JP2002525376A - アミド結合形成のための補助基 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、アミド結合形成のための新規な補助基に関し、ペプチドおよびペプチド模倣化合物の合成のような種々の合成用途におけるこれらの補助基の使用に関し、特に、「小環状ペプチド」、いわゆる「困難な」ペプチド配列、およびネイティブペプチド骨格を有する大きなペプチドの合成のための新規補助基に関する。本発明の補助基はまた、Ｃ末端修飾ペプチドのペプチド合成、有機分子の樹脂上環化、ライゲーション化学、骨格置換、および骨格リンカーとして有用である。特に好ましい実施態様では、本発明は、光分解によって除去され得る補助基を提供する。直鎖状または環状ペプチド、Ｃ末端修飾ペプチド、またはペプチド分子の樹脂上環化の合成方法は、アミン窒素原子を本発明の補助化合物、特定の補助化合物（これは、固体支持体に必要に応じて連結され得る）に連結する工程を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、アミド結合の形成のための新規補助基に関し、そして種々の合成適
用におけるこれらの補助基の使用に関する。特に、本発明の補助基は、ペプチド
およびペプチド模倣化合物の合成、そして特に「小環状ペプチド」（いわゆる、
「困難な」ペプチド配列）およびネイティブペプチド骨格を有する大きなペプチ
ドの合成に有用である。本発明の補助基はまた、ペプチドの、またはＣ−末端改
変ペプチドの合成、ならびに有機分子の樹脂上（ｏｎ−ｒｅｓｉｎ）環化、ライ
ゲーション化学（ｌｉｇａｔｉｎｇ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、骨格置換および骨
格リンカーに有用である。特に好ましい実施態様において、本発明は、光分解に
よって除去され得る補助基を提供する。

【０００２】 （発明の背景） アミド結合形成は、化学および生物において最も研究されている反応の１つで
ある。これは、ペプチドおよびタンパク質の合成を可能にし、そしてペプチド模
倣化合物として知られるペプチド様分子（これは、薬物設計および発見プログラ
ムにおいて広範に使用される）の合成を可能にする。カルボン酸を活性化し、そ
してこれを第１級または第２級アミンと混合することによって、アミド結合形成
を容易にする、たくさんの薬剤および反応条件が、数年にわたって開発されてい
る。しかし、多くの場合、アシル化反応は、完了し得ないか、または全く進行し
得ない。この分野の発展および広範な研究の努力にもかかわらず、いわゆる「困
難な」アミド結合はなお、存在し、これは研究コミュニティーの大いな目的の多
数の化合物にアクセスすることを防げる。特に、これらは、小環状ペプチド、大
きなペプチドおよびタンパク質ならびに困難なペプチド配列を含む。これらの場
合、アシル化を、加熱することによるか、または活性化エステルの活性を増大さ
せることにより、強いる試みは、所望でない副反応（例えば、ラセミ化または二
量体化）という結果になる。これらの場合において、異なるアプローチは、アミ
ド結合形成を容易にするために要求される。過去１０数年において、多数の補助
基ストラテジーが発達してきており、これは、これらの問題のいくつかを克服す
るために分子内アシル転移を使用する。これらのストラテジーおよびそれらの標
的は、以下により詳細に概説される。

【０００３】 （１．ネイティブライゲーション化学） 化学ライゲーションの一般的考えは、高純度で大きなペプチドを合成すること
である。このプロセスは、最適な固相ペプチド合成を使用することによって、５
０までの残基長の非常に均一な直鎖状ペプチドを生成する能力を利用する。次い
で、これらのペプチドセグメントは、各セグメントの最後で相互に反応性の実体
を使用する、溶液中で連結またはライゲーションされる。既存のライゲーション
ストラテジーに対する主な制限は、これらが非常に制限された数のライゲーショ
ン部位に関してのみ働くことである。

【０００４】 数例は、相互に反応性の基がアミドアイソスターを生成することを発表してい
る。これらの第１例において、ライゲーション化学は、生成物のペプチド骨格に
おける改変を生成した。１９８６，Ｋｅｍｐら（１９８６）は、スキーム１に示
されるチオール−キャプチャストラテジーを提案した。

【０００５】

【化６】 （スキーム１） （チオール−キャプチャストラテジー） ここで、２つのペプチドセグメントは、第１セグメントのＣ−末端でメルカプ
トベンゾフラン置換基を使用してライゲーションされる。システイン残基をＮ−
末端で有する第２のセグメントは、反応し、ジスルフィド結合を形成する。Ｏ−
からＮ−アシルのシフトの後、ジスルフィド結合は、切断され、「ネイティブ」
アミド結合を形成する。この補助基ストラテジーは、それ自体の権利において革
命的であるが、多芸性を欠き、そして選択的に保護されたペプチドセグメントの
合成における固有の困難さのため、非常に制限された数の場合に成功して使用さ
れてきたのみである（Ｆｏｔｏｕｈｉら。１９８９）。これは、ストラテジーア
プローチおよび補助基の設計の点で本発明者らの発明とは異なる。同じグループ
は、分子内アシル転移の速度に影響を与える多数のパラメータを研究し、補助基
の形状にたいてい焦点を合わしている（Ｋｅｍｐら、１９８１）。この研究は、
本発明者らの発明とは非常に異なり、そして本発明に記載されることを示唆する
ものは決してない。

【０００６】 １９９４年、Ｄａｗｓｏｎら（１９９４）は、ネイティブライゲーションの概
念を紹介し、これは、完全に非保護の構築ブロックからネイティブまたは非改変
の骨格を有するタンパク質を生成させる。スキーム２に概説されるこのアプロー
チは、アミノ酸を反応するためのＷｉｅｌａｎｄによってまず記載される化学を
使用する。

【０００７】

【化７】 （スキーム２） （ネイティブライゲーション） 第１の工程において、非保護ペプチド−α−チオエステルは、第２の非保護ペ
プチドのＮ−末端システイン側鎖上のチオール官能基と選択的に反応する。初期
形成チオエステルは、水性緩衝液中、イオウから窒素原子への自発的アシル転移
を起こし、これによって、標準ペプチド結合が生成される。数例は、大きなタン
パク質の高純度での合成を可能にするこの研究の重要性を示す（Ｈａｃｋｅｎｇ
ら、１９９７）。このネイティブライゲーションストラテジーの制限の１つは、
これが標的ペプチド配列の中間のどこかのシステイン残基の存在に依存すること
である。

【０００８】 この研究の拡大において、Ｃａｎｎｅら（１９９６）は、ペプチドセグメント
の１つのＮ−末端で補助基を使用するネイティブライゲーションストラテジーを
報告した。このストラテジーは、Ｎ−末端システイン残基に関する必要性を避け
、そしてＸ−ＧｌｙおよびＧｌｙ−Ｘへのネイティブ化学ライゲーションに従う
部位の範囲を拡大する。このストラテジーは、スキーム３に概説される。

【０００９】

【化８】 （スキーム３） （ネイティブライゲーションの拡大） ペプチド−α−チオエステルは、

【００１０】

【化９】 と反応し、ライゲーション生成物を生成する。チオエステル連結中間体は、アシ
ル転移を介してアミド連結生成物に再配置する。第３級アミドでのＮ−Ｏ結合は
、酸性水溶液中の亜鉛ダストを使用して容易に切断され得、これによって、オキ
シエタンチオール補助基を放出し、そしてライゲーション生成物中にネイティブ
骨格構造を生成する。この補助基アプローチの範囲および制限は、異なるライゲ
ーション部位の範囲を選択することによって試験された。

【００１１】 Ｓ−から−Ｎのアシル転移はＧｌｙ−Ｇｌｙライゲーション部位に関してよく
進行するのみであるが、ライゲーション部位の周囲の立体障害が増大した場合に
より困難となることが見出された。例えば、Ｇｌｙ−Ａｌａライゲーション部位
の場合、再配置は、ｐＨ７．５の緩衝液中で１０時間後、不完全であった。ｐＨ
を４．５まで下げると、再配置は促進され、これは、１０時間後に完了した。Ｐ
ｈｅ−Ｇｌｙライゲーション部位の場合、再配置は、３７℃で２日後、ほとんど
完了した。より嵩高いＰｈｅ−Ａｌａライゲーション部位に関して、Ｓ−から−
Ｎのアシル転移工程は観察されなかった（ｐＨが低くなるかまたはサンプルが３
７℃で２４時間静置された後でもなおそうであった）。従って、Ｇｌｙ−Ｘまた
はＸ−Ｇｌｙライゲーション部位のみが標的生成物を生成することが結論付けら
れた。制限がアシル−転移工程にあり、これは嵩高いライゲーション部位に関し
て進行しない。このストラテジーは、補助基が導入されそして除去される様式で
、そして補助基の設計において本発明者らの発明とは異なる。

【００１２】 ネイティブライゲーションはまた、樹脂結合ペプチドを使用して行われている
。このようなストラテジーのもの（Ｃａｍａｒｅｒｏら、１９９８）は、Ｃ−末
端チオエステルを介して固体支持体に連結される第１ペプチドセグメントのアセ
ンブリ、次いでＮ−末端でシステイン残基を含む第２のセグメントを加える工程
、ならびにネイティブライゲーション工程を溶液相ライゲーションに関して行う
工程を包含する。このことは、中間体の扱いが著しく減少するという利点を有す
る。さらに、数個のライゲーションは、同じ化学アプローチを使用してシリーズ
で行われ得る。固相アプローチに関する制限は、溶液相化学に関するものと同じ
であり、すなわち、ネイティブライゲーションは、Ｘ−Ｃｙｓ、Ｇｌｙ−Ｘまた
はＸ−Ｇｌｙ部位のみで行われ得る。

【００１３】 （２．小環状ペプチド） タンパク質およびペプチドは、巨大分子レセプターと相互作用することにより
生物学的プロセスを開始する第１手段である。特異的活性を決定する重大な情報
は、しばしば、その表面での比較的小さな配列に含まれ、そして３次元コンホメ
ーション（ここで、その配列は、レセプターと相互作用する場合、その側鎖を適
所に位置付ける）によって決定される。直鎖形態において、生物活性ペプチドは
、数百万の異なるコンホメーションを仮定し得、このうちの非常に少量のみが標
的レセプターに結合し得る。生物効力および選択性に重要である重要な構造およ
び動的特性を評価するために、コンホメーション束縛が、典型的に環化によって
導入される。このような環状分子は、より規定されたコンホメーションにおいて
存在し、そしてそれゆえ、薬学的に先導的（ｌｅａｄ）発見の見地から非常に興
味をそそる。活性がこれらの環状ペプチドにおいて維持または増強される場合、
構造情報は、例えばＮＭＲ、Ｘ線または分子モデリングによって得られ、そして
治療薬剤の開発の指針とするために使用される。さらに、環化は、一般に、ペプ
チドの代謝安定性およびバイオアベイラビリティーの増大を促進する。

【００１４】 側鎖がレセプター相互作用のための主要メディエータであると考えれられる場
合、環化は、好ましくは、Ｃ−末端とＮ−末端との間で達成される。直鎖状ペプ
チドの合成が一般によく進むのに対して、頭−尾（ｈｅａｄ−ｔｏ−ｔａｉｌ）
環化は、しばしば、厄介である。これは、特に、小ペプチド（すなわち、７残基
長未満のペプチド）に関してである。例えばすべてのＬ−環状テトラペプチドは
、あまり到達可能ではない（ＳｃｈｍｉｄｔおよびＬａｎｇｎｅｒ、１９９７）
。効果的でない環化に関する主な理由は、「困難な配列」と呼ばれることから起
こる。環化において、この用語は、頭−尾環化のための「末端を合わせる」こと
における配列関連の非効果性をいう。ペプチド結合は、強いπ−特性を有し、そ
してトランスコンホメーションを優先的に採用する。従って、直鎖状前駆体は、
一般に、遠隔位置に末端カルボン酸およびアミン官能性基を有するコンホメーシ
ョンで伸長し、それゆえ、環化のために不向きである。この問題は、小環状ペプ
チドの合成において最も顕著であり、Ｃ−末端の活性化は、しばしば、直鎖状お
よび環状のダイマーまたはオリゴマーを、低収率の標的環状モノマーとともにま
たは標的環状モノマーなしで、形成する。

【００１５】 「困難な」環化の問題を扱う（ａｄｄｒｅｓｓ）非常に少ない研究が存在する
。Ｃａｖａｌｉｅｒ−Ｆｒｏｎｔｉｎら（１９９３）は、シス−アミドコンホメ
ーションを増強するためのペプチド骨格の可逆化学改変の使用を報告した。シク
ロ−［Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ］の合成において、各アミドのＮは、Ｂ
ＯＣ保護基で置換された。環化収率は、１％から２７％へ増大した。同様に、Ｎ
−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）（Ｈｍｂ）基の可逆Ｎ−骨格アミ
ド置換基としての使用は、環状ペプチドの収率の増大という結果となった（Ｅｈ
ｒｌｉｃｈら、１９９６）。ここで「補助基」が、「困難な」アミド結合を形成
するために反応するＮ−末端アミン上でなく、骨格アミド上に配置されることが
強調されるべきである。

【００１６】 ２〜３年前に、ライゲーション化学が分子内様式で使用される少しの研究が報
告されている。これらの例において、始めのより大きな環が形成され、そして環
縮小は分子内Ｏ−から−ＮまたはＳ−から−Ｎアシル転移によって達成された。

【００１７】 Ｂｏｔｔｉら（１９９６）によって報告される第１の方法において、Ｎ−末端
においてシステイン残基およびＣ−末端においてアルデヒドを有する直鎖状非保
護ペプチドは、環化され、スキーム４に示されるような、環状ペプチドを含むチ
アゾリジンを生成する。始めに、より大きな環が形成され、ここで、Ｃ−および
Ｎ−末端は、Ｏ−から−Ｎのアシル転移ならびにより小さな環への環縮小のため
に前配置（ｐｒｅｐｏｓｉｔｉｏｎ）される。この方法の欠点は、環状生成物が
、さらなるキラル中心を有して、必ずチアゾリジン部分を環内に含むことであり
、これは、２つのジアステレオマーの形成を生じ、そして直鎖状前駆体のＮ−末
端でのシステイン残基を必要とする。この方法は、非改変環状ペプチドの生成を
可能にせず、そしてコンビナトリアルライブラリーアプローチに適した融通の利
く手順ではない。

【００１８】

【化１０】 （スキーム４） （環中にチアゾリジンユニットを使用する環の縮小化学） Ｍｕｉｒらは、Ｎ末端にシステイン残基およびＣ末端にチオエステルを使用す
る「ネイティブな」ライゲーションは、スキーム５に示されるように、環状ペプ
チドを生成するための分子内方法で適用され得ることを実証した（Ｃａｍａｒｅ
ｒｏおよびＭｕｉｒ、１９９７）。

