JP5785275B2 - 単離された微生物菌株、ラクトバチルスプランタルム（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ）ｍｃｃ１ｄｓｍ２３８８１およびラクトバチルスガセリ（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｇａｓｓｅｒｉ）ｍｃｃ２ｄｓｍ２３８８２ならびにそれらの使用 - Google Patents

Description

本発明は、バイオテクノロジーの分野に関し、食品産業で使用されることになる。さらに正確には、本発明は、微生物菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２ならびに乳アレルギーおよび良性前立腺肥大症に伴う下部尿路刺激症状ならびにこれらに関連する酸化ストレスおよび炎症の低減へのそれらの使用に関する。

乳酸桿菌は、長い間、健康によい食品を作るために、例えば、スターター培養菌としてなど広く使用されてきた。最も一般的な方法は、機能性食物における乳酸桿菌の使用である。機能性食物とは、通常の食事の価値に加えて生物の一部の機能に有益な影響を与えるかまたは疾患のリスクを低下させる付加的な天然の構成成分を含む食品のことである。

食品を調製する際に、意図的に生物学的選択をされ、後続の技術的段階において低温殺菌により死滅する生きた乳酸桿菌を含む方法が使用されることは少なかった。これは、最終製品は、生きた乳酸菌を含まないが、前処理、適した技術方式および必要な添加物により、作り出される製品が意図した生物学的効果を有することを意味する。

乳アレルギーおよびその軽減
感染症、炎症、アレルギーおよび酸化ストレス関連の問題、例えば、食物アレルギー、尿路症状（例えば、前立腺の病気に関連する排尿異常）が経済的にさらに社会の負担になってきている。例えば、人口の最大４％が食物アレルギーに苦しんでおり、米国では、１００〜２００人の死亡は食物アレルギーが直接的な原因である。乳幼児についての（牛乳に対するアレルギー反応を含む）食物アレルギーは、特に深刻な問題である。乳幼児に乳製品を使用することは、乳幼児の正常な成長および発達を保証するために必須である。絶対的にアレルギー反応のない製品であると同時に非常に高く良好な生物学的品質を持つ製品を作り出すことは不可能であるため、食物のアレルゲン性の問題を解決することは非常に複雑である。ＵＮ、ＦＡＯおよびＷＨＯの最新の議論は宣言した−アレルゲンフリー：明確にするとき；声明：すべてのアレルゲンを含まないことを宣言する実際の法律はない。したがって、アレルギー反応のある乳幼児の数を少なくとも数パーセント減少させることになる、より低アレルギー性の製品をもたらすいかなる技術的発想／解決策も高い評価を受けることになるであろう。食品のアレルゲン性を減少させるためのアレルギーの分野におけるいかなる成功も大幅な社会経済上の結果（小児および成人の生活の質の改善および治療コストの削減など）をもたらすため、アレルギー反応のいかなる割合の低減も、結論として／長期的な視点で非常に重要である。

乳製品のアレルゲン性は、タンパク質によって判断されるが、１つのいわゆる主要なアレルゲンを明らかにすることは難しい（例えば、非特許文献１、非特許文献２参照）。それにもかかわらず、カゼインおよびベータ−ラクトグロブリンの両方が同等の割合でアレルギー反応を引き起こす。牛乳アレルギーは、主にα−カゼインおよびβ−ラクトグロブリンと関連している（例えば、非特許文献３、非特許文献１参照）。乳アレルギーの小児の多くは、アルファ−カゼインに対して反応する（例えば、非特許文献４、非特許文献１、非特許文献５参照）。

カゼインは、以下のサブユニット、α−Ｓ１（主要なアレルゲン）、α−Ｓ２、β−およびκ−カゼインからなり、α−Ｓ１およびβ−カゼインが主たるものである。乳タンパク質の酵素的加水分解は、そのアレルゲン性を低減する。乳タンパク質の部分的な加水分解の間に大きなペプチドが生成され、さらに完全な加水分解により大小ペプチドおよびアミノ酸の混合物がもたらされる。アレルギー反応は、無視できる量の未変性タンパク質の免疫反応性構成成分によっても起こることがあるため、完全なペプシン−トリプシン加水分解をしても、アレルギーはなくならない。このように、完全な加水分解ベースのアプローチのみがいくらかの可能性をもたらしたものの、ホエイタンパク質の加水分解物の場合であっても最終的な解決手段を提供するものではない（例えば、非特許文献６、非特許文献７参照）。したがって、牛乳アレルギーを低減するための新しいアプローチが必要とされている。そのため、製品に付加価値を与える（１種または複数の）微生物の（１種または複数の）菌株による、アレルギーの原因となる乳タンパク質の制御された加水分解がアレルギー問題の大幅な低減に対しての将来性のある方向である。

乳酸菌および添加物を用いた乳タンパク質の加水分解についてかねてより示されてきた。ペプシンおよびトリプシンにより加水分解されたタンパク質の加水分解産物調製物を生成するためのＬ．ラムノサス（ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ＡＴＣＣ５３１０３（ＬＧＧ）菌株の使用について記載されている（例えば、特許文献１（特許文献２、Ｖａｌｉｏ Ｏｙ）参照）。アレルギーのリスクを低減するためのＬＧＧの使用がＮｅｓｔｅｃ ＳＡのいくつかの発明において考察されている。小児のアトピー性疾患のリスク低減のためのＬＧＧの使用について記載されている（例えば、特許文献３参照）。帝王切開により産まれた乳幼児のアレルギーのリスクを低減するための、ビフィズス菌ならびにＬＧＧ、Ｌ．ラムノサス、ＣＧＭＣＣ１．３７２４、Ｌ．ロイテリ（ｒｅｕｔｅｒｉ）、ＡＴＣＣ５５７３０およびＬ．パラカセイ（ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ＣＮＣＭ Ｉ−２１１６の使用について記載されており、これには、部分的に（２〜２０％）加水分解されたタンパク質が含まれる（例えば、特許文献４参照）。乳酸菌のタンパク質分解系およびビフィドバクテリウム ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ＡＴＣＣ２７５３６を含む食品について、とりわけ、食物アレルギーを低減するための使用が記載されているが、細菌は不活化されるかまたは死滅させられてもよい（例えば、Ｎｅｓｔｅｃ ＳＡの特許文献５参照）。小児のアトピーの問題を減少させるためなどのＬ．パラカセイ亜種パラカセイの使用について記載されている（例えば、特許文献６（特許文献７、Ａｒｉａ Ｆｏｏｄｓ）参照）。微生物を含む低温殺菌されたシリアル飲料について記載されている（例えば、特許文献８（Ｂｉｏｆｅｒｍｅ ＯＹ）参照）。ビフィズス菌含有トウモロコシ飲料について記載されており、これは、発酵を用いて生産され、発酵製品の細菌は不活化されている（例えば、特許文献９（Ｍｉｎ Ｚｈａｏ）の特許請求の範囲、参照）。ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）では、β−ラクトグロブリンの加水分解は最高で２１％に達した（例えば、非特許文献８参照）。良好な味覚特性を持つ製品を得るための２つの微生物による乳タンパク質の加水分解（２〜３２％）について記載されており（例えば、特許文献１０（Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｄａｉｒｙ Ｂｏａｒｄ）参照）、ここで、提案されている一方の微生物は、マクロコッカス（Ｍａｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アルスロバクターまたはコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、好ましくは、マクロコッカス カセオリティクス（ｃａｓｅｏｌｙｔｉｃｕｓ）であり、他方の微生物は、乳酸菌、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトバチルス、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）またはロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）であり、発酵は、微生物を除去または死滅させることによって停止された。微生物、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来の酵素、トリプシンおよびパパインを用いた乳ホエイの部分的な加水分解（３０％）について記載されている（例えば、特許文献１１（森永乳業株式会社）参照）。

前立腺の不快症状およびその軽減
前立腺は、以下のいくつかの不快症状を引き起こすことがある：尿路閉塞および刺激症状ならびに小骨盤部分の痛みまたは不快。前立腺の不快症状、特に、排尿に関連する不快症状は、非常に一般的であり、多くの男性の生活の質を低下させる。前立腺肥大症（良性前立腺肥大症−ＢＰＨ）は、５０歳男性で約半数、７０歳超の男性で約７０％において起こると推定される。良性前立腺肥大症に伴う下部尿路症状（ＬＵＴＳ）としては、刺激症状および閉塞（排尿）症状が挙げられ、これは、国際前立腺症状スコア（ＩＰＳＳ）を使用して評価される。男性の排尿困難を軽減するための非薬学的で実現可能な手段はすべて高く評価されるであろうし、新規の食品がそのような効果を持つのであればそれが最良であろう。

