[go: up one dir, main page]

JP2015211685A - 第１１因子発現の調節 - Google Patents

第１１因子発現の調節 Download PDF

Info

Publication number
JP2015211685A
JP2015211685A JP2015132654A JP2015132654A JP2015211685A JP 2015211685 A JP2015211685 A JP 2015211685A JP 2015132654 A JP2015132654 A JP 2015132654A JP 2015132654 A JP2015132654 A JP 2015132654A JP 2015211685 A JP2015211685 A JP 2015211685A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
factor
compound
seq
complementary
oligonucleotide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2015132654A
Other languages
English (en)
Other versions
JP6084255B2 (ja
Inventor
フレアー，スーザン・エム
M Freier Susan
モニア，ブレット・ピー
Brett P Monia
チャン，ホン
Hong Zhang
チャオ，チェングァン
Chenguang Zhao
クロスビー，ジェフリー・アール
Jeffrey R Crosby
シウコウスキ，アンドリュー・エム
M Siwkowski Andrew
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ionis Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Isis Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Isis Pharmaceuticals Inc filed Critical Isis Pharmaceuticals Inc
Publication of JP2015211685A publication Critical patent/JP2015211685A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6084255B2 publication Critical patent/JP6084255B2/ja
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system having sulfur as a ring hetero atom, e.g. ticlopidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/727—Heparin; Heparan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/737—Sulfated polysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21027—Coagulation factor XIa (3.4.21.27)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)

Abstract

【課題】第１１因子ｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を減少させるための方法、化合物、及び組成物の提供。
【解決手段】第１１因子を減少させて血栓塞栓合併症を治療又は予防することを必要とする個体において用いるためのアンチセンス化合物。第１１因子核酸を標的とする１２〜３０個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを有する化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸配列が、第１１因子核酸の等しい長さの部分に少なくとも９０％相補的である、前記化合物。第１１因子に標的指向するアンチセンス化合物を、血栓症及び塞栓症のリスク状態にある個体を予防するための予防治療薬としても使用する。
【選択図】なし