【００１９】

【化１１】 （スキーム５） （システインを使用する分子内のネイティブなライゲーション） Ｃ末端チオ酸を含む１５−残基の未保護ペプチドを、

【００２０】

【化１２】 をｐＨ ７．５の緩衝液に溶解することによって頭−尾環状ペプチドに変換した
。環化を１０分間で達成した。最初に形成された環状チオエステルを、最終ペプ
チド結合を形成するためにすばやく再配列する。このストラテジーは、Ｎ末端に
システイン酸基を必要とする点で、一般的ではない。

【００２１】 類似の方法において、Ｓｈａｏら（１９９８）は、Ｎ末端のＮ−（オキシエタ
ンチオール）−グリシンを使用し、チオール官能基をＣ末端のチオエステルと位
置選択的に反応させることによって環化が達成され得る。Ｓｈａｏらが指摘する
ようにこれらのストラテジーは、Ｃ末端およびＮ末端に含まれる残基の型によっ
て限定される。環化は、Ｇｌｙ−Ｘ（ここで、Ｘは、非β−置換残基である）間
でのみ可能である。この緩やかなアシル転移は、この環化ストラテジーにおいて
、この場合もやはり限定的因子である。

【００２２】 これらの方法はどれも、非修飾ペプチド骨格またはネイティブなペプチド骨格
を含有する環状ペプチドの合成を可能とする可変性合成経路を提供しない。この
環の縮小が、非障害事例でのみ進められる場合、この最初の２つの反応は、Ｎ末
端にシステインの存在を必要とし、そして最後の反応は、可変性に欠ける。本発
明者らは、後者のアプローチは、多数の公知の「困難な」環状ペプチドへのアク
セスを提供しないことを見い出している。

【００２３】 （３．骨格の置換） 固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）における主な問題の一つは、いわゆる「困難な
」配列の非効率的なアセンブリである。さらに、これらの配列に関する問題は、
事前に予想することが不可能であることである。この問題は、主に、固体支持体
の保護されたペプチドのアセンブリの中の鎖間凝集および鎖内凝集のためである
と考えられる。このことにより、以下のスキーム６に概要が示される骨格の置換
ストラテジー（Ｈｙｄｅら、１９９４）の開発に導く。２−ヒドロキシ−４−メ
トキシベンジル置換基（＝Ｈｍｂ）は、Ｎ，Ｏ−ビス−Ｆｍｏｃ−保護（Ｈｍｂ
）−アミノ酸を使用することによって誘導される。一般に、グリシン以外のＮ−
置換アミノ酸のアシル化は、Ｎ−置換基によって与えられる塊状の立体障害のた
めに、促進条件を必要とする。Ｈｍｂ−置換アミノ酸の場合、アシル化は、実質
的に、内部アシル転移機構により増強される。アシル化は、最初に、フェノール
性酸素原子上で起こり（分子内のアミン塩基の存在によって可能となる）、次に
酸素原子から窒素原子へのアシル転移が起こる。次いで、Ｆｍｏｃ−固相合成が
進み、標準的なＳＰＰＳを使用して構築するには困難なペプチド配列の収率を有
意に改良する。

【００２４】

【化１３】 （スキーム６） （固相ペプチド合成中のＨｍｂ−骨格タンパク質の使用） 構築後、このペプチドをＴＦＡを使用して脱保護および切断し、Ｈｍｂ骨格置
換基の同時の除去を伴い、標的とする保護していないペプチドを高収率かつ高純
度で得る。この骨格タンパク質をまた使用して、アスパルトイミド（ａｓｐａｒ
ｔｉｍｉｄｅ）の形成を防止し得、保護ペプチドの溶解性を改良し得る。最近の
報告では、Ｈｍｂ基が還元性アミノ化により樹脂結合ペプチドに導入され、これ
により、より緩慢なＮ，Ｏ−ｂｉｓ−Ｆｍｏｃ（Ｈｍｂ）アミノ酸（Ｎｉｃｏｌ
ａｓら、１９９７）の使用を避ける。

【００２５】 Ｈｍｂ−骨格保護のストラテジーでは、２つの主な制限が存在する。第１に、
内部のＯからＮへのアシル転移のみが、嵩高くない場合には良好に進まない。β
分枝アミノ酸をグリシン以外の

【００２６】

【化１４】 にカップリングしなければならない場合、数時間の加熱（８０℃）が再配列を進
めるために必要とされる。第２に、この基は、Ｆｍｏｃ化学物質とのみ適合性で
あり、ＴＦＡライブラリのためにしばしば好ましいＢＯＣ ＳＰＰＳと適合性で
ない。

【００２７】 Ｈｍｂ方法論により、骨格置換基が、Ｆｍｏｃ化学物質についての配列に関す
るアセンブリの問題を軽減し得ることを実証した。しかし、嵩高い場合、この場
合自体のさらなる問題が生じる。この方法論により、より速い分子内アシル転移
（加熱を必要としない）、およびＦｍｏｃまたはＢｏｃ ＳＰＰＳのいずれかを
使用する困難な配列の改良したアセンブリを可能とする、より酸安定性補助基の
開発に有意に利益を得る。

【００２８】 このＨｍｂ−骨格置換アプローチは、スキーム７に示されるような骨格アミド
のリンカー（ＢＡＬ）の最近の開発（Ｊｅｎｓｅｎら、１９９８）に導いている
。

【００２９】

【化１５】 ｔｒｉｓ−アルコキシベンジルユニットを使用して、固体支持体に骨格アミド
窒素原子を介してペプチドを連結する。この連結は、この合成の終わりに単純な
ＴＦＡ処理によって切断される。他の多くのこのようなストラテジーとは対照的
に、この連結ストラテジーは、Ｃ末端のカルボン酸の使用を行わず、少なくとも
理論上は、任意のアミド結合を使用し得る。従って、Ｃ末端修飾ペプチドの合成
または頭−尾環状ペプチドの樹脂上合成に特に有用である。Ｈｍｂ基の場合、こ
の第１の制限は、「連結した」アミド結合を形成するために第２のアミンをアシ
ル化する工程の困難さにある。第２の問題は、標準のＦｍｏｃ ＳＰＰＳを、ジ
ペプチド段階でジケトピペラジン形成にほぼ完了するように導くことである。特
別なタンパク質のストラテジーを、この問題を避けるために使用する必要がある
。

【００３０】 ペプチドライゲーション、環化、または困難なペプチド配列アセンブリのため
のほとんどの価値ある補助基のストラテジーは、最終生成物に非修飾ペプチド骨
格を生成する。これらの補助基のストラテジーにおいて、スキーム８に例示され
るような導入、アシル化、および除去の３つの重要な特徴が存在する。先行技術
のストラテジーは、限定された場合においてうまく適合される。しかし、これら
のストラテジーの適用は、アシル転移工程および／または最終の補助基の除去に
おいて発生する困難性によりかなり制限される。しばしば、アシル転移が非常に
遅いか、または全く進まなかったりする。

【００３１】

【化１６】 この補助基のアプローチをより可変性にするために必要とされる少なくとも３
つの要求が存在する： １．Ｎ原子において補助基の一般的導入を可能にすること ２．窒素原子のより有効なアシル化を可能にすること ３．アシル化後の補助基の除去を可能にすること。

【００３２】 これらの要求の組み合わせが、新規な補助基の設計をかなり制限する。

【００３３】 本発明者は、酸素原子または硫黄原子を窒素原子に連結する分子フラグメント
の改変により、先行技術の例とは対照的に、窒素原子のアシル化速度において強
力な高速化効果を有することを、驚くことに見出した。特に好ましい実施態様に
おいて、この改変はさらに、アシル化した窒素原子と残りの分子フラグメントと
の間の共有結合（窒素原子と酸素原子または硫黄原子とを結ぶ）の光分解切断を
可能とする。

【００３４】 このアプローチは、小環状ペプチドの形成、より小さなペプチドフラグメント
のネイティブなライゲーションによる大きなペプチドの形成、「困難な」ペプチ
ドの合成、および固体支持体への骨格−連結のような適用のためのペプチド合成
化学の分野において特に有用である。先行技術の方法は、ほとんど有効ではなく
、すなわちこれらの方法は、少数の例でしか研究されておらず、従って、一般的
ではない。本発明は、小環状ペプチドの合成、ペプチドセグメントのライゲーシ
ョン、骨格の保護、および固相ペプチドアセンブリ中の樹脂へのペプチドの結合
のためのより改変性のアプローチを提供する。

【００３５】 （本発明の要旨） 本発明は、例えば、ペプチドのＮ末端で第１級アミンに容易に連結される新し
いクラスの補助基の使用を記載し、これにより、窒素原子の効率的なアシル化を
可能とし、好ましい実施態様において、光分解により容易に除去される。この補
助基の使用の全体的な成果により、アミド結合を形成する。以下に記載されるよ
うに、補助基のこの新しいクラスは、直鎖状ペプチドおよび環状ペプチドの合成
において、ライゲーション化学において、および骨格リンカーとしての適用性を
有する。

【００３６】 第１の局面において、本発明は、直鎖状または環状ペプチドの合成、あるいは
Ｃ末端修飾ペプチドの合成、あるいは分子の樹脂上環化の方法を提供し、この方
法は、アミン窒素原子を一般式Ｉ：

【００３７】

【化１７】 の化合物に連結する工程を包含し、 ここで、この環は、必要に応じて、窒素、酸素、および硫黄からなる群から選択
される１つ以上のヘテロ原子を包含し； この環は、５〜７個の原子からなり； この環は、ＸＨ、Ｚ、およびＹによってそれぞれ置換される３個の炭素原子を含
み； この環は、この化合物が５員環である場合、基Ｒ³およびＲ⁴によってさらに置換
されるか、またはこの化合物が６員環である場合、基Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵によっ
てさらに置換されるか、またはこの化合物が７員環である場合、基Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ ⁵ およびＲ⁶によってさらに置換され； ここで、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＨ₂Ｏ−、またはＣＨ₂Ｓ−であり； Ｙは、電子求引性基であり； Ｚは、炭素−窒素共有結合の形成を可能にする任意の基であり； Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、
アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロア
リール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ＸＨもしくはＹ、
または固体支持体に対する共有結合であり、 ここで、Ｒ³およびＲ⁴、またはＲ⁴およびＲ⁵は、必要に応じて、この環とともに
、５−、６−、または７−員環を形成し得る。

【００３８】 好ましくは、この化合物は、一般式ＩＩ：

【００３９】

【化１８】 である。

【００４０】 対称の度合い（ａ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｓｙｍｍｅｔｒｙ）がこの環におけ
る原子の番号付けに存在することが、当業者によって理解される。本明細書の目
的について、置換基Ｚを有する炭素原子は、１位として番号を付けられ；従って
、式ＩＩにおいて示される番号付けスキームが使用される。

【００４１】 適切な電子求引性基Ｙには、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ニ
トロ、ケトン、カルボン酸エステル、アミド、ニトリル、スルホンアミド、スル
ホキシド、スルホン、スルホネート、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素。他の適
切な基は、当業者に公知である。例えば、Ｍａｒｃｈ（１９８５）を参照のこと
。

【００４２】 Ｚは、適切には、アルデヒド、アルキルアルコール、アルキルハライド、ケト
ン、またはハロゲン化Ｃ_1-3アルキル基であり、ここで、ハロゲンは、好ましく
はヨウ素、臭素または塩素である。好ましくは、このハロゲン化アルキル基は、
メチル基である。適切なＺ基は、当業者に周知である。例えば、Ｈｏｕｂｅｎ−
Ｗｅｉｌ（１９５７）を参照のこと。

【００４３】 好ましくは、ＸＨ基は２位または３位にあり、そしてＹは任意の他の位置にあ
り；より好ましくは、ＸＨ基は２位にあり、そしてＹは任意の他の位置にあり；
最も好ましくは、ＸＨは、２位にあり、Ｙは６位にある。

【００４４】 本発明の好ましい実施態様において、電子求引性基Ｙは６位にある。特に好ま
しい実施態様において、Ｙは６位のＮＯ₂である。これらの場合、一般式ＩＩの
化合物とアミン窒素原子との間の結合は、光不安定性である。本発明の範囲内の
特定の化合物には、以下が挙げられるが、これらに限定されない：

【００４５】

【化１９】 一般式Ｉまたは一般式ＩＩの化合物の構造に依存して、この化合物は、アシル
転移の増強を伴う、アミド結合の形成のための可逆的補助基、または置換アミド
結合の形成のための非可逆的補助基を提供し得（ここで、アシル転移が増強され
る）、これは、特に環状ペプチドの合成において特に有用である。従って、式Ｉ
ＩＩの化合物は、環状ペプチド、大きなペプチド、および困難なペプチドの合成
を可能にし（これらは、当該分野において以前に利用可能である方法によっては
受容不可能であった）、そしてアミド結合形成後の補助基の光分解性除去を可能
する。そして式ＩＶの化合物は、補助基が除去されない置換アミド結合を含む、
環状ペプチド、大きなペプチドおよび困難なペプチドの合成を可能にする。

【００４６】

【化２０】 第２の局面において、本発明は、以下からなる群から選択される化合物の合成
の方法を提供する：直鎖状および環状ペプチド、ネイティブなペプチド骨格を有
する大きなペプチド、「困難な」ペプチド配列（すなわちペプチド合成のための
骨格連結のもの）、Ｃ末端修飾ペプチド（すなわち樹脂上環化のためのもの）。
この方法は、一般式Ｉ、一般式ＩＩ、一般式ＩＩＩまたは一般式ＩＶの化合物を
、アミン窒素原子へ連結させる工程を包含する。好ましくは、ＸＨは２位にあり
、そしてＹは６位のニトロである。このとき、結合は光不安定性である。

【００４７】 Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は、好ましくは、独立して、水素、アルキル、アリー
ル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、および固体支
持体への共有結合からなる群から選択される。

【００４８】 一つの好ましい実施態様において、本発明は、環状ペプチドを合成する方法を
提供し、この方法は、以下 ａ）環化されるべき直鎖状ペプチドを合成する工程、 ｂ）本発明の補助基をこの直鎖状ペプチドの所望の第１級アミンに連結する工
程、 ｃ）所望のカルボン酸を活性化して環化させる工程、および必要な場合、環の
縮小を誘導する工程、ならびに、必要に応じて ｄ）Ｎ−アシル化を完了した後にこの補助基を除去する工程、 を包含する。

【００４９】 環の縮小は、公知の方法によって導入され得、これには加熱または金属に添加
が挙げられるが、これらには限定されない。

【００５０】 好ましくは、この補助基は、一般式ＩＩＩであり、光分解によって除去される
。

【００５１】 当業者はまた、上記工程が固体支持体上で行われ得、続いて、固体支持体から
環化生成物を切断し得、所望であれば、側鎖保護基を除去し得ることを理解する
。

