ITTO960710A1

ITTO960710A1 - Utilizzo della vitamina c o di suoi derivati o analoghi per stimolare la sintesi dell'elastina cutanea.

Info

Publication number: ITTO960710A1
Application number: IT96TO000710A
Authority: IT
Inventors: Marc Dumas; Frederic Bonte; Alain Meybeck; Catherine Chaudagne
Original assignee: Lvmh Rech
Priority date: 1995-08-25
Filing date: 1996-08-20
Publication date: 1998-02-20
Also published as: GB9708362D0; NL1003883A1; CA2202629A1; JPH10509735A; ES2129013B1; DE19680859T1; GB2308811A8; US5801192A; JP4313846B2; GB2308811A; ES2129013A1; WO1996019099A2; FR2737971A1; AU5407796A; FR2737971B1; CH690489A5; BE1009858A5; IT1284758B1; NL1003883C2; WO1996019099A3

Description

DESCRIZIONE dell'invenzione industriale dal titolo: "Utilizzo della vitamina C o di suoi derivati o analoghi per stimolare la sintesi dell'elastina cutanea "

La presente invenzione si riferisce essenzialmente all'utilizzo dell'acido ascorbico, in particolare dell'acido L-ascorbico o vitamina C, o del suo isomero l'acido isoascorbico, ancora chiamato acido eritorbico, o di loro sali o esteri per stimolare la sintesi dell'elastina cutanea. Nel seguito della presente descrizione, l'insieme di questi composti è indicato per semplicità con il nome generico di "derivato ascorbico".

La vitamina C, o acido L-ascorbico, è conosciuta da lungo tempo per attività fisiologiche, quali antiscorbutica, antiossidante come descritto da DOR-VAULT, 23* edizione, pag.1983, edizioni Vigot, gennaio 1995, o nel Merck Index 1989, 11* edizione, riferimento 855.

E' d'altra parte noto dall'articolo di C.L. Phillips ed altri in J.Invest.Dermatol . 1994, 103, pagg .228-232, che l'acido ascorbico favorisce la sintesi del collagene da parte dei fibroblasti del derma umano, il collagene contribuendo essenzialmente alle qualità di resistenza della pelle nei confronti di sollecitazioni che le sono applicate.

Peraltro, è noto dall'articolo di Grégòry C.Sephel ed altri in J.Invest.Dermatol . 1986, J36_, pagg.

279-285, che la produzione di elastina da parte dei fibroblasti di donatori anziani diminuisce. E' egualmente noto che l'elasticità cutanea diminuisce in modo significativo con l'età come descritto da Takema ed altri in British Journal of Dermatology 1994, 131. pagg.641-648.

Nel quadro dell'invenzione è stato messo in evidenza, in maniera inaspettata, che questi derivati ascorbici permetto di stimolare la sintesi di elastina da parte dei fibroblasti del derma, in particolare dei fibroblasti del derma umano.

Ora, si ricorderà che nel derma le fibre elastiche formano una rete che contribuisce all'elasticità della pelle e di conseguenza alla sua tonicità ed alla sua consistenza. L'elastina è il componente maggiore di queste fibre. Essa è inizialmente sintetizzati dai fibroblasti sotto forma di un polipeptide solubile di 70 IcDa, la tropoelastina . La formazione di microfibrille si realizza a seguito di legami intramolecolari chiamati desmosine fra i residui lisina delle catene polipeptidiche. Questi legami conferiscono all'elastina una grande insolubilità .

Così, la presente invenzione ha per scopo di risolvere il nuovo problema tecnico consistente nel provvedere una soluzione che permette di migliorare l'elasticità cutanea favorendo la sintesi dell'elastina, secondo una soluzione di semplice concezione, facilmente utilizzabile su scala industriale e permettendo nello stesso tempo un utilizzo cosmetico o farmaceutico, in particolare dermatologico.

