JP2019534850A - 抗ｇｍ−ｃｓｆ抗体およびその使用 - Google Patents

Abstract

ヒト化抗体および断片を含む抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体または抗体断片を提供する。また、治療、診断、予後の目的の抗体および抗体断片の使用を提供する。抗体および断片の治療用途には、例えば、炎症性および自己免疫性の疾患および障害の治療が含まれる。

Description

顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ）は、コロニー刺激因子２（ＣＳＦ２）としても知られ、マクロファージ、Ｔ細胞、マスト細胞、ＮＫ細胞、内皮細胞および線維芽細胞によって分泌される単量体糖タンパク質であり、サイトカインとして機能する。天然に発生するＧＭ−ＣＳＦの医薬類似体は、サルグラモスチムおよびモルグラモスチムとも呼ばれる。特に好中球の増殖および成熟を促進する顆粒球コロニー刺激因子と異なり、ＧＭ−ＣＳＦは、より多くの種類の細胞、特に、マクロファージおよび好酸球に影響を及ぼす。

ＧＭ−ＣＳＦは、サイトカインとして機能する単量体糖タンパク質である。ＧＭ−ＣＳＦは、幹細胞を刺激して、顆粒球（好中球、好酸球、好塩基球）および単球を生成する。単球は循環を終了して組織に移動し、そこでマクロファージおよび樹状細胞に成熟する。このように、ＧＭ−ＣＳＦは、少数のマクロファージの活性化がそれらの数の急速な増加につながり得る免疫／炎症カスケードの一部であり、このプロセスは感染と戦うために重要である。ＧＭ−ＣＳＦはまた、免疫系の成熟細胞に対するいくつかの作用がある。これらは、例えば、好中球の移動を阻害して、細胞表面で発現する受容体の変更を引き起こすことを含む。

ＧＭ−ＣＳＦは、シグナル伝達兼転写活性化因子ＳＴＡＴ５を介してシグナル伝達する。マクロファージにおいて、ＧＭ−ＣＳＦは、ＳＴＡＴ３を介してシグナル伝達することも示されている。サイトカインは、マクロファージを活性化して、真菌の生存を抑制する。ＧＭ−ＣＳＦは、細胞内に遊離する亜鉛の枯渇を誘導し、活性酸素種の生成を増加させ、最終的には真菌亜鉛の飢餓および毒性をもたらす。このように、ＧＭ−ＣＳＦは、免疫系の発生を促進し、感染に対する防護を容易にする。また、ＧＭ−ＣＳＦは、生殖器系によって生成されるエンブリオカイン（Ｅｍｂｒｙｏｋｉｎｅ）として機能することによって、胚発生において重要な役割を果たす。

ＧＭ−ＣＳＦは、組換えＤＮＡ技術を使用して作製され、モルグラモスチム（または、タンパク質が酵母細胞において発現されるとき、サルグラモスチム）と呼ばれるタンパク質治療剤として販売されている。ＧＭ−ＣＳＦは、白血球細胞の生成を刺激することにより化学療法後の好中球減少症を防止するための薬として使用される。また、ＧＭ−ＣＳＦは、ＨＩＶ感染患者におけるワクチンの補助剤としての可能性について、臨床試験において評価されてきた。

対照的に、ＧＭ−ＣＳＦの阻害は、関節リウマチ（ＯＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、尋常性乾癬を含む炎症性疾患および自己免疫疾患などの疾患の治療に有用であり得る。また、ＧＭ−ＣＳＦの阻害は、癌治療に有用であり得る。

本開示は、ヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質への高い結合親和性を有し、ＧＭ−ＣＳＦがその受容体に結合することを阻害する強力な活性を有する抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体を提供する。これらの抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体は、様々な種類の炎症性疾患、自己免疫疾患、癌の治療などの治療目的に有用であり、また、診断および予後の目的に使用できる。

本開示は、一実施形態において、単離された抗体または抗体断片を提供し、抗体または抗体断片は、ヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質への特異性を有し、配列識別番号１のＶＨ ＣＤＲ１、配列識別番号２のＶＨ ＣＤＲ２、配列識別番号３のＶＨ ＣＤＲ３、配列識別番号４のＶＬ ＣＤＲ１、配列識別番号５のＶＬ ＣＤＲ２、配列識別番号６のＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は更に、重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、または、それらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、軽鎖定常領域はカッパまたはラムダ鎖定常領域である。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤのアイソタイプである。いくつかの実施形態において、アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、完全ヒト抗体である。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片はヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、（ａ）位置１のＧｌｕ、（ｂ）位置９８のＡｒｇ、（ｃ）位置７２のＳｅｒ、（ｄ）位置６８のＡｌａ、（ｅ）位置７０のＬｅｕ、（ｆ）位置４８のＩｌｅ、（ｇ）位置２６のＡｓｐ、（ｈ）位置２９のＬｅｕから成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基、および、その組み合わせを含む重鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って位置２６から開始するＤＹＴＬＴ（配列識別番号４２）またはＧＹＴＦＴ（配列識別番号４３）の断片を含む。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、（ａ）位置４６のＡｌａ、（ｂ）位置６０のＡｓｐ、（ｃ）位置７０のＡｓｐ、（ｄ）位置４３のＳｅｒ、（ｆ）位置８７のＰｈｅから成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基、および、それらの組み合わせを含む軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号８−１７から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号８−１７から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は配列識別番号１１、１４または１７のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号１９−２２から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号１９−２２から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列識別番号１９または２２のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列識別番号１４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列識別番号２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、二重特異性抗体または一本鎖可変断片である。

本開示は、一実施形態において、単離された抗体または抗体断片を提供し、抗体または抗体断片は、ヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質への特異性を有し、配列識別番号２３のＶＨ ＣＤＲ１、配列識別番号２４のＶＨ ＣＤＲ２、配列識別番号２５のＶＨ ＣＤＲ３、配列識別番号２６のＶＬ ＣＤＲ１、配列識別番号２７のＶＬ ＣＤＲ２、配列識別番号２８のＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は更に、重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、または、それらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、軽鎖定常領域はカッパまたはラムダ鎖定常領域である。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤのアイソタイプである。いくつかの実施形態において、アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、完全ヒト抗体である。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片はヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、Ｅ１、Ｒ８４、Ｙ２７、Ｉ２８、Ｉ４８、Ｔ６８、Ｌ７０またはＴ３０から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基、および、その組み合わせを含む重鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って位置２６から開始するＧＹＩＦＴ（配列識別番号４４）、ＧＹＩＦ（配列識別番号４５）、または、ＧＧＴＦ（配列識別番号４６）の断片を含む。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、Ｖ４８、Ｄ５７、Ｑ７０またはＳ４３から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基、および、その組み合わせを含む軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号２９−３５から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号２９−３５から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は配列識別番号３４または３５のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号３６−４１から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号３６−４１から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列識別番号３８または３９のアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列識別番号３４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列識別番号３８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列識別番号３５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列識別番号３９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、二重特異性抗体または一本鎖可変断片である。

一実施形態において、本開示の抗体または抗体断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物が提供される。また、一実施形態において、本開示の抗体または抗体断片をコードする１または複数のポリヌクレオチドを含む単離細胞が提供される。

一実施形態において、本開示は、治療を必要とする患者における炎症性または自己免疫性の疾患または症状を治療する方法を提供し、当該方法は、本開示の抗体または抗体断片、または、組成物を患者に投与する段階を含む。また、炎症性または自己免疫性の疾患または症状を治療する薬剤を製造するための、抗体または抗体断片、または、組成物の使用を提供する。

いくつかの実施形態において、炎症性疾患または症状は、アルツハイマー病、アジソン病、アテローム性動脈硬化、強直性脊椎炎、関節炎、変形性関節炎（ＯＡ）、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬性関節炎（ＰＡ）、強直性脊椎炎、喘息、アテローム性動脈硬化、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、クローン病、大腸炎、皮膚炎、憩室炎、線維筋痛、肝臓炎、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腎炎、パーキンソン病（ＰＤ）、血管炎、潰瘍性大腸炎から成る群から選択される。

また、一実施形態において、必要とする患者における痛みを低減または緩和する方法が提供され、当該方法は、本開示の抗体または抗体断片を患者に投与する段階を含む。

いくつかの実施形態において、自己免疫性の疾患または病状は、円形脱毛症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、皮膚筋炎、糖尿病（１型）、セリアック病、自己免疫性若年性特発性関節炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、自己免疫性心筋炎、多発性硬化症、天疱瘡／類天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発筋炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、関節リウマチ、強皮症／全身性強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎、自己免疫性ブドウ膜炎、白斑、および、多発血管炎性肉芽腫症（Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症）から成る群から選択される。

また、試料におけるＧＭ−ＣＳＦの発現を検出する方法が提供され、当該方法は、抗体または抗体断片がＧＭ−ＣＳＦに結合する条件下で、抗体または抗体断片に試料を接触させる段階と、試料におけるＧＭ−ＣＳＦの発現を示す結合を検出する段階とを備える。

サブクローニングのために一次ハイブリドーマクローンを選択するための、ＥＬＩＳＡ結合確認アッセイの結果を示す。

サブクローニングのために一次ハイブリドーマクローンを選択するための、ＥＬＩＳＡ結合確認アッセイの結果を示す。

ヒトＧＭ−ＣＳＦに対する試験抗体の用量依存的結合を示す。 ヒトＧＭ−ＣＳＦに対する試験抗体の用量依存的結合を示す。

抗体の結合速度を組換えヒトＧＭ−ＣＳＦに対してプロットする。

抗体によるＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファに対するＧＭ−ＣＳＦ結合の用量依存的阻害を示す。

ＧＭ−ＣＳＦによって誘導されるｐＳＴＡＴ５活性化のレベルを抗体が著しく減少したことを示す。

ＧＭ−ＣＳＦ依存的ＴＦ−１増殖の抗体による阻害を示す。

すべてのヒト化抗体が、ヒトＧＭ−ＣＳＦに対する強力な結合能を実証したことを示す。 すべてのヒト化抗体が、ヒトＧＭ−ＣＳＦに対する強力な結合能を実証したことを示す。 すべてのヒト化抗体が、ヒトＧＭ−ＣＳＦに対する強力な結合能を実証したことを示す。 すべてのヒト化抗体が、ヒトＧＭ−ＣＳＦに対する強力な結合能を実証したことを示す。

いくつかのヒト化抗体が、ＴＦ−１増殖のもっとも強い阻害を示したことを示す。

試験対象の抗体がｐＳＴＡＴ５シグナリングを効果的にブロッキングしたことを示す。

アカゲザルＧＭ−ＣＳＦに対する抗体の用量依存的結合を示す。

Ｈｕ２３Ｆ４−２７の薬物動態パラメータをプロットする。

［定義］
「１」または「一」という語句のエンティティは、１または複数のエンティティを指すことに留意されたい。例えば、「１つの抗体」は、１または複数の抗体を表すものと理解されるべきである。したがって、本明細書においては、「１」（または「一」）、「１または複数」、「少なくとも１つ」という語句は、交換可能に使用できる。

本明細書において使用される「ポリペプチド」という語句は、単一の「ポリペプチド」、および、複数の「ポリペプチド」を包含することを意図し、アミド結合（ペプチド結合としても知られている）によって直線状に連結されるモノマー（アミノ酸）から構成される分子を指す。「ポリペプチド」という語句は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖または複数の鎖を指し、産物の特定の長さを指すものではない。したがって、２つ以上のアミノ酸の鎖または複数の鎖を指すために使用される、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または、任意の他の語句は、「ポリペプチド」の定義に含まれ、「ポリペプチド」という語句は、これらの語句のいずれかの代わりに、または、それらと交換可能に使用され得る。「ポリペプチド」という語句はまた、これらに限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質切断、または、非天然に発生するアミノ酸による改変を含む、ポリペプチドの発現後改変の産物を指すことを意図する。ポリペプチドは、天然の生物学的ソースに由来し得るか、または、組換え技術によって生成され得るが、必ずしも、指定された核酸配列から翻訳されるわけではない。ポリペプチドは、化学合成を含む任意の方式で生成され得る。

本明細書において、細胞、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸に関連して「単離」という語句が使用される場合、高分子の天然のソースに存在する、他のＤＮＡまたはＲＮＡからそれぞれ分離された分子を指す。「単離」という語句は、本明細書において使用される場合、組換えＤＮＡ技法によって生成されたときに細胞物質、ウイルス物質もしくは培地を、または、化学的に合成されたときは前駆的化学物質もしくは他の化学物質を実質的に含まない核酸またはペプチドを指すこともある。更に、「単離された核酸」は、断片として天然に発生しない、天然の状態で見られないであろう核酸断片を含めることを意味している。 「単離」という語句は、本明細書において、他の細胞タンパク質または組織から単離された細胞またはポリペプチドを指すためにも使用される。単離されたポリペプチドとは、精製されたポリペプチド、および、組換えのポリペプチドの両方を包含することを意味している。

本明細書において使用される、「組換え」という語句は、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドに関連する場合、天然に存在しないポリペプチドまたはポリヌクレオチドの形態を意図し、それらの非限定的な例は、通常は共に発生しないであろうポリヌクレオチドまたはポリペプチドを組み合わせることによって形成できる。

「相同性」または「同一性」または「類似性」は、２つのペプチドの間、または、２つの核酸分子の間の配列類似性を指す。相同性は、比較の目的で揃えられ得る各配列における位置を比較することによって決定できる。比較される配列内のある位置が、同一の塩基またはアミノ酸によって占められるとき、分子はその位置において相同である。配列間の相同性の程度は、配列によって共有される、一致する位置または相同的な位置の数の関数である。「関連のない」、または、「非相同的」配列は、本開示の配列の１つと４０％未満の同一性（好ましくは２５％未満の同一性）を共有する。

ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドまたはポリペプチド領域）が別の配列と特定の割合（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）の配列同一性を有することは、揃えられたとき、２つの配列の比較において、その割合の塩基（またはアミノ酸）が同一であることを意味する。このアライメントおよび百分率相同性または配列同一性は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ． （２００７） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙにおいて説明されているものなど、本技術分野において知られているソフトウェアプログラムを使用して決定できる。好ましくは、デフォルトパラメータがアライメントのために使用される。１つのアライメントプログラムは、デフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴである。特に、プログラムは、以下のデフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰである。Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｄｅ ＝ ｓｔａｎｄａｒｄ； ｆｉｌｔｅｒ ＝ ｎｏｎｅ； ｓｔｒａｎｄ ＝ ｂｏｔｈ； ｃｕｔｏｆｆ ＝ ６０； ｅｘｐｅｃｔ ＝ １０； Ｍａｔｒｉｘ ＝ ＢＬＯＳＵＭ６２； Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ ＝ ５０ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ； ｓｏｒｔ ｂｙ ＝ ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ； Ｄａｔａｂａｓｅｓ ＝ ｎｏｎ−ｒｅｄｕｎｄａｎｔ， ＧｅｎＢａｎｋ ＋ ＥＭＢＬ ＋ ＤＤＢＪ ＋ ＰＤＢ ＋ ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ ＋ ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ ＋ ＳＰｕｐｄａｔｅ ＋ ＰＩＲ。生物学的に同等のポリヌクレオチドとは、上で示された指定の百分率相同性を有し、かつ、同一または同様の生物学的活性を有するポリペプチドをコードするものである。