【００５２】 当業者は、工程の順番が同じ結果を得るために変えられ得ることを理解する。
例えば、Ｃ末端カルボン酸の活性化は、式ＩＩの化合物の存在下で行われ得、環
化は、Ｚ基を介して所望のアミンに補助基を接続することによって行われ得る。

【００５３】 第２の実施態様において、本発明は、ネイティブペプチド骨格を有する大きな
ペプチドの合成方法を提供し、この方法は、以下 ａ）大きなペプチドを形成するために連結されるべきペプチドフラグメントの
一セットを合成する工程、 ｂ）本発明の補助基を、第１ペプチドフラグメントの第１級アミンに連結する
工程、 ｃ）第２ペプチドフラグメントのカルボン酸を活性化する工程、 ｄ）第２ペプチドフラグメントを第１ペプチドフラグメントに加える工程、お
よびこの２つのフラグメント間にペプチド結合を形成する工程、ならびに必要に
応じて、 Ｎアシル化が完了した後に、補助基を除去する工程、 を包含する。

【００５４】 好ましくは、この補助基は、一般式ＩＩＩであり、光分解によって除去される
。

【００５５】 第３の実施態様において、本発明は、困難なペプチド配列の合成方法を提供し
、この方法は、以下 ａ）本発明の補助基を、固体支持体に連結されたペプチドのペプチド結合の一
つ以上の窒素原子に連結する工程、 ｂ）標準的な固相合成法を使用して完全なペプチドを合成する工程、および必
要に応じて、 ｃ）合成が完了した場合、この補助基を除去する工程、 を包含する。

【００５６】 好ましくは、この補助基は、一般式ＩＩＩであり、光分解によって除去される
。

【００５７】 第４の実施態様において、本発明は、ペプチドの合成のための骨格連結の方法
を提供し、この方法は、以下 ａ）所望のペプチドの酸残基のα−窒素を固体支持体に連結するリンカーとし
て、本発明の補助基を使用する工程、 ｂ）標準的な固相ペプチド合成法を使用して、この直鎖状ペプチドを組み立て
る工程、および必要に応じて ｃ）側鎖保護基を除去する工程、および／または ｄ）固体支持体からこのペプチドを切断する工程、 を包含する。

【００５８】 同じ方法が、Ｃ末端修飾ペプチドの合成のために使用され得る。この場合、Ｃ
末端アミノ酸残基のカルボン酸基は、エステル、アルキルアルコール、アセター
ルまたはアミドのような基によって置き換えられる。他の適切な官能性カルボン
酸置換基は、当業者に公知である。好ましくは、Ｙは、６位においてニトロであ
り、ＸＨは、２位であり、切断は、光分解によって行われる。

【００５９】 第５の実施態様において、本発明は、直鎖状ペプチドの樹脂上環化の方法を提
供し、この方法は、以下 ａ）所望ペプチドのアミノ酸残基のα−窒素を固体支持体に連結するリンカー
として、本発明の補助基を使用する工程、 ｂ）標準的な固相ペプチド合成法を使用して、固体支持体上で直鎖状ペプチド
を合成する工程、 ｃ）所望のアミンおよびカルボン酸基を脱保護する工程、 ｄ）環化を行うために該カルボン酸基を活性化する工程、ならびに必要に応じ
て、 ｅ）アミノ酸側鎖基を脱保護する工程、ならびに／または ｆ）固体支持体からこの環状ペプチドを切断する工程、 を包含する。

【００６０】 好ましくは、Ｙは、６位においてニトロ基であり、ＸＨは、２位であり、切断
は、光分解によって行われる。

【００６１】 従って、本発明の補助基は、以下の目的のために使用され得る： １．小環状ペプチドを含む（１０個までのアミノ酸残基の長さ）、「困難な」
環状ペプチドの合成を可能にすること。この補助基は、直鎖状ペプチドの１級ア
ミンへ結合され、そして環化が、Ｃ末端カルボン酸を活性化することによって実
施される。必要に応じて、この補助基がＮ−アシル化の完了後に除去される。

【００６２】

【化２１】 これらは、アミノ酸鎖官能基を介しての、またはアミド窒素原子を介しての、固
体支持体への共有結合を含み得る。 Ｒ₁＝Ｈ、アルキルエステル、固体支持体への共有結合。

【００６３】 ２．大きなペプチドの合成を可能にすること。補助基は、第１フラグメントの
１級アミンへ結合され、そして第２フラグメントのカルボン酸が活性化され、そ
して第１フラグメントへ付加される。Ｎ−アシル化が完了した後、この補助基が
必要に応じて除去される。

【００６４】

【化２２】 分子フラグメントは、固体支持体へ共有結合され得る。

【００６５】 ３．「困難な」ペプチド配列の合成を可能にすること。補助基は、ペプチドの
攻撃を避け、そして固相ペプチドアセンブリを増強するために、骨格保護基とし
て使用され得る。補助基を導入した後、標準ＳＰＰＳプロトコルがペプチドの合
成のために使用される。必要に応じて、合成の終わりに、この補助基が光分解に
よって除去される。

【００６６】

【化２３】 ４．ペプチド、またはＣ末端修飾ペプチドの合成のための骨格連結を可能にす
ること。補助基は、アミノ酸残基のα窒素を樹脂へ連結するためのリンカーとし
て利用される。次いで、標準ＳＰＰＳプロトコルが、直鎖状ペプチドを構築する
ために利用され得る。Ｃ末端残基において、修飾カルボン酸（例えば、エステル
、アルコール、アセタール、アミドまたは他の官能基）が使用され得る。あるい
は、直鎖状ペプチドは、Ｎ−末端アミンおよびＣ末端カルボン酸を脱保護した後
、樹脂上で環化される。次いで、側鎖脱保護が、光分解の前に実施され得る。（
Ａ＝カルボン酸、またはエステル、アセタール、アミド、アルコールのような修
飾酸）。

【００６７】

【化２４】 ５．分子の樹脂上環化のための骨格連結を可能にすること。この場合、直鎖状
ペプチドは、上記４に記載のように合成された樹脂−結合直鎖状ペプチドからの
所望のアミンおよびカルボン酸基の脱保護後、樹脂上で環化される。次いで、側
鎖脱保護が、光分解の前に実施され得る。

【００６８】

【化２５】 これらの反応は、６員のカルボン酸環として示される本発明の補助基と共に示
されるが、これは本発明の一般性を制限しないことが、明らかに理解される。

【００６９】 第３の局面において、本発明は、一般式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩのいずれか１つ
に従う補助基を提供し、これは、固相ペプチド合成のために適切な支持体へまた
はペプチド骨格の窒素原子へ結合される。適切な支持樹脂は、当業者に周知であ
り、そして機能化されたポリスチレン、テンタゲル（ｔｅｎｔａｇｅｌ）樹脂、
ならびにＰＥＧおよびＰＥＧＡのようなポリエチレングリコール樹脂が挙げられ
るが、これらに限定されない。

【００７０】 本発明の補助基は、環状ペプチドの合成において有用な他の試剤（例えば、本
願と同日に出願された「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｃｙｃｌｉｃ Ｐｅｐｔｉ
ｄｅｓ」の表題の、本発明者らの同時係属中の豪州仮出願に記載のもの）との組
み合わせにおいての使用に適する。

【００７１】 本発明はまた、ペプチド、環状ペプチド、または有機化合物の合成において使
用するためのキットを考慮する。このキットは、本発明の補助基、または固体支
持体に連結した本発明の補助基を、固相ペプチド合成のための１種以上の他の試
剤と共に含む。

【００７２】 本発明の補助基は、上に列挙した３つの要求を、より用途の広い様式で満足す
る。すなわち、これらの補助基は、アシル化の収率を有意に改善し、そしてこれ
らの補助基は容易に導入され得、また必要に応じて除去され得る。本発明者らは
、アシル化の割合（スキーム８の工程ＩＩ）を、電子求引性置換基をこの補助基
の芳香族環に導入することによって、有意に改善した。本発明者らの補助基のア
シル化は、妨害された場合においてさえも、温和に活性化したアミノ酸を用いて
室温で容易に起こる。さらに、アルキルアミドのオルト位にニトロ基が存在する
ことによって、光不安定性が提供される。この補助基の、改善されたアシル化と
、容易かつクリーンな除去とのこの組み合わせは、アミド結合生成のための新規
かつ強力な手段を提供し、これは、環状ペプチド合成、ネイティブなライゲーシ
ョン、困難なペプチド配列の組み立て、および骨格連結に、直接適用可能である
。

【００７３】 本発明者らは、これらの補助基の、「困難な」環状ペプチドの合成における使
用をさらに評価した。本発明者らは、先行技術の方法と比較して、驚くべき改善
を見出した。先行技術の方法が、所望の生成物を得ることに完全に失敗した例に
おいて、本発明者らのストラテジーは、目的の環状ペプチドを高収率および高純
度で生成した。これらの補助基は、今のところ未知の、多くの種類の環状ペプチ
ドへのアクセスを可能とすることが、予測される。

【００７４】 この補助基は、樹脂と連結して、有機分子またはペプチド分子の固相合成のた
めの、新規な光不安定性骨格リンカーとして、作用する。このリンカーは、Ｃ末
端修飾ペプチドおよび環状ペプチドの固相合成のために、特に価値がある。

【００７５】 Ｈｏｌｍｅｓ（１９９７）および米国特許第５，７３９，３８６号は、以下の
構造を有する一連の光不安定性化合物を記載する：

【００７６】

【化２６】 ここで、 Ｒ₁は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、アリールまたはアリールアルキルであり
；Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、各々独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、またはＣ
１〜Ｃ８アルコキシであり；ＸおよびＹは、各々独立して、ハロゲン、−ＳＨ、
−ＳＰ、−ＯＨ、−ＯＰ、−ＮＨ₂、−ＮＨＰ（ここでＰは適切な保護基または
活性基である）、および−ＮＲ₅Ｒ₆（ここでＲ₅およびＲ₆は、独立して、水素、
アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテ
ロアリール、アリールアルキル、置換アリールアルキルからなる群から選択され
る）からなる群から選択され；そしてｑは、１〜１０、好ましくは１〜４の整数
である。

【００７７】 これらの化合物は、分子を固体支持体に連結するための固相化学において、有
用である。これらのリンカーは、強酸および塩基に対して安定であるが、３５０
ｎｍ前後のＵＶ光に対しては不安定である。これらの化合物は、少なくとも以下
の２点で、本発明の化合物とは異なる： ａ） Ｈｏｌｍｅｓのリンカーは、Ｃ末端リンカーとしてのみ使用され、そして
環状ペプチドの合成、ペプチドライゲーションまたは困難な配列の合成における
アミド結合形成を容易にするためには、使用されない。これらのリンカーは、ペ
プチド骨格を固体支持体に連結するためには、使用されない。 ｂ） Ｈｏｌｍｅｓによって記載される化合物のいずれも、ヒドロキシ置換基ま
たはチオール置換基を芳香族環上に有さない。そして実際に、このような置換基
は、Ｈｏｌｍｅｓにより記載される目的のためには、所望されなかった。本発明
者らの化合物における芳香族環上のヒドロキシ基は、困難なアミド結合の形成を
可能とするために、重要である。

【００７８】 本明細書の目的のためには、固相ペプチド合成の言及は、ペプチド模倣化合物
の合成の方法の言及を含むと理解されるべきであることが、明らかに理解される
。

【００７９】 本明細書の目的のためには、用語「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、
「〜を含むがそれらに限定されない」を意味すること、および用語「〜を含む（
ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、対応する意味を有することもまた、明らかに理解さ
れる。

【００８０】 本明細書の目的のためには、用語「モノマー」は、１，２、１，３、１，４ま
たはさらに大きな置換パターンで分離されたアミノ末端およびカルボキシ末端を
有する化合物を含む。この用語は、２０種の天然に存在するαアミノ酸（Ｌまた
はＤのいずれかの配置）、生合成により入手可能なアミノ酸であって、タンパク
質には通常見られないもの（例えば、４−ヒドロキシ−プロリン、５−ヒドロキ
シリジン、シトルリンおよびオルニチン）；合成により誘導されるαアミノ酸（
例えば、α−メチルアラニン、ノルロイシン、ノルバリン、Ｃα−およびＮ−ア
ルキル化アミノ酸、ホモシステイン、およびホモセリン）；ならびに当該分野に
おいて公知の多数の他のものを含む。この用語はまた、１，３またはさらに大き
な置換パターンで分離されたアミン官能基およびカルボキシル官能基を有する化
合物（例えば、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒラクタム
（Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒら、１９８２）、二環式ジペプチド（ＢＴＤ）（Ｆｒｅ
ｉｄｉｎｇｅｒら、１９８２；ＮａｇａｉおよびＳａｔｏ、１９８５）、アミノ
−メチル安息香酸（Ｓｍｙｔｈｅおよびｖｏｎ Ｉｔｚｓｔｅｉｎ、１９９４）
、ならびに当該分野において周知の他のもの）を含む。スタチン様（ｓｔａｔｉ
ｎｅ−ｌｉｋｅ）アイソスター、ヒドロキシエチレンアイソスター、還元アミド
結合アイソスター、チオアミドアイソスター、尿素アイソスター、カルバメート
アイソスター、チオエーテルアイソスター、ビニルアイソスター、および当該分
野において公知の他のアミド結合アイソスターもまた、本発明の目的のために有
用である。従って、用語「ペプチド」は、本明細書中で使用する際には、ペプチ
ド模倣化合物を含む。必要に応じて、ペプチドは、当該分野において使用される
種類の１つ以上の保護基で保護され得る（例えば、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，Ｍ．（
１９８４）、「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇを参照のこと
）。

【００８１】 固体支持体は、ペプチド、ペプチド模倣物、オリゴヌクレオチド、オリゴサッ
カリドまたは有機分子の固相合成のために使用される、任意の種類のものであり
得る。この固体支持体は、ビーズ、ピンまたは固相合成における使用に適切な別
の表面の形態であり得る。広範な適切な支持材料が、当該分野において公知であ
る。例えば、Ｍｅｌｄａｌ（１９９７）を参照のこと。市販のポリスチレン支持
体（アミノメチルポリスチレン、ベンズヒドリルアミンポリスチレン、ポリエチ
レングリコール−ポリスチレンを含む）が、特に適切である。

【００８２】 ペプチド結合を形成するためのカップリング方法もまた、当該分野において周
知である。例えば、ＡｌｂｅｒｉｃｉｏおよびＣａｒｐｉｎｏ（１９９７）を参
照のこと。

