JP2013508279A - スピロピペリジン化合物および糖尿病治療のためのその医薬用途 - Google Patents

Abstract

式（Ｉ）の化合物：

（Ｉ）
またはその医薬的に許容可能な塩および医薬組成物ならびに糖尿病を治療するための方法。

Description

（該当なし）

糖尿病は発展途上国が直面している最も深刻な医療問題のうちの１つである。２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）のための一部の有益な市販の経口治療は、ＰＰＡＲガンマ受容体の調節を介して作用すると考えられている。

これらの薬剤の投与は、時々、低血糖症、肝臓障害、胃腸疾患、体重増加を含む、望ましくない副作用、またはＰＰＡＲガンマ活性と関連し得る他の望ましくない作用と関連している。Ｔ２Ｄを管理するためのより望ましい安全性プロファイルを与える新規の治療選択は、多くの患者における糖尿病を効果的に治療または予防することが望まれる。特に、ＰＰＡＲガンマ活性化と関連している作用を最小化または回避できる新規機構に基づいた治療法がとりわけ望まれる。

ＧＰＲ４０は、齧歯動物の膵臓ベータ細胞、インスリノーマ細胞株、およびヒト膵島において高レベルで主に発現されると報告されているＧタンパク質共役受容体である。この受容体は培地および長鎖脂肪酸によって活性化されるので、その受容体はＦＦＡＲ１（遊離脂肪酸受容体１）としても知られている。非特許文献１を参照のこと。インスリン分泌のグルコース依存性は、ＧＰＲ４０を活性化し、この受容体を、Ｔ２Ｄの治療に使用するための所望の安全性プロファイルを有する効果的な治療を開発するための優れた標的とする重要な特徴である。このような化合物は有効性を示し、インスリンおよびスルホニル尿素などの既存の治療と比べてより望ましい安全性プロファイルが特に望まれ得る。

最近公開された特許文献１（「９０８」）は概して、炭化水素スピロ基の特性を有する化合物を開示しており、Ｇタンパク質共役受容体４０（「ＧＰＲ−４０」）調節因子としての活性を有すると記載されている。しかしながら、「９０８」の開示は、ＰＰＡＲガンマに対する選択性について言及していない。加えて、「９０８」の開示の化合物は、スピロ特性においてヘテロ原子を含まない炭化水素スピロ基を必要とする化合物である。対照的に、本発明で特許請求されているスピロピペリジン化合物の多くは、検出可能なＰＰＡＲ活性を有さずにＧＰＲ４０の所望の選択的活性化を与える。

米国特許出願ＵＳ２００９／０１７０９０８Ａ１号明細書

Ｂｒｉｓｃｏｅ ＣＰら，Ｔｈｅ ｏｒｐｈａｎ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＧＰＲ４０ ｉｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂｙ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｌｏｎｇ ｃｈａｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７８：１１３０３−１１３１１，２００３

本発明の化合物はＧＰＲ−４０の有効な活性化因子である。本発明は、商業的に利用可能な治療と比べて特有の薬理学的機構を介して作用する所望の新規治療選択を提供し、さらに、ＰＰＡＲガンマと比べてＧＰＲ−４０を選択的に活性化する化合物を提供する。選択的ＧＰＲ−４０活性化因子としての本発明の化合物の薬理学的プロファイルはＴ２Ｄの治療に使用するのに特に望ましくなり得る。加えて、選択的ＧＰＲ−４０調節は、ＰＰＡＲガンマ調節と関連する作用を回避することによってＴ２Ｄの治療に使用するのに特に望ましい安全性プロファイルを提供できる。

本発明は、以下の式の化合物：

［式中、
Ｒ^１は、Ｈ、ＦおよびＣｌからなる群より選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、ＣＦ_３、ＯＣＨ_３、Ｆ、およびＣｌからなる群より選択され；
Ｒ_４およびＲ_４ａは、各々独立して、Ｈ、ＯＣＨ_３、Ｃ_１−３アルキル、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択され、ここで、Ｒ_４およびＲ_４ａからなる群より選択される少なくとも１つはＨであり；
Ｒ^５は、ＨまたはＣ≡ＣＣＨ_３であり；
Ｘは、−ＣＨ（Ｒ_３）ＣＨ_２−、−ＣＨ（Ｒ_３）＝ＣＨ−、−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２−からなる群より選択され；
Ｒ_３は、ＨおよびＣ_１−３アルキルからなる群より選択され；
Ｒ_７は、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、およびフェニルからなる群より選択される］
またはその医薬的に許容可能な塩に関する。

本発明は、以下の式の中間体化合物：

［式中、
Ｒ^１は、Ｈ、ＦおよびＣｌからなる群より選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、ＣＦ_３、ＯＣＨ_３、Ｆ、およびＣｌからなる群より選択され；
Ｒ_４およびＲ_４ａは、各々独立して、Ｈ、ＯＣＨ_３、Ｃ_１−３アルキル、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択され、ここで、Ｒ_４およびＲ_４ａからなる群より選択される少なくとも１つはＨであり；
Ｒ_５は、ＨまたはＣ≡ＣＣＨ_３であり；
Ｒ_６は、Ｃ_１−３アルキルからなる群より選択され；
Ｘは、−ＣＨ（Ｒ_３）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ−、−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２−からなる群より選択され；
Ｒ_３は、ＨおよびＣ_１−３アルキルからなる群より選択され；
Ｒ_７は、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−４アルキル、およびフェニルからなる群より選択される］
またはその塩を提供する。

式ＩＩの化合物（式中、Ｒ_６はＣ_１−Ｃ_３アルキルからなる群より選択される）は、スピロピペリジン化合物の合成における中間体として有用である。

本発明のさらなる実施形態は、薬剤の製造において使用するための本発明によって特許請求されている化合物またはその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明の別の実施形態において、その薬剤は糖尿病の治療における使用のためである。本発明のさらなる実施形態は、治療として使用するための、本明細書で特許請求されている化合物またはその医薬的に許容可能な塩の使用である。本発明のさらなる実施形態は、糖尿病の治療に使用するための本発明によって特許請求されている化合物、またはその医薬的に許容可能な塩である。さらに、本発明は、薬剤としての使用のための本発明によって特許請求されている化合物に関する。

本発明のさらなる実施形態は、哺乳動物における糖尿病を治療するための方法であって、本発明によって特許請求されている化合物またはその医薬的に許容可能な塩を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。

別の実施形態において、本発明はまた、本発明によって特許請求されている化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、および医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物に関する。さらなる実施形態は、第２の薬剤をさらに含む本発明の医薬組成物である。

本発明の化合物はＧＰＲ−４０を選択的に活性化することが好ましい。例示した化合物のＰＰＡＲ活性についての相対的ＩＣ５０は概して１０μＭより高く、そのような化合物がＰＰＡＲアイソフォームを活性化しないことを支持する。

実施例１の化合物である、（３Ｓ）−３−（４−｛［４−（１’Ｈ−スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）ベンジル］オキシ｝フェニル）ヘキサ−４−イン酸、またはその塩が好適であり得る。

実施例２４の化合物である、（３Ｓ）−３−［４−（｛４−［（１−メチル−１，２，−ジヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］ベンジル｝オキシ）フェニル］ヘキサ−４−イン酸、またはその塩が好適であり得る。

Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、式Ｉの化合物はキラル中心を有する。本発明は、ラセミ化合物および個々の異性体の両方を意図する。Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、Ｓ異性体が概して好適である。

Ｒ_５はＣ≡ＣＣＨ_３である、式Ｉの化合物が好適であり得る。Ｒ_５はＨであり、Ｒ_１はＦまたはＣｌである化合物が好適であり得る。Ｒ_５はＨであり、Ｒ_１はＦである化合物が好適であり得る。Ｒ_５はＣ≡ＣＣＨ_３であり、Ｒ_１はＨである化合物が好適であり得る。Ｒ_１はＨである化合物が好適であり得る。Ｘは−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ−、−ＣＨ（Ｒ_３）ＣＨ_２−および−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−からなる群より選択される化合物が好適である。Ｘは−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ−である化合物が好適であり得る。Ｒ_３はＨおよびＣＨ_３からなる群より選択される化合物が好適である。Ｒ_３はＨである化合物が好適であり得る。Ｒ_４ａはＨである化合物が好適である。Ｒ_２はＨ、ＯＣＨ_３、ＣＨ_３、およびＣＦ_３からなる群より選択される化合物が好適である。Ｒ_２はＨである化合物が好適であり得る。Ｒ_４はＨ、ＯＣＨ_３、ＣＨ_３、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択される化合物が好適である。Ｒ_４はＯＣＨ_３、ＣＨ_３、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択される化合物が好適であり得る。Ｒ_４はＨである化合物が好適であり得る。Ｒ_４ａはＨおよびＣｌからなる群より選択される化合物が好適であり得る。Ｒ_４およびＲ_４ａは各々Ｈである化合物が好適であり得る。Ｘは−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−である化合物が好適であり得る。Ｒ_７はＨおよびＣ_１−Ｃ_３アルキルからなる群より選択される化合物が好適である。Ｒ_７はＣＨ_３である化合物が特に好適であり得る。

