JP2888991B2 - Ｎα−２−（４−ニトロフェニルスルフォニル）エトキシカルボニル−アミノ酸 - Google Patents
Ｎα−２−（４−ニトロフェニルスルフォニル）エトキシカルボニル−アミノ酸Info
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- C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
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Description
【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明の分野は固相ペプチド合成用の被保護アミノ酸
誘導体、すなわち、下記の一般式を有し、固相ペプチド
合成用のＮα保護アミノ酸誘導体として使用されるＮα
−２−（４−ニトロフェニルスルフォニル）エトキシカ
ルボニル−アミノ酸に関するものである。
誘導体、すなわち、下記の一般式を有し、固相ペプチド
合成用のＮα保護アミノ酸誘導体として使用されるＮα
−２−（４−ニトロフェニルスルフォニル）エトキシカ
ルボニル−アミノ酸に関するものである。
ここに、R1は水素原子を表わし、R2は水素、メチル、
イソプロピル、１−メチルプロピル,2−メチルプロピ
ル、tert−ブトキシメチル、１−tert−ブトキシエチ
ル、２−メチルチオエチル、ベンジル、カルボキシアミ
ドメチル、２−カルボキシアミドエチル、tert−ブトキ
シカルボニルメチル、２−（tert−ブトキシカルボニ
ル）エチル、４−（tert−ブトキシカルボアミド）ブチ
ル、４−tert−ブトキシベンジル、インドリル−３−メ
チル、Ｓ−（トリフェニルメチル）チオメチル、１−
（トリフェニルメチル）イミダゾリル−４−メチル、３
−（NG−メシチレンスルフォニル）グアニジノプロピ
ル、Ｎ−キサンチルカルボキシアミドメチル、２−（Ｎ
−キサンチルカルボキシアミド）エチルまたはＳ−（ア
セトアミドメチル）チオメチルを表わす事ができ、ある
いはR1とR2が一緒にプロピレン基を表わすものとする。
イソプロピル、１−メチルプロピル,2−メチルプロピ
ル、tert−ブトキシメチル、１−tert−ブトキシエチ
ル、２−メチルチオエチル、ベンジル、カルボキシアミ
ドメチル、２−カルボキシアミドエチル、tert−ブトキ
シカルボニルメチル、２−（tert−ブトキシカルボニ
ル）エチル、４−（tert−ブトキシカルボアミド）ブチ
ル、４−tert−ブトキシベンジル、インドリル−３−メ
チル、Ｓ−（トリフェニルメチル）チオメチル、１−
（トリフェニルメチル）イミダゾリル−４−メチル、３
−（NG−メシチレンスルフォニル）グアニジノプロピ
ル、Ｎ−キサンチルカルボキシアミドメチル、２−（Ｎ
−キサンチルカルボキシアミド）エチルまたはＳ−（ア
セトアミドメチル）チオメチルを表わす事ができ、ある
いはR1とR2が一緒にプロピレン基を表わすものとする。
固相ペプチド合成は、医学および生物学的研究におい
てまた薬学、獣医学および診断において活性物質として
使用される生物学的活性ペプチドの製造のために広く使
用されている。
てまた薬学、獣医学および診断において活性物質として
使用される生物学的活性ペプチドの製造のために広く使
用されている。
固相ペプチド合成の本質は、不溶性キャリヤに結合さ
れた第1C−末端アミノから始まる反復化学反応サイクル
によるペプチド分子鎖の段階的伸長と概括する事ができ
る。合成工程中に、すべての反応の目標生成物はキャリ
ヤに結合されたままであるが、余分の反応物と副生物が
キャリヤの濾過および洗浄によって除去される。
れた第1C−末端アミノから始まる反復化学反応サイクル
によるペプチド分子鎖の段階的伸長と概括する事ができ
る。合成工程中に、すべての反応の目標生成物はキャリ
ヤに結合されたままであるが、余分の反応物と副生物が
キャリヤの濾過および洗浄によって除去される。
ペプチドの固相合成を実行するため、被保護α−アミ
ノ基を有する第１アミノ酸（目標アミノ酸配列のＣ−末
端）が遊離α−カルボキシ基を介してエステル結合また
はアミド結合形成により不溶性ポリマーキャリヤに対し
て共有結合される。次に、Ｎα保護基がこのようにして
得られたＮα保護アミノアシル−ポリマーから選択的に
開裂され、遊離α−アミノ基を有するアミノアシル−ポ
リマーが形成される。このポリマーがさらに次のＮα被
保護アミノ酸によってアシル化され、このようにしてＮ
α被保護ジペプチドポリマーを生じる。Ｎα保護基の開
裂と次のＮα被保護アミノ酸による遊離アミノ基のアシ
ル化とから成るこのような合成サイクルが、目標アミノ
酸配列組立体の完成まで繰り返される。
ノ基を有する第１アミノ酸（目標アミノ酸配列のＣ−末
端）が遊離α−カルボキシ基を介してエステル結合また
はアミド結合形成により不溶性ポリマーキャリヤに対し
て共有結合される。次に、Ｎα保護基がこのようにして
得られたＮα保護アミノアシル−ポリマーから選択的に
開裂され、遊離α−アミノ基を有するアミノアシル−ポ
リマーが形成される。このポリマーがさらに次のＮα被
保護アミノ酸によってアシル化され、このようにしてＮ
α被保護ジペプチドポリマーを生じる。Ｎα保護基の開
裂と次のＮα被保護アミノ酸による遊離アミノ基のアシ
ル化とから成るこのような合成サイクルが、目標アミノ
酸配列組立体の完成まで繰り返される。
実際の固相合成に際して完全転化を生じるため、一般
に大モル余剰量（２〜10倍）のアシル化試薬が使用され
るので、アミノ酸の側鎖中に存在するアミノ基、カルボ
キシル基、ヒドロキシル基、チオール基、グアニジノ基
などのすべての反応基が適当な保護基によってブロック
されなければならない。この目的の保護基は、ペプチジ
ル−ポリマーアシル化反応条件においてまた一時的Ｎα
保護基の開裂に際して側鎖を確実に永久的に保護するた
め慎重に選択されなければならない。他方これらの側鎖
保護基は、１段階または２段階において定量的にまた合
成ペプチドの構造を破壊する事なく、この合成ペプチド
を保護解除する機会を与えなければならない。多くの場
合、ペプチジル−ポリマー結合も同時的に開裂されなけ
ればならない。アミノ酸の側鎖の永久的保護基の構造お
よび化学特性は、保護される反応性官能基の性質によっ
て決定されるのみならず、使用される一時的Ｎα保護基
の構造および化学的特性によって大きく決定される事は
明らかである。従って、一時的Ｎα保護は固相ペプチド
合成の全ストラテジーのキーエレメントである。
に大モル余剰量（２〜10倍）のアシル化試薬が使用され
るので、アミノ酸の側鎖中に存在するアミノ基、カルボ
キシル基、ヒドロキシル基、チオール基、グアニジノ基
などのすべての反応基が適当な保護基によってブロック
されなければならない。この目的の保護基は、ペプチジ
ル−ポリマーアシル化反応条件においてまた一時的Ｎα
保護基の開裂に際して側鎖を確実に永久的に保護するた
め慎重に選択されなければならない。他方これらの側鎖
保護基は、１段階または２段階において定量的にまた合
成ペプチドの構造を破壊する事なく、この合成ペプチド
を保護解除する機会を与えなければならない。多くの場
合、ペプチジル−ポリマー結合も同時的に開裂されなけ
ればならない。アミノ酸の側鎖の永久的保護基の構造お
よび化学特性は、保護される反応性官能基の性質によっ
て決定されるのみならず、使用される一時的Ｎα保護基
