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JP2018528161A - Ｋｓｐ阻害剤との部位特異的均一複合体 - Google Patents

Ｋｓｐ阻害剤との部位特異的均一複合体 Download PDF

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JP2018528161A JP2017566401A JP2017566401A JP2018528161A JP 2018528161 A JP2018528161 A JP 2018528161A JP 2017566401 A JP2017566401 A JP 2017566401A JP 2017566401 A JP2017566401 A JP 2017566401A JP 2018528161 A JP2018528161 A JP 2018528161A
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キャンチョ・グランデ，ヨランダ
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ゾマー，アネット
マーラート，クリストフ
レブストック，アンヌ−ソフィ
グレーフェン，シモーヌ
グリーベノー，ニルス
テッベ，ヤン
ケンシュ，オリバー
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バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト
バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト
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Abstract

本発明は、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤の部位特異的均一バインダー薬物複合体；これら複合体の活性代謝物；これら複合体の製造方法；疾患の治療および／または予防のためのこれら複合体の使用；ならびに疾患、特には過剰増殖性障害および／または血管新生障害、例えば癌疾患の治療および／または予防のための医薬製造のためのこれら複合体の使用に関するものである。そのような治療は、単独療法として、または他の医薬もしくは別の治療手段と組み合わせて行うことができる。【選択図】なし

Description

緒言および最新技術
本発明は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤の部位特異的均一結合体薬剤複合体、これら複合体の活性代謝物、これら複合体の製造方法、疾患の治療および／または予防のためのこれら複合体の使用、および疾患、特に過剰増殖性および／または血管新生障害、例えば癌疾患の治療および／または予防のための医薬を製造するためのこれら複合体の使用に関する。そのような治療は、単独療法として、または他の医薬もしくはさらなる治療手段と組み合わせて行うことができる。
癌疾患は、最も多様な組織の制御されない細胞増殖の結果である。多くの場合、新たな細胞が既存の組織に侵入し（浸潤性増殖）、またはそれらは離れた臓器に転移する。癌疾患は、最も多様な臓器で生じ、多くの場合、疾患の組織特異的経過を辿る。従って、一般名称として「癌」という用語は、各種臓器、組織および細胞型の所定の疾患の大きい群を説明するものである。
早期の腫瘍は、外科手段および放射線療法手段によって摘出することができる可能性がある。転移腫瘍は基本的に、化学療法によって対症的に治療可能なだけである。この場合の目的は、生活の質の向上および寿命延長の至適な組み合わせを達成することにある。
結合体タンパク質の１以上の活性化合物分子との複合体は、特に腫瘍関連抗原に向かうインターナライジング抗体がリンカーを介して細胞毒性薬に共有結合的に結合している抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の形態で知られている。腫瘍細胞へのＡＤＣの導入と次に複合体の解離に続いて、細胞毒性薬自体またはそれから形成される細胞毒性代謝物が腫瘍細胞内で放出され、直接および選択的にそれの作用を発揮することができる。このようにして、従来の化学療法と対照的に、正常組織への損傷は、かなり狭い範囲に抑えられる［例えば、Ｊ． Ｍ． Ｌａｍｂｅｒｔ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５， ５４３−５４９ （２００５）； Ａ． Ｍ． Ｗｕ ａｎｄ Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２３， １１３７−１１４６ （２００５）； Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． １３， ２３５−２４４ （２００９）； Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２１， ５−１３ （２０１０）参照］。従って、ＷＯ２０１２／１７１０２０には、複数の担毒体分子が高分子リンカーを介して抗体に結合しているＡＤＣが記載されている。可能な担毒体として、ＷＯ２０１２／１７１０２０には、特に、物質ＳＢ７４３９２１、ＳＢ７１５９９２（イスピネシブ）、ＭＫ−０３７１、ＡＺＤ８４７７、ＡＺ３１４６およびＡＲＲＹ−５２０が挙げられている。
ＷＯ２０１２／１７１０２０
Ｊ． Ｍ． Ｌａｍｂｅｒｔ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５， ５４３−５４９ （２００５） Ａ． Ｍ． Ｗｕ ａｎｄ Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２３， １１３７−１１４６ （２００５） Ｐ． Ｄ． Ｓｅｎｔｅｒ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． １３， ２３５−２４４ （２００９） Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２１， ５−１３ （２０１０）
最後に挙げた物質は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤である。キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ、Ｅｇ５、ＨｓＥｇ５、ＫＮＳＬ１またはＫＩＦ１１とも称される）は、双極性有糸分裂紡錘体が機能するのに必須のキネシン様モータータンパク質である。ＫＳＰの阻害によって有糸分裂停止となり、比較的長期間かけてアポトーシスに至る（Ｔａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２００５ Ｊｕｌ ８（１）， ３９−５９）。最初の細胞透過性ＫＳＰ阻害剤であるモナストロール発見後、ＫＳＰ阻害剤は新たな化学療法剤の種類として確立され（Ｍａｙｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：９７１−９７４， １９９９）、多くの特許出願のテーマとなっている（例えばＷＯ２００６／０４４８２５；ＷＯ２００６／００２２３６；ＷＯ２００５／０５１９２２；ＷＯ２００６／０６０７３７；ＷＯ０３／０６００６４；ＷＯ０３／０４０９７９；およびＷＯ０３／０４９５２７）。しかしながら、ＫＳＰは、有糸分裂期の比較的短期間中にのみそれの作用を発揮することから、ＫＳＰ阻害剤は、これらの初期相中に十分に高い濃度で存在していなければならない。
抗体複合化方法は代表的には、リジン類またはシステイン類のそれぞれ活性化エステルもしくはマレイミド官能基との化学反応を含む。しかしながら、これらの反応は部位特異性および立体化学に関して制御が困難であり、不均一生成物を生じる（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， タンパク質 Ｓｃｉ． １４， ２４３６−２４４６ （２００５）； Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １０， ７０６３−７０７０（２００４）；Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． １６， １２８２−１２９０ （２００５）； Ｗｉｌｌｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． ４， ５２１−５２７（１９９３））。結果的に、不均一ＡＤＣは、非複合と過剰の両方の抗体を含む可能性がある。非複合抗体は、抗原結合について薬剤負荷化学種と競合し、それはＡＤＣ療法の活性を低下させ得る。他方、高度の抗体修飾は、抗体凝集、毒性上昇、安定性低下および循環におけるＡＤＣ類の半減期短縮を生じ得る（Ｓｏｃｈａｊ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ， ３３， ７７５−７８４（２０１５））。ＡＤＣ種の不均一性が、それの薬物動態（ＰＫ）、イン・ビボ性能および安全性プロファイルに影響し得ることが報告されている（Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ９， ｅ８３８６５（２０１４）；Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２６， ９２５−９３２ （２００８）； Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ．２０， １６１−１６７（２０１３）；Ｂｏｓｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２２， １９９４−２００４（２０１１））。さらに、ＡＤＣ製造におけるバッチ間一貫性は困難な課題であり、かなりの製造能力を要求するものである。従って、新たなＡＤＣ承認のためには、将来的に規制要件が変わる可能性がある。
既知数のリンカー−薬物が一貫して所定部位に結合する部位特異的結合が、これらの課題を克服する一つの方途である。不均一性が低下し、ＡＤＣ特性の予測がより容易となり、バッチ間の複合体製造が一貫する。薬物：抗体比（ＤＡＲ）が正確に制御され、各種のリンカー−薬物に合うように調整することができる。部位特異的結合については、文献に各種方法が記載されている（Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ． Ｃｈｅｍ． ２６， １７６−１９２（２０１５）；Ｃａｌ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ． ５３， １０５８５−１０５８７（２０１４）；Ｂｅｈｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ６， ４６−５３（２０１４）；Ｐａｎｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ６， ３４−４５（２０１４））。部位特異的結合方法には、特には、例えばトランスグルタミナーゼ類（ＴＧａｓｅ類）、グリシルトランスフェラーゼ類またはホルミルグリシン発生酵素を用いる酵素法などがある（Ｓｏｃｈａｊ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ， ３３， ７７５−７８４ ２０１５）。
ＷＯ２０１４／１９８８１７には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が、ＷＯ２０１５／１８９１４３には脱グリコシル化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が記載されており、それらは抗体薬物複合体（ＡＤＣ類）で用いることができる。さらに、ＷＯ２０１５／０９６９８２には、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）が、キネシン紡錘体タンパク質（ＫＳＰ）で記載されている。特には、この出願には、ＴＷＥＡＫＲ抗体とのＡＤＣ類が記載されている。
本発明は、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤が結合体のグルタミン側鎖に結合しており、ランダム結合結合体薬物複合体の前記欠点を持たない、新規なキネシン紡錘体タンパク質阻害剤の部位特異的均一結合体複合体を提供する。より具体的には本発明は、トランスグルタミナーゼ類（ＴＧａｓｅ類）を用いて、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤が結合体のグルタミン側鎖に結合しており、ランダム結合結合体薬物複合体の前記の欠点を持たない新規なキネシン紡錘体タンパク質阻害剤の部位特異的均一結合体複合体を提供する。
この背景に対して、本発明の目的は、比較的低濃度で投与した後に、アポトーシス作用を発揮することから、癌療法において有益であり得る物質を提供することにある。
この目的を達成するため、本発明は、結合体またはそれの誘導体の１以上の活性化合物分子との部位特異的均一複合体であって、その活性化合物分子がリンカーＬを介して結合体に結合している１以上のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）またはそれのプロドラッグである複合体を提供する。その結合体は、好ましくは結合体タンパク質またはペプチド、特に好ましくはヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体もしくはそれの抗原結合性断片または抗ＥＧＦＲ抗体もしくはそれの抗原結合性断片である。特に好ましいものは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合する抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０、または抗Ｈｅｒ２抗体トラスツズマブである。結合体が抗体である場合、それは優先的に定常領域にアクセプターグルタミンを含む。そのようなアクセプターグルタミンは、好適な位置のグルタミンへの突然変異（例えば突然変異Ｎ２９７Ｑ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）によって、または脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の形成（例えばＰＮＧａｓｅ Ｆによる酵素的脱グリコシルによって、またはＮ２９７Ｘの突然変異によって、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）によって導入することができる。脱グリコシルもしくは脱グリコシル化抗体のその後者の場合、グルタミンＱ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）はアクセプターグルタミンとなる。非常に好ましいのは、突然変異Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む抗体である。従って、概して、ここで記載の抗体は、ＰＮＧａｓｅ Ｆの脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（抗体のＫａｂａｔナンバリングシステム、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ． 、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｌｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ．（１９９１）参照）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって形成されるこれら抗体の脱グリコシル化変異体も含む。さらに、本明細書に記載の抗体には、トランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）触媒反応のために１以上のアクセプターグルタミン残基を含むように改変されている記載の抗体の変異体などもある。
この結合の一つの方法は、トランスグルタミナーゼを用いる結合体の部位特異的結合を扱う文献記載のアプローチである。細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）（ＥＣ２．３．２．１３）などのトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）は、グルタミン類のγ−カルボニルアミド基とリジン類の一級アミンの間の共有結合の形成を触媒する酵素のファミリーである。一部のＴＧａｓｅはアミン供与体としてリジン以外の基質も受容することから、それらを用いて、好適なアクセプターグルタミン残基で抗体を含むタンパク質を修飾している（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５−９９９７ （２０１０）； Ｊｏｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４０， ４７−５４ （２０００）； Ｍｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １９， ２７１−２７８ （２００８）； Ｄｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕａｇｔｅｓ （Ｄｕｃｒｙ， Ｌ．， Ｅｄ．）， ｐｐ ２０５−２１５， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ． （２０１３））。一方で、遺伝子工学によって導入されたトランスグルタミナーゼアクセプターグルタミンである遺伝的に人工のグルタミン標識を有する抗体に薬物をカップリングさせるのに、トランスグルタミナーゼが用いられている（Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． ２０， １６１−１６７（２０１３））。他方で、重鎖の定常領域に位置する保存グルタミンＱ２９５（ＩｇＧ類のＫａｂａｔナンバリングシステム）は、脱グリコシル化ＩｇＧ１の骨格内の細菌トランスグルタミナーゼ（ＥＣ２．３．２．１３）に対する単一のγ−カルボニルアミド供与体であるが、重鎖の位置Ｎ２９７（ｋａｂａｔナンバリング）でグリコシル化されているＩｇＧ１における骨格にはアクセプターグルタミンは全く存在しないことが報告されている（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５−９９９７（２０１０））。要約すると、細菌トランスグルタミナーゼを、リンカー／薬物のアミン基の抗体のアクセプターグルタミン残基への結合に用いることができる。そのようなアクセプターグルタミンは、突然変異による抗体の操作によって、または脱グリコシル化抗体の形成によって導入することができる。そのような脱グリコシル化抗体は、Ｎ−グリコシダーゼＦ（ＰＮＧａｓｅＦ）を用いる脱グリコシルによって、または重鎖のグリコシル化部位のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）の他のいずれかのアミノ酸への突然変異によって形成することができる。そのような脱グリコシル化抗体の酵素的結合が、突然変異Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５−９９９７（２０１０））、またはＮ２９７Ｓ（特許出願ＷＯ２０１３０９２９９８Ａ１およびＷＯ２０１３０９２９８３Ａ２を参照する。）を有する脱グリコシル化抗体変異体について記載されている。そのような脱グリコシル化抗体のトランスグルタミナーゼを用いる酵素的結合によって、両方の重鎖が位置Ｑ２９５（Ｋａｂａｔナンバリング）で部位特異的に官能化されている、概して２のＤＡＲを有するＡＤＣが提供される。抗体の突然変異Ｎ２９７Ｑは、各重鎖での結合のためのもう一つ別の部位を提供し、それによって例えば、両方の重鎖が位置Ｑ２９５およびＱ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）で部位特異的に官能化されている、４のＤＡＲを有するＡＤＣＳが生じる。突然変異Ｑ２９５ＮおよびＮ２９７Ｑを有する抗体変異体は、位置Ｑ２９７に一つのアクセプターグルタミン残基を提供する（Ｓｉｍｏｎｅ Ｊｅｇｅｒ， Ｓｉｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｕｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ， Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ ａｔ ＥＴＨ Ｚｕｒｉｃｈ （２００９））。トランスグルタミナーゼを介した脱グリコシル化抗体の部位特異的結合について記載した文献にいくつかの例がある（例えばＤｅｎｎｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９， ５６９−５７８ （２０１４）； Ｌｈｏｓｐｉｃｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １２， １８６３−１８７１ （２０１５））。脱グリコシル化抗体のトランスグルタミナーゼ触媒結合を用いる戦略は、図８にまとめてある。
本発明者らは、部位特異的均一的にＫＳＰ阻害剤に結合体を結合させて、上記の目的を達成する方法を見出した。さらに、トランスグルタミナーゼが突然変異Ｎ２９７Ａ（Ｋａｂａｔナンバリング）を有する脱グリコシル化抗体変異体への結合を効率的に触媒することが可能であることが、それらによって示された。
本発明は、結合体もしくはそれの誘導体の１以上の活性化合物分子との部位特異的均一複合体であって、前記活性化合物分子がリンカーＬを介して結合体に結合したキネシン紡錘体タンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）であり、前記リンカーＬが結合体、好ましくは結合体のグルタミン側鎖の特異的部位に結合している複合体を提供する。
より具体的には、本発明は、結合体もしくはそれの誘導体の１以上の活性化合物分子との部位特異的均一複合体であって、前記活性化合物分子がリンカーＬを介して結合体に結合したキネシン紡錘体タンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）であり、前記リンカーＬがトランスグルタミナーゼ類（ＴＧａｓｅ類）を用いて結合体のグルタミン側鎖に結合している複合体を提供する。
本発明による複合体は、下記一般式によって表すことができる。
Figure 2018528161
式中、ＢＩＮＤＥＲはバインダー、好ましくは抗体を表し、Ｌはリンカーを表し、ＫＳＰはＫＳＰ阻害剤を表し、ｍは１から５の数字、好ましくは１を表し、ｎは２から１０、好ましくは２から４、やはり好ましくは２または４を表す。ここで、ｍはリンカー当たりのＫＳＰ阻害剤の数であり、ｎはＢＩＮＤＥＲ当たりのＫＳＰ阻害剤／リンカー複合体の数である。従って、複合体中に存在する全てのＫＳＰの合計は、ｍとｎの積である。ＢＩＮＤＥＲは好ましくは、バインダーペプチドまたはタンパク質、例えば抗体である。バインダーが抗体である場合、それは優先的に定常領域にアクセプターグルタミンを含む。そのようなアクセプターグルタミン類は、好適な位置のグルタミンへの突然変異（例えば突然変異Ｎ２９７Ｑ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）または脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の形成（例えば、ＰＮＧａｓｅ Ｆによる酵素的脱グリコシルによって、またはＮ２９７Ｘ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリングの突然変異によって）によって導入することができる。その後者の脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の場合、グルタミンＱ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）はアクセプターグルタミンになる。非常に好ましいものは、突然変異Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む抗体である。さらに、リンカーは、バインダーペプチドまたはタンパク質もしくはそれの誘導体のグルタミン残基に結合している。特に好ましいものは、抗体のグルタミン残基への結合である。
本発明によれば、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤は下記の下位構造Ｉ（ｓｕｂ）を有することができる。
Figure 2018528161
式中、
＃ａは、分子の残りの部分への結合を表し；
Ｒ１ａは、−Ｈ、−ＭＯＤ、または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は、Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ＝Ｏ−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは、−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２ａは、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４ａは、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルによって置換されていても良い−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２を表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ４ａは、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基もしくはカテプシン開裂性基または基Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−を表し、
Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２または−ＯＨで１回以上置換されていても良く；またはそれは、−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり，
ｖは１から１０の数字であり、
Ｒ２２は、−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
または
Ｒ２ａおよびＲ４ａが一緒に、（ピロリジン環の形成を伴う）−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は、−Ｈ、ハロゲン（好ましくは−Ｆまたは−Ｃｌ）、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＨＣ１−４−アルキル、ハロ−Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、ヒドロキシ置換されたＣ１−４−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１−４−アルキル）または−ＯＨを表す。
本発明によれば、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤は、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａまたはＲ１０で水素原子の置換によってリンカーを介してバインダーに結合していることができる。
このバインダーに結合しているＫＳＰ阻害剤（または非常に多くの場合、複数のＫＳＰ阻害剤がバインダーに結合していることからＫＳＰ阻害剤）は好ましくは、下記の式（Ｉａ）の化合物ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
式（Ｉａ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｒ１ａは、−Ｈ、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは、−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分基のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２ａは、−Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４ａは、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ４ａは、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−、またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基、もしくはカテプシン開裂性基または式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−を表し、
Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（それは、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良い。）、−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は、−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
または
Ｒ２ａおよびＲ４ａが一緒に、（ピロリジン環の形成を伴う）−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は、−Ｈ、ハロゲン（好ましくは−Ｆまたは−Ｃｌ）、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＨ、Ｃ１−４−アルキル、ハロ−Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、ヒドロキシ置換されたＣ１−４−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１−４−アルキル）または−ＯＨを表し；
Ｒ３ａは、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキルまたは複素環アルキル基、好ましくはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
ｎは０、１または２であり、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
Ｒ８ａは、Ｃ１−１０−アルキルまたは−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、
ＨＺ２は、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環を表し；
ＨＺは、単環式もしくは二環式複素環を表し、それはハロゲン、Ｃ１−１０−アルキル基、Ｃ６−１０−アリール基およびＣ６−１０−アラルキル基からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く、それはハロゲンによって置換されていても良く；
上記で定義の−ＭＯＤは、−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０は、−Ｈ；ハロゲンまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０はＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
いずれかの側鎖を含む前記炭化水素基は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｙは、Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｘは、−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニル）を表し、
Ｇ３は、−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有し；
前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤は、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ８ａもしくはＲ１０で水素原子の置換によって、または適宜にＨＺの置換基のうちの一つを介して、特にはＲ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａまたはＲ１０を介してリンカーに結合している。
上記で示した式中のＫＳＰ−Ｌ−は好ましくは下記式（ＩＩａ）を有するもの、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
式（ＩＩａ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１は、Ｎを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し、
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１はＨ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２は−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ４はＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基もしくはカテプシン開裂性基Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−を表し、
Ｒ２１はＨ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（それは、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良い）、−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；複数のアミノ酸Ｐ３がある場合、Ｐ３は、上記で定義の同一もしくは異なるアミノ酸を有することができ；
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０はＬ−＃１、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し、ピロリジン環中の２級アミノ基の水素原子がＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっていても良く；
Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
−ＳＩＧは、−Ｃ（＝Ｏ）ーＳＩＧ結合の開裂時に遊離２級アミンを与える自壊性基であり；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
ｎは０、１または２を表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
Ｒ５は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８は（フッ素化されていても良い）Ｃ１−１０−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−１０−アルキニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、
ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２または−Ｌ−＃１によって置換されていても良く；
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
上記で定義の−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０はＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｙは−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの−ＣＯＯＨ基を有する。
本発明による複合体は、化学的に不安定なリンカー、酵素的に不安定なリンカーまたは安定なリンカーを有することができる。特に好ましいものは、安定なリンカーおよびレグマインまたはカテプシンによって開裂可能なリンカーである。
本発明はさらに、本発明による部位特異的均一複合体の製造方法、さらにはその製造のための前駆体および中間体も提供する。
本発明による複合体の製造は通常、次の段階を含む。
（ｉ）保護基を有していても良く、バインダーにカップリングし得る反応性基を有するリンカー前駆体の製造；
（ｉｉ）保護基を有していても良い低分子量ＫＳＰ阻害剤の誘導体（好ましくは下位構造Ｉ（ｓｕｂ）を有するＫＳＰ阻害剤、特に好ましくは式（Ｉａ）のもの、特には式（ＩＩａ）のもの；これらの式において、リンカーへの結合はまだない。）へのリンカー前駆体の結合による、保護基を有していても良い反応性のＫＳＰ阻害剤／リンカー複合体の取得；
（ｉｉｉ）ＫＳＰ阻害剤／リンカー複合体に存在する保護基の除去、および
（ｉｖ）好ましくはトランスグルタミナーゼを用いる、ＫＳＰ阻害剤／リンカー複合体へのバインダーの部位特異的結合による、本発明によるバインダー／ＫＳＰ阻害剤部位特異的均一複合体の取得。
反応性基の結合は、保護されていても良いＫＳＰ阻害剤／リンカー前駆体複合体の構築後に行うこともできる。
上記で説明したように、低分子量ＫＳＰ阻害剤へのリンカー前駆体の結合は、リンカーにより、下位構造Ｉ（ｓｕｂ）におけるＲ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａまたはＲ１０で、式（Ｉａ）におけるＲ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ８ａもしくはＲ１０で、または式（ＩＩａ）におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８またはＲ１０で水素原子の置換によって起こり得る。複合体化前の合成段階において、存在する官能基は、保護された形で存在しても良い。複合体化段階の前に、これらの保護基はペプチド化学の公知の方法によって除去される。複合体化は、実施例における図式２から６に例示的に示されているように、各種経路によって化学的に行われる。特に、例えば置換を促進するための保護基もしくは脱離基の導入により、リンカーへの結合のために、低分子量ＫＳＰ阻害剤を修飾しても良い。
特に、本発明は、バインダーに結合した低分子量ＫＳＰ阻害剤を提供する。これらのバインダー複合体は、下記一般式（ＩＩＩａ）を有するもの、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１は−Ｈ、−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３はＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０はＬ−＃１、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、または−ＯＨを表し；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ４はＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−、またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−、もしくはカテプシン開裂性基の基または式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−を表し、
Ｒ２１は−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２もしくは−ＯＨで１回以上置換されていても良いか、−Ｈまたは基−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２であり、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０はＬ−＃１、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ヒドロキシル置換されたＣ１−４アルキル、ＣＯＯ（Ｃ１−４アルキル）または−ＯＨを表し；ピロリジン環中の２級アミノ基の水素原子がＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっていても良く；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
−ＳＩＧは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ結合の開裂時に遊離２級アミンを与える自壊性基であり；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎは０、１または２であり、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキル）を表し；
Ｒ５は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し，
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、
ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環（好ましくはオキセタン）を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲによって置換されていても良く；
Ｌはリンカーを表し、
ＢＩＮＤＥＲはバインダーもしくはそれの誘導体を表し、当該バインダーは複数の活性化合物分子に結合していても良く、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０の一つの代表的なものは−Ｌ−バインダーを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０はＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く，Ｒｙは−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、または−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−を表し、Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有する。
図１は、各種生物種のＴＷＥＡＫＲシステイン豊富ドメイン（アミノ酸３４から６８）の配列（数字は、シグナル配列；配列番号１６９を含む全長構築物におけるアミノ酸位置を示す。）。
図２Ａは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の構造の模式図である。その図は、システイン豊富ドメイン（３６から６７）を含む細胞外ドメイン（アミノ酸２８から８０）（配列番号１６８）、膜貫通ドメイン−ＴＭ（８１から１０１）および細胞内ドメイン（１０２から１２９）を示している。ＴＰＰ−２２０２−完全細胞外ドメイン（２８から８０）は、ｈＩｇＧ１のＦｃドメインに融合している。ＴＰＰ−２２０３−Ｎ末端およびＣ末端切断（３４から６８）のある細胞外ドメインは、ｈＩｇＧ１のＦｃドメインに融合している。ジスルフィド架橋Ｃｙｓ３６−Ｃｙｓ４９、Ｃｙｓ５２−Ｃｙｓ６７およびＣｙｓ５５−Ｃｙｓ６４は、黒色棒線で示されている。Ｎ末端およびＣ末端のＴＰＰ−２２０３は、未修飾システイン豊富ドメインと比較して、それぞれアミノ酸２個およびアミノ酸１個を多く含むことで、適切な折り畳みが確保されている。ＴＰＰ−１９８４−Ｃ末端切断を有する細胞外ドメイン（２８から６８）は、ＨＩＳ６標識に融合している。３種類全ての構築物は、本発明による抗体およびＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）に対して同等の結合を示す。Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）は、全長細胞外ドメイン（ＴＰＰ−２２０２）にのみ結合する。
図２Ｂは、細胞外ドメインのアミノ酸配列であり：アミノ酸６４がＴＷＥＡＫリガンド結合に必須であり；およびアミノ酸４７が、本明細書で確認したように本発明による抗体の結合に必須であることが公開されている。
図３は、ＴＷＥＡＫＲ細胞外ドメインの抗体および基準抗体との相互作用である。図示してあるものは、ＴＷＥＡＫＲ−Ｆｃ融合タンパク質コーティング（ＴＰＰ−２２０２、１μｇ／ｍＬ）および０．０８μｇ／ｍＬ（白抜き棒線）および０．０３μ／ｍＬ（黒抜き棒線）の可溶性結合相手としてのビオチン化ＩｇＧでのＥＬＩＳＡの結果である。検出は、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよびＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ基質を用いて行った。Ｙは「ＥＬＩＳＡシグナル強度［Ｒｆｕ］」であり；Ｘは「試験抗体構築物」であり：ａは「ＴＰＰ−２０９０」であり；ｂは「ＴＰＰ−２０８４」であり；ｃは「ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）」であり；ｄは「Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）」であり；ｅは「Ｐ３Ｇ５（ＴＰＰ−２１９５）」であり；ｆは「１３６．１（ＴＰＰ−２１９４）」であり；ｈは「ＩＴＥＭ１」であり；ｉは「ＩＴＥＭ４」であり；ｊはマイスアイソタイプ対照であり；ｋはヒトアイソタイプ対照である。調べた全ての抗体が８０ｎｇ／ｍＬの濃度で飽和結合を示している。
図４は、ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインの本発明による抗体および基準抗体との相互作用である。示してあるものは、ＴＷＥＡＫＲ（３４−６８）−Ｆｃ融合タンパク質コーティング（ＴＰＰ−２２０３、１μｇ／ｍＬ）および０．０８μｇ／ｍＬ（白抜き棒線）および０．３μ／ｍＬ（黒抜き棒線）の可溶性結合相手としてのビオチン化ＩｇＧでのＥＬＩＳＡの結果である。検出は、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよびＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ基質を用いて行った。Ｘは「試験抗体構築物」であり：ａは「ＴＰＰ−２０９０」であり；ｂは「ＴＰＰ−２０８４」であり；ｃは「ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）」であり；ｄは「Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）」であり；ｅは「Ｐ３Ｇ５（ＴＰＰ−２１９５）」であり；ｆは「１３６．１（ＴＰＰ−２１９４）」であり；ｈは「ＩＴＥＭ１」であり；ｉは「ＩＴＥＭ４」であり；ｊはマイスアイソタイプ対照であり；ｋはヒトアイソタイプ対照である。調べた全ての抗体が８０ｎｇ／ｍＬの濃度で飽和結合を示している。
図５は、ＴＷＥＡＫＲ（２８−６８）の本発明による抗体および基準抗体との相互作用である。示してあるものは、ＴＷＥＡＫＲ（２８−６８）−ＨＩＳコーティング（ＴＴＰ−１９８４、１μｇ／ｍＬ）および０．０８μｇ／ｍＬ（白抜き棒線）および０．３μ／ｍＬ（黒抜き棒線）の可溶性結合相手としてのビオチン化ＩｇＧでのＥＬＩＳＡの結果である。検出は、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよびＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ基質を用いて行った。Ｘは「試験抗体構築物」であり：ａは「ＴＰＰ−２０９０」であり；ｂは「ＴＰＰ−２０８４」であり；ｃは「ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）」であり；ｄは「Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）」であり；ｅは「Ｐ３Ｇ５（ＴＰＰ−２１９５）」であり；ｆは「１３６．１（ＴＰＰ−２１９４）」であり；ｈは「ＩＴＥＭ１」であり；ｉは「ＩＴＥＭ４」であり；ｊはマイスアイソタイプ対照であり；ｋはヒトアイソタイプ対照である。調べた全ての抗体が８０ｎｇ／ｍＬの濃度で飽和結合を示している。
図６Ａは、システイン豊富ドメインのアラニンスキャンである。ＴＷＥＡＫＲ（３４−６８）−Ｆｃの突然変異タンパク質を、ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）（Ｘ）−およびＴＰＰ−２０９０（Ｙ）−結合について分析した。Ｓ３７Ａ、Ｒ３８Ａ、Ｓ４０Ａ、Ｗ４２Ａ、Ｓ４３Ａ、Ｄ４５Ａ、Ｄ４７Ａ、Ｋ４８Ａ、Ｄ５１Ａ、Ｓ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｒ５８Ａ、Ｐ５９Ａ、Ｈ６０Ａ、Ｓ６１Ａ、Ｄ６２Ａ、Ｆ６３ＡおよびＬ６５Ａ突然変異タンパク質をＨＥＫ２９３細胞で発現させた（黒色菱形）。ＰＦＬ１９２（ＴＰＰ−１１０４）およびＴＰＰ−２０９０をコーティングし（１μｇ／ｍＬ）、ＨＥＫ２９３発酵ブロスの８倍希釈上清を、ＴＷＥＡＫＲタンパク質結合用に加えた。Ｘは「ＰＤＬ−１９２／ＴＴＰ−１１０４）相互作用のＥＬＩＳＡ強度［Ｒｆｕ］」であり、Ｙは「ＴＰＰ−２０９０相互作用のＥＬＩＳＡ強度［Ｒｆｕ］」である。ＴＰＰ−２０９０（Ｙ）は、Ｄ７４Ａ−ＴＷＥＡＫＲ突然変異タンパク質の結合減少を示し（閉じた箱形）、ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）（Ｘ）はＲ５６Ａへの結合減少を示している（点線の箱形）。
Ｂ−Ｙは「野生型結合シグナルに対して正規化した％単位での結合［％］」であり、１は「ＴＰＰ−２０９０」であり；２は「ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）」であり；３は「Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）」であり（１μｇ／ｍＬ）、ＴＷＥＡＫＲ変異体を２５０ｎｇ／ｍＬで加え、検出は抗ＨＩＳ ＨＲＰによるものであった。野生型構築物と比較して、ＴＴＰ−２０９０は５％未満の結合を示している。
図７は、Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉら（ＦＥＢＳ２８０：１８１８−１８２９）が発表しているＴＷＥＡＫＲ細胞外ドメインのＮＭＲ構造である。ＴＷＥＡＫ結合はＬ４６に依存し（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉら）、ＴＴＰ−２０９０結合はに依存し、ＰＤＬ−１９２はＲ５６に結合する。ＰＤＬ−１９２はＴＷＥＡＫリガンド結合部位と逆に結合し、ＴＰＰ−２０９０はＴＷＥＡＫリガンド部位に直接結合する。
図８は、脱グリコシル化抗体のトランスグルタミナーゼ触媒複合体化を用いる戦略をまとめたものである。
各種生物種のＴＷＥＡＫＲシステイン豊富ドメイン（アミノ酸３４から６８）の配列（数字は、シグナル配列；配列番号１６９を含む全長構築物におけるアミノ酸位置を示す。）である。 ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の構造の模式図である。 細胞外ドメインのアミノ酸配列である。 ＴＷＥＡＫＲ細胞外ドメインの抗体および基準抗体との相互作用である。 ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインの本発明による抗体および基準抗体との相互作用である。 ＴＷＥＡＫＲ（２８−６８）の本発明による抗体および基準抗体との相互作用である。 システイン豊富ドメインのアラニンスキャンである。 野生型結合シグナルに対して正規化した％単位での結合［％］を示す図である。 Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉら（ＦＥＢＳ２８０：１８１８−１８２９）が発表しているＴＷＥＡＫＲ細胞外ドメインのＮＭＲ構造である。 脱グリコシル化抗体のトランスグルタミナーゼ触媒複合体化を用いる戦略をまとめたものである。
本発明は、バインダーもしくはそれの誘導体の１以上の活性化合物分子との部位特異的均一複合体であって、前記活性化合物分子がリンカーＬを介してバインダーに結合したキネシン紡錘体タンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）であり、前記リンカーＬがバインダー、好ましくはバインダーのグルタミン側鎖の特異的部位に結合している複合体を提供する。
より具体的には本発明は、バインダーもしくはそれの誘導体の１以上の活性化合物分子との部位特異的均一複合体であって、前記活性化合物分子がリンカーＬを介してバインダーに結合したキネシン紡錘体タンパク質阻害剤（ＫＳＰ阻害剤）であり、前記リンカーＬがトランスグルタミナーゼ類（ＴＧａｓｅ類）を用いてバインダーのグルタミン側鎖に結合している複合体を提供する。
本発明による複合体は、下記一般式によって表すことができる。
Figure 2018528161
式中、ＢＩＮＤＥＲはバインダー、好ましくは抗体を表し、Ｌはリンカーを表し、ＫＳＰはＫＳＰ阻害剤を表し、ｍは１から５の数字、好ましくは１を表し、ｎは２から１０、好ましくは２から４、やはり好ましくは２または４を表す。ここで、ｍはリンカー当たりのＫＳＰ阻害剤の数であり、ｎはＢＩＮＤＥＲ当たりのＫＳＰ阻害剤／リンカー複合体の数である。従って、複合体中に存在する全てのＫＳＰの合計は、ｍとｎの積である。ＫＳＰ−Ｌは好ましくは、上記で示した式（ＩＩａ）を有する。ＢＩＮＤＥＲは好ましくは、バインダーペプチドまたはタンパク質、例えば抗体である。バインダーが抗体である場合、それは優先的に定常領域にアクセプターグルタミンを含む。そのようなアクセプターグルタミン類は、好適な位置のグルタミンへの突然変異（例えば突然変異Ｎ２９７Ｑ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）または脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の形成（例えば、ＰＮＧａｓｅ Ｆによる酵素的脱グリコシルによって、またはＮ２９７Ｘ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリングの突然変異によって）によって導入することができる。その後者の脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の場合、グルタミンＱ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）はアクセプターグルタミンになる。非常に好ましいものは、突然変異Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む抗体である。さらに、リンカーは、バインダーペプチドまたはタンパク質もしくはそれの誘導体のグルタミン残基に結合している。特に好ましいものは、抗体のグルタミン残基への結合である。
本発明に従って使用可能なバインダー、本発明に従って使用可能なＫＳＰ阻害剤および制限なく組み合わせて使用可能な本発明に従って使用可能なリンカーについて、下記で説明する。特に、好ましいまたは特に好ましいものとして各場合で表されるバインダーを、好ましいまたは特に好ましいものとして各場合で表されるＫＳＰ阻害剤と組み合わせて、適宜に好ましいまたは特に好ましいものとして各場合で表されるリンカーと組み合わせて用いることができる。
ＫＳＰ阻害剤およびそれらのバインダー複合体
低分子量ＫＳＰ阻害剤が、例えばＷＯ２００６／０４４８２５；ＷＯ２００６／００２２３６；ＷＯ２００５／０５１９２２；ＷＯ２００６／０６０７３７；ＷＯ０３／０６００６４；ＷＯ０３／０４０９７９；およびＷＯ０３／０４９５２７から知られている。
基本的に、ＫＳＰ阻害剤は、下記の下位構造Ｉ（ｓｕｂ）を有する。
Figure 2018528161
式中、
＃ａは、分子の残りの部分への結合を表し；
Ｒ１ａは、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は、Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは、−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２ａは、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４ａは、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルによって置換されていても良い−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ４ａは、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基もしくはカテプシン開裂性基または式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−を表し、
Ｒ２１は、−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２または−ＯＨで１回以上置換されていても良く；またはそれは、−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり，
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は、−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
または
Ｒ２ａおよびＲ４ａが一緒に、（ピロリジン環の形成を伴う）−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は、−Ｈ、ハロゲン（好ましくは−Ｆまたは−Ｃｌ）、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＨＣ１−４−アルキル、ハロ−Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、ヒドロキシ置換されたＣ１−４−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１−４−アルキル）または−ＯＨを表す。
特に高頻度であるものは、下記の下位構造ＩＩ（ｓｕｂ）である。
Figure 2018528161
式中、
＃ａ、Ｒ１ａ、Ｒ２ａおよびＲ４ａは、Ｉ（ｓｕｂ）におけるものと同じ意味を有し、Ｒ１２ａおよびＲ１３ａは−Ｈを表し、
または
Ｒ１２ａおよびＲ１３ａが一緒に（ピペリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し；
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたは−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表す。
特に、多くのＫＳＰ阻害剤が、下位構造ＩＩ（ｓｕｂ）を有し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａ、Ｒ１２ａおよびＲ１３ａはＨを表す。
本発明によれば、下位構造Ｉ（ｓｕｂ）または下位構造ＩＩ（ｓｕｂ）のＫＳＰ阻害剤を用いることができる。本発明に従って使用されるＫＳＰ阻害剤には、例えばイスピネシブ（Ｃｙｔｏｋｉｎｅｔｉｃｓ／ＧＳＫ）、ＭＫ−０７３１（Ｍｅｒｃｋ）、ＡＺＤ４８７７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＲＲＹ−５２０（Ａｒｒａｙ ＢｉｏＰｈａｒｍａ）およびＡＲＱ６２１（ＡｒＱｕｌｅ）などもある。
本発明に従って好ましいＫＳＰ阻害剤は、下記の基本構造を有するもの、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
式（Ｉａ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｒ１ａは、−Ｈ、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは、−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分基のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２ａは、−Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４ａは、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ４ａは、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−、またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基、もしくはカテプシン開裂性基または式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−を表し、
Ｒ２１は、−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（それは、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良い。）を表し、または−Ｈもしくは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は、−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
または
Ｒ２ａおよびＲ４ａが一緒に、（ピロリジン環の形成を伴う）−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は、−Ｈ、ハロゲン（好ましくは−Ｆまたは−Ｃｌ）、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し、ピロリジン環中の２級アミノ基の水素原子がＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっていても良く；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
−ＳＩＧは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ結合の開裂時に遊離２級アミンを提供する自壊性基であり；
Ｒ３ａは、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキルまたは複素環アルキル基、好ましくはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
ｎは０、１または２であり、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は、−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
Ｒ８ａは、Ｃ１−１０−アルキルを表し、
ＨＺは、単環式もしくは二環式複素環を表し、それはハロゲン、Ｃ１−１０−アルキル基、Ｃ６−１０−アリール基およびＣ６−１０−アラルキル基からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く、それはハロゲンによって置換されていても良く；
上記で定義の−ＭＯＤは、−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０は、−Ｈ；ハロゲンまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が−ＨＣ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０はＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
いずれかの側鎖を含む前記炭化水素基は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｙは、Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｘは、−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニル）を表し、
Ｇ３は、−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有する。
本発明によれば、そのようなキネシン紡錘体タンパク質阻害剤は、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ８ａもしくはＲ１０で水素原子の置換によって、または適宜にＨＺの置換基のうちの一つを介して、特にはＲ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａまたはＲ１０を介してリンカーに結合していることができる。
式（Ｉａ）の置換基は好ましくは下記の意味を有し、これらの好ましい意味が、好ましくは互いに組み合わせられる。
Ｒ１ａは好ましくは、Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、を−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジル表し；
Ｒ２ａおよびＲ４ａは互いに独立に、好ましくは−Ｈ、−Ｌ−＃１、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚ、を表し、またはＲ２ａおよびＲ４ａが一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
Ｙ４は互いに独立に、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５はＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表す。
あるいは、Ｒ４ａは、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−または式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−のカテプシン開裂性基であることができる。別の選択肢において、ピロリジン環上の−ＮＨの水素原子が、Ｒ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっている。
基Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−またはＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−は、酵素レグマインによってイン・ビボで開裂すると考えられている。従って、以下において、これらの基は、「レグマイン開裂性基」と称される。レグマイン開裂性基は、式−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−または−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−を有する。本発明の複合体において、この基は好ましくは、式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）＃を有する、すなわちレグマイン開裂性基は、一端に基Ｒ２１を有し、他端（−＃）で、それは式Ｉａにおけるアミノ基相当位置Ｒ４ａに結合している。
−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−（すなわち、アスパラギン）および−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−（すなわち、アスパラギン酸）は、天然のＬ配置で存在する。レグマイン開裂性基は、アスパラギンに加えて、１から３個の別のアミノ酸（−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−；−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−；−（Ｐ３）（２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−）を含むことから、ジ−、トリ−、もしくはテトラペプチドまたはそれの誘導体である（ジペプチド：−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−；トリペプチド：−Ｐ３−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−；テトラペプチド：−（Ｐ３）２−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−）。レグマイン開裂性基がアスパラギン酸を含む場合も、同じことが当てはまる。
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択される、好ましくはＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、シトルリンおよびＡｓｎから選択されるアミノ酸である。Ｐ２は通常は、天然Ｌ配置で存在する。特に好ましいものは、Ｌ−Ａｌａである。
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリン、またはそれのＮ−アルキル−アミノ酸類、好ましくはＮ−メチル−アミノ酸類から選択されるアミノ酸である。Ｐ３は好ましくは、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、シトルリンおよびＧｌｎから選択される。Ｐ３は通常は、天然Ｌ配置で存在する。特に好ましいものは、Ｌ−Ａｌａである。
特に好ましいレグマイン開裂性基は、−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｓｎ−（例えばＲ２１−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｓｎ−＃）である。
Ｒ２１は好ましくは、−Ｈ、Ｃ１−５−アルキル、Ｃ５−１０−アラルキル、Ｃ１−５−アルコキシ、Ｃ６−１０−アリールオキシ、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、またはＣ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それらはそれぞれ、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＮＨ２、−ＮＨ２または−Ｎ（アルキル）２，）で１回以上置換されていても良く；または基−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり、
ｖは１から１０の数字であり、
Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表す。
「アルキル」はここでは、２０個以下の炭素原子を有するアルキル基、好ましくはＣ１−１２−アルキルを意味する。
カテプシン開裂性基は、式−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−を有する。本発明の複合体において、この基は好ましくは式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−＃を有する、すなわちカテプシン開裂性基は、一端に基Ｒ２１を有し、他端（−＃）で、それは式Ｉａにおけるアミノ基相当位置Ｒ４ａに結合している。ここで、Ｒ２１、Ｐ２およびＰ３は、レグマイン開裂性基におけるものと同じ意味を有する。特に好ましいカテプシン開裂性基は、Ｐ２がアラニン、リジンおよびシトルリンから選択され、Ｐ３がバリン、アラニンおよびフェニルアラニンから選択されるものであり、特には式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−Ｐ３−Ｐ２−のものである。
Ｒ３は好ましくは、置換されていても良いアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤ、またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎは０、１または２であり、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（−ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキルを表す。
Ｒ８ａは好ましくは、Ｃ１−１０−アルキルを表す。
ＨＺは好ましくは、単環式もしくは二環式複素環を表し、それはハロゲン、Ｃ１−１０−アルキル基、Ｃ６−１０−アリール基およびＣ６−１０−アラルキル基（ハロゲンによって置換されていても良い）からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良い。
本発明の文脈において（すなわち、上記式において、そして下記の式においても）Ｃ１−１０−アルキルは、１から１０個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のアルキルを表す。好ましいものとして挙げることができる例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、１−メチルプロピルおよびｔｅｒｔ−ブチルである。
本発明の文脈においてＣ６−１０−アリール−は、単環式または二環式芳香族同素環、例えばフェニルおよびナフチルを表す。
Ｃ６−１０−アラルキル基本発明の文脈においては、Ｃ１−Ｃ４−アルキル基が結合している単環式芳香族同素環、例えばフェニルを表す。Ｃ６−１０−アラルキル基の１例はベンジルである。
Ｃ５−１０−ヘテロアリール本発明の文脈においては、合計６から１０個の環原子を有する単環式もしくは二環式芳香族複素環を表し、その環はＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯおよびＳＯ２からなる群からの１個もしくは２個の環ヘテロ原子を含み、環炭素原子または適宜に環窒素原子を介して結合している。挙げることができる例には、ピリジル、フラニル、ピリミジル、イミダゾリル、チエニル、チオフェニル、イソオキサゾイル（ｉｓｏｘａｚｏｙｌ）、イソチアゾイル（ｉｓｏｔｈｉａｚｏｙｌ）、１，２，３−オキサジアゾリル（ｏｘａｄｉａｚｏｙｌ）、フラザニル、１，２，３−トリアゾイル（ｔｒｉａｚｏｙｌ）、１，２，４−トリアゾイル（ｔｒｉａｚｏｙｌ）、ピリダジル、ピロリル、トリアジニル、インドリル、キノリニル、キナゾリニル、１，３−ベンゾジオキソール、イソインドリル、インダゾリル、１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジル、ベンゾトリアゾリル、イソキノリニル、シノリニル（ｃｉｎｏｌｉｎｙｌ）、フタラジニル、プテリジニル、ナフチリジニル、ベンゾイミダゾリニル、ベンゾチアゾリニル、ベンゾオキサゾリニル、３，４−メチレンジオキシフェニルおよびベンゾ［６］フラニルである。
単環式または二環式複素環本発明の文脈においては、合計５から１０個の環炭素原子を有する単環式もしくは二環式複素環を表し、その環はＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯおよびＳＯ２からなる群からの１から３個の環ヘテロ原子を含み、環炭素原子または適宜に環窒素原子を介して結合している。挙げることができる例は、ピペリジル、ピロリニル、モルホリニル、３，４−メチレンジオキシフェニルおよびテトラヒドロフラニルである。
本発明の文脈においてハロゲン原子は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表す。
本明細書で使用される場合、「ヘテロアルキル」という用語は、１以上のヘテロ原子、すなわち１以上の炭素原子に代わる炭素以外の元素（酸素、硫黄、窒素、リンなど（これらに限定されるものではない））を含む直鎖もしくは分岐のアルキル基を指す。
ある基が「置換されている」と記載されている場合は常に、その基は１以上の指定の置換基によって置換されている。置換基が全く示されていない場合、それは、示された「置換された」基がアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、ヘテロアラルキル、（ヘテロアリシクリル）アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アシル、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロゲン、チオカルボニル、カルバミル、チオカルバミル、アミド、スルホンアミド、スルホンアミド、カルボキシ、イソシアナト、チオシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、シリル、スルフェニル、スルフィニル、スルホニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、トリハロメタンスルホニル、トリハロメタンスルホンアミド、アミノ、モノ置換されたアミノ基およびジ置換されたアミノ基、およびこれらの保護された誘導体から個別かつ独立に選択される１以上の基で置換されていても良いことを意味する。
置換基の数が特定されていない場合（例えばハロアルキル）、１以上の置換基が存在していても良い。例えば「ハロアルキル」は、１以上の同一もしくは異なるハロゲンを含むことができる。別の例として、「Ｃ〜−Ｃ〜アルコキシフェニル」は、１個、２個もしくは３個の原子を含む１以上の同一もしくは異なるアルコキシ基を含むことができる。
下位構造Ｉ（ｓｕｂ）または下位構造ＩＩ（ｓｕｂ）におけるＲ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａまたはＲ１０での、または式（Ｉａ）におけるＨＺでのＲ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ８ａもしくはＲ１０での水素原子の置換によって、式（Ｉａ）の化合物は、当業者に公知の形でリンカーに結合していることができる。特に好ましくは、水素原子の置換は、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａで、またはＲ２ａおよびＲ４ａによって形成されるピロリジン環で起こる。この結合は、実施例における図式２から１６で例示的に示されているように、各種経路によって化学的に行うことができる。特に、例えば置換を促進するための保護基もしくは脱離基の導入によって、リンカーへの結合のために低分子量ＫＳＰ阻害剤を修飾することが可能である場合がある（その反応において、水素原子ではない前記脱離基がリンカーによって置換される。）。次に、このようにして得られたＫＳＰ阻害剤−リンカー分子（そのリンカーはバインダーへの結合に関して反応性基を有する。）をバインダーと反応させることで、本発明によるバインダー複合体を得ることができる。実験の部において、この手順を、いくつかの実施例によって例示的に説明する。
Ｒ１ａに好ましいものは、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″（ＣＨ２）１−３−ＮＨ２および
−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨであり、
Ｚ″は−Ｈまたは−ＮＨ２を表す。
Ｒ２ａおよびＲ４ａに好ましいものはＨであるか、Ｒ２ａおよびＲ４ａが一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は−Ｈを表す。
Ｒ３ａに好ましいものはＣ１−１０−アルキル−であり、それは−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２または−ＮＨ２によって置換されていても良く、
アルキルは好ましくはＣ１−３−アルキルであり、
ｎは０、１または２である。
Ｒ８ａに好ましいものは、分岐のＣ１−５−アルキル基、好ましくはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、１−メチルプロピルおよびｔｅｒｔ−ブチルである。
ＨＺに好ましいものは、単環式または二環式複素環であり、それはハロゲン、Ｃ１−１０−アルキル基、Ｃ６−１０−アリール基およびＣ６−１０−アラルキル基（ハロゲンによって置換されていても良い）からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良い。
特に好ましくは、ＨＺは、置換されたピロール、ピラゾール、イミダゾール、キナゾリンまたはジヒドロキナゾリンであり、それは置換されていても良いベンジル基によってオルト位（Ｒ１ａなどと置換基に関して）で置換されている。さらに、置換されたピロール、ピラゾール、イミダゾールまたはキナゾリンは好ましくは、オキソ（ジヒドロキナゾリンの場合）または１個もしくは２個のハロゲン原子によって置換されたフェニル基によって置換されていることができる。特に好ましくは、ＨＺは、置換されたピロールである。
好ましく用いられるＫＳＰ阻害剤はイスピネシブである。さらなる好ましいＫＳＰ阻害剤はＡｒｒｙ−５２０である。
構造ＫＳＰ−Ｌ−の他の特に好ましい化合物は、下記の式（ＩＩａ）または（ＩＩ）を有するもの、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
式（ＩＩａ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１は−Ｈ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２は−Ｈ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４は−Ｈ、−Ｌ−＃１、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ４はＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基もしくはカテプシン開裂性基Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−を表し、
Ｒ２１はＨ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（それは、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良い。）、−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；複数のアミノ酸Ｐ３がある場合、Ｐ３は、上記で定義の同一もしくは異なるアミノ酸を有することができ；
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は−Ｈ、ハロゲン（好ましくは−Ｆ）、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨを表しピロリジン環中の２級アミノ基の水素原子がＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっていても良く；
Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；複数のアミノ酸Ｐ３がある場合、Ｐ３は、上記で定義の同一もしくは異なるアミノ酸を有することができ；
−ＳＩＧは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ結合の開裂時に遊離２級アミンを与える自壊性基であり；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−２０Ｈ）基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
ｎは０、１または２を表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
Ｒ５は−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＭＯＤ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキル、−または−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、
ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２または−Ｌ−＃１によって置換されていても良く；
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０のうちの一つが、−Ｌ−＃１を表し（またはＲ８の場合、含む）、
Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
上記で定義の−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｙは−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの−ＣＯＯＨ基を有する。
式（ＩＩ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し、

Ｒ１は−Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｌ−＃１または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し，
Ｙ４は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２は−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ４はＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基もしくはカテプシン開裂性基Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−を表し、
Ｒ２１はＨ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２もしくは−ＯＨで１回以上置換されていても良く、または−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；複数のアミノ酸Ｐ３がある場合、Ｐ３は、上記で定義の同一もしくは異なるアミノ酸を有することができ；
