgcagc tggtgcagtc tgggcctgag gtgaagaagc ctgggacctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggatt cacctttact agctctgctg tgcagtgggt gcgacaggct 120 cgtggacaac gccttgagtg gataggatgg atcgtcgttg gcagtggtaa cacaaactac 180 gcacagaagt tccaggaaag agtcaccatt accagggaca tgtccacaag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atccgaggac acggccgtgt attactgtgc ggcaga 296 <210> 269 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-58*02 <400> 269 caaatgcagc tggtgcagtc tgggcctgag gtgaagaagc ctgggacctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggatt cacctttact agctctgcta tgcagtgggt gcgacaggct 120 cgtggacaac gccttgagtg gataggatgg atcgtcgttg gcagtggtaa cacaaactac 180 gcacagaagt tccaggaaag agtcaccatt accagggaca tgtccacaag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atccgaggac acggccgtgt attactgtgc ggcaga 296 <210> 270 <211> 275 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*03 <400> 270 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgatgac acggc 275 <210> 271 <211> 233 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*07 <400> 271 agaagcctgg gtcctcggtg aaggtctcct gcaaggcttc tggaggcacc ttcagcagct 60 atgctatcag ctgggtgcga caggcccctg gacaagggct tgagtggatg ggaaggatca 120 tccctatctt tggtacagca aactacgcac agaagttcca gggcagagtc acgattaccg 180 cggacgaatc cacgagcaca gcctacatgg agctgagcag cctgagatct gag 233 <210> 272 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*12 <400> 272 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 273 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*05 <400> 273 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accacggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gaga 294 <210> 274 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*13 <400> 274 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 275 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*01 <400> 275 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 276 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*06 <400> 276 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 277 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*02 <400> 277 caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatacta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gaga 294 <210> 278 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*08 <400> 278 caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatacta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 279 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*04 <400> 279 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 280 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*11 <400> 280 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtac agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 281 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*09 <400> 281 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 282 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-69*10 <400> 282 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 283 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-f*01 <400> 283 gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggctac agtgaaaatc 60 tcctgcaagg tttctggata caccttcacc gactactaca tgcactgggt gcaacaggcc 120 cctggaaaag ggcttgagtg gatgggactt gttgatcctg aagatggtga aacaatatac 180 gcagagaagt tccagggcag agtcaccata accgcggaca cgtctacaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc aaca 294 <210> 284 <211> 233 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-f*02 <400> 284 agaagcctgg ggctacagtg aaaatctcct gcaaggtttc tggatacacc ttcaccgact 60 actacatgca ctgggtgcaa caggcccctg gaaaagggct tgagtggatg ggacttgttg 120 atcctgaaga tggtgaaaca atatatgcag agaagttcca gggcagagtc accataaccg 180 cggacacgtc tacagacaca gcctacatgg agctgagcag cctgagatct gag 233 <210> 285 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV1-24*01 <400> 285 caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg tttccggata caccctcact gaattatcca tgcactgggt gcgacaggct 120 cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagatggtga aacaatctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accgaggaca catctacaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc aacaga 296 <210> 286 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV7-4-1*01 <400> 286 caggtgcagc tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact agctatgcta tgaattgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacacca acactgggaa cccaacgtat 180 gcccagggct tcacaggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatct gcagcctaaa ggctgaggac actgccgtgt attactgtgc gaga 294 <210> 287 <211> 274 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV7-4-1*03 <400> 287 caggtgcagc tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact agctatgcta tgaattgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacacca acactgggaa cccaacgtat 180 gcccagggct tcacaggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcacgctaaa ggctgaggac actg 274 <210> 288 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV7-4-1*02 <400> 288 caggtgcagc tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact agctatgcta tgaattgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacacca acactgggaa cccaacgtat 180 gcccagggct tcacaggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaggac actgccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 289 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV7-81*01 <400> 289 caggtgcagc tggtgcagtc tggccatgag gtgaagcagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cagtttcacc acctatggta tgaattgggt gccacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ttcaacacct acactgggaa cccaacatat 180 gcccagggct tcacaggacg gtttgtcttc tccatggaca cctctgccag cacagcatac 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaggac atggccatgt attactgtgc gagata 296 <210> 290 <211> 289 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV7-40*03 <400> 290 ctgcagctgg tgcagtctgg gcctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc 60 tataagtctt ctggttacac cttcaccatc tatggtatga attgggtatg atagacccct 120 ggacagggct ttgagtggat gtgatggatc atcacctaca ctgggaaccc aacgtatacc 180 cacggcttca caggatggtt tgtcttctcc atggacacgt ctgtcagcac ggcgtgtctt 240 cagatcagca gcctaaaggc tgaggacacg gccgagtatt actgtgcga 289 <210> 291 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-51*01 <400> 291 gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180 agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagaca 296 <210> 292 <211> 245 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-51*05 <400> 292 aaaagcccgg ggagtctctg aagatctcct gtaagggttc tggatacagc tttaccagct 60 actggatcgg ctgggtgcgc cagatgccca ggaaaggcct ggagtggatg gggatcatct 120 atcctggtga ctctgatacc agatacagcc cgtccttcca aggccaggtc accatctcag 180 ccgacaagtc catcagcacc gcctacctgc agtggagcag cctgaaggcc tcggacaccg 240 ccatg 245 <210> 293 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-51*02 <400> 293 gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga ccggctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcttggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180 agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagaca 296 <210> 294 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-51*03 <400> 294 gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc cgggggagtc tctgaagatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180 agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gaga 294 <210> 295 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-51*04 <400> 295 gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc cgggggagtc tctgaagatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180 agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agcccatcag caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gaga 294 <210> 296 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-a*01 <400> 296 gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcagctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggagtg gatggggagg attgatccta gtgactctta taccaactac 180 agcccgtcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagctgaca agtccatcag cactgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gaga 294 <210> 297 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-a*03 <400> 297 gaagtgcagc tggtgcagtc cggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcagctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggagtg gatggggagg attgatccta gtgactctta taccaactac 180 agcccgtcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagctgaca agtccatcag cactgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gaga 294 <210> 298 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-a*04 <400> 298 gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcagctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggagtg gatggggagg attgatccta gtgactctta taccaactac 180 agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagctgaca agtccatcag cactgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gaga 294 <210> 299 <211> 295 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-a*02 <400> 299 gaagtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaggatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcagctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcttggagtg gatggggagg attgatccta gtgactctta taccaactac 180 agcccgtcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagctgaca agtccatcag cactgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggctcggaca ccgccatgta ttactgtgcg agaca 295 <210> 300 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV5-78*01 <400> 300 gaggtgcagc tgttgcagtc tgcagcagag gtgaaaagac ccggggagtc tctgaggatc 60 tcctgtaaga cttctggata cagctttacc agctactgga tccactgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag aactggagtg gatggggagc atctatcctg ggaactctga taccagatac 180 agcccatcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagccgaca gctccagcag caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac gccgccatgt attattgtgt gaga 294 <210> 301 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-11*01 <400> 301 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 302 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-11*03 <400> 302 caggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtagtta cacaaactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaga 294 <210> 303 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-21*01 <400> 303 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180 gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 304 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-21*02 <400> 304 gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180 gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 305 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-48*01 <400> 305 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtagtac catatactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 306 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-48*02 <400> 306 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtagtagtac catatactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agacgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 307 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-h*01 <400> 307 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtaccat atactacgca 180 gactctgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaactc actgtatctg 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aga 293 <210> 308 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-h*02 <400> 308 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtaccat atactacgca 180 gactctgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaactc actgtatctg 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtttatt actgtgcgag aga 293 <210> 309 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-48*03 <400> 309 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agttatgaaa tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgttt attactgtgc gagaga 296 <210> 310 <211> 292 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-8*01 <400> 310 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactg 60 tcctgtccag cctctggatt caccttcagt aaccactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggagtg ggtttcatac attagtggtg atagtggtta cacaaactac 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaataa ctcaccgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgt ga 292 <210> 311 <211> 292 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-9*01 <400> 311 gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aaccactaca cgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggagtg ggtttcatac agtagtggta atagtggtta cacaaactac 180 gcagactctg tgaaaggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgt ga 292 <210> 312 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-13*01 <400> 312 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctacgaca tgcactgggt ccgccaagct 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagct attggtactg ctggtgacac atactatcca 180 ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag aga 293 <210> 313 <211> 291 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-13*03 <400> 313 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctgtggatt caccttcagt agctacgaca tgcactgggt ccgccaagct 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagct attggtactg ctggtgacac atactatcca 180 ggctccgtga agggccaatt caccatctcc agagaaaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag a 291 <210> 314 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-13*02 <400> 314 gaggtgcatc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctgggggggc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactacgaca tgcactgggt ccgccaagct 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagcc aatggtactg ctggtgacac atactatcca 180 ggctccgtga aggggcgatt caccatctcc agagaaaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag aga 293 <210> 315 <211> 123 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-47*02 <400> 315 atactatgca gactccgtga tgggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaagtc 60 cttgtatctt caaatgaaca gcctgatagc tgaggacatg gctgtgtatt attgtgcaag 120 aga 123 <210> 316 <211> 282 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-47*03 <400> 316 gaggatcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagaccc 60 tcctgtgcag cctctggatt cgccttcagt agctatgttc tgcactgggt tcgccgggct 120 ccagggaagg gtccggagtg ggtatcagct attggtactg gtggtgatac atactatgca 180 gactccgtga tgggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaagtc cttgtatctc 240 aaatgaacag cctgatagct gaggacatgg ctgtgtatta tg 282 <210> 317 <211> 291 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-47*01 <400> 317 gaggatcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgcgaccc 60 tcctgtgcag cctctggatt cgccttcagt agctatgctc tgcactgggt tcgccgggct 120 ccagggaagg gtctggagtg ggtatcagct attggtactg gtggtgatac atactatgca 180 gactccgtga tgggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaagtc cttgtatctt 240 catatgaaca gcctgatagc tgaggacatg gctgtgtatt attgtgcaag a 291 <210> 318 <211> 291 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-10*01 <400> 318 gaggttcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtacatc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag gctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt tcgccaggct 120 ccaggaaaag gtctggagtg ggtatcagct attggtactg gtggtggcac atactatgca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacatg gctgtgtatt actgtgcaag a 291 <210> 319 <211> 291 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-10*02 <400> 319 gaggttcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag gctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt tcgccaggct 120 ccaggaaaag gtctggagtg ggtatcagct attggtactg gtggtggcac atactatgca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacatg gctgtgtatt actgtgcaag a 291 <210> 320 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-62*01 <400> 320 gaggtgcagc tggtggagtc tggggaaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctctgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaagaaagg gtttgtagtg ggtctcagtt attagtacaa gtggtgatac cgtactctac 180 acagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atgcccagaa ttcactgtct 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgagggc acagttgtgt actactgtgt gaaaga 296 <210> 321 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-64*01 <400> 321 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggaata tgtttcagct attagtagta atgggggtag cacatattat 180 gcaaactctg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 cttcaaatgg gcagcctgag agctgaggac atggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 322 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-64*02 <400> 322 gaggtgcagc tggtggagtc tggggaaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggaata tgtttcagct attagtagta atgggggtag cacatattat 180 gcagactctg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 cttcaaatgg gcagcctgag agctgaggac atggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 323 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-64*03 <400> 323 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgttcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggaata tgtttcagct attagtagta atgggggtag cacatactac 180 gcagactcag tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 gtccaaatga gcagtctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgt gaaaga 296 <210> 324 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-64*05 <400> 324 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgttcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggaata tgtttcagct attagtagta atgggggtag cacatactac 180 gcagactcag tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 gttcaaatga gcagtctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgt gaaaga 296 <210> 325 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-64*04 <400> 325 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgttcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gactggaata tgtttcagct attagtagta atgggggtag cacatactac 180 gcagactcag tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 326 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-16*01 <400> 326 gaggtacaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aacagtgaca tgaactgggc ccgcaaggct 120 ccaggaaagg ggctggagtg ggtatcgggt gttagttgga atggcagtag gacgcactat 180 gtggactccg tgaagcgccg attcatcatc tccagagaca attccaggaa ctccctgtat 240 ctgcaaaaga acagacggag agccgaggac atggctgtgt attactgtgt gagaaa 296 <210> 327 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-16*02 <400> 327 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aacagtgaca tgaactgggc ccgcaaggct 120 ccaggaaagg ggctggagtg ggtatcgggt gttagttgga atggcagtag gacgcactat 180 gtggactccg tgaagcgccg attcatcatc tccagagaca attccaggaa ctccctgtat 240 ctgcaaaaga acagacggag agccgaggac atggctgtgt attactgtgt gagaaa 296 <210> 328 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-15*02 <400> 328 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagacac 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aacagtgaca tgaactgggt cctctaggct 120 ccaggaaagg ggctggagtg ggtctcgggt attagttgga atggcggtaa gacgcactat 180 gtggactccg tgaagggcca atttaccatc tccagagaca attccagcaa gtccctgtat 240 ctgcaaaaga acagacagag agccaaagac atggccgtgt attactgtgt gaga 294 <210> 329 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-16*01 <400> 329 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagacac 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aacagtgaca tgaactgggt cctctaggct 120 ccaggaaagg ggctggagtg ggtctcggat attagttgga atggcggtaa gacgcactat 180 gtggactccg tgaagggcca atttaccatc tccagagaca attccagcaa gtccctgtat 240 ctgcaaaaga acagacagag agccaaggac atggccgtgt attactgtgt gaga 294 <210> 330 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-15*01 <400> 330 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctgtatt caccttcagt aacagtgaca taaactgggt cctctaggct 120 ccaggaaagg ggctggagtg ggtctcgggt attagttgga atggcggtaa gacgcactat 180 gtggactccg tgaagggcca attttccatc tccagagaca attccagcaa gtccctgtat 240 ctgcaaaaga acagacagag agccaaggac atggccgtgt attactgtgt gagaaa 296 <210> 331 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-19*01 <400> 331 acagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtagagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aacagtgaca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccaggaaagg ggctggagtg ggtatcgggt gttagttgga atggcagtag gacgcactat 180 gcagactctg tgaagggccg attcatcatc tccagagaca attccaggaa cttcctgtat 240 cagcaaatga acagcctgag gcccgaggac atggctgtgt attactgtgt gagaaa 296 <210> 332 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-35*01 <400> 332 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctgggggatc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aacagtgaca tgaactgggt ccatcaggct 120 ccaggaaagg ggctggagtg ggtatcgggt gttagttgga atggcagtag gacgcactat 180 gcagactctg tgaagggccg attcatcatc tccagagaca attccaggaa caccctgtat 240 ctgcaaacga atagcctgag ggccgaggac acggctgtgt attactgtgt gagaaa 296 <210> 333 <211> 298 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-43*01 <400> 333 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagtc gtggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatacca tgcactgggt ccgtcaagct 120 ccggggaagg gtctggagtg ggtctctctt attagttggg atggtggtag cacatactat 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acagcaaaaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag aactgaggac accgccttgt attactgtgc aaaagata 298 <210> 334 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-43*02 <400> 334 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccgtcaagct 120 ccagggaagg gtctggagtg ggtctctctt attagtgggg atggtggtag cacatactat 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acagcaaaaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag aactgaggac accgccttgt attactgtgc aaaa 294 <210> 335 <211> 298 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-9*01 <400> 335 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120 ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga atagtggtag cataggctat 180 gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaagata 298 <210> 336 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-20*01 <400> 336 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggt gtggtacggc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatggca tgagctgggt ccgccaagct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctctggt attaattgga atggtggtag cacaggttat 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccttgt atcactgtgc gagaga 296 <210> 337 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-74*01 <400> 337 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120 ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attaatagtg atgggagtag cacaagctac 180 gcggactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aagaga 296 <210> 338 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-74*02 <400> 338 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120 ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attaatagtg atgggagtag cacaagctac 180 gcggactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aaga 294 <210> 339 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-74*03 <400> 339 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttagttcagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120 ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attaatagtg atgggagtag cacaacgtac 180 gcggactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc aagaga 296 <210> 340 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-13*01 <400> 340 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtacagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaagct 120 ccagggaagg ggctggtgtg ggtctcacgt attaatagtg atgggagtag cacaagctac 180 gcagactcca tgaagggcca attcaccatc tccagagaca atgctaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac atggctgtgt attactgtac taga 294 <210> 341 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-14*01 <400> 341 gaggtgcagc tggaggagtc tgggggaggc ttagtacagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctactgga tgcactgggt ccgccaatct 120 ccagggaagg ggctggtgtg agtctcacgt attaatagtg atgggagtag cacaagctac 180 gcagactcct tgaagggcca attcaccatc tccagagaca atgctaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac atggctgtgt attactgtac taga 294 <210> 342 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*01 <400> 342 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 343 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*08 <400> 343 caggtgcagc tggtggactc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctgcatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaga 294 <210> 344 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*17 <400> 344 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccgggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 345 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*11 <400> 345 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 346 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*10 <400> 346 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 acagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 347 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*16 <400> 347 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggcc 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 348 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*15 <400> 348 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga gcagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 349 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*07 <400> 349 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 350 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*04 <400> 350 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 351 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*09 <400> 351 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcgccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 352 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*14 <400> 352 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 cttcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 353 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30-3*01 <400> 353 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagcaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaga 294 <210> 354 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30-3*02 <400> 354 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagcaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaaga 296 <210> 355 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*03 <400> 355 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 356 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*18 <400> 356 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaaga 296 <210> 357 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*06 <400> 357 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 358 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*12 <400> 358 caggtgcagc tggtggagtc tggggggggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 359 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*19 <400> 359 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 360 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-33*05 <400> 360 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 361 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*05 <400> 361 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgagggc acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 362 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*13 <400> 362 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa caggctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 363 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-33*01 <400> 363 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 364 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-33*04 <400> 364 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctagagtg ggtggcagtt atatggtatg acggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 365 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-33*02 <400> 365 caggtacagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg cgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccacgaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 366 