Così, secondo un primo aspetto, la presente invenzione concerne l'utilizzo dell'acido ascorbico, in particolare dell'acido L-ascorbico o vitamina C, o del suo isomero l'acido eritorbico o di loro sali o esteri, indicati con il nome generico di derivato ascorbico, come agente cosmetico destinato a stimolare la sintesi dell'elastina da parte dei fibroblasti del derma, in vista di migliorare in particolare l'elasticità cutanea, la tonicità cutanea o di favorire il rassodamento cutaneo.

Essa concerne ugualmente, secondo un secondo aspetto, l'utilizzo dell'acido ascorbico, in particolare dell'acido L- ascorbico o vitamina C, o del suo isomero l'acido eritorbico o di loro sali o esteri, indicati con il nome generico di derivato ascorbico, per la preparazione di una composizione farmaceutica, in particolare dermatologica, destinata a stimolare la sintesi dell'elastina da parte dei fibroblasti del derma, in vista di migliorare in particolare l'elasticità cutanea, la tonicità cutanea o di favorire il rassodamento cutaneo.

Ben inteso, il derivato ascorbico sopra menzionato può essere utilizzato altrettanto bene a titolo curativo o preventivo per correggere o prevenire la perdita di elasticità, di tonicità, o di consistenza cutanea, dovuta in particolare all'invecchiamento o all'esposizione a raggi ultravioletti.

Secondo un vantaggioso modo di realizzazione, il .derivato ascorbico sopra menzionato è utilizzato per via topica in una concentrazione compresa fra lo 0,001% ed il 5% in rapporto al peso totale di una composizione che lo contiene in un idoneo eccipiente, veicolo o sopporto, di preferenza cosmeticamente o farmaceuticamente, in particolare dermatologicamente, accettabile. Una concentrazione preferita è compresa fra lo 0,01 e l'1% in peso in rapporto al peso totale della composizione che lo contiene.

Secondo una variante di realizzazione particolare, il derivato ascorbico sopra menzionato è scelto dal gruppo costituito dall'acido ascorbico, l'ascorbato di sodio, l'ascorbato di magnesio, l'ascorbilfosfato di sodio, l'ascorbilfosfato di magnesio, l'acido eritorbico, l'eritorbato di sodio, l'eritorbato di magnesio e gli esteri acetici, propionici e paimitici degli acidi ascorbici ed eritorbici.

Secondo un vantaggioso modo di realizzazione dell'invenzione, il derivato ascorbico secondo l'invenzione è utilizzato in combinazione con una quantità efficace di un principio attivo che stimola la sintesi di componenti della matrice extracellulare del derma, fra i quali il collagene, in particolare il collagene I ed il collagene III, ed i glucosamminoglicani .

Si utilizza, a titolo di esempio di principio attivo che stimola la sintesi del collagene, in particolare del collagene I e del collagene III, la madecasosside, un estratto della centella asiatica, o un estratto di ginseng, in particolare un estratto contenente il ginsenoside R0, detto principio attivo essendo in una concentrazione compresa fra lo 0,01% ed il 5% in peso in rapporto al peso totale della composizione finale.

Si utilizzerà, a titolo di esempio di principio attivo stimolante la sintesi di glicosamminoglicani , un estratto vegetale quale un estratto di Filicium decipiens, in particolare un estratto di corteccia di radice di questa pianta, descritto nella domanda di brevetto francese 9507708, o un fattore di crescita, in particolare il PGDF (platlet derived growth factor) , fattore di crescita derivato di piastrine del sangue.

Secondo un altro modo vantaggioso dì realizzazione, il derivato ascorbico sopra menzionato è utilizzato in combinazione con una vitamina, in particolare la vitamina A, il suo estere paimitico, propionico o acetico, o la vitamina E ed i suoi derivati, in particolare in una concentrazione compresa fra lo 0,0001 ed il 5% in peso in rapporto al peso totale della composizione.