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は−Ｈ、ハロゲン（好ましくは−Ｆまたは−Ｃｌ）、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−ハロアルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、ヒドロキシ置換されたＣ１−４−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１−４−アルキル）または−ＯＨを表し、ピロリジン環中の２級アミノ基の水素原子がＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっていても良く；
Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
−ＳＩＧは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ結合の開裂時に遊離２級アミンを与える自壊性基であり；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
ｎは０、１または２を表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ５は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキル、または置換されていても良いオキセタンを表し；
Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。
当業者に公知の形でのＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５もしくはＲ８での、またはＲ２およびＲ４によって形成されたピロリジン環（Ｒ１０）での水素原子の置換によって、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０のうちのいずれも−Ｌ−＃１を表さない式（ＩＩａ）または（ＩＩ）の化合物をリンカーに結合させることができる。これによって、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８またはＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、Ｌがリンカーを表し、＃１がバインダーまたはそれの誘導体の結合を表す式（ＩＩａ）または（ＩＩ）の複合体が得られる。そこで、式（ＩＩａ）または（ＩＩ）によるＫＳＰ阻害剤がバインダーと結合している場合、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８もしくはＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、Ｌはリンカーを表し、＃１はバインダーまたはそれの誘導体への結合を表す。すなわち、その複合体の場合、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、−Ｌ−＃１はバインダー、例えば抗体への結合を表す。特に好ましくは、置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す。この実施形態において、Ｒ４が、上記で定義の−Ｈ、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−を表すことが好ましい。別の好ましい実施形態において、置換基Ｒ４は−Ｌ−＃１を表し、リンカーはＲ４に結合している窒素原子で開裂可能であることで、開裂によって１級アミノ基が生じる（Ｒ４＝−Ｈに相当）。相当する開裂性基については下記で説明する。
Ｒ１が−Ｈではない場合、Ｒ１に結合している炭素原子は立体中心であり、それはＬおよび／またはＤ配置で、好ましくはＬ配置で存在することができる。
Ｒ２がではない場合、Ｒ２に結合している炭素原子は立体中心であり、それはＬおよび／またはＤ配置で存在することができる。
バインダーは好ましくは、ヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体もしくはそれの抗原結合性断片、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体もしくはそれの抗原結合性断片または抗ＥＧＦＲ抗体もしくはそれの抗原結合性断片である。特に好ましいものは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）でアミノ酸Ｄに特異的に結合している抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０、または抗Ｈｅｒ２抗体トラスツズマブである。記載の抗体全てが、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって生じるこれら抗体の脱グリコシル化変異体を含む。
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；
Ｘ１がＮＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表す式（ＩＩａ）または（ＩＩ）の化合物、
特には、Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；またはＸ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すものが特に好ましい。特に好ましいものは、Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表す化合物である。
Ａに関して、好ましいものは−Ｃ（＝Ｏ）−である。
Ｒ１に関して好ましいものは、−Ｌ−＃１、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″（ＣＨ２）１−３ＮＨ２および−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨであり、Ｚ″は−Ｈまたは−ＮＨ２を表す。
Ｒ２およびＲ４は、−Ｈを表し、またはＲ２が−Ｈを表し、Ｒ４がＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、またはＲ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、Ｒ１０が−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表す。
Ｒ３に関して好ましいものは、−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル−であり、それは−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−Ｓ（Ｏ）ｎ−アルキル、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２または−ＮＨ２によって置換されていても良く；アルキルは好ましくはＣ１−３−アルキルであり、ｎは０、１または２である。
Ｒ５について好ましいものは−Ｌ−＃１、−Ｈまたは−Ｆである。
Ｒ６およびＲ７について好ましいものは、互いに独立に、−Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンである。
Ｒ８について好ましいものは、分岐のＣ１−５−アルキル基、特には式−Ｃ（ＣＨ３）２−（ＣＨ２）０−２−Ｒｙの基であり、Ｒｙは−Ｈ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２または−Ｌ−＃１を表す。特に好ましいものは、式−Ｃ（ＣＨ３）２−（ＣＨ２）−Ｒｙの基であり、Ｒｙは−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表す。
Ｒ９について好ましいものは−Ｈまたは−Ｆである。
特に好ましいものは、
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０のうちで−Ｌ−＃１を表すものが全くないか一つであり、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；
Ｘ１がＮＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し
Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−を表し；
Ｒ１が−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″（ＣＨ２）１-３−ＮＨ２および−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨを表し、Ｚ″が−Ｈまたは−ＮＨ２を表し；
Ｒ２およびＲ４が−Ｈを表しまたはＲ２が−Ｈを表し、Ｒ４がＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｐ２およびＰ３は上記で定義のものと同じ意味を有する。）を表し、またはＲ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、Ｒ１０がＨまたは−Ｌ−＃１を表し；
Ｒ３が、ハロゲン（特にはＦ）またはフッ素化されていても良いＣ１−３−アルキルによってモノ置換もしくは多置換されていても良いフェニル基を表すか、フッ素化されていても良いＣ１−１０−アルキル基［それは、−ＯＹ４、−ＳＹ４、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ４、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｙ４、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ４、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｙ４、−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−Ｙ４（ｎは０、１または２を表す。）、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−Ｙ４、−ＮＨ−Ｙ４または−Ｎ（Ｙ４）２によって置換されていても良く、Ｙ４は−Ｈ、フェニル（ハロゲン（特にはＦ）またはフッ素化されていても良いＣ１−３−アルキルによってモノ置換または多置換されていても良い）、またはアルキル（アルキル基は、−ＯＨ、−ＣＯＯＨおよび／または−ＮＨＣ（＝Ｏ）−Ｃ１−３−アルキルによって置換されていても良く、アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルを表す。）を表す。］を表し；
特に好ましくはＲ３が、−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル（ｎは０、１または２を表す。）、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２または−ＮＨ２（アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルを意味する。）によって置換されていても良く、
Ｒ５が−Ｈまたは−Ｆを表し；
Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、−Ｈ、（フッ素化されていても良い）Ｃ１−３−アルキル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルケニル、（フッ素化されていても良い）Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲンを表し；
Ｒ８が分岐のＣ１−５−アルキル基を表し；
Ｒ９が−Ｈまたは−Ｆを表す、式（ＩＩａ）または（ＩＩ）の化合物である。
さらに、（単独でまたは組み合わせて）、
●Ｒ１が−Ｌ−＃１、−ＣＯＯＨまたは−Ｈを表し、
●Ｒ２およびＲ４が互いに独立に−Ｌ−＃１または−Ｈを表し；またはＲ２が−Ｈを表し、Ｒ４がＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｐ２およびＰ３は上記で定義のものと同じ意味を有する。）を表し、またはＲ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、Ｒ１０が−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表し、
●Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、
●Ｒ３が−（ＣＨ２）ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３、フェニル基（１から３個のハロゲン原子、１から３個のアミノ基または１から３個のアルキル基（ハロゲン化されていても良い）によって置換されていても良い。）を表し、または−Ｌ−＃１を表し、
●Ｒ５が−Ｌ−＃１または−Ｈを表し、
●Ｒ６およびＲ７が互いに独立に−Ｈ、Ｃ１−３−アルキルまたはハロゲンを表し；特には、Ｒ６およびＲ７が−Ｆを表し；
●Ｒ８がＣ１−４−アルキル（好ましくはｔｅｒｔ−ブチル）を表し；および／または
●Ｒ９が−Ｈを表し、
●置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す場合が好ましい。
さらに、本発明によれば、
●Ｒ１が−Ｌ−＃１、−ＣＯＯＨまたは−Ｈを表し、
●Ｒ２およびＲ４が互いに独立に−Ｌ−＃１または−Ｈを表し、またはＲ２が−Ｈを表し、Ｒ４がＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｐ２およびＰ３は上記で定義のものと同じ意味を有する。）を表し、またはＲ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、Ｒ１０が−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表し、
●Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、
●Ｒ３が−（ＣＨ２）ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３、フェニル基［１から３個のハロゲン原子、１から３個のアミノ基または１から３個のアルキル基（ハロゲン化されていても良い）によって置換されていても良い。］を表し、−Ｌ−＃１を表し、
●Ｒ５が−Ｌ−＃１または−Ｈを表し、
●Ｒ６およびＲ７が互いに独立に−Ｈ、Ｃ１−３−アルキルまたはハロゲンを表し；特には、Ｒ６およびＲ７が−Ｆを表し；
●Ｒ８がＣ１−４−アルキル（好ましくはｔｅｒｔ−ブチル）を表し；
●Ｒ９が−Ｈを表し、
●置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す場合が好ましい。
他の特に好ましい化合物は、下記式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）を有するもの、ならびにそれの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩である。
式（ＩＩＩａ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し、
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１は−Ｈ、−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３はＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ４はＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基を表し、
Ｒ２１は−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良く、または−Ｈまたは基−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２であり、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表し；
Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎは０、１または２であり、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキル）を表し；
Ｒ５は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、
Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、
ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環（好ましくはオキセタン）を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲによって置換されていても良く；
Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
Ｌはリンカーを表し、
ＢＩＮＤＥＲはバインダーもしくはそれの誘導体を表し、当該バインダーは複数の活性化合物分子に結合していても良く、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３Ｒ４、Ｒ５およびＲ８の一つの代表的なものは−Ｌ−バインダーを表し；
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｈを表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０はＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
Ｒｙは−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、または−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−を表し、
Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有する。
式（ＩＩＩａ）のＫＳＰ阻害剤のバインダー複合体の場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０の多くとも一つの代表的なもの（上記で提供の条件のうちの一つに代えて）が、−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲを表すことができ、Ｌはリンカーを表し、ＢＩＮＤＥＲはバインダーもしくはそれの誘導体を表し、当該バインダーは複数の活性化合物分子に結合していても良い。
式（ＩＩＩ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し、または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し、または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し、または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ｒ１は−Ｈ、−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３はＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２およびＲ４は互いに独立に、−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０はＬ−＃１、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、または−ＯＨを表し；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎは、０、１または２であり、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキル）を表し；
Ｒ５は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、またはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキルまたは置換されていても良いオキセタンを表し；
Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
−Ｌはリンカーを表し、
−ＢＩＮＤＥＲはバインダーもしくはそれの誘導体を表し、当該バインダーは複数の活性化合物分子に結合していても良く、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０の一つの代表的なものは−Ｌ−バインダーを表し；
ならびにそれの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。
さらに、本発明による好ましいものは、次のＫＳＰ阻害剤の複合体である。
式（ＩＩＩｂ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）におけるものと同じ意味を有し（好ましくはＸ１は−ＣＨ−を表し、Ｘ２は−Ｃ−を表し、Ｘ３は−Ｎ−を表す。）、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）におけるものと同じ意味を有し、Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、Ｂは単結合、−Ｏ−ＣＨ２−または−ＣＨ２−Ｏ−を表し、Ｒ２０は−ＮＨ２、−Ｆ、−ＣＦ３または−ＣＨ３を表し、ｎは０、１または２を表す。
式（ＩＩＩｃ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）（好ましくはＸ１は−ＣＨ−を表し、Ｘ２は−Ｃ−を表し、Ｘ３は−Ｎ−を表す。）におけるものと同じ意味を有し；
Ａ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）におけるものと同じ意味を有し、Ａは好ましくは、−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、Ｒ３は−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨまたは−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３を表す。
式（ＩＩＩｄ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）におけるものと同じ意味を有し（好ましくはＸ１は−ＣＨ−を表し、Ｘ２は−Ｃ−を表し、Ｘ３は−Ｎ−を表す。）；
Ａ、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）におけるものと同じ意味を有し、Ａは好ましくは、−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、Ｒ３は−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨを表し、ｘは０または１であり、Ｙ５は−Ｈまたは−ＮＨＹ６を表し、Ｙ６は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３を表す。
式（ＩＩＩｅ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１は−ＣＨ−を表し、Ｘ２は−Ｃ−を表し、Ｘ３は−Ｎ−を表し；
Ａ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、式（ＩＩＩａ）または（ＩＩＩ）におけるものと同じ意味を有し、Ｒ１は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲを表す。
さらに、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）および（ＩＩＩｅ）の化合物において（単独でまたは組み合わせて）、
●ＺがＣｌまたはＢｒを表し；
●Ｒ１が−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２を表し、Ｙ２が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ１が−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−ＣＯＯＨを表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し、Ｙ４基の一方がｉ−プロピルを表し、他方が−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を表し；
●Ｙ１がＨを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し、Ｙ４基の一方が−ＣＨ３を表し、他方が−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を表し；
●Ｙ４が−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
●少なくとも一つのＹ４の代表的なものが、ｉ−プロピルおよび−ＣＨ３からなる群から選択され；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨＹ４ＣＯＯＨを表し、Ｙ４が−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
●Ｙ４がアミノベンジルを表し；
●Ｒ２が−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−ＳＹ３を表し；
●Ｒ４が−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、Ｙ５が−Ｈを表し；
●Ｒ４が−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、Ｙ５が−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し；
●Ｒ４がＲ２１−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｓｎ−＃を表し；
●Ｙ４が−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表す場合が好ましい。
さらに、式（ＩＩａ）または（ＩＩＩａ）におけるＲ１、Ｒ２またはＲ３が−ＭＯＤを表す場合、特にはＲ４が−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲを表す場合（特には−Ｌが、−Ｎ−Ｒ４または−Ｎ−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲで直接開裂する開裂性リンカーであることで、Ｒ４またはＬが−Ｈによって置き換わる場合）が好ましい。
特に好ましくは、Ｒ３は−ＭＯＤを表し、Ｒ１またはＲ４は−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲを表し、
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｈを表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０はＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎは、０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
Ｒｙは−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、または−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−を表し、
Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有する。
特に好ましくは、基−ＭＯＤは、（好ましくは末端）−ＣＯＯＨ基を、例えばベタイン基で有する。好ましくは、基−ＭＯＤは、式−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨを有し、ｘは０または１であり、Ｙ５は−Ｈまたは−ＮＨＹ６を表し、Ｙ６は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３を表す。
他の特に好ましい化合物は、下記の式（ＩＶ）を有するもの、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；
Ｒ１は−Ｈ、−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し，
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３はＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２およびＲ４は互いに独立に−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０はＬ−＃１、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、または−ＯＨを表し；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、または−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨを表し、
ｘは０または１であり、
Ｙ５は−Ｈまたは−ＮＨＹ６を表し、
Ｙ６は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３を表し、
好ましくは−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎは、０、１または２であり、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキル）を表し；
Ｒ５は−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｌはリンカーを表し、
ＢＩＮＤＥＲはバインダーもしくはそれの誘導体を表し、当該バインダーは複数の活性化合物分子に結合していても良く；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し；
Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキルまたは置換されていても良いオキセタンを表し；
Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
ただし、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４が同時に−Ｈを表すことはない。
さらに、式（ＩＩａ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）および（ＩＶ）の化合物において（単独でまたは組み合わせて）、
●ＺがＣｌまたはＢｒを表し；
●Ｒ１が−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２を表し、Ｙ２が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、Ｙ１が−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−ＣＯＯＨを表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し、一方のＹ４の代表的なものがｉ−プロピルを表し、他方が−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を表し；
●Ｙ１がＨを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨＹ４）２ＣＯＯＨを表し、一方のＹ４の代表的なものが−ＣＨ３を表し、他方が−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２を表し；
●Ｙ４が−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
●少なくとも一つのＹ４の代表的なものが、ｉ−プロピルおよび−ＣＨ３からなる群から選択され；
●Ｙ１が−Ｈを表し、Ｙ２が−ＣＨ２ＣＨ２Ｚ′を表し、Ｚ′が−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＣＨＹ４ＣＯＯＨを表し、Ｙ４が−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
●Ｙ４がアミノベンジルを表し；
●Ｒ２が−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚが−ＳＹ３を表し；
●Ｒ４が−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、Ｙ５が−Ｈを表し；
●Ｒ４が−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、Ｙ５が−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し；
●Ｒ４がＲ２１−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｓｎ−＃を表し；
●Ｙ４が−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表す場合が好ましい。
好ましいものは、さらには、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；または
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；または
Ｘ１がＮＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１がＨ、−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３がＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′が−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗが−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４が−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２が−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４が−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５が−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６が直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４が−ＨまたはＲ２１−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｓｎ−を表し；
Ｒ２１が−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良く、または−Ｈまたは基−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２であり、
ｘが０または１であり、
ｖが１から２０の数字であり、
Ｒ２２が−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表し；
Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３が−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎが、０、１または２であり、
Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３が−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
「アルキル」が好ましくは、Ｃ１−１０−アルキル）を表し；
Ｒ５が−Ｈ、−ＭＯＤ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８がＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、Ｃ４−１０−シクロアルキルまたはフルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキルを表し、
置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つが−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲを表し、
Ｌがリンカーを表し、
＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
ＢＩＮＤＥＲがバインダーを表し、
Ｒ９が−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
−ＭＯＤが−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
Ｒ１０が−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎが、０または１であり；
ｏが０または１であり；
Ｇ２が、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
Ｒｙが−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、または−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−を表し、
Ｒｘが−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖が、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｇ３が−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
−ＭＯＤが好ましくは、少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有する、式（ＩＩａ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）または（ＩＶ）の化合物ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
好ましいものはさらに、
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＮを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；または
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表し；または
Ｘ１がＮＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＣを表し；または
Ｘ１がＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２がＮを表し、Ｘ３がＣを表し；
（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１が−Ｈ、−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３がＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′が−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗが−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４が−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２が−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４が−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５が−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６が直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４が−ＨまたはＲ２１−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｓｎ−を表し；
Ｒ２１が−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良く、または−Ｈまたは基−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２であり、
ｘが０または１であり、
ｖが１から２０の数字であり、
Ｒ２２が−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表し；
Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３が−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲ、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎが、０、１または２であり、
Ｚが−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３が−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
「アルキル」が好ましくは、Ｃ１−１０−アルキル）を表し；
Ｒ５が−ＭＯＤ、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特にはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚが−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′が−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、−Ｈまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８がＣ１−１０−アルキルまたはフルオロ−Ｃ１−１０−アルキルを表し、
置換基Ｒ１およびＲ３のうちの一つが−Ｌ−＃１または−Ｌ−ＢＩＮＤＥＲを表し、
Ｌがリンカーを表し、
＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
ＢＩＮＤＥＲがバインダーを表し、
Ｒ９が−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
−ＭＯＤが−ＣＨ２−Ｓｘ−（ＣＨ２）０−４−ＣＨＹ５−ＣＯＯＨを表し、
ｘが０または１であり、、
Ｙ５がＨまたはＮＨＹ６を表し、
Ｙ６がＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３を表す、式（ＩＩａ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）または（ＩＶ）の化合物、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
本発明による特に好ましいものは、下記の式Ｖ、ＶＩおよびＶＩＩの化合物（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は上記で言及の意味を有する（例えば式（ＩＩａ）または（ＩＩＩａ）について挙げたように）。）の複合体である。
Figure 2018528161
特に好ましいものは、Ｒ１およびＲ５が−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表し；Ｒ２およびＲ４が互いに独立に−Ｌ−＃１または−Ｈを表し、またはＲ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、Ｒ１０が−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表し；Ｒ３が−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨまたは−Ｌ−＃１を表し、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す式Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩの化合物である。特別に好ましいものは、相当する式ＶＩの化合物である。
本発明の好ましい抗体薬物複合体（ＡＤＣ類）は、下記式ＶＩＩのものである。
Figure 2018528161
式中、
ｍは０から２の数字であり；
ｎは０または１であり；
Ｘは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｌａは自壊性リンカーを表し；
Ｌｃはリンカーを表し、
Ａ１は、アミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓのうちの一つ由来の残基であり；
Ａ２は、アミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキル−アミノ酸、好ましくはＮ−メチル−アミノ酸のうちの一つ（Ｐ３が複数ある場合、Ｐ３は異なる意味を有することができる。）のうちの一つ由来の残基であり；
Ｄ１は、式ＩＩまたはＩＩａによるＫＳＰ（すなわち、リンカーＬなし）であり；
ＲはＺ１−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−を表し、
ｑは０または１であり、
Ｚ１はＣ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアリール−アルコキシ−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、−ＯＨ、−Ｈまたは基−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ１で１回以上置換されていても良く、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ１は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表し、
ＡＢは抗体を表し、
ｓは１から２０、好ましくは２から８の数字であり、特に好ましくは２から４、例えば４である。
本発明の好ましい抗体プロドラッグ複合体（ＡＰＤＣ類）は、下記式ＩＸのものである。
Figure 2018528161
式中、
ｍは０、１または２であり；
ｎは０または１であり；
Ｘは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｌａは自壊性リンカーを表し；
Ｌｂはリンカーを表し；
Ａ１はアミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓのうちの一つ由来の残基であり；
Ａ２は、アミノ酸Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキル−アミノ酸、好ましくはＮ−メチル−アミノ酸のうちの一つ（Ｐ３が複数ある場合、Ｐ３は異なる意味を有することができる。）のうちの一つ由来の残基であり；
Ｄ１は、式ＩＩまたはＩＩａによるＫＳＰ（すなわち、リンカーＬなし）であり；
ＲはＺ１−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−を表し、
ｑは０または１であり、
Ｚ１はＣ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアリール−アルコキシ−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨ、−Ｈまたは基−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ１で１回以上置換されていても良く、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ１は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２を表し、
ＡＢは抗体を表し、
ｓは１から２０、好ましくは２から８の数字、特に好ましくは２から４、例えば４である。
リンカー
文献に、部位特異的に均一的に、例えば抗体などのバインダーに有機分子を共有結合的にカップリング（結合）させるための多様な選択肢が開示されている（例えば、Ｓｏｃｈａｊ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ、近刊の論文（２０１５）、Ｐａｎｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ ６， ３４−４５（２０１４））参照）。本発明に従って好ましいものは、トランスグルタミナーゼを用いる抗体のアクセプターグルタミン残基を介した抗体へのＫＳＰ阻害剤の結合である。そのようなアクセプターグルタミン類は、突然変異による、または脱グリコシル化抗体の形成による抗体の操作によって導入することができる。抗体における前記アクセプターグルタミン残基の数は、好ましくは２または４である。カップリングのためには、リンカーを用いる。リンカーは、イン・ビボで開裂可能なリンカーの群およびイン・ビボで安定なリンカーの群に分類することができる（Ｌ． Ｄｕｃｒｙ ａｎｄ Ｂ． Ｓｔｕｍｐ， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２１， ５−１３（２０１０）参照）。イン・ビボで開裂可能なリンカーは、イン・ビボで開裂可能な基を有し、そこで、イン・ビボで化学的に開裂可能な基とイン・ビボで酵素的に開裂可能な基の間で区別することが可能である。「イン・ビボで化学的に開裂可能な」および「イン・ビボで酵素的に開裂可能な」は、リンカーまたは基が循環中では安定であり、標的細胞でもしくは標的細胞内でのみ、そこでの化学的もしくは酵素的に異なる環境（比較的低いｐＨ；高いグルタチオン濃度；レグマイン、カテプシンもしくはプラスチンなどのリソソーム酵素、または例えば、β−グルクロニダーゼ類などのグリオシダーゼ類（ｇｌｙｏｓｉｄａｓｅｓ）の存在）によって開裂することで、低分子量ＫＳＰ阻害剤またはそれの誘導体を放出することを意味する。イン・ビボで化学的に開裂可能な基は、特にはジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールおよびアミナールであり；酵素的にイン・ビボで開裂可能な基は、特に２−８−オリゴペプチド基、特別にはジペプチド基またはグリコシドである。ペプチド開裂部位は、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２００２， １３， ８５５−８６９およびＢｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ８ （１９９８） ３３４１−３３４６、さらにはＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １９９８， ９， ６１８−６２６に開示されている。これらには、例えば、バリン−アラニン、バリン−リジン、バリン−シトルリン、アラニン−リジンおよびフェニルアラニン−リジン（適宜に、さらなるアミド基を有する）などがある。
イン・ビボで安定なリンカーは、高い安定性（血漿中２４時間後に５％未満の代謝物）によって区別され、上記のようなイン・ビボで化学的または酵素的に開裂可能基を持たない。
リンカー−Ｌ−は好ましくは、
下記の基本構造（ｉ）から（ｉｖ）：
（ｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−ＳＧ１−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｖ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ２
のうちの一つを有し、
ｍは０または１であり；ＳＧは、（化学的にまたは酵素的に）イン・ビボで開裂可能な基（特に、ジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールおよびアミナール；またはプロテアーゼによって開裂可能な２から８オリゴペプチド基）であり、ＳＧ１はオリゴペプチド基または好ましくはジペプチド基であり、Ｌ１は互いに独立に、イン・ビボで安定な有機基を表し、Ｌ２は、バインダーに対するカップリング基を表す。
本発明に従って特に好ましいものは、特にはバインダーが抗体である場合に、基本的リンカー構造（ｉｉｉ）である。代謝により、基本的リンカー構造（ｉｉｉ）を有する本発明による複合体の投与およびトランスグルタミナーゼを用いるバインダータンパク質またはペプチドのグルタミン残基へのリンカーのカップリングによって、下記式のグルタミン誘導体が生じる。
Figure 2018528161
式中、Ｌ１は、各場合で、低分子量ＫＳＰ阻害剤、例えば式式（Ｉ）、（ＩＩａ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）または（ＩＶ）から（ＩＸ）のいずれかの化合物に結合している。
本発明によれば、Ｌ１は好ましくは、下記式によって表される。
Figure 2018528161
式中、
Ｒ１０は、Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ−（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合はＲ１０は好ましくはＮＨ２ではない。）を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ３は、結合またはアリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する置換されていても良い直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状のアルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−（Ｒｙは、Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、それらはそれぞれ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２Ｎ、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。）、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒｘは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）および／または４個以下のＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−からなる群から選択されるヘテロ原子を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018528161
）の１以上によって１回もしくは複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
Ｇ３は、結合またはアリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する置換されていても良い直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳ、または−Ｓ（＝Ｏ）−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018528161
）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、前記側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
Ｇ３は好ましくは、結合またはアリーレン基からの１から１００個の炭素原子を有する置換されていても良い直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−（Ｒｘは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。）およびＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員、例えば５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018528161
または
Figure 2018528161
）の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
Ｇ３におけるさらなる中断基は、好ましくは
Figure 2018528161
であり、
Ｒｘは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表す。
ここで、＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２はバインダーへのカップリング基への結合である（例えばＬ２）。
アリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基の直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖は通常、言及される個々の数の炭素原子を有するα，ω−二価アルキル基を含む。好ましいものとして挙げることができる例いは、メチレン、エタン−１，２−ジイル（１，２−エチレン）、プロパン−１，３−ジイル（１，３−プロピレン）、ブタン−１，４−ジイル（１，４−ブチレン）、ペンタン−１，５−ジイル（１，５−ペンチレン）、ヘキサン−１，６−ジイル（１，６−ヘキシレン）、ヘプタン−１，７−ジイル（１，７−ヘキシレン）、オクタン−１，８−ジイル（１，８−オクチレン）、ノナン−１，９−ジイル（１，９−ノニレン）、デカン−１，１０−ジイル（１，１０−デシレン）である。しかしながら、炭化水素鎖におけるアルキレン基は分岐であることもでき、すなわち上記で言及の直鎖アルキレン基の１以上の水素原子がＣ１−１０−アルキル基によって置換されていることで、側鎖を形成していることができる。炭化水素鎖はさらに、環状アルキレン基（シクロアルカンジイル）、例えば１，４−シクロヘキサンジイルまたは１，３−シクロペンタンジイルを含んでいても良い。これらの環状基は不飽和であっても良い。特に、その炭化水素基には、芳香族基（アリーレン基）、例えばフェニレンが存在しても良い。そして、環状アルキレン基およびアリーレン基において、やはり、１以上の水素原子がＣ１−１０−アルキル基によって置換されていても良い。このようにして、分岐していても良い炭化水素鎖が形成される。この炭化水素鎖は、合計０から１００個の炭素原子、好ましくは１から５０個、特に好ましくは２から２５個の炭素原子を有する。
側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
当該炭化水素鎖は、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−ならびにＮ、ＯおよびＳ、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族または非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018528161
）の１以上によって同一でまたは異なって１回または複数回中断されていても良い。
Ｇ３におけるさらなる中断基は好ましくは、
Figure 2018528161
である。
本発明によれば、Ｌ２は好ましくは、下記式：
Figure 2018528161
によって表され、
ｐは０または１であり；
ｑは０または１であり；
Ｇ４は、置換されていても良いアルキルまたはヘテロアルキル鎖を表し、その鎖のいずれかの炭素がアルコキシ、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、−Ｓ−アルキル、チオール、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、アミン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良く、
＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示す。
好ましくは、Ｌ２は、次の基のうちの一つ：
Figure 2018528161
であり、
Ｒｙは−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＮＨ２であり、
＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示す。
好ましくはＲｙは、−Ｈまたは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｍｅである。
好ましくは、リンカーは、下記式に相当する。
Figure 2018528161
式中、
ｍは０または１であり；
§は、活性化合物分子への結合を表し、
§§は、バインダーペプチドもしくはタンパク質への結合を表し、
Ｌ１およびＬ２は上記で提供の意味を有する。
上記で言及したリンカーは、リンカーがＲ１もしくはＲ３での水素原子の置換によってカップリングする式（Ｉ）または（ＩＩ）の複合体で、またはＲ４での開裂可能リンカーＳＧ１と組み合わせたものが特に好ましく、すなわちＲ１が−Ｌ−＃１を表し、またはＲ３が−Ｌ−＃１を表し、またはＲ４が−ＳＧ１−Ｌ−＃１を表し、＃１がバインダーへの結合を表す。
上記の式§−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−§§における好ましい基Ｌ１は下記のものであり、各場合でのｒは、互いに独立には、０から２０、好ましくは０から１５、特に好ましくは１から２０、特別に好ましくは２から１０の数字を表す。
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
相当するリンカーを有する複合体の例は、下記の構造を有し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、ＲｙおよびＬ１は上記で提供の意味を有し、ＡＫはバインダー、好ましくはグルタミン側鎖に結合した抗体を表し、ｎは２から１０、好ましくは２から４、そして好ましくは２または４である。特に好ましくは、ＡＫは、ヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体もしくはそれの抗原結合性断片、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体もしくはそれの抗原結合性断片または抗ＥＧＦＲ抗体もしくはそれの抗原結合性断片である。バインダーが抗体である場合、それは優先的に定常領域にアクセプターグルタミンを含む。そのようなアクセプターグルタミン類は、好適な位置のグルタミンへの突然変異（例えば突然変異Ｎ２９７Ｑ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）または脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の形成（例えば、ＰＮＧａｓｅ Ｆによる酵素的脱グリコシルによって、またはＮ２９７Ｘ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリングの突然変異によって）によって導入することができる。その後者の脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の場合、グルタミンＱ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）はアクセプターグルタミンになる。非常に好ましいものは、突然変異Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む抗体である。特に好ましいものは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）でアミノ酸Ｄに特異的に結合している抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０、または抗Ｈｅｒ２抗体である。記載の抗体全てが、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって生じるこれら抗体の脱グリコシル化変異体を含む。
Figure 2018528161
Figure 2018528161
本発明に従って好ましいものはさらに、基本構造（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｖ）であり、それらにおいて、ＳＧ１またはＳＧはカテプシンによって開裂可能な基を表し、Ｌ１およびＬ２は上記で提供の意味を有する。特に好ましいものは、下記の基である。
●−ＮＨ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＣＯＮＨ−（これにより、アラニンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
●−ＮＨ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ＣＯＮＨ−（リジンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
●−ＮＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯＮＨ−（シトルリンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
●−ＮＨ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＣＯＮＨ（リジンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
●−ＮＨ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−ＣＯＮＨ−（リジンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）
●−ＮＨ−Ａｌａ−Ｃｉｔ−ＣＯＮＨ−（シトルリンのＣ末端アミドでのアミド結合の開裂）。
ＳＧ１またはＳＧは特に好ましくは
Figure 2018528161
であり、
Ｘは、−ＨまたはＣ１−１０−アルキル基を表し、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２またはスルホン酸によって置換されていても良い。
下記の表は、リンカー部分−ＳＧ１−Ｌ１−または−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−の例を提供するものであり、ＳＧ１およびＳＧは、カテプシンによって開裂し得る基である。Ｌ１基が四角で強調されている。しかしながら、これらの基Ｌ１は、上記の式§−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−§§について提供される基Ｌ１のうちの一つによって置き換わっていることができる。
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
構造（ｉ）を有する複合体の例は、下記の構造を有し、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｒ１およびＲｙは上記で提供の意味を有し、ＡＫはバインダー、好ましくはグルタミン側鎖に結合した抗体を表し、ｎは２から１０、好ましくは２から４、そして好ましくは２または４である。特に好ましいものは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）でアミノ酸Ｄに特異的に結合している抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０である。記載の抗体全てが、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって生じるこれら抗体の脱グリコシル化変異体を含む。
Figure 2018528161
ＫＳＰ阻害剤−リンカー−中間体および複合体の製造
本発明による複合体は、最初に低分子量ＫＳＰ阻害剤にリンカーを提供することによって製造される。次に、このようにして得られた中間体をトランスグルタミナーゼを用いてバインダー（好ましくは抗体）と反応させる。好ましくは、グルタミン側鎖への部位特異的カップリングのため、下記の化合物のうちの一つを、トランスグルタミナーゼを用いて、抗体などのアクセプターグルタミン含有バインダーと反応させる。
Figure 2018528161
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式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、ＳＧ、Ｌ１、Ｒ１およびＲｙは、上記と同じ意味を有する。上記の式においては、遊離アミノ基（−ＮＨ２）に代えて、基Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−が存在しても良い（Ｒ２１、Ｐ２およびＰ３は、例えば式（ＩＩａ）に関して上記で定義のものと同じ意味を有する。）。
バインダーが抗体である場合、それは優先的に定常領域にアクセプターグルタミンを含む。そのようなアクセプターグルタミン類は、好適な位置のグルタミンへの突然変異（例えば突然変異Ｎ２９７Ｑ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）または脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の形成（例えば、ＰＮＧａｓｅ Ｆによる酵素的脱グリコシルによって、またはＮ２９７Ｘ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリングの突然変異によって）によって導入することができる。その後者の脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の場合、グルタミンＱ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）はアクセプターグルタミンになる。非常に好ましいものは、突然変異Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む抗体である。
当該化合物は、例えばそれのトリフルオロ酢酸塩の形態で用いることができる。例えば抗体との反応に関しては、当該化合物は、バインダーに関して、２から１００倍モル過剰で、より好ましくは１０から１００倍モル過剰で、さらにより好ましくは５０から１００倍モル過剰で用いる。
グルタミン側鎖への中間体カップリングについては、反応は次のように示すことができる。
他の中間体および他の抗体は、それに応じて反応させることができる。
Figure 2018528161
本発明によれば、これは次の複合体を提供する。
Figure 2018528161
上記式において、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＲ１は、式（ＩＩ）におけるものと同じ意味を有し、ＳＧ、ＲｙおよびＬ１は上記のものと同じ意味を有する。ＡＫはグルタミン側鎖にカップリングした抗体である。特に好ましくは、ＡＫ１は、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特にはＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）でアミノ酸Ｄに特異的に結合している抗体、特には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０である。記載の抗体全てが、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって生じるこれら抗体の脱グリコシル化変異体を含む。
特に好ましいＫＳＰ−阻害剤−複合体
特に好ましいものは、次の複合体であり、ＡＫ３ａ、ＡＫ３ｂ、ＡＫ３ｄ、ＡＫ３ｅはバインダー、好ましくは抗体を表し、ｎは２から１０、好ましくは２から４、やはり好ましくは２または４を表す。好ましい抗体は、セクション「ＢＩＮＤＥＲ類」で下記に記載のもの、特には抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ（特にはＡＫ３ａとして）、抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（特にはＡＫ３ｂとして）、トラスツズマブ（ＴＰＰ−７５１０）（トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）（特にはＡＫ３ｄとして）、およびトラスツズマブ（ＴＰＰ−７５１１）（トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）（特にはＡＫ３ｅとして）である。
Figure 2018528161
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置換基の定義
アルキル
アルキルは、１から１０、好ましくは１から６（Ｃ１−Ｃ６−アルキル）、より好ましくは１から４（Ｃ１−Ｃ４−アルキル）、特に好ましくは１から３（Ｃ１−Ｃ３−アルキル）個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐の飽和一価炭化水素基を表す。
好ましいものとして挙げることができる例には、メチル−、エチル−、プロピル−、ブチル−、ペンチル−、ヘキシル−、イソプロピル−、イソブチル−、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル−、イソペンチル−、２−メチルブチル−、１−メチルブチル−、１−エチルプロピル−、１，２−ジメチルプロピル、ネオペンチル−、１，１−ジメチルプロピル−、４−メチルペンチル−、３−メチルペンチル−、２−メチルペンチル−、１−メチルペンチル−、２−エチルブチル−、１−エチルブチル−、３，３−ジメチルブチル−、２，２−ジメチルブチル−、１，１−ジメチルブチル−、２，３−ジメチルブチル−、１，３−ジメチルブチル−、１，２−ジメチルブチル−がある。特に好ましいものは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルまたはｔｅｒｔ−ブチル基である。
ヘテロアルキル
ヘテロアルキルは、上記の「アルキル」下に定義のアルキルを表し、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−によって中断されているものである。
シクロアルキル
シクロアルキルは、３から１０（Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル）、好ましくは３から８（Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル）、特に好ましくは３から７（Ｃ３−Ｃ７−シクロアルキル）個の炭素原子を有する単環式飽和一価炭化水素基を表す。
好ましいものとして挙げることができる単環式シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルがある。
特に好ましいものは、シクロプロピル、シクロペンチルまたはシクロヘキシル基である。
アラルキル
アリール−Ｃ１−Ｃ６−アルキル−は、置換されていても良いアリール基およびＣ１−Ｃ６−アルキル基から構成され、Ｃ１−Ｃ６−アルキル基を介して分子の残りの部分に結合している基を意味するものと理解される。ここで、そのアルキル基は、アルキル下で上記にて提供の意味を有する。
挙げることができる例には、ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル、フェニルペンチルなどがあり、ベンジルが好ましい。
アルコキシ
アルコキシは、１から６（Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ）、好ましくは１から４（Ｃ１−Ｃ４−アルコキシ）、特に好ましくは１から３（Ｃ１−Ｃ３−アルコキシ）個の炭素原子を有する式−Ｏ−アルキルの直鎖もしくは分岐の飽和アルキルエーテル基を表す。
好ましいものとして挙げることができる例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシおよびｎ−ヘキシルオキシがある。
アラルコキシ
アラルコキシは、置換されていても良いアリール基およびＣ１−Ｃ６−アルコキシ基から構成され、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ基を介して分子の残りの部分に結合している基を意味するものと理解される。ここで、アルコキシ基は、上記で定義の意味を有する。
挙げることができる例には、ベンジルオキシ、フェニルエチルオキシ、フェニルプロピルオキシ、フェニルペンチルオキシなどがあり、ベンジルオキシが好ましい。
アルコキシアルキル
アルコキシアルキルは、アルコキシによって置換されたアルキル基を表し、例えばＣ１−Ｃ６−アルコキシ−Ｃ１−Ｃ６−アルキル−またはＣ１−Ｃ３−アルコキシ−Ｃ１−Ｃ３−アルキル−である。
ここで、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ−Ｃ１−Ｃ６−アルキル−は、アルコキシアルキル基が分子の残りの部分にアルキル部分を介して結合していることを意味する。
ヘテロ原子
ヘテロ原子は、酸素、窒素または硫黄原子を意味するものと理解される。
アリール
アリールは炭素原子からなる一価の単環式もしくは二環式芳香環系を表す。例には、ナフチル−およびフェニル−などがあり、好ましいものはフェニル−またはフェニル基である。
ヘテロアリール
ヘテロアリールは、同一であっても異なっていても良い１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を有する１価の単環式もしくは二環式芳香環系を表す。ヘテロ原子は窒素原子、酸素原子または硫黄原子であることができる。結合価は、芳香族炭素原子または窒素原子でのものであることができる。
本発明による単環式ヘテロアリール基は、５個もしくは６個の環原子を有する。
好ましいモノは、１個もしくは２個のヘテロ原子を有するヘテロアリール基である。ここで、特に好ましいものは、１個もしくは２個の窒素原子である。
５個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：
チエニル、チアゾリル、フリル、ピロリル、オキサゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリルおよびチアジアゾリルなどがある。
６個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：
ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニルおよびトリアジニルなどがある。
本発明による二環式ヘテロアリール基は、９個または１０個の環原子を有する。
９個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、次の環：
フタリジル、チオフタリジル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、アゾシニル、インドリジニル、プリニル、インドリニルなどがある。
１０個の環原子を有するヘテロアリール基には、例えば、下記の環：
イソキノリニル、キノリニル、キノリジニル、キナゾリニル、キノキザリニル、シンノリニル、フタラジニル、１，７−および１，８−ナフチリジニル、プテリジニル、クロマニルなどがある。
ヘテロアリールはさらに、部分飽和二環式アリールおよび部分飽和二環式ヘテロアリールの意味を有する。
部分飽和二環式アリールおよび部分飽和二環式ヘテロアリール
部分飽和二環式アリール基またはヘテロアリール基は、各場合で２個の直接隣接する環原子を介して、４から７個の環原子を有し、同一もしくは異なっていても良い１個もしくは２個のヘテロ原子を含んでいても良い脂肪族環状基に縮合しているフェニル基または単環式５員もしくは６員のヘテロアリール基からなる二環式基を表す。そのヘテロ原子は、窒素原子、酸素原子または硫黄原子であることができる。
部分飽和二環式アリール基には、例えば、下記の基：
テトラヒドロナフチル、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシニル、２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラニルおよび１，３−ベンゾジオキソリルなどがある。
部分飽和二環式ヘテロアリール基には、例えば、下記の基：
５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル−および５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニル−などがある。
複素環アルキル
複素環アルキルは、単環式複素環、ヘテロスピロシクロアルキルおよび架橋複素環アルキルを意味する。
単環式複素環
単環式複素環は、同一でも異なっていても良い１、２または３個のヘテロ原子を有する非芳香族単環式環系を意味する。ヘテロ原子は、窒素原子、酸素原子または硫黄原子であることができる。
本発明による単環式複素環環は、３から８個、好ましくは４から７個、特に好ましくは５個もしくは６個の環原子を有することができる。
例えば好ましくは、次のもの：アジリジニル−が、３個の環原子を有する単環式複素環基について挙げられる。
例えば好ましくは、次のもの：アゼチジニル−、オキセタニル−が、４個の環原子を有する単環式複素環基について挙げられる。
例えば好ましくは、次のもの：ピロリジニル−、イミダゾリジニル−、ピラゾリジニル−、ピロリニル−、ジオキソラニル−およびテトラヒドロフラニル−が、５個の環原子を有する単環式複素環基について挙げられる。
例えば好ましくは、次のもの：ピペリジニル−、ピペラジニル−、モルホリニル−、ジオキサニル−、テトラヒドロピラニル−およびチオモルホリニル−が、６個の環原子を有する単環式複素環基について挙げられる。
例えば好ましくは、次のもの：アゼパニル−、オキセパニル−、１，３−ジアゼパニル−、１，４−ジアゼパニル−が、７個の環原子を有する単環式複素環基について挙げられる。
例えば好ましくは、次のもの：オキソカニル−、アゾカニル−が、８個の環原子を有する単環式複素環基について挙げられる。
単環式複素環基の中からは、Ｏ、ＮおよびＳからなる群からの２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の飽和複素環基が好ましい。
特に好ましいものは、モルホリニル−、ピペリジニル−およびピロリジニル−である。
スピロシクロアルキルおよびヘテロスピロシクロアルキル
いずれかの組み合わせで１個、２個、３個もしくは４個の炭素原子が上記で定義のヘテロ原子によって置き換わっているＣ５−Ｃ１２−スピロシクロアルキルまたはＣ５−Ｃ１２−ヘテロスピロシクロアルキルは、１個の共通の原子を共有する二つの飽和環系の縮合を意味するものと理解される。例には、スピロ［２．２］ペンチル、スピロ［２．３］ヘキシル、アザスピロ［２．３］ヘキシル、スピロ［３．３］ヘプチル、アザスピロ［３．３］ヘプチル、オキサアザスピロ［３．３］ヘプチル、チアアザスピロ［３．３］ヘプチル、オキサスピロ［３．３］ヘプチル、オキサザスピロ［３．５］ノニル、オキサザスピロ［３．４］オクチル、オキサザスピロ［５．５］ウンデシル、ジアザスピロ［３．３］ヘプチル、チアザスピロ［３．３］ヘプチル、チアザスピロ［３．４］オクチル、アザスピロ［５．５］デシル、および定義に従ってヘテロ原子によって修飾された変形形態を含むさらなる同族のスピロ［３．４］、スピロ［４．４］、スピロ［５．５］、スピロ［６．６］、スピロ［２．４］、スピロ［２．５］、スピロ［２．６］、スピロ［３．５］、スピロ［３．６］、スピロ［４．５］、スピロ［４．６］およびスピロ［５．６］系がある。好ましいものは、Ｃ６−Ｃ１０−ヘテロスピロシクロアルキル−であり、例えば特に好ましいものは２−アザスピロ［３．３］ヘプチル−、１−チア−６−アザスピロ［３．３］ヘプチル−、２−チア−６−アザスピロ［３．３］ヘプチル−、２−オキサ−６−アザスピロ［３．３］ヘプチル−、２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプチル−、２−オキサ−６−アザスピロ［３．４］オクチル−、２−オキサ−６−アザスピロ［３．５］ノニル−、２−オキサ−７−アザスピロ［３．５］ノニル−、８−アザスピロ［４．５］デシル−、２，８−ジアザスピロ［４．５］デシル−、３−オキサ−１，８−ジアザスピロ［４．５］デシル−である。
ビシクロアルキルおよびヘテロビシクロアルキル
いずれかの組み合わせで上記のように定義のヘテロ原子によって１個、２個、３個もしくは４個の炭素原子が置き換わっているＣ６−Ｃ１２−ビシクロアルキルまたはＣ６−Ｃ１２−ヘテロビシクロアルキルは、２個の直接隣接する原子を共有する二つの飽和環系の縮合体を意味するものと理解される。例には、ビシクロ［２．２．０］ヘキシル−、ビシクロ［３．３．０］オクチル−、ビシクロ［４．４．０］デシル−、ビシクロ［５．４．０］ウンデシル−、ビシクロ［３．２．０］ヘプチル−、ビシクロ［４．２．０］オクチル−、ビシクロ［５．２．０］ノニル−、ビシクロ［６．２．０］デシル−、ビシクロ［４．３．０］ノニル−、ビシクロ［５．３．０］デシル−、ビシクロ［６．３．０］ウンデシル−およびビシクロ［５．４．０］ウンデシル−であり、ヘテロ原子によって修飾された変形形態、例えばアザビシクロ［３．３．０］オクチル−、アザビシクロ［４．３．０］ノニル−、ジアザビシクロ［４．３．０］ノニル−、オキサザビシクロ［４．３．０］ノニル−、チアザビシクロ［４．３．０］ノニル−もしくはアザビシクロ［４．４．０］デシル−、ならびに定義によるさらなる可能な組み合わせから誘導される基である。好ましいものは、Ｃ６−Ｃ１０−ヘテロビシクロアルキルであり、例えば特に好ましいものは、パーヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロリル−、パーヒドロフロ［３，２−ｃ］ピリジニル−、パーヒドロピロロ［１，２−ａ］ピラジニル−、パーヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピロリル−である。