【００８３】 （発明の詳細な説明） ここで、本発明を、以下の非限定的な実施例のみを参照して、詳細に記載する
。

【００８４】 本明細書中において使用される略号は、以下の通りである： ＡｃＯＨ 酢酸 ＢＯＣ Ｎα−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル ＢＯＰ ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチル
アミノ）−ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェート^t Ｂｕ ｔｅｒｔ−ブチル ｃａｌｃｄ 計算値 ＤＣＭ ジクロロメタン ＤＩＥＡ ジイソプロピルエチルアミン ＤＭＦ Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド ｅｑ 当量 ＥＳ−ＭＳ 電子スプレー質量分析 ＬＣ／ＭＳ 液体クロマトグラフィー−質量分析 Ｆｍｏｃ ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル− ＨＢＴＵ Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル
ウロニウムヘキサフルオロホスフェート ＨＦ 無水フッ化水素 ＮＭＲ 核磁気共鳴 ＯＮＢＳ ｏ−ニトロベンゼン−スルホンアミド Ｐａｍ フェニルアセトアミドメチル ＰＭＣ ２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル
ＲＰ−ＨＰＬＣ 逆相高速液体クロマトグラフィー ＲＴ 室温 ＳＰＰＳ 固相ペプチド合成 ＴＦＡ トリフルオロ酢酸 ＵＶ 紫外。

【００８５】 （材料および方法） クロロトリチル樹脂（ｓｖ＝０．９２ｍｍｏｌ／ｇｒ）を、ＰｅｐＣｈｅｍ（
Ｔｕｂｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。Ｗａｎｇ樹脂およびＮα−
ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）−Ｌ−アミノ酸の全てが、Ａｕｓｐｅ
ｐ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓ
ａｎ Ｄｉｅｇｏ）またはＰｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｏｓａｋａ、
Ｊａｐａｎ）から購入した、ペプチド合成グレードであった。Ｐａｍ樹脂を、Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）から購
入した。ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジイソプロピル−エチルアミン（ＤＩＥＡ
）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、およびトリフルオロ酢酸（ＴＦ
Ａ）を、Ａｕｓｐｅｐ（Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から入手し
た。ｐ−クレゾール、ｐ−チオクレゾール、３−ニトロフェノール、ポリリン酸
、ヘキサメチレンテトラミンを、ＡｌｄｒｉｃｈまたはＦｌｕｋａ（Ｓｙｄｎｅ
ｙ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から購入した。ＨＰＬＣグレードのアセトニトリルを
、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ−Ｗａｔｅｒｓ（Ｓｙｄｎｅｙ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）か
ら購入した。２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−
テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートおよびベンゾ−トリアゾー
ル−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウム−ヘキサフ
ルオロホスフェートを、Ｒｉｃｈｅｌｉｅｕ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
（Ｑｕｅｂｅｃ、Ｃａｎａｄａ）から購入した。脱イオン水を全体にわたって使
用し、そしてこれを、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水精製系（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ−Ｗａｔｅ
ｒｓ）によって調製した。半融ガラス濾過器フリットを備える、ネジ式キャップ
のガラス製のペプチド合成反応容器（２０ｍＬ）を、Ｅｍｂｅｌｌ Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ Ｇｌａｓｓｗａｒｅ（Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ
）から入手した。アルゴン、ヘリウムおよび窒素（全て、超純粋グレード）を、
ＢＯＣ Ｇａｓｅｓ（Ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から入手し
た。

【００８６】 ¹Ｈ ＮＭＲスペクトルおよび¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルを、ＣＤ₃ＯＤ中でＶａ
ｒｉａｎ ３００ＭＨｚ Ｇｅｍｉｎｉを用いて記録し、そして化学シフトを、
（ＣＨ₃）₄Ｓｉから低磁場への百万分の１（ｐｐｍ）で記録した。

【００８７】 逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を、２１４ｎｍまたは２
３０ｎｍにおける４８４吸光度検出器を備えるＷａｔｅｒｓ ６００Ｅ溶媒送達
系（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）、またはダイオードア
レイ検出器を備えるＨａｗｌｅｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＨＰ１１００系で実施した
。ＨＰＬＣデータを、ＴｕｒｂｏｃｈｒｏｍｅまたはＨＰＬＣ ２Ｄ Ｃｈｅｍ
ｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して収集した。ＲＰ−ＨＰＬＣを、Ｚｏｒｂ
ａｘ小口径（ＳＢ−Ｃ１８、２．１ｍｍ×５ｃｍ）カラム、Ｖｙｄａｃ Ｃ−１
８分析（５ｍｍ、０．４６ｃｍ×２５ｃｍ）カラムまたはＶｙｄａｃ分取Ｃ−１
８（１０ｍｍ、２．２ｃｍ×２５ｃｍ）カラムで実施した。クロマトグラフィー
分離を、Ａ中の緩衝液Ｂの直線勾配（Ａ＝０．１％水性ＴＦＡ； Ｂ＝９０％Ｃ
Ｈ₃ＣＮ、１０％Ｈ₂Ｏ、０．０９％ＴＦＡ）を使用して、０．２５ｍＬ／分（小
口径）、１ｍＬ／分（分析）および８ｍＬ／分（分取）の流速で、達成した。

【００８８】 イオンスプレー大気圧イオン化源を備えたＰＥ−Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ−ＩＩＩ
三連四重極質量分析計で質量スペクトルを得た。サンプル（１０μＬ）を、石英
ガラスキャピラリーインターフェース（５０ｍｍ内径×５０ｃｍ長）を介してイ
オン化源に直接結合された移動溶媒に注入した（３０μ／分；５０／５０ ＣＨ ₃ ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ）。サンプルの液滴は５ｋＶの正電位でイオン化され
、そしてインターフェースプレートを介してアナライザに入り、続いて、８０Ｖ
の電位でオリフィス（１００〜１２０ｍｍ直径）を通過した。全走査質量スペク
トルを０．１ダルトンの走査ステップサイズで４００〜２０００ダルトンの質量
範囲にわたって得た。分子の質量をＭａｃＳｐｅｃ ３．３およびＢｉｏｍｕｌ
ｔｉｖｉｅｗ１．２ソフトウエアパッケージ（ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ Ｔｏｒｏｎｔ
ｏ、Ｃａｎａｄａ）を使用して、観測されたｍ／ｚ値から誘導した。計算された
理論的な単一同位体の質量および平均質量をＭａｃＢｉｏｓｐｅｃプログラム（
ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｃａｎａｄａ）を使用して決定した。ＬＣ
／ＭＳ運転を、１４０Ｂ ＡＢＩデュアルシリンジポンプ溶媒送達システムおよ
びＺｏｒｂａｘ逆相Ｃ−１８（ＳＢ−２．１ｍｍ×５ｃｍ）カラムを使用し、１
５０μＬ／分の流速で直線勾配を使用して行なった。サンプル（典型的には５μ
Ｌの１ｍｇ／ｍＬ溶液）をカラムに直接充填し、そして溶離液を３０ｃｍ、７５
ｍｍ内径の石英ガラスキャピラリーを介して直接質量分析計に接続した。Ｔｕｒ
ｂｏ Ｉｏｎｓｐｒａｙ^TM（５Ｌ／分 Ｎ２、５００℃）の適用によって開裂す
ることなく、感度を損なうことなく全溶離液の導入が可能となった。獲得したパ
ラメータを以下に記載する。

【００８９】 （実施例１〜５−補助基の導入） 補助基を導入するための本発明者らの合成アプローチをスキーム９に記載する
。簡単に、Ｎ置換直鎖ペプチドへのアクセスを提供する２つの経路を報告する： １．最も一般的な第一のルートは、Ｎ末端一級アミンとアルデヒドとの還元的
アルキル化を使用する。最初に、アルデヒドを樹脂に結合したペプチドに対して
過剰に添加する。イミン形成（ニンヒドリン反応によって評価される）が完了し
た後、５％酢酸を含む、ＤＭＦ／ＭｅＯＨ（２／１）中のＮａＢＨ₄またはＤＭ
Ｆ／ＭｅＯＨ（１／１）中のＮａＢＨ₃ＣＮの溶液を添加してイミンを還元し、
そして補助基およびアミンとの間に−ＣＨ₂−連結が形成される。

【００９０】

【化２７】 ２．第二のルートにおいて、ｏ−ニトロベンゼンスルホンアミド（ＯＮＢＳ）
を対応するスルホニルクロリドおよびアミンから調製する。光延型アルキル化（
補助基のアルコールを使用する）によってアミンとの連結が確立される。最終的
に、ＯＮＢＳ基をＤＭＦ中のＰｈＳＮａを使用して除去する。この３工程プロセ
スはまたＦｕｋｕｙａｍａ反応としても公知である。

【００９１】 （実施例１ ＨＳ−（ＣＨ₂）₂−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨの合
成） 合成をＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＷＡＮＧ樹脂（０．３６ｍｍｏｌ／ｇ）上で実施し
た。テトラペプチドＴｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙを、ＨＢＴＵカップリング
およびピペリジン脱保護を以下のように変更し、段階的なＦｍｏｃ−ＳＰＰＳを
使用して構築した： （カップリング） ２ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−アミノ酸（４当量）をＤＭＦ（４ｍＬ）中に溶解し、
そして２ｍｍｏｌのＨＢＴＵをＤＩＥＡ（４００μＬ）とともに溶液に添加した
。１分間の予備活性化後、この溶液をアミノ−樹脂に添加した。反応系を１０分
間放置し、そしてニンヒドリン試験を少量の樹脂サンプル上で実施し、残留遊離
アミンの量を測定した。測定した遊離アミンの量が０．５％を越えている場合、
反応系をさらに（３０分間）放置し、必要であれば繰り返した。樹脂を次いで、
数回ＤＭＦで洗浄した。

【００９２】 （脱保護） Ｆｍｏｃで保護された樹脂（０．５ｍｍｏｌ）をピペリジン／ＤＭＦ（１／１
）（４ｍＬ）の溶液で２分間処理した。この樹脂をドレイン（ｄｒａｉｎ）し、
そしてピペリジン処理を繰り返した。樹脂を次いで、数回ＤＭＦで洗浄し、その
後、次のカップリング工程を開始した。

【００９３】 Ｔｙｒ（Ｂｕ）−Ａｒｇ（ＰＭＣ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＷＡＮＧ樹脂（１ｇ）
を次いで、ＭｅＯＨ／ＤＭＦ／ＡｃＯＨ（４７／４７／５）（６ｍＬ）中に溶解
したＳ−（ｐ−メチルベンジル）−２−メルカプト−アセトアルデヒド（５８ｍ
ｇ；０．３２ｍｍｏｌ、Ｂｉｔａｎら、１９９７）で処理した。５分間攪拌後、
６０ｍｇのＮａＢＨ₃ＣＮを添加し、そしてその混合物を６０分間放置した。還
元的アルキル化工程を次いで、さらに一回繰り返し、反応を確実に完了させた。
樹脂をＤＭＦ／ＭｅＯＨ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭおよびＤＣＭで数回洗浄し、そして
最終的に空気乾燥した。

【００９４】 （ＨＦ切断） １ｇの樹脂を１ｍＬのｐ−クレゾールおよび９ｍＬのＨＦを用いて、０℃で１
時間処理した。ＨＦを真空下でエバポレートし、そして残渣を冷ジエチルエーテ
ル（２０ｍＬ）で粉砕した。エーテルを濾別し、そして沈殿物を少量の水に溶解
した。この溶液を次いで、生成物をＨＰＬＣ精製するためにＨＰＬＣカラム（Ｖ
ｙｄａｃ、Ｃ１８逆相２．１×２５ｃｍ）に直接充填した（緩衝液Ａ：水、０．
１％ＴＦＡ；緩衝液Ｂ：アセトニトリル／水 １／１、０．０９％ＴＦＡ）（１
００％のＡ〜８０％のＢ、６０分）。ＨＳ−（ＣＨ₂）₂−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ₂Ｐ
ｈＯＨ）−ＣＯ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨを単離し、そして凍結乾燥し、
７０ｍｇの白色粉末を得た（４５％収率）、Ｍｒ ６０１．５、Ｃ₂₈Ｈ₃₉Ｎ₇Ｏ₆ Ｓの計算値：６０１．２７。

【００９５】 （実施例２ Ｎ−（５−ニトロ−２−メルカプトベンジル）−Ｔｙｒ−Ａｒｇ
−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨの合成） 実施例１に記載されるようにＴｙｒ（Ｂｕ）−Ａｒｇ（ＰＭＣ）−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙ−ＷＡＮＧ樹脂を調製した。

【００９６】 １２０ｍｇの２，２’−ジアルデヒド−４，４’−ジニトロ−［ジフェニルジ
スルフィド］（ＦｒｉｅｓおよびＢｒｏｔｈｕｈｎ、１９２３）（０．３３ｍｍ
ｏｌ）をＭｅＯＨ／ＤＭＦ／ＡｃＯＨ（４７／４７／５）（３ｍＬ）に溶解し、
この溶液を樹脂に添加した。５分後、１００ｍｇのＮａＢＨ₃ＣＮ（１．６ｍｍ
ｏｌ）を添加し、そして溶液を１５時間攪拌した。樹脂をＤＭＦ（３×）および
ＭｅＯＨ／ＤＣＭ １／１（３×）で洗浄した。

【００９７】 （ＴＦＡ切断） ７００ｍｇの樹脂を１０ｍＬのＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ（９５／５）で１時間室温で処
理した。ＴＦＡを真空下で除去し、そして残渣をＨＰＬＣ緩衝液 Ａ／Ｂ １／
１（５ｍＬ）中に溶解した。この溶液を次いで、ＨＰＬＣカラムに直接充填し、
そして生成物の精製を実施例１のように実施した。２５ｍｇのＮ−（５−ニトロ
−２−メルカプトベンジル）−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨを凍結乾
燥から得た（２０％収率）、Ｍｒ ７０８．４（Ｃ₃₃Ｈ₄₀Ｎ₈Ｏ₈Ｓ計算値：７０
８．２７）。

【００９８】 （実施例３ ＨＳ−（ＣＨ₂）₂−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−
ＯＨの合成） Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＷＡＮＧ樹脂をＦｍｏｃ−Ａｌａ
−ＷＡＮＧ樹脂（０．４４ｍｍｏｌ／ｇ）を出発とし、実施例１に記載されるＨ
ＢＴＵカップリングおよびピペリジン脱保護を伴う、標準的なＦｍｏｃ−ＳＰＰ
Ｓプロトコルを使用して調製した。５００ｍｇのこの樹脂に、ＤＩＥＡ（２００
μＬ）を含むＤＭＦ（４ｍＬ）中のｏ−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（３
００ｍｇ）の溶液を添加した。３０分後、この樹脂をドレインし、そしてＤＭＦ
（３×）で洗浄した。この樹脂をＤＣＭ（５ｍＬ）中のＳ−（ｐ−メチルベンジ
ル）−２−メルカプトエタノール（２７０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の溶液と混合
した。トリフェニルホスフィン（３９３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）およびジエチル
アゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ、２６１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（
５ｍＬ）中に予め混合した。１分後、この溶液を樹脂に添加し、そして反応系を
３０分間放置した。樹脂をＤＣＭ（３×）およびＤＭＦ（３×）で洗浄した。樹
脂をさらに、ＮａＳＰｈｅ（２００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）
溶液で３０分間処理した。この樹脂をＤＭＦ（３×）およびＭｅＯＨ／ＤＣＭ（
３×）で洗浄し、そして空気乾燥した。