いくつかの特許出願には、前立腺感染症を含む泌尿生殖器感染症の治療および軽減のために治療効果のある組成物に乳酸菌を使用することが記載されており、この組成物は、１つまたはいくつかの種の乳酸菌を含む（例えば、特許文献１２、Ｎｅｓｓａ Ｊｅｆｆｒｅｙ Ｂｒｙａｎら、２００７年参照）。

一方の構成成分がＬ．クリスパツス（ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、Ｌ．サリワリウス（ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）およびＬ．カゼイ（ｃａｓｅｉ）を含み、他方の構成成分がＬ．ブレビス（ｂｒｅｖｉｓ）、Ｌ．ガセリおよびＬ．ファーメンタム（ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）を含む乳酸菌の組み合わせが、尿道炎などの感染症および炎症の治療および予防のための栄養補助食品または医薬組成物として使用されることもある（例えば、特許文献１３、Ａｃｔｉａｌ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ Ｌｄａ、２０００年参照）。乳酸菌、Ｌ．コプロフィルス（ｃｏｐｒｏｐｈｉｌｕｓ）、ＰＬ９００１（ＫＣＣＭ−１０２４５）は、泌尿生殖器感染症を予防および治療するために使用されてきた（例えば、特許文献１４、ＰＬ ＢＩＯ Ｃｏ Ｌｔｄ．、２００３年参照）。局所療法のために泌尿器科で使用される医薬組成物は、活性物質として乳酸菌、Ｌ．カゼイ、Ｌ．ガセリを含むこともある（例えば、特許文献１５、Ｓｉｌｖａｎａ Ｔｏｓｉら、１９９３年参照）。

これは、部分的な加水分解および乳酸菌を用いた乳アレルギーおよび前立腺の不快症状の軽減について長い間研究されてきたことを示している。

それにもかかわらず、市場に出るほど十分な量の、乳アレルギーおよび前立腺の不快症状を低減する食品および栄養補助食品が存在しない。したがって、信頼性があり、試験により証明された健康によい特性を持つ食品および栄養補助食品の生産および使用に対して需要がある。

エストニア共和国特許第０３４２４号明細書 国際公開第９７／０００７８号 欧州特許第１２９６６９４号明細書 国際公開第２００８／１１６９０７号 国際公開第０３／０９９０３７号 エストニア共和国特許第０４７２４号明細書 国際公開第９９／２９８３３号 欧州特許第１１７５１５６号明細書 中国特許第１０１４２７７８２号明細書 欧州特許第１３８３３９４号明細書 特開平７−２０３８４４号公報 米国特許出願公開第２００８／２７４１６２号明細書 エストニア共和国特許第０４６２０号明細書 韓国公開特許第２００４００６７１６１号明細書 欧州特許第３５３５８１号明細書

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本発明は、新規の単離された抗酸化作用のある微生物菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１ ＤＳＭ２３８８１およびＬ．ガセリＭＣＣ２ ＤＳＭ２３８８２、一方または両方の菌株を含む組成物、食品および栄養補助食品の生産のための抗酸化タンパク質分解成分としての言及した微生物の使用、乳アレルギーおよび良性前立腺肥大に伴う下部尿路刺激症状ならびにこれらに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減する食品および栄養補助食品の生産のための微生物の使用ならびに上記の不快症状を低減する食品および栄養補助食品を生産するための方法に関する。

本発明の目的である乳タンパク質を部分的に加水分解する乳酸菌が段階的な生物学的選択によって発見された。目標は、多くの価値を持つ生物学的潜在能力のある菌株を発見することであり、その多くの価値により、所望の特性を持つ食品を得るための有益な生物学的効果（より低アレルギー性、アレルギー反応の低減、炎症および酸化ストレスを低減する効果）を相乗的に使用することが可能になるであろう。本発明のアプローチのイデオロギーは、タンパク質を完全に加水分解することではない。完全な加水分解が試みられてきたが、これにより、産物に非常に深刻な感覚刺激性の不快感などの新しい問題が生じる。必要な技術的手順を用いた多くの生物学的効果を有する菌株の使用および適切で健康によい追加の未処理の産物の使用が本発明のイデオロギーとして選択された。Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２は、多面的な生物学的効果が高く、相乗効果がある。それらは、乳タンパク質（カゼイン）を意図的に（部分的に）加水分解することができ、著しい酸化抵抗性を有し、共役リノール酸、ＮＯおよび他の構成成分を産生する。したがって、本発明は、バイオテクノロジーの完全な解決手段を用いて、乳アレルギーおよび尿路の不快症状を低減する可能性のある食品を作り出すことを可能にする。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２の説明
本発明の目的、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１ ＤＳＭ２３８８１およびＬ．ガセリＭＣＣ２ ＤＳＭ２３８８２は、エストニア−スウェーデン間の小児のミクロフローラの比較研究の間に健康な小児の大便から単離された。菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１および菌株Ｌ．ガセリＭＣＣ２は、１歳児の大便の段階希釈液を蒔くことによって単離された（０．０４％チオグリコール酸を含むリン酸緩衝液中に１０^−２〜１０^−７、ｐＨ７．２）。その希釈液は、新たに作製されたＭＲＳ寒天培養培地（Ｏｘｏｉｄ、英国）に蒔かれ、微好気環境において３７℃で培養された。本発明の目的である菌株は、ラクトバチルス属種に特徴的なコロニーおよび細胞形態に基づいて単離された。これには、暫定的な同定、さらにその後、以下に示されるさらに高精度な同定が続いた。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２は、微生物株保存機関、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨに、それぞれ、番号ＤＳＭ２３８８１およびＤＳＭ２３８８２として、２０１０年８月５日に寄託された。

ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計による分析（実例となる典型的な実験）のグラフである。菌株Ｌ．ガセリＭＣＣ２と混合した３０分後のベータ−カゼイン。 ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計による分析（実例となる典型的な実験）のグラフである。菌株Ｌ．ガセリＭＣＣ２とともに４８ｈインキュベーションした後、ベータ−カゼインの質量スペクトルのピーク２４．０ｋＤａは、実質的になくなった。 ４８および９６時間インキュベーションした場合のベータ−カゼインの量に対する菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２の効果（基礎レベルを１００％とした、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計およびＲＰ−ＨＰＬＣ分析データに基づく）のグラフである。 菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２によるＮＯ産生のグラフである。 菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２によるＨ_２Ｏ_２産生のグラフである。 食品および栄養補助食品の生産のスキーム図である。

培養菌の形態的な特徴
ＭＲＳ寒天および培養液（Ｏｘｏｉｄ）培地での培養後に培養菌の形態的な特徴が確認された。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１の培養には、微好気環境下における２４〜４８時間のＭＲＳ培養液が適しており、その後、培養液に一様に濁りが観察された。ＭＲＳ寒天培養培地において、微好気環境下、３７℃で４８時間培養した後、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１のコロニーは、直径が２〜２．５ｍｍ、白色、凸状で、光沢があり、規則的な周辺部を持つ。細胞は、部分的に平行な位置にある鎖状の短桿菌である。最適な増殖温度は３７℃であるが、菌株は、１５℃および４５℃においても増殖する。最適な増殖環境のｐＨは６．５である。Ｌ．プランタルムＭＣＣ１は、カタラーゼおよびオキシダーゼ陰性、条件的ヘテロ発酵型であり、アルギニンを加水分解しないかまたはグルコース発酵中に気体を産生する。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１は、Ｌ．プランタルムとしてＡＰＩ ５０ＣＨＬシステム（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）試験キットに基づいて確認された（基準株との一致：非常に良好、ＩＤ％ ９９．９、Ｔ値 ０．８３）。

１６Ｓ ｒＲＮＡ配列に基づくＬ．プランタルムＭＣＣ１の分子同定により、基準株Ｌ．プランタルム、Ｌｐ−０１との相同性が示された（ＢＬＡＳＴ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｕｉｄｅ／ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ａｎａｌｙｓｉｓ／）。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１の炭水化物発酵特性は、ＡＰＩ ＣＨＬ ５０に基づいて以下のとおりであった。この菌株は、リボース、ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンノース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、セロビオース、マルトース、ラクトース、サッカロース、トレハロース、メレシトース、Ｄ−ラフィノース、Ｌ−アラビノース、メチル−Ｄ−マンノピラノシド、Ｄ−ツラノース、メリビオース、ソルビトールおよびマンニトールを発酵する。

ＡＰＩ ＺＹＭ（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）試験キットによると、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１は、ロイシンアリールアミダーゼ、バリンアリールアミダーゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼ活性があった。