Ｒ_５はＣ≡ＣＣＨ_３である式ＩＩの化合物が好適であり得る。

Ｒ_１はＦおよびＣｌからなる群より選択され、Ｒ_５はＨである式ＩＩの化合物が好適であり得る。

Ｒ_１はＨであり；Ｒ_４は各々Ｈであり；Ｒ_５はＣ≡ＣＣＨ_３であり；−ＸはＣ（Ｒ_３）＝ＣＨ−であり、Ｒ_３はＨである式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_１はＦまたはＣｌであり；Ｒ_４およびＲ_４ａは各々Ｈであり；Ｒ_５はＨであり；Ｘは−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ−である式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_１はＦまたはＣｌであり；Ｒ_４およびＲ_４ａは各々Ｈであり；Ｒ_５はＣ≡ＣＣＨ_３であり；ＸはＣ（Ｒ_３）＝ＣＨ−である式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_５がＨである場合、Ｒ_１はＦまたはＣｌであり；Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、Ｒ_１はＨ、ＦおよびＣｌから選択され；Ｒ_４およびＲ_４ａは各々Ｈであり；Ｒ_２はＣＦ_３であり；Ｘは−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ−であり、Ｒ_３はＨである式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_５がＨである場合、Ｒ_１はＦまたはＣｌであり；Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、Ｒ_１はＨ、ＦおよびＣｌから選択され；Ｒ_４およびＲ_４ａは各々Ｈであり；Ｒ_２はＣＦ_３であり；Ｘは−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ_２−である式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_５がＨである場合、Ｒ_１はＦまたはＣｌであり；Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、Ｒ_１はＨ、ＦおよびＣｌから選択され；Ｒ_２はＣＨ_３、ＣＦ_３、ＯＣＨ_３、およびＦからなる群より選択され；Ｒ_４はＨであり；Ｒ_５はＨまたはＣ≡ＣＣＨ_３であり；Ｘは−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−である式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_５がＨである場合、Ｒ_１はＦまたはＣｌであり；Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、Ｒ_１はＨ、ＦおよびＣｌから選択され；Ｒ_２はＣＨ_３、ＣＦ_３、ＯＣＨ_３、Ｆ、およびＣｌからなる群より選択され；Ｒ_４はＨ、ＯＣＨ_３、ＣＨ_３、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択され；Ｒ_５はＨまたはＣ≡ＣＣＨ_３であり；Ｒ_６はＣ_１−３アルキルであり；Ｘは−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−であり、Ｒ_７はＣ（Ｏ）ＯＣ_４アルキルである式ＩＩの中間体として有用な化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_５がＨである場合、Ｒ_１はＦまたはＣｌであり；Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、Ｒ_１はＨであり；Ｒ_２はＣＨ_３、ＣＦ_３、ＯＣＨ_３、およびＦからなる群より選択され；Ｒ_４およびＲ_４ａは各々Ｈであり；Ｒ_５はＨまたはＣ≡ＣＣＨ_３であり；Ｘは−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−である式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_５がＨである場合、Ｒ_１はＦまたはＣｌであり；Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、Ｒ_１はＨから選択され；Ｒ_２はＨであり；Ｒ_４はＯＣＨ_３、ＣＨ_３、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択され；Ｒ_５はＨまたはＣ≡ＣＣＨ_３であり；Ｘは−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−である式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_５がＨである場合、Ｒ_１はＦまたはＣｌであり；Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、Ｒ_１はＨから選択され；Ｒ_２はＨであり；Ｒ_４はＨ、ＯＣＨ_３、ＣＨ_３、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択され；Ｒ_５はＨまたはＣ≡ＣＣＨ_３であり；Ｘは−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−であり；Ｒ_７はＣＨ_３である式Ｉの化合物またはその医薬的に許容可能な塩が好適であり得る。

Ｒ_５はＣ≡ＣＣＨ_３である式Ｉの化合物のＳ異性体が概して好適である。本発明の化合物のＳ異性体は概して好適である。

本発明の化合物は好ましくは種々の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。最も好ましくは、このような組成物は経口投与用である。このような医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，２００５を参照のこと）。

「医薬的に許容可能な塩」とは、臨床および／または獣医的用途に許容可能であるとみなされる本発明の化合物の塩を指す。医薬的に許容可能な塩およびそれらを調製するための一般的方法論は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，１９７７年１月を参照のこと。

用語「医薬的に許容可能な担体」とは、組成物の他の成分と医薬的に適合する担体、希釈剤、賦形剤、および塩を意味する。

ある立体化学中心は特定されていないままであり、ある置換基は明確さのために以下のスキームにおいて取り除かれており、スキームの教示を限定することを意図するものでは決してない。さらに、個々の異性体、鏡像異性体、またはジアステレオマーは、キラルクロマトグラフィーなどの方法によって式Ｉの化合物の合成において任意の都合の良い点で分離されてもよい。加えて、以下のスキームに記載されている中間体は、多くの窒素、ヒドロキシ、および酸保護基を含む。可変保護基は、特定の反応条件および実施されるべき特定の変換に応じて各々の存在において同じであっても、または異なっていてもよい。保護および脱保護条件は、当業者に周知であり、文献に記載されている。例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，（Ｔ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｗｕｔｓ，ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．１９９１）を参照のこと。

本明細書で使用される略語は、Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．１，１９８４に従って定義される。他の略語は以下のように定義される：「Ｐｒｅｐ」は調製例を指し；「Ｅｘ」は実施例を指し；「ｍｉｎ」は分を指し；「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し；「ＡＤＤＰ」は１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジンを指し；「ｂｏｃ」または「ｔ−ｂｏｃ」はｔｅｒｔブトキシカルボニルを指し；「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し；「Ｅｔ_２Ｏ」はジエチルエーテルを指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「ＥｔＯＨ」はエチルアルコールまたはエタノールを指し；「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールを指し；「ＭｅＯＨ」はメチルアルコールまたはメタノールを指し；「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「Ｔ_Ｒ」は保持時間を指し；「ＩＣ_５０」は薬剤に関して可能な５０％の最大阻害反応を生じるその薬剤の濃度を指し；「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し；「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し；「Ｆ１２」はＨａｍ’ｓ Ｆ１２培地を指し；「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し；「ＨＥＫ」はヒト胎児腎臓細胞を指し；「ＰＰＡＲ」はペルオキシソーム増殖剤活性化受容体を指し；「ＰＰＲＥ」はペルオキシソーム増殖剤応答エレメントを指し；「ＲＰＭＩ」はＲｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅを指し；「ＴＫ」はチミジンキナーゼを指し、「ＲＦＵ」は相対蛍光ユニットを指し；「ＥＳＩ」はエレクトロスプレーイオン化を指す。

以下のスキームにおいて、他に示さない限り、全ての置換基は以前に定義された通りである。試薬および出発物質は一般に当業者に容易に利用可能である。他のものは、知られている構造的に同様の化合物の合成と同様の有機化学および複素環化学の標準的な技術ならびに任意の新規手順を含む以下の調製例および実施例に記載されている手順によって作製され得る。

式Ｉの化合物はスキームＩに示されている反応に従って調製され得る。スキームＩ（工程１ａ）は、工程２におけるエステルの還元後に置換ベンジルアルコール（５）を得るために、適切な置換ピペリジン（３）を用いる置換臭化ベンジル（１）のアルキル化を示す。化合物（５）はさらにヒドロキシルで伸長されて、式Ｉの化合物を得ることができるか、または化合物はさらに脱保護されて、式Ｉの化合物を得ることができる。「ＰＧ」は、エステルなどの酸、ならびにまたカルバメートおよびアミドなどのアミノ基のために生成された保護基である。そのような保護基は周知であり、当該技術分野において理解されている。例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，前出を参照のこと。

式（１）の化合物はアルキル化条件下で式（３）の化合物と反応する（工程１ａ）。当業者は、臭化ベンジルおよびアミンの反応から生じるアミンアルキル化についての多くの方法および試薬が存在することを認識するだろう。例えば、ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸セシウムなどの塩基の存在下で、式（１）の適切な化合物と、式（３）の適切なアミンまたはトリフルオロ酢酸塩もしくはＨＣｌ塩などのアミン塩との反応により、式（４）の化合物が得られる。式４のエステルのカルボニルは、水素化ジイソブチルアルミニウム、水素化アルミニウムリチウムまたは水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤を用いて工程２におけるように還元されて、化合物（５）を得ることができる。次いで化合物（５）はさらに、光延条件下で式（７）の化合物とアルキル化されて、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。光延条件は当該技術分野において周知であり、トリブチルホスフィン、トリフェニルホスフィン、またはトリエチルホスフィンなどのホスフィンおよびＡＤＤＰなどのアゾジカルボニルまたはジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）などのアゾジカルボキシレートを用いてアルコール（５）とフェノール（７）などの求核試薬との反応を伴う。代替として、化合物５は三臭化リンなどの適切な臭素化剤を用いて臭化ベンジル（６、工程３）に変換され得る。化合物（６）は、工程４ｂにおいて、炭酸カリウムなどの適切な塩基を用いて（７）とアルキル化され、必要な場合、脱保護されて、式Ｉの化合物を得ることができる。別の変形において、式（１）の化合物は、工程１ｂに示すように水素化ジイソブチルアルミニウムなどの還元剤を用いてブロモベンジルヒドロキシ（２）に還元され得るか、または化合物（２）は商業的に利用可能であり得、ジイソプロピルエチルアミンまたは炭酸セシウムなどの塩基の存在下で、式（３、工程１ｃ）の適切なアミンまたはアミン塩とアルキル化されて、化合物（５）を得ることができ、次いで上記のように実施されて、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

任意選択の工程において、式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容可能な塩は、標準的な条件下で適切な溶媒中での式（Ｉ）の適切な酸と、適切な医薬的に許容可能な塩基との反応によって形成され得る。加えて、そのような塩の形成はエステルの加水分解時に同時に起こり得る。そのような塩の形成は当該技術分野において周知であり、理解されている。