Description

関連出願への相互参照
本出願は、35 U.S.C.§119（e）の下で、米国仮特許出願番号61/105,772（2008年10月1
5日出願）及び米国仮特許出願番号61/174,461（2009年4月30日出願）に対する優先権を主
張する。上記出願のいずれも、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列一覧表
本出願は、配列一覧表と共に電子フォーマットで出願されている。配列一覧表は、2009
年10月15日に創出されて、サイズが92 Kbである、20091015_BIOL0107WOSEQ.txtと題する
ファイルとして提供される。配列一覧表の電子フォーマット中の情報は、その全体が参照
により本明細書に組み込まれる。
技術分野
本発明の態様は、動物において第11因子のmRNA及びタンパク質の発現を低下させるため
の方法、化合物、及び組成物を提供する。そのような方法、化合物、及び組成物は、血栓
塞栓合併症を治療、予防、又は改善するのに有用である。
循環系は、血液損失を防ぐ機序、並びに不適正な血管内閉塞に対抗する機序を必要とす
る。一般に、凝固は、可溶性フィブリノーゲンの不溶性フィブリンゲルへの変換へ行き着
く反応のカスケードを含む。このカスケードの工程は、不活性な酵素源の活性化酵素への
変換を伴う。次いで、この活性酵素は、このカスケードにおける次の工程を触媒する。
凝固カスケード
凝固カスケードは、主要な経路である組織因子経路（又は「外因系経路」）と接触活性
化経路（又は「内因系経路」）という、2つの岐路を通して始動され得る。
組織因子経路は、血管外の細胞（周皮細胞、心筋細胞、平滑筋細胞、及び角化細胞）に
よって構成的に発現されて、炎症性サイトカイン又はエンドトキシンによる誘導時に血管
単球及び内皮細胞によって発現される、細胞表面受容体の組織因子（TF、第III因子とも
呼ばれる）によって始動される（Drake et al., Am J Pathol 1989, 134:1087-1097）。T
Fは、凝固第VIIa因子、セリンプロテアーゼへ高親和性の細胞受容体である。TFの非存在
時には、VIIaは、きわめて低い触媒活性を有して、VIIaがアロステリック機序を介して機
能的になるには、TFへ結合することが必要である（Drake et al., Am J Pathol 1989, 13
4:1087-1097）。TF-VIIa複合体は、第X因子を第Xa因子へ活性化する。次に、Xaは、その
補因子である第Va因子と会合してプロトロンビナーゼ複合体となり、これが次にプロトロ
ンビン（第II因子又は第2因子としても知られる）をトロンビン（第IIa因子又は第2a因子
としても知られる）へ活性化する。トロンビンは、血小板を活性化し、フィブリノーゲン
をフィブリンへ変換して、第XIII因子を活性化することによってフィブリン架橋結合を促
進し、それにより、TFが血管外細胞上で曝露される部位で、安定した血栓（plug）を形成
する。その上に、トロンビンは、第V因子及び第VIII因子を活性化することによって、凝
固カスケード反応を強化する。
接触活性化経路は、第XII因子の第XIIa因子への活性化が引き金になる。第XIIa因子は
、XIをXIaへ変換して、XIaはIXをIXaへ変換する。IXaは、その補因子のVIIIaと会合して
、XをXaへ変換する。上記2つの経路は、第Xa因子が第Va因子と会合してプロトロンビン（
第II因子）をトロンビン（第IIa因子）へ活性化するので、この点で集束する。
凝固の阻害
少なくとも3つの機序が凝固カスケードを抑制する、即ち、活性化プロテインC、アンチ
トロンビン、及び組織因子経路阻害剤の作用である。活性化プロテインCは、補因子のVa
及びVIIIaを分解するセリンプロテアーゼである。プロテインCは、トロンボモジュリンを
伴うトロンビンによって活性化されて、機能するには補酵素のプロテインSを必要とする
。アンチトロンビンは、セリンプロテアーゼ：トロンビン、Xa、XIIa、XIa、及びIXaを阻
害する、セリンプロテアーゼ阻害剤（セルピン）である。組織因子経路阻害剤は、Xaの作
用とTF-VIIa複合体を阻害する（Schwartz AL et al., Trends Cardiovasc Med. 1997; 7:
234-239）。
疾患
血栓症は、血塊の病的発展であり、血塊が身体の別の部分へ移動して臓器機能に干渉す
るときに、塞栓症が生じる。血栓塞栓症は、深在性静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、及
び卒中のような病気を引き起こす場合がある。重要にも、血栓塞栓症は、毎年200万を超
すアメリカ人に影響を及ぼす罹病の主因である（Adcock et al. American Journal of Cl
inical Pathology. 1997;108:434-49）。血栓症のほとんどの症例は、後天的な外因性の
問題、例えば、外科手術、癌、不動性状態によるが、遺伝的素因による症例もある。例え
ば、抗リン脂質抗体症候群、常染色体優性状態、第V因子ライデンである（Bertina RM et
al. Nature 1994; 369: 64-67）。
治療
最も一般的に使用されている抗凝固薬である、ワルファリン、ヘパリン、及び低分子量
ヘパリン（LMWH）は、いずれも重大な欠点を保有する。
ワルファリンは、典型的には、心房細動に罹患する患者を治療するために使用される。
この薬物は、第II因子、第VII因子、第IX因子、及び第X因子が含まれる、ビタミンK依存
的な凝固因子と相互作用する。抗凝固性ののプロテインC及びSも、ワルファリンによって
阻害されてしまう。ワルファリンを使用する薬物療法は、アミオダロンのような、心房細
動を治療するために使用される薬物が含まれる他の医薬品とワルファリンが相互作用する
という事実によってさらに複雑になる。ワルファリンでの治療は、予測することが難しい
ので、異常な出血の徴候を検知するために、患者を注意深く監視しなければならない。
ヘパリンは、トロンビンと第X因子をともに阻害するアンチトロンビンを活性化するこ
とによって機能する（Bjork I, Lindahl U. Mol Cell Biochem. 1982 48: 161-182）。ヘ
パリンでの治療は、血栓症につながる可能性がある、血小板を血管内で凝集させる免疫学
的反応を引き起こす場合がある。この副作用は、ヘパリン誘発性血小板減少症（HIT）と
して知られていて、患者の監視が求められる。ヘパリンでの長期治療は、骨粗鬆症をもた
らす場合もある。LMWHも、第2因子を阻害し得るが、未分画ヘパリン（UFH）より低い度合
いである。LMWHは、HITの発症との関連が示唆されている。
このように、現行の抗凝固剤は、予測可能性と特異性が不足しているので、出血合併症
のような有害な副作用を防ぐために、注意深い患者モニタリングが求められる。現行では
、内因系経路又は外因系経路だけに標的指向する抗凝固薬はない。
Drake et al., Am J Pathol 1989, 134:1087-1097 Schwartz AL et al., Trends Cardiovasc Med. 1997; 7:234-239 Adcock et al. American Journal of Clinical Pathology. 1997;108:434-49 Bertina RM et al. Nature 1994; 369: 64-67 Bjork I, Lindahl U. Mol Cell Biochem. 1982 48: 161-182
本明細書に提供するのは、第11因子のmRNA及びタンパク質の発現を調節するための方法
、化合物、及び組成物である。ある態様において、第11因子特異的阻害剤は、第11因子の
mRNA及びタンパク質の発現を調節する。ある態様において、第11因子特異的阻害剤は、核
酸、タンパク質、又は低分子である。
ある態様において、調節は、細胞又は組織において起こり得る。ある態様において、細
胞又は組織は、動物にある。ある態様において、動物は、ヒトである。ある態様では、第
11因子mRNAレベルが低下される。ある態様では、第11因子タンパク質レベルが低下される
。そのような低下は、時間依存的なやり方で、又は用量依存的なやり方で起こり得る。
また提供するのは、疾患、障害、及び状態を予防、治療、及び改善するのに有用な方法
、化合物、及び組成物である。ある態様において、そのような疾患、障害、及び状態は、
血栓塞栓合併症である。そのような血栓塞栓合併症には、血栓症、塞栓症、及び血栓塞栓
症のカテゴリーが含まれる。ある態様において、そのような血栓塞栓合併症には、深在性
静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、及び卒中が含まれる。
そのような疾患、障害、及び状態は、1以上の危険因子、原因、又はアウトカムを共有
する可能性がある。血栓塞栓合併症の発症への確かな危険因子及び原因には、不動性状態
、外科手術（特に、整形外科手術）、悪性腫瘍、妊娠、高齢、経口避妊薬の使用、心房細
動、既往の血栓塞栓合併症、慢性炎症性疾患、及び先天的又は後天的な血栓形成促進性の
凝固障害が含まれる。血栓塞栓合併症の進展に関連した確かなアウトカムには、血管の罹
患による血流の減少、組織の死、及び死亡が含まれる。
ある態様において、治療の方法には、第11因子特異的阻害剤を必要とする個体へそれを
投与することが含まれる。
上述の一般的な記載と以下の詳細な記載は、いずれも単に例示的で説明的なものであり
、特許請求される本発明を制限するものではないと理解されたい。本明細書において、単
数形の使用には、他に特に述べなければ、複数形が含まれる。本明細書に使用するように
、「又は」の使用は、他に述べなければ、「及び／又は」を意味する。さらに、「〜を含
めて（including）」という用語の使用は、「〜が含まれる（includes）」及び「〜が含
まれている（included）」といった他の形式と同様に、限定的なものではない。また、「
要素」又は「成分」のような用語には、他に特に述べなければ、1つのユニットを含んで
なる要素及び成分と、1より多いサブユニットを含む要素及び成分がともに含まれる。
本明細書に使用するセクション見出しは、文書構成（organizational）の目的にすぎず
、記載の主題を限定するものと解釈してはならない。限定されないが、特許、特許出願、
記事、書籍、及び約定が含まれる、本出願に引用するすべての文書、又は文書の一部は、
その全体だけでなく、本明細書において考察される文書のその部分についても、参照によ
り本明細書に明白に組み込まれる。
定義
特殊な定義を提供しなければ、本明細書に記載する、分析化学、合成有機化学、並びに
医化学及び薬化学に関連して利用される命名法とその手順及び技術は、当該技術分野にお
いてよく知られていて、一般的に使用されるものである。化学合成と化学分析では、標準
技術を使用してよい。許容される場合、すべての特許、特許出願、公開出願と他の公開公
報、米国立生物工学情報センター（NCBI）のようなデータベースより入手可能なGENBANK
登録番号と関連配列情報、並びに、本明細書の開示を通して言及される他のデータは、そ
の全体だけでなく、本明細書において考察される文書のその部分についても、参照により
本明細書に組み込まれる。
他に示さなければ、以下の用語は、以下の意味を有する：
「2'-O-メトキシエチル」（又は、2'-MOE及び2'-O（CH2）2-OCH3）は、フロシル環の2'
位のO-メトキシ-エチル修飾を意味する。2'-O-メトキシエチル修飾された糖は、修飾糖で
ある。
「2'-O-メトキシエチルヌクレオチド」は、2'-O-メトキシエチル修飾糖部分を含んでな
るヌクレオチドを意味する。
「5-メチルシトシン」は、メチル基が5'位へ付いて修飾されたシトシンを意味する。5-
メチルシトシンは、修飾ヌクレオ塩基である。
「活性薬剤」は、個体へ投与されるときに治療利益を提供する、医薬組成物中の単数又
は複数の物質を意味する。例えば、ある態様において、第11因子へ標的指向されるアンチ
センスオリゴヌクレオチドは、活性薬剤である。
「活性標的領域」又は「標的領域」は、1以上の活性アンチセンス化合物が標的指向さ
れる領域を意味する。「活性アンチセンス化合物」は、標的核酸レベル又はタンパク質レ
ベルを低下させるアンチセンス化合物を意味する。
「同時に投与される」は、2つの薬剤のあらゆるやり方での同時投与に言及して、ここ
では両剤の薬理効果が患者において同時に顕在化される。同時投与では、両剤が単一の医
薬組成物において、同じ剤形において、又は同じ投与経路によって投与されることを求め
ない。両剤の効果は、同時に顕現されるに及ばない。その効果は、ある時間帯の間だけ重
なればよいのであって、共存するに及ばない。
「投与すること」は、薬剤を個体へ提供することを意味して、限定されないが、医療専
門家が投与することと自ら投与することが含まれる。
「改善」は、関連する疾患、障害、又は状態の少なくとも1つの指標、徴候、又は症状
の軽減に言及する。指標の重症度は、当業者に知られている、主観的又は客観的な尺度に
よって決定してよい。
「動物」は、ヒト又は非ヒト動物に言及して、限定されないが、マウス、ラット、ウサ
ギ、イヌ、ネコ、ブタ、及び非ヒト霊長動物（限定されないが、サル及びチンパンジーが
含まれる）が含まれる。
「解毒化合物」は、あらゆるアンチセンス媒介活性の強度又は期間を減少させることが
可能な化合物に言及する。
「解毒オリゴヌクレオチド」は、アンチセンス化合物に相補的でそれとハイブリダイズ
することが可能であるオリゴヌクレオチドを含んでなる解毒化合物を意味する。
「解毒タンパク質」は、ペプチドを含んでなる解毒化合物を意味する。
「抗体」は、抗原と何らかのやり方で特異的に反応することを特徴とする分子に言及し
て、ここで抗体と抗原は、他方に関してそれぞれ定義される。抗体は、完全抗体分子、又
は、重鎖、軽鎖、Fab領域、及びFc領域のような、そのあらゆる断片又は領域に言及する
場合がある。
「アンチセンス活性」は、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーシ
ョンに起因する、あらゆる検出可能又は測定可能な活性を意味する。ある態様において、
アンチセンス活性は、標的核酸又はそのような標的核酸によりコードされるタンパク質の
量又は発現における減少である。
「アンチセンス化合物」は、標的核酸への水素結合によるハイブリダイゼーションを起
こすことが可能であるオリゴマー化合物を意味する。
「アンチセンス阻害」は、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物の存在下での標的核
酸レベル又は標的タンパク質レベルの、そのアンチセンス化合物の非存在下での標的核酸
レベル又は標的タンパク質レベルと比較した低下を意味する。
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、標的核酸の対応する領域又はセグメントへの
ハイブリダイゼーションを許容するヌクレオ塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチド
を意味する。
「二環糖」は、2つの非ジェミナル環原子の架橋によって修飾されるフロシル環を意味
する。二環糖は、修飾糖である。
「二環式核酸」又は「BNA」は、ヌクレオシド又はヌクレオチドのフラノース部分に、
フラノース環上の2つの原子を連結する架橋が含まれることによって二環式環系が形成さ
れる、ヌクレオシド又はヌクレオチドに言及する。
「キャップ（Cap）構造」又は「末端キャップ部分」は、アンチセンス化合物のいずれ
の末端でも取り込まれた化学修飾を意味する。
「化学的に異なる領域」は、同じアンチセンス化合物の別の領域とは何らかのやり方で
化学的に異なる、アンチセンス化合物の領域に言及する。例えば、2'-O-メトキシエチル
ヌクレオチドを有する領域は、2'-O-メトキシエチル修飾のないヌクレオチドを有する領
域とは化学的に異なる。
「キメラアンチセンス化合物」は、少なくとも2つの化学的に異なる領域を有するアン
チセンス化合物を意味する。
「同時投与」は、2以上の薬剤の個体への投与を意味する。2以上の薬剤は、単一の医薬
組成物にあっても、別々の医薬組成物にあってもよい。2以上の薬剤のそれぞれは、同じ
又は異なる投与経路を介して投与してよい。同時投与には、並行又は連続の投与が含まれ
る。
「凝固因子」は、血液凝固カスケード中の第I、II、III、IV、V、VII、VIII、IX、X、X
I、XII、XIII、又はTAFI因子のいずれも意味する。「凝固因子核酸」は、凝固因子をコー
ドするあらゆる核酸を意味する。例えば、ある態様において、凝固因子核酸には、制限な
しに、凝固因子をコードするDNA配列（イントロン及びエクソンを含んでなるゲノムDNAが
含まれる）、凝固因子をコードするDNAより転写されたRNA配列、及び凝固因子をコードす
るmRNA配列が含まれる。「凝固因子mRNA」は、凝固因子タンパク質をコードするmRNAを意
味する。
「相補性」は、第一核酸のヌクレオ塩基と第二核酸のヌクレオ塩基の間で対合する能力
を意味する。
「連続ヌクレオ塩基」は、互いにすぐ隣りにあるヌクレオ塩基を意味する。
「希釈剤」は、薬理活性を欠くが、製剤的に必要であるか又は望ましい、組成物中の成
分を意味する。例えば、注射用組成物中の希釈剤は、液剤、例えば、生理食塩水溶液であ
り得る。
「用量」は、単一の投与において、又は特定の時間帯において提供される薬剤の特定量
を意味する。ある態様において、用量は、1、2、又はより多くのボーラス、錠剤、又は注
射剤で投与してよい。例えば、皮下投与が所望される態様において、所望される用量は、
単一の注射剤によっては容易に提供されない容量が求められるので、2以上の注射剤を使
用して、所望の用量を達成してよい。ある態様において、薬剤は、注入によって、延長さ
れた時間帯にわたるか又は連続的に投与される。用量は、1時間、1日、1週、又は1月あた
りの薬剤の量として述べられる場合がある。
「有効量」は、活性薬剤を必要とする個体において所望の生理学的アウトカムを産出す
るのに十分なその薬剤の量を意味する。有効量は、治療される個体の健康及び身体状態、
治療される個体の分類学的な群、組成物の製剤、個体の医学的状態の評価、及び他の関連
要因に依存して、個体間で変動する場合がある。
「第11因子核酸」又は「第XI因子核酸」又は「F11核酸」又は「FXI核酸」は、第11因子
をコードするあらゆる核酸を意味する。例えば、ある態様において、第11因子核酸には、
第11因子をコードするDNA配列、第11因子をコードするDNA（イントロン及びエクソンを含
んでなるゲノムDNAが含まれる）より転写されたRNA配列、及び第11因子をコードするmRNA
配列が含まれる。「第11因子mRNA」は、第11因子タンパク質をコードするmRNAを意味する
。
「第11因子特異的阻害剤」は、第11因子mRNA及び／又は第11因子タンパク質の分子レベ
ルでの発現を特異的に阻害することが可能なあらゆる薬剤に言及する。例えば、第11因子
特異的阻害剤には、第11因子mRNA及び／又は第11因子タンパク質の発現を阻害することが
可能な核酸（アンチセンス化合物が含まれる）、ペプチド、抗体、低分子、及び他の薬剤
が含まれる。ある態様において、第11因子mRNA発現及び／又は第11因子タンパク質発現を
特異的に調節することによって、第11因子特異的阻害剤は、下流成分が含まれる、凝固カ
スケードの他の成分に影響を及ぼす場合がある。同様に、ある態様において、第11因子特
異的阻害剤は、動物中の他の分子プロセスに影響を及ぼす場合がある。
「第11因子特異的阻害剤解毒薬」は、第11因子特異的阻害剤の効果を減少させることが
可能な化合物を意味する。ある態様において、第11因子特異的阻害剤解毒薬は、第11因子
ペプチド；第11因子解毒オリゴヌクレオチド（第11因子アンチセンス化合物に相補的な第
11因子解毒化合物が含まれる）；及び内因系又は外因系の凝固経路に影響を及ぼすあらゆ
る化合物又はタンパク質より選択される。
「完全に相補的」又は「100％相補的」は、第一核酸の各ヌクレオ塩基が第二核酸にお
いて相補的なヌクレオ塩基を有することを意味する。ある態様では、第一核酸がアンチセ
ンス化合物であって、標的核酸が第二核酸である。
「ギャップマー」は、RNアーゼH切断を支援する複数のヌクレオシドを有する内部領域
が1以上のヌクレオシドを有する外部領域の間に位置するキメラアンチセンス化合物を意
味して、ここで内部領域を含んでなるヌクレオシドは、外部領域を含んでなる単数又は複
数のヌクレオシドとは化学的に異なる。内部領域は、「ギャップセグメント」と呼ばれる
場合があり、外部領域は、「ウィングセグメント」と呼ばれる場合がある。
「ギャップ拡張」は、12以上の連続した2'-デオキシリボヌクレオシドのギャップセグ
メントが、1〜6のヌクレオシドを有する5'及び3'ウィングセグメントの間に、そしてその
すぐ隣りに位置するキメラアンチセンス化合物を意味する。
「ハイブリダイゼーション」は、相補的な核酸分子のアニーリングを意味する。ある態
様において、相補的な核酸分子には、アンチセンス化合物と標的核酸が含まれる。
「血栓塞栓合併症のリスク状態にある動物を同定すること」は、血栓塞栓合併症と診断
された動物を同定すること、又は血栓塞栓合併症を発症する素因がある動物を同定するこ
とを意味する。血栓塞栓合併症を発症する素因がある個体には、不動性状態、外科手術（
特に、整形外科手術）、悪性腫瘍、妊娠、高齢、経口避妊薬の使用、及び先天的又は後天
的な血栓形成促進性の凝固障害が含まれる、血栓塞栓合併症の1以上の危険因子を有する
ものが含まれる。そのような同定は、個体の病歴を評価することと標準的な臨床検査又は
評価が含まれる、どの方法によっても達成してよい。
「すぐ隣り」は、すぐ隣りの要素の間に介在する要素がないことを意味する。
「個体」は、治療又は療法のために選択されるヒト又は非ヒト動物を意味する。
「ヌクレオシド間連結」は、ヌクレオシド間の化学結合に言及する。
「連結ヌクレオシド」は、互いに結合している隣接ヌクレオシドを意味する。
「ミスマッチ」又は「非相補的なヌクレオ塩基」は、第一核酸のヌクレオ塩基が第二又
は標的核酸の対応するヌクレオ塩基と対合することが可能でない場合に言及する。
「修飾ヌクレオシド間連結」は、天然に存在するヌクレオシド間結合（即ち、ホスホジ
エステルヌクレオシド間結合）からの置換又はあらゆる変化に言及する。
「修飾ヌクレオ塩基」は、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、又はウラシル以
外のあらゆるヌクレオ塩基に言及する。「非修飾ヌクレオ塩基」は、プリン塩基のアデニ
ン（A）及びグアニン（G）と、ピリミジン塩基のチミン（T）、シトシン（C）、及びウラ
シル（U）を意味する。
「修飾ヌクレオチド」は、修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間連結、又は修飾ヌクレオ塩
基を独立的に有するヌクレオチドを意味する。「修飾ヌクレオシド」は、修飾糖部分又は
修飾ヌクレオ塩基を独立的に有するヌクレオシドを意味する。
「修飾オリゴヌクレオチド」は、修飾ヌクレオシド間連結、修飾糖、又は修飾ヌクレオ
塩基を含んでなるオリゴヌクレオチドを意味する。
「修飾糖」は、天然糖からの置換又は変化に言及する。
「モチーフ」は、アンチセンス化合物中の化学的に異なる領域のパターンを意味する。
「天然に存在するヌクレオシド間連結」は、3'から5'へのホスホジエステル連結を意味
する。
「天然糖部分」は、DNA（2'-H）又はRNA（2'-OH）に見出される糖を意味する。
「核酸」は、モノマーヌクレオチドより構成される分子に言及する。核酸には、リボ核
酸（RNA）、デオキシリボ核酸（DNA）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（
siRNA）、及びミクロRNA（miRNA）が含まれる。
「ヌクレオ塩基」は、別の核酸の塩基と対合することが可能な複素環式部分を意味する
。
「ヌクレオ塩基配列」は、どの糖、連結、又はヌクレオ塩基の修飾とも無関係な、連続
ヌクレオ塩基の順序を意味する。
「ヌクレオシド」は、糖へ連結したヌクレオ塩基を意味する。
「ヌクレオシド模倣体」には、例えば、モルホリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシ
ル、テトラヒドロピラニル、二環若しくは三環糖模倣体（例、非フラノース糖単位）を有
するヌクレオシド模倣体のように、オリゴマー化合物の1以上の位置で、その糖、又はそ
の糖と塩基、そして（必ずではないが）連結を置き換えるために使用される構造が含まれ
る。ヌクレオチド模倣体には、例えば、ペプチド核酸又はモルホリノ（-N（H）-C（＝O）
-O-又は他の非ホスホジエステル連結によって連結されるモルホリノ）のように、オリゴ
マー化合物の1以上の位置で、そのヌクレオシドとその連結を置き換えるために使用され
る構造が含まれる。糖代用物は、やや広義では、ヌクレオシド模倣体と重なるが、糖単位
（フラノース環）の置き換えだけを示すものとする。本明細書に提供されるテトラヒドロ
ピラニル環は、フラノース糖基がテトラヒドロピラニル環系で置き換えられた糖代用物の
1例の例示である。
「ヌクレオチド」は、リン酸基がヌクレオシドの糖部分へ共有結合したヌクレオシドを
意味する。
「オリゴマー化合物」又は「オリゴマー」は、核酸分子の少なくとも1つの領域へハイ
ブリダイズすることが可能である、連結したモノマーサブユニットのポリマーを意味する
。
「オリゴヌクレオチド」は、そのそれぞれが互いに独立して修飾又は非修飾であり得る
、連結ヌクレオシドのポリマーを意味する。
「非経口投与」は、注射又は注入による投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、
静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、又は頭蓋内投与（例、鞘内又は脳室
内投与）が含まれる。
「ペプチド」は、少なくとも2つのアミノ酸をアミド結合によって連結することによっ
て形成される分子を意味する。ペプチドは、ポリペプチド及びタンパク質に言及する。
「医薬組成物」は、個体へ投与するのに適した物質の混合物を意味する。例えば、医薬
組成物は、1以上の活性薬剤と無菌の水溶液剤を含む場合がある。
「医薬的に許容される塩」は、アンチセンス化合物の生理学的及び医薬的に許容される
塩、即ち、元のオリゴヌクレオチドの所望される生理活性を保持して、望まれない毒性効
果をそれへ付与しない塩を意味する。
「ホスホロチオエート連結」は、非架橋酸素原子の1つをイオウ原子で置き換えること
によってホスホジエステル結合が修飾される、ヌクレオシド間の連結を意味する。ホスホ
ロチオエート連結（P＝S）は、修飾ヌクレオシド間連結である。
「部分」は、核酸の一定数の連続（即ち、連結）ヌクレオ塩基を意味する。ある態様に
おいて、「部分」は、標的核酸の一定数の連続ヌクレオ塩基である。ある態様において、
「部分」は、アンチセンス化合物の一定数の連続ヌクレオ塩基である。
「予防する」は、疾患、障害、又は状態の発現又は発症を数分〜無期限の時間帯の間遅
らせるか又は牽制することに言及する。「予防する」は、疾患、障害、又は状態を発症す
るリスクを低下させることも意味する。
「プロドラッグ」は、不活性型で製造されて、内因性の酵素又は他の化学品又は条件の
作用によって身体又はその細胞の内部で活性型へ変換される治療薬剤を意味する。
「副作用」は、治療薬に起因する、望まれる効果以外の生理学的反応を意味する。ある
態様において、副作用には、注射部位での反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、
腎毒性、中枢神経系の異常、ミオパシー、及び倦怠感が含まれる。例えば、血清アミノト
ランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性又は肝機能異常を示す場合がある。例えば、ビ
リルビンの増加は、肝毒性又は肝機能異常を示す場合がある。
「一本鎖オリゴヌクレオチド」は、相補鎖へハイブリダイズしないオリゴヌクレオチド
を意味する。
「特異的にハイブリダイズし得る」は、所望の効果を引き起こすのに十分な度合いの相
補性をアンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸の間に有する一方で、特異結合が所望
される条件の下で（即ち、in vivo アッセイや療法的治療の場合の生理学的条件の下で）
、非標的核酸に対してはほとんど又は全く効果を示さないアンチセンス化合物に言及する
。
「標的指向する」又は「標的指向される」は、標的核酸へ特異的にハイブリダイズして
、所望の効果を引き起こすアンチセンス化合物の設計及び選択の方法を意味する。
「標的核酸」、「標的RNA」、及び「標的RNA転写物」は、いずれも、アンチセンス化合
物によって標的指向されることが可能な核酸に言及する。
「標的セグメント」は、アンチセンス化合物が標的指向される、標的核酸のヌクレオチ
ドの配列を意味する。「5'標的部位」は、標的セグメントの5'端ヌクレオチドに言及する
。「3'標的部位」は、標的セグメントの3'端ヌクレオチドに言及する。
「治療有効量」は、個体へ治療利益をもたらす薬剤の量を意味する。
「血栓塞栓合併症」は、血栓に起因する塞栓症を伴うあらゆる疾患、障害、又は状態を
意味する。そのような疾患、障害、及び状態の例には、血栓症、塞栓症、及び血栓塞栓症
のカテゴリーが含まれる。ある態様において、そのような疾患、障害、及び状態には、深
在性静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、及び卒中が含まれる。
「治療する」は、疾患、障害、又は状態の変化又は改善をもたらすために医薬組成物を
投与することに言及する。
「非修飾ヌクレオチド」は、天然に存在するヌクレオ塩基、糖部分、及びヌクレオシド
間連結より構成されるヌクレオチドを意味する。ある態様において、非修飾ヌクレオチド
は、RNAヌクレオチド（即ち、β-D-リボヌクレオシド）又はDNAヌクレオチド（即ち、β-
D-デオキシリボヌクレオシド）である。
諸態様
本発明の態様は、第11因子mRNA及びタンパク質の発現を減少させるための方法、化合物
、及び組成物を提供する。
本発明の態様は、第11因子に関連した疾患、障害、及び状態の治療、予防、又は改善を
必要とする個体においてそれをするための方法、化合物、及び組成物を提供する。また考
慮されるのは、第11因子に関連した疾患、障害、又は状態の治療、予防、又は改善のため
の医薬品の製造のための方法及び化合物である。第11因子関連の疾患、障害、及び状態に
は、血栓症、塞栓症、血栓塞栓症、深在性静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、及び卒中の
ような血栓塞栓合併症が含まれる。
本発明の態様は、第11因子特異的阻害剤を、第11因子関連疾患を治療すること、予防す
ること、又は改善することにおける使用に提供する。ある態様において、第11因子特異的
阻害剤は、第11因子mRNA及び／又は第11因子タンパク質の発現を阻害することが可能な、
核酸（アンチセンス化合物が含まれる）、ペプチド、抗体、低分子、及び他の薬剤である
。
本発明のある態様において、第11因子特異的阻害剤は、限定されないが、J Clin Inves
t 1982, 69:844-852 に記載のようなα1プロテアーゼ阻害剤、アンチトロンビンIII、C1
阻害剤、及びα2プラスミン阻害剤；Thromb Res 1987, 48:145-151 に記載のようなα1ア
ンチトリプシン（α1AT）；USPPN 2008/021998 及び Blood 1998, 92: 4198-206 に記載
のような第11因子ペプチド阻害剤；Thromb Res 2001, 104: 451-465 に記載のようなMAP4
-RGKWC；Proc Natl Acad Sci 2004, 101: 3939-44 に記載のようなβ2GPI；Eur J Bioche
m 1999, 262: 915-923 に記載のようなレンチナス（Lentinus）プロテイナーゼ阻害剤；J
Biol Chem 2004, 279: 29485-29492 に記載のようなプロテアーゼネキシン-2／アミロイ
ドβタンパク質前駆体クニッツ（Kunitz）ドメイン阻害剤（APPI）及びアンチトロンビン
（AT）；及び、J Biol Chem 2005, 280: 23523-30 に記載のようなアプロチニンといった
、ペプチド又はタンパク質である。
本発明のある態様において、第11因子特異的阻害剤は、限定されないが、Blood 1988,
72: 1748-54 に記載のようなウィンストン-セーラム（Winston-Salem）（IgG3κ）及びボ
ルチモア（Baltimore）（IgG1κ）；J Biol Chem 1985, 260 10714-719 に記載のような5
F4、3C1、及び1F1；Throm Haemost 1990, 63: 417-23 に記載のようなモノクローナル抗
体；J Thromb Haem 2006, 4: 1496-1501 に記載のようなXI-5108；Thromb Res 1986, 42:
225-34 に記載のようなモノクローナル抗体4-1；及び、USPN6,566,140の実施例19に記載
のようなアブシキシマブ抗体といった、抗体である。
本発明のある態様において、第11因子特異的阻害剤は、限定されないが、フルオロリン
酸ジイソプロピル（DFP）；USPPN2004/0180855 の実施例1〜7に記載のような低分子阻害
剤；及び、J Biol Chem 2005, 280: 23523-30 に記載のようなp-アミノベンズアミジン（
pAB）といった、低分子である。
本発明の態様は、本明細書に記載のような第11因子特異的阻害剤を、血栓症、塞栓症、
血栓塞栓症、深在性静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、及び卒中のような血栓塞栓合併症
を治療、予防、又は改善することにおける使用に提供する。
本発明の態様は、本明細書に記載のような第11因子特異的阻害剤の、血栓症、塞栓症、
血栓塞栓症、深在性静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、及び卒中のような血栓塞栓合併症
を治療、改善、又は予防するための医薬品の製造における使用を提供する。
本発明の態様は、本明細書に記載のような第11因子特異的阻害剤を、本明細書に記載の
ような血栓塞栓合併症を本明細書に記載のような追加の薬剤又は療法との組合せ療法によ
って治療、予防、又は改善することにおける使用に提供する。薬剤又は療法は、同時投与
しても、併用的に投与してもよい。
本発明の態様は、本明細書に記載のような第11因子特異的阻害剤の、本明細書に記載の
ような血栓塞栓合併症を本明細書に記載のような追加の薬剤又は療法との組合せ療法によ
って治療、予防、又は改善するための医薬品の製造における使用を提供する。薬剤又は療
法は、同時投与しても、併用的に投与してもよい。
本発明の態様は、本明細書に記載のような第11因子特異的阻害剤の、本明細書に記載の
ような血栓塞栓合併症を、本明細書に記載のような追加の薬剤又は療法を後に投与される
患者において治療、予防、又は改善するための医薬品の製造における使用を提供する。
本発明の態様は、本明細書に記載のような血栓塞栓合併症を治療、予防、又は改善する
ためのキットを提供し、ここで該キットは：
（i）本明細書に記載のような第11因子特異的阻害剤；及び、代替的に
（ii）本明細書に記載のような追加の薬剤又は療法を含む。
本発明のキットには、本明細書に記載のような血栓塞栓合併症を本明細書に記載のよう
な組合せ療法によって治療、予防、又は改善するキットを使用するための説明書をさらに
含めてよい。
本発明の態様は、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物を提供する。ある
態様において、第11因子核酸は、GENBANK登録番号NM_000128.3（本明細書では、SEQ ID N
O: 1として取り込む）、GENBANK登録番号NT_022792.17［19598000〜19624000が切断され
た］（本明細書では、SEQ ID NO: 2として取り込む）、GENBANK登録番号NM_028066.1（本
明細書では、SEQ ID NO: 6として取り込む）、エクソン1〜15 GENBANK登録番号NW_001118
167.1（本明細書では、SEQ ID NO: 274として取り込む）に示される配列のいずれでもよ
い。
ある態様において、本発明は、修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を提供する
。ある態様において、本発明の化合物は、12〜30の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴ
ヌクレオチドを含む。
ある態様において、本発明の化合物は、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80
％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97
％、少なくとも98％、又は少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オ
リゴヌクレオチドを含み得る。ある態様において、本発明の化合物は、SEQ ID NO: 1の等
しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを
含み得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基656〜676の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基656〜676の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選択的
にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも80％の阻害を達
成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基665〜687の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基665〜687の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選択的
にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも50％の阻害を達
成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基675〜704の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基675〜704の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選択的
にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも50％の阻害を達
成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基677〜704の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基677〜704の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選択的
にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも60％の阻害を達
成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基678〜697の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基678〜697の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選択的
にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも70％の阻害を達
成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基680〜703の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基680〜703の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3及び実施例30に記載のように
）任意選択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも80
％の阻害を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基683〜702の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基683〜702の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選択的
にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも90％の阻害を達
成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基738〜759の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基738〜759の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3及び実施例30に記載のように
）任意選択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも80
％の阻害を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基738〜760の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基738〜760の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選択的
にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも60％の阻害を達
成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基738〜762の少なくとも一部
分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基738〜762の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少
なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少なくと
も90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は少な
くとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ
ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリ
ゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選択的
にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも45％の阻害を達
成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1018〜1042の少なくとも一
部分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1018〜1042
の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌ
クレオチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少な
くとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は
少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、
SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾
オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選
択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも80％の阻害
を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1062〜1089の少なくとも一
部分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1062〜1089
の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌ
クレオチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少な
くとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は
少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、
SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾
オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選
択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも70％の阻害
を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1062〜1090の少なくとも一
部分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1062〜1090
の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌ
クレオチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少な
くとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は
少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、
SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾
オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選
択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも60％の阻害
を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1062〜1091の少なくとも一
部分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1062〜1091
の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌ
クレオチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少な
くとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は
少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、
SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾
オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選
択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも20％の阻害
を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1275〜1301の少なくとも一
部分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1275〜1301
の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌ
クレオチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少な
くとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は
少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、
SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾
オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選
択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも80％の阻害
を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1276〜1301の少なくとも一
部分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1276〜1301
の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌ
クレオチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少な
くとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は
少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、
SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾
オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選
択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも80％の阻害
を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1284〜1308の少なくとも一
部分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1284〜1308
の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌ
クレオチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少な
くとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は
少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、
SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾
オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選
択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも80％の阻害
を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1291〜1317の少なくとも一
部分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1291〜1317
の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌ
クレオチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少な
くとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は
少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、
SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾
オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選
択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも80％の阻害
を達成し得る。
ある態様において、本発明は、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1275〜1318の少なくとも一
部分に相補的なヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を提供する。前記修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1275〜1318
の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、少なくとも18又は20の連続ヌクレオ塩基を含み得る。前記修飾オリゴヌ
クレオチドは、SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に少なくとも80％、少なくとも85％、少な
くとも90％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、又は
少なくとも99％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾オリゴヌクレオチドは、
SEQ ID NO: 1の等しい長さ部分に100％相補的なヌクレオ塩基配列を含み得る。前記修飾
オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選
択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも70％の阻害
を達成し得る。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 15〜241に引用され
るヌクレオ塩基配列の間より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8、少なくとも10
、少なくとも12、少なくとも14、少なくとも16、少なくとも18、又は20の連続ヌクレオ塩
基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を
提供する。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 15〜269に引用され
るヌクレオ塩基配列の間より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8、少なくとも10
、少なくとも12、少なくとも14、少なくとも16、少なくとも18、又は20の連続ヌクレオ塩
基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を
提供する。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 242〜269に引用さ
れるヌクレオ塩基配列の間より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8、少なくとも1
0、少なくとも12、少なくとも14、少なくとも16、少なくとも18、又は20の連続ヌクレオ
塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を提供する。
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ISIS番号22、31、32、34、36〜38、40
、41、43、51〜53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98〜103、105〜109、113
〜117、119、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181〜197、199〜211、及
び213〜232より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8、少なくとも10、少なくとも1
2、少なくとも14、少なくとも16、又は少なくとも18のヌクレオ塩基を含む。ある態様に
おいて、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 22、31、32、34、36〜38、40、41、43
、51〜53、55、56、59、60、64、66、71、73、75、96、98〜103、105〜109、113〜117、1
19、124、127、129、171、172、174、176、178、179、181〜197、199〜211、及び213〜23
2より選択されるヌクレオ塩基配列を含む。ある態様において、修飾オリゴヌクレオチド
は、SEQ ID NO: 22、31、32、34、36〜38、40、41、43、51〜53、55、56、59、60、64、6
6、71、73、75、96、98〜103、105〜109、113〜117、119、124、127、129、171、172、17
4、176、178、179、181〜197、199〜211、及び213〜232より選択されるヌクレオ塩基配列
からなる。前記修飾オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例3に記
載のように）任意選択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少
なくとも70％の阻害を達成し得る。
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ISIS番号22、31、34、37、40、43、51
〜53、60、98、100〜102、105〜109、114、115、119、171、174、176、179、181、186、1
88〜193、195、196、199〜210、及び213〜232より選択されるヌクレオ塩基配列の少なく
とも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少なくとも16、又は少なくとも18
のヌクレオ塩基を含む。ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 22
、31、34、37、40、43、51〜53、60、98、100〜102、105〜109、114、115、119、171、17
4、176、179、181、186、188〜193、195、196、199〜210、及び213〜232より選択される
ヌクレオ塩基配列を含む。ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 2
2、31、34、37、40、43、51〜53、60、98、100〜102、105〜109、114、115、119、171、1
74、176、179、181、186、188〜193、195、196、199〜210、及び213〜232より選択される
ヌクレオ塩基配列からなる。前記修飾オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例え
ば、実施例3に記載のように）任意選択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒト
mRNAレベルの少なくとも80％の阻害を達成し得る。
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、ISIS番号31、37、100、105、179、190
〜193、196、202〜207、209、210、214〜219、221〜224、226、227、229、及び231より選
択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14
、少なくとも16、又は少なくとも18のヌクレオ塩基を含む。ある態様において、修飾オリ
ゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 31、37、100、105、179、190〜193、196、202〜207、209
、210、214〜219、221〜224、226、227、229、及び231より選択されるヌクレオ塩基配列
を含む。ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 31、37、100、105
、179、190〜193、196、202〜207、209、210、214〜219、221〜224、226、227、229、及
び231より選択されるヌクレオ塩基配列からなる。前記修飾オリゴヌクレオチドは、RT-PC
Rアッセイ法を（例えば、実施例3に記載のように）任意選択的にHepG2細胞で使用して定
量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも90％の阻害を達成し得る。
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 34、52、53、114、115、1
90、213〜232、242〜260、及び262〜266より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8
、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少なくとも16、又は少なくとも18のヌク
レオ塩基を含む。ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 34、52、5
3、114、115、190、213〜232、242〜260、及び262〜266より選択されるヌクレオ塩基配列
を含む。ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 34、52、53、114、
115、190、213〜232、242〜260、及び262〜266より選択されるヌクレオ塩基配列からなる
。前記修飾オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例30に記載のよう
に）任意選択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの少なくとも7
0％の阻害を達成し得る。
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 34、52、53、114、115、1
90、213〜216、218〜226、243〜246、248、249、252〜259、264、及び265より選択される
ヌクレオ塩基配列の少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少なく
とも16、又は少なくとも18のヌクレオ塩基を含む。ある態様において、修飾オリゴヌクレ
オチドは、SEQ ID NO: 34、52、53、114、115、190、213〜216、218〜226、243〜246、24
8、249、252〜259、264、及び265より選択されるヌクレオ塩基配列を含む。ある態様にお
いて、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 34、52、53、114、115、190、213〜216、
218〜226、243〜246、248、249、252〜259、264、及び265より選択されるヌクレオ塩基配
列からなる。前記修飾オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例えば、実施例30に
記載のように）任意選択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、ヒトmRNAレベルの
少なくとも80％の阻害を達成し得る。
