KR20000030002A - 트롬빈억제제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화학식 I의 화합물, 또한 이 화합물의 제조에 관한 것이다. 이 물질은 질병의 치료에 사용될 수 있다.

＜화학식 I＞

상기 식에서 A, B, E 및 D는 명세서에서 나타낸 의미를 나타낸 의미를 가진다.

Description

트롬빈 억제제 {Thrombin Inhibitors}

본 발명은 신규 5-원 헤테로시클릭 아미딘, 이들의 제조 방법, 및 트립신형 세린 프로테아제, 특히 트롬빈 및 키니노게나제 (예, 칼라크레인)의 경쟁적 억제제로서 이들의 용도에 관한 것이다. 또한 본 발명은 활성 성분으로서 본 발명의 화합물을 함유하는 제약 조성물, 및 트롬빈 억제제, 항응고제 및 항염증제로서 본 화합물의 용도에 관한 것이다.

트롬빈은 세린 프로테아제의 일종이고 혈액 응고 캐스케이드에서 종말 효소로서 중요한 역할을 한다. 내인성 및 외인성 응고 캐스케이드는 모두 다수의 증폭 단계를 거쳐 프로트롬빈으로부터 트롬빈의 생산을 유도한다. 트롬빈이 촉매 작용하여 피브리노겐을 피브린으로 절단하면 혈액 응고 및 혈소판의 응집이 개시되고, 이것은 다시 혈소판 인자 3과 응고 인자 XIII의 결합 및 고도로 활성인 다수의 매개체로 인해 트롬빈 형성을 증진한다.

트롬빈의 형성 및 작용은 백색, 동맥 혈전 및 적색, 정맥 혈전의 형성에 중심 사건이므로, 약물의 효과적인 공략 대상이 될 수도 있다. 헤파린과는 반대로, 트롬빈 억제제는 조인자에 대해 독립적으로 유리 트롬빈과 혈소판에 결합된 트롬빈의 작용을 동시에 완전히 억제할 수 있다. 이들은 경피적경혈관관상동맥확장술 (PTCA) 및 용해 후의 급성 혈전색전 발생을 방지할 수 있고, 체외 순환 (인공 심폐 장치, 혈액 투석)에서 항응고제로 작용할 수 있다. 이들은 또한 일반적으로 혈전증의 예방, 예를 들면 외과 수술 후의 혈전증의 예방에 사용될 수 있다.

합성 아르기닌 유도체가 프로테아제 트롬빈의 활성 세린 잔기와 상호 작용하여 트롬빈의 효소적 활성에 영향을 끼친다는 것은 알려져 있다. N-말단 아미노산이 D형인 Phe-Pro-Arg 기재의 펩티드가 특히 유익한 것으로 증명되었다. D-Phe-Pro-Arg 이소프로필 에스테르가 경쟁적인 트롬빈 억제제로서 기재되어 있다 (문헌 [C.Mattson et al., Folia Haematol, 109 (1983) 43-51]을 참조).

아르기닌을 C-말단에서 알데히드로 유도체화하면 억제 효과가 향상된다. 따라서, 다수의 아르기날이 "활성" 세린의 히드록실기에 헤미아세탈 형태로 결합할 수 있다는 것이 문헌 [유럽 특허 제185390호, 동 제479489호, 동 제526877호, 동 제542525호, 국제 특허 공개 제93/15756호, 동 제93/18060호]에 기재되어 있다.

펩티드 케톤, 플루오로화된 알킬 케톤 및 케토 에스테르, 붕산 유도체, 포스포릭 에스테르 및 α-케토 카르복사미드의 트롬빈-억제 활성도 마찬가지로 이러한 세린 상호작용에 의해 설명될 수 있다 (문헌 [유럽 특허 제118280호, 동 제195212호, 동 제362002호, 동 제364344호, 동 제410411호, 동 제471651호, 동 제589741호, 동 제293881호, 동 제503203호, 동 제504064호, 동 제530167호, 국제 특허 공개 제92/07869호, 동 제94/08941호]을 참조).

문헌 [J.Oleksyszyn et al., in J. Med. Chem. 37(1994) 226-231]에 기재되어 있는 펩티드-4-아미디노페닐글리신포스포네이트 디페닐 에스테르들은 다른 세린 프로테아제에 대해서 부적절한 선택성을 가지는 비가역적 트롬빈 억제제이다.

독일 특허 제3 108 810호, 국제 특허 공개 제93/11152호 및 유럽 특허 제601 459호는 세린 프로테아제 중의 활성 세린과 상호작용할 수 없는 아그마틴 및 아르기닌 유도체를 기재한다.

국제 특허 공개 제94/29336호, 유럽 특허 제0 601 459호 및 국제 특허 95/23609호는 아그마틴이 아릴아미딘 잔기에 의해 치환된 화합물을 개시한다.

키니노게나제는 키닌 (브라디키닌, 칼리딘 및 Met-Lys-브라디키닌)이라 불리는 혈관작용성 펩티드를 키니노겐으로부터 유리하는 세린 프로테아제이다. 키니노겐은 응고 및 염증 캐스케이드 반응에 관여하는 다기능 단백질이다. 억제제로서, 이들은 세포들을 시스테인 프로테아제에 의한 손상으로부터 보호한다 (문헌 [Mueller Esterl, FEBS Lett. 182 (1985) 310-314]을 참조). 중요한 키니노게나제는 혈장 칼리크레인, 조직 칼리크레인 및 비만세포 트립타제이다.

브라디키닌 및 칼리딘과 같은 키닌은 다수의 생물학적 과정에 영향을 끼치는 혈관작용성 펩티드이다. 이들은 염증 반응에서 필수적인 역할을 한다. 혈관 투과성을 증가시킴으로써, 고혈압 및 부종을 일으킨다. 더욱이, 이들은 아주 강력한 통증 유발성 제산제이고 천식, 알러지성 비염 및 관절염의 병리학에서 세포의 매개물로 아주 중요하다 (문헌 [K.D. Bhoola, C.D. Figueroa, K. Worthy, Pharmacological Revies 44 (1) (1992) 1-80]을 참조).

염증 반응의 기초가 되는 메카니즘이 어떠하든, 순환하는 혈액 중의 모든 단백질계를 함유하는 유체는 혈관으로부터 배출된다. 이는 혈관으로부터 혈장액의 배출이 천식, 비염 및 염증성 내과적 질환과 같은 질병에 관련된다는 것을 의미한다. 더욱이, 비만세포 트립타제는 특히 알러지 반응에서 방출된다 (문헌 [Salomonsson et al., Am. Rev. Respir. Dis. 146 (1992) 1535-1542]을 참조).

아르기닌 클로로메틸 케톤 H-(D)-Pro-Phe-Arg-CH₂Cl 및 H-(D)-Phe-Phe-Arg-CH₂-Cl은 케트너 (Kettner) 및 쇼 (Shaw)의 문헌 [Biochem. 17 (1978) 4778-4784 및 Meth. Enzym. 80 (1981) 826-842]에 혈장 칼리크레인 억제제로서 기재되어 있다.

벤즈아미딘 및 벤질아민의 각종 합성 유도체들이 상당히 강력한 억제 효과를 가지는 벤즈아미딘과 함께 혈장 칼리크레인의 억제제인 것으로 증명되었다 (문헌 [F. Markward, S. Drawert, P. Walsmann, Biochemical Pharmacology 23 (1974) 2247-2256]을 참조).

N-(트랜스-4-아미노메틸시클로헥실-카르보닐)-L-페닐알라닌-4-카르복시메틸아닐리드의 히드로클로라이드인 PKSI-527도 또한 키니노게나제의 효과적인 억제제이다 (문헌 [Wanaka, Ohamoto et al., Thromb. Res., 57 (6) (1990) 889-895]을 참조).

본 발명은 화학식 I의 화합물 및 그의 생리학상 허용되는 산염에 관한 것이다.

상기 식에서,

A는

(여기서, m은 0, 1 또는 2이고,

n은 0, 1 또는 2이고,

R¹은 HOOC-, C_1-6-알킬-OOC-, 아릴-OOC 또는 -OH이고,

R²는 H, C_1-4-알킬 또는 R¹-(CH₂)_m-이고,

R³은 H 또는 C_1-4-알킬임)이고,

B는

(여기서, R⁴는 H, C_1-4-알킬 또는 R¹-(CH₂)_m- (여기서, R¹및 m은 앞서 정의된 것과 같음)이고,

p는 0 또는 1이고,

R⁵는 H 또는 C_1-4-알킬이고,

R⁶은 H, C_1-8-알킬이거나, C_1-4-알킬, CF₃, C_1-4-알콕시, F 및 Cl의 군으로부터 선택된 3개 이하의 동일하거나 상이한 라디칼로 치환될 수 있는 페닐, 또는 4개 이하의 동일하거나 상이한 C_1-4-알킬을 담지할 수 있는 C_3-8-시클로알킬이고, 여기서 고리 중의 1 또는 2개의 C-C 단일 결합이 C=C 이중 결합으로 치환될 수 있거나, 페닐 고리가 C₇-C₁₂-비시클로-알킬 또는 C₁₀-트리시클로알킬 상에서 융합될 수 있거나,

R⁴와 R⁶이 함께 에틸렌 또는 프로필렌기이고,

R⁷은 H, C_1-8-알킬이거나, C_1-4-알킬, CF₃, C_1-4-알콕시, F 및 Cl의 군으로부터 선택된 3개 이하의 동일하거나 상이한 라디칼을 담지할 수 있는 페닐, 또는 4개 이하의 동일하거나 상이한 C_1-4-알킬을 담지할 수 있는 C_3-8-시클로알킬이고,

R⁸은 H 또는 C_1-4-알킬임)이고,

E는

(여기서, q는 0 또는 1임)이고,

D는

(여기서, R⁹는 H 또는 C_1-3-알킬이고,

R¹⁰은 H 또는 C_1-4-알킬이고,

R¹¹은 H 또는 C_1-4-알킬이고,

X는 O, S, -NR¹²(R¹²은 H, C_1-6-알킬)이고,

Y는 -N= 또는 -CR¹³= (R¹³은 H, C_1-4-알킬, Cl, CF₃)이고,

Z는 -N= 또는 -CR¹³= 임)이다.

B로 대표되는 아미노산 유도체들은 D형이고, 3,4-디히드로프롤린 및 4,5-디히드로피페콜산은 L형이다.

바람직한 화학식 I의 화합물들은

A가 HOOC-(CH₂)_t- (t=1, 2 또는 3), (HOOC-CH₂)₂-CH-, (HO-CH₂)₂CH-, HOOC-CH₂-CH(COOH)-, HOOC-CH(CH₂-CH₂-OH)-, HOOC-CH(C_1-4-알킬)-, HOOC-C(C_1-4-알킬)₂-, C_1-4-알킬-OOC-(CH₂)_t-이고,

B가

(여기서, P는 0 또는 1이고,

R⁴는 H, C_1-4-알킬 또는 HOOC-(CH₂)_m- (m은 1, 2 또는 3)이고,

R⁵는 H 또는 메틸이고,

R⁶은 H, C_1-8-알킬이거나, CH₃, CF₃, CH₃-O, F 및 Cl의 군으로부터 선택된 3개 이하의 동일하거나 상이한 라디칼을 담지할 수 있는 페닐, 또는 4개 이하의 메틸 라디칼, 1,4-시클로헥사디에닐, 비시클로[2.2.2]옥틸, 비시클로[2.2.1]헵틸, 노르보르닐, 아다만틸, 인다닐 또는 데칼리닐을 담지할 수 있는 C_3-8-시클로알킬이고,

R⁷은 H, C_1-8-알킬이거나, CH₃, CF₃, CH₃O, F 또는 Cl의 군으로부터 선택된 3개 이하의 동일하거나 상이한 라디칼을 담지할 수 있는 페닐, 또는 4개 이하의 메틸 라디칼을 담지할 수 있는 C_3-8-시클로알킬이고,

R⁸은 H 또는 C_1-4-알킬이고 (B는 바람직하게는 D형임),

E (바람직하게는 L형)가

(여기서, q는 0 또는 1임)이고,

D는

X가 S, O, NH, NCH₃, NC₂H₅,

Y가 CH, C-CH₃, C-Cl, C-CF₃및

Z가 CH, C-CH₃, C-Cl, C-CF₃이거나,

X가 S, O, NH, N-CH₃, Y가 N, Z가 CH, C-CH₃, C-CF₃이거나,

X가 S, O, NH, N-CH₃, Y가 CH, C-CH₃, C-CF₃, Z가 N이거나,

X가 S, O, NH, N-CH₃, Y가 N, Z가 N인 화학식

,

X가 S, O, NH, NCH₃, NC₂H₅,

Y가 CH, C-CH₃, C-CF₃및

Z가 CH, C-CH₃, C-CF₃, C-Cl이거나,

X가 O, NH, NCH₃, Y가 N, Z가 CH, C-CH₃, C-CF₃이거나,

X가 O, S, NH, NCH₃, Y가 CH, C-CH₃, C-CF₃, Z가 N이거나,

X가 O, S, NH, NCH₃, Y 및 Z가 N인 화학식

,

X가 S, O, NH, NCH₃, NC₂H₅,

Y가 CH, C-CH₃, C-CF₃및

Z가 CH, C-CH₃, C-CF₃, C-Cl이거나,

X가 O, NH, NCH₃, Y가 N, Z가 CH, C-CH₃, C-CF₃, C-Cl이거나,

X가 O, S, NH, NCH₃, Y가 CH, C-CH₃, C-CF₃, Z가 N이거나,

X가 O, NH, NCH₃, Y 및 Z가 N인 화학식

의 화합물들이다.

특히 바람직한 화학식 I의 화합물들은

A가 HOOC-CH₂, HOOC-CH₂-CH₂, HOOC-CH(CH₃), HOOC-CH(C₂H₅)이고,

B가

(여기서, p는 0 또는 1이고,

R⁴는 H, CH₃이고,

R⁵는 H, CH₃이고,

R⁶은 C_1-8-알킬, 4개 이하의 메틸 라디칼을 담지할 수 있는 C_5-8-시클로알킬, 비시클로[2.2.2]옥틸, 비시클로[2.2.1]헵틸, 노르보르닐, 아다만틸, 인다닐, 및 시클로펜틸, 시클로헥실 및 특히 바람직하게는 시클로헵틸을 가진 데칼리닐이고,

R⁷이 H, CH₃이고,

R⁸이 H, CH₃임)이고,

E가

(여기서, q는 0, 1임)이고,

D가

R¹⁴가 H, CH₃, Cl, CF₃, 바람직하게는 H이고,

R¹⁵가 H, Cl, CF₃, 바람직하게는 H이고,

R¹⁶이 H, CH₃, C₂H₅, 바람직하게는 CH₃이고,

R¹⁷이 H, CH₃, CF₃, 바람직하게는 H, CH₃인

인 화합물들이다

특히 아래의 물질들이 바람직하다.