【００９９】 （ＨＦ切断） ５００ｍｇの樹脂をＨＦ／ｐ−クレゾール／ｐ−チオクレゾール（９／１／１
）（１０ｍＬ）（０℃で１時間）を使用して切断し、そして実施例１に記載され
るように処理した。粗残渣を緩衝液Ａ／Ｂ（１／１）に溶解し、そしてＨＰＬＣ
で精製し、ＨＳ−（ＣＨ₂）₂−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ₃）−ＣＯ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−
Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＯＨを得た（２５ｍｇ、２２％収率）。Ｍｒ：５７７．１（Ｃ ₂₈ Ｈ₄₃Ｎ₅Ｏ₆Ｓの計算値：５７７．２９）。

【０１００】 （実施例４ Ｎ−（２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＯＨの合成） Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−トリチル樹脂（０．４ｍｍｏｌ／ｇｒ）をまず、Ｐｅｐｃ
ｈｅｍ（Ｔｕｂｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によって提供されたプロトコルを
使用し、トリチル樹脂（０．９６ｍｍｏｌ／ｇｒ）から調製した。Ａｌａ−Ｐｈ
ｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−トリチル樹脂を実施例１のような標準的なＦｍｏ
ｃ ＳＰＰＳプロトコルを使用して構築した。この樹脂（０．５ｇｒ）をさらに
、２−ヒドロキシ−５−ニトロベンズアルデヒド（１１５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ
）およびＡｃＯＨ（２０μＬ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液で処理した。５分後、こ
の樹脂をドレインし、そして第二のアルデヒド処理を実施した。この樹脂をドレ
インし、そして溶離液が無色となるまでＤＭＦで何回も洗浄した。ＤＭＦ／Ｍｅ
ＯＨ ３／１（４ｍＬ）中のＮａＢＨ₄（１５０ｍｇ、４ｍｍｏｌ）の溶液を添
加し、そしてこの樹脂を１０分間攪拌した。この樹脂をドレインし、ＤＭＦ／Ｍ
ｅＯＨ １／１、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １／１およびＤＣＭで洗浄し、そして空気
乾燥した。

【０１０１】 （ＴＦＡ切断） 樹脂をＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＴＦＡ（１００μＬ）で１時間処理した。溶
液をエバポレートし、緩衝液Ｂ（３ｍＬ）を添加しそして樹脂を濾別した。溶液
を分取ＨＰＬＣカラムに直接充填し、そしてＨＰＬＣ精製を２％勾配（９０％Ａ
〜１０％Ａ、４０分間）を使用して実施した。凍結乾燥後、Ｎ−（２−ヒドロキ
シ−５−ニトロベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＯＨ（
１１４ｍｇ）を白色粉末として単離した（８５％収率）Ｍｒ：６６８．２（Ｃ₃₃ Ｈ₄₄Ｎ₆Ｏ₉の計算値：６６８．３２）。

【０１０２】 （実施例５ Ｎ−（２−ヒドロキシ−６−ニトロベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＯＨの合成） 直鎖ペプチドを実施例４に記載されるようにトリチル樹脂上で合成したが、２
−ヒドロキシ−６−ニトロベンズアルデヒド（Ｈａｒａｙａｍａら、１９９４）
を使用した。凍結乾燥後、Ｎ−（２−ヒドロキシ−６−ニトロベンジル）−Ａｌ
ａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＯＨ（８５ｍｇ）を白色粉末として単離
した（６３％収率）。Ｍｒ：６６８．２（Ｃ₃₃Ｈ₄₄Ｎ₆Ｏ₉の計算値：６６８．３
２）。

【０１０３】 （実施例６ アリールアミンのアシル化速度） 先行技術の方法の使用を制限する最も重要な因子は、ＯとＮまたはＳとＮアシ
ル転移工程であった。本発明者らが、アシル転移の速度に大きな影響を与えると
考えたパラメータのうちの１つは、中間オキシエステル結合またはチオエステル
結合の活性化であった。この点を考慮して、本発明者らは、以下の補助基の修飾
に焦点を当てた： −補助基の芳香族環へのニトロ置換基の導入。ニトロフェニルエステルは、フ
ェニルエステルと比較した場合、求核剤と非常に容易に反応する。

【０１０４】 −チオエステル 対 オキシエステル。本発明者らの研究室における以前の研
究において、本発明者らは、同一条件下で両方のエステルが同一速度で加水分解
することを発見した。本発明者らは、フェノールおよびチオフェノールの両方を
本発明者らのＮ置換基のセットに入れた。

【０１０５】 アシル転移速度を比較するために、本発明者らは、スキーム１０に示される反
応を実施した。

【０１０６】

【化２８】 トリペプチド（Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ）をＷＡＮＧ樹脂上で構築し、そして
選択された範囲のアルデヒドを還元的アミノ化によって導入した。各Ｎ置換トリ
ペプチドを次いで、ＨＢＴＵによって活性化されたＢｏｃ−アミノ酸（Ｂｏｃ−
Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨまたはＢｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ）溶液と樹脂
を混合することによるアシル化に供した。一般的な反応経路は以下の通りであっ
た：Ｎ置換トリペプチドのアシル化はまず、フェノールの酸素（または硫黄）原
子で起こる。アシル基は続いて、窒素原子に移動する。生じたフェノール（また
はチオフェノール）官能基は次いで、二回目のアシル化を受ける。

【０１０７】 本発明者らは、コントロールとして２−クロロ−４−ニトロベンジル置換基を
含めた。アルコールが存在しないので、本発明者らは、二級アミンへの直接アシ
ル化は、フェノール／チオフェノールの場合についてよりもさらに遅いと予測し
た。これらの結果を表１にまとめる。

【０１０８】

【表１】 以下の結論は、これらの結果から出され得る： １．芳香族環のオルト位におけるアルコール／チオール官能基の存在により、
置換アミンのアシル化の速度が劇的に増加する。同一のアシル化条件下で、オル
ト−クロロ「補助基（ａｕｘｉｌｉａｒｙ）」は、第２級アミン部位で、アシル
化を受けない。

【０１０９】 ２．芳香族環上の、ニトロ置換基と組み合わされたアルコール／チオール官能
基の存在は、第２級アミンの非常に迅速なアシル化を保証した。研究されるほと
んどの場合、７０％より多いジアシル化生成物が、１０分後に形成された。２−
ヒドロキシ−６−ニトロ誘導体の、Ｂｏｃ−バリンを用いるアシル化は、８２％
のジアシル化を達成するために６０分必要であった。言い換えれば、Ｂｏｃ−バ
リンを使用した場合、窒素原子におけるアシル化は、６０分後に８０％より多く
完了した。比較として、非常に類似した研究において、Ｎ−［２−ヒドロキシ−
４−メトキシベンジル］−アラニンのα−窒素原子の、Ｆｍｏｃ−バリンを用い
るアシル化は、２４時間後もなお不完全であった。２−メルカプト−５−ニトロ
誘導体のＢｏｃ−アラニンを用いるアシル化の場合、ジアシル化は、６０分後で
３７％しか達成しない；他の結果との比較から、本発明者らはこれを、後処理中
のジアシル化生成物中の、非常に反応性の、立体障害が低いエステル結合の加水
分解が原因であるとする。

【０１１０】 ３．環におけるニトロ基の位置は、重要な役割を果たさないようであるが、小
さな差異が観測され得る。チオエステルのオキシ−エステルでの置換は、その速
度を顕著に変えない。

【０１１１】 （実験） Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ配列を、標準Ｆｍｏｃ／ＨＢＴＵプロトコルを使用し
て、Ｗａｎｇ樹脂（０．１ｍｍｏｌ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）上で構築した。
補助基を、実施例２、４および５に記載されるように導入した。次いで、各樹脂
を、別個の反応容器で３つの部分に分配し、ＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。３
当量のＢｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、またはＢｏｃ−Ｖａｌ−
ＯＨを、４当量のＤＩＥＡと共に０．９９当量のＨＢＴＵを使用して、Ａｌａ−
Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−樹脂に結合した。１分後、１０分後および６０分後にサンプル
（１０〜１５ｍｇ）を取り出し、すぐにドレインし、１：１のＤＣＭ：ＭｅＯＨ
で洗浄し、そして乾燥した。次いで、サンプルを、室温で１時間、９７％のＴＦ
Ａ（２５０ｍＬ）を用いて切断した。ＴＦＡを、窒素ストリームを用いてエバポ
レートし、生成物を５０％のＢ（１００ｍＬ）に溶解した。サンプルを遠心分離
し、上清を回収し、次いで、ＲＰ−ＨＰＬＣおよびＥＳ−ＭＳまたはＬＣ／ＭＳ
で分析した。各実験について、未反応の出発物質、モノアシル化およびジアシル
化生成物の相対収率を、対応するクロマトグラムにおけるＨＰＬＣシグナルを積
分することによって算出した。

【０１１２】 （実施例７：補助アシル転移率（ａｕｘｉｌｉａｒｙ ａｃｙｌ ｔｒａｎｓ
ｆｅｒ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）の評価） この実施例において、本発明者らは、先行技術の補助基（例えば、２−ヒドロ
キシ−４−メトキシベンジル補助基）と比較した場合の、本発明の補助基の改良
されたＯ→Ｎアシル転移反応速度（ｔｒａｎｓｆｅｒ ｋｉｎｅｔｉｃｓ）を示
す。Ｎ−アシル化生成物は、樹脂結合ペプチドと１つの残基とのライゲーション
により形成される。従って、この実施例はまた、本発明の補助基を使用する改良
されたライゲーションの例として役立つ。

【０１１３】 ２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル、２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジ
ルおよび２−ヒドロキシ−６−ニトロベンジル補助基の相対Ｏ→Ｎアシル転移率
を確立するために、一連の２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，
１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）
−媒介アミノ酸アシル化実験を行った。最初、ベンジル補助基のオルト−酸素原
子を、ＨＢＴＵ−活性化アミノ酸によってアシル化して、２を得た。この後次い
で、アシル基を

【０１１４】

【化２９】 に転位して、アミド結合３を形成する。次いで、過剰のアシル化剤の存在下では
、オルト−酸素は２度のアシル化に有効になり、ジアシル化によって、４に至る
（スキーム１１）。

【０１１５】 樹脂−結合トリペプチドである、Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅを、標準Ｆｍｏｃ−
ＳＰＰＳプロトコルを使用して、クロロトリチル樹脂上に構築し、そして還元的
アルキル化によってベンズアルデヒド補助基を導入した。各

【０１１６】

【化３０】 のペプチド樹脂を、３つの別個の部分に分け、ＤＭＦ中の３当量の０．５Ｍ Ｈ
ＢＴＵ−活性化Ｆｍｏｃ−Ａｌａ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ、またはＦｍｏｃ−Ｖａｌ
とのアシル化に供した。１、１０および６０分後に、アリコートを分析のために
取り出した。反応に続いて、ペプチド−樹脂をＤＭＦで洗浄し、ピペリジン／Ｄ
ＭＦ／水で塩基処理し、ＤＭＦ次いでＤＣＭで洗浄し、乾燥し、そしてＤＣＭ中
０．５％のＴＦＡで３０分間切断した。これらの塩基処理は、補助基（Ｏ）と

【０１１７】

【化３１】 とを区別するため、ＴＦＡ切断の前に、存在するＯ−アリールエステル（２およ
び４）を除去するために用いた（スキーム１１）。次いで、これらの生成物を、
ＥＳ−ＭＳまたはＬＣ／ＭＳ分析によって同定し、そして逆相−ＨＰＬＣピーク
の積分によって定量した。これらの結果を表２に示す。

【０１１８】 最初に、ＨＢＴＵ−活性化アミノ酸を使用する

【０１１９】

【化３２】 の程度を決定するために、アシル化実験を、コントロール補助基、

【０１２０】

【化３３】 を用いて行った。予想通り、３０分後、かなりの量の

【０１２１】

【化３４】 は、ＨＢＴＵ−活性化アラニン、フェニルアラニンまたはバリンを用いた場合起
こらなかった（＜１％）。次に、Ｈｍｂ補助基（１ａ）と同様に、「不活性化」
オルト−ヒドロキシ基の存在を試験した。本発明者らは、

【０１２２】

【化３５】 の生成が、比較的遅い速度ではあるが、アシル転移によって生じることを見出し
た。Ｈｍｂ−媒介アシル転移は、アラニンに適切な速度で１時間後（９２％）に
進むが、フェニルアラニン（４８％）またはバリン（１２％）と同様に、アミノ
酸側鎖上の立体的な嵩が増加すると、転移率は急激に減少する。これらの観察は
、他者によって行われたアシル化の研究と良く一致し、そしてまた、改良された
アシル転移率を有するＳＰＰＳのためのＮ−末端補助基の必要性を、再び強調す
る。

【０１２３】

【化３６】 Ｈｍｂ補助基（１ａ）とは反対に、補助基のベンジル環上に、オルト−ヒドロ
キシル基が電子求引性ニトロ置換基と共に存在することにより、アシルの捕捉お
よび転移率が有意に増加する。２，５−Ｈｎｂ補助基（１Ｂ）により媒介される
アシル転移

【０１２４】

【化３７】 は、３つ全てのアミノ酸について、迅速であった。アラニンおよびフェニルアラ
ニンの場合、

【０１２５】

【化３８】 が迅速に形成され、そしてこの反応は１０分後にほぼ完了した。２，５−Ｈｎｂ
補助基と同様の様式で、アラニン、フェニルアラニンおよびバリンの高いアシル
転移率がまた、Ｈｎｂ補助基（１Ｃ）を用いて１時間後に観測された。重要なこ
とに、バリンの

【０１２６】

【化３９】 上へのより立体的に厳しいアシル化の場合、２，５−Ｈｎｂ補助基を用いた場合
の収率（＞９５％）およびＨｎｂ補助基を用いた場合の収率（８８％）は共に、
同一の実験条件下でＨｍｂ補助基を用いた場合の収率（１２％）の約８倍であっ
た。補助基の芳香族環上のニトロ置換基の位置は、重要な役割を果たさないよう
である。全ての場合において、アシル転移反応によるラセミ化は明らかではなか
った。

