JP3266311B2 - 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗ｈｉｖ剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規ポリペプチド及び該
ポリペプチドを有効成分として含有する抗ＨＩＶ剤に関
する。更に詳しくはリポ多糖類、殊にエンドトキシンに
強い親和性を示し、改良された抗菌性、抗ウイルス性を
有する新規ポリペプチド並びにその製薬学的組成物に関
する。

【０００２】

【従来技術】従来、下記文献に示されるように、中村、
岩永、丹羽らによりカブトガニ由来のエンドトキシン親
和性を示すポリペプチド（タキプレシン、ポリフエムシ
ン）並びにこれらの薬学的性質が報告されている。

【０００３】（ｉ）Ｊ．Ｂiol ．Ｃhem.，２６３，１６
７０９〜１６７１３（１９８８） （ii）公表特許公報 平２−５００１９４ （iii ）Ｃhem ．Ｐharm．Ｂull ．３７，２６６１〜２
６６４（１９８９） （iv）特開平２−５３７９９号公報 （v ）特開平２−１５２９８７号公報 （vi）特開平２−１６７２３号公報 （vii ）Ｊ．Ｂiochem. ，１０６，６６３〜６６８（１
９８９） （viii）代謝、２６、３０１〜３１１（１９８９） （iX）ＦＥＢＳ Ｌett.，２５２，１２１〜１２４（１
９８９） （X) Ｊ．Ｂiochem. ，１０８，２６１〜２６６（１９
９０） （Xi）Ｊ．Ｂiol ．Ｃhem.，２６５，１５３６５〜１５
３６７（１９９０） （Xii ）Ｃhemotherapy ，３７，２０６〜２１１（１９
９１） （Xii ）Ｃhemotherapy ，３７，３２７〜３３４（１９
９１） カブトガニ（Ｔachypleus 属、Ｌimulus属並びにＣarci
noscorpius属）から分離されたエンドキシン親和性のポ
リペプチドは、知られている限り、５種類の構造類縁体
が存在し、そのいずれもが１７または１８個の天然アミ
ノ酸からなる環構造を有するポリペプチドである。また
これらポリペプチドは、いずれも極めて類似した性質を
示しており、このポリペプチドの存在は、カブトガニが
生きた化石として太古より今日まで、外界の環境の変化
に適応し、種の保存を可能とした鍵物質の１つとして興
味深いことである。

【０００４】一方、高度に分化したヒトの生存維持に関
し、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の感染により引き
起こされる後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の発症に
対し予防または治療効果の期待される薬剤が望まれてい
る。

【０００５】本発明者らは前記したカブトガニの強い種
の保存性に係わると予測されるエンドトキシン親和性ポ
リペプチドに着目し、該物質の構造変換と抗ヒト免疫不
全ウイルス（ＨＩＶ）活性の相関につき研究した結果、
カブトガニの既知エンドトキシン親和性ポリペプチドの
共通構造と基本的に異なる新規ポリペプチドを見出し、
驚くべきことに、この新規ポリペプチドはその抗ＨＩＶ
活性値が、既知エンドトキシン親和性ポリペプチドの値
と比較して少なくとも約５倍以上の優れた効果を有する
ことを確認した。

【０００６】

【発明の構成】本発明は、かかる知見に基いて到達され
たものであり、下記式（Ｉ）

【０００７】

【化３】

【０００８】［但し、式中Ａ1 は水素原子であるか或い
は、リジンおよびアルギニンから選ばれるアミノ酸の１
個または少なくとも２個を有するアミノ酸残基またはペ
プチド残基を示し、Ａ2 は独立してチロシン、フエニル
アラニンまたはトリプトフアン残基を示し、Ａ3 は独立
してアルギニンまたはリジン残基を示し、Ａ4 はリジン
およびアルギニンから選ばれるアミノ酸の１個または少
なくとも２個を有するアミノ酸残基またはペプチド残基
を示し、Ａ5 は−ＯＨ（カルボキシル基由来）または−
ＮＨ2 （酸アミド基由来）を示し、Ｃysはシステイン残
基を示し、Ｇlyはグリシン残基を示す；ここで３、７、
１２および１６位のシステイン残基は、３位と１６位で
ジスルフイド結合（−Ｓ−Ｓ−）により、および／また
は７位と１２位でジスルフイド結合により連結していて
もよい］で表わされる新規ポリペプチドである。

