DE60014893T2

DE60014893T2 - Pyrazolobenzodiazepine mit cdk2 hemmender wirkung

Info

Publication number: DE60014893T2
Application number: DE60014893T
Authority: DE
Inventors: Qingjie Ding; Jin-Jun Liu; Stewart Vincent MADISON; Giacomo Pizzolato; Chung-Chen Wei; Michael Peter WOVKULICH
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1999-04-21
Filing date: 2000-04-14
Publication date: 2005-10-13
Anticipated expiration: 2020-04-15
Also published as: US20020183514A1; PE20010054A1; KR100481757B1; CN1279029C; US6838558B2; AU768667B2; CN1348455A; NO20015065D0; EP1185529B1; IL145764A0; DE60014893D1; TR200103016T2; HUP0300318A2; NZ514523A; PL200933B1; ZA200108016B; US6440959B1; RU2249593C2; NO20015065L; CN1196703C

Description

Die vorliegende Erfindung richtet sich auf neue Pyrazolobenzodiazepine, welche cyclinabhängige Kinasen (CDKs) inhibieren, im Besonderen CDK2. Diese Verbindungen und ihre pharmazeutisch verträglichen Salze und Wirkstoffvorstufen der Verbindungen sind antiproliferative Mittel, die geeignet sind zur Behandlung oder Bekämpfung von Zellproliferationsstörungen, im Besonderen Krebs. Die Erfindung richtet sich ebenfalls auf pharmazeutische Zusammensetzungen, die solche Verbindungen enthalten und auf Verfahren zur Behandlung oder Vorbeugung von Krebs, im Besonderen die Behandlung oder die Bekämpfung fester Tumore. Die Verbindungen der Erfindung sind besonders geeignet bei der Behandlung oder Bekämpfung von Brust-, Darm-, Lungen- und Prostatatumoren. Die Erfindung richtet sich auch auf Zwischenstufen, die geeignet sind zur Herstellung der obigen Antiproliferationsmittel.
Ungesteuerte Zellproliferation ist das Merkmal von Krebs. Krebsartige Tumorzellen weisen typischerweise eine gewisse Form der Schädigung der Gene auf, die direkt oder indirekt den Zellteilungszyklus steuern.
Cyclinabhängige Kinasen (CDKs) sind Enzyme, welche kritisch für den Zellsteuerungszyklus sind. Diese Enzyme regulieren die Übergänge zwischen den verschiedenen Phasen des Zellzyklus, wie etwa die Progression von der G₁-Phase in die S-Phase (die Dauer aktiver DNA-Synthese) oder die Progression von der G₂-Phase in die M-Phase, worin aktive Mitose und Zellteilung auftritt.
CDKs bestehen aus einer katalytischen CDK-Untereinheit und einer steuernden Cyclinuntereinheit. Die Cyclinuntereinheit ist der Schlüsselregulator der CDK- Aktivität, wobei jede CDK mit einem spezifischen Untersatz von Cyclinen wechselwirkt: z.B. Cyclin A (CDK1, CDK2). Die verschiedenen Kinase/Cyclin-Paare steuern bzw. regulieren die Progression durch spezifische Stufen des Zellzyklus.
Abweichungen in dem Zellzyklussteuerungssystem sind in Zusammenhang gestanden mit unkontrolliertem Wachstum krebsartiger Zellen. Es gibt umfangreiche Literatur, die die Verwendung von Verbindungen, welche CDKs als antiproliferative therapeutische Mittel validiert.