スキームＩＩ、工程１において、保護されたピペリジン−４−カルボキシアルデヒド（８）は、酸触媒環化において置換フェニルヒドラジン（９）と反応して、置換スピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］（１０）を得て、次いでそれをアルキル化し、脱保護し、さらにアルキル化して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。例えば、フェニルヒドラジン（９）または置換フェニルヒドラジン（９）およびトリフルオロ酢酸などの適切な酸に、窒素保護−４−ホルミル−ピペリジン（８）を加える。適切な反応時間の後、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤およびメタノールなどのアルコールを加えて、所望の置換スピロ｛インドリン−３，４’−保護ピペリジン］（１０）を得る。工程２において、（１０）のインドリン窒素は、酢酸などの適切な酸およびメタノールなどのアルコール中で、適切なアルデヒドおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウムなどの適切な還元剤を用いて還元的アルキル化によってアルキル化され得る。脱保護の後、化合物（１１）が単離され得る。代替として、インドリンアミン（１０）は、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートを用いてｂｏｃなどの保護基で保護され得るか、またはインドリンアミンは、ブロモベンゼンなどのアルキル化剤、および炭酸セシウムなどの適切な塩基を用いて標準的な条件下でアルキル化され得る。ピペリジン窒素の脱保護の後、化合物（１１）は単離され得る。ピペリジン窒素上の保護基は、水素化または酸性条件などの当該技術分野において周知の標準的条件下で除去されて、化合物（１１）を得ることができる。次いで工程３において、化合物（１１）は上記のように（１）とアルキル化されて、化合物（１２）を得ることができ、工程４において、スキームＩ（工程１ａおよび２）に以前に記載されるように還元されて、化合物（５’）を得ることができる。次いで化合物（５’）は、化合物（５）と実質的に同様のスキームＩに関して記載したように式（Ｉ）の化合物を得るように実施され得る。

スキームＩＩＩにおいて、置換安息香酸は、ＤＩＢＡＬ−Ｈなどの還元剤を用いて当該技術分野において周知の条件下で還元されて、工程１において化合物（１４）を得ることができる。工程２において、ヒドロキシル化合物（１４）は、イミダゾールおよびｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシランなどの塩基を用いてｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシランなどの保護基で保護されて、（１５）を得ることができる。化合物（１５）は、炭酸カリウムなどの塩基を用いて化合物（７）でアルキル化され、脱保護されて、工程３における化合物（１６）を得ることができる。化合物（１６）のヒドロキシルは、三臭化リンなどの臭素化条件を用いて臭化物に変換されて、工程４における化合物（１７）を得ることができる。次いで化合物（１７）は、炭酸セシウムまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基を用いて当該技術分野において周知の条件下で、化合物（３、スキームＩ）でアルキル化され、脱保護されて、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

代替として、スキームＩＶに示したように、１，４−ビス（ブロモメチル）ベンゼン（１８）は、炭酸セシウムなどの塩基を用いて化合物（７）でモノアルキル化されて、化合物（１７）を得ることができる。次いで化合物（１７）は、炭酸セシウムまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基を用いて当該技術分野において周知の条件下で、化合物（３、スキームＩ）でアルキル化され、脱保護されて、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

当該技術分野において周知である式（Ｉ）の化合物の成分を作製する種々の方法が存在する。スキームＶに示すように、一例は、例えば、クネーフェナーゲル縮合においてメルドラム酸（２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン）、（２０）を用いて置換ベンズアルデヒド（１９）のアルデヒドを保護して、工程１ａにおける（２１）を得ることである。アルデヒドは、商業的に購入できるか、または当該技術分野において周知の標準的な方法によって調製できる。ベンズアルデヒド（１９）はヒドロキシルで置換されてもよく、またはヒドロキシルは当該技術分野において周知の保護基によって保護されてもよい。次いでグリニャール反応が、１−プロピニルマグネシウムブロミドなどの典型的なグリニャール試薬を用いて達成されて、（２２、工程２ａ）を得ることができる。ピリジン−水などの塩基を用いるメルドラム酸中間体（２２）の脱保護および酸の処理により、化合物（２３、工程３ａ）、カルボン酸を得る。保護されたヒドロキシルは三臭化ホウ素を用いて脱保護され得、Ｒ_５がＣ≡ＣＣＨ_３である場合、酸は保護されて（７’’、工程４ａ）を得ることができる。キラル分離が、工程３ａなどのプロセスにおける種々の工程にて達成され得ることは留意されるべきである。次いで化合物（７’’）は、化合物（７）と実質的に同様にスキームＩにおけるように使用されて、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

代替として、ヒドロキシル保護ベンズアルデヒド（１９）は、トリエチルホスホアセテートなどのホスホニウム塩および水素化ナトリウムなどの塩基と反応し、ウィッティヒ試薬を形成して、エチル保護アクリラート（２４、工程１ｂ）を得ることができる。二重結合は、１０％ Ｐｄ／Ｃおよび水素などの典型的な触媒を用いる水素化条件下で還元され、続いて、三臭化ホウ素を用いるヒドロキシルを脱保護して、工程２ｂにおける化合物（７’）を得ることができる。次いで化合物（７’）が化合物（７）と実質的に同様にスキームＩにおいて使用されて、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

（調製例および実施例）
以下の調製例および実施例は本発明をさらに説明し、式（Ｉ）の化合物の典型的な合成を示すものである。本発明の化合物に関する化合物名は、一般に、ＩＵＰＡＣＮＡＭＥ ＡＣＤＬＡＢＳおよびＳｙｍｙｘ Ｄｒａｗ３．２によって提供される。

（調製例１）
ベンジルスピロ［インドリン−３、４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート

４９：１のトルエン：アセトニトリル（５０ｍＬ）の溶液中のフェニルヒドラジン（１．２９ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（３．０ｍＬ）の溶液を３５℃で加熱する。４−ホルミル−ピペリジン−１−カルボン酸ベンジルエステル（２．７ｇ、１０．９１ｍｍｏｌ）を４９：１のトルエン：アセトニトリルの溶液（１０ｍＬ）中で溶解させ、混合物に滴下して加える（国際公開第２００５０４６６８２号パンフレット）。混合物を一晩３５℃で攪拌する。得られた溶液を０℃に冷却し、メタノール（５ｍＬ）を加える。ＮａＢＨ_４（０．６１９ｇ、１６．３８ｍｍｏｌ）を一部ずつ溶液に加え、混合物を４５分間攪拌する。反応混合物をＮＨ_４ＯＨ水溶液（６％、２５ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固して乾燥させ、黄色の固体を得る。粗固体をＥｔＯＡｃから再結晶化し、黄色の固体（１．２５ｇ、第１の収集物）を得る。母液を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン：酢酸エチル（８：２）で溶出して、標題化合物を淡黄色の固体（１．２ｇ、第２の収集物）として（２．４ｇ、７６％）の総収率で得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３２３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

以下の化合物を、調製例１の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例７）
ベンジル１−メチルスピロ［インドリン−３、４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート
メタノール（２５ｍＬ）中のベンジルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１．１５ｇ、３．５６ｍｍｏｌ）、ホルムアルデヒド（３７％の水溶液、１．４４ｍＬ、１７．８３ｍｍｏｌ）および酢酸（１．０２ｍＬ、１７．８３ｍｍｏｌ）の０℃の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．６７ｇ、１０．６８ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を一晩、室温まで加温する。混合物のｐＨを１０％のＮａＨＣＯ_３溶液で約８まで調整し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン：酢酸エチル（８５：１５）で溶出して、オフホワイト色の固体（０．９ｇ、７５％）として標題化合物を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３３７．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

以下の化合物を、適切なアルデヒドを用いて、調製例７の方法によって記載されたように実質的に調製する。

（調製例１４）
ベンジル１−フェニルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート

１−４ジオキサン（５ｍＬ）中のベンジルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１．５ｇ、４．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、ブロモベンゼン（０．８０３ｇ、５．１１５ｍｍｏｌ）、４，５−（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（０．８０７ｇ、１．３９５ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（４．５４ｇ、１３．９５ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応混合物を１５分間、窒素ガスでパージして、酢酸パラジウム（０．０６２ｇ、０．２７９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を１００℃で５時間、攪拌し、濾過し、塩化アンモニウム溶液で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮する。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（９．０：１．０）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、標題化合物（１．６ｇ、８６．４８％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３９９．４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（調製例１５）
１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］
メタノール（５０ｍＬ）中のベンジル１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（０．８５ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（１０％、０．１５ｇ）を加え、混合物を１６時間、バルーンを用いて水素添加する。反応混合物を珪藻土で濾過し、メタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、蒸発乾固し、標題化合物（０．５ｇ、９８％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２０３．４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

以下の化合物を、調製例１５の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例２２）
７−クロロ−１−メチル−スピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］
トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）中のベンジル７−クロロ−１−メチル−スピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−カルボキシレート（１．１ｇ、２．９６ｍｍｏｌ）の溶液を３時間還流する。反応混合物を濃縮し、残渣のｐＨを、１０％のＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）で塩基性に調整し、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を１０％のＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）、およびブライン溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥剤で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固し、標題化合物を茶色の液体（０．７３ｇ、１０３．９％の粗物質）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２３７．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（調製例２３）
５−［（４−ヒドロキシフェニル）メチレン］−２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４、６−ジオン
水（２５０ｍＬ）中の４−ヒドロキシベンズアルデヒド（２０ｇ、１６３ｍｍｏｌ）の溶液に、７５℃で、水（２５０ｍＬ）中のスラリーとして、メルドラム酸（２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン）（２４．７８ｇ、１７１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を２時間、攪拌し、氷槽内で冷却し、ＥｔＯＡｃ（２×４００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を飽和ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して黄色の固体（３９ｇ、９７％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２４７．１（Ｍ−Ｈ）⁻。