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 34、190、215、222、223
、226、246、及び254より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8、少なくとも10、少
なくとも12、少なくとも14、少なくとも16、又は少なくとも18のヌクレオ塩基を含む。あ
る態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、SEQ ID NO: 34、190、215、222、223、226
、246、及び254より選択されるヌクレオ塩基配列を含む。ある態様において、修飾オリゴ
ヌクレオチドは、SEQ ID NO: 34、190、215、222、223、226、246、及び254より選択され
るヌクレオ塩基配列からなる。前記修飾オリゴヌクレオチドは、RT-PCRアッセイ法を（例
えば、実施例30に記載のように）任意選択的にHepG2細胞で使用して定量されるように、
ヒトmRNAレベルの少なくとも90％の阻害を達成し得る。
ある態様において、本化合物は、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる。
ある態様において、その修飾オリゴヌクレオチドは、20の連結ヌクレオシドからなる。
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1又は
SEQ ID NO: 2又はSEQ ID NO: 6又はSEQ ID NO: 274のヌクレオ塩基配列に100％相補的で
ある。
ある態様において、本化合物は、少なくとも1つの修飾ヌクレオシド間連結を有する。
ある態様において、そのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結
である。
ある態様において、本化合物は、修飾糖を含んでなる少なくとも1つのヌクレオシドを
有する。ある態様において、少なくとも1つの修飾糖は、二環糖である。ある態様におい
て、少なくとも1つの修飾糖は、2'-O-メトキシエチルを含む。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 15〜241、SEQ ID N
O: 15〜269、又はSEQ ID NO: 242〜269に引用されるヌクレオ塩基配列の間より選択され
るヌクレオ塩基配列の少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少な
くとも16、少なくとも18、又は20の連続ヌクレオ塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有
する修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を提供し、ここで少なくとも1つのヌク
レオシドは、修飾糖を含む。
ある態様において、前記少なくとも1つの修飾糖は、二環糖である。
ある態様において、前記少なくとも1つの二環糖は、4'-（CH2）n-O-2'架橋（ここでnは
、1又は2である）を含む。
ある態様において、前記少なくとも1つの二環糖は、4'-CH（CH3）-O-2'架橋を含む。
ある態様において、前記少なくとも1つの修飾糖は、2'-O-メトキシエチル基を含む。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 15〜241、SEQ ID N
O: 15〜269、又はSEQ ID NO: 242〜269に引用されるヌクレオ塩基配列の間より選択され
るヌクレオ塩基配列の少なくとも8、少なくとも10、少なくとも12、少なくとも14、少な
くとも16、少なくとも18、又は20の連続ヌクレオ塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有
して、少なくとも1つのテトラヒドロピラン修飾ヌクレオシド（ここでは、テトラヒドロ
ピラン環がフラノース環に置き換わっている）を含んでなる、修飾オリゴヌクレオチドを
含んでなる化合物を提供する。
ある態様において、前記少なくとも1つのテトラヒドロピラン修飾ヌクレオシドは、構
造：
Figure 2015211685
を有する。
ある態様において、本化合物は、修飾ヌクレオ塩基を含んでなる、少なくとも1つのヌ
クレオシドを有する。ある態様において、修飾ヌクレオ塩基は、5-メチルシトシンである
。
ある態様において、本化合物の修飾オリゴヌクレオチドは：
（i）連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ii）連結ヌクレオシドからなる5'ウィングセグメント；
（iii）連結ヌクレオシドからなる3'ウィングセグメントを含み、ここでギャップセグ
メントは、5'ウィングセグメントと3'ウィングセグメントのすぐ隣りでその間に位置して
、そしてここでそれぞれのウィングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖を含
む。いくつかのそのような態様において、修飾オリゴヌクレオチド中のそれぞれのシトシ
ンは、5-メチルシトシンである。
ある態様において、本化合物の修飾オリゴヌクレオチドは：
（i）10の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ii）5の連結ヌクレオシドからなる5'ウィングセグメント；
（iii）5の連結ヌクレオシドからなる3'ウィングセグメントを含み、ここでギャップセ
グメントは、5'ウィングセグメントと3'ウィングセグメントのすぐ隣りでその間に位置し
て、そしてここでそれぞれのウィングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、2'-O-メ
トキシエチル糖を含み；そしてここでそれぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエ
ート連結である。いくつかのそのような態様において、修飾オリゴヌクレオチド中のそれ
ぞれのシトシンは、5-メチルシトシンである。
ある態様において、本化合物の修飾オリゴヌクレオチドは：
（i）14の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ii）3の連結ヌクレオシドからなる5'ウィングセグメント；
（iii）3の連結ヌクレオシドからなる3'ウィングセグメントを含み、ここでギャップセ
グメントは、5'ウィングセグメントと3'ウィングセグメントのすぐ隣りでその間に位置し
て、そしてここでそれぞれのウィングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、2'-O-メ
トキシエチル糖を含み；そしてここでそれぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエ
ート連結である。いくつかのそのような態様において、修飾オリゴヌクレオチド中のそれ
ぞれのシトシンは、5-メチルシトシンである。
ある態様において、本化合物の修飾オリゴヌクレオチドは：
（i）13の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ii）2の連結ヌクレオシドからなる5'ウィングセグメント；
（iii）5の連結ヌクレオシドからなる3'ウィングセグメントを含み、ここでギャップセ
グメントは、5'ウィングセグメントと3'ウィングセグメントのすぐ隣りでその間に位置し
て、そしてここでそれぞれのウィングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、2'-O-メ
トキシエチル糖を含み；そしてここでそれぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエ
ート連結である。いくつかのそのような態様において、修飾オリゴヌクレオチド中のそれ
ぞれのシトシンは、5-メチルシトシンである。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 15〜241に引用され
るヌクレオ塩基配列の間より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも12の連続ヌクレオ
塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と医薬的
に許容される担体又は希釈剤を含んでなる組成物を提供する。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 15〜269に引用され
るヌクレオ塩基配列の間より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも12の連続ヌクレオ
塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と医薬的
に許容される担体又は希釈剤を含んでなる組成物を提供する。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 241〜269に引用さ
れるヌクレオ塩基配列の間より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも12の連続ヌクレ
オ塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と医薬
的に許容される担体又は希釈剤を含んでなる組成物を提供する。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 15〜241に引用され
るヌクレオ塩基配列の間より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8の連続ヌクレオ
塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を動物へ投与することを含んでなる方法を提供する。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 15〜269に引用され
るヌクレオ塩基配列の間より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8の連続ヌクレオ
塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物
を動物へ投与することを含んでなる方法を提供する。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなり、SEQ ID NO: 241〜269に引用さ
れるヌクレオ塩基配列の間より選択されるヌクレオ塩基配列の少なくとも8の連続ヌクレ
オ塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合
物を動物へ投与することを含んでなる方法を提供する。
ある態様において、動物は、ヒトである。
ある態様において、「投与すること」は、深在性静脈血栓症又は肺塞栓症を予防する。
ある態様において、本化合物は、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパ
リン、レピルジン、チクロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、及び
LOVENOX（ロベノックス）より選択される群のいずれとも同時投与される。
ある態様において、本化合物は、どの第Xa因子阻害剤とも同時投与される。
ある態様において、第Xa因子阻害剤は、リバロキサバン（Rivaroxaban）、LY517717、Y
M150、アピキサバン、PRT054021、及びDU-176bのいずれでもよい。
ある態様において、本化合物は、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパ
リン、レピルジン、チクロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、及び
LOVENOXより選択される群のいずれとも併用投与される。
ある態様において、「投与すること」は、非経口投与である。ある態様において、非経
口投与は、皮下又は静脈内投与のいずれでもある。
本発明の態様は、血栓塞栓合併症を発症するリスク状態にある動物を同定すること、及
び12〜30の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物の治療
有効量をそのリスク状態の動物へ投与することを含んでなる方法を提供し、ここで修飾オ
リゴヌクレオチドは、第11因子核酸に相補的である。
ある態様において、血栓塞栓合併症は、深在性静脈血栓症、肺塞栓症、又はそれらの組
合せである。
本発明の態様は、凝固障害を有する動物を同定すること、及び12〜30の連結ヌクレオシ
ドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物の治療有効量をその動物へ投与す
ることを含んでなる方法を提供し、ここで修飾オリゴヌクレオチドは、第11因子核酸に相
補的である。
ある態様において、本化合物は、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパ
リン、レピルジン、チクロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、及び
LOVENOXより選択される群のいずれとも同時投与される。
ある態様において、本化合物は、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパ
リン、レピルジン、チクロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、及び
LOVENOXより選択される群のいずれとも併用投与される。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んで
なる化合物の治療有効量を動物へ投与することによって、その動物において血栓塞栓合併
症のリスクを低下させることを含んでなる方法を提供し、ここで修飾オリゴヌクレオチド
は、第11因子核酸に相補的である。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んで
なる化合物の治療有効量を動物へ投与することによって、その動物において凝固障害を治
療することを含んでなる方法を提供し、ここで修飾オリゴヌクレオチドは、第11因子核酸
に相補的である。
本発明の態様は、12〜30の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んで
なる化合物の治療有効量を動物へ投与することによって、その動物において第11因子発現
を阻害することを含んでなる方法を提供し、ここで修飾オリゴヌクレオチドは、第11因子
核酸に相補的である。
ある態様において、動物における第11因子阻害は、修飾オリゴヌクレオチドへの解毒薬
を投与することによって逆転される。
ある態様において、解毒薬は、修飾オリゴヌクレオチドに相補的なオリゴヌクレオチド
である。
アンチセンス化合物
オリゴマー化合物には、限定されないが、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、
オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣体、アンチセンス化合物、アンチセ
ンスオリゴヌクレオチド、及びsiRNAが含まれる。オリゴマー化合物は、標的核酸に対し
て「アンチセンス」で有り得て、それが水素結合により標的核酸へのハイブリダイゼーシ
ョンを起こすことが可能であることを意味する。
ある態様において、アンチセンス化合物は、5'から3'の方向で書かれるときに、それが
標的指向される標的核酸の標的セグメントの逆相補体（reverse complement）を含むヌク
レオ塩基配列を有する。あるそのような態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチド
は、5'から3'の方向で書かれるときに、それが標的指向される標的核酸の標的セグメント
の逆相補体を含むヌクレオ塩基配列を有する。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、長さが12〜
30のサブユニットである。言い換えると、そのようなアンチセンス化合物は、12〜30の連
結サブユニットである。他の態様において、アンチセンス化合物は、8〜80、12〜50、15
〜30、18〜24、19〜22、又は20の連結サブユニットである。あるそのような態様において
、アンチセンス化合物は、長さが8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、
21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、
41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、
61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、又は
80の連結サブユニット、又は上記数値の任意の2つによって画定される範囲である。いく
つかの態様において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
そして連結サブユニットは、ヌクレオチドである。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは
、短縮又は先端切断されてよい。例えば、単一のサブユニットは、5'端より欠失（5'先端
切断）しても、あるいは3'端より欠失（3'先端切断）してもよい。第11因子核酸へ標的指
向される、短縮又は先端切断されたアンチセンス化合物は、そのアンチセンス化合物の5'
端より2つのサブユニットが欠失しても、あるいはその3'端より2つのサブユニットが欠失
してもよい。あるいは、欠失したヌクレオシドは、アンチセンス化合物全体に分散してよ
く、例えば、あるアンチセンス化合物では、1つのヌクレオシドが5'端より欠失して、1つ
のヌクレオシドが3'端より欠失している。
延長されたアンチセンス化合物中に単一の付加サブユニットが存在するとき、付加サブ
ユニットは、アンチセンス化合物の5'又は3'端に位置してよい。2以上の付加サブユニッ
トが存在するとき、この付加サブユニットは、互いに隣接してよく、例えば、あるアンチ
センス化合物では、2つのサブユニットがそのアンチセンス化合物の5'端へ付加（5'付加
）しても、あるいは、3'端へ付加（3'付加）してもよい。あるいは、付加サブユニットは
、アンチセンス化合物全体に分散してよく、例えば、あるアンチセンス化合物では、1つ
のサブユニットが5'端へ付加して、1つのサブユニットが3'端へ付加している。
活性を消失させること無く、アンチセンスオリゴヌクレオチドのようなアンチセンス化
合物の長さを増加させるか又は減少させること、及び／又はミスマッチ塩基を導入するこ
とが可能である。例えば、Woolf et al.（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 7305-7309,
1992）では、長さが13〜25ヌクレオ塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドの系列につい
て、卵母細胞注入モデルにおいて標的RNAの切断を誘導するその能力が試験された。アン
チセンスオリゴヌクレオチドの末端付近に8又は11のミスマッチ塩基がある、長さが25ヌ
クレオ塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含有しないアンチセンス
オリゴヌクレオチドより低い程度であったが、標的mRNAの特異的な切断を指令することが
できた。同様に、1又は3のミスマッチがあるものが含まれる、13ヌクレオ塩基のアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドを使用して、標的特異的な切断が達成された。
Gautschi et al（J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001）は、bcl-2 mRNAへ
の100％相補性を有して、bcl-xL mRNAに対して3つのミスマッチを有するオリゴヌクレオ
チドがbcl-2とbcl-xLの両方の発現を in vitro と in vivo で低下させる能力を実証した
。さらに、このオリゴヌクレオチドは、強力な抗腫瘍活性を in vivo で明示した。
Maher and Dolnick（Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988）は、タンデム14ヌクレオ
塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドの系列と、このタンデムアンチセンスオリゴヌク
レオチドの2又は3の配列より構成される、それぞれ28及び42のヌクレオ塩基のアンチセン
スオリゴヌクレオチドについて、ウサギ網状赤血球アッセイにおいてヒトDHFRの翻訳を阻
止するその能力を試験した。3つの14ヌクレオ塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドのそ
れぞれは、28又は42のヌクレオ塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドより控え目なレベル
であるものの、単独で翻訳を阻害することができた。
アンチセンス化合物モチーフ
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、阻害活性の
増強、標的核酸への結合親和性の増加、又は in vivo ヌクレアーゼによる分解への抵抗
性といった特性をそのアンチセンス化合物へ付与する、パターン配置された化学修飾サブ
ユニット、又はモチーフを有する。
キメラアンチセンス化合物は、典型的には、ヌクレアーゼ分解への抵抗性増加、細胞取
込み増加、標的核酸への結合親和性の増加、及び／又は阻害活性の増加を付与するように
修飾された、少なくとも1つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第二領域は
、RNA：DNA二重鎖のRNA鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼRNアーゼHの基質として役
立ってもよい。
ギャップマーモチーフを有するアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物とみ
なされる。ギャップマーでは、RNアーゼH切断を支援する複数のヌクレオチドを有する内
部領域が、内部領域のヌクレオシドとは化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外部
領域の間に位置する。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの
場合、ウィングセグメントが修飾ヌクレオシドを含むのに対し、ギャップセグメントは、
エンドヌクレアーゼ切断の基質として概して役立つ。ある態様において、ギャップマーの
領域は、それぞれ異なる領域を含んでなる糖部分の種類によって区別される。ギャップマ
ーの領域を区別するために使用される糖部分の種類には、いくつかの態様において、β-D
-リボヌクレオシド、β-D-デオキシリボヌクレオシド、2'-修飾ヌクレオシド（そのよう
な2'-修飾ヌクレオシドには、中でも、2'-MOE、及び2'-O-CH3が含まれ得る）、及び二環
糖修飾ヌクレオシド（そのような二環糖修飾ヌクレオシドには、4'-（CH2）n-O-2'架橋を
有するものが含まれ得る、ここでn＝1又はn＝2）が含まれ得る。好ましくは、それぞれの
異なる領域が均一の糖部分を含む。このウィング-ギャップ-ウィングモチーフは、「X-Y-
Z」としばしば記載されて、ここで「X」は5'ウィング領域の長さを表し、「Y」はギャッ
プ領域の長さを表し、そして「Z」は3'ウィング領域の長さを表す。本明細書に使用する
ように、「X-Y-Z」と記載されるギャップマーは、5'ウィングセグメントと3'ウィングセ
グメントのそれぞれのすぐ隣りにギャップセグメントが位置するような配置を有する。従
って、5'ウィングセグメントとギャップセグメントの間に、又はギャップセグメントと3'
ウィングセグメントの間に介在ヌクレオチドは存在しない。本明細書に記載するアンチセ
ンス化合物のいずれも、ギャップマーモチーフを有する可能性がある。いくつかの態様に
おいて、XとZは同じであり、他の態様において、それらは異なる。好ましい態様において
、Yは、8と15の間のヌクレオチドである。X、Y、又はZは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、
10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、又はより多いヌクレオチドのい
ずれでもあり得る。このように、本発明のギャップマーには、限定されないが、例えば、
5-10-5、4-8-4、4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1
-10-1、2-8-2、5-8-5、又は6-8-6が含まれる。
ある態様において、アンチセンス化合物は、ウィング-ギャップ又はギャップ-ウィング
の配置、即ち、ギャップマー配置について上記に記載のようなX-Y又はY-Z配置を有する、
「ウィングマー」モチーフを有する。このように、本発明のウィングマー配置には、限定
されないが、例えば、5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8
-2、2-13、5-13、5-8、又は6-8が含まれる。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、5-10-5ギャ
ップマーモチーフを保有する。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、3-14-3ギャ
ップマーモチーフを保有する。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、2-13-5ギャ
ップマーモチーフを保有する。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、5-8-5ギャ
ップマーモチーフを保有する。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、6-8-6ギャ
ップマーモチーフを保有する。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、ギャップ拡
張モチーフを有する。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるギャップ拡張アンチセンスオリゴヌ
クレオチドは、3つの化学修飾ヌクレオシドのウィングセグメントのすぐ隣りでその間に
位置する、14の2'-デオキシリボヌクレオチドのギャップセグメントを有する。ある態様
において、化学修飾は、2'-糖修飾を含む。別の態様において、化学修飾は、2'-MOE糖修
飾を含む。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるギャップ拡張アンチセンスオリゴヌ
クレオチドは、2つの化学修飾ヌクレオシドの5'ウィングセグメントと5つの化学修飾ヌク
レオシドの3'ウィングセグメントのすぐ隣りでその間に位置する、13の2'-デオキシリボ
ヌクレオチドのギャップセグメントを有する。ある態様において、化学修飾は、2'-糖修
飾を含む。別の態様において、化学修飾は、2'-MOE糖修飾を含む。
標的核酸、標的領域、及びヌクレオチド配列
第11因子をコードするヌクレオチド配列には、制限なしに、以下が含まれる：GENBANK
登録番号NM_000128.3（1999年3月24日にGENBANKに初めて寄託、本明細書では、SEQ ID NO
: 1として取り込む）；NT_022792.17［19598000〜19624000が切断された］（2000年11月2
9日にGENBANKに初めて寄託、本明細書では、SEQ ID NO: 2として取り込む）；GENBANK登
録番号NM_028066.1（2002年6月2日にGENBANKに初めて寄託、本明細書では、SEQ ID NO: 6
として取り込む）；及び、エクソン1-15 GENBANK登録番号NW_001118167.1（2006年3月28
日にGENBANKに初めて寄託、本明細書では、SEQ ID NO: 274として取り込む）。
本明細書に含まれる「実施例」の各SEQ ID NO: に示される配列は、糖部分、ヌクレオ
シド間連結、又はヌクレオ塩基に対するどの修飾とも無関係であると理解される。それ故
に、SEQ ID NO: によって定義されるアンチセンス化合物は、糖部分、ヌクレオシド間連
結、又はヌクレオ塩基に対する1以上の修飾を独立的に含んでよい。Isis番号（Isis No）
によって記載されるアンチセンス化合物は、ヌクレオ塩基配列とモチーフの組合せを示す
。
ある態様において、標的領域は、標的核酸の構造的に規定される領域である。例えば、
標的領域には、3'UTR、5'UTR、エクソン、イントロン、エクソン／イントロン接続部分、
コーディング領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域、又は他の規定核酸領域が含まれ得る。
第11因子の構造的に規定される領域は、NCBIのような配列データベースからの登録番号に
よって入手し得て、そのような情報が参照により本明細書に組み込まれる。ある態様にお
いて、標的領域には、標的領域内の1つの標的セグメントの5'標的部位から同じ標的領域
内の別の標的セグメントの3'標的部位までの配列が含まれ得る。
標的指向することには、所望の効果が生じるようにアンチセンス化合物がハイブリダイ
ズする、少なくとも1つの標的セグメントの決定が含まれる。ある態様において、所望の
効果は、mRNA標的核酸レベルの低下である。ある態様において、所望の効果は、標的核酸
によってコードされるタンパク質のレベルの低下、又は標的核酸に関連した表現型の変化
である。
標的領域は、1以上の標的セグメントを含有し得る。標的領域内の多数の標的セグメン
トは、重複してよい。あるいは、それらは、非重複であってよい。ある態様において、標
的領域内の標的セグメントは、約300以下のヌクレオチドによって分離している。ある態
様において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の一定数（即ち、約250、200、
150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、又は10である、それ以下である、又は先行
値の任意の2つによって規定される範囲である）のヌクレオチドによって分離している。
ある態様において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の5以下、又は約5以下の
ヌクレオチドによって分離している。ある態様において、標的セグメントは、連続してい
る。考慮されるのは、本明細書に収載される5'標的部位又は3'標的部位のいずれかである
開始核酸を有する範囲によって規定される標的領域である。
好適な標的セグメントは、5'UTR、コーディング領域、3'UTR、イントロン、エクソン、
又はエクソン／イントロン接続部分の内側に見出し得る。開始コドン又は終止コドンを含
有する標的セグメントも、好適な標的セグメントである。好適な標的セグメントには、開
始コドン又は終止コドンのような、ある構造的に規定される領域が特異的に排除されてよ
い。
好適な標的セグメントの決定には、標的核酸の配列を他の配列とゲノム全体で比較する
ことを含めてよい。例えば、BLASTアルゴリズムを使用して、異なる核酸の間で類似した
領域を同定することができる。この比較により、選択される標的核酸以外の配列（即ち、
非標的又は標的外配列）へ非特異的なやり方でハイブリダイズし得るアンチセンス化合物
配列の選択を防ぐことができる。
アンチセンス化合物の活性（例えば、標的核酸レベルの低下パーセントによって明確化
されるような）には、活性標的領域の内部で変動があり得る。ある態様において、第11因
子mRNAレベルの低下は、第11因子発現の阻害の指標となる。第11因子タンパク質のレベル
の低下も、標的mRNA発現の阻害の指標となる。さらに、表現型の変化が、第11因子発現の
阻害の指標となる。例えば、aPTT時間の延長は、第11因子発現の阻害の指標となり得る。
別の例において、正常なPT時間と連動したaPTT時間の延長は、第11因子発現の阻害の指標
となり得る。別の例において、血小板第4因子（PF-4）の量の減少は、第11因子発現の阻
害の指標となり得る。別の例において、血栓形成の低下、又は血栓形成時間の増加は、第
11因子発現の阻害の指標となり得る。
ハイブリダイゼーション
いくつかの態様では、本明細書に開示のアンチセンス化合物と第11因子核酸の間でハイ
ブリダイゼーションが起こる。最も一般的なハイブリダイゼーションの機序は、核酸分子
の相補的なヌクレオ塩基の間での水素結合（例、ワトソン-クリック、フーグスティーン
、又は逆フーグスティーン水素結合）を伴う。
ハイブリダイゼーションは、多様な条件の下で起こり得る。ストリンジェント条件は、
配列依存的であり、ハイブリダイズされる核酸分子の性質及び組成によって決定される。
ある配列が標的核酸へ特異的にハイブリダイズ可能であるかどうかを判定する方法は、
当該技術分野でよく知られている。ある態様において、本明細書に提供するアンチセンス
化合物は、第11因子核酸と特異的にハイブリダイズ可能である。
相補性
アンチセンス化合物と標的核酸は、アンチセンス化合物の十分な数のヌクレオ塩基が、
所望の効果（例、第11因子核酸のような標的核酸のアンチセンス阻害）が生じるように、
標的核酸の対応するヌクレオ塩基と水素結合することができるとき、互いに相補的である
。
アンチセンス化合物と第11因子核酸の間の非相補的なヌクレオ塩基は、アンチセンス化
合物が標的核酸へ特異的にハイブリダイズすることが可能なままであれば、忍容される場
合がある。さらに、アンチセンス化合物は、介在又は隣接セグメント（例、ループ構造、
ミスマッチ、又はヘアピン構造）がハイブリダイゼーションイベントに関与しないように
、第11因子核酸の1以上のセグメントにわたってハイブリダイズしてよい。
ある態様において、本明細書に提供するアンチセンス化合物又はその特定部分は、第11
因子核酸、標的領域、標的セグメント、又はそれらの特定部分に対して、（少なくとも）
70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96
％、97％、98％、99％、又は100％相補的である。アンチセンス化合物の標的核酸との相
補性パーセントは、常法を使用して定量することができる。
例えば、アンチセンス化合物の20ヌクレオ塩基のうち18が標的領域に相補的であり、そ
れ故に特異的にハイブリダイズするアンチセンス化合物は、90パーセントの相補性を表す
だろう。この例において、残る非相補的なヌクレオ塩基は、密集していても、相補的なヌ
クレオ塩基で分散されてもよく、互いに、又は相補的な配列に連続している必要はない。
このように、長さが18のヌクレオ塩基であり、標的核酸との完全な相補性の2つの領域に
よって隣接されている4つの非相補的なヌクレオ塩基を有するアンチセンス化合物は、標
的核酸と77.8％の全体相補性を有するので、本発明の範囲に入るだろう。標的核酸の領域
とアンチセンス化合物の相補性パーセントは、当該技術分野で知られたBLAST（基本ロー
カルアライメント検索ツール）プログラム及びPowerBLASTプログラム（Altschul et al.,
J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649
656）を使用して、常法により定量することができる。相同性パーセント、配列同一性、
又は相補性は、例えば、Smith 及び Waterman のアルゴリズム（Adv. Appl. Math., 1981
, 2, 482 489）を用いたデフォルト設定を使用するギャッププログラム（ウィスコンシン
配列解析パッケージ、バージョン8、Unix（登録商標）用、Genetics Computer Group, Un
iversity Research Park, ウィスコンシン州マジソン）によって定量することができる。
ある態様において、本明細書に提供するアンチセンス化合物又はその特定部分は、標的
核酸又はその特定部分に完全に相補的（即ち、100％相補的）である。例えば、アンチセ
ンス化合物は、第11因子核酸、又は標的領域、又は標的セグメント、又はその標的配列へ
完全に相補的であり得る。本明細書に使用するように、「完全に相補的」は、アンチセン
ス化合物のそれぞれのヌクレオ塩基が標的核酸の対応するヌクレオ塩基と正確に塩基対合
することが可能であることを意味する。例えば、20ヌクレオ塩基のアンチセンス化合物は
、アンチセンス化合物に完全に相補的である、標的核酸の対応する20ヌクレオ塩基部分が
ある限りは、400ヌクレオ塩基の長さである標的配列に完全に相補的である。「完全に相
補的」はまた、第一及び／又は第二核酸の特定部分に関連して使用することができる。例
えば、30ヌクレオ塩基アンチセンス化合物の20ヌクレオ塩基部分は、400ヌクレオ塩基の
長さである標的配列に「完全に相補的」であり得る。30ヌクレオ塩基オリゴヌクレオチド
の20ヌクレオ塩基部分は、標的配列が対応する20ヌクレオ塩基部分を有するならば、標的
配列に完全に相補的である（ここでは、それぞれのヌクレオ塩基がアンチセンス化合物の
20ヌクレオ塩基部分に相補的である）。同時に、全体で30ヌクレオ塩基のアンチセンス化
合物は、そのアンチセンス化合物の残る10ヌクレオ塩基も標的配列に相補的であるかどう
かに依存して、標的配列に完全に相補的であり得るか、又は有り得ない。
非相補的なヌクレオ塩基の位置は、アンチセンス化合物の5'端又は3'端であり得る。あ
るいは、非相補的な単数又は複数のヌクレオ塩基は、アンチセンス化合物の内部位置にあ
ってよい。2以上の非相補的なヌクレオ塩基が存在するとき、それらは、連続（即ち、連
結）であっても非連続であってもよい。1つの態様において、非相補的なヌクレオ塩基は
、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウィングセグメントに位置する。
ある態様において、長さが12、13、14、15、16、17、18、19、又は20ヌクレオ塩基であ
るか又はそれ以下であるアンチセンス化合物は、第11因子核酸又はその特定部分のような
標的核酸に関連して、4以下、3以下、2以下、又は1以下の非相補的なヌクレオ塩基（複数
）を含む。
ある態様において、長さが12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25
、26、27、28、29、又は30ヌクレオ塩基であるか又はそれ以下であるアンチセンス化合物
は、第11因子核酸又はその特定部分のような標的核酸に対して、6以下、5以下、4以下、3
以下、2以下、又は1以下の非相補的なヌクレオ塩基（複数）を含む。
本明細書に提供するアンチセンス化合物には、標的核酸の一部分に相補的であるものも
含まれる。本明細書に使用するように、「部分」は、標的核酸の領域又はセグメント内に
ある一定数の連続（即ち、連結）ヌクレオ塩基に言及する。「部分」は、アンチセンス化
合物の一定数の連続ヌクレオ塩基にも言及し得る。ある態様において、アンチセンス化合
物は、標的セグメントの少なくとも8のヌクレオ塩基部分に相補的である。ある態様にお
いて、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも12のヌクレオ塩基部分に相補
的である。ある態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも15の
ヌクレオ塩基部分に相補的である。また考慮されるのは、標的セグメントの少なくとも9
、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20以上、又は上記数値の任意の2つによっ
て画定される範囲のヌクレオ塩基部分に相補的である、アンチセンス化合物である。
同一性
本明細書に提供するアンチセンス化合物はまた、特別なヌクレオチド配列、SEQ ID NO:
、又は特定のIsis番号によって表される化合物、又はその部分に対して一定の同一性パ
ーセントを有し得る。本明細書に使用するように、アンチセンス化合物は、それが同一の
ヌクレオ塩基対合能力を有するならば、本明細書に開示される配列と同一である。例えば
、開示されるDNA配列においてチミジンの代わりにウラシルを含有するRNAは、ウラシルと
チミジンがともにアデニンと対合するので、そのDNA配列と同一であるとみなされよう。
本明細書に記載するアンチセンス化合物の短縮又は延長バージョン、並びに本明細書に提
供するアンチセンス化合物に対して非同一の塩基を有する化合物も考慮される。この非同
一の塩基は、互いに隣接していても、アンチセンス化合物全体に分散していてもよい。ア
ンチセンス化合物の同一性パーセントは、比較される配列に対する、同一の塩基対合を有
する塩基の数に従って計算される。
ある態様において、アンチセンス化合物又はその部分は、本明細書に開示されるアンチ
センス化合物又はSEQ ID NO: 、又はその部分の1以上に対して、少なくとも70％、75％、
80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、又は100％同一である。
ある態様では、アンチセンス化合物の一部分を標的核酸の等しい長さ部分に比較する。
ある態様では、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、
又は25ヌクレオ塩基の部分を標的核酸の等しい長さ部分に比較する。
ある態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの一部分を標的核酸の等しい長さ部分
に比較する。ある態様では、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、
22、23、24、又は25ヌクレオ塩基の部分を標的核酸の等しい長さ部分に比較する。
修飾
ヌクレオシドは、塩基-糖の組合せである。ヌクレオシドのヌクレオ塩基（塩基として
も知られる）部分は、通常、複素環式塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの
糖部分へ共有結合したリン酸基がさらに含まれるヌクレオシドである。ペントフラノシル
糖が含まれるヌクレオシドでは、リン酸基は、糖の2'、3'又は5'ヒドロキシル部分へ連結
することができる。オリゴヌクレオチドは、隣接ヌクレオシドが互いに共有結合すること
により形成されて、線状のポリマーオリゴヌクレオチドを形成する。オリゴヌクレオチド
構造の内部で、リン酸基は、一般に、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間連結を形成す
るものとして言及される。
アンチセンス化合物への修飾には、ヌクレオシド間連結、糖部分、又はヌクレオ塩基へ
の置換又は変更が含まれる。修飾アンチセンス化合物は、しばしば、例えば、細胞取込み
の増強、核酸標的への親和性の増強、ヌクレアーゼの存在下での安定性の増加、又は阻害
活性の増加のような望ましい特性のために、ネイティブ型に優って好ましい。
化学修飾ヌクレオシドはまた、短縮又は先端切断アンチセンスオリゴヌクレオチドのそ
の標的核酸への結合親和性を増加させるために利用し得る。結果として、そのような化学
修飾ヌクレオシドを有する、より短いアンチセンス化合物では、同等の結果をしばしば得
ることができる。
修飾ヌクレオシド間連結
RNA及びDNAの天然に存在するヌクレオシド間連結は、3'から5'へのホスホジエステル連
結である。1以上の修飾された、即ち、天然に存在しないヌクレオシド間連結を有するア
ンチセンス化合物は、しばしば、例えば、細胞取込みの増強、核酸標的への親和性の増強
、及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増加のような望ましい特性のために、天然に存
在するヌクレオシド間連結を有するアンチセンス化合物に優って選択される。
修飾ヌクレオシド間連結を有するオリゴヌクレオチドには、リン原子を保持するヌクレ
オシド間連結、並びにリン原子を有さないヌクレオシド間連結が含まれる。代表的なリン
含有ヌクレオシド間連結には、限定されないが、ホスホジエステル、ホスホトリエステル
、メチルホスホネート、ホスホロアミデート、及びホスホロチオエートが含まれる。リン
含有及び非リン含有の連結の製造の方法は、よく知られている。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、1以上の修
飾ヌクレオシド間連結を含む。ある態様において、修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロ
チオエート連結である。ある態様において、アンチセンス化合物のそれぞれのヌクレオシ
ド間連結は、ホスホロチオエートのヌクレオシド間連結である。
修飾糖部分
本発明のアンチセンス化合物は、糖基が修飾された1以上のヌクレオシドを含有しても
よい。そのような糖修飾ヌクレオシドは、ヌクレアーゼ安定性の増強、結合親和性の増加
、又は他の何らかの有益な生物学的特性をアンチセンス化合物へ付与する場合がある。あ
る態様において、ヌクレオシドは、化学修飾リボフラノース環部分を含む。化学修飾リボ
フラノース環の例には、制限なしに、置換基（5'及び2'置換基が含まれる）の付加、ノン
ジェミナル環原子の架橋形成による二環式核酸（BNA）の形成、リボシル環酸素原子のS、
N（R）、又はC（R1）（R）2（R＝H、C1〜C12アルキル、又は保護基）での置き換え、及び
これらの組合せが含まれる。化学修飾糖の例には、2'-F-5'-メチル置換ヌクレオシド（他
の開示された5',2'-ビス置換ヌクレオシドについてのPCT国際出願WO2008/101157、2008年
8月21日公開、を参照のこと）、又はリボシル環酸素原子のSでの置き換えと2'位でのさら
なる置換（公開の米国特許出願US2005-0130923、2005年6月16日公開、を参照のこと）、
またあるいは、BNAの5'置換（PCT国際出願WO2007/134181、2007年11月22日公開、を参照
のこと。ここでLNAは、例えば5'-メチル又は5'-ビニル基で置換される）が含まれる。
修飾糖部分を有するヌクレオシドの例には、制限なしに、5'-ビニル、5'-メチル（R又
はS）、4'-S、2'-F、2'-OCH3、及び2'-O（CH2）2OCH3置換基を含んでなるヌクレオシドが
含まれる。2'位での置換基はまた、アリル、アミノ、アジド、チオ、O-アリル、O-C1-C10
アルキル、OCF3、O（CH2）2SCH3、O（CH2）2-O-N（Rm）（Rn）、及びO-CH2-C（＝O）-N（
Rm）（Rn）より選択され得る（ここでそれぞれのRm及びRnは、独立して、H、又は置換若
しくは未置換C1-C10アルキルである）。
二環式核酸（BNA）の例には、制限なしに、4'リボシル環原子と2'リボシル環原子の間
の架橋を含んでなるヌクレオシドが含まれる。ある態様において、本明細書に提供するア
ンチセンス化合物には、架橋が以下の式：4'-（CH2）-O-2'（LNA）；4'-（CH2）-S-2'；4
'-（CH2）-O-2'（LNA）；4'-（CH2）2-O-2'（ENA）；4'-C（CH3）2-O-2'（PCT/US2008/06
8922を参照のこと）；4'-CH（CH3）-O-2'及び4'-CH（CH2OCH3）-O-2'（米国特許第7,399,
845号、2008年7月15日発行、を参照のこと）；4'-CH2-N（OCH3）-2'（PCT/US2008/064591
を参照のこと）；4'-CH2-O-N（CH3）-2'（公開米国特許出願US2004-0171570、2004年9月2
日公開、を参照のこと）；4'-CH2-N（R）-O-2'（米国特許第7,427,672号、2008年9月23日
発行、を参照のこと）；4'-CH2-C（CH3）-2'及び4'-CH2-C（＝CH2）-2'（PCT/US2008/066
154を参照のこと）の1つを含む1以上のBNAヌクレオシドが含まれ、そしてここでRは、独
立して、H、C1-C12アルキル、又は保護基である。先述のBNAのそれぞれには、例えば、α
-L-リボフラノースとβ-D-リボフラノースが含まれる、様々な立体化学の糖配置が含まれ
る（PCT国際出願PCT/DK98/00393、WO99/14226として1999年3月25日に公開、を参照のこと
）。
ある態様において、ヌクレオシドは、リボシル環の糖代用物での置き換えによって修飾
される。そのような修飾には、制限なしに、以下の式の1つを有するような、モルホリノ
環、シクロヘキセニル環、シクロヘキシル環、又はテトラヒドロピラニル環のような代用
環系（DNA類似体と呼ばれる場合もある）でのリボシル環の置き換えが含まれる：
Figure 2015211685
当該技術分野では、アンチセンス化合物への取込み用にヌクレオシドを修飾するために
使用し得る、多くの他の二環及び三環糖代用環系も知られている（例えば、総説：Leuman
n, J. C, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854 を参照のこと）。そ
のような環系は、活性を高めるために、様々な追加の置換を受けることができる。
当業者には、修飾糖の製造の方法がよく知られている。
修飾糖部分を有するヌクレオチドにおいて、ヌクレオ塩基部分（天然、修飾又はそれら
の組合せ）は、適正な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために維持される。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、修飾糖部分
を有する1以上のヌクレオチドを含む。ある態様において、修飾糖部分は、2'-MOEである
。ある態様において、2'-MOE修飾ヌクレオチドは、ギャップマーモチーフにおいて配置さ
れる。
修飾ヌクレオ塩基
ヌクレオ塩基（又は塩基）の修飾又は置換は、天然に存在するか又は合成の非修飾ヌク
レオ塩基より構造的に識別可能であるが、機能的には、それと交換可能である。天然のヌ
クレオ塩基と修飾ヌクレオ塩基は、ともに水素結合に参画することが可能である。そのよ
うなヌクレオ塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合親和性、又は他の何らかの有益な生
物学的特性をアンチセンス化合物へ付与することができる。修飾ヌクレオ塩基には、例え
ば、5-メチルシトシン（5-me-C）のような、合成及び天然のヌクレオ塩基が含まれる。5-
メチルシトシン置換が含まれる、あるヌクレオ塩基置換は、アンチセンス化合物の標的核
酸への結合親和性を高めるのに特に有用である。例えば、5-メチルシトシン置換は、核酸
二重鎖の安定性を0.6〜1.2℃だけ高めることが示された（Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T
. and Lebleu, B.（監修）、「アンチセンスの研究及び応用（Antisense Research and A
pplications）」CRCプレス、ボカラトン（1993）、276-278 頁）。
追加の修飾ヌクレオ塩基には、5-ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサン
チン、2-アミノアデニン、アデニン及びグアニンの6-メチル誘導体と他のアルキル誘導体
、アデニン及びグアニンの2-プロピル誘導体と他のアルキル誘導体、2-チオウラシル、2-
チオチミン及び2-チオシトシン、5-ハロウラシル及びシトシン、5-プロピニル（-C≡C-CH
3）ウラシル及びシトシンとピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、6-アゾウラシル、
シトシン、及びチミン、5-ウラシル（シュードウラシル）、4-チオウラシル、8-ハロ、8-
アミノ、8-チオール、8-チオアルキル、8-ヒドロキシル、及び他の8-置換アデニン及びグ
アニン、5-ハロ、特に5-ブロモ、5-トリフルオロメチル、及び他の5-置換ウラシル及びシ
トシン、7-メチルグアニン及び7-メチルアデニン、2-F-アデニン、2-アミノ-アデニン、8
-アザグアニン及び8-アザアデニン、7-デアザグアニン及び7-デアザアデニン及び3-デア
ザグアニン及び3-デアザアデニンが含まれる。
複素環式塩基部分には、プリン又はピリミジン塩基が他の複素環、例えば、7-デアザ-
アデニン、7-デアザグアノシン、2-アミノピリジン、及び2-ピリドンで置き換えられたも
のも含まれ得る。アンチセンス化合物の結合親和性を高めるのに特に有用であるヌクレオ
塩基には、5-置換ピリミジン、6-アザピリミジン、及びN-2、N-6、及びO-6置換プリン（2
-アミノプロピルアデニン、5-プロピニルウラシル、及び5-プロピニルシトシンが含まれ
る）が含まれる。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、1以上の修
飾ヌクレオ塩基を含む。ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるギャップ拡張
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、1以上の修飾ヌクレオ塩基を含む。ある態様におい
て、修飾ヌクレオ塩基は、5-メチルシトシンである。ある態様において、それぞれのシト
シンは、5-メチルシトシンである。
組成物と、医薬組成物を製剤化するための方法
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物又は製剤の製造のための医薬的に許容
される活性又は不活性物質と混合してよい。組成物と、医薬組成物の製剤化のための方法
は、限定されないが、投与の経路、疾患の程度、投与すべき用量が含まれるいくつかの判
断基準に依存している。
第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物は、好適な医薬的に許容される希釈
剤又は担体とそのアンチセンス化合物を組み合わせることによって、医薬組成物において
利用することができる。医薬的に許容される希釈剤には、リン酸緩衝化生理食塩水（PBS
）が含まれる。PBSは、非経口的に送達される組成物での使用に適した希釈剤である。従
って、1つの態様において、本明細書に記載の方法に利用されるのは、第11因子核酸へ標
的指向されるアンチセンス化合物と医薬的に許容される希釈剤を含んでなる医薬組成物で
ある。ある態様において、医薬的に許容される希釈剤は、PBSである。ある態様において
、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
アンチセンス化合物を含んでなる医薬組成物には、医薬的に許容される塩、エステル、
又はそのようなエステルの塩、又は他のあらゆるオリゴヌクレオチドが含まれ、それらは
、ヒトが含まれる動物への投与時に、生理活性のある代謝物又はその残基を（直接的及び
間接的に）提供することが可能である。従って、例えば、本開示はまた、アンチセンス化
合物の医薬的に許容される塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの医薬的に許容さ
れる塩、及び他の生物学的同等物へ引用される。好適な医薬的に許容される塩には、限定
されないが、ナトリウム塩とカリウム塩が含まれる。
プロドラッグには、アンチセンス化合物の一端又は両端での追加ヌクレオシドの取込み
を含めることができる。これは、身体内で内因性ヌクレアーゼによって切断されて、活性
のあるアンチセンス化合物を生成する。
コンジュゲートしたアンチセンス化合物
アンチセンス化合物は、生じるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、又
は細胞取込みを高める、1以上の部分又はコンジュゲートへ共有的に連結させることがで
きる。典型的なコンジュゲート基には、コレステロール部分と脂質部分が含まれる。追加
のコンジュゲート基には、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナン
トリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、及び
色素が含まれる。
アンチセンス化合物はまた、例えば、ヌクレアーゼ安定性のような特性を高めるために
、一般的にはアンチセンス化合物の一端又は両端へ付ける、1以上の安定化基を有するよ
うに修飾することができる。安定化基に含まれるのは、キャップ構造である。これらの末
端修飾は、末端核酸を有するアンチセンス化合物をエクソヌクレアーゼ分解から保護して
、細胞内での送達及び／又は局在化に役立てることができる。キャップは、5'-末端（5'-
キャップ）又は3'-末端（3'-キャップ）に存在し得るか、又は両方の末端に存在し得る。
キャップ構造は、当該技術分野でよく知られていて、例えば、逆位デオキシ脱塩基キャッ
プが含まれる。さらに、ヌクレアーゼ安定性を付与するためにアンチセンス化合物の一端
又は両端をキャップするのに使用し得るさらなる3'及び5'-安定化基には、WO03/004602（
2003年1月16日公開）に開示されるものが含まれる。
細胞培養とアンチセンス化合物処置
第11因子核酸のレベル、活性、又は発現に対するアンチセンス化合物の効果について、
多様な細胞種において in vitro で試験することができる。そのような分析に使用する細
胞種は、市販ベンダー（例、American Type Culture Collection、バージニア州マナッサ
ス；Zen-Bio 社、ノースカロライナ州リサーチトライアングルパーク；Clonetics Corpor
ation、メリーランド州ウォーカーズビル）より入手可能であり、ベンダーの説明書に従
って、市販の試薬（例、Invitrogen Life Technologies、カリフォルニア州カールスバッ
ド）を使用して培養される。例示の細胞種には、限定されないが、HepG2細胞、Hep3B細胞
、及び初代培養肝細胞が含まれる。
アンチセンスオリゴヌクレオチドの in vitro 試験
本明細書に記載するのは、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの細胞の処置についての
方法であって、これは、他のアンチセンス化合物での処置のために適宜修飾することがで
きる。
一般には、細胞が培養中にほぼ60〜80％の集密度に達したときに、細胞をアンチセンス
オリゴヌクレオチドで処置する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞の中へ導入するのに通常使用される1つの
試薬には、カチオン性脂質トランスフェクション試薬、LIPOFECTIN（Invitrogen、カリフ
ォルニア州カールスバッド）が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドをOPTI-MEM1
（Invitrogen、カリフォルニア州カールスバッド）中のLIPOFECTINと混合して、アンチセ
ンスオリゴヌクレオチドの所望の最終濃度と、典型的には100 nMアンチセンスオリゴヌク
レオチドにつき2〜12μg/mLの範囲に及ぶLIPOFECTIN濃度を達成する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中へ導入するために使用する別の試薬には
、LIPOFECTAMINE（Invitrogen、カリフォルニア州カールスバッド）が含まれる。アンチ
センスオリゴヌクレオチドをOPTI-MEM1血清使用量低減培地（Invitrogen、カリフォルニ
ア州カールスバッド）中のLIPOFECTAMINEと混合して、アンチセンスオリゴヌクレオチド
の所望の濃度と、典型的には100 nMアンチセンスオリゴヌクレオチドにつき2〜12μg/mL
の範囲に及ぶLIPOFECTAMINE濃度を達成する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中へ導入するために使用する別の技術には
、エレクトロポレーションが含まれる。
常法によって、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置する。典型的には、アン
チセンスオリゴヌクレオチド処置後16〜24時間で細胞を採取して、この時点で、当該技術
分野で知られて本明細書に記載する方法によって、標的核酸のRNA又はタンパク質レベル
を測定する。一般に、処置を多数の反復物で実施するとき。データは、その反復処置の平
均として提示する。
使用するアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞系ごとに変動する。特別な細
胞系に最適なアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度を決定する方法は、当該技術分野でよ
く知られている。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、LIPOFECTAMINEでトランスフェク
トするとき、典型的には、1 nM〜300 nMに及ぶ濃度で使用する。エレクトロポレーション
を使用してトランスフェクトするときは、625〜20,000 nMに及ぶ、より高い濃度でアンチ
センスオリゴヌクレオチドを使用する。
RNA単離
RNA分析は、全細胞RNA又はポリ（A）＋mRNAで実施することができる。RNA単離の方法は
、当該技術分野でよく知られている。RNAは、当該技術分野でよく知られた方法を使用し
て、例えば、製造業者の推奨プロトコールに従って、TRIZOL試薬（Invitrogen、カリフォ
ルニア州カールスバッド）を使用して調製する。
標的レベル又は発現の阻害の分析
第11因子核酸のレベル又は発現の阻害は、当該技術分野で知られた多様な方法でアッセ
イすることができる。例えば、標的核酸レベルは、例えば、ノーザンブロット分析、競合
的ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）、又は定量的リアルタイムPCRによって定量することがで
きる。RNA分析は、全細胞RNA又はポリ（A）＋mRNAで実施することができる。RNA単離の方
法は、当該技術分野でよく知られている。ノーザンブロット分析も、当該技術分野では、
常法である。定量的リアルタイムPCRは、簡便には、市販のABI PRISM 7600、7700、又は7
900配列検出システム（PE-Applied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティより
入手可能）を使用して、そして製造業者の説明書に従って使用して達成することができる
。
標的RNAレベルの定量的リアルタイムPCR分析
標的RNAレベルの定量は、ABI PRISM 7600、7700、又は7900配列検出システム（PE-Appl
ied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティ）を製造業者の説明書に従って使用
する、定量的リアルタイムPCRによって達成することができる。定量的リアルタイムPCRの
方法は、当該技術分野でよく知られている。
リアルタイムPCRに先立って、単離したRNAを逆転写酵素（RT）反応へ処して、相補的DN
A（cDNA）を産生してから、これをリアルタイムPCR増幅の基質として使用する。RT反応と
リアルタイムPCR反応は、同一の試料ウェルにおいて連続的に実施する。RT及びリアルタ
イムPCRの試薬は、Invitrogen（カリフォルニア州カールスバッド）より入手される。RT
リアルタイム-PCR反応は、当業者によく知られた方法によって行う。
リアルタイムPCRによって得られる遺伝子（又はRNA）標的の量は、シクロフィリンAの
ような、その発現が一定である遺伝子の発現レベルを使用して、又はRIBOGREEN（Invitro
gen 社、カリフォルニア州カールスバッド）を使用して全RNAを定量することによって、
正規化する。シクロフィリンAの発現は、標的と同時に、又は別々に実施して多重化する
ことによって、リアルタイムPCRによって定量する。全RNAは、RIBOGREEN RNA定量試薬（I
nvetrogen 社、オレゴン州ユージーン）を使用して定量する。RIBOGREENによるRNA定量の