Ｌ．ガセリＭＣＣ２の培養には、嫌気環境下における２４〜４８時間のＭＲＳ培養液が適しており、その後、培養液に一様に濁りが観察された。ＭＲＳ寒天培養培地において嫌気環境下（Ｃ０_２／Ｈ_２／Ｎ_２：５／５／９０）、３７℃で４８時間の培養した後、Ｌ．ガセリＭＣＣ２のコロニーは、直径が１．５〜２ｍｍ、オフホワイト、凹凸があり不均整な周辺部を持つ。細胞は、中程度の厚さを持つ短い桿菌から球状の桿菌である。最適な増殖温度は３７℃であるが、菌株は、４５℃においても増殖する。最適な増殖環境のｐＨは６．５である。Ｌ．ガセリＭＣＣ２は、カタラーゼおよびオキシダーゼ陰性、偏性ホモ発酵型（ＯＨＯＬ）であり、アルギニンを加水分解せず、グルコース発酵中に気体を産生しない。

Ｌ．ガセリＭＣＣ２は、Ｌ．デルブルエッキー（ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）亜種デルブルエッキーとしてＡＰＩ ５０ＣＨＬシステム（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）試験キットに基づいて確認された（基準株との一致：良好、ＩＤ％ ９４．６、Ｔ値 ０．３５）。１６Ｓ ｒＲＮＡ配列に基づくＬ．ガセリＭＣＣ２の分子同定により、基準株Ｌ．ガセリ、ＩＤＣＣ ３１０２との相同性が示された（ＢＬＡＳＴ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｕｉｄｅ／ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ａｎａｌｙｓｉｓ／）。

Ｌ．ガセリＭＣＣ２の炭水化物発酵特性は、ＡＰＩ ＣＨＬ ５０に基づいて以下のとおりであった。菌株は、ラクトース、サッカロース、トレハロースおよびエスクリンを発酵する。

ＡＰＩ ＺＹＭ（ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、フランス）試験キットによると、Ｌ．ガセリＭＣＣ２は、ロイシンアリールアミダーゼ、バリンアリールアミダーゼ、α−グルコシダーゼおよびβ−グルコシダーゼ活性があった。

安全性
微生物（ｍｉｃｒｏｂｅ）菌株が健康な小児の消化管由来であることは、ＧＲＡＳ（一般に安全と認められる）状態または微生物（ｍｉｃｒｏｂｅ）菌株がヒトに対して安全で、経口投与に適していることを示す。また、乳酸桿菌、Ｌ．プランタルムおよびＬ．ガセリの種は、ＥＦＳＡによるＱＰＳ（安全性適格推定（Ｑｕａｌｉｆｉｅｄ Ｐｒｅｓｕｍｐｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｆｅｔｙ））状態の分類単位の一覧に入っている（例えば、非特許文献９参照）。

溶血作用
方法論：血液寒天プレート（Ｂｌｏｏｄ Ａｇａｒ Ｂａｓｅ Ｎｏ．２、Ｏｘｏｉｄ＋７％ヒトまたはウマの血液）上において微好気環境下でインキュベーションした後に、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２の溶血作用が判定された。

結果。菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２に溶血作用はなかった。

抗生物質に対する耐性
方法論：Ｅ−ｔｅｓｔ（ＡＢ Ｂｉｏｄｉｓｋ、ソルナ）を用いて抗生物質に対するＬ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２の感受性が試験された。欧州委員会によって推奨される疫学的限界点に従って最小発育阻止濃度が確認された。

欧州委員会によって確立された乳酸桿菌についての指標に従い、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１は、セフォキシチンおよびバンコマイシンに対して耐性があることがわかった（例えば、非特許文献１０参照）。

乳酸桿菌のいくつかの種／菌株は、言及した抗生物質に対して自然耐性を有することが知られているため、この微生物（ｍｉｃｒｏｂｅ）の使用による抗生物質耐性遺伝子の水平伝播は考慮されない。調査された他の抗生物質に対して耐性は生じなかった。

菌株Ｌ．ガセリＭＣＣ２は、試験された抗生物質に対して耐性がなかった。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２の機能特性
代謝産物の特性
方法論：代謝産物特性は、微好気的増殖環境における２４ｈおよび４８ｈのインキュベーションに続くガスクロマトグラフィー（ＨＰ６８９０）によって確認された（表２）。ラクトバチリーは、ＭＲＳ寒天培養培地において１０％Ｃ０_２環境下で４８時間増殖させられ、その後、マクファーランドに従い０．９％ＮａＣｌ溶液中、密度が１０^９微生物（ｍｉｃｒｏｂｅ）／ｍＬの懸濁液が調製され、１．０ｍＬの得られた懸濁液は、９．０ｍＬのＭＲＳ液体培養培地に接種された。代謝産物の量ｍｍｏｌ／Ｌは、キャピラリーカラム、ＨＰ−ＩＮＮＯＷａｘ（１５ｍ×０．２５ｍｍ；０．１５μｍ）を使用して測定された。カラム温度プログラム ６０℃ １分、２０℃／分 １２０℃ １０分；検出器（ＦＩＤ）３５０℃。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２の凝集および乳凝固能力の測定
方法論：乳凝固能力。ＵＨＴ無脂肪乳中、微好気的条件下、３７℃で菌株を４８ｈインキュベートした後、乳を凝固する能力が調査された。以下の方式に従い凝固能力が評価された：
１．強い（＋）−２４ｈの間に乳が凝固する、
２．遅い（＋／−）−４８ｈの間に乳が凝固する、
３．なし（−）−乳が凝固しない。

自己凝集。自己凝集の能力を評価するために、ＭＲＳ寒天培養培地において２４ｈ予め前培養された菌株を生理溶液に懸濁させた。得られた懸濁液は、室温で１５分間置かれた。以下の方式に従い、凝集能力が評価された：０−なし、均質に濁った懸濁；１−溶液中にいくらかの小さな塊；２−懸濁液中に多くの小さな塊、試験管の下部にわずかな沈殿物；３−強力、懸濁しない、下部に沈殿物、溶液はほぼ透明。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２は、２４時間の間に乳を凝固し、強い自己凝集特性を有した（表３）。

プレバイオティクスの発酵能力
タガトース（Ａｒｌａ Ｆｏｏｄ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ）、Ｒａｆｔｉｌｏｓｅ Ｐ９５（Ｂｅｎｅｏ Ｏｒａｆｔｉ）、Ｒａｆｔｉｌｏｓｅ Ｓｙｎｅｒｇｙ １（Ｂｅｎｅｏ Ｏｒａｆｔｉ）およびＲａｆｔｉｌｏｓｅ Ｌ６０／７５（Ｏｒａｆｔｉ）の発酵を評価するために、試験されたラクトバチルス菌種の４８ｈ培養物０．０５ｍＬが、グルコースの代わりに０．５％のソルビット、タガトースまたはメレシトースを含むＭＲＳ培養培地に接種される。指示薬としてクロロフェノールレッド（０．００４％）が培養培地に添加された。発酵は、４８ｈ後の色の変化（レッドから黄色）に基づいて評価された。

病原体に対する抗菌活性
方法論：抗菌特性の評価のために画線法が使用された（例えば、非特許文献１２参照）。

病原体の阻止を判定するために、増殖していない領域がｍｍ単位で測定された。Ｈｕｔｔら（２００６年）と同様に、算術平均および標準誤差が、使用したサンプルの結果に基づいて算出され、３７℃におけるインキュベーション時の菌株の拮抗作用（ｍｍ）は以下のとおり評価された：−弱い ＜９．７；中程度 ９．７〜１２．２；強い ＞１２．２。すべての試験は、並行して少なくとも３回繰り返された。

画線試験におけるＬ．プランタルムＭＣＣ１の抗菌活性（死滅した細胞およびそれらが排出した代謝産物の影響）は、両環境において試験された大半の病原体（リステリア菌および腸炎菌を除く）に対して強かった。

Ｌ．ガセリＭＣＣ２は、両環境において弱い拮抗体であることがわかった。

全般的なタンパク質分解特性
Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２の一般的なタンパク質分解特性は、ＭＲＳ培養液中で４８ｈ間予め増殖させた菌株を画線した、試験培養培地、ＳＭＡ培養培地（スキムミルク−寒天培地）およびＣａ−カゼイナート寒天上で調査された。これらは、微好気環境、３７℃で７日間インキュベートされた。タンパク質分解の強度は、以下の評価システムに基づいて評価された（６試験、算術平均）：４−強い、３−中程度、２−弱い、１−非常に弱い、０−なし。

結果：Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２は、十分に良好な全般的なタンパク質分解作用を有している（４−ポイントシステムにおいて、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１は、３ポイント、Ｌ．ガセリＭＣＣ２は、２ポイントであった）。