「同等の核酸またはポリヌクレオチド」という語句は、核酸のヌクレオチド配列またはその相補的配列とある程度の相同性、または、配列同一性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を指す。二本鎖核酸のホモログとは、ある程度の相同性を有するヌクレオチド配列を有する核酸、または、その相補的配列を含むことを意図している。一態様において、核酸のホモログは、核酸またはその相補的配列にハイブリダイズすることが可能である。同様に、「同等のポリペプチド」は、基準ポリペプチドのアミノ酸配列とある程度の相同性または配列同一性を有するポリペプチドを指す。いくつかの態様において、配列同一性は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％である。いくつかの態様において、同等のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、基準のポリペプチドまたはポリヌクレオチドと比較したとき、１、２、３、４または５個の追加、欠失、置換および組み合わせを有する。いくつかの態様において、同等の配列は、基準配列の活性（例えば、エピトープ結合）または構造（例えば塩橋）を保持する。

ハイブリダイゼーション反応は、異なる「厳密性」の条件下で実行できる。一般に、低厳密性ハイブリダイゼーション反応は、約１０倍のＳＳＣ溶液、または、同等のイオン強度／温度の溶液において、約４０℃で実行される。中程度の厳密性のハイブリダイゼーションは、典型的には、約６倍のＳＳＣにおいて、約５０℃で実行される。高厳密性ハイブリダイゼーション反応は、一般的に、約１倍のＳＳＣにおいて、約６０℃で実行される。 ハイブリダイゼーション反応は、当業者によく知られている「生理的条件」下で実行することもできる。生理的条件の非限定的な例は、細胞において通常見られる温度、イオン、強度、ｐＨ、および、Ｍｇ^２＋濃度である。

ポリヌクレオチドは、４個のヌクレオチド塩基、すなわち、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）の特定配列（ポリヌクレオチドがＲＮＡであるとき、チミンの代わりにウラシル（Ｕ））から構成される。したがって、「ポリヌクレオチド配列」という語句は、ポリヌクレオチド分子の文字表現である。この文字表現は、中央処理装置を有するコンピュータ内のデータベースに入力でき、機能ゲノミクスおよび相同性検索などのバイオインフォマティクスの用途に使用できる。「ポリモーフィズム」という語句は、１つより多くの形態の遺伝子またはその部分が共存することを指す。遺伝子のうち、少なくとも２つの異なる形態、すなわち、２つの異なるヌクレオチド配列がある部分は、「遺伝子の多型領域」と呼ばれる。多型領域は単一のヌクレオチドであってよく、異なる対立遺伝子において同一性は異なる。

「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という語句は、交換可能に使用され、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドまたはその類似体のいずれかである、任意の長さの高分子形態のヌクレオチドを指す。ポリヌクレオチドは、任意の３次元構造を有することができ、既知または未知の任意の機能を実行し得る。以下はポリヌクレオチドの非限定的な例である。遺伝子または遺伝子断片（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴまたはＳＡＧＥタグ）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐型ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブおよびプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などの修飾されたヌクレオチドを含み得る。ヌクレオチド構造への修飾は、もしある場合、ポリヌクレオチドの構築の前または後に付与することができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって割り込まれ得る。ポリヌクレオチドは重合後、標識部分への連結などにより、更に修飾され得る。また、この語句は、二本鎖および一本鎖の分子両方を指す。別段の記載がある場合を除き、または、必要である場合を除き、本開示の任意の実施形態のポリヌクレオチドは、二本鎖形と、二本鎖形を形成することが知られている、または、予想される、２つの相補的な一本鎖形の各々との両方を含む。

ポリヌクレオチドに適用される「コード」という語句は、ポリヌクレオチドが天然型の状態において、または、当業者によく知られている方法によって操作されるとき、転写および／または翻訳されてポリペプチドおよび／またはその断片のためのｍＲＮＡを生成できる場合、ポリペプチドを「コード」するといわれるポリヌクレオチドを指す。アンチセンス鎖は、そのような核酸の相補鎖であり、コード配列をそれから推測できる。

本明細書において使用される「抗体」または「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識してそれに結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体および任意の抗原結合断片、または、それらの一本鎖であってよい。したがって、「抗体」という語句は、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む分子を含む任意のタンパク質またはペプチドを含む。そのような例には、これらに限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれらのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、または、それらの任意の部分、または、結合タンパク質の少なくとも１つ一部が含まれる。

本明細書において使用される、「抗体断片」または「抗原結合断片」という語句は、Ｆ（ａｂ'）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ'、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および同様のものなどの抗体の一部である。構造にかかわらず、抗体断片は、完全な抗体によって認識される抗原と同一のものに結合する。「抗体断片」という語句は、アプタマー、スピゲルマー、２特異性抗体を含む。「抗体断片」という語句は、特異的抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように機能する、合成タンパク質、または、遺伝子組み換えタンパク質も含む。

「一本鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖（Ｖ_Ｈ）および軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質を指す。いくつかの態様において、この領域は１０〜約２５アミノ酸の短いリンカペプチドに結合する。リンカは、柔軟性のためのグリシン、および、溶解性のためのセリンまたはスレオニンが豊富であり得、Ｖ_ＨのＮ末端、または、Ｖ_ＬのＣ末端のいずれかに接続され得る（逆も成立する）。このタンパク質は、定常領域が除去されていてリンカが導入されているが、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。本技術分野において、ＳｃＦｖ分子が知られており、例えば、米国特許第５,８９２,０１９号において説明されている。

抗体という語句は、生化学的に区別できる様々な幅広いクラスのポリペプチドを包含する。当業者であれば、重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、または、イプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として、また、それらの中のいくつかのサブクラス（例えば、γｌ‐γ４）に分類されることを理解するであろう。この鎖の性質によって、抗体の「クラス」がそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧまたはＩｇＥとして決定される。免疫グロブリンのサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＧ_５などは、特徴がはっきりしており、機能的な特化を付与することが知られている。これらのクラスおよびアイソタイプの各々の改変版は、当業者が本開示を参照して容易に認識でき、従って、本開示の範囲内にある。すべての免疫グロブリンのクラスが本開示の範囲内にあることは明確であり、以下の説明は一般的に、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスに関連する。ＩｇＧに関連して、標準の免疫グロブリン分子は、分子量約２３，０００ドルトンである２つの同一の軽鎖ポリペプチドと、分子量５３,０００−７０,０００である２つの同一の重鎖ポリペプチドとを含む。４本の鎖は、典型的には、「Ｙ」の形状でジスルフィド結合によって連結され、軽鎖は「Ｙ」の開いた部分から開始する重鎖と対を形成し、可変領域全体にわたって連続している。

本開示の抗体、抗原結合ポリペプチド、それらの変異型または誘導体には、これらに限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、多特異性、ヒト型、ヒト化、霊長類化もしくはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ'およびＦ（ａｂ'）_２、Ｆｄ、Ｆｖｓ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫまたはＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリによって生成される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書において開示されるＬＩＧＨＴ抗体への抗Ｉｄ抗体を含む）が含まれる。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、または、免疫グロブリン分子のサブクラスであり得る。

軽鎖はカッパまたはラムダ（Κ、λ）のいずれかに分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダのいずれかの軽鎖に結合し得る。一般に、軽鎖および重鎖は、互いに共有結合し、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞、または、遺伝子組み換えの宿主細胞のいずれかによって生成されるとき、２つの重鎖の「テール」部分は、共有結合性ジスルフィド連結または非共有結合性連結によって互いに結合される。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ形状の分岐端におけるＮ末端から、各鎖の底部におけるＣ末端まで続いている。

軽鎖および重鎖は両方、構造および機能的に相同の複数の領域に分割される。「定常」および「可変」という語句は、機能について使用される。これに関連して、軽鎖（ＶＫ）および重鎖（ＶＨ）部分両方の可変ドメインは、抗原認識および特異性を決定することを理解されたい。逆に、軽鎖（ＣＫ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、相補的結合および同様のものなどの重要な生物学的特性を付与する。慣習的に、定常領域ドメインの番号は、抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠ざかるにつれて増加する。可変領域におけるＮ末端部分およびＣ末端部分は定常領域であり、ＣＨ３およびＣＫドメインはそれぞれ、重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を実際に含む。

上で示されるように、可変領域は、抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識して特異的に結合することを可能にする。つまり、抗体のＶＫドメインおよびＶＨドメイン、または、相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットは結合して、３次元の抗原結合部位を画定する可変領域を形成する。この４要素抗体構造は、Ｙの各腕の末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨおよびＶＫ鎖の各々における３個のＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３）によって画定される。いくつかの場合において、例えば、ラクダ科に由来する、または、ラクダ科免疫グロブリンをベースにして操作された特定の免疫グロブリン分子において、完全な免疫グロブリン分子は、軽鎖が無く重鎖のみから成ることがあり得る。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６−４４８ （１９９３）を参照されたい。

天然に発生する抗体において、各抗原結合ドメインに存在する６個の「相補性決定領域」またはＣＤＲは、アミノ酸の短い不連続配列であり、これらは、抗体が水性環境において３次元構成をとるときに、抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置される。抗原結合ドメインにおける残りのアミノ酸は、「フレームワーク」領域と呼ばれ、より小さい分子間の可変性を示す。フレームワーク領域は主に、βシートの形態を取り、ＣＤＲは、βシート構造を接続する、および、いくつかの場合には、βシート構造の一部を形成するループを形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合性相互作用によってＣＤＲを正しい向きに位置決めするため足場を形成するように機能する。位置決めされたＣＤＲによって形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を画定する。この相補的表面は、同族エピトープに対する抗体の非共有結合を促進する。ＣＤＲおよびフレームワーク領域をそれぞれ構成するアミノ酸は、正確に定義されているので（"Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，" Ｋａｂａｔ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ．， Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， （１９８３）、および、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９６：９０１−９１７ （１９８７）を参照）、当業者によって、任意の重鎖または軽鎖可変領域について、容易に同定されることができる。

当分野において使用および／または受け入れられている語句に２つ以上の定義がある場合、本明細書において使用される語句の定義は、別段の明示的な記載が無い限り、そのような意味をすべて含むことが意図されている。具体的な例は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域において見られる不連続抗原結合部位を説明するために、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という語句を使用することである。この特定の領域は、参照によって全体が本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，アメリカ合衆国保健福祉省「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９８３）、および、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１−９１７ （１９８７）において記載されている。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲの定義は、互いに比較したときに、重複するアミノ酸残基のサブセットを含む。上記にかかわらず、抗体またはその変異型のＣＤＲを指すために、いずれかの定義を適用することは、本明細書において定義および使用される語句の範囲内にあることが意図される。上で挙げられた参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを含む適切なアミノ酸残基を下の表において比較として説明する。特定のＣＤＲを包含する厳密な残基番号は、ＣＤＲの配列およびサイズに応じて変動する。当業者であれば、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮することで、どの残基が特定のＣＤＲを構成するかを定型的に決定できる。

また、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌは、任意の抗体に適用される可変ドメイン配列について、ナンバリングシステムを定義した。当業者であれば、配列自体以外のいかなる実験データにも頼ることなく、この「Ｋａｂａｔナンバリング」のシステムを任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。本明細書において使用される「Ｋａｂａｔナンバリング」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，アメリカ合衆国保健福祉省「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９８３）によって説明されるナンバリングシステムを指す。

上の表に加えて、Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、ＣＤＲ領域を以下のように説明する。ＣＤＲ−Ｈ１は、約３１番目のアミノ酸（すなわち、最初のシステイン残基の後の約９残基）から開始し、約５〜７のアミノ酸を含み、次のトリプトファン残基で終了する。ＣＤＲ−Ｈ２は、ＣＤＲ−Ｈ１の末端の後の第１５の残基から開始し、約１６〜１９アミノ酸を含み、次のアルギニンまたはリシン残基で終了する。ＣＤＲ−Ｈ３は、ＣＤＲ−Ｈ２の末端の後の約３３番目のアミノ酸残基から開始し、３〜２５アミノ酸を含み、配列Ｗ‐Ｇ‐Ｘ‐Ｇにおいて終了し、Ｘは任意のアミノ酸であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、約２４番目の残基（すなわち、システイン残基の後）から開始し、約１０〜１７残基を含み、次のトリプトファン残基で終了する。ＣＤＲ−Ｌ２は、ＣＤＲ−Ｌ１の末端の後の約１６番目の残基から開始し、約７残基を含む。ＣＤＲ−Ｌ３は、ＣＤＲ−Ｌ２の末端の後の約３３番目の残基（すなわち、システイン残基の後）から開始し、約７〜１１残基を含み、ＦまたはＷ‐Ｇ‐Ｘ‐Ｇの配列で終了し、Ｘは任意のアミノ酸である。

本明細書において開示される抗体は、鳥類および哺乳類を含む任意の動物起源であり得る。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、または、ニワトリの抗体である。別の実施形態において、可変領域は、（例えばサメからの）コンドリクトイド（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）が起源であり得る。

本明細書において使用される「重鎖定常領域」という語句は、免疫グロブリン重鎖由来のアミノ酸配列を含む。重鎖定常領域を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上、中央、および／または、下のヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、もしくは、変異型、または、それらの断片のうち少なくとも１つを含む。例えば、本開示において使用するための抗原結合ポリペプチドは、（ａ）ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖、（ｂ）ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖、（ｃ）ヒンジドメインの少なくとも一部およびＣＨ２ドメイン、（ｄ）ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖、（ｅ）ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、および、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖、または、（ｆ）ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、および、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を備え得る。別の実施形態において、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。更に、本開示に使用される抗体には、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインのすべてまたは一部）が無いことがあり得る。上で説明したように、当業者であれば、天然に発生する免疫グロブリン分子とはアミノ酸配列が異なるように重鎖定常領域が改変され得ることを理解するであろう。

本明細書において開示される抗体の重鎖定常領域は、異なる免疫グロブリン分子に由来し得る。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ_１分子由来のＣＨ１ドメイン、および、ＩｇＧ_３分子由来のヒンジ領域を含み得る。別の例において、重鎖定常領域は、部分的にＩｇＧ_１分子に由来し、部分的にＩｇＧ_３分子に由来するヒンジ領域を含み得る。別の例において、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ_１分子に由来し、部分的にＩｇＧ_４分子に由来するキメラヒンジを含み得る。

本明細書において使用される、「軽鎖定常領域」という語句は、抗体軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖定常領域は、定常カッパドメインまたは定常ラムダドメインのうち少なくとも１つを含む。

「軽鎖‐重鎖ペア」は、軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合を通して二量体を形成できる軽鎖および重鎖の組を指す。

上述のように、様々な免疫グロブリンのクラスの定常領域のサブユニット構造および３次元構成はよく知られている。本明細書において使用される「ＶＨドメイン」という語句は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、「ＣＨ１ドメイン」という語句は、免疫グロブリン重鎖の第１（最アミノ末端）定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに隣接し、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域へのアミノ末端である。

本明細書において使用される「ＣＨ２ドメイン」という語句は、例えば、従来のナンバリング方式を使用すると、抗体の約２４４番目の残基から３６０番目の残基まで延在する重鎖分子の部分を含む（Ｋａｂａｔナンバリングシステムでは残基２４４〜３６０、ＥＵナンバリングシステムでは残基２３１〜３４０、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，アメリカ合衆国保健福祉省，"Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ" （１９８３）を参照）。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密に対になっていないという点で独自である。むしろ、２つのＮ結合型分岐炭水化物鎖は、完全な天然型のＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に挿入される。また、ＣＨ３ドメインがＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端へ延在し、約１０８残基を含むことが十分に立証されている。

本明細書において使用される「ヒンジ領域」という語句は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに連結させる重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は、約２５の残基を含み柔軟であり、したがって、２つのＮ末端抗原結合領域が独立に移動することを可能にする。ヒンジ領域は、３つの区別されるドメイン、すなわち、上、中央、下ヒンジドメインに細分化され得る（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３ （１９９８））。

本明細書において使用される「ジスルフィド結合」という語句は、２つの硫黄原子の間に形成される共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基との間にジスルフィド結合またはブリッジを形成できるチオール基を含む。天然に発生する大部分のＩｇＧ分子において、ＣＨ１およびＣＫ領域はジスルフィド結合によって連結され、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用したときの２３９および２４２（ＥＵナンバリングシステムの場合、位置２２６または２２９）に対応する位置における２つのジスルフィド結合によって連結される。

本明細書において使用される「キメラ抗体」という語句は、免疫反応性領域または部位が第１の種から取得され、または、それに由来し、かつ、定常領域（本開示によれば、完全なもの、部分的なもの、または、改変されたものであり得る）が第２の種から取得される、任意の抗体を意味するものとする。特定の実施形態おいて、標的結合領域または部位は、非ヒトのソースに由来し（例えば、マウスまたは霊長類）、定常領域はヒト型である。

本明細書において使用される「ヒト化率」は、ヒト化ドメインと生殖細胞系ドメインとの間のフレームワークアミノ酸の数の差（すなわち、非ＣＤＲの差）を決定し、その数を総アミノ酸数から減算し、それを総アミノ酸数で除算し、１００で乗算することによって算出される。

「特異的に結合」または「特異性を有する」は、一般的に、抗体が抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、および、結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間のいくらかの相補性を伴うことを意味する。この定義によれば、ランダムな関連のないエピトープに結合する場合より容易に、抗体が抗原結合ドメインを介してエピトープに結合するとき、そのエピトープに「特異的に結合」すると言われる。「特異性」という語句は、本明細書において、特定の抗体が特定のエピトープに結合する相対的な親和性を認めるために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、任意のエピトープについて、抗体「Ｂ」より高い特異性を有すると見なされ得る、または、抗体「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」について有する特異性より高い特異性でエピトープに結合すると言われ得る。

本明細書において使用される「治療」または「治療する」という語句は、治療処置および予防または防止手段の両方を指し、目的は、自己免疫疾患の進行などの、望ましくない生理的変化または障害を防止または鈍化する（緩和する）。有利な、または、望ましい臨床結果には、これらに限定されないが、検出可能かどうかを問わず、症状の軽減、疾患の程度の減弱、病状の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患の進行の遅延または鈍化、病状の改善または緩和、寛解（完全または部分的を問わず）が含まれる。「治療」は、治療を受けない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延ばすことも意味し得る。治療を必要とする者には、既に病態または障害を有する者、および、病態または障害を有する傾向がある者、または、病態または障害を予防されるべき者が含まれる。

「対象」または「個人」または「動物」または「患者」または「哺乳類」は、任意の対象、特に、診断、予後または治療が望ましい哺乳類対象を意味する。哺乳類対象には、ヒト、家畜動物、農業用の動物、または、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、乳牛など、動物園、スポーツ、もしくは、ペット用の動物などが含まれる。

本明細書において使用される、「治療を必要とする患者に」または「治療を必要とする対象」などの語句は、例えば、検出、診断手順、および／または、治療に使用される、本開示の抗体または組成物の投与から恩恵を受けるであろう、哺乳類対象などの対象を含む。

［抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体］
本開示は、ヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質への高い親和性を有する抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体を提供する。試験対象の抗体は、強力な結合および阻害活性を示したので、治療および診断の用途に有用である。元のマウス抗体に加えて、ヒト化抗体も、アカゲザルＧＭ−ＣＳＦおよびヒトＧＭ−ＣＳＦに対する強い結合親和性を示し、この結合は、ＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファに対するＧＭ−ＣＳＦの結合をブロッキングし、ＧＭ−ＣＳＦによって誘導されるｐＳＴＡＴ５シグナリングをブロッキングし、ＧＭ−ＣＳＦ依存的ＴＦ−１増殖を阻害した。

本開示の一実施形態によれば、以下に示すように、配列識別番号１−６または配列識別番号２３−２８において定義されるＣＤＲ領域を有する重鎖および軽鎖可変ドメインを含む抗体が提供される。
［表１ａ ２３Ｆ４のＣＤＲ領域の配列］
［表１ｂ ５０Ｃ５のＣＤＲ領域の配列］

実験例において示されるように、これらのＣＤＲ領域を含む抗体は、マウス、ヒト化、または、キメラのいずれも、強力なＧＭ−ＣＳＦ結合および阻害活性を有する。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体は、表１ａ−ｂに列挙されるように、１、２、または、３個の更なる改変を有するＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを含む。そのような改変は、アミノ酸の追加、欠失、または、置換であり得る。

いくつかの実施形態において、改変は、ＣＤＲの各々からの１つだけの残基での置換である。いくつかの実施形態において、改変は、１、２、または、３個の残基での置換である。一実施形態において、改変は、残基のうちの１つでの置換である。いくつかの実施形態において、そのような置換は保存的置換である。

「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられる置換のことである。本技術分野において定義された類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐型側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および、芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、免疫グロブリンポリペプチドにおける非本質的なアミノ酸残基は、好ましくは、同一の側鎖ファミリーの別のアミノ酸残基に置き換えられる。別の実施形態において、アミノ酸の鎖は、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる、構造的に同様の鎖に置き換えることができる。

保存的アミノ酸置換の非限定的な例を以下の表に提供する。ここでは、０またはそれより高い類似性スコアは、２つのアミノ酸の間の保存的置換を示す。
［表２ アミノ酸類似性マトリクス］
［表３ 保存的アミノ酸置換］

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、上記の置換のうち１つだけ、２つだけ、または、３つだけを含む。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、ヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質への特異性を有し、配列識別番号１のＶＨ ＣＤＲ１、配列識別番号２のＶＨ ＣＤＲ２、配列識別番号３のＶＨ ＣＤＲ３、配列識別番号４のＶＬ ＣＤＲ１、配列識別番号５のＶＬ ＣＤＲ２、配列識別番号６のＶＬ ＣＤＲ３を含む。ＶＨの非限定的な例は、配列識別番号７−１７において提供され、そのうちの配列識別番号７は、マウスＶＨであり、配列識別番号８−１７はヒト化ＶＨである。更に、これらのヒト化ＶＨは、マウスバージョンに対する１または複数の復帰突然変異を含む。同様に、ＶＬ（ＶＫ）の非限定的な例は、配列識別番号１８−２２において提供される。配列識別番号１８はマウス配列であり、配列識別番号１９−２２はヒト化配列であり、そのうちの配列識別番号２０−２２は、例に示すような１または複数の復帰突然変異を含む。

復帰突然変異は、抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体の特定の特徴を保持するために有用であることが示される。従って、いくつかの実施形態において、本開示の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体、特に、ヒト型またはヒト化抗体は、復帰突然変異のうち１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨ復帰突然変異（すなわち、指定の位置におけるアミノ酸を含む）は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、（ａ）位置１のＧｌｕ（Ｅ１）、（ｂ）位置９８のＡｒｇ（Ｒ９８）、（ｃ）位置７２のＳｅｒ（Ｓ７２）、（ｄ）位置６８のＡｌａ（Ａ６８）、（ｅ）位置７０のＬｅｕ（Ｌ７０）、（ｆ）位置４８のＩｌｅ（Ｉ４８）、（ｇ）位置２６のＡｓｐ（Ｄ２６）、（ｈ）位置２９のＬｅｕ（Ｌ２９）から選択される１または複数、および、それらの組み合わせである。

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異Ｅ１を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異Ｅ１およびＲ９８を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異Ｅ１、および、上で列挙された別のものを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異の群（Ｅ１、Ｒ９８およびＳ７２）、（Ｅ１、Ｒ９８、Ｓ７２およびＡ６８）、（Ｅ１、Ｒ９８、Ｓ７２、Ａ６８、Ｌ７０およびＩ４８）、（Ｅ１、Ｒ９８、Ｓ７２、Ａ６８、Ｌ７０、Ｉ４８、Ｄ２６およびＬ２９）、（Ｅ１およびＳ７２）、（Ｅ１、Ｓ７２およびＬ７０）、（Ｅ１、Ｓ７２、Ｌ７０、Ｉ４８およびＡ６８）、（Ｅ１、Ｓ７２、Ｌ７０、Ｉ４８、Ａ６８、Ｄ２６およびＬ２９）を含む。

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、ＣＤＲ１のＮ末端における、すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従って位置２６から開始する、ＤＹＴＬＴ（配列識別番号４２）またはＧＹＴＦＴ（配列識別番号４３）の断片を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、ＤＹＴＬＴ（配列識別番号４２）を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、ＧＹＴＦＴ（配列識別番号４３）を含む。

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、復帰突然変異のうち１または複数を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬ復帰突然変異は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、（ａ）位置４６のＡｌａ（Ａ４６）、（ｂ）位置６０のＡｓｐ（Ｄ６０）、（ｃ）位置７０のＡｓｐ（Ｄ７０）、（ｄ）位置４３のＳｅｒ（Ｓ４３）、（ｆ）位置８７のＰｈｅ（Ｆ８７）から選択される１または複数、および、その組み合わせである。

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ＶＬ復帰突然変異Ａ４６、Ｄ６０、Ｄ７０、Ｓ４３またはＦ８７のうち少なくとも２、３または４つを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＬ復帰突然変異Ａ４６を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＬ復帰突然変異Ａ４６およびＤ６０、ならびに、上で列挙された別のものを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＬ復帰突然変異の群（Ａ４６、Ｄ６０、Ｄ７０）または（Ａ４６、Ｄ６０、Ｄ７０、Ｓ４３、Ｆ８７）を含む。

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異（Ｅ１、Ｒ９８、Ｓ７２、Ａ６８、Ｌ７０、Ｉ４８）を含み、ＶＬ復帰突然変異を含まない。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異（Ｅ１、Ｓ７２、Ｌ７０、Ｉ４８、Ａ６８、Ｄ２６、Ｌ２９）を含み、ＶＬ復帰突然変異を含まない。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異（Ｅ１、Ｓ７２）、および、ＶＬ復帰突然変異（Ａ４６、Ｄ６０、Ｄ７０、Ｓ４３、Ｆ８７）を含む。

いくつかの実施形態において、本開示の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体は、配列識別番号８−１７のＶＨ、配列識別番号１９−２２のＶＬ、または、それぞれの生物学的同等物を含む。ＶＨまたはＶＬの生物学的同等物は、全体的に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有する、指定されたアミノ酸を含む配列である。配列識別番号１０の生物学的同等物は、したがって、配列識別番号１０と全体的に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するが、ＣＤＲ（配列識別番号１−３またはそれらの変異型）を保持し、任意で、復帰突然変異のうち１つまたは複数、または、すべてを保持するＶＨであり得る。

一実施形態において、ＶＨは配列識別番号１１のアミノ酸配列を有し、ＶＬは配列識別番号１９のアミノ酸配列を有する。一実施形態において、ＶＨは配列識別番号１７のアミノ酸配列を有し、ＶＬは配列識別番号１９のアミノ酸配列を有する。一実施形態において、ＶＨは配列識別番号１１のアミノ酸配列を有し、ＶＬは配列識別番号２２のアミノ酸配列を有する。挙げられた配列の各々は、それらの生物学的同等物で置換され得ることも留意されたい。

いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、ヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質への特異性を有し、配列識別番号２３のＶＨ ＣＤＲ１、配列識別番号２４のＶＨ ＣＤＲ２、配列識別番号２５のＶＨ ＣＤＲ３、配列識別番号２６のＶＬ ＣＤＲ１、配列識別番号２７のＶＬ ＣＤＲ２、配列識別番号２８のＶＬ ＣＤＲ３を含む。ＶＨの非限定的な例は、配列識別番号２９−３５において提供され、そのうちの配列識別番号２９は、マウスＶＨであり、配列識別番号３０−３５はヒト化ＶＨである。更に、これらのヒト化ＶＨは、マウスバージョンへの１または複数の復帰突然変異を含む。同様に、ＶＬ（ＶＫ）の非限定的な例は、配列識別番号３６−４１において提供される。配列識別番号３６はマウス配列であり、配列識別番号３７−４１はヒト化配列であり、そのうちの配列識別番号３８−４１は、例に示すような１または複数の復帰突然変異を含む。

復帰突然変異は、抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体の特定の特徴を保持するために有用であることが示される。従って、いくつかの実施形態において、本開示の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体、特に、ヒト型またはヒト化抗体は、復帰突然変異のうち１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨ復帰突然変異（すなわち、指定の位置にアミノ酸を含む）は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、Ｅ１、Ｒ８４、Ｙ２７、Ｉ２８、Ｉ４８、Ｔ６８、Ｌ７０またはＴ３０から選択される１または複数、および、それらの組み合わせである。

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異Ｅ１を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異Ｅ１およびＲ８４を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異Ｅ１、および、上で列挙された別のものを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異の群（Ｅ１）、（Ｅ１およびＲ８４）、（Ｅ１、Ｒ８４、Ｙ２７およびＩ２８）、（Ｅ１、Ｒ８４、Ｙ２７、Ｉ２８およびＩ４８）、（Ｅ１、Ｒ８４、Ｙ２７、Ｉ２８、Ｉ４８、Ｔ６８およびＬ７０）、または（Ｅ１、Ｒ８４、Ｙ２７、Ｉ２８、Ｉ４８、Ｔ６８、Ｌ７０およびＴ３０）を含む。

いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、ＣＤＲ１のＮ末端における、すなわち、Ｋａｂａｔナンバリングに従って位置２６から開始するＧＹＩＦＴ（配列識別番号４４）、ＧＹＩＦ（配列識別番号４５）、または、ＧＧＴＦ（配列識別番号４６）の断片を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、ＧＹＩＦＴ（配列識別番号４４）を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、ＧＹＩＦ（配列識別番号４５）を含む。一実施形態において、重鎖可変領域は、ＧＧＴＦ（配列識別番号４６）を含む。

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、復帰突然変異のうち１または複数を含む。いくつかの実施形態において、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、ＶＬ復帰突然変異は、Ｖ４８、Ｄ５７、Ｑ７０またはＳ４３から選択される１または複数、および、それらの組み合わせである。

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ＶＬ復帰突然変異Ｖ４８、Ｄ５７、Ｑ７０またはＳ４３のうち少なくとも２、３または４つを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＬ復帰突然変異Ｖ４８を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＬ復帰突然変異Ｖ４８およびＤ５７、ならびに、上で列挙された別のものを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＬ復帰突然変異の群（Ｖ４８）、（Ｖ４８およびＤ５７）、（Ｖ４８、Ｄ５７、Ｑ７０）、または、（Ｖ４８、Ｄ５７、Ｑ７０、Ｓ４３）を含む。

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異（Ｅ１、Ｒ８４、Ｙ２７、Ｉ２８、Ｉ４８、Ｔ６８、Ｌ７０）、および、ＶＬ復帰突然変異（Ｖ４８）を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくともＶＨ復帰突然変異（Ｅ１、Ｒ８４、Ｙ２７、Ｉ２８、Ｉ４８、Ｔ６８、Ｌ７０、Ｔ３０）、および、ＶＬ復帰突然変異（Ｖ４８およびＤ５７）を含む。

いくつかの実施形態において、本開示の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体は、配列識別番号３０−３５のＶＨ、配列識別番号３７−４１のＶＬ、または、それぞれの生物学的同等物を含む。ＶＨまたはＶＬの生物学的同等物は、全体的に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有する、指定されたアミノ酸を含む配列である。配列識別番号３５の生物学的同等物は、したがって、配列識別番号３５と全体的に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するが、ＣＤＲ（配列識別番号２３−２５またはそれらの変異型）を保持し、任意で、復帰突然変異のうち１つまたは複数、または、すべてを保持するＶＨであり得る。

一実施形態において、ＶＨは配列識別番号３４のアミノ酸配列を有し、ＶＬは配列識別番号３８のアミノ酸配列を有する。一実施形態において、ＶＨは、配列識別番号３５のアミノ酸配列を有し、ＶＬは、配列識別番号３９のアミノ酸配列を有する。列挙された配列の各々は、それらのの生物学的同等物で置換され得ることにも留意されたい。

また、当業者であれば、本明細書に開示される抗体は、それらの由来となる、天然に発生する結合ポリペプチドと比較して、アミノ酸配列が変動するように改変され得ることを理解するであろう。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は同様であり得て、例えば、開始配列に対して、特定のパーセントの同一性を有し、例えば、開始配列に対して、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であり得る。

本開示の抗体および断片は、いくつかの実施形態において、単一特異性または二重特異性の抗体または断片であり得る。二重特異性の抗体については、他の特異性は、例えば治療用途などの特定の使用に有用な、ＧＭ−ＣＳＦの異なる標的エピトープ、または、異なる標的タンパク質に対するものであり得る。一態様において、標的タンパク質は、ＴＮＦアルファ、ＩＬ―６、ＩＬ−１、ＩＬ−１７などのサイトカインである。別の態様において、標的タンパク質は、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３などのケモカインである。別の態様において、標的タンパク質は、ＣＤ３、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＤ２０、ＣＤ７３などの細胞表面タンパク質である。

特定の実施形態において、抗体は、通常は抗体に関連しない、アミノ酸配列、または、１または複数の部分を含む。例示的な改変は、以下でより詳細に説明される。例えば、本開示の抗体は、柔軟なリンカ配列を含み得る、または、官能基（例えば、ＰＥＧ、薬剤、毒物、または、標識）を追加するように改変され得る。

本開示の抗体、変異型、または、それらの誘導体は、改変された誘導体、すなわち、エピトープへの抗体の結合が共有結合によって防止されないように任意の種類の分子を抗体に共有結合させることによって改変された誘導体を含む。例えば、これらに限定されないが、抗体は例えば、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などによって改変できる。多数の化学改変のいずれも、これらに限定されないが、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含む、既知の技法によって実行され得る。加えて、抗体は、１または複数の非従来型アミノ酸を含み得る。

いくつかの実施形態において、抗体は、他の手段によって別の分子と結合または接続され、機能性分子を形成し得る。第２分子は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物反応修飾物質、医薬品、または、ＰＥＧのうちの１つであり得る。いくつかの非限定的な例は、サイトカイン、または、ＩＬ−１０、ＩＬ−２５、ＩＬ−２７、ＩＬ−３３、ＩＬ−３５、ＩＬ−３６などの他の可溶性因子である。また、いくつかの実施形態において、本開示の抗体または断片と小分子薬剤とを含む抗体薬物複合体が提供される。

抗体は、放射性標識などの検出可能な標識を含み得る治療剤、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療剤、光活性診断剤、薬物または毒物であり得る細胞傷害性剤、超音波造影剤、非放射性標識、それらの組み合わせ、および、本技術分野において既知である他のそのような物質に結合または融合され得る。

抗体は、化学発光化合物と結合させることによって、検出可能に標識できる。その後、化学発光標識された抗原結合ポリペプチドの存在は、化学反応の過程において生じる発光の存在を検出することによって判定される。特に有用な化学発光標識化合物の例には、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ酸エステルがある。

また、抗体は、^１５２Ｅｕまたはランタニド系列の他のものなどの蛍光放射金属を使用して検出可能に標識できる。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの金属キレート基を使用して、抗体に取り付けることができる。様々な部分を抗体に結合させる技法は既知である。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， ｐｐ． ２４３−５６ （Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ． （１９８５）のＡｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ， "Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ"、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ （２ｎｄ Ｅｄ．）， Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， （ｅｄｓ．）， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， ｐｐ． ６２３− ５３ （１９８７）のＨｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．， "Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ"、 Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ '８４： Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， ｐｐ． ４７５−５０６ （１９８５）のＴｈｏｒｐｅ， "Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ： Ａ Ｒｅｖｉｅｗ"、 Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ｐｐ． ３０３−１６ （１９８５）の"Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｒｅｓｕｌｔｓ， Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ"、および、Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｖ． （５２：１１９−５８ （１９８２））のＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．， "Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ"を参照されたい。

［抗体をコードするポリヌクレオチドおよび抗体の調製方法］
また、本開示は、開示の抗体、変異型、または、誘導体をコードする、単離ポリヌクレオチドまたは核酸分子を提供する。本開示のポリヌクレオチドは、同一のポリヌクレオチド分子上で、または、別個のポリヌクレオチド分子上で、抗原結合ポリペプチド、その変異型または誘導体の重鎖および軽鎖可変領域の全体をコードし得る。加えて、本開示のポリヌクレオチドは、同一のポリヌクレオチド分子上で、または、別個のポリヌクレオチド分子上で、抗原結合ポリペプチド、その変異型または誘導体の重鎖および軽鎖可変領域の一部をコードし得る。

抗体を作成する方法は、本技術分野において既知であり、本明細書において説明されている。特定の実施形態において、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域および定常領域の両方は、完全にヒト型である。完全ヒト抗体は、本技術分野において説明される技法を使用して、本明細書において説明されるように作成できる。例えば、特異的抗原に対する完全ヒト抗体は、抗原投与に応答してそのような抗体を生成するが内因性の遺伝子座を欠損するように改変されたトランスジェニック動物に抗原を投与することによって調製できる。そのような抗体を作成するために使用できる例示的技法は、参照によって全体が組み込まれる米国特許第６，１５０，５８４号、第６，４５８，５９２号、第６，４２０，１４０号に説明されている。

特定の実施形態において、調製された抗体は、例えばヒトなど、治療されるべき動物において、有害な免疫反応を誘発しない。一実施形態において、本開示の抗原結合ポリペプチド、その変異型または誘導体は、本分野において認識されている技法を使用することによって、免疫原性を低減するように改変される。例えば、抗体はヒト化、霊長類化、脱免疫化でき、または、キメラ抗体を作成できる。これらの種類の抗体は、親抗体の抗原結合特性を保持する、または、実質的に保持するが、ヒトにおいては免疫原性がより小さい、典型的にはマウスまたは霊長類抗体などの非ヒト抗体に由来する。これは、（ａ）非ヒト可変ドメイン全体をヒト定常領域に移植してキメラ抗体を生成すること、（ｂ）非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）の１または複数の少なくとも一部を、重大なフレームワーク残基を保持する、または保持しない、ヒトフレームワークおよび定常領域に移植すること、または、（ｃ）非ヒト可変ドメイン全体を移植するが、表面残基の置き換えによって、ヒト様領域でそれらを「クローキング（ｃｌｏａｋｉｎｇ）」することを含む、様々な方法によって達成され得る。そのような方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ５７：６８５１−６８５５ （１９８４）； Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４４：６５−９２ （１９８８）； Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６ （１９８８）； Ｐａｄｌａｎ， Ｍｏｌｅｃ． Ｉｍｍｕｎ． ２５：４８９−４９８ （１９９１）； Ｐａｄｌａｎ， Ｍｏｌｅｃ． Ｉｍｍｕｎ． ３１：１６９−２１７ （１９９４）、ならびに、米国特許第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号および第６，１９０，３７０号において開示されており、これらはすべて、参照によって全体が本明細書に組み込まれる。

脱免疫は、抗体の免疫原性を低減するために使用することもできる。本明細書において使用される「脱免疫」という語句は、Ｔ細胞エピトープを改変するように抗体を変更することを含む（例えば、国際特許出願公報ＷＯ／９８５２９７６ Ａ１およびＷＯ／００３４３１７ Ａ２を参照）。例えば、開始抗体の可変重鎖および可変軽鎖の配列が解析され、相補性決定領域（ＣＤＲ）に関連するエピトープおよび配列内の他の重要な残基の位置を示す、各Ｖ領域のヒトＴ細胞エピトープ「マップ」が作成される。最終的な抗体の活性を変更するリスクが低い、代替的なアミノ酸置換を同定するべく、Ｔ細胞エピトープマップの個々のＴ細胞エピトープが解析される。アミノ酸置換の組み合わせを含む様々な代替的な可変重鎖および可変軽鎖の配列が設計され、これらの配列は後に、様々な結合ポリペプチドに組み込まれる。典型的には、１２から２４の間の変異型抗体が生成され、結合および／または機能について試験される。完全な重鎖および軽鎖遺伝子は、改変された可変領域を含み、ヒト定常領域は、発現ベクターにクローニングされ、その後、全抗体を生成するための細胞株にプラスミドが導入される。次に、抗体は、適切な生化学および生物学的アッセイにおいて比較され、最適な変異型が同定される。

本開示の抗原結合ポリペプチドの結合特異性は、免疫沈降、放射免疫測定（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロアッセイによって決定できる。

代替的に、一本鎖ユニットを生成するための記載される技法（米国特許第４，６９４，７７８号；Ｂｉｒｄ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４４２ （１９８８）； Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ５５：５８７９− ５８８３ （１９８８）；およびＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４４−５５４ （１９８９））は、本開示の一本鎖ユニットの生成に適用できる。一本鎖ユニットは、アミノ酸ブリッジを介してＦｖ領域の重鎖および軽鎖断片を連結することによって形成され、一本鎖融合ペプチドが結果として得られる。また、大腸菌において機能性Ｆｖ断片を組み立てるための技法が使用され得る（Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２： １０３８−１０４１ （１９８８））。

一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）および抗体を生成するために使用できる技法の例は、米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８ （１９９１）； Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９０：１９９５−１９９９ （１９９３）；およびＳｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４０ （１９８８）において記載されるものを含む。ヒトにおける抗体のインビボ使用、および、インビトロ検出アッセイを含む、いくつかの使用について、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、ヒト抗体を使用することが好ましいことがあり得る。キメラ抗体とは、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体など、抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体を生成する方法は本技術分野において知られている。例えば、参照によって全体が本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２ （１９８５）； Ｏｉ ｅｔ ａｌ．， ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４ （１９８６）； Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２ （１９８９）；米国特許第５，８０７，７１５号、；第４，８１６，５６７号；および第４，８１６３９７号を参照されたい。

ヒト化抗体とは、非ヒト種およびフレームワーク領域ならびにヒト免疫グロブリン分子の１または複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を有し、所望される抗原に結合する、非ヒト種抗体に由来する抗体分子である。ヒトフレームワーク領域におけるフレームワーク残基はしばしば、抗原結合を変更する、好ましくは改善するために、対応するＣＤＲドナー抗体の残基に置換される。これらのフレームワーク置換は、本技術分野において既知の方法により同定され、例えば、ＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用をモデル化することにより、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定する方法、および、配列比較により、特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定する方法が使用される。（例えば、参照によって全体が本明細書に組み込まれるＱｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，５８５，０８９号； Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３ （１９８８）を参照されたい。）抗体は、例えば、ＣＤＲ移植（ＥＰ ２３９，４００； ＰＣＴ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ＷＯ ９１／０９９６７、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号；および第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェイシング（ＥＰ ５９２，１０６； ＥＰ ５１９，５９６、Ｐａｄｌａｎ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８ （１９９１）、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４ （１９９４）、Ｒｏｇｕｓｋａ． ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１：９６９−９７３ （１９９４））、チェインシャフリング（全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５６５，３３２号）を含む、本技術分野において知られている様々な技法を使用してヒト化できる。

完全ヒト抗体は、ヒトの患者の治療処置に特に望ましい。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用するファージディスプレイ法を含む、本技術分野において知られている様々な方法によって作成できる。米国特許第４，４４４，８８７号および第４，７１６，１１１号、ならびに、ＰＣＴ公報ＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８９３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３５およびＷＯ ９１／１０７４１も参照されたい。これらは各々、全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

また、機能的内因性免疫グロブリンを発現できないがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用してヒト抗体を生成できる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、マウス胚性幹細胞内に、無作為に、または、相同組換えによって導入され得る。代替的に、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、多様性領域がマウス胚性幹細胞内に導入され得る。マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン座位の導入と別個に、または同時に、非機能性を付与され得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合型欠失は、内因性抗体の生成を防止する。改変された胚性幹細胞を増殖させ、胚盤胞に微量注入することにより、キメラマウスを作る。次に、キメラマウスを繁殖させることにより、ヒト抗体を発現するホモ接合型の子孫を作る。例えば、所望の標的ポリペプチドの全部または一部など、選択された抗原を用いて、通常の方式でトランスジェニックマウスを免疫化する。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫化されたトランスジェニックマウスから取得できる。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞の分化中に再編成し、その後、クラススイッチおよび体細胞突然変異が起きる。したがって、そのような技法を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を生成することが可能である。ヒト抗体を生成するためのこの技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ Ｉｎｔ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ７３：６５−９３ （１９９５）を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を生成するためのこの技術、ならびに、そのような抗体を生成するためのプロトコルの詳細な説明については、例えば、参照によって全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公報ＷＯ ９８／２４８９３、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３５、米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号および第５，９３９，５９８号を参照されたい。加えて、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州フリーモント）ＧｅｎＰｈａｒｍ（カリフォルニア州サンノゼ）などの企業は、上で説明されたものと同様の技術を使用して、選択された抗原に対するヒト抗体の提供に従事できる。

選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」と呼ばれる技法を使用して生成することもできる。この手法において、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体は、同一のエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を誘導するために使用される。（Ｊｅｓｐｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７２：８９９−９０３ （１９８８）、また、参照によって全体が組み込まれる、米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたい。）

別の実施形態において、所望されるモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離およびシーケンシングされ得る。単離およびサブクローニングされたハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として機能する。ＤＮＡは一旦単離されると、発現ベクター内に配置され得て、これが次に、本来は免疫グロブリンを生成しない、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または、骨髄腫細胞など、原核性または真核性の宿主細胞内にトランスフェクトされる。より具体的には、単離されたＤＮＡ（本明細書において記載されるように合成され得る）は、参照によって本明細書に組み込まれる、１９９５年１月２５日に出願された、Ｎｅｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，６５８，５７０号に記載されるような抗体を製造するための定常および可変領域配列をクローンするために使用され得る。基本的に、これは、選択された細胞からのＲＮＡの抽出、ｃＤＮＡへの変換、Ｉｇに特異的なプライマーを使用するＰＣＲによる増幅を伴う。この目的のための好適なプライマーはまた、米国特許第５，６５８，５７０号に記載される。以下でより詳細に説明されるように、所望の抗体を発現する形質転換された細胞は、免疫グロブリンの臨床および商業用のサプライを提供するために比較的大量に増殖され得る。

加えて、定型的な組換えＤＮＡ技法を使用することにより、本開示の抗原結合ポリペプチドのＣＤＲのうちの１または複数は、非ヒト抗体をヒト化するべく、フレームワーク領域内、例えば、ヒトフレームワーク領域内に挿入され得る。フレームワーク領域は、天然に発生する、または、コンセンサスフレームワーク領域であり得て、好ましくは、ヒトフレームワーク領域（ヒトフレームワーク領域の一覧は、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２７８：４５７−４７９ （１９９８）を参照されたい）であり得る。好ましくは、フレームワーク領域およびＣＤＲの組み合わせによって生成されるポリヌクレオチドは、例えばＬＩＧＨＴなど、所望されるポリペプチドの少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する抗体をコードする。好ましくは、フレームワーク領域内において、１または複数のアミノ酸置換が成され得て、好ましくは、アミノ酸置換は抗原に対する抗体の結合を改善する。加えて、そのような方法は、１または複数の鎖内ジスルフィド結合を欠く抗体分子を生成するべく、鎖内ジスルフィド結合に関与する１または複数の可変領域システイン残基のアミノ酸置換または欠失を行うために使用され得る。ポリヌクレオチドへの他の変更は本開示に包含され、本技術分野の範囲内にある。

加えて、適切な生物学的活性のヒト抗体分子の遺伝子と共に、適切な抗原特異性を有する、マウス抗体分子の遺伝子をスプライシングすることによる、「キメラ抗体」を生成するために開発された技法を使用できる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ：８５１−８５５ （１９８４）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３７２：６０４−６０８ （１９８４）、Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２−４５４ （１９８５））。本明細書において使用されるキメラ抗体とは、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有するものなど、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。

組換え抗体を生成するための更に別の非常に効率的な手段がＮｅｗｍａｎ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０： １４５５−１４６０ （１９９２）において開示される。具体的には、この技法の結果、猿の可変ドメインおよびヒト定常配列を含む霊長類化抗体が生じる。この参考文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。更に、この技法はまた、参照により本明細書に各々組み込まれる、同一出願人による米国特許第５，６５８，５７０号、第５，６９３，７８０号および第５，７５６，０９６号において記載されている。

代替的に、当業者によく知られている技法を使用して、抗体生成細胞株が選択および培養され得る。そのような技法は、様々な実験室マニュアルおよび一次公報において説明されている。これに関して、後述する開示における使用に好適な技法が、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｅｄｓ．， Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９９１）において説明され、これは、参照によって付録を含む全体が本明細書に組み込まれる。

加えて、本開示の抗体をコードするヌクレオチド配列に、これらに限定されないが、アミノ酸置換を引き起こす特定部位突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発を含む突然変異を導入するために、当業者に知られている標準的な技法を使用できる。好ましくは、変異型（誘導体を含む）は、基準となる可変重鎖領域、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、可変軽鎖領域、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、または、ＣＤＲ−Ｌ３に対して、５０未満のアミノ酸置換、４０未満のアミノ酸置換、３０未満のアミノ酸置換、２５未満のアミノ酸置換、２０未満のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換、または、２未満のアミノ酸置換をコードする。代替的に、突然変異は、飽和突然変異誘発（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）など、コード配列の全部または一部に沿って、無作為に導入でき、結果として生じる変異体は生物学的活性についてスクリーニングされ、活性を保持する変異体を同定できる。

［治療方法および使用］
本明細書において説明されるように、本開示の抗体、変異型または誘導体は、特定の治療および診断方法において使用され得る。

本開示は更に、本明細書において説明される疾患または病態の１または複数を治療するために、動物、哺乳類およびヒトなどの患者に開示の抗体を投与することを伴う抗体ベースの治療法に関連する。本開示の治療用化合物には、これらに限定されないが、本開示の抗体（本明細書において説明される変異型、および、変異型の誘導体を含む）、および、本開示の抗体（本明細書において説明される変異型、および、変異型の誘導体を含む）をコードする核酸またはポリヌクレオチドが含まれる。

本開示の抗体および断片は、いくつかの実施形態において、炎症性もしくは自己免疫性の疾患もしくは障害、または、癌を治療するための薬剤の製造に使用できる。本本開示の抗体および断片は、痛みの根元的な機構または痛み自体を治療するのに有用であるとも考えられる。

顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）が、骨髄前駆細胞から顆粒球およびマクロファージの両方のコロニーを生成する能力を有することは、元々既知であった。また、ＧＭ−ＣＳＦが、生存促進性因子、活性化因子、および、分化因子として、成熟骨髄細胞に作用することが示されていた。近年の研究では、ＧＭ−ＣＳＦはまた、多くの炎症誘発機能を有し、自己免疫性および炎症性の疾患の発症において重要な役割を有することが示唆されている。

ＧＭ−ＣＳＦは、マクロファージ、好中球および好酸球の生存および活性、ならびに、樹状細胞（ＤＣ）の成熟を促進する。ＧＭ−ＣＳＦは、マクロファージをＭ１様炎症性マクロファージに極性化でき、これは、ＴＮＦ、ＩＬ―６、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−２３、または、ＩＬ−１βなどの様々な炎症性サイトカインを生成し、これにより、Ｔｈ１−Ｔｈ１７応答を促進する。他方で、ＧＭ−ＣＳＦとＴｈ２免疫との関連もアレルギー性気管支炎において報告されている。

ＧＭ−ＣＳＦ受容体は、低い親和性でＧＭ−ＣＳＦと結合するαサブユニット（ＧＭＲα）、ならびに、ＩＬ−３およびＩＬ−５受容体と共有されるＩＬシグナル伝達βｃサブユニットから成る。ＧＭ−ＣＳＦおよびＧＭＲαの二元複合体は、遊離βｃサブユニットと相互作用し、高親和性の六量体複合体を形成する。２つの六量体複合体の横方向の凝集によって形成される十二量体複合体は、βｃサブユニットに関連するＪａｋ２が二量体化およびリン酸基転移を行うことを可能にするが、これは六量体複合体にはできない。この構造は、ＧＭ−ＣＳＦ受容体活性の用量依存的反応をもたらす。通常の状態における低濃度のＧＭ−ＣＳＦは、βｃ Ｓｅｒ５８５リン酸化をもたらし、細胞生存のみをもたらす１４−３−３／ＰＩ−３キナーゼ経路を活性化する。炎症状態における、より高い濃度のＧＭ−ＣＳＦは、βｃ Ｓｅｒ５８５リン酸化、および、媒介されるβｃ Ｔｙｒ５７７リン酸化、ならびに、Ｊａｋ２／ＳＴＡＴ５経路、Ｒａｓ／ＭＡＰキナーゼ経路、および、ＰＩ−３キナーゼ経路の活性を停止し、結果として、細胞生存、増殖、活性の促進をもたらす。

幅広い様々な細胞がＧＭ−ＣＳＦを生成できる。ＧＭ−ＣＳＦの主な供給源は、Ｔ細胞およびＢ細胞、単球／マクロファージ内皮細胞、ならびに、線維芽細胞である。好中球、好酸球、上皮細胞、中皮細胞、パネート細胞、軟骨細胞、および、腫瘍細胞もＧＭ−ＣＳＦを生成できる。ＧＭ−ＣＳＦの生成は、ＴＮＦ、ＩＬ−１、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、および、プロスタグランジンＥ２を含む様々な因子によって刺激される。近年、自己免疫性および炎症性の疾患における、ＧＭ−ＣＳＦを生成するＣＤ４ Ｔ細胞の病原性が明らかにされ、ますます関心を集めている。

近年のエビデンスでは、ＧＭ−ＣＳＦが多くの自己免疫疾患の発症において重要な役割を果たすことが明らかにされた。ＧＭ−ＣＳＦの枯渇または中和により、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、関節炎、関節炎関連間質性肺疾患、腎炎または乾癬を含む多くの自己免疫疾患モデルが抑制される。ＧＭ−ＣＳＦの阻害が癌の治療に有用であり得ることも示唆されている。

いくつかの実施形態において、開示される抗体、断片および組成物によって治療される炎症性疾患または症状は、アルツハイマー病、アジソン病、アテローム性動脈硬化、強直性脊椎炎、関節炎、変形性関節炎（ＯＡ）、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬性関節炎（ＰＡ）、強直性脊椎炎、喘息、アテローム性動脈硬化、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、クローン病、大腸炎、皮膚炎、憩室炎、線維筋痛、肝臓炎、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腎炎、パーキンソン病（ＰＤ）、血管炎、潰瘍性大腸炎のうちの１または複数を含む。

いくつかの実施形態において、本開示の抗体、断片、および、組成物によって治療される自己免疫疾患または病状は、円形脱毛症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、皮膚筋炎、糖尿病（１型）、セリアック病、自己免疫性若年性特発性関節炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、自己免疫性心筋炎、多発性硬化症、天疱瘡／類天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発筋炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、関節リウマチ、強皮症／全身性強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎、自己免疫性ブドウ膜炎、白斑、および、多発血管炎性肉芽腫症（Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症）のうちの１または複数を含む。

関節リウマチ（ＲＡ）は、主に関節に影響を及ぼす長期の自己免疫疾患である。典型的には、関節の発熱、腫れ、痛みをもたらす。痛みおよび強張りは、安静後に悪化することが多い。手首および手において発生することがもっとも一般的であり、典型的には、身体の両側の同一の関節において発生する。この疾患は、身体の他の部分にも影響を及ぼし得る。関節リウマチの原因は明確ではないが、遺伝因子および環境因子の組み合わせが関与していると考えられる。根元的な機構は、身体の免疫系が関節を攻撃することに関連する。この結果、関節包が炎症し、厚くなる。治療の目標は、痛みを低減し、炎症を減少させ、人の全体的機能を改善することである。症状を和らげるために、鎮痛剤、ステロイド、および、ＮＳＡＩＤが使用されることが多い。疾患の進行を遅らせるべく、ヒドロキシクロロキンおよびメトトレキサートなどの疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）と呼ばれる一群の薬が使用され得る。

変形性関節炎（ＯＡ）は、関節軟骨およびその下の骨の破壊の結果として生じる関節疾患の一種である。もっとも一般的な症状は、関節の痛み、および、強張りである。初期には、症状は運動後のみに発生し得るが、時間が経過するにつれて、常に発生し得る。他の症状には、関節の腫れ、可動範囲の減少、ならびに、裏側が影響を受ける場合は腕および脚の筋力低下または無感覚が含まれ得る。原因には、過去の関節の傷害、異常な関節または四肢の成長、および、遺伝因子が含まれる。体重が重く、一方の脚の長さが異なり、関節の負荷が大きい仕事に従事している人の方がリスクが大きい。変形性関節炎は、関節に対する機械的負荷、および、軽度の炎症プロセスによって引き起こされると考えられる。治療には、運動、関節の負荷を減少させる努力、サポートグループ、鎮痛剤が含まれる。

多発性硬化症（ＭＳ）は、脳および脊髄における神経細胞の絶縁カバーが損傷する脱髄疾患である。この損傷は、神経系の一部が信号を伝達する能力を妨げ、その結果、身体、精神、場合によっては、精神医学的問題を含む、様々な兆候および症状が生じる。特有の症状には、複視、一方の目の失明、筋力低下、感覚の問題、または、協調運動の問題が含まれ得る。原因は明確ではないが、根元的な機構は、免疫系の破壊、または、ミエリン生成細胞の障害のいずれであると考えられる。多発性硬化症に対する既知の治療は無い。治療は、発作後の機能を改善し、再発を防止することを試みるものである。

喘息は、肺の気道の一般的な長期の炎症性疾患である。変化しやすく反復的な症状、可逆的な気道閉塞、および、気管支けいれんを特徴とする。症状には、喘鳴、咳、胸部圧迫感、息切れの発現が含まれる。喘息は、遺伝因子および環境因子の組み合わせにより引き起こされると考えられる。環境因子には、大気汚染およびアレルゲンへの曝露が含まれる。喘息は、症状の頻度、努力性呼気１秒量（ＦＥＶ１）、および、最大呼気流量に従って分類される。また、アトピー性または非アトピー性に分類され得て、アトピーとは、１型過敏反応を発症する傾向を指す。喘息には治療法が無い。症状は、アレルゲンおよび刺激物などのトリガを回避することによって、および、吸入コルチコステロイドの使用によって防止できる。喘息の症状が治まらない場合、吸入コルチコステロイドに加えて、長時間作用型βアゴニスト（ＬＡＢＡ）または抗ロイコトリエン剤が使用され得る。急速に悪化する症状の治療は通常、経口投与されるサルブタモールおよびコルチコステロイドなど、吸入される短時間作用型β‐２アゴニストを用いる。非常に深刻な症例では、静脈内コルチコステロイド、硫酸マグネシウム、および、入院が必要であり得る。

慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、長期的な気道の不全を特徴とする、閉塞性肺疾患の一種である。ＣＯＰＤは、２つの主な病状、すなわち、肺気腫および慢性気管支炎を含み得る。肺気腫では、多くの肺包の間の壁が損傷する。その結果、肺包は形状を失い、弾性が低下する。この損傷はまた、肺包の壁を破壊し得て、多くの小さい肺胞ではなく、より少なくより大きい肺包が生じる。これが発生した場合、肺で交換される気体の量が低下する。慢性気管支炎では、気道の内壁が常に刺激を受け炎症を起こし、これが原因で内壁が腫れる。気道の中で多くの厚い粘液が形成され、呼吸が難しくなる。ＣＯＰＤには既知の治療法が無いが、症状は処置可能であり、その進行を遅延させることができる。

痛みは、爪先をぶつける、指を火傷する、切り傷がアルコールに触れる、または、「肘先の骨」を打つなど、強い、または、損傷を与える刺激によって引き起こされることが多い、苦しい感覚である。痛みは複雑で主観的な現象であり、痛みの定義は困難である。痛みはまた、実際の、または、潜在的な組織の損傷に関連する、不快な感覚的および感情的経験と呼ばれる。痛みは、炎症などの、根元的な病状の症状としてみなされることがある。

いくつかの実施形態において、治療を必要とする患者の癌を治療するための方法を提供する。一実施形態において、当該方法は、本開示の抗体の有効量を患者に投与することを伴う。

癌の非限定的な例には、膀胱癌、乳癌、大腸癌、子宮体癌、食道癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、悪性黒色腫、膵癌、前立腺癌および甲状腺癌が含まれる。

開示の抗体もしくは変異型、または、それらの誘導体を用いて治療、予防、診断、および／または、予後され得る、細胞生存の増加に関連する追加の疾患または病状には、これらに限定されないが、白血病（急性白血病、（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病を含む）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病））を含む）、真性多血症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、原発性マクログロブリン血症、重鎖病、および、固形腫瘍（これらに限定されないが、繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮種、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、肺小細胞癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫などの肉腫および癌腫などを含む）などの悪性腫瘍および関連する障害の進行および／または転移が含まれる。

特定の患者に対する具体的な投与量および治療計画は、特定の抗体、使用される変異型または誘導体、患者の年齢、体重、一般的健康状態、性別、食生活、投与時刻、排泄率、併用薬剤、治療対象である特定の疾患の重症度を含む様々な要素に依存するであろう。医療従事者による、そのような要素の判断は、当分野における一般的な能力の範囲内である。また、その量は、治療される個々の患者、投与経路、製剤の種類、使用される化合物の特徴、疾患の重症度、および、所期の効果に依存するであろう。使用される量は、本技術分野において既知の薬学的および薬物動態学な原理によって決定できる。

抗体の投与方法には、これらに限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および、経口の経路が含まれる。抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、都合の良い経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜内壁（例えば、口腔粘膜、直腸および腸の粘膜など）を通した吸収によって投与され得て、他の生物学的活性剤と共に投与され得る。したがって、開示の抗原結合ポリペプチドを含む医薬組成物は、経口、経直腸、非経口、嚢内、膣内、腹腔内、局所的（粉末、軟膏、注入薬または経皮パッチとして）、口腔内に、または、口腔もしくは鼻腔スプレーとして投与され得る。

本明細書において使用される「非経口」という語句は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、関節内の注射および注入を含む投与方式を指す。

投与は全身投与であっても、または、局所的投与であってもよい。加えて、脳室内および髄腔内注射を含む好適な経路によって中枢神経系に本開示の抗体を導入することが望ましいことがあり得る。脳室内注射は、例えば、オマヤリザーバーなどのリザーバーに取り付けられた脳室内カテーテルによって容易になり得る。また、例えば吸入器または噴霧器、および、エアロゾル剤の製剤の使用によって、肺投与を利用できる。

開示の抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましいことがあり得る。これは、例えば、これらに限定されないが、手術中の局所注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯と組み合わせる）、注射によって、カテーテルによって、座薬によって、または、インプラントによって達成され得て、上記インプラントは、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜などの膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、または、ゲル状物質である。好ましくは、抗体を含む、本開示のタンパク質を投与するとき、タンパク質が吸収されない材料を使用するように注意する必要がある。

別の実施形態において、抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、小胞、特に、リポソームにおいて輸送できる（Ｌａｎｇｅｒ， １９９０， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３； Ｔｒｅａｔ ｅｔ ａｌ．， ｉｎ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ， Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ （ｅｄｓ．）， Ｌｉｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ． ３５３−３６５ （１９８９）； Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ， ｉｂｉｄ．， ｐｐ． ３１７−３２７； ｓｅｅ ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｉｂｉｄ．を参照されたい）。

更に別の実施形態において、抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、制御された放出システムにおいて輸送できる。一実施形態において、ポンプが使用され得る（Ｓｅｆｔｏｎ， １９８７， ＣＲＣ Ｃｒｉｔ． Ｒｅｆ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ． １４：２０１； Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．， １９８０， Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７； Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３２１：５７４を参照されたい）。別の実施形態において、高分子材料を使用できる（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ， Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ （ｅｄｓ．）， ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌａ． （１９７４）； Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ， Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ， Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ （ｅｄｓ．）， Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８４）； Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ， Ｊ．， １９８３， Ｍａｃｒｏｍｏｌ． Ｓｃｉ． Ｒｅｖ． Ｍａｃｒｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２３：６１； ｓｅｅ ａｌｓｏ Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．， １９８５， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０； Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ａｎｎ． Ｎｅｕｒｏｌ． ２５：３５１； Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ． ７１：１０５を参照されたい）。更に別の実施形態において、制御された放出システムは、治療標的、すなわち、脳の付近に配置でき、したがって、全身投与の場合の数分の１のみが必要になる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ， ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ， ｓｕｐｒａ， ｖｏｌ． ２， ｐｐ． １１５−１３８ （１９８４）を参照されたい）。他の制御された放出システムは、Ｌａｎｇｅｒ （１９９０， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３）のレビューにおいて説明されている。

本開示の組成物が、核酸、または、タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、特定の実施形態において、核酸は、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構築して、それが細胞内になるように投与することによって（例えば、レトロウイルスベクターの使用によって（米国特許第４，９８０，２８６号を参照））、または、直接注射によって、または、微粒子ボンバードメントの使用によって（例えば、遺伝子銃、Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）、または、脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクト剤でコーティングすることによって、または、核に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに結合させて投与することなどによって（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８８：１８６４−１８６８を参照されたい）、コードされたタンパク質の発現を促進するように核酸をインビボで投与できる。代替的に、核酸は、細胞内に導入され得て、相同組換えによって、発現するように宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれ得る。

炎症性、免疫性もしくは悪性の疾患、障害または病状の、治療、抑制および予防に効果的となるであろう、本開示の抗体の量は、標準的な臨床的技法によって決定できる。加えて、最適な投与量範囲を同定することに役立てるべく、インビトロアッセイが任意で利用され得る。製剤において利用される厳密な用量はまた、投与経路、ならびに、疾患、障害または病状の重症度に依存し、医療従事者の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験システムから得られる用量反応曲線から推定され得る。

一般的な提案として、患者に投与される、本開示の抗原結合ポリペプチドの投与量は、典型的には、患者の体重に対して０．１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇの間、患者の体重に対して０．１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、または、患者の体重に対して１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である。一般的に、ヒト抗体は、他の種に由来する抗体と比べて、ヒトの身体内における半減期が長い。これは、外来ポリペプチドに対する免疫反応に起因する。したがって、ヒト抗体の投与量を少なくすること、および、投与の頻度を少なくすることが、しばしば可能である。更に、例えば脂質化などの改変によって、抗体の（例えば脳への）吸収および組織透過性を向上させることによって、本開示の抗体の投与の投与量および頻度が減少し得る。

本開示の抗体、変異型または誘導体の投与を含む、感染性または悪性の疾患、病態または障害を治療するための方法は、典型的には、インビトロで試験され、次に、ヒトに使用される前に、所望される治療または予防活性について、許容される動物モデルにおいてインビボで試験される。トランスジェニック動物を含む好適な動物モデルは当業者にとって既知である。例えば、本明細書において説明される、抗原結合ポリペプチドの治療有用性を示すインビトロアッセイは、細胞株または患者の組織試料に対する、抗原結合ポリペプチドの作用を含む。細胞株および／または組織試料に対する抗原結合ポリペプチドの作用は、本明細書の別の箇所に開示されているアッセイなど、当業者に知られている技法を利用して決定できる。本開示によれば、特定の抗原結合ポリペプチドの投与が適応されるかどうかを決定するために使用できるインビトロアッセイは、インビトロ細胞培養アッセイを含み、このアッセイでは、患者の組織試料を培地において増殖させ、化合物に曝し、または、そうでない場合、化合物を投与し、組織試料に対する当該化合物の作用を観察する。

例えば、リポソーム内におけるカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、化合物を発現可能な組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ， １９８７， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６２：４４２９−４４３２を参照）、レトロウイルスもしくは他のベクターの一部としての核酸の構築など、様々な輸送システムが知られており、これらは、本開示の抗体、または、本開示の抗体をコードするポリヌクレオチドを投与するために使用できる。

更なる実施形態において、本開示の組成物は、抗腫瘍剤、抗ウイルス剤、抗菌剤もしくは抗生物質製剤、または、抗真菌剤と組み合わせて投与される。本技術分野において知られている、これらの製剤のいずれかは、本開示の組成物において投与され得る。

別の実施形態において、本開示の組成物は、化学療法剤と組み合わせて投与される。本開示の組成物と共に投与され得る化学療法剤には、これらに限定されないが、抗生物質誘導体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン）、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン）、代謝拮抗物質（例えば、フルオロウラシル、５‐ＦＵ、メトトレキサート、フロクスウリジン、インターフェロンアルファ‐２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン、メルカプトプリン、６‐チオグアニン）、細胞傷害性剤（例えば、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホスファミドエストラムスチン、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シスプラチン、ビンクリスチン硫酸塩）、ホルモン（例えば、メドロキシプロゲステロン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、二リン酸ジエチルスチルベストロール、クロロトリアニセン、テストラクトン）、ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メルファラン、クロラムブシル、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、チオテパ）、ステロイドおよび組み合わせ（例えば、リン酸ベタメタゾンナトリウム）、その他（例えば、ダカルバジン、アスパラギナーゼ、ミトタン、ビンクリスチン硫酸塩、ビンブラスチン硫酸塩、エトポシド）などが含まれる。

［併用組成物および併用療法］
本開示の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体は、いくつかの実施形態において、別の治療剤と共に使用できる。

いくつかの実施形態において、第２治療薬は、抗炎症剤である。非限定的な例には、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、セレコキシブ（セレブレックス）、ピロキシカム（フェルデン）、インドメタシン（インドシン）、メロキシカム（モービックビビロデックス）、ケトプロフェン（オルディス、ケトプロフェンＥＲ、オルベール、アクトロン）、スリンダク（クリノリル）、ジフルニサル（ドロビッド）、ナブメトン（レラフェン）、オキサプロジン（ダイプロ）、トルメチン（トルメチンナトリウム、トレクチン）、サルサラート、エトドラク（ロダイン）、フェノプロフェン（ナフロン）、フルルビプロフェン（アンサイド）、ケトロラク（トラドール）、メクロフェナメート、メフェナム酸（ポンステル）が含まれる。

いくつかの実施形態において、第２治療薬は、自己免疫疾患の治療に好適である。非限定的な例には、糖質コルチコイド、ムロモナブＣＤ３などの抗ＣＤ３抗体、バシリキシマブ（シムレクト）およびダクリズマブ（ゼナパックス）などのＩＬ−２ａ阻害剤、タクロリムスおよびシクロスポリンなどのカルシニューリン阻害剤、シロリムス、エベロリムス、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質または抗体、および、ミコフェノール酸が含まれる。

いくつかの実施形態において、第２治療薬は、癌の化学療法剤である。化学療法剤は、作用機序によって、例えば、ピリミジン類似体フロクスウリジン、カペシタビン、シタラビンなどの代謝拮抗剤／抗癌剤；プリン類似体、葉酸アンタゴニスト、および、関連する阻害剤；ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン）などの天然産物、および、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン、ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））、エピポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）などの微小管を含む抗増殖／抗有糸分裂剤；アクチノマイシン、アムサクリン、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イフォスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、エトポシド、トリエチレンチオホスホラミドなどのＤＮＡ損傷剤；ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンなどの抗生物質；全身的にＬ−アスパラギンを代謝し、自身のアスパラギンを合成する能力が無い細胞を取り除く、Ｌ−アスパラギナーゼなどの酵素；抗血小板剤；ナイトロジェンマスタードシクロホスファミドおよび類似体（メルファラン、クロラムブシル、ヘキサメチルメラミン、チオテパ）、アルキルニトロソウレア（カルムスチン）および類似体、ストレプトゾシン、トリアゼン（ダカルバジン）などの抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤；葉酸類似体（メトトレキサート）などの抗増殖／抗有糸分裂代謝拮抗物質；白金配位錯体（シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類似体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）、および、アロマターゼ阻害剤（レトロゾールおよびアナストロゾール）；ヘパリン、合成ヘパリン塩、および、トロンビンの他の阻害剤などの抗凝固薬；組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレルなどの線維素溶解剤；抗遊走剤；抗分泌剤（ブレフェルジン）；免疫抑制剤タクロリムス、シロリムス、アザチオプリン、ミコフェノール酸；化合物（ＴＮＰ−４７０、ゲニステイン）および増殖因子阻害剤（血管内皮増殖因子阻害剤および線維芽細胞増殖因子阻害剤）；アンギオテンシン受容体ブロッカー、一酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；トラスツズマブおよびリツキシマブなどの抗体；トレチノインなどの細胞周期阻害剤および分化誘導因子；阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン、ミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；機能障害誘導因子；コレラ毒素、リシン、シュードモナス外毒素、ボルデテラ・ペルツシスのアデニル酸シクラーゼ毒素、ジフテリア毒素、カスパーゼ活性化因子；クロマチンの群に分類され得る。

［組成物］
また、本開示は医薬組成物を提供する。そのような組成物は、有効量の抗体、および、許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態において、組成物は更に、第２治療薬を含む。

特定の実施形態において、「薬学的に許容可能な」という語句は、動物、より具体的には、ヒトへの使用について、連邦政府または州政府の規制機関によって承認されている、または、米国薬局方協会もしくは他の一般的に認識されている薬局方に記載されていることを意味する。更に、「薬学的に許容可能な担体」とは、一般的に、非毒性の固体、半固体、または、液体の増量剤、希釈剤、封入材、または、任意の種類の製剤補助物である。

「担体」という語句は、治療薬の投与に用いる、希釈剤、補助剤、賦形剤、または、媒体を指す。当該医薬担体は、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ごま油、および、同様のものなど、石油、動物、植物、または、合成に由来するものを含む、水および油などの無菌液体であってよい。医薬組成物が静脈内投与されるとき、水は好ましい担体である。また、生理食塩水、ならびに、デキストロースおよびグリセロールの水溶液を、液体担体として、特に注射液に利用できる。適切な医薬品の賦形剤には、澱粉、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。また、組成物は、所望される場合、わずかな量の湿潤剤もしくは乳化剤、または、酢酸塩などのｐＨ緩衝剤、クエン酸、または、リン酸塩を含み得る。ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化物質、エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、および、塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調整剤も想定される。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、タブレット、錠剤、カプセル、粉末、徐放性製剤などの形態を取り得る。組成物は、トリグリセライドなど、従来の結合剤および担体と共に、座薬として製剤化され得る。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、澱粉、マグネシウム、ステアリン酸塩、サッカリンナトリウム、セルロース、マグネシウム炭酸塩などの標準的な担体を含み得る。適切な医薬品担体の例は、参照によって本明細書に組み込まれる、Ｅ． Ｗ． ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。そのような組成物には、患者に対する適切な投与のための形態を提供するように、好適な量の担体と組み合わされた、好ましくは精製された形態の、治療有効量の抗原結合ポリペプチドが含まれるであろう。製剤は、投与の方式に好適なものであるべきである。非経口製剤は、ガラスまたはプラスチックからできている、アンプル、使い捨てシリンジ、または、多回投与バイアルの中に封入され得る。

一実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合された医薬組成物として、定型的な手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、無菌水性等張緩衝液の溶液である。必要である場合、組成物はまた、可溶化剤と、注射の部位における疼痛を緩和するためのリグノカインなどの局所麻酔剤とを含み得る。一般的に、成分は、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたは小袋などの密封容器における、凍結乾燥粉末または無水濃縮物などの単位投与量形態で、別個に供給されるか、または、共に混合されるかのいずれかである。組成物が注入によって投与される場合、組成物は、医薬品グレードの無菌水または生理食塩水を含む注入ボトルを用いて分注できる。組成物が注射によって投与される場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用の無菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。

本開示の化合物は、中性または塩の形態として製剤化できる。薬学的に許容可能な塩には、塩酸塩、リン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩などに由来するものなどの陰イオンと共に形成されるものと、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２‐エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなど、陽イオンと共に形成されるものとが含まれる。

