DE69520345T2

DE69520345T2 - Diphenyl-disulfid Verbindungen

Info

Publication number: DE69520345T2
Application number: DE69520345T
Authority: DE
Inventors: Masato Ariga; Shigeo Hatanaka; Koichi Katsuyama; Yukio Saito; Toshihiro Takahashi
Original assignee: Nisshin Seifun Group Inc
Current assignee: Nisshin Seifun Group Inc
Priority date: 1994-12-26
Filing date: 1995-12-21
Publication date: 2001-09-06
Anticipated expiration: 2015-12-22
Also published as: CA2165918A1; DE69520345D1; EP0720983B1; KR960022476A; EP0720983A1; US5698564A

Description

GEBIET DER ERFINDUNG

Diese Erfindung betrifft neue Diphenyldisulfidverbindungen die die Aktivität besitzen, die Produktion von Interleukin-1β (IL-1β) und die Freisetzung des Tumor-Nekrose- Faktors α (TNFα) zu inhibieren.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

IL-1β ist ein Protein, das hauptsächlich von immunkompetenten Zellen wie Makrophagen und Neutrophilen produziert wird, was ein bedeutender Faktor für die Immunantwort ist. Es ist außerdem bekannt, das es ein Faktor ist, der eine zentrale Rolle bei entzündlichen Prozessen spielt oder ein Faktor ist, der an vielen vitalen Reaktionen wie der Hämo-poese, der inneren Sekretion und am Nervensystem teilnimmt.
Z. B. wurde kürzlich die Beziehung zwischen IL-1β und entzündlichen Erkrankungen wie chronischem Rheumatismus geklärt. IL-1β wurde in der Synovialmembran von Patienten festgestellt, die unter chronischem Rheumatismus litten. Es wurde berichtet, daß das IL-1β-Niveaü in der Synovialflüssigkeit mit der Beobachtung lokaler Entzündungen korreliert.
2,2'-Diamino-diphenyl-disulfid und 4-Amino-2'-nitrodiphenyldisulfid sind bekannt als Ausgangsmaterialien für die Synthese organischer Verbindungen aus der WO 92/05164 bzw. "Phosphorus and Sulfur", 1987, Bd. 32, Seiten 91-97. Es gibt keinen Hinweis auf ihre pharmazeutische Verwendung.
Bestimmte Diphenyldisulfide werden in der EP-A-0 611 757 als Zwischenprodukte verwendet.
Steroidale Mittel und nicht-steroidale antiinflammatorische Mittel wurden für die Behandlung von inflammatorischen Erkrankungen wie chronischem Rheumatismus verwendet. Steroidale Mittel können deutliche Verbesserungen verschiedener Symptome inflammatorischer Erkrankungen erzielen, aber sie besitzen das Problem, daß sie bei der Verabreichung über einen längeren Zeitraum zur Entwicklung einer Arzneimitteltoleranz-führen und Nebenwirkungen, manchmal schwerwiegender Art, wie gastrointestinale Störungen, Dermatopathie und Nephritis verursacht werden können. Nichtsteroidale Mittel können zeitweise inflammatorische Symptome inhibieren, aber sie können die inflammatorischen Erkrankungen nicht radikal heilen.

ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG

Angesichts dieser Umstände fanden wir neue Diphenyldisulfidverbindungen mit der potenten Wirkung, die Produktion von IL-1β und die Freisetzung von TNFα zu inhibieren, die nützlich als therapeutische Mittel bei chronischem Rheumatismus und Sepsis sind.
Die vorliegende Erfindung stellt neue Diphenyldisulfidverbindungen der Formel (I) und pharmakologisch verträgliche Salze davon bereit.
worin R&sub1; eine 5- oder 6-gliedrige heterocyclische Gruppe, die zwei Stickstoffatome als Heteroatome enthält; die genannte heterocyclische Gruppe, die mit einem Phenylring kondensiert ist; eine Aminogruppe; oder eine Aminogruppe ist, die durch eine 5- oder 6-gliedrige heterocyclische Gruppe, die zwei Stickstoffatome als Heteroatome enthält oder durch die genannte heterocyclische Gruppe, die mit einem Phenylring kondensiert ist, monosubstituiert ist; R&sub2; eine 5- oder 6- gliedrige heterocyclische Gruppe mit zwei Stickstoffatomen als Heteroatom; die genannte heterocyclische Gruppe, die mit einem Phenylring kondensiert ist; eine Aminogruppe; eine Aminogruppe, die durch eine 5- oder 6-gliedrige heterocycli-sche Gruppe, die zwei Stickstoffatome als Heteroatome enthält oder durch die genannte heterocyclische Gruppe, die mit einem Phenylring kondensiert ist, monosubstituiert ist; oder eine Nitrogruppe ist; und R&sub3; und R&sub4; gleich oder verschieden voneinander sein können und jeweils ein Wasserstoffatom; eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen; eine Alkoxygruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen; eine Aminogruppe; oder eine Nitrogruppe sind; mit der Maßgabe, dass wenn R&sub1; eine Aminogruppe ist, R&sub2; keine Aminogruppe oder Nitrogruppe ist.
Die vorliegende Erindung stellt auch eine pharmazeutische Zusammensetzung bereit, die als aktiven Bestandteil eine Diphenyldisulfidverbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon umfaßt.
Die vorliegende Erindung schließt auch eine pharmazeutische Zusammensetzung ein, die die Aktivität besitzt, die Produktion von IL-1β und die Freisetzung von TNF α zu inhibieren und nützlich als therapeutisches Mittel zur Behandlung von chronischem Rheumatismus und Sepsis ist.

DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Die Gruppen R&sub1; und R&sub3; sind Substituenten an einem Phenylring der Verbindung der Formel (I), während die Gruppen R&sub2; und R&sub4; Substituenten am anderen Phenylring sind. Die Gruppen R&sub1; bis R&sub4; sind Substituenten an irgend einer Position in jedem Phenylring, aber bevorzugt sind sie Substituenten an den 2- und 4-Positionen.
Beispiele der 5- oder 6-gliedrigen heterocyclischen Gruppen, die für R&sub1; und R&sub2; definiert sind, schließen heteroaromatische Gruppen, wie Imidazolyl, Pyrazolyl, Pyrazinyl, Pyrimidinyl und Pyridazinylgruppen; und nichtaromatische heterocyclische Gruppen wie Imidazolinyl, Pyrazolinyl, Imidazolidinyl, Pyrazolidinyl, Piperazinyl, Hexahydropyrimidinyl und Hexahydropyridazinylgruppen ein. Beispiele der 5- oder 6- gliedrigen heterocyclischen Gruppen, die mit einem Phenylring kondensiert sind, wie für R&sub1; und R&sub2; definiert, schließen kondensierte heteroaromatische Gruppen ein, wie Benzimidazoyl, Cinnolinyl, Purinyl, Indazolyl, Chinoxalinyl und Chinazolinylgruppen, und nichtaromatische kondensierte heterocyclische Gruppen wie Benzpyrazolidinyl, Benzimidazolidinyl und Benzpiperazinylgruppen.
Beispiele der (C&sub1;-C&sub4;)Alkylgruppen wie sie für R&sub3; und R&sub4; definiert sind, schließen gradkettige oder verzweigtkettige Alkylgruppen ein wie Methyl-, Ethyl-, n-Propyl-, Isopropyl-, n-Butyl-, Isobutyl- und tert-Butylgruppen.
Beispiele der (C&sub1;-C&sub4;)Alkoxygruppen, wie sie für R&sub3; und R&sub4; definiert sind, schließen diejenigen ein, die sich aus gradkettigen oder verzweigtkettigen Alkylgruppen mit 1-4 Kohlenstoffatomen ableiten, z. B. Methoxy-, Ethoxy- und n- Propoxygruppen.
Die Verbindungen der Formel (I) können durch verschiedene Verfahren synthetisiert werden. Eines dieser Verfahren umfaßt die Umsetzung von Di(aminophenyl)disulfidverbindungen der Formel (II)
worin R&sub3; und R&sub4; wie oben definiert sind, mit Halogeniden der Formel R'Hal oder einem gemischten Halogenid, worin R' eine 5- oder 6-gliedrige heterocyclische Gruppe, die zwei Stickstoffatome als Heteroatome enthält oder die genannte heterocyclische Gruppe ist, die mit einem Phenylring kondensiert ist, und Hal ein Halogenatom ist, wodurch eine oder beide der Aminogruppen in der Verbindung der Formel (II) durch die erwähnte heterocyclische Gruppe monosubstituiert wird.
Diese Reaktion wird durchgeführt unter Verwendung von 0,5-4 mol der Verbindung der Formel R'Hal pro mol der Verbindung der Formel (II). Wenn das Halogenid in einer geringeren Molzahl verwendet wird, kann hauptsächlich das Produkt hergestellt werden, worin eine der Aminogruppen durch die heterocyclische Gruppe monosubstituiert ist. Wenn das Halogenid in einer höheren Molzahl verwendet wird, kann hauptsächlich das Produkt hergestellt werden, worin beide Aminogruppen durch die heterocyclische Gruppe monosubstituiert sind.