さらに特異的なタンパク質分解能力に基づく生物学的選択（α−Ｓ１−カゼインおよびβ−カゼインのタンパク質分解の程度を確認するための質量分析計およびＲＰ−ＨＰＬＣ技術の試験）
Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２がどのようにさまざまな乳タンパク質を加水分解するのかわかっていなかった。そのため、まず加水分解の間に起こる分子マススペクトルの変化が、個々の純粋な乳タンパク質（β−ラクトグロブリン、α−Ｓ１カゼイン、β−カゼイン）を使用して確認され、後で乳脂を取り除いていない乳のタンパク質のスペクトル変化が分析された。乳タンパク質加水分解生成物の分子量は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型）質量分析計により測定された（例えば、非特許文献１３参照）。マクファーランド４標準液により、ＫＣｌ生理溶液中の密度が１０^９ＣＦＵ／ｍＬの懸濁液が培養物から作製された。１０μｌの乳タンパク質画分が添加されて懸濁液が得られた。これらの画分の溶液中の菌株の生存は、試験前後の希釈系列を画線することにより判定された。菌株は、対応するタンパク質画分の環境、３７℃において２〜６日インキュベートされた。その後、そのサンプルは、遠心分離され、タンパク質特性が質量分析計（Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥ Ｐｒｏ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）により測定された（図１および図２）。本発明の目的の菌株は、栄養分が乏しい環境に対して代謝を調節できることがわかった。例えば、この試験では、栄養源は、α−Ｓ１カゼイン、β−ラクトグロブリン、β−カゼインまたは菌株細胞自体から得られる物質のいずれかのみであった。試験の終わりの時点で、３つすべてのタンパク質画分の環境（α−Ｓ１カゼイン、β−ラクトグロブリン、β−カゼイン）において菌株は検出可能であった。

その後、ＲＰ−ＨＰＬＣ（逆相高速液体クロマトグラフィー）法を用いて、脂肪含有量が２．５％の市販の乳中で菌株のタンパク質分解特性が調査された。α−Ｓ１カゼインおよびβ−カゼインのタンパク質分解の程度は、インキュベーションの２日および４日目に測定された（図３）。これについて、調査された乳タンパク質に対応するＲＰ−ＨＰＬＣクロマトグラムのピーク面積が開始時点と比較され（対照、すなわち、乳酸桿菌を添加する前の乳が１００％とされた）、残った乳タンパク質の百分率による量が算出された。さらに、実験は、２１日を超えるインキュベーション期間で行われた。タンパク質分解効力およびタンパク質分解活性を改善するために、（アレルギー性カゼインの量を低減するため）予め希釈された乳の場合はホエイも含めて本発明の目的の菌株の組み合わせについても調査された。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析のための乳サンプルの調製およびクロマトグラフィーを行う条件は、Ｂｏｂｅらによって示された方法論の手順に従って展開された（例えば、非特許文献１４）。１０^７ＣＦＵ／ｍＬの調査される菌株が添加され、３７℃においてインキュベートされた脂肪含有量が２．５％の市販の乳が菌株を含まない乳と比較された。高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ １１００）および多孔質シリカを充填した逆相カラムＺｏｒｂａｘ ３００ＳＢ−Ｃ１８が乳タンパク質の分離ために使用された。移動相は、濃度勾配が変化する溶出系であり、以下からなる：溶液Ａ−アセトニトリル、水、ＴＦＡの割合が９００：１００：１（ｖ／ｖ／ｖ）；溶液Ｂ−アセトニトリル、水、ＴＦＡの割合が１００：９００：１（ｖ／ｖ／ｖ）。濃度勾配は、溶液Ｂから開始し、サンプルがその系に注入された直後から溶液Ａの割合が増し始める。分離段階中、乳タンパク質の分離が起こると、溶液Ａの含有量は毎分あたり０．４７％増加する。得られた画分は、その保持時間を主要な乳タンパク質標準の保持時間と比較し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計を用いて分子量を測定することによって確認された。乳タンパク質を次の順序で溶出する：κ−ＣＮ、α_Ｓ２−ＣＮ、α_Ｓ１−ＣＮ、β−ＣＮ、α−ＬＡおよびβ−ＬＧ。Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２は、α−Ｓ１カゼインおよびβ−カゼインに関して特有の効果を有しており（図１および図２の集約データを参照）、牛乳に対する小児アレルギー応答の多くを占めるタンパク質、α−Ｓ１カゼインおよびβ−カゼインの量が２日目に減少した。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析に基づいて、最良に制御された部分的なタンパク質分解者はＬ．ガセリＭＣＣ２であった（図３）。上記の乳酸桿菌それら自体を組み合わせると、乳中のタンパク質分解作用は、同じ菌株を個々に使用した場合と比較してやや低下した。Ｌ．プランタルムＭＣＣ１もまた、４０％乳および６０％ホエイからなる組み合わせ中で４日間インキュベートされた：開始時と比較して４日目に、α−カゼインの含有量は８１％であり、β−カゼインの含有量は８３％であった。

定めた目的は達成された：菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２ならびにそれらの組み合わせは、α−Ｓ１カゼインおよび／またはβ−カゼインの量を２０〜４０％減少させた（すなわち、制御された適度な加水分解が起こった）。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２は、乳アレルギーの原因となるタンパク質を加水分解し、良好で全般的なタンパク質分解活性を有する。それらを単独使用または同時使用により、乳アレルギーが低減されるため、それらは、乳アレルギーを低減する、健康によい特性を持つ食品および栄養補助食品を生産するために使用することができる。

共役リノール酸（ＣＬＡ）産生に基づく生物学的選択
ＣＬＡは、二重結合が共役した１８炭素の脂肪酸であり、リノール酸（ＬＡ、シス−９、シス−１２−１８：２）の異性体の群を表わす。ＣＬＡは、天然に生物学的水素化および酸化の過程において生成される。ＣＬＡは、抗脂質生成、抗発がん、抗糖尿病誘発性および抗炎症効果、免疫系に対する調節性効果、サイトカインおよび免疫グロブリンの生産ならびに特異的な転写因子により直接的または間接的に特定の遺伝子の発現を調節する能力を有していると考えられている（例えば、非特許文献１５参照）。いくつかの乳酸菌は、リノール酸を共役リノール酸に変えることができるため、その結果、発酵乳製品中のＣＬＡ含有量を増加させることが可能であろう（例えば、非特許文献１６参照）。これについて、どの乳酸菌がＣＬＡ生成者であるか試験するべきである。微生物（ｍｉｃｒｏｂｅ）の増殖環境に生じる遊離脂肪酸は、静菌作用を有し、微生物（ｍｉｃｒｏｂｅ）の増殖および細胞膜透過性に影響を及ぼすことが知られている。効果の強さは、脂肪酸によって決まる。飽和度が高い長鎖脂肪酸ほど抗菌作用が強い。二重結合の空間的配置も抗菌活性に影響を与える：シス配置を有する脂肪酸は、トランス形態よりも強い阻害物質である（例えば、非特許文献１７参照）。微生物（ｍｉｃｒｏｂｅ）は、その生命維持機能を抑制する化合物に対抗するための防御メカニズムを確立してきた：多価不飽和脂肪酸は、低抑制性の変形物に異性化される。例えば、より強い静菌作用を有するリノール酸（ＬＡ）は、ＣＬＡに変えられる（例えば、非特許文献１６参照）。発生したＣＬＡの大半は、その環境にとどまるが、一部は細胞膜の脂質に付加される。少量のＣＬＡが微生物細胞中にある場合もあることがわかった。ラクトバチルス種を含む典型的な微生物いくつかの属において、ＬＡおよび他の脂肪酸（オレイン酸、リシノール酸）を共役させる能力が発見された。増殖環境（ＭＲＳ、スキムミルク）に添加されたリノール酸に基づいてＣＬＡを産生する菌株の能力は、本発明者らが開発したＣＬＡ測定法を使用して定量的に評価された。必要とされる意図したタンパク質分解作用を有するＬ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２がＣＬＡを大幅に産生することが明らかになった（表７）。同時に、これらの菌株は、ＬＡの静菌作用の影響を実質的に受けにくかった。

酸化抵抗性に基づく生物学的選択
（抗酸化性）
特異的で制限されたタンパク質分解特性、さらにＣＬＡ産生力を有する菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２が生理学的に著しい酸化抵抗性を有するかどうかが調査された。酸化抵抗性は、少なくとも２つの方法により測定されるべきである。

乳酸桿菌の細胞懸濁液の、リノール酸の過酸化を抑制する能力を確認することができるリノール酸試験（ＬＡ試験）が第１の方法として使用された。

乳酸桿菌の細胞懸濁液による、過酸化水素によって生成されるフェリルメトミオグロビンラジカルの生成の阻止がベースの市販の試験（Ｔｏｔａｌ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ Ｓｔａｔｕｓ−ＴＡＳ、Ｒａｎｄｏｘ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｌｔｄ．、英国）が、第２の方法として使用された（Ｒｉｃｅ−ＥｖａｎｓおよびＭｉｌｌｅｒ、１９９４年）。ＴＡＳ値は、トロロクス（ビタミンＥの可溶型）単位（ｍｍｏｌ／Ｌ）で記録された。両方法とも出版されている（例えば、非特許文献１８、非特許文献１９参照）。