方法は、Jones, L. J., et al,（Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374）に教
示されている。CYTOFLUOR 4000機器（PE Applied Biosystems）を使用して、RIBOGREEN蛍
光を測定する。
第11因子核酸とハイブリダイズするようにプローブとプライマーを設計する。リアルタ
イムPCRのプローブ及びプライマーを設計する方法は、当該技術分野でよく知られていて
、PRIMER EXPRESS Software（Applied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティ
）のようなソフトウェアの使用を含めてよい。
タンパク質レベルの分析
第11因子タンパク質レベルを測定することによって、第11因子核酸のアンチセンス阻害
を評価することができる。第11因子のタンパク質レベルは、免疫沈降、ウェスタンブロッ
ト分析（イムノブロッティング）、酵素結合免疫吸着法（ELISA）、定量的タンパク質ア
ッセイ、タンパク質活性アッセイ（例えば、カスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、
免疫細胞化学又は蛍光活性化細胞ソーティング（FACS）のような、当該技術分野でよく知
られた様々なやり方で評価又は定量することができる。標的へ指向される抗体は、抗体の
MSRSカタログ（Aerie Corporation、ミシガン州バーミンガム）のような多様な供給源よ
り同定して入手するか、又は当該技術分野でよく知られた慣用のモノクローナル又はポリ
クローナル抗体作製法により製造することができる。マウス、ラット、サル、及びヒトの
第11因子の検出に有用な抗体が市販されている。
アンチセンス化合物の in vivo 試験
アンチセンス化合物、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドについて、第11因子の
発現を阻害して、aPTTの延長、正常なPTと連動したaPTT時間の延長、血小板第4因子（PF-
4）の量の減少、並びに血栓形成の低下又は血栓形成時間の増加といった表現型の変化を
もたらすその能力を評価するために、動物で試験する。試験は、正常な動物において、又
は実験的な疾患モデルにおいて実施してよい。動物への投与のために、リン酸緩衝化生理
食塩水のような医薬的に許容される希釈剤でアンチセンスオリゴヌクレオチドを製剤化す
る。投与には、腹腔内、静脈内、及び皮下のような非経口の投与経路が含まれる。アンチ
センスオリゴヌクレオチドの投与量及び投薬頻度の計算は、当業者の能力内にあり、投与
経路や動物体重のような要因に依存する。アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置の期
間に続いて、肝臓組織よりRNAを単離して、第11因子核酸発現の変化を測定する。トロン
ビン産生アッセイを使用して、第11因子タンパク質レベルの変化も測定する。その上に、
処置動物からの血漿を使用して、凝固時間（例、PT及びaPTT）に対する効果を判定する。
忍容性
ある態様において、本明細書に提供する化合物は、ごくわずかな副作用を示す。副作用
には、典型的には第11因子の標的化とは無関係である、動物中での炎症反応のような、ア
ンチセンス化合物の投与に対する応答が含まれる。ある態様において、化合物は、動物に
より十分忍容される。忍容性の増加は、限定されないが、アンチセンス化合物のヌクレオ
チド配列、ヌクレオチドへの化学修飾、アンチセンス化合物中の非修飾及び修飾ヌクレオ
シドの特別なモチーフ、又はこれらの組合せが含まれる、いくつかの要因に依存する可能
性がある。忍容性は、いくつかの要因によって決定される場合がある。そのような要因に
は、体重、臓器重量、肝機能、腎機能、血小板数、白血球数が含まれる。
ある態様において、本明細書に提供する化合物は、臓器重量に対してごくわずかな効果
を示す。ある態様において、該化合物は、脾臓及び／又は肝臓重量の7倍未満、6倍、5倍
、4倍、3倍、2倍の増加を示すか又は有意な増加を示さない。
ある態様において、本明細書に提供する化合物は、肝機能に対してごくわずかな効果を
示す。肝機能の評価用の因子には、ALTレベル、ASTレベル、血漿ビリルビンレベル、及び
血漿アルブミンレベルが含まれる。ある態様において、本明細書に提供する化合物は、AL
T又はASTの7倍未満、6倍未満、5倍未満、4倍未満、3倍未満、又は2倍未満の増加を示すか
又は有意な増加を示さない。ある態様において、本明細書に提供する化合物は、血漿ビリ
ルビンレベルの3倍未満、2倍未満の増加を示すか又は有意な増加を示さない。
ある態様において、本明細書に提供する化合物は、腎機能に対してごくわずかな効果を
示す。ある態様において、本明細書に提供する化合物は、血中尿素窒素（BUN）の血漿濃
度の3倍未満、2倍未満の増加を示すか又は有意な増加を示さない。ある態様において、本
明細書に提供する化合物は、尿タンパク質／クレアチニン比の6倍未満、5倍、4倍、3倍、
2倍の増加を示すか又は有意な増加を示さない。
ある態様において、本明細書に提供する化合物は、血液学的因子に対してごくわずかな
効果を示す。ある態様において、本明細書に提供する化合物は、血小板数の60％未満、50
％、40％、30％、20％、10％、又は5％の減少を示す。ある態様において、本明細書に提
供する化合物は、単球数の4倍未満、3倍未満、2倍未満の増加を示すか又は有意な増加を
示さない。
ある態様において、本化合物は、好ましい薬物動態をさらに示す。ある態様において、
アンチセンス化合物は、関連の生体液又は組織において相対的に高い半減期を明示する。
ある態様において、本化合物又は組成物は、好ましい粘度をさらに示す。ある態様にお
いて、該化合物又は組成物の粘度は、165〜185 mg/mLの濃度で40 cP以下である。
他の態様において、本化合物は、上記の特徴の組合せを示して、動物モデルにおける第
11因子mRNA発現を高い効率で低下させる。
特定の適応症
ある態様において、本発明は、本発明の1以上の医薬組成物を投与することを含んでな
る、個体を治療する方法を提供する。ある態様において、個体は、血栓塞栓合併症を有す
る。ある態様において、個体は、限定されないが、深在性静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗
塞、及び卒中のような、梗塞、血栓症、塞栓症、血栓塞栓症が含まれる血液凝固障害への
リスク状態にある。これには、血栓症のリスクをもたらす後天的な問題、疾患、又は障害
（例えば、外科手術、癌、不動性状態、敗血症、アテローム性動脈硬化症、心房細動）、
並びに遺伝的素因（例えば、抗リン脂質抗体症候群と常染色体優性状態、第V因子ライデ
ン）のある個体が含まれる。ある態様において、個体は、抗凝固療法を必要とすると確認
されている。そのような個体の例には、限定されないが、重大な整形外科手術（例、股関
節／膝置換又は股関節骨折の手術）を受けている個体、並びに卒中を予防するために慢性
治療の必要がある患者（心房細動に罹患している患者のような）が含まれる。ある態様に
おいて、本発明は、第11因子発現を個体において予防的に低下させるための方法を提供す
る。ある態様には、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物の治療有効量を個
体へ投与することによって、それを必要とする個体を治療することが含まれる。
1つの態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物の治療有効量
の投与には、個体の血清中の第11因子レベルを監視して、アンチセンス化合物の投与に対
する個体の応答を判定することを伴う。医師は、アンチセンス化合物の投与に対する個体
の応答を使用して、治療介入の量及び期間を決定する。
ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物の投与は、第11
因子発現の、少なくとも15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85
、90、95又は99％、又は上記数値の任意の2つによって画定される範囲だけの低下をもた
らす。ある態様において、第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンス化合物の投与は、
標準試験、例えば、限定されないが、活性化部分トロンボプラスチン時間（aPTT）検査、
プロトロンビン時間（PT）検査、トロンビン時間（TCT）、出血時間、又はD-二量体によ
って測定されるような血液凝固の測定値の変化をもたらす。ある態様において、第11因子
アンチセンス化合物の投与は、その測定値を少なくとも15、20、25、30、35、40、45、50
、55、60、65、70、75、80、85、90、95又は99％、又は上記数値の任意の2つによって画
定される範囲だけ増加させる。いくつかの態様において、第11因子アンチセンス化合物の
投与は、その測定値を少なくとも15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75
、80、85、90、95又は99％、又は上記数値の任意の2つによって画定される範囲だけ減少
させる。
ある態様では、第11因子へ標的指向されるアンチセンス化合物を含んでなる医薬組成物
を、血栓塞栓合併症に罹患しているか又は罹患しやすい患者を治療するための医薬品の製
造に使用する。
特定の組合せ療法
ある態様では、本発明の1以上の医薬組成物を1以上の他の薬剤と同時投与する。ある態
様において、そのような1以上の他の薬剤は、本発明の1以上の医薬組成物と同じ疾患、障
害、又は状態を治療するように設計される。ある態様において、そのような1以上の他の
薬剤は、本発明の1以上の医薬組成物とは異なる疾患、障害、又は状態を治療するように
設計される。ある態様において、そのような1以上の他の薬剤は、本発明の1以上の医薬組
成物の望まれない副作用を処置するように設計される。ある態様では、本発明の1以上の
医薬組成物を別の薬剤と同時投与して、他の薬剤の望まれない効果を処置する。ある態様
では、本発明の1以上の医薬組成物を別の薬剤と同時投与して、組合せの効果をもたらす
。ある態様では、本発明の1以上の医薬組成物を別の薬剤と同時投与して、相乗効果をも
たらす。
ある態様では、本発明の1以上の医薬組成物と1以上の他の薬剤を同時に投与する。ある
態様では、本発明の1以上の医薬組成物と1以上の他の薬剤を異なる時間で投与する。ある
態様では、本発明の1以上の医薬組成物と1以上の他の薬剤を単一の製剤において一緒に調
製する。ある態様では、本発明の1以上の医薬組成物と1以上の他の薬剤を別々に調製する
。
ある態様において、本発明の医薬組成物と同時投与され得る薬剤には、抗凝固薬又は抗
血小板剤が含まれる。ある態様において、本発明の医薬組成物と同時投与され得る薬剤に
は、アスピリンのような、NSAID／シクロオキシゲナーゼ阻害剤が含まれる。ある態様に
おいて、本発明の医薬組成物と同時投与され得る薬剤には、クロピドグレル（PLAVIX）及
びチクロピジン（TICLID）のような、アデノシン二リン酸（ADP）受容体阻害剤が含まれ
る。ある態様において、本発明の医薬組成物と同時投与され得る薬剤には、シロスタゾー
ル（PLETAL）のようなホスホジエステラーゼ阻害剤が含まれる。ある態様において、本発
明の医薬組成物と同時投与され得る薬剤には、アブシキシマブ（REOPRO）、エプチフィバ
チド（INTEGRILIN）、チロフィバン（AGGRASTAT）、及びデフィロチドのような、糖タン
パク質IIB/IIIA阻害剤が含まれる。ある態様において、本発明の医薬組成物と同時投与さ
れ得る薬剤には、ジピリダモール（PERSANTINE）のようなアデノシン再取込み阻害剤が含
まれる。ある態様において、本発明の医薬組成物と同時投与され得る薬剤には、限定され
ないが、ワルファリン（と関連クマリン類）、ヘパリン、直接的なトロンビン阻害剤（レ
ピルジン、ビバリルジンのような）、アピキサバン、LOVENOX、及び、特別な凝固因子の
酵素作用に直接的に干渉する低分子化合物（例、第Xa因子に干渉するリバロキサバン）が
含まれる。ある態様において、本発明の第11因子特異的阻害剤と同時投与され得る薬剤に
は、限定されないが、追加の第11因子阻害剤が含まれる。ある態様において、抗凝固薬又
は抗血小板剤は、本発明の医薬組成物の投与に先立って投与される。ある態様において、
抗凝固薬又は抗血小板剤は、本発明の医薬組成物の投与に続いて投与される。ある態様に
おいて、抗凝固薬又は抗血小板剤は、本発明の医薬組成物と同時に投与される。ある態様
において、同時投与される抗凝固薬又は抗血小板剤の用量は、抗凝固薬又は抗血小板剤が
単独で投与される場合に投与されるはずの用量と同じである。ある態様において、同時投
与される抗凝固薬又は抗血小板剤の用量は、抗凝固薬又は抗血小板剤が単独で投与される
場合に投与されるはずの用量より低い。ある態様において、同時投与される抗凝固薬又は
抗血小板剤の用量は、抗凝固薬又は抗血小板剤が単独で投与される場合に投与されるはず
の用量より高い。
ある態様において、第二化合物の同時投与は、その化合物の同時投与により、第一化合
物を単独で投与する効果より大きい抗凝固効果をもたらすように、第一化合物の抗凝固効
果を増強する。他の態様において、同時投与は、化合物が単独で投与されるときの効果の
相加的である抗凝固効果をもたらす。ある態様において、同時投与は、化合物が単独で投
与されるときの効果の超相加的である抗凝固効果をもたらす。ある態様において、第二化
合物の同時投与は、出血リスクを高めることなく、抗血栓活性を増加させる。ある態様に
おいて、第一化合物は、アンチセンス化合物である。ある態様において、第二化合物は、
アンチセンス化合物である。
ある態様では、第11因子特異的阻害剤の投与後いつでも解毒薬を投与する。ある態様で
は、第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後いつでも解毒薬を
投与する。ある態様では、第11因子に標的指向するアンチセンス化合物の投与から数分、
数時間、数日、数週、又は数ヶ月後に解毒薬を投与する。ある態様において、解毒薬は、
第11因子に標的指向するアンチセンス化合物に相補的である（例、センス鎖）。ある態様
において、解毒薬は、第7因子、第7a因子、第11因子、又は第11a因子のタンパク質である
。ある態様において、第7因子、第7a因子、第11因子、又は第11a因子のタンパク質は、ヒ
ト第7因子、ヒト第7a因子、ヒト第11因子、又はヒト第11a因子のタンパク質である。ある
態様において、第7因子タンパク質は、NOVOSEVENである。
特定の同時投与抗血小板療法
ある態様では、第11因子阻害剤を抗血小板療法と組み合わせる。ある態様において、抗
血小板療法と組み合わせた第11因子阻害剤の投与は、抗血小板療法単独と比較した、出血
のリスクの明瞭又は検出可能な増加をほとんど又はまったくもたらさない。ある態様にお
いて、このリスクプロフィール又はリスク徴候は、抗血小板療法単独と変わらない。
抗血小板及び抗凝固療法の組合せは、例えば、血栓塞栓症、心房細動、心臓弁障害、心
臓弁膜症、卒中、CADと診断された患者において、そして人工弁を有する患者において最
も頻繁に臨床現場で使用される。二元療法の利益は、血小板と凝固因子の活性をともに抑
制する、有り得べき相加効果に関する。二元療法のリスクは、出血増加の潜在可能性であ
る（Dowd, M. Plenary Sessions/Thrombosis Research 123 (2008)）。
抗血小板及び抗凝固薬療法の従来の組合せは、抗凝固療法又は抗血小板療法単独と比較
して、出血のリスクを高めると示されてきた。そのような組合せには、ADP受容体／P2Y12
阻害剤（PLAVIXとしても知られるクロピドグレルのようなチエノピリジン類）及びNSAID
（例、アスピリンとナプロキセン）とFXa阻害剤（例、アピキシバンとリバロキサバン）
が含まれる（Kubitza, D. et al., Br. J. Clin. Pharmacol. 63: 4 (2006)；Wong, P. C
. et al. Journal of Thrombosis and Haemostasis 6 (2008)；新薬承認申請に関するFDA
諮問委員会ブリーフィング資料 22-406 (2009)）。例えば、Wong は、アスピリンとアス
ピリン＋クロピドグレルへある量のアピキサバンを加えると、アスピリン単独とアスピリ
ン＋クロピドグレルと比較して、出血時間の有意な増加をもたらしたと報告している。Ku
bitza は、リバロキサバン及びナプロキセンの組合せ投与により、ナプロキセン単独に対
して出血時間が有意に増加したと報告している。
非限定的な開示と参照による組込み
本明細書に記載するある化合物、組成物、及び方法について、ある態様に準拠して特定
して記載してきたが、以下の実施例は、本明細書に記載する化合物について例解するため
にのみ役立つのであって、それを限定することを企図しない。本出願に引用する参考文献
のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
実施例1：HepG2細胞におけるヒト第11因子のアンチセンス阻害
第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンスオリゴヌクレオチドについて、第11因子mR
NAに対するその効果を in vitro で試験した。リポフェクチン試薬を75 nMアンチセンス
オリゴヌクレオチドとともに使用して、10,000個の細胞／ウェルの密度の培養HepG2細胞
にトランスフェクトした。ほぼ24時間の処置期間の後で、この細胞よりRNAを単離して、
定量的リアルタイムPCRによって第11因子mRNAレベルを測定した。第11因子mRNAレベルは
、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。未処置対照細胞に対する第
11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。
表1及び2のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5-10-5MOEギャップマーとして
設計した。このギャップマーは、20ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセ
グメントは、10の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）
それぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。5'ウィングセグメントの各ヌ
クレオチドと3'ウィングセグメントの各ヌクレオチドは、2'-MOE修飾を有する。それぞれ
のギャップマー全体のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（P＝S）連結である。
それぞれのギャップマー全体のすべてのシチジン残基は、5-メチルシチジンである。「標
的開始部位」は、ギャップマーが標的指向される5'末端ヌクレオチドを示す。「標的終結
部位」は、ギャップマーが標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。表1に収載するそ
れぞれのギャップマーは、SEQ ID NO: 1（GENBANK登録番号NM_000128.3）へ標的指向され
て、表2に収載するそれぞれのギャップマーは、SEQ ID NO: 2（GENBANK登録番号NT_02279
2.17［19598000〜19624000が切断された］）へ標的指向されている。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例2：HepG2細胞におけるヒト第11因子の用量依存的なアンチセンス阻害
ヒト第11因子の84パーセント以上の in vitro 阻害を明示する12のギャップマーについ
て、HepG2細胞において様々な用量で試験した。細胞を10,000個の細胞／ウェルの密度で
プレート培養して、表3に特定されるように、9.375 nM、18.75 nM、37.5 nM、75 nM、及
び150 nM濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドとともにリポフェクチン試薬を使用して
トランスフェクトした。ほぼ16時間の処置期間の後で、この細胞よりRNAを単離して、定
量的リアルタイムPCRによって第11因子mRNAレベルを測定した。ヒト第11因子プライマー
プローブセット：RTS2966（フォワード配列：CAGCCTGGAGCATCGTAACA、本明細書ではSEQ I
D NO: 3として取り込む；リバース配列：TTTATCGAGCTTCGTTATTCTGGTT、本明細書ではSEQ
ID NO: 4として取り込む；プローブ配列：TTGTCTACTGAAGCACACCCAAACAGGGAX、本明細書で
はSEQ ID NO: 5として取り込む）を使用して、mRNAレベルを測定した。第11因子mRNAレベ
ルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。未処置対照細胞に対す
る第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表3に例証されるように、第11因子m
RNAレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞において用量依存的なやり方で
低下した。
Figure 2015211685
実施例3：マイクロウォーク（microwalk）によって設計したオリゴヌクレオチドによる
、HepG2細胞におけるヒト第11因子のアンチセンス阻害
表3に提示するギャップマーに基づいて、追加のギャップマーを設計した。これらのギ
ャップマーは、表3からの元のギャップマーのやや上流及び下流にシフトした（即ち、「
マイクロウォーク」）ギャップマーを創出することによって設計した。ギャップマーは、
様々なモチーフ、例、5-10-5MOE、3-14-3MOE、及び2-13-5MOEでも創出した。これらのギ
ャップマーについて in vitro で試験した。75 nMアンチセンスオリゴヌクレオチドとと
もにリポフェクチン試薬を使用して、10,000個の細胞／ウェルの密度の培養HepG2細胞に
トランスフェクトした。ほぼ24時間の処置期間の後で、この細胞よりRNAを単離して、定
量的リアルタイムPCRによって第11因子mRNAレベルを測定した。第11因子mRNAレベルは、R
IBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。未処置対照細胞に対する第11
因子の阻害パーセントとして結果を提示する。
次いで、表4、5、6、7、及び8に示すように、マイクロウォークによって設計したギャ
ップマーの in vitro 阻害データを表3からのギャップマーの in vitro 阻害データと比
較した。上記のオリゴヌクレオチドは、それらがマップされる、ヒトmRNA（GENBANK登録
番号NM_000128.3）上の領域に従って表示される。
表4のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5-10-5MOE、3-14-3MOE、及び2-13-5M
OEギャップマーとして設計した。表4で最初に収載したギャップマーは、元のギャップマ
ー（表3を参照のこと）であり、これよりマイクロウォークによって残りのギャップマー
を設計して、アステリスクにより表記する。5-10-5ギャップマーは、20ヌクレオチドの長
さであり、ここで中央のギャップセグメントは、10の2'-デオキシヌクレオチドより構成
されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接
する。3-14-3ギャップマーは、20ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグ
メントは、14の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）そ
れぞれ3ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。2-13-5ギャップマーは、20ヌク
レオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、13の2'-デオキシヌクレオ
チドより構成される。中央のギャップは、5'端に2のヌクレオチドを含んでなるウィング
、そして3'端に5のヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。このモチーフ（5-10-
5、3-14-3、及び2-13-5）のそれぞれで、5'ウィングセグメントの各ヌクレオチドと3'ウ
ィングセグメントの各ヌクレオチドは、2'-MOE修飾を有する。それぞれのギャップマー全
体のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（P＝S）連結である。それぞれのギャッ
プマー全体のすべてのシチジン残基は、5-メチルシチジンである。「標的開始部位」は、
ギャップマーが標的指向される5'末端ヌクレオチドを示す。「標的終結部位」は、ギャッ
プマーが標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。表4に収載するそれぞれのギャップ
マーは、SEQ ID NO: 1（GENBANK登録番号NM_000128.3）へ標的指向される。
表4に示すように、SEQ ID NO: 1の標的開始部位656に始まって、標的終結部位704で終
わる標的領域（即ち、ヌクレオ塩基656〜704）へ標的指向される、5-10-5MOEギャップマ
ー、3-14-3MOEギャップマー、及び2-13-5MOEギャップマーのいずれも、第11因子mRNAの少
なくとも20％の阻害を示す。このギャップマーの多くは、少なくとも60％の阻害を示す。
ISIS番号：416806、416809、416811、416814、416821、416825、416826、416827、416828
、416868、416869、416878、416879、416881、416883、416890、416891、416892、416893
、416894、416895、416896、416945、416946、416969、416970、416971、416972、416973
、412203、413467、413468、及び413469が含まれる、このギャップマーのいくつかは、少
なくとも80％の阻害を示す。以下のISIS番号は、少なくとも90％の阻害を示した：412203
、413467、416825、416826、416827、416868、416878、416879、416892、416893、416895
、416896、416945、416972、及び416973。以下のISIS番号は、少なくとも95％の阻害を示
した：416878、416892、416895、及び416896。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
表5のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5-10-5MOE、3-14-3MOE、及び2-13-5M
OEギャップマーとして設計した。表5で最初に収載したギャップマーは、元のギャップマ
ー（表3を参照のこと）であり、これよりマイクロウォークによって残りのギャップマー
を設計して、アステリスクにより表記する。5-10-5ギャップマーは、20ヌクレオチドの長
さであり、ここで中央のギャップセグメントは、10の2'-デオキシヌクレオチドより構成
されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接
する。3-14-3ギャップマーは、20ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグ
メントは、14の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）そ
れぞれ3ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。2-13-5ギャップマーは、20ヌク
レオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、13の2'-デオキシヌクレオ
チドより構成される。中央のギャップは、5'端に2のヌクレオチドを含んでなるウィング
、そして3'端に5のヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。このモチーフ（5-10-
5、3-14-3、及び2-13-5）のそれぞれで、5'ウィングセグメントの各ヌクレオチドと3'ウ
ィングセグメントの各ヌクレオチドは、2'-MOE修飾を有する。それぞれのギャップマー全
体のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（P＝S）連結である。それぞれのギャッ
プマー全体のすべてのシチジン残基は、5-メチルシチジンである。「標的開始部位」は、
ギャップマーが標的指向される5'末端ヌクレオチドを示す。「標的終結部位」は、ギャッ
プマーが標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。表5に収載するそれぞれのギャップ
マーは、SEQ ID NO: 1（GENBANK登録番号NM_000128.3）へ標的指向される。
表5に示すように、SEQ ID NO: 1の標的開始部位738に始まって、標的終結部位762で終
わる標的領域（即ち、ヌクレオ塩基738〜762）へ標的指向される、5-10-5MOEギャップマ
ー、3-14-3MOEギャップマー、及び2-13-5MOEギャップマーのいずれも、第11因子mRNAの少
なくとも45％の阻害を示す。このギャップマーのほとんどは、少なくとも60％の阻害を示
す。ISIS番号：412206、416830、416831、416898、416899、416900、416903、416975、41
6976、416977、及び416980が含まれる、このギャップマーのいくつかは、少なくとも80％
の阻害を示す。以下のISIS番号は、少なくとも90％の阻害を示した：412206、416831、及
び416900。
Figure 2015211685
表6のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5-10-5MOE、3-14-3MOE、及び2-13-5M
OEギャップマーとして設計した。表6で最初に収載したギャップマーは、元のギャップマ
ー（表3を参照のこと）であり、これよりマイクロウォークによって残りのギャップマー
を設計して、アステリスクにより表記する。5-10-5ギャップマーは、20ヌクレオチドの長
さであり、ここで中央のギャップセグメントは、10の2'-デオキシヌクレオチドより構成
されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接
する。3-14-3ギャップマーは、20ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグ
メントは、14の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）そ
れぞれ3ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。2-13-5ギャップマーは、20ヌク
レオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、13の2'-デオキシヌクレオ
チドより構成される。中央のギャップは、5'端に2のヌクレオチドを含んでなるウィング
、そして3'端に5のヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。このモチーフ（5-10-
5、3-14-3、及び2-13-5）のそれぞれで、5'ウィングセグメントの各ヌクレオチドと3'ウ
ィングセグメントの各ヌクレオチドは、2'-MOE修飾を有する。それぞれのギャップマー全
体のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（P＝S）連結である。それぞれのギャッ
プマー全体のすべてのシチジン残基は、5-メチルシチジンである。「標的開始部位」は、
ギャップマーが標的指向される5'末端ヌクレオチドを示す。「標的終結部位」は、ギャッ
プマーが標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。表6に収載するそれぞれのギャップ
マーは、SEQ ID NO: 1（GENBANK登録番号NM_000128.3）へ標的指向される。
表6に示すように、SEQ ID NO: 1の標的開始部位1018に始まって、標的終結部位1042で
終わる標的領域（即ち、ヌクレオ塩基1018〜1042）へ標的指向される、5-10-5MOEギャッ
プマー、3-14-3MOEギャップマー、及び2-13-5MOEギャップマーのいずれも、第11因子mRNA
の少なくとも80％の阻害を示す。以下のISIS番号は、少なくとも90％阻害を示した：4134
74、416837、416838、416904、416907、及び416908。
Figure 2015211685
表7のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5-10-5MOE、3-14-3MOE、及び2-13-5M
OEギャップマーとして設計した。表7で最初に収載したギャップマーは、元のギャップマ
ー（表3を参照のこと）であり、これよりマイクロウォークによって残りのギャップマー
を設計して、アステリスクにより表記する。5-10-5ギャップマーは、20ヌクレオチドの長
さであり、ここで中央のギャップセグメントは、10の2'-デオキシヌクレオチドより構成
されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接
する。3-14-3ギャップマーは、20ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグ
メントは、14の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）そ
れぞれ3ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。2-13-5ギャップマーは、20ヌク
レオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、13の2'-デオキシヌクレオ
チドより構成される。中央のギャップは、5'端に2のヌクレオチドを含んでなるウィング
、そして3'端に5のヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。このモチーフ（5-10-
5、3-14-3、及び2-13-5）のそれぞれで、5'ウィングセグメントの各ヌクレオチドと3'ウ
ィングセグメントの各ヌクレオチドは、2'-MOE修飾を有する。それぞれのギャップマー全
体のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（P＝S）連結である。それぞれのギャッ
プマー全体のすべてのシチジン残基は、5-メチルシチジンである。「標的開始部位」は、
ギャップマーが標的指向される5'末端ヌクレオチドを示す。「標的終結部位」は、ギャッ
プマーが標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。表4に収載するそれぞれのギャップ
マーは、SEQ ID NO: 1（GENBANK登録番号NM_000128.3）へ標的指向される。
表7に示すように、SEQ ID NO: 1の標的開始部位1062に始まって、標的終結部位1091で
終わる標的領域（即ち、ヌクレオ塩基1062〜1091）へ標的指向される、5-10-5MOEギャッ
プマー、3-14-3MOEギャップマー、及び2-13-5MOEギャップマーのいずれも、第11因子mRNA
の少なくとも20％の阻害を示す。ISIS番号：412215、413476、413476、416839、416840、
416841、416842、416843、416844、416845、416846、416847、416909、416910、416911、
416912、416913、416914、416915、416916、416917、416918、416986、416987、416988、
416989、416990、416991、416992、416993、416994、416995が含まれる、このギャップマ
ーの多くは、少なくとも50％の阻害を示す。以下のISIS番号は、少なくとも80％の阻害を
示した：412215、413476、413476、416839、416840、416841、416842、416843、416844、
416845、416910、416911、416912、416913、416914、416916、416917、416986、416987、
416989、416991、416992、416993、及び416994。以下のISIS番号は、少なくとも90％の阻
害を示した：413476、413476、416842、416844、416910、416911、416912、416913、4169
16、416917、及び416993。
Figure 2015211685
表8のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5-10-5MOE、3-14-3MOE、及び2-13-5M
OEギャップマーとして設計した。表8で最初に収載したギャップマーは、元のギャップマ
ー（表3を参照のこと）であり、これよりマイクロウォークによって残りのギャップマー
を設計して、アステリスクにより表記する。5-10-5ギャップマーは、20ヌクレオチドの長
さであり、ここで中央のギャップセグメントは、10の2'-デオキシヌクレオチドより構成
されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接
する。3-14-3ギャップマーは、20ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグ
メントは、14の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）そ
れぞれ3ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。2-13-5ギャップマーは、20ヌク
レオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、13の2'-デオキシヌクレオ
チドより構成される。中央のギャップは、5'端に2のヌクレオチドを含んでなるウィング
、そして3'端に5のヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。このモチーフ（5-10-
5、3-14-3、及び2-13-5）のそれぞれで、5'ウィングセグメントの各ヌクレオチドと3'ウ
ィングセグメントの各ヌクレオチドは、2'-MOE修飾を有する。それぞれのギャップマー全
体のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（P＝S）連結である。それぞれのギャッ
プマー全体のすべてのシチジン残基は、5-メチルシチジンである。「標的開始部位」は、
ギャップマーが標的指向される5'末端ヌクレオチドを示す。「標的終結部位」は、ギャッ
プマーが標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。表8に収載するそれぞれのギャップ
マーは、SEQ ID NO: 1（GENBANK登録番号NM_000128.3）へ標的指向される。
表8に示すように、SEQ ID NO: 1の標的開始部位1275に始まって、標的終結部位1318で
終わる標的領域（即ち、ヌクレオ塩基1275〜1318）へ標的指向される、5-10-5MOEギャッ
プマー、3-14-3MOEギャップマー、及び2-13-5MOEギャップマーのいずれも、第11因子mRNA
の少なくとも70％の阻害を示す。ISIS番号：412223、412224、412225、413482、416848、
416849、416850、416851、416852、416853、416854、416855、416856、416857、416858、
416859、416860、416861、416862、416863、416864、416865、416866、416867、416920、
416921、416922、416923、416924、416925、416926、416927、416928、416929、416930、
416931、416932、416933、416934、416935、416936、416937、416938、416939、416940、
416941、416942、416943、416944、416997、416998、416999、417000、417001、417002、
417003、417004、417006、417007、417008、417009、417010、417011、417013、417014、
417015、417016、417017、417018、417019、及び417020が含まれる、このギャップマーの
多くは、少なくとも80％の阻害を示す。以下のISIS番号は、少なくとも90％の阻害を示し
た：412224、416850、416853、416856、416857、416858、416861、416862、416864、4169
22、416923、416924、416925、416926、416928、416931、416932、416933、416934、4169
35、416937、416938、416940、416941、416943、416999、417002、416854、及び416859。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例4：HepG2細胞におけるヒト第11因子の用量依存的なアンチセンス阻害
ヒト第11因子の in vitro 阻害を明示する、実施例3からのギャップマー（表4、5、6、
7、及び8を参照のこと）について、HepG2細胞において様々な用量で試験した。細胞を10,
000個の細胞／ウェルの密度でプレート培養して、表9に特定されるように、9.375 nM、18
.75 nM、37.5 nM、及び75 nM濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドとともにリポフェク
チン試薬を使用してトランスフェクトした。ほぼ16時間の処置期間の後で、この細胞より
RNAを単離して、定量的リアルタイムPCRによって第11因子mRNAレベルを測定した。ヒト第
11因子プライマープローブセット：RTS2966を使用して、mRNAレベルを測定した。第11因
子mRNAレベルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。未処置対照
細胞に対する第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表9に例証されるように
、第11因子mRNAレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞において用量依存的
なやり方で低下した。
Figure 2015211685
このギャップマーは、エレクトロポレーションによってもトランスフェクトして、ヒト
第11因子mRNAへのその用量依存的な阻害を測定した。細胞を20,000個の細胞／ウェルの密
度でプレート培養して、表10に特定されるように、エレクトロポレーションにより、0.7
μM、2.2μM、6.7μM、及び20μM濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェ
クトした。ほぼ16時間の処置期間の後で、この細胞よりRNAを単離して、定量的リアルタ
イムPCRによって第11因子mRNAレベルを測定した。ヒト第11因子プライマープローブセッ
ト：RTS2966を使用して、mRNAレベルを測定した。第11因子mRNAレベルは、RIBOGREENによ
って測定される全RNA含量に従って補正した。未処置対照細胞に対する第11因子の阻害パ
ーセントとして結果を提示する。表10に例証されるように、第11因子mRNAレベルは、アン
チセンスオリゴヌクレオチド処置細胞において用量依存的なやり方で低下した。
Figure 2015211685
実施例5：HepG2細胞におけるヒト第11因子の有効な用量依存的アンチセンス阻害の選択
及び確認
実施例4においてヒト第11因子の有意な用量依存的阻害を明示するギャップマーについ
て選択して、HepG2細胞において様々な用量で試験した。細胞を10,000個の細胞／ウェル
の密度でプレート培養して、表11に特定されるように、2.34 nM、4.69 nM、9.375 nM、18
.75 nM、37.5 nM、及び75 nM濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドとともにリポフェク
ションを使用してトランスフェクトした。ほぼ16時間の処置期間の後で、この細胞よりRN
Aを単離して、定量的リアルタイムPCRによってヒト第11因子mRNAレベルを測定した。ヒト
第11因子プライマープローブセット：RTS2966を使用して、mRNAレベルを測定した。第11
因子mRNAレベルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。未処置対
照細胞に対するヒト第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表11に例証される
ように、第11因子mRNAレベルは、対照と比較して、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置
細胞において用量依存的なやり方で低下した。
Figure 2015211685
このギャップマーは、エレクトロポレーションによってもトランスフェクトして、ヒト
第11因子mRNAへのその用量依存的な阻害を測定した。細胞を20,000個の細胞／ウェルの密
度でプレート培養して、表12に特定されるように、エレクトロポレーションにより、625
nM、1250 nM、2500 nM、5,000 nM、10,000 nM、及び20,000 nM濃度のアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドでトランスフェクトした。ほぼ16時間の処置期間の後で、この細胞よりRNA
を単離して、定量的リアルタイムPCRによってヒト第11因子mRNAレベルを測定した。ヒト
第11因子プライマープローブセット：RTS2966を使用して、mRNAレベルを測定した。第11
因子mRNAレベルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。未処置対
照細胞に対するヒト第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表12に例証される
ように、第11因子mRNAレベルは、対照と比較して、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置
細胞において用量依存的なやり方で低下した。
Figure 2015211685
実施例6：シアノ（cyano）初代培養肝細胞におけるヒト第11因子の有効な用量依存的ア
ンチセンス阻害の選択及び確認
ヒト第11因子の有意な用量依存的 in vitro 阻害を明示する実施例4からのギャップマ
ーについて、シアノ初代培養肝細胞においても様々な用量で試験した。細胞を35,000個の
細胞／ウェルの密度でプレート培養して、表13に特定されるように、エレクトロポレーシ
ョンにより、0.74 nM、2.2 nM、6.7 nM、20 nM、60 nM、及び180 nM濃度のアンチセンス
オリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。ほぼ16時間の処置期間の後で、この細胞よ
りRNAを単離して、定量的リアルタイムPCRによってヒト第11因子mRNAレベルを測定した。
ヒト第11因子プライマープローブセット：RTS2966を使用して、mRNAレベルを測定した。
第11因子mRNAレベルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。未処
置対照細胞に対するヒト第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表13に例証さ
れるように、第11因子mRNAレベルは、対照と比較して、アンチセンスオリゴヌクレオチド
処置細胞において用量依存的なやり方で低下した。
Figure 2015211685
実施例7：ギャップマーによる、HepB3細胞におけるヒト第11因子の有効な用量依存的ア
ンチセンス阻害の選択及び確認
実施例4においてヒト第11因子の in vitro 阻害を明示するギャップマーについて、Hep
B3細胞において様々な用量で試験した。細胞を4,000個の細胞／ウェルの密度でプレート
培養して、表14に特定されるように、2.3 nM、4.7 nM、9.4 nM、18.75 nM、37.5 nM、及
び75 nM濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドとともにリポフェクチン試薬を使用して
トランスフェクトした。ほぼ16時間の処置期間の後で、この細胞よりRNAを単離して、定
量的リアルタイムPCRによってヒト第11因子mRNAレベルを測定した。ヒト第11因子プライ
マープローブセット：RTS2966を使用して、mRNAレベルを測定した。第11因子mRNAレベル
は、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。未処置対照細胞に対する
第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表14に例証されるように、第11因子mR
NAレベルは、対照と比較して、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞において用量依
存的なやり方で低下した。
Figure 2015211685
このギャップマーは、エレクトロポレーションによってもトランスフェクトして、ヒト
第11因子mRNAへのその用量依存的な阻害を測定した。細胞を20,000個の細胞／ウェルの密
度でプレート培養して、表15に特定されるように、エレクトロポレーションにより、41.1
5 nM、123.457 nM、370.37 nM、1111.11 nM、3333.33 nM、及び10,000 nM濃度のアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。ほぼ16時間の処置期間の後で、この細
胞よりRNAを単離して、定量的リアルタイムPCRによってヒト第11因子mRNAレベルを測定し
た。ヒト第11因子プライマープローブセット：RTS2966を使用して、mRNAレベルを測定し
た。第11因子mRNAレベルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。
未処置対照細胞に対するヒト第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表15に例
証されるように、第11因子mRNAレベルは、対照と比較して、アンチセンスオリゴヌクレオ
チド処置細胞において用量依存的なやり方で低下した。
Figure 2015211685
実施例8：マウス初代培養肝細胞におけるマウス第11因子のアンチセンス阻害
マウス第11因子に標的指向するキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを、マウス第11
因子（GENBANK登録番号NM_028066.1、本明細書ではSEQ ID NO: 6として取り込む）に標的
指向する5-10-5MOEギャップマーとして設計した。このギャップマーは、20ヌクレオチド
の長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、10の2'-デオキシヌクレオチドより
構成されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィングが
隣接する。それぞれのウィングセグメント中の各ヌクレオチドは、2'-MOE修飾を有する。
それぞれのギャップマー全体のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（P＝S）連結
である。それぞれのギャップマー全体のすべてのシチジン残基は、5-メチルシチジンであ
る。このアンチセンスオリゴヌクレオチドについて、マウス初代培養肝細胞においてマウ
ス第11因子mRNAを低下させるその能力を評価した。
マウス初代培養肝細胞を6.25 nM、12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM、及び200 nMのアン
チセンスオリゴヌクレオチドでほぼ24時間の間処置した。この細胞よりRNAを単離して、
定量的リアルタイムPCRによってマウス第11因子mRNAレベルを測定した。マウス第11因子
プライマープローブセット：RTS2898（フォワード配列：ACATGACAGGCGCGATCTCT、本明細
書ではSEQ ID NO: 7として取り込む；リバース配列：TCTAGGTTCACGTACACATCTTTGC、本明
細書ではSEQ ID NO: 8として取り込む；プローブ配列：TTCCTTCAAGCAATGCCCTCAGCAATX、
本明細書ではSEQ ID NO: 9として取り込む）を使用して、mRNAレベルを測定した。第11因
子mRNAレベルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。このマウス
アンチセンスオリゴヌクレオチドのいくつかは、第11因子mRNAレベルを用量依存的なやり
方で低下させた。
実施例9：マウス初代培養肝細胞におけるマウス第11因子の交差反応性アンチセンス阻
害
マウス第11因子核酸へ標的指向されるアンチセンスオリゴヌクレオチドについて、第11
因子mRNAに対するその効果を in vitro で試験した。10,000細胞／ウェルの密度で培養し
たマウス初代培養肝細胞を100 nMのアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。ほぼ24
時間の処置期間の後で、この細胞よりRNAを単離して、定量的リアルタイムPCRによってマ
ウス第11因子mRNAレベルを測定した。第11因子mRNAレベルは、RIBOGREENによって測定さ
れる全RNA含量に従って補正した。未処置対照細胞に対する第11因子の阻害パーセントと
して結果を提示する。
表16のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5-10-5MOEギャップマーとして設計
した。このギャップマーは、20ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメ
ントは、10の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）それ
ぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。5'ウィングセグメントの各ヌクレ
オチドと3'ウィングセグメントの各ヌクレオチドは、2'-MOE修飾を有する。それぞれのギ
ャップマー全体のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート（P＝S）連結である。それ
ぞれのギャップマー全体のすべてのシチジン残基は、5-メチルシチジンである。「マウス
標的開始部位」は、ギャップマーが標的指向される5'末端ヌクレオチドを示す。「マウス
標的終結部位」は、ギャップマーが標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。収載した
すべてのマウスオリゴヌクレオチドは、本明細書ではSEQ ID NO: 6として取り込むマウス
第11因子mRNA（GENBANK登録番号NM_028066.1）と本明細書ではSEQ ID NO: 1として取り込
むヒト第11因子mRNA（GENBANK登録番号NM_000128.3）の間で交差反応性を示す。「ヒト標
的開始部位」は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが標的指向される、ヒトmRNA（GENBAN
K登録番号NM_000128.3）中の5'末端ヌクレオチドを示す。「ヒト標的終結部位」は、アン
チセンスオリゴヌクレオチドが標的指向される、ヒトmRNA（GENBANK登録番号NM_000128.3
）中の3'末端ヌクレオチドを示す。「ミスマッチ数」は、マウスオリゴヌクレオチドとヒ
トmRNA配列の間のミスマッチを示す。
Figure 2015211685
実施例10：マウス第11因子の in vivo アンチセンス阻害
統計学的に有意な用量依存的阻害を示す、マウス第11因子mRNA（GENBANK登録番号NM_02
8066.1、本明細書ではSEQ ID NO: 6として取り込む）へ標的指向されるいくつかのアンチ
センスオリゴヌクレオチドについて、in vivo で評価した。BALB/cマウスをISIS404057（
TCCTGGCATTCTCGAGCATT、標的開始部位487、本明細書ではSEQ ID NO: 10として取り込む）
とISIS404071（TGGTAATCCACTTTCAGAGG、標的開始部位869、本明細書ではSEQ ID NO: 11と
して取り込む）で処置した。
処置
BALB/cマウスに、5 mg/kg、10 mg/kg、25 mg/kg、又は50 mg/kgのISIS404057又はISIS4
04071を週2回、3週間注射した。対照群のマウスには、リン酸緩衝化生理食塩水（PBS）を
週2回、3週間注射した。最後の投薬を受けてから5日後にマウスを犠牲にした。RNA分析の
ために肝臓全体を回収して、凝固分析（PT及びaPTT）とタンパク質分析のために血漿を採
取した。
RNA分析
第11因子のリアルタイムPCR分析のために肝臓組織よりRNAを抽出した。表17に示すよう
に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、PBS対照に優って、マウス第11因子の用量依存
的な低下をもたらした。未処置対照細胞に対するヒト第11因子の阻害パーセントとして結
果を提示する。
Figure 2015211685
PT及びaPTTアッセイ
ISIS404057及びISIS404071で処置したマウスからの血小板欠乏血漿（PPP）を使用して
、プロトロンビン時間（PT）と活性化部分トロンボプラスチン時間（aPTT）を測定した。
表18に提供するPT及びaPTT値は、国際標準化比（INR）の数値として報告する。PT及びaPT
TのINR値は、各実験群（即ち、ISIS404057又はISIS404071で、5 mg/kg、10 mg/kg、25 mg
/kg、及び50 mg/kgの処置）のPT又はaPTT値をPBS処置群のPT又はaPTTで割ることによって
定量した。次いで、使用する組織因子の国際感度指数（ISI）の冪数だけこの比を掛け合
わせた。表18に示すように、ISIS404057又はISIS404071で処置したマウスにおいて、PTは
、有意には延長しなかった。しかしながら、ISIS404057及びISIS404071で処置したマウス
において、aPTTは、用量依存的なやり方で延長した。これらのデータは、第11因子のアン
チセンス低下が血液凝固の接触活性化経路には影響を及ぼすが、その外因性経路には影響
を及ぼさないことを示唆する。
Figure 2015211685
タンパク質分析
凝固時間に基づいたF11アッセイを使用して、ISIS404071で処置したマウスの血漿から
の第11因子プロ酵素を測定した。凝固時間は、ST4半自動化凝固測定機器（Diagnostica S
tago、ニュージャージー州）を用いて、同一2検体で定量した。BSA入りHEPES-NaCl緩衝液
で20倍希釈した30μlのクエン酸添加試料血漿を30μlのaPTT試薬（血小板第3因子試薬＋
粒子状アクチベータ）と30μlの第11因子欠乏クエン酸添加血漿（ヒト先天性、George Ki
ng Bio-Medical 社）とともに37℃でインキュベートして、凝固を開始させた。系列希釈
したクエン酸添加対照マウス血漿の標準曲線で結果を内挿した。
表19に示すように、ISIS404071での処置は、第11因子タンパク質の有意な用量依存的低
下をもたらした。PBS対照に対する第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。
Figure 2015211685
実施例11：ワルファリンと比較した、FeCl3誘導性静脈血栓症（VT）モデルにおけるマ
ウス第11因子のアンチセンス阻害の in vivo 効果
処置
ISIS404071とワルファリン（COUMADIN）をFeCl3誘導性VTマウスモデルにおいて評価し
た。1.25 mg/kg、2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、又は40 mg/kgのISIS404071
を週2回、3週間皮下投与して、6群のBALB/cマウスを処置した。最後のISIS404071の投薬
を受けてから2日後に、10 mg/kgのキシラジンと混合した150 mg/kgのケタミンを腹腔内注
射により投与して、マウスを麻酔した。0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/k
g、及び5 mg/kgのワルファリンを毎日6日間腹腔内投与して、追加の6群のBALB/cマウスを
処置した。最後のワルファリンの投薬から4時間後に、10 mg/kgのキシラジンと混合した1
50 mg/kgのケタミンを腹腔内注射により投与して、マウスを麻酔した。PBSを週2回、3週
間皮下投与して、2つの対照群のBALB/cマウスを処置した。最後のPBSの投薬から2日後に
、10 mg/kgのキシラジンと混合した150 mg/kgのケタミンを腹腔内注射により投与して、
両群のマウスを麻酔した。第一の対照群を除く全群のマウスにおいて、FeCl3で血栓形成
を誘導した。
FeCl3処置を受けたマウスにおいて、10％FeCl3溶液で予め飽和させた濾紙片（2×4 mm
）を大静脈に直接当てることによって、血栓形成を誘導した。曝露の3分後に、濾紙を除
去した。濾紙当てから30分後、その血栓を含有する静脈の一定の長さを血小板分析用に切
り出した。肝臓をRNA分析用に採取した。
RNA分析
第11因子のリアルタイムPCR分析用に、RNAを肝臓組織より抽出した。PBS対照に対する
第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表20に示すように、ISIS404071での処
置は、PBS対照と比較して、第11因子mRNAの有意な用量依存的低下をもたらした。逆に、
ワルファリンでの処置は、PBS対照と比較して、第11因子mRNAの有意な低下をもたらさな
かった。
Figure 2015211685
血小板組成の定量
血小板第4因子（PF-4）のリアルタイムPCR定量を使用して、血栓形成の尺度として大静
脈中の血小板を定量した。2つのPBS処置対照群に比較した、ISIS404071又はワルファリン
処置マウスにおけるPF-4の百分率として結果を提示する。表21に示すように、ISIS404071
での処置は、5 mg/kg以上の投与量で、PBS対照と比較して、PF-4の用量依存的な低下をも
たらした。ワルファリンでの処置は、2 mg/kg以上の投与量で、PBS対照と比較して、PF-4
の低下をもたらした。故に、本明細書に提供する化合物による第11因子の低下は、血栓及
び血塊形成を阻害するのに有用である。
Figure 2015211685
実施例12：尾出血（tail bleeding）アッセイにおける、ワルファリンと比較したマウ
ス第11因子のアンチセンス阻害の in vivo 効果
処置
尾出血を測定して、ISIS404071又はワルファリンでの処置がマウスにおいて内出血を引