の構造および化学的特性によって大きく決定される事は
明らかである。従って、一時的Ｎα保護は固相ペプチド
合成の全ストラテジーのキーエレメントである。
固相ペプチド合成に際しては、その目的からR.B.メリ
フィールドによってBiochemistry、1964、V.3,p.1385に
記載されたＮα−tert−ブトキシカルボニル アミノ酸
（Boc−アミノ酸）が公知であり、広く使用されてい
る。tert−ブトキシカルボニル（Boc）基は、中強度の
酸性試薬、例えばトリフルオロ酢酸およびその塩素化炭
化水素中の溶液、有機溶媒中の塩化水素溶液、三フッ化
ホウ素／ジエチルエーテル錯体およびその他の二、三の
酸の作用によって、イソブチレンおよび二酸化炭素の生
成を伴なって開裂する事ができる。
フィールドによってBiochemistry、1964、V.3,p.1385に
記載されたＮα−tert−ブトキシカルボニル アミノ酸
（Boc−アミノ酸）が公知であり、広く使用されてい
る。tert−ブトキシカルボニル（Boc）基は、中強度の
酸性試薬、例えばトリフルオロ酢酸およびその塩素化炭
化水素中の溶液、有機溶媒中の塩化水素溶液、三フッ化
ホウ素／ジエチルエーテル錯体およびその他の二、三の
酸の作用によって、イソブチレンおよび二酸化炭素の生
成を伴なって開裂する事ができる。
一時的Ｎα−Boc−保護と共に、側鎖の永久的ブロッ
キングのため、Ｎα−Boc開裂に際して安定であるが、
より強力な酸性試薬によって開裂され、同時にペプチジ
ル−ポリマー結合の分裂を生じる保護基が使用される。
この目的に使用される公知の試薬は液状フッ化水素、ト
リフルオロメタンスルフォン酸およびそのアニゾール、
チオアニゾール、ジメチルスルフィドとの混合物であ
る。一時的Ｎα−Boc−保護を使用する合成ストラテジ
ーの主な欠点は、一時的および永久的保護基の開裂のた
めに酸性分解を使用するにあたり、これは完全に安定な
永久的保護を与える事ができない。合成ペプチドの分子
鎖の長さが増大するに従って、永久的保護基がBoc開裂
段階中に酸性試薬の累積作用を受け、その結果、これら
の保護基の部分的損失と副生物の累積を生じる。これと
は別に、組立てられたペプチジル−ポリマーの過酸性試
薬による最終処理は目標ペプチドの部分的破壊を生じる
可能性がある。過酸の非常に危険な性質の故に操作中に
特殊な装置および適当な安全手段を備える必要がある事
にも注意しよう。
キングのため、Ｎα−Boc開裂に際して安定であるが、
より強力な酸性試薬によって開裂され、同時にペプチジ
ル−ポリマー結合の分裂を生じる保護基が使用される。
この目的に使用される公知の試薬は液状フッ化水素、ト
リフルオロメタンスルフォン酸およびそのアニゾール、
チオアニゾール、ジメチルスルフィドとの混合物であ
る。一時的Ｎα−Boc−保護を使用する合成ストラテジ
ーの主な欠点は、一時的および永久的保護基の開裂のた
めに酸性分解を使用するにあたり、これは完全に安定な
永久的保護を与える事ができない。合成ペプチドの分子
鎖の長さが増大するに従って、永久的保護基がBoc開裂
段階中に酸性試薬の累積作用を受け、その結果、これら
の保護基の部分的損失と副生物の累積を生じる。これと
は別に、組立てられたペプチジル−ポリマーの過酸性試
薬による最終処理は目標ペプチドの部分的破壊を生じる
可能性がある。過酸の非常に危険な性質の故に操作中に
特殊な装置および適当な安全手段を備える必要がある事
にも注意しよう。
最終ペプチドの保護解除のための過酸性試薬の使用を
避けるため、最近、一時的Ｎα保護基として二、三の高
度に酸感性の基が提案され、これらの基は、中庸強度の
酸性試薬によって開裂可能のいわゆるtert−ブチル型の
永久的側鎖保護基と相容性であるとみなされる。このよ
うなＮα保護基の例は、１−（3,5−ジ−tert−ブチル
フェニル）−１−メチル−エトキシカルボニル（ｔ−Bu
meoc）基である。これは、Collect.Czech.Chem.Commu
n.,1992,V.57,P.1707に記載されている。Ｎα−ｔ−Bum
eoc−基はジクロロメタン中の１％トリフルオロ酢酸に
よって開裂され、トリフルオロ酢酸そのものまたはその
濃縮溶液によって開裂可能のｔ−ブチル型永久的保護基
と共に使用する事ができる。この場合、過酸の使用は避
けられるが、示差酸性分解の基本原理は不変である。
避けるため、最近、一時的Ｎα保護基として二、三の高
度に酸感性の基が提案され、これらの基は、中庸強度の
酸性試薬によって開裂可能のいわゆるtert−ブチル型の
永久的側鎖保護基と相容性であるとみなされる。このよ
うなＮα保護基の例は、１−（3,5−ジ−tert−ブチル
フェニル）−１−メチル−エトキシカルボニル（ｔ−Bu
meoc）基である。これは、Collect.Czech.Chem.Commu
n.,1992,V.57,P.1707に記載されている。Ｎα−ｔ−Bum
eoc−基はジクロロメタン中の１％トリフルオロ酢酸に
よって開裂され、トリフルオロ酢酸そのものまたはその
濃縮溶液によって開裂可能のｔ−ブチル型永久的保護基
と共に使用する事ができる。この場合、過酸の使用は避
けられるが、示差酸性分解の基本原理は不変である。
固相ペプチド合成のストラテジーに関する他のアプロ
ーチがR.B.メリフィールドによってScience、1986、V.2
32,p.341に概説されている。「直交原理」と呼ばれるこ
のアプローチは、一時的および永久的保護基が完全に別
個の化学メカニズムにより完全に別個の試薬によって除
去可能であって、一時的Ｎα保護基が絶対的選択性をも
って開裂されて永久的保護基を完全に保存し、またはそ
の逆とする事ができるという仮説に基づいている。現在
この「直交原理」は、固相ペプチド合成の効率的ストラ
テジーの開発のガイドラインとして一般に受け入れられ
ている。
ーチがR.B.メリフィールドによってScience、1986、V.2
32,p.341に概説されている。「直交原理」と呼ばれるこ
のアプローチは、一時的および永久的保護基が完全に別
個の化学メカニズムにより完全に別個の試薬によって除
去可能であって、一時的Ｎα保護基が絶対的選択性をも
って開裂されて永久的保護基を完全に保存し、またはそ
の逆とする事ができるという仮説に基づいている。現在
この「直交原理」は、固相ペプチド合成の効率的ストラ
テジーの開発のガイドラインとして一般に受け入れられ
ている。
「直交原理」の実施例として、固相合成におけるＮα
−ジチアスクシニルアミノ酸（Dts−アミノ酸）の使用
例がInst.J.Peptide and Protein Res.,1987,V.30 p.74
0に記載されている。Ｎα−ジチアスクシニル（Dts）保
護基は中庸強度の酸性媒質に対してきわめて抵抗性であ
って、中性媒質中においてチオール試薬によって順調に
開裂され、アミノ基を解放し、チオ酸化炭素を形成す
る。実際の合成におけるDts−アミノ酸の利用はその有
用な製造法が存在しないので、なお制限されている。
−ジチアスクシニルアミノ酸（Dts−アミノ酸）の使用
例がInst.J.Peptide and Protein Res.,1987,V.30 p.74
0に記載されている。Ｎα−ジチアスクシニル（Dts）保
護基は中庸強度の酸性媒質に対してきわめて抵抗性であ
って、中性媒質中においてチオール試薬によって順調に
開裂され、アミノ基を解放し、チオ酸化炭素を形成す