ＴＡＡおよびＴＡＳの測定のために、菌株は、ＭＲＳ培養液（Ｏｘｏｉｄ）において３７℃で２４ｈインキュベートされた。微生物細胞は、４℃、１５００ｒｐｍで１０分間遠心分離され、生理食塩水（４℃）で洗浄され、１．１５％ＫＣｌ（Ｓｉｇｍａ、米国）に懸濁された。ＯＤ_２６０が１．１の懸濁液の密度は、１０^９微生物細胞／ｍＬであった。Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２は、生理学的に有意な全抗酸化性を有する（表６）。

酸化窒素および過酸化水素産生能力に基づく生物学的選択
意図した情報を得るために、予め選択された菌株（特異的で制限されたタンパク質分解特性、ＣＬＡ産生、抗酸化性）がさらに、ＮＯおよびＨ_２Ｏ_２産生に関して調査された。文献によると、微生物菌株によるＮＯおよびＨ_２Ｏ_２の同時産生についての過去の研究はない。測定は、ＩＳＯ−ＨＰＯ２およびＩＳＯ−ＮＯＰタイプの電極を使用した電気化学的測定（Ａｐｏｌｌｏ ４０００ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ａｎａｌｙｚｅｒ ＷＰＩ、ベルリン、ドイツ）を使用して生きた細胞を用いて行われた。ＭＲＳ培養液（Ｏｘｏｉｄ）中で増殖させた培養物に電極が入れられた、５〜７分間のシグナルが同時に記録され、測定時間中の平均信号強度が算出された。それぞれ実験点は、４つの独立した並列回路として測定された、それぞれの並列回路は２回測定された。調査されたサンプル中のＮＯおよびＨ_２Ｏ_２の濃度は、サンプル信号を標準曲線と比較することによって求められた。

Ｌ．プランタルムＭＣＣ１は、ＮＯおよび過酸化水素を生産する著しい能力があり、両化合物は、Ｌ．ガセリＭＣＣ２によっても産生された（図４および５）。

したがって、菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２は、食品および栄養補助食品の生産のための酸化防止剤として適している。

表７は、上記の菌株およびそれらの組み合わせの機能特性の一覧を示す。

上記は、本発明の目的の微生物菌株を示した。

本発明の次の目的は、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２の一方または両方の菌株を含む組成物である。本組成物が一方の菌株のみ含む場合、菌株の含有量は、０．８〜１．２体積パーセントの範囲であり、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１菌株の菌数は、０．２５×１０^８〜４×１０^８ＣＦＵ／ｍＬであり、Ｌ．ガセリＭＣＣ２菌株の菌数は、０．５×１０^７〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬである。

一方の菌株が使用される場合、菌株の含有量は、好ましくは、１．０体積パーセントであり、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１菌株の菌数は、０．４×１０^８〜４．８×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲であり、Ｌ．ガセリＭＣＣ２菌株の菌数は、０．８×１０^７〜１．２×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲である。

本組成物が菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２の両方を含む場合、両方の含有量は、０．４〜０．６体積パーセントの範囲であり、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１菌株の菌数は、０．２×１０^８〜２．４×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲であり、Ｌ．ガセリＭＣＣ２菌株の菌数は、０．４×１０^７〜０．６×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲である。

両方の菌株が使用される場合、両方それぞれの菌株の含有量は、好ましくは、少なくとも０．５体積パーセントであり、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１菌株の菌数は、０．２５×１０^８〜２×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲であり、Ｌ．ガセリＭＣＣ２菌株の菌数は、０．５×１０^７〜０．５×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲である。

上記の菌株は、生きていても、死滅していてもよい。

本発明の次の目的は、挙げられた菌株の
−食品および／または栄養補助食品の生産のための抗酸化タンパク質分解成分としての、
−乳アレルギーを低減する低アレルギー性の食品および／または栄養補助食品の生産のための、
−良性前立腺肥大症に伴う下部尿路刺激症状ならびにこれらに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減する食品および／または栄養補助食品の生産のための
別々のまたは同時の使用である。

次の本発明の目的は、乳アレルギーおよび下部尿路刺激症状ならびにこれらに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減する食品および／または栄養補助食品の生産のための方法である。

本発明による方法は、次の段階を含む：
Ａ）乳タンパク質を含む最初の混合物を、３７±２℃まで加温する段階；
Ｂ）Ｌ．プランタルムＭＣＣ１および／もしくはＬ．ガセリＭＣＣ２または両方を一緒に添加する段階。Ｌ．プランタルムＭＣＣ１が単独で使用される場合、最大１．２体積パーセント、好ましくは、１体積パーセント、菌数が０．４×１０^８〜４．８×１０^８ＣＦＵ／ｍＬで添加されることになる。Ｌ．ガセリＭＣＣ２が単独で使用される場合、最大１．２体積パーセント、好ましくは、１体積パーセント、菌数が０．８×１０^７〜１．２×１０^８ＣＦＵ／ｍＬで添加されることになる。上記の両方の菌株が一緒に使用される場合、最大１．２体積パーセント、好ましくは、１体積パーセント添加されることになり、ここで、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１は、０．２５×１０^８〜２×１０^８ＣＦＵ／ｍＬ、Ｌ．ガセリＭＣＣ２は、０．５×１０^７〜０．５×１０^８ＣＦＵ／ｍＬで添加されることになる。発酵の終了ｐＨは４．２±０．２５である。

Ｃ）混合物を、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１もしくはＬ．ガセリＭＣＣ２によってまたはＬ．プランタルムＭＣＣ１＋Ｌ．ガセリＭＣＣ２によって３７＋２℃で少なくとも１８〜２６時間発酵させる段階。

Ｄ）混合物を、８０〜８５℃の範囲（好ましくは、８２℃±２）で３０〜３５分間（好ましくは、３０分間）低温殺菌し、２０〜３０℃の温度に冷却する段階。

Ｅ）得られた混合物を、添加物によって風味付けし、２〜６℃の温度に冷却する段階。

Ｆ）得られた混合物を、食品および／または栄養補助食品の生産のために使用する段階。食品の場合、この混合物を瓶に詰め、（２〜６℃で）保存し、必要とされる分析のすべてを行う（酸化抵抗性の測定など）。混合物は、販売される栄養補助食品の生産のために粉末（カプセル、トローチ、錠剤、粉末分包など）または液体（アンプル）形態の状態で使用されてもよい。

粉末形態での栄養補助食品の調製中に、例えば、凍結乾燥（フリーズドライ）、噴霧乾燥、粉砕乾燥または他の既知の方法によって混合物から水が除去される（粉末のコンシステンシーが得られるまで）。液体栄養補助食品の調製中に、所望のコンシステンシーが得られるまで、生成物から部分的に水が除去される。栄養補助食品は、適切な添加物（例えば、酸化防止剤、甘味料、プレバイオティクス）を加えて、または加えずに調製されてもよい。

上記の方法において、乳タンパク質の原料は、乳、粉乳、乳タンパク質濃縮物、ホエイまたは他の乳タンパク質原料である。果実もしくはベリーの汁、濃縮物、シロップもしくはジュース飲料または果実もしくはベリーのジャム、好ましくは、シーバックソーン、ブルーベリーもしくはラズベリーの汁または他の汁、シロップ、濃縮物が適した添加物である。

乳アレルギーの反応および尿路刺激症状ならびに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減し、微生物、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１もしくはＬ．ガセリＭＣＣ２またはそれらの組み合わせを含む、上記の健康によい特性を持つ食品および栄養補助食品の生産方法。

以下に好ましい実施形態を提示する。

乳アレルギーの反応および尿路の不快症状を低減する食品および／または栄養補助食品の生産のために、２４ｈ間発酵槽で予め増殖させ、その後、凍結乾燥した微生物の培養物を使用した。

食品の生産のために、凍結乾燥した微生物の培養物、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１および／またはＬ．ガセリＭＣＣ２を、少量の温かい（少なくとも２０℃）ホエイ、乳もしくは粉乳／乳タンパク質濃縮物または他の乳タンパク質原料から作った溶液中で少なくとも４時間活性化した。

