DE69900718T2

DE69900718T2 - Synthetische polysaccharide, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen

Info

Publication number: DE69900718T2
Application number: DE69900718T
Authority: DE
Inventors: Johannes Basten; Cornelia Dreef-Tromp; Pierre-Alexandre Driguez; Philippe Duchaussoy; Jean-Marc Herbert; Maurice Petitou; Boeckel Constant Van
Original assignee: Sanofi Synthelabo SA; Akzo Nobel NV
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 1998-01-19
Filing date: 1999-01-13
Publication date: 2002-08-22
Anticipated expiration: 2019-01-14
Also published as: IL137241A0; EE200000429A1; AU741748B2; WO1999036443A1; BR9907025A; NO329903B1; ES2168000T3; SK283411B6; ATE209219T1; EP1049721A1; KR100513196B1; US6528497B1; EE04157B1; SK10782000A3; SI1049721T1; JP2002509164A; CA2317465A1; PL202802B1; MA26597A1; FR2773804A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue synthetische Polysaccharide mit den antikoagulierenden und antithrombotischen pharmakologischen Wirkungen von Heparin.
Heparin gehört der Familie der Glykosaminoglykane (GAGs) an, welche natürliche heterogene sulfatierte Polysaccharide darstellen.
Heparinpräparate sind Mischungen von Ketten, die eine Anzahl von Monosaccharideinheiten aufweisen, die sich von 10 bis 100 und darüber hinaus erstreckt. Zu dieser Heterogenität der Molekülgröße kommt eine Heterogenität der Struktur im Bereich der Art der die Polysaccharide bildenden Monosaccharide jedoch auch im Bereich der Substituenten, die sie tragen (L. Roden in: "The Biochemistry of Glycoproteins and Glycosaminoglycans", hergb. von W. J. Lennarz, Plenum Press, New York und London (1980), 267-371).
Jede Familie der natürlichen GAGs besitzt im allgemeinen einen breiten Fächer von pharmakologischen Wirkungen. Sie sind sämtlich vereinigt in den Präparaten, die man ausgehend von den natürlichen Produkten erhalten kann. So entfalten beispielsweise die Heparine und die Heparansulfate eine antithrombotische Wirkung, die mit der gleichzeitigen Wirkung auf mehrere Gerinnungsfaktoren verknüpft ist.
Heparin katalysiert insbesondere über Antithrombin III (AT III) die Inhibierung von zwei Enzymen, die in der Blutgerinnungskaskade auftreten, d. h. den Faktor Xa und den Faktor IIa (oder Thrombin). Heparinpräparate mit niedrigem Molekulargewicht (HBPM) enthalten Ketten, die aus 4 bis 30 Monosacchariden gebildet sind und besitzen die Eigenschaft, selektiver auf den Faktor Xa als auf Thrombin einzuwirken.
Bestimmte synthetische Oligosaccharide, insbesondere die in der EP 84999 beschriebenen, besitzen die Fähigkeit, selektiv über Antithrombin III den Faktor Xa zu inhibieren, ohne eine Wirkung auf Thrombin auszuüben.
Es ist bekannt, daß die Inhibierung des Faktors Xa eine Bindung des Heparins an AT III über die Bindungsdomäne des Antithrombins (DLA) erfordert und daß die Inhibierung des Faktors IIa (Thrombin), eine Bindung an AT III über DLA sowie für Thrombin über eine Bindungsdomäne, die weniger gut definiert ist (DLT).
Die synthetischen Oligosaccharide, die der Domäne DLA des Heparins entsprechen, sind bekannt und entfalten bei der Venenthrombose eine antithrombotische Wirkung. Diese Verbindungen sind in EP 529715, EP 621282 und in dem Patent CA 2.040.905 beschrieben.
Die Wirksamkeit dieser Oligosaccharide bei der Vorbeugung der arteriellen Thrombose wird jedoch durch ihre Unfähigkeit, Thrombin zu inhibieren, beeinträchtigt.
Eine Synthese von Glykosaminoglykanen des Heparin-Typs, die in der Lage sind, Thrombin über die Aktivierung von AT III zu inhibieren, ist in der Patentanmeldung PCT/FR 97/01344 beschrieben.
In dieser Patentanmeldung sind neue biologisch aktive Polysaccharidderivate beschrieben, die insbesondere Antikoagulantien und Antithrombotika darstellen. Durch die Möglichkeit, diese Polysaccharide synthetisch zu erhalten, ist es möglich, selektiv ihre Struktur zu modifizieren und insbesondere unerwünschte Sulfat-Substituenten zu eliminieren, die die Wechselwirkung mit bestimmten basischen Proteinen, wie dem Plättchenfaktor 4 (FP4) stören, der bei der Aktivierung der Plättchen freigesetzt wird und in starkem Maße das Heparin in der Nähe des Blutpfropfens neutralisiert. So kann man Polysaccharide erhalten, die starke antithrombotische und antikoagulierende Mittel darstellen und die in vivo der Wirkung von Proteinen, wie FP4, entgehen können, die die Wirkung des Heparins insbesondere auf Thrombin neutralisieren.
Es konnte insbesondere gezeigt werden, daß diese sulfatierten und alkylierten Polysaccharide in Abhängigkeit von der Anordnung der Alkylgruppen und der Sulfatgruppen, die von dem Zuckergerüst getragen werden, starke Antithrombotika und Antikoagulantien darstellen.
Ganz allgemein wurde gefunden, daß es durch Erzeugung von Polysaccharidsequenzen möglich ist, mit Präzision die Wirkungen vom Typ der GAGs zu modulieren und sehr aktive Produkte zu erhalten, die die Eigenschaften von Heparin besitzen.
Die therapeutische Verwendung bestimmter Produkte, die in der Patentanmeldung PCT/FR 97/01344 beschrieben sind, in der Humantherapie kann sich jedoch als schwierig erweisen, insbesondere wenn die Produkte eine hohe Halbwertszeit besitzen. Im Bereich der Vorbeugung oder der Behandlung der Thrombose mit den obigen Produkten muß man die Fluidität des Blutes wieder herstellen oder aufrechterhalten, ohne jedoch eine Blutung zu verursachen. Der vitale Charakter der hier angesprochenen Funktionen macht es erforderlich, daß man zur Erzielung dieses Gleichgewichts nur Verbindungen mit einer kurzen Halbwertszeit einsetzt, die leichter zu handhaben sind.
Es ist gut bekannt, daß bei einem behandelten Patienten aus irgendeinem zufälligen Grund eine Blutung ausgelöst werden kann. Es kann auch erforderlich sein, bei dem Kranken, der einer antithrombotischen Behandlung unterworfen wird, einen chirurgischen Eingriff vorzunehmen. Diese verschiedenen Gründe haben zur Folge, daß es bevorzugt ist, Verbindungen mit einer kurzen Halbwertszeit einzusetzen.
Die Halbwertszeit der erfindungsgemäßen synthetischen Polysaccharide wurde bei der Ratte bestimmt und es wurde überraschenderweise gefunden, daß sie durch die Struktur des Moleküls und insbesondere der DLA, der DLT (Domäne der Bindung von Thrombin) und der Größe beeinflußt wird.
Demzufolge betrifft die vorliegende Erfindung neue synthetische Polysaccharide mit einer Struktur, die ähnlich ist jener der Verbindungen der Patentanmeldung PCT/FR 97/01344, die jedoch besondere Eigenschaften besitzen. In der Tat besitzen diese Verbindungen in unerwarteter. Weise eine Halbwertszeit der Ausscheidung, die nach der intravenösen Injektion an der Ratte bezüglich der Anti-Xa-Wirkung bestimmt worden ist, von weniger als eineinhalb Stunden.
Diese Verbindungen sind Hexadecasaccharide mit drei definierten Sequenzen: einer sulfatierten Pentasaccharidsequenz DEFGH, einer nicht sulfatierten Heptasaccharidsequenz Z(MN)&sub3; und einer sulfatierten Tetrasaccharidsequenz VWXY.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind synthetische Polysaccharide in Form der Säure und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze mit pharmazeutisch annehmbaren Kationen, deren anionische Form einer der folgenden Formeln (I). (II), (III), (IV) oder (V) entspricht: Aktive erfindungsgemäße Strukturen
Die Erfindung umfaßt die Polysaccharide in Form der Säure oder in der Form irgendwelcher pharmazeutisch annehmbaren Salze. In der Säureform liegen die Funktionen -COO&supmin; bzw. -SO&sub3;&supmin; in den Formen -COOH bzw. -SO&sub3;H vor.
Unter pharmazeutisch annehmbaren Salzen der erfindungsgemäßen Polysaccharide versteht man ein Polysaccharid, bei dem eine oder mehrere der Funktionen -COO&supmin; und/oder -SO&sub3;&supmin; in ionischer Form an ein pharmazeutisch annehmbares Metallkation gebunden sind. Die bevorzugten erfindungsgemäßen Salze sind jene, bei denen das Kation aus Alkalimetallkationen ausgewählt sind, und insbesondere jene, bei denen das Kation Na&spplus; oder K&spplus; ist.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Polysaccharide.
Im Prinzip verwendet man bei diesem Verfahren Di- oder Oligosaccharid-Synthone, die in der Weise hergestellt werden, wie es oben in der Literatur angegeben ist. Insbesondere sei Bezug genommen auf EP 300099, EP 529715, EP 621282 und EP 649854 sowie C. von Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem., Int. Ausg. Engl., 32 (1993), 1671-1690. Diese Synthone werden anschließend miteinander in der Weise verknüpft, daß man einen vollständig geschützten Vorläufer eines erfindungsgemäßen Hexadecasaccharids erhält, welcher anschließend selektiv von den Schutzgruppen befreit und sulfatiert wird zur Bildung des erfindungsgemäßen Hexadecasaccharids.
Bei den erforderlichen Kupplungsreaktionen reagiert ein an seinem anomeren Kohlenstoffatom aktiviertes "Donor"-di- oder -oligosaccharid mit dem eine freie Hydroxylgruppe aufweisenden "Akzeptor"-di- oder -oligosaccharid.
Die Synthese der erfindungsgemäßen Hexadecasaccharide kann unter Durchführung der nachfolgenden Verfahrensabläufe erfolgen, bei denen auf Saccharideinheiten Bezug genommen wird, wie sie in der obigen Formel (I) angegeben sind.
Man bereitet zunächst einen geschützten Vorläufer von GH, nämlich pGH, der eine Alkoholfunktion in der 4'-Stellung aufweist, und einen geschützten Vorläufer von EF, nämlich pEF, der am anomeren Kohlenstoffatom aktiviert ist. Die Zwischenprodukte pGH und pEF werden miteinander umgesetzt unter Bildung von EFGH. Die 4-Stellung der endständigen nicht reduzierenden Einheit wird dann von der Schutzgruppe befreit zur Bildung eines Vorläufers pEFGH.
Parallel dazu bereitet man unter Anwendung der gleichen Strategie einen Vorläufer des an dem anomeren Kohlenstoffatom aktivierten Teils YZ(MN)&sub3;D, nämlich pYZ(MN)&sub3;D.
Anschließend setzt man das Tetrasaccharid pEFGH mit pYZ(MN)&sub3;D um unter Erhalt von YZ(MN)&sub3;DEFGH. Dann wird die Schutzgruppe von der nicht-reduzierenden terminalen Einheit abgespaltet unter Erhalt eines Vorläufers pYZ(MN)&sub3;DEFGH.
Parallel dazu bereitet man eine Vorläufer von VWX, nämlich pVWX.
Die Umsetzung von pVWX und pYZ(MN)&sub3;DEFGH ergibt dann direkt den Vorläufer des Hexadecasaccharids, welches von den Schutzgruppen befreit und sulfatiert wird unter Erhalt des erwarteten Hexadecasaccharids.
Es ist für den Fachmann ersichtlich, daß eine Vielzahl von Synthesestrategien in Abhängigkeit von den ausgewählten Akzeptoren und Donoren möglich ist. So kann man beispielsweise einen Donor VWXYZ(MN)&sub3;D herstellen und diesen mit EFGH kuppeln zur Bildung eines Vorläufers des gewünschten Hexadecasaccharids. Man kann beispielsweise auf die obigen Druckschriften Bezug nehmen und auf Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products, P. M. Collins und R. J. Ferner; J. Wiley & sons (1995) und auf G. J. Boons, Tetrahedron, 51 (1996), 1095-1121.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen waren Gegenstand biochemischer und pharmakologischer Untersuchungen, welche gezeigt haben, daß sie weiterhin die sehr interessanten Eigenschaften der in der Patentanmeldung PCT/- FR 97/01344 beschriebenen Produkte besitzen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen, die sich selektiv an AT III binden mit einer Affinität, die gleich oder größer ist als die von Heparin, besitzen stärkere antikoagulierenden und antithrombotische Wirkungen als Heparin.