る。実際の合成におけるDts−アミノ酸の利用はその有
用な製造法が存在しないので、なお制限されている。
「直交原理」に対応する固相合成の最もよく知られま
た広く使用されているストラテジーはC.D.チャングおよ
びJ.マイエンホーファによってInt.J.Peptide and Prot
ein Res.,1975,V.11,P.246に記載されたＮα−９−フル
オレニルメトキシカルボニルアミノ酸（Fmoc−アミノ
酸）の使用に基づいている。Ｎα−９−フルオレニルメ
トキシカルボニル（Fmoc）基は酸性試薬に対して抵抗性
であり、β−除去メカニズムによって、非プロトン性溶
媒中の有機塩基によって、例えばジメチルフォルムアミ
ド（DMF）またはジクロロメタンの中でモルフォリン
ジエチルアミン、ピペラジンまたはピペリジンによって
開裂され、アミノ基が解放されジベンゾフルベンがCO2
と共に形成される。固相合成に際して、Fmoc基の開裂は
好ましくはＮα被保護ペプチジル−ポリマーをDMFの中
で10乃至30分間、20乃至50％ピペリジンによって処理す
る事によって実行される。前記の条件はｔ−ブチル型の
永久的酸感性保護基を一時的Ｎα−Fmoc−保護基と共に
使用する事を可能とし、このようにして合成ストラテジ
ーの「直交性」を生じる事ができる。
た広く使用されているストラテジーはC.D.チャングおよ
びJ.マイエンホーファによってInt.J.Peptide and Prot
ein Res.,1975,V.11,P.246に記載されたＮα−９−フル
オレニルメトキシカルボニルアミノ酸（Fmoc−アミノ
酸）の使用に基づいている。Ｎα−９−フルオレニルメ
トキシカルボニル（Fmoc）基は酸性試薬に対して抵抗性
であり、β−除去メカニズムによって、非プロトン性溶
媒中の有機塩基によって、例えばジメチルフォルムアミ
ド（DMF）またはジクロロメタンの中でモルフォリン
ジエチルアミン、ピペラジンまたはピペリジンによって
開裂され、アミノ基が解放されジベンゾフルベンがCO2
と共に形成される。固相合成に際して、Fmoc基の開裂は
好ましくはＮα被保護ペプチジル−ポリマーをDMFの中
で10乃至30分間、20乃至50％ピペリジンによって処理す
る事によって実行される。前記の条件はｔ−ブチル型の
永久的酸感性保護基を一時的Ｎα−Fmoc−保護基と共に
使用する事を可能とし、このようにして合成ストラテジ
ーの「直交性」を生じる事ができる。
Ｎα−Fmoc−アミノ酸は手動式固相ペプチド合成にお
いても、あらゆる型の自動的または半自動的合成装置に
おいても広く使用されている。しかしＮα−Fmoc−アミ
ノ酸の極度の塩基感性と中性非プロトン性溶媒中のある
程度の不安定性の故に、アシル化条件と使用される溶媒
の純度を慎重に制御する必要のある事を注意しよう。分
子鎖において30残基を超えるペプチドの合成のためにＮ
α−Fmoc−アミノ酸を使用する場合には特に注意が必要
である。さらに比較的製造コストが高いので、Fmoc誘導
体を大規模ペプチド製造に使用する事ができない。
いても、あらゆる型の自動的または半自動的合成装置に
おいても広く使用されている。しかしＮα−Fmoc−アミ
ノ酸の極度の塩基感性と中性非プロトン性溶媒中のある
程度の不安定性の故に、アシル化条件と使用される溶媒
の純度を慎重に制御する必要のある事を注意しよう。分
子鎖において30残基を超えるペプチドの合成のためにＮ
α−Fmoc−アミノ酸を使用する場合には特に注意が必要
である。さらに比較的製造コストが高いので、Fmoc誘導
体を大規模ペプチド製造に使用する事ができない。
発明の概要 従って、固相ペプチド合成の効率的なストラテジーを
開発するために有用な新規なＮα被保護アミノ酸誘導体
を開発する事が望ましい。本発明の目的は新規なアミノ
酸誘導体、特に下記の一般式を有し、 ここに、R1は水素原子を表わし、R2は水素、メチル、イ
ソプロピル、１−メチルプロピル,2−メチルプロピル、
tert−ブトキシメチル、１−tert−ブトキシエチル、２
−メチルチオエチル、ベンジル、カルボキシアミドメチ
ル、２−カルボキシアミドエチル、tert−ブトキシカル
ボニルメチル、２−（tert−ブトキシカルボニル）エチ
ル、４−（tert−ブトキシカルボアミド）ブチル、４−
tert−ブトキシベンジル、インドリル−３−メチル、Ｓ
−（トリフェニルメチル）チオメチル、１−（トリフェ
ニルメチル）イミダゾリル−４−メチル、３−（NG−メ
シチレンスルフォニル）グアニジノプロピル、Ｎ−キサ
ンチルカルボキシアミドメチル、２−（Ｎ−キサンチル
カルボキシアミド）エチルまたはＳ−（アセトアミドメ
チル）チオメチルを表わし、あるいはR1とR2は一緒にプ
ロピレン基を表わし、 固相ペプチド合成用のＮα保護アミノ酸誘導体として
使用する事のできるＮα−２−（４−ニトロフェニルス
ルフォニル）エトキシカルボニル−アミノ酸（Ｎα−Ns
c−アミノ酸）を提供するにある。
開発するために有用な新規なＮα被保護アミノ酸誘導体
を開発する事が望ましい。本発明の目的は新規なアミノ
酸誘導体、特に下記の一般式を有し、 ここに、R1は水素原子を表わし、R2は水素、メチル、イ
ソプロピル、１−メチルプロピル,2−メチルプロピル、
tert−ブトキシメチル、１−tert−ブトキシエチル、２
−メチルチオエチル、ベンジル、カルボキシアミドメチ
ル、２−カルボキシアミドエチル、tert−ブトキシカル
ボニルメチル、２−（tert−ブトキシカルボニル）エチ
ル、４−（tert−ブトキシカルボアミド）ブチル、４−
tert−ブトキシベンジル、インドリル−３−メチル、Ｓ
−（トリフェニルメチル）チオメチル、１−（トリフェ
ニルメチル）イミダゾリル−４−メチル、３−（NG−メ
シチレンスルフォニル）グアニジノプロピル、Ｎ−キサ
ンチルカルボキシアミドメチル、２−（Ｎ−キサンチル
カルボキシアミド）エチルまたはＳ−（アセトアミドメ
チル）チオメチルを表わし、あるいはR1とR2は一緒にプ
ロピレン基を表わし、 固相ペプチド合成用のＮα保護アミノ酸誘導体として
使用する事のできるＮα−２−（４−ニトロフェニルス
ルフォニル）エトキシカルボニル−アミノ酸（Ｎα−Ns
c−アミノ酸）を提供するにある。
本発明の他の目的はＮα−Nsc−アミノ酸の製造法を
提供するにある。
提供するにある。
本発明のさらに他の目的は、Ｎα−Nsc−アミノ酸を
使用する固相ペプチド合成法を提供するにある。本発明
のこれらの目的およびその他の目的は下記の説明から明
かとなろう。
使用する固相ペプチド合成法を提供するにある。本発明
のこれらの目的およびその他の目的は下記の説明から明
かとなろう。
発明の詳細な説明 本発明のＮα−Nsc−アミノ酸（Ｉ）は一般式（II）
のアミノ酸（ここにR1とR2は式Ｉについて与えられた意
味を有する）を、２−（ニトロフェニルスルフォニル）
クロロフォルメート（III）と共に、水性／有機溶媒混
合物の中で、塩基の存在において、０乃至40℃、好まし
くは０乃至20℃の温度で処理する事によって製造される
（スキーム１）。
のアミノ酸（ここにR1とR2は式Ｉについて与えられた意
味を有する）を、２−（ニトロフェニルスルフォニル）
クロロフォルメート（III）と共に、水性／有機溶媒混
合物の中で、塩基の存在において、０乃至40℃、好まし
くは０乃至20℃の温度で処理する事によって製造される
（スキーム１）。
クロロフォルメートIIIはアミノ酸に対して0.5乃至1.