【０１２７】

【表２】 より立体的に厳しい残基を用いた場合、ニトロ置換基の活性化効果もまたアシ
ル転移速度および収率を改善し得るかを決定するために、アシル化実験の第２セ
ットを行った。これらの実験において、同一の補助基の各々を、還元的アルキル
化によって、樹脂−結合テトラペプチドである、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈ
ｅに導入し、ＨＢＴＵ−活性化Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ、Ｆｍｏｃ−ＰｈｅおよびＦｍ
ｏｃ−Ｖａｌによるアシル化に供した。立体的に妨害された第２級アミンのアシ
ル化に関連する固有の差のため、これらの実験のアシル転移反応の時間経過を、
１、６および２４時間まで増加した。アシル化に続いて、ペプチド−樹脂を、ピ
ペリジン塩基処理に供し、

【０１２８】

【化４０】 のみを観測し、次いで、ＤＣＭ中０．５％のＴＦＡを用いて、３０分間切断した
。これらの生成物を、ＥＳ−ＭＳまたはＬＣ／ＭＳ分析によって同定し、ＲＰ−
ＨＰＬＣピークの積分によって定量した。それらの結果を表３にまとめる。

【０１２９】

【表３】 表３に記載されるアシル化結果から、ニトロ−活性化補助基は、Ｈｍｂ補助基
に関して、Ｏ→Ｎアシル転移速度および収率を猛烈に増加することが明らかであ
る。３つ全ての場合において、２，５−Ｈｎｂ補助基およびＨｎｂは、優れたア
シル転移補助基であった。グリシンのバリンへの２，５−Ｈｎｂ−補助アシル転
移は、迅速に進み、そして１時間以内に本質的に完了（＞９８％）したが、フェ
ニルアラニンおよびバリンは、９５％を超える完了に２４時間必要である。Ｈｎ
ｂ補助基はまた、迅速なアシル転移を引き起こしたが、それにもかかわらず、３
つ全てのアミノ酸について、約９５％の

【０１３０】

【化４１】 のために２４時間必要とした。言い換えると、Ｈｍｂ−補助アシル転移は、特に
フェニルアラニンおよびバリンを用いた場合、Ｏ−アシル化が、１時間後、それ
ぞれ約５０％および９０％の収率で進むにもかかわらず、

【０１３１】

【化４２】 の受容不可能な低収率をもたらす。より詳細には、バリンの

【０１３２】

【化４３】 は、２４時間後、２３％の収率で進み、そして２，５−Ｈｎｂ補助基を用いた場
合の収率（９５％）またはＨｎｂ補助基を用いた場合の収率（９３％）の約１／
４の収率である。これらの結果は、特にβ−分枝残基または嵩高い残基が優勢で
ある場合、２，５−ＨｎｂおよびＨｎｂ補助基が、「異なる」ペプチド配列の鎖
構築に相当重要であることを強く示した。

【０１３３】 （実験） ペプチド合成。ペプチドを、上記のように、ＦｍｏｃおよびＢｏｃ化学につい
ての０．５Ｍ ＨＢＴＵ−ＤＭＦ活性化プロトコルを使用して、段階的に、化学
的に合成した。これらの合成は、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Ｗａ
ｎｇ）樹脂またはクロロトリチル樹脂上で行った。以下のアミノ酸側鎖の保護を
使用した：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙ
ｓ−（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｏ−ベンジル）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｈｒ（Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル）−ＯＨ、およびＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｏ−ｔｅｒ
ｔ−ブチル）−ＯＨ。各残基を、１０分間カップリングし、そしてカップリング
率を、定量的ニンヒドリン反応および定量的イサチン試験によって決定した。

【０１３４】 （還元的アルキル化）ＰＳＳＰ間での、補助基の成長ペプチド鎖上への組み込
みのための典型的手順。０．１ｍｍｏｌの

【０１３５】

【化４４】 を１０ｍＬのＤＭＦ／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（９：９：２）で洗浄し、ドレインし
、次いで１ｍＬのＤＭＦ／ＭｅＯＨ（１：１）中の３当量の置換ベンズアルデヒ
ドと、３０分間混合した。次いで、この溶液をドレインし、そしてイミン形成反
応を繰り返した。排液に続いて、この樹脂をＤＭＦで簡単に洗浄し、次いで、Ｄ
ＭＦ／ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ（９：９：２）中の５当量の水素化ホウ素ナトリウム
を添加し、そして室温で５分間混合した。次いで、この樹脂をドレインし、そし
てＤＭＦ、ＤＭＦ／Ｈ₂Ｏ、Ｈ₂Ｏ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、ＤＣＭ、およびＤＭＦで
連続的に洗浄した。次いで、数ミリグラム（約３ｍｇ）を取り出し、乾燥し、９
７％の水性ＴＦＡで切断し、３０％緩衝液Ｂに溶解し、濾過し、次いで直ちに、
ＥＳ−ＭＳおよびＲＰ−ＨＰＬＣで分析して、反応の完了を決定した。

【０１３６】 （アシル化実験）Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ配列およびＶａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ
−Ｐｈｅ配列を、標準的なＦｍｏｃ／ＨＢＴＵプロトコルを使用して、クロロト
リチル樹脂（０．９６ｍｍｏｌ／ｇ、ＰｅｐＣｈｅｍ）上に構築した。次いで、
この樹脂を個別の反応容器中で、３つに分け、ＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。
３当量のＦｍｏｃ−保護グリシン、アラニン、フェニルアラニン、およびバリン
を、４当量のＤＩＥＡを含むＤＭＦ中の２．９５当量の０．５ＭのＨＢＴＵを使
用して、それぞれ１、１０、および６０分または１、６および２４時間の間、Ａ
ｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ樹脂またはＶａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ樹脂にカップ
リングした。排他的に

【０１３７】

【化４５】 を試し、そしてまたＦｍｏｃ基を除去するために、切断前の樹脂サンプルを２サ
イクルの５分間のピペリジン／ＤＭＦ（１：１）および５分間のＤＭＦ／ピペリ
ジン／Ｈ₂Ｏ（４：４：２）処理に供し、次いで、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（１：１）
で乾燥した。トリチル樹脂サンプルを、ＤＣＭ中の０．５％ＴＦＡで３０分間切
断した。このＴＦＡ切断溶液を窒素流下で、エバポレートし、そして生成物を１
００μＬの５０％緩衝液Ｂに溶解した。サンプルを遠心分離し、上清を回収し、
次いで、直ちに、ＲＰ−ＨＰＬＣおよびＥＳ−ＭＳあるいはＬＣ／ＭＳによって
分析した。

【０１３８】 （実施例８：「困難な」ペプチド、ＳＴＡＴ−９１（６９９−７０９）の合成
） 原則的に、２，６−ＨｎｂおよびＨｍｂ基は、水素結合ネットワークを乱すこ
とに対する同様な効果を有すべきであり、これは、これらの両方が、成長ペプチ
ド鎖の骨格構造を変化させ、そして骨格水素結合ドナーを除去するためである。
この有益な効果を説明するために、Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳおよびＢｏｃ−ＳＰＰＳ
の両方において、「困難」であると発明者らが以前に報告した（Ｍｅｕｔｅｒｍ
ａｎｓら，１９９６；Ａｌｅｗｏｏｄら，１９９７）、ＳＴＡＴ−９１（６９９
−７０９）配列（ＴＧＹＩＫＴＥＬＩＳＶ）は、標準鎖構築プロトコルを使用し
て、そしてまた、同一の実験条件下で、Ｎ−Ｈｎｂ骨格置換の補助によって構築
される。このＳＴＡＴ−９１ペプチドは、このペプチドが、「困難な」部分に出
会う前に、比較的妨げられていない部位を含まないために選択され、従って、Ｈ
ｍｂ補助基の使用を除外する。

【０１３９】 ＤＭＦ中での標準Ｆｍｏｃ／ｔｅｒｔ−ブチル０．５Ｍ ＨＢＴＵ／ＤＩＥＡ
の１０分カップリングプロトコルを使用して、ＳＴＡＴ−９１（６９９−７０９
）の鎖構築は、残基Ｇｌｕ⁷⁰⁵およびＴｈｒ⁷⁰⁴（これらは、それぞれ、６７％お
よび９１％の収率で結合するのみである）まで十分に進行する。次いで、これは
、ｌｙｓ⁷⁰³での５９％のカップリング収率に続く（これは、報告されるように
、１時間後の再カップリングで６２％に増加するのみである）。さらに、ＨＢＴ
ＵのＨＡＴＵによる置換は、この残基に対するカップリング収率を有意に改善し
ない。チロシン⁷⁰⁰はまた、１時間の再カップリングの後でさえ、有意に改善し
ない低いカップリング収率（６１％）を与えた。すなわち、標準的なカップリン
グ条件下でのＳＴＡＴ−９１（６９９−７０９）の鎖構築は、８３％の受け入れ
がたい平均アシル化収率で進行する（以下の図を参照）。しかし、Ｈｎｂ（３）
補助基が、還元的アルキル化によって、Ｉｌｅ⁷⁰⁷（樹脂リンカーから３番目の
残基）で成長ペプチドの骨格上に組み込まれる場合、その後の鎖構築は、同じカ
ップリング条件を使用して、高い効率で進行する。Ｈｎｂ補助基の補助によって
、

【０１４０】

【化４６】 の構築に対する平均カップリング収率は、定量ニンヒドリンアッセイによって決
定されるように９９．６％に増加した。これを図１に示す。

【０１４１】 Ｌｕｅ⁷⁰⁶の

【０１４２】

【化４７】 への

【０１４３】

【化４８】 を、継続の前に、切断樹脂サンプルのＥＳ−ＭＳおよびＲＰ−ＨＰＬＣによって
モニタした。

【０１４４】

【化４９】 へのＦｍｏｃ−Ｌｅｕのアシル転移反応は、１時間後約５０％完了したが、２４
時間後、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析によって決定されるように、見かけ上、定量的であ
った（データは示されていない）。比較によって、

【０１４５】

【化５０】 への同一のＦｍｏｃ−Ｌｅｕのアシル転移反応において、

【０１４６】

【化５１】 のみが、同じ時間の後、２１％の収率で進行する。この低い

【０１４７】

【化５２】 は、「困難な」ペプチドを含む妨げられた、またはβ分岐したペプチドの合成に
おけるＨｍｂ補助基の制限をさらに強調する。

【０１４８】 鎖構築に続いて、標準およびＨｎｂ補助ＳＴＡＴ−９１（６９９−７０９）合
成の粗ＴＦＡ切断物質を、ＥＳ−ＭＳおよびＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。
標準Ｆｍｏｃ／ＨＢＴＵ合成プロトコルを使用する場合、感知可能な量の標的Ｓ
ＴＡＴ−９１ペプチドが、ＥＳ−ＭＳまたはＲＰ−ＨＰＬＣ分析のいずれによっ
ても、粗生成物中に見出されなかった（＜１％）。逆に、Ｈｎｂ補助合成におい
て、Ｈｎｂ置換−ＳＴＡＴ−９１（６９９−７０９）ペプチドが、ＥＳ−ＭＳお
よびＲＰ−ＨＰＬＣによって決定されるように、粗切断物質中の主成分であった
。次いで、

【０１４９】

【化５３】 を、直ちに３６６ｎｍで３時間光分解し、標的ペプチドを良好な収率で得た。こ
の比較から、Ｈｎｂ補助基は、「困難な」ペプチドの鎖構築の効率を、Ｈｍｂ置
換の様式と同様な様式で、しかし、顕著に改善されたアシル転移率の重要な利点
と共に、有意に改善するために使用され得ると思われる。

【０１５０】 （実験） （ＳＴＡＴ−９１（６９９−７０９）の合成）ＳＴＡＴ−９１（６９９−７０
９）の標準およびＨｎｂ補助合成を、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｗａｎｇ樹脂（Ａｐｐ
ｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．，０．７０ｍｍｏｌ／ｇ，０．１ｍ
ｍｏｌ合成スケール）に対するＦｍｏｃ化学を使用して実施した。１０分間のカ
ップリング時間を使用する標準構築により、８３％の平均カップリング収率を得
た。ＳＴＡＴ−９１（６９９−７０９）のＨｎｂ補助Ｆｍｏｃ鎖構築をまた、１
０分間のカップリング時間を使用して実施し、９９．６％の平均カップリング収
率を得た。Ｈｎｂ補助基を、Ｉｌｅ⁷⁰⁷に、還元的アミン化（５当量のＨｎｂを
使用する２×３時間のイミン形成反応）によって導入し、次いで、ＤＭＦ中で、
Ｌｅｕ⁷⁰⁶の０．５Ｍ ＨＢＴＵカップリングを行った。

【０１５１】

【化５４】 上への

【０１５２】

【化５５】 は、小さな樹脂サンプルのＴＦＡ切断に続く、ＥＳ−ＭＳおよびＲＰ−ＨＰＬＣ
分析によって決定されるように、２４時間後完了した。実験の一貫性を維持する
ために、標準的な合成において、Ｉｌｅ⁷⁰⁷をまた、ＨＢＴＵと２４時間カップ
リングした。両方の場合において、最終的なペプチド−樹脂生成物を、室温で１
時間、９７％水性ＴＦＡで切断した。ＴＦＡの真空中でのエバポレートの後、粗
生成物を冷ジエチルエーテルで洗浄し（２×５ｍＬ）、３０％のＢ（５ｍＬ）に
溶解し、そして凍結乾燥した。

【０１５３】

【化５６】 Ｍｒ １３７４．１Ｄａ；Ｃ₆₃Ｈ₉₉Ｎ₁₃Ｏ₂₁に対する計算値：１３７３．７Ｄａ
（単一同位体（ｍｏｎｏｉｓｏｔｏｐｉｃ））；Ｈｎｂ置換ＳＴＡＴペプチドを
、次いで、下記のように光分解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ精製後、標的ペプチドを７６
％の収率で得た：ＳＴＡＴ−９１（６９９−７０９）ＥＳ−ＭＳ：Ｍｒ １２２
２．７Ｄａ；Ｃ₅₆Ｈ₉₄Ｈ₁₂Ｏ₁₈に対する計算値：１２２２．６８Ｄａ（単一同位
体）。

【０１５４】 （光分解）光分解を、ＧＡＭＡＧ ＵＶ−キャビネットＩＩ中、３６６ｎｍの
ランプ波長および０．２５アンペアの供給源を用いて、２〜３時間実施した。典
型的に、ペプチド−樹脂の５ｍｇのサンプル、またはペプチドの１ｍｇのサンプ
ルを、白色マット上の被覆されていない広い口のバイアル中の５００μＬ Ｍｅ
ＯＨに取り上げた。

【０１５５】 （実施例９：困難な環状ペプチド、Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ
の合成） Ｈ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＯＨは、環化することが困難
な配列の近年報告された例である（ＳｃｈｍｉｄｔおよびＬａｎｇｎｅｒ，１９
９７）。環化条件に供される場合、２量体およびより高いオリゴマーが生成した
が、標的シクロペンタペプチドは形成されなかった。発明者らの方法論を探索し
、そしてそれを先行技術の方法と比較するために、発明者らはこの直鎖状ペプチ
ドを使用した、。以下の一連の実験において、発明者らは、単環中のこのＡｌａ
−Ａｌａアミド結合が、先行技術の方法論を使用するこの直鎖状ペプチドからで
はアクセス可能ではないが、発明者らの光不安定性補助基を使用することによっ
てアクセス可能であることを示した。

