DE60131189T2

DE60131189T2 - Spül- und konservierungslösung

Info

Publication number: DE60131189T2
Application number: DE60131189T
Authority: DE
Inventors: David The School o POTTS; Jeremy Peter Alan Lodge
Original assignee: Leeds Teaching Hospitals NHS Trust
Current assignee: Leeds Teaching Hospitals NHS Trust
Priority date: 2000-11-22
Filing date: 2001-11-20
Publication date: 2008-08-14
Anticipated expiration: 2021-11-21
Also published as: AU1513102A; EP1339280B1; AU2002215131B2; ATE376770T1; EP1997373A1; EP1997373B1; US9049857B2; US20040053205A1; KR100855354B1; US7510823B2; CA2427325A1; JP2004513955A; GB0028414D0; EP1339280A1; WO2002041696A1; NZ525522A; US20090226877A1; KR20030065523A; DE60131189D1; US8236486B2

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft eine Spül- und Konservierungslösung, um Zellen ohne Blutversorgung am Leben zu erhalten, deren Verwendung, um die Schädigung von Zellen bei der Transplantation, bei Operationen, bei Versuchen und in vitro zu verhindern, ein Verfahren zum Konservieren, Spülen oder Spülen und Konservieren, ein Behandlungsverfahren und ein Kit aus Teilen, das die Lösung umfasst.
Die Organtransplantation ist heute für Niere, Leber, Herz, Lunge, Bauchspeicheldrüse und Darm verfügbar. Bei der Entnahme wird das Gefäßsystem eines Transplantationsorgans mit einer Konservierungslösung durchspült. Diese Lösung ist dafür ausgelegt, die Temperatursenkung des Organs zu erleichtern, das Anschwellen von Zellen zu verhindern, freie Sauerstoffradikale zu beseitigen, den pH zu kontrollieren, ischämische Schädigungen zu mindern, die sichere Zeit zu verlängern, während der Organe außerhalb des Körpers aufbewahrt werden können, und die Erholung des Organs bei der Reperfusion zu erleichtern.
Wichtige Spüllösungen wurden 1967 von Belzer und 1969 von Collins eingeführt und anschließend nach Euro-Collins (EC), Marshall (1976), Bretschneider (siehe Isemer et al. 1988) und weiteren modifiziert. Die „University of Wisconsin"-Lösung (UW), die erfolgreichste aller Lösungen, wurde 1988 von Belzer und seinen Kollegen eingeführt. Es besteht weiterhin Bedarf an einer verbesserten Spülung und Konservierung. Neue Ergebnisse legen nahe, dass ein Transplantat von hoher Qualität sowohl eine bessere Sofortfunktion als auch eine längere funktionelle Lebensdauer des Transplantats mit sich bringt.
Dieses Gebiet der Literatur wurde besprochen von: Belzer, 1993; Belzer & Southard, 1988; Bonventre und Weinburg, 1992; Changani et al., 1999; Churchill & Kneteman, 1998; Collins, 1997; Collins & Wicomb, 1992; D'Allesandro et al., 1994; Muhlbacker et al., 1999 und Southard & Belzer, 1995.
Es wurde 1982 von Andrews und Coffey und 1983 von Coffey und Andrews gezeigt, dass eine einfache Spüllösung, die lediglich Natriumphosphat und Saccharose enthält, die Morphologie der Nierenkanälchen vor einer ischämischen Schädigung schützt. Wir haben Funktionstests durchgeführt und stellten fest, dass eine ähnliche Lösung (PBS 140) im Vergleich zu gängigen Konservierungslösungen (EC- und Collins C2-Lösung) sehr erfolgreich bei der Konservierung von Nierenkanälchen ist, beurteilt anhand der Mikroperfusion (Pirie und Potts, 1986). Es wurde festgestellt, dass PBS 140 für eine bessere Konservierung der Morphologie und Funktion von proximalen Kanälchen sorgt als andere Lösungen. Es wurde 1988 und 1989 von Ferwana, Pirie und Potts festgestellt, dass PBS 140 auch bei der Konservierung der Funktion der ganzen Niere wirksam ist. Bei Transplantationen zu Versuchszwecken erkannten Lam, Mavor, Potts und Giles (1989), dass PBS 140 für eine hochwirksame Konservierung sorgt, die den Vergleich mit der hyperosmolaren Citrat- und der UW-Lösung nicht zu scheuen braucht (Lodge, Perry, Skinner, Potts und Giles 1991). PBS 140 wurde klinisch in Leeds getestet und erwies sich als gut funktionierend bei der Transplantation der menschlichen Niere (Ahmad, Kashi, Helmy, Hadingham, Potts und Lodge, 1997).
Mit dem Aufkommen einer verbesserten Immunosuppression ergab sich der Bedarf an einer leistungsstarken Spüllösung für verschiedene Organe.
US-A-4920044 beschreibt Spül- und Aufbewahrungslösungen, die Puffer, Mannitol und Verapamil sowie Kalziumionen, Allopurinol (Sauerstoffradikal-Inhibitor), Adenosin (Energieversorgungssystem) enthalten. Die Lösungen weisen einen pH von 7,20 bis 7,50 und eine Osmolalität von 255 bis 425 osm/kg auf.
US-A-5145771 beschreibt Spül- und Konservierungslösungen für zur Transplantation bestimmte Organe und Gewebe, die Fruktose und Glukose, Nicardipin (Kalziumblocker), Puffer, gelöste Stoffe, Allopurinol, Glutathion (beides Sauerstoffradikal-Inhibitoren) und modifizierte Hydroxyethylstärke (Kolloid) enthalten. Es wird eine Spüllösung mit einem pH von 6,5 hergestellt (Tabelle 2). Die Spüllösung kann einen pH zwischen 6,0 und 7,1 aufweisen. US-A-6080730 offenbart eine ähnliche Lösung, die angepasst ist und Glycin enthält.
US-A-5405742 beschreibt Blutersatzlösungen zum Spülen oder Erhalten von Organen während einer Operation oder zum Aufbewahren von Organen für die Transplantation, die gelöste Stoffe einschließlich Kalzium enthalten, einen einfachen Zucker wie Saccharose, Mannitol, Puffer, Glutathion, ein impermeantes Anion, das Lactobionat ist, Eisenchelatbildner, Kalziumkanalblocker wie Nicardipin und Allopurinol. Der pH der Lösungen beträgt 7,3 bis 7,7.
US-A-5370989 beschreibt Lösungen für die Konservierung oder Erhaltung von Organen, die ein Vasodilatant sowie D-Glukose, Puffer wie KH₂PO₄, anorganische Ionen wie Kalium und Magnesium und vorzugsweise weitere Bestandteile wie einen Kalziumblocker, Kolloide, Adenosin usw. enthalten. Die bevorzugte Ausführungsform weist einen pH von 7,6 auf.
CN-A-1176738 beschreibt Lösungen für die Konservierung von Organen für die Transplantation, die Zucker, einen Kaliumphosphat-Puffer, den Kalziumkanalblocker Verapamil, Lactobionat, gelöste Stoffe, ein Kolloid (Dextran), Allopurinol und reduziertes Glutathion und Adenosin enthalten.
US-A-6140123 beschreibt Lösungen, die für die Konditionierung und Kryokonservierung von Zellen verwendet werden und Adenosin, einen Kalziumkanalblocker wie Verapamil, ein Saccharid wie Glukose, Aminosäuren, anorganische gelöste Stoffe, Radikalfänger wie Allopurinol und Glutathion und Puffer je nach Temperatur enthalten.
Zahlreiche Experten haben an der Entwicklung von verbesserten Lösungen und insbesondere von einfacheren Lösungen gearbeitet, die mehrere Zusatzstoffe enthalten. Es wurden Versuche unternommen, die Ergebnisse, die mit unterschiedlichen Zubereitungen erzielt wurden, zu rationalisieren. Es ist dennoch offenkundig, dass scheinbar austauschbare Arten von Zusatzstoffen tatsächlich Wirkungen haben können, die von den erwarteten abweichen, dadurch werden Zubereitungen sowohl hinsichtlich einer bestimmten Art von Zusatzstoff als auch hinsichtlich anderer Bestandteile, die gemeinsam mit einem bestimmten Zusatzstoff vorliegen, äußerst spezifisch, da die Funktion von der Zubereitung als Ganzem und nicht einfach von einem einzelnen Bestandteil abhängt. Es ist darüber hinaus offenkundig, dass eine universelle Spüllösung ein irreführendes Ziel ist, da verschiedene Organe durchaus stark abweichende Anforderungen aufweisen. Einzelne Experten haben jedoch versucht, sich auf wesentliche Bestandteile zu konzentrieren, welche die Grundlage für Spüllösungen bilden, die an bestimmte Organe angepasst werden können. Eine Anzahl von Artikeln zu dem Thema sind von Bedeutung, insbesondere „Evaluation of preservation of the intra abdominal Organs", F. O. Belzer, Transplantation Proceedings, Vol. 25, Nr. 4 (August) 1993, P2527–2530, „Organ Preservation", D'Alessandro et al., Horizons in Organ Transplantation. Vol. 74, Nr. 5, 1994, Seite 1083–1093, „A comparison of Flushing Solutions for Liver procurement using an isolated perfused Porcine Model", Bell et al., Aust. N. Z. J. Surg. (1994) 64, 565–568, „New Organ Preservation Solutions", Collins et al., Kidney International, Vol. 42, Suppl: 38 (1992) PS197–S202, „Improved Preservation Solutions for Organ Storage", Changani et al., Transplantation, Vol. 68, 345–355, Nr. 3, 1999 und „Investigation of a Primary Requirement of Organ Preservation Solutions", Churchill et al., Transplantation, Vol. 65, 551–559, Nr. 4, 1998. Obwohl sie teilweise aufschlussreich sind, weisen die einzelnen Arbeiten und die Artikel so viele Variablen auf, dass aussagekräftige Schlüsse als solche nicht gezogen werden können. Es werden konstruktive Gestaltungen vorgeschlagen, beispielsweise die Konstruktion einer Zubereitung um wesentliche Zellbestandteile herum, die während der Konservierung verloren gehen oder abgebaut werden, und eine sich davon unterscheidende Idee der Konstruktion von Zubereitungen um Bestandteile herum, die mit den natürlichen Zellfunktionen und Zellbestandteilen Wechselwirken, um eine Zerstörung zu verhindern, bestimmte Funktionen aufrechtzuerhalten oder andere Funktionen zu stoppen und Ähnliches. Das Ergebnis ist, dass jede wirksame Spüllösung wahrscheinlich aufgrund von sorgfältigen Versuchen anstatt durch Schussfolgerungen aus oder Analyse von bestehenden Arbeiten gewonnen wird.
Es besteht folglich weiterhin Bedarf an einer wirtschaftlich tragfähigen und wirksamen Spüllösung, die eine längere Konservierung von Zellen, insbesondere von Organen und lebenden Geweben, einschließlich gentechnisch hergestellter Organe und Gewebe, ermöglicht, die eine größere Vielseitigkeit, höhere Wirksamkeit und bessere Reperfusion bei Transplantation, Operationen, einschließlich eines beliebigen Zustands warmer oder kalter Ischämie, Kardioplegie und offener Herzchirurgie, ganzen Gliedmaßen, ganzen Körpern oder bei Versuchen bietet.
Wir haben Versuche durchgeführt, um eine verbesserte Lösung für die Lebertransplantation zu entwickeln. Es stellte sich heraus, dass eine Saccharose-Phosphatpufferlösung für eine gute grundlegende Konservierung sorgte. Durch die Zugabe von einer Anzahl von Zusatzstoffen entstand eine Lösung, die eine bessere Konservierung als die UW-Lösung bot, beurteilt anhand eines stärkeren Gallenflusses, einer vermehrten Gallensäurenextraktion und einer geringeren Gewichtszunahme der Leber und Freisetzung von Leberenzymen. Diese Vorgehensweise stellte eine neue Spüllösung zur Verwendung bei Niere und Leber bereit.
Das Herz hat andere Anforderungen. Es stellte sich heraus, dass die neuen Lösungen, die für Niere und Leber entwickelt wurden, für das Herz nicht geeignet waren. Es wurde jedoch festgestellt, dass eine Saccharose-Phosphatpuffer-Grundlösung mit einigen Modifikationen wirksam bei der Konservierung von Herzgewebe ist. Diese abweichenden Anforderungen stehen beinahe sicher mit dem muskulären Aufbau des Herzens in Verbindung.
Nach dem allgemeinsten Aspekt der Erfindung ist folglich eine Spül- und Konservierungslösung für die Konservierung von Zellen in Abwesenheit einer Blutzufuhr bereitgestellt, umfassend:
Spül- und Konservierungslösung zur Konservierung von Zellen in Abwesenheit einer Blutzufuhr, umfassend:

i) Wasser für Injektionszwecke und
ii) Saccharose und
iii) mindestens einen Bestandteil mit pH-Puffer-Eigenschaften und
iv) mindestens einen Bestandteil mit Kalziumtransportblockierungseigenschaften oder einer Wirkung gegen Kalziumtätigkeit, zusammen mit
viii) Kalziumionen

Es ist möglich, dass die Spüllösung ausschließlich aus diesen Bestandteilen besteht, wobei sie sich in diesem Fall für die Konservierung von universellen Zellarten und Zellfunktionen eignet, insbesondere für die Konservierung von einfachen Zellsystemen, alternativ kann sie zusammen mit einem oder mehreren weiteren Substituenten vorgesehen sein, die besonders an die Konservierung einer gewünschten Art oder Funktion von Zellen angepasst sind, insbesondere bei der Konservierung komplexer Zellsysteme wie Organen oder lebendem Gewebe, vor allem für kleine oder große Tiere, ganz besonders Organe und lebendes Gewebe des Menschen.
Mit Hilfe der vorliegenden Erfindung haben wir überraschenderweise festgestellt, dass eine hochwirksame universelle Grundlösung für die gleiche Wirkung mit einer Anzahl von verschiedenen Bestandteilen für unterschiedliche Anwendungen ergänzt werden kann. Dies bringt hinsichtlich der Verbesserung bestehender Lösungen mehrere Vorteile mit sich, bei einer geringeren Schädigung während der Konservierung und mit der Möglichkeit der Verlängerung der Konservierungsdauer, zusätzlich zur Bereitstellung eines Zubereitungskits, mit dem eine bestimmte gewünschte Zubereitung hergestellt wird, mit den damit verbundenen Annehmlichkeiten und Auswirkungen auf die Kosten, die eine derartige Zubereitung wirtschaftlich tragfähig machen.
Im Stand der Technik wurde versucht, die Grundlage für eine universelle Konservierungslösung zu lehren, jedoch geht die Lehre weit auseinander und selbst die Bestimmung einer Kombination aus Saccharid und pH-Puffer ist nicht allgemein anerkannt. In der vorliegenden Erfindung wurde festgestellt, dass die hierin zuvor definierte Spül- und Konservierungslösung allgemein akzeptabel ist, auf der Grundlage von Experimenten und ohne zu versuchen, den zugrunde liegenden Konservierungsmechanismus zu rationalisieren.
Alle Bestandteile der Spül- und Konservierungslösung der Erfindung erfüllen, wo zutreffend, nationale oder internationale Reinheitsnormen nach Arzneibuch. Wasser für Injektionszwecke wird üblicherweise vor der Sterilisation gereinigt und vollentsalzt.
Ein pH-Puffer wird aus einem Natriumphosphatpuffer, einem Kaliumphosphatpuffer und Ähnlichem, vorzugsweise Na₂HPO₄, NaH₂PO₄, K₂HPO₄, KH₂PO4 und Ähnlichem, ausgewählt.
Ein Kalziumtransportblocker oder ein Mittel mit Wirkung gegen Kalziumtätigkeit wird aus allen bekannten Kalziumtransport- oder Kalziumkanalblockern wie Nicardipin, Diltiazem, Verapamil, Nisoldipin, Chlorpromazin oder Trifluorperazin, vorzugsweise Nicardipin und/oder Diltiazem, ausgewählt.
Ohne auf diese Theorie beschränkt zu sein, wird nachfolgend auf Bestandteile nach ihrer Funktion verwiesen, entsprechend der allgemein anerkannten physiologischen Aktivität. Um jedoch Zweifel zu vermeiden, sei erwähnt, dass die aufgeführten Bestandteile zu der zugeordneten Funktion eine zusätzliche oder abweichende Funktion beitragen können und dies sollte nicht als eine Einschränkung angesehen werden. Zusätzlich können funktionelle Entsprechungen zu den Aufgeführten als in den Schutzbereich dieser Erfindung fallend betrachtet werden.
Die Spül- und Konservierungslösung umfasst vorzugsweise einen oder mehrere zusätzliche Bestandteile, ausgewählt aus:

v) mindestens einem Anion, das weitgehend nicht in Zellen eindringen kann, vorzugsweise ein impermeantes maskierendes Anion;
vi) einem Thromboxan-Inhibitor und
vii) mindestens einem Bestandteil mit Kolloidosmoseeigenschaften.

Ein impermeantes maskierendes Anion umfasst vorzugsweise Lactobionat oder Lactobionsäure.
Ein Thromboxan-Inhibitor verhindert die Blutgerinnung und umfasst vorzugsweise Aspirin.
Ein Kolloidosmotikum umfasst vorzugsweise Polyethyenglykol (PEG), succinylierte Gelatine (wie in Gelofusin), Ficoll (ein Polysaccharid) oder ein Stärkeprodukt.
Alternativ oder zusätzlich kann die Spül- und Konservierungslösung der Erfindung einen oder mehrere Bestandteile umfassen, ausgewählt aus:

viii) gelösten anorganischen oder organischen Stoffen;
ix) einem Bestandteil oder Bestandteilen mit Kalziumchelatbildungseigenschaften und
ix) einem Bestandteil oder Bestandteilen mit Eisenchelatbildungseigenschaften.

Ein gelöster anorganischer oder organischer Stoff umfasst vorzugsweise einen anorganischen gelösten Stoff und ist ein Elektrolyt einschließlich Kationen und/oder Anionen, beispielsweise ausgewählt aus Na⁺, K⁺, Cl^–, OH^–, Ca²⁺, Mg²⁺ und Ähnlichen.
Ein Kalziumchelatbildner umfasst vorzugsweise Citrat oder EGTA und ein Eisenchelatbildner umfasst EDTA.
Alternativ oder zusätzlich kann die Spül- und Konservierungslösung der Erfindung einen oder mehrere Bestandteile umfassen, ausgewählt aus:

xi) einer oder mehreren Aminosäuren
xii) mindestens einem Bestandteil, der gegen Sauerstoffradikale oder die Produktion von Sauerstoffradikalen wirksam ist;
xiii) und mindestens einem Bestandteil des Energieversorgungssystems oder der das Energieversorgungssystem oder einen Ketonkörper beeinflusst.

Eine Aminosäure ist vorzugsweise Glutamin, Glycin oder N-Acetylcystein.
Sauerstoffradikal-Inhibitoren sind vorzugsweise aus Allopurinol und reduziertem Glutathion, mehr bevorzugt einer Kombination davon, ausgewählt.
Vorzugsweise umfasst ein Bestandteil des Energieversorgungssystems Adenosin. Vorzugsweise umfasst ein Ketonkörper Beta-Hydroxybutyrat.
Alternativ oder zusätzlich kann die Spül- und Konservierungslösung der Erfindung zusätzliche Bestandteile für eine bestimmte Funktion umfassen, ausgewählt aus:

xiv) mindestens einem Bestandteil, der auf die Querbrückenfunktion im Muskel auf reversible Weise wirkt, vorzugsweise Butandionmonoxim;
xv) mindestens einem Bestandteil, der die Einfügung und Entfernung von Proteinen in und aus Zellmembranen beeinflusst, vorzugsweise Taxol;
xvi) mindestens einem Bestandteil des intrazellulären Signaltransduktionssystems oder der dieses System verändert, vorzugsweise ein Proteinkinase-Inhibitor oder ein Calmodulin-Inhibitor,
xvii) mindestens einem Bestandteil, der eine Membranstabilisierungswirkung hat, vorzugsweise Ranolazin und Ähnliches.

