JP2018008914A - 抗脳腫瘍剤及び脳腫瘍治療用医薬組成物 - Google Patents
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Abstract
【課題】脳腫瘍への特異性が高い新規の抗脳腫瘍剤を提供する。
【解決手段】本発明の抗脳腫瘍剤は、アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
【選択図】なし
【解決手段】本発明の抗脳腫瘍剤は、アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
【選択図】なし
Description
本発明は、抗脳腫瘍剤及び脳腫瘍治療用医薬組成物に関する。
ｍＴＯＲ（ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ）は、ラパマイシンの標的分子として同定された、２種類の異なる複合体として存在するセリン・スレオニンキナーゼである。
ｍＴＯＲ複合体１（ｍＴＯＲＣ１）は、ｍＴＯＲ、Ｒａｐｔｏｒ、ＧβＬ（ｍＬＳＴ８）、及びＤｅｐｔｏｒから構成され、ラパマイシンによって部分的に阻害される。ｍＴＯＲＣ１は、増殖因子、栄養素、又はエネルギーの利用状況を反映する多くのシグナルを統合して、条件が良い時には細胞増殖を促進し、ストレス条件下や条件が良くない時には分解過程を亢進させる。ｍＴＯＲＣ１によるシグナル伝達経路の制御には様々ながん抑制遺伝子、及びがん遺伝子が関わっていることが知られている。
また、ｍＴＯＲ複合体２（ｍＴＯＲＣ２）は、ｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ＧβＬ、Ｓｉｎ１、ＰＲＲ５／Ｐｒｏｔｏｒ−１、及びＤｅｐｔｏｒから構成され、Ａｋｔを活性化することによって細胞の生存を促進する。
ｍＴＯＲは、細胞の栄養状態を反映し、蛋白合成、細胞増殖、血管新生、免疫などを制御する。ｍＴＯＲ阻害剤は、抗癌剤、免疫抑制剤として実用化されている。
ｍＴＯＲ複合体１（ｍＴＯＲＣ１）は、ｍＴＯＲ、Ｒａｐｔｏｒ、ＧβＬ（ｍＬＳＴ８）、及びＤｅｐｔｏｒから構成され、ラパマイシンによって部分的に阻害される。ｍＴＯＲＣ１は、増殖因子、栄養素、又はエネルギーの利用状況を反映する多くのシグナルを統合して、条件が良い時には細胞増殖を促進し、ストレス条件下や条件が良くない時には分解過程を亢進させる。ｍＴＯＲＣ１によるシグナル伝達経路の制御には様々ながん抑制遺伝子、及びがん遺伝子が関わっていることが知られている。
また、ｍＴＯＲ複合体２（ｍＴＯＲＣ２）は、ｍＴＯＲ、Ｒｉｃｔｏｒ、ＧβＬ、Ｓｉｎ１、ＰＲＲ５／Ｐｒｏｔｏｒ−１、及びＤｅｐｔｏｒから構成され、Ａｋｔを活性化することによって細胞の生存を促進する。
ｍＴＯＲは、細胞の栄養状態を反映し、蛋白合成、細胞増殖、血管新生、免疫などを制御する。ｍＴＯＲ阻害剤は、抗癌剤、免疫抑制剤として実用化されている。
膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ；ＧＢＭ）は、ヒトにおける星状細胞系腫瘍のうちグレードＩＶに分類される、最も悪性度の高い神経膠腫（グリオーマ）である。また、ｍＴＯＲＣ１の活性が高いほど、神経膠腫（グリオーマ）の予後が悪いことが知られている（例えば、非特許文献１〜３参照。）。ｍＴＯＲＣ１によるシグナル伝達経路は神経膠腫（グリオーマ）の悪性化の進行に関与していることは明らかであるが、ラパマイシン及びその類似体等のｍＴＯＲＣ１阻害剤は、ＧＢＭの治療に有効ではない。
よって、Ｐ１３Ｋの活性化を刺激し、腫瘍細胞の生存を助けるフィードバックループがｍＴＯＲによるシグナル伝達経路に存在すると考えられる。このことから、基質のリン酸化を完全に阻害するＡＴＰ競合ＴＯＲ阻害剤及びＰ１３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤が開発されている（例えば、非特許文献４参照。）。
Chakravarti, A., et al., "The prognostic significance of phosphatidylinositol 3-kinase pathway activation in human gliomas", J. Clin. Oncol., vol.22, p1926-1933、2004.
Yang, J., et al., "Mammalian target of rapamycin signaling pathway contributes to glioma progression and patients' prognosis", The Journal of surgical research, vol.168, p97-102, 2011.
Korkolopoulou, P., et al., "Phosphorylated 4E-binding protein 1 (p-4E-BP1): a novel prognostic marker in human astrocytomas", Histopathology, vol.61, p293-305, 2012.
Thoreen, C. C., et al., "An ATP-competitive mammalian target of rapamycin inhibitor reveals rapamycin-resistant functions of mTORC1", J. Biol. Chem., vol.284, p8023-8032, 2009.