【０１５６】 （非置換Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａの環化） 対照実験として、発明者らは、非置換直鎖状ペプチド（Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ）を、標準的な環化条件（ＤＭＦ中１ｍＭ、３当量ＢＯＰ、
５当量ＤＩＥＡ、室温で３時間）を使用して、環化しようと試みた。以前に報告
された結果から期待されるように、環状２量体および幾分かの３量体のみが得ら
れたが、標的単環式生成物は得られなかった。

【０１５７】 （エタンチオール補助基を使用する環化） 発明者らは、最初に、エタンチオール補助基を評価した。この補助基を、実施
例３に記載されるように、樹脂上でのＦｕｋｕｙａｍａ合成により、スキーム１
２に要約される反応手順を使用して導入した。

【０１５８】

【化５７】 スキーム１２：Ｎ−メルカプトエタニルペプチド１の環化：ｉ）３当量ＢＯＰ／
５当量ＤＩＥＡ、室温で３時間；ｉｉ）０．１Ｍ ＮＨ₄ＨＣＯ₃。

【０１５９】 Ｎ−エタンチオール誘導体１の環化により、単環式生成物２（４５％単離収率
）のみを得、これは、質量スペクトル分析（正確な分子量および同位体分布）に
よって決定された。２量体生成物または他のオリゴマー生成物は、この粗反応混
合物内に見出されなかった。

【０１６０】 この単環式生成物はチオエステル構造を有し、この構造は、直鎖状ペプチドア
ミドおよび酸のジスルフィド３を生成するＮＨ₄ＨＣＯ₃中の単環式生成物２のけ
ん化によって確かめられた。環縮小を、塩基（ＤＩＥＡ、ＤＢＵ）の存在下、有
機溶媒（ＤＭＦ、ジオキサン）中で単離エステルを加熱する（６５℃）ことによ
って、または水性緩衝液（ｐＨ４〜８）中で加熱することによって強いる試みは
失敗した。エステルは変化しないままか、直鎖状ペプチドに加水分解するかした
。

【０１６１】 環縮小に対するこの失敗は、発明者らの考えでは、制限された転移状態構造と
いうよりもむしろ第２級アミンに対するアルキルチオエステルの低い反応性に起
因する。初期環化が、有意に改善されたアシル転移反応速度で、より反応性のニ
トロフェニルエステルを生成するために、発明者らは、環縮小アプローチにおい
て２−ヒドロキシニトロべンズアルデヒドを試験することを決定した。

【０１６２】 （５−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル補助基を使用する環化） ペプチド４ａを、実施例４に記載されるように合成した。標準的な条件下での
ペプチド４ａの環化により、最初に、２つの単環式生成物、および有意な量の副
生成物６ａ（Ｍｒ，８１２Ｄａ）（これは、反応混合物中のフェノール官能基と
過剰のＢＯＰとの反応によって生じる）を得た（スキーム１３，Ａ）。活性試薬
および塩基の量を調節することによって、この副生成物の形成は完全に避けられ
た。反応条件を、初期環化期間後の温度および塩基の量を変化させ、そして単環
式生成物の形成を、ＬＣ／ＭＳ分析によってモニタすることによって、さらに最
適化した。反応（ＤＭＦ中１ｍＭ、１当量ＢＯＰ、２当量ＤＩＥＡ、室温）の３
時間後、過剰のＤＩＥＡ（１０当量）を添加し、そしてこの混合物を２４時間放
置するか、または６５℃で１時間加熱する場合、最も良好な結果を得た。

【０１６３】

【化５８】 スキーム１３：補助基含有ペプチド４、５の環化（Ａ）ならびに標的環状ペプ
チド１０、１１の形成（Ｂ）；ｉ）３当量ＢＯＰ／５当量ＤＩＥＡ、室温で３時
間；ｉｉ）１当量ＢＯＰ／２当量ＤＩＥＡ、室温で３時間；１０当量ＤＩＥＡ、
室温で１２時間または６５℃で１時間；ｉｉｉ）ｈν（３６６ｎｍ）。

【０１６４】 粗生成物のＨＰＬＣプロフィールを図２Ｂに示す。主生成物（５０％単離収率
）を、ＮＭＲ、ＥＳ−ＭＳおよびキラルアミノ酸分析によって明らかに全てＬ体
の標的単環式生成物１０ａとして同定した。１１．５ｐｐｍの¹Ｈ ＮＭＲ吸収
は、この生成物が遊離ヒドロキシ置換基を含み、したがってエステル構造を有さ
ず、むしろ標的環状アミド構造を確証した。さらに、少量のＣ末端ラセミ化生成
物１０ｂをまた単離した（図２Ｂを参照にこと）。この生成物のキラルアミノ酸
分析は、Ｄ−Ａｌａ残基の存在を示した。

【０１６５】 中間体の環状エステル８ａを単離しようした際に、初期の３時間の環化後、Ｈ
ＰＬＣ（図２Ａ）およびＬＣ／ＭＳによって反応混合物を分析した。この混合物
は、直鎖状ペプチドならびに単環式生成物１０ａおよび１０ｂを含んだが、単環
式エステルは見られなかった。ｐ−ニトロフェニルエステルは、おそらく水性ワ
ークアップ中で直鎖状ペプチドに加水分解する。

【０１６６】 （６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル補助基を使用する環化） ５−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル補助基は環化後に容易に除去されないた
め、本発明者らは、６−ニトロ−２−ヘドロキシベンジル補助ペプチド５ａの環
化を調べた。オルト−ニトロ置換基は、８ａと比較して環状中間体９ａの環縮小
に及ぼす同様な活性効果を維持しながら、それが補助基に光不安定性を与えると
いう追加の利点を有する。この直鎖状ペプチド５ａを５−ニトロ−２−ヒドロキ
シ誘導体について上記したように合成し処理した。従って、環化物（ＤＭＦ中の
１ｍＭ、１当量ＢＯＰ／２当量ＤＩＥＡ）を室温で３時間予備形成し、続いて過
剰のＤＩＥＡ（１０当量の）を添加し、１時間６５℃まで加熱した。この主生成
物を収率３９％で単離し、ＮＭＲおよびキラルアミノ酸分析によって全てＬ体の
シクロペンタペプチド１１ａとして同定した。少量のＣ末端ラセミ化環状生成物
１１ｂ（Ｄ−Ａｌａを含む）をまた単離した。同様にＮ−（６−ニトロ−２−ヒ
ドロキシベンジル）Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ ５ｃを上記のよ
うに構築し環化した。全てＬ体のシクロペンタペプチド１１ｃを収率４５％で単
離した。

【０１６７】 （補助基の除去） 次いで、環状ペプチド１１ａを溶媒条件の範囲内で、標準ＵＶランプを使用し
て３６６ｎｍでの光分解に供した。ほとんどの溶媒（ＭｅＯＨ、ＭｅＯＨ／Ａｃ
ＯＨ、ＴＨＦ／ＡｃＯＨ、ジオキサン）において、骨格窒素上のニトロベンジル
置換基を容易に除去して標的環状ペプチド１２ａを生成する（スキーム１４、Ｂ
）。図３は、クリーンで効率的な転化（１１ａから１２ａ）を例示する。

【０１６８】 この環状生成物を、キラルアミノ酸分析および¹Ｈ ＮＭＲによって同定した
。このスペクトルデータは報告されたデータとよく一致した。さらに、Ｓｃｈｍ
ｉｄｔら（１９９７）に従って光分解から得られる生成物で共溶出したＰｈｅ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａの環化から、環状ペプチドの独立したサンプル
を調製した。

【０１６９】 同じ生成物１２ａをレジオアナログ１１ｃの光分解から得た。ラセミ化した環
状生成物１１ｂを光分解し、同様に非置換Ｄ−Ａｌａ含有生成物１２ｂを生成し
、これは独立して合成したサンプルと共溶出した。

【０１７０】 （実験） （環化実験） 補助基含有ペプチド４および５の環化：ＤＭＦ中の１当量のＢＯＰおよび２当
量のＤＩＥＡをＤＭＦ中の直鎖状ペプチドの１ｍＭ溶液に加え、室温で３時間撹
拌した。次いで、１０当量のＤＩＥＡを加えこの溶液を６５℃で１時間加熱した
。ＤＭＦを真空下で除去し、粗生成物をアセトニトリル／水（１：１）に溶解し
、ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。

【０１７１】 他の直鎖状ペプチドの環化： ＤＭＦ中の直鎖状ペプチドの１ｍＭ溶液を使用して環化を実施した。３当量の
ＢＯＰおよび５当量のＤＩＥＡを加え、この溶液を室温で３時間撹拌した。上記
のようにワークアップした。

【０１７２】 （シクロ−［Ｓ−（ＣＨ₂）₂−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］２
） ＨＳ−（ＣＨ₂）₂−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ１（１０ｍｇの
ＴＦＡ塩、０．０１４ｍｍｏｌ）の環化は単環式チオエステル２（３．４ｍｇ、
収率４５％）を生成した：Ｍｒ：５５９．３、Ｃ₂₈Ｈ₄₁Ｎ₅Ｏ₅Ｓの計算値：５５
９．３。水性炭酸水素アンモニウム緩衝液を使用してこのチオエステルを加水分
解し（０．１Ｍ、ｐＨ８、６０℃で６時間）、Ｃ末端アミドおよび酸を形成した
。穏やかな塩基条件下でこれらのチオール生成物を、ＥＳ−ＭＳによって同定し
たジスルフィド３に酸化した。

【０１７３】

【化５９】 （シクロ−［Ｎ−（５−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］（１０ａ）） Ｎ−（５−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ−Ａｌａ４ａ（３０ｍｇのＴＦＡ塩、０．０３８ｍｍｏｌ）の環化は収率５
１％で１０ａ（１２．５ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を生成した。

【０１７４】

【化６０】 （シクロ−［Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］（１１ａ）） Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ−Ａｌａ５ａ（２０ｍｇのＴＦＡ塩、０．０２５ｍｍｏｌ）の環化から、１
１ａ（６．５ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を収率３９％で得た。

【０１７５】

【化６１】 （シクロ−［Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ］（１１ｃ）） Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａ
ｌａ−Ａｌａ（２０ｍｇのＴＦＡ塩、０．０２５ｍｍｏｌ）の環化から、１１ａ
（７．３ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を収率４４％で得た。

【０１７６】

【化６２】 （シクロ−［Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］（１２ａ）） ａ）シクロ−［Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ａｌａ−Ｐｈ
ｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］（１ｍＭ ＭｅＯＨ）を３０分間窒素でパージし
、次いで、３時間標準実験室ＵＶランプ（３６６ｎｍ、０．２５Ａ）で光分解し
た。ＭｅＯＨをエバポレートし、残渣を５０％緩衝液Ｂに溶解し、ＨＰＬＣ精製
のためにＶｙｄａｃ Ｃ１８カラム（分離用）上に直接この溶液を充填した。シ
クロ−［Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ］を収率５２％で単離した。
この生成物を独立して合成したサンプルで共溶出した。ＥＳ−ＭＳ Ｍｒ４９９
．４、Ｃ₂₆Ｈ₃₇Ｎ₅Ｏ₅の計算値、４９９．３（モノ同位体）。 ｂ）精製したシクロ−［Ｎ−（６−ニトロ−２−ヒドロキシベンジル）−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ］の光分解を上記のように実施した。シクロ
−［Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ］を収率２８％で単離した。この
生成物を独立して合成したサンプルで共溶出した。ＥＳ−ＭＳ Ｍｒ４９９．１
、Ｃ₂₆Ｈ₃₇Ｎ₅Ｏ₅の計算値、４９９．３（モノ同位体）。

【０１７７】 （実施例１０：環の縮小方法による全てＬ体のテトラペプチド、Ｔｙｒ−Ａｒ
ｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙの環化に対する光不安定性補助基の適用） 本発明者らは、より拘束された全てＬ体のシクロテトラペプチドの合成のため
の本発明者らの補助方法の実行可能性を研究することに決めた。直鎖状ペプチド
Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙの標準環化は、環状モノマー／環状ダイマー／
環状トリマーを２／８／３の比率で得た。（ＨｎＢ）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−
Ｇｌｙの環化を上記のように実施したが、加熱（ＤＩＥＡ添加後６５℃）を２０
時間（１時間の代わりに）継続した。生成物シクロ−［（ＨｎＢ）Ｔｙｒ−Ａｒ
ｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］を収率４０％で単離した。ＭｅＯＨ／ＡｃＯＨ中のこの生
成物の光分解は遅く、不純なシクロ［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］を得た
が、ＴＨＦ、ＤＭＦ、またはジオキサン中の光分解は顕著により速かった（１時
間で完了）。シクロ−［Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ］を収率４１％で単離
した（光分解工程）。

【０１７８】 （実施例１１） （ネイティブライゲーション） この実験において、本発明者らはネイティブライゲーションを達成するための
実施にこの補助方法をいかにして導入するかを例示する。２つのライゲーション
部分、すなわち嵩高くない部分、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、およびより嵩高い部分、Ｐｈ
ｅ−Ａｌａを調べた。オキシエタンチオール補助方法をこれらのライゲーション
部分（Ｃａｎｎｅら、１９９６）に適用し、最初の嵩高くない場合のみ成功した
。

【０１７９】

【化６３】 標準のインサイチュ中和プロトコルを使用して、第１のペプチドセグメント（
ペプチド１）を構築し、この補助基を実施例１〜５に記載されるように導入する
。標準ＨＦ切断および側鎖脱保護は、第１の非保護ペプチドセグメントを提供す
る。Ｃ末端にチオフェニルエステルを含む第２のペプチドセグメント（ペプチド
２）を前に記載するように（Ｃａｎｎｅら、１９９６）合成する。

【０１８０】 次いで、ライゲーション条件を最適化するために、以下の実験を実施する：ペ
プチド１およびペプチド２をＤＭＦ中に１ｍＭ、１０ｍＭおよび１００ｍＭ濃度
で溶解し、２または５当量のＤＩＥＡを加える。各実験についての反応の進行を
異なる時間間隔でＨＰＬＣおよびＬＣＭＳによってモニターする。幾つかの他の
溶媒系（ＤＭＳＯ／ＤＩＥＭ、および水性緩衝液（４〜８の範囲のｐＨ）（ＤＩ
ＥＭなし））を試験する。

【０１８１】 （実施例１２） （骨格リンカー） この実験において、本発明者は環状ペプチドの固相合成に対して、この補助方
法を使用して連結する光不安定性骨格をいかにして適応させるかについて例示す
る。