5、好ましくは0.7乃至0.9モル当量を反応中に導入され
る。溶媒の有機成分としては、アシル化試薬を溶解する
事ができ水と混和性の任意の非プロトン性有機溶媒、例
えばアセトニトリル、DMF、テトラヒドロフランまたは
ジオキサンを使用する事ができる。塩基は有機または無
機塩基、例えば炭酸ナトリウムまたはカリウム、酸化マ
グネシウムまたはカルシウム、トリエチルアミン、Ｎ−
メチルモルフォリンとする事ができる。
5、好ましくは0.7乃至0.9モル当量を反応中に導入され
る。溶媒の有機成分としては、アシル化試薬を溶解する
事ができ水と混和性の任意の非プロトン性有機溶媒、例
えばアセトニトリル、DMF、テトラヒドロフランまたは
ジオキサンを使用する事ができる。塩基は有機または無
機塩基、例えば炭酸ナトリウムまたはカリウム、酸化マ
グネシウムまたはカルシウム、トリエチルアミン、Ｎ−
メチルモルフォリンとする事ができる。
本発明の他の方法によれば、まず、一般式IIのアミノ
酸を業界公知の方法によってN,O−ビス−トリメチルシ
リル誘導体IVに転化し、次に無水有機溶媒中において、
例えばジクロロメタンの中でクロロフォルメートIIIよ
って処理する。中間トリメチルシリル誘導体の水性加水
分解後に、所望のＮα−Nsc−アミノ酸Ｉが遊離形で得
られる（スキーム２）。
酸を業界公知の方法によってN,O−ビス−トリメチルシ
リル誘導体IVに転化し、次に無水有機溶媒中において、
例えばジクロロメタンの中でクロロフォルメートIIIよ
って処理する。中間トリメチルシリル誘導体の水性加水
分解後に、所望のＮα−Nsc−アミノ酸Ｉが遊離形で得
られる（スキーム２）。
R1が水素、R2がＮ−キサンチルカルボキシアミドメチ
ルまたは２−（Ｎ−キサンチルカルボキシアミド）エチ
ルである式Ｉの誘導体は、R1が水素、R2がカルボキシア
ミドメチルまたは２−カルボキシアミド）エチルである
式Ｉの誘導体を非プロトン性有機溶媒の中で、酸の存在
においてキサンチドロールと反応させる事によって製造
する事ができる。溶媒としてDMFを使用する事ができ、
また好ましい酸は有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、メ
タンスルフォン酸、またはｐ−トルエンスルフォン酸で
ある。
ルまたは２−（Ｎ−キサンチルカルボキシアミド）エチ
ルである式Ｉの誘導体は、R1が水素、R2がカルボキシア
ミドメチルまたは２−カルボキシアミド）エチルである
式Ｉの誘導体を非プロトン性有機溶媒の中で、酸の存在
においてキサンチドロールと反応させる事によって製造
する事ができる。溶媒としてDMFを使用する事ができ、
また好ましい酸は有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、メ
タンスルフォン酸、またはｐ−トルエンスルフォン酸で
ある。
分子式から明かなように、化合物Ｉは（R1＝R2＝Ｈの
化合物以外は）、非対称α−炭素原子を有する。α−炭
素原子は化合物Ｉの製造に使用される反応には参加しな
いので、出発アミノ酸II中に存在するこのキラール中心
の形態は得られたＮα−Nsc−誘導体Ｉの中に保持され
る。従って、本発明の方法は、出発化合物IIの構造に従
って、任意のキラール形状（Ｌ型またはＤ型）の、また
ラセミ化合物としての、Ｎα−Nsc−アミノ酸Ｉの製造
に使用できる事は明かである。
化合物以外は）、非対称α−炭素原子を有する。α−炭
素原子は化合物Ｉの製造に使用される反応には参加しな
いので、出発アミノ酸II中に存在するこのキラール中心
の形態は得られたＮα−Nsc−誘導体Ｉの中に保持され
る。従って、本発明の方法は、出発化合物IIの構造に従
って、任意のキラール形状（Ｌ型またはＤ型）の、また
ラセミ化合物としての、Ｎα−Nsc−アミノ酸Ｉの製造
に使用できる事は明かである。
本発明による式Ｉの誘導体中のR1およびR2置換基の意
味は、業界公知の保護基、多くの場合にはtert−ブチル
型基または開裂条件に関して類似の基を含みまたは含ま
ない天然アミノ酸の側鎖の構造に対応する。（表１） 明らかに、前記の表１に示された式Ｉの化合物は任意
のアミノ酸組成物のペプチドの合成に必要な被保護タン
パク質形成アミノ酸誘導体の完全セットを示す。また明
かに、他の型のバックボーン保護基を有するアミノ酸Ｎ
α−Nsc−誘導体および非タンパク質形成または異常ア
ミノ酸のＮα−Nsc−誘導体が本発明の方法によって合
成される。
味は、業界公知の保護基、多くの場合にはtert−ブチル
型基または開裂条件に関して類似の基を含みまたは含ま
ない天然アミノ酸の側鎖の構造に対応する。（表１） 明らかに、前記の表１に示された式Ｉの化合物は任意
のアミノ酸組成物のペプチドの合成に必要な被保護タン
パク質形成アミノ酸誘導体の完全セットを示す。また明
かに、他の型のバックボーン保護基を有するアミノ酸Ｎ
α−Nsc−誘導体および非タンパク質形成または異常ア
ミノ酸のＮα−Nsc−誘導体が本発明の方法によって合
成される。
Ｎα−Nsc−アミノ酸Ｉは、水中に不溶性または軽度
溶性であって、極性有機溶媒中に可溶、−10℃乃至25℃
で長期間安定な結晶性化合物である。
溶性であって、極性有機溶媒中に可溶、−10℃乃至25℃
で長期間安定な結晶性化合物である。
本発明によれば、式ＩのＮα−Nsc−アミノ酸を使用
して固相ペプチド合成を実施する方法が提供される。
して固相ペプチド合成を実施する方法が提供される。
この方法によれば、第1Nα−Nsc−アミノ酸（目標ア
ミノ配列のＣ−末端）が不溶性ポリマーキャリヤに対し
て遊離α−カルボキシ基を介してエステル結合またはア
ミド結合の形成により共有結合され、Ｎα−Nsc−アミ
ノアシルポリマーが得られる。種々のポリマーをポリマ
ーキャリヤとして使用する事ができる。例えば、橋かけ
結合またはマクロ細孔プリスチレン、粒状のまたはけい
そう土との複合体としての橋かけ結合されたポリ−N,N
−ジメチルアクリルアミド、橋かけ結合されたデキスト
ラン、セルロース、ペーパまたはその他業界公知のポリ
マーを使用する事ができる。
ミノ配列のＣ−末端）が不溶性ポリマーキャリヤに対し
て遊離α−カルボキシ基を介してエステル結合またはア
ミド結合の形成により共有結合され、Ｎα−Nsc−アミ
ノアシルポリマーが得られる。種々のポリマーをポリマ
ーキャリヤとして使用する事ができる。例えば、橋かけ
結合またはマクロ細孔プリスチレン、粒状のまたはけい
そう土との複合体としての橋かけ結合されたポリ−N,N
−ジメチルアクリルアミド、橋かけ結合されたデキスト
ラン、セルロース、ペーパまたはその他業界公知のポリ
マーを使用する事ができる。
第1Nα−Nsc−アミノ酸の結合のため、ポリマーキャ
リヤは適当なアンカー基を含まなければならない。多く
の場合、トリフルオロ酢酸などの酸性試薬およびその溶
液または有機溶媒中の塩化水素溶液によるペプチジルポ
リマーの処理に際してポリマーキャリヤから合成ペプチ
ドを開裂してＣ−末端カルボキシル基またはカルボキシ
アミド基を解放するアンカー基が好ましい。このような
エステル型アンカー基は４−ヒドロキシメチルフェノキ
シアルキル、４−クロロ−または４−ブロモメチルフェ
ノキシアルキル、α−ヒドロキシジフェニルメチルおよ
びその他の業界公知の基であり得る。カルボキシアミド
型結合の場合、ジ−およびトリアルコキシベンズヒドリ
ルアニム基、４−アミノメチル−3,5−ジメトキシフェ
ノキシアルキル基およびこの目的に使用されるその他公
知の基であり得る。
リヤは適当なアンカー基を含まなければならない。多く
の場合、トリフルオロ酢酸などの酸性試薬およびその溶
液または有機溶媒中の塩化水素溶液によるペプチジルポ
リマーの処理に際してポリマーキャリヤから合成ペプチ