약어 목록:

Adaala: 아다만틸알라닌

Adagly: 아다만틸글리신

AIBN: 아조비스이소부티로니트릴

Ac: 아세틸

Ala: 알라닌

am: 아미디노

Asp: 아스파르트산

Aze: 아제티딘카르복실산

Bn: 벤질

Boc: t-부틸옥시카르보닐

Bu: 부틸

Cbz: 벤질옥시카르보닐

Cha: 시클로헥실알라닌

Chea: 시클로헵틸알라닌

Cheg: 시클로헵틸글리신

Chg: 시클로헥실글리신

Cog: 시클로옥틸글리신

Cpa: 시클로펜틸알라닌

Cpg: 시클로펜틸글리신

DCC: 디시클로헥실카르보디이미드

Dch: 디시클로헥실알라닌

Dcha: 디시클로헥실아민

DCM: 디클로로메탄

Dep: 4,5-디히드로피페콜산

DMF: 디메틸포름아미드

DIPEA: 디이소프로필에틸아민

Dpa: 디페닐알라닌

Diphe: 2,5-디히드로페닐알라닌

Et: 에틸

Eq: 등가물

fur: 푸란

Gly: 글리신

ham: 히드록시아미디노

HOSucc: 히드록시숙신이미드

HPLC: 고성능 액상 크로마토그래피

Hyp: 히드록시프롤린

iPi: 이미다졸

2-Ind: 2-디히드로인돌카르복실산

ipr: 이소-프로필

Leu: 류신

Me: 메틸

α-MeCha: α-메틸시클로헥실알라닌

ββ-Me₂Cha: 2-아미노-3-시클로헥실-3-메틸부티르산 또는 ββ-디메틸시클로헥실알라닌

4-MeCha: (4-메틸-1-시클로헥실)알라닌

γ-MeCha: (1-메틸-1-시클로헥실)알라닌

3,3-Me₂Cha: (3,3-디메틸-1-시클로헥실)알라닌

4-MeChg: (4-메틸-1-시클로헥실)글리신

3,3-Me₂Chg: (3,3-디메틸-1-시클로헥실)글리신

MPLC: 중간 압력 액상 크로마토그래피

MTBE: 메틸 t-부틸 에테르

NBS: N-브로모숙신이미드

Nog: 노르보르닐글리신

Oxadiaz: 1,2,4-옥사디아졸

Oxaz: 옥사졸

Ph: 페닐

Phe: 페닐알라닌

2Phi: 2-퍼히드로인돌카르복실산

Pic: 피페콜산

pico: 피콜릴

pim: 피페리디닐메틸

PPA: 프로필포스폰산 무수물

Pro: 프롤린

Py: 피리딘

Pyr: 3,4-디히드로프롤린

pyraz: 피라졸

pyrr: 피롤

RT: 실온

RP-18: 역상 C-18

t: 3급

tBu: 3급 부틸

tert: 3급

TBAB: t-부틸암모늄 브로마이드

TEA: 트리에틸아민

TFA: 트리플루오로아세트산

TFFA: 트리플루오로아세트산 무수물

TLC: 박층 크로마토그래피

thiaz: 티아졸

thioph: 티오펜

1Tic: 1-테트라히드로이소퀴놀린카르복실산

3Tic: 3-테트라히드로이소퀴놀린카르복실산

TOTU: [O-(시아노에톡시카르보닐에틸렌)아미노]-N,N,N',N'-테트라메틸우라늄 테트라플루오로보레이트

triaz: 1,3,4-트리아졸

Z: 벤질옥시카르보닐.

본 발명은 구조원(여기서, E 및 D는 앞서 언급된 의미를 가지고, E의 질소 원자 상에 수소 원자, 보호기, 치환되지 않았거나 치환된 천연 또는 비천연 아미노산, 치환되지 않았거나 치환된 카르복실산 또는 술폰산, 또는 치환되지 않았거나 치환된 알킬 라디칼이 존재함)을 함유하는 화합물에 관한 것이다. 구조 단편은 세린 프로테아제 억제제, 특히 트롬빈 및 칼리크레인 억제제의 구성분으로서 가치있다.

또한 본 발명은 화학식 IIa 및 IIb의 중간물에 관한 것이다.

A - B - E - D - CN

A - B - E - D - CSNH₂

상기 식에서, A, B, E 및 D는 청구항 1에서 나타낸 의미를 가진다.

신규 중간물을 사용하여 화합물 I을 제조하고, 이는 세린 프로테아제 억제제의 합성에 유용한 성분이다.

화학식 I의 화합물은 그 자체로 존재하거나 생리학적으로 내성을 가진 산에 의한 이들의 염의 형태로 존재할 수 있다. 상기 산의 예로는 염산, 시트르산, 타르타르산, 락트산, 인산, 메탄술폰산, 아세트산, 포름산, 말레산, 푸마르산, 숙신산, 히드록시숙신산, 황산, 글루타르산, 아스파트산, 피루브산, 벤조산, 글루쿠론산, 옥살산, 아스코르브산 및 아세틸글리신이 있다.

화학식 I의 신규 화합물들은 다음의 적응증에 사용될 수 있다.

- 발병 기작이 직간접적으로 트롬빈의 단백질분해 작용에 기인하는 질병,

- 발병 기작이 수용체 및 신호전달의 트롬빈-의존 활성화에 기인하는 질병,

- 체세포내에서 유전자 발현의 촉진 [예, PAI-1, PDGF (혈소판 기원의 성장 인자), P-셀렉틴, ICAM-1, 조직 인자에 의한 것] 또는 억제 [예, 평활근 세포에서의 NO 합성]와 관련된 질병,

- 트롬빈의 유사분열촉진 작용에 기인하는 질병,

- 상피 세포 (예, 혈관 내피 세포)의 수축능 및 투과성의 트롬빈-의존성 변화에 기인하는 질병,

- 심정맥혈전증, 폐색전증, 심근경색, 뇌경색, 심방세동, 대체 혈관 폐색과 같은 트롬빈 의존성 혈전색전증,

- 파종성혈관내응고 (DIC),

- 스트렙토키나제, 유로키나제, 프로유로키나제, t-PA, APSAC, 동물 타액선으로부터의 플라스미노겐 활성화체, 및 이들 모든 물질들의 재조합 및 돌연변이 형태와 같은 혈전용해제와 함께 투여시 재관류 시간의 단축 및 재폐색 시간 연장,

- PTCA 후 초기 재폐색 및 후기 재발협착증의 발생,

- 평활근 세포의 트롬빈-의존성 증식,

- CNS에 활성 트롬빈의 축적 (예, 알쯔하이머 질환의 경우),

- 종양 성장, 및 종양 세포의 유착 및 전이의 방지.

신규 화합물들은 특히 심정맥혈전, 폐색전증, 심근경색, 뇌경색 및 불안정한 협심증과 같은 트롬빈-의존성 혈전색전증의 치료 및 예방에, 또한 파종성혈관내응고 (DIC)의 치료에 사용될 수 있다. 이들은 또한 재관류 시간을 단축시키고 재폐색 시간을 연장시키는 스트렙토키나제, 유로키나제, 프로유로키나제, t-PA, APSAC 및 그외의 플라스미노겐 활성체와 같은 혈전용해제와 함께 복합 치료용으로 적합하다.

더욱 바람직한 사용 분야는 경피적경혈관관상동맥확장술 후의 초기 재폐색 및 후기 재발협착증의 방지, 평활근 세포의 트롬빈-유도 증식의 방지, CNS에서 활성 트롬빈의 축적 (알쯔하이머 질환) 방지, 종양 억제 및 종양 세포의 유착 및 전이를 유발하는 기작의 예방이다.

신규 화합물들은 혈액투석막, 및 혈관외 순환에서의 산소 공급기, 스텐트 및 심장판에 필수적인, 이들의 관 시스템 및 융선과 같은 인공 표면의 코팅에 사용할 수 있다.

신규 화합물들은 또한 병리학적 기작이 키니노게나제, 특히 칼리크레인 (예, 염증성 질환, 예컨대 천식, 췌장염, 비염, 관절염, 담마진, 및 그외의 내부 염증성 질환)의 단백 분해 결과에 직·간접적으로 기인하는 질병에 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물들은 경구 또는 비경구적인 통상의 방법으로 투여될 수 있다 (피하, 정맥내, 근육내, 복강내, 직장내). 또한, 투여는 비인두 공간을 통한 증기 또는 분무에 의해 수행될 수도 있다.

투여량은 환자의 나이, 병세 및 체중, 및 투여 방식에 따라 결정된다. 일반적으로, 환자 1인 당 활성 물질의 일일 투여량은 경구 투여시 약 10 내지 2000 ㎎이고, 비경구 투여시 약 1 내지 200 ㎎이다. 이 투여량은 2 내지 4회의 단일 투여량이나, 저류물 형태인 경우, 일일 일회 투여할 수 있다.

신규 화합물들은 통상적인 고체 또는 액상 제형, 예컨대 코팅되지 않았거나 (필름)코팅된 정제, 캡슐제, 분말제, 과립제, 좌약제, 액제, 연고, 크림 또는 분무로 사용될 수 있다. 이들은 통상적인 방법으로 제조된다. 활성 물질은 이러한 목적을 위해 정제 결합제, 벌크제, 보존제, 정제 붕해제, 유동 조절제, 가소제, 습윤제, 분산제, 유화제, 용매, 서방화제, 산화방지제 및(또는) 분출 가스와 같은 통상적인 제약 보조제와 혼합될 수 있다 (문헌 [H. Sucker et al.: Pharmazeutische Technologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978]을 참조).

실험

반응식 I-III에서 나타낸 것과 같이 화학식 I의 화합물을 제조할 수 있다.

구성 성분 A, B, E 및 D를 사전에 별도로 조립하여 적절히 보호된 형태로 사용하는 것이 바람직하다 (반응식 I-III을 참조).

상기 식에서, P는 보호기이고, (P)는 보호기이거나 H이다.

반응식 I은 아민 (H-D-CN)을 N-보호된 아미노산 (P-E-OH)에 커플링시켜 P-E-D-CN을 생성하고, N-말단 보호기를 제거하여, H-E-D-CN을 생성하고, 이를 N-보호된 아미노산 (P-B-OH)과 커플링시켜 P-B-E-D-CN을 생성하고, 보호기 P를 제거하여 H-B-E-D-CN을 생성하고, 이어서 보호되지 않았거나 보호된 (P)-A-U (U는 이탈기) 구성 성분으로 알킬화시키거나 (P)-A'-U (U는 알데히드, 케톤)로 알킬화시키거나 적합한 (P)-A"-C=C- 유도체로 마이클 첨가 반응시켜 (P)-A-B-E-D-CN을 생성하는 것을 설명한다. 니트릴 관능기를 아미딘기로 전환시키는 것은 고전적인 핀너 합성 (문헌 [R. Boder, D.G. Neilson, Chem. Rev. 61 (1962) 179]을 참조) 또는 문헌 [H. Vieweg et al., Pharmazie 39 (1984) 226]에 기재된, 중간물로서 이미노 티오에스테르염을 통해 진행하는 변형된 핀너 합성에 의하거나, 문헌 [A. Eschenmoser Helv. Chimica Acta 69 (1986) 1224]에 기재된 방법에 따라 직접 수행된다. 이어서, 여전해 분자내에 존재하는 보호기를 바람직하게는 산 가수분해에 의해 제거한다.

구성 성분 D가 H-D-CONH₂로 합성에 도입되는 경우, 보호된 중간물 중 하나에서 아미드를 니트릴 관능기로 탈수시키거나, 티오아미드 관능기로 전환시킨다. 별법으로, 구성 성분 D는 H-D-CSNH₂로서 합성에 사용될 수 있다.

반응식 II는 H-B-P를 적절하게 보호되지 않았거나 보호된 A 구성 성분 상에 알킬화, 환원성 아민화 또는 마이클 첨가 반응시켜 (P)-A-B-P를 생성하고, C-말단 보호기를 제거하여 (P)-A-B-OH를 생성하고, H-E-P와 커플링시켜 (P)-A-B-E-P를 생성하고, C-말단 보호기를 제거하여 (P)-A-B-E-OH를 생성하고, H-D-CN에 커플링시켜 (P)-A-E-C-D-CN을 생성하고 이 중간물을 반응시켜 반응식 I에서와 같은 최종 생성물을 생성하는 것을 설명한다.

화합물 (P)-A-B-P가 여전히 B 상에 자유 NH 관능기를 가지는 경우, C-말단 보호기를 제거하기 전에 적합한 보호기로 보호되어야 한다. 각 경우에 사용된 보호기는 서로 수직이어야 한다.

H-D-CN 구성 성분에 대한 대체물로서, H-D-CONH₂, H-D-CSNH₂, H-D-C(NH)NH₂, H-D-C(NP)NH₂, H-D-C(NP)NHP를 첫번째 경우의 커플된 중간물 (P)-A-B-E-D-CONH₂와 함께 사용하여 (P)-A-B-E-D-CN으로 탈수시키거나 직접 (P)-A-B-E-D-CSNH₂로 전환시키는 것도 가능하다.

반응식 III은 집중 합성에 의해 화합물 I을 제조하는 아주 효과적인 방법을 설명한다. 적절하게 보호된 구성 성분 (P)-A-B-OH 및 H-E-D-CN을 함께 커플링시키고 생성되는 중간물 (P)-A-B-E-D-CN을 반응시켜 반응식 I에서와 같은 최종 생성물을 생성하였다.

H-E-D-CN에 대한 대체물로서, H-E-D-CONH₂또는 H-E-D-CSNH₂를 사용하는 것도 가능하고, 첫번째 경우의 커플된 중간물 (P)-A-B-E-D-CONH₂를 (P)-A-B-E-D-CN으로 탈수시키거나 (P)-A-B-E-D-CSNH₂로 전환시키는 것이 가능하다.

사용된 N-말단 보호기들은 Boc, Cbz 또는 Fmoc, 바람직하게는 Boc이고, C-말단 보호기는 메틸, t-부틸 및 벤질이다. 다수의 보호기가 분자내에 존재할 경우, 이들이 동시에 제거되지 않는다면 서로 수직이어야 한다. 중간물이 구성 성분 E를 함유하는 경우, Cbz 및 벤질 보호기들은 부적합하다.

보호기들을 도입하고 제거하는데 필요한 커플링 반응 및 다른 반응들은 펩티드 케미스트리의 표준 조건하에서 수행된다 (문헌 [M. Bodanszky, A. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis", 2nd edition, Springer Verlag Heidelberg, 1994]을 참조).

Boc 보호기들은 디옥산/HCl 또는 TFA/DCM을 사용하여 제거되고, Cbz 보호기들은 가수소 분해에 의하거나 HF에 의해 제거된다. 에스테르 관능기의 가수분해는 알콜 용매 또는 디옥산/물에서 LiOH를 사용하여 수행된다. TFA 또는 디옥산/HU를 사용하여 t-부틸 에스테르를 절단하였다.

이 반응을, 일반적으로 아래의 이동상을 사용하는 TLC로 체크하였다.

A. DCM/MeOH 95:5

B. DCM/MeOH 9:1

C. DCM/MeOH 8:1

D. DCM/MeOH/50% HOAc 40:10:5

E. DCM/MeOH/50% HOAc 35:15:5

칼럼 크로마토그래피에 의한 분리를 언급하는 경우, 이는 상기 이동상을 사용하는 실리카겔 상의 분리를 의미한다.

아세토니트릴/물 및 HOAc 완충 용액을 사용하여 역상 HPLC 분리를 수행하였다.

다음의 방법으로 출발 화합물들을 제조하였다.

알킬화에 사용된 구성 성분 A의 예는 t-부틸 α-브로모아세테이트, t-부틸 β-브로모프로피오네이트, t-부틸 α-브로모프로피오네이트, t-부틸 γ-브로모부티레이트, t-부틸 α-브로모부티레이트, THP-보호된 브로모에탄올, THP-보호된 γ-브로모프로판올, α-브로모-γ-부티롤아세톤이고, 환원성 아민화에 사용된 것의 예는 디히드록시아세톤, 디-t-부틸 아세톤디카르복실레이트이고, 마이클 첨가 반응에 사용된 것의 예는 t-부틸 아크릴레이트, t-부틸 메타크릴레이트, 디-t-부틸 푸마레이트이다. 시판되지 않는 t-부틸 에스테르들은 문헌 [G. Uray, W. Lindner, Tetrahedron, 44 1988 4357-4362]와 유사한 방법으로 제조하였다.

구성 성분 B:

아미노산의 일반적인 및 특이한 합성법에 관한 문헌을 폭넓게 이용할 수 있다. 이들에 관한 고찰은 특히 문헌 [Houben-Weyl, Volume E16d/Part 1, page 406 이하]에 기재되어 있다.

흔히 사용되는 전구체는 벤조페논 이민 아세트산 에틸 에스테르, 디에틸 아세트아미도말로네이트 및 에틸 이소니트릴아세테이트이다.