健康によい特性を持つ食品または栄養補助食品の生産方法は、次の段階（図６のスキームを参照のこと）を含む：
ａ）乳タンパク質を含む最初の混合物、チーズ産業から入手し、分離によって脂肪相を減少させ、チーズかすを除いたホエイ（表８の化学的−物理的特性）を、発酵温度３７±２℃に加温した；
ｂ）１体積パーセントの菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１（菌数が０．５×１０^８〜４×１０^８ＣＦＵ／ｍＬ）もしくは菌株Ｌ．ガセリＭＣＣ２（菌数が１×１０^７〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬ）または両方一緒（０．５体積パーセントで密度が０．２５〜２×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲の菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１の生きた細胞および密度が０．５×１０^７〜０．５×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲の菌株Ｌ．ガセリＭＣＣ２の生きた細胞の両方）。

ｃ）その混合物を３７±２℃の温度で１８〜２６ｈ発酵させ、その間、（１種または複数の）菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１および／またはＬ．ガセリＭＣＣ２の効果により乳タンパク質の部分的な加水分解が起こった。酸性度がｐＨの値で４．２０±０．２５に達するまで発酵は続いた；
ｄ）（１種または複数の）菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１および／またはＬ．ガセリＭＣＣ２を不活化する（死滅させる）ために、混合物を８２±２℃で３０〜３５分間低温殺菌し、２０〜３０℃の温度に冷却した；
ｅ）得られた混合物を、選択した添加物により風味付けした。これには、果実もしくはベリーの汁、濃縮物、シロップ、ジュース飲料または果実もしくはベリーのジャムが可能であった。例えば、シーバックソーンジャムを１６〜１７体積パーセントまたは濃縮サクランボジュース飲料およびシーバックソーンの汁を４．７〜５体積パーセントならびにラズベリー−ブルーベリー濃縮ジュース飲料を９．８〜１０．２体積パーセント使用した。

ｆ）得られた混合物を２〜６℃に冷却した、食品を瓶に詰めた、感覚刺激性および酸化抵抗性の分析を行い、保存し（２〜６℃）、臨床研究を行った（以下参照）。

粉末の栄養補助食品を生産するために、食品加工技術において既知の方法を使用して、得られた混合物から水を除去した（例えば、凍結乾燥または（噴霧乾燥、粉砕乾燥などの）乾燥を活用して）。好ましくは、粉末の栄養補助食品を生産するために、一段階噴霧乾燥機（空気流入温度１６０℃および空気流出温度８０℃）を使用した。

上記の方法によって生成した混合物に、融点がラクトースよりも高い、例えば、マルトデキストリンなどの適した充填剤を（ホエイ乾燥物質と１：１の割合で）添加した。

別の選択肢として、限外ろ過による水、砂糖（ラクトース）および塩の分離を使用した。これには、その後、減圧器による濃縮および乾燥（噴霧乾燥）が続き、その結果、ラクトース含有量が低く、タンパク質含有量の高い粉末の栄養補助食品を得た。

第３の選択肢として、水の除去のための減圧装置による濃縮に続いて噴霧乾燥を使用した。最終結果は、ラクトースを含む粉末の栄養補助食品であった。

本発明の目的の微生物および添加物を含む食品ＦＰ−Ｉ〜ＦＰ−Ｖを上記の方法で、以下のとおり生産した：
食品Ｉ（またはＦＰ−Ｉ）：乳タンパク質を含む混合物＋Ｌ．プランタルムＭＣＣ１＋Ｌ．ガセリＭＣＣ２；添加物はシーバックソーンの汁（ＢＴ）；

食品ＩＩ（またはＦＰ−ＩＩ）：乳タンパク質を含む混合物＋Ｌ．プランタルムＭＣＣ１；添加物、ラズベリー−ブルーベリー濃縮ジュース飲料（ＲＢ）。

食品ＩＩＩ（またはＦＰ−ＩＩＩ）：乳タンパク質を含む混合物＋Ｌ．プランタルムＭＣＣ１＋Ｌ．ガセリＭＣＣ２；添加物はクロフサスグリ−ラズベリー濃縮ジュース飲料（ＢＲ）。

食品ＩＶ（またはＦＰ−ＩＶ）：乳タンパク質を含む混合物＋Ｌ．プランタルムＭＣＣ１；添加物はブルーベリー濃縮物（Ｂ）。

食品Ｖ（またはＦＰ−Ｖ）：乳タンパク質を含む混合物＋Ｌ．プランタルムＭＣＣ１；添加物はコケモモ濃縮ジュース飲料（Ｃ）。

栄養補助食品Ｉ（またはＤＳ／ＦＰ−Ｉ）：乳タンパク質を含む混合物＋Ｌ．プランタルムＭＣＣ１＋Ｌ．ガセリＭＣＣ２；添加物はシーバックソーンの汁（ＢＴ）；
栄養補助食品ＩＩ（またはＤＳ／ＦＰ−ＩＩ）：乳タンパク質を含む混合物＋Ｌ．プランタルムＭＣＣ１；添加物はラズベリー−ブルーベリー濃縮ジュース飲料（ＲＢ）。

栄養補助食品ＩＩＩ（またはＤＳ／ＦＰ−ＩＩＩ）：乳タンパク質を含む混合物＋Ｌ．ガセリＭＣＣ２；添加物。

微生物Ｌ．プランタルムＭＣＣ１もしくはＬ．ガセリＭＣＣ２またはそれらの組み合わせを含む乳アレルギーの反応および尿路刺激症状ならびに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減する食品および栄養補助食品の生産のための添加物。

製品添加物として、シーバックソーンの汁（ＢＴ）（保存料を用いずにシーバックソーンベリーから作り、低温圧縮および低温殺菌した）、ラズベリー−ブルーベリー濃縮ジュース飲料（組成物：濃縮ラズベリー−ブルーベリー汁（ＲＢ）、砂糖、酸度調整剤のクエン酸、保存料のソルビン酸カリウム、１０倍希釈した）、コケモモ濃縮ジュース飲料（Ｃ）およびブルーベリー濃縮物（Ｂ）（表１０を参照のこと）を使用した。原子吸光分析（ＡＡＳ）法、Ｓｐｅｋｔｒａ ＡＡＦＳおよび２２０Ｚにより添加物についての抗酸化性（ＴＡＡおよびＤＰＰＨ試験）および生元素の含有量を測定した（Ｖａｒｉａｎ、オーストラリア）。ＡＡＳフレーム法により、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｍｎ含有物を測定し、空気−アセチレン混合物中における蛍光法により、Ｋ含有量を測定した。特別な質問票を用いて適正な要件に従って最終製品の感覚刺激試験を行った。その結果を表１０に示す。

臨床試験番号１。

製品の安全性および有益な効果、生化学的−臨床的および感覚刺激試験。

多目的な生物学的選択によって得られた複数の効果を生む菌株および添加物を使用し、適した技術方式（実施例１を参照のこと）を適用して食品ＦＰ−Ｉ（ＭＣＣ１＋Ｌ．ガセリＭＣＣ２、ＢＴ）およびＦＰ−ＩＩ（ＭＣＣ１、ＲＢ）を得た。その後、臨床試験（世界医師会のヘルシンキ宣言に従い、Ｔａｒｔｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｅｔｈｉｃｓ Ｒｅｖｉｅｗ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された）を行って食品ＦＰ−ＩおよびＦＰ−ＩＩの安全性および健康によい効果を明らかにした。

臨床試験の主なスキームは、以下のとおりとした：４０〜６５歳の２５名のボランティア（１１名の女性、１４名の男性）を、次の研究対象選択基準に基づいて無作為に２つの群に割り当てた：臨床的な問題、慢性疾患、特別食がなく、ビタミン、ミネラル調製物の使用がない人、参加者は、身体的活動、通常のアルコール摂取、喫煙習慣または食習慣を変える必要はない。毎日２００ｇのＦＰ−Ｉ（ｎ＝１０）またはＦＰ−ＩＩ（ｎ＝１５）の２週間の使用前後に、次の生化学的−臨床的なパラメータを測定した：炎症マーカー（ｈｓＣＲＰ、ＭＰＯ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０）、脂質およびリポタンパク質マーカー（ＴＧ、コレステロール、ＬＤＬ−コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール、ｓｄＬＤＬ）、免疫グロブリン（ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ）、酸化ストレス（ＯｘＳ）マーカー（イソプロスタン、ｏｘＬＤＬ、ＬＤＬ−ｂ２ＧＰＩ）、血糖、血圧および尿中クレアチニン。