ドを開裂してＣ−末端カルボキシル基またはカルボキシ
アミド基を解放するアンカー基が好ましい。このような
エステル型アンカー基は４−ヒドロキシメチルフェノキ
シアルキル、４−クロロ−または４−ブロモメチルフェ
ノキシアルキル、α−ヒドロキシジフェニルメチルおよ
びその他の業界公知の基であり得る。カルボキシアミド
型結合の場合、ジ−およびトリアルコキシベンズヒドリ
ルアニム基、４−アミノメチル−3,5−ジメトキシフェ
ノキシアルキル基およびこの目的に使用されるその他公
知の基であり得る。
ポリマーキャリヤのアンカー基に対するＣ−末端Ｎα
−Nsc−アミノ酸の結合は業界公知の方法によって実施
される。
−Nsc−アミノ酸の結合は業界公知の方法によって実施
される。
得られたＮα−Nsc−アミノアシルポリマーからＮα
−保護基を開裂するため、前記の保護されたアミノアシ
ルポリマーを塩基性試薬によって処理する。好ましい塩
基性試薬は窒素塩基、例えばアンモニア、モルフォリ
ン、ピペリジン、ピペラジン、ジエチルアミン、1,8−
ジアザビシクロ［5,4,0］ウンデク−７−エン、1,1,3,3
−テトラメチルグアニジニンおよび非プロトン性有機溶
媒中のその溶液である。さらに好ましい塩基試薬はDMF
中の20乃至50％ピペリジン溶液である。この場合、Nsc
基はＮ−［２−（４−ニトロフェニルスルフォニル）エ
チル］ピペリジンと二酸化炭素の形式を伴なって開裂さ
れ、α−アミノ基が解放される。
−保護基を開裂するため、前記の保護されたアミノアシ
ルポリマーを塩基性試薬によって処理する。好ましい塩
基性試薬は窒素塩基、例えばアンモニア、モルフォリ
ン、ピペリジン、ピペラジン、ジエチルアミン、1,8−
ジアザビシクロ［5,4,0］ウンデク−７−エン、1,1,3,3
−テトラメチルグアニジニンおよび非プロトン性有機溶
媒中のその溶液である。さらに好ましい塩基試薬はDMF
中の20乃至50％ピペリジン溶液である。この場合、Nsc
基はＮ−［２−（４−ニトロフェニルスルフォニル）エ
チル］ピペリジンと二酸化炭素の形式を伴なって開裂さ
れ、α−アミノ基が解放される。
さらに遊離アミノ基を有するアミノアシルポリマーが
次のＮα−Nsc−アミノ酸によってアシル化されて、Ｎ
α−Nsc−ジペプチジル−ポリマーを生じる。この目的
から通常この目的に使用される方法が使用される。アシ
ル化試剤として、例えばＮα−Nsc−アミノ酸の４−ニ
トロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロ
フェニル、１−ヒドロキシベンゾトリアゾリルエステル
および固相ペプチド合成に使用されるその他業界公知の
活性エステル、Ｎα−Nsc−アミノ酸の対称無水物が使
用される。またアシル化は、公知の結合試薬、例えばジ
シクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボ
ジイミド、ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾリル−
１−オキシ−（トリス−ジメチルアミノ）ホスホニウム
の存在においてＮα−Nsc−アミノ酸によって実施する
事ができる。
次のＮα−Nsc−アミノ酸によってアシル化されて、Ｎ
α−Nsc−ジペプチジル−ポリマーを生じる。この目的
から通常この目的に使用される方法が使用される。アシ
ル化試剤として、例えばＮα−Nsc−アミノ酸の４−ニ
トロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロ
フェニル、１−ヒドロキシベンゾトリアゾリルエステル
および固相ペプチド合成に使用されるその他業界公知の
活性エステル、Ｎα−Nsc−アミノ酸の対称無水物が使
用される。またアシル化は、公知の結合試薬、例えばジ
シクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボ
ジイミド、ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾリル−
１−オキシ−（トリス−ジメチルアミノ）ホスホニウム
の存在においてＮα−Nsc−アミノ酸によって実施する
事ができる。
Ｎα−Nsc−基開裂と次のＮα−Nsc−アミノ酸による
遊離アミノ基のアシル化とから成る合成サイクルが、目
標アミノ酸配列組立体が完成するまで繰り返される。
遊離アミノ基のアシル化とから成る合成サイクルが、目
標アミノ酸配列組立体が完成するまで繰り返される。
所望のＮα−Nsc−ペプチジル−ポリマーが組立体か
ら得られた後に、Ｎα−保護基が前記の方法によって開
裂され、次に多くの場合、目標ペプチドがキャリヤのア
ンカー基から分離され、同時にアミノ酸の側鎖から永久
的保護基を開裂する。そのため、tert−ブチル保護基の
開裂用の業界公知の酸性試薬を使用する事ができる。例
えば発生したカルボニウムイオンを捕捉するための公知
の添加剤、例えば水、アニゾール、チオアニゾール、ジ
メチルスルフィド、エタンジチオール−1,2−トリイソ
プロピルシランを含有しまたは含有しないトリフルオロ
酢酸、メタンスルフォン酸またはｐ−トルエンスルフォ
ン酸の溶液を使用する事ができる。
ら得られた後に、Ｎα−保護基が前記の方法によって開
裂され、次に多くの場合、目標ペプチドがキャリヤのア
ンカー基から分離され、同時にアミノ酸の側鎖から永久
的保護基を開裂する。そのため、tert−ブチル保護基の
開裂用の業界公知の酸性試薬を使用する事ができる。例
えば発生したカルボニウムイオンを捕捉するための公知
の添加剤、例えば水、アニゾール、チオアニゾール、ジ
メチルスルフィド、エタンジチオール−1,2−トリイソ
プロピルシランを含有しまたは含有しないトリフルオロ
酢酸、メタンスルフォン酸またはｐ−トルエンスルフォ
ン酸の溶液を使用する事ができる。
オプションとして、目標ペプチドは開裂なしでポリマ
ーキャリヤからデブロッキングする事ができる。このよ
うな場合、耐酸性ペプチジル−ポリマー結合を生じる事
のできる公知のアンカー基を使用しなければならない。
ーキャリヤからデブロッキングする事ができる。このよ
うな場合、耐酸性ペプチジル−ポリマー結合を生じる事
のできる公知のアンカー基を使用しなければならない。
Fmocと比較して、Nsc基は塩基性試薬に対して一層抵
抗性であり、その開裂率は同一条件ではるかに低いが、
固相合成プロトコールによってＮα−保護基の開裂に通
常割当てられる時間（15〜20分）は、DMF中ピペリジン
の20乃至50％溶液などの塩基性試薬によって、被保護ペ
プチジル−ポリマーからＮα−Nsc−基を定量的に開裂
するのに十分である。他方、塩基性試薬に対するNsc基
の抵抗性の増大の故に、好ましくはアシル化段階の実施
に使用される中性または弱塩基性媒体の中でその安定性
が著しく増大される。
抗性であり、その開裂率は同一条件ではるかに低いが、
固相合成プロトコールによってＮα−保護基の開裂に通
常割当てられる時間（15〜20分）は、DMF中ピペリジン
の20乃至50％溶液などの塩基性試薬によって、被保護ペ
プチジル−ポリマーからＮα−Nsc−基を定量的に開裂
するのに十分である。他方、塩基性試薬に対するNsc基
の抵抗性の増大の故に、好ましくはアシル化段階の実施
に使用される中性または弱塩基性媒体の中でその安定性
が著しく増大される。
前述のように、Nsc基は、有機性塩基に対して抵抗性
のtert−ブチル型保護基の存在において、塩基性試薬に
よって定量的に開裂される。他方、Nsc基は、tert−ブ
チル型の保護基の開裂のために通常使用される酸性試薬
の作用に対して完全に抵抗性である。従って、好ましく
はtert−ブチル型の保護基または開裂条件に関してこれ
と同等の保護基を側鎖中に含む一般式ＩのＮα−Nsc−