以下の化合物を、調製例２３の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例２５）
５−［１−（４−ヒドロキシフェニル）ブト−２−イニル］−２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン

ＴＨＦ（０．５Ｎ、３２２ｍＬ、１６１．２８ｍｍｏｌ）中の１−プロピニル臭化マグネシウムの溶液に、窒素雰囲気下でカニューレにより、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の５−（４−ヒドロキシ−ベンジリデン）−２，２−ジメチル［１，３］ジオキサン−４，６−ジオン（２０ｇ、８０．６４ｍｍｏｌ）の溶液を加える。添加の過程の間に、反応混合物は、厚い黄色の懸濁液へと変わる。添加が完了した後、反応混合物を、５０℃で１５分間、攪拌し、ＮＨ_４Ｃｌ水溶液でクエンチし、２ＮのＨＣｌを用いてｐＨ約２に酸性化する。混合物をＥｔＯＡｃ（２×３００ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、黄色の固体（２０ｇ、８６％）を得る。生成物は粗物質で実施する。

以下の化合物を、調製例２５の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例２７）
３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イン酸
ピリジン−水（５：１、３９０ｍＬ）中の５−［１−（４−ヒドロキシフェニル）ブト−２−イニル］−２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン（２０ｇ、６９．４４ｍｍｏｌ）の溶液を、１６時間、還流で加熱し、冷却後に、５ＮのＨＣｌでｐＨ約２に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×３００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、オフホワイト色の固体（１３．５ｇ、９６％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２０３（Ｍ−Ｈ）⁻。

以下の化合物を、調製例２７の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例２９）
（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イン酸
３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イン酸の鏡像異性体を、キラルクロマトグラフィー［カラムキラルパックＩＡ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）移動相（Ａ）ｎ−ヘキサン、移動相（Ｂ）０．０１％のＴＦＡを含むイソプロピルアルコール；組成（８５：１５）、流速１．０ｍＬ／分、検出２２５ｎｍ）によって分離して、標題化合物（４．２ｇ、５０．５８％）を得る。保持時間７．９６。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２０３（Ｍ＋Ｈ）⁻。鏡像異性体の混合物を、国際公開第２００５０８６６６１号パンフレットに記載されたものと同様の方法を用いて、キラル分離により分離して、標題化合物を得る。

（調製例３０）
エチル（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イノエート
エタノール（１３５ｍＬ）中の（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イン酸（２．７ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）の０℃の溶液に、硫酸（２．７ｍＬ）を加え、混合物を４時間、還流にて加熱し、濃縮し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を飽和ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、黄色の油（２．１ｇ、６８％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），４．９（ｂｓ，１Ｈ），４．１１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｍ，１Ｈ），２．６０−２．７５（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．２１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。

以下の化合物を、調製例３０の方法によって記載したように実質的に調製する。

ａ．^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．２５（ｓ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．６５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），３．９７−４．０２（ｍ，２Ｈ），３．９（ｍ，１Ｈ），２．５９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｍ，１Ｈ），１．７（ｓ，３Ｈ），１．０９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）。
３２ｂ．メチル３−（２−フルオロ−４−ヒドロキシ−フェニル）ヘキサ−４−イノエートを、キラルＨＰＬＣ（キラルパックＩＡ、流速０．６ｍＬ／分、検出２２５ｎｍ、９０：１０のヘプタン：ＩＰＡ）で分離して、メチル３−（２−フルオロ−４−ヒドロキシ−フェニル）ヘキサ−４−イノエート、異性体−１を得る。

（調製例３３）
３−（２−フルオロ−４−ヒドロキシ−フェニル）ヘキサ−４−イン酸
３−（２−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）ヘキサ−４−イン酸（０．２５０ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）中で溶解させ、三臭化ホウ素（０．５ｍＬ、３．７ｍｍｏｌ）を−１０℃で加える。混合物を周囲温度で１時間、攪拌する。溶液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出し、乾燥剤で乾燥させ、減圧下で濃縮して、標題化合物を薄茶色の液体（０．１８０ｇ、７６％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ２１２（Ｍ−Ｈ）⁻。

（調製例３４）
エチル３−（２−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）プロパノエート
エタノール（１２０ｍＬ）中のエチル（Ｅ）−３−（２−フルオロ−４−メトキシ−フェニル）プロパ−２−イノエート（１１ｇ、４９ｍｍｏｌ）および１０％のＰｄ／Ｃ触媒（１．１ｇ）の混合物を、水素雰囲気下で一晩、バルーンで攪拌する。混合物を珪藻土で濾過し、エタノールで洗浄し、その濾液を蒸発乾固し、標題化合物（１０ｇ、９０％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．１７（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．５３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．１３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。

以下の化合物を、調製例３４の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例３６）
［４−（ブロモメチル）フェニル］メタノール
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中の４−ブロモメチル安息香酸メチルエステル（５ｇ、２１．８２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（ヘキサン中１．０Ｍ、５４．５６ｍＬ、５４．５６ｍｍｏｌ）を、−７８°Ｃにて滴下して加える。反応混合物を室温まで加温し、１６時間、攪拌する。反応混合物を酒石酸カリウムナトリウム（１０％溶液、８ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈する。合わせた有機層を水（５０ｍＬ）、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、標題化合物をオフホワイト色の固体（３．５ｇ、８１％）として得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．２３−７．２１（ｍ，２Ｈ），７．４−７．３（ｍ，２Ｈ），４．５−４．３（ｂｓ，２Ｈ），４．６８（ｓ，２Ｈ）。

以下の化合物を、調製例３６の方法によって記載したように実質的に調製する。

ａ．^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）７．２５−７．２４（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ），６．９８−６．９６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｓ，２Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ）。

（調製例３９）
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［４−（ブロモメチル）フェニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート

ＤＭＦ（５ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イノエート（０．１ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）および１，４−ビス（ブロモメチル）ベンゼン（０．２２７ｇ、０．８６１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（０．２８ｇ、０．８６１ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応混合物を２時間にわたって室温まで加温する。反応混合物を水（２５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を水（１０ｍＬ×３）および飽和ブライン溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン：酢酸エチル（９．０：１．０）で溶出して、標題化合物（０．１ｇ、５５．９％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）^＋４１５．４。

以下の化合物を、調製例３９の方法によって記載したように実質的に調製する。

ａ．^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４２−７．３６（ｍ，４Ｈ），７．１２−７．０７（ｍ，１Ｈ），６．６８−６．３（ｍ，２Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），４．１０−４．０９（ｍ，２Ｈ），２．９２−２．８８（ｍ，２Ｈ），２．６０−２．５８（ｍ，２Ｈ），１．２４−１．２１（ｍ，３Ｈ）。

（調製例４１）
エチル−４−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）ベンゾエート

エタノール（２５ｍＬ）中のスピロ−［インデン−１，４−ピペリジン］トリフルオロアセテート（４ｇ、１４ｍｍｏｌ）の溶液に、エチル４−（ブロモメチル）−ベンゾエート（２．９ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を加え、その後、ジイソプロピルエチルアミン（９．６ｍＬ、５６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を一晩、８５℃で還流する。エタノールを減圧下で取り除き、残渣をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との間に分配する。有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ヘキサン：酢酸エチル（８．０：２．０）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、標題化合物を茶色の固体（２．８ｇ、６０％）として得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）７．９４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｍ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），２．８５（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３８（ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０９（ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ），１．３１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２Ｈ）。

以下の化合物を、調製例４１の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例４８）
（４−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル）メタノール

ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のエチル−４−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１−イルメチル）ベンゾエート（２．８ｇ、８０ｍｍｏｌ）の−７８℃の溶液に、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＴＨＦ中１Ｍ、４０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を加える。混合物を２時間、−７８℃で攪拌する。反応を水（２５ｍＬ）でクエンチし、３０分間、室温で攪拌する。反応混合物を珪藻土で濾過し、ＤＣＭ（２５ｍＬ×２）で抽出する。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物を白色の固体（１．５ｇ、４６％）として得る。^１Ｈ ＮＭＲδ ７．９４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｍ，２Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３７（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ），３．４７（ｓ，２Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０６（ｔ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，２Ｈ）。

以下の化合物を、調製例４８の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例５５）
［４−（スピロ［インダン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メタノール
ＤＭＦ（１２ｍＬ）中の２，３−ジヒドロスピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］（０．４ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（１．４ｇ、４．４ｍｍｏｌ）および［４−（ブロモメチル）フェニル］メタノール（０．３６ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩、室温で攪拌する。反応混合物を冷水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮させる。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８／２の勾配）によって精製して、標題化合物（０．６ｇ、９８％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３０８．４０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（調製例５６）
１’−［［４−（ブロモメチル）フェニル］メチル］スピロ［インデン−１、４’−ピペリジン］
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の［４−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メタノール（１．５ｇ、４．９１ｍｍｏｌ）の０℃の溶液に、三臭化リン（０．６６７ｍＬ、６．８ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を０℃で１５分間、攪拌する。反応混合物を０℃にて、水（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物をオフホワイト色の固体（１．１ｇ、６１％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３６９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

以下の化合物を、調製例５６の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例６２）
［４−（ブロモメチル）−２−メトキシ−フェニル］メトキシ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン

ジクロロメタン（１５ｍＬ）中の（４−ブロモメチル−２−メトキシ−フェニル）−メタノール（１．１ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（０．８６１ｇ、５．７１ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（０．９７１ｇ、１２．９８ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応混合物を室温まで加温させて、一時間、攪拌する。反応混合物を水でクエンチして濃縮する。残渣をＤＣＭで希釈し、水（１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（１．１ｇ、６６．９％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４３−７．４１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．００−６．９８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｓ，１Ｈ），４．７３（ｓ，２Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），０．９５（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，６Ｈ）。