Secondo un terzo aspetto, la presente invenzione copre inoltre un procedimento di trattamento, cosmetico o terapeutico, della pelle, destinato a prevenire o a correggere una perdita di elasticità, di tonicità o di consistenza cutanea, caratterizzato dal fatto che esso comprende l'applicazione sulle zone della pelle da trattare di una quantità efficace di un derivato ascorbico scelto dal gruppo costituito dall'acido ascorbico, in particolare l'acido L-ascorbico o vitamina C, l'acido eritorbico, e loro salì ed esteri cosmeticamente o farmaceuticamente accettabili, per stimolare la sintesi di elastina da parte dei fibroblasti, detto derivato ascorbico essendo incorporato in un eccipiente cosmeticamente o farmaceuticamente accettabile.

Le varianti di realizzazione di questo procedimento risultano in modo egualmente chiaro dalle varianti di realizzazione dell'utilizzo sopra menzionato .

Risulta da quanto precede che i derivati ascorbici secondo l'invenzione sono preziosi per la fabbricazione di una composizione cosmetica o farmaceutica, in particolare dermatologica, ove si ricerchi un miglioramento dell'elasticità cutanea.

il tecnico del ramo comprende cosi il grande interesse dell'invenzione che favorisce la sintesi dell'elastina e la sua facilità di impiego grazie ad un'applicazione topica sulla pelle.

Secondo un quarto aspetto, la presente invenzione copre ugualmente un procedimento di preparazione di un derma artificiale ottenuto mediante coltura di fibroblasti, caratterizzato dal fatto che si utilizza, in almeno uno stadio della coltura cellulare, una quantità efficace di un derivato ascorbico, come precedentemente definito, per aumentare il tenore in elastina del derma artificiale così preparato .

Secondo una variante vantaggiosa, i fibroblasti utilizzati per la preparazione del derma artificiale sono dei fibroblasti del derma umano.

Secondo un'altra variante vantaggiosa, il derivata ascorbico è incorporato nel mezzo di coltura cellulare, di preferenza ad una concentrazione compresa fra 5 micromoli per litro e 150 micromoli per litro del mezzo, o vantaggiosamente fra 10 micromoli per litro e 50 micromoli per litro del mezzo.

Si può, per esempio, utilizzare un mezzo di coltura disponibile in commercio e generalmente utilizzato per la coltura di fibroblasti, quale il mezzo MEM, al quale si aggiungerà una concentrazione efficace di derivato ascorbico, in particolare ad esempio dell'ascorbato di sodio, in particolare una concentrazione compresa fra i valori sopra indicati.

Altri scopi, caratteristiche e vantaggi dell'invenzione risulteranno chiaramente alla luce della descrizione esplicativa che segue, fatta con riferimento agli esempi dati nel seguito semplicemente a titolo illustrativo e che non potranno pertanto in alcun modo limitare la portata dell'invenzione.

Negli esempi, tutte le percentuali sono fornite in peso, salvo indicazione contraria.

Esempio 1

Esempio di prova che dimostra la stimolazione della sintesi dell'elastina da parte dei fibroblasti cutanei umani

Materiale e procedimenti

Provenienza delle cellule:

Si utilizza in questo studio un ceppo di fibroblasti umani normali (FUN) provenienti da pelle chirurgica del viso di una donna di 50 anni. Le cellule erano state ottenute mediante il procedimento di espianto quale descritto da Dumas M. ed altri, nell'articolo avente per titolo "in vitro biosynthesis of type I and III collagens by human dermal fibroblast from donors of increasing ages" in Mech.Ageing Dev. 73. (1994), pagg .179-187.

Preparazione delle soluzioni di prodotti da saggiare:

Questi fibroblasti cutanei umani normali così ottenuti sono inseminati nei pozzi di una scatola di coltura multipozzo, in un mezzo di coltura E 199, in cui si aggiungono 2 millimoli per litro di L-glutammina .

24 ore dopo l'inseminazione, certi pozzi ricevono dell 'ascorbato di sodio a 25 o 150 micromoli per litro, o dell'ascorbilf osfato di sodio a 25 o 150 micromoli per litro.