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-33*03 <400> 366 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca actccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaaga 296 <210> 367 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-30*02 <400> 367 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcattt atacggtatg atggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaaga 296 <210> 368 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-52*01 <400> 368 gaggtgcagc tggtggagtc tgggtgaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctcctgga tgcactgggt ctgccaggct 120 ccggagaagg ggctggagtg ggtggccgac ataaagtgtg acggaagtga gaaatactat 180 gtagactctg tgaagggccg attgaccatc tccagagaca atgccaagaa ctccctctat 240 ctgcaagtga acagcctgag agctgaggac atgaccgtgt attactgtgt gagagg 296 <210> 369 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-52*02 <400> 369 gaggtgcagc tggtggagtc tgggtgaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctcctgga tgcactgggt ctgccaggct 120 ccggagaagg ggcaggagtg ggtggccgac ataaagtgtg acggaagtga gaaatactat 180 gtagactctg tgaagggccg attgaccatc tccagagaca atgccaagaa ctccctctat 240 ctgcaagtga acagcctgag agctgaggac atgaccgtgt attactgtgt gaga 294 <210> 370 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-52*03 <400> 370 gaggtgcagc tggtcgagtc tgggtgaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctcctgga tgcactgggt ctgccaggct 120 ccggagaagg ggctggagtg ggtggccgac ataaagtgtg acggaagtga gaaatactat 180 gtagactctg tgaagggccg attgaccatc tccagagaca atgccaagaa ctccctctat 240 ctgcaagtga acagcctgag agctgaggac atgaccgtgt attactgtgt gaga 294 <210> 371 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-7*01 <400> 371 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agctattgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtggccaac ataaagcaag atggaagtga gaaatactat 180 gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagaga 296 <210> 372 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-7*02 <400> 372 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agctattgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaaag ggctggagtg ggtggccaac ataaagcaag atggaagtga gaaatactat 180 gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gaga 294 <210> 373 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-23*01 <400> 373 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaga 296 <210> 374 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-23*04 <400> 374 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaga 296 <210> 375 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-23*02 <400> 375 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180 ggagactccg tgaagggccg gttcaccatc tcaagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaga 296 <210> 376 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-23*03 <400> 376 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagtag cacatactat 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagata attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaa 294 <210> 377 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-23*05 <400> 377 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct atttatagca gtggtagtag cacatactat 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaa 294 <210> 378 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-53*01 <400> 378 gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctgggtt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac atactacgca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag aga 293 <210> 379 <211> 291 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-53*02 <400> 379 gaggtgcagc tggtggagac tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctgggtt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac atactacgca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgcgag a 291 <210> 380 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-66*03 <400> 380 gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctgggtt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagct gtggtagcac atactacgca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aga 293 <210> 381 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-53*03 <400> 381 gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttgatccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctgggtt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccagcct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac atactacgca 180 gactctgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtgtatt actgtgctag gga 293 <210> 382 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-66*01 <400> 382 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac atactacgca 180 gactccgtga agggcagatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aga 293 <210> 383 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-66*04 <400> 383 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac atactacgca 180 gactccgtga agggcagatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aca 293 <210> 384 <211> 291 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-66*02 <400> 384 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt atttatagcg gtggtagcac atactacgca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc tgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag a 291 <210> 385 <211> 292 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-38*01 <400> 385 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctagggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaatgaga tgagctggat ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtggtg gtagcacata ctacgcagac 180 tccaggaagg gcagattcac catctccaga gacaattcca agaacacgct gtatcttcaa 240 atgaacaacc tgagagctga gggcacggcc gcgtattact gtgccagata ta 292 <210> 386 <211> 292 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-38*02 <400> 386 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctagggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaatgaga tgagctggat ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtggtg gtagcacata ctacgcagac 180 tccaggaagg gcagattcac catctccaga gacaattcca agaacacgct gtatcttcaa 240 atgaacaacc tgagagctga gggcacggcc gtgtattact gtgccagata ta 292 <210> 387 <211> 288 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-d*01 <400> 387 gaggtgcagc tggtggagtc tcggggagtc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccgtcagt agcaatgaga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gtctggagtg ggtctcatcc attagtggtg gtagcacata ctacgcagac 180 tccaggaagg gcagattcac catctccaga gacaattcca agaacacgct gcatcttcaa 240 atgaacagcc tgagagctga ggacacggct gtgtattact gtaagaaa 288 <210> 388 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR16-12*01 <400> 388 gaggtgcagc tggtagagtc tgggagaggc ttggcccagc ctggggggta cctaaaactc 60 tccggtgcag cctctggatt caccgtcggt agctggtaca tgagctggat ccaccaggct 120 ccagggaagg gtctggagtg ggtctcatac attagtagta gtggttgtag cacaaactac 180 gcagactctg tgaagggcag attcaccatc tccacagaca actcaaagaa cacgctctac 240 ctgcaaatga acagcctgag agtggaggac acggccgtgt attactgtgc aaga 294 <210> 389 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-15*01 <400> 389 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300 ga 302 <210> 390 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-15*02 <400> 390 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagcc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300 ga 302 <210> 391 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-15*04 <400> 391 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attgaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300 ga 302 <210> 392 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-15*05 <400> 392 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240 ctgtatctgc aaatgaacag tctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300 ga 302 <210> 393 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-15*06 <400> 393 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 aactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300 ga 302 <210> 394 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-15*07 <400> 394 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggttt cactttcagt aacgcctgga tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcggccgt attaaaagca aaactgatgg tgggacaaca 180 gactacgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300 ga 302 <210> 395 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-15*03 <400> 395 gaggtgcagc tggtggagtc tgccggagcc ttggtacagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacttgcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt attaaaagca aagctaatgg tgggacaaca 180 gactacgctg cacctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagttgattc aaaaaacacg 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300 ga 302 <210> 396 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-15*08 <400> 396 gaggtgcagc tggtggagtc tgcgggaggc ttggtacagc ctggggggtc ccttagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacttgcagt aacgcctgga tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggctgt attaaaagca aagctaatgg tgggacaaca 180 gactacgctg cacctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240 ctgtatctgc aaatgatcag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtaccaca 300 gg 302 <210> 397 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-72*01 <400> 397 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gaccactaca tggactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggttggccgt actagaaaca aagctaacag ttacaccaca 180 gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240 ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 ga 302 <210> 398 <211> 165 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-72*02 <400> 398 accttcagtg accactacat ggactgggtc cgccaggctc cagggaaggg gctggagtgg 60 gttggccgta ctagaaacaa agctaacagc tacaccacag aatacgccgc gtctgtgaaa 120 ggcagattca ccatctcaag agatgattca aagaactcac tgtat 165 <210> 399 <211> 300 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR15-7*01 <400> 399 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctgggggttc tctgagactc 60 tcatgtgcag cctctggatt caccttcagt gaccactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 caagggaaag ggctagagtt ggtaggttta ataagaaaca aagctaacag ttacacgaca 180 gaatatgctg cgtctgtgaa aggcagactt accatctcaa gagaggattc aaagaacacg 240 atgtatctgc aaatgagcaa cctgaaaacc gaggacttgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 <210> 400 <211> 300 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR15-7*03 <400> 400 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctgggggttc tctgagactc 60 tcatgtgcag cctctggatt caccttcagt gaccactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 caagggaaag ggctagagtt ggtaggttta ataagaaaca aagctaacag ttacacgaca 180 gaatatgctg cgtctgtgaa aggcagactt accatctcaa gagaggattc aaagaacacg 240 ctgtatctgc aaatgagcag cctgaaaacc gaggacttgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 <210> 401 <211> 300 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3/OR15-7*02 <400> 401 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctgggggttc tctgagactc 60 tcatgtgctg cctctggatt caccttcagt gaccactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 caagggaaag ggctagagtt ggtaggttta ataagaaaca aagctaacag ttacacgaca 180 gaatatgctg cgtctgtgaa aggcagactt accatctcaa gagaggattc aaagaacacg 240 ctgtatctgc aaatgagcag cctgaaaacc gaggacttgg ccgtgtatta ctgtgctaga 300 <210> 402 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-73*01 <400> 402 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctctgggtt caccttcagt ggctctgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 tccgggaaag ggctggagtg ggttggccgt attagaagca aagctaacag ttacgcgaca 180 gcatatgctg cgtcggtgaa aggcaggttc accatctcca gagatgattc aaagaacacg 240 gcgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtactaga 300 ca 302 <210> 403 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-73*02 <400> 403 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctctgggtt caccttcagt ggctctgcta tgcactgggt ccgccaggct 120 tccgggaaag ggctggagtg ggttggccgt attagaagca aagctaacag ttacgcgaca 180 gcatatgctg cgtcggtgaa aggcaggttc accatctcca gagatgattc aaagaacacg 240 gcgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtactaga 300 ca 302 <210> 404 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-22*01 <400> 404 gaggtgcatc tggtggagtc tgggggagcc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt tactactaca tgagcggggt ccgccaggct 120 cccgggaagg ggctggaatg ggtaggtttc attagaaaca aagctaatgg tgggacaaca 180 gaatagacca cgtctgtgaa aggcagattc acaatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240 acctatctgc aaatgaagag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgttccaga 300 ga 302 <210> 405 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-22*02 <400> 405 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt tactactaca tgagcggggt ccgccaggct 120 cccgggaagg ggctggaatg ggtaggtttc attagaaaca aagctaatgg tgggacaaca 180 gaatagacca cgtctgtgaa aggcagattc acaatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240 acctatctgc aaatgaagag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ctgttccaga 300 ga 302 <210> 406 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-71*01 <400> 406 gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctgggt ccgccaggct 120 cccgggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaaaca aagctaatgg tgggacaaca 180 gaatagacca cgtctgtgaa aggcagattc acaatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240 acctatctgc aaatgaacag cctgagagcc gaggacacgg ccgtgtatta ctgtgcgaga 300 ga 302 <210> 407 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-49*03 <400> 407 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60 tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180 gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240 gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtactaga 300 ga 302 <210> 408 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-49*05 <400> 408 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtaaagc cagggcggtc cctgagactc 60 tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180 gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240 gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtactaga 300 ga 302 <210> 409 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: |IGHV3-49*01 <400> 409 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60 tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180 gaatacaccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatggttc caaaagcatc 240 gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtactaga 300 ga 302 <210> 410 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-49*04 <400> 410 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60 tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180 gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240 gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtactaga 300 ga 302 <210> 411 <211> 302 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-49*02 <400> 411 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggccgtc cctgagactc 60 tcctgtacag cttctggatt cacctttggg tattatccta tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180 gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240 gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtactaga 300 ga 302 <210> 412 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-25*01 <400> 412 gagatgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttgcaaaagc ctgcgtggtc cccgagactc 60 tcctgtgcag cctctcaatt caccttcagt agctactaca tgaactgtgt ccgccaggct 120 ccagggaatg ggctggagtt ggtttgacaa gttaatccta atgggggtag cacatacctc 180 atagactccg gtaaggaccg attcaatacc tccagagata acgccaagaa cacacttcat 240 ctgcaaatga acagcctgaa aaccgaggac acggccctct attagtgtac cagaga 296 <210> 413 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-25*02 <400> 413 gagatgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggcaaagc ctgcgtggtc cccgagactc 60 tcctgtgcag cctctcaatt caccttcagt agctactaca tgaactgtgt ccgccaggct 120 ccagggaatg ggctggagtt ggtttgacaa gttaatccta atgggggtag cacatacctc 180 atagactccg gtaaggaccg attcaatacc tccagagata acgccaagaa cacacttcat 240 ctgcaaatga acagcctgaa aaccgaggac acggccctct attagtgtac cagaga 296 <210> 414 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-25*03 <400> 414 gagatgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggcaaagc ctgcgtggtc cccgagactc 60 tcctgtgcag cctctcaatt caccttcagt agctactaca tgaactgtgt ccgccaggct 120 ccagggaatg ggctggagtt ggttggacaa gttaatccta atgggggtag cacatacctc 180 atagactccg gtaaggaccg attcaatacc tccagagata acgccaagaa cacacttcat 240 ctgcaaatga acagcctgaa aaccgaggac acggccctgt attagtgtac caga 294 <210> 415 <211> 298 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-63*01 <400> 415 gaggtggagc tgatagagtc catagagggc ctgagacaac ttgggaagtt cctgagactc 60 tcctgtgtag cctctggatt caccttcagt agctactgaa tgagctgggt caatgagact 120 ctagggaagg ggctggaggg agtaatagat gtaaaatatg atggaagtca gatataccat 180 gcagactctg tgaagggcag attcaccatc tccaaagaca atgctaagaa ctcaccgtat 240 ctccaaacga acagtctgag agctgaggac atgaccatgc atggctgtac ataaggtt 298 <210> 416 <211> 294 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-63*02 <400> 416 gaggtggagc tgatagagtc catagagggc ctgagacaac ttgggaagtt cctgagactc 60 tcctgtgtag cctctggatt caccttcagt agctactgaa tgagctgggt caatgagact 120 ctagggaagg ggctggaggg agtaatagat gtaaaatatg atggaagtca gatataccat 180 gcagactctg tgaagggcag attcaccatc tccaaagaca atgctaagaa ctcaccgtat 240 ctgcaaacga acagtctgag agctgaggac atgaccatgc atggctgtac ataa 294 <210> 417 <211> 298 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-32*01 <400> 417 gaggtggagc tgatagagtc catagaggac ctgagacaac ctgggaagtt cctgagactc 60 tcctgtgtag cctctagatt cgccttcagt agcttctgaa tgagccgagt tcaccagtct 120 ccaggcaagg ggctggagtg agtaatagat ataaaagatg atggaagtca gatacaccat 180 gcagactctg tgaagggcag attctccatc tccaaagaca atgctaagaa ctctctgtat 240 ctgcaaatga acactcagag agctgaggac gtggccgtgt atggctatac ataaggtc 298 <210> 418 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-54*01 <400> 418 gaggtacagc tggtggagtc tgaagaaaac caaagacaac ttgggggatc cctgagactc 60 tcctgtgcag actctggatt aaccttcagt agctactgaa tgagctcaga ttcccaagct 120 ccagggaagg ggctggagtg agtagtagat atatagtagg atagaagtca gctatgttat 180 gcacaatctg tgaagagcag attcaccatc tccaaagaaa atgccaagaa ctcactctgt 240 ttgcaaatga acagtctgag agcagagggc acggccgtgt attactgtat gtgagy 296 <210> 419 <211> 296 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-54*04 <400> 419 gaggtacagc tggtggagtc tgaagaaaac caaagacaac ttgggggatc cctgagactc 60 tcctgtgcag actctggatt aaccttcagt agctactgaa tgagctcaga ttcccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg agtagtagat atatagtagg atagaagtca gctatgttat 180 gcacaatctg tgaagagcag attcaccatc tccaaagaaa atgccaagaa ctcactctgt 240 ttgcaaatga acagtctgag agcagagggc acggccgtgt attactgtat gtgagt 296 <210> 420 <211> 207 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: IGHV3-54*02 <400> 420 tagctactga atgagctcag attcccaggc tccagggaag gggctggagt gagtagtaga 60 tatatagtac gatagaagtc agatatgtta tgcacaatct gtgaagagca gattcaccat 120 ctccaaagaa aatgccaaga actcactccg tttgcaaatg aacagtctga gagcagaggg 180 cacggccgtg tattactgta tgtgagg 207 <210> 421 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ4_1 <400> 421 tgaggagacg gtgaccaggg ttccttggcc c 31 <210> 422 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ4_3 <400> 422 tgaggagacg gtgaccaggg tcccttggcc c 31 <210> 423 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ4_2 <400> 423 tgaggagacg gtgaccaggg ttccctggcc c 31 <210> 424 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ3_12 <400> 424 ctgaagagac ggtgaccatt gtcccttggc cc 32 <210> 425 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ6_1 <400> 425 ctgaggagac ggtgaccgtg gtcccttgcc cc 32 <210> 426 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ6_2 <400> 426 tgaggagacg gtgaccgtgg tcccttggcc c 31 <210> 427 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ6_34 <400> 427 ctgaggagac ggtgaccgtg gtccctttgc cc 32 <210> 428 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ2_1 <400> 428 ctgaggagac agtgaccagg gtgccacggc cc 32 <210> 429 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ5_1 <400> 429 ctgaggagac ggtgaccagg gttccttggc cc 32 <210> 430 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ5_2 <400> 430 ctgaggagac ggtgaccagg gttccctggc cc 32 <210> 431 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ1_1 <400> 431 ctgaggagac ggtgaccagg gtgccctggc cc 32 <210> 432 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ4_1 <400> 432 tgaggagacg gtgaccaggg ttccttggcc ccag 34 <210> 433 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ4_3 <400> 433 tgaggagacg gtgaccaggg tcccttggcc ccag 34 <210> 434 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ4_2 <400> 434 tgaggagacg gtgaccaggg ttccctggcc ccag 34 <210> 435 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ3_12 <400> 435 ctgaagagac ggtgaccatt gtcccttggc cccag 35 <210> 436 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ6_1 <400> 436 ctgaggagac ggtgaccgtg gtcccttgcc cccag 35 <210> 437 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ6_2 <400> 437 tgaggagacg gtgaccgtgg tcccttggcc ccag 34 <210> 438 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ6_34 <400> 438 ctgaggagac ggtgaccgtg gtccctttgc cccag 35 <210> 439 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ2_1 <400> 439 ctgaggagac agtgaccagg gtgccacggc cccag 35 <210> 440 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ5_1 <400> 440 ctgaggagac ggtgaccagg gttccttggc cccag 35 <210> 441 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ5_2 <400> 441 ctgaggagac ggtgaccagg gttccctggc cccag 35 <210> 442 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJSEQ1_1 <400> 442 ctgaggagac ggtgaccagg gtgccctggc cccag 35 <210> 443 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHV1 <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> n is a, c, g, or t <400> 443 tgggtgcacc aggtccangn acaagggctt gagtgg 36 <210> 444 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHV2 <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> n is a, c, g, or t <400> 444 tgggtgcgac aggctcgngn acaacgcctt gagtgg 36 <210> 445 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHV3 <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> n is a, c, g, or t <400> 445 tgggtgcgcc agatgccngn gaaaggcctg gagtgg 36 <210> 446 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHV4 <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> n is a, c, g, or t <400> 446 tgggtccgcc agscyccngn gaaggggctg gagtgg 36 <210> 447 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHV5 <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> n is a, c, g, or t <400> 447 tgggtccgcc aggctccngn aaaggggctg gagtgg 36 <210> 448 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHV6 <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> n is a, c, g, or t <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> n is a, c, g, or t <400> 448 tgggtctgcc aggctccngn gaaggggcag gagtgg 36 <210> 449 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGH7_3.25p <400> 449 tgtgtccgcc aggctccagg gaatgggctg gagttgg 37 <210> 450 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGH8_3.54p <400> 450 tcagattccc aagctccagg gaaggggctg gagtgag 37 <210> 451 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGH9_3.63p <400> 451 tgggtcaatg agactctagg gaaggggctg gagggag 37 <210> 452 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ4*01/1-48 <400> 452 actactttga ctactggggc caaggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 48 <210> 453 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ4*03/1-48 <400> 453 gctactttga ctactggggc caagggaccc tggtcaccgt ctcctcag 48 <210> 454 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ4*02/1-48 <400> 454 actactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 48 <210> 455 <211> 50 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ3*01/1-50 <400> 455 tgatgctttt gatgtctggg gccaagggac aatggtcacc gtctcttcag 50 <210> 456 <211> 50 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ3*02/1-50 <400> 456 tgatgctttt gatatctggg gccaagggac aatggtcacc gtctcttcag 50 <210> 457 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ6*01/1-63 <400> 457 attactacta ctactacggt atggacgtct gggggcaagg gaccacggtc accgtctcct 60 cag 63 <210> 458 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ6*02/1-62 <400> 458 attactacta ctactacggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc accgtctcct 60 cag 63 <210> 459 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ6*04/1-63 <400> 459 attactacta ctactacggt atggacgtct ggggcaaagg gaccacggtc accgtctcct 60 cag 63 <210> 460 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ6*03/1-62 <400> 460 attactacta ctactactac atggacgtct ggggcaaagg gaccacggtc accgtctcct 60 cag 63 <210> 461 <211> 53 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ2*01/1-53 <400> 461 ctactggtac ttcgatctct ggggccgtgg caccctggtc actgtctcct cag 53 <210> 462 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ5*01/1-51 <400> 462 acaactggtt cgactcctgg ggccaaggaa ccctggtcac cgtctcctca g 51 <210> 463 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ5*02/1-51 <400> 463 acaactggtt cgacccctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca g 51 <210> 464 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ1*01/1-52 <400> 464 gctgaatact tccagcactg gggccagggc accctggtca ccgtctcctc ag 52 <210> 465 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ2P*01/1-61 <400> 465 ctacaagtgc ttggagcact ggggcagggc agcccggaca ccgtctccct gggaacgtca 60 g 61 <210> 466 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ1P*01/1-54 <400> 466 aaaggtgctg ggggtcccct gaacccgacc cgccctgaga ccgcagccac atca 54 <210> 467 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: >IGHJ3P*01/1-52 <400> 467 cttgcggttg gacttcccag ccgacagtgg tggtctggct tctgaggggt ca 52 <210> 468 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-2 <400> 468 aatgatacgg cgaccaccga gatctaccta caacggttaa cctggtcccc gaaccgaa 58 <210> 469 <211> 284 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBV2*02 <400> 469 gaacctgaag tcacccagac tcccagccat caggtcacac agatgggaca ggaagtgatc 60 ttgcactgtg tccccatctc taatcactta tacttctatt ggtacagaca aatcttgggg 120 cagaaagtcg agtttctggt ttccttttat aataatgaaa tctcagagaa gtctgaaata 180 ttcgatgatc aattctcagt tgaaaggcct gatggatcaa atttcactct gaagatccgg 240 tccacaaagc tggaggactc agccatgtac ttctgtgcca gcag 284 <210> 470 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 1-1 <400> 470 acaactgtga gtctggtgcc ttgtccaaag aaa 33 <210> 471 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 1-2 <400> 471 acaacggtta acctggtccc cgaaccgaag gtg 33 <210> 472 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 1-3 <400> 472 acaacagtga gccaacttcc ctctccaaaa tat 33 <210> 473 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 1-4 <400> 473 aagacagaga gctgggttcc actgccaaaa aac 33 <210> 474 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 1-5 <400> 474 aggatggaga gtcgagtccc atcaccaaaa tgc 33 <210> 475 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 1-6 <400> 475 gtcacagtga gcctggtccc gttcccaaag tgg 33 <210> 476 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 2-1 <400> 476 agcacggtga gccgtgtccc tggcccgaag aac 33 <210> 477 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 2-2 <400> 477 agtacggtca gcctagagcc ttctccaaaa aac 33 <210> 478 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 2-3 <400> 478 agcactgtca gccgggtgcc tgggccaaaa tac 33 <210> 479 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 2-4 <400> 479 agcactgaga gccgggtccc ggcgccgaag tac 33 <210> 480 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 2-5 <400> 480 agcaccagga gccgcgtgcc tggcccgaag tac 33 <210> 481 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 2-6 <400> 481 agcacggtca gcctgctgcc ggccccgaaa gtc 33 <210> 482 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: Jseq 2-7 <400> 482 gtgaccgtga gcctggtgcc cggcccgaag tac 33 <210> 483 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-5 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> n is a, c, g, or t; 5 end modified with universal reverse primer <400> 483 nacctaggat ggagagtcga gtcccatcac caaa 34 <210> 484 <211> 58 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic DNA: TRBJ1-5 <400> 484 aatgatacgg cgaccaccga gatctaccta ggatggagag tcgagtccca tcaccaaa 58