き起こすかどうかを観察した。ISIS404071とワルファリン（COUMADIN）を尾出血アッセイ
において評価した。1.25 mg/kg、2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、又は40 mg/
kgのISIS404071を週2回、3週間皮下投与して、6群のBALB/cマウスを処置した。0.5 mg/kg
、1 mg/kg、2 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、及び5 mg/kgのワルファリンを毎日6日間腹腔内
投与して、追加の6群のBALB/cマウスを処置した。PBSを週2回、3週間皮下投与して、別の
対照群のBALB/cマウスを処置した。
尾出血アッセイ
ISIS404071、ワルファリン、又はPBSでの最後の処置から2日後、マウスを尾出血チャン
バに入れた。このチャンバにおいてマウスをイソフルランで麻酔して、尾の小片（先端か
らほぼ4 mm）を無菌の鋏で切断した。切断した尾を、ほぼ10 mLの0.9％NaCl緩衝液で満た
して37℃へ温めた15 mLファルコン管にすぐに入れた。40分の経過にわたり血液を採取し
た。この生理食塩水を満たした試験管を出血の前と後で秤量した。この結果を表22に提供
する。
ISIS404071での処置は、PBS処置マウスに比較して、出血に影響を及ぼさなかった。し
かしながら、ワルファリンは、PBS対照に比較して、マウスでの出血を実際に増加させた
。ワルファリンの用量の増加は、血液損失の増加と正の相関を示した。これらのデータは
、本明細書に提供する化合物の出血ポテンシャルが特にワルファリンとの比較において低
いことを示唆する。これらのデータは、実施例11で得られた結果とともに、本明細書に記
載する化合物での第11因子の阻害が関連した出血リスクを伴わずに抗血栓活性をもたらす
のに有用であることを示唆する。
Figure 2015211685
実施例13：ワルファリンと比較した、マウス第11因子のアンチセンス阻害のPT及びaPTT
に対する in vivo 効果
処置
1.25 mg/kg、2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、又は40 mg/kgのISIS404071を
週2回、3週間皮下投与して、6群のBALB/cマウスを処置した。0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/
kg、3 mg/kg、4 mg/kg、及び5 mg/kgのワルファリンを毎日6日間腹腔内投与して、追加の
6群のBALB/cマウスを処置した。対照群では、PBSを週2回、3週間皮下投与して、BALB/cマ
ウスを処置した。最後の用量を投与してから2日後に、PPPを採取して、PT及びaPTTアッセ
イを実施した。
PT及びaPTTアッセイ
表16に提供したPT及びaPTTの数値は、国際標準化比（INR）の値として報告する。PT及
びaPTTのINR値は、各実験群（即ち、ISIS404071で、5 mg/kg、10 mg/kg、25 mg/kg、及び
50 mg/kgの処置）のPT又はaPTT値をPBS処置群のPT又はaPTTで割ることによって定量した
。次いで、使用する組織因子の国際感度指数（ISI）の冪数だけこの比を掛け合わせた。
表23に示すように、ワルファリン処置マウスのPTは、どの投与量でも有意に延長している
。ワルファリン処置マウスのaPTTは、特に1 mg/kg以上の投与量で延長した。ISIS404071
は、PTに有意には影響を及ぼさなかったが、aPTTは、延長させた；しかしながら、ワルフ
ァリン処置マウスほど有意ではなかった。これらのデータは、ワルファリンが血液凝固の
接触活性化経路と外因性経路の両方に影響を及ぼす一方で、ISIS404071は、血液凝固の接
触活性化経路には影響を及ぼすが、その外因性経路には影響を及ぼさないことを示唆する
。
Figure 2015211685
実施例14：アピキサバンと比較した、FeCl3誘導性静脈血栓症（VT）モデルにおけるマ
ウス第11因子のアンチセンス阻害の in vivo 効果
処置
ISIS404071とアピキサバンをFeCl3誘導性VTマウスモデルにおいて評価した。1.25 mg/k
g、2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、又は40 mg/kgのISIS404071を週2回、3週
間皮下投与して、6群のBALB/cマウスを処置した。最後のISIS404071の投薬を受けてから2
日後に、10 mg/kgのキシラジンと混合した150 mg/kgのケタミンを腹腔内注射により投与
して、マウスを麻酔した。0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、及び5 mg/
kgのアピキサバンを1回皮下投与して、追加の6群のBALB/cマウスを処置した。アピキサバ
ンを受けてから20分後に、10 mg/kgのキシラジンと混合した150 mg/kgのケタミンを腹腔
内注射により投与して、マウスを麻酔した。PBSを週2回、3週間皮下投与して、2つの対照
群のBALB/cマウスを処置した。最後のPBSの投薬から2日後に、10 mg/kgのキシラジンと混
合した150 mg/kgのケタミンを腹腔内注射により投与して、両群のマウスを麻酔した。第
一の対照群を除くすべてのマウスにおいて、FeCl3で血栓形成を誘導した。
FeCl3処置を受けたマウスにおいて、10％FeCl3溶液で予め飽和させた濾紙片（2×4 mm
）を大静脈に直接当てることによって、血栓形成を誘導した。曝露の3分後に、濾紙を除
去した。濾紙当てから30分後、その血栓を含有する静脈の一定の長さを血小板分析用に切
り出した。肝臓をRNA分析用に採取した。
RNA分析
第11因子のリアルタイムPCR分析用に、RNAを肝臓組織より抽出した。PBS対照に対する
第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表24に示すように、ISIS404071での処
置は、PBS対照と比較して、第11因子mRNAの有意な用量依存的低下をもたらした。逆に、
アピキサバンでの処置は、PBS対照と比較して、第11因子mRNAの有意な低下をもたらさな
かった。
Figure 2015211685
血小板組成の定量
血小板第4因子（PF-4）のリアルタイムPCR定量を使用して、血栓形成の尺度として大静
脈中の血小板を定量した。表25に示すように、ISIS404071での処置は、PBS対照と比較し
て、PF-4の低下をもたらした。アピキサバンでの処置も、PBS対照と比較して、PF-4の低
下をもたらした。2つのPBS処置対照群と比較した、ISIS404071又はアピキサバン処置マウ
スにおけるPF-4の百分率として結果を提示する。
Figure 2015211685
実施例15：尾出血アッセイにおける、アピキサバンと比較したマウス第11因子のアンチ
センス阻害の in vivo 効果
処置
尾出血を測定して、ISIS404071又はアピキサバンでの処置がマウスにおいて内出血を引
き起こすかどうかを観察した。ISIS404071とアピキサバンを尾出血モデルにおいて評価し
た。1.25 mg/kg、2.5 mg/kg、5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、又は40 mg/kgのISIS404071
を週2回、3週間皮下投与して、6群のBALB/cマウスを処置した。0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 m
g/kg、3 mg/kg、4 mg/kg、及び5 mg/kgのアピキサバンを単回皮下用量で投与して、追加
の6群のBALB/cマウスを処置した。PBSを週2回、3週間皮下投与して、別の対照群のBALB/c
マウスを処置した。
尾出血アッセイ
ISIS404071、アピキサバン、又はPBSでの最後の処置から2日後、マウスを尾出血チャン
バに入れた。このチャンバにおいてマウスを麻酔して、尾の小片（先端からほぼ4 mm）を
無菌の鋏で切断した。切断した尾を、ほぼ10 mLの0.9％NaCl緩衝液で満たして37℃へ温め
た15 mLファルコン管にすぐに入れた。40分の経過にわたり血液を採取した。この生理食
塩水を満たした試験管を出血の前と後で秤量した。
表26に示すように、ISIS404071での処置は、PBS処置マウスに比較して、出血に影響を
及ぼさなかった。しかしながら、アピキサバンは、PBS対照に比較して、マウスでの出血
を実際に増加させた。アピキサバンの用量の増加は、血液損失の増加と正の相関を示した
。これらのデータは、本明細書に提供する化合物の出血ポテンシャルが特にアピキサバン
との比較において低いことを示唆する。これらのデータは、実施例14で得られた結果とと
もに、本明細書に記載する化合物での第11因子の阻害が関連した出血リスクを伴わずに抗
血栓活性をもたらすのに有用であることを示唆する。
Figure 2015211685
実施例16：LOVENOXとの組合せにおける、マウス第11因子のアンチセンス阻害の ex viv
o 効果
処置
10 mg/kg、20 mg/kg、又は40 mg/kgのISIS404071を週2回、3週間皮下投与して、3群のB
ALB/cマウスを処置した。PBSを週2回、3週間投与して、対照群のマウスを処置した。最後
の投薬から5日後、マウスを犠牲にして、血漿を採取した。低分子量（LMW）ヘパリン、LO
VENOXを、0μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、及び7.5μg/mlの様々な濃度で血漿へ ex viv
o（生体外）投与した。LOVENOXを投与して20分後にPTとaPTTを測定した。
PT及びaPTTアッセイ
表27に示すように、LOVENOXでの処置は、PTを用量依存的なやり方で増加させる。ISIS4
04071での処置は、PTを有意には増加させない。PTは、ISIS404071での処置によって有意
には影響を受けない。ISIS404071及びLOVENOXで処置した血漿において、PTに対する組合
せ効果の証拠はない。
Figure 2015211685
表28に示すように、LOVENOXでの処置は、aPTTを用量依存的なやり方で増加させる。ISI
S404071での処置も、aPTTを用量依存的なやり方で増加させる。さらに、ISIS404071及びL
OVENOXの組合せ処置は、aPTTに対して相乗効果を有するように見える。
Figure 2015211685
実施例17：FeCl3誘導性静脈血栓症（VT）モデルにおける、LOVENOXと組み合わせたマウ
ス第11因子のアンチセンス阻害の in vivo 効果
処置
ISIS404071及びLOVENOXの組合せをFeCl3誘導性VTマウスモデルにおいて評価した。15 m
g/kg、30 mg/kg、45 mg/kg、又は60 mg/kgのLOVENOXを1日1回、3日間皮下投与して、4群
のBALB/cマウスを処置した。20 mg/kgのISIS404071を週2回、3週間皮下投与して、追加の
4群のBALB/cマウスを処置した。最後のISIS404071の投薬後、15 mg/kg、30 mg/kg、45 mg
/kg、又は60 mg/kgのLOVENOXを1日1回、3日間皮下投与して、マウスを処置した。PBSを週
2回、3週間皮下投与して、2つの対照群のBALB/cマウスを処置した。第一の対照群を除く
すべてのマウスにおいて、FeCl3で血栓形成を誘導した。10 mg/kgのキシラジンと混合し
た150 mg/kgのケタミンを腹腔内注射により投与して、すべてのマウスを麻酔した。
FeCl3処置を受けたマウスにおいて、10％FeCl3溶液で予め飽和させた濾紙片（2×4 mm
）を大静脈に直接当てることによって、血栓形成を誘導した。曝露の3分後に、濾紙を除
去した。濾紙当てから30分後、その血栓を含有する静脈の一定の長さを血小板分析用に切
り出した。
血小板組成の定量
PF-4のリアルタイムPCR定量を使用して、血栓形成の尺度として大静脈中の血小板を定
量した。表29に示すように、LOVENOXでの処置は、PBS対照と比較して、PF-4の低下をもた
らした。ISIS404071と組み合わせたLOVENOXでの処置は、LOVENOX単独と比較して、PF-4の
より大きな低下をもたらした。
Figure 2015211685
実施例18：LOVENOXと組み合わせたマウス第11因子のアンチセンス阻害の、出血に対す
る in vivo 効果
処置
尾出血を測定して、ISIS404071及びLOVENOXでの処置がマウスにおいて内出血を引き起
こすかどうかを観察した。4群のBALB/cマウスへISIS404071を20 mg/kgの投与量で週2回、
3週間皮下投与して、ISIS404071処置の最後の3日間に、LOVENOXを15 mg/kg、30 mg/kg、4
5 mg/kg、及び60 mg/kgの様々な投与量で1日1回皮下投与した。第五群では、BALB/cマウ
スへISIS404071を20 mg/kgの投与量で週2回、3週間皮下投与した。第六群では、対照とし
て、BALB/cマウスへPBSを週2回、3週間皮下投与した。
尾出血アッセイ
最後の処置を受けてから2日後、マウスを尾出血チャンバに入れた。このチャンバにお
いてマウスをイソフルランで麻酔して、尾の小片（先端からほぼ4 mm）を無菌の鋏で切断
した。切断した尾を、ほぼ10 mLの0.9％NaCl緩衝液で満たして37℃へ温めた15 mLファル
コン管にすぐに入れた。40分の経過にわたり血液を採取した。この生理食塩水を満たした
試験管を出血の前と後で秤量した。
表30に示すように、LOVENOXは、PBS処置マウスに比較して、マウスでの出血を増加させ
た。LOVENOXの用量の増加は、血液損失の増加と正の相関を示した。LOVENOXと組み合わせ
たISIS404071は、LOVENOX単独処置マウスで示される血液損失の増加以上に出血を有意に
は増加させなかった。
Figure 2015211685
実施例19：LOVENOXと組み合わせたマウス第11因子のアンチセンス阻害の、
PT及びaPTTに対する in vivo 効果
処置
LOVENOXと組み合わせたISIS404071で処置したマウスからのPPPを使用して、PT及びaPTT
を測定した。第一コホートでは、BALB/cマウスへISIS404071を25 mg/kgの投与量で週2回
、3週間皮下投与した。これらのマウスより、ISIS404071の最終投薬を受けてから5日後に
血漿を採取した。第二コホートでは、BALB/cマウスへLOVENOXを20 mg/kgの投与量で1日1
回、3日間皮下投与した。これらのマウスより、LOVENOXの最終投薬を受けてから4時間後
に血漿を採取した。第三コホートでは、BALB/cマウスへISIS404071を20 mg/kgの投与量で
週2回、3週間皮下投与して、ISIS404071の最終投薬を受けてから2日後に、LOVENOXを20 m
g/kgの投与量で1日1回皮下投与した。これらのマウスより、LOVENOXの最終投薬の4時間後
に血漿を採取した。第四コホートでは、対照として、PBSを週2回、3週間皮下投与した。
これらのマウスより、最終投薬の5日後に血漿を採取した。
PT及びaPTTアッセイ
表31に提供するPT及びaPTT値は、国際標準化比（INR）の数値として報告する。表31に
示すように、PTは、ISIS40471、LOVENOXでの処置によっても、LOVENOXと組み合わせたISI
S40471での処置によっても有意に影響を受けない。これらのデータは、LOVENOXと組み合
わせたISIS404071による、PTに対する組合せの効果はないことを示唆する。また表31に示
されるように、LOVENOXでの処置と、LOVENOXと組み合わせたISIS404071での処置は、aPTT
を増加させる。これらのデータは、ISIS404071及びLOVENOXの組合せの処置がaPTTに対し
て相加効果を有することを示唆する。
Figure 2015211685
実施例20：アピキサバンと組み合わせたマウス第11因子のアンチセンス阻害の、
PT及びaPTTに対する in vivo 効果
処置
アピキサバンと組み合わせたISIS404071で処置したマウスからのPPPを使用して、PT及
びaPTTを測定した。第一コホートでは、BALB/cマウスへISIS404071を25 mg/kgの投与量で
週2回、3週間皮下投与した。これらのマウスより、ISIS404071の最終投薬を受けてから5
日後に血漿を採取した。第二コホートでは、BALB/cマウスへアピキサバンを6 mg/kgの投
与量で1日2回、3日間皮下投与した。これらのマウスより、アピキサバンの最終投薬を受
けてから20分後に血漿を採取した。第三コホートでは、BALB/cマウスへISIS404071を20 m
g/kgの投与量で週2回、3週間皮下投与して、ISIS404071処置の最後の3日間に、アピキサ
バンを6 mg/kgの投与量で1日2回皮下投与した。これらのマウスより、アピキサバンの最
終投薬を受けてから20分後に血漿を採取した。第四コホートでは、対照として、PBSを週2
回、3週間皮下投与した。PBSの最終投薬の5日後に血漿を採取した。
PT及びaPTTアッセイ
表32に提供するPT及びaPTT値は、国際標準化比（INR）の数値として報告する。表32に
示すように、PTは、ISIS40471での処置によって有意には影響を受けない。しかしながら
、アピキサバンと、ISIS404071と組み合わせたアピキサバンは、PTを増加させた。また表
32に示されるように、アピキサバン、ISIS404071、アピキサバンと組み合わせたISIS4040
71は、aPTTを増加させる。
Figure 2015211685
実施例21：ワルファリンと組み合わせたマウス第11因子のアンチセンス阻害の、
PT及びaPTTに対する in vivo 効果
処置
ワルファリンと組み合わせたISIS404071で処置したマウスからのPPPを使用して、PT及
びaPTTを測定した。25 mg/kg又は50 mg/kgのいずれかのISIS404071を週2回、3週間皮下投
与して、2群のBALB/cマウスを処置した。各群より、最終用量を投与してから5日後に血漿
を採取した。第3群では、BALB/cマウスを2 mg/kgのワルファリンで、1日1回、5日間処置
した。ワルファリンの最終用量を投与してから6時間後に血漿を採取した。25 mg/kg又は5
0 mg/kgのいずれかのISIS404071を週2回、3週間皮下投与し、ISIS404071処置の最後の5日
間にワルファリンを2 mg/kgの投与量で1日1回皮下投与して、2つの追加群のBALB/cマウス
を処置した。各群より、最後のワルファリン処置の6時間後に血漿を採取した。BALB/cマ
ウスの最後の群では、対照として、PBSを週2回、3週間皮下投与した。最後のPBS処置の5
日後に血漿を採取した。
PT及びaPTTアッセイ
表33に提供するPT及びaPTT値は、国際標準化比（INR）の数値として報告する。表33に
示すように、PTは、PBS又はISIS40471での処置により、いずれの投与量でも影響を受けな
い。しかしながら、2 mg/kgのワルファリン、2 mg/kgワルファリンと組み合わせた25 mg/
kgのISIS404071、そして2 mg/kgのワルファリンと組み合わせた50 mg/kgのISIS404071で
の処置は、PTを増加させる。これらのデータは、ISIS404071及びワルファリンの組合せの
処置がPTに対して相加効果を有することを示唆する。また表33に示されるように、aPTTは
、ISIS404071とワルファリンでの処置によって影響を受ける。ISIS404071及びワルファリ
ンの組合せは、それぞれの薬物単独より大きいaPTTの増加を示す。これらのデータは、IS
IS404071及びワルファリンの組合せの処置がaPTTに対して相乗効果を有することを示唆す
る。
Figure 2015211685
実施例22：マウスの腸間膜静脈血栓症に対する、マウス第11因子のアンチセンス阻害の
in vivo 抗血栓効果
処置
第一コホートでは、C57BL／6マウスへISIS404071を50 mg/kgの用量で週2回、3週間皮下
投与した。第二コホートでは、C57Bl／6マウスへ対照オリゴヌクレオチド、ISIS405277（
AAGGACCTACACTATGGAAT；第2因子のアンチセンスオリゴヌクレオチド、本明細書では、SEQ
ID NO: 12として取り込む）を50 mg/kgの用量で週2回、3週間皮下投与した。
血小板調製
純系C57BL／6マウスの後眼窩静脈より、穿刺によって血液を採取して、300μlのヘパリ
ン（30 U/ml）を含有するポリプロピレン管に採取した。1000 rpmで5分間の遠心分離によ
って、血小板濃厚血漿（PRP）を入手した。このPRPを、2μlのプロスタグランジンI2（PG
I2）（2μg/ml）を含有する新鮮な試験管へ移して、37℃で5分間インキュベートした。26
00 rpmでの遠心分離後、2μlのPGI2を含有する1 mlの改良タイロード（Tyrode）-HEPES緩
衝液（137 mM NaCl、0.3 mM Na2HPO4、2 mM KCl、12 mM NaHCO3、5 mM HEPES、5 mMグル
コース、0.35％ BSA、pH7.2）にペレットを再懸濁させて、37℃で5分間インキュベートし
た。懸濁したペレットを2600 rpmで5分間遠心分離させた。PGI2を除去するために、洗浄
工程を2回繰り返して、血小板をカルセインAM 2.5μg/mL（Molecular Probe,オレゴン州
ユージーン）で、室温で10分間、蛍光標識した。
血栓症への生体内顕微鏡法
蛍光標識した血小板をISIS404071処置及び対照オリゴヌクレオチド処置のC57BL／6マウ
スに静脈内注射した。このマウスを2.5％アバチンで麻酔して、腹壁を貫いて切開を施し
て、直径250〜300μmで、ほぼ150 s-1のずり速度（shear rate）を有する腸間膜静脈を曝
露した。この曝露した腸間膜は、加温（37℃）PBSでの周期的な表面灌流によって、実験
を通して湿った状態にした。この腸間膜を、12 V、100 W、DC安定化電源でトランス蛍光
化（transluminated）した。CCDビデオカメラ（浜松ホトニックス、浜松市、日本）を使
用するSVHSビデオレコーダー（AG-6730；パナソニック、東京、日本）へ接続した Zeiss
（ドイツ）Axiovert 135倒立顕微鏡（対物レンズ32倍）を使用して、静脈を可視化した。
光学式ドップラー速度計（Microcirculation Research Institute、テキサスA＆M医科大
学、テキサス州カレッジステーション）を使用して、中心線赤血球速度（Vrbc）を測定し
た。ニュートン流体についてのポアズイユの法則：τ＝8（V平均／Dv）［ここでDvは、細
静脈の直径であり、V平均は、測定したVrbcより、経験的相関性：V平均＝Vrbc／1.6を使
用して推定する］に基づいて、細静脈ずり速度を計算した。
結果分析
最後のアンチセンスオリゴヌクレオチド注射の2日後に、腸間膜静脈の血栓形成（throm
bosis）を実施した。10％FeCl3溶液に浸した Whatman 濾紙を腸間膜静脈上に5分間当てる
ことによって、血栓症を誘導した。この静脈を40分間、又は閉塞までモニタリングした。
直径30〜50μmの最初の血栓前の経過時間と、血液の流れが30秒間止まる前の経過時間を
観測した。
ISIS404071で処置したマウスでは、血栓形成（直径30μm）が14.8±1.7分で生じた。対
照マウスでは、血栓形成（直径30μm）が8.9±0.6分で生じた。対照マウスでは、閉塞性
の血栓が19.3±0.8分で生成して、すべての損傷した細静脈が閉塞した。対照的に、ISIS4
04071処置マウスの静脈の大多数は、損傷後40分、そして静脈が閉塞を示して観測を止め
るときに、閉塞しなかった。ISIS404071処置マウスにおいて閉塞を示した唯一の静脈は、
29.5分で閉塞して、その5分後、試験の終了に先立って、再び開いた。
実施例23：BALB/cマウスにおけるマウス第11因子のアンチセンス阻害への in vivo セ
ンス-オリゴヌクレオチド解毒薬
処置
BALB/cマウスにおいて、ISIS404071に対する特異的センスオリゴヌクレオチドの解毒薬
としての効果を試験した。第一コホートでは、BALB/cマウスへISIS404071を40 mg/kgの用
量で週2回、3週間皮下投与した。第二コホートでは、BALB/cマウスへISIS404057を40 mg/
kgの用量で週2回、3週間皮下投与した。両方のコホートへISIS404071の特異的解毒薬、IS
IS418026（CCTCTGAAAGTGGATTACCA；ISIS404071へ相補的、本明細書では、SEQ ID NO: 13
として取り込む）を、ISIS404071又は404057の最終処置から48時間後に、90 mg/kgの単回
注射で皮下投与した。第三コホートでは、BALB/cマウスへISIS404071を40 mg/kgの用量で
週2回、3週間皮下投与した。ISIS404071の最終処置に続いて、マウスにPBSを皮下注射し
た。第四コホートでは、BALB/cマウスへISIS404057を40 mg/kgの用量で週2回、3週間皮下
投与した。ISIS404057の最終処置に続いて、マウスにPBSを皮下注射した。解毒薬投与に
続く12時間、1日、2日、3日、7日、及び14日の時点で各コホートより4匹のマウスのセッ
トを犠牲にした。全肝臓をRNA分析用に採取して、aPTT分析用にPPPを採取した。
RNA分析
第11因子のリアルタイムPCR分析のために肝臓組織よりRNAを抽出した。PBS対照に対す
る第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表34に示すように、解毒薬なしのIS
IS404071で処置したマウスは、14日の観察期間にわたって阻害の漸進的な減少を示した。
しかしながら、ISIS404071及び解毒薬で処置したマウスは、解毒薬を受けなかったマウス
と比較して、14日の観察期間にわたって、加速的な減少を示した。また表34に示されるよ
うに、ISIS418026での処置は、ISIS404057処置マウスにおける第11因子mRNA発現の阻害に
影響を及ぼさなかった。
Figure 2015211685
aPTTアッセイ
表35に示すように、ISIS404071及び解毒薬（ISIS418026）で処置したマウスは、解毒薬
なしのISIS404071で処置したマウスと比較して、14日の観察期間にわたり、aPTTの漸進的
な減少を示した。
Figure 2015211685
実施例24：BALB/cマウスにおける、マウス第11因子のアンチセンス阻害への in vivo
第7a因子タンパク質-解毒薬
処置
BALB/cマウスにおいて、ヒト第7a因子（第VIIa因子）タンパク質のISIS404071への解毒
薬としての効果について試験した。20 mg/kgのISIS404071を週2回、3週間皮下投与して、
2つの実験群のBALB/cマウスを処置した。PBSを週2回、3週間皮下投与して、2つの対照群
のBALB/cマウスを処置した。第一の対照群を除くすべてのマウスにおいて、FeCl3で血栓
形成を誘導した。FeCl3処置の15分前に、第一の実験群を5μg/kgのヒト第7a因子タンパク
質解毒薬（製品番号：407act、American Diagnostica 社）で処置した。その最終投薬の2
日後に、10 mg/kgのキシラジンと混合した150 mg/kgのケタミンを腹腔内注射により投与
して、すべてのマウスを麻酔した。
FeCl3処置を受けたマウスにおいて、10％FeCl3溶液で予め飽和させた濾紙片（2×4 mm
）を大静脈に直接当てることによって、血栓形成を誘導した。曝露の3分後に、濾紙を除
去した。濾紙当てから30分後、その血栓を含有する静脈の一定の長さを血小板分析用に切
り出した。
血小板組成の定量
血小板第4因子（PF-4）のリアルタイムPCR定量を使用して、血栓形成の尺度として大静
脈中の血小板を定量した。2つのPBS処置対照群と比較した、解毒薬処置及び非処置マウス
におけるPF-4の百分率として結果を提示する。表36に示すように、ヒト7a因子タンパク質
解毒薬で処置した動物は、ISIS404071単独で処置した動物との比較において、より多くの
PF-4を発現した。これらのデータは、ヒト7a因子がアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害
の効果から救出することに成功することを示す。
Figure 2015211685
実施例25：コラゲナーゼ誘導性脳内出血モデルにおけるマウス第11因子の in vivo ア
ンチセンス阻害
処置
コラゲナーゼ誘導性脳内出血モデルにおいて、ISIS404071とワルファリン（COUMADIN）
を試験した。第一コホートでは、BALB/cマウスへISIS404071を40 mg/kgの用量で週2回、2
週間皮下投与した。第二コホートでは、マウスへワルファリンを2 mg/kgの用量で週2回、
2週間腹腔内投与した。第三コホートでは、BALB/cマウスへISIS421208（TCGGAAGCGACTCTT
ATATG、マウス第11因子に対して8つのミスマッチ、本明細書では、SEQ ID NO: 14として
取り込む）を40 mg/kgの用量で週2回、2週間皮下投与した。第四コホートでは、BALB/cマ
ウスへPBSを週2回、2週間皮下投与した。
その最終投薬を受けてから2日後、すべてのコホートの全マウスを5μg/gのアバチンで
麻酔した。次に、0.075 Uコラゲナーゼ（150 U/mL）を含有する10μLのハミルトン（Hami
lton）シリンジで、ブレグマ扁平頭蓋（bregma flat skull）より-1 mm AP、1 mm R ML、
-4 mm DVの所でマウスに注射した。コラゲナーゼを5分にわたり送達して、注射針をさら
に5分間適所に保って、逆流を防いだ。次いで、このマウスについて、出血量、神経脱落
スコア、及び死亡率を分析した。
表37は、コラゲナーゼ処置後のマウスで検出された出血量を提示する。表38は、マウス
の神経脱落スコアを提示して、表39は、マウスの死亡率を提示する。神経脱落は、脱落な
しを0として、重篤な脱落を5とする標準スコアリングシステムによって測定する。まとめ
ると、上記のデータは、ISIS404071がマウスの出血量、神経脱落スコア、及び死亡率に有
意な影響を及ぼさなかったことを示唆する。従って、ISIS404071処置マウスでは、ワルフ
ァリン処置マウスに比較して、脳内出血のリスク（ワルファリン処置個体にとっての危険
因子）が有意に低下する。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例26：FeCl3誘導性静脈血栓症（VT）モデルにおける、PLAVIXと組み合わせたマウ
ス第11因子のアンチセンス阻害の in vivo 効果
処置
ISIS404071及びPLAVIXの組合せをFeCl3誘導性VTマウスモデルにおいて評価した。それ
ぞれほぼ25 gの体重である、4群の8匹のBALB/cマウスを6.25 mg/kg、12.50 mg/kg、25.00
mg/kg、又は50.00 mg/kgのPLAVIXで処置した。このマウスには、1日目に2用量のPLAVIX
、そして2日目、外科手術の2時間前に1用量のPLAVIXを与えた。
20 mg/kgのISIS404071を週2回、3週間皮下投与して、それぞれほぼ25 gの体重である、
追加の4群の8匹のBALB/cマウスを処置した。ISIS404071の最終投薬の後で、マウスを6.25
mg/kg、12.50 mg/kg、25.00 mg/kg、又は50.00 mg/kgのPLAVIXで処置した。このマウス
には、1日目に2用量のPLAVIX、そして2日目、外科手術の2時間前に1用量のPLAVIXを与え
た。
それぞれほぼ25 gの体重である、2つの対照群の8匹のBALB/cマウスは、ISIS404071でも
PLAVIXでも処置しなかった。それぞれほぼ25 gの体重である、2つの追加対照群の8匹のBA
LB/cマウスは、20 mg/kgのISIS404071を週2回、3週間皮下投与して処置したが、PLAVIXで
は処置しなかった。第一及び第三の対照群を除くすべてのマウスにおいて、FeCl3で血栓
形成を誘導した。10 mg/kgのキシラジンと混合した150 mg/kgのケタミンを腹腔内注射に
より投与して、すべてのマウスを麻酔した。
FeCl3処置を受けたマウスにおいて、10％FeCl3溶液で予め飽和させた濾紙片（2×4 mm
）を下大静脈に直接当てることによって、血栓形成を誘導した。曝露の3分後に、濾紙を
除去した。濾紙当てから30分後、その血栓を含有する静脈の一定の長さを血小板分析用に
切り出した。
血小板組成の定量
PF-4のリアルタイムPCR定量を使用して、血栓形成の尺度として大静脈中の血小板を定
量した。表40に示すように、PLAVIXでの処置は、PBS対照と比較して、PF-4の低下をもた
らした。ISIS404071と組み合わせたPLAVIXでの処置は、PLAVIX単独と比較して、PF-4のよ
り大きい低下をもたらした。故に、第11因子ASO（アンチセンスオリゴヌクレオチド）と
抗血小板療法の組合せは、抗血栓活性を増加させる。データは、PBS＋FeCl3対照と比較し
た、PF-4 mRNAのパーセントとして提示する。
Figure 2015211685
実施例27：PLAVIXと組み合わせたマウス第11因子のアンチセンス阻害の出血に対する i
n vivo 効果
処置
尾出血を測定して、PLAVIXと組み合わせたISIS404071での処置が出血傾向の増加を引き
起こすかどうかを観測した。5群の8匹のBALB/cマウスへISIS404071を20 mg/kgの投与量で
週2回、3週間皮下投与した。ISIS404071の最終投薬の後で、マウスを0 mg/kg、6.25 mg/k
g、12.50 mg/kg、25.00 mg/kg、又は50.00 mg/kgのPLAVIXで処置した。このマウスには、
1日目に2用量のPLAVIX、そして2日目、出血の2時間前に1用量のPLAVIXを投与した。
5つの追加群の8匹のBABL/cマウスについて、ISIS404071注射を与えないこと以外は、同
様に処置した。
尾出血アッセイ
その最後の処置を与えてから2時間後、マウスを尾出血チャンバに入れた。このチャン
バにおいてマウスをイソフルランで麻酔して、尾の小片（先端からほぼ4 mm）を無菌の鋏
で切断した。切断した尾を、ほぼ10 mLの0.9％NaCl緩衝液で満たして37℃へ温めた15 mL
ファルコン管にすぐに入れた。40分の経過にわたり血液を採取した。この生理食塩水を満
たした試験管を出血の前と後で秤量した。
実施例26の結果と合わせると、これらのデータは、第11因子ASOと抗血小板療法の組合
せが、出血リスクの増加を伴うことなく抗血栓活性を増加させることを示す。
Figure 2015211685
実施例28：PLAVIXと組み合わせた第Xa因子低分子阻害剤の出血に対する in vivo 効果
処置
尾出血を測定して、PLAVIXと組み合わせた第10a因子低分子での処置が出血傾向の増加
を引き起こすかどうかを観測した。5群の8匹のBALB/cマウスを0 mg/kg、6.25 mg/kg、12.
50 mg/kg、25.00 mg/kg、又は50.00 mg/kgのPLAVIXで処置した。マウスには、1日目に2用
量のPLAVIX、そして2日目、出血の2時間前に1用量のPLAVIXを与えた。
5つの追加群の8匹のBABL/cマウスを0 mg/kg、6.25 mg/kg、12.50 mg/kg、25.00 mg/kg
、又は50.00 mg/kgのPLAVIXで処置した。マウスには、1日目に2用量のPLAVIX、そして2日
目、出血の2時間前に1用量のPLAVIXを与えた。これらのマウスは、出血の20分前に、腹腔
内に1回、0.5 mg/kgのアピキサバン（低分子第10a因子阻害剤）でも処置した。
尾出血アッセイ
その最後の処置を与えてから2時間後、マウスを尾出血チャンバに入れた。このチャン
バにおいてマウスをイソフルランで麻酔して、尾の小片（先端からほぼ4 mm）を無菌の鋏
で切断した。切断した尾を、ほぼ10 mLの0.9％NaCl緩衝液で満たして37℃へ温めた15 mL
ファルコン管にすぐに入れた。40分の経過にわたり血液を採取した。この生理食塩水を満
たした試験管を出血の前と後で秤量した。
表42に示すように、これらのデータは、アピキサバンのような低分子第10a因子阻害剤
と抗血小板療法の組合せが、出血リスクを増加させることを示す。故に、第11因子ASOと
抗血小板療法の組合せでの処置は、低分子第10a因子阻害剤と抗血小板療法の組合せの安
全性プロフィールに比較して、よりよい安全性プロフィールを提供する。
Figure 2015211685
実施例29：マウス第11因子の in vivo でのアンチセンス媒介性の低下と対応する血中
での抗凝固の経時変化
処置
BALB/cマウスにおいて、マウス第11因子mRNAのアンチセンス媒介性低下の経時変化を観
測した。BALB/cマウスへ1回用量の50 mg/kg ISIS404071を皮下投与した。ISIS404071投与
に続いて、マウスを12時間、1日、2日、3日、4日、7日、14日、28日、及び56日で犠牲に
した。全肝臓をRNA分析用に採取して、aPTT分析用にPPPを採取した。対照群のマウスを1
回の皮下用量のPBSで処置した。
RNA分析
第11因子のリアルタイムPCR分析のために肝臓組織よりRNAを抽出した。PBS対照に対す
る結果を提示する。ISIS404071で処置したマウスは、有意な第11因子mRNAダウンレギュレ
ーションを1日目までに示した。マウスは、第11因子mRNA発現の回復を14目までに始めた
。マウスは、完全な第11因子mRNA発現を28日目までに回復して、56日目からの結果は、第
11因子mRNAが処置前のレベルに維持されたことを示す。故に、ISIS404071処置マウスは、
リバウンド効果を経験しなかった。
リバウンド効果は、第11因子の抗体媒介性の低下ではすでに観測されている（Blood,
初版論文、プレ公表オンライン、2008年10月22日；「Prevention of vascular graft occ
ulsion and thrombus-associated thrombin generation by inhibition of factor XI（
第XI因子の阻害による、血管移植片閉塞及び血栓関連トロンビン産生の予防）」。第11因
子の過剰発現は、凝固の増加をもたらすことによって傷害性であり得るので、これらのデ
ータは、第11因子のアンチセンス媒介性阻害がリバウンドしないので、第11因子のアンチ
センス媒介性阻害は、第11因子の抗体媒介性阻害より安全であることを示唆する。
aPTTアッセイ
表43に提供するaPTT値は、国際標準化比（INR）の数値として報告する。aPTTのINR値は
、ISIS404071処置マウスのaPTT値をPBS処置群のaPTTで割ることによって定量した。次い
で、使用する組織因子の国際感度指数（ISI）の冪数だけこの比を掛け合わせた。表43に
示すように、ISIS404071で処置したマウスは、aPTTの漸進的な減少を4日目まで示してか
ら、処置前レベルへの漸進的な増加を7日目から28日目に示した。
Figure 2015211685
実施例30：マイクロウォークによって設計したオリゴヌクレオチドによる、HepG2細胞
におけるヒト第11因子のアンチセンス阻害
ISIS416850及びISIS416858に基づいて、追加のギャップマーを設計した（上記の表8を
参照のこと）。これらのギャップマーは、ISIS416850及びISIS416858の上流及び下流でや
やシフトさせた（即ち、「マイクロウォーク」）。このマイクロウォークギャップマーは
、5-8-5MOE又は6-8-6MOEモチーフのいずれかで設計した。
これらのマイクロウォークギャップマーについて in vitro で試験した。エレクトロポ
レーションを8,000 nMのアンチセンスオリゴヌクレオチドとともに使用して、20,000個の
細胞／ウェルの密度の培養HepG2細胞にトランスフェクトした。ほぼ24時間の処置期間の
後で、この細胞よりRNAを単離して、定量的リアルタイムPCRによって第11因子mRNAレベル
を測定した。第11因子mRNAレベルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補
正した。未処置対照細胞に対する第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。
ISIS416850とISIS416858、並びに表1及び8より選択されるギャップマー（即ち、ISIS41
2206、ISIS412223、ISIS412224、ISIS412225、ISIS413481、ISIS413482、ISIS416825、IS
IS416848、ISIS416849、ISIS416850、ISIS416851、ISIS416852、ISIS416853、ISIS416854
、ISIS416855、ISIS416856、ISIS416857、ISIS416858、ISIS416859、ISIS416860、ISIS41
6861、ISIS416862、ISIS416863、ISIS416864、ISIS416865、ISIS416866、及びISIS416867
）について、上記の記載と同じ条件の下で、マイクロウォークギャップマーとともに in
vitro で再試験した。
表44のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5-10-5MOE、5-8-5、及び6-8-6MOEギ
ャップマーとして設計した。表44で最初に収載した2つのギャップマーは、元のギャップ
マー（ISIS416850及びISIS416858）であり、これよりマイクロウォークによってISIS4454
93〜445543を設計して、アステリスクにより表記する。5-10-5ギャップマーは、20ヌクレ
オチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、10の2'-デオキシヌクレオチ
ドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィ
ングが隣接する。5-8-5ギャップマーは、18ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギ
ャップセグメントは、8の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方
向に）それぞれ5ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。6-8-6ギャップマーは、
20ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、8の2'-デオキシヌク
レオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ6ヌクレオチドを含んでな
るウィングが隣接する。このモチーフ（5-10-5、5-8-5、及び6-8-6）のそれぞれで、5'ウ
ィングセグメントの各ヌクレオチドと3'ウィングセグメントの各ヌクレオチドは、2'-MOE
修飾を有する。それぞれのギャップマー全体のヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエー
ト（P＝S）連結である。それぞれのギャップマー全体のすべてのシチジン残基は、5-メチ
ルシチジンである。「ヒト標的開始部位」は、ギャップマーがヒト配列において標的指向
される5'末端ヌクレオチドを示す。「ヒト標的終結部位」は、ギャップマーがヒト配列に
おいて標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。表44に収載するそれぞれのギャップマ
ーは、SEQ ID NO: 1（GENBANK登録番号NM_000128.3）へ標的指向される。表44のそれぞれ
のギャップマーはまた、本明細書においてSEQ ID NO: 274（エクソン1〜15 GENBANK登録
番号NW_001118167.1）と表記される、アカゲザル第11因子遺伝子配列と完全に交差反応性
である。「アカゲザル開始部位」は、ギャップマーがアカゲザル配列において標的指向さ
れる5'末端ヌクレオチドを示す。「アカゲザル終結部位」は、ギャップマーがアカゲザル
配列へ標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。
表44に示すように、SEQ ID NO: 1の標的開始部位1275に始まって、標的終結部位1317で
終わる標的領域（即ち、ヌクレオ塩基1275〜1317）へ標的指向される、マイクロウォーク
設計ギャップマーのいずれも、第11因子mRNAの少なくとも60％の阻害を示した。同様に、
表1及び8からの再試験ギャップマーのいずれも、少なくとも60％の阻害を示した。
ISIS番号：ISIS412206、412224、412225、413481、413482、416825、416848、416849、
416850、416851、416852、416853、416854、416855、416856、416857、416858、416859、
416860、416861、416862、416863、416864、416865、416866、416867、445494、445495、
445496、445497、445498、445499、445500、445501、445502、445503、445504、445505、
445506、445507、445508、445509、445510、445511、445512、445513、445514、445515、
445516、445517、445518、445519、445520、445521、445522、445523、445524、445525、
445526、445527、445528、445529、445530、445531、445532、445533、445534、445535、
445536、445537、455538、445539、445540、445541、445542、及び445543が含まれる、ギ
ャップマーのいくつかは、少なくとも70％の阻害を示した。
ISIS番号：ISIS412206、412224、412225、413481、413482、416825、416848、416849、
416850、416851、416852、416853、416854、416855、416856、416857、416858、416859、
416860、416861、416862、416863、416864、416865、416866、416867、445494、445495、
445496、445497、445498、445500、445501、445502、445503、445504、445505、445506、
445507、445508、445509、445510、445513、445514、445519、445520、445521、445522、
445525、445526、445529、445530、445531、445532、445533、445534、445535、445536、
455538、445541、及び445542が含まれる、ギャップマーのいくつかは、少なくとも80％の
阻害を示した。
ISIS番号：ISIS412206、416825、416850、416857、416858、416861、445522、及び4455
31が含まれる、ギャップマーのいくつかは、少なくとも90％の阻害を示した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例31：HepG2細胞におけるヒト第11因子の用量依存的なアンチセンス阻害
ヒト第11因子の in vitro 阻害を示す、実施例30からのギャップマーについて、HepG2
細胞において様々な用量で試験した。細胞を20,000個の細胞／ウェルの密度でプレート培
養して、表45に特定されるように、エレクトロポレーションを使用して、123.46 nM、370
.37 nM、1,111.11 nM、3,333.33 nM、及び10,000 nM濃度のアンチセンスオリゴヌクレオ
チドでトランスフェクトした。ほぼ16時間の処置期間の後で、この細胞よりRNAを単離し
て、定量的リアルタイムPCRによって第11因子mRNAレベルを測定した。ヒト第11因子プラ
イマープローブセット：RTS2966を使用して、mRNAレベルを測定した。第11因子mRNAレベ
ルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従って補正した。未処置対照細胞に対す
る第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表45に例証されるように、第11因子
mRNAレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞において用量依存的なやり方で
低下した。
使用したアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度をそれぞれの濃度で達成される第11因
子mRNA発現の阻害パーセントに対してプロットすることによって、それぞれのオリゴヌク
レオチドの半数阻害濃度（IC50）を計算して、PBS対照と比較して、第11因子mRNA発現の5
0％阻害が達成されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度に注目した。IC50値を表45
に提示する。
Figure 2015211685
実施例32：マイクロウォークによって設計したオリゴヌクレオチドによる、HepG2細胞
におけるヒト第11因子の用量依存的なアンチセンス阻害
ISIS416850及びISIS416858に基づいて、追加のギャップマーを設計した（上記の表8を
参照のこと）。これらのギャップマーは、ISIS416850及びISIS416858の上流及び下流でや
やシフトさせる（即ち、「マイクロウォーク」）。マイクロウォークによって設計したギ
ャップマーは、3-8-3MOE、4-8-4MOE、2-10-2MOE、3-10-3MOE、又は4-10-4MOEのモチーフ
を有する。
これらのギャップマーについて、HepG2細胞において様々な用量で試験した。細胞を20,
000個の細胞／ウェルの密度でプレート培養して、表47に特定されるように、エレクトロ
ポレーションを使用して、375 nM、750 nM、1,500 nM、3,000 nM、6,000 nM、及び12,000
nM濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。ほぼ16時間の処置
期間の後で、この細胞よりRNAを単離して、定量的リアルタイムPCRによって第11因子mRNA
レベルを測定した。ヒト第11因子プライマープローブセット：RTS2966を使用して、mRNA
レベルを測定した。第11因子mRNAレベルは、RIBOGREENによって測定される全RNA含量に従
って補正した。未処置対照細胞に対する第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する
。
ISIS416850、ISIS416858、ISIS445522、及びISIS445531（上記の表45を参照のこと）に
ついて、上記の記載と同じ条件の下で、マイクロウォークギャップマーとともに in vitr
o で再試験した。
表46のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、3-8-3MOE、4-8-4MOE、2-10-2MOE、3
-10-3MOE、又は4-10-4MOEギャップマーとして設計した。3-8-3ギャップマーは、14ヌクレ
オチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、8の2'-デオキシヌクレオチド
より構成されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ3ヌクレオチドを含んでなるウィン
グが隣接する。4-8-4ギャップマーは、16ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャ
ップセグメントは、8の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向
に）それぞれ4ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。2-10-2ギャップマーは、1
4ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、10の2'-デオキシヌク
レオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ2ヌクレオチドを含んでな
るウィングが隣接する。3-10-3ギャップマーは、16ヌクレオチドの長さであり、ここで中
央のギャップセグメントは、10の2'-デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'
及び3'方向に）それぞれ3ヌクレオチドを含んでなるウィングが隣接する。4-10-4ギャッ
プマーは、18ヌクレオチドの長さであり、ここで中央のギャップセグメントは、10の2'-
デオキシヌクレオチドより構成されて、両端に（5'及び3'方向に）それぞれ4ヌクレオチ
ドを含んでなるウィングが隣接する。このモチーフ（3-8-3、4-8-4、2-10-2、3-10-3、及
び4-10-4）のそれぞれで、5'ウィングセグメントの各ヌクレオチドと3'ウィングセグメン
トの各ヌクレオチドは、2'-MOE修飾を有する。それぞれのギャップマー全体のヌクレオシ
ド間連結は、ホスホロチオエート（P＝S）連結である。それぞれのギャップマー全体のす
べてのシチジン残基は、5-メチルシチジンである。「ヒト標的開始部位」は、ギャップマ
ーがヒト配列において標的指向される5'末端ヌクレオチドを示す。「ヒト標的終結部位」
は、ギャップマーがヒト配列において標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。表46に
収載するそれぞれのギャップマーは、SEQ ID NO: 1（GENBANK登録番号NM_000128.3）へ標
的指向される。表46のそれぞれのギャップマーはまた、本明細書においてSEQ ID NO: 274
（エクソン1〜15 GENBANK登録番号NW_001118167.1）と表記される、アカゲザル第11因子
遺伝子配列と完全に交差反応性である。「アカゲザル開始部位」は、ギャップマーがアカ
ゲザル配列において標的指向される5'末端ヌクレオチドを示す。「アカゲザル終結部位」
は、ギャップマーがアカゲザル配列へ標的指向される3'末端ヌクレオチドを示す。
Figure 2015211685
用量-応答阻害データを表47に示す。表47に例証されるように、第11因子mRNAレベルは
、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞において用量依存的なやり方で低下した。そ
れぞれのアンチセンスオリゴヌクレオチドのIC50も計算して、表47に提示した。表47で最
初に収載した2つのギャップマーは、元のギャップマー（ISIS416850及びISIS416858）で
あり、これよりマイクロウォークによって残りのギャップマーを設計して、アステリスク
により表記する。
Figure 2015211685
実施例33：ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドのCD1マウス
における忍容性
ヒト第11因子に標的指向するISISアンチセンスオリゴヌクレオチドでCD1マウスを処置
して、様々な代謝マーカーのレベルの変化を評価した。
処置
数群の5匹のCD1マウスのそれぞれに、週2回、2、4、又は6週の間、50 mg/kgのISIS4168
25、ISIS416826、ISIS416838、ISIS416850、ISIS416858、ISIS416864、ISIS416892、ISIS
416925、ISIS416999、ISIS417002、又はISIS417003を皮下注射した。対照群の5匹のマウ
スには、2週間、PBSを皮下注射した。すべての実験群（即ち、2、4、6週間、ASO処置した
マウス）を対照群（即ち、PBS、2週間）と比較した。
すべての群へ最終用量を投与してから3日後に、マウスを犠牲にした。臓器重量を測定
して、さらなる分析のために血液を採取した。
臓器重量
肝臓、脾臓、及び腎臓の重量を試験の最後に測定して、体重へ正規化したPBS対照のパ
ーセントとして、表48、49、及び50に提示する。肝臓及び脾臓の重量がPBS対照の6倍より
多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドを、さらなる試験のために選択し
た。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、トランスアミナ
ーゼの血漿濃度を測定した。アラニントランスアミナーゼ（ALT）及びアスパラギン酸ト
ランスアミナーゼ（AST）の測定値をIU/Lで表して、その結果を表51及び52に提示する。
ビリルビン及びアルブミンの血漿レベルも同じ臨床化学分析機を使用して測定して、mg/d
Lで表した。この結果を表53及び54に提示する。ALT/ASTレベルが対照レベルの7倍より多
い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドを、さらなる試験のために選択した
。ビリルビンのレベルを対照レベルの2倍より多く増加させなかったアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
腎機能
腎機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、血中尿素窒素（
BUN）及びクレアチニンの血漿濃度を測定した。結果をmg/dLで表して、表55及び56に提示
する。BUNレベルがPBS対照に比較して2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
血液学アッセイ
すべてのマウス群より入手した血液をヘマトクリット（HCT）、平均赤血球容積（MCV）
、平均赤血球ヘモグロビン量（MCH）、及び平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）の測定
及び分析、並びにWBC（好中球、リンパ球、及び単球）、RBC、血小板のような様々な血球
と全ヘモグロビン含量の測定のために Antech Diagnostics へ送った。この結果を表57〜
67に提示する。表に示す百分率は、全血球数のパーセントを示す。50％より多い血小板数
の減少、及び／又は3倍より多い単球数の増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオ
チドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例34：CD1マウス肝臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期の測定
ヒト第11因子に標的指向するISISアンチセンスオリゴヌクレオチドでCD1マウスを処置
して、このオリゴヌクレオチドの半減期、並びにオリゴヌクレオチドの分解と肝臓からの
消失の経過時間について評価した。
処置
数群の15匹のCD1マウスのそれぞれに、週2回、2週間、50 mg/kgのISIS416825、ISIS416
826、ISIS416838、ISIS416850、ISIS416858、ISIS416864、ISIS416892、ISIS416925、ISI
S416999、ISIS417002、又はISIS417003を皮下注射した。各群より5匹のマウスを、最終投
薬に続く3日目、28日目、及び56日目に犠牲にした。肝臓を分析用に回収した。
オリゴヌクレオチド濃度の測定
全長オリゴヌクレオチドの濃度、並びにオリゴヌクレオチド全体（分解型が含まれる）
の濃度を測定した。使用した方法は、フェノール-クロロホルム（液体-液体）抽出に続く
固相抽出からなる、すでに公表された方法（Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999）
の改良法である。抽出に先立って、内部標準（ISIS355868、27マー2'-O-メトキシエチル
修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT、本明細書
ではSEQ ID NO: 270と表記する）を加えた。定量下限濃度（LLOQ）がほぼ1.14μg/gであ
る検量線を使用して、組織試料濃度を計算した。次いで、WinNonlin ソフトウェア（PHAR
SIGHT）を使用して、半減期を計算した。
この結果をμg/g（肝臓組織）として表して、表68及び69に提示する。各オリゴヌクレ
オチドの半減期を表70に提示する。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例35：ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドのスプラーグ
・ドーリーラットにおける忍容性
ヒト第11因子に標的指向するISISアンチセンスオリゴヌクレオチドでスプラーグ・ドー
リーラットを処置して、様々な代謝マーカーのレベルの変化を評価した。
処置
数群の4匹のスプラーグ・ドーリーラットのそれぞれに、週2回、6週間、50 mg/kgのISI
S416825、ISIS416826、ISIS416838、ISIS416850、ISIS416858、ISIS416848、ISIS416864
、ISIS416892、ISIS416925、ISIS416999、ISIS417002、又はISIS417003を皮下注射した。
対照群の4匹のスプラーグ・ドーリーラットには、週2回、6週間、PBSを皮下注射した。体
重測定を処置期間の前とそれを通して行なった。尿試料を処置の開始前に採取した。最終
投薬から3日後に、尿試料を採取して、ラットを犠牲にした。臓器重量を測定して、さら
なる分析のために血液を採取した。
体重と臓器重量
ラットの体重を試験の開始時に、そしてその後、週2回測定した。体重を表71に提示し
て、試験の開始時に記録した重量に対する変化パーセントとして表す。肝臓、脾臓、及び
腎臓の重量を試験の最後に測定して、体重へ正規化した生理食塩水対照のパーセントとし
て表71に提示する。肝臓及び脾臓の重量がPBS対照の6倍より多い増加に影響しないアンチ
センスオリゴヌクレオチドを、さらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、トランスアミナ
ーゼの血漿濃度を測定した。アラニントランスアミナーゼ（ALT）及びアスパラギン酸ト
ランスアミナーゼ（AST）の測定値をIU/Lで表して、その結果を表72に提示する。ALT/AST
レベルが対照レベルの7倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドを
、さらなる試験のために選択した。ビリルビン及びアルブミンの血漿レベルも同じ臨床化
学分析機で測定して、その結果もmg/dLで表して、表72に提示する。アンチセンスオリゴ
ヌクレオチド処置による、ビリルビンのレベルの対照レベルの2倍より多い増加に影響し
ないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
腎機能
腎機能への影響を評価するために、自動化臨床化学分析機（日立オリンパス、AU400e、
ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、血中尿素窒素（BUN）及びクレアチニンの血漿
濃度を測定した。結果をmg/dLで表して、表73に提示する。BUNレベルがPBS対照に比較し
て2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のため
に選択した。全尿試料における尿タンパク質対クレアチニンの比もアンチセンスオリゴヌ
クレオチド処置の前と後で計算して、表74に提示する。尿タンパク質／クレアチニンの比
がPBS対照に比較して5倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさ
らなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
血液学アッセイ
すべてのラット群より入手した血液をヘマトクリット（HCT）、平均赤血球容積（MCV）
、平均赤血球ヘモグロビン量（MCH）、及び平均赤血球ヘモグロビン濃度（MCHC）の測定
及び分析、並びにWBC（好中球、リンパ球、及び単球）、RBC、及び血小板のような様々な
血球とヘモグロビン含量の測定のために Antech Diagnostics へ送った。この結果を表75