Die globale antithrombotische Wirkung der Produkte der Formeln (I) bis (V) wurde auf intravenösem oder subkutanem Wege an der Ratte bewertet an einem Modell der Venenstase und der Induktion von Thromboplastin gemäß der von J. Reyers et al. in Thrombosis Research, 18 (1980), 669-674 beschriebenen Methode sowie an einem Modell der arteriellen Thrombose, die durch eine Verbindung zwischen der Carotisarterie und der Drosselvene der Ratte verursacht worden ist, wie es von Umetsu et al., Thromb. Haemost., 39 (1978), 74-83 beschrieben worden ist. Bei diesen beiden experimentellen Modellen liegt die DE&sub5;&sub0; der erfindungsgemäßen Verbindungen mindestens in der gleichen Größenordnung oder unterhalb jener von anderen bereits bekannten synthetischen Heparinoiden (DE5o zwischen 1 und 50 nMol/kg). Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen somit eine besonders interessante spezifische Wirkung und antikoagulierende und antithrombotische Wirkung.
Aufgrund ihrer biochemischen und pharmazeutischen Wirkung stellen die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sehr interesssante Arzneimittel dar. Ihre Toxizität ist vollständig verträglich mit ihrer Anwendung. Sie sind sehr stabil und sind damit besonders gut geeignet als Wirkstoff für pharmazeutische Präparate.
Weiterhin werden die erfindungsgemäßen Verbindungen nicht durch starke Dosierungen von kationischen Plättchenproteinen, wie FP4, die bei der Aktivierung der Plättchen während des Thromboseprozesses freigesetzt werden, neutralisiert. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind daher besonders interessant zur Behandlung und zur Vorbeugung von Thrombosen sowohl arteriellen als auch venösen Ursprungs.
Sie können bei verschiedenartigen pathologischen Zuständen, die mit einer Modifizierung der Homöostase des Gerinnungssystems auftreten, eingesetzt werden, die insbesondere bei Störungen des kardiovaskulären Systems und des zerebrovaskulären Systems auftreten, wie thromboembolischen Störungen, die mit der Artheriosklerose und dem Diabetes verknüpft sind, wie instabiler Angina, Zerebralvorfällen, Restenosen nach der Angioplastie, der Endarteriektomie oder dem Anbringen von endovaskulären Prothesen; oder aber auch von thromboembolischen Störungen, die mit der Rethrombose nach der Thrombolyse, dem Infarkt, der Demenz ischämischen Ursprungs, peripheren arteriellen Erkrankungen, der Hämodialyse, aurikularen Fibrillationen oder auch bei der Verwendung von Gefäßprothesen bei Aorto-Koronar-Bypässen auftreten. Dieses Produkt kann auch verwendet werden zur Behandlung oder zur Vorbeugung von thromboembolischen pathologischen Zuständen venösen Ursprungs, wie Lungenembolien, und es kann auch verwendet werden zur Vorbeugung oder zur Behandlung von thrombotischen Komplikationen, die bei chirurgischen Eingriffen oder zusammen mit anderen pathologischen Zuständen, wie Krebs, bakteriellen oder viralen Infekten, auftreten. Im Fall der Anwendung beim Anbringen von Prothesen kann die erfindungsgemäße Verbindung die Prothesen überdecken und sie in dieser Weise blutverträglich machen. Sie kann insbesondere an intravaskulären Prothesen (Stants) fixiert werden. In diesem Fall können sie gegebenenfalls an ihrem nicht reduzierenden oder reduzierenden Ende mit einer geeigneten Seitengruppe chemisch modifiziert werden, wie es in der EP 649 854 beschrieben ist.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch als Adjuvantien bei der Endarteriektomie verwendet werden, die mit porösen Ballonkathetern durchgeführt wird.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind sehr stabil und sind daher besonders gut geeeignet als Wirkstoff von Arzneimitteln.
So können die erfindungsgemäßen Verbindungen für die Herstellung von Arzneimitteln, die zur Behandlung der oben beschriebenen Erkrankungen bestimmt sind, verwendet werden.
Gemäß einem weiteren Gegenstand betrifft die Erfindung auch pharmazeutische Zubereitungen, die als Wirkstoff ein synthetisches Polysaccharid der oben definierten Art enthalten.
Die Erfindung betrifft vorzugsweise pharmazeutische Zubereitungen, die als Wirkstoff eine erfindungsgemäße Verbindung in Form der Säure oder eines ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze gegebenenfalls in Kombination mit einem oder mehreren inerten und geeigneten Trägermaterialien enthalten. Ganz allgemein sind die erfindungsgemäßen Polysaccharide nützlich bei der Behandlung von pathologischen Zuständen, die durch eine Dysfunktion der Blutgerinnung verursacht sind.
In jeder Dosiseinheit ist der. Wirkstoff in einer Menge enthalten, die an die angestrebten täglichen Dosierungen angepaßt ist. Im allgemeinen wird jede Dosiseinheit in Abhängigkeit von der Dosierung und der vorgesehenen Verabreichungsform, beispielsweise Tabletten, Gelkapseln und ähnlichen Produkten, Sachets, Ampullen, Sirupen und ähnlichen Produkten, Tropfen, transdermalem Pflaster oder transmukösem Pflaster, derart eingestellt, daß eine Dosiseinheit 0,1 bis 100 mg des Wirkstoffs, vorzugsweise 0,5 bis 50 mg, enthält.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Kombination mit einem oder mehreren anderen Wirkstoffen eingesetzt werden, die für die angestrebte Therapie nützlich sind, beispielsweise Antithrombotika, Antikoagulantien, gegen die Blutplättchenaggregation gerichtete Mittel, wie beispielsweise Dipyramidol, Aspirin, Ticlopidin, Clopidogrel oder Antagonisten des Glykoproteins IIb/IIIa-Komplexes.
Die pharmazeutischen Zubereitungen sind für die Verabreichung an Säuger einschließlich Menschen zur Behandlung der oben genannten Krankheiten formuliert.
Die in dieser Weise erhaltenen pharmazeutischen Zubereitungen liegen vorzugsweise in Form von unterschiedlichen Verabreichungsformen vor, wie beispielsweise injizierbaren oder trinkbaren Lösungen, Dragees, Tabletten oder Gelkapseln. Die injizierbaren Lösungen sind die bevorzugten pharmazeutischen Formen. Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zubereitungen sind besonders nützlich zur vorbeugenden oder heilenden Behandlung von Störungen der Gefäßwandung, wie der Atherosklerose, von Hyperkoagulierungszuständen, wie man sie beispielsweise in der Folge von chirurgischen Operationen von Tumorentwicklungen oder bei der Deregulierung der Koagulation, die durch bakterielle, virale oder enzymatische Aktivatoren ausgelöst werden, beobachtet. Die Dosierung kann in starkem Maße in Abhängigkeit von dem Alter, dem Gewicht und dem Gesundheitszustand des Patienten, der Art und der Schwere der Erkrankung sowie dem Verabreichungsweg variieren. Diese Dosierung umfaßt die Verabreichung einer oder mehrerer Dosierungen von etwa 0,1 bis 100 mg täglich, vorzugsweise etwa 0,5 bis 50 mg täglich bei intramuskulärer oder subkutaner Verabreichung, bei kontinuierlicher Verabreichung oder in regelmäßigen Intervallen.
Die vorliegende Erfindung betrifft daher auch pharmazeutische Zubereitungen, die als Wirkstoff eine der obigen Verbindungen gegebenenfalls in Kombination mit einem weiteren Wirkstoff enthalten. Diese Zubereitungen werden in der Weise hergestellt, daß sie über den Verdauungstrakt oder auf parenteralem Wege verabreicht werden können.
Bei den erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zubereitungen für die Verabreichung auf oralem, sublingualem, subkutanem, intramuskulärem, intravenösem, transdermalem, transmukösem, lokalem oder rektalem Wege kann der Wirkstoff in Einheitsverabreichungsformen in Mischung mit klassischen pharmazeutischen Trägermaterialien an Tiere und Menschen verabreicht werden. Die geeigneten Einheitsverabreichungsformen umfassen Formen, die auf oralem Wege gegeben werden können, wie Tabletten, Gelkapseln, Pulver, Granulate und oral zu nehmende Lösungen oder Suspensionen, Formen, die auf sublingualem oder bukkalem Wege verabreicht werden können, Formen zur subkutanen, intramuskulären, intravenösen, intranasalen oder intraokularen Verabreichung und rektal zu verabreichende Formen.
Wenn man eine feste Zubereitung in Form von Tabletten herstellt, vermischt man den Hauptwirkstoff mit einem geeigneten pharmazeutischen Trägermaterial, wie Gelatine, Stärke, Lactose, Magnesiumstearat, Talkum, Gummi arabicum oder dergleichen. Man kann die Tabletten mit Saccharose oder anderen geeigneten Materialien umhüllen oder man kann sie in der Weise behandeln, daß sie eine verlängerte oder verzögerte Wirkstofffreisetzung besitzen und eine vorbestimmte Menge des Wirkstoffs in kontinuierlicher Weise abgeben.
Man erhält ein Präparat in Gelkapseln durch Vermischen des Wirkstoffs mit einem Verdünnungsmittel und Einbringen der erhaltenen Mischung in weiche oder harte Gelkapseln.
In Wasser dispergierbare Pulver oder Granulate können den Wirkstoff in Mischung mit Dispergiermitteln oder Netzmitteln oder Suspendiermitteln, wie Polyvinylpyrrolidon, und zusammen mit Süßungsmitteln oder Geschmacksverbesserungsmitteln enthalten.
Für die rektale Verabreichung greift man auf Suppositorien zurück. welche mit Bindemitteln hergestellt werden, die bei der Rektaltemperatur schmelzen, beispielsweise Kakaobutter oder Polyethylenglykole.
Für die parenterale, intranasale oder intraokulare Verabreichung verwendet man wäßrige Suspensionen, isotonische Salzlösungen oder sterile und injizierbare Lösungen, welche pharmakologisch verträgliche Dispergiermittel und/oder Netzmittel, wie beispielsweise Propylenglykol oder Butylenglykol, enthalten.
Für die Verabreichung auf transmukösem Wege kann der Wirkstoff durch die Gegenwart eines Promotors, wie eines Gallensalzes, eines hydrophilen Polymers, wie beispielsweise Hydroxypropylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Hydroxyethylcellulose, Ethylcellulose, Carboxymethylcellulose, Dextran, Polyvinylpyrrolidon, Pectine, Stärken. Gelatine, Casein, Acrylsäuren, Acrylsäureester und deren Copolymere, Polymere oder Copolymere von Vinyl, Vinylalkohole, Alkoxypolymere, Polymere von Polyethylenoxid, Polyether oder Mischungen davon formuliert werden.
Der Wirkstoff kann auch in Form vo Mikrokapseln, gegebenenfalls zusammen mit einem oder mehreren Trägermaterialien oder Hilfsstoffen, formuliert werden.
Der Wirkstoff kann auch in Form eines Komplexes mit einem Cyclodextrin vorliegen, beispielsweise α-, β- oder γ-Cyclodextrin, 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin oder Methyl-β-cyclodextrin.
Der Wirkstoff kann auch mit Hilfe eines Ballons freigesetzt werden oder mit Hilfe eines endovaskulären Extenders, der in die Blutgefäße eingeführt wird. Die pharmakologische Wirksamkeit des Wirkstoffs wird in dieser Weise nicht beeinträchtigt.
Die Verabreichung auf subkutanem Wege ist der bevorzugte Weg.
Die nachfolgend beschriebenen Methoden, Herstellungsweisen und Schemata verdeutlichen die Synthese der verschiedenen Zwischenprodukte, die für die Herstellung der erfindungsgemäßen Polysaccharide nützlich sind.
Hierbei werden die folgenden Abkürzungen verwendet:
TBDMS: tert.-Butyldimethylsilyl; Lev: Lävulinoyl; Bn: Benzyl; Bz: Benzoyl; CCM: Dünnschichtchromatographie; Olm: Trichloracetimidoyl; LSIMS: die Abkürzung für den englischen Begriff Liquid Secondary lon Mass Spectrometry; ESIMS: Abkürzung des englischen Begriffs Eiectron Spray Ionisation Mass Spectrometry; TMS: Trimethylsilyl; TSP: Trimethylsilyl-tetradeuteriopropionsäurenatriumsalz; Tf: Triflat: MS: Molekularsieb; PMB: p-Methoxybenzyl; MP: p-Methoxyphenyl; TS: Tosyl; Et: Ethyl; Ph: Phenyl; Me: Methyl; Ac: Acetyl.
Dowex®, Sephadex®, Chelex® und Toyopearl® sind eingetragene Marken.
Bei den nachfolgend beschriebenen Methoden, Herstellungsbeispielen und Beispielen können die allgemeinen Verfahrensweisen betreffend die katalytische Kupplung der Imidate, die Spaltung der Lävulinester, die katalytische Kupplung der Thioglykoside, die Verseifung, die Methylierung und die selektive Schutzgruppenabspaltung der p-Methoxybenzylgruppe, die Schutzgruppenabspaltung und die Sulfatierung der Oligo- und Polysaccharide durch Hydrogenolyse der Benzylester oder Benzylether, die Verseifung der Ester oder schließlich die Sulfatierungen unter Anwendung der nachfolgend beschriebenen allgemeinen Methoden auf geeignete Zwischenprodukte durchgeführt werden.
Die folgenden Beispiele der Synthese der erfindungsgemäßen Verbindungen dienen nur der Erläuterung. SCHEMA 1 - Synthese des Pentasaccharids 9

HERSTELLUNGSBEISPIEL 1

Ethyl-O-(2, 3-di-O-benzoyl-4,6-O-benzyliden-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2,3,6- tri-O-benzoyl-1-thio-β-D-glucopyranosid (2)

Man gibt zu einer gekühlten (0ºC) Lösung der Verbindung 1 (16,7 g, 35,2 mMol) (J. Westman und M. Nilsson, J. Carbohydr. Chem., 14(7), (1995), 949-960) in Pyridin (202 ml) im Verlaufe von 20 Minuten tropfenweise Benzoylchlorid (24,5 ml, 211 mMol). Man rührt die Reaktionsmischung während 20 Stunden bei Raumtemperatur; die CCM zeigt eine Umwandlung von etwa 50%. Man verdünnt die Mischung mit Wasser und Dichlormethan. Nach der Extraktion wäscht man die organische Phase mit einer 10%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser, trocknet über Magnesiumsulfat und engt ein. Man behandelt den Rückstand erneut in der oben beschriebenen Weise mit Benzoylchlorid. Man reinigt das rohe Produkt säulenchromatographisch über Kieselgel und erhält 22 g der Verbindung 2.
CCM: Rf = 0,80, Kieselgel, Toluol/Ethanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 2

O-(2,3-Di-O-benzoyl-4,6-O-benzyliden-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)- 1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (4)

Man rührt eine Mischung aus dem Thioglykosid 2 (1,05 g, 1,05 mMol), der Verbindung 3 (200 mg, 1,05 mMol) (Jeanloz et aL., J. Org. Chem., 26 (1961), 3939-3944) und ein pulverförmiges 4Å-Molekularsieb (1,1 g) in Toluol (18 ml) unter einer Stickstoffatmosphäre während 15 Minuten. Anschließend kühlt man die Mischung auf -20ºC ab und gibt eine Lösung von frisch hergestelltem N-Iodsuccinimid (1,11 mMol) und Trifluormethansulfonsäure (0,125 mMol) in Dichlormethan/Dioxan 1/1 V/V (6 ml) zu. Nach 10 Minuten filtriert man die rote Reaktionsmischung, verdünnt mit Dichlormethan, extrahiert, wäscht nacheinander mit einer 10%-igen Natriumthiosulfatlösung, einer 10%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser, trocknet über Magnesiumsulfat und engt im Vakuum ein. Man bewirkt die Reinigung des Rückstands säulenchromatographisch über Siliciumdioxid und erhält 1,25 g der Verbindung 4.
CCM: Rf = 0,55, Kieselgel, Heptan/Ethylacetat 4/6 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 3

O-(4,6-O-Benzyliden-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(β-D-glucopyranosyl)-(1→4)- 1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (5)

Man gibt zu einer Lösung der Verbindung 4 (1,24 g, 1,11 mMol) in Methanol/Dioxan 1/1 V/V (7 ml) Kalium-tert.-butylat (etwa 50 mg). Man rührt während einer Stunde und gibt dann erneut 50 mg Kalium-tert.-butylat zu und rührt die Mischung dann noch während 60 Minuten. Man neutralisiert die Reaktionsmischung mit einem Harz Dowex® 50WX8 H+, filtriert und engt im Vakuum ein. Nach der Säulenchromatographie über Kieselgel isoliert man 665 mg der Verbindung 5 in Form eines Öls.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol, 85/15 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 4

O-(4,6-O-Benzyliden-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (6)

Man gibt zu einer gekühlten Lösung (5ºC) der Verbindung 5 (660 mg, 1,1 mMol) in trockenem Tetrahydrofuran (8 ml) unter einer Stickstoffatmosphäre Natriumhydrid (387 mg, 9,65 mMol). Dann gibt man tropfenweise Methyliodid (0,51 ml, 8,22 mMol) zu und rührt die Mischung während 20 Stunden bei Raumtemperatur. Man zerstört das überschüssige Natriumhydrid mit Methanol und gießt die Mischung in 50 ml eisgekühltes Wasser. Nach der Extraktion mit Ethylacetat (3-mal 20 ml) wäscht man die organische Phase mit einer Natriumchloridlösung, trocknet über Magnesiumsulfat, engt ein und erhält 690 mg der Verbindung 6.
CCM: Rf = 0,25, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 95/5 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 5

O-(2,3-Di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (7)

Man löst die Verbindung 6 (690 mg, 1,03 mMol) in 80%-iger Essigsäure (7,3 ml) und rührt während 20 Stunden bei 40ºC. Man engt die Mischung im Vakuum ein und dampft nach Zugabe von Toluol ein. Durch Säulenchromatographie über Kieselgel in Dichlormethan/Ethylacetat/Methanol, 8/1/1, erhält man 569 mg der Verbindung 7.
CCM: Rf = 0,40, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 6

O-(6-O-Benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (8)

Man gibt zu einer Lösung der Verbindung 7 (560 mg, 0,96 mMol) in Dichlormethan 1-Benzoyloxy-1H-benzotriazol (227 mg, 1,05 mMol) und Triethylamin (1,15 mMol) und rührt die Mischung dann während 20 Stunden bei Raumtemperatur. Man verdünnt die Reaktionsmischung mit Dichlormethan, wäscht mit einer 10%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung und mit Wasser, trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat, filtriert und dampft zur Trockne ein.
Man reinigt das Produkt säulenchromatographisch über Kieselgel und erhält schließlich 600 mg der Verbindung 8.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 7

O-(2,3-Di-O-benzoyl-4,6,O-benzyliden-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (9)

Man wandelt die Verbindung 8 nach der für die Herstellung der Verbindung 4 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 9 um. Die Kupplungsreaktion wird bei 5ºC durchgeführt.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Heptan/Ethylacetat 2/8 V/V SCHEMA 2 - Synthese des Heptasaccharids 14

HERSTELLUNGSBEISPIEL 8

O-(4,6-O-Benzyliden-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(β-D-glucopyranosyl)-(1→4) - O-(2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (10)

Man wandelt die Verbindung 9 nach der Verfahrensweise, die für die Herstellung der Verbindung 5 beschrieben worden ist, in die Verbindung 10 um.
CCM: Rf = 0,35, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 9

O-(4,6-O-Benzyliden-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3- di-O-methyl-β-D-glucopyranose (11)

Man wandelt die Verbindung 10 nach der für die Herstellung der Verbindung 6 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 11 um.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 10

O-(2,3-Di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3, 6- tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (12)

Man wandelt die Verbindung 11 nach der für die Herstellung der Verbindung 7 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 12 um.
CCM: Rf = 0,35, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 11

O-(6-O-Benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O- methyl-β-D-glucopyranose (13)

Man wandelt die Verbindung 12 nach der für die Herstellung der Verbindung 8 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 13 um.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 7,0/1,5/1,5 V V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 12

O-(2,3-Di-O-benzoyl-4,6-O-benzyliden-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)- (1→4)-O-(2,3, 6- tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (14)

Die Kupplungsreaktion der Verbindung 13 mit dem Disaccharid 2 wird nach der für die Herstellung der Verbindung 9 beschriebenen Verfahrensweise durchgeführt und liefert die Verbindung 14.
CCM: Rf = 0,40, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 7,0/1,5/1,5 V/V/V SCHEMA 3 - Synthese des Nonasaccharids 19

HERSTELLUNGSBEISPIEL 13

O-(4,6-O-Benzyliden-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(β-D-glucopyranosyl)-(1→4)- O-(2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (15)

Man wandelt die Verbindung 14 nach der für die Herstellung der Verbindung 5 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 15 um.
CCM: Rf = 0,60, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 14

O-(4,6-O-Benzyliden-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O- methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub2;-1,6-anhydro-2,3-di-O- methyl-β-D-glucopyranose (16)

Man wandelt die Verbindung 15 nach der für die Herstellung der Verbindung 6 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 16 um.
CCM: Rf = 0,70, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 15

O-(2,3-Di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub2;-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (17)

Man rührt eine Lösung der Verbindung 16 (5,05 g, 2,0 mMol) in 80%- iger Essigsäure (50 ml) während 20 Stunden bei 40ºC. Dann engt man die Mischung im Vakuum ein und dampft erneut nach der Zugabe von Toluol ein. Man löst den Rückstand in Ethylacetat und extrahiert mit Wasser. Man extrahiert die wäßrige Phase mit Dichlormethan, trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat, filtriert, dampft zur Trockne ein und erhält 2,68 g der Verbindung 17.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 16

O-(6-O-Benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub2;-1,6-anhydro-2,3-di- O-methyl-β-D-glucopyranose (18)

Man wandelt die Verbindung 17 nach der für die Herstellung der Verbindung 8 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 18 um.
CCM: Rf = 0,80, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 7,0/1,5/1,5 V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 17

O-(2,3-Di-O-benzoyl-4,6-O-benzyliden-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1-4)-[O- (2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub2;-1,6-anhydro-2,3-di-O-methy1-β-D-glucopyranose (19)

Man rührt eine Mischung aus dem Thioglykosid 2 (1,97 g, 2,0 mMol, 3,5 Äq.), des Heptasaccharids 18 (0,86 g, 0,57 mMol) und eines pulverförmigen 4Å-Molekularsiebes in Toluol (22 ml) während 15 Minuten unter einer Stickstoffatmosphäre. Dann gibt man tropfenweise bei Raumtemperatur eine frisch hergestellte Lösung, die N-Iodsuccinimid (496 mg, 2,2 mMol) und Trifluormethansulfonsäure (0,808 mMol) in die Dichlormethan/Dioxan 1/1 V/V (12 ml) enthält, zu. Nach 10 Minuten filtriert man die Reaktionsmischung, verdünnt mit Dichlormethan, extrahiert, wäscht mit einer 10%-igen Natriumthiosulfatlösung und einer 10%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung, trocknet über Magnesiumsulfat und engt im Vakuum ein. Man reinigt das rohe Produkt säulenchromatographisch über Kieselgel und erhält 1,09 g der Verbindung 19.
CCM: Rf = 0,80, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 6/2/2 V/V/V SCHEMA 4 - Synthese des Nonasaccharids 25