アミノ酸の使用は、「直交原理」による固相ペプチド合
成の新しいストラテジーを展開させる。
のtert−ブチル型保護基の存在において、塩基性試薬に
よって定量的に開裂される。他方、Nsc基は、tert−ブ
チル型の保護基の開裂のために通常使用される酸性試薬
の作用に対して完全に抵抗性である。従って、好ましく
はtert−ブチル型の保護基または開裂条件に関してこれ
と同等の保護基を側鎖中に含む一般式ＩのＮα−Nsc−
アミノ酸の使用は、「直交原理」による固相ペプチド合
成の新しいストラテジーを展開させる。
以下、本発明を図面に示す実施例について詳細に説明
するが本発明はこれに限定されない。下記の説明におけ
るすべてのアミノ酸は特記なき限りＬ構造を有するもの
とする。
するが本発明はこれに限定されない。下記の説明におけ
るすべてのアミノ酸は特記なき限りＬ構造を有するもの
とする。
実施例 １ Ｎα−Nsc−アスパラギン（Ｉ−10） 3.95gのアスパラギンと7.7gの炭酸カリウムを100mlの
水−ジオキサン混合物（3:1、v/v）の中に溶解し、氷浴
で冷却し、次にジオキサン70ml中7.5gの２−（４−ニト
ロフェニルスルフォニル）エチル クロロフォルメート
IIIの溶液を15分間、撹拌しながら滴下した。冷却浴を
除去し、混合物をさらに20分間撹拌し、次に減圧下に約
100mlまで蒸発させ、分離漏斗中に移した。100mlの水を
加え、得られた溶液を２×50mlの酢酸エチルによって抽
出した。水性層を分離し、40％硫酸をもってpH2まで酸
性化し、氷浴の中で冷却した。30分後に、形成された析
出物を濾別し、氷水で十分に洗浄し、空気乾燥して所望
化合物Ｉ−10を白色結晶粉末として生じた。特性につい
ては、表２参照（実施例５）。
水−ジオキサン混合物（3:1、v/v）の中に溶解し、氷浴
で冷却し、次にジオキサン70ml中7.5gの２−（４−ニト
ロフェニルスルフォニル）エチル クロロフォルメート
IIIの溶液を15分間、撹拌しながら滴下した。冷却浴を
除去し、混合物をさらに20分間撹拌し、次に減圧下に約
100mlまで蒸発させ、分離漏斗中に移した。100mlの水を
加え、得られた溶液を２×50mlの酢酸エチルによって抽
出した。水性層を分離し、40％硫酸をもってpH2まで酸
性化し、氷浴の中で冷却した。30分後に、形成された析
出物を濾別し、氷水で十分に洗浄し、空気乾燥して所望
化合物Ｉ−10を白色結晶粉末として生じた。特性につい
ては、表２参照（実施例５）。
実施例 ２ Ｎα−Nsc−ロイシン（Ｉ−５） 4.92gのロイシンと90mlの無水ジクロロメタンとを、
還流凝縮装置と滴下漏斗とを備えた250ml丸底フラスコ
の中に入れた。懸濁液となるまで、9.5mlのクロロトリ
メチルシランを強く撹拌しながら添加し、この混合物を
１時間、沸騰点まで加熱した。得られた溶液を氷浴の中
で冷却し、次に9.1mlのトリエチルアミンと9.0gのクロ
ロフォルメートIIIとを撹拌しながら添加した。混合物
を20分間、氷浴の中で撹拌し、次に常温で1.5時間撹拌
した。溶媒を減圧で蒸発させ、残留物を200mlの酢酸エ
チルと250mlの2.5％水性重炭酸ナトリウムとに分配し
た。水相を分離し、50mlのエーテルで洗浄し、1N塩酸で
pH2まで酸性化し、次に３×70ml酢酸エチルで抽出し
た。結合された抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、減圧で蒸発させた。ヘキサン−酢酸エチルから残留
物を再晶出させて、所望の生成物Ｉ−５を白色結晶性粉
末（80％）の形で得た。その特性については表２（実施
例５）参照。
還流凝縮装置と滴下漏斗とを備えた250ml丸底フラスコ
の中に入れた。懸濁液となるまで、9.5mlのクロロトリ
メチルシランを強く撹拌しながら添加し、この混合物を
１時間、沸騰点まで加熱した。得られた溶液を氷浴の中
で冷却し、次に9.1mlのトリエチルアミンと9.0gのクロ
ロフォルメートIIIとを撹拌しながら添加した。混合物
を20分間、氷浴の中で撹拌し、次に常温で1.5時間撹拌
した。溶媒を減圧で蒸発させ、残留物を200mlの酢酸エ
チルと250mlの2.5％水性重炭酸ナトリウムとに分配し
た。水相を分離し、50mlのエーテルで洗浄し、1N塩酸で
pH2まで酸性化し、次に３×70ml酢酸エチルで抽出し
た。結合された抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、減圧で蒸発させた。ヘキサン−酢酸エチルから残留
物を再晶出させて、所望の生成物Ｉ−５を白色結晶性粉
末（80％）の形で得た。その特性については表２（実施
例５）参照。
実施例 ３ Ｎα−Nsc−アスパラギン酸β−tert−ブチルエステル
（Ｉ−12） 7.09gのアスパラギン酸β−tert−ブチル エステル
と90mlの無水ジクロロメタンとを、還流凝縮装置と滴下
漏斗とを備えた250ml丸底フラスコの中に配置した。こ
の混合物に対して12.7mlのジイソプロピルエチルアミ
ン、次に9.5mlのクロロトリメチルシランを強く撹拌し
ながら添加し、次に混合物を1.5時間沸騰点まで加熱し
た。次に反応混合物を氷浴の中で冷却し、9.0gのクロロ
フォルメートIIIを一度に添加し、さらに常温で1.5時
間、撹拌を続けた。溶媒を減圧で蒸発させ、残留物を20
0mlの酢酸エチルと250mlの25％水性重炭酸ナトリウムと
に分配した。水相を分離し、50mlのエーテルで洗浄し、
1N塩酸をもってpH2まで酸性化し、次に３×70mlの酢酸
エチルをもって抽出した。抽出された混合物を無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、減圧で蒸発させた。ヘキサン−酢
酸エチルから残留物を再晶出させて、所望の生成物Ｉ−
12を白色結晶性粉末（86％）の形で得た。その特性につ
いては表２（実施例５）参照。
（Ｉ−12） 7.09gのアスパラギン酸β−tert−ブチル エステル
と90mlの無水ジクロロメタンとを、還流凝縮装置と滴下
漏斗とを備えた250ml丸底フラスコの中に配置した。こ
の混合物に対して12.7mlのジイソプロピルエチルアミ
ン、次に9.5mlのクロロトリメチルシランを強く撹拌し
ながら添加し、次に混合物を1.5時間沸騰点まで加熱し
た。次に反応混合物を氷浴の中で冷却し、9.0gのクロロ
フォルメートIIIを一度に添加し、さらに常温で1.5時
間、撹拌を続けた。溶媒を減圧で蒸発させ、残留物を20
0mlの酢酸エチルと250mlの25％水性重炭酸ナトリウムと
に分配した。水相を分離し、50mlのエーテルで洗浄し、
1N塩酸をもってpH2まで酸性化し、次に３×70mlの酢酸
エチルをもって抽出した。抽出された混合物を無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、減圧で蒸発させた。ヘキサン−酢
酸エチルから残留物を再晶出させて、所望の生成物Ｉ−
12を白色結晶性粉末（86％）の形で得た。その特性につ
いては表２（実施例５）参照。
実施例 ４ Ｎα−Nsc−Ｎ−キサンチル−アスパラギン（Ｉ−20） 3.89gのＮα−Nsc−アスパラギン（Ｉ−10）と2.6gの
キサンチドロールとを20mlの乾燥DMFの中に溶解した。
溶液に対して、0.4mlのメタンスルフォン酸を添加し、
混合物を２日間常温で放置した。得られた混合物を100m
lの氷冷却水の中に撹拌しながら注出し、得られた析出
物を濾別し、水洗し、次に酢酸エチルとエーテルで洗浄
した。粗生成物を10mlの暖かいDMFの中に溶解し、濾過
し、エーテルで再析出させた。析出物を濾過によって捕
集し、エーテルで洗浄し、減圧乾燥して、所望の化合物
