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JP2020011981A - ワクチンナノテクノロジー - Google Patents

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JP2020011981A
JP2020011981A JP2019172918A JP2019172918A JP2020011981A JP 2020011981 A JP2020011981 A JP 2020011981A JP 2019172918 A JP2019172918 A JP 2019172918A JP 2019172918 A JP2019172918 A JP 2019172918A JP 2020011981 A JP2020011981 A JP 2020011981A
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ハー． フォン アンドリアン ウルリッヒ
Andrian Ulrich H Von
ハー． フォン アンドリアン ウルリッヒ
シー． ファロカザド オミド
Omid C Farokhzad
シー． ファロカザド オミド
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Robert S Langer
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バスト パメラ
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Boston Childrens Hospital
Massachusetts Institute of Technology
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Boston Childrens Hospital
Massachusetts Institute of Technology
Harvard University
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Abstract

【課題】ワクチンナノテクノロジーの提供。【解決手段】本発明は、ナノキャリアを免疫系の細胞に送達するための組成物および系を提供する。本発明は、Ｔ細胞および／またはＢ細胞において免疫応答を刺激することができ、いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫調節剤を含み、そして必要に応じて少なくとも１つの標的化部分および必要に応じて少なくとも１つの免疫刺激剤を含む、ワクチンナノキャリアを提供する。本発明は、発明性のあるワクチンナノキャリアを含む薬学的組成物を提供する。本発明は、発明性のあるワクチンナノキャリアおよびその薬学的組成物を設計し、製造し、そして使用する方法を提供する。本発明は、疾患、障害および状態の予防および／または処置の方法を提供し、その方法は、少なくとも１つの発明性のあるワクチンナノキャリアを、それを必要とする被験体に投与する工程を包含する。【選択図】図１

Description

関連出願
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項の下、２００７年１０月１２日に出願された米国仮特許出願第６０／９７９，５９６号の利益を主張する。この米国仮特許出願の全体の内容は、本明細書中に参考として援用される。
政府支援
合衆国政府は、本発明の開発において使用された助成金支援を提供した。特に、米国国立衛生研究所（契約金番号ＡＩ０６９２５９、ＡＩ０２７７５２、およびＨＬ５６９４９）ならびに米国国立衛生研究所／国立画像生物医学・生物工学研究所（契約金番号ＥＢ００３６４７）が、本発明の開発を支援した。合衆国政府は本発明に一定の権利を有する。
発明の背景
微生物病原体に対する多くの現行のワクチンは、原因となる微生物の生の弱毒化株または非ビルレント（ｎｏｎ−ｖｉｒｕｌｅｎｔ）株を含む。多くのワクチンは、死滅させた微生物または別途不活性化した微生物を含む。他のワクチンは、病原体溶解産物の精製成分（例えば、表面炭水化物または組換え病原体由来タンパク質）を利用する。生の弱毒化病原体または不活性化病原体を利用するワクチンは、代表的には、活発な免疫応答をもたらすが、それらの使用には、限界がある。例えば、生のワクチン株は、特に、免疫力が低下したレシピエントに投与されるとき、感染性の病状を時折引き起こし得る。さらに、多くの病原体、特にウイルスは、そのゲノムにおいて継続的かつ迅速に変異を起こし、それによって、それらの病原体は、抗原性において異なるワクチン株に対する免疫応答から免れることができる。
ワクチン開発が困難であることを考慮すると、多くのワクチンは、極端に供給不足である。例えば、２００７年１０月の時点において、米国では、インフルエンザ、水痘およびＡ型肝炎のワクチンが不足している。いくつかの実例では、需要に応えるためにワクチン生産に設備を充てる製造者が十分ではないために、ワクチン不足が起きている。いくつかの場合では、ワクチン不足は、ワクチンの効力が低いことに起因し、このことは、予防効果を達成するために大量のワクチン製品が各個体に投与されなければならないことを意味する。例えば、いくつかのワクチンは、感染性の病状を引き起こすので、そのままの生物として投与することができない（たとえそれが弱毒化されていても、または死滅させていたとしても）。その代わりに、そのようなワクチンは、通常、精製された病原体成分を含むが、それは、代表的にはそれほど強力でない免疫応答をもたらす。
このように、高度に免疫原性で効果的なワクチンを作製するための系および方法が当該分野において必要とされている。また、長期にわたって免疫応答を強力に誘導し得る改善されたワクチン組成物も必要とされている。感染症の処置および予防のために、高度に免疫原性であるが疾患を引き起こさない改善されたワクチン組成物が必要とされている。
発明の要旨
本発明は、免疫系を調節するための合成ナノキャリアを提供する。その合成ナノキャリアは、免疫調節剤、免疫刺激剤および標的化剤（本明細書中で「標的化部分」とも称される）のうちの１つ以上を含む。免疫調節剤は、Ｂおよび／またはＴ細胞において免疫応答を誘導する。免疫刺激剤は、免疫系を刺激するのを助ける（最終的に免疫応答を増強し得るか、抑制し得るか、指示し得るか、または再指示し得る様式で）。それゆえ、免疫刺激剤には、免疫抑制剤および制御性Ｔ細胞を誘導する薬剤が包含される。そのような薬剤は、いくつかの実施形態において、寛容の獲得を促進し得る。標的化剤は、特定の器官、組織、細胞および／または細胞下の場所と会合されている１つ以上の標的を認識する。本ナノキャリアは、免疫系の調節による処置に影響されやすい疾患、障害または状態の予防および／または処置のための薬学的調製物およびキットにおいて有用である。そのような状態としては、特異的もしくは非特異的に免疫応答を増強するか、特異的もしくは非特異的に免疫応答を抑制するか、または特異的もしくは非特異的に免疫応答を指示／再指示することによって改変される疾患、障害または状態が挙げられる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１） 特定の細胞、組織または器官を標的化し、免疫応答を調節し、Ｂ細胞抗原、Ｔ細胞抗原および免疫刺激剤のうちの少なくとも１つを含む、ナノキャリア
を含む、組成物。
（項目２） 前記ナノキャリアが、Ｂ細胞抗原を含む、項目１に記載の組成物。
（項目３） 前記Ｂ細胞抗原が、前記ナノキャリアの表面上に存在する、項目２に記載の組成物。
（項目４） 前記Ｂ細胞抗原が、Ｂ細胞レセプターを活性化する密度で前記ナノキャリアの表面上に存在する、項目３に記載の組成物。
（項目５） 前記Ｂ細胞抗原が、前記ナノキャリアの中に被包されている、項目２に記載の組成物。
（項目６） 前記Ｂ細胞抗原が、前記ナノキャリアの表面上に存在し、そして該ナノキャリアの中にも被包されている、項目３または４に記載の組成物。
（項目７） 前記Ｂ細胞抗原が、前記ナノキャリアと会合されている、項目２〜５のいずれかに記載の組成物。
（項目８） 前記Ｂ細胞抗原が、前記ナノキャリアと共有結合的に会合されている、項目７に記載の組成物。
（項目９） 前記Ｂ細胞抗原が、免疫原性が低い抗原である、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１０） 前記Ｂ細胞抗原が、タンパク質またはペプチドである、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１１） 前記Ｂ細胞抗原が、小分子である、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１２） 前記Ｂ細胞抗原が、乱用性物質である、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１３） 前記Ｂ細胞抗原が、習慣性物質である、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１４） 前記習慣性物質が、ニコチン、麻薬、幻覚剤、刺激剤、鎮咳剤、トランキライザーまたは鎮静剤である、項目１３に記載の組成物。
（項目１５） 前記Ｂ細胞抗原が、トキシンである、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１６） 前記トキシンが、化学兵器由来または細菌戦の薬剤由来である、項目１５に記載の組成物。
（項目１７） 前記化学兵器または細菌戦の薬剤が、マスタードガス、リシン、ボツリヌストキシン、サキシトキシン、サリン、ホスフィン（ｐｈｏｓｐｈｅｎｅ）、クロロピクリンまたはルイサイトである、項目１６に記載の組成物。
（項目１８） 前記Ｂ細胞抗原が、有害な環境作用物質である、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目１９） 前記有害な環境作用物質が、ヒ素、鉛、水銀、塩化ビニル、ポリ塩化ビフェニル、ベンゼン、多環式芳香族炭化水素、カドミウム、ベンゾ（ａ）ピレン、ベンゾ（ｂ）フルオランテン、クロロホルム、ＤＤＴ、Ｐ，Ｐ’−、アロクロール１２５４、アロクロール１２６０、ジベンゾ（ａ，ｈ）アントラセン、トリクロロエチレン、ジエルドリン、六価クロムまたはＤＤＥ、Ｐ，Ｐ’である、項目１８に記載の組成物。
（項目２０） 前記Ｂ細胞抗原が、タンパク質またはペプチドである、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目２１） 前記Ｂ細胞抗原が、炭水化物である、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目２２） 前記炭水化物が、感染性因子由来である、項目２０または２１に記載の組成物。
（項目２３） 前記感染性因子が、細菌、真菌、ウイルス、原生動物または寄生生物である、項目２２に記載の組成物。
（項目２４） 前記細菌が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、ＶｉｂｒｉｏまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ細菌またはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍである、項目２３に記載の組成物。
（項目２５） 前記ウイルスが、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、はしかウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、耳下腺炎を引き起こすウイルス、狂犬病を引き起こすウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルトミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルスである、項目２３に記載の組成物。
（項目２６） 前記Ｂ細胞抗原が、自己抗原である、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目２７） 前記自己抗原が、タンパク質もしくはペプチド、リポタンパク質、脂質、炭水化物または核酸である、項目２６に記載の組成物。
（項目２８） 前記自己抗原が、酵素、構造タンパク質、分泌タンパク質、細胞表面レセプターまたはサイトカインである、項目２６に記載の組成物。
（項目２９） 前記サイトカインが、ＴＮＦ、ＩＬ−１またはＩＬ−６である、項目２８に記載の組成物。
（項目３０） 前記自己抗原が、コレステリルエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）、アルツハイマー病に関連するＡβタンパク質、該Ａβタンパク質の病理学的な形状をプロセシングするタンパク分解性酵素、アテローム性動脈硬化症に関連するＬＤＬ、またはＨＩＶ−１に対するコレセプターである、項目２６に記載の組成物。
（項目３１） 前記Ａβタンパク質の病理学的な形状をプロセシングする前記タンパク分解性酵素が、ベータ−セクレターゼである、項目３０に記載の組成物。
（項目３２） アテローム性動脈硬化症に関連する前記ＬＤＬが、酸化されているか、または最小限に改変されている、項目３０に記載の組成物。
（項目３３） 前記ＨＩＶ−１に対するコレセプターが、ＣＣＲ５である、項目３０に記載の組成物。
（項目３４） 前記Ｂ細胞抗原が、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原または代謝疾患酵素である、項目２〜８のいずれかに記載の組成物。
（項目３５） 前記感染症抗原が、ウイルス抗原である、項目３４に記載の組成物。
（項目３６） 前記ウイルス抗原が、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、はしかウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、耳下腺炎を引き起こすウイルス、狂犬病を引き起こすウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルトミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルス由来の抗原である、項目３５に記載の組成物。
（項目３７） 前記ナノキャリアが、Ｔ細胞抗原を含む、項目３６のいずれかに記載の組成物。
（項目３８） 前記ナノキャリアが、Ｂ細胞抗原とＴ細胞抗原の両方を含むとき、該Ｂ細胞抗原が、タンパク質抗原、ペプチド抗原または非タンパク質抗原である、項目３７に記載の組成物。
（項目３９） 前記Ｔ細胞抗原が、ユニバーサルＴ細胞抗原である、項目３７に記載の組成物。
（項目４０） 前記ユニバーサルＴ細胞抗原が、破傷風トキソイド、エプスタイン・バーウイルスまたはインフルエンザウイルスに由来する１つ以上のペプチドである、項目３９に記載の組成物。
（項目４１） 前記Ｔ細胞抗原が、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、接触感作物質、ハプテンまたは代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である、項目３７に記載の組成物。
（項目４２） 前記感染症抗原が、ウイルス抗原である、項目４１に記載の組成物。
（項目４３） 前記ウイルス抗原が、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、はしかウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、耳下腺炎を引き起こすウイルス、狂犬病を引き起こすウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルトミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルス由来の抗原である、項目４２に記載の組成物。
（項目４４） 前記ナノキャリアが、Ｂ細胞抗原およびＴ細胞抗原を含むとき、該Ｂ細胞抗原と該Ｔ細胞抗原とが、異なる抗原である、項目３７〜４３のいずれかに記載の組成物。
（項目４５） 前記ナノキャリアが、Ｂ細胞抗原およびＴ細胞抗原を含むとき、該Ｂ細胞抗原と該Ｔ細胞抗原とが、同じである、項目３７に記載の組成物。
（項目４６） 前記Ｔ細胞抗原が、前記ナノキャリアの中に被包されている、項目３７〜４５のいずれかに記載の組成物。
（項目４７） 前記Ｔ細胞抗原が、前記ナノキャリアと会合されている、項目３７〜４５のいずれかに記載の組成物。
（項目４８） 前記Ｔ細胞抗原が、前記ナノキャリアと共有結合的に会合されている、項目４７に記載の組成物。
（項目４９） 前記ナノキャリアが、免疫刺激剤を含む、項目１〜４８のいずれかに記載の組成物。
（項目５０） 前記免疫刺激剤が、前記ナノキャリアの表面上に存在する、項目４９に記載の組成物。
（項目５１） 前記免疫刺激剤が、前記ナノキャリアの中に被包されている、項目４９に記載の組成物。
（項目５２） 前記免疫刺激剤が、前記ナノキャリアの表面上に存在し、かつ、該ナノキャリアの中に被包されている、項目４９に記載の組成物。
（項目５３） 前記ナノキャリアの表面上の前記免疫刺激剤が、該ナノキャリアの中に被包されている該免疫刺激剤と異なる、項目５２に記載の組成物。
（項目５４） 前記ナノキャリアが、１つより多い免疫刺激剤を含む、項目４９に記載の組成物。
（項目５５） 前記１つより多い免疫刺激剤が、異なるものである、項目５４に記載の組成物。
（項目５６） 前記免疫刺激剤が、前記ナノキャリアと会合されている、項目４９〜５１のいずれかに記載の組成物。
（項目５７） 前記免疫刺激剤が、前記ナノキャリアと共有結合的に会合されている、項目５６に記載の組成物。
（項目５８） 前記免疫刺激剤が、トール様レセプター（ＴＬＲ）アゴニスト、サイトカインレセプターアゴニスト、ＣＤ４０アゴニスト、Ｆｃレセプターアゴニスト、ＣｐＧ含有核酸、補体レセプターアゴニストまたはアジュバントからなる群から選択される、項目４９〜５７のいずれかに記載の組成物。
（項目５９） 前記ＴＬＲアゴニストが、ＴＬＲ−１、ＴＬＲ−２、ＴＬＲ−３、ＴＬＲ−４、ＴＬＲ−５、ＴＬＲ−６、ＴＬＲ−７、ＴＬＲ−８、ＴＬＲ−９またはＴＬＲ−１０のアゴニストである、項目５８に記載の組成物。
（項目６０） 前記Ｆｃレセプターアゴニストが、Ｆｃ−ガンマレセプターアゴニストである、項目５８に記載の組成物。
（項目６１） 前記補体レセプターアゴニストが、ＣＤ２１またはＣＤ３５に結合する、項目５８に記載の組成物。
（項目６２） 前記補体レセプターアゴニストが、前記ナノキャリアの内因性補体オプソニン化を誘導する、項目６１に記載の組成物。
（項目６３） 前記サイトカインレセプターアゴニストが、サイトカインである、項目５８に記載の組成物。
（項目６４） 前記サイトカインレセプターアゴニストが、小分子、抗体、融合タンパク質またはアプタマーである、項目５８に記載の組成物。
（項目６５） 前記アジュバントが、サイトカイン生合成を誘導する、項目５８に記載の組成物。
（項目６６） 前記アジュバントが、ミョウバン、ＭＦ５９、ＱＳ２１、コレラ毒素、フロイントアジュバント、スクアレン、リン酸塩アジュバントまたはテトラクロロデカオキシドである、項目５８または６５に記載の組成物。
（項目６７） 前記ナノキャリアが、標的化部分をさらに含む、項目１〜６６のいずれかに記載の組成物。
（項目６８） 前記標的化部分が、前記ナノキャリアの表面上に存在する、項目６７に記載の組成物。
（項目６９） 前記標的化部分が、前記ナノキャリアと会合されている、項目６８に記載の組成物。
（項目７０） 前記標的化部分が、前記ナノキャリアと共有結合的に会合されている、項目６９に記載の組成物。
（項目７１） 前記標的化部分が、細胞の表面上に発現されるレセプターに結合する、項目６７〜７０のいずれかに記載の組成物。
（項目７２） 前記標的化部分が、可溶性レセプターに結合する、項目６７〜７０のいずれかに記載の組成物。
（項目７３） 前記可溶性レセプターが、補体タンパク質または前から存在する抗体である、項目７２に記載の組成物。
（項目７４） 前記標的化部分が、前記ナノキャリアを抗原提示細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞に送達するためのものである、項目６７〜７１のいずれかに記載の組成物。
（項目７５） 前記抗原提示細胞が、マクロファージである、項目７４に記載の組成物。（項目７６） 前記マクロファージが、被膜下洞マクロファージである、項目７５に記載の組成物。
（項目７７） 前記抗原提示細胞が、樹状細胞である、項目７４に記載の組成物。
（項目７８） 前記抗原提示細胞が、濾胞樹状細胞である、項目７４に記載の組成物。
（項目７９） 前記標的化部分が、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６９、マンノースレセプター、ＤＥＣ−２０５、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ２１／ＣＤ３５、ＣＸ３ＣＲ１またはＦｃレセプターに結合する分子である、項目６７〜７８のいずれかに記載の組成物。
（項目８０） 前記標的化部分が、ＣＤ１６９、ＣＸ３ＣＲ１またはＦｃレセプターに結合する分子である、項目７９に記載の組成物。
（項目８１） 前記標的化部分が、免疫グロブリンのＦｃ部を含む、項目７９または８０に記載の組成物。
（項目８２） 前記標的化部分が、ＩｇＧのＦｃ部を含む、項目８１に記載の組成物。
（項目８３） 前記ナノキャリアが、正のゼータ電位を有する、項目１〜６６のいずれかに記載の組成物。
（項目８４） 前記ナノキャリアが、その表面に１つ以上のアミン部分を含む、項目１〜６６のいずれかに記載の組成物。
（項目８５） 前記１つ以上のアミン部分が、１つ以上の脂肪族アミンである、項目８４に記載の組成物。
（項目８６） 前記ナノキャリアが、ラテックス粒子である、項目８３〜８５のいずれかに記載の組成物。
（項目８７） 前記ナノキャリアが、中性ｐＨにおいて正味の正電荷を有する、項目８３〜８５に記載の組成物。
（項目８８） 前記ナノキャリアが、１つ以上のポリマーから構成される、項目１〜８７のいずれかに記載の組成物。
（項目８９） 前記１つ以上のポリマーが、水溶性で非粘着性のポリマーである、項目８８に記載の組成物。
（項目９０） 前記水溶性で非粘着性のポリマーが、ＰＥＧ、ＰＥＯ、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシドである、項目８９に記載の組成物。
（項目９１） 前記１つ以上のポリマーが、生分解性ポリマーである、項目８８に記載の組成物。
（項目９２） 前記１つ以上のポリマーが、水溶性で非粘着性のポリマーと生分解性ポリマーとの結合体である生体適合性ポリマーである、項目８８に記載の組成物。
（項目９３） 前記生分解性ポリマーが、ＰＬＡ、ＰＧＡまたはＰＬＧＡである、項目９１または９２に記載の組成物。
（項目９４） 前記ナノキャリアが、自己組織化によって形成される、項目１〜９３のいずれかに記載の組成物。
（項目９５） 前記免疫応答が、誘導されるか、増強されるか、抑制されるか、指示されるか、または再指示される、項目１〜９４のいずれかに記載の組成物。
（項目９６） 前記ナノキャリアが、１つ以上の二次リンパ組織または器官を標的化する、項目１〜９５のいずれかに記載の組成物。
（項目９７） 前記二次リンパ組織または器官が、リンパ節、脾臓、パイエル板、虫垂または扁桃である、項目９６に記載の組成物。
（項目９８） 前記ナノキャリアが、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子である、項目１〜９７のいずれかに記載の組成物。
（項目９９） 前記粒子が、自己組織化によって形成される、項目９８に記載の組成物。
（項目１００） （ａ）ポリマーと抗原との結合体、（ｂ）ポリマーと免疫刺激剤との結合体、および／または（ｃ）ポリマーと標的化部分との結合体を含むナノキャリア
を含む、組成物。
（項目１０１） 前記ナノキャリアが、（ａ）ポリマーと抗原との結合体、および（ｂ）ポリマーと免疫刺激剤との結合体を含む、項目１００に記載の組成物。
（項目１０２） 前記ナノキャリアが、（ａ）ポリマーと抗原との結合体、および（ｃ）ポリマーと標的化部分との結合体を含む、項目１００に記載の組成物。
（項目１０３） 前記ナノキャリアが、（ｂ）ポリマーと免疫刺激剤との結合体、および（ｃ）ポリマーと標的化部分との結合体を含む、項目１００に記載の組成物。
（項目１０４） 前記ナノキャリアが、（ａ）ポリマーと抗原との結合体、（ｂ）ポリマーと免疫刺激剤との結合体、および（ｃ）ポリマーと標的化部分との結合体を含む、項目１００に記載の組成物。
（項目１０５） 前記１つまたは複数の結合体が、１つまたは複数の共有結合性の結合体である、項目１００〜１０４のいずれかに記載の組成物。
（項目１０６） 前記ナノキャリアが、自己組織化によって形成される、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子である、項目１００〜１０５のいずれかに記載の組成物。
（項目１０７） 前記抗原が、Ｂ細胞抗原である、項目１０１〜１０２および１０４〜１０６のいずれかに記載の組成物。
（項目１０８） 前記ナノキャリアが、ポリマーとＴ細胞抗原との結合体をさらに含む、項目１０７に記載の組成物。
（項目１０９） 前記結合体が、共有結合性の結合体である、項目１０８に記載の組成物。
（項目１１０） 前記抗原が、Ｔ細胞抗原である、項目１０１〜１０２および１０４〜１０６のいずれかに記載の組成物。
（項目１１１） 前記ナノキャリアが、ポリマーとＢ細胞抗原との結合体をさらに含む、項目１１０に記載の組成物。
（項目１１２） 前記結合体が、共有結合性の結合体である、項目１１１に記載の組成物。
（項目１１３） 以下の式Ｘ−Ｌ１−Ｙ−Ｌ２−Ｚの１つまたは複数の分子を含むナノキャリアであって、ここで、Ｘは、生分解性ポリマーであり、Ｙは、水溶性で非粘着性のポリマーであり、Ｚは、標的化部分、免疫刺激剤、免疫調節剤または薬学的作用物質であり、そして、Ｌ１およびＬ２は、結合剤であるか、または連結分子であり、ここで、ＹまたはＺのいずれかは、存在しないことがあり得るが、ＹとＺの両方が存在しないことはあり得ない、ナノキャリア
を含む、組成物。
（項目１１４） 前記ナノキャリアが、抗原、免疫刺激剤またはその両方を被包する、項目１１３に記載の組成物。
（項目１１５） Ｚが、抗原である、項目１１３または１１４に記載の組成物。
（項目１１６） Ｚが、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、習慣性物質または代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である、項目１１３〜１１５のいずれかに記載の組成物。
（項目１１７） 前記抗原が、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、習慣性物質または代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である、項目１１４に記載の組成物。
（項目１１８） Ｚが、細胞の表面上に発現されるレセプターに結合する標的化部分である、項目１１３、１１４または１１７のいずれかに記載の組成物。
（項目１１９） Ｚが、可溶性レセプターに結合する標的化部分である、項目１１３、１１４または１１７のいずれかに記載の組成物。
（項目１２０） 前記可溶性レセプターが、補体タンパク質または前から存在する抗体である、項目１１９に記載の組成物。
（項目１２１） 前記標的化部分が、前記ナノキャリアを抗原提示細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞に送達するためのものである、項目１１３〜１１８のいずれかに記載の組成物。
（項目１２２） 前記抗原提示細胞が、マクロファージである、項目１２１に記載の組成物。
（項目１２３） 前記マクロファージが、被膜下洞マクロファージである、項目１２２に記載の組成物。
（項目１２４） 前記抗原提示細胞が、樹状細胞である、項目１２１に記載の組成物。
（項目１２５） 前記抗原提示細胞が、濾胞樹状細胞である、項目１２１に記載の組成物。
（項目１２６） 前記標的化部分が、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６９、マンノースレセプター、ＤＥＣ−２０５、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ２１／ＣＤ３５、ＣＸ３ＣＲ１またはＦｃレセプターに結合する分子である、項目１１３〜１１８のいずれかに記載の組成物。
（項目１２７） 前記標的化部分が、ＣＤ１６９、ＣＸ３ＣＲ１またはＦｃレセプターに結合する分子である、項目１２６に記載の組成物。
（項目１２８） Ｙが、ＰＥＧ、ＰＥＯ、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシドである、項目１１３〜１２７のいずれかに記載の組成物。
（項目１２９） Ｘが、ＰＬＧＡ、ＰＬＡまたはＰＧＡである、項目１１３〜１２８のいずれかに記載の組成物。
（項目１３０） Ｚが、存在しない、項目１１３および１２１〜１２６のいずれかに記載の組成物。
（項目１３１） 前記ナノキャリアが、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子である、項目１１３〜１３０のいずれかに記載の組成物。
（項目１３２） 前記粒子が、自己組織化によって形成される、項目１３１に記載の組成物。
（項目１３３） 免疫刺激剤を含むナノキャリアを含む、組成物。
（項目１３４） 抗原および／または標的化部分をさらに含む、項目１３３に記載の組成物。
（項目１３５） 前記抗原、標的化部分および免疫刺激剤のうちの少なくとも１つが、水溶性で非粘着性のポリマーと結合体化されている、項目１３４に記載の組成物。
（項目１３６） 前記抗原、標的化部分および免疫刺激剤のうちの少なくとも１つが、生分解性ポリマーと結合体化されている、項目１３４に記載の組成物。
（項目１３７） 前記抗原、標的化部分および免疫刺激剤のうちの少なくとも１つが、生分解性ポリマーと結合体化されている水溶性で非粘着性のポリマーの結合体である生体適合性ポリマーと結合体化されている、項目１３４に記載の組成物。
（項目１３８） 前記抗原が、Ｂ細胞抗原である、項目１３４〜１３７のいずれかに記載の組成物。
（項目１３９） 前記Ｂ細胞抗原が、Ｔ細胞非依存性抗原である、項目１３８に記載の組成物。
（項目１４０） 前記ナノキャリアが、Ｔ細胞抗原をさらに含む、項目１３８または１３９に記載の組成物。
（項目１４１） 前記抗原が、Ｔ細胞抗原である、項目１３４〜１３７のいずれかに記載の組成物。
（項目１４２） 前記ナノキャリアが、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子である、項目１３４〜１４１のいずれかに記載の組成物。
（項目１４３） 前記粒子が、自己組織化によって形成される、項目１４２に記載の組成物。
（項目１４４） 小分子、標的化部分、免疫刺激剤およびＴ細胞抗原を含む、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子
を含む、組成物。
（項目１４５） 前記小分子が、ポリマーと結合体化されている、項目１４４に記載の組成物。
（項目１４６） 前記ポリマーが、水溶性で非粘着性のポリマーと生分解性ポリマーとの結合体である生体適合性ポリマーである、項目１４５に記載の組成物。
（項目１４７） 前記標的化部分が、ポリマーと結合体化されている、項目１４４〜１４６のいずれかに記載の組成物。
（項目１４８） 前記ポリマーが、水溶性で非粘着性のポリマーと生分解性ポリマーとの結合体である生体適合性ポリマーである、項目１４７に記載の組成物。
（項目１４９） 前記免疫刺激剤が、生分解性ポリマーと結合体化されている、項目１４４〜１４８のいずれかに記載の組成物。
（項目１５０） 前記生分解性ポリマーが、ＰＬＧＡ、ＰＬＡまたはＰＧＡである、項目１４６、１４８または１４９のいずれかに記載の組成物。
（項目１５１） 前記水溶性で非粘着性のポリマーが、ＰＥＧ、ＰＥＯ、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシドである、項目１４６または１４８に記載の組成物。
（項目１５２） 前記粒子が、自己組織化によって形成される、項目１４４〜１５０のいずれかに記載の組成物。
（項目１５３） 前記小分子が、習慣性物質、化学兵器由来の小分子または有害な環境作用物質である、項目１４４〜１５０のいずれかに記載の組成物。
（項目１５４） 特定の細胞または組織を標的化し、免疫応答を調節し、Ｂ細胞レセプターおよび免疫刺激剤を活性化する密度で表面上にＢ細胞抗原を含む、ナノキャリア
を含む、組成物。
（項目１５５） 前記ナノキャリアが、標的化部分をさらに含む、項目１５４に記載の組成物。
（項目１５６） 前記ナノキャリアが、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子である、項目１５５または１５５に記載の組成物。
（項目１５７） 前記粒子が、自己組織化によって形成される、項目１５６に記載の組成物。
（項目１５８） 前記組成物が、薬学的組成物であり、そして薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む、項目１〜１５７のいずれかに記載の組成物。
（項目１５９） 前記薬学的組成物が、ワクチン組成物である、項目１５８に記載の組成物。
（項目１６０） 抗原提示細胞標的化部分とナノキャリアとの結合体
を含む、薬学的組成物。
（項目１６１） 前記結合体が、共有結合性の結合体である、項目１６０に記載の薬学的組成物。
（項目１６２） 前記抗原提示細胞標的化部分が、マクロファージを標的化する、項目１６０または１６１に記載の薬学的組成物。
（項目１６３） 前記マクロファージが、被膜下洞マクロファージである、項目１６２に記載の薬学的組成物。
（項目１６４） 前記抗原提示細胞標的化部分が、樹状細胞を標的化する、項目１６０または１６１に記載の薬学的組成物。
（項目１６５） 前記抗原提示細胞標的化部分が、濾胞樹状細胞を標的化する、項目１６０または１６１に記載の薬学的組成物。
（項目１６６） 前記ナノキャリアが、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子である、項目１６０〜１６５のいずれかに記載の薬学的組成物。
（項目１６７） 前記粒子が、自己組織化によって形成される、項目１６６に記載の薬学的組成物。
（項目１６８） 免疫刺激剤とナノキャリアとの結合体
を含む、薬学的組成物。
（項目１６９） 前記結合体が、共有結合性の結合体である、項目１６８に記載の薬学的組成物。
（項目１７０） 前記ナノキャリアが、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子である、項目１６８または１６９に記載の薬学的組成物。
（項目１７１） 前記粒子が、自己組織化によって形成される、項目１７０に記載の薬学的組成物。
（項目１７２） 式Ｘ−Ｌ１−Ｙ−Ｌ２−Ｚを有する分子であって、ここで、Ｘは、生分解性ポリマーであり、Ｙは、水溶性で非粘着性のポリマーであり、Ｚは、標的化部分、免疫刺激剤、免疫調節剤または薬学的作用物質であり、そしてＬ１およびＬ２は、結合剤であるか、または連結分子であり、ここで、ＹまたはＺは、存在しないことがあり得るが、ＹとＺの両方が存在しないことはあり得ない、分子
を含む、組成物。
（項目１７３） 式Ｔ−Ｌ１−Ｘ−Ｌ２−Ｙ−Ｌ３−Ｚを有する分子であって、ここで、Ｔは、Ｔ細胞抗原であり、Ｘは、生分解性（ｄｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ）ポリマーであり、Ｙは、水溶性で非粘着性のポリマーであり、Ｚは、Ｂ細胞抗原であり、ここで、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３は、結合剤であるか、または連結分子であり、ここで、Ｔ、ＹおよびＺのうちのいずれか１つまたは２つは、存在しないことがあり得るが、Ｔ、ＹおよびＺの３つすべてが存在しないことはあり得ない、分子
を含む、組成物。
（項目１７４） Ｚが、抗原である、項目１７２に記載の組成物。
（項目１７５） Ｚが、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、ハプテン、習慣性物質または代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である、項目１７２〜１７４のいずれかに記載の組成物。（項目１７６） Ｚが、細胞の表面上に発現されるレセプターに結合する標的化部分である、項目１７５に記載の組成物。
（項目１７７） Ｚが、可溶性レセプターに結合する標的化部分である、項目１７５に記載の組成物。
（項目１７８） 前記可溶性レセプターが、補体または前から存在する抗体である、項目１７７に記載の組成物。
（項目１７９） 前記標的化部分が、抗原提示細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞を標的化するためのものである、項目１７５〜１７６のいずれかに記載の組成物。
（項目１８０） 前記抗原提示細胞が、マクロファージである、項目１７９に記載の組成物。
（項目１８１） 前記マクロファージが、被膜下洞マクロファージである、項目１８０に記載の組成物。
（項目１８２） 前記抗原提示細胞が、樹状細胞である、項目１７９に記載の組成物。
（項目１８３） 前記抗原提示細胞が、濾胞樹状細胞である、項目１７９に記載の組成物。
（項目１８４） 前記標的化部分が、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６９、マンノースレセプター、ＤＥＣ−２０５、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ２１／ＣＤ３５、ＣＸ３ＣＲ１またはＦｃレセプターに特異的に結合する分子である、項目１７５〜１７６のいずれかに記載の組成物。
（項目１８５） 前記標的化部分が、ＣＤ１６９、ＣＸ３ＣＲ１またはＦｃレセプターである、項目１８４に記載の組成物。
（項目１８６） Ｙが、ＰＥＧ、ＰＥＯ、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシドである、項目１７５〜１８８のいずれかに記載の組成物。
（項目１８７） Ｘが、ＰＬＧＡ、ＰＧＡまたはＰＬＡである、項目１７５〜１８６のいずれかに記載の組成物。
（項目１８８） Ｚが、存在しない、項目１７５および１８６〜１８８のいずれかに記載の組成物。
（項目１８９） Ｙが、存在しない、項目１７５および１８６〜１８７のいずれかに記載の組成物。
（項目１９０） 免疫刺激剤とポリマーとの結合体
を含む、薬学的組成物。
（項目１９１） 前記結合体が、共有結合性の結合体である、項目１９０に記載の組成物。
（項目１９２） 前記ポリマーが、生体適合性ポリマーである、項目１９０または１９１に記載の薬学的組成物。
（項目１９３） 前記生体適合性ポリマーが、生分解性ポリマーまたは水溶性で非粘着性のポリマーである、項目１９２に記載の薬学的組成物。
（項目１９４） 前記生分解性ポリマーが、合成のものである、項目１９３に記載の薬学的組成物。
（項目１９５） 前記薬学的組成物が、ナノキャリアを含み、ここで、前記結合体が、該ナノキャリアの成分である、項目１９０〜１９４のいずれかに記載の薬学的組成物。
（項目１９６） 前記ナノキャリアが、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子である、項目１９５に記載の薬学的組成物。
（項目１９７） 抗原をさらに含む、項目１９０〜１９６のいずれかに記載の薬学的組成物。
（項目１９８） 前記薬学的組成物が、抗原を含まない、項目１９０〜１９６のいずれかに記載の薬学的組成物。
（項目１９９） 標的化剤をさらに含む、項目１９０〜１９８のいずれかに記載の薬学的組成物。
（項目２００） 免疫刺激剤とポリマーとの結合体
を含む、ワクチン組成物。
（項目２０１） 前記結合体が、共有結合性の結合体である、項目２００に記載のワクチン組成物。
（項目２０２） 前記ポリマーが、水溶性で非粘着性のポリマーである、項目２００または２０１に記載のワクチン組成物。
（項目２０３） 前記ポリマーが、合成のものである、項目２０２に記載のワクチン組成物。
（項目２０４） 前記水溶性で非粘着性のポリマーが、ポリエチレングリコールである、項目２０２または２０３に記載のワクチン組成物。
（項目２０５） 前記ワクチン組成物が、ナノキャリアを含み、ここで、前記結合体が、該ナノキャリアの成分である、項目２００〜２０４のいずれかに記載のワクチン組成物。（項目２０６） 前記ナノキャリアが、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子である、項目２０５に記載のワクチン組成物。
（項目２０７） 抗原をさらに含む、項目２００〜２０６のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目２０８） 前記ワクチン組成物が、抗原を含まない、項目２００〜２０６のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目２０９） 標的化剤をさらに含む、項目２００〜２０８のいずれかに記載のワクチン組成物。
（項目２１０） 項目１〜２０９のいずれか１項に記載の組成物を、免疫応答を調節するのに有効な量で被験体に投与する工程
を包含する、方法。
（項目２１１） 前記組成物が、免疫応答を誘導するか、または増強するのに有効な量である、項目２１０に記載の方法。
（項目２１２） 前記被験体が、癌、感染症、非自己免疫性の代謝疾患もしくは変性疾患または嗜癖を有するか、または有しやすい、項目２１１に記載の方法。
（項目２１３） 前記感染症が、慢性ウイルス感染である、項目２１２に記載の方法。
（項目２１４） 前記慢性ウイルス感染が、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶの感染である、項目２１３に記載の方法。
（項目２１５） 前記感染症が、細菌感染であるか、または細菌感染によって引き起こされる、項目２１２に記載の方法。
（項目２１６） 前記被験体が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ感染、結核、マラリア、リーシュマニア症、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ感染を有するか、または有しやすい、項目２１２に記載の方法。
（項目２１７） 前記感染症が、真菌感染であるか、または真菌感染によって引き起こされる、項目２１２に記載の方法。
（項目２１８） 前記感染症が、寄生生物感染であるか、または寄生生物感染によって引き起こされる、項目２１２に記載の方法。
（項目２１９） 前記感染症が、原虫感染であるか、または原虫感染によって引き起こされる、項目２１２に記載の方法。
（項目２２０） 前記被験体が、インフルエンザを有するか、または有しやすい、項目２１２に記載の方法。
（項目２２１） 前記組成物が、免疫応答を抑制するのに有効な量で投与される、項目２１０に記載の方法。
（項目２２２） 前記組成物が、免疫応答を改変するのに有効な量で投与される、項目２１０に記載の方法。
（項目２２３） 前記被験体が、自己免疫疾患、アレルギーまたは喘息を有する、項目２２１または２２２に記載の方法。
（項目２２４） 前記自己免疫疾患が、疾患であり、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチ、Ｉ型真性糖尿病、炎症性腸疾患、甲状腺炎またはセリアック病である、項目２２３に記載の方法。
（項目２２５） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ナノキャリアを抗原提示細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞に送達するための標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２２６） 前記抗原提示細胞が、被膜下洞マクロファージである、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目２２７） 前記抗原提示細胞が、樹状細胞である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目２２８） 前記抗原提示細胞が、濾胞樹状細胞である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目２２９） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ナノキャリアを被膜下洞マクロファージに送達するための標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３０） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ナノキャリアを樹状細胞に送達するための標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３１） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ナノキャリアを濾胞樹状細胞に送達するための標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３２） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ＣＤ１１ｂに特異的に結合する標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３３） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ＣＤ１６９に特異的に結合する標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３４） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
マンノースレセプターに特異的に結合する標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３５） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ＤＥＣ−２０５に特異的に結合する標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３６） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ＣＤ１１ｃに特異的に結合する標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３７） Ｔ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ＣＤ２１／ＣＤ３５に特異的に結合する標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３８） 領域リンパ節におけるＴ細胞およびＢ細胞において免疫応答を刺激することができる免疫調節剤；
ナノキャリアを抗原提示細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞に送達するための標的化部分；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２３９） ナノキャリアの表面上に存在し、そしてＢ細胞または抗原提示細胞を刺激することができる、第１免疫調節剤；
該ナノキャリアの表面上に存在するか、または該ナノキャリアの中に被包されていて、そして抗原提示細胞によってプロセシングされることおよびＴ細胞に提示されることができる、第２免疫調節剤；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目２４０） Ｂ細胞における免疫応答の前記刺激が、免疫された被験体の抗体価を免疫されていない被験体の抗体価と比較することによって判定される、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２４１） 前記免疫された被験体における抗体価が、前記免疫されていない被験体よりも約１０倍高いと測定される場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２４０に記載のナノキャリア。
（項目２４２） 前記免疫された被験体における抗体価が、前記免疫されていない被験体よりも約１００倍高いと測定される場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２４０に記載のナノキャリア。
（項目２４３） 前記免疫された被験体における抗体価が、前記免疫されていない被験体よりも約１０００倍高いと測定される場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２４０に記載のナノキャリア。
（項目２４４） Ｂ細胞における免疫応答の前記刺激が、抗体親和性を測定することによって判定される、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２４５） 抗体親和性が、前記抗体の平衡解離定数を測定することによって判定される、項目２４４に記載のナノキャリア。
（項目２４６） 抗体が、１０−７Ｍ未満の平衡解離定数を有する場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２４５に記載のナノキャリア。
（項目２４７） 抗体が、１０−８Ｍ未満の平衡解離定数を有する場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２４５に記載のナノキャリア。
（項目２４８） 抗体が、１０−９Ｍ未満の平衡解離定数を有する場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２４５に記載のナノキャリア。
（項目２４９） 抗体が、１０−１０Ｍ未満の平衡解離定数を有する場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２４５に記載のナノキャリア。
（項目２５０） 抗体が、１０−１１Ｍ未満の平衡解離定数を有する場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２４５に記載のナノキャリア。
（項目２５１） 抗体が、１０−１２Ｍ未満の平衡解離定数を有する場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２４５に記載のナノキャリア。
（項目２５２） Ｂ細胞においてクラススイッチ組換えが起きている場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２５３） Ｂ細胞におけるクラススイッチ組換えが、該Ｂ細胞によって産生される抗体アイソタイプをＩｇＭからＩｇＧに切り換えさせる、項目２５２に記載のナノキャリア。
（項目２５４） Ｂ細胞における免疫応答の前記刺激が、抗原特異的抗体の親和性成熟を測定することによって判定される、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２５５） 長時間にわたって大量の高親和性抗体を産生し得る記憶Ｂ細胞または長命の形質細胞が形成されている場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２５６） 活発な胚中心反応が起きる場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２５７） 組織学解析を行うことによって、活発な胚中心反応が起きていると判定される、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２５８） リンパ組織の免疫蛍光法を行うことによって、活発な胚中心反応が起きていると判定される、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２５９） Ｂ細胞における免疫応答の刺激が、抗体アイソタイプを同定することによって判定される、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２６０） ＩｇＧアイソタイプ抗体を産生するＢ細胞が同定される場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２５９に記載のナノキャリア。
（項目２６１） Ｂ細胞における免疫応答の刺激が、中和アッセイにおいて抗体機能を解析することによって判定される、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２６２） 微生物の感染が、約１：１０の希釈度で中和される場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６１に記載のナノキャリア。
（項目２６３） 微生物の感染が、約１：１００の希釈度で中和される場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６１に記載のナノキャリア。
（項目２６４） 微生物の感染が、約１：１０００の希釈度で中和される場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６１に記載のナノキャリア。
（項目２６５） 微生物の感染が、約１：５０００の希釈度で中和される場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６１に記載のナノキャリア。
（項目２６６） 微生物の感染が、約１：１０，０００の希釈度で中和される場合に、Ｂ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６１に記載のナノキャリア。
（項目２６７） Ｔ細胞における免疫応答の刺激が、Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生を測定することによって判定される、項目２３９に記載のナノキャリア。
（項目２６８） 前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、ＩＬ−２またはＴＮＦαである、項目２６７に記載のナノキャリア。
（項目２６９） Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生が、細胞内のサイトカイン染色の後のフローサイトメトリーによって測定される、項目２６７に記載のナノキャリア。
（項目２７０） Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生が、表面捕捉サイトカイン染色の後のフローサイトメトリーによって測定される、項目２６７に記載のナノキャリア。
（項目２７１） Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生が、ＥＬＩＳＡによって培養上清中のサイトカイン濃度を測定することによって判断される、項目２６７に記載のナノキャリア。
（項目２７２） 抗原特異的Ｔ細胞の少なくとも１％が、サイトカインを産生する場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６９に記載のナノキャリア。
（項目２７３） 抗原特異的Ｔ細胞の少なくとも２５％が、サイトカインを産生する場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６９に記載のナノキャリア。
（項目２７４） 抗原特異的Ｔ細胞の少なくとも５０％が、サイトカインを産生する場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６９に記載のナノキャリア。
（項目２７５） 抗原特異的Ｔ細胞の少なくとも９０％が、サイトカインを産生する場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６９に記載のナノキャリア。
（項目２７６） 抗原特異的Ｔ細胞の実質的に１００％が、サイトカインを産生する場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２６９に記載のナノキャリア。
（項目２７７） Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生が、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定される、項目２６７に記載のナノキャリア。
（項目２７８） 免疫された被験体が、無処置コントロールよりも約１０倍多いサイトカイン産生細胞を含む場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２７７に記載のナノキャリア。
（項目２７９） 免疫された被験体が、無処置コントロールよりも約１００倍多いサイトカイン産生細胞を含む場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２７７に記載のナノキャリア。
（項目２８０） 免疫された被験体が、無処置コントロールよりも約１０００倍多いサイトカイン産生細胞を含む場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２７７に記載のナノキャリア。
（項目２８１） 免疫された被験体が、無処置コントロールよりも約１０，０００倍多いサイトカイン産生細胞を含む場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２７７に記載のナノキャリア。
（項目２８２） 免疫された被験体が、無処置コントロールよりも約１００，０００倍多いサイトカイン産生細胞を含む場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２７７に記載のナノキャリア。
（項目２８３） Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生が、Ｔ細胞の抗原誘導性増殖を測定することによって判断される、項目２６７に記載のナノキャリア。
（項目２８４） Ｔ細胞の抗原誘導性増殖が、被験サンプルにおけるＨ３−チミジンの取り込みを無処置コントロールにおけるＨ３−チミジンの取り込みと比較することによって判断される、項目２８３に記載のナノキャリア。
（項目２８５） 前記被験サンプルにおけるＨ３−チミジンの取り込みが、前記無処置コントロールよりも約１０倍高い場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２８４に記載のナノキャリア。
（項目２８６） 前記被験サンプルにおけるＨ３−チミジンの取り込みが、前記無処置コントロールよりも約５０倍高い場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２８４に記載のナノキャリア。
（項目２８７） 前記被験サンプルにおけるＨ３−チミジンの取り込みが、前記無処置コントロールよりも約１００倍高い場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２８４に記載のナノキャリア。
（項目２８８） 前記被験サンプルにおけるＨ３−チミジンの取り込みが、前記無処置コントロールよりも約１０００倍高い場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２８４に記載のナノキャリア。
（項目２８９） 前記被験サンプルにおけるＨ３−チミジンの取り込みが、前記無処置コントロールよりも約１０倍高い場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２８４に記載のナノキャリア。
（項目２９０） Ｔ細胞の抗原誘導性増殖が、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）希釈アッセイを行うことによって判断される、項目２８３に記載のナノキャリア。
（項目２９１） ＣＦＳＥ希釈度が、約１０％である場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２９０に記載のナノキャリア。
（項目２９２） ＣＦＳＥ希釈度が、約２５％である場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２９０に記載のナノキャリア。
（項目２９３） ＣＦＳＥ希釈度が、約５０％である場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２９０に記載のナノキャリア。
（項目２９４） ＣＦＳＥ希釈度が、約７５％である場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２９０に記載のナノキャリア。
（項目２９５） ＣＦＳＥ希釈度が、約１００％である場合に、Ｔ細胞における免疫応答が、刺激されていると言われる、項目２９１に記載のナノキャリア。
（項目２９６） 前記Ｔ細胞における免疫応答の刺激が、Ｔ細胞活性化の細胞性マーカーを測定することによって判定される、項目２６７に記載のナノキャリア。
（項目２９７） Ｔ細胞が、無処置コントロール細胞と比べて高レベルのＣＤ１１ａ ＣＤ２７、ＣＤ２５、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＯまたはＣＤ６９を発現する場合に、該Ｔ細胞は、刺激されていると言われる、項目２９６に記載のナノキャリア。
（項目２９８） Ｔ細胞が、無処置コントロール細胞と比べて低レベルのＬ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＣＤ４５ＲＡまたはＣＣＲ７を発現する場合に、該Ｔ細胞は、刺激されていると言われる、項目２９６に記載のナノキャリア。
（項目２９９） 前記Ｔ細胞における免疫応答の刺激が、エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞による抗原パルス標的細胞に対する細胞傷害性をアッセイすることによって判定される、項目２６７に記載のナノキャリア。
（項目３００） エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞による抗原パルス標的細胞に対する細胞傷害性をアッセイすることが、５１クロム（５１Ｃｒ）放出アッセイを用いて行われる、項目２９９に記載のナノキャリア。
（項目３０１） 前記免疫調節剤が、前記ナノキャリアと共有結合的に会合されている、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３０２） 前記免疫調節剤が、前記ナノキャリアと非共有結合的に会合されている、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３０３） 前記非共有結合的な会合が、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用または双極子−双極子相互作用によって媒介される、項目３０２に記載のナノキャリア。
（項目３０４） 第２免疫調節剤をさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３０５） 前記第２免疫調節剤が、Ｔ細胞における免疫応答を刺激することができる、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３０６） 前記第２免疫調節剤が、Ｂ細胞において免疫応答を刺激することができる、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３０７） 前記第２免疫調節剤が、抗原提示細胞において免疫応答を刺激することができる、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３０８） 標的化部分をさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３０９） 複数の標的化部分をさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３１０） 前記複数の標的化部分の個別の標的化部分のすべてが、互いに同一である、項目３０９に記載のナノキャリア。
（項目３１１） 前記複数の標的化部分の個別の標的化部分のすべてが、互いに同一でない、項目３０９に記載のナノキャリア。
（項目３１２） 前記標的化部分が、抗体、抗体のフラグメント、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、アプタマー、オリゴヌクレオチド、炭水化物、脂質、グリコサミノグリカン、アフィボディ、アドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎ）、シュピーゲルマー、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）および小分子からなる群から選択される、項目３０８に記載のナノキャリア。
（項目３１３） 前記標的化部分が、抗原提示細胞を標的化する、項目３０８に記載のナノキャリア。
（項目３１４） 前記標的化部分が、樹状細胞（ＤＣ）、被膜下洞マクロファージ（ＳＣＳ−Ｍｐｈ）、Ｂ細胞および濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）からなる群から選択される抗原提示細胞を標的化する、項目３０８に記載のナノキャリア。
（項目３１５） 前記標的化部分が、樹状細胞を標的化する、項目３０８に記載のナノキャリア。
（項目３１６） 前記標的化部分が、ＤＥＣ−２０５（ＣＤ２０５）を標的化する、項目３０８に記載のナノキャリア。
（項目３１７） 前記標的化部分が、ＣＤ１６９を標的化する、項目３０８に記載のナノキャリア。
（項目３１８） 前記標的化部分が、ＣＤ１１ｂを標的化する、項目３０８に記載のナノキャリア。
（項目３１９） 前記標的化部分が、マンノースレセプターを標的化する、項目３０８に記載のナノキャリア。
（項目３２０） 前記標的化部分が、ＣＤ２１／ＣＤ３５（ＣＲ２／ＣＲ１）を標的化する、項目３０８に記載のナノキャリア。
（項目３２１） 免疫刺激剤をさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３２２） 前記免疫刺激剤が、トール様レセプター（ＴＬＲ）アゴニスト、サイトカインレセプターアゴニスト、ＣＤ４０アゴニスト、Ｆｃレセプターアゴニストおよび補体レセプターアゴニストからなる群から選択される、項目３２１に記載のナノキャリア。（項目３２３） ＴＬＲ−７アゴニストをさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３２４） ＣｐＧをさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３２５） ＴＬＲ−４アゴニストをさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３２６） 細菌のリポ多糖（ＬＰＳ）をさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３２７） ＣＤ４０アゴニストをさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。（項目３２８） ＴＬＲ−２アゴニストをさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３２９） Ｆｃ−ガンマレセプターアゴニストをさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３３０） 補体レセプターアゴニストをさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３３１） 前記補体レセプターアゴニストが、ＣＤ２１またはＣＤ３５に結合する、項目３２４に記載のナノキャリア。
（項目３３２） サイトカインをさらに含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３３３） 前記ナノキャリアが、脂質膜を含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３３４） 前記ナノキャリアが、ポリマーマトリックスを含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３３５） 前記ナノキャリアが、金属性粒子を含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３３６） 前記ナノキャリアが、両親媒性の実体を含むリポソームである、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３３７） 前記両親媒性の実体が、前記リポソームの内面の中に配置される、項目３３６に記載のナノキャリア。
（項目３３８） 前記両親媒性の実体が、ホスファチジルコリン、脂質Ａ、コレステロール、ドリコール、スフィンゴシン（ｓｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）、スフィンゴミエリン、セラミド、セレブロシド、スルファチド、フィトスフィンゴシン、ホスファチジルエタノールアミン、グリコシルセラミド、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸およびリゾホスファチドからなる群から選択される、項目３３６に記載のナノキャリア。
（項目３３９） 前記ナノキャリアが、リポソーム−ポリマーベースのナノキャリアである、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４０） 前記ナノキャリアが、脂質単層ベースのナノキャリアである、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４１） 第２免疫調節剤が、逆ミセルの中に配置される、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４２） 前記賦形剤が、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマレート、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、それらの誘導体、それらの組み合わせ、およびそれらのコポリマーからなる群から選択されるポリマーである、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４３） 前記賦形剤が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）；ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）とＰＥＧとのコポリマー；ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）；ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）とＰＥＧとのコポリマー；ポリグリコール酸；ポリグリコール酸とＰＥＧとのコポリマー；ポリ−Ｌ−乳酸；ポリ−Ｌ−乳酸とＰＥＧとのコポリマー；ポリ−Ｄ−乳酸；ポリ−Ｄ−乳酸とＰＥＧとのコポリマー；ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸；ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸とＰＥＧとのコポリマー；ポリ−Ｌ−ラクチド；ポリ−Ｌ−ラクチドとＰＥＧとのコポリマー；ポリ−Ｄ−ラクチド；ポリ−Ｄ−ラクチドとＰＥＧとのコポリマー；ポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチド；ポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチドとＰＥＧとのコポリマー；ポリ（オルトエステル）；ポリ（オルトエステル）とＰＥＧとのコポリマー；ポリ（カプロラクトン）；ポリ（カプロラクトン）とＰＥＧとのコポリマー；ポリリジン；ポリリジンとＰＥＧとのコポリマー；ポリ（エチレンイミン）；ポリ（エチレンイミン）とＰＥＧとのコポリマー；ポリヒドロキシ酸；ポリ無水物；ポリ（Ｌ−ラクチド−コ−Ｌ−リジン）；ポリ（セリンエステル）；ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）；ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］；それらの誘導体；それらの組み合わせ；およびそれらのコポリマーからなる群から選択されるポリマーである、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４４） 前記賦形剤が、ポリエチレングリコールとポリ（ラクチド−コ−グリコリド）とのコポリマーである、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４５） 前記賦形剤が、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４６） 前記賦形剤が、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、脂質およびポリエチレングリコールを含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４７） 前記賦形剤が、脂質を含む、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４８） 前記脂質が、ホスファチジルコリン、脂質Ａ、コレステロール、ドリコール、スフィンゴシン（ｓｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）、スフィンゴミエリン、セラミド、グリコシルセラミド、セレブロシド、スルファチド、フィトスフィンゴシン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸およびリゾホスファチドからなる群から選択される、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３４９） 前記ナノキャリアの直径が、およそ１０ｎｍからおよそ２００ｎｍの範囲である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５０） 前記ナノキャリアの直径が、およそ５０ｎｍからおよそ２００ｎｍの範囲である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５１） 前記ナノキャリアの直径が、およそ１０ｎｍからおよそ１５０ｎｍの範囲である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５２） 前記ナノキャリアの直径が、およそ５０ｎｍからおよそ１５０ｎｍの範囲である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５３） 第１免疫調節剤が、Ｂ細胞抗原である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５４） 第１免疫調節剤が、病原体由来タンパク質である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５５） 第１免疫調節剤が、ペプチドのコレクションである、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５６） 第２免疫調節剤が、Ｔ細胞抗原である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５７） 第２免疫調節剤が、病原体由来タンパク質である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５８） 第２免疫調節剤が、ペプチドのコレクションである、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３５９） 第１免疫調節剤と第２免疫調節剤とが、互いに同一である、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３６０） 第１免疫調節剤と第２免疫調節剤とが、互いに同一でない、項目２２５に記載のナノキャリア。
（項目３６１） 治療有効量の項目２２５に記載のナノキャリアおよび薬学的に許容可能な賦形剤を含む、薬学的組成物。
（項目３６２） 治療有効量の項目２２５に記載のナノキャリアおよびアジュバントを含む、薬学的組成物。
（項目３６３） 前記アジュバントが、ミョウバン、ＭＦ５９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＱＳ２１、コレラ毒素、フロイントアジュバント、スクアレン、リン酸塩アジュバントまたはテトラクロロデカオキシドである、項目３６２に記載の薬学的組成物。
（項目３６４） 項目２２５に記載のナノキャリアを調製する方法であって、該方法は、
免疫調節剤；
ポリマー；
脂質
を提供する工程；および
該免疫調節剤、標的化部分、ポリマーおよび脂質を混合する工程；および
該ナノキャリアの自己組織化を生じさせることを可能にする工程
を包含する、方法。
（項目３６５） 項目２２５に記載のナノキャリアを調製する方法であって、該方法は、
免疫調節剤；
粒子；
脂質
を提供する工程；および
該免疫調節剤、標的化部分、粒子および脂質を混合する工程；および
該ナノキャリアの自己組織化を生じさせることを可能にする工程
を包含する、方法。
（項目３６６） 標的化部分を提供する工程をさらに包含する、項目３６４または３６５に記載の方法。
（項目３６７） 項目２２５に記載のナノキャリアを調製する方法であって、該方法は、
疎水性免疫調節剤；および
脂質
を含む第１混合物を提供する工程；および
親水性免疫調節剤；および
水溶液
を含む第２混合物を提供する工程；および
該第１混合物と該第２混合物とを併せる工程であって、ここで、該第１混合物と該第２混合物とを併せることにより、自己組織化によってナノキャリアが形成される、工程
を包含する、方法。
（項目３６８） 被験体にワクチン接種する方法であって、該方法は、
治療有効量の項目２２５に記載のナノキャリアを被験体に投与する工程
を包含する、方法。
（項目３６９） 免疫調節剤を含む外側部であって、ここで、該免疫調節剤が、Ｂ細胞およびＴ細胞を刺激することができる、外側部；
内側部；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目３７０） 前記内側部が、免疫調節剤を含み、ここで、該内側部の該免疫調節剤が、抗原提示細胞によってプロセシングされることおよびＴ細胞に提示されることができる、項目３６９に記載のナノキャリア。
（項目３７１） 免疫調節剤を含む外側部であって、ここで、該免疫調節剤は、Ｂ細胞および抗原提示細胞を刺激することができる、外側部；
内側部；および
賦形剤
を含む、ナノキャリア。
（項目３７２） 前記免疫調節剤が、抗原提示細胞によってプロセシングされることおよびＴ細胞に提示されることができる、項目３７１に記載のナノキャリア。
（項目３７３） 前記外側部が、第２免疫調節剤を含み、ここで、該外側部の該第２免疫調節剤は、抗原提示細胞によってプロセシングされることおよびＴ細胞に提示されることができる、項目３７１に記載のナノキャリア。
（項目３７４） 前記内側部が、免疫調節剤を含み、ここで、該内側部の該免疫調節剤は、抗原提示細胞によってプロセシングされることおよびＴ細胞に提示されることができる、項目３７１に記載のナノキャリア。
（項目３７５） 前記外側部が、脂質である、項目３６９に記載のナノキャリア。
（項目３７６） 前記外側部の脂質が、脂質二重層を含む、項目３７５に記載のナノキャリア。
（項目３７７） 前記外側部の脂質が、脂質単層である、項目３７５に記載のナノキャリア。
（項目３７８） 免疫調節剤が、前記外側部の脂質の外面と会合されている、項目３７５に記載のナノキャリア。
（項目３７９） 免疫調節剤が、前記外側部の脂質の内面と会合されている、項目３７５に記載のナノキャリア。
（項目３８０） 免疫調節剤が、前記外側部の脂質の中に包埋されている、項目３７５に記載のナノキャリア。
（項目３８１） 免疫調節剤が、前記脂質二重層の内腔の中に包埋されている、項目３７６に記載のナノキャリア。
（項目３８２） 前記外側部の脂質の内面が、両親媒性の実体と会合されている、項目３７５に記載のナノキャリア。
（項目３８３） 前記内側部が、ポリマーマトリックスを含む、項目３６９に記載のナノキャリア。
（項目３８４） 前記ポリマーマトリックスが、架橋ポリマーネットワークを含む、項目３８３に記載のナノキャリア。
（項目３８５） 第２免疫調節剤が、前記ポリマーマトリックス全体に分布している、項目３８３に記載のナノキャリア。
（項目３８６） 少なくとも１つの免疫調節剤が、逆ミセルの中に被包されており、ここで、該逆ミセルは、前記内側部のポリマー部の中に含められている、項目３８３に記載のナノキャリア。
当業者によって認識されるように、免疫系の調節は、とりわけ、内科療法（例えば、感染症、癌、アレルギー、喘息（アレルギー性喘息を含む）、自己免疫疾患（関節リウマチを含む）の予防および／または処置、移植に関連して移植片拒絶を回復させる免疫抑制、習慣性（ａｄｄｉｃｔｉｖｅ）物質に対する免疫化、ならびにバイオハザードおよび他の有毒物質に対する免疫化のためのもの）と関連して有用である。免疫系の調節は、産業および学術における研究の環境におけるツール（例えば、抗体を産生させるために動物を免疫するためのツール）としても有用である。本発明のナノキャリアは、これらのすべての目的のために使用され得る。
本発明の１つの局面は、ワクチンの供給である。本発明に従うワクチンは、代表的には、抗原を含む。１つの実施形態において、抗原は、共有結合性または非共有結合性の手段によってナノキャリアと物理的に「結合している」。非共有結合的な結合としては、例えば、イオン結合、疎水性結合、物理的な封入などが挙げられ、これらのすべてが、以下でさらに詳細に説明される。それ自体が抗原を有するそのようなナノキャリアは、以下でワクチンナノキャリアと称されるカテゴリーに含められる。別の実施形態において、ナノキャリアは、それと、免疫応答、好ましくは抗原に対する免疫応答を増強するため、抑制するため、指示するためまたは再指示するための免疫刺激剤とを結合している。この場合、その免疫刺激剤が結合しているナノキャリアが結合した薬剤の調製物と抗原が混合されることにより、ワクチンが形成され得る。当然のことながら、抗原も、以下に記述するように、免疫刺激剤が結合しているのと同じナノキャリアをはじめとしたナノキャリアに結合され得る。
抗原は、いくつかの実施形態において、受動的に送達されることが企図される（例えば、被験体がアレルゲンに環境的に曝露される場合）。この例において、免疫刺激剤と結合しているナノキャリアは、抗原なしで投与され得、抗原は、環境的に送達され得る。例えば、その免疫刺激剤は、免疫系をＴｈ２応答からＴｈ１応答に再指示する薬剤であり得る。それゆえ、いくつかの実施形態において、投与される薬剤／ナノキャリアと環境的に送達される抗原との組み合わせは、免疫応答をＴｈ２応答から離れるように再指示するように作用し、ここでＴｈ２応答は、一般に、ＩｇＥ産生と関連するものであり、サイトカインＩＬ−４によって主要なＴｈ１応答（ＩｇＧ産生と関連するものであり、ＩＬ−１２およびインターフェロン−ガンマによって駆動される）に向かうように駆動される。それゆえ、いくつかの実施形態において、投与される薬剤／ナノキャリアおよび環境的に送達される抗原は、ＩｇＥ抗体の存在を減少させ、それによってアレルギーが処置される。抗原に対する予想される環境的な曝露がなかったとしても、ナノキャリアに結合した免疫刺激剤を単剤治療として投与すること、Ｔｈ１に向かうように免疫応答を再指示すること、または好酸球浸潤などの抗原投与と無関係な操作され得る免疫系の局面に影響を及ぼすことも可能である。
多くの例における本発明の調製物は、１つ以上のナノキャリアを含む。いくつかの実施形態において、調製物は、免疫調節剤、免疫刺激剤および標的化剤のうちの１つ以上（すべてではない）に結合したナノキャリアを含む。いくつかの実施形態において、調製物は、免疫調節剤、免疫刺激剤および標的化剤のうちの１つ以上（すべてではない）を有する部分集団とナノキャリアとの混合物である。いくつかの実施形態において、調製物は、様々なナノキャリアの混合物であり、各ナノキャリアは、免疫調節剤、免疫刺激剤および標的化剤のうちの１つ以上（すべてではない）を有する。調製物は、同様に、ナノキャリアの１つであり得、ここで、各ナノキャリアは、それと、免疫調節剤、免疫刺激剤および標的化剤のすべてとを結合している。この例では、ナノキャリア自体は、それらが送達する薬剤とは別で、同じであってもよいし、異なっていてもよい。
本発明のナノキャリアが、免疫系を刺激する際に強力であるという発見が重要である。本ナノキャリアが、自然にまたは以前のワクチン技術において抗原に曝露されたときに免疫系が「見る」ものを模倣し、そして免疫学的観点から、それを改善するように、適応させられ得るという発見が重要である。この点において、ナノキャリアに共有結合的に結合している場合、アジュバントの活性が著しく増強され得ることが予想外に発見されている。また、標的化剤を用いなくても、ナノキャリアが、免疫調節剤または免疫刺激剤を適切な免疫細胞に標的化することを助け得ることも、予想外に発見されている。
本明細書中に記載される系は、改善された免疫調節をもたらす様式で免疫系に影響を及ぼすパラメータの操作を可能にする。本発明の１つの重要な局面は、ナノキャリアが、サイズ、薬剤の密度、標的化の程度および位置、分解、薬剤の放出などに関して制御可能である点である。本発明の種々の局面は、以下でより詳細に説明されるこれらの利点の１つ以上を達成する。特に、免疫調節調製物、そのような調製物の合成ナノキャリア成分、特定のおよび好ましいナノキャリア、特定のおよび好ましい免疫調節剤、免疫刺激剤ならびに標的化剤、本発明のナノキャリアの構成部分および構成単位、ならびにそのようなナノキャリアを製造するための方法（自己組織化されるナノキャリアが関与する好ましい方法を含む）が下記に記載される。さらに、弱い抗原およびＴ細胞によって認識されない抗原（例えば、炭水化物抗原および小分子抗原）と関連する頑強な免疫調節をもたらすための調製物および系が記載される。いくつかの局面において、ナノキャリア（例えば、特定の器官、組織、細胞または細胞下の場所を標的化するナノキャリア）を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、１つ以上の二次リンパ組織または器官を標的化する。いくつかの実施形態において、二次リンパ組織または器官は、リンパ節、脾臓、パイエル板、虫垂または扁桃である。
本ナノキャリアの骨格（ｓｃａｆｆｏｌｄ）（および本明細書中に提供される薬剤と会合され得るか、それによって被包され得るもの）は、ポリマー分子および／または非ポリマー分子から構成され得る。したがって、そのナノキャリア骨格は、タンパク質ベース、核酸ベースまたは炭水化物ベースであり得る。その骨格は、いくつかの実施形態において、高分子である。いくつかの実施形態において、骨格は、アミノ酸または核酸から構成される。いくつかの実施形態において、骨格は、核酸などの分子の架橋鎖から構成される。いくつかの実施形態において、骨格は、ＲＮＡｉ架橋鎖から構成される。いくつかの実施形態において、骨格は、ポリアミノベースである。ナノキャリアは、１つまたは複数の脂質ベースのナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属性ナノ粒子、界面活性物質ベースのエマルジョン、デンドリマーおよび／または脂質−ポリマーナノ粒子などのナノ材料の組み合わせを用いて開発されるナノ粒子であり得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、１つ以上のポリマーから構成される。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマーである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）である。いくつかの実施形態において、ポリマーは、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシドである。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリマーは、生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態において、１つ以上のポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマーと生分解性ポリマーとの結合体である生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、生分解性ポリマーは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）またはポリ（乳酸／グリコール酸）（ＰＬＧＡ）である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ＰＥＧ−ＰＬＧＡポリマーから構成される。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、自己組織化によって形成される。自己組織化とは、ナノキャリアを予想通りかつ再現可能なように形成する予測可能な様式でそれら自体を方向づける成分を用いるナノキャリアの形成のプロセスのことを指す。いくつかの実施形態において、ナノキャリアが、互いに対してそれら自体を方向付ける両親媒性のバイオマテリアルを用いて形成されることにより、予測可能な寸法、構成物質および構成物質配置のナノキャリアが形成される。本発明によれば、ナノキャリアが自己組織化するときに、そのナノキャリア上／そのナノキャリア中の薬剤の局在および密度に関して再現性のあるパターンが存在するように、両親媒性のバイオマテリアルは、免疫調節剤、免疫刺激剤および／または標的化剤をナノキャリアと結び付けているかもしれない。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子（ｐｉｃｏｐａｒｔｉｃｌｅ）である。いくつかの実施形態において、その微小粒子、ナノ粒子またはピコ粒子は、自己組織化する。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、正のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、中性ｐＨにおいて正味の正電荷を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、その表面に１つ以上のアミン部分を含む。いくつかの実施形態において、そのアミン部分は、第１級、第２級、第３級または第４級アミンである。いくつかの実施形態において、アミン部分は、脂肪族アミンである。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、アミン含有ポリマーを含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、アミン含有脂質を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、中性ｐＨにおいて正に帯電したタンパク質またはペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ラテックス粒子である。いくつかの実施形態において、表面上に１つ以上のアミン部分を有するナノキャリアは、中性ｐＨにおいて正味の正電荷を有する。