及び76に提示する。50％より多い血小板数の減少と3倍より多い単球数の増加に影響しな
いアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例36：スプラーグ・ドーリーラットの肝臓及び腎臓におけるアンチセンスオリゴヌ
クレオチドの半減期の測定
ヒト第11因子に標的指向するISISアンチセンスオリゴヌクレオチドでスプラーグ・ドー
リーラットを処置して、このオリゴヌクレオチドの半減期、並びにオリゴヌクレオチドの
分解と肝臓及び腎臓からの消失の経過時間について評価した。
処置
数群の4匹のスプラーグ・ドーリーラットのそれぞれに、週2回、2週間、20 mg/kgのISI
S416825、ISIS416826、ISIS416838、ISIS416850、ISIS416858、ISIS416864、ISIS416892
、ISIS416925、ISIS416999、ISIS417002、又はISIS417003を皮下注射した。最終投薬から
3日後、ラットを犠牲にして、肝臓と腎臓を分析用に回収した。
オリゴヌクレオチド濃度の測定
全長オリゴヌクレオチドの濃度、並びにオリゴヌクレオチド全体（分解型が含まれる）
の濃度を測定した。使用した方法は、フェノール-クロロホルム（液体-液体）抽出に続く
固相抽出からなる、すでに公表された方法（Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999）
の改良法である。抽出に先立って、内部標準（ISIS355868、27マー2'-O-メトキシエチル
修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT、本明細書
ではSEQ ID NO: 270と表記する）を加えた。定量下限濃度（LLOQ）がほぼ1.14μg/gであ
る検量線を使用して、組織試料濃度を計算した。この結果をμg/g（肝臓又は腎臓の組織
）として表して、表77及び78に提示する。次いで、WinNonlin ソフトウェア（PHARSIGHT
）を使用して、半減期を計算した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例37：ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドのCD1マウス
における忍容性
ヒト第11因子に標的指向するISISアンチセンスオリゴヌクレオチドでCD1マウスを処置
して、様々な代謝マーカーのレベルの変化を評価した。
処置
数群の5匹のCD1マウスのそれぞれに、週2回、6週間、50 mg/kgのISIS412223、ISIS4122
24、ISIS412225、ISIS413481、ISIS413482、ISIS416848、ISIS416849、ISIS416850、ISIS
416851、ISIS416852、ISIS416853、ISIS416854、ISIS416855、ISIS416856、ISIS416857、
ISIS416858、ISIS416859、ISIS416860、ISIS416861、ISIS416862、ISIS416863、ISIS4168
64、ISIS416865、ISIS416866、又はISIS416867を皮下注射した。対照群の10匹のCD1マウ
スには、週2回、6週間、PBSを皮下注射した。体重測定を処置期間の前とそれを通して行
なった。最終投薬から3日後に、尿試料を採取して、マウスを犠牲にし、臓器重量を測定
して、さらなる分析のために血液を採取した。
体重と臓器重量
体重を試験の開始時に、そしてその後、週2回測定した。マウスの体重を表80に提示し
て、処置の開始時に記録したPBS対照体重に優るグラム数で増加を表す。肝臓、脾臓、及
び腎臓の重量を試験の最後に測定して、体重の百分率として表80にまた提示する。肝臓及
び脾臓の重量がPBS対照の6倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチド
を、さらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、トランスアミナ
ーゼの血漿濃度を測定した。アラニントランスアミナーゼ（ALT）及びアスパラギン酸ト
ランスアミナーゼ（AST）の測定値をIU/Lで表して、その結果を表81に提示する。ALT/AST
レベルが対照レベルの7倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドを
、さらなる試験のために選択した。ビリルビン、コレステロール、及びアルブミンの血漿
レベルも同じ臨床化学分析機を使用して測定し、mg/dLで表して、表81に提示する。アン
チセンスオリゴヌクレオチド処置による、ビリルビンのレベルの対照レベルの2倍より多
い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
腎機能
腎機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機を使用して、血中尿素窒素（BUN）の血漿濃度を測定し、結果をmg/dLで表して、表82に
提示する。BUNレベルがPBS対照に比較して2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオ
リゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
血液学アッセイ
すべてのマウス群より入手した血液をヘマトクリット（HCT）測定、並びにWBC（好中球
、リンパ球、及び単球）、RBC、及び血小板のような様々な血球と全ヘモグロビン含量分
析の測定のために Antech Diagnostics へ送った。この結果を表83及び84に提示する。50
％より多い血小板数の減少と3倍より多い単球数の増加に影響しないアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例38：CD1マウス肝臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期の測定
CD1マウスにおいてすでに評価した15種のアンチセンスオリゴヌクレオチド（実施例37
）についてさらに評価した。CD1マウスをISISアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し
て、このオリゴヌクレオチドの半減期、並びに肝臓におけるオリゴヌクレオチドの分解及
び消失の経過時間について評価した。
処置
数群の15匹のCD1マウスのそれぞれに、週2回、2週間、50 mg/kgのISIS412223、ISIS412
225、ISIS413481、ISIS413482、ISIS416851、ISIS416852、ISIS416856、ISIS416860、ISI
S416861、ISIS416863、ISIS416866、ISIS416867、ISIS412224、ISIS416848、又はISIS416
859を皮下注射した。各群より5匹のマウスを、最終投薬後の3日目、28日目、及び56日目
に犠牲にして、肝臓を分析用に回収した。
オリゴヌクレオチド濃度の測定
全長オリゴヌクレオチドの濃度を測定した。使用した方法は、フェノール-クロロホル
ム（液体-液体）抽出に続く固相抽出からなる、すでに公表された方法（Leeds et al., 1
996; Geary et al., 1999）の改良法である。抽出に先立って、内部標準（ISIS355868、2
7マー2'-O-メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、GCGTTTGCTCTTCT
TCTTGCGTTTTTT、本明細書ではSEQ ID NO: 270と表記する）を加えた。定量下限濃度（LLO
Q）がほぼ1.14μg/gである検量線を使用して、組織試料濃度を計算した。この結果をμg/
g（肝臓組織）として表して、表85に提示する。各オリゴヌクレオチドの半減期も、表85
に提示した。
Figure 2015211685
実施例39：ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドのスプラーグ
・ドーリーラットにおける忍容性
CD1マウスにおいてすでに評価した15種のアンチセンスオリゴヌクレオチド（実施例37
）について、スプラーグ・ドーリーラットにおいて様々な代謝マーカーのレベルの変化を
さらに評価した。
処置
数群の4匹のスプラーグ・ドーリーラットのそれぞれに、週2回、6週間、50 mg/kgのISI
S412223、ISIS412224、ISIS412225、ISIS413481、ISIS413482、ISIS416848、ISIS416851
、ISIS416852、ISIS416856、ISIS416859、ISIS416860、ISIS416861、ISIS416863、ISIS41
6866、又はISIS416867を皮下注射した。対照群の4匹のスプラーグ・ドーリーラットには
、週2回、6週間、PBSを皮下注射した。体重測定を処置期間の前とそれを通して行なった
。最終投薬から3日後に、尿試料を採取してから、ラットを犠牲にし、臓器重量を測定し
て、さらなる分析のために血液を採取した。
体重と臓器重量
ラットの体重を試験の開始時に、そしてその後、週2回測定した。体重を表86に提示し
て、処置の開始時に記録したPBS対照体重に優るグラム数の増加として表す。肝臓、脾臓
、及び腎臓の重量を試験の最後に測定して、体重の百分率として表86にまた提示する。肝
臓及び脾臓の重量がPBS対照の6倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオ
チドを、さらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、トランスアミナ
ーゼの血漿濃度を測定した。アラニントランスアミナーゼ（ALT）及びアスパラギン酸ト
ランスアミナーゼ（AST）の測定値をIU/Lで表して、その結果を表87に提示する。ALT/AST
レベルが対照レベルの7倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドを
、さらなる試験のために選択した。ビリルビン及びアルブミンの血漿レベルも同じ臨床化
学分析機を使用して測定して、その結果をmg/dLで表して、表87に提示する。アンチセン
スオリゴヌクレオチド処置による、ビリルビンのレベルの対照レベルの2倍より多い増加
に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
腎機能
腎機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、血中尿素窒素（
BUN）及びクレアチニンの血漿濃度を測定した。結果をmg/dLで表して、表88に提示する。
BUNレベルがPBS対照に比較して2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレ
オチドをさらなる試験のために選択した。全尿試料における全尿タンパク質と尿タンパク
質対クレアチニンの比をアンチセンスオリゴヌクレオチド処置の後で計算して、表88にま
た提示する。尿タンパク質／クレアチニンの比がPBS対照に比較して5倍より多い増加に影
響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
血液学アッセイ
すべてのラット群より入手した血液をヘマトクリット（HCT）測定、並びにWBC（好中球
及びリンパ球）、RBC、及び血小板のような様々な血球と全ヘモグロビン含量の測定のた
めに Antech Diagnostics へ送った。この結果を表89及び90に提示する。50％より多い血
小板数の減少と3倍より多い単球数の増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチド
をさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例40：スプラーグ・ドーリーラットの肝臓及び腎臓におけるアンチセンスオリゴヌ
クレオチドの半減期の測定
ヒト第11因子に標的指向するISISアンチセンスオリゴヌクレオチドでスプラーグ・ドー
リーラットを処置して、このオリゴヌクレオチドの半減期、並びにオリゴヌクレオチドの
分解と肝臓及び腎臓からの消失の経過時間について評価した。
処置
数群の4匹のスプラーグ・ドーリーラットのそれぞれに、週2回、2週間、20 mg/kgのISI
S412223、ISIS412224、ISIS412225、ISIS413481、ISIS413482、ISIS416848、ISIS416851
、ISIS416852、ISIS416856、ISIS416859、ISIS416860、ISIS416861、ISIS416863、ISIS41
6866、又はISIS416867を皮下注射した。最終投薬から3日後、ラットを犠牲にして、肝臓
と腎臓を回収した。
オリゴヌクレオチド濃度の測定
全長オリゴヌクレオチドの濃度、並びにオリゴヌクレオチド全体（分解型が含まれる）
の濃度を測定した。使用した方法は、フェノール-クロロホルム（液体-液体）抽出に続く
固相抽出からなる、すでに公表された方法（Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999）
の改良法である。抽出に先立って、内部標準（ISIS355868、27マー2'-O-メトキシエチル
修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT、本明細書
ではSEQ ID NO: 270と表記する）を加えた。定量下限濃度（LLOQ）がほぼ1.14μg/gであ
る検量線を使用して、組織試料濃度を計算した。この結果をμg/g（肝臓又は腎臓の組織
）として表して、表91及び92に提示する。次いで、WinNonlin ソフトウェア（PHARSIGHT
）を使用して、半減期を計算した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例41：ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドのCD1マウス
における忍容性
ヒト第11因子に標的指向する、6-8-6MOE及び5-8-5MOEモチーフのISISオリゴヌクレオチ
ドをCD1マウスに投与して、様々な代謝マーカーのレベルの変化を評価した。
処置
数群の5匹のCD1マウスのそれぞれに、週2回、6週間、50 mg/kgのISIS416850、ISIS4454
98、ISIS445503、ISIS445504、ISIS445505、ISIS445509、ISIS445513、ISIS445522、ISIS
445530、ISIS445531、又はISIS445532を皮下注射した。対照群の5匹のマウスには、週2回
、6週間、PBSを皮下注射した。体重測定を処置期間の前と最後に行った。最終投薬から3
日後に、マウスを犠牲にし、臓器重量を測定して、さらなる分析のために血液を採取した
。
体重と臓器重量
マウスの体重変化を表94に提示して、試験の開始時に記録したPBS対照体重に優るグラ
ム数で増加を表す。肝臓、脾臓、及び腎臓の重量を試験の最後に測定して、体重の百分率
として表94にまた提示する。肝臓及び脾臓の重量がPBS対照の6倍より多い増加に影響しな
いアンチセンスオリゴヌクレオチドを、さらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、トランスアミナ
ーゼの血漿濃度を測定した。アラニントランスアミナーゼ（ALT）及びアスパラギン酸ト
ランスアミナーゼ（AST）の測定値をIU/Lで表して、その結果を表95に提示する。ALT/AST
レベルが対照レベルの7倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドを
、さらなる試験のために選択した。ビリルビン及びアルブミンの血漿レベルも測定して、
結果をmg/dLで表して、表95にまた提示する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置によ
る、ビリルビンのレベルの対照レベルの2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
腎機能
腎機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、血中尿素窒素（
BUN）の血漿濃度を測定した。結果をmg/dLで表して、表96に提示する。BUNレベルがPBS対
照に比較して2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる
試験のために選択した。
Figure 2015211685
血液学アッセイ
すべてのマウス群より入手した血液をヘマトクリット（HCT）測定、並びにWBC（好中球
及びリンパ球）、RBC、及び血小板のような様々な血球と全ヘモグロビン含量の測定のた
めに Antech Diagnostics へ送った。この結果を表97及び98に提示する。50％より多い血
小板数の減少と3倍より多い単球数の増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチド
をさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例42：ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドのスプラーグ
・ドーリーラットにおける忍容性
CD1マウスにおいてすでに評価した8種のアンチセンスオリゴヌクレオチド（実施例41）
について、スプラーグ・ドーリーラットにおいて様々な代謝マーカーのレベルの変化をさ
らに評価した。
処置
数群の4匹のスプラーグ・ドーリーラットのそれぞれに、週2回、6週間、50 mg/kgのISI
S445498、ISIS445504、ISIS445505、ISIS445509、ISIS445513、ISIS445522、ISIS445530
、又はISIS445531を皮下注射した。対照群のスプラーグ・ドーリーラットには、週2回、6
週間、PBSを皮下注射した。体重測定を処置期間の前とそれを通して行なった。最終投薬
から3日後に、尿試料を採取してから、ラットを犠牲にし、臓器重量を測定して、さらな
る分析のために血液を採取した。
体重と臓器重量
ラットの体重を試験の開始時に、そしてその後、週2回測定した。体重を表99に提示し
て、処置の開始時に記録したPBS対照重量に対する増加パーセントとして表す。肝臓、脾
臓、及び腎臓の重量を試験の最後に測定して、体重の百分率として表99にまた提示する。
肝臓及び脾臓の重量がPBS対照の6倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレ
オチドを、さらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、トランスアミナ
ーゼの血漿濃度を測定した。ALT（アラニントランスアミナーゼ）及びAST（アスパラギン
酸トランスアミナーゼ）の血漿濃度を測定して、結果をIU/Lで表して、表100に提示する
。ALT/ASTレベルが対照レベルの7倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレ
オチドを、さらなる試験のために選択した。ビリルビン及びアルブミンの血漿レベルも同
じ臨床化学分析機を使用して測定して、その結果をmg/dLで表して、表100に提示する。ア
ンチセンスオリゴヌクレオチド処置による、ビリルビンのレベルの対照レベルの2倍より
多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した
。
Figure 2015211685
腎機能
腎機能に対するISISオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、血中尿素窒素（
BUN）及びクレアチニンの血漿濃度を測定した。結果をmg/dLで表して、表101に提示する
。BUNレベルがPBS対照に比較して2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌク
レオチドをさらなる試験のために選択した。全尿試料における全尿タンパク質と尿タンパ
ク質対クレアチニンの比をアンチセンスオリゴヌクレオチド処置の後で計算して、表101
にまた提示する。尿タンパク質／クレアチニンの比がPBS対照に比較して5倍より多い増加
に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
血液学アッセイ
すべてのラット群より入手した血液をヘマトクリット（HCT）測定、並びにWBC（好中球
、リンパ球、及び単球）、RBC、及び血小板のような様々な血球と全ヘモグロビン含量の
測定のために Antech Diagnostics へ送った。この結果を表102及び103に提示する。50％
より多い血小板数の減少と3倍より多い単球数の増加に影響しないアンチセンスオリゴヌ
クレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例43：ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドのCD1マウス
における忍容性
ヒト第11因子に標的指向する、4-8-4MOE、3-8-3MOE、2-10-2MOE、3-10-3MOE、及び4-10
-4MOEモチーフのISISオリゴヌクレオチドをCD1マウスに投与して、様々な代謝マーカーの
レベルの変化を評価した。
処置
数群の5匹のCD1マウスのそれぞれに、週2回、6週間、50 mg/kgのISIS449707、ISIS4497
08、ISIS449409、ISIS449710、又はISIS449711を皮下注射した。対照群の5匹のCD1マウス
には、週2回、6週間、PBSを皮下注射した。体重測定を処置期間の前と最後に行なった。
最終投薬から3日後に、マウスを犠牲にし、臓器重量を測定して、さらなる分析のために
血液を採取した。
体重と臓器重量
試験の最後に記録したマウスの体重をグラム数で表して、表104に提示する。肝臓、脾
臓、及び腎臓の重量も試験の最後に測定して、体重の百分率として表104にまた提示する
。肝臓及び脾臓の重量がPBS対照の6倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌク
レオチドを、さらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、トランスアミナ
ーゼの血漿濃度を測定した。ALT（アラニントランスアミナーゼ）及びAST（アスパラギン
酸トランスアミナーゼ）の血漿濃度を測定して、結果をIU/Lで表して、表105に提示する
。ALT/ASTレベルが対照レベルの7倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレ
オチドを、さらなる試験のために選択した。ビリルビン及びアルブミンの血漿レベルも同
じ臨床化学分析機を使用して測定して、その結果をmg/dLで表して、表105に提示する。ア
ンチセンスオリゴヌクレオチド処置による、ビリルビンのレベルの対照レベルの2倍より
多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した
。
Figure 2015211685
腎機能
腎機能に対するISISオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、血中尿素窒素（
BUN）及びクレアチニンの血漿濃度を測定した。結果をmg/dLで表して、表106に提示する
。BUNレベルがPBS対照に比較して2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌク
レオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
血液学アッセイ
すべてのマウス群より入手した血液をヘマトクリット（HCT）測定、並びにWBC（好中球
、リンパ球、及び単球）、RBC、及び血小板のような様々な血球と全ヘモグロビン含量の
測定のために Antech Diagnostics へ送った。この結果を表107及び108に提示する。50％
より多い血小板数の減少と3倍より多い単球数の増加に影響しないアンチセンスオリゴヌ
クレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例44：ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドのスプラーグ
・ドーリーラットにおける忍容性
CD1マウスにおいてすでに評価した5種のアンチセンスオリゴヌクレオチド（実施例43）
について、スプラーグ・ドーリーラットにおいて様々な代謝マーカーのレベルの変化をさ
らに評価した。
処置
数群の4匹のスプラーグ・ドーリーラットのそれぞれに、週2回、6週間、50 mg/kgのISI
S449707、ISIS449708、ISIS449709、ISIS449710、又はISIS449711を皮下注射した。対照
群の4匹のスプラーグ・ドーリーラットには、週2回、6週間、PBSを皮下注射した。体重測
定を処置期間の前とそれを通して行なった。最終投薬から3日後に、尿試料を採取してか
ら、ラットを犠牲にし、臓器重量を測定して、さらなる分析のために血液を採取した。
体重と臓器重量
ラットの体重を試験の開始時と試験の終了時に測定した。体重の変化を表109に提示し
て、処置の開始時に記録したPBS対照重量に優る増加としてグラム数で表す。肝臓、脾臓
、及び腎臓の重量を試験の最後に測定して、体重の百分率として表109にまた提示する。
肝臓及び脾臓の重量がPBS対照の6倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレ
オチドを、さらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、ALT及びASTの血
漿濃度を測定した。アラニントランスアミナーゼ（ALT）及びアスパラギン酸トランスア
ミナーゼ（AST）の血漿濃度を測定して、その結果をIU/Lで表して、表110に提示する。AL
T/ASTレベルが対照レベルの7倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドを、さらなる試験のために選択した。ビリルビン及びアルブミンの血漿レベルも測定し
て、結果をmg/dLで表して、表110に提示する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置によ
る、ビリルビンのレベルの対照レベルの2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
腎機能
腎機能に対するISISオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、BUN及びクレア
チニンの血漿濃度を測定した。結果をmg/dLで表して、表111に提示する。BUNレベルがPBS
対照に比較して2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらな
る試験のために選択した。全尿試料における全尿タンパク質と尿タンパク質対クレアチニ
ンの比をアンチセンスオリゴヌクレオチド処置の後で計算して、表111にまた提示する。
尿タンパク質／クレアチニンの比がPBS対照に比較して5倍より多い増加に影響しないアン
チセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
血液学アッセイ
すべてのラット群より入手した血液をヘマトクリット（HCT）測定、並びにWBC（好中球
、リンパ球、及び単球）、RBC、及び血小板のような様々な血球と全ヘモグロビン含量の
測定のために Antech Diagnostics へ送った。この結果を表112及び113に提示する。50％
より多い血小板数の減少と3倍より多い単球数の増加に影響しないアンチセンスオリゴヌ
クレオチドをさらなる試験のために選択した。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例45：カニクイザルにおける、ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌ
クレオチドの用量依存的な薬理効果
いくつかのアンチセンスオリゴヌクレオチドをカニクイザルにおいて試験して、第11因
子活性、抗凝固及び出血の時間、肝臓及び腎臓での分布、及び忍容性に対する、このオリ
ゴヌクレオチドの薬理効果を判定した。この試験に使用したすべてのISISオリゴヌクレオ
チドは、標的ヒト第11因子mRNAに標的指向して、アカゲザルの遺伝子配列とも完全に交差
反応性である（表44を参照のこと）。アカゲザルのISISオリゴヌクレオチドは、カニクイ
ザルの遺伝子配列とも完全に交差反応性であると予測される。本試験を行った時点で、カ
ニクイザルのゲノム配列は、米国立生物工学情報センター（NCBI）のデータベースで入手
可能でなかった；故に、カニクイザルの遺伝子配列との交差反応性を確かめることはでき
なかった。
処置
2匹の雄ザルと3匹の雌ザルからそれぞれなる数群のサルに、ISIS416838、ISIS416850、
ISIS416858、ISIS416864、又はISIS417002を上昇用量で皮下注射した。そのサルへアンチ
センスオリゴヌクレオチドを5 mg/kgで週3回、1週間；5 mg/kgで週2回、2及び3週間；10
mg/kgで週3回、4週間；10 mg/kgで週2回、5及び6週間；25 mg/kgで週3回、7週間；及び、
25 mg/kgで週2回、8、9、10、11、及び12週間投与した。2匹の雄ザルと3匹の雌ザルから
なる1つの対照群に、同じ投薬レジメンに従って、PBSを皮下投与した。2匹の雄ザルと3匹
の雌ザルからなる追加の実験群に、慢性的でより低い用量レジメンでISIS416850を皮下注
射した。そのサルへアンチセンスオリゴヌクレオチドを5 mg/kgで週3回、1週間；5 mg/kg
で週2回、2及び3週間；10 mg/kgで週3回、4週間；及び、10 mg/kgで週2回、5〜12週間投
与した。体重を毎週測定した。血漿中の第11因子タンパク質活性分析、フィブリノーゲン
測定、PT及びaPTT測定、出血時間、及び様々な血液学的因子の測定のために、血液試料を
処置の開始の14日前と5日前に、そしてその後は週1回採取した。85日目、このサルを、深
い麻酔下の間に瀉血により安楽死させて、臓器をさらなる分析用に回収した。
RNA分析
85日目に、プライマープローブセット：LTS00301（フォワードプライマー配列：ACACGC
ATTAAAAAGAGCAAAGC、本明細書においてSEQ ID NO: 271として表記する；リバースプライ
マー配列：CAGTGTCATGGTAAAATGAAGAATGG、本明細書においてSEQ ID NO: 272として表記す
る；及び、プローブ配列：TGCAGGCACAGCATCCCAGTGTTCTX、本明細書においてSEQ ID NO: 2
73として表記する）を使用する第11因子のリアルタイムPCR分析のために肝臓組織よりRNA
を抽出した。PBS対照に対する第11因子の阻害パーセントとして結果を提示する。表114に
示すように、ISISオリゴヌクレオチドでの処置は、PBS対照と比較して、第11因子mRNAの
有意な低下をもたらした。
Figure 2015211685
タンパク質分析
全群のサルより異なる日に採取した血漿試料を、アフィニティー精製ポリクローナル抗
第11因子抗体を捕捉抗体として、そしてペルオキシダーゼ共役ポリクローナル抗第11因子
抗体を検出抗体として使用するサンドイッチ式ELISAアッセイ（Affinity Biologicals 社
）によって分析した。サルの血漿をアッセイ用に50倍希釈した。ペルオキシダーゼ活性を
、基質：o-フェニレンジアミンとのインキュベーションによって発現させた。発現された
色は、マイクロプレートリーダーを490 nmで使用して定量して、試料中の第11因子の濃度
に比例するとみなされた。
この結果を、PBS対照のそれに対する百分率の低下として表して、表115に提示する。IS
IS416850及びISIS416858での処置は、タンパク質レベルの時間依存的な減少をもたらした
。
Figure 2015211685
PT及びaPTTアッセイ
クエン酸ナトリウムを含有する試験管に血液試料を採取した。PT及びaPTTは、ACL9000
凝固機器（Instrumentation Laboratory、イタリア）を用いて、同一2検体で定量した。
試験した系列希釈クエン酸添加対照サル血漿の標準曲線で結果を内挿して、報告結果を正
常値パーセントで示した。
ISISオリゴヌクレオチドで処置したサルからの血小板欠乏血漿（PPP）を使用して、プ
ロトロンビン時間（PT）と活性化部分トロンボプラスチン時間（aPTT）を測定した。PT及
びaPTTの数値を表116及び117に提供して、国際標準化比（INR）値として報告する。PT及
びaPTTのINR値は、各実験群のPT又はaPTT値をPBS処置群のPT又はaPTTで割ることによって
定量した。次いで、使用する組織因子の国際感度指数（ISI）の冪数だけこの比を掛け合
わせた。慢性用量レジメンで投与したISISオリゴヌクレオチドのISIS416850を他のオリゴ
ヌクレオチドからアステリスク（＊）で識別する。
表116に示すように、PTは、ISISオリゴヌクレオチドで処置したサルにおいて、上昇用
量レジメン又は慢性用量レジメンのいずれでも、有意には延長しなかった。しかしながら
、aPTTは、表117に提示するように、用量依存的なやり方で延長した。これらのデータは
、第11因子のアンチセンス低下が血液凝固の接触活性化経路には影響を及ぼすが、その外
因性経路には影響を及ぼさないことを示唆する。故に、第11因子のアンチセンス低下は、
組織損傷への応答ではなく、異常な血管壁に応答した血栓又は血塊の形成を阻害するのに
有用である。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
タンパク質活性分析
血液試料を様々な時点で採取して、凝固時間に基づいたF11アッセイを使用して、第11
因子プロ酵素を測定した。凝固時間は、ST4半自動化凝固測定機器（Diagnostica Stago、
ニュージャージー州）を用いて、同一2検体で定量した。BSA入りHEPES-NaCl緩衝液で20倍
希釈した30μlのクエン酸添加試料血漿を30μlのaPTT試薬（自動化aPTT、Organon Techni
ka、ノースカロライナ州）と30μlの第11因子欠乏クエン酸添加血漿（George King Bio-M
edical 社）とともに37℃で5分間インキュベートして、30μlの25 mM CaCl2の添加を続け
て、凝固を開始させた。系列希釈したクエン酸添加対照血漿の標準曲線で結果を内挿した
。
結果を、PBS対照に対する第11因子活性の阻害パーセントとして表118に提示する。慢性
用量レジメンで投与したISISオリゴヌクレオチドのISIS416850を他のオリゴヌクレオチド
からアステリスク（＊）で識別する。
Figure 2015211685
フィブリノーゲンアッセイ
9分量の新鮮なサル血漿を1分量のクエン酸三ナトリウムへ採取した。この試料について
、ACL9000凝固機器（Instrumentation Laboratory、イタリア）を使用して、フィブリノ
ーゲン含量を評価した。結果をmg/dLで表して、表119に提示する。慢性用量レジメンで投
与したISISオリゴヌクレオチドのISIS416850を他のオリゴヌクレオチドからアステリスク
（＊）で識別する。
Figure 2015211685
出血アッセイ
処置期間の間の異なる日に、Surgicutt Jr. デバイス（ITC、ニュージャージー州）を
使用して、出血アッセイを実施した。サルを、その腕を安定支持具に入れた状態で、モン
キーチェアに入れた。この腕を軽く剃毛して、血圧計を上腕に装着した。血圧計のカフ（
cuff）を40 mmHgへ上昇させて、この手順を通してこの圧力を維持した。切開する上腕の
領域を防腐スワブで清潔にして、Surgicutt Jr. デバイスを使用して、肘前皮線（antecu
bital crease）に平行した、その5 cm下の側面部、前腕の掌側表面上を切開した。切開を
行った瞬間に、ストップウォッチを始動させた。30秒ごとに、切開部からの血液を、血栓
の形成が妨害されないように、切開部に直に触ることなく、吸取紙を使用して拭った。血
液がもはや吸取紙を汚さなくなるまで、血液を30秒ごとに拭った。このときにストップウ
ォッチを止めて、出血時間を決定した。血圧計を動物の腕から外し、切開部位を防腐的に
綿棒処理して、創傷閉鎖ストリップを当てた。この結果を秒数で表して、表Xに提供する
。この結果を表120に提供する。慢性用量レジメンで投与したISISオリゴヌクレオチドのI
SIS416850を他のオリゴヌクレオチドからアステリスク（＊）で識別する。
これらのデータは、本明細書に提供する化合物の出血ポテンシャルが低いことを示唆す
る。
Figure 2015211685
血小板凝集アッセイ
血漿試料へ1ミリモル／L ADP及び／又は3μgコラーゲン（表121に概括するように、採
取日に依る）を加えることによって、血小板凝集を開始させて、そのまま10分間進行させ
た。電気抵抗又はインピーダンスの変化と血小板形状変化後の凝集の初期傾斜（initial
slope）の変化を記録することによって、凝集を特性決定した。この凝集試験は、それぞ
れの採取日に、試料につき2回実施して、その平均値を取った。慢性用量レジメンで投与
したISISオリゴヌクレオチドのISIS416850を他のオリゴヌクレオチドからアステリスク（
＊）で識別する。
Figure 2015211685
体重と臓器重量
投薬レジメンを通して週1回、体重を記録した。各群の測定値をグラム数で表して、表1
22に示す。この結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置が、PBS対照に比較し
て体重の有意な変化をもたらす可能性がある、動物の健康における有害な変化を引き起こ
さなかったことを示している。動物を安楽死させた後で臓器重量を記録して、肝臓、腎臓
、及び脾臓を採取して秤量した。この結果を表123に提示すると、脾臓重量の増加を示すI
SIS416858以外は、PBS対照に比較して重量の有意な変化も示さない。慢性用量レジメンで
投与したISISオリゴヌクレオチドのISIS416850を他のオリゴヌクレオチドからアステリス
ク（＊）で識別する。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、トランスアミナ
ーゼの血漿濃度を測定した。ALT（アラニントランスアミナーゼ）及びAST（アスパラギン
酸トランスアミナーゼ）の血漿濃度を測定して、その結果をIU/Lで表して、表124及び125
に提示する。ALT/ASTレベルが対照レベルの7倍より多い増加に影響しないアンチセンスオ
リゴヌクレオチドを、さらなる試験のために選択した。ビリルビンの血漿濃度も測定して
、結果をmg/dLで表して、表126に提示する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置による
、ビリルビンのレベルの対照レベルの2倍より多い増加に影響しないアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。慢性用量レジメンで投与したISISオリゴ
ヌクレオチドのISIS416850を他のオリゴヌクレオチドからアステリスク（＊）で識別する
。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
腎機能
腎機能に対するISISオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、尿試料を採取した。
アンチセンスオリゴヌクレオチド処置後の尿試料中の尿タンパク質対クレアチニンの比を
計算して、表127に提示する。尿タンパク質／クレアチニン比がPBS対照に比較して5倍よ
り多い増加に影響しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択し
た。
Figure 2015211685
オリゴヌクレオチド濃度の測定
全長オリゴヌクレオチドの濃度、並びにオリゴヌクレオチドの分解と肝臓及び腎臓から
の消失の経過時間を評価した。使用した方法は、フェノール-クロロホルム（液体-液体）
抽出に続く固相抽出からなる、すでに公表された方法（Leeds et al., 1996; Geary et a
l., 1999）の改良法である。抽出に先立って、内部標準（ISIS355868、27マー2'-O-メト
キシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT
、本明細書ではSEQ ID NO: 270と表記する）を加えた。定量下限濃度（LLOQ）がほぼ1.14
μg/gである検量線を使用して、組織試料濃度を計算した。次いで、WinNonlin ソフトウ
ェア（PHARSIGHT）を使用して、半減期を計算した。この結果をμg/g（肝臓又は腎臓の組
織）として表して、表128及び129に提示する。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
血液学アッセイ
全群のサルより入手した血液を、HCT、MCV、MCH、及びMCHC分析、並びにWBC（好中球、
リンパ球、単球、好酸球、好塩基球、網状赤血球）、RBC、血小板のような様々な血球と
全ヘモグロビン含量の測定のために韓国安全性評価研究所（KIT）へ送った。この結果を
表130〜143に提示する。50％より多い血小板数の減少と3倍より多い単球数の増加に影響
しないアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。慢性用量レジ
メンで投与したISISオリゴヌクレオチドのISIS416850を他のオリゴヌクレオチドからアス
テリスク（＊）で識別する。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
サイトカイン及びケモカインのアッセイ
上昇する用量レジメンで投与するPBS、ISIS416850、及びISIS416858で処置したサルの
群より入手した血液試料を、ケモカイン及びサイトカインのレベルの測定のために Pierc
e Biotechnology（マサチューセッツ州ウォバーン）へ送った。それぞれの霊長動物の抗
体を使用してIL-1β、IL-6、IFN-γ、及びTNF-αのレベルを測定して、それぞれの交差反
応ヒト抗体を使用してIL-8、MIP-1α、MCP-1、MIP-1β、及びRANTESのレベルを測定した
。処置の開始の14日前と、サルを安楽死させた85日目に測定値を取った。この結果を表14
4及び145に提示する。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例46：カニクイザルにおける、ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌ
クレオチドの薬理効果
齧歯動物の忍容性試験（実施例41〜44）より選択したいくつかのアンチセンスオリゴヌ
クレオチドをカニクイザルにおいて試験して、カニクイザルモデルにおけるその薬理効果
、第11因子活性に対する相対効力、及び忍容性を判定した。このアンチセンスオリゴヌク
レオチドは、先に記載のサル試験（実施例45）より選択したISIS416850及びISIS416858と
も比較した。この試験に使用したすべてのISISオリゴヌクレオチドは、ヒト第11因子mRNA
に標的指向して、アカゲザルの遺伝子配列とも完全に交差反応性である（表44及び46を参
照のこと）。アカゲザルのISISオリゴヌクレオチドは、カニクイザルの遺伝子配列とも完
全に交差反応性であると予測される。本試験を行った時点で、カニクイザルのゲノム配列
は、米国立生物工学情報センター（NCBI）のデータベースで入手可能でなかった；故に、
カニクイザルの遺伝子配列との交差反応性を確かめることはできなかった。
処置
2匹の雄ザルと2匹の雌ザルからそれぞれなる数群のサルに、25 mg/kgのISIS416850、IS
IS449709、ISIS445522、ISIS449710、ISIS449707、ISIS449711、ISIS449708、416858、及
びISIS445531を皮下注射した。そのサルへアンチセンスオリゴヌクレオチドを25 mg/kgで
週3回、1週間、そして25 mg/kgで週2回、2〜8週間投与した。2匹の雄ザルと2匹の雌ザル
からなる対照群に、同じ投薬レジメンに従って、PBSを皮下投与した。体重を処置の開始
の14日前と7日前に記録して、その後は処置期間を通して毎週測定した。血液試料は、PT
及びaPTT測定と様々な血液学的因子の測定のために、処置の開始の14日前と5日前に、そ
してその後は投薬レジメンの間に数回採取した。55日目、このサルを、深い麻酔下の間に
瀉血により安楽死させて、臓器をさらなる分析用に回収した。
RNA分析
55日目に、プライマープローブセット：LTS00301を使用する第11因子のリアルタイムPC
R分析のために肝臓組織よりRNAを抽出した。PBS対照に対する第11因子の阻害パーセント
として結果を提示する。表146に示すように、ISIS416850、ISIS449709、ISIS445522、ISI
S449710、ISIS449707、ISIS449708、ISIS416858、及びISIS445531での処置は、PBS対照と
比較して、第11因子mRNAの有意な低下をもたらした。
Figure 2015211685
タンパク質分析
全群のサルより異なる日に採取した血漿試料を、アフィニティー精製ポリクローナル抗
第11因子抗体を捕捉抗体として、そしてペルオキシダーゼ共役ポリクローナル抗第11因子
抗体を検出抗体として使用するサンドイッチ式ELISAアッセイ（Affinity Biologicals 社
）によって分析した。サルの血漿をアッセイ用に50倍希釈した。ペルオキシダーゼ活性を
、基質：o-フェニレンジアミンとのインキュベーションによって発現させた。発現された
色は、マイクロプレートリーダーを490 nmで使用して定量して、試料中の第11因子の濃度
に比例するとみなされた。
この結果を、PBS対照のそれに対する百分率の低下として表して、表147に提示する。IS
IS416850、ISIS449709、ISIS445522、及びISIS416858での処置は、タンパク質レベルの時
間依存的な減少をもたらした。
Figure 2015211685
PT及びaPTTアッセイ
ISISオリゴヌクレオチドで処置したサルからの血小板欠乏血漿（PPP）を使用して、PT
とaPTTを測定した。PT及びaPTTの数値を表148及び149に提供して、国際標準化比（INR）
値として報告する。PT及びaPTTのINR値は、各実験群のPT又はaPTT値をPBS処置群のPT又は
aPTTで割ることによって定量した。次いで、使用する組織因子の国際感度指数（ISI）の
冪数だけこの比を掛け合わせた。表148に示すように、PTは、ISISオリゴヌクレオチドで
処置したサルにおいて、有意には延長しなかった。しかしながら、aPTTは、表148に提示
するように、ISIS416850、ISIS445522、及びISIS416858で処置した群において、有意に延
長した。これらのデータは、第11因子のアンチセンス低下が血液凝固の接触活性化経路に
は影響を及ぼすが、その外因性経路には影響を及ぼさないことを示唆する。故に、これら
のISISオリゴヌクレオチドでの第11因子のアンチセンス低下は、組織損傷への応答ではな
く、異常な血管壁に応答した血栓又は血塊の形成を阻害するのに有用である。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
体重と臓器重量
各群の体重をグラム数で表して、表150に示す。この結果は、アンチセンスオリゴヌク
レオチドでの処置が、PBS対照に比較して体重の有意な変化をもたらす可能性がある、動
物の健康における有害な変化を引き起こさなかったことを示している。55日目に動物を安
楽死させた後で臓器重量を記録して、肝臓、腎臓、及び脾臓を採取した。この結果を体重
の百分率として表して表150に提示すると、脾臓重量の増加を引き起こしたISIS449711以
外は、PBS対照に比較して重量の有意な変化も示さない。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
肝機能
肝機能に対するISISオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、自動化臨床化学分析
機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル）を使用して、ALT及びASTの血
漿濃度を測定した。アラニントランスアミナーゼ（ALT）及びアスパラギン酸トランスア
ミナーゼ（AST）の血漿濃度を測定して、その結果をIU/Lで表して、表152及び153に提示
する。ビリルビンの血漿濃度も測定して、結果をmg/dLで表して、表154に提示する。表15
2〜154に観測されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置後、肝臓代謝マーカー
のいずれにも有意な増加がなかった。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
腎機能
腎機能に対するISISオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、尿試料を異なる日に
採取した。自動化臨床化学分析機（日立オリンパス、AU400e、ニューヨーク州メルヴィル
）を使用して、BUNレベルを様々な時点で測定して、その結果を表155に提示する。アンチ
センスオリゴヌクレオチド処置後の尿試料における尿タンパク質対クレアチニンの比も49
日目に計算して、結果を表156に提示する。表155及び156に観測されるように、アンチセ
ンスオリゴヌクレオチド処置後、腎臓代謝マーカーのいずれにも有意な増加がなかった。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
血液学アッセイ
全群のサルより異なる日に入手した血液を、HCT、MCV、MCH、及びMCHC測定、並びにWBC
（好中球と単球）、RBC、及び血小板のような様々な血球と全ヘモグロビン含量の測定の
ために韓国安全性評価研究所（KIT）へ送った。この結果を表157〜166に提示する。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
Figure 2015211685
サイトカイン及びケモカインのアッセイ
全群のサルより入手した血液試料を、ケモカイン及びサイトカインレベルの測定のため
にPierce Biotechnology（マサチューセッツ州ウォバーン）へ送った。それぞれの霊長動
物の抗体を使用してIL-1β、IL-6、IFN-γ、及びTNF-αのレベルを測定して、それぞれの
交差反応ヒト抗体を使用してIL-8、MIP-1α、MCP-1、MIP-1β、及びRANTESのレベルを測
定した。処置の開始の14日前と、サルを安楽死させた55日目に測定値を取った。この結果
を表167及び168に提示する。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
実施例47：ヒト第11因子に標的指向するISISアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度の
測定
165〜185 mg/mLの濃度で40 cPより高い粘度を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド
を篩い落とす目的で、ヒト第11因子に標的指向するアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘
度を測定した。
ISISオリゴヌクレオチド（32〜35 mg）をガラスバイアルに秤量して、120μlの水を加
えて、そのバイアルを50℃で加熱することによって、アンチセンスオリゴヌクレオチド溶
液に溶かした。予熱した試料の一部（75μL）をミクロ粘度計（Cambridge）へピペット注
入した。ミクロ粘度計の温度を25℃へ設定して、試料の粘度を測定した。予熱試料の別分
量（20μL）を、260 nM、85℃でのUV読み取り（Cary UV 機器）のために、10 mLの水へピ
ペット注入した。この結果を表169に提示する。
Figure 2015211685
Figure 2015211685
 ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 223の少なくとも12の連続ヌクレオ塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物。
［態様２］
一本鎖の修飾オリゴヌクレオチドからなる、態様１の化合物。
［態様３］
修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列がSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基配列に100％相補的である、態様２の化合物。
［態様４］
少なくとも1つのヌクレオシド間連結が修飾ヌクレオシド間連結である、態様２の化合物。
［態様５］
それぞれのヌクレオシド間連結がホスホロチオエートヌクレオシド間連結である、態様４の化合物。
［態様６］
少なくとも1つのヌクレオシドが修飾糖を含む、態様１の化合物。
［態様７］
少なくとも1つの修飾糖が二環糖である、態様６の化合物。
［態様８］
少なくとも1つの二環糖のそれぞれが4'-（CH2）n-O-2'架橋を含み、ここでnは1又は2である、態様７の化合物。
［態様９］
少なくとも1つの二環糖のそれぞれが4'-CH（CH3）-O-2'架橋を含む、態様７の化合物。
［態様１０］
少なくとも1つの修飾糖が2'-O-メトキシエチル基を含む、態様６の化合物。
［態様１１］
テトラヒドロピラン環がフラノース環に置き換わっている、少なくとも1つのテトラヒドロピラン修飾ヌクレオシドを含んでなる、態様１の化合物。
［態様１２］
少なくとも1つのテトラヒドロピラン修飾ヌクレオシドのそれぞれが構造：
Figure 2015211685
 ［式中、Bxは、保護されていてもよい複素環式塩基部分である］を有する、態様１１の化合物。
［態様１３］
少なくとも1つのヌクレオシドが修飾ヌクレオ塩基を含む、態様２の化合物。
［態様１４］
修飾ヌクレオ塩基が5-メチルシトシンである、態様１３の化合物。
［態様１５］
修飾オリゴヌクレオチドが：
連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
連結ヌクレオシドからなる5'ウィングセグメント；
連結ヌクレオシドからなる3'ウィングセグメントを含み、
ここでギャップセグメントは、5'ウィングセグメントと3'ウィングセグメントのすぐ隣りでその間に位置して、そしてここでそれぞれのウィングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖を含む、態様１の化合物。
［態様１６］
修飾オリゴヌクレオチドが：
10の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
5の連結ヌクレオシドからなる5'ウィングセグメント；
5の連結ヌクレオシドからなる3'ウィングセグメントを含み、
ここでギャップセグメントは、5'ウィングセグメントと3'ウィングセグメントのすぐ隣りでその間に位置して、ここでそれぞれのウィングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、2'-O-メトキシエチル糖を含み；そしてここでそれぞれのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である、態様１５の化合物。
［態様１７］
それぞれのシトシンが5-メチルシトシンである、態様１６の化合物。
［態様１８］
修飾オリゴヌクレオチドが20の連結ヌクレオシドからなる、態様２又は態様１７の化合物。
［態様１９］
血栓塞栓合併症を治療するための、態様１〜態様１８のいずれか1項に記載の化合物。
［態様２０］
動物がヒトである、態様１９の化合物。
［態様２１］
深在性静脈血栓症を予防するための、態様２０の化合物。
［態様２２］
肺塞栓症を予防するための、態様２０のいずれか1つの化合物。
［態様２３］
アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパリン、レピルジン、チクロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、LOVENOX、及び第Xa因子阻害剤より選択される群のいずれとも同時投与するための、態様１９のいずれか1つの化合物。
［態様２４］
アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパリン、レピルジン、チクロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、LOVENOX、及び第Xa因子阻害剤より選択される群のいずれとも併用投与するための、態様１９のいずれか1つの化合物。
［態様２５］
非経口投与のための、態様２３の化合物。
［態様２６］
非経口投与のための、態様２４の化合物。
［態様２７］
皮下又は静脈内投与のための、態様２５の化合物。
［態様２８］
皮下又は静脈内投与のための、態様２６の化合物。
［態様２９］
12〜30の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって、ここで修飾オリゴヌクレオチドは、第11因子の核酸に相補的である、凝固障害を治療するための前記化合物。
［態様３０］
血栓塞栓合併症を治療するための医薬品の製造のための、態様１〜態様１８のいずれか1項の化合物の、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパリン、レピルジン、チクロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、及びLOVENOXより選択される群のいずれかとの使用。
［態様３１］
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 223の少なくとも12の連続ヌクレオ塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチド又はその塩と、医薬的に許容される担体又は希釈剤を含んでなる組成物。
［態様３２］
一本鎖オリゴヌクレオチドからなる、態様３１の組成物。
［態様３３］
修飾オリゴヌクレオチドが20の連結ヌクレオシドからなる、態様３２の組成物。
［態様３４］
血栓塞栓合併症のリスク状態にある動物を同定すること；及び
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、第11因子の核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物の治療有効量をそのリスク状態の動物へ投与することを含んでなる、方法。
［態様３５］
血栓塞栓合併症が、深在性静脈血栓症、肺塞栓症、又はその組合せである、態様３４の方法。
［態様３６］
凝固障害を有する動物を同定すること；及び
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、第11因子の核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物の治療有効量を該動物へ投与することを含んでなる、方法。
［態様３７］
該化合物と、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパリン、レピルジン、チクロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、LOVENOX、及び第Xa因子阻害剤より選択される群のいずれとも同時投与することを含んでなる、態様３６の方法。
［態様３８］
動物において血栓塞栓合併症のリスクを低下させること；及び
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、第11因子の核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物の治療有効量を該動物へ投与することを含んでなる、方法。
［態様３９］
動物において凝固障害を治療すること；及び
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、第11因子の核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物の治療有効量を該動物へ投与することを含んでなる、方法。
［態様４０］
修飾オリゴヌクレオチドに対する解毒薬を投与することによって、動物において第11因子阻害を逆転させることを含んでなる、態様３９の方法。
［態様４１］
解毒薬が修飾オリゴヌクレオチドに相補的なオリゴヌクレオチドである、態様３９の方法。
［態様４２］
第7因子、第7a因子、第11因子、又は第11a因子のタンパク質より選択される群のいずれも投与することによって動物において第11因子阻害を逆転させることを含んでなる、態様４０の方法。
［態様４３］
血栓塞栓合併症のリスク状態にある動物を同定すること；及び
第11因子特異的阻害剤及び抗血小板療法薬の治療有効量をそのリスク状態の動物へ投与することを含んでなる、方法。
［態様４４］
凝固障害を有する動物を同定すること；及び
第11因子特異的阻害剤及び抗血小板療法薬の治療有効量を該動物へ投与することを含んでなる、方法。
［態様４５］
動物において血栓塞栓合併症のリスクを低下させること；及び
第11因子特異的阻害剤及び抗血小板療法薬の治療有効量を該動物へ投与することを含んでなる、方法。
［態様４６］
動物において凝固障害を治療すること；及び
第11因子特異的阻害剤及び抗血小板療法薬の治療有効量を該動物へ投与することを含んでなる、方法。
［態様４７］
抗血小板療法薬が、ADP受容体阻害剤、NSAID、ホスホジエステラーゼ阻害剤、糖タンパク質IIB/IIIA阻害剤、又はアデノシン再取込み阻害剤、又はこれらの組合せより選択される、態様４３〜４６のいずれかの方法。
［態様４８］
NSAIDが、アスピリン、ナプロキセン、又は両方の組合せである、態様47の方法。
［態様４９］
ADP受容体／P2Y12阻害剤がチエノピリジンである、態様47の方法。
［態様５０］
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基738〜762の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここで修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的である、前記化合物。
［態様５１］
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基656〜704の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここで修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的である、前記化合物。
［態様５２］
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1018〜1042の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここで修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的である、前記化合物。
［態様５３］
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1062〜1091の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここで修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的である、前記化合物。
［態様５４］
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1275〜1318の等しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここで修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的である、前記化合物。