Die vorliegende Erfindung betrifft Pyrazolobenzodiazepine, die in der Lage sind zum Inhibieren der Aktivität von einer oder mehreren CDKs, im Besonderen CDK2. Derartige Verbindungen sind geeignet für die Behandlung von Krebs, im Besonderen von festen Tumoren. Im Besonderen sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung besonders geeignet bei der Behandlung oder Bekämpfung von Brust-, Darm-, Lungen- und Prostatatumoren. Die Erfindung richtet sich auch auf Zwischenproduktverbindungen, die geeignet sind bei der Herstellung der oben genannten Pyrazolobenzodiazepine.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind Verbindung der nachstehenden Formel I
worin
R¹ Wasserstoff, NO₂, CN, Halogen, OR⁵, R⁶OR⁷, COOR⁷, CONR⁸R⁹, NR¹⁰R¹¹, NHCOR¹², NHSO₂R¹³ oder geradkettiges niederes Alkyl ist, das optional durch Hydroxy und/oder Halogen substituiert ist, ist;
R² und R⁴ jeweils unabhängig Wasserstoff, Halogen, NO₂, CF₃ oder geradkettiges niederes Alkyl sind;
R³ Wasserstoff, Cycloalkyl, Aryl, Heterozyklus, Heteraryl, COOR⁷,
CN, Alkenyl, CONR⁸R⁹, Alkinyl oder niederes Alkyl, das gegebenenfalls substituiert ist durch Hydroxy, OR⁹, F und/oder Aryl ist;
R⁵ niederes Alkyl ist, das optional durch Halogen substituiert ist;
R⁶ niederes Alkyl ist;
R⁷ Wasserstoff oder niederes Alkyl ist;
R⁸ und R⁹ jeweils unabhängig Wasserstoff oder niederes Alkyl sind, welches selbst optional substituiert ist durch Hydroxy und/oder NH₂; wobei R⁸ und R⁹ alternativ einen 5- oder 6-gliedrigen Heterozyklus bilden können der optional durch Hydroxy, NH₂ und/oder niederes Alkyl substituiert ist;
R¹⁰, R¹¹ und R¹² jeweils unabhängig Wasserstoff oder niederes Alkyl sind;
R¹³ niederes Alkyl ist, das optional substituiert ist durch Halogen und/oder NR¹⁴R¹⁵; und
R¹⁴ und R¹⁵ jeweils unabhängig Wasserstoff oder niederes Alkyl sind, optional substituiert durch Halogen oder alternativ ist in NR¹⁴R¹⁵ ein Heterozyklus.
Weiterhin betrifft die Erfindung Wirkstoffvorstufe und pharmazeutisch aktive bzw. wirksame Metaboliten von Verbindungen der Formel I und die pharmazeutisch verträglichen Salze der oben angegebenen Verbindungen.
Weiterhin betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von Verbindungen der Formel I oder Wirkstoffvorstufen und pharmazeutisch aktiven bzw. wirksamen Metaboliten von Verbindungen der Formel I und der pharmazeutisch verträglichen Salze der oben angegebenen Verbindungen als Medikamente; und pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine pharmazeutisch wirksame Menge einer oder mehrerer der oben beschriebenen Verbindungen oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes oder einer Wirkstoffvorstufe davon und einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder ein pharmazeutisch verträgliches Hilfsmittel.
Die vorliegende Erfindung richtet sich auch auf die Verwendung der Verbindungen der Formel I, Wirkstoffvorstufen oder pharmazeutisch aktiver Metaboliten der Verbindungen der Formel I oder pharmazeutisch verträglicher Salze der vorstehenden Verbindungen zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung fester Tumore, im Besonderen Brust-, Darm-, Lungen- und Prostatatumoren, noch spezieller Brust- und Darmtumoren.
Wie hier verwendet sollen die folgenden Ausdrücke die folgenden Definitionen besitzen.
"Aryl" bedeutet eine aromatische Gruppe mit 5 bis 10 Atomen und welche aus 1 oder 2 Ringen besteht. Beispiele von Arylgruppen umfassend Phenyl und 1- oder 2-Naphthyl.
"Alkenyl" bedeutet einen geradkettigen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten, aliphatisch ungesättigten Kohlenwasserstoff mit 2 bis 6, vorzugsweise 2 bis 4 Kohlenstoffatomen und welcher Doppelbindungen enthält. Typische Alkenylgruppen umfassen Ethylen, Propylen, Isopropylen, Butylen und dgl. Bevorzugte Alkenylgruppen sind geradkettig.
"Alkinyl" bedeutet einen geradkettigen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten aliphatischen ungesättigten Kohlenwasserstoff mit 2 bis 6, vorzugsweise 2 bis 4 Kohlenstoffatomen und welcher Dreifachbindungen enthält. Typische Alkinylgruppen umfassen Acetylen und dgl. Bevorzugte Alkinylgruppen sind geradkettig.
"Cycloalkyl" bedeutet eine nichtaromatische, teilweise oder vollständig gesättigte cyclische aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe mit 3 bis 8 Atomen. Beispiele von Cycloalkylgruppen umfassen Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl.
"Wirksame Menge" bedeutet eine Menge mindestens einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes, einer Wirkstoffvorstufe oder eines Metaboliten davon, welche wesentlich Proliferation einer Tumorzelle, einschließlich humaner Tumorzelllinien, inhibiert.
"Halogen" bedeutet Fluor, Chlor, Brom oder Jod. Bevorzugte Halogene sind Fluor und Chlor.
"Heteroaryl"-Gruppen sind aromatische Gruppen mit 5 bis 10 Atomen, einem oder zwei Ringen, und welche ein oder mehrere Heteroatome enthalten. Beispiele von Heteroarylgruppen sind 2-, 3- oder 4-Pyridyl, Tetrazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazinyl, Chinolyl, Pyrrolyl und Imidazolyl.
"Heteroatom" bedeutet ein Atom, ausgewählt aus N, O und S.
"Heterozyklus" bedeutet eine 3- bis 10-gliedrige nichtaromatische, teilweise oder vollständig gestättigte Kohlenwasserstoffgruppe, wie etwa Tetrahydrochinolyl, welche ein oder zwei Ringe und mindestens ein Heteroatom enthält.
"IC₅₀" betrifft die Konzentration eines speziellen Pyrazolobenzodiazepins, die erforderlich ist, um 50 % einer spezifischen gemessenen Aktivität zu inhibieren. IC₅₀ kann inter alia wie unten in Beispiel 4, beschrieben, gemessen werden.
"Niederes Alkyl" bezeichnet einen geradkettigen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten, gesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoff mit 1 bis 6, vorzugsweise 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Typische niedere Alkylgruppen umfassen Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, t-Butyl, 2-Butyl, Pentyl, Hexyl und dgl.
"Pharmazeutisch verträgliches Salz" betrifft herkömmliche Säurezugabesalze oder Basezugabesalze, welche die biologische Wirksamkeit und Eigenschaften der Verbindungen der Formel I beibehalten und werden aus geeigneten nicht toxischen organischen oder anorganischen Säuren oder organischen oder anorganischen Basen gebildet. Beispielhafte Säurezugabesalze umfassen diejenigen, die erhalten werden aus anorganischen Säuren, wie etwa Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Sulfaminsäure, Phosphorsäure und Salpetersäure, und diejenigen, die von organischen Säuren, wie etwa p-Toluolsulfonsäure, Salicylsäure, Methansulfonsäure, Oxalsäure, Succinsäure, Zitronensäure, Hydroxybernsteinsäure, Milchsäure, Fumarsäure und dgl. Beispielhafte Basezugabesalze umfassen diejenigen, die erhalten werden mit Ammonium, Kalium, Natrium und quaternären Ammoniumhydroxiden, wie etwa z.B. Tetramethylammoniumhydroxid.
"Pharmazeutisch verträglich", wie etwa pharmazeutisch verträglicher Träger, Hilfsmittel, Wirkstoffvorstufen usw. bedeutet pharmazeutisch verträglich und im Wesentlichen nicht toxisch für den Patienten, welchem die spezielle Verbindung verabreicht wird.
"Pharmazeutisch aktiver Metabolit" bedeutet ein Metabolitenprodukt einer Verbindung der Formel I, welches pharmazeutisch verträglich und wirksam ist.
"Wirkstoffvorstufe bedeutet eine Verbindung, die unter physiologischen Bedingungen oder durch Solvolyse in eine der Verbindungen der Formel I oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz einer Verbindung der Formel I übergeführt werden kann. Eine Wirkstoffvorstufe kann bei Verabreichung an einen Patienten inaktiv sein, wird jedoch in vivo in eine aktive Verbindung der Formel I übergeführt.
"Substituiert", wie etwa substituiertes Alkyl, bedeutet, dass die Substitution an einer oder mehreren Positionen auftreten kann, es sei denn, es ist anders angegeben, dass die Substituenten an jeder Subsitutionsstelle unabhängig ausgewählt sind aus den angegebenen Optionen.