Ｃ６−Ｃ１２−ビシクロアルキル−の好ましい例は、パーヒドロナフタレニル−（デカリニル−）、パーヒドロベンゾアンヌレニル−、パーヒドロアズレニル−、パーヒドロインダニル−、パーヒドロペンタレニル−である。
架橋シクロアルキルおよび架橋複素環アルキル
架橋Ｃ６−Ｃ１２−シクロアルキル−または架橋Ｃ６−Ｃ１２−複素環アルキル−などの架橋Ｃ６−Ｃ１２環系は、互いに直接隣接しない２個の原子を共有する少なくとも二つの飽和環の縮合を意味するものと理解される。これによって、架橋炭素環（架橋シクロアルキル−）またはいずれかの組み合わせで上記で定義のヘテロ原子によって１個、２個、３個もしくは４個の炭素原子が置き換わっている架橋複素環（架橋複素環アルキル−）が生じ得る。例には、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル−、アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル−、オキサザビシクロ［２．２．１］ヘプチル−、チアザビシクロ［２．２．１］ヘプチル−、ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプチル−、ビシクロ［２．２．２］オクチル−、アザビシクロ［２．２．２］オクチル−、ジアザビシクロ［２．２．２］オクチル−、オキサザビシクロ［２．２．２］オクチル−、チアザビシクロ［２．２．２］オクチル−、ビシクロ［３．２．１］オクチル−、アザビシクロ［３．２．１］オクチル−、ジアザビシクロ［３．２．１］オクチル−、オキサザビシクロ［３．２．１］オクチル−、チアザビシクロ［３．２．１］オクチル−、ビシクロ［３．３．１］ノニル−、アザビシクロ［３．３．１］ノニル−、ジアザビシクロ［３．３．１］ノニル−オキサザビシクロ［３．３．１］ノニル−、チアザビシクロ［３．３．１］ノニル−、ビシクロ［４．２．１］ノニル−、アザビシクロ［４．２．１］ノニル−、ジアザビシクロ［４．２．１］ノニル−、オキサザビシクロ［４．２．１］ノニル−、チアザビシクロ［４．２．１］ノニル−、ビシクロ［３．３．２］デシル−、アザビシクロ［３．３．２］デシル−、ジアザビシクロ［３．３．２］デシル−、オキサザビシクロ［３．３．２］デシル−、チアザビシクロ［３．３．２］デシル−またはアザビシクロ［４．２．２］デシル−および定義によるさらなる可能な組み合わせがある。好ましいものは架橋Ｃ６−Ｃ１０−複素環アルキル−であり、例えば特に好ましくは、２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル−、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプチル−、２−オキサ−５−アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル−，８−アザビシクロ［３．２．１］オクチル−、８−オキサ−３−アザビシクロ［３．２．１］オクチル−、３，９−ジアザビシクロ［４．２．１］ノニル−である。
ハロゲン化アルキル基
ハロゲン化アルキル基は、少なくとも１個のハロゲン置換基を有するアルキル基である。ハロ−Ｃ１−Ｃ６−アルキル基は、１から６個の炭素原子および少なくとも１個のハロゲン置換基を有するアルキル基である。複数のハロゲン置換基が存在する場合、これらは互いに異なっていても良い。好ましいものは、フルオロ−Ｃ１−Ｃ６−アルキル、フルオロ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルおよびフルオロ−Ｃ１−Ｃ３−アルキル基である。同様に好ましいものとして挙げることができる例は、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、ペンタフルオロエチル、４，４，５，５，５−ペンタフルオロペンチルまたは３，３，４，４，５，５，５−ヘプタフルオロペンチル基である。
好ましいものは、トリフルオロメチルまたはペンタフルオロエチルなどのパーフルオロアルキル基である。
さらなる定義
「ＴＧａｓｅ」または「ＴＧ」と互換的に用いられる「トランスグルタミナーゼ」という用語は、ペプチド結合グルタミンのγ−カルボキサミド基とリジンもしくは構造的に関連のある１級アミン、例えばアミノペンチル基、例えばペプチド結合リジンのε−アミノ基との間のアシル転位反応によるタンパク質を架橋して８−（ｙ−グルタミル）リジンイソペプチド結合を形成することができる酵素を指す。ＴＧａｓｅ類には、特には、細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）、例えばＥＣ参照番号ＥＣ２．３．２．１３を有する酵素（タンパク質−グルタミン−ｙ−グルタミルトランスフェラーゼ）などがある。
抗体のアミノ酸残基を指す場合の「アクセプターグルタミン」という用語は、好適な条件下でＴＧａｓｅによって認識され、グルタミンとリジンもしくは構造的に関連する１級アミン、例えばアミノペンチル基との間の反応によりＴＧａｓｅによって架橋され得るグルタミン残基を意味する。適宜に、アクセプターグルタミンは、表面露出グルタミンである。
本明細書において「アミノ酸修飾」または「突然変異」は、ポリペプチド配列におけるアミノ酸置換、挿入および／または欠失を意味する。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は置換である。本明細書における「アミノ酸置換」または「置換」は、タンパク質配列における所定位置での別のアミノ酸によるアミノ酸の置き換えを意味する。例えば、置換Ｙ５０Ｗは、位置５０でのチロシンがトリプトファンによって置き換わっている親ポリペプチドの変異体を指す。ポリペプチドの「変異体」は、基準ポリペプチド、代表的には天然もしくは「親」ポリペプチドと実質的に同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。ポリペプチド変異体は、天然アミノ酸配列内の一定の位置での１以上のアミノ酸置換、欠失および／または挿入を有することができる。
「部位特異的複合体」という用語は、バインダー、好ましくは抗体、および部分の複合体、好ましくはリンカー−薬物−部分を指し、そのバインダーは、バインダーの１以上の所定の位置、好ましくはグルタミン残基で官能化されている。細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）（ＥＣ２．３．２．１３）などのトランスグルタミナーゼ類（ＴＧａｓｅ）は、グルタミンタンパク質基質の認識において厳密な特異性を示し、「部位特異的複合体化」を触媒することができる。
「均一複合体」または「均一ＡＤＣ」という用語は、バインダーの少なくとも６０、７０、８０または９０％がバインダー当たり同数の複合体化部分を有する部位特異的複合体の組成を指す。抗体の場合、抗体当たりの複合体化部分の数は、偶数、優先的には２または４になるものと考えられる。
バインダー
最も広い意味で、「バインダー」という用語は、バインダー／活性化合物複合体によって処理されるある種の標的細胞群で存在する標的分子に結合する分子を意味するものと理解される。バインダーという用語は、それの最も広い意味で理解されるべきであり、例えば、レクチン類、ある種の糖鎖に結合することができるタンパク質、およびリン脂質結合タンパク質も含む。そのようなバインダーには、例えば、高分子量タンパク質（結合タンパク質）、ポリペプチド類またはペプチド類（結合ペプチド）、非ペプチド（例えば、Ｋｅｅｆｅ ＡＤ．， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｒｅｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ． ２０１０；９：５３７−５５０による総覧があるアプタマー類（ＵＳ５，２７０，１６３））、またはビタミン類）および全ての他の細胞結合性の分子もしくは物質などがある。結合タンパク質は、例えば、脱グリコシル化変異体を含む抗体、および抗体断片または抗体模倣体、例えばアフィボディ類、アドネクチン類、アンチカリン類、ＤＡＲＰｉｎ類、アビメール類、ナノボディ類である（Ｇｅｂａｕｅｒ Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ．２００９；１３：２４５−２５５；Ｎｕｔｔａｌｌ Ｓ．Ｄ． ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２００８；８：６０８−６１７による総覧）。結合ペプチドは、例えば、リガンド／受容体対のリガンド、例えばリガンド／受容体対ＶＥＧＦ／ＫＤＲのＶＥＧＦ、例えばリガンド／受容体対トランスフェリン／トランスフェリン受容体のトランスフェリンまたはサイトカイン／サイトカイン受容体、例えばリガンド／受容体対ＴＮＦα／ＴＮＦα受容体のＴＮＦαである。
「バインダー」は、細菌トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ）（ＥＣ２．３．２．１３）などのトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）によって官能化することができるアクセプターグルタミン残基を含む。このアクセプターグルタミンは、バインダーの変化のない天然のものであるか、発生されたものである。アクセプターグルタミンは、好適な位置でのグルタミン残基の挿入（例えば、アクセプターグルタミンを含む標識への融合を介して）、好適な位置のグルタミン残基への突然変異、アミノ酸残基の突然変異（その突然変異は、以前にはＴＧａｓｅによって認識されなかった天然グルタミン残基がアクセプターグルタミンとなる効果を有する。）、または翻訳後修飾（例えばグリコシル化）の変化（その変化は、以前にはＴＧａｓｅによって認識されなかった天然グルタミン残基がアクセプターグルタミンとなる効果を有する。）によって形成されるものと考えられる。バインダーが抗体である場合、それは優先的に定常領域にアクセプターグルタミンを含む。そのようなアクセプターグルタミン類は、好適な位置のグルタミンへの突然変異（例えば突然変異Ｎ２９７Ｑ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）または脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の形成（例えば、ＰＮＧａｓｅ Ｆによる酵素的脱グリコシルによって、またはＮ２９７Ｘ、Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリングの突然変異によって）によって導入することができる。その後者の脱グリコシルまたは脱グリコシル化抗体の場合、グルタミンＱ２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）はアクセプターグルタミンになる。非常に好ましいものは、突然変異Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含む抗体である。
本明細書における「脱グリコシル抗体」または「脱グリコシル化抗体」または「脱グリコシル抗体」という用語は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおける保存Ｎ連結部位に結合したグリカンを持たないＦｃ領域を含む抗体または抗体誘導体を定義するのに用いられる。脱グリコシル抗体は、例えば、Ｎ２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリングを使用）の重鎖グリコシル化部位の突然変異によって、またはグリコシル化がない発現系での抗体の発現によって製造することができる。抗体の酵素的脱グリコシル方法は、当業界で公知である（例えば、Ｗｉｎｋｅｌｈａｋｅ ＆ Ｎｉｃｏｌｓｏｎ （１９７６）， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２５１（４）：１０７４−８０）。脱グリコシル化抗体は、例えばＰＮＧａｓｅＦを用いる酵素的脱グリコシルによって製造することができる。本発明の１実施形態において、脱グリコシル抗体は、原核生物宿主での抗体発現によって製造することができる。好適な原核生物宿主には、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ならびにシュードモナス属、ストレプトミセス属およびスタフィロコッカス属の各種生物種などがあるが、これらに限定されるものではない。本発明の別の実施形態において、脱グリコシル抗体は、グリコシル化阻害剤ツニカマイシンとともに哺乳動物発現系を用いることで達成することができる（Ｎｏｓｅ ＆ Ｗｉｇｚｅｌｌ （１９８３）， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ８０（２１）：６６３２−６）。すなわち、その修飾は、前記抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインにおける保存Ｎ連結部位でのグリコシル化の防止である。
文献には、有機分子の抗体への均一部位特異的共有結合カップリング（複合体化）の各種選択肢も開示されている。本発明による好ましいものは、抗体の二つもしくは四つのアクセプターグルタミン残基を介した抗体への担毒体の結合である。
最も広い意味での「標的分子」は、標的細胞群に存在し、タンパク質（例えば、増殖因子の受容体）または非ペプチド分子（例えば、糖またはリン脂質）であることができる分子を意味するものと理解される。それは好ましくは、受容体または抗原である。
「細胞外」標的分子という用語は、細胞外にあって細胞に結合した標的分子、または細胞外にある標的分子の一部を説明するものである。すなわちバインダーは、無傷細胞上で、それの細胞外標的分子に結合することができる。細胞外標的分子は、細胞膜に固定されることができるか、細胞膜の構成成分であることができる。当業者であれば、細胞外標的分子を識別する方法については知っている。タンパク質の場合、それは、膜貫通ドメインおよび膜におけるタンパク質の配向を確認することで行い得る。これらのデータは通常、タンパク質データベースに寄託される（例えばＳｗｉｓｓＰｒｏｔ）。
「癌標的分子」という用語は、同じ組織型の非癌細胞上より１以上の癌細胞種上で豊富に存在する標的分子を説明するものである。好ましくは、癌標的分子は、同じ組織型の非癌細胞と比較して１以上の癌細胞種上に選択的に存在し、「選択的に」とは、同じ組織型の非癌細胞と比較して癌細胞上で少なくとも２倍豊富であることを説明するものである（「選択的癌標的分子」）。癌標的分子を用いることで、本発明による複合体を用いる癌細胞の選択的療法が可能となる。
バインダーは、結合を介してリンカーに結合していることができる。バインダーの結合は、グルタミン側鎖のカルボニル官能基を介したものであることができる。好ましくは、そのようなグルタミン残基は、細菌トランスグルタミナーゼによって基質として認識される。本発明によるグルタミン残基は、天然バインダー中に存在し得るか、分子生物学の方法によって、例えばＰＮＧａｓｅＦによる抗体の脱グリコシルもしくは突然変異の導入によって導入することができる。本発明によれば、担毒体へのバインダーの結合は、標的分子に関してバインダーの結合活性に対するごくわずかな効果しか持たない。好ましい実施形態において、その結合は、標的分子に関してバインダーの結合アフィニティおよび特異性に対して全く効果を持たない。
本発明によれば、「抗体」という用語は、それの最も広い意味で理解すべきであり、免疫グロブリン分子、例えば無傷もしくは修飾モノクローナル抗体、脱グリコシル化抗体、ポリクローナル抗体または多特異的抗体（例えば二重特異抗体）を含む。免疫グロブリン分子は好ましくは、代表的にはジスルフィド架橋によって連結される四つのポリペプチド鎖、二つの重鎖（Ｈ鎖）および二つの軽鎖（Ｌ鎖）を有する分子を含む。各重鎖は、重鎖の可変ドメイン（略称ＶＨ）および重鎖の定常ドメインを含む。重鎖の定常ドメインは、例えば、三つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含むことができる。各軽鎖は、可変ドメイン（略称ＶＬ）および定常ドメインを含む。軽鎖の定常ドメインは、ドメイン（略称ＣＬ）を含む。ＶＨおよびＶＬドメインは、超可変性を有する領域［相補性決定領域（略称ＣＤＲ）とも称される］および低い配列可変性を有する領域（フレームワーク領域、略称ＦＲ）にさらに細分することができる。代表的には、各ＶＨおよびＶＬ領域は、三つのＣＤＲおよび四つ以下のＦＲからなる。例えば、アミノ末端からカルボキシ末端に次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４である。抗体は、いずれか好適な生物種、例えばウサギ、ラマ、ラクダ、マウスまたはラットから得ることができる。１実施形態において、抗体は、ヒトまたはマウス起源のものである。抗体は、例えばヒト、ヒト化またはキメラであることができる。
「モノクローナル」抗体という用語は、実質的に均一な抗体の群から得られる抗体を指し、すなわち、その群の個々の抗体は、数が少ない可能性がある自然突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高い特異性を有する単一抗原性結合部位を認識する。モノクローナル抗体という用語は、特定の製造プロセスを指さない。
「無傷」抗体という用語は、軽鎖および重鎖の抗原結合ドメインおよび定常ドメインの両方を含む抗体を指す。定常ドメインは、多くの修飾アミノ酸位置を有する天然ドメインまたはそれの変異体であることができ、脱グリコシル化されていることもできる。
「修飾無傷」抗体という用語は、抗体起源ではないさらなるポリペプチドもしくはタンパク質との共有結合（例えば、ペプチド結合）によってアミノ末端またはカルボキシ末端を介して融合した無傷抗体を指す。さらに、抗体を修飾して、定義の位置で、反応性システインを導入して、担毒体へのカップリングを促進するようにすることができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００８， Ａｕｇ．， ２６（８）：９２５−３２参照）。
「ヒト」抗体という用語は、ヒトから得ることができるか、合成ヒト抗体である抗体を指す。「合成」ヒト抗体は、ヒト抗体配列の分析に基づいて合成配列からイン・シリコで部分的または完全に得ることができる抗体である。ヒト抗体は、例えば、ヒト起源の抗体配列のライブラリから単離された核酸によってコードされ得る。そのような抗体の例が、Ｓｏｄｅｒｌｉｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２０００， １８：８５３−８５６にある。そのような「ヒト「」および「合成」抗体には、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって形成される脱グリコシル化変異体も含まれる。
「ヒト化」または「キメラ」抗体という用語は、配列の非ヒトおよびヒト部分からなる抗体を説明するものである。これらの抗体において、ヒト免疫グロブリン（受容体）の配列の一部が、非ヒト免疫グロブリン（供与体）の配列部分によって置き換わっている。多くの場合で、供与体はマウス免疫グロブリンである。ヒト化抗体の場合、受容体のＣＤＲのアミノ酸が、供与体のアミノ酸によって置き換わっている。場合により、フレームワークのアミノ酸も、供与体の相当するアミノ酸によって置き換わっている。場合により、ヒト化抗体は、抗体の至適化時に導入された、受容体にも供与体にも存在しないアミノ酸を含む。キメラ抗体の場合、供与体免疫グロブリンの可変ドメインが、ヒト抗体の定常領域と融合している。そのような「ヒト化」および「キメラ」抗体には、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって形成される脱グリコシル化変異体も含まれる。
本明細書で使用される相補性決定領域（ＣＤＲ）という用語は、抗原への結合に必要な可変抗体ドメインのアミノ酸を指す。代表的には、各可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と称される三つのＣＤＲ領域を有する。各ＣＤＲ領域は、カバットの定義によるアミノ酸および／またはコチアに従って定義される超可変ループのアミノ酸を包含することができる。カバットによる定義は、例えば、可変軽鎖のほぼアミノ酸位置２４から３４（ＣＤＲ１）、５０から５６（ＣＤＲ２）および８９から９７（ＣＤＲ３）、そして可変重鎖の３１から３５（ＣＤＲ１）、５０から６５（ＣＤＲ２）および９５から１０２（ＣＤＲ３）からの領域を含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ．（１９９１））。コチアによる定義は、例えば、可変軽鎖のほぼアミノ酸位置２６から３２（ＣＤＲ１）、５０から５２（ＣＤＲ２）および９１から９６（ＣＤＲ３）そして可変重鎖の２６から３２（ＣＤＲ１）、５３から５５（ＣＤＲ２）および９６から１０１（ＣＤＲ３）の領域を含む（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ； Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１−９１７（１９８７））。場合により、ＣＤＲは、カバットおよびコチアに従って定義されるＣＤＲ領域からのアミノ酸を含むことができる。
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は異なる群に分けることができる。無傷抗体の主要な５群：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、さらなる下位群（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けることができる。異なる群に相当する重鎖の定常ドメインは、［アルファ／α］、［デルタ／δ］、［イプシロン／ε］、［ガンマ／γ］および［ミュー（ｍｙ）／μ］と称される。抗体の三次元構造およびサブユニット構造の両方が公知である。
抗体／免疫グロブリンの「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」という用語は、やはり抗体／免疫グロブリンの抗原結合性ドメインを含む抗体／免疫グロブリンの断片（例えば、ＩｇＧの可変ドメイン）と定義される。抗体の「抗原結合性ドメイン」は代表的には、抗体の１以上の超可変領域、例えばＣＤＲ、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域を含む。しかしながら、抗体の「フレームワーク」または「骨格」領域は、抗原に対する抗体の結合時に関与し得る。そのフレームワーク領域は、ＣＤＲの骨格を形成する。好ましくは、抗原結合性ドメインは、少なくとも可変軽鎖のアミノ酸４から１０３および可変重鎖のアミノ酸５から１０９、より好ましくは可変軽鎖のアミノ酸３から１０７および可変重鎖の４から１１１、特に好ましくは完全な可変軽および重鎖、すなわちＶＬのアミノ酸１から１０９およびＶＨの１から１１３（ＷＯ９７／０８３２０による番号付け）を含む。
本発明の「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２およびＦｖ断片、二重特異抗体、単一ドメイン抗体（ＤＡｂｓ）、線状抗体、抗体の個々の鎖（単鎖Ｆｖ、略称ｓｃＦｖ）；および多特異的抗体、例えば二重特異抗体および三重特異抗体、例えば抗体断片から形成されるものを包含するが、これらに限定されるものではない（Ｃ． Ａ． Ｋ Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ， ｅｄｉｔｏｒ （１９９５） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ （Ｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｒ． Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ＆Ｓ． Ｄｕｅｂｅｌ， ｅｄｉｔｏｒｓ （２００１） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ）。「多特異的」または「多機能性」抗体以外の抗体は、同一の結合部位を有するものである。多特異的抗体は、抗原の異なるエピトープに特異的であることができるか、複数の抗原のエピトープに特異的であることができる（例えば、ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔ， ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：６０ ６９；米国特許第４，４７４，８９３号；同４，７１４，６８１号；同４，９２５，６４８号；同５，５７３，９２０号；同５，６０１，８１９号；またはＫｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４８：１５４７１５５３参照）。Ｆ（ａｂ′）２またはＦａｂ分子は、Ｃｈ１ドメインとＣＬドメインの間で起こる分子間ジスルフィド相互作用の作用を低減または完全に防止することができるように構築することができる。
「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合する能力を有するタンパク質決定基を指す。エピトープ決定基は通常、アミノ酸もしくは糖側鎖またはそれらの組み合わせなどの分子の化学的に活性な表面基からなり、通常は特異な三次元構造特性を有し、特異な電荷特性も有する。
「機能性断片」または「抗原結合性抗体断片」は、それのアミノ末端またはカルボキシル末端を介して、共有結合（例えばペプチド連結）によって、抗体を起源としない別のポリペプチドまたはタンパク質と融合していることができる。さらに、抗体および抗原結合性断片を、規定の場所で反応性システインを導入することで修飾して、担毒体へのカップリングを促進することができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００８ Ａｕｇ；２６（８）：９２５−３２参照）。
ポリクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる（Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ, Ｎａｔｕｒｅ, ２５６, ４９５−４９７, １９７５）。ヒトおよびヒト化モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって作ることができる（Ｏｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．, Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ９２, ３−１６またはＣａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ ＵＳ ４，８１６，５６７またはＢｏｓｓ ｅｔ ａｌ ＵＳ４，８１６，３９７）。
当業者は、例えば、トランスジェニックマウス（Ｎ Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｄ Ｈｕｓｚａｒ， Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９５； １３（１）：６５−９３）またはファージ提示技術（Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ． １９９１ Ａｕｇ １５；３５２（６３３６）：６２４−８）によってヒト抗体およびそれの断片を作る多様な方法を知っている。本発明の抗体は、例えば非常に多数の健常志願者から集めた非常に多数の抗体のアミノ酸配列からなる組換え抗体ライブラリーから得ることができる。抗体は、公知の組換えＤＮＡ技術によって作ることも可能である。抗体の核酸配列は、通常の配列決定によって得ることができるか、公開でアクセス可能なデータベースから入手することができる。
「単離」抗体またはバインダーは、精製されて細胞の他の構成要素が除去されたものである。診断的使用または治療的使用を妨害し得る細胞の汚染構成要素は、例えば、酵素類、ホルモン類、または細胞の他のペプチドもしくは非ペプチド構成要素である。好ましい抗体またはバインダーは、抗体またはバインダーに対して９５重量％強の範囲（例えばローリー法、ＵＶ−Ｖｉｓスペクトル分析またはＳＤＳキャピラリーゲル電気泳動によって測定）まで精製されているものである。さらに、アミノ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個のアミノ酸を決定することができる程度まで精製されている抗体、または均一となるまで精製された（均一性は還元条件もしくは非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって決定される（検出は、クマシー・ブルー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｌａｕ）染色または好ましくは銀着色によって決定することができる。）。）抗体である。しかしながら、抗体は通常は、１以上の精製段階によって得られる。
「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原／標的分子に結合する抗体またはバインダーを指す。抗体またはバインダーの特異的結合は代表的には、少なくとも１０−７Ｍのアフィニティを有する抗体またはバインダーを説明するものであり（Ｋｄ値として；すなわち好ましくは１０ −７ Ｍより小さいＫｄ値を有するもの）、その抗体またはバインダーは所定の抗原／標的分子でも非常に関連の深い抗原／標的分子でもない非特異的抗原／標的分子（例えばウシ血清アルブミンまたはカゼイン）に対してより、所定の抗原／標的分子に対して少なくとも２倍高いアフィニティを有する。その抗体は好ましくは、少なくとも１０−７Ｍ（Ｋｄ値として；すなわち、好ましくは１０−７Ｍより小さいＫｄ値を有するもの）、好ましくは少なくとも１０−８Ｍ、より好ましくは１０−９Ｍから１０−１１Ｍの範囲のアフィニティを有する。Ｋｄ値は、例えば表面プラズモン共鳴分光法によって測定することができる。
本発明の抗体−薬物複合体は同様に、これらの範囲のアフィニティを示す。そのアフィニティは、好ましくは薬物の結合によってほとんど影響を受けない（概して、そのアフィニティは一桁未満低下し、すなわち、例えば、多くとも１０−８Ｍから１０−７Ｍである。）。
本発明に従って使用される抗体は、好ましくは高い選択性についても注目すべきものである。高い選択性が存在するのは、本発明の抗体が、独立の他の抗原、例えばヒト血清アルブミンに対してより少なくとも２倍、好ましくは５倍、またはより好ましくは１０倍良好な標的タンパク質に対するアフィニティを示す場合である（アフィニティは、例えば表面プラズモン共鳴分光法によって測定することができる。）。
さらに、使用される本発明の抗体は、好ましくは交差反応性である。前臨床試験、例えば毒性試験または活性試験（例えば、異種移植マウスでの試験）を容易にし、より良好に解釈できるようにするために、本発明に従って使用される抗体がヒト標的タンパク質に結合するだけでなく、試験に用いられる生物における生物標的タンパク質にも結合する場合が有利である。１実施形態において、本発明に従って使用される抗体は、ヒト標的タンパク質に加えて、少なくとも一つの別の生物種の標的タンパク質に対して交差反応性である。毒性試験および活性試験に関しては、齧歯類、イヌおよび非ヒト霊長類の科の生物を用いることが好ましい。好ましい齧歯類種は、マウスおよびラットである。好ましい非ヒト霊長類は、アカゲザル、チンパンジーおよびカニクイザルである。
１実施形態において、本発明に従って用いられる抗体は、ヒト標的タンパク質に加えて、マウス、ラットおよびカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）からなる生物種の群から選択される少なくとも一つの別の生物種の標的タンパク質に対して交差反応性である。特別に好ましいものは、ヒト標的タンパク質に加えて、少なくともマウス標的タンパク質に対して交差反応性である本発明に従って用いられる抗体である。好ましいものは、前記別の非ヒト生物種の標的タンパク質に対するアフィニティがヒト標的タンパク質に対するアフィニティと５０倍まで、詳細には１０倍まで異なる交差反応性抗体である。
癌標的分子に対する抗体
バインダー、例えば抗体またはそれの抗原結合性断片が向かう標的分子は、好ましくは癌標的分子である。「癌標的分子」という用語は、同じ組織型の非癌細胞上より１以上の癌細胞種上で豊富に存在する標的分子を説明するものである。好ましくは、癌標的分子は、同じ組織型の非癌細胞と比較して１以上の癌細胞種上に選択的に存在し、「選択的に」とは、同じ組織型の非癌細胞と比較して癌細胞上で少なくとも２倍豊富であることを説明するものである（「選択的癌標的分子」）。癌標的分子を用いることで、本発明による複合体を用いる癌細胞の選択的療法が可能となる。
抗原、例えば癌細胞抗原に対して特異的である抗体は、当業者が熟知している方法（例えば、組み換え発現）、または市販の方法（例えば、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ， Ｇｅｒｍａｎｙから）によって、当業者が製造することができる。癌療法における公知の市販抗体の例には、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ、Ｒｏｃｈｅ）およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）である。トラスツズマブは、細胞に基づくアッセイで（Ｋｄ＝５ｎＭ）、ヒト表皮成受容体の細胞外ドメインに高アフィニティで結合するＩｇＧ１κ型の組み換えヒト化モノクローナル抗体である。その抗体は、ＣＨＯ細胞で組み換え的に産生される。これらの抗体はいずれも、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって形成されるこれら抗体の脱グリコシル化変異体としても製造され得る。
好ましい実施形態において、標的分子は選択的癌標的分子である。
特に好ましい実施形態において、標的分子はタンパク質である。
１実施形態において、標的分子は細胞外標的分子である。好ましい実施形態において、細胞外標的分子はタンパク質である。
癌標的分子は当業者には公知である。これらの例を以下に列記する。
癌標的分子の例は次のものである。
（１）ＥＧＦ受容体（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００５２１９．２）、配列番号２１３（１２１０アミノ酸）：
＞ｇｉ｜２９７２５６０９｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００５２１９．２｜ＥＧＦＲ受容体前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＲＰＳＧＴＡＧＡＡＬＬＡＬＬＡＡＬＣＰＡＳＲＡＬＥＥＫＫＶＣＱＧＴＳＮＫＬＴＱＬＧＴＦＥＤＨＦＬＳＬＱＲＭＦＮＮＣＥＶＶＬＧＮＬＥＩＴＹＶＱＲＮＹＤＬＳＦＬＫＴＩＱＥＶＡＧＹＶＬＩＡＬＮＴＶＥＲＩＰＬＥＮＬＱＩＩＲＧＮＭＹＹＥＮＳＹＡＬＡＶＬＳＮＹＤＡＮＫＴＧＬＫＥＬＰＭＲＮＬＱＥＩＬＨＧＡＶＲＦＳＮＮＰＡＬＣＮＶＥＳＩＱＷＲＤＩＶＳＳＤＦＬＳＮＭＳＭＤＦＱＮＨＬＧＳＣＱＫＣＤＰＳＣＰＮＧＳＣＷＧＡＧＥＥＮＣＱＫＬＴＫＩＩＣＡＱＱＣＳＧＲＣＲＧＫＳＰＳＤＣＣＨＮＱＣＡＡＧＣＴＧＰＲＥＳＤＣＬＶＣＲＫＦＲＤＥＡＴＣＫＤＴＣＰＰＬＭＬＹＮＰＴＴＹＱＭＤＶＮＰＥＧＫＹＳＦＧＡＴＣＶＫＫＣＰＲＮＹＶＶＴＤＨＧＳＣＶＲＡＣＧＡＤＳＹＥＭＥＥＤＧＶＲＫＣＫＫＣＥＧＰＣＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭＲＲＲＨＩＶＲＫＲＴＬＲＲＬＬＱＥＲＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＴＱＬＭＰＦＧＣＬＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧＦＦＳＳＰＳＴＳＲＴＰＬＬＳＳＬＳＡＴＳＮＮＳＴＶＡＣＩＤＲＮＧＬＱＳＣＰＩＫＥＤＳＦＬＱＲＹＳＳＤＰＴＧＡＬＴＥＤＳＩＤＤＴＦＬＰＶＰＥＹＩＮＱＳＶＰＫＲＰＡＧＳＶＱＮＰＶＹＨＮＱＰＬＮＰＡＰＳＲＤＰＨＹＱＤＰＨＳＴＡＶＧＮＰＥＹＬＮＴＶＱＰＴＣＶＮＳＴＦＤＳＰＡＨＷＡＱＫＧＳＨＱＩＳＬＤＮＰＤＹＱＱＤＦＦＰＫＥＡＫＰＮＧＩＦＫＧＳＴＡＥＮＡＥＹＬＲＶＡＰＱＳＳＥＦＩＧＡ
細胞外ドメインは下線によって印を付けている。
（２）メソテリン（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ参照番号Ｑ１３４２１−３）、配列番号２１４（６２２アミノ酸）：
＞ｓｐ｜Ｑ１３４２１−３｜ＭＳＬＮ＿ＨＵＭＡＮメソテリンＯＳ＝ホモ・サピエンスＧＮ＝ＭＳＬＮのアイソフォーム２
ＭＡＬＰＴＡＲＰＬＬＧＳＣＧＴＰＡＬＧＳＬＬＦＬＬＦＳＬＧＷＶＱＰＳＲＴＬＡＧＥＴＧＱＥＡＡＰＬＤＧＶＬＡＮＰＰＮＩＳＳ
ＬＳＰＲＱＬＬＧＦＰＣＡＥＶＳＧＬＳＴＥＲＶＲＥＬＡＶＡＬＡＱＫＮＶＫＬＳＴＥＱＬＲＣＬＡＨＲＬＳＥＰＰＥＤＬＤＡＬＰＬ
ＤＬＬＬＦＬＮＰＤＡＦＳＧＰＱＡＣＴＲＦＦＳＲＩＴＫＡＮＶＤＬＬＰＲＧＡＰＥＲＱＲＬＬＰＡＡＬＡＣＷＧＶＲＧＳＬＬＳＥＡ
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ＡＣＰＳＧＫＫＡＲＥＩＤＥＳＬＩＦＹＫＫＷＥＬＥＡＣＶＤＡＡＬＬＡＴＱＭＤＲＶＮＡＩＰＦＴＹＥＱＬＤＶＬＫＨＫＬＤＥＬＹ
ＰＱＧＹＰＥＳＶＩＱＨＬＧＹＬＦＬＫＭＳＰＥＤＩＲＫＷＮＶＴＳＬＥＴＬＫＡＬＬＥＶＮＫＧＨＥＭＳＰＱＶＡＴＬＩＤＲＦＶＫ
ＧＲＧＱＬＤＫＤＴＬＤＴＬＴＡＦＹＰＧＹＬＣＳＬＳＰＥＥＬＳＳＶＰＰＳＳＩＷＡＶＲＰＱＤＬＤＴＣＤＰＲＱＬＤＶＬＹＰＫＡ
ＲＬＡＦＱＮＭＮＧＳＥＹＦＶＫＩＱＳＦＬＧＧＡＰＴＥＤＬＫＡＬＳＱＱＮＶＳＭＤＬＡＴＦＭＫＬＲＴＤＡＶＬＰＬＴＶＡＥＶＱ
ＫＬＬＧＰＨＶＥＧＬＫＡＥＥＲＨＲＰＶＲＤＷＩＬＲＱＲＱＤＤＬＤＴＬＧＬＧＬＱＧＧＩＰＮＧＹＬＶＬＤＬＳＭＱＥＡＬＳＧＴ
ＰＣＬＬＧＰＧＰＶＬＴＶＬＡＬＬＬＡＳＴＬＡ
メソテリンは、アミノ酸２９６から５９８によってコードされる。アミノ酸３７−２８６は、巨核球強化因子をコードしている。メソテリンは、ＧＰＩアンカーを介して細胞膜に固定されており、細胞外で局在している。
（３）炭酸脱水酵素ＩＸ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ参照番号Ｑ１６７９０）、配列番号２１５（４５９アミノ酸）：
＞ｓｐ｜Ｑ１６７９０｜ＣＡＨ９＿ＨＵＭＡＮ炭酸脱水酵素９ＯＳ＝ホモ・サピエンスＧＮ＝ＣＡ９ＰＥ＝１ＳＶ＝２
ＭＡＰＬＣＰＳＰＷＬＰＬＬＩＰＡＰＡＰＧＬＴＶＱＬＬＬＳＬＬＬＬＶＰＶＨＰＱＲＬＰＲＭＱＥＤＳＰＬＧＧＧＳＳＧＥＤＤＰＬ
ＧＥＥＤＬＰＳＥＥＤＳＰＲＥＥＤＰＰＧＥＥＤＬＰＧＥＥＤＬＰＧＥＥＤＬＰＥＶＫＰＫＳＥＥＥＧＳＬＫＬＥＤＬＰＴＶＥＡＰＧ
ＤＰＱＥＰＱＮＮＡＨＲＤＫＥＧＤＤＱＳＨＷＲＹＧＧＤＰＰＷＰＲＶＳＰＡＣＡＧＲＦＱＳＰＶＤＩＲＰＱＬＡＡＦＣＰＡＬＲＰＬ
ＥＬＬＧＦＱＬＰＰＬＰＥＬＲＬＲＮＮＧＨＳＶＱＬＴＬＰＰＧＬＥＭＡＬＧＰＧＲＥＹＲＡＬＱＬＨＬＨＷＧＡＡＧＲＰＧＳＥＨＴ
ＶＥＧＨＲＦＰＡＥＩＨＶＶＨＬＳＴＡＦＡＲＶＤＥＡＬＧＲＰＧＧＬＡＶＬＡＡＦＬＥＥＧＰＥＥＮＳＡＹＥＱＬＬＳＲＬＥＥＩＡ
ＥＥＧＳＥＴＱＶＰＧＬＤＩＳＡＬＬＰＳＤＦＳＲＹＦＱＹＥＧＳＬＴＴＰＰＣＡＱＧＶＩＷＴＶＦＮＱＴＶＭＬＳＡＫＱＬＨＴＬＳ
ＤＴＬＷＧＰＧＤＳＲＬＱＬＮＦＲＡＴＱＰＬＮＧＲＶＩＥＡＳＦＰＡＧＶＤＳＳＰＲＡＡＥＰＶＱＬＮＳＣＬＡＡＧＤＩＬＡＬＶＦ
ＧＬＬＦＡＶＴＳＶＡＦＬＶＱＭＲＲＱＨＲＲＧＴＫＧＧＶＳＹＲＰＡＥＶＡＥＴＧＡ
細胞外ドメインは、下線によって印を付けている。
（４）Ｃ４．４ａ（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０５５２１５．２；同義語ＬＹＰＤ３）、配列番号２１６（３４６アミノ酸）：
＞ｇｉ｜９３００４０８８｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０５５２１５．２｜ｌｙ６／ＰＬＡＵＲドメイン含有タンパク質３−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＤＰＡＲＫＡＧＡＱＡＭＩＷＴＡＧＷＬＬＬＬＬＬＲＧＧＡＱＡＬＥＣＹＳＣＶＱＫＡＤＤＧＣＳＰＮＫＭＫＴＶＫＣＡＰＧＶＤＶＣＴＥＡＶＧＡＶＥＴＩＨＧＱＦＳＬＡＶＲＧＣＧＳＧＬＰＧＫＮＤＲＧＬＤＬＨＧＬＬＡＦＩＱＬＱＱＣＡＱＤＲＣＮＡＫＬＮＬＴＳＲＡＬＤＰＡＧＮＥＳＡＹＰＰＮＧＶＥＣＹＳＣＶＧＬＳＲＥＡＣＱＧＴＳＰＰＶＶＳＣＹＮＡＳＤＨＶＹＫＧＣＦＤＧＮＶＴＬＴＡＡＮＶＴＶＳＬＰＶＲＧＣＶＱＤＥＦＣＴＲＤＧＶＴＧＰＧＦＴＬＳＧＳＣＣＱＧＳＲＣＮＳＤＬＲＮＫＴＹＦＳＰＲＩＰＰＬＶＲＬＰＰＰＥＰＴＴＶＡＳＴＴＳＶＴＴＳＴＳＡＰＶＲＰＴＳＴＴＫＰＭＰＡＰＴＳＱＴＰＲＱＧＶＥＨＥＡＳＲＤＥＥＰＲＬＴＧＧＡＡＧＨＱＤＲＳＮＳＧＱＹＰＡＫＧＧＰＱＱＰＨＮＫＧＣＶＡＰＴＡＧＬＡＡＬＬＬＡＶＡＡＧＶＬＬ
成熟細胞外ドメインは、下線によって印を付けている。
（５）ＣＤ５２（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００１７９４．２）、配列番号２１７
＞ｇｉ｜６８３４２０３０｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１７９４．２｜ＣＡＭＰＡＴＨ−１抗原−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＫＲＦＬＦＬＬＬＴＩＳＬＬＶＭＶＱＩＱＴＧＬＳＧＱＮＤＴＳＱＴＳＳＰＳＡＳＳＮＩＳＧＧＩＦＬＦＦＶＡＮＡＩＩＨＬＦＣＦＳ
（６）Ｈｅｒ２（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿００４４３９．２）、配列番号２１８
＞ｇｉ｜５４７９２０９６｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００４４３９．２｜受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２アイソフォームａ［ホモ・サピエンス］
ＭＥＬＡＡＬＣＲＷＧＬＬＬＡＬＬＰＰＧＡＡＳＴＱＶＣＴＧＴＤＭＫＬＲＬＰＡＳＰＥＴＨＬＤＭＬＲＨＬＹＱＧＣＱＶＶＱＧＮＬＥＬＴＹＬＰＴＮＡＳＬＳＦＬＱＤＩＱＥＶＱＧＹＶＬＩＡＨＮＱＶＲＱＶＰＬＱＲＬＲＩＶＲＧＴＱＬＦＥＤＮＹＡＬＡＶＬＤＮＧＤＰＬＮＮＴＴＰＶＴＧＡＳＰＧＧＬＲＥＬＱＬＲＳＬＴＥＩＬＫＧＧＶＬＩＱＲＮＰＱＬＣＹＱＤＴＩＬＷＫＤＩＦＨＫＮＮＱＬＡＬＴＬＩＤＴＮＲＳＲＡＣＨＰＣＳＰＭＣＫＧＳＲＣＷＧＥＳＳＥＤＣＱＳＬＴＲＴＶＣＡＧＧＣＡＲＣＫＧＰＬＰＴＤＣＣＨＥＱＣＡＡＧＣＴＧＰＫＨＳＤＣＬＡＣＬＨＦＮＨＳＧＩＣＥＬＨＣＰＡＬＶＴＹＮＴＤＴＦＥＳＭＰＮＰＥＧＲＹＴＦＧＡＳＣＶＴＡＣＰＹＮＹＬＳＴＤＶＧＳＣＴＬＶＣＰＬＨＮＱＥＶＴＡＥＤＧＴＱＲＣＥＫＣＳＫＰＣＡＲＶＣＹＧＬＧＭＥＨＬＲＥＶＲＡＶＴＳＡＮＩＱＥＦＡＧＣＫＫＩＦＧＳＬＡＦＬＰＥＳＦＤＧＤＰＡＳＮＴＡＰＬＱＰＥＱＬＱＶＦＥＴＬＥＥＩＴＧＹＬＹＩＳＡＷＰＤＳＬＰＤＬＳＶＦＱＮＬＱＶＩＲＧＲＩＬＨＮＧＡＹＳＬＴＬＱＧＬＧＩＳＷＬＧＬＲＳＬＲＥＬＧＳＧＬＡＬＩＨＨＮＴＨＬＣＦＶＨＴＶＰＷＤＱＬＦＲＮＰＨＱＡＬＬＨＴＡＮＲＰＥＤＥＣＶＧＥＧＬＡＣＨＱＬＣＡＲＧＨＣＷＧＰＧＰＴＱＣＶＮＣＳＱＦＬＲＧＱＥＣＶＥＥＣＲＶＬＱＧＬＰＲＥＹＶＮＡＲＨＣＬＰＣＨＰＥＣＱＰＱＮＧＳＶＴＣＦＧＰＥＡＤＱＣＶＡＣＡＨＹＫＤＰＰＦＣＶＡＲＣＰＳＧＶＫＰＤＬＳＹＭＰＩＷＫＦＰＤＥＥＧＡＣＱＰＣＰＩＮＣＴＨＳＣＶＤＬＤＤＫＧＣＰＡＥＱＲＡＳＰＬＴＳＩＩＳＡＶＶＧＩＬＬＶＶＶＬＧＶＶＦＧＩＬＩＫＲＲＱＱＫＩＲＫＹＴＭＲＲＬＬＱＥＴＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＡＭＰＮＱＡＱＭＲＩＬＫＥＴＥＬＲＫＶＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＩＷＩＰＤＧＥＮＶＫＩＰＶＡＩＫＶＬＲＥＮＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＧＶＧＳＰＹＶＳＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＶＴＱＬＭＰＹＧＣＬＬＤＨＶＲＥＮＲＧＲＬＧＳＱＤＬＬＮＷＣＭＱＩＡＫＧＭＳＹＬＥＤＶＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＳＰＮＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＲＬＬＤＩＤＥＴＥＹＨＡＤＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＲＲＲＦＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＡＫＰＹＤＧＩＰＡＲＥＩＰＤＬＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＳＥＣＲＰＲＦＲＥＬＶＳＥＦＳＲＭＡＲＤＰＱＲＦＶＶＩＱＮＥＤＬＧＰＡＳＰＬＤＳＴＦＹＲＳＬＬＥＤＤＤＭＧＤＬＶＤＡＥＥＹＬＶＰＱＱＧＦＦＣＰＤＰＡＰＧＡＧＧＭＶＨＨＲＨＲＳＳＳＴＲＳＧＧＧＤＬＴＬＧＬＥＰＳＥＥＥＡＰＲＳＰＬＡＰＳＥＧＡＧＳＤＶＦＤＧＤＬＧＭＧＡＡＫＧＬＱＳＬＰＴＨＤＰＳＰＬＱＲＹＳＥＤＰＴＶＰＬＰＳＥＴＤＧＹＶＡＰＬＴＣＳＰＱＰＥＹＶＮＱＰＤＶＲＰＱＰＰＳＰＲＥＧＰＬＰＡＡＲＰＡＧＡＴＬＥＲＰＫＴＬＳＰＧＫＮＧＶＶＫＤＶＦＡＦＧＧＡＶＥＮＰＥＹＬＴＰＱＧＧＡＡＰＱＰＨＰＰＰＡＦＳＰＡＦＤＮＬＹＹＷＤＱＤＰＰＥＲＧＡＰＰＳＴＦＫＧＴＰＴＡＥＮＰＥＹＬＧＬＤＶＰＶ
（７）ＣＤ２０（ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０６８７６９．２）、配列番号２１９
＞ｇｉ｜２３１１０９８７｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０６８７６９．２｜Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ２０［ホモ・サピエンス］
ＭＴＴＰＲＮＳＶＮＧＴＦＰＡＥＰＭＫＧＰＩＡＭＱＳＧＰＫＰＬＦＲＲＭＳＳＬＶＧＰＴＱＳＦＦＭＲＥＳＫＴＬＧＡＶＱＩＭＮＧＬＦＨＩＡＬＧＧＬＬＭＩＰＡＧＩＹＡＰＩＣＶＴＶＷＹＰＬＷＧＧＩＭＹＩＩＳＧＳＬＬＡＡＴＥＫＮＳＲＫＣＬＶＫＧＫＭＩＭＮＳＬＳＬＦＡＡＩＳＧＭＩＬＳＩＭＤＩＬＮＩＫＩＳＨＦＬＫＭＥＳＬＮＦＩＲＡＨＴＰＹＩＮＩＹＮＣＥＰＡＮＰＳＥＫＮＳＰＳＴＱＹＣＹＳＩＱＳＬＦＬＧＩＬＳＶＭＬＩＦＡＦＦＱＥＬＶＩＡＧＩＶＥＮＥＷＫＲＴＣＳＲＰＫＳＮＩＶＬＬＳＡＥＥＫＫＥＱＴＩＥＩＫＥＥＶＶＧＬＴＥＴＳＳＱＰＫＮＥＥＤＩＥＩＩＰＩＱＥＥＥＥＥＥＴＥＴＮＦＰＥＰＰＱＤＱＥＳＳＰＩＥＮＤＳＳＰ
（８）リンパ球活性化抗原ＣＤ３０（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ２８９０８）、配列番号２２０
＞ｇｉ｜６８３４８７１１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１２３４．２｜腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー８アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＲＶＬＬＡＡＬＧＬＬＦＬＧＡＬＲＡＦＰＱＤＲＰＦＥＤＴＣＨＧＮＰＳＨＹＹＤＫＡＶＲＲＣＣＹＲＣＰＭＧＬＦＰＴＱＱＣＰＱＲＰＴＤＣＲＫＱＣＥＰＤＹＹＬＤＥＡＤＲＣＴＡＣＶＴＣＳＲＤＤＬＶＥＫＴＰＣＡＷＮＳＳＲＶＣＥＣＲＰＧＭＦＣＳＴＳＡＶＮＳＣＡＲＣＦＦＨＳＶＣＰＡＧＭＩＶＫＦＰＧＴＡＱＫＮＴＶＣＥＰＡＳＰＧＶＳＰＡＣＡＳＰＥＮＣＫＥＰＳＳＧＴＩＰＱＡＫＰＴＰＶＳＰＡＴＳＳＡＳＴＭＰＶＲＧＧＴＲＬＡＱＥＡＡＳＫＬＴＲＡＰＤＳＰＳＳＶＧＲＰＳＳＤＰＧＬＳＰＴＱＰＣＰＥＧＳＧＤＣＲＫＱＣＥＰＤＹＹＬＤＥＡＧＲＣＴＡＣＶＳＣＳＲＤＤＬＶＥＫＴＰＣＡＷＮＳＳＲＴＣＥＣＲＰＧＭＩＣＡＴＳＡＴＮＳＲＡＲＣＶＰＹＰＩＣＡＡＥＴＶＴＫＰＱＤＭＡＥＫＤＴＴＦＥＡＰＰＬＧＴＱＰＤＣＮＰＴＰＥＮＧＥＡＰＡＳＴＳＰＴＱＳＬＬＶＤＳＱＡＳＫＴＬＰＩＰＴＳＡＰＶＡＬＳＳＴＧＫＰＶＬＤＡＧＰＶＬＦＷＶＩＬＶＬＶＶＶＶＧＳＳＡＦＬＬＣＨＲＲＡＣＲＫＲＩＲＱＫＬＨＬＣＹＰＶＱＴＳＱＰＫＬＥＬＶＤＳＲＰＲＲＳＳＴＱＬＲＳＧＡＳＶＴＥＰＶＡＥＥＲＧＬＭＳＱＰＬＭＥＴＣＨＳＶＧＡＡＹＬＥＳＬＰＬＱＤＡＳＰＡＧＧＰＳＳＰＲＤＬＰＥＰＲＶＳＴＥＨＴＮＮＫＩＥＫＩＹＩＭＫＡＤＴＶＩＶＧＴＶＫＡＥＬＰＥＧＲＧＬＡＧＰＡＥＰＥＬＥＥＥＬＥＡＤＨＴＰＨＹＰＥＱＥＴＥＰＰＬＧＳＣＳＤＶＭＬＳＶＥＥＥＧＫＥＤＰＬＰＴＡＡＳＧＫ
（９）リンパ球接着分子ＣＤ２２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ２０２７３）、配列番号２２１
＞ｇｉ｜１５７１６８３５５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１７６２．２｜Ｂ細胞受容体ＣＤ２２アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＨＬＬＧＰＷＬＬＬＬＶＬＥＹＬＡＦＳＤＳＳＫＷＶＦＥＨＰＥＴＬＹＡＷＥＧＡＣＶＷＩＰＣＴＹＲＡＬＤＧＤＬＥＳＦＩＬＦＨＮＰＥＹＮＫＮＴＳＫＦＤＧＴＲＬＹＥＳＴＫＤＧＫＶＰＳＥＱＫＲＶＱＦＬＧＤＫＮＫＮＣＴＬＳＩＨＰＶＨＬＮＤＳＧＱＬＧＬＲＭＥＳＫＴＥＫＷＭＥＲＩＨＬＮＶＳＥＲＰＦＰＰＨＩＱＬＰＰＥＩＱＥＳＱＥＶＴＬＴＣＬＬＮＦＳＣＹＧＹＰＩＱＬＱＷＬＬＥＧＶＰＭＲＱＡＡＶＴＳＴＳＬＴＩＫＳＶＦＴＲＳＥＬＫＦＳＰＱＷＳＨＨＧＫＩＶＴＣＱＬＱＤＡＤＧＫＦＬＳＮＤＴＶＱＬＮＶＫＨＴＰＫＬＥＩＫＶＴＰＳＤＡＩＶＲＥＧＤＳＶＴＭＴＣＥＶＳＳＳＮＰＥＹＴＴＶＳＷＬＫＤＧＴＳＬＫＫＱＮＴＦＴＬＮＬＲＥＶＴＫＤＱＳＧＫＹＣＣＱＶＳＮＤＶＧＰＧＲＳＥＥＶＦＬＱＶＱＹＡＰＥＰＳＴＶＱＩＬＨＳＰＡＶＥＧＳＱＶＥＦＬＣＭＳＬＡＮＰＬＰＴＮＹＴＷＹＨＮＧＫＥＭＱＧＲＴＥＥＫＶＨＩＰＫＩＬＰＷＨＡＧＴＹＳＣＶＡＥＮＩＬＧＴＧＱＲＧＰＧＡＥＬＤＶＱＹＰＰＫＫＶＴＴＶＩＱＮＰＭＰＩＲＥＧＤＴＶＴＬＳＣＮＹＮＳＳＮＰＳＶＴＲＹＥＷＫＰＨＧＡＷＥＥＰＳＬＧＶＬＫＩＱＮＶＧＷＤＮＴＴＩＡＣＡＡＣＮＳＷＣＳＷＡＳＰＶＡＬＮＶＱＹＡＰＲＤＶＲＶＲＫＩＫＰＬＳＥＩＨＳＧＮＳＶＳＬＱＣＤＦＳＳＳＨＰＫＥＶＱＦＦＷＥＫＮＧＲＬＬＧＫＥＳＱＬＮＦＤＳＩＳＰＥＤＡＧＳＹＳＣＷＶＮＮＳＩＧＱＴＡＳＫＡＷＴＬＥＶＬＹＡＰＲＲＬＲＶＳＭＳＰＧＤＱＶＭＥＧＫＳＡＴＬＴＣＥＳＤＡＮＰＰＶＳＨＹＴＷＦＤＷＮＮＱＳＬＰＹＨＳＱＫＬＲＬＥＰＶＫＶＱＨＳＧＡＹＷＣＱＧＴＮＳＶＧＫＧＲＳＰＬＳＴＬＴＶＹＹＳＰＥＴＩＧＲＲＶＡＶＧＬＧＳＣＬＡＩＬＩＬＡＩＣＧＬＫＬＱＲＲＷＫＲＴＱＳＱＱＧＬＱＥＮＳＳＧＱＳＦＦＶＲＮＫＫＶＲＲＡＰＬＳＥＧＰＨＳＬＧＣＹＮＰＭＭＥＤＧＩＳＹＴＴＬＲＦＰＥＭＮＩＰＲＴＧＤＡＥＳＳＥＭＱＲＰＰＰＤＣＤＤＴＶＴＹＳＡＬＨＫＲＱＶＧＤＹＥＮＶＩＰＤＦＰＥＤＥＧＩＨＹＳＥＬＩＱＦＧＶＧＥＲＰＱＡＱＥＮＶＤＹＶＩＬＫＨ
（１０）骨髄（ｍｙｌｏｉｄ）細胞表面抗原ＣＤ３３（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ２０１３８）、配列番号２２２
＞ｇｉ｜１３０９７９９８１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１７６３．３｜骨髄細胞表面抗原ＣＤ３３アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡＭＤＰＮＦＷＬＱＶＱＥＳＶＴＶＱＥＧＬＣＶＬＶＰＣＴＦＦＨＰＩＰＹＹＤＫＮＳＰＶＨＧＹＷＦＲＥＧＡＩＩＳＲＤＳＰＶＡＴＮＫＬＤＱＥＶＱＥＥＴＱＧＲＦＲＬＬＧＤＰＳＲＮＮＣＳＬＳＩＶＤＡＲＲＲＤＮＧＳＹＦＦＲＭＥＲＧＳＴＫＹＳＹＫＳＰＱＬＳＶＨＶＴＤＬＴＨＲＰＫＩＬＩＰＧＴＬＥＰＧＨＳＫＮＬＴＣＳＶＳＷＡＣＥＱＧＴＰＰＩＦＳＷＬＳＡＡＰＴＳＬＧＰＲＴＴＨＳＳＶＬＩＩＴＰＲＰＱＤＨＧＴＮＬＴＣＱＶＫＦＡＧＡＧＶＴＴＥＲＴＩＱＬＮＶＴＹＶＰＱＮＰＴＴＧＩＦＰＧＤＧＳＧＫＱＥＴＲＡＧＶＶＨＧＡＩＧＧＡＧＶＴＡＬＬＡＬＣＬＣＬＩＦＦＩＶＫＴＨＲＲＫＡＡＲＴＡＶＧＲＮＤＴＨＰＴＴＧＳＡＳＰＫＨＱＫＫＳＫＬＨＧＰＴＥＴＳＳＣＳＧＡＡＰＴＶＥＭＤＥＥＬＨＹＡＳＬＮＦＨＧＭＮＰＳＫＤＴＳＴＥＹＳＥＶＲＴＱ
（１１）膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｑ１４９５６）、配列番号２２３
＞ｇｉ｜５２６９４７５２｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１００５３４０．１｜膜貫通糖タンパク質ＮＭＢアイソフォームａ−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＥＣＬＹＹＦＬＧＦＬＬＬＡＡＲＬＰＬＤＡＡＫＲＦＨＤＶＬＧＮＥＲＰＳＡＹＭＲＥＨＮＱＬＮＧＷＳＳＤＥＮＤＷＮＥＫＬＹＰＶＷＫＲＧＤＭＲＷＫＮＳＷＫＧＧＲＶＱＡＶＬＴＳＤＳＰＡＬＶＧＳＮＩＴＦＡＶＮＬＩＦＰＲＣＱＫＥＤＡＮＧＮＩＶＹＥＫＮＣＲＮＥＡＧＬＳＡＤＰＹＶＹＮＷＴＡＷＳＥＤＳＤＧＥＮＧＴＧＱＳＨＨＮＶＦＰＤＧＫＰＦＰＨＨＰＧＷＲＲＷＮＦＩＹＶＦＨＴＬＧＱＹＦＱＫＬＧＲＣＳＶＲＶＳＶＮＴＡＮＶＴＬＧＰＱＬＭＥＶＴＶＹＲＲＨＧＲＡＹＶＰＩＡＱＶＫＤＶＹＶＶＴＤＱＩＰＶＦＶＴＭＦＱＫＮＤＲＮＳＳＤＥＴＦＬＫＤＬＰＩＭＦＤＶＬＩＨＤＰＳＨＦＬＮＹＳＴＩＮＹＫＷＳＦＧＤＮＴＧＬＦＶＳＴＮＨＴＶＮＨＴＹＶＬＮＧＴＦＳＬＮＬＴＶＫＡＡＡＰＧＰＣＰＰＰＰＰＰＰＲＰＳＫＰＴＰＳＬＡＴＴＬＫＳＹＤＳＮＴＰＧＰＡＧＤＮＰＬＥＬＳＲＩＰＤＥＮＣＱＩＮＲＹＧＨＦＱＡＴＩＴＩＶＥＧＩＬＥＶＮＩＩＱＭＴＤＶＬＭＰＶＰＷＰＥＳＳＬＩＤＦＶＶＴＣＱＧＳＩＰＴＥＶＣＴＩＩＳＤＰＴＣＥＩＴＱＮＴＶＣＳＰＶＤＶＤＥＭＣＬＬＴＶＲＲＴＦＮＧＳＧＴＹＣＶＮＬＴＬＧＤＤＴＳＬＡＬＴＳＴＬＩＳＶＰＤＲＤＰＡＳＰＬＲＭＡＮＳＡＬＩＳＶＧＣＬＡＩＦＶＴＶＩＳＬＬＶＹＫＫＨＫＥＹＮＰＩＥＮＳＰＧＮＶＶＲＳＫＧＬＳＶＦＬＮＲＡＫＡＶＦＦＰＧＮＱＥＫＤＰＬＬＫＮＱＥＦＫＧＶＳ
（１２）接着分子ＣＤ５６（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１３５９１）、配列番号２２４
＞ｇｉ｜９４４２０６８９｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０００６０６．３｜神経細胞接着分子１アイソフォーム１［ホモ・サピエンス］
ＭＬＱＴＫＤＬＩＷＴＬＦＦＬＧＴＡＶＳＬＱＶＤＩＶＰＳＱＧＥＩＳＶＧＥＳＫＦＦＬＣＱＶＡＧＤＡＫＤＫＤＩＳＷＦＳＰＮＧＥＫＬＴＰＮＱＱＲＩＳＶＶＷＮＤＤＳＳＳＴＬＴＩＹＮＡＮＩＤＤＡＧＩＹＫＣＶＶＴＧＥＤＧＳＥＳＥＡＴＶＮＶＫＩＦＱＫＬＭＦＫＮＡＰＴＰＱＥＦＲＥＧＥＤＡＶＩＶＣＤＶＶＳＳＬＰＰＴＩＩＷＫＨＫＧＲＤＶＩＬＫＫＤＶＲＦＩＶＬＳＮＮＹＬＱＩＲＧＩＫＫＴＤＥＧＴＹＲＣＥＧＲＩＬＡＲＧＥＩＮＦＫＤＩＱＶＩＶＮＶＰＰＴＩＱＡＲＱＮＩＶＮＡＴＡＮＬＧＱＳＶＴＬＶＣＤＡＥＧＦＰＥＰＴＭＳＷＴＫＤＧＥＱＩＥＱＥＥＤＤＥＫＹＩＦＳＤＤＳＳＱＬＴＩＫＫＶＤＫＮＤＥＡＥＹＩＣＩＡＥＮＫＡＧＥＱＤＡＴＩＨＬＫＶＦＡＫＰＫＩＴＹＶＥＮＱＴＡＭＥＬＥＥＱＶＴＬＴＣＥＡＳＧＤＰＩＰＳＩＴＷＲＴＳＴＲＮＩＳＳＥＥＫＴＬＤＧＨＭＶＶＲＳＨＡＲＶＳＳＬＴＬＫＳＩＱＹＴＤＡＧＥＹＩＣＴＡＳＮＴＩＧＱＤＳＱＳＭＹＬＥＶＱＹＡＰＫＬＱＧＰＶＡＶＹＴＷＥＧＮ
ＱＶＮＩＴＣＥＶＦＡＹＰＳＡＴＩＳＷＦＲＤＧＱＬＬＰＳＳＮＹＳＮＩＫＩＹＮＴＰＳＡＳＹＬＥＶＴＰＤＳＥＮＤＦＧＮＹＮＣＴＡＶＮＲＩＧＱＥＳＬＥＦＩＬＶＱＡＤＴＰＳＳＰＳＩＤＱＶＥＰＹＳＳＴＡＱＶＱＦＤＥＰＥＡＴＧＧＶＰＩＬＫＹＫＡＥＷＲＡＶＧＥＥＶＷＨＳＫＷＹＤＡＫＥＡＳＭＥＧＩＶＴＩＶＧＬＫＰＥＴＴＹＡＶＲＬＡＡＬＮＧＫＧＬＧＥＩＳＡＡＳＥＦＫＴＱＰＶＱＧＥＰＳＡＰＫＬＥＧＱＭＧＥＤＧＮＳＩＫＶＮＬＩＫＱＤＤＧＧＳＰＩＲＨＹＬＶＲＹＲＡＬＳＳＥＷＫＰＥＩＲＬＰＳＧＳＤＨＶＭＬＫＳＬＤＷＮＡＥＹＥＶＹＶＶＡＥＮＱＱＧＫＳＫＡＡＨＦＶＦＲＴＳＡＱＰＴＡＩＰＡＮＧＳＰＴＳＧＬＳＴＧＡＩＶＧＩＬＩＶＩＦＶＬＬＬＶＶＶＤＩＴＣＹＦＬＮＫＣＧＬＦＭＣＩＡＶＮＬＣＧＫＡＧＰＧＡＫＧＫＤＭＥＥＧＫＡＡＦＳＫＤＥＳＫＥＰＩＶＥＶＲＴＥＥＥＲＴＰＮＨＤＧＧＫＨＴＥＰＮＥＴＴＰＬＴＥＰＥＫＧＰＶＥＡＫＰＥＣＱＥＴＥＴＫＰＡＰＡＥＶＫＴＶＰＮＤＡＴＱＴＫＥＮＥＳＫＡ
（１３）表面分子ＣＤ７０（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ３２９７０）、配列番号２２５
＞ｇｉ｜４５０７６０５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１２４３．１｜ＣＤ７０抗原［ホモ・サピエンス］
ＭＰＥＥＧＳＧＣＳＶＲＲＲＰＹＧＣＶＬＲＡＡＬＶＰＬＶＡＧＬＶＩＣＬＶＶＣＩＱＲＦＡＱＡＱＱＱＬＰＬＥＳＬＧＷＤＶＡＥＬＱＬＮＨＴＧＰＱＱＤＰＲＬＹＷＱＧＧＰＡＬＧＲＳＦＬＨＧＰＥＬＤＫＧＱＬＲＩＨＲＤＧＩＹＭＶＨＩＱＶＴＬＡＩＣＳＳＴＴＡＳＲＨＨＰＴＴＬＡＶＧＩＣＳＰＡＳＲＳＩＳＬＬＲＬＳＦＨＱＧＣＴＩＡＳＱＲＬＴＰＬＡＲＧＤＴＬＣＴＮＬＴＧＴＬＬＰＳＲＮＴＤＥＴＦＦＧＶＱＷＶＲＰ
（１４）表面分子ＣＤ７４（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０４２３３）、配列番号２２６
＞ｇｉ｜１０８３５０７１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００４３４６．１｜ＨＬＡクラスＩＩ組織適合性抗原γ鎖アイソフォームｂ［ホモ・サピエンス］
ＭＨＲＲＲＳＲＳＣＲＥＤＱＫＰＶＭＤＤＱＲＤＬＩＳＮＮＥＱＬＰＭＬＧＲＲＰＧＡＰＥＳＫＣＳＲＧＡＬＹＴＧＦＳＩＬＶＴＬＬＬＡＧＱＡＴＴＡＹＦＬＹＱＱＱＧＲＬＤＫＬＴＶＴＳＱＮＬＱＬＥＮＬＲＭＫＬＰＫＰＰＫＰＶＳＫＭＲＭＡＴＰＬＬＭＱＡＬＰＭＧＡＬＰＱＧＰＭＱＮＡＴＫＹＧＮＭＴＥＤＨＶＭＨＬＬＱＮＡＤＰＬＫＶＹＰＰＬＫＧＳＦＰＥＮＬＲＨＬＫＮＴＭＥＴＩＤＷＫＶＦＥＳＷＭＨＨＷＬＬＦＥＭＳＲＨＳＬＥＱＫＰＴＤＡＰＰＫＥＳＬＥＬＥＤＰＳＳＧＬＧＶＴＫＱＤＬＧＰＶＰＭ
（１５）Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ１９（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１５３９１）、配列番号２２７
＞ｇｉ｜２９６０１０９２１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１１７１５６９．１｜Ｂ−リンパ球抗原ＣＤ１９アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＰＰＰＲＬＬＦＦＬＬＦＬＴＰＭＥＶＲＰＥＥＰＬＶＶＫＶＥＥＧＤＮＡＶＬＱＣＬＫＧＴＳＤＧＰＴＱＱＬＴＷＳＲＥＳＰＬＫＰＦＬＫＬＳＬＧＬＰＧＬＧＩＨＭＲＰＬＡＩＷＬＦＩＦＮＶＳＱＱＭＧＧＦＹＬＣＱＰＧＰＰＳＥＫＡＷＱＰＧＷＴＶＮＶＥＧＳＧＥＬＦＲＷＮＶＳＤＬＧＧＬＧＣＧＬＫＮＲＳＳＥＧＰＳＳＰＳＧＫＬＭＳＰＫＬＹＶＷＡＫＤＲＰＥＩＷＥＧＥＰＰＣＬＰＰＲＤＳＬＮＱＳＬＳＱＤＬＴＭＡＰＧＳＴＬＷＬＳＣＧＶＰＰＤＳＶＳＲＧＰＬＳＷＴＨＶＨＰＫＧＰＫＳＬＬＳＬＥＬＫＤＤＲＰＡＲＤＭＷＶＭＥＴＧＬＬＬＰＲＡＴＡＱＤＡＧＫＹＹＣＨＲＧＮＬＴＭＳＦＨＬＥＩＴＡＲＰＶＬＷＨＷＬＬＲＴＧＧＷＫＶＳＡＶＴＬＡＹＬＩＦＣＬＣＳＬＶＧＩＬＨＬＱＲＡＬＶＬＲＲＫＲＫＲＭＴＤＰＴＲＲＦＦＫＶＴＰＰＰＧＳＧＰＱＮＱＹＧＮＶＬＳＬＰＴＰＴＳＧＬＧＲＡＱＲＷＡＡＧＬＧＧＴＡＰＳＹＧＮＰＳＳＤＶＱＡＤＧＡＬＧＳＲＳＰＰＧＶＧＰＥＥＥＥＧＥＧＹＥＥＰＤＳＥＥＤＳＥＦＹＥＮＤＳＮＬＧＱＤＱＬＳＱＤＧＳＧＹＥＮＰＥＤＥＰＬＧＰＥＤＥＤＳＦＳＮＡＥＳＹＥＮＥＤＥＥＬＴＱＰＶＡＲＴＭＤＦＬＳＰＨＧＳＡＷＤＰＳＲＥＡＴＳＬＡＧＳＱＳＹＥＤＭＲＧＩＬＹＡＡＰＱＬＲＳＩＲＧＱＰＧＰＮＨＥＥＤＡＤＳＹＥＮＭＤＮＰＤＧＰＤＰＡＷＧＧＧＧＲＭＧＴＷＳＴＲ
（１６）表面タンパク質ムチン−１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１５９４１）、配列番号２２８
＞ｇｉ｜６５３０１１１７｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００２４４７．４｜ムチン−１アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＴＰＧＴＱＳＰＦＦＬＬＬＬＬＴＶＬＴＶＶＴＧＳＧＨＡＳＳＴＰＧＧＥＫＥＴＳＡＴＱＲＳＳＶＰＳＳＴＥＫＮＡＬＳＴＧＶＳＦＦＦＬＳＦＨＩＳＮＬＱＦＮＳＳＬＥＤＰＳＴＤＹＹＱＥＬＱＲＤＩＳＥＭＦＬＱＩＹＫＱＧＧＦＬＧＬＳＮＩＫＦＲＰＧＳＶＶＶＱＬＴＬＡＦＲＥＧＴＩＮＶＨＤＶＥＴＱＦＮＱＹＫＴＥＡＡＳＲＹＮＬＴＩＳＤＶＳＶＳＤＶＰＦＰＦＳＡＱＳＧＡＧＶＰＧＷＧＩＡＬＬＶＬＶＣＶＬＶＡＬＡＩＶＹＬＩＡＬＡＶＣＱＣＲＲＫＮＹＧＱＬＤＩＦＰＡＲＤＴＹＨＰＭＳＥＹＰＴＹＨＴＨＧＲＹＶＰＰＳＳＴＤＲＳＰＹＥＫＶＳＡＧＮＧＧＳＳＬＳＹＴＮＰＡＶＡＡＴＳＡＮＬ
（１７）表面タンパク質ＣＤ１３８（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ１８８２７）、配列番号２２９
＞ｇｉ｜２９５６８０８６｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００２９８８．３｜シンデカン−１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＲＲＡＡＬＷＬＷＬＣＡＬＡＬＳＬＱＰＡＬＰＱＩＶＡＴＮＬＰＰＥＤＱＤＧＳＧＤＤＳＤＮＦＳＧＳＧＡＧＡＬＱＤＩＴＬＳＱＱＴＰＳＴＷＫＤＴＱＬＬＴＡＩＰＴＳＰＥＰＴＧＬＥＡＴＡＡＳＴＳＴＬＰＡＧＥＧＰＫＥＧＥＡＶＶＬＰＥＶＥＰＧＬＴＡＲＥＱＥＡＴＰＲＰＲＥＴＴＱＬＰＴＴＨＱＡＳＴＴＴＡＴＴＡＱＥＰＡＴＳＨＰＨＲＤＭＱＰＧＨＨＥＴＳＴＰＡＧＰＳＱＡＤＬＨＴＰＨＴＥＤＧＧＰＳＡＴＥＲＡＡＥＤＧＡＳＳＱＬＰＡＡＥＧＳＧＥＱＤＦＴＦＥＴＳＧＥＮＴＡＶＶＡＶＥＰＤＲＲＮＱＳＰＶＤＱＧＡＴＧＡＳＱＧＬＬＤＲＫＥＶＬＧＧＶＩＡＧＧＬＶＧＬＩＦＡＶＣＬＶＧＦＭＬＹＲＭＫＫＫＤＥＧＳＹＳＬＥＥＰＫＱＡＮＧＧＡＹＱＫＰＴＫＱＥＥＦＹＡ
（１８）インテグリンαＶ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２２０１．１）、配列番号２３０
＞ｇｉ｜４５０４７６３｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００２２０１．１｜インテグリンα−Ｖアイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＡＦＰＰＲＲＲＬＲＬＧＰＲＧＬＰＬＬＬＳＧＬＬＬＰＬＣＲＡＦＮＬＤＶＤＳＰＡＥＹＳＧＰＥＧＳＹＦＧＦＡＶＤＦＦＶＰＳＡＳＳＲＭＦＬＬＶＧＡＰＫＡＮＴＴＱＰＧＩＶＥＧＧＱＶＬＫＣＤＷＳＳＴＲＲＣＱＰＩＥＦＤＡＴＧＮＲＤＹＡＫＤＤＰＬＥＦＫＳＨＱＷＦＧＡＳＶＲＳＫＱＤＫＩＬＡＣＡＰＬＹＨＷＲＴＥＭＫＱＥＲＥＰＶＧＴＣＦＬＱＤＧＴＫＴＶＥＹＡＰＣＲＳＱＤＩＤＡＤＧＱＧＦＣＱＧＧＦＳＩＤＦＴＫＡＤＲＶＬＬＧＧＰＧＳＦＹＷＱＧＱＬＩＳＤＱＶＡＥＩＶＳＫＹＤＰＮＶＹＳＩＫＹＮＮＱＬＡＴＲＴＡＱＡＩＦＤＤＳＹＬＧＹＳＶＡＶＧＤＦＮＧＤＧＩＤＤＦＶＳＧＶＰＲＡＡＲＴＬＧＭＶＹＩＹＤＧＫＮＭＳＳＬＹＮＦＴＧＥＱＭＡＡＹＦＧＦＳＶＡＡＴＤＩＮＧＤＤＹＡＤＶＦＩＧＡＰＬＦＭＤＲＧＳＤＧＫＬＱＥＶＧＱＶＳＶＳＬＱＲＡＳＧＤＦＱＴＴＫＬＮＧＦＥＶＦＡＲＦＧＳＡＩＡＰＬＧＤＬＤＱＤＧＦＮＤＩＡＩＡＡＰＹＧＧＥＤＫＫＧＩＶＹＩＦＮＧＲＳＴＧＬＮＡＶＰＳＱＩＬＥＧＱＷＡＡＲＳＭＰＰＳＦＧＹＳＭＫＧＡＴＤＩＤＫＮＧＹＰＤＬＩＶＧＡＦＧＶＤＲＡＩＬＹＲＡＲＰＶＩＴＶＮＡＧＬＥＶＹＰＳＩＬＮＱＤＮＫＴＣＳＬＰＧＴＡＬＫＶＳＣＦＮＶＲＦＣＬＫＡＤＧＫＧＶＬＰＲＫＬＮＦＱＶＥＬＬＬＤＫＬＫＱＫＧＡＩＲＲＡＬＦＬＹＳＲＳＰＳＨＳＫＮＭＴＩＳＲＧＧＬＭＱＣＥＥＬＩＡＹＬＲＤＥＳＥＦＲＤＫＬＴＰＩＴＩＦＭＥＹＲＬＤＹＲＴＡＡＤＴＴＧＬＱＰＩＬＮＱＦＴＰＡＮＩＳＲＱＡＨＩＬＬＤＣＧＥＤＮＶＣＫＰＫＬＥＶＳＶＤＳＤＱＫＫＩＹＩＧＤＤＮＰＬＴＬＩＶＫＡＱＮＱＧＥＧＡＹＥＡＥＬＩＶＳＩＰＬＱＡＤＦＩＧＶＶＲＮＮＥＡＬＡＲＬＳＣＡＦＫＴＥＮＱＴＲＱＶＶＣＤＬＧＮＰＭＫＡＧＴＱＬＬＡＧＬＲＦＳＶＨＱＱＳＥＭＤＴＳＶＫＦＤＬＱＩＱＳＳＮＬＦＤＫＶＳＰＶＶＳＨＫＶＤＬＡＶＬＡＡＶＥＩＲＧＶＳＳＰＤＨＩＦＬＰＩＰＮＷＥＨＫＥＮＰＥＴＥＥＤＶＧＰＶＶＱＨＩＹＥＬＲＮＮＧＰＳＳＦＳＫＡＭＬＨＬＱＷＰＹＫＹＮＮＮＴＬＬＹＩＬＨＹＤＩＤＧＰＭＮＣＴＳＤＭＥＩＮＰＬＲＩＫＩＳＳＬＱＴＴＥＫＮＤＴＶＡＧＱＧＥＲＤＨＬＩＴＫＲＤＬＡＬＳＥＧＤＩＨＴＬＧＣＧＶＡＱＣＬＫＩＶＣＱＶＧＲＬＤＲＧＫＳＡＩＬＹＶＫＳＬＬＷＴＥＴＦＭＮＫＥＮＱＮＨＳＹＳＬＫＳＳＡＳＦＮＶＩＥＦＰＹＫＮＬＰＩＥＤＩＴＮＳＴＬＶＴＴＮＶＴＷＧＩＱＰＡＰＭＰＶＰＶＷＶＩＩＬＡＶＬＡＧＬＬＬＬＡＶＬＶＦＶＭＹＲＭＧＦＦＫＲＶＲＰＰＱＥＥＱＥＲＥＱＬＱＰＨＥＮＧＥＧＮＳＥＴ
（１９）奇形癌由来増殖因子１タンパク質ＴＤＧＦ１（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００３２０３．１）、配列番号２３１
＞ｇｉ｜４５０７４２５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００３２０３．１｜奇形癌由来増殖因子１アイソフォーム１−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＤＣＲＫＭＡＲＦＳＹＳＶＩＷＩＭＡＩＳＫＶＦＥＬＧＬＶＡＧＬＧＨＱＥＦＡＲＰＳＲＧＹＬＡＦＲＤＤＳＩＷＰＱＥＥＰＡＩＲＰＲＳＳＱＲＶＰＰＭＧＩＱＨＳＫＥＬＮＲＴＣＣＬＮＧＧＴＣＭＬＧＳＦＣＡＣＰＰＳＦＹＧＲＮＣＥＨＤＶＲＫＥＮＣＧＳＶＰＨＤＴＷＬＰＫＫＣＳＬＣＫＣＷＨＧＱＬＲＣＦＰＱＡＦＬＰＧＣＤＧＬＶＭＤＥＨＬＶＡＳＲＴＰＥＬＰＰＳＡＲＴＴＴＦＭＬＶＧＩＣＬＳＩＱＳＹＹ
（２０）前立腺特異的膜抗原ＰＳＭＡ（Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ ＩＤ：Ｑ０４６０９）、配列番号２３２
＞ｇｉ｜４７５８３９８｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００４４６７．１｜グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ２アイソフォーム１［ホモ・サピエンス］
ＭＷＮＬＬＨＥＴＤＳＡＶＡＴＡＲＲＰＲＷＬＣＡＧＡＬＶＬＡＧＧＦＦＬＬＧＦＬＦＧＷＦＩＫＳＳＮＥＡＴＮＩＴＰＫＨＮＭＫＡＦＬＤＥＬＫＡＥＮＩＫＫＦＬＹＮＦＴＱＩＰＨＬＡＧＴＥＱＮＦＱＬＡＫＱＩＱＳＱＷＫＥＦＧＬＤＳＶＥＬＡＨＹＤＶＬＬＳＹＰＮＫＴＨＰＮＹＩＳＩＩＮＥＤＧＮＥＩＦＮＴＳＬＦＥＰＰＰＰＧＹＥＮＶＳＤＩＶＰＰＦＳＡＦＳＰＱＧＭＰＥＧＤＬＶＹＶＮＹＡＲＴＥＤＦＦＫＬＥＲＤＭＫＩＮＣＳＧＫＩＶＩＡＲＹＧＫＶＦＲＧＮＫＶＫＮＡＱＬＡＧＡＫＧＶＩＬＹＳＤＰＡＤＹＦＡＰＧＶＫＳＹＰＤＧＷＮＬＰＧＧＧＶＱＲＧＮＩＬＮＬＮＧＡＧＤＰＬＴＰＧＹＰＡＮＥＹＡＹＲＲＧＩＡＥＡＶＧＬＰＳＩＰＶＨＰＩＧＹＹＤＡＱＫＬＬＥＫＭＧＧＳＡＰＰＤＳＳＷＲＧＳＬＫＶＰＹＮＶＧＰＧＦＴＧＮＦＳＴＱＫＶＫＭＨＩＨＳＴＮＥＶＴＲＩＹＮＶＩＧＴＬＲＧＡＶＥＰＤＲＹＶＩＬＧＧＨＲＤＳＷＶＦＧＧＩＤＰＱＳＧＡＡＶＶＨＥＩＶＲＳＦＧＴＬＫＫＥＧＷＲＰＲＲＴＩＬＦＡＳＷＤＡＥＥＦＧＬＬＧＳＴＥＷＡＥＥＮＳＲＬＬＱＥＲＧＶＡＹＩＮＡＤＳＳＩＥＧＮＹＴＬＲＶＤＣＴＰＬＭＹＳＬＶＨＮＬＴＫＥＬＫＳＰＤＥＧＦＥＧＫＳＬＹＥＳＷＴＫＫＳＰＳＰＥＦＳＧＭＰＲＩＳＫＬＧＳＧＮＤＦＥＶＦＦＱＲＬＧＩＡＳＧＲＡＲＹＴＫＮＷＥＴＮＫＦＳＧＹＰＬＹＨＳＶＹＥＴＹＥＬＶＥＫＦＹＤＰＭＦＫＹＨＬＴＶＡＱＶＲＧＧＭＶＦＥＬＡＮＳＩＶＬＰＦＤＣＲＤＹＡＶＶＬＲＫＹＡＤＫＩＹＳＩＳＭＫＨＰＱＥＭＫＴＹＳＶＳＦＤＳＬＦＳＡＶＫＮＦＴＥＩＡＳＫＦＳＥＲＬＱＤＦＤＫＳＮＰＩＶＬＲＭＭＮＤＱＬＭＦＬＥＲＡＦＩＤＰＬＧＬＰＤＲＰＦＹＲＨＶＩＹＡＰＳＳＨＮＫＹＡＧＥＳＦＰＧＩＹＤＡＬＦＤＩＥＳＫＶＤＰＳＫＡＷＧＥＶＫＲＱＩＹＶＡＡＦＴＶＱＡＡＡＥＴＬＳＥＶＡ
（２１）チロシンタンパク質キナーゼＥＰＨＡ２（Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ２９３１７）、配列番号２３３
＞ｇｉ｜３２９６７３１１｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００４４２２．２｜エフリンＡ型受容体２−前駆体［ホモ・サピエンス］
ＭＥＬＱＡＡＲＡＣＦＡＬＬＷＧＣＡＬＡＡＡＡＡＡＱＧＫＥＶＶＬＬＤＦＡＡＡＧＧＥＬＧＷＬＴＨＰＹＧＫＧＷＤＬＭＱＮＩＭＮＤＭＰＩＹＭＹＳＶＣＮＶＭＳＧＤＱＤＮＷＬＲＴＮＷＶＹＲＧＥＡＥＲＩＦＩＥＬＫＦＴＶＲＤＣＮＳＦＰＧＧＡＳＳＣＫＥＴＦＮＬＹＹＡＥＳＤＬＤＹＧＴＮＦＱＫＲＬＦＴＫＩＤＴＩＡＰＤＥＩＴＶＳＳＤＦＥＡＲＨＶＫＬＮＶＥＥＲＳＶＧＰＬＴＲＫＧＦＹＬＡＦＱＤＩＧＡＣＶＡＬＬＳＶＲＶＹＹＫＫＣＰＥＬＬＱＧＬＡＨＦＰＥＴＩＡＧＳＤＡＰＳＬＡＴＶＡＧＴＣＶＤＨＡＶＶＰＰＧＧＥＥＰＲＭＨＣＡＶＤＧＥＷＬＶＰＩＧＱＣＬＣＱＡＧＹＥＫＶＥＤＡＣＱＡＣＳＰＧＦＦＫＦＥＡＳＥＳＰＣＬＥＣＰＥＨＴＬＰＳＰＥＧＡＴＳＣＥＣＥＥＧＦＦＲＡＰＱＤＰＡＳＭＰＣＴＲＰＰＳＡＰＨＹＬＴＡＶＧＭＧＡＫＶＥＬＲＷＴＰＰＱＤＳＧＧＲＥＤＩＶＹＳＶＴＣＥＱＣＷＰＥＳＧＥＣＧＰＣＥＡＳＶＲＹＳＥＰＰＨＧＬＴＲＴＳＶＴＶＳＤＬＥＰＨＭＮＹＴＦＴＶＥＡＲＮＧＶＳＧＬＶＴＳＲＳＦＲＴＡＳＶＳＩＮＱＴＥＰＰＫＶＲＬＥＧＲＳＴＴＳＬＳＶＳＷＳＩＰＰＰＱＱＳＲＶＷＫＹＥＶＴＹＲＫＫＧＤＳＮＳＹＮＶＲＲＴＥＧＦＳＶＴＬＤＤＬＡＰＤＴＴＹＬＶＱＶＱＡＬＴＱＥＧＱＧＡＧＳＫＶＨＥＦＱＴＬＳＰＥＧＳＧＮＬＡＶＩＧＧＶＡＶＧＶＶＬＬＬＶＬＡＧＶＧＦＦＩＨＲＲＲＫＮＱＲＡＲＱＳＰＥＤＶＹＦＳＫＳＥＱＬＫＰＬＫＴＹＶＤＰＨＴＹＥＤＰＮＱＡＶＬＫＦＴＴＥＩＨＰＳＣＶＴＲＱＫＶＩＧＡＧＥＦＧＥＶＹＫＧＭＬＫＴＳＳＧＫＫＥＶＰＶＡＩＫＴＬＫＡＧＹＴＥＫＱＲＶＤＦＬＧＥＡＧＩＭＧＱＦＳＨＨＮＩＩＲＬＥＧＶＩＳＫＹＫＰＭＭＩＩＴＥＹＭＥＮＧＡＬＤＫＦＬＲＥＫＤＧＥＦＳＶＬＱＬＶＧＭＬＲＧＩＡＡＧＭＫＹＬＡＮＭＮＹＶＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＶＮＳＮＬＶＣＫＶＳＤＦＧＬＳＲＶＬＥＤＤＰＥＡＴＹＴＴＳＧＧＫＩＰＩＲＷＴＡＰＥＡＩＳＹＲＫＦＴＳＡＳＤＶＷＳＦＧＩＶＭＷＥＶＭＴＹＧＥＲＰＹＷＥＬＳＮＨＥＶＭＫＡＩＮＤＧＦＲＬＰＴＰＭＤＣＰＳＡＩＹＱＬＭＭＱＣＷＱＱＥＲＡＲＲＰＫＦＡＤＩＶＳＩＬＤＫＬＩＲＡＰＤＳＬＫＴＬＡＤＦＤＰＲＶＳＩＲＬＰＳＴＳＧＳＥＧＶＰＦＲＴＶＳＥＷＬＥＳＩＫＭＱＱＹＴＥＨＦＭＡＡＧＹＴＡＩＥＫＶＶＱＭＴＮＤＤＩＫＲＩＧＶＲＬＰＧＨＱＫＲＩＡＹＳＬＬＧＬＫＤＱＶＮＴＶＧＩＰＩ
（２２）表面タンパク質ＳＬＣ４４Ａ４（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００１１７１５１５）、配列番号２３４
＞ｇｉ｜２９５８４９２８２｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿００１１７１５１５．１｜コリントランスポーター様タンパク質４アイソフォーム２［ホモ・サピエンス］
ＭＧＧＫＱＲＤＥＤＤＥＡＹＧＫＰＶＫＹＤＰＳＦＲＧＰＩＫＮＲＳＣＴＤＶＩＣＣＶＬＦＬＬＦＩＬＧＹＩＶＶＧＩＶＡＷＬＹＧＤＰＲＱＶＬＹＰＲＮＳＴＧＡＹＣＧＭＧＥＮＫＤＫＰＹＬＬＹＦＮＩＦＳＣＩＬＳＳＮＩＩＳＶＡＥＮＧＬＱＣＰＴＰＱＴＶＩＴＳＬＱＱＥＬＣＰＳＦＬＬＰＳＡＰＡＬＧＲＣＦＰＷＴＮＶＴＰＰＡＬＰＧＩＴＮＤＴＴＩＱＱＧＩＳＧＬＩＤＳＬＮＡＲＤＩＳＶＫＩＦＥＤＦＡＱＳＷＹＷＩＬＶＡＬＧＶＡＬＶＬＳＬＬＦＩＬＬＬＲＬＶＡＧＰＬＶＬＶＬＩＬＧＶＬＧＶＬＡＹＧＩＹＹＣＷＥＥＹＲＶＬＲＤＫＧＡＳＩＳＱＬＧＦＴＴＮＬＳＡＹＱＳＶＱＥＴＷＬＡＡＬＩＶＬＡＶＬＥＡＩＬＬＬＭＬＩＦＬＲＱＲＩＲＩＡＩＡＬＬＫＥＡＳＫＡＶＧＱＭＭＳＴＭＦＹＰＬＶＴＦＶＬＬＬＩＣＩＡＹＷＡＭＴＡＬＹＬＡＴＳＧＱＰＱＹＶＬＷＡＳＮＩＳＳＰＧＣＥＫＶＰＩＮＴＳＣＮＰＴＡＨＬＶＮＳＳＣＰＧＬＭＣＶＦＱＧＹＳＳＫＧＬＩＱＲＳＶＦＮＬＱＩＹＧＶＬＧＬＦＷＴＬＮＷＶＬＡＬＧＱＣＶＬＡＧＡＦＡＳＦＹＷＡＦＨＫＰＱＤＩＰＴＦＰＬＩＳＡＦＩＲＴＬＲＹＨＴＧＳＬＡＦＧＡＬＩＬＴＬＶＱＩＡＲＶＩＬＥＹＩＤＨＫＬＲＧＶＱＮＰＶＡＲＣＩＭＣＣＦＫＣＣＬＷＣＬＥＫＦＩＫＦＬＮＲＮＡＹＩＭＩＡＩＹＧＫＮＦＣＶＳＡＫＮＡＦＭＬＬＭＲＮＩＶＲＶＶＶＬＤＫＶＴＤＬＬＬＦＦＧＫＬＬＶＶＧＧＶＧＶＬＳＦＦＦＦＳＧＲＩＰＧＬＧＫＤＦＫＳＰＨＬＮＹＹＷＬＰＩＭＴＳＩＬＧＡＹＶＩＡＳＧＦＦＳＶＦＧＭＣＶＤＴＬＦＬＣＦＬＥＤＬＥＲＮＮＧＳＬＤＲＰＹＹＭＳＫＳＬＬＫＩＬＧＫＫＮＥＡＰＰＤＮＫＫＲＫＫ
（２３）表面タンパク質ＢＭＰＲ１Ｂ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｏ００２３８）
（２４）輸送タンパク質ＳＬＣ７Ａ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ０１６５０）
（２５）表皮前立腺抗原ＳＴＥＡＰ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９ＵＨＥ８）
（２６）卵巣癌抗原ＭＵＣ１６（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８ＷＸＩ７）
（２７）輸送タンパク質ＳＬＣ３４Ａ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｏ９５４３６）
（２８）表面タンパク質ＳＥＭＡ５ｂ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９Ｐ２８３）
（２９）表面タンパク質ＬＹＰＤ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８Ｎ２Ｇ４）
（３０）エンドセリン受容体Ｂ型ＥＤＮＲＢ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ２４５３０）
（３１）薬指タンパク質ＲＮＦ４３（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ６８ＤＶ７）
（３２）前立腺癌関連タンパク質ＳＴＥＡＰ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８ＮＦＴ２）
（３３）カチオンチャンネルＴＲＰＭ４（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８ＴＤ４３）
（３４）補体受容体ＣＤ２１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ２００２３）
（３５）Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質ＣＤ７９ｂ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ４０２５９）
（３６）細胞接着抗原ＣＥＡＣＡＭ６（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ４０１９９）
（３７）ジペプチダーゼＤＰＥＰ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ１６４４４）
（３８）インターロイキン受容体ＩＬ２０Ｒα（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９ＵＨＦ４）
（３９）プロテオグリカンＢＣＡＮ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＧＷ７）
（４０）エフリン受容体ＥＰＨＢ２（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ２９３２３）
（４１）前立腺幹細胞関連タンパク質ＰＳＣＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００５６６３．２）
（４２）表面タンパク質ＬＨＦＰＬ３（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ８６ＵＰ９）
（４３）受容体タンパク質ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＲＪ３）
（４４）Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質ＣＤ７９ａ（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ１１９１２）
（４５）受容体タンパク質ＣＸＣＲ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ３２３０２）
（４６）イオンチャンネルＰ２Ｘ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９３０８６）
（４７）リンパ球抗原ＣＤ１８０（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９９４６７）
（４８）受容体タンパク質ＦＣＲＬ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＬＡ６）
（４９）受容体タンパク質ＦＣＲＬ５（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ９６ＲＤ９）
（５０）ＭＨＣクラスＩＩ分子Ｉａ抗原ＨＬＡ−ＤＯＢ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００２１１１．１）
（５１）Ｔ細胞タンパク質ＶＴＣＮ１（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ７Ｄ３）
（５２）ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９（タンパク質）；配列番号１７０（ＤＮＡ）
（５３）リンパ球抗原ＣＤ３７（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ：Ｐ１１０４９）
（５４）ＦＧＦ受容体２；ＦＧＦＲ２（Ｇｅｎｅ ＩＤ：２２６３；公式記号：ＦＧＦＲ２）．ＦＧＦＲ２受容体は、各種スプライス変異体（α、β、ＩＩＩｂ、ＩＩＩｃ）で生じる。全てのスプライス変異体が標的分子として働き得る。
（５５）膜貫通糖タンパク質Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６；Ｇｅｎｅ ＩＤ：８０３８１．
（５６）Ｂ細胞受容体ＢＡＦＦＲ（ＣＤ２６８；Ｇｅｎｅ ＩＤ：１１５６５０）
（５７）受容体タンパク質ＲＯＲ１（Ｇｅｎｅ ＩＤ：４９１９）
（５８）表面受容体ＩＬ３ＲＡ（ＣＤ１２３；Ｇｅｎｅ ＩＤ：３５６１）
（５９）ＣＸＣケモカイン受容体ＣＸＣＲ５（ＣＤ１８５；Ｇｅｎｅ ＩＤ６４３）
（６０）受容体タンパク質シンシチン（Ｇｅｎｅ ＩＤ３０８１６）。
本発明の好ましい主題において、癌標的分子は、癌標的分子（１）から（６０）、特には（１）、（６）および（５２）からなる群から選択される。
本発明のさらなる特に好ましい主題において、バインダーは、癌標的分子（１）から（６０）、特には（１）、（６）および（５２）からなる群から選択される細胞外癌標的分子に結合する。
本発明のさらなる特に好ましい主題において、バインダーは、癌標的分子（１）から（６０）、特には（１）、（６）および（５２）からなる群から選択される細胞外癌標的分子に特異的に結合する。好ましい実施形態において、バインダーは、標的細胞上のそれの細胞外標的分子への結合後に、その結合の結果として標的細胞によって内在化される。これによって、免疫複合体またはＡＤＣであることができるバインダー／活性化合物複合体が、標的細胞によって取り込まれることになる。次に、バインダーが、好ましくは細胞内で、好ましくはリソソームで処理される。
１実施形態において、バインダーは、結合タンパク質である。好ましい実施形態において、バインダーは、抗体、脱グリコシル化抗体、抗原結合抗体断片、多特異的抗体または抗体模倣体である。
好ましい抗体模倣体は、アフィボディ類、アドネクチン類、アンチカリン類、ＤＡＲＰｉｎ類、アビメール類、またはナノボディ類である。好ましい多特異的抗体は、二重特異性および三重特異性抗体である。
好ましい実施形態において、バインダーは、抗体または抗原結合抗体断片、より好ましくは単離抗体または単離抗原結合抗体断片である。
好ましい抗原結合抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２およびＦｖ断片、二重特異性抗体、ＤＡｂｓ、直鎖抗体およびｓｃＦｖである。特に好ましいのは、Ｆａｂ、二重特異性抗体およびｓｃＦｖである。
特に好ましい実施形態において、バインダーは抗体である。特に好ましいのは、モノクローナル抗体またはそれの抗原結合抗体断片である。さらなる特に好ましいものは、ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体またはそれの抗原結合抗体断片である。
癌標的分子に結合する抗体または抗原結合抗体断片は、例えば化学合成または組換え発現などの公知の方法を用いて当業者が作ることができる。癌標的分子についてのバインダーは、商業的に入手できるか、例えば化学合成または組換え発現などの公知の方法を用いて当業者が作ることができる。抗体または抗原結合性抗体断片を作るさらなる方法については、ＷＯ２００７／０７０５３８に記載されている（２２頁「抗体」参照）。当業者であれば、ファージ提示ライブラリー（例えばＭｏｒｐｈｏｓｙｓ ＨｕＣＡＬ Ｇｏｌｄ）などのプロセスを収集および使用して抗体または抗原結合性抗体断片を発見する方法については知っている（ＷＯ２００７／０７０５３８、２４頁以降および７０頁のＡＫ実施例１、７２頁のＡＫ実施例２参照）。Ｂ細胞からのＤＮＡライブラリーを用いるさらなる抗体取得方法が、例えば２６頁（ＷＯ２００７／０７０５３８）に記載されている。ヒト化抗体についてのプロセスは、ＷＯ２００７０７０５３８の３０−３２頁に記載されており、Ｑｕｅｅｎ、ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３， １９８９またはＷＯ９０／０７８６に詳細に記載されている。さらに、タンパク質一般および特に抗体の組換え発現方法は当業者には公知である（例えば、Ｂｅｒｇｅｒ ａｎｄ Ｋｉｍｒｎｅｌ （Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， Ｖｏ１． １５２， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．）； Ｓａｍｂｒｏｏｋ， ｅｔ ａｌ．， （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， （Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．； １９８９） Ｖｏｌ． １−３）； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， （Ｆ． Ｍ． Ａｕｓａｂｅｌ ｅｔ ａｌ． ［Ｅｄｓ．］， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， Ｉｎｃ． ／ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．）； Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， （Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９８８１， Ｐａｕｌ ［Ｅｄ．］）； Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ （１９９８））； ａｎｄ Ｈａｒｌｏｗ， ｅｔ ａｌ．， （Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （１９９８）参照）。当業者であれば、タンパク質／抗体の発現に必要な相当するベクター、プロモーターおよびシグナルペプチドは知っている。通常プロセスが、ＷＯ２００７／０７０５３８の４１−４５頁にも記載されている。ＩｇＧ１抗体の取得方法が、例えばＷＯ２００７／０７０５３８の７４頁以降の実施例６に記載されている。抗原への結合後の抗体の内在化の決定を可能とするプロセスが当業者には公知であり、例えばＷＯ２００７／０７０５３８の８０頁に記載されている。当業者は、異なる標的分子特異性を有する抗体の作製と同様にして炭酸脱水酵素ＩＸ（Ｍｎ）抗体を作るのに用いられているＷＯ２００７／０７０５３８に記載の方法を用いることができる。
抗ＥＧＦＲ抗体
癌標的分子ＥＧＦＲに結合する抗体の例は、セツキシマブ（ＩＮＮ番号７９０６）、パニツムマブ（ＩＮＮ番号８４９９）およびニモツズマブ（ＩＮＮ番号８５４５）．セツキシマブ（Ｄｒｕｇ Ｂａｎｋ受託番号ＤＢ００００２）は、ＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞で産生され、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ／Ｍｅｒｃｋ ＫｇａＡ／Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．によって販売されているキメラ抗ＥＧＦＲ１抗体である。セツキシマブは、野生型Ｋ−Ｒａｓ遺伝子を有する転移性でＥＧＦＲ発現性の結腸直腸癌の治療に適応される。それは、１０−１０Ｍのアフィニティを有する。
配列：
セツキシマブ軽鎖（κ）、配列番号２３５：
ＤＩＬＬＴＱＳＰＶＩＬＳＶＳＰＧＥＲＶＳＦＳＣＲＡＳＱＳＩＧＴＮＩＨＷＹＱＱＲＴＮＧＳＰＲＬＬＩＫＹＡＳＥＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＳＥＤＩＡＤＹＹＣＱＱＮＮＮＷＰＴＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
セツキシマブ重鎖、配列番号２３６：
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＮＹＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＳＧＧＮＴＤＹＮＴＰＦＴＳＲＬＳＩＮＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＭＮＳＬＱＳＮＤＴＡＩＹＹＣＡＲＡＬＴＹＹＤＹＥＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
パニツムマブ（ＩＮＮ番号８４９９）（Ｄｒｕｇ Ｂａｎｋ受託番号ＤＢ０１２６９）は、Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎによって販売されているヒトＥＧＦ受容体１に特異的に結合する組み換えモノクローナルヒトＩｇＧ２抗体である。パニツムマブは、トランスジェニックマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ）の免疫化が起源である。これらのマウスは、ヒト免疫グロブリン（軽および重鎖）を産生することができる。ＥＧＦＲに対する抗体を産生する特異的Ｂ細胞クローンが選択されており、このクローンはＣＨＯ細胞によって不死化されている（チャイニーズハムスター卵巣細胞）。これらの細胞は現在、１００％ヒト抗体の産生に用いられている。パニツムマブは、フルオロピリミジン、オキサリプラチンおよびイリノテカンによる化学療法に抵抗性であるＥＧＦＲ発現性の転移性結腸直腸癌の治療に適応される。それは、１０−１１Ｍのアフィニティを有する。