本明細書中に記載される組成物のナノキャリアは、いくつかの実施形態において、５００ｎｍ未満の幾何平均直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、５０ｎｍより大きいが、５００ｎｍ未満の幾何平均直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の幾何平均直径は、約６０ｎｍ、７５ｎｍ、１００ｎｍ、１２５ｎｍ、１５０ｎｍ、１７５ｎｍ、２００ｎｍ、２２５ｎｍ、２５０ｎｍ、２７５ｎｍ、３００ｎｍ、３２５ｎｍ、３５０ｎｍ、３７５ｎｍ、４００ｎｍ、４２５ｎｍ、４５０ｎｍまたは４７５ｎｍである。いくつかの実施形態において、幾何平均直径は、１００〜４００ｎｍ、１００〜３００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍまたは１００〜２００ｎｍである。いくつかの実施形態において、幾何平均直径は、６０〜４００ｎｍ、６０〜３５０ｎｍ、６０〜３００ｎｍ、６０〜２５０ｎｍまたは６０〜２００ｎｍである。いくつかの実施形態において、幾何平均直径は、７５〜２５０ｎｍである。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、５００ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、５０ｎｍより大きいが５００ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、約６０ｎｍ、７５ｎｍ、１００ｎｍ、１２５ｎｍ、１５０ｎｍ、１７５ｎｍ、２００ｎｍ、２２５ｎｍ、２５０ｎｍ、２７５ｎｍ、３００ｎｍ、３２５ｎｍ、３５０ｎｍ、３７５ｎｍ、４００ｎｍ、４２５ｎｍ、４５０ｎｍまたは４７５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、１００〜４００ｎｍ、１００〜３００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍまたは１００〜２００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、６０〜４００ｎｍ、６０〜３５０ｎｍ、６０〜３００ｎｍ、６０〜２５０ｎｍまたは６０〜２００ｎｍの直径を有する。前述の実施形態のいくつかにおいて、ナノキャリアは、ナノ粒子である。
本明細書中に提供されるナノキャリアは、免疫応答を調節するため（例えば、増強するため、抑制するため、指示するためまたは再指示するため）に使用され得、そして免疫調節剤、免疫刺激剤および標的化剤のうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、Ｂ細胞抗原、Ｔ細胞抗原、免疫刺激剤および標的化剤のうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、Ｂ細胞抗原、Ｔ細胞抗原、免疫刺激剤および標的化剤のうちの少なくとも２つを含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、Ｂ細胞抗原、Ｔ細胞抗原、免疫刺激剤および標的化剤のうちの少なくとも３つを含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、Ｂ細胞抗原、Ｔ細胞抗原、免疫刺激剤および標的化剤のすべてを含む。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、Ｂ細胞抗原を含む。そのＢ細胞抗原は、ナノキャリアの表面上に存在し得るか、ナノキャリアの中に被包され得るか、またはその両方であり得る。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、Ｂ細胞レセプターを活性化する密度でナノキャリアの表面上に存在する。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ナノキャリアと会合されている。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ナノキャリアと共有結合的に会合されている。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ナノキャリアと非共有結合的に会合されている。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、免疫原性が低い（ｐｏｏｒｌｙ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ）抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、小分子である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、習慣性物質である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、トキシンである。いくつかの実施形態において、ナノキャリア内に封入されるためのトキシンは、完全な分子またはその一部である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、Ｔ細胞抗原ではない。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、炭水化物である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、習慣性物質または代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である。
アレルゲンとは、感受性被験体においてアレルギー応答を誘導し得る物質（抗原）のことを指す。アレルゲンのリストは、莫大であり、花粉、昆虫の毒液、動物麟屑塵、真菌胞子および薬物（例えば、ペニシリン）が挙げられる。アレルゲンは、食物アレルゲンも包含する。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、Ｔ細胞抗原を含む。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、ナノキャリアの表面上に存在するか、ナノキャリアの中に被包されるか、またはその両方である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、ナノキャリアと会合されている。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、ナノキャリアと共有結合的に会合されている。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、ナノキャリアと非共有結合的に会合されている。いくつかの実施形態において、抗原は、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、習慣性物質または代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、「ユニバーサル」Ｔ細胞抗原（すなわち、Ｔ細胞の補助を刺激するために、炭水化物を含む無関係のＢ細胞抗原とともに使用され得るもの）である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化部分をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、Ｂ細胞抗原とＴ細胞抗原の両方を含む。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原とＴ細胞抗原とは、異なる抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原とＴ細胞抗原とは、同じ抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、ナノキャリアの表面上に存在する（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合されている）か、またはナノキャリアの表面上に存在し（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合し）、かつ、ナノキャリアの中に被包されている（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合されている）のに対し、Ｔ細胞抗原は、ナノキャリアの表面上に存在する（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合されている）か、ナノキャリアの中に被包されている（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合されている）か、またはナノキャリアの表面上に存在し（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合し）、かつ、ナノキャリアの中に被包されている（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合されている）。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアが、Ｂ細胞抗原とＴ細胞抗原の両方を含む場合、そのナノキャリアは、免疫刺激剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの表面上に存在し、そして／またはナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアと会合されている。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアと共有結合的に会合されている。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアと非共有結合的に会合されている。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアが、Ｂ細胞抗原とＴ細胞抗原の両方を含む場合、そのナノキャリアは、標的化剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、標的化剤は、ナノキャリアの表面上に存在する。いくつかの実施形態において、標的化剤は、ナノキャリアと会合されている。いくつかの実施形態において、標的化剤は、ナノキャリアと共有結合的に会合されている。いくつかの実施形態において、標的化剤は、ナノキャリアと非共有結合的に会合されている。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアが、Ｂ細胞抗原とＴ細胞抗原の両方を含む場合、そのナノキャリアは、免疫刺激剤および標的化剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの表面上に存在し（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合し）、そして／またはナノキャリアの中に被包されている（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合されている）のに対し、標的化剤は、ナノキャリアの表面上に存在する（例えば、共有結合的または非共有結合的に会合されている）。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの表面上に存在する。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの表面上に存在し、かつ、ナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの表面上に存在する免疫刺激剤は、ナノキャリアの中に被包されている免疫刺激剤と異なる。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの表面上に存在する免疫刺激剤とナノキャリアの中に被包されている免疫刺激剤とは、同じである。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、１つより多い種類の免疫刺激剤を含み、その場合、それらの免疫刺激剤は、異なるものである。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、免疫刺激剤および抗原を含む。いくつかの実施形態において、抗原は、Ｂ細胞抗原またはＴ細胞抗原である。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、免疫抑制剤（免疫応答を抑制する）である。いくつかの実施形態において、免疫抑制剤は、シクロスポリン、ステロイド、メトトレキサートまたはＴ細胞活性化を妨害する任意の薬剤である。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、制御性Ｔ細胞を誘導する（例えば、ＴＧＦ−β、ラパマイシンまたはレチノイン酸）。いくつかの実施形態において、免疫抑制剤または制御性Ｔ細胞を誘導する薬剤は、抗原に対する寛容の獲得を促進する。ナノキャリアは、いくつかの実施形態において、標的化剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、被験体において免疫系を抑制するためおよび／または寛容を促進するために、使用され得る。
ナノキャリアが免疫刺激剤を含むいくつかの実施形態において、そのナノキャリアは、Ｂ細胞抗原および／またはＴ細胞抗原をさらに含む。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、免疫原性が低い抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、小分子である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、炭水化物である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、習慣性物質である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、トキシンである。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、習慣性物質または代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、ユニバーサルＴ細胞抗原である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化剤をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、被験体において免疫原性が低い抗原（例えば、小分子または炭水化物）に対する免疫応答を誘導するためまたは増強するために、使用され得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、被験体において習慣性物質に対する免疫応答を誘導するためまたは増強するために、使用され得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、被験体においてトキシンに対する免疫応答を誘導するためまたは増強するために、使用され得る。ナノキャリアは、いくつかの実施形態において、嗜癖を有するか、または嗜癖を起こしやすい被験体を処置するために使用され得る。ナノキャリアは、いくつかの実施形態において、トキシンに曝露されているか、または曝露される被験体を処置するために使用され得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、感染症、癌、アレルギー、喘息（アレルギー性喘息を含む）または自己免疫疾患（関節リウマチを含む）を処置するためおよび／または予防するために、使用され得る。他の実施形態において、ナノキャリアは、移植に関連して、移植片拒絶を回復させるための免疫抑制のために使用され得る。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、標的化部分は、そのナノキャリアの表面上に存在する。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアと会合されている。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアと共有結合的に会合されている。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアと非共有結合的に会合されている。
いくつかの局面において、（ａ）ポリマーと抗原との結合体、（ｂ）ポリマーと免疫刺激剤との結合体、および／または（ｃ）ポリマーと標的化部分との結合体を含むナノキャリアを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ポリマーと抗原との結合体およびポリマーと免疫刺激剤との結合体を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ポリマーと抗原との結合体およびポリマーと標的化部分との結合体を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ポリマーと免疫刺激剤との結合体およびポリマーと標的化部分との結合体を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ポリマーと抗原との結合体、ポリマーと免疫刺激剤との結合体およびポリマーと標的化部分との結合体を含む。いくつかの実施形態において、結合体は、共有結合性の結合体もしくは非共有結合性の結合体またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗原は、Ｂ細胞抗原である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ポリマーとＴ細胞抗原との結合体をさらに含む。いくつかの実施形態において、そのような結合体は、共有結合性または非共有結合性の結合体である。いくつかの実施形態において、抗原は、Ｔ細胞抗原である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ポリマーとＢ細胞抗原との結合体をさらに含む。いくつかの実施形態において、そのような結合体は、共有結合性または非共有結合性の結合体である。
いくつかの局面において、以下の式Ｘ−Ｌ１−Ｙ−Ｌ２−Ｚ（ここで、Ｘは、生分解性ポリマーであり、Ｙは、水溶性で非粘着性のポリマーであり、Ｚは、標的化部分、免疫調節剤、免疫刺激剤または薬学的作用物質であり、そして、Ｌ１およびＬ２は、結合剤（ｂｏｎｄ）であるか、または連結分子であり、ここで、ＹまたはＺのいずれかは、存在しないことがあり得るが、ＹとＺの両方が存在しないことはあり得ない）の分子を含むナノキャリアを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、抗原、免疫刺激剤またはその両方を含む。いくつかの実施形態において、薬学的作用物質は、抗原である。いくつかの実施形態において、抗原は、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、習慣性物質または代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である。Ｚは、本明細書中に記載される任意の抗原であり得る。いくつかの実施形態において、Ｚは、標的化部分である。いくつかの実施形態において、Ｚは、細胞の表面上に発現されるレセプターに結合する標的化部分である。いくつかの実施形態において、Ｚは、可溶性レセプターに結合する標的化部分である。いくつかの実施形態において、可溶性レセプターは、補体タンパク質または前から存在する抗体である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアを抗原提示細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞に送達するためのものである。いくつかの実施形態において、抗原提示細胞は、樹状細胞（ＤＣ）、濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）またはマクロファージである。いくつかの実施形態において、マクロファージは、被膜下洞マクロファージ（ＳＣＳ−Ｍｐｈ）である。いくつかの実施形態において、Ｙは、ＰＥＧまたはＰＥＯである。いくつかの実施形態において、Ｙは、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシドである。いくつかの実施形態において、Ｘは、ＰＬＧＡ、ＰＬＡまたはＰＧＡである。いくつかの実施形態において、Ｚは、存在しない。
いくつかの局面において、免疫刺激剤を含むナノキャリアを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、組成物は、抗原および／または標的化部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、抗原、標的化部分および免疫刺激剤のうちの少なくとも１つは、水溶性で非粘着性のポリマーと結合体化される。いくつかの実施形態において、抗原、標的化部分および免疫刺激剤のうちの少なくとも１つは、生分解性ポリマーと結合体化される。いくつかの実施形態において、抗原、標的化部分および免疫刺激剤のうちの少なくとも１つは、生体適合性ポリマーと結合体化される。いくつかの実施形態において、生体適合性ポリマーは、生分解性ポリマーと結合体化されている水溶性で非粘着性のポリマーの結合体である。いくつかの実施形態において、抗原は、Ｂ細胞抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、Ｔ細胞抗原ではない。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、Ｔ細胞抗原をさらに含む。いくつかの実施形態において、抗原は、Ｔ細胞抗原である。
いくつかの局面において、小分子、免疫刺激剤およびＴ細胞抗原を含むナノキャリアを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、小分子は、ナノキャリアの表面上に存在するか、またはナノキャリアの表面上に存在し、かつナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、小分子は、習慣性物質である。いくつかの実施形態において、習慣性物質は、ニコチンである。いくつかの実施形態において、小分子は、トキシンである。いくつかの実施形態において、トキシンは、化学兵器、細菌戦の薬剤または有害な環境作用物質（ｈａｚａｒｄｏｕｓ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ａｇｅｎｔ）由来のものである。いくつかの実施形態において、小分子は、ポリマーと結合体化されている。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの表面上に存在するか、またはナノキャリアの表面上に存在し、かつナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ポリマーと結合体化されている。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマー生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマーまたは生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ポリマーと結合体化されている。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマー生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、水溶性で非粘着性のポリマーは、ＰＥＧまたはＰＥＯである。いくつかの実施形態において、水溶性で非粘着性のポリマーは、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシドである。いくつかの実施形態において、生分解性ポリマーは、ＰＬＧＡ、ＰＬＡまたはＰＧＡである。いくつかの実施形態において、生体適合性ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマーと生分解性ポリマーとの結合体である。
いくつかの実施形態において、ニコチン、免疫刺激剤、Ｔ細胞抗原および標的化部分を含むナノキャリアを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ＴＬＲ７／８アゴニストである。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、Ｒ８４８（ＣＬ０９７とも称される）またはイミキモドである。いくつかの実施形態において、ニコチンは、ナノキャリアの表面上に存在するか、またはナノキャリアの表面上に存在し、かつナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、ニコチンは、ポリマーと結合体化、好ましくは、共有結合的に結合体化されている。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、ニコチンは、生体適合性ポリマーと結合体化されている。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの表面上に存在するか、ナノキャリアの中に被包されているか、またはナノキャリアの表面上に存在し、かつナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ポリマーと結合体化されている。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマー生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、生分解性ポリマーと結合体化されている。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ポリマーと結合体化されている。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマー生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態において、標的化部分は、生体適合性ポリマーと結合体化されている。いくつかの実施形態において、水溶性で非粘着性のポリマーは、ＰＥＧまたはＰＥＯである。いくつかの実施形態において、水溶性で非粘着性のポリマーは、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシドである。いくつかの実施形態において、生分解性ポリマーは、ＰＬＧＡ、ＰＬＡまたはＰＧＡである。いくつかの実施形態において、生体適合性ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマーと生分解性ポリマーとの結合体である。
本明細書中に提供されるナノキャリアのいずれかのいくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの中に被包されている。これらの実施形態のいくつかにおいて、免疫刺激剤は、Ｒ８４８、ＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣｐＧ／ＣｐＧ含有核酸）である。そのようなナノキャリアは、いくつかの実施形態において、ＣＤ４Ｔ細胞および／またはＣＤ８Ｔ細胞を活性化するために使用され得る。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤、例えば、Ｒ８４８またはＴＬＲ９アゴニストは、結合体化されていない。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤、例えば、Ｒ８４８またはＴＬＲ９アゴニストは、ポリマーと結合体化されている。いくつかの実施形態において、結合体化は、共有結合性である。いくつかの実施形態において、結合体化は、非共有結合性である。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマーである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、ＰＥＧ−ＰＬＡまたはＰＬＡである。これらの実施形態のいずれかにおいて、ナノキャリアは、Ｔ細胞抗原をさらに含み得る。
いくつかの局面において、免疫原性が低い抗原、免疫刺激剤およびＴ細胞抗原を含むナノキャリアを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、ナノキャリアの表面上に存在するか、またはナノキャリアの表面上に存在し、かつナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、小分子または炭水化物である。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、習慣性物質である。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、トキシンである。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、ポリマーと共有結合的に結合体化されている。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマー生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの表面上に存在するか、またはナノキャリアの表面上に存在し、かつナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ポリマーと共有結合的に結合体化されている。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマー生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ポリマーと共有結合的に結合体化されている。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマー生分解性ポリマーである。
いくつかの局面において、特定の細胞、組織または器官を標的化し、そして免疫応答を調節し、Ｂ細胞を活性化する密度で表面上にＢ細胞抗原および免疫刺激剤を含むナノキャリアを含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的組成物であり、薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、ワクチン組成物である。
いくつかの局面において、抗原提示細胞標的化部分およびナノキャリアを含む、薬学的組成物などの組成物が提供される。いくつかの実施形態において、抗原提示細胞標的化部分とナノキャリアとは、結合体化されている。いくつかの実施形態において、結合体は、共有結合性の結合体である。いくつかの実施形態において、結合体は、非共有結合性の結合体である。
いくつかの局面において、免疫刺激剤およびナノキャリアを含む、薬学的組成物などの組成物が提供される。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤とナノキャリアとは、結合体化されている。いくつかの実施形態において、結合体は、共有結合性の結合体である。いくつかの実施形態において、結合体は、非共有結合性の結合体である。
いくつかの局面において、式Ｘ−Ｌ１−Ｙ−Ｌ２−Ｚ（ここで、Ｘは、生分解性ポリマーであり、Ｙは、水溶性で非粘着性のポリマーであり、Ｚは、標的化部分、免疫刺激剤または薬学的作用物質であり、そして、Ｌ１およびＬ２は、結合剤であるか、または連結分子であり、ここで、ＹまたはＺのいずれかは、存在しないことがあり得るが、ＹとＺの両方が存在しないことはあり得ない）を有する分子を含む組成物が提供される。
いくつかの局面において、式Ｔ−Ｌ１−Ｘ−Ｌ２−Ｙ−Ｌ３−Ｚ（ここで、Ｔは、Ｔ細胞抗原であり、Ｘは、生分解性ポリマーであり、Ｙは、水溶性で非粘着性のポリマーであり、Ｚは、Ｚであり、標的化部分、免疫刺激剤または薬学的作用物質であり、ここで、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３は、結合剤であるか、または連結分子であり、ここで、Ｔ、ＹおよびＺのうちのいずれか１つまたは２つは、存在しないことがあり得るが、Ｔ、ＹおよびＺの３つすべてが存在しないことはあり得ない）を有する分子を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、薬学的作用物質は、抗原である。いくつかの実施形態において、抗原は、Ｂ細胞抗原またはＴ細胞抗原である。
いくつかの実施形態において、Ｚは、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、ハプテン、習慣性物質または代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である。いくつかの実施形態において、Ｚは、本明細書中に記載されるＢ細胞抗原のいずれかである。いくつかの実施形態において、Ｚは、本明細書中に提供されるＴ細胞抗原のいずれかである。
いくつかの実施形態において、Ｚは、細胞の表面上に発現されるレセプターに結合する標的化部分である。いくつかの実施形態において、Ｚは、可溶性レセプターに結合する標的化部分である。いくつかの実施形態において、可溶性レセプターは、補体または前から存在する抗体である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、抗原提示細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞を標的化するためのものである。
いくつかの実施形態において、Ｙは、ＰＥＧまたはＰＥＯである。いくつかの実施形態において、Ｙは、ポリアルキレングリコールまたはポリアルキレンオキシドである。
いくつかの実施形態において、Ｘは、ＰＬＧＡ、ＰＧＡまたはＰＬＡである。
いくつかの実施形態において、Ｚは、存在しない。いくつかの実施形態において、Ｙは、存在しない。
いくつかの局面において、免疫刺激剤とポリマーとの結合体を含む薬学的組成物が提供される。いくつかの実施形態において、結合体は、共有結合性の結合体である。いくつかの実施形態において、結合体は、非共有結合性の結合体である。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、生体適合性ポリマーは、生分解性ポリマーまたは水溶性で非粘着性のポリマーである。いくつかの実施形態において、生体適合性ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマーと生分解性ポリマーとの結合体である。いくつかの実施形態において、ポリマーは、合成のものである。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、１つ以上のナノキャリアを含み、ここで、その結合体は、１つ以上のナノキャリアの成分である。いくつかの実施形態において、組成物は、抗原をさらに含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、抗原を含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、標的化剤をさらに含む。
いくつかの局面において、免疫刺激剤とポリマーとの結合体を含むワクチン組成物が提供される。いくつかの実施形態において、結合体は、共有結合性の結合体である。いくつかの実施形態において、結合体は、非共有結合性の結合体である。いくつかの実施形態において、ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマー、生分解性ポリマーまたは生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、水溶性で非粘着性のポリマーは、ポリエチレングリコールである。いくつかの実施形態において、ポリマーは、生体適合性ポリマーである。いくつかの実施形態において、生体適合性ポリマーは、生分解性ポリマーまたは水溶性で非粘着性のポリマーである。いくつかの実施形態において、生体適合性ポリマーは、水溶性で非粘着性のポリマーと生分解性ポリマーとの結合体である。いくつかの実施形態において、ポリマーは、合成のものである。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、１つ以上のナノキャリアを含み、ここで、結合体が、その１つ以上のナノキャリアの成分である。いくつかの実施形態において、組成物は、抗原をさらに含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、抗原を含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、標的化剤をさらに含む。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、タンパク質またはペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、非タンパク質抗原である（すなわち、タンパク質でもペプチドでもない）。いくつかの実施形態において、タンパク質またはペプチドは、感染性因子（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ａｇｅｎｔ）である。いくつかの実施形態において、感染性因子は、細菌、真菌、ウイルス、原生動物または寄生生物である。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、はしかウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、耳下腺炎を引き起こすウイルス、狂犬病を引き起こすウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルトミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルスである。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、小分子である。いくつかの実施形態において、小分子は、乱用性（ａｂｕｓｅｄ）物質、習慣性物質またはトキシンである。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、習慣性物質である。いくつかの実施形態において、習慣性物質は、ニコチン、麻薬、幻覚剤、刺激剤、鎮咳剤、トランキライザーまたは鎮静剤である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、オピオイド（ｏｐｉｏｄ）またはベンゾジアゼピンである。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、トキシンである。いくつかの実施形態において、トキシンは、化学兵器由来である。いくつかの実施形態において、化学兵器由来のトキシンは、ボツリヌストキシンまたはホスフィン（ｐｈｏｓｐｈｅｎｅ）である。化学兵器由来のトキシンとしては、Ｏ−アルキル（＜Ｃ１０、シクロアルキルを含む）アルキル（Ｍｅ、Ｅｔ、ｎ−Ｐｒまたはｉ−Ｐｒ）−ホスホノフルオリデート（例えば、サリン：Ｏ−イソプロピルメチルホスホノフルオリデート、ソマン：Ｏ−ピナコリルメチルホスホノフルオリデート）、Ｏ−アルキル（＜Ｃ１０、シクロアルキルを含む）Ｎ，Ｎ−ジアルキル（Ｍｅ、Ｅｔ、ｎ−Ｐｒまたはｉ−Ｐｒ）ホスホルアミドシアニデート（例えば、タブン：Ｏ−エチルＮ，Ｎ−ジメチルホスホルアミドシアニデート）、Ｏ−アルキル（Ｈまたは＜Ｃ１０、シクロアルキルを含む）Ｓ−２−ジアルキル（Ｍｅ、Ｅｔ、ｎ−Ｐｒまたはｉ−Ｐｒ）−アミノエチルアルキル（Ｍｅ、Ｅｔ、ｎ−Ｐｒまたはｉ−Ｐｒ）ホスホノチオレートおよび対応するアルキル化塩またはプロトン化塩（例えば、ＶＸ：Ｏ−エチルＳ−２−ジイソプロピルアミノエチルメチルホスホノチオレート）、硫黄マスタード：２−クロロエチルクロロメチルスルフィド、マスタードガス：ビス（２−クロロエチル）スルフィド、ビス（２−クロロエチルチオ）メタン、セスキマスタード：１，２−ビス（２−クロロエチルチオ）エタン、１，３−ビス（２−クロロエチルチオ）−ｎ−プロパン、１，４−ビス（２−クロロエチルチオ）−ｎ−ブタン、１，５−ビス（２−クロロエチルチオ）−ｎ−ペンタン、ビス（２−クロロエチルチオメチル）エーテル、Ｏ−マスタード：ビス（２−クロロエチルチオエチル）エーテル、ルイサイト：ルイサイト１：２−クロロビニルジクロロアルシン、ルイサイト２：ビス（２−クロロビニル）クロロアルシン、ルイサイト３：トリス（２−クロロビニル）アルシン、ナイトロジェンマスタード：ＨＮ１：ビス（２−クロロエチル）エチルアミン、ＨＮ２：ビス（２−クロロエチル）メチルアミン、ＨＮ３：トリス（２−クロロエチル）アミン、サキシトキシン、リシン、アミトン：Ｏ，Ｏ−ジエチルＳ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）ホスホロチオレートおよび対応するアルキル化塩またはプロトン化塩、ＰＦＩＢ：１，１，３，３，３−ペンタフルオロ−２−（トリフルオロメチル）−１−プロペン、３−キヌクリジニルベンジレート（ＢＺ）、ホスゲン：二塩化カルボニル、塩化シアン、シアン化水素およびクロロピクリン：トリクロロニトロメタンも挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ナノキャリア内に封入されるためのトキシンは、前述のいずれかの完全な分子またはその一部である。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、バイオハザードまたは有害な環境作用物質である。いくつかの実施形態において、有害な環境作用物質は、ヒ素、鉛、水銀、塩化ビニル、ポリ塩化ビフェニル、ベンゼン、多環式芳香族炭化水素、カドミウム、ベンゾ（ａ）ピレン、ベンゾ（ｂ）フルオランテン、クロロホルム、ジクロロ−ジフェニル−トリクロロエチレン（ＤＤＴ）、Ｐ，Ｐ’−、アロクロール１２５４、アロクロール１２６０、ジベンゾ（ａ，ｈ）アントラセン、トリクロロエチレン、ジエルドリン、六価クロムまたはｐ，ｐ’−ジクロロジフェニルジクロロエテン（ＤＤＥ、Ｐ，Ｐ’）である。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、炭水化物である。いくつかの実施形態において、炭水化物は、感染性因子由来である。いくつかの実施形態において、感染性因子は、細菌、真菌、ウイルス、原生動物または寄生生物である。いくつかの実施形態において、細菌は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、ＶｉｂｒｉｏまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ細菌またはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍである。いくつかの実施形態において、ウイルスは、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、はしかウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、耳下腺炎を引き起こすウイルス、狂犬病を引き起こすウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルトミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルスである。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、自己抗原である。いくつかの実施形態において、自己抗原は、タンパク質もしくはペプチド、リポタンパク質、脂質、炭水化物または核酸である。いくつかの実施形態において、自己抗原は、酵素、構造タンパク質、分泌タンパク質、細胞表面レセプターまたはサイトカインである。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ＴＮＦ、ＩＬ−１またはＩＬ−６である。いくつかの実施形態において、自己抗原は、コレステリルエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）、アルツハイマー病に関連するＡβタンパク質、Ａβタンパク質の病理学的な形状をプロセシングするタンパク分解性酵素、アテローム性動脈硬化症に関連するＬＤＬまたはＨＩＶ−１に対するコレセプターである。いくつかの実施形態において、Ａβタンパク質の病理学的な形状をプロセシングするタンパク分解性酵素は、ベータ−セクレターゼである。いくつかの実施形態において、アテローム性動脈硬化症に関連するＬＤＬは、酸化されているか、または最小に改変されている。いくつかの実施形態において、ＨＩＶ−１に対するコレセプターは、ＣＣＲ５である。いくつかの実施形態において、自己抗原は、自己免疫疾患抗原である。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原または代謝疾患酵素もしくはその酵素反応生成物である。
いくつかの実施形態において、抗原は、癌抗原である。いくつかの実施形態において、癌抗原は、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児抗原（ＣＥＡ）ならびにその免疫原性エピトープＣＡＰ−１およびＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）ならびにその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２およびＰＳＡ−３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞レセプター／ＣＤ３−ゼータ鎖、腫瘍抗原のＭＡＧＥ−ファミリー（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、腫瘍抗原のＧＡＧＥ−ファミリー（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニンおよびγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１、ＣＴ−７、ｃｄｃ２７、大腸腺腫性ポリポーシスタンパク質（ＡＰＣ）、ホドリン、Ｐ１Ａ、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、ＥＢＶによってコードされる核抗原（ＥＢＮＡ）−１またはｃ−ｅｒｂＢ−２である。
いくつかの実施形態において、感染症抗原は、ウイルス抗原である。いくつかの実施形態において、ウイルス抗原は、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、はしかウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、耳下腺炎を引き起こすウイルス、狂犬病を引き起こすウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルトミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルス由来の抗原である。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、免疫原性が低い抗原である。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、非タンパク質抗原である。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、炭水化物または小分子である。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、乱用性物質、習慣性物質またはトキシンである。いくつかの実施形態において、トキシンは、化学兵器由来である。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、有害な環境作用物質である。いくつかの実施形態において、免疫原性が低い抗原は、自己抗原である。
一般に、Ｔ細胞抗原は、タンパク質またはペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、アレルゲン、接触感作物質、ハプテンまたは代謝疾患の酵素もしくは酵素反応生成物である。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、感染性因子由来である。いくつかの実施形態において、感染性因子は、細菌、真菌、ウイルス、原生動物または寄生生物である。いくつかの実施形態において、感染症抗原は、ウイルス抗原である。いくつかの実施形態において、ウイルス抗原は、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、はしかウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトパピローマウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、耳下腺炎を引き起こすウイルス、狂犬病を引き起こすウイルス、レオウイルス、風疹ウイルス、トガウイルス、オルトミクソウイルス、レトロウイルス、ヘパドナウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルスまたはＥ型肝炎ウイルス由来の抗原である。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、ユニバーサルＴ細胞抗原である。いくつかの実施形態において、ユニバーサルＴ細胞抗原は、破傷風トキソイド、エプスタイン・バーウイルスまたはインフルエンザウイルスに由来する１つ以上のペプチドである。
いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、インターロイキン、インターフェロン、サイトカインなどである。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、トール様レセプター（ＴＬＲ）アゴニスト、サイトカインレセプターアゴニスト、ＣＤ４０アゴニスト、Ｆｃレセプターアゴニスト、ＣｐＧ含有免疫刺激核酸、補体レセプターアゴニストまたはアジュバントである。いくつかの実施形態において、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ−１、ＴＬＲ−２、ＴＬＲ−３、ＴＬＲ−４、ＴＬＲ−５、ＴＬＲ−６、ＴＬＲ−７、ＴＬＲ−８、ＴＬＲ−９またはＴＬＲ−１０のアゴニストである。いくつかの実施形態において、Ｆｃレセプターアゴニストは、Ｆｃ−ガンマレセプターアゴニストである。いくつかの実施形態において、補体レセプターアゴニストは、ＣＤ２１またはＣＤ３５に結合する。いくつかの実施形態において、補体レセプターアゴニストは、ナノキャリアの内因性補体オプソニン化を誘導する。いくつかの実施形態において、サイトカインレセプターアゴニストは、サイトカインである。いくつかの実施形態において、サイトカインレセプターアゴニストは、小分子、抗体、融合タンパク質またはアプタマーである。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、アジュバントである。いくつかの実施形態において、アジュバントは、サイトカイン生合成を誘導する。いくつかの実施形態において、アジュバントは、ミョウバン、ＭＦ５９、Ｒ８４８、コレラ毒素、スクアレン、リン酸塩アジュバントまたはテトラクロロデカオキシドである。いくつかの実施形態において、アジュバントは、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ，ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ）；ＱＳ２１を含むサポニン（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ）；免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えば、Ｋｒｅｉｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３７４：５４６−９，１９９５によって初めて報告されたＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド）；フロイント不完全アジュバント；フロイント完全アジュバント；モンタニド；ビタミンＥ、および生分解性油から調製される様々な油中水エマルジョン、例えば、スクアレンおよび／もしくはトコフェロール、Ｑｕｉｌ Ａ、Ｒｉｂｉ Ｄｅｔｏｘ、ＣＲＬ−１００５またはＬ−１２１である。
特定の実施形態において、免疫刺激剤は、トール様レセプター（ＴＬＲ）に対する天然または合成のアゴニストであり得る。特定の実施形態において、免疫刺激剤は、トール様レセプター（ＴＬＲ）−７に対するリガンド、例えば、Ｉ型インターフェロン産生を誘導するＣｐＧ；ＤＣ表面分子ＣＤ４０に対するアゴニスト；ＤＣ成熟を促進する薬剤；ＴＬＲ−４アゴニスト；サイトカイン；壊死性細胞から放出される炎症促進性刺激物（例えば、尿酸塩結晶）；補体カスケードの活性化された成分（例えば、ＣＤ２１、ＣＤ３５など；などであり得る。
いくつかの実施形態において、標的化部分は、細胞の表面上に発現されるレセプターと結合する。いくつかの実施形態において、標的化部分は、可溶性レセプターと結合する。いくつかの実施形態において、可溶性レセプターは、補体タンパク質または前から存在する抗体である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアを抗原提示細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞に送達するためのものである。いくつかの実施形態において、抗原提示細胞は、マクロファージである。いくつかの実施形態において、マクロファージは、被膜下洞マクロファージである。いくつかの実施形態において、抗原提示細胞は、樹状細胞である。いくつかの実施形態において、抗原提示細胞は、濾胞樹状細胞である。
いくつかの実施形態において、標的化部分は、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６９、マンノースレセプター、ＤＥＣ−２０５、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ２１／ＣＤ３５、ＣＸ３ＣＲ１またはＦｃレセプターに結合する分子である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ＣＤ１６９、ＣＸ３ＣＲ１またはＦｃレセプターに結合する分子である。いくつかの実施形態において、ＣＤ１６９に結合する分子は、抗ＣＤ１６９抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＸ３ＣＲ１に結合する分子は、ＣＸ３ＣＬ１（フラクタルカイン）である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、免疫グロブリンのＦｃ部を含む。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ＩｇＧのＦｃ部を含む。いくつかの実施形態において、免疫グロブリンのＦｃ部は、免疫グロブリンのヒトＦｃ部である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧのＦｃ部は、ＩｇＧのヒトＦｃ部である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、可溶性レセプターであるＣＲＦｃである。いくつかの実施形態において、ＣＲＦｃは、髄質のマクロファージではなく被膜下洞内のマクロファージを標的化するために使用され得る。いくつかの実施形態において、標的化部分は、１つ以上のアミン部分である。
いくつかの局面において、本明細書中に提供される組成物は、免疫原性である。
いくつかの局面において、本明細書中に提供される組成物のいずれかを、免疫応答を調節するのに有効な量で被験体に投与する工程を包含する方法が提供される。いくつかの実施形態において、その組成物は、免疫応答を誘導するかまたは増強するのに有効な量で存在する。いくつかの実施形態において、その組成物は、免疫応答を抑制するのに有効な量で存在する。いくつかの実施形態において、その組成物は、免疫応答を指示するかまたは再指示するのに有効な量で存在する。いくつかの実施形態において、本方法は、本明細書中で特定される状態の予防および／または処置のためのものである。
いくつかの実施形態において、本方法が、免疫応答を誘導するためかまたは増強するためのものである場合、被験体は、癌、感染症、非自己免疫性の代謝性疾患もしくは変性疾患、アトピー性疾患、アレルギー性疾患または嗜癖を有するか、または有しやすい。いくつかの実施形態において、被験体は、トキシンに曝露されているか、または曝露され得る。いくつかの実施形態において、被験体は、化学兵器由来のトキシンに曝露されているか、または曝露され得る。いくつかの実施形態において、被験体は、有害な環境作用物質由来のトキシンに曝露されているか、または曝露され得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、Ｂ細胞抗原、免疫刺激剤およびユニバーサルＴ細胞抗原などのＴ細胞抗原を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化部分をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本方法が、嗜癖を処置するためまたは予防するためのもの（またはトキシンに曝露されているかもしくは曝露され得る被験体を処置するためのもの）である場合、ナノキャリアは、習慣性物質またはトキシン、アジュバントおよびＴ細胞を含む。いくつかの実施形態において、本方法は、原因物質（ｏｆｆｅｎｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）がそのエフェクター部位（例えば、脳）に到達する前に、その原因物質と結合し、その原因物質を中和する高力価抗体を産生させる。いくつかの実施形態において、習慣性物質またはトキシンは、高密度でナノキャリアの表面上に存在する。
いくつかの実施形態において、感染症は、慢性ウイルス感染である。いくつかの実施形態において、慢性ウイルス感染は、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶの感染である。いくつかの実施形態において、感染症は、細菌感染であるか、または細菌感染によって引き起こされる。いくつかの実施形態において、被験体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ感染、結核、マラリア、リーシュマニア症、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ感染を有するか、または有しやすい。いくつかの実施形態において、感染症は、真菌感染であるか、または真菌感染によって引き起こされる。いくつかの実施形態において、感染症は、寄生生物感染であるか、または寄生生物感染によって引き起こされる。いくつかの実施形態において、感染症は、原虫感染であるか、または原虫感染によって引き起こされる。いくつかの実施形態において、被験体は、インフルエンザを有するか、または有しやすい。
いくつかの実施形態において、本方法が、免疫応答を抑制するためまたは再指示するためのものである場合、被験体は、アレルギー性疾患または自己免疫疾患を有するか、または有しやすい。いくつかの実施形態において、被験体は、食物アレルギーを有する。いくつかの実施形態において、被験体は、乳もしくは他の乳成分（例えば、ラクトース）、卵、ピーナッツ、樹木のナッツ（クルミ、カシューなど）、魚類、甲殻類、ダイズまたはコムギに対してアレルギー性である。いくつかの実施形態において、本方法は、アレルゲンなどの抗原に対して被験体を寛容化するためのものである。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、疾患であり、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチ、Ｉ型真性糖尿病、炎症性腸疾患、甲状腺炎またはセリアック病である。いくつかの実施形態において、被験体は、移植を受けたことがあるか、または移植を受ける被験体であり、本方法は、移植片拒絶を予防するためまたは回復させるためであり得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、抗原および免疫抑制剤または制御性Ｔ細胞を誘導する薬剤を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化部分をさらに含む。通常、本方法が、免疫応答を抑制するためのものである場合、抗原は、アジュバントの非存在下において提供される。
アレルギーを処置するためのいくつかの実施形態において、ナノキャリアは、アレルゲンおよび免疫刺激剤（例えば、アジュバント、例えば、ＴＬＲアゴニスト）を含む。
いくつかの実施形態において、組成物は、免疫応答を（例えば、Ｔｈ２からＴｈ１免疫応答に）改変するのに有効な量で投与される。いくつかの実施形態において、被験体は、アレルギー性疾患を有するか、または有しやすい。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、アレルゲンなどの抗原および免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、標的化部分をさらに含む。
いくつかの局面において、免疫調節剤を免疫系の細胞に送達するためのワクチンナノキャリアが提供される。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｂ細胞および／またはＴ細胞において免疫応答を誘導することができる少なくとも１つの免疫調節剤を含む。ある特定の実施形態において、ナノキャリア表面上に提示される免疫調節剤は、Ｂ細胞を刺激し、そしてそのナノキャリアの中に被包されている免疫調節剤は、プロセシングされて、Ｔ細胞に提示される。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、そのワクチンナノキャリアを特定の抗原提示細胞（ＡＰＣ）に選択的に送達するために有用な少なくとも１つの標的化部分を含む。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、単離されたおよび／または組換えのタンパク質もしくは組換えペプチド、炭水化物、糖タンパク質、糖ペプチド、プロテオグリカン、不活性化された生物およびウイルス、死滅させた生物およびウイルス、遺伝的に変更された生物またはウイルス、ならびに細胞抽出物を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、核酸、炭水化物、脂質および／または小分子を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、免疫応答を誘発するものである。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、抗原である。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、ワクチンのために使用される。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、病原体由来の任意のタンパク質および／または他の抗原である。その病原体は、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、寄生生物などであり得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、死滅させた生物全体、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、糖ペプチド、プロテオグリカン、炭水化物またはそれらの組み合わせの形態であり得る。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの免疫調節剤のすべてが、互いに同一である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの免疫調節剤のすべてが、異なる。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、厳密に１つの異なるタイプ（すなわち、種類）の免疫調節剤を含む。例えば、その免疫調節剤が、抗原であるとき、そのワクチンナノキャリア中の抗原のすべてが、同じである。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、厳密に２つの異なるタイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つよりも多い異なるタイプの免疫調節剤を含む。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｂ細胞において免疫応答を刺激する単一タイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｔ細胞において免疫応答を刺激する単一タイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの免疫調節剤を含み、ここで、第１免疫調節剤が、Ｂ細胞を刺激し、第２免疫調節剤が、Ｔ細胞を刺激する。ある特定の実施形態において、上述の薬剤のいずれかは、Ｂ細胞とＴ細胞の両方を刺激し得るが、そうである必要はない。ある特定の実施形態において、上述の免疫調節剤は、それぞれＢ細胞だけまたはＴ細胞だけを刺激する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫調節剤を含み、ここで、１つ以上のタイプの免疫調節剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして１つ以上のタイプの免疫調節剤が、Ｔ細胞を刺激する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、脂質膜（例えば、脂質二重層、脂質単層など）を含む。少なくとも１つの免疫調節剤が、脂質膜と会合され得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの免疫調節剤が、脂質膜の中に包埋されており、脂質二重層の内腔の中に包埋されており、脂質膜の内面と会合されており、そして／またはワクチンナノキャリアの脂質膜で被包されている。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ポリマー（例えば、ポリマーのコア）を含む。上記免疫調節剤は、そのポリマーと会合され得、いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫調節剤が、ポリマーと会合されている。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、そのポリマーの中に包埋されており、そのポリマーの内面と会合されており、そして／またはワクチンナノキャリアのポリマーの中に被包されていて、そして、いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫調節剤が、そのポリマーの中に包埋されており、そのポリマーの内面と会合されており、そして／またはワクチンナノキャリアのポリマーの中に被包されている。
いくつかの実施形態において、発明性のある（ｉｎｖｅｎｔｉｖｅ）ワクチンナノキャリアは、９０重量％未満未満、７５重量％未満、５０重量％未満、４０重量％未満、３０重量％未満、２０重量％未満、１５重量％未満、１０重量％未満、５重量％未満、１重量％未満または０．５重量％未満の免疫調節剤を含む。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、少なくとも１つの標的化部分と会合されている。いくつかの実施形態において、標的化部分は、核酸、ポリペプチド、ペプチド、糖タンパク質、糖ペプチド、プロテオグリカン、炭水化物、脂質、小分子などであり得る。例えば、標的化部分は、細胞型特異的マーカーに結合する核酸標的化部分（例えば、アプタマー、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ（登録商標）など）であり得る。いくつかの実施形態において、標的化部分は、細胞表面タンパク質、例えば、ＤＥＣ−２０５、ＣＤ１６９、ＣＤ１１ｂなどに対する天然に存在するリガンドまたは合成リガンドであり得る。標的化部分の例としては、上に記載されたものなど、本明細書中の別の箇所に提供されるものも挙げられる。
本発明によれば、標的化部分は、特定の器官、組織、細胞および／または細胞下の場所と会合されている１つ以上の「標的」または「マーカー」を認識する。いくつかの実施形態において、標的は、１つもしくはいくつかの細胞型、１つもしくはいくつかの疾患および／または１つもしくはいくつかの発達段階と排他的にまたは主に関連するマーカーであり得る。標的化される細胞の例としては、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、濾胞樹状細胞およびマクロファージ）が挙げられる。マクロファージの１つの例は、被膜下洞マクロファージである。標的化される他の細胞としては、Ｔ細胞およびＢ細胞が挙げられる。いくつかの実施形態において、標的は、タンパク質、炭水化物、脂質および／または核酸を含み得る。いくつかの実施形態において、標的は、腫瘍マーカーである。いくつかの実施形態において、標的は、ＡＰＣマーカーである。ある特定の実施形態において、標的は、Ｔ細胞マーカーである。いくつかの実施形態において、標的化部分は、二次リンパ組織または器官を標的化する。二次リンパ組織または器官としては、リンパ節、脾臓、パイエル板、虫垂または扁桃が挙げられる。
ある特定の実施形態において、標的は、樹状細胞マーカーである。いくつかの実施形態において、ＤＣマーカーとしては、ＤＣ−２０５、ＣＤ１１ｃ、クラスＩＩ ＭＨＣ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＣＤ１１ｂ、ＢＤＣＡ−１、ＢＤＣＡ−２、ＢＤＣＡ−４、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｈ、ＣＸ３ＣＲ１および／またはＬａｎｇｅｒｉｎが挙げられる。そのようなマーカーの例は、本明細書中の別の箇所に提供される。
ある特定の実施形態において、標的は、被膜下洞マクロファージマーカーである。いくつかの実施形態において、ＳＣＳ−Ｍｐｈマーカーとしては、ＣＤ１６９（すなわち、シアロアドヘシン）、ＣＤ１１ｂ（すなわち、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８、Ｍａｃ−１、ＣＲ３またはαＭβ２インテグリン）、Ｆｃレセプターおよび／またはマンノースレセプター（すなわち、多価レクチン）、ＳＣＳ−Ｍｐｈ上に顕著に発現されるタンパク質すべてが挙げられる。そのようなマーカーの例は、本明細書中の別の箇所に提供される。
ある特定の実施形態において、標的は、Ｂ細胞マーカーである。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞マーカーとしては、補体レセプター、ＣＲ１（すなわち、ＣＤ３５）またはＣＲ２（すなわち、ＣＤ２１）、Ｂ細胞上に発現されるタンパク質が挙げられ得る。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞標的化は、Ｂ細胞マーカー（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０および／またはＣＤ２２）によって達成され得る。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞標的化は、Ｂ細胞マーカー（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ８０、ＣＸＣＲ５、ＶＬＡ−４、クラスＩＩ ＭＨＣ、表面ＩｇＭもしくはＩｇＤ、ＡＰＲＬおよび／またはＢＡＦＦ−Ｒ）によって達成され得る。そのようなマーカーの例は、本明細書中の別の箇所に提供される。
ある特定の実施形態において、標的は、ＦＤＣマーカーである。いくつかの実施形態において、ＦＤＣマーカーとしては、補体レセプター、ＣＲ１（すなわち、ＣＤ３５）またはＣＲ２（すなわち、ＣＤ２１）、ＦＤＣ上に発現されるタンパク質が挙げられる。そのようなマーカーの例は、本明細書中の別の箇所に提供される。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、そのワクチンナノキャリアを単一の細胞型に送達すること（例えば、ＳＣＳ−Ｍｐｈのみに送達すること）を指示する単一タイプの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ワクチンナノキャリアを複数の細胞型に送達すること（例えば、ＳＣＳ−ＭｐｈとＦＤＣの両方またはＳＣＳ−ＭｐｈとＤＣの両方に送達すること）を指示する単一タイプの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２タイプの標的化部分を含み、ここで、第１タイプの標的化部分は、そのワクチンナノキャリアを１つの細胞型に送達することを指示し、第２タイプの標的化部分は、そのワクチンナノキャリアを第２の細胞型に送達することを指示する。例えば、いくつかの実施形態において、第１タイプの標的化部分は、ＳＣＳ−Ｍｐｈへの送達を指示し、そして第２タイプの標的化部分は、ＤＣへの送達を指示する。別の例として、第１タイプの標的化部分は、ＳＣＳ−Ｍｐｈへの送達を指示し、そして第２タイプの標的化部分は、ＦＤＣへの送達を指示する。
いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、５０重量％未満、４０重量％未満、３０重量％未満、２０重量％未満、１５重量％未満、１０重量％未満、５重量％未満、１重量％未満または０．５重量％未満の標的化部分を含む。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、免疫応答を刺激するのを助け得る１つ以上のタイプの免疫刺激剤を輸送し得る。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ＡＰＣを活性化して、その免疫刺激能力を増強することによって、免疫応答を押し上げる。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、特定の抗原に対するリンパ球応答を増幅することによって、免疫応答を押し上げる。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、種々の細胞型由来のサイトカインなどのメディエーターの局所的放出を誘導することによって、免疫応答を押し上げる。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｂ細胞とＴ細胞の両方を刺激する単一タイプの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２タイプの免疫刺激剤を含み、ここで、第１タイプの免疫刺激剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして第２タイプの免疫刺激剤が、Ｔ細胞を刺激する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫刺激剤を含み、ここで、１つ以上のタイプの免疫刺激剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして１つ以上のタイプの免疫刺激剤が、Ｔ細胞を刺激する。
いくつかの実施形態において、免疫応答がＢ細胞もしくはＢ細胞の群またはＴ細胞もしくはＴ細胞の群において調節されているか否かを判定するために、様々なアッセイが利用され得る。いくつかの実施形態において、アッセイは、その細胞または細胞の群が、「活性化」されているか否かを評価する。
いくつかの実施形態において、免疫応答がＴ細胞またはＴ細胞の群において刺激されているか否かを判定するために、様々なアッセイが利用され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答の刺激は、Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生を測定することによって判定され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答の刺激は、Ｔ細胞の抗原誘導性増殖を測定することによって判定され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答は、Ｔ細胞活性化の細胞性マーカーが、刺激されていない細胞と異なるレベル（例えば、それより高いレベルまたはそれより低いレベル）で発現される場合に、刺激されていると判定される。
いくつかの実施形態において、免疫応答がＢ細胞またはＢ細胞の群において刺激されているか否かを判定するために、様々なアッセイが利用され得る。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞における免疫応答の刺激は、抗体価、抗体親和性、中和アッセイにおける抗体の性能、クラススイッチ組換え、抗原特異的抗体の親和性成熟、記憶Ｂ細胞の発達、長期間にわたって大量の高親和性抗体を産生し得る長命の形質細胞の発達、胚中心反応および／または中和アッセイにおける抗体の性能を測定することによって判定され得る。
ワクチンナノキャリアは、例えば、Ｂ細胞および／またはＴ細胞において免疫応答を刺激することができる少なくとも１つの免疫調節剤を含む実体である。任意のワクチンナノキャリアは、本発明に従って使用され得る。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、１００ミクロン（μｍ）未満の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、３００ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、２５０ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、２００ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、１５０ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、１００ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、２５ｎｍ〜２００ｎｍの範囲の最大の寸法を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、２０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲の最大の寸法を有する。
種々の異なるナノキャリアが、本発明に従って使用され得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、球または回転楕円体である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、平らまたはプレート形である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、立方体またはさいころ形である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、卵形または長円形である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、円柱、円錐または角錐である。ナノキャリアは、中空でないかまたは中空であり得、そして１つ以上の層を含み得る。いくつかの実施形態において、各層は、他の層と比べて独特の組成および独特の特性を有する。単なる１つの例を挙げると、ナノキャリアは、コア／シェル構造を有し得、ここで、そのコアは、１つの層（例えば、ポリマーのコア）であり、そしてシェルは、第２の層（例えば、脂質二重層または脂質単層）である。ナノキャリアは、複数の異なる層を含み得る。いくつかの実施形態において、１つの層は、実質的に架橋され得、第２の層は、実質的に架橋されないなどである。いくつかの実施形態において、異なる層の１つ、いくつかまたはすべてが、１つ以上の免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはそれらの組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態において、１つの層は、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤を含み、第２の層は、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤を含まないなどである。いくつかの実施形態において、各個別の層は、異なる免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、必要に応じて１つ以上の脂質を含み得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、リポソームである。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、脂質二重層を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、脂質単層を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ミセルである。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）によって取り囲まれているポリマーマトリックスのコアを含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）によって取り囲まれている非ポリマーのコア（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子など）を含む。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、１つ以上のポリマーを含む。いくつかの実施形態において、ポリマーマトリックスは、被覆層（例えば、リポソーム、脂質単層、ミセルなど）によって取り囲まれ得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、そのポリマーマトリックスと会合され得る。そのような実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、効果的にナノキャリアの中に被包されている。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ナノキャリアと共有結合的に会合され得る。いくつかの実施形態において、共有結合性の会合は、リンカーによって媒介される。いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ナノキャリアに非共有結合的に会合されている。例えば、いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ポリマーマトリックス、脂質膜などの中に被包されており、それらによって取り囲まれており、そして／またはそれら全体に分散されている。あるいはまたはさらに、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、疎水性相互作用、電荷相互作用、ファンデルワールス力などによってポリマーマトリックス、脂質膜などと会合され得る。
多岐にわたるポリマーおよびそれらからポリマーマトリックスを形成するための方法は、薬物送達の分野で公知である。通常、ポリマーマトリックスは、１つ以上のポリマーを含む。任意のポリマーが、本発明に従って使用され得る。ポリマーは、天然のポリマーであってもよいし、または非天然の（合成の）ポリマーであってもよい。ポリマーは、ホモポリマーであってもよいし、２つ以上のモノマーを含むコポリマーであってもよい。配列に関して、コポリマーは、ランダムであり得るか、ブロックであり得るか、またはランダム配列とブロック配列との組み合わせを含み得る。本発明に従うポリマーは、有機ポリマーであり得る。いくつかの実施形態において、ポリマーは、樹枝状ポリマーまたはポリマーの混合物である。
ポリマーの例としては、ポリエチレン、ポリカーボネート（例えば、ポリ（１，３−ジオキサン−２オン））、ポリ無水物（例えば、ポリ（セバシン酸無水物））、ポリヒドロキシ酸（例えば、ポリ（β−ヒドロキシアルカノエート））、ポリプロピルフメレート、ポリカプロラクトン、ポリアミド（例えば、ポリカプロラクタム）、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコリド）、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリ尿素、ポリスチレンおよびポリアミンが挙げられる。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、逆ミセルの中に包埋されている免疫調節剤を含む。単なる１つの例を挙げると、リポソームナノキャリアは、リポソーム膜の中に包埋されている疎水性免疫調節剤およびリポソーマル（ｌｉｐｏｓｏｍａｌ）ナノキャリアの内部に見られる逆ミセルに包埋されている親水性免疫調節剤を含み得る。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ポリマー成分を含まない。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子などを含む。いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、そのような非ポリマーナノキャリアの表面と会合されている。いくつかの実施形態において、非ポリマーナノキャリアは、金属原子（例えば、金原子）の凝集物などの非ポリマー成分の凝集物である。いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、非ポリマー成分の凝集物の表面と会合しており、その凝集物の中に被包されており、その凝集物によって取り囲まれており、そして／またはその凝集物全体に分布している。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、必要に応じて、１つ以上の両親媒性の実体（すなわち、親水性特性と疎水性特性の両方を有する実体）を含み得る。いくつかの実施形態において、両親媒性の実体は、高い安定性、改善された一様性または高い粘度を有するナノキャリアの生成を促進し得る。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、そのナノキャリアの外表面と会合されており、そして／またはそのナノキャリアの中に被包されている、１つ以上のナノ粒子を含む。