【０００９】この本発明の新規ポリペプチドは、前記カ
ブトガニ由来の既知のポリペプチドにおいては、共通し
て、タキプレシン類にあっては６位、ポリフェムシン類
にあっては７位のアミノ酸残基がバリン（Ｖal）残基で
あるのに対し、対応するこれらバリン残基とは全く性質
の異なる塩基性アミノ酸であるリジン（Ｌys）およびア
ルギニン（Ａrg）から選ばれるアミノ酸残基であること
が基本的に重要な特徴である。

【００１０】さらに、本発明の新規ポリペプチドは、そ
の１１位が芳香族アミノ酸であるチロシン（Ｔyr）、フ
エニルアラニン（Ｐhe）およびトリプトフアン（Ｔrp）
から選ばれるアミノ酸残基であり、タキプレシンの対応
する中性アミノ酸であるイソロイシン（Ｉle）と異なる
ことも重要な特徴である。

【００１１】以下さらに詳しく本発明の新規ポリペプチ
ドについて説明する。

【００１２】本発明の新規ポリペプチドは、それ自体公
知の方法、例えば固相合成法によって製造することがで
きる。すなわち１７位がアルギニン残基の場合、Ｎ- 保
護アルギニンのカルボキシル基を直接、或いは場合によ
りカルボキシル基と結合しうる官能基およびカルボキシ
ル基を有するスペーサーを介して、アミノ基を有する不
溶性樹脂に結合させて後、下記式（Ｉ）

【００１３】

【化４】

【００１４】［式中Ａ1 、Ａ2 、Ａ3 、Ａ4 、Ａ5、Ｃy
sおよびＧlyの定義は前記式（Ｉ）と同じ］で示される
アミノ酸配列の１６位から１位までの各保護アミノ酸を
固相合成法に従って順次結合し、次いで不溶性樹脂およ
びアミノ酸の保護基を脱離させて、直鎖状の前記式
［Ｉ］の本発明のポリペプチドを得ることができる。こ
の場合１７位のアミノ酸残基のカルボキシル末端はフリ
ー（Ａ5 が−ＯＨに相当）であるこ ともできるし、あ
るいは酸アミド（Ａ5 が−ＮＨ2 に相当）に変換するこ
ともできる。さらに得られたポリペプチドは、その３位
と１６位、７位と１２位の２対のシステインは、独立し
てメルカプト基を介してジスルフイド結合（−Ｓ−Ｓ
−）を形成することができる。

【００１５】これらのジスルフイド結合の形成は、例え
ば、空気酸化により２対とも、又はAtherton, E., ら；
J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, １９８５，２０６５
の方法に準じ、あらかじめ３位と１６位、７位と１２位
のいずれかの対のシステインのメルカプト基をt-BuS、 A
cmの保護基で選択的に保護し、t-BuS の脱保護、部分酸
化、次いでAcm を公知の方法に準じて脱保護するステツ
プを経て、いずれか一対のジスルフイド結合を形成する
ことができる。

【００１６】前記固相合成法に使用される各アミノ酸は
共通してＬ体であることもできるし、また共通してＤ体
であることもできる。

【００１７】本発明の新規ポリペプチドを合成する場合
に使用される前記のアミノ基を有する不溶性樹脂として
は、そのアミノ基を介してＣ末端のＮ- 保護アルギニン
のカルボキシル基又は場合によりこれに結合しているス
ペーサーのカルボキシル基と結合可能であり、かつ、そ
の後脱離可能なものであれば如何なるものでもよい。か
かる不溶性樹脂としては、例えば、アミノメチル樹脂
（アミノメチル化スチレン- ジビニルベンゼン共重合
体）、ベンズヒドリルアミン樹脂、メチルベンズヒドリ
ルアミン樹脂、アミノメチルフエノキシメチル樹脂及び
これらの誘導体等が挙げられる。ベンズヒドリルアミン
樹脂、メチルベンズヒドリルアミン樹脂、ジメトキシベ
ンズヒドリルアミン（ＤＭＢＨＡ）樹脂、アミノメチル
フエノキシメチル樹脂を用いれば開裂によって直接アミ
ドを与えるが、収率の点からはアミノメチル樹脂が好ま
しい。

【００１８】前述のカルボキシル基と結合しうる官能基
およびカルボキシル基を有するスペーサーとしては、例
えばアルギニンのカルボキシル基をp-カルボキシメチル
ベンジルエステルに変換しうるものが挙げられるが特に
制限はない。

