JP2017141270A - １−（５，６−ジクロロ−１ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸のメグルミン塩製剤 - Google Patents

Abstract

【課題】プロリルヒドロキシラーゼ（ＰＨＤ）酵素の阻害物質の新規な塩、また、ＰＨＤ酵素と関連する１つ以上の疾患及び障害の治療方法、予防方法、阻害方法、又は改善方法の提供。
【解決手段】１−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（化合物（１））のメグルミン塩、及びその医薬的に許容される製剤。このような化合物は、プロリルヒドロキシラーゼ活性によって媒介される病態、疾患及び状態を治療するための医薬組成物及び方法において使用され得る。

【選択図】なし

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１１年１０月２５日に出願された米国特許仮出願第６１／５５１，３９
５号の利益を主張するものである。

（発明の分野）
本発明は、１−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾ［Ｄ］イミダゾール−２−イル）−
１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸のメグルミン塩、及び関連する製造方法を目的とする
。

細胞は、高度に保存された酸素、鉄、及び２−オキソグルタレート依存性のプロリルヒ
ドロキシラーゼ（ＰＨＤ）酵素ファミリーによる、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）の翻訳後修
飾によって、低酸素症に応答する（Ｉｖａｎら、２００１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９２：４
６４〜６８、Ｊａａｋｋｏｌａら、２００１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９２：４６８〜７２）
。酸素正常状態では、ＰＨＤはＨＩＦ内に保存されている２つのプロリン残基のヒドロキ
シル化を触媒する。酸素に対するＰＨＤの親和性は酸素の生理学的範囲内にあり、酸素は
ヒドロキシル化ＨＩＦを修飾するのに必須の補助因子であるため、酸素圧が低下するとＰ
ＨＤは不活性化される。このようにして、ＨＩＦは酸素正常状態で急速に分解するが、低
酸素状態又はＰＨＤが阻害されている場合には細胞に蓄積する。

ＰＨＤの４つのアイソタイプＰＨＤ１、ＰＨＤ２、ＰＨＤ３、及びＰＨＤ４が記述され
ている（Ｅｐｓｔｅｉｎら、２００１，Ｃｅｌｌ，１０７：４３〜５４、Ｋａｅｌｉｎ，
２００５，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，７４：１１５〜２８、Ｓｃｈｍｉｄら
、２００４，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．，８：４２３〜３１）。様々なアイソタイ
プが遍在して発現するが、異なって調節され、低酸素症に対する細胞応答において異なる
生理学的役割を有する。この様々なアイソタイプが、３つの異なるＨＩＦ−αサブタイプ
に対して異なる選択性を有するということが証明されている（Ｅｐｓｔｅｉｎら、上記）
。細胞の局所化については、ＰＨＤ１は主に細胞核、ＰＨＤ２は主に細胞質、そしてＰＨ
Ｄ３は細胞質及び細胞核の両方にあると見られる（Ｍｅｔｚｅｎ Ｅら、２００３，Ｊ
Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．，１１６（７）：１３１９〜２６）。ＰＨＤ２は、酸素正常状態で主
要なＨＩＦ−αプロリルヒドロキシラーゼであると思われる（Ｉｖａｎら、２００２．Ｐ
ｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９９（２１）：１３４５９〜６４；Ｂｅ
ｒｒａら、２００３，ＥＭＢＯ Ｊ．，２２：４０８２〜９０）。この３つのアイソタイ
プは高度なアミノ酸相同性を有し、酵素の活性部位は高度に保存されている。

小分子によるＰＨＤ酵素活性の標的破壊は、酸素検知と分配の障害の治療において、潜
在的な有用性を有する。その例としては、貧血症、鎌状赤血球貧血、末梢血管疾患、冠状
動脈疾患、心不全、虚血（心筋虚血、心筋梗塞及び脳卒中などの状態におけるもの）から
の組織保護、移植用臓器の保存、組織虚血の処置（血流の調節及び／若しくは回復、酸素
供給、並びに／又はエネルギー利用による）、特に糖尿病及び高齢の患者の創傷治癒の促
進、火傷の処置、感染症の処置、骨の治癒、並びに骨の成長が挙げられるが、これらに限
定されない。加えて、ＰＨＤの標的破壊は、糖尿病、肥満、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患
、及びクローン病などの関連疾患などの代謝性疾患の治療に有用性を有すると見込まれて
いる。（Ｒｅｃｅｎｔ Ｐａｔｅｎｔｓ ｏｎ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ＆ Ａｌｌ
ｅｒｇｙ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２００９，３：１〜１６）。

ＨＩＦは、低酸素状態でエリスロポエチン産生を増加させる主要な転写因子であること
が示されている（Ｗａｎｇら、１９９３、上記）。組換え型ヒトエリスロポエチンでの治
療は、貧血治療の有効な方法として示されているが、小分子介在ＰＨＤ阻害は、エリスロ
ポエチンでの治療を上回る利点を提供することが見込まれ得る。具体的には、他のＨＩＦ
遺伝子産物の機能は造血（hematopoesis）に不可欠であり、この因子の調節が、造血（he
matopoesis）の効率を増大させる。造血（hematopoesis）に必須であるＨＩＦ標的遺伝子
産物の例としては、トランスフェリン（Ｒｏｌｆｓら、１９９７，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅ
ｍ．，２７２（３２）：２００５５〜６２）、トランスフェリン受容体（Ｌｏｋら、１９
９９，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２７４（３４）：２４１４７〜５２、Ｔａｃｃｈｉｎ
ｉら、１９９９，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２７４（３４）：２４１４２〜４６）及び
セルロプラスミン（Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙら、２０００，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．
，２７５（２８）：２１０４８〜５４）が挙げられる。またヘプシジン発現がＨＩＦによ
って抑制され（Ｐｅｙｓｓｏｎｎａｕｘら、２００７，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．，
１１７（７）：１９２６〜３２）、ＰＨＤの小分子阻害物質がヘプシジン産生を低下させ
ることが示されている（Ｂｒａｌｉｏｕら、２００８，Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ．，４８：８
０１〜１０）。ヘプシジンは、造血（hematopoesis）に必要な鉄の利用可能性に対する負
の制御因子であり、よってヘプシジン産生の低下は、貧血治療に有用であることが見込ま
れる。ＰＨＤ阻害も、鉄補充及び／又は外因性エリスロポエチンを含むその他の貧血治療
と組み合わせて使用した場合、有用であり得る。ヒト母集団において自然に発生するＰＨ
Ｄ２遺伝子における突然変異の研究は、ＰＨＤ阻害の貧血治療への利用に関する更なる根
拠を提供している。２つの最近の報告により、ＰＨＤ２遺伝子に機能不全の突然変異を有
する患者が、赤血球増多及び血液ヘモグロビン増加を呈することが示されている（Ｐｅｒ
ｃｙら、２００７，ＰＮＡｓ，１０３（３）：６５４〜５９、Ａｌ−Ｓｈｅｉｋｈら、２
００８，Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ Ｍｏｌ Ｄｉｓ．，４０：１６０〜６５）。加えて、
小分子ＰＨＤ阻害物質が、健康なボランティア及び慢性腎臓病を有する患者において評価
されている（２００６年１２月７日出願の米国特許出願第２００６／０２７６４７７号）
。血漿中エリスロポエチンは用量依存的に増加し、血中ヘモグロビン濃度は慢性腎臓病患
者において上昇した。

低酸素状態におけるＨＩＦの全体的蓄積が、糖分解の適応的上方制御を支配し、過酸化
水素及び超酸化物の産生の低減をもたらす酸化的リン酸化の低減、虚血性損傷に対して細
胞を保護する酸化的リン酸化の最適化が生じる。よって、ＰＨＤ阻害物質は、臓器及び組
織移植の保全に有用であると見込まれる（Ｂｅｒｎｈａｒｄｔら、２００７，Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，４３５：２２１〜４５）。移植用の臓器を採取する前にＰＨＤ
阻害物質を投与することによって利益が得られる可能性があるが、採取後の臓器／組織（
保存中（例えば心停止液）又は移植後のいずれか）に阻害物質を投与することにより、治
療的利益が得られる可能性もある。

ＰＨＤ阻害物質は、部分的な虚血及び／又は低酸素状態から組織を保護するのに有効で
あると見込まれる。これには、とりわけ、狭心症、心筋虚血、脳卒中、骨格筋虚血に関連
する虚血／低酸素状態が含まれる。最近では、虚血プレコンディショニングが、ＨＩＦ依
存性の現象であることが示されている（Ｃａｉら、２００８，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒ
ｅｓ．，７７（３）：４６３〜７０）。プレコンディショニングの概念は心臓の保護効果
に関して最もよく知られているが、肝臓、骨格筋、肝臓、肺、腎臓、腸及び脳を含むがこ
れらに限定されないその他の組織にも適用される（Ｐａｓｕｐａｔｈｙら、２００５，Ｅ
ｕｒ Ｊ Ｖａｓｃ Ｅｎｄｏｖａｓｃ Ｓｕｒｇ．，２９：１０６〜１５、Ｍａｌｌｉ
ｃｋら、２００４，Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ．，４９（９）：１３５９〜７７）。ＰＨＤ
阻害及びＨＩＦ増加の組織保護効果に関する実験的証拠は、数多くの動物モデルにおいて
得られており、これには、虚血侵襲に対する骨格筋の保護をもたらすＰＨＤ１の生殖系列
ノックアウト（Ａｒａｇｏｎｅｓら、２００８，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．，４０（２）：１
７０〜８０）、虚血侵襲に対して心臓を保護するｓｉＲＮＡの使用によるＰＨＤ２のサイ
レンシング（Ｎａｔａｒａｊａｎら、２００６，Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ．，９８（１）：１３
３〜４０）、虚血障害から心筋を保護する、一酸化炭素投与によるＰＨＤの阻害（Ｃｈｉ
ｎら、２００７，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１０４（１２
）：５１０９〜１４）、虚血に対する耐性を増強した脳の低酸素状態（Ｂｅｒｎａｕｄｉ
ｎら、２００２，Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．，２２（４）：
３９３〜４０３）が挙げられる。加えて、ＰＨＤの小分子阻害物質は、実験脳卒中モデル
において脳を保護する（Ｓｉｄｄｉｑら、２００５，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２８０
（５０）：４１７３２〜４３）。更に、ＨＩＦ上方制御は、糖尿病マウスの心臓を保護す
ることが示されているが、結果は全般により不良である（Ｎａｔａｒａｊａｎら、２００
８，Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５１（２）：１７８〜１８７）
。組織保護効果は、バーガー病、レイノー病、及び先端チアノーゼにおいても観察され得
る。