Diese Reaktion wird in einem inerten organischen Lösungsmittel, bevorzugt in Gegenwart eines Säurebindungsmittels wie einer anorganischen Base, z. B. Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Natriumcarbonat und Kaliumcarbonat und einer organischen Base, z. B. Pyridin, Pikolin, Lutidin durchgeführt. Als inertes organisches Lösungsmittel können beliebige organische Lösungsmittel verwendet werden, die keine nachteilige Wirkung auf die Reaktion ergeben, welche einen Alkohol, wie Methanol, Ethanol, Propanol und Butanol; einen Kohlenwasserstoff wie Aceton, ein Keton, z. B. Methylethylketon; Cyclohexan, Benzol und Toluol; und einen Ether wie Ether und Tetrahydrofuran einschliessen. Die Reaktion wird bei einer Temperatur durchgeführt, die von Raumtemperatur bis zum Siedepunkt des verwendeten Lösungsmittels reicht.
Alternativ kann die Verbindung der Formel (I) hergestellt werden durch Umsetzung einer Mercaptoverbindung der Formel (III) oder einem reaktiven Derivat davon
worin R&sub1; und R&sub3; wie oben definiert sind, mit einer Mercaptoverbindung der Formel (IV) oder einem reaktiven Derivat davon
worin R&sub2; und R&sub4; wie oben definiert sind, um eine Disulfidbindung zu bilden.
In diesem Fall kann die Reaktion der beiden Mercaptoverbindungen durchgeführt werden unter Verwendung eines geeigneten Oxidationsmittels z. B. Wasserstoffperoxid, Iod, Brom, Hypoiodid und Sulfurylchlorid. Alternativ kann diese Reaktion durch Umwandlung der Mercaptogruppe entweder der Verbindung (III) oder der Verbindung (IV) in das entsprechende Quecksilbersalz, Zinksalz oder Bleisalz und einer anderen Mercaptogruppe in das entsprechende Sulfenylchlorid, gefolgt durch die Umsetzung beider Verbindungen durchgeführt werden. Diese Reaktion kann bevorzugt in einem inerten organischen Lösungsmittel wie dem oben erwähnten durchgeführt werden. Die Reaktion wird bei einer Temperatur im Bereich von Raumtemperatur bis zum Siedepunkt des verwendeten Lösungsmittels durchgeführt.
Veranschaulichende Beispiele der Verbindung der Formel (I) sind im Wege der folgenden chemischen Strukturen gezeigt: Verbindung 1 Verbindung 2 Verbindung 3
Bei Bedarf können die Diphenyldisulfidverbindungen der Formel (I) mit pharmazeutisch verträglichen Säuren in die entsprechenden Salze umgewandelt werden, die im Umfang der Erfindung enthalten sind. Beispiele der pharmakologisch verträglichen Säuren schließen Mineralsäuren ein wie Salzsäure, Schwefelsäure, Bromwasserstoffsäure und Phosphorsäure; organische Sulfonsäuren wie Methansulfonsäure, Benzolsulfonsäure und p-Toluolsulfonsäure; und organische Carbonsäuren wie Essigsäure, Propionsäure, Oxalsäure, Succinsäure, Malein-säure, Fumarsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure und Zitronensäure. Diese Umwandlungsreaktion kann durch konventionelle Salzbildungsverfahren durchgeführt werden.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung besitzen, bei geringer Toxizität, eine potente Wirkung, die Produktion von IL-1β zu inhibieren, wodurch sie für die Prophylaxe oder Therapie von verschiedenen Erkrankungen, an denen IL-1β teilnimmt, wie chronischem Rheumatismus, rheumatische Polyarthritis, Sepsis, systemischer Lupus erythematodes, systemisches Skleroderma, Behcet-Erkrankung, Periarteritis nodosa, Colitis ulcerosa, aktive chronische Hepatitis, Glomerular- Nephritis, Ostearthritis, Gicht, Atherosklerose, Psoriasis, atopische Dermatitis und Osteopörose nützlich sind.
Weiterhin besitzen die vorliegenden Diphenyldisulfidverbindungen die Aktivität die Freisetzung von TNFα zu inhibieren, was für die Prophylaxe oder Behandlung von Erkrankungen, an denen TNFα am pathologischen Fortschritt beteiligt ist, nützlich ist. Solche Erkrankungen schließen das erworbene Immun-Defizienzsyndrom (AIDS) zusätzlich zu Erkrankungen ein, an denen IL-1β beteiligt ist, z. B. chronischer Rheumatismus, rheumatische Polyarthritis, Sepsis und atopische Dermatitis.
Eine Dosis der vorliegenden Erfindung beträgt, um eine wirksame Aktivität auszuüben, gewöhnlich 5 mg bis 6 g pro Erwachsener täglich, bevorzugt 10-300 mg. Die Verabreichung der vorliegenden Verbindung schließt z. B. die orale, intravenöse, subkutane, intramuskuläre, intrarektale oder intraartikuläre Verabreichung ein, wobei die orale, die intraartikuläre und die intravenöse Verabreichung bevorzugt sind.
Die vorliegenden Verbindungen können durch Verabreichung von beliebigen konventionellen Verfahren zur Bildung pharmazeutischer Präparate formuliert werden.
Beispiele der Präparate schließen feste Präparate ein wie Tabletten, Granulate, Pulver, Hartkapseln und Weichkapseln und flüssige Präparate.
Die festen Präparate können beliebige konventionelle Komponenten enthalten wie Bindemittel, z. B. Dextrine, Hydroxypropylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Polyvinylpyrrolidon und Makrogol; Exzipienten, z. B. Lactose, Maisstärke, Calciumphosphat und Magnesiumaluminiummetasilikat; Gleitmittel, z. B. Calciumstearat und Talk; Zerfallshilfsmittel, z. B. Carboxymethylcellulose und kristalline Cellulose. Die Tabletten können durch beliebige Verfahren im Stand der Technik beschichtet werden.
Die flüssigen Präparate schließen wäßrige oder ölige Suspensionen, Emulsionen, Lösungen, Sirups, Elixiere und andere ein. Alternativ können es beliebige Trockenprodukte sein, die fähig sind, in Wasser oder anderen geeigneten Vehikeln vor der Verwendung erneut gelöst werden. Solche flüssigen Präparate können beliebige konventionelle Additive enthalten, wie Suspendierungsmittel, z. B. Sorbitolsirup, Carboxymethylcellulose, Gelatine, Hydroxyethylcellulose, Aluminiumstearatgele und hydrierte eßbare Öle; Emulgatoren, z. B. Lecithin, Glycerinmonostearat und Gummi arabikum; nicht- wäßrige Vehikel, z. B. Palmöl, Propylenglykol und Ethanol; und antiseptische Mittel, z. B. p-Hydroxybenzoesäureethylester und Sorbinsäure.
Dosierungsformen für die parenterale Verabreichung schließen Injektionen und Zäpfchen ein.
Die Injektionen können durch konventionelle Verfahren hergestellt werden, falls erforderlich durch Hinzufügen von pH-Einstellungsmitteln, Pufferstoffen, Stabilisatoren, Konservierungsstoffen, Löslichkeitsmittel und ähnlichem zur Verbindung der vorliegenden Erfindung.
Diese Erfindung wird weiterhin durch die folgenden Beispiele veranschaulicht.

Beispiel 1

3,85 g 2-Chlorpyrimidin und 6,02 g 2-Aminobenzoldisulfid wurden unter Rückfluß in Ethanol für 18 Stunden erwärmt.
Nachdem die Reaktionslösung unter vermindertem Druck destilliert worden war, wurde der Rückstand in Chloroform gelöst, mit 10%iger wäßriger Lösung von Natriumhydroxid gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Die Reinigung durch Silikagel-Chromatographie ergab 3,65 g der Verbindung 1 aus dem Eluat mit Ethylacetat/Chloroform (1 : 20) und 2,68 g der Verbindung 2 aus dem Eluat mit Ethylacetat/Chloroform (1 : 10). Die physikalischen Eigenschaften dieser Verbindungen sind in Tabelle 1 gezeigt.

Beispiel 2

Zu einer Lösung von 0,98 g 2-(2-Mercaptophenyl)benzimidazol in Pyridin wurden 0,72 g Quecksilberacetat gegeben, und die Mischung wurde bei Raumtemperatur für 3 Stunden gerührt. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtration isoliert und getrocknet, um das 2-(2-Mercaptophenyl)benzimidazol- Quecksilbersalz zu ergeben. Das Rohprodukt wurde zu Acetonitril gegeben, und die Mischung wurde mit einer Gefriermischung aus Natriumchlorid und Eis abgekühlt. 0,75 g 2,4-Dinitrobenzolsulfenylchlorid wurden hinzugegeben und unter Stickstoffatmosphäre gerührt. Nach 2 Stunden wurden unlösliche Anteile durch Filtration isoliert und mit einer gemischten Lösung von Chloroform und Ethanol gewaschen.
Das Filtrat wurde durch Silikagel-Chromatographie gereinigt, und das Eluat mit Ethylacetat/Chloroform (1 : 5) aus Chloroform umkristallisiert, um 0,22 g der Verbindung 3 zu ergeben. Die Verbindung 3 besaß die folgenden physikalischen Eigenschaften:
Schmelzpunkt (ºC): 113,8
IR(cm&supmin;¹) (Nujol): 1605, 1540, 1460, 1350
NMR(CDCl&sub3;, δ): 7,3-7,85(9H, m), 8,18-8,21 (2H, m) 9,04 (1H, d, 2 Hz)

Testbeispiel 1

Die Verbindungen 1-3, die vorliegenden Diphenyldisulfidverbindungen, erhalten in den Beispielen 1 und 2 wurden hinsichtlich ihrer Aktivität, die Produktion von IL-1β zu inhibieren entsprechend dem folgenden Verfahren untersucht.
THP-1-Zellen, die aus peripherem Humanblut (ATCC TIB202) abgeleitet wurden, wurden in RPMI 1640 Medium (erhältlich von Bio-Whittaker Co., Ltd.) suspendiert, das 10% (v/v) fötales Rinderserum, 2 mM Glutamin, 50 um 2-Mercaptoethanol, 60 ug/ml Penicillin und 100 ug/ml Streptomycin enthielt.
Die Suspension der THP-1-Zellen wurden bei 37ºC unter einer Atmosphäre von 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid subkultiviert. Ein Teil der subkultivierten Suspension wurde bei 1200 Upm bei Raumtemperatur für 3 Minuten zentrifugiert, um subkultivierte THP-1-Zellen zu ergeben.
Die resultierenden THP-1-Zellen wurden erneut in RPMI 1640 Medium suspendiert, das 2% (v/v) fötales Rinderserum, 2 mM Glutamin, 50 um 2-Mercaptoethanol, 60 um/ml Penicillin und 100 ug/ml Streptomycin enthielt, um eine finale THP-1-Zellkonzentration von 3 · 10&sup6;-Zellen/ml bereitzustellen.
Die Resuspendierung der Zellen wurde in 0,5 ml-Portionen in Vertiefungen einer 24 Vertiefungen-Platte für die Zellkultur verteilt. Dann wurde jede Lösung der vorliegenden Verbindung 1-3, die in den jeweiligen spezifizierten Konzentrationen in DMSO gelöst waren, in 2,5 ul Portionen in jede Vertiefung gegeben. Die Platte wurde bei 37ºC unter einer Atmosphäre von 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid für 1 Stunde inkubiert. Dann wurden jeweils 12-o-Tetradecanoylphorbol-13- acetat (PMA) und Polyinosinsäure zu jeder Vertiefung gegeben, um eine Endkonzentration von 2 mg/ml bzw. 200 ug/ml zu ergeben. Die Platte wurde bei 37ºC in einer Atmosphäre-won 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid für 24 Stunden inkubiert. Nach der Inkubation wurde die überstehende Lösung aus jeder Vertiefung mit Hilfe eines "Pipetteman", erhältlich von Gilson Co., Ltd. isoliert. Anschließend wurde die Menge des IL- 1β in der überstehenden Lösung mit Hilfe eines Enzymimmunoassay-Kits erhältlich von Cayman Chemical Co., Ltd. gemessen.
Die Ergebnisse sind unten zusammengefaßt, ausgedrückt als IC&sub5;&sub0;-Wette in um-Einheiten, worin die Menge des IL-1β, die erzeugt wird, wenn keine Zugabe der Diphenyldisulfidverbindung erfolgte, als 100 definiert wurde, und jeweils die Konzentrationen der Verbindungen 1-3, die erforderlich waren, eine 50%ige Inhibierung der IL-1β-Produktion zu erzeugen als IC&sub5;&sub0; definiert wurden.

Testverbindung IC&sub5;&sub0; (uM)

Verbindung 1 3,8
Verbindung 2 34
Verbindung 3 34

Testbeispiel 2

Die Verbindung 1, die vorliegende Diphenyldisulfidverbindung, die in Beispiel 1 erhalten wurde, wurde hinsichtlich ihrer Aktivität, die Freisetzung von TNFα zu inhibieren, durch das folgende Verfahren bewertet.
Die THP-1-Zellen, die sich aus humanen peripheren Blut (ATCC TIB202) ableiteten, wurden in RPMI 1640 Medium (erhältlich von Bio-Whittaker Co., Ltd.) suspendiert, das 10% (v/v) fötales Rinderserum, 2 mM Glutamin, 50 uM 2-Mercaptoethanol, 60 ug/ml Penicillin und 100 ug/ml Streoptomycin enthielt.
Die Suspension der THP-1-Zellen wurden bei 37ºC in einer Atmosphäre von 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid subkultiviert. Ein Anteil der subkultivierten Suspension wurde bei 1200 Upm bei Raumtemperatur für 3 Minuten zentrifugiert, um die subkultivierten THP-1-Zellen zu zentrifugieren.
Die resultierenen THP-1-Zellen wurden in RPMI 1640 Medium resuspendiert, das 2% (v/v) fötales Rinderserum, 2 mM Glutamin, 50 uM 2-Mercaptoethanol, 60 ug/ml Penicillin und 100 ug/ml Streptomycin enthielt, um eine finale THP-1-Zellkonzentration von 3 · 10&sup6;-Zellen/ml-zu erhalten.
Die Resuspendierung der Zellen wurde in 0,5 ml Portionen in Vertiefungen von 24 Vertiefungs-Platte für die Zellkultur verteilt und bei 37ºC für eine Stunde inkubiert. Jede Lösung der vorliegenden Verbindung 1, gelöst in DMSO in den jeweiligen angegebenen Konzentrationen, wurde in 2,5 ul Portionen in jede Vertiefung gegeben. Die Platte wurde bei 37ºC unter einer Atmosphäre von 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid für 1 Stunde inkubiert. Anschließend wurde PMA und Polyinosinsäure zu jeder Vertiefung gegeben, um Endkonzentrationen von 2 ug/ml bzw. 200 ug/ml bereitzustellen. Die Platten wurden bei 37ºC in einer Atmosphäre von 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid für 24 Stunden inkubiert. Nach der Inkubation wurde die überstehende Lösung aus den jeweiligen Vertiefungen mit Hilfe von "Pipetteman" erhältlich von Gilson Co., Ltd. isoliert. Die Menge des TNFα in der überstehenden Lösung wurde mit Hilfe eines Human-TNFα-ELISA-Kits, erhältlich von Genzyme Co., Ltd. gemessen.
Die Ergebnisse sind, unten zusammengefaßt, ausgedrückt als ICS-Werte in um-Einheiten, worin die Menge des TNFα, die freigesetzt wurde, wenn keine Diphenyldisulfidverbindung zugesetzt wurde, als 100 definiert wurde, und die Konzentration der vorliegenden Verbindung 1, die erforderlich war 50% der TNFα-Freisetzung zu inhibieren, als IC&sub5;&sub0; definiert wurde.

Testverbindung IC&sub5;&sub0; (uM)

Verbindung 1 19

Testbeispiel 3

Die Verbindungen 1-3, die vorliegende Diphenyldisulfidverbindung, die in den Beispielen 1 und 2 erhalten wurden, wurden hinsichtlich ihrer Cytotoxizität durch das folgende Verfahren bewertet.
Die THP-1-Zellen, die sich aus humanen peripheren Blut (ATCC TIB202) ableiteten, wurden in RPMI 1640 Medium (erhältlich von Bio-Whittaker Co., Ltd.) suspendiert, das 10% (v/v) fötales Rinderserum, 2 mM Glutamin, 50 uM 2-Mercaptoethanol, 60 ug/ml Penicillin und 100 ug/ml Streoptomycin enthielt.
Die Suspension der THP-1-Zellen wurden bei 37ºC in einer Atmosphäre von 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid subkultiviert. Ein Anteil der subkultivierten Suspension wurde bei 1200 Upm bei Raumtemperatur für 3 Minuten zentrifugiert, um subkultivierten THP-1-Zellen zu isolieren.
Die resultierenen THP-1-Zellen wurden in RPMI 1640 Medium resuspendiert, das 2% (v/v) fötales Rinderserum, 2 mM Glutamin, 50 uM 2-Mercaptoethanol, 60 ug/ml Penicillin und 100 ug/ml Streptomycin enthielt, um eine finale THP-1-Zellkonzentration von 1 · 10&sup6;-Zellen/ml zu erhalten.
Die Resuspension der Zellen wurde in 1 ml-Portionen auf Vertiefungen von 24 Vertiefungs-Platten für die Zellkultur verteilt. Anschließend wurden jeweils Lösungen der vorliegenden Verbindung 1-3, gelöst in DMSO bei den jeweils angegebenen Konzentrationen, in 5 ul-Portionen jeder Vertiefung zugesetzt. Die Platte wurde bei 37ºC in einer Atmosphäre von 95 % Sauerstoff und 5% Kohlendioxid für 24 Stunden inkubiert. Nach der Inkubation wurden 100 ul Alamar Blue (erhältlich von Biosource Co., Ltd.) zu jeder Vertiefung gegeben, und anschließend wurde die Inkubation weiter bei 37ºC unter einer Atmosphäre von 95% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid für 3 Stunden fortgesetzt. Nach der Inkubation wurde eine überstehende Lösung mit Hilfe von Pipetteman, erhältlich von Gilson Co., Ltd. isoliert und der Unterschied in den Extinktionen bei 570 nm und 600 nm bestimmt. Der Unterschied in den Extinktionen bei 570 nm und 600 nm für die Testlösung, die keine Diphenyldisulfidverbindung enthielt, wurde als Standard verwendet. Wenn der Unterschied in der Extinktion nach der Zugabe der Verbindungen 1-3 der vorliegenden Erfindung signifikant reduziert wurde, wurde geschätzt, dass eine Cytotoxizität bestand.
Der obige Test zeigte, dass keine Cytotoxizität in den Verbindungen 1-3 bei Konzentrationen von bis zu 50 um gefunden wurde.

Herstellungsbeispiel 1

Tabletten wurden unter Verwendung der folgenden Formulierungen je Tablette hergestellt.

Tabletten

Verbindung 1 20 mg
Magnesiumsilikat 20 mg
Lactose 98,5 mg
Hydroxypropylcellulose 7,5 mg
Magnesiumstearat 1 mg
Gehärtetes Pflanzenöl 3 mg
Die Verbindung 1, Magnesiumsilikat und Lactose wurden vermischt und mit einer alkoholischen Lösung, die Hydroxypropylcellulose enthielt, verknetet. Die resultierende Mischung wurde zu einer geeigneten Partikelgröße granuliert, getrocknet und klassiert. Dann wurde Magnesiumstearat und gehärtetes Pflanzenöl vermischt, um gleichförmiges Granulat zu bilden, und anschließend wurde das Granulat mit Hilfe einer Rotationstablettiermaschine zu Tabletten geformt, wobei die Tablette jeweils einen Durchmesser von 7,0 mm, ein Gewicht von 150 mg und eine Härte von 6 kg aufwies.

Herstellungsbeispiel 2

Granulat

Verbindung 1 10 mg
Magnesiumoxid 40 mg
Calciumhydrogenphosphat 38 mg
Lactose 10 mg
Hydroxypropylcellulose 20 mg
Die gesamten obigen Komponenten, ausgenommen Hydroxypropylcellulose, wurden vermischt und anschließend wurde eine alkoholische Lösung, die Hydroxypropylcellulose enthielt, hinzugegeben und verknetet. Die resultierende Mischung wurde mit Hilfe einer Extrusionsgranuliermaschine granuliert und getrocknet, um ein Granulat zu bilden, das anschließend klassiert und über ein 12 Mesh-Sieb gegeben wurde. Das Produkt, das auf einem 48 Mesh-Sieb zurückblieb, wurde als Granulat erhalten.

Herstellungsbeispiel 3

Sirups

Verbindung 1 1,000 g
Sucrose 30,000 g
70w/v% D-Sorbitol 25,000 g
p-Hydroxybenzoesäureethylester 0,030 g
p-Hydroxybenzoesäurepropylester 0,015 g
Aromastoff 0,200 g
Glycerin 0,150 g
96%iges Ethanol 0,500 g
gereinigtes Wasser ad lib.
Total 100 ml
Sucrose, D-Sorbitol, p-Hydroxybenzoesäureethylester, p- Hydroxybenzoesäurepropylester und die Verbindung 1 wurden in 60 g gereinigtem Wasser (warmes Wasser) gelöst. Nach dem Abkühlen wurde eine Lösung eines Aromastoffes in Glycerin und 96%igem Ethanol hinzugegeben. Zu der resultierenden Mischung wurde gereinigtes Wasser gegeben, um auf 100 ml aufzuaddieren.

Herstellungsbeispiel 4

Injektionen

Hydrochlorid der Verbindung 1 10,0 mg
Natriumchlorid 81,0 mg
Natriumbicarbonat 8,40 mg
destilliertes Wasser zur Injektion ad lib.
Total 10,0 ml
Natriumbicarbonat, Natriumchlorid und das Hydrochlorid der Verbindung 1 wurden in destilliertem Wasser zur Injektion gelöst, um Injektionen herzustellen, die jeweils ein Gesamtvolumen von 10,0 ml besaßen.

Herstellungsbeispiel 5

Zäpfchen

Verbindung 1 2 g
Macrogol (Polyethylenglykol) 4000 20 g
Glycerol 78 g
Total 100 g
Die Verbindung 1 wurde in Glycerin gelöst und anschließend wurde Macrogol 4000 hinzugegeben. Die Mischung wurde in der Wärme gelöst, in eine Zäpfchenform gegossen und anschließend durch Abkühlen verfestigt, um Zäpfchen zu bilden, die jeweils 1,5 g wogen.

Claims

1. Diphenyldisulfidverbindung der Formel (I) und pharmakologisch verträgliche Salze davon

worin R&sub1; eine 5- oder 6-gliedrige heterocyclische Gruppe, die zwei Stickstoffatome als Heteroatome enthält; die genannte heterocyclische Gruppe, die mit einem Phenylring kondensiert ist; eine Aminogruppe; oder eine Aminogruppe ist, die durch eine 5- oder 6-gliedrige heterocyclische Gruppe, die zwei Stickstoffatome als Heteroatome enthält oder durch die genannte heterocyclische Gruppe, die mit einem Phenylring kondensiert ist, monosubstituiert ist; R&sub2; eine 5- oder 6- gliedrige heterocyclische Gruppe mit zwei Stickstoffatomen als Heteroatom; die genannte heterocyclische Gruppe, die mit einem Phenylring kondensiert ist; eine Aminogruppe; eine Aminogruppe, die durch eine 5- oder 6-gliedrige heterocycli-sche Gruppe, die zwei Stickstoffatome als Heteroatome enthält oder durch die genannte heterocyclische Gruppe, die mit einem Phenylring kondensiert ist, monosubstituiert ist; oder eine Nitrogruppe ist; und R&sub3; und R&sub4; gleich oder verschieden voneinander sein können und jeweils ein Wasserstoffatom; eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen; eine Alkoxygruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen; eine Aminogruppe; oder eine Nitrogruppe sind; mit der Maßgabe, dass wenn R&sub1; eine Aminogruppe ist, R&sub2; keine Aminogruppe oder Nitrogruppe ist.

2. Verbindung nach Anspruch 1 mit der folgenden Formel:

3. Verbindung nach Anspruch 1 mit der folgenden Formel:

4. Verbindung nach Anspruch 1 mit der folgenden Formel:

5. Pharmazeutische Zusammensetzung, die als aktiven Bestandteil eine Diphenyldisulfidverbindung nach irgend einem der Ansprüche 1 bis 4 oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon und einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfaßt.

6. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 5, die als Mittel für die Inhibierung der Produktion von Interleukin-1β verwendet wird.

7. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 5, die als Mittel zur Inhibierung der Freisetzung des Tumor-Nekrose- Faktors α verwendet wird.

8. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 5, die als Arzneimittel zur Behandlung von chronischem Rheumatismus verwendet wird.

9. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 5, die als Arzneimittel für die Behandlung von Sepsis verwendet wird.

10. Verwendung einer Diphenyldisulfidverbindung nach irgend einem der Ansprüche 1 bis 4 oder deren pharmazeutische verträgliche Salze für die Herstellung von Medikamenten für die Inhibierung der Produktion von Interleukin-1β, zur Inhibierung der Freisetzung des Tumor-Nekrose-Faktors α, für die Behandlung von chronischem Rheumatismus oder für die Behandlung von Sepsis.