Claims (45)

  1. (a) 단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V-세그먼트 프라이머 및
    (b) J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J-세그먼트 프라이머를 포함하는 조성물로서,
    상기 V 세그먼트 및 J-세그먼트 프라이머는 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 TCR 또는 IG CDR3 영역을 증폭시켜 TCR 또는 IG 유전자의 다양성을 정량화하기에 충분한 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는, 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 각각의 V-세그먼트 프라이머가 단일 Vγ 세그먼트 또는 유사한 Vγ 세그먼트 부류에 상보성인 서열을 포함하고, 각각의 J 세그먼트 프라이머가 Jγ 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하며, V 세그먼트 및 J-세그먼트 프라이머는 TCRγ CDR3 영역을 증폭시키는 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 각각의 V-세그먼트 프라이머가 단일 Vδ 세그먼트 또는 유사한 Vδ 세그먼트 부류에 상보성인 서열을 포함하고, 각각의 J 세그먼트 프라이머가 Jδ 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하며, V 세그먼트 및 J-세그먼트 프라이머는 TCRδ CDR3 영역을 증폭시키는 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 각각의 V-세그먼트 프라이머가 단일 Vα 세그먼트 또는 유사한 Vα 세그먼트 부류에 상보성인 서열을 포함하고, 각각의 J 세그먼트 프라이머가 Jα 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하며, V 세그먼트 및 J-세그먼트 프라이머는 TCRα CDR3 영역을 증폭시키는 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 각각의 V-세그먼트 프라이머가 단일 Vβ 세그먼트 또는 유사한 Vβ 세그먼트 부류에 상보성인 서열을 포함하고, 각각의 J 세그먼트 프라이머가 Jβ 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하며, V 세그먼트 및 J-세그먼트 프라이머는 TCRβ CDR3 영역을 증폭시키는 조성물.
  6. 제1항에 있어서, V 세그먼트가 유사한 어닐링 강도를 갖는 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 모든 J 세그먼트 프라이머가 동일한 보존된 프레임워크 영역 모티프에 어닐링되는 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 증폭된 DNA 분자가 상기 보존된 모티프로부터 출발하고 J 세그먼트를 진단학적으로 동정하며 V 세그먼트로의 결합을 포함하는 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 증폭된 DNA 분자 내의 영역에 하이브리드화하는 서열분석 올리고뉴클레오타이드 세트를 추가로 포함하는 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 증폭된 DNA가 V-D-J 결합을 확장하는 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 V-세그먼트 또는 J-세그먼트가, 밀접하게 관련된 서열의 병합에 의해 서열 에러-보정을 함유하도록 선택되는 조성물.
  12. 제1항에 있어서, mRNA로부터 cDNA를 생성하기 위한 범용 C 세그먼트 프라이머를 추가로 포함하는 조성물.
  13. 제5항에 있어서, 상기 V 세그먼트 프라이머가 재조합 시그날 서열(RSS)에 대해 Vβ 내의 위치 -43에 고정되어 있는 조성물.
  14. 제5항에 있어서, 상기 다수의 V 세그먼트 프라이머가 14개의 상이한 Vβ 유전자에 특이적인 적어도 14개 프라이머로 이루어진 조성물.
  15. 제5항에 있어서, 상기 V 세그먼트 프라이머가 서열번호: 1 내지 45로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열을 갖는 조성물.
  16. 제5항에 있어서, 상기 V 세그먼트 프라이머가 서열번호: 58 내지 102로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열을 갖는 조성물.
  17. 제5항에 있어서, 각각의 Vβ 세그먼트 또는 Vβ 세그먼트 부류에 대한 V 세그먼트 프라이머가 존재하는 조성물.
  18. 제5항에 있어서, 상기 프라이머가 인트론/엑손 경계를 교차하지 않는 조성물.
  19. 제5항에 있어서, 상기 J 세그먼트 프라이머가 Jβ 세그먼트의 보존된 요소와 하이브리화하고, 유사한 어닐링 강도를 갖는 조성물.
  20. 제5항에 있어서, 상기 다수의 J 세그먼트 프라이머가 5개의 상이한 Jβ 유전자에 특이적인 적어도 5개의 프라이머로 이루어진 조성물.
  21. 제5항에 있어서, 상기 J 세그먼트 프라이머가 서열번호: 46 내지 57 및 483으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열을 갖는 조성물.
  22. 제5항에 있어서, 상기 J 세그먼트 프라이머가 서열번호: 103 내지 113, 468 및 484으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열을 갖는 조성물.
  23. 제5항에 있어서, 각각의 Jβ 세그먼트에 대한 J 세그먼트 프라이머가 존재하는 조성물.
  24. 제5항에 있어서, 상기 증폭된 Jβ 유전자 세그먼트가 RSS 부위 하류의 위치 +11 내지 +14에 유니크(unique)한 4개 염기 태그를 갖는 조성물.
  25. 제24항에 있어서, 상기 서열분석 올리고뉴클레오티드가 RSS 부위 하류의 위치 +11 내지 +14에서 증폭된 Jβ 유전자 세그먼트 내에 4개 염기 태그에 인접하여 하이브리드화하는 조성물.
  26. 제24항에 있어서, 상기 서열분석 올리고뉴클레오티드가 서열번호: 470 내지 482로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 조성물.
  27. (a) 단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V 세그먼트 프라이머 및
    (b) J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J 세그먼트 프라이머를 포함하는 조성물로서,
    상기 V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머는 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 항체 중쇄(IGH) VH 영역을 증폭시켜 항체 중쇄 유전자의 다양성을 정량화하기에 충분한 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는, 조성물.
  28. (a) 단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V 세그먼트 프라이머 및
    (b) J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J 세그먼트 프라이머를 포함하는 조성물로서,
    상기 V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머는 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 항체 경쇄(IGL) VL 영역을 증폭시켜 항체 경쇄 유전자의 다양성을 정량화하기에 충분한 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는, 조성물.
  29. (a) 단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V 세그먼트 프라이머를 선택하는 단계;
    (b) J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J 세그먼트 프라이머를 선택하는 단계; 및
    (c) V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머를 게놈 DNA 샘플과 조합하여 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 TCR CDR3 영역을 증폭시킴으로써 TCR 유전자의 다양성을 정량화하기에 충분한 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는 단계를 포함하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 각각의 V 세그먼트 프라이머가 단일 Vβ 세그먼트 또는 Vβ 세그먼트 부류에 상보성인 서열을 포함하고, 각각의 J 세그먼트 프라이머가 Jβ 세그먼트에 상보성인 서열을 포함하며, V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머와 게놈 DNA 샘플과의 조합이 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 TCRB CDR3 영역을 증폭시켜 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는 방법.
  31. 제30항에 있어서, 증폭된 DNA 분자를 서열분석하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 서열분석 단계가, 증폭된 DNA 분자 내의 소정 영역과 하이브리드화하는 서열분석 올리고뉴클레오티드 세트를 사용하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 증폭된 DNA 분자 중에서 TCRβ CDR3 서열의 전체 다양성을 계산하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 방법은 정상 사람 피검체의 전체 다양성이 1*106개 초과의 서열임을 나타내는 방법.
  35. 제33항에 있어서, 상기 방법은 정상 사람 피검체의 전체 다양성이 2×106개 초과의 서열임을 나타내는 방법.
  36. 제33항에 있어서, 상기 방법은 정상 사람 피검체의 전체 다양성이 3×106개 초과의 서열임을 나타내는 방법.
  37. 환자의 TCR CDR3 서열의 다양성을 측정하는 단계; 및
    피검체의 다양성을 정상 피검체로부터 수득한 다양성과 비교하는 단계를 포함하는,
    사람 환자에서 면역결핍을 진단하는 방법.
  38. 제37항에 있어서, TCR 서열의 다양성을 측정하는 단계가
    (a) 단일 작용성 V 세그먼트 또는 V 세그먼트의 소부류에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 V 세그먼트 프라이머를 선택하는 단계;
    (b) J 세그먼트에 상보성인 서열을 각각 포함하는 다수의 J 세그먼트 프라이머를 선택하는 단계;
    (c) V 세그먼트 및 J 세그먼트 프라이머를 게놈 DNA 샘플과 조합하여 다중 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 TCR CDR3 영역을 증폭시킴으로써 다수의 증폭된 DNA 분자를 생성하는 단계;
    (d) 증폭된 DNA 분자를 서열분석하는 단계; 및
    (e) 증폭된 DNA 분자 중에서 TCR CDR3 서열의 전체 다양성을 계산하는 단계를 포함하는 방법.
  39. 제38항에 있어서, 다양성의 비교는 하기 수학식을 사용하여 계산함으로써 측정하는 방법.
    Figure pct00011