非特許文献４に記載されているＡＴＰ競合ＴＯＲ阻害剤及びＰ１３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤は、望ましくない副作用を有する可能性があり、正常組織に重大な損傷を引き起こす可能性がある。
このため、脳腫瘍への特異性が高く、脳腫瘍の治療に有効な治療薬が求められていた。
このため、脳腫瘍への特異性が高く、脳腫瘍の治療に有効な治療薬が求められていた。
本発明は、上記事情を鑑みてなされたものであり、脳腫瘍への特異性が高い新規の抗脳腫瘍剤を提供する。
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、発明者が独自に開発したマウスの脳腫瘍モデルを用いた実験系により、脳腫瘍の治療に有効な化合物が複数見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下の態様を含む。
［１］アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有することを特徴とする抗脳腫瘍剤。
［２］脳腫瘍が神経膠腫（グリオーマ）である［１］に記載の抗脳腫瘍剤。
［３］［１］又は［２］に記載の抗脳腫瘍剤及び薬学的に許容できる担体を含むことを特徴とする脳腫瘍治療用医薬組成物。
［１］アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有することを特徴とする抗脳腫瘍剤。
［２］脳腫瘍が神経膠腫（グリオーマ）である［１］に記載の抗脳腫瘍剤。
［３］［１］又は［２］に記載の抗脳腫瘍剤及び薬学的に許容できる担体を含むことを特徴とする脳腫瘍治療用医薬組成物。
本発明によれば、脳腫瘍への特異性が高い抗脳腫瘍剤を提供することができる。
＜＜抗脳腫瘍剤＞＞
一実施形態において、本発明は、アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する抗脳腫瘍剤を提供する。
一実施形態において、本発明は、アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する抗脳腫瘍剤を提供する。
本実施形態の抗脳腫瘍剤は、脳腫瘍への特異性が高く、脳腫瘍、特に悪性度の高い脳腫瘍を効果的に治療することができる。
本発明者は、独自に開発したマウスの脳腫瘍モデルを用いた実験系（参考文献：Hirao,A.,et al., “Loss of Tsc1 accelerates malignant gliomagenesis when combined with oncogenic signals”, J. Biochem., vol.15, no.4, p227-233, 2014.）により、脳腫瘍に有効な化合物を複数見出し、本発明を完成させた。
上記実験系による脳腫瘍の治療に有効な化合物のスクリーニング方法について、以下に詳細に説明する。
まず、マウスのグリオーマ細胞（以下、「コントロール細胞」と称する場合がある。）と、マウスのＴｓｃ１遺伝子が欠損し、ｍＴＯＲが活性化されたグリオーマ細胞（以下、「Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞」と称する場合がある。）と、をそれぞれ同じ細胞数となるように播種する。ｍＴＯＲＣ１の活性が高いほど、神経膠腫（グリオーマ）の予後が悪いことが知られていることから、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞は、より悪性度の高いグリオーマ（例えば、膠芽腫（グリオブラストーマ）等）のモデル細胞である。
上記実験系による脳腫瘍の治療に有効な化合物のスクリーニング方法について、以下に詳細に説明する。
まず、マウスのグリオーマ細胞（以下、「コントロール細胞」と称する場合がある。）と、マウスのＴｓｃ１遺伝子が欠損し、ｍＴＯＲが活性化されたグリオーマ細胞（以下、「Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞」と称する場合がある。）と、をそれぞれ同じ細胞数となるように播種する。ｍＴＯＲＣ１の活性が高いほど、神経膠腫（グリオーマ）の予後が悪いことが知られていることから、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞は、より悪性度の高いグリオーマ（例えば、膠芽腫（グリオブラストーマ）等）のモデル細胞である。
次いで、コントロール細胞及びＴｓｃ１遺伝子欠損細胞に被検化合物を添加し、４８時間程度培養する。次いで、被検化合物処理後のコントロール細胞及びＴｓｃ１遺伝子欠損細胞での細胞生存率（％）を算出する。
ここで、「生存率（％）」とは、［（特定の被検化合物処理後の生存細胞数）÷（特定の被検化合物未処理での生存細胞数）×１００］で算出された値である。例えば、化合物Ａ未処理での生存細胞数が１００個であり、化合物Ａ処理後の生存細胞数が８０個である場合、生存率は８０％となる。
次いで、それぞれの被検化合物において、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞における生存率（％）とコントロール細胞における生存率（％）とを比較し、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞における生存率（％）が低い被検化合物をスクリーニングする。
本発明者は、スクリーニングした被検化合物のうち、１３種類の被検化合物では、上記実験系によるスクリーニング方法において、高い再現性が得られることを明らかにした。さらに、１３種類の被検化合物のうち、アモキサピン、モキシフロキサシン、及びクリンダマイシンの３つの化合物が抗脳腫瘍剤として有効であることを初めて明らかにし（後述の実施例１及び図１（Ａ）〜（Ｃ）参照。）、本発明を完成するに至った。
ここで、「生存率（％）」とは、［（特定の被検化合物処理後の生存細胞数）÷（特定の被検化合物未処理での生存細胞数）×１００］で算出された値である。例えば、化合物Ａ未処理での生存細胞数が１００個であり、化合物Ａ処理後の生存細胞数が８０個である場合、生存率は８０％となる。
次いで、それぞれの被検化合物において、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞における生存率（％）とコントロール細胞における生存率（％）とを比較し、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞における生存率（％）が低い被検化合物をスクリーニングする。
本発明者は、スクリーニングした被検化合物のうち、１３種類の被検化合物では、上記実験系によるスクリーニング方法において、高い再現性が得られることを明らかにした。さらに、１３種類の被検化合物のうち、アモキサピン、モキシフロキサシン、及びクリンダマイシンの３つの化合物が抗脳腫瘍剤として有効であることを初めて明らかにし（後述の実施例１及び図１（Ａ）〜（Ｃ）参照。）、本発明を完成するに至った。
＜アモキサピン＞
一実施形態において、本発明の抗脳腫瘍剤は、アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
一実施形態において、本発明の抗脳腫瘍剤は、アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
アモキサピンは、従来、抗うつ薬として用いられる有機化合物の一種である。アモキサピンの構造式は、下記式（１）で表される化合物である。第二世代の三環系抗うつ薬として知られ、抗コリン作用が軽減されている。うつ病、抑うつ状態、パニック障害、過食症、線維筋痛症等の治療に用いられる。
本発明者により、アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩が抗脳腫瘍剤として有効であることが初めて明らかとなった。
本発明者により、アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩が抗脳腫瘍剤として有効であることが初めて明らかとなった。
本明細書において、「薬学的に許容できる」とは、被検動物に適切に投与された場合に、概して、副作用を起こさない程度を意味する。
塩としては、薬学的に許容できる酸付加塩又は塩基性塩が好ましい。
酸付加塩としては、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸等の無機酸との塩；酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸等の有機酸との塩が挙げられる。
塩基性塩としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム等の無機塩基との塩；カフェイン、ピペリジン、トリメチルアミン、ピリジン等の有機塩基との塩が挙げられる。
酸付加塩としては、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸等の無機酸との塩；酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸等の有機酸との塩が挙げられる。
塩基性塩としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム等の無機塩基との塩；カフェイン、ピペリジン、トリメチルアミン、ピリジン等の有機塩基との塩が挙げられる。
本実施形態の抗脳腫瘍剤は、他の成分として、ＰＢＳ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ等の緩衝液、アジ化ナトリウム、グリセロール等の添加剤を含んでいてもよい。
本実施形態の抗脳腫瘍剤を用いて、脳腫瘍、特に悪性度の高い脳腫瘍の治療方法を提供することができる。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、ヒトが好ましい。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、ヒトが好ましい。
本実施形態の抗脳腫瘍剤の治療対象となる脳腫瘍は、頭蓋内に発生する全ての腫瘍が含まれ、血液、肺や胃など他の臓器由来の腫瘍であっても、転移により頭蓋内で増殖する腫瘍であれば含まれる。
前記脳腫瘍としては、発生頻度の高く代表的な神経膠腫（グリオーマ）、下垂体腺腫、神経鞘腫等が挙げられる。中でも、本実施形態の抗脳腫瘍剤の治療対象となる脳腫瘍は、神経膠腫（グリオーマ）であることが好ましい。
前記脳腫瘍としては、発生頻度の高く代表的な神経膠腫（グリオーマ）、下垂体腺腫、神経鞘腫等が挙げられる。中でも、本実施形態の抗脳腫瘍剤の治療対象となる脳腫瘍は、神経膠腫（グリオーマ）であることが好ましい。
一般に、「神経膠腫（グリオーマ）」とは、神経膠（グリア）細胞から発生する腫瘍を意味する。また、「神経膠（グリア）細胞」とは、神経系（脳及び脊髄等）を構成する神経細胞ではない細胞の総称であり、神経に栄養を与え、神経の活動を支える役割を果たしている。
グリオーマには、様々な種類及び悪性度があり、例えば、表１に示すように分類できる。
グリオーマには、様々な種類及び悪性度があり、例えば、表１に示すように分類できる。
表１において、「悪性度」とは、グレード（ｇｒａｄｅ）ともいい、細胞の顕微鏡観察所見の異常、又は増殖及び転移速度の予測に基づいて評価されるものである。悪性度は、表２に示すように分類できる（参考文献：中里洋一、脳腫瘍の新ＷＨＯ分類、脳神経外科 ３６：４７３−４９１，２００８）。
表２において、ＭＩＢ−１とは、抗Ｋｉ−６７抗体のクローンの１つであって、増殖の程度を表わす細胞増殖マーカーである。また、Ｋｉ−６７は乳癌、胃癌、大腸癌、子宮癌など多くの腫瘍において、分化度、血管侵襲及びリンパ節転移といった腫瘍の悪性度や予後とよく相関することが知られており、細胞増殖マーカーとして非常に有用である。
上述したグリオーマは、様々な種類又は悪性度のグリオーマが混ざっていることが多く、同じ病名でも抗がん剤の効果、放射線治療の効果、生命予後等が異なる。
本実施形態の抗脳腫瘍剤は、上述した全ての種類又は悪性度のグリオーマを効果的に治療することができ、特に、高悪性度のグリオーマであるグレード３、４の膠芽腫（グリオブラストーマ）を効果的に治療することができる。
本実施形態の抗脳腫瘍剤は、上述した全ての種類又は悪性度のグリオーマを効果的に治療することができ、特に、高悪性度のグリオーマであるグレード３、４の膠芽腫（グリオブラストーマ）を効果的に治療することができる。
＜モキシフロキサシン＞
他の実施形態において、本発明の抗脳腫瘍剤は、モキシフロキサシン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
他の実施形態において、本発明の抗脳腫瘍剤は、モキシフロキサシン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
モキシフロキサシンは、従来、ニューキノロン系抗菌薬として用いられる有機化合物の一種である。モキシフロキサシンの構造式は、下記式（２）で表される化合物である。表在性皮膚感染症、深在性皮膚感染症、外傷・熱傷及び手術創等の二次感染、咽頭及び喉頭炎、扁桃炎、急性気管支炎、肺炎、慢性呼吸器病変の二次感染、副鼻腔炎、眼瞼炎、涙嚢炎、麦粒腫、結膜炎、瞼板腺炎、角膜炎（角膜潰瘍を含む）等の治療に用いられている。
本発明者により、モキシフロキサシン又はその薬学的に許容できる塩が抗脳腫瘍剤として有効であることが初めて明らかとなった。
本発明者により、モキシフロキサシン又はその薬学的に許容できる塩が抗脳腫瘍剤として有効であることが初めて明らかとなった。
塩としては、薬学的に許容できる酸付加塩又は塩基性塩が好ましい。
酸付加塩及び塩基性塩としては、上述の＜アモキサピン＞において例示されたものと同様のものが挙げられる。
酸付加塩及び塩基性塩としては、上述の＜アモキサピン＞において例示されたものと同様のものが挙げられる。
本実施形態の抗脳腫瘍剤は、他の成分として、ＰＢＳ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ等の緩衝液、アジ化ナトリウム、グリセロール等の添加剤を含んでいてもよい。
本実施形態の抗脳腫瘍剤を用いて、脳腫瘍、特に悪性度の高い脳腫瘍の治療方法を提供することができる。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、ヒトが好ましい。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、ヒトが好ましい。
本実施形態の抗脳腫瘍剤の治療対象となる脳腫瘍は、上述の＜アモキサピン＞において例示されたものと同様のものが挙げられる。中でも、本実施形態の抗脳腫瘍剤の治療対象となる脳腫瘍は、グリオーマであることが好ましい。
本実施形態の抗脳腫瘍剤は、上述の＜アモキサピン＞において例示された全ての種類又は悪性度のグリオーマを効果的に治療することができ、特に、高悪性度のグリオーマであるグレード３、４の膠芽腫（グリオブラストーマ）を効果的に治療することができる。
＜クリンダマイシン＞
他の実施形態において、本発明の抗脳腫瘍剤は、クリンダマイシン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
他の実施形態において、本発明の抗脳腫瘍剤は、クリンダマイシン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有する。
クリンダマイシンは、従来、リンコマイシン系抗菌薬として用いられる有機化合物の一種である。クリンダマイシンの構造式は、下記式（３）で表される化合物である。誤嚥性肺炎（嚥下性肺炎）、口腔内感染症、ペニシリンアレルギーがある場合の咽頭炎や副鼻腔炎、腹腔内感染症、ＣＡ−ＭＲＳＡ（市中獲得型ＭＲＳＡ）感染症、表在性皮膚感染症、深在性皮膚感染症等の治療に用いられている。
本発明者により、クリンダマイシン又はその薬学的に許容できる塩が抗脳腫瘍剤として有効であることが初めて明らかとなった。
本発明者により、クリンダマイシン又はその薬学的に許容できる塩が抗脳腫瘍剤として有効であることが初めて明らかとなった。
塩としては、薬学的に許容できる酸付加塩又は塩基性塩が好ましい。
酸付加塩及び塩基性塩としては、上述の＜アモキサピン＞において例示されたものと同様のものが挙げられる。
酸付加塩及び塩基性塩としては、上述の＜アモキサピン＞において例示されたものと同様のものが挙げられる。
本実施形態の抗脳腫瘍剤は、他の成分として、ＰＢＳ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ等の緩衝液、アジ化ナトリウム、グリセロール等の添加剤を含んでいてもよい。
本実施形態の抗脳腫瘍剤を用いて、脳腫瘍、特に悪性度の高い脳腫瘍の治療方法を提供することができる。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、ヒトが好ましい。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、ヒトが好ましい。
本実施形態の抗脳腫瘍剤の治療対象となる脳腫瘍は、上述の＜アモキサピン＞において例示されたものと同様のものが挙げられる。中でも、本実施形態の抗脳腫瘍剤の治療対象となる脳腫瘍は、グリオーマであることが好ましい。
本実施形態の抗脳腫瘍剤は、上述の＜アモキサピン＞において例示された全ての種類又は悪性度のグリオーマを効果的に治療することができ、特に、高悪性度のグリオーマであるグレード３、４の膠芽腫（グリオブラストーマ）を効果的に治療することができる。
＜＜脳腫瘍治療用医薬組成物＞＞
一実施形態において、本発明は、上述の抗脳腫瘍剤及び薬学的に許容できる担体を含む脳腫瘍治療用医薬組成物を提供する。
一実施形態において、本発明は、上述の抗脳腫瘍剤及び薬学的に許容できる担体を含む脳腫瘍治療用医薬組成物を提供する。
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物によれば、脳腫瘍、特に悪性度の高い脳腫瘍を効果的に治療することができる。
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物の治療対象となる脳腫瘍は、上述の＜アモキサピン＞において例示されたものと同様のものが挙げられる。中でも、本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物の治療対象となる脳腫瘍は、グリオーマであることが好ましい。
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物は、上述の＜アモキサピン＞において例示された全ての種類又は悪性度のグリオーマを効果的に治療することができ、特に、高悪性度のグリオーマであるグレード３、４の膠芽腫（グリオブラストーマ）を効果的に治療することができる。
＜組成成分＞
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物は、治療的に有効量の上述の抗脳腫瘍剤及び薬学的に許容されうる担体を含む。薬学的に許容されうる担体としては、通常製剤に用いられる賦形剤、希釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味料、粘稠剤、矯味剤、溶解補助剤、添加剤等が挙げられる。これら担体の１種以上を用いることにより、注射剤、液剤、カプセル剤、懸濁剤、乳剤、又はシロップ剤等の形態の医薬組成物を調製することができる。
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物は、治療的に有効量の上述の抗脳腫瘍剤及び薬学的に許容されうる担体を含む。薬学的に許容されうる担体としては、通常製剤に用いられる賦形剤、希釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味料、粘稠剤、矯味剤、溶解補助剤、添加剤等が挙げられる。これら担体の１種以上を用いることにより、注射剤、液剤、カプセル剤、懸濁剤、乳剤、又はシロップ剤等の形態の医薬組成物を調製することができる。
また、担体としてコロイド分散系を用いることもできる。コロイド分散系は、上述の抗脳腫瘍剤の生体内安定性を高める効果や、特定の臓器、組織、又は細胞へ、上述の抗脳腫瘍剤の移行性を高める効果が期待される。コロイド分散系としては、例えばポリエチレングリコール、高分子複合体、高分子凝集体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、水中油系の乳化剤、ミセル、混合ミセル、リポソームを包含する脂質を挙げることができ、特定の臓器、組織、又は細胞へ、上述の抗脳腫瘍剤を効率的に輸送する効果のある、リポソームや人工膜の小胞が好ましい。
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物における製剤化の例としては、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤として経口的に使用されるものが挙げられる。
または、水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用されるものが挙げられる。更には、薬理学上許容される担体又は希釈剤、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化されたものが挙げられる。
または、水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用されるものが挙げられる。更には、薬理学上許容される担体又は希釈剤、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化されたものが挙げられる。
錠剤、カプセル剤に混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖又はサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油又はチェリーのような香味剤が用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記の材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物が注射剤である場合、無菌組成物は、例えば、注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。また、注射用の水溶液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム等が挙げられ、適当な溶解補助剤（例えば、アルコール（具体的には、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等））、又は非イオン性界面活性剤（例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０等）と併用してもよい。
また、油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油等が挙げられ、溶解補助剤として、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等と併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液等）、無痛化剤（例えば、塩酸プロカイン等）、安定剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノール等）、又は酸化防止剤をさらに配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
また、注射剤は、非水性の希釈剤（例えば、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、エタノール等のアルコール類等）、懸濁剤、又は乳濁剤として調製することもできる。このような注射剤の無菌化は、フィルターによる濾過滅菌、殺菌剤等の配合により行うことができる。注射剤は、用事調製の形態として製造することができる。即ち、凍結乾燥法などによって、無菌の固体組成物とし、使用前に注射用蒸留水又は他の溶媒に溶解して使用することができる。
本実施形態の医薬組成物は、単独で用いてもよく、その他の脳腫瘍治療用医薬組成物と組み合わせて用いてもよい。
＜投与量及び投与方法＞
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物は、患者又は患畜の年齢、性別、体重、症状、治療方法、投与方法、処理時間等を勘案して適宜調節される。また、投与方法としては、例えば、動脈内注射、静脈内注射、皮下注射、鼻腔内的、腹腔内的、経気管支的、筋内的、経皮的、または経口的に当業者に公知の方法が挙げられる。
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物は、患者又は患畜の年齢、性別、体重、症状、治療方法、投与方法、処理時間等を勘案して適宜調節される。また、投与方法としては、例えば、動脈内注射、静脈内注射、皮下注射、鼻腔内的、腹腔内的、経気管支的、筋内的、経皮的、または経口的に当業者に公知の方法が挙げられる。
本実施形態の脳腫瘍治療用医薬組成物に含まれる上述の抗脳腫瘍剤の投与量は、症状及び抗脳腫瘍剤に含まれる有効成分（アモキサピン、モキシフロキサシン、又はクリンダマイシン）の種類により差異はあるが、有効成分がアモキサピンである場合、成人（体重６０ｋｇ）１日あたり２５〜３００ｍｇを経口投与することが挙げられる。また、有効成分がモキシフロキサシンである場合、成人（体重６０ｋｇ）１日あたり２００〜４００ｍｇを経口投与することが挙げられる。また、有効成分がクリンダマイシンである場合、成人（体重６０ｋｇ）１日あたり６００〜１，２００ｍｇ（力価）を点滴静注することが挙げられる。抗脳腫瘍剤は、上記の投与量となるように１日に１回投与してもよいし、１日に複数回投与してもよい。
＜治療方法＞
本発明の一側面は、脳腫瘍の治療のための上述の抗脳腫瘍剤を含む医薬組成物を提供する。
また、本発明の一側面は、治療的に有効量の上述の抗脳腫瘍剤、並びに薬学的に許容されうる担体又は希釈剤を含む脳腫瘍治療用医薬組成物を提供する。
また、本発明の一側面は、前記医薬組成物を含む、脳腫瘍の治療剤を提供する。
また、本発明の一側面は、脳腫瘍の治療剤を製造するための上述の抗脳腫瘍剤の使用を提供する。
また、本発明の一側面は、上述の抗脳腫瘍剤の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、脳腫瘍の治療方法を提供する。
本発明の一側面は、脳腫瘍の治療のための上述の抗脳腫瘍剤を含む医薬組成物を提供する。
また、本発明の一側面は、治療的に有効量の上述の抗脳腫瘍剤、並びに薬学的に許容されうる担体又は希釈剤を含む脳腫瘍治療用医薬組成物を提供する。
また、本発明の一側面は、前記医薬組成物を含む、脳腫瘍の治療剤を提供する。
また、本発明の一側面は、脳腫瘍の治療剤を製造するための上述の抗脳腫瘍剤の使用を提供する。
また、本発明の一側面は、上述の抗脳腫瘍剤の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、脳腫瘍の治療方法を提供する。
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［実施例１］抗脳腫瘍剤として有効な化合物のスクリーニング
（１）マウスＴｓｃ１遺伝子欠損細胞の作製
まず、Ｔｓｃ１ｆ／ｆ；Ｒｏｓａ２６−ＣｒｅＥＲＴ２マウスの脳室下帯（ｓｕｂｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｚｏｎｅ：ＳＶＺ）から神経幹／前駆細胞 （ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ： ＮＳＰＣ）を単離した。次いで、ＮＳＰＣをＣｏｓｔａｒ（登録商標） Ｕｌｔｒａ−ＬＯＷ 付着性マルチウェルプレート（コースター社製）に播種し、血清不含のＮＳＰＣ培地を用いて培養した。ＮＳＰＣ培地の組成成分としては、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（ライフテクノロジー社製）、Ｂ２７（登録商標）サプリメント（ライフテクノロジー社製）、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、０．５％ストレプトマイシン（ライフテクノロジー社製））、２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）である。
（１）マウスＴｓｃ１遺伝子欠損細胞の作製
まず、Ｔｓｃ１ｆ／ｆ；Ｒｏｓａ２６−ＣｒｅＥＲＴ２マウスの脳室下帯（ｓｕｂｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｚｏｎｅ：ＳＶＺ）から神経幹／前駆細胞 （ｎｅｕｒａｌ ｓｔｅｍ／ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ： ＮＳＰＣ）を単離した。次いで、ＮＳＰＣをＣｏｓｔａｒ（登録商標） Ｕｌｔｒａ−ＬＯＷ 付着性マルチウェルプレート（コースター社製）に播種し、血清不含のＮＳＰＣ培地を用いて培養した。ＮＳＰＣ培地の組成成分としては、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（ライフテクノロジー社製）、Ｂ２７（登録商標）サプリメント（ライフテクノロジー社製）、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、０．５％ストレプトマイシン（ライフテクノロジー社製））、２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）である。
次いで、レトロウイルス産生用パッケージング細胞に、ＥＧＦＲｖＩＩＩ及びヒト化されたクサビラオレンジ（ｈｕＫＯ）の発現ベクターを導入した。次いで、導入後の培養上清を６，０００×ｇ、１６時間遠心し、ＥＧＦＲｖＩＩＩ及びｈｕＫＯを発現するレトロウイルスを得た。
次いで、ＮＳＰＣにＥＧＦＲｖＩＩＩ及びｈｕＫＯを発現するレトロウイルスを添加し、２４時間培養し、感染させた。次いで、形質転換されたＮＳＰＣについて、単一の細胞を分離し、５％ＦＢＳ含有ＰＢＳに再懸濁した。次いで、形質転換されたＮＳＰＣのうち１×１０４個を、麻酔をしたＢａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスの脳内に移植した。
次いで、脳内に細胞を移植されたマウスから腫瘍組織を摘出し、Ｂｒａｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて、グリオーマ細胞を分離した。次いで、分離されたグリオーマ細胞において、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩＩを用いて、ｈｕＫＯ＋細胞を選別した。
次いで、０．１μＭ ４−ｈｙｄｒｏｘｙｔａｍｏｘｉｆｅｎ （４−ＯＨＴ）（シグマ社製）含有完全ＮＳＰＣ培地（２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）含有）を用いて、ｈｕＫＯ＋細胞を３日間培養した。次いで、培養細胞を洗浄して４−ＯＨＴを取り除き、完全ＮＳＰＣ培地（２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）含有）でさらに２日間培養して、Ｔｓｃ１遺伝子欠損グリオーマ細胞（以下、「Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞」と称する場合がある。）を得た。また、コントロールとして、４−ＯＨＴ処理をしていないグリオーマ細胞（以下、「コントロール細胞」と称する場合がある。）も準備した。
（２）抗脳腫瘍剤として有効な化合物のスクリーニング
次いで、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞をそれぞれ同じ細胞数となるように３８４ウェルプレート（コーニング社製）に播種し、ドラッグライブラリに登録されている複数の化合物を、１μＭ、５μＭ、及び２０μＭと濃度をふって添加し、４８時間培養した。使用したドラックライブラリとしては、ＦＤＡ−ａｐｐｒｏｖｅｄ ｄｒｕｇ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ−ＭＬ−２８４１Ｊ０１００）、ＩＣＣＢ ｋｎｏｗｎ ｂｉｏａｃｔｉｖｅｓ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ−ＢＭＬ−２８４０Ｊ０１００）、ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ−ＢＭＬ−２８３２Ｊ０１００）、ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ−ＢＭＬ−２８０３Ｊ０１００） 、及び ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ―ＢＭＬ−２８３４Ｊ０１００）である。また、細胞生存率を算出するために、化合物未処理のＴｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞も準備した。
次いで、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞をそれぞれ同じ細胞数となるように３８４ウェルプレート（コーニング社製）に播種し、ドラッグライブラリに登録されている複数の化合物を、１μＭ、５μＭ、及び２０μＭと濃度をふって添加し、４８時間培養した。使用したドラックライブラリとしては、ＦＤＡ−ａｐｐｒｏｖｅｄ ｄｒｕｇ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ−ＭＬ−２８４１Ｊ０１００）、ＩＣＣＢ ｋｎｏｗｎ ｂｉｏａｃｔｉｖｅｓ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ−ＢＭＬ−２８４０Ｊ０１００）、ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ−ＢＭＬ−２８３２Ｊ０１００）、ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ−ＢＭＬ−２８０３Ｊ０１００） 、及び ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｌｉｂｒａｒｙ（ＥＮＺＯ；ＣＢ―ＢＭＬ−２８３４Ｊ０１００）である。また、細胞生存率を算出するために、化合物未処理のＴｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞も準備した。
次いで、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ（同仁化学研究所製）を用いて、生存している細胞を測定した。具体的には、ＷＳＴ−８剤を用いて３０分間インキュベーションし、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｐｒｏ２００（Ｔｅｃａｎ社製）を用いて、４５０ｎｍでの吸光度を測定した。化合物未処理のＴｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞における４５０ｎｍでの吸光度と比較することで、細胞生存率を算出した。
この結果、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞での細胞生存率が、コントロール細胞での細胞生存率での細胞生存率よりも低くなる化合物が３７種類得られた（図示せず。）。
さらに、そのうち、１３種類の化合物について、高い再現性が得られた。中でも、アモキサピン、モキシフロキサシン、及びクリンダマイシンの３つの化合物が抗脳腫瘍剤として有効であることが初めて明らかとなった。
アモキサピン、モキシフロキサシン、及びクリンダマイシンを用いた場合におけるＴｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞での細胞生存率を図１（Ａ）〜（Ｃ）に示す。図１（Ａ）〜（Ｃ）において、横軸はそれぞれの化合物の細胞に添加した濃度を示し、縦軸は、細胞生存率（％）を示す。また、図１（Ａ）〜（Ｃ）において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、コントロール細胞を示し、「Ｔｓｃ１−／−」はＴｓｃ１遺伝子欠損細胞を示す。
さらに、そのうち、１３種類の化合物について、高い再現性が得られた。中でも、アモキサピン、モキシフロキサシン、及びクリンダマイシンの３つの化合物が抗脳腫瘍剤として有効であることが初めて明らかとなった。
アモキサピン、モキシフロキサシン、及びクリンダマイシンを用いた場合におけるＴｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞での細胞生存率を図１（Ａ）〜（Ｃ）に示す。図１（Ａ）〜（Ｃ）において、横軸はそれぞれの化合物の細胞に添加した濃度を示し、縦軸は、細胞生存率（％）を示す。また、図１（Ａ）〜（Ｃ）において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、コントロール細胞を示し、「Ｔｓｃ１−／−」はＴｓｃ１遺伝子欠損細胞を示す。
図１（Ａ）〜（Ｃ）から、いずれの化合物においても、Ｔｓｃ１遺伝子欠損細胞での生存率が、コントロール細胞での生存率よりも低く、ｍＴＯＲが活性化されているＴｓｃ１遺伝子欠損細胞、すなわちより悪性度の高いグリオーマ細胞に有効な抗腫瘍剤となり得る可能性が示唆された。
［実施例２］アモキサピン処理したヒト膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ；ＧＢＭ）患者由来細胞株におけるミトコンドリア膜電位測定試験
（１）アモキサピン処理
細胞としては、ヒト膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ；ＧＢＭ）患者由来細胞株であるＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４を用いた。次いで、２０μＭのアモキサピンを添加、又は無添加条件下において、ＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４をそれぞれ３０分間培養した。
（１）アモキサピン処理
細胞としては、ヒト膠芽腫（ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ；ＧＢＭ）患者由来細胞株であるＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４を用いた。次いで、２０μＭのアモキサピンを添加、又は無添加条件下において、ＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４をそれぞれ３０分間培養した。
（２）ミトコンドリア膜電位測定
次いで、アモキサピン処理及び未処理のＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４に、ＪＣ−１０ ｄｙｅ ｂｕｆｆｅｒ（アブカム社製）を添加し、５％ＣＯ２条件下で、３７℃、３０分間インキュベーションした。ＪＣ−１０ ｄｙｅは、ミトコンドリア膜電位依存的な蓄積を呈し、これは緑色（約５２９ｎｍ）から赤色（約５９０ｎｍ）への蛍光波長シフトによって示される。このため、ミトコンドリアの脱分極は、赤色／緑色の蛍光強度比の減少によって示される。
次いで、ＰＢＳで洗浄し、５３０ｎｍ及び５８５ｎｍのバンドパスフォルターを装着したフローサイトメーターにより４８８ｎｍの励起波長で解析した。結果を図２（Ａ）及び（Ｂ）に示す。図２（Ａ）及び（Ｂ）において、「Ａｍｏｘａｐｉｎｅ（−）」とはアモキサピン未処理のＴＧＳ−０１又はＴＧＳ−０４を示し、「Ａｍｏｘａｐｉｎｅ（＋）」とはアモキサピン処理のＴＧＳ−０１又はＴＧＳ−０４を示す。
次いで、アモキサピン処理及び未処理のＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４に、ＪＣ−１０ ｄｙｅ ｂｕｆｆｅｒ（アブカム社製）を添加し、５％ＣＯ２条件下で、３７℃、３０分間インキュベーションした。ＪＣ−１０ ｄｙｅは、ミトコンドリア膜電位依存的な蓄積を呈し、これは緑色（約５２９ｎｍ）から赤色（約５９０ｎｍ）への蛍光波長シフトによって示される。このため、ミトコンドリアの脱分極は、赤色／緑色の蛍光強度比の減少によって示される。
次いで、ＰＢＳで洗浄し、５３０ｎｍ及び５８５ｎｍのバンドパスフォルターを装着したフローサイトメーターにより４８８ｎｍの励起波長で解析した。結果を図２（Ａ）及び（Ｂ）に示す。図２（Ａ）及び（Ｂ）において、「Ａｍｏｘａｐｉｎｅ（−）」とはアモキサピン未処理のＴＧＳ−０１又はＴＧＳ−０４を示し、「Ａｍｏｘａｐｉｎｅ（＋）」とはアモキサピン処理のＴＧＳ−０１又はＴＧＳ−０４を示す。
図２（Ａ）及び（Ｂ）から、アモキサピン処理によりミトコンドリアの膜電位が変化することが確かめられた。本発明者は、ｍＴＯＲが活性化されているグリオーマ細胞では、ミトコンドリアでの酸化的リン酸化をエネルギー源としていることをすでに確かめている。よって、膜電位を変化させ、酸化的リン酸化を阻害するアモキサピンは、ｍＴＯＲが活性化されているグリオーマ細胞、すなわち悪性度の高いグリオーマ細胞に有効な抗腫瘍剤となり得ることが示唆された。
［実施例３］アモキサピン処理したヒトＧＢＭ患者由来細胞株及びマウスＧＢＭモデル細胞におけるＡＴＰの定量試験
（１）アモキサピン処理
細胞としては、ヒトＧＢＭ患者由来細胞株ＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４、並びに実施例１で作製したＴｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞を用いた。
まず、それぞれの細胞を９６ウェル又は３８４ウェル低接着プレート（コーニング社製）に播種し、ＤＭＳＯ、又は１μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、若しくは５０μＭのアモキサピン添加し、４８時間培養した。
（１）アモキサピン処理
細胞としては、ヒトＧＢＭ患者由来細胞株ＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４、並びに実施例１で作製したＴｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞を用いた。
まず、それぞれの細胞を９６ウェル又は３８４ウェル低接着プレート（コーニング社製）に播種し、ＤＭＳＯ、又は１μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、若しくは５０μＭのアモキサピン添加し、４８時間培養した。
（２）ＡＴＰの定量
次いで、それぞれの細胞に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（プロメガ社製）を添加し、撹拌して１０分間静置した。次いで、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｐｒｏ２００（Ｔｅｃａｎ社製）を用いて、発光を検出し、細胞内在性のＡＴＰ量を測定した。結果を図３（Ａ）〜（Ｃ）に示す。図３（Ａ）〜（Ｃ）において、横軸はＤＭＳＯ、又はアモキサピンの濃度を示し、縦軸は発光強度を示す。また、図（Ｃ）において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、コントロール細胞を示し、「Ｔｓｃ１−／−」はＴｓｃ１遺伝子欠損細胞を示す。
次いで、それぞれの細胞に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（プロメガ社製）を添加し、撹拌して１０分間静置した。次いで、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｐｒｏ２００（Ｔｅｃａｎ社製）を用いて、発光を検出し、細胞内在性のＡＴＰ量を測定した。結果を図３（Ａ）〜（Ｃ）に示す。図３（Ａ）〜（Ｃ）において、横軸はＤＭＳＯ、又はアモキサピンの濃度を示し、縦軸は発光強度を示す。また、図（Ｃ）において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、コントロール細胞を示し、「Ｔｓｃ１−／−」はＴｓｃ１遺伝子欠損細胞を示す。
図３（Ａ）及び（Ｂ）から、アモキサピンの濃度が２０μＭ以上において、細胞内在性のＡＴＰ量が低下しており、図３（Ｃ）から、アモキサピンの濃度が５０μＭ以上において、細胞内在性のＡＴＰ量が低下していた。この差は、ヒトとマウスとの違いによるものであると推察された。
また、図３（Ａ）〜（Ｃ）から、アモキサピンの濃度依存的に、顕著なＡＴＰ合成阻害効果が見られることが確かめられた。
また、図３（Ａ）〜（Ｃ）から、アモキサピンの濃度依存的に、顕著なＡＴＰ合成阻害効果が見られることが確かめられた。
［実施例４］アモキサピン処理したヒトＧＢＭ患者由来細胞株及びマウスＧＢＭモデル細胞におけるスフィア形成アッセイ