ミトコンドリア内のクレブス回路を介する好気性代謝に対する依存性の低下、及びＰＨ
Ｄ阻害によって産生された嫌気性糖分解に対する依存性の増加は、酸素正常状態の組織に
おいて有利な効果を有し得る。ＰＨＤ阻害は酸素正常状態でＨＩＦを高めることも示され
ていることに注意するのが重要である。よって、ＰＨＤ阻害は、ＨＩＦによって開始され
た低酸素反応を伴う擬似低酸素状態を生み出すが、組織酸素化状態は正常のままである。
ＰＨＤ阻害によってもたらされた代謝の変化も、糖尿病、肥満及び関連疾患（併存疾患を
含む）の治療パラダイムを提供することが見込まれる。

全体に、ＰＨＤ阻害によりもたらされた遺伝子発現変化の集合は、グルコース単位当た
り発生するエネルギー量を低下させ、エネルギーバランスを維持するために身体がより多
くの脂肪を燃やすよう刺激する。糖分解増加のメカニズムは、上記で検討されている。他
の観測結果は、低酸素状態の反応と、糖尿病及び肥満の治療に有益であることが見込まれ
る効果とを結びつけている。低酸素状態、及びデスフェリオキサミンなどの低酸素模倣物
質は、脂肪細胞分化を防ぐことが示されている（Ｌｉｎら、２００６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃ
ｈｅｍ．，２８１（４１）：３０６７８〜８３、Ｃａｒｒｉｅｒｅら、２００４，Ｊ Ｂ
ｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２７９（３９）：４０４６２〜６９）。脂肪形成の初期段階におけ
るＰＨＤ活性の阻害は、新たな脂肪細胞の形成を阻害する（Ｆｌｏｙｄら、２００７，Ｊ
Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０１：１５４５〜５７）。低酸素状態、塩化コバルト
、及びデスフェリオキサミンはＨＩＦを増加させ、ＰＰＡＲγ２核ホルモン受容体転写を
阻害した（Ｙｕｎら、２００２，Ｄｅｖ Ｃｅｌｌ．，２：３３１〜４１）。ＰＰＡＲγ
２は脂肪細胞分化の重要な信号であるため、ＰＨＤ阻害は、脂肪細胞分化を阻害すると見
込まれ得る。これらの効果は、ＨＩＦで制御された遺伝子ＤＥＣ１／Ｓｔｒａ１３によっ
て媒介されることが示されている（Ｙｕｎら、上記）。

ＰＨＤの小分子阻害物質は、糖尿病及び肥満の動物モデルにおいて有益な効果を有する
ことが示されている（２００４年６月２４日出願の国際特許出願公開第２００４／０５２
２８４号、２００４年６月２４日出願の国際特許出願公開第２００４／０５２２８５号）
。マウスの食事由来肥満におけるＰＨＤ阻害物質について示された効果の中で、ｄｂ／ｄ
ｂマウス及びＺｕｃｋｅｒ ｆａ／ｆａラットモデルでは、血中グルコース濃度、腹部及
び内臓脂肪層の両方における脂肪量、ヘモグロビンＡ１ｃ、血漿中トリグリセリド、体重
が低下し、並びにアドレノメデュリン及びレプチンの濃度増加など、確立された疾患バイ
オマーカーの変化をもたらしている。レプチンは既知のＨＩＦ標的遺伝子産物である（Ｇ
ｒｏｓｆｅｌｄら、２００２，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２７７（４５）：４２９５３
〜５７）。脂肪細胞における代謝に関与する遺伝子産物は、ＰＨＤ阻害によってＨＩＦ依
存型で制御されることが示されている（国際特許出願公開第２００４／０５２２８５号、
上記）。これらには、アポリポタンパク質Ａ−ＩＶ、アシルＣｏＡチオエステラーゼ、カ
ルニチンアセチルトランスフェラーゼ、及びインスリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧ
ＦＢＰ）−１が挙げられる。

ＰＨＤ阻害物質は、脈管形成、血管形成、及び動脈形成の刺激物質として治療に有用で
あることが見込まれる。これらのプロセスは、虚血及び／又は低酸素状態にある組織への
血流及び酸素化を確立又は回復する（Ｓｅｍｅｎｚａら、２００７，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．，１０２：８４０〜４７、Ｓｅｍｅｎｚａ，２００７，Ｅｘｐ Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ．，９２（６）：９８８〜９１）。身体的エクササイズは実験動物モデル及びヒトに
おいてＨＩＦ−１及び血管内皮成長因子を増加させ（Ｇｕｓｔａｆｓｓｏｎら、２００１
，Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ．，６：Ｄ７５〜８９）、その結果として、骨格筋内の血管
の数が増えることが示されている。ＶＥＧＦは、血管形成の主要な推進力である既知のＨ
ＩＦ標的遺伝子産物である（Ｌｉｕら、上記）。ＰＨＤ阻害は、複数の血管由来成長因子
の制御された発現をＨＩＦ依存型で刺激し、その成長因子としては、胎盤成長因子（ＰＬ
ＧＦ）、アンジオポエチン−１（ＡＮＧＰＴ１）、アンジオポエチン−２（ＡＮＧＰＴ２
）、血小板由来成長因子β（ＰＤＧＦＢ）（Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ、２００４，Ｊ Ｉｎｔ
ｅｒｎ Ｍｅｄ．，２５５：５３８〜６１；Ｋｅｌｌｙら、２００３，Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ
．，９３：１０７４〜８１）、及び間質細胞由来因子１（ＳＤＦ−１）（Ｃｅｒａｄｉｎ
ｉら、２００４，Ｎａｔ Ｍｅｄ．，１０（８）：８５８〜６４）が挙げられるが、これ
らに限定されない。血管形成中のアンジオポエチン−１の発現は、ＶＥＧＦ単独投与によ
って生じた血管とは対照的に、漏れ抵抗性の血管を生成する（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、１９
９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８６：２５１１〜１４、Ｔｈｕｒｓｔｏｎら、２０００，Ｎａ
ｔ Ｍｅｄ．，６（４）：４６０〜３；Ｅｌｓｏｎら、２００１，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．
，１５（１９）：２５２０〜３２）。間質細胞由来因子１（ＳＤＦ−１）は、組織損傷部
位に対し内皮前駆細胞を補充するプロセスに必須であることが示されている。ＳＤＦ−１
発現は、虚血組織に対するＣＸＣＲ４−陽性前駆細胞の接着、移動、及び循環回帰を増加
させた。更に、虚血組織におけるＳＤＦ−１の阻害、又は循環細胞に対するＣＸＣＲ４の
遮断は、損傷部位への前駆細胞補充を阻む（Ｃｅｒａｄｉｎｉら、２００４、上記、Ｃｅ
ｒａｄｉｎｉら、２００５，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ．，１５（２
）：５７〜６３）。重要なのは、内皮前駆細胞の損傷部位への補充は、高齢のマウスでは
減少し、これは、損傷部位でＨＩＦを高める介入を行うことによって修正されることであ
る（Ｃｈａｎｇら、２００７，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１１６（２４）：２８１８〜２
９）。ＰＨＤ阻害は、数々の血管形成作用の発現を増加させるだけでなく、血管形成プロ
セス全体にわたる発現の協調、及び虚血組織への内皮前駆細胞の補充を増加させる利点を
もたらす。

ＰＨＤ阻害物質は、血管新生促進療法においても同様に有用である。アデノウイルス介
在のＨＩＦ過剰発現は、成体動物の非虚血組織において血管形成を誘発していることが示
されており（Ｋｅｌｌｙら、２００３，Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ．，９３（１１）：１０７４〜
８１）、ＨＩＦを高める治療（例えばＰＨＤ阻害など）が、血管形成を誘発することの根
拠を提供している。胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）は、ＨＩＦ標的遺伝子でもあり、虚血組織
における血管形成に重要な役割を果たしていることが示されている（Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ
，２００４，Ｊ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ．，２５５（５）：５３８〜６１、Ｌｕｔｔｕｎ
ら、２００２，Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．，９７９：８０〜９３）。骨格筋に
おいて（Ｐａｊｕｓｏｌａら、２００５，ＦＡＳＥＢ Ｊ．，１９（１０）：１３６５〜
７、Ｖｉｎｃｅｎｔら、２０００，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０２：２２５５〜６１）
、及び心筋において（Ｓｈｙｕら、２００２，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ．，５４：
５７６〜８３）、ＨＩＦ過剰発現を介して、ＨＩＦを高める治療の強力な血管新生促進効
果が示されている。ＨＩＦ標的遺伝子ＳＤＦ−１による、虚血心筋への内皮前駆細胞の補
充についても示されている（Ａｂｂｏｔｔら、２００４，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１１
０（２１）：３３００〜０５）。よって、ＰＨＤ阻害物質は、組織虚血、特に筋肉虚血の
状況において、血管形成を刺激するのに有効である可能性が高い。ＰＨＤ阻害物質によっ
て生じた治療的血管形成は、組織への血流を回復させ、よって、狭心症、心筋虚血及び心
筋梗塞、末梢虚血疾患、跛行、胃潰瘍及び十二指腸潰瘍、潰瘍性大腸炎、並びに炎症性腸
疾患を含むがこれらに限定されない疾患を改善させる可能性が高い。