    상기 수학식에서,
    G(λ)는 파라미터 λ1, ···, λs의 경험적 분포 함수이고,
    nx는 정확하게 x배 서열분석된 클론형의 수이고,
    Figure pct00012
    이다.
  40. 제38항에 있어서, 게놈 DNA의 적어도 2개 샘플의 다양성이 비교되는 방법.
  41. 제40항에 있어서, 게놈 DNA의 하나의 샘플이 환자의 것이고 다른 샘플이 정상 피검체의 것인 방법.
  42. 제40항에 있어서, 게놈 DNA의 하나의 샘플이 치료학적 치료 전의 환자의 것이고 다른 샘플이 치료 후의 환자의 것인 방법.
  43. 제40항에 있어서, 게놈 DNA의 2개 샘플이 치료 동안 상이한 시간에서의 동일한 환자의 것인 방법.
  44. 제40항에 있어서, 질환이 게놈 DNA의 샘플 중에서 다양성의 비교에 기초하여 진단되는 방법.
  45. 제40항에 있어서, 사람 환자의 면역경쟁이 비교에 의해 평가되는 방법.
KR1020117030953A 2009-06-25 2010-06-04 적응 면역의 측정방법 Ceased KR20120044941A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22034409P 2009-06-25 2009-06-25
US61/220,344 2009-06-25

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020147031470A Division KR20140146180A (ko) 2009-06-25 2010-06-04 적응 면역의 측정방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20120044941A true KR20120044941A (ko) 2012-05-08

Family

ID=42543134

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020117030953A Ceased KR20120044941A (ko) 2009-06-25 2010-06-04 적응 면역의 측정방법
KR1020147031470A Ceased KR20140146180A (ko) 2009-06-25 2010-06-04 적응 면역의 측정방법

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020147031470A Ceased KR20140146180A (ko) 2009-06-25 2010-06-04 적응 면역의 측정방법

Country Status (11)

Country Link
US (10) US20100330571A1 (ko)
EP (2) EP3409792B1 (ko)
JP (2) JP2012531202A (ko)
KR (2) KR20120044941A (ko)
CN (1) CN102459643B (ko)
AU (1) AU2010263172B2 (ko)
CA (1) CA2765949C (ko)
IL (1) IL217200A (ko)
RU (2) RU2539032C2 (ko)
SG (2) SG10201403451QA (ko)
WO (1) WO2010151416A1 (ko)