以下の化合物を、調製例６２の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例６４）
エチル３−［４−［［４−［（ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル）オキシメチル］−３−メトキシ−フェニル］メトキシ］−２−フルオロ−フェニル］プロパノエート

ＡＣＮ（２０ｍＬ）中の３−（２−フルオロ−４−ヒドロキシ−フェニル）−プロピオン酸エチルエステル（０．５４ｇ、３．１８８ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（１．３２ｇ、９．５６ｍｍｏｌ）および４−ブロモメチル２−メトキシ−ベンジルオキシ）−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン（１．１ｇ、３．１８８ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応混合物を２５℃で１６時間、攪拌する。反応混合物を濃縮し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（１５ｍＬ）および飽和ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物を無色のゲル（１ｇ、６６．６６％）として得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４７−７．４５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．１１−７．０７（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．００−６．９８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．６９−６．６５（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ），４．１４−４．０９（ｑ，２Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），２．９１−２．８８（ｔ，３Ｈ），２．５９−２．２６（ｔ，２Ｈ），１．２５−１．２２（ｔ，２Ｈ），０．９５（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，６Ｈ）。

以下の化合物を、調製例６４の方法によって記載したように実質的に調製する。

ａ．^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４６−７．４４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．２８−７．２５（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），７．００−６．９８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−６．８８（ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ，３Ｈ），５．０１（ｓ，２Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ），４．１２−４．０５（ｍ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．７１−２．６４（ｍ，２Ｈ），１．８１（ｓ，３Ｈ），１．２５−１．２１（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ），０．９５（ｓ，９Ｈ）。

（調製例６７）
エチル３−［２−フルオロ−４−［［４−（ヒドロキシメチル）−３−メトキシ−フェニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート

ＴＨＦ（１５ｍＬ）中の３−｛４−［４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシラニルオキシメチル）−３−メトキシ−ベンジルオキシ］−２−フルオロ−フェニル｝−プロピオン酸エチルエステル（１ｇ、２．１ｍｍｏｌ）の溶液に、テトラ−ｎ−ブチルフッ化アンモニウム（ＴＨＦ中１Ｍ、３．１５ｍＬ、３．１５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、反応混合物を、２時間、２５℃で攪拌する。反応混合物を、水でクエンチし、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、水（１５ｍＬ）およびブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（１．０ｇ、粗物質）を得る。粗生成物をさらに精製せずに用いる。

以下の化合物を、調製例６７の方法によって記載したように実質的に調製する。

ａ．^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）δ７．３７−７．３５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２５９−７．２４（ｍ，２Ｈ），６．９２−６．８９（ｄｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．７０（ｓ，２Ｈ），４．１３−４．１１（ｑ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），２．７２−２．６５（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｓ，１Ｈ），２．１８（ｓ，２Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．２７−１．２３（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ），１．０８７（ｓ，９Ｈ）。

（調製例７１）
エチル３−［４−［［４−（ブロモメチル）−３−メトキシ−フェニル］メトキシ］−２−フルオロ−フェニル］プロパノエート

ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の３−［２−フルオロ−４−（４−ヒドロキシメチル−３−メトキシ−ベンジルオキシ）−フェニル］−プロピオン酸エチルエステル（１．０ｇ、２．７６ｍｍｏｌ）の溶液に、三臭化リン（０．４ｍＬ、４．４１ｍｍｏｌ）を０℃で加え、反応混合物を０℃で１５分間、攪拌する。混合物を０℃に冷却し、水で希釈し、ジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を、飽和ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（１．１ｇ、粗物質）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）δ７．３４−７．３２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．１２−７．０８（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．９６−６．９４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），６．６７−６．６４（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），４．１２−４．０９（ｑ，２Ｈ），２．９０−２．８８（ｔ，２Ｈ），２．６０−２．５６（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），１．２５−１．２２（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ）。

以下の化合物を、調製例７１の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例７５）
４−［（ｔｅｒｔ−ブチル（ジフェニル）シリル）オキシメチル］−３−メチル−ベンズアルデヒド
テトラヒドロフラン中の（４−ブロモメチル−２−メチル−ベンジルオキシ）−ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラン（３ｇ、６．８３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、窒素雰囲気下で、−７８℃で、ｓｅｃ−ブチルリチウムを加える。反応混合物を、０℃まで加温して、３０分間攪拌する。反応混合物を−７８°Ｃまで冷却し、Ｎ−ホルミルピペリジン（１．１３ｍＬ、１０．２４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３時間、室温で攪拌する。反応混合物を０°Ｃにて水でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出する。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、標題化合物（３ｇ、４６％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ３８９．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（調製例７６）
［４−［（ｔｅｒｔ−ブチル（ジフェニル）シリル）オキシメチル］−３−メチル−フェニル］メタノール
無水ＤＣＭ中の４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−３−メチル−ベンズアルデヒド（０．１ｇ、０．２５７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、−７８°Ｃにて、水素化ジイソブチルアルミニウム（ヘキサン中１．０Ｍ、０．３ｍＬ、０．３ｍｍｏｌ）を混合するまでゆっくりと加える。添加が完了した後、反応混合物を室温まで加温して、２時間攪拌する。２Ｎの酒石酸カリウムナトリウム四水和物（１０ｍＬ）の水溶液を、反応混合物に加え、その混合物を３０分間、攪拌する。反応生成物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固して、標題化合物（０．３ｇ、３０％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳｍ／ｚ３９１．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（調製例７７）
［４−（ブロモメチル）−２−メチル−フェニル］メトキシ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラン

ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の［４−［（ｔｅｒｔ−ブチル（ジフェニル）シリル）オキシメチル］−３−メチル−フェニル］メタノール（０．３ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、三臭化リン（０．０７２ｍＬ、０．７６ｍｍｏｌ）を０°Ｃで加え、反応混合物を１時間、攪拌する。反応混合物をジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、標題化合物を淡黄色の固体（０．３ｇ、粗物質）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４３８．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（調製例７８）
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［４−［（ｔｅｒｔ−ブチル（ジフェニル）シリル）オキシメチル］−３−メチル−フェニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート

ＴＨＦ中の１，１’−（アゾジカルボニル）ジピペリジン（０．７７０ｇ、３．０７５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリブチルホスフィン（ＥｔＯＡｃ中５０％、７．１７ｍＬ、３．５８ｍｍｏｌ）を０〜５℃にて加える。反応混合物を３０分間、室温で攪拌する。［４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジフェニル−シラニルオキシメチル）−３−メチル−フェニル］−メタノール（０．８ｇ、２．０５ｍｍｏｌ）を０°Ｃにて加える。反応混合物を、３０分間攪拌し、３−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ヘキサ−４−イン酸エチルエステル（０．５２３ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温まで加温し、一晩攪拌する。ヘキサン（７５ｍＬ）を反応混合物に加え、形成された沈殿物を濾過する。濾液を減圧下で濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０〜３０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンの勾配）によって精製して、標題化合物（１．３ｇ、８３％）を得る。^１Ｈ（ｄ_６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）δ７．７０−７．６８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ），７．５３−７．５１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．４２−７．４１（ｍ，５Ｈ），７．３９−７．３５（ｍ，４Ｈ），７．２９−７．２５（ｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，２Ｈ），６．９３−６．９１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），４．７２（ｓ，２Ｈ），４．１３−４．１１（ｑ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），２．７２−２．６５（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｓ，１Ｈ），２．１８（ｓ，２Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．２７−１．２３（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ），１．０８７（ｓ，９Ｈ）。

（調製例７９）
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［４−（スピロ［インデン−１、４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート

アセトニトリル（２５ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）ヘキサ−４−イネート（０．３５０ｇ、１．５ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（０．６２１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）および１’−［４−（ブロモメチル）ベンジル］スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］（０．７７ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を１６時間、９０℃で加熱する。混合物を濃縮し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、標題化合物（０．３ｇ、３８％）を得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５２０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

以下の化合物を、調製例７９の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例８６）
エチル３−［２−フルオロ−４−［［４−（スピロ［インダン−１、４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の１’−［４−（ブロモメチル）ベンジル］−２，３−ジヒドロスピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］（０．３５ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）、エチル３−（２−フルオロ−４−ヒドロキシフェニル）プロパノエート（０．２ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）およびＫ_２ＣＯ_３（０．３２ｇ、２．３ｍｍｏｌ）の混合物を、一晩、室温で攪拌する。反応混合物を冷水で希釈し、ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブライン溶液で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮する。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ８／２の勾配）によって精製して、標題化合物をオフホワイト色の固体（０．２２ｇ、粗物質）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ５０２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（調製例８７）
メチル３−［２−フルオロ−４−［［４−（スピロ［インデン−１、４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート、異性体１

ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＡＤＤＰ（０．３０２ｇ、１．２ｍｍｏｌ）の溶液に、トリブチルホスフィン（０．２９１ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を０°Ｃで加え、１５分間、０°Ｃで攪拌する。ＴＨＦ（２ｍＬ）中の［４−（１’Ｈ−スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メタノール（０．２１９ｇ、０．９ｍｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を０℃で１５分間、攪拌する。ＴＨＦ（２ｍＬ）中の３−（２−フルオロ−４−ヒドロキシ−フェニル）−ヘキサ−４−イン酸メチルエステル（異性体−１、０．２００ｇ、０．８ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で加え、反応混合物を１６時間、室温で攪拌する。反応混合物をヘキサンで希釈し、珪藻土で濾過し、濾液を蒸発させる。粗物質を、酢酸エチルの勾配（６：４）を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物を液体（０．２２０ｇ、４２％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５２４（Ｍ＋Ｈ）^＋。