【０１８２】

【化６４】 ２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロベンズアルデヒド（Ｐｅｒｅｚら、１９９
２）をアセトン中の１当量のブロモ吉草酸および１当量のＫＨＣＯ₃で処理する
。得られる酸をアミノメチル化したポリスチレンに連結する。アラニンアリルエ
ステルを還元性アミノ化によって樹脂に結合し、得られた第２級アミンを実施例
６に記載されるようにＢｏｃ−Ａｌａ−ＯＨでアシル化する。インサイチュ中和
プロトコールを使用してこの直鎖状ペプチド（Ｐｈｅ−ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ
−Ａｌａ）をさらに構築する。このＮ末端をＴＦＡで脱保護し、記載されるよう
にＰｄ［Ｐ（Ｐｈ）₃］₄を使用してＣ末端アリル保護基を除去する。次いで、Ｄ
ＭＦ中でＢＯＰ／ＤＩＥＡによってこの環化を実施し、光分解によって樹脂から
この生成物を切断した。

【０１８３】 明瞭および理解の目的のために本発明が幾らか詳細に記載される一方で、本明
細書中に記載される実施態様および方法に対する種々の改変および変形が本明細
書中に開示される発明概念の範囲から逸脱することなくなされ得ることは、当業
者にとって明らかである。

【０１８４】 本明細書中で引用した引用文献は、以下の頁に列挙され、本明細書中にてこの
引用文献により援用される。

【０１８５】 参考文献

【０１８６】

【数１】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、以下を使用するＳＴＡ−９１（６９９−７０９）のＦｍｏｃ連鎖アセ
ンブリについてのカップリング収率の比較を示す：（Ａ）標準的な１０分間のＨ
ＢＴＵカップリングプロトコル（−ｏ−）であって、これは８３％の平均カップ
リング収率を得た；および（Ｂ）Ｈｎｂ補助基をＩｌｅ⁷⁰⁷で組み込む、Ｈｎｂ
に補助された１０分間のＨＢＴＵカップリングプロトコル（−Δ−）であって、
平均カップリング収率は９９．６％であった。

【図２】 図２は、直鎖状ペプチド４ａの環化のＨＰＬＣ分析の結果を示す。Ａ）室温で
３時間後、およびＢ）過剰のＤＩＥＡの存在下、６５℃で１時間加熱。溶液を高
真空下で乾燥し、５０％アセトニトリル水溶液に溶解し、そしてＶｙｄａｃ逆相
Ｃ−１８（５μｍ、３００Å、０．４６×２５ｃｍ）ＨＰＬＣカラムに直接充填
した。生成物を、４０分間にわたる０〜８０％の緩衝液Ｂの直線勾配を使用して
、１ｍＬ／分の流速で分離した。

【図３】 図３は、環状ペプチド１１ａの光分解のＨＰＬＣ分析の結果を、測定した時間
の間隔で示す。ＭｅＯＨ／１％ＡｃＯＨ中のペプチド１１ａの０．１５ｍＭ溶液
を、標準的なＵＶランプを使用して光分解し、そして異なる時間間隔で、少量の
アリコートをＺｏｒｂａｘ逆相Ｃ−１８（３μｍ、３００Å、０．２１×５ｃｍ
）ＨＰＬＣカラムに注入した。生成物を、１０分間にわたる０〜８０％の緩衝液
Ｂの直線勾配を使用して、２００μＬ／分の流速で分離した（２１４ｎｍで検出
）。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年８月１日（２０００．８．１）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３１】

【化１６】 多数の先行技術の刊行物が、本明細書中に参照されるが、これらの任意の資料
が、オーストラリアまたは任意の他の国において、当該技術の通常の一般的知識
の一部を形成するという容認を、この参照が構成するするものではないことが、
明確に理解される。 この補助物のアプローチをより可変性にするために必要とされる少なくとも３
つの要求が存在する： １．Ｎ原子において補助物の一般的導入を可能にすること ２．窒素原子のより有効なアシル化を可能にすること ３．アシル化後の補助物の除去を可能にすること。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ミューターマンズ， ウィム デニス フ ランズ オーストラリア国 クイーンズランド 4006， ハーストン， フレミング ロー ド 16 Ｆターム(参考） 4H045 AA20 BA13 BA16 BA32 BA35 FA41 FA51 FA60 FA61 FA81 GA22

Claims (34)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ａ）直鎖状または環状ペプチドの合成、 ｂ）Ｃ末端修飾ペプチドの合成、あるいは ｃ）ペプチド分子の樹脂上環化 の方法であって、該方法は、一般式Ｉ： 【化１】 の環状芳香族またはアルキル補助化合物を、アミン窒素原子に連結する工程を包
   含し、 ここで、該環は、必要に応じて、窒素、酸素、および硫黄からなる群から選択さ
   れる１つ以上のヘテロ原子を包含し； 該環は、５〜７個の原子からなり； 該環は、ＸＨ、Ｚ、およびＹによってそれぞれ置換される３個の炭素原子を含み
   ；そして 該環は、該化合物が５員環である場合、基Ｒ³およびＲ⁴によってさらに置換され
   るか、または該化合物が６員環である場合、基Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵によってさら
   に置換されるか、または該化合物が７員環である場合、基Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵および
   Ｒ⁶によってさらに置換され； ここで、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＨ₂Ｏ−、またはＣＨ₂Ｓ−であり； Ｙは、電子求引性基であり； Ｚは、炭素−窒素共有結合の形成を可能にする任意の基であり；そして Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は、それぞれ独立して、水素、アルキル、置換アルキル、
   アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロア
   リール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ＸＨもしくはＹ、
   または固体支持体に対する共有結合であり、 ここで、Ｒ³およびＲ⁴、Ｒ⁴およびＲ⁵、またはＲ⁵およびＲ⁶は、必要に応じて、
   該環とともに、５−、６−、または７−員環を形成し得、これによって該アミン
   のアミドへの転換を容易にする、方法。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の方法であって、ここで、Ｙはニトロ、ケト
   ン、カルボン酸エステル、アミド、ニトリル、スルホンアミド、スルホキシド、
   スルホン、スルホネート、フルオリド、クロリド、ブロミド、またはヨージドで
   ある、方法。
3. 【請求項３】 請求項１または２に記載の方法であって、Ｚがアルデヒド、
   アルキルアルコール、アルキルハライド、またはケトンであるか、あるいはハロ
   ゲン化Ｃ_1-3アルキル基である、方法。
4. 【請求項４】 請求項３に記載の方法であって、前記ハロゲン化アルキル基
   がメチル基である、方法。
5. 【請求項５】 請求項３または４に記載の方法であって、前記ハロゲンがヨ
   ウ素、臭素または塩素である、方法。
6. 【請求項６】 請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法であって、ここで
   、前記補助化合物が一般式ＩＩ： 【化２】 である、方法。
7. 【請求項７】 請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法であって、ここで
   、前記ＸＨ基が、一般式Ｉまたは一般式ＩＩの２位または３位にあり、Ｙが他の
   任意の位置にある、方法。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の方法であって、ここで、前記ＸＨ基が２位
   にある、方法。
9. 【請求項９】 請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法であって、ここで
   、Ｙが６位にある、方法。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の方法であって、ここで、ＹがＮＯ₂であ
    る、方法。
11. 【請求項１１】 請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法であって、ここ
    で、前記補助化合物が、以下： 【化３】 からなる群から選択される、方法。
12. 【請求項１２】 請求項１に記載の方法であって、該方法は、環状ペプチド
    、大きなペプチド、または困難なペプチドの合成のためであって、ここで、前記
    補助化合物が一般式ＩＩＩ： 【化４】 であり、該補助化合物がアミド結合形成に続いて、光分解によって除去される、
    方法。
13. 【請求項１３】 請求項１に記載の方法であって、該方法は、一つ以上の置
    換されたアミド結合を含む、環状ペプチド、大きなペプチド、または困難なペプ
    チドの合成のためであって、ここで、前記補助化合物が除去されず、そして該補
    助化合物が一般式ＩＶ： 【化５】 である、方法。
14. 【請求項１４】 ａ）直鎖状および環状ペプチド、ネイティブペプチド骨格
    を有する大きなペプチド、および「困難な」ペプチド配列からなる群から選択さ
    れる化合物の合成、 ｂ）ペプチド、Ｃ末端修飾ペプチドの合成のための骨格連結、あるいは ｃ）樹脂上環化 の方法であって、該方法は、 一般式Ｉ、一般式ＩＩ、一般式ＩＩＩ、または一般式ＩＶの環状補助化合物を
    アミン窒素原子に連結し、それによって該アミンのアミドへの変換を容易にする
    工程を包含する、方法。
15. 【請求項１５】 請求項１４に記載の方法であって、ここで、一般式ＩＩＩ
    におけるＸＨが、２位にあり、そしてＹが６位でＮＯ₂である、方法。
16. 【請求項１６】 請求項１または請求項１５に記載の方法であって、ここで
    、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶が、独立して、水素、アルキル、アリール、ヘテロア
    リール、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、および固体支持体への共有
    結合からなる群から選択される、方法。
17. 【請求項１７】 環状ペプチドの合成方法であって、該方法は、以下 ａ）環化されるべき直鎖状ペプチドを合成する工程、 ｂ）請求項１〜１１のいずれか一項に記載の補助化合物を該直鎖状ペプチドの
    所望の第１級アミンに連結する工程、 ｃ）所望のカルボン酸を活性化して環化させる工程、および必要な場合、環の
    縮小を誘導する工程、ならびに、必要に応じて ｄ）Ｎ−アシル化を完了した後に該補助化合物を除去する工程、 を包含する、方法。
18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の方法であって、ここで、環の縮小が加
    熱または金属の添加によって誘導される、方法。
19. 【請求項１９】 請求項１７または１８に記載の方法であって、ここで、前
    記補助化合物が一般式ＩＩＩであり、該補助化合物が光分解によって除去される
    、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の方法であって、
    ここで、工程ａ）〜ｄ）が、固体支持体上で行われ、続いて、該固体支持体から
    前記環状生成物が切断され、所望であれば、側鎖保護基を除去する、方法。
21. 【請求項２１】 請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の方法であって、
    ここで、前記Ｃ末端カルボン酸の活性化が、一般式ＩＩＩの補助化合物の存在下
    で行われ、そして前記環化が、該補助化合物を、Ｚ基を介して前記所望のアミン
    に接続することによって行われる、方法。
22. 【請求項２２】 ネイティブペプチド骨格を有する大きなペプチドの合成方
    法であって、該方法は、以下 ａ）大きなペプチドを形成するために連結されるべきペプチドフラグメントの
    一セットを合成する工程、 ｂ）請求項１〜１１のいずれか一項に記載の補助化合物を、第１ペプチドフラ
    グメントの第１級アミンに連結する工程、 ｃ）第２ペプチドフラグメントのカルボン酸を活性化する工程、 ｄ）該第２ペプチドフラグメントを該第１ペプチドフラグメントに加える工程
    、および該２つのフラグメント間のペプチド結合を形成する工程、ならびに必要
    に応じて、 ｅ）Ｎアシル化が完了した後に、該補助化合物を除去する工程、 を包含する、方法。
23. 【請求項２３】 請求項２１に記載の方法であって、ここで、前記補助化合
    物が一般式ＩＶであり、そして該補助化合物が、光分解によって除去される、方
    法。
24. 【請求項２４】 困難なペプチド配列の合成方法であって、該方法は、以下 ａ）請求項１〜１０のいずれか一項に記載の補助化合物を、固体支持体に連結
    されたペプチドのペプチド結合の一つ以上の窒素原子に連結する工程、 ｂ）標準的な固相合成法を使用して完全なペプチドを合成する工程、および必
    要に応じて、 ｃ）合成が完了した場合、該補助化合物を除去する工程、 を包含する、方法。
25. 【請求項２５】 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記補助化合
    物が、一般式ＩＩＩであり、そして該補助化合物が、光分解によって除去される
    、方法。
26. 【請求項２６】 直鎖状ペプチドの合成のための骨格連結の方法であって、
    該方法が、以下 ａ）所望のペプチドの酸残基のα−窒素を固体支持体に連結するリンカーとし
    て、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の補助化合物を使用する工程、 ｂ）標準的な固相ペプチド合成法を使用して、該直鎖状ペプチドを組み立てる
    工程、および必要に応じて ｃ）側鎖保護基（単数または複数）を除去する工程、および／または ｄ）該固体支持体から該ペプチドを切断する工程、 を包含する、方法。
27. 【請求項２７】 請求項２６に記載の方法であって、ここで、前記Ｃ末端ア
    ミノ酸残基のカルボン酸基が、官能基によって置き換えられる、方法。
28. 【請求項２８】 請求項２６に記載の方法であって、ここで、前記Ｃ末端ア
    ミノ酸残基のカルボン酸基が、エステル、アルキルアルコール（ａｌｋｙｌａｌ
    ｃｏｈｏｌ）、アセタールまたはアミド基によって置き換えられる、方法。
29. 【請求項２９】 請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の方法であって、
    ここで、Ｙが６位でニトロであり、ＸＨが２位であり、そして切断が光分解によ
    って行われる、方法。
30. 【請求項３０】 直鎖状ペプチドの樹脂上環化の方法であって、該方法が、
    以下 ａ）所望ペプチドのアミノ酸残基のα−窒素を固体支持体に連結するリンカー
    として、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の補助化合物を使用する工程、 ｂ）標準的な固相ペプチド合成法を使用して、固体支持体上で直鎖状ペプチド
    を合成する工程、 ｃ）所望のアミンおよびカルボン酸基を脱保護する工程、 ｄ）環化を行うために該カルボン酸基を活性化する工程、ならびに必要に応じ
    て、 ｅ）アミノ酸側鎖基を脱保護する工程、ならびに／または ｆ）該固体支持体から該環状ペプチドを切断する工程、 を包含する、方法。
31. 【請求項３１】 請求項３０に記載の方法であって、ここで、Ｙが６位でニ
    トロ基であり、ＸＨが２位であり、そして切断が光分解によって行われる、方法
    。
32. 【請求項３２】 固相ペプチド合成に適した支持体に連結される、請求項１
    、１２および１３にそれぞれ記載される一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶのい
    ずれか一つに従う補助化合物。
33. 【請求項３３】 支持体に連結された請求項３２に記載の補助化合物であっ
    て、ここで、該支持体が官能基化ポリスチレン樹脂、テンタゲル（ｔｅｎｔａｇ
    ｅｌ）樹脂、およびポリエチレングリコール樹脂からなる群から選択される、支
    持体に連結された補助化合物。
34. 【請求項３４】 ペプチド、環状ペプチドの合成において使用するためのキ
    ットであって、該キットは、以下 ａ）請求項１〜１１のいずれか一項に記載される補助化合物、または ｂ）固相ペプチド合成のための１つ以上の試薬とともに、固体支持体に連結さ
    れた、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の補助化合物、 を含む、キット。