ナノキャリアは、当該分野で公知の任意の方法を用いて調製され得る。例えば、粒状のナノキャリア調合物は、方法（例えば、ナノ沈殿、流体チャネルを用いるフローフォーカシング（ｆｌｏｗ ｆｏｃｕｓｉｎｇ）、噴霧乾燥、単一および二重エマルジョン溶媒蒸発、溶媒抽出、相分離、ミリング（ｍｉｌｌｉｎｇ）、マイクロエマルジョン手順、マイクロファブリケーション、ナノファブリケーション、犠牲層、単純コアセルベーションおよび複合コアセルベーション、ならびに当業者に周知の他の方法）によって形成され得る。あるいはまたはさらに、単分散半導体ナノ粒子、伝導性ナノ粒子、磁性ナノ粒子、有機ナノ粒子および他のナノ粒子に対する水性溶媒合成および有機溶媒合成が利用され得る。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ナノキャリアと共有結合的に会合されていない。例えば、ナノキャリアは、ポリマーマトリックスを含み得、そして免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤などが、発明性のあるナノキャリアのポリマーマトリックスの表面と会合されており、そのポリマーマトリックスの中に被包されており、そして／またはそのポリマーマトリックス全体に分布している。免疫調節剤は、ナノキャリアの拡散、分解および／またはそれらの組み合わせによって放出され得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアのポリマーは、バルク浸食（ｂｕｌｋ ｅｒｏｓｉｏｎ）によって分解する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアのポリマーは、表面浸食によって分解する。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、粒子と共有結合的に会合されている。いくつかの実施形態において、共有結合性の会合は、１つ以上のリンカーによって媒介される。任意の適当なリンカーは、本発明に従って使用され得る。いくつかの実施形態において、リンカーは、切断可能なリンカー（例えば、エステル結合、アミド結合、ジスルフィド結合など）である。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、自己組織化によって作製される。例として、脂質は、親油性の免疫調節剤と混合され、次いで、固体表面上において薄膜に形成される。親水性免疫調節剤を水溶液に溶解し、それをその脂質膜に加えて、ボルテックスによって脂質を加水分解する。二重層壁に組み込まれた親油性の免疫調節剤およびリポソーム内腔の内側の親水性免疫調節剤を有するリポソームは、自発的に組織化する。ある特定の実施形態において、予め製剤化された（ｐｒｅ−ｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ）ポリマーナノ粒子は、穏やかにボルテックスすることによって小型のリポソームと混合され、ポリマーナノ粒子表面上にリポソーム融合物が誘導される。
別の例として、被包される親水性免疫調節剤は、まず、揮発性の水混和性有機溶媒において天然由来かつ無毒性の両親媒性の実体と混合することによって逆ミセルに組み込まれる。いくつかの実施形態において、生分解性ポリマーは、逆ミセルの形成が完了した後に加えられる。得られた生分解性ポリマー−逆ミセル混合物をポリマー不溶性の親水性非溶媒と併せることにより、非溶媒へのその溶媒の迅速な拡散およびその有機溶媒の蒸発によってナノ粒子が形成される。
いくつかの実施形態において、脂質単層で安定化されたポリマーのナノキャリアは、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される。ある特定の実施形態において、親水性免疫調節性分子は、まず、脂質の極性頭部基と化学的に結合体化される。その結合体は、１つ以上の水混和性溶媒を含む水溶液中で、ある特定の比の非結合体化脂質分子と混合される。生分解性ポリマー材料は、疎水性免疫調節剤と混合されることにより、水混和性または部分的に水混和性の有機溶媒の中に被包される。得られたポリマー溶液は、結合体化脂質および非結合体化脂質の水溶液に加えられ、水へのその有機溶媒の迅速な拡散およびその有機溶媒の蒸発によってナノ粒子が得られる。
本明細書中に記載される組成物および方法は、任意の感染症、障害および／または状態の予防および／または処置のために使用され得る。他の疾患、障害および／または状態の例は、本明細書中の別の箇所に提供される。いくつかの実施形態において、本発明に従うワクチンナノキャリアは、疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状または特徴を、処置するため、緩和するため、回復させるため、軽減するため、その発症を遅延させるため、その進行を阻害するため、その重症度を低下させるため、および／またはその発生率を低下させるために、使用され得る。いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、微生物感染（例えば、細菌感染、真菌感染、ウイルス感染、寄生生物感染など）の１つ以上の症状または特徴を、処置するため、緩和するため、回復させるため、軽減するため、その発症を遅延させるため、その進行を阻害するため、その重症度を低下させるため、および／またはその発生率を低下させるために、使用され得る。いくつかの実施形態において、微生物感染の予防および／または処置は、治療有効量の発明性のあるワクチンナノキャリアを、それを必要とする被験体に、所望の結果を達成するのに必要な量でおよび必要な時間にわたって投与することを含む。本発明のある特定の実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアの「治療有効量」は、本明細書中に提供される疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状または特徴を、処置するため、緩和するため、回復させるため、軽減するため、その発症を遅延させるため、その進行を阻害するため、その重症度を低下させるため、および／またはその発生率を低下させるために有効な量である。
いくつかの実施形態において、発明性のある予防的および／または治療的なプロトコルは、治療有効量の１つ以上の発明性のあるワクチンナノキャリアを、免疫応答が調節される（例えば、Ｔ細胞とＢ細胞の両方またはそのいずれかにおいて刺激される）ように被験体に投与することを含む。
本発明は、治療有効量の１つ以上のワクチンナノキャリアおよび１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む新規組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載されるような発明性のあるワクチンナノキャリアを含む薬学的組成物を提供する。その組成物は、１つより多いタイプのナノキャリアを含み得、各タイプは、異なる構成物質（例えば、免疫調節剤、標的化剤、免疫刺激剤、賦形剤など）を有する。いくつかの実施形態によれば、発明性のある組成物を含む薬学的組成物を、それを必要とする被験体（例えば、ヒト）に投与する方法が提供される。
いくつかの実施形態において、治療有効量の発明性のあるワクチンナノキャリア組成物は、疾患、障害および／または状態を有するという診断の前に、診断と同時に、および／または診断の後に、患者および／または動物に送達される。いくつかの実施形態において、治療量の発明性のあるワクチンナノキャリア組成物は、疾患、障害および／または状態の症状の発生の前、発生と同時に、および／または発生の後に、患者および／または動物に送達される。ある特定の実施形態において、治療量の発明性のあるワクチンナノキャリア組成物は、感染性因子に曝露される前に患者および／または動物に投与される。ある特定の実施形態において、治療量の発明性のあるワクチンナノキャリア組成物は、感染性因子に曝露された後に患者および／または動物に投与される。ある特定の実施形態において、治療量の発明性のあるワクチンナノキャリア組成物は、習慣性物質またはトキシンに曝露される前に患者および／または動物に投与される。ある特定の実施形態において、治療量の発明性のあるワクチンナノキャリア組成物は、習慣性物質またはトキシンに曝露された後に患者および／または動物に投与される。
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、皮下、脳（心）室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）、経皮的、皮膚間（ｉｎｔｅｒｄｅｒｍａｌ）、直腸、膣内、腹腔内、局所的（粉末、軟膏、クリームおよび／または液滴によるようなもの）、経皮的、粘膜、鼻、頬、経腸的、舌下；気管内点滴注入、気管支点滴注入および／もしくは吸入によるもの；ならびに／または経口スプレー、鼻スプレーおよび／もしくはエアロゾルとしてのものをはじめとした、種々の経路によって投与される。ある特定の実施形態において、組成物は、経口的に投与される。ある特定の実施形態において、組成物は、非経口的に投与される。ある特定の実施形態において、組成物は、筋肉内注射を介して投与される。
ある特定の実施形態において、疾患、障害および／または状態（例えば、特定の微生物感染）の発症および／または進行を遅延させるワクチンナノキャリアは、その疾患、障害および／または状態の症状を処置する１つ以上のさらなる治療薬と併用して投与され得る。例えば、本ワクチンナノキャリアは、抗癌剤、抗炎症剤、抗生物質または抗ウイルス剤の使用と併用され得る。
本発明は、本発明のナノキャリアの１つ以上を備える種々のキットを提供する。例えば、本発明は、発明性のあるナノキャリアおよびそれを使用するための指示書を備えるキットを提供する。キットは、複数の異なるナノキャリアを備え得る。キットは、任意のいくつかのさらなる成分または試薬を任意の組み合わせで備え得る。本発明のある特定の実施形態によれば、キットは、例えば、（ｉ）少なくとも１つの免疫調節剤を含むナノキャリア（ここで、その少なくとも１つの免疫調節剤は、Ｔ細胞応答とＢ細胞応答の両方またはそのいずれかを刺激することができる）、少なくとも１つの標的化部分および／または少なくとも１つの免疫刺激剤；（ｉｉ）そのナノキャリアを、それを必要とする被験体に投与するための指示書を備え得る。ある特定の実施形態において、キットは、例えば、（ｉ）少なくとも１つの免疫調節剤（ここで、その少なくとも１つの免疫調節剤は、Ｔ細胞応答とＢ細胞応答の両方を刺激することができる）；（ｉｉ）少なくとも１つの標的化部分；（ｉｉｉ）少なくとも１つの免疫刺激剤；（ｉｖ）ポリマーマトリックス前駆体；（ｖ）脂質および両親媒性の実体；（ｖｉ）発明性のあるワクチンナノキャリアを個別の成分（ｉ）〜（ｖ）から調製するための指示書を備え得る。
いくつかの実施形態において、キットは、発明性のあるナノキャリアおよび混合するための指示書を備える。そのようなキットは、いくつかの実施形態において、免疫刺激剤および／または抗原も備える。そのようなキットのナノキャリアは、免疫調節剤（例えば、ユニバーサルＴ細胞抗原などのＴ細胞抗原）および／または標的化部分を含み得る。そのＴ細胞抗原および／または標的化部分は、ナノキャリアの表面上に存在し得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤と抗原とは、同じである。いくつかの実施形態において、それらは、異なる。
上に記載された前述の実施形態のいずれかにおいて、結合体化という単語は、文脈が別のことを明確に示さない限り、共有結合的または非共有結合的な結合体化のことを意味する。上に記載された前述の実施形態のいずれかにおいて、被包という単語は、混合物によってか、コアを取り囲んでいるシェルによってか、ナノキャリアの表面の内側の共有結合によってか、などに関係なく、その中への物理的な捕捉のことを意味する。
本願は、様々な発行された特許、公開された特許出願、学術論文および他の刊行物を参照し、それらのすべては、本明細書中で参考として援用される。
最適な体液性免疫応答および細胞性免疫応答に対する複合型ワクチン標的化ストラテジー。複合（ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ）ワクチンは、内在的なＴ細胞抗原、アジュバント（示さず）ならびにＤＣ、ＦＤＣおよびＳＣＳ−Ｍｐｈに対する標的化部分を、Ｂ細胞認識のための表面抗原とともに有する。ｓ．ｃ．またはｉ．ｍ．注射すると、その材料は、排出リンパ管（ｄｒａｉｎｉｎｇ ｌｙｍｐｈ ｖｅｓｓｅｌ）を介してリンパ節に達し、そして各ＡＰＣ上に蓄積する（明確にするために、ＡＰＣ特異的な標的化部分だけが示されているが、各ＡＰＣは、複合体全体を獲得する）。ＤＣは、その複合体を内部移行して消化し、そして抗原ペプチドをＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩにおいてそれぞれＣＤ８およびＣＤ４Ｔ細胞に提示する。活性化されたＴ細胞は、細胞性免疫応答を媒介するエフェクター／記憶（ＴＥｆｆ／Ｍｅｍ）細胞に分化する。ＴＦＨ細胞は、ＳＣＳ−Ｍｐｈ上の抗原によって最初に刺激されたＢ細胞に対して、およびＴＦＨの再刺激のためにＴ細胞抗原を獲得してプロセシングするプロセスにおいて、補助を提供する。ＴＦＨ細胞によって提供される補助は、Ｂ細胞が増殖し、そして高親和性抗体を産生する、ＧＣ反応の発生を可能にする。 ＳＣＳ−Ｍｐｈは、リンパ由来のウイルス粒子に結合し、そしてそれらを濾胞Ｂ細胞に提示する。（Ａ）抗ＣＤ１６９で染色され、そしてコムギ胚芽凝集素で対比染色された、マウス膝窩リンパ節の皮質の免疫組織化学的染色。このリンパ節は、赤色蛍光水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）の足蹠注射の３０分後に回収された。排出リンパ節の被膜下洞において、その赤色のウイルスは、もっぱらＣＤ１６９＋マクロファージと共局在化した。（Ｂ）ＶＳＶ注射の３０分後の被膜下洞の床（ＳＣＳｆ）の下のリンパ節マクロファージ（Ｍｐｈ）および濾胞Ｂ細胞（Ｂ１）の電子顕微鏡像は、Ｍｐｈの表面およびファゴリソソーム内ならびにＭｐｈとＢ細胞との間の界面におけるＶＳＶを示している（矢頭）。（Ｃ）無処置マウス（Ｂ６）の足蹠にＶＳＶを注射することによって、ウイルス特異的Ｂ細胞上の表面に発現されるＩｇＭの迅速なダウンレギュレーションが生じ、これは、Ｂ細胞活性化の徴候である。クロドロネートリポソーム（ＣＬＬ）の足蹠注射後のＳＣＳ−Ｍｐｈの枯渇は、Ｂ細胞活性化を無くし、このことから、ＳＣＳ−Ｍｐｈが、Ｂ細胞への粒状抗原の提示に必須であることが示唆される。 ＳＣＳ−Ｍｐｈは、リンパ由来のウイルス粒子に結合し、そしてそれらを濾胞Ｂ細胞に提示する。（Ａ）抗ＣＤ１６９で染色され、そしてコムギ胚芽凝集素で対比染色された、マウス膝窩リンパ節の皮質の免疫組織化学的染色。このリンパ節は、赤色蛍光水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）の足蹠注射の３０分後に回収された。排出リンパ節の被膜下洞において、その赤色のウイルスは、もっぱらＣＤ１６９＋マクロファージと共局在化した。（Ｂ）ＶＳＶ注射の３０分後の被膜下洞の床（ＳＣＳｆ）の下のリンパ節マクロファージ（Ｍｐｈ）および濾胞Ｂ細胞（Ｂ１）の電子顕微鏡像は、Ｍｐｈの表面およびファゴリソソーム内ならびにＭｐｈとＢ細胞との間の界面におけるＶＳＶを示している（矢頭）。（Ｃ）無処置マウス（Ｂ６）の足蹠にＶＳＶを注射することによって、ウイルス特異的Ｂ細胞上の表面に発現されるＩｇＭの迅速なダウンレギュレーションが生じ、これは、Ｂ細胞活性化の徴候である。クロドロネートリポソーム（ＣＬＬ）の足蹠注射後のＳＣＳ−Ｍｐｈの枯渇は、Ｂ細胞活性化を無くし、このことから、ＳＣＳ−Ｍｐｈが、Ｂ細胞への粒状抗原の提示に必須であることが示唆される。 ＳＣＳ−Ｍｐｈは、リンパ由来のウイルス粒子に結合し、そしてそれらを濾胞Ｂ細胞に提示する。（Ａ）抗ＣＤ１６９で染色され、そしてコムギ胚芽凝集素で対比染色された、マウス膝窩リンパ節の皮質の免疫組織化学的染色。このリンパ節は、赤色蛍光水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）の足蹠注射の３０分後に回収された。排出リンパ節の被膜下洞において、その赤色のウイルスは、もっぱらＣＤ１６９＋マクロファージと共局在化した。（Ｂ）ＶＳＶ注射の３０分後の被膜下洞の床（ＳＣＳｆ）の下のリンパ節マクロファージ（Ｍｐｈ）および濾胞Ｂ細胞（Ｂ１）の電子顕微鏡像は、Ｍｐｈの表面およびファゴリソソーム内ならびにＭｐｈとＢ細胞との間の界面におけるＶＳＶを示している（矢頭）。（Ｃ）無処置マウス（Ｂ６）の足蹠にＶＳＶを注射することによって、ウイルス特異的Ｂ細胞上の表面に発現されるＩｇＭの迅速なダウンレギュレーションが生じ、これは、Ｂ細胞活性化の徴候である。クロドロネートリポソーム（ＣＬＬ）の足蹠注射後のＳＣＳ−Ｍｐｈの枯渇は、Ｂ細胞活性化を無くし、このことから、ＳＣＳ−Ｍｐｈが、Ｂ細胞への粒状抗原の提示に必須であることが示唆される。 膜に組み込まれている親油性の免疫調節剤およびリポソームの中に被包されている親水性免疫調節剤を有する例示的なリポソームナノキャリア。 膜に組み込まれている親油性の免疫調節剤およびリポソームの中に被包されている親水性免疫調節剤を有する、ナノ粒子によって安定化された例示的なリポソームナノキャリア。 膜に組み込まれている親油性の免疫調節剤およびポリマーナノ粒子の中に被包されている疎水性免疫調節剤を有する例示的なリポソーム−ポリマーナノキャリア。 膜に組み込まれている親油性の免疫調節剤およびポリマーナノ粒子の中に被包されている疎水性免疫調節剤を有する、ナノ粒子によって安定化された例示的なリポソーム−ポリマーナノキャリア。 膜に組み込まれている親油性の免疫調節剤および逆ミセルの中に被包されている親水性免疫調節剤を有する逆ミセルを含む例示的なリポソーム−ポリマーナノキャリア。 膜に組み込まれている親油性の免疫調節剤およびリポソームの内側に被包されている親水性免疫調節剤を有する逆ミセルを含む、ナノ粒子によって安定化された例示的なリポソーム−ポリマーナノキャリア。 脂質単層と結合体化されている親水性免疫調節剤およびポリマーコアの内側に被包されている疎水性免疫調節剤を有する、脂質によって安定化された例示的なポリマーナノキャリア。 脂質単層と結合体化されている親水性免疫調節剤およびポリマーコアの内側に被包されている親水性免疫調節剤を有する逆ミセルを含む、脂質によって安定化された例示的なポリマーナノキャリア。 ＳＣＳマクロファージによるリンパ由来ＶＳＶの捕捉。（Ａ）膝窩ＬＮにおけるＶＳＶのＭＰ−ＩＶＭ顕微鏡像（数字：足蹠注射後の分；スケールバー：１００μｍ）。（Ｂ）注射の３時間後のＣ５７ＢＬ／６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）レシピエントにおけるＶＳＶ蓄積（スケールバー：５０μｍ）。（Ｃ）注射の５分後のＬＮにおけるＶＳＶの電子顕微鏡像。中央の顕微鏡像が、模式的に示され（左）、より高い倍率で示される（右）。矢頭は、ＶＳＶ粒子を特定している（スケールバー：２μｍ）。（Ｄ）ＶＳＶ−排出ＬＮの共焦点顕微鏡像（３０分）。スケールバー：１００μｍ（左）、１５μｍ（右）。（Ｅ）野生型マウス、Ｃ３欠損マウスまたはＣＬＬ枯渇マウスへの注射の２時間後の膝窩ＬＮにおけるＶＳＶ力価。＊＊＊：ｐ＜０．００１（２元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニの事後検定）。（Ｆ）ＤＨ−ＬＭＰ２ａマウスにおけるＶＳＶ捕捉。＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｇ）無処置マウスおよびＣＬＬ処置マウスにおける足蹠注射後のＶＳＶ力価（２回の同様の実験のうちの１回；ｎ＝３）。ＰｒｏｘＬＮ：鼠径部の傍大動脈（ｐａｒａａｏｒｔｉｃ）ＬＮ；ＢｒａｃｈＬＮ：上腕ＬＮ。（Ｈ）ＴＤカニューレ挿入後のリンパ、脾臓および血液中のウイルス価；＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｅ〜Ｈ）における水平バーは、平均値を表している。 ＳＣＳマクロファージによるリンパ由来ＶＳＶの捕捉。（Ａ）膝窩ＬＮにおけるＶＳＶのＭＰ−ＩＶＭ顕微鏡像（数字：足蹠注射後の分；スケールバー：１００μｍ）。（Ｂ）注射の３時間後のＣ５７ＢＬ／６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）レシピエントにおけるＶＳＶ蓄積（スケールバー：５０μｍ）。（Ｃ）注射の５分後のＬＮにおけるＶＳＶの電子顕微鏡像。中央の顕微鏡像が、模式的に示され（左）、より高い倍率で示される（右）。矢頭は、ＶＳＶ粒子を特定している（スケールバー：２μｍ）。（Ｄ）ＶＳＶ−排出ＬＮの共焦点顕微鏡像（３０分）。スケールバー：１００μｍ（左）、１５μｍ（右）。（Ｅ）野生型マウス、Ｃ３欠損マウスまたはＣＬＬ枯渇マウスへの注射の２時間後の膝窩ＬＮにおけるＶＳＶ力価。＊＊＊：ｐ＜０．００１（２元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニの事後検定）。（Ｆ）ＤＨ−ＬＭＰ２ａマウスにおけるＶＳＶ捕捉。＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｇ）無処置マウスおよびＣＬＬ処置マウスにおける足蹠注射後のＶＳＶ力価（２回の同様の実験のうちの１回；ｎ＝３）。ＰｒｏｘＬＮ：鼠径部の傍大動脈（ｐａｒａａｏｒｔｉｃ）ＬＮ；ＢｒａｃｈＬＮ：上腕ＬＮ。（Ｈ）ＴＤカニューレ挿入後のリンパ、脾臓および血液中のウイルス価；＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｅ〜Ｈ）における水平バーは、平均値を表している。 ＳＣＳマクロファージによるリンパ由来ＶＳＶの捕捉。（Ａ）膝窩ＬＮにおけるＶＳＶのＭＰ−ＩＶＭ顕微鏡像（数字：足蹠注射後の分；スケールバー：１００μｍ）。（Ｂ）注射の３時間後のＣ５７ＢＬ／６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）レシピエントにおけるＶＳＶ蓄積（スケールバー：５０μｍ）。（Ｃ）注射の５分後のＬＮにおけるＶＳＶの電子顕微鏡像。中央の顕微鏡像が、模式的に示され（左）、より高い倍率で示される（右）。矢頭は、ＶＳＶ粒子を特定している（スケールバー：２μｍ）。（Ｄ）ＶＳＶ−排出ＬＮの共焦点顕微鏡像（３０分）。スケールバー：１００μｍ（左）、１５μｍ（右）。（Ｅ）野生型マウス、Ｃ３欠損マウスまたはＣＬＬ枯渇マウスへの注射の２時間後の膝窩ＬＮにおけるＶＳＶ力価。＊＊＊：ｐ＜０．００１（２元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニの事後検定）。（Ｆ）ＤＨ−ＬＭＰ２ａマウスにおけるＶＳＶ捕捉。＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｇ）無処置マウスおよびＣＬＬ処置マウスにおける足蹠注射後のＶＳＶ力価（２回の同様の実験のうちの１回；ｎ＝３）。ＰｒｏｘＬＮ：鼠径部の傍大動脈（ｐａｒａａｏｒｔｉｃ）ＬＮ；ＢｒａｃｈＬＮ：上腕ＬＮ。（Ｈ）ＴＤカニューレ挿入後のリンパ、脾臓および血液中のウイルス価；＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｅ〜Ｈ）における水平バーは、平均値を表している。 ＳＣＳマクロファージによるリンパ由来ＶＳＶの捕捉。（Ａ）膝窩ＬＮにおけるＶＳＶのＭＰ−ＩＶＭ顕微鏡像（数字：足蹠注射後の分；スケールバー：１００μｍ）。（Ｂ）注射の３時間後のＣ５７ＢＬ／６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）レシピエントにおけるＶＳＶ蓄積（スケールバー：５０μｍ）。（Ｃ）注射の５分後のＬＮにおけるＶＳＶの電子顕微鏡像。中央の顕微鏡像が、模式的に示され（左）、より高い倍率で示される（右）。矢頭は、ＶＳＶ粒子を特定している（スケールバー：２μｍ）。（Ｄ）ＶＳＶ−排出ＬＮの共焦点顕微鏡像（３０分）。スケールバー：１００μｍ（左）、１５μｍ（右）。（Ｅ）野生型マウス、Ｃ３欠損マウスまたはＣＬＬ枯渇マウスへの注射の２時間後の膝窩ＬＮにおけるＶＳＶ力価。＊＊＊：ｐ＜０．００１（２元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニの事後検定）。（Ｆ）ＤＨ−ＬＭＰ２ａマウスにおけるＶＳＶ捕捉。＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｇ）無処置マウスおよびＣＬＬ処置マウスにおける足蹠注射後のＶＳＶ力価（２回の同様の実験のうちの１回；ｎ＝３）。ＰｒｏｘＬＮ：鼠径部の傍大動脈（ｐａｒａａｏｒｔｉｃ）ＬＮ；ＢｒａｃｈＬＮ：上腕ＬＮ。（Ｈ）ＴＤカニューレ挿入後のリンパ、脾臓および血液中のウイルス価；＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｅ〜Ｈ）における水平バーは、平均値を表している。 ＳＣＳマクロファージによるリンパ由来ＶＳＶの捕捉。（Ａ）膝窩ＬＮにおけるＶＳＶのＭＰ−ＩＶＭ顕微鏡像（数字：足蹠注射後の分；スケールバー：１００μｍ）。（Ｂ）注射の３時間後のＣ５７ＢＬ／６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）レシピエントにおけるＶＳＶ蓄積（スケールバー：５０μｍ）。（Ｃ）注射の５分後のＬＮにおけるＶＳＶの電子顕微鏡像。中央の顕微鏡像が、模式的に示され（左）、より高い倍率で示される（右）。矢頭は、ＶＳＶ粒子を特定している（スケールバー：２μｍ）。（Ｄ）ＶＳＶ−排出ＬＮの共焦点顕微鏡像（３０分）。スケールバー：１００μｍ（左）、１５μｍ（右）。（Ｅ）野生型マウス、Ｃ３欠損マウスまたはＣＬＬ枯渇マウスへの注射の２時間後の膝窩ＬＮにおけるＶＳＶ力価。＊＊＊：ｐ＜０．００１（２元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニの事後検定）。（Ｆ）ＤＨ−ＬＭＰ２ａマウスにおけるＶＳＶ捕捉。＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｇ）無処置マウスおよびＣＬＬ処置マウスにおける足蹠注射後のＶＳＶ力価（２回の同様の実験のうちの１回；ｎ＝３）。ＰｒｏｘＬＮ：鼠径部の傍大動脈（ｐａｒａａｏｒｔｉｃ）ＬＮ；ＢｒａｃｈＬＮ：上腕ＬＮ。（Ｈ）ＴＤカニューレ挿入後のリンパ、脾臓および血液中のウイルス価；＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｅ〜Ｈ）における水平バーは、平均値を表している。 ＳＣＳマクロファージによるリンパ由来ＶＳＶの捕捉。（Ａ）膝窩ＬＮにおけるＶＳＶのＭＰ−ＩＶＭ顕微鏡像（数字：足蹠注射後の分；スケールバー：１００μｍ）。（Ｂ）注射の３時間後のＣ５７ＢＬ／６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）レシピエントにおけるＶＳＶ蓄積（スケールバー：５０μｍ）。（Ｃ）注射の５分後のＬＮにおけるＶＳＶの電子顕微鏡像。中央の顕微鏡像が、模式的に示され（左）、より高い倍率で示される（右）。矢頭は、ＶＳＶ粒子を特定している（スケールバー：２μｍ）。（Ｄ）ＶＳＶ−排出ＬＮの共焦点顕微鏡像（３０分）。スケールバー：１００μｍ（左）、１５μｍ（右）。（Ｅ）野生型マウス、Ｃ３欠損マウスまたはＣＬＬ枯渇マウスへの注射の２時間後の膝窩ＬＮにおけるＶＳＶ力価。＊＊＊：ｐ＜０．００１（２元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニの事後検定）。（Ｆ）ＤＨ−ＬＭＰ２ａマウスにおけるＶＳＶ捕捉。＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｇ）無処置マウスおよびＣＬＬ処置マウスにおける足蹠注射後のＶＳＶ力価（２回の同様の実験のうちの１回；ｎ＝３）。ＰｒｏｘＬＮ：鼠径部の傍大動脈（ｐａｒａａｏｒｔｉｃ）ＬＮ；ＢｒａｃｈＬＮ：上腕ＬＮ。（Ｈ）ＴＤカニューレ挿入後のリンパ、脾臓および血液中のウイルス価；＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｅ〜Ｈ）における水平バーは、平均値を表している。 ＳＣＳマクロファージによるリンパ由来ＶＳＶの捕捉。（Ａ）膝窩ＬＮにおけるＶＳＶのＭＰ−ＩＶＭ顕微鏡像（数字：足蹠注射後の分；スケールバー：１００μｍ）。（Ｂ）注射の３時間後のＣ５７ＢＬ／６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）レシピエントにおけるＶＳＶ蓄積（スケールバー：５０μｍ）。（Ｃ）注射の５分後のＬＮにおけるＶＳＶの電子顕微鏡像。中央の顕微鏡像が、模式的に示され（左）、より高い倍率で示される（右）。矢頭は、ＶＳＶ粒子を特定している（スケールバー：２μｍ）。（Ｄ）ＶＳＶ−排出ＬＮの共焦点顕微鏡像（３０分）。スケールバー：１００μｍ（左）、１５μｍ（右）。（Ｅ）野生型マウス、Ｃ３欠損マウスまたはＣＬＬ枯渇マウスへの注射の２時間後の膝窩ＬＮにおけるＶＳＶ力価。＊＊＊：ｐ＜０．００１（２元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニの事後検定）。（Ｆ）ＤＨ−ＬＭＰ２ａマウスにおけるＶＳＶ捕捉。＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｇ）無処置マウスおよびＣＬＬ処置マウスにおける足蹠注射後のＶＳＶ力価（２回の同様の実験のうちの１回；ｎ＝３）。ＰｒｏｘＬＮ：鼠径部の傍大動脈（ｐａｒａａｏｒｔｉｃ）ＬＮ；ＢｒａｃｈＬＮ：上腕ＬＮ。（Ｈ）ＴＤカニューレ挿入後のリンパ、脾臓および血液中のウイルス価；＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｅ〜Ｈ）における水平バーは、平均値を表している。 ＳＣＳマクロファージによるリンパ由来ＶＳＶの捕捉。（Ａ）膝窩ＬＮにおけるＶＳＶのＭＰ−ＩＶＭ顕微鏡像（数字：足蹠注射後の分；スケールバー：１００μｍ）。（Ｂ）注射の３時間後のＣ５７ＢＬ／６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）レシピエントにおけるＶＳＶ蓄積（スケールバー：５０μｍ）。（Ｃ）注射の５分後のＬＮにおけるＶＳＶの電子顕微鏡像。中央の顕微鏡像が、模式的に示され（左）、より高い倍率で示される（右）。矢頭は、ＶＳＶ粒子を特定している（スケールバー：２μｍ）。（Ｄ）ＶＳＶ−排出ＬＮの共焦点顕微鏡像（３０分）。スケールバー：１００μｍ（左）、１５μｍ（右）。（Ｅ）野生型マウス、Ｃ３欠損マウスまたはＣＬＬ枯渇マウスへの注射の２時間後の膝窩ＬＮにおけるＶＳＶ力価。＊＊＊：ｐ＜０．００１（２元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニの事後検定）。（Ｆ）ＤＨ−ＬＭＰ２ａマウスにおけるＶＳＶ捕捉。＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｇ）無処置マウスおよびＣＬＬ処置マウスにおける足蹠注射後のＶＳＶ力価（２回の同様の実験のうちの１回；ｎ＝３）。ＰｒｏｘＬＮ：鼠径部の傍大動脈（ｐａｒａａｏｒｔｉｃ）ＬＮ；ＢｒａｃｈＬＮ：上腕ＬＮ。（Ｈ）ＴＤカニューレ挿入後のリンパ、脾臓および血液中のウイルス価；＊：ｐ＜０．０５（対応のないｔ検定）。（Ｅ〜Ｈ）における水平バーは、平均値を表している。 末梢ＬＮにおけるＣＤ１６９＋マクロファージの特徴付け。（Ａ〜Ｃ）ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスのＬＮからプールされた単核細胞の系列マーカーの発現解析。（Ａ）ＣＤ１６９＋集団（中央パネル）に対してゲーティングした後、マクロファージと会合されている２つの表面マーカーであるＩ−Ａｂ（ＭＨＣクラスＩＩ）およびＣＤ１１ｂの発現について細胞を解析した（下パネル）。抗ＣＤ１６９に対するアイソタイプコントロールでの染色は、上パネルに示されている。（Ｂ）ＣＤ１６９＋Ｉ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞をＣＤ６８、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｃおよびＧｒ−１の発現についてさらに解析した。ＣＤ１１ｃ染色を除いて、マーカー＋細胞を同定するためにゲートをかけ、ここで、そのマーカーは、通常のＣＤ１１ｃ高樹状細胞を同定するように位置させた（オーバーレイ）。数字は、ヒストグラムゲート下のＣＤ１６９＋Ｉ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞のパーセンテージを示している。データは、同様の結果を有した３〜５回の実験の代表である。（Ｃ）パネル（Ｂ）におけるデータの定量的解析、エラーバーは、ＳＥＭを表している。（Ｄ〜Ｇ）選択されたマーカーがＣＤ１６９＋細胞上で同時発現していることを示している（矢頭）、ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウス由来の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。スケールバー：左カラムでは１２５μｍおよび他のすべてのカラムでは２０μｍ。 末梢ＬＮにおけるＣＤ１６９＋マクロファージの特徴付け。（Ａ〜Ｃ）ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスのＬＮからプールされた単核細胞の系列マーカーの発現解析。（Ａ）ＣＤ１６９＋集団（中央パネル）に対してゲーティングした後、マクロファージと会合されている２つの表面マーカーであるＩ−Ａｂ（ＭＨＣクラスＩＩ）およびＣＤ１１ｂの発現について細胞を解析した（下パネル）。抗ＣＤ１６９に対するアイソタイプコントロールでの染色は、上パネルに示されている。（Ｂ）ＣＤ１６９＋Ｉ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞をＣＤ６８、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｃおよびＧｒ−１の発現についてさらに解析した。ＣＤ１１ｃ染色を除いて、マーカー＋細胞を同定するためにゲートをかけ、ここで、そのマーカーは、通常のＣＤ１１ｃ高樹状細胞を同定するように位置させた（オーバーレイ）。数字は、ヒストグラムゲート下のＣＤ１６９＋Ｉ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞のパーセンテージを示している。データは、同様の結果を有した３〜５回の実験の代表である。（Ｃ）パネル（Ｂ）におけるデータの定量的解析、エラーバーは、ＳＥＭを表している。（Ｄ〜Ｇ）選択されたマーカーがＣＤ１６９＋細胞上で同時発現していることを示している（矢頭）、ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウス由来の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。スケールバー：左カラムでは１２５μｍおよび他のすべてのカラムでは２０μｍ。 末梢ＬＮにおけるＣＤ１６９＋マクロファージの特徴付け。（Ａ〜Ｃ）ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスのＬＮからプールされた単核細胞の系列マーカーの発現解析。（Ａ）ＣＤ１６９＋集団（中央パネル）に対してゲーティングした後、マクロファージと会合されている２つの表面マーカーであるＩ−Ａｂ（ＭＨＣクラスＩＩ）およびＣＤ１１ｂの発現について細胞を解析した（下パネル）。抗ＣＤ１６９に対するアイソタイプコントロールでの染色は、上パネルに示されている。（Ｂ）ＣＤ１６９＋Ｉ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞をＣＤ６８、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｃおよびＧｒ−１の発現についてさらに解析した。ＣＤ１１ｃ染色を除いて、マーカー＋細胞を同定するためにゲートをかけ、ここで、そのマーカーは、通常のＣＤ１１ｃ高樹状細胞を同定するように位置させた（オーバーレイ）。数字は、ヒストグラムゲート下のＣＤ１６９＋Ｉ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞のパーセンテージを示している。データは、同様の結果を有した３〜５回の実験の代表である。（Ｃ）パネル（Ｂ）におけるデータの定量的解析、エラーバーは、ＳＥＭを表している。（Ｄ〜Ｇ）選択されたマーカーがＣＤ１６９＋細胞上で同時発現していることを示している（矢頭）、ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウス由来の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。スケールバー：左カラムでは１２５μｍおよび他のすべてのカラムでは２０μｍ。 末梢ＬＮにおけるＣＤ１６９＋マクロファージの特徴付け。（Ａ〜Ｃ）ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスのＬＮからプールされた単核細胞の系列マーカーの発現解析。（Ａ）ＣＤ１６９＋集団（中央パネル）に対してゲーティングした後、マクロファージと会合されている２つの表面マーカーであるＩ−Ａｂ（ＭＨＣクラスＩＩ）およびＣＤ１１ｂの発現について細胞を解析した（下パネル）。抗ＣＤ１６９に対するアイソタイプコントロールでの染色は、上パネルに示されている。（Ｂ）ＣＤ１６９＋Ｉ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞をＣＤ６８、Ｆ４／８０、ＣＤ１１ｃおよびＧｒ−１の発現についてさらに解析した。ＣＤ１１ｃ染色を除いて、マーカー＋細胞を同定するためにゲートをかけ、ここで、そのマーカーは、通常のＣＤ１１ｃ高樹状細胞を同定するように位置させた（オーバーレイ）。数字は、ヒストグラムゲート下のＣＤ１６９＋Ｉ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞のパーセンテージを示している。データは、同様の結果を有した３〜５回の実験の代表である。（Ｃ）パネル（Ｂ）におけるデータの定量的解析、エラーバーは、ＳＥＭを表している。（Ｄ〜Ｇ）選択されたマーカーがＣＤ１６９＋細胞上で同時発現していることを示している（矢頭）、ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウス由来の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。スケールバー：左カラムでは１２５μｍおよび他のすべてのカラムでは２０μｍ。 ＣＬＬ処置後の膝窩ＬＮにおける形態学的変化。（Ａ）無処置コントロールマウス（−ＣＬＬ、左カラム）および６〜１０日前にＣＬＬ足蹠注射を受けていた動物の膝窩ＬＮ（上３列）および脾臓（下列）の共焦点顕微鏡像。ＣＬＬ処置により、ＬＮ（上列）においてＣＤ１６９＋マクロファージが枯渇したが、脾臓では枯渇しなかった；Ｌｙｖｅ−１＋髄質性リンパ内皮細胞（２列目）および皮質性ＣＤ１１ｃ高樹状細胞（３列目）は、影響されなかった。（Ｂ）ＣＬＬ処置有りおよび無しの膝窩ＬＮにおける細胞サブセットの出現率、データは、ｎ＝３匹のマウスからであり、平均値±ＳＥＭとして示されている；＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１；対応のないスチューデントのｔ検定。（Ｃ）５０μｌのＣＬＬの足蹠注射の６〜１０日後の膝窩ＬＮにおける様々なＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋白血球サブセットの出現率。各符号は、１匹のマウスからのプールされた膝窩ＬＮを表している。膝窩ＬＮにおける全単核細胞のうちのサブセット出現率は、図１２Ａに示されるようにＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞に対してゲーティングした後に、フローサイトメトリーによって評価された。（Ｄ）処置無し（−ＣＬＬ）またはＣＬＬの足蹠注射の７日後の（＋ＣＬＬ）、膝窩ＬＮの免疫組織化学的解析。スケールバー：３００ｍｍ。（Ｅ）ＣＬＬ処置の７日後かつ２０μｇのＶＳＶ−ＩＮＤの足蹠注射の５分後の代表的な膝窩ＬＮにおけるＳＣＳの超微細構造。ＳＣＳマクロファージおよびウイルス粒子が完全に存在しないことに注意すること。スケールバー：２μｍ。 ＣＬＬ処置後の膝窩ＬＮにおける形態学的変化。（Ａ）無処置コントロールマウス（−ＣＬＬ、左カラム）および６〜１０日前にＣＬＬ足蹠注射を受けていた動物の膝窩ＬＮ（上３列）および脾臓（下列）の共焦点顕微鏡像。ＣＬＬ処置により、ＬＮ（上列）においてＣＤ１６９＋マクロファージが枯渇したが、脾臓では枯渇しなかった；Ｌｙｖｅ−１＋髄質性リンパ内皮細胞（２列目）および皮質性ＣＤ１１ｃ高樹状細胞（３列目）は、影響されなかった。（Ｂ）ＣＬＬ処置有りおよび無しの膝窩ＬＮにおける細胞サブセットの出現率、データは、ｎ＝３匹のマウスからであり、平均値±ＳＥＭとして示されている；＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１；対応のないスチューデントのｔ検定。（Ｃ）５０μｌのＣＬＬの足蹠注射の６〜１０日後の膝窩ＬＮにおける様々なＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋白血球サブセットの出現率。各符号は、１匹のマウスからのプールされた膝窩ＬＮを表している。膝窩ＬＮにおける全単核細胞のうちのサブセット出現率は、図１２Ａに示されるようにＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞に対してゲーティングした後に、フローサイトメトリーによって評価された。（Ｄ）処置無し（−ＣＬＬ）またはＣＬＬの足蹠注射の７日後の（＋ＣＬＬ）、膝窩ＬＮの免疫組織化学的解析。スケールバー：３００ｍｍ。（Ｅ）ＣＬＬ処置の７日後かつ２０μｇのＶＳＶ−ＩＮＤの足蹠注射の５分後の代表的な膝窩ＬＮにおけるＳＣＳの超微細構造。ＳＣＳマクロファージおよびウイルス粒子が完全に存在しないことに注意すること。スケールバー：２μｍ。 ＣＬＬ処置後の膝窩ＬＮにおける形態学的変化。（Ａ）無処置コントロールマウス（−ＣＬＬ、左カラム）および６〜１０日前にＣＬＬ足蹠注射を受けていた動物の膝窩ＬＮ（上３列）および脾臓（下列）の共焦点顕微鏡像。ＣＬＬ処置により、ＬＮ（上列）においてＣＤ１６９＋マクロファージが枯渇したが、脾臓では枯渇しなかった；Ｌｙｖｅ−１＋髄質性リンパ内皮細胞（２列目）および皮質性ＣＤ１１ｃ高樹状細胞（３列目）は、影響されなかった。（Ｂ）ＣＬＬ処置有りおよび無しの膝窩ＬＮにおける細胞サブセットの出現率、データは、ｎ＝３匹のマウスからであり、平均値±ＳＥＭとして示されている；＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１；対応のないスチューデントのｔ検定。（Ｃ）５０μｌのＣＬＬの足蹠注射の６〜１０日後の膝窩ＬＮにおける様々なＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋白血球サブセットの出現率。各符号は、１匹のマウスからのプールされた膝窩ＬＮを表している。膝窩ＬＮにおける全単核細胞のうちのサブセット出現率は、図１２Ａに示されるようにＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞に対してゲーティングした後に、フローサイトメトリーによって評価された。（Ｄ）処置無し（−ＣＬＬ）またはＣＬＬの足蹠注射の７日後の（＋ＣＬＬ）、膝窩ＬＮの免疫組織化学的解析。スケールバー：３００ｍｍ。（Ｅ）ＣＬＬ処置の７日後かつ２０μｇのＶＳＶ−ＩＮＤの足蹠注射の５分後の代表的な膝窩ＬＮにおけるＳＣＳの超微細構造。ＳＣＳマクロファージおよびウイルス粒子が完全に存在しないことに注意すること。スケールバー：２μｍ。 ＣＬＬ処置後の膝窩ＬＮにおける形態学的変化。（Ａ）無処置コントロールマウス（−ＣＬＬ、左カラム）および６〜１０日前にＣＬＬ足蹠注射を受けていた動物の膝窩ＬＮ（上３列）および脾臓（下列）の共焦点顕微鏡像。ＣＬＬ処置により、ＬＮ（上列）においてＣＤ１６９＋マクロファージが枯渇したが、脾臓では枯渇しなかった；Ｌｙｖｅ−１＋髄質性リンパ内皮細胞（２列目）および皮質性ＣＤ１１ｃ高樹状細胞（３列目）は、影響されなかった。（Ｂ）ＣＬＬ処置有りおよび無しの膝窩ＬＮにおける細胞サブセットの出現率、データは、ｎ＝３匹のマウスからであり、平均値±ＳＥＭとして示されている；＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１；対応のないスチューデントのｔ検定。（Ｃ）５０μｌのＣＬＬの足蹠注射の６〜１０日後の膝窩ＬＮにおける様々なＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋白血球サブセットの出現率。各符号は、１匹のマウスからのプールされた膝窩ＬＮを表している。膝窩ＬＮにおける全単核細胞のうちのサブセット出現率は、図１２Ａに示されるようにＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞に対してゲーティングした後に、フローサイトメトリーによって評価された。（Ｄ）処置無し（−ＣＬＬ）またはＣＬＬの足蹠注射の７日後の（＋ＣＬＬ）、膝窩ＬＮの免疫組織化学的解析。スケールバー：３００ｍｍ。（Ｅ）ＣＬＬ処置の７日後かつ２０μｇのＶＳＶ−ＩＮＤの足蹠注射の５分後の代表的な膝窩ＬＮにおけるＳＣＳの超微細構造。ＳＣＳマクロファージおよびウイルス粒子が完全に存在しないことに注意すること。スケールバー：２μｍ。 ＣＬＬ処置後の膝窩ＬＮにおける形態学的変化。（Ａ）無処置コントロールマウス（−ＣＬＬ、左カラム）および６〜１０日前にＣＬＬ足蹠注射を受けていた動物の膝窩ＬＮ（上３列）および脾臓（下列）の共焦点顕微鏡像。ＣＬＬ処置により、ＬＮ（上列）においてＣＤ１６９＋マクロファージが枯渇したが、脾臓では枯渇しなかった；Ｌｙｖｅ−１＋髄質性リンパ内皮細胞（２列目）および皮質性ＣＤ１１ｃ高樹状細胞（３列目）は、影響されなかった。（Ｂ）ＣＬＬ処置有りおよび無しの膝窩ＬＮにおける細胞サブセットの出現率、データは、ｎ＝３匹のマウスからであり、平均値±ＳＥＭとして示されている；＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１；対応のないスチューデントのｔ検定。（Ｃ）５０μｌのＣＬＬの足蹠注射の６〜１０日後の膝窩ＬＮにおける様々なＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋白血球サブセットの出現率。各符号は、１匹のマウスからのプールされた膝窩ＬＮを表している。膝窩ＬＮにおける全単核細胞のうちのサブセット出現率は、図１２Ａに示されるようにＩ−Ａｂ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞に対してゲーティングした後に、フローサイトメトリーによって評価された。（Ｄ）処置無し（−ＣＬＬ）またはＣＬＬの足蹠注射の７日後の（＋ＣＬＬ）、膝窩ＬＮの免疫組織化学的解析。スケールバー：３００ｍｍ。（Ｅ）ＣＬＬ処置の７日後かつ２０μｇのＶＳＶ−ＩＮＤの足蹠注射の５分後の代表的な膝窩ＬＮにおけるＳＣＳの超微細構造。ＳＣＳマクロファージおよびウイルス粒子が完全に存在しないことに注意すること。スケールバー：２μｍ。 膝窩ＬＮにおける蛍光性ウイルスおよびラテックスナノ粒子の保持。（Ａ）Ａｌｅｘａ−５６８標識アデノウイルス（ＡｄＶ）を足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９およびＡｌｅｘａ−６４７−α−Ｂ２２０で染色することにより、Ｂ細胞を特定した。スケールバー：１００μｍ（左パネル）および１５μｍ（右パネル）。（Ｂ）ＳＣＳマクロファージによって捕捉されたＡｄＶ粒子の透過型電子顕微鏡像。上パネルは、低倍率での全体像（中央パネル）の注釈付きの模式的な図を示している。中央パネル内の四角で囲まれた領域は、下のパネルにおいて拡大され、矢頭は、高電子密度の球状ＡｄＶ粒子を示している。スケールバー：２μｍ（上および中央パネル）および１μｍ（下パネル）。（Ｃ〜Ｄ）Ａｌｅｘａ−５６８標識されＵＶ不活性化された２０μｇのＡｄＶ（Ｃ）またはＶＶ（Ｄ）を足蹠注射した３０分後のＣ５７ＢＬ／６マウス由来の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。蛍光性のウイルスは、ＦＩＴＣ−α−Ｂ２２０染色によって特定されるＢ濾胞の上の皮質性ＳＣＳおよび髄質にも蓄積し、ここで、ウイルスは、ＣＤ１６９＋マクロファージだけでなく、ＬＹＶＥ−１＋リンパ内皮細胞によっても結合された。スケールバーは、１２５μｍ（左パネル）および２５μｍ（右パネル）を示している。（Ｅ）Ａｌｅｘａ−５６８標識ＶＳＶおよびおよそ１０１１Ｃｒｉｍｓｏｎ Ｆｌｕｏｓｐｈｅｒｅｓ（２００ｎｍ直径）を後足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結ＬＮ切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９で対比染色した。ラテックスビーズは、ＶＳＶとは異なり、排出ＬＮにおいて十分に保持されなかったことに注意すること。スケールバー：１２５μｍ。 膝窩ＬＮにおける蛍光性ウイルスおよびラテックスナノ粒子の保持。（Ａ）Ａｌｅｘａ−５６８標識アデノウイルス（ＡｄＶ）を足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９およびＡｌｅｘａ−６４７−α−Ｂ２２０で染色することにより、Ｂ細胞を特定した。スケールバー：１００μｍ（左パネル）および１５μｍ（右パネル）。（Ｂ）ＳＣＳマクロファージによって捕捉されたＡｄＶ粒子の透過型電子顕微鏡像。上パネルは、低倍率での全体像（中央パネル）の注釈付きの模式的な図を示している。中央パネル内の四角で囲まれた領域は、下のパネルにおいて拡大され、矢頭は、高電子密度の球状ＡｄＶ粒子を示している。スケールバー：２μｍ（上および中央パネル）および１μｍ（下パネル）。（Ｃ〜Ｄ）Ａｌｅｘａ−５６８標識されＵＶ不活性化された２０μｇのＡｄＶ（Ｃ）またはＶＶ（Ｄ）を足蹠注射した３０分後のＣ５７ＢＬ／６マウス由来の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。蛍光性のウイルスは、ＦＩＴＣ−α−Ｂ２２０染色によって特定されるＢ濾胞の上の皮質性ＳＣＳおよび髄質にも蓄積し、ここで、ウイルスは、ＣＤ１６９＋マクロファージだけでなく、ＬＹＶＥ−１＋リンパ内皮細胞によっても結合された。スケールバーは、１２５μｍ（左パネル）および２５μｍ（右パネル）を示している。（Ｅ）Ａｌｅｘａ−５６８標識ＶＳＶおよびおよそ１０１１Ｃｒｉｍｓｏｎ Ｆｌｕｏｓｐｈｅｒｅｓ（２００ｎｍ直径）を後足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結ＬＮ切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９で対比染色した。ラテックスビーズは、ＶＳＶとは異なり、排出ＬＮにおいて十分に保持されなかったことに注意すること。スケールバー：１２５μｍ。 膝窩ＬＮにおける蛍光性ウイルスおよびラテックスナノ粒子の保持。（Ａ）Ａｌｅｘａ−５６８標識アデノウイルス（ＡｄＶ）を足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９およびＡｌｅｘａ−６４７−α−Ｂ２２０で染色することにより、Ｂ細胞を特定した。スケールバー：１００μｍ（左パネル）および１５μｍ（右パネル）。（Ｂ）ＳＣＳマクロファージによって捕捉されたＡｄＶ粒子の透過型電子顕微鏡像。上パネルは、低倍率での全体像（中央パネル）の注釈付きの模式的な図を示している。中央パネル内の四角で囲まれた領域は、下のパネルにおいて拡大され、矢頭は、高電子密度の球状ＡｄＶ粒子を示している。スケールバー：２μｍ（上および中央パネル）および１μｍ（下パネル）。（Ｃ〜Ｄ）Ａｌｅｘａ−５６８標識されＵＶ不活性化された２０μｇのＡｄＶ（Ｃ）またはＶＶ（Ｄ）を足蹠注射した３０分後のＣ５７ＢＬ／６マウス由来の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。蛍光性のウイルスは、ＦＩＴＣ−α−Ｂ２２０染色によって特定されるＢ濾胞の上の皮質性ＳＣＳおよび髄質にも蓄積し、ここで、ウイルスは、ＣＤ１６９＋マクロファージだけでなく、ＬＹＶＥ−１＋リンパ内皮細胞によっても結合された。スケールバーは、１２５μｍ（左パネル）および２５μｍ（右パネル）を示している。（Ｅ）Ａｌｅｘａ−５６８標識ＶＳＶおよびおよそ１０１１Ｃｒｉｍｓｏｎ Ｆｌｕｏｓｐｈｅｒｅｓ（２００ｎｍ直径）を後足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結ＬＮ切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９で対比染色した。ラテックスビーズは、ＶＳＶとは異なり、排出ＬＮにおいて十分に保持されなかったことに注意すること。スケールバー：１２５μｍ。 膝窩ＬＮにおける蛍光性ウイルスおよびラテックスナノ粒子の保持。（Ａ）Ａｌｅｘａ−５６８標識アデノウイルス（ＡｄＶ）を足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９およびＡｌｅｘａ−６４７−α−Ｂ２２０で染色することにより、Ｂ細胞を特定した。スケールバー：１００μｍ（左パネル）および１５μｍ（右パネル）。（Ｂ）ＳＣＳマクロファージによって捕捉されたＡｄＶ粒子の透過型電子顕微鏡像。上パネルは、低倍率での全体像（中央パネル）の注釈付きの模式的な図を示している。中央パネル内の四角で囲まれた領域は、下のパネルにおいて拡大され、矢頭は、高電子密度の球状ＡｄＶ粒子を示している。スケールバー：２μｍ（上および中央パネル）および１μｍ（下パネル）。（Ｃ〜Ｄ）Ａｌｅｘａ−５６８標識されＵＶ不活性化された２０μｇのＡｄＶ（Ｃ）またはＶＶ（Ｄ）を足蹠注射した３０分後のＣ５７ＢＬ／６マウス由来の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。蛍光性のウイルスは、ＦＩＴＣ−α−Ｂ２２０染色によって特定されるＢ濾胞の上の皮質性ＳＣＳおよび髄質にも蓄積し、ここで、ウイルスは、ＣＤ１６９＋マクロファージだけでなく、ＬＹＶＥ−１＋リンパ内皮細胞によっても結合された。スケールバーは、１２５μｍ（左パネル）および２５μｍ（右パネル）を示している。（Ｅ）Ａｌｅｘａ−５６８標識ＶＳＶおよびおよそ１０１１Ｃｒｉｍｓｏｎ Ｆｌｕｏｓｐｈｅｒｅｓ（２００ｎｍ直径）を後足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結ＬＮ切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９で対比染色した。ラテックスビーズは、ＶＳＶとは異なり、排出ＬＮにおいて十分に保持されなかったことに注意すること。スケールバー：１２５μｍ。 膝窩ＬＮにおける蛍光性ウイルスおよびラテックスナノ粒子の保持。（Ａ）Ａｌｅｘａ−５６８標識アデノウイルス（ＡｄＶ）を足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９およびＡｌｅｘａ−６４７−α−Ｂ２２０で染色することにより、Ｂ細胞を特定した。スケールバー：１００μｍ（左パネル）および１５μｍ（右パネル）。（Ｂ）ＳＣＳマクロファージによって捕捉されたＡｄＶ粒子の透過型電子顕微鏡像。上パネルは、低倍率での全体像（中央パネル）の注釈付きの模式的な図を示している。中央パネル内の四角で囲まれた領域は、下のパネルにおいて拡大され、矢頭は、高電子密度の球状ＡｄＶ粒子を示している。スケールバー：２μｍ（上および中央パネル）および１μｍ（下パネル）。（Ｃ〜Ｄ）Ａｌｅｘａ−５６８標識されＵＶ不活性化された２０μｇのＡｄＶ（Ｃ）またはＶＶ（Ｄ）を足蹠注射した３０分後のＣ５７ＢＬ／６マウス由来の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。蛍光性のウイルスは、ＦＩＴＣ−α−Ｂ２２０染色によって特定されるＢ濾胞の上の皮質性ＳＣＳおよび髄質にも蓄積し、ここで、ウイルスは、ＣＤ１６９＋マクロファージだけでなく、ＬＹＶＥ−１＋リンパ内皮細胞によっても結合された。スケールバーは、１２５μｍ（左パネル）および２５μｍ（右パネル）を示している。（Ｅ）Ａｌｅｘａ−５６８標識ＶＳＶおよびおよそ１０１１Ｃｒｉｍｓｏｎ Ｆｌｕｏｓｐｈｅｒｅｓ（２００ｎｍ直径）を後足蹠注射した３０分後の膝窩ＬＮの共焦点顕微鏡像。凍結ＬＮ切片をＦＩＴＣ−α−ＣＤ１６９で対比染色した。ラテックスビーズは、ＶＳＶとは異なり、排出ＬＮにおいて十分に保持されなかったことに注意すること。スケールバー：１２５μｍ。 排出ＬＮにおけるＶＳＶ分布に対するＣＬＬ足蹠注射の影響。共焦点顕微鏡像は、ＣＬＬ処置無し（Ａ）またはＣＬＬ処置の７日後（Ｂ）の膝窩ＬＮにおける蛍光性ＶＳＶ粒子の局在化を示している。Ｂ濾胞は、ＦＩＴＣ−α−Ｂ２２０染色によって特定された。髄質（四角で囲まれた領域）では、ＶＳＶは、ＣＬＬ処置によって影響されないＬＹＶＥ−１＋細胞によって結合された。スケールバー：１２５μｍ（左カラム）および２５μｍ（右カラム）。 ＳＣＳマクロファージは、リンパ由来のＡｄＶを濾胞Ｂリンパ球に提示する。（Ａ）膝窩ＬＮにおけるＢ濾胞の上のＳＣＳにおけるＣＤ１６９＋マクロファージの共焦点顕微鏡像。凍結切片をコムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）で対比染色することにより、細胞外マトリックスを特定し、そしてα−Ｂ２２０で対比染色することにより、Ｂ細胞を検出した。いくつかのＢ細胞が、ＳＣＳに存在しており、そして１つのＢ細胞が、濾胞とＳＣＳとの間を遊走しているとみられる（矢頭）ことに注意すること。スケールバー：２５μｍ。ＡｄＶの足蹠注射の３０分後の膝窩ＬＮにおけるＳＣＳマクロファージおよび周囲の細胞の、（Ｂ）電子顕微鏡像および（Ｃ）模式的な図。スケールバー：２μｍ。（Ｃ）における四角は、パネル（Ｄ）および（Ｅ）に示される高倍率の領域を示している。これらのパネルは、ＳＣＳマクロファージとＢ細胞との間の境界面におけるＡｄＶ粒子（矢頭）の２つの例を示している。アステリスクは、他のマクロファージに会合しているＡｄＶ粒子を示している。スケールバー：５００ｎｍ。 ＳＣＳ床を横切るリンパ由来のＶＳＶのマクロファージ媒介性の移行は、ウイルス特異的Ｂ細胞の挙動を変化させる。（Ａ）ＶＳＶ注射の３０分後に膝窩ＬＮのＳＣＳ床を貫通するマクロファージを示している、電子顕微鏡像および模式的な図（中央）。スケールバー：１０μｍ（左）および２μｍ（右）。矢印：消化されたＶＳＶを有する小胞。矢頭：マクロファージとＢ細胞との間の接触帯におけるビリオン。（Ｂ）膝窩ＬＮにおけるポリクローナルおよびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞のＭＰ−ＩＶＭ。スケールバー：５０μｍ。（Ｃ）ＶＳＶ注射後のＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞／コントロールＢ細胞の領域における比。結果は、３つの動画／群からものである。（Ｄ、Ｅ）ＳＣＳと比べたときの膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の局在化。＊＊：ｐ＜０．０１（ボンフェローニの事後検定による１元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））。 ＳＣＳ床を横切るリンパ由来のＶＳＶのマクロファージ媒介性の移行は、ウイルス特異的Ｂ細胞の挙動を変化させる。（Ａ）ＶＳＶ注射の３０分後に膝窩ＬＮのＳＣＳ床を貫通するマクロファージを示している、電子顕微鏡像および模式的な図（中央）。スケールバー：１０μｍ（左）および２μｍ（右）。矢印：消化されたＶＳＶを有する小胞。矢頭：マクロファージとＢ細胞との間の接触帯におけるビリオン。（Ｂ）膝窩ＬＮにおけるポリクローナルおよびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞のＭＰ−ＩＶＭ。スケールバー：５０μｍ。（Ｃ）ＶＳＶ注射後のＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞／コントロールＢ細胞の領域における比。結果は、３つの動画／群からものである。（Ｄ、Ｅ）ＳＣＳと比べたときの膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の局在化。＊＊：ｐ＜０．０１（ボンフェローニの事後検定による１元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））。 ＳＣＳ床を横切るリンパ由来のＶＳＶのマクロファージ媒介性の移行は、ウイルス特異的Ｂ細胞の挙動を変化させる。（Ａ）ＶＳＶ注射の３０分後に膝窩ＬＮのＳＣＳ床を貫通するマクロファージを示している、電子顕微鏡像および模式的な図（中央）。スケールバー：１０μｍ（左）および２μｍ（右）。矢印：消化されたＶＳＶを有する小胞。矢頭：マクロファージとＢ細胞との間の接触帯におけるビリオン。（Ｂ）膝窩ＬＮにおけるポリクローナルおよびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞のＭＰ−ＩＶＭ。スケールバー：５０μｍ。（Ｃ）ＶＳＶ注射後のＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞／コントロールＢ細胞の領域における比。結果は、３つの動画／群からものである。（Ｄ、Ｅ）ＳＣＳと比べたときの膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の局在化。＊＊：ｐ＜０．０１（ボンフェローニの事後検定による１元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））。 ＳＣＳ床を横切るリンパ由来のＶＳＶのマクロファージ媒介性の移行は、ウイルス特異的Ｂ細胞の挙動を変化させる。（Ａ）ＶＳＶ注射の３０分後に膝窩ＬＮのＳＣＳ床を貫通するマクロファージを示している、電子顕微鏡像および模式的な図（中央）。スケールバー：１０μｍ（左）および２μｍ（右）。矢印：消化されたＶＳＶを有する小胞。矢頭：マクロファージとＢ細胞との間の接触帯におけるビリオン。（Ｂ）膝窩ＬＮにおけるポリクローナルおよびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞のＭＰ−ＩＶＭ。スケールバー：５０μｍ。（Ｃ）ＶＳＶ注射後のＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞／コントロールＢ細胞の領域における比。結果は、３つの動画／群からものである。（Ｄ、Ｅ）ＳＣＳと比べたときの膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の局在化。＊＊：ｐ＜０．０１（ボンフェローニの事後検定による１元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））。 ＳＣＳ床を横切るリンパ由来のＶＳＶのマクロファージ媒介性の移行は、ウイルス特異的Ｂ細胞の挙動を変化させる。（Ａ）ＶＳＶ注射の３０分後に膝窩ＬＮのＳＣＳ床を貫通するマクロファージを示している、電子顕微鏡像および模式的な図（中央）。スケールバー：１０μｍ（左）および２μｍ（右）。矢印：消化されたＶＳＶを有する小胞。矢頭：マクロファージとＢ細胞との間の接触帯におけるビリオン。（Ｂ）膝窩ＬＮにおけるポリクローナルおよびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞のＭＰ−ＩＶＭ。スケールバー：５０μｍ。（Ｃ）ＶＳＶ注射後のＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞／コントロールＢ細胞の領域における比。結果は、３つの動画／群からものである。（Ｄ、Ｅ）ＳＣＳと比べたときの膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の局在化。＊＊：ｐ＜０．０１（ボンフェローニの事後検定による１元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））。 ＶＳＶ血清型およびＶＳＶ−ＩＮＤ特異的ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の特徴。（Ａ）精製されたＶＳＶ溶解産物のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（１２％）。上：ＶＳＶ−ＩＮＤおよびＶＳＶ−ＮＪ。ＮおよびＰタンパク質は、ＶＳＶ−ＮＪにおいて共に移動し、括弧内に近似の分子量を示す。（Ｂ）Ｃ５７ＢＬ／６マウス（左カラム）またはＶＩ１０ＹＥＮマウス（右カラム）由来のＢ細胞への、Ａｌｅｘａ−４８８標識ＶＳＶ−ＩＮＤ（中列）またはＶＳＶ−ＮＪ（下列）の結合。上列は、抗イディオタイプ抗体３５．６１によるＶＩ１０ＹＥＮ ＢＣＲに対するコントロール染色を示している（Ｄａｎｇ ａｎｄ Ｒｏｃｋ，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４６：３２７３）。（Ｃ）ＶＩ１０ＹＥＮマウス（上列）またはＣ５７ＢＬ／６マウス（下列）由来の精製されたＣＤ４３陰性Ｆｌｕｏ−ＬＯＪＯ負荷Ｂ細胞における細胞内へのカルシウム流入。事象を経時的に連続的に回収し、アステリスクは、抗体またはウイルスを加える時点を示している。ウイルス粒子を１０００／Ｂ細胞で使用し、抗ＩｇＭ−（Ｆａｂ）２を１０μｇ／１０６Ｂ細胞で使用した。（Ｄ）１０μｇのＵＶ−ＶＳＶまたはＵＶ−ＶＳＶ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８−ＩＮＤの足蹠注射による免疫化の４および１０日後のＣ５７ＢＬ／６マウスの血清中の全ＩｇおよびＩｇＧに対する中和アッセイ。（Ｅ）ＶＳＶ原液からの上清に曝露されたＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞におけるカルシウム流入。ウイルス価のおよそ１０，０００倍低下をもたらすスクロースクッションを通過する超遠心分離によって上清を調製し、そしてそれを希釈せずに（右上）または１：１００希釈で（右下）Ｂ細胞に対して使用した。コントロールとして、ＶＳＶ原液を等しいウイルス価に希釈した（ＭＯＩ；左パネル）。結果から、本発明者らのウイルス調製物において、ウイルス粒子と会合されていない抗原性ＶＳＶ−Ｇの存在が証明される。 ＶＳＶ血清型およびＶＳＶ−ＩＮＤ特異的ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の特徴。（Ａ）精製されたＶＳＶ溶解産物のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（１２％）。上：ＶＳＶ−ＩＮＤおよびＶＳＶ−ＮＪ。ＮおよびＰタンパク質は、ＶＳＶ−ＮＪにおいて共に移動し、括弧内に近似の分子量を示す。（Ｂ）Ｃ５７ＢＬ／６マウス（左カラム）またはＶＩ１０ＹＥＮマウス（右カラム）由来のＢ細胞への、Ａｌｅｘａ−４８８標識ＶＳＶ−ＩＮＤ（中列）またはＶＳＶ−ＮＪ（下列）の結合。上列は、抗イディオタイプ抗体３５．６１によるＶＩ１０ＹＥＮ ＢＣＲに対するコントロール染色を示している（Ｄａｎｇ ａｎｄ Ｒｏｃｋ，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４６：３２７３）。（Ｃ）ＶＩ１０ＹＥＮマウス（上列）またはＣ５７ＢＬ／６マウス（下列）由来の精製されたＣＤ４３陰性Ｆｌｕｏ−ＬＯＪＯ負荷Ｂ細胞における細胞内へのカルシウム流入。事象を経時的に連続的に回収し、アステリスクは、抗体またはウイルスを加える時点を示している。ウイルス粒子を１０００／Ｂ細胞で使用し、抗ＩｇＭ−（Ｆａｂ）２を１０μｇ／１０６Ｂ細胞で使用した。（Ｄ）１０μｇのＵＶ−ＶＳＶまたはＵＶ−ＶＳＶ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８−ＩＮＤの足蹠注射による免疫化の４および１０日後のＣ５７ＢＬ／６マウスの血清中の全ＩｇおよびＩｇＧに対する中和アッセイ。（Ｅ）ＶＳＶ原液からの上清に曝露されたＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞におけるカルシウム流入。ウイルス価のおよそ１０，０００倍低下をもたらすスクロースクッションを通過する超遠心分離によって上清を調製し、そしてそれを希釈せずに（右上）または１：１００希釈で（右下）Ｂ細胞に対して使用した。コントロールとして、ＶＳＶ原液を等しいウイルス価に希釈した（ＭＯＩ；左パネル）。結果から、本発明者らのウイルス調製物において、ウイルス粒子と会合されていない抗原性ＶＳＶ−Ｇの存在が証明される。 ＶＳＶ血清型およびＶＳＶ−ＩＮＤ特異的ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の特徴。（Ａ）精製されたＶＳＶ溶解産物のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（１２％）。上：ＶＳＶ−ＩＮＤおよびＶＳＶ−ＮＪ。ＮおよびＰタンパク質は、ＶＳＶ−ＮＪにおいて共に移動し、括弧内に近似の分子量を示す。（Ｂ）Ｃ５７ＢＬ／６マウス（左カラム）またはＶＩ１０ＹＥＮマウス（右カラム）由来のＢ細胞への、Ａｌｅｘａ−４８８標識ＶＳＶ−ＩＮＤ（中列）またはＶＳＶ−ＮＪ（下列）の結合。上列は、抗イディオタイプ抗体３５．６１によるＶＩ１０ＹＥＮ ＢＣＲに対するコントロール染色を示している（Ｄａｎｇ ａｎｄ Ｒｏｃｋ，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４６：３２７３）。（Ｃ）ＶＩ１０ＹＥＮマウス（上列）またはＣ５７ＢＬ／６マウス（下列）由来の精製されたＣＤ４３陰性Ｆｌｕｏ−ＬＯＪＯ負荷Ｂ細胞における細胞内へのカルシウム流入。事象を経時的に連続的に回収し、アステリスクは、抗体またはウイルスを加える時点を示している。ウイルス粒子を１０００／Ｂ細胞で使用し、抗ＩｇＭ−（Ｆａｂ）２を１０μｇ／１０６Ｂ細胞で使用した。（Ｄ）１０μｇのＵＶ−ＶＳＶまたはＵＶ−ＶＳＶ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８−ＩＮＤの足蹠注射による免疫化の４および１０日後のＣ５７ＢＬ／６マウスの血清中の全ＩｇおよびＩｇＧに対する中和アッセイ。（Ｅ）ＶＳＶ原液からの上清に曝露されたＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞におけるカルシウム流入。ウイルス価のおよそ１０，０００倍低下をもたらすスクロースクッションを通過する超遠心分離によって上清を調製し、そしてそれを希釈せずに（右上）または１：１００希釈で（右下）Ｂ細胞に対して使用した。コントロールとして、ＶＳＶ原液を等しいウイルス価に希釈した（ＭＯＩ；左パネル）。結果から、本発明者らのウイルス調製物において、ウイルス粒子と会合されていない抗原性ＶＳＶ−Ｇの存在が証明される。 ＶＳＶ血清型およびＶＳＶ−ＩＮＤ特異的ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の特徴。（Ａ）精製されたＶＳＶ溶解産物のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（１２％）。上：ＶＳＶ−ＩＮＤおよびＶＳＶ−ＮＪ。ＮおよびＰタンパク質は、ＶＳＶ−ＮＪにおいて共に移動し、括弧内に近似の分子量を示す。（Ｂ）Ｃ５７ＢＬ／６マウス（左カラム）またはＶＩ１０ＹＥＮマウス（右カラム）由来のＢ細胞への、Ａｌｅｘａ−４８８標識ＶＳＶ−ＩＮＤ（中列）またはＶＳＶ−ＮＪ（下列）の結合。上列は、抗イディオタイプ抗体３５．６１によるＶＩ１０ＹＥＮ ＢＣＲに対するコントロール染色を示している（Ｄａｎｇ ａｎｄ Ｒｏｃｋ，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４６：３２７３）。（Ｃ）ＶＩ１０ＹＥＮマウス（上列）またはＣ５７ＢＬ／６マウス（下列）由来の精製されたＣＤ４３陰性Ｆｌｕｏ−ＬＯＪＯ負荷Ｂ細胞における細胞内へのカルシウム流入。事象を経時的に連続的に回収し、アステリスクは、抗体またはウイルスを加える時点を示している。ウイルス粒子を１０００／Ｂ細胞で使用し、抗ＩｇＭ−（Ｆａｂ）２を１０μｇ／１０６Ｂ細胞で使用した。（Ｄ）１０μｇのＵＶ−ＶＳＶまたはＵＶ−ＶＳＶ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８−ＩＮＤの足蹠注射による免疫化の４および１０日後のＣ５７ＢＬ／６マウスの血清中の全ＩｇおよびＩｇＧに対する中和アッセイ。（Ｅ）ＶＳＶ原液からの上清に曝露されたＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞におけるカルシウム流入。ウイルス価のおよそ１０，０００倍低下をもたらすスクロースクッションを通過する超遠心分離によって上清を調製し、そしてそれを希釈せずに（右上）または１：１００希釈で（右下）Ｂ細胞に対して使用した。コントロールとして、ＶＳＶ原液を等しいウイルス価に希釈した（ＭＯＩ；左パネル）。結果から、本発明者らのウイルス調製物において、ウイルス粒子と会合されていない抗原性ＶＳＶ−Ｇの存在が証明される。 ＶＳＶ血清型およびＶＳＶ−ＩＮＤ特異的ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の特徴。（Ａ）精製されたＶＳＶ溶解産物のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（１２％）。上：ＶＳＶ−ＩＮＤおよびＶＳＶ−ＮＪ。ＮおよびＰタンパク質は、ＶＳＶ−ＮＪにおいて共に移動し、括弧内に近似の分子量を示す。（Ｂ）Ｃ５７ＢＬ／６マウス（左カラム）またはＶＩ１０ＹＥＮマウス（右カラム）由来のＢ細胞への、Ａｌｅｘａ−４８８標識ＶＳＶ−ＩＮＤ（中列）またはＶＳＶ−ＮＪ（下列）の結合。上列は、抗イディオタイプ抗体３５．６１によるＶＩ１０ＹＥＮ ＢＣＲに対するコントロール染色を示している（Ｄａｎｇ ａｎｄ Ｒｏｃｋ，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４６：３２７３）。（Ｃ）ＶＩ１０ＹＥＮマウス（上列）またはＣ５７ＢＬ／６マウス（下列）由来の精製されたＣＤ４３陰性Ｆｌｕｏ−ＬＯＪＯ負荷Ｂ細胞における細胞内へのカルシウム流入。事象を経時的に連続的に回収し、アステリスクは、抗体またはウイルスを加える時点を示している。ウイルス粒子を１０００／Ｂ細胞で使用し、抗ＩｇＭ−（Ｆａｂ）２を１０μｇ／１０６Ｂ細胞で使用した。（Ｄ）１０μｇのＵＶ−ＶＳＶまたはＵＶ−ＶＳＶ−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８−ＩＮＤの足蹠注射による免疫化の４および１０日後のＣ５７ＢＬ／６マウスの血清中の全ＩｇおよびＩｇＧに対する中和アッセイ。（Ｅ）ＶＳＶ原液からの上清に曝露されたＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞におけるカルシウム流入。ウイルス価のおよそ１０，０００倍低下をもたらすスクロースクッションを通過する超遠心分離によって上清を調製し、そしてそれを希釈せずに（右上）または１：１００希釈で（右下）Ｂ細胞に対して使用した。コントロールとして、ＶＳＶ原液を等しいウイルス価に希釈した（ＭＯＩ；左パネル）。結果から、本発明者らのウイルス調製物において、ウイルス粒子と会合されていない抗原性ＶＳＶ−Ｇの存在が証明される。 ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１へのＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の、ＶＳＶに誘導された接着。（Ａ、Ｂ）記載の濃度の組換えＩＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ａ）またはＶＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ｂ）でコーティングされたプラスチックプレートへの、精製されたナイーブＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞およびＶＳＶ−ＩＮＤ活性化（３０分間曝露）ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。２つの３つ組実験のプールされたデータを示している。水平バーは、平均値を表している。（Ｃ、Ｄ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの膝窩ＬＮにおけるＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１発現の共焦点顕微鏡像。スケールバー：５０μｍ。（Ｅ）記載のｐｆｕ−等濃度のＵＶ不活性化されたＶＳＶ−ＩＮＤでコーティングされたプラスチックディッシュへの、精製されたナイーブ野生型およびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。データは、３つ組の平均値±ＳＥＭを表している。 ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１へのＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の、ＶＳＶに誘導された接着。（Ａ、Ｂ）記載の濃度の組換えＩＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ａ）またはＶＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ｂ）でコーティングされたプラスチックプレートへの、精製されたナイーブＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞およびＶＳＶ−ＩＮＤ活性化（３０分間曝露）ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。２つの３つ組実験のプールされたデータを示している。水平バーは、平均値を表している。（Ｃ、Ｄ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの膝窩ＬＮにおけるＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１発現の共焦点顕微鏡像。スケールバー：５０μｍ。（Ｅ）記載のｐｆｕ−等濃度のＵＶ不活性化されたＶＳＶ−ＩＮＤでコーティングされたプラスチックディッシュへの、精製されたナイーブ野生型およびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。データは、３つ組の平均値±ＳＥＭを表している。 ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１へのＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の、ＶＳＶに誘導された接着。（Ａ、Ｂ）記載の濃度の組換えＩＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ａ）またはＶＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ｂ）でコーティングされたプラスチックプレートへの、精製されたナイーブＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞およびＶＳＶ−ＩＮＤ活性化（３０分間曝露）ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。２つの３つ組実験のプールされたデータを示している。水平バーは、平均値を表している。（Ｃ、Ｄ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの膝窩ＬＮにおけるＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１発現の共焦点顕微鏡像。スケールバー：５０μｍ。（Ｅ）記載のｐｆｕ−等濃度のＵＶ不活性化されたＶＳＶ−ＩＮＤでコーティングされたプラスチックディッシュへの、精製されたナイーブ野生型およびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。データは、３つ組の平均値±ＳＥＭを表している。 ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１へのＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の、ＶＳＶに誘導された接着。（Ａ、Ｂ）記載の濃度の組換えＩＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ａ）またはＶＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ｂ）でコーティングされたプラスチックプレートへの、精製されたナイーブＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞およびＶＳＶ−ＩＮＤ活性化（３０分間曝露）ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。２つの３つ組実験のプールされたデータを示している。水平バーは、平均値を表している。（Ｃ、Ｄ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの膝窩ＬＮにおけるＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１発現の共焦点顕微鏡像。スケールバー：５０μｍ。（Ｅ）記載のｐｆｕ−等濃度のＵＶ不活性化されたＶＳＶ−ＩＮＤでコーティングされたプラスチックディッシュへの、精製されたナイーブ野生型およびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。データは、３つ組の平均値±ＳＥＭを表している。 ＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１へのＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の、ＶＳＶに誘導された接着。（Ａ、Ｂ）記載の濃度の組換えＩＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ａ）またはＶＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ｂ）でコーティングされたプラスチックプレートへの、精製されたナイーブＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞およびＶＳＶ−ＩＮＤ活性化（３０分間曝露）ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。２つの３つ組実験のプールされたデータを示している。水平バーは、平均値を表している。（Ｃ、Ｄ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの膝窩ＬＮにおけるＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１発現の共焦点顕微鏡像。スケールバー：５０μｍ。（Ｅ）記載のｐｆｕ−等濃度のＵＶ不活性化されたＶＳＶ−ＩＮＤでコーティングされたプラスチックディッシュへの、精製されたナイーブ野生型およびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の接着。データは、３つ組の平均値±ＳＥＭを表している。 ＳＣＳマクロファージは、ＬＮにおけるＶＳＶ特異的Ｂ細胞の早期の活性化に必要である。（Ａ）共焦点顕微鏡像は、深部濾胞（アステリスク）ではなくＳＣＳ（矢頭）におけるＶＩ１０ＹＥＮ×ＭＨＣＩＩ（ＥＧＦＰ）Ｂ細胞内の、ＶＳＶ−ＩＮＤ（注射の３０分後）とＭＨＣ−ＩＩとの共局在化を示している。スケールバー：２５μｍ。（Ｂ）ＶＳＶと会合されている、およびＶＳＶを含まない、ＶＩ１０ＹＥＮ×ＭＨＣＩＩ（ＥＧＦＰ）Ｂ細胞とＳＣＳとの距離。水平線：中央値。ＶＳＶ−ＩＮＤを足蹠注射した後の、ＶＩ１０ＹＥＮ上のＢＣＲ発現動態（Ｃ）および（Ｄ）ポリクローナルＢ細胞上のＢＣＲ発現動態。（Ｅ）ＶＳＶ−ＩＮＤ注射（２０μｇ）後のＣＬＬ処置膝窩ＬＮまたは無処置膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ細胞上のＢＣＲ発現。平均蛍光強度を、ウイルスを含まない値に対して正規化した（破線）。平均値±ＳＥＭ（３〜５匹のマウス）。ＶＳＶ−ＩＮＤ注射（０．４μｇ）の６時間後の、コントロール膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の共焦点顕微鏡像（Ｆ）および（Ｇ）ＣＬＬ処置膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の共焦点顕微鏡像。スケールバー：１２５μｍ。（Ｈ）記載の用量でのＶＳＶ−ＩＮＤ注射の６時間後のＴ／Ｂ境界および濾胞におけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の出現率。平均値±ＳＥＭ；ｎ＝３〜４個の濾胞／２匹のマウス；＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（ｔ−検定）。 ＳＣＳマクロファージは、ＬＮにおけるＶＳＶ特異的Ｂ細胞の早期の活性化に必要である。（Ａ）共焦点顕微鏡像は、深部濾胞（アステリスク）ではなくＳＣＳ（矢頭）におけるＶＩ１０ＹＥＮ×ＭＨＣＩＩ（ＥＧＦＰ）Ｂ細胞内の、ＶＳＶ−ＩＮＤ（注射の３０分後）とＭＨＣ−ＩＩとの共局在化を示している。スケールバー：２５μｍ。（Ｂ）ＶＳＶと会合されている、およびＶＳＶを含まない、ＶＩ１０ＹＥＮ×ＭＨＣＩＩ（ＥＧＦＰ）Ｂ細胞とＳＣＳとの距離。水平線：中央値。ＶＳＶ−ＩＮＤを足蹠注射した後の、ＶＩ１０ＹＥＮ上のＢＣＲ発現動態（Ｃ）および（Ｄ）ポリクローナルＢ細胞上のＢＣＲ発現動態。（Ｅ）ＶＳＶ−ＩＮＤ注射（２０μｇ）後のＣＬＬ処置膝窩ＬＮまたは無処置膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ細胞上のＢＣＲ発現。平均蛍光強度を、ウイルスを含まない値に対して正規化した（破線）。平均値±ＳＥＭ（３〜５匹のマウス）。ＶＳＶ−ＩＮＤ注射（０．４μｇ）の６時間後の、コントロール膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の共焦点顕微鏡像（Ｆ）および（Ｇ）ＣＬＬ処置膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の共焦点顕微鏡像。スケールバー：１２５μｍ。（Ｈ）記載の用量でのＶＳＶ−ＩＮＤ注射の６時間後のＴ／Ｂ境界および濾胞におけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の出現率。平均値±ＳＥＭ；ｎ＝３〜４個の濾胞／２匹のマウス；＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（ｔ−検定）。 ＳＣＳマクロファージは、ＬＮにおけるＶＳＶ特異的Ｂ細胞の早期の活性化に必要である。（Ａ）共焦点顕微鏡像は、深部濾胞（アステリスク）ではなくＳＣＳ（矢頭）におけるＶＩ１０ＹＥＮ×ＭＨＣＩＩ（ＥＧＦＰ）Ｂ細胞内の、ＶＳＶ−ＩＮＤ（注射の３０分後）とＭＨＣ−ＩＩとの共局在化を示している。スケールバー：２５μｍ。（Ｂ）ＶＳＶと会合されている、およびＶＳＶを含まない、ＶＩ１０ＹＥＮ×ＭＨＣＩＩ（ＥＧＦＰ）Ｂ細胞とＳＣＳとの距離。水平線：中央値。ＶＳＶ−ＩＮＤを足蹠注射した後の、ＶＩ１０ＹＥＮ上のＢＣＲ発現動態（Ｃ）および（Ｄ）ポリクローナルＢ細胞上のＢＣＲ発現動態。（Ｅ）ＶＳＶ−ＩＮＤ注射（２０μｇ）後のＣＬＬ処置膝窩ＬＮまたは無処置膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ細胞上のＢＣＲ発現。平均蛍光強度を、ウイルスを含まない値に対して正規化した（破線）。平均値±ＳＥＭ（３〜５匹のマウス）。ＶＳＶ−ＩＮＤ注射（０．４μｇ）の６時間後の、コントロール膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の共焦点顕微鏡像（Ｆ）および（Ｇ）ＣＬＬ処置膝窩ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の共焦点顕微鏡像。スケールバー：１２５μｍ。（Ｈ）記載の用量でのＶＳＶ−ＩＮＤ注射の６時間後のＴ／Ｂ境界および濾胞におけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の出現率。平均値±ＳＥＭ；ｎ＝３〜４個の濾胞／２匹のマウス；＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（ｔ−検定）。 ウイルス注射後の排出ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の運動性。ＶＳＶ足蹠注射の約５〜３５分後の深部濾胞およびＳＣＳ／表在性濾胞における野生型（三角）およびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞（丸）の中央値３Ｄ瞬間速度。水平バーは、平均値を表している；＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１（ボンフェローニの事後検定による１元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ））。おそらく本発明者らの調製物中の遊離ＶＳＶ−Ｇの結果として、特定のＢ細胞が、濾胞全体において減速することに注意すること（図１８を参照のこと）。コントロール実験から、ＣＬＬ処置膝窩ＬＮおよび非処置膝窩ＬＮにおいて同様のＢ細胞運動性パラメータが示された。 ＶＳＶ−ＩＮＤ注射後の、ウイルス排出ＬＮおよび非排出ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞上の活性化マーカー誘導の時間経過。ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞をＣＭＴＭＲで蛍光的にタグ化し、そして２０μｇのＵＶ不活性化されたＶＳＶ−ＩＮＤで注射した（時間０時間）１８時間後にナイーブマウスに移入した。膝窩排出ＬＮ（膝窩ＬＮ）および遠位の上腕ＬＮ（ｂｒａｃｈＬＮ）を、記載の時間間隔後に回収して、単一細胞懸濁液を調製した。Ｂ細胞上でのＣＤ６９およびＣＤ８６の発現を、（Ａ）Ｂ２２０＋ＣＭＴＭＲ＋ＶＩ１０ＹＥＮ細胞または（Ｂ）Ｂ２２０＋ＣＭＴＭＲ−内因性コントロールＢ細胞に対してゲーティングした後、フローサイトメトリーによって評価した。 ＣＭＴＭＲ標識ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞とＣＭＡＣ標識ポリクローナルＢ細胞との混合物を養子移入されたマウス（右カラム）の膝窩ＬＮの、共焦点顕微鏡像（左および中央カラム）およびＭＰ−ＩＶＭ顕微鏡像（右カラム中）。翌日、２０μｇのＵＶ不活性化されたＶＳＶ−ＩＮＤを足蹠に注射し、そして膝窩排出ＬＮをＭＰ−ＩＶＭのために外科的に準備するか、または記載の時点において凍結切片の共焦点解析のために回収した。ＭＰ−ＩＶＭ像は、ウイルス注射の早くも３０分後にＳＣＳにおけるＶＳＶと接触させた、ポリクローナルＢ細胞でなくＶＳＶ特異的Ｂ細胞を示している。ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞は、注射の６時間後にＴ／Ｂ境界に再配置した。スケールバー：左カラムにおいて１５０μｍおよび他のカラムにおいて２５μｍ。 ヒトＩｇＧ由来のＦｃフラグメントを用いるＳＣＳ−Ｍｐｈのインビボ標的化。（Ａ）左側のＦＡＣＳヒストグラムは、リンパ節マクロファージへの蛍光ＰＥＧ−ＰＬＧＡナノ粒子（約１００ｎｍ直径）の結合を証明している。（Ｂ）Ｆｃ−ナノ粒子（ＮＰ）は、ＳＣＳ−Ｍｐｈおよび濾胞樹状細胞を標的化している。 ヒトＩｇＧ由来のＦｃフラグメントを用いるＳＣＳ−Ｍｐｈのインビボ標的化。（Ａ）左側のＦＡＣＳヒストグラムは、リンパ節マクロファージへの蛍光ＰＥＧ−ＰＬＧＡナノ粒子（約１００ｎｍ直径）の結合を証明している。（Ｂ）Ｆｃ−ナノ粒子（ＮＰ）は、ＳＣＳ−Ｍｐｈおよび濾胞樹状細胞を標的化している。 髄質におけるマクロファージではなく、リンパ節被膜下洞（ＳＣＳ）におけるマクロファージ上のケモカインレセプターＣＸ３ＣＲ１（フラクタルカインレセプター）の同定。右の顕微鏡像は、ダブルノックインマウス由来のリンパ節の３Ｄ投影であり、ここで、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）は、ＣＸ３ＣＲ１遺伝子座に発現されるが、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）は、別のケモカインレセプターであるＣＣＲ２の発現を報告する。ＳＣＳ−Ｍｐｈは、顕著な緑色蛍光によって容易に同定可能であるが、髄質性マクロファージは、主にＲＦＰを発現する。 ＳＣＳ−Ｍｐｈは、ケモカインレセプターＣＸ３ＣＲ１を発現する。このグラフは、ＣＸ３ＣＲ１遺伝子座からＧＦＰを発現するように遺伝的に操作されたノックインマウスのリンパ節からの単一細胞懸濁液のＦＡＣＳプロットを示している。ＳＣＳ−Ｍｐｈは、ＳＣＳにおけるマクロファージと結合するが髄質におけるマクロファージと結合しない、可溶性レセプターであるＣＲＦｃで染色することによって同定される。ＣＲＦｃ陰性ＣＸ３ＣＲ１を発現する（すなわち、ＧＦＰ高）細胞は、このケモカインレセプターを発現する通常の樹状細胞である。 アミン部分（左および中央パネル）またはカルボキシ部分（右パネル）で改変された直径０．２μｍのラテックスビーズ表面を足蹠注射した２４時間後のマウス膝窩リンパ節からの凍結切片の蛍光顕微鏡像。両方のセットのビーズを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した（Ｃａｔ．ｎｏ．Ｆ８７６３およびＦ８８０５）。左および右の切片を抗ＣＤ１６９で対比染色した。髄質（抗ＣＤ１６９による弱い散在性の染色）が右を向いていて、被膜下洞（ＳＣＳ）領域（明るい抗ＣＤ１６９）が左を向いているように、像が方向づけられている。赤色のアミン改変粒子が、顕著にＳＣＳに局在化しているが、青色のカルボキシ改変ビーズは、主に髄質に保持されていることに注意すること。 （Ａ）抗原を有する標的化ナノ粒子は、高度に免疫原性であり、かつ、高い抗体価を誘導する。（Ｂ）ナノ粒子ワクチンによって誘発される誘導免疫応答は、致死量のＶＳＶからの強力な保護をもたらす。 （Ａ）抗原を有する標的化ナノ粒子は、高度に免疫原性であり、かつ、高い抗体価を誘導する。（Ｂ）ナノ粒子ワクチンによって誘発される誘導免疫応答は、致死量のＶＳＶからの強力な保護をもたらす。 免疫調節性ナノ粒子によるインビボにおけるＴ細胞活性化。（Ａ）ＣＤ４Ｔ細胞活性化に対するＮＰの影響。（Ｂ）ＣｐＧアジュバント（ＴＬＲ９アゴニスト）と混合されたＣＤ８Ｔ細胞応答に対するＮＰの影響。（Ｃ）ＣＤ８Ｔ細胞活性化に対する、共被包されたアジュバントの影響。 免疫調節性ナノ粒子によるインビボにおけるＴ細胞活性化。（Ａ）ＣＤ４Ｔ細胞活性化に対するＮＰの影響。（Ｂ）ＣｐＧアジュバント（ＴＬＲ９アゴニスト）と混合されたＣＤ８Ｔ細胞応答に対するＮＰの影響。（Ｃ）ＣＤ８Ｔ細胞活性化に対する、共被包されたアジュバントの影響。 免疫調節性ナノ粒子によるインビボにおけるＴ細胞活性化。（Ａ）ＣＤ４Ｔ細胞活性化に対するＮＰの影響。（Ｂ）ＣｐＧアジュバント（ＴＬＲ９アゴニスト）と混合されたＣＤ８Ｔ細胞応答に対するＮＰの影響。（Ｃ）ＣＤ８Ｔ細胞活性化に対する、共被包されたアジュバントの影響。 例示的なニコチン結合体化ストラテジーを示している。 例示的なＲ８４８結合体化ストラテジーを示している。