以下の化合物を、調製例８７の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例９４）
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［４−［（１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］フェニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート

ＤＭＦ（５ｍＬ）中の１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］（０．０４８６ｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）、エチル（３Ｓ）−３−（４−｛［４−（ブロモメチル）ベンジル］オキシ｝フェニル）ヘキサ−４−イノエート（０．１００ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、およびＣｓ_２ＣＯ_３（０．１５６ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１６時間、攪拌する。反応混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を水（３×２５ｍＬ）および飽和ブライン溶液（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥剤で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して、液体を得る。粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン３０％の勾配）によって精製して、標題化合物を無色の液体（０．０９５ｇ、７３．３％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５３７（Ｍ＋Ｈ）^＋。

以下の化合物を、調製例９４の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例１１０）
エチル（３Ｓ）−３−［４−［［４−（スピロ［インダン−１、４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート

アセトニトリル（２０．０ｍＬ）中の２，３−ジヒドロスピロ［インデン−１、４’−ピペリジン］（０．３７ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（１．３７ｇ、４．２１ｍｍｏｌ）を室温で加え、次いで、３−［４−（４−ブロモメチル−ベンジルオキシ）−フェニル］−ヘキサ−４−イン酸エチルエステル（０．７０ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物一晩、室温で攪拌する。反応混合物を珪藻土で濾過し、濾液を蒸発させる。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の３％のメタノールの勾配）により精製して、標題化合物を無色のゲル（０．８２ｇ、９３．７％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ５２２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。

（調製例１１１）
エチル３−［２−フルオロ−４−［［３−メトキシ−４−（スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート

ＥｔＯＨ（１５ｍＬ）中のスピロ［インデン−１、４’−ピペリジン］（０．５１５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．４ｍＬ、２．５８９ｍｍｏｌ）および３−［４−（４−ブロモメチル−２−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ）−２−フルオロ−フェニル］−プロピオン酸エチルエステル（１．１ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応混合物を８０℃で１６時間、攪拌する。混合物を濃縮し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を水（２０ｍＬ）および飽和ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮させる。粗物質を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物を無色のゲル（０．６５０ｇ、４７．７％）として得る。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．４２−７．３５（ｍ，２Ｈ），７．３１−７．２９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．２０−７．０１（ｍ，３Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），７．０１−６．９９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．６４−６．９３（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ），６．８６−６．８３（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）６．７７（ｓ，１Ｈ），５．０５（ｓ，２Ｈ），４．０３−３．９８（ｍ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．５７（ｓ，２Ｈ），２．８９−２．８６（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），２．７９−２．７６（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），２．５５−２．５３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），２．４１−２．３５（ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），２．１０−２．０５（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），１．２２−１．１７（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ）。

以下の化合物を、調製例１１１の方法によって記載したように実質的に調製する。

（調製例１１７）
３−［４−［［４−［（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］フェニル］メトキシ］−２−フルオロ−フェニル］プロパン酸

エタノール：水（３：１、４ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル１’−［［４−［［４−（３−エトキシ−３−オキソ−プロピル）−３−フルオロ−フェノキシ］メチル］フェニル］メチル］スピロ［インドリン−３、４’−ピペリジン］−１−カルボキシレート（０．３２ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ（０．１４８ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１６時間、攪拌する。反応混合物を蒸発乾固する。残渣を水（８ｍＬ）中に再び溶解させ、０℃まで冷却し、１．５ＮのＨＣｌでｐＨ約６に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を水（１５ｍＬ）および飽和ブライン溶液（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥剤で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して、標題化合物をオフホワイト色の固体（０．２２ｇ、７２．１％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５７５．６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（調製例１１８）
メチル３−［２−フルオロ−４−［［４−（スピロ［インドリン−３、４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート塩酸塩

メタノール（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルスピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１（２Ｈ），−カルボキシレート−３−｛２−フルオロ−４−［（４−メチルベンジル）オキシ］フェニル｝プロパン酸（０．１２ｇ、０．２０８ｍｍｏｌ）の溶液に、メタノール（４Ｍ、５ｍＬ）中のＨＣｌを０°Ｃで加える。反応混合物を室温まで加温し、一時間、攪拌する。反応混合物を蒸発乾固して、標題化合物を淡黄色の固体（０．０７ｇ、６４％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４８９．６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（実施例１）
（３Ｓ）−３−（４−｛［４−（１’Ｈ−スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）ベンジル］オキシ｝フェニル）ヘキサ−４−イン酸

エタノール（１２ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［［４−スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート（０．３ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、５．０Ｍの水酸化ナトリウム（０．２３１ｍＬ、１．１５６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物に、５分間、９０℃でマイクロ波を照射する。反応混合物を濃縮乾固し、水で希釈し、２ＮのＨＣｌでｐＨ約４に酸性化して、濾過により回収した沈殿物を得る。固体を水（５ｍＬ）およびヘキサン（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、標題化合物を白色の固体（０．２１０ｇ、７３％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４９２．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

この物質を、直接精製するか、または１０％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いるシリカゲルクロマトグラフィー精製のために他のロットと合わせて、標題化合物を白色の固体（０．３１ｇ）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ４９２．１（Ｍ＋Ｈ）^＋。

以下の化合物を、実施例１の方法によって記載したように実質的に調製する。

（実施例２４）
（３Ｓ）−３−［４−（｛４−［（１−メチル−１，２−ジヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］ベンジル｝オキシ）フェニル］ヘキサ−４−イン酸

エタノール：水（３：１、２ｍＬ）中のエチル（３Ｓ）−３−［４−［［４−［（１−メチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］フェニル］メトキシ］フェニル］ヘキサ−４−イノエート（０．０９ｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＯＨ（０．０４７ｇ、０．８３８ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間、攪拌する。反応混合物を蒸発乾固する。残渣を水（５ｍＬ）に再び溶解させ、Ｅｔ_２Ｏ（３×５ｍＬ）で洗浄する。水層を１．５ＮのＨＣｌでｐＨ約６に酸性化する。固体の沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させる。固体をジクロロメタン（４０ｍＬ）中に溶解させ、１０％のＮａＨＣＯ_３（１５ｍＬ）、水（１５ｍＬ）、および飽和塩化アンモニウム溶液（１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して、標題化合物をオフホワイト色の固体（０．０５ｇ、５８．２％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５０９（Ｍ＋Ｈ）^＋。

以下の化合物を、実施例２４の方法によって記載したように実質的に調製する。

（実施例３８）
３−（４−｛［４−（２，３−ジヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インデン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）ベンジル］オキシ｝−２−フルオロフェニル）プロパン酸

ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）中のエチル３−［２−フルオロ−４−［［４−（スピロ［インダン−１，４’−ピペリジン］−１’−イルメチル）フェニル］メトキシ］フェニル］プロパノエート（０．２２ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ_２Ｏ（０．２０ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物をマイクロ波オーブン内で、４５分間、８５℃で加熱する。メタノールを蒸発させ、残渣を水中に溶解させる。ｐＨを約６に調整し、固体の沈殿物を濾過し、回収し、乾燥させて、標題化合物をオフホワイト色の固体（０．１２ｇ、５５．０％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ４７４．６（Ｍ＋Ｈ）^＋。

（実施例３９）
３−［４−（｛４−［（１，５−ジメチル−１，２−ジヒドロ−１’Ｈ−スピロ［インドール−３，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］ベンジル｝オキシ）−２−フルオロフェニル］プロパン酸

ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の１，５−ジメチルスピロ［インドリン−３，４’−ピペリジン］（０．３０ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）およびエチル３−（４−｛［４−（ブロモメチル）ベンジル］オキシ｝−２−フルオロフェニル）プロパノエート（０．６０ｇ、１．５２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（０．８９ｇ、２．７６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で１２時間、攪拌し、水（１００ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ_２Ｏで抽出する。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯで乾燥させ、真空下で濃縮して、（０．２ｇ、０．３７６ｍｍｏｌ）を得る。この物質をエタノール／水（４ｍＬ／１ｍＬ）中に溶解させ、ＫＯＨ（０．０６３ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温で４時間、攪拌し、エタノールを蒸発させる。ｐＨを１ＮのＨＣｌ溶液で約５に調整し、形成された沈殿物を濾過して、標題化合物をオフホワイト色の固体（０．１３ｇ、１８．６％）として得る。ＥＳＩ／ＭＳ ｍ／ｚ ５０３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

Ｔ２Ｄの原因は、２倍のインスリン抵抗性、および循環グルコース値を低下させるための適切な量のインスリンを産生する膵臓ベータ細胞の進行性破壊であると考えられている。正常なインスリン値が、骨格筋および脂肪組織を含む、標的組織内の循環血漿グルコースを処分できない場合、インスリン抵抗は発達する。膵臓が、インスリン抵抗性に起因する過剰に高いグルコース値を補うためにより多くのインスリンを産生するので、膵臓ベータ細胞は最終的に枯渇し、さらなるインスリンが分泌に使用できなくなる。時間とともに、膵臓ベータ細胞は完全に機能しなくなり、Ｔ２Ｄを有するヒトは、１型糖尿病を有するヒトを同様になる。高レベルの循環グルコースは糖尿病の特徴であり、最終的に、心臓疾患および脳卒中、高血圧、失明、腎障害および神経障害、感染、ならびに歯周病などの重篤な合併症を引き起こし得る。従って、運動；適切な食事；経口抗糖尿病治療；および最終的にインスリンを用いてできる限り早期にＴ２Ｄを制御および治療することは重要である。本発明によって特許請求されている化合物はさらなる薬理学的治療の選択を提供する。ＧＰＲ４０を選択的に調節する化合物が特に望まれ得る。