【００１９】保護アミノ酸とは、官能基を公知の方法に
より保護基で保護したアミノ酸であり、各種の保護アミ
ノ酸が市販されている。本発明のポリペプチドを合成す
る場合には、以下に示す保護基のいずれかを選択するの
が好ましい。まず、アミノ酸のα-アミノ基の保護基は
Ｂoc（t-ブチルオキシカルボニル）又はＦmoc （９-フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル）である。アルギニ
ン（Ａrg）のグアニジノ基の保護基は、Ｔos（トシ
ル）、ＮＯ2（ニトロ）、Ｍtr（４- メトキシ- ２,３,
６- トリメチルベンゼンスルホニル）又はＰmc（２,
２, ５, ７, ８- ペンタメチルクロマン- ６- スルホニ
ル）である。システイン（Ｃys）のメルカプト基の保護
基としてはＢzl（ベンジル）、ＭＢzl（４- メトキシベ
ンジル）、４-Ｍe Ｂzl（４- メチルベンジル）、Ａcm
（アセタミドメチル）、Ｔrt（トリチル）、Ｎpys （３
- ニトロ- ２- ピリジンスルフエニル）、t-Ｂu （t-ブ
チル）、t-Ｂu Ｓ（t-ブチルチオ）が挙げられるが、Ｍ
Ｂzl、４- Ｍe Ｂzl、Ｔrt、Ａcm、Ｎpys が好ましい。
チロシン（Ｔyr）の水酸基の保護基は、Ｂzl、Ｃl2・Ｂ
zl（２, ６- ジクロロベンジル）、t-Ｂu であるか、あ
るいは保護しなくてもよい。リジン（Ｌys）のε- アミ
ノ基の保護基は、Ｚ（ベンジルオキシカルボニル）、Ｃ
l ・Ｚ（２- クロロベンジルオキシカルボニル）、Ｂo
c、Ｎpys である。各保護基は、ペプチドの合成条件に
応じ適当なものをそれ自体公知の中から選択することが
好ましい。

【００２０】保護アミノ酸の結合は、通常の縮合法、例
えば、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）法、
ＤＩＰＣＤＩ（ジイソプロピルカルボジイミド）法［Ｔ
artar 、Ａら；Ｊ．Ｏr g ．Ｃhem.，４４、５０００
（１９７９）］、活性エステル法、混合あるいは対称酸
無水物法、カルボニルジイミダゾール法、ＤＣＣ- ＨＯ
Ｂt（１-ヒドロキシベンゾトリアゾール）法［Ｋoeni
g、Ｗら；Ｃhem. Ｂer.，１０３、７８８、２０２４、
２０３４（１９７０）］、ジフエニルホスホリルアジド
法等に従って行なうことができるが、ＤＣＣ法、ＤＣＣ
- ＨＯＢt 法、ＤＩＰＣＤＩ- ＨＯＢt 法、対称酸無水
物法が好ましい。これらの縮合反応は、通常、ジクロロ
メタン、ジメチルホルムアミド等の有機溶媒又はそれら
の混合溶媒中で行なわれる。α- アミノ基の保護基の脱
離試薬としては、トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン、
ＨＣl ／ジオキサン、ピペリジン／ジメチルホルムアミ
ド等が用いられ、該保護基の種類により適宜選択する。
また、合成の各段階における縮合反応の進行の程度は
Ｅ．カイサーらの方法［Ａnal ．Ｂio chem.，３４，５
９５（１９７０）］（ニンヒドリン反応法）によって検
査される。

