FI111716B

FI111716B - Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 9-amino-7-(substituoitu)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinien valmistamiseksi

Info

Publication number: FI111716B
Application number: FI924453A
Authority: FI
Inventors: Phaik-Eng Sum; Ving J Lee; Joseph J Hlavka; Yakov Gluzman
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1991-10-04
Filing date: 1992-10-02
Publication date: 2003-09-15
Also published as: MX9205573A; ES2081005T3; PL296140A1; PL170933B1; PH30343A; HU211214B; DE69205792T2; DE69205792D1; NZ244556A; PL170939B1; AU651734B2; CA2079703A1; ZA927608B; SK297292A3; EP0535346B1; HU211922A9; US5326759A; JPH05239006A; KR100261528B1; CZ285015B6

Description

111716

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 9-amino-7-(substituoitu)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinien valmistamiseksi 5 1. Keksinnön alue

Keksintö koskee menetelmää uusien [4S—(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-(substituoitu amino)-1,4,4a,5,-5a,6,11,12a-oktahydro-3-10,12,12a-tetrahydroksi-l, 11-di-ok-so-2-naftaseenikarboksiamidien valmistamiseksi, joita kut-10 sutaan jäljempänä 9-amino-7-(substituoitu amino)-6-de-metyyli-6-deoksitetrasykliineiksi ja joilla on antibioottinen aktiivisuus useita erilaisia organismeja vastaan, mukaan lukien organismit, jotka ovat resistenttejä tetrasyk-liineille, ja jotka ovat käyttökelpoisia bakteerien vastai-15 sinä aineina.

Keksintö koskee myös uusia 7-(substituoitu amino)-9-nitro-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliiniyhdisteitä, jotka ovat käyttökelpoisia tämän keksinnön mukaisten uusien yhdisteiden valmistusta varten.

20 Tekniikan tason kuvaus

Erilaisia tetrasykliiniantibiootteja on syntetisoi- · * • *,· tu ja kuvattu tarttuvien tautien hoitoa varten ihmisessä • · J ja eläimissä vuodesta 1947 lähtien. Tetrasykliinit inhi- ··· boivat proteiinisynteesiä sitoutumalla bakteeriribosomin • · « · 25 30S-alayksikköön estäen aminoasyyli-RNA:n sitoutumisen • · · · .·. : (Chopra, Handbook of Experimental Pharmacology, Voi. 78, • · · 317 - 392, Springer-Verlag, 1985) . Monille kliinisesti * · · tärkeille mikro-organismeille on syntynyt resistenssi tet- rasykliineitä vastaan, mikä rajoittaa näiden antibioottien : ·' 30 käyttökelpoisuutta. Bakteeriresistenssilla tetrasykliinejä » * vastaan on kaksi päämekanismia: a) energiasta riippuva | antibiootin ulosvirtaus, jota välittävät proteiinit, jotka .**·. sijaitsevat sytoplasman membraanissa, joka virtaus estää • · • tetrasykliinin solun sisäisen kasautumisen (S.B. Levy, et ' 35 ai., Antimicrob. Agents Chemotherapy 33 (1989) 1373 - 1374) ; ja b) ribosomaalinen suojaus, jota välittää syto- 2 111716 plasmaproteiini, jolla on sellainen vuorovaikutus riboso-min kanssa, että tetrasykliini ei enää sido tai inhiboi proteiinisynteesiä (A.A. Salyers, B.S. Speers ja N.B. Shoemaker, Mol. Microbiol, 4: 151 - 156, 1990). Resistens-5 sin ulosvirtausmekanismia kuvataan resistenssideterminan-teilla nimillä tetA-tetL. Ne ovat tavallisia monissa gram-negatiivisissa bakteereissa (resistenssigeenit luokka A - E) kuten Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Haemophilus ja Aeromonas ja gram-positiivisissa bakteereissa (resis-10 tenssigeenit luokka K ja L) kuten Staphylococcus, Bacillus ja Streptococcus. Resistenssin ribosomaalista suojausmeka-nismia kuvataan resistenttideterminanteilla nimillä TetM, N ja 0, ja se on tavallinen organismeissa Staphylococcus, Streptococcus, Campylobacter, Gardnerella, Haemophilus ja 15 Mycoplasma (A.A. Salyers, B.S. Speers ja N.B. Shoemaker, Mol. Microbiol, 4: 151 - 156, 1990).

Erityisen käyttökelpoinen tetrasykliiniyhdiste on 7-(dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliini,joka tunnetaan minosykliininä (katso US 3 148 212, RE 26 253 ja 20 3 226 436, tarkasteltu jäljempänä). Kuitenkin kannat, jot ka käyttävät tetB-mekanismia (ulosvirtaus gram-negatiivi-sissa bakteereissa) mutta ei tetK:ta (ulosvirtaus organis-! missä Staphylococcus), ovat resistenttejä minosykliinille.

”·,1 Myös kannat, jotka käyttävät tetM:ää (ribosomaalinen suo- * · · 25 jaus), ovat resistenttejä minosykliinille. Tässä keksin- • · · nössä kuvataan uusien tetrasykliiniyhdisteiden synteesi, • · ·.1·1 joilla yhdisteillä on merkittävä in vitro ja in vivo -ak- • · · : tiivisuus tetrasykliini- ja minosykliiniherkkiä kantoja ja joitakin tetrasykliini- ja minosykliiniresistenttejä kan- •'·'; 30 toja kohtaan eli sellaisia kantoja kohtaan, jotka käyttä- • » vät tetM- (ribosomaalinen suojaus) resistenssideterminant- » · 1 teja.

• · · • ·ί · Julkaisussa Duggar, US-patentti nro 2 482 055, esi- *...1 tetään AureomycininR (I) valmistus fermentaatiolla, jolla • 35 Aureomycinillä on bakteerien vastainen aktiivisuus. Jul- • ·

> I

> t 3 111716 kaisussa Growich et ai., US-patentti nro 3 007 965, esitetään parannuksia I:n fermentaatiovalmistukseen. Kummassakaan näistä patenteista ei kuvata eikä ehdoteta 6-demetyy-li-6-deoksitetrasykliinej ä.

5 Cl V«oh NCCH3)2 OH 0 OH 0 0 10

Julkaisussa Beereboom et ai., US-patentti nro 3 043 875, esitetään tetrasykliinijohdannaiset, joilla on kaavat (II) ja (III), joissa R on H tai CH3; on H ja kun R on CH3, OH; R2 on H tai N(CH3)2; X ja Y merkitsevät halogeenia; Z on 15 H tai halogeeni ja B on bromi, kloori tai jodi, ja joilla on bakteerien vastainen aktiivisuus. Tässä patentissa ei kuvata eikä ehdoteta sekä di(alempi alkyyli)amino- tai mono(alempi alkyyli)aminosubstituenttien (Y:ssä tai Z:ssa) että aminofunktionaalisuuden (B:ssä) sisällyttämistä.

20 ? ? Ie y R Rj (003Xnh nh : OH o o 0H 0 0 OH o * 0 °H0 o • · » • * * ·

Il I I I

25 "

Julkaisuissa Boothe et ai., US-patentti nro 3 148 212, uudelleen julkaistu nimellä RE 26 253, ja Petisi et ai., US-patentti nro 3 226 436, esitetään tetrasykliini johdannaiset, joilla on kaava (IV), jossa R on vety tai metyyli 30 ja R2 ja R2 merkitsevät vetyä, mono(alempi alkyyliJaminoa tai di(alempi alkyyli)aminoa edellyttäen, että Rx ja R2 eivät voi kumpikin merkitä vetyä, ja jotka ovat käyttökel-:.· · poisia bakteeri-infektioiden hoidossa. Tässä patentissa ei : : kuvata eikä ehdoteta 9-aminofunktionaalisuuden (R2:ssa) 35 sisällyttämistä.

4 111716 f* f fr «,ΎγΜγν""» s il I 011(1 n 5 0H O OH o o

IV

Julkaisussa Blackwood et ai., US-patentti nro 3 200 149, esitetään tetrasykliinijohdannaiset, joilla on kaavat (V) 10 ja (VI), ja niiden pelkistystuotteet, joissa kaavoissa Y voi olla vety tai hydroksyyli, X voi olla vety, kloori, jodi tai bromi, X2 voi olla vety, amino tai alempi alka-noyyliamino, X2 voi olla vety tai nitro ja Z on kloori tai fluori, joilla yhdisteillä on mikrobiologinen aktiivisuus. 15 Tässä patentissa ei kuvata eikä ehdoteta sekä di(alempi alkyyli)aminoryhmän (X:ssä) että muun typpifunktionaali-suuden (X^ssa) sisällyttämistä 6-demetyyli-6-deoksitetra-sykli iniytimeen.

x CHj v N<CH3>2 X CHj V N(CH3>2

NH

: *. *. ÖH 0 IH 0 0 OH o o ~ o o ; ; vi

; : ; V

25 Julkaisussa Petisi et ai., US-patentti nro 3 338 963, esi-;· tetään tetrasykliiniyhdisteet, joilla on kaava (VII), jos- sa R3 ja R2 merkitsevät vetyä, nitroa, aminoa, formyyliami-noa, asetyyliaminoa, p-(dihydroksiboryyli) bent soyy li aminoa, p-(aminobentseenisulfonyyli)aminoa, klooria, bromia 30 tai diatsoniumia, edellyttäen, että Rx ja R2 eivät voi kum- pikin merkitä vetyä, ja edelleen edellyttäen, että kun Rx ;·’ on kloori tai bromi, R2 ei voi olla vety ja päinvastoin, R3 : on vety tai metyyli ja R4 on vety tai hydroksi, ja joilla yhdisteillä on laaja-alainen bakteerien vastainen aktiivi-35 suus. Tässä patentissa ei kuvata eikä ehdoteta sekä di- s 111716 (alempi alkyyli)amino- tai mono(alempi alkyyli)aminosubs-tituenttien (R^ssä) että aminosubstituenttien (R2:ssa) sisällyttämistä.

5 Rx r3 *4 N<CH3)2 [P n

R

OH 0 OH °H 0 0

V I I

10

Julkaisussa Bitha et ai., US-patentti nro 3 341 585, esitetään tetrasykliiniyhdisteet, joilla on kaava (VIII), jossa R5 on vety, α-hydroksi tai β-hydroksi, R6 on a-metyy-li tai β-metyyli, ja R7 ja Rg merkitsevät vetyä, mono(alem-15 pi alkyyli)aminoa tai di(alempi alkyyli)aminoa edellyttäen, että R7 ja R9 eivät voi kumpikin merkitä vetyä, ja edelleen edellyttäen, että kun R5 on vety, niin R6 on a-me-tyyli. Yleisen kaavan (VIII) mukainen edullinen toteutus-muoto on sellainen, että R5 on α-hydroksi tai B-hydroksi, 20 R6 on a-metyyli tai β-metyyli, R7 on di(alempi alkyyli)amino ja R9 on vety, ja joilla yhdisteillä on laaja-alainen bakteerien vastainen aktiivisuus. Tässä patentissa ei ku- : .* vata eikä ehdoteta sekä di(alempi alkyyli)amino- tai mo- j no( alempi alkyyli )aminosubstituenttien (R7:ssä) että amino- 25 substituenttien (Rg:ssä) sisällyttämistä.

] R7 R6 R5 NCCH3>2 v·: ... 30 5 T li T ShIT n 1 * : OH 0 OH o o

·...·’ V 1 I I

• 1 j : : Julkaisussa Shu, US-patentti nro 3 360 557, esitetään 9-hydroksitetrasykliinit, joilla on kaava (IX), jossa Rt on 35 vety tai hydroksi, R2 on vety tai hydroksi, R3 on vety tai I t · • » 6 111716 metyyli, R2 ja R3 muodostavat yhdessä metyleenin, ja R4 on vety, halogeeni, nitro, amino, mono(alempi alkyyli)amino tai di(alempi alkyyli)amino, ja joilla on todettu olevan bakteerien vastainen aktiivisuus. Tämä patentti rajoittuu 5 9-hydroksitetrasykliineihin eikä siinä kuvata tai ehdoteta näiden patenttivaatimusten kohteena olevia yhdisteitä.

r4 r3 r2 r1 n(ch3>2 10 ίΓ7%Ί ΗΠ \F\ I

OH 0 OH °H 0 0

I X

15 Julkaisussa Zambrano, US-patentti nro 3 360 561, esitetään menetelmä kaavan (X) mukaisten 9-nitrotetrasykliinien valmistamiseksi, jossa kaavassa R5 on vety tai hydroksi, Rx on vety tai hydroksi, R6 on vety tai metyyli, Rx ja R6 muodostavat yhdessä metyleenin, R7 on vety, kloori tai nitro 20 ja R, on vety tai nitro edellyttäen, että R7 ja R9 eivät voi kumpikin merkitä vetyä. Tässä patentissa ei esitetä eikä ehdoteta sekä di(alempi alkyyli)amino- tai mono(alempi • · S alkyyli)aminosubstituentin (R7:ssä) että aminofunktionaali- • 1 ·.· · suuden (R9:ssä) sisällyttämistä.

·:· 25 R? R* Ri R5 ncch3)2 30 oh o oh°Ho o

X

; : : Julkaisussa Martell et ai., US-patentti nro 3 518 306, esitetään 7- ja/tai 9-(N-nitrosoalkyyliamino)-6-demetyyli-35 6-deoksitetrasykliinit, joilla on kaava (XI) ja joilla on 7 11171(5 bakteerien vastainen aktiivisuus in vivo. Tässä patentissa ei kuvata eikä ehdoteta sekä di(alempi alkyyli)amino- tai mono(alempi alkyyli)aminosubstituentin (C-7:ssä) että ami-nofunktionaalisuuden (C-9:ssä) sisällyttämistä.

5 N(CHg)e N0( R )N-(£· || OH 0 OH °H 0 0 10

x I

US-patentissa 5 021 407 esitetään menetelmä tetra-sykliiniresistenttien bakteerien resistenssin voittamiseksi. Menetelmä käsittää salpaajayhdisteen käyttämisen yhdes-15 sä tetrasykliinityyppisen antibiootin kanssa. Tässä patentissa ei esitetä uusia tetrasykliiniyhdisteitä, joilla itsessään on aktiivisuus resistenttejä organismeja vastaan.

Lyhyesti sanottuna missään edellä mainituista patenteista ei kuvata eikä ehdoteta tämän hakemuksen mukaisia 20 uusia yhdisteitä. Lisäksi missään edellä mainituista patenteista ei kuvata eikä ehdoteta uusia tetrasykliiniyhdistei-tä, joilla on aktiivisuus tetrasykliini- ja minosyk- • ;'t> liiniresistentte j ä kantoja vastaan sekä sellaisia kantoja • i i · . . vastaan, jotka ovat tavallisesti herkkiä tetrasykliineille.

, , 25 Keksinnön yhteenveto , Tämä keksintö koskee menetelmää uusien 9-amino-7- • 1 i *,.1 (substituoitu amino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinien • » » ’ valmistamiseksi, joilla on kaavat I ja II ja joilla on bak teerien vastainen aktiivisuus. Erityisemmin tämä keksintö ί V 30 koskee menetelmää kaavan I mukaisten yhdisteiden valmista-» « ^ ‘ miseksi, joilla on lisääntynyt bakteerien vastainen aktii- visuus in vitro ja in vivo tetrasykliiniresistenttejä kan- ' » ♦ toja vastaan sekä korkea aktiivisuus sellaisia kantoja vas-taan, jotka ovat tavallisesti herkkiä tetrasykliineille.

ϊ V 35 » > i 111716 8 R N(CH,)2 5 (| \r\ ir| II (i)

H2M TTT IT T

OH 0 OH 0 0 10 R H( CH 3) 2 (II) ίιΤ^Τ^Τ^Γ /»>

HiM imi ohII II 4

OH O OH 0 O

15 jossa: R = NR1R2, ja kun Ri = vety 20 R2 = etyyli, n-propyyli tai 1-metyylietyyli; ja kun Ri = metyyli, 5 ' : R2 = metyyli, etyyli tai n-propyyli; : ja kun Ri = etyyli, • « · · • R2 = etyyli; 25 R3 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat haarautumaton tai ; haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; Cö-io-aryyliryhmä; C7-9- • * * aralkyyliryhmä; ja - (CH2) nCOORs, kun n = 1 - 4, ja R5 väli- « 1 t » · » ’ taan ryhmästä, jonka muodostavat vety; haarautumaton tai haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; ja C6-io-aryyliryhmä; : .· 30 R4 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat haarautumaton tai ·,,,· haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; Cö-io-aryyliryhmä; C7-9- ; ,·. aralkyyliryhmä; ja - (CH2) nCOOR6, kun n = 1 - 4; ·.·' Rö valitaan ryhmästä, jonka muodostavat vety; haarautumaton tai haarautunut Ci-3-alkyyli; ja C6-io~aryyli; : 35 tai R3 ja R4 muodostavat yhdessä ryhmän 9 111716 - (CH2) 2W (CH2) 2-, jossa W valitaan ryhmästä, jonka muodostavat (CH2) n, ja n = 0 - 1, -NH, -N-Ci-3-alkyyli, -N-C1-4- alkoksi, happi ja rikki, tai W on substituoitu samansukui-nen radikaali, joka valitaan ryhmästä, jonka muodostavat (L 5 tai D)proliini ja etyyli(L tai D)prolinaatti, morfoliini, pyrrolidiini ja piperidiini, sen farmakologisesti hyväksyttävien orgaanisten ja epäorgaanisten suolojen ja metalli-kompleksien valmistamiseksi.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle kaavan (I) ja 10 (II) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on tunnusomaista, että yhdiste, jolla on kaava III

R n(ch3)2 15 il h^i h^i || {III)

°2N Il ÖHM M

OH 0 OH 0 0 20 jossa R on edellä määritelty,saatetaan reagoimaan pelkisti-men kanssa kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, ja ha-luttaessa näin saatu kaavan I mukainen yhdiste N- • alkyloidaan kaavan II mukaisen yhdisteen saamiseksi.

tM * Tähän keksintöön kuuluvat myös yhdisteet, jotka 25 ovat käyttökelpoisia välituotteina edellä esitettyjen kaa-van I mukaisten yhdisteiden valmistusta varten. Tällaisia • * · välituoteyhdisteitä ovat mm. yhdisteet, joilla on kaavat: • » r H (CH3 ) 2 j·1 fiS^rr OH 0 OH o o : V 35

: Kaava III

10

11171C

M (CH 3 ) 2 R r il H^T H'M if /R>

n A,H>^^4vvJ^kv/NHcH2N\R

5 0 jN [ [f I 0ηΠ Π OH 0 OH 0 0

Kaava IV

jossa: 10 R = NRiR2, ja kun Ri = vety, R2 = etyyli, n-propyyli tai 1-metyylietyyli; ja kun Ri = metyyli, R2 = metyyli, etyyli tai n-propyyli; 15 ja kun Ri = etyyli, R2 = etyyli; R3 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat haarautumaton tai haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; Cö-io-aryyliryhmä; C7-9- aralkyyliryhmä; ja - (CH2) nCOORs, kun n = 1 - 4, ja R5 vali- 20 taan ryhmästä, jonka muodostavat vety; haarautumaton tai haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; C6-io-aryyliryhmä; :*·*: R4 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat haarautumaton tai • · { ;*j haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; C6-io-aryyliryhmä; C7-g-aral- • · · · kyyliryhmä; ja - (CH2) nCOORö, kun n = 1 - 4, ja «ti» 25 R6 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat vety; haarautumaton *!’*, tai haarautunut Ci-3-alkyyli; ja C6-io~aryyli; tai R3 ja R4 • ♦ · muodostavat yhdessä ryhmän - (CH2) 2W (CH2) 2-, jossa W valitaan • · » ’·’ * ryhmästä, jonka muodostavat (CH2)n, ja n = 0 - 1, -NH, -N-Ci-3-alkyyli, -N-Ci-4-alkoksi, happi ja rikki, tai W on ’,· 30 substituoitu samankaltainen radikaali, joka valitaan ryh- mästä, jonka muodostavat (L tai D)proliini ja etyyli (L tai ; D) prolinaatti, morfoliini, pyrrolidiini ja piperidiini; ja farmakologisesti hyväksyttävät orgaaniset ja epäorgaaniset '1' suolat ja metallikompleksit.

Γ\: 35 111716 11

Edullisten toteutusmuotojen kuvaus Tämän keksinnön mukaiset uudet yhdisteet voidaan valmistaa helposti seuraavien kaavioiden mukaisesti.

Lähtöaineina käytettävät 7-(substituoitu amino)-6-5 demetyyli-6-deoksitetrasykliinit, joilla on kaava 1, jossa R = NR1R2 ja Ri = R2 (la) ja R = NHR2 (,1b) , tai niiden suolat valmistetaan alan ammattimiesten tuntemilla menetelmillä, jotka käsittävät US-patenteissa 3 226 436 ja 3 518 306 kuvatut menetelmät.

10 R N(CH,), 15 OH 0 OH 0 0 la - R - H R , R 2, R ^ - R 2 j_b - R-NHR2 20 J_c - R -NR , R2 , R , R2 • ’/· Lähtöaineena käytettävät 7-(substituoitu amino)-6- i demetyyli-6-deoksitetrasykliinit, joilla on kaava 1, jossa ··· R = NR1R2 ja Ri=, / R2 (_lc) , valmistetaan kaavion 1 mukai- • · · » 25 sesti.

• * « ·

,·, ; Kaavio I

• < · • * 1, 1.

V

NHR2 N(CH3>e N N(CH3>2 30 un " . > OH 0 OH 0 0 OH 0 OH 0 0 " . . , k . — 1 · * » “ Ι'ύ 35 < < · 111716 12

Kaavion I mukaisesti 7-(monoalkyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliini, Ib, jossa R = NHR2, alkyloidaan pelkistävästä aldehydillä, jolloin saadaan epäsymmetrinen dialkyyliamino, le.

5 Kaavio II

R N(CH,>2 R |(CH3)j OH 0 ÖHÖH0 0 OH 0 OH5M0 0 10 _I_ · . b . tai « 2.

R N(CH3)z JL ^NH, 15 H2N Il |0HM 11

OH O OH O O

£

Kaavion II mukaisesti 7-(substituoitu amino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliiniä tai sen suoloja, _la - le, käsitellään 20 a) metallinitraattisuolalla; kuten kalsiumilla, ka liumilla tai natriumilla; ja vahvalla hapolla; kuten rikki-!'· : hapolla, trif luorietikkahapolla, metaanisulfonihapolla tai • perkloorihapolla tai 1 1 « · b) typpihapolla ja vahvalla hapolla; kuten rikkiha- • · * * 25 polla, trifluorietikkahapolla, metaanisulfonihapolla tai ]]’; perkloorihapolla; jolloin muodostuu vastaava 7-(substi- !i;' tuoitu amino)-9-nitro-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliini 2.

* ’ Tämän keksinnön mukaisten 9-(amino)-7-(substituoitu amino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinien valmistamiseksi ,* 30 yhdistettä 2 tai sen suoloja käsitellään vedyllä happoalko- ',,,· holiliuottimessa, edullisesti 2-metoksietanolissa, niin et- ; tä läsnä on sopiva katalyytti kuten esimerkiksi: a) mikä tahansa tuettu katalyytti; kuten 0,5 -d* 25-%:inen palladium hiilellä, 0,5 - 25-%:inen palladium ba- • ’,· 35 riumsulfaatilla, 0,5 - 25-%:inen platina hiilellä tai 0,5 - !/>· 25-%:inen rodium hiilellä; 111716 13 b) mikä tahansa pelkistyvä metallioksidikatalyytti; kuten Raney-nikkeli tai platinaoksidi; tai c) homogeeninen hydrauskatalyytti; kuten tris (tri-fenyylifosfiini)rodium(I)kloridi; jolloin saadaan 9-amino- 5 7-(substituoitu amino)-6-demetyyli-6-deoksitetra-sykliini, 3.

Vaihtoehtoisesti tämän keksinnön mukaiset 9-(amino)-7-(substituoitu amino)-6-demetyyli-6-deoksitetra-sykliinit saadaan käsittelemällä: 10 a) tina (II)klorididihydraatilla kuten kuvataan jul kaisussa R.B. Wordward, Org. Syn., Coll. Voi. 3 (1955) 453; b) liukoisella metallisulfidillä, edullisesti nat-riumsulfidillä, alkoholipitoisissa liuottimissa kuten kuvataan julkaisussa G.R. Robertson, Org. Syn., Coll. Voi. 1 15 (1941) 52; c) aktiivisella metallilla mineraalihapossa; kuten raudalla, tinalla tai sinkillä laimeassa vetykloridihapos-sa; d) aktiivisilla metallipareilla; kuten kupari-20 sinkillä, tina-elohopealla tai alumiiniamalgaamilla laimeassa hapossa; tai e) siirtohydrauksella käyttäen trietyyliammonium- * formiaattia ja tuettua katalyyttiä kuten kuvataan julkai- • 1 2 · · sussa I.D. Entwistle et ai., J. Chem. Soc., Perkin 1 (1977) 25 443.

Kaavio III

« · · f M<CH,>e R H(CH,>e ;3.: 30 o öhOHo o oh d 6hBH0 o * i : Kaavion III mukaisesti Z = NO2 tai NH2; yhdiste _4 N-alkyloidaan selektiivisesti niin, että läsnä on formalde- • · hydiä ja joko primaarista amiinia kuten metyyliamiinia, ’,· 35 etyyliamiinia, bentsyyliamiinia, metyyliglysinaattia, 2 • » 3 ’./! (L tai D) lysiiniä, (L tai D)alaniinia tai niiden kanssa sa- 111716 14 mankaltaisia substituoituja yhdisteitä; tai sekundääristä amiinia kuten morfoliinia, pyrrolidiiniä, piperidiiniä tai niiden kanssa samankaltaisia substituoituja yhdisteitä, jolloin saadaan biologisesti aktiivisten 7-(substituoitu 5 amino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinien vastaavia Man-nich-emäsaddukteja, _5. Tarkastellut ekvivalentit käsittävät ne substituoidut morfoliini-, pyrrolidiini- tai piperi-diiniosat, joissa substituentit on valittu niin, että saadaan riittävä liukoisuuden lisäys ilman, että bakteerien 10 vastaiseen aktiivisuuteen vaikutetaan haitallisesti.

9-amino-7-(substituoitu amino)-6-demetyyli-6-deok-sitetrasykliinit, 3, voidaan myös saada metallikomplekseina kuten alumiini-, kalsium-, rauta-, magnesium-, mangaani- ja kompleksisuoloina; epäorgaanisina ja orgaanisina suoloina 15 ja vastaavina Mannich-emäsaddukteina käyttäen alan ammattimiesten tuntemia menetelmiä. Edullisesti 9-amino-7-(substituoitu amino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinit saadaan epäorgaanisina suoloina kuten vetykloridi-, vety-bromidi-, vetyjodidi-, fosfori-, typpi- tai sulfaat-20 tisuoloina; tai orgaanisina suoloina kuten asetaattina, bentsoaattina, sitraattina, kysteiininä tai muina aminohap- • » · : .* poina, fumaraattina, glykolaattina, maleaattina, sukkinaat- · tina, tartraattina, alkyylisulfonaattina tai aryylisulfo- naattina. Kaikissa tapauksissa suolan muodostusta esiintyy ;· 25 C (4)-dimetyyliaminoryhmällä. Suolat ovat edullisia oraalis- ;‘· ta ja parenteraalista antamista varten.

Biologinen aktiivisuus t

Menetelmät in vitro bakteerien vastaista arviointia varten (taulukko 1) 30 Minimiestokonsentraatio (MIC), antibiootin alhaisin pitoisuus, joka inhiboi koeorganismin kasvua, määritetään » : mikrotiitterilihaliemilaimennosmenetelmällä käyttäen 0,1 ml:aa Muller-Hinton II -lihalientä (Baltimore Biologi-cal Laboratories) kuoppaa kohti. Analyysiväliaineeseen li-

* · I

\ ’t 35 sätään sopivaa hapen sitojaa (so. kysteiiniä tai ditiotrei- ’* "· tolia) kaavan I mukaisten yhdisteiden tutkimista varten 111716 15 johtuen niiden yhdisteiden herkkyydestä hapettumiselle. Käytetään 1 - 5 x 105 CFU/ml:n siirrostusmäärää ja antiobi-oottipitoisuuksien aluetta (32 - 0,004 pg/ml). MIC:t määritettiin sen jälkeen, kun levyjä oli inkuboitu 18 tuntia 5 35 °C:ssa syöttöilmainkubaattorissa.

E. colin in vitro -proteiinitranslaatiojärjestely (taulukko 2) E.colin in vitro -translaatiojärjestelyä voidaan käyttää paitsi itse proteiinin siirtomekanismin tutkimi-10 seen, myös vaikutuksen tutkimiseen, joka eri yhdisteillä voi proteiinisynteesiin olla. Järjestely voidaan säätää toimimaan yhdistettynä transkriptio- ja translaatiojärjes-telynä tai vain translaatiojärjestelynä riippuen siitä, lisätäänkö alkuperäiseen proteiinisynteesiin DNA:ta vai 15 RNA:ta. Tällä tavalla voidaan tutkia yhdisteet, jotka vaikuttavat joko RNA-synteesiin ja/tai proteiinisynteesiin. Proteiinisynteesiä tarkkaillaan lisäämällä radioleimattuja aminohappoja trikloorietikkahappoa saostavaan aineeseen. Käytetty järjestely perustuu kirjallisuuden menetelmiin [G. 20 Zubay, Ann. Rev. Genet., 7: 267 - 287 (1973) ja J. Collins, Gene, 6: 28 - 42 (1979)].

: Tetrasykliiniproteiinisynteesin inhibition tutkimi- ·,· j seen käytetty järjestely on seuraavanlainen: *:* Joko tetrasykliiniherkkien tai tetrasykliiniresis- ·· 25 tenttien (tetM+) solujen S30-uute (supernatantti hajotettu- • · · · : jen solujen 30 000 x G:n sentrifugoinnista) yhdistetään seoksen kanssa, jonka muodostavat alhaisen moolimassa omaa- • · · vat yhdisteet, jotka vaaditaan proteiinisynteesiä varten ja . jotka käsittävät 19 aminohapon, metioniinin, 35S-meti- • ·’ 30 oniinin, plasmiditemplaatti-DNA:n ja joko dimetyylisulfok- sidin (DMSO) tai tutkittavan tetrasykliinin seoksen liuo-i tettuna ja laimennettuna DMSO:ssa. Tätä seosta inkuboidaan J". 37 °C:ssa 30 minuuttia. Inkuboinnin jälkeen 2,5 μΐ 10 μ1:η reaktioseoksesta poistetaan ja lisätään 0,5 ml:aan 1 N nat- * ·’ 35 riumhydroksidia. Liuosta inkuboidaan vielä 15 minuuttia 37 °C:ssa mahdollisen m-RNA:n ja t-RNA:n tuhoamiseksi. 35S- 111716 16 metioniinin lisääminen määräytyy saostamalla suuren moolimassan omaava aine natriumhydroksidierässä trikloorietikka-hapolla (TCA:lla), ottamalla saostunut aine talteen Whatman G/FC -suodattimille, kuivaamalla suodattimet ja laskemalla 5 suodattimeen jäänyt radioaktiivisuus. Proteiinisynteesin inhibition prosentuaalinen osuus (P.I.) määritetään seuraa-valla yhtälöllä: suodattimeen jäänyt kokonais-CPM* lisätyn tetrasykliiniyhdisteen 10 läsnä ollessa P.I. = 100 - ---------------------------------- x 100 suodattimeen jäänyt kokonais-CPM* DMSO:ta varten (vertailu) *CPM = lukumäärä minuutissa 15 In vivo bakteerien vastainen arviointi (taulukko 3)

Tetrasykliinien terapeuttiset vaikutukset määritetään akuutteja letaaleja infektioita vastaan erilaisilla stafylokokki- ja E. coli-kannoilla. Naarashiirille, kanta CD-I, Charles River Laboratories (20 ± 2 grammaa), suorite-20 taan vatsakalvonsisäinen injektio riittävällä bakteerimäärällä (suspendoitu lihaliemeen tai sian mahalaukun musii-i niin) käsittelemättöjen vertailujen tappamiseksi 24 - 48 ·,· · tunnin sisällä. Bakteerien vastaiset aineet, jotka sisälty- ·:* vät 0,5 ml: aan 0,2-%:ista vesipitoista agaria, annetaan ··· 25 ihonalaisesti tai oraalisesti 30 minuuttia infektion jäl- .*. : keen. Kun käytetään oraalista annostussuunnitelmaa, eläimi- « · en annetaan olla ilman ruokaa 5 tuntia ennen infektiota ja • · · 2 tuntia sen jälkeen. Viisi hiirtä käsitellään kullakin an-, nostasolla. 7 vuorokauden eloonjäämissuhteet kolmesta eril- 30 lisestä kokeesta yhdistetään keskimääräisen tehokkaan an-noksen (ED50) laskemista varten, i Selitys taulukkoja I - III varten A = 9-amino-7-(dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetra-sykliinivetykloridi • ·’ 35 B = 7-(dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliini- vetykloridi (minosykliinivetykloridi) 111716 17 C = 9-amino-7-(dietyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetra- sykliinisulfaatti D = 7-(dietyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliini- sulfaatti » # t · • · * < t • « * * · * * a • « a · ιη 111716 1 o

Taulukko 1 6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinijohdannaisten bakteerien vastainen aktiivisuus in vitro MIC (pg/ml)

5 Organismi Aa B Ca D

S.aureus UBMS 88-5 (tetM) 0,06 4 0,5 16 S . aureus UBMS 88-4 (tetrasykliiniherkkä) 0,015 0,008 0,03 0,03 10 S . aureus UBMS 90-1 (tetM) 0,25 428 S.aureus UBMS 90-2 (tetM) 0,06 1 0,25 8 S.aureus UBMS 90-3 15 (tetrasykliiniherkkä) 0,015 0,015 0,03 0,03 S.aureus UBMS 88-7 (tetK) 0,12 0,03 0,06 0,12 S.aureus IVES 2943 (metisilliiniresistentti) 0,5 1 0,25 8 20 S . aureus IVES 1983 (metisilliiniresistentti) 0,5 1 0,25 8 V S . aureus CI 2371

j : (metisilliiniresistentti) 0,5 4 ΝΑ NA

·;· S . aureus CI3300

25 (metisilliiniresistentti) 0,25 8 ΝΑ NA

.·. ; Koagulaasinegatiivinen

stafylokokki CI 664 0,003 0,015 NA NA

Koagulaasinegatiivinen

stafylokokki CI 535 1 8 NA NA

• ·’ 30 S. haemolyticus AVAH 88-3 0,06 0,12 0,12 NA

E . f aecalis AMV 120

\ (tetM) 4 16 NA NA

•'‘1. E.faecalis PAM 211

y’ (tetN) 4 16 NA NA

» * » 19 111716 E. faecalis 12201 (vankomysiiniresistentti) 0,5 4 ΝΑ ΝΑ E.faecalis CI 2735 0,5 4 ΝΑ ΝΑ E.coli UBMS 88-1 (tetB) >32 8 2 32 5 E.coli UBMS 88-2 (tet- rasykliiniherkkä) 0,25 0,5 0,5 2

E.coli UBMS 89-1 (tetM) 1 8 2 NA

E.coli UBMS 89-2 (tet- rasykliiniherkkä) 0,5 0,5 0,5 4 10 E.coli UBMS 90-4 (tetM) 4 >32 32 >32 E.coli UBMS 90-5 (tet- rasykliiniherkkä) 0,25 0,5 1 2 M.morqanii NEMC 87-119 2 2 2 32 S.marcescens FPOR 87-33 4 2 4 32 15 P. aeruginosa ATCC 27853 2 4 8 32

X.maltophilia FPOR

87-210 0,12 0,06 0,12 0,25 E.coli ATCC25922 0,25 0,25 0,50 1 E.faecalis ATCC 29212 0,06 0,25 0,12 8 20 S.aureus ATCC 29213 0,008 <0,004 <0,015 <0,015 • 'a In vitro -analyysi suoritetaan kysteiinin (0,05 %) läsnä- : ollessa. B:n ja D:n bakteerien vastainen tehokkuus ei li- ··· sääntynyt kysteiinin läsnä ollessa.

• · » · 25 * tetM-resistenssideterminantti suojaa ribosomit tetrasyk- .·, : liiniltä, tetK-determinantti edistää lääkkeen ulosvirtausta • · * solusta.

• · · » « * t 20 111716

KO

Ή

«H

H # H I '

Q O O

H ® M 0\ ^ Ό (Ο Ό -H OONO>«OMn o j-ι ch o> oo ώ r-f'vi * p 3 vo Tr m i-i00 °

n *H «d *H

tn Λ j Λ •H Ή Ή

•H JS "A

a c h c a m h m

Q

£*"t Λ

4J O

_ ^ rs _ m tn —> m Γ7 r— oo ><r oo φ o\i^

2 ^ Ν0»Ο'<'ηΝ0 W im ^ 'Ot^OQOOO'O

Sir; a S ΓΊ ΟΙΠΓ'ΦΛ^'? H N OOON^^ 000 StS ΐΛΟΟ'ΰ'ίιΠΜΓ- 52 r; ro 05 Sv ^ ^ °2 ω S n 'ί'ΰΐΝΟΟΓ-^Ο >Soo "'""'«csnm .$ «§ xf -<-< ts rs m Ίί m < m

»-S dP

»H I d® •HO ^ ·

O) -H * O

1 o t! oo rs OWN >n m VO '2 Tl οοόοο^-λλ O n -h oooorM^vun^f p p t* m .-i ° ® ° <n tn P ' '5 0 -H H Λ

n χ: H -H

•H *H C Q »O

H a M .S

1 a * -H H

>1 KO <u O >1 4J „ m p ·· o w - ,Λ P2 »n ti- v-> Sk i5 Z? m 00 o-Tf r-tnntn . Söi® So»Z-<00\ooo> w,m ro οοΌοο» mars •h 2 Q ,¾ <N KS?oCirnr'',:r n 2 θ\ oo -* -if \o cS r- 2 ^ rso ° !C ^10 £ f~- ον οοη-<ηο«θ m 5'el^iQ viwafr'00;,r «5 5S 'f <s<nOdios-« υ > ω Σ ^ ^ ~ or rs rs g rs —< —· rs rs ro r*s m • ω 0 * •h ><o

P H

tti »H

m o ·· dP _

Ή -H Ed I PP

w tn t-ι O ^ S > OH S oi £ 2 ί$ S * P CZ^^'0000 ä -s ws « 3 3 h a -h c o .. jc •h >1 a m c h 5

01 >, a £ Ed M

P P Si 3 q OS-I 3 p c p ε o ·*·’· P" 2 »n —. -1 ^ ^ 2 :T s £? r- >n ΟΌΟ m Oi tn r- ; ,· 1 S 2 2 ^ ^^h-aooÖQ £l w r-mvotnr-nom m n m n, ,ϊβ ” οοσνΟ^’β'^'Ο a _ p rs vf ·» « vi Ό rs oo c .’,·. M > «.S Cl oo So - 2> r- σν oo p 5 «d r~- --tn-mors <d ... il ^ SsC; 1^, I~^ ·-' 'T o OO —> ϋ'Ό'Π' r-m t-rs Oi oi VI -n .... il >soo ^ O' d. tN m vn «J £ 4 mrrunxf mti-s· o .:. > .tl ...: cm w M c • . dP dP ω " ’ (N I · 9< • . o * o 2

* · O Ή _ ltd Ή P

% ° il OOOOOOO c ... 5 -H td -H 2

3 -H JC O -2 P

td a c . £ 2 td a s· m -hm p >, nti <u JJ1

>.p „ ’S

; » · 4J ·· O Pd '** m Id ud PS vo tj- <—) *C! <23 ^ tn 00 00 n 5 in 00 ov rs —

... 2 q 2 JS Ov 3 § Q Cr <> S? itd ro rs tn g oi oi rs tr H

* · n .m Μ SsaSf Oipvö V ϋ O. VMO öi in TT tn IS Ed -> m rr _J inr-m^rS^ tund^ 00 vs s 00 co Ό tr --- * 5><us·^- 11 — rs ro o· n v rs rs rs rs rs rs rs rs : , · , td

» » * *H

» * * * H

* * * O (0 U) il] D) (0 (0 O CO W W tf) V) U) O

tnooooooo w <u 2 2 2 9 2 2 il ... spcccccc 2P £££·£££'«

QU) CCCCCC Q CO G G G G G G (D

-H 0) O) 0) tt) 0) O) ··"* 0) QJ QJ QJ 0) Φ U

: . . 3 n-? £ b e a e e „ 22 c § § SS o • O H ,C E ·Η ·γ| ·γ| ·Η ·Η ·Η ° *-» x; Ε ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η Ο 3 -S ^ 5 5 5 5 5 J3 ί 3

*. ’ ·: ia ti IS ^ vorsxt id Ρ IS Ε Orin Q

dj a; Qj O rs -vr oo — ro to tu oi ui orssoo-tmo st os > tn _ ^,· a: ~ « oi > “ ^ .1; J_' ^ ^ 2i 111716

Taulukko 3

Yhdisteiden Ά ja B vaikutukset akuutteihin letaa-leihin infektioihin hiirissä EDso (mg/kg)+

5 Organismi Antibiootin A B

antamistapa E.coli 311 (herkkä) Ihonalainen 2,8 3,1 E.coli UBMS 90-4 (tetM) Ihonalainen 24 >256 10 S . aureus UBMS 90-1 (tetM) Ihonalainen 0,30 1,7 S.aureus UBMS 90-2 (tetM) Oraalinen 1,6 1,8

Ihonalainen 0,53 1,8 15 S . aureus Smith (herkkä) Oraalinen 0,81 0,53

Ihonalainen 0,34 0,32

Yksittäinen annos + Keskimääräinen tehokas annos, joka suojaa 50 % infek-20 toiduista hiiristä

Tutkimustulokset • · · j ',·* Kuten edellä esitetystä tutkimuksesta nähdään, tä- | män keksinnön mukaisilla yhdisteillä on hyvä aktiivisuus ·;· useita erilaisia tetrasykliiniherkkiä ja -resistenttejä « « * i •j. 25 gram-positiivisia ja gram-negatiivisia bakteereita vastaan, • · · * ,·. : erityisesti kantoja E. coli, S. aureus ja E. faecalis vas- • » » — taan, jotka sisältävät tetM- tai tetK-resistenttejä determinantteja. Kuten taulukossa I kuvataan, 9-amino-7-. (dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinivetyklo- : 30 ridilla (A) on hyvä in vitro -aktiivisuus tetrasyk- * » *···* liiniresistenttejä kantoja vastaan, joilla on tetM- • resistenssideterminantti, kuten S. aureus UB;S 88 - 5, S.

.*··. aureus UBMS 90 - 1 ja 90 - 2, E. coli UBMS 89 - 1 ja 90 - 4; ja se on yhtä tehokas kuin 7-(dimetyyliamino)-6- > i t • ·* 35 demetyli-6-deoksitetrasykliinivetykloridi (B) herkkiä kan- i · • ► * toja vastaan. 7-(dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetra- 22 111716 sykliinivetykloridista (B) ja 9-amino-7-(dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinivetykloridista (A) analysoidaan in vitro niiden kyky inhiboida proteiinisynteesiä, joka tapahtuu joko vapaan tyyppisissä tai tetM-suoj atuissa 5 ribosomeissa, käyttäen yhdistettyä transkriptio- ja translaatio j ärj estelyä . Samalla tavalla 9-amino-7-(dietyyli- amino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinisulfaatilla (C) on lisääntynyt bakteerien vastainen aktiivisuus 7-(dietyyliamino)-β-demetyyli-β-deoksitetrasykliinisulfaat-10 tiin (D) nähden.

Molempien yhdisteiden (A & B) todetaan inhiboivan tehokkaasti proteiinisynteesiä vapaan tyyppisissä ribosomeissa ja niillä on yhtä suuret aktiivisuudet (taulukko II) . 7-(dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliini- 15 vetykloridi (B) ei pysty inhiboimaan proteiinisynteesiä, joka esiintyy tetM-suojatuissa ribosomeissa. Sitä vastoin 9-amino-7-(dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasyklii-nivetykloridi (A) on tehokas tetM-suojatuissa ribosomeissa esiintyvän proteiinisynteesin inhiboimisessa, vaikka tarvi-20 taan suurempia lääkemääriä samansuuruisten inhibitioastei-den saavuttamiseen suhteessa vapaan tyyppisiin ribosomei- • ’,· hin.

|t; j 9-amino-7-(dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitet- ·;· rasykliinisulfaatin (A) lisääntynyt aktiivisuus tetrasyk- • « · · 25 liiniherkkiä ja -resistenttejä organismeja (tetM) vastaan : osoitetaan taulukossa 3 eläimille, jotka on infektoitu esi- • » # t*;*# merkkibakteereilla. 9-amino-7- (dimetyyliamino) -6-demetyyli- » · · 6-deoksitetrasykliinisulfaatilla (A) saadaan alhaisemmat . EDsott kuin 7-(dimetyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetra- I ( * 30 sykliinivetykloridilla (B) hiirissä käyttäen S. aureusta ja E. colia, joissa on tetM-resistenssideterminantti. Saman- * ' laiset ED5ö:t saadaan 9-amino-7-(dimetyyliamino)-6- • » f | demetyyli-6-deoksitetrasykliinisulfaatilla (A) ja 7-(dime-tyyliamino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinivetykloridilla * · * : ·’ 35 (B) infektioita vastaan minosykliiniherkillä organismeilla.

• » t > I

23 111716

Kuten taulukoista 1 ja 3 nähdään, uusia 9-amino-7-(substituoitu amino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinejä voidaan käyttää merkittävien eläinsairauksien kuten maito-rauhastulehduksen, ripulin, virtsaelinten alueen infektioi-5 den, ihoinfektioiden, korvainfektioiden, haavainfektioiden ja niiden kaltaisten estämiseen tai kontrolloimiseen.

Uusien 9-amino-7-(substituoitu amino)-6-demetyyli-6-deoksitetrasykliinien parantunut tehokkuus todistetaan in vitro -aktiivisuudella isogeenisiä kantoja vastaan, joihin 10 kantoihin kloonataan resistenttideterminantit kuten tetM (taulukko 1); proteiinisynteesin inhibitiolla tetM-resistenteillä ribosomeilla (taulukko 2); ja in vivo -aktiivisuudella koeinfektioita vastaan, jotka aiheutetaan kannoilla, jotka ovat resistenttejä tetrasykliineille re-15 sistenttideterminanttien, tetM, läsnäolon vuoksi (taulukko 3) .

Kun yhdisteitä käytetään bakteerien vastaisina aineita, ne voidaan yhdistää yhden tai useamman farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan kanssa, esimerkiksi liuottimi-20 en, laimentimien tai niiden kaltaisten kanssa, ja ne voidaan antaa oraalisesti sellaisissa muodoissa kuin tablet-: teinä, kapseleina, dispergoituvina jauheina, rakeina tai • suspensioina, jotka sisältävät esimerkiksi noin 0,05 - 5 % • « » · suspendointiainetta, siirappimaisina aineina, jotka sisäl-25 tävät esimerkiksi noin 10 - 50 % sokeria, ja eliksiireinä, ; jotka sisältävät esimerkiksi noin 20 - 50 % etanolia, ja !..* niiden kaltaisissa muodoissa, tai parenteraalisesti sterii- » * · • · · ’ lien injektoitavien liuosten tai suspensioiden muodossa, jotka sisältävät noin 0,05 - 5 % suspendointiainetta iso-·" 30 tonisessa väliaineessa. Tällaiset farmaseuttiset valmisteet voivat sisältää esimerkiksi noin 25 - noin 90 % aktiivista j aineosaa yhdessä kantajan kanssa, tavallisemmin noin 5-60 ,*··. paino-%.

Tehokas määrä yhdistettä, 2,0 mg/kg kehon painos-: 35 ta - 100,0 mg/kg kehon painosta, pitäisi antaa 1-4 kertaa vuorokaudessa millä tahansa tavallisella antotavalla, joita 24 111716 ovat näihin kuitenkaan rajoittumatta oraalinen, parenteraa-linen (käsittää ihonalaisen, laskimonsisäisen, lihaksen sisäisen, rintalastan sisäisen injektion tai infuusioteknii-kat), paikallinen tai rektaalinen tapa, annostusyksikköfor-5 mulaatioina, jotka sisältävät tavanomaisia ei-toksisia farmaseuttisesti hyväksyttäviä kantajia, adjuvantteja ja ve-hikkeleitä. On kuitenkin ymmärrettävä, että spesifinen an-nostaso ja annostuksen taajuus mille tahansa kyseessä olevalle potilaalle voivat vaihdella ja ne riippuvat eri teki-10 joista, joita ovat mm. spesifisen käytetyn yhdisteen aktiivisuus, metabolinen stabiilisuus ja tämän yhdisteen toimin-ta-aika, ikä, kehon paino, yleinen terveys, sukupuoli, ruokavalio, antotapa ja -aika, erittymisnopeus, lääkeyhdistelmä, kyseessä olevan tilan vakavuus ja hoitoa saava kohde.

15 Nämä aktiiviset yhdisteet voidaan antaa oraalisesti sekä laskimonsisäisellä, lihaksen sisäisellä tai ihonalaisella tavalla. Kiinteitä kantajia ovat mm. tärkkelys, laktoosi, dikalsiumfosfaatti, mikrokiteinen selluloosa, sakkaroosi ja kaoliini, kun taas nestemäisiä kantajia ovat mm. 20 steriili vesi, polyetyleeniglykolit, ei-ioniset pinta-aktiiviset aineet ja ravintoöljyt kuten maissi-, maapähki-: ',· nä- ja seesamiöljyt, siten kuin aktiivisen aineosan luon- |t· | teeseen ja kyseessä olevaan haluttuun antomuotoon sopii.

·:· Edullisesti voidaan sisällyttää adjuvantteja, joita taval- *·· 25 lisesti käytetään farmaseuttisten koostumusten valmistuk- : sessa, kuten aromiaineita, väriaineita, säilöntäaineita ja . y, antioksidantteja, esimerkiksi E-vitamiinia, askorbiinihap- * * * poa, BHT:ta ja BHA:ta.

, Edulliset farmaseuttiset koostumukset valmistuksen '#i; 30 ja antamisen helppouden näkökulmasta ovat kiinteitä koostu- ’···’ muksia, erityisesti tabletteja ja kovatäyte- ja nestetäyte- : kapseleita. Yhdisteiden oraalinen antaminen on edullista.

Nämä aktiiviset yhdisteet voidaan myös antaa paren-teraalisesti tai vatsakalvon sisään. Näiden vapaina emäksi-\ ·’ 35 nä tai farmakologisesti hyväksyttävinä suoloina olevien ak- *· tiivisten yhdisteiden liuokset tai suspensiot voidaan vai- 25 111716 mistaa veteen, johon on sopivasti sekoitettu pinta-aktiivista ainetta kuten hydroksipropyyliselluloosaa. Dispersiot voidaan myös valmistaa glyseroliin, nestemäisiin polyetyleeniglykoleihin ja niiden seoksiin öljyissä. Taval-5 lisissä varastointi- ja käyttöolosuhteissa nämä valmisteet sisältävät säilöntäainetta mikro-organismien kasvun estämistä varten.

Farmaseuttisia muotoja, jotka sopivat injektointi-käyttöön, ovat mm. steriilit vesipitoiset liuokset tai dis-10 persiot ja steriilit jauheet steriilien injektoitavien liuosten tai dispersioiden käyttövalmiiksi valmistusta varten. Kaikissa tapauksissa muodon täytyy olla steriili ja sen täytyy olla siinä määrin juoksevaa, että se on helposti ruiskutettavissa. Sen täytyy olla stabiili valmistus- ja 15 varastointiolosuhteissa ja sen täytyy olla suojattu mikro-organismien kuten bakteerien ja sienien kontaminoivaa vaikutusta vastaan. Kantaja voi olla liuotin tai dispersiovä-liaine, joka sisältää esimerkiksi vettä, etanolia, polyolia (esim. glyserolia, propyleeniglykolia ja nestemäistä poly-20 etyleeniglykolia), niiden sopivia seoksia ja kasvisöljyä.

Keksintöä kuvataan yksityiskohtaisemmin seuraavien | ' spesifisten esimerkkien yhteydessä, joita esimerkkejä ei • tule pitää keksinnön piiriä rajoittavina.

» • 1 • · » • · · • » · » i t · 26 111716

Esimerkki 1 [4S-(4α,12aa)]-4,7-bis(dimetyyliamino)1,4,4a,5,5a,-6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,11-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisulfaatti (1:1) 5 Sekoitettuun jäähauteessa jäähdytettyyn liuokseen, jonka muodostaa 0,444 g [4S—(4a,12aa)]-4,7-bis(dimetyy-liamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3, 10,12,12a-tetra-hydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidivetykloridia, joka on valmistettu US-patentissa 3 226 436 kuvatulla mene-10 telmällä, liuotettuna 15 ml:aan rikkihappoa, lisätään 0,101 g natriumnitraattia. Seosta sekoitetaan kylmässä 45 minuuttia, minkä jälkeen se lisätään tipoittain 500 ml:aan dietyylieetteriä. Muodostunut kiinteä aine otetaan talteen, pestään dietyylieetterillä ja kuivataan, jolloin saadaan 15 0,6 g haluttua tuotetta kiinteänä aineena.

MS (FAB) : m/z 503 (M+H) ja 601 (M+H2S04+H) .

Esimerkki 2 [4S-(4a,12aa)]-7-(dietyyliamino)-4-(dimetyyliami-no)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahyd-20 roksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul-faatti (1:2) «· * • Sekoitettuun jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jonka i muodostaa 0, 660 g [4S— (4a, 12aa) ] -7-(dietyyliamino) -4-(dime- • · · * ··· tyyliamino) -1,4,4a, 5, 5a, 6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tet- • · · · 25 rahydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidivetyklori- • · · · .·. ; dia, joka on valmistettu US-patentissa 3 226 436 kuvatulla • · * I..* menetelmällä, liuotettuna 15 ml: aan rikkihappoa, lisätään t t · ' 0,151 g natriumnitraattia. Seosta sekoitetaan kylmässä, minkä jälkeen se lisätään tipoittain 500 ml:aan dietyyli- *’ 30 eetteriä. Muodostunut kiinteä aine otetaan talteen, pestään ·...’ dietyylieetterillä ja kuivataan, jolloin saadaan 0,8 g ha- : »*. luttua tuotetta kiinteänä aineena.

> | I

!"·! MS (FAB) : m/z 531 (M+H) ja 629 (M+H2S04+H) .

27 111716

Esimerkki 3 [4S-(4α,12aa)]-9-amino-4,7-bis(dimetyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi- 1.11- diokso-2-naftaseenikarboksiamidisulfaatti (1:1) 5 Seosta, jonka muodostaa 2,0 g esimerkin 1 tuotetta 20 ml:ssa 2-metoksietanolia, sekoitetaan 10 minuuttia ja suodatetaan. Suodosta ravistetaan painepullossa 1,0 g:n kanssa 10-%:ista palladiumia hiilellä ja 5 ml:n kanssa 2 N rikkihappoa 207 kPa:n (30 lbsrn) vetypaineessa 1 tunti. Re-10 aktioseos suodatetaan ja suodos väkevöidään tyhjössä puoleen tilavuuteen. Liuos kaadetaan 100 ml:aan dietyylieette-riä, kiinteä aine otetaan talteen, pestään dietyylieette-rillä ja kuivataan, jolloin saadaan 1,6 g haluttua tuotetta kiinteänä aineena.

15 MS (FAB): m/z 473 (M+H).

Esimerkki 4 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4,7-bis(dimetyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi- 1.11- diokso-2-naftaseenikarboksiamidivetykloridi (1:1) 20 Seosta, jonka muodostaa 20,0 g esimerkin 1 tuotetta 250 mlrssa 2-metoksietanolia, sekoitetaan 10 minuuttia ja j * : suodatetaan. Suodosta ravistetaan painepullossa 10,0 g:n • kanssa 10-%:ista palladiumia hiilellä ja 100 ml:n kanssa 1 N etanolipitoista vetykloridia 207 kPa:n (30 lbs:n) vety- 25 paineessa 1 tunti. Reaktioseos suodatetaan ja suodos väke->·> ; voidaan tyhjössä puoleen tilavuuteen. Liuos kaadetaan !,.* 1 1: aan dietyylieetteriä, kiinteä aine otetaan talteen, » · ' pestään dietyylieetterillä ja kuivataan, jolloin saadaan 16,0 g haluttua tuotetta öljynä. Öljy suspendoidaan 30 20 ml:aan tislattua vettä, tehdään happamaksi 2,8 ml :11a ·.,.· 32-%:ista vetykloridihappoa ja väri poistetaan puuhiilellä.

: Seos suodatetaan piimään läpi ja tehdään emäksiseksi (pH

,···, 4,0) väkevällä ammoniumhydroksidilla. Kiinteä aine otetaan talteen 4 °C:ssa, pestään pH 4 vedellä ja kuivataan tyhjös- i * · : .* 35 sä, jolloin saadaan 14,2 g haluttua tuotetta kiinteänä ai- ·,'·· neena.

111716 28 XH NMR (CD3SOCD3) : δ 4,19 (s, 1H, 4-H) ja 7,29 (s, 1H, 8-H) . MS (FAB): m/z 473 (M+H).

Analyysi yhdisteelle C23H28N4O7HCI 6,7 % H2O:

Laskettu: C 50,64; H 6,10; N 10,27; Cl 6,50 5 Todettu:C 50,72; H 6,07; N 10,27; Cl 6,62.

Esimerkki 5 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4,7-bis(dimetyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidi-p-tolueenisulfonaatti 10 (1:1)

Otsikon yhdiste valmistetaan esimerkin 4 menetelmällä käyttäen 20 g: aa esimerkin 1 tuotetta, jolloin saadaan 16,0 g haluttua tuotetta vapaana emäksenä. Vapaa emäs suspendoidaan 20 ml:aan tislattua vettä, tehdään happamaksi 15 p-tolueenisulfonihappomonohydraatilla ja väri poistetaan puuhiilellä. Seos suodatetaan piimään läpi ja tehdään emäksiseksi (pH 4,0) väkevällä ammoniumhydroksidilla. Kiinteä aine otetaan talteen 4 °C:ssa, pestään pH 4 vedellä ja kuivataan tyhjössä, jolloin saadaan 16,0 g haluttua tuotetta.

2 0 Esimerkki 6 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-7-(dietyyliamino)-4-(dime- • tyyliamino)-l,4,4a,5,5a,6,ll,12a-oktahydro-3,10,12,12a- : tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul- • · · · 29 111716

Esimerkki 7 [4S-(4α,12ao)]-4-(dimetyyliamino)-7-(etyylimetyyli amino) -1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetra-hydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidivetykloridi 5 (1:1)

Liuosta, jonka muodostavat 0,460 g [4S-(4a,12aa)]- 4-(dimetyyliamino)-7-(etyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftasee-nikarboksiamidivetykloridia, joka on valmistettu US-paten-10 tissa 3 226 436 kuvatulla tavalla, 0,5 ml 97-%:ista muurahaishappoa ja 0,75 ml 40-%:ista vesipitoista formaldehydiä, kuumennetaan palautusjäähdyttäen 2 tuntia. Reaktioseos jäähdytetään, väkevöidään tyhjössä puoleen tilavuuteen ja kaadetaan dietyylieetteriin. Muodostunut kiinteä aine ote-15 taan talteen, pestään dietyylieetterillä ja kuivataan, jolloin saadaan 0,3 g haluttua tuotetta kiinteänä aineena.

Esimerkki 8 [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-(etyylimetyyli amino) -1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetra-20 hydro-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul-faatti (1:1) j \S Otsikon yhdiste valmistetaan esimerkin 1 menetel- • mällä käyttäen 0,46 g: aa esimerkin 7 tuotetta, jolloin saa- ·*· daan 0,5 g haluttua tuotetta kiinteänä aineena.

f · · · 25 Esimerkki 9 « M · .·, : [4S- (4a, 12aa) ] -9-amino-4- (dimetyyliamino) -7- (etyy- » * * !,. ’ limetyyliamino)-1,4,4a,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a- * f * tetrahydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul-faatti (1:1) 30 Otsikon yhdiste valmistetaan esimerkin 3 menetel- mällä käyttäen 1,0 g:aa esimerkin 8 tuotetta, jolloin saa- | daan 0,8 g haluttua tuotetta kiinteänä aineena.

1 ·

! I

30 111716

Esimerkki 10 [4S- (4α, 12aot) ] -4- (dimetyyliamino) -7- [ (1-metyyli-etyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiami-5 disulfaatti (1:1)

Otsikon yhdiste valmistetaan esimerkin 1 menetelmällä käyttäen 0,48 g:aa [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)- 7-[(1-metyylietyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksi-10 amidivetykloridia, joka on valmistettu US-patentissa 3 226 436 kuvatulla menetelmällä, jolloin saadaan 0,5 g haluttua tuotetta kiinteänä aineena.

Esimerkki 11 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-15 metyylietyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro- 3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseenikarbok-siamidisulfaatti (1:1)

Otsikon yhdiste valmistetaan esimerkin 3 menetelmällä käyttäen 2,1 g:aa esimerkin 10 tuotetta, jolloin saa-20 daan 1,5 g haluttua tuotetta kiinteänä aineena.

Esimerkki 12 • * • ' · [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-(etyyliamino)- : : : 1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9- ;· nitro-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisulfaatti (1:1) • * * » 25 Otsikon yhdiste valmistetaan esimerkin 1 menetel- • « * * ,·, : mällä käyttäen 0,96 g:aa [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)- !./ 7-(etyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a- • » | ‘ tetrahydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidia, joka on valmistettu US-patentissa 3 226 436 kuvatulla menetel-·’ 30 mällä, jolloin saadaan 0,9 g haluttua tuotetta kiinteänä aineena.

i · t 3i 111716

Esimerkki 13 [4S- (4α, 12aoc) ] -9-amino-4- (dimetyyliamino) -7- (etyyli amino) -1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetra-hydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisulfaatti 5 (1:1)

Otsikon yhdiste valmistetaan esimerkin 3 menetelmällä käyttäen 1,0 g: aa esimerkin 12 tuotetta, jolloin saadaan 0,7 g haluttua tuotetta kiinteänä aineena.

Esimerkit 14 - 35 10 Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka on lue teltu jäljempänä esimerkeissä 14 - 35, valmistetaan oleellisesti noudattaen edellä esimerkeissä 3 ja 9 yksityiskohtaisesti kuvattuja menetelmiä.

Esimerkki 14 15 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-(metyy- lipropyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro3, 10,12,12a-tetrahydroksi-1,1l-diokso-2-naftaseenikarboksiamidi-sulfaatti

Esimerkki 15 20 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-(butyy- limetyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a- • tetrahydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidi- : sulfaatti ··· Esimerkki 16 • * * i 25 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[1-me- «llt : tyylipropyyliamino)metyyliamino]-1, 4,4a, 5, 5a, 6,11, 12a-ok- t < * tahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftasee- > » » nikarboksiamidisulfaatti

Esimerkki 17 30 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(2- >..* metyylipropyyli)metyyliamino] -1, 4,4a, 5, 5a, 6,11,12a-okta- * ; 7 ; hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseeni- ,*··, karboksiamidisulfaatti I t

f » I

I ! t 32 111716

Esimerkki 18 [4 S—(4α,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-(etyy-lipropyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,-12a-tetrahydroksi-l,1l-diokso-2-naftaseenikarboksiamidi-5 sulfaatti

Esimerkki 19 [ 4 S—(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylietyyli)etyyliamino]-1,4,4a,5, 5a, 6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseenikarbok-10 siamidisulfaatti

Esimerkki 20 [4 S— (4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-(butyy-lietyyliamino)-1,4,4a,5,5a, 6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-1,1l-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul-15 faatti

Esimerkki 21 [4 S—(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipropyyli)etyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-okta-hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseeni-20 karboksiamidisulfaatti

Esimerkki 22 : [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(2- ♦ metyylipropyyli) etyyliamino]-1,4,4a, 5, 5a, 6,11,12a-okta- hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l, ll-diokso-2-naftaseeni-*·· 25 karboksiamidisulfaatti ;'. | Esimerkki 23 [4S-(4a,12aa)] -9-amino-4- (dimetyyliamino) -7- (dipro-pyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10, 12,12a-, , tetrahydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul- 30 faatti

Esimerkki 24 : [ 4S- (4a, 12aa) ] -9-amino-4- (dimetyyliamino) -7- [ (1- : "; metyylietyyli)propyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-okta- hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l, ll-diokso-2-naftaseeni-·’ 35 karboksiamidisulfaatti 33 111716

Esimerkki 25 [4 S—(4α,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-(butyy-lipropyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,-12a-tetrahydroksi-l,1l-diokso-2-naftaseenikarboksiamidi-5 sulfaatti

Esimerkki 26 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipropyyli)propyyliamino]-1,4,4a, 5,5a, 6,11,12a-okta-hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseeni-10 karboksiamidisulfaatti Esimerkki 27 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(2-metyylipropyyli)propyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-o kta-hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseeni-15 karboksiamidisulfaatti Esimerkki 28 [4 S —(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylietyyli)butyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseenikar-20 boksiamidisulfaatti Esimerkki 29 t · · i ’.· [4S-(4a, 12aa) ]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1- • · ·,* f metyylietyyli) (1-metyylipropyyli) amino]-1, 4 , 4a, 5,5a, 6, 11,- 12a-oktahydro-3, 10,12,12a-tetrahydroksi-l, ll-diokso-2-naf-··· 25 taseenikarboksiamidisulf aatti .: Esimerkki 30 [4S — (4a, 12aa) ] -9-amino-4- (dimetyyliamino) -7- [ (1- metyylietyyli)(2-metyylipropyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,-, . 12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naf- '* 30 taseenikarboksiamidisulfaatti ··' Esimerkki 31 ; [4S-(4a, 12aa) ]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-(dibu- tyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10, 12,12a-"· t tetrahydroksi-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul- : ** 35 faatti * * » 34 111716

Esimerkki 32 [4 S—(4α,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipropyyli)butyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-okta-hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseeni-5 karboksiamidisulfaatti Esimerkki 33 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(2-metyylipropyyli)butyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-okta-hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l, ll-diokso-2-naftaseeni-10 karboksiamidisulfaatti Esimerkki 34 [4S-(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipropyyli)amino]-1,4,4a,5,5a, 6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseenikarbok-15 siamidisulfaatti

Esimerkki 35 [4 S —(4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipropyyli)(2-metyylipropyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6, -11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l, ll-diokso-2-2 0 naftaseenikarboksiamidisulfaatti Esimerkit 36 - 39 • * • ·* Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka on lue- : teltu jäljempänä esimerkeissä 36 - 39, valmistetaan oleel- lisesti noudattaen edellä esimerkeissä 3 ja 11 yksityiskoh-··· 25 taisesti kuvattuja menetelmiä.

:*·,· Esimerkki 36 [4S— (4a, 12aa) ] -9-amino-4- (dimetyyliamino) -7- (pro-pyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-·,. tetrahydroksi-1, ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul- 30 faatti

Esimerkki 37 ;,· j [4S-(4a, 12aa) ]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-(butyy- : : liamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetra- hydroksi-1, ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisulfaatti 35 111716

Esimerkki 38 [4 S—(4α,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(2-metyylipropyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseenikarbok-5 siamidisulfaatti

Esimerkki 39 [ 4 S— (4a,12aa)]-9-amino-4-(dimetyyliamino)-7-[(1,1 — dimetyylietyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2-naftaseenikarbok-10 siamidisulfaatti

Esimerkit 40-65 Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet, jotka on lueteltu jäljempänä esimerkeissä 40 - 65, valmistetaan oleellisesti noudattaen edellä esimerkeissä 1 ja 2 yksityiskoh-15 taisesti kuvattuja menetelmiä.

Esimerkki 40 [4 S—(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-(metyylipropyy-liamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetra-hydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul-20 faatti

Esimerkki 41 : [4S— (4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-(butyylimetyy- ·.; · liamino) -1,4,4a, 5, 5a, 6,11,12a-oktahydro-3, 10, 12, 12a-tetra- '!· hydro ks i -9-nit ro-1,1 l-diokso-2-naf taseeni karboksiamidi sul- *;· 25 faatti ·*· · Esimerkki 42 • * · [4S— (4a, 12aa) ] -4- (dimetyyliamino) -7- [ (1-metyylipro- • » · pyyliamino)metyyliamino]-1,4,4a,5, 5a, 6,11,12a-oktahydro- .. . 3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftasee- » · j,| 30 nikarboksiamidisulfaatti

Esimerkki 43 i [4S-(4a, 12aa) ]-4-(dimetyyliamino)-7-[ (2-metyylipro- * · · · pyyli)metyyliamino] -1,4,4a, 5, 5a, 6,11,12a-oktahydro-3,10, -12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l, ll-diokso-2-naftaseenikar- » # *_ 35 boksiamidisulfaatti 36 111716

Esimerkki 44 [4 S—(4α,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-(etyylipropyy-liamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetra-hydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul-5 faatti

Esimerkki 45 [4 S —(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyy-lietyyli)etyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l, ll-diokso-2-naftasee-10 nikarboksiamidisulfaatti

Esimerkki 46 [4 S—(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-(butyylietyy-liamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetra-hydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul-15 faatti

Esimerkki 47 [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipro-pyyli)etyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11, 12a-oktahydro-3,10,-12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikar-20 boksiamidisulfaatti

Esimerkki 48 » » · ; ,· [4 S—(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(2-metyyli- j(; j propyyli) etyyliamino)-1,4, 4a, 5,5a, 6, 11, 12a-oktahydro- ;· 3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftasee- *·· 25 nikarboksiamidisulfaatti ·*. : Esimerkki 49 [4S-(4a,12aa)]-4 - (dimetyyliamino) - 7- * · · (dipropyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11, 12a-oktahydro-, 3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2- 30 naf taseenikarboksiamidisulf aatti i

Esimerkki 50 i ;’· [4S-(4a, 12aa) ]-4-(dimetyyliamino)-7-[ (1-metyyli- etyyli)propyyliamino]-1,4,4a,5,5a, 6,11,12a-oktahydro-3, 10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l, ll-diokso-2-naftasee- » » » ·’ 35 nikarboksiamidisulfaatti » » 37 111716

Esimerkki 51 [4S-(4α,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-(butyylipropyy-liamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetra-hydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul-5 faatti

Esimerkki 52 [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipro-pyyli)propyyliamino]-1,4,4a,5,5a, 6, 11, 12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftasee-10 nikarboksiamidisulfaatti Esimerkki 53 [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(2-metyylipro-pyyli)propyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftasee-15 nikarboksiamidisulfaatti Esimerkki 54 [4 S—(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyyli-etyyli)butyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftasee-20 nikarboksiamidisulfaatti Esimerkki 55 ; [4S— (4a, 12aa) ] -4-(dimetyyliamino) -7-[ (1-metyyli- II j etyyli)(1-metyylipropyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a- ·;· oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l, ll-diokso-2- ·]· 25 naftaseenikarboksiamidisulfaatti : Esimerkki 56 • 1 » [4S- (4a, 12aa) ] -4- (dimetyyliamino) -7- [ (1-metyyli-etyyli)(2-metyylipropyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-, . oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l, ll-diokso-2- 30 naftaseenikarboksiamidisulfaatti '1··' Esimerkki 57 ; [4S-(4a, 12aa) ]-4-(dimetyyliamino)-7-(dibutyyli- amino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l, ll-diokso-2-naftaseenikarboksi- * ·’ 35 amidisulfaatti

» I

1 1 < · 38 111716

Esimerkki 58 [4S-(4α,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipro-pyyli)butyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,-12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikar-5 boksiamidisulfaatti

Esimerkki 59 [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(2-metyylipro-pyyli)butyyliamino]-1,4,4a,5,5a,6,11, 12a-oktahydro-3,10,-12,12a-tetrahydroksi-9-nitro~l,ll-diokso-2-naftaseenikar-10 boksiamidisulfaatti

Esimerkki 60 [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipro-pyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,1l-diokso-2-naftaseenikarboksiami-15 disulfaatti

Esimerkki 61 [4S-(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(1-metyylipro-pyyli) (2-metyylipropyyli)amino]-1,4,4a, 5,5a, 6,11,12a-okta-hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naf-20 taseenikarboksiamidisulfaatti

Esimerkki 62 f * · • ,· [4 S—(4a,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-(propyyliami- j j no)-1,4,4a, 5,5a, 6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahyd- ;· roksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisul- ·*· 25 faatti : Esimerkki 63 * > · * * [4S- (4a, 12aa) ] -4- (dimetyyliamino) -7- (butyyliamino) - » * · 1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-, , nitro-1,ll-diokso-2-naftaseenikarboksiamidisulfaatti i * ’ 30 Esimerkki 64 [4S- (4a, 12aa) ] -4- (dimetyyliamino) -7- [ (2-metyylipro-i pyyli) amino]-1,4, 4a, 5,5a, 6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a- tetrahydroksi-9-nitro-l,1l-diokso-2-naftaseenikarboksiami-^ disulfaatti i t * i 39 111716

Esimerkki 65 [ 4 S— (4α,12aa)]-4-(dimetyyliamino)-7-[(1,1-dimetyy-1ietyyli)amino]-1,4,4a,5,5a,6,11,l2a-oktahydro-3,10,12,12 a-tetrahydroksi-9-nitro-l,1l-diokso-2-naftaseenikarboksiami-5 disulfaatti » > t 4 I * » * * * * I » S « * » < » I « I i i I t > · ! 1 t

Claims

40 111716

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen tetrasykliini yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava I tai II 5 R "(CHj),

10 H*M IMI oh π n OH 0 OH 0 0 (II) R H(CH3)2 OH 0 OH °H 0 0 jossa:

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [4S-(4a, 12aa) ]-25 9-amino-4,7-bis (dimetyyliamino) -l,4,4a,5,5a,6,ll,12a-okta-hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l, ll-diokso-2-naftaseeni- • · 1 karboksiamidisulfaatti (1:1).

« « · '·' 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [4S-(4a,12aa)]-; '.· 30 9-amino-4,7-bis (dimetyyliamino)-1, 4,4a, 5, 5a, 6,11,12a-okta- :>(ΐί hydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l, ll-diokso-2-naftaseeni- ; ,·. karboksiamidivetykloridi (1:1). • · » > » t • · · 42 111716

2. R = NRiR2, ja kun Ri = vety R2 = etyyli, n-propyyli tai 1-metyylietyyli; • ja kun Ri = metyyli, 4 < · » .:. R2 = metyyli, etyyli tai n-propyyli; • · · · 25 ja kun Ri = etyyli, R2 = etyyli; • 4 * R3 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat haarautumaton tai ’·’ ’ haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; C6-io_aryyliryhmä; C7-g-aral- kyyliryhmä; ja - (CH2) nCOORs, kun n = 1 - 4, ja R5 valitaan ; ’.· 30 ryhmästä, jonka muodostavat vety; haarautumaton tai haarau- !it>! tunut Ci-3-alkyyliryhmä; ja C6-io~anyyliryhmä; ; R4 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat haarautumaton tai , 1. * haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; C6-io-aryyliryhmä; C7-9- aralkyyliryhmä; ja - (CH2) nCOORö, kun n = 1 - 4; ; V 35 R6 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat vety; haarautumaton tai haarautunut Ci-3-alkyyli; ja Cö-io-aryyli; 41 111716 tai R3 ja R4 muodostavat yhdessä ryhmän - (CH2) 2W (CH2) 2-, jossa W valitaan ryhmästä, jonka muodostavat (CH2) n ja n = 0 - 1, -NH, -N-Ci-3-alkyyli, -N-C1-4-alkoksi, happi ja rikki, tai W on substituoitu samansukui-5 nen radikaali, joka valitaan ryhmästä, jonka muodostavat (L tai D)proliini ja etyyli(L tai D)prolinaatti, morfoliini, pyrrolidiini ja piperidiini, sen farmakologisesti hyväksyttävien orgaanisten ja epäorgaanisten suolojen ja metalli-kompleksien valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 10 yhdiste, jolla on kaava III R N(CH3)2 (iii) 5 °2n I II I ÖH li II OH 0 OH 0 0 jossa R on edellä määritelty,saatetaan reagoimaan pelkisti-20 men kanssa kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, ja haluttaessa näin saatu kaavan I mukainen yhdiste N-*'1’; alkyloidaan kaavan II mukaisen yhdisteen saamiseksi.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [4S-(4a,12aa)]-9-amino-7-(dietyyliamino)-4-(dimetyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,-11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-l,ll-diokso-2- 5 naftaseenikarboksiamidisulfaatti (1:2).

5. Yhdiste, jolla on kaava III tai IV R |(CHj), (III> OH 0 OH °H 0 0

15. M(CH$)2 uv) OH 0 OH 0 0 20 ;’· : jossa: • R = NR1R2 ja kun Ri = vety,

25 R2 = etyyli, n-propyyli tai 1-metyylietyyli ; ja kun Ri = metyyli, R2 = metyyli, etyyli tai n-propyyli; • ja kun Ri = etyyli, R2 = etyyli; : ,· 30 R3 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat haarautumaton tai haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; C6-io-aryyliryhmä; C7-9-aral-: kyyliryhmä; ja - (CH2) nCOORs, kun n = 1 - 4, ja R5 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat vety; haarautumaton tai haarau- » · tunut Ci-3-alkyyliryhmä; ja C6-io_aryyliryhmä; 43 111716 R-4 valitaan ryhmästä, jonka muodostavat haarautumaton tai haarautunut Ci-3-alkyyliryhmä; C6-io~aryyliryhmä; C7-9-aral-kyyliryhmä; ja - (CH2) nC00R6, kun n = 1 - 4, ja Rö valitaan ryhmästä, jonka muodostavat vety; haarautumaton 5 tai haarautunut Ci-3-alkyyli; ja C6-io~aryyli; tai R3 ja R4 muodostavat yhdessä ryhmän -(CH2) 2W(CH2) 2-, jossa W valitaan ryhmästä, jonka muodostavat (CH2)n, ja n = 0 - 1, -NH, -N-Ci-3-alkyyli, -N-Ci-4-alkoksi, happi ja rikki, tai W on subs-tituoitu samansukuinen radikaali, joka valitaan ryhmästä, 10 jonka muodostavat (L tai D)proliini ja etyyli(L tai D)prolinaatti, morfoliini, pyrrolidiini ja piperidiini; ja farmakologisesti hyväksyttävät orgaaniset ja epäorgaaniset suolat ja metallikompleksit.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen yhdiste, 15 tunnettu siitä, että se on [4S-(4a,12aa)]-4,7- bis(dimetyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,-12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l,ll-diokso-2-naftaseenikar-boksiamidisulfaatti (1:1).

7. Patenttivaatimuksen 5 mukainen yhdiste, 20 tunnettu siitä, että se on [ 4S-(4a, 12aa) ]-7- (dietyyliamino)-4-(dimetyyliamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-oktahydro-3,10,12,12a-tetrahydroksi-9-nitro-l, ll-diokso-2-I naftaseenikarboksiamidisulfaatti (1:2). • · « · « » • * « t · > t » « 111716