ＰＨＤ及びＨＩＦは、損傷及び潰瘍の治療を含む組織修復及び再生において中心的役割
を果たす。最近の研究では、高齢のマウスの損傷部位で、３種類のＰＨＤ全ての発現の増
加と、その結果としてＨＩＦ蓄積の減少が示されている（Ｃｈａｎｇら、上記）。ここで
、デスフェリオキサミン投与による高齢のマウスでのＨＩＦ上昇は、創傷治療の度合を、
若いマウスで観察されるレベルにまで戻って高めた。同様に、糖尿病マウスモデルにおい
て、ＨＩＦの上昇は、非糖尿病の同腹仔に比べて抑制されていた（Ｍａｃｅら、２００７
，Ｗｏｕｎｄ Ｒｅｐａｉｒ Ｒｅｇｅｎ．，１５（５）：６３６〜４５）。塩化コバル
ト（低酸素状態模倣物質）の局所投与、又は酸素依存性分解範囲を欠いているためＨＩＦ
の常時活性型を提供するハツカネズミＨＩＦの過剰発現は、創傷部位におけるＨＩＦの増
加、ＨＩＦ標的遺伝子（ＶＥＧＦ、Ｎｏｓ２、及びＨｍｏｘ１など）の発現増加、並びに
創傷治癒の加速をもたらした。ＰＨＤ阻害の有益な効果は、皮膚に限定されず、ＰＨＤの
小分子阻害物質は最近、大腸炎のマウスモデルに効果をもたらすことが示されている（Ｒ
ｏｂｉｎｓｏｎら、２００８，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１３４（１）：１４
５〜５５）。

要約すると、ＨＩＦの蓄積をもたらすＰＨＤ阻害は、少なくとも次の４つのメカニズム
による作用で、創傷の治癒加速及びより完全な治癒に寄与する可能性が高い：１）低酸素
状態及び／又は虚血により危機に曝された組織の保護、２）適切な血流をその部位に確立
又は回復するための血管形成の刺激、３）創傷部位への内皮前駆細胞の補充、４）特に治
癒及び再生を刺激する成長因子の放出の刺激。

ＰＤＧＦはＨＩＦ遺伝子標的であるため（Ｓｃｈｕｌｔｚら、２００６，Ａｍ Ｊ Ｐ
ｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２９０（６）：Ｈ２５２８〜
３４、Ｙｏｓｈｉｄａら、２００６，Ｊ Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ．，７６（１）：１３〜
２１）、ＰＨＤ阻害は、内因性ＰＤＧＦの発現を増加させ、ＰＤＧＦ単独で産生されるの
と同様か又はより有益な効果を生み出す可能性が高い。動物研究では、ＰＤＧＦの局所適
用により、損傷ＤＮＡ、タンパク質、及びヒドロキシプロリンの量の増加がもたらされ、
より厚い肉芽組織及び表皮組織が形成され、創傷部位の細胞再増殖が増加したことが示さ
れている。ＰＤＧＦは、新しい結合組織の形成を強化する局所的効果を発揮する。ＰＨＤ
阻害の有効性は、ＨＩＦが介在する追加の組織保護効果及び血管新生促進効果により、Ｐ
ＤＧＦによってもたらされる有効性を超える可能性が高い。

ＰＨＤの阻害の有益な効果は、皮膚及び大腸の創傷治癒を促進するだけに留まらず、胃
腸潰瘍、皮膚移植置換、火傷、慢性創傷、及び凍傷などを含むがこれらに限定されないそ
の他の組織損傷の治癒にも拡大される。

体内の低酸素性適所には幹細胞及び前駆細胞が見出されており、低酸素状態がその分化
及び細胞の運命を制御している（Ｓｉｍｏｎら、２００８，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃ
ｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，９：２８５〜９６）。よって、ＰＨＤ阻害物質は、幹細胞及び前駆
細胞を多能性状態に維持し、所望の細胞種へ分化させるのに有用であり得る。幹細胞は、
幹細胞集団の培養及び拡大に有用であり得、細胞を多能性状態に保持しながら、ホルモン
及びその他の因子を細胞に投与して分化及び細胞の運命に影響を与えることができる。

幹細胞及び前駆細胞による治療分野における、ＰＨＤ阻害物質の更なる使用は、これら
細胞を調整して体内への着床プロセスに耐えるようにし、身体に対する適切な反応を起こ
して、幹細胞及び前駆細胞の着床を生存可能なものにする、というＰＨＤ阻害物質の利用
に関する（Ｈｕら、２００８，Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｓｕｒｇ．，
１３５（４）：７９９〜８０８）。より具体的には、ＰＨＤ阻害物質は、幹細胞の同化を
促進し、同化した後の幹細胞を維持するために適切な血液供給を招くことができる。この
血管形成は、これらの細胞から身体の他の部分へと放出されるホルモン及びその他の因子
を運ぶ機能も果たす。

ＰＨＤ阻害物質は、感染症の治療にも有用であり得る（Ｐｅｙｓｓｏｎｎａｕｘら、２
００５，Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１１５（７）：１８０６〜１５、Ｐｅ
ｙｓｓｏｎｎａｕｘら、２００８ Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，２００８
Ａｕｇ；１２８（８）：１９６４〜８）。ＨＩＦの増加は、食細胞及びケラチノサイトに
おける感染症に対する内在的免疫反応を高めることが示されている。ＨＩＦが増加してい
るときの食細胞は、殺菌活性の増加、一酸化窒素産生の増加、及び抗菌ペプチドカテリシ
ジンの表現の増加を示す。これらの効果も、火傷による感染症の治療に有用である可能性
がある。

ＨＩＦは骨の成長及び治癒にも関与していることが示されており（Ｐｆａｎｄｅｒ Ｄ
ら、２００３ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．，１１６（Ｐｔ ９）：１８１９〜２６、Ｗａｎ
ｇら、２００７ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．，１７（６）：１６１６〜２６）、よっ
て、骨折の治癒又は予防に用いることができる。ＨＩＦは糖分解を刺激してエネルギーを
供給することにより、低酸素環境における骨端軟骨細胞の細胞外マトリックスの合成を可
能にする。ＨＩＦはまた、骨治癒プロセスにおいてＶＥＧＦの放出及び血管形成を推進す
る役割を果たす。成長中又は治癒中の骨の中に血管を成長させるのは、プロセスの律速段
階であり得る。

ＰＨＤの小分子阻害物質は、限定されるものではないが、ｉｍｉｄａｚｏ［１，２−ａ
］ｐｙｒｉｄｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（Ｗａｒｓｈａｋｏｏｎら、２００６，Ｂ
ｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．，１６（２１）：５５９８〜６０１）、ｓｕ
ｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｐｙｒｉｄｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（Ｗａｒｓｈａｋｏｏ
ｎら、２００６，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．，１６（２１）：５６１
６〜２０）、ｐｙｒａｚｏｌｏｐｙｒｉｄｉｎｅｓ（Ｗａｒｓｈａｋｏｏｎら、２００６
、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．，１６（２１）：５６８７〜９０）、ｂ
ｉｃｙｃｌｉｃ ｈｅｔｅｒｏａｒｏｍａｔｉｃ Ｎ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｇｌｙ
ｃｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（国際特許出願公開第２００７／１０３９０５号、２
００７年９月１３日）、ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ ｂａｓｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（国際特
許出願公開第２００７／０７０３５９号、２００７年６月２１日）、ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ
ｅｔｒｉｏｎｅ Ｎ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｇｌｙｃｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ
ｓ（国際特許出願公開第２００７／１５００１１号、２００７年１２月２７日）、ｓｕｂ
ｓｔｉｔｕｔｅｄ ａｒｙｌ ｏｒ ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ ａｍｉｄｅ ｃｏｍｐｏｕ
ｎｄｓ（米国特許出願公開第２００７／０２９９０８６号、２００７年１２月２７日）、
及びｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−５−ｃａｒｂ
ｏｘａｍｉｄｅｓ（国際特許出願公開第２００９／１１７２６９号、２００９年９月２４
日）などの文献に記載されている。

本発明は、本明細書に示される、定義された一般的及び好ましい実施形態を目的とする
。発明の好ましくかつ代表的な特徴は、以下の「発明を実施するための形態」から、及び
図面を参照することにより明らかとなるであろう。

その多くの実施形態では、本発明は、プロリルヒドロキシラーゼ（ＰＨＤ）酵素の阻害
物質の新規な塩に関し、また、ＰＨＤ酵素と関連する１つ以上の疾患及び障害の治療方法
、予防方法、阻害方法、又は改善方法が提供される。

より詳細には、本発明は、メグルミン塩の形態の下記式：

の化合物及びその化合物の、関連する調製及び製造方法に関する。

別の実施形態では、本発明は、化合物（１）のメグルミン塩の水和形態に関する。

本発明の追加の実施形態及び利点は、下記の議論、スキーム、実施例及び請求項から明
らかとなるであろう。

化合物（１）の溶液飽和度のｐＨ依存性を示す。 化合物（１）のメグルミン塩のＰＸＲＤデータを示す。 化合物（１）のメグルミン塩のＤＳＣ、ＴＧＡ、及びｘ線データを示す。 （Ａ）は、化合物（１）のメグルミン塩の単結晶構造を示し、図４（Ｂ）は、化合物（１）のメグルミン塩の単結晶の実験及び刺激粉末パターンを示す。 化合物（１）のメグルミン塩の製剤に暴露されたときのＨＩＦ１−αの刺激率を示す。 化合物（１）のメグルミン塩の製剤の局所適用後の、創傷マウスにおける血漿レベル（全身的な負荷）を示す。 フランツ拡散セルを用いた、化合物（１）のメグルミン塩の製剤を適用したときの皮膚（ヒト真皮）及び人工膜への化合物（１）の浸透フラックスの相関関係を示す。 鶏卵漿尿膜アッセイで試験した化合物（１）のメグルミン塩の製剤を適用することによってもたらされる非常に軽度の炎症を示す。