定義
乱用性物質：本明細書中で使用されるとき、用語「乱用性物質」は、記載されている目的以外の目的、または医師が指示する様式もしくは量以外の様式もしくは量で、被験体（例えば、ヒト）によって摂取される任意の物質である。いくつかの実施形態において、乱用性物質は、違法薬物などの薬物である。ある特定の実施形態において、乱用性物質は、一般薬（ｏｖｅｒ−ｔｈｅ−ｃｏｕｎｔｅｒ ｄｒｕｇ）である。いくつかの実施形態において、乱用性物質は、処方薬である。乱用性物質は、いくつかの実施形態において、習慣性物質である。いくつかの実施形態において、乱用性物質は、気分を変化させる効果を有し、ゆえに、吸入剤および溶媒を包含する。他の実施形態において、乱用性物質は、気分を変化させる効果または中毒特性を有しないものであり、ゆえに、アナボリックステロイドを包含する。乱用性物質としては、カンナビノイド（例えば、ハシシュ、マリファナ）、抑制薬（例えば、バルビツエート、ベノジアゼピン、フルニトラゼパム（Ｒｏｈｙｐｎｏｌ）、ＧＨＢ、メタカロン（クアールード））、解離麻酔薬（例えば、ケタミン、ＰＣＰ）、幻覚剤（例えば、ＬＳＤ、メスカリン、シロシビン）、オピオイドおよびモルヒネ誘導体（例えば、コデイン、フェンタニール、ヘロイン、モルヒネ、アヘン）、刺激剤（アンフェタミン、コカイン、Ｅｃｓｔａｃｙ（ＭＤＭＡ）、メタンフェタミン、メチルフェニデート（Ｒｉｔａｌｉｎ）、ニコチン）、アナボリックステロイド（ａｎａｂｏｌｉｃ ｓｔｅｒｉｏｄ）および吸入剤が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ナノキャリアに封入するための乱用性物質は、完全な分子またはその一部である。
習慣性物質：本明細書中で使用されるとき、用語「習慣性物質」は、強迫、強制または身体的依存もしくは心理学的依存を引き起こす物質である。いくつかの実施形態において、習慣性物質は、違法薬物である。他の実施形態において、習慣性物質は、一般薬である。なおも他の実施形態において、習慣性物質は、処方薬である。習慣性物質としては、コカイン、ヘロイン、マリファナ、メタンフェタミンおよびニコチンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ナノキャリアに封入するための習慣性物質は、完全な分子またはその一部である。
アミノ酸：本明細書中で使用されるとき、用語「アミノ酸」とは、その最も広い意味において、ポリペプチド鎖に組み込まれ得る任意の化合物および／または物質のことを指す。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、一般構造Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、合成アミノ酸であり；いくつかの実施形態において、アミノ酸は、Ｄ−アミノ酸であり；いくつかの実施形態において、アミノ酸は、Ｌ−アミノ酸である。「標準的なアミノ酸」または「天然のアミノ酸」とは、天然に存在するペプチドに通常見られる２０個の標準的なＬ−アミノ酸のいずれかのことを指す。「標準的でないアミノ酸」とは、それが合成的に調製されるか、または天然源から得られるかにかかわらず、上記の標準的なアミノ酸以外の任意のアミノ酸のことを指す。本明細書中で使用されるとき、「非天然アミノ酸」は、化学的に生成されたアミノ酸または化学的に改変されたアミノ酸を包含し、それらとしては、塩、アミノ酸誘導体（例えば、アミド）および／または置換されたものが挙げられるが、これらに限定されない。ペプチドにおけるカルボキシ末端および／またはアミノ末端のアミノ酸を含むアミノ酸は、メチル化、アミド化、アセチル化、および／または活性に悪影響を及ぼさずにペプチドの循環半減期を変化させ得る他の化学基による置換によって改変され得る。アミノ酸は、ジスルフィド結合に関与し得る。用語「アミノ酸」は、「アミノ酸残基」と交換可能に使用され、そしてそれらは、遊離アミノ酸および／またはペプチドのアミノ酸残基のことを指し得る。その用語が、遊離アミノ酸を指すのか、またはペプチドの残基を指すのかは、その用語が使用される文脈から明らかであろう。
動物：本明細書中で使用されるとき、用語「動物」とは、動物界の任意のメンバーのことを指す。いくつかの実施形態において、「動物」とは、任意の発達段階におけるヒトのことを指す。いくつかの実施形態において、「動物」とは、任意の発達段階における非ヒト動物のことを指す。ある特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類および／またはブタ）である。いくつかの実施形態において、動物としては、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類および／または虫が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子が操作された動物および／またはクローンであり得る。
抗体：本明細書中で使用されるとき、用語「抗体」とは、天然の、または全体的もしくは部分的に合成的に作製された、任意の免疫グロブリンのことを指す。特定の結合能力を維持するそれらの誘導体のすべてもまた、この用語の中に含められる。この用語は、免疫グロブリン結合ドメインと相同または概して相同な結合ドメインを有する任意のタンパク質も包含する。そのようなタンパク質は、天然源から得られ得るか、または部分的もしくは全体的に合成的に作製され得る。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体は、任意のヒトクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む任意の免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。本明細書中で使用されるとき、用語「抗体フラグメント」または「抗体の特徴的な一部」は、交換可能に使用され、それらは、完全長未満の抗体の任意の誘導体のことを指す。抗体フラグメントは、完全長抗体の特定の結合能の少なくとも有意な一部を保持し得る。そのような抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ ダイアボディおよびＦｄフラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。抗体フラグメントは、Ｆｃフラグメントも含む。抗体フラグメントは、任意の手段によって作製され得る。例えば、抗体フラグメントは、インタクトな抗体の断片化によって酵素的または化学的に作製され得、そして／または部分的な抗体配列をコードする遺伝子から組換え的に作製され得る。あるいはまたはさらに、抗体フラグメントは、全体的または部分的に合成的に作製され得る。抗体フラグメントは、必要に応じて一本鎖抗体フラグメントを含み得る。あるいはまたはさらに、抗体フラグメントは、例えば、ジスルフィド結合によって、共に連結された複数の鎖を含み得る。抗体フラグメントは、必要に応じて多分子錯体を含み得る。機能的な抗体フラグメントは、代表的には、少なくとも約５０アミノ酸を含み、より代表的には、少なくとも約２００アミノ酸を含む。
およそ：本明細書中で使用されるとき、数値に関して、用語「およそ」または「約」は、別段述べられないか、または別段文脈から明らかでない限り（そのような数値が、可能性のある値の０％未満または１００％超であり得る場合を除く）、通常、その数値のいずれかの方向（その数値より大きいかまたは小さい方向）における５％、１０％、１５％または２０％の範囲内に入る数値を含むと受け取られる。
〜と会合されている：本明細書中で使用されるとき、用語「〜と会合されている」とは、直接または間接的な共有結合性または非共有結合性の相互作用によって連結されている２つ以上の実体の状態のことを指す。いくつかの実施形態において、会合は、共有結合性である。いくつかの実施形態において、共有結合性の会合は、リンカー部分によって媒介される。いくつかの実施形態において、会合は、非共有結合性である（例えば、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用など）。例えば、いくつかの実施形態において、ある実体（例えば、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤、ナノ粒子など）は、ワクチンナノキャリアと共有結合的に会合され得る。いくつかの実施形態において、ある実体（例えば、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤、ナノ粒子など）は、ワクチンナノキャリアと非共有結合的に会合され得る。例えば、その実体は、発明性のあるワクチンナノキャリアの脂質二重層、脂質単層、ポリマーマトリックスなどの表面と会合され得、それらの中に被包され得、それらによって取り囲まれ得、そして／またはそれら全体に分布され得る。
生体適合性：本明細書中で使用されるとき、用語「生体適合性」とは、細胞にとって毒性でない物質のことを指す。いくつかの実施形態において、インビボにおいてある物質を細胞に加えることによって、インビボにおいて炎症および／または他の有害作用が誘導されない場合に、その物質は、「生体適合性」とみなされる。いくつかの実施形態において、インビトロまたはインビボにおいてある物質を細胞に加えることによって、約５０％以下、約４５％以下、約４０％以下、約３５％以下、約３０％以下、約２５％以下、約２０％以下、約１５％以下、約１０％以下、約５％以下または約５％未満の細胞死がもたらされる場合に、その物質は、「生体適合性」とみなされる。
生分解性：本明細書中で使用されるとき、用語「生分解性」とは、生理学的条件下において分解される物質のことを指す。いくつかの実施形態において、生分解性物質は、細胞の機構によって破壊される物質である。いくつかの実施形態において、生分解性物質は、化学的プロセスによって破壊される物質である。
Ｂ細胞抗原：本明細書中で使用されるとき、用語「Ｂ細胞抗原」とは、Ｂ細胞における免疫応答によって認識される任意の抗原およびＢ細胞における免疫応答の引き金を引く任意の抗原のことを指す。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原である抗原は、Ｔ細胞抗原でもある。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞抗原は、Ｔ細胞抗原ではない。ある特定の実施形態において、本明細書中に提供されるようなナノキャリアが、Ｂ細胞抗原とＴ細胞抗原の両方を含むとき、そのＢ細胞抗原とＴ細胞抗原とは、同じ抗原ではないが、Ｂ細胞抗原およびＴ細胞抗原の各々は、いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原とＴ細胞抗原の両方であり得る。他の実施形態において、ナノキャリアのＢ細胞抗とＴ細胞抗原とは、同じである。
細胞型：本明細書中で使用されるとき、用語「細胞型」とは、細胞型を定義する異なるセットの形態学的、生化学的および／または機能的な特徴を有する細胞の形態のことを指す。当業者は、細胞型が様々なレベルの特異性で定義され得ることを認識するだろう。例えば、Ｔ細胞とＢ細胞とは、異なる細胞型であり、それらは、互いに区別され得るが、その両方ともがメンバーであるより広範な「リンパ球」細胞型に特有の特徴を共有する。代表的には、様々なタイプの細胞が、当該分野において特定の細胞型（例えば、特定の系譜の細胞型）の「マーカー」と称される種々の遺伝子の差次的な発現に基づいて互いに区別され得る。いくつかの実施形態において、様々なタイプの細胞は、その異なる機能に基づいて互いに区別され得る。「細胞型特異的マーカー」は、１つ以上の細胞型によって、他の細胞型のすべてまたはほとんどよりも有意に高いレベルで発現され、そしてその発現がその細胞型に特有である、遺伝子産物またはその改変バージョンである。多くの細胞型特異的マーカーは、当該分野においてそのようなものとして認識されている。
有害な環境作用物質：本明細書中で使用されるとき、用語「有害な環境作用物質」とは、環境中に見られる任意の有害な物質のことを指す。そのような物質は、通常、健康上のリスクを引き起こすと考えられる。有害な環境作用物質には、実際にリスクを引き起こさないかもしれないとしても健康上のリスクを引き起こすと考えられる物質が包含される。有害な環境作用物質としては、ヒ素、鉛、水銀、塩化ビニル、ポリ塩化ビフェニル、ベンゼン、多環式芳香族炭化水素、カドミウム、ベンゾ（ａ）ピレン、ベンゾ（ｂ）フルオランテン、クロロホルム、ＤＤＴ，Ｐ，Ｐ’−、アロクロール１２５４、アロクロール１２６０、ジベンゾ（ａ，ｈ）アントラセン、トリクロロエチレン、ジエルドリン、六価クロムおよびＤＤＥ，Ｐ，Ｐ’が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ナノキャリアに封入するための有害な環境作用物質は、完全な分子またはその一部である。
インビトロ：本明細書中で使用されるとき、用語「インビトロ」とは、生物（例えば、動物、植物および／または微生物）内ではなく、人工的な環境、例えば、試験管内または反応容器内、細胞培養物などにおいて起きる事象のことを指す。
インビボ：本明細書中で使用されるとき、用語「インビボ」とは、生物（例えば、動物、植物および／または微生物）内で起きる事象のことを指す。
免疫刺激剤：本明細書中で使用されるとき、用語「免疫刺激剤」とは、抗原に対する免疫応答を調節するが、抗原ではないか、または抗原由来ではない、薬剤のことを指す。「調節する」とは、本明細書中で使用されるとき、免疫応答を誘導するか、増強するか、抑制するか、指示するか、または再指示することを指す。そのような薬剤には、上で定義したように、抗原に対する免疫応答を刺激する（または押し上げる）が、抗原ではないか、または抗原由来ではない、免疫刺激剤が包含される。ゆえに、免疫刺激剤は、アジュバントを含む。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ナノキャリアの表面上に存在し、そして／またはナノキャリアの中に被包されている。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの表面上に存在する免疫刺激剤は、ナノキャリアの中に被包されている免疫刺激剤と異なる。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、１つより多いタイプの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、１つより多いタイプの免疫刺激剤は、異なる経路に対して作用する。免疫刺激剤の例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
核酸：本明細書中で使用されるとき、用語「核酸」とは、その最も広い意味において、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれているか、または組み込まれ得る、任意の化合物および／または物質のことを指す。いくつかの実施形態において、核酸は、ホスホジステル結合を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれているか、または組み込まれ得る、化合物および／または物質である。いくつかの実施形態において、「核酸」とは、個別の核酸残基（例えば、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）のことを指す。いくつかの実施形態において、「核酸」とは、個別の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖のことを指す。本明細書中で使用されるとき、用語「オリゴヌクレオチド」と「ポリヌクレオチド」とは、交換可能に使用され得る。いくつかの実施形態において、「核酸」は、ＲＮＡならびに一本鎖および／または二本鎖のＤＮＡおよび／またはｃＤＮＡを包含する。さらに、用語「核酸」、「ＤＮＡ」、「ＲＮＡ」および／または類似の用語は、核酸アナログ、すなわち、ホスホジエステル骨格以外を有するアナログを包含する。例えば、当該分野で公知であり、そしてその骨格中にホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有する、いわゆる「ペプチド核酸」は、本発明の範囲内とみなされる。用語「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、そして／または同じアミノ酸配列をコードする、すべてのヌクレオチド配列を包含する。タンパク質をコードするヌクレオチド配列および／またはＲＮＡは、イントロンを含み得る。核酸は、天然源から精製され得、組換え発現系を用いて生成され得、そして必要に応じて精製され得、化学的に合成などされ得る。適切な場合、例えば、化学的に合成される分子の場合、核酸は、化学的に改変された塩基または糖、骨格修飾などを有するアナログなどのヌクレオシドアナログを含み得る。核酸配列は、別段記載されない限り、５’から３’への方向で示される。用語「核酸セグメント」は、長い核酸配列の一部である核酸配列のことを指すために本明細書中で使用される。多くの実施形態において、核酸セグメントは、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれを超える残基を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、天然のヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジン）；ヌクレオシドアナログ（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニルシチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニンおよび２−チオシチジン）；化学的に改変された塩基；生物学的に改変された塩基（例えば、メチル化された塩基）；インターカレートされた（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｅｄ）塩基；改変された糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノースおよびヘキソース）；および／または改変されたリン酸塩の基（例えば、ホスホロチオエートおよび５’−Ｎ−ホスホルアミダイト結合）であるか、またはそれらを含む。
粒子：本明細書中で使用されるとき、「粒子」とは、１０ミクロン（μｍ）未満の直径を有する任意の実体のことを指す。代表的には、粒子は、１０００ｎｍ以下の最長の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、３００ｎｍ以下の直径を有する。粒子には、微小粒子、ナノ粒子およびピコ粒子が包含される。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、２００ｎｍ以下の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、１００ｎｍ以下の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、５０ｎｍ以下の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、３０ｎｍ以下の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、２０ｎｍ以下の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、１０ｎｍ以下の直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、ポリマーのマトリックスであり得る。いくつかの実施形態において、粒子は、非ポリマー粒子（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック、無機材料、骨など）であり得る。粒子は、リポソームおよび／またはミセルでもあり得る。本明細書中で使用されるとき、用語「ナノ粒子」とは、１０００ｎｍ未満の直径を有する任意の粒子のことを指す。本明細書中に提供される組成物のナノキャリアは、いくつかの実施形態において、５００ｎｍ未満の幾何平均直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、５０ｎｍより大きいが５００ｎｍ未満の幾何平均直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の幾何平均直径は、約６０ｎｍ、７５ｎｍ、１００ｎｍ、１２５ｎｍ、１５０ｎｍ、１７５ｎｍ、２００ｎｍ、２２５ｎｍ、２５０ｎｍ、２７５ｎｍ、３００ｎｍ、３２５ｎｍ、３５０ｎｍ、３７５ｎｍ、４００ｎｍ、４２５ｎｍ、４５０ｎｍまたは４７５ｎｍである。いくつかの実施形態において、幾何平均直径は、１００〜４００ｎｍ、１００〜３００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍまたは１００〜２００ｎｍである。いくつかの実施形態において、幾何平均直径は、６０〜４００ｎｍ、６０〜３５０ｎｍ、６０〜３００ｎｍ、６０〜２５０ｎｍまたは６０〜２００ｎｍである。いくつかの実施形態において、幾何平均直径は、７５〜２５０ｎｍである。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、５００ｎＭ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、５０ｎｍより大きいが５００ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、約６０ｎｍ、７５ｎｍ、１００ｎｍ、１２５ｎｍ、１５０ｎｍ、１７５ｎｍ、２００ｎｍ、２２５ｎｍ、２５０ｎｍ、２７５ｎｍ、３００ｎｍ、３２５ｎｍ、３５０ｎｍ、３７５ｎｍ、４００ｎｍ、４２５ｎｍ、４５０ｎｍまたは４７５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、１００〜４００ｎｍ、１００〜３００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍまたは１００〜２００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるナノキャリアは、６０〜４００ｎｍ、６０〜３５０ｎｍ、６０〜３００ｎｍ、６０〜２５０ｎｍまたは６０〜２００ｎｍの直径を有する。
免疫原性が低い抗原：本明細書中で使用されるとき、用語「免疫原性が低い抗原」とは、任意のレベルまたは十分なレベルの所望の免疫応答の引き金を引かない抗原のことを指す。「十分な」とは、本明細書中で使用されるとき、本明細書中に記載されるナノキャリアを使用しない組成物として、例えば、ナノキャリアの非存在下においてアジュバントと混合された遊離抗原として、投与されたときに、検出可能または保護的な免疫応答を誘発する能力のことを指す。いくつかの実施形態において、所望の免疫応答は、疾患または状態を処置するためまたは予防するためのものである。ある特定の実施形態において、所望の免疫応答は、疾患または状態の１つ以上の症状を緩和するためのものである。免疫原性が低い抗原としては、自己抗原、小分子および炭水化物が挙げられるが、これらに限定されない。
自己抗原：本明細書中で使用されるとき、用語「自己抗原」とは、動物内の抗原に対して免疫応答の引き金が引かれるときに自己免疫（例えば、自己免疫疾患）が起き得る、動物の身体内の正常な物質のことを指す。自己抗原は、タンパク質もしくはペプチド、リポタンパク質、脂質、炭水化物または核酸であり得る。その核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。自己抗原としては、酵素、構造タンパク質、分泌タンパク質、細胞表面レセプターおよびサイトカインが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、自己抗原は、サイトカインであり、そのサイトカインは、ＴＮＦ、ＩＬ−１またはＩＬ−６である。いくつかの実施形態において、自己抗原は、コレステリルエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）から低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ）へのコレステロールの転移に関与する血清タンパク質、アルツハイマー病に関連するＡβタンパク質、Ａβタンパク質の病理学的な形状をプロセシングするタンパク分解性酵素、アテローム性動脈硬化症に関連するＬＤＬ、またはＨＩＶ−１に対するコレセプターである。いくつかの実施形態において、Ａβタンパク質の病理学的な形状をプロセシングするタンパク分解性酵素は、ベータ−セクレターゼである。いくつかの実施形態において、アテローム性動脈硬化症に関連するＬＤＬは、酸化されているか、または最小限に改変されている。いくつかの実施形態において、ＨＩＶ−１に対するコレセプターは、ＣＣＲ５である。
小分子：一般に、「小分子」は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満のサイズの有機分子であると当該分野において理解されている。いくつかの実施形態において、小分子は、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満または約１０００ｇ／ｍｏｌ未満である。いくつかの実施形態において、小分子は、約８００ｇ／ｍｏｌ未満または５００ｇ／ｍｏｌ未満である。いくつかの実施形態において、小分子は、非ポリマーおよび／または非オリゴマーである。いくつかの実施形態において、小分子は、タンパク質、ペプチドまたはアミノ酸ではない。いくつかの実施形態において、小分子は、核酸またはヌクレオチドではない。いくつかの実施形態において、小分子は、サッカリドまたは多糖ではない。
特異的結合：本明細書中で使用されるとき、用語「特異的結合」とは、第１部分と第２部分との非共有結合性の物理的会合のことを指し、ここで、その第１部分と第２部分との間の会合は、結合が生じる環境中に存在するほとんどまたはすべての他の部分といずれかの部分との会合よりも、少なくとも２倍強いか、少なくとも５倍強いか、少なくとも１０倍強いか、少なくとも５０倍強いか、少なくとも１００倍強いか、またはそれよりも強い。２つ以上の実体の結合は、使用される条件下、例えば、生理学的条件下（例えば、細胞内部の条件または細胞生存と一致する条件）において、平衡解離定数Ｋｄが、１０−３Ｍ以下、１０−４Ｍ以下、１０−５Ｍ以下、１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１１Ｍ以下または１０−１２Ｍ以下である場合に、特異的であるとみなされ得る。いくつかの実施形態において、特異的結合は、複数のより弱い相互作用（例えば、複数の個別の相互作用、ここで、個別の相互作用の各々は、１０−３Ｍよりも大きいＫｄを特徴とする）によって達成され得る。いくつかの実施形態において、「分子認識」とも称され得る特異的結合は、各実体上の官能基の相補的な方向に依存した、２つの実体間の飽和性の結合相互作用である。特異的結合相互作用の例としては、アプタマー−アプタマー標的相互作用、抗体−抗原相互作用、アビジン−ビオチン相互作用、リガンド−レセプター相互作用、金属−キレート相互作用、相補的な核酸間のハイブリダイゼーションなどが挙げられる。
被験体：本明細書中で使用されるとき、用語「被験体」または「患者」とは、例えば、実験、診断および／または治療の目的のために本発明の組成物が投与され得る、任意の生物のことを指す。代表的な被験体としては、動物（例えば、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類およびヒト））および／または植物が挙げられる。
〜に罹患している：疾患、障害および／または状態「に罹患している」個体は、その疾患、障害および／または状態を有すると診断されているか、診断され得るか、またはそれらの１つ以上の症状を示す。
〜の影響を受けやすい：疾患、障害および／または状態「の影響を受けやすい」個体は、その疾患、障害および／または状態を有すると診断されておらず、そして／またはそれらの症状を示さなくてもよい。いくつかの実施形態において、疾患、障害および／または状態は、微生物感染（例えば、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、寄生生物感染など）に関連する。いくつかの実施形態において、微生物感染の影響を受けやすい個体は、微生物に曝露され得る（例えば、経口摂取、吸入、物理的接触などによって）。いくつかの実施形態において、微生物感染の影響を受けやすい個体は、微生物に感染している個体に曝露され得る。いくつかの実施形態において、微生物感染の影響を受けやすい個体は、微生物が流行している場所に居る個体（例えば、微生物が流行している場所に旅行している個体）である。いくつかの実施形態において、疾患、障害および／または状態の影響を受けやすい個体は、その疾患、障害および／または状態を発症する。いくつかの実施形態において、疾患、障害および／または状態の影響を受けやすい個体は、その疾患、障害および／または状態を発症しない。いくつかの実施形態において、被験体は、癌、感染症、非自己免疫性の代謝性疾患もしくは変性疾患または嗜癖を有するか、または有しやすい。いくつかの実施形態において、被験体は、細菌、真菌、原生動物、寄生生物（ｐａｒｉｓｉｔｉｃ）またはウイルスの感染を有するか、または有しやすい。そのような感染の原因は、本明細書中に提供されるような生物のいずれかであり得る。いくつかの実施形態において、被験体は、結核、マラリア、リーシュマニア症、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ感染を有するか、またはそれらの影響を受けやすい。いくつかの実施形態において、被験体は、インフルエンザを有するか、または有しやすい。いくつかの実施形態において、被験体は、自己免疫疾患、アレルギーまたは喘息を有するか、またはそれらの影響を受けやすい。
Ｔ細胞抗原：本明細書中で使用されるとき、用語「Ｔ細胞抗原」とは、Ｔ細胞における免疫応答によって認識される任意の抗原およびＴ細胞における免疫応答の引き金を引く任意の抗原（例えば、主要組織適合遺伝子複合体分子（ＭＨＣ）に結合される抗原またはその一部の提示を介してＴ細胞上のＴ細胞レセプターによって特異的に認識される抗原）のことを指す。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原である抗原は、Ｂ細胞抗原でもある。他の実施形態において、Ｔ細胞抗原は、Ｂ細胞抗原ではない。Ｔ細胞抗原は、一般に、タンパク質またはペプチドである。Ｔ細胞抗原は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答またはその両方を刺激する抗原であり得る。ゆえに、ナノキャリアは、いくつかの実施形態において、両方のタイプの応答を効果的に刺激し得る。
標的：本明細書中で使用されるとき、用語「標的」または「マーカー」とは、特定の標的化部分に特異的に結合することができる任意の実体のことを指す。いくつかの実施形態において、標的は、１つ以上の特定の組織タイプと特異的に会合されている。いくつかの実施形態において、標的は、１つ以上の特定の細胞型と特異的に会合されている。例えば、細胞型特異的マーカーは、代表的には、参照細胞集団よりも少なくとも２倍高いレベルで細胞型において発現される。いくつかの実施形態において、細胞型特異的マーカーは、参照集団におけるその平均の発現よりも少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍または少なくとも１０００倍高いレベルで存在する。細胞型特異的マーカーの検出または測定は、目的の細胞型と、多くの、ほとんどの、またはすべての他のタイプの細胞との区別を可能にし得る。いくつかの実施形態において、標的は、本明細書中に記載されるような、タンパク質、炭水化物、脂質および／または核酸を含み得る。
標的化される：ある物質が標的に特異的に結合する場合に、その物質は、本明細書中に記載される目的のために「標的化される」とみなされる。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ストリンジェントな条件下において標的に特異的に結合する。標的化部分を含む、ワクチンナノキャリアなどの発明性のあるナノキャリアは、その標的化部分が、標的に特異的に結合することによって、特定の器官、組織、細胞および／または細胞下の場所にナノキャリア全体が送達される場合に、「標的化される」とみなされる。
標的化部分：本明細書中で使用されるとき、用語「標的化部分」とは、細胞の成分に結合する任意の部分のことを指す。いくつかの実施形態において、標的化部分は、細胞の成分に特異的に結合する。そのような成分は、「標的」または「マーカー」と称される。標的化部分は、ポリペプチド、糖タンパク質、核酸、小分子、炭水化物、脂質などであり得る。いくつかの実施形態において、標的化部分は、抗体またはその特徴的な一部である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、レセプターまたはその特徴的な一部である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、リガンドまたはその特徴的な一部である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、細胞型特異的マーカーに結合する核酸標的化部分（例えば、アプタマー）である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、小分子である。標的化部分は、いくつかの実施形態において、ナノキャリアの表面上に存在する。他の実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアの中に被包されている。なおも他の実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアと会合されている。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアと共有結合的に会合されている。他の実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアと非共有結合的に会合されている。さらに他の実施形態において、標的化部分は、細胞の表面上に発現されるレセプターと結合する。標的化部分は、いくつかの実施形態において、可溶性レセプターと結合する。いくつかの実施形態において、可溶性レセプターは、補体タンパク質または前から存在する抗体である。さらなる実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアを抗原提示細胞、Ｔ細胞またはＢ細胞に送達するためのものである。いくつかの実施形態において、抗原提示細胞は、マクロファージである。他の実施形態において、マクロファージは、被膜下洞マクロファージである。なおも他の実施形態において、抗原提示細胞は、樹状細胞である。いくつかの実施形態において、抗原提示細胞は、濾胞樹状細胞である。標的化部分の特定の非限定的な例としては、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６９、マンノースレセプター、ＤＥＣ−２０５、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ２１／ＣＤ３５、ＣＸ３ＣＲ１またはＦｃレセプターに結合する分子が挙げられる。いくつかの実施形態において、前述のもののいずれかと結合する分子は、抗体またはその抗原結合フラグメント（例えば、抗ＣＤ１６９抗体）である。いくつかの実施形態において、Ｆｃレセプターと結合する分子は、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）のＦｃ部を含むものである。他の実施形態において、免疫グロブリンのＦｃ部は、ヒトＦｃ部であるある。いくつかの実施形態において、ＣＸ３ＣＲ１と結合する分子は、ＣＸ３ＣＬ１（フラクタルカイン）である。ＣＤ１６９と結合する標的化部分としては、抗ＣＤ１６９抗体およびＣＤ１６９のリガンド、例えば、シアル化されたＣＤ２２７、ＣＤ４３、ＣＤ２０６、または結合機能を保持しているこれらのリガンドの一部、例えば、可溶性の一部が挙げられる。
治療有効量：本明細書中で使用されるとき、用語「治療有効量」とは、疾患、障害および／または状態に罹患しているか、またはそれらの影響を受けやすい被験体に投与されたときに、その疾患、障害および／または状態を処置するため、緩和するため、回復させるため、軽減するため、その症状を緩和するため、予防するため、その発症を遅延させるため、その進行を阻害するため、その重症度を低下させるため、および／またはその発生率を低下させるために十分な、治療的、予防的および／または診断的な薬剤（例えば、発明性のあるワクチンナノキャリア）の量のことを意味する。この用語は、被験体において免疫応答を調節する本明細書中に提供されるナノキャリアまたはその組成物の量のことを指すとも意図される。
治療薬：本明細書中で使用されるとき、用語「治療薬」とは、被験体に投与されたときに、治療的、予防的および／もしくは診断的な作用を有し、そして／または所望の生物学的作用および／もしくは薬理学的作用を誘発する、任意の薬剤のことを指す。
処置する：本明細書中で使用されるとき、用語「処置する」とは、部分的または完全に、特定の疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状または特徴を、緩和すること、回復させること、軽減すること、その発症を遅延させること、その進行を阻害すること、その重症度を低下させること、および／またはその発生率を低下させることを指す。例えば、微生物感染を「処置する」とは、その微生物の生存、成長および／または拡散を阻害することを指し得る。処置は、疾患、障害および／もしくは状態の徴候を示さない被験体、ならびに／または疾患、障害および／もしくは状態の初期の徴候を示すだけの被験体に対して、その疾患、障害および／または状態に関連する病状を発症するリスクを低下させる目的で、施され得る。いくつかの実施形態において、処置は、発明性のあるワクチンナノキャリアを被験体に送達することを含む。
ユニバーサルＴ細胞抗原：本明細書中で使用されるとき、用語「ユニバーサルＴ細胞抗原」とは、Ｔ細胞の補助を促進し得、そして完全に無関係な抗原に対する免疫応答を増強し得る、Ｔ細胞抗原のことを指す。ユニバーサルＴ細胞抗原には、破傷風トキソイド、ならびに破傷風トキソイド、エプスタイン・バーウイルスまたはインフルエンザウイルスに由来する１つ以上のペプチドが包含される。ユニバーサルＴ細胞抗原には、インフルエンザウイルスの成分（例えば、赤血球凝集素、ノイラミニダーゼまたは核タンパク質）またはそれら由来の１つ以上のペプチドも包含される。
ワクチンナノキャリア：本明細書中で使用されるとき、用語「ワクチンナノキャリア」とは、少なくとも１つの免疫調節剤または免疫刺激剤を含む実体のことを指す。ある特定の実施形態において、ワクチンナノキャリアは、少なくとも２つのタイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、抗原であり、そしてワクチンナノキャリアは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれを超える抗原を含む。その様々な抗原は、完全に異なる抗原性分子であり得るか、もしくはそれらに由来し得るか、またはその様々な抗原は、同じ抗原性分子由来の異なるエピトープであり得る。他の実施形態において、ワクチンナノキャリアは、同じ抗原性分子由来の２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれを超える異なるエピトープを含む。ワクチンナノキャリアは、任意の形態の粒子であり得る。ワクチンナノキャリアは、いくつかの実施形態において、Ｔ細胞および／またはＢ細胞において免疫応答を刺激することができる。他の実施形態において、ワクチンナノキャリアは、免疫応答を増強することができるか、抑制することができるか、指示することができるか、または再指示することができる。いくつかの実施形態において、当該分野において利用可能な任意のアッセイが、Ｔ細胞および／またはＢ細胞が刺激されているか否かを判定するために使用され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の刺激は、サイトカインの抗原誘導性産生、Ｔ細胞の抗原誘導性増殖および／またはタンパク質発現の抗原誘導性変化をモニタリングすることによってアッセイされ得る。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞の刺激は、抗体価、抗体親和性、中和アッセイにおける抗体の性能、クラススイッチ組換え、抗原特異的抗体の親和性成熟、記憶Ｂ細胞の発達、長期間にわたって大量の高親和性抗体を産生し得る長命の形質細胞の発達、胚中心反応および／または中和アッセイにおける抗体の性能をモニタリングすることによってアッセイされ得る。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、そのワクチンナノキャリアを被験体内の特定の標的（例えば、器官、組織、細胞および／または細胞下の場所）に送達するのを助け得る少なくとも１つの標的化部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｔ細胞および／またはＢ細胞において免疫応答を刺激するのを助け得る少なくとも１つの免疫刺激剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、調整可能な膜の剛性および制御可能なリポソーム安定性を可能にさせる少なくとも１つのナノ粒子をさらに含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、脂質、両親媒性の化合物、ポリマー、糖、ポリマーマトリックスおよび／または非ポリマー粒子を含む。
水溶性で非粘着性のポリマー：本明細書中で使用されるとき、用語「水溶性で非粘着性のポリマー」とは、水に可溶性であり、かつ、低い生物付着（ｂｉｏｆｏｕｌｉｎｇ）特性を付与し得る、ポリマーのことを指す。いくつかの実施形態において、水溶性で非粘着性のポリマーは、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリアルキレングリコールおよびポリアルキレンオキシドである。
本発明のある特定の好ましい実施形態の詳細な説明
ワクチン
ワクチン接種は、代表的には、受動的または能動的のいずれかの性質のものである。一般に、能動的なワクチン接種は、望まれないもの、所望でないものならびに／または外来のものとして認識され、そして、内因性の免疫応答を誘発して、抗原特異的ナイーブリンパ球の活性化をもたらし、次いで、抗体分泌Ｂ細胞もしくは抗原特異的エフェクターおよび記憶Ｔ細胞またはその両方を生じる、１つ以上の作用物質に対する被験体の免疫系の曝露を含む。このアプローチは、同じ抗原性材料への新たな曝露によって時々押し上げられ得る、長続きする保護的な免疫をもたらし得る。能動的なワクチン接種に対する首尾良い免疫応答の長続きの見込みは、最も臨床的な環境において、このストラテジーを受動的なワクチン接種（レシピエントが、予め形成された抗体または抗原特異的エフェクターリンパ球を注射されるものであり、これは、迅速なその場限りの保護を付与し得るが、代表的には、持続的な免疫を確立しない）よりも望ましくさせる。
多岐にわたるワクチン調合物が、ヒトにおいて使用されているか、または使用されてきた。ヒトにおける最も一般的な投与経路は、筋肉内（ｉ．ｍ．）注射であるが、ワクチンは、経口的、鼻腔内、皮下、吸入的（ｉｎｈａｌａｔｉｏｎｌｙ）または静脈内にも適用され得る。ほとんどの場合において、ワクチン由来の抗原は、最初に、局所リンパ節においてナイーブリンパ球に提示される。
例えば、微生物病原体に対する、いくつかの現在のワクチンは、生の弱毒化バリアント株もしくは非ビルレントバリアント株の微生物、または死滅させた生物もしくは別途不活性化された生物からなる。他のワクチンは、病原体溶解産物のおおよそ精製された成分（例えば、表面炭水化物、または他の分子、特に、アジュバント活性を付与し得るタンパク質に時折融合されている組換え病原体由来タンパク質）を利用するものである。
筋肉内注射に使用されるワクチンは、代表的には、アジュバントキャリア、最も頻繁には、ミョウバン（すなわち、硫酸アルミニウムカリウム）とともに投与され、それは、抗原性材料の長期間にわたる放出のための貯蔵物（ｄｅｐｏｔ）を確立すると考えられているが、完全には理解されていない機序によって、Ｔｈ２応答に偏らせるなどの免疫調節性活性も発揮する（Ｌｉｎｄｂｌａｄ，２００４，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，８２：４９７；およびＪｏｒｄａｎら、２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０４：１８０８；この両方が本明細書中で参考として援用される）。
生の弱毒化された病原体または不活性化された病原体を利用するワクチンは、代表的には、活発な免疫応答をもたらすが、それらの使用には限界がある。例えば、生のワクチン株は、特に、免疫力が低下したレシピエントに投与されるとき、感染性の病状を時折引き起こし得る。さらに、多くの病原体、特にウイルスは、そのゲノムにおいて継続的かつ迅速に変異を起こし、それによって、それらの病原体は、抗原的に異なるワクチン株に対する免疫応答から免れることができる。しかしながら、ほとんどまたはすべての病原体は、必須の機能に関連するがゆえに容易に変異しないある特定の抗原決定基を有すると考えられる。可変性で非必須のエピトープではなく、これらの保存されたエピトープに対する抗体は、高度に変異可能なウイルスから保護し得る（Ｂａｂａら、２０００，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，６：２００；本明細書中で参考として援用される）。生または死滅させたインタクトな病原体に基づくワクチンは、必ずしもこれらの重大なエピトープの認識を促進しないが、免疫系を本質的に「かき乱す」ことにより、その攻撃を高度に可変性の決定基に集中させ得る。したがって、本発明は、ウイルス粒子の高度に免疫原性の粒状の性質を模倣するが、必須で不変のエピトープを選択的に提示する操作されたワクチンナノキャリアが、インタクトな微生物よりも、強力かつ「逃亡を防ぐ」中和抗体およびエフェクターＴ細胞応答をもたらし得るという認識を包含している。
ワクチンが排出リンパ節において抗体応答を刺激する（またはそのようにできない）正確な機序は、まだ完全には理解されていない。Ｂ細胞およびＴ細胞は、初めに、異なる解剖学的領域に、それぞれ、表面に位置するＢ濾胞ならびに周囲の副皮質（ｐａｒａｃｏｒｔｅｘ）および副皮質（ｄｅｅｐ ｃｏｒｔｅｘ）に隔離されている。抗原負荷されると、濾胞内の抗原特異的Ｂ細胞ならびにＴ細胞領域内のＣＤ４Ｔ細胞は、活性化されるようになり、次いで、その２つの区画間の境界域に向かって遊走する。貪食されたリンパ由来の抗原を有するＢ細胞は、獲得した材料をプロセシングし、そしてＭＨＣクラス−ＩＩ表面分子において抗原ペプチドを提示し始め、次いでそれは、活性化ＣＤ４Ｔ細胞（ＴＦＨ細胞）によって認識される。抗原認識によって、ＴＦＨ細胞がＢ細胞を助けることが可能となり、これは、強力な生存シグナルを構成し、そしてＢ濾胞内の胚中心（ＧＣ）の形成の引き金を引く。そのＧＣ反応は、クラススイッチ組換え、抗原特異的抗体の親和性成熟ならびに記憶Ｂ細胞および大量の高親和性抗体を長期間にわたって産生し得る長命の形質細胞の形成を促進する。したがって、本発明は、ワクチンナノキャリアが、抗原性材料がＢ細胞とＴ細胞の両方によって効率的に認識されることおよび活発なＧＣ反応を誘導することを可能にする成分を有し得るという認識を包含する（図１）。
本発明は、現在のワクチン技術のこれらの上述の限界を克服し得る、ワクチン送達のためのワクチンナノキャリアを開発するための系を記載する。本発明は、数十から数百ナノメートルの直径を有し、そして強力な細胞性応答および抗体応答を誘導するリンパ由来のウイルス粒子が、捕捉され、そして排出リンパ節の被膜下洞におけるマクロファージ（すなわち、被膜下洞マクロファージ、ＳＣＳ−Ｍｐｈと省略される）の表面上に保持されるという認識を包含する。これらのマクロファージは、濾胞Ｂ細胞への、インタクトなウイルス粒子の効率的な初期の提示に関与する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、ウイルス粒子を模倣し、そしてＳＣＳ−Ｍｐｈを標的化する。実施例１に示されるように、脂質およびポリエチレングリコールの単層で表面安定化されている、Ｃｙ５を被包するポリ（乳酸−コグリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子（５０ｎｍ〜１５０ｎｍ）を皮下注射すると、その注射されたナノ粒子は、リンパ由来のウイルスと同様に、リンパ管に容易に進入し、そして排出リンパ節の被膜下洞に結合される。Ｂ細胞および／またはＴ細胞を刺激する免疫調節剤を有する同様のナノキャリアは、被験体をワクチン接種する際に特に有用である。
したがって、本発明は、免疫調節剤を有するリンパ由来のウイルスサイズのナノキャリアなどのナノキャリアが、あたかもそれがウイルスであるようにリンパ節において認識され得、例えば、その粒子がＢ細胞および／またはＴ細胞によって認識される免疫調節剤を含むときに、強力な免疫応答を誘発し得るという認識を包含する。
表面上に免疫調節剤を有することによって、および／または内側に同様のもしくは異なる免疫調節剤を負荷することによって、ナノキャリアは、これらの免疫調節剤を免疫系の異なる細胞に同時に送達し得、そしてそれらを刺激し得る。ある特定の実施形態において、ナノキャリア表面上に提示される免疫調節剤は、Ｂ細胞を刺激し、そしてそのナノキャリアの中に被包されている免疫調節剤は、リンパ組織における樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって（および活性化後のＢ細胞によって）プロセシングされ、そしてＴ細胞に提示される。いくつかの実施形態において、標的化部分（例えば、抗体もしくはそのフラグメント、ペプチドまたはポリペプチド、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（商標）、ＡｄＮｅｃｔｉｎ（商標）、Ａｖｉｍｅｒ（商標）、アプタマー、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ（登録商標）、小分子、脂質、炭水化物など）を用いてナノキャリアの表面を改変することによって、ナノキャリアは、免疫調節剤を特定の抗原提示細胞（例えば、ＤＣ、ＳＣＳ−Ｍｐｈ、ＦＤＣ、Ｔ細胞、Ｂ細胞および／またはそれらの組み合わせ）に選択的に送達し得る。ナノキャリアは、１つまたは複数の脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属性ナノ粒子、界面活性物質ベースのエマルジョン、デンドリマーおよび／または脂質−ポリマーナノ粒子などのナノ材料の組み合わせを用いて開発されるナノ粒子であり得るが、これらに限定されない。ワクチンナノキャリアは、「ワクチンナノキャリア」と題される項でさらに詳細に説明される。
Ｔ細胞
本発明は、例えば、免疫調節剤を免疫系の細胞に送達するためのワクチンナノキャリアを提供する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ＡＰＣに送達され得る少なくとも１つの免疫調節剤を含み、次いで、そのワクチンナノキャリアは、その免疫調節剤をプロセシングし、そしてＴ細胞に送達する。
プロフェッショナルＡＰＣは、ファゴサイトーシスまたはエンドサイトーシスによる抗原の内部移行において非常に有効であり、次いで、そのＡＰＣ膜上のクラスＩＩ主要組織適合遺伝子複合体（クラスＩＩＭＨＣ）分子またはクラスＩＭＨＣ分子に結合されたその抗原のフラグメントを表示する。ＣＤ４Ｔ細胞は、そのＡＰＣ膜上の抗原−クラスＩＩＭＨＣ分子複合体を認識して、それと相互作用するのに対し、ＣＤ８Ｔ細胞は、抗原−クラスＩＭＨＣ分子複合体を認識して、相互作用する。次いで、さらなる共刺激シグナルならびに調節サイトカインが、ＡＰＣによって産生されることにより、Ｔ細胞の活性化が生じる。
免疫調節剤
本発明は、１つ以上の免疫調節剤を含むワクチンナノキャリアを提供する。いくつかの実施形態において、１つ以上の免疫調節剤を含む発明性のあるナノキャリアは、ワクチンとして使用される。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、単離されたおよび／または組換えのタンパク質もしくはペプチド、炭水化物、糖タンパク質、糖ペプチド、プロテオグリカン、不活性化された生物およびウイルス、死滅させた生物およびウイルス、遺伝的に変更された生物またはウイルス、ならびに細胞抽出物を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、核酸、炭水化物、脂質および／または小分子を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、免疫応答を誘発するものである。他の実施形態において、免疫調節剤は、タンパク質またはペプチドが発現されたときに免疫応答が誘発される、そのタンパク質またはペプチドをコードするポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、抗原である。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、タンパク質またはペプチドである。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、ワクチンのために使用される。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、病原体由来の任意のタンパク質および／または他の抗原である。その病原体は、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、寄生生物などであり得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、細菌生物（例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ種、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｃａｍｐｈｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ種、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ種、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｅｒｌｉｃｈｉａ種、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ種、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ種、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ種、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ種、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ種、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｃｕｓ ｐｎｕｅｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ種、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ種、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓなど）の抗原を含み得る。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、ウイルス生物（例えば、ポックスウイルス、痘瘡（天然痘）、エボラウイルス、ヘパドナウイルス、マールブルグウイルス、デング熱ウイルス、インフルエンザＡおよびＢ、パラインフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス、麻疹（はしかウイルス）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、水痘−帯状疱疹、単純ヘルペス１および２型、サイトメガロウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ＪＣウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、オルトミクソウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、耳下腺炎、狂犬病、レオウイルス、風疹、トガウイルス、レトロウイルス、コクサッキーウイルス、ウマ脳炎、日本脳炎、黄熱病、リフトバレー熱、Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥ型肝炎ウイルスなど）の抗原を含み得る。ウイルス生物には、ｄｓＤＮＡウイルス、ｓｓＤＮＡウイルス、ｄｓＲＮＡウイルス、（＋）ｓｓＲＮＡウイルス、（−）ｓＲＮＡウイルス、ｓｓＲＮＡ−ＲＴウイルスおよびｄｓＤＮＡ−ＲＴウイルスであるものが包含される。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、真菌、原生動物および／または寄生生物（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種、Ｃａｎｄｉｄａ種、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ種、Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ種、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉなど）の抗原を含み得る。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、ＨＣＶのＥ１および／またはＥ２タンパク質を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、ＨＩＶのｇｐ１２０を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、インフルエンザウイルスの赤血球凝集素および／またはノイラミニダーゼを含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、肺炎球菌の多糖またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのファミリー１および／もしくはファミリー２ＰｓｐＡまたは５型および８型莢膜多糖またはＳｔａｐｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓの粘着性マトリックス分子を認識する微生物表面成分を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓのマンナンまたはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓのクリプトコッカス莢膜多糖を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのＰｆＥＭＰ１またはマラリア原虫感染赤血球上に発現される他の寄生生物由来の抗原もしくはＴｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉのＧＲＡ７を含み得る。
本明細書中に記載される任意の抗原は、死滅させた生物全体、ペプチド、タンパク質、糖タンパク質、糖ペプチド、プロテオグリカン、タンパク質もしくはペプチドをコードする核酸、炭水化物、小分子またはそれらの組み合わせの形態であり得る。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、すでに少なくとも１つのワクチンが存在する微生物に由来する。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、ワクチンが開発されていない微生物に由来する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、少なくとも１つのタイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの免疫調節剤のすべては、互いに同一である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、いくつかの異なる免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、複数の個別の免疫調節剤を含み、それらはすべて同じである。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、厳密に１つのタイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、厳密に２つの異なるタイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多い異なるタイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれを超える異なるタイプの免疫調節剤を含む。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの免疫調節剤を含み、その両方ともが、単一の属の微生物に由来する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの免疫調節剤を含み、その両方ともが、単一の属および種の微生物に由来する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの免疫調節剤を含み、その両方ともが、単一の属、種および株の微生物に由来する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの免疫調節剤を含み、その両方ともが、単一クローンの微生物に由来する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫調節剤を含み、そのすべてが、単一の属の微生物に由来する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫調節剤を含み、そのすべてが、単一の属および種の微生物に由来する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫調節剤を含み、そのすべてが、単一の属、種および株の微生物に由来する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫調節剤を含み、そのすべてが、単一クローンの微生物に由来する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つ以上のタイプの免疫調節剤を含み、そのすべてが、単一の属の微生物に由来する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つ以上のタイプの免疫調節剤を含み、そのすべてが、単一の属および種の微生物に由来する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つ以上のタイプの免疫調節剤を含み、そのすべてが、単一の属、種および株の微生物に由来する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、単一の種の異なる株の微生物に由来する２つ以上のタイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、同じ属の異なる種の微生物に由来する２つ以上のタイプの免疫調節剤を含む。他の実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つ以上のタイプの免疫調節剤を含み、その各々は、異なる属の微生物に由来する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｂ細胞とＴ細胞の両方において免疫応答を刺激する単一タイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの免疫調節剤を含み、ここで、第１免疫調節剤は、Ｂ細胞を刺激し、そして第２タイプの免疫調節剤は、Ｔ細胞を刺激する。ある特定の実施形態において、一方または両方の薬剤が、Ｔ細胞およびＢ細胞を刺激し得る。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫調節剤を含み、ここで、１つ以上のタイプの免疫調節剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして１つ以上のタイプの免疫調節剤が、Ｔ細胞を刺激する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、そのワクチンナノキャリアの外面と会合されている少なくとも１つのタイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、会合は、共有結合性である。いくつかの実施形態において、共有結合性の会合は、１つ以上のリンカーによって媒介される。いくつかの実施形態において、会合は、非共有結合性である。いくつかの実施形態において、非共有結合性の会合は、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせによって媒介される。どのようにして免疫調節剤がワクチンナノキャリアと会合され得るかに関するさらに詳細な説明については、下記の「ワクチンナノキャリアの生成」と題される項を参照のこと。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、脂質膜（例えば、脂質二重層、脂質単層など）を含む。少なくとも１つの免疫調節剤が、脂質膜と会合され得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの免疫調節剤が、脂質膜の中に包埋される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの免疫調節剤が、脂質二重層の内腔の中に包埋される。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、脂質膜の内面と会合されている少なくとも１つの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの免疫調節剤が、ワクチンナノキャリアの脂質膜の中に被包される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫調節剤が、ワクチンナノキャリアの複数の位置に配置され得る。例えば、第１タイプの免疫調節剤は、脂質膜の中に包埋され得、そして第２タイプの免疫調節剤は、ワクチンナノキャリアの脂質膜の中に被包され得る。別の例を挙げると、第１タイプの免疫調節剤は、脂質膜の外面と会合され得、そして第２タイプの免疫調節剤は、ワクチンナノキャリアの脂質膜の内面と会合され得る。いくつかの実施形態において、第１タイプの免疫調節剤は、ワクチンナノキャリアの脂質二重層の内腔の中に包埋され得、そしてその脂質二重層は、第２タイプの免疫調節剤が分布しているポリマーマトリックスを被包し得る。いくつかの実施形態において、第１タイプの免疫調節剤および第２タイプの免疫調節剤は、ワクチンナノキャリアの同じ場所に存在し得る（例えば、それらは、両方ともがワクチンナノキャリアの外面と会合され得る；それらは、両方ともがワクチンナノキャリアの中に被包され得る；など）。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ポリマー（例えば、ポリマーのコア）を含む。少なくとも１つのタイプの免疫調節剤が、ポリマーと会合され得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫調節剤が、ポリマーの中に包埋される。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ポリマーの内面と会合されている少なくとも１つのタイプの免疫調節剤を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫調節剤が、ワクチンナノキャリアのポリマーで被包される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫調節剤が、ワクチンナノキャリアの複数の位置に配置され得る。例えば、第１タイプの免疫調節剤が、ポリマーの中に包埋され得、そして第２タイプの免疫調節剤が、ワクチンナノキャリアのポリマーのコアを取り囲んでいる脂質膜の中に被包され得る。別の例を挙げると、第１タイプの免疫調節剤が、ポリマーの外面と会合され得、そして第２タイプの免疫調節剤が、ワクチンナノキャリアのポリマーの中に包埋され得る。
当業者は、前述の例が、複数の免疫調節剤がワクチンナノキャリアの様々な位置と会合され得る多くの異なる方法の単なる代表であることを認識するだろう。複数の免疫調節剤は、ワクチンナノキャリアの任意の組み合わせの場所に配置され得る。さらに、上述の例は、ナノキャリアの他の薬剤（例えば、免疫刺激剤）にも適用され得る。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、Ｔ細胞抗原であり、そしてそのＴ細胞抗原は、ワクチン接種が意図される同じ病原体に由来する。この場合、初めのうちは少数のナイーブＴ細胞が、刺激されることにより、病原体特異的エフェクターおよび記憶Ｔ細胞が産生される。いくつかの実施形態において、抗原は、無関係な供給源（例えば、広範な免疫が既に存在する感染性因子（例えば、破傷風トキソイドまたはインフルエンザウイルスの一般的な成分（例えば、赤血球凝集素、ノイラミニダーゼまたは核タンパク質）））から得られ得る。後者の場合、そのワクチンは、先の感染またはワクチン接種に応答して生じている記憶Ｔ細胞の存在を活用する。記憶細胞は、一般に、抗原再負荷に対してより迅速かつ活発に反応し、ゆえに、Ｂ細胞に対する補助の優れた供給源を提供し得る。
他のＴ細胞抗原としては、変性疾患抗原、感染症抗原、癌抗原、アレルゲン、同種抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、接触感作物質、ハプテン、異種抗原または代謝疾患酵素もしくはその酵素反応生成物が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、感染症抗原は、本明細書中に記載されるウイルスのいずれか由来の任意の抗原を含むウイルス抗原である。Ｔ細胞抗原の例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、インタクトなタンパク質としてナノキャリアに組み込まれる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、改変されたタンパク質としてナノキャリアに組み込まれる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、変異したタンパク質としてナノキャリアに組み込まれる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ複合体への抗原の組み込みを押し上げ得、ゆえにヘルパー応答をさらに促進し得る、重複ペプチドのコレクションとして提供される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ複合体への抗原の組み込みを押し上げ得、ゆえにヘルパー応答をさらに促進し得る、非重複ペプチドのコレクションとして提供される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞抗原は、その抗原をコードする核酸として提供される。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアなどの発明性のあるナノキャリアは、９０重量％未満未満、７５重量％未満、５０重量％未満、４０重量％未満、３０重量％未満、２０重量％未満、１５重量％未満、１０重量％未満、５重量％未満、１重量％未満または０．５重量％未満の免疫調節剤を含む。
標的化部分
いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、１つ以上の標的化部分を含む。本発明のある特定の実施形態において、ナノキャリアは、１つ以上の標的化部分と会合される。標的化部分は、器官、組織、細胞、細胞外マトリックスおよび／または細胞下の場所と会合されている成分に結合する任意の部分である。いくつかの実施形態において、そのような成分は、「標的」または「マーカー」と称され、これらは、以下でさらに詳細に論じられる。
標的化部分は、核酸、ポリペプチド、糖タンパク質、炭水化物、脂質、小分子などであり得る。例えば、標的化部分は、細胞型特異的マーカーに結合する核酸標的化部分（例えば、アプタマー、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ（登録商標）など）であり得る。一般に、アプタマーは、ポリペプチドなどの特定の標的に結合するオリゴヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはそのアナログもしくは誘導体）である。いくつかの実施形態において、標的化部分は、細胞表面レセプターに対する天然に存在するリガンドまたは合成リガンド、例えば、成長因子、ホルモン、ＬＤＬ、トランスフェリンなどであり得る。標的化部分は、抗体であり得、この用語は、抗体フラグメント、抗体の特徴的な一部、一本鎖抗体などを包含すると意図される。合成結合タンパク質（例えば、Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（商標）、ＡｄＮｅｃｔｉｎｓ（商標）、Ａｖｉｍｅｒｓ（商標）など）が、使用され得る。ペプチド標的化部分は、例えば、ファージディスプレイなどの手順を用いて同定され得る。この広く使用される手法は、種々の異なる細胞型に対する細胞特異的リガンドを同定するために使用されている。
本発明によれば、標的化部分は、特定の器官、組織、細胞および／または細胞下の場所と会合されている１つ以上の「標的」または「マーカー」を認識する。いくつかの実施形態において、標的は、１つもしくはいくつかの細胞型、１つもしくはいくつかの疾患および／または１つもしくはいくつかの発生段階と排他的にまたは主に関連するマーカーであり得る。細胞型特異的マーカーは、代表的には、例えば、ほぼ同量の細胞（例えば、ほぼ同数の細胞、ほぼ同体積の細胞、ほぼ同質量の細胞など）を含む混合物からなり得る参照細胞集団よりも、その細胞型において少なくとも２倍高いレベルで発現される。いくつかの実施形態において、細胞型特異的マーカーは、参照集団におけるその平均発現よりも少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、少なくとも５０００倍または少なくとも１０，０００倍高いレベルで存在する。細胞型特異的マーカーの検出または測定は、目的の細胞型と、多くの、ほとんどの、またはすべての他のタイプの細胞との区別を可能にし得る。
いくつかの実施形態において、標的は、タンパク質、炭水化物、脂質および／または核酸を含み得る。ある特定の実施形態において、標的は、タンパク質および／またはその特徴的な一部（例えば、腫瘍マーカー、インテグリン、細胞表面レセプター、膜貫通タンパク質、細胞間タンパク質、イオンチャネル、膜トランスポータータンパク質、酵素、抗体、キメラタンパク質、糖タンパク質など）を含み得る。ある特定の実施形態において、標的は、炭水化物および／またはその特徴的な一部（例えば、糖タンパク質、糖（例えば、単糖、二糖、多糖）、糖衣（すなわち、ほとんどの真核細胞の外面上に存在する炭水化物リッチな辺縁部）など）を含み得る。ある特定の実施形態において、標的は、脂質および／またはその特徴的な一部（例えば、油、脂肪酸、グリセリド、ホルモン、ステロイド（例えば、コレステロール、胆汁酸）、ビタミン（例えば、ビタミンＥ）、リン脂質、スフィンゴ脂質、リポタンパク質など）を含み得る。ある特定の実施形態において、標的は、核酸および／またはその特徴的な一部（例えば、ＤＮＡ核酸；ＲＮＡ核酸；改変ＤＮＡ核酸；改変ＲＮＡ核酸；ＤＮＡ、ＲＮＡ、改変ＤＮＡおよび改変ＲＮＡの任意の組み合わせを含む核酸；など）を含み得る。
いくつかの実施形態において、標的化部分は、ＶＳＶ由来の表面糖タンパク質分子であり得る。ＶＳＶは、トール様レセプターアゴニストである、単一表面分子のＶＳＶ−Ｇを含む。ＶＳＶは、免疫系の細胞に効率的に標的化されるので、いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ワクチンナノキャリアを免疫系の細胞に対して標的化するために、ＶＳＶ表面分子を含み得る。
いくつかの実施形態において、標的は、腫瘍マーカーである。いくつかの実施形態において、腫瘍マーカーは、腫瘍細胞において発現されるが健常な細胞および／または正常な細胞において発現されない抗原である。いくつかの実施形態において、腫瘍マーカーは、健常な細胞および／または正常な細胞よりも腫瘍細胞において優勢である抗原である。例示的な腫瘍マーカーとしては、ｇｐ１００；Ｍｅｌａｎ−Ａ；チロシナーゼ；ＰＳＭＡ；ＨＥＲ−２／ｎｅｕ；ＭＵＣ−１；トポイソメラーゼＩＩα；シアリル−Ｔｎ；癌胎児抗原；ＥｒｂＢ−３結合タンパク質−１；アルファ−フェトプロテイン；および精巣癌抗原ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥＡ４およびＮＹ−ＥＳＯ−１が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、標的は、ＡＰＣマーカーである。いくつかの実施形態において、ＡＰＣ標的は、ＡＰＣにおいて発現されるが非ＡＰＣにおいて発現されない抗原である。いくつかの実施形態において、ＡＰＣ標的は、非ＡＰＣよりもＡＰＣにおいて優勢である抗原である。例示的なＡＰＣマーカーとしては、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ１６３、ＣＤ１６９（シアロアドヘシン）、ＤＥＣ２０５（ＣＤ２０５）、ＭＨＣクラスＩＩ、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＣＤ２１／ＣＤ３５およびＦｃγＲＩ、ＰＤ−Ｌ２が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＡＰＣマーカーは、ＤＣマーカーおよび／またはマクロファージマーカーのいずれかを含み、それらの例は、本明細書中に記載される。
ある特定の実施形態において、標的は、ＤＣマーカーである。いくつかの実施形態において、ＤＣ標的は、ＤＣにおいて発現されるが非ＤＣでは発現されない抗原である。いくつかの実施形態において、ＤＣ標的は、非ＤＣよりもＤＣにおいて優勢である抗原である。例示的なＤＣマーカーは、下記の「樹状細胞」と題される項において列挙され、そしてそれらとしては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
ある特定の実施形態において、標的は、Ｔ細胞マーカーである。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞標的は、Ｔ細胞において発現されるが非Ｔ細胞では発現されない抗原である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞標的は、非Ｔ細胞よりもＴ細胞において優勢である抗原である。例示的なＴ細胞マーカーは、下記の「Ｔ細胞標的化部分」と題される項において列挙され、そしてそれらとしては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態において、標的は、特定の細胞型において優先的に発現される。例えば、ＡＰＣ、ＤＣおよび／またはＴ細胞におけるＡＰＣ標的、ＤＣ標的および／またはＴ細胞標的の発現は、参照集団と比べてＡＰＣ、ＤＣおよび／またはＴ細胞において少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍または少なくとも１０００倍過剰発現される。いくつかの実施形態において、参照集団は、非ＡＰＣ、非ＦＤＣおよび／または非Ｔ細胞を含み得る。
いくつかの実施形態において、活性化されたＡＰＣ、ＤＣおよび／またはＴ細胞におけるＡＰＣ標的、ＤＣ標的および／またはＴ細胞標的の発現は、参照集団と比べて、活性化されたＡＰＣ、ＤＣおよび／またはＴ細胞において、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍または少なくとも１０００倍過剰発現される。いくつかの実施形態において、参照集団は、活性化されていないＡＰＣ、ＤＣおよび／またはＴ細胞を含み得る。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアなどの発明性のあるナノキャリアは、５０重量％未満、４０重量％未満、３０重量％未満、２０重量％未満、１５重量％未満、１０重量％未満、５重量％未満、１重量％または０．５重量％未満の標的化部分を含む。
いくつかの実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアと共有結合的に会合されている。いくつかの実施形態において、共有結合性の会合は、リンカーによって媒介される。いくつかの実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアと共有結合的に会合されていない。例えば、標的化部分は、発明性のある粒子のポリマーマトリックスの表面と会合され得、その中に被包され得、それによって取り囲まれ得、そして／またはそれ全体に分布され得る。例えば、いくつかの実施形態において、標的化部分は、ナノキャリアのリポソーム膜および／またはポリマーマトリックスの中に被包され得、それらによって取り囲まれ得、そして／またはそれら全体に分布され得る。あるいはまたはさらに、標的化部分は、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせによってナノキャリアと会合され得る。ワクチンナノキャリアと標的化部分との会合は、下記の「ワクチンナノキャリアの生成」と題される項においてさらに詳細に説明される。
樹状細胞
樹状細胞（ＤＣ）は、あるタイプの骨髄系白血球であり；Ｔリンパ球に対する最も強力な抗原提示細胞である。休止（Ｒｅｓｔｉｎｇ）ＤＣは、未成熟な免疫寛容誘発状態で、リンパ節をはじめとした多くの組織に存在する、すなわち、休止ＤＣは、わずかな共刺激分子を用いて、または共刺激分子無しで、かつ、Ｔ細胞がエフェクター細胞に分化するのに必要であるサイトカインを分泌することなく、中レベルから高レベルのペプチド−ＭＨＣ複合体を提示する。未成熟ＤＣによって特定の抗原を提示されるＴ細胞は、数日間増殖し始めるが、次いで、それらは、アポトーシスによって死滅するか、またはさらなる活性化に対して無応答性になる。その後の抗原特異的Ｔ細胞応答の枯渇は、この抗原に対して宿主を選択的に寛容にする。対照的に、成熟刺激に曝露されながらＤＣが抗原を獲得するとき、その細胞は、ＭＨＣおよび共刺激分子を迅速にアップレギュレートし、そしていくつかのサイトカインを分泌する。この時点での成熟ＤＣは、エフェクターＴ細胞および免疫記憶の強力なインデューサーである。ＤＣ成熟は、多くのシグナル（例えば、ある特定の炎症性サイトカイン、ＤＣによって発現されるＣＤ４０の連結、ＴＬＲに対するアゴニスト（例えば、細菌のエンドトキシン）、免疫複合体、活性化された補体、壊死細胞、アポトーシス細胞、遊離尿酸塩（ｆｒｅｅ ｕｒａｔｅ）、尿酸塩結晶および／またはＨＭＧＢ−１）によって誘導され得る。
ＤＥＣ−２０５（すなわち、ＣＤ２０５）は、リンパ組織におけるＤＣ上および胸腺上皮細胞上に選択的に発現される、表面に発現される多機能のレクチンである。皮下に注射されるキメラα−ＤＥＣ−２０５モノクローナル抗体を用いたインビボ実験から、ＤＥＣ−２０５へのリガンド結合が、マウスとヒトの両方において、効率的な内部移行、およびその後のＭＨＣ分子における提示のためのエンドサイトーシスされた物質のプロセシングを誘導することが示された（Ｈａｗｉｇｅｒら、２００１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９４：７６９；Ｂｏｎｉｆａｚら、２００２，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９６：１６２７；およびＢｏｚｚａｃｃｏら、２００７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１０４：１２８９；これらの各々が、本明細書中で参考として援用される）。そのキメラ抗体は、皮内注射または皮下注射されると、リンパ管を介して排出リンパ節に輸送され、それが、常在ＤＣと特異的に結合し、それにより、それらの成熟を引き起こすことなく、抗原を休止ＤＣに標的化する手段が提供される。次いで、標的化されたＤＣは、提示される抗原に対して、免疫ではなくＴ細胞寛容を誘導する。しかしながら、ＤＥＣ−２０５が、ＤＣ成熟を誘導する免疫刺激剤（例えば、α−ＣＤ４０またはＤＣによって発現されるＴＬＲに対する１つ以上のリガンド；下記の「免疫刺激剤」と題される項においてさらに詳細に論じられる）を用いて共に標的化されるとき、そのワクチンは、優先的に細胞傷害性応答およびＴｈ１型エフェクターＴ細胞応答を促進する強力な免疫賦活薬として作用する。
