DE91543T1 - Anti-interferon antikoerper und verfahren zu deren herstellung. - Google Patents
Anti-interferon antikoerper und verfahren zu deren herstellung.Info
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Claims (22)
- EP 85 101 A71.7
A/S Alfred BenζonΊ . Antikörper die gegen solche immunologischen Determinanten der menschlichen Le-Form Interferonproteine entstanden sind oder im wesentlichen nur gegen diese gerichtet sind, welche, unter SDS PAGE-und Markierungsbedingungen, wie sie hierin definiert sind, bei einer vollständigen Interferonbeladung von 0.9 x 10 IFU zwei scharfe, markierte Haupt-Proteinbanden zeigen, die bei 18.400 bzw.20.100 Daltons antivirale Interferonaktivität aufweisen sowie eine markierte Neben-Proteinban.de, die zwischen 20.300 und 20.400 Daltons antivirale Interferonaktivität aufweist, zusammen mit kleineren Peaks von antiviraler Interferonaktivität bei 19-500, 21.130 und 23.440 Daltons (wobei das genannte Dalton-Molekulargewicht einer experimentellen Genauigkeit von ■- 200 Daltons unterworfen ist) , und die markierten Proteinregionen der genannten SDS PAGE Acrylamidgradienten im wesentlichen nur markierte Interferonproteine sind. - 2. Antikörper, die gegen solche immunologischen Determinanten der menschlichen Le-Form Interferonproteine entstanden sind oder im wesentlichen nur gegen diese gerichtet sind, welche unter SDS-PAGE-und Markierungsbedingungen, wie sie hierin definiert sind, bei einer vollständigen Interferonbeladung von 3.8 χ 10 IFU sechs markierte Proteinbanden zeigen, die antivirale Interferon-QQ aktivität aufweisen, mit starken Banden bei 18.410 bzw. 20.180 Daltons, einer mittelstarken Bande bei 20.400 Daltons und gerade noch sichtbaren Banden bei 19-500, 21.130 bzw. 23.400 Daltons (wobei das genannte Oalton-Molekulargewicht einer experimentellen Genauigkeit vonoc - 200 Daltons unterworfen ist), wobei die Peaks mit antiviraler Interferonaktivität genau mit den markiertenProteinbanden übereinstimmen und die markierten Proteinregionen des genannten SDS PAGE Acrylamidgradienten im wesentlichen nur markierte Interferonproteine sind.
- 3. Antikörper, die gegen irgendeins der Proteine öder Kombinationen der einzelnen Proteine entstanden sind oder im wesentlichen nur gegen diese gerichtet sind, welche antivirale Interferonaktivität aufweisen und Komponenten der menschlichen Le-Form Interferonproteine gemäß Anspruch 1 oder 2 sind.
- 4. Antikörper nach Anspruch 3, erhalten durch Immunisieren eines immunisierbaren Tiers mit den menschlichen Le-Form Interferon- Komponenten der Proteine gemäß Anspruch 1 oder 2f welche die Molekulargewichte 18.400 -200 oder 20.100 - 200 ^altons aufweisen oder Kombinationen der Proteine mit 18.400 - 200 und 20.100 i 200 Daltons Molekulargewicht.
- 5. Verfahren zürn Herstellen von Antikörpern nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4r wobei ein immunisierbares Tier mit den menschlichen Le-Form Interferonproteinen gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4 immunisiert wird und das Antiserum aus dem Tier erhalten wird.
- 6. Verfahren nach Anspruch 5, wobei die menschlichen Le-Form Interferonproteine,, die für das Immunisieren verwendet werden, aus der entsprechenden Bande oder den entsprechenden Banden aus dem SDS-PAGE-GeI geschnitten werden.
- 7- Verfahren nach Anspruch 6, wobei die Banden aus den SDS-PAGE-GeI nach Markierung des genannten Gels und kurzem Waschen in destilliertem Wasser geschnitten werden.
- 8. Verfahren nach mindestens einem der Ansprüche 5 bis 7 t wobei das Immunisieren mit einer stabilisierten wässrigen Lösung des (der) Interferonproteins (Interferon--3-proteine ) durchgeführt wird.
- 9- Verfahren nach Anspruch 8, wobei der in der stabilisierten ? wässrigen Lösung vorhandene Stabilisator SDS ist. 5
- 10. Verfahren nach Anspruch 8 oder Anspruch 9, wobei die stabilisierte, wässrige Lösung des (der) Interferonproteins (Interferonproteine ) mit PBS bei einem pH-Wertvon etwa 7,2 gepuffert ist.
10 - 11. Verfahren nach mindestens einem der Ansprüche 8 bis 1O1 wobei die stabilisierte, wässrige Lösung ein Adjuvans enthält.
- 12. Verfahren nach Anspruch 11 ,wobei das Adjuvans Freund's Adjuvans ist.
- 13- Verfahren zum Herstellen von Antikörpern gemäß mindestens einem der Ansprüche 1 bis 4r wobei ein Hybridoma-Zellklon kultiviert wird, der Antikörper produziert, die gegen immunologische Determinanten der menschlichen Le-Form Interferonproteine gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4 gerichtet sind und die Antikörper aus dem Kulturmedium wiedergewonnen werden.
- 14. Antikörper, hergestellt nach irgendeinem der Ansprüche 5 bis IS
- IS. Antikörper gemäß mindestens einem der Ansprüche 1 bis 4 oder 1 4 Coder Fragmente oder Abkömmlinge dieser, die die wesentlichen Antiinterferon-Determinanten behalten haben), die an eine Matrix immobilisiert sind.
- 16. Antikörper nach Anspruch 15, die kovalent an die Matrix gebunden sind.
- 17- Antikörper nach Anspruch 16, wobei die Matrix eine vernetzte Agarose, beispielsweise Sepharose 4 B ist.
- 18. Matrix-immobilisierte Antikörper gemäß mindestens einem der Ansprüche 15 bis 17f die im wesentlichen frei von proteolytischer Enzymaktivität sind.
- 19- Matrix-immobilisierte Antikörper gemäß Anspruch 18, die im wesentlichen von proteolytischer Enzymaktivität durch Behandlung mit Enzyminhibitoren oder Enzyme zerstörenden Mitteln gereinigt wurden.
- 20. Matrix-immobilisierte Antikörper nach Anspruch 19/, wobei die Behandlung mit Enzyminhibitoren oder Enzyme zerstörenden Mitteln durch Matrix-immobilisierte Enzyminhibitoren oder Enzyme zerstörenden Mitteln durchgeführt wird.
- 21. Matrix-immobilisierte Antikörper nach Anspruch 20, die, vor dem kovalenten Binden an die Matrix, durch eine Säule mit Matrix-immobilisiertem Poly-Lysin und/oder Matrix-immobilisiertem Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor und/ oder Matrix-immobilisiertem Kallikrein-Inaktivator geschickt werden.
- 22. Verwendung der Antikörper, wie sie nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 4 und 14 bis 21 beansprucht werden zum Reinigen von Lösungen, die menschliche Le-Form Interferone enthalten.
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