Ｉ−20を結晶性粉末として得た（74％）。その特性につ
いては、表２（実施例５）参照。
キサンチドロールとを20mlの乾燥DMFの中に溶解した。
溶液に対して、0.4mlのメタンスルフォン酸を添加し、
混合物を２日間常温で放置した。得られた混合物を100m
lの氷冷却水の中に撹拌しながら注出し、得られた析出
物を濾別し、水洗し、次に酢酸エチルとエーテルで洗浄
した。粗生成物を10mlの暖かいDMFの中に溶解し、濾過
し、エーテルで再析出させた。析出物を濾過によって捕
集し、エーテルで洗浄し、減圧乾燥して、所望の化合物
Ｉ−20を結晶性粉末として得た（74％）。その特性につ
いては、表２（実施例５）参照。
実施例 ５ Ｎα−Nsc−アミン酸Ｉの特性 表２には、実施例１−４に詳細に記載の方法によって
製造された式Ｉの化合物の特性を示す。「方法」欄の数
字は特定の方法の記載された実施例の番号に対応する。
特異施光［ａ］D 25はDIP320ポラリメータ（JASCO、日
本）上で、 10cmキュベット中で測定された。融点は開放毛管中で測
定され、補正されなかった。クロマトグラフィー移動度
Rfは薄層クロマトグラフィーシート Alufolien Kiesel
gel 60 F254（メルク、ダルムシュタット、ドイツ）に
おいて表示された。展開溶媒として、（Ａ）クロロフォ
ルム／メタノール／酢酸、95:5:3と、（Ｂ）ベンゼン／
アセトン／酢酸、100:50:3とを使用し、スポットはUV−
吸光度および／またはニンヒドリン反応によって検出さ
れた。分子イオン量（Ｍ＋Ｈ）＋は、Cf252放射線加速
脱離型の飛行時間質量スペクトロメータMS−BC−１（El
ectronSPA,スミー、ウクライナ）を使用して測定され
た。
製造された式Ｉの化合物の特性を示す。「方法」欄の数
字は特定の方法の記載された実施例の番号に対応する。
特異施光［ａ］D 25はDIP320ポラリメータ（JASCO、日
本）上で、 10cmキュベット中で測定された。融点は開放毛管中で測
定され、補正されなかった。クロマトグラフィー移動度
Rfは薄層クロマトグラフィーシート Alufolien Kiesel
gel 60 F254（メルク、ダルムシュタット、ドイツ）に
おいて表示された。展開溶媒として、（Ａ）クロロフォ
ルム／メタノール／酢酸、95:5:3と、（Ｂ）ベンゼン／
アセトン／酢酸、100:50:3とを使用し、スポットはUV−
吸光度および／またはニンヒドリン反応によって検出さ
れた。分子イオン量（Ｍ＋Ｈ）＋は、Cf252放射線加速
脱離型の飛行時間質量スペクトロメータMS−BC−１（El
ectronSPA,スミー、ウクライナ）を使用して測定され
た。
実施例 ６ ドデカペプチドの固相合成 Ala−Ser−Ser−Thr−Ile−Ile−Lys−Phe−Gly−Ile−
Asp−Lys. ａ）ポリマーキャリヤの中へのアンカー基の挿入 DMF3ml中の250mgのアミノメチル化 スチレン−１％
ジビニルベンゼン コポリマー（1.0meq.NH2/g）に対
して、0.75mmolの2,4,5−トリクロロフェニル−４−ヒ
ドロキシルメチルフェノキシプロピオネートと0.75mmol
の１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを添加し、懸濁液
を24時間、常温で振とうした。ポリマーを濾別し、DM
F、エタノール、エーテルで洗浄し、最後にヘキサンで
洗浄し、24時間、五酸化リン上で減圧乾燥した。
Asp−Lys. ａ）ポリマーキャリヤの中へのアンカー基の挿入 DMF3ml中の250mgのアミノメチル化 スチレン−１％
ジビニルベンゼン コポリマー（1.0meq.NH2/g）に対
して、0.75mmolの2,4,5−トリクロロフェニル−４−ヒ
ドロキシルメチルフェノキシプロピオネートと0.75mmol
の１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを添加し、懸濁液
を24時間、常温で振とうした。ポリマーを濾別し、DM
F、エタノール、エーテルで洗浄し、最後にヘキサンで
洗浄し、24時間、五酸化リン上で減圧乾燥した。
ｂ）アンカー基に対するNsc−Lys（Boc）−OHの結合 得られたポリマーを4mlの1,2−ジクロロエタン/N−メ
チルピロリジン混合物（3:1）中で膨潤させ、次に0.75m
molのNsc−Lys（Boc）−OH（Ｉ−14）と、0.1mmolの４
−ジメチルアミノピリジンと、0.75mmolのジシクロヘキ
シルカルボジイミドを添加した。懸濁液を24時間、常温
で振とうした。ポリマーを濾別し、クロロフォルム、ク
ロロフォルム／メタノール混合物（1:1）、エタノー
ル、エーテル、最後にヘキサンで完全洗浄し、乾燥し
て、400mgのNsc−Lys（Boc）−ポリマーを得た。
チルピロリジン混合物（3:1）中で膨潤させ、次に0.75m
molのNsc−Lys（Boc）−OH（Ｉ−14）と、0.1mmolの４
−ジメチルアミノピリジンと、0.75mmolのジシクロヘキ
シルカルボジイミドを添加した。懸濁液を24時間、常温
で振とうした。ポリマーを濾別し、クロロフォルム、ク
ロロフォルム／メタノール混合物（1:1）、エタノー
ル、エーテル、最後にヘキサンで完全洗浄し、乾燥し
て、400mgのNsc−Lys（Boc）−ポリマーを得た。
ｃ）ペプチド組立体 底部にポリプロピレンフリットを備えた10mlポリプロ
ピレン注射器の中にNsc−Lys（Boc）−ポリマー（200m
g）を入れた。注射器中のポリマーをDMFで洗浄し、さら
に下記の操作手順で合成サイクルを実施した。
ピレン注射器の中にNsc−Lys（Boc）−ポリマー（200m
g）を入れた。注射器中のポリマーをDMFで洗浄し、さら
に下記の操作手順で合成サイクルを実施した。
1.前洗浄 33％ピペリジン/DMF、 4ml;0.5分間、 2.デブロッキング 33％ピペリジン/DMF, 4ml;15分間、 3.洗浄 DMF,6×（4ml;1分間） 4.アシル化 Ｎα−Nsc−アミノ酸I,0.5mmol; ベンゾトリ９アゾリル−１−オキシ−（ト
リスジメチルアミノ） ホスホニウム ヘキサフルオロ フォソフェート、0.5m
mol; １−ヒドロキシベンゾトリアゾール、 0.5mmol; Ｎ−メチル−モルフォリン、 0.75mmol; DMF,2ml; 60分間（NSC−Ile−OHについては90分
間） 5.洗浄 DMF,5×（4ml;1分間） 合成サイクル中、下記の順序でＮα−Nsc−アミノ酸
を導入した:Nsc−Asp（OtBu）−OH,Nsc−Ile−OH,Nsc−
Gly−OH,Nsc−Phe−OH,Nsc−Lys（Boc）−OH,Nsc−Ile
−OH,Nsc−Ile−OH,Nsc−Thr（tBu）−OH,Nsc−Ser（tB
u）−OH,Nsc−Ser（tBu）−OH,Nsc−Ala−OH. 目標アミノ酸配列の配列後に、ペプチジル−ポリマー
を33％ピペリジン/DMF（4ml）で20分間処理し、次にDM
F,ジクロロメタン、エタノール、エーテル、最後にヘキ
サンで洗浄した。
リスジメチルアミノ） ホスホニウム ヘキサフルオロ フォソフェート、0.5m
mol; １−ヒドロキシベンゾトリアゾール、 0.5mmol; Ｎ−メチル−モルフォリン、 0.75mmol; DMF,2ml; 60分間（NSC−Ile−OHについては90分
間） 5.洗浄 DMF,5×（4ml;1分間） 合成サイクル中、下記の順序でＮα−Nsc−アミノ酸
を導入した:Nsc−Asp（OtBu）−OH,Nsc−Ile−OH,Nsc−
Gly−OH,Nsc−Phe−OH,Nsc−Lys（Boc）−OH,Nsc−Ile
−OH,Nsc−Ile−OH,Nsc−Thr（tBu）−OH,Nsc−Ser（tB