ＤＣ標的化は、ＤＣ−２０５、ＣＤ１１ｃ、クラスＩＩＭＨＣ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＣＤ１１ｂ、ＢＤＣＡ−１、ＢＤＣＡ−２、ＢＤＣＡ−４、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｈ、ＣＸ３ＣＲ１および／またはＬａｎｇｅｒｉｎに結合する部分によって達成され得る。
いくつかの実施形態において、ＤＣ標的化は、ＤＣ上に顕著に発現されるおよび／または存在する任意の実体（例えば、タンパク質、脂質、炭水化物、小分子など）（すなわち、ＤＣマーカー）に特異的に結合する任意の標的化部分によって達成され得る。例示的なＤＣマーカーとしては、ＣＤ１ａ（Ｒ４、Ｔ６、ＨＴＡ−１）；ＣＤ１ｂ（Ｒ１）；ＣＤ１ｃ（Ｍ２４１、Ｒ７）；ＣＤ１ｄ（Ｒ３）；ＣＤ１ｅ（Ｒ２）；ＣＤ１１ｂ（αＭインテグリン鎖、ＣＲ３、Ｍｏｌ、Ｃ３ｎｉＲ、Ｍａｃ−１）；ＣＤ１１ｃ（αＸインテグリン、ｐ１５０、９５、ＡＸｂ２）；ＣＤｗ１１７（ラクトシルセラミド、ＬａｃＣｅｒ）；ＣＤ１９（Ｂ４）；ＣＤ３３（ｇｐ６７）；ＣＤ３５（ＣＲ１、Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂレセプター）；ＣＤ３６（ＧｐＩＩＩｂ、ＧＰＩＶ、ＰＡＳＩＶ）；ＣＤ３９（ＡＴＰデヒドロゲナーゼ、ＮＴＰデヒドロゲナーゼ−１）；ＣＤ４０（Ｂｐ５０）；ＣＤ４５（ＬＣＡ、Ｔ２００、Ｂ２２０、Ｌｙ５）；ＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ４５ＲＣ；ＣＤ４５ＲＯ（ＵＣＨＬ−１）；ＣＤ４９ｄ（ＶＬＡ−４α、α４インテグリン）；ＣＤ４９ｅ（ＶＬＡ−５α、α５インテグリン）；ＣＤ５８（ＬＦＡ−３）；ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）；ＣＤ７２（Ｌｙ−１９．２、Ｌｙ−３２．２、Ｌｙｂ−２）；ＣＤ７３（Ｅｃｔｏ−５’ヌクレオチダーゼ（ｎｕｃｌｏｔｉｃｌａｓｅ））；ＣＤ７４（Ｉｉ、インバリアント鎖）；ＣＤ８０（Ｂ７、Ｂ７−１、ＢＢ１）；ＣＤ８１（ＴＡＰＡ−１）；ＣＤ８３（ＨＢ１５）；ＣＤ８５ａ（ＩＬＴ５、ＬＩＲ３、ＨＬ９）；ＣＤ８５ｄ（ＩＬＴ４、ＬＩＲ２、ＭＩＲ１０）；ＣＤ８５ｊ（ＩＬＴ２、ＬＩＲ１、ＭＩＲ７）；ＣＤ８５ｋ（ＩＬＴ３、ＬＩＲ５、ＨＭ１８）；ＣＤ８６（Ｂ７−２／Ｂ７０）；ＣＤ８８（Ｃ５ａＢ）；ＣＤ９７（ＢＬ−ＫＤＤ／Ｆ１２）；ＣＤ１０１（ＩＧＳＦ２、Ｐ１２６、Ｖ７）；ＣＤ１１６（ＧＭ−ＣＳＦＲα）；ＣＤ１２０ａ（ＴＭＦＲＩ、ｐ５５）；ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＩＩ、ｐ７５、ＴＮＦＲｐ８０）；ＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα）；ＣＤ１３９；ＣＤ１４８（ＨＰＴＰ−η、ｐ２６０、ＤＥＰ−１）；ＣＤ１５０（ＳＬＡＭ、ＩＰＯ−３）；ＣＤ１５６ｂ（ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭ１７、ｃＳＶＰ）；ＣＤ１５７（Ｍｏ５、ＢＳＴ−１）；ＣＤ１６７ａ（ＤＤＲ１、ｔｒｋＥ、ｃａｋ）；ＣＤ１６８（ＲＨＡＭＭ、ＩＨＡＢＰ、ＨＭＭＲ）；ＣＤ１６９（シアロアドヘシン、Ｓｉｇｌｅｃ−１）；ＣＤ１７０（Ｓｉｇｌｅｃ−５）；ＣＤ１７１（ＬｌＣＡＭ、ＮＩＬＥ）；ＣＤ１７２（ＳＩＲＰ−１α、ＭｙＤ−１）；ＣＤ１７２ｂ（ＳＩＲＰβ）；ＣＤ１８０（ＲＰ１０５、Ｂｇｐ９５、Ｌｙ６４）；ＣＤ１８４（ＣＸＣＲ４、ＮＰＹ３Ｒ）；ＣＤ１９３（ＣＣＲ３）；ＣＤ１９６（ＣＣＲ６）；ＣＤ１９７（ＣＣＲ７（ｗｓＣＤｗ１９７））；ＣＤｗ１９７（ＣＣＲ７、ＥＢＩ１、ＢＬＲ２）；ＣＤ２００（ＯＸ２）；ＣＤ２０５（ＤＥＣ−２０５）；ＣＤ２０６（ＭＭＲ）；ＣＤ２０７（ランゲリン（Ｌａｎｇｅｒｉｎ））；ＣＤ２０８（ＤＣ−ＬＡＭＰ）；ＣＤ２０９（ＤＣ−ＳＩＧＮ）；ＣＤｗ２１８ａ（ＩＬ１８Ｒα）；ＣＤｗ２１８ｂ（ＩＬ８Ｒβ）；ＣＤ２２７（ＭＵＣ１、ＰＵＭ、ＰＥＭ、ＥＭＡ）；ＣＤ２３０（プリオンタンパク質（ＰｒＰ））；ＣＤ２５２（ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー４）；ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１４）；ＣＤ２６５（ＴＲＡＮＣＥ−Ｒ、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１１ａ）；ＣＤ２７１（ＮＧＦＲ、ｐ７５、ＴＮＦＲスーパーファミリー、メンバー１６）；ＣＤ２７３（Ｂ７ＤＣ、ＰＤＬ２）；ＣＤ２７４（Ｂ７Ｈ１、ＰＤＬ１）；ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２、ＩＣＯＳＬ）；ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）；ＣＤ２７７（ＢＴ３．１、Ｂ７ファミリー：ブチロフィリン（Ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ）３）；ＣＤ２８３（ＴＬＲ３、トール様レセプター３）；ＣＤ２８９（ＴＬＲ９、ＴＯＬＬ様レセプター９）；ＣＤ２９５（ＬＥＰＲ）；ＣＤ２９８（ＡＴＰ１Ｂ３、Ｎａ Ｋ ＡＴＰアーゼβ３サブミット）；ＣＤ３００ａ（ＣＭＲＦ−３５Ｈ）；ＣＤ３００ｃ（ＣＭＲＦ−３５Ａ）；ＣＤ３０１（ＭＧＬ１、ＣＬＥＣＳＦ１４）；ＣＤ３０２（ＤＣＬ１）；ＣＤ３０３（ＢＤＣＡ２）；ＣＤ３０４（ＢＤＣＡ４）；ＣＤ３１２（ＥＭＲ２）；ＣＤ３１７（ＢＳＴ２）；ＣＤ３１９（ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７）；ＣＤ３２０（８Ｄ６）；およびＣＤ６８（ｇｐ１１０、マクロシアリン（Ｍａｃｒｏｓｉａｌｉｎ））；クラスＩＩＭＨＣ；ＢＤＣＡ−１；Ｓｉｇｌｅｃ−Ｈ；が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、括弧内に列挙される名称は、代替名を表している。
Ｔ細胞標的化部分
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞標的化は、Ｔ細胞上に顕著に発現されるおよび／または存在する任意の実体（例えば、タンパク質、脂質、炭水化物、小分子など）（すなわち、Ｔ細胞マーカー）に特異的に結合する任意の標的化部分によって達成され得る。例示的なＴ細胞マーカーとしては、ＣＤ２（Ｅ−ロゼットＲ、Ｔ１１、ＬＦＡ−２）；ＣＤ３（Ｔ３）；ＣＤ３α；ＣＤ３β；ＣＤ３ε；ＣＤ４（Ｌ３Ｔ４、Ｗ３／２５、Ｔ４）；ＣＤ５（Ｔ１、Ｔｐ６７、Ｌｅｕ−１、ＬＹ−１）；ＣＤ６（Ｔ１２）；ＣＤ７（ｇｐ４０、Ｌｅｕ９）；ＣＤ８ａ（Ｌｅｕ２、Ｔ８、Ｌｙｔ２，３）；ＣＤ８ｂ（ＣＤ８、Ｌｅｕ２、Ｌｙｔ３）；ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１α、αインテグリン鎖）；ＣＤ１１ｂ（αＭインテグリン鎖、ＣＲ３、Ｍｏｌ、Ｃ３ｎｉＲ、Ｍａｃ−１）；ＣＤ１１ｃ（αＸインテグリン、ｐ１５０、９５、ＡＸｂ２）；ＣＤ１５ｓ（シアリルＬｅｗｉｓＸ）；ＣＤ１５ｕ（３’スルホＬｅｗｉｓＸ）；ＣＤ１５ｓｕ（６スルホ−シアリルＬｅｗｉｓＸ）；ＣＤ１６ｂ（ＦｃｇＲＩＩＩｂ）；ＣＤｗ１７（ラクトシルセラミド、ＬａｃＣｅｒ）；ＣＤ１８（インテグリンβ２ＣＤ１１ａ、ｂ、ｃβ−サブユニット）；ＣＤ２６（ＤＰＰＩＶエクト酵素（ｅｃｔｏｅｎｅｙｍｅ）、ＡＤＡ結合タンパク質）；ＣＤ２７（Ｔ１４、Ｓ１５２）；ＣＤ２８（Ｔｐ４４、Ｔ４４）；ＣＤ２９（血小板ＧＰＩＩａ、β−１インテグリン、ＧＰ）；ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１、Ｅｎｄｏｃａｍ）；ＣＤ３５（ＣＲ１、Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂレセプター）；ＣＤ３７（ｇＰ５２−４０）；ＣＤ３８（ＡＤＰ−リボシル／シクラーゼ、Ｔ１０）；ＣＤ４３（シアロホリン（Ｓｉａｌｏｐｈｏｒｉｎ）、ロイコシアリン（Ｌｅｕｋｏｓｉａｌｉｎ））；ＣＤ４４（ＥＣＭＲＩＩ、Ｈ−ＣＡＭ、Ｐｇｐ−１）；ＣＤ４５（ＬＣＡ、Ｔ２００、Ｂ２２０、Ｌｙ５）；ＣＤ４５ＲＡ（ｐ５６１ｃｋ、ｐ５９ｆｙｎ、Ｓｒｃキナーゼ）；ＣＤ４５ＲＢ（ｐ５６ｌｃｋ、ｐ５９ｆｙｎ、Ｓｒｃキナーゼ）；ＣＤ４５ＲＣ（ｐ５６１ｃｋ、ｐ５９ｆｙｎ、Ｓｒｃキナーゼ）；ＣＤ４６（ＭＣＰ）；ＣＤ４７（ｇｐ４２、ＩＡＰ、ＯＡ３、ニューロフィリン（Ｎｅｕｒｏｐｈｉｌｌｉｎ））；ＣＤ４７Ｒ（ＭＥＭ−１３３）；ＣＤ４８（Ｂｌａｓｔ−１、Ｈｕｌｙｍ３、ＢＣＭ−１、ＯＸ−４５）；ＣＤ４９ｃ（ＶＬＡ−３α、α３インテグリン）；ＣＤ４９ｄ（ＶＬＡ−４α、α４インテグリン）；ＣＤ４９ｅ（ＶＬＡ−５α、α５インテグリン）；ＣＤ４９ｆ（ＶＬＡ−６α、α６インテグリンｇｐ１ｃ）；ＣＤ５０（ＩＣＡＭ−３）；ＣＤ５２（キャンパス（ＣＡＭＰＡＴＨ）−１、ＨＥＳ）；ＣＤ５３（ＯＸ−４４）；ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）；ＣＤ５５（ＤＡＦ）；ＣＤ５６（Ｌｅｕ−１９、ＮＫＨ−１、ＮＣＡＭ）；ＣＤ５７（ＨＮＫ１、Ｌｅｕ−７）；ＣＤ５８（ＬＦＡ−３）；ＣＤ５９（１Ｆ５Ａｇ、Ｈ１９、プロテクチン（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎ）、ＭＡＣＩＦ、ＭＩＲＬ、Ｐ−１８）；ＣＤ６０ａ（ＧＤ３）；ＣＤ６０ｂ（９−Ｏ−アセチルＧＤ３）；ＣＤ６０ｃ（７−ＯアセチルＧＤ３）；ＣＤ６２Ｌ（Ｌ−セレクチン、ＬＡＭ−１、ＬＥＣＡＭ−１、ＭＥＬ−１４、Ｌｅｕ８、ＴＱ１）；ＣＤ７３（Ｅｃｔｏ−５’−ヌクレオチダーゼ（ｎｕｃｌｏｔｉｄａｓｅ））；ＣＤ７５（シアロでマスクされたラクトサミン）；ＣＤ７５Ｓ（α２，６シアル化ラクトサミン）；ＣＤ８１（ＴＡＰＡ−１）；ＣＤ８２（４Ｆ９、Ｃ３３、ＩＡ−４、ＫＡＩ１、Ｒ２）；ＣＤ８４（Ｐ７５、ＧＲ６）；ＣＤ８５ａ（ＩＬＴ５、ＬＩＲ３、ＨＬ９）；ＣＤ８５ｊ（ＩＬＴ２、ＬＩＲ１、ＭＩＲ７）；ＣＤ８７（ｕＰＡＲ）；ＣＤｗ９２（ｐ７０）；ＣＤ９４（Ｋｐ４３）；ＣＤ９５（ＡＰＯ−１、ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）；ＣＤ９８（４Ｆ２、ＦＲＰ−１、ＲＬ−３８８）；ＣＤ９９（ＭＩＣ２、Ｅ２）；ＣＤ９９Ｒ（ＣＤ９９Ｍａｂ制限型（ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ））；ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）；ＣＤ１０２（ＩＣＡＭ−２）；ＣＤ１０８（ＳＥＭＡ７Ａ、ＪＭＨ血液型抗原）；ＣＤｗ１１９（ＩＦＮγＲ、ＩＦＮγＲａ）；ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＩ、ｐ５５）；ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＩＩ、ｐ７５、ＴＮＦＲｐ８０）；ＣＤ１２１ａ（１型ＩＬ−１Ｒ）；ＣＤ１２１ｂ（２型ＩＬ−１Ｒ）；ＣＤ１２２（ＩＬ２Ｒβ）；ＣＤ１２４（ＩＬ−４Ｒα）；ＣＤ１２６（ＩＬ−６Ｒα）；ＣＤ１２７（ｐ９０、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−７Ｒα）；ＣＤ１２８ａ（ＩＬ−８Ｒａ、ＣＸＣＲ１、（ＣＤ１８１と仮称されている））；ＣＤ１２８ｂ（ＩＬ−８Ｒｂ、ＣＸＣＲ２、（ＣＤ１８２と仮称されている））；ＣＤ１３０（ｇｐ１３０）；ＣＤ１３２（共通γ鎖、ＩＬ−２Ｒγ）；ＣＤ１４７（バシギン（Ｂａｓｉｇｉｎ）、ＥＭＭＰＲＩＮ、Ｍ６、ＯＸ４７）；ＣＤ１４８（ＨＰＴＰ−η、ｐ２６０、ＤＥＰ−１）；ＣＤ１５０（ＳＬＡＭ、ＩＰＯ−３）；ＣＤ１５３（ＣＤ３ＯＬ、ＴＮＳＦ８）；ＣＤ１５６ｂ（ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭ１７、ｃＳＶＰ）；ＣＤ１５８ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１、ｐ５８．１）；ＣＤ１５８ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２、ｐ５８．２）；ＣＤ１５８ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３、ｐ５８．３）；ＣＤ１５８ｃ（ＫＩＲ２ＤＳ６、ＫＩＲＸ）；ＣＤ１５８｜ｅ１／ｅ２（ＫＩＲ３ＤＬＩ／Ｓ１、ｐ７０）；ＣＤ１５９Ｆ（ＫＩＲ２ＤＬ５）；ＣＤ１５８ｇ（ＫＩＲ２ＤＳ５）；ＣＤ１５８ｈ（ＫＩＲ２ＤＳ１、ｐ５０．１）；ＣＤ１５８ｉ（ＫＩＲ２ＤＳ４、ｐ５０．３）；ＣＤ１５８ｊ（ＫＩＲ２ＤＳ２、ｐ５０．２）；ＣＣＤ１５８ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２、ｐ１４０）；ＣＤ１５９ａ（ＮＫＧ２Ａ）；ＣＤ１６０（ＢＹ５５、ＮＫ１、ＮＫ２８）；ＣＤ１６１（ＮＫＲ、ＮＫＲＰ１Ａ）；ＣＤ１６２（ＰＳＧＬ−１）；ＣＤ１６４（ＭＧＣ−２４、ＭＵＣ−２４）；ＣＤ１７１（Ｌ１ＣＡＭ、ＮＩＬＥ）；ＣＤ１７２ｇ（ＳＩＲＰｇ）；ＣＤ１８１（ＣＸＣＲ１、（以前はＣＤ１２８ａとして知られていた））；ＣＤ１８２（ＣＸＣＲ２、（以前はＣＤ１２８ｂとして知られていた））；ＣＤ１８３（ＣＸＣＲ３、ＧＰＲ９）；ＣＤ１８４（ＣＸＣＲ４、ＮＰＹ３Ｒ）；ＣＤ１８５（ＣＸＣＲ５）；ＣＤ１８６（ＣＸＣＲ６）；ＣＤ１９１（ＣＣＲ１）；ＣＤ１９２（ＣＣＲ２）；ＣＤ１９３（ＣＣＲ３）；ＣＤ１９５（ＣＣＲ５）；ＣＤ１９６（ＣＣＲ６）；ＣＤ１９７（ＣＣＲ７（かつてＣＤｗ１９７だった））；ＣＤｗ１９７（ＣＣＲ７、ＥＢＩ１、ＢＬＲ２）；ＣＤｗ１９８（ＣＣＲ８）；ＣＤｗ１９９（ＣＣＲ９）；ＣＤ２０５（ＤＥＣ−２０５）；ＣＤｗ２１０（ＣＫ）；ＣＤｗ２１７（ＣＫ）；ＣＤｗ２１８ａ（ＩＬ１８Ｒα）；ＣＤｗ２１８ｂ（ＩＬ１８Ｒβ）；ＣＤ２２０（インスリンＲ）；ＣＤ２２１（ＩＧＦ１Ｒ）；ＣＤ２２２（Ｍ６Ｐ−Ｒ、ＩＧＦＩＩ−Ｒ）；ＣＤ２２３（ＬＡＧ−３）；ＣＤ２２４（ＧＧＴ）；ＣＤ２２５（Ｌｅｕｌ３）；ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ−１、ＰＴＡ１）；ＣＤ２２９（Ｌｙ９）；ＣＤ２３０（プリオンタンパク質（ＰｒＰ））；ＣＤ２４４（２Ｂ４、Ｐ３８、ＮＡＩＬ）；ＣＤ２４５（ｐ２２０／２４０）；ＣＤ２４７（ＣＤ３ゼータ鎖）；ＣＤ２６１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ａ）；ＣＤ２６２（ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ｂ）；ＣＤ２６３（ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ｃ）；ＣＤ２６４（ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ｄ）；ＣＤ２６５（ＴＲＡＮＣＥ−Ｒ、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１１ａ）；ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１３Ｃ）；ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）；ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２、ＩＣＯＳＬ）；ＣＤ２７７（ＢＴ３．１、Ｂ７ファミリー：ブチロフィリン３）；ＣＤ２９４（ＣＲＴＨ２、ＰＧＲＤ２、Ｇタンパク質共役レセプター４４）；ＣＤ２９５（ＬＥＰＲ）；ＣＤ２９６（ＡＲＴ１、ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ１）；ＣＤ２９８（ＡＴＰ１Ｂ３、Ｎａ Ｋ ＡＴＰアーゼβ３サブユニット）；ＣＤ３００ａ（ＣＭＲＦ−３５Ｈ）；ＣＤ３００ｃ（ＣＭＲＦ−３５Ａ）；ＣＤ３０５（ＬＡＩＲ１）；ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）；ＣＤ３１６（ＥＷ１２）；ＣＤ３１７（ＢＳＴ２）；ＣＤ３１９（ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７）；ＣＤ３２１（ＪＡＭ１）；ＣＤ３２２（ＪＡＭ２）；ＣＤｗ３２８（Ｓｉｇｌｅｃ７）；およびＣＤ６８（ｇｐ１１０、マクロシアリン）；が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、括弧内に列挙された名称は、代替名を表している。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞標的化は、活性化されたときにＴ細胞上に顕著に発現されるおよび／または存在する任意の実体（例えば、タンパク質、脂質、炭水化物、小分子など）（すなわち、活性化Ｔ細胞標的）に結合する（例えば、特異的に結合する）任意の標的化部分によって達成され得る。例示的な活性化Ｔ細胞標的化部分としては、ＣＤ１ａ（ＲＡ、Ｔ６、ＨＴＡ−１）；ＣＤ１ｂ（Ｒ１）；Ｃｄ１ｃ（Ｍ２４１、Ｒ７）；ＣＤ１ｄ（Ｒ３）；ＣＤ９（ｐ２４、ＤＲＡＰ−１、ＭＲＰ−１）；ＣＤ２５（Ｔａｃ抗原、ＩＬ−２Ｒα、ｐ５５）；ＣＤ３０（Ｂｅｒ−Ｈ２、Ｋｉ−１）；ＣＤ３９（ＡＴＰデヒドロゲナーゼ、ＮＴＰデヒドロゲナーゼ−１）；ＣＤ４５ＲＯ（ＵＣＨＬ−１）；ＣＤ４９ａ（ＶＬＡ−１α、α１インテグリン）；ＣＤ４９ｂ（ＶＬＡ−２α、ｇｐｌａ、α２インテグリン）；ＣＤ６９（ＡＩＭ、ＥＡ１、ＭＬＲ３、ｇｐ３４／２８、ＶＥＡ）；ＣＤ７０（Ｋｉ−２４、ＣＤ２７リガンド）；ＣＤ７４（Ｉｉ、インバリアント鎖）；ＣＤ８０（Ｂ７、Ｂ７−１、ＢＢ１）；ＣＤ８６（Ｂ７−２／Ｂ７０）；ＣＤ９６（ＴＡＣＴＩＬＥ）；ＣＤ９７（ＢＬ−ＫＤＤ／Ｆ１２）；ＣＤ１０１（ＩＧＳＦ２、Ｐ１２６、Ｖ７）；ＣＤ１０３（ＨＭＬ−１、インテグリンαＥ、ＩＴＧＡＥ）；ＣＤ１０７ａ（ＬＡＭＰ−１）；ＣＤ１０７ｂ（ＬＡＭＰ−２）；ＣＤ１０９（８Ａ３、Ｅ１２３７Ｄ１）；ＣＤ１３４（ＯＸ４０、ＴＮＦＲＳＦ４）；ＣＤｗ１３７（４−１ＢＢ、ＩＬＡ）；ＣＤ１４６（Ｍｕｃ１８、Ｓ−エンド、ＭＣＡＭ、ＭｅＩ−ＣＡＭ）；ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）；ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ、ｇｐ３９、ＴＲＡＰ−１、Ｔ−ＢＡＭ）；ＣＤ１６６（ＡＬＣＡＭ、ＫＧ−ＣＡＭ、ＳＣ−１、ＢＥＮ、ＤＭ−ＧＲＡＳＰ）；ＣＤ１７８（Ｆａｓリガンド）；ＣＤ２２７（ＭＵＣ１、ＰＵＭ、ＰＥＭ、ＥＭＡ）；ＣＤ２５３（ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１０）；ＣＤ２５４（ＴＲＡＮＣＥ、ＲＡＮＫＬ、ＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１１）；ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ、ＴＭＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１４）；ＣＤ２６７（ＴＡＣＩ、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１３Ｂ）；ＣＤ２７３（Ｂ７ＤＣ、ＰＤＬ２）；ＣＤ２７４（Ｂ７Ｈ１、ＰＤＬ１）；ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）；ＣＤ２７９（ＰＤ１）；およびＣＤ３１２（ＥＭＲ２）；が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、括弧内に列挙された名称は、代替名を表している。
標的化部分の分子の特徴
核酸標的化部分。本明細書中で使用されるとき、「核酸標的化部分」は、標的と選択的に結合する核酸である。いくつかの実施形態において、核酸標的化部分は、核酸アプタマーである。アプタマーは、代表的には、特定の器官、組織、細胞、細胞外マトリックス成分および／または細胞下の場所と会合されている特定の標的構造に結合するポリヌクレオチドである。通常、アプタマーの標的化の機能は、アプタマーの３次元構造に基づく。いくつかの実施形態において、標的へのアプタマーの結合は、代表的には、アプタマーと標的の両方の２次元構造および／または３次元構造の相互作用によって媒介される。いくつかの実施形態において、標的へのアプタマーの結合は、もっぱらアプタマーの一次配列に基づくのではなく、アプタマーおよび／または標的の３次元構造に依存する。いくつかの実施形態において、アプタマーは、塩基対合を途絶する構造（例えば、ヘアピンループ）によって中断される相補的なワトソン−クリック塩基対合を介してそれらの標的に結合する。
いくつかの実施形態において、核酸標的化部分は、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ（登録商標）である。一般に、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓ（登録商標）は、Ｄ−オリゴヌクレオチドと比べて酵素分解に対して高い抵抗性を示す高親和性のＬ−鏡像異性オリゴヌクレオチドリガンドである。いくつかの実施形態において、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ（登録商標）は、アプタマーが設計され、利用されるであろうとおり、設計され得、利用され得る。
当業者は、標的に特異的に結合することができる任意の核酸が、本明細書中に記載されるように本発明に従って使用され得ることを認識するだろう。
本発明の核酸（核酸標的化部分および／または送達される機能的ＲＮＡ、例えば、下記でさらに詳細に説明されるＲＮＡｉ剤、リボザイム、ｔＲＮＡなどを含む）は、任意の利用可能な手法に従って調製され得、それらとしては、化学合成、酵素的合成、より長い前駆体の酵素的または化学的な切断などが挙げられるが、これらに限定されない。ＲＮＡを合成する方法は、当該分野で公知である（例えば、Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．（ｅｄ．）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ［Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ］，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８４；およびＨｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．（ｅｄ．）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖ．２８８（Ｃｌｉｆｔｏｎ，ＮＪ．）Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，２００５を参照のこと；この両方が本明細書中で参考として援用される）。
核酸標的化部分を形成する核酸は、天然に存在するヌクレオシド、改変ヌクレオシド、１つ以上のヌクレオシド間に挿入された炭化水素リンカー（例えば、アルキレン）もしくはポリエーテルリンカー（例えば、ＰＥＧリンカー）を有する天然に存在するヌクレオシド、１つ以上のヌクレオシド間に挿入された炭化水素リンカーもしくはＰＥＧリンカーを有する改変ヌクレオシドまたはその組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態において、核酸標的化部分の結合親和性および結合選択性が、置換によって実質的に低下しない（例えば、標的に対する核酸標的化部分の解離定数は、約１×１０−３Ｍより大きくなるべきでない）という条件で、核酸標的化部分のヌクレオチドまたは改変ヌクレオチドは、炭化水素リンカーまたはポリエーテルリンカーと置換され得る。
本発明に従う核酸が、天然に存在する核酸に見られるタイプのヌクレオチドをひたすら含み得るか、またはその代わりに１つ以上のヌクレオチドアナログを含み得るか、もしくは天然に存在する核酸の構造と別途異なる構造を有することが、当業者によって認識されるだろう。米国特許第６，４０３，７７９号；同第６，３９９，７５４号；同第６，２２５，４６０号；同第６，１２７，５３３号；同第６，０３１，０８６号；同第６，００５，０８７号；同第５，９７７，０８９号；およびこれらにおける参考文献は、使用され得る多岐にわたる特異的なヌクレオチドアナログおよび改変を開示している。Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．（ｅｄ．）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（１ｓｔ ｅｄ），Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；ＩＳＢＮ：０８２４７０５６６１，１ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）；本明細書中で参考として援用される；およびこの中の参考文献を参照のこと。例えば、２’−改変は、ハロ基、アルコキシ基およびアリルオキシ基を含む。いくつかの実施形態において、２’−ＯＨ基は、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ１、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２またはＣＮ（ここで、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである）から選択される基によって置換される。改変された結合の例としては、ホスホロチオエート結合および５’−Ｎ−ホスホルアミダイト結合が挙げられる。
種々の異なるヌクレオチドアナログ、改変された骨格または天然に存在しないヌクレオシド間結合を含む核酸が、本発明に従って利用され得る。本発明の核酸は、天然のヌクレオシド（すなわち、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジン）または改変ヌクレオシドを含み得る。改変ヌクレオチドの例としては、塩基改変ヌクレオシド（例えば、アラシチジン、イノシン、イソグアノシン、ネブラリン、プソイドウリジン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、２−チオチミジン、３−デアザ−５−アザシチジン、２’−デオキシウリジン、３−ニトロピロール（３−ｎｉｔｏｒｐｙｒｒｏｌｅ）、４−メチルインドール、４−チオウリジン、４−チオチミジン、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、２−チオウリジン、５−ブロモシチジン、５−ヨードウリジン、イノシン、６−アザウリジン、６−クロロプリン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−アザアデノシン、８−アジドアデノシン、ベンズイミダゾール、Ｍ１−メチルアデノシン、ピロロ−ピリミジン、２−アミノ−６−クロロプリン、３−メチルアデノシン、５−プロピニルシチジン、５−プロピニルウリジン、５−ブロモウリジン、５−フルオロウリジン、５−メチルシチジン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニンおよび２−チオシチジン）、化学的または生物学的に改変された塩基（例えば、メチル化塩基）、改変された糖（例えば、２’−フルオロリボース、２’−アミノリボース、２’−アジドリボース、２’−Ｏ−メチルリボース、Ｌ−鏡像異性ヌクレオシドのアラビノースおよびヘキソース）、改変されたリン酸基（例えば、ホスホロチオエート結合および５’−Ｎ−ホスホルアミダイト結合）およびそれらの組み合わせが挙げられる。核酸の化学合成用の天然ヌクレオチドモノマーおよび改変ヌクレオチドモノマーは、容易に入手可能である。いくつかの場合において、そのような改変を含む核酸は、天然に存在するヌクレオチドだけからなる核酸と比べて、改善された特性を示す。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される核酸の改変は、ヌクレアーゼ（例えば、エキソヌクレアーゼ、エンドヌクレアーゼなど）による消化を減少させるためおよび／または防ぐために利用される。例えば、核酸の構造は、消化を減少させるために一方または両方の鎖の３’末端にヌクレオチドアナログを含めることによって安定化され得る。
改変される核酸は、分子の長さ全体にわたって均一に改変される必要はない。様々なヌクレオチドの改変および／または骨格構造が、その核酸中の様々な位置に存在し得る。当業者は、核酸の機能が実質的に影響されないように、ヌクレオチドアナログまたは他の改変が、核酸の任意の位置に配置され得ることを認識するだろう。単なる１つの例を挙げると、改変は、アプタマーがそのアプタマーの標的に特異的に結合する能力が実質的に影響されないように、そのアプタマーの任意の位置に配置され得る。改変される領域は、一方または両方の鎖の５’末端および／または３’末端であり得る。例えば、両方の鎖のいずれかの５’末端および／または３’末端のおよそ１残基〜およそ５残基が、ヌクレオチドアナログであり、そして／または骨格改変を有する改変されたアプタマーが、使用され得る。その改変は、５’または３’末端の改変であり得る。核酸鎖は、少なくとも５０％の未改変ヌクレオチド、少なくとも８０％の未改変ヌクレオチド、少なくとも９０％の未改変ヌクレオチドまたは１００％の未改変ヌクレオチドを含み得る。
本発明に従う核酸は、例えば、糖、ヌクレオシドまたはヌクレオシド間結合に対する改変（例えば、米国特許公報２００３／０１７５９５０、２００４／０１９２６２６、２００４／００９２４７０、２００５／００２０５２５および２００５／００３２７３３に記載されているもの）を含み得る。本発明は、本明細書中に記載される改変のうちの任意の１つ以上を有する任意の核酸の使用を包含する。例えば、いくつかの末端の結合体、例えば、コレステロールなどの脂質、リトコール酸、ラウリン酸（ａｌｕｒｉｃ ａｃｉｄ）または長鎖アルキル分枝鎖は、細胞の取り込みを改善すると報告されている。アナログおよび改変は、例えば、治療薬の改善された送達、アプタマー標的に対するアプタマーの改善された特異的結合などをもたらすものを選択するために、例えば、当該分野で公知の任意の適切なアッセイを用いて、試験され得る。いくつかの実施形態において、本発明に従う核酸は、１つ以上の非天然ヌクレオシド結合を含み得る。いくつかの実施形態において、アプタマーの３’末端、５’末端または３’末端と５’末端の両方における１つ以上の内部ヌクレオチドが反転されることにより、３’−３’結合または５’−５’結合などの結合がもたらされる。
いくつかの実施形態において、本発明に従う核酸は、合成ではなく、その天然の環境から単離された天然に存在する実体である。
小分子標的化部分。いくつかの実施形態において、本発明に従う標的化部分は、小分子であり得る。ある特定の実施形態において、小分子は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満のサイズである。いくつかの実施形態において、小分子は、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満または約１０００ｇ／ｍｏｌ未満である。いくつかの実施形態において、小分子は、約８００ｇ／ｍｏｌ未満または約５００ｇ／ｍｏｌ未満である。
ある特定の実施形態において、小分子は、オリゴマーである。ある特定の実施形態において、小分子は、非オリゴマーである。ある特定の実施形態において、小分子は、天然物であるか、または天然物の完全な構造に基づく部分的構造（例えば、下部構造）を有する天然物様の化合物である。ある特定の実施形態において、小分子は、合成物である。いくつかの実施形態において、小分子は、化学ライブラリー由来であり得る。いくつかの実施形態において、小分子は、製薬会社の歴史的なライブラリー由来であり得る。ある特定の実施形態において、小分子は、米国連邦規則集（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｄｅ ｏｆ Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）（Ｃ．Ｆ．Ｒ．）に提供されているような、米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認された薬物である。
当業者は、本明細書中に記載されるような、所望の標的に特異的に結合する任意の小分子が、本発明に従って使用され得ることを認識するだろう。
タンパク質標的化部分。いくつかの実施形態において、本発明に従う標的化部分は、タンパク質またはペプチドであり得る。ある特定の実施形態において、ペプチドは、約５〜約１００、約５〜約５０、約１０〜約７５、約１５〜約５０または約２０〜約２５アミノ酸のサイズの範囲である。いくつかの実施形態において、ペプチド配列は、タンパク質の配列に基づき得る。いくつかの実施形態において、ペプチド配列は、アミノ酸のランダムな配置であり得る。
用語「ポリペプチド」および「ペプチド」は、本明細書中で交換可能に使用され、「ペプチド」とは、代表的には、約１００アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドのことを指す。ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸またはその両方を含み得、そして当該分野で公知の任意の種々のアミノ酸の改変またはアナログを含み得る。有用な改変としては、例えば、末端のアセチル化、アミド化、脂質化、リン酸化、グリコシル化、アシル化、ファルネシル化、硫酸化などが挙げられる。
本発明に従って標的化部分として使用され得る例示的なタンパク質としては、抗体、レセプター、サイトカイン、ペプチドホルモン、糖タンパク質、糖ペプチド、プロテオグリカン、コンビナトリアルライブラリー由来のタンパク質（例えば、Ａｖｉｍｅｒｓ（商標）、Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など）およびそれらの特徴的な一部が挙げられるが、これらに限定されない。Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（商標）、ＡｄＮｅｃｔｉｎｓ（商標）などの合成結合タンパク質が使用され得る。いくつかの実施形態において、タンパク質標的化部分は、ペプチドであり得る。
当業者は、本明細書中に記載されるような、所望の標的に特異的に結合する任意のタンパク質および／またはペプチドが、本発明に従って使用され得ることを認識するだろう。
いくつかの実施形態において、標的化部分は、抗体および／またはその特徴的な一部であり得る。用語「抗体」とは、天然であるか、または全体的もしくは部分的に合成的に作製されたか、に関係なく、任意の免疫グロブリンのこと、ならびにそれらの誘導体およびそれらの特徴的な一部のことを指す。抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体は、任意のヒトクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む任意の免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。
本明細書中で使用されるとき、抗体フラグメント（すなわち、抗体の特徴的な一部）とは、完全長より短い抗体の任意の誘導体のことを指す。いくつかの実施形態において、抗体フラグメントは、完全長抗体の特異的結合能の少なくとも重要な一部を保持する。そのような抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖダイアボディおよびＦｄフラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。抗体フラグメントとしてはまた、Ｆｃフラグメントも挙げられるが、これに限定されない。
抗体フラグメントは、任意の手段によって作製され得る。例えば、抗体フラグメントは、インタクトな抗体の断片化によって酵素的もしくは化学的に作製され得、そして／または抗体フラグメントは、部分的な抗体配列をコードする遺伝子から組換え的に作製され得る。あるいはまたはさらに、抗体フラグメントは、全体的または部分的に合成的に作製され得る。抗体フラグメントは、必要に応じて一本鎖抗体フラグメントを含み得る。あるいはまたはさらに、抗体フラグメントは、例えば、ジスルフィド結合によって、共に連結された複数の鎖を含み得る。抗体フラグメントは、必要に応じて多分子錯体を含み得る。機能的な抗体フラグメントは、代表的には、少なくとも約５０アミノ酸を含み、より代表的には、少なくとも約２００アミノ酸を含む。
いくつかの実施形態において、抗体は、キメラ（例えば、「ヒト化」）抗体および一本鎖（組換え）抗体を包含し得る。いくつかの実施形態において、抗体は、低いエフェクター機能および／または二重特異性分子を有し得る。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｆａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメントを包含し得る。
一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、ポリペプチドリンカーによって互いに共有結合的に接続された可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）のみからなる組換え抗体フラグメントである。ＶＬまたはＶＨのいずれかが、ＮＨ２末端ドメインを含み得る。その２つの可変ドメインが、著しく立体的に干渉されずに架橋される限り、そのポリペプチドリンカーは、様々な長さおよび組成であり得る。代表的には、リンカーは、主に、溶解性のためにいくつかのグルタミン酸残基またはリジン残基が散在しつつ、長く伸びたグリシン残基およびセリン残基を含む。
ダイアボディは、二量体のｓｃＦｖである。ダイアボディは、代表的には、ほとんどのｓｃＦｖよりも短いペプチドリンカーを有し、そしてしばしば、二量体として会合することに対して優先傾向を示す。
Ｆｖフラグメントは、非共有結合性の相互作用によって共に保持される１つのＶＨドメインおよび１つのＶＬドメインからなる抗体フラグメントである。用語「ｄｓＦｖ」とは、本明細書中で使用されるとき、ＶＨ−ＶＬ対を安定化する操作された分子間ジスルフィド結合を有するＦｖのことを指す。
Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ｐＨ４．０〜４．５において酵素ペプシンを用いる消化によって免疫グロブリンから得られるものと本質的に等価な抗体フラグメントである。そのフラグメントは、組換え的に作製され得る。
Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントにおいて２つの重鎖片をつないでいるジスルフィド架橋の還元によって得られるものと本質的に等価な抗体フラグメントである。Ｆａｂ’フラグメントは、組換え的に作製され得る。
Ｆａｂフラグメントは、酵素（例えば、パパイン）を用いる免疫グロブリンの消化によって得られるものと本質的に等価な抗体フラグメントである。Ｆａｂフラグメントは、組換え的に作製され得る。Ｆａｂフラグメントの重鎖セグメントは、Ｆｄ片である。
炭水化物標的化部分。いくつかの実施形態において、本発明に従う標的化部分は、炭水化物を含み得る。いくつかの実施形態において、炭水化物は、当該分野で公知のようなグリコシド結合によって接続された単糖（またはそれらの誘導体）を含む多糖であり得る。そのような糖としては、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、セロビオース（ｃｅｌｌｂｉｏｓｅ）、マンノース、キシロース、アラビノース、グルクロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ガラクツロン酸（ｇａｌａｃｔｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラクトサミン（ｇａｌａｔｏｓａｍｉｎｅ）およびノイラミン酸（ｎｅｕｒａｍｉｃ ａｃｉｄ）が挙げられ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、炭水化物は、プルラン、セルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシセルロース、メチルセルロース、デキストラン、シクロデキストラン、グリコーゲン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、カラギナン（ｃａｒａｇｅｅｎａｎ）、グリコン、アミロース、キトサン、Ｎ，Ｏ−カルボキシルメチルキトサン、アルギンおよびアルギン酸、デンプン、キチン、ヘパリン、コンニャク（ｋｏｎｊａｃ）、グルコマンナン（ｇｌｕｃｏｍｍａｎｎａｎ）、プスツラン、ヘパリン、ヒアルロン酸、カードランおよびキサンタンのうちの１つ以上であり得る。
いくつかの実施形態において、炭水化物は、アミノ化され得、カルボキシル化され得、そして／または硫酸化され得る。いくつかの実施形態において、親水性多糖は、多数の側鎖疎水性基を導入することによって疎水性になるように改変され得る。いくつかの実施形態において、疎水性炭水化物としては、酢酸セルロース、プルランアセテート、コンニャクアセテート（ｋｏｎｊａｃ ａｃｅｔａｔｅ）、アミロースアセテートおよびデキストランアセテートが挙げられ得る。
当業者は、本明細書中に記載されるような、所望の標的に特異的に結合する任意の炭水化物が、本発明に従って使用され得ることを認識するだろう。
脂質標的化部分。いくつかの実施形態において、本発明に従う標的化部分は、１つ以上の脂肪酸基またはその塩を含み得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、消化可能な長鎖（例えば、Ｃ８−Ｃ５０）の置換または非置換炭化水素を含み得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ１０−Ｃ２０脂肪酸またはその塩であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ１５−Ｃ２０脂肪酸またはその塩であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ１５−Ｃ２５脂肪酸またはその塩であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、非置換であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、一価不飽和であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、多価不飽和であり得る。いくつかの実施形態において、不飽和脂肪酸基の二重結合は、ｃｉｓ立体配座であり得る。いくつかの実施形態において、不飽和脂肪酸の二重結合は、ｔｒａｎｓ立体配座であり得る。
いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸またはリグノセリン酸のうちの１つ以上であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、アルファ−リノール酸、ガンマ−リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはエルカ酸のうちの１つ以上であり得る。
当業者は、本明細書中に記載されるような、所望の標的に特異的に結合する任意の脂肪酸基が、本発明に従って使用され得ることを認識するだろう。
新規標的化部分
任意の新規標的化部分が、本発明に従って、ナノキャリアにおいて利用され得る。当該分野で公知の任意の方法を用いることにより、新規標的化部分が設計され得、同定され得、そして／または単離され得る。例えば、分子のライブラリーを利用する標準的な手法およびインビトロ結合アッセイを利用することにより、新規標的化部分が同定され得る。
核酸標的化部分（例えば、アプタマー、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ（登録商標））は、任意の利用可能な方法を用いて設計され得、そして／または同定され得る。いくつかの実施形態において、核酸標的化部分は、設計され、そして／または核酸の候補混合物から核酸標的化部分を同定することによって同定される。試験管内人工進化法（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ Ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）（ＳＥＬＥＸ）またはその変法は、核酸の候補混合物から標的に結合する核酸標的化部分を同定する通常用いられる方法である（例えば、米国特許第６，４８２，５９４号；同第６，４５８，５４３号；同第６，４５８，５３９号；同第６，３７６、１９０号；同第６，３４４，３１８号；同第６，２４２，２４６号；同第６，１８４，３６４号；同第６，００１，５７７号；同第５，９５８，６９１号；同第５，８７４，２１８号；同第５，８５３，９８４号；同第５，８４３，７３２号；同第５，８４３，６５３号；同第５，８１７，７８５号；同第５，７８９，１６３号；同第５，７６３，１７７号；同第５，６９６，２４９号；同第５，６６０，９８５号；同第５，５９５，８７７号；同第５，５６７，５８８号；および同第５，２７０，１６３号を参照のこと；これらの各々は、本明細書中で参考として援用される）。あるいはまたはさらに、ポリプレックスインビボコンビナトリアル最適化（Ｐｏｌｙｐｌｅｘ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ）（ＰＩＣＯ）は、インビボおよび／またはインビトロにおいて核酸の候補混合物から標的に結合する核酸標的化部分（例えば、アプタマー）を同定するために使用され得る方法であり、２００６年１２月１５日出願の“Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ”という表題の同時係属中のＰＣＴ出願ＵＳ０６／４７９７５（本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
免疫刺激剤
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、免疫応答を刺激するのを助け得る１つ以上の免疫刺激剤を輸送し得る。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、ＡＰＣを活性化することによって免疫応答を押し上げることにより、ＡＰＣの免疫刺激の能力を増強する。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、特定の抗原に対するリンパ球応答を増幅することによって免疫応答を押し上げる。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、種々の細胞型からのサイトカインなどのメディエーターの局所的な放出を誘導することによって、免疫応答を押し上げる。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、免疫応答を抑制するか、または再指示する。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、制御性Ｔ細胞を誘導する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの免疫刺激剤のすべてが、互いに同一である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、いくつかの異なるタイプの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、複数の個別の免疫刺激剤を含み、それらのすべてが、互いに同一である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、厳密に１つのタイプの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、厳密に２つの異なるタイプの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多い異なるタイプの免疫刺激剤を含む。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｂ細胞とＴ細胞の両方を刺激する単一タイプの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの免疫刺激剤を含み、ここで、第１タイプの免疫刺激剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして第２タイプの免疫刺激剤が、Ｔ細胞を刺激する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫刺激剤を含み、ここで、１つ以上のタイプの免疫刺激剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして１つ以上のタイプの免疫刺激剤が、Ｔ細胞を刺激する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、そのワクチンナノキャリアの外面に会合されている少なくとも１つのタイプの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、会合は、共有結合性である。いくつかの実施形態において、共有結合性の会合は、１つ以上のリンカーによって媒介される。いくつかの実施形態において、会合は、非共有結合性である。いくつかの実施形態において、非共有結合性会合は、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせによって媒介される。ワクチンナノキャリアと免疫刺激剤の会合は、下記の「ワクチンナノキャリアの生成」と題される項でさらに詳細に説明される。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、脂質膜（例えば、脂質二重層、脂質単層など）を含み、ここで、少なくとも１つのタイプの免疫刺激剤が、脂質膜と会合される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫刺激剤は、脂質膜の中に包埋される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫刺激剤は、脂質二重層の内腔の中に包埋される。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、脂質膜の内面と会合されている少なくとも１つのタイプの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫刺激剤は、ワクチンナノキャリアの脂質膜で被包される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのタイプの免疫刺激剤は、ワクチンナノキャリアの複数の位置に配置され得る。例えば、第１タイプの免疫刺激剤は、脂質膜の中に包埋され得、そして第２タイプの免疫刺激剤は、ワクチンナノキャリアの脂質膜の中に被包され得る。別の例を挙げると、第１タイプの免疫刺激剤は、脂質膜の外面と会合され得、そして第２タイプの免疫刺激剤は、ワクチンナノキャリアの脂質膜の内面と会合され得る。いくつかの実施形態において、第１タイプの免疫刺激剤は、ワクチンナノキャリアの脂質二重層の内腔の中に包埋され得、そして脂質二重層は、第２タイプの免疫刺激剤が分布されるポリマーマトリックスを被包し得る。いくつかの実施形態において、第１タイプの免疫刺激剤および第２タイプの免疫刺激剤は、ワクチンナノキャリアの同じ場所に存在し得る（例えば、それらの両方ともが、ワクチンナノキャリアの外面と会合され得る；それらの両方ともが、ワクチンナノキャリアの中に被包され得る；など）。当業者は、前述の例が、複数の免疫刺激剤がワクチンナノキャリアの異なる場所と会合され得る多くの様々な方法の単なる代表であることを認識するだろう。複数の免疫刺激剤が、ワクチンナノキャリアの任意の組み合わせの場所に配置され得る。
ある特定の実施形態において、免疫刺激剤は、インターロイキン、インターフェロン、サイトカインなどであり得る。特定の実施形態において、免疫刺激剤は、トール様レセプター（ＴＬＲ）に対する天然または合成のアゴニストであり得る。特定の実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｉ型インターフェロン産生を誘導する、トール様レセプター（ＴＬＲ）−７に対するリガンド（例えば、ＣｐＧ）を組み込んでいる。特定の実施形態において、免疫刺激剤は、ＤＣ表面分子のＣＤ４０に対するアゴニストであり得る。ある特定の実施形態において、寛容ではなく免疫を刺激するために、ナノキャリアは、ＤＣ成熟（ナイーブＴ細胞のプライミングに必要）ならびに抗体応答および抗ウイルス免疫を促進するサイトカイン（例えば、Ｉ型インターフェロン）の産生を促進する免疫刺激剤を組み込んでいる。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、ＴＬＲ−４アゴニスト（例えば、細菌のリポ多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｈａｒｉｄｅ）（ＬＰＳ）、ＶＳＶ−Ｇおよび／またはＨＭＧＢ−１）であり得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、細胞によって放出される低分子のタンパク質または生物学的因子（５ｋＤ〜２０ｋＤの範囲内）であるサイトカインであり、そして細胞−細胞相互作用、コミュニケーションおよび他の細胞の挙動に対して特定の作用を有する。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、壊死細胞から放出される炎症促進性の刺激（例えば、尿酸塩結晶）であり得る。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、補体カスケードの活性化された成分（例えば、ＣＤ２１、ＣＤ３５など）であり得る。いくつかの実施形態において、免疫刺激剤は、免疫複合体の活性化された成分であり得る。免疫刺激剤は、ＴＬＲ−１、ＴＬＲ−２、ＴＬＲ−３、ＴＬＲ−４、ＴＬＲ−５、ＴＬＲ−６、ＴＬＲ−７、ＴＬＲ−８、ＴＬＲ−９およびＴＬＲ−１０のアゴニストを包含する。また、免疫刺激剤は、ＣＤ２１またはＣＤ３５に結合する分子などの補体レセプターアゴニストも包含する。いくつかの実施形態において、補体レセプターアゴニストは、ナノキャリアの内因性の補体オプソニン化を誘導する。免疫刺激剤は、サイトカインなどのサイトカインレセプターアゴニストも包含する。いくつかの実施形態において、サイトカインレセプターアゴニストは、小分子、抗体、融合タンパク質またはアプタマーである。
いくつかの実施形態において、１つより多いタイプの免疫刺激剤が存在する。いくつかの実施形態において、様々な免疫刺激剤の各々が、異なる経路に対して作用する。ゆえに、それらの免疫刺激剤は、様々なトール様レセプター、トール様レセプターおよびＣＤ４０、トール様レセプターおよびインフラマソーム（ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ）の成分などであり得る。
いくつかの実施形態において、本発明は、１つ以上のアジュバントとともに製剤化されたワクチンナノキャリアを含む薬学的組成物を提供する。用語「アジュバント」とは、本明細書中で使用されるとき、特定の抗原を構成するのではなく、投与される抗原に対する免疫応答を押し上げる、薬剤のことを指す。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、１つ以上のアジュバント（例えば、ゲルタイプのアジュバント（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、リン酸カルシウムなど）、微生物アジュバント（例えば、ＣｐＧモチーフを含む免疫調節性ＤＮＡ配列；モノホスホリル脂質Ａなどの内毒素；外毒素（例えば、コレラ毒素、Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性トキシンおよび百日咳毒素）；ムラミルジペプチドなど）；油−エマルジョンおよび乳化剤ベースのアジュバント（例えば、フロイントアジュバント、ＭＦ５９［Ｎｏｖａｒｔｉｓ］、ＳＡＦなど）；粒状アジュバント（例えば、リポソーム、生分解性ミクロスフェア、サポニンなど）；合成アジュバント（例えば、非イオン性ブロックコポリマー、ムラミルペプチドアナログ、ポリホスファゼン、合成ポリヌクレオチドなど）および／またはそれらの組み合わせ）とともに製剤化される。他の例示的なアジュバントとしては、いくつかのポリマー（例えば、米国特許第５，５００，１６１号（本明細書中で参考として援用される）に記載されているポリホスファゼン）、ＱＳ２１、スクアレン、テトラクロロデカオキシドなどが挙げられる。
Ｔ細胞活性化に対するアッセイ
いくつかの実施形態において、様々なアッセイが、免疫応答がＴ細胞またはＴ細胞の群において刺激されているか否か（すなわち、Ｔ細胞またはＴ細胞の群が「活性化されて」いるか否か）を判定するために利用され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答の刺激は、Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生を測定することによって判定され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答の刺激は、Ｔ細胞によるＩＦＮγ、ＩＬ−４、ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７および／またはＴＮＦαの抗原誘導性産生を測定することによって判定され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞によるサイトカインの抗原生成性産生は、細胞内のサイトカイン染色の後のフローサイトメトリーによって測定され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生は、表面捕捉染色の後のフローサイトメトリーによって測定され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞によるサイトカインの抗原誘導性産生は、活性化されたＴ細胞培養物の上清中のサイトカイン濃度を測定することによって判断され得る。いくつかの実施形態において、これは、ＥＬＩＳＡによって測定され得る。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞によるサイトカインの抗原生成性産生は、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定され得る。一般に、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）という手法に非常に類似の手法を使用する。抗体（例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体など）を、ＰＶＤＦ（フッ化ポリビニリデン）が裏打ちされた（ｂａｃｋｅｄ）マイクロプレート上に無菌的にコーティングする。抗体を、対象のサイトカインに対する特異性について選択する。そのプレートをブロッキングする（例えば、そのアッセイにおけるいずれの抗体とも反応性でない血清タンパク質を用いて）。目的の細胞を、抗原またはマイトジェンとともに様々な密度でプレーティングし、次いで、加湿された３７℃のＣＯ２恒温器内に指定の時間にわたって置く。活性化された細胞によって分泌されたサイトカインは、広い表面積のＰＶＤＦ膜上のコーティングされた抗体によって局所的に捕捉される。ウェルを洗浄することにより、細胞、残骸および培地成分を除去した後、そのサイトカインに特異的な２次抗体（例えば、ビオチン化ポリクローナル抗体）をそのウェルに加える。この抗体は、標的サイトカインの異なるエピトープと反応性であり、ゆえに、これを用いることにより、捕捉されたサイトカインが検出される。洗浄することにより、任意の未結合のビオチン化抗体を除去した後、検出されたサイトカインを、アビジン−ＨＲＰおよび促進基質（例えば、ＡＥＣ、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ）を用いて可視化する。着色した最終産物（スポット、通常、黒っぽい青色）は、代表的には、個別のサイトカイン産生細胞を表す。スポットは、手動で（例えば、解剖顕微鏡を用いて）、またはマイクロウェルの像を捕捉し、そしてスポットの数および大きさを解析する自動リーダーを用いて、計数され得る。いくつかの実施形態において、各スポットは、単一のサイトカイン産生細胞に対応する。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答は、約１％〜約１００％の抗原特異的Ｔ細胞が、サイトカインを産生している場合に、刺激されていると言われる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答は、少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％または約１００％の抗原特異的Ｔ細胞が、サイトカインを産生している場合に、刺激されていると言われる。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答は、免疫された被験体が、無処置コントロールよりも少なくとも約１０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約１０００倍、少なくとも約５０００倍、少なくとも約１０，０００倍、少なくとも約５０，０００倍、少なくとも約１００，０００倍または少なくとも約１００，０００倍超、多いサイトカイン産生細胞を含む場合に、刺激されていると言われる。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答の刺激は、Ｔ細胞の抗原誘導性増殖を測定することによって判定され得る。いくつかの実施形態において、抗原誘導性増殖は、分裂Ｔ細胞におけるＨ３−チミジンの取り込みとして測定され得る（時折、「リンパ球形質転換試験」または「ＬＴＴ」と称される）。いくつかの実施形態において、Ｈ３−チミジンの取り込み（γカウンターからのカウント数として与えられる）が、無処置コントロールよりも、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約１０００倍、少なくとも約５０００倍、少なくとも約１０，０００倍または少なくとも約１０，０００倍超、高い場合に、抗原誘導性増殖が生じたと言われる。
いくつかの実施形態において、抗原誘導性増殖は、フローサイトメトリーによって測定され得る。いくつかの実施形態において、抗原誘導性増殖は、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）希釈アッセイによって測定され得る。ＣＦＳＥは、そのスクシンイミジル反応基によって細胞質タンパク質（例えば、Ｔ細胞タンパク質）のアミノ基に結合する、無毒性で蛍光性の膜透過性色素である。細胞が分裂するとき、ＣＦＳＥ標識されたタンパク質は、娘細胞に等しく分配されるので、細胞蛍光は分裂ごとに半減する。その結果として、抗原特異的Ｔ細胞は、各々の抗原の存在下における培養後にその蛍光を失い（ＣＦＳＥ低）、そして培養物中の他の細胞（ＣＦＳＥ高）と識別可能になる。いくつかの実施形態において、ＣＦＳＥ希釈（すべてのＣＦＳＥ＋細胞に対するＣＦＳＥ低細胞のパーセンテージとして与えられる）が、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約１００％である場合に、抗原誘導性増殖が生じたと言われる。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答は、Ｔ細胞活性化の細胞性マーカーが、刺激されていない細胞と異なるレベル（例えば、それより高いレベルまたはより低いレベル）で発現されている場合に、刺激されていると言われる。いくつかの実施形態において、ＣＤ１１ａＣＤ２７、ＣＤ２５、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＯおよび／またはＣＤ６９は、刺激されていないＴ細胞よりも、活性化されているＴ細胞において、より高度に発現される。いくつかの実施形態において、Ｌ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＣＤ４５ＲＡおよび／またはＣＣＲ７は、刺激されていないＴ細胞よりも、活性化されているＴ細胞において、それほど高度に発現されない。
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞における免疫応答は、抗原パルス（ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｕｌｓｅｄ）標的細胞に対するエフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞による細胞傷害性をアッセイすることによって測定される。例えば、５１クロム（５１Ｃｒ）放出アッセイが、行われ得る。このアッセイでは、エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞が、クラスＩＭＨＣ上にウイルスペプチドを提示している感染細胞と結合し、そしてその感染細胞にアポトーシスを起こすようにシグナル伝達する。エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞が加えられる前に、その細胞が５１Ｃｒで標識されている場合、上清に放出される５１Ｃｒの量は、死滅させた標的の数に比例する。
当業者は、上に記載されたアッセイが、Ｔ細胞の活性化が起きているか否かを判定するために利用され得る単なる例示的な方法であることを認識するだろう。Ｔ細胞の活性化が起きているか否かを判定するために使用され得る当業者に公知の任意のアッセイは、本発明の範囲内に包含される。本明細書中に記載されるアッセイならびにＴ細胞の活性化が起きているか否かを判定するために使用され得るさらなるアッセイは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＹ，２００７；本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
Ｂ細胞
本発明は、例えば、免疫調節剤を免疫系の細胞に送達するためのワクチンナノキャリアを提供する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｂ細胞に対して提示され得る少なくとも１つの免疫調節剤（すなわち、Ｂ細胞抗原）を含む。
免疫調節剤
Ｂ細胞およびＴ細胞は、異なる機序によって抗原を認識する。上に記載したように、Ｔ細胞は、プロセシングされた形態で（例えば、ＡＰＣのＭＨＣ分子によってＴ細胞レセプターに提示されるペプチドフラグメントとして）抗原を認識する。Ｂ細胞は、そのままの形態で抗原を認識する。Ｂ細胞は、Ｂ細胞レセプター（ＢＣＲ）および／または膜結合型免疫グロブリンを用いて、血液中またはリンパ中の遊離（例えば、可溶性）抗原を認識する。
免疫調節剤は、Ｂ細胞抗原であり得る。Ｂ細胞抗原としては、タンパク質、ペプチド、小分子および炭水化物が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、非タンパク質抗原（すなわち、タンパク質またはペプチドでない抗原）である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、感染性因子と関連する炭水化物である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、感染性因子と関連する糖タンパク質または糖ペプチドである。その感染性因子は、細菌、ウイルス、真菌、原生動物または寄生生物であり得る。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、免疫原性が低い抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、乱用性物質またはその一部である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、習慣性物質またはその一部である。習慣性物質としては、ニコチン、麻薬、鎮咳剤、トランキライザーおよび鎮静剤が挙げられるが、これらに限定されない。習慣性物質の例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、化学兵器由来のトキシンなどのトキシンである。いくつかの実施形態において、化学兵器由来のトキシンは、ボツリヌストキシンまたはホスフィン（ｐｈｏｓｐｈｅｎｅ）である。化学兵器由来のトキシンとしては、Ｏ−アルキル（＜Ｃ１０、シクロアルキルを含む）アルキル（Ｍｅ、Ｅｔ、ｎ−Ｐｒまたはｉ−Ｐｒ）−ホスホノフルオリデート（例えば、サリン：Ｏ−イソプロピルメチルホスホノフルオリデート、ソマン：Ｏ−ピナコリルメチルホスホノフルオリデート）、Ｏ−アルキル（＜Ｃ１０、シクロアルキルを含む）Ｎ，Ｎ−ジアルキル（Ｍｅ、Ｅｔ、ｎ−Ｐｒまたはｉ−Ｐｒ）ホスホルアミドシアニデート（例えば、タブン：Ｏ−エチルＮ，Ｎ−ジメチルホスホルアミドシアニデート）、Ｏ−アルキル（Ｈまたは＜Ｃ１０、シクロアルキルを含む）Ｓ−２−ジアルキル（Ｍｅ、Ｅｔ、ｎ−Ｐｒまたはｉ−Ｐｒ）−アミノエチルアルキル（Ｍｅ、Ｅｔ、ｎ−Ｐｒまたはｉ−Ｐｒ）ホスホノチオレートおよび対応するアルキル化塩またはプロトン化塩（例えば、ＶＸ：Ｏ−エチルＳ−２−ジイソプロピルアミノエチルメチルホスホノチオレート）、硫黄マスタード：２−クロロエチルクロロメチルスルフィド、マスタードガス：ビス（２−クロロエチル）スルフィド、ビス（２−クロロエチルチオ）メタン、セスキマスタード：１，２−ビス（２−クロロエチルチオ）エタン、１，３−ビス（２−クロロエチルチオ）−ｎ−プロパン、１，４−ビス（２−クロロエチルチオ）−ｎ−ブタン、１，５−ビス（２−クロロエチルチオ）−ｎ−ペンタン、ビス（２−クロロエチルチオメチル）エーテル、Ｏ−マスタード：ビス（２−クロロエチルチオエチル）エーテル、ルイサイト：ルイサイト１：２−クロロビニルジクロロアルシン、ルイサイト２：ビス（２−クロロビニル）クロロアルシン、ルイサイト３：トリス（２−クロロビニル）アルシン、ナイトロジェンマスタード：ＨＮ１：ビス（２−クロロエチル）エチルアミン、ＨＮ２：ビス（２−クロロエチル）メチルアミン、ＨＮ３：トリス（２−クロロエチル）アミン、サキシトキシン、リシン、アミトン：Ｏ，Ｏ−ジエチルＳ−（２−（ジエチルアミノ）エチル）ホスホロチオレートおよび対応するアルキル化塩またはプロトン化塩、ＰＦＩＢ：１，１，３，３，３−ペンタフルオロ−２−（トリフルオロメチル）−１−プロペン、３−キヌクリジニルベンジレート（ＢＺ）、ホスゲン：二塩化カルボニル、塩化シアン、シアン化水素およびクロロピクリン：トリクロロニトロメタンが挙げられるが、これらに限定されない。
Ｂ細胞抗原は、有害な環境作用物質でもあり得る。有害な環境作用物質としては、ヒ素、鉛、水銀、塩化ビニル、ポリ塩化ビフェニル、ベンゼン、多環式芳香族炭化水素、カドミウム、ベンゾ（ａ）ピレン、ベンゾ（ｂ）フルオランテン、クロロホルム、ＤＤＴ，Ｐ，Ｐ’−、アロクロール１２５４、アロクロール１２６０、ジベンゾ（ａ，ｈ）アントラセン、トリクロロエチレン、ジエルドリン、六価クロムおよびＤＤＥ，Ｐ，Ｐ’が挙げられるが、これらに限定されない。そのような作用物質の例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞抗原は、自己抗原である。他の実施形態において、Ｂ細胞抗原は、同種抗原、アレルゲン、接触感作物質、変性疾患抗原、ハプテン、感染症抗原、癌抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、習慣性物質、異種抗原または代謝疾患酵素もしくはその酵素反応生成物である。そのような抗原の例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
上に記載したように、本発明は、例えば、１つ以上の免疫調節剤を含む、ワクチンナノキャリアを提供する。いくつかの実施形態において、１つ以上の免疫調節剤を含む発明性のあるナノキャリアが、ワクチンとして使用される。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞に対する抗原提示は、ナノキャリアの表面上に、構造的にインタクトな免疫調節剤を提示することによって最適化され得る。いくつかの実施形態において、構造的にインタクトな免疫調節剤は、高コピー数および／または高密度でワクチンナノキャリアの表面上に提示される。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、単離されたおよび／または組換えのタンパク質またはペプチド、不活性化された生物およびウイルス、死滅させた生物およびウイルス、遺伝的に変更された生物またはウイルスならびに細胞抽出物を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、核酸、炭水化物、脂質および／または小分子を含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、免疫応答を誘発するものである。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、抗原である。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、ワクチンに使用される。免疫調節剤のさらなる説明は、上記の「Ｂ細胞」と題される項に見られる。
上で論じたように、ワクチンナノキャリアは、Ｂ細胞とＴ細胞の両方を刺激する単一タイプの免疫調節剤を含み得る。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの免疫調節剤を含み、ここで、第１タイプの免疫調節剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして第２タイプの免疫調節剤が、Ｔ細胞を刺激する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫調節剤を含み、ここで、１つ以上のタイプの免疫調節剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして１つ以上のタイプの免疫調節剤が、Ｔ細胞を刺激する。
標的化部分
上で論じたように、発明性のあるナノキャリアは、１つ以上の標的化部分を含む。本発明に従う標的化部分の一般的および特異的な特性の考察については、上記の「Ｔ細胞」と題される項の中の「標的化部分」という副題を参照のこと。いくつかの実施形態において、標的化部分は、特定の細胞型を標的化する。ある特定の実施形態において、標的は、Ｂ細胞マーカーである。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞標的は、Ｂ細胞において発現されるが非Ｂ細胞において発現されない抗原である。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞標的は、非Ｂ細胞よりもＢ細胞において優勢である抗原である。
ある特定の実施形態において、標的は、ＳＣＳ−Ｍｐｈマーカーである。いくつかの実施形態において、ＳＣＳ−Ｍｐｈ標的は、ＳＣＳ−Ｍｐｈにおいて発現されるが非ＳＣＳ−Ｍｐｈにおいて発現されない抗原である。いくつかの実施形態において、ＳＣＳ−Ｍｐｈ標的は、非ＳＣＳ−ＭｐｈよりもＳＣＳ−Ｍｐｈにおいて優勢である抗原である。例示的なＳＣＳ−Ｍｐｈマーカーは、下記の「被膜下洞マクロファージ細胞」と題される項に列挙され、そしてそれは、本明細書中の別の箇所に提供されるものを含む。
ある特定の実施形態において、標的は、ＦＤＣマーカーである。いくつかの実施形態において、ＦＤＣ標的は、ＦＤＣにおいて発現されるが非ＦＤＣにおいて発現されない抗原である。いくつかの実施形態において、ＦＤＣ標的は、非ＦＤＣよりもＦＤＣにおいて優勢である抗原である。例示的なＦＤＣマーカーは、下記の「濾胞樹状細胞」と題される項に列挙され、そしてそれは、本明細書中の別の箇所に提供されるものを含む。
いくつかの実施形態において、標的は、特定の細胞型において優先的に発現される。例えば、ＳＣＳ−Ｍｐｈ、ＦＤＣおよび／またはＢ細胞におけるＳＣＳ−Ｍｐｈ標的、ＦＤＣ標的および／またはＢ細胞標的の発現は、参照集団と比べて、ＳＣＳ−Ｍｐｈ、ＦＤＣおよび／またはＢ細胞において少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍または少なくとも１０００倍過剰発現される。いくつかの実施形態において、参照集団は、非ＳＣＳ−Ｍｐｈ、非ＦＤＣおよび／または非Ｂ細胞を含み得る。
いくつかの実施形態において、活性化されたＳＣＳ−Ｍｐｈ、ＦＤＣおよび／またはＢ細胞におけるＳＣＳ−Ｍｐｈ標的、ＦＤＣ標的および／またはＢ細胞標的の発現は、参照集団と比べて、活性化されたＳＣＳ−Ｍｐｈ、ＦＤＣおよび／またはＢ細胞において少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍または少なくとも１０００倍過剰発現される。いくつかの実施形態において、参照集団は、活性化されていないＳＣＳ−Ｍｐｈ、ＦＤＣおよび／またはＢ細胞を含み得る。
被膜下洞マクロファージ細胞
本発明は、被膜下洞マクロファージ（ＳＣＳ−Ｍｐｈ）への抗原の標的化が、ウイルスなどのリンパ由来の病原体を濾胞Ｂ細胞に効率的に早期に提示することに関与するという認識を包含する（図２）。実施例１に記載されるように、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）またはアデノウイルス（ＡｄＶ）をマウスの足蹠に皮下注射した後、ウイルス粒子は、膝窩排出リンパ節においてＣＤ１６９＋ＳＣＳ−Ｍｐｈによって効率的かつ選択的に保有される。このウイルス負荷の際、これらのリンパ節内のＶＳＶ特異的Ｂ細胞レセプター（ＢＣＲ）トランスジェニックＢ細胞は、迅速に活性化され、そして極度に高い抗体価をもたらした。クロドロネート（Ｍｐｈにとって毒性）を負荷されたリポソームの注射によるＳＣＳ−Ｍｐｈの枯渇が、早期のＢ細胞活性化を無くしたことから、ＳＣＳ−Ｍｐｈは、リンパ由来の粒状抗原をＢ細胞に提示するのに必須であることが示唆される。
Ｂ細胞は、溶液中ではなく固定表面上でＢ細胞に提示される多価抗原によってより強力に活性化される。任意の１つの理論に拘束するつもりはないが、本発明は、エンベロープを有する多くのウイルス（例えば、ＶＳＶ）が、そのエンベロープ糖タンパク質に対して強力な中和抗体応答を誘発する理由：その抗原性タンパク質が、ウイルス粒子の表面上に非常に高密度で提示され、そしてそのウイルス粒子が、比較的固定された様式で、すなわち、ＳＣＳ−Ｍｐｈの原形質膜に結合された状態で、Ｂ細胞に対して提示されること、を示唆する。本発明は、皮下注射の際に、ＳＣＳ−Ｍｐｈを標的化し、そしてその表面上に立体配座的にインタクトな多価抗原を提示することによってウイルス粒子を模倣しているワクチンキャリアが、強力なＢ細胞応答を刺激し得るという認識を包含する。
いくつかの実施形態において、ＳＣＳ−Ｍｐｈ標的化は、ＣＤ１６９（すなわち、シアロアドヘシン）、ＣＤ１１ｂ（すなわち、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８、Ｍａｃ−１、ＣＲ３またはαＭβ２インテグリン）および／またはマンノースレセプター（すなわち、多価レクチン）、ＳＣＳ−Ｍｐｈ上に顕著に発現されるすべてのタンパク質に結合する部分によって達成される。そのような部分の例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態において、ＳＣＳ−Ｍｐｈ標的化は、マクロファージ上に顕著に発現されるおよび／または存在する任意の実体（例えば、タンパク質、脂質、炭水化物、小分子など）（すなわち、ＳＣＳ−Ｍｐｈマーカー）に特異的に結合する任意の標的化部分によって達成され得る。例示的なＳＣＳ−Ｍｐｈマーカーとしては、ＣＤ４（Ｌ３Ｔ４、Ｗ３／２５、Ｔ４）；ＣＤ９（ｐ２４、ＤＲＡＰ−１、ＭＲＰ−１）；ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１α、αＬインテグリン鎖）；ＣＤ１１ｂ（αＭインテグリン鎖、ＣＲ３、Ｍｏｌ、Ｃ３ｎｉＲ、Ｍａｃ−１）；ＣＤ１１ｃ（αＸインテグリン、ｐ１５０、９５、ＡＸｂ２）；ＣＤｗ１２（ｐ９０−１２０）；ＣＤ１３（ＡＰＮ、ｇｐ１５０、ＥＣ３．４．１１．２）；ＣＤ１４（ＬＰＳ−Ｒ）；ＣＤ１５（Ｘ−ハプテン、Ｌｅｗｉｓ、Ｘ、ＳＳＥＡ−１、３−ＦＡＬ）；ＣＤ１５ｓ（シアリルＬｅｗｉｓＸ）；ＣＤ１５ｕ（３’スルホＬｅｗｉｓＸ）；ＣＤ１５ｓｕ（６スルホ−シアリルＬｅｗｉｓＸ）；ＣＤ１６ａ（ＦＣＲＩＩＩＡ）；ＣＤ１６ｂ（ＦｃｇＲＩＩＩｂ）；ＣＤｗ１７（ラクトシルセラミド、ＬａｃＣｅｒ）；ＣＤ１８（インテグリンβ２、ＣＤ１１ａ，ｂ，ｃβ−サブユニット）；ＣＤ２６（ＤＰＰＩＶエクト酵素（ｅｃｔｏｅｎｅｙｍｅ）、ＡＤＡ結合タンパク質）；ＣＤ２９（血小板ＧＰＩＩａ、β−１インテグリン、ＧＰ）；ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１、Ｅｎｄｏｃａｍ）；ＣＤ３２（ＦＣγＲＩＩ）；ＣＤ３３（ｇｐ６７）；ＣＤ３５（ＣＲ１、Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂレセプター）；ＣＤ３６（ＧｐＩＩＩｂ、ＧＰＩＶ、ＰＡＳＩＶ）；ＣＤ３７（ｇｐ５２−４０）；ＣＤ３８（ＡＤＰ−リボシルシクラーゼ、Ｔ１０）；ＣＤ３９（ＡＴＰデヒドロゲナーゼ、ＮＴＰデヒドロゲナーゼ−１）；ＣＤ４０（Ｂｐ５０）；ＣＤ４３（シアロホリン、ロイコシアリン）；ＣＤ４４（ＥＭＣＲＩＩ、Ｈ−ＣＡＭ、Ｐｇｐ−１）；ＣＤ４５（ＬＣＡ、Ｔ２００、Ｂ２２０、Ｌｙ５）；ＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ４５ＲＣ；ＣＤ４５ＲＯ（ＵＣＨＬ−１）；ＣＤ４６（ＭＣＰ）；ＣＤ４７（ｇｐ４２、ＩＡＰ、ＯＡ３、ニューロフィリン）；ＣＤ４７Ｒ（ＭＥＭ−１３３）；ＣＤ４８（Ｂｌａｓｔ−１、Ｈｕｌｙｍ３、ＢＣＭ−１、ＯＸ−４５）；ＣＤ４９ａ（ＶＬＡ−１α、α１インテグリン）；ＣＤ４９ｂ（ＶＬＡ−２α、ｇｐｌａ、α２インテグリン）；ＣＤ４９ｃ（ＶＬＡ−３α、α３インテグリン）；ＣＤ４９ｅ（ＶＬＡ−５α、α５インテグリン）；ＣＤ４９ｆ（ＶＬＡ−６α、α６インテグリン、ｇｐ１ｃ）；ＣＤ５０（ＩＣＡＭ−３）；ＣＤ５１（インテグリンα、ＶＮＲ−α、ビトロネクチン−Ｒα）；ＣＤ５２（キャンパス−１、ＨＥ５）；ＣＤ５３（ＯＸ−４４）；ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）；ＣＤ５５（ＤＡＦ）；ＣＤ５８（ＬＦＡ−３）；ＣＤ５９（ｌＦ５Ａｇ、Ｈ１９、プロテクチン、ＭＡＣＩＦ、ＭＩＲＬ、Ｐ−１８）；ＣＤ６０ａ（ＧＤ３）；ＣＤ６０ｂ（９−Ｏ−アセチルＧＤ３）；ＣＤ６１（ＧＰＩＩＩａ、β３インテグリン）；ＣＤ６２Ｌ（Ｌ−セレクチン、ＬＡＭ−１、ＬＥＣＡＭ−１、ＭＥＬ−１４、Ｌｅｕ８、ＴＱ１）；ＣＤ６３（ＬＩＭＰ、ＭＬＡ１、ｇｐ５５、ＮＧＡ、ＬＡＭＰ−３、ＭＥ４９１）；ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）；ＣＤ６５（セラミド、ＶＩＭ−２）；ＣＤ６５ｓ（シアル化ＣＤ６５、ＶＩＭ２）；ＣＤ７２（Ｌｙ−１９．２、Ｌｙ−３２．２、Ｌｙｂ−２）；ＣＤ７４（Ｉｉ、インバリアント鎖）；ＣＤ７５（シアロでマスクされたラクトサミン）；ＣＤ７５Ｓ（α２，６シアル化ラクトサミン）；ＣＤ８０（Ｂ７、Ｂ７−１、ＢＢ１）；ＣＤ８１（ＴＡＰＡ−１）；ＣＤ８２（４Ｆ９、Ｃ３３、ＩＡ４、ＫＡＩ１、Ｒ２）；ＣＤ８４（ｐ７５、ＧＲ６）；ＣＤ８５ａ（ＩＬＴ５、ＬＩＲ２、ＨＬ９）；ＣＤ８５ｄ（ＩＬＴ４、ＬＩＲ２、ＭＩＲ１０）；ＣＤ８５ｊ（ＩＬＴ２、ＬＩＲ１、ＭＩＲ７）；ＣＤ８５ｋ（ＩＬＴ３、ＬＩＲ５、ＨＭ１８）；ＣＤ８６（Ｂ７−２／Ｂ７０）；ＣＤ８７（ｕＰＡＲ）；ＣＤ８８（Ｃ５ａＲ）；ＣＤ８９（ＩｇＡ Ｆｃレセプター、ＦｃαＲ）；ＣＤ９１（α２Ｍ−Ｒ、ＬＲＰ）；ＣＤｗ９２（ｐ７０）；ＣＤｗ９３（ＧＲ１１）；ＣＤ９５（ＡＰＯ−１、ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）；ＣＤ９７（ＢＬ−ＫＤＤ／Ｆ１２）；ＣＤ９８（４Ｆ２、ＦＲＰ−１、ＲＬ−３８８）；ＣＤ９９（ＭＩＣ２、Ｅ２）；ＣＤ９９Ｒ（ＣＤ９９Ｍａｂ制限型）；ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）；ＣＤ１０１（ＩＧＳＦ２、Ｐ１２６、Ｖ７）；ＣＤ１０２（ＩＣＡＭ−２）；ＣＤ１１１（ＰＶＲＬ１、ＨｖｅＣ、ＰＲＲ１、ネクチン（Ｎｅｃｔｉｎ）１、ＨＩｇＲ）；ＣＤ１１２（ＨｖｅＢ、ＰＲＲ２、ＰＶＲＬ２、ネクチン２）；ＣＤ１１４（ＣＳＦ３Ｒ、Ｇ−ＣＳＲＦ、ＨＧ−ＣＳＦＲ）；ＣＤ１１５（ｃ−ｆｍｓ、ＣＳＦ−１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦＲ）；ＣＤ１１６（ＧＭ−ＣＳＦＲα）；ＣＤｗ１１９（ＩＦＮγＲ、ＩＦＮγＲＡ）；ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＩ、ｐ５５）；ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＩＩ、ｐ７５、ＴＮＦＲｐ８０）；ＣＤ１２１ｂ（２型ＩＬ−１Ｒ）；ＣＤ１２２（ＩＬ２Ｒβ）；ＣＤ１２３（ＩＬ−３Ｒα）；ＣＤ１２４（ＩＬ−４Ｒα）；ＣＤ１２７（ｐ９０、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−７Ｒα）；ＣＤ１２８ａ（ＩＬ−８Ｒａ、ＣＸＣＲ１、（ＣＤ１８１と仮称されている））；ＣＤ１２８ｂ（ＩＬ−８Ｒｂ、ＣＳＣＲ２、（ＣＤ１８２と仮称されている））；ＣＤ１３０（ｇｐ１３０）；ＣＤ１３１（共通βサブユニット）；ＣＤ１３２（共通γ鎖、ＩＬ−２Ｒγ）；ＣＤｗ１３６（ＭＳＰ−Ｒ、ＲＯＮ、ｐ１５８−ｒｏｎ）；ＣＤｗ１３７（４−１ＢＢ、ＩＬＡ）；ＣＤ１３９；ＣＤ１４１（トロンボモジュリン、フェトモジュリン（Ｆｅｔｏｍｏｄｕｌｉｎ））；ＣＤ１４７（バシギン、ＥＭＭＰＲＩＮ、Ｍ６、ＯＸ４７）；ＣＤ１４８（ＨＰＴＰ−η、ｐ２６０、ＤＥＰ−１）；ＣＤ１５５（ＰＶＲ）；ＣＤ１５６ａ（ＣＤ１５６、ＡＤＡＭ８、ＭＳ２）；ＣＤ１５６ｂ（ＴＡＣＥ、ＡＤＡＭ１７、ｃＳＶＰ）；ＣＤｗ１５６Ｃ（ＡＤＡＭ１０）；ＣＤ１５７（Ｍｏ５、ＢＳＴ−１）；ＣＤ１６２（ＰＳＧＬ−１）；ＣＤ１６４（ＭＧＣ−２４、ＭＵＣ−２４）；ＣＤ１６５（ＡＤ２、ｇｐ３７）；ＣＤ１６８（ＲＨＡＭＭ、ＩＨＡＢＰ、ＨＭＭＲ）；ＣＤ１６９（シアロアドヘシン、Ｓｉｇｌｅｃ−１）；ＣＤ１７０（Ｓｉｇｌｅｃ５）；ＣＤ１７１（Ｌ１ＣＡＭ、ＮＩＬＥ）；ＣＤ１７２（ＳＩＲＰ−１α、ＭｙＤ−１）；ＣＤ１７２ｂ（ＳＩＲＰβ）；ＣＤ１８０（ＲＰ１０５、Ｂｇｐ９５、Ｌｙ６４）；ＣＤ１８１（ＣＸＣＲ１、（以前はＣＤ１２８ａとして知られていた））；ＣＤ１８２（ＣＸＣＲ２、（以前はＣＤ１２８ｂとして知られていた））；ＣＤ１８４（ＣＸＣＲ４、ＮＰＹ３Ｒ）；ＣＤ１９１（ＣＣＲ１）；ＣＤ１９２（ＣＣＲ２）；ＣＤ１９５（ＣＣＲ５）；ＣＤｗ１９７（ＣＣＲ７（かつてＣＤｗ１９７だった））；ＣＤｗ１９８（ＣＣＲ８）；ＣＤ２０４（ＭＳＲ）；ＣＤ２０５（ＤＥＣ−２５）；ＣＤ２０６（ＭＭＲ）；ＣＤ２０７（ランゲリン）；ＣＤｗ２１０（ＣＫ）；ＣＤ２１３ａ（ＣＫ）；ＣＤｗ２１７（ＣＫ）；ＣＤ２２０（インスリンＲ）；ＣＤ２２１（ＩＧＦ１Ｒ）；ＣＤ２２２（Ｍ６Ｐ−Ｒ、ＩＧＦＩＩ−Ｒ）；ＣＤ２２４（ＧＧＴ）；ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ−１、ＰＴＡ１）；ＣＤ２３０（プリオンタンパク質（ＰｒＰ））；ＣＤ２３２（ＶＥＳＰ−Ｒ）；ＣＤ２４４（２Ｂ４、Ｐ３８、ＮＡＩＬ）；ＣＤ２４５（ｐ２２０／２４０）；ＣＤ２５６（ＡＰＲＩＬ、ＴＡＬＬ２、ＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１３）；ＣＤ２５７（ＢＬＹＳ、ＴＡＬＬ１、ＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１３ｂ）；ＣＤ２６１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ａ）；ＣＤ２６２（ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ｂ）；ＣＤ２６３（ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＮＢＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ｃ）；ＣＤ２６４（ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ｄ）；ＣＤ２６５（ＴＲＡＮＣＥ−Ｒ、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１１ａ）；ＣＤ２７７（ＢＴ３．１、Ｂ７ファミリー：ブチロフィリン３）；ＣＤ２８０（ＴＥＭ２２、ＥＮＤＯ１８０）；ＣＤ２８１（ＴＬＲ１、ＴＯＬＬ様レセプター１）；ＣＤ２８２（ＴＬＲ２、ＴＯＬＬ様レセプター２）；ＣＤ２８４（ＴＬＲ４、ＴＯＬＬ様レセプター４）；ＣＤ２９５（ＬＥＰＲ）；ＣＤ２９８（ＡＴＰ１Ｂ３、Ｎａ Ｋ ＡＴＰアーゼ、β３サブユニット）；ＣＤ３００ａ（ＣＭＲＦ−３５Ｈ）；ＣＤ３００ｃ（ＣＭＲＦ−３５Ａ）；ＣＤ３００ｅ（ＣＭＲＦ−３５Ｌ１）；ＣＤ３０２（ＤＣＬ１）；ＣＤ３０５（ＬＡＩＲ１）；ＣＤ３１２（ＥＭＲ２）；ＣＤ３１５（ＣＤ９Ｐ１）；ＣＤ３１７（ＢＳＴ２）；ＣＤ３２１（ＪＡＭ１）；ＣＤ３２２（ＪＡＭ２）；ＣＤｗ３２８（Ｓｉｇｌｅｃ７）；ＣＤｗ３２９（Ｓｉｇｌｅｃ９）；ＣＤ６８（ｇｐ１１０、マクロシアリン）；および／またはマンノースレセプター；が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、括弧内に列挙された名称は、代替名を表している。そのようなマーカーの例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態において、ＳＣＳ−Ｍｐｈ標的化は、活性化された際にマクロファージ上に顕著に発現されるおよび／または存在する任意の実体（例えば、タンパク質、脂質、炭水化物、小分子など）（すなわち、活性化ＳＣＳ−Ｍｐｈマーカー）に特異的に結合する任意の標的化部分によって達成され得る。例示的な活性化ＳＣＳ−Ｍｐｈマーカーとしては、ＣＤ１ａ（Ｒ４、Ｔ６、ＨＴＡ−１）；ＣＤ１ｂ（Ｒ１）；ＣＤ１ｃ（Ｍ２４１、Ｒ７）；ＣＤ４４Ｒ（ＣＤ４４ｖ、ＣＤ４４ｖ９）；ＣＤ４９ｄ（ＶＬＡ−４α、α４インテグリン）；ＣＤ６９（ＡＩＭ、ＥＡ１、ＭＬＲ３、ｇｐ３４／２８、ＶＥＡ）；ＣＤ１０５（エンドグリン）；ＣＤ１４２（組織因子、トロンボプラスチン、Ｆ３）；ＣＤ１４３（ＡＣＥ、ペプチジルジペプチダーゼＡ、キニナーゼＩＩ）；ＣＤ１５３（ＣＤ３０Ｌ、ＴＮＳＦ８）；ＣＤ１６３（Ｍ１３０、ＧＨＩ／６ｌ、ＲＭ３／１）；ＣＤ１６６（ＡＬＣＡＭ、ＫＧ−ＣＡＭ、ＳＣ−１、ＢＥＮ、ＤＭ−ＧＲＡＳＰ）；ＣＤ２２７（ＭＵＣ１、ＰＵＭ、ＰＥＭ、ＥＭＡ）；ＣＤ２５３（ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１０）；ＣＤ２７３（Ｂ７ＤＣ、ＰＤＬ２）；ＣＤ２７４（Ｂ７Ｈ１、ＰＤＬ１）；ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２、ＩＣＯＳＬ）；ＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）；ＣＤ２９７（ＡＲＴ４、ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ４；およびドンブロック血液型糖タンパク質；が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、括弧内に列挙された名称は、代替名を表している。そのようなマーカーの例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