Si utilizzano ogni volta sei pozzi per prodotto e per concentrazione, cosicché sei pozzi non ricevono alcun prodotto da saggiare per le colture di confronto .

La coltura è proseguita per 48 ore.

Dopo 48 ore di coltura come sopra indicata, si determina quantitativamente sui surnatanti della coltura l'elastina secreta mediante un procedimento ELISA derivato da quello utilizzato per la determinazione quantitativa del collagene come descritto da Dumas M. ed altri, nella pubblicazione sopra menzionata, ad eccezione del fatto che un anticorpo policlonale antielastina umana in commercio è stato utilizzato al posto dell'anticorpo policlonale anticollagene I e ili umano.

Questa determinazione quantitativa è naturalmente realizzata anche sulle colture di confronto che non ricevono prodotto da saggiare.

Una gamma a campione realizzata a partire da elastina solubile in commercio permette di convertire in nanogrammi di elastina i valori di densità ottica (DO) ottenuti a partire dai surnatanti della col tura.

Determinazione quantitativa delle proteine;

Parallelamente alla determinazione quantitativa dell'elastina, si effettua una determinazione quantitativa di proteine cellulari sulle coltura dei fibroblasti, dopo l'eliminazione del surnatante, al fine di riportare la quantità di elastina determinata quantitativamente ad una quantità fissa di proteine cellulari. La determinazione quantitativa è effettuata utilizzando il corredo BCA-1 (corredo di acido bicinconico, commercializzato da Sigma, Francia) dopo dissoluzione del tappeto cellulare da parte di soda 0,1 N.

Espressione dei risultati e statistiche:

I risultati sono espressi in nanogrammi di elastina secreta per microgrammo dì proteine cellulari. L'attività A di stimolazione, espressa in percentuale, è calcolata secondo la formula seguente:

nella quale:

q rappresenta la quantità di elastina secreta dai FUN trattati,

qo rappresenta la quantità di elastina secreta dai FUN di confronto.

Il risultati ottenuti sulle colture trattate (n=6) e di confronto (n=6) sono confrontati con l'aiuto del test t di Student per serie non accoppiate. Ogni valore di p < 0,05 indicherà che esiste una differenza significativa fra la secrezione di elastina da parte dei FUN di confronto e di quelli trattati con i prodotti dell'invenzione.

La tavola I riporta i risultati della prova con l'ascorbato di sodio, mentre la tavola il riporta i risultati con l'ascorbìlfosfato di magnesio, indicato con l'abbreviazione vcPMg, che è uno dei derivati della vitamina C cosmeticamente utilizzabile.

TAVOLA I

*σ: scarto-tipo o deviazione standard

TAVOLA II

Conclusione

Come risulta dalle tavole I e II, l'ascorbato di sodio, nonché l' ascorbilfosf ato di magnesio (VCPMg) , stimolano fortemente la sintesi dell'elastina. Questa stimolazione cresce con la concentrazione del prodotto provato.

Si osserva inoltre che, per le prove qui riportate, l'attività di stimolazione della sintesi dell'elastina è massima (+ 171%) nel caso di colture trattate con 150 μΜ di ascorbilfosfato di magnesio, il che è notevole, mentre quest'attività è ad un minimo dell'85% nel caso di colture trattate con 25 μΜ di ascorbato di sodio, il che è ugualmente eccezionale. E' così dimostrato che l'utilizzo dell'acido ascorbico o di uno dei suoi derivati, in particolare dei suoi salì o esteri, permette di stimolare la sìntesi dell'elastina da parte dei fibroblasti in maniera significativa e particolarmente inaspettata. Esempi di applicazioni

Le composizioni sono espresse nel seguito in percentuali in peso.

Esempio 2

Gel per la cura del viso:

ascorbilf osfato di magnesio 2 lecitina idrogenata 1 acido ialuronico 1 carbopol 941 1,25 acqua conservante trietanolammina q.b. 100 In applicazione locale due volte al giorno sulla parte bassa del viso e del collo, questo prodotto di cura migliora e mantiene la consistenza e la tonicità della pelle del viso e ne attenua le grinze e le rughe.

Esempio 3

Crema rassodante per il viso:

propìlenglicole 1 glìcerilstearato PEG 100 2 glìcerils tearato sodio laurilsolfato 4 glìcerilstearato 3 alcol cetilico 1 trigliceride caprilico/caprico 3 ottilstearato 2 olio di avocado 1 olio di camelia 1 palmitato di ascorbìle 0,5 palmitato di vitamina A 0,01 glicocerammidi di frumento 0,1 acido lattico 0,5 carbopol 940 0,5 ascorbilf osf ato di magnesio 1 acqua conservante profumi q.b. 100 Questa crema si applica mattino e sera e ridona l' elasticità ai viso che presenta allora una buona tonicità ed un aspetto rassodato.

Esempio 4

Latte per la cura corporea:

olio vegetale 2 trigliceride caprilico/caprico 5 acetato di vitamina Ξ 0,56 carbomer 0,5 gomma xantano 0,20 acido ialuronico 0,15 eritorbato di sodio 0,9 estratto di ginseng 0,1 estratto di centella asiatica 0,1 estratto di te verde 0,05 acqua conservante agente rinfrescante

profumo q.b. 100 Per evitare ogni rischio di degradazione dei componenti ossidabili, in particolare dell'eritorbato di sodio, questa composizione è preferibilmente fabbricata e confezionata al riparo da ogni contatto con l'ossigeno, in particolare al riparo dall'aria.

In applicazione sul busto la sera per cura di venti giorni, con massaggio per permettere ai tessuti del busto di conservare la loro elasticità.

Esempio 5

Lozione rassodante per il viso:

Questa lozione è ottenuta mediante mescolazione effettuata sul momento di 5 ml di lozione A con 100 mg di L-ascorbato di sodio.

Lozione A:

madecasosside 1 ginsenoside R0 1 soluzione acquosa aìl'1% di acido ialuronico 1 glicerolo 2 acqua conservante q.b. 100 Questa lozione rassodante può essere commercializzata, per esempio, sotto forma di un flaconcino di 8 mi contenente i 100 mg di polvere di L-ascorbato di sodio e di un'ampolla sigillata contenente 5 ml di lozione A. Al momento dell'impiego, il contenuto dell'ampolla è versato nel flaconcino ed è agitato fino a dissoluzione della polvere.

Questa preparazione effettuata sul momento, utilizzata quotidianamente, migliora l'elasticità della pelle del viso ed ha quindi un effetto rassodante.

L'invenzione copre egualmente tutti gli equivalenti tecnici dei mezzi descritti, così come le loro diverse combinazioni.

Claims

RIVENDICAZIONI 1. Utilizzo dell'acido ascorbico, in particolare dell'acido L-ascorbico o vitamina C, o del suo isomero l'acido eritorbico o di loro sali o esteri, indicati con il nome generico di derivato ascorbico, come agente cosmetico destinato a stimolare la sintesi di elastina da parte dei fibroblasti del derma, in vista di migliorare in particolare l'elasticità cutanea, la tonicità cutanea o di favorire il rassodamento cutaneo.
2. Utilizzo dell'acido ascorbico, in particolare dell'acido L-ascorbico o vitamina C o del suo isomero l'acido eritorbico o dì loro sali o esteri, indicati con il nome generico di derivato ascorbico, per la preparazione dì una composizione farmaceutica, in particolare dermatologica, destinata a stimolare la sintesi di elastina da parte dei fibroblasti del derma, in vista di migliorare in particolare l'elasticità cutanea, la tonicità cutanea o di favorire il rassodamento cutaneo.
3. utilizzo secondo le rivendicazioni 1 o 2, caratterizzato dal fatto che il derivato ascorbico sopra citato è utilizzato per via topica in una concentrazione compresa fra 0,001% e 5% in peso in rapporto al peso totale di una composizione che lo contiene in un idoneo eccipiente, veicolo o sopporto, in particolare cosmeticamente o farmaceuticamente, in particolare dermatologicamente, accettabile.
4. Utilizzo secondo la rivendicazione 3, caratterizzato dal fatto che il derivato ascorbico sopra citato è utilizzato in una concentrazione compresa fra 0,01 e 1% in peso in rapporto al peso totale di detta composizione.
5. Utilizzo secondo una delle rivendicazioni 1 a 4, caratterizzato dal fatto che il derivato ascorbico sopra citato è scelto dal gruppo costituito dall'acido ascorbico , l'ascorbato di sodio, l'ascorbato di magnesio, l'ascorbilf osfato di sodio o di magnesio, l'acido eritorbico, l'eritorbato di sodio, l'eritorbato di magnesio e gli esteri acetici, propionici e paimitici degli acidi ascorbico ed eritorbico .
6. Utilizzo secondo una delle rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che il derivato ascorbico sopra citato è utilizzato in combinazione con una quantità efficace di un principio attivo che stimola la sintesi dei componenti della matrice extracellulare del derma, fra i quali il collagene, in particolare il collagene I ed il collagene III, ed i glucosamminoglicani .
7. Utilizzo secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che il derivata ascorbico sopra citato è utilizzato in combinazione con un principio attivo che stimola la sintesi del collagene, in particolare del collagene I e del collagene III, scelto fra il gruppo costituito dal madecaosside, un estratto di centella asiatica ed un estratto di ginseng, in particolare contenente il ginsenoside R0, in una concentrazione in peso da 0,01% a 5%.
8. Utilizzo secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che il derivato ascorbico sopra citato è utilizzato in combinazione con un principio attivo che stimola la sintesi dei glucosamminoglica -ni, scelto dal gruppo costituito da un estratto di Filicium decipiens, in particolare un estratto di corteccia di radice di questa pianta ed il PDGF (platlet derived growth factor).
9. Utilizzo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che il derivato ascorbico sopra citato è utilizzato in combinazione con delle vitamine, in particolare la vitamina A, il suo estere paimitico, propionico o acetico, o la vitamina E e suoi derivati, in una concentrazione in peso da 0,0001 a 5%.
10. Procedimento di trattamento cosmetico destinato a prevenire o a correggere una perdita di elasticità, di tonicità o di consistenza cutanea, caratterizzato dal fatto che esso comprende l'applicazione sulle zone della pelle da trattare di una quantità efficace di un derivato ascorbico scelto dal gruppo costituito dall'acido ascorbico, in particolare l'acido L-ascorbico o vitamina C, l'acido eritorbico e loro sali ed esteri cosmeticamente accettabili, per stimolare la sintesi dell'elastina da parte dei fibroblasti del derma, detto derivato ascorbico essendo incorporato in un eccipiente cosmeticamente accettabile.
11. Procedimento di preparazione di un derma artificiale ottenuto mediante coltura di fibroblasti, caratterizzato dal fatto Che si utilizza in almeno uno stadio della coltura cellulare una quantità efficace di un derivato ascorbico sopra citato per aumentare il tenore in elastina del derma artificiale così preparato.
12. Procedimento secondo la rivendicazione 11, caratterizzato dal fatto che si realizza una coltura di fibroblasti di derma umano.
13. Procedimento secondo le rivendicazioni 11"o 12, caratterizzato dal fatto che il derivato ascorbico sopra citato è incorporato nel mezzo di coltura cellulare in una concentrazione compresa fra 5 e 150 μΜ/l di mezzo o, vantaggiosamente, compresa fra 10 e 50 μΜ/l di mezzo.
14. Procedimento secondo una delle rivendicazioni 11 a 13, caratterizzato dal fatto che il derivato ascorbico utilizzato è l'ascorbato di sodio.