HERSTELLUNGSBEISPIEL 18

O-(4,6-O-Benzyliden-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(β-D-glucopyranosyl)-(1→4)- O-(2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-[(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)]&sub2;-(1→4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methylβ-D-glucopyranose (20)

Man wandelt die Verbindung 19 nach der für die Herstellung der Verbindung 5 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 20 um.
CCM: Rf = 0,25, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 5,0/2,5/2,5 V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 19

O-(4,6-O-Benzyliden-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-methyl-β-D-glucopyranasyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-1,6-anhydro-2,3- di-O-methyl-β-D-glucopyranose (21)

Man wandelt die Verbindung 20 nach der für die Herstellung der Verbindung 6 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 21 um.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 6/2/2 V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 20

O-(2,3-Di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-{2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-1,6-anhydro-2,3-di-O-methylβ-D-glucopyranose (22)

Man wandelt die Verbindung 21 nach der für die Herstellung der Verbindung 7 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 22 um.
CCM: Rf = 0, 20, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 6/2/2 V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 21

O-(6-O-Benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-1,6-anhydro-2,3-di- O-methyl-β-D-glucopyranose (23)

Man wandelt die Verbindung 22 nach der für die Herstellung der Verbindung 8 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 23 um.
CCM: Rf = 0,20, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 6/2/2 V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 22

O-(6-O-Benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranose (24)

Man gibt zu einer Lösung der Verbindung 23 (320 mg, 0,167 mMol) in Dioxan (1 ml) 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (48 mg, 0,25 mMol), Lävulinsäure (29 mg, 0,25 mMol) und Dimethylaminopyridin (4 mg, 0,033 mMol) zu und rührt die Reaktionsmischung während 3 Stunden bei Raumtemperatur unter einer Stickstoffatmosphäre. Dann gibt man Dichlormethan und Wasser zu, wäscht nach der Extraktion die organische Phase mit Wasser, trocknet über Magnesiumsulfat, filtriert und engt ein. Man reinigt das rohe Produkt säulenchromatographisch über Kieselgel und erhält 312 mg der Verbindung 24.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 6/2/2 V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 23

O-(6-O-Benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-1,6-di- O-acetyl-2,3-di-O-methyl-α,β-D-glucopyranose (25)

Man rührt eine Lösung der Verbindung 24 (312 mg, 0,155 mMol) in einer Mischung aus Essigsäureanhydrid (2,25 ml), Essigsäure (50 ul) und Trifluoressigsäure (0,14 ml) während 4 Stunden bei Raumtemperatur. Nach der Zugabe von Toluol (10 ml) engt man die Mischung ein und verdampft erneut und nach Zugabe von Toluol (3-mal 10 ml) ein. Nach der Säulenchromatographie über Kieselgel isoliert man 324 mg der Verbindung 25.
CCM: Rf = 0,65, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 6/2/2 V/V/V SCHEMA 5 - Synthese des Nonasaccharids 27

HERSTELLUNGSBEISPIEL 24

O-(6-O-Benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-6-O- acetyl-2,3-di-O-methyl-α,β-D-glucopyranose (26)

Man rührt eine Lösung der Verbindung 25 (3,24 mg, 0.153 mMol) und Morpholin (22,3 pl, 0,256 mMol) in Toluol (2 ml) während 4 Stunden bei 35ºC. Anschließend gibt man erneut Morpholin (22,3 ul) zu und rührt die Reaktionsmischung während 20 Stunden bei 35ºC. Man kühlt die Mischung schnell mit Wasser ab, extrahiert mit Dichlormethan, wäscht die organische Phase nacheinander mit 0,1 N Chlorwasserstoffsäure und Wasser, trocknet und dampft zur Trockne ein. Nach der Säulenchromatographie über Kieselgel isoliert man 280 mg der Verbindung 26.
CCM: Rf = 0,45, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 6/2/2 V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 25

O-(6-O-Benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-6-O- acetyl-2,3-di-O-methyl-α,β-D-glucopyranose-trichloracetimidat (27)

Man gibt Trichloracetonitril (39 ul, 0,39 mMol) und Caesiumcarbonat (4,7 mg) zu einer Lösung der Verbindung 26 (138 mg, 0,066 mMol) in Dichlormethan (1,5 ml). Nach dem Rühren während 2 Stunden filtriert man die Mischung, engt ein und chromatographiert den Rückstand über einer mit Siliciumdioxid beschickten Säule und erhält 152 mg des Imidats 27.
CCM: Rf = 0,35, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 8/1/1 V/V/V SCHEMA 6 - Synthese des Disaccharids 33

HERSTELLUNGSBEISPIEL 26

Methyl-O-(4,6-O-isopropyliden-3-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2,6-di-O- benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (29)

Man behandelt die Verbindung 28 (2,5 g, 3,53 mMol) (M. Petitou et al., J. Med. Chem., 40 (1997), 1600) wie für die Synthese der Verbindung 5 beschrieben und erhält nach der Chromatographie über Siliciumdioxid (Cyclohexan/Ethylacetat 2/I) die Verbindung 29 (2,1 g, 98%).
CCM: Rf = 0,32, Kieselgel, Cyclohexan/Ethylacetat 2/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 27

Methyl-O-(4,6-O-isopropyliden-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2,6- di-O-benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (30)

Man behandelt die Verbindung 29 (2,0 g, 3,3 mMol) wie für die Synthese der Verbindung 6 beschrieben und erhält nach der Chromatographie über Siliciumdioxid (Cyclohexan/Ethylacetat 5/1) die Verbindung 30 (1,83 g, 98%).
CCM: Rf = 0,38, Kieselgel, Cyclohexan/Ethylacetat 5/2 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 28

Methyl-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2,6-di-O-benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (31)

Man gibt zu einer Lösung der Verbindung 30 (1,76 g, 2,84 mMol) in Dichlormethan (16 ml) eine 70%-ige wäßrige Lösung von Trifluoressigsäure (3,14 ml). Nach 50 Minuten verdünnt man das Reaktionsmedium mit Dichlormethan und wäscht dann bis zur Neutralität mit Wasser. Man trocknet die organische Phase anschließend (Natriumsulfat), filtriert und engt ein. Man reinigt den Rückstand über Siliciumdioxid und erhält die Verbindung 31 (1,45 g, 88%).
[α]²&sup0;D = + 10 (c = 1,0, Dichlormethan).

HERSTELLUNGSBEISPIEL 29

Methyl-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1→4)-2,6-di-O-benzyl- 3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (32)

Man gibt zu einer Lösung der Verbindung 31(1,16 g) in Dichlormethan (6 ml) 2,2,6,6-Tetramethyl-1-piperidinyloxy (3,3 mg), eine Lösung von Natriumhydrogencarbonat (4 ml), Kaliumbromid (22 mg) und Tetrabutylammoniumchlorid (29 mg). Man kühlt die Mischung auf 0ºC und gibt im Verlaufe von 15 Minuten eine Mischung aus einer gesättigten Natriumchloridlösung (4,4 ml), einer gesättigten Natriumhydrogencarbonatlösung (2,2 ml) und Natriumhypochlorit (1,3 M, 5 ml). Nach dem Rühren während 1 Stunde verdünnt man die Mischung mit Wasser und extrahiert (3-mal) mit Dichlormethan. Man wäscht die organische Phase mit einer wäßrigen Natriumchloridlösung, trocknet über Magnesiumsulfat, filtriert und dampft zur Trockne ein unter Erhalt von 1,34 g der rohen Verbindung 32.
Rf = 0,22, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 10/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 30

Methyl-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronat)-(1→4)-2,6-di-O- benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (33)

Man löst die Verbindung 32 unter einer Stickstoffatmosphäre in N,N- Dimethylformamid (11 ml). Dann gibt man Kaliumhydrogencarbonat (0,67 g) und Benzylbromid (1,07 ml) zu und rührt die Mischung während 90 Minuten. Man gibt Ethylacetat und Wasser zu und engt die organische Phase nach der Extraktion ein. Eine säulenchromatographische Reinigung über Kieselgel liefert 0,99 g der Verbindung 33.
CCM: Rf = 0,58, Kieselgel, Toluol/Diethylether 1/4 V/V SCHEMA 7 - Synthese des Tetrasaccharids 36

HERSTELLUNGSBEISPIEL 31

Methyl-O-(benzyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)- (1→4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(benzyl-2, 3- di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronat)-(1→4)-2,6-di-O-benzyl-3-O-methyl-α-D- glucopyranosid (35)

Man behandelt die Verbindung 34 (247 mg, 0,31 mMol) (M. Petitou et al., J. Med. Chem., 40 (1997), 1600) und die Verbindung 33 (200 mg, 0,29 mMol) in Toluol (10 ml) in Gegenwart eines Molekularsiebes (220 mg) bei -20ºC mit tert.-Butyldimethylsilyl-trifluormethansulfonat (0,15 ml einer 1-molaren Lösung in Toluol). Nach dem Rühren während 10 Minuten neutralisiert man die Reaktionsmischung (NaHCO&sub3;), filtriert und engt ein. Die Säulenchromatographie über Kieselgel liefert die Verbindung 35 (334 mg, 80%).
[α]²&sup0;D = +31 (c = 0,76, Dichlormethan).

HERSTELLUNGSBEISPIEL 32

Methyl-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)-O-(3,6-di- O-acetyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L- idopyranosyluronat)-(1→4)-2,6-di-O-benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (36)

Man löst die Verbindung 35 (308 mg, 0,22 mMol) in einer Toluol/Ethanol-Mischung (1/2, 43 ml) und gibt dann Hydrazinacetat (101 mg, 5 Äq.) zu. Nach dem Rühren während 45 Minuten engt man die Mischung ein und reinigt über einer mit Siliciumdioxid beschickten Säule unter Erhalt der Verbindung 36 (162 mg, 89%).
[α]²&sup0;D = + 29 (c = 1,05, Dichlormethan). SCHEMA 8 - Synthese des Polysaccharids 38

HERSTELLUNGSBEISPIEL 33

Methyl-O-(6-O-benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6,-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)- (1→4)-]&sub3;-O-(6-O-acetyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(benzyl- 2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronat)-(1→4)-2,6-di-O-benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (37)

Man behandelt das Imidat 27 (177 mg, 76,6,uMol) und den Akzeptor 36 (201 mg, 0,15 mMol) in einer Diethylether/Dichlormethan-Mischung 2/1 (2,8 ml) mit tert.-Butyldimethylsilyl-trifluormethansulfonat (11,5 ul einer 1-molaren Lösung in Dichlormethan), wie bezüglich der Synthese der Verbindung 35 beschrieben. Man reinigt die Verbindung säulenchromatographisch über Sephadex® LH-20 (Dichlormethan/Ethanol 1/1) und dann mit einer mit Siliciumdioxid beschickten Säule (Toluol/Aceton/Ethanol 3/0,5/1) und schließlich mit einer mit Siliciumdioxid beschickten Säule (Diisopropylether/Ethanol 3/2) und erhält das Derivat 37 (116 mg, 44%).
CCM: Rf = 0,31, Kieselgel, Diisopropylether/Aceton/Ethanol 3/0,5/0,4 V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 34

Methyl-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6- tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(6-O-acetyl- 2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronat)-(1→4)-2,6-di-O-benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (38)

Man wandelt die Verbindung 37 (110 mg, 0,032 mMol) nach der für die Herstellung der Verbindung 36 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 38 (95 mg. 89%) um.
CCM: Rf = 0,32, Kieselgel, Toluol/Aceton 1/1 V/V SCHEMA 9 - Synthese des Trisaccharids 43

HERSTELLUNGSBEISPIEL 35

O-[2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-acetyl-α-D- glucopyranosyl)-1→4)-1,2,3,6-tetra-O-acetyl-β-D-glucopyranose (40)

Man gibt handelsübliche Maltrotriose (7 g, 13,9 mMol) portionsweise bei 155ºC zu einer Suspension von Natriumacetat (7 g, 85 mMol) in Essigsäureanhydrid (70 ml). Nach 15 Minuten kühlt man die Lösung ab und gießt sie in eisgekühltes Wasser (700 ml). Nach der Extraktion mit Ethylacetat wäscht man die organische Phase mit Wasser, trocknet über Magnesiumsulfat, filtriert, engt ein und erhält 13,1 g der Verbindung 40.
CCM: Rf = 0,53, Kieselgel, Dichlormethan/Ethylacetat 7/3 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 36

Ethyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-acetyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2,3,6-tri-O-acetyl-1-thio-β-D-glucopyranosid (41)

Man löst die Verbindung 40 (13 g, 13,5 mMol) in Toluol (80 ml). Dann gibt man unter einer Stickstoffatmosphäre Ethanthiol (1,97 ml, 26,9 mMol) und Bortrifluorid-diethyletherat (13,7 ml einer molaren Lösung in Toluol) zu. Nach dem Rühren während 60 Stunden verdünnt man die Mischung mit Wasser und mit Dichlormethan. Nach der Extraktion wäscht man die organische Phase mit einer 10%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung und mit Wasser, trocknet, filtriert und engt ein. Man reinigt das rohe Produkt säulenchromatographisch über Kieselgel unter Erhalt von 8,6 g der Verbindung 41.
CCM: Rf = 0,60, Kieselgel, Dichlormethan/Ethylacetat 7/3 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 37

Ethyl-O-(α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(α-D-glucopyranosy1)-(1→4)-1-thio-β-D- glucopyranosid (42)

Man wandelt die Verbindung 41 nach der für die Herstellung der Verbindung 5 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 42 um.
CCM: Rf = 0,80, Kieselgel, Ethylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasser 13/7/1,6/4 V/V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 38

Ethyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-O-(2,3,6-tri-O- benzoyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-2,3,6-tri-O-benzoyl-1-thio-β-D-glucopyranosid (43)

Man wandelt die Verbindung 43 nach der für die Herstellung der Verbindung 2 beschriebenen Verfahrensweise in die Verbindung 43 um. SCHEMA 10 - Herstellung des Polysaccharids 46

HERSTELLUNGSBEISPIEL 39

Methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O- benzoyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6- tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-a-Dglucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(6-O-acetyl- 2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl) - (1→4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronat)-(1→4)-2,6-di-O-benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (44)

Man kuppelt das Thioglykosid 43 (170 mg, 106,7 uMol) und den Akzeptor 39 (90 mg, 27 uMol) nach der für die Verbindung 4 beschriebenen Verfahrensweise. Man reinigt das Produkt zunächst durch eine Chromatographie über Sephadex® LH 20 (Dichlormethan/Ethanol 1/1), gefolgt von einer Säulenchromatographie über Kieselgel (Cyclohexan/Aceton 12/10 V/V) und erhält 89,5 mg (68 %) der Verbindung 44.
CCM: Rf = 0,43, Kieselgel, (Cyclohexan/Aceton 12/10 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 40

Methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O- benzoyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-benzoyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(6-O-benzoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3, 6- tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(6-O-acetyl- 2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-β-glucopyranosyluronsäure)-(1→4)-O-(3,6-di-O-acetyl-α-D-glucopyranosy1)-(1→4)-O-(2,3-di-O- methyl-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1→4)-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (45)

Man behandelt eine Lösung der Verbindung 44 (80 mg, 0,0163 mMol) in Essigsäure (3 ml) unter Wasserstoffdruck (10 bar) in Gegenwart von 10% Palladium-auf-Kohlenstoff (160 mg). Nach der Filtration engt man die Lösung ein und erhält die Verbindung 45, die ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe verwendet wird.

HERSTELLUNGSBEISPIEL 41

Methyl-O-(α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronsäure)-(1→4)-O-(α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1-4)-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (46)

Man gibt eine Mischung aus Methanol (2,8 ml) und einer 5 N Natriumhydroxidlösung (0,69 ml) zu der Verbindung 45 (72 mg, 0,016 mMol). Man gibt eine wäßrige 5 M Natriumhydroxidlösung (in einer solchen Menge, daß die Natriumhydroxidkonzentration nach Beendigung der Zugabe 0,5 M ist) zu einer Lösung eines Esters in Methanol (150 ml/mMol). Nach 2-5 Stunden gibt man Wasser zu und führt über eine Säule mit Sephadex® G-25-Gel (1,6 · 115 cm) und eluiert mit Wasser. Man engt ein, führt über eine mit Dowex® 50 H&spplus; (2 ml) gefüllt Säule und bewirkt eine Gefriertrocknung. In diesem Stadium stellt man durch Protonen NMR-Spektrum fest, daß sämtliche Schutzgruppen entfernt worden sind. Falls erforderlich, unterwirft man das Produkt erneut der Hydrierung und oder Verseifung. In dieser Weise erhält man die Verbindung 46 (34 mg, 68% in beiden Stufen). SCHEMA 11 - Herstellung des Disaccharids 54

HERSTELLUNGSBEISPIEL 42

Methyl-O-4,6-O-benzyliden-2-O-benzyl-α-D-glucopyranosid (48)

Man löst die Verbindung 47 (60 g) (im Handel erhältlich) mit Benzylbromid (50,5 ml) in N,N-Dimethylformamid (858 ml). Man kühlt die Lösung bis auf +10ºC ab und gibt tropfenweise unter Rühren der Mischung einer wäßrige 20 %-ige Natriumhydroxidlösung zu. Nach 1 Stunde erhöht man die Reaktionstemperatur auf 20ºC und rührt die Mischung während weiterer 20 Stunden. Anschließend gießt man die Lösung ine ine Mischung aus Wasser, Eis und Toluol und extrahiert. Man engt die organische Phase ein und reinigt das rohe Produkt durch Kristallisation, wobei man 30,0 g der Verbindung 48 erhält, die von J. M. Küster et al. in Justus Liebigs Ann. Chem. (1975), 2179-2189 beschrieben worden ist.
CCM: Rf = 0,60, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 7/3 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 43

Methyl-O-4,6-O-benzyliden-2-O-benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (49)

Man löst die Verbindung 48 (26,4 g) in N,N-Dimethylformamid (211 ml) und kühlt auf +5ºC ab. Man gibt dann unter einer Stickstoffatmosphäre Natriumhydrid (3,2 g) zu. Dann gibt man tropfenweise Iodmethan (11,3 g) zu und rührt die Mischung während 1 Stunde bei Raumtemperatur. Man verdünnt die Mischung mit Ethylacetat, wäscht 2-mal mit Wasser, engt ein und erhält 28 g der rohen Verbindung 49, die von M. Petitou et al. in J. Med. Chem., 40 (1997), 1600-1607 beschrieben worden ist.
CCM: Rf = 0,70, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 7/3 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 44

Methyl-O-2-O-benzyl-3-O-methyl-α-D-glucopyranosid (50)

Man löst die Verbindung 49 (28 g) in Methanol (468 ml). Dann gibt man p-Toluolsulfonsäure (1,35 g) zu und rührt die Mischung während 20 Stunden bei 20ºC. Man verdünnt die Mischung mit Toluol und engt ein. Eine säulenchromatographische Reinigung über Kieselgel liefert 21 g der Verbindung 50.
CCM: Rf = 0,07, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 6/4 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 45

Methyl-O-2-O-benzyl-3,6-di-O-methyl-α-D-glucopyranosid (51)

Man löst die Verbindung 50 (11,8 g) unter Stickstoff in Dichlormethan (160 ml). Dann gibt man bei Raumtemperatur Trimethyloxoniumtetrafluorborat (7,0 g) und 2,6-Di-tert.-butyl-4-methylpyridin (10,6 g) zu. Nach 2 Stunden gießt man die Mischung in eine Mischung aus Wasser und Eis und extrahiert mit Dichlormethan. Man wäscht die organische Phase mit Natriumhydrogencarbonat und engt ein. Die säulenchromatographische Reinigung des Produkts über Kieselgel liefert 10,1 g der Verbindung 51.
CCM: Rf = 0,25, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 7/3 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 46

Ethyl-2,4,6-tri-O-acetyl-3-O-methyl-1-thio-α-L-idopyranose (52)

Man löst 1,2,4,6-Tetra-O-acetyl-3-O-methyl-α-L-idopyranose (hergestellt wie für sein per-benzoyliertes Analogon unter Ersatz des Benzoylchlorids durch Essigsäureanhydrid beschrieben; Jaurand et al. Bio. Med. Chem. Lett., 2 (1992), 897-900) (48,4 g) in Toluol (175 ml). Man gibt unter einer Stickstoffatmosphäre Ethanthiol (20 ml) und Bortrifluorid-etherat (1 M in Toluol, 134 ml) zu. Nach dem Rühren während 1 Stunde gibt man wäßriges Natriumhydrogencarbonat (400 ml) zu und rührt die Mischung während 1 Stunde. Man gießt die Mischung dann in Ethylacetat, wäscht die organische Phase zweimal mit Wasser und engt ein. Die säulenchromatographische Reinigung über Kieselgel liefert 29,6 g der Verbindung 52.
CCM: Rf = 0,45, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 6/4 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 47

Methyl-O-(2,4,6-tri-O-acetyl-3-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O-benzyl- 3,6-di-O-methyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (53)

Man löst die Verbindung 51 (10,1 g) und die Verbindung 52 (16,0 g) unter einer Stickstoffatmosphäre in Toluol (304 ml). Nach der Zugabe eines pulverförmigen Molekularsiebs (4Å) kühlt man das Reaktionsmedium auf -20ºC ab und gibt tropfenweise unter einem Stickstoffstrom eine frisch hergestellte 0,1M Lösung von N-Iodsuccinimid (10,1 g) und von Trifluormethansulfonsäure (0,80 ml) in einer Dioxan/Dichlormethan-Mischung 1/1 V/V zu. Nach 10 Minuten filtriert man die rote Reaktionsmischung und wäscht nacheinander mit wäßrigen Natriumthiosulfat und wäßrigen Natriumhydrogencarbonat. Man engt die organische Phase ein, reinigt den Rückstand chromatographisch über Kieselgel und erhält 21,1 g der Verbindung 53.
CCM: Rf = 0,30, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 6/4 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 48

Methyl-O-(3-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-methyl-α-D- glucopyranosid (54)

Man löst die Verbindung 53 (21,1 g) in 295 ml einer Methanol/Dioxan- Mischung (1/1 V/V) und gibt Kalium-tert.-butylat zu. Nach 30 Minuten neutralisiert man die Mischung mit einem Harz Dowex® 50WX8 in der H&spplus;-Form und engt im Vakuum ein. Man bewirkt die Reinigung chromatographisch über Kieselgel und erhält 12,7 g der Verbindung 54.
CCM: Rf = 0,08, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 3/7 V/V) SCHEMA 12 - Herstellung des Tetrasaccharids 62

HERSTELLUNGSBEISPIEL 49

Methyl-O-(4,6-O-isopropyliden-3-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O-benzyl- 3,6-di-O-methyl-α-D-glucopyranosid (55)

Man löst die Verbindung 54 (12,7 g) unter einer Stickstoffatmosphäre in Tetrahydrofuran (67 ml). Dann gibt man 2,2-Dimethoxypropan (19 ml) und p- Toluolsulfonsäure zu und rührt die Mischung während 16 Stunden bei Raumtemperatur. Anschließend verdünnt man das Reaktionsmedium mit wäßrigem Matriumhydrogencarbonat und extrahiert mit Ethylacetat, so daß man nach dem Verdampfen des Lösungsmittels einen rohen Rückstand erhält, der über Kieselgel chromatographiert wird und 10,4 g der Verbindung 55 liefert.
CCM: Rf = 0,35, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 1/1 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 50

Methyl-O-(4,6-O-isopropyliden-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O- benzyl-3,6-di-O-methyl-α-D-glucopyranosid (56)

Man löst die Verbindung 55 (10,4 g) in Tetrahydrofuran (140 ml) und kühlt auf 10ºC ab. Dann gibt man unter einer Stickstoffatmosphäre Natriumhydrid (1,38 g; 60%-ige Dispersion in Öl) und Iodmethan (1,84 ml) zu. Nach 4 Stunden zerstört man das überschüssige Natriumhydrid mit Methanol, extrahiert die Mischung mit Dichlormethan und engt ein. Man reinigt den Rückstand chromatographisch über Kieselgel und erhält 11,1 g der Verbindung 56.
CCM: Rf = 0,55, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 95/5 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 51

Methyl-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-methyl-α-D-glucopyranosid (57)

Man löst die Verbindung 56 (11,1 g) in einer Essigsäure/Wasser-Mischung 7/3 (V/V) und rührt über Nacht. Man dampft die Mischung zweimal in Gegenwart von Toluol ein und reinigt chromatographisch über Kieselgel unter Erhalt von 9,2 g der Verbindung 57.
CCM: Rf = 0.09, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 1/1 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 52

Methyl-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1→4)-2-O-benzyl-3,6- di-O-methyl-α-D-glucopyranosid (58)

Man gibt 2,2,6,6-Tetramethyi-1-piperidinyloxy (13 mg), eine gesättigte Natriumhydrogencarbonatlösung (16 ml), Kaliumbromid (88 mg) und Tetrabutylammoniumchlorid (117 mg) zu einer Lösung der Verbindung 57 (4, 7 g) in Dichlormethan (28 ml). Man kühlt die Mischung auf 0ºC ab und gibt im Verlaufe von 15 Minuten eine Mischung aus einer gesättigten Natriumchloridlösung (17,8 ml), einer gesättigten Natriumhydrogencarbonatlösung (8,8 ml) und Natriumhypochlorit (1,3 M; 20 ml) zu. Nach dem Rühren während 1 Stunde verdünnt man das Medium mit Ethylacetat, wäscht mit einer gesättigten Natriumchloridlösung, trocknet über Magnesiumsulfat, filtriert, dampft zur Trockne ein und erhält 3,5 g der rohen Verbindung 58.
CCM: Rf = 0,14, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 53

Methyl-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronat)-(1→4)-2-O-benzyl- 3,6-di-O-methyl-α-D-glucopyranosid (59)

Man löst die Verbindung 58 (3,5 g) unter einer Stickstoffatmosphäre in N,N-Dimethylformamid (29 ml). Man gibt Kaliumhydrogencarbonat (1,76 g) und Benzylbromid (2,85 ml) zu und rührt die Mischung während 4 Stunden. Man gibt Ethylacetat und Wasser zu, engt die organische Phase nach der Extraktion ein und erhält nach der chromatographischen Reinigung über Kieselgel 3,4 g der Verbindung 59.
CCM: Rf = 0,43, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 4/6 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 54

Methyl-O-(benzyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)- (1→4)-O-(3-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosyl-(1→4)-O-(benzyl- 2,3-di-O-methyl-α-L-iodpyranosyluronat)-(1→4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-methyl-α- D-glucopyranosid (61)

Man dampft eine Mischung aus der Verbindung 59 (0,53 g) und der Verbindung 60 (1,0 g) in Gegenwart von Toluol ein und löst unter einer Stickstoffatmosphäre in Dichlormethan (16,2 ml). Nach der Zugabe eines pulverförmigen Molekularsiebs (4Å) kühlt man die Mischung auf -20ºC ab. Nach dem Rühren während 15 Minuten gibt man Trimethylsilyl-trifluormethansulfonat (15 Mol-% bezogen auf die Verbindung 60) zu. Nach 15 Minuten behandelt man die Mischung mit wäßrigem Natriumhydrogencarbonat. Nach dem Abfiltrieren des Molekularsiebs verdünnt man das Filtrat mit Dichlormethan, wäscht mit Wasser, engt ein und reinigt chromatographisch über Kieselgel unter Erhalt von 0,75 g der Verbindung 61.
NMR: Rf = 0,45, Kieselgel, (Toluol/Ethylacetat 3/7 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 55

Methyl-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)-O-(3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronat)-(1→4)-2-O-benzyl-3,6-di-O-methyl-α-D-glucopyranosid (62)

Man löst die Verbindung 61 (0,74 g) in Pyridin (3,0 ml) und gibt bei Raumtemperatur eine Mischung aus Essigsäure (4,1 ml) und Hydrazinhydrat (0,47 ml) in Pyridin (3,0 ml) zu. Nach 9-stündigem Rühren gibt man Dichlormethan und Wasser zu. Man trennt die organische Phase ab, wäscht sie nacheinander mit einer Chlorwasserstoffsäurelösung (1,0 N), wäßrigem Natriumhydrogencarbonat und Wasser. Man engt die organische Phase ein, reinigt chromatographisch über Kieselgel und erhält 0,66 g der Verbindung 62.
CCM: Rf = 0,25, Kieselgel, (Dichlormethan/Methanol 98/2 V/V)
Die nachfolgende Herstellung des Tetrasaccharids 68 erfolgt in analoger Weise unter Anwendung des nachfolgenden Reaktionsschemas 13 ausgehend von dem Disaccharid 55. SCHEMA 13 - Herstellung des Tetrasaccharids 68 SCHEMA 14 - Herstellung des Disaccharids 75

HERSTELLUNGSBEISPIEL 56

Methyl-2-O-benzyl-4,6-di-O-benzyliden-3-O-p-methoxybenzyl-α-D-glucopyrano- sid (69)

Man löst die Verbindung 48 (26,4 g) in N,N-Dimethylformamid (211 ml) und kühlt auf 5ºC ab. Man gibt unter einer Stickstoffatmosphäre Natriumhydrid (2.5 g) und dann tropfenweise 4-Methoxybenzylchlorid (13,3 g) zu und rührt die Mischung während 1 Stunde bei Raumtemperatur. Man verdünnt die Mischung mit Ethylacetat, wäscht zweimal mit Wasser, engt ein und erhält 40,7 g der Verbindung 69.
CCM: Rf = 0,80, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 7/3 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 57

Methyl-O-benzyl-3-O-p-methoxybenzyl-α-D-glucopyranosid (70)

Man löst die Verbindung 69 (34,9 g) in 60%-iger wäßriger Essigsäure und rührt während 4 Stunden bei 60ºC. Man verdünnt die Mischung mit Toluol und engt ein. Die säulenchromatographische Reinigung über Kieselgel liefert 26,4 g der Verbindung 70.
CCM: Rf = 0,07, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 7/3 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 58

Methyl-2-O-benzyl-3-O-p-methoxybenzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (71)

Man löst die Verbindung 70 (26,4 g) unter einer Stickstoffatmosphäre in Dichlormethan (263 ml). Dann gibt man bei Raumtemperatur Trimethyloxoniumtetrafluorborat (11,6 g) und 2,6-Di-tert.-butyl-4-methylpyridin (17,4 g) zu. Nach 4 Stunden gießt man die Mischung auf Eiswasser und extrahiert mit Dichlormethan. Man wäscht die organische Phase mit Natriumhydrogencarbonat und engt ein. Die säulenchromatographische Reinigung des rohen Produkts über Kieselgel liefert 18,5 g der Verbindung 71.
CCM: Rf = 0,25, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 7/3 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 59

Methyl-O-(2,4,6-tri-O-acetyl-3-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O-benzyl-3- O-p-methoxybenzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (72)

Man löst die Verbindung 71 (17,5 g) und die Verbindung 52 (28.2 g) unter einer Stickstoffatmosphäre in Toluol (525 ml). Nach der Zugabe eines 4Å- Molekularsiebs kühlt man die Reaktionsmischung auf -20ºC ab und gibt tropfenweise unter einem ständigen Stickstoffstrom eine frisch hergestellte 0,1 M Lösung von N-Iodsuccinimid (17,4 g) und Trifluormethansulfonsäure (1,38 ml) in Dioxan/Dichlormethan 1/1 / V/V zu. Nach 10 Minuten filtriert man die rote Reaktionsmischung und wäscht nacheinander mit wäßrigem Natriumthiosulfat und wäßrigem Natriumhydrogencarbonat. Man engt die organische Phase im Vakuum ein und isoliert 30,0 g der Verbindung 72.
CCM: Rf = 0,45, Kieselgel, Dichlormethan/Ethylacetat 8/2 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 60

Methyl-O-(3-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O-benzyl-3-O p-methoxybenzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (73)

Man löst die Verbindung 72 (30,0 g) in 460 ml Methanol/Dioxan 1/1 V/V und gibt Kalium-tert.-butylat zu. Nach 15 Minuten neutralisiert man die Mischung mit einem Harz Dowex® 50WX8H&spplus; und engt im Vakuum ein. Die Reinigung erfolgt säulenchromatographisch über Kieselgel und liefert 17,4 g der Verbindung 73.
CCM: Rf = 0,25, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 95/5 V/V)

HERSTELLUNGSBEISPIEL 61

Methyl-O-(4,6-O-isopropyliden-3-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O-benzyl- 3-O-p-methoxybenzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (74)

Man löst die Verbindung 73 (17,4 g) unter einer Stickstoffatmosphäre in N,N-Dimethylformamid (77 ml). Man gibt 2,2-Dimethoxypropan (26 ml) und p- Toluolsulfonsäure zu und rührt die Mischung dann während 30 Minuten. Das Verdünnen der Mischung mit wäßrigem Natriumhydrogencarbonat und die Extraktion mit Ethylacetat liefert nach dem Verdampfen des Lösungsmittels 19,7 g der Verbindung 74.
CCM: Rf = 0,45, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 95/5 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 62

Methyl-O-(4,6-O-isopropyliden-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O- benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (75)

Man löst die Verbindung 74 (18,5 g) in N,N-Dimethylformamid (24,4 ml) und kühlt auf 0ºC ab. Unter einer Stickstoffatmosphäre gibt man Natriumhydrid (1,47 g; 60%-ige Dispersion in Öl) und Iodmethan (2,36 ml) zu. Nach 1 Stunde zerstört man das überschüssige Natriumhydrid mit Methanol, extrahiert die Mischung mit Dichlormethan, engt ein und erhält 20,0 g der Verbindung 75.
CCM: Rf = 0,85, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 95/5 V/V SCHEMA 15 - Synthese des Disaccharids 60

HERSTELLUNGSBEISPIEL 63

Methyl-O-(4,6-O-isopropyliden-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2-O- benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (76)

Man löst die Verbindung 75 (18,4 g) in Dichlormethan (838 ml) und Wasser (168 ml). Man gibt 2,3-Dichlor-5,6-diycano-1,4-benzochinon (7,1 g) zu und rührt die Mischung während 18 Stunden bei 4ºC. Man gießt die Mischung in wäßriges Natriumhydrogencarbonat und extrahiert mit Dichlormethan. Das Einengen der organischen Phase liefert 12,7 g der Verbindung 76.
CCM: Rf = 0,40, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 95/5 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 64

Methyl-O-(4,6-O-ispropyliden-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2,3-di- O-benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (77)

Man löst die Verbindung 76 (10,5 g) in trockenem N,N-Dimethylformamid (178 ml) und kühlt dann unter einer Stickstoffatmosphäre auf 0ºC ab. Man gibt Natriumhydrid (1,91 g; 60%-ige Dispersion in Öl) und dann tropfenweise Benzylbromid (3,3 ml) zu. Nach 30 Minuten beendet man die Reaktion durch Zerstören des überschüssigen Natriumhydrids mit Methanol, gibt Wasser zu und extrahiert die Mischung zweimal mit Ethylacetat. Durch Verdampfen des Lösungsmittels erhält man 13,6 g der Verbindung 77.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 1/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 65

Methyl-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (78)

Man löst die Verbindung 77 in Essigsäure/Wasser 77/33 (V/V) und rührt über Nacht. Man dampft die Mischung zweimal in Gegenwart von Toluol ein und reinigt säulenchromatographisch über Kieselgel unter Erhalt von 11,5 g der Verbindung 78.
CCM: Rf = 0,09, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 1/1 V/V
Rf = 0,68, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 66

Methyl-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1→4)-2,3-di-O-benzyl- 6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (79)

Man gibt zu einer Lösung der Verbindung 78 (11,6 g) in Dichlormethan (60 ml) 2,2,6,6-Tetramethyl-1-piperidinyloxy (33 mg), eine Natriumhydrogencarbonatlösung (40 ml), Kaliumbromid (218 mg) und Tetrabutylammoniumchlorid (289 mg). Man kühlt die Mischung auf 0ºC ab und gibt im Verlaufe von 15 Minuten eine Mischung aus einer gesättigten Natriumchloridlösung (44 ml), einer gesättigten Natriumhydrogencarbonatlösung (21,8 ml) und Natriumhypochlorit (1,3 M, 50 ml) zu. Nach dem Rühren während 1 Stunde verdünnt man die Mischung mit Wasser und extrahiert (3-mal) mit Dichlormethan. Man wäscht die organische Phase mit einer wäßrigen Natriumchloridlösung, trocknet über Magnesiumsulfat, filtriert, dampft zur Trockne ein und erhält 13,4 g der rohen Verbindung 79.
CCM: Rf = 0,14, Kieselgel, Dichlormethan/Methanol 9/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 67

Methyl-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-D-idopyranosyluronat)-(1→4)-2,3-di-O- benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (80)

Man löst die Verbindung 79 unter einer Stickstoffatmosphäre in N,N- Dimethylformamid (110 ml). Man gibt dann Kaliumhydrogencarbonat (6,7 g) und Benzylbromid (10,7 ml) zu und rührt die Mischung während 90 Minuten. Man gibt Ethylacetat und Wasser zu und engt die organische Phase nach der Extraktion ein. Die säulenchromatographische Reinigung über Kieselgel liefert 9,9 g der Verbindung 80.
CCM: Rf = 0.43, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 4/6 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 68

Methyl-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)-2,3-di-O- benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (81)

Man löst die Verbindung 80 (9,9 g) in 300 ml Methanol und erhitzt unter einer Stickstoffatmosphäre zum Sieden am Rückfluß. Dann gibt man tropfenweise 1M Natriummethylat in Methanol (65,2 ml) zu und rührt die Mischung während 3 Stunden am Rückfluß. Anschließend kühlt man die Mischung auf Raumtemperatur ab, gibt 1 N Natriumhydroxid (22,2 ml) zu und rührt die Reaktionsmischung während weiterer 90 Minuten. Nach der Neutralisation mit dem Harz Dowex® 50WX8H&spplus; und der Filtration engt man die Mischung ein. Man löst das reine Produkt in N,N-Dimethylformamid (192 ml) und gibt unter einer Stickstoffatmosphäre ein Molekularsieb zu. Man gibt Kaliumhydrogencarbonat (3,2 g) und Benzylbromid (4,8 ml) zu und rührt die Mischung während 5 Stunden. Nach der Zugabe von Ethylacetat und Wasser, der Extraktion und der Trennung der beiden Phasen engt man die organische Phase ein. Man reinigt das rohe Produkt säulenchromatographisch über Kieselgel und erhält 6,19 g der Verbindung 81 und 1,88 g der Ausgangsverbindung 90.
CCM: Rf = 0.55, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 4/6 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 69

Methyl-O-(benzyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)- (1→4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (82)

Man löst die Verbindung 81 (6,2 g) in 40 ml Dioxan, gibt Lävulinsäure (2,1 g), Dicyclohexylcarbodiimid (3,75 g) und 4-Dimethylaminopyridin (0,2 g) zu und rührt die Mischung während 2 Stunden unter einer Stickstoffatmosphäre. Man gibt Diethylether (95 ml) zu und filtriert den Niederschlag ab. Man wäscht das Filtrat mit wäßrigem Kaliumhydrogensulfat, trocknet über Magnesiumsulfat, filtriert und engt ein. Die Kristallisation aus Ether/Heptan liefert 6,2 g der Verbindung 82.
CCM: Rf = 0,26, Kieselgel, Dichlormethan/Aceton 95/5 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 70

O-(Benzyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)- 1,3-di-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methyl-α,β-D-glucopyranose (83

Man löst die Verbindung 82 (6,1 g) unter einer Stickstoffatmosphäre in Essigsäureanhydrid (256 ml) und kühlt auf -20ºC ab. Man gibt tropfenweise im Verlaufe von 30 Minuten eine Mischung aus Schwefelsäure (4,9 ml) in Essigsäureanhydrid (49 ml) zu. Nach 60 Minuten gibt man Natriumacetat zu bis zum Erhalt einer Mischung mit einem neutralen pH-Wert. Dann gibt man Ethylacetat und Wasser zu und engt die organische Phase ein. Die säulenchromatographische Reinigung über Kieselgel liefert 4,2 g der Verbindung 83.
CCM: Rf = 0,24, Kieselgel, Dichlormethan/Ethylacetat 8/2 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 71

O-(Benzyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)-3- O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methyl-α,β-D-glucopyranose (84)

Man löst die Verbindung 83 (4,2 g) in Tetrahydrofuran (42 ml) und gibt Piperidin (4,1 ml) zu. Man rührt die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur. Dann gibt man Ethylacetat zu und wäscht die Mischung mit 0,5 N Chlorwasserstoffsäure. Man engt die organische Phase ein, reinigt den Rückstand säulenchromatographisch über Kieselgel und erhält 3,2 g der Verbindung 84.
CCM: Rf = 0,33, Kieselgel, Dichlormethan/Ethylacetat 1/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 72

O-(Benzyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)-3- O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methyl-α,β,D-glucopyranose-trichloracetimidat (60)

Man löst die Verbindung 84 (1,59 g) in trockenem Dichlormethan unter einer Stickstoffatmosphäre. Man gibt Trichloracetonitril (1,1 ml) und Caesiumcarbonat (72 mg) zu und rührt die Mischung während 1 Stunde. Man filtriert das Caesiumcarbonat ab und engt das Filtrat ein. Die säulenchromatographische Reinigung über Kieselgel liefert 1,57 g der Verbindung 60.
CCM: Rf = 0,60, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 3/7 V/V SCHEMA 16 - Synthese des Tetrasaccharids 86

HERSTELLUNGSBEISPIEL 73

Methyl-O-(benzyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)- (1→4)-O-(3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronat)-(1→4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (85)

Man dampft eine Mischung der Verbindung 80 (300 mg) und der Verbindung 60 (455,6 mg) in Gegenwart von Toluol ein und löst unter einer Stickstoffatmosphäre in Dichlormethan (6 ml). Nach der Zugabe eines 4Å-Molekularsiebs kühlt man die Mischung auf -20ºC ab. Nach dem Rühren während 20 Minuten gibt man Trimethylsilyl-trifluormethansulfonat (15 Mol-%, bezogen auf die Verbindung 60) zu. Nach 10 Minuten neutralisiert man die Mischung mit wäßrigem Natriumhydrogencarbonat. Nach dem Abfiltrieren des Molekularsiebs verdünnt man das Filtrat mit Dichlormethan, wäscht mit Wasser, engt ein, reinigt säulenchromatographisch über Kieselgel und erhält 560 mg der Verbindung 85.
CCM: Rf = 0,50, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 3/7 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 74

Methyl-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronat)-(1→4)-O-(3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronat)-(1→4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-methyl-α-D-glucopyranosid (86)

Man löst die Verbindung 85 (532,6 mg) in Pyridin (1,9 ml) und gibt bei Raumtemperatur eine Mischung aus Essigsäure (2,4 ml), Hydrazinhydrat (0,3 ml) und Pyridin (1,9 ml) zu. Nach dem Rühren während 9 Minuten gibt man Dichlormethan und Wasser zu. Man trennt die organische Phase ab und wäscht sie nacheinander mit 0,1 N Chlorwasserstoffsäure, wäßrigem Natriumhydrogencarbonat und Wasser. Man engt die organische Phase ein, reinigt sie säulenchromatographisch über Kieselgel und erhält 451 mg der Verbindung 86.
CCM: Rf = 0,45, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat 3/7 V/V SCHEMA 17 - Synthese des Monosaccharids 93

HERSTELLUNGSBEISPIEL 75

1,6-Anhydro-4-O-p-methoxyphenyl-2-O-tosyl-β-D-glucopyranose (88)

Man erhitzt eine Mischung aus dem Epoxid 87 (20 g, 67 mMol) (M. Cerny et al. Collect. Czech. Chem. Commun., 26 (1961), 2542) und p-Methoxyphenol (33,3 g, 268 mMol) unter Argon auf 90ºC. Wenn die Mischung flüssig wird, gibt man AlCl&sub3; (0,3 g, 2,35 mMol) in kleinen Spatelspitzen zu, worauf man nach dem Rühren während 30 Minuten und dem Abkühlen auf Raumtemperatur das Reaktionsmedium mit Dichlormethan (600 ml) verdünnt, mit Triethylamin (0,5 ml) neutralisiert und mit einer wäßrigen 1M Natriumhydroxidlösung (120 ml), einer gesättigten Natriumchloridlösung (3 · 60 ml), einer wäßrigen 10%-igen Kaliumhydrogensulfatlösung (50 ml) und einer wäßrigen gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen wird. Anschließend trocknet man die organische Phase (Natriumsulfat), filtriert und engt ein. Man reinigt den Rückstand durch Ausfällen in Ether und durch Chromatographie über Siliciumdioxid unter Erhalt der Verbindung 88 (19,4 g, 69%).
CCM: Rf = 0,37, Kieselgel, Dichlormethan/Ethylether 6/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 76

1,6-Anhydso-4-O-p-methoxyphenyl-3-O-methyl-2-O-tosyl-β-D-glucopyranose (89)

Man gibt zu einer Lösung der Verbindung 88 (3,36 g, 7,95 mMol) in trockenem N,N-Dimethylformamid (8 ml) Methyliodid (54 ml, 954 mMol) und Silberoxid (18,4 g, 79,5 mMol). Nach dem Rühren während 16 Stunden filtriert man die Mischung (Celit), verdünnt mit Ethylacetat (300 ml), wäscht mit Wasser (3 · 100 ml), trocknet (Natriumsulfat), filtriert, engt ein und reinigt chromatographisch über Siliciumdioxid und erhält das Derivat 89 (3,23 g, 80%),
CCM: Rf = 0,36, Kieselgel, Cyclohexan/Ethylether 2/3 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 77

1,6-Anhydro-4-O-p-methoxyphenyl-3-O-methyl-2-O-benzoyl-β-D-mannopyranose (90)

Man löst die Verbindung 89 (27,4 g, 62.7 mMol) in N,N-Dimethylformamid (315 ml). Man gibt anschließend Tetrabutylammoniumbenzoat (341 g, 940 mMol) zu und erhitzt während 3 Stunden auf 150ºC. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur verdünnt man das Medium mit Ethylacetat (300 ml), wäscht bis zur Neutralität mit Wasser, trocknet und engt ein. Man verwendet den der Verbindung 90 entsprechenden Rückstand direkt in der nächsten Stufe.
CCM: Rf = 0,53, Kieselgel, Dichlormethan/Ethylether 10/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 78

1,6-Anhydro-4-O-p-methoxyphenyl-3-O-methyl-β-D-mannopyranose (91)

Man gibt zu einer Lösung des in der obigen Weise erhaltenen rohen Rückstands 90 in Dichlormethan/Methanol (540 ml. 1/1) Natriummethylat (13,5 g, 250 mMol). Nach dem Rühren während 1 Stunde verdünnt man das Reaktionsmedium mit Dichlormethan (500 ml), wäscht dann mit einer wäßrigen 3%-igen Chlorwasserstoffsäurelösung und mit Wasser. Nach dem Trocknen, der Filtration und dem Einengen reinigt man den Rückstand über Siliciumdioxid und erhält die Verbindung 91 (10,5 g, 59% in zwei Stufen).
CCM: Rf = 0,29, Kieselgel, Toluol/Ethylether 1/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 79

1,6-Anhydro-2-O-benzyl-4-O-p-methoxyphenyl-3-O-methyl-β-D-mannopyranose (92)

Man gibt zu einer Lösung der Verbindung 91 (9,8 g, 34,6 mMol) in N,N- Dimethylformamid (180 ml) Benzylbromid (6,2 ml, 51,9 mMol) und dann bei 0ºC 95%-iges Natriumhydrid (1,16 g, 48,4 mMol). Nach dem Rühren während 16 Stunden gibt man bei 0ºC Methanol (3 ml) zu, verdünnt die Reaktionsmischung mit Ethylacetat (200 ml), wäscht mit Wasser, trocknet, filtriert und engt ein. Man verwendet den der Verbindung 92 entsprechenden Rückstand direkt ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe. Man erhält jedoch nach der Chromatographie über Siliciumdioxid eine Analysenfraktion.
[α]²&sup0;D = -49 (c = 0,73, Dichlormethan).

HERSTELLUNGSBEISPIEL 80

1,6-Anhydro-2-O-benzyl-3-O-methyl-β-D-mannopyranose (93)

Man löst die in der obigen Weise erhaltene rohe Verbindung 92 in einer THF/Wasser-Mischung (311 ml, 17/1) und gibt dann bei 0ºC Ammoniumceriumnitrat (76 g, 138 mMol) zu. Nach dem Rühren während 30 Minuten verdünnt man die Reaktionsmischung mit Dichlormethan (1 l) und wäscht dann mit einer wäßrigen 2%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung und dann mit Wasser. Nach dem Trocknen, der Filtration und dem Einengen reinigt man den Rückstand über Siliciumdioxid und erhält die Verbindung 93 (6,63 g, 72% in zwei Stufen).
[α]20D = -68 (c = 1,02, Dichlormethan).
Die Herstellung des nachfolgenden Nonasaccharids 94 erfolgt ausgehend von dem Monosaccharid 93 mit Hilfe einer Reaktionssequenz, die analog zu derjenigen ist, die ausgehend von dem Monosaccharid 3 zu dem Nonasaccharid 24 durchgeführt worden ist. SCHEMA 18 - Synthese des Nonasaccharids 96

HERSTELLUNGSBEISPIEL 81

O-(6-Benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-]&sub3;-1,6-anhydro-3-O-methyl-β-D-mannopyranose (95)

Man gibt zu einer Lösung der Verbindung 94 (759 mg, 0,36 mMol) in einer Dichlormethan/tert.-Butanol-Mischung (3,3 ml, 1/2) 5% Pd/C (109 mg). Nach 16 Stunden Rühren unter einem Druck von 10 bar bei 55ºC filtriert man die Mischung und engt ein. Man setzt die Verbindung 95 ohne weitere Reinigung oder auch Charakterisierung in der nächsten Stufe ein.

HERSTELLUNGSBEISPIEL 82

O-(6-Benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-]&sub3;-1,6-anhydro-2-O-benzoyl-3-O-methyl-β-D-mannopyranose (96)

Man gibt Benzoylchlorid (63 ul, 0,54 mMol) und Dimethylaminopyridin (9 mg, 0,073 mMol) zu einer Lösung der Verbindung 95 (726 mg, 0,36 mMol) in wasserfreiem Pyridin (5,4 ml). Nach dem Rühren während 2 Stunden bei 60ºC gibt man die gleiche Menge Benzoylchlorid zu und engt die Lösung nach 35 Minuen ein, nimmt den Rückstand mit Dichlormethan auf, wäscht ihn mit einer wäßrigen 10%-igen Kaliumhydrogensulfatlösung, einer wäßrigen 2%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung und dann mit Wasser. Anschließend trocknet man die organische Phase über Natriumsulfat, filtriert und engt ein. Man reinigt den Rückstand anschließend über Siliciumdioxid und erhält die Verbindung 96 (684 mg, 90% in zwei Stufen).
CCM: Rf = 0,5, Kieselgel, Toluol/Aceton 1/1 V/V SCHEMA 19 - Synthese des Nonasaccharids 99

HERSTELLUNGSBEISPIEL 83

O-(6-O-Benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-1,6-di- O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-methyl-α,β-D-mannopyranose (97)

Man behandelt die Verbindung 96 (657 mg, 0,31 mMol) mit einer Mischung aus Essigsäureanhydrid (4,5 ml), Essigsäure (100 g1) und Trifluoressigsäure (0,19 ml), wie in dem Herstellungsbeispiel 23 beschrieben. Nach der Chromatographie über einer mit Kieselgel beschickten Säule erhält man die Verbindung 97 (432 mg, 92%).
CCM: Rf = 0,53, Kieselgel, Toluol/Aceton 1/1 V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 84

O-(6-O-Benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-6-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-methyl-α,β-D-mannopyranose (98)

Man rührt eine Lösung der Verbindung 97 (382 mg, 0,17 mMol) und von Benzylamin (736 ul, 6,74 mMol) in THF (6 ml) während 5 Stunden. Anschließend gießt man die Mischung auf Eis, extrahiert mit Ethylether, wäscht die organische Phase nacheinander mit 3%-iger Chlorwasserstoffsäure und Wasser, trocknet und engt ein. Nach der Chromatographie über einer mit Kieselgel beschickten Säule erhält man die Verbindung 98 (241 mg).
CCM: Rf = 0,37, Kieselgel, Toluol/Ethylacetat/Ethanol 6/2/2 V/V/V

HERSTELLUNGSBEISPIEL 85

D-(6-O-Benzoyl-4-O-lävulinoyl-2,3-di-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-6-O-acetyl-2-O-benzoyl-3-O-methyl-α,β-D-mannopyranose-trichloracetimidat (99)

Man gibt Trichloracetonitril (57,ul, 0,56 mMol) und Caesiumcarbonat (58 mg) zu einer Lösung der Verbindung 98 (241 mg) in Dichlormethan (2,2 ml). Nach dem Rühren während 1 Stunde filtriert man die Mischung, engt ein und unterzieht den Rückstand einer Säulenchromatographie über Kieselgel unter Erhalt des Imidats 99 (221 mg, 56% in zwei Stufen).
CCM: Rf = 0,19, Kieselgel, Cyclohexan/Aceton 3/2 V/V

BEISPIEL 1

Methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfoα-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3-di-O-methyl-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β- D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(2,3-di-O-methyl-6-O-sulfoα-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronsäure)- (1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-α-L- idopyranosyluronsäure)-(1→4)-3-O-methyl-2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Natriumsalz (I)

Man löst das Hexadecasaccharid 46 (34 mg, 11 uMol) in N,N-Dimethylformamid (1 ml). Man gibt dann den Schwefeltrioxid/Triethylamin-Komplex (180 mg, 0,89 mMol) zu und rührt die Mischung während 20 Stunden bei 55ºC. Man gibt dann den Triethylamin/Schwefeltrioxid-Komplex (5 Mol/Mol Hydroxylfunktion) zu einer Lösung der zu sulfatierenden Verbindung in N,N-Dimethylformamid (5 mg/ml). Nach einem Tag bei 55ºC trägt man die Lösung auf den Kopf einer mit Sephadex® G-25 beschickten Säule (1,6 · 115 cm) auf und eluiert mit 0,2 M Natriumchlorid. Man engt die das Produkt enthaltenden Fraktionen ein und entsalzt sie unter Verwendung der gleichen Säule, die mit Wasser eluiert wird. Man erhält die Verbindung I (47 mg, 87%) nach dem Gefriertrocknen als weißes Pulver. [α]²&sup0;D = +65 (c = 1,0, Wasser).

BEISPIEL 2

Methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfoα-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3-di-O-methyl-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β- D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(2,3-di-O-methyl-6-O-sulfoα-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronsäure)- (1→4)-O-(6-O-methyl-2,3-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1→4)-3,6-di-O-methyl-2-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Natriumsalz (II)

BEISPIEL 3

Methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfoα-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3-di-O-methyl-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β- D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(3-O-methyl-2,6-di-O-sulfoα-D-mannopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronsäure)- (1→4)-O-(6-O-methyl-2,3-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1→4)-6-O-methyl-2,3-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Natriumsalz (III)

BEISPIEL 4

Methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfoα-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3-di-O-methyl-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β- D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(3-O-methyl-2,6-di-O-sulfoα-D-mannopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosylnronsäure)- (1→4)-O-(6-O-methyl-2,3-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1→4)-3,6-di-O-methyl-2-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Natriumsalz (IV)

BEISPIEL 5

Methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfoα-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3-di-O-methyl-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β- D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O- (2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(2,3-di-O-methyl-6-O-sulfoα-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronsäure)- (1→4)-O-(6-O-methyl-2,3-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(3-O-methyl-2- O-sulfo-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1→4)-3,6-di-O-methyl-2-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Natriumsalz (V)

Die Verbindungen der Beispiele 2 bis 5 wurden in analoger Weise hergestellt durch Kuppeln eines geeigneten Tetrasaccharids mit einem geeigneten Nonasaccharid und dann Kuppeln mit dem Trisaccharid 41 oder 43 (wie es in den Herstellungsbeispielen 36 oder 38 beschrieben ist), gefolgt von den üblichen Reaktionen der Schutzgruppenabspaltung und der Sulfatierung.
Im Fall des Beispiels 2 ist das verwendete Tetrasaccharid das in dem Herstellungsbeispiel 55 beschriebene (Verbindung 62) und das verwendete Nonasaccharid das in dem Herstellungsbeispiel 25 beschriebene (Verbindung 27).
Im Fall des Beispiels 3 ist das verwendete Tetrasaccharid das in dem Herstellungsbeispiel 74 beschriebene (Verbindung 86) und das verwendete Nonasaccharid das in dem Herstellungsbeispiel 85 beschriebene (Verbindung 99).
Im Fall des Beispiels 4 ist das verwendete Tetrasaccharid das in dem Herstellungsbeispiel 55 beschriebene (Verbindung 62) und das verwendete Nonasaccharid das in dem Herstellungsbeispiel 85 beschriebene (Verbindung 99).
Im Fall des Beispiels 5 ist das verwendete Tetrasaccharid die Verbindung 68 und das verwendete Nonasaccharid das in dem Herstellungsbeispiel 25 beschriebene (Verbindung 27). TABELLE I TABELLE II

Claims

1. Synthetisches Polysaccharid in Form der Säure und dessen pharmazeutisch annehmbare Salze, deren anionische Form einer der folgenden Formeln (I) bis (V) entspricht:

Aktive Strukturen der Erfindung

2. Polysaccharid nach Anspruch 1 in Form des Natriumsalzes oder des Kaliumsalzes.

3. Polysaccharid nach einem der Ansprüche 1 und 2 der Formel:

Methyl-O-(2,3,4,6-tetra-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-α- D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3- di-O-methyl-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3,6-tri- O-methyl-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)]&sub3;-O-(2,3-di-O-methyl-6-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-β-D-glucopyranosyluronsäure)-(1→4)-O-(2,3-6- tri-O-sulfo-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-(2,3-di-O-methyl-α-L-idopyranosyluronsäure)-(1→4)-3-O-methyl-2,6-di-O-sulfo-α-D-glucopyranosid, Natriumsalz.

4. Pharmazeutische Zubereitungen enthaltend als Wirkstoff ein Polysaccharid nach einem der Ansprüche 1 bis 3 in Form des Salzes mit einer pharmazeutisch annehmbaren Base oder in Form der Säure, in Kombination oder in Mischung mit einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch annehmbaren Trägermaterial.

5. Pharmazeutische Zubereitung nach Anspruch 4 in Form von Dosiseinheiten, in denen der Wirkstoff mit mindestens einem pharmazeutischen Trägermaterial vermischt ist.

6. Zubereitung nach Anspruch 5, worin jede Dosiseinheit 0,1 bis 100 mg des Wirkstoffs enthält.

7. Zubereitung nach Anspruch 6, worin jede Dosiseinheit 0,5 bis 50 mg des Wirkstoffs enthält.

8. Verwendung eines Polysaccharids nach einem der Ansprüche 1 bis 3 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von pathologischen Zuständen, die von einer Dysfunktion der Blutgerinnung abhängen.

9. Verwendung eines Polysaccharids nach den Ansprüchen 1 bis 3 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und Vorbeugung von Störungen des kardiovaskulären und zerebrovaskulären Systems, von thromboembolischen Störungen, die mit Atherosklerose und Diabetes verknüpft sind, oder von thromboembolischen Störungen, die mit Rethrombose nach Thrombolyse, Infarkten, Dementien ischämischen Ursprungs, peripheren arteriellen Erkrankungen, der Hämodialyse, Herzmuskelflimmern oder Bypass-Gefäßprothesen verbunden sind.

10. Verwendung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß die hergestellten Arzneimittel bei der Vorbeugung oder der Behandlung von thromboembolischen Krankheiten eingesetzt werden.

11. Verwendung nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die hergestellten Arzneimittel bei der Vorbeugung oder der Behandlung von instabiler Angina, Zerebralvorfällen, Restenosen nach der Angioplastie, der Endarterektomie oder dem Anbringen von endovaskulären Prothesen verwendet werden.