【００２１】以上のようにして、所望のアミノ酸配列を
有する保護ペプチド樹脂を得ることができる。

【００２２】不溶性樹脂としてアミノメチル樹脂誘導体
を用いた場合には、例えば適当な溶媒中においてアンモ
ニアで処理することにより該樹脂を脱離させることがで
きる。次いで、フッ化水素で処理することにより、前記
式で示される、全ての保護基が脱離したポリペプチドア
ミドが得られる。不溶性樹脂としてベンズヒドリルアミ
ン樹脂、メチルベンズヒドリルアミン樹脂、アミノメチ
ルフエノキシメチル樹脂、ＤＭＢＨＡ樹脂［Ｆunakosh
i、Ｓら；Ｊ．Ｃhem．Ｓoc.，Ｃhem．Ｃommun.,１９８
８、３８２］を用いた場合には、フッ化水素、ＴＦＭＳ
Ａ（トリフルオロメタンスルホン酸）［Ａcademic Ｐ
ress発行、Ｅ．Ｇross編集、Ｙajima ，Ｈら；“Ｔhe
Ｐeptides ”vol ５、p ６５（１９８３）］、ＴＭＳＯ
Ｔf （トリメチルシリルトリフラート）［Ｆujii、Ｎ
ら；Ｊ．Ｃhem ．Ｓoc.，Ｃhem ．Ｃommun.，１９８
７、２７４］またはＴＭＳＢr（トリメチルシリルブロ
ミド）［Ｆujii、Ｎら；Ｃhem．Ｐharm．Ｂull.，３
５、３８８０（１９８７）］などで処理することによ
り、該樹脂および保護基を同時に脱離させることができ
る。

【００２３】次いで、所望により、２- メルカプトエタ
ノール、ＤＴＴ（ジチオスライトール）などで還元する
ことによりシステインのメルカプト基が還元型となって
いることを確実ならしめた後、酸化処理することにより
本発明に属する環状ポリペプチドを得ることができる。

【００２４】この際の酸化処理は、公知の方法を用いる
ことができ、通常、大気中の酸素やフエリシアン酸塩
（例えば、フエリシアン化カリウム）のような酸化剤を
用いるかくして得られたポリペプチドは、ポリペプチド
のそれ自体知られた手段、例えば、抽出、再結晶、各種
クロマトグラフイー（ゲルろ過、イオン交換、分配、吸
着、逆相）、電気泳動、向流分配等により単離精製する
ことができるが、逆相高速液体クロマトグラフイーによ
る方法が最も効果的である。

【００２５】本発明の前記式（Ｉ）で示されるポリペプ
チドの具体例としては、下記（１）〜（３３）のものを
挙げることができる。

【００２６】下記（１）〜（３３）のポリペプチドにお
いて各記号は国際的に認められた三文字表示によるアミ
ノ酸残基を示す。すなわち各記号は下記アミノ酸の残基
を示す。

【００２７】Ａrg；アルギニン Ｔrp；トリプトフアン Ｃys；システイン Ｔyr；チロシン Ｌys；リジン Ｇly；グリシン Ｐhe；フエニルアラニン

【００２８】

【化５】

【００２９】本発明の、前記式（Ｉ）で示されるポリペ
プチドは、構成するアミノ酸の特徴から塩基性を示す故
に酸付加により塩を形成する。たとえば無機酸（塩酸、
臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸など）または有機カル
ボン酸（酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、コハク酸、
リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、サリチル酸、トリフルオ
ロ酢酸など）グルクロン酸、ガラクッロン酸、グルコン
酸、アスコルビン酸等の酸性糖、ヒアルロン酸、コンド
ロイチン硫酸塩類、アルギン酸等の酸性多糖、または有
機スルホン酸（メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホ
ン酸など）との塩を形成する。本発明の前記式（Ｉ）で
示されるポリペプチドは、これらの医薬として許容しう
る塩として用いることができる。

【００３０】本発明による抗ＨＩＶ剤は、有効成分とし
て、前記式（Ｉ）で示されるポリペプチドまたはその塩
と、薬剤の投与方法および投与形態に応じて選択された
薬学的に許容されうる担体とからなる医薬組成物として
調製される。すなわち、本発明の抗ＨＩＶ剤は、生体内
部ウイルス疾患あるいは、生体外部ウイルス感染部の治
療又は消毒対象に応じて、経口的にあるいは非経口的に
投与され、その投与方法に応じて適宜な薬物担体によ
り、粉末、顆粒、注射用もしくは内服用液剤、錠剤、座
剤、ペッサリー、軟膏、クリーム、エアゾールなどの製
剤として調製することができる。

【００３１】本発明の抗ＨＩＶ剤を、注射剤として直
接、生体に投与する場合には、本発明のポリペプチドま
たはその塩を、ヒト体重Ｋｇ／１日あたり１０mgないし
５０００mgあて生理食塩液に溶解し点滴静注により連続
的又は間欠的に投与することができる。