u）−OH,Nsc−Ser（tBu）−OH,Nsc−Ala−OH. 目標アミノ酸配列の配列後に、ペプチジル−ポリマー
を33％ピペリジン/DMF（4ml）で20分間処理し、次にDM
F,ジクロロメタン、エタノール、エーテル、最後にヘキ
サンで洗浄した。
ｄ）デブロッキングと精製 ペプチジルポリマーを5mlの50％トリフルオロ酢酸を
もって、1,2−ジクロロエタン中で、60分間、常温で処
理した。ポリマーを濾別し、1,2−ジクロロエタン中50
％トリフルオロ酢酸5mlをもって洗浄し、洗浄液を合体
して100mlの氷冷却無水エーテルによって希釈した。析
出物を濾別し、エーテルデ乾燥し、減圧乾燥し、170mg
の粗ドデカペプチド（分析逆相高性能液体クロマトグラ
フィーによる純度70％）を得た。
もって、1,2−ジクロロエタン中で、60分間、常温で処
理した。ポリマーを濾別し、1,2−ジクロロエタン中50
％トリフルオロ酢酸5mlをもって洗浄し、洗浄液を合体
して100mlの氷冷却無水エーテルによって希釈した。析
出物を濾別し、エーテルデ乾燥し、減圧乾燥し、170mg
の粗ドデカペプチド（分析逆相高性能液体クロマトグラ
フィーによる純度70％）を得た。
この粗ドデカペプチドを3mlの1M水性酢酸中に溶解
し、TSK HW−40F（メルク、ダルムシュタット、ドイ
ツ）を封入された1.5×70cmカラム上でクロマトグラフ
ィー分析し、平衡させ、同一緩衝剤で溶離した。純粋ペ
プチドを含有するフラクションをプールし、親液化し
た。目標ドデカペプチドの最後の収率は104mg（41％）
であり、純度は分析逆相高性能液体クロマトグラフィー
により95％以上であった。アミノ酸組成（6N HCl 加水
分解、110℃、24時間および48時間後）は下記であっ
た。Asp 1.02（１）:Ser 1.84（２）:Thr 0.93（２）:T
hr 0.93（１）:Glu 0.94（１）:Gly 1.03（１）:Ala 1.
00（１）:Ile 2.78（３）:Lys 2.04（２）。
し、TSK HW−40F（メルク、ダルムシュタット、ドイ
ツ）を封入された1.5×70cmカラム上でクロマトグラフ
ィー分析し、平衡させ、同一緩衝剤で溶離した。純粋ペ
プチドを含有するフラクションをプールし、親液化し
た。目標ドデカペプチドの最後の収率は104mg（41％）
であり、純度は分析逆相高性能液体クロマトグラフィー
により95％以上であった。アミノ酸組成（6N HCl 加水
分解、110℃、24時間および48時間後）は下記であっ
た。Asp 1.02（１）:Ser 1.84（２）:Thr 0.93（２）:T
hr 0.93（１）:Glu 0.94（１）:Gly 1.03（１）:Ala 1.
00（１）:Ile 2.78（３）:Lys 2.04（２）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ポツニャルコフ，パベル イワノビッチ ロシア連邦ノボシビルスク、リージョ ン、コルツォホ、１−47 (56)参考文献 Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅ ｒｓ，Ｖｏｌ．35，Ｎｏ．42，ｐ．7821 −7824（1994) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07C 317/16 - 317/22 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (7)
- 【請求項１】R1が水素原子を表わし、R2がイソプロピ
ル、２−メチルプロピル、２−メチルチオエチル、ベン
ジル、カルボキシアミドメチル、２−カルボキシアミド
メチル、４−tert−ブトキシベンジル、インドリル−３
−メチル、Ｓ−（トリフェニルメチル）チオメチル、１
−（トリフェニルメチル）イミダゾリル−４−メチル、
３−（NG−メシチレンスルフォニル）グアニジノプロピ
ル、Ｎ−キサンチルカルボキシアミドメチル、２−（Ｎ
−キサンチルカルボキシアミド）エチルまたはＳ−（ア
セトアミドメチル）チオメチルを表わし、あるいはR1と
R2が一緒にプロピレン基を表わす下記の一般式に対応す
る Ｎα−２−（４−ニトロフェニルスルフォニル）エトキ
シカルボニル−アミノ酸。 - 【請求項２】R1とR2が請求項１による基を示す下記一般
式を有するアミノ酸を、 HNR1−CHR2−COOH ２−（４−ニトロフェニルスルフォニル）エトキシカル
ボニルクロロフォルメートと共に、水性／有機溶媒混合
物の中で、塩基の存在において反応させる段階を含む事
を特徴とする請求項１に記載の化合物の製造法。 - 【請求項３】ａ）R1とR2が請求項１による基を示す下記
一般式を有するアミノ酸を、 HNR1−CHR2−COOH O,N−トリメチルシリル化誘導体に変換する段階と、 ｂ）前記のO,N−トリメチルシリル化誘導体を２−（４
−ニトロフェニルスルフォニル）エトキシカルボニルク
ロロフォルメートと、非プロトン性溶剤中で塩基の存在
において反応させ、次に加水分解する段階とを含む事を
特徴とする請求項１に記載の化合物の製法。 - 【請求項４】R1が水素原子、R2がＮ−キサンチルカルボ
キシアミドメチルまたは２−（Ｎ−キサンチルカルボキ
シアミド）エチルである請求項１による化合物の製法に
おいて、R1が水素原子、R2がカルボキシアミドメチルま
たは２−（カルボキシアミド）エチルである請求項１に
よる化合物を非プロトン性有機溶媒の中で、酸の存在に
おいてキサンチドロールと反応させる段階を含む事を特
徴とする方法。 - 【請求項５】不溶性ポリマーキャリヤに結合された成長
ペプチド鎖に対して、請求項１による化合物から成る被
保護アミノ酸モノマーを逐次添加する事によりペプチド
を製造する方法において、 ａ）前記ポリマーキャリヤに結合されたアンカー基のア
ミノ官能基またはヒドロキシル官能基に対して、前記被
保護モノマーの遊離カルボキシル基を介して、Ｃ−末端
被保護モノマーを結合して、被保護アミノアシル−ポリ
マーを生じる段階と、 ｂ）前記被保護アミノアシル−ポリマーを塩基性試薬処
理によってデブロッキングして、遊離α−アミノ基を有
するアミノアシル−ポリマーを生じる段階と、 ｃ）次の被保護アミノ酸モノマーを前記アミノアシル−
ポリマーの遊離α−アミノ基に結合して被保護ペプチジ
ル−ポリマーを生じる段階と、 ｄ）最後の被保護アミノ酸モノマーが結合されるまで段
階（ｂ）と（ｃ）を繰り返し、次いで段階（ｂ）を実施
する段階とを含むペプチドの製法。 - 【請求項６】前記塩基性試薬はアンモニア、モルフォリ
ン、ピペリジン、ピペラジン、ジエチルアミン、1,8−
ジアザビシクロ［5,4,0］ウンデク−７−エン、1,1,3,3
−テトラメチルグアニジンおよび非プロトン性有機溶媒
中のその溶液から成るグループから選定される窒素塩基
である事を特徴とする請求項５に記載の方法。 - 【請求項７】前記窒素塩基はピペリジンであり、また前
記有機溶剤はジメチルフォルムアミドである事を特徴と
する請求項６に記載の方法。
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| AU1894000A (en) * | 1999-12-24 | 2001-07-24 | Hyundai Pharmaceutical Ind. Co., Ltd. | Nalpha-2-(4-nitrophenylsulfonyl)ethoxycarbonyl-amino acid fluorides and process for the preparation thereof |
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