예를 들어, 에틸 이소니트릴아세테이트 및 적합한 케톤 또는 알데히드로부터 출발하는, 다양한 글리신 및 알라닌 유도체들을 제조하였다 (문헌 [H.-J. Praetorius, J. Flossdorf, M.-R. Kula Chem. Ber. 108 (1975) 3079]을 참조).

시클로옥틸글리신, 2-노르보르닐글리신, 아다만틸알라닌, γ-메틸시클로헥실알라닌, 4-이소프로필-1-시클로헥실알라닌, 4-메틸-1-시클로헥실알라닌 및 4-메틸-1-시클로헥실글리신의 합성은 아래의 방법에 의해 관련 카르보닐 화합물들인 시클로옥타논, 2-노르보나논, 1-포르밀아다만탄, 1-포르밀-1-메틸시클로헥산, 1-포르밀-4-이소프로필시클로헥산, 1-포르밀-4-메틸시클로헥산 및 4-메틸시클로헥사논과 함께 에틸 이소시아노아세테이트로부터 출발하는 해당 에틸 2-포르밀아미노아크릴레이트 (문헌 [U. Schoellkopf 및 R. Meyer, Liebigs Ann. Chem. 1977, 1174]을 참조)를 통해 수행하였다.

에틸 2-포르밀아미노아크릴레이트의 합성하는 일반적인 방법

THF 50 ㎖ 중의 에틸 이소시아네이트 100 ㎖로된 용액을 0 내지 -10℃에서 150 ㎖ THF 중의 칼륨 t-부톡시드 100 mmol에 적가하였다. 동일 온도에서 15분 후, THF 50 ㎖ 중의 적합한 카르보닐 화합물 100 mmol을 첨가하고, 이 반응 혼합물을 실온으로 서서히 승온시키고, 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 잔류물을 물 50 ㎖, 아세트산 100 ㎖ 및 DCM 100 ㎖와 혼합하고, 생성물을 DCM으로 추출하였다. DCM상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 생성된 생성물은 거의 완전히 순수하지만, 필요에 따라 실리카겔 상의 칼럼 크로마토그래피 (이동상: 에테르/광유 에테르 혼합물)로 더 정제할 수 있다.

아미노산 히드로클로라이드를 제조하기 위한, 에틸 2-포르밀아미노아크릴레이트로부터 출발하는 일반적인 방법

에틸 2-포르밀아미노아크릴레이트 100 mmol을 반응이 완료될 때까지 빙초산 200 ㎖에서 Pd/C (10%) 및 수소로 수소화시켰다. 그 다음, 촉매를 여과 제거하고, 아세트산을 회전식 증발기에서 가능한한 제거하고, 잔류물을 5시간 동안 50%의 진한 염산 200 ㎖에서 환류시켰다. 염산을 회전식 증발기에서 제거하고, 생성물을 감압하의 50℃에서 건조시킨 다음, 에테르로 수회 세척하였다. 옅은 색의 결정으로 히드로클로라이드를 생성하였다.

시클로옥타논 18.9 g (150 mmol)으로부터 출발하여 시클로옥틸글리신 히드로클로라이드 25.0 g을 생성하였다. 16.5 g (150 mmol)의 2-노르보르나논으로부터 출발하여 2-노르보르닐글리신 히드로클로라이드 26.6 g을 생성하였다. 1-포르밀아다만탄 19.7 g (120 mmol)으로부터 출발하여 아다만틸알라닌 히드로클로라이드 26.0 g을 생성하였다. 1-포르밀-1-메틸시클로헥산 12.6 g (100 mmol)으로부터 출발하여 γ-메틸시클로헥실알라닌 히드로클로라이드 16.6 g을 생성하였다. 4-메틸시클로헥사논 16.8 g (150 mmol)으로부터 출발하여 4-메틸시클로헥실글리신 히드로클로라이드 25.9 g을 생성하였다. 트랜스-1-포르밀-4-메틸시클로헥산 15 g으로부터 출발하여 트랜스-4-메틸-1-시클로헥실알라닌 히드로클로라이드 18 g을 생성하였다. 3,3-디메틸-1-포르밀시클로헥산 9 g으로부터 출발하여 3,3-디메틸-1-시클로헥실알라닌 히드로클로라이드 10 g을 생성하였다.

합성에 필요한 알데히드 1-포르밀-3,3-디메틸시클로헥산을 문헌 [Moskal 및 Lensen, Rec. Trav. Chim. Pays-Bas 106 (1987) 137-141]에 기재된 방법에 따라 제조하였다.

n-헥산 중에 n-부틸리튬으로된 용액 (72 ㎖, 115 mmol)을 무수디에틸 에테르 280 ㎖ 중에 디에틸 이소시아노메틸포스포네이트 (17 ㎖, 105 mmol)로된 교반 용액에 -60℃에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 생성되는 현탁액을 -60℃에서 15분간 교반하고, -45℃ 미만의 온도를 유지하면서 10분에 걸쳐 무수 디에틸 에테르 100 ㎖ 중에 3,3-디메틸시클로헥사논 (13 g, 105 mmol)으로된 용액을 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 0℃에 이르게 하고, 90분간 이 온도에서 교반한 후, 38% 염산 수용액 150 내지 200 ㎖를 조심스럽게 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 15시간 동안 왕성하게 교반하여 가수분해를 완료하였다. 유기상을 분리 제거하고 물, 포화 중탄산나트륨 용액 및 포화 염화나트륨 용액 각 200 ㎖로 세척하였다. 이를 황산마그네슘 상에서 건조시키고 여과하고 회전식 증발기에서 농축시켜 용매를 제거하였다. 생성되는 잔류물을 더 정제하지 않고 아미노산 합성을 위한 출발 물질로서 사용하였다.

Boc-(D)-α-메틸시클로헥실알라닌

Boc-(D)-α-메틸-Phe-OH를 Al₂O₃상의 5% Rh 250 ㎎이 존재하는 상태에서, 10 바의 수소하에서, 50℃에서 24시간 동안 MeOH 100 ㎖에서 수소화시켰다. 용매를 여과하고 제거하여 2.8 g의 Boc-(D)-α-메틸-Cha-OH를 생성하였다.

¹H-NMR (DMSO-d⁶, δ in ppm): 12 (아주 넓은 신호, COOH); 1.7-0.8 (25H; 1.35 (s, Boc), 1.30 (s, Me)).

문헌 [J.Y.L. Chung et al. J.Org. Chem. 55 (1990) 270]에 기재된 것과 유사한 방법으로 Boc-(3-Ph)-Pro-OH를 합성하였다.

Boc-1-테트라리닐글리신의 제조

Boc-1-테트라리닐글리신을 1,2-디히드로나프탈렌으로부터 출발하여 제조하였다. HBr을 사용하여 1,2-디히드로나프탈렌을 우선 1-테트라릴 브로마이드로 전환시켰다 (문헌 [J. Med. Chem. 37 (1994) 1586)]에 기재된 방법과 유사). 이어서, 이 브로마이드를 디에틸 아세트아미도말로네이트와 반응시키고, 가수분해 절단 후, 생성되는 α-아미노산을 표준 조건하에서 Boc-보호된 형태로 전환시켰다. 또 다른 제법으로는 문헌 [E. Reimann, D. Voss, Arch. Pharm. 310 (1977) 102]에 기재된 것이 가능하다.

Boc-1-(D,L)Tic-OH의 제조

문헌 [R.T. Shuman et al. J. Med. Chem. 36 (1993) 314]에 기재된 방법에 따라 Boc-1-(D,L)Tic-OH를 제조하였다.

Boc-(D,L)Dch-OH의 제조

Boc-(D,L)-Dpa-OH 1 mmol을 5 바의 압력에서 촉매량의 5% Rh/Al₂O₃과 함께 12 ㎖의 MeOH에서 수소화시켰다. 여과하고 감압하에서 용매를 제거하여 정량 수율로 생성물을 생성하였다.

시클로헵틸글리신, 시클로펜틸글리신, 4-이소프로필시클로헥실글리신 및 3,3-디메틸-시클로헥실글리신의 제조

문헌 [H.J. Praetorius, J. Flossdorf, M. Kula, Chem. Ber. 108 (1985) 3079]에 기재된 방법에 따라, 시클로헵타논, 시클로펜타논, 4-이소프로필시클로헥사논 및 3,3-디메틸시클로헥사논을 각각 에틸 이소니트릴아세테이트와 반응시켜 이들 아미노산들을 제조하였다.

H-D, L-Chea-OH의 제조

시클로헵틸메탄올 및 메탄술포닐 클로라이드로부터 제조된 시클로헵틸메틸 메탄술포네이트 4.0 g (19.39 mmol)을 불활성 가스 대기하에서 무수 아세토니트릴 50 ㎖ 중에서 벤조페논 이민 글리신 에틸 에스테르 4.9 g (18.47 mmol), 건조 미분된 탄산칼륨 8.9 g (64.65 mmol) 및 테트라부틸암모늄 브로마이드 1 g (3 mmol)과 함께 10시간 동안 환류시켰다. 그 다음 탄산칼륨을 여과 제거하고, 여액을 증발시켜 건조하고, 조생성물을 1.5시간 동안 실온에서 교반하면서, 에탄올 40 ㎖ 중의 2 N 염산 20 ㎖를 직접 사용하여 가수분해시켰다. 반응 용액을 희석한 다음 벤조페논을 산성 범위내에서 에틸 아세테이트로 추출하고, 이어서 알칼리 범위 (pH=9)에서 DCM을 사용하여 H-D,L-Chea-OEt를 추출하고, 이 용액을 황산나그네슘상에서 건조시키고 회전식 증발기에서 농축시켰다. 수율 3.7 g이론치의 95%.

벤조페논 이민 글리신 에틸 에스테르를 트리메톡시벤질 클로라이드를 사용하여 알킬화시킨 다음, Boc 보호기를 도입하고 에스테르 가수분해하여 Boc-(D,L)-(3,4,5-(MeO)₃)Phe-OH를 제조하였다.

문헌 [G. Zivilichovsky, V. Gurvich J. Chem. Soc., Perkin Trans I 19 (1995) 2509-15]에 기재된 방법에 따라 D-(1,4-시클로헥사디엔-1-일)ala-OH를 제조하였다.

문헌 [U. Schoellkopf, R. Meyer, L. Ann. Chem. (1977) 1174-82]에 기재된 방법에 따라 H-(D,L)-ββ-Me₂Cha-OH를 제조하였다.

통상적인 방법에 따라 물/디옥산 중에서 디-t-부틸 디카르보네이트를 사용하여 상기 아미노산들을 각각의 Boc-보호된 형태로 전환시키고, 이어서 에틸 아세테이트/헥산 혼합물로부터 재결정화시키거나 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (이동상: 에틸 아세테이트/광유 에테르 혼합물)하여 정제하였다.

Boc-보호된 아미노산을 반응식 I에서 나타낸 구성 성분 B로 사용하였다.

구성 성분 B인 상기 아미노산들을 몇몇 경우 해당 벤질 에스테르로 전환시키고 적절하게 보호된 구성 성분 A에 결합시켰다. 여전히 자유로운 N-H 관능기를 가진 화합물의 경우, 수소첨가 반응에 의해 벤질 에스테르 기를 제거시키고, 결정화, 염 침전 또는 칼럼 크로마토그래피시켜 구성 성분 A-B-OH를 정제하였다. 이 경로를 아래의 tBuOOC-CH₂-(Boc)(D)Cha-OH를 예로 들어 설명하였다.

D-시클로헥실알라닌 벤질 에스테르의 합성

톨루엔 2200 ㎖ 중의 D-시클로헥실알라닌 히드로클로라이드 100 g (481 mmol), 벤질 알콜 104 g (962 mmol) 및 p-톨루엔술폰산 일수화물 109.7 g (577 mmol)으로된 현탁액을 서서히 가열하고 수분리기를 사용하여 환류시켰다. 염화수소를 증발시키고 현탁액을 용해시켜 80 내지 90℃의 온도 범위에서 관찰하였을 때, 맑은 용액을 생성하였다. 물을 더 이상 분리 (약 4시간)하지 않았을 때, 톨루엔 500 ㎖를 증류 제거하고, 반응 혼합물을 밤새 냉각되게 두고, 생성 혼합물을 여과 제거하고 각 1000 ㎖의 헥산으로 2번 세척하였다. 생성되는 잔류물 195 g을 디클로로메탄 2000 ㎖ 중에 현탁시키고, 물 1000 ㎖를 첨가한 후, 교반하면서 50% 수산화나트륨 용액을 점차 첨가하여 pH 9-9.5로 조정하였다. 유기상을 분리 제거하고, 각각 500 ㎖의 물로 2번 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시키고 여과하여 건조제를 제거하고, 여액을 농축시켜 옅은 오일로된 표제 생성물 115 g (94%)를 생성하였다.

N-(t-부틸옥시카르보닐메틸렌)-D-시클로헥실알라닌 벤질 에스테르

D-시클로헥실알라닌 벤질 에스테르 115 g (440 mmol)을 아세토니트릴 2000 ㎖ 중에 용해시키고, 실온에서 탄산칼륨 607.5 g (4.40 몰) 및 t-부틸 브로모아세테이트 94.3 g (484 mmol)을 첨가하고, 이 혼합물을 이 온도에서 3일간 교반하였다. 탄산염을 여과 제거하고, 아세토니트릴로 세척하고, 모액을 농축 (30℃, 20 밀리바)시키고, 잔류물을 메틸 t-부틸 에테르 1000 ㎖ 중에 취하고, 유기상을 5% 시트르산 및 포화 중탄산나트륨 용액으로 추출하였다. 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고, 여과시켜 건조제를 제거하고 농축시켜, 오일 168 g을 생성하고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다.

N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐메틸렌)-D-시클로헥실알라닌 벤질 에스테르

앞의 합성에서 생성된 오일 168 g (447 mmol)을 아세토니트릴 1400 ㎖ 중에 용해시키고, 탄산칼륨 분말 618 g (4.47 mmol) 및 디-t-부틸 디카르보네이트 107.3 g (492 mmol)을 첨가한 후, 6일간 실온에서 교반하였다. 탄산칼륨을 흡인하여 여과 제거하고, 아세토니트릴 약 1000 ㎖로 세척하고, 여액을 농축시켰다. 요구되는 생성물 230 g을 생성하였다.

N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐메틸렌)-D-시클로헥실알라닌 시클로헥실암모늄염

N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐메틸렌)-D-시클로헥실알라닌 벤질 에스테르 115 g을 순수한 에탄올 1000 ㎖ 중에 용해시키고 대기압하의 25 내지 30℃에서 2시간 동안 활성탄상의 10% Pd 9 g의 존재하에서 수소를 사용하여 수소화시켰다. 여과하고 회전식 증발기에서 용매를 제거하여 노란색 오일 100 g (260 mmol)을 생성하고, 이를 아세톤 1600 ㎖에 취하고 환류로 가열하였다. 가열조를 제거하고, 아세톤 중의 시클로헥실아민 27 g (273 mmol)으로된 용액을 적가 깔대기를 통해 신속히 첨가하였다.

반응 혼합물을 실온으로 냉각하여 요구되는 염을 결정화시켰다. 이 고체를 여과 제거하고 아세톤 200 ㎖로 세척하고, 최종 정제를 위해, 아세톤으로 1회 이상 재결정화시켰다. 약 30℃의 진공 오븐에서 잔류물을 건조시켜 백색 분말로된 요구되는 염 70.2 g을 생성하였다.

전구체인 시클로헥실글리신으로부터 유사한 방법으로 N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐메틸렌)-D-시클로헥실글리신 시클로헥실암모늄염을 제조하였다.