Claims (54)

12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 223の少なくとも12の連続ヌク
レオ塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでな
る化合物。
一本鎖の修飾オリゴヌクレオチドからなる、請求項1の化合物。
修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列がSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基配列に100
％相補的である、請求項2の化合物。
少なくとも1つのヌクレオシド間連結が修飾ヌクレオシド間連結である、請求項2の化合
物。
それぞれのヌクレオシド間連結がホスホロチオエートヌクレオシド間連結である、請求
項4の化合物。
少なくとも1つのヌクレオシドが修飾糖を含む、請求項1の化合物。
少なくとも1つの修飾糖が二環糖である、請求項6の化合物。
少なくとも1つの二環糖のそれぞれが4'-（CH2）n-O-2'架橋を含み、ここでnは1又は2で
ある、請求項7の化合物。
少なくとも1つの二環糖のそれぞれが4'-CH（CH3）-O-2'架橋を含む、請求項7の化合物
。
少なくとも1つの修飾糖が2'-O-メトキシエチル基を含む、請求項6の化合物。
テトラヒドロピラン環がフラノース環に置き換わっている、少なくとも1つのテトラヒ
ドロピラン修飾ヌクレオシドを含んでなる、請求項1の化合物。
少なくとも1つのテトラヒドロピラン修飾ヌクレオシドのそれぞれが構造：
Figure 2015211685
 ［式中、Bxは、保護されていてもよい複素環式塩基部分である］を有する、請求項11の化
合物。
少なくとも1つのヌクレオシドが修飾ヌクレオ塩基を含む、請求項2の化合物。
修飾ヌクレオ塩基が5-メチルシトシンである、請求項13の化合物。
修飾オリゴヌクレオチドが：
連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
連結ヌクレオシドからなる5'ウィングセグメント；
連結ヌクレオシドからなる3'ウィングセグメントを含み、
ここでギャップセグメントは、5'ウィングセグメントと3'ウィングセグメントのすぐ隣
りでその間に位置して、そしてここでそれぞれのウィングセグメントのそれぞれのヌクレ
オシドは、修飾糖を含む、請求項1の化合物。
修飾オリゴヌクレオチドが：
10の連結デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
5の連結ヌクレオシドからなる5'ウィングセグメント；
5の連結ヌクレオシドからなる3'ウィングセグメントを含み、
ここでギャップセグメントは、5'ウィングセグメントと3'ウィングセグメントのすぐ隣
りでその間に位置して、ここでそれぞれのウィングセグメントのそれぞれのヌクレオシド
は、2'-O-メトキシエチル糖を含み；そしてここでそれぞれのヌクレオシド間連結は、ホ
スホロチオエート連結である、請求項15の化合物。
それぞれのシトシンが5-メチルシトシンである、請求項16の化合物。
修飾オリゴヌクレオチドが20の連結ヌクレオシドからなる、請求項2又は17の化合物。
血栓塞栓合併症を治療するための、請求項1〜18のいずれか1項に記載の化合物。
動物がヒトである、請求項19の化合物。
深在性静脈血栓症を予防するための、請求項20の化合物。
肺塞栓症を予防するための、請求項20のいずれか1つの化合物。
アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパリン、レピルジン、チクロピジン
、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、LOVENOX、及び第Xa因子阻害剤より選
択される群のいずれとも同時投与するための、請求項19のいずれか1つの化合物。
アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパリン、レピルジン、チクロピジン
、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、LOVENOX、及び第Xa因子阻害剤より選
択される群のいずれとも併用投与するための、請求項19のいずれか1つの化合物。
非経口投与のための、請求項23の化合物。
非経口投与のための、請求項24の化合物。
皮下又は静脈内投与のための、請求項25の化合物。
皮下又は静脈内投与のための、請求項26の化合物。
12〜30の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であっ
て、ここで修飾オリゴヌクレオチドは、第11因子の核酸に相補的である、凝固障害を治療
するための前記化合物。
血栓塞栓合併症を治療するための医薬品の製造のための、請求項1〜18のいずれか1項の
化合物の、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパリン、レピルジン、チク
ロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、及びLOVENOXより選択される
群のいずれかとの使用。
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 223の少なくとも12の連続ヌク
レオ塩基を含んでなるヌクレオ塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチド又はその塩
と、医薬的に許容される担体又は希釈剤を含んでなる組成物。
一本鎖オリゴヌクレオチドからなる、請求項31の組成物。
修飾オリゴヌクレオチドが20の連結ヌクレオシドからなる、請求項32の組成物。
血栓塞栓合併症のリスク状態にある動物を同定すること；及び
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、第11因子の核酸に相補的である修飾オリゴヌクレ
オチドを含んでなる化合物の治療有効量をそのリスク状態の動物へ投与することを含んで
なる、方法。
血栓塞栓合併症が、深在性静脈血栓症、肺塞栓症、又はその組合せである、請求項34の
方法。
凝固障害を有する動物を同定すること；及び
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、第11因子の核酸に相補的である修飾オリゴヌクレ
オチドを含んでなる化合物の治療有効量を該動物へ投与することを含んでなる、方法。
該化合物と、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、ヘパリン、レピルジン、
チクロピジン、ワルファリン、アピキサバン、リバロキサバン、LOVENOX、及び第Xa因子
阻害剤より選択される群のいずれとも同時投与することを含んでなる、請求項36の方法。
動物において血栓塞栓合併症のリスクを低下させること；及び
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、第11因子の核酸に相補的である修飾オリゴヌクレ
オチドを含んでなる化合物の治療有効量を該動物へ投与することを含んでなる、方法。
動物において凝固障害を治療すること；及び
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、第11因子の核酸に相補的である修飾オリゴヌクレ
オチドを含んでなる化合物の治療有効量を該動物へ投与することを含んでなる、方法。
修飾オリゴヌクレオチドに対する解毒薬を投与することによって、動物において第11因
子阻害を逆転させることを含んでなる、請求項39の方法。
解毒薬が修飾オリゴヌクレオチドに相補的なオリゴヌクレオチドである、請求項39の方
法。
第7因子、第7a因子、第11因子、又は第11a因子のタンパク質より選択される群のいずれ
も投与することによって動物において第11因子阻害を逆転させることを含んでなる、請求
項40の方法。
血栓塞栓合併症のリスク状態にある動物を同定すること；及び
第11因子特異的阻害剤及び抗血小板療法薬の治療有効量をそのリスク状態の動物へ投与
することを含んでなる、方法。
凝固障害を有する動物を同定すること；及び
第11因子特異的阻害剤及び抗血小板療法薬の治療有効量を該動物へ投与することを含ん
でなる、方法。
動物において血栓塞栓合併症のリスクを低下させること；及び
第11因子特異的阻害剤及び抗血小板療法薬の治療有効量を該動物へ投与することを含ん
でなる、方法。
動物において凝固障害を治療すること；及び
第11因子特異的阻害剤及び抗血小板療法薬の治療有効量を該動物へ投与することを含ん
でなる、方法。
抗血小板療法薬が、ADP受容体阻害剤、NSAID、ホスホジエステラーゼ阻害剤、糖タンパ
ク質IIB/IIIA阻害剤、又はアデノシン再取込み阻害剤、又はこれらの組合せより選択され
る、請求項43〜46のいずれかの方法。
NSAIDが、アスピリン、ナプロキセン、又は両方の組合せである、請求項47の方法。
ADP受容体／P2Y12阻害剤がチエノピリジンである、請求項47の方法。
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基738〜762の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ塩
基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここで
修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的で
ある、前記化合物。
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基656〜704の等
しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ塩
基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここで
修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的で
ある、前記化合物。
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1018〜1042の
等しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ
塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここ
で修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的
である、前記化合物。
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1062〜1091の
等しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ
塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここ
で修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的
である、前記化合物。
12〜30の連結ヌクレオシドからなり、そしてSEQ ID NO: 1のヌクレオ塩基1275〜1318の
等しい長さ部分に相補的な少なくとも8の連続ヌクレオ塩基の部分を含んでなるヌクレオ
塩基配列を含んでなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって；そしてここ
で修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、SEQ ID NO: 1に少なくとも90％相補的
である、前記化合物。
JP2015132654A 2008-10-15 2015-07-01 第１１因子発現の調節 Expired - Fee Related JP6084255B2 (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10577208P 2008-10-15 2008-10-15
US61/105,772 2008-10-15
US17446109P 2009-04-30 2009-04-30
US61/174,461 2009-04-30