［例］
［例１ マウス抗体の生成］
この例は、ハイブリドーマ技術を使用して、抗ヒトＧＭ−ＣＳＦマウスモノクローナル抗体を調製するプロセスを説明する。組換えヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質を抗原として使用した。ヒトＧＭ−ＣＳＦに対するマウスモノクローナル抗体を生成するべく、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７／ＢＬ６またはＳＪＬマウスを含む６〜８週齢のマウスの異なる系統を最初に２０μｇの組換えヒトＧＭ−ＣＳＦで免疫化した。最初の免疫化後の１４日目、２８日目および４２日目に、免疫化マウスを５μｇの組換えタンパク質で再免疫化した。ＧＭ−ＣＳＦタンパク質に結合する抗体を生成するマウスを選択するべく、免疫化マウスの血清をＥＬＩＳＡによって試験した。簡潔に説明すると、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳにおける１μｇ／ｍｌのヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質でコーティングし（１００μｌ／ウェル、室温（ＲＴ）で一晩）、次に、１００μｌ／ウェルの５％ＢＳＡでブロッキングした。免疫化マウスの血漿の希釈物を各ウェルに添加し、室温で１〜２時間インキュベートし、プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次に、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）が結合した抗マウスＩｇＧ抗体と共に室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ＡＢＴＳ基質を用いてプレートを現像し、分光光度計によってＯＤ ４０５ｎｍで解析した。免疫化後の６０日目に、抗ＧＭ−ＣＳＦ ＩｇＧの十分な力価を有するマウスを２５μｇの組換えヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質でブーストした。その結果得られたマウスをハイブリドーマに使用した。

ＥＬＩＳＡスクリーニングによって、ハイブリドーマ上清を抗ＧＭ−ＣＳＦ ＩｇＧについて試験した。限界希釈法を使用して、一次ＥＬＩＳＡ陽性ハイブリドーマクローンをサブクローニングのために選択し、更に、ＥＬＩＳＡ結合確認アッセイ（図１）およびＴＦ−１増殖アッセイ（図２）によって試験した。ＧＭ−ＣＳＦ刺激の前に、ＴＦ−１細胞をＲＰＭＩ１６４０基本培地で洗浄し、一晩飢餓状態にした。２日目に、これらの飢餓細胞を収集し、平底９６ウェル細胞培養プレートのウェルあたり５０μｌずつ、３×１０^５細胞／ｍｌの濃度で播種した。

０．２ｎｇ／ｍｌ（４倍）の濃度のヒト組み換えＧＭ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を２０％ハイブリドーマ培養上清（４倍）と１：１で混合し、５０μｌの混合物をＴＦ−１細胞に添加し、ＧＭ−ＣＳＦの最終濃度を０．０５ｎｇ／ｍｌ、ハイブリドーマ上清の最終濃度を５％にした。ハイブリドーマ上清を添加することなく、最終濃度０．０５ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦでＴＦ−１細胞をインキュベートして、最大細胞増殖（０％阻害）を測定した。アッセイからＧＭ−ＣＳＦを省略し、細胞をＲＰＭＩ１６４０完全培地のみに保持することにより、ＴＦ−１増殖の１００％阻害を測定した。次に、ＴＦ−１細胞を３７℃で７２時間インキュベートした。製造元のプロトコルに従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙによって細胞生存率を測定した。

ＴＦ−１増殖の著しい阻害を示したハイブリドーマモノクローンは全部で３つ（２３Ｆ４、３２Ｃ４および５０Ｃ５）あったが、更なる特性評価のために２３Ｆ４および５０Ｃ５を選択した。

［例２ヒトまたはアカゲザルＧＭ−ＣＳＦに対するマウス抗体の結合］
この例では、組換えヒトまたはアカゲザルＧＭ−ＣＳＦタンパク質に対するマウス抗ＧＭ−ＣＳＦ ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ、１００μｌ）のＥＬＩＳＡ結合の用量反応を試験する。

組換えヒトまたはアカゲザルＧＭ−ＣＳＦタンパク質（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を、マイクロタイタープレートを用いて、ＰＢＳにおいて１μｇ／ｍｌの濃度で、室温（室温）で２時間コーティングした。抗原のコーティング後、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）を用いて、ウェルを室温で１時間ブロッキングした。ＰＢＳＴでウェルを洗浄した後に、異なる濃度の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。結合抗体の検出のために、マウスＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に対するＨＲＰ結合型二次的抗体を添加し、次に、蛍光原基質（ロシュ）を添加した。すべてのインキュベート段階の間に、プレートのウェルをＰＢＳＴで３回洗浄した。蛍光はＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダーで測定した。

図３Ａおよび図３Ｂに示されるように、２３Ｆ４および５０Ｃ５抗体は両方とも用量依存的結合を示し、ヒトＧＭ−ＣＳＦに対しては、ＥＣ５０はそれぞれ１１．８ｎｇ／ｍｌおよび１４．６ｎｇ／ｍｌであり、アカゲザルＧＭ−ＣＳＦに対しては、ＥＣ５０はそれぞれ、１０．２ｎｇ／ｍｌおよび２１．７ｎｇ／ｍｌであった。

［例３ ヒトＧＭ−ＣＳＦに対するマウス抗体の結合速度］
図４は、組換えヒトＧＭ−ＣＳＦに対して、２３Ｆ４および５０Ｃ５の結合速度をプロットしたものである。連続的濃度（１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１２５ｎＭ）を有する分析物として、組換えヒトＧＭ−ＣＳＦを設定した。抗原に対する抗体の結合速度アッセイは、マウス抗体捕捉手法を通して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００システムを使用した実行した。抗マウスＦｃ ＩｇＧを製造元の指示に従って、ＣＭ５センサーチップ上で固定化した。試験抗体を注入し、固定化した抗マウスＦｃ ＩｇＧによって捕捉した。次に、連続的濃度の抗原を個別に注入し、抗原分析物の各濃度について、結合プロファイルをそれぞれ記録した。１０ｍＭグリシン−ＨＣＬ ｐＨ１．５を３０秒間にわたって注入することにより、アッセイシステムを再生した。泳動バッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭ ＨＥＰＥ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ Ｐ２０）であった。アッセイ温度は２５℃であり、結合時間および解離時間はそれぞれ、１８０秒および６００秒であった。

Ｂｉａｃｏｒｅデータは、１：１結合モデルに従ってＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア１．０を使用して結合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数ならびに平衡定数（ＫＤ）を算出してフィッティングされた。図４に加えて、以下の表において、いくつかの概要データが示される。

［例４ ＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファに対するＧＭ−ＣＳＦ結合のマウス抗体によるブロッキング］
ＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファ鎖に対するＧＭ−ＣＳＦ結合のブロッキングにおける抗体の能力を試験するべく、組換えヒトＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファタンパク質（ＣＤ１１６）を２μｇ／ｍｌのＰＢＳにおいて、マイクロタイタープレートで、４℃で一晩コーティングした。抗原のコーティング後、１％ ＢＳＡを有するＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）でウェルを室温で１時間ブロッキングした。ウェルをＰＢＳＴで洗浄した後に、ビオチン化ヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質（０．０５ｇ／ｍｌ）の存在下で、異なる濃度の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。

コーティングされた受容体に対するビオチン化ＧＭ−ＣＳＦの結合の検出のために、ＨＲＰ結合型ストレプトアビジンを添加し、次に蛍光原基質（ロシュ）を添加した。すべてのインキュベート段階の間に、プレートのウェルをＰＢＳＴで３回洗浄した。蛍光はＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダーで測定した。図５に示すように、両方の抗体は、ＧＭ−ＣＳＦ受容体アルファに対するＧＭ−ＣＳＦ結合の用量依存的阻害を示した。

［例５ マウス抗体誘導ｐＳＴＡＴ５シグナリングによるＧＭ−ＣＳＦのブロッキング］
ＣＤ１４陽性マイクロビード（ミルテニーバイオテク（登録商標））を使用することによって、ヒト末梢血からＣＤ１４＋単球を精製した。精製された単球を、ヒトＧＭ−ＣＳＦ（０．２ｎｇ／ｍｌ）を用いて、異なる濃度の２３Ｆ４抗体の存在下で、３７℃で３０分間刺激した。インキュベート後、細胞を収集し、ＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、２％ＰＦＡで透過処理を行い、次に、低温のメタノールを使用して細胞を固定した。次に、ＰＥ結合抗ｐＳＴＡＴ５抗体を細胞に添加して、更に４℃で３０分間インキュベートして、フローサイトメトリーで解析した。阻害率は、［１−（ＭＦＩ試験試料／ＭＦＩ対照）］×１００％によって算出した。抗体の添加により、０．１または１μｇ／ｍｌの用量で、ＧＭ−ＣＳＦによって誘導されるｐＳＴＡＴ５活性化のレベルを著しく減少させることができた（図６）。

［例６ マウス抗体によるＧＭ−ＣＳＦ依存的ＴＦ−１増殖の阻害］
ＧＭ−ＣＳＦ刺激の前に、ＲＰＭＩ１６４０基本培地でＴＦ−１細胞を洗浄し、一晩飢餓状態にした。２日目に、これらの飢餓細胞を収集し、次に、３×１０^５細胞／ｍｌの濃度で、平底９６ウェル細胞培養プレートのウェルあたり５０μｌずつ播種した。０．２ｎｇ／ｍｌの濃度（４倍）のヒト組み換えＧＭ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）をマウス抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体（０．０１ｎｇ／ｍｌ~１０００ｎｇ／ｍｌで完全培地に希釈）と１：１で混合し、５０μｌの混合物をＴＦ−１細胞に添加した。抗体を添加することなく、最終濃度０．０５ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦでＴＦ−１細胞をインキュベートして、最大細胞増殖（０％阻害）を測定した。アッセイからＧＭ−ＣＳＦを省略し、細胞をＲＰＭＩ１６４０完全培地のみに保持することにより、ＴＦ−１増殖の１００％阻害を測定した。次に、ＴＦ−１細胞を３７℃で７２時間インキュベートした。製造元のプロトコルに従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙによって細胞生存率を測定した。ＴＦ−１増殖の阻害における２３Ｆ４および５０Ｃ５のＩＣ５０値は両方とも約１０．９ｎｇ／ｍｌ（図７）であった。

［例７ マウス抗体のヒト化］
マウス抗体の可変領域遺伝子を利用してヒト化ｍＡｂを作成した。このプロセスの第１段階において、抗体のＶＨおよびＶＫのアミノ酸配列をヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体の一致率が最高のヒト生殖細胞系Ｉｇ遺伝子配列を発見した。

次に、ヒト化可変ドメイン配列を設計し、ここで、抗体重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３をヒトＩｇ遺伝子のフレームワーク配列に移植した。次に、マウスのアミノ酸をヒトのアミノ酸に置き換えること（復帰突然変異）によって結合および／またはＣＤＲの形態に影響を生じさせ得る何らかのフレームワーク位置があるかどうかを決定するために、３次元モデルを生成した。関連する配列および復帰突然変異を以下の表に示す。
２３Ｆ４ ＶＨのＣＤＲ配列
２３Ｆ４ＶＬのＣＤＲ配列
２３Ｆ４のヒト化設計

ヒト化抗体２３Ｆ４のいくつかのアミノ酸およびヌクレオチド配列を以下の表に列挙する。
ヒト化抗体の配列（ＣＤＲ残基は下線で、復帰突然変異は四角で示す）
ヒト化抗体２３Ｆ４のＶＨ／ＶＫの組み合わせ
５０Ｃ５ ＶＨのＣＤＲ配列
５０Ｃ５ＶＬのＣＤＲ配列
５０Ｃ５のヒト化設計
ヒト化抗体配列（ＣＤＲ残基は下線で、復帰突然変異は四角で示す）
ヒト化抗体５０Ｃ５のＶＨ／ＶＫの組み合わせ

［例８ ヒトＧＭ−ＣＳＦに対するヒト化抗体の結合］
上記のように、組換えヒトＧＭ−ＣＳＦに対する結合について、ヒト化バリアントを試験した。組換えヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を、マイクロタイタープレートを用いて、ＰＢＳにおいて１μｇ／ｍｌの濃度で、室温（室温）で２時間コーティングした。抗原のコーティング後、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）を用いて、ウェルを室温で１時間ブロッキングした。ＰＢＳＴでウェルを洗浄した後に、異なる濃度の抗ＧＭ−ＣＳＦヒト化抗体をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。

結合抗体の検出のために、マウスＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に対するＨＲＰ結合型二次的抗体を添加し、次に、蛍光原基質（ロシュ）を添加した。すべてのインキュベート段階の間に、プレートのウェルをＰＢＳＴで３回洗浄した。蛍光はＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダーで測定した。図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃおよび図８Ｄに示されるように、すべてのヒト化バリアントは、キメラ抗体と比較して、ヒトＧＭ−ＣＳＦに対する同様の結合能を示した。

［例９ ヒト化抗体の結合速度］
ヒト化抗体の結合速度を上記のようにＢｉａｃｏｒｅで測定した。連続的濃度（１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１２５ｎＭ）を有する分析物として、組換えヒトＧＭ−ＣＳＦを設定した。抗原に対する抗体の結合速度アッセイは、ヒト抗体捕捉手法を通して、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００システムを使用した実行した。抗ヒトＦｃ ＩｇＧを製造元の指示に従って、ＣＭ５センサーチップ上で固定化した。試験抗体を注入し、固定化した抗ヒトＦｃ ＩｇＧによって捕捉した。次に、連続的濃度の抗原を個別に注入し、抗原分析物の各濃度について、結合プロファイルをそれぞれ記録した。

１０ｍＭグリシン−ＨＣＬ ｐＨ１．５を３０秒間にわたって注入することにより、アッセイシステムを再生した。泳動バッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭ ＨＥＰＥ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ Ｐ２０）であった。アッセイ温度は２５℃であり、結合時間および解離時間はそれぞれ、１８０秒および６００秒であった。Ｂｉａｃｏｒｅデータは、１：１結合モデルに従ってＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア１．０を使用して結合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数ならびに平衡定数（ＫＤ）を算出してフィッティングされた。以下の表に示されるように、２３Ｆ４から、Ｈｕ２３Ｆ４−１３、Ｈｕ２３Ｆ４−２７およびＨｕ２３Ｆ４−３６は、キメラ抗体と比較して、もっとも強い結合親和性を示し、５０Ｃ５から、Ｈｕ５０Ｃ５−８、Ｈｕ５０Ｃ５−１７、Ｈｕ５０Ｃ５−１８、Ｈｕ５０Ｃ５−１９、Ｈｕ５０Ｃ５−２１およびＨｕ５０Ｃ５−２３は、キメラ抗体と比較して、もっとも強い結合親和性を示した。

［例１０ ヒト化抗体によるＴＦ−１増殖の阻害］
ＧＭ−ＣＳＦ刺激の前に、ＲＰＭＩ１６４０基本培地でＴＦ−１細胞を洗浄し、一晩飢餓状態にした。２日目に、これらの飢餓細胞を収集し、次に、３×１０^５細胞／ｍｌの濃度で、平底９６ウェル細胞培養プレートのウェルあたり５０μｌずつ播種した。０．２ｎｇ／ｍｌの濃度（４倍）のヒト組み換えＧＭ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）をヒト化抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体（０．０１ｎｇ／ｍｌ~１０００ｎｇ／ｍｌで完全培地に希釈）と１：１で混合し、５０μｌの混合物をＴＦ−１細胞に添加した。抗体を添加することなく、最終濃度０．０５ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦでＴＦ−１細胞をインキュベートして、最大細胞増殖（０％阻害）を測定した。アッセイからＧＭ−ＣＳＦを省略し、細胞をＲＰＭＩ１６４０完全培地のみに保持することにより、ＴＦ−１増殖の１００％阻害を測定した。次に、ＴＦ−１細胞を３７℃で７２時間インキュベートした。製造元のプロトコルに従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙによって細胞生存率を測定した。試験された２３Ｆ４からのヒト化抗体のうち、Ｈｕ２３Ｆ４−１３、Ｈｕ２３Ｆ４−２７、および、Ｈｕ２３Ｆ４−３６はもっとも強い阻害を示し、ＩＣ５０はそれぞれ、４．９５ｎｇ／ｍｌ、３．９５ｎｇ／ｍｌおよび３．３０ｎｇ／ｍｌであった（図９）。試験された５０Ｃ５からのヒト化抗体のうち、Ｈｕ５０Ｃ５−２３はもっとも強い阻害を示し、ＩＣ５０は１４．３１ｎｇ／ｍｌ（図９）であった。

［例１１ ヒト化抗体によるｐＳＴＡＴ５シグナリングのブロッキング］
ＣＤ１４陽性マイクロビード（ミルテニーバイオテク（登録商標））を使用することによって、ヒト末梢血からＣＤ１４＋単球を精製した。精製された単球を、ヒトＧＭ−ＣＳＦ（０．２ｎｇ／ｍｌ）を用いて、異なる濃度のヒト化抗体の存在下で、３７℃で３０分間刺激した。インキュベート後、細胞を収集し、ＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、２％ＰＦＡで透過処理を行い、次に、低温のメタノールを使用して細胞を固定した。次に、ＰＥ結合抗ｐＳＴＡＴ５抗体を細胞に添加して、更に４℃で３０分間インキュベートして、フローサイトメトリーで解析した。阻害率は、［１−（ＭＦＩ試験試料／ＭＦＩ対照）］×１００％によって算出した。Ｈｕ２３Ｆ４−１３、Ｈｕ２３Ｆ４−２７、Ｈｕ２３Ｆ４−３６、Ｈｕ５０Ｃ５−１７およびＨｕ５０Ｃ５−２３の追加により、０．１または１μｇ／ｍｌの用量で、ＧＭ−ＣＳＦによって誘導されるｐＳＴＡＴ５活性化のレベルを著しく減少させることができた（図１０）。

［例１２ アカゲザルＧＭ−ＣＳＦに対するヒト化抗体の結合］
組換えアカゲザルＧＭ−ＣＳＦタンパク質（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を、マイクロタイタープレートを用いて、ＰＢＳにおいて１μｇ／ｍｌの濃度で、室温（室温）で２時間コーティングした。抗原のコーティング後、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）を用いて、ウェルを室温で１時間ブロッキングした。ＰＢＳＴでウェルを洗浄した後に、異なる濃度のヒト化抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。結合抗体の検出のために、マウスＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に対するＨＲＰ結合型二次的抗体を添加し、次に、蛍光原基質（ロシュ）を添加した。すべてのインキュベート段階の間に、プレートのウェルをＰＢＳＴで３回洗浄した。蛍光はＴＥＣＡＮ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダーで測定した。図１１に示されるように、Ｈｕ２３Ｆ４−１３、Ｈｕ２３Ｆ４−２７およびＨｕ２３Ｆ４−３６は、アカゲザルＧＭ−ＣＳＦに対する用量依存的結合を示し、ＥＣ５０はそれぞれ、７．４４ｎｇ／ｍｌ、６．２５ｎｇ／ｍｌおよび７．７５ｎｇ／ｍｌであった。Ｈｕ５０Ｃ５−１７およびＨｕ５０Ｃ５−２３はアカゲザルＧＭ−ＣＳＦに対する用量依存的結合を示し、ＥＣ５０はそれぞれ、１８．８６ｎｇ／ｍｌおよび２１．６３ ｎｇ／ｍｌであった。

［例１３ カニクイザルにおけるＨｕ２３Ｆ４−２７の薬物動態］
ｉｎ ｖｉｔｒｏ生理活性アッセイの過去の結果から、ナイーブのカニクイザルにおける薬物動態特性を決定するためにＨｕ２３Ｆ４−２７を選択した。静脈内ボーラス注射によって、それぞれ、０．４ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇの異なる用量で、Ｈｕ２３Ｆ４−２７抗体をナイーブのカニクイザルに投与した。投与後、２８日目までの選択された時点において、血漿試料を収集し、それぞれのタンパク質の濃度をＥＬＩＳＡによって決定した。次に、図１２に示されるように、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（Ｃｅｒｔａｒａ、ＣＡ）を使用して、非コンパートメントのアプローチで、薬物動態パラメータを算出した。

本開示は、開示の個々の態様の１つの例示であることが意図される、記載された特定の実施形態によって範囲が限定されることを意図するものではなく、機能的に同等の任意の組成物または方法は、本開示の範囲内にある。本開示の思想または範囲から逸脱することなく、様々な改変および変形を開示の方法および組成物に成すことができることは、当業者にとって明らかであろう。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲およびその同等物の範囲に該当する限り、本開示の改変および変形を包含することを意図している。

本明細書において言及されるすべての公報および特許出願は、個々の公報または特許出願が各々、参照によって、具体的かつ別個に組み込まれることが示される場合と同一の程度で、参照によって本明細書に組み込まれる。

（項目１）
単離された抗体または抗体断片であって、ヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質に対する特異性を有し、配列識別番号１のＶＨ ＣＤＲ１、配列識別番号２のＶＨ ＣＤＲ２、配列識別番号３のＶＨ ＣＤＲ３、配列識別番号４のＶＬ ＣＤＲ１、配列識別番号５のＶＬ ＣＤＲ２、および、配列識別番号６のＶＬ ＣＤＲ３を備える、抗体または抗体断片。
（項目２）
重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、または、それらの組み合わせを更に備える、項目１に記載の抗体または抗体断片。
（項目３）
軽鎖定常領域はカッパまたはラムダ鎖定常領域である、項目２に記載の抗体または抗体断片。
（項目４）
抗体または抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤのアイソタイプである、項目１に記載の抗体または抗体断片。
（項目５）
アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である、項目４に記載の抗体または抗体断片。
（項目６）
抗体または抗体断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、完全ヒト抗体である、項目１から５のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
（項目７）
抗体または抗体断片はヒト化抗体である、項目６に記載の抗体または抗体断片。
（項目８）
Ｋａｂａｔナンバリングに従って、
（ａ）位置１のＧｌｕ、
（ｂ）位置９８のＡｒｇ、
（ｃ）位置７２のＳｅｒ、
（ｄ）位置６８のＡｌａ、
（ｅ）位置７０のＬｅｕ、
（ｆ）位置４８のＩｌｅ、
（ｇ）位置２６のＡｓｐ、
（ｈ）位置２９のＬｅｕ
から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基およびそれらの組み合わせを含む重鎖可変領域を備える項目７に記載の抗体または抗体断片。
（項目９）
重鎖可変領域は、少なくとも（ａ）位置１のＧｌｕを含む、項目８に記載の抗体または抗体断片。
（項目１０）
重鎖可変領域は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、位置２６から開始する、ＤＹＴＬＴ（配列識別番号４２）またはＧＹＴＦＴ（配列識別番号４３）の断片を含む、項目８に記載の抗体または抗体断片。
（項目１１）
Ｋａｂａｔナンバリングに従って、
（ａ）位置４６のＡｌａ、
（ｂ）位置６０のＡｓｐ、
（ｃ）位置７０のＡｓｐ、
（ｄ）位置４３のＳｅｒ、
（ｆ）位置８７のＰｈｅ
から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基およびそれらの組み合わせを含む軽鎖可変領域を備える、項目７に記載の抗体または抗体断片。
（項目１２）
配列識別番号８−１７から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号８−１７から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を備える、項目１から１１のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
（項目１３）
重鎖可変領域は、配列識別番号１１、１４または１７のアミノ酸配列を含む、項目８に記載の抗体または抗体断片。
（項目１４）
配列識別番号１９−２２から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号１９−２２から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を備える、項目１から１３のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
（項目１５）
軽鎖可変領域は、配列識別番号１９または２２のアミノ酸配列を含む、項目１１に記載の抗体または抗体断片。
（項目１６）
重鎖可変領域は配列識別番号１４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列識別番号２２のアミノ酸配列を含む、項目１に記載の抗体または抗体断片。
（項目１７）
抗体または抗体断片は二重特異性抗体または一本鎖可変断片である、項目１に記載の抗体または抗体断片。
（項目１８）
項目１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
（項目１９）
項目１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片をコードする１または複数のポリヌクレオチドを含む単離細胞。
（項目２０）
治療を必要とする患者における炎症性または自己免疫性の疾患または症状を治療するための方法であって、項目１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を患者に投与する段階を備える方法。
（項目２１）
炎症性の疾患または症状は、アルツハイマー病、アジソン病、アテローム性動脈硬化、強直性脊椎炎、関節炎、変形性関節炎（ＯＡ）、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬性関節炎（ＰＡ）、強直性脊椎炎、喘息、アテローム性動脈硬化、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、クローン病、大腸炎、皮膚炎、憩室炎、線維筋痛、肝臓炎、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腎炎、パーキンソン病（ＰＤ）、血管炎、潰瘍性大腸炎から成る群から選択される、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
自己免疫性の疾患または病状は、円形脱毛症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、皮膚筋炎、糖尿病（１型）、セリアック病、自己免疫性若年性特発性関節炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、自己免疫性心筋炎、多発性硬化症、天疱瘡／類天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発筋炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、関節リウマチ、強皮症／全身性強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎、自己免疫性ブドウ膜炎、白斑、および、多発血管炎性肉芽腫症（Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症）から成る群から選択される、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
治療を必要とする患者における癌を治療する方法であって、項目１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を患者に投与する段階を備える方法。
（項目２４）
癌は、膀胱癌、乳癌、大腸癌、子宮体癌、食道癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、悪性黒色腫、膵癌、前立腺癌および甲状腺癌から成る群から選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
治療を必要とする患者の痛みを低減または緩和する方法であって、項目１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を患者に投与する段階を備える方法。
（項目２６）
試料におけるＧＭ−ＣＳＦの発現を検出する方法であって、
項目１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片がＧＭ−ＣＳＦに結合する条件下で、抗体または抗体断片に試料を接触させる段階と、
試料におけるＧＭ−ＣＳＦの発現を示す結合を検出する段階と
を備える方法。

Claims (26)

1. 単離された抗体または抗体断片であって、ヒトＧＭ−ＣＳＦタンパク質に対する特異性を有し、配列識別番号１のＶＨ ＣＤＲ１、配列識別番号２のＶＨ ＣＤＲ２、配列識別番号３のＶＨ ＣＤＲ３、配列識別番号４のＶＬ ＣＤＲ１、配列識別番号５のＶＬ ＣＤＲ２、および、配列識別番号６のＶＬ ＣＤＲ３を備える、抗体または抗体断片。
2. 重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、または、それらの組み合わせを更に備える、請求項１に記載の抗体または抗体断片。
3. 前記軽鎖定常領域はカッパまたはラムダ鎖定常領域である、請求項２に記載の抗体または抗体断片。
4. 前記抗体または抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤのアイソタイプである、請求項１に記載の抗体または抗体断片。
5. 前記アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である、請求項４に記載の抗体または抗体断片。
6. 前記抗体または抗体断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、完全ヒト抗体である、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
7. 前記抗体または抗体断片はヒト化抗体である、請求項６に記載の抗体または抗体断片。
8. Ｋａｂａｔナンバリングに従って、
   （ａ）位置１のＧｌｕ、
   （ｂ）位置９８のＡｒｇ、
   （ｃ）位置７２のＳｅｒ、
   （ｄ）位置６８のＡｌａ、
   （ｅ）位置７０のＬｅｕ、
   （ｆ）位置４８のＩｌｅ、
   （ｇ）位置２６のＡｓｐ、
   （ｈ）位置２９のＬｅｕ
   から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基およびそれらの組み合わせを含む重鎖可変領域を備える請求項７に記載の抗体または抗体断片。
9. 前記重鎖可変領域は、少なくとも（ａ）位置１のＧｌｕを含む、請求項８に記載の抗体または抗体断片。
10. 前記重鎖可変領域は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、位置２６から開始する、ＤＹＴＬＴ（配列識別番号４２）またはＧＹＴＦＴ（配列識別番号４３）の断片を含む、請求項８に記載の抗体または抗体断片。
11. Ｋａｂａｔナンバリングに従って、
    （ａ）位置４６のＡｌａ、
    （ｂ）位置６０のＡｓｐ、
    （ｃ）位置７０のＡｓｐ、
    （ｄ）位置４３のＳｅｒ、
    （ｆ）位置８７のＰｈｅ
    から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基およびそれらの組み合わせを含む軽鎖可変領域を備える、請求項７に記載の抗体または抗体断片。
12. 配列識別番号８−１７から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号８−１７から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を備える、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
13. 前記重鎖可変領域は、配列識別番号１１、１４または１７のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の抗体または抗体断片。
14. 配列識別番号１９−２２から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号１９−２２から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を備える、請求項１から１３のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
15. 前記軽鎖可変領域は、配列識別番号１９または２２のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の抗体または抗体断片。
16. 重鎖可変領域は配列識別番号１４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列識別番号２２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体または抗体断片。
17. 前記抗体または抗体断片は二重特異性抗体または一本鎖可変断片である、請求項１に記載の抗体または抗体断片。
18. 請求項１から１７のいずれか一項に記載の前記抗体または抗体断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
19. 請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片をコードする１または複数のポリヌクレオチドを含む単離細胞。
20. 治療を必要とする患者における炎症性または自己免疫性の疾患または症状を治療するための方法であって、請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を前記患者に投与する段階を備える方法。
21. 前記炎症性の疾患または症状は、アルツハイマー病、アジソン病、アテローム性動脈硬化、強直性脊椎炎、関節炎、変形性関節炎（ＯＡ）、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬性関節炎（ＰＡ）、強直性脊椎炎、喘息、アテローム性動脈硬化、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、クローン病、大腸炎、皮膚炎、憩室炎、線維筋痛、肝臓炎、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腎炎、パーキンソン病（ＰＤ）、血管炎、潰瘍性大腸炎から成る群から選択される、請求項２０に記載の方法。
22. 前記自己免疫性の疾患または病状は、円形脱毛症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、皮膚筋炎、糖尿病（１型）、セリアック病、自己免疫性若年性特発性関節炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、自己免疫性心筋炎、多発性硬化症、天疱瘡／類天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発筋炎、原発性胆汁性肝硬変症、乾癬、関節リウマチ、強皮症／全身性強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎、自己免疫性ブドウ膜炎、白斑、および、多発血管炎性肉芽腫症（Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症）から成る群から選択される、請求項２０に記載の方法。
23. 治療を必要とする患者における癌を治療する方法であって、請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を前記患者に投与する段階を備える方法。
24. 前記癌は、膀胱癌、乳癌、大腸癌、子宮体癌、食道癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、悪性黒色腫、膵癌、前立腺癌および甲状腺癌から成る群から選択される、請求項２３に記載の方法。
25. 治療を必要とする患者の痛みを低減または緩和する方法であって、請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を前記患者に投与する段階を備える方法。
26. 試料におけるＧＭ−ＣＳＦの発現を検出する方法であって、
    請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片が前記ＧＭ−ＣＳＦに結合する条件下で、前記抗体または抗体断片に前記試料を接触させる段階と、
    前記試料におけるＧＭ−ＣＳＦの発現を示す前記結合を検出する段階と
    を備える方法。