【００３２】このようにして得られる本発明の、前記一
般式（Ｉ）で示されるポリペプチドは、カブトガニ由来
の既知のポリペプチドと同様に、エンドトキシン結合
能、抗菌活性、エンドトキシン感作血球溶血性、抗ウイ
ルス活性を有しているが、殊にヒト免疫不全ウイルス
（ＨＩＶ）に対して良好な抗ウイルス活性を呈し、その
作用の程度は既知のポリペプチドの１種であるタキプレ
シンＩに比べて約４０倍〜約４０００倍の高い値を示
す。

【００３３】

【実施例】以下実施例を掲げて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれらより何ら限定を受けるもので
はない。

【００３４】なお以下の実施例において、使用された装
置および試薬は、下記のとおりである。

【００３５】ＨＰＬＣ装置：ウオーターズ社（米国）６
００型同装置のカラム：アサヒパックＯＤＰ- ９０（ア
サヒケミカル工業）Ｆmoc アミノ酸：国産化学製アミノ
樹脂および縮合剤：（株）ペプチド研究所製ＦＡＢ- Ｍ
Ｓ（ＦＡＢ- 質量分析機）：ＶＧ社（米国）、ＺＡＢ-
ＳＥ型 実施例１ 下記式のポリペプチド（１）の合成

【００３６】

【化６】

【００３７】上記式（１）中、Ａrg、Ｔrp、Ｃys、Ｔy
r、ＬysおよびＧlyは前記したアミノ酸残基を示し、３,
１６位および７, １２位Ｃｙｓ間の実線はジスルフイ
ド結合を示す。

【００３８】（１）アミノメチル樹脂へのＦmoc-ＤＭＢ
ＨＡ- ＣＨ2 ＣＨ2 ＣＯＯＨ（３- （α- Ｆmoc-アミノ
- ４- メトキシベンジル）- ４- メトキシフエニルプロ
ピオン酸の導入； アミノメチル樹脂（０. ７４meq ／
g ）２７０mg（０. ２mmole ）とＦmoc-ＤＭＢ ＨＡ-
ＣＨ2-ＣＨ2 ＣＯＯＨ（ＭＷ５３７）２６８. ５mg
（０. ５mmole 、２. ５eq）を固相合成用カラムに入れ
Ｇuo，Ｌ. らの方法［Ｃhem．Ｐharm．Ｂull.，３６、
４９８９（１９８８）］に従いＤＭＦ中ＤＩＰＣＤＩ-
ＨＯＢt 法により２時間縮合反応を行った。

【００３９】縮合反応終了後、フリーのアミノ基を保護
するための無水酢酸を用いてカップリングを行った（Ｄ
ＭＢＨＡ樹脂）。

【００４０】（２）ＤＭＢＨＡ樹脂への１７位アルギニ
ンの導入；（１）で調製したＤＭＢＨＡ樹脂のＦmoc 基
を２０％ピペリジン／ＤＭＦで除去後、ＤＭＢＨＡ樹脂
に対しＦmoc-Ａrg（Ｍtr）- ＯＨの２. ５eqを加えＤＭ
Ｆ中、ＤＩＰＣＤＩ- ＨＯＢt 法によって縮合反応を行
った。

【００４１】縮合反応の進行の程度はＫaiser 、Ｅ、ら
［Ａnal．Ｂiochem.，３４、５９５（１９７０）］のニ
ンヒドリンの試験により測定して行った。

【００４２】（３）１６位システインの導入；（２）で
調製したアルギニン導入ＤＭＢＨＡ樹脂のＦmoc 基を２
０％ピペリジン／ＤＭＦで除去後ＤＭＢＨＡ樹脂に対し
ＦmocＣys（ＭＢzl）- ＯＨの２.５eqを加え、ＤＭＦ中
ＤＩＰＣＤＩ- ＨＯＢt 法によって縮合反応を行った。
縮合反応の進行の程度は（２）と同様にニンヒドリン試
験により測定して行った。

【００４３】（４）１５位〜１位のアミノ酸の導入；以
下同様にしてＣ端アミノ酸からの配列に従い順次Ｌys
（Ｂoc）、Ａrg（Ｍtr）、Ｔyr（t Ｂu ）、Ｃys（ＭＢ
zl）、Ｔyr（t Ｂu ）、Ｇly、Ｌys（Ｂoc）、Ｔyr（t
Ｂu ）、Ｃys（ＭＢzl）、Ｌys（Ｂoc）、Ａrg（Ｍt
r）、Ｔyr（t Ｂu ）、Ｃys（ＭＢzl）、Ｔrp、Ａrg
（Ｍtr）、Ａrg（Ｍtr）残基をＤＭＢＨＡ樹脂に導入し
て保護基保護化ペプチド（１）- 樹脂を得た。