Ｂ細胞標的化部分
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞標的化は、Ｂ細胞上ならびにＦＤＣ上に発現されるタンパク質である、補体レセプターのＣＲ１（すなわち、ＣＤ３５）またはＣＲ２（すなわち、ＣＤ２１）に結合する部分によって達成され得る。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞標的化は、Ｂ細胞マーカー（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０および／またはＣＤ２２）によって達成され得る。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞標的化は、Ｂ細胞マーカー（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ８０、ＣＸＣＲ５、ＶＬＡ−４、クラスＩＩＭＨＣ、表面ＩｇＭもしくはＩｇＤ、ＡＰＲＬおよび／またはＢＡＦＦ−Ｒ）によって達成され得る。本発明は、補体レセプターまたは他のＡＰＣ関連分子に特異的な部分によるＢ細胞の同時標的化が、体液性応答を押し上げるという認識を包含する。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞標的化は、Ｂ細胞上に顕著に発現されるおよび／または存在する任意の実体（例えば、タンパク質、脂質、炭水化物、小分子など）（すなわち、Ｂ細胞マーカー）に特異的に結合する任意の標的化部分によって達成され得る。例示的なＢ細胞マーカーとしては、ＣＤ１ｃ（Ｍ２４１、Ｒ７）；ＣＤ１ｄ（Ｒ３）；ＣＤ２（Ｅ−ロゼットＲ、Ｔ１１、ＬＦＡ−２）；ＣＤ５（Ｔ１、Ｔｐ６７、Ｌｅｕ−１、Ｌｙ−１）；ＣＤ６（Ｔ１２）；ＣＤ９（ｐ２４、ＤＲＡＰ−１、ＭＲＰ−１）；ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１α、αＬインテグリン鎖）；ＣＤ１１ｂ（αＭインテグリン鎖、ＣＲ３、Ｍｏｌ、Ｃ３ｎｉＲ、Ｍａｃ−１）；ＣＤ１１ｃ（αＸインテグリン、Ｐ１５０、９５、ＡＸｂ２）；ＣＤｗ１７（ラクトシルセラミド、ＬａｃＣｅｒ）；ＣＤ１８（インテグリンβ２、ＣＤ１１ａ、ｂ、ｃβ−サブユニット）；ＣＤ１９（Ｂ４）；ＣＤ２０（Ｂ１、Ｂｐ３５）；ＣＤ２１（ＣＲ２、ＥＢＶ−Ｒ、Ｃ３ｄＲ）；ＣＤ２２（ＢＬ−ＣＡＭ、Ｌｙｂ８、Ｓｉｇｌｅｃ−２）；ＣＤ２３（ＦｃｅＲＩＩ、Ｂ６、ＢＬＡＳＴ−２、Ｌｅｕ−２０）；ＣＤ２４（ＢＢＡ−１、ＨＳＡ）；ＣＤ２５（Ｔａｃ抗原、ＩＬ−２Ｒα、ｐ５５）；ＣＤ２６（ＤＰＰＩＶエクト酵素（ｅｃｔｏｅｎｅｙｍｅ）、ＡＤＡ結合タンパク質）；ＣＤ２７（Ｔ１４、Ｓ１５２）；ＣＤ２９（血小板ＧＰＩＩａ、β−１インテグリン、ＧＰ）；ＣＤ３１（ＰＥＣＡＭ−１、Ｅｎｄｏｃａｍ）；ＣＤ３２（ＦＣγＲＩＩ）；ＣＤ３５（ＣＲ１、Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂレセプター）；ＣＤ３７（ｇｐ５２−４０）；ＣＤ３８（ＡＤＰ−リボシルシクラーゼ、Ｔ１０）；ＣＤ３９（ＡＴＰデヒドロゲナーゼ、ＮＴＰデヒドロゲナーゼ−１）；ＣＤ４０（Ｂｐ５０）；ＣＤ４４（ＥＣＭＲＩＩ、Ｈ−ＣＡＭ、Ｐｇｐ−１）；ＣＤ４５（ＬＣＡ、Ｔ２００、Ｂ２２０、Ｌｙ５）；ＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ４５ＲＣ；ＣＤ４５ＲＯ（ＵＣＨＬ−１）；ＣＤ４６（ＭＣＰ）；ＣＤ４７（ｇｐ４２、ＩＡＰ、ＯＡ３、ニューロフィリン（Ｎｅｕｒｏｐｈｉｌｉｎ））；ＣＤ４７Ｒ（ＭＥＭ−１３３）；ＣＤ４８（Ｂｌａｓｔ−１、Ｈｕｌｙｍ３、ＢＣＭ−１、ＯＸ−４５）；ＣＤ４９ｂ（ＶＬＡ−２α、ｇｐｌａ、α２インテグリン）；ＣＤ４９ｃ（ＶＬＡ−３α、α３インテグリン）；ＣＤ４９ｄ（ＶＬＡ−４α、α４インテグリン）；ＣＤ５０（ＩＣＡＭ−３）；ＣＤ５２（キャンパス−１、ＨＥＳ）；ＣＤ５３（ＯＸ−４４）；ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）；ＣＤ５５（ＤＡＦ）；ＣＤ５８（ＬＦＡ−３）；ＣＤ６０ａ（ＧＤ３）；ＣＤ６２Ｌ（Ｌ−セレクチン、ＬＡＭ−１、ＬＥＣＡＭ−１、ＭＥＬ−１４、Ｌｅｕ８、ＴＱ１）；ＣＤ７２（Ｌｙ−１９．２、Ｌｙ−３２．２、Ｌｙｂ−２）；ＣＤ７３（Ｅｃｔｏ−５’−ヌクレオチダーゼ（ｎｕｃｉｏｔｉｄａｓｅ））；ＣＤ７４（Ｉｉ、インバリアント鎖）；ＣＤ７５（シアロでマスクされたラクトサミン）；ＣＤ７５Ｓ（α２，６シアリル化（６ ｓｉａｌｙｔａｔｅｄ）ラクトサミン）；ＣＤ７７（Ｐｋ抗原、ＢＬＡ、ＣＴＨ／Ｇｂ３）；ＣＤ７９ａ（Ｉｇα、ＭＢ１）；ＣＤ７９ｂ（Ｉｇβ、Ｂ２９）；ＣＤ８０；ＣＤ８１（ＴＡＰＡ−１）；ＣＤ８２（４Ｆ９、Ｃ３３、ＩＡ４、ＫＡＩ１、Ｒ２）；ＣＤ８３（ＨＢ１５）；ＣＤ８４（Ｐ７５、ＧＲ６）；ＣＤ８５ｊ（ＩＬＴ２、ＬＩＲ１、ＭＩＲ７）；ＣＤｗ９２（ｐ７０）；ＣＤ９５（ＡＰＯ−１、ＦＡＳ、ＴＮＦＲＳＦ６）；ＣＤ９８（４Ｆ２、ＦＲＰ−１、ＲＬ−３８８）；ＣＤ９９（ＭＩＣ２、Ｅ２）；ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）；ＣＤ１０２（ＩＣＡＭ−２）；ＣＤ１０８（ＳＥＭＡ７Ａ、ＪＭＨ血液型抗原）；ＣＤｗ１１９（ＩＦＮγＲ、ＩＦＮγＲａ）；ＣＤ１２０ａ（ＴＮＦＲＩ、ｐ５５）；ＣＤ１２０ｂ（ＴＮＦＲＩＩ、ｐ７５、ＴＮＦＲｐ８０）；ＣＤ１２１ｂ（２型ＩＬ−１Ｒ）；ＣＤ１２２（ＩＬ２Ｒβ）；ＣＤ１２４（ＩＬ−４Ｒα）；ＣＤ１３０（ｇｐ１３０）；ＣＤ１３２（共通γ鎖、ＩＬ−２Ｒγ）；ＣＤｗ１３７（４−１ＢＢ、ＩＬＡ）；ＣＤ１３９；ＣＤ１４７（バシギン、ＥＭＭＰＲＦＮ、Ｍ６、ＯＸ４７）；ＣＤ１５０（ＳＬＡＭ、ＩＰＯ−３）；ＣＤ１６２（ＰＳＧＬ−１）；ＣＤ１６４（ＭＧＣ−２４、ＭＵＣ−２４）；ＣＤ１６６（ＡＬＣＡＭ、ＫＧ−ＣＡＭ、ＳＣ−１、ＢＥＮ、ＤＭ−ＧＲＡＳＰ）；ＣＤ１６７ａ（ＤＤＲ１、ｔｒｋＥ、ｃａｋ）；ＣＤ１７１（Ｌ１ＣＭＡ、ＮＩＬＥ）；ＣＤ１７５ｓ（シアリル−Ｔｎ（Ｓ−Ｔｎ））；ＣＤ１８０（ＲＰ１０５、Ｂｇｐ９５、Ｌｙ６４）；ＣＤ１８４（ＣＸＣＲ４、ＮＰＹ３Ｒ）；ＣＤ１８５（ＣＸＣＲ５）；ＣＤ１９２（ＣＣＲ２）；ＣＤ１９６（ＣＣＲ６）；ＣＤ１９７（ＣＣＲ７（かつてＣＤｗ１９７だった））；ＣＤｗ１９７（ＣＣＲ７、ＥＢＩ１、ＢＬＲ２）；ＣＤ２００（ＯＸ２）；ＣＤ２０５（ＤＥＣ−２０５）；ＣＤｗ２１０（ＣＫ）；ＣＤ２１３ａ（ＣＫ）；ＣＤｗ２１７（ＣＫ）；ＣＤｗ２１８ａ（ＩＬ１８Ｒα）；ＣＤｗ２１８ｂ（ＩＬ１８Ｒβ）；ＣＤ２２０（インスリンＲ）；ＣＤ２２１（ＩＧＦ１Ｒ）；ＣＤ２２２（Ｍ６Ｐ−Ｒ、ＩＧＦＩＩ−Ｒ）；ＣＤ２２４（ＧＧＴ）；ＣＤ２２５（Ｌｅｕ１３）；ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ−１、ＰＴＡ１）；ＣＤ２２７（ＭＵＣ１、ＰＵＭ、ＰＥＭ、ＥＭＡ）；ＣＤ２２９（Ｌｙ９）；ＣＤ２３０（プリオンタンパク質（Ｐｒｐ））；ＣＤ２３２（ＶＥＳＰ−Ｒ）；ＣＤ２４５（ｐ２２０／２４０）；ＣＤ２４７（ＣＤ３ゼータ鎖）；ＣＤ２６１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ａ）；ＣＤ２６２（ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ｂ）；ＣＤ２６３（ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ｃ）；ＣＤ２６４（ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１０ｄ）；ＣＤ２６５（ＴＲＡＮＣＥ−Ｒ、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１１ａ）；ＣＤ２６７（ＴＡＣＩ、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１３Ｂ）；ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１３Ｃ）；ＣＤ２６９（ＢＣＭＡ、ＴＮＦ−Ｒスーパーファミリー、メンバー１６）；ＣＤ２７５（Ｂ７Ｈ２、ＩＣＯＳＬ）；ＣＤ２７７（ＢＴ３．１．Ｂ７ファミリー：ブチロフィリン３）；ＣＤ２９５（ＬＥＰＲ）；ＣＤ２９８（ＡＴＰ１Ｂ３Ｎａ Ｋ ＡＴＰアーゼβ３サブユニット）；ＣＤ３００ａ（ＣＭＲＦ−３５Ｈ）；ＣＤ３００ｃ（ＣＭＲＦ−３５Ａ）；ＣＤ３０５（ＬＡＩＲ１）；ＣＤ３０７（ＩＲＴＡ２）；ＣＤ３１５（ＣＤ９Ｐ１）；ＣＤ３１６（ＥＷ１２）；ＣＤ３１７（ＢＳＴ２）；ＣＤ３１９（ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７）；ＣＤ３２１（ＪＡＭ１）；ＣＤ３２２（ＪＡＭ２）；ＣＤｗ３２７（Ｓｉｇｌｅｃ６、ＣＤ３３Ｌ）；ＣＤ６８（ｇｐ１００、マクロシアリン）；ＣＸＣＲ５；ＶＬＡ−４；クラスＩＩＭＨＣ；表面ＩｇＭ；表面ＩｇＤ；ＡＰＲＬ；および／またはＢＡＦＦ−Ｒ；が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、括弧内に列挙された名称は、代替名を表している。マーカーの例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞標的化は、活性化された際にＢ細胞上に顕著に発現されるおよび／または存在する任意の実体（例えば、タンパク質、脂質、炭水化物、小分子など）（すなわち、活性化されたＢ細胞マーカー）に特異的に結合する任意の標的化部分によって達成され得る。例示的な活性化Ｂ細胞マーカーとしては、ＣＤ１ａ（Ｒ４、Ｔ６、ＨＴＡ−１）；ＣＤ１ｂ（Ｒ１）；ＣＤ１５ｓ（シアリルＬｅｗｉｓＸ）；ＣＤ１５ｕ（３’スルホＬｅｗｉｓＸ）；ＣＤ１５ｓｕ（６スルホ−シアリルＬｅｗｉｓＸ）；ＣＤ３０（Ｂｅｒ−Ｈ２、Ｋｉ−１）；ＣＤ６９（ＡＩＭ、ＥＡ１、ＭＬＲ３、ｇｐ３４／２８、ＶＥＡ）；ＣＤ７０（Ｋｉ−２４、ＣＤ２７リガンド）；ＣＤ８０（Ｂ７、Ｂ７−１、ＢＢ１）；ＣＤ８６（Ｂ７−２／Ｂ７０）；ＣＤ９７（ＢＬ−ＫＤＤ／Ｆ１２）；ＣＤ１２５（ＩＬ−５Ｒα）；ＣＤ１２６（ＩＬ−６Ｒα）；ＣＤ１３８（シンデカン−１、ヘパラン硫酸プロテオグリカン）；ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）；ＣＤ２５２（ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー４）；ＣＤ２５３（ＴＲＡＩＬ、ＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１０）；ＣＤ２７９（ＰＤ１）；ＣＤ２８９（ＴＬＲ９、ＴＯＬＬ様レセプター９）；およびＣＤ３１２（ＥＭＲ２）；が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、括弧内に列挙された名称は、代替名を表している。マーカーの例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
濾胞樹状細胞
これまで知られていない抗原を初めて検出するＢ細胞は、はじめは、その抗原に対して最適以下の結合親和性を有するＢ細胞レセプター（ＢＣＲ、すなわち、膜貫通型ドメインを有する抗体）を発現している。しかしながら、Ｂ細胞は、Ｂ細胞が胚中心（ＧＣ）反応に入るとき、Ｂ細胞が産生する抗体の親和性を数桁増加させ得る。代表的には数週間継続するこの事象は、抗原性材料を蓄積し、保有し、そして活性化Ｂ細胞に対して提示するＦＤＣに依存する。Ｂ細胞は、活発に増殖しつつ、その抗体の抗原結合部位をコードするゲノム配列を繰り返し変異させ、そしてクラススイッチ組換えを起こすことにより、主としてＩｇＧアイソタイプの、分泌型の高親和性抗体を形成する。ＧＣ反応はまた、しばしば長年にわたって、保護的な高抗体価を維持する長命の記憶Ｂ細胞および形質細胞の発生を刺激する。皮下注射される際にＦＤＣを標的化するワクチンキャリアおよび長期間にわたってＦＤＣ表面上に保有されるワクチンキャリアは、ワクチン接種に応答してＧＣ反応を押し上げ、そして所望の体液性免疫応答の親和性および長命を改善すると予測される。
いくつかの実施形態において、ＦＤＣ標的化は、ＦＤＣ上ならびにＢ細胞上に発現されるタンパク質である補体レセプターのＣＲ１（すなわち、ＣＤ３５）またはＣＲ２（すなわち、ＣＤ２１）に結合する部分によって達成され得る。部分の例としては、本明細書中の別の箇所に提供されるものが挙げられる。
複数の標的化部分を含むワクチンナノキャリア
ＧＣ反応およびＢ細胞の生存は、ＦＤＣを必要とするだけでなく、活性化されたＣＤ４Ｔ細胞によって提供される補助にも依存する。補助は、ＣＤ４Ｔ細胞が、ＭＨＣクラスＩＩ（ｐＭＨＣ）において同起源のペプチドを提示するＤＣによって初めて刺激されることにより濾胞性ヘルパー（ＴＦＨ）表現型を達成するとき、最も効率的に提供される。その新たに発生したＴＦＨ細胞は、次いで、Ｂ濾胞に向かって遊走し、そして同じｐＭＨＣ複合体とともにそれらを提示するそのＢ細胞に対して補助を提供する。このために、Ｂ細胞は、まず、抗原性材料（例えば、ウイルスまたはウイルス様ワクチン）を獲得し、それを内部移行し、そしてプロセシングし（すなわち、ＭＨＣクラスＩＩに負荷されているペプチドを抽出し）、次いで、そのｐＭＨＣをＴＦＨ細胞に提示する。
したがって、本発明は、最適な体液性免疫を刺激するワクチンが、いくつかの特徴および成分（図１）：（ａ）ＤＣに標的化され、そしてＤＣによって提示される、ＣＤ４Ｔ細胞に対する抗原性材料；（ｂ）ＳＣＳ−Ｍｐｈによって天然型で抗原特異的濾胞Ｂ細胞に提示され得る高密度の表面抗原；（ｃ）ＴＦＨ細胞に対して提示するために、濾胞Ｂ細胞によって獲得され、そしてプロセシングされる能力（本発明は、Ｂ細胞が、ＳＣＳ−Ｍｐｈからの粒状物を容易に獲得し、そして内部移行するという認識を包含する）；（ｄ）ＦＤＣに達し、そしてインタクトな形態で、かつ、長期間にわたってＦＤＣ上に保有される能力；および（ｅ）ＡＰＣを完全に免疫原性にし、そして寛容を回避するか、または克服する、アジュバント活性、を組み合わせ得るという認識を包含する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、少なくとも１つの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの標的化部分のすべてが、互いに同一である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、いくつかの異なるタイプの標的化部分である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、複数の個別の標的化部分を含み、それらのすべてが、互いに同一である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、厳密に１つのタイプの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、厳密に２つの異なるタイプの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多い異なるタイプの標的化部分を含む。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ワクチンナノキャリアを単一の細胞型に送達すること（例えば、ＳＣＳ−Ｍｐｈだけに送達すること）を指示する単一タイプの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ワクチンナノキャリアを複数の細胞型に送達すること（例えば、ＳＣＳ−ＭｐｈとＦＤＣの両方に送達すること）を指示する単一タイプの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの標的化部分を含み、ここで、第１タイプの標的化部分が、ワクチンナノキャリアを１つの細胞型に送達することを指示し、そして第２タイプの標的化部分が、ワクチンナノキャリアを第２の細胞型に送達することを指示する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの標的化部分を含み、ここで、１つ以上のタイプの標的化部分が、ワクチンナノキャリアを１つの細胞型に送達することを指示し、そして１つ以上のタイプの標的化部分が、ワクチンナノキャリアを第２の細胞型に送達することを指示する。単なる１つの例を挙げると、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの標的化部分を含み得、ここで、第１タイプの標的化部分が、ワクチンナノキャリアをＤＣに送達することを指示し、そして第２タイプの標的化部分が、ワクチンナノキャリアをＳＣＳ−Ｍｐｈに送達することを指示する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ワクチンナノキャリアの外面に会合している少なくとも１つの標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、会合は、共有結合性である。いくつかの実施形態において、共有結合性の会合は、１つ以上のリンカーによって媒介される。いくつかの実施形態において、会合は、非共有結合性である。いくつかの実施形態において、非共有結合性の会合は、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせによって媒介される。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、脂質膜（例えば、脂質二重層、脂質単層など）を含み、ここで、少なくとも１つの標的化部分は、脂質膜と会合されている。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの標的化部分は、脂質膜の中に包埋されている。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの標的化部分は、脂質二重層の内腔の中に包埋されている。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの標的化部分は、ワクチンナノキャリアの複数の位置に配置され得る。例えば、第１の標的化部分は、脂質膜の中に包埋され得、そして第２の免疫刺激剤は、ワクチンナノキャリアの外面と会合され得る。別の例を挙げると、第１の標的化部分および第２の標的化部分は、両方とも、ワクチンナノキャリアの外面と会合され得る。
免疫刺激剤
上に記載したように、いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、免疫応答を刺激するのを助け得る１つ以上の免疫刺激剤を輸送し得る。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、Ｂ細胞とＴ細胞の両方を刺激する単一タイプの免疫刺激剤を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つのタイプの免疫刺激剤を含み、ここで、第１タイプの免疫刺激剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして第２タイプの免疫刺激剤が、Ｔ細胞を刺激する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、２つより多いタイプの免疫刺激剤を含み、ここで、１つ以上のタイプの免疫刺激剤が、Ｂ細胞を刺激し、そして１つ以上のタイプの免疫刺激剤が、Ｔ細胞を刺激する。本発明に従って使用され得る免疫刺激剤に関するさらに詳細な説明については、上記の項を参照のこと。
Ｂ細胞活性化についてのアッセイ
いくつかの実施形態において、免疫応答がＢ細胞またはＢ細胞の群において刺激されているか否か（すなわち、Ｂ細胞またはＢ細胞の群が「活性化されて」いるか否か）を判定するために、様々なアッセイが利用され得る。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞における免疫応答の刺激は、抗体価を測定することによって判定され得る。一般に、「抗体価」とは、特定の希釈度において抗体が抗原と結合し、そして抗原を中和する能力のことを指す。例えば、高抗体価とは、高い希釈度においても抗体が抗原と結合し、そして抗原を中和する能力のことを指す。いくつかの実施形態において、Ｂ細胞における免疫応答は、抗体価が、免疫されていない個体または免疫前の血清よりも、少なくとも約５倍高いか、少なくとも約１０倍高いか、少なくとも約２０倍高いか、少なくとも約５０倍高いか、少なくとも約１００倍高いか、少なくとも約５００倍高いか、少なくとも約１０００倍高いか、または約１０００倍超、高い希釈度で陽性であると判断される場合に、刺激されていると言われる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞における免疫応答の刺激は、抗体親和性を測定することによって判定され得る。特に、Ｂ細胞における免疫応答は、抗体が、１０−７Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満またはそれより低い平衡解離定数（Ｋｄ）を有する場合に、刺激されていると言われる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞におけるＴ細胞依存性免疫応答は、クラススイッチ組換えが生じている場合に、刺激されていると言われる。特に、ＩｇＭからＩｇＧアイソタイプもしくはＩｇＡまたはこれらのアイソタイプの混合物へのスイッチが、Ｂ細胞におけるＴ細胞依存性免疫応答を示唆する。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞における免疫応答は、抗原特異的抗体の親和性成熟を測定することによって判定される。親和性成熟は、胚中心反応中に生じ、それにより、活性化されたＢ細胞が、抗原結合領域をコードする免疫グロブリン遺伝子の領域を繰り返し変異させる。抗原に対してより高い親和性を有する変異した抗体を産生するＢ細胞は、生存および増殖が優先的に可能になる。したがって、ＧＣにおいてＢ細胞によって産生される抗体は、経時的に徐々に高くなる親和性を獲得する。いくつかの実施形態において、このプロセスの出力（ｒｅａｄｏｕｔ）は、高抗体価の存在（例えば、高希釈度でも、抗原に結合し、そして抗原を中和する高親和性のＩｇＧ抗体）である。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞における免疫応答は、長期間にわたって大量の高親和性抗体を産生し得る記憶Ｂ細胞および／または長命の形質細胞が形成されている場合に、刺激されていると言われる。いくつかの実施形態において、長期間にわたって大量の高親和性抗体を産生し得る記憶Ｂ細胞および／または長命の形質細胞の存在について試験するために、抗体価が、ワクチン接種の後の様々な時間間隔の後（例えば、２週間後、１ヶ月後、２ヶ月後、６ヶ月後、１年後、２年後、５年後、１０年後、１５年後、２０年後、２５年後またはそれを超えて後）に測定される。いくつかの実施形態において、長期間にわたって大量の高親和性抗体を産生し得る記憶Ｂ細胞および／または長命の形質細胞は、体液性応答を測定することによって（例えば、体液性応答が、初回感作中よりも、後の追加免疫のワクチン接種の後のほうが、著しく迅速であり、そしてより高い力価をもたらす場合に）、存在すると言われる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞における免疫応答は、活発な胚中心反応が生じている場合に、刺激されていると言われる。いくつかの実施形態において、活発な胚中心反応は、組織学実験を行うことによって視覚的に評価され得る。いくつかの実施形態において、活発な胚中心反応は、抗原含有リンパ組織（例えば、ワクチン排出リンパ節、脾臓など）の免疫組織化学を行うことによってアッセイされ得る。いくつかの実施形態において、免疫組織化学に続いて、フローサイトメトリーが行われる。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞における免疫応答の刺激は、抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ）を同定することによって判定され得る。ある特定の実施形態において、Ｂ細胞によるＩｇＧアイソタイプ抗体の産生は、Ｂ細胞における望ましい免疫応答である。
いくつかの実施形態において、Ｂ細胞における免疫応答は、中和アッセイにおいて抗体の機能を解析することによって判定される。特に、微生物（例えば、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、寄生生物など）が血清の非存在下のインビトロにおいて感受性の細胞株に感染する能力が、その細胞が生育している培地に様々な希釈度の免疫血清および非免疫血清が加えられるときの条件と比較される。ある特定の実施形態において、微生物の感染が、約１：５、約１：１０、約１：５０、約１：１００、約１：５００、約１：１０００、約１：５０００、約１：１０，０００またはそれ以下の希釈度において中和される場合に、Ｂ細胞における免疫応答は、刺激されていると言われる。
いくつかの実施形態において、動物モデルにおけるワクチンの効力は、免疫されたマウスおよび免疫されていないマウスの群を、代表的には致死性の微生物の投与量で感染させることによって（例えば、ワクチン接種の３週間以上後に）判定され得る。両方の群の生存の大きさおよび持続時間をモニターし、そして代表的には、カプラン・マイヤー曲線を図示する。生存の増加が、Ｂ細胞応答に起因するか否かを評価するために、免疫マウス由来の血清を「受動ワクチン」として移入することにより、致死性の感染からの非免疫マウスの保護が評価され得る。
当業者は、上に記載したアッセイが、Ｂ細胞の活性化が生じているか否かを判定するために利用され得る単なる例示的な方法であることを認識するだろう。Ｂ細胞の活性化が生じているか否かを判定するために使用され得る当業者に公知の任意のアッセイは、本発明の範囲内に包含される。本明細書中に記載されるアッセイならびにＢ細胞の活性化が生じているか否かを判定するために使用され得るさらなるアッセイは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＹ，２００７；本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
ワクチンナノキャリア
一般に、ワクチンナノキャリアは、例えば、Ｂ細胞とＴ細胞の両方において免疫応答を刺激することができる少なくとも１つの免疫調節剤を含む実体である。任意のワクチンナノキャリアが、本発明に従って使用され得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、生分解性かつ生体適合性である。一般に、生体適合性物質は、細胞に対して毒性でない。いくつかの実施形態において、ある物質が細胞に加えられることにより、ある特定の細胞死の閾値より低い細胞死（例えば、５０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満またはそれより低い細胞死）をもたらす場合に、その物質は、生体適合性であると考えられる。いくつかの実施形態において、ある物質が細胞に加えることにより、有害作用が誘導されない場合に、その物質は、生体適合性であると考えられる。一般に、生分解性物質は、治療的に関連性のある期間（例えば、数週間、数ヶ月、または数年）にわたって生理学的条件下において分解を起こす物質である。いくつかの実施形態において、生分解性物質は、細胞の機構によって分解され得る物質である。いくつかの実施形態において、生分解性物質は、化学プロセスによって分解され得る物質である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、生体適合性かつ生分解性の物質である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、生体適合性であるが、生分解性でない物質である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、生分解性であるが、生体適合性でない物質である。
一般に、本発明に従うナノキャリアは、１００ミクロン（μｍ）未満の最大の寸法（例えば、直径）を有する任意の実体である。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、１０μｍ未満の最大の寸法を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、１０００ナノメートル（ｎｍ）未満の最大の寸法を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、９００ｎｍ、８００ｎｍ、７００ｎｍ、６００ｎｍ、５００ｎｍ、４００ｎｍ、３００ｎｍ、２００ｎｍまたは１００ｎｍ未満の最大の寸法を有する。代表的には、発明性のあるナノキャリアは、３００ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、２５０ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、２００ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、１５０ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、１００ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。例えば、５０ｎｍ以下の最大の寸法を有する、より小さいナノキャリアが、本発明のいくつかの実施形態において使用される。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、２５ｎｍ〜２００ｎｍの範囲の最大の寸法を有する。いくつかの実施形態において、発明性のあるナノキャリアは、２０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲の最大の寸法を有する。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、１０００ｎｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ７５０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ５００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ４５０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ４００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ３５０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ３００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ２７５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ２５０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ２２５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ２００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ１７５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ１５０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ１２５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ１００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ７５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ５０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、およそ２５ｎｍの直径を有する。
ある特定の実施形態において、ナノキャリアは、腎排泄の限界サイズよりも大きい（例えば、６ｎｍより大きい直径を有するナノキャリア）。ある特定の実施形態において、ナノキャリアは、肝臓による血流からのナノキャリアのクリアランスを回避するのに十分小さい（例えば、１０００ｎｍ未満の直径を有するナノキャリア）。一般に、ナノキャリアの物理化学的な特徴は、腎排泄および肝臓クリアランスを減少させることによってナノキャリアが血漿中をより長く循環することを可能にするべきである。
サイズ、形状および／または組成に関して比較的均一であり、各ナノキャリアが同様の特性を有する、ナノキャリアの集団を使用することが望ましいことが多い。例えば、そのナノキャリアの少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％が、平均直径または最大の寸法の５％、１０％または２０％以内に入る直径または最大の寸法を有し得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアの集団は、サイズ、形状および／または組成に関して不均一であり得る。
種々の異なるナノキャリアが、本発明に従って使用され得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、球または回転楕円体である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、球または回転楕円体である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、平らまたはプレート形である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、立方体またはさいころ形である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、卵形または長円形である。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、円柱、円錐または角錐である。
ナノキャリアは、固体または中空であり得、そして１つ以上の層を含み得る。いくつかの実施形態において、各層は、他の層に対して独特の組成および独特の特性を有する。単なる１つの例を挙げると、ナノキャリアは、コア／シェル構造を有し得、ここで、そのコアは、１つの層（例えば、ポリマーのコア）であり、そしてシェルは、第２の層（例えば、脂質二重層または単層）である。ナノキャリアは、複数の異なる層を含み得る。いくつかの実施形態において、１つの層は、実質的に架橋され得、第２の層は、実質的に架橋されないなど。いくつかの実施形態において、様々な層の１つ、いくつかまたはすべてが、１つ以上の免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはそれらの組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態において、１つの層は、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤を含み、第２の層は、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤を含まないなど。いくつかの実施形態において、各個別の層は、異なる免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはそれらの組み合わせを含む。
脂質ワクチンナノキャリア
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、必要に応じて１つ以上の脂質を含み得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、リポソームを含み得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、脂質二重層を含み得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、脂質単層を含み得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ミセルを含み得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）によって取り囲まれているポリマーマトリックスを含むコアを含み得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）によって取り囲まれている非ポリマーコア（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子など）を含み得る。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、そのナノキャリアの内部および外部が、親水性であり、そして脂質二重層の内腔が、疎水性であるように、方向づけられた脂質二重層を含み得る。脂質二重層を含むワクチンナノキャリアの例は、実施例２に記載されており、図３〜８に示されている。いくつかの実施形態において、疎水性の免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、脂質二重層の内腔と会合され得る（例えば、その中に包埋され得る）。いくつかの実施形態において、親水性の免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ナノキャリアの内部および／または外部と会合され得る（例えば、それらと共有結合的または非共有結合的に会合され得る、それらの中に被包され得るなど）。いくつかの実施形態において、親水性の免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、脂質二重層の内面および／または外面と会合され得る（例えば、それらと共有結合的または非共有結合的に会合され得る、それらの中に被包され得るなど）。いくつかの実施形態において、脂質二重層の内部の親水性の表面が、両親媒性の実体と会合される。いくつかの実施形態において、両親媒性の実体は、その両親媒性の実体の親水性の端が、脂質二重層の内面と会合され、そして両親媒性の実体の疎水性の端が、ナノキャリアの内部に向かうように方向づけられ、それにより、ナノキャリア内部が疎水性環境になるよう方向づけられる。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ナノキャリアの内部が疎水性であり、そしてナノキャリアの外部が親水性であるように、方向づけられた脂質単層を含み得る。脂質単層を含むワクチンナノキャリアの例は、実施例２に記載されており、そして図９および１０に示されている。いくつかの実施形態において、疎水性の免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ナノキャリアの内部および／または脂質単層の内面と会合され得る（例えば、それらと共有結合的または非共有結合的に会合され得る、それらの中に被包され得るなど）。いくつかの実施形態において、親水性の免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ナノキャリアの外部および／または脂質単層の外面と、会合され得る（例えば、それらと共有結合的または非共有結合的に会合され得る、それらの中に被包され得るなど）。いくつかの実施形態において、脂質二重層の内部の疎水性表面は、両親媒性の実体と会合される。いくつかの実施形態において、両親媒性の実体は、その両親媒性の実体の疎水性の端が、脂質二重層の内面と会合され、そして両親媒性の実体の親水性の端が、ナノキャリアの内側に向かうように方向づけられており、それによって、そのナノキャリアの内部が親水性環境になるよう方向づけられる。
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、そのナノキャリアの外面と会合されている１つ以上のナノ粒子を含み得る。ナノキャリアの外面と会合されているナノ粒子を含むワクチンナノキャリアの例は、実施例２に記載され、図４、６および８に示されている。
ナノキャリアにおける脂質のパーセントは、０％〜９９重量％、１０％〜９９重量％、２５％〜９９重量％、５０％〜９９重量％または７５％〜９９重量％の範囲であり得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアにおける脂質のパーセントは、０％〜７５重量％、０％〜５０重量％、０％〜２５重量％または０％〜１０重量％の範囲であり得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアにおける脂質のパーセントは、およそ１重量％、およそ２重量％、およそ３重量％、およそ４重量％、およそ５重量％、およそ１０重量％、およそ１５重量％、およそ２０重量％、およそ２５重量％またはおよそ３０重量％であり得る。
いくつかの実施形態において、脂質は、油である。一般に、当該分野で公知の任意の油が、ナノキャリアに含められ得る。いくつかの実施形態において、油は、１つ以上の脂肪酸基またはその塩を含み得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、消化可能な長鎖（例えば、Ｃ８−Ｃ５０）の置換または非置換炭化水素を含み得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ１０−Ｃ２０脂肪酸またはその塩であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ１５−Ｃ２０脂肪酸またはその塩であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、Ｃ１５−Ｃ２５脂肪酸またはその塩であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、不飽和であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、一価不飽和であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、多価不飽和であり得る。いくつかの実施形態において、不飽和脂肪酸基の二重結合は、ｃｉｓ立体配座であり得る。いくつかの実施形態において、不飽和脂肪酸の二重結合は、ｔｒａｎｓ立体配座であり得る。
いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸またはリグノセリン酸のうちの１つ以上であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、アルファ−リノール（ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ）酸、ガンマ−リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはエルカ酸のうちの１つ以上であり得る。
いくつかの実施形態において、油は、液体トリグリセリドである。
本発明とともに使用するための適当な油としては、アーモンドオイル、杏仁油、アボカド油、ババス油、ベルガモット油、ブラックカラント（ｂｌａｃｋ ｃｕｒｒｅｎｔ）シードオイル、ルリヂサ油、カデ油、カモミールオイル、カノーラ油、カラウェー油、カルナバオイル、ヒマシ油、桂皮油、カカオバター油、ヤシ油、タラ肝油、コーヒーオイル、トウモロコシ油、綿実油、エミューオイル、ユーカリ油、月見草油、魚油、亜麻仁油、ゲラニオール油、ヒョウタン（ｇｏｕｒｄ）油、ブドウ種油、ヘーゼルナッツオイル、ヒソップ油、ホホバ油、ククイナッツ油、ラバンジン油、ラベンダー油、レモン油、リトシーキュービバ（ｌｉｔｓｅａ ｃｕｂｅｂａ）油、マカダミアナッツ（ｍａｃａｄｅｍｉａ ｎｕｔ）油、ゼニアオイ（ｍａｌｌｏｗ）油、マンゴー種子油、メドウフォーム種子油、ミンク油、ナツメグ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラフィー油、パーム油、パーム核油、桃仁油、落花生油、ケシ油、パンプキンシードオイル、菜種油、米糠油、ローズマリー油、ベニバナ油、ビャクダン油、サザンカ（ｓａｓｑｕａｎａ）油、セイボリー（ｓａｖｏｕｒｙ）油、シーバックソーンオイル、ゴマ油、シアバター油、シリコーン油、ダイズ油、ヒマワリ油、ティーツリー油、アザミ油、ツバキ油、ベチベル油、クルミ油およびコムギの胚種油ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。本発明とともに使用するための適当な油としては、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコーン、セバシン酸ジエチル、ジメチコーン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、脂質は、ホルモン（例えば、エストロゲン、テストステロン）、ステロイド（例えば、コレステロール、胆汁酸）、ビタミン（例えば、ビタミンＥ）、リン脂質（例えば、ホスファチジルコリン）、スフィンゴ脂質（例えば、セラミド）またはリポタンパク質（例えば、アポリポタンパク質）である。
ポリマーマトリックスを含むナノキャリア
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、１つ以上のポリマーを含み得る。いくつかの実施形態において、ポリマーマトリックスは、被覆層（例えば、リポソーム、脂質単層、ミセルなど）によって取り囲まれ得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ポリマーマトリックスと会合され得る。そのような実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、効率的にナノキャリアの中に被包されている。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ポリマーマトリックスと共有結合的に会合され得る。いくつかの実施形態において、共有結合性の会合は、リンカーによって媒介される。いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ポリマーマトリックスと非共有結合的に会合され得る。例えば、いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、ポリマーマトリックスの中に被包され得、それによって取り囲まれ得、そして／またはそれ全体に分散され得る。あるいはまたはさらに、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、疎水性相互作用、電荷相互作用、ファンデルワールス力などによってポリマーマトリックスと会合され得る。
多岐にわたるポリマーおよびそれらからポリマーマトリックスを形成するための方法が、薬物送達の分野において公知である。一般に、ポリマーマトリックスは、１つ以上のポリマーを含む。任意のポリマーが、本発明に従って使用され得る。ポリマーは、天然のポリマーであってもよいし、または非天然の（合成の）ポリマーであってもよい。ポリマーは、ホモポリマーであってもよいし、２つ以上のモノマーを含むコポリマーであってもよい。配列に関して、コポリマーは、ランダムであり得るか、ブロックであり得るか、またはランダム配列とブロック配列との組み合わせを含み得る。代表的には、本発明に従うポリマーは、有機ポリマーである。
ポリマーの例としては、ポリエチレン、ポリカーボネート（例えば、ポリ（１，３−ジオキサン−２オン））、ポリ無水物（例えば、ポリ（セバシン酸無水物））、ポリヒドロキシ酸（例えば、ポリ（β−ヒドロキシアルカノエート））、ポリプロピルフメレート、ポリカプロラクトン、ポリアミド（例えば、ポリカプロラクタム）、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコリド）、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリ尿素、ポリスチレンおよびポリアミンが挙げられる。
いくつかの実施形態において、本発明に従うポリマーは、２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１７７．２６００のもとに米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって、ヒトにおいて使用するために承認されているポリマーを包含し、それらとしては、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリバレロラクトン、ポリ（１，３−ジオキサン−２オン））；ポリ無水物（例えば、ポリ（セバシン酸無水物））；ポリエーテル（例えば、ポリエチレングリコール）；ポリウレタン；ポリメタクリレート；ポリアクリレート；およびポリシアノアクリレートが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、親水性であり得る。例えば、ポリマーは、陰イオン基（例えば、リン酸塩基、硫酸塩基、カルボキシレート基）；陽イオン基（例えば、第４級アミン基）；または極性基（例えば、ヒドロキシル基、チオール基、アミン基）を含み得る。いくつかの実施形態において、親水性ポリマーマトリックスを含むナノキャリアは、そのナノキャリア内に親水性環境をもたらす。いくつかの実施形態において、親水性の免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、親水性ポリマーのマトリックスと会合され得る。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、疎水性であり得る。いくつかの実施形態において、疎水性ポリマーマトリックスを含むナノキャリアは、そのナノキャリア内に疎水性環境をもたらす。いくつかの実施形態において、疎水性の免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、疎水性ポリマーのマトリックスと会合され得る。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、１つ以上の部分および／または官能基によって改変され得る。任意の部分または官能基が、本発明に従って使用され得る。いくつかの実施形態において、ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、炭水化物、および／または多糖由来非環式ポリアセタール（Ｐａｐｉｓｏｖ，２００１，ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ，７８６：３０１；本明細書中で参考として援用される）によって改変され得る。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、脂質または脂肪酸基によって改変され得、それらの特性は、下記でさらに詳細に説明される。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸またはリグノセリン酸のうちの１つ以上であり得る。いくつかの実施形態において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、アルファ−リノール酸、ガンマ−リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはエルカ酸のうちの１つ以上であり得る。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、乳酸単位およびグリコール酸単位を含むコポリマー（例えば、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）およびポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、本明細書中で集合的に「ＰＬＧＡ」と称される）；およびグリコール酸単位を含むホモポリマー（本明細書中で「ＰＧＡ」と称される）および乳酸単位を含むホモポリマー（例えば、ポリ−Ｌ−乳酸、ポリ−Ｄ−乳酸、ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸、ポリ−Ｌ−ラクチド、ポリ−Ｄ−ラクチドおよびポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチド、本明細書中で集合的に「ＰＬＡ」と称される）を含むポリエステルであり得る。いくつかの実施形態において、例示的なポリエステルとしては、例えば、ポリヒドロキシ酸；ＰＥＧコポリマーおよびラクチドとグリコリドとのコポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧコポリマー、ＰＧＡ−ＰＥＧコポリマー、ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマーおよびそれらの誘導体）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ポリエステルには、例えば、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、ポリ（オルトエステル）−ＰＥＧコポリマー、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（カプロラクトン）−ＰＥＧコポリマー、ポリリジン、ポリリジン−ＰＥＧコポリマー、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（エチレンイミン）−ＰＥＧコポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−コ−Ｌ−リジン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］およびそれらの誘導体が包含される。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、ＰＬＧＡであり得る。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸との生体適合性かつ生分解性のコポリマーであり、様々な形態のＰＬＧＡが、乳酸：グリコール酸の比によって特徴付けられている。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸またはＤ，Ｌ−乳酸であり得る。ＰＬＧＡの分解速度は、乳酸：グリコール酸比を変更することによって調整され得る。いくつかの実施形態において、本発明に従って使用されるＰＬＧＡは、およそ８５：１５、およそ７５：２５、およそ６０：４０、およそ５０：５０、およそ４０：６０、およそ２５：７５またはおよそ１５：８５という乳酸：グリコール酸比によって特徴づけられる。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、１つ以上のアクリルポリマーであり得る。ある特定の実施形態において、アクリルポリマーとしては、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸のコポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（メタクリル酸無水物）、メチルメタクリレート、ポリメタクリレート、ポリ（メチルメタクリレート）コポリマー、ポリアクリルアミド、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、グリシジルメタクリレートコポリマー、ポリシアノアクリレートおよび前述のポリマーの１つ以上を含む組み合わせが挙げられる。上記アクリルポリマーは、第４級アンモニウム基の含有量が少ない、アクリル酸エステルおよびメタクリル酸エステルの完全に重合されたコポリマーを含み得る。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、カチオン性ポリマーであり得る。一般に、カチオン性ポリマーは、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの誘導体）の負に帯電した鎖を縮合することができ、そして／または保護することができる。アミン含有ポリマー（例えば、ポリ（リジン）（Ｚａｕｎｅｒら、１９９８，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．，３０：９７；およびＫａｂａｎｏｖら、１９９５，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，６：７；これら両方ともが本明細書中で参考として援用される）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ；Ｂｏｕｓｓｉｆら、１９９５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１９９５，９２：７２９７；本明細書中で参考として援用される）およびポリ（アミドアミン）デンドリマー（Ｋｕｋｏｗｓｋａ−Ｌａｔａｌｌｏら、１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９３：４８９７；Ｔａｎｇら、１９９６，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，７：７０３；およびＨａｅｎｓｌｅｒら、１９９３，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，４：３７２；これらのすべてが本明細書中で参考として援用される）は、生理学的ｐＨにおいて正に帯電し、核酸とイオン対を形成し、そして種々の細胞株においてトランスフェクションを媒介する。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、カチオン性側鎖を有する分解性ポリエステルであり得る（Ｐｕｔｎａｍら、１９９９，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２：３６５８；Ｂａｒｒｅｒａら、１９９３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１１５：１１０１０；Ｋｗｏｎら、１９８９，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２２：３２５０；Ｌｉｍら、１９９９，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１２１：５６３３；およびＺｈｏｕら、１９９０，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２３：３３９９；これらのすべてが本明細書中で参考として援用される）。これらのポリエステルの例としては、ポリ（Ｌ−ラクチド−コ−Ｌ−リジン）（Ｂａｒｒｅｒａら、１９９３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１１５：１１０１０；本明細書中で参考として援用される）、ポリ（セリンエステル）（Ｚｈｏｕら、１９９０，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２３：３３９９；本明細書中で参考として援用される）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）（Ｐｕｔｎａｍら、１９９９，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２：３６５８；およびＬｉｍら、１９９９，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１２１：５６３３；これらの両方ともが本明細書中で参考として援用される）およびポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）（Ｐｕｔｎａｍら、１９９９，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２：３６５８；およびＬｉｍら、１９９９，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１２１：５６３３；これらの両方ともが本明細書中で参考として援用される）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、本発明に従うポリマーは、炭水化物であり得、それらの特性は、下記でさらに詳細に説明される。いくつかの実施形態において、炭水化物は、当該分野で公知のように、グリコシド結合によって接続された単糖（またはその誘導体）を含む多糖であり得る。いくつかの実施形態において、炭水化物は、プルラン、セルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシセルロース、メチルセルロース、デキストラン、シクロデキストラン、グリコーゲン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、カラギナン（ｃａｒａｇｅｅｎａｎ）、グリコン、アミロース、キトサン、Ｎ，Ｏ−カルボキシルメチルキトサン、アルギンおよびアルギン酸、デンプン、キチン、ヘパリン、コンニャク、グルコマンナン（ｇｌｕｃｏｍｍａｎｎａｎ）、プスツラン、ヘパリン、ヒアルロン酸、カードラン、ならびにキサンタンのうちの１つ以上であり得る。
いくつかの実施形態において、本発明に従うポリマーは、タンパク質またはペプチドであり得、それらの特性は、下記でさらに詳細に説明される。本発明に従って使用され得る例示的なタンパク質としては、アルブミン、コラーゲン、ポリ（アミノ酸）（例えば、ポリリジン）、抗体などが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、本発明に従うポリマーは、核酸（すなわち、ポリヌクレオチド）であり得、それらの特性は、下記でさらに詳細に説明される。本発明に従って使用され得る例示的なポリヌクレオチドとしては、ＤＮＡ、ＲＮＡなどが挙げられるが、これらに限定されない。
これらのポリマーおよび他のポリマーの特性ならびにそれらを調製するための方法は、当該分野で周知である（例えば、米国特許第６，１２３，７２７号；同第５，８０４，１７８号；同第５，７７０，４１７号；同第５，７３６，３７２号；同第５，７１６，４０４号；同第６，０９５，１４８号；同第５，８３７，７５２号；同第５，９０２，５９９号；同第５，６９６，１７５号；同第５，５１４，３７８号；同第５，５１２，６００号；同第５，３９９，６６５号；同第５，０１９，３７９号；同第５，０１０，１６７号；同第４，８０６，６２１号；同第４，６３８，０４５号；および同第４，９４６，９２９号；Ｗａｎｇら、２００１，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１２３：９４８０；Ｌｉｍら、２００１，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１２３：２４６０；Ｌａｎｇｅｒ，２０００，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，３３：９４；Ｌａｎｇｅｒ，１９９９，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，６２：７；およびＵｈｒｉｃｈら、１９９９，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，９９：３１８１；を参照のこと。これらのすべてが本明細書中で参考として援用される）。より一般には、適当なポリマーを合成するための種々の方法が、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ａｍｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｍｍｏｎｉｕｍ Ｓａｌｔｓ，Ｇｏｅｔｈａｌｓ編，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，１９８０；Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，Ｏｄｉａｎによる，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００４；Ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｌｌｃｏｃｋらによる、Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，１９８１；Ｄｅｍｉｎｇら、１９９７，Ｎａｔｕｒｅ，３９０：３８６；ならびに米国特許第６，５０６，５７７号、同第６，６３２，９２２号、同第６，６８６，４４６号および同第６，８１８，７３２号に記載されており；これらのすべてが本明細書中で参考として援用される。
いくつかの実施形態において、ポリマーは、線状ポリマーまたは分枝ポリマーであり得る。いくつかの実施形態において、ポリマーは、デンドリマーであり得る。いくつかの実施形態において、ポリマーは、互いに実質的に架橋され得る。いくつかの実施形態において、ポリマーは、実質的に架橋され得ない。いくつかの実施形態において、ポリマーは、架橋工程を受けることなく本発明に従って使用され得る。
発明性のあるナノキャリアが、前述のポリマーおよび他のポリマーのいずれかのブロックコポリマー、グラフトコポリマー、混成物、混合物および／または付加物を含み得ることがさらに理解されるべきである。
当業者は、本明細書中に列挙されるポリマーが、例示的であって包括的でない、本発明に従って有用であり得るポリマーのリストを代表していることを認識するだろう。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、逆ミセルの中に包埋されている免疫調節剤を含む。単なる１つの例を挙げると、リポソームナノキャリアは、リポソーム膜の中に包埋されている疎水性の免疫調節剤、およびリポソーマルナノキャリアの内部に見られる逆ミセルで包埋されている親水性の免疫調節剤を含み得る。
非ポリマーナノキャリア
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、ポリマー成分を含まないこともある。いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子などを含み得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、そのような非ポリマーナノキャリアの表面と会合され得る。いくつかの実施形態において、非ポリマーナノキャリアは、非ポリマー成分の凝集物（例えば、金属原子（例えば、金原子）の凝集物）である。いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤は、非ポリマー成分の凝集物の表面と会合され得、その中に被包され得、それによって取り囲まれ得、そして／またはそれ全体に分散され得る。
本発明のある特定の実施形態において、非ポリマーナノキャリアは、勾配（ｇｒａｄｉｅｎｔ）合金または均一な合金を含む。本発明のある特定の実施形態において、ナノキャリアは、光学的および／または磁気的に検出可能な特性を有する粒子を含む。
両親媒性の実体を含むナノキャリア
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、必要に応じて１つ以上の両親媒性の実体を含み得る。いくつかの実施形態において、両親媒性の実体は、安定性が高いか、均一性が改善されているか、または粘度が高い、ナノキャリアの生成を促進し得る。いくつかの実施形態において、両親媒性の実体は、脂質膜（例えば、脂質二重層、脂質単層など）の内面と会合され得る。例えば、脂質膜の内面が、親水性である場合、脂質ナノキャリアの中に被包されている空間は、親水性である。しかしながら、両親媒性の実体の親水性の端が、親水性脂質膜の内面と会合され、そして両親媒性の実体の疎水性の端が、ナノキャリアの内部と会合されるように、その両親媒性の実体が、親水性脂質膜の内面と会合されている場合、そのナノキャリアの中に被包されている空間は、疎水性である。
ナノキャリアにおける両親媒性の実体のパーセントは、０％〜９９重量％、１０％〜９９重量％、２５％〜９９重量％、５０％〜９９重量％または７５％〜９９重量％の範囲であり得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアにおける両親媒性の実体のパーセントは、０％〜７５重量％、０％〜５０重量％、０％〜２５重量％または０％〜１０重量％の範囲であり得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアにおける両親媒性の実体のパーセントは、およそ１重量％、およそ２重量％、およそ３重量％、およそ４重量％、およそ５重量％、およそ１０重量％、およそ１５重量％、およそ２０重量％、およそ２５重量％またはおよそ３０重量％であり得る。
当該分野で公知の任意の両親媒性の実体は、本発明に従ってナノキャリアを作製する際に、使用するのに適している。そのような両親媒性の実体としては、ホスホグリセリド；ホスファチジルコリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）；ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；ジオレイルオキシプロピルトリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；ジオレオイルホスファチジルコリン；コレステロール；コレステロールエステル；ジアシルグリセロール；ジアシルグリセロールスクシネート；ジホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；ヘキサンデカノール；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの脂肪アルコール；ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル；パルミチン酸またはオレイン酸などの表面活性脂肪酸；脂肪酸；脂肪酸モノグリセリド；脂肪酸ジグリセリド；脂肪酸アミド；トリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ（登録商標）８５）グリココレート；ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ（登録商標）２０）；ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）；ポリソルベート６０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０）；ポリソルベート６５（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６５）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）；ポリソルベート８５（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８５）；モノステアリン酸ポリオキシエチレン；スルファクチン；ポロキソマー（ｐｏｌｏｘｏｍｅｒ）；トリオレイン酸ソルビタンなどのソルビタン脂肪酸エステル；レシチン；リゾレシチン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴミエリン；ホスファチジルエタノールアミン（ケファリン）；カルジオリピン；ホスファチジン酸；セレブロシド；ジセチルホスフェート；ジパルミトイルホスファチジルグリセロール；ステアリルアミン；ドデシルアミン；ヘキサデシル−アミン；パルミチン酸アセチル；リシノール酸グリセロール；ステアリン酸ヘキサデシル（ｈｅｘａｄｅｃｙｌ ｓｔｅｒａｔｅ）；ミリスチン酸イソプロピル；チロキサポール；ポリ（エチレングリコール）５０００−ホスファチジルエタノールアミン；ポリ（エチレングリコール）４００−モノステアレート；リン脂質；高い界面活性物質特性を有する合成および／または天然の洗浄剤；デオキシコレート；シクロデキストリン；カオトロピック塩；イオン対形成剤；およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。両親媒性の実体成分は、様々な両親媒性の実体の混合物であり得る。これらの両親媒性の実体は、天然源から抽出され、そして精製され得るか、または研究室内で合成的に調製され得る。ある特定の実施形態において、両親媒性の実体は、市販されているものである。
当業者は、これが、例示的であって包括的でない、界面活性物質活性を有する物質のリストであることを認識するだろう。任意の両親媒性の実体は、本発明に従って使用されるナノキャリアの生成に使用され得る。
炭水化物を含むワクチンナノキャリア
いくつかの実施形態において、ナノキャリアは、必要に応じて１つ以上の炭水化物を含み得る。ナノキャリアにおける炭水化物のパーセントは、０％〜９９重量％、１０％〜９９重量％、２５％〜９９重量％、５０％〜９９重量％または７５％〜９９重量％の範囲であり得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアにおける炭水化物のパーセントは、０％〜７５重量％、０％〜５０重量％、０％〜２５重量％または０％〜１０重量％の範囲であり得る。いくつかの実施形態において、ナノキャリアにおける炭水化物のパーセントは、およそ１重量％、およそ２重量％、およそ３重量％、およそ４重量％、およそ５重量％、およそ１０重量％、およそ１５重量％、およそ２０重量％、およそ２５重量％またはおよそ３０重量％であり得る。
炭水化物は、天然であってもよいし、合成であってもよい。炭水化物は、誘導体化された天然の炭水化物であり得る。ある特定の実施形態において、炭水化物は、単糖であり、それらとしては、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、セロビオース（ｃｅｌｌｂｉｏｓｅ）、マンノース、キシロース、アラビノース、グルクロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ガラクツロン酸（ｇａｌａｃｔｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラクトサミン（ｇａｌａｔｏｓａｍｉｎｅ）およびノイラミン酸（ｎｅｕｒａｍｉｃ ａｃｉｄ）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、炭水化物は、二糖であり、それらとしては、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロースおよびセロビオースが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、炭水化物は、多糖であり、それらとしては、プルラン、セルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシセルロース（ＨＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、デキストラン、シクロデキストラン、グリコーゲン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、カラギナン（ｃａｒａｇｅｅｎａｎ）、グリコン、アミロース、キトサン、Ｎ，Ｏ−カルボキシルメチルキトサン、アルギンおよびアルギン酸、デンプン、キチン、ヘパリン、コンニャク、グルコマンナン（ｇｌｕｃｏｍｍａｎｎａｎ）、プスツラン、ヘパリン、ヒアルロン酸、カードランおよびキサンタンが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、炭水化物は、糖アルコールであり、それらとしては、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトールおよびラクチトールが挙げられるが、これらに限定されない。
ワクチンナノキャリアと会合される粒子
いくつかの実施形態において、本発明に従うワクチンナノキャリアは、１つ以上の粒子を含み得る。いくつかの実施形態において、１つ以上の粒子は、ワクチンナノキャリアと会合される。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、そのナノキャリアの外面と会合されている１つ以上の粒子を含む。いくつかの実施形態において、粒子は、共有結合を介してワクチンナノキャリアと会合され得る。いくつかの実施形態において、粒子は、非共有結合性の相互作用（例えば、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせ）を介してワクチンナノキャリアと会合され得る。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、そのナノキャリアの中に被包されている１つ以上の粒子を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ナノキャリアの表面の中に包埋されている（例えば、脂質二重層の中に包埋されている）１つ以上の粒子を含む。いくつかの実施形態において、ナノキャリアと会合されている粒子は、調整可能な膜の剛性および制御可能なリポソーム安定性を可能にさせる。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアに会合される粒子は、上に記載されたようなポリマーマトリックスを含み得る。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアと会合される粒子は、上に記載されたような非ポリマー成分（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子など）を含み得る。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアと会合される粒子は、負電荷を有し得る。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアと会合される粒子は、正電荷を有し得る。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアと会合される粒子は、電気的に中性であり得る。
いくつかの実施形態において、粒子は、その表面上に１つ以上のアミン部分を有する。そのアミン部分は、例えば、脂肪族アミン部分であり得る。ある特定の実施形態において、アミンは、第１級、第２級、第３級または第４級アミンである。ある特定の実施形態において、粒子は、アミン含有ポリマーを含む。ある特定の実施形態において、粒子は、アミン含有脂質を含む。ある特定の実施形態において、粒子は、中性（ｎｅｕｔｒｏｌ）ｐＨにおいて正に帯電したタンパク質またはペプチドを含む。いくつかの実施形態において、表面上に１つ以上のアミン部分を有する粒子は、中性ｐＨにおいて正味の正電荷を有する。中性（ｎｅｕｔｒｏｌ）ｐＨにおいて正電荷を提供する他の化学部分もまた、発明性のある粒子において使用され得る。
ゼータ電位は、粒子の表面電位の大きさである。いくつかの実施形態において、粒子は、正のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、−５０ｍＶ〜＋５０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、−２５ｍＶ〜＋２５ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、−１０ｍＶ〜＋１０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、−５ｍＶ〜＋５ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、０ｍＶ〜＋５０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、０ｍＶ〜＋２５ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、０ｍＶ〜＋１０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、０ｍＶ〜＋５ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、−５０ｍＶ〜０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、−２５ｍＶ〜０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、−１０ｍＶ〜０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、−５ｍＶ〜０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、実質的に中性のゼータ電位（すなわち、およそ０ｍＶ）を有する。
通常、ワクチンナノキャリアと会合される粒子は、１０ミクロン（μｍ）未満の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、１０００ナノメートル（ｎｍ）未満の最大の寸法を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、９００ｎｍ、８００ｎｍ、７００ｎｍ、６００ｎｍ、５００ｎｍ、４００ｎｍ、３００ｎｍ、２００ｎｍまたは１００ｎｍ未満の最大の寸法を有する。代表的には、粒子は、３００ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、２００ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、１００ｎｍ以下の最大の寸法（例えば、直径）を有する。より小さい粒子、例えば、５０ｎｍ以下の最大の寸法を有する粒子が、本発明のいくつかの実施形態において使用される。いくつかの実施形態において、粒子は、２５ｎｍ〜２００ｎｍの範囲の最大の寸法を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、１ｎｍ〜１００ｎｍの範囲の最大の寸法を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、１ｎｍ〜３０ｎｍの範囲の最大の寸法を有する。
いくつかの実施形態において、粒子は、およそ１０００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ７５０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ５００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ４００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ３００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ２００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ１００ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ７５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ５０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ３０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ２５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ２０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ１５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ１０ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ５ｎｍの直径を有する。いくつかの実施形態において、粒子は、およそ１ｎｍの直径を有する。
いくつかの実施形態において、粒子は、微小粒子（例えば、ミクロスフェア）である。一般に、「微小粒子」とは、１０００μｍ未満の直径を有する任意の粒子のことを指す。いくつかの実施形態において、粒子は、ナノ粒子（例えば、ナノスフェア）である。一般に、「ナノ粒子」とは、１０００ｎｍ未満の直径を有する任意の粒子のことを指す。いくつかの実施形態において、粒子は、ピコ粒子（例えば、ピコスフェア（ｐｉｃｏｓｐｈｅｒｅｓ））である。一般に、「ピコ粒子」とは、１ｎｍ未満の直径を有する任意の粒子のことを指す。いくつかの実施形態において、粒子は、リポソームである。いくつかの実施形態において、粒子は、ミセルである。
種々の異なる粒子が、本発明に従って使用され得る。いくつかの実施形態において、粒子は、球または回転楕円体である。いくつかの実施形態において、粒子は、球または回転楕円体である。いくつかの実施形態において、粒子は、平らまたはプレート形である。いくつかの実施形態において、粒子は、立方体またはさいころ形である。いくつかの実施形態において、粒子は、卵形または長円形である。いくつかの実施形態において、粒子は、円柱、円錐または角錐である。
粒子（例えば、ナノ粒子、微小粒子）は、当該分野で公知の任意の方法を用いて調製され得る。例えば、粒状の製剤は、ナノ沈殿、流体チャネルを用いるフローフォーカシング、噴霧乾燥、単一および二重エマルジョン溶媒蒸発、溶媒抽出、相分離、ミリング、マイクロエマルジョン手順、マイクロファブリケーション、ナノファブリケーション、犠牲層、単純および複合コアセルベーションのような方法、ならびに当業者に周知の他の方法によって形成され得る。あるいはまたはさらに、単分散半導体ナノ粒子、伝導性ナノ粒子、磁性ナノ粒子、有機ナノ粒子および他のナノ粒子に対する水性溶媒および有機溶媒の合成が、報告されている（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｏら、２００５，Ｓｍａｌｌ，１：４８；Ｍｕｒｒａｙら、２０００，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍａｔ．Ｓｃｉ．，３０：５４５；およびＴｒｉｎｄａｄｅら、２００１，Ｃｈｅｍ．Ｍａｔ．，１３：３８４３；これらのすべてが本明細書中で参考として援用される）。
ある特定の実施形態において、粒子は、ナノ沈殿プロセスまたは噴霧乾燥によって調製される。粒子を調製する際に使用される条件を変更することにより、所望のサイズまたは特性（例えば、疎水性、親水性、外部の形態、「粘着性」、形状など）の粒子が得られ得る。その粒子を調製する方法および使用される条件（例えば、溶媒、温度、濃度、空気流速度など）は、送達される治療薬および／またはポリマーマトリックスの組成に依存し得る。
被包された薬剤を送達するための微小粒子を作製するための方法は、文献（例えば、Ｄｏｕｂｒｏｗ，Ｅｄ．，“Ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ ａｎｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ，”ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９２；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚら、１９８７，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，５：１３；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚら、１９８７，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，６：２７５；およびＭａｔｈｉｏｗｉｔｚら、１９８８，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．，３５：７５５を参照のこと；これらのすべてが本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
上記の方法のいずれかによって調製された粒子が、所望の範囲外のサイズ範囲を有する場合、例えば、篩を用いて、粒子の大きさを整えることができる。
ワクチンナノキャリアの生成
ワクチンナノキャリアは、当該分野で公知の任意の方法を用いて調製され得る。例えば、粒状のナノキャリア調合物は、ナノ沈殿、流体チャネルを用いるフローフォーカシング、噴霧乾燥、単一および二重エマルジョン溶媒蒸発、溶媒抽出、相分離、ミリング、マイクロエマルジョン手順、マイクロファブリケーション、ナノファブリケーション、犠牲層、単純コアセルベーションおよび複合コアセルベーションのような方法、ならびに当業者に周知の他の方法によって形成され得る。あるいはまたはさらに、単分散半導体ナノ粒子、伝導性ナノ粒子、磁性ナノ粒子、有機ナノ粒子および他のナノ粒子に対する水性溶媒合成および有機溶媒合成が報告されている（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｏら、２００５，Ｓｍａｌｌ，１：４８；Ｍｕｒｒａｙら、２０００，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍａｔ．Ｓｃｉ．，３０：５４５；およびＴｒｉｎｄａｄｅら、２００１，Ｃｈｅｍ．Ｍａｔ．，１３：３８４３；これらのすべてが本明細書中で参考として援用される）。
ある特定の実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ナノ沈殿プロセスまたは噴霧乾燥によって調製される。ナノキャリアを調製する際に使用される条件を変更することにより、所望のサイズまたは特性（例えば、疎水性、親水性、外部の形態、「粘着性」、形状など）の粒子が得られ得る。ナノキャリアを調製する方法および使用される条件（例えば、溶媒、温度、濃度、空気流速度など）は、そのワクチンナノキャリアの組成および／または生じるワクチンナノキャリアの構造に依存し得る。
被包された薬剤を送達するための微小粒子を作製するための方法は、文献（例えば、Ｄｏｕｂｒｏｗ，Ｅｄ．，“Ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ ａｎｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ，”ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９２；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚら、１９８７，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，５：１３；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚら、１９８７，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，６：２７５；およびＭａｔｈｉｏｗｉｔｚら、１９８８，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．，３５：７５５を参照のこと；これらのすべてが本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、少なくとも１つの免疫調節剤、ならびに必要に応じて、脂質膜、ポリマーマトリックスおよび／または非ポリマー粒子を含む。ある特定の実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、少なくとも１つの免疫調節剤；脂質膜、ポリマーマトリックスおよび／または非ポリマー粒子；ならびに少なくとも１つの標的化部分を含む。ある特定の実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、少なくとも１つの免疫調節剤；脂質膜、ポリマーマトリックスおよび／または非ポリマー粒子；少なくとも１つの標的化部分；ならびに少なくとも１つの免疫刺激剤を含む。ある特定の実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、少なくとも１つの免疫調節剤；脂質膜、ポリマーマトリックスおよび／または非ポリマー粒子；少なくとも１つの標的化部分；少なくとも１つの免疫刺激剤；ならびに少なくとも１つのナノ粒子を含む。
発明性のあるワクチンナノキャリアは、任意の利用可能な方法を用いて製造され得る。免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤の３次元の特性および立体配座に悪影響を及ぼすことなく、その免疫調節剤、標的化部分および／または免疫刺激剤をワクチンナノキャリアに会合させることが望ましい。そのワクチンナノキャリアが、体内の特定の細胞に到達することができるように全身性投与後の単核食細胞系による取り込みを回避することが可能であるべきであることが望ましい。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子は、ワクチンナノキャリアと共有結合的に会合されない。例えば、ワクチンナノキャリアは、ポリマーマトリックスを含み得、そして免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子は、発明性のあるワクチンナノキャリアのポリマーマトリックスの表面と会合され得、その中に被包され得、そして／またはそれ全体に分散され得る。免疫調節剤は、ワクチンナノキャリアの拡散、分解および／またはそれらの組み合わせによって放出される。いくつかの実施形態において、ポリマーは、バルク浸食によって分解する。いくつかの実施形態において、ポリマーは、表面浸食によって分解する。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子は、ワクチンナノキャリアと共有結合的に会合される。そのようなワクチンナノキャリアの場合、免疫調節剤の放出および標的部位への送達は、その会合を破壊することによって生じる。例えば、免疫調節剤が、切断可能なリンカーによってナノキャリアと会合されている場合、その免疫調節剤は、そのリンカーが切断されると、放出され、そして標的部位に送達される。
いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子は、ワクチンナノキャリアと共有結合的に会合されない。例えば、ワクチンナノキャリアは、ポリマーを含み得、そして免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子は、発明性のあるワクチンナノキャリアのポリマーの表面と会合され得、その中に被包され得、それによって取り囲まれ得、そして／またはそれ全体に分散され得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子は、ワクチンナノキャリアと物理的に会合される。
物理的会合は、種々の異なる方法で達成され得る。物理的会合は、共有結合性または非共有結合性であり得る。ワクチンナノキャリア、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子は、例えば、１つ以上の共有結合によって、互いに直接会合され得るか、または１つ以上のリンカーを用いて会合され得る。１つの実施形態において、リンカーは、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と１つ以上の共有結合または非共有結合、ならびにその免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と１つ以上の共有結合または非共有結合を形成することにより、それらが互いに接着される。いくつかの実施形態において、第１リンカーが、ワクチンナノキャリアと共有結合または非共有結合を形成し、そして第２リンカーが、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と共有結合または非共有結合を形成する。その２つのリンカーは、互いと１つ以上の共有結合または非共有結合を形成する。
任意の適当なリンカーが、本発明に従って使用され得る。リンカーは、アミド結合、エステル結合、ジスルフィド結合などを形成するために使用され得る。リンカーは、炭素原子またはヘテロ原子（例えば、窒素、酸素、硫黄など）を含み得る。代表的には、リンカーは、１〜５０原子長、１〜４０原子長、１〜２５原子長、１〜２０原子長、１〜１５原子長、１〜１０原子長または１〜１０原子長である。リンカーは、様々な置換基によって置換され得、それらとしては、水素原子、アルキル基、アルケニル基、アルキニル（ａｌｋｙｎｌ）基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、トリアルキルアミノ基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、ハロゲン基、アリール基、複素環式基、芳香族複素環式基、シアノ基、アミド基、カルバモイル基、カルボン酸基、エステル基、チオエーテル基、アルキルチオエーテル基、チオール基およびウレイド基が挙げられるが、これらに限定されない。この分野の当業者によって認識され得るように、これらの基の各々は、さらに置換され得る。
いくつかの実施形態において、リンカーは、脂肪族リンカーまたはヘテロ脂肪族リンカーである。いくつかの実施形態において、リンカーは、ポリアルキルリンカーである。ある特定の実施形態において、リンカーは、ポリエーテルリンカーである。ある特定の実施形態において、リンカーは、ポリエチレンリンカーである。ある特定の実施形態において、リンカーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーである。
いくつかの実施形態において、リンカーは、切断可能なリンカーである。単なるいくつかの例を挙げると、切断可能なリンカーとしては、プロテアーゼ切断可能ペプチドリンカー、ヌクレアーゼ感受性核酸リンカー、リパーゼ感受性脂質リンカー、グリコシダーゼ感受性炭水化物リンカー、ｐＨ感受性リンカー、低酸素感受性リンカー、光切断可能リンカー、熱不安定性リンカー、酵素切断可能リンカー（例えば、エステラーゼ切断可能リンカー）、超音波感受性リンカー、ｘ線切断可能リンカーなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、リンカーは、切断可能なリンカーではない。
種々の方法のいずれかを用いることにより、リンカーをワクチンナノキャリアと会合することができる。通常のストラテジーとしては、受動的吸着（例えば、静電相互作用を介して）、多価キレート化、特異的結合対のメンバー間の高親和性非共有結合、共有結合形成など（Ｇａｏら、２００５，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６：６３；本明細書中で参考として援用される）が挙げられる。いくつかの実施形態において、クリック化学を用いることにより、リンカーを粒子に会合することができる（例えば、ディールス−アルダー反応、Ｈｕｉｇｓｅｎ １，３−双極子付加環化、求核置換、カルボニル化学、エポキシ化、ジヒドロキシル化など）。
二官能性架橋試薬が、使用され得る。そのような試薬は、２つの反応基を含み、それにより、２つの標的基を共有結合的に会合する手段が提供される。化学架橋試薬における反応基は、代表的には、様々なクラスの官能基（例えば、スクシンイミジルエステル、マレイミドおよびピリジルジスルフィド）に属する。例示的な架橋剤としては、例えば、カルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（ＮＨＳ−ＡＳＡ）、ピメルイミド酸ジメチル二塩酸塩（ＤＭＰ）、スベルイミド酸ジメチル（ＤＭＳ）、３，３’−ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、Ｎ−スクシンイミジル３−［２−ピリジルジチオ］−プロピオンアミド（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル（ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ）α−メチルブタノエート、ビオチンアミドヘキサノイル−６−アミノ−ヘキサン酸Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステル（ＳＭＣＣ）、スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−ドデカエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＯ１２）などが挙げられる。例えば、カルボジイミド媒介性のアミド形成および活性エステルマレイミド媒介性アミンおよびスルフヒドリル結合が、広く使用されているアプローチである。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、時折２工程または３工程の反応順序によって、１つの分子上のアミン基を第２の分子上のチオール基に結合することによって形成され得る。チオール含有分子は、ヘテロ二官能性架橋試薬、例えば、スクシンイミジルエステルと、マレイミド、ピリジルジスルフィドまたはヨードアセトアミドのいずれかとの両方を含む試薬を用いて、アミン含有分子と反応し得る。アミン−カルボン酸架橋およびチオール−カルボン酸架橋、マレイミド−スルフヒドリル結合化学（例えば、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）法）などが使用され得る。ポリペプチドは、好都合にも、リジン側鎖もしくはシステイン側鎖におけるそれぞれアミン基もしくはチオール基を介して、またはＮ末端のアミノ基によって、粒子に付着され得る。ＲＮＡなどの核酸は、末端のアミノ基を用いて合成され得る。種々の結合試薬（例えば、スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）およびスルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）を用いることにより、ワクチンナノキャリアの様々な成分が会合され得る。ワクチンナノキャリアは、生体分子との会合を促進する表面において利用可能な官能基、例えば、アミン基またはカルボキシル基を用いて調製され得る。
非共有結合性の特異的結合相互作用が、使用され得る。例えば、粒子または生体分子のいずれかが、ビオチンを用いて官能化され得、他方が、ストレプトアビジンを用いて官能化される。これらの２つの部分は、互いに特異的に高親和性で非共有結合し、それによって、その粒子および生体分子を会合する。他の特異的結合対も同様に使用され得る。あるいは、ヒスチジンタグ化された生体分子は、ニッケル−ニトリロ三酢酸（ｎｉｃｋｅｌ−ｎｉｔｒｏｌｏｔｒｉａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（Ｎｉ−ＮＴＡ）と結合体化された粒子と会合され得る。
任意の生体分子が、粒子、標的化部分および／または治療薬に付着される。スペーサーは、例えば、短いペプチド鎖、例えば、１〜１０アミノ酸長、例えば、１、２、３、４または５アミノ酸長のペプチド鎖、核酸、アルキル鎖などであり得る。
会合および／または結合体化の方法ならびに架橋剤についてのさらなる一般的な情報については、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ ＯＨ，ＰＯ Ｂｏｘ ３３３７，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ，４３２１０によって出版されている雑誌Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｐｉｅｒｃｅのウェブサイトにおいて入手可能であり、本来、１９９４〜９５年のＰｉｅｒｃｅ Ｃａｔａｌｏｇに発表されていた“Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，”Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ、およびその中で引用されている参考文献；Ｗｏｎｇ ＳＳ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９１；ならびにＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，１９９６を参照のこと。
あるいはまたはさらに、ワクチンナノキャリアは、非共有結合性の相互作用を介して、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と直接または間接的に付着され得る。非共有結合性の相互作用としては、電荷相互作用、親和性相互作用、金属配位、物理吸着、ホスト−ゲスト相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファンデルワールス相互作用、磁気相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用および／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、電荷相互作用を介して、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と会合され得る。例えば、ワクチンナノキャリアは、カチオン性表面を有し得るか、またはポリ（リジン）またはポリ（エチレンイミン）などのカチオン性ポリマーと反応することにより、カチオン性表面をもたらし得る。そのワクチンナノキャリアの表面は、次いで、電荷相互作用を介して、負に帯電した免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と結合し得る。その免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子の一端は、代表的には、負に帯電したポリマー（例えば、ポリ（カルボン酸））、またはその免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／もしくはナノ粒子の機能を破壊することなくカチオン性ポリマー表面と相互作用し得るさらなるオリゴヌクレオチド配列に付着される。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、親和性相互作用を介して、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と会合され得る。例えば、ビオチンが、ワクチンナノキャリアの表面に付着され得、そしてストレプトアビジンが、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子に付着され得るか；または逆に、ビオチンが、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子に付着され得、そしてストレプトアビジンが、ワクチンナノキャリアの表面に付着され得る。そのビオチン基およびストレプトアビジンは、アルキレンリンカーまたはポリエーテルリンカーなどのリンカーを介して、ワクチンナノキャリアまたは免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／もしくはナノ粒子に付着され得る。ビオチンおよびストレプトアビジンは、親和性相互作用を介して結合し、それにより、そのワクチンナノキャリアが免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子に結合する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、金属配位を介して、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と会合され得る。例えば、ポリヒスチジンが、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子の一端に付着され得、そしてニトリロ三酢酸が、ワクチンナノキャリアの表面に付着され得る。Ｎｉ２＋などの金属は、ポリヒスチジンおよびニトリロ三酢酸をキレートし、それにより、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子がワクチンナノキャリアに結合する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、物理吸着を介して、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と会合され得る。例えば、疎水性のテイル（例えば、ポリメタクリレートまたは少なくとも約１０個の炭素を有するアルキル基）が、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子の一端に付着され得る。その疎水性のテイルは、疎水性ワクチンナノキャリアの表面上に吸着し、それにより、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子がワクチンナノキャリアに結合する。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、ホスト−ゲスト相互作用を介して、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と会合され得る。例えば、ククルビツリルまたはシクロデキストリンなどの大環状ホストが、ワクチンナノキャリアの表面に付着され得、そしてゲスト基（例えば、アルキル基、ポリエチレングリコールまたはジアミノアルキル基）が、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子に付着され得るか；または逆に、そのホスト基が、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子に付着され得、そしてゲスト基が、ワクチンナノキャリアの表面に付着され得る。いくつかの実施形態において、ホスト分子および／またはゲスト分子が、アルキレンリンカーまたはポリエーテルリンカーなどのリンカーを介して、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／もしくはナノ粒子、またはワクチンナノキャリアに付着され得る。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、水素結合相互作用を介して、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子と会合され得る。例えば、特定の配列を有するオリゴヌクレオチドが、ワクチンナノキャリアの表面に付着され得、そして本質的に相補的な配列が、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子の機能を破壊しないように、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子の一端または両端に付着され得る。次いで、その免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子は、ワクチンナノキャリアに付着されているオリゴヌクレオチドとの相補的な塩基対合を介してワクチンナノキャリアと結合する。一方のオリゴヌクレオチド上の核酸塩基の約８０％が、オリゴヌクレオチド塩基対合系（例えば、ワトソン−クリック塩基対合、逆ワトソン−クリック塩基対合、Ｈｏｏｇｓｔｅｎ塩基対合など）を介して、第２のオリゴヌクレオチド上の塩基と水素結合を形成する場合、２つのオリゴヌクレオチドは、本質的に相補的である。代表的には、ワクチンナノキャリアに付着されているオリゴヌクレオチド配列が、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子に付着されている相補的なオリゴヌクレオチドと少なくとも約６つの相補的な塩基対を形成することが望ましい。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、自己組織化によって生成される。ワクチンナノキャリアの自己組織化の詳細な例については、実施例１および２を参照のこと。ある特定の実施形態において、１つまたは複数の免疫調節剤を免疫系の細胞に送達するために、小型リポソーム（１０ｎｍ〜１０００ｎｍ）が、製造され、そして使用される（図３）。一般に、リポソームは、人工的に構築された球状の脂質ベシクルであり、その数十〜数千ｎｍの制御可能な直径は、個別のリポソームが、様々なカーゴ（例えば、タンパク質、酵素、ＤＮＡおよび薬物分子）を被包し、保管するために使用され得る、ゼプトリットル（１０−２１Ｌ）〜フェムトリットル（１０−１５Ｌ）の体積を有する生体適合性の区画を構成することを示す。リポソームは、両親媒性の特性：二重層の内面と外面の両方が親水性であり、そして二重層の内腔が疎水性である、を有する脂質二重層を含み得る。親油性の分子は、リポソーム膜中にそれ自身を自発的に包埋し得、そしてその親水性ドメインを外側に保持し得、親水性分子は、膜の生体機能性（ｂｉｏｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）を利用してリポソームの外面と化学的に結合体化され得る。
ある特定の実施形態において、脂質が、親油性の免疫調節剤と混合され、次いで、固体表面上で薄膜に形成される。親水性免疫調節剤を水溶液に溶解し、それをその脂質薄膜に加えて、ボルテックスによって脂質を加水分解する。二重層壁に組み込まれた親油性の免疫調節剤およびリポソーム内腔の内側の親水性免疫調節剤を有するリポソームが、自発的に組織化される。
ある特定の実施形態において、リポソームにおいて使用される脂質は、以下：ホスファチジルコリン、脂質Ａ、コレステロール、ドリコール、スフィンゴシン、スフィンゴミエリン、セラミド、グリコシルセラミド、セレブロシド、スルファチド、フィトスフィンゴシン、ホスファチジル−エタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸およびリゾホスファチドのうちの１つまたは複数であり得るが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、免疫調節剤は、リポソームの表面と結合体化され得る。いくつかの実施形態において、リポソームは、内部に、同一であるかまたは同一でない免疫調節剤を有する。いくつかの実施形態において、リポソームの表面の膜は、免疫調節剤を特定の抗原発現細胞に選択的に送達し得る標的化部分を用いて改変され得る。
いくつかの実施形態において、ナノ粒子によって安定化されたリポソームが、１つまたは複数の免疫調節剤を免疫系の細胞に送達するために使用される（図４）。小型の荷電ナノ粒子（１ｎｍ〜３０ｎｍ）がリポソーム表面上に吸着することを可能にすることによって、リポソーム−ナノ粒子複合体は、上述の裸のリポソームの長所だけでなく（図３）、調整可能な膜の剛性および制御可能なリポソーム安定性も有する。小型の荷電ナノ粒子が、逆の電荷を有するか、または正味電荷を有しない、リポソームの表面に近づくとき、ナノ粒子と膜との間の静電気的相互作用または電荷−双極子相互作用によって、ナノ粒子が引きつけられることにより、そのナノ粒子がその膜表面上に留まり、その結果、脂質膜によって部分的に包まれる。これは、リポソームの局所的な膜の屈曲および小球の表面張力（これらの両方が膜の剛性の調整を可能にする）を誘導する。この局面は、ウイルスを模倣するリポソームを用いるワクチン送達にとって重大であり、その堅さはウイルス膜内の他の生物学的成分の組成に依存する。さらに、吸着されたナノ粒子は、リポソームを融合から保護する帯電したシェルを形成し、それにより、リポソームの安定性が増大する。ある特定の実施形態において、小型のナノ粒子は、穏やかなボルテックスによってリポソームと混合され、そしてそのナノ粒子は、自発的にリポソーム表面に固着する。特定の実施形態において、小型のナノ粒子は、ポリマーナノ粒子、金属性ナノ粒子、無機もしくは有機ナノ粒子、それらのハイブリッドおよび／またはそれらの組み合わせであり得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、リポソーム−ポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を免疫系の細胞に送達するために使用される（図５）。親水性の免疫調節剤は、リポソーム内部の中空を維持する代わりに、被包され得る。図３は、リポソームで被覆されたポリマーナノキャリアを形成するジブロックコポリマーナノ粒子が負荷されたリポソームを示しており、これは、リポソームおよびポリマーナノ粒子の限界のいくつかを排除しつつ、それら両方の長所を有する。いくつかの実施形態において、リポソームシェルは、親油性の免疫調節剤を有するためまたは親水性の免疫調節剤を結合体化するために使用され得、そしてポリマーコアは、疎水性免疫調節剤を送達するために使用され得る。
ある特定の実施形態において、予め製剤化されたポリマーナノ粒子（４０ｎｍ〜１０００ｎｍ）を、穏やかなボルテックスによって小型のリポソーム（２０ｎｍ〜１００ｎｍ）と混合することにより、ポリマーナノ粒子の表面上にリポソーム融合が誘導される。特定の実施形態において、ジブロックコポリマーナノ粒子は、以下：ポリ（Ｄ，Ｌ乳酸）−ブロック−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＡ−ｂ−ＰＥＧ）、ポリ（Ｄ，Ｌグリコール酸）−ブロック−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＧ−ｂ−ＰＥＧ）、ポリ（Ｄ，Ｌ乳酸−コ−グリコール酸）−ブロック−ポリ（エチレングリコール）（ＰＬＧＡ−ｂ−ＰＥＧ）およびポリ（ε−カプロラクトン）−ブロック−ポリ（エチレングリコール）（ＰＣＬ−ｂ−ＰＥＧ）のうちの１つまたは複数であり得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ナノ粒子によって安定化されたリポソーム−ポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図６）。小型のナノ粒子（１ｎｍ〜３０ｎｍ）をリポソーム−ポリマーナノキャリア表面に吸着させることによって、そのナノキャリアは、上述のナノ粒子によって安定化されたリポソーム（図４）と、上述のリポソーム−ポリマーナノ粒子（図５）の両方の長所だけでなく、調整可能な膜の剛性および制御可能なリポソーム安定性も有する。
いくつかの実施形態において、逆ミセルを含むリポソーム−ポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図７）。上述のリポソーム−ポリマーナノキャリア（図５および６）は、ポリマーナノ粒子内に疎水性免疫調節剤を有するために限定されているので、ここで、小型の逆ミセル（１ｎｍ〜２０ｎｍ）は、親水性免疫調節剤を被包するように製剤化され、次いで、ジブロックコポリマーと混合されることにより、リポソームのポリマーコアを製剤化する。
ある特定の実施形態において、被包される親水性免疫調節剤は、まず、揮発性で水混和性の有機溶媒中において、天然由来かつ無毒性の両親媒性の実体と混合することによって、逆ミセルに組み込まれる。ある特定の実施形態において、その両親媒性の実体は、以下：ホスファチジルコリン、脂質Ａ、コレステロール、ドリコール、スフィンゴシン（ｓｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）、スフィンゴミエリン、セラミド、グリコシルセラミド、セレブロシド、スルファチド、フィトスフィンゴシン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸およびリゾホスファチド（ｌｙｓｏｐｈｏｐｈａｔｉｄｅ）のうちの１つまたは複数であり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、揮発性で水混和性の有機溶媒は：テトラヒドロフラン、アセトン、アセトニトリルまたはジメチルホルムアミドであり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、逆ミセルの形成が完了した後に、生分解性ポリマーが、この混合物に加えられる。得られた生分解性ポリマー−逆ミセル混合物をポリマー不溶性の親水性非溶媒と併せることにより、その非溶媒への溶媒の迅速な拡散および有機溶媒の蒸発によってナノ粒子が形成される。ある特定の実施形態において、そのポリマー不溶性の親水性非溶媒は、以下：水、エタノール、メタノールおよびそれらの混合物のうちの１つまたは複数であり得るが、これらに限定されない。ポリマーナノ粒子を含んだ逆ミセルは、脂質分子と混合されることにより、上述のリポソーム−ポリマー複合体構造が形成される（図５）。
いくつかの実施形態において、逆ミセルを含む、ナノ粒子によって安定化されたリポソーム−ポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図８）。小型のナノ粒子（１ｎｍ〜３０ｎｍ）をリポソーム−ポリマーナノキャリア表面に吸着させることによって、そのナノキャリアは、上述のナノ粒子によって安定化されたリポソーム（図４）と、上述の逆ミセルを含んだリポソーム−ポリマーナノ粒子（図７）の両方の長所だけでなく、調整可能な膜の剛性および制御可能なリポソーム安定性も有する。
いくつかの実施形態において、脂質単層によって安定化されたポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図９）。上述のリポソーム−ポリマーナノキャリア（図５〜８）と比べると、この系は、薬剤と製造の両方に関して単純さという長所を有する。いくつかの実施形態において、疎水性ホモポリマーは、疎水性セグメントと親水性セグメントの両方を有する図５〜８において使用されるジブロックコポリマーと対照的に、ポリマーのコアを形成し得る。脂質によって安定化されたポリマーナノキャリアは、ポリマーナノ粒子およびリポソームを別個に製剤化した後、それらを融合する代わりに、単一工程において形成され得る。
ある特定の実施形態において、まず、親水性の免疫調節性分子を、脂質頭部基と化学的に結合体化する。その結合体を、１つ以上の水混和性溶媒を含む水溶液中で、ある特定の比の非結合体化脂質分子と混合する。ある特定の実施形態において、両親媒性の実体は、以下：ホスファチジルコリン、脂質Ａ、コレステロール、ドリコール、スフィンゴシン（ｓｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）、スフィンゴミエリン、セラミド、セレブロシド、スルファチド、フィトスフィンゴシン、ホスファチジルエタノールアミン、グリコシルセラミド、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸およびリゾホスファチドのうちの１つまたは複数であり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、水混和性溶媒は：アセトン、エタノール、メタノールおよびイソプロピルアルコールであり得るが、これらに限定されない。生分解性のポリマー材料は、水混和性または部分的に水混和性の有機溶媒中で被包される疎水性免疫調節剤と混合される。特定の実施形態において、生分解性ポリマーは、以下：ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）、ポリ（Ｄ，Ｌ−グリコール酸）、ポリ（ε−カプロラクトン）または様々なモル比におけるそれらのコポリマーのうちの１つまたは複数であり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、水混和性の有機溶媒は：アセトン、エタノール、メタノールまたはイソプロピルアルコールであり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、部分的に水混和性の有機溶媒は：アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、イソプロピルアルコール、酢酸イソプロピルまたはジメチルホルムアミドであり得るが、これらに限定されない。得られたポリマー溶液は、結合体化された脂質および結合体化されていない脂質の水溶液に加えられることにより、水への有機溶媒の迅速な拡散および有機溶媒の蒸発によってナノ粒子が得られる。
いくつかの実施形態において、逆ミセルを含む、脂質単層によって安定化されたポリマーナノ粒子が、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図１０）。上述の脂質によって安定化されたポリマーナノキャリア（図９）は、疎水性免疫調節剤を有することに限定されているが、ここで、小型の逆ミセル（１ｎｍ〜２０ｎｍ）は、親水性免疫調節剤を被包するように製剤化され、そして生分解性ポリマーと混合されることにより、ポリマーナノキャリアコアが形成される。
本発明の組成物が任意の適当な様式で生成され得ること、および本発明が本明細書中に記載される方法を用いて生成され得る組成物に決して限定されないことが理解されるべきである。適切な方法の選択は、会合される特定の部分の特性への注意を必要とし得る。
所望であれば、様々な方法を使用することにより、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子が付着されていないワクチンナノキャリアから、免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子が付着されているワクチンナノキャリアが分離され得るか、または、異なる数の免疫調節剤、標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子が付着されているワクチンナノキャリアが分離され得る。例えば、サイズ排除クロマトグラフィ、アガロースゲル電気泳動または濾過を用いることにより、それらに付着された異なる数の実体を有するワクチンナノキャリアの集団を分離すること、および／または他の実体からワクチンナノキャリアを分離することができる。いくつかの方法としては、サイズ排除または陰イオン交換クロマトグラフィが挙げられる。
いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、滅菌条件下において製造される。このことにより、得られるワクチンが、滅菌されたものであり、感染性でないので、生ワクチンと比べて安全性が改善されることが確実になり得る。これは、特に、ワクチンを受けた被験体が、免疫不全（ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｅｃｔｓ）を有しているとき、感染症に罹患しているとき、および／または感染しやすいときに、価値ある安全性の程度を提供する。
いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、凍結乾燥され得、そして製剤化のストラテジーに応じて懸濁液の形態または凍結乾燥された粉末として、活性を失うことなく長期間にわたって保存され得る。
応用法
本明細書中に記載される組成物および方法は、免疫応答を誘導するため、増強するため、抑制するため、指示するため、または再指示するために使用され得る。本明細書中に記載される組成物および方法は、任意の癌、感染症、代謝疾患、変性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、炎症性疾患、免疫学的疾患または他の障害および／もしくは状態の予防および／または処置のために使用され得る。本明細書中に記載される組成物および方法は、本明細書中に記載される習慣性物質のいずれかに対する嗜癖などの嗜癖の処置のためにも使用され得る。本明細書中に記載される組成物および方法は、トキシン、有害な物質、環境トキシンまたは他の有害な作用物質への曝露に起因する状態の予防および／または処置のためにも使用され得る。被験体としては、ヒトおよび／もしくは他の霊長類；商業的に関連性のある哺乳動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコおよび／またはイヌ）を含む哺乳動物；ならびに／または商業的に関連性のある鳥類（例えば、ニワトリ、アヒル、ガチョウおよび／またはシチメンチョウ）を含む鳥類が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、本発明に従うワクチンナノキャリアは、疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状または特徴を、処置するため、緩和するため、回復させるため、軽減するため、その発症を遅延させるため、その進行を阻害するため、その重症度を低下させるため、および／またはその発生率を低下させるために、使用され得る。いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、微生物感染（例えば、細菌感染、真菌感染、ウイルス感染、寄生生物感染など）の１つ以上の症状または特徴を、処置するため、緩和するため、回復させるため、軽減するため、その発症を遅延させるため、その進行を阻害するため、その重症度を低下させるため、および／またはその発生率を低下させるために、使用され得る。
本発明の１つの局面において、疾患、障害または状態（例えば、微生物感染）の予防および／または処置のための方法が提供される。いくつかの実施形態において、疾患、障害または状態の予防および／または処置は、所望の結果を達成するために必要な量でおよび必要な時間にわたって、治療有効量の発明性のあるワクチンナノキャリアを、それを必要とする被験体に投与することを含む。本発明のある特定の実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアの「治療有効量」は、微生物感染の１つ以上の症状または特徴を、処置するため、緩和するため、回復させるため、軽減するため、その発症を遅延させるため、その進行を阻害するため、その重症度を低下させるため、および／またはその発生率を低下させるために、有効な量のことである。いくつかの実施形態において、「治療有効量」は、免疫系を調節するために有効な量である。そのような量は、免疫原性の量、すなわち、被験体において検出可能な免疫応答、例えば、検出可能な抗体応答および／または検出可能なＴ細胞応答を誘発するのに十分な量であり得る。
発明性のある予防的および／または治療的なプロトコルは、治療有効量の１つ以上の発明性のあるワクチンナノキャリアを健常な被験体（例えば、微生物感染のいかなる症状も示していない被験体および／または微生物感染と診断されていない被験体；まだトキシンに曝露されていない被験体、乱用性物質または習慣性物質などをまだ摂取していない被験体）に投与することを含む。例えば、健常個体は、微生物感染を発症する前、トキシン、乱用性物質、習慣性物質などに曝露される前、および／またはそれらに関係する症状を発症する前に、発明性のあるワクチンナノキャリアを用いてワクチン接種され得る；リスク個体（例えば、微生物感染に罹患している個体に曝露される患者、微生物／トキシンが流行している場所に旅行する患者；など）は、症状の発症および／または曝露／摂取と実質的に同時に処置され得る（例えば、その４８時間以内、２４時間以内または１２時間以内）。当然のことながら、微生物感染していると判明している個体、トキシンに曝露された個体、または乱用性物質もしくは習慣性（ａｄｄｉｔｉｖｅ）物質を摂取した個体は、どの時点においても処置を受けてもよい。
いくつかの実施形態において、発明性のある予防的および／または治療的なプロトコルは、Ｔ細胞とＢ細胞の両方において免疫応答が刺激されるように、治療有効量の１つ以上の発明性のあるワクチンナノキャリアを被験体に投与することを含む。
いくつかの実施形態において、選択された免疫調節剤を様々なＡＰＣに対する標的化部分および免疫刺激剤と組み合わせることによって、免疫応答（例えば、エフェクター応答）が、所与の適応症に対して最も望ましいタイプの免疫応答、例えば、体液性応答、１型Ｔ細胞応答、２型Ｔ細胞応答、細胞傷害性Ｔ細胞応答および／またはこれらの応答の組み合わせを優先的に誘発するように調整され得る。従って、病原体の宿主に対する予防的ワクチン、ならびに既存の疾患（例えば、感染症、アレルギー、自己免疫疾患および／または癌）の免疫療法をはじめとした広い範囲の様々な臨床上の応用法に対して、同じプラットフォームが使用され得る。
癌としては、胆管癌；脳腫瘍；乳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸癌；子宮体癌；食道癌；胃癌；上皮内新生物；リンパ腫；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）；メラノーマ；神経芽細胞腫；口腔癌；卵巣癌；膵癌；前立腺癌；直腸癌；肉腫；皮膚癌；精巣癌；甲状腺癌；および腎癌、ならびに他の癌腫および肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。
自己免疫疾患としては、関節リウマチ、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、セリアック病、クローン病、炎症性腸疾患、インスリン依存性真性糖尿病、真性糖尿病、若年性糖尿病、自然発症の自己免疫性糖尿病、胃炎、自己免疫性萎縮性胃炎、自己免疫性肝炎、甲状腺炎、橋本甲状腺炎、自己免疫性甲状腺炎、インシュリン炎、卵巣炎、睾丸炎、ブドウ膜炎、水晶体起因性ブドウ膜炎、多発性硬化症、重症筋無力症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、甲状腺中毒症、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、アジソン病、強皮症、グッドパスチャー症候群、ギランバレー症候群、グレーヴズ病、糸球体腎炎、乾癬、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、交感神経性眼炎（ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ ｏｐｔｈａｌｍｉａ）、特発性血小板減少性紫斑病（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｌｏｐｅｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ）、特発性白血球減少症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｆｅｕｃｏｐｅｎｉａ）、シェーグレン症候群（Ｓｉｏｇｒｅｎｓ’ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ウェゲナー肉芽腫症、多発性筋炎／皮膚筋炎または全身性エリテマトーデスが挙げられるが、これらに限定されない。
アレルギー性疾患としては、湿疹、アレルギー性鼻炎またはコリーザ、枯草熱、結膜炎、喘息、じんま疹（発疹）、局所的な（ｔｏｐｉｃ）アレルギー反応、食物アレルギー、アナフィラキシー、アトピー性皮膚炎、過敏症反応および他のアレルギー性の状態が挙げられるが、これらに限定されない。アレルギー反応は、任意のアレルゲン（通常の塵、花粉、植物、動物の鱗屑、薬物、食物アレルゲン、昆虫毒液、ウイルスまたは細菌が挙げられるが、これらに限定されない）に対する免疫反応の結果であり得る。
炎症性の疾患／障害としては、例えば、循環器疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支拡張症、慢性胆嚢炎、結核、橋本甲状腺炎、敗血症、サルコイドーシス、珪肺症および他の塵肺症、ならびに創傷に埋め込まれた異物が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中で使用されるとき、用語「敗血症」とは、微生物の侵入に対する宿主の全身性の炎症性応答に関連する、よく認識された臨床上の症候群のことを指す。用語「敗血症」とは、本明細書中で使用されるとき、代表的には、発熱または体温低下、頻拍および頻呼吸によって伝えられる状態のことを指し、重篤な例では、血圧低下、臓器機能不全および死亡にも達し得る。
薬学的組成物
本発明は、治療有効量の１つ以上のワクチンナノキャリアおよび１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む新規組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、発明性のあるワクチンナノキャリアを含む薬学的組成物および／または本明細書中に記載される任意の組成物を提供する。そのような薬学的組成物は、必要に応じて１つ以上のさらなる治療的に活性な物質を含み得る。いくつかの実施形態によれば、発明性のある組成物を含む薬学的組成物を、それを必要とする被験体に投与する方法が提供される。いくつかの実施形態において、発明性のある組成物は、ヒトに投与される。本発明の目的のために、句「活性成分」とは、通常、少なくとも１つの免疫調節剤を含み、そして必要に応じて、１つ以上の標的化部分、免疫刺激剤および／またはナノ粒子を含む、発明性のあるワクチンナノキャリアのことを指す。
本明細書中に提供される薬学的組成物の説明は、主として、ヒトへの投与に適した薬学的組成物を対象にしているが、そのような組成物が、通常、すべての種類の動物への投与に適していることが、当業者によって理解されるだろう。薬学的組成物を様々な動物への投与に適するようにするためにヒトへの投与に適した該組成物を改変することが、十分に理解されており、通常の熟練した獣医学の薬理学者は、たとえ行ったとしても単なる通常の実験を用いて、そのような改変を設計することができ、そして／または行うことができる。本発明の薬学的組成物の投与が企図される被験体としては、ヒトおよび／もしくは他の霊長類；商業的に関連性のある哺乳動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコおよび／またはイヌ）を含む哺乳動物；ならびに／または商業的に関連性のある鳥類（例えば、ニワトリ、アヒル、ガチョウおよび／またはシチメンチョウ）を含む鳥類が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中に記載される薬学的組成物の調合物は、薬剤学の分野において公知であるかまたは今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、そのような調製方法は、活性成分を１つ以上の賦形剤および／または１つ以上の他の副成分と併せ、次いで、必要な場合および／または望ましい場合、その生成物を所望の単回投与単位または複数回投与単位に成形し、そして／または包装する工程を包含する。
本発明の薬学的組成物は、単一単位用量として、および／または複数の単一単位用量として、調製され得、包装され得、そして／またはまとめて販売され得る。本明細書中で使用されるとき、「単位用量」は、所定の量の活性成分を含む薬学的組成物の別々の量である。活性成分の量は、一般に、被験体に投与され得る活性成分の投与量および／またはそのような投与量の好都合な分割量（例えば、そのような投与量の２分の１または３分の１）と等しい。
本発明の薬学的組成物中の、活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤および／または任意のさらなる成分の相対量は、処置される被験体の個性、サイズおよび／または状態に応じて、さらに、その組成物が投与される経路に応じて、変動する。例としては、本組成物は、０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
本発明の薬学的調合物は、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含み得、その薬学的に許容可能な賦形剤は、本明細書中で使用されるとき、所望の特定の剤形に適するような、任意およびすべての溶媒、分散媒、希釈剤または他の液体ビヒクル、分散または懸濁の補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固体結合剤、潤滑剤などを含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６；本明細書中で参考として援用される）は、薬学的組成物を製剤化する際に使用される様々な賦形剤およびその調製のための公知の手法を開示している。任意の従来の賦形剤が、任意の望ましくない生物学的作用をもたらすこと、または別途、その薬学的組成物の任意の他の成分と有害な様式で相互作用することなどによって、ある物質またはその誘導体と不適合である場合を除いて、その使用は、本発明の範囲内であると企図される。
いくつかの実施形態において、薬学的に許容可能な賦形剤は、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％純粋である。いくつかの実施形態において、賦形剤は、ヒトにおける使用および動物用の使用について承認されている。いくつかの実施形態において、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認されている。いくつかの実施形態において、賦形剤は、薬剤グレードである。いくつかの実施形態において、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、ヨーロッパ薬局方（ＥＰ）、英国薬局方および／または国際薬局方の基準を満たしている。
薬学的組成物の製造において使用される薬学的に許容可能な賦形剤としては、不活性な希釈剤、分散剤および／もしくは造粒剤（ｇｒａｎｕｌａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、界面活性剤および／もしくは乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝剤、滑沢剤ならびに／または油が挙げられるが、これらに限定されない。そのような賦形剤は、必要に応じて、本発明性のある調合物の中に含められ得る。賦形剤（例えば、カカオバターおよび坐剤用のろう、着色剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤）は、調合者の判断に従って、組成物中に存在し得る。
例示的な希釈剤としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、パウダーシュガーなどおよびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な造粒剤および／または分散剤としては、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、クレー、アルギン酸、グアーゴム、柑橘類の果肉、寒天、ベントナイト、セルロースおよび木製品、天然の海綿、陽イオン交換樹脂、炭酸カルシウム、シリケート、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニルピロリドン）（クロスポビドン）、カルボキシメチルデンプンナトリウム（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシルメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（デンプン１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）、ラウリル硫酸ナトリウム、四級アンモニウム化合物など、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な界面活性剤および／または乳化剤としては、天然の乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガント、コンドラックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ろうおよびレシチン）、コロイド粘土（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］およびＶｅｅｇｕｍ［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、ジステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリルおよびモノステアリン酸プロピレングリコール、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマーおよびカルボキシビニルポリマー）、カラギナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン［Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０］、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン［Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０］、モノパルミチン酸ソルビタン［Ｓｐａｎ（登録商標）４０］、モノステアリン酸ソルビタン［Ｓｐａｎ（登録商標）６０］、トリステアリン酸ソルビタン［Ｓｐａｎ（登録商標）６５］、モノオレイン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン［Ｓｐａｎ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、モノステアリン酸ポリオキシエチレン［Ｍｙｒｊ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリエトキシ化ひまし油、ステアリン酸ポリオキシメチレンおよびＳｏｌｕｔｏｌ）、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル、（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［Ｂｒｉｊ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウムなど、および／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な結合剤としては、デンプン（例えば、コーンスターチおよびデンプンペースト）；ゼラチン；糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然ゴムおよび合成ゴム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、トチャカ（Ｉｒｉｓｈ ｍｏｓｓ）の抽出物、パンワールゴム（ｐａｎｗａｒ ｇｕｍ）、ガッチゴム、イサポール皮（ｉｓａｐｏｌ ｈｕｓｋｓ）の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）およびカラマツアラボガラクタン（ｌａｒｃｈ ａｒａｂｏｇａｌａｃｔａｎ）；アルギネート；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート；ろう；水；アルコール；など；およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な保存剤としては、酸化防止剤、キレート剤、抗菌保存剤、抗真菌保存剤、アルコール保存剤、酸性保存剤および他の保存剤が挙げられ得る。例示的な酸化防止剤としては、アルファトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウムおよび亜硫酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なキレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸およびエデト酸三ナトリウムが挙げられる。例示的な抗菌保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコールおよびチメロサールが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な抗真菌保存剤としては、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウムおよびソルビン酸が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアルコール保存剤としては、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエートおよびフェニルエチルアルコールが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な酸性保存剤としては、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータ−カロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸およびフィチン酸が挙げられるが、これらに限定されない。他の保存剤としては、トコフェロール、酢酸トコフェロール、デテロキシムメシレート（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ ｍｅｓｙｌａｔｅ）、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅｄ）（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ナトリウムラウリルエーテルスルフェート（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、Ｇｌｙｄａｎｔ Ｐｌｕｓ（登録商標）、Ｐｈｅｎｏｎｉｐ（登録商標）、メチルパラベン、Ｇｅｒｍａｌｌ １１５、Ｇｅｒｍａｂｅｎ ＩＩ、Ｎｅｏｌｏｎｅ（商標）、Ｋａｔｈｏｎ（商標）およびＥｕｘｙｌ（登録商標）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、保存剤は、酸化防止剤である。他の実施形態において、保存剤は、キレート剤である。
例示的な緩衝剤としては、クエン酸塩緩衝溶液、酢酸塩緩衝溶液、リン酸塩緩衝溶液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルコヘプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、Ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、リン酸一水素カルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、水酸化リン酸カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱物質非含有水、等張性食塩水、リンガー溶液、エチルアルコールなど、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル（ｇｌｙｃｅｒｙｌ ｂｅｈａｎａｔｅ）、硬化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、マグネシウムラウリルスルフェート、ラウリル硫酸ナトリウムなど、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な油としては、アーモンドオイル、杏仁油、アボカド油、ババス油、ベルガモット油、ブラックカラント（ｂｌａｃｋ ｃｕｒｒｅｎｔ）シードオイル、ルリヂサ油、カデ油、カモミールオイル、カノーラ油、カラウェー油、カルナバオイル、ヒマシ油、桂皮油、カカオバター油、ヤシ油、タラ肝油、コーヒーオイル、トウモロコシ油、綿実油、エミューオイル、ユーカリ油、月見草油、魚油、亜麻仁油、ゲラニオール油、ヒョウタン油、ブドウ種油、ヘーゼルナッツオイル、ヒソップ油、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ油、ククイナッツ油、ラバンジン油、ラベンダー油、レモン油、リトシーキュービバ油、マカダミアナッツ（ｍａｃａｄｅｍｉａ ｎｕｔ）油、ゼニアオイ油、マンゴー種子油、メドウフォーム種子油、ミンク油、ナツメグ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラフィー油、パーム油、パーム核油、桃仁油、落花生油、ケシ油、パンプキンシードオイル、菜種油、米糠油、ローズマリー油、ベニバナ油、ビャクダン油、サザンカ油（ｓａｓｑｕａｎａ）、セイボリー油、シーバックソーンオイル、ゴマ油、シアバター油、シリコーン油、ダイズ油、ヒマワリ油、ティーツリー油、アザミ油、ツバキ油、ベチベル油、クルミ油およびコムギの胚種油が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な油としては、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコーン、セバシン酸ジエチル、ジメチコーン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
経口投与用および非経口投与用の液体の剤形としては、薬学的に許容可能なエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定されない。その液体の剤形は、活性成分に加えて、当該分野において通常使用される不活性な希釈剤（例えば、水または他の溶媒）、可溶化剤および乳化剤（例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ（ｇｒｏｕｎｄｎｕｔ）油、トウモロコシ油、胚芽（ｇｅｒｍ）油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル）ならびにそれらの混合物を含み得る。経口組成物は、不活性な希釈剤に加えて、佐剤（例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤）、甘味剤、香味剤および芳香剤を含み得る。非経口投与についてのある特定の実施形態において、本発明のワクチンナノキャリアは、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）などの可溶化剤、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマーおよびそれらの組み合わせと混合される。
注射可能な調合物、例えば、滅菌の注射可能な水性または油性の懸濁液は、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて、公知の技術に従って製剤化され得る。滅菌の注射可能な調製物は、無毒性の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液としての滅菌の注射可能な溶液、懸濁液またはエマルジョンであり得る。使用され得る許容可能なビヒクルおよび溶媒であるのは、水、リンガー溶液，Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張性塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌の固定油は、溶媒または懸濁化媒質として、慣習的に使用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドをはじめとした任意の無刺激性の固定油が使用され得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射可能物の調製に使用される。
注射可能な調合物は、例えば、細菌保持フィルターで濾過すること、あるいは使用前に、滅菌水もしくは他の滅菌の注射可能な媒質に溶解され得るかまたは分散され得る、滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌され得る。
薬物の作用を長くするために、皮下注射または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅延させることが望ましいことが多い。これは、水に難溶性である結晶性または非晶質の材料の液体懸濁液を使用することによって達成され得る。そして、薬物の吸収速度は、溶解の速度に依存し、そしてその溶解の速度は、結晶のサイズおよび結晶の形状に依存し得る。あるいは、非経口的に投与された薬物形態の遅延された吸収は、油性のビヒクルに薬物を溶解するかまたは懸濁することによって達成され得る。
直腸投与用または膣投与用の組成物は、代表的には、本発明のワクチンナノキャリアを、外界温度では固体であるが体温では液体であり、ゆえに直腸または膣腔において融解し、そして活性成分を放出する、適当な非刺激性賦形剤（例えば、カカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ろう）と混合することによって調製され得る坐剤である。
経口投与用の固体剤形としては、カプセル、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤が挙げられる。そのような固体剤形において、活性成分は、少なくとも１つの不活性で薬学的に許容可能な賦形剤（例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム）、ならびに／またはａ）充填剤もしくは増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸）、ｂ）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシアなど）、ｃ）グリセロールなどの湿潤剤、ｄ）崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケートおよび炭酸ナトリウム）、ｅ）パラフィンなどの溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｒｅｔａｒｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、ｆ）四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイトクレーなどの吸収剤、およびｉ）潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、およびそれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤および丸剤の場合において、それらの剤形は、緩衝剤を含み得る。
同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコール（ｐｏｌｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）などの賦形剤を用いた軟ゼラチンカプセルおよび硬ゼラチンカプセル内の充填剤として使用され得る。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸剤および顆粒剤の固体剤形は、コーティングおよびシェル（例えば、腸溶コーティングおよび製薬分野において周知の他のコーティング）とともに調製され得る。それらは、必要に応じて、乳白剤（ｏｐａｃｉｆｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を含み得、そして、腸管のある特定の部分において、必要に応じて遅延様式で、活性成分のみを放出するか、または活性成分を優先的に放出する組成物であり得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびろうが挙げられる。同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いた軟ゼラチンカプセルおよび硬ゼラチンカプセル内の充填剤として使用され得る。
活性成分は、上で述べたような１つ以上の賦形剤を含むマイクロカプセル型であり得る。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸剤および顆粒剤の固体剤形は、コーティングおよびシェル（例えば、腸溶コーティング、放出制御コーティングおよび製薬分野において周知の他のコーティング）とともに調製され得る。そのような固体剤形において、活性成分は、少なくとも１つの不活性な希釈剤（例えば、スクロース、ラクトースまたはデンプン）と混合され得る。そのような剤形は、通常の慣行と同じように、不活性な希釈剤、例えば、錠剤化潤滑剤および他の錠剤化補助剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロース）以外のさらなる物質を含み得る。カプセル、錠剤および丸剤の場合、それらの剤形は、緩衝剤を含み得る。それらは、必要に応じて、乳白剤を含み得、そして、腸管のある特定の部分において、必要に応じて遅延様式で、活性成分のみを放出するか、または活性成分を優先的に放出する組成物であり得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびろうが挙げられる。
本発明に従うワクチンナノキャリアの局所的投与用および／または経皮的投与用の剤形は、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤および／またはパッチを包含し得る。一般に、活性成分は、必要とされ得るとき、薬学的に許容可能な賦形剤ならびに／または任意の必要な保存剤および／もしくは緩衝液と滅菌条件下において混合される。さらに、本発明は、経皮パッチの使用を企図し、それは、身体への活性成分の制御された送達を提供するという追加の利点を有することが多い。そのような剤形は、例えば、活性成分を適切な媒質に溶解することおよび／または分散することによって調製され得る。あるいはまたはさらに、その速度は、律速膜を提供すること、ならびに／または活性成分をポリマーマトリックスおよび／もしくはゲルに分散することによって、制御され得る。
本明細書中に記載される皮内薬学的組成物を送達する際の使用に適したデバイスとしては、米国特許第４，８８６，４９９号；同第５，１９０，５２１号；同第５，３２８，４８３号；同第５，５２７，２８８号；同第４，２７０，５３７号；同第５，０１５，２３５号；同第５，１４１，４９６号；および同第５，４１７，６６２号に記載されているような短針デバイスが挙げられる。皮内組成物は、皮膚への針の有効な穿通長を限定するデバイス（例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ９９／３４８５０に記載されているもの）およびその機能的な均等物によって投与され得る。液体ジェット式注射器を介して、および／または角質層に突き刺し、そして真皮に到達するジェットをもたらす針を介して、液体のワクチンを真皮に送達するジェット式注射デバイスが適当である。ジェット式注射デバイスは、例えば、米国特許第５，４８０，３８１号；同第５，５９９，３０２号；同第５，３３４，１４４号；同第５，９９３，４１２号；同第５，６４９，９１２号；同第５，５６９，１８９号；同第５，７０４，９１１号；同第５，３８３，８５１号；同第５，８９３，３９７号；同第５，４６６，２２０号；同第５，３３９，１６３号；同第５，３１２，３３５号；同第５，５０３，６２７号；同第５，０６４，４１３号；同第５，５２０，６３９号；同第４，５９６，５５６号；同第４，７９０，８２４号；同第４，９４１，８８０号；同第４，９４０，４６０号；ならびにＰＣＴ公報ＷＯ９７／３７７０５およびＷＯ９７／１３５３７に記載されている。粉末の形態のワクチンを皮膚の外層を通過して真皮に向かって加速する圧縮ガスを使用する弾道的な粉末／粒子の送達デバイスが適当である。あるいはまたはさらに、従来の注射器が、従来のマントー（ｍａｎｔｏｕｘ）法の皮内投与において使用され得る。
局所的投与に適した調合物としては、液体および／または半液体の調製物（例えば、リニメント剤、ローション、水中油型および／もしくは水中油型のエマルジョン（例えば、クリーム、軟膏および／またはペースト）ならびに／または溶液および／もしくは懸濁液）が挙げられるが、これらに限定されない。局所的に投与可能な調合物は、例えば、約１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得るが、その活性成分の濃度は、溶媒中の活性成分の溶解性の限界と同じであり得る。局所的投与用の調合物は、本明細書中に記載されるさらなる成分の１つ以上をさらに含み得る。
本発明の薬学的組成物は、口腔前庭を介する肺投与に適した調合物として、調製され得、包装され得、そして／または販売され得る。そのような調合物は、活性成分を含み、かつ、約０．５μｍ〜約７μｍまたは約１μｍ〜約６μｍの範囲の直径を有する、乾燥粒子を含み得る。そのような組成物は、好都合にも、噴霧剤の流れが粉末を分散させるように割り当てられていることがある乾燥粉末レザバーを備えているデバイスを用いて、および／または密閉容器内に低沸点噴霧剤に溶解された活性成分および／もしくは懸濁された活性成分を含むデバイスなどの自動推進式の溶媒／粉末投薬容器を用いて、投与するための乾燥粉末の形態である。そのような粉末は、粒子を含み、ここで、その粒子の少なくとも９８重量％が、０．５μｍを超える直径を有し、そしてその粒子の少なくとも９５％の数が、７μｍ未満の直径を有する。あるいは、その粒子の少なくとも９５重量％が、１μｍを超える直径を有し、そしてその粒子の少なくとも９０％の数が、６μｍ未満の直径を有する。乾燥粉末組成物は、糖などの固体の微粉希釈剤を含み得、そして単位用量の形態で便利に提供される。
低沸点噴霧剤は、通常、大気圧において６５°Ｆ未満の沸点を有する液体噴霧剤を含む。通常、その噴霧剤は、組成物の５０％〜９９．９％（ｗ／ｗ）を構成し得、そして活性成分は、組成物の０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）を構成し得る。その噴霧剤は、さらなる成分（例えば、液体の非イオン性および／もしくは固体の陰イオン性の界面活性物質、ならびに／または固体希釈剤（その活性成分を構成する粒子と同じ桁の粒径を有し得る）をさらに含み得る。
肺送達のために製剤化された本発明の薬学的組成物は、溶液および／または懸濁液の液滴の形態で活性成分を提供し得る。そのような調合物は、活性成分を含む水溶液および／もしくは希薄アルコール溶液ならびに／または懸濁液として、必要に応じて、滅菌されたものとして、調製され得、包装され得、そして／または販売され得、任意の噴霧化デバイスおよび／または霧化デバイスを用いて便利に投与され得る。そのような調合物は、１つ以上のさらなる成分をさらに含み得、それらとしては、サッカリンナトリウムなどの着香料、揮発油、緩衝剤、界面活性剤、および／またはメチルヒドロキシベンゾエートなどの保存剤が挙げられるが、これらに限定されない。この投与経路によって提供される液滴は、約０．１μｍ〜約２００μｍの範囲の平均直径を有し得る。
肺送達に有用であるような本明細書中に記載される調合物は、本発明の薬学的組成物の鼻腔内送達に有用である。鼻腔内投与に適した別の調合物は、活性成分を含み、かつ、約０．２μｍ〜約５００μｍの平均粒子を有する、粗い粉末である。そのような調合物は、嗅剤が摂取される様式で、すなわち、外鼻孔に近づけられた粉末の容器から鼻道を通過する迅速な吸入によって、投与される。
経鼻投与に適した調合物は、例えば、わずか約０．１％（ｗ／ｗ）から１００％（ｗ／ｗ）もの活性成分を含み得、そして本明細書中に記載されるさらなる成分の１つ以上を含み得る。本発明の薬学的組成物は、頬側投与に適した調合物として、調製され得、包装され得、そして／または販売され得る。そのような調合物は、例えば、従来の方法を用いて作製される錠剤および／または舐剤の形態であり得、そして例えば、０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分であり得、そのバランスは、経口的に溶解可能および／または分解可能な組成物、ならびに必要に応じて、本明細書中に記載されるさらなる成分の１つ以上を含む。あるいは、頬側投与に適した調合物は、活性成分を含む、散剤ならびに／またはエアロゾル化および／もしくは霧化された溶液および／もしくは懸濁液を含み得る。そのような粉末状の、エアロゾル化された、および／またはエアロゾル化された、調合物は、分散されるとき、約０．１μｍ〜約２００μｍの範囲の平均粒子サイズおよび／または平均液滴サイズを有し得、そして本明細書中に記載されるさらなる成分の１つ以上をさらに含み得る。
本発明の薬学的組成物は、眼科投与に適した調合物として、調製され得、包装され得、そして／または販売され得る。そのような調合物は、水性または油性の液体賦形剤中の、例えば、０．１％／１．０％（ｗ／ｗ）の溶液および／または懸濁液の活性成分を含む、例えば点眼剤の形態であり得る。そのような点眼剤は、緩衝剤、塩および／または本明細書中に記載されるさらなる成分の１つ以上の他のものをさらに含み得る。眼科的に投与可能で有用な他の調合物としては、微結晶性の形態および／またはリポソーマル調製物として、活性成分を含む調合物が挙げられる。点耳剤および／または点眼剤は、本発明の範囲内であると企図される。
薬学的作用物質の製剤化および／または製造における一般的な考慮は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５に見られる。
投与
いくつかの実施形態において、治療有効量の発明性のあるワクチンナノキャリア組成物は、疾患、障害および／または状態の診断の前、診断と同時に、および／または診断の後に、患者および／または動物に送達される。いくつかの実施形態において、治療量の発明性のある組成物は、疾患、障害および／または状態の症状の発生の前に、発生と同時に、および／または発生の後に、患者および／または動物に送達される。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの量は、その疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状または特徴を、処置するため、緩和するため、回復させるため、軽減するため、その発症を遅延させるため、その進行を阻害するため、その重症度を低下させるため、および／またはその発生率を低下させるために、十分である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの量は、被験体において検出可能な免疫応答を誘発するのに十分である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの量は、被験体において検出可能な抗体応答を誘発するのに十分である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの量は、被験体において検出可能なＴ細胞応答を誘発するのに十分である。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの量は、被験体において検出可能な抗体応答およびＴ細胞応答を誘発するのに十分である。いくつかの実施形態において、提供されるナノキャリアの利点は、ナノキャリアが、従来のワクチンで必要とされる濃度よりもかなり低い濃度の抗原で強力な応答を誘発し得る点である。
本発明の方法によれば、本組成物は、処置のために有効な、任意の量および任意の投与経路を用いて投与され得る。必要とされる正確な量は、被験体の種、年齢および全般的な状態、感染の重症度、特定の組成物、その投与様式、その活性様式などに応じて、被験体ごとに変動する。本発明の組成物は、代表的には、投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、単位投薬形態（ｄｏｓａｇｅ ｕｎｉｔ ｆｏｒｍ）で製剤化される。しかしながら、本発明の組成物の１日の使用量の合計は、正常な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されるものであると理解されるだろう。任意の特定の被験体または生物に対する治療的に有効な具体的な用量レベルは、処置される障害およびその障害の重症度；使用される特定の活性成分の活性；使用される特定の組成物；被験体の年齢、体重、全般的な健康状態、性別および食餌；使用される特定の活性成分の投与回数、投与経路および排出速度；処置の継続期間；使用される特定の活性成分と併用してまたは同時に使用される薬物；ならびに医学分野において周知の同様の因子をはじめとした、種々の因子に依存する。
本発明の薬学的組成物は、任意の経路によって投与され得る。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、皮下、脳（心）室内、経皮的、皮膚間、直腸、膣内、腹腔内、局所的（粉末、軟膏、クリームおよび／または液滴によるようなもの）、経皮的、粘膜、鼻、頬、経腸的、舌下；気管内点滴注入、気管支点滴注入および／もしくは吸入；ならびに／または経口スプレー、鼻スプレーおよび／もしくはエアロゾルをはじめとした種々の経路によって投与される。具体的に企図される経路は、経口投与、静脈内注射、筋肉内注射および／または皮下注射である。いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、非経口的に投与される。いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、静脈内に投与される。いくつかの実施形態において、本発明性のあるワクチンナノキャリアは、経口的に投与される。
一般に、最も適切な投与経路は、ワクチンナノキャリアの性質（例えば、消化管の環境における安定性）、被験体の状態（例えば、被験体が経口投与に耐えることができるか否か）などをはじめとした種々の因子に依存する。本発明は、薬物送達の科学における進歩をおそらく考慮に入れた任意の適切な経路による発明性のある薬学的組成物の送達を包含する。
ある特定の実施形態において、本発明のワクチンナノキャリアは、１日１回以上で、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇの被験体の体重／日の範囲の量で投与されることにより、所望の治療効果が得られ得る。所望の投薬量は、１日に３回、１日に２回、１日に１回、１日おき、３日目ごと、毎週、２週間ごと、３週間ごと、または４週間ごとに、送達され得る。ある特定の実施形態において、所望の投薬量は、複数回投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回またはそれを超える投与）を用いて送達され得る。
いくつかの実施形態において、本発明は、発明性のあるワクチンナノキャリアの集団を含む「治療的なカクテル」を包含する。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの集団内のワクチンナノキャリアのすべてが、複数の標的に結合し得る（例えば、ＳＣＳ−ＭｐｈとＦＤＣの両方に結合し得る）単一の種類の標的化部分を含む。いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアの集団内の異なるワクチンナノキャリアが、異なる標的化部分を含み、そしてその異なる標的化部分のすべてが、同じ標的に結合し得る。いくつかの実施形態において、異なるワクチンナノキャリアが、異なる標的化部分を含み、そしてその異なる標的化部分のすべてが、異なる標的に結合し得る。いくつかの実施形態において、そのような異なる標的は、同じ細胞型と会合されていることがある。いくつかの実施形態において、そのような異なる標的は、異なる細胞型と会合されていることがある。
併用療法
本発明のワクチンナノキャリアおよび薬学的組成物は、併用療法において使用され得ることが認識される。併用レジメンにおいて用いられる治療（療法または手技）の特定の併用は、所望の療法および／または手技と達成されるべき所望の治療効果との適合性を考慮に入れている。用いられる治療は、同じ目的に対して所望の効果を達成し得る（例えば、特定のタイプの微生物感染に対するワクチン接種に有用な発明性のあるワクチンナノキャリアは、同じ微生物感染の処置に有用な別の薬剤と同時に投与され得る）こと、またはそれらは、異なる効果（例えば、ワクチンナノキャリアが原因の任意の有害作用の管理）を達成し得ることが認識されるだろう。
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、単独で投与されてもよいし、１つ以上の他の治療薬と併用して投与されてもよい。「〜と併用して」とは、上記薬剤が、同時に投与されなければならず、そして／または共に送達されるために製剤化されていなければならないことを意味することを意図しないが、これらの送達方法は、本発明の範囲内である。それらの組成物は、１つ以上の他の所望の療法または医学的手技と同時に、その前に、またはその後に、投与され得る。一般に、各薬剤は、その薬剤に対して決定された用量および／または時間スケジュールで投与される。さらに、本発明は、発明性のある薬学的組成物のバイオアベイラビリティを改善し得、それらの代謝を低下させ得、そして／もしくは改変し得、それらの排出を阻害し得、そして／またはそれらの体内分布を改変し得る、薬剤と併用される、それらの送達を包含する。
併用レジメンにおいて用いられる治療（療法および／または手技）の特定の組み合わせは、所望の療法および／もしくは手技ならびに／または達成されるべき所望の治療効果の適合性を考慮に入れている。用いられる治療は、同じ障害に対して所望の効果を達成し得る（例えば、発明性のあるワクチンナノキャリアは、同じ障害を処置するために使用される別の治療薬と同時に投与され得る）こと、および／またはそれらは、異なる効果（例えば、ワクチンナノキャリアが原因の任意の有害作用の管理）を達成し得ることが認識されるだろう。いくつかの実施形態において、本発明のワクチンナノキャリアは、米国食品医薬品局によって承認されている第２の治療薬とともに投与される。
併用で利用される治療的に活性な薬剤は、単一の組成物として一斉に投与されてもよいし、異なる組成物として別個に投与されてもよいことがさらに認識されるだろう。
一般に、併用して利用される薬剤は、個別で利用されるレベルを超えないレベルで利用されると考えられる。いくつかの実施形態において、併用して利用されるレベルは、個別で利用されるレベルよりも低い。
いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアは、例えば、治療薬、診断薬および／または予防薬をはじめとした薬剤と併用して投与され得る。本発明に従って送達される例示的な薬剤としては、小分子、有機金属化合物、核酸、タンパク質（多量体タンパク質、タンパク質複合体などを含む）、ペプチド、脂質、炭水化物、ホルモン、金属、放射性の元素および化合物、薬物、ワクチン、免疫学的作用物質など、および／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態において、特定の微生物感染の発症および／または進行を遅延させるワクチンナノキャリアは、微生物感染の症状を処置する１つ以上のさらなる治療薬と併用して投与され得る。単なる１つの例を挙げると、狂犬病ウイルスに曝露された際、狂犬病ウイルスに対するワクチン接種に有用な免疫調節剤を含むナノキャリアが、狂犬病ウイルスの症状の処置に有用な１つ以上の治療薬（例えば、狂犬病ウイルス感染を示すパラノイアの処置に有用な抗精神病薬）と併用して投与され得る。
いくつかの実施形態において、発明性のあるワクチンナノキャリアを含む薬学的組成物は、５０重量％未満、４０重量％未満、３０重量％未満、２０重量％未満、１５重量％未満、１０重量％未満、５重量％未満、１重量％未満または０．５重量％未満の送達されるべき薬剤を含む。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、薬学的活性を有する、１つ以上の小分子および／または有機化合物と併用して投与される。いくつかの実施形態において、薬剤は、臨床上使用される薬物である。いくつかの実施形態において、薬物は、抗癌剤、抗生物質、抗ウイルス剤、抗ＨＩＶ剤、抗寄生生物剤、抗原虫剤、麻酔薬、抗凝固薬、酵素のインヒビター、ステロイド剤、ステロイド性または非ステロイド性の抗炎症剤、抗ヒスタミン、免疫抑制剤、抗新生物剤、抗原、ワクチン、抗体、うっ血除去薬、鎮静薬、オピオイド、鎮痛薬、解熱薬、受胎調節剤（ｂｉｒｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｇｅｎｔ）、ホルモン、プロスタグランジン、プロゲステロン剤、抗緑内障剤、眼科剤、抗コリン作用薬、鎮痛薬、抗うつ薬、抗精神病薬、神経毒、催眠薬、トランキライザー、抗痙攣薬、筋弛緩剤、抗パーキンソン病剤、鎮痙薬、筋収縮薬（ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔａｎｔ）、チャネル遮断薬、縮瞳剤、抗分泌剤、抗血栓剤、抗凝固薬、抗コリン作用薬、β−アドレナリン遮断剤、利尿薬、心臓血管活性剤、血管作用剤、血管拡張剤、抗高血圧剤、脈管形成剤、細胞−細胞外マトリックス相互作用の調節因子（ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）（例えば、細胞成長インヒビターおよび抗接着分子）、ＤＮＡ合成、ＲＮＡ合成またはタンパク質合成のインヒビターなどである。
ある特定の実施形態において、小分子剤は、任意の薬物であり得る。いくつかの実施形態において、薬物は、適切な行政機関または規制機関によって、ヒトまたは動物における使用に対して安全であり、かつ、有効であるとすでにみなされているものである。例えば、ヒトにおける使用に対して承認された薬物は、２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§３３０．５、３３１〜３６１および４４０〜４６０（本明細書中で参考として援用される）のもとに、ＦＤＡによって列挙されており；動物用で使用するための薬物は、２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§５００〜５８９（本明細書中で参考として援用される）のもとにＦＤＡによって列挙されている。列挙されたすべての薬物が、本発明に従う使用について許容可能であるとみなされる。
本発明における使用に適したクラスおよび特定の薬物のより完全な列挙は、Ａｘｅｌ ＫｌｅｅｍａｎｎおよびＪｕｒｇｅｎ ＥｎｇｅｌによるＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｒｕｇｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｐａｔｅｎｔｓ，Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｔｈｉｅｍｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９９およびＢｕｄａｖａｒｉら編、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ：Ａｎ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９６（これらの両方ともが本明細書中で参考として援用される）に見られ得る。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、１つ以上の核酸（例えば、機能的ＲＮＡ、機能的ＤＮＡなど）と併用して、特定の位置（例えば、組織、細胞または細胞下の場所）に投与される。例えば、特定の微生物感染の発症および／または進行を遅延させるために使用される発明性のあるワクチンナノキャリアは、微生物タンパク質の発現を低下させるＲＮＡｉ剤と併用して投与され得る。核酸の分子特性は、上記の「核酸標的化部分」と題される項に記載されている。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、１つ以上のタンパク質またはペプチドと併用して投与される。いくつかの実施形態において、送達される薬剤は、ペプチド、ホルモン、エリトロポイエチン、インスリン、サイトカイン、ワクチン接種用の抗原などであり得る。いくつかの実施形態において、送達される薬剤は、抗体および／またはその特徴的な一部であり得る。それらの分子特性は、上記の「タンパク質標的化部分」と題される項に記載されている。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、１つ以上の炭水化物（例えば、タンパク質と会合されている炭水化物（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカン（ｐｒｏｔｅｏｇｙｃａｎ）など））と併用して投与される。炭水化物は、天然のものであってもよいし、合成のものであってもよい。炭水化物は、誘導体化された天然の炭水化物であってもよい。ある特定の実施形態において、炭水化物は、単糖であってもよいし、複合糖（ｃｏｍｐｌｅｘ ｓｕｇａｒ）であってもよい。ある特定の実施形態において、炭水化物は、単糖であり、グルコース、フルクトース、ガラクトースおよびリボースが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、炭水化物は、二糖であり、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロースおよびセロビオースが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、炭水化物は、多糖であり、セルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、デキストロース、デキストラン、グリコーゲン、キサンタンガム、ジェランガム（ｇｅｌｌａｎ ｇｕｍ）、デンプンおよびプルランが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、炭水化物は、糖アルコールであり、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール（ｍａｌｉｔｏｌ）およびラクチトールが挙げられるが、これらに限定されない。炭水化物の分子特性は、上記の「炭水化物を含むワクチンナノキャリア」と題される項に記載されている。
いくつかの実施形態において、ワクチンナノキャリアは、１つ以上の脂質（例えば、タンパク質と会合されている脂質（例えば、リポタンパク質））と併用して投与される。本発明に従って使用され得る例示的な脂質としては、油、脂肪酸、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、必須脂肪酸、シス脂肪酸、トランス脂肪酸、グリセリド、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、ホルモン、ステロイド（例えば、コレステロール、胆汁酸）、ビタミン（例えば、ビタミンＥ）、リン脂質、スフィンゴ脂質およびリポタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。脂質の分子特性は、上記の「脂質ワクチンナノキャリア」と題される項に記載されている。
当業者は、これが、本発明のワクチンナノキャリアと併用して送達され得る治療薬、診断薬および／または予防薬の例示的であって包括的でないリストであることを認識するだろう。任意の治療薬、診断薬および／または予防薬は、本発明に従ってワクチンナノキャリアとともに投与され得る。
キット
本発明は、本発明のナノキャリアの１つ以上を備える種々のキットを提供する。例えば、本発明は、発明性のあるワクチンナノキャリアおよび使用のための指示書を備えるキットを提供する。キットは、複数の異なるワクチンナノキャリアを備え得る。キットは、任意のいくつかのさらなる成分または試薬を任意の組み合わせで備え得る。その様々な組み合わせのすべてが、明確に示されるわけではないが、各組み合わせが、本発明の範囲内に包含される。
本発明のある特定の実施形態によれば、キットは、例えば、（ｉ）少なくとも１つの免疫調節剤を含むワクチンナノキャリア（ここで、その少なくとも１つの免疫調節剤は、Ｔ細胞応答とＢ細胞応答の両方を刺激することができる）；（ｉｉ）そのワクチンナノキャリアを、それを必要とする被験体に投与するための指示書を備え得る。
ある特定の実施形態において、キットは、例えば、（ｉ）少なくとも１つの免疫調節剤を含むワクチンナノキャリア（ここで、その少なくとも１つの免疫調節剤は、Ｔ細胞応答とＢ細胞応答の両方を刺激することができる）、少なくとも１つの標的化部分および／または少なくとも１つの免疫調節剤；（ｉｉ）そのワクチンナノキャリアを、それを必要とする被験体に投与するための指示書を備え得る。
ある特定の実施形態において、キットは、例えば、（ｉ）少なくとも１つの免疫調節剤（ここで、その少なくとも１つの免疫調節剤は、Ｔ細胞応答とＢ細胞応答の両方を刺激することができる）；（ｉｉ）少なくとも１つの標的化部分；（ｉｉｉ）少なくとも１つの免疫刺激剤；（ｉｖ）ポリマーマトリックス前駆体；（ｖ）脂質および両親媒性の実体；（ｖｉ）個別の成分（ｉ）〜（ｖ）から発明性のあるワクチンナノキャリアを組織化するための指示書を備え得る。
いくつかの実施形態において、キットは、発明性のあるナノキャリアおよび混合するための指示書を備える。そのようなキットは、いくつかの実施形態において、免疫刺激剤および／または免疫調節剤（例えば、Ｂ細胞抗原またはＴ細胞抗原）も備える。そのようなキットのナノキャリアは、免疫調節剤（例えば、ユニバーサルＴ細胞抗原などのＴ細胞抗原）および／または標的化部分を含み得る。そのＴ細胞抗原および／または標的化部分は、ナノキャリアの表面上に存在し得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤および抗原は、同じである。いくつかの実施形態において、それらは、異なる。
キットは、代表的には、発明性のあるワクチンナノキャリアを使用するための指示書を備える。指示書は、例えば、プロトコルを含み得、そして／またはワクチンナノキャリアの生成のための条件、ワクチンナノキャリアを必要とする被験体へのその投与についての条件などを記載し得る。キットは、通常、１つ以上の器または容器を備えており、個別の成分および試薬の一部または全部が別個に入れられ得る。キットは、商業的販売のための比較的厳重な梱包（ｃｌｏｓｅ ｃｏｎｆｉｎｅｍｅｎｔ）で個別の容器を封入するための手段、例えば、プラスチック箱（ここには、指示書、スタイロフォームなどの包装材料が同封されていることがある）も包含し得る。識別子、例えば、バーコード、無線周波数識別（ｒａｄｉｏ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＩＤ）タグなどが、そのキット内もしくはキット上、またはそのキットに備えられる器もしくは容器の１つ以上の中もしくはそれらに存在し得る。識別子は、例えば、品質管理、在庫管理、追跡、ワークステーション間の移動などの目的のために独自にキットを識別するために使用され得る。
実施例１：リンパ節内の被膜下洞マクロファージは、リンパ由来のウイルスを除去し、そしてそれらを抗ウイルス性Ｂ細胞に提示する
材料および方法
方法の要旨
ＶＳＶ−ＩＮＤおよびＶＳＶ−ＮＪビリオンを、感染ＢＳＲＴ７細胞の培養上清から精製し、そして改変されていないか、またはＡｌｅｘａ−５６８（赤色）もしくはＡｌｅｘａ−４８８（緑色）で蛍光標識されたものを使用した。組織イメージングに使用される蛍光性のウイルスをＵＶ照射することにより、非蛍光の子孫の発生を防いだ。ＶＳＶ−ＩＮＤ粒子の蛍光標識またはＵＶ照射は、それらの抗原性またはＶＩ１０ＹＥＮ細胞内へのカルシウム流入を誘発する能力に影響を及ぼさなかった（図示せず）。足蹠に蛍光性のウイルスを注射した後、電子顕微鏡による解析のために、または免疫染色用および共焦点顕微鏡観察用の凍結切片を作製するために、膝窩排出ＬＮを回収した。ＬＮにおける養子移入されたＢ細胞を画像化するために、ＶＩ１０ＹＥＮおよび野生型Ｂ細胞を蛍光標識し、そして野生型または変異型のレシピエントマウスにｉ．ｖ．注射によって同時移入した。１８時間後、Ｂ細胞がＢ細胞濾胞にホーミングしたとき、標識されたＶＳＶまたは標識されていないＶＳＶをマウスの右足蹠に注射した。その後、様々な時間間隔で、膝窩排出ＬＮを、ＭＰ−ＩＶＭによって観察したか、または共焦点顕微鏡もしくはフローサイトメトリーのために回収することにより、ウイルス特異的Ｂ細胞およびコントロールＢ細胞の活性化状態を解析した。いくつかの実験において、膝窩ＬＮにおけるマクロファージをＣＬＬのｓｃ注射によって枯渇させ、そして７〜１０日後に実験のために動物を使用した。様々なマーカーに対して、ＭＰ−ＩＶＭ、電子顕微鏡、免疫組織化学およびフローサイトメトリーを、ＣＬＬ前処理有りおよび無しで、ＬＮにおいて行った。規定量の生ＶＳＶを足蹠に注射した後、ＶＳＶ注射の２時間後または６時間後に組織を回収することによって、足蹠注射部位から血液および他の器官へのＶＳＶの伝播を評価した。ウイルス価を測定するために、組織をホモジナイズし、そしてプラークアッセイにおいて使用した。胸管のカニューレ挿入後に、いくつかのウイルス伝播実験を行った。
マウスおよび抗体
Ｃ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃマウスをＴａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＮＹ）から購入した。ＶＩ１０ＹＥＮマウス（Ｈａｎｇａｒｔｎｅｒら、２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１００：１２８８３；本明細書中で参考として援用される）、Ｃ３−／−マウス（Ｗｅｓｓｅｌｓら、１９９５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９２：１１４９０；本明細書中で参考として援用される）、ＭＨＣＩＩ−ＥＧＦＰマウス（Ｂｏｅｓら、２００２，Ｎａｔｕｒｅ，４１８：９８３；本明細書中で参考として援用される）、Ａｃｔ−ＥＧＦＰマウス（Ｗｒｉｇｈｔら、２００１，Ｂｌｏｏｄ，９７：２２７８）およびＤＨ−ＬＭＰ２Ａマウス（Ｃａｓｏｌａら、２００４，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：３１７；本明細書中で参考として援用される）をＨａｒｖａｒｄ Ｍｅｄｉｃａｌ ＳｃｈｏｏｌおよびＩｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＩＤＩ）におけるバリアを設けている動物施設内で飼育した。６５０ｒａｄの２線量でＡｃｔ（ＥＧＦＰ）マウスを放射線照射し、そしてＣ５７ＢＬ／６骨髄を用いて再構成することによって、放射線照射キメラを作出し、そのキメラは、使用する前の８週間にわたって再構成された。いくつかの実験において、その実験の７〜１０日前の３０μｌのクロドロネートリポソーム（ＣＬＬ）の足蹠注射によって、ＳＣＳマクロファージを枯渇させた。
クロドロネートは、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙからの寄贈品だった。リポソームを調製するための他の試薬は：ホスファチジルコリン（ＬＩＰＯＩＤ Ｅ ＰＣ，Ｌｉｐｏｉｄ ＧｍｂＨ，Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびコレステロール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）だった。
米国国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）のガイドラインに従って、特定病原体未感染かつ抗ウイルス抗体を含まない状態でマウスを収容した。すべての実験動物の手技は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ ｏｆ Ｈａｒｖａｒｄ Ｍｅｄｉｃａｌ ＳｃｈｏｏｌおよびＩＤＩによって承認されたものだった。
抗Ｂ２２０−Ａｌｅｘａ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｃａｌｔａｇ）、抗ＬＹＶＥ−１（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ−Ｕｐｓｔａｔｅ）、ヤギ−抗ウサギ−ＡＰＣ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ヤギ−抗ＧＦＰ−ＦＩＴＣ（Ｒｏｃｋｌａｎｄ）、抗ＦＩＴＣ−Ａｌｅｘａ４８８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＦａｂ抗ＩｇＭ−ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を除いて、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）から抗体を購入した。以下の抗体：抗ＣＤ６８−Ａｌｅｘａ６４７、抗ＣＤ１１ｂ−Ａｌｅｘａ６４７、Ｆ４／８０−Ａｌｅｘａ６４７、抗ＣＤ１６９−ＦＩＴＣ（３Ｄ６）は、ＡｂＤ−Ｓｅｒｏｔｅｃから購入した。ＶＩ１０ＹＥＮマウスにおけるＶＩ１０ＢＣＲの検出用の抗イディオタイプ抗体３５．６１（Ｈａｎｇａｒｔｎｅｒら、２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１００：１２８８３；本明細書中で参考として援用される）は、標準的な方法に従ってハイブリドーマ上清から作製された。
フローサイトメトリー
マウスの後眼窩より瀉血を行い、そしてＡＣＫ緩衝液（０．１５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ、１ｍＭ ＫＨＣＯ３、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ（二ナトリウム塩），ｐＨ７．２）によって赤血球を溶解した後に、血液サンプルのフローサイトメトリー解析を行った。組織を慎重に細かく切り、続いて、２５０μｇ／ｍｌのリベラーゼ（ｌｉｂｅｒａｓｅ）ＣＩ（Ｒｏｃｈｅ）＋５０μｇ／ｍｌのＤＮアーゼ−Ｉ（Ｒｏｃｈｅ）の存在下、ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｇｉｂｃｏ）中において３７℃にて４０分間消化することによって、フローサイトメトリー用のＬＮおよび脾臓の単一細胞懸濁液を作製した。消化の２０分後、サンプルを１８Ｇ針に勢いよく通過させることにより、器官の完全な分離を確実にした。すべてのフローサイトメトリー解析を、２ｍＭ ＥＤＴＡおよび２％ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−ＧＩＢＣＯ）を含むＰＢＳ含有ＦＡＣＳ緩衝液中でＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）において行い、そしてＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ Ｉｎｃ．，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）によって解析した。カルシウム流入のために、細胞を、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭにおいて４μＭ Ｆｌｕｏ−ＬＯＪＯ（Ｔｅｆｌａｂｓ）で３７℃にて９０分間標識した。ＦＣＳを通して細胞を遠心し、そしてすぐに使用した。
ウイルスおよびＶＳＶプラークアッセイ
ＶＳＶ血清型Ｉｎｄｉａｎａ（ＶＳＶ−ＩＮＤ、Ｍｕｄｄ−Ｓｕｍｍｅｒｓ由来のクローン、インビトロにおいてレスキューされたもの（Ｗｈｅｌａｎら、１９９５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９２：８３８８；本明細書中で参考として援用される）およびプラーク精製されたもの）またはＮｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（ＶＳＶ−ＮＪ，Ｐｒｉｎｇｌｅ Ｉｓｏｌａｔｅ，プラーク精製されたもの）を、ＢＳＲＴ７細胞に対して０．０１のＭＯＩで伝播させた。２０００×ｇにおいて遠心分離し、０．４５μｍ滅菌フィルターで濾過し、そして４０，０００×ｇ、９０分間の超遠心分離に供することによって、感染細胞の上清を細胞残屑から除去した。ペレットをＰＢＳに再懸濁し、そしてＮＴＥ（０．５ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ７．５、５ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ８）中の１０％スクロースのクッションを通過する超遠心分離（１５７，０００×ｇ，６０分間）によって精製した。一晩ＰＢＳに再懸濁した後、ウイルスタンパク質をＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）によって定量化し、そして感染性をプラークアッセイによって定量化した。数回分をＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８またはＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−５６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）のカルボン酸スクシンイミジルエステルで（ウイルス粒子に対して１０４〜１０５倍過剰のモル濃度のＡｌｅｘａ色素で）標識した。結合体化されていない色素を、ＮＴＥ中の１０％スクロースを通過する超遠心分離により除去し、ペレットをＰＢＳに再懸濁し、そして凍結保存した。ＶＳＶ調製物の感染性を、ミドリザル腎臓細胞（Ｖｅｒｏ）におけるプラークアッセイによって定量化した。感染マウスの器官からのＶＳＶ力価は、Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｊｈｅｍホモジナイザーを用いて器官を均質化した後に、同様に測定した。必要な場合には、ウイルス調製中に、１５７，０００×ｇの超遠心分離からのおよそ４ｍｌの上清を回収し、そして１０，０００ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮した。濃縮された上清中の残留感染性を説明するために、ＶＳＶ原液を、濃縮された上清のレベルと等しい感染性のレベルに希釈し、そしてＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞におけるカルシウム流入をさらに１００倍希釈のＶＳＶおよび上清と比較した。ＵＶによって不活性化されたＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−５６８標識アデノウイルス５（ＡｄＶ５）を、標準的な手順（Ｌｅｏｐｏｌｄら、１９９８，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，９：３６７；本明細書中で参考として援用される）に従って作出した。すべての感染性の作業は、施設のガイドラインに従って指定されたＢＬ２＋作業空間において行われ、そしてそれは、Ｈａｒｖａｒｄ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓａｆｅｔｙによって承認されたものだった。
ＶＳＶ中和アッセイ
免疫されたマウスの血清を、２％ＦＣＳを含むＭＥＭに予め４０倍希釈した。２倍段階希釈物を等体積のＶＳＶ（５００ｐｆｕ／ｍｌ）と混合し、そして５％ＣＯ２中、３７℃において９０分間インキュベートした。１００μｌの血清−ウイルス混合物を９６ウェルプレート内のＶｅｒｏ細胞単層上に移し、そして３７℃において１時間インキュベートした。その単層を、１％メチルセルロースを含む１００μｌのＤＭＥＭで覆い、そして３７℃において２４時間インキュベートした。続いて、その覆いを廃棄し、そして単層を固定し、０．５％クリスタルバイオレットで染色した。プラーク数を５０％減少させた最も高い血清の希釈度を力価とした。ＩｇＧ価を測定するために、無希釈の血清を、食塩水中の等体積の０．１ｍＭ β−メルカプトエタノールで前処理した。
接着アッセイ
９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を、ＰＢＳ中の、組換えマウスＶＣＡＭ−１−ＦｃもしくはＩＣＡＭ−１−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）または精製されたＶＳＶ−ＩＮＤの希釈物で、３つ組にて一晩コーティングした。ネガティブコントロールのウェルは、４％ＢＳＡでコーティングし、ポジティブコントロールのウェルは、１ｍｇ／ｍｌポリ−Ｌ−リジンでコーティングした。プレートを、Ｈａｎｋｓ平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）／１％ＢＳＡを用いて４℃において１〜２時間ブロッキングし、そして洗浄した。ＶＩ１０ＹＥＮまたはＣ５７ＢＬ／６マウス由来のナイーブＢ細胞を、ＣＤ４３磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いる磁気細胞分離によってネガティブ選択し、そしてＵＶで不活性化されたＶＳＶ−ＩＮＤ（１０００のＭＯＩ）の存在下または非存在下、１％ＢＳＡ、１ｍＭ Ｃａ２ ＋および１ｍＭ Ｍｇ２ ＋を含むＨＢＳＳにおいて３×１０５／ウェルで３７℃にて３０分間、上記プレートに加えた。穏やかに洗浄した後（１％ＢＳＡを含むＨＢＳＳ中で３回）、ＰＢＳ／１０％グルタルアルデヒドを用いてプレートを１０分間固定し、０．５％クリスタルバイオレット／２０％メタノールを用いて４５分間染色し、そして水中で洗浄した。１％ＳＤＳを加えることによって色素を溶出し、そして３０分後に５７０ｎｍにおける吸光度を分光光度的に測定した（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ３４０ＰＣマイクロプレートリーダーおよびＳｏｆｔｍａｘＰｒｏ３．１．２ソフトウェア，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）。
共焦点顕微鏡観察
いくつかの解析のために、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−５６８またはＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８で標識された２０μｇのＶＳＶ−ＩＮＤまたはＶＳＶ−ＮＪをＣ５７ＢＬ／６マウスの両後足蹠に３０分間注射した。他の実験のために、ＶＩ１０ＹＥＮ×ＭＨＣＩＩ−ＥＧＦＰマウス由来のネガティブ選択された１×１０７個のナイーブＢ細胞を、実験の１日前にマウスに輸注した。所定の時点において、膝窩ＬＮを、１％パラホルムアルデヒド／過ヨウ素酸塩（ＰＬＰ）を含むリン酸塩緩衝化Ｌ−リジンの足蹠注射によってインサイチュにおいて固定した。膝窩ＬＮを取り出し、そして４℃のＰＬＰ中で３〜５時間インキュベートした後、膝窩ＬＮを０．１Ｍ ＰＢＳ，ｐＨ７．２中で洗浄し、そしてＰＢＳ中の上昇系列の１０％、２０％および３０％スクロースによって凍結保護した。サンプルをＴＢＳ組織凍結液（Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｄｕｒｈａｍ ＮＣ）中で急凍し、そして−８０℃において保存した。４０μｍの厚さの切片をＳｕｐｅｒｆｒｏｓｔ Ｐｌｕｓスライド（Ｆｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ）上に載せ、そして１μｇ／ｍｌの抗体２．４Ｇ２（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）でＦｃレセプターを遮断した後に、加湿チャンバー内において蛍光抗体で染色した。サンプルをＦｌｕｏｒＳａｖｅ試薬溶液（ＥＭＤ−Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）中に入れ、そして解析するまで４℃で保存した。Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ５０ＷＩ顕微鏡および１０×／０．４または６０×／１．２Ｗの対物レンズを使用するＢｉｏＲａｄ共焦点顕微鏡システムを用いて像を集めた。ＬａｓｅｒＳｈａｒｐ２０００ソフトウェア（ＢｉｏＲａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｅｍｅｌ Ｈｅｍｐｓｔｅａｄ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａｉｎ）およびＰｈｏｔｏｓｈｏｐ ＣＳ（Ａｄｏｂｅ）を使用して、像を解析した。Ｂ２２０対比染色によって表される、５０μｍのＴ／Ｂ境界内に存在する細胞を数えることによって、Ｔ／Ｂ境界に局在化したＢ細胞の定量化を行い、より中心領域に局在する任意の細胞を濾胞性と考えた。
電子顕微鏡観察
０．１Ｍカコジル酸ナトリウム緩衝液，ｐＨ７．４中の２％ホルムアルデヒドおよび２．５％グルタルアルデヒドの足蹠注射によって、膝窩ＬＮをインサイチュにおいて固定した。そのＬＮを切除し、そして同じ緩衝液中に４℃にて一晩浸漬し、カコジレート緩衝液中で洗浄し、そして暗黒下の室温において１時間、１％四酸化オスミウム／１．５％フェロシアン化カリウム（水溶液）でオスミウム酸染色した。水中で洗浄した後、サンプルを０．０５Ｍマレイン酸塩（ｍａｌｅｌａｔｅ）緩衝液ｐＨ５．１５中で３〜４回洗浄した。サンプルを、マレイン酸塩緩衝液中の１％酢酸ウラニルで２時間対比染色し、そして水中で３回洗浄した。サンプルを、水におけるエタノールの希釈物（７０％−９０％−１００％）中で１５分間インキュベートすることによって脱水し、プロピレンオキシド中で１時間インキュベートし、そしてプロピレンオキシドと１：１混合されたＥｐｏｎ中にＲＴにて一晩移した。サンプルを、新たに混合されたＥｐｏｎで満たされた包埋型に移し、そして重合のために６０℃で２４〜４８時間加熱した。Ｈａｒｖａｒｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ＥＭ施設のＴｅｃｎａｉ Ｇ２ Ｓｐｉｒｉｔ ＢｉｏＴＷＴＮ電子顕微鏡においてサンプルを解析した。
膝窩ＬＮの生体多光子顕微鏡観察（ＭＰ−ＩＶＭ）
ＣＤ４３ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いる磁気単離によって、ナイーブＢ細胞をネガティブ選択した。ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞を３７℃において２０分間、１０μＭ ５−（および６−）−（（（４−クロロメチル）ベンゾイル）アミノ）テトラメチルローダミン（ＣＭＴＭＲ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識し、Ｃ５７ＢＬ／６Ｂ細胞を、３７℃において２５分間、１０μＭ ７−アミノ−４−クロロメチルクマリン（ＣＭＡＣ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識した。いくつかの実験において、非特異的な色素の作用を排除するために、野生型とＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞との間で標識を交換した。解析の１日前に、各集団の５〜６×１０６個のＢ細胞を混合し、そして尾静脈注射によってＣ５７ＢＬ／６レシピエントマウスに養子移入した。いくつかの実験において、ＳＣＳマクロファージを排除するために、その実験の７〜１０日前にレシピエントＣ５７ＢＬ／６マウスの後足蹠に３０μｌのＣＬＬの注射を行った（Ｄｅｌｅｍａｒｒｅら、１９９０，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ，４７：２５１；本明細書中で参考として援用される）。Ｂ細胞の養子移入の１８時間後に、ケタミン（５０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射によってレシピエントマウスを麻酔した。右の膝窩ＬＮをＭＰ−ＩＶＭのために顕微手術的に準備し、報告されているような（Ｍｅｍｐｅｌら、２００４，Ｎａｔｕｒｅ，４２７：１５４；本明細書中で参考として援用される）注文製の顕微鏡ステージ上に置いた。血管および輸入リンパ管を残すように注意を払った。露出させたＬＮを通常の食塩水に浸し、そしてカバーガラスで覆った。ＬＮの隣に熱電対を置くことにより、３６〜３８℃に維持される局所温度をモニターした。ＭａｉＴａｉ Ｔｉ：サファイアチューナブルレーザー（Ｓｐｅｃｔｒａ−Ｐｈｙｓｉｃｓ）からの８００ｎｍの励起波長におけるＢｉｏＲａｄ２１００ＭＰシステムにおいて、ＭＰ−ＩＶＭを行った。蛍光標識されたＶＳＶ（２０μｌ中２０μｇ）を、観察と同時にレシピエントマウスの右後足蹠に３１Ｇ針を通して注射した。細胞遊走の４次元オフライン解析のために、２０×／０．９５水浸対物レンズ（Ｏｌｙｍｐｕｓ）によって１．８×〜３×に電子ズームしながら、４μｍのｚ間隔での１１個の光学的ｘ−ｙ断面の積み重ねを１５秒ごとに取得した。非デスキャン型（ｎｏｎ−ｄｅｓｃａｎｎｅｄ）検出器を用いて４００／４０ｎｍ、４５０／８０ｎｍ、５２５／５０ｎｍおよび６３０／１２０ｎｍの帯域フィルターによって放射蛍光および第二高調波シグナルを検出することにより、３色の像を生成した。Ｖｏｌｏｃｉｔｙソフトウェア（Ｉｍｐｒｏｖｉｓｉｏｎ）を用いて、一連の像の積み重ねを、ボリュームレンダリングされた（ｖｏｌｕｍｅ−ｒｅｎｄｅｒｅｄ）４次元の微速度動画に変換した。Ｖｏｌｏｃｉｔｙを用いる半自動化の細胞追跡およびＭａｔｌａｂ（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ）によるコンピュータ解析によって、３Ｄ瞬間速度を測定した。盲検の観察者が行った手動による動画解析によって、ＳＣＳにおける細胞の蓄積を測定した。２分ごとに、ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞およびポリクローナルＢ細胞を、ＳＣＳにおいて、表在性濾胞（ＳＣＳから＜５０μｍの距離）および深部濾胞（ＳＣＳから＞５０μｍの距離）について数え、そして３０分間の動画全体における各区画についてのＶＩ１０ＹＥＮ／ポリクローナルＢ細胞の比を表した。
胸管カニューレ挿入
胸管カニューレ挿入のために、カニューレ挿入の３０分前に、マウスに２００μｌのオリーブ油をｐ．ｏ．投与することにより、リンパ管の可視化を促進した。次いで、動物をキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）およびケタミンＨＣｌ（５０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した。１Ｕ／ｍｌヘパリン（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）を含む乳酸リンゲル液（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｎｏｒｔｈ Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）の持続注入（２ｍｌ／時間）のために、ポリエチレンカテーテル（ＰＥ−１０）を右頚静脈に挿入した。解剖顕微鏡を用いて、左肋骨下切開によってＴＤを露出させた。Ｓｉｌａｓｔｉｃ（登録商標）ケイ素チューブ（０．０１２”Ｉ．Ｄ．，Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｍｉｄｌａｎｄ，ＵＳＡ）にヘパリン化された（５０Ｕ／ｍｌ）リン酸塩緩衝化食塩水（ＤＰＢＳ，Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）を流し、およそ０．３ｍｍ切開することによって乳び槽に挿入し、そしてイソブチルシアノアクリレートモノマー（Ｎｅｘａｂａｎｄ（登録商標），Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で固定した。そのチューブの残りの部分を後腹壁から体外に出した。続いて、６−０非吸収性縫合糸（Ｓｏｆｓｉｌｋ，Ｔｙｃｏ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｇｒｏｕｐ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＯ）を用いて腹部切開を閉じた。リンパ流を３０分間平衡させた後、動物の足蹠に１０８ｐｆｕのＶＳＶ−ＩＮＤを注射し、そしてリンパサンプルを氷上に６時間回収した。胸管リンパの回収の６時間後にリンパおよび器官を採取し、そして上に記載したとおりプラーク形成させた（ｐｌａｑｕｅｄ）。リンパおよび器官を上に記載したとおりプラーク形成させた。いくつかの実験において、膝窩および傍大動脈の排出リンパ節を外科的に切除し、そして周囲のリンパ管を焼灼することにより、血液にリンパ由来のウイルスが侵入するのを防いだ。
結果および考察
リンパ節（ＬＮ）は、末梢の感染部位から身体の表面に進入するウイルスなどの病原体の全身性の伝播（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ）を防ぐ。リンパ節は、病原体由来の抗原に対する適応性の免疫応答の足場でもある（ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ ａｎｄ Ｍｅｍｐｅｌ，２００３，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，３：８６７；およびＫａｒｒｅｒら、１９９７，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ，１８５：２１５７；これらの両方ともが本明細書中で参考として援用される）。どのようにしてウイルス粒子が輸入リンパから除去されるのか、および同族のＢ細胞に提示されることにより抗体応答が誘導されるのかは不明である。ここで、本発明者らは、皮下（ｓ．ｃ．）注射後、数分以内にウイルス粒子を捕捉するＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１６９＋ＭＨＣＩＩ＋マクロファージの集団を被膜下洞（ＳＣＳ）の床上およびＬＮの髄質中に同定する。ＳＣＳマクロファージは、表面に結合したウイルス粒子を、ＳＣＳ床を通って転位させ、そしてそれらをその下にある濾胞内の遊走Ｂ細胞に提示した。これらのマクロファージの選択的枯渇は、局所的なウイルス保持を損なわせ、宿主のウイルス血症を増悪させ、そして局所的なＢ細胞活性化を弱めた。これらの知見は、ＣＤ１６９＋マクロファージが、二重の生理学的機能を有することを示唆する。そのマクロファージは、リンパ由来の病原体が全身に広がるのを防ぐことによって、生得的な「ハエ捕り紙」として作用し、そして粒状抗原のＢ細胞認識を促進し、体液性免疫応答を開始する、リンパ組織境界面における決定的な門番として作用する。
本発明者らは、末梢組織に進入するウイルス粒子がどのようにして排出ＬＮ内で取り扱われるのかを調べた。マウスの後足蹠に、蛍光標識されＵＶ不活性化された水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）（虫刺されによって伝播可能であり（Ｍｅａｄら、２０００，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９１６：４３７；本明細書中で参考として援用される）、そしてＴと無関係な中和Ｂ細胞応答を誘発する（Ｂａｃｈｍａｎｎら、１９９５，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２５：３４４５；本明細書中で参考として援用される）細胞変性性ラブドウイルスである）を注射した。本発明者らは、注射された足蹠を流出させている膝窩ＬＮにおいて多光子生体顕微鏡（ＭＰ−ＩＶＭ）を用いて（Ｍｅｍｐｅｌら、２００４，Ｎａｔｕｒｅ，４２７：１５４；本明細書中で参考として援用される）、ＶＳＶが、ｓｃ注射後、数分以内にＳＣＳ床上の別個の斑に蓄積したが、ＳＣＳの実質および蓋にはウイルスが存在しないままであったことを観察した（図１１Ａ）。ウイルスの沈積物は、著しい不規則な網状パターンを形成しながら次第に濃くなり、それは、数時間にわたってその場に固定されたままだった。
ＬＮ内のＶＳＶ結合についての偏向部位を特徴付けるために、本発明者らは、照射されたＡｃｔ（ＥＧＦＰ）マウスを野生型骨髄で再構成した。得られたＢ６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）キメラは、ＳＣＳの床上および蓋上の非造血細胞、おそらくリンパ内皮細胞においてＥＧＦＰを発現した。蛍光ＶＳＶをＣ５７ＢＬ／６→Ａｃｔ（ＥＧＦＰ）キメラに足蹠注射すると、ウイルス粒子は、ＳＣＳに押し寄せた。３時間後、未結合の内腔のＶＳＶは、消失したが、ＳＣＳ床は、ＥＧＦＰ＋細胞と共局在化しないＶＳＶの顕著な斑を示したことから、ＶＳＶが、造血細胞によって捕捉されたことが示唆される（図１１Ｂ）。推定上のＶＳＶ捕捉白血球を特徴付けるために、本発明者らは、ＶＳＶ注射の５分後に回収された膝窩ＬＮの電子顕微鏡観察を行った（図１１Ｃ）。弾丸型の高電子密度のＶＳＶ粒子は、ＳＣＳ内またはＳＣＳ床のすぐ下に存在する散らばった大きな細胞の表面上の別個の領域に選択的に結合した。ＳＣＳ床の下に位置するＶＳＶ結合細胞は、代表的には、ＳＣＳ内腔に伸びる突起を介してリンパ区画と接触していた。
ＬＮの超微細構造的研究から、ＳＣＳが多くのマクロファージを含むことが示されている（Ｃｌａｒｋ，１９６２，Ａｍ．Ｊ．Ａｎａｔ．，１１０：２１７；およびＦａｉｒら、１９８０，Ａｍ．Ｊ．Ａｎａｔ．，１５７：２６５；これらの両方ともが本明細書中で参考として援用される）ので、本発明者らは、ＶＳＶ保持細胞が、この集団に属するという仮説を立てた。実際に、足蹠注射の３０分後に得られた凍結ＬＮ切片の共焦点顕微鏡観察から、ＶＳＶが、マクロファージマーカーであるＣＤ１６９／シアロアドヘシンとＳＣＳ内に共局在化したことが示された（図１１Ｄ）。フローサイトメトリーを用いて、本発明者らは、ＬＮ内のおよそ１％〜２％の単核細胞（ＭＮＣ）上にＣＤ１６９を検出し、それらは、ＣＤ１１ｂとＭＨＣ−ＩＩとを均等に同時発現していたことから、ＶＳＶ結合細胞は、実際にマクロファージであることが示唆される（図１２）。ほとんどのＣＤ１６９＋細胞は、ＣＤ６８およびＦ４／８０をはじめとした他のマクロファージマーカーも発現したが、顆粒球／単球マーカーＧｒ−１を発現していたのはわずかだった。ＣＤ１６９＋細胞は、ＣＤ１１ｃも発現したが、ＣＤ１１ｃ高の通常の樹状細胞（ＤＣ）よりも低いレベルで発現した。本発明者らは、インタクトなビリオンが、経皮的な沈着の後、数分以内にリンパに進入し、そして排出ＬＮの髄質内およびＳＣＳ内のマクロファージ上に迅速かつ選択的に蓄積すると結論する。
ウイルス固定についての機序を探求するために、生のＶＳＶ（２×１０８ｐｆｕを含む２０μｇ）を後足蹠に注射し、そして２時間後に排出ＬＮにおけるウイルス価を評価した。補体Ｃ３欠損マウスの排出ＬＮにおけるＶＳＶ保持について欠陥は無かった（図１１Ｅ）。分泌型免疫グロブリンを欠くＤＨ−ＬＭＰ２ａマウスのウイルス価は、脾臓において低かったが、膝窩ＬＮでは低くなかった（図１１Ｆ）。ゆえに、ＬＮにおけるＶＳＶ固定は、脾臓周辺帯マクロファージ（血液由来ＶＳＶを捕捉するためにＣ３および自然抗体を必要とする）（Ｏｃｈｓｅｎｂｅｉｎら、１９９９，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９０：１１６５；およびＯｃｈｓｅｎｂｅｉｎら、１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６：２１５６；これらの両方ともが本明細書中で参考として援用される）によって用いられる機序と異なる機序を介して生じる。おそらく、ＶＳＶ表面糖タンパク質（ＶＳＶ−Ｇ）は、マクロファージによって発現される炭水化物結合スカベンジャーレセプターによってＬＮにおいて認識され得る（Ｔａｙｌｏｒら、２００５，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２３：９０１；本明細書中で参考として援用される）が、正確な機序は、さらなる検討を必要とするだろう。
ウイルスの伝播に対するマクロファージによるウイルス捕捉および抗ウイルス免疫の結果は何だろうか。この疑問に立ち向かうために、本発明者らは、クロドロネートリポソーム（ＣＬＬ；Ｄｅｌｅｍａｒｒｅら、１９９０，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ，４７：２５１；本明細書中で参考として援用される）の足蹠注射によってＬＮ常在性マクロファージを枯渇させた。使用した用量では、ｓｃ注射されたＣＬＬは、注射部位を流出させるＬＮ（膝窩、鼠径部および傍大動脈（ｐａｒａｏｒｔｉｃ）のＬＮを含む）においてマクロファージを選択的に排除した（Ｄｅｌｅｍａｒｒｅら、１９９０，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ，４７：２５１；本明細書中で参考として援用される）が、遠位のＬＮおよび脾臓におけるマクロファージは、残ったままだった（図１３Ａ、Ｂ）。様々なＬＮ常在性ＣＤ１１ｂ＋ＭＨＣＩＩ＋食細胞のうち、ＣＬＬは、ＣＤ１６９＋サブセットを優先的に除去したのに対し、ＬＹＶＥ−１＋細胞および通常のＤＣは、変化しないままだった。ＣＬＬ処置された膝窩ＬＮは、処置の７日後に、Ｂ細胞の数を増加させ、そして濾胞を大きくさせたが、他の形態学的パラメータ、例えば、Ｔ／Ｂ境界の分界およびＳＣＳ超微細構造は、変化しないままだった（図１３Ｃ〜Ｅ）。
本発明者らは、無処置ＬＮと比べて、ＣＬＬ処置マウスの排出ＬＮからおよそ１０倍低いウイルス価を再確認した（図１１Ｇ）ことから、マクロファージの枯渇は、リンパの濾過を非効率的にさせることが示唆される。実際に、ＶＳＶ力価は、ＣＬＬ処置マウスの血液、脾臓および非排出ＬＮにおいて劇的に増加した。ＣＬＬ処置マウスにおいてでさえも胸管（ＴＤ）において閉塞カテーテルを有するマウスの足蹠にウイルスが注射されたとき、循環ＶＳＶが検出不可能だったので、注射部位から血液へのウイルスの伝播は、厳密にリンパドレナージに依存した。ウイルス価は、無処置のマウスのＴＤリンパ液において低かったが検出可能であり、ＣＬＬ処置動物では有意に増加した（図１１Ｈ）。このことから、末梢組織から早期にウイルスが伝播するための主要な導管が、リンパであり、これは、リンパ由来ＶＳＶが全身に広がるのを防ぐＬＮ常在性でＣＬＬ感受性のマクロファージによって監視されることが示唆される。
この捕捉機序は、ＶＳＶに特有ではなかった；ＣＤ１６９＋ＳＣＳマクロファージは、アデノウイルス（ＡｄＶ；図１４Ａ〜Ｃ）およびワクシニアウイルス（ＶＶ、図１４Ｄ）も保持したことから、マクロファージが、多くの構造的に異なる病原体に対する監視者として作用することが示唆される。対照的に、ウイルスサイズのラテックスビーズ（２００ｎｍ）は、足蹠注射後、ＳＣＳにおいて十分に保持されなかった（図１４Ｅ）。したがって、ＳＣＳマクロファージは、リンパ由来のウイルスと他の類似サイズの粒子を区別する。蛍光性のＶＳＶ、ＡｄＶおよびＶＶは、排出ＬＮの髄質にも蓄積したが、それらは、ＣＤ１６９低細胞（図１１Ｄ）だけでなく、ＣＤ１６９−ＬＹＶＥ−１＋リンパ内皮細胞（図１４Ｃ、Ｄ）によっても結合された。このことは、ＣＬＬ処置ＬＮにおいて確証され、ＶＳＶは、もっぱら髄質性ＬＹＶＥ−１＋細胞上に蓄積した（図１５）。
次に、本発明者らは、捕捉されたＶＳＶが、どのようにしてＢ細胞によって認識されるのかを調べた。膝窩ＬＮは、ＳＣＳ内腔に珍しいＢ細胞を含む（図１６Ａ）が、本発明者らは、電子顕微鏡像においてＳＣＳ内にウイルス結合リンパ球についての証拠を見いだせなかった。その代わり、ウイルス粒子は、ＳＣＳ床を横切って伸びるマクロファージによって、表在性の濾胞内のＢ細胞に提示されていた。ＶＳＶ（図１７Ａ）またはＡｄＶ（図１６Ｂ〜Ｅ）の注射の後、ビリオンは、少なくとも４時間にわたって、Ｂ細胞−マクロファージ境界面において容易に検出可能だった。このことは、ＳＣＳマクロファージが、Ｂ細胞への提示のためにＳＣＳ床を横切ってウイルス粒子を往復輸送することを示唆した。ＳＣＳマクロファージにおいてＶＳＶを含む少しのベシクルしかウイルスの分解の証拠を示さなかったので、トランスサイトーシスは、ありそうにもないとみられた。さらに、本発明者らは、ＭＰ−ＩＶＭによって、負荷後の少なくとも最初の６時間はウイルス結合マクロファージの実質的な運動を検出しなかった。ゆえに、ウイルス粒子は、おそらくマクロファージ表面に沿って移動することによって、ＬＮ実質に到達した。注目すべきは、ＶＳＶおよび他の抗原もまた、末梢の位置から移行するＤＣによってＢ細胞に提示される（Ｌｕｄｅｗｉｇら、２０００，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，３０：１８５；およびＱｉら、２００６，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３１２：１６７２；これらの両方ともが本明細書中で参考として援用される）が、足蹠由来のＤＣの膝窩ＬＮへの遊走は、長い時間を要するので、足蹠由来のＤＣは、これらの非常に早期の事象において関与しない可能性がある。本発明者らは、ＳＣＳ床が、リンパ由来のウイルスにとって乗り越えられないものであり；ＣＤ１６９＋マクロファージは、ウイルスの転位およびＢ細胞への提示の門番役および進行役として作用するとみられると結論付ける。
次に、本発明者らは、どのようにしてナイーブＢ細胞が、ウイルスの遭遇に応答するのかを２つのＶＳＶ血清型Ｉｎｄｉａｎａ（ＶＳＶ−ＩＮＤ）およびＮｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ（ＶＳＶ−ＮＪ）（図１８；Ｒｏｏｓｔら、１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１８９：２３３；本明細書中で参考として援用される）を用いて探索した。本発明者らは、野生型Ｂ細胞と、ＶＳＶ−ＮＪと結合しないＶＳＶ−ＩＮＤ特異的Ｂ細胞レセプターを発現するＶＩ１０ＹＥＮマウス由来のＢ細胞（Ｈａｎｇａｒｔｎｅｒら、２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１００：１２８８３；本明細書中で参考として援用される）とを比較した。対照的に、少数（２％〜５％）の野生型Ｂ細胞が、活性化されずに両方の血清型に結合した。これは、ＶＳＶ−Ｇとの低親和性の反応性または間接的な相互作用、例えば、補体を介する相互作用（Ｒｏｓｓｂａｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ，２００３，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９８：５９１；本明細書中で参考として援用される）を反映し得る。インビボにおける応答を評価するために、異なって標識された野生型およびＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞を養子移入し、そしてＬＮ濾胞ホーミングさせた。次いで、蛍光性のＵＶ不活性化ウイルスを足蹠に注射し、そして約５〜３５分後にＭＰ−ＩＶＭによって膝窩ＬＮを記録した。ウイルスを含まないＬＮにおいて、またはＶＳＶ−ＮＪの注射後に、ＶＩ１０ＹＥＮおよびコントロールＢ細胞は、同じ分布を示した（図１７Ｂ〜Ｃ）。対照的に、ＶＳＶ−ＩＮＤを注射したとき、ＶＩ１０ＹＥＮ細胞は、迅速にＳＣＳ床およびその下に蓄積した。ＣＬＬ処置ＬＮと無処置ＬＮとの間にベースラインのＢ細胞の運動性および分布の差異はなかったことから、ＶＳＶ特異的Ｂ細胞が、両方の条件においてＳＣＳを探索する可能性が同様にあると示唆される。しかしながら、ＣＬＬ処置ＬＮでは、蛍光性のウイルスが、ＳＣＳにおいて保持されず、そしてＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞が、その領域に集まらなかったことから、ＳＣＳマクロファージが、両方の事象にとって必須であることが示唆される（図１７Ｂ）。
ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞分布を厳密に定量化するために、ＬＮをＶＳＶ負荷の３０分後に回収し、そして共焦点顕微鏡によって解析した。濾胞のＶＩ１０ＹＥＮ集団全体は、その全体的な分布を保持した（図１７Ｄ）が、ＳＣＳの≦５０μｍ下に存在する細胞のサブセットは、ＶＳＶ−ＩＮＤを含むＬＮではＳＣＳに向かって移動したが、ＶＳＶ−ＮＪを含むＬＮでは移動しなかった（図１７Ｅ）。非応答性ポリクローナルＢ細胞が、同じ化学誘引物質レセプターを発現するので、化学誘引物質シグナルが原因で、ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞がＳＣＳに再分布されることはありそうにないとみられる。それどころか、運動性のＶＩ１０ＹＥＮ細胞と、マクロファージに結合したＶＳＶ−ＩＮＤとのランダムな接触が、ＢＣＲ依存性の「停止シグナル」の引き金を引く（Ｏｋａｄａら、２００５，ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ，３：ｅｌ５０；本明細書中で参考として援用される）：ＶＳＶ−ＩＮＤに対する短期間の曝露が、ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞においてＬＦＡ−１および／またはα４インテグリンを活性化し（Ｄａｎｇ ａｎｄ Ｒｏｃｋ，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４６：３２７３；本明細書中で参考として援用される）、その結果、それぞれのリガンドであるＩＣＡＭ−１およびＶＣＡＭ−１（両方ともがＳＣＳにおいて発現される）への接着がもたらされる（図１９）。さらに、ＳＣＳマクロファージに結合されたＶＳＶ−ＩＮＤは、ＢＣＲを介して直接、ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞接着に対する基質を提供し得る。
捕捉されたビリオンが、どのようにして検出時にＢ細胞によってプロセシングされるのかを調べるために、本発明者らは、ＶＩ１０ＹＥＮ×ＭＨＣＩＩ−ＥＧＦＰマウス由来のＢ細胞を試験し、これにより、本発明者らは、Ｂ細胞プライミングの指標として、エンドソームのＭＨＣ−ＩＩと共局在化するエンドサイトーシスによって取り込まれたＶＳＶを可視化させた（Ｖａｓｃｏｔｔｏら、２００７，Ｃｕｒｒ．，Ｏｐｉｎ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９：９３；本明細書中で参考として援用される）。注射後３０分以内に、表在性濾胞内のＶＩ１０ＹＥＮ×ＭＨＣＩＩ−ＥＧＦＰ Ｂ細胞は、大規模にＶＳＶ−ＩＮＤを内部移行したが、ＶＳＶ−ＮＪ粒子を内部移行しなかった（図２０Ａ、Ｂ）。ウイルスを保持しているＶＳＶ特異的Ｂ細胞は、深部濾胞において、まれだったが、検出可能だった。これらの細胞は、表面上にＶＳＶを有する珍しいポリクローナルＢ細胞からビリオンを獲得したかもしれないか、またはＶＳＶ−ＩＮＤを獲得した後にＳＣＳにおいて拘束されなかったＶＩ１０ＹＥＮ細胞に相当し得る。
本発明者らの組織学的な知見から、インタクトなビリオンが、ＳＣＳおよび表在性濾胞においてＢ細胞によって優先的に検出され、そして獲得されることが証明されるが、Ｂ細胞運動性のＭＰ−ＩＶＭ測定から、より広い抗原伝播が明らかになった。ＶＳＶ−ＩＮＤ注射の後、ＶＩ１０ＹＥＮ細胞は、Ｂ濾胞全体において急速な速度の低下を示した（図２１）。これは、ＣＬＬ処置ＬＮおよびコントロールＬＮにおいて等しく観察されたことから、ウイルス抗原が、マクロファージと無関係にＢ細胞に達したことが示唆される。この抗原性物質は、おそらく、天然の感染の避けられない副産物である遊離ウイルスタンパク質から構成されていた。実際に、本発明者らのＶＳＶ原液の精製された上清が、ＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞において強力なカルシウム流入を誘導した（図１８Ｅ）。低分子のリンパ由来タンパク質は、迅速に濾胞中に拡散し、そして同族のＢ細胞を活性化することが知られている（Ｐａｐｅら、２００７，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２６：４９１；本明細書中で参考として援用される）。したがって、ウイルス上清の注射は、ＳＣＳにおける蓄積を誘導せずに濾胞のＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の運動性を抑制したことから、遊離ＶＳＶ−Ｇがそのウイルス接種材料中に含まれ、活性であったことが示唆される。このことは、ＶＳＶ−ＩＮＤ注射のマクロファージ非依存性の汎−濾胞作用を説明し得る。
ウイルス遭遇時のＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞活性化の動態を測定するために、本発明者らは、通常の活性化マーカーを測定した（図２２）。共刺激分子ＣＤ８６が、まず、ＶＳＶ−ＩＮＤ負荷の６時間後にアップレギュレートされた。ＣＤ６９は、おそらく多面発現性のＩＦＮ−αシグナル伝達によって、ポリクローナルＢ細胞上でも、より迅速に誘導された（Ｂａｒｃｈｅｔら、２００２，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９５：５０７；およびＳｈｉｏｗら、２００６，Ｎａｔｕｒｅ，４４０：５４０；これらの両方ともが本明細書中で参考として援用される）。＞７０％のＶＩ１０ＹＥＮ細胞がＢＣＲ低／負だったとき、表面ＩｇＭ（図２０Ｃ、Ｄ）が、早くも負荷の３０分後にダウンレギュレートされ、２時間以内に最大に達した。ゆえに、ＢＣＲ内部移行は、ウイルス特異的Ｂ細胞活性化に対して最も早い特異的な読み取りを提供した。著しいことに、ＣＬＬ処置ＬＮにおけるＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞は、２０μｇのＶＳＶ−ＩＮＤを皮下注射した後の最初の２時間においてＢＣＲをダウンレギュレートしなかった（図２０Ｅ）ことから、ＳＣＳマクロファージが、捕捉されたビリオンをＢ細胞に効率的に早期に提示するために必要であることが示唆される。
プライミングされたＢ細胞は、クラススイッチ組換えおよび胚中心形成のために、最終的にＣＤ４＋Ｔ細胞からの補助を求める（Ｖａｓｃｏｔｔｏら、２００７，Ｃｕｒｒ．，Ｏｐｉｎ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９：９３；本明細書中で参考として援用される）。Ｔ細胞と接触するために、新たに活性化されたＢ細胞は、Ｔ／Ｂ境界に向かって遊走する（Ｏｋａｄａら、２００５，ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌ，３：ｅｌ５０；およびＲｅｉｆら、Ｎａｔｕｒｅ，４１６：９４；これらの両方ともが本明細書中で参考として援用される）。この機序は、マクロファージが十分なマウスにおいて効率的に作動した；ほとんどのＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞は、わずか４０ｎｇのＶＳＶ−ＩＮＤの足蹠注射後の６時間以内にＴ／Ｂ境界に再分布した（図２０Ｆ、Ｈおよび２３）。対照的に、ＣＬＬ処置マウスにおいてＶＩ１０ＹＥＮ Ｂ細胞の十分な再分布を誘発するためには、１００倍多いウイルスの用量が必要だった（図２０Ｇ、Ｈ）。注射された用量と無関係に、注射の後１２時間までにほとんどのＶＳＶ特異的細胞が、Ｔ−Ｂ境界に達した。したがって、ＳＣＳマクロファージ無しでさえも、濾胞Ｂ細胞は、たとえ効率的でなくても、ＶＳＶ由来抗原によって最終的に活性化される。
結論として、本発明者らは、ＬＮにおけるＣＤ１６９＋マクロファージに対する二重の役割を証明する：それらは、リンパ由来のウイルスを捕捉して全身への伝播を防ぎ、そして濾胞Ｂ細胞の効率的な提示および活性化のためにＳＣＳ床を横切って、捕捉されたビリオンを導く。
実施例２：例示的な脂質ベースのワクチンナノテクノロジー構造
リポソームナノキャリア
いくつかの実施形態において、１つまたは複数の免疫調節剤を免疫系の細胞に送達するために、いくつかの実施形態において、小型のリポソーム（１０ｎｍ〜１０００ｎｍ）が、製造され、そして使用される（図３）。一般に、リポソームは、人工的に構築された球状の脂質ベシクルであり、その数十〜数千ｎｍの制御可能な直径は、個別のリポソームが、様々なカーゴ（例えば、タンパク質、酵素、ＤＮＡおよび薬物分子）を被包し、保管するために使用され得る、ゼプトリットル（１０−２１Ｌ）〜フェムトリットル（１０−１５Ｌ）の体積を有する生体適合性の区画を構成することを示す。リポソームは、両親媒性の特性：二重層の内面と外面の両方が親水性であり、そして二重層の内腔が疎水性である、を有する脂質二重層を構成し得る。親油性の分子は、リポソーム膜中にそれ自身を自発的に包埋し得、そしてその親水性ドメインを外側に保持し得、親水性分子は、膜の生体機能性を利用してリポソームの外面と化学的に結合体化され得る。
ある特定の実施形態において、脂質が、親油性の免疫調節剤と混合され、次いで、固体表面上で薄膜に形成される。親水性免疫調節剤を水溶液に溶解し、それをその脂質薄膜に加えて、ボルテックスによって脂質を加水分解する。二重層壁に組み込まれた親油性の免疫調節剤およびリポソーム内腔の内側の親水性免疫調節剤を有するリポソームが、自発的に組織化される。
ナノ粒子によって安定化されたリポソームナノキャリア
いくつかの実施形態において、ナノ粒子によって安定化されたリポソームが、１つまたは複数の免疫調節剤を免疫系の細胞に送達するために使用される（図４）。小型の荷電ナノ粒子が、逆の電荷を有するか、または正味電荷を有しない、リポソームの表面に近づくとき、ナノ粒子と膜との間の静電気的相互作用または電荷−双極子相互作用によって、ナノ粒子が引きつけられることにより、そのナノ粒子がその膜表面上に留まり、その結果、脂質膜によって部分的に包まれる。これは、リポソームの局所的な膜の屈曲および小球の表面張力（これらの両方が膜の剛性の調整を可能にする）を誘導する。この局面は、ウイルスを模倣するリポソームを用いるワクチン送達にとって重大であり、その堅さはウイルス膜内の他の生物学的成分の組成に依存する。さらに、吸着されたナノ粒子は、リポソームを融合から保護する帯電したシェルを形成し、それにより、リポソームの安定性が増大する。ある特定の実施形態において、小型のナノ粒子は、穏やかなボルテックスによってリポソームと混合され、そしてそのナノ粒子は、自発的にリポソーム表面に固着する。
リポソーム−ポリマーナノキャリア
いくつかの実施形態において、リポソーム−ポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を免疫系の細胞に送達するために使用される（図５）。親水性の免疫調節剤は、リポソーム内部の中空を維持する代わりに、被包され得る。図３は、リポソームで被覆されたポリマーナノキャリアを形成するジブロックコポリマーナノ粒子が負荷されたリポソームを示しており、これは、リポソームおよびポリマーナノ粒子の限界のいくつかを排除しつつ、それら両方の長所を有する。いくつかの実施形態において、リポソームシェルは、親油性の免疫調節剤を有するためまたは親水性の免疫調節剤を結合体化するために使用され得、そしてポリマーコアは、疎水性免疫調節剤を送達するために使用され得る。ある特定の実施形態において、予め製剤化されたポリマーナノ粒子（４０ｎｍ〜１０００ｎｍ）は、穏やかなボルテックスによって小型のリポソーム（２０ｎｍ〜１００ｎｍ）と混合されることにより、ポリマーナノ粒子の表面上にリポソーム融合が誘導される。
ナノ粒子によって安定化されたリポソーム−ポリマーナノキャリア
いくつかの実施形態において、ナノ粒子によって安定化されたリポソーム−ポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図６）。小型のナノ粒子（１ｎｍ〜３０ｎｍ）をリポソーム−ポリマーナノキャリア表面に吸着させることによって、そのナノキャリアは、上述のナノ粒子によって安定化されたリポソーム（図４）と、上述のリポソーム−ポリマーナノ粒子（図５）の両方の長所だけでなく、調整可能な膜の剛性および制御可能なリポソーム安定性も有する。
逆ミセルを含むリポソーム−ポリマーナノキャリア
いくつかの実施形態において、逆ミセルを含むリポソーム−ポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図７）。上述のリポソーム−ポリマーナノキャリア（図５および６）は、ポリマーナノ粒子内に疎水性免疫調節剤を有することに限定されているので、ここで、小型の逆ミセル（１ｎｍ〜２０ｎｍ）は、親水性免疫調節剤を被包するように製剤化され、次いで、ジブロックコポリマーと混合されることにより、リポソームのポリマーコアを製剤化する。
ある特定の実施形態において、被包される親水性免疫調節剤は、まず、揮発性で水混和性の有機溶媒中において、天然由来かつ無毒性の両親媒性の実体と混合することによって、逆ミセルに組み込まれる。得られた生分解性ポリマー−逆ミセル混合物をポリマー不溶性の親水性非溶媒と併せることにより、その非溶媒への溶媒の迅速な拡散および有機溶媒の蒸発によってナノ粒子が形成される。ポリマーナノ粒子を含んだ逆ミセルは、脂質分子と混合されることにより、上述のリポソーム−ポリマー複合体構造が形成される（図５）。
逆ミセルを含む、ナノ粒子によって安定化されたリポソーム−ポリマーナノキャリア
いくつかの実施形態において、逆ミセルを含む、ナノ粒子によって安定化されたリポソーム−ポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図８）。小型のナノ粒子（１ｎｍ〜３０ｎｍ）をリポソーム−ポリマーナノキャリア表面に吸着させることによって、そのナノキャリアは、上述のナノ粒子によって安定化されたリポソーム（図４）と、上述の逆ミセルを含んだリポソーム−ポリマーナノ粒子（図７）の両方の長所だけでなく、調整可能な膜の剛性および制御可能なリポソーム安定性も有する。
脂質単層によって安定化されたポリマーナノキャリア
いくつかの実施形態において、脂質単層によって安定化されたポリマーナノキャリアが、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図９）。上述のリポソーム−ポリマーナノキャリア（図５〜８）と比べると、この系は、薬剤と製造の両方に関して単純さという長所を有する。いくつかの実施形態において、疎水性ホモポリマーは、疎水性セグメントと親水性セグメントの両方を有する図５〜８において使用されるジブロックコポリマーと対照的に、ポリマーコアを形成し得る。脂質によって安定化されたポリマーナノキャリアは、ポリマーナノ粒子およびリポソームを別個に製剤化した後、それらを融合する代わりに、単一工程で形成され得る。
ある特定の実施形態において、まず、親水性の免疫調節性分子を、脂質頭部基と化学的に結合体化する。その結合体を、１つ以上の水混和性溶媒を含む水溶液中において、ある特定の比で非結合体化脂質分子と混合する。生分解性のポリマー材料を、被包される疎水性免疫調節剤と、水混和性または部分的に水混和性の有機溶媒中で混合する。得られたポリマー溶液を、結合体化された脂質および結合体化されていない脂質の水溶液に加えることにより、水への有機溶媒の迅速な拡散および有機溶媒の蒸発によってナノ粒子が得られる。
逆ミセルを含む、脂質単層によって安定化されたポリマーナノキャリア
いくつかの実施形態において、逆ミセルを含む、脂質単層によって安定化されたポリマーナノ粒子が、１つまたは複数の免疫調節剤を送達するために使用される（図１０）。上述の脂質によって安定化されたポリマーナノキャリア（図９）は、疎水性免疫調節剤を有することに限定されているので、ここで、小型の逆ミセル（１ｎｍ〜２０ｎｍ）は、親水性免疫調節剤を被包するように製剤化され、そして生分解性ポリマーと混合されることにより、ポリマーナノキャリアコアが形成される。
実施例３：ヒトＩｇＧ由来のＦｃフラグメントを用いるＳＣＳ−Ｍｐｈのインビボ標的化
蛍光で改変されていないコントロールナノ粒子（上パネル、図２４Ａ）またはＦｃ表面結合体化標的化ナノ粒子（中央および下パネル、図２４Ａ）を、麻酔されたマウスの足蹠に注射し、そして１時間後に膝窩排出リンパ節を切除し、フローサイトメトリーのために単一細胞懸濁液を調製した。クロドロネート負荷リポソームの注射によってリンパ節マクロファージを枯渇させた１週間後のマウスにも標的化ナノ粒子を注射した（下パネル、図２４Ａ）。ＣＤ１１ｂの高発現に基づいて、ゲート内の細胞集団を、ナノ粒子と会合されているマクロファージと同定した。これらの結果から、（ｉ）ナノ粒子結合は、クロドロネート感受性マクロファージの存在に依存すること、および（ｉｉ）標的化ナノ粒子は、コントロールナノ粒子よりも約２倍多いマクロファージと結合することが示唆される。
図２４の右のパネルは、青色蛍光コントロールナノ粒子（上パネル、図２４Ａ）または標的化ナノ粒子（中央および下パネル、図２４Ａ）を注射した後の凍結リンパ節切片の蛍光顕微鏡像を示している。切片を抗ＣＤ１６９、および髄質（上および下パネル、図２４Ａ）またはＢ細胞（中央パネル、図２４Ａ）のいずれかを同定するマーカーで対比染色した。ナノ粒子注射の１時間後、ほとんどのコントロール粒子が、髄質内に見られる（上、図２４Ａ）が、標的化ナノ粒子は、Ｂ細胞濾胞に隣接するＣＤ１６９＋ＳＣＳ−Ｍｐｈと共局在化する（中央、図２４Ａ）。注射の２４時間後に、ＳＣＳと髄質との間の皮質性領域に、標的化ナノ粒子の細胞サイズの不連続な蓄積が見られることから、遊走性樹状細胞による取り込みおよび輸送が示唆される。
マウスに赤色蛍光Ｂ細胞をｉ．ｖ．注射し、そしてコントロールとＦｃ標的化ナノ粒子との１：１混合物を足蹠に注射した。２４時間後、移入されたＢ細胞のいくつかが、Ｂ細胞濾胞に遊走したとき、膝窩排出リンパ節を切除し、そして共焦点顕微鏡および緑色：青色蛍光比の定量的画像解析のために切片にした。被膜下洞（ＳＣＳ）領域は、類似レベルの青色ナノ粒子と緑色ナノ粒子とを含んだ（右側の丸で囲まれた細胞、図２４Ｂ）が、Ｆｃ標的化ナノ粒子と会合された緑色蛍光は、ＳＣＳにおいて約２倍強かった。散らばった赤色Ｂ細胞によって表されるＢ濾胞内の緑色ナノ粒子の顕著な蓄積も存在した。これらの領域は、マクロファージおよび樹状細胞と同様に、大量のＦｃレセプターを発現することが知られている濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）の特徴的なサイズ、形状および分布を有する。
実施例４：抗原を有する標的化ナノ粒子は、高度に免疫原性であり、高い抗体価を誘導する
マウスの群（５匹／群）を：ＵＶ不活性化された水疱性口内炎（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｓｔｏｍａｔｉｔｓ）ウイルス（ＶＳＶ、血清型Ｉｎｄｉａｎａ）またはＶＳＶの精製された免疫原性エンベロープ糖タンパク質（ＶＳＶ−Ｇ）で免疫した。ＶＳＶ−Ｇは、ミョウバンと混合されている可溶型、またはアジュバントとしてミョウバン有りもしくは無しの、非標的化もしくは標的化（表面に固定化されたヒトＦｃによって）ＰＬＧＡナノ粒子と結合体化されている可溶型で、投与された。遊離ＶＳＶ−Ｇの用量は、ナノ粒子とともに送達されたＶＳＶ−Ｇの用量よりも約１０倍高いと推定された。初回の免疫化の後の５５日目に、マウスに追加免疫注射を行い、そして１０週間後に血清を得て、Ｖｅｒｏ細胞に対するＶＳＶ媒介性のプラーク形成の中和について試験した。結果は、プラーク形成を少なくとも５０％阻止した最も高い血清希釈度として力価を示している。各符号は、１匹のマウスにおける中和抗ＶＳＶ力価を反映している。Ｆｃ標的化ナノ粒子上に提示されたＶＳＶ−Ｇで免疫されたマウスの群は、他の任意の群よりも有意に高い中和抗ＶＳＶ力価をもたらした（その群の中で最も高い力価を有した２匹の動物は、試験された最も高い希釈度においてプラーク形成を完全に中和したので、実際の力価は、より高かっただろう）。
ナノ粒子（ＮＰ）ワクチンによって誘発される誘導型免疫応答は、致死量のＶＳＶからの強力な保護をもたらす。ワクチン接種されたすべての群が、いくらかの保護を示したが、Ｆｃ標的化ＮＰに対するＶＳＶ−Ｇ結合体＋ミョウバンを投与された群だけが、致死感染からの１００％保護を示した。遊離ＶＳＶ−Ｇ（ＶＳＶ−Ｇ＋ミョウバン）のレシピエントには、ナノ粒子と結合体化されているＶＳＶ−Ｇを投与される動物よりも約１０倍多い抗原を投与した。ネガティブコントロールとして、１つのマウスの群に、ＶＳＶ−Ｇを含まないＦｃ標的化ナノ粒子（ＮＰ−Ｆｃ）を投与したところ、保護をもたらさなかった。
実施例５：免疫調節性ナノ粒子によるインビボでのＴ細胞活性化
Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウスに、ＭＨＣクラスＩＩにおいて提示されるニワトリオボアルブミン（ＯＶＡ）に特異的なトランスジェニックＴＣＲを発現するＯＴ−ＩＩドナーマウス由来のＣＦＳＥ標識ＣＤ４Ｔ細胞をｉ．ｖ．注射した。続いて、ＯＶＡ無しのナノ粒子またはモデル抗原として等量のＯＶＡを被包しているＰＬＡもしくはＰＬＧＡのいずれかから構成されているナノ粒子を片方の足蹠に注射することによって、免疫化実験を行った。すべての抗原性混合物は、アジュバントとしてＣｐＧ（ＴＬＲ９アゴニスト）も含んだ。動物に注射し、免疫化の３日後に屠殺し、そして様々な組織由来の単一細胞懸濁液におけるフローサイトメトリーによってＯＴ−ＩＩＴ細胞活性化を評価した。
刺激されていない５，６−カルボキシ−スクシンイミジル−フルオレセイン−エステル（ＣＦＳＥ）標識Ｔ細胞は、分裂しないので、一様に高い濃度のＣＦＳＥを有し、明るい蛍光細胞の単一の狭いピークを生じる。対照的に、活性化されたＴ細胞は、分裂し、そしてそのプロセスにおいて２つの娘細胞に蛍光色素を均等に分割し、連続分裂ごとに蛍光強度が徐々に減少する。したがって、Ｔ細胞が活性化されるにつれて、ＣＦＳＥ蛍光はより左にシフトした。結果は：（ｉ）ナノ粒子に被包された抗原が、膝窩排出リンパ節において、遊離抗原よりも強力なＣＤ４Ｔ細胞応答をもたらしたこと（膝窩ＬＮ、上列）；（ｉｉ）ナノ粒子だけで、上腕リンパ節（中列）および脾臓（下列）を含む遠位のリンパ組織において局所的なＴ細胞増殖を誘導したが、遊離ＯＶＡは誘導しなかったことを示唆している。遊離ＯＶＡのレシピエントでは、上腕ＬＮおよび脾臓は、非分裂細胞のみまたは非常に少ないＣＦＳＥ含有量の細胞を含んだ。後者の集団は、局所的なＴ細胞活性化を示すのではなく、他の箇所で活性化されたＴ細胞の遊走を示す。
Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウスに、ＭＨＣクラスＩにおいて提示されるニワトリオボアルブミン（ＯＶＡ）に特異的なトランスジェニックＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現するＯＴ−Ｉドナーマウス由来のＣＦＳＥ標識ＣＤ８Ｔ細胞をｉ．ｖ．注射した。実験プロトコルは、すぐ上に記載されたものとその他の点は同一だった。
Ｃ５７ＢＬ６Ｊマウスに、上記のようなＯＴ−Ｉドナーマウス由来のＣＦＳＥ標識ＣＤ８Ｔ細胞をｉ．ｖ．注射した。しかしながら、この実験では、ＴＬＲ−７およびＴＬＲ−８を活性化するイミダゾキノリン化合物であるＣＬ０９７をアジュバントとして使用し、そしてアジュバント送達の様々な方法を試験した。この場合におけるＴ細胞活性化は、遊離アジュバント（１６０ｎｇ）と混合された遊離ＯＶＡ（１μｇまたは１００ｎｇ）の足蹠注射の３日後に、膝窩排出リンパ節におけるＯＴ−Ｉ Ｔ細胞の総数を数えることによって評価された。ナノ粒子を投与したすべての動物に、１６０ｎｇのＣＬ０９７有りまたは無しで１００ｎｇのＯＶＡを与えた。ナノ粒子の中に被包されているがＰＬＡポリマーに共有結合的に付着していない材料を［］の中に示す。ＣＬ０９７とＰＬＡとの共有結合は、ハイフンで結ぶことによって特定される。同じ区画内に遊離型で混合された材料を「＋」で分ける。これらの結果から、アジュバントが賦形剤と共有結合的に連結されているナノ粒子の中に被包されたＯＶＡを投与された動物におけるＣＤ８Ｔ細胞増殖の著明な増加が明らかになった。
均等物および範囲
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を、認識するか、または単なる通例の実験を用いて確かめることができるだろう。本発明の範囲は、上記の説明に限定されると意図されず、添付の請求項によって示されるとおりである。
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を、認識するか、または単なる通例の実験を用いて確かめることができるだろう。本発明の範囲は、上記の説明に限定されると意図されず、添付の請求項によって示されるとおりである。
その請求項において、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの冠詞は、反対のことが示されていないか、または文脈から別途明らかでない限り、１つまたは１つより多いことを意味し得る。したがって、例えば、「ナノ粒子（ａ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）」という表示は、複数のそのようなナノ粒子を包含し、そして「細胞（ｔｈｅ ｃｅｌｌ）」という表示は、当業者に公知の１つ以上の細胞という指示物を包含するなど。ある群の１つ以上のメンバー間に「または」を含む請求項または説明は、反対のことが示されていないか、または文脈から別途明らかでない限り、１つ、１つより多い、またはすべてのその群のメンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、使用されているか、または別途関連性があることを満たすとみなされる。本発明は、その群の厳密に１つのメンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、使用されているか、または別途関連性がある、実施形態を包含する。本発明は、１つより多いか、またはすべてのその群のメンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、使用されているか、または別途関連性がある、実施形態を包含する。さらに、本発明は、列挙される請求項の１つ以上からの１つ以上の制限、エレメント、節、記述用語などが、別の請求項に導入されている、すべてのバリエーション、組み合わせおよび順列を包含すると理解されるべきである。例えば、別の請求項に従属している任意の請求項は、同じ基本請求項に従属する他の任意の請求項に見られる１つ以上の制限を含むように修飾され得る。さらに、請求項が、組成物を列挙している場合、別途記載されていないか、または矛盾もしくは不一致が生じ得ると当業者に明らかでない限り、本明細書中に開示される目的のいずれかのためにその組成物を使用する方法が包含され、そして本明細書中に開示される生成方法のいずれかに従ってその組成物を生成する方法または当該分野で公知の他の方法が包含されることが理解されるべきである。
エレメントが列挙として、例えば、マーカッシュ形式（Ｍａｒｋｕｓｈ ｇｒｏｕｐ ｆｏｒｍａｔ）で提示されている場合、それらのエレメントの各サブグループもまた開示され、そして任意のエレメントが、その群から除去され得ると理解されるべきである。通常、本発明または本発明の局面が、特定のエレメント、特徴などを含むと言及される場合、本発明または本発明の局面のある特定の実施形態は、そのようなエレメント、特徴などからなるか、またはそれらから本質的になると理解されるべきである。単純化の目的で、それらの実施形態は、これらの言葉で本明細書中に具体的に示されていない。用語「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープン（ｏｐｅｎ）であることおよびさらなるエレメントまたは工程の包含を許容することが意図されることに注意が必要である。
範囲が与えられる場合、端点は、含まれる。さらに、別途記載されていないか、または文脈および当業者の理解から別途明らかでない限り、範囲として表現される値は、本発明の様々な実施形態において、記載される範囲内の任意の特定の値または部分領域を、文脈が明らかに別のことを示していない限りその範囲の下限の単位の１０分の１まで想定し得ると理解されるべきである。
さらに、従来技術内に包含される本発明の任意の特定の実施形態は、請求項の任意の１つ以上から明示的に除外され得ると理解されるべきである。そのような実施形態は、当業者に公知であると見なされるので、それらは、その除外が本明細書中で明示的に示されていなくても除外され得る。本発明の組成物の任意の特定の実施形態（例えば、任意の免疫調節剤、任意の標的化部分、任意の免疫刺激剤、任意の抗原提示細胞、任意のワクチンナノキャリア構造、任意の微生物、任意の投与方法、任意の予防的および／または治療的な応用法など）は、従来技術の存在に関係があってもなくても、任意の理由のために任意の１つ以上の請求項から除外され得る。
上記および本文中の全体において記述される刊行物は、本願の出願日前に、その開示のためにもっぱら提供されている。本発明者らが、事前開示の理由でそのような開示に先行する権利を与えられないという承認と解釈されるものは本明細書中に無い。

Claims (26)

  1. 個体において抗原に対する寛容を誘導するための投与単位であって、
    約５０ｎｍ〜５００ｎｍの幾何平均直径を有し、かつ、制御性Ｔ細胞を誘導する免疫刺激剤を含有するポリマーナノ粒子
    を含み、前記ポリマーナノ粒子は、ａ）疎水性ポリマーと、ｂ）疎水性ポリマーおよび親水性ポリマーから形成される両親媒性ポリマーと、を含むポリマー混合物の自己組織化によって形成され、
    前記ポリマーナノ粒子は、前記ナノ粒子と同時に投与される際に前記抗原に対する寛容を誘導するのに有効な量である、
    投与単位。
  2. 前記制御性Ｔ細胞を誘導する免疫刺激剤と、前記抗原とが、同じ前記ポリマーナノ粒子内にあるか、または、同じ前記ポリマーナノ粒子と会合している、請求項１に記載の投与単位。
  3. 前記制御性Ｔ細胞を誘導する免疫刺激剤が、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、ラパマイシンおよびレチノイン酸からなる群より選択され、前記免疫刺激剤が、前記ナノ粒子内に被包されるか、前記ナノ粒子の表面上にあるか、および／または、前記ナノ粒子を形成する前記ポリマーに共有結合される、請求項１または２に記載の投与単位。
  4. 前記抗原が、変性疾患抗原、アトピー性疾患抗原、自己免疫疾患抗原、同種抗原、異種抗原、自己抗原、代謝疾患酵素またはその酵素反応生成物、および、アレルゲンからなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の投与単位。
  5. 前記抗原が、前記ナノ粒子内に被包されるか、前記ナノ粒子の表面上にあるか、または、前記ナノ粒子を形成する前記ポリマーに結合される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の投与単位。
  6. 前記抗原が、代謝疾患酵素またはその酵素反応生成物である、請求項５に記載の投与単位。
  7. 前記抗原がＴ細胞抗原である、請求項５に記載の投与単位。
  8. 前記抗原がＢ細胞抗原である、請求項５に記載の投与単位。
  9. 前記抗原がラパマイシンである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の投与単位。
  10. 前記投与単位が、免疫応答をブロックまたは抑制する制御性Ｔ細胞を誘導する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の投与単位。
  11. 前記ナノ粒子が、二次リンパ組織を標的化する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の投与単位。
  12. 前記ナノ粒子が、排出リンパ節内の被膜下洞マクロファージおよび樹状細胞を選択的に標的化する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の投与単位。
  13. 前記ナノ粒子が、前記ナノ粒子の表面上に標的化剤を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の投与単位。
  14. 前記標的化剤が、抗原提示細胞およびＴ細胞への前記ナノ粒子の送達のためのものである、請求項１３に記載の投与単位。
  15. 前記ナノ粒子が、６０ｎｍ〜４００ｎｍの直径を有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の投与単位。
  16. 前記疎水性ポリマーおよび前記両親媒性ポリマーが、ポリヒドロキシ酸、ポリ無水物、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンオキシド、ポリ（オルトエステル）、ポリ（カプロラクトン）、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、これらのコポリマーおよびブロックコポリマーからなる群より選択されるポリマーを含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の投与単位。
  17. 前記親水性ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）からなる群より選択され、前記疎水性ポリマーが、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）およびポリ（乳酸／グリコール酸）（ＰＬＧＡ）からなる群より選択される、請求項１６に記載の投与単位。
  18. 個体において治療剤、診断剤または予防剤のバイオアベイラビリティを改善するための組成物であって、
    ａ）約５０ｎｍ〜５００ｎｍの幾何平均直径を有し、かつ、
    ｉ）疎水性ポリマー、および、
    ｉｉ）疎水性ポリマーおよび親水性ポリマーから形成される両親媒性ポリマー
    を含むポリマー混合物と、
    少なくとも１つの免疫調節剤と、
    の自己組織化によって形成される、ポリマーナノ粒子と、
    ｂ）治療剤、診断剤または予防剤と、
    を含み、前記治療剤、診断剤または予防剤に対して免疫応答が生成され得る、組成物。
  19. 前記治療剤、診断剤または予防剤が、習慣性物質、毒素、有機金属化合物、核酸、ペプチド、脂質、炭水化物、金属、放射性の元素および化合物、ならびに、これらの組み合わせからなる群より選択される薬剤である、請求項１８に記載の組成物。
  20. 必要とする個体を治療的または予防的に処置するための、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の投与単位または請求項１８もしくは１９に記載の組成物であって、前記投与単位または前記組成物の有効な量が前記個体に投与されることを特徴とする、投与単位または組成物。
  21. 前記抗原が、代謝疾患酵素またはその酵素反応生成物である、請求項２０に記載の投与単位または組成物。
  22. 前記抗原が、同種抗原または異種抗原である、請求項２０または２１に記載の投与単位または組成物。
  23. 前記個体が、アレルギー性疾患または自己免疫疾患を有するか、または、前記疾患を有しやすい、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の投与単位または組成物。
  24. 前記個体が、食物アレルギーを有する、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の投与単位または組成物。
  25. 前記食物アレルギーが、乳もしくは乳成分、卵、ピーナッツ、樹木のナッツ、魚類、甲殻類、ダイズまたはコムギに対するアレルギーである、請求項２４に記載の投与単位または組成物。
  26. 前記自己免疫疾患が、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチ、Ｉ型真性糖尿病、炎症性腸疾患、甲状腺炎およびセリアック病からなる群より選択される、請求項２３に記載の投与単位または組成物。
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