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2011532267A Division JP5809058B2 (ja) 2008-10-15 2009-10-15 第１１因子発現の調節

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017009895A Division JP6397517B2 (ja) 2008-10-15 2017-01-24 第１１因子発現の調節

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2015211685A true JP2015211685A (ja) 2015-11-26
JP6084255B2 JP6084255B2 (ja) 2017-02-22

Family

ID=42107256

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2011532267A Active JP5809058B2 (ja) 2008-10-15 2009-10-15 第１１因子発現の調節
JP2015132654A Expired - Fee Related JP6084255B2 (ja) 2008-10-15 2015-07-01 第１１因子発現の調節
JP2017009895A Active JP6397517B2 (ja) 2008-10-15 2017-01-24 第１１因子発現の調節
JP2018156847A Active JP6633155B2 (ja) 2008-10-15 2018-08-24 第１１因子発現の調節

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2011532267A Active JP5809058B2 (ja) 2008-10-15 2009-10-15 第１１因子発現の調節

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017009895A Active JP6397517B2 (ja) 2008-10-15 2017-01-24 第１１因子発現の調節
JP2018156847A Active JP6633155B2 (ja) 2008-10-15 2018-08-24 第１１因子発現の調節

Country Status (23)

Country Link
US (7) US8334372B2 (ja)
EP (2) EP2379084B1 (ja)
JP (4) JP5809058B2 (ja)
KR (2) KR101773551B1 (ja)
CN (4) CN104212799B (ja)
AU (2) AU2009305636A1 (ja)
BR (1) BRPI0920263B1 (ja)
CA (2) CA2966011C (ja)
CY (1) CY1119909T1 (ja)
DK (1) DK2379084T3 (ja)
ES (1) ES2657679T3 (ja)
HR (1) HRP20171969T1 (ja)
HU (1) HUE035888T2 (ja)
IL (2) IL212267A (ja)
LT (1) LT2379084T (ja)
MX (1) MX2011004097A (ja)
NO (1) NO2379084T3 (ja)
NZ (2) NZ603603A (ja)
PL (1) PL2379084T3 (ja)
PT (1) PT2379084T (ja)
RU (2) RU2535964C2 (ja)
SI (1) SI2379084T1 (ja)
WO (1) WO2010045509A2 (ja)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2535964C2 (ru) 2008-10-15 2014-12-20 АйЭсАйЭс ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. Модуляция экспрессии фактора 11
CN102458480A (zh) * 2009-04-15 2012-05-16 Isis制药公司 因子xi对炎症反应的调节
US9150864B2 (en) * 2010-11-08 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating factor 12 expression
UA118951C2 (uk) 2011-04-21 2019-04-10 Айоніс Фармасьютікалз, Інк. Модулювання експресії вірусу гепатиту b (hbv)
WO2012145674A1 (en) * 2011-04-21 2012-10-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
WO2012170947A2 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating factor 12 expression
WO2013070771A1 (en) * 2011-11-07 2013-05-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Administration of factor xi antisense oligonucleotides
EP3971571A3 (en) 2012-05-25 2022-06-08 The University of Vermont and State Agriculture College Compositions and methods for assaying platelet reactivity and treatment selection
KR20160002977A (ko) 2013-05-01 2016-01-08 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 조성물 및 방법
RU2724527C2 (ru) 2014-05-01 2020-06-23 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы модулирования экспрессии рецептора гормона роста
US10570169B2 (en) 2014-05-22 2020-02-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
EP3177642B1 (en) 2014-08-07 2021-11-24 Novartis AG Angiopoietin-like 4 antibodies and methods of use
TW201613977A (en) 2014-08-07 2016-04-16 Novartis Ag Angiopoetin-like 4 (ANGPTL4) antibodies and methods of use
JOP20200312A1 (ar) 2015-06-26 2017-06-16 Novartis Ag الأجسام المضادة للعامل xi وطرق الاستخدام
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
WO2018067900A1 (en) 2016-10-06 2018-04-12 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method of conjugating oligomeric compounds
WO2018102397A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
CN110325550B (zh) 2016-12-23 2024-03-08 诺华股份有限公司 因子xi抗体和使用方法
KR20250107294A (ko) 2017-12-01 2025-07-11 쑤저우 리보 라이프 사이언스 컴퍼니, 리미티드 핵산, 이를 포함하는 조성물과 컨쥬게이트, 및 그의 제조 방법과 용도
JP7273417B2 (ja) 2017-12-01 2023-05-15 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物および複合体ならびに調製方法と使用
EP3719128B1 (en) 2017-12-01 2025-01-15 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Double-stranded oligonucleotide, composition and conjugate comprising double-stranded oligonucleotide, preparation method therefor and use thereof
CN118291456A (zh) 2017-12-01 2024-07-05 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
JP7261494B2 (ja) 2017-12-01 2023-04-20 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
US11633482B2 (en) 2017-12-29 2023-04-25 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Conjugates and preparation and use thereof
KR20210005100A (ko) * 2018-04-20 2021-01-13 더 유니버시티 오브 버몬트 앤드 스테이트 애그리컬쳐 칼리지 선택된 환자에서 심혈관 질환을 치료하기 위한 조성물 및 방법
BR112020020957B1 (pt) 2018-05-09 2022-05-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc Compostos oligoméricos, população e composição farmacêutica dos mesmos e seus usos
CN111655849B (zh) 2018-08-21 2024-05-10 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的药物组合物和缀合物及其用途
JP7376952B2 (ja) 2018-09-30 2023-11-09 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド ｓｉＲＮＡ複合体及びその調製方法と使用
JP7507495B2 (ja) 2018-12-28 2024-06-28 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、当該核酸を含む組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
CN113227376B (zh) * 2019-05-22 2024-04-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
US12540323B2 (en) 2019-05-22 2026-02-03 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, pharmaceutical composition, conjugate, preparation method, and use
WO2022028457A1 (zh) * 2020-08-04 2022-02-10 上海拓界生物医药科技有限公司 抑制凝血因子XI表达的siRNA、组合物及其医药用途
MX2023007257A (es) 2020-12-18 2023-07-03 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y metodos para modular el factor xii.
EP4323523A4 (en) * 2021-04-13 2025-06-11 Sirnaomics, Inc. PRODUCTS AND COMPOSITIONS
TW202340466A (zh) * 2021-12-16 2023-10-16 大陸商上海拓界生物醫藥科技有限公司 一種ｄｓｒｎａ、其製備方法及應用
TW202334425A (zh) * 2021-12-16 2023-09-01 大陸商上海拓界生物醫藥科技有限公司 一種ｄｓｒｎａ、其製備方法及應用
UY40743A (es) * 2023-05-19 2024-12-13 Shanghai Argo Biopharmaceutical Co Ltd COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA INHIBIR LA EXPRESIÓN DEL factor de coagulación XI (FXI)
WO2025045194A1 (zh) * 2023-08-31 2025-03-06 正大天晴药业集团股份有限公司 靶向凝血因子xi的双链核糖核酸
CN120712356A (zh) * 2024-01-26 2025-09-26 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种抑制f11基因表达的核酸分子
WO2025199356A1 (en) * 2024-03-22 2025-09-25 Sirius Therapeutics, Inc. Polynucleic acid molecules for inhibiting expression of fxi, pharmaceutical compositions, and uses thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007089661A2 (en) * 2006-01-31 2007-08-09 Searete Llc Power sparing synchronous apparatus
WO2007146511A2 (en) * 2006-05-05 2007-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating gene expression
WO2008066776A2 (en) * 2006-11-27 2008-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia

Family Cites Families (190)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
USRE34036E (en) 1984-06-06 1992-08-18 National Research Development Corporation Data transmission using a transparent tone-in band system
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
DE3788914T2 (de) 1986-09-08 1994-08-25 Ajinomoto Kk Verbindungen zur Spaltung von RNS an eine spezifische Position, Oligomere, verwendet bei der Herstellung dieser Verbindungen und Ausgangsprodukte für die Synthese dieser Oligomere.
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
EP0366685B1 (en) 1987-06-24 1994-10-19 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Nucleoside derivatives
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5403711A (en) 1987-11-30 1995-04-04 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved
ATE151467T1 (de) 1987-11-30 1997-04-15 Univ Iowa Res Found Durch modifikationen an der 3'-terminalen phosphodiesterbindung stabilisierte dna moleküle, ihre verwendung als nukleinsäuresonden sowie als therapeutische mittel zur hemmung der expression spezifischer zielgene
JPH03503894A (ja) 1988-03-25 1991-08-29 ユニバーシィティ　オブ　バージニア　アランミ　パテンツ　ファウンデイション オリゴヌクレオチド　ｎ‐アルキルホスホラミデート
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5194599A (en) 1988-09-23 1993-03-16 Gilead Sciences, Inc. Hydrogen phosphonodithioate compositions
US5256775A (en) 1989-06-05 1993-10-26 Gilead Sciences, Inc. Exonuclease-resistant oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5721218A (en) 1989-10-23 1998-02-24 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides with inverted polarity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
CA2071510C (en) 1989-10-24 2004-07-06 Chris A. Buhr 2' modified oligonucleotides
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US7101993B1 (en) 1990-01-11 2006-09-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines
US5623065A (en) 1990-08-13 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped 2' modified oligonucleotides
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5220007A (en) 1990-02-15 1993-06-15 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
EP0745689A3 (en) 1990-05-11 1996-12-11 Microprobe Corporation A dipstick for a nucleic acid hybridization assay
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5223618A (en) 1990-08-13 1993-06-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5614617A (en) 1990-07-27 1997-03-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5378825A (en) 1990-07-27 1995-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5386023A (en) 1990-07-27 1995-01-31 Isis Pharmaceuticals Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling
IL113519A (en) 1990-08-03 1997-11-20 Sterling Winthrop Inc Oligonucleoside sequences of from about 6 to about 200 bases having a three atom internucleoside linkage, their preparation and pharmaceutical compositions for inhibiting gene expression containing said oligonucleosides
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
WO1992005186A1 (en) 1990-09-20 1992-04-02 Gilead Sciences Modified internucleoside linkages
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
FR2676231A1 (fr) * 1991-05-07 1992-11-13 Aetsrn Concentre de facteur xi de la coagulation sanguine a haute activite specifique, approprie a usage therapeutique et son procede de preparation.
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
DE59208572D1 (de) 1991-10-17 1997-07-10 Ciba Geigy Ag Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
JP3739785B2 (ja) 1991-11-26 2006-01-25 アイシス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド 修飾されたピリミジンを含有するオリゴマーを使用する増強された三重らせんおよび二重らせんの成形
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US5700922A (en) 1991-12-24 1997-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
GB9304620D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Compounds
WO1994022864A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
WO1994022891A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
NZ278490A (en) 1993-12-09 1998-03-25 Univ Jefferson Chimeric polynucleotide with both ribo- and deoxyribonucleotides in one strand and deoxyribonucleotides in a second strand
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
AU1397895A (en) * 1993-12-22 1995-07-10 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Peptide analogs of the activated platelet binding site on factor xi
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5646269A (en) 1994-04-28 1997-07-08 Gilead Sciences, Inc. Method for oligonucleotide analog synthesis
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5652356A (en) 1995-08-17 1997-07-29 Hybridon, Inc. Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides
WO1997020563A1 (en) 1995-11-22 1997-06-12 The Johns-Hopkins University Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
DE69829760T3 (de) 1997-09-12 2016-04-14 Exiqon A/S Bi- und tri-zyklische - nukleosid, nukleotid und oligonukleotid-analoga
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
JP2002517739A (ja) 1998-06-08 2002-06-18 ユニバーシティ オブ バーモント アンド ステイト アグリカルチャー カレッジ 血液および血液製剤における凝固の抑制
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6043352A (en) 1998-08-07 2000-03-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides
JP4805461B2 (ja) 1999-03-18 2011-11-02 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 血小板接着の阻止用タンパク質
AU776362B2 (en) 1999-05-04 2004-09-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S L-ribo-LNA analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US6426220B1 (en) 2000-10-30 2002-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of calreticulin expression
WO2002043771A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Cell Works Inc. Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide
DE10111925A1 (de) * 2001-03-13 2002-10-02 Ogham Gmbh Herzchip
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
EP1499627A2 (en) 2001-07-03 2005-01-26 ISIS Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030040480A1 (en) * 2001-07-20 2003-02-27 Rasmus Rojkjaer Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and factor XI polypeptides
WO2003013423A2 (en) * 2001-08-05 2003-02-20 Gvg, Inc. Antithrombotic agent
US20040142325A1 (en) 2001-09-14 2004-07-22 Liat Mintz Methods and systems for annotating biomolecular sequences
US7176303B2 (en) 2003-11-06 2007-02-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of STAT5 expression
AU2003295387A1 (en) 2002-11-05 2004-06-03 Isis Parmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
EP1562971B1 (en) 2002-11-05 2014-02-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
AU2003295600A1 (en) 2002-11-14 2004-06-15 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
US7144999B2 (en) * 2002-11-23 2006-12-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hypoxia-inducible factor 1 alpha expression
US20040180855A1 (en) 2003-02-19 2004-09-16 Schumacher William A. Methods of treating thrombosis with reduced risk of increased bleeding times
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
ES2382807T3 (es) 2003-08-28 2012-06-13 Takeshi Imanishi Nuevos ácidos nucleicos artificiales del tipo de enlace N-O con reticulación
AU2004274021B2 (en) 2003-09-18 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
US20050181978A1 (en) 2003-11-20 2005-08-18 Rasmus Rojkjaer Therapeutic use of factor XI
ES2494940T3 (es) 2004-04-22 2014-09-16 Regado Biosciences, Inc. Moduladores de factores de coagulación mejorados
CN101052717A (zh) * 2004-05-11 2007-10-10 α基因株式会社 诱发rna干扰的多核苷酸以及使用该多核苷酸的基因表达抑制方法
US8394947B2 (en) * 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
EP2397563A3 (en) * 2004-09-17 2012-07-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced antisense oligonucleotides
US20060134663A1 (en) 2004-11-03 2006-06-22 Paul Harkin Transcriptome microarray technology and methods of using the same
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
EP1931780B1 (en) 2005-08-29 2016-01-06 Regulus Therapeutics Inc. Antisense compounds having enhanced anti-microrna activity
WO2007059966A1 (en) * 2005-11-23 2007-05-31 Georg Dewald Detection and treatment of drug associated angioedema
PT2161038E (pt) * 2006-01-26 2014-03-10 Isis Pharmaceuticals Inc Composições e suas utilizações dirigidas à huntingtina
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
ES2516815T3 (es) 2006-01-27 2014-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en la posición 6
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
US7547684B2 (en) 2006-05-11 2009-06-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5′-modified bicyclic nucleic acid analogs
US20080021999A1 (en) * 2006-07-18 2008-01-24 Aspect Software, Inc. Remote expert screen pop via data message
US20080021998A1 (en) 2006-07-20 2008-01-24 Rachel Wentink Presence-based resource locator
EP2410054B2 (en) 2006-10-18 2019-12-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds
US7521213B2 (en) 2006-12-01 2009-04-21 Quest Diagnostics Investments Incorporated Sample processing for nucleic acid amplification
US20100190837A1 (en) 2007-02-15 2010-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Substituted-2-F' Modified Nucleosides and Oligomeric Compounds Prepared Therefrom
AU2008260277C1 (en) 2007-05-30 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
EP2176280B2 (en) 2007-07-05 2015-06-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
JP5572090B2 (ja) 2007-08-15 2014-08-13 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド テトラヒドロピラン核酸類似体
WO2009067660A2 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Oregon Health & Science University Anti-factor xi monoclonal antibodies and methods of use thereof
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
CA2930393C (en) 2007-12-04 2022-11-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
WO2009100320A2 (en) 2008-02-07 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
EP2356129B1 (en) 2008-09-24 2013-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
RU2535964C2 (ru) 2008-10-15 2014-12-20 АйЭсАйЭс ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. Модуляция экспрессии фактора 11
CN102458480A (zh) 2009-04-15 2012-05-16 Isis制药公司 因子xi对炎症反应的调节
EP2462153B1 (en) 2009-08-06 2015-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
WO2011133876A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
CA2812046A1 (en) 2010-09-15 2012-03-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified irna agents
EP3467109A1 (en) 2011-02-08 2019-04-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
EP3453761A1 (en) 2011-08-29 2019-03-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
WO2013070771A1 (en) 2011-11-07 2013-05-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Administration of factor xi antisense oligonucleotides
WO2013159108A2 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
WO2014059353A2 (en) 2012-10-11 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and uses thereof
DK2920307T3 (en) 2012-11-15 2018-07-16 Roche Innovation Ct Copenhagen As ANTI-APOB, ANTISENSE CONJUGATE RELATIONSHIPS
KR20160002977A (ko) 2013-05-01 2016-01-08 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 조성물 및 방법
EP3151839A4 (en) 2014-06-06 2018-02-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for enhanced intestinal absorption of conjugated oligomeric compounds
BR112020020957B1 (pt) 2018-05-09 2022-05-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc Compostos oligoméricos, população e composição farmacêutica dos mesmos e seus usos

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007089661A2 (en) * 2006-01-31 2007-08-09 Searete Llc Power sparing synchronous apparatus
WO2007146511A2 (en) * 2006-05-05 2007-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating gene expression
WO2008066776A2 (en) * 2006-11-27 2008-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6014012714; Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｖｏｌ．１９８, 200807, ｐ．２７１-２７４ *

Also Published As

Publication number Publication date
IL244116A0 (en) 2016-04-21
KR20110081294A (ko) 2011-07-13
RU2535964C2 (ru) 2014-12-20
EP3335715A2 (en) 2018-06-20
RU2739594C2 (ru) 2020-12-28
CA2966011C (en) 2021-10-19
CA2740785A1 (en) 2010-04-22
CN102245186A (zh) 2011-11-16
US20210169921A1 (en) 2021-06-10
ES2657679T3 (es) 2018-03-06
KR101979134B1 (ko) 2019-05-15
IL212267A0 (en) 2011-06-30
US10772906B2 (en) 2020-09-15
JP6633155B2 (ja) 2020-01-22
JP2012505660A (ja) 2012-03-08
US8735370B2 (en) 2014-05-27
US11376273B2 (en) 2022-07-05
RU2011119479A (ru) 2012-11-27
HUE035888T2 (en) 2018-05-28
EP2379084A4 (en) 2012-06-06
CA2740785C (en) 2017-06-20
CN109797150A (zh) 2019-05-24
CN102245186B (zh) 2014-08-27
CN103820450A (zh) 2014-05-28
SI2379084T1 (en) 2018-04-30
AU2009305636A1 (en) 2010-04-22
RU2014134408A (ru) 2016-03-20
KR101773551B1 (ko) 2017-08-31
BRPI0920263B1 (pt) 2021-09-21
US20130274308A1 (en) 2013-10-17
US20230263822A1 (en) 2023-08-24
HRP20171969T1 (hr) 2018-04-06
US20170035798A1 (en) 2017-02-09
CY1119909T1 (el) 2018-06-27
EP2379084A2 (en) 2011-10-26
EP2379084B1 (en) 2017-11-22
EP3335715A3 (en) 2018-08-08
WO2010045509A3 (en) 2010-07-15
CA2966011A1 (en) 2010-04-22
MX2011004097A (es) 2011-07-28
JP6084255B2 (ja) 2017-02-22
DK2379084T3 (en) 2018-01-22
JP6397517B2 (ja) 2018-09-26
US20200000839A1 (en) 2020-01-02
BRPI0920263A2 (pt) 2016-07-12
US20100137414A1 (en) 2010-06-03
NZ603603A (en) 2014-06-27
PL2379084T3 (pl) 2018-04-30
US8334372B2 (en) 2012-12-18
NO2379084T3 (ja) 2018-04-21
IL212267A (en) 2016-02-29
CN104212799B (zh) 2018-11-23
US20130190384A1 (en) 2013-07-25
CN104212799A (zh) 2014-12-17
AU2017202862B2 (en) 2018-09-20
JP5809058B2 (ja) 2015-11-10
CN103820450B (zh) 2018-08-21
LT2379084T (lt) 2018-03-26
JP2018199700A (ja) 2018-12-20
IL244116B (en) 2019-03-31
AU2017202862A1 (en) 2017-05-18
NZ592203A (en) 2013-01-25
PT2379084T (pt) 2018-02-19
KR20170101324A (ko) 2017-09-05
WO2010045509A2 (en) 2010-04-22
JP2017099395A (ja) 2017-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6084255B2 (ja) 第１１因子発現の調節
US20100298417A1 (en) Modulation of factor 7 expression
US20120214862A1 (en) Modulation of factor 7 expression
US20130331434A1 (en) Methods for modulating factor 12 expression
US20110059895A1 (en) Modulation of factor 9 expression
HK1162320A (en) Modulation of factor 11 expression
HK1162320B (en) Modulation of factor 11 expression

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20160531

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20160720

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20161130

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20161226

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20170124

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6084255

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees