HUP0000577A2

HUP0000577A2 - Heptapeptid oxitocin analogók, e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények,továbbá eljárás előállításukra,valamint e vegyületek alkalmazása

Info

Publication number: HUP0000577A2
Application number: HU0000577A
Authority: HU
Inventors: Carl-Johan Aurell; Robert Haigh; Per Melin; Anders Nilsson; Pierre Riviere; Jerzy Trojnar
Original assignee: Ferring B.V.
Priority date: 1996-11-26
Filing date: 1997-11-21
Publication date: 2000-11-28
Also published as: DK0938496T3; DE69722651D1; HRP970630B1; ES2203823T3; KR100463132B1; CN1238781A; EP0938496A1; MY125555A; NZ336445A; EE9900210A; SK70499A3; TR199901028T2; HUP0000577A3; DE69722651T2; LT4650B; IL129519A0; HK1022481A1; PL189292B1; CA2272990C; ATE242264T1

Abstract

A találmány szerinti oxitocinantagonista hatású heptapeptidanalógokvagy gyógyászatilag elfogadható sóik hexapeptidből származtatott (S)általános képletű csoportból - amely képletben Mpa jelentése 3-merkapto-propionsavból származtatott csoport, Ile jelentéseizoleucinból származtatott csoport, Asn jelentése aszparaginsavbólszármaztatott csoport, Abu jelentése a-amino-vajsavból származtatottcsoport, X jelentése D-aromás a- aminosav, és Y jelentése alifás a-aminosav - és az (S) általános képletű csoporthoz amidkötésselkapcsolódó, C-terminális (3-b-amino-alkoholból származtatott (Z)általános képletű csoportból - amely képletben Q jelentése (CH2)n-NH-Aáltalános képletű csoport, ahol n értéke 1-től 6-ig terjedő szám, Ajelentése hidrogénatom vagy -C(=NH)NH2 képletű csoport, és R jelentése-CH3 vagy -C2H5 képletű csoport - állnak. A találmány tárgyköréhez tartoznak még a fenti vegyületekettartalmazó gyógyászati készítmények, ezek előállítása, valamintalkalmazása. Ó

Description

Heptapeptid oxitocin analógok, e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények, továbbá eljárás előállításukra, valamint e vegyületek alkalmazá^^^^-ρ^ι p^LDÁNY

A találmány tárgya oxitocin antagonista hatású, új heptapeptid analógok (azaz olyan heptapeptidek, amelyekben az N-láncvégi csoport dezaminálva van, és a C-láncvég alkohollá van redukálva), amelyek többek között a vajúdással és menstruációs fájdalmakkal járó méhizomzat-összehúzódás csökkentése vagy meggátlása tekintetében hasznosak. A találmány e pepiid analógok előállítására, az ezeket tartalmazó gyógyászati készítményekre és e vegyületek alkalmazására is vonatkozik.

Az oxitocin peptid hormon, amely a méhizomzat összehúzódását stimulálja. Emiatt úgy vélik, hogy szerepet játszik a vajúdás és a menstruációs fájdalmak kóroktanában. Feltételezik továbbá, hogy oxitocin antagonisták hasznosak lennének ezen állapotok befolyásolásában. Gyógyászati alkalmazáshoz megfelelő hatású és szelektivitású oxitocin antagonista peptidek ismertek. Ezeket az anyagokat gyakran vizes oldatban való beadásra szánják. Az ilyen antagonisták használatra kész dózisainak előállítása megkívánja, hogy az oldatok hosszú időn keresztül stabilak legyenek, ami nem mindig teljesül. Ilyen esetekben a gyógyszert közvetlenül a használat előtt kell elkészíteni, amihez többek között alkalmazható fagyasztva szárított peptid vagy gyógyászatilag elfogadható sója. Az ilyen művelet azonban kényelmetlen és a szennyeződés veszélyével jár.

A találmány feladata ezért új oxitocin antagonisták biztosítása, amelyek vizes közegben megnövelt stabilitású - és

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 ugyanakkor a gyógyászati hatásossághoz megfelelő hatású és szelektivitású - heptapeptid analógok.

A találmány feladata továbbá ezen új heptapeptid analóg oxitocin antagonistákat tartalmazó és javított stabilitású, így tárolhatóságú gyógyászati készítmények előállítása.

A találmány feladata még a fenti heptapeptid analógok alkalmazása túlságosan nagy vagy alkalmatlan méhizomzat-összehúzódással járó állapotok kezelésére szolgáló gyógyászati készítmények előállítására.

A fentiek alapján a találmány oxitocin antagonista hatású heptapeptid analógok vagy gyógyászatilag elfogadható sóik, amelyek hexapeptidből származtatott (S) általános képletű csoportból

Mpa-X-lle-Y-Asn-Abu- (S)

I_______________________________________________________1

- amely képletben

Mpa jelentése 3-merkapto-propionsavból származtatott csoport,

He jelentése izoleucinból származtatott csoport, Asn jelentése aszparaginsavból származtatott csoport, Abu jelentése α-amino-vasjavból származtatott csoport, X jelentése D-aromás α-aminosav, és

Y jelentése alifás α-aminosav és az (S) általános képletű csoporthoz amidkötéssel kapcsolódó, C-terminális β-amino-alkoholból származtatott (Z) általános képletű csoportból

-NR-CH-CH₂OH (Z)

Q

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

- amely képletben

Q jelentése (CH₂)_n-NH-A általános képletű csoport, ahol n értéke 1 -töl 6-ig terjedő szám,

A jelentése hidrogénatom vagy -C( = NH)NH₂ képletű csoport, és

R jelentése -CH₃ vagy -C2H5 képletű csoport állnak.

Az új vegyületeket bevihetjük szilárd vagy folyékony formálásokba. Az ilyen formálások lehetnek tabletták, kapszulák, oldatok és szuszpenziók. E formálások egyéb komponensei többek között hígítók, diszpergálószerek, konzerválószerek, pufferoló anyagok, illatosító anyagok és az ozmózisnyomást szabályozó anyagok. Szilárd formálások különösen alkalmasak orális beadásra, míg oldatok leginkább (intravénás, intramuszkuláris vagy szubkután) injekcióként vagy intranazális beadásra alkalmasak. A találmány szerinti vegyületek különös előnye, hogy oldatuk megnövelt időtartamú tárolás során stabilabb, mint összehasonlítható hatásosságú ismert vegyületek oldatai.

A találmány szerinti gyógyászati készítmények hasznosak a méhösszehúzódások szabályozása szempontjából. Ilyen szabályozás szükségességét valószínűsítő két indikáció a vajúdás és a menstruációs fájdalom. A vajúdás esetén használva a gyógyászati készítményeket a vajúdás kezdetét követően beadhatjuk akut szülészeti hatóanyagként és ilyen epizódok ismétlődő fellépésének meggátlására fenntartó terápiaként.

A találmány tehát gyógyászatilag hasznos oxitocin antagonista hatású és vizes közegben megnövelt stabilitású heptapeptid analógokat tár fel.

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

A találmány szerinti heptapeptid analógok szerkezete (S) általános képletű N-terminális hexapeptid analógból származtatott csoportot és C-terminális β-amino-alkoholból származtatott (Z) általános képletű csoportot tartalmaz. Az (S) általános képletű csoport

M [ja-X-lle-Y-Asn-Ab u - (S) képletében Mpa jelentése 3-merkapto-propionsavból származtatott csoport,

Y jelentése alifás a-aminosav, és a β-amino-alkoholból származtatott (Z) általános képletű csoport

-NR-CH-CH2OH (Z)

I Q képletében

A jelentése hidrogénatom vagy -C( = NH)NH₂ képletű csoport, és

R jelentése -CH₃ vagy -C₂H₅ képletű csoport.

Aromás α-aminosav olyan α-aminosavat jelent, amely az oldalláncban aromás gyűrűrendszert tartalmaz. Ilyen rendszer lehet karbociklusos vagy heterociklusos, monociklusos vagy

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

- 5 kondenzált. Aromás α-aminosavakra többek között példa a fenil-alanin, tirozin, (O-etiI)-tirozin, triptofán, p-(2-naftil)-alanin és a fenil-glicin. Megjegyezzük, hogy a találmány szerinti vegyietekben az X helyettesítő nem természetes D-konfigurációjú.

Alifás a-aminosav olyan α-aminosavat jelent, amely az oldalláncban csak szénatomot és hidrogénatomot tartalmaz. Az ilyen oldalláncok alkil- és cikloalkilcsoportokat foglalnak magukban. E csoportok lehetnek telítetlenek, aromás csoportot azonban nem tartalmazhatnak. Ezek az oldalláncok 1-12 szénatomosak, előnyösen 3-7 szénatomosak. Az alifás a-aminosavak többek között lehetnek alanin, valin, leucin, ciklohexil-glicin és adamantil-alanin. Az Y helyettesítő természetes L-konfigurációjú.

Az (S) általános képletű, hexapeptid analógból származtatott csoport képletében az Mpa és Abu csoportokat összekötő vonalat a hagyományos értelemben használjuk. Ez a vonal a két csoport oldalláncainak végét összekapcsoló kovalens kötést jelzi. Ebben az esetben az Mpa csoport kénatomja kovalens kötéssel kapcsolódik az Abu csoport γ-szénatomjához (vagy 4-es helyzetű szénatomjához).

A (Z) általános képletű amino-alkohol-csoport szimmetriacentrumot tartalmaz, így két - (R) és (S) - epimer alakban létezhet, amelyek a vonatkozó aminosavak D és L izomerjeinek felelnek meg. A találmány a heptapeptid analógok ezen izomer alakjaira és az epimerek elegyeire egyaránt vonatkozik. Az amino-alkohol-származék előnyösen egyetlen epimer alakjában van, amely még előnyösebben S-konfigurációjú.

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

- 6 A leírásban az Mpa csoportot és az amino-alkoholból származtatott (Z) általános képletü csoportot α-aminosavak formális ekvivalenseinek tekintjük, és ennek megfelelően a találmány szerinti vegyületeket heptapeptid analógoknak nevezzük.

A találmány egyik előnyös kiviteli alakjában X jelentése D-triptofán vagy p-(2-naftil)-D-alanin aminosavból származtatott csoport.

A találmány egyik további előnyös kiviteli alakjában Y jelentése leucin, valin, izoleucin, allo-izoleucin, β,β-dietil-alanin, ciklohexil-alanin vagy ciklohexil-glicin aminosavból származtatott csoport.

A találmány egyik további előnyös kiviteli alakjában n értéke 2-től 4-ig terjedő szám.

A találmány még előnyösebb kiviteli alakjában X jelentése D-triptofán vagy β-(2-η3ίίΐΙ)-0-3ΐ3ηϊη aminosavból származtatott csoport, és Y jelentése leucin, valin, izoleucin, allo-izoleucin, β, β-d i et i I-a I s n i n, ciklohexil-alanin vagy ciklohexil-glicin aminosavból származtatott csoport.

A tolálmány egyik különösen előnyös kiviteli alakjában 3 heptapeptid analóg a következő képletű vegyületek közül van választva:

Mpa-D-T rp-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH i1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I I ch₃ ch₂ch₂nh₂

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

-7 Μ pa-D-Trp-lle-allolle-Asn-Ab u - Ν----C Η - C Η ₂ Ο Η

CH₃ ch₂ch₂ch₂nh-c = nh νη₂

Μ |pa-D-Trp-lle-Ala(3,3-dietil)-Asn-Abu - Ν----C Η - C Η ₂ Ο Η

CH₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Nal-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

J--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

M pa-D-Nal-lle-Ala(3,3-dietil)-Asn-Abu - N----C H - C Η ₂ Ο H

CH₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-lle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-Leu-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-Val-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH »

ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-Cha-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

II I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂ahol a használt rövidítések jelentése a következő: D-Trp D-triptofánból származtatott csoport, allolle allo-izoleucinból származtatott csoport,

Al a (3,3-d i et i I) (β, β-d i et i I)-a I an i n bél származtatott csoport, D-Nal β-(2-η3ίίϊΙ)-0-3ΐ3η^όΙ származtatott csoport,

Leu leucinból származtatott csoport,

Val valinból származtatott csoport, és

Cha β-ciklohexil-alaninból származtatott csoport.

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

A találmány egyik legelőnyösebb kiviteli alakjában a hep tapeptid analóg

Mpa-D-T rp-lle-allolle-Asn-Abu-N—

CH₃

-CH-CH2OH

I

CH2CH₂CH₂NH₂.

A találmány szerinti vegyületek tartalmaznak bázikus helyet (amint vagy guanidint), és így savakkal sókat képezhetnek, amely sók megtartják a szabad bázisok gyógyászati tulajdonságait. Ennek megfelelően az ilyen sók is a találmány oltalmi körébe tartoznak. Az ilyen sókra példa többek között a hidroklorid, hidrobromid, szulfát, acetát, citrát, benzoát, trifluor-acetát és metánszulfonát.

• A találmány továbbá gyógyászati készítmény, amely legalább egy fenti oxitocin antagonista hatású heptapeptid analóg gyógyászatilag hatásos mennyiségét tartalmazza. A készítmény tartalmazhat továbbá gyógyászatilag elfogadható adalékokat, amelyek lehetnek konzerválószerek, hígítók, diszpergálószerek, a nyálkahártyán keresztül történő felvételt fokozó szerek [Merkus, F. W. Η. M. és munkatársai: J. Controlled Release 24, 201-208, (1993)], (többek között: felületaktív anyagok, epesavak, folyósítószerek, foszfolipidek és ciklodextrinek), pufferolószerek és illatosító anyagok. A találmány szerinti, orális vagy parenterális beadásra szolgáló gyógyászati készítmények formálhatók szilárd anyagként (így tabletta, kapszula vagy por alakjában) vagy folyadékként (így oldatként vagy szuszpenzióként), utóbbiak magukban foglalnak krémeket és kenőcsöket is. Orális (többek között szublinguális és bukkális), intranazális, pulmonális, transzdermális, rektális, vaginális, szubkután, int

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 ramuszkuláris és intravénás beadás egyaránt lehet alkalmas beadási mód.

A találmány szerinti készítmény előnyös változata valamely fenti heptapeptid analóg steril vizes oldata, különösen intranazális beadásra vagy intravénás injekcióként alkalmas izotóniás sóoldat. Az oldat tartalmazhat pufferolószert, amelylyel az oldat pH-ját a 3,0-7,0 tartományban, különösen a 3,5-5,5 tartományban tartjuk. A pufferolószer többek között lehet foszfát/citrát pufferolószer.

A találmány szerinti gyógyászati készítmény egyik további előnyös kiviteli alakja orális beadásra szolgáló tabletta. Különösen előnyösen a tabletta olyan anyaggal van bevonva, amely alacsony pH-jú közegben, mint amely a gyomorban jelen van, lényegileg oldhatatlan, viszont a vékonybélben jellemző, a semlegeshez közeli pH-tartományban leadja a heptapeptid analógot a felszívódáshoz. Ilyen bevonatok a technika állásából ismertek (PCT/SE94/00244 és PCT/SE95/00249).

A találmány ezenkívül a fenti vegyületek alkalmazása a méhizomzat nemkívánatos összehúzódásának csökkentésére vagy meggátlására szolgáló gyógyászati készítmény előállítására. A találmány egyik előnyös kiviteli alakja szerint a fenti gyógyászati készítmény a vajúdás időszakában a méh összehúzódásának megállítására szolgál. Az 1-3 nap időtartamú kezdeti beavatkozást követően a gyógyászati kezelést folytathatjuk a vajúdás ismételt fellépésének elkerülésére mindaddig, amíg azt a kezelőorvos alkalmasnak tartja. Ily módon e megoldásnak két aspektusa van, az akut szülészeti alkalmazás és tartós gyógyászati alkalmazás.

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

A találmány egyik további előnyös kiviteli alakja a méh menstruációval kapcsolatos fájdalmas összehúzódásának csökkentése.

A heptapeptid analóg gyógyászatilag hatásos dózist jelentő mennyisége számos tényezőtől függ. A beadás módja lényeges körülmény. Az intravénás injekció valószínűleg a leghatásosabb beadás, míg az intranazális beadás hatásossága várhatóan meghaladja az orális beadásét. Ennek megfelelően a vegyület kisebb mennyisége szükséges egyetlen intravénás dózishoz, mint egyetlen intranazális dózishoz, és a vegyület még nagyobb mennyisége szükséges egyetlen orális dózishoz. A kezelőorvosnak olyan tényezőket is figyelembe kell vennie, mint a beteg életkora, testtömeg és egészségi állapota. A menstruációs fájdalmak kezelése valószínűleg kisebb mennyiségű hatóanyagot igényel, mint a vajúdás kezelése. 24-órás időtartamot tekintve egy átlagos vajúdó nő intravénás kezeléséhez szükséges egyetlen hatásos dózis 0,1-500 mg, előnyösen 1-200 mg hatóanyagot tartalmaz.

A találmány szerinti heptapeptid analógok a méhizomzat összehúzódását szelektív módon gátolják, nemkívánatos oxitocin agonista tulajdonságok nem lépnek fel. E vegyületek vizeletkiválasztást gátló, vérnyomáscsökkentő vagy vérnyomásfokozó hatást nem vagy csak kis mértékben mutatnak, ami oxitocin analógok és a rokon vazopresszin hormon lehetséges mellékhatásai. A találmány szerinti vegyületek a hatásosság tekintetében összehasonlíthatók a szerkezetileg hozzájuk legközelebb álló ismert vegyületekkel. A találmány szerinti vegyületek a W095/02609 dokumentumban ismertetett vegyüle

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 tektől a C-láncvégi csoport jellegében különböznek. Az ismert vegyületek karboxamidcsoportot (-CONH₂), míg a találmány szerinti vegyületek primer alkoholra jellemző (-CH₂OH) csoportot tartalmaznak. A találmány szerinti vegyületek stabilitása - különösen vizes közegben - meghaladja a fenti dokumentumban ismertetett vegyületek stabilitását. Ez nyilvánvalóan előnyös, ha a vegyületet vizes oldatként kell formálni, ami következésképpen hosszabb tárolhatóságot és a hűtve tárolás tekintetében kevésbé szigorú követelményeket tesz lehetővé, azonban a gyártási és formálási eljárásban is előnyös, minthogy - még szilárd készítmény esetén is - vannak olyan műveletek, ahol a vegyület oldat alakjában van.

A fentiekben hangsúlyoztuk, hogy a találmány szerinti vegyületek különösen hasznosak a méhizomzat összehúzódásának szabályozásában, szakember számára azonban nyilvánvaló, hogy oxitocin antagonisták egyéb terápiás használata is lehetséges. így az oxitocin hatásának egy másik célpontja az emlő, ahol elősegíti tej kiválasztását. A találmány szerinti vegyületek ezért használhatók a nem kielégítő tejkiválasztás szabályozására. E vegyületek használhatók továbbá bizonyos tumorok, különösen emlőrák és primer emlőrákból származó másodlagos áttételek kezelésére. További gyógyászati terület lehet a prosztatatúltengés kezelése. Azt is feltételezték, hogy az oxitocin szerepet játszik a sárgatest fejlődésében és a közösülést követően elősegíti az ondó szállítását. Ebből következően a találmány szerinti vegyületek hasznosak lehetnek fogamzásgátló vagy termékenységet szabályozó szerként. Az oxitocin további perifériális célpontja az immunrendszer. Oxi

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 tocin antagonisták ezért potenciálisan hasznos immunszabályozó és gyulladásgátló szerek. Oxitocin az agyban is jelen van, emiatt feltételezték, hogy szerepet játszik számos állapot, így pszichés eredetű merevedési zavarok, skizofrénia és alkohol által kiváltott neuropszichológiai fogyatékosságok kóroktanában. Bizonyos egyedek esetében igazolták, hogy hatást gyakorol a komplex szociális viselkedésre. Ennek megfelelően a találmány szerinti vegyületek hasznáhatók többek között pszichózisos állapotok kezelésére vagy az észlelést fokozó hatóanyagként. A találmány szerinti vegyületek alkalmazása valamennyi ilyen terápiás helyzetben a találmány oltalmi körébe tartozik.

A következőkben a találmányt általánosságban és példákon keresztül ismertetjük. Megjegyezzük, hogy a leírás nem korlátozó jellegű, és a szakember számára kézenfekvő további változatok is a találmány oltalmi körébe tartoznak.

A találmány szerinti vegyületek általános előállítási módszerei

A találmány szerinti vegyületek előállításához szükséges kémiai átalakítások szakember számára ismertek. E vegyületek előállítására használhatjuk a peptidkémiában szokásos módszerek közül mind az oldatfázisban szokásos eljárásokat [Law, Η. B. és Du Vigneaud, V.: J. Am. Chem. Soc. 82, 4579-4581 (1960); ZhuZe, A. L. és munkatársai: Coll. Czech. Chem. Comm. 29, 2648-2662, (1964); és Larsson L.-E. és munkatársai: J. Med. Chem. 21, 352-356, (1978)], mind a szilárd fázisú eljárásokat [Merrifield, R. B.: J. Am. Chem. Soc. 85, 2149,

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 (1963); Merrifield, R. B.: Biochemistry 3, 1385, (1964); és König, W. és Geiger, R.: Chem. Ber. 103, 788, (1970)].

Az általunk használt eljárásokat az alábbiakban tárgyaljuk és a példákban részletesen szemléltetjük. A peptidkémia gyakorlatában jártas szakembernek nyilvánvaló, hogy bizonyos átalakítások sorrendje variálható. E nyilvánvaló variációk is a találmány oltalmi körébe tartoznak.

A kiindulási anyag leggyakrabban (1) általános képletű védett N-alkil-aminosav, amely képletben R jelentése és n értéke a fenti, P¹ jelentése nitrogén-védöcsoport.

P² (CH₂)_n—N—P³I (1)

P¹—N—CH—CO₂H

R

P¹ különösen előnyös jelentése 9-fluorenil-metil-oxi-karbonil-csoport (Fmoc).

Ha a célvegyületben A jelentése hidrogénatom, akkor P²jelentése P¹ jelentésétől eltérő nitrogén-védőcsoport (így benzil-oxi-karbonil-csoport), és P³ jelentése hidrogénatom vagy megegyezik P² jelentésével, vagy P² és P³ együtt két vegyértékű nitrogén-védőcsoportot (így ftaloilcsoportot) alkotnak.

Ha A jelentése -C( = NH)NH₂ képletű csoport, akkor P² jelentése vagy hidrogénatom vagy a fentiek szerinti védőcsoport, és P³ jelentése -C( = NP⁴)NH₂ általános képletű csoport, ahol P⁴jelentése védőcsoport, amely előnyösen megegyezik P² jelentésével. Szakember számára nyilvánvaló, hogy e védett guanidinek tautomerek és pozicionális izomerek alakjában lé

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 tezhetnek. A leírás szempontjából a (2^B), (2^C) és (2^D) általános képletű izomerek a (2^A) általános képletű szerkezet [—(CH)_n-N(P²)P³] ekvivalenseinek tekinthetők.

P —(CH₂)_n—N-	N—P N—H II II C NH₂ — (CH₂)_n—N—C—NH— P (2^A) (2^B)
H	N—P NH—P II I

—(CH₂)_n—N—C—NH—P — (CH₂)_n—N=C—NH—P

(2^C) (2^D)

Ha az (1) általános képletű védett N-alkil-aminosavak kereskedelmi forgalomban nem kaphatók, előállíthatok a szakirodalomban ismertetett eljárásokkal vagy azok analógiájára.

Feltételezve, hogy szilárd fázisú eljárást használunk, az (1) általános képletű aminosavat alkalmas gyantához kapcsolva első köztitermékként (3) általános képletű vegyületet kapunk,

P²I (CH₂)_n—N—P³I (3)

P¹—N—CH—CO₂—Rés

R ahol Rés polimer gyantát jelent.

P¹ lehasítását és FmocAbu(SCH₂CH₂C0₂t-Bu)0H kapcsolását követően a (4) általános képletű vegyületet kapjuk.

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

P² t-BuO₂C(CH₂)₂-S-(CH₂)₂ (CH₂)_n—N—P³

I I (4)

F moc—N H—C H—C Ο—N—C H—CO₂—Res I R

A peptid meghosszabbítására egymást követően FmocAsn, FmocY, Fmoclle, majd BocX kapcsolása következik. Ha X jelentése D-Trp, akkor az indol nitrogénatomját előnyösen formilszármazékaként védjük. Ezen aminosavhoz Boc védőcsoportot használva lehetővé válik, hogy a terc-butil-észtert és az N-terminális védöcsoportot egyidejűleg hasítsuk le. Ebben a szakaszban az (5) általános képletú köztiterméket kapjuk.

P² t-BuO₂C(CH₂)₂-S-(CH₂)₂ (CH₂)_n—N—P³

I I (5)

B o c—X—11 e—Y—As η—N H—C H—C Ο—N—C H—C 0₂—Rés

I

R

A peptidet a gyantáról alkalmas körülményeket alkalmazva lehasítjuk és észterezzük, ehhez benzil-bromiddal lefolytatott kezelést használva a (6) általános képletű benzil-észtert kapjuk.

P² t-BuO₂C(CH₂)₂-S-(CH₂)₂ (CH₂)_n—N—P³

I I (6)

B o c—X—11 e—Y—As η—N H—C H—C 0—N—C H—C 0 ₂—C h₂ P h

I

R

[Ezt a vegyületet felírhatjuk (6’) általános képletű vegyületként is.]

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 . 16 - j.

Ρ² (6’)

I (CH₂)n—Ν—Ρ³

Μ pa—Ot—Bu Boc—X—lie—Y—Asn—Ab u—N—C H—C O ₂—C h ₂ P h

R

A Boc csoportot és a terc-butil-észtert savas kezelés útján hasítjuk, majd a kapott amin- és savcsoportokat kondenzálva makrociklust kapunk. Ezután a benzil-észtert redukálva a célvegyület primer alkoholcsoportját kapjuk, ehhez többek között vizes izopropanolban nátrium-[tetrah i dri do-borát( 111 )]-taI lefolytatott reakciót használhatunk. A visszamaradó védöcsoportokat kényelmesen eltávolíthatjuk e konverzió során. Ha nem így járunk el, végső lépésként szükséges a védőcsoportok lehasítása. A terméket szokásos eljárásokkal izoláljuk és tisztítjuk.

Ezen általános leírásnak megfelelően állítjuk elő a következő példák szerinti vegyületeket. E vegyületek a találmány szerinti vegyületeket szemléltetik. A leírásban használt további rövidítések jelentése a következő:

TBTU 2-(1 -H-benzo-triazol-1 -i I )-1,1,3,3-tetrametil-urónium-tetrafluor-borát,

Boc terc-butil-oxi-karbonil-csoport,

Fmoc 9-fluorenil-metil-oxi-karbonil-csoport,

TFA trifluor-ecetsav,

DMF dimetil-formamid,

DBU 1,8-diaza-biciklo[5.4.0]undek-7-én,

Bn benzilcsoport,

Orn ornitin, és

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

Pht ftaloilcsoport.

Védett aminosavakat ismert eljárásokkal állítunk elő a következők szerint: FmocAbu(SCH₂CH₂CO₂t-Bu) [Prochazka, E. és munkatársai: Coll. Czech. Chern. Comm. 57, 1335, (1992)]; FmocN^aMeOrn(Pht) - a lizinszármazék előállítására használt eljárás analógiájára [Freidinger, R. M. és munkatársai: J. Org. Chem. 48, 77, (1983)];

Fmoc-allolle [Ten Kortenaar, P. B. W. és munkatársai: Int. J. Peptide Protein Rés. 27, 398, (1986)];

FmocAla(3,3-dietil) [Eisler, K. és munkatársai: Coll, Czech. Chem. Comm. 31, 4563, (1966);

Boc-D-Trp(CHO); Boc-D-Nal; FmocAsn; Amoclle; FmocVal; FmocLeu és FmocCha reagensek a Bachem cég (CH és US) gyártmányai.

1. példa

Mpa-D-T rp-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

L---------------------------------------------------------------1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

- (1) képletű vegyület előállítása (1a) Boc-D-Trp(CHO)-lle-allolle-Asn-Abu-N^aMeOrn(Pht)OBn

SCH₂CH₂CO₂t-Bu

Az (1a) képletű pepiidet szilárd fázisú eljárást használva o-klór-tritil-gyantán állítjuk elő Fmoc használatával.

Az FmocN^aMeOrn(Pht)OH első aminosavat a gyantához kapcsoljuk. Az Fmoc csoportot DMF közegben lévő 2 tömeg% DBU-val lehasítjuk. Egymást követően elvégezzük a csoportok kapcsolását, utolsóként a Boc-D-Trp(CHO)OH következik. A

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 gyantához kötött pepiidet ecetsav/trifluor-etanol/diklór-metán (1:2:7 térfogatarányú) elegyével kezeljük, majd az elegyet szűrjük, és a szűrletet betöményítjük, majd fagyasztva szárítjuk. A kapott peptid savas csoportját DMF-ben lévő (2 mólegyenérték) benzil-bromiddal és (2,5 mólegyenérték) diizopropil-etil-aminnal 27 órán át folytatott reakcióban észterezzük. Az oldószert elpárologtatjuk, és a maradékot ecetsavból fagyasztva szárítjuk.

(1b) Mpa-D-Trp-(CHO)-lle-allolle-Asn-Abu-N^aMeOrn(Pht)OBn

Az (1a) képletű vegyület N-láncvégi Boc csoportját és a terc-butil-észtert szobahőmérsékleten 1,5 órán át TFA/anizol/víz (95:2,5:2,5 térfogatarányú) elegyével végzett kezelés útján lehasítjuk. TFA elpárologtatása után a terméket dietil-éter hozzáadásával kicsapjuk. A peptidet szobahőmérsékleten DMF közegben lévő (1 mólegyenérték) TBTU és (17 mólegyenérték) N-metil-morfolin által történő kezeléssel ciklizáljuk. Az oldószert elpárologtatjuk, és az (1b) képletű peptidet fordított fázisú kromatográfiás eljárással tisztítjuk.

(1c) Mpa-D-Trp-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

CH₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Az (1b) képletű tisztított benzil-észtert inert gázatmoszféra alatt szobahőmérsékleten 22 órán át izopropanol és víz (6:1 térfogatarányú) elegyében oldott (7 mólekvivalens) NaBH₄ reagenssel kezeljük. (18 mólekvivalens) ecetsav hozzáadása után a kapott elegyet 6 órán át 80 °C hőmérsékleten tartjuk. Az oldószert elpárologtatjuk, és a kapott (1c) peptidet (az 1. példa

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

cím szerinti vegyületét) fordított fázisú folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk. Az ennek során használt paraméterek: álló fázis - Kromasil 13 pm vagy 4 pm, 10 nm, Ci₈ vagy C₈ (gyártó cég: EKA Nobel, SE); mobil fázis - acetonitril/0,1 tömeg% TFA vizes oldata. A fentiekben ismertetett módon 14 mg terméket kapunk. A tömegspektrometriás vizsgálat (elektronsugaras ionizálás, pozitív üzemmódban végzett ioncsapdás elemzés) a feltüntetett képlettel összhangban lévő molekulatömeget mutat. [MH⁺] mért m/z értéke: 830,5, a [C4oH₆3N₉0₈S + hl·] összegképletre számított m/z értéke: 830,5.

2-7. példa

Az 1. példában ismertetett eljárást használva, Boc-D-Trp(CHO)OH és Fmoc-AllolleOH aminosavakat a megfelelően védett aminosavakkal helyettesítve az 1. táblázatban felsorolt (I) általános képletű peptideket állítjuk elő.

Mpa-X-lle-Y-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I------------------------------1 I I (0 ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

1. táblázat - (I) általános képletű vegyületek tömegspektroszkópiás mérési adatai

peptid	X	Y	molekulatömeg [MH⁺]
számított	mért
2.	D-Trp	Leu	830,5	830,4
3.	D-Trp	Val	816,4	816,4
4.	D-Trp	Cha	870,5	870,5
5.	D-Trp	He	830,5	830,5
6.	D-Nal	allolle	841,5	841,5
7.	D-Trp	Ala(3,3-d iet i I)	844,5	844,5

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 t

- 20 találmány szerinti vegyületek tulajdonságainak ismert vegyületekkel történő összehasonlítása céljából számos öszszehasonlító peptid-amidot állítunk elő a W095/02609 dokumentumban ismertetett eljárással. Ezeket a (II) általános képletű összehasonlító peptideket a 2. táblázat sorolja fel.

M ya-X-lle-Y-Asn-Ab u - N---C H - C O N H ₂

CH₃ ch₂ch₂ch₂nh₂ (II)

2. táblázat - Összehasonlító peptidek

peptid	X	Y
9.	D-Trp	allolle
10.	D-Trp	Val
11.	D-Nal	allolle

8. példa

Az 1. példában ismertetett eljárás szerint járunk el azzal az eltéréssel, hogy az N^a-metil-aminosavat N^a-etil-ornitinnal helyettesítjük. Az ennek során kapott (8) képletű peptid [MH⁺] alakra mért m/z értéke: 855,1, míg a [C41H65N₉O₈S + H⁺] összegképletre számított m/z érték: 855,5.

Mpa-D-Nal-lle-allolle-Y-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I-----------------------------------------------------------1 I I (8)

CH3-CH2 CH2CH2CH2NH2

9. példa

A vegyületek biológiai tulajdonságainak meghatározása

A találmány szerinti vegyületek számos in vitro és in vivo biológiai rendszerben vizsgálhatók. Ezeket a vizsgálati rend

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 szereket úgy választjuk meg, hogy a kezelés szempontjából tekintetbe vett humán betegek szempontjából a lehető legrelevánsabbak legyenek.

i) Oxitocin receptor kötődési vizsgálat

Szokásos molekuláris biológiai eljárásokkal CHO vagy HEK293 sejtekben rekombináns humán oxitocin receptorokat fejezünk ki. Membránfrakciót állítunk elő, amelyet [¹²⁵l]-oxitocin és változó koncentrációjú heptapeptid analóg jelenlétében inkubálunk. A membránokat ezután szűréssel izoláljuk, és az oxitocin kötődés meghatározására mérjük a radioaktivitás mértékét. Az egyes analógokra meghatározzuk a K, gátlási állandó értékét. Az eredményeket a 3. táblázat foglalja össze.

3. táblázat - Oxitocin receptor vizsgálatban meghatározott

Ki gátlási állandó értéke

peptid	Kj (nmol) - átlag ± szórás
1.	0,25 ± 0,16
2.	3,2 ± 0,75
3.	0,80 ± 0,30
4.	7,0 ± 1,85
5.	1,4 ± 0,15
6.	0,1 ± 0,0
7.	_________________2,4 ± 0,85__________________

ii) Humán méhizomzatot alkalmazó modellben in vitro meghatározott antagonista hatás

A terhesség késői szakaszában császármetszésen átesett nő méhizomszövetéből vett mintát csíkokra vágunk, amelyeket Krebs-Ringer pufferoldattal megtöltött és karbogéngázzal (95

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

- 22 térfogat% 0₂ + 5 térfogat% C0₂) oxigénezett szövetfürdőben preparálunk. Az izometriás izomfeszültség változásait erőjeladóval detektáljuk és Grass típusú íróberendezéssel regisztráljuk.

Az oxitocinra vonatkozóan regisztráljuk a koncentráció-hatás görbét. A mért hatás ebben az esetben megegyezik az agonista (azaz oxitocin) beadását követő 10 perc időtartam alatt az intergrált összehúzódási görbe eredő értékével. Olyan oxitocinkoncentrációt választunk, amelynél a maximális válasz legalább 50%-a fellép. Ilyen koncentrációjú agonistát adunk a szövethez különböző koncentrációjú antagonista heptapeptid analógok jelenlétében, majd regisztráljuk a választ. Regresszióanalízissel meghatározzuk azt az antagonistakoncentrációt, amely a válasz 50%-os csökkentéséhez szükséges az ellenőrző értékhez képest, amelyet a leírásban IC₅₀ értékként aduk meg. (Az IC₅o érték az az antagonistakoncentráció, amely ahhoz szükséges, hogy egy adott agonista dózis hatását 50%-kal csökkentsük.) Az eredményeket a 4. táblázat mutatja be.

4..t áblázat - Agonista hatás gátlása (méhizomzatot alkalmazó modellben)

peptid	IC₅₀ (nmol)
1.	5 ± 1
r-8.	18 ± 3

iii) In vivo patkánymodell

Természetes úton megtermékenyített (250 g névleges testtömegű) Sprague-Dawley patkányokat (intraperitoneálisan beadott 0,5 mg/100 g testtömeg) Inactin hatóanyaggal érzéstele

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 nítünk. A méhizomzat aktivitását katéter segítségével mérjük, amelyet a méhüregben helyeztünk el és módosított Lockes-oldattal töltünk meg. A katétert Statham P23d típusú erőjeladóhoz kapcsoljuk, és az összehúzódást Grass 7D típusú íróberendezéssel regisztráljuk.

Oxitocinra vonatkozóan (a 2 x 10'⁴ - 5 x W³ pmol/kg tartományban) regisztráljuk a dózis-válasz összefüggésre vonatkozó görbét. Ebben az esetben a választ oly módon számszerűsítjük, hogy az agonista injektálását követő 15 perc alatt integráljuk a görbét. Olyan oxitocindózist választunk, amely - a görbe egyenes szakaszán belül 1,33-4,0 kPa üregen belüli összehúzódási nyomásnak felel meg. Ezt az oxitocindózist adjuk be az állatnak legalább két különböző antagonista dózissal együtt, és regisztráljuk a hatást. Interpolálással határozzuk meg azt az antagonistadózist, amely az agonista hatását az ellenőrző értékhez képest 50%-ra csökkenti, és ezt az értéket ID₅o értékként adjuk meg. (ID₅o értéke az az antagonistadózis, amely adott agonistadózis hatásának 50%-kal való csökkentéséhez szükséges.) Az eredményeket az 5. táblázat tünteti fel.

Ebben a modellben meghatározzuk az antagonisták hatásának időtartamát is. Olyan oxitocindózist választunk (a 2 x W⁴ - 5 x 10’³ pmol/kg tartományban), amely a maximális hatás felének megfelelő hatást vált ki (ezt a dózist az ED₅₀ szimbólummal jelöljük). Az ebben az esetben meghatározott hatás ugyanaz, mint amelyet ID₅₀ meghatározása során a fentiekben ismertetett módon mérünk. Olyan antagonistadózist választunk (a 8 x 10'⁴ - 4 x 10'³ pmol/kg tartományban), amely az agonistára adott választ legalább 50%-os mértékben gátolja. A vizs89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

- 24 ·* gálát kezdetekor az agonista és antagonista 1-1 dózisát adjuk be együtt. Ezt követően 20-perces időtartamok eltelte után az agonista dózisait adjuk be egyedül, és mérjük a választ. Interpolációval meghatározzuk és t₇₅ szimbólummal jelöljük azt az időtartamot, amely ahhoz szükséges, hogy az agonista hatása kezdeti értékének 25%-ára csökkenjen. (A t₇₅ érték az az időtartam, amely ahhoz szükséges, hogy egyetlen dózis hatásossága 75%-kal csökkenjen.) Az eredményeket az 5. táblázat mutatja be.

5. táblázat

Agonista hatás gátlása (in vivo patkánymodellben)

peptid	ID₅o (nmol/kg)	t₇₅ (min)
1.	2,9 ± 0,3	169 ± 2
r-9.	2,9 ± 0,3	180 ± 9

A 3-5. táblázatban közölt adatokból nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti vegyületek a patkánymodellben - mind a hatásosság, mind a hatás időtartama tekintetében - legalább olyan jók, mint az ismert vegyületek, és hogy e vegyületek hatásossága a relevánsabb humán modellben meghaladja az ismert vegyületekét.

10. példa - Gyógyászati formálások

Izotóniás pufferolt sóoldatban lévő oldat intravénás injekcióhoz

A következő oldatokat állítjuk elő:

A oldat (0,02 mól/l koncentrációjú citromsavoldat): 0,42 g citrom sav-m on oh i drát és 100 ml térfogathoz szükséges mennyiségű desztillált víz,

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

- 25 B oldat (0,04 mól/l koncentrációjú dinátrium-hidrogén-foszfát-oldat): 0,712 g Na₂HPO₄-2H₂O és 100 ml térfogathoz szükséges mennyiségben desztillált víz.

ml A oldathoz 23 ml B oldatot, 0,81 g nátrium-kloridot és acetát alakban 0,322 g (1) képletű pepiidet adunk. A pH értékét A oldattal 4,5 értékre állítjuk be, majd 100 ml össztérfogatig desztillált vizet adunk az elegyhez. Végül az elegyet 0,22 μηΊ-es Sterivex-GB típusú szűrőn keresztül szűrjük. Ezáltal intravénás injektálásra alkalmas izotóniás oldatot kapunk, amely (szabad bázisként számítva) 0,3 mg/ml (1) képletű pepiidet tartalmaz.

Orális beadásra szolgáló tabletták

A következő komponenseket elegyítjük össze:

(I) képletű peptid acetát alakjában	1 08 mg
mannitol	7,7 g
laktóz	6.0 g
mikrokristályos cellulóz	6,0 g
térhálósított karboxi-metil-cellulóz	200 mg
talkum	800 mg
magnéz ium-sztearát	200 mg
poli(vinil-pirrolidon)/etanol	kötőanyagként

Az összekevert elegyet szokásos eljárással tablettákká formáljuk. A fenti elegy elegendő 100 db, egyenként (szabad bázisként számítva) 1 mg (1) képletű peptidet tartalmazó tabletta előállítására.

Orális beadásra szánt, bélben oldódó tabletták db előzőekben említett tablettát 100 mg cellulóz-acetát89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

-ftaláttal vonunk be levegővel végzett porlasztás útján (tablettánként 4 mg bevonatot használva).

A találmány szempontjából hasznos a WO95/25534 dokumentumban ismertetett készítmény is, amelyben a hatóanyagot (így a dezmopresszint) helyettesíthetjük a találmány szerinti vegyületekkel. A készítmény alkalmazása nagyobb mennyiségű hatóanyag tablettákba történő bevitelére szakember számára nem jelent nehézséget.

11. példa

A stabilitás meghatározása

A találmány szerinti heptapeptid analógok oldatait készítjük el vizes formálásokhoz szokásos összetétellel. Az oldatokat több héten át 50 °C hőmérsékleten tároljuk, és azok alikvot részét rendszeresen elemezzük HPLC útján. Párhuzamos kísérletekben összehasonlító peptideket vizsgálunk, a bomlás mértékét peptidveszteségként határozzuk meg (tömeg%/hét egységben) a bomlástermékek természetétől függetlenül. Az eredményeket a 6. táblázat foglalja össze.

6. táblázat

A stabilitás vizsgálata

peptid	a vizsgált oldat összetétele	bomlás 50 °C-on (tömeg%/hét)
1.	izotóniás citrát/foszfát-puffer, pH=4,5	0,4
r-9.	izotóniás citrát/foszfát-puffer, pH=4,5	2,9
3.	izotóniás citrát/foszfát-puffer, pH=4,5	0,7
r-10.	izotóniás citrát/foszfát-puffer, pH=4,5	4,3
6.	izotóniás citrát/foszfát-puffer, pH=4,5	1,2
r-11.	izotóniás citrát/foszfát-puffer, pH=4,5	4,0

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

A fentiekben bemutatott adatok egyértelműen mutatják, hogy a találmány szerinti vegyületek oldatban sokkal stabilabbak, mind az ismert vegyületek. Ez a megnövelt stabilitás a gyakorlatban azt jelenti, hogy vizes formálások tárolhatósága hosszabb, és kevésbé szigorú követelményt támasztanak a hűtve tárolással szemben. A gazdasági megtakarítás mellett előny származik mind a kényelem, mind a biztonság terén, minthogy egyedi dózisok közvetlenül a beadás előtt történő elkészítésére kevesebb igény mutatkozik.

Minthogy a vegyületek bomlással szemben ellenállóbbak a tisztítás során és azt követően, ez a körülmény a gyártási eljárás számára is előnyös.

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Oxitocin antagonists hatású heptapeptid analógok vagy gyógyászatilag elfogadható sóik, amelyek hexapeptidből származtatott (S) általános képletű csoportból

M |ja-X-lle-Y-Asn-Ab u - (S)

- amely képletben

Mpa jelentése 3-merkapto-propionsavból származtatott csoport,

He jelentése izoleucinból származtatott csoport, Asn jelentése aszparaginsavból származtatott csoport, Abu jelentése α-amino-vasjavból származtatott csoport, X jelentése D-aromás a-aminosav, és

Y jelentése alifás α-aminosav és az (S) általános képletű csoporthoz amidkötéssel kapcsolódó, C-terminális β-amino-alkoholból származtatott (Z) általános képletű csoportból

-NR-CH-CH₂OH (Z)

Q

- amely képletben

Q jelentése (CH₂)_n-NH-A általános képletű csoport, ahol n értéke 1-től 6-ig terjedő szám,

A jelentése hidrogénatom vagy -C( = NH)NH₂ képletű csoport, és

R jelentése -CH₃ vagy -C₂H₅ képletű csoport állnak.

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968
2. Az 1. igénypont szerinti heptapeptid, ahol X jelentése D-triptofán vagy p-(2-naftil)-D-alanin aminosavból származtatott csoport.
3. A 2. igénypont szerinti heptapeptid, ahol Y jelentése leucin, valin, izoleucin, allo-izoleucin, β,β-dietil-alanin, ciklohexil-alanin vagy ciklohexil-glicin aminosavból származtatott csoport.
4. Az 1. igénypont szerinti heptapeptid, ahol Y jelentése leucin, valin, izoleucin, allo-izoleucin, β,β-dietil-alanin, ciklohexil-alanin vagy ciklohexil-glicin aminosavból származtatott csoport.
5. A 4. igénypont szerinti heptapeptid analógok, ahol n értéke 2, 3 vagy 4.
6. Az 1. igénypont szerinti heptapeptid analógok, ahol n értéke 2, 3 vagy 4.
7. A 6. igénypont szerinti heptapeptid, ahol X jelentése D-triptofán vagy β-(2-η3ίίίΙ)-0-3ΐ3ηϊη aminosavból származtatott csoport.
8. Az 1. igénypont szerinti heptapeptid, ahol X jelentése D-triptofán vagy β-(2-η3ίίίΙ)-0-3ΐ3ηίη aminosavból származtatott csoport, Y jelentése leucin, valin, izoleucin, allo-izoleucin, β,β-dietil-alanin, ciklohexil-alanin vagy ciklohexil-glicin aminosavból származtatott csoport, és n értéke 2, 3 vagy 4.
9. A 8. igénypont szerinti

Mpa-D-Trp-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH i---------------------------------------------------------------------------------------------------1 | | ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

1--------------------------------------------------------------------------------------------------1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂ch₂nh₂

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

- 30 • · · · · · ί «· «· ···· ···· ···

Μ ^a-D-Trp-lle-allolle-Asn-Ab u - Ν----C Η - C Η ₂ Ο Η

CH₃ ch₂ch₂nh₂

Μ pa-D-Trp-lle-allolle-Asn-Ab u - Ν----C Η - C Η ₂ Ο Η

CH₃ ch₂ch₂ch₂nh-c = nh I νη₂

Mpa-D-Trp-lle-Ala(3,3-dietil)-Asn-Abu-N---C Η-C Η₂Ο Η

CH₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Nal-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH »

ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Nal-lle-Ala(3,3-dietil)-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-lle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-Leu-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-Val-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I1 I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂

Mpa-D-Trp-lle-Cha-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

11 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂ képletű heptapeptid analógok.
10. Az 1. igénypont szerinti

Mpa-D-Trp-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH >----------------------------------------------------------------------------------------------------1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂ képletű heptapeptid analóg.

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968
11. Az 1. igénypont szerinti

Mpa-D-Trp-lle-all olle-Asn-Ab u - N----C H - C Η ₂ Ο H

CH₃ CH₂CH₂CH₂CH₂NH₂képletű heptapeptid analóg.
12. Az 1. igénypont szerinti

Mpa-D-Trp-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh-c=nh

I nh₂képletű heptapeptid analóg.
13. Az 1. igénypont szerinti

Mpa-D-Nal-lle-Ala(3,3-dietil)-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH

I----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂ képletű heptapeptid analóg.
14. Az 1. igénypont szerinti

Mpa-D-Nal-lle-allolle-Asn-Abu-N---CH-CH₂OH ।--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------’ I I ch₃ ch₂ch₂ch₂nh₂ képletű heptapeptid analóg.
15. Gyógyászati készítmény, amely gyógyászatilag hatásos mennyiségben egy 1. igénypont szerinti heptapeptid analógot és gyógyászatilag. elfogadható hordozót tartalmaz.
16. A 15. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, amely nazális, szubkután vagy intravénás beadásra szolgáló vizes oldat.
17. A 15. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, amelyben a hordozó pufferolószert tartalmaz.

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968
18. A 15. igénypont szerinti gyógyászati készítmény orális beadásra szolgáló tabletta, kapszula, granulátum vagy hasonló készítmény alakjában.
19. Az 1. igénypont szerinti heptapeptid analógok alkalmazása a méhizomzat összehúzódásának csökkentésére vagy meggátlására.
20. A 15. igénypont szerinti készítmény alkalmazása a méhizomzat összehúzódásának csökkentésére vagy meggátlására.
21. A 20. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a méhizomzat összehúzódása vajúdással kapcsolatos.
22. A 20. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a méhizomzat összehúzódása menstruációs fájdalmakkal kapcsolatos.
23. Az 1. igénypont szerinti vegyületek alkalmazása vajúdás kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény előállítására.
24. Az 1. igénypont szerinti heptapeptid analógok alkalmazása daganatképződés, túlfejlődés, skizofrénia, viselkedési rendellenesség, merevedési zavarok, gyulladás és elégtelen tejképződés kezelésére vagy észlelési képességet javító, immunszabályozó vagy termékenységet szabályozó szerként.
25. Eljárás oxitocin antagonista hatású heptapeptid analógok vagy gyógyászatilag elfogadható sóik előállítására, amelyek hexapeptidből származtatott (S) általános képletú csoportból

M |ja-X-lle-Y-Asn-Ab u - (S)

- amely képletben

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

- 33 ·«*· »· ·ν »»_Λ * • ·«« · · · *,·’ ·-·* ·*·· *’♦* .1*

Mpa jelentése 3-merkapto-propionsavból származtatott csoport,

He jelentése izoleucinból származtatott csoport,

Asn jelentése aszparaginsavból származtatott csoport, Abu jelentése α-amino-vasjavból származtatott csoport, X jelentése D-aromás α-aminosav, és

Y jelentése alifás α-aminosav és az (S) általános képletű csoporthoz amidkötéssel kapcsolódó, C-terminális β-amino-alkoholból származtatott (Z) általános képletű csoportból

-NR-CH-CH₂OH (Z)

I

Q

- amely képletben

Q jelentése (CH₂)n-NH-A általános képletű csoport, ahol n értéke 1-től 6-ig terjedő szám,

A jelentése hidrogénatom vagy -C( = NH)NH₂ képletű csoport, és

R jelentése -CH₃ vagy -C₂H₅ képletű csoport állnak, azzal jellemezve, hogy egy megfelelő kiindulási vegyületet, ahol (Z) jelentése (Y) általános képletű csoport -NR¹-CH-CO-OBn (Y)

I

M

- amely képletben

M jelentése -(CH₂)_n-N(Pht) vagy -(CH₂)_n-N(P)-C( = NP)NP₂általános képletű csoport, amely képletben a P helyettesítők közül egy vagy kettő nitrogén-védőcsoportot jelent, és a többi P helyettesítő jelentése hidrogénatom, n értéke 1-től 6-ig terjedő szám, és

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968 • ·«* · · «

R¹ jelentése -CH₃ vagy -C₂H₅ képletű csoport bór-hidrid-sót vagy helyettesített bór-hidridet vagy boránt használva redukálunk.
26. A 25. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy NaBH₄ képletű bór-hidridet használunk.
27. Eljárás vajúdás, menstruációs fájdalmak, daganatképződés, túlfejlődés, skizofrénia, viselkedési rendellenesség, merevedési zavarok, gyulladás és elégtelen tejképzödés kezelésére vagy észlelési képességet javító, immunszabályozó vagy termékenységet szabályozó gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy egy oxitocin antagonista hatású heptapeptid analógot vagy gyógyászatilag elfogadható sóját, amely hexapeptidből származtatott (S) általános képletű csoportból

Mya-X-lle-Y-Asn-Abu- (S) amely képletben

Mpa jelentése 3-merkapto-propionsavból származtatott csoport, He jelentése izoleucinból származtatott csoport, Asn jelentése aszparaginsavból származtatott csoport, Abu jelentése α-amino-vasjavból származtatott csoport, X jelentése D-aromás a-aminosav, és

Y jelentése alifás α-aminosav és az (S) általános képletű csoporthoz amidkötéssel kapcsolódó, C-terminális β-amino-alkoholból származtatott (Z) általános képletű csoportból

-NR-CH-CH₂OH (Z)

Q

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968

- amely képletben

Q jelentése (CH₂)_n-NH-A általános képletű csoport, ahol n értéke 1-től 6-ig terjedő szám,

A jelentése hidrogénatom vagy -C( = NH)NH₂ képletű csoport, és

R jelentése -CH₃ vagy -C₂H₅ képletű csoport áll, gyógyászatilag elfogadható hordozóval elegyítünk össze.
28. A 27. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a heptapeptid analógot vagy sóját és a hordozót alaposan összekeverjük.
29. A 28. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a keveréket bélben oldódó bevonattal, különösen 5,0 értékű vagy annál alacsonyabb pH-jú közegben nehezen oldható, bélben oldódó bevonattal vonjuk be.
30. A 28. vagy 29. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az elegyet tablettázzuk vagy granuláljuk és/vagy kapszulába töltjük.

FERRING B.V.

helyett a meghatalmazott:

DANUBIA

Szabadalmi és Védjegy Iroda Kft.

dr. Vitális László szabadalmi ügyvivő

89737-8789/VO/LZs

PCT/SE97/01968