配列：
パニツムマブ軽鎖（κ）、配列番号２３７：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＦＣＱＨＦＤＨＬＰＬＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
パニツムマブ重鎖、配列番号２３８：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＶＳＳＧＤＹＹＷＴＷＩＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＩＧＨＩＹＹＳＧＮＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＩＳＩＤＴＳＫＴＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＩＹＹＣＶＲＤＲＶＴＧＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ニモツズマブ（ＩＮＮ番号８５４５）（ＥＰ００５８６００２、ＥＰ００７１２８６３）は、ヒトＥＧＦ受容体１に特異的に結合し、ＹＭ ＢｉｏＳｃｉｅｎｅｃｓ Ｉｎｃ． （Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ Ｃａｎａｄａ）によって販売されているヒト化モノクローナルＩｇＧ１抗体である。それは、非分泌性ＮＳＯ細胞（哺乳動物細胞系）で産生される。ニモツズマブは、頭頸部腫瘍、極めて悪性の星状細胞腫および多形性膠芽腫（ＥＵおよびＵＳでは未承認）および膵臓癌（オーファンドラッグ、ＥＭＡ）の治療用に承認されている。それは、１０−８Ｍのアフィニティを有する。
ニモツズマブ軽鎖、配列番号２３９：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＳＳＱＮＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＤＷＹＱＱＴＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＦＱＹＳＨＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＬＱＩＴＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ニモツズマブ重鎖、配列番号２４０：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＩＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＮＰＴＳＧＧＳＮＦＮＥＫＦＫＴＲＶＴＩＴＡＤＥＳＳＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＦＹＦＣＴＲＱＧＬＷＦＤＳＤＧＲＧＦＤＦＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ。
ＥＧＦＲ抗体のさらなる実施形態は、次の通りである。
●ザルツムマブ／２Ｆ８／ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ、Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓから（ＷＯ０２／１００３４８、ＷＯ２００４／０５６８４７、ＩＮＮ番号８６０５）
●ネシツムマブ／１１Ｆ８、ＩｍＣｌｏｎｅ／ＩＭＣ−１１Ｆ８、ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．［Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ＆ Ｃｏ］から（ＷＯ２００５／０９０４０７（ＥＰ０１７３５３４８−Ａ１、ＵＳ２００７／０２６４２５３−Ａ１、ＵＳ７，５９８，３５０、ＷＯ２００５／０９０４０７−Ａ１）、ＩＮＮ番号９０８３）
●マツズマブ／抗ＥＧＦＲＭＡｂ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ／抗ＥＧＦＲ ＭＡｂ、Ｔａｋｅｄａ／ＥＭＤ７２０００／ＥＭＤ−６２００／ＥＭＤ−７２０００およびＥＭＤ−５５９００／ＭＡｂ４２５／モノクローナル抗体４２５、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ／Ｔａｋｅｄａから（ＷＯ９２／１５６８３、ＩＮＮ番号８１０３（マツズマブ））
●ＲＧ−７１６０／ＧＡ−２０１／ＧＡ２０１／Ｒ−７１６０／Ｒ７１６０／ＲＧ７１６０／ＲＯ−４８５８６９６／ＲＯ−５０８３９４５／ＲＯ４８５８６９６／ＲＯ５０８３９４５、Ｇｌｙｃａｒｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ（Ｒｏｃｈｅ Ｈｏｌｄｉｎｇ ＡＧ）から（ＷＯ２０１０／１１２４１３−Ａ１、ＷＯ２０１０／１１５５５４）
●ＧＴ−ＭＡＢ５．２−ＧＥＸ／ＣｅｔｕＧＥＸ、Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅ ＧＭＢＨ（ＷＯ２００８／０２８６８６−Ａ２から（ＥＰ０１９００７５０−Ａ１、ＥＰ０１９１１７６６−Ａ１、ＥＰ０２０７３８４２−Ａ２、ＵＳ２０１０／００２８９４７−Ａ１）
●ＩＳＵ−１０１、Ｉｓｕ Ａｂｘｉｓ Ｉｎｃ（ＩＳＵ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ Ｌｔｄ）／Ｓｃａｎｃｅｌｌから（ＷＯ２００８／００４８３４−Ａ１）
●ＡＢＴ−８０６／ｍＡｂ−８０６／ｃｈ−８０６／抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体８０６、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ａｂｂｏｔｔ／Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから（ＷＯ０２／０９２７７１、ＷＯ２００５／０８１８５４およびＷＯ２００９／０２３２６５）
●ＳＹＭ−００４（二つのキメラＩｇＧ１抗体（９９２および１０２４）からなる）、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ Ａ／Ｓから（ＷＯ２０１０／０２２７３６−Ａ２）
●ＭＲ１−１／ＭＲ１−１ＫＤＥＬ、ＩＶＡＸ Ｃｏｒｐ（Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｌｔｄ）から（Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、（特許：ＷＯ２００１／０６２９３１−Ａ２）
●欠失変異体に対する抗体、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ａｍｇｅｎ／Ａｂｇｅｎｉｘから（ＷＯ２００５／０１０１５１、ＵＳ７，６２８，９８６）
●ＳＣ−１００、Ｓｃａｎｃｅｌｌ Ｌｔｄから（ＷＯ０１／０８８１３８−Ａ１）
●ＭＤＸ−４４７／ＥＭＤ８２６３３／ＢＡＢ−４４７／Ｈ４４７／ＭＡｂ、ＥＧＦＲ、Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｍｅｒｃｋ ＫｇａＡ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ（ＵＳ）／Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ（ＤＥ）／Ｔａｋｅｄａ（ＪＰ）から、（ＷＯ９１／０５８７１、ＷＯ９２／１５６８３）
●抗ＥＧＦＲ−Ｍａｂ、Ｘｅｎｃｏｒから（ＷＯ２００５／０５６６０６）
●ＤＸＬ−１２１８／抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（癌）、ＩｎＮｅｘｕｓ、ＩｎＮｅｘｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃから、Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ ＰＨ０４８６３８。
好ましい実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、ネシツムマブ、マツズマブ、ＲＧ−７１６、ＧＴ−ＭＡＢ５．２−ＧＥＸ、ＩＳＵ−１０１、ＡＢＴ−８０６、ＳＹＭ−００４、ＭＲ１−１、ＳＣ−１００、ＭＤＸ−４４７およびＤＸＬ−１２１８からなる群から選択される。
特に好ましい実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、ネシツムマブおよびマツズマブからなる群から選択される。
当業者であれば、配列変化によって上記の抗体のＣＤＲ領域からさらなる抗体を製造するのに用いることができる方法については知っており、これらのさらなる抗体は、標的分子についての同様もしくはより良好なアフィニティおよび／または特異性を有する。さらに、当業者であれば、配列変化によって上記抗体のＣＤＲ領域からさらなる抗体を製造するのに用いることができる方法を知っており、これらのさらなる抗体は脱グリコシル化されており、および／またはトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）触媒反応用に１以上のアクセプターグルタミン残基を含むように改変されている。
さらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体または抗原結合抗体断片は、次の抗体：セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、ネシツムマブ、マツズマブ、ＲＧ−７１６、ＧＴ−ＭＡＢ５．２−ＧＥＸ、ＩＳＵ−１０１、ＡＢＴ−８０６、ＳＹＭ−００４、ＭＲ１−１、ＳＣ−１００、ＭＤＸ−４４７およびＤＸＬ−１２１８のうちの一つの軽鎖の３つのＣＤＲ領域および重鎖の３つのＣＤＲ領域を含む抗体または抗原結合抗体断片からなる群から選択される。
さらなる実施形態において、抗ＥＧＦＲ抗体または抗原結合抗体断片は、次の抗体：セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、ネシツムマブ、マツズマブのうちの一つの軽鎖の３つのＣＤＲ領域および重鎖の３つのＣＤＲ領域を含む抗体または抗原結合抗体断片からなる群から選択される。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらを本発明の文脈で用いることができる。
抗炭酸脱水酵素ＩＸ抗体
癌標的分子炭酸脱水酵素ＩＸに結合する抗体の例が、ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２（例えば、請求項１から１６）に記載されている。
好ましい実施形態において、抗炭酸脱水酵素ＩＸ抗体または抗原結合抗体断片は、抗炭酸脱水酵素ＩＸ抗体または抗原結合抗体断片３ｅｅ９（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ａ））、３ｅｆ２（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｂ））、１ｅ４（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｃ））、３ａ４（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｄ））、３ａｂ４（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｅ））、３ａｈ１０（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｆ））、３ｂｂ２（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｇ））、１ａａ１（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｈ））、５ａ６（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｉ））および５ａａ３（ＷＯ２００７／０７０５３８−Ａ２の請求項４（ｊ））からなる群から選択される。
抗Ｃ４．４ａ抗体：
本発明によれば、Ｃ４．４ａ抗体を用いることができる。
Ｃ４．４ａ抗体および抗原結合性断片の例は、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２に記載されている。参照によって、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２の全ての抗体は本明細書に組み込まれ、それらを本発明で用いることができる。その抗体の配列がＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２の表１にあり、その表中で各列は、第１欄に挙げられた抗体の可変軽鎖または可変重鎖の個々のＣＤＲアミノ酸配列を示している。
１実施形態において、抗Ｃ４．４ａ抗体またはそれの抗原結合抗体断片は、Ｃ４．４ａを発現する細胞に結合した後に、その細胞によって内在化される。
さらなる実施形態において、抗Ｃ４．４ａ抗体または抗原結合抗体断片は、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２の表１またはＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２の表２に挙げた抗体の少なくとも一つ、二つまたは三つのＣＤＲアミノ酸配列を含む。そのような抗体の好ましい実施形態も同様に、ＷＯ２０１２／１４３４９９Ａ２に列記されており、参照によって本明細書に組み込まれる。
抗ＨＥＲ２抗体：
癌標的分子Ｈｅｒ２に結合する抗体の例には、トラスツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）がある。トラスツズマブは、特に乳癌治療に用いられるヒト化抗体である。
ＨＥＲ２に結合する抗体のさらなる例は、トラスツズマブ（ＩＮＮ７６３７、ＣＡＳ番号：ＲＮ：１８０２８８−６９−１）およびペルツズマブ（ＣＡＳ番号３８０６１０−２７−５）に加えて、ＷＯ２００９／１２３８９４−Ａ２、ＷＯ２００／８１４０６０３−Ａ２またはＷＯ２０１１／０４４３６８−Ａ２に開示の抗体である。抗ＨＥＲ２複合体の例は、トラスツズマブ−エムタンシン（ＩＮＮ番号９２９５）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ２０抗体：
癌標的分子ＣＤ２０に結合する抗体の例は、リツキシマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）である。リツキシマブ（ＣＡＳ番号：１７４７２２−３１−７）は、非ホジキンリンパ腫の治療に使用されるキメラ抗体である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ５２抗体：
癌標的分子ＣＤ５２に結合する抗体の例は、アレムツズマブ（Ｇｅｎｚｙｍｅ）である。アレムツズマブ（ＣＡＳ番号：２１６５０３−５７−０）は、慢性リンパ性白血病の治療に用いられるヒト化抗体である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗メソテリン抗体：
抗メソテリン抗体の例が、例えばＷＯ２００９／０６８２０４に記載されている。参照によって、ＷＯ２００９／０６８２０４に記載の全ての抗体が、本記載に組み込まれることで、これら抗体を、本明細書に開示の本発明の文脈で用いることができる。
本発明に従って用いられる抗メソテリン抗体は、好ましくはメソテリンに結合する不変異体においても注目すべきものである。不変異体結合は、例えば、本発明に従って使用される抗体が、さらなる細胞外タンパク質によってマスクできないメソテリンのエピトープに結合することを特徴とする。そのようなさらなる細胞外タンパク質は、例えば、タンパク質卵巣癌抗原１２５（ＣＡ１２５）である。好ましく使用される抗体は、それのメソテリンへの結合がＣＡ１２５によってブロックされないことを特徴とする。
抗ＣＤ３０抗体
癌標的分子ＣＤ３０に結合し、癌、例えばホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例は、ブレンツキシマブ、イラツムマブ（ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）およびＷＯ２００８／０９２１１７、ＷＯ２００８／０３６６８８またはＷＯ２００６／０８９２３２に開示の抗体である。抗ＣＤ３０複合体の例は、ブレンツキシマブベドチン（ＩＮＮ番号９１４４）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ２２抗体
癌標的分子ＣＤ２２に結合し、癌、例えばリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例は、イノツズマブおよびエプラツズマブである。抗ＣＤ２２複合体の例は、イノツズマブオザガマイシン（ｏｚａｇａｍｙｃｉｎ）（ＩＮＮ番号８５７４）または抗ＣＤ２２−ＭＭＡＥおよび抗ＣＤ２２−ＭＣ−ＭＭＡＥ（それぞれＣＡＳＲＮ：１３９５０４−５０−０および４７４６４５−２７−７）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ３３抗体
癌標的分子ＣＤ３３に結合し、癌、例えば白血病の治療に用いることができる抗体の例は、ゲムツヅマブおよびリンツズマブ（ＩＮＮ７５８０）である。抗ＣＤ３３複合体の例は、ゲムツヅマブ−オザガマイシン（ｏｚａｇａｍｙｃｉｎ）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＮＭＢ抗体
癌標的分子ＮＭＢに結合し、癌、例えばメラノーマまたは乳癌の治療に用いることができる抗体の例はグレンバツムマブ（ＩＮＮ９１９９）である。抗ＮＭＢ複合体の例は、グレンバツムマブベドチン（ＣＡＳＲＮ：４７４６４５−２７−７）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ５６抗体
癌標的分子ＣＤ５６に結合し、癌、例えば多発性骨髄種、小細胞肺癌、ＭＣＣまたは卵巣癌の治療に用いることができる抗体の例は、ロルボツズマブである。抗ＣＤ５６複合体の例は、ロルボツズマブメルタンシン（ＣＡＳＲＮ：１３９５０４−５０−０）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ７０抗体
癌標的分子ＣＤ７０に結合し、癌、例えば非ホジキンリンパ腫または腎細胞癌の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００７／０３８６３７−Ａ２およびＷＯ２００８／０７０５９３−Ａ２に開示されている。抗ＣＤ７０複合体の例は、ＳＧＮ−７５（ＣＤ７０ＭＭＡＦ）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ７４抗体
癌標的分子ＣＤ７４に結合し、癌、例えば多発性骨髄種の治療に用いることができる抗体の例は、ミラツズマブである。抗ＣＤ７４複合体の例は、ミラツズマブ−ドキソルビシン（ＣＡＳＲＮ：２３２１４−９２−８）である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ１９抗体
癌標的分子ＣＤ１９に結合し、癌、例えば非ホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００８／０３１０５６−Ａ２に開示されている。さらなる抗体および抗ＣＤ１９複合体（ＳＡＲ３４１９）の例が、ＷＯ２００８／０４７２４２−Ａ２に開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ムチン抗体
癌標的分子ムチン−１に結合し、癌、例えば非ホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体の例は、クリバツズマブおよびＷＯ２００３／１０６４９５−Ａ２、ＷＯ２００８／０２８６８６−Ａ２に開示の抗体である。抗ムチン複合体の例は、ＷＯ２００５／００９３６９−Ａ２で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＣＤ１３８抗体
癌標的分子ＣＤ１３８およびそれの複合体に結合し、癌、例えば多発性骨髄種の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００９／０８０８２９−Ａ１、ＷＯ２００９／０８０８３０−Ａ１で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗インテグリン−αＶ抗体
癌標的分子インテグリンαＶに結合し、癌、例えばメラノーマ、肉腫または癌腫の治療に用いることができる抗体の例は、インテツムマブ（ＣＡＳＲＮ：７２５７３５−２８−４）、アブシキシマブ（ＣＡＳＲＮ：１４３６５３−５３−６）、エタラシズマブ（ＣＡＳＲＮ：８９２５５３−４２−３）およびＵＳ７，４６５，４４９、ＥＰ７１９８５９−Ａ１、ＷＯ２００２／０１２５０１−Ａ１およびＷＯ２００６／０６２７７９−Ａ２に開示の抗体である。抗インテグリンαＶ複合体の例は、インテツムマブ−ＤＭ４およびＷＯ２００７／０２４５３６−Ａ２で開示の他のＡＤＣ類である。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＴＤＧＦ１抗体
癌標的分子ＴＤＧＦ１に結合し、癌の治療に用いることができる抗体の例は、ＷＯ０２／０７７０３３−Ａ１、ＵＳ７，３１８，９２４、ＷＯ２００３／０８３０４１−Ａ２およびＷＯ２００２／０８８１７０−Ａ２に開示の抗体である。抗ＴＤＧＦ１複合体の例が、ＷＯ２００２／０８８１７０−Ａ２に開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＰＳＭＡ抗体
癌標的分子ＰＳＭＡに結合し、癌、例えば前立腺癌の治療に用いることができる抗体の例は、ＷＯ９７／３５６１６−Ａ１、ＷＯ９９／４７５５４−Ａ１、ＷＯ０１／００９１９２−Ａ１およびＷＯ２００３／０３４９０３に開示の抗体である。抗ＰＳＭＡ複合体の例が、ＷＯ２００９／０２６２７４−Ａ１およびＷＯ２００７／００２２２２で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＥＰＨＡ２抗体
癌標的分子ＥＰＨＡ２に結合し、複合体の製造および癌の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００４／０９１３７５−Ａ２で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体
癌標的分子ＳＬＣ４４Ａ４に結合し、複合体の製造および癌、例えば膵臓癌または前立腺癌の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００９／０３３０９４−Ａ２およびＵＳ２００９／０１７５７９６−Ａ１で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＨＬＡ−ＤＯＢ抗体
癌標的分子ＨＬＡ−ＤＯＢに結合する抗体の例は、癌、例えば非ホジキンリンパ腫の治療に用いることができる抗体Ｌｙｍ−１（ＣＡＳＲＮ：３０１３４４−９９−０）である。抗ＨＬＡ−ＤＯＢ複合体の例が、例えば、ＷＯ２００５／０８１７１１−Ａ２に開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＶＴＣＮ１抗体
癌標的分子ＶＴＣＮ１に結合し、複合体の製造および癌、例えば卵巣癌、膵臓癌、肺癌または乳癌の治療に用いることができる抗体の例が、ＷＯ２００６／０７４４１８−Ａ２で開示されている。参照によって、これらの抗体およびそれの抗原結合性断片は本明細書に組み込まれ、それらは本発明の文脈で使用することができる。
抗ＦＧＦＲ２抗体
本発明によれば、抗ＦＧＦＲ２抗体を用いることができる。
抗ＦＧＦＲ２抗体および抗原結合性断片の例がＷＯ２０１３０７６１８６に記載されている。参照によって、ＷＯ２０１３０７６１８６の全ての抗体が、本発明の説明に組み込まれ、それらを本発明で用いることができる。抗体の配列が、ＷＯ２０１３０７６１８６の表９および表１０に示されている。好ましいものは、Ｍ０４８−Ｄ０１およびＭ０４７−Ｄ０８と称される抗体、抗原結合性断片およびその抗体由来の抗体の変異体である。好ましい抗ＦＧＦＲ２は、ＦＧＦＲ２と称される各種スプライス変異体に結合する。
１実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体またはそれの抗原結合抗体断片は、ＦＧＦＲ２を発現する細胞に結合した後、その細胞によって内在化される。
さらなる実施形態において、抗ＦＧＦＲ２抗体または抗原結合抗体断片は、ＷＯ２０１３０７６１８６の表９または表１０に挙げた抗体の少なくとも一つ、二つまたは三つのＣＤＲアミノ酸配列を含む。そのような抗体の好ましい実施形態も同様に、ＷＯ２０１３０７６１８６に列記されており、参照によって本明細書に組み込まれる。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体
好ましい実施形態において、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはそれの抗原結合性断片を本発明による方法で用いる場合、この抗体または断片は、下記のものから選択される。さらに、ＴＷＥＡＫＲに結合する抗体は当業者に知られており、例えば、ＷＯ２０１５／１８９１４３（Ａ１）、ＷＯ２０１４／１９８８１７（Ａ１）、ＷＯ２００９／０２０９３３（Ａ２）またはＷＯ２００９１４０１７７（Ａ２）を参照する。さらに、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによって、または重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって形成された記載の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の脱グリコシル化変異体を、本発明による方法で用いる。さらに、これら抗体の変異体を、トランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）触媒反応のための１以上のアクセプターグルタミン残基を含むように改変した。
本発明は特に、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９（タンパク質）；配列番号１７０（ＤＮＡ））の強い活性化を生じることでＴＷＥＡＫＲを過剰発現する各種癌細胞におけるアポトーシスを強く誘発する抗体またはそれの抗原結合性抗体断片またはそれらの変異体との複合体に関するものである。
アポトーシス誘発および既述の抗ＴＷＥＡＫＲ抗体（例えばＰＤＬ−１９２）の増殖の阻害に関係するＴＷＥＡＫＲのアゴニスト活性が制限され、内因性リガンドＴＷＥＡＫの効力に達しない。これらの抗体は、内因性リガンドＴＷＥＡＫと比較して、同様の範囲であるアフィニティでＴＷＥＡＫＲで結合し（Ｍｉｃｈａｅｌｓｏｎ ＪＳ ｅｔ ａｌ．， ＭＡｂｓ． ２０１１ Ｊｕｌ−Ａｕｇ；３（４）：３６２−７５；Ｃｕｌｐ ＰＡ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１０ Ｊａｎ １５；１６（２）：４９７−５０８）、そして、より高い結合アフィニティを有する抗体でさえ、必ずしもより効果的なシグナル伝達活性を示すとは限らない（Ｃｕｌｐ ＰＡ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２０１０ Ｊａｎ １５；１６（２）：４９７−５０８）ことから、このアゴニスト活性の欠如はアフィニティ低下に基づくものではない。さらに、既述の抗体の抗腫瘍活性はＦｃエフェクター機能によって決まることが明らかになり、ＡＤＣＣがマウスモデルでのイン・ビボ効力において重要な役割を果たすことが明らかになっている。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の形成
完全ヒト抗体ファージライブラリー（Ｈｏｅｔ ＲＭ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：３４４−８）を用いて、固定化標的としてヒトおよびマウス−ＴＷＥＡＫＲの二量体Ｆｃ融合細胞外ドメインを用いるタンパク質パニング（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．Ｒ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：１１０５−１６）によって、本発明のＴＷＥＡＫＲ特異ヒトモノクローナル抗体を単離した。１１種類の異なるＦａｂファージを同定し、可溶性ＦＡｂのないＣＨ２−ＣＨ３ドメインを提供する哺乳動物ＥｇＧ発現ベクターで、相当する抗体をクローニングした。好ましい抗体を同定した後、これらを全長ＩｇＧとして発現した。個々の抗体の重鎖において突然変異Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑを導入することで、記載の抗体の脱グリコシル化変異体を形成した。その構築物を、例えば、Ｔｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈａｐｔｅｒ１２， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ： Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ， 編者Ｍｉｃｈａｅｌ Ｒ． Ｄｙｓｏｎ ａｎｄ Ｙｖｅｓ Ｄｕｒｏｃｈｅｒ、Ｓｃｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ， ２００７ （ＡＫ実施例１参照）によって記載の方法に従って、哺乳動物細胞で一時的に発現させた。それらの抗体をタンパク質Ａクロマトグラフィーによって精製し、ＡＫ実施例２に記載の方法に従って、ＥＬＩＳＡおよびＢＩＡｃｏｒｅ分析を用いる可溶性モノマーＴＷＥＡＫＲに対する結合アフィニティによってさらに特性決定した。抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の細胞結合特性を確認するため、多くの細胞系（ＨＴ２９、ＨＳ６８、ＨＳ５７８）に関して、結合をフローサイトメトリーによって調べた。ＮＦκＢレポーター遺伝子アッセイを行って、同定した１１種類全ての抗体（ヒトＩｇＧ１）のアゴニスト活性を調べた。最も高いイン・ビトロ活性を有する抗体（ＴＰＰ−８８３）を、さらなる活性およびアフィニティ成熟に関して選択した（詳細については、ＡＫ実施例１参照）。改善されたアゴニスト活性を有する単一の置換変異体：ＣＤＲ−Ｈ３のＧ１０２Ｔが検出された。結局、最良の単一置換変異体Ｇ１０２Ｔと比較しての高いアフィニティに基づいて、７種類の変異体を選択した。それの相当するＤＮＡを、哺乳動物ＩｇＧ発現ベクターにクローニングし、上記のＮＦ−κＢレポーター遺伝子アッセイでの機能活性について調べた。結局、得られた配列をヒト生殖系列配列と比較し、アフィニティおよび効力に対してほとんど効果のない逸脱を調整した。抗体ライブラリースクリーニングにより、そしてアフィニティおよび／または活性成熟によって、次の抗体：「ＴＰＰ−２０９０」、「ＴＰＰ−２１４９」、「ＴＰＰ−２０９３」、「ＴＰＰ−２１４８」、「ＴＰＰ−２０８４」、「ＴＰＰ−２０７７」、「ＴＰＰ−１５３８」、「ＴＰＰ−８８３」、「ＴＰＰ−１８５４」、「ＴＰＰ−１８５３」、「ＴＰＰ−１８５７」、および「ＴＰＰ−１８５８」を得た。
本発明の抗体は、抗体ファージ提示スクリーニングなどの当業界で公知の方法（例えば、Ｈｏｅｔ ＲＭ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：３４４−８参照）、確立されたハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ． １９７５ Ａｕｇ ７；２５６（５５１７）：４９５−７参照）、またはマウスの免疫化、特にはｈＭＡｂマウスの免疫化（例えばＶｅｌｏｃ免疫マウス（登録商標））によってさらに得ることができる。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の特定の実施形態
本発明の１実施形態は、１以上のＴＷＥＡＫＲ発現細胞系においてカスパーゼ３／７の強い誘発を示す抗体またはそれの抗原結合性抗体断片またはそれらの変異体を提供することである（ＷＯ２０１５／１８９１４３Ａ１およびＷＯ２０１４／１９８８１７Ａ１も参照）。好ましい実施形態において、１以上のＴＷＥＡＫＲ発現細胞系が、ＷｉＤｒ、Ａ２５３、ＮＣＩ−Ｈ３２２、ＨＴ２９および７８６−Ｏからなる群に存在する。本明細書に記載の方法などの当業界で公知の一般的な方法によって、「カスパーゼ３／７の誘発」を測定することができる。１実施形態において、「カスパーゼ３／７の誘発」を、本発明に従って、カスパーゼ３／７溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｇ８０９３）を用いた活性測定およびＶＩＣＴＯＲ Ｖ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）での発光の読取値を用いて求める。インキュベーション時間が終了した後、カスパーゼ３／７活性を求め、カスパーゼ３／７の誘発係数を、未処理細胞との比較で求めた。抗体は、誘発係数が１．２より大きい、好ましくは１．５より大きい、さらにより好ましくは１．８より大きい、さらにより好ましくは２．１より大きい、さらにより好ましくは２．５より大きい場合に、カスパーゼ３／７の「強い誘発」を示すものと言われる。既述のアゴニスト抗体［例えばＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）、Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）、１３６．１（ＴＰＰ−２１９４）］と比較して、さらには３００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＴＷＥＡＫと比較して、ＨＴ２９細胞でのカスパーゼ３／７誘発がより強い抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が提供される。癌細胞でのカスパーゼ３／７誘発におけるこの強い活性は、ＷｉＤｒ、Ａ２５３、ＮＩＣ−Ｈ３２２および７８６−Ｏ細胞でも認められ、その場合に、ほとんどの実験で、調べた本発明の抗体が、参考抗体［ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）、Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）］および３００ｎｇ／ｍＬのＴＷＥＡＫと比べて高い変動係数を誘発した。本発明の一部の抗体は、中等度のアフィニティ（＞１０ｎＭ）でのみＴＷＥＡＫＲに結合し、それは内因性リガンドＴＷＥＡＫのアフィニティより明らかに小さく、他の既知のアゴニスト抗体の場合より小さかった。この特性は、例えば、腫瘍への浸透がより深くなる可能性などのさらなる可能な利点を提供するものである。
これに関して、本発明の１実施形態は、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９；図１も参照）の位置４７（Ｄ４７）でアスパラギン酸（Ｄ）に選択的に結合することを特徴とする、新たなエピトープでＴＷＥＡＫＲに特異的に結合する抗体またはそれの抗原結合性抗体断片を提供することにある。抗体相互作用についてのある種のＴＷＥＡＫＲアミノ酸について確認された依存性は、これらの抗体において測定されたアゴニスト活性と相関するものである。自然リガンドＴＷＥＡＫは、ＴＷＥＡＫＲの効果的活性化を示し、ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインにおいてロイシン４６に応じて結合する（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， ＦＥＢＳ ２８０：１８１８−１８２９）。Ｐ４Ａ８は非常に低いアゴニスト活性を示し、ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインの外のドメインと少なくとも部分的に相互作用する。ＰＬＤ−１９２は、中等度のアゴニスト活性を示し、Ｒ５６に応じてシステイン豊富ドメインに結合するが、ＴＷＥＡＫリガンド部位と反対である。本発明の抗体（例えばＴＰＰ−２０９０）はＤ４７に応じて結合し、ＴＷＥＡＫはＬ４６に応じて結合する。従って、ＴＷＥＡＫは、同様であるが異なる結合部位に結合する（図７）。従って、強いアゴニスト活性を示す本発明の抗体は、非常に高いアゴニスト活性に関連する抗体についての新規なエピトープに結合する（Ｄ４７依存性）。
ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）のアミノ酸は、本発明による抗体の結合に必須であると考えられ、それはＡＫ実施例２および図６に記載のように、この残基をアラニンに変えることによって、抗体がそれのＥＬＩＳＡシグナルの２０％強、あるいは３０％強、あるいは４０％強、あるいは５０％強、あるいは６０％強、あるいは７０％強、あるいは８０％強、あるいは９０％強、あるいは１００％を失ったら、抗体がＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるＤに特異的に結合することを意味する。あるいは、抗体がＴＰＰ−２２０３と比較してＴＰＰ−２６１４へのそれのＥＬＩＳＡシグナルの２０％強、あるいは３０％強、あるいは４０％強、あるいは５０％強、あるいは６０％強、あるいは７０％強、あるいは８０％強、あるいは９０％強、あるいは１００％を失うと、抗体はＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるＤに特異的に結合する。好ましくは、抗体がＴＰＰ−２２０３と比較してＴＰＰ−２６１４へのそれのＥＬＩＳＡシグナルの８０％強を失うと、抗体はＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるＤに特異的に結合する。
本願では、下記の表で示したように、次の本発明の好ましい抗体：「ＴＰＰ−２０９０」、「ＴＰＰ−２１４９」、「ＴＰＰ−２０９３」、「ＴＰＰ−２１４８」、「ＴＰＰ−２０８４」、「ＴＰＰ−２０７７」、「ＴＰＰ−１５３８」、「ＴＰＰ−８８３」、「ＴＰＰ−１８５４」、「ＴＰＰ−１８５３」、「ＴＰＰ−１８５７」、「ＴＰＰ−１８５８」を挙げている。
表：抗体のタンパク質配列
Figure 2018528161
ＴＰＰ−２０９０は、配列番号２に相当する重鎖の領域および配列番号１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２６５８は、配列番号２４１に相当する重鎖の領域および配列番号１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−５４４２は、配列番号２４２に相当する重鎖の領域および配列番号１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−８８２５は、配列番号２４３に相当する重鎖の領域および配列番号１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２１４９は、配列番号１２に相当する重鎖の領域および配列番号１１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０９３は、配列番号２２に相当する重鎖の領域および配列番号２１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２１４８は、配列番号３２に相当する重鎖の領域および配列番号３１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０８４は、配列番号４２に相当する重鎖の領域および配列番号４１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０７７は、配列番号５２に相当する重鎖の領域および配列番号５１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１５３８は、配列番号６２に相当する重鎖の領域および配列番号６１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−８８３は、配列番号７２に相当する重鎖の領域および配列番号７１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５４は、番号８２に相当する重鎖の領域配列および配列番号８１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５３は、配列番号９２に相当する重鎖の領域および配列番号９１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５７は、配列番号１０２に相当する重鎖の領域および配列番号１０１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５８は、番号１１２に相当する重鎖の領域配列および配列番号１１１に相当する軽鎖の領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０９０は、配列番号１０に相当する重鎖の可変領域および配列番号９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２１４９は、配列番号２０に相当する重鎖の可変領域および配列番号１９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０９３は、配列番号３０に相当する重鎖の可変領域および配列番号２９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２１４８は、配列番号４０に相当する重鎖の可変領域および配列番号３９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０８４は、配列番号５０に相当する重鎖の可変領域および配列番号４９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−２０７７は、配列番号６０に相当する重鎖の可変領域および配列番号５９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１５３８は、配列番号７０に相当する重鎖の可変領域および配列番号６９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−８８３は、配列番号８０に相当する重鎖の可変領域および配列番号７９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５４は、配列番号９０に相当する重鎖の可変領域および配列番号８９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５３は、配列番号１００に相当する重鎖の可変領域および配列番号９９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５７は、配列番号１１０に相当する重鎖の可変領域および配列番号１０９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
ＴＰＰ−１８５８は、配列番号１２０に相当する重鎖の可変領域および配列番号１１９に相当する軽鎖の可変領域を含む抗体である。
表：本発明による抗体のＤＮＡ配列
Figure 2018528161
Figure 2018528161
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の好ましい実施形態は、下記のものである。
１．ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）でＤに特異的に結合する抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、脱グリコシル化変異体、またはそれの抗原結合性断片。
２．抗体がアゴニスト抗体である実施形態１による抗体またはそれの抗原結合性断片。
３．
（ａ）式ＰＹＰＭＸ（ＸはＩまたはＭである。）を含むアミノ酸配列（配列番号１７１）によってコードされた重鎖のＣＤＲ１；
（ｂ）式ＹＩＳＰＳＧＧＸＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（ＸはＳまたはＫである。）を含むアミノ酸配列（配列番号１７２）によってコードされた重鎖のＣＤＲ２；および
（ｃ）式ＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹを含むアミノ酸配列（配列番号１７３）によってコードされた重鎖のＣＤＲ３
を含む可変重鎖
および
（ａ）式ＲＡＳＱＳＩＳＸＹＬＮ（ＸはＧまたはＳである。）を含むアミノ酸配列（配列番号１７４）によってコードされた軽鎖のＣＤＲ１；
（ｂ）式ＸＡＳＳＬＱＳ（ＸはＱ、ＡまたはＮである。）を含むアミノ酸配列（配列番号１７５）によってコードされた軽鎖のＣＤＲ２；および
（ｃ）式ＱＱＳＹＸＸＰＸＩＴ（位置５でのＸはＴまたはＳであり、位置６でのＸはＴまたはＳであり、位置８でのＸはＧまたはＦである。）を含むアミノ酸配列（配列番号１７６）によってコードされた軽鎖のＣＤＲ３
を含む可変軽鎖
を含む実施形態１または２による抗体またはそれの抗原結合性断片。
４．
ａ．配列番号６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｂ．配列番号１６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号１８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号１３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号１５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｃ．配列番号２６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号２７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号２８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号２３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号２４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号２５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｄ．配列番号３６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号３８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号３３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号３４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号３５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｅ．配列番号４６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号４７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号４８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号４３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号４４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号４５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｆ．配列番号５６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号５７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号５８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号５３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号５４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号５５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｇ．配列番号６６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号６７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号６８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号６３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号６４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号６５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｈ．配列番号７６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号７７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号７８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号７３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号７４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号７５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｉ．配列番号８６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号８７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号８８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号８３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号８４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号８５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｊ．配列番号９６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号９７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号９８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号９３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号９４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号９５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｋ．配列番号１０６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１０７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号１０８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号１０３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１０４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号１０５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖または
ｌ．配列番号１１６に示した重鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１１７に示した重鎖の可変ＣＤＲ２配列、配列番号１１８に示した重鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変重鎖、そしてさらに
配列番号１１３に示した軽鎖の可変ＣＤＲ１配列、配列番号１１４に示した軽鎖の可変ＣＤＲ２配列および配列番号１１５に示した軽鎖の可変ＣＤＲ３配列を含む可変軽鎖
を含む前出の実施形態のいずれかによる抗体またはそれの抗原結合性断片。
５．
ａ．配列番号１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｂ．配列番号２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｃ．配列番号３０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号２９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｄ．配列番号４０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号３９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｅ．配列配列番号５０に示した重鎖の可変性、そしてさらに配列番号４９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｆ．配列番号６０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号５９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｇ．配列番号７０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号６９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｈ．配列番号８０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号７９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｉ．配列番号９０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号８９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｊ．配列番号１００に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｋ．配列番号１１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１０９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｌ．配列番号１２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１１９に示した軽鎖の可変性配列
を含む前出の実施形態のいずれかによる抗体またはそれの抗原結合性断片。
６．ＩｇＧ抗体である前出の実施形態のいずれかによる抗体。
７．
ａ．配列番号２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１に示した軽鎖の配列、または
ｂ．配列番号１２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１１に示した軽鎖の配列、または
ｃ．配列番号２２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号２１に示した軽鎖の配列、または
ｄ．配列番号３２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号３１に示した軽鎖の配列、または
ｅ．配列番号４２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号４１に示した軽鎖の配列、または
ｆ．配列番号５２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号５１に示した軽鎖の配列、または
ｇ．配列番号６２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号６１に示した軽鎖の配列、または
ｈ．配列番号７２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号７１に示した軽鎖の配列、または
ｉ．配列番号８２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号８１に示した軽鎖の配列、または
ｊ．配列番号９２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号９１に示した軽鎖の配列、または
ｋ．配列番号１０２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１０１に示した軽鎖の配列、または
ｌ．配列番号１１２に示した重鎖の配列、そしてさらに配列番号１１１に示した軽鎖の配列
を含む前出の実施形態のいずれかによる抗体。
８．ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′断片またはＦ（ａｂ′）２断片である前出の実施形態のいずれかによる抗原結合性断片または前出の実施形態のいずれかによる抗体の抗原結合性断片。
９．モノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片である、前出の実施形態のいずれかによる抗体またはそれの抗原結合性断片。
１０．ヒト、ヒト化もしくはキメラ抗体または抗原結合性断片である前出の実施形態のいずれかによる抗体またはそれの抗原結合性断片。
特に好ましいものは、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０である。
本発明の１実施形態は、キネシン紡錘体タンパク質阻害剤のトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）介在複合体化に好適な抗体を提供するものである。
ヒトアイソタイプの野生型全長ＩｇＧ抗体は、ＴＧａｓｅの存在下にアクセス可能で反応性である重鎖の残基２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）に保存アクセプターグルタミンを有することで、抗体が非グリコシル化型である場合に、抗体および好適な化合物から複合体を形成する。そのような「脱グリコシル」または「脱グリコシル化抗体」または「脱グリコシル抗体」は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおける保存Ｎ連結部位に結合したグリカンを持たないＦｃ領域を含む。
脱グリコシル抗体は、例えばグリコシル化を持たない発現系で抗体を発現させることで発生させることができる。脱グリコシル抗体は、原核生物宿主での抗体の発現によって製造することができる。好適な原核生物宿主には、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ならびにシュードモナス属、ストレプトミセス属およびスタフィロコッカス属の各種生物種などがあるが、これらに限定されるものではない。本発明の別の実施形態において、脱グリコシル抗体は、グリコシル化阻害剤ツニカマイシンとともに哺乳動物発現系を用いて達成することができる（Ｎｏｓｅ ＆ Ｗｉｇｚｅｌｌ （１９８３）， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ８０（２１）：６６３２−６）。すなわち、その修飾は、前記抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインにおける保存Ｎ連結部位でのグリコシル化の防止である。本発明の別の実施形態において、Ｆｃ領域抗体のＣＨ２ドメインにおける保存Ｎ連結部位に結合したグリカンを除去し、それは、抗体が脱グリコシルであることを意味する。抗体の酵素的脱グリコシル方法は、当業界で公知である（例えば、Ｗｉｎｋｅｌｈａｋｅ ＆ Ｎｉｃｏｌｓｏｎ （１９７６）， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２５１（４）：１０７４−８０）。脱グリコシル化抗体は、例えばＰＮＧａｓｅＦを用いる酵素的脱グリコシルによって製造することができる。
本発明の別の実施形態において、脱グリコシル化抗体は、Ｎ２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリングを使用）の重鎖グリコシル化部位の突然変異によって製造される。そのような改変脱グリコシル化抗体の酵素的複合体化が、突然変異Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ（Ｊｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ ４９， ９９９５−９９９７（２０１０））、またはＮ２９７Ｓ（特許出願ＷＯ２０１３０９２９９８Ａ１およびＷＯ２０１３０９２９８３Ａ２を参照）を有する脱グリコシル化抗体変異体について記載されている。さらに、本発明は、トランスグルタミナーゼが突然変異Ｎ２９７Ａ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を有する脱グリコシル化抗体変異体への複合体化を効率的に触媒する可能性のあることを示すものである。
ＴＧａｓｅ存在下で反応性のさらなる部位または別の部位を、抗体の操作によって作ることができる。本発明の化合物は、野生型または親抗体の１以上のアミノ酸がグルタミンアミノ酸で置き換わっているか（それによって置換）、グルタミン残基が、適宜に他のアミノ酸残基（例えばアクセプターグルタミン残基を含む標識）とともに、野生型または親に導入または付加されるグルタミン改変抗体を含む。
ＴＧａｓｅにアクセス可能なグルタミンを提供する単一部位突然変異は、抗体が複数の改変鎖を含む場合に複合体化し得る複数の改変グルタミン残基を生じ得る。例えば、単一部位突然変異は、ＩｇＧ抗体の二量体性のために、ＩｇＧに二つの改変グルタミン残基を生じる。
好適な条件下でＴＧａｓｅの存在下に反応性である抗体のグルタミンアミノ酸残基が、重鎖、代表的には定常領域において重鎖にあり得る。１実施形態において、アミノ酸位置２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のアスパラギンが、グルタミンと異なる残基で置き換わっている。好ましいものはＮ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７ＳまたはＮ２９７Ａであり、非常に好ましいものはＮ２９７Ａである。その抗体は、Ｎ２９７Ｘ置換のある定常領域を有する。従って、Ｎ２９７Ｘ置換および残基２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）でグルタミンを有する抗体は、一つのアクセプターグルタミン、従って、重鎖当たり一つの結合部位を有することになる。従って、完全ＩｇＧ型は、抗体当たり二つの複合体を有することになる。
好適な条件下でＴＧａｓｅの存在下に反応性である抗体のグルタミンアミノ酸残基が、重鎖、代表的には定常領域において重鎖にあり得る。１実施形態において、アミノ酸位置２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のアスパラギンが、グルタミン残基で置き換わっている。その抗体は、Ｎ２９７Ｑ置換のある定常領域を有する。従って、Ｎ２９７Ｑ置換および残基２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）でグルタミンを有する抗体は、二つのアクセプターグルタミン、従って、重鎖当たり二つの結合部位を有することになる。従って、完全ＩｇＧ型は、抗体当たり四つの複合体を有することになる。
好適な条件下でＴＧａｓｅの存在下に反応性である抗体のグルタミンアミノ酸残基が、重鎖、代表的には定常領域において重鎖にあり得る。１実施形態において、アミノ酸位置２９７（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のアスパラギンが、グルタミン残基で置換されており、位置２９５（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）で、グルタミンが置き換わっている。その抗体は、Ｎ２９７ＱおよびＱ２９５Ｘ置換のある定常領域を有することになる。好ましいのはＱ２９５Ｎ置換である。従って、Ｎ２９７Ｑ置換を有し、残基２９５（ＥＵナンバリング）でグルタミンを持たない抗体は、一つのアクセプターグルタミン、従って重鎖当たり一つの結合部位を有することになる。従って、完全ＩｇＧ型は、抗体当たり二つの複合体を有することになる。
トランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）介在複合体化に好適な好ましい抗体は、
ｉ．Ｘがアスパラギン以外のアミノ酸であるＮ２９７Ｘ置換（さらにより好ましいものは、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７ＳまたはＮ２９７Ａ、非常に好ましいものはＮ２９７ＡおよびＮ２９７Ｑである。）
ｉｉ．Ｘがグルタミン以外のアミノ酸であるＮ２９７Ｑ置換およびＱ２９５Ｘ置換（好ましいものはＱ２９５Ｎである。）
を含む。
従って、複合体化抗体製造の有利な手法には、原料としてＮ２９７連結グリコシル化を持たない抗体を提供することが関与する（そのようなＮ連結グリコシル化は、ＴＧａｓｅカップリングを妨害する。）。
同位体、塩、溶媒和物、同位体変異体
本発明はまた、本発明による化合物の全ての好適な同位体形態を包含する。本発明による化合物の同位体形態は本明細書において、本発明による化合物内の少なくとも一つの原子が同じ原子番号であるが、自然界において通常もしくは支配的にある原子質量とは異なる原子質量を有する別の原子に交換されている化合物を意味するものと理解される。本発明による化合物に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の同位体があり、例えば２Ｈ（重水素）、３Ｈ（三重水素）、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３３Ｓ、３４Ｓ、３５Ｓ、３６Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２９Ｉおよび１３１Ｉである。本発明による化合物の特定の同位体型、特別には１以上の放射性同位体が組み込まれているものは、例えば、作用機序または身体中での活性化合物分布の試験に有用となり得る。製造および検出が比較的容易であることから、特には、３Ｈまたは１４Ｃ同位体で標識された化合物がその目的には好適である。さらに、同位体、例えば重水素を組み込むことにより、化合物の代謝安定性が高くなることで特に治療上有益となり得るものであり、例えば身体中での半減期が長くなり、または必要な活性成分用量が減る。従って、本発明による化合物のそのような修飾も、場合により、本発明の好ましい実施形態を構成し得る。本発明による化合物の同位体型は、当業者に公知の方法によって、例えば下記に記載の方法および実施例に記載の手順によって、個々の試薬および／または出発化合物の相当する同位体修飾を用いることで製造することができる。
本発明の文脈において好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容される塩である。自体は医薬用途には適さないが、例えば本発明による化合物の単離または精製には用いることができる塩も包含される。
本発明による化合物の生理的に許容される塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩などがある。
本発明の化合物の生理的に許容される塩にはさらに、通常の塩基の塩、例えば好ましくは、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアもしくは１から１６個の炭素原子を有する有機アミン、例えば好ましくはエチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、アルギニン、リジンおよび１,２−エチレンジアミンから誘導されるアンモニウム塩などがある。
本発明の文脈で溶媒和物は、溶媒分子による配位によって固体または液体での錯体を形成している本発明による化合物の形態と記述される。水和物は、配位が水によるものである溶媒和物の特定の形態である。本発明の文脈で好ましい溶媒和物は水和物である。
さらに、本発明は、本発明による化合物のプロドラッグも包含する。ここでの「プロドラッグ」という用語は、自体は生理的に活性または不活性であり得るが、身体に存在中に本発明の化合物に変換される（例えば、代謝的または加水分解的に）化合物を指す。
特定の実施形態
次の実施形態が特に好ましい。
実施形態Ａ：
下記式のＡＤＣ（またはＡＰＤＣ）。
Figure 2018528161
［式中、ＫＳＰ−Ｌ−は式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）、（ＩＶ）から（ＩＸ）のいずれか、または下記式（ＩＩｆ）の化合物であり、バインダーは、アクセプターグルタミン残基（特に好ましくは、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）でアミノ酸Ｄに特異的に結合する抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはそれの変異体、特別には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０）、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによってまたは重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって形成されるこれら抗体の脱グリコシル化変異体、および細菌トランスグルタミナーゼの基質である溶媒アクセス可能グルタミン残基を含むように改変された前記記載の抗体の変異体を含む抗ＴＷＥＡＫＲ抗体であり、
ｎは２または４であり、
式（ＩＩｆ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
ＡはＣ（＝Ｏ）を表し；
Ｒ１は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″（ＣＨ２）１−３ＮＨ２および−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨを表し、Ｚ″は−Ｈまたは−ＮＨ２を表し；
Ｒ２およびＲ４は−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表し、またはＲ２は−Ｈを表し、Ｒ４はＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｐ２およびＰｅは、例えば式（ＩＩａ）に関して示したように上記で定義のものと同じ意味を有する。）を表し、またはＲ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、Ｒ１０は−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表し；
Ｒ３は−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル−を表し、それは−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２または−ＮＨ２によって置換されていても良く（アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルである。）；
Ｒ５は−Ｌ−＃１、ＨまたはＦを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８は分岐のＣ１−５−アルキル基を表し、それは−Ｌ−＃１によって置換されていても良く；
Ｒ９はＨまたはＦを表し、
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、
−Ｌ−はリンカーを表しおよび＃１は抗体への結合を表す。］
ならびにそのＡＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。
リンカーは好ましくは、下記のリンカーである。
Figure 2018528161
式中、
ｍは０または１であり；
§はＫＳＰへの結合を表し、
§§は抗体への結合を表し、
Ｌ２は
＃１−（ＮＨ）ｐ−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−Ｇ４−ＮＨ−＃２または＃１−（ＮＨ）ｐ−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−Ｇ４−Ｏ−ＮＨ−＃２
を表し、
ｐは０または１であり；
ｑは０または１であり；
Ｇ４は置換されていても良いアルキルまたはヘテロアルキル鎖を表し、適宜に、当該鎖のいずれかの炭素がアルコキシ、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、−Ｓ−アルキル、チオール、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、アミン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２で置換されており、
＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示し，
Ｌ１は、下記式：
Figure 2018528161
によって表され、
式中、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ３は結合またはアリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する置換されていても良い直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳまたは−Ｓ（＝Ｏ）−（好ましくは
Figure 2018528161
または
Figure 2018528161
）からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
ここで、＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２はバインダー（例えばＬ２）へのカップリング基への結合である。
実施形態Ｂ：
下記式のＡＤＣ：
Figure 2018528161
［式中、
ＫＳＰ−Ｌ−は、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＶ）から（ＩＸ）のいずれかまたは下記の式（ＩＩｇ）の化合物であり、バインダーはアクアセプターグルタミン残基を含む抗体であり、ｎは２または４であり、
式（ＩＩｇ）：
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−を表し；
Ｒ１は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ２、−（ＣＨ２）１−３ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″（ＣＨ２）１−３ＮＨ２および−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＺ″ＣＨ２ＣＯＯＨを表し、Ｚ″は−Ｈまたは−ＮＨ２を表し；
Ｒ２およびＲ４は、−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表し、またはＲ２は−Ｈを表し、Ｒ４はＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｐ２およびＰｅは、例えば式（ＩＩａ）に関して示したように上記で定義のものと同じ意味を有する。）を表し、またはＲ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、Ｒ１０は−Ｈまたは−Ｌ−＃１を表し；
Ｒ３は−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル−を表し、それは−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−ＳＨ、−Ｓ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２または−ＮＨ２によって置換されていても良く（アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルである。）；
Ｒ５は−Ｌ−＃１、ＨまたはＦを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８は分岐のＣ１−５−アルキル基を表し；
Ｒ９はＨまたはＦを表し、
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、
−Ｌ−はリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表し、
−Ｌ−は、
Figure 2018528161
によって表され、
式中、
ｍは０または１であり；
§はＫＳＰへの結合を表し、
§§は抗体への結合を表し、
Ｌ２は
＃１−（ＮＨ）ｐ−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−Ｇ４−ＮＨ−＃２または＃１−（ＮＨ）ｐ−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−Ｇ４−Ｏ−ＮＨ−＃２
を表し、
ｐは０または１であり；
ｑは０または１であり；
Ｇ４は置換されていても良いアルキルまたはヘテロアルキル鎖を表し、適宜に、前記鎖のいずれかの炭素がアルコキシ、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、−Ｓ−アルキル、チオール、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、アミン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２で置換されており、
＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示し、
Ｌ１は、下記式：
Figure 2018528161
によって表され、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表し、
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ３は結合またはアリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する置換されていても良い直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、
−Ｓ（＝Ｏ）２、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびからなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環Ｎ、ＯおよびＳまたは−Ｓ（＝Ｏ）−（好ましくは
Figure 2018528161
または
Figure 2018528161
）のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２は、抗体（例えばＬ２）に対するカップリング基への結合である。］
ならびにそのＡＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。
実施形態Ｃ：
下記式のＡＤＣ：
Figure 2018528161
［式中、ＫＳＰ−Ｌ−は下記の下位構造Ｉ（ｓｕｂ）の化合物であり、バインダーは、アクセプターグルタミン残基（特に好ましくは、トラスツズマブまたはＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）でアミノ酸Ｄに特異的に結合する抗ＴＷＥＡＫＲ抗体、特別には抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０）、抗ＨＥＲ２抗体または抗ＥＧＲＦ抗体（好ましくはニモツズマブ）、ＰＮＧａｓｅＦによる脱グリコシルによってまたは重鎖のＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）のいずれかのアミノ酸への突然変異によって形成されるこれら抗体の脱グリコシル化変異体、およびトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）触媒反応のために１以上のアクセプターグルタミン残基を含むように改変された前記の抗体の変異体であり、ｎは２または４であり；
Figure 2018528161
式中、
＃ａは分子の残りの部分への結合を表し；
Ｒ１ａは−Ｌ−＃１、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２ａおよびＲ４ａは互いに独立に、−Ｌ−＃１、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ２ａは−Ｈを表し、
Ｒ４ａはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、
Ｐ２およびＰ３は、例えば式（ＩＩａ）に関して示したように上記で定義のものと同じ意味を有し、
Ｒ２１はＨ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良く、または、−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
または
Ｒ２ａおよびＲ４ａが一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は−Ｈ、−Ｌ−＃１、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈまたは−ＯＨを表し、
置換基Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａまたはＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し、
−Ｌ−はリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表し、
−Ｌ−は、
Figure 2018528161
によって表され；
式中、
ｍは０または１であり；
§はＫＳＰへの結合を表し、
§§は抗体への結合を表し、
Ｌ２は
Figure 2018528161
を表し、
ｐは０または１であり；
ｑは０または１であり；
Ｇ４は置換されていても良いアルキルまたはヘテロアルキル鎖を表し、適宜に、前記鎖のいずれかの炭素がアルコキシ、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、−Ｓ−アルキル、チオール、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、アミン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２で置換されており、
＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示し，
Ｌ１は、下記式：
Figure 2018528161
によって表され；
式中、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ３は結合またはアリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する置換されていても良い直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳまたは−Ｓ（＝Ｏ）−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018528161
または
Figure 2018528161
）のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
ここで、＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２はバインダー（例えばＬ２）へのカップリング基への結合である。］
ならびにそのＡＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。
実施形態Ｄ：
下記式のＡＤＣ：
Figure 2018528161
［式中、ＫＳＰ−Ｌ−は、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ），（ＩＩＩ）から（ＩＸ）のいずれか、または下記の式（ＩＩｈ）の化合物であり、バインダーはアクアセプターグルタミン残基を含む抗体であり、ｎは２または４の数字であり；
Figure 2018528161
式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−を表し；
Ｒ１は−Ｌ−＃１を表し；
Ｒ２およびＲ４は、−Ｈを表し、
または
Ｒ２は−Ｈを表し、
Ｒ４はＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、
Ｐ２およびＰ３は、例えば式（ＩＩａ）に関して示したように上記で定義のものと同じ意味を有し、
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、Ｒ１０はＨを表し；
Ｒ３はＣ１−１０−アルキルを表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基または１から３個の−ＮＨ２基によって置換されていても良く、