N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐에틸렌)-D-시클로헥실알라닌 시클로헥실암모늄염

a) t-부틸 3-브로모프로피오네이트

질소 역류하의 -30℃에서 브로모프로피온산 16.64 g (109 mmol), 진한 2-메틸프로펜 150 ㎖ 및 진한 황산 2 ㎖를 오토글레이브용으로 적합한 유리 용기에 담고, 밀폐시키고 72시간 동안 실온에서 교반하였다. 마무리 처리를 위하여, 반응 용기를 -30℃로 다시 냉각시키고, 용액을 주의깊게 얼음 냉각된 포화 중탄산나트륨 용액 200 ㎖에 부었다. 과잉한 양의 2-메틸프로핀을 교반하면서 증발 제거시키고, 잔류물을 각각 디클로로메탄 50 ㎖로 3번 추출하고, 합한 유기상을 황산나트륨으로 건조시키고, 건조제를 여과 제거하고, 이 용액을 수펌프 진공하에서 농축시켰다. 유성 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (이동상 n-헥산, 그후, n-헥산/디에틸 에테르 9:1)로 정제하였다. 표제 화합물 18.86 g을 생성하였다.

b) N-(t-부틸옥시카르보닐에틸렌)-D-시클로헥실알라닌 벤질 에스테르

D-시클로헥실알라닌 벤질 에스테르 49.4 g (189 mmol)을 아세토니트릴 250 ㎖에 용해시키고, t-부틸 브로모프로피오네이트 31.6 g (151 mmol)을 실온에서 첨가한 후, 5일간 환류시켰다. 생성되는 침전물을 여과 제거하고 아세토니트릴로 여러회 세척하고 여액을 수펌프 진공에서 농축시키고, 잔류물을 디클로로메탄 350 ㎖에 취하고, 유기상을 5% 시트르산 및 포화 중탄산나트륨 용액으로 추출하였다. 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하여 건조제를 제거하고 농축시켰다. 유성상을 칼럼 크로마토그래피 (이동상 디클로로메탄, 그 후, 디클로로메탄/메탄올 95:5)로 정제하였다. 약간의 불순물을 함유하는 오일을 생성하였고 이를 다음 반응에서 직접 사용하였다.

c) N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐에틸렌)-D-시클로헥실알라닌 벤질 에스테르

앞의 합성에서 생성된 오일 (30 g, 최대 30 mmol)을 아세토니트릴 150 ㎖에 용해시키고, 디이소프로필에틸아민 28 ㎖ (160 mmol) 및 디-t-부틸 디카보네이트 19.2 g (88 mmol)을 첨가하고 실온에서 3일간 교반하였다. 반응 혼합물을 수펌프 진공하의 회전식 증발기에서 농축시키고, 잔류물을 n-헥산에 취하고 각각 5% 시트르산 용액 3 ㎖로 5번 세척하고, 합한 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 건조제를 여과 제거하고, 잔류물을 농축시키고 칼럼 크로마토그래피 (이동상 헥산/에틸 아세테이트 95:5)로 분리하여 요구되는 생성물 32.66 g (64 mmol)을 생성하였다.

d) N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐에틸렌)-D-시클로헥실알라닌 시클로헥실암모늄염

N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐에틸렌)-D-시클로알라닌 벤질 에스테르 32.66 g (64 mmol)을 순수한 에탄올 325 ㎖ 중에 용해시키고 활성탄 상의 10% Pd 3 g이 존재하는 25 내지 30℃의 대기압하에서 수소를 사용하여 14시간 동안 수소화시켰다. 용액을 셀라이트로 여과하고, 에탄올로 세척하고, 회전식 증발기로 용매를 제거하여 노란색 오일 26.7 g을 생성하였고, 이를 아세톤에 취하고 환류로 가열하였다. 가열조를 제거하고, 아세톤 중에 시클로헥실아민 7 g (70 mmol)로된 용액을 적가 깔대기를 통해 즉시 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켜서 요구되는 염을을 결정화시켰다. 이 고체를 여과 제거하고, 아세톤 25 ㎖로 세척하고, 최종 정제를 위해 아세톤으로부터 1번 이상 재결정화시켰다. 잔류물을 30℃의 진공 오븐에서 건조시켜 백색 분말로된 요구되는 염 26.6 g (54 mmol)을 생성하였다.

N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤린

a) N-Boc-Pyr-OH (5 g, 23.45 mmol)를 MeOH 50 ㎖에 용해시키고, 디옥산 중의 HCl (4 N, 30 ㎖)을 첨가하였다. 12시간 동안 환류시킨 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하여 생성물로서 H-Pyr-OMe 염화수소를 생성하였다. 수율: 3.84 g (100%).

b) N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-OH (8 g, 20.75 mmol)을 디클로로메탄 75 ㎖에 용해시키고, -10℃에서 에틸 디이소프로필아민 (15.5 ㎖, 89.24 mmol)을 첨가하였다. 이 온도에서 5분간 교반한 후, 디클로로메탄 25 ㎖ 중에 H-Pyr-OMe 염화수소 (3.4 g, 20.75 mmol)로된 용액을 적가하였다. 에틸 아세테이트 중의 프로판포스폰산 무수물로된 용액 (50%, 20 ㎖, 26.96 mmol)을 적가하고, 이 혼합물을 -10 내지 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 포화 중탄산나트륨 용액 (2 x 80 ㎖), 5% 시트르산 용액 (2 x 15 ㎖) 및 포화 염화나트륨 용액 (1 x 20 ㎖)으로 세척하였다. 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고, 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 조생성물을 플래시 크로마토그래피 (실시카 겔, 디클로로메탄/메탄올 = 95/5)로 정제하였다. 수율 = 6.2 g (60%).

c) N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OMe (5.5 g, 11.12 mmol)를 디옥산 40 ㎖ 중에 용해시키고, 수산화나트륨 용액 (1N, 22.2 ㎖, 22.24 mmol)을 첨가한 후, 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 디옥산을 회전식 증발기에서 제거하고, 수성상을 에틸 아세테이트로 세척하고, 황산수소칼륨 용액 (20%)을 사용하여 pH 1-2로 산성화시켰다. 수성상을 디클로로메탄으로 추출하고, 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시켰다. 수율: 무색 폼 5 g (94%). 물로 포화된 n-헥산으로부터 재결정화시켜 무색 결정을 생성하였다 (융점 = 158 내지 160℃).

N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤린

N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리신 및 3,4-디히드로프롤린 메틸 에스테르로부터 유사한 방법으로 이 화합물을 제조하였다.

E 성분으로 사용된 (L)3,4-디히드로프롤린은 시판되고 있으며, (D,L)-4,5-디히드로피페콜산은 문헌 [A. Burgstahler, C.E. Aiman, J. Org. Chem. 25 (1960) 489 또는 C. Herdeis, W. Engel Arch. Pharm. 326 (1993) 297]에 기재된 방법에 따라 제조할 수 있으며, (Boc)₂O를 사용하여 Boc-(D,L)-Dep-OH로 전환된다.

아래와 같이 D 성분을 합성하였다.

5-아미노메틸-2-시아노티오펜

국제 특허 공개 제95/23609호에 기재된 것과 같이 이 성분의 제조를 수행하였다.

4-아미노메틸-2-시아노티오펜

a) 2-브로모-4-포르밀티오펜

3-포르밀티오펜 36 g (320 mmol)을 메틸렌 클로라이드 600 ㎖에 용해시키고, 5℃로 냉각시키고, 알루미늄 트리클로라이드 100 g (750 mmol)을 조금씩 첨가하여, 반응 혼합물을 환류시켰다. 메틸렌 클로라이드 40 ㎖ 중의 브롬 59 g (360 mmol)으로된 용액 19 ㎖를 45분에 걸쳐 적가하고, 반응물을 4시간 동안 환류시켰다. 냉각시킨 후, 반응 용액을 600 g의 얼음-물에 붓고 메틸렌 클로라이드로 추출하고, 유기상을 포화 중탄산나트륨 용액으로 세척하고 황산마그네슘 상에서 건조시키고 회전식 증발기에서 농축시켰다. 조생성물 64.5 g을 생성하였고 이를 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 메틸렌 클로라이드/광유 에테르)로 정제하여 약간 불순물을 함유하는 생성물 총 56.5 g을 생성하였다.

b) 2-시아노-4-포르밀티오펜

시안화구리(I) 7.6 g (85 mmol)을 DMF 25 ㎖ 중의 2-브로모-4-포름티오펜 13.53 g (70.82 mmol)으로된 용액에 첨가하고, 이 반응 혼합물을 3.5시간 동안 환류시켜, 원래 옅은 녹색인 현탁액이 검은 용액으로 변하였다. 물을 첨가한 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 수회 추출하고, 유기상을 합하고, 포화 염수로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시키고 완만한 진공하에서 회전식 증발기에서 농축시켰다. 잔류물에 에테르를 첨가하여 순수한 생성물 1.6 g을 생성하였다. 모액을 다른 배치로부터의 조생성물과 함께 크로마토그래피 (실리카겔, 메틸렌 클로라이드/광유 에테르 1:1)로 정제하였다. 총 2-브로모-4-포르밀티오펜 56.5 g을 반응시켜 순수한 2-시아노-4-포르밀티오펜 12.6 g (31% 수율)을 생성하였다.

c) 2-시아노-3-히드록시메틸티오펜

붕화수소나트륨 3.47 g (91.8 mmol)을 에탄올 200 ㎖ 중의 2-시아노-4-포르밀티오펜 12.6 g (91.8 mmol)으로된 현탁액에 조금씩 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하여, 이 동안 맑은 용액이 서서히 형성되었다. 감압하에서 농축시킨 후, 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 취하고 포화 염수, 5% 시트르산 및 표화 염수로 연속적으로 세척하고, 유기상을 황산나트륨으로 건조시키고 감압하에서 농축시켜 거의 순수한 생성물 11.7 g (수율 91.5%)을 생성하였다.

d) 3-브로모메틸-2-시아노티오펜

2-시아노-3-히드록시메틸티오펜 11.7 g (84.07 mmol)을 THF 100 ㎖ 중에 트리페닐포스핀 24.1 g (91.87 mmol)과 함께 실온에서 용해시키고, 냉각 (얼음조)시키면서 테트라브로모메탄 30.47 g (91.87 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 감압하에서 농축시키고 실리카겔 상에서 크로마토그래피 (메틸렌 클로라이드/광유 에테르)하여 여전히 광유 에테르를 함유하는 옅은 노란색 결정질 생성물 18.8 g을 생성하였다.

e) 4-N,N-비스(t-부톡시카르보닐)아미노메틸-2-시아노티오펜

3-브로모메틸-2-시아노티오펜 18.81 g (조생성물, 최대 84.07 mmol)을 THF 160 ㎖에 용해시키고, 5℃로 냉각시키고, 80% 수소화나트륨 (102.4 mmol) 3.07 g을 조금씩 첨가하였다. 이어서, THF 160 ㎖ 중에 용해된 디-t-부틸 이미노디카르복실레이트 22.25 g (102.4 mmol)을 5℃에서 적가하고, 이 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. TLC에 의하면 전환이 불완전하였기에, 이 혼합물을 30 내지 35℃에서 4.5시간 동안 가열하였다. 0 내지 5℃로 냉각시킨 후, 포화 염화암모늄 용액 33 ㎖를 서서히 적가하고, THF를 감압하에서 증류 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 수회 추출하고, 에틸 아세테이트상을 포화 염수로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시키고 회전식 증발기에서 농축시켰다. 점성 적색 잔류물 (34.61 g)을 다음 반응에서 조생성물로 사용하였다.

f) 4-아미노메틸-2-시아노티오펜 히드로클로라이드

4-N,N-비스(t-부톡시카르보닐)아미노메틸-2-시아노티오펜 (조생성물, 최대 84.07 mmol) 34.61 g을 에틸 아세테이트 600 ㎖에 용해시키고, 0 내지 5℃로 냉각시키고, HCl 가스로 포화시키고 실온으로 승온시켰다. 3시간 후, 생성되는 현탁액을 회전식 증발기에서 농축시키고 메틸렌 클로라이드와 함께 수회 증류시키고, 잔류물을 에테르와 교반하여 추출하고 감압하에서 건조시켰다. 생성물 13.85 g을 옅은 분말로서 생성하였다. 2 단계에 걸친 수율은 94.3%였다.

2-아미노메틸-4-시아노티오펜

a) 시아노티오펜-2-카르브알데히드

4-브로모티오펜-2-카르브알데히드 49.3 g (258.05 mmol) 및 시안화구리(I) 27.8 g (310.41 mmol)을 순수한 DMF 130 ㎖에 현탁시키고 8시간 동안 환류시켰다. 용매를 40℃의 회전식 증발기에서 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트에서 현탁시키고 속슬렛 장치로 옮겼다. 잔류물을 밤새 추출하고, 노란색 용액을 황산나트륨상에서 건조시키고 회전식 증발기에서 농축시키고, 생성되는 노란색 고체를 에테르로부터 재결정화시켜 생성물 25.3 g (이론치의 80%)을 생성하였다.

b) 4-시아노티오펜-2-카르브알데히드 옥심

4-시아노티오펜-2-카르브알데히드 11.6 g (84.6 mmol)을 메탄올 140 ㎖에 용해시키고, 탄산나트륨 12.3 g (116.1 mmol)을 첨가하였다. 그 다음 히드록실아민 히드로클로라이드 6.5 g (93.5 mmol)을 15℃에서 냉각시키면서 조금씩 첨가하고, 이 혼합물을 10℃에서 2시간 동안 교반하였다. 물 80 ㎖를 첨가한 후, 이 반응 혼합물을 각각 디에틸 에테르 50 ㎖로 5회 추출하고, 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고, 용매를 감압하에서 제거하여 노란색 결정질 분말로된 요구되는 생성물 12.5 g (이론치의 96%)을 생성하였다.

c) 2-아미노메틸-4-시아노티오펜 히드로클로라이드

미세한 아연 분진 11.22 g (171.64 mmol)을, 온도가 15℃를 넘지 않도록 0 내지 5℃로 냉각된 트리플루오로아세트산 50 ㎖ 중의 4-시아노티오펜-2-카르브알데히드 옥심 4.65 g (30.60 mmol)으로된 용액에 조금씩 수회 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반하고 과잉한 아연으로부터 따뤄낸 후, 트리플루오로아세트산을 감압하 (오일 펌프)에서 제거하고, 잔류 오일을 0℃로 냉각시키고, 0℃로 냉각된 3 N 수산화나트륨 용액 150 ㎖ 및 메틸렌 클로라이드 2 리터로된 혼합물을 조금씩 첨가하였다. 불용성 성분을 여과하여 제거한 다음, 유기상을 분리 제거하고, 수성상을 메틸렌 클로라이드 20 ㎖로 8번 추출하고, 수집한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시킨 다음, 얼음 냉각하면서 6 M 메탄올성 염산 20 ㎖를 첨가하였다. 생성물을 백색 고체로된 염화수소의 형태로 침전시키고, 4℃에서 밤새 현탁액을 냉각시켜 결정화를 완료하였다. 생성물 2.2 g을 무색 침상으로 생성하였다 (이론치의 50%).

5-아미노메틸-3,4-디메틸티오펜-2-카르복사미드 히드로클로라이드

5-시아노-3,4-디메틸티오펜-2-카르복사미드 19 g (105.42 mmol)을 메탄올 760 ㎖ 및 2 N 염산 용액에 현탁시키고, 탄소 상의 Pd (10%) 9.5 g을 첨가한 후, 실온에서 수소화시켰다. 수소 4.7 리터를 취한 후 (4시간), 메탄올을 감압하에서 증류시키고, 수성상을 에틸 아세테이트로 3번 추출하고 냉동 건조시켰다. 요구되는 생성물 16.3 g을 백색 고체로 생성하였다 (이론치의 70.4%).