ＧＰＲ４０：情報
Ｎａｇａｓｕｍｉによって最近報告されているインスリンＩＩプロモーターの制御下でヒトＧＰＲ４０遺伝子を過剰発現するトランスジェニックマウスを用いる研究結果は、特にインスリン抵抗性の齧歯動物モデルにおいてインビボでのＧＤＩＳおよび血漿グルコース値の調節においてＧＰＲ４０が重要な役割を果たすということをさらに支持している。Ｎａｇａｓｕｍｉ Ｋら，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＧＰＲ４０ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ β−ｃｅｌｌｓ ａｕｇｍｅｎｔｓ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ａｎｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｉｃｅ Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５８：１０６７−１０７６，２００９。これらの見解は、新規ＧＰＲ４調節化合物の開発がＴ２Ｄの治療における使用に特に望まれ得ることをさらに支持している。

カルシウム流出一次アッセイ
本明細書に例示した化合物を以下に記載するように実質的に試験し、カルシウム流出一次アッセイについて１μＭ未満のＥＣ_５０値を示す。

このアッセイを使用して、リガンドがＧＰＲ４０に結合し、活性化する場合に得られる細胞内カルシウム濃度の増加を測定することによって化合物をスクリーニングし、それにより、ＧＰＲ４０アゴニストの有効性および効果を実証する。３７℃および５％ＣＯ_２にて３：１の比で１０％ＦＢＳと８００μｇ／ｍｌのジェネテシンとを補足したＦ１２培地を含むダルベッコ改変イーグル培地に維持したヒトＧＰＲ４０ ｃＤＮＡを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞をこの研究について用いる。アゴニストアッセイを、アッセイ緩衝液（１×ＨＢＳＳ（ハンクス平衡塩類溶液）および２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）中の脂肪酸遊離ＢＳＡの存在下（０．１％）または非存在下でＣａｌｃｉｕｍ ４ Ｄｙｅアッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて実施する。蛍光測定画像解析用プレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）を用いて細胞内カルシウムの増加として受容体活性化を測定する。ベースライン上での蛍光の最大変化を使用して、アゴニスト反応を決定する。化合物のＥＣ_５０（最大反応の半分の有効濃度）値を、濃度対相対蛍光ユニット（ＲＦＵ）をプロットすることによってエクセルフィットソフトウェア（バージョン４；ＩＤＢＳ）を用いて計算する。有効性の割合を、天然のリガンドである、リノール酸と比較して、化合物によって示される最大反応に基づいて計算する。実施例１の試験化合物は、このアッセイにおいて試験した場合、９１＋／−１０％の有効性で１８６＋／−９３ｎＭのＥＣ_５０を有する。これらの結果はさらに、ＧＰＲ−４０アゴニストとしての望ましい効果および有効性を実証する。

グルコース依存性インスリン分泌（ＧＤＩＳ）アッセイ
ＧＰＲ４０の活性化は、高グルコース濃度に依存するインスリン分泌を生じることが知られているので、２つの別々のアッセイ系（インスリノーマ細胞株および初期の齧歯動物の膵島）を発展させて、上記で議論したＧＰＲ４０一次アッセイにおいて細胞内カルシウムを増加させることが知られている化合物をさらに特徴付ける。

ＧＤＩＳアッセイを、マウスインスリノーマ細胞株Ｍｉｎ６を用いて実施する。Ｍｉｎ６細胞を、３７℃＋５％ＣＯ_２にて非必須アミノ酸、１０％ＦＢＳ、５０ｍＭの２−メルカプトエタノールならびに１％ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に維持する。実験の日に、グルコースを含まない２００μｌの予熱したクレブスリンガー緩衝液で２回、細胞を洗浄する。２．５ｍＭのグルコースを含有する２００μＬの予熱したクレブスリンガー緩衝液の添加を使用して、細胞を飢餓し、その後、高濃度のグルコース（２５ｍＭ）の存在下で化合物を添加する。プレートを３７℃で２時間インキュベートする。２時間のインキュベーションの終わりに、上清をミリポアフィルタープレートに穏やかに移し、２００ｇ（重力）にて３分間回転させる。インスリンを、メルコディア（Ｍｅｒｃｏｄｉａ）インスリン測定キットを用いてアッセイする。１μＭ＋２５ｍＭのグルコースでの実施例１のＭｉｎ６細胞への添加は、２５ｍＭのグルコース単独で達成したものと比較して、インスリン分泌の統計的に有意な２倍の増加を生じた。

初期の齧歯動物の膵臓ランゲルハンス島を用いるＧＤＩＳアッセイも使用して、例示した化合物を特徴付ける。膵島を、コラゲナーゼ消化およびヒストパック（Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ）密度勾配分離により雄性ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）ラットから単離する。膵島を、ＧｌｕｔａＭＡＸｎ（安定化した、Ｌ−グルタミンのジペプチド形態（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号６１８７０−０１０））を含むＲＰＭＩ−１６４０培地中で一晩培養して、単離プロセスからの回収を容易にする。インスリン分泌を、４８ウェルプレートにおけるＥＢＳＳ（アール平衡塩溶液）緩衝液中での９０分のインキュベーションにより決定する。手短に述べると、膵島を２．８ｍＭのグルコースを含むＥＢＳＳ中で最初に３０分間プレインキュベートし、次いで１５０μｌの２．８ｍＭグルコースを含有する４８ウェルプレート（４個の膵島／ウェル）に移し、試験化合物の存在下または非存在下で２．８または１１．２ｍＭグルコースを含む１５０μｌのＥＢＳＳと９０分間インキュベートする。インキュベーションの終わりに緩衝液をウェルから取り除き、ラットインスリンＥＬＩＳＡキット（Ｍｅｒｃｏｄｉａ）を用いてインスリン値についてアッセイする。このアッセイ系において、異なる濃度での実施例１の投与により、１１．２ｍＭグルコース単独で達成されたものと比較して、インスリンの２倍〜４倍の増加が得られる。

選択的アッセイ
ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）α、δ、およびγ結合および機能的アッセイ
ＧＰＲ４０は、ＰＰＡＲγに対するリガンドによって活性化されることが知られているので、例示した化合物を、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、およびＰＰＡＲγ結合および機能的アッセイにおいて試験して、例示した化合物のＧＰＲ４０に対する選択性を決定する。本明細書に例示した化合物を、ＰＰＡＲ結合に対して以下に記載するように実質的に試験し、概して、１０μＭ濃度の試験化合物で１０００ｎＭより高い結合値を有し、それにより、ＰＰＡＲ活性に対して陰性であるとみなされる。

ＰＰＡＲα、δ、およびγ受容体に対する化合物の結合親和性を、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）技術を用いて評価する。ビオチン化オリゴヌクレオチドダイレクトリピート２（ＤＲ２）を、ケイ酸イットリウムストレプトアビジンでコーティングされたＳＰＡビーズに受容体を結合するために使用する。ＰＰＡＲα、δ、γおよびレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）αをＨＥＫ２９３細胞において過剰発現させ、特定の受容体を含有する細胞溶解物を個々のアッセイにおいて使用する。ＤＲ２を、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．８、８０ｍＭのＫＣｌ、０．５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％の３［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−プロパンスルホン酸（ＣＨＡＰＳ）、および４．４％のウシ血清を含有する結合緩衝液中で３０分間にわたってＳＰＡビーズに結合させる。細胞溶解物を、アルファおよびデルタ受容体アッセイについて、放射性標識した（約０．０３３．８μＣｉ^３Ｈ）ＰＰＡＲα／δ二重アゴニスト参照化合物、およびガンマ受容体アッセイについて、放射性標識した（約０．０３７．３μＣｉ^３Ｈ）ＰＰＡＲγアゴニスト参照化合物、１１０．３μｇのイットリウムＳＰＡストレプトアビジンでコーティングされたビーズ、０．１２６ｎＭのＨＤオリゴＤＲ２、および結合緩衝液中の０．５μｇのＲＸＲαと０．３μｇのＰＰＡＲα、０．５μｇのＲＸＲαと０．５μｇのＰＰＡＲδ、または３．０３μｇのＲＸＲαと１．２５μｇのＰＰＡＲγのいずれか、その上さらに１４％のグリセロールおよび５μｇの剪断したサケ精子ＤＮＡの存在下で１１の濃度の化合物のうちの１つを含む各ウェルにおいてインキュベートする。非特異的結合は、１０，０００ｎＭの、アルファおよびデルタ受容体アッセイについて、非標識ＰＰＡＲα／δ二重アゴニスト参照化合物、およびガンマ受容体アッセイについて、ＰＰＡＲγアゴニスト参照化合物の存在下で決定される。結合反応物（９６ウェル［Ｃｏｓｔａｒ３６３２］プレート中に１００μｌ／ウェル）を１０時間インキュベートし、Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａで壊変毎分（ｄｐｍ）をカウントする。化合物に対する受容体結合親和性（ＩＣ_５０）を、４パラメータロジスティック式を用いて１１点濃度反応曲線をフィットすることによって決定する。チェン−プルソフ（Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｓｏｆｆ）式および飽和結合によって決定されたＫｄを用いて、Ｋ_ｉをＩＣ_５０から決定する。実施例１の化合物に関して、１０μＭまでの濃度で３つのＰＰＡＲ結合アッセイのいずれにおいても結合は検出されない。従って、本明細書に記載したアッセイにより、実施例１の化合物が、望ましくないＰＰＡＲ活性を回避しながら、ＧＰＲ−４０を選択的に活性化するということが支持される。例示した化合物の相対的ＩＣ５０は概してＰＰＡＲアイソフォームに対して１０μＭより高く、これにより、その化合物が、望ましいＧＰＲ−４０活性化を与えながら、ＰＰＡＲ活性を回避するということが支持される。