アルキルは好ましくは、Ｃ１−３−アルキルまたは−ＭＯＤであり、
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｈを表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０はＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎは、０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く，
Ｒｙは−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、または−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−を表し、
Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有し；
Ｒ５はＨまたはＦを表し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、Ｃ１−３−アルキル、フルオロ−Ｃ１−３−アルキル、Ｃ２−４−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−４−アルケニル、Ｃ２−４−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−４−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８は分岐のＣ１−５−アルキル基を表し；
Ｒ９はＨまたはＦを表し、
−Ｌ−はリンカーを表し、＃１は抗体への結合を表し，
−Ｌ−は、
Figure 2018528161
によって表され、
ｍは０または１であり；
§はＫＳＰへの結合を表し、
§§は抗体への結合を表し、
Ｌ２は
Figure 2018528161
を表し、
式中、
ｐは０または１であり；
ｑは０または１であり；
Ｇ４は置換されていても良いアルキルまたはヘテロアルキル鎖を表し、適宜に、前記鎖のいずれかの炭素がアルコキシ、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、−Ｓ−アルキル、チオール、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、アミン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２で置換されており
＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示し，
Ｌ１は、下記式：
Figure 2018528161
によって表され；
式中、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ３は結合またはアリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する置換されていても良い直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、
−Ｓ（＝Ｏ）２、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳまたは−Ｓ（＝Ｏ）−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018528161
または
Figure 2018528161
）のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
＃１はＫＳＰ阻害剤への結合であり、＃２は、抗体（例えばＬ２）に対するカップリング基への結合である。］
ならびにＡＤＣの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。
実施形態Ｅ：
下記式の部位特異的および均一ＡＤＣ：
Figure 2018528161
［式中、ＫＳＰ−Ｌ−は、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、または（ＩＩＩ）から（ＩＸ）のいずれか、または式（ＩＩｈ）の化合物である。］ならびにＡＤＣの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩。
本発明の１実施形態は、バインダーもしくはそれの誘導体の１以上の活性化合物分子との複合体であって、その活性化合物分子がリンカーＬを介してバインダーに結合したキネシン紡錘体タンパク質阻害剤であり、そのリンカーＬがバインダーのグルタミン側鎖に結合しており、１から５個のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤がリンカーＬに結合しており、前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤が下記式（ＩＩａ）：
Figure 2018528161
［式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し（Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
Ｒ１は−Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｌ−＃１または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２は−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ４は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０はＬ−＃１、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し、
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
ｎは０、１または２を表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ５は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキルまたは−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、
ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環（好ましくはオキセタン）を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ２または
−Ｌ−＃１によって置換されていても良く；
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０のうちの一つまたはゼロ個が−Ｌ−＃１を表し、または（Ｒ８の場合）それを含み、
Ｌはリンカーを表し、
＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｈを表し、
Ｒ１０は−ＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
Figure 2018528161
（Ｇ１が、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表す場合、Ｒ１０はＮＨ２を表さない。）を表し；
ｎは、０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
Ｒｙは−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、または−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−を表し、
Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
−ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有する。］
を有する複合体ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
本発明の別の実施形態は、Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表す上記の複合体である。
本発明の別の実施形態は、置換基Ｒ１が−Ｌ−＃１を表す上記の複合体である。
本発明の別の実施形態は、バインダーもしくはそれの誘導体のリンカーＬを介してバインダーに結合したキネシン紡錘体タンパク質阻害剤である活性化合物分子との複合体であって、そのリンカーＬがバインダーのグルタミン側鎖に結合しており、前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤が、下記の下位構造：
Figure 2018528161
［式中、
＃ａは分子の残りの部分への結合を表し；
Ｒ１ａはＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２ａおよびＲ４ａは互いに独立に、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、または−ＯＨを表し；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤は、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａでまたはＲ２ａおよびＲ４ａによって形成されたピロリジン環で水素原子の置換によってリンカーに結合している。］
を有する複合体ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
本発明の別の実施形態は、前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤が下記一般式（Ｉ）：
Figure 2018528161
［式中、
Ｒ１ａは−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＮＨＹ３、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２ａおよびＲ４ａは互いに独立に、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
または
Ｒ２ａおよびＲ４ａが一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、または−ＯＨを表し；
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｙ４は−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
Ｒ３ａは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−バインダー、またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
ｎは、０、１または２であり、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
「アルキル」は好ましくは、Ｃ１−１０−アルキル）を表し；
Ｒ８ａはＣ１−１０−アルキルを表し；
ＨＺは、単環式もしくは二環式複素環を表し、それはハロゲン、Ｃ１−１０−アルキル基、Ｃ６−１０−アリール基およびＣ６−１０−アラルキル基からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く、それはハロゲンによって置換されていても良く；
前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤は、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ８ａでまたはＲ２ａおよびＲ４ａによって形成されたピロリジン環で水素原子の置換によってリンカーに結合している。］
によって表される上記の複合体ならびにそれの塩、溶媒和物および溶媒和物の塩である。
本発明の別の実施形態は、リンカーＬがバインダーのグルタミン側鎖に結合しており、１から５個のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤がリンカーＬに結合しており、前記活性化合物分子リンカーが、一般式（ＩＩ）：
Figure 2018528161
［式中、
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；
Ｒ１は−Ｈ、−Ｌ−＃１または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２およびＲ４は互いに独立に、−Ｌ−＃１、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｙ４は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
または
Ｒ２は−Ｈを表し、
Ｒ４は、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基を表し、
Ｒ２１はＨ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、
−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良く、または−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
ｘは０または１であり、
ｖは１から２０の数字であり、
Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
Ｐ２およびＰ３は、例えば式（ＩＩａ）に関して示したように上記で定義のものと同じ意味を有し、
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
Ｒ１０はＬ−＃１、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
Ｒ３は−Ｌ−＃１または置換されていても良いアルキル、アリール、ヘテロアリール、または複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリール、Ｃ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
−Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
ｎは０、１または２を表し、
Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ５は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−Ｆ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のうちの一つ置換基が−Ｌ−＃１を表し、
Ｌはリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキル、または置換されていても良いオキセタンを表し；
Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表す。］
によって表される上記で定義の複合体ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
本発明の別の実施形態は、
Ｒ１が−Ｈ、−Ｌ−＃１または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
−Ｌ−＃１がリンカーを表し、＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
Ｚが−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
Ｚ′が−Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
Ｗが−Ｈまたは−ＯＨを表し、
Ｙ４が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
Ｒ２およびＲ４が互いに独立に、−Ｌ−＃１、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、
または
Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−を表し、Ｒ１０が−Ｈ、−Ｌ−＃１、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈを表し、
Ｙ４が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
Ｙ５が−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
Ｙ６が直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−を表し、
Ｒ３が−（ＣＨ２）ＯＨまたは−Ｌ−＃１を表し、
Ｒ５が−Ｌ−＃１または−Ｈを表し、
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す。］
によって表される上記の複合体ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマーである。
本発明の別の実施形態は、Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、−Ｈ、Ｃ１−３−アルキルまたはハロゲンを表す上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、Ｒ８がＣ１−４−アルキル（好ましくはｔｅｒｔ−ブチル）を表す上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、Ｒ９が−Ｈを表す上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、Ｒ６およびＲ７が−Ｆを表す上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーまたはそれの誘導体が、バインダーペプチドもしくはタンパク質またはバインダーペプチドもしくはタンパク質の誘導体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記複合体がバインダー当たり二つの結合部位を有する上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記複合体がバインダー当たり四つの結合部位を有する上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質がトランスグルタミナーゼによって認識され得るアクセプターグルタミン側鎖を含むバインダーペプチドまたはタンパク質の抗体または誘導体を表す、上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、トランスグルタミナーゼ介在複合体化によって産生される上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、スタフィロミセス・モバラエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｍｏｂａｒａｅｎｓｉｓ）由来のトランスグルタミナーゼを用いて製造される上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーが癌標的分子に結合する上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーが細胞外標的分子に結合する上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーが、細胞外標的分子に結合した後、標的分子を発現する細胞によって細胞内で（好ましくは、リソソーム的に）内在化および処理される上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、ヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、適宜にＣＨ２ドメイン内の重鎖でアクセプターグルタミン残基を有する抗体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、位置２９５（Ｋａｂａｔナンバリングシステム）で重鎖にアクセプターグルタミン残基を有する抗体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、Ｎ２９７Ｘ置換（Ｘはアスパラギン以外のアミノ酸である。）、さらにより好ましくはＮ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７ＳまたはＮ２９７Ａ、非常に好ましくはＮ２９７ＡおよびＮ２９７Ｑを含む抗体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、Ｎ２９７Ｑ置換およびＱ２９５Ｘ置換（Ｘはグルタミン以外のアミノ酸である。）、好ましくはＱ２９５Ｎを含む抗体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、実質的にＮ連結グリコシル化を持たない残基２９７でアスパラギンを含む抗体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、アミノ酸残基Ｎ２９７でＮ連結グリコシル化を持たない抗体を産生する宿主細胞で産生される抗体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質が抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはそれの抗原結合性断片である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合し、好ましくは抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ２０９０およびそれの脱グリコシル化変異体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合し、好ましくは抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７ＡまたはＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑである上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記リンカーＬがバインダーのグルタミン側鎖に結合し、１から５個のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤がリンカーＬに結合しており、前記リンカーＬが下記の基本構造（ｉ）から（ｉｖ）：
（ｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−ＳＧ１−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−
（ｉｖ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ２
のうちの一つを有し、
ｍが０または１であり、ＳＧおよびＳＧ１がイン・ビボ開裂性基であり、Ｌ１が互いに独立にイン・ビボで非開裂性の有機基を表し、Ｌ２がバインダーへのカップリング基を表す、上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記リンカーＬがバインダーのグルタミン側鎖に結合し、１から５個のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤がリンカーＬに結合しており、前記イン・ビボ開裂性基ＳＧが２から８オリゴペプチド基、好ましくはジペプチド基またはジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールもしくはアミナールであり、ＳＧ１が２から８オリゴペプチド基、好ましくはジペプチド基である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、上記で定義の複合体である。前記リンカーがグルタミン側鎖に結合し、下記式を有する。
Figure 2018528161
式中、
ｍは０または１であり；
§は、活性化合物分子への結合を表し、
§§は、バインダーペプチドまたはタンパク質への結合を表し、
Ｌ１は−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ３−を表し、
Ｒ１０は−Ｈ、−Ｈ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
Figure 2018528161
を表し；
ｎは０または１であり；
ｏは０または１であり；
Ｇ３は結合またはアリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する置換されていても良い直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−およびＮ、ＯおよびＳまたは−Ｓ（＝Ｏ）−からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する３から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環（好ましくは
Figure 2018528161
または
Figure 2018528161
）のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖を含む炭化水素鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
または下記の基：
Figure 2018528161
のうちの一つを表し、
Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
Ｌ２は＃１−（ＮＨ）ｐ−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−Ｇ４−ＮＨ−＃２または＃１−（ＮＨ）ｐ−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−Ｇ４−Ｏ−ＮＨ−＃２を表し、
ｐは０または１であり；
ｑは０または１であり；
Ｇ４は置換されていても良いアルキルまたはヘテロアルキル鎖を表し、適宜に、前記鎖のいずれかの炭素がアルコキシ、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、−Ｓ−アルキル、チオール、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、アミン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２で置換されており、
＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示す。
本発明の別の実施形態は、前記炭化水素鎖が、下記の基のうちの一つによって中断されている上記で定義の複合体である。
Figure 2018528161
Figure 2018528161
式中、Ｘは−ＨまたはＣ１−１０−アルキル基を表し、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。
本発明の別の実施形態は、上記で定義の複合体である。Ｌ２が下記の基のうちの一つであり；
Ｌ２が、
Figure 2018528161
（Ｒｙは−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、または−ＮＨ２である。）であり、
＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示す。
本発明の別の実施形態は、ＲｙがＨまたはＮＨＣＯＭｅである上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、Ｒ１またはＲ４が−Ｌ−＃１を表す上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体がアゴニスト抗体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、
ａ．式ＰＹＰＭＸ（配列番号１７１）（ＸはＩまたはＭである。）を含むアミノ酸配列によってコードされる重鎖のＣＤＲ１；
ｂ．式ＹＩＳＰＳＧＧＸＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１７２）（ＸはＳまたはＫである。）を含むアミノ酸配列によってコードされる重鎖のＣＤＲ２；および
ｃ．式ＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹ（配列番号１７３）を含むアミノ酸配列によってコードされる重鎖のＣＤＲ３；
を含む可変重鎖：
ならびに
ｄ．式ＲＡＳＱＳＩＳＸＹＬＮ（配列番号１７４）（ＸはＧまたはＳであｗる。）を含むアミノ酸配列によってコードされる軽鎖のＣＤＲ１；
ｅ．式ＸＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７５）（ＸはＱ、ＡまたはＮである。）を含むアミノ酸配列によってコードされる軽鎖のＣＤＲ２；および
ｆ．式ＱＱＳＹＸＸＰＸＩＴ（配列番号１７６）（位置５でのＸはＴまたはＳであり、位置６でのＸはＴまたはＳであり、位置８でのＸはＧまたはＦである。）を含むアミノ酸配列によってコードされる軽鎖のＣＤＲ３；
を含む可変軽鎖
を含む上記の複合体である。
本発明の別の実施形態は、
ａ．配列番号１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｂ．配列番号２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｃ．配列番号３０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号２９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｄ．配列番号４０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号３９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｅ．配列番号５０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号４９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｆ．配列番号６０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号５９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｇ．配列番号７０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号６９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｈ．配列番号８０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号７９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｉ．配列番号９０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号８９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｊ．配列番号１００に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｋ．配列番号１１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１０９に示した軽鎖の可変性配列、または
ｌ．配列番号１２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１１９に示した軽鎖の可変性配列
を含む上記の複合体である。
本発明の別の実施形態は、前記抗体がＩｇＧ抗体である上記で定義の複合体である。
本発明の別の実施形態は、好ましくはトリフルオロ酢酸塩の形態での下記式のうちの一つの化合物を、トランスグルタミナーゼを用いてバインダーペプチドまたはタンパク質の残基に結合させ、前記化合物を好ましくはバインダーペプチドまたはタンパク質に関して２から１００倍モル過剰で用いる、上記で定義の複合体の製造方法である。
Figure 2018528161
Figure 2018528161
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、ＳＧ、Ｌ１、Ｒ１は、上記、例えば式（ＩＩａ）におけるものと同じ意味を有し、Ｒｙは−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、または−ＮＨ２である。］
Figure 2018528161
Figure 2018528161
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、ＳＧ、Ｌ１、Ｒ１およびＲｘは上記で定義のものと同じ意味を有する。］
本発明の別の実施形態は、前記バインダーペプチドまたはタンパク質が抗体または下記式によるバインダーペプチドまたはタンパク質の誘導体を表す、上記で定義の複合体である。
Figure 2018528161
本発明の別の実施形態は、上記で定義の複合体または上記で定義の化合物を不活性で無毒性の医薬として好適な補助剤と組み合わせて含む医薬組成物である。
本発明の別の実施形態は、疾患の治療および／または予防方法で使用される上記で定義の複合体または上記で定義の化合物である。
本発明の別の実施形態は、過剰増殖性および／または血管新生傷害の治療方法で使用される上記で定義の複合体または上記で定義の化合物である。
本発明の別の実施形態は、有効量の少なくとも一つの上記で定義の複合体または上記で定義の化合物を用いる、ヒトおよび動物での過剰増殖性および／または血管新生傷害の治療および／または予防方法である。
特に好ましい実施形態は、下記式のうちの一つによる複合体であり、Ａｋ３ａ、Ａｋ３ｂ、ＡＤ３ｄ、Ａｋ３ｅは、バインダー、好ましくは抗体を表し、ｎは２から１０、好ましくは２から４、そしてさらに好ましくは２または４を表す。
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
Figure 2018528161
治療用途
治療するのに本発明による化合物を用いることができる過増殖性疾患には、特には癌および腫瘍疾患の群などがある。本発明の文脈において、これらは、特には次の疾患（ただし、これらに限定されるものではない）：乳癌および乳房腫瘍（腺管癌および小葉型などの乳癌、イン・サイツも）、気道の腫瘍（小細胞肺癌および非小細胞癌、気管支癌）、脳腫瘍（例えば、脳幹の腫瘍および視床下部の腫瘍、星細胞腫、上衣細胞腫、神経膠芽腫、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫ならびに神経外胚葉性（ｎｅｕｒｏ−ｅｃｔｏｒｍａｌ）腫瘍および松果体腫瘍）、消化器の腫瘍（食道、胃、胆嚢、小腸、大腸、直腸および肛門の癌）、肝臓腫瘍（特に、肝細胞癌、胆管癌および混合型肝細胞胆管癌）、頭部および頸部領域の腫瘍（喉頭、下咽頭、鼻咽頭、口咽頭癌、口唇および口腔癌、口腔メラノーマ）、皮膚腫瘍（基底細胞腫、棘細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性メラノーマ、非メラノーマ皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、肥満細胞腫瘍）、軟組織の腫瘍（特に、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、線維肉腫、血管肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ肉腫および横紋筋肉腫）、眼球の腫瘍（特に、眼球内メラノーマおよび網膜芽細胞腫）、内分泌腺および外分泌腺の腫瘍（例えば甲状腺および副甲状腺、膵臓および唾液腺の癌、腺癌）、尿路の腫瘍（膀胱、陰茎、腎臓、腎盂および尿管の腫瘍）および生殖器の腫瘍（女性における子宮内膜、子宮頸部、卵巣、膣、外陰部および子宮の癌、および男性における前立腺および睾丸の癌）を意味するものと理解される。これらには、固形型または循環細胞としての血液、リンパ系および脊髄の増殖性疾患などもあり、例えば白血病、リンパ腫および骨髄増殖性疾患、例えば急性骨髄性、急性リンパ芽球性、慢性リンパ性、慢性骨髄性およびヘアリー細胞性の白血病、およびＡＩＤＳ関連リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫および中枢神経系でのリンパ腫である。
ヒトでのこれらの十分に特徴付けられている疾患は、他の哺乳動物でも同等の病因によって生じ得るものであり、本発明の化合物によって同様に治療可能である。
本発明による化合物による上記で言及の癌疾患の治療は、固体腫瘍の治療およびそれの転移型および循環型の治療の両方を含むものである。
本発明の文脈において、「治療」または「治療する」という用語は、従来の意味で用いられ、疾患または健康上の異常と戦い、軽減し、弱化し、または改善すること、ならびに例えば癌の場合でのように、この疾患によって障害される生活条件を改善することを目的として、患者の世話を行い、ケアを行い、看病することを意味する。
従って、本発明はさらに、障害の、特には上記障害の治療および／または予防のための本発明による化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、障害の、特には上記障害の治療および／または予防のための医薬品を製造するための本発明による化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、障害の、特には上記障害の治療および／または予防方法での本発明による化合物の使用を提供する。
本発明はさらに、有効量の少なくとも１種類の本発明による化合物を用いて、障害、特には上記障害を治療および／または予防する方法を提供する。
本発明による化合物は、単独で、または必要に応じて、１以上の他の薬理活性物質と組み合わせて用いることができ、ただしその組み合わせは望ましくないおよび許容できない副作用を生じるものではない。従って、本発明はさらに、特には上記障害の治療および／または予防のための、少なくとも１種類の本発明による化合物および１以上のさらなる活性化合物を含む医薬品を提供する。
例えば、本発明の化合物は、癌疾患治療のための既知の抗過剰増殖性、細胞増殖抑制性または細胞毒性物質と組み合わせることができる。好適な組み合わせ活性化合物の例には、下記のものなどがある。
１３１Ｉ−ｃｈＴＮＴ、アバレリックス、アビラテロン、アクラルビシン、アドゥ−トラスツズマブエムタンシン、アファチニブ、アフリベルセプト、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アレンドロン酸、アリトレチノイン、アルトレタミン、アミホスチン、アミノグルテチミド、ヘキシルアミノレブリネート、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、アンセスチム、アネトールジチオレチオン、アンギオテンシンＩＩ、アンチトロンビンＩＩＩ、アプレピタント、アルシツモマブ、アルグラビン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アキシチニブ、アザシチジン、バシリキシマブ、ベロテカン、ベンダムスチン、ベリノスタット、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビサントレン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブセレリン、ボスチニブ、ブレンツキシマブ・ベドチン、ブスルファン、カバジタキセル、カボザンチニブ、カルシウムホリナート、カルシウムレボホリナート、カペシタビン、カプロマブ、カルボプラチン、カルフィルゾミブ、カルモフール、カルムスチン、カツマキソマブ、セレコキシブ、セルモロイキン、セリチニブ、セツキシマブ、クロラムブシル、クロルマジノン、クロルメチン、シドフォビル、シナカルセト、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、クロファラビン、コパンリシブ、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デプレオチド、デスロレリン、デクスラゾキサン、塩化ジブロスピジウム、ジアンヒドロガラクチトール、ジクロフェナク、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドキソルビシン＋エストロン、ドロナビノール、エクリズマブ、エドレコロマブ、酢酸エリプチニウム、エルトロンボパグ、エンドスタチン、エノシタビン、エンザルタミド、エピルビシン、エピチオスタノール、エポエチンアルファ、エポエチンベータ、エポエチンゼータ、エプタプラチン、エリブリン、エルロチニブ、エソメプラゾール、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エベロリムス、エキセメスタン、ファドロゾール、フェンタニル、フィルグラスチム、フルオキシメステロン、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルタミド、フォリン酸、フォルメスタン、ホスアプレピタント、フォテムスチン、フルベストラント、ガドブトロール、ガドテリドール、ガドテル酸メグルミン、ガドベルセタミド、ガドキセト酸、硝酸ガリウム、ガニレリクス、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、グルカルピダーゼ、グルトキシム（ｇｌｕｔｏｘｉｍ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ゴセレリン、グラニセトロン、顆粒球コロニー刺激因子、ヒスタミン二塩酸塩、ヒストレリン、ヒドロキシカルバミド、Ｉ−１２５シード、ランソプラゾール、イバンドロン酸、イブリツモマブ チウキセタン、イブルチニブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、イミキモド、インプロスルファン、インジセトロン、インカドロン酸、インゲノールメブテート、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、イオビトリドール、イオベングアン（１２３Ｉ）、イオメプロール、イピリムマブ、イリノテカン、イトラコナゾール、イキサベピロン、ランレオチド、ラパチニブ、ラソコリン、レナリドマイド、レノグラスチム、レンチナン、レトロゾール、リュープロレリン、レバミソール、レボノルゲストレル、レボチロキシンナトリウム、リスリド、ロバプラチン、ロムスチン、ロニダミン、マソプロコール、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メラルソプロール、メルファラン、メピチオスタン、メルカプトプリン、メスナ、メタドン、メトトレキサート、メトキサレン、アミノレブリン酸メチル、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、メチロシン、ミファムルチド、ミルテホシン、ミリプラチン、ミトブロニトール、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、モガムリズマブ、モルグラモスチム、モピダモール、モルヒネ塩酸塩、モルヒネ硫酸塩、ナビロン、ナビキシモルス、ナファレリン、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナルトレキソン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネララビン、ネリドロン酸、ニボルマブペンテトレオチド（ｎｉｖｏｌｕｍａｂｐｅｎｔｅｔｒｅｏｔｉｄｅ）、ニロチニブ、ニルタミド、ニモラゾール、ニモツズマブ、ニムスチン、ニトラクリン、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オクトレオチド、オファツムマブ、オマセタキシン−メペサクシネート、オメプラゾール、オンダンセトロン、オプレルベキン、オルゴテイン、オリロチモド、オキサリプラチン、オキシコドン、オキシメトロン、オゾガマイシン、ｐ５３遺伝子治療、パクリタキセル、パリフェルミン、パラジウム−１０３シード、パロノセトロン、パミドロン酸、パニツムマブ、パントプラゾール、パゾパニブ、ペグアスパルガーゼ、ＰＥＧ−エポエチンベータ（メトキシＰＥＧ−エポエチンベータ）、ペンブロリズマブ、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、ペメトレキセド、ペンタゾシン、ペントスタチン、ペプロマイシン、ペルフルブタン、ペルホスファミド、ペルツズマブ、ピシバニール、ピロカルピン、ピラルビシン、ピクサントロン、プレリキサホル、プリカマイシン、ポリグルサム、リン酸ポリエストラジオール、ポリビニルピロリドン＋ヒアルロン酸ナトリウム、ポリサッカライド−Ｋ、ポマリドミド、ポナチニブ、ポルフィマーナトリウム、プララトレキセート、プレドニムスチン、プレドニゾン、プロカルバジン、プロコダゾール、プロプラノロール、キナゴリド、ラベプラゾール、ラコツモマブ、塩化ラジウム−２２３、ラドチニブ、ラロキシフェン、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ラムシルマブ、ラニムスチン、ラスブリカーゼ、ラゾキサン、レファメチニブ、レゴラフェニブ、リセドロン酸、エチドロン酸レニウム−１８６、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、ロムルチド、ロニシクリブ、サマリウム（１５３Ｓｍ）レキシドロナム、サルグラモスチム、サツモマブ、セクレチン、シプロイセル−Ｔ、シゾフィラン、ソブゾキサン、グリシジダゾールナトリウム、ソラフェニブ、スタノゾロール、ストレプトゾシン、スニチニブ、タラポルフィン、タミバロテン、タモキシフェン、タペンタドール、タソネルミン、テセロイキン、テクネチウム（９９ｍＴｃ）ノフェツモマブ（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）メルペンタン、９９ｍＴｃ−ＨＹＮＩＣ−［Ｔｙｒ３］−オクトレオチド、テガフール、テガフール＋ギメラシル＋オテラシル、テモポルフィン、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、テストステロン、テトロホスミン、サリドマイド、チオテパ、チマルファシン、チオグアニン、トシリズマブ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラベクテジン、トラマドール、トラスツズマブ、トラスツズマブ・エムタンシン、トレオスルファン、トレチノイン、トリフルリジン＋チピラシル、トリロスタン、トリプトレリン、トラメチニブ、トロホスファミド、トロンボポエチン、トリプトファン、ウベニメクス、ヴァラチニブ、バルルビシン、バンデタニブ、バプレオチド、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンフルニン、ビノレルビン、ビスモデギブ、ボリノスタット、ボロゾール、イットリウム−９０ガラス微小球、ジノスタチン、ジノスタチンスチマラマー、ゾレドロン酸、ゾルビシン。
さらに、本発明の化合物は、例えば、例として次の標的：ＯＸ−４０、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＤＲ３、ＩＤＯ１／ＩＤＯ２、ＬＡＧ−３、ＣＤ４０に結合し得るバインダーと組み合わせることができる。
さらに、本発明による化合物は、放射線療法および／または外科的介入と組み合わせて用いることもできる。
概して、本発明の化合物と他の細胞増殖抑制的にまたは細胞毒性的に活性な薬剤との組み合わせで、次の目的を追求することができる。
●個々の活性化合物による治療と比較して、腫瘍増殖の遅延、それの大きさの低減、またはさらにそれの完全な除去における効力の改善；
●単独療法の場合より低い用量で使用される化学療法剤使用の可能性；
●個々の投与と比較して副作用少なく、より耐容性のある治療法の可能性；
●より広いスペクトラムの腫瘍疾患の治療の可能性；
●療法に対するより高い応答速度の達成；
●現代の標準療法と比較して長い患者の生存時間。
さらに、本発明による化合物は、放射線療法および／または外科的介入と組み合わせて用いることもできる。
本発明はさらに、代表的には１以上の不活性で無毒性の医薬として好適な賦形剤とともに少なくとも一つの本発明による化合物を含む医薬、および上記目的のためのそれの使用を提供する。
本発明による化合物は、全身的および／または局所的に作用し得る。これに関して、それは好適な形で、例えば非経口的に、可能な場合に吸入によって、またはインプラントもしくはステントとして投与することができる。
本発明による化合物は、これらの投与経路に好適な投与形態で投与することができる。
非経口投与は、吸収段階（例えば、静脈、動脈、心臓内、髄腔内または腰椎内で）を回避することができ、または吸収（例えば、筋肉、皮下、皮内、経皮または腹腔内で）を含むことができる。非経口投与の好適な投与形態には、液剤、懸濁液、乳濁液または凍結乾燥物の形態での注射および注入用製剤などがある。好ましいものは、非経口投与、特別には静脈投与である。
概して、非経口投与の場合、約０．００１から１ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０１から０．５ｍｇ／ｋｇの量を投与して、効果的な結果を得ることが有利であることが認められている。
そうではあっても、適切な場合、具体的に体重、投与経路、活性化合物に対する個体の応答、製剤の種類、および投与を行う時刻もしくは間隔に応じて、指定量から逸脱する必要であることもあり得る。従って、場合により、上記最小量より少ない量で十分である可能性があるが、他の場合には、言及した上限を超えなければならない。より大きい量の投与の場合、それらを１日かけて、いくつかの個々の用量に分けることが得策である可能性がある。
実施例
下記の実施例は、本発明を説明するものである。本発明は実施例に限定されるものではない。
別段の断りがない限り、下記の試験および実施例におけるパーセントは重量パーセントであり、部は重量部である。液体／液体溶液における溶媒比、希釈比および濃度データは、各場合で体積基準である。
合成経路：
作業例の例として、下記の図式は、作業例に至る例示的合成経路を示すものである。
図式１：グルタミン連結ＡＤＣの合成
Figure 2018528161
ｎは２または４である。
図式２
Figure 2018528161
ａ．ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、ｒｔ；ｂ．ＡＣＮ、緩衝液ｐＨ８、室温；ｃ．ＨＣｌ４Ｍ、ジオキサン、室温。
図式３：グルタミン連結ＡＤＣの合成
Figure 2018528161
ｎは２または４である。
図式４
Figure 2018528161
［ａ）：例えばベンジルブロマイド、Ｃｓ２ＣＯ３、ＤＭＦ、ＲＴ；ｂ）例えばＰｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２、ＤＭＦ、Ｎａ２ＣＯ３、８５℃；ｃ）例えばＬｉＡｌＨ４、ＴＨＦ、０℃；ＭｎＯ２、ＤＣＭ、ＲＴ；ｄ）例えばＴｉ（ｉＯＰｒ）４、ＴＨＦ、ＲＴ；ｅ）例えばｔＢｕＬｉ、ＴＨＦ、−７８℃；ＭｅＯＨ、ＮＨ４Ｃｌ；ｆ）例えばＨＣｌ／１，４−ジオキサン］
図式５
Figure 2018528161
ａ．ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、ｒｔ；ｂ）Ｐｄ／Ｃ１０％、ＭｅＯＨ；ｃ）ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、ｒｔ、ｄ）Ｐｄ／Ｃ１０％、ＭｅＯＨ
図式６
Figure 2018528161
［ａ）：例えば水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）例えばアセトキシアセチルクロライド、ＮＥｔ３、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）例えばＬｉＯＨ、ＴＨＦ／水、ＲＴ；ｄ）例えばＨ２、Ｐｄ−Ｃ、ＥｔＯＨ、ＲＴ；ｅ）例えばＴｅｏｃ−ＯＳｕ、ＮＥｔ３、ジオキサン、ＲＴ；ｆ）例えばＦｍｏｃ−Ｃｌ、ジイソプロピルエチルアミン、ジオキサン／水２：１、ＲＴ］
図式７：
Figure 2018528161
［ａ）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｄ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃；ｅ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、ＴＨＦ／水、ＲＴ］
図式８
Figure 2018528161
［ａ）ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｂ）Ｈ２、Ｐｄ／Ｃ、ＴＨＦ／水、ＲＴ；ｃ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃］
図式９：グルタミン連結ＡＤＣの合成
Figure 2018528161
ｎは２または４である。
図式１０：
Figure 2018528161
［ａ）：水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム、酢酸、ＤＣＭ、ＲＴ；ｂ）アセトキシアセチルクロライド、トリエチルアミン、ＤＣＭ、ＲＴ；ｃ）Ｌ−システイン、ＮａＨＣＯ３、ＤＢＵ、イソプロパノール／水、ＲＴ；ｄ）Ｂｏｃ−６−アミノカプロン酸、ＨＡＴＵ、ＤＭＦ、ジイソプロピルエチルアミン、ＲＴ；ｅ）塩化亜鉛、トリフルオロエタノール、５０℃、ＥＤＴＡ。］
Ａ．実施例
略称および頭字語：
Ａ４３１ＮＳ：ヒト腫瘍細胞系
Ａ５４９：ヒト腫瘍細胞系
ＡＢＣＢ１：ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＢメンバー１（Ｐ−ｇｐおよびＭＤＲ１と同義語）
ａｂｓ．：純粋
Ａｃ：アセチル
ＡＣＮ：アセトニトリル
ａｑ．：水系、水溶液
ＡＴＰ：アデノシン三リン酸
ＢＣＲＰ：乳癌耐性タンパク質、排出輸送体
ＢＥＰ：２−ブロモ−１−エチルピリジニウムテトラフルオロボレート
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｂｒ．：広い（ＮＭＲで）
Ｅｘ．：実施例
ＣＩ：化学イオン化（ＭＳで）
Ｄ：二重線（ＮＭＲで）
Ｄ：日
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＤＣＩ：直接化学イオン化（ＭＳで）
Ｄｄ：二重線の二重線（ＮＭＲで）
ＤＭＡＰ：４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ：１，２−ジメトキシエタン
ＤＭＥＭ：ダルベッコ改変イーグル培地（細胞培養のための標準培養液）
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＰＢＳ、Ｄ−ＰＢＳ、ＰＢＳ：ダルベッコのリン酸緩衝塩溶液
ＰＢＳ＝ＤＰＢＳ＝Ｄ−ＰＢＳ、ｐＨ７．４、Ｓｉｇｍａから、Ｎｏ Ｄ８５３７
組成：
ＫＣｌ ０．２ｇ
ＫＨ２ＰＯ４（無水物）０．２ｇ
ＮａＣｌ ８．０ｇ
Ｎａ２ＨＰＯ４（無水物）１．１５ｇ
Ｈ２Ｏで１リットルとする
Ｄｔ：三重線の二重線（ＮＭＲで）
ＤＴＴ：ＤＬ−ジチオスレイトール
ＥＤＣ：Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＧＦＲ：上皮増殖因子受容体
ＥＩ：電子衝撃イオン化（ＭＳで）
ＥＬＩＳＡ：酵素結合免疫吸着検定法
ｅｑ．：当量
ＥＳＩ：電気スプレーイオン化（ＭＳで）
ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆｑ：ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆｑ（Ｔｏｆ＝飛行時間およびｑ＝四重極を用いる質量分析装置の名称）
ＦＣＳ：ウシ胎仔血清
Ｆｍｏｃ：（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル
ＧＴＰ：グアノシン５′三リン酸
Ｈ：時間
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＣＴ−１１６：ヒト腫瘍細胞系
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸
ＨＯＡｃ：酢酸
ＨＯＡｔ：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物
ＨＯＳｕ：Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド
ＨＰＬＣ：高圧高速液体クロマトグラフィー
ＨＴ２９：ヒト腫瘍細胞系
ＩＣ５０：半最大阻害濃度
ｉ．ｍ．：筋肉的に、筋肉への投与
ｉ．ｖ．：静脈的に、静脈への投与
ｃｏｎｃ．：濃厚
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー結合質量分析
ＬＬＣ−ＰＫ１細胞：ルイス肺癌ブタ（ｐｏｒｋ）腎臓細胞系
Ｌ−ＭＤＲ：ヒトＭＤＲ１トランスフェクトＬＬＣ−ＰＫ１細胞
Ｍ：多重線（ＮＭＲで）
ＭＤＲ１：多剤耐性タンパク質１
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
Ｍｅ：メチル
Ｍｉｎ：分
ＭＳ：質量分析
ＭＴＴ：３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイド３
ＮＣＩ−Ｈ２９２：ヒト腫瘍細胞系
ＮＣＩ−Ｈ５２０：ヒト腫瘍細胞系
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ：Ｎ−メチル−２−ピロリジノン
ＮＭＲ：核磁気共鳴スペクトル測定
ＮＭＲＩ：Ｎａｖａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＭＲＩ）由来のマウス系統
ＮＳＣＬＣ：非小細胞肺癌
ＰＢＳ：リン酸緩衝塩溶液
Ｐｄ／Ｃ：パラジウム／活性炭
Ｐ−ｐｇ：Ｐ−糖タンパク質（ｇｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）、輸送体タンパク質
ＰＮＧａｓｅＦ：糖を開裂させる酵素
ｑｕａｎｔ．：定量的（収率で）
Ｑｕａｒｔ：四重線（ＮＭＲで）
Ｑｕｉｎｔ：五重線（ＮＭＲで）
Ｒｆ：保持指数（ＴＬＣで）
ＲＴ：室温
Ｒｔ：保持時間（ＨＰＬＣで）
Ｓ：一重線（ＮＭＲで）
ｓ．ｃ．：皮下的に、皮下への投与
ＳＣＣ−４：ヒト腫瘍細胞系
ＳＣＣ−９：ヒト腫瘍細胞系
ＳＣＩＤマウス：重度の複合免疫不全を有する試験マウス
ｔ：三重線（ＮＭＲで）
ＴＢＡＦ：フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム
ＴＥＭＰＯ：（２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−イル）オキシル
ｔｅｒｔ：ターシャリー
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Ｔ３Ｐ（登録商標）：２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキサイド
ＵＶ：紫外線スペクトル測定
ｖ／ｖ：体積比（溶液のもの）
Ｚ：ベンジルオキシカルボニル。
アミノ酸略称
Ａｌａ＝アラニン
Ａｒｇ＝アルギニン
Ａｓｎ＝アスパラギン
Ａｓｐ＝アスパラギン酸
Ｃｙｓ＝システイン
Ｇｌｕ＝グルタミン酸
Ｇｌｎ＝グルタミン
Ｇｌｙ＝グリシン
Ｈｉｓ＝ヒスチジン
Ｉｌｅ＝イソロイシン
Ｌｅｕ＝ロイシン
Ｌｙｓ＝リジン
Ｍｅｔ＝メチオニン
Ｎｖａ＝ノルバリン
Ｐｈｅ＝フェニルアラニン
Ｐｒｏ＝プロリン
Ｓｅｒ＝セリン
Ｔｈｒ＝トレオニン
Ｔｒｐ＝トリプトファン
Ｔｙｒ＝チロシン
Ｖａｌ＝バリン。
本開示の文脈で、反応の記述において温度が全く与えられていない場合、常に室温を仮定すべきである。
ＨＰＬＣ法およびＬＣ−ＭＳ法：
方法１（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９０％Ａ→１．２分５％Ａ→２．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
方法２（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ−ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＢＥＨ３００、２．１×１５０ｍｍ、Ｃ１８ １．７μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分２％Ｂ→１．５分２％Ｂ→８．５分９５％Ｂ→１０．０分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：０．５０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２０ｎｍ。
方法３（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）ＱＭ；ＨＰＬＣ装置：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ；カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ ＺＯＲＢＡＸ Ｅｘｔｅｎｄ−Ｃ１８ ３．０×５０ｍｍ ３．５ミクロン；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１ｍｏｌの炭酸アンモニウム、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル；勾配：０．０分９８％Ａ→０．２分９８％Ａ→３．０分５％Ａ→４．５分５％Ａ；オーブン：４０℃；流量：１．７５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法４（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ−ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×５０ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分１０％Ｂ→０．３分１０％Ｂ→１．７分９５％Ｂ→２．５分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法５（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＳＱＤ ＵＰＬＣシステム；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９５％Ａ→６．０分５％Ａ→７．５分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．３５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０−４００ｎｍ。
方法６（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ搭載Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｐｒｅｍｉｅｒ；カラム：Ｔｈｅｒｍｏ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＧＯＬＤ１．９μ５０×１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋５０％強度ギ酸０．５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋５０％強度ギ酸０．５ｍＬ；勾配：０．０分９７％Ａ→０．５分９７％Ａ→３．２分５％Ａ→４．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：０．３ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法７（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：Ａｇｉｌｅｎｔ ＭＳ Ｑｕａｄ ６１５０；ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０；カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＨＳＳ Ｔ３ １．８μ ５０×２．１ｍｍ；移動相Ａ：水１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ、移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋９９％強度ギ酸０．２５ｍＬ；勾配：０．０分９０％Ａ→０．３分９０％Ａ→１．７分５％Ａ→３．０分５％Ａオーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２０５−３０５ｎｍ。
方法８（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２Ｓ；ＵＰＬＣ装置型：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ｉ−ＣＬＡＳＳ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×５０ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；移動相Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；移動相Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分２％Ｂ→２．０分２％Ｂ→１３．０分９０％Ｂ→１５．０分９０％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：１．２０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法９：実施例１８１から１９１についてのＬＣ−ＭＳ−Ｐｒｅｐ精製法（方法ＬＩＮＤ−ＬＣ−ＭＳ−Ｐｒｅｐ）
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ（カラムＷａｔｅｒｓ Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８、１９ｍｍ×５０ｍｍ、５μｍ、移動相Ａ：水＋０．０５％アンモニア、移動相Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）勾配；流量：４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０−４００ｎｍ）。
または
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ （カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）１００Ａ、ＡＸＩＡ Ｔｅｃｈ． ５０×２１．２ｍｍ、移動相Ａ：水＋０．０５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）勾配；流量：４０ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０−４００ｎｍ）。
方法１０：実施例１８１から１９１についてのＬＣ−ＭＳ分析法（ＬＩＮＤ＿ＳＱＤ＿ＳＢ＿ＡＱ）
ＭＳ装置：Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ；ＨＰＬＣ装置：Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ；カラム：Ｚｏｒｔｅｘ ＳＢ−Ａｑ（Ａｇｉｌｅｎｔ）、５０ｍｍ×２．１ｍｍ、１．８μｍ；移動相Ａ：水＋０．０２５％ギ酸、移動相Ｂ：アセトニトリル（ＵＬＣ）＋０．０２５％ギ酸；勾配：０．０分９８％Ａ−０．９分２５％Ａ−１．０分５％Ａ−１．４分５％Ａ−１．４１分９８％Ａ−１．５分９８％Ａ；オーブン：４０℃；流量：０．６００ｍＬ／分；ＵＶ検出：ＤＡＤ；２１０ｎｍ。
方法１１（ＨＰＬＣ）：
装置：ＨＰ１１００シリーズ
カラム：Ｍｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＳｐｅｅｄＲＯＤ ＲＰ−１８ｅ、５０−４．６ｍｍ、カタログ番号１．５１４５０．０００１、プレカラムＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｇｕａｒｄカートリッジキット、ＲＰ−１８ｅ、５−４．６ｍｍ、カタログ番号１．５１４７０．０００１
勾配：流量５ｍＬ／分
注入容量５μＬ
溶媒Ａ：ＨＣｌＯ４（７０％強度）／水（４ｍＬ／Ｌ）
溶媒Ｂ：アセトニトリル
開始２０％Ｂ
０．５０分２０％Ｂ
３．００分９０％Ｂ
３．５０分９０％Ｂ
３．５１分２０％Ｂ
４．００分２０％Ｂ
カラム温度：４０℃
波長：２１０ｎｍ。
以下において製造が明瞭に記載されていない全ての反応物または試薬は、一般に利用可能な提供元から商業的に購入したものである。製造が同様に以下において記載されておらず、商業的に入手できなかったか、通常は使えない供給元から得た他の全ての反応物または試薬については、それらの製造が記載されている刊行文献を挙げてある。
方法１２（ＬＣ−ＭＳ）
装置ＭＳ：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＦＴ−ＭＳ；装置ＵＨＰＬＣ＋：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００；カラム：Ｗａｔｅｒｓ、ＨＳＳＴ３、２．１×７５ｍｍ、Ｃ１８ １．８μｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋０．０１％ギ酸；溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル＋０．０１％ギ酸；勾配：０．０分１０％Ｂ→２．５分９５％Ｂ→３．５分９５％Ｂ；オーブン：５０℃；流量：０．９０ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ／最適積分経路２１０−３００ｎｍ。
方法１３：（ＬＣ−ＭＳ）
装置ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ （Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ） Ｑｕａｔｔｒｏ Ｍｉｃｒｏ；装置Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ Ａｃｑｕｉｔｙ；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨＣ１８ １．７μ ５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水１リットル＋０．０１ｍｏｌギ酸アンモニウム、溶離液Ｂ：アセトニトリル１リットル；勾配：０．０分９５％Ａ→０．１分９５％Ａ→２．０分１５％Ａ→２．５分１５％Ａ→２．５１分１０％Ａ→３．０分１０％Ａ；オーブン：４０℃；流量：０．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
方法１４：（ＬＣ−ＭＳ）：
原料および中間体：
中間体Ｃ１
トリフルオロ酢酸−（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（１：１）
Figure 2018528161
ＷＯ２００６／００２３２６に記載の方法に従って、標題化合物を製造した。
中間体Ｃ２
ｔｅｒｔ−ブチル−（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタノエート
Figure 2018528161
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ホモセリネート４．２２ｇ（１４．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１８０ｍＬに溶かし、ピリジン３．５ｍＬおよび１，１，１−トリアセトキシ−１λ５，２−ベンゾヨードキソール−３（１Ｈ）−オン９．２ｇ（２１．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、次にジクロロメタン５００ｍＬで希釈し、１０％強度チオ硫酸ナトリウム溶液で２回抽出し、５％強度クエン酸で２回および１０％強度重炭酸ナトリウム溶液で２回その順で抽出した。有機相を分離し、硫酸マグネシウムで脱水し、真空乾燥した。残留物をジエチルエーテルに取り、ＨＣｌ（ジエチルエーテル中溶液）を加えた。沈殿を濾去し、濾液を濃縮し、アセトニトリル／水から凍結乾燥した。これによって、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノエート３．７ｇ（９３％）を得て、それをそれ以上精製せずに次の段階に用いた（Ｒｆ：０．５（ＤＣＭ／メタノール９５／５））。
中間体Ｃ１ ３．５ｇ（９．８５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １６０ｍＬに溶かし、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．１３ｇ（１４．７７ｍｍｏｌ）および酢酸０．７ｍＬを加えた。室温で５分間撹拌後、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソブタノエート３．２３ｇ（１１．８５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温でさらに３０分間撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物をアセトニトリル／水に取った。沈殿固体を濾過し、乾燥させて、標題化合物５．４６ｇ（８４％）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ３
（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸
Figure 2018528161
中間体Ｃ２ ５．４６ｇ（８．２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １６０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン４．８ｍＬおよびアセトキシアセチルクロライド２．２ｍＬ（２０．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で３回と次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を、移動相シクロヘキサン／酢酸エチル２：１を用いるＢｉｏｔａｇｅ／Ｉｓｏｌｅｒａ（ＳＮＡＰ ３４０ｇ）でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。これによって、アシル化中間体４．５７ｇ（７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１ｇ（１．３６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ２０ｍＬに溶かし、ＴＦＡ ２０ｍＬを加えた。室温で５時間撹拌後、混合物を濃縮し、残留物をｎ−ペンタンで２回磨砕した。各場合で、ｎ−ペンタンを傾斜法で除去し、残った固体を高真空乾燥した。これによって、（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−アミノブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）１．１ｇを得た。ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体０．９１ｇ（１．５７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ７０ｍＬに溶かし、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート３．４３ｇ（１５．７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４．１ｍＬを加えた。室温で３０分間撹拌後、反応液をＤＣＭで希釈し、５％強度クエン酸で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物をｎ−ペンタンで２回磨砕し、各場合でｎ−ペンタンを傾斜法で除去した。残った固体をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥して、標題化合物１．１１ｇを得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．５５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ４
（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタン酸／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018528161
中間体Ｃ２ ５．４６ｇ（８．２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １６０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン４．８ｍＬおよびアセトキシアセチルクロライド２．２ｍＬ（２０．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で終夜撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で３回、次に飽和塩化ナトリウム溶液で抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を、移動相シクロヘキサン／酢酸エチル２：１を用いるＢｉｏｔａｇｅ／Ｉｓｏｌｅｒａ（ＳＮＡＰ ３４０ｇ）でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。これによって、アシル化中間体４．５７ｇ（７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
この中間体１．５ｇ（２．０３５ｍｍｏｌ）をエタノール５０ｍＬに取り、４０％強度メタンアミン水溶液５．８ｍＬを加えた。反応液を５０℃で４時間撹拌し、濃縮した。残留物をＤＣＭに取り、水で２回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。
残留物を高真空乾燥した。これによって、この中間体１．２３５ｍｇを得て、それをそれ以上精製せずにさらに反応させた。
この中間体１．２３５ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ １５ｍＬに溶かし、ＴＦＡ １５ｍＬを加えた。室温で４時間撹拌後、混合物を濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を濃縮し、残留物をアセトニトリルから凍結乾燥した。これによって、標題化合物１．０４ｇ（定量的）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝１．９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ５
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸
Figure 2018528161
中間体Ｃ４ ０．９ｇ（１．２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ６０ｍＬに溶かし、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート２．７ｇ（１２．５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３．３ｍＬを加えた。室温で４５分間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物をジエチルエーテルに取り、混合物が濁り始めるまでｎ−ペンタンを加えた。反応液を冷却して０℃とし、傾斜法で液を除去した。再度、ｎ−ペンタンを残留物に加え、混合物を傾斜法で液を除去した。残った固体をアセトニトリル／水１：１から凍結乾燥して、標題化合物０．９５ｇ（定量的）を得た。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝２．５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ５２
（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン
Figure 2018528161
最初に、４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル１０．００ｇ（４９．０１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １００．０ｍＬに入れ、炭酸セシウム２０．７６ｇ（６３．７２ｍｍｏｌ）およびベンジルブロマイド９．２２ｇ（５３．９１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を、水と酢酸エチルとの間で分配し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。反応を４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル９０．０ｇで繰り返した。
二つの合わせた反応取得物を、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｄａｉｓｏ ３００×１００；１０μ、流量：２５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物１−ベンジル−４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル１２５．１５ｇ（理論値の８７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９５［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、アルゴン下に、１−ベンジル−４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル４．８０ｇ（１６．３２ｍｍｏｌ）をＤＭＦに入れ、（２，５−ジフルオロフェニル）ボロン酸３．６１ｇ（２２．８５ｍｍｏｌ）、飽和炭酸ナトリウム１９．２０ｍＬ溶液および［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム（ＩＩ）：ジクロロメタン１．３３ｇ（１．６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８５℃で終夜撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、フィルターケーキを酢酸エチルで洗浄した。有機相を水で抽出し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物をシリカゲル（移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル１００：３）で精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル３．６０ｇ（理論値の６７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝１．５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２８［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチル３．６０ｇ（１１．００ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ ９０．０ｍＬに入れ、水素化リチウムアルミニウム１．０４ｇ（２７．５０ｍｍｏｌ）（２．４Ｍ ＴＨＦ中溶液）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。０℃で、飽和酒石酸カリウムナトリウム溶液を加え、酢酸エチルを反応混合物に加えた。有機相を飽和酒石酸カリウムナトリウム溶液で３回抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物をジクロロメタン３０．０ｍＬに溶解させた。酸化マンガン（ＩＶ）３．３８ｇ（３２．９９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。追加の酸化マンガン（ＩＶ）２．２０ｇ（２１．４７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、フィルターケーキをジクロロメタンで洗浄した。溶媒を減圧下に留去し、残留物（１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド）２．８０ｇを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝１．４８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２９８［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド２８．２１ｇ（９４．８８ｍｍｏｌ）と（Ｒ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド２３．００ｇ（１８９．７７ｍｍｏｌ）を、純粋ＴＨＦ ４０３．０ｍＬに入れ、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド７．４２ｇ（２３７．２１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。飽和ＮａＣｌ溶液５００．０ｍＬおよび酢酸エチル１０００．０ｍＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を珪藻土で濾過し、濾液を飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム１５００＋３４０ｇＳＮＡＰ、流量２００ｍＬ／分、酢酸エチル／シクロヘキサン１：１０）を用いて精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法７）：Ｒｔ＝１．６３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に（Ｒ）−Ｎ−｛（Ｅ／Ｚ）−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］メチレン｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド２５．００ｇ（６２．４２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下に純粋ＴＨＦに入れ、冷却して−７８℃とした。ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１．７Ｍペンタン中溶液）１２．００ｇ（１８７．２７ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、混合物をこの温度で３時間撹拌した。−７８℃で、メタノール７１．４ｍＬおよび飽和塩化アンモニウム溶液２１４．３ｍＬをその順で加え、反応混合物を昇温させて室温とし、室温で１時間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物（Ｒ）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドを、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５９［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に（Ｒ）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド２８．００ｇ（６１．０５ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン１８６．７ｍＬに入れ、ＨＣｌ／１，４−ジオキサン溶液（４．０Ｍ）４５．８ｍＬを加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｋｉｎｅｔｉｘ１００×３０；流量：６０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水）によって精製した。アセトニトリルを減圧下に留去し、ジクロロメタンを水系残留物に加えた。有機相を重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物１６．２ｇ（理論値の７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２．１０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３８［Ｍ−ＮＨ２］＋、７０９［２Ｍ＋Ｈ］＋。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．８７（ｓ、９Ｈ）、１．５３（ｓ、２Ｈ）、３．５９（ｓ、１Ｈ）、５．２４（ｄ、２Ｈ）、６．５６（ｓ、１Ｈ）、６．９４（ｍ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、２Ｈ）、７．２０（ｍ、１Ｈ）、７．２６（ｍ、２Ｈ）、７．３４（ｍ、２Ｈ）、７．４６（ｍ、１Ｈ）。
中間体Ｃ５３
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸
Figure 2018528161
最初に、Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２を、ベンジル（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートで還元的にアルキル化した。２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化し、次に二つのエステル基を２Ｍ水酸化リチウム溶液／メタノールで加水分解した。このようにして得られた中間体をエタノールに溶解させ、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を、室温で標準気圧下に水素で１時間水素化した。脱保護化合物をジオキサン／水２：１に取り、最後の段階で、９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルクロロカーボネートの存在下にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いてＦｍｏｃ保護基を導入した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３４（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｃ５８
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタン酸
Figure 2018528161
最初に、中間体Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２を、ベンジル（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートで還元的にアルキル化した。最初に、Ｃ２と同様にして、中間体Ｃ５２を、ベンジル（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートで還元的にアルキル化した。中間体Ｃ２７について記載の方法に従って２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソ酢酸エチルでアシル化し、二つのエステル基を２Ｍ水酸化リチウム溶液／メタノールで加水分解した。このようにして得られた中間体をエタノールに溶解させ、パラジウム／炭素（１０％）を加え、混合物を室温で水素によって標準気圧下に１時間水素化した。
この完全に脱保護された中間体５００ｍｇ（０．８８６ｍｍｏｌ）をジオキサン６０ｍＬに取り、１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオン２５３ｍｇ（０．９７５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン１９８μＬを加えた。室温で２４時間撹拌後、反応液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製した。適切な分画を合わせ、減圧下に濃縮し、真空乾燥することで、標題化合物３１２ｍｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝４．６１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６５８（Ｍ＋Ｈ）−。
中間体Ｃ６１
Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−β−アラニン
Figure 2018528161
中間体Ｃ５８ ６０ｍｇ（０．０９１ｍｍｏｌ）をβ−アラニネートメチルとカップリングさせ、次に２Ｍ水酸化リチウム溶液でエステル開裂することで、標題化合物を製造した。これによって、２段階で標題化合物６７ｍｇ（理論値の６１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ６９
１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−１４−チア−７，１１−ジアザ−２−シラヘプタデカン−１７−オン酸
Figure 2018528161
最初に（２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）１１７．０ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸２１．６ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を、メタノール３．０ｍＬに入れ、炭酸カリウム８９．５ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で４時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。これによって、標題化合物１０６．１ｍｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７００（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｃ７０
（２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート
Figure 2018528161
最初に（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（中間体Ｃ５２）９９０．０ｍｇ（２．７９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１５．０ｍＬに入れ、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム８２８．８ｍｇ（３．９１ｍｍｏｌ）および酢酸１２９．９ｍｇ（３．２１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。ジクロロメタン１５．０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート（中間体Ｌ１５）６９８．１ｍｇ（３．２１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に溶媒を留去した。残留物をシリカゲル（移動相：ジクロロメタン／メタノール＝１００：２）を用いて精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、化合物２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート１．２５ｇ（理論値の７３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５５６（Ｍ＋Ｈ）＋。
最初に２−（トリメチルシリル）エチル［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］カーバメート９０８．１ｍｇ（１．６３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン５４５．６ｍｇ（５．３９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１０．０ｍＬに入れ、混合物を冷却して０℃とした。この温度で、クロロアセチルクロライド５９０．５ｍｇ（５．２３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を各場合で、飽和重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化アンモニウム溶液で３回洗浄した。有機相を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物６７３．８ｍｇ（理論値の６５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．５３分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋ＨＣＯＯ−）−。
中間体Ｃ７１
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン／トリフルオロ酢酸（１：１）
Figure 2018528161
Ｌ−システイン５３６．６ｍｇ（４．４３ｍｍｏｌ）を、水２．５ｍＬと重炭酸ナトリウム５３１．５ｍｇ（６．３３ｍｍｏｌ）に懸濁させた。イソプロパノール２５．０ｍＬに溶かした２−（トリメチルシリル）エチル｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］プロピル｝カーバメート（中間体Ｃ７０）４００．０ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン１．１６ｇ（７．５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で１．５時間撹拌した。酢酸エチルを反応混合物に加え、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で繰り返し洗浄し、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。溶媒を減圧下に留去し、残留物を高真空下に乾燥した。これによって、標題化合物４４９．５ｍｇ（理論値の８６％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ７４
２−（トリメチルシリル）エチル３−アミノ−Ｎ−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノイル］−Ｄ−アラニネートトリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
中間体Ｃ５８ ７５ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ １２．５ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ ６５ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン７９μＬの存在下に中間体Ｌ６ ７８ｍｇ（０．１７１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。分取ＨＰＬＣによる精製後、残留物をエタノール２０ｍＬに溶かし、１０％Ｐｄ／Ｃの存在下に室温で大気圧下に１時間水素化した。触媒の濾過後、溶媒を減圧下に留去した。残留物を分取ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥して標題化合物６３ｍｇ（２段階で６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ７５
メチル（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート
Figure 2018528161
中間体Ｃ５２ ４．３ｇ（１２．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５２５ｍＬ）中溶液に、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム３．６３ｇ（１７．１２ｍｍｏｌ）および酢酸８．４ｍＬを加えた。混合物を室温で５分間撹拌後、メチル−（２Ｓ）−４−オキソ−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（古典的方法を用い、（３Ｓ）−３−アミノ−４−メトキシ−４−オキソブタン酸から製造）３．２３ｇ（１１．８５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１７５ｍＬ）中溶液を加え、反応混合物を室温で４５分間撹拌した。粗混合物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液１００ｍＬで２回、次にブラインで洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒留去した。残留物を分取ＨＰＬＣで精製して、メチル（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート４．６ｇ（６１％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．９７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４．３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
メチル（２Ｓ）−４−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート２００ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン１０５μＬおよびアセトキシアセチルクロライド７７μＬ（０．７１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で２回、次にブラインで洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒留去して標題化合物２１３ｍｇ（７５％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ８８
ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｒ）−３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレートトリフルオロアセテート（１：１）
（立体異性体の混合物）
Figure 2018528161
ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｒ）−３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレートトリフルオロアセテート（１：１）（中間体Ｃ５２）２．０４ｍｇ（５．７５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５１ｍＬ）中溶液に、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１．７１ｇ（８．０５ｍｍｏｌ）および酢酸０．４０ｇ（６．６１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５分間撹拌した。３−ホルミルピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル１．３２ｇ（６．６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。酢酸エチルを加え、有機相を飽和炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。これによって、標題化合物１．８６ｇ（理論値の５０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５３８（Ｍ＋Ｈ−ＣＦ３ＣＯ２Ｈ）＋。
中間体Ｃ８９
ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート
Figure 2018528161
４Åモレキュラーシーブスを入れたｔｅｒｔ−ブチル（３Ｒ）−３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８８）２．８９ｇ（４．１９ｍｍｏｌ、純度８０％）のジクロロメタン（４２ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン１．３６ｇ（１３．４２ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド２．１３ｇ（１８．８７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌し、溶媒を留去した。残留物を分取ＨＰＬＣで精製して、標題化合物の異性体１ ４４９ｍｇ（理論値の１７％）および異性体２ ４４２ｍｇ（理論値の１７％）を得た。
異性体１ ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
異性体２ ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝２．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９０
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（異性体１）
Figure 2018528161
Ｌ−システイン４９３ｍｇ（４．０７ｍｍｏｌ）の水（２．３ｍＬ）中溶液に、炭酸水素ナトリウム４８９ｍｇ（５．８２ｍｍｏｌ）と、次にｔｅｒｔ−ブチル（３Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体１）３５７ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（２３．０ｍＬ）中溶液および１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデカ−７−エン１．０６ｇ（６．９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。酢酸エチルを加え、有機相を飽和炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。残留物を、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。これによって、標題化合物２５５ｍｇ（理論値の６２％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ９５
３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパン酸（異性体１）
Figure 2018528161
ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝ピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ８９、異性体１）３８４．０ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ）および３−スルファニルプロパン酸７３．０ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ）のメタノール（１４ｍＬ）および水１滴中混合物に、炭酸カリウム３０２．５ｍｇ（２．１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２．５時間撹拌した。酢酸エチルを加え、有機相を水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に溶媒留去した。残留物を高真空乾燥し、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。これによって、標題化合物３５８．０ｍｇ（理論値の８４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０１
Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド
Figure 2018528161
（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（中間体Ｃ５２）１５０．０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）を最初に、ジクロロメタン２．０ｍＬに入れ、ＨＯＡｃ ２９．２ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム１２５．６ｍｇ（０．５９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５分間撹拌した。３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロパナール９８．９ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水後、減圧下に溶媒留去し、残留物を、シリカゲルを用いて精製した（移動相：ジクロロメタン／メタノール１００：１）。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン１８８．６ｍｇ（７４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．００分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５４１［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、２−［３−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）プロピル］−１Ｈ−イソインドール−１，３（２Ｈ）−ジオン１７１．２ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン５．０ｍＬに入れ、トリエチルアミン７３．６ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃で、アセトキシアセチルクロライド９４．９ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和重炭酸ナトリウム溶液で２回および飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。硫酸マグネシウムで脱水後、減圧下に溶媒留去し、残留物を、ＢｉｏｔａｇｅＩｓｏｌｅｒａ（シリカゲル、カラム１０ｇＳＮＡＰ、流量１２ｍＬ／分、酢酸エチル／シクロヘキサン１：３）を用いて精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、化合物２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］アミノ）−２−オキソ酢酸エチル１５９．０ｍｇ（７７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４２［Ｍ＋Ｈ］＋。
最初に、２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［３−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］アミノ）−２−オキソ酢酸エチル１４７．２ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を、エタノール４．０ｍＬに入れ、メタンアミン（４０％水溶液）３５６．２ｍｇ（４．５９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で終夜撹拌した。減圧下に溶媒留去し、残留物を、トルエンと３回共蒸留した。残留物を、シリカゲルを用いて精製した（移動相：ジクロロメタン／メタノール１０：１）。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、標題化合物６７．４ｍｇ（６３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１０２
ｔｅｒｔ−ブチル｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート
Figure 2018528161
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ブタン酸（中間体Ｃ５）２０．０ｍｇ（３２．５４μｍｏｌ）、Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミドトリフルオロアセテート（１：１）（中間体Ｌ１）１０．１ｍｇ（３２．５４μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ １８．６ｍｇ（４８．８１μｍｏｌ）をＤＭＦ ２．５ｍＬに溶かした。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン１６．８ｍｇ（２３μＬ、１３０．１５μｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（溶離液：アセトニトリル／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配３５：６５→９５：５）によって直接精製し、次に凍結乾燥して、標的化合物１５ｍｇ（５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２３分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１０３
ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−（｛２−［（｛３−［（２，２−ジメチル−４，１２−ジオキソ−３，１５，１８，２１，２４−ペンタオキサ−５，１１−ジアザヘキサコサン−２６−イル）スルファニル］−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル｝アセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−１−オキソブタン−２−イル］カーバメート
Figure 2018528161
ｔｅｒｔ−ブチル｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−｛［（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセチル］アミノ｝エチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝カーバメート（中間体Ｃ１０２）１５ｍｇ（１８．９０μｍｏｌ）をアセトニトリル５００μＬに溶かした。リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ＝７）２７５μＬに溶かしたｔｅｒｔ−ブチル（７−オキソ−２１−スルファニル−１０，１３，１６，１９−テトラオキサ−６−アザヘニコス−１−イル）カーバメート（中間体Ｌ２）１２．３ｍｇ（２６．４５μｍｏｌ）を混合物に加えた。１Ｎ水酸化ナトリウム溶液数滴を加えることで、溶液のｐＨをｐＨ＝８に調節した。混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（溶離液：アセトニトリル／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配３５：６５→９５：５）によって精製し、次に凍結乾燥して、標的化合物２０ｍｇ（８４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１２６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｃ１０４
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸
Figure 2018528161
中間体Ｃ５２を、中間体Ｃ２と同様にしてベンジル−（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−４−オキソブタノエートで還元的にアルキル化した。次に、２級アミノ基を２−クロロ−２−オキソエチルアセテートでアシル化した。最終段階で、二つのエステル基を、２Ｍ水酸化リチウムのメタノール中溶液を用いて開裂させた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６４６（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｃ１０５
ベンジルＮ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニネート・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
中間体Ｃ５８ ２００ｍｇを、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中でベンジルβ−アラニネートとカップリングさせ、次にＴｅｏｃ保護基を、５０℃で加熱下に４０分間にわたり４当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いて開裂させた。４当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物を、ＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０６
２−（トリメチルシリル）エチルＮ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−グルタミネート
Figure 2018528161
中間体Ｃ１０４ １５１ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中で中間体Ｌ９ １２８ｍｇ（０．２３４ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。次に、Ｚ−保護基を常圧下で１０％パラジウム／活性炭での水素化によって開裂させた。
収率：２段階で理論値の３０％。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０８
２−（トリメチルシリル）エチルＮ６−（Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル）−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−リジネート
Figure 2018528161
中間体Ｃ１０４ １０３ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）を、ＥＤＣ、ＨＯＢＴおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、ＤＭＦ中、２−（トリメチルシリル）エチルＮ６−β−アラニル−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−リジネート（中間体Ｌ１１）１１０ｍｇ（０．１７５ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。次に、Ｚ−保護基を、常圧下で１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ−メタノール１：１中における水素化によって開裂させた。標題化合物を、収量１１３ｍｇ（２段階で７５％）で得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９５７（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１０９
ジベンジルＮ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−β−アラニル−Ｌ−グルタメート
Figure 2018528161
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中における中間体Ｃ６１のジベンジルＬ−グルタメートとのカップリングおよびその後のトリフルオロエタノール中、５０℃で１時間加熱下での１０当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いるＴｅｏｃ保護基の除去によって、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．０９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１１０
Ｎ２−アセチル−Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンアミド
Figure 2018528161
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中における中間体Ｃ１０４の中間体Ｌ１３とのカップリングおよびその後の常圧下で１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ−メタノール１：１中における水素化によるＺ−保護の除去によって、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８２６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１１１
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン−１−アミン（１０８ｍｇ、３０４μｍｏｌ）（中間体Ｃ５２）のＤＣＭ（５６．０ｍＬ）中溶液およびモレキュラーシーブス４Åに、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（９０．２ｍｇ、４２６μｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１５分間撹拌し、２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｓ）−３−フルオロ−４−ホルミルピロリジン−１−カルボキシレート（９７．３ｍｇ、純度９８％、３６５μｍｏｌ）（参考：ＷＯ２０１４／１５１０３０Ａ１）を加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌し、次にＤＣＭで希釈した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウムおよび水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製して、標題化合物１．３９ｇ（理論値の２４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６００（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１１２
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート
Figure 2018528161
２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−［（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ）メチル］−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレートトリフルオロアセテート（１：１）（中間体Ｃ１１１）６９２．８ｍｇ（０．８８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８．７ｍＬ）中溶液とモレキュラーシーブス４Åに、トリエチルアミン２９５．０ｍｇ（２．９１ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド４１８．９ｍｇ（３．７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２．５時間撹拌し、ＤＣＭで希釈した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウムおよび飽和塩化アンモニウムで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒留去した。残留物をＤＣＭ ８．７ｍＬで希釈し、モレキュラーシーブス４Å、トリエチルアミン２９５．０ｍｇ（２．９１ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロライド４１８．９ｍｇ（３．７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、ＤＣＭで希釈した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウムおよび飽和塩化アンモニウムで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒留去して標題化合物６９１ｍｇ（理論値の７４％）を得て、それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝６７６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｃ１１３
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン
Figure 2018528161
Ｌ−システイン２０３．６ｍｇ（１．６８ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム２０１．７ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）の水（０．９５ｍＬ）中懸濁液に、２−（トリメチルシリル）エチル（３Ｒ，４Ｒ）−３−｛［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（クロロアセチル）アミノ］メチル｝−４−フルオロピロリジン−１−カルボキシレート（中間体Ｃ１１２）１７０．０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（９．５ｍＬ）中溶液および１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデカ−７−エン４３８．５ｍｇ（２．４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウムおよびブラインで洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を留去して、標題化合物１５２ｍｇ（理論値の８３％）を得て、それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．２６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１
トリフルオロ酢酸／Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセトアミド（１：１）
Figure 2018528161
市販の（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酢酸およびｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートから出発してペプチド化学の古典的方法によって、標題化合物を製造した。
ＨＰＬＣ（方法１１）：Ｒｔ＝０．１９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ２
ｔｅｒｔ−ブチル（７−オキソ−２１−スルファニル−１０，１３，１６，１９−テトラオキサ−６−アザヘニコス−１−イル）カーバメート
Figure 2018528161
ｔｅｒｔ−ブチル（５−アミノペンチル）カーバメート３５６ｍｇ（１．７５７ｍｍｏｌ）、１−スルファニル−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−酸４９６ｍｇ（１．７５７ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ ８０１ｍｇ（２．１０８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ５．９５ｍＬに溶かした。反応混合物を氷浴で冷却し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン６８１ｍｇ（９２０μＬ、５．２７２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌し、４℃の冷蔵庫で終夜保存した。混合物を、分取ＨＰＬＣ（溶離液：アセトニトリル／水＋０．１％ＴＦＡ、勾配２０：８０→８０：２０）によって直接精製し、次に凍結乾燥して、標的化合物２５５ｍｇ（２９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ３
Ｎ２−アセチル−Ｎ６−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−リジン
Figure 2018528161
ベンジルカルボノクロリデートをＮ２−アセチル−Ｌ−リジンと反応させることで、この中間体を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ４
Ｎ２−アセチル−Ｎ６−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−リジン
Figure 2018528161
１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンをＮ２−アセチル−Ｌ−リジンと反応させることで、この中間体を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ５
９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル｛（５Ｓ）−５−アセトアミド−６−［（２−アミノエチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝カーバメートトリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
市販のＮ２−アセチル−Ｎ６−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−リジンをｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートと反応させ、次にＢｏｃ基をトリフルオロ酢酸で除去することで、この中間体を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１３）：Ｒｔ＝０．８７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４５３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ６
２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｄ−アラニネートトリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
古典的なペプチド化学法を用い、３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｄ−アラニンから出発して、標題化合物を製造した。ＥＤＣ／ＤＭＡＰを用いる２−（トリメチルシリル）エタノールによるエステル化と、次にＴＦＡによるＢｏｃ基の脱保護によって、標題化合物４０５ｍｇ（２段階で５８％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ７
Ｎ２−アセチル−Ｎ６−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018528161
標題化合物の合成を、ＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンおよびｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパラギネートのカップリングから出発し、次にメタノール中１０％パラジウム／活性炭を用いる水素化によってＺ−保護基を除去した。得られた中間体をＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にて中間体Ｌ３とカップリングさせ、最終段階で、ｔｅｒｔ−ブチルエステル基をトリフルオロ酢酸／ＤＣＭで開裂させた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５７９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８
Ｎ２−アセチル−Ｎ６−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギン
Figure 2018528161
標題化合物の合成を、ＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンおよびｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパラギネートのカップリングから出発し、次に常圧下で１０％パラジウム／活性炭でのメタノール中にての水素化によってＺ−保護基を除去した。得られた中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ中にて中間体Ｌ４とカップリングさせ、次に両方の保護基を７．５％トリフルオロ酢酸／ＤＣＭ中で１時間撹拌下で除去した。最終段階で、アミノ基を、ＤＭＦ中Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンを用いて再度保護した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ９
２，２−ジメチルプロパン酸−−２−（トリメチルシリル）エチル−Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−グルタミネート（１：１）
Figure 2018528161
最初に、（４Ｓ）−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−５−オキソペンタン酸を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にベンジル−（２−アミノエチル）カーバメートとカップリングさせた。次に、Ｂｏｃ基およびｔｅｒｔ−ブチルエステル基の両方を、トリフルオロ酢酸を用いて開裂させた。次に、最初に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にＤＭＦ／水中でトリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンと反応させることでアミノ基を再度保護し、次にＥＤＣ／ＤＭＡＰを用い、ＤＣＭ中にて２−（トリメチルシリル）エタノールでカルボキシ基をエステル化した。最終段階で、常圧下で１０％パラジウム／活性炭での水素化によってＺ−保護基を除去し、標題化合物を得て、ＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４３４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギネート
Figure 2018528161
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中でのＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニンのｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパラギネートとのカップリングと、次にＤＣＭ中でのトリフルオロ酢酸によるｔｅｒｔ−ブチルエステル基の除去によって、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４０９（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１１
２−（トリメチルシリル）エチルＮ６−β−アラニル−Ｎ２−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝−Ｌ−リジネート
Figure 2018528161
ペプチド化学の古典的方法によって、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いるＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−β−アラニンの２−（トリメチルシリル）エチルＮ２−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−リジネートとのカップリングから出発し、常圧下での１０％パラジウム／活性炭での水素化によるＺ−保護基の除去、１−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝オキシ）ピロリジン−２，５−ジオンによるトリメチルシリル−エチルオキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）−保護基の導入、最後に７．５％トリフルオロ酢酸のジクロロメタン中溶液中での４５分間の撹拌によるＢｏｃ−保護基の温和な除去により標題化合物を合成した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４６２（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１２
ベンジル（２Ｓ）−５−（｛（５Ｓ）−５−アセトアミド−６−［（２−アミノエチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタノエート・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ペプチド化学の古典的方法により、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いるｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カーバメートの中間体Ｌ３とのカップリングから出発して、常圧下での１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ／メタノール１：１中での水素化によるＺ−保護基の除去、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いる得られた中間体の（４Ｓ）−５−（ベンジルオキシ）−４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタン酸とのカップリング、最後に２５％トリフルオロ酢酸のジクロロエタン中溶液中での１時間の撹拌によるＢｏｃ−保護基の除去によって、標題化合物を合成した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．６６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝５８４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１３
ベンジル（２Ｓ）−５−（｛（５Ｓ）−５−アセトアミド−６−［（２−アミノエチル）アミノ］−６−オキソヘキシル｝アミノ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−５−オキソペンタノエート・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ペプチド化学の古典的方法により、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いるＮ２−アセチル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンのベンジル（２−アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）とのカップリングから出発して、次に、常圧下での１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ／メタノール１：１中での水素化によるＺ−保護基の除去によって、標題化合物を合成した。ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１４
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アスパラギントリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ペプチド化学の古典的方法を用い、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを用いるピリジン−４−イル酢酸塩酸塩（１：１）の市販のｔｅｒｔ−ブチルＬ−アラニル−Ｌ−アラニネート塩酸塩（１：１）とのカップリングから出発し、次に、ＤＣＭ中にてトリフルオロ酢酸でｔｅｒｔ−ブチルエステルを除去することで、標題化合物を合成した。得られた中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にｔｅｒｔ−ブチルＬ−アスパラギネートとカップリングさせ、最後に、ｔｅｒｔ−ブチルエステルをトリフルオロ酢酸／ＤＣＭで開裂させた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．１５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１５
２−（トリメチルシリル）エチル（３−オキソプロピル）カーバメート
Figure 2018528161
３−アミノ−１−プロパノール４３４．４ｍｇ（５．７８ｍｍｏｌ）および２−（トリメチルシリル）エチル２，５−ジオキソピロリジン−１−カルボキシレート１．５０ｇ（５．７８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０．０ｍＬに溶かし、トリエチルアミン５８５．３ｍｇ（５．７８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を水および飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去した。残留物２−（トリメチルシリル）エチル（３−ヒドロキシプロピル）カーバメート（９９６．４ｍｇ、理論値の７９％）を高真空乾燥し、それ以上精製せずに次の合成段階で用いた。
最初に、２−（トリメチルシリル）エチル（３−ヒドロキシプロピル）カーバメート８０７．０ｍｇ（３．６８ｍｍｏｌ）をクロロホルム１５．０ｍＬおよび０．０５Ｎ炭酸カリウム／０．０５Ｎ重炭酸ナトリウム溶液（１：１）１５．０ｍＬに入れた。テトラ−ｎ−ブチル塩化アンモニウム１０２．２ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）、Ｎ−クロロコハク酸イミド７３６．９ｍｇ（５．５２ｍｍｏｌ）およびＴＥＭＰＯ ５７．５ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜高撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し、有機相を水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に留去した。残留物を高真空乾燥し、それ以上精製せずに、次の合成段階で用いた（８９０．３ｍｇ）。
中間体Ｌ１６
２，２−ジメチル−４，１１−ジオキソ−３，１５，１８，２１，２４−ペンタオキサ−５，１２−ジアザヘプタコサン−２７−酸
Figure 2018528161
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン存在下でのＤＭＦ中でのメチル１−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−オエートの６−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキサン酸とのカップリングと、次にＴＨＦ：水（１：１）中室温で１時間にわたる５当量の水酸化リチウムを用いるエステル基のケン化によって、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．２５分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７９［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｌ１７
２−（トリメチルシリル）エチル３−｛［Ｎ２−アセチル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジル］アミノ｝−Ｄ−アラニネート
Figure 2018528161
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中にての３−アミノ−Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｄ−アラニンおよび２，５−ジオキソピロリジン−１−イルＮ２−アセチル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジネートのカップリングと、次にピリジンおよび１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在下でのアセトニトリル中にてのカルボン酸基の２−（トリメチルシリル）エタノールとののカップリング、次に、室温で２時間にわたる１０％Ｐｄ／Ｃの存在下でのメタノール中の水素化によるベンジルオキシカルボニル基の脱保護によって、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝４７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ８１
ベンジル｛２−［（２−アミノエチル）スルホニル］エチル｝カーバメートトリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ＤＭＦ中、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、２，２′−スルホニルジエタンアミン２５０ｍｇ（１．１１ｍｍｏｌ）を１−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］オキシ｝ピロリジン−２，５−ジオン９２．３ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。ＨＰＬＣ精製後、標題化合物７０ｍｇ（理論値の４７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝０．６４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝２５７．１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｌ１０８
Ｎ２−アセチル−Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンアミド
Figure 2018528161
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中でのＮ２−アセチル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジンおよびベンジル（２−アミノエチル）カーバメート塩酸塩（１：１）のカップリング、次に室温で１時間にわたる１０％Ｐｄ／Ｃの存在下でのジクロロメタン／メタノール１：１中における水素化によるベンジルオキシカルボニル基の脱保護によって、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．４３分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝３３１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１
１−｛［１−（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］アミノ｝−２−オキソエチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル］スルファニル｝−Ｎ−（５−アミノペンチル）−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカン−１５−アミド・２塩酸塩
Figure 2018528161
ｔｅｒｔ−ブチル［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−（｛２−［（｛３−［（２，２−ジメチル−４，１２−ジオキソ−３，１５，１８，２１，２４−ペンタオキサ−５，１１−ジアザヘキサコサン−２６−イル）スルファニル］−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル｝アセチル）アミノ］エチル｝アミノ）−１−オキソブタン−２−イル］カーバメート（中間体Ｃ１０３）１９ｍｇ（１５．０７μｍｏｌ）をＤＣＭ ３００μＬに溶かした。４Ｍ塩化水素のジオキサン中溶液１１３μＬを加え、混合物を室温で１時間撹拌した。追加の４Ｍ塩化水素のジオキサン中溶液１００μＬを加え、混合物を再度１時間撹拌した。
溶媒を留去し、アセトニトリルおよび水の混合物からの凍結乾燥によって残留物を固化させて、標的化合物１１ｍｇ（６４％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝５．８６分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０６０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ２
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−カルボキシプロピル｝−Ｌ−アラニンアミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ペプチド合成で公知の古典的方法を用い、メチル−（２Ｓ）−４−［（アセトキシアセチル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−（｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝アミノ）ブタノエート（中間体Ｃ７５）から出発して、標題化合物を製造した。最初に、Ｔｅｏｃ基を、トリフルオロエタノール中、５０℃で２時間加熱下に、６当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いて開裂させた。次に、ＤＭＦ中、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に、脱保護された中間体をＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンと反応させた。次の段階で、Ｚ−保護基を、常圧下で１０％パラジウム／活性炭での水素化によって除去した。得られた中間体を、ＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ３と反応させた。次に、２Ｍ水酸化リチウムの水／ＴＨＦ２：１中溶液でのエステル開裂および常圧下で１０％パラジウム／活性炭での水素化によるＺ−保護基の最終除去によって、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ３
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｌ−バリル−Ｎ−｛３−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］プロピル｝−Ｌ−アラニンアミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ペプチド合成において公知の古典的方法を用い、ＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下にベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−バリル−Ｌ−アラニンとのカップリングによって、Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２−ヒドロキシアセトアミド（中間体Ｃ１０１）から出発して標題化合物を合成した。次の段階で、常圧下で１０％パラジウム／活性炭での水素化によってＺ−保護基を除去した。得られた中間体を、ＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ３と反応させた。最後に、常圧下で１０％パラジウム／活性炭での水素化によって標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．９０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ４
３−［（Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル）アミノ］−Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｄ−アラニントリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
中間体Ｃ７４ ２５ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３．７５ｍＬに溶かし、ＨＡＴＵ １２ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）および３当量のＮ、Ｎジイソプロピルエチルアミンの存在下に、市販のＮ２−アセチル−Ｎ６−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−リジン１３ｍｇ（０．０３１ｍｍｏｌ）とカップリングさせた。第２段階で、Ｆｍｏｃ保護基をＤＭＦ ５ｍＬ中にて１００当量のＤＡＢＣＯで開裂させた。最後に、Ｔｅｏｃ保護基を、トリフルオロエタノール中、５０℃で２時間加熱下に６当量の塩化亜鉛で開裂させた。ＨＰＬＣ精製後、標題化合物４．５ｍｇ（２０％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ５
Ｎ２−アセチル−Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｌ−リジンアミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−２−｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸（中間体Ｃ５３）の中間体Ｌ５とのカップリングと、次にＤＭＦ中１００当量のＤＡＢＣＯによってＦｍｏｃ保護基を除去することによって、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．１１分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７２４．４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ６
３−（｛１５−［（Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル）アミノ］−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル｝アミノ）−Ｎ−｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝−Ｄ−アラニントリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
最初の段階で、中間体Ｃ７４を、ＤＭＦ中Ｎ、Ｎジイソプロピルエチルアミンの存在下に市販の９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル｛１５−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−１５−オキソ−３，６，９，１２−テトラオキサペンタデカ−１−イル｝カーバメートとカップリングさせた。次に、Ｆｍｏｃ保護基をＤＭＦ中１００当量のＤＡＢＣＯで開裂させ、得られた中間体をＤＭＦ中１．１当量のＨＡＴＵおよび３当量のＮ、Ｎジイソプロピルエチルアミンの存在下にＬ４とカップリングさせた。最後に、Ｔｅｏｃ保護基およびトリメチルシリルエチルエステルを、トリフルオロエタノール中にて５０℃で１時間加熱下に、１２当量の塩化亜鉛で開裂させた。ＨＰＬＣ精製後、標題化合物２．３ｍｇを得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１７［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ７
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（２−カルボキシエチル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド
Figure 2018528161
ＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ１０５の中間体Ｌ７とのカップリング、次に１０％パラジウム／活性炭を用いるＤＣＭ−メタノール１：１中での水素化によるＺ−保護基およびベンジルエステルの同時除去およびＨＰＬＣ精製によって、標題化合物を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１０１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ８
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−［（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−｛［２−（Ｌ−γ−グルタミルアミノ）エチル］アミノ｝−１−オキソブタン−２−イル］−Ｌ−アスパルタミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ１０６の中間体Ｌ８とのカップリング、次に５０℃で６時間加熱下に１０当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いる全ての保護基の同時除去によって、標題化合物を得た。６当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７２分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１１１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ９
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−１−［（３−｛［（５Ｓ）−５−アミノ−５−カルボキシペンチル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ１０８の中間体Ｌ１０とのカップリング、次に常圧下での１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ／メタノール１：１中での水素化によるＺ−保護基の除去、次にＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｌ４とのカップリング、最後に５０℃で２時間加熱下に１２当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いる全ての保護基の同時除去によって、標題化合物を得た。１２当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１１．７分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝１１３７（Ｍ−Ｈ）−。
中間体Ｆ１０
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−［（３−｛［（１Ｓ）−１，３−ジカルボキシプロピル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ１０９の中間体Ｌ８とのカップリング、次に常圧下で１０％パラジウム／活性炭でのメタノール中の水素化によるベンジルエステル保護基の除去、最後に５０℃で６時間加熱下に６当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノール下でのＴｅｏｃ保護基の除去によって、標題化合物を得た。６当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．３１分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１４０（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１１
Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイントリフルオロアセテート（１：２）
Figure 2018528161
Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイントリフルオロアセテート（１：１）（２０．０ｍｇ、２４．１μｍｏｌ）（中間体Ｃ７１）およびＮ２−アセチル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジン（９．０２ｍｇ、３１．３μｍｏｌ）のアセトニトリル（２．０ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３４μＬ、１９０μｍｏｌ）および２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキサイド（１９μＬ、純度５０％、３１μｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を高真空乾燥した。これによって、Ｎ２−アセチル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン５．２ｍｇ（理論値の２２％）を得た。得られた生成物は、それのエピマーを約１５％含んでいた。
Ｎ２−アセチル−Ｎ６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−リジル−Ｓ−（１１−｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝−２，２−ジメチル−６，１２−ジオキソ−５−オキサ−７，１１−ジアザ−２−シラトリデカン−１３−イル）−Ｌ−システイン（６１．６ｍｇ、６２．４μｍｏｌ）の２，２，２−トリフルオロエタノール（６．０ｍＬ）中溶液に塩化亜鉛（５１．０ｍｇ、３７４μｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で１時間撹拌した。塩化亜鉛（５１．０ｍｇ、３７４μｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で１時間撹拌した。混合物をＥＤＴＡ（２１８ｍｇ、７４８μｍｏｌ）とともに５分間撹拌し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（カラム：Ｒｅｐｒｏｓｉｌ ２５０×３０；１０μ、流量：５０ｍＬ／分、ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製した。減圧下に溶媒留去し、残留物を凍結乾燥した。これによって、標題化合物４１．６ｍｇ（理論値の６９％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１．３２分；ＭＳ（ＥＳＩｎｅｇ）：ｍ／ｚ＝７４１［Ｍ−Ｈ］−。
中間体Ｆ１２
Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｓ，４Ｒ）−４−フルオロピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイントリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
６−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキサン酸（２９．２ｍｇ、１２６μｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２１μＬ、１２０μｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４６．２ｍｇ、１２２μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｌ−システイン（３７．０ｍｇ、４８．６μｍｏｌ）（中間体Ｃ１０７）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水およびＤＣＭを加え、有機相を分離し、水でさらに洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒留去してＳ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−｛６−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−システイン４９．７ｍｇ（理論値の８５％）を得て、それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝１．４７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９７４［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝｛［（３Ｒ，４Ｒ）−４−フルオロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］カルボニル｝ピロリジン−３−イル］メチル｝アミノ）−２−オキソエチル］−Ｎ−｛６−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ヘキサノイル｝−Ｌ−システイン（４９．７ｍｇ、純度８１％、４１．４μｍｏｌ）のトリフルオロエタノール（３．５ｍＬ）中溶液に、（４５．２ｍｇ、３３２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。ＥＤＴＡ（９６．９ｍｇ、３３２μｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１５分間撹拌した。酢酸エチルを加え、有機相を水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒留去した。残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ／水、０．１％ＴＦＡ）によって精製して、標題化合物４．５ｍｇ（理論値の１３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７３０［Ｍ＋Ｈ］＋。
中間体Ｆ１３
Ｎ−（ピリジン−４−イルアセチル）−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラニル−Ｎ１−｛（２Ｓ）−１−（｛２−［（Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル）アミノ］エチル｝アミノ）−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］−１−オキソブタン−２−イル｝−Ｌ−アスパルタミド・トリフルオロアセテート（１：１）
Figure 2018528161
ＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ１１０の中間体Ｌ１４とのカップリング、次に５０℃で０．５時間加熱下に６当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いるＢｏｃ基の除去によって、標題化合物を得た。６当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝１１０１（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１４
Ｎ２−アセチル−Ｎ−（２−｛［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］スルホニル｝エチル）−Ｌ−リジンアミド・トリフルオロアセテート（１：２）
Figure 2018528161
最初に、中間体Ｌ８１をＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｃ５８とカップリングさせた。次に、常圧下での１０％パラジウム／活性炭でのＤＣＭ／メタノール１：１中での水素化によってＺ保護基を除去した。得られた中間体を、ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下に中間体Ｌ４とカップリングさせた。
最後に、Ｔｅｏｃ保護基を、５０℃で２時間加熱下に６当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いて開裂させた。６当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝０．７分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１８（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１５
Ｎ２−アセチル−Ｎ−｛２−［（３−｛［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［ピロリジン−３−イルメチル］アミノ）−２−オキソエチル］スルファニル｝プロパノイル）アミノ］エチル｝−Ｌ−リジンアミド・トリフルオロアセテート（１：２）（異性体１）
Figure 2018528161
ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下でのＤＭＦ中での中間体Ｃ９５の中間体Ｌ１０８とのカップリング、次に５０℃で１時間加熱下に６当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いるＢｏｃ基の除去によって、標題化合物を得た。６当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７９６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１６
Ｎ−（１５−アミノ−４，７，１０，１３−テトラオキサペンタデカン−１−オイル）−Ｓ−［２−（｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝［ピロリジン−３−イルメチル］アミノ）−２−オキソエチル］システイン・トリフルオロアセテート（１：２）（異性体１）
Figure 2018528161
ＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ９０の２，２−ジメチル−４−オキソ−３，８，１１，１４，１７−ペンタオキサ−５−アザエイコサン−２０−酸とのカップリング、次に５０℃で３時間加熱下での６当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いるＢｏｃ基の除去によって、標題化合物を得た。６当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．８０分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１７
Ｎ−（２２−アミノ−１７−オキソ−４，７，１０，１３−テトラオキサ−１６−アザドコサン−１−オイル）−Ｓ−｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝−Ｌ−システイントリフルオロアセテート（１：２）
Figure 2018528161
ＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ７１の中間体Ｌ１６とのカップリング、次に、５０℃で１時間加熱下に６当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いる保護基の除去によって、標題化合物を得た。６当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７８分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝９３３（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１８
３−［（Ｎ２−アセチル−Ｌ−リジル）アミノ］−Ｎ−［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］−Ｄ−アラニントリフルオロアセテート（１：２）
Figure 2018528161
ＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ６９の中間体Ｌ１７とのカップリングと、次に５０℃で１時間加熱下に６当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いる保護基の除去によって、標題化合物を得た。６当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７６分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８１４（Ｍ＋Ｈ）＋。
中間体Ｆ１９
Ｎ２−アセチル−Ｎ−（２−｛［３−（｛２−［（３−アミノプロピル）｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝アミノ］−２−オキソエチル｝スルファニル）プロパノイル］アミノ｝エチル）−Ｌ−リジンアミドトリフルオロアセテート（１：２）
Figure 2018528161
ＤＭＦ中でのＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下での中間体Ｃ６９の中間体Ｌ１０８とのカップリングと、次に５０℃で１時間加熱下に６当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いる保護基の除去によって、標題化合物を得た。６当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７９分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝７７０（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｂ：抗体／活性化合物複合体（ＡＤＣ）の製造
Ｂ−１．抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の一般的形成方法
例えば、組み換えヒトＴＷＥＡＫＲ配列番号１３８およびマウスＴＷＥＡＫＲ配列番号１３７についてのファージディスプレイライブラリのスクリーニングによって抗ＴＷＥＡＫＲ抗体を形成した。特に、抗体ＴＰＰ−２０９０は重要な例である。このようにして得られた抗体を、ヒトＩｇＧ１フォーマットに再フォーマットした。脱グリコシル化変異体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａを、ＴＰＰ−２０９０（免疫グロブリン類のＫａｂａｔナンバリングシステム）の重鎖に突然変異Ｎ２９７Ａを導入することで形成した。脱グリコシル化変異体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑを、ＴＰＰ−２０９０（免疫グロブリン類のＫａｂａｔナンバリングシステム）の重鎖に突然変異Ｎ２９７Ｑを導入することによって形成した。これら二つの抗体を、本明細書に記載の作業例に用いた（ＷＯ２０１５／１８９１４３Ａ１およびＷＯ２０１４／１９８８１７Ａ１も参照）。さらに、ＴＷＥＡＫＲに結合する抗体は当業者に公知であり、例えば、ＷＯ２００９／０２０９３３（Ａ２）またはＷＯ２００９１４０１７７（Ａ２）を参照する。
配列番号１３８（ポリペプチド）：
ＥＱＡＰＧＴＡＰＣＳＲＧＳＳＷＳＡＤＬＤＫＣＭＤＣＡＳＣＲＡＲＰＨＳＤＦＣＬＧＣＡＡＡＰＰＡＰＦＲＬＬＷＰＲＳＤＫＴＨＴ
ＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ
ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥ
ＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦ
ＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１３７（ポリペプチド）：
ＥＱＡＰＧＴＳＰＣＳＳＧＳＳＷＳＡＤＬＤＫＣＭＤＣＡＳＣＰＡＲＰＨＳＤＦＣＬＧＣＡＡＡＰＰＡＨＦＲＬＬＷＰＲＳＤＫＴＨＴ
ＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨ
ＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥ
ＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦ
ＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
Ｂ−２．哺乳動物細胞での抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の一般的発現方法
抗体、例えばＴＰＰ−２０９０および脱グリコシル化変異体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ、ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ（ＴＰＰ−７５１０に等しい）、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に等しい）を、Ｔｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈａｐｔｅｒ １２ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ： Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ， ｅｄ． Ｍｉｃｈｅａｌ Ｒ． Ｄｙｓｏｎ ａｎｄ Ｙｖｅｓ Ｄｕｒｏｃｈｅｒ， Ｓｃｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ， ２００７に記載の方法に従って一時哺乳動物細胞培養液で製造した（ＡＫ−実施例１参照）。
Ｂ−３．細胞上清からの抗体の一般的精製方法
抗体、例えばＴＰＰ−２０９０および脱グリコシル化変異体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ、ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ（ＴＰＰ−７５１０に等しい）、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に等しい）を細胞培養上清から得た。細胞上清を、細胞の遠心によって清澄化した。次に、細胞上清を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）クロマトグラフィーカラムでのアフィニティクロマトグラフィーによって精製した。そのために、カラムをＤＰＢＳｐＨ７．４（Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ）で平衡とし、細胞上清を乗せ、カラムを約１０カラム体積のＤＰＢＳｐＨ７．４＋５００ｍＭ塩化ナトリウムで洗浄した。抗体を５０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ３．５＋５００ｍＭ塩化ナトリウムで溶離し、次にＤＰＢＳｐＨ７．４中Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによってさらに精製した。
市販の抗体セツキシマブ（商標名エルビタックス）を、標準的クロマトグラフィー法（タンパク質Ａ、分取ＳＥＣ）によって市販品から精製した。
市販の抗体トラスツズマブ（商標名ハーセプチン）を、標準的クロマトグラフィー法（タンパク質Ａ、分取ＳＥＣ）によって市販品から精製した。
トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ（ＴＰＰ−７５１０に等しい）は、配列番号２４４によって表される重鎖を含む。軽鎖は、トラスツズマブのものと同一である。
トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に等しい）は、配列番号２４５によって表される重鎖を含む。軽鎖は、トラスツズマブのものと同一である。
市販品（商標名ＣＩＭＡｈｅｒ）から、抗体ニモツズマブを、標準的クロマトグラフィー法（タンパク質Ａ、分取ＳＥＣ）によって市販品から精製した。
市販品（商標名ベクティビックス）から、抗体パニツムマブを、標準的クロマトグラフィー法（タンパク質Ａ、分取ＳＥＣ）によって市販品から精製した。
Ｂ−４．グルタミンへの一般的カップリング方法
最大ＤＡＲ２を得るために下記実施例で用いられるトランスグルタミナーゼの一般的カップリング手順：
ＡＤＣ作業例の反応のため、次の抗体を用いた（次の名称：抗体−ＨＣ−Ｎ２９７Ｚは、抗体の両方の重鎖においてアミノ酸ＺによるＮ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）の置き換えを有する抗体を意味し、名称ＴＰＰ−ＸＸＸＸ−ＨＣ−Ｑ２９５Ｎ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑは、抗体の両方の重鎖でのアミノ酸Ｎによるアミノ酸Ｑ２９５（Ｋａｂａｔナンバリング）の置き換えおよび抗体の両方の重鎖においてアミノ酸Ｑ（Ｋａｂａｔナンバリング）によるアミノ酸Ｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）の置き換えを有するＴＰＰ−ＸＸＸＸとの抗体を意味する。抗体の名称は、名前（例えばトラスツズマブ）またはＴＰＰ−ＸＸＸＸ（ＴＰＰ−番号ＸＸＸＸを有する抗体）と称される。
ＡＫ３ａ：ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ（抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８に等しい）
ＡＫ３ｃ：ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｑ２９５Ｎ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−８８２５に等しい）
ＡＫ３ｄ：トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ（ＴＰＰ−７５１０に等しい）。
個々の抗体の脱グリコシル（ａｇｌｙｃｏ）変異体（ＨＣ−Ｎ２９７ＡまたはＨＣ−Ｑ２９５Ｎ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ）５ｍｇのＤＰＢＳｐＨ７．４中溶液（ｃ約５から１５ｍｇ／ｍＬ）に、個々の前駆体中間体Ｆの溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）２０μＬ（６当量）を加えた。３７℃で５分間インキュベーションした後、組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙから）（２５Ｕ／ｍＬ）５０μＬ（１．２５Ｕ）を加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートし、次にＤＰＢＳｐＨ７．４で希釈して体積２．５ｍＬとした。そのＡＤＣ溶液を、ＤＰＢＳ−Ｐｕｆｆｅｒ ｐＨ７．４（これは溶離にも用いた）で平衡としたＰＤ１０−カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過によって精製した。次に、ＡＤＣ溶液を、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮し、再希釈して体積約２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ １２．５μＬ中のｂ−トランスグルタミナーゼブロッカーＺｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．００６２５μｍｏｌを加えた。得られたＡＤＣ溶液について、タンパク質濃度を、個々の実施例での方法で求めた。チャプターＢ５に記載の方法によって、薬物負荷量を求めた。実施例で指摘の方法に従って、ＡＤＣバッチの特性決定を行った。
最大ＤＡＲ４を達成するために下記の実施例で用いたトランスグルタミナーゼカップリングの一般手順Ｂ：
ＡＤＣ作業例の反応のため、次の抗体を用いた（次の名称は、上記で用いた通りである。）：
ＡＫ３ｂ：ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２に等しい）
ＡＫ３ｅ：トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に等しい）
個々の抗体の脱グリコシル（ａｇｌｙｃｏ）変異体（ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ）５ｍｇのＤＰＢＳｐＨ７．４中溶液（ｃ約５から１５ｍｇ／ｍＬ）に、１６から２４当量の個々の前駆体中間体Ｆの溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）を加えた。３７℃で５分間インキュベーションした後、組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙから）（２５Ｕ／ｍＬ）４００μＬ（１０Ｕ）を加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートし、次にＤＰＢＳｐＨ７．４で希釈して体積２．５ｍＬとした。そのＡＤＣ溶液を、ＤＰＢＳ−Ｐｕｆｆｅｒ ｐＨ７．４（これは溶離にも用いた）で平衡としたＰＤ１０−カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過によって精製した。次に、ＡＤＣ溶液を、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮し、再希釈して体積約２．５ｍＬとした。最後に、ＤＰＢＳ ２００μＬ中のｂ−トランスグルタミナーゼブロッカーＺｅｄｉｒａ Ｃ１００ ０．１μｍｏｌを加えた。得られたＡＤＣ溶液について、タンパク質濃度を、個々の実施例での方法で求めた。チャプターＢ７に記載の方法によって、薬物負荷量を求めた。実施例で指摘の方法に従って、ＡＤＣバッチの特性決定を行った。
最大ＤＡＲ２を達成するために下記実施例で用いたより大きい規模でのトランスグルタミナーゼカップリングの一般手順：
個々の抗体の脱グリコシル（ａｇｌｙｃｏ）変異体（ＨＣ−Ｎ２９７ＡまたはＨＣ−Ｑ２９５Ｎ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ）３０ｍｇのＤＰＢＳｐＨ７．４中溶液（ｃ約５から１５ｍｇ／ｍＬ）に、６当量の個々の前駆体中間体Ｆの溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）を加えた。３７℃で５分間インキュベーションした後、組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙから）（２５Ｕ／ｍＬ）２００μＬ（７．５Ｕ）を加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートした。ＡＤＣを、ＤＰＢＳ ７．４でＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、ＡＤＣから小分子およびトランスグルタミナーゼを除去し、最後にＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮して最終濃度を５から２５ｍｇ／ｍＬとした。その溶液を滅菌濾過した。
ＡＤＣ溶液の作業例で記載の個々のタンパク質濃度を求めた。チャプターＢ５に記載の方法によって、薬物負荷量を求めた。実施例で指摘の方法に従って、ＡＤＣバッチの特性決定を行った。
最大ＤＡＲ４を達成するために下記実施例で用いたより大きい規模でのトランスグルタミナーゼカップリングの一般手順：
個々の抗体の脱グリコシル（ａｇｌｙｃｏ）変異体（ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ）３０ｍｇのＤＰＢＳｐＨ７．４中溶液（ｃ約５から１５ｍｇ／ｍＬ）に、１６から２４当量の個々の前駆体中間体Ｆの溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）を加えた。３７℃で５分間インキュベーションした後、組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの水溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙから）（２５Ｕ／ｍＬ）２４００μＬ（６０Ｕ）を加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートした。ＡＤＣを、ＤＰＢＳ ７．４でＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、ＡＤＣから小分子およびトランスグルタミナーゼを除去し、最後にＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮して最終濃度を５から２５ｍｇ／ｍＬとした。その溶液を滅菌濾過した。
ＡＤＣ溶液の作業例で記載の個々のタンパク質濃度を求めた。チャプターＢ５に記載の方法によって、薬物負荷量を求めた。実施例で指摘の方法に従って、ＡＤＣバッチの特性決定を行った。
Ｂ−５．抗体、担毒体負荷量の測定および結合部位の測定
脱グリコシル化および／または変性後の分子量測定に加えてタンパク質同定のため、トリプシン消化を行い、それは、変性、還元および誘導体化後に、トリプシンペプチドを介してタンパク質のアイデンティティーを確認するものである。
作業例に記載の複合体の得られたＰＢＳ緩衝液溶液の担毒体負荷量を、下記のように求めた。さらに、このアプローチを、複合体化トリプシンペプチドの検出によるカップリング部位の確認に用いることができると考えられる。
グルタミン連結ＡＤＣの担毒体負荷量の測定を、個々の複合体種の分子量の質量分析測定によって行った。ここで、サンプルを酸性とし、短Ｃ４カラム（ＧｒｏｍＳｉｌ ３００ Ｂｕｔｙｌ−１ ＳＴ、５μｍ、５ｍｍ×５００μｍ）でのＨＰＬＣ分離／脱塩後に、ＥＳＩ−ＭｉｃｒｏＴｏｆＱシステム（Ｂｒｕｋｅｒ Ｄａｌｔｏｎｉｋ）を用いる質量分析によって分析した。ＴＩＣ（全イオンクロマトグラム）におけるシグナルでの全てのスペクトラムを加え、異なる複合体種の分子量をＭａｘＥｎｔデコンボリューションに基づいて計算した。次に、異なる種のシグナル積分後に、担毒体数加重カップリング種の合計を各化学種の単一加重積分結果の合計によって割ることでＤＡＲ（＝薬物／抗体比）を計算した。
さらに、化学種分布に基づいて、ｂＴＧカップリング法の均一性（ＤＡＲ２について、Ｄ２のパーセント＞８５％）は、例として、下記の表中の実施例５Ａの四つの異なる製造を比較することで示すことができると考えられる。
表：実施例５Ａの四つの異なる製造の分布比較（ＤＡＲ２）
Figure 2018528161
他のｂＴＧカップリング担毒体−リンカー構築物で、匹敵する均一分布を得ることができる。これは、例として、下記の表中の四つの異なるＡＤＣ化合物で示された。
表：四つの異なるＡＤＣ例の分布（ＤＡＲ２）
Figure 2018528161
抗体内のＮ２９７Ｑ置換に基づいて、ＤＡＲ４の結果とのｂＴＧに基づく組み合わせが可能である。このＡＤＣの均一性（Ｄ４のパーセント＞７０％）および異なる抗体上での移動性が、例として、下記の表中の三つの異なるＡＤＣ化合物で示された。
表：二つの異なるＡＤＣ例の分布（ＤＡＲ４）
Figure 2018528161
あるいは、還元および変性ＡＤＣの逆相クロマトグラフィーによって、グルタミン連結複合体の担毒体負荷量を求めた。グアニジニウム塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）（２８．６ｍｇ）およびＤＬ−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）の溶液（５００ｍＭ、３μＬ）をＡＤＣ溶液（１ｍｇ／ｍＬ、５０μＬ）に加えた。混合物を５５℃で１時間インキュベートし、ＨＰＬＣによって分析した。
ＨＰＬＣ分析を、２２０ｎｍで検出を行うＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ＨＰＬＣシステムで行った。Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ＰＬＲＰ−Ｓポリマー逆相カラム（カタログ番号ＰＬ１９１２−３８０２）（２．１×１５０ｍｍ、粒径８μｍ、１０００Å）を、次の勾配：０分、３１％Ｂ；１分、３１％Ｂ；１４分、３８％Ｂ；１６分、９５％Ｂで流量１ｍＬ／分で用いた。移動相Ａは、０．０５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／水からなり、移動相Ｂは０．０５％トリフルオロ酢酸／アセトニトリルからなるものであった。
非複合体化抗体の軽鎖（Ｌ０）および重鎖（Ｈ０）との保持時間比較によって、検出されたピークの割り当てを行った。専ら複合体化サンプルで検出されたピークを、１個または２個の担毒体（Ｈ１、Ｈ２）を有する重鎖に割り当てた。
担毒体を有する抗体の平均負荷量を、ＨＣ負荷量およびＬＣ負荷量の合計の倍として積分することで求められるピーク面積から計算し、その場合に、ＨＣ負荷量は、全重鎖（ＨＣ）ピークの担毒体数加重積分結果の合計をＨＣピークの単一加重積分結果の合計で割った値であり、ＬＣ負荷量は、軽鎖（ＬＣ）ピークの担毒体数加重積分結果の合計を全ＬＣピークの単一加重積分結果の合計で割った値である。
Ｂ−６．ＡＤＣ類の抗原結合のチェック
バインダーの標的分子への結合能力を、カップリングが起こった後に調べた。当業者であれば、この目的に用いられる多種多様の方法については熟知しており、例えば、複合体のアフィニティは、ＥＬＩＳＡ技術または表面プラズモン共鳴分析（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標名）測定）を用いて調べることができる。複合体濃度は、例えばタンパク質による抗体複合体についての一般的な方法を用いて当業者が測定することができる（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．； Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００３；２１：７７８−７８４およびＰｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ ２００７；１１０２：６１６−６２３も参照）。
作業例ＡＤＣ類
トランスグルタミナーゼカップリングの一般手順Ｃ（チャプターＢ−４参照）に従って、下記の実施例を合成した。
実施例１Ａ
Figure 2018528161
ここでは、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４ ２２５０μＬ、中間体Ｆ１の溶液２００μＬ（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）、および組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（１００Ｕ／ｍＬ）５０μＬを、抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａの溶液（２ｍｇ／ｍＬ）２５００μＬに加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートした。ＤＰＢＳ ｐＨ７．４中のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによってＡＤＣを精製して、ＡＤＣから小分子およびトランスグルタミナーゼを除去し、最後にＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮した。
タンパク質濃度：１．６５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。
実施例１Ａ４
Figure 2018528161
ここでは、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４ ４５０μＬ、中間体Ｆ１の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）４０μＬ、および組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（１００Ｕ／ｍＬ）１０μＬを、抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑの溶液（２ｍｇ／ｍＬ）５００μＬに加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートし、その後、それ以上精製せずに薬物抗体比について直接分析した。
反応混合物中のタンパク質濃度：１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．５。
実施例２Ａ
Figure 2018528161
ＤＰＢＳ ｐＨ７．４ ５０μＬ、中間体Ｆ２の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）４０μＬ、および組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（１００Ｕ／ｍＬ）１０μＬを、抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａの溶液（２ｍｇ／ｍＬ）５００μＬに加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートした。ＡＤＣを、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４中のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、ＡＤＣから小分子およびトランスグルタミナーゼを除去し、最後にＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮した。
タンパク質濃度：１．２６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．６。
実施例３Ａ
Figure 2018528161
ここでは、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４ ４５０μＬ、中間体Ｆ３の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）４０μＬ、および組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（１００Ｕ／ｍＬ）１０μＬを、抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａの溶液（２ｍｇ／ｍＬ）５００μＬに加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートした。ＡＤＣを、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４中のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、ＡＤＣから小分子およびトランスグルタミナーゼを除去し、最後にＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮した。
タンパク質濃度：１．０６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
実施例４Ａ
Figure 2018528161
ここでは、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４ ９００μＬ、中間体Ｆ４の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）８０μＬ、および組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（１００Ｕ／ｍＬ）２０μＬを、抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａの溶液（２ｍｇ／ｍＬ）１０００μＬに加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートした。ＡＤＣを、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４中のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、ＡＤＣから小分子およびトランスグルタミナーゼを除去し、最後にＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮した。
タンパク質濃度：２．１８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．７。
実施例５Ａ
Figure 2018528161
ここでは、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４ ９００μＬ、中間体Ｆ５の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）８０μＬ、および組み換え微生物（細菌）トランスグルタミナーゼの溶液（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（１００Ｕ／ｍＬ）２０μＬを、抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａの溶液（２ｍｇ／ｍＬ）１０００μＬに加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートした。ＡＤＣを、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４中のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過クロマトグラフィーによって精製して、ＡＤＣから小分子およびトランスグルタミナーゼを除去し、最後にＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａｃｅｌ−３０Ｋ遠心装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて濃縮した。
タンパク質濃度：２．２４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。
実施例６Ａ
Figure 2018528161
ここでは、ＤＰＢＳ ｐＨ７．４ ９００μＬ、中間体Ｆ６の溶液（１０ｍＭ ＤＭＳＯ中溶液）８０μＬ、および組み換え微生物の溶液（細菌）トランスグルタミナーゼ（製品番号Ｔ００１、Ｚｅｄｉｒａ ＧｍｂＨ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， Ｇｅｒｍａｎｙ）（１００Ｕ／ｍＬ）２０μＬを、抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａの溶液（２／ｍｇ／ｍＬ）１０００μＬに加えた。反応混合物を３７℃で２４時間インキュベートし、その後に、それ以上精製せずに、薬物抗体比について直接分析した。
反応混合物中のタンパク質濃度：２．２２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
５ｍｇ規模でのトランスグルタミナーゼカップリングの一般手順ＡもしくはＢに従い、そしてより大きい規模での手順ＣもしくはＤ（チャプターＢ−４参照）に従って、下記実施例を合成した。
実施例２Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ２、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．６６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．７。
実施例３Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ３、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。
実施例４Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ４、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。
実施例４Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ４、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：１．４９ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．４。
実施例５Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ５、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．３５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
このＡＤＣのカップリングを、チャプターＢ４における一般手順Ｃに従って３０ｍｇ規模でも行った。
タンパク質濃度：１１．２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
実施例５Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ５、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：０．８３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
このＡＤＣのカップリングを、チャプターＢ４における一般手順Ｄに従って３０ｍｇ規模でも行った。
タンパク質濃度：１０．０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例５Ｅ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ５、一般手順Ａ、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ（ＴＰＰ−７５１０に等しい）
タンパク質濃度：２．４４ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．６。
実施例５Ｅ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ５、一般手順Ｂ、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に等しい）
タンパク質濃度：２．８５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例６Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ６、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．６３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。
このＡＤＣのカップリングを、チャプターＢ４における一般手順Ｃに従って３０ｍｇ規模でも行った。
タンパク質濃度：１３．２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９
実施例６Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ６、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：１．６３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：４．１。
このＡＤＣのカップリングを、チャプターＢ４における一般手順Ｄに従って３０ｍｇ規模でも行った。
タンパク質濃度：１１．８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例７Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ７、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．６６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。
実施例８Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ８、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．６８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。
実施例９Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ９、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
実施例１０Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１０、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．７３ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。
実施例１０Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１０、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：１．７６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例１０Ｅ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１０、一般手順Ｂ、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に等しい）
タンパク質濃度：１．５６ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．９。
実施例１１Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１１、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．８２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．９。
実施例１１Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１１、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：１．１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例１１Ｅ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１１、一般手順Ｂ、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に等しい）。
タンパク質濃度：１．７５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例１２Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１２、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．７７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。
実施例１３Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１３、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：２．１１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．８。
このＡＤＣのカップリングを、チャプターＢ４における一般手順Ｃに従って３０ｍｇ規模でも行った。
タンパク質濃度：１１．８８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：２．０。
実施例１３Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１３、一般手順Ｄ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）。
このＡＤＣのカップリングを、チャプターＢ４における一般手順Ｃに従って３０ｍｇ規模でも行った。
タンパク質濃度：１２．０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例１４Ａ
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１４、一般手順Ａ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２６５８（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａに等しい）
タンパク質濃度：１．５８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：１．７。
実施例１５Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１５、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：１．０５ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．６。
実施例１６Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１６、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：１．７８ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例１６Ｅ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１６、一般手順Ｂ、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に等しい）
タンパク質濃度：１．８２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例１７Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１７、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：１．７１ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例１７Ｅ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１７、一般手順Ｂ、トラスツズマブ−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ（ＴＰＰ−７５１１に等しい）
タンパク質濃度：１．９０ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．８。
実施例１８Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１８、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：１．０７ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．７。
実施例１９Ａ４
Figure 2018528161
前駆体：Ｆ１９、一般手順Ｂ、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−５４４２（ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑに等しい）
タンパク質濃度：０．９２ｍｇ／ｍＬ
薬物／ｍＡｂ比：３．３。
代謝物例Ｍ１００
Ｎ６−Ｌ−γ−グルタミル−Ｎ２−アセチル−Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−２−アミノ−４−［｛（１Ｒ）−１−［１−ベンジル−４−（２，５−ジフルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−２−イル］−２，２−ジメチルプロピル｝（グリコロイル）アミノ］ブタノイル｝アミノ）エチル］−Ｌ−リジンアミドトリフルオロ
アセテート（１：１）
Figure 2018528161
最初に、中間体Ｃ５８を、ＤＭＦ中ＨＡＴＵおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下で中間体Ｌ１２とカップリングさせ、次に、Ｔｅｏｃ−保護基を、５０℃で２時間加熱下に４当量の塩化亜鉛／２，２，２トリフルオロエタノールを用いて開裂させ、４当量のＥＤＴＡを加えた後、生成物をＨＰＬＣによって精製した。最後に、Ｚ保護基およびベンジルエステルを、常圧下で１０％パラジウム／活性炭でのメタノール中の水素化によって開裂させた。
ＬＣ−ＭＳ（方法１）：Ｒｔ＝０．７４分；ＭＳ（ＥＳＩｐｏｓ）：ｍ／ｚ＝８５５（Ｍ＋Ｈ）＋。
Ｃ：生物学的効力の評価
本発明による化合物の生理活性を、下記の評価で示すことができる。
ａ．Ｃ−１ａ：ＴＷＥＡＫＲに対するＡＤＣの細胞毒性効果の測定
抗ＴＷＥＡＫＲ−ＡＤＣの細胞毒性効果の分析を、各種細胞系を用いて行った。
ＮＣＩ−Ｈ２９２：ヒト粘液性類表皮肺癌細胞、ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１８４８、標準培地：ＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃Ｓ０４１５）、ＴＷＥＡＫＲ−陽性、ＥＧＦＲ−陽性。
ＳＫ−ＨＥＰ−１：ヒト肝臓癌細胞、ＡＴＣＣ番号ＨＴＢ−５２、標準培地：アール塩＋Ｇｌｕｔａｍａｘ Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ４１０９０）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｆａ．ｇｉｂｃｏ．番号１０５００−０６４）含有ＭＥＭ；ＥＧＦＲ−陽性、ＴＷＥＡＫＲ陽性。
ＬｏＶｏ：ヒト結腸直腸癌細胞、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−２２９、標準培地：カイン（Ｋａｉｇｈｎ′ｓ）＋Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ２１１２７）＋１０％熱失活ＦＣＳ（Ｆａ．ｇｉｂｃｏ．番号１０５００−０６４）、ＴＷＥＡＫＲ−陽性。
ＢｘＰＣ３：ヒト膵臓癌細胞、ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１６８７、標準培地：ＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃ＦＧ１２１５、安定グルタミン）＋１０％ＦＣＳ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；＃Ｓ０４１５）、ＴＷＥＡＫＲ−陽性．
ＫＰＬ４：ヒト乳癌細胞、標準培地：ＲＰＭＩ１６４０＋ＧｌｕｔａＭＡＸＩ＋１０％ＦＢＳ、ｃｅｌｌ ｂａｎｋ、Ｂａｙｅｒ Ｐｈａｒｍａ ＡＧ（ＤＳＭＺで２０１２年７月１９日に同一性をチェックおよび確認）、ベルリン、ＥＲＢＢ２−陽性。
個々の細胞系についてＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に示された標準的方法によって、細胞を培養した。
ＭＴＴアッセイ
本試験は、ＡｃｃｕｔａｓｅのＰＢＳ中溶液（ＢｉｏｃｈｒｏｍＡＧ＃Ｌ２１４３）による細胞の分離、ペレット化、培地での再懸濁、カウンティングおよび白色底の９６ウェル培養プレートへの細胞播種によって行った（Ｃｏｓｔａｒ＃３６１０、ＬｏＶｏ：１０００細胞／ウェル、ＳＫ−ＨＥＰ−１：１２００細胞／ウェル、ＮＣＩ Ｈ２９２：総体積１００μＬ中１５００細胞／ウェル）。次に、細胞を、インキュベータにおいて３７℃および５％二酸化炭素でインキュベートした。４８時間後、抗体薬物複合体を、濃度１０−５Ｍから１０−１３Ｍで培地１０μＬに加え（三連で）、インキュベータにおいて３７℃および５％二酸化炭素でインキュベートした。９６時間後、ＭＴＴアッセイ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖｉｒｇｉｎｉａ， ＵＳＡ、カタログ番号３０−１０１０Ｋ）を用いて増殖を測定した。選択されたインキュベーション時間終了後、ＭＴＴ試薬を加え、細胞とともに４時間インキュベートし、次に界面活性剤を加えることで、細胞を終夜溶解させた。生成した色素を、５７０ｎｍで検出した（Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ｐｒｏ， Ｆａ．Ｔｅｃａｎ）。測定データに基づいて、ＤＲＣ（用量応答曲線）からＩＣ５０値を求めた。試験物質で処理しなかったが、それ以外は同様に処理した細胞の増殖を、１００％値と定義した。選択された例由来のデータを、表１にまとめてある。
表１
Figure 2018528161
表２
Figure 2018528161
Ｃ−１ｂ：キネシンスピンドルタンパク質ＫＳＰ／Ｅｇ５の阻害の測定
ヒトキネシンスピンドルタンパク質ＫＳＰ／Ｅｇ５（ｔｅｂｕ−ｂｉｏ／Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ Ｉｎｃから、Ｎｏ．０２７ＥＧ０１−ＸＬ）のモータードメインを、１５ｍＭ ＰＩＰＥＳ、ｐＨ６．８（５ｍＭ ＭｇＣｌ２および１０ｍＭ ＤＴＴ、Ｓｉｇｍａから）中室温で５分間、５０μｇ／ｍＬタキソール（Ｓｉｇｍａから、Ｎｏ．Ｔ７１９１−５ＭＧ）安定化した微小管（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｉ）（ウシまたはブタ、ｔｅｂｕ−ｂｉｏ／Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ Ｉｎｃから）とともに濃度１０ｎＭでインキュベートする。調製したばかりの混合物を３８４ウェルＭＴＰに小分けした。濃度１．０×１０−６Ｍから１．０×１０−１３Ｍの調べる阻害剤およびＡＴＰ（最終濃度５００μＭ、Ｓｉｇｍａから）を加えた。インキュベーションを室温で２時間行った。マラカイトグリーン（Ｂｉｏｍｏｌから）を用いて形成された無機ホスフェートを検出することで、ＡＴＰａｓｅ活性を検出した。試薬を加えた後、アッセイ液を室温で５０分間インキュベートしてから、波長６２０ｎｍでの吸収を検出した。モナストロール（Ｆａ． Ｓｉｇｍａ、Ｍ８５１５−１ｍｇ）およびイスピネシブ（Ａｄｏｏｑから、Ａ１０４８６）を陽性対照として使用した。用量−活性曲線の個々のデータは、８倍測定である。ＩＣ５０値は、三つの独立の実験の平均である。１００％対照は、阻害剤で処理されなかったサンプルであった。
下記の表２に、記載のアッセイおよび相当する細胞毒性データからの誘導された代表的な例のＩＣ５０値をまとめてある（ＭＴＴアッセイ）。
表２
Figure 2018528161
Ｃ−２：内在化アッセイ
内在化は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を介した抗原発現性癌細胞における細胞毒性ペイロードの特異的かつ効率的提供を可能とする重要なプロセスである。このプロセスは、特異的ＴＷＥＡＫＲ抗体およびアイソタイプ対照抗体の蛍光標識を介してモニタリングされる。最初に、蛍光色素を抗体のリジンに結合させる。結合は、ｐＨ８．３の２倍モル過剰のＣｙｐＨｅｒ ５ＥモノＮＨＳエステル（バッチ３５７３９２, ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行う。カップリング後、反応混合物をゲルクロマトグラフィー（Ｚｅｂａ Ｓｐｉｎ Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ Ｃｏｌｕｍｎｓ、４０Ｋ、Ｆａ． Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｎｏ．８７７６８；溶離緩衝液：ダルベッコＰＢＳ、Ｆａ． Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｎｏ．Ｄ８５３７）を用いて精製して、過剰の色素を除去し、ｐＨを調節した。得られたタンパク質溶液を濃縮した（ＶＩＶＡＳＰＩＮ５００、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ｓｔｅｄｉｍ ｂｉｏｔｅｃから）。抗体の色素負荷量の測定を、分光光度分析（ＮａｎｏＤｒｏｐ）および次に計算（Ｄ：Ｐ＝Ａｄｙｅεｐｒｏｔｅｉｎ：（Ａ２８０−０．１６Ａｄｙｅ）εｄｙｅ）によって行った。ここで調べたＴＷＥＡＫＲ抗体およびアイソタイプ対照の色素負荷量は、同等の次数のものであった。細胞結合アッセイにおいて、前記結合が抗体のアフィニティにおける変化をもたらさないことが確認された。
その標識抗体を、内在化アッセイで用いた。この処理開始前に、９６ウェルＭＴＰ（肉厚、黒色、透明底Ｎｏ４３０８７７６、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから）における培地１００μＬに、細胞（２×１０４／ウェル）を播いた。３７℃／５％ＣＯ２で１８時間インキュベートした後、培地を代え、標識ＴＷＥＡＫＲ抗体を異なる濃度で加えた（１０、５、２．５、１、０．１μｇ／ｍＬ）。標識されたアイソタイプ対照（陰性対照）について、同じ処理プロトコールを用いた。選択されたインキュベーション時間は、０時間、０．２５時間、０．５時間、１時間、１．５時間、２時間、３時間、６時間および２４時間である。ＩｎＣｅｌｌａｎａｌｙｚｅｒ １０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから）を用いて、蛍光測定を行った。次に、パラメータである顆粒カウント／細胞および総顆粒強度／細胞の測定によって、動力学的評価を行った。
ＴＷＥＡＫＲへの結合後、ＴＷＥＡＫＲ抗体について、内在化能力を調べた。そのために、異なるＴＷＥＡＫＲ発現レベルを有する細胞を選択した。標的介在特異的内在化がＴＷＥＡＫＲ抗体の観察されたが、アイソタイプ対照は内在化を全く示さなかった。
市販の抗体（セツキシマブ、ニモツズマブ、ハーセプチン）を同様に処理し、個々の標的発現細胞を用いて上記のように内在化を行った。全ての抗体について、標的依存性内在化を認めることができたが、アイソタイプ対照は内在化を全く示さなかった。
Ｃ−３：細胞透過性を求めるためのイン・ビトロ試験
Ｃａｃｏ−２細胞を用いるフラックスアッセイでのイン・ビトロ試験によって、基質の細胞透過性を調べることができる［Ｍ． Ｄ． Ｔｒｏｕｔｍａｎ ａｎｄ Ｄ． Ｒ． Ｔｈａｋｋｅｒ, Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ． ２０ （８）, １２１０−１２２４（２００３）］。これに関して、２４ウェルフィルタープレート上で、細胞１５から１６日間培養した。透過を求めるため、個々の作業例を、ＨＥＰＥＳ緩衝液溶液で、頂部で（ａｐｉｃａｌｌｙ）（Ａ）または基底部で（ｂａｓａｌｌｙ）（Ｂ）細胞に付与し、２時間インキュベートした。０時間後および２時間後に、シスおよびトランスコンパートメントからサンプルを取った。それらのサンプルを、逆相カラムを用いるＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２００、Ｂｏｅｂｌｉｎｇｅｎ, Ｇｅｒｍａｎｙ）によって分離した。ＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ Ｉｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介して三連四重極質量分析計ＡＰＩ４０００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ａｐｐｌｅｒａ, Ｄａｒｍｓｔａｄｔ, Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結した。Ｓｃｈｗａｂらが公開した式を用いて計算されたＰａｐｐ値に基づいて透過性を評価した［Ｄ． Ｓｃｈｗａｂ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４６, １７１６−１７２５（２００３）］。Ｐａｐｐ（Ｂ−Ａ）／Ｐａｐｐ（Ａ−Ｂ）の比（排出比）が＞２または＜０．５であった場合に、物質は能動的に輸送されると分類された。
細胞内で放出される担毒体について非常に重要なものは、ＢからＡへの透過性［Ｐａｐｐ（Ｂ−Ａ）］およびＰａｐｐ（Ｂ−Ａ）：Ｐａｐｐ（Ａ−Ｂ）の比（排出比）であり、この浸透率が低いほど、Ｃａｃｏ−２細胞の単層を通る物質の能動輸送および受動輸送が遅くなる。さらに、排出比が能動輸送を示さない場合、その物質は、細胞内放出後に、細胞内でより長く留まることができる。従って、生化学的標的（この場合、キネシンスピンドルタンパク質、ＫＳＰ／Ｅｇ５）との相互作用に使える時間も長くなる。
表３
Figure 2018528161
Ｃ−４：Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）についての基質特性を求めるためのイン・ビトロ試験
多くの腫瘍細胞が、薬物のための輸送タンパク質を発現し、これは非常に多くの場合、細胞増殖抑制剤に対する抵抗性の発達を伴う。従って、そのような輸送タンパク質、例えばＰ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）またはＢＣＲＰの基質ではない物質は、例えば、改善された活性プロファイルを示し得ると考えられる。
Ｐ−ｇｐ（ＡＢＣＢ１）用の物質の基質特性を、Ｐ−ｇｐを過剰発現するＬＬＣ−ＰＫ１細胞（Ｌ−ＭＤＲ１細胞）を用いるフラックスアッセイによって求めた［Ａ．Ｈ． Ｓｃｈｉｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ９６, １６９８−１７０５ （１９９５）］。このために、ＬＬＣ−ＰＫ１細胞またはＬ−ＭＤＲ１細胞を、３から４日間、９６ウェルフィルタープレートで培養した。透過性を測定するため、個々の試験物質を、単独でまたは阻害剤（例えば、イベルメクチンまたはベラパミル）の存在下に、ＨＥＰＥＳ緩衝液溶液で、頂部で（ａｐｉｃａｌｌｙ）（Ａ）または基底部で（ｂａｓａｌｌｙ）（Ｂ）細胞に付与し、２時間インキュベートした。０時間後および２時間後に、シスおよびトランスコンパートメントからサンプルを取った。それらのサンプルを、逆相カラムを用いるＨＰＬＣによって分離した。ＨＰＬＣシステムを、Ｔｕｒｂｏ Ｉｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅを介して三連四重極質量分析計ＡＰＩ３０００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ａｐｐｌｅｒａ, Ｄａｒｍｓｔａｄｔ, Ｇｅｒｍａｎｙ）に連結した。Ｓｃｈｗａｂらが公開した式を用いて計算されたＰａｐｐ値に基づいて透過性を評価した［Ｄ． Ｓｃｈｗａｂ ｅｔ ａｌ．, Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４６, １７１６−１７２５（２００３）］。Ｐａｐｐ（Ｂ−Ａ）／Ｐａｐｐ（Ａ−Ｂ）の排出比が＞２であった場合に、物質はＰ−ｇｐ基質であると分類された。
Ｐ−ｇｐ基質特性の評価のためのさらなる基準として、Ｌ−ＭＤＲ１細胞およびＬＬＣ−ＰＫ１細胞における排出比または阻害剤存在下もしくは非存在下での排出比を比較することができる。これらの値が２より大きい係数だけ異なる場合、対象の物質はＰ−ｇｐ基質である。
Ｃ−５：薬物動態
Ｃ５ａ：イン・ビトロでの内在化後のＡＤＣ代謝物の確認
方法の説明：
免疫複合体を用いる内在化試験を行って、細胞内的に形成された代謝物を分析する。このために、ヒト肺腫瘍細胞ＮＣＩ Ｈ２９２（３×１０５／ウェル）を６ウェルプレートに播き、終夜インキュベートする（３７℃、５％ＣＯ２）。その細胞を１０μｇ／ｍＬの被験ＡＤＣで処理する。内在化を、３７℃および５％ＣＯ２で行う。各種時間点で（０、４、２４、４８、７２時間）、さらなる分析用に細胞サンプルと取る。最初に、上清（約５ｍＬ）を回収し、遠心（２分、室温、１０００ｒｐｍ Ｈｅｒａｅｕｓ Ｖａｒｉｏｆｕｇｅ ３．０Ｒ）後に、−８０℃で保存する。細胞をＰＢＳで洗浄し、Ａｃｃｕｔａｓｅを用いて分離し、細胞数を測定する。さらに洗浄した後、所定数の細胞（２×１０５）を溶解緩衝液（哺乳動物細胞溶解キット（Ｓｉｇｍａ ＭＣＬ１）１００μＬで処理し、Ｐｒｏｔｅｉｎ ＬｏＢｉｎｄ管（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆカタログ番号００３０１０８．１１６）中、連続振盪しながら（Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ、１５分、４℃、６５０ｒｐｍ）インキュベートする。インキュベーション後、溶解物を遠心し（１０分、４℃、１２０００ｇ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ５４１５Ｒ）、上清を回収する。得られた上清を−８０℃で保存する。そして、全てのサンプルを下記のように分析する。
培養上清または細胞溶解物中の化合物の測定を、メタノールまたはアセトニトリルでタンパク質を沈殿させた後に、三連四重極質量分析計（ＭＳ）に連結された高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって行う。
培養上清／細胞溶解物５０μＬの後処理のため、沈殿試薬（一般にはアセトニトリル）１５０μＬを加え、混合物を１０秒間振盪する。沈殿試薬は、好適な濃度で（通常は、２０から１００ｎｇ／ｍＬの範囲）内部標準（ＩＳＴＤ）を含んでいる。１６０００ｇで３分間遠心した後、上清をオートサンプラーバイアルに移し、移動相に適した緩衝液５００μＬを加え、再度振盪する。
次に、ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨからのＨＰＬＣ連結三連四重極質量分析計ＡＰＩ６５００を用いて、その二つのマトリックスサンプルの測定を行う。
較正のため、０．５から２０００μｇ／Ｌの濃縮液を血漿サンプルに加える。検出限界（ＬＯＱ）は約２μｇ／Ｌである。直線範囲は、２から１０００μｇ／Ｌの幅である。
腫瘍サンプルの較正のため、０．５から２００μｇ／Ｌの濃縮液を、未処理腫瘍の上清に加える。検出限界は４μｇ／Ｌである。直線範囲は、４から２００μｇ／Ｌの幅である。
妥当性を調べるための品質対照は、５および５０μｇ／Ｌを含んでいる。
Ｃ５ｂ：イン・ビボでのＡＤＣ代謝物の確認
３から３０ｍｇ／ｋｇの異なるＡＤＣを静脈投与した後、ＡＤＣおよび生じる全ての代謝物の血漿濃度および腫瘍濃度を測定することができ、クリアランス（ＣＬ）、曲線下面積（ＡＵＣ）および半減期（ｔ１／２）などの薬物動態パラメータを計算することができる。同様に、血漿、腫瘍および組織におけるＡＤＣの生じ得る代謝物濃度を測定することができる。
生じる代謝物の定量分析
メタノールまたはアセトニトリルによるタンパク質の沈殿後に、三連四重極質量分析計（ＭＳ）に連結された高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、血漿および腫瘍中の化合物の測定を行う。
血漿５０μＬの後処理のため、沈殿試薬（一般にアセトニトリル）２５０μＬを加え、混合物を１０秒間振盪する。沈殿試薬は、好適な濃度で（通常は、２０から１００ｎｇ／ｍＬの範囲）内部標準（ＩＳＴＤ）を含んでいる。１６０００ｇで３分間遠心した後、上清をオートサンプラーバイアルに移し、移動相に適した緩衝液５００μＬを加え、再度振盪する。
腫瘍の後処理中、後者を３倍量の抽出緩衝液で処理する。その抽出緩衝液は、組織タンパク質抽出試薬（Ｐｉｅｒｃｅ, Ｒｏｃｋｆｏｒｄ, ＩＬ）５０ｍＬ、完全−プロテアーゼ−阻害剤−カクテルのペレット２個（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧＭＢＨ, Ｍａｎｎｈｅｉｍ, Ｇｅｒｍａｎｙ）および最終濃度１ｍＭでフェニルメチルスルホニルフルオリド（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ, ＭＯ）を含んでいる。最大ストローク数でＴｉｓｓｕｅｌｙｓｅｒ ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ）で、サンプルを２０分間２回ホモジナイズする。ホモジネート５０μＬをオートサンプラーバイアルに移し入れ、ＩＳＴＤを含むメタノール１５０μＬを加える。１６０００ｇで３分間遠心後、上清１０μＬに移動相に適した緩衝液１８０μＬを加え、再度振盪する。そして、腫瘍サンプルは測定準備が整った状態である。
次に、ＡＢ ＳＣＩＥＸ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨからのＨＰＬＣ連結三連四重極質量分析計ＡＰＩ６５００を用いて、二つのマトリクスサンプルを測定する。
較正のため、０．５から２０００μｇ／Ｌの濃縮液を血漿サンプルに加える。検出限界（ＬＯＱ）は約２μｇ／Ｌである。直線範囲は、２から１０００μｇ／Ｌの幅である。
腫瘍サンプルの較正のため、０．５から２００μｇ／Ｌの濃縮液を、未処理腫瘍の上清に加える。検出限界は５μｇ／Ｌである。直線範囲は、５から２００μｇ／Ｌの幅である。
妥当性を調べるための品質対照は、５および５０μｇ／Ｌを含み、血漿ではさらに５００μｇ／Ｌである。
使用した抗体の定量分析
ＡＤＣの抗体部分を、リガンド結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、血漿サンプルおよび腫瘍溶解物中の総ＩｇＧ濃度として測定した。ここでは、サンドイッチＥＬＩＳＡ方式を用いた。このＥＬＩＳＡは、血漿および腫瘍サンプルでの測定に関して適格性判定し、バリデーションしたものであった。ＥＬＩＳＡプレートを、抗ヒト−ヤギＩｇＧ−Ｆｃ抗体でコーティングした。サンプルとともにインキュベーションした後、プレートを洗浄し、サル抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体および西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の検出器（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）複合体とともにインキュベートした。さらなる洗浄段階後、ＨＲＰ基質をＯＰＤに加え、４９０ｎｍでの吸収を介して、発色をモニタリングした。既知ＩｇＧ濃度を有する標準サンプルを、４パラメータ式を用いて適合させた。定量下限（ＬＬＯＱ）および定量上限（ＵＬＯＱ）の範囲内で、未知濃度を内挿によって求めた。
Ｃ−６：イン・ビボ活性試験
本発明による複合体の活性を、例えば異種移植モデルを用いて調べた。当業者であれば、本発明による化合物の活性を調べることができる先行技術の方法については熟知している（例えば、ＷＯ２００５／０８１７１１；Ｐｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．, Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００９ Ｍａｒ １５；６９（６）：２３５８−６４参照）。このために、例えば、バインダーの標的分子を発現する腫瘍細胞系を、齧歯類（例えばマウス）に移植した。次に、本発明による複合体、アイソタイプ対照複合体、対照抗体または等張性生理食塩水をインプラント動物に投与した。投与は、１回または複数回行った。数日のインキュベーション時間後、複合体処理動物および対照群を比較することで、腫瘍の大きさを測定した。複合体処理動物は、相対的に小さい腫瘍サイズを示した。
マウスでの増殖阻害／実験腫瘍の退行
抗体薬物複合体に対する抗原を発現するヒト腫瘍細胞を、免疫抑制マウス、例えばＮＭＲｉヌードまたはＳＣＩＤマウスの側部に皮下接種する。１００から１０００万個の細胞を細胞培養液から除去し、遠心し、培地または培地／マトリゲルに再懸濁させる。細胞懸濁液をマウスの皮下に注射する。
数日以内に腫瘍が増殖する。腫瘍サイズ約４０ｍｍ２で腫瘍が確立された後に、処置を開始する。比較的大きい腫瘍に対する効果を調べるため、腫瘍サイズが５０から１００ｍｍ２でのみ処置を開始することも可能である。
ＡＤＣによる処置は、マウスの尾静脈に静脈経路で行う。ＡＤＣは５ｍＬ／ｋｇの体積で投与する。
処置プロトコールは、抗体の薬物動態によって決まる。標準として、処置は、４日ごとに３連続回行う。迅速な評価のために、単回処置を行うプロトコールを用いることができる。しかしながら、治療をさらに続けることも可能であるか、後の時点で、３処置日の第２サイクルを行うことができる。
標準として、処置群当たり動物８匹を用いる。活性物質を投与される群に加えて、同じプロトコールに従って、一つの群を緩衝液のみで対照群として処理する。
実験中、腫瘍面積を、定期的にカリパスを用いて２次元（長さ／幅）で測定する。その腫瘍面積は、長さ×幅として求める。処置群の対照群との平均腫瘍面積の比を、Ｔ／Ｃ面積と記述する。
処置終了後、実験の全ての群を同時に屠殺する場合、腫瘍を摘出し、秤量することができる。処置群の対照群との平均腫瘍重量の比を、Ｔ／Ｃ重量と記述する。
Ｄ．医薬組成物の作業例
本発明による化合物は、下記のような医薬製剤に変換することができる。
静注液剤：
本発明による化合物を、生理的に許容される溶媒（例えば、等張性生理食塩水溶液、Ｄ−ＰＢＳ、またはポリソルベート８０を加えたクエン酸緩衝液中のグリシンおよび塩化ナトリウムを含む製剤）中、飽和溶解度以下の濃度で溶かす。その溶液について無菌濾過を行い、無菌で発熱物質を含まない注射容器に分配する。
静注液剤：
本発明による化合物を、言及の投与形態に変換することができる。これは、自体公知の方法で、不活性で無毒性の医薬として好適な賦形剤（例えば緩衝物質、安定剤、可溶化剤、保存剤）「との混和」または「への溶解」によって行うことができる。例えば、次のもの：アミノ酸（グリシン、ヒスチジン、メチオニン、アルギニン、リジン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、グルタミン酸、フェニルアラニンおよびその他）、糖類および関連化合物（グルコース、サッカロース、マンニトール、トレハロース、ショ糖、マンノース、乳糖、ソルビトール）、グリセリン、ナトリウム塩、カリウム、アンモニウム塩およびカルシウム塩（例えば塩化ナトリウム、塩化カリウムまたはリン酸水素二ナトリウムおよび多くの他のもの）、酢酸塩／酢酸緩衝系、リン酸緩衝液、クエン酸およびクエン酸塩緩衝系、トロメタモール（ＴＲＩＳおよびＴＲＩＳ塩）、ポリソルベート類（例えばポリソルベート８０およびポリソルベート２０）、ポロキサマー類（例えばポロキサマー１８８およびポロキサマー１７１）、マクロゴール類（ＰＥＧ誘導体、例えば３３５０）、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、ＥＤＴＡ塩、グルタチオン、アルブミン類（例えばヒト）、尿素、ベンジルアルコール、フェノール、クロロクレゾール、メタクレゾール、塩化ベンザルコニウムおよび多くの他のものが存在していても良い。
後の静注、皮下注射または筋注液剤への変換のための凍結乾燥物：
あるいは、本発明の化合物は、安定な凍結乾燥物（恐らくは、上記賦形剤の助けを得て）に変換し、投与に先だって、好適な溶媒（例えば、注射用水、等張性生理食塩水溶液）で再生し、投与することができる。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の作業例
本明細書において詳細に記載されていない限り、全ての実施例は、当業者に公知の標準的方法を用いて実施した。下記の実施例の分子生物学の通常の方法を、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ２． Ｅｄｉｔｉｏｎ； Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ． Ｙ．， １９８９などの標準的な実験書に記載の方法に従って行うことができる。
ＡＫ実施例１：抗体ライブラリーを用いる抗体製造
完全Ａヒトファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｅｔ ＲＭ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：３４４−８）を用いて、ヒトおよびマウスＴＷＥＡＫＲの二量体Ｆｃ融合細胞外ドメインを標的として固定化するタンパク質パンニング（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．Ｒ．， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００５；２３（３）：１１０５−１６）により、本発明のＴＷＥＡＫＲ特異的ヒトモノクローナル抗体を単離した。
表ＡＫ−１：抗体選択に使用される組み換え抗原のリスト
Figure 2018528161
製造者の説明書に従い約２倍モル過剰のビオチン−ＬＣ−ＮＨＳ（Ｐｉｅｒｃｅ；カタログ番号２１３４７）を用いて抗原をビオチン化し、Ｚｅｂａ脱塩カラム（Ｐｉｅｒｃｅ；カタログ番号８９８８９）を用いて脱塩した。洗浄磁気ビーズ（ＤｙｎａＢｅａｄｓ）を２００ｎＭビオチン化抗原とともに４℃で終夜インキュベートし、ブロッキング緩衝液（３％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０含有ＰＢＳ）とともに４℃で１時間ブロックした。ブロックＦａｂファージライブラリーをブロックＴＷＥＡＫＲビーズ（ＤｙｎａＢｅａｄｓストレプトアビジン−Ｍ２８０−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １１２−０６Ｄ）に加え、室温で３０分間インキュベートした。ストリンジェント洗浄（ブロッキング緩衝液で３回および０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（１５０ｍＭ ＮａＣｌ；８ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４；１．５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４；ｐＨ＝７．４から７．６に調節）で９回）後、ビオチン化ＴＷＥＡＫＲビーズ（ＤｙｎａＢｅａｄｓストレプトアビジン−Ｍ２８０−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ １１２−０６Ｄ）に特異的に結合するＦａｂファージをＰＢＳに再懸濁させ、増幅のため、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）株ＴＧ１感染に直接用いた。第２の選択ラウンドで、二つのマウスＴＷＥＡＫＲ（２００ｎＭ）を用いて、交差反応性バインダーについての選択を行い、第３の選択ラウンドで、ヒトＴＷＥＡＫＲの濃度を低下させて（１００ｎＭ）、高アフィニティバインダーへの選択圧力を高めた。
１１種類の異なるＦａｂファージを同定し、相当する抗体を、哺乳動物ＩｇＧ発現ベクターにクローニングし、それによって、可溶性Ｆａｂに存在しない欠けたＣＨ２−ＣＨ３ドメインが得られた。Ｔｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈａｐｔｅｒ １２ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ ｅｄ． ｂｙ Ｍｉｃｈｅａｌ Ｒ． Ｄｙｓｏｎ ａｎｄ Ｙｖｅｓ Ｄｕｒｏｃｈｅｒ， Ｓｃｉｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｌｔｄ， ２００７に記載の方法に従って、得られたＩｇＧを哺乳動物細胞で一時的に発現させた。すなわち、ＣＭＶプロモーターに基づく発現プラスミドをＨＥＫ２９３−６Ｅ細胞にトランスフェクションし、フェルンバッハ瓶またはウェーブ（Ｗａｖｅ）バッグでインキュベートした。発現を、Ｆ１７培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において３７℃で５から６日間行った。トランスフェクションから２４時間後、１％Ｕｌｔｒａ−Ｌｏｗ ＩｇＧ ＦＣＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および０．５ｍＭバルプロ酸（Ｓｉｇｍａ）を補充として加えた。抗体をタンパク質−Ａクロマトグラフィーによって精製し、ＡＫ−実施例２に記載のＥＬＩＳＡおよびＢＩＡｃｏｒｅ分析を用いて可溶性モノマーＴＷＥＡＫＲへの結合アフィニティによってさらに特性決定した。
表ＡＫ−２：アフィニティ測定に使用される組み換え抗原のリスト
Figure 2018528161
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の細胞結合特性を求めるため、多くの細胞系（ＨＴ２９、ＨＳ６８、ＨＳ５７８）への結合を、フローサイトメトリーによって調べた。その細胞を、抗体（５μｇ／ｍＬ）のＦＡＣＳ緩衝液中希釈液に懸濁させ、氷上で１時間インキュベートした。第２の抗体（ＰＥヤギ−抗ヒトＩｇＧ、Ｄｉａｎｏｖａ＃１０９−１１５−０９８）を加えた。氷上で１時間インキュベーションした後、細胞を、ＦＡＣＳアレー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いるフロサイトメトリーによって分析した。
ＮＦ−κＢレポーター遺伝子アッセイを行って、同定した１１種類全ての抗体（ヒトＩｇＧ１）のアゴニスト活性を評価した。ＨＥＫ２９３細胞を、製造者の説明書に従って２９３ｆｅｃｔｉｎを用いて、ＮＦ−κＢレポーター構築物（ＢｉｏＣａｔ、カタログ番号ＬＲ−００５１−ＰＡ）で一時的にトランスフェクションした。トランスフェクション細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で、白色のポリリジンコーティングした３８４ウェルプレート（ＢＤ）のＦ１７培地（血清を含まない；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に播いた。翌日、細胞を、各種濃度の精製抗体で６時間刺激してから、標準的な方法を用いてルシフェラーゼアッセイを行った。
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の蛍光標識（ＣｙｐＨｅｒ ５ＥモノＮＨＳエステル；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介して、内在化をモニタリングした。処理に先だって、ＨＴ２９細胞を、９６ウェルＭＴＰプレート（肉厚、黒色、透明底、Ｎｏ．４３０８７７６、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の培地１００μＬに播いた（２×１０４／ウェル）。３７℃／５％ＣＯ２で１８時間のインキュベーション後、培地を入れ換え、標識抗ＴＷＥＡＫＲ抗体を、異なる濃度（１０、５、２．５、１、０．１μｇ／ｍＬ）で加えた。選択したインキュベーション時間は、０、０．２５、０．５、１、１，５、２、３、６および２４時間であった。蛍光測定を、ＩｎＣｅｌｌ−アナライザー１０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で行った。
最も高いイン・ビトロ活性を有する抗体（ＴＰＰ−８８３）を、さらなる活性およびアフィニティ成熟のために選択した。
ＴＰＰ−８８３
配列番号７１
ＡＱＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶ
ＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＳＰＧＩＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩ
ＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳ
ＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＬＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号７２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＭＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＫＴＨＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＤＧＹＦＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥ
ＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ＴＰＰ−８８３の軽鎖（配列番号７１）および重鎖（配列番号７２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施している。
第一の突然変異収集ラウンドで成熟化を行い、次にアフィニティおよび活性が最も上昇したアミノ酸の組み換えを行った。突然変異ＮＮＫ（Ｎ＝ＡＧＣＴ、Ｋ＝ＧまたはＴ）を収集するため、ＮＮＫコドン多様化を含む合成オリゴヌクレオチド（連続アミノ酸命名法）を用いる部位指向性変異誘発によって次の個々のアミノ酸位置：ＣＤＲ−Ｌ１でのＳ３５、Ｓ３６、Ｙ３７およびＮ３９；ＣＤＲ−Ｌ２でのＡ５１、Ｓ５３、Ｓ５４、Ｑ５６およびＳ５７；ＣＤＲ−Ｌ３でのＳ９２、Ｙ９３、Ｓ９４、Ｓ９５、Ｇ９７およびＩ９８；ＣＤＲ−Ｈ１でのＰ３１、Ｙ３２、Ｐ３３、Ｍ３４およびＭ３５；ＣＤＲ−Ｈ２でのＹ５０、Ｓ５２、Ｐ５３、Ｓ５４、Ｇ５６、Ｋ５７およびＨ５９；ＣＤＲ−Ｈ３でのＧ９９、Ｇ１００、Ｄ１０１、Ｇ１０２、Ｙ１０３、Ｆ１０４、Ｄ１０５およびＹ１０６で無作為化を行った。全ての個々のＮＮＫ飽和変異誘発ライブラリーのＤＮＡを、活性成熟のために哺乳動物ＩｇＧ発現ベクターに、またはアフィニティ成熟のためにファージミドベクターにクローニングした。アフィニティ成熟をファージパニングによって行った。洗浄磁気ビーズ（ＤｙｎａＢｅａｄｓ）を、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭまたは１０ｐＭビオチン化抗原とともに４℃で終夜インキュベートし、４℃で１時間にわたりブロッキング緩衝液（３％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０含有ＰＢＳ）でブロックした。ブロックＦａｂファージライブラリーを、理論的ライブラリー複雑度と比較して１００００倍、１０００倍または１００倍過剰で、ブロックＴＷＥＡＫＲ−ＤｙｎａＢｅａｄｓに加え、室温で３０分間インキュベートした。それは、合計で１２の戦略を次に行ったことを意味する（４抗原濃度×３Ｆａｂファージ力価測定）。ストリンジェント洗浄（ブロッキング緩衝液で３回および０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０含有ＰＢＳで９回）後、ビオチン化ＴＷＥＡＫＲ ＤｙｎａＢｅａｄｓ（ＤｙｎａＢｅａｄｓ ストレプトアビジン−Ｍ２８０−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ１１２−０６Ｄ）に対して特異的に結合するＦａｂファージをＰＢＳに再懸濁させ、増幅のため、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）株ＴＧ１の感染に直接用いた。選択ラウンド２において、ヒトＴＷＥＡＫＲ−Ｆｃの濃度を下げ（１ｎＭ、１００ｐＭ、１０ｐＭおよび１ｐＭ）、同じＦａｂファージ力価測定を、１２の戦略全てについて用いた（４．４×１０１１）。可溶性Ｆａｂの発現のため、ファージミドベクターをＭｌｕＩで消化させて、ファージ上でのＦａｂディスプレイに必要な遺伝子−ＩＩＩ膜アンカー配列を除去し、ベクターを再結合させた。１２の選択プールそれぞれの９６の変異体を可溶性Ｆａｂとして発現させ、ＥＬＩＳＡフォーマットで調べた。このために、２．５ｎＭビオチン化ＴＷＥＡＫＲ−Ｆｃを抗原コーティングし、可溶性Ｆａｂの結合を、抗ｃ−Ｍｙｃ抗体（Ａｂｃａｍ ａｂ６２９２８）を用いて示した。ＴＷＥＡＫＲ−Ｆｃ（配列番号１３８）に対する改善された結合を有する７種類の単一置換変異体（連続アミノ酸命名法）が示され、ＣＤＲ−Ｌ１のＳ３６Ｇ、ＣＤＲ−Ｌ２のＡ５１ＱおよびＳ５７Ｋ、ＣＤＲ−Ｌ３のＳ９４ＴおよびＧ９７Ｆ、ＣＤＲ−Ｈ１のＭ３５ＩおよびＣＤＲ−Ｈ３のＧ１０２Ｔであった。活性成熟のため、ＨＥＫ２９３細胞をＮＦ−κＢレポーター（ＢｉｏＣａｔ、カタログ番号ＬＲ−００５１−ＰＡ）でトランスフェクションした。トランスフェクション細胞を、白色のポリリジンコーティングした３８４ウェルプレート（ＢＤ）のＦ１７培地（血清を含まない；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に播き、ＮＮＫ多様化位置抗体（ヒトＩｇＧ１）ライブラリーの個々の変異体を哺乳動物細胞で一時的に発現させた。翌日、ＮＦ−κＢレポーター細胞を、発現した個々のＮＮＫ抗体変異体で６時間刺激してから、標準的な方法を用いてルシフェラーゼアッセイを行った。改善されたアゴニスト活性を有する１種類の単一置換変異体が検出され、それはＣＤＲ−Ｈ３のＧ１０２Ｔであった。この変異体は、アフィニティ成熟によっても得られ、やはりそれも、最も高いアフィニティ促進を示した。アフィニティおよび活性スクリーニングによる突然変異収集後、７種類全ての好ましい個々の置換（ライブラリー複雑度：１２８変異体）を組み換えライブラリーに組み換えた。このために、オリゴヌクレオチドを合成して、各選択された位置に選択された突然変異または相当する野生型アミノ酸を導入した。オーバーラップエクステンション（ｏｖｅｒｌａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）ＰＣＲの連続ラウンドを用いて、ライブラリーを確立した。最終ＰＣＲ産物を、細菌可溶性Ｆａｂ発現ベクターに結合させ、上記のような可溶性Ｆａｂによる平衡ＥＬＩＳＡスクリーニング用に無作為に５２８個の変異体を選択した（取ったサンプルの約４倍過剰）。最後に、最良の単一置換変異体Ｇ１０２Ｔと比較したアフィニティ上昇に基づいて、７個の変異体を選択した。これらの相当するＤＮＡを哺乳動物ＩｇＧ発現ベクターにクローニングし、上記ＮＦ−κＢレポーター細胞アッセイで機能活性について調べた。最後に、得られた配列をヒト生殖細胞系配列と比較し、アフィニティおよび効力に対して有意な効果がない逸脱を適合させた。下記の配列を有する抗体が、抗体ライブラリースクリーニングおよびアフィニティおよび／または活性成熟によって得られた。
ＴＰＰ−２０９０

配列番号１：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＧＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＳＰＦＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ
ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＳＴＨＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ
ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ＴＰＰ−２０９０の軽鎖（配列番号１）および重鎖（配列番号２）のアミノ酸配列；
重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲには下線を施している。ＴＰＰ−２０９０の配列に基づき、脱グリコシル化抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ（重鎖Ｎ２９７Ａ（Ｋａｂａｔ、ＥＵナンバリング）に突然変異を含む）およびＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ−２９７Ｑ（重鎖Ｎ２９７Ｑ（Ｋａｂａｔ、ＥＵナンバリング）に突然変異を含む）が、部位指向性突然変異誘発によって形成された。
ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ａ
軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＧＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＳＰＦＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ
ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
重鎖：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＳＴＨＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ
ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑ
軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＧＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＳＰＦＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ
ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
重鎖：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＳＴＨＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＱ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ
ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ＴＰＰ−２１４９
配列番号１１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＧＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＳＰＦＩＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ
ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＬＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＫＴＨＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ
ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ＴＰＰ−２１４９の軽鎖（配列番号１１）および重鎖（配列番号１２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
ＴＰＰ−２０９３
配列番号２１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＳＰＦＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
ＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬ
ＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＭＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＳＴＨＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ
ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ＴＰＰ−２０９３の軽鎖（配列番号２１）および重鎖（配列番号２２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
ＴＰＰ−２１４８
配列番号３１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＳＰＦＩＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰ
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配列番号３２
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ＴＰＰ−２１４８の軽鎖（配列番号３１）および重鎖（配列番号３２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
ＴＰＰ−２０８４
配列番号４１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
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配列番号４２
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ＴＰＰ−２０８４の軽鎖（配列番号４１）および重鎖（配列番号４２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
ＴＰＰ−２０７７
配列番号５１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ
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配列番号５２
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ＴＰＰ−２０７７の軽鎖（配列番号５１）および重鎖（配列番号５２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
ＴＰＰ−１５３８
配列番号６１
ＡＱＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶ
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ＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＬＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号６２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＭＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＫＴＨＹ
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ＴＰＰ−１５３８の軽鎖（配列番号６１）および重鎖（配列番号６２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
ＴＰＰ−１８５４
配列番号８１
ＡＱＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＧＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＮＡＳＳＬＱＳＧＶ
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ＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＬＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号８２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＩＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＫＴＨＹ
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ＴＰＰ−１８５４の軽鎖（配列番号８１）および重鎖（配列番号８２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
ＴＰＰ−１８５３
配列番号９１
ＡＱＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＮＡＳＳＬＱＳＧＶ
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ＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＬＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号９２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＭＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＫＴＨＹ
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ＴＰＰ−１８５３の軽鎖（配列番号９１）および重鎖（配列番号９２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
ＴＰＰ−１８５７
配列番号１０１
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配列番号１０２
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ＴＰＰ−１８５７の軽鎖（配列番号１０１）および重鎖（配列番号１０２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
ＴＰＰ−１８５８
配列番号１１１
ＡＱＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＮＡＳＳＬＱＳＧＶ
ＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＳＰＦＩＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩ
ＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳ
ＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＬＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１１２
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＰＹＰＭＭＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＰＳＧＧＫＴＨＹ
ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ
ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ＴＰＰ−１８５８の軽鎖（配列番号１１１）および重鎖（配列番号１１２）のアミノ酸配列；重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲに下線を施してある。
実施例２：抗体の生化学的特徴
Ｂｉａｃｏｒｅ分析による結合アフィニティの測定：
抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の結合アフィニティを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉａｃｏｒｅ, Ｉｎｃ．）での表面プラズモン共鳴分析を用いて調べた。抗体を、間接捕捉試薬、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）を用いてＣＭ５センサーチップ上に固定した。「ヒト抗体捕捉キット」（ＢＲ−１００８−３９、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉａｃｏｒｅ, Ｉｎｃ．）の試薬を、製造者に説明に従って用いた。抗ＴＷＥＡＫＲ抗体を、１０μＬ／分で１０秒間、濃度１０μｇ／ｍＬで注射した。
表ＡＫ−３：アフィニティ測定に用いられる組み換え抗原（ＴＷＥＡＫＲ）のリスト
Figure 2018528161
表ＡＫ−４：アフィニティ測定に用いられる抗体のリスト
Figure 2018528161
表ＡＫ−５：アフィニティ測定に用いられる市販の抗体のリスト
Figure 2018528161
ＨＥＰＥＳ−ＥＰ緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．）中の各種濃度（２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２ｎＭ、１．５６ｎＭ）の精製組み換えヒトＴＷＥＡＫＲタンパク質（ＴＰＰ−２３０５、配列番号１６８）を、３分間にわたり流量６０μＬ／分で固定化抗ＴＷＥＡＫＲ抗体上に注入し、解離時間は５分であった。インライン基準細胞補正と、次に緩衝液サンプルの減算後に、センサーグラムを得た。１：１一次結合モデルを用いてセンサーグラムを適合させることで得られた会合（ｋｏｎ）定数および解離（ｋｏｆｆ）定数の比に基づいて、解離定数（ＫＤ）を計算した。
表ＡＫ−６：ＴＷＥＡＫＲタンパク質（ＴＰＰ−２３０５（配列番号１６８））を用い、Ｂｉｏｃｏｒｅを用いて測定された抗ＴＷＥＡＫＲ抗体の一価ＫＤ値
Figure 2018528161
Figure 2018528161
本発明の抗体は中等度の（ｍｏｒａｔｅ）アフィニティ（ＫＤ１０から２００ｎＭ）でＴＷＥＡＫＲに結合するが、いくつかの比較抗体（例えばＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）、１３６．１（ＴＰＰ−２１９４）、１８．３．３（ＴＰＰ−２１９３）、Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）、Ｐ３Ｇ５（ＴＰＰ−２１９５）、Ｐ２Ｄ３（ＴＰＰ−２１９６）、ＩＴＥＭ−１、ＩＴＥＭ−４）は高いアフィニティ結合（０．７から３．７ｎＭ）を示すことが確認された。抗体ＰＤＬ−１９２、１３６．１、１８．３．３、Ｐ４Ａ８、Ｐ３Ｇ５およびＰ２Ｄ３の可変ドメインの配列を、特許文献ＷＯ２００９／０２０９３３およびＷＯ２００９／１４０１７７から得て、ヒトＩｇＧ１およびマウスＩｇＧ２の定常領域をコードする配列を加えて、全長ＩｇＧであるＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）、１３６．１（ＴＰＰ−２１９４）、１８．３．３（ＴＰＰ−２１９３）、Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）、Ｐ３Ｇ５（ＴＰＰ−２１９５）、Ｐ２Ｄ３（ＴＰＰ−２１９６）を得た。この試験で測定されたアフィニティの範囲は、公開データと良好に一致しており；ＰＤＬ−１９２、１８．３．３および１３６．１に関しては、ＫＤ値５．５、０．２および０．７ｎＭが公開されおり（ＷＯ２００９／０２０９３３）；Ｐ４Ａ８については２．６ｎＭである（ＷＯ２００９／１４０１７７）。比較のため、天然リガンドＴＷＥＡＫは、ＫＤ値０．８から２．４ｎＭでＴＷＥＡＫＲに結合する（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ． ２００１ Ｎｏｖ；１５（５）：８３７−４６； Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ． ２００６ Ｊｕｌ １５；３９７（２）：２９７−３０４； Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ． ２００３ Ａｐｒ １；２３（４）：５９４−６００）。
結果的に、本発明の抗体（ＴＰＰ−８８３、ＴＰＰ−１５３８、ＴＰＰ−２０７７、ＴＰＰ−２０８４、ＴＰＰ−２１４８、ＴＰＰ−２０９３、ＴＰＰ−２１４９およびＴＰＰ−２０９０）が、中等度（ｍｏｒａｔｅ）のアフィニティ（ＫＤ１０から２００ｎＭ）でＴＷＥＡＫＲに結合すると記録することができる。
ＴＷＥＡＫＲ細胞外ドメインのＮ末端およびＣ末端切断変異体を用いるＴＰＰ−２０９０の結合エピトープの特性決定：
異なる生物種のＴＷＥＡＫＲ（アミノ酸３４から６８）のシステイン豊富ドメインの配置（図１−配置）は、それが分析した６種類の生物種で良好に保存されていることを示している。ＰＤＬ−１９２はＲ５６に依存して結合することから（ＷＯ２００９／０２０９３３：図２Ｂ）、ラット、ブタおよびマウスＴＷＥＡＫＲには結合しない。ＴＰＰ−２０９０は保存アミノ酸Ｄ４７に依存して結合することから、示した全ての生物種に結合する。
上記抗体の結合エピトープの特性決定を行う最初のアプローチにおいて、ＴＷＥＡＫＲ細胞外ドメインのＮ末端およびＣ末端切断変異体を形成し、それが各種抗ＴＷＥＡＫＲ抗体に結合する能力を調べた。アミノ酸２８から３３がＮ末端で欠失され、アミノ酸６９から８０がＣ末端で欠失されていたことで、Ｃｙｓ３６−Ｃｙｓ４９、Ｃｙｓ５２−Ｃｙｓ６７およびＣｙｓ５５−Ｃｙｓ６４の間でジスルフィド架橋を有するシステイン豊富ドメインが無傷で残った（図２を比較）。両方の構築物、Ｎ末端およびＣ末端を含む全細胞外ドメイン２８から８０および切断細胞外ドメイン３４から６８が発現され、それぞれＦｃ融合タンパク質ＴＰＰ−２２０２およびＴＰＰ−２２０３として精製した。
その結合を分析するため、１μｇ／ｍＬの相当する二量体ＴＷＥＡＫＲ Ｆｃ構築物をコートし、０．３μｇ／ｍＬおよび０．０８μｇ／ｍＬのビオチン化ＩｇＧを可溶性結合相手として用いた。ストレプトアビジン−ＨＲＰおよびＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ基質を用いて検出を行った。ＩｇＧを、製造者の説明書に従って約２倍モル過剰のビオチン−ＬＣ−ＮＨＳ（Ｐｉｅｒｃｅ；カタログ番号２１３４７）を用いてビオチン化し、Ｚｅｂａ脱塩カラム（Ｐｉｅｒｃｅ；カタログ番号８９８８９）を用いて脱塩した。可溶性リガンドの用いた全ての濃度で、本発明の抗体は両方の構築物に対する飽和結合を示したが、抗体Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）、Ｐ３Ｇ５（ＴＰＰ−２１９５）およびＩｔｅｍ−４は全長細胞外ドメインに対してのみ飽和結合を示し、Ｎ末端およびＣ末端切断構築物に対する結合は悪化を示した（図３および図４）。これは、本発明の抗体の結合エピトープが、アミノ酸３４から６８の間のシステイン豊富ドメインに一していることを示している。Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）およびＰ３Ｇ５（ＴＰＰ−２１９５）結合にはＴＷＥＡＫＲ細胞外ドメインのＮ末端またはＣ末端のいずれが必要であるかを分析するため、アミノ酸６９から８０のＣ末端欠失を有するモノマー細胞外ドメインを形成した。Ｃ末端切断ＴＷＥＡＫＲ細胞外ドメインへのＰ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）およびＰ３Ｇ５（ＴＰＰ−２１９５）の結合も同様に悪化しているが、本発明の抗体は飽和結合を示している（図５）。
表ＡＫ−９：エピトーププロファイリングのためのＥＬＩＳＡ分析で使用される組み換え抗原のリスト
Figure 2018528161
表ＡＫ−１０：エピトーププロファイリングのためのＥＬＩＳＡ分析で使用される抗体のリスト
Figure 2018528161
Figure 2018528161
従って、システイン豊富ドメインにおけるＴＰＰ−２０９０、ＴＰＰ−２０８４、ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）および１３６．１（ＴＰＰ−２１９４）の結合エピトープおよびＰ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）およびＰ３Ｇ５（ＴＰＰ−２１９５）の結合エピトープは、少なくとも部分的に、システイン豊富ドメインの外にある。
抗体アフィニティに対するＴＷＥＡＫＲ−Ｆｃ突然変異タンパク質の効果
本発明の抗体の結合特性をより詳細に調べるため、公知のアゴニスト抗体（ＷＯ２００９／１４０１７７）の活性について関連性があることが示唆されているＴＷＥＡＫＲのある種の突然変異タンパク質について調べた。このために、次の個々のアミノ酸置換：Ｔ３３Ｑ；Ｓ４０Ｒ；Ｗ４２Ａ；Ｍ５０Ａ；Ｒ５６Ｐ；Ｈ６０Ｋ；Ｌ６５Ｑを有する全長細胞外ドメイン（アミノ酸２８から８０）を発現させ、Ｆｃ融合タンパク質として精製した。
表ＡＫ−１１：突然変異タンパク質結合についてのＥＬＩＳＡ分析で使用される組み換えタンパク質のリスト
Figure 2018528161
用量−反応データを得るため、各種ＴＷＥＡＫＲ−Ｆｃ突然変異タンパク質を低濃度（６２ｎｇ／ｍＬ）で３８４ウェルＭａｘｉｓｏｒｂ ＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、濃度１００ｎＭから出発するビオチン化ＩｇＧの一連の２倍希釈液を可溶性結合相手として用いた。ストレプトアビジン−ＨＲＰおよびＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄを用いて検出を行った。調べたＩｇＧは、本発明のＴＰＰ−２０９０およびＴＰＰ−２０８４；ＷＯ２００９／０２０９３３のＰＤＬ−１９２、１３６．１および１８．３．３；ＷＯ２００９／１４０１７７のＰ４Ａ８およびＰ３Ｇ５；ならびにＮａｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ ［Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍ ３０６： ８１９−８２５］のＩＴＥＭ−１およびＩＴＥＭ−４であった。
表ＡＫ−１２：突然変異タンパク質結合についてのＥＬＩＳＡ分析で使用される抗体のリスト
Figure 2018528161
Figure 2018528161
表ＡＫ−１３：突然変異タンパク質結合についてのＥＬＩＳＡで使用される市販の抗体のリスト
Figure 2018528161
ＩｇＧを、製造者の説明書に従って約２倍モル過剰のビオチン−ＬＣ−ＮＨＳ（Ｐｉｅｒｃｅ；カタログ番号２１３４７）を用いてビオチン化し、Ｚｅｂａ脱塩カラム（Ｐｉｅｒｃｅ；カタログ番号８９８８９）を用いて脱塩した。用量−反応データを適合させ、ＩＣ５０を求めた。結果を示すため、作表を行い、「−」は５０ｎＭを超えるＩＣ５０を示し、「＋」は１から１５０ｐＭの範囲のＩＣ５０を示す。
表ＡＫ−１４：抗体結合に対する突然変異タンパク質の効果
Figure 2018528161
既報のように、ＩＴＥＭ−４は、Ｈ６０Ｋ突然変異タンパク質［ＷＯ２００９／１４０１７７：図２３Ｆ］に対する結合悪化を示し、ＰＤＬ−１９２はＲ５６Ｐ突然変異タンパク質に対する結合の悪化を示す［ＷＯ２００９／０２０９３３：図２２Ｂ］。公開されたデータとは対照的に、ＩＴＥＭ−１はＲ５６Ｐに対する結合悪化を示し、全ての抗体はＷ４２Ａに対する悪化を示す［ＷＯ２００９／１４０１７７：図２３Ｅ、図２３Ｆ］。これらの差は選択された方法によって説明することができる。
ＩＴＥＭ−１、ＩＴＥＭ−４、ＰＤＬ−１９２、１３６．１および１８．３．３とは対照的に、本発明の抗体は、Ｗ４２Ａ以外の全ての置換から独立に結合する。
システイン豊富ドメインのアラニンスキャン：
システイン豊富ドメイン（アミノ酸３４から６８）のアラニンスキャンを行って、本発明の抗体の結合部位の位置を決定した。図６は、ＴＷＥＡＫＲの全長細胞外ドメインのＮ末端およびＣ末端切断変異体が、本発明の抗体の結合を悪化させないことを示している。従って、結合エピトープは、システイン豊富ドメインにある。次の置換：Ｓ３７Ａ、Ｒ３８Ａ、Ｓ４０Ａ、Ｓ４１Ａ、Ｗ４２Ａ、Ｓ４３Ａ、Ｄ４５Ａ、Ｄ４７Ａ、Ｋ４８Ａ、Ｄ５１Ａ、Ｓ５４Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｒ５８Ａ、Ｐ５９Ａ、Ｈ６０Ａ、Ｓ６１Ａ、Ｄ６２Ａ、Ｆ６３ＡおよびＬ６５Ａが、ＴＷＥＡＫＲ（３４−６８）Ｆｃ構築物に導入された。
表ＡＫ−１５：システイン豊富ドメインのアラニンスキャンのためのＴＷＥＡＫＲ突然変異タンパク質構築物のリスト
Figure 2018528161
これらのＴＷＥＡＫＲ（３４−６８）Ｆｃ突然変異タンパク質を、ＨＥＫ２９３細胞で発現させた。用量−反応データを得るため、ＩｇＧを、３８４ウェルＭａｘｉｓｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレート上に濃度１μｇ／ｍＬでコーティングし、ＴＷＥＡＫＲ突然変異タンパク質を含む上清の連続２倍希釈液を、可溶性結合相手として用いた。抗ＨＩＳ−ＨＲＰおよびＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄを用いて検出を行った。調べたＩｇＧは、本発明のＴＰＰ−２０９０、ＷＯ２００９／０２０９３３のＰＤＬ−１９２およびＷＯ２００９／１４０１７７のＰ４Ａ８であった。
表ＡＫ−１６：システイン豊富ドメインのアラニンスキャンに用いられる抗体のリスト
Figure 2018528161
各種ＩｇＧに対する結合についてのＴＷＥＡＫＲ突然変異タンパク質の関連性を評価するため、ある突然変異タンパク質濃度での相関ブロットを作った。例を挙げると、図６にはＴＷＥＡＫＲ発現ブロスの８倍希釈上清についての相関ブロットを示してあり、ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）がＸ軸であり、ＴＰＰ−２０９０がＹ軸である。そのブロットは、ＴＰＰ−２０９０の結合が置換Ｄ４７Ａによって悪化し、ＰＤＬ−１９２（ＴＰＰ−１１０４）の結合が置換Ｒ５６Ａによって悪化したことを示している。Ｐ４Ａ８（ＴＰＰ−１３２４）への結合は、どの構築物についても示されず、それは上記で得られた結果と一致している（図６）。従って、Ｐ４Ａ８エピトープは、少なくとも部分的に、システイン豊富ドメインの外にある。抗体相互作用に関してある種のＴＷＥＡＫＲアミノ酸において確認された依存性は、これらの抗体について測定されたアゴニスト活性と相関している。天然リガンドＴＷＥＡＫは、ＴＷＥＡＫＲの効果的活性化を示し、ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインにおけるロイシン４６に依存して結合する（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ， ＦＥＢＳ２８０：１８１８−１８２９）。Ｐ４Ａ８は、非常に低いアゴニスト活性を示し、少なくとも部分的に、ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインの外のドメインと相互作用する。ＰＤＬ−１９２は、中等度の（ｍｏｒａｔｅ）アゴニスト活性を示し、Ｒ５６に依存してシステイン豊富ドメインに結合するが、ＴＷＥＡＫリガンド部位は逆である。ＴＰＰ−２０９０およびＴＷＥＡＫ結合は、それぞれＤ４７およびＬ４６に依存することから、それらは同様の結合部位に結合する（図７）。
本発明の抗体（例えばＴＰＰ−２０９０）はＤ４７に依存する形でＴＷＥＡＫＲに結合すると結論付けることができる。
抗体相互作用に関してある種のＴＷＥＡＫＲアミノ酸において確認された依存性は、これらの抗体について測定されたアゴニスト活性と相関している。天然リガンドＴＷＥＡＫは、ＴＷＥＡＫＲの効果的活性化を示し、ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインにおけるロイシン４６に依存して結合する（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ， ＦＥＢＳ２８０：１８１８−１８２９）。Ｐ４Ａ８は、非常に低いアゴニスト活性を示し、少なくとも部分的に、ＴＷＥＡＫＲのシステイン豊富ドメインの外のドメインと相互作用する。ＰＤＬ−１９２は、中等度の（ｍｏｒａｔｅ）アゴニスト活性を示し、Ｒ５６に依存してシステイン豊富ドメインに結合するが、ＴＷＥＡＫリガンド部位は逆である。本発明の抗体（実施例ＴＰＰ−２０９０）は、Ｄ４７に依存する形で結合し、ＴＷＥＡＫはＤ４６に依存する形で結合し、そして同様の（しかし異なる）結合部位に結合する（図７）。従って、強いアゴニスト活性を示す本発明の抗体は、非常に高いアゴニスト活性を伴う抗体についての新規なエピトープ（Ｄ４７依存性）に結合する。留意すべき興味深い点として、ミカエルソン（Ｍｉｃｈａｅｌｓｏｎ）ら（Ｍｉｃｈａｅｌｓｏｎ ＪＳ ｅｔ ａｌ， ＭＡｂｓ． ２０１１ Ｊｕｌ−Ａｕｇ；３（４）：３６２−７５の３６９頁左欄を参照）が、彼らが調べた全てのアゴニスト抗体が天然リガンドＴＷＥＡＫより弱いアゴニスト活性を有するという事実の説明を提供している。彼らは、効力低下は、抗体のＴＷＥＡＫＲとの二量体結合相互作用の関数である可能性があり、ＴＷＥＡＫが恐らくは三量体相互作用に入ると結論付けている。従って、驚くべき結果として、本発明の抗体は、ＴＷＥＡＫＲとのそれの二量体相互作用にも拘わらず、かなり高いアゴニスト活性を有する。この驚くべき活性は、本発明の抗体の特異的結合特性、すなわちＴＷＥＡＫＲのＤ４７への特異的結合に関連している。

Claims (49)

  1. バインダーもしくはそれの誘導体の１以上の活性化合物分子との複合体であって、前記活性化合物分子がリンカーＬを介して前記バインダーに結合したキネシン紡錘体タンパク質阻害剤であり、前記リンカーＬが前記バインダーのグルタミン側鎖に結合しており、１から５個のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤が前記リンカーＬに結合しており、前記リンカーＬに結合した前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤が下記式（ＩＩａ）を有する複合体、ならびに該複合体の塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。
    Figure 2018528161
     ［式中、
    Ｘ１は、Ｎを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
    Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
    Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
    Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
    Ｘ１はＣＨまたはＣＦを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し、
    （Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表すのが好ましい）；
    Ｒ１は−Ｈ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    −Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    −ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
    Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し、
    Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
    Ｒ２は、−Ｈ、−Ｌ−＃１、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    −Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    −ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
    Ｒ４は−Ｈ、−Ｌ−＃１、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    −Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
    または
    Ｒ４はＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基もしくはカテプシン開裂性基Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−を表し、
    Ｒ２１はＨ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基（それは、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２、または−ＯＨで１回以上置換されていても良い）、−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
    ｘは０または１であり、
    ｖは１から２０の数字であり、
    Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；複数のアミノ酸Ｐ３がある場合、Ｐ３は、上記で定義の同一もしくは異なるアミノ酸を有することができ；
    または
    Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
    Ｒ１０は−Ｈ、ハロゲン（好ましくは−Ｆまたは−Ｃｌ）、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨ、Ｃ１−４−アルキル、ハロ−Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、ヒドロキシ置換されたＣ１−４−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１−４−アルキル）または−ＯＨを表し、ピロリジン環中の２級アミノ基の水素原子がＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっていても良く；
    Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；複数のアミノ酸Ｐ３がある場合、Ｐ３は、上記で定義の同一もしくは異なるアミノ酸を有することができ；
    −ＳＩＧは、−Ｃ（＝Ｏ）ーＳＩＧ結合の開裂時に遊離２級アミンを与える自壊性基であり；
    Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
    Ｒ３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ（（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１−２０Ｈ）基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
    −Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    −ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
    ｎは０、１または２を表し、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
    Ｒ５は−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＭＯＤ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２Ｆ、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
    Ｒ８は、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキル、−または−（ＣＨ２）０−２−（ＨＺ２）を表し、
    ＨＺ２はＮ、ＯおよびＳからなる群から選択される２個以下のヘテロ原子を有する４から７員の複素環を表し、これらの基のそれぞれは−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２または−Ｌ−＃１によって置換されていても良く；
    −Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４Ｒ５、Ｒ８およびＲ１０のうちの一つが−Ｌ−＃１を表し（またはＲ８の場合、それを含み）、
    Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表し；
    上記で定義の−ＭＯＤは−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
    Ｒ１０はＨまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
    Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
    Figure 2018528161
     （Ｇ１が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
    Figure 2018528161
     を表す場合、Ｒ１０は−ＮＨ２を表さない。）を表し；
    ｎは０または１であり；
    ｏは０または１であり；
    Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
    いずれかの側鎖を含む炭化水素鎖は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    Ｒｙは−Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
    Ｇ３は−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
    −ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの−ＣＯＯＨ基を有する。］
  2. Ｘ１がＣＨを表し、Ｘ２がＣを表し、Ｘ３がＮを表す請求項１に記載の複合体。
  3. 前記置換基Ｒ１または置換基Ｒ３が−Ｌ−＃１を表す請求項１または２に記載の複合体。
  4. リンカーＬを介してバインダーに結合したキネシン紡錘体タンパク質阻害剤である活性化合物分子とバインダーもしくはそれの誘導体の複合体であって、前記リンカーＬが前記バインダーのグルタミン側鎖に結合しており、前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤が下記の下位構造を有する複合体、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。
    Figure 2018528161
     ［式中、
    ＃ａは、分子の残りの部分への結合を表し；
    Ｒ１ａは、−Ｈ、−ＭＯＤ、または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    −ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
    Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
    Ｙ３は、Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ＝Ｏ−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
    Ｗは、−Ｈまたは−ＯＨを表し、
    Ｙ４は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
    Ｒ２ａは、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
    Ｒ４ａは、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルによって置換されていても良い−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２を表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
    または
    Ｒ４ａは、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−の基もしくはカテプシン開裂性基または基Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−を表し、
    Ｒ２１は、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２または−ＯＨで１回以上置換されていても良く；またはそれは、−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
    ｘは０または１であり，
    ｖは１から１０の数字であり、
    Ｒ２２は、−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
    または
    Ｒ２ａおよびＲ４ａが一緒に、（ピロリジン環の形成を伴う）−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
    Ｒ１０は、−Ｈ、ハロゲン（好ましくは−Ｆ）、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し；
    前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤は、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａで、またはＲ２ａおよびＲ４ａによって形成されたピロリジン環で、水素原子の置換によってリンカーに結合している。］
  5. 前記キネシン紡錘体タンパク質阻害剤が、一般式（Ｉａ）によって表される請求項４に記載の複合体ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。
    Figure 2018528161
     ［式中、
    Ｒ１ａは、−Ｈ、−ＭＯＤまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
    Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
    Ｗは、−Ｈまたは−ＯＨを表し、
    Ｙ４は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分基のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
    Ｒ２ａは、−Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
    Ｒ４ａは、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは、−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は、−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６は、直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
    または
    Ｒ４ａは、Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−、またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基、もしくはカテプシン開裂性基または式Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−を表し、
    Ｒ２１は、−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２もしくは−ＯＨで１回以上置換されていても良く；または−Ｈもしくは基−Ｏｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
    ｘは０または１であり、
    ｖは１から２０の数字であり、
    Ｒ２２は、−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
    または
    Ｒ２ａおよびＲ４ａが一緒に、（ピロリジン環の形成を伴う）−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
    Ｒ１０は、Ｈ、ハロゲン（好ましくはＦ）、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し、ピロリジン環中の２級アミノ基の水素原子がＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっていても良く；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
    −ＳＩＧは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ結合の開裂時に遊離２級アミンを提供する自壊性基であり；
    Ｒ３ａは、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキルまたは複素環アルキル基、好ましくはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個のＯ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
    Ｚは、−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    −ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
    ｎは０、１または２であり、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は、−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は、−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し、
    Ｒ８ａは、Ｃ１−１０−アルキルを表し、
    ＨＺは、単環式もしくは二環式複素環を表し、それはハロゲン、Ｃ１−１０−アルキル基、Ｃ６−１０−アリール基およびＣ６−１０−アラルキル基からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く、それはハロゲンによって置換されていても良く；
    上記で定義の−ＭＯＤは、−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ２−Ｇ３を表し、
    Ｒ１０は、−Ｈ；ハロゲンまたはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
    Ｇ１は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−または
    Figure 2018528161
     （Ｇ１が−ＮＨＣ（＝Ｏ）−または
    Figure 2018528161
     を表す場合、Ｒ１０はＮＨ２を表さない。）を表し；
    ｎは０または１であり；
    ｏは０または１であり；
    Ｇ２は、直鎖および／または分岐の炭化水素基を表し、それは１から１０個の炭素原子を有し、基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＣ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙ−、−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｙＮＲｙ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＲｘ＝Ｎ−Ｏ−の１以上によって１回または複数回中断されていても良く、
    いずれかの側鎖を含む前記炭化水素基は、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    Ｒｙは、Ｈ、フェニル、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ２−Ｃ１０−アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０−アルキニルを表し、そのそれぞれは−ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    Ｒｘは、−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニル）を表し、
    Ｇ３は、−Ｈまたは−ＣＯＯＨを表し、
    −ＭＯＤは好ましくは、少なくとも一つの基−ＣＯＯＨを有する。］
  6. 前記リンカーＬが前記バインダーのグルタミン側鎖に結合し、１から５個のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤が前記リンカーＬに結合しており、前記活性化合物分子リンカーが、一般式（ＩＩ）によって表される前記請求項のうちの１以上に記載の複合体、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。
    Figure 2018528161
     ［式中、
    Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し；または
    Ｘ１はＮを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
    Ｘ１はＣＨもしくはＣＦを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＮを表し；または
    Ｘ１はＮＨを表し、Ｘ２はＣを表し、Ｘ３はＣを表し；または
    Ｘ１はＣＨを表し、Ｘ２はＮを表し、Ｘ３はＣを表し、

    Ｒ１は−Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｌ−＃１または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    −Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    −ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′（例えば−（ＣＨ２）０−３Ｚ′）または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
    Ｗは−Ｈまたは−ＯＨを表し，
    Ｙ４は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
    Ｒ２は−Ｌ−＃１、Ｈ、−ＭＯＤ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    −Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    −ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
    Ｒ４は−Ｌ−＃１、−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    −Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｙ４は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５は−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６は直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し、
    または
    Ｒ４はＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−またはＲ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−Ｃ（＝Ｏ）−の基もしくはカテプシン開裂性基Ｒ２１−（Ｃ＝Ｏ）（０−１）−（Ｐ３）（１−２）−Ｐ２−を表し、
    Ｒ２１は−Ｈ、Ｃ１−１０−アルキル−、Ｃ５−１０−アリール−またはＣ６−１０−アラルキル−、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリール−、Ｃ５−１０−複素環アルキル−、ヘテロアリール−、ヘテロアリール−アルキル−、Ｃ１−１０−アルコキシ−、Ｃ６−１０−アリールオキシ−またはＣ６−１０−アラルコキシ−、Ｃ５−１０−ヘテロアルコキシ−、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールオキシ−、Ｃ５−１０−複素環アルコキシ基を表し、それは−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、−Ｎ（アルキル）２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、Ｎ（アルキル）−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｎ（アルキル）２、−ＣＯＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（アルキル）２もしくは−ＯＨで１回以上置換されていても良く、または−Ｈまたは基−（Ｏ）ｘ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｙ−Ｒ２２を表し、
    ｘは０または１であり、
    ｖは１から２０の数字であり、
    Ｒ２２は−Ｈ、−アルキル（好ましくはＣ１−１２−アルキル）、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）を表し；
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；複数のアミノ酸Ｐ３がある場合、Ｐ３は、上記で定義の同一もしくは異なるアミノ酸を有することができ；
    または
    Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−または−ＣＨＲ１０−ＣＨ２−を表し、
    Ｒ１０は−Ｈ、ハロゲン（好ましくは−Ｆ）、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＳＨまたは−ＯＨを表し、ピロリジン環中の２級アミノ基の水素原子がＲ２１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐ３（０−２）−Ｐ２−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ−によって置き換わっていても良く；
    Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    Ｐ２は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓから選択されるアミノ酸であり；
    Ｐ３は、独立にＧｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｎｖａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、シトルリンおよびＨｉｓまたは相当するＮ−アルキルアミノ酸、好ましくはＮ−メチルアミノ酸のうちの一つから選択されるアミノ酸であり；
    −ＳＩＧは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＳＩＧ結合の開裂時に遊離２級アミンを与える自壊性基であり；
    Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−または−Ｃ（＝Ｎ−ＮＨ２）−を表し；
    Ｒ３は−Ｌ−＃１、−ＭＯＤまたは置換されていても良いアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、複素環アルキル基、好ましくは−Ｌ−＃１またはＣ１−１０−アルキル、Ｃ６−１０−アリールまたはＣ６−１０−アラルキル、Ｃ５−１０−ヘテロアルキル、Ｃ１−１０−アルキル−Ｏ−Ｃ６−１０−アリールまたはＣ５−１０−複素環アルキル基を表し、それは１から３個の−ＯＨ基、１から３個のハロゲン原子、１から３個のハロゲン化アルキル基（それぞれ１から３個のハロゲン原子を有する）、１から３個の−Ｏ−アルキル基、１から３個の−ＳＨ基、１から３個の−Ｓ−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）ｎ−アルキル基、１から３個の−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−ＮＨ−アルキル基、１から３個の−Ｎ（アルキル）２基、１から３個の−ＮＨ２基または１から３個の−（ＣＨ２）０−３Ｚ基によって置換されていても良く、
    −Ｌ−＃１はリンカーを表し、＃１はバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    −ＭＯＤは、上記で定義のように表され、
    ｎは０、１または２を表し、
    Ｚは−Ｈ、ハロゲン、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈ、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨＣ（＝Ｏ）−ＣＨ３）Ｚ′、−（ＣＨ２）０−３−ＣＨ（ＮＨ２）Ｚ′または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｒ５は−Ｈ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、ハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）、−ＳＨまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    Ｚは−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、ハロゲン、−ＮＨＹ３、−Ｃ（Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２は互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２または−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｙ３は−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′は−Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＨ２または−ＣＯＯＨを表し；
    Ｒ６およびＲ７は互いに独立に、−Ｈ、シアノ、Ｃ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ２−１０−アルケニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルケニル、Ｃ２−１０−アルキニル、フルオロ−Ｃ２−１０−アルキニル、ヒドロキシまたはハロゲン（特には−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ）を表し、
    Ｒ８はＣ１−１０−アルキル、フルオロ−Ｃ１−１０−アルキル、Ｃ４−１０−シクロアルキル、フルオロ−Ｃ４−１０−シクロアルキル、または置換されていても良いオキセタンを表し；
    Ｒ９は−Ｈ、−Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＨ２Ｆまたは−ＣＨＦ２を表す。］
  7. Ｒ１が−Ｈ、−Ｌ−＃１または−（ＣＨ２）０−３Ｚを表し、
    −Ｌ−＃１がリンカーを表し、＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し；
    Ｚが−Ｈ、−ＯＹ３、−ＳＹ３、−ＮＨＹ３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＹ１Ｙ２または−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＹ３を表し、
    Ｙ１およびＹ２が互いに独立に、−Ｈ、−ＮＨ２、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）０−３−（ＣＨ２）０−３Ｚ′または−ＣＨ（ＣＨ２Ｗ）Ｚ′を表し、
    Ｙ３が−Ｈまたは−（ＣＨ２）０−３Ｚ′を表し、
    Ｚ′が−Ｈ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨまたは−（Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＹ４）１−３ＣＯＯＨを表し、
    Ｗが−Ｈまたは−ＯＨを表し、
    Ｙ４が−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し；
    Ｒ２およびＲ４が互いに独立に、−Ｌ−＃１、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ４−ＮＨＹ５を表し、
    −Ｌ−＃１がリンカーを表し、＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    Ｙ４が−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ２によって置換されていても良い直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表すか、−ＮＨ２によって置換されていても良いアリールもしくはベンジルを表し、
    Ｙ５が−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨＹ６−ＮＨ２を表し、
    Ｙ６が直鎖もしくは分岐のＣ１−６−アルキルを表し；
    または
    Ｒ２およびＲ４が一緒に（ピロリジン環を形成）、−ＣＨ２−ＣＨＲ１０−を表し、
    Ｒ１０が−Ｌ−＃１、−Ｈ、−ＮＨ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＣＯＯＨ、
    −ＳＨまたは−ＯＨを表し、
    Ｌ−＃１がリンカーを表し、＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    Ａが−Ｃ（＝Ｏ）を表し；
    Ｒ３が−（ＣＨ２）ＯＨまたは−Ｌ−＃１を表し、
    −Ｌ−＃１がリンカーを表し、＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    Ｒ５が−Ｌ−＃１または−Ｈを表し、
    −Ｌ−＃１がリンカーを表し、＃１がバインダーもしくはそれの誘導体への結合を表し、
    置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５のうちの一つが−Ｌ−＃１を表す、請求項６に記載の複合体、ならびにそれの塩、溶媒和物、溶媒和物の塩およびエピマー。
  8. Ｒ６およびＲ７が互いに独立に、Ｈ、Ｃ１−３−アルキルまたはハロゲンを表す、請求項６に記載の複合体。
  9. Ｒ８がＣ１−４−アルキル（好ましくはｔｅｒｔ−ブチル）を表す、請求項６に記載の複合体。
  10. Ｒ９がＨを表す請求項６に記載の複合体。
  11. Ｒ６およびＲ７がＦを表す請求項６に記載の複合体。
  12. 前記バインダーまたはそれの誘導体がバインダーペプチドもしくはタンパク質またはバインダーペプチドもしくはタンパク質の誘導体である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  13. 前記複合体が、バインダー当たり二つの結合部位を有する前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  14. 前記複合体が、バインダー当たり四つの結合部位を有する前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  15. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、トランスグルタミナーゼによって認識され得るアクセプターグルタミン側鎖を含む抗体またはバインダーペプチドもしくはタンパク質の誘導体を表す請求項１２から１４のうちの１以上に記載の複合体。
  16. トランスグルタミナーゼ介在結合によって製造される請求項１２から１５のうちの１以上に記載の複合体。
  17. ストレプトミセス・モバラエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｍｏｂａｒａｅｎｓｉｓ）からトランスグルタミナーゼを用いて製造される請求項１２から１６のうちの１以上に記載の複合体。
  18. 前記バインダーが癌標的分子に結合する前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  19. 前記バインダーが細胞外標的分子に結合する請求項１８に記載の複合体。
  20. 前記バインダーが、細胞外標的分子への結合後に、内在化され、標的分子を発現する細胞により、細胞内で（好ましくはリソソームで）処理される請求項１９に記載の複合体。
  21. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質がヒト、ヒト化もしくはキメラモノクローナル抗体またはそれの抗原結合性断片である請求項１２から２０のうちの１以上に記載の複合体。
  22. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、適宜にＣＨ２ドメイン内で、それの重鎖にアクセプターグルタミン残基を有する抗体である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  23. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、位置２９５（Ｋａｂａｔナンバリングシステム）でそれの重鎖にアクセプターグルタミン残基を有する抗体である請求項２２に記載の複合体。
  24. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、Ｎ２９７Ｘ置換（Ｘはアスパラギン以外のアミノ酸である。）；さらにより好ましくはＮ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７ＳまたはＮ２９７Ａ、非常に好ましくはＮ２９７ＡおよびＮ２９７Ｑを含む抗体である請求項２２に記載の複合体。
  25. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、Ｎ２９７Ｑ置換およびＱ２９５Ｘ置換（Ｘはアスパラギン以外のアミノ酸である。）、好ましくはＱ２９５Ｎを含む抗体である請求項２２に記載の複合体。
  26. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、実質的にＮ連結グリコシル化を持たない残基２９７でアスパラギンを含む抗体である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  27. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、アミノ酸残基Ｎ２９７でＮ連結グリコシル化を持たない抗体を産生する宿主細胞で産生される抗体である請求項２６に記載の複合体。
  28. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＴＷＥＡＫＲ抗体またはそれの抗原結合断片である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  29. 前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）、好ましくは抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ２０９０およびそれの脱グリコシル化変異体の位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合する請求項２８に記載の複合体。
  30. 前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体が、ＴＷＥＡＫＲ（配列番号１６９）、好ましくは抗ＴＷＥＡＫＲ抗体ＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７ＡまたはＴＰＰ−２０９０−ＨＣ−Ｎ２９７Ｑの位置４７（Ｄ４７）におけるアミノ酸Ｄに特異的に結合する請求項２８および２９に記載の複合体。
  31. 前記リンカーＬが前記バインダーのグルタミン側鎖に結合しており、１から５個のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤が前記リンカーＬに結合しており、前記リンカーＬが下記の基本構造（ｉ）から（ｉｖ）：
    （ｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−ＳＧ１−Ｌ１−Ｌ２−
    （ｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ１−Ｌ２−
    （ｉｉｉ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−Ｌ２−
    （ｉｖ）−（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｌ１−ＳＧ−Ｌ２
    （式中、ｍは０または１であり、ＳＧおよびＳＧ１はイン・ビボ開裂性基であり、Ｌ１は互いに独立に、イン・ビボで開裂しない有機基を表し、Ｌ２はバインダーへのカップリング基を表す。）のうちの一つを有する前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  32. 前記リンカーＬが前記バインダーのグルタミン側鎖に結合しており、１から５個のキネシン紡錘体タンパク質阻害剤が前記リンカーＬに結合しており、前記イン・ビボ開裂性基ＳＧが２から８オリゴペプチド基、好ましくはジペプチド基またはジスルフィド、ヒドラゾン、アセタールもしくはアミナールであり、ＳＧ１が２から８オリゴペプチド基、好ましくはジペプチド基である請求項３１に記載の複合体。
  33. 前記リンカーがグルタミン側鎖に結合しており、下記式を有する請求項３１に記載の複合体。
    Figure 2018528161
     ［式中、
    ｍは０または１であり；
    §は、活性化合物分子への結合を表し、
    §§は前記バインダーペプチドまたはタンパク質への結合を表し、
    Ｌ１は−（ＮＲ１０）ｎ−（Ｇ１）ｏ−Ｇ３−を表し、
    Ｒ１０は−Ｈ、−ＮＨ２またはＣ１−Ｃ３−アルキルを表し；
    Ｇ１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または
    Figure 2018528161
     を表し；
    ｎは０または１であり；
    ｏは０または１であり；
    Ｇ３は結合またはアリーレン基および／または直鎖および／または分岐および／または環状アルキレン基からの１から１００個の炭素原子を有する置換されていても良い直鎖もしくは分岐の炭化水素鎖を表し、それは基−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−Ｓ（＝Ｏ）２−、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＭｅ−、−ＮＨＮＨ−、−Ｓ（＝Ｏ）２−ＮＨＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＮＨ−および−Ｎ−、−Ｏ−および−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）２−（好ましくは
    Figure 2018528161
     ）からなる群から選択される４個以下のヘテロ原子を有する５から１０員の芳香族もしくは非芳香族複素環のうちの１以上によって１回または複数回中断されていても良く、側鎖が存在する場合、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホンアミド、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良く、
    または、下記の基：
    Figure 2018528161
     のうちの一つを表し、
    Ｒｘは−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３−アルキルまたはフェニルを表し、
    Ｌ２は＃１−（ＮＨ）ｐ−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−Ｇ４−ＮＨ−＃２または＃１−（ＮＨ）ｐ−（Ｃ＝Ｏ）ｑ−Ｇ４−Ｏ−ＮＨ−＃２を表し、
    ｐは０または１であり；
    ｑは０または１であり；
    Ｇ４は置換されていても良いアルキルまたはヘテロアルキル鎖を表し、適宜に、前記鎖のいずれかの炭素がアルコキシ、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、−Ｓ−アルキル、−チオール、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｓ−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、アミン、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２で置換されており、
    ＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
    ＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示す。］
  34. 前記炭化水素鎖が下記の基のうちの一つによって中断されている請求項３３に記載の複合体。
    Figure 2018528161
     ［式中、ＸはＨまたはＣ１−１０−アルキル基を表し、それは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＮ−ＮＨ２、スルホン、スルホキシドまたはスルホン酸によって置換されていても良い。］
  35. Ｌ２が下記の基のうちの一つである請求項３１から３４のうちの１以上に記載の複合体。
    Figure 2018528161
     ［式中、
    Ｒｙは−Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−アルキル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＮＨ２であり、
    ＃１は、基Ｌ１への結合箇所を示し、
    ＃２は、バインダーのグルタミン残基への結合箇所を示す。］
  36. Ｒｙが−Ｈまたは−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３である請求項３５に記載の複合体。
  37. Ｒ１またはＲ４が−Ｌ−＃１を表す請求項３５または３６に記載の複合体。
  38. 前記抗ＴＷＥＡＫＲ抗体がアゴニスト抗体である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  39. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、
    ａ．式ＰＹＰＭＸ（配列番号１７１）（ＸはＩまたはＭである。）を含むアミノ酸配列によってコードされる重鎖のＣＤＲ１；
    ｂ．式ＹＩＳＰＳＧＧＸＴＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１７２）（ＸはＳまたはＫである。）を含むアミノ酸配列によってコードされる重鎖のＣＤＲ２；および
    ｃ．式ＧＧＤＴＹＦＤＹＦＤＹ（配列番号１７３）を含むアミノ酸配列によってコードされる重鎖のＣＤＲ３；
    を含む可変重鎖
    および
    ｄ．式ＲＡＳＱＳＩＳＸＹＬＮ（配列番号１７４）（ＸはＧまたはＳである。）を含むアミノ酸配列によってコードされる軽鎖のＣＤＲ１；
    ｅ．式ＸＡＳＳＬＱＳ（配列番号１７５）（ＸはＱ、ＡまたはＮである。）を含むアミノ酸配列によってコードされる軽鎖のＣＤＲ２；および
    ｆ．式ＱＱＳＹＸＸＰＸＩＴ（配列番号１７６）（位置５のＸはＴまたはＳであり、位置６のＸはＴまたはＳであり、位置８のＸはＧまたはＦである。）を含むアミノ酸配列によってコードされる軽鎖のＣＤＲ３
    を含む可変軽鎖
    を含む抗体である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  40. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、
    ａ．配列番号１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｂ．配列番号２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｃ．配列番号３０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号２９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｄ．配列番号４０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号３９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｅ．配列番号５０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号４９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｆ．配列番号６０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号５９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｇ．配列番号７０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号６９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｈ．配列番号８０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号７９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｉ．配列番号９０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号８９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｊ．配列番号１００に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号９９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｋ．配列番号１１０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１０９に示した軽鎖の可変性配列、または
    ｌ．配列番号１２０に示した重鎖の可変性配列、そしてさらに配列番号１１９に示した軽鎖の可変性配列
    を含む抗体である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  41. 前記抗体がＩｇＧ抗体である前記請求項のうちの１以上に記載の複合体。
  42. 好ましくはトリフルオロ酢酸塩の形態での下記式のうちの一つの化合物を、トランスグルタミナーゼを用いてバインダーペプチドまたはタンパク質の残基に結合させ、前記化合物が好ましくはバインダーペプチドまたはタンパク質に関して２から１００倍モル過剰で用いられる、前記請求項のうちの１以上に記載の複合体の製造方法。
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    ［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、ＳＧ、Ｌ１、Ｌ３、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ１０およびＲｙは、請求項１から４１におけるものと同じ意味を有する。］
  43. 下記式のうちの一つの化合物。
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    ［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、ＳＧ、Ｌ１、Ｌ３、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ１０およびＲｙは、請求項１から４１におけるものと同じ意味を有する。］
  44. 下記式のうちの一つによる複合体［式中、Ａｋ３ａ、Ａｋ３ｂ、ＡＤ３ｄ、Ａｋ３ｅは、バインダー、好ましくは抗体を表し、ｎは２から１０、好ましくは２から４、そしてさらに好ましくは２または４を表す。］
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
    Figure 2018528161
  45. 前記バインダーペプチドまたはタンパク質が、抗体または下記式によるバインダーペプチドまたはタンパク質の誘導体を表す請求項１から４４のうちの１以上に記載の複合体。
    Figure 2018528161
  46. 不活性で無毒性の医薬として好適な補助剤と組み合わせて請求項１から４３に記載の複合体または請求項４４もしくは４５に記載の化合物を含む医薬組成物。
  47. 疾患の治療および／または予防方法で使用される請求項１から４３のうちの１以上に記載の複合体または請求項４４もしくは４５に記載の化合物。
  48. 過剰増殖性障害および／または血管新生障害の治療方法で使用される請求項１から４３のうちの１以上に記載の複合体または請求項４４もしくは４５に記載の化合物。
  49. 有効量の少なくとも一つの請求項１から４３のうちの１以上に記載の複合体または請求項４４もしくは４５に記載の化合物を用いる、ヒトおよび動物での過剰増殖性障害および／または血管新生障害の治療および／または予防方法。
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