5-아미노메틸이속사졸-3-카르복사미드

a) 에틸 5-클로로메틸이속사졸-3-카르복실레이트

트리에틸아민 21.2 g (210 mmol)을 에틸 2-클로로-2-히드록시이미노아세테이트 30 g (198 mmol) 및 10 내지 15℃로 냉각된 프로파르길 클로라이드 150 ㎖로된 교반 혼합물에 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 이 혼합물을 에테르로 추출하고, 유기상을 황산마그네슘상에서 건조시키고 회전식 증발기에서 농축시켰다. 잔류물을 0.5 토르에서 증류하고, 생성물을 116 내지 122℃에서 증류하였다.

b) 5-클로로메틸이속사졸-3-카르복실산

에탄올 150 ㎖ 중의 에틸 5-클로로메틸이속사졸-3-카르복실레이트 47.3 g (250 mmol)을 수산화칼륨 14 g (250 mmol)과 혼ㅎ바하고, 이 혼합물을 60 내지 70℃에서 6시간 동안 교반하였다. 냉각시키고 감압하에서 농축시킨 후, 잔류물을 물에 취하고 에테르로 추출하고, 수성상을 염산으로 산성화시킨 다음 에테르로 수회 추출하고 에테르상을 황산나트륨상에서 건조시키고 감압 (오일 펌프, 50℃)하에서 농축시켰다. 요구되는 생성물 31 g을 생성하였다 (이론치의 77%).

c) 5-클로로메틸이속사졸-3-카르보닐 클로라이드

5-클로로메틸이속사졸-3-카르복실산 120 g (743 mmol)을 티오닐 클로라이드 및 피리딘 2 방울과 함께 10시간 동안 환류시킨 다음, 감압하에서 농축시키고 20 토르 하에서 증류시켰다. 생성물을 125 내지 133℃에서 증류하여 78 g (이론치의 58%)을 생성하였다.

d) 5-클로로메틸이속사졸-3-카르복사미드

암모니아를 10 내지 15℃에서 1시간 동안 메틸렌 클로라이드 100 ㎖ 중의 5-클로로메틸이속사졸-3-카르보닐 클로라이드 10 g (55.56 mmol)로된 용액에 통과시키고, 이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 0℃로 냉각시키고, 침전물을 흡인 여과 제거하고 조금 차가운 메틸렌 클로라이드로 세척하고, 잔류물을 교반하면서 물로 2번 추출하여 암모늄염을 제거하였다. 감압하에서 건조시켜 옅은 분말로된 순수한 생성물 6.58 g을 생성하였다 (이론치의 74%).

e) 5-아미노메틸이속사졸-3-카르복사미드 히드로클로라이드

진한 암모니아 용액 100 ㎖ 및 메탄올 72 ㎖로된 혼합물에 5-클로로메틸이속사졸-3-카르복사미드 2.44 g (15.2 mmol)을 첨가하고, 이 용액을 40℃로 승온시키고, 건조시키고, 암모니아 가스로 포화시켰다. 전구체를 6시간 동안 반응시켰다. 메탄올을 감압하에서 제거하고, 수성상을 메틸렌 클로라이드로 2번 추출하고, 수성상을 주의깊게 증발시켜 감압하에서 건조시켰다. 백색 고체 잔류물을 Boc-디히드로프롤린과 함께 조생성물로서 사용하였다.

2-아미노메틸티아졸-4-티오카르복사미드를 문헌 [G. Videnov, D. kaier, C. Kempter and G. Jung, Angew. Chemie 108, (1996) 1604]에 기재된 것과 같이 제조하고, 이 문헌에 기재된 N-Boc-보호된 화합물을 메틸렌 클로라이드에서 에테르성 염산을 사용하여 탈보호시켰다.

4-아미노메틸티아졸-2-티오카르복사미드

전구체인 에틸 4-아미노메틸티아졸-2-카르복실레이트를 미국 특허 제4 826 816호에 기재된 것과 같이 제조하였다. 아민 관능기에 Boc 보호기를 도입한 후, 에스테르기를 가수분해시키고, 생성되는 산 관능기를 혼합된 무수물 (이소부틸 카르보네이트)을 통해 카르복사미드로 전환시키고 로쏜 (Lawesson) 시약을 사용하여 티오아미드로 전환시켰다. 보호기를 제거하여 상기된 중간 화합물을 생성하였다.

5-아미노메틸-2-시아노푸란

a) 5-시아노푸란-2-카르브알데히드

n-헥산 중의 n-부틸리튬으로된 1.6 몰 용액 165 ㎖ (264 mmol)을 20분에 걸쳐, -78℃로 냉각된 테트라히드로푸란 600 ㎖ 중의 디이소프로필아민 26.7 g (264 mmol)로된 용액에 첨가하였다. 이 용액을 -20℃로 한 다음, 다시 -75℃로 냉각시키고, 이 온도에서 테트라히드로푸란 100 ㎖ 중의 2-시아노푸란 22.3 g (240 mmol)으로된 용액을 서서히 적가하였다. 30분간 교반한 후, 93 ㎖의 디메틸포름아미드를 서서히 적가하고, 이 혼합물을 30분 더 교반하였다. 마무리 처리를 위해, 물 200 ㎖ 중의 시트르산 40 g으로된 용액을 -70℃에서 첨가하였다. 회전식 증발기에서 농축시킨 후, 염화나트륨 포화 용액 600 ㎖를 첨가하고, 이 혼합물을 매번 200 ㎖의 디에틸 에테르로 3번 추출하였다. 합한 유기 추출물을 황산마그네슘상에서 건조시켰다. 건조제를 여과 제거한 다음 용매를 수펌프 진공 하에서 증류 제거하고 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (이동상 디클로로메탄)로 정제하였다. 용리액을 농축시키고 잔류물을 스팀 증류 (물과 공비인 비점 범위: p=0.1 mmHg에서 60 내지 65℃)하였다. 증류물을 디에틸 에테르로 추출하고, 유기상을 건조시키고 이 용액을 농축시켜 표제 화합물 10.6 g (88 mmol, 36%)을 생성하였다.¹H-NMR (270 MHz, d₆-DMSO): δ = 7.7 (d, 1H), 7.8 (d, 1H), 9.75 (s, 1H).

b) 5-히드록시메틸-2-시아노푸란

수소화붕소 나트륨 2.34 g (62 mmol)을 -30℃에서 순수한 에탄올 500 ㎖ 중의 5-시아노푸란-2-카르브알데히드로된 30 g (0.25몰)로된 용액에 조금씩 첨가하였다. 이 용액을 2시간 동안 -30℃에서 교반하고, 냉각시키면서 수중의 5% 시트르산 용액으로 pH 7로 조정하였다. 이 반응 혼합물을 수펌프 진공하에서 농축시키고, 포화 염화나트륨 용액을 잔류물에 첨가하고, 이 혼합물을 매번 150 ㎖ 디에틸 에테르를 사용하여 수회 추출하고, 합한 유기상을 황산마그네슘상에서 건조시키고, 건조제를 여과 제거하고, 용매를 실온에서 수펌프 진공하에서 증류 제거하였다. 이렇게 하여 짙은 적색 오일로된 표제 화합물 27 g (22 mmol, 88%)을 생성하였고, 이를 더 정제하지 않고 다음 반응에 사용하였다.¹H-NMR (250 MHz, d₆-DMSO): δ = 4.4 (m, 2H), 5.6 (bs, 1H), 6.6 (d, 1H), 7.5 (d, 1H).

c) 5-브로모메틸-2-시아노푸란

테트라히드로푸란 250 ㎖ 중의 5-히드록시메틸-2-시아노푸란 15 g (121 몰)로된 용액에 트리페닐포스핀 38 g (145 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 -10℃로 냉각시키고, 테트라히드로푸란 100 ㎖ 중의 테트라브로모메탄 48 g (145 mmol)으로도니 용액을 실온으로 승온시키고 이 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 이 혼합물을 수펌프 진공하에서 회전식 증발기에서 농축시키고 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (이동상 광유 에테르: 디클로로메탄 1:1, Rf = 0.5)에서 정제하였다. 표제 화합물 11.5 g을 생성하였다.¹H-NMR (250 MHz, d₆-DMSO): δ = 4.8 (m, 2H), 6.7 (d, 1H), 7.7 (d, 1H).

d) 5-N,N-비스(t-부톡시카르보닐)아미노메틸-2-시아노푸란

수소화나트륨 (미네랄유 중의 80% 현탁액) 4.0 g (135 mmol)을 0℃로 냉각된 테트라히드로푸란 400 ㎖ 중의 5-브로모메틸-2-시아노푸란 22.9 g (123 mmol)로된 용액에 조금씩 첨가하였다. 그 다음 테트라히드로푸란 200 ㎖ 중의 디-t-부틸 이미노디카르복실레이트 29.4 g (135 mmol)으로된 용액을, 5℃를 넘지 않는 온도에서 적가하였다. 이 혼합물을 실온으로 승온되게 두고 밤새 교반하였다. 전환이 불환전 (TLC로 확인)하기에, 총 1.2 g의 수소화나트륨을 9시간에 걸쳐 3번에 나누어 첨가하였다. 전환을 완료하기 위해, 이 혼합물을 3시간 동안 35℃로 가열하고, 실온으로 냉각되게 둔 다음, 포화 염화암모늄 용액 600 ㎖를 서서히 첨가하였다. 용매를 수펌프 진공하에서 증류 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 수회 추출하고, 합한 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 회전식 증발기에서 농축하였다. 여전히 디-t-부틸 이미노디카복실레이트를 함유하는 37.3 g의 유성 잔류물을 생성하였고 이를 다음 단계에서 조생성물로 사용하였다.¹H-NMR (250 MHz, d₆-DMSO): δ = 1.40, 1.45 (s, 18H), 4.75 (s, 2H), 6.55 (d, 1H), 7.55 (d, 1H).

e) 5-아미노메틸-2-시아노푸란 히드로클로라이드

5-N,N-비스(t-부톡시카르보닐)아미노메틸-2-시아노푸란 (d)로부터의 조생성물, 최대 123 mmol) 37.3 g을 에틸 아세테이트 600 ㎖에 용해시키고 0℃로 냉각시켰다. 이 용액을 염화수소 가스로 포화시키고, 30분 후에 백색 침전물을 분리시켰다. 이 혼합물을 실온으로 되게 두고 밤새 교반한 다음, 생성되는 현탁액을 회전식 증발기에서 농축시키고, 잔류물을 디에틸 에테르와 교반하여 추출하고, 용매를 여과하여 제거하고, 고체 잔류물을 감압하의 실온에서 건조시켰다. 표제 화합물 (2 단계에 걸쳐 77% 수율) 15.1 g을 옅은 황토색 분말로 생성하였다.¹H-NMR (250 MHz, d₆-DMSO): δ = 4.15 (bs, 2H), 6.85 (d, 1H), 7.65 (d, 1H), 8.8-9.0 (bs, 3H).

5-아미노메틸-3-시아노푸란

a) 에틸 4-옥소펜타노에이트

벤젠 200 ㎖ 중에서 4-옥소펜타노산 100 g (0.86 몰), 에탄올 150 g 및 황산 1 ㎖를 딘-스타크 트랩에서 수분리를 마칠때까지 환류시켰다. 냉각된 반응 혼합물을 물, 탄산나트륨 및 물로 세척한 다음 딘-스타크 트랩을 사용하여 환류하에서 건조시켰다. 수상을 완전히 제거하였을때, 용매를 증류 제거하고 잔류물을 감압하에서 증류시켰다. 비점 85 내지 87℃/16 mmHg, 수율 105.5 g (85%).

b) 에틸 4,4-디에톡시펜타노에이트

에틸 4-옥소펜타노에이트 171.3 g (1.19 몰), 트리에틸 오르쏘포르메이트 207 ㎖ (184.2 g, 1.24 몰), 순수한 에탄올 26 ㎖ 및 p-톨루엔술폰산으로된 혼합물을 왕성하게 교반하면서 8시간 동안 환류시키고 감압하에서 증류시켰다. 에틸 4,4-디에톡시펜타노에이트 187.9 g (72.5%)을 생성하였고, 이의 비점은 104 내지 106℃/14 mmHg였다.

c) 에틸 2-포르밀레불리네이트

에틸 4,4-디에톡시펜타노에이트 106.3 g (0.489 몰) 및 에틸 포르메이트 80 ㎖ (73.6 g, 0.99 몰)로된 혼합물을 왕성하게 교반된 무수 벤젠 300 ㎖ 중의 나트륨 (shaving) 12.7 g (0.55 g원자)로된 현탁액에 10 내지 15℃에서 3시간 동안 적가하였다. 3시간 더 교반시키고, 반응 혼합물을 밤새 두었다. 왕성하게 교반하면서 250 ㎖의 물을 첨가하고, 15분간 더 교반하였다. 수층을 분리 제거하고, 벤젠층을 70 ㎖의 물로 추출하였다. 합한 수성 추출물을 pH 2까지 산성화시키고 에틸 아세테이트 (5 x 50 ㎖)로 추출하고, 유기 추출물을 염화칼슘 상에서 건조시켰다.

에틸 아세테이트 용액을 감압하에서 증류시키고, 102 내지 110℃/1 mmHg에서 끓는 분획물을 수집하였다. 이 분획물은 에틸 2-포르밀레불리네이트와 그의 디에틸 케탈로 이루어진 혼합물이었다. 혼합물의 비는 교반의 강도 및 포르밀화 생성물의 분리시 상 분리의 기간에 따른다.

벤젠층도 마찬가지로 염화칼슘상에서 건조시켰고, 용매를 제거하고 잔류물을 감압하에서 증류시킨 후, 생성되는 에틸 레불리네이트/케탈 혼합물을 순수한 에틸 레불리네이트 대신에 b)에 기재된 것과 같이 처리하였다. (2) 및 (3a) 단계를 필요한 양의 에틸 2-포르밀레불리네이트가 생성될 때까지 반복하였다.

d) 에틸 5-메틸푸란-3-카르복실레이트

에틸 2-포르밀레불리네이트 및 그의 디에틸 케탈로 이루러진 상기 혼합물을 벤젠에 용해시키고, 촉매를 첨가하고, 생성되는 용액을 물이 완전히 제거될 때까지 딘-스타크 트랩을 사용항여 3 내지 3.5시간 동안 환류시켰다. 이 반응 혼합물을 감압하에서 증류시켜, 에틸 5-메틸푸란-3-카르복실레이트 15 g (97 mmol)을 생성하였고, 이의 비점은 97℃/15 mmHg였다.

e) 5-메틸푸란-3-카르복실산

에틸 5-메틸푸란-3-카르복실레이트 31.7 g (206 mmol), 45% 수산화칼륨 40 ㎖ 및 물 100 ㎖로된 혼합물을 4시간 동안 환류시킨 다음, 10℃로 냉각시키고 15% 염산을 사용하여 pH 1로 산성화시켰다. 생성 혼합물을 이 온도에서 2시간 동안 두고, 침전물을 여과 제거하고 45 내지 50℃에서 불변 중량으로 건조시켜, 5-메틸-푸란-3-카르복실산 23.7 g (188 mmol, 91%)을 생성하였다.

f) 5-메틸푸란-3-카르보닐 클로라이드

염화인(V) 39.2 g (188 mmol)을 벤젠 100 ㎖ 중의 5-메틸푸란-3-카르복실산 23.7 g (188 mmol)으로된 교반 현탁액에 조금씩 첨가하였다. 상당한 양의 열 및 염화수소가 배출되는 것이 관찰되었다. 생성 혼합물을 4시간 동안 환류시킨 다음 감압하에서 증류시켜 산 클로라이드 24.7 g (171 mmol, 91%)를 생성하였고, 이의 비점은 79℃/12 mmHg였다.

g) 5-메틸푸란-3-카르복사미드

5-메틸푸란-3-카르보닐 클로라이드 24.7 g (171 mmol)을 25 내지 40℃에서 25% 수산화암모늄 용액 80 ㎖ 및 벤젠 80 ㎖로된 교반 혼합물에 적가하였다. 생성 혼합물으 3시간 동안 교반하고 밤새 두었다. 다음날, 백색 결정의 아미드를 여과 제거하고, 차가운 물로 세척하고 40 내지 45℃에서 일정 중량으로 건조시켰다. 수율 19.7 g (158 mmol, 92%), 비점 158℃.

h) 5-메틸-3-시아노푸란

염화인(V) 32.9 g을 벤젠 100 ㎖ 중의 5-메틸푸란-3-카르복사미드 19.7 g (158 mmol)으로된 현탁액에 30 내지 40℃에서 조금씩 첨가하였다. 생성되는 혼합물을 맑아질 때까지 (3.5 내지 4시간) 환류시킨 다음 감압하에서 증류시켰다. 79 내지 140℃/15 mmHg에서 끓는 분획물을 수집하였다. 2번째 증류하여 표제 화합물 12.7 g (119 mmol, 75%)을 생성하였고, 이의 비점은 79 내지 80℃/15 mmHg였다.

i) 5-브로모메틸-3-푸란카르보니트릴

5-메틸-3-시아노푸란 12.7 g (119 mmol)을 테트라클로로메탄 100 ㎖에 용해시키고, NBS 22 g (122 mmol) 및 AIBN 12 g (73 mmol)을 첨가하였다. 생성되는 혼합물을 70℃로 왕성하게 교반하면서 가열하였고, 발열 반응을 시작하였다. 열 반출이 그친 후, 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 생성되는 숙신아미드를 여과 제거하고 테트라클로로메탄 (2 x 15 ㎖)으로 여과기에서 세척하였다.

용매를 감압하에서 제거하고, 감압하에서 잔류물을 증류시켜 비점이 105℃/1 mmHg인 5-브로모메틸-3-푸란카르보니트릴 12.7 g (86 mmol, 57%)을 생성하였다.¹H-NMR 스펙트럼은 δ 1.3 및 2.2 ppm에서 신호를 발생시켜 불순물을 함유함을 나타내었다. 이들의 양은 2차 증류에 의해 만족스러울 정도로 더 낮아졌지만, 약 15%의 생성물 손실이 발생하였다. 5-브로모메틸-3-푸란카르보니트릴은 융점이 40 내지 45℃인 백색 결정질 물질이었다.¹H-NMR (CDCl₃, ppm): 4.41 (2H, CH₂), 6.58 (1H, H4), 7.92 (1H, H2); 13C-NMR (CDCl₃, ppm): 20.86 (CH₂), 99.03 (CN 또는 C3), 109.97 (C4), 112.27 (C3 (또는 CN)), 149.84 (C2), 152.32 (C5).

반응 생성물이 아주 자극적이므로, 극단적으로 주의하여 취급하여야 한다.

5-N,N-비스(t-부톡시카르보닐)아미노메틸-3-시아노푸란을 5-N,N-비스(t-부톡시카르보닐)아미노메틸-2-시아노푸란과 유사한 방법으로 합성하였다. t-부톡시카르보닐기를 클로로포름에 포화된 염화수소 용액에서 수행하였다.

2-아미노-5-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤 히드로아세테이트

a) 5-시아노-1-메틸피롤-2-카르브알데히드

1-메틸피롤을 아세토니트릴 중의 클로로술포닐 이소시아네이트 및 디메틸포름아미드와 반응시켜 2-시아노-1-메틸피롤로 전환시킬 수 있다 (문헌 [C.E. Loader et al. Can. J. Chem. 59, (1981) 2673-6]을 참조). 디이소프로필아민 (17.5 ㎖, 124.38 mmol)을 질소하에서 THF 100 ㎖ 중에 유입하였다. -78℃에서, 헥산 중의 n-부틸리튬 용액 (15%, 75.9 ㎖, 124.38 mmol)을 적가하였다. 이 혼합물을 -20℃에서 45분간 교반하고, 다시 -78℃로 냉각시키고, 이 온도에서 THF 50 ㎖ 중의 N-메틸피롤-2-카르보니트릴 (12 g, 113.07 mmol)을 적가하였다. -78℃에서 45분간 교반한 후, DMF (43.9 ㎖, 546.46 mmol)을 적가하고, 이 온도에서 2시간 동안 교반시켰다. 시트르산 단수화물 20.56 g을 첨가하고, 실온으로 승온시키고 물 112 ㎖를 첨가하였다. THF를 회전식 증발기에서 제거하고, 수상을 염화나트륨으로 포화시키고 디에틸 에테르 (3 x 200 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 조생성물을 플래시 크로마토그래피 (실리카겔, 디클로로메탄)하여 정제하였다. 수율: 8.25 g (54%).¹H-NMR (CDCl₃) δ = 4.1 (s, 3H), 6.8 (d, 1H), 6.9 (d, 1H), 9.7 (s, 1H).

b) 5-히드록시메틸-1-메틸피롤-2-카르보니트릴

a)에서 얻은 생성물 (8.2 g, 61.1 mmol)을 에탄올 200 ㎖에 용해시키고, -10℃에서 수소화붕소나트륨 (2.31 g, 61.13 mmol)을 첨가하였다. 0 내지 5℃에서 1.5시간 동안 교반한 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 얼음-물 및 20% 황산수소나트륨 용액을 잔류물에 첨가하였다. 수상을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기상이 중성이 될때까지 포화 중탄산나트륨 용액 및 물로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시켰다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 조생성물을 플래시 크로마토그래피 (실리카겔, 디클로로메탄/메탄올 = 97.5/2.5)로 정제하였다. 수율: 7.6 g (91%).

¹H-NMR (CDCl₃) δ = 1.9 (t, 1H), 3.75 (s, 3H), 4.6 (d, 2H), 6.1 (d, 1H), 6.7 (d, 1H).

c) 5-아지도메틸-1-메틸피롤-2-카르보니트릴

b)에서 얻은 생성물 (7.5 g, 55.08 mmol)을 DMF 220 ㎖ 중에 용해시키고, 0℃에서 트리페닐포스핀 (43.34 g, 165.25 mmol)을 첨가하였다. 이 온도에서 5분간 교반한 후, 테트라브로로메탄 (54.8 g, 165.25 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 0℃에서 30분간, 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시킨 후, 아지드화나트륨 (4.37 g, 67.21 mmol)을 첨가하고, 이 혼합물을 실온에서 4.5시간 동안 교반하였다. 표화 염화나트륨 용액을 0℃에서 적가하고, 이 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기상을 분리 제거하고 수상을 디에틸 에테르로 추출하였다. 합한 유기상을 물로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 조생성물을 플래시 크로마토그래피 (실리카겔, 에틸 아세테이트/헥산 = 1/20)로 정제하였다. 수율: 5.6 g (63%).

¹H-NMR (CDCl₃) δ = 3.75 (s, 3H), 4.35 (s, 2H), 6.2 (d, 1H), 6.7 (d, 1H).

d) 5-아미노메틸-1-메틸피롤-2-카르보니트릴

c)에서 얻은 생성물 (4.71 g, 29.25 mmol)을 메탄올 100 ㎖에 용해시키고, 탄소 상의 팔라듐 (10%, 1 g)을 첨가하였다. 혼합물을 1기압하에서 4시간 동안 수소를 사용하여 수소화시켰다. 촉매를 셀라이트를 통해 여과 제거하고, 여액을 회전식 증발기에서 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄/디에틸 에테르 = 1/1과 함께 교반하여 추출하였다. 생성물을 흡인 여과 제거하고 35℃의 진공 오븐에서 건조시켰다. 수율 2.7 g (68%).

¹H-NMR (CDCl₃) δ = 3.75 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 6.05 (d, 1H), 6.7 (d, 1H).

e) 5-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤-2-카르보니트릴

d)에서 얻은 생성물 (2.7 g, 19.97 mmol)을 디클로로메탄 50 ㎖에 용해시키고 트리에틸아민 (2.8 ㎖, 19.97 mmol)을 첨가하였다. 디클로로메탄 30 ㎖ 중의 디-t-부틸 디카르보네이트 (4.36 g, 19.97 mmol)으로된 용액을 적가하였다. 2시간 동안 실온에서 교반한 후, 물을 첨가하고, 수상을 디클로로메탄으로 추출하였다. 합산 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고 회전식 증발기에서 농축시켰다. 조생성물을 더 정제하지 않고 다음 반응에 사용하였다.

수율: 4.4 g (94%).

¹H-NMR (CDCl₃) δ = 1.45 및 1.55 (각 s, 총 9H), 3.7 (s, 3H), 4.3 (d, 2H), 4.7 (sbr, 1H), 6.05 (d, 1H), 6.7 (d, 1H).

f) 5-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤-2-히드록시아미딘

e)에서 얻은 생성물 (4.3 g, 18.27 mmol)을 메탄올/디클로로메탄 (100 ㎖, 1/1)에 용해시키고, 히드록실아민 히드로클로라이드 (3.17 g, 45.61 mmol)을 첨가하였다. 그 다음, 에틸디이소프로필아민 (19.1 ㎖, 109.65 mmol)을 실온에서 적가하였다. 40℃에서 12시간 동안 교반하고 용매를 회전식 증발기에서 제거한 후, 물을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 아세트산을 사용하여 pH 5로 산성화시키고 디클로로메탄 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고 회전식 증발기에서 농축시켰다. 플래시 크로마토그래피 (실리카겔, 디클로로메탄/메탄올 = 95/5)하여 조생성물을 정제하였다. 수율: 3.4 g (69%).

¹H-NMR (CDCl₃) δ = 1.4 (s, 9H), 3.7 (s, 3H), 4.3 (d, 2H), 4.7-4.9 (m, 3H), 6.05 (d, 1H), 6.3 (d, 1H), 7.3 (sbr, 1H).

g) 2-아미디노-5-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤 히드로아세테이트

f)에서 얻은 생성물 (3.4 g, 12.67 mmol)을 메탄올 150 ㎖에 용해시키고, 아세트산 (1.45 ㎖, 25.31 mmol) 및 라니 니켈 (421 ㎎)을 첨가하였다. 그 다음, 50℃에서 5시간 동안 1기압의 수소하에서 수소화시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 촉매를 셀라이트를 통해 여과 제거하고, 여액을 농축시켰다. 생성되는 생성물을 더 정제하지 않고 다음 반응에서 사용하였다. 수율: 3.7 g (94%).

FAB-MS (M+H⁺): 253.

2-아미디노-4-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤 히드로아세테이트

a) 5-시아노-1-메틸피롤-3-카르브알데히드

삼염화알루미늄 (24.24 g, 180.86 mmol)을 니트로메탄/디클로로메탄 (1/1, 320 ㎖)에 용해시키고, -20℃로 냉각시킨 후, 1-메틸피롤-2-카르보니트릴 (8 g, 75.36 mmol)을 첨가하였다. 그 다음, 디클로로메탄 42 ㎖ 중에 용해된 α,α-디클로로디메틸 에테르 (10.4 g, 90.43 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 4시간 동안 0℃에서 교반시킨 후, 얼음 200 g에 부었다. 수상을 디에틸 에테르로 추출하였다. 합한 유기상이 중화될 때까지 포화 중탄산나트륨 용액, 물 및 포화 중탄산나트륨 용액으로 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 조생성물을 더 정제하지 않고 다음 반응에서 사용하였다. 수율: 9.2 g (91%).

¹H-NMR (CDCl₃) δ = 3.8 (s, 3H), 7.2 (s, 1H), 7.4 (s, 1H), 9.85 (s, 1H).

b) 5-시아노-1-메틸피롤-3-카르보일데히드로부터 출발하여 5-아미노메틸-1-메틸피롤-2-카르보니트릴의 합성과 유사한 방법으로 4-아미노메틸-1-메틸피롤-2-카르보니트릴을 제조하였다. 그러나, 4-아지도메틸-1-메틸피롤-2-카르보니트릴을 스토이딩거 반응으로 유리하게 환원시켰다 (문헌 [S. Nagarajan et al., J. Org. Chem. 52 (1987) 5044-6]을 참조).

c) 4-아미노메틸-1-메틸피롤-2-카르보니트릴로부터 출발하여 2-아미디노-5-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤 히드로아세테이트의 합성과 유사한 방법으로 2-아미노-4-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤 히드로아세테이트를 제조하였다.

FAB-MS (M+H⁺): 253.

4-아미디노-2-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤 히드로아세테이트

a) 4-시아노-1-메틸피롤-2-카르브알데히드

1-메틸피롤-2-카르브알데히드 (10 g, 91.6 mmol)을 아세토니트릴 100 ㎖에 용해시키고 -45℃로 냉각시켰다. 아세토니트릴 40 ㎖ 중의 클로로술포닐 이소시아네이트 (38.9 g, 274.9 mmol)를 40분에 걸쳐 적가하였다. 그 다음 이 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 디메틸포름아미드 35 ㎖를 적가한 후, 이 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 얼음 200 ㎖ 및 2 N 수산화나트륨 용액 286 ㎖에 첨가하였다. 형성된 침전물을 흡인 여과 제거하였다. 여액을 디에틸 에테르로 추출하였다. 합한 에테르상이 중화될 때까지 묽은 중탄산나트륨 용액 및 물로 세척하고 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 수펌프 진공에서 증류 제거하고, 잔류물을 앞에서 얻은 침전물과 합하였다. 광유 에테르로부터 재결정화시켜 4-시아노-1-메틸피롤-2-카르브알데히드 4.3 g을 생성하였다 (문헌 [C.E. Loader et al. Can. J. Chem. 59 (1981) 2673-6]을 참조).

¹H-NMR (CDCl₃) δ = 4.0 (s, 3H), 7.2 (s, 1H), 7.3 (s, 1H), 9.6 (s, 1H).

¹³C-NMR (DCCl₃) δ = 37.4, 94.1, 114.7, 125.8, 132.2, 135.8, 179.7.

b) 4-시아노-1-메틸피롤-2-카르브알데히드로부터 출발하여 5-아미노메틸-1-메틸피롤-2-카르보니트릴의 합성과 유사한 방법으로 5-아미노메틸-1-메틸피롤-3-카르보니트릴을 제조하였다.

¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 3.6 (s, 3H), 3.8 (s, 2H), 4.2 (sbr, 2H), 6.4 (s, 1H), 7.6 (s, 1H).

c) 5-아미노메틸-1-메틸피롤-3-카르보니트릴로부터 출발하여 2-아미디노-5-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤 히드로아세테이트의 합성과 유사하게 3-아미디노-5-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤 히드로아세테이트를 제조하였다.

FAB-MS (M+H⁺): 253.

5-아미노메틸-3-시아노-1,2,4-옥사디아졸 히드로클로라이드

a) N-Boc-5-아미노메틸-3-시아노-1,2,4-옥사디아졸

에틸 N-Boc-5-아미노메틸-1,2,4-옥사디아졸-2-카르복실레이트 (문헌 [S. Borg et al. J. Org. Chem. 60 (1995) 3112-20]을 참조)를 메탄올 50 ㎖에 용해시켰다. 전환이 완료될 때까지 암모니아를 -10℃ 내지 실온에서 이 용액에 통과시켰다. 이 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 생성되는 조생성물을 디클로로메탄 70 ㎖에 용해시키고, -5℃에서 디이소프로필에틸아민 (2.9 ㎖, 16.55 mmol)을 첨가하였다. 그 다음, 디클로로메탄 10 ㎖ 중에 용해된 트리플루오로아세트산 무수물 (1.06 ㎖, 7.61 mmol)을 적가하였다. 이 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반시킨 후, 디클로로메탄으로 희석하고, 중탄산나트륨 용액으로 2회, 5% 시트르산 용액으로 2회 및 포화 염화나트륨 용액으로 1회 세척한 다음 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 조생성물을 크로마토그래피 (실리카겔, 디클로로메탄:메탄올 = 97.5:2.5)로 정제하였다. 수율: 1.2 g (80%).

b) 5-아미노메티러-3-시아노-1,2,4-옥사디아졸 히드로클로라이드

a)에서 얻은 생성물 (0.9 g, 4.0 mmol)을 디클로로메탄 45 ㎖에 용해시키고, 실온에서 디옥산 (3.9 ㎖, 15.61 mmol) 중의 4 M 염산을 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 수율: 645 ㎎ (100%).

¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 4.6 (s, 2H), 9.2 (s, 3H).

N-메틸-5-아미노메틸피라졸-3-카르복사미드

a) 메틸 N-메틸-5-아미도피라졸-3-카르복실레이트

N-메틸-3-메톡시카르보닐피라졸-5-카르보닐 클로라이드 (N-메틸-3-메톡시카르보닐-3-카르복실산 3.7 g, 20.09 mmol로부터 제조, 문헌 [J. Org. Chem. 54 (1989) 428]을 참조)를 톨루엔에 용해시키고 -10℃로 냉각시켰다. 그 다음, -10℃ 내지 0℃에서, 전환이 완료될 때까지 암모니아를 통과시켰다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 잔류물을 에탄올에 취하고, 15분간 교반한 후, 에탄올을 회전식 증발기에서 제거하고, 잔류물을 온수에 용해시키고 0℃로 냉각하여 침전시켰다. 침전물을 흡인 여과 제거하고, 아세톤으로 세척하고 감압하의 45℃에서 건조시켰다. 수율: 1.5 g (41%).

b) 메틸 N-메틸-5-시아노피라졸-3-카르복실레이트

a)에서 얻은 생성물 (1.5 g, 8.19 mmol)을 디클로로메탄 20 ㎖에 취하였다. -10℃에서, 디이소프로필에틸아민 (3.85 ㎖, 22.11 mmol)을 첨가하고, 이 온도에서 디클로로메탄 5 ㎖ 중에 트리플루오로아세트산 무수물 (1.3 ㎖, 9.44 mmol)로된 용액을 45분에 걸쳐 적가하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 0℃에서 교반하고 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 용액으로 2회, 5% 시트르산 용액으로 2회 및 포화 염화나트륨 용액으로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 수율: 1.35 g (100%).

EI-MS (M+):165.

c) N-메틸-5-시아노피라졸-3-카르복사미드

b)에서 얻은 생성물 (1.35 g, 8.19 mmol)을 메탄올 50 ㎖에 유입하고 -10℃로 냉각시켰다. 암모니아를 8시간 동안 통과시켰다. 12시간 동안 실온에서 교반한 후, 전구체를 완전히 반응시켰다. 침전 생성물을 흡인 여과 제저하고, 차가운 메탄올로 세척하고 감압하에서 건조시켰다. 수율: 1.22 g (100%).

¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 4.0 (s, 3H), 7.4 (s, 1H), 7.5 (s, 1H), 7.8 (s, 1H).

d) N-메틸-5-아미노메틸피라졸-3-카르복사미드

c)에서 얻은 생성물 (0.4 g, 2.66 mmol)을 아세트산 30 ㎖에 용해시키고, 탄소 상의 10% 팔라듐 78 ㎎을 첨가하였다. 이 혼합물을 전환이 완료될 때까지 대기압하의 실온에서 수소화시켰다. 촉매를 셀라이트를 통해 여과 제거하고, 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 수율: 0.4 g (100%).

EI-MS (M+): 154.

＜실시예 1＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

a) 3,4-디히드로프롤릴 5-(2-시아노)-티에닐메틸아미드:

Boc-3,4-디히드로프롤린 (5 g, 23.4 mmol) 및 5-아미노메틸-2-시아노티오펜 히드로클로라이드 (4.5 g, 25.8 mmol)를 디클로로메탄 25 ㎖에 용해시키고, 0℃에서 에틸디이소프로필아민 (28 ㎖, 163.8 mmol)를, 에틸 아세테이트 (24.8 ㎖, 117 mmol) 중의 프로판포스폰산 무수물로된 50% 용액을 첨가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 이 혼합물을 실온으로 승온시키고 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 황산수소나트륨 용액 (4회), 중탄산나트륨 용액 (3회) 및 포화 염화나트륨 용액 (1회)으로 희석하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과하여 건조제를 제거한 후, 용매를 수펌프 진공하에서 증류 제거하였다. Boc기를 제거하기 위해, 잔류물을 디클로로메탄 95 ㎖ 중에서 혼합시키고, 실온에서 교반하고, 증발시켜 건조하고 디클로로메탄과 함께 2번 증류하고, 다시 농축시키고 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. 여전히 적은 양의 용매를 함유하는 요구되는 생성물 6.6 g을 생성하였다.

b) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-시아노)-티에닐메틸아미드:

t-BuO₂C-CH₂-Boc-(D)-Cha-OH (7.3 g, 18.98 mmol) 및 H-Pyr-NH-CH₂-5-(2-CN)-thioph 히드로클로라이드 (5.12 g, 18.98 mmol)을 디클로로메탄 100 ㎖ 중에 용해시키고, 에틸디이소프로필아민 (12.26 g, 94.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 에틸 아세테이트 20 ㎖ 중의 50% 프로판포스폰산 무수물로된 용액을 적가하였다. 0 내지 10℃에서 3시간 동안 교반하고, 디클로로메탄 100 ㎖로 희석하고 묽은 황산수소나트륨 용액 (3회), 포화 중탄산나트륨 용액 (2회) 및 물 (1회)로 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시키고 건조제를 제거한 후, 용매를 수펌프 진공하에서 증류 제거하였다. 12.47 g의 옅은 갈색을 띠는 오일을 생성하였다.

c) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-아미도티오카르보닐)-티에닐-메틸아미드:

b)에서 얻은 생성물을 피리딘 70 ㎖ 및 트리에틸아민 12 ㎖에 용해시켰다. 반응 생성물을 0℃로 냉각시키고 황화수소로 포화시켰다 (용액이 녹색으로 변함). 그 다음 실온에서 이 용액을 48시간 동안 교반하였다. 과잉한 황화수소를 질소로 대체하고, 용매를 수펌프 진공에서 증류 제거하였다. 잔류물을 디에틸 에테르 200 ㎖에 용해시키고 묽은 황화수소나트륨 용액 (2회), 중탄산나트륨 용액 (2회) 및 물 (1회)로 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 용매를 수펌프 진공하에서 증류 제거하였다. 조생성물 (12.6 g)을 플래시 크로마토그래피 (실리카겔, 디클로로메탄 내지 디클로로메탄:메탄올 = 40:1의 구배)로 정제하였다. 여전히 적은 양의 용매를 함유하는 요구되는 생성물 12.1 g을 생성하였다.

d) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-S-메틸이미도카르보닐)-티에닐메틸아미드 히드로요오디드:

c)에서 얻은 생성물을 디클로로메탄 120 ㎖에 용해시키고, 요오드화메틸 (16.24 g, 114.38 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 12시간 동안 교반한 후, 용매를 수펌프 진공하에서 증류 제거하였다. 14.6 g의 노란색을 띠는 오일을 생성하였다.

e) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트:

d)에서 얻은 조생성물을 아세토니트릴 90 ㎖에 용해시키고, 암모늄 아세테이트 (2.94 g, 38.12 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 2시간, 40℃에서 1.5시간 동안 교반한 후, 메탄올 (14.65 g, 19.05 mmol) 중의 10% 암모늄 아세테이트 용액을 첨가하였다. 이 혼합물을 50℃에서 4.5시간 동안 교반하고, 용매를 수펌프 진공하에서 증류 제거하였다. 잔류물을 디클로로메탄과 혼합하고, 염을 흡인 여과 제거하고, 여액을 농축시켰다. 잔류물을 이온 교환기 (Fluka, No. 00402)상에서 아세테이트염으로 전환시켜, 노란색을 띠는 오일 11.15 g을 생성하였다.

f) N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-히드로프롤릴 5-(2-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

e)에서 얻은 생성물ㅇ르 디클로로메탄 175 ㎖에 용해시키고, 에테르성 염산 용액 38.3 ㎖를 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후, 용매를 수펌프 진공하에서 증류 제거하였다. 잔류물을 디클로로메탄과 혼합하고, 용매를 수펌프 진공하에서 2번 증류 제거하였다. 조생성물 9.35 g을 이온 교환기 (Fluka, No.00402)로 정제하고 플래시 크로마토그래피 (실리카겔, 디클로로메탄:메탄올: 4:1 대 디클로로메탄:메탄올:50% 아세트산: 40:10:2 내지 디클로로메탄:메탄올:50% 아세트산 = 35:15:5의 구배)하였다. 이 방법으로 얻은 생성물을 물에 용해시켰다. 불용성 물질을 여과하여 제거하고, 여액을 동결 건조시켜 무정형 백색 고체로된 5.55 g의 생성물을 얻었다.

FAB-MS (m+H⁺): 462

실시예 1에서와 같이 다음을 제조하였다.

＜실시예 2＞

N-(히드록시카르보닐에틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프로릴 5-(2-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 476

N-(t-부톡시카르보닐에틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닌 및 3,4-디히드로프롤릴 5-(2-시아노)-티에닐메틸아미드로부터 출발하는 실시예 1에서와 같은 여러 단계에 걸쳐 제조하였다.

＜실시예 3＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리실-3,4-히히드로프롤릴 5-(2-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 448

N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실글리신 및 3,4-디히드로프롤릴 5-(2-시아노)-티에닐메틸아미드로부터 출발하는 실시예 1에서와 같은 여러 단계에 걸쳐 제조하였다.

＜실시예 4＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-히드로프롤릴 5-(2-아미디노-3,4-디메틸)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 490

실시예 1에서와 같이 5-아미노메틸-3,4-디메틸티오펜-2-카르복사미드를 Boc-3,4-디히드로프롤린과 커플링시켜 Boc-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-카르바모일-3,4-디메틸)-티에닐-메틸아미드를 제조하였다. Boc 보호기를 제거한 후, 이 성분을 실시예 1에서와 같이 N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닌에 커플링시켰다. 아미드를 니트릴 관능기로의 탈수 과정을 아래와 같이 수행하였다.

N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-카르바모일-3,4-디메틸)-티에닐메틸아미드 4.8 g (7.42 mmol)을 메틸렌 클로라이드 60 ㎖에 용해시키고, 디이소프로필에틸아민 3.83 g (29.64 mmol)을 첨가한 후, 0℃로 냉각시켰다. 메틸렌 클로라이드 3 ㎖ 중의 트리플루오로아세트산 무수물 2.8 g을 서서히 적가하고, 이 혼합물을 2시간 동안 0 내지 5℃에서 냉각시켰다. 그 다음 이 혼합물을 메틸렌 클로라이드 60 ㎖로 희석하고 20% 시트르산 20 ㎖로 3회, 포화 중탄산나트륨 용액 20 ㎖로 2회 및 포화 염수로 2회 연속 세척하고, 메틸렌 클로라이드상을 황산나트륨상에서 건조시키고 회전식 증발기에서 농축시켰다. 여전히 용매를 함유하는 N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-시아노-3,4-디메틸)-티에닐메틸아미드 5.35 g을 생성하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다.

니트릴 관능기를 아미딘기로 전환시키고 보호기를 제거하는 것은 실시예 1에서와 같이 실시하였다.

＜실시예 5＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 462

5-아미노메틸-2-시아노티오펜 히드로클로라이드 대신에 5-아미노메틸-3-시아노티오펜 히드로클로라이드를 사용하여, 실시예 1에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 6＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 4-(2-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 462

5-아미노메틸-2-시아노티오펜 히드로클로라이드 대신에 4-아미노메틸-2-시아노티오펜 히드로클로라이드를 사용하여 실시예 1에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 7a＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-(D)-4,5-디히드로피페콜릴 5-(2-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 476

＜실시예 7b＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-4,5-디히드로피페콜릴 5-(2-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 476

Boc-3,4-디히드로프롤린 대신에 라세미체 Boc-(D,L)-4,5-디히드로피페콜산을 사용하여 실시예 1에서와 같이 제조하였다. N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-(D,L)-4,5-디히드로피페콜릴 5-(2-시아노)-티에닐메틸아미드의 단계에서, 크로마토그래피 (실리카겔, 시클로헥살/에틸 아세테이트 7:3)를 사용하여 2개의 부분입체 이성질체 화합물들을 분리하는 것이 가능하였다. 이어서 2개의 부분입체 이성질체들을 실시예 1에서와 같은 최종 생성물로 전환시켰다.

＜실시예 8＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 448

5-아미노메틸-3-시아노-티오펜 및 N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-N-Boc-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤린으로부터 출발하여 실시예 1에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 9＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤릴 4-(2-아미디노)-티에닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 448

4-아미노메틸-2-시아노-티오펜 및 N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-N-Boc-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤린으로부터 출발하여 실시예 1에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 10＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-아미디노)-푸라닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 446

5-아미노메틸-2-시아노티오펜 히드로클로라이드 대신에 5-아미노메틸-2-시아노푸란 히드로클로라이드를 사용하여 실시예 1에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 11＞

N-(히드록시카르보닐에틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-아미디노)-푸라닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 460

5-아미노메틸-2-시아노티오펜 히드로클로라이드 대신에 5-아미노메틸-2-시아노푸란 히드로클로라이드를 사용하여 실시예 1에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 12＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-아미디노)-푸라닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 432

＜실시예 13＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노-푸라닐메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 446

＜실시예 14＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-아미디노-1-메틸)-피롤메틸아미드 히드로클로라이드

a) 5-(N-Boc-아미노메틸)-1-메틸피롤-2-아미딘 히드로아세테이트 (1.5 g, 4.4 mmol)을 이소프로판올 70 ㎖에 용해시키고, 이소프로판올 염산 (5.5 M, 4.5 ㎖, 24.0 mmol)을 첨가한 후, 2시간 동안 50℃에서 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 회전식 증반기에서 제거하고, 잔류물을 DMF 50 ㎖ 중의 t-BuO₂C-CH₂-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-OH로된 용액에 첨가하였다. 이 용액을 0℃로 냉각시키고 N-메틸모르폴린 (1.92 ㎖, 17.44 mmol)을 첨가하였다. 이어서, TOTU (1.18 g, 3.58 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 0℃에서 45분간 교반한 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 조생성물을 MPLC로 정제하였다 (RP-18, 아세토니트릴/물). 수율: 980 ㎎ (45%).

FAB-MS (M+H⁺): 615

b) a)에서와 얻은 생성물 (550 ㎎, 0.845 mmol)을 디클로로메탄 50 ㎖에 용해시키고, 이 용액을 0 내지 5℃에서 HCl 가스로 포화시켰다. 이어서, 이를 0℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 조생성물을 냉동 건조시켰다. 수율: 450 ㎎ (100%).

FAB-MS (M+H⁺): 459

＜실시예 15＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 2-(4-아미디노-1-메틸)-피롤메틸아미드 히드로클로라이드를 실시예 14에서와 같이 제조하였다.

FAB-MS (M+H⁺): 459

＜실시예 16＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 4-(2-아미디노-1-메틸)-피롤메틸아미드 히드로클로라이드를 실시예 14에서와 같이 제조하였다.

FAB-MS (M+H⁺): 459

＜실시예 17＞

N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 2-(4-아미도티오카르보닐)옥사졸메틸아미드 히드로클로라이드

a) t-BuO₂C-CH₂-(Boc)-(D)-Cha-Pyr-OH (2.36 g, 4.92 mmol)을 디클로로메탄 60 ㎖에 용해시켰다. -10℃에서, 디이소프로필에틸아민 (4.3 ㎖, 24.59 mmol)을 적가하였다. 이 온도에서 5분간 교반한 후, 2-아미노메틸옥사졸-4-티오카르바미드 히드로클로라이드 (1 g, 5.16 mmol, ansgjs [G. Videnov et al. Angew. Chem. 108 (1996) 1604-9]을 참조, 이 문헌에 기재된 N-Boc-2-아미노메틸옥사졸-4-티오카르바미드 중의 Boc기를 에테르성 염산으로 절단하고, 농축시켜 대응하는 염화수소를 생성)를 첨가하고, 디클로로메탄 10 ㎖로 희석된 에틸 아세테이트 (5.06 ㎖, 6,39 mmol) 중의 프로판포스핀산 무수물 50% 용액을 20분간 적가하였다. 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 3시간 동안 실온으로 승온시켰다. 이 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 용액으로 2회, 5% 시트르산 용액으로 2회 및 포화 염화나트륨 용액으로 1회 세척하고 황산나트륨상에서 건조시켰다. 이 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 조생성물을 크로마토그래피 (실리카겔, 디클로로메탄:메탄올 = 95:5)로 정제하였다. 수율: 2.5 g (82%).