Families Citing this family (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2281065B1 (en) 2008-04-16 2015-09-09 HudsonAlpha Institute For Biotechnology Method for evaluating and comparing immunorepertoires
US8748103B2 (en) 2008-11-07 2014-06-10 Sequenta, Inc. Monitoring health and disease status using clonotype profiles
US9528160B2 (en) 2008-11-07 2016-12-27 Adaptive Biotechnolgies Corp. Rare clonotypes and uses thereof
US8628927B2 (en) 2008-11-07 2014-01-14 Sequenta, Inc. Monitoring health and disease status using clonotype profiles
EP3699296A1 (en) * 2008-11-07 2020-08-26 Adaptive Biotechnologies Corporation Methods of monitoring conditions by sequence analysis
US9506119B2 (en) 2008-11-07 2016-11-29 Adaptive Biotechnologies Corp. Method of sequence determination using sequence tags
US9365901B2 (en) 2008-11-07 2016-06-14 Adaptive Biotechnologies Corp. Monitoring immunoglobulin heavy chain evolution in B-cell acute lymphoblastic leukemia
US8691510B2 (en) * 2008-11-07 2014-04-08 Sequenta, Inc. Sequence analysis of complex amplicons
DK2387627T3 (en) 2009-01-15 2016-07-04 Adaptive Biotechnologies Corp Adaptive immunity profiling and methods for producing monoclonal antibodies
RU2539032C2 (ru) 2009-06-25 2015-01-10 Фред Хатчинсон Кансэр Рисёч Сентер Способ измерения искусственного иммунитета
US9043160B1 (en) 2009-11-09 2015-05-26 Sequenta, Inc. Method of determining clonotypes and clonotype profiles
WO2011106738A2 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Fred Hutchinson Cancer Research Center Use of tcr clonotypes as biomarkers for disease
WO2012097374A1 (en) 2011-01-14 2012-07-19 Cb Biotechnologies, Inc. Immunodiversity assessment method and its use
US10385475B2 (en) 2011-09-12 2019-08-20 Adaptive Biotechnologies Corp. Random array sequencing of low-complexity libraries
US9279159B2 (en) 2011-10-21 2016-03-08 Adaptive Biotechnologies Corporation Quantification of adaptive immune cell genomes in a complex mixture of cells
EP3388535B1 (en) 2011-12-09 2021-03-24 Adaptive Biotechnologies Corporation Diagnosis of lymphoid malignancies and minimal residual disease detection
US9499865B2 (en) 2011-12-13 2016-11-22 Adaptive Biotechnologies Corp. Detection and measurement of tissue-infiltrating lymphocytes
CN103289994B (zh) * 2012-03-05 2015-08-05 深圳华大基因科技有限公司 用于扩增T细胞受体α链CDR3编码序列的引物组合物及其用途
WO2013097744A1 (zh) * 2011-12-27 2013-07-04 深圳华大基因科技有限公司 用于扩增cdr3编码序列的引物组合物及其用途
CN103184216B (zh) * 2011-12-27 2015-03-18 深圳华大基因科技有限公司 用于扩增免疫球蛋白重链cdr3编码序列的引物组合物及其用途
CN103205420B (zh) * 2012-01-13 2015-04-01 深圳华大基因科技有限公司 用于扩增T细胞受体β链CDR3编码序列的引物组合物及其用途
US10077478B2 (en) 2012-03-05 2018-09-18 Adaptive Biotechnologies Corp. Determining paired immune receptor chains from frequency matched subunits
US9150905B2 (en) * 2012-05-08 2015-10-06 Adaptive Biotechnologies Corporation Compositions and method for measuring and calibrating amplification bias in multiplexed PCR reactions
WO2013188831A1 (en) 2012-06-15 2013-12-19 Adaptive Biotechnologies Corporation Uniquely tagged rearranged adaptive immune receptor genes in a complex gene set
CA2878291A1 (en) * 2012-07-03 2014-01-09 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Quantitative assessment of human t-cell repertoire recovery after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation
US11913065B2 (en) 2012-09-04 2024-02-27 Guardent Health, Inc. Systems and methods to detect rare mutations and copy number variation
US10876152B2 (en) 2012-09-04 2020-12-29 Guardant Health, Inc. Systems and methods to detect rare mutations and copy number variation
EP4424826A3 (en) 2012-09-04 2024-11-27 Guardant Health, Inc. Systems and methods to detect rare mutations and copy number variation
US20160040229A1 (en) 2013-08-16 2016-02-11 Guardant Health, Inc. Systems and methods to detect rare mutations and copy number variation
EP3330384B1 (en) * 2012-10-01 2019-09-25 Adaptive Biotechnologies Corporation Immunocompetence assessment by adaptive immune receptor diversity and clonality characterization
US10119134B2 (en) 2013-03-15 2018-11-06 Abvitro Llc Single cell bar-coding for antibody discovery
SG11201506991VA (en) 2013-03-15 2015-10-29 Adaptive Biotechnologies Corp Uniquely tagged rearranged adaptive immune receptor genes in a complex gene set
US9708657B2 (en) 2013-07-01 2017-07-18 Adaptive Biotechnologies Corp. Method for generating clonotype profiles using sequence tags
CN106103711A (zh) 2013-11-21 2016-11-09 组库创世纪株式会社 T细胞受体和b细胞受体库分析系统及其在治疗和诊断中的应用
CN114807335A (zh) 2013-12-10 2022-07-29 伊鲁米那股份有限公司 用于鉴定基因的等位基因的试剂盒和探针
EP3378952B1 (en) 2013-12-28 2020-02-05 Guardant Health, Inc. Methods and systems for detecting genetic variants
CA2941612A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Adaptive Biotechnologies Corporation Methods using randomer-containing synthetic molecules
US11390921B2 (en) 2014-04-01 2022-07-19 Adaptive Biotechnologies Corporation Determining WT-1 specific T cells and WT-1 specific T cell receptors (TCRs)
US10066265B2 (en) 2014-04-01 2018-09-04 Adaptive Biotechnologies Corp. Determining antigen-specific t-cells
ES2777529T3 (es) 2014-04-17 2020-08-05 Adaptive Biotechnologies Corp Cuantificación de genomas de células inmunitarias adaptativas en una mezcla compleja de células
US10202640B2 (en) * 2014-05-07 2019-02-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Single cell analysis of T cells using high-throughput multiplex amplification and deep sequencing
US10590483B2 (en) 2014-09-15 2020-03-17 Abvitro Llc High-throughput nucleotide library sequencing
ES2784343T3 (es) 2014-10-29 2020-09-24 Adaptive Biotechnologies Corp Detección simultánea altamente multiplexada de ácidos nucleicos que codifican heterodímeros de receptores inmunes adaptativos emparejados de muchas muestras
US10246701B2 (en) 2014-11-14 2019-04-02 Adaptive Biotechnologies Corp. Multiplexed digital quantitation of rearranged lymphoid receptors in a complex mixture
AU2015353581A1 (en) 2014-11-25 2017-06-15 Adaptive Biotechnologies Corporation Characterization of adaptive immune response to vaccination or infection using immune repertoire sequencing
EP3591074B1 (en) 2015-02-24 2024-10-23 Adaptive Biotechnologies Corp. Methods for diagnosing infectious disease and determining hla status using immune repertoire sequencing
AU2016242967B2 (en) 2015-04-01 2021-07-01 Adaptive Biotechnologies Corp. Method of identifying human compatible T cell receptors specific for an antigenic target
CN105040111B (zh) * 2015-05-28 2017-07-14 眭维国 系统性红斑狼疮图谱模型的构建方法
US9422547B1 (en) 2015-06-09 2016-08-23 Gigagen, Inc. Recombinant fusion proteins and libraries from immune cell repertoires
US10539564B2 (en) 2015-07-22 2020-01-21 Roche Sequencing Solutions, Inc. Identification of antigen epitopes and immune sequences recognizing the antigens
WO2017013170A1 (en) 2015-07-22 2017-01-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Identification of antigen epitopes and immune sequences recognizing the antigens
US20180300453A1 (en) * 2015-08-07 2018-10-18 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Estimation of Descriptive Parameters from a Sample
CN105154440B (zh) * 2015-08-14 2016-11-30 深圳市瀚海基因生物科技有限公司 一种基于高通量测序构建白血病微小残留病灶tcr文库的多重pcr引物和方法
CN108291249A (zh) * 2015-11-18 2018-07-17 国立研究开发法人海洋研究开发机构 靶核酸的定量方法和用于该方法的试剂盒
WO2017106768A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Guardant Health, Inc. Methods to determine tumor gene copy number by analysis of cell-free dna
CN105447336B (zh) * 2015-12-29 2018-06-19 北京百迈客生物科技有限公司 基于生物云平台的微生物多样性分析系统
US11098360B2 (en) 2016-06-01 2021-08-24 Roche Sequencing Solutions, Inc. Immuno-PETE
US10428325B1 (en) 2016-09-21 2019-10-01 Adaptive Biotechnologies Corporation Identification of antigen-specific B cell receptors
CN106957905B (zh) * 2016-12-23 2020-12-04 孙涛 一种用于评估肿瘤免疫治疗效果的分子检测方法及引物组合物及试剂盒
GB201718238D0 (en) * 2017-11-03 2017-12-20 Univ Oxford Innovation Ltd Method and system for determining the disease status of a subject
US11254980B1 (en) 2017-11-29 2022-02-22 Adaptive Biotechnologies Corporation Methods of profiling targeted polynucleotides while mitigating sequencing depth requirements
RU2694412C9 (ru) * 2017-12-25 2019-09-18 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) Моноклональные антитела и способы их применения
US20210361768A1 (en) * 2018-06-01 2021-11-25 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for assessing and treating cancers
WO2019237146A1 (en) * 2018-06-11 2019-12-19 Monoquant Pty Ltd Amplification method and primers for use therein
JP7145980B2 (ja) 2018-06-15 2022-10-03 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 腫瘍浸潤リンパ球にて発現するｔ細胞受容体により認識される抗原を識別するためのシステム
AR117735A1 (es) 2018-12-25 2021-08-25 Joint Stock Company “Biocad” ANTICUERPOS MONOCLONALES QUE SE UNEN ESPECÍFICAMENTE A LA REGIÓN b DE LA FAMILIA TRBV-9 DEL RECEPTOR DE CÉLULAS T HUMANO, Y LOS MÉTODOS PARA SU USO
RU2712251C1 (ru) * 2018-12-25 2020-01-27 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) Гуманизированные антитела против участка бета цепи 9-го семейства TRBV9 TKP человека, и способы их применения
EP3941491A4 (en) 2019-03-21 2023-03-29 Gigamune, Inc. ENGINEERED CELLS EXPRESSING ANTIVIRAL T-CELL RECEPTORS AND METHODS OF USE
CN109929924B (zh) * 2019-03-27 2022-11-08 上海科医联创医学检验所有限公司 一种基于高通量测序的igh基因重排检测方法
CN111755075B (zh) * 2019-03-28 2023-09-29 深圳华大生命科学研究院 对免疫组库高通量测序样本间序列污染进行过滤的方法
CN110246539B (zh) * 2019-04-15 2020-04-28 成都益安博生物技术有限公司 一种免疫力水平评估的方法及装置
US12263179B1 (en) 2019-08-01 2025-04-01 Adaptive Biotechnologies Corporation Lyme disease-associated T cell receptor-related methods
WO2021053008A1 (en) 2019-09-20 2021-03-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Immune repertoire profiling by primer extension target enrichment
US12266425B1 (en) 2020-06-10 2025-04-01 Adaptive Biotechnologies Corporation T cell receptor sequences diagnostic for COVID-19 and related compositions
WO2023201265A1 (en) * 2022-04-12 2023-10-19 The Johns Hopkins University Method of measuring level of immune suppression
CN116153407A (zh) * 2023-04-03 2023-05-23 广州华银医学检验中心有限公司 基于基因测序判断受试者抗新冠免疫力强弱的系统
WO2025070334A1 (ja) * 2023-09-27 2025-04-03 国立大学法人大阪大学 情報処理方法、学習モデルの生成方法、学習モデル、コンピュータプログラム及び情報処理装置

Family Cites Families (327)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3270960A (en) 1964-09-11 1966-09-06 Sperry Rand Corp Fluid sensor
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
DE3211263A1 (de) 1981-03-31 1983-01-27 Otsuka Pharmaceutical Co. Ltd., Tokyo Human-interferon verwandte peptide, antigene und antikoerper, sowie verfahren zu deren herstellung
DE3238353A1 (de) 1982-10-15 1984-04-19 Max Planck Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen Verfahren zur simultanen quantitativen bestimmung der blutzellen und reagenz hierfuer
US5189147A (en) 1984-06-13 1993-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Meterodimeric T lymphocyte receptor antibody
US4965188A (en) 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
DE3541033A1 (de) 1985-11-19 1987-05-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur quantifizierung von zellpopulationen bzw. subpopulationen sowie hierfuer geeignetes reagenz
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
US4942124A (en) 1987-08-11 1990-07-17 President And Fellows Of Harvard College Multiplex sequencing
US5149625A (en) 1987-08-11 1992-09-22 President And Fellows Of Harvard College Multiplex analysis of DNA
US5667967A (en) 1990-05-01 1997-09-16 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University T-cell receptor varible transcripts as disease related markers
US5506126A (en) 1988-02-25 1996-04-09 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
US5168038A (en) 1988-06-17 1992-12-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University In situ transcription in cells and tissues
US5296351A (en) 1988-10-20 1994-03-22 Alexander A. Morley Method for diagnosis of monoclonality in leukaemia and lymphoma
US5075217A (en) 1989-04-21 1991-12-24 Marshfield Clinic Length polymorphisms in (dC-dA)n ·(dG-dT)n sequences
US5231012A (en) 1989-06-28 1993-07-27 Schering Corporation Nucleic acids encoding cytokine synthesis inhibitory factor (interleukin-10)
CA2020958C (en) 1989-07-11 2005-01-11 Daniel L. Kacian Nucleic acid sequence amplification methods
US5298396A (en) 1989-11-15 1994-03-29 National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine Method for identifying T cells disease involved in autoimmune disease
US5336598A (en) 1989-11-15 1994-08-09 National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine Method for diagnosing a superantigen caused pathologial condition via assay of T-cells
US6054034A (en) 1990-02-28 2000-04-25 Aclara Biosciences, Inc. Acrylic microchannels and their use in electrophoretic applications
US5126022A (en) 1990-02-28 1992-06-30 Soane Tecnologies, Inc. Method and device for moving molecules by the application of a plurality of electrical fields
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6916605B1 (en) 1990-07-10 2005-07-12 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
CA2090126C (en) 1990-08-02 2002-10-22 John W. Schrader Methods for the production of proteins with a desired function
US5210015A (en) 1990-08-06 1993-05-11 Hoffman-La Roche Inc. Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase
IE76732B1 (en) 1990-08-07 1997-11-05 Becton Dickinson Co One step test for absolute counts
US5699798A (en) 1990-08-10 1997-12-23 University Of Washington Method for optically imaging solid tumor tissue
US5635354A (en) 1991-01-09 1997-06-03 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Method for describing the repertoires of antibodies (Ab) and of T-cell receptors (TcR) of an individual's immune system
US5364759B2 (en) 1991-01-31 1999-07-20 Baylor College Medicine Dna typing with short tandem repeat polymorphisms and identification of polymorphic short tandem repeats
AU660306B2 (en) * 1991-02-12 1995-06-22 Roussel-Uclaf Nucleotidic sequences coding for variable regions of beta chains of human T lymphocyte receptors, corresponding peptidic segments and diagnostic and therapeutic applications
JP3080178B2 (ja) 1991-02-18 2000-08-21 東洋紡績株式会社 核酸配列の増幅方法およびそのための試薬キット
US6091000A (en) 1991-03-15 2000-07-18 Duke University SCID mouse engrafted with human synovium tissue
JP3266311B2 (ja) 1991-05-02 2002-03-18 生化学工業株式会社 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗ｈｉｖ剤
US5674679A (en) 1991-09-27 1997-10-07 Amersham Life Science, Inc. DNA cycle sequencing
US5981179A (en) 1991-11-14 1999-11-09 Digene Diagnostics, Inc. Continuous amplification reaction
US5213960A (en) 1992-03-09 1993-05-25 Tanox Biosystems, Inc. Methods for selecting low frequency antigen-specific single B lymphocytes
US5256542A (en) 1992-03-09 1993-10-26 Tanox Biosystems, Inc. Selecting low frequency antigen-specific single B lymphocytes with correction for background noise
US5837447A (en) 1992-04-15 1998-11-17 Blood Center Research Foundation, Inc., The Monitoring an immune response by analysis of amplified immunoglobulin or T-cell-receptor nucleic acid
US5587128A (en) 1992-05-01 1996-12-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Mesoscale polynucleotide amplification devices
US5498392A (en) 1992-05-01 1996-03-12 Trustees Of The University Of Pennsylvania Mesoscale polynucleotide amplification device and method
US5981176A (en) 1992-06-17 1999-11-09 City Of Hope Method of detecting and discriminating between nucleic acid sequences
US5925517A (en) 1993-11-12 1999-07-20 The Public Health Research Institute Of The City Of New York, Inc. Detectably labeled dual conformation oligonucleotide probes, assays and kits
EP0753060A4 (en) 1994-04-18 1999-11-24 New York Society PRESERVED T CELL RECEPTOR SEQUENCES
US6001229A (en) 1994-08-01 1999-12-14 Lockheed Martin Energy Systems, Inc. Apparatus and method for performing microfluidic manipulations for chemical analysis
US6090592A (en) 1994-08-03 2000-07-18 Mosaic Technologies, Inc. Method for performing amplification of nucleic acid on supports
FR2724182B1 (fr) 1994-09-02 1996-12-13 Pasteur Institut Obtention d'un anticorps monoclonal recombinant a partir d'un anticorps monoclonal humain anti-rhesus d, sa production en cellules d'insecte, et ses utilisations
US5846719A (en) 1994-10-13 1998-12-08 Lynx Therapeutics, Inc. Oligonucleotide tags for sorting and identification
US5604097A (en) 1994-10-13 1997-02-18 Spectragen, Inc. Methods for sorting polynucleotides using oligonucleotide tags
US5776737A (en) 1994-12-22 1998-07-07 Visible Genetics Inc. Method and composition for internal identification of samples
US6919434B1 (en) 1995-02-20 2005-07-19 Sankyo Co., Ltd. Monoclonal antibodies that bind OCIF
US5698396A (en) 1995-06-07 1997-12-16 Ludwig Institute For Cancer Research Method for identifying auto-immunoreactive substances from a subject
AU7437996A (en) 1995-10-11 1997-04-30 Leonard Adleman Large scale dna sequencing by position sensitive hybridization
WO1997013877A1 (en) 1995-10-12 1997-04-17 Lynx Therapeutics, Inc. Measurement of gene expression profiles in toxicity determination
US6087096A (en) 1995-11-13 2000-07-11 Dau; Peter C. Method of intrafamily fragment analysis of the T cell receptor α and β chain CDR3 regions
US5854033A (en) 1995-11-21 1998-12-29 Yale University Rolling circle replication reporter systems
US20020076725A1 (en) 1996-03-13 2002-06-20 Tomoko Toyosaki-Maeda Human t cell clone specific for rheumatoid arthritis
US6458530B1 (en) 1996-04-04 2002-10-01 Affymetrix Inc. Selecting tag nucleic acids
US6416948B1 (en) * 1996-06-03 2002-07-09 The Governors Of The University Of Alberta Methods for detection of rearranged DNA
US6174670B1 (en) 1996-06-04 2001-01-16 University Of Utah Research Foundation Monitoring amplification of DNA during PCR
WO1998001738A2 (en) 1996-06-20 1998-01-15 Cornell Research Foundation, Inc. Identification of abnormalities in the expression of t and b cell antigen receptors as disease indicators
US6074827A (en) 1996-07-30 2000-06-13 Aclara Biosciences, Inc. Microfluidic method for nucleic acid purification and processing
AU727541B2 (en) 1996-09-06 2000-12-14 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Purification of antigen-specific T cells
US5935793A (en) 1996-09-27 1999-08-10 The Chinese University Of Hong Kong Parallel polynucleotide sequencing method using tagged primers
GB9626815D0 (en) 1996-12-23 1997-02-12 Cemu Bioteknik Ab Method of sequencing DNA
GB9704444D0 (en) 1997-03-04 1997-04-23 Isis Innovation Non-invasive prenatal diagnosis
WO1998044151A1 (en) 1997-04-01 1998-10-08 Glaxo Group Limited Method of nucleic acid amplification
US6143496A (en) 1997-04-17 2000-11-07 Cytonix Corporation Method of sampling, amplifying and quantifying segment of nucleic acid, polymerase chain reaction assembly having nanoliter-sized sample chambers, and method of filling assembly
DE69838521T2 (de) 1997-07-07 2008-05-21 Medical Research Council Methode zur Erhöhung der Konzentration von Nucleinsäuremolekülen
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6803019B1 (en) 1997-10-15 2004-10-12 Aclara Biosciences, Inc. Laminate microstructure device and method for making same
AU753732B2 (en) 1997-10-23 2002-10-24 Genzyme Corporation Methods for detecting contamination in molecular diagnostics using PCR
US7351578B2 (en) 1999-12-10 2008-04-01 Invitrogen Corp. Use of multiple recombination sites with unique specificity in recombinational cloning
US6210910B1 (en) 1998-03-02 2001-04-03 Trustees Of Tufts College Optical fiber biosensor array comprising cell populations confined to microcavities
DE19833738A1 (de) 1998-07-27 2000-02-03 Michael Giesing Verfahren zur Isolierung von Krebszellen aus zellhaltigen Körperflüssigkeiten sowie Sets zur Durchführung dieses Verfahrens
US6787308B2 (en) 1998-07-30 2004-09-07 Solexa Ltd. Arrayed biomolecules and their use in sequencing
AR021833A1 (es) 1998-09-30 2002-08-07 Applied Research Systems Metodos de amplificacion y secuenciacion de acido nucleico
DE19844931C1 (de) 1998-09-30 2000-06-15 Stefan Seeger Verfahren zur DNS- oder RNS-Sequenzierung
US6541608B1 (en) * 1999-02-23 2003-04-01 Baylor College Of Medicine T cell receptor Vβ-Dβ-Jβ sequence and methods for its detection
US6307024B1 (en) 1999-03-09 2001-10-23 Zymogenetics, Inc. Cytokine zalpha11 Ligand
US6300070B1 (en) 1999-06-04 2001-10-09 Mosaic Technologies, Inc. Solid phase methods for amplifying multiple nucleic acids
US6440706B1 (en) 1999-08-02 2002-08-27 Johns Hopkins University Digital amplification
US20040209314A1 (en) 1999-09-06 2004-10-21 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale France Means for detection and purification of CD8+ T lymphocyte populations specific to peptides presented in the context of HLA
US6235483B1 (en) 2000-01-31 2001-05-22 Agilent Technologies, Inc. Methods and kits for indirect labeling of nucleic acids
EP1283906A4 (en) 2000-03-31 2005-04-27 Univ Southern California EPIGENETIC SEQUENCES OF OESOPHAGEAL ADENOCARCINOMAS
AUPQ687600A0 (en) 2000-04-13 2000-05-11 Flinders Technologies Pty Ltd A method of detection
US20030207300A1 (en) 2000-04-28 2003-11-06 Matray Tracy J. Multiplex analytical platform using molecular tags
GB0016138D0 (en) * 2000-06-30 2000-08-23 Novartis Ag Organic compounds
US6596492B2 (en) 2000-07-11 2003-07-22 Colorado State University Research Foundation PCR materials and methods useful to detect canine and feline lymphoid malignancies
US7567870B1 (en) 2000-07-31 2009-07-28 Institute For Systems Biology Multiparameter analysis for predictive medicine
US6939451B2 (en) 2000-09-19 2005-09-06 Aclara Biosciences, Inc. Microfluidic chip having integrated electrodes
CA2426824A1 (en) 2000-10-24 2002-07-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Direct multiplex characterization of genomic dna
US6778724B2 (en) 2000-11-28 2004-08-17 The Regents Of The University Of California Optical switching and sorting of biological samples and microparticles transported in a micro-fluidic device, including integrated bio-chip devices
EP1362093B1 (en) 2001-02-20 2010-11-17 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Rapid production of monoclonal antibodies
US7265208B2 (en) 2001-05-01 2007-09-04 The Regents Of The University Of California Fusion molecules and treatment of IgE-mediated allergic diseases
WO2002094009A2 (en) 2001-05-24 2002-11-28 Guard Inc. Methods for selecting and producing animals having a predicted level of immune response
US20050260570A1 (en) 2001-05-29 2005-11-24 Mao Jen-I Sequencing by proxy
US6720144B1 (en) 2001-06-21 2004-04-13 Quest Diagnostics Detection of clonal T-cell receptor-γ gene rearrangement by PCR/temporal temperature gradient gel electrophoresis (TTGE)
CA2492220C (en) 2001-07-15 2014-03-18 Keck Graduate Institute Nucleic acid amplification using nicking agents
WO2003020983A1 (en) 2001-08-30 2003-03-13 Virginia Commonwealth University Allele specific pcr for genotyping
NZ531208A (en) 2001-08-31 2005-08-26 Avidex Ltd Multivalent soluble T cell receptor (TCR) complexes
AU2002322518A1 (en) 2001-08-31 2003-03-18 Rosetta Inpharmactis Llc Methods for preparing nucleic acid samples
CA2460639C (en) 2001-09-19 2013-07-16 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Engineered templates and their use in single primer amplification
CN102402650A (zh) 2001-11-09 2012-04-04 生命技术公司 利用基因表达分布图识别、监控和治疗疾病以及鉴定生物学状态
GB2382137A (en) 2001-11-20 2003-05-21 Mats Gullberg Nucleic acid enrichment
GB0128153D0 (en) 2001-11-23 2002-01-16 Bayer Ag Profiling of the immune gene repertoire
WO2003052101A1 (en) 2001-12-14 2003-06-26 Rosetta Inpharmatics, Inc. Sample tracking using molecular barcodes
GB0130267D0 (en) 2001-12-19 2002-02-06 Neutec Pharma Plc Focussed antibody technology
AU2003207528A1 (en) 2002-01-09 2003-07-30 Maxx Genetech Co. Ltd Method of detecting t-cell proliferation for diagnosis of diseases by gene array
US7157274B2 (en) 2002-06-24 2007-01-02 Cytonome, Inc. Method and apparatus for sorting particles
US20030228617A1 (en) 2002-05-16 2003-12-11 Vanderbilt University Method for predicting autoimmune diseases
AU2003247129A1 (en) 2002-07-01 2004-01-19 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) System, method, device, and computer program product for extraction, gathering, manipulation, and analysis of peak data from an automated sequencer
WO2004005465A2 (en) 2002-07-03 2004-01-15 Institute For Scientific Research, Inc. Compositions and methods for the detection of human t cell receptor variable family gene expression
WO2004006951A1 (en) 2002-07-12 2004-01-22 The Johns Hopkins University Reagents and methods for engaging unique clonotypic lymphocyte receptors
CA2491023A1 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Althea Technologies, Inc. Strategies for gene expression analysis
US7157228B2 (en) 2002-09-09 2007-01-02 Bioarray Solutions Ltd. Genetic analysis and authentication
US7459273B2 (en) 2002-10-04 2008-12-02 Affymetrix, Inc. Methods for genotyping selected polymorphism
ATE483822T1 (de) * 2002-10-11 2010-10-15 Univ Erasmus Primer für nukleinsäureamplifikation in pcr- basierten klonalitätsstudien
AU2003282612A1 (en) 2002-10-11 2004-05-04 The Regents Of The University Of California A method for diagnosis and prognosis of multiple sclerosis
US20060147925A1 (en) 2002-11-13 2006-07-06 Morley Alexander A Method of detection
EP1566635B1 (en) 2002-11-14 2011-12-07 Vivalis Microwell array chip for detecting antigen-specific lymphocyte, method of detecting antigen-specific lymphocyte and method of cloning antigen-specific lymphocyte antigen receptor gene
AU2003300919A1 (en) 2002-12-11 2004-06-30 Coley Pharmaceutical Gmbh 5' cpg nucleic acids and methods of use
WO2004063706A2 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Maxx Genetech Co., Ltd. Method of detecting over-expression of t-cell receptor genes by real-time pcr
JP4480715B2 (ja) 2003-01-29 2010-06-16 ４５４ コーポレーション 二重末端シーケンシング
GB0304068D0 (en) 2003-02-22 2003-03-26 Avidex Ltd Substances
US20070042349A1 (en) 2003-04-24 2007-02-22 Ogle Brenda M Methods for assessing biologic diversity
AU2003902299A0 (en) 2003-05-13 2003-05-29 Flinders Medical Centre A method of analysing a marker nucleic acid molecule
WO2005020784A2 (en) 2003-05-23 2005-03-10 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Surrogate cell gene expression signatures for evaluating the physical state of a subject
US20050010030A1 (en) 2003-07-02 2005-01-13 Zang Jingwu Z. T cell receptor CDR3 sequence and methods for detecting and treating rheumatoid arthritis
EP1641809B2 (en) 2003-07-05 2018-10-03 The Johns Hopkins University Method and compositions for detection and enumeration of genetic variations
US20060228350A1 (en) * 2003-08-18 2006-10-12 Medimmune, Inc. Framework-shuffling of antibodies
US20050048498A1 (en) 2003-08-29 2005-03-03 Applera Corporation Compositions, methods, and kits for assembling probes
US7365179B2 (en) 2003-09-09 2008-04-29 Compass Genetics, Llc Multiplexed analytical platform
TWI333977B (en) 2003-09-18 2010-12-01 Symphogen As Method for linking sequences of interest
FR2863274B1 (fr) 2003-12-05 2012-11-16 Commissariat Energie Atomique Procede d'evaluation quantitative d'un rearrangement ou d'une recombinaison genetique ciblee d'un individu et ses applications.
WO2005053603A2 (en) 2003-12-08 2005-06-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Antigen receptor variable region typing
US20080166718A1 (en) 2003-12-15 2008-07-10 Institut Pasteur Repertoire determination of a lymphocyte B population
US20070160994A1 (en) 2003-12-15 2007-07-12 Institut Pasteur Repertoire determination of a lymphocyte b population
DE60326052D1 (de) 2003-12-15 2009-03-19 Pasteur Institut Ermittlung des Repertoires von B-Lymphozyten Populationen
WO2006019407A2 (en) 2004-02-18 2006-02-23 The Trustees Of Boston University Method for detecting and quantifying rare mutations/polymorphisms
US20060046258A1 (en) 2004-02-27 2006-03-02 Lapidus Stanley N Applications of single molecule sequencing
WO2005084134A2 (en) 2004-03-04 2005-09-15 Dena Leshkowitz Quantifying and profiling antibody and t cell receptor gene expression
JP4480423B2 (ja) 2004-03-08 2010-06-16 独立行政法人科学技術振興機構 免疫細胞クローンの拡大の有無の判定方法
DE102004016437A1 (de) 2004-04-04 2005-10-20 Oligene Gmbh Verfahren zur Erkennung von Signaturen in komplexen Genexpressionsprofilen
WO2005111242A2 (en) 2004-05-10 2005-11-24 Parallele Bioscience, Inc. Digital profiling of polynucleotide populations
JP2007536939A (ja) 2004-05-14 2007-12-20 アモークス インコーポレーティッド 免疫細胞バイオセンサーおよびその使用方法
EP1598429A1 (en) 2004-05-19 2005-11-23 Amplion Ltd. Detection of amplicon contamination during PCR exhibiting two different annealing temperatures
GB0412973D0 (en) 2004-06-10 2004-07-14 Celltech R&D Ltd Identification of antibody producing cells
US20060020397A1 (en) 2004-07-21 2006-01-26 Kermani Bahram G Methods for nucleic acid and polypeptide similarity search employing content addressable memories
CN101087890A (zh) 2004-07-26 2007-12-12 帕拉列勒生物科学公司 多个基因组的同时分析
US20060094018A1 (en) 2004-08-03 2006-05-04 Bauer A R Jr Discovery and a method for the early detection of pancreatic cancer and other disease conditions
US7820382B2 (en) 2004-08-03 2010-10-26 Bauer A Robert Method for the early detection of breast cancer, lung cancer, pancreatic cancer and colon polyps, growths and cancers as well as other gastrointestinal disease conditions and the preoperative and postoperative monitoring of transplanted organs from the donor and in the recipient and their associated conditions related and unrelated to the organ transplantation
US7476724B2 (en) 2004-08-05 2009-01-13 Genentech, Inc. Humanized anti-cmet antibodies
US7915036B2 (en) 2004-09-13 2011-03-29 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Compositions comprising T cell receptors and methods of use thereof
US7170050B2 (en) 2004-09-17 2007-01-30 Pacific Biosciences Of California, Inc. Apparatus and methods for optical analysis of molecules
US8053235B2 (en) 2004-10-29 2011-11-08 Benaroya Research Institute At Virginia Mason Methods of generating antigen-specific CD4+CD25+regulatory T cells, compositions and methods of use
US7966988B2 (en) 2005-01-11 2011-06-28 Exxonmobil Research And Engineering Company Method for controlling soot induced lubricant viscosity increase
US8029783B2 (en) 2005-02-02 2011-10-04 Genentech, Inc. DR5 antibodies and articles of manufacture containing same
FR2881436B1 (fr) 2005-02-03 2007-04-27 Commissariat Energie Atomique Procede de determination de la diversite des lymphocytes t dans un echantillon biologique
US7393665B2 (en) 2005-02-10 2008-07-01 Population Genetics Technologies Ltd Methods and compositions for tagging and identifying polynucleotides
US20080280774A1 (en) 2005-02-16 2008-11-13 Wyeth Methods and Systems for Diagnosis, Prognosis and Selection of Treatment of Leukemia
US7537894B2 (en) 2005-03-02 2009-05-26 The University Of Chicago Methods and kits for monitoring Barrett's metaplasia
US20060216737A1 (en) 2005-03-10 2006-09-28 John Bodeau Methods for multiplex amplification
WO2006099604A2 (en) 2005-03-16 2006-09-21 Compass Genetics, Llc Methods and compositions for assay readouts on multiple analytical platforms
CA2604095A1 (en) * 2005-04-12 2006-10-19 454 Life Sciences Corporation Methods for determining sequence variants using ultra-deep sequencing
WO2006116155A2 (en) 2005-04-21 2006-11-02 The Regents Of The University Of California A method for diagnosis and prognosis of multiple sclerosis subtypes
US20060263789A1 (en) 2005-05-19 2006-11-23 Robert Kincaid Unique identifiers for indicating properties associated with entities to which they are attached, and methods for using
US7208795B2 (en) 2005-05-24 2007-04-24 Atmel Corporation Low-cost, low-voltage single-layer polycrystalline EEPROM memory cell integration into BiCMOS technology
US20090264299A1 (en) 2006-02-24 2009-10-22 Complete Genomics, Inc. High throughput genome sequencing on DNA arrays
CA2611671C (en) 2005-06-15 2013-10-08 Callida Genomics, Inc. Single molecule arrays for genetic and chemical analysis
WO2007008759A2 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Hematologics, Inc. Methods for detecting and confirming minimal disease in a cancer patient
US20070020640A1 (en) 2005-07-21 2007-01-25 Mccloskey Megan L Molecular encoding of nucleic acid templates for PCR and other forms of sequence analysis
GB0521521D0 (en) 2005-10-21 2005-11-30 Medical Res Council Diagnostic methods and kits
GB0522310D0 (en) * 2005-11-01 2005-12-07 Solexa Ltd Methods of preparing libraries of template polynucleotides
US20070105165A1 (en) 2005-11-04 2007-05-10 Charles Goolsby Composite profiles of cell antigens and target signal transduction proteins for analysis and clinical management of hematologic cancers
US7375211B2 (en) * 2005-11-18 2008-05-20 Kou Zhong C Method for detection and quantification of T-cell receptor Vβ repertoire
US8137936B2 (en) 2005-11-29 2012-03-20 Macevicz Stephen C Selected amplification of polynucleotides
EP1987162A4 (en) 2006-01-23 2009-11-25 Population Genetics Technologi NUCLEIC ACID ANALYSIS ABOUT SEQUENCE TOKENS
WO2007087312A2 (en) 2006-01-23 2007-08-02 Population Genetics Technologies Ltd. Molecular counting
MX2008011280A (es) 2006-03-06 2008-09-12 Symphogen As Anticuerpor policlonal recombinante para el tratamiento de infecciones por el virus sincitial respiratorio.
ES2546848T3 (es) 2006-03-10 2015-09-29 Epigenomics Ag Un método para identificar una muestra biológica para el análisis de la metilación
EP2963127B1 (en) 2006-04-04 2017-08-16 Keygene N.V. High throughput detection of molecular markers based on restriction fragments
CA2652086A1 (en) 2006-05-11 2007-11-22 University Of Maryland Biotechnology Institute A general method for generating human antibody responses in vitro
WO2007136518A2 (en) 2006-05-17 2007-11-29 Torrey Pines Institute For Molecular Studies Treatment of autoimmune disorders
WO2007139584A2 (en) 2006-05-25 2007-12-06 Institute For Advanced Study Methods for identifying sequence motifs, and applications thereof
US7833716B2 (en) 2006-06-06 2010-11-16 Gen-Probe Incorporated Tagged oligonucleotides and their use in nucleic acid amplification methods
JP2009539411A (ja) 2006-06-12 2009-11-19 パシフィック バイオサイエンシーズ オブ カリフォルニア， インコーポレイテッド 分析反応を行うための基板
US20100027896A1 (en) * 2006-06-28 2010-02-04 Amir Geva Automated application interaction using a virtual operator
CA2656525A1 (en) 2006-06-30 2008-01-10 Applera Corporation Reversible terminator nucleotides and methods of use
WO2008108803A2 (en) 2006-07-13 2008-09-12 Amaox, Ltd. Immune cell biosensors and methods of using same
US8394590B2 (en) 2006-08-02 2013-03-12 California Institute Of Technology Capture agents and related methods and systems for detecting and/or sorting targets
US20080274904A1 (en) 2006-08-10 2008-11-06 Niall Anthony Gormley Method of target enrichment
WO2008026927A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Academisch Medisch Centrum Process for displaying t- and b-cell receptor repertoires
US20100035764A1 (en) 2006-09-26 2010-02-11 St. Jude Children's Research Hospital Methods and compositions for monitoring t cell receptor diversity
WO2008039818A2 (en) 2006-09-26 2008-04-03 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Modified t cell receptors and related materials and methods
JP5026047B2 (ja) 2006-10-18 2012-09-12 株式会社膠原病研究所 自己免疫疾患の発症に関わる自己応答性ｔ細胞またはｔ細胞受容体の同定方法、およびその利用
EP2102367A2 (en) 2006-11-09 2009-09-23 XDX, Inc. Methods for diagnosing and monitoring the status of systemic lupus erythematosus
US8262900B2 (en) 2006-12-14 2012-09-11 Life Technologies Corporation Methods and apparatus for measuring analytes using large scale FET arrays
US7862999B2 (en) 2007-01-17 2011-01-04 Affymetrix, Inc. Multiplex targeted amplification using flap nuclease
PL2121920T3 (pl) 2007-03-01 2012-01-31 Symphogen As Sposób klonowania pokrewnych przeciwciał
WO2008147879A1 (en) 2007-05-22 2008-12-04 Ryan Golhar Automated method and device for dna isolation, sequence determination, and identification
WO2008150432A1 (en) 2007-06-01 2008-12-11 454 Life Sciences Corporation System and meth0d for identification of individual samples from a multiplex mixture
US8454906B2 (en) 2007-07-24 2013-06-04 The Regents Of The University Of California Microfabricated droplet generator for single molecule/cell genetic analysis in engineered monodispersed emulsions
US7901889B2 (en) 2007-07-26 2011-03-08 Pacific Biosciences Of California, Inc. Molecular redundant sequencing
ITRM20070429A1 (it) 2007-08-06 2009-02-07 Uni Cattolica Del Sacro Cuor E Mezzi per la diagnosi la prevenzione e la cura dell'artrite reumatoide.
CN104307581B (zh) 2007-08-09 2017-04-12 诺思可有限公司 关联的多参数单细胞测定及残余生物材料回收的方法和装置
US8268564B2 (en) 2007-09-26 2012-09-18 President And Fellows Of Harvard College Methods and applications for stitched DNA barcodes
US7960116B2 (en) 2007-09-28 2011-06-14 Pacific Biosciences Of California, Inc. Nucleic acid sequencing methods and systems
WO2009045898A2 (en) 2007-09-28 2009-04-09 Mayo Foundation For Medical Education And Research Assessing t cell repertoires
BRPI0820707A2 (pt) 2007-11-07 2015-06-16 Genentech Inc Métodos e composição para avaliar a responsividade do linfoma de células b para o tratamento com anticorpos anti-cd40
WO2009070767A2 (en) 2007-11-28 2009-06-04 Whitehead Institute For Biomedical Research Systemic instigation systems to study tumor growth or metastasis
EP2062982A1 (fr) 2007-11-26 2009-05-27 ImmunID Procédé d'étude de la diversité combinatoire V(D)J
CN101225441B (zh) 2007-12-05 2010-12-01 浙江大学 一种检测克隆特异性t淋巴细胞tcr bv cdr3基因组成的方法
US8621502B2 (en) 2007-12-21 2013-12-31 Microsoft Corporation Obtaining user reactions to video
US7767400B2 (en) 2008-02-03 2010-08-03 Helicos Biosciences Corporation Paired-end reads in sequencing by synthesis
EP2088432A1 (en) 2008-02-11 2009-08-12 MorphoSys AG Methods for identification of an antibody or a target
JP2011516033A (ja) 2008-02-28 2011-05-26 ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション 急性骨髄性性白血病（ａｍｌ）における細胞遺伝学および予後と関連するマイクロｒｎａシグネチャーおよびその使用
EP3112477A1 (en) 2008-02-28 2017-01-04 The Ohio State University Research Foundation Microrna-based methods and compositions for the diagnosis, prognosis and treatment of prostate related disorders
US20090226975A1 (en) 2008-03-10 2009-09-10 Illumina, Inc. Constant cluster seeding
TW200938840A (en) 2008-03-12 2009-09-16 Emo Biomedicine Corp A method for in vitro study of immune modulation using pig blood cell
EP2100970B1 (en) 2008-03-13 2017-05-10 National Institute of Immunology Ig genes specific oligonucleotides and uses thereof
EP3269824A1 (en) 2008-03-28 2018-01-17 Pacific Biosciences Of California, Inc. Compositions and methods for nucleic acid sequencing
ATE530497T1 (de) 2008-03-31 2011-11-15 Sony Deutschland Gmbh Verfahren zur herstellung einer membran mit konischer pore
EP2281065B1 (en) 2008-04-16 2015-09-09 HudsonAlpha Institute For Biotechnology Method for evaluating and comparing immunorepertoires
US8911948B2 (en) 2008-04-30 2014-12-16 Integrated Dna Technologies, Inc. RNase H-based assays utilizing modified RNA monomers
CN102171569A (zh) 2008-05-09 2011-08-31 杜克大学 检测和治疗癌症的自身抗体
US9068181B2 (en) 2008-05-23 2015-06-30 The General Hospital Corporation Microfluidic droplet encapsulation
DE102008025656B4 (de) 2008-05-28 2016-07-28 Genxpro Gmbh Verfahren zur quantitativen Analyse von Nukleinsäuren, Marker dafür und deren Verwendung
EP2297333B1 (en) 2008-05-30 2015-01-28 Massachusetts Institute of Technology Method for spatial separation and screening of cells
WO2009151628A2 (en) 2008-06-12 2009-12-17 Gov't Of The Usa, As Represented By The Secretary, Department Of Health Human Services Monitoring tcr-b to determine hiv therapy and disease progression
EA201170088A1 (ru) 2008-06-25 2011-10-31 Бейлор Рисёч Инститьют Транскрипционная сигнатура крови инфекции mycobacterium tuberculosis
US8394583B2 (en) 2008-07-24 2013-03-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System VH4 codon signature for multiple sclerosis
EP3629022A1 (en) 2008-07-25 2020-04-01 Richard W. Wagner Protein screening methods
CA3149293C (en) 2008-09-23 2023-09-12 Bio-Rad Laboratories, Inc. Droplet-based assay system
US9156010B2 (en) 2008-09-23 2015-10-13 Bio-Rad Laboratories, Inc. Droplet-based assay system
US8699361B2 (en) 2008-09-30 2014-04-15 Qualcomm Incorporated Out-of-synchronization handling method and apparatus
US8546128B2 (en) 2008-10-22 2013-10-01 Life Technologies Corporation Fluidics system for sequential delivery of reagents
US20100137143A1 (en) 2008-10-22 2010-06-03 Ion Torrent Systems Incorporated Methods and apparatus for measuring analytes
US9394567B2 (en) 2008-11-07 2016-07-19 Adaptive Biotechnologies Corporation Detection and quantification of sample contamination in immune repertoire analysis
US8691510B2 (en) 2008-11-07 2014-04-08 Sequenta, Inc. Sequence analysis of complex amplicons
US8628927B2 (en) 2008-11-07 2014-01-14 Sequenta, Inc. Monitoring health and disease status using clonotype profiles
US9506119B2 (en) 2008-11-07 2016-11-29 Adaptive Biotechnologies Corp. Method of sequence determination using sequence tags
US9528160B2 (en) 2008-11-07 2016-12-27 Adaptive Biotechnolgies Corp. Rare clonotypes and uses thereof
US9365901B2 (en) 2008-11-07 2016-06-14 Adaptive Biotechnologies Corp. Monitoring immunoglobulin heavy chain evolution in B-cell acute lymphoblastic leukemia
US8748103B2 (en) 2008-11-07 2014-06-10 Sequenta, Inc. Monitoring health and disease status using clonotype profiles
US20140234835A1 (en) 2008-11-07 2014-08-21 Sequenta, Inc. Rare clonotypes and uses thereof
EP3699296A1 (en) 2008-11-07 2020-08-26 Adaptive Biotechnologies Corporation Methods of monitoring conditions by sequence analysis
WO2010060051A2 (en) 2008-11-21 2010-05-27 Emory University Systems biology approach predicts the immunogenicity of vaccines
US8367330B2 (en) 2008-12-22 2013-02-05 Quest Diagnostics Investments Incorporated Methods for detecting TCR-gamma gene rearrangement
CN102272326B (zh) 2008-12-30 2014-11-12 森托科尔奥索生物科技公司 预测强直性脊柱炎患者对于抗TNFα抗体的临床反应的血清标记物
DK2387627T3 (en) 2009-01-15 2016-07-04 Adaptive Biotechnologies Corp Adaptive immunity profiling and methods for producing monoclonal antibodies
EP2389453B1 (en) 2009-01-20 2015-11-25 The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University Single cell gene expression for diagnosis, prognosis and identification of drug targets
US20100323348A1 (en) 2009-01-31 2010-12-23 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Methods and Compositions for Using Error-Detecting and/or Error-Correcting Barcodes in Nucleic Acid Amplification Process
US8574835B2 (en) 2009-05-29 2013-11-05 Life Technologies Corporation Scaffolded nucleic acid polymer particles and methods of making and using
US8673627B2 (en) 2009-05-29 2014-03-18 Life Technologies Corporation Apparatus and methods for performing electrochemical reactions
RU2539032C2 (ru) * 2009-06-25 2015-01-10 Фред Хатчинсон Кансэр Рисёч Сентер Способ измерения искусственного иммунитета
US20120058902A1 (en) * 2009-06-25 2012-03-08 Livingston Robert J Method of measuring adaptive immunity
JP5829606B2 (ja) 2009-06-29 2015-12-09 カリフォルニア・インスティテュート・オブ・テクノロジーＣａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｏｆｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 単一細胞からの未知の再配列されたｔ細胞受容体の単離
JP5926183B2 (ja) 2009-09-22 2016-05-25 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 疾患関連ｋｉｒハプロタイプの決定
US9043160B1 (en) 2009-11-09 2015-05-26 Sequenta, Inc. Method of determining clonotypes and clonotype profiles
US8835358B2 (en) 2009-12-15 2014-09-16 Cellular Research, Inc. Digital counting of individual molecules by stochastic attachment of diverse labels
US9315857B2 (en) 2009-12-15 2016-04-19 Cellular Research, Inc. Digital counting of individual molecules by stochastic attachment of diverse label-tags
US8545248B2 (en) 2010-01-07 2013-10-01 Life Technologies Corporation System to control fluid flow based on a leak detected by a sensor
KR101323827B1 (ko) 2010-01-08 2013-10-31 키스트 유럽 에프게엠베하 강직성척추염 진단용 프라이머 및 이를 이용한 강직성 척추염 진단 방법
GB201000375D0 (en) 2010-01-09 2010-02-24 Univ Cardiff T Cell clonotypes
WO2011106738A2 (en) 2010-02-25 2011-09-01 Fred Hutchinson Cancer Research Center Use of tcr clonotypes as biomarkers for disease
EP2367000A1 (en) 2010-03-04 2011-09-21 Charité Universitätsmedizin Berlin High throughput analysis of T-cell receptor repertoires
CA2798431C (en) 2010-05-06 2018-10-23 Sequenta, Inc. Monitoring health and disease status using clonotype profiles
US9234240B2 (en) 2010-05-07 2016-01-12 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Measurement and comparison of immune diversity by high-throughput sequencing
US20130123120A1 (en) 2010-05-18 2013-05-16 Natera, Inc. Highly Multiplex PCR Methods and Compositions
EP2580353B1 (en) 2010-06-11 2015-07-29 Life Technologies Corporation Alternative nucleotide flows in sequencing-by-synthesis methods
ES2690753T3 (es) 2010-09-21 2018-11-22 Agilent Technologies, Inc. Aumento de la confianza en las identificaciones de alelos con el recuento molecular
US9562897B2 (en) 2010-09-30 2017-02-07 Raindance Technologies, Inc. Sandwich assays in droplets
GB2512213B (en) 2010-10-08 2015-02-11 Harvard College High-throughput single cell barcoding
US10392726B2 (en) 2010-10-08 2019-08-27 President And Fellows Of Harvard College High-throughput immune sequencing
WO2012055929A1 (en) 2010-10-26 2012-05-03 Illumina, Inc. Sequencing methods
CA2821299C (en) 2010-11-05 2019-02-12 Frank J. Steemers Linking sequence reads using paired code tags
US9193997B2 (en) 2010-12-15 2015-11-24 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Measuring and monitoring of cell clonality
WO2012083225A2 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Gigagen, Inc. System and methods for massively parallel analysis of nycleic acids in single cells
US9594870B2 (en) 2010-12-29 2017-03-14 Life Technologies Corporation Time-warped background signal for sequencing-by-synthesis operations
US10146906B2 (en) 2010-12-30 2018-12-04 Life Technologies Corporation Models for analyzing data from sequencing-by-synthesis operations
US8759036B2 (en) 2011-03-21 2014-06-24 Affymetrix, Inc. Methods for synthesizing pools of probes
EP3246416B1 (en) 2011-04-15 2024-06-05 The Johns Hopkins University Safe sequencing system
RS64230B1 (sr) 2011-05-24 2023-06-30 BioNTech SE Individualizovane vakcine protiv kancera
US9834766B2 (en) 2011-09-02 2017-12-05 Atreca, Inc. DNA barcodes for multiplexed sequencing
US20140356339A1 (en) 2011-09-09 2014-12-04 Sequenta Inc. Sequence-based measures of immune response
US10385475B2 (en) 2011-09-12 2019-08-20 Adaptive Biotechnologies Corp. Random array sequencing of low-complexity libraries
US20140256592A1 (en) 2011-10-11 2014-09-11 Sequenta, Inc. Determining responsiveness of autoimmune patients to dmard treatment
US9279159B2 (en) 2011-10-21 2016-03-08 Adaptive Biotechnologies Corporation Quantification of adaptive immune cell genomes in a complex mixture of cells
WO2013066726A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Sequenta, Inc. T-cell receptor clonotypes shared among ankylosing spondylitis patients
US20140336059A1 (en) 2011-12-05 2014-11-13 Sequenta, Inc. Clonotypes as biometric specimen tags
EP3388535B1 (en) 2011-12-09 2021-03-24 Adaptive Biotechnologies Corporation Diagnosis of lymphoid malignancies and minimal residual disease detection
US20140342360A1 (en) 2011-12-09 2014-11-20 Sequenta, Inc. Method of measuring immune activation
US9499865B2 (en) 2011-12-13 2016-11-22 Adaptive Biotechnologies Corp. Detection and measurement of tissue-infiltrating lymphocytes
US20150031553A1 (en) 2011-12-13 2015-01-29 Sequenta, Inc. Method of measuring immune activation
JP2015504661A (ja) 2011-12-20 2015-02-16 シーケンタ インコーポレイテッド 免疫レパートリー解析による、濾胞性リンパ腫からびまん性大細胞型ｂ細胞リンパ腫への形質転換のモニタリング
US20150031555A1 (en) 2012-01-24 2015-01-29 Gigagen, Inc. Method for correction of bias in multiplexed amplification
US11177020B2 (en) 2012-02-27 2021-11-16 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and uses for molecular tags
WO2013131074A1 (en) 2012-03-02 2013-09-06 Diogenix, Inc. Methods and reagents for evaluating autoimmune disease and determining antibody repertoire
US20150038346A1 (en) 2012-03-05 2015-02-05 Sequenta, Inc. Monitoring immune responsiveness to cancer vaccination
WO2013134302A1 (en) 2012-03-05 2013-09-12 Sequenta, Inc. Monitoring immune responsiveness to cancer vaccination
US10077478B2 (en) 2012-03-05 2018-09-18 Adaptive Biotechnologies Corp. Determining paired immune receptor chains from frequency matched subunits
CA2869481A1 (en) 2012-04-13 2013-10-17 Sequenta, Inc. Detection and quantitation of sample contamination in immune repertoire analysis
WO2013158936A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Sequenta, Inc Monitoring immunoglobulin heavy chain evolution in b-cell acute lymphoblastic leukemia
US9150905B2 (en) 2012-05-08 2015-10-06 Adaptive Biotechnologies Corporation Compositions and method for measuring and calibrating amplification bias in multiplexed PCR reactions
WO2013181428A2 (en) 2012-05-31 2013-12-05 Sequenta, Inc. Predicting relapse of chronic lymphocytic leukemia patients treated by allogeneic stem cell transplantation
US20130324422A1 (en) 2012-06-04 2013-12-05 Sequenta, Inc. Detecting disease-correlated clonotypes from fixed samples
CN104520443A (zh) 2012-06-11 2015-04-15 赛昆塔公司 使用序列标签的序列确定方法
WO2013188831A1 (en) 2012-06-15 2013-12-19 Adaptive Biotechnologies Corporation Uniquely tagged rearranged adaptive immune receptor genes in a complex gene set
CN104540964A (zh) 2012-07-24 2015-04-22 赛昆塔公司 使用序列标签的单细胞分析
WO2014026031A1 (en) 2012-08-10 2014-02-13 Sequenta, Inc. High sensitivity mutation detection using sequence tags
CN114085896A (zh) 2012-09-24 2022-02-25 Cb生物技术公司 使用非干扰性噪音消除性多核苷酸鉴定标签的多重焦磷酸测序
US20150275308A1 (en) 2012-10-19 2015-10-01 Sequenta, Inc. Monitoring diffuse large b-cell lymphoma from peripheral blood samples
JP2015535178A (ja) 2012-10-19 2015-12-10 シーケンタ・インコーポレイテッド 末梢血における形質細胞増殖障害のクロノタイプのモニタリング
JP2015532123A (ja) 2012-10-22 2015-11-09 シーケンタ・インコーポレイテッド 免疫移植後の末梢血におけるマントル細胞リンパ腫のクローン型のモニタリング
CA2900240A1 (en) 2013-02-22 2014-08-28 Sequenta, Inc. Rare clonotypes and uses thereof
US20140255944A1 (en) 2013-03-08 2014-09-11 Sequenta, Inc. Monitoring treatment-resistant clones in lymphoid and myeloid neoplasms by relative levels of evolved clonotypes
US20140255929A1 (en) 2013-03-11 2014-09-11 Sequenta, Inc. Mosaic tags for labeling templates in large-scale amplifications
WO2014189635A1 (en) * 2013-05-20 2014-11-27 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Tracking donor-reactive tcr as a biomarker in transplantation
US9708657B2 (en) 2013-07-01 2017-07-18 Adaptive Biotechnologies Corp. Method for generating clonotype profiles using sequence tags
WO2015013461A2 (en) 2013-07-26 2015-01-29 Sequenta, Inc. Cancer vaccination with antigen evolution
US20160258025A1 (en) 2013-10-18 2016-09-08 The Regents Of The University Of California Predicting patient responsiveness to immune checkpoint inhibitors
US20150218656A1 (en) 2014-02-03 2015-08-06 Adaptive Biotechnologies Corp. Methods for detection and diagnosis of a lymphoid malignancy using high throughput sequencing
ES2777529T3 (es) 2014-04-17 2020-08-05 Adaptive Biotechnologies Corp Cuantificación de genomas de células inmunitarias adaptativas en una mezcla compleja de células
ES2784343T3 (es) 2014-10-29 2020-09-24 Adaptive Biotechnologies Corp Detección simultánea altamente multiplexada de ácidos nucleicos que codifican heterodímeros de receptores inmunes adaptativos emparejados de muchas muestras