結果
１）安全性
毎日の質問票の科学的分析により、２週間の使用中に不快感または腸管内の問題を訴えた被験者はおらず、ネガティブな症状も生じなかったことが示された。ＦＰ−ＩまたはＦＰ−ＩＩの使用に、生化学的および臨床的パラメータを固有の基準限界値から外させる作用はなかった。試験期間前と比較して、重要なアレルギーマーカーの１つとしての被験者のＩｇＥ抗体の量は増えなかった。炎症反応は生じなかった（ｈｓＣＲＰ、ｏｘＬＤＬ、ＭＰＯ、ＩＬ−６）。または、血中脂質、リポタンパク質（ＴＧ、ＬＤＬ、ＨＤＬ）およびグルコースの値は変わらなかった。体内のＯｘＳのレベルも増加しなかた（イソプロスタン、ｏｘＬＤＬ、ＭＰＯ、ｓｄＬＤＬ、ＬＤＬ ｂ２ＧＰＩ）（表１１）。さらに、腎機能を損なうこともなかった（尿中クレアチニン）。したがって：本発明のイデオロギーに基づいて得られるＦＰ−ＩおよびＦＰ−ＩＩにより、炎症反応、一般的なアレルギーの感作、ＯｘＳは生じなかったため、健常者の生物に障害を与えることはなかった。

２）健康を促進する効果
臨床試験の結果の分析から、ＦＰ−ＩまたはＦＰ−ＩＩの使用により、統計学的に有意でいくぶん異なるいくらかのプラスの効果が引き起こされることが示された（表１１）。ＦＰ−Ｉは、全身のＯｘＳ負荷を低減する効果（尿中イソプロスタンおよび血中ＭＰＯレベルの低下）および抗炎症効果（血中ＭＰＯの低下）を発揮した。ＦＰ−ＩＩは、全身のＯｘＳ負荷を低減し（尿中イソプロスタンレベルの低下）、抗炎症効果を発揮した（ｈｃ−ＣＲＰの低下およびＩＬ−１０の増加）。同時に、両方の食品を使用しても、免疫グロブリンＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＭの数量的な値は変化しなかった。

したがって：第１の臨床試験により、本発明のイデオロギー（菌株の複数の異なる意図的な生物学的選択、添加物の生物学的選択および技術的解決手段）が、安全であり、いくつかの炎症および酸化ストレス関連の効果（牛乳と比較してアレルギー反応を起こしにくい）があるより低アレルギー性で、生化学的および臨床的パラメータに対して、さらに前立腺に不快症状（排尿障害を含む）がある人に対してプラスの効果がある食品をもたらすことが示された。

臨床試験番号２．小児における牛乳アレルギーの研究
牛乳タンパク質によって引き起こされる反応は、乳幼児の５〜１５％に起こる（例えば、非特許文献３参照）が、牛乳タンパク質アレルギー（ＣＭＰＡ）が起こるのは２〜７．５％である（例えば、非特許文献４参照）。ＣＭＰＡは、ＩｇＥ依存性または非ＩｇＥ依存性である場合がある。通例、初期反応は、蕁麻疹、血管浮腫、嘔吐またはアトピー性皮膚炎の増悪である。遅延反応としてアトピー性皮膚炎の増悪または胃腸の不快症状が起こる（例えば、非特許文献５参照）。既存の診断検査のいずれも、その小児がＣＭＰＡであるか否かを証明するものでも否定するものでもない（例えば、非特許文献２０参照）。したがって、ＣＭＰＡの診断の判断基準は除去食の後の誘発である（例えば、非特許文献５参照）。誘発試験の手順として国際的に認められたＩｓｏｌａｕｒｉらによって示されたそのような調査のためのスキームを使用した（例えば、非特許文献２１、非特許文献２２参照）。

方法論
食品ＦＰ−ＩＩおよびＦＰ−Ｉによるオープン誘発を、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃ ｏｆ ｔｈｅ Ｔａｒｔｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｌｉｎｉｃｓ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎのＣｅｎｔｒｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓにおいて行った（世界医師会のヘルシンキ宣言に従い、Ｔａｒｔｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｅｔｈｉｃｓ Ｒｅｖｉｅｗ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された）。９ヶ月から４歳８ヶ月の小児（平均年齢２５．１ヶ月）に試験を２０回行った（被験者の一部は、両方の食品の試験に参加した）。試験前の背景は以下のとおりであった：すべての小児は、病歴および補助的な調査によりＣｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃ ｏｆ ｔｈｅ Ｔａｒｔｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｌｉｎｉｃ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎのＣｅｎｔｒｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓの医師によって牛乳アレルギーおよび／または不耐性と診断された（乳に対するＩｇＥ試験、乳に対するＮＴＴ）。研究群のすべての小児は、乳を含まない除去食の状態であった。乳の使用後、９名の小児に発疹、通常アトピー性皮膚炎の増悪が出た。１名の小児には急性蕁麻疹が出た。１名の小児は下痢症になった。１名の小児は、加工された乳製品を食べた後にのみ呼吸困難になり、発疹が出た。３名の小児が共に喘息と診断され、そのうちの１名はアレルギー性鼻炎もあり、１名は花粉アレルギー（花粉症）だった。１名の小児には、併発症として喘息および花粉アレルギーがあった。どの小児も抗ヒスタミン剤または副腎皮質ステロイド薬の治療を受けていなかった。３名の小児に併発した喘息は寛解したため、誘発試験が行われたときには、持続的な喘息治療を受けていなかった。

試験１日目にオープン経口誘発をＣｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ Ｃｌｉｎｉｃ ｏｆ ｔｈｅ ＴＵＣＦのＣｅｎｔｒｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓで行った。調査する製品（ＦＰ−ＩＩまたはＦＰ−Ｉ）の量を増加させて小児に投与した（下唇にたらす、２ｍＬ、１０ｍＬ、５０ｍＬ、１００ｍＬ）。各量の後に、小児の状態およびアレルギー反応の発生について２０分間評価した。発疹、咳、呼吸困難または腹痛／下痢症が出た場合、製品の投与をすぐに止めた。試験１日目に小児に反応が出なかった場合、最大１００ｍＬの製品の後に、小児は、その後、調査する製品を家で２日、３日および４日目に１００ｍＬ／日投与された。遅発性反応の発生を評価するために親に質問した。小児が以下のような場合、試験は陽性と見なされた：ａ）初期反応−誘発１日目の少量の製品の投与後に、そう痒、発疹、蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ）または嘔吐があった；ｂ）遅発性反応−調査した製品による誘発開始＞２４時間後に皮膚炎の増悪、嘔吐、腹痛および下痢症があった。誘発の間（４日間）および次の週の間に反応が出なかった場合、オープン誘発試験は陰性とした。したがって、被験者は本製品を許容した。

結果の概要
食物のアレルゲン性の問題を解決することは、非常に複雑であり、絶対的にアレルギー反応がないが非常に高い生物学的特質を持つ製品を作り出すことは不可能である。現在、小児は、いくつかの食品に対して（他の共通因子に対しても）同時にアレルギー反応がある場合があるため、この問題はさらに難しくなる。このことは、我々の試験でも観察された（表１２を参照のこと）。このことが、所与の時点における陽性反応の発疹が他の原因による惹起により現われたのではないと除外するのを困難にする。そこで、アレルギー反応を低減するために本調査の焦点が向けられた。すなわち、得られる食品は牛乳よりも低アレルギー性のものであろう。与えた食品に対してアレルギーがないかアレルギーがより軽い小児が１パーセント増えるごとに、生物学的発達の最も重要な期間に、発達のために十分な生物学的に高品質の食物を得ることになる小児の数が増加することになろう。誘発試験により、両食品ＦＰ−ＩＩならびにＦＰ−Ｉは牛乳よりも低アレルギー性であったことが示された（表１２）。１２名のうち少なくとも３〜４名の小児には、誘発試験に基づくＦＰ−Ｉの使用後、いかなるアレルギー反応も出なかった。８名のうち３名の被験者には、ＦＰ−ＩＩの使用後いかなるアレルギー反応も出なかった。ＦＰ−Ｉがいくらかの反応を引き起こした５名の被験者のうち３名は、ＦＰ−ＩＩを許容した（６０％）。このように、ＦＰ−ＩＩは、この件に関してＦＰ−Ｉよりもさらに低アレルギー性であった。大半の小児はまた、味の特性によりＦＰ−ＩＩの方を好んだ。

臨床試験番号３．良性前立腺肥大症に伴う下部尿路刺激症状ならびに酸化ストレスおよび炎症指標に対する食品ＦＰ−ＩおよびＦＰ−ＩＩの効果。

上記の臨床試験から、本発明のイデオロギー（菌株の複数の異なる意図的な生物学的選択、添加物の生物学的選択および技術的解決手段）が、使用に対して安全であり、いくつかの炎症および酸化ストレス関連の効果があるより低アレルギー性で、尿路刺激症状ならびにＯｘＳおよび炎症指標に対してプラスの効果がある食品ＦＰ−ＩおよびＦＰ−ＩＩをもたらすことが示された。