¹H-NMR (DMSO-d₆) δ = 0.5-2.0 (m, 31H), 3.1-5.5 (m, 8H), 5.8-6.2 (m, 2H), 8.5-9.3 (m, 3H), 9.8 (sbr, 1H).

b) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-boc)-(D)-시클로헥실알리닐-3,4-디히드로프롤릴 2-(4-아미디노)옥사졸메틸아미드 히드로아세테이트

a)에서 얻은 생성물을 아세톤 50 ㎖에 용해시키고, 요오드화메틸 (1.97 ㎖, 31.29 mmol)을 첨가한 후, 2시간 동안 환류시켰다. 이 용매 및 과잉한 요오드화 메틸을 회전식 증발기에서 제거하였다. 생성되는 조생성물을 테트라히드로푸란 50 ㎖에 용해시키고, 암모늄 아세테이트 (466 ㎎, 6.05 mmol)를 첨가하고, 60℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 조생성물을 이온 교환기 (중합 지지체 상의 아세테이트, Fluka 00402)를 사용하여 아세테이트로 전환시키고, 크로마토그래피 (실리카겔, 디클로로메탄:메탄올:아세트산 = 75:20:5)로 정제하였다. 수율: 2.0 g (75%).

FAB-MS (M+H⁺): 603

c) N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 2-(4-아미디노)옥사졸메틸아미드 히드로클로라이드

b)에서 얻은 생성물 (1.95 g, 2.94 mmol)을 디클로로메탄 50 ㎖에 용해시키고 디옥산 (3.7 ㎖, 14.71 mmol) 중의 4 M 염산을 첨가하였다. 실온에서 20시간 동안 교반한 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 조생성물을 물에 용해시키고 냉동건조시켰다. 수율: 1.5 g (100%).

13-H-NMR (DMSO-d₆) δ = 168.6, 167.8, 166.2, 162.2, 156.4, 144.7, 129.6, 127.7, 125.5, 67.9, 55.0, 53.5, 45.3, 36.4, 35.7, 33.0, 32.5, 32.0, 25.7, 25.4, 25.2.

＜실시예 18＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노)-1,2,4-옥사디아졸메틸아미드 히드로클로라이드

a) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-시아노)-1,2,4-옥사디아졸-메틸아미드

N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OH (1.93 g, 4.0 mmol)를 디클로로메탄 65 ㎖에 용해시키고, -10℃에서 디이소프로필에틸아민 (3.1 ㎖, 17.67 mmol)을 첨가하였다. 그 다음, 디클로로메탄 30 ㎖ 중에 용해된 5-아미노메틸-3-시아노-1,2,4-옥사디아졸 히드로클로라이드 (645 ㎎, 4.0 mmol)를 첨가하였다. 5분간 교반한 후, 디클로로메탄 15 ㎖로 희석된 에틸 아세테이트 (3.9 ㎖, 4.93 mmol) 중의 프로판포스폰산 무수물 50% 용액을 30분에 걸쳐 적가하였다. 0℃에서 1시간 후, 이 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 포화 중탄산나트륨으로 2회, 5% 시트르산 용액으로 2회 및 포화 염화나트륨 용액으로 1회 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시킨 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 조생성물을 크로마토그래피 (실리카겔, 디클로로메탄:메탄올 = 95:5)로 정제하였다. 수율: 1.55 g (71%).

FAB-MS (M+H⁺): 587.

b) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노)-1,2,4-옥사디아졸-메틸아미드 히드로아세테이트

a)에서 얻은 생성물 (1.5 g, 2.56 mmol)을 메탄올 5 ㎖에 용해시키고, 아세틸시스테인 (450 ㎎, 2.76 mmol)을 첨가하였다. 그 다음, 완전히 전환될 때까지 35℃에서 암모니아를 통과시켰다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 이온 교화기 (중합 지지체 상의 아세테이트, Fluka 00402)를 사용하여 조생성물을 아세테이트로 전환시켰다. 생성되는 조생성물을 크로마토그래피 (RP-18, 아세토니트릴, 물)로 정제하였다. 수율: 300 ㎎ (18%).

FAB-MS (M+H⁺): 604.

c) N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미노-1,2,4-옥사디아졸메틸아미드 히드로클로라이드

b)에서 얻은 생성물 (300 ㎎, 0.45 mmol)을 디클로로메탄 20 ㎖에 용해시키고, 실온에서 디옥산 (0.6 ㎖, 2.48 mmol) 중의 4 M 염산 용액을 첨가하였다. 실온에서 20시간 동안 교반한 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 생성물을 물에 용해시키고 냉동 건조하였다. 수율: 230 ㎎ (98%).

＜실시예 19＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노-N-메틸피라졸메틸아미드 히드로클로라이드

a) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미도-N-메틸)-피라졸메틸아미드

N-(t-BuO₂C-CH₂)-N-Boc-(D)-Cha-Pyr-OH (1.25 g, 2.59 mmol)를 디클로로메탄 30 ㎖에 유입하였다. -10℃에서, 디이소프로필에틸아민 (1.95 ㎖, 11.16 mmol)을 적가하였다. 그 다음, 테트라히드로푸란 20 ㎖ 중의 N-메틸-5-아미노메틸피라졸-3-카르복사미드 (0.4 g, 2.59 mmol)를 첨가하였다. 5분간 교반한 후, 에틸 아세테이트 (2.36 ㎖, 3.11 mmol) 및 디클로로메탄 5 ㎖ 중의 50% 프로판포스폰산 무수물 용액을 5분에 걸쳐 적가하였다. 0℃에서 45분간 교반하고, 실온에서 12시간 동안 승온시켰다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄에 취하고, 포화 중탄산나트륨 용액으로 2회, 5% 시트르산 용액으로 2회 및 포화 염화나트륨 용액으로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 조생성물을 크로마토그래피 (RP-18, 아세토니트릴, 물)로 정제하였다. 수율: 220 ㎎ (14%).

FAB-MS (M+H⁺): 617.

b) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-시아노-N-메틸)피라졸-메틸아미드

a)에서 얻은 생성물 (220 ㎎, 0.36 mmol)을 디클로로메탄 15 ㎖에 용해시키고, -10℃에서 디이소프로필에틸아민 (0.17 ㎖, 0.96 mmol)을 첨가하였다. 5분간 교반한 후, 디클로로메탄 1 ㎖ 중의 트리플루오로아세트산 무수물 (0.057 ㎖, 0.41 mmol)로된 용액을 적가하였다. 0℃에서 1시간 후, 이 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨으로 2회, 5% 시트르산 용액을 2회 및 포화 염화나트륨 용액으로 1회 세척하였다. 황산나트륨 상에서 건조시킨 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하였다. 수율: 180 ㎎ (84%).

c) N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노-N-메틸)피라졸-메틸아미드 히드로아세테이트

b)에서 얻은 생성물 (180 ㎎, 0.3 mmol)을 메탄올 1 ㎖에 용해시키고, 아세틸시스테인 (52.8 ㎎, 0.32 mmol)을 첨가하였다. 35℃에서 암모니아를 전환이 완료될 때까지 통과시켰다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고, 이온 교환기 (중합 지지체 상의 아세테이트, Fluka 00402)를 사용하여 조생성물을 아세테이트로 전환시켰다. 조생성물을 크로마토그래피 (RP-18, 아세토니트릴, 물)로 정제하였다. 수율: 50 ㎎ (16%).

FAB-MS (M+H⁺): 616.

d) N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노-N-메틸)피라졸메틸아미드 히드로클로라이드

c)에서 얻은 생성물 (50 ㎎, 0.081 mmol)을 디클로로메탄 5 ㎖에 용해시키고, 디에틸 에테르 0.147 ㎖ 중의 5 M 염산을 첨가하였다. 실온에서 12시간 동안 교반한 후, 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 생성물을 물에 취하고 냉동 건조시켰다. 수율: 40 ㎎ (92%).

FAB-MS (M+H⁺): 460.

＜실시예 20＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노)이속사졸메틸아미드 히드로클로라이드

5-아미노메틸이속사졸릴-3-카르복사미드 및 Boc-3,4-디히드로프롤린으로부터 출발하여 제조하였다. 커플링시키고 Boc 보호기를 제거한 후, 생성되는 구성분을 N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닌과 연결하여 N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-카르바모일)-이속사졸메틸아미드를 생성하였다. 일차 아미드를 탈수시켜 실시예 4에서와 같이 니트릴 관능기를 생성한 후, 아래와 같이 아미딘을 형성시켰다.

N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-아미디노)이속사졸메틸아미드 히드로아세테이트:

N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-(N-Boc)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(3-시아노)이속사졸메틸아미드 1.75 g (3.0 mmol)을 메탄올 10 ㎖에 용해시키고, N-아세틸시스테인 0.54 g (3.28 mmol)을 첨가한 후, 4시간 동안 가스 상태의 암모니아를 통과시키면서 환류시켰다. N-아세틸시스테인을 제거하고, 생성물을 정제하고 MPL 크로마토그래피 (RP-18, 아세토니트릴/물/0.1 M 아세트산)를 실시하여 아세테이트로 전환시켰다. 냉동 건조시켜 백색 분말 1.39 g (이론치의 70%)을 생성하였다.

정제된 생성물을 메틸렌 클로라이드 중의 에테르성 염산으로 탈보호시켜 표제 화합물을 생성하였다.

FAB-MS (M+H⁺): 448.

＜실시예 21＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 2-(4-아미디노)티아졸메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 463.

2-아미노메틸티아졸-4-티오카르복사미드 및 N-Boc-N-(t-부틸옥시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤린으로부터 출발하여 실시예 1에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 22＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤린 2-(4-아미디노)티아졸메틸아미드 히드로클로라이드

FAB-MS (M+H⁺): 449.

＜실시예 23＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 4-(2-아미디노)티아졸메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 463.

4-아미노메틸티아졸-2-티오카르복사미드 및 N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-N-Boc-(D)-시클로알라닐-3,4-디히드로프롤린으로부터 출발하여 실시예 1에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 24＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤릴 4-(2-아미디노)티아졸메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 449.

4-아미노메틸티아졸-2-티오카르복사미드 및 N-(t-부톡시카르보닐메틸렌)-N-Boc-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤린으로부터 출발하여 실시예 1에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 25＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 2-(5-아미디노)티아졸메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 463.

실시예 21에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 26＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤릴 2-(5-아미디노)티아졸메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 449.

실시예 22에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 27＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실알라닐-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-아미디노)티아졸메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 463.

실시예 23에서와 같이 제조하였다.

＜실시예 28＞

N-(히드록시카르보닐메틸렌)-(D)-시클로헥실글리실-3,4-디히드로프롤릴 5-(2-아미디노)티아졸메틸아미드 히드로아세테이트

FAB-MS (M+H⁺): 449.

실시예 24에서와 같이 제조하였다.

Claims (7)

1. 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 생리학상 허용되는 산염.

   ＜화학식 I＞

   상기 식에서,

   A는

   (여기서, m은 0, 1 또는 2이고,

   n은 0, 1 또는 2이고,

   R¹은 HOOC-, C_1-6-알킬-OOC-, 아릴-C₁-C₄-알킬-OOC- 또는 -OH이고,

   R²는 H, C_1-4-알킬 또는 R¹-(CH₂)_m-이고,

   R³은 H 또는 C_1-4-알킬임)이고,

   B는

   (여기서, R⁴는 H, C_1-4-알킬 또는 R¹-(CH₂)_m- (R¹및 m은 상기 의미를 가짐)이고,

   p는 0 또는 1이고,

   R⁵는 H 또는 C_1-4-알킬이고,

   R⁶은 H, C_1-8-알킬이거나, C_1-4-알킬, CF₃, C_1-4-알콕시, F 및 Cl의 군으로부터 선택된 3개 이하의 동일하거나 상이한 라디칼로 치환될 수 있는 페닐, 또는 4개 이하의 동일하거나 상이한 C_1-4-알킬 라디칼을 담지할 수 있거나, 고리 중의 1 또는 2개의 C-C 단일 결합이 C=C 이중 결합으로 대체될 수 있거나, 페닐 고리가 융합될 수 있는 C_3-8-시클로알킬, C_7-12-비시클로알킬 또는 C₁₀-트리시클로알킬이거나,

   R⁴와 R⁶이 함께 에틸렌 또는 프로필렌기이고,

   R⁷은 H, C_1-8-알킬이거나, C_1-4-알킬, CF₃, C_1-4-알콕시, F 및 Cl의 군으로부터 선택된 3개 이하의 동일하거나 상이한 라디칼을 담지할 수 있는 페닐, 또는 4개 이하의 동일하거나 상이한 C_1-4-알킬 라디칼을 담지할 수 있는 C_3-8-시클로알킬이고,

   R⁸은 H 또는 C_1-4-알킬임)이고,

   E는

   (여기서, q는 0 또는 1임)이고,

   D는

   (여기서, R⁹는 H 또는 C_1-3-알킬이고,

   R¹⁰은 H 또는 C_1-4-알킬이고,

   R¹¹은 H 또는 C_1-4-알킬이고,

   X는 O, S 또는 -NR¹²(R¹²= H, C_1-6-알킬)이고,

   Y는 -N=, -CR¹³= (R¹³= H, C_1-4-알킬), Cl 또는 CF₃이고,

   Z는 -N= 또는 -CR¹³= 임)이다.
2. 제1항에 있어서, 질병의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물.
3. - 발병 기작이 직간접적으로 트롬빈의 단백질분해 작용에 기인하는 질병,

   - 발병 기작이 수용체 및 신호 전달의 트롬빈-의존 활성화에 기인하는 질병,

   - 체세포내에서 유전자 발현의 촉진 또는 억제와 관련된 질병,

   - 트롬빈의 유사분열촉진 작용에 기인하는 질병,

   - 상피 세포의 수축능 및 투과성의 트롬빈-의존성 변화에 기인하는 질병,

   - 트롬빈 의존성 혈전색전 증상,

   - 파종성혈관내응고,

   - 혈전용해제와 함께 투여시 재관류 시간의 단축 및 재폐색 시간 연장,

   - PTCA 후 초기 재폐색 및 후기 재발협착증의 발생,

   - 평활근 세포의 트롬빈-의존성 증식,

   - CNS에 활성 트롬빈의 축적,

   - 종양 성장, 및 종양 세포의 유착 및 전이의 방지

   를 위한 약물을 생산하기 위한 제1항에 따른 화학식 I의 화합물의 용도.
4. - 발병 기작이 직·간접적으로 키니노게나제, 특히 칼리크레인의 단백질 분해 작용에 기인하는 질환,

   - 천식, 췌장염, 비염, 관절염, 담마진, 및 칼리크레인이 관련된 다른 내과적 질환과 같은 염증성 질환

   을 위한 약물을 생산하기 위한 제1항에 따른 화학식 I의 화합물의 용도.
5. 제1항에 있어서, 표면 코팅용인 화학식 I의 화합물.
6. 하기 화학식의 구조 절편을 포함하는 화합물.

   상기 식에서, E 및 D는 제1항에서 나타낸 의미를 가진다.
7. 하기 화학식 IIa 및 IIb의 화합물.

   ＜화학식 IIa＞

   A - B - E - D - CN

   ＜화학식 IIb＞

   A - B - E - D - CSNH₂

   상기 식에서, A, B, E 및 D는 제1항에서 나타낸 의미를 가진다.