Also Published As

Publication number Publication date
US20180073015A1 (en) 2018-03-15
WO2010151416A1 (en) 2010-12-29
EP3409792B1 (en) 2023-09-20
RU2014144463A (ru) 2015-06-20
US20140221220A1 (en) 2014-08-07
EP3409792A1 (en) 2018-12-05
US20140206549A1 (en) 2014-07-24
CN102459643B (zh) 2016-06-01
CN102459643A (zh) 2012-05-16
RU2012101828A (ru) 2013-07-27
IL217200A (en) 2016-02-29
US9809813B2 (en) 2017-11-07
US11905511B2 (en) 2024-02-20
US20180312832A1 (en) 2018-11-01
AU2010263172A1 (en) 2012-01-19
JP2016005469A (ja) 2016-01-14
CA2765949C (en) 2016-03-29
IL217200A0 (en) 2012-02-29
US20140194295A1 (en) 2014-07-10
SG10201403451QA (en) 2014-09-26
EP2446052B1 (en) 2018-08-08
SG176691A1 (en) 2012-01-30
AU2010263172B2 (en) 2016-03-31
US20160251721A1 (en) 2016-09-01
EP3409792C0 (en) 2023-09-20
JP6125578B2 (ja) 2017-05-10
US20140256567A1 (en) 2014-09-11
US20140213463A1 (en) 2014-07-31
US11214793B2 (en) 2022-01-04
EP2446052A1 (en) 2012-05-02
KR20140146180A (ko) 2014-12-24
US20100330571A1 (en) 2010-12-30
RU2539032C2 (ru) 2015-01-10
US20140206548A1 (en) 2014-07-24
JP2012531202A (ja) 2012-12-10
CA2765949A1 (en) 2010-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2010263172B2 (en) Method of measuring adaptive immunity
AU2020213348B2 (en) Uniquely tagged rearranged adaptive immune receptor genes in a complex gene set
KR101621643B1 (ko) 다중 pcr 반응에서 증폭 바이어스를 측정 및 교정하기 위한 조성물 및 방법
AU2012325791B2 (en) Quantification of adaptive immune cell genomes in a complex mixture of cells
US20170335386A1 (en) Method of measuring adaptive immunity
Kirsch et al. T-cell receptor profiling in cancer
ES2374954T3 (es) Variaciones genéticas asociadas con tumores.
KR20230146139A (ko) 암 유전자 및 항암제 대사 관련 유전자 변이 분석을 위한 차세대 염기 서열 분석(ngs) 기반 혼합 진단 패널
CN112301123A (zh) 一种用于50种遗传病单基因突变检测的试剂盒及其使用的探针组
JP2022544578A (ja) Ｔ細胞レパトアを決定するための標的ハイブリッドキャプチャー法
KR20150017525A (ko) 차세대 염기서열 분석법을 이용한 체성돌연변이 검출방법
HK1169147B (en) Method of measuring adaptive immunity
HK1169147A (en) Method of measuring adaptive immunity
Masqué Soler Gene expression profiling and immunoglobulin stereotypy in Burkitt lymphoma

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

Patent event date: 20111223

Patent event code: PA01051R01D

Comment text: International Patent Application

PG1501 Laying open of application
A201 Request for examination
PA0201 Request for examination

Patent event code: PA02012R01D

Patent event date: 20140314

Comment text: Request for Examination of Application

PA0302 Request for accelerated examination

Patent event date: 20140314

Patent event code: PA03022R01D

Comment text: Request for Accelerated Examination

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20140530

Patent event code: PE09021S01D

A107 Divisional application of patent
PA0104 Divisional application for international application

Comment text: Divisional Application for International Patent

Patent event code: PA01041R01D

Patent event date: 20141107

E90F Notification of reason for final refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Final Notice of Reason for Refusal

Patent event date: 20150202

Patent event code: PE09021S02D

E90F Notification of reason for final refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Final Notice of Reason for Refusal

Patent event date: 20150601

Patent event code: PE09021S02D

PE0601 Decision on rejection of patent

Patent event date: 20151130

Comment text: Decision to Refuse Application

Patent event code: PE06012S01D

Patent event date: 20150601

Comment text: Final Notice of Reason for Refusal

Patent event code: PE06011S02I

Patent event date: 20150202

Comment text: Final Notice of Reason for Refusal

Patent event code: PE06011S02I

Patent event date: 20140530

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event code: PE06011S01I