方法論
試験には、軽度または中程度のＩＰＳＳ（国際前立腺症状スコア）＜８である５５名の男性（ＦＰ−Ｉ投与）および５名の男性（ＦＰ−ＩＩ投与）が参加した。ＩＰＳＳの質問票には、下部尿路刺激症状を評価する３つの質問および尿路閉塞（閉塞症状）を評価する４つの質問が含まれる。また、研究群の正確な選択のために、必要とされる事前の試験（ＰＳＡ、前立腺分泌物）を行った。これは、前立腺分泌物調査およびＮＩＨ−ＣＰＳＩ質問票を用いて活動期の前立腺炎（前立腺の炎症）を排除し、ＰＳＡ試験および指診を使用することによって、前立腺癌の臨床的な可能性が排除したことを意味する。したがって、不快症状の他の原因（前立腺炎、前立腺癌）を排除した軽度または中程度の泌尿器障害の男性を研究群に含めた。（軽度および中程度の排尿障害はあるが、炎症反応はない）患者が、２００ｇの食品ＦＰ−ＩまたはＦＰ−ＩＩを２週間毎日使用した。

結果
ＦＰ−Ｉ．２つの試験シリーズを行った。第１の試験には、２３名の患者が参加し、第２の試験には（プラセボ対照も行った）３２名の患者が参加した（表１３）。両方の場合について、炎症マーカー、ＨｓＣＲＰおよびＯｘＳマーカー、イソプロスタンに統計学的に有意な低下が観察された。第２の試験シリーズでも、抗炎症性のＩＬ−１０および炎症／ＯｘＳマーカー、ｏｘＬＤＬに統計学的にプラスの変化が示された。第１の試験シリーズ（ｎ＝２３）でも、このマーカーにプラスの変化の傾向が観察された。第２の試験シリーズでは、糖化ヘモグロビンのレベルも測定し、この低下は、統計に基づくものだった。

両方の試験シリーズの結果をまとめると（表１３）、その結果、ｈｓＣＲＰ、イソプロスタンおよびｏｘＬＤＬが統計学的に低下し、ＩｇＥ低下に好ましい傾向があり、ＩＬ−１０は統計学的に増加した。ＦＰ−Ｉの使用後のｈｓＣＲＰとｏｘＬＤＬの間に相関関係があった。対照群では、言及したパラメータのいずれに関しても統計学的に有意な変化は見られなかった。

ＦＰ−ＩＩ．１つの試験シリーズを行い、次のパラメータを測定した：ＩｇＥ ｋＵ／Ｌ、ｏｘＬＤＬ、ＩＬ−１０、８−イソプロスタン、ｈｓＣＲＰおよびＭＰＯ。ＲＰ−ＩＩ使用者の群では、炎症およびＯｘＳ マーカー、ＭＰＯの統計学的に有意な低下（前７７±１３および後５３±９ｎｇ／ｍＬ、ｐ＝０．００５６）ならびに４０％超える使用者で泌尿器障害の頻度の減少が起こったことがわかった。

結果の概要
ＦＰ−ＩならびにＦＰ−ＩＩの投与により、中程度の下部尿路の不快症状（ＩＰＳＳスコア＜８）および主要な刺激症状のあった被験者のＯｘＳおよび炎症のレベルが低下した。ＦＰ−Ｉの場合、中程度の下部尿路の不快症状（ＩＰＳＳスコア＜８）および主要な刺激症状がある研究群男性（５５名）の６６％において、不快症状が少なくとも２０％緩和され、研究群の３０％において不快症状が平均４０％緩和された。患者の臨床的および生化学的パラメータ（ｈｓ−ＣＲＰ、ＩＬ−１０、ｏｘＬＤ、８−イソプロスタン）は、ことによると統計学的に改善された。対照群では変化がなかった。

良性前立腺肥大症に伴う下部尿路刺激症状ならびに酸化ストレスおよび炎症指標に対する栄養補助食品（ＤＳ／ＦＰ−Ｉ）の効果。

軽度または中程度の排尿障害−ＩＰＳＳ（国際前立腺症状スコア）がある１０名の男性を試験に含めた、事前の前立腺分泌物調査およびＮＩＨ−ＣＰＳＩ質問票に基づいて、活動期の前立腺炎を排除し、ＰＳＡ試験および指診を使用することによって、臨床的に有意な前立腺癌の可能性を排除した。栄養補助食品を、１４日間、１日に４５ｇ使用した。それぞれ軽度（ＩＰＳＳスコア２〜７）の泌尿器障害３名および中程度（ＩＰＳＳスコア８〜１９）の泌尿器障害７名を含む１０名すべての患者において、栄養補助食品の使用後に「国際前立腺症状スコア」に従い５０〜６６％泌尿器障害が改善され（ｐ＝０．００３）、夜間の排尿の必要性が減少した点で有意なプラスの変化が起こったことがわかった（平均８７．５％）。

すべての臨床試験の全般的な概要
Ｌ．プランタルムＭＣＣ１およびＬ．ガセリＭＣＣ２を含む食品および栄養補助食品は、低アレルギー性で、ＯｘＳのレベルを低下させ、中程度の下部尿路の不快症状および主要な刺激症状があるような人の前立腺の不快症状に対して統計学的に実証された効果がある。

Claims (11)

1. 単離された微生物菌株Ｌ．プランタルムＭＣＣ１ ＤＳＭ２３８８１。
2. 単離された微生物菌株Ｌ．ガセリＭＣＣ２ ＤＳＭ２３８８２。
3. 死滅した状態であることを特徴とする請求項１または２に記載の微生物。
4. １種または複数の請求項１から３に記載の微生物を含むことを特徴とする組成物。
5. １種の微生物が存在する場合、前記微生物の含有量は、０．８〜１．２体積パーセントの範囲であり、
   菌数は、Ｌ．プランタルムＭＣＣ１の場合、０．２５×１０^８〜４×１０^８ＣＦＵ／ｍＬであり、Ｌ．ガセリＭＣＣ２の場合、０．５×１０^７〜１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬであり、両方の微生物が存在する場合、両方の含有量は、０．４〜０．６体積パーセントの範囲であり、
   Ｌ．プランタルムＭＣＣ１の菌数は、０．２×１０^８〜２．４×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲であり、Ｌ．ガセリＭＣＣ２の菌数は、０．４×１０^７〜０．６×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの範囲である、
   ことを特徴とする請求項４に記載の組成物。
6. 食品および／または栄養補助食品の生産のための抗酸化タンパク質分解成分としての、一緒または別々での、請求項１および／または２に記載の微生物の使用。
7. 低アレルギー性の乳アレルギーを低減する食品および／または栄養補助食品の生産のための、一緒または別々での、請求項１から３に記載の微生物の使用。
8. 良性前立腺肥大症に伴う下部尿路刺激症状ならびにこれらに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減する食品および／または栄養補助食品の生産のための、一緒または別々での、請求項１から３に記載の微生物の使用。
9. 乳アレルギーおよび尿路の不快症状ならびにこれらに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減する食品および栄養補助食品の生産のための方法であって、次の段階：
   Ａ）乳タンパク質を含む最初の混合物を加温する（３７±２℃）段階と、
   Ｂ）１体積パーセントの、菌数が０．４×１０^８〜４．８×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの請求項１に記載の微生物または菌数が０．８×１０^７〜１．２×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの請求項２に記載の微生物またはそれぞれ０．２５×１０^８〜２×１０^８ＣＦＵ／ｍＬおよび０．５×１０^７〜０．５×１０^８ＣＦＵ／ｍＬの請求項１および請求項２に記載の微生物を一緒に添加する段階と、
   Ｃ）得られた混合物を３７±２℃の温度で１８〜２６時間発酵させる段階と、
   Ｄ）前記混合物を８２±２℃の温度で３０〜３５分間低温殺菌し、２０〜３０℃の温度に冷却する段階と、
   Ｅ）前記混合物を添加物により風味付けし、得られた食品を２〜６℃に冷却する段階と、
   Ｆ）粉末の栄養補助食品の生産のために、粉末のコンシステンシーが達成されるまで前記混合物から水を除去する段階と、および
   液体の栄養補助食品の生産ために、所望のコンシステンシーが達成されるまで前記混合物から水を部分的に除去する段階と
   を含むことを特徴とする方法。
10. 前記添加物は、果実もしくはベリーの汁、濃縮物、シロップもしくはジュース飲料または果実もしくはベリーのジャム、好ましくは、シーバックソーン、ブルーベリーまたはラズベリーの汁であることを特徴とする請求項９に記載の方法。
11. 前記乳タンパク質原料は、ホエイ、濃縮されたホエイ、ホエイパウダー、乳、粉乳または乳タンパク質濃縮物であることを特徴とする請求項９に記載の方法。

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