Ｇａｌ４ ＰＰＡＲα、Ｇａｌ４ ＰＰＡＲδ、およびＰＰＡＲγ受容体機能的アッセイも使用して、例示した化合物の選択性をモニターする。アフリカミドリザルの腎組織由来のＣＶ１細胞を、Ｆｕｇｅｎｅを用いて種々の受容体およびレポータープラスミドでトランスフェクトする。Ｇａｌ４ ＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲδアッセイに関して、アデノウイルスの主要後期プロモーターによって駆動されるホタルルシフェラーゼ遺伝子の上流でクローニングされる、酵母転写タンパク質Ｇａｌ４反応エレメントの５つのタンデムコピーを含有するレポータープラスミドを、Ｇａｌ４ ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）、およびＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲδリガンド結合のいずれかを含有するハイブリッドタンパク質を構造的に発現するシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）により駆動されるプラスミドと一緒にトランスフェクトする。ＰＰＡＲγアッセイに関して、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターによって両方駆動される、ＰＰＡＲγおよびＲＸＲαをコードするプラスミドを、ＴＫプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼレポーターｃＤＮＡおよび受容体反応エレメント（２×ＰＰＲＥ）を含有するプラスミドと一緒にトランスフェクトする。細胞を、Ｔ２２５ｃｍ^２細胞培養フラスコ内の５％活性炭処理済（ｃｈａｒｃｏａｌ−ｓｔｒｉｐｐｅｄ）ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地中でトランスフェクトする。一晩のインキュベーション後、トランスフェクトした細胞をトリプシン処理し、不透明な９６ウェルディッシュ内の５％活性炭処理済ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ培地中に播種し（１５，０００細胞／ウェル）、４時間インキュベートし、３．２倍（ｈａｌｆ ｌｏｇ）希釈で０．１７ｎＭ〜１０μＭの試験化合物または参照化合物に曝露する。化合物との２４時間のインキュベーション後、細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性を、蛍光による受容体活性化の尺度として決定する。データを４パラメーター−フィットロジスティックモデルにフィットして、ＥＣ_５０値を決定する。最大刺激の割合を、１０μＭの適切なＰＰＡＲアゴニスト参照化合物で得た最大刺激に対して決定する。ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、またはＰＰＡＲγの機能的活性化は、特異的ＰＰＡＲ共トランスフェクション（ＣＴＦ）／上記の機能的アッセイにおいて１０μＭまでで試験した場合、実施例１の化合物では検出されない。従って、このアッセイにより、例示した化合物が、望まれるように、ＰＰＡＲアゴニスト活性を回避することが支持される。

インビボでの有効性：腹腔内グルコース負荷試験（ＩＰＧＴＴ）
例示した化合物の抗糖尿病効果を生じるインビボでＧＰＲ４０を活性化させる、すなわち、インスリンを増加させ、グルコース値を減少させる能力を試験するために、４日の腹腔内グルコース負荷試験（ｉｐＧＴＴ）研究を、各化合物を用いて完了する。

雄性Ｂａｌｂ／ｃ（アルビノマウス）マウス（８〜９週齢）を一つに収容し、通常の齧歯動物食事および水を自由に与える。動物の体重を測定し、体重によって無作為化し、毎日の体重を記録する。研究開始後、１日１回で３日間、メチルセルロースおよびｔｗｅｅｎ−８０を有する製剤を用いて動物に経口投与する。４日のＩＰＧＴＴ研究の前の夜に、動物をきれいなケージで一晩絶食させる。ＩＰＧＴＴ（４日）の朝、ＩＰＧＴＴ（グルコース２ｋｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の６０分前に、化合物またはビヒクルのみを動物に経口投与する。グルコースチャレンジ後、０、３、７、１５、３０、および６０分にて取得した尾の出血から血糖値を決定する。血漿を単離し、使用して、それぞれのインスリン値を測定する。ｔ＝０からｔ＝６０分の血糖可動域プロファイルを使用して、各処置について曲線下面積（ＡＵＣ）を積分する。グルコースの低下の割合を、ビヒクル群のＡＵＣに対して化合物のＡＵＣデータから計算する。０．０３、０．１、０．３、１．０、または３．０ｍｇ／ｋｇにて試験化合物を経口投与し、ポジティブコントロールを１０ｍｇ／ｋｇにて投与する。実施例１の化合物またはポジティブコントロールの濃度は、ＧＴＴの間、３分の時点でグルコース値を有意に低下させなかった。対照的に、グルコース値は、７分の時点で０．３、１．０、および３．０ｍｇ／ｋｇの用量の実施例１の化合物およびポジティブコントール、ならびに１５分の時点で０．１、０．３、１．０、および３．０ｍｇ／ｋｇの用量の実施例１の化合物およびポジティブコントロールで有意に低下する。実施例１の化合物およびポジティブコントロールの全ての用量は、３０および６０分の時点でグルコース値を有意に低下させた。グルコース低下についてのＡＵＣに基づいた実施例１の化合物についてのＥＤ_５０は０．０９ｍｇ／ｋｇである。この研究において、インスリン値は、ＧＰＲ４０の活性化と一致する３分の時点で１．０および３．０ｍｇ／ｋｇ用量の実施例１の化合物で有意に増加した。このアッセイの結果により、ＧＰＲ−４０の化合物の活性化が、インビボでの抗糖尿病効果を生じることが支持される。

Claims (28)

1. 以下の式の化合物：
   

   

   ［式中、
   Ｒ_１は、Ｈ、ＦおよびＣｌからなる群より選択され；
   Ｒ_２は、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、ＣＦ_３、ＯＣＨ_３、Ｆ、およびＣｌからなる群より選択され；
   Ｒ_４およびＲ_４ａは、各々独立してＨ、ＯＣＨ_３、Ｃ_１−３アルキル、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択され、Ｒ_４およびＲ_４ａからなる群より選択される少なくとも１つはＨであり；
   Ｒ_５は、ＨまたはＣ≡ＣＣＨ_３であり；
   Ｘは、−ＣＨ（Ｒ_３）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ−、−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２−からなる群より選択され；
   Ｒ_３は、ＨおよびＣ_１−３アルキルからなる群より選択され；
   Ｒ_７は、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、およびフェニルからなる群より選択される］
   またはその医薬的に許容可能な塩。
2. Ｘは、−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ−、および−ＣＨ（Ｒ_３）ＣＨ_２からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物またはその塩。
3. Ｘは、−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ−である、請求項１または２のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
4. Ｒ_３は、ＨおよびＣＨ_３からなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
5. Ｒ_３は、Ｈである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
6. Ｘは、−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−である、請求項１または２のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
7. Ｒ_７は、Ｈ、Ｃ_１−３アルキルからなる群より選択される、請求項６に記載の化合物またはその塩。
8. Ｒ_７は、ＣＨ_３である、請求項７に記載の化合物またはその塩。
9. Ｒ_４は、ＯＣＨ_３、ＣＨ_３、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
10. Ｒ_４ａは、ＨおよびＣｌからなる群より選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
11. Ｒ_４およびＲ_４ａは、各々Ｈである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
12. Ｒ_２は、Ｈ、ＯＣＨ_３、ＣＨ_３、およびＣＦ_３からなる群より選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
13. Ｒ_２は、Ｈである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
14. Ｒ_５は、Ｃ≡ＣＣＨ_３である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
15. Ｒ_１は、ＦおよびＣｌからなる群より選択され；Ｒ_５はＨである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
16. Ｒ_１は、Ｈである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
17. 前記化合物は、Ｓ異性体である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
18. 前記化合物は、医薬的に許容可能な塩である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物。
19. 医薬的に許容可能な担体および請求項１〜１７のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物またはその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
20. 別の薬剤をさらに含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
21. 哺乳動物における糖尿病を治療するための方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容可能な塩を前記哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
22. 治療として使用するための請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容可能な塩。
23. 糖尿病の治療に使用するための請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物。
24. 以下の式の化合物
    

    

    またはその医薬的に許容可能な塩。
25. 以下の式の化合物
    

    

    またはその医薬的に許容可能な塩。
26. 以下の式の中間体化合物：
    

    

    ［式中、
    Ｒ_１は、Ｈ、ＦおよびＣｌからなる群より選択され；
    Ｒ_２は、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、ＣＦ_３、ＯＣＨ_３、Ｆ、およびＣｌからなる群より選択され；
    Ｒ_４およびＲ_４ａは、各々独立してＨ、ＯＣＨ_３、Ｃ_１−３アルキル、ＣＦ_３、およびＦからなる群より選択され、Ｒ_４およびＲ_４ａからなる群より選択される少なくとも１つはＨであり；
    Ｒ_５は、ＨまたはＣ≡ＣＣＨ_３であり；
    Ｒ_６は、Ｃ_１−３アルキルからなる群より選択され；
    Ｘは、−ＣＨ（Ｒ_３）ＣＨ_２−、−Ｃ（Ｒ_３）＝ＣＨ−、−Ｎ（Ｒ_７）ＣＨ_２−および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２−からなる群より選択され；
    Ｒ_３は、ＨおよびＣ_１−３アルキルからなる群より選択され；
    Ｒ_７は、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＣ_１−４アルキル、およびフェニルからなる群より選択される］
    またはその塩。
27. Ｒ_５は、Ｃ≡ＣＣＨ_３である、請求項２６に記載の化合物またはその塩。
28. Ｒ_１は、ＦおよびＣｌからなる群より選択され；Ｒ_５はＨである、請求項２５に記載の化合物またはその塩。