本発明は、プロリルヒドロキシラーゼ（ＰＨＤ）酵素の阻害物質である下記式：

の化合物の新規な塩、及びプロリルヒドロキシラーゼ酵素の調節と関連した障害及び疾
患の治療、改善、又は阻害のためのその組成物に関する。本発明はまた、かかる化合物、
その医薬組成物、医薬的に許容される塩、医薬的に許容されるプロドラッグ、及び医薬的
に活性の代謝産物の製造方法に関する。

Ａ）用語
本発明は、下記の定義、図面、及び本明細書に提供されている代表的な開示を参照する
ことにより、最もよく理解される。

用語「備える」、「含有する」、及び「含む」は本明細書においては、それらの開放さ
れた非限定的な意味で用いられる。

「投与する」又は「投与」は、薬理学上有用な方法で患者に薬剤を提供することを意味
する。

「組成物」は、本発明の化合物を含む製品（例えば、特定の量で特定の成分を含む製品
、及び特定の量での特定の成分のこのような組み合わせから直接的又は間接的に得られる
任意の製品など）を意味する。

「化合物」又は「薬剤」は、式（１）の化合物又はその医薬的に許容される形態を意味
する。

「形態」は、式（１）の１つ以上の化合物及びその塩又は水和物の異性体及び混合物を
意味する。用語「異性体」は、組成及び分子量は同じであるが、物理的及び／又は化学的
特性が異なる化合物を指す。このような物質が有する原子の数及び種類は同じであるが、
構造は異なる。その構造の違いは構成の違い（幾何異性体）又は偏光面を回転させる能力
の違い（立体異性体）であり得る。用語「立体異性体」は、構成は同じであるが原子の空
間配置が異なる異性体を指す。鏡像異性体及びジアステレオマーは、不斉置換されている
炭素原子がキラル中心として働く立体異性体である。用語「キラル」は、分子が鏡像に重
なり合わないことを指し、これは、対称軸及び面又は中心が存在しないことを意味する。

用語「低酸素状態」又は「低酸素疾患」は、血中又は組織及び臓器に供給される酸素量
が不十分である状態を指す。低酸素疾患は、様々なメカニズムによって起こる可能性があ
り、これには酸素を運ぶ血液の能力が不十分な場合（即ち貧血）、心不全又は血管及び／
若しくは動脈の遮断によって組織及び／若しくは臓器への血流が不十分な場合（即ち虚血
）、気圧低下がある場合（即ち高標高の場所での高山病）、あるいは、機能不全細胞が酸
素を適切に利用できない場合（即ち組織毒性状態）が挙げられる。したがって、本発明は
、貧血、心不全、冠状動脈疾患、血栓塞栓症、脳卒中、狭心症及び同様疾患などの様々な
低酸素状態の治療に有用であることが、当業者には容易に認識されるであろう。

「患者」又は「被験者」は、動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒトで、治療的
介入を必要としている者を意味する。

「医薬的に許容される」は、本発明の組成物又は薬剤の製剤において使用するのに十分
な純度と品質とを有する、分子的実体及び組成物を意味する。ヒトでの使用（臨床及び市
販）及び獣医学的使用の両方が本発明の範囲内に等しく含まれることから、製剤には、ヒ
トでの又は獣医学的用途でのいずれの組成物又は薬剤も含まれるであろう。

「医薬的に許容される賦形剤」は、薬理学的組成物に添加されるか、あるいは薬剤の投
与を容易にする賦形剤、担体又は希釈剤として用いられかつその薬剤と相溶する、例えば
、不活性な物質のような、毒性を有さないか、生物学的に許容されるか、あるいは患者に
投与するうえで生物学的に適した物質を指す。賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リ
ン酸カルシウム、各種糖類及び各種デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、及
びポリエチレングリコールが挙げられる。

「医薬的に許容される塩」は、本発明の組成物又は薬剤の製剤に使用するのに十分な純
度及び品質を有し、かつ医薬品に使用するのに忍容性であり、十分に非毒性である、本発
明の化合物の酸塩又は塩基塩を意味する。好適な医薬的に許容される塩には、酸付加塩が
含まれ、これは例えば薬剤化合物を、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢
酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、カルボン酸又はリン酸のような好適な医薬的に許容さ
れる酸と反応させることにより形成することができる。

用語「溶媒和物」は、溶液又は固体若しくは結晶形態のいずれかである、化合物と１つ
以上の溶媒分子との相互作用又は錯化から形成される化合物を意味する。用語「水和物」
は、溶媒が水である溶媒和物を意味する。

「治療的有効量」は、研究者、獣医、医師又は他の臨床医により求められている、治療
される疾患又は障害の症状の治療的緩和を含む、組織系、動物又はヒト内で生物学的反応
又は医薬反応を顕現させる化合物の量を意味する。

用語「治療する」は、本明細書で使用される場合、別途記載のない限り、その用語が適
用される障害若しくは状態、又はそのような障害若しくは状態の１つ以上の症状を、後退
させ、緩和し、進行を阻害し、重症度を軽減し、又は予防することを意味する。本明細書
で使用される場合、用語「治療」は、別途記載のない限り、治療する行為を指す。

Ｂ）化合物
本発明は、式（１）の化合物の新規な塩に関する。具体的には、本発明は、式（１）の
化合物のメグルミン塩に関する。概して、本発明は、プロリルヒドロキシラーゼ酵素の調
節と関連した障害及び疾患の治療を必要とする患者に投与される全ての化合物に関する。

本発明のいくつかの実施形態は、かかる化合物の水和物、溶媒和物、又は多形体、及び
これらの混合物を含み、たとえかかる形態が本明細書に明示的に記載されていないとして
もこれらを含む。好ましくは、式（１）の化合物又はその医薬的に許容される塩のいくつ
かの実施形態は、溶媒和物を含む。好ましくは、式（１）の化合物又はその医薬的に許容
される塩のいくつかの実施形態は、水和物を含む。

本発明の更に別の実施形態は、結晶形態である式（１）の化合物を含み、又は式（１）
の化合物の医薬的に許容される塩は、共結晶として得ることができる。

本発明の特定の実施形態では、式（１）の化合物は結晶形態で得られた。他の実施形態
では、式（１）の化合物の結晶形態は本質的に立方体であった。他の実施形態では、式（
１）の化合物の医薬的に許容される塩は結晶形態で得られた。更に他の実施形態では、式
（１）の化合物は、いくつかの多型形態のうちの１つで、結晶形態の混合物として、多型
形態として、又は非晶質形態として得られた。他の実施形態では、式（１）の化合物は、
溶液中で１つ以上の結晶形態及び／又は多型形態の間で変形する。

本発明の薬剤化合物はまた、立体異性体の混合物又はそれぞれの純粋な異性体若しくは
実質的に純粋な異性体を含む。例えば、本化合物は、所望により、任意の１つの置換基を
含有する炭素原子に、１つ以上の不斉中心を有してもよい。よって、この化合物は、鏡像
異性体若しくはジアステレオマー又はその混合物の形で存在してもよい。本化合物が二重
結合を含有するとき、本化合物は、幾何異性（シス−化合物、トランス−化合物）の形で
存在してもよく、本化合物がカルボニルのような不飽和結合を含有するとき、本化合物は
、互変異性体の形で存在してもよく、本化合物はまた、これらの異性体又はこれらの混合
物を含む。ラセミ混合物、鏡像異性体又はジアステレオマーの形の出発化合物を、本化合
物を製造する方法で用いてもよい。本化合物がジアステレオマー又は鏡像異性体の形で得
られるとき、それらはクロマトグラフィー又は分別晶出のような従来の方法により分離す
ることができる。加えて、本化合物は、その分子内塩、水和物、溶媒和物又は同質異像を
含む。好適な薬剤化合物は、粘膜、真皮に浸透した後、又は経口投与の場合には唾液と共
に胃腸管へ運ばれた後に、局所的な生理学的効果、又は全身的な効果を発揮するものであ
る。

本発明は更に、式（１）の化合物の医薬的に許容される塩、及びかかる塩の使用方法に
関する。医薬的に許容される塩は、無毒であるか、生物学的に許容されるか、あるいは別
様に被験者に投与するのに生物学的に適した、化合物の遊離酸又は塩基の塩を指す。Ｓ．
Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．
Ｓｃｉ．，１９７７，６６：１〜１９、及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓ
ｅ，Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｗｅｒｍｕｔｈ編、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ ａｎｄ ＶＨＣＡ，
Ｚｕｒｉｃｈ，２００２を参照のこと。医薬的に許容される好ましい塩とは、薬理学的に
効果があり、過度の毒性、刺激、又はアレルギー反応を起こすことなく患者の組織に接触
するのに適したものである。化合物は、十分に酸性の基、十分に塩基性の基、又は両方の
種類の官能基を持つ可能性があり、したがっていろいろな無機又は有機塩基、並びに無機
及び有機酸と反応して医薬的に許容される塩を形成し得る。医薬的に許容される塩の例と
しては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸水素
塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩
、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、蟻酸塩、イソ酪酸塩、カ
プロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、蓚酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベ
リン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシ
ン−１，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息
香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレ
ンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸
塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタン−スルホン酸塩
、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸
塩、及びマンデル酸塩が挙げられる。

所望の医薬的に許容される塩は、塩基性窒素の存在下で、当該技術分野で利用可能な任
意の好適な方法によって調製することができ、その方法としては、例えば、遊離塩基を無
機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、過塩素酸、硫酸、スルファミン酸、硝酸
、ホウ酸、リン酸などでか、又は有機酸、例えば酢酸、トリフルオロ酢酸、フェニル酢酸
、プロピオン酸、ステアリン酸、乳酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイ
ン酸、リンゴ酸、パモ酸、イセチオン酸、コハク酸、吉草酸、フマル酸、サッカリン酸、
マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、オレイン酸、パルミチン
酸、ラウリン酸、ピラノシジル酸、例えばグルクロン酸若しくはガラクツロン酸など、α
−ヒドロキシ酸、例えばマンデル酸、クエン酸若しくは酒石酸など、アミノ酸、例えばア
スパラギン酸若しくはグルタミン酸など、芳香族酸、例えば安息香酸、２−アセトキシ安
息香酸、ナフトエ酸若しくは桂皮酸など、スルホン酸、例えばラウリルスルホン酸、ベン
ゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン
酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、シクロヘキサンスルホン酸、本明
細書に例として示したような酸の適合し得る任意の混合物、並びに当該技術分野の技術の
通常のレベルに照らして相当物又は許容される代替物であると見なされる任意の他の酸及
びこれらの混合物で処理する方法などが挙げられる。

所望の医薬的に許容される塩は、カルボン酸又はスルホン酸などの酸性基の存在下で、
任意の好適な方法によって調製することができ、その方法としては、例えば、遊離酸を無
機又は有機塩基、例えばアミン（第一級、第二級若しくは第三級）、アルカリ金属の水酸
化物、アルカリ土類金属の水酸化物、本明細書に例として示したような塩基の任意の適合
し得る混合物、並びに当該技術分野の技術の通常のレベルに照らして相当物又は許容され
る代替物であると見なされる任意の他の塩基及びこれらの混合物で処理する方法などが挙
げられる。好適な塩の具体例としては、アミノ酸、例えばグリシン及びアルギニンなど、
アンモニア、炭酸塩、重炭酸塩、第一級、第二級、及び第三級アミン、及び環式アミン、
例えばベンジルアミン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、及びピペラジンなどから
生じさせた有機塩、並びにナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン
、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム及びリチウムから生じさせた無機塩が挙げられる。代表的
な有機塩基又は無機塩基としては更に、ベンザチン、クロロプロカイン、コリン、ジエタ
ノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン、及びプロカインが挙げられる。

本発明はまた、この化合物の医薬的に許容されるプロドラッグ、及びかかる医薬的に許
容されるプロドラッグを用いた治療方法にも関する。用語「プロドラッグ」は、被験者に
投与した後に化学的又は生理学的方法、例えば生体内で起こる加溶媒分解又は酵素による
開裂などで、又は生理学的条件下で当該化合物になる指定化合物の前駆体を意味する。「
医薬的に許容されるプロドラッグ」は、非毒性であり、生物学的に許容され、あるいは別
様に被験者に投与するのに生物学的に適したプロドラッグである。好適なプロドラッグ誘
導体の選択及び調製の具体的な操作手順は、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒ
ｕｇｓ」、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編、１９８５，Ｅｌｓｅｖｉｅｒに記載されている。

追加的な種類のプロドラッグは、例えば、化合物の構造の遊離カルボキシル基をアミド
又はアルキルエステルとして誘導体化することで製造することができる。アミドの例とし
は、アンモニア、第一級アルキルアミン、及び第二級ジ−アルキルアミンから誘導される
アミドが挙げられる。第二級アミンとしては、５員若しくは６員のヘテロシクロアルキル
又はヘテロアリール環部分が挙げられる。アミドの例としては、アンモニア、アルキル第
一級アミン及びジアルキルアミンから誘導されるアミドが挙げられる。本発明のエステル
の例としては、アルキルエステル、シクロアルキルエステル、フェニルエステル、及びフ
ェニルアルキルエステルが挙げられる。好適なエステルとしてはメチルエステルが挙げら
れる。プロドラッグは、ヘミコハク酸塩、リン酸エステル、ジメチルアミノ酢酸塩、及び
ホスホリルオキシメチルオキシカルボニルなどの基を用いて、Ｆｌｅｉｓｈｅｒら、Ａｄ
ｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．，１９９６，１９：１１５〜１３０に概略が
示されている手順に従って遊離ヒドロキシ基を誘導体化することで調製することもできる
。ヒドロキシ基及びアミノ基のカルバメート誘導体も、プロドラッグを生じさせることが
できる。また、ヒドロキシ基のカーボネート誘導体、スルホン酸エステル、及び硫酸エス
テルもプロドラッグをもたらし得る。また、ヒドロキシ基に誘導体化をアシルオキシメチ
ル及びアシルオキシエチルエーテル（このアシル基はアルキルエステルであってもよく、
所望により１個以上のエーテル、アミン、又はカルボン酸官能基で置換されていてもよい
か、あるいはアシル基は上記のようなアミノ酸エステルである）として受けさせることも
、プロドラッグを生じさせるのに有効である。この種のプロドラッグは、Ｇｒｅｅｎｗａ
ｌｄら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，３９（１０）：１９３８〜４０に記述され
ているように調製することができる。遊離アミンもまた、アミド、スルホンアミド、又は
ホスホンアミドとして誘導体化され得るそのようなプロドラッグ部分の全部に、エーテル
、アミン、及びカルボン酸官能を包含する基が組み込まれている可能性がある。

本発明はまた、本発明の方法で用いることもできる、式（１）の化合物の医薬的に活性
の代謝産物に関する。「医薬的に活性の代謝産物」とは、化合物又はその塩の体内の代謝
による医薬的に活性な生成物を意味する。化合物のプロドラッグ及び活性の代謝産物は、
当該技術分野で公知又は利用可能な常規技術を用いて求めることができる。例えば、Ｂｅ
ｒｔｏｌｉｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，４０：２０１１〜２０１６、Ｓ
ｈａｎら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９９７，８６（７）：７６５〜７６７、Ｂａｇ
ｓｈａｗｅ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．，１９９５，３４：２２０〜２３０、Ｂｏｄｏ
ｒ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．，１９８４，１３：２２４〜３３１、Ｂｕｎｄｇａａｒ
ｄ，Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，１９８５，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｐｒｅｓｓ
、及びＬａｒｓｅｎ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｄ
ｒｕｇｓ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９９１，Ｋｒ
ｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎら編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｅｒｓを参照のこと。

Ｃ）医薬組成物
本発明の特定の実施形態では、式（１）の化合物の塩、より詳細にはメグルミン塩は、
医薬組成物を処方するために、単独で又は１つ以上の追加成分と組み合わされて用いられ
る。医薬組成物は、本発明による少なくとも１種の化合物を有効量で含有する。

本開示はまた、本明細書に記述されている化合物又は誘導体と、１つ以上の医薬的に許
容される担体、賦形剤、及び希釈剤とを含む組成物（医薬組成物を含む）も提供する。本
発明の特定の実施形態では、組成物はまた、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝
剤を含み得る。特定の一実施形態では、この医薬組成物は、ヒトに投与するのに医薬的に
許容される。特定の実施形態では、この医薬組成物は、本明細書に記述される化合物又は
誘導体の治療的有効量又は予防的有効量を含む。治療的に有効又は予防的に有効となる、
本発明の化合物又は誘導体の量は、標準の臨床的技法によって決定することができる。代
表的な有効量は、下記のセクションでより詳しく記述される。本発明の特定の実施形態で
は、組成物は、安定剤も含み得る。安定剤は、化合物（１）の組成物の化学的劣化速度を
遅らせる化合物である。好適な安定剤には、酸化防止剤（アスコルビン酸など）、ｐＨ緩
衝剤、又は塩緩衝剤が挙げられるが、これらに限定されない。

医薬組成物は、被験者、好ましくはヒト被験者に投与するのに好適な任意の形態であり
得る。特定の実施形態では、この組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、錠剤、丸薬、カプセ
ル、粉末、及び持続放出性製剤の形態である。この組成物はまた、特定の単位剤形であり
得る。単位剤形の例としては、錠剤；キャプレット；カプセル（例えばソフト弾性ゼラチ
ンカプセル）；カシェ剤；トローチ剤；口内錠；分散剤；座薬；軟膏；パップ剤（湿布）
；ペースト；粉末；包帯；クリーム；ギプス；溶液；パッチ；エアロゾル（例えば鼻スプ
レー又は吸入器）；ゲル；患者に経口又は粘膜投与するのに好適な液体投与形態（懸濁液
（例えば水性又は非水性の液体懸濁液、水中油型エマルション、又は油中水型液体エマル
ション）、溶液、及びエリキシル剤を含む）；被験者に非経口投与するのに好適な液体投
与形態；並びに被験者に非経口投与するのに好適な液体投与形態に還元できる滅菌固体（
例えば結晶又はアモルファス固体）が挙げられるが、これらに限定されない。

特定の一実施形態では、被験者は、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、家禽、ネコ、イヌ、マ
ウス、ラット、ウサギ、又はモルモットなどの哺乳類である。好ましい実施形態では、被
験体はヒトである。好ましくは、この医薬組成物は獣医学的投与及び／又はヒトへの投与
に好適である。この実施形態に従い、用語「医薬的に許容される」とは、動物における使
用について、及びより具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府又は州政府の規制
機関によって認可されていること、又は、米国薬局方若しくは他の一般に承認されている
薬局方に記載されていることを意味する。

この組成物における使用に好適な医薬担体は、水及び油（石油、動物、植物又は合成由
来のものを含む）などの滅菌液体である。特定の一実施形態では、この油は、落花生油、
大豆油、鉱物油、又はゴマ油である。医薬組成物が静注投与される場合には、水が好まし
い担体である。生理食塩水並びに水性デキストロース及びグリセロール溶液も、特に注射
溶液用の液体担体として採用され得る。好適な医薬担体の更なる例は、当該技術分野にお
いて既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）第１８版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｅａｓｔｏｎ
Ｐａ．）に記述されている。

この組成物に使用するのに好適な賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース
、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナ
トリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク
、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、及びエタノールが挙げられる。特定の賦
形剤が医薬組成物への組み込みに好適かどうかは、当該技術分野において周知の様々な要
素に依存し、例えばその組成物の投与経路及び特定の活性成分が挙げられるが、これらに
限定されない。

本明細書に記述されている化合物若しくは誘導体、又はその医薬的に許容される塩及び
溶媒和物を含む医薬組成物は、意図された投与経路に適合するように製剤化される。この
製剤は、好ましくは局所投与用であるが、例えば吸入又は吹送（口又は鼻を介して）、皮
内、経口、皮下、舌下、非経口、経膣、又は直腸などの他の手段による投与用であり得る
。好ましくは、この組成物はまた、保管及び輸送中に化合物の化学的安定性の改善をもた
らすように製剤化される。この製剤は、凍結乾燥することができ、又は液体製剤であって
よい。

Ｄ）投与
本明細書に記述されている化合物若しくは誘導体、又はそれらの医薬的に許容される塩
は、好ましくは、所望により医薬的に許容される溶媒を含む組成物の構成要素として投与
される。この化合物又は誘導体は、好ましくは経口投与される。別の好ましい投与方法は
、化合物又は誘導体の局所適用を介した投与である。

特定の実施形態では、この化合物又は誘導体は、任意の他の便利な経路、例えば、皮膚
、上皮層又は皮膚粘膜層（例えば、表皮、口腔粘膜、直腸、及び腸粘膜）からの吸収によ
って投与される。投与方法としては、非経口、皮内、筋肉内、腹膜内、静脈内、皮下、鼻
孔内、硬膜外、経口、舌下、鼻孔内、大脳内、膣内、経皮、直腸、吸入により、又は局所
的に、特に耳、鼻、目、若しくは皮膚に対しての投与が挙げられるが、これらに限定され
ない。多くの場合において、投与は、化合物又は誘導体の血中内への放出を生じる。好ま
しい実施形態では、化合物又は誘導体は経口で送達される。

更に、本発明は、例えば貧血、血管疾患、代謝性疾患、及び創傷治癒など、プロリルヒ
ドロキシラーゼが介在する疾患、障害、又は状態と診断された、あるいはそれらを患って
いる被験体を治療するために、本明細書に記述されている化合物を用いる方法に関する。

好ましい実施形態では、本発明の化合物は、慢性腎臓疾患、多発性嚢胞腎、再生不良性
貧血、自己免疫性溶血性貧血、骨髄移植貧血、チャーグ−ストラウス症候群、ダイアモン
ドブラックファン貧血、ファンコニ貧血、フェルティ症候群、移植片対宿主病、造血性幹
細胞移植、溶血性尿毒症症候群、骨髄異形成症候群、発作性夜間ヘモグロビン尿症、骨骨
髄線維症、汎血球減少症、真性赤血球無形成症、シェーンライン−ヘノッホ紫斑病、芽球
増加を伴う不応性貧血、関節リウマチ、シュバッハマン症候群、鎌状赤血球症、重症型サ
ラセミア、軽症型サラセミア、血小板減少性紫斑病、手術を受ける貧血患者若しくは非貧
血患者、外傷を伴う又は外傷に従属して起こる貧血、鉄芽球性貧血、他の治療（ＨＩＶ治
療のための逆転写酵素抑制剤、コルチコステロイドホルモン、環状シスプラチン又は非シ
スプラチン含有の化学療法剤、ビンカアルカロイド、有糸分裂阻害剤、トポイソメラーゼ
ＩＩ阻害剤、アントラサイクリン、アルキル化薬）に従属して起こる貧血、特に炎症、加
齢、及び／若しくは慢性疾患に従属して起こる貧血に関連する貧血状態の治療を含む、貧
血の治療又は予防に有用である。ＰＨＤ阻害は、慢性疲労、蒼白及びめまいを含む、貧血
症状の治療にも用いることができる。

別の好ましい実施形態では、本発明の分子は、糖尿病及び肥満を含むがこれらに限定さ
れない代謝性障害の疾患の治療及び予防に有用である。別の好ましい実施形態では、本発
明の分子は、血管疾患の治療又は予防に有用である。これには、脈管形成、血管形成及び
動脈形成のための血管新生促進媒介を必要とする疾患に関連する、低酸素状態又は創傷治
癒が含まれるが、これらに限定されない。

本発明による治療方法では、かかる疾患、障害又は状態に罹患しているか、あるいはそ
うであると診断された被検体に、本発明による薬剤の有効量を投与する。「有効量」とは
、対象の疾患、障害又は状態のかかる治療を必要とする患者において、所望の治療的又は
予防的効果を一般的にもたらすのに十分な量又は投与量を意味する。本発明の化合物の有
効量若しくは用量は、常法、例えばモデリング、用量漸増試験又は臨床試験など、及び常
規要因、例えば投与様式若しくは経路又は薬剤送達など、化合物の薬物動態、疾患、障害
又は状態の重症度及び過程、患者が以前又は現在受けている治療、患者の健康状態及び薬
剤に対する反応、並びに治療を施す医者の判断などを考慮に入れることで確定することが
できる。化合物の用量の例は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．００１〜約２００ｍｇ／
日、好ましくは約０．０５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、又は１回又は投薬単位を分割（例え
ば、ＢＩＤ、ＴＩＤ、ＱＩＤ）して約１〜３５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。例えば、７
０ｋｇのヒトの場合の適切な投薬量の例となる範囲は、約０．０５〜約７ｇ／日又は約０
．２〜約２．５ｇ／日である。

経口錠剤に本発明による化合物を含有させてもよく、医薬的に上許容できる賦形剤、例
えば不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑剤、甘味剤、香味剤、着色剤及び防腐剤等と混合
してもよい。好適な不活性充填剤としては、炭酸ナトリウム及び炭酸カルシウム、リン酸
ナトリウム及びリン酸カルシウム、ラクトース、デンプン、糖、グルコース、メチルセル
ロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが挙げられる。代
表的な液体経口賦形剤としては、エタノール、グリセロール、水などが挙げられる。デン
プン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、デンプングリコール酸ナトリウム、微結晶性セ
ルロース、及びアルギン酸が、好適な崩壊剤である。結合剤にはデンプン及びゼラチンが
含まれ得る。滑剤を存在させる場合、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタル
クであってもよい。必要に応じて、錠剤をモノステアリン酸グリセリル又はジステアリン
酸グリセリルなどの材料でコーティングすることにより胃腸管内での吸収を遅らせてもよ
いか、あるいは腸溶性コーティングでコーティングしてもよい。

経口投与用カプセルには、硬質及び軟質ゼラチンカプセルが含まれる。硬質ゼラチン製
カプセルの調製は、本発明の化合物を固体、半固体、又は液体希釈剤と混合することで実
施可能である。軟質ゼラチン製カプセルの調製は、本発明の化合物を水、油、例えば落花
生油若しくはオリーブ油、液状パラフィン、短鎖脂肪酸のモノ−グリセリドとジ−グリセ
リドとの混合物、ポリエチレングリコール４００、又はプロピレングリコールと混合する
ことで実施可能である。

経口投与用の液体は、懸濁液、溶液、乳液又はシロップの形態であってもよいか、ある
いは使用前に水又は他の適切な媒体でもどす乾燥製品として提供することも可能である。
このような液体組成物は、所望により、医薬的に許容される賦形剤、例えば懸濁化剤（例
えばソルビトール、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒドロキシエ
チルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルなど）；
非水性媒体、例えば油（例えばアーモンド油又は分別ヤシ油）、プロピレングリコール、
エチルアルコール又は水；防腐剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル又はプロピル
又はソルビン酸）；湿潤剤、例えばレシチンなど；及び必要ならば香味又は着色剤を含有
してもよい。

また、本発明の活性剤は、非経口経路で投与することもできる。例えば、組成物を直腸
投与の目的で座薬として処方してもよい。静脈内、筋肉内、腹腔内、又は皮下経路を包含
する非経口用途の場合、本発明の化合物を、適切なｐＨ及び等張性に緩衝された無菌の水
溶液若しくは懸濁液又は非経口的に許容される油として提供してもよい。好適な水性媒体
としては、リンゲル液及び等張性塩化ナトリウム溶液が含まれる。そのような形態物を単
位用量形態、例えばアンプル又は使い捨て可能注射デバイスなど、複数回用量形態、例え
ば適量を取り出すことが可能なバイアル瓶など、又は注射可能製剤を生じさせる目的で使
用可能な固体形態物若しくは予濃縮液の形態で提供してもよい。具体的な輸液用量は、数
分〜数日の範囲の期間にわたって約１〜１０００μｇ／ｋｇ／分の範囲の、医薬担体と混
ざり合った化合物であってよい。

局所投与の場合には、本化合物を、媒体に対する薬剤の濃度が約０．１％〜約１０％に
なるように医薬担体と混合してもよい。例としては、ローション、クリーム、軟膏及びこ
れらに類するものが挙げられ、これらは既知の方法により配合することができる。本発明
の化合物を投与する別の様式では、経皮送達を行う目的でパッチ製剤を利用してもよい。

開発に最も適した特性を有する化合物（１）の塩を同定するために、塩選択評価を行っ
た。選択過程に不可欠であると考えられる基準は、結晶化度、再結晶過程からの形態再現
性、加速条件下での化学的及び物理的安定性、並びに原薬開発及び製剤開発の双方を支持
するために最適である溶解度であった。

実施形態では、この化合物は、必要としている患者に投与するのに好適な剤形に製剤さ
れる。薬剤及び担体粒子の調製方法及び装置は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，１９８５，第１７版、１５８５〜１５９４；Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｐｅｒｒｙ，１９８４，第６版、ｐ
ｐ．２１−１３から２１−１９（１９８４）；Ｐａｒｒｏｔら、１９７４，Ｊ．Ｐｈａｒ
ｍ．Ｓｃｉ．，６１（６）：８１３〜８２９；及びＨｉｘｏｎら、１９９０，Ｃｈｅｍ．
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐｐ．９４〜１０３に開示されている。

本発明の剤形に組み込まれる化合物の量は、一般に治療適応及び所望の投与期間（例え
ば１２時間おき、２４時間おきなど）に応じて、組成物の重量を基準として約１０重量％
〜約９０重量％で変化し得る。投与したい化合物の用量に応じて、１つ以上の剤形で投与
することができる。製剤によっては、この化合物は、酢酸塩の形態又は遊離塩基の形態と
なるのが好ましい。

更に、本発明はまた、ヒト又はヒト以外の動物体の治療又は診断方法での使用について
前述した、医薬組成物又は医薬剤形にも関する。

本発明はまた、治療を必要としている哺乳類に経口投与するための医薬剤形の製造にお
ける使用のための医薬組成物に関し、その剤形が、その哺乳類による食事摂取とは独立に
、１日のうちいつでも投与できることを特徴とする。

本発明はまた、ヒト又はヒト以外の動物体の治療又は診断方法に関し、これはその動物
体に、本明細書に記述されている医薬組成物の治療的又は診断的有効量を投与することを
含む。

本発明はまた、本明細書に記述される容器、剤形を含む、商業的販売に好適な医薬品パ
ッケージに関し、そのパッケージに、その剤形が食事と共に又は食事なしで投与できるか
どうかについてなど、非限定的な書面を伴う。

下記の製剤実施例は説明目的に限定され、本発明の範囲をいかなる意味でも制限するも
のではない。

５つのバージョンの化合物（１）（即ち、遊離酸、ナトリウム塩、カリウム塩、トロメ
タミン塩、及びメグルミン塩）を生成し、それらの物理的特性及び製造可能性が、化合物
の好ましい形態の選択の指針となった。

Ｅ）合成実施例
以下の実施例に記述する化合物、及びそれに対応する分析データを得るため、別途記載
のない限り、以下の実験プロトコル及び分析プロトコルを順守した。特に明記しない限り
、反応混合物は室温（ｒｔ）で磁気的に攪拌され、溶液は一般に、Ｎａ₂ＳＯ₄又はＭｇＳ
Ｏ₄などの乾燥剤上で「乾燥」され、混合物、溶液、及び抽出物は、典型的には、ロータ
リーエバポレーター上で減圧下で「濃縮」された。

データ解析設定
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０ Ｆ₂₅₄ ２．５ｃ
ｍ×７．５ｃｍ ２５０μｍ又は５．０ｃｍ×１０．０ｃｍ ２５０μｍコーティング済
みシリカゲルプレートを使用して実施された。分取薄層クロマトグラフィーは、ＥＭ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅシリカゲル６０ Ｆ₂₅₄ ２０ｃｍ×２０ｃｍ ０．５ｍｍコーティング済
みプレートで、濃縮ゾーンが２０ｃｍ×４ｃｍのものを使用して実施された。

順相フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣＣ）は、特に明記しない限り、シリカ
ゲル（ＳｉＯ₂）用いてヘキサン／酢酸エチルで溶離させることで実施し、逆相ＨＰＬＣ
は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ₁₈（５μｍ、４．６×１５０ｍｍ）カラムが備
わっているＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＨＰＬＣシリーズ１１００を用いて実施し
、検出はλ＝２３０、２５４、及び２８０ｎｍで実施し、流量を１ｍＬ／分にして１０〜
９９％のアセトニトリル／水（０．０５％のトリフルオロ酢酸）に５．０分かけて至らせ
る勾配をかけた。あるいは、分取ＨＰＬＣ精製は、逆相ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−Ａ（
５μｍ、３０×２５０ｍｍ）カラムが備わっており、Ｇｉｌｓｏｎ Ｕｎｉｐｏｉｎｔ
ＬＣソフトウェアを実行するＧｉｌｓｏｎ自動化ＨＰＬＣシステムを用いて実施し、ＵＶ
ピーク検出はλ＝２２０ｎｍで実施し、流量を１０〜２０ｍＬ／分にして１０〜９９％の
アセトニトリル／水（０．０５％のトリフルオロ酢酸）に１５〜２０分かけて至らせる移
動勾配をかけた。

マススペクトル（ＭＳ）は、別途記載のない限り、ＥＳＩ／ＡＰＣＩポジティブ及びネ
ガティブマルチモードソースが備わったＡｇｉｌｅｎｔシリーズ１１００ ＭＳＤを用い
て得て、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルはＢｒｕｋｅｒモデルＤＲＸ分光計を用いて得
て、¹Ｈ ＮＭＲデータは、テトラメチルシラン標準のダウンフィールドへの化学シフト
（ｐｐｍ）（見かけの多重度、結合定数Ｊ（Ｈｚ）、積分値）を示している。

実施例１：１−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−
ピラゾール−４−カルボン酸（化合物（１））の遊離酸

方法Ａ：
化合物（１）の遊離酸を、２，５，６−トリクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール及び１
Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を用いて調製した。ＭＳ（ＥＳＩ／ＣＩ）：Ｃ₁₁Ｈ₆Ｃ
ｌ₂Ｎ₄Ｏ₂の質量計算値、２９７．１；ｍ／ｚ実測値、２９６．０［Ｍ−Ｈ］^-。¹Ｈ Ｎ
ＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）：１４．１８−１２．５２（ｂｒ ｓ，２Ｈ），
８．８９（ｄ，Ｊ ０．５Ｈｚ，１Ｈ），８．３１（ｄ，Ｊ＝０．５Ｈｚ，１Ｈ），７．
８０（ｓ，２Ｈ）。

方法Ｂ：
工程Ａ：５，６−ジクロロ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン：乾燥
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中４，５−ジクロロ−ベンゼン−１，２−ジアミン（２５ｇ、０．
１４モル）の溶液に、固体ＣＤＩ（２３ｇ、０．１４モル）を添加した。この反応溶液を
室温で１時間攪拌し、次に水（５００ｍＬ）を加えた。沈殿固形物を濾過により回収し、
水で洗浄し、完全に乾燥させて、標題化合物を得た（２６．０ｇ、９０％）。この粗生成
物を、更に精製することなく、次の反応に使用した。

工程Ｂ：２，５，６−トリクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール：十分に乾燥させた５，
６−ジクロロ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（２８．４ｇ、０．１
４モル）をＰＯＣｌ₃（７５ｍＬ）中に懸濁させた。この反応溶液を還流温度に３時間加
熱し、室温まで冷却した。この溶液を、十分に攪拌しながら、砕いた氷／水（１．５Ｌ）
にゆっくり注いだ。この溶液をＮａＯＨでｐＨ＝７．０に中和した。沈殿固形物を濾過に
より回収し、水で洗浄し、乾燥させて、標題化合物を得た（２７．９ｇ、９０％）。この
粗生成物を、更に精製することなく、次の反応に使用した。

工程Ｃ：１−（５，６−ジクロロ−１−ジメチルスルファモイル−１Ｈ−ベンゾイミダ
ゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル。２，５，６−
トリクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール２（２７．６ｇ、０．１２５モル）を乾燥ＤＭＦ
（２００ｍＬ）に溶解し、Ｋ₂ＣＯ₃（２０．７ｇ、０．１５モル）及び塩化ジメチルスル
ファモイル（１７．９ｇ、０．１２５モル）を加えた。この反応混合物を室温で１６時間
攪拌した。ＨＰＬＣ分析により、２，５，６−トリクロロ−ベンゾイミダゾール−１−ス
ルホン酸ジメチルアミドの完全な形成が示された。同じ容器に、２，５，６−トリクロロ
−ベンゾイミダゾール−１−スルホン酸ジメチルアミドを分離することなく、１Ｈ−ピラ
ゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１７．５ｇ、０．１２５モル）及びＫ₂ＣＯ₃（
２０．７ｇ、０．１５モル）を加えた。この反応混合物を７０℃で４時間攪拌し、反応溶
液がまだ熱いうちに水（５００ｍＬ）を加えた。この反応溶液を、室温に冷却した。沈殿
固形物を濾過により回収し、水で洗浄し、乾燥させた。この粗生成物を、更に精製するこ
となく、次の反応に使用した。

工程Ｄ：１−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−ピ
ラゾール−４−カルボン酸。粗１−（５，６−ジクロロ−１−ジメチルスルファモイル−
１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸エチルエス
テルを、ＴＨＦ（１２５ｍＬ）中に溶かし、水（２５０ｍＬ）中のＬｉＯＨ・Ｈ₂Ｏ（２
１ｇ、０．５モル）を加えた。この反応混合物を還流温度で２時間攪拌し、室温に冷却し
た。濃ＨＣｌを加えて、ｐＨを２．０に調節した。固体の沈殿を濾過により回収し、水で
洗浄し、乾燥させた。この固体を熱いＥｔＯＡｃ（１Ｌ）中で粉砕した。室温まで冷却し
て濾過した後、式（Ｉ）の化合物を褐色の固体として得た（１８．５ｇ、５０％）。ＭＳ
［Ｍ＋Ｈ］⁺実測値２９７．０。¹Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ₆）：１３．
７１（ｓ，１Ｈ），１２．９９（ｓ，１Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｓ，１
Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ）。

化合物（１）の遊離酸の６．０ｇバッチの熱特性、結晶性、見かけ純度、及び吸湿性を
表１に要約する。化合物（１）の飽和度データを図１に示す。

^a分解

実施例２：化合物（１）のカリウム塩
１−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール
−４−カルボン酸のカリウム塩の調製は、遊離酸（５５ｇ、１．７モル）をＥｔＯＨ（１
．５Ｌ）中に還流温度で懸濁させ、２０ｍＬの水中のＫ₂ＣＯ₃（１２．７９ｇ、０．８５
モル）を５分にわたり滴加することにより行われた。適切な攪拌を確保するため、強力な
機械的攪拌が必要であった。この懸濁液を還流温度で８時間攪拌した後、５時間かけて室
温まで冷却した。沈殿した固体を濾過により回収し、１００ｍＬの水、続いてＥｔＯＨで
素早く洗浄した。カリウム塩が白色固体として得られた（３８ｇ、６５％）。その後、母
液を濃縮し、上記のプロセスをもう一度繰り返して、カリウム塩の２番目の生成物（１３
ｇ、２２％）を得た。ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］⁺＝２９７．０。¹Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆）：８．６５（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｓ，２Ｈ）。

上記の再スラリー化方法によって調製されたカリウム塩は非吸湿性であり、ＰＸＲＤ及
び熱分析から分かるように低結晶性の水和物と一致する。それぞれ脱水事象及び融解／分
解と関係し得る化合物（１）のカリウム塩の２つのブロードな吸熱ピークが、ＤＳＣから
見て取れる（表２）。

^d分解

実施例３：化合物（１）のナトリウム塩
化合物（１）のナトリウム塩は、ＰＸＲＤ及び熱分析が示すように、低結晶性の水和固
形物である。ＤＳＣは２つのブロードな吸熱ピークを明らかにし、第１の事象は水分の損
失（ＴＧＡにより〜９％）と関係しており、第２の吸熱は塩の融解／分解が原因である。
ナトリウム塩は、カリウム塩の調製で用いたのと同様の方法（スラリー法）で調製された
。

実施例４：化合物（１）のトロメタミン塩の結晶化手順
これまでにトロメタミン塩の２つの形態が生成されている。第１の形態は、エタノール
水溶液（１４％水）中の化合物（１）とトロメタミンのスラリーから得た。塩ではないが
、この物理的な混合物は探求されなかった。第２の形態は、過剰量の対イオンを含む水系
後処理から生成された。この形態は、カリウム塩より低い見かけの水溶解度を有すること
が認められた水和塩であった。この化合物はまた、不十分なバルク特性を呈した。

実施例５：化合物（１）のメグルミン塩の結晶化手順
化合物（１）の遊離酸と１．２モル当量のメグルミンの透明溶液（３０ｍｇ／ｍＬ）を
、わずかに加熱した後のメタノール水溶液（１２％水）中で生成した。シード添加を伴う
室温での攪拌、又はシード添加を伴う若しくは伴わない冷凍は、一貫してメグルミン塩の
結晶化をもたらし、これを濾過により回収した。この方法を用いて２ｇバッチの塩を生成
した。上記手順における溶媒組成を水性エタノールに変更し、ＰＤＭＳ ＡＰＩ ＳＭ開
発チームがこれを使用して、ＦＩＨの効果及びＦＩＨの研究の裏付けのためにＧＭＰグレ
ードの物質８．７ｋｇを製造した。

化合物（１）のメグルミン塩の熱特性、結晶性、及び見かけ純度を表３に要約する。図
２及び図３はそれぞれ、ＰＸＲＤデータ、並びにＤＳＣ、ＴＧＡ、及びｘ線データを含む
、化合物（１）のメグルミン塩の塩バルク特性を示している。単結晶データにより、化合
物（１）のメグルミン塩は、図４Ａ及び図４Ｂに示す実験の粉末パターンと極めてよく一
致しているシミュレートした粉末パターンを有する二水和物であることが確認された。化
合物（１）のメグルミン塩は、化合物（１）の遊離酸又はカリウム塩に比べて、改善され
たバルク特性、溶解度、及び向上した加工性を有することが認められた。

実施例６：化合物（１）のメグルミン塩の局所製剤
化合物（１）のメグルミン塩の局所製剤の開発で用いられる材料及び賦形剤を表４に列
挙する。

^*賦形剤の熱可逆特性により５℃で可溶化。

表５は、化合物（１）のメグルミン塩の選択された製剤に対して行われた、４週間保存
後の物理的及び化学安的定性の結果を一覧で示す。

^*バイアル瓶中に認められる沈殿物

ＨＰＬＣ分析は、これら６つの製剤組成物が、研究で用いた保存条件下で４週間にわた
って化学的に安定であったことを示した。ポロキサマーを主にした製剤（実験４）の物質
収支の見かけの損失は、４０℃における化合物（１）の遊離酸の沈殿に起因したものであ
り、分解のせいではなかった。４０℃でポリマーは分解し、その結果酢酸、アルデヒドが
形成されると同時に、粘性が消失し、かつｐＨが低下する。結果として生じる酸性環境は
、化合物（１）の不溶性遊離酸の沈殿及び製剤の退色を引き起こした。ポロキサマー（又
はルトロール）の不安定性は周知であり、Ｅｒｌａｎｄｓｓｏｎ，Ｂ．，２００２，Ｐｏ
ｌｙｍ．Ｄｅｇｒａｄ．ａｎｄ Ｓｔａｂ．，７８：５７１〜５７５に開示されている。
このような分解は、室温で保存されたか、又は冷蔵保存されたサンプルでは認められなか
った。

化合物（１）のメグルミン塩の製剤の溶解度スクリーニングの結果を表６に示す。調べ
た１０種の媒体のうちの４種、即ち、１％ Ｎａ−ＣＭＣ（実験１）、１％カルボマー９
４１（実験２）、１％カルボマー９３４Ｐ（実験３）、及び２０％ ＨＰ−β−ＣＤ（実
験４）は、対象としている溶解度基準である１０ｍｇ／ｍＬ（遊離酸換算）を満たさなか
ったか、又はＨｅｌａ細胞に有害であった。１％ ＭＣの媒体は、２％ ＭＣを含有する
生成物に勝る顕著な利点を有さなかった。化合物（１）のメグルミン塩は、実験５及び７
〜１１の許容可能なｐＨ範囲（６〜８．５）内で十分に可溶性であった。

^*製剤はＨｅｌａ細胞に有害であった。

Ｆ）生物学的実施例
ＨＩＦ１−αについての細胞アッセイ
Ｈｅｌａ細胞（ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））を、ウシ胎児血清１０％、非必
須アミノ酸１％、ペニシリン５０ＩＵ／ｍＬ、及びストレプトマイシン５０μｇ／ｍＬを
含む１００μＬのＤＭＥＭ中、１ウェル当たり２０，０００個の細胞で９６ウェルプレー
トに蒔いた（細胞培養試薬は全てＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）より
入手）。播種の２４時間後、培地を、ウシ胎児血清１０％を含まない１００μＬのＤＭＥ
Ｍに変更し、各化合物の原液を１．１μＬ加え、６時間インキュベートした。全ての化合
物を最終化合物濃度１００μＭで試験した。上清を除き、プロテアーゼ阻害物質を含有す
るＭＳＤ溶解バッファー５５μＬで細胞を溶解した。次に、ブロッキングしたＭＳＤヒト
ＨＩＦ−１α検出プレート（製造元のプロトコルに従う、Ｍｅｓｏ−Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓ
ｃｏｖｅｒｙ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ））に５０μＬの細胞可溶化物を移し、
軌道振盪器の上で室温にて２時間インキュベートした。ＰＢＳで３回洗浄した後、２５μ
Ｌの２０ｎＭ抗−ＨＩＦ１α検出抗体を加え、軌道振盪器の上で室温にて１時間インキュ
ベートした。ＰＢＳで３回洗浄した後、１Ｘ読み取り用緩衝液（read buffer）１５０μ
Ｌを加え、次に、プレートをＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ装置で測定した。１００μＭの化合物
の存在下でのＨＩＦ刺激率（％）を測定することにより、検定の対照化合物（７−［（４
−クロロ−フェニル）−（５−メチル−イソキサゾル−３−イルアミノ）−メチル］−キ
ノリン−８−オール）と比較してデータを分析した。化合物（１）のメグルミン塩のこの
生物学的データは図５に示されている。

化合物（１）のメグルミン塩の製剤の更なる生物学的データは、図６〜図８に示されて
いる。

上記の明細書は、説明を目的として与えられる実施例と共に本発明の原理を教示するも
のであるが、本発明の実施には、以下の「特許請求の範囲」及びその均等物の範囲内に含
まれる全ての通常の変形例、適合例及び／又は改変例が包含される点は理解されるであろ
う。

Claims (5)

1. １−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−１Ｈ−ピラ
   ゾール−４−カルボン酸のメグルミン塩を含む、製剤。
2. メグルミン塩の形態の下記式：
   

   

   の化合物。
3. 請求項２に記載の化合物と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
4. 前記メグルミン塩が、二水和物の形態である、請求項１に記載の製剤。
5. 請求項１に記載の製剤を含む、局所軟膏。

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