Die Verbindungen
In einer Ausführungsform richtet sich die vorliegende Erfindung auf Verbindungen mit der Formel:
und Wirkstoffvorstufen und pharmazeutisch aktive Metaboliten von Verbindungen der Formel I und die pharmazeutisch verträglichen Salze der vorhergehenden Verbindungen, worin R¹ bis R¹⁵ wie oben definiert sind.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Formel I ist R¹ Wasserstoff, NO₂, CN, CONH₂, Halogen oder unsubstituiertes niederes Alkyl. Bevorzugte niedere Alkyle sind Methyl und Ethyl. Bevorzugter ist R¹ NO₂, CN oder CONH₂. R¹ ist vorzugsweise in der 7- oder 8-Position.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindungen der Formel I ist R² in der 2'-Position und ist Wasserstoff oder Halogen.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindungen der Formel I ist R³ unsubstituiertes niederes Alkyl, niederes Hydroxyalkyl, Cycloalkyl, heterocyclisch oder Heteroaryl. Bevorzugte niedere Alkylgruppen sind Methyl, Ethyl und Hydroxymethyl. Bevorzugte Cycloalkylgruppen sind unsubstituiertes C₃-C₅.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindungen der Formel I ist R⁴ in der 4'-Position und ist Wasserstoff oder Halogen, am bevorzugtesten ist R⁴ Wasserstoff.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindungen der Formel I sind R⁵ und R⁶ unabhängig Methyl oder Ethyl, wobei jedes davon optional substituiert sein kann durch Halogen. Bevorzugter ist R⁵ Trifluormethyl.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindungen der Formel I ist R⁷ Wasserstoff, Methyl oder Ethyl.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindungen der Formel I sind R⁸ und R⁹ jeweils unabhängig Wasserstoff, Methyl, Ethyl oder Hydroxyethyl. Wenn R⁸ und R⁹ einen Heterocyclus bilden, sind bevorzugte Heterocyclusgruppen 6-gliedrige unsubstituierte Gruppen, die am bevorzugtesten zwei Heteroatome umfassen. Die bevorzugtesten Heteroatome sind ausgewählt aus O und N.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindungen der Formel I sind R¹⁰, R¹¹ und R¹² jeweils unabhängig Wasserstoff, Methyl und Ethyl.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindungen der Formel I ist R¹³ niederes Alkyl, welches optional substituiert sein kann durch Halogen, am bevorzugtesten ist R¹³ Methyl, Ethyl oder Trifluormethyl.
In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der Verbindungen der Formel I sind R¹⁴ und R¹⁵ jeweils unabhängig Wasserstoff, Methyl, Ethyl oder heterocyclisch. Bevorzugte Heterocylcen sind 3-7-gliedrige Ringe, die mindestens einen Stickstoff umfassen.
Die folgenden Zwischenstufen sind ebenfalls Beispiele zusätzlicher bevorzugter Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung:
worin R¹, R² und R⁴ wie oben definiert sind;
worin in jeder der unmittelbar vorhergehenden Formeln jedes R¹, R², R³ und R⁴ wie hier zuvor definiert ist. Diese Zwischenstufen sind geeignet bei der Synthese von Verbindungen der Formel I.
Die hier offenbarten und durch die obige Formel umfassten Verbindungen können eine Tautomerie oder Strukturisomerie zeigen. Es ist vorgesehen, dass die Erfindung jede tautomere oder strukturell isomere Form dieser Verbindungen oder Gemische solcher Formen umfasst und nicht auf eine tautomere oder strukturisomere Form, die innerhalb der oben aufgezeichneten Formeln verwendet wird, begrenzt ist.
Synthese von Verbindungen der Formel I
Die Verbindungen der Erfindung können durch in der Technik bekannte Verfahren hergestellt werden. Geeignete Verfahren zum Synthetisieren dieser Verbindungen werden in den Beispielen bereitgestellt. Im Allgemeinen können diese Verbindungen gemäß den unten angegebenen Syntheseschemata hergestellt werden. Schema 1 R³=H
a) Lawesson-Reagenz (eine bekannte Reaktion für die meisten Substitutionen)
b) Reaktion mit Me₂N-CH(OEt)₂
c) Reaktion mit Hydrazin.
Die Verbindung 1 ist entweder über kommerzielle Quellen erhältlich oder wird durch in der Technik bekannte Verfahren synthetisiert. Schema 2 R³ ist von H verschieden
a) Lawesson-Reagenz (eine bekannte Reaktion für die meisten Substitutionen)
b) Reaktion mit R³-CHO in der Gegenwart einer Base, vorzugsweise Piperidin
c) Reaktion mit