実施例１で作製したＴｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞について、Ａｃｃｕｔａｓｅ（登録商標）（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて単一細胞の懸濁液を調製し、４０μｍセルストレーナー（ＢＤバイオサイエンス社製）を用いてろ過した。次いで、ヒトＧＢＭ患者由来細胞株ＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４、並びにろ過したＴｓｃ１遺伝子欠損グリオーマ細胞及びコントロール細胞を５×１０２細胞ずつ低接着プレート（コーニング社製）に播種した。次いで、ＤＭＳＯ、又は各濃度のアモキサピン、及び１％メチルセルロース含有ＮＳＰＣ培地（２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）含有）を用いて、７日間培養した。結果を図４（Ａ）〜（Ｃ）に示す。
図４（Ａ）〜（Ｃ）において、横軸はＤＭＳＯ、又はアモキサピンの濃度を示し、５×１０２細胞播種したうち形成されたスフィア数を示す。また、図４（Ｃ）において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、コントロール細胞を示し、「Ｔｓｃ１−／−」はＴｓｃ１遺伝子欠損細胞を示す。
実施例１で作製したＴｓｃ１遺伝子欠損細胞及びコントロール細胞について、Ａｃｃｕｔａｓｅ（登録商標）（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて単一細胞の懸濁液を調製し、４０μｍセルストレーナー（ＢＤバイオサイエンス社製）を用いてろ過した。次いで、ヒトＧＢＭ患者由来細胞株ＴＧＳ−０１及びＴＧＳ−０４、並びにろ過したＴｓｃ１遺伝子欠損グリオーマ細胞及びコントロール細胞を５×１０２細胞ずつ低接着プレート（コーニング社製）に播種した。次いで、ＤＭＳＯ、又は各濃度のアモキサピン、及び１％メチルセルロース含有ＮＳＰＣ培地（２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）含有）を用いて、７日間培養した。結果を図４（Ａ）〜（Ｃ）に示す。
図４（Ａ）〜（Ｃ）において、横軸はＤＭＳＯ、又はアモキサピンの濃度を示し、５×１０２細胞播種したうち形成されたスフィア数を示す。また、図４（Ｃ）において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、コントロール細胞を示し、「Ｔｓｃ１−／−」はＴｓｃ１遺伝子欠損細胞を示す。
図４（Ａ）及び（Ｂ）から、アモキサピン濃度が１０μＭ以上において、スフィア形成数が減少していた。また、図４（Ｃ）から、アモキサピン濃度が１μＭ以上において、スフィア形成数が減少していた。この差は、ヒトとマウスとの違いによるものであると推察された。
また、図４（Ａ）〜（Ｃ）から、アモキサピンの濃度依存的に、スフィア形成能の低下、すなわちグリオーマ細胞の増殖抑制効果が見られることが確かめられた。
また、図４（Ａ）〜（Ｃ）から、アモキサピンの濃度依存的に、スフィア形成能の低下、すなわちグリオーマ細胞の増殖抑制効果が見られることが確かめられた。
［実施例５］アモキサピン処理したヒトＧＢＭ患者由来細胞株におけるタンパク質合成確認試験
（１）アモキサピン処理
細胞としては、ヒトＧＢＭ患者由来細胞株ＴＧＳ−０１を用いた。まず、ＴＧＳ−０１を９６ウェル低接着プレート（コーニング社製）に播種した。次いで、ＤＭＳＯ、又は２０μＭのアモキサピン、及び１μｇ／ｍＬピューロマイシン含有ＮＳＰＣ培地（２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）含有）を用いて、４８時間培養した。ピューロマイシンは、細胞内の翻訳中のペプチドに取り込まれるため、細胞内におけるタンパク質合成の指標となる。
（１）アモキサピン処理
細胞としては、ヒトＧＢＭ患者由来細胞株ＴＧＳ−０１を用いた。まず、ＴＧＳ−０１を９６ウェル低接着プレート（コーニング社製）に播種した。次いで、ＤＭＳＯ、又は２０μＭのアモキサピン、及び１μｇ／ｍＬピューロマイシン含有ＮＳＰＣ培地（２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）含有）を用いて、４８時間培養した。ピューロマイシンは、細胞内の翻訳中のペプチドに取り込まれるため、細胞内におけるタンパク質合成の指標となる。
（２）ウェスタンブロッティング法によるピューロマイシンの検出
次いで、各条件で培養した細胞を回収し、Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．７）、４％ＳＤＳ、リン酸化酵素阻害剤（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）、プロテアーゼインヒビターカクテル錠Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｍｉｎｉ（ロッシュ社製）含有）を用いて、細胞破砕液を調製した。次いで、ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、細胞破砕液に含まれるタンパク質量を定量した。次いで、５μｇのタンパク質量となるように調製した各条件の細胞破砕液をＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、分画した。次いで、分画したタンパク質を０．４５ｍｍＰＶＤＦメンブレン（ミリポア社製）に転写し、５％ＢＳＡ及び０．０２％Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳを用いて、ブロッキングした。次いで、ヤギ抗ピューロマイシン抗体を用いて、４℃でオーバーナイト１次抗体による抗原抗体反応を行った。次いで、ＨＲＰ結合抗ヤギ抗体を用いて２次抗体による抗原抗体反応を行い、ＥＣＬ Ｐｒｉｍｅ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて、検出した。結果を図５に示す。
次いで、各条件で培養した細胞を回収し、Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．７）、４％ＳＤＳ、リン酸化酵素阻害剤（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）、プロテアーゼインヒビターカクテル錠Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｍｉｎｉ（ロッシュ社製）含有）を用いて、細胞破砕液を調製した。次いで、ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、細胞破砕液に含まれるタンパク質量を定量した。次いで、５μｇのタンパク質量となるように調製した各条件の細胞破砕液をＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、分画した。次いで、分画したタンパク質を０．４５ｍｍＰＶＤＦメンブレン（ミリポア社製）に転写し、５％ＢＳＡ及び０．０２％Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳを用いて、ブロッキングした。次いで、ヤギ抗ピューロマイシン抗体を用いて、４℃でオーバーナイト１次抗体による抗原抗体反応を行った。次いで、ＨＲＰ結合抗ヤギ抗体を用いて２次抗体による抗原抗体反応を行い、ＥＣＬ Ｐｒｉｍｅ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて、検出した。結果を図５に示す。
図５から、２０μＭのアモキサピン処理したＴＧＳ−０１では、ほとんどバンドが検出されなかった。このことから、アモキサピンによるタンパク質合成抑制効果が見られることが確かめられた。
［実施例６］アモキサピン処理したヒトＧＢＭ患者由来細胞株における細胞周期解析試験
（１）アモキサピン処理
細胞としては、ヒトＧＢＭ患者由来細胞株ＴＧＳ−０１を用いた。まず、ＴＧＳ−０１を９６ウェル低接着プレート（コーニング社製）に播種した。次いで、ＤＭＳＯ、又は２０μＭのアモキサピン含有ＮＳＰＣ培地（２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）含有）を用いて、４８時間培養した。
（１）アモキサピン処理
細胞としては、ヒトＧＢＭ患者由来細胞株ＴＧＳ−０１を用いた。まず、ＴＧＳ−０１を９６ウェル低接着プレート（コーニング社製）に播種した。次いで、ＤＭＳＯ、又は２０μＭのアモキサピン含有ＮＳＰＣ培地（２０ｎｇ／ｍＬヒトＦＧＦ２（和光社製）、及び２０ｎｇ／ｍＬヒトＥＧＦ（シグマ社製）含有）を用いて、４８時間培養した。
（２）細胞周期の解析
次いで、１０μＭのＢｒｄＵを添加し、３７℃で３０分間インキュベーションした。次いで、細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄後、−３０℃の７０％エタノールを加えて１６時間保存した。次いで、２Ｎの塩酸及び０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ １００を加えて、室温で３０分間インキュベーションした。次いで、抗ＢｒｄＵ−ＦＩＴＣ抗体（ＢＤバイオサイエンス社製）を用いて、遮光条件下において室温で１時間インキュベーションして細胞を染色した。次いで、１％ウシ血清アルブミン及び７ＡＡＤ（ＢＤバイオサイエンス社製）含有ＰＢＳに細胞を再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩＩを用いて、１細胞ずつ検出し、細胞周期を解析した。結果を図６に示す。図６において、横軸は細胞周期の各期（Ｇ０／Ｇ１期、Ｓ期、又はＧ２／Ｍ期）を示し、縦軸は全生細胞数中の各期にある細胞数の割合を示す。
次いで、１０μＭのＢｒｄＵを添加し、３７℃で３０分間インキュベーションした。次いで、細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄後、−３０℃の７０％エタノールを加えて１６時間保存した。次いで、２Ｎの塩酸及び０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ １００を加えて、室温で３０分間インキュベーションした。次いで、抗ＢｒｄＵ−ＦＩＴＣ抗体（ＢＤバイオサイエンス社製）を用いて、遮光条件下において室温で１時間インキュベーションして細胞を染色した。次いで、１％ウシ血清アルブミン及び７ＡＡＤ（ＢＤバイオサイエンス社製）含有ＰＢＳに細胞を再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩＩを用いて、１細胞ずつ検出し、細胞周期を解析した。結果を図６に示す。図６において、横軸は細胞周期の各期（Ｇ０／Ｇ１期、Ｓ期、又はＧ２／Ｍ期）を示し、縦軸は全生細胞数中の各期にある細胞数の割合を示す。
図６から、２０μＭのアモキサピン処理したＴＧＳ−０１では、ＤＭＳＯ処理したＴＧＳ−０１よりＧ２／Ｍ期の細胞数が上昇しており、Ｇ０／Ｇ１期の細胞が低下していることが明らかとなった。このことから、アモキサピンにより細胞周期異常が引き起こされており、細胞分裂が停止されて、細胞増殖が停止していると推察された。
［実施例７］アモキサピン投与によるマウス生存率の確認試験
（１）Ｔｓｃ１遺伝子欠損グリオーマモデルマウスの作製
実施例１において作製した、ＥＧＦＲｖＩＩＩ及びｈｕＫＯを発現するＮＳＰＣを脳内に移植したＢａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスを用いた。前記マウスに１ｍｇタモキシフェン（ＴＡＭ）（シグマ社製）を腹腔内投与し、腫瘍組織においてＴｓｃ１遺伝子を欠損させた。
（１）Ｔｓｃ１遺伝子欠損グリオーマモデルマウスの作製
実施例１において作製した、ＥＧＦＲｖＩＩＩ及びｈｕＫＯを発現するＮＳＰＣを脳内に移植したＢａｌｂ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスを用いた。前記マウスに１ｍｇタモキシフェン（ＴＡＭ）（シグマ社製）を腹腔内投与し、腫瘍組織においてＴｓｃ１遺伝子を欠損させた。
（２）アモキサピンの投与
次いで、アモキサピン（５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を腹腔内投与した。コントロールとして、アモキサピンを投与していないものも準備した。次いで、それぞれのマウスを飼育し、経時的な生存率を算出した。
次いで、アモキサピン（５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を腹腔内投与した。コントロールとして、アモキサピンを投与していないものも準備した。次いで、それぞれのマウスを飼育し、経時的な生存率を算出した。
その結果、アモキサピンを投与したマウス群が全て死滅したのは約３３日後であり、アモキサピンを投与しなかったマウス群が全て死滅したのは約２９日後であった。また、アモキサピンを投与したマウス群は、アモキサピンを投与しなかったマウス群と比較して、経時的な生存率が高い傾向があった。
このことから、アモキサピンはグリオーマの治療に有効であると推察された。
このことから、アモキサピンはグリオーマの治療に有効であると推察された。
本発明によれば、脳腫瘍への特異性が高い抗脳腫瘍剤を提供することができる。
Claims (3)
- アモキサピン又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有することを特徴とする抗脳腫瘍剤。
- 脳腫瘍が神経膠腫（グリオーマ）である請求項１に記載の抗脳腫瘍剤。
- 請求項１又は２に記載の抗脳腫瘍剤及び薬学的に許容できる担体を含むことを特徴とする脳腫瘍治療用医薬組成物。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2022528908A (ja) * | 2019-04-15 | 2022-06-16 | インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル） | 細胞集団のエネルギー代謝をプロファイリングする方法 |
| EP4368183A4 (en) * | 2021-07-06 | 2025-07-02 | Nat Cancer Ct | PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF CANCER, COMPRISING A CDK4/6 INHIBITOR AND A TRICYCLIC ANTIDEPRESSANT |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009016488A2 (en) * | 2007-08-02 | 2009-02-05 | Compugen, Ltd. | Compositions comprising tetracyclic antidepressants for treatment of cancer and related methods |
| US20110224141A1 (en) * | 2008-06-05 | 2011-09-15 | Stc.Unm | Methods and related compositions for the treatment of cancer |
| US20110251144A1 (en) * | 2008-09-16 | 2011-10-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Molecular modulators of the wnt/beta-catenin pathway |
-
2016
- 2016-07-15 JP JP2016140810A patent/JP2018008914A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009016488A2 (en) * | 2007-08-02 | 2009-02-05 | Compugen, Ltd. | Compositions comprising tetracyclic antidepressants for treatment of cancer and related methods |
| US20110224141A1 (en) * | 2008-06-05 | 2011-09-15 | Stc.Unm | Methods and related compositions for the treatment of cancer |
| US20110251144A1 (en) * | 2008-09-16 | 2011-10-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Molecular modulators of the wnt/beta-catenin pathway |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MOLECULAR AND CELLULAR NEUROSCIENCE, vol. 54, JPN6020016214, 2013, pages 44 - 57, ISSN: 0004388743 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2022528908A (ja) * | 2019-04-15 | 2022-06-16 | インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル） | 細胞集団のエネルギー代謝をプロファイリングする方法 |
| JP7518853B2 (ja) | 2019-04-15 | 2024-07-18 | インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル） | 細胞集団のエネルギー代謝をプロファイリングする方法 |
| EP4368183A4 (en) * | 2021-07-06 | 2025-07-02 | Nat Cancer Ct | PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF CANCER, COMPRISING A CDK4/6 INHIBITOR AND A TRICYCLIC ANTIDEPRESSANT |
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