Die Spül- und Konservierungslösung der Erfindung wird vorzugsweise zubereitet, um einem bestimmten Bereich der nach Arzneibuch annehmbaren physikalischen Eigenschaften zu entsprechen. Die Lösung weist einen pH von 6,8 bis 7,0 auf.
Vorzugsweise weist die Lösung eine Osmolalität im Bereich von 300 bis 450 mosmol/l bevorzugter 350 bis 400 mosmol/l auf.
Es versteht sich, dass eine Veränderung spezifisch oder unspezifisch für die Wirksamkeit der Lösung sein kann und dass ein Ausmaß der Veränderung, das keine Auswirkung auf die Leistungsfähigkeit der Flüssigkeit hat, als in den Anwendungsbereich dieser Erfindung fallend betrachtet wird. Die Auswahl der Art eines Bestandteils, bei der ein Maß an Überprüfung durch routinemäßige Versuche erforderlich ist, wird als in den Anwendungsbereich dieser Erfindung fallend betrachtet.
Vorzugsweise liegt der Bestandteil (ii) in einer Menge im Bereich von 50–150 mmol/l vor, zum Beispiel ungefähr 100 mmol/l; jeder der Bestandteile (iii), (v), (viii) liegt in einer Gesamtmenge im Bereich von 15–75 mmol/l vor, zum Beispiel ungefähr 15–20 oder 40–70 mmol/l; der Bestandteil (xi) liegt in einer Menge im Bereich von 15–30 mmol/l vor, zum Beispiel ungefähr 20 mmol/l; der Bestandteil (xii) liegt in einer Gesamtmenge im Bereich von bis zu 5 mmol/l vor, zum Beispiel ungefähr 3–5 mmol/l; der Bestandteil xiii (Ketonkörperbestandteil) liegt in einer Menge im Bereich von bis zu 40 mmol/l vor, zum Beispiel 25 mmol/l; der Bestandteil (vii) liegt in einer Menge im Bereich von 0,5–3,0 mmol/l vor, zum Beispiel ungefähr 0,75–1,33 mmol/l, beispielsweise 1,0 mmol/l, und einer Molekülmasse von 20.000; der Bestandteil (vi) liegt in einer Menge im Bereich von 0,3–1,0 mmol/l vor, zum Beispiel 0,5 mmol/l; der Bestandteil (iv) liegt in einer Menge im Bereich von 0,0005–0,1 mmol/l vor, zum Beispiel ungefähr 0,0005–0,5 mmol/l.
Andere Bestandteile liegen üblicherweise in geringen Mengen, beispielsweise im Bereich von bis zu 1 mmol/l, vor.
Im Fall bestimmter Bestandteile, die als 2 oder mehr Arten vorliegen, können die relativen Mengen entscheidend oder nicht entscheidend sein. Bevorzugt für xii) sind ungefähr 3 mmol/l reduziertes Glutathion und 0,35 bis 0,4, noch bevorzugter 0,4 mmol/l, Allopurinol.
Bevorzugt für viii) sind Elektrolyte wie folgt:
Na⁺ 50–150 mmol/l
K⁺ 0–25 mmol/l
Cl^– 0–100 mmol/l
OH^– 0–75 mmol/l
Ca²⁺ 0–2 mmol/l
Mg²⁺ 0–10 mmol/l
Eine erfindungsgemäße Lösung wird vorzugsweise unter anoxischen Bedingungen in Abwesenheit von UV-Licht hergestellt und aufbewahrt. Es ist ein besonderer Vorteil, dass die definierte Lösung, welche die Bestandteile (i) bis (iv) umfasst, über einen längeren Zeitraum aufbewahrt werden kann und unmittelbar vor Gebrauch zusätzliche Bestandteile zugegeben werden können.
Die wie hierin zuvor definierte Spül- und Konservierungslösung der Erfindung umfasst die Grundbestandteile (i) bis (iv) zusammen mit zusätzlichen Bestandteilen für eine bestimmte Funktion. Die Lösung zur Verwendung bei der Konservierung von Organen weist insbesondere eine größere Komplexität auf als die für die Konservierung von einfachen Zellsystemen, jedoch haben wir festgestellt, dass die Lösung dennoch verhältnismäßig einfach sein kann.
Vorzugsweise umfasst eine Lösung, die zur Konservierung von muskulären Organen wie dem Herzen verwendet wird, die wie hierin zuvor definierten Bestandteile (i) bis (iv) zusammen mit Bestandteilen, die aus (viii) ausgewählt werden, und noch bevorzugter zusätzlich mindestens einen wie hierin zuvor definierten Bestandteil (xiv).
Vorzugsweise umfasst eine Spül- und Konservierungslösung zur Herzkonservierung eine Kombination der unten angegebenen Bestandteilklassen, noch bevorzugter des spezifischen aufgeführten Typs, am meisten bevorzugt im Wesentlichen in der aufgeführten Menge:

Bestandteil Typ Menge mmol/l:

iii) Na₂HPO₄ 42,3

iii) NaH₂PO₄·2H₂O 10,67

iii) KH₂PO4 16

ii) Saccharose 100

viii) MgCl₂ 5

viii) CaCl₂ 0,6

viii) NaCl 12

iv) Diltiazem 0,5
Wir haben darüber hinaus überraschenderweise festgestellt, dass die Wirksamkeit von Bestandteilen einer erfindungsgemäßen Spül- und Konservierungslösung durch die Gegenwart anderer Bestandteile beeinflußt wird. Ohne auf diese Theorie beschränkt zu sein, hat es den Anschein, dass die Wirkung bestimmter Bestandteile in Abwesenheit von Bestandteilen, die den Erhalt anderer Zellfunktionen gewährleisten, entweder negiert oder einfach nicht an einen Zielort weitergegeben wird. Es wird zum Beispiel angenommen, dass die Gegenwart eines impermeanten maskierenden Anions (v) und die Gegenwart eines kolloidosmotischen Mittels (vii) kombiniert wirksamer ist, als wenn diese einzeln verwendet werden, und die Gegenwart von sowohl Allopurinol als auch reduziertem Glutathion als Sauerstoffradikalfänger (xii) wirksamer ist als die einzelnen Verbindungen. Wir haben festgestellt, dass dies besonders nützlich ist bei der Auswahl konkreter Lösungen für die Konservierung von bestimmten Zell-, Gewebe- oder Organarten, wobei bestimmte Kombinationen bei einer Art verwendbar sind und einfach durch die Kombinationen ersetzt werden können, die sich für eine andere Art eignen. Wie hierin zuvor beschrieben wurde, kann der Austausch mit der Gegenwart eines Substituenten in den normal funktionierenden Zellen in Zusammenhang gebracht werden oder kann auf eine gewisse Weise mit Zellfunktionen wechselwirken. Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung haben wir festgestellt, dass sich das impermeante maskierte Anion (v) zusammen mit dem kolloidosmotischen Mittel (vii) für die Konservierung von intraabdominalen Organen eignet und bei der Anpassung einer Flüssigkeit für die Verwendung bei der Konservierung von muskulären Organen wie dem Herzen durch ein Muskel-Querbrückenfunktionsmittel (xiv) ersetzt wird.
Das Ergebnis gemäß der vorliegenden Erfindung lautet folglich, dass bestimmte Substituenten wesentlich für den Erhalt der grundlegenden Zellfunktionen sind, die für alle Zellarten wichtig sind, und diese wurden als die wie hierin zuvor definierten Bestandteile (i) bis (iv) ermittelt. Zwar kann diese Zubereitung hochwirksam oder zufriedenstellend bei der Konservierung von einfachem Gewebe oder einfachen Zellsystemen sein, jedoch ist es notwendig, wenn es erwünscht ist, Organe oder Zellsysteme zu konservieren, die eine unübliche oder komplexere Zellfunktion erfordern oder bereitstellen, Substituenten einzubeziehen, die spezifisch auf die erforderliche oder bereitgestellte Funktion gerichtet sind, ob es sich dabei um die Muskel-, eine elektrische, eine spezifische Membranaktivität, die Energieversorgung und Ähnliches handelt.
Die Lösung kann bei der Transplantation, einschließlich von Organen von „Heart-Beating-Donors" oder „Non-Heart-Beating-Donors", bei der Chirurgie, einschließlich eines beliebigen Zustands warmer oder kalter Ischämie, Kardioplegie oder offene Herzchirurgie, bei der Konservierung von ganzen Gliedmaßen oder ganzen Körpern, bei Versuchen an lebenden Geweben, bei der Kultivierung und Konservierung von gentechnisch hergestellten Zellen, Geweben und Organen und Ähnlichem verwendet werden. Vorzugsweise wird die Lösung als Spüllösung verwendet, die über das Gefäßsystem in Kontakt mit Zellen, lebenden Geweben, Organen, Gliedmaßen oder dem ganzen Körper gebracht wird und gegebenenfalls darüber hinaus als eine Konservierungslösung zur Lagerung von gespülten Zellen, Geweben und Organen dient. In einer Ausführungsform der Erfindung wird eine erste wie hierin zuvor definierte Lösung zum Spülen der Zellen, des Gewebes, des Organs, der Gliedmaße oder des Körpers verwendet und eine zweite Lösung wird zur Konservierung dieser bzw. dieses oder eines Teils davon verwendet. Die Spüllösung umfasst zum Beispiel die wie hierin zuvor definierten Bestandteile (i) bis (iv) und die Konservierungslösung umfasst zusätzliche Bestandteile für das weitere Funktionieren oder zur Verhinderung von Schädigungen bestimmter Zell- oder Organfunktionen, die spezifisch für die fragliche Zelle, das fragliche Gewebe oder Organ sind.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung ist ein Verfahren zum Spülen, Konservieren oder Spülen und Konservieren von Zellen, insbesondere lebenden Zellen, Geweben oder Organen, bereitgestellt, wobei die Zellen, das Gewebe oder die Organe mit einer wie hierin zuvor definierten Lösung in Kontakt gebracht werden. Das Verfahren kann zur einfachen hypothermalen Lagerung dienen, wobei die Zellen, das Gewebe oder das Organ mit der Lösung gespült, aus dem normalen Lokus entnommen, vorzugsweise auf Temperaturen, die normalerweise im Bereich zwischen null und 4°C liegen, abgekühlt und gelagert werden bzw. wird. Wir haben festgestellt, dass Zellen, Gewebe oder Organe über einen ausgedehnten Zeitraum aufbewahrt werden können, der länger als der bisher angewendete ist, zum Beispiel wurde das Herz über einen Zeitraum in der Größenordnung von 6 bis 12 Stunden und Niere und Leber über einen Zeitraum in der Größenordnung von 48 Stunden oder mehr aufbewahrt. Zusätzlich oder alternativ dient das Verfahren zur Konservierung von Zellen, insbesondere Gewebe oder Organen, wobei die Zellen, das Gewebe oder die Organe gespült und in einen hypothermalen Zustand gebracht wurden bzw. wurde und mittels Eintauchen oder Perfusion mit der Konservierungslösung in Berührung gebracht werden bzw. wird.
Vorzugsweise umfasst das Verfahren der Erfindung das Verabreichen einer biologisch wirksamen Menge der Lösung der Erfindung in einer wirksamen Rate oder in einer wirksamen Konzentration an die Zellen, das Gewebe, das Organ oder einen Patienten, um deren bzw. dessen Funktion aufrechtzuerhalten oder zu verstärken. Vorzugsweise ist das Verfahren ein Verfahren zum Bewahren einer bestimmten Zell-, Gewebe- oder Organfunktion, zum Beispiel dem Zellstoffwechsel, und/oder zum vorübergehenden Stoppen bestimmter Funktionen, zum Beispiel der Muskelaktivität, Zerstörung oder Ausscheidung wesentlicher Zellbestandteile und Ähnlichem und/oder Exkrete, zum Beispiel in Form von Gallenflüssigkeit oder Urin und Ähnlichem.
Ischämie ist der Zustand, der sich aus der Unterbrechung der Durchblutung eines Organs ergibt. Die Auswirkungen sind auf den Sauerstoffmangel und fehlende Nährstoffe sowie auf das Ansammeln von Kohlendioxid und anderen Abfallprodukten zurückzuführen. Sie ist schädlicher bei Körpertemperatur als bei Kälte, was der Grund dafür ist, warum Transplantationsorgane gespült und gekühlt werden. Organspender haben häufig Verletzungen erlitten und das Spenderorgan kann daher aufgrund der Verletzung einen Zeitraum mit einer warmen Ischämie erlebt haben. Kommt bei Versuchen vor dem Spülen ein Zeitraum mit einer warmen Ischämie hinzu, wird dieser Zustand nachgeahmt. Es ist ein Vorteil, dass unsere Lösung vor einer solchen warmen Ischämie schützt.
Die Spülperfusion wird vorzugsweise bei einem Druck von bis zu 300 mmHg, bevorzugter im Bereich von Atmosphärendruck bis 200 mmHg, bevorzugter im Bereich von bis zu 160 mmHg, bevorzugter bis zu 100 mmHg, am meisten bevorzugt bis zu 50 mmHg durchgeführt.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung ist ein Kit aus Teilen bereitgestellt, das eine Spül- und Konservierungslösung umfasst, die die wie hierin zuvor definierten Bestandteile (i) bis (iv) zusammen mit einzelnen Bestandteilen aufweist, die aus einem oder mehreren der wie hierin zuvor definierten (v) bis (xvii) ausgewählt sind, zur Verwendung bei der Herstellung einer oder mehrerer Spüllösungen für einen spezifischen Zweck, und die als eine universelle Spül-, Konservierungs- oder Spül- und Konservierungslösung dient.
Die Erfindung wird nun auf nicht beschränkende Weise unter Bezug auf die Beispiele dargestellt.
Beispiel 1
Spül- und Konservierungslösungen, die in der Erfindung & als Vergleich verwendet wurden
Die Konservierungslösungen, die an dieser Untersuchung beteiligt waren, sind in den Tabellen 1 und 2 dargestellt, die Menge ist in mmol/l angegeben. Die Lösungen wurden mit einem halb mit Wasser gefüllten Kolben hergestellt, in den von Lactobionat, KOH, Natriumphosphat, Glutamin, Saccharose, Aspirin, Allopurinol und Nicardipin beliebige oder alle nacheinander gegeben und aufgelöst wurden. Anschließend wurde das Kolloid (PEG) zugegeben und die Lösung wurde beinahe aufgefüllt. NaOH wurde zugegeben, um den pH einzustellen. Die Lösung wurde anschließend aufgefüllt. Alle Lösungen wurden durch Filtration sterilisiert und bei 4°C in Glasflaschen aufbewahrt und innerhalb von 3 Tagen nach Herstellung verbraucht. Reduziertes Glutathion wurde während der Herstellung oder unmittelbar vor Gebrauch zugegeben.
Vergleich
UW ist eine gängige originale handelsübliche Lösung (viaSpan/BELZER UW, DU PONT PHARMA). PBS140 (nicht dargestellt) besteht aus Phosphat und Saccharose (140 mmol/l).
Chemikalien

Lactobionsäure (Sigma, L-2398), Allopurinol (Sigma, A-8003), Glutamin (Sigma, G-7029), reduziertes Glutathion (Sigma, G-4251), Aspirin (Sigma, A-5376), Diltiazem (Sigma, D-2521), Taurocholsäuren (Sigma, T-4009), Polyethylenglykol (Sigma, P-2263), Nicardipin (Sigma, N-7510), Adenosin (Sigma, A-9251), Glycin (Sigma, G07126), N-Acetyl-Cystein (Sigma, A-8199), Bovines Albumin (Sigma, A-7906), Alanin (Sigma, A-5824), Glukose (BDH, 10117 Y), Gelofusin (B. Braun Medical Ltd., Lot: 8274D14F), KOH (BDH, 102104V), NaOH (BDH, 102524X), NaH₂PO₄ (BDH, 102494C), NaH₂PO₄ 2H₂O (BDH, 310324Q), Saccharose (BDH, 102745C), MgCl₂ 6H₂O (BDH, 101494 V).

Tabelle 1

Zusammensetzung von handelsüblichen Konservierungslösungen
„University of Wisconsin"-Lösung
Gehalt in mmol/l
KHPO₄	25
KCl	5
Adenosin	5
Glutathion	3
MgSO₄	5
Raffinose	30
Allopurinol	0,01
K-Lactobionat	100
Pentastarch	5
Osmolalität	320 mosmol/l
pH	7,4

Tabelle 2 Zusammensetzung der Lösungen der Erfindung für die Kaltkonservierung (Forts.).

mmol	PBSL	PBSH
Lactobionat	50
KOH	16
NaOH	35
Glutathion	3
Na₂HPO₄	26,45	42,3
Glutamin	20
NaH₂PO₄ 2H₂O	16,66	10,67
KH₂PO₄		16
Saccharose	100	100
Aspirin	0,5
Allopurinol	0,4
Diltiazem		0,5
Nicardipin	0,005
Adenosin
Glycin
N-Acetyl-Cystein
NaCl		12
MgCl₂ 6H₂O		5
CaCl₂ 2H₂O		0,6
Polyethylenglykol	1,0
Osmolalität	380
pH	7,0

Molekulare Masse von Polyethylenglykol *8000 Dalton #20000 Dalton. LSG 4, LSG 5, LSG 8, LSG 7, LSG 8, LSG 12, LSG 13, LSG 14, LSG 15, LSG 16, LSG 17, LSG 18, LSG 19, LSG 20 basierten alle auf LSG 4, jedoch mit unterschiedlichen Zusatzstoffen. Die Wirkungen der einzelnen Zusatzstoffe wurden untersucht und die wichtigeren sind wie folgt angeführt. Konkrete Ergebnisse sind nachfolgend hinsichtlich LSG 20 angegeben.
2. Herzkonservierung: Materialien und Methoden.
Die Versuche wurden mit Genehmigung des britischen Innenministeriums in Übereinstimmung mit den Richtlinien des britischen Innenministeriums für die Arbeit mit Tieren durchgeführt.
2.1 Perfusionsvorrichtung.
Es wurde ein isoliertes arbeitendes Rattenherzmodell verwendet, wie von Neely JR beschrieben (7). Diese Vorrichtung bestand aus den folgenden Teilen:

1) Wassergekühlter Langendorff-Behälter mit Glasfilter am unteren Auslass
2) Herzkammer und Kanülenanordnung. Ein Teflonstöpsel hielt zwei Kanülen aus Edelstahl mit Rillen zum Aufnehmen von Ligaturfäden. Eine Kanüle war gerade, um in die Aorta zu passen und war mit vier Seitenarmverbindungsstücken für die Langendorff-Perfusion, die Kardioplegie-Perfusion, die Messung von Druck und Herzfrequenz und für die Messung des Aortenabflusses ausgestattet. Die andere Kanüle war winklig, um die Kanülierung des linken Vorhofs zu erleichtern. Das perfundierte Herz, das von den beiden Kanülen gehalten wurde, saß locker in einer wassergekühlten Herzkammer.
3. Blasenfalle für Aorta und Vorhöfe sowie Elastizitätskammer.
4. Sauerstoffanreicherungskammer, die aus drei wassergekühlten Kondensatoreinheiten mit konischen Verbindungselementen bestand, die eine große Oberfläche boten, um die Sauerstoffanreicherung zu erleichtern.
5. Kardioplegie-Behälter, der sich 60 cm über dem Herz befand und durch den die Konservierungslösung dem Herz zugeführt wurde.
6. Peristaltikpumpe und Filter, die zum Rückführen der Perfusionslösung durch die Sauerstoffanreicherungskammer verwendet wurden.
7. Druckmesser und Schreiber zum Aufzeichnen der Herzfrequenz und des Aortendrucks.

Eine vereinfachte grafische Darstellung der Herzreperfusionsvorrichtung ist in 1b dargestellt.
2.2 Perfusionsmedium.
Die Perfusionslösung war modifizierter Krebs-Henseleit-Puffer (KHB), äquilibriert mit 95% Sauerstoff und 5% CO₂ bei 37°C. Die Endkonzentration Salz dieses Puffers (mmol/l) war NaCl 118, KCl 4,7, MgSO₄ 1,2, CaCl₂ 2,5, KH₂PO₄ 1,2 und NaHCO₃ 25.
2.3 Studienprotokoll.
Männliche Wistar-Ratten (250 bis 320 g) wurden durch intraperitoneale Injektion von Natriumpentobarbiton (0,26 bis 0,28 ml) narkotisiert. Unmittelbar vor der Operation wurde intravenös Heparin (250 IU) injiziert. Der Bauch wurde geöffnet, um die Freilegung zum Brustkorb zu erleichtern, der Brustkorb wurde eröffnet und das Herz entnommen und unmittelbar in eiskalte physiologische Kochsalzlösung gelegt. Anschließend wurde die Aorta kanüliert und das Herz an der Perfusionsvorrichtung befestigt, mit anschließender Perfusion mit KHB-Lösung bei 37°C für ein erstes Ausspülen und einen Ausgleichszeitraum, während dessen das Herz wieder zu schlagen anfing. Während dieses Zeitraums wurde der linke Vorhof kanüliert, damit das Herz in einen Pumpmodus wechseln konnte. Bei dieser Anordnung läuft KHB zur linken Herzkammer, die wiederum die Lösung zur Aorta pumpte, aus der sie zur Elastizitätskammer strömte. Diese Kammer war teilweise mit Luft gefüllt, um dem ansonsten starren System etwas Elastizität zu verleihen. Durch die Druckentwicklung in dieser Kammer wurde die Lösung durch einen Durchflussmesser zu einer Blasenfalle gedrückt, die sich 100 cm über dem Herzen befand, aus der sie über die Sauerstoffanreicherungskammer zurückkehrte, um rückgeführt zu werden.
Zu Kontrollmessungen der Herzfunktionen gehörten die Herzfrequenz (HF), der systolische Druck (SD), der Aortendurchfluss (AD), der koronare Durchfluss (KD) und das Herzminutenvolumen (HV) alle fünf Minuten für eine Dauer von 15 Minuten. Herzen, die einen Aortendurchfluss von unter 45 ml/min, einen koronaren Durchfluss von unter 16 ml/min oder eine Herzfrequenz von unter 240 Schlägen/min erreichten, wurden aus der Studie ausgeschlossen. Die Herzen wurden dann mit einer der vier Konservierungslösungen (25 ml) aus dem Kardioplegie-Behälter, der sich über dem Herzen befand, gespült, und 6 Stunden lang bei 4°C aufbewahrt. Die getesteten Lösungen waren „St. Thomas' Hospital"-Solution Nr. 2 (STH2), „University of Wisconsin"-Solution, eine Lösung, die nach der Formel von Celsior (CS) hergestellt wurde, und phosphatgepufferte Saccharoselösung (PBSH). Die Mindestanzahl von Herzen in jeder Gruppe betrug 6.
Nach der Aufbewahrung über den gewünschten Zeitraum wurde die Reperfusion im Langendorff-Modus über einen Äquilibrierungszeitraum von 15 min durchgeführt, gefolgt vom Übergang zu einem Modus mit arbeitendem Herz, indem die Langendorff-Perfusion angehalten und die Perfusion durch den linken Vorhof begonnen wurde. Der Modus mit arbeitendem Herz dauert 30 min, während denen zum Vergleich mit ihren einzelnen Kontrollwerten vor der Ischämie alle 5 Minuten die Herzfunktion gemessen wurde. Die Erholung der Herzfunktionen wurde als Prozentsatz der Kontrollwerte vor der Ischämie ausgedrückt.
Zusammengefasst sah das Protokoll folgendermaßen aus:
Langendorff-Modus (2 bis 3 min)
Arbeitsmodus (15 min)
Kardioplegie (25 ml Spüllösung).
Konservierung (6 Stunden)
Langendorff-Reperfusion (15 min)
Arbeitsreperfusion (30 min)
Statistische Analyse.
Die Ergebnisse in jeder Gruppe wurden als Mittelwert ± SEM ausgedrückt. Die Mittelwerte der Gruppen wurden unter Verwendung der einfaktoriellen Varianzanalyse (ANOVA) verglichen. Statistische Signifikanz wurde bei einem P-Wert von unter 0,05 akzeptiert.
2.4 Ergebnisse.

Tabelle 11. Ergebnisse (Mittelwert ± SEM) für die vier Untersuchungsgruppen sind in der Tabelle dargestellt, ausgedrückt als % Wiederherstellung der prä-ischämischen Funktion für jeden der dargestellten hämodynamischen Parameter.

Gruppe	Anzahl	HF	SD	AD	KD	HV
STH2	8	93 ± 2,2	80,2 ± 0,8	37,5 ± 2,5	71,59 ± 5,9	47,3 ± 2,1
CS	8	89,6 ± 2,4	79 ± 1,2	41,5 ± 3,2	67,8 ± 4,2	47,6 ± 2,0
UW	7	98,7 ± 1,2	80,1 ± 1,8	47,6 ± 5,0	65,3 ± 4,5	51,2 ± 4,4
PBSH	6	89,2 ± 2,8	90,5 ± 1,5	57,1 ± 3,7*	87,7 ± 5,8*	66,5 ± 3,3*

LITERATUR

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Belzer FO, Ashby BS und Dunphy JE (1967). Lancet 2, 536–539.
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Coffey AK und Andrews PM (1983). Transplantation 35, 136–143.
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Ferwana O, Pirie SC und Potts DJ (1989). Clinical Science 77, 77–84
Isemer FE, Ludwig A, Schuck O., Bretschneider HJ und Peiper HJ (1988) Transplantation Proceedings 20, 885–886.
Lam FT, Mavor A, Potts DJ und Giles G (1989). Transplantation 47, 767–771.
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Pirie SC und Potts DJ (1986). Clinical Science 70, 443–452

Claims

Spül- und Konservierungslösung zur Konservierung von Zellen in Abwesenheit einer Blutzufuhr, umfassend: i) Wasser für Injektionszwecke und ii) Saccharose und iii) mindestens einen Bestandteil mit pH-Puffer-Eigenschaften und iv) mindestens einen Bestandteil mit Kalziumtransportblockierungseigenschaften oder einer Wirkung gegen Kalziumtätigkeit, zusammen mit viii) Kaiziumionen, wobei die Spül- und Konservierungslösung einen pH-Wert im Bereich von 6,8 bis 7,0 aufweist.
Spül- und Konservierungslösung nach Anspruch 1, wobei der Kalziumtransportblocker aus Nicardipin, Diltiazem, Verapamil, Nisoldipin, Chlorpromazin und Trifluorperazin ausgewählt ist, vorzugsweise Diltiazem umfasst.
Spül- und Konservierungslösung nach Anspruch 1 oder 2, wobei ein pH-Puffer aus einem Natriumphosphatpuffer und einem Kaliumphosphatpuffer und Kombinationen davon ausgewählt ist.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, die einen oder mehrere zusätzliche Bestandteile umfasst, ausgewählt aus: v) mindestens einem Anion, das weitgehend nicht in Zellen eindringen kann, vorzugsweise ein impermeantes maskierendes Anion ist; vii) mindestens einem Bestandteil mit Kolloidosmoseeigenschaften.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, das als einen zusätzlichen Bestandteil Folgendes umfasst: vi) einen Thromboxan-Inhibitor.
Spül- und Konservierungslösung nach Anspruch 4, wobei ein impermeantes maskierendes Anion Lactobionat oder Lactobionsäure umfasst.
Spül- und Konservierungslösung nach Anspruch 5, wobei ein Thromboxan-Inhibitor die Blutgerinnung verhindert und Aspirin umfasst.
Spül- und Konservierungslösung nach Anspruch 4, wobei ein Kolloidosmotikum Polyethylenglykol (PEG), succinylierte Gelatine (wie in Gelofusin), Ficoll (ein Polysaccharid) oder ein Stärkeprodukt umfasst.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, die darüber hinaus einen oder mehrere Bestandteile umfasst, ausgewählt aus: ix) einem Bestandteil oder Bestandteilen mit Kalziumchelatbildungseigenschaften und x) einem Bestandteil oder Bestandteilen mit Eisenchelatbildungseigenschaften.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, die darüber hinaus einen oder mehrere Bestandteile umfasst, ausgewählt aus: xi) einer oder mehreren Aminosäuren; xii) mindestens einem Bestandteil, der gegen Sauerstoffradikale oder die Produktion von Sauerstoffradikalen wirksam ist; xiii) und mindestens einem Bestandteil des Energieversorgungssystems oder der das Energieversorgungssystem oder einen Ketonkörper beeinflusst.
Spül- und Konservierungslösung nach Anspruch 10, wobei eine Aminosäure Glutamin, Glycin oder n-Acetylcystein ist.
Spül- und Konservierungslösung nach Anspruch 10, wobei ein Sauerstoffradikal-Inhibitor aus Allopurinol und reduziertem Glutathion, mehr bevorzugt einer Kombination davon ausgewählt ist.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 12, die zusätzliche Bestandteile umfasst, ausgewählt aus: xiv) mindestens einem Bestandteil, der auf die Querbrückenfunktion im Muskel auf reversible Weise wirkt.
Spül- und Konservierungslösung nach Anspruch 13, wobei der mindestens eine Bestandteil, der auf die Querbrückenfunktion im Muskel auf reversible Weise wirkt, Butandionmonoxim umfasst.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 14, die zusätzliche Bestandteile umfasst, ausgewählt aus: xv) mindestens einem Bestandteil, der die Einfügung und Entfernung von Proteinen in und aus Zellmembranen beeinflusst, vorzugsweise Taxol; xvi) mindestens einem Proteinkinase-Inhibitor oder einem Calmodulin-Inhibitor; xvii) mindestens einem Bestandteil, der eine Membranstabilisierungswirkung hat, vorzugsweise Ranolazin.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 15, die eine Osmolalität im Bereich von 300–450 mosmol/l aufweist.
Spül- und Konservierungslösung zur Herzkonservierung nach Anspruch 1, die eine Kombination der unten angegebenen Bestandteilklassen des spezifischen aufgeführten Typs umfasst: Bestandteil Typ: iii) Na₂HPO₄ iii) NaH₂PO₄·2H₂O iii) KH₂PO₄ ii) Saccharose viii) MgCl₂ viii) CaCl₂ viii) NaCl iv) Diltiazem.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 17, wobei der Bestandteil (ii) in einer Menge im Bereich von 50–150 mmol/l vorliegt, jeder der Bestandteile (iii), (v), (viii) in einer Gesamtmenge im Bereich von 15–75 mmol/l vorliegt; der Bestandteil (xi) in einer Menge im Bereich von 15–30 mmol/l vorliegt; der Bestandteil (xii) in einer Gesamtmenge im Bereich von bis zu 5 mmol/l vorliegt; der Bestandteil (vii) in einer Menge im Bereich von 0,5–3,0 mmol/l vorliegt; der Bestandteil (vi) in einer Menge im Bereich von 0,3–1,0 mmol/l vorliegt; der Bestandteil (iv) in einer Menge im Bereich von 0,0005–0,1 mmol/l vorliegt und andere Bestandteile in geringen Mengen im Bereich von bis zu 1 mmol/l vorliegen.
Spül- und Konservierungslösung zur Herzkonservierung nach Anspruch 1, die die unten angegebenen Bestandteilklassen des spezifischen Typs und im Wesentlichen in der aufgeführten Menge, wenn sie in Wasser zum Volumen aufgefüllt wird, umfasst: Bestandteil Typ Menge in mmol/l: iii) Na₂HPO₄ 42,3 iii) NaH₂PO₄·2H₂O 10,67 iii) KH₂PO₄ 16 ii) Saccharose 100 viii) MgCl₂ 5 viii) CaCl₂ 0,6 viii) NaCl 12 iv) Diltiazem 0,5.
Verfahren zur Herstellung einer Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19, das das Zugeben von Bestandteilen unter gemäß der Pharmakopöe unbedenklichen Bedingungen nacheinander in Wasser, mit Ausnahme des Bestandteils vii), falls vorhanden, und instabiler Bestandteile, falls vorhanden, und Lösen, Zugeben des Bestandteils vii) und etwaiger instabiler Bestandteile und Auffüllen der Lösung bis nahezu dem Volumen und schließlich Auffüllen bis zu dem Volumen, um den pH-Wert einzustellen, Sterilisieren und Abkühlen umfasst.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19 zur Verwendung als eine Spüllösung, Konservierungslösung oder Spül- und Konservierungslösung zur Konservierung von Zellen in Abwesenheit einer Blutzufuhr, insbesondere zum Verhindern einer Schädigung von Organen, lebenden Geweben und Zellen.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19 zur Verwendung nach Anspruch 21 bei der Transplantation, einschließlich von Organen von „Heart-Beating-Donors" oder „Non-Heart-Beating-Donors", bei der Chirurgie, einschließlich eines beliebigen Zustands warmer oder kalter Ischämie, Kardioplegie oder offene Herzchirurgie, bei der Konservierung von ganzen Gliedmaßen oder ganzen Körpern, bei Versuchen an lebenden Geweben oder bei der Kultivierung und Konservierung von gentechnisch hergestellten Zellen, Geweben und Organen, Gliedmaßen oder des ganzen Körpers.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19, die über das Gefäßsystem in Kontakt mit Zellen, lebenden Geweben, Organen, Gliedmaßen oder dem ganzen Körper gebracht wird und gegebenenfalls darüber hinaus als eine Konservierungslösung zur Lagerung von gespülten Zellen, Geweben und Organen dient.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19 zur Verwendung nach einem der Ansprüche 21 bis 23, wobei eine erste wie hierin zuvor definierte Lösung zum Spülen der Zellen, des Gewebes, des Organs, der Gliedmaße oder des Körpers verwendet wird und eine zweite Lösung zur Konservierung dieser bzw. dieses oder eines Teils davon verwendet wird.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19 zur Verwendung beim Spülen, Konservieren oder Spülen und Konservieren von Zellen, insbesondere lebenden Zellen, Geweben oder Organen, wobei die Zellen, das Gewebe oder die Organe zur einfachen hypothermalen Lagerung mit der Lösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19 in Kontakt gebracht werden, wobei die Zellen, das Gewebe oder das Organ mit der Lösung gespült, aus dem normalen Lokus entnommen, vorzugsweise auf Temperaturen, die normalerweise im Bereich zwischen null und 4°C liegen, abgekühlt und gelagert werden bzw. wird.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19 zur Verwendung nach Anspruch 25, wobei die Lösung zur Konservierung von Zellen, insbesondere Gewebe oder Organen ist, wobei die Zellen, das Gewebe oder die Organe gespült und in einen hypothermalen Zustand gebracht wurden bzw. wurde und mittels Eintauchen oder Perfusion mit der Konservierungslösung in Berührung gebracht werden bzw. wird.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19 zur Verwendung nach einem der Ansprüche 25 und 26, die das Verabreichen einer biologisch wirksamen Menge der Lösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19 in einer wirksamen Rate oder in einer wirksamen Konzentration an die Zellen, das Gewebe, das Organ oder einen Patienten, um deren bzw. dessen Funktion aufrechtzuerhalten oder zu verstärken, umfasst, wobei das Verfahren ein Verfahren zum Bewahren einer bestimmten Zell-, Gewebe- oder Organfunktion und/oder zum vorübergehenden Stoppen bestimmter Funktionen ist.
Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19 zur Verwendung beim Spülen, Konservieren oder Spülen und Konservieren von Zellen, wobei die Zellen gespült und in einen hypothermalen Zustand und durch Eintauchen oder Perfusion mit einer wie hierin zuvor in einem der Ansprüche 1 bis 19 definierten Konservierungslösung in Berührung gebracht werden.
Kit aus Teilen, das eine Spül- und Konservierungslösung nach einem der Ansprüche 1 bis 19, die die Bestandteile (i), (ii), (iii) und (iv) zusammen mit wie hierin zuvor in einem der Ansprüche 1 bis 19 definierten einzelnen Bestandteilen aufweist, zur Verwendung bei der Herstellung einer oder mehrerer Spüllösungen für einen spezifischen Zweck, und die als eine universelle Spül-, Konservierungs- oder Spül- und Konservierungslösung dient.