【００４４】なお、固相合成に於ける各アミノ酸縮合反
応は次表の操作条件に従って行った。

【００４５】

【表１】 （５）脱保護基並びに脱樹脂操作と部分精製によるペプ
チド（１）の調製；前記（１）〜（４）の操作を経て調
製した保護基保護化ペプチド（１）樹脂は、２０％ピペ
リジン／ＤＭＦ処理によりＦmoc 基を除去し、次いで該
樹脂１００mg当り１Ｍ- ＴＭＳＯＴf-チオアニソール／
ＴＦＡ系（ｍ- クレゾール（１００eq）、エタンジチオ
ール（３００eq）の存在するトリフルオロ酢酸１０ml）
で２５℃２時間反応させた。反応混合液から樹脂を濾別
し、トリフルオロ酢酸１mlにて２回洗浄し、濾液、洗液
を合せたものに氷冷乾燥エーテル１００mlを加え、生じ
た沈殿物を遠心し、残渣をデカンテーションにより上清
から分離した。得られた残渣を、冷エーテルで洗浄後４
Ｎ ＡｃＯＨ １０mlに溶解し８３０mg、８０eqのジチ
オスライトールを加え、室温で一夜撹拌した。

【００４６】反応液を遠心し、上清をＳephadex Ｇ-１
０（３.７×５０cm）で処理し、４ＮＡｃＯＨでゲル濾
過し、素通り画分である主溶出部分を集め、凍結乾燥し
て粉末状の部分精製未環化ポリペプチド（１）を得た。

【００４７】（６）空気酸化によるポリペプチド（１）
の調製：一方、Ｓephadex ゲル濾過素通り画分の１／２
量を濃アンモニア水にてp Ｈ７. ５に調整し、通気によ
り空気酸化を行い環化反応を行った。空気酸化終了後環
化ペプチド（１）をダイアイオンＨＰ- ２０樹脂１０g
に吸着せしめ、次いで６０％ＣＨ3 ＣＮ（in １Ｎ Ａ
ｃＯＨ）を用いて脱着溶出し、該溶出液を室温下減圧
濃縮してＣＨ3 ＣＮを除去し、さらに凍結乾燥により粉
末化した。該粉末を少量 の水に溶解し、その溶液をア
サヒパックＯＤＰ- ９０カラムにかけ、ＣＨ3 ＣＮのグ
ラデイエント溶出による高速液体クロマトグラフイー
（ウオーターズ社製ＨＰＬＣ−６００型）で精製し単一
ピークのペプチド（１）を２７％の収率（保護基保護化
ペプチド（１）樹脂から計算した値）で得た。

【００４８】（７）ポリペプチドの分析；前記（６）で
精製されたポリペプチドのロイシンアミノペプチダーゼ
消化によるアミノ酸組成値は、前記式（１）のアミノ酸
配列による組成の計算値とよく一致した。

【００４９】またＦＡＢ- ＭＳによる分子量値は（Ｍ＋
Ｈ+）の計算値２４８７.０２に対し実測値は２４８８.
０６であった。

【００５０】得られたポリペプチドの比旋光度［α］²⁰
_Dは＋８. ４°（Ｃ＝０. １、１Ｎ酢酸）であった。

【００５１】実施例２および比較例１、２ ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する抗ウイルス作
用 実施例１により合成したポリペプチド（１）のＨＩ
Ｖに対する抗ウイルス作用を以下の方法に従い試験し判
定した。

【００５２】９６穴マイクロタイタープレートに、種々
の濃度の試験物質と共にＨＩＶ感染ＭＴ−４細胞（２.
５×１０4 個／穴(well)、感染多重度（ＭＯＩ）：０.
００１）を感染直後に加える。ＣＯ2 インキユベーター
中、３７℃で５日間培養した後、 生存細胞数をＭＴＴ
法[ Ｐauwelsら; Ｊ. Ｖivol Ｍethods ２０，３０９
〜３２ １（１９８８）］で測定する。抗ウイルス活性
は、ＨＩＶ感染による細胞障害を５０％抑制する濃度
（ＥＣ50：５０％ effective concentration)で表わ
す。一方、試験物質のＭＴ−４細胞に対する細胞毒性を
知るために、ウイルス非感染細胞を上と同様に、種々の
濃度の試験物質と共に培養を行う。細胞毒性は試験物質
による５０％細胞障害濃度（ＣＣ50：５０％ cytotoxi
c concentration)で表わす。また、ＣＣ50とＥＣ50の概
略比（ＣＣ50／ＥＣ50）を有効率（ＳＩ）として表わし
た。

【００５３】ポリペプチド（１）および比較のために用
いたペプチド系抗ウイルス剤であるタキプレシンＩおよ
びアジドチミジンのＥＣ50とＣＣ50の値を示す。

【００５４】

【表２】 上記表から明らかなように先に抗ＨＩＶ作用が明らかと
なつているタキプレシンＩに比べて本発明のポリペプチ
ド（１）は細胞毒性が同等であるものの１／４５２５の
濃度で抗ウイルス作用を示した。アジドチミジンに比べ
るとＥＣ50は高濃度であるもののＣＣ50は約７倍で、細
胞毒性は低い。

【００５５】実施例３ 実施例１に準じて調製して得た本発明のポリペプチド各
種の構造式、物性及び実施例２に準じて試験し判定した
ＨＩＶに対する抗ウイルス作用を表に示す。

【００５６】

【表３】

【００５７】但し、上記表中の本実施例の化合物は、特
に表示しない限り３、７、１２、１６位のＣysは、３／
１６位、７／１２位間でジスルフイド結合により連結し
ていることを示す。

【００５８】また、上記表中“ＡＺＴ”はアジドチミジ
ン（一般名ジドブジン）を示す。

【００５９】

【発明の効果】本発明によれば、ヒト免疫不全ウイルス
（ＨＩＶ）に対する抗ウイルス作用を有する新規ポリペ
プチドを提供できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図面は、本発明の新規ポリペプチドを合成する
ための工程概略図の１例を示すものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07K 7/00 - 7/28 A61K 38/03 - 38/11 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式（Ｉ） 【化１】 ［但し、式中Ａ1 は水素原子であるか或いは、リジンお
   よびアルギニンから選ばれるアミノ酸の１個または少な
   くとも２個を有するアミノ酸残基またはペプチド残基を
   示し、 Ａ2 は独立してチロシン、フエニルアラニンまたはトリ
   プトフアン残基を示し、 Ａ3 は独立してアルギニンまたはリジン残基を示し、 Ａ4 はリジンおよびアルギニンから選ばれるアミノ酸の
   １個または少なくとも２個を有するアミノ酸残基または
   ペプチド残基を示し、 Ａ5 は−ＯＨ（カルボキシル基由来）または−ＮＨ2
   （酸アミド基由来）を示し、 Ｃｙｓはシステイン残基を示し、 Ｇｌｙはグリシン残基を示す；ここで３、７、１２およ
   び１６位のシステイン残基は、３位と１６位でジスルフ
   イド結合（−Ｓ−Ｓ−）により、および／または７位と
   １２位でジスルフイド結合により連結していてもよい］
   で表わされる新規ポリペプチド。
2. 【請求項２】 下記式（Ｉ） 【化２】 ［但し、式中Ａ1 は水素原子であるか或いは、リジンお
   よびアルギニンから選ばれるアミノ酸の１個または少な
   くとも２個を有するアミノ酸残基またはペプチド残基を
   示し、 Ａ2 は独立してチロシン、フエニルアラニンまたはトリ
   プトフアン残基を示し、 Ａ3 は独立してアルギニンまたはリジン残基を示し、 Ａ4 はリジンおよびアルギニンから選ばれるアミノ酸の
   １個または少なくとも２個を有するアミノ酸残基または
   ペプチド残基を示し、 Ａ5 は−ＯＨ（カルボキシル基由来）または−ＮＨ2
   （酸アミド基由来）を示し、 Ｃｙｓはシステイン残基を示し、 Ｇｌｙはグリシン残基を示す；ここで３、７、１２およ
   び１６位のシステイン残基は、３位と１６位でジスルフ
   イド結合（−Ｓ−Ｓ−）により、および／または７位と
   １２位でジスルフイド結合により連結していてもよい］
   で表わされる新規ポリペプチドまたはその医薬として許
   容される塩を有効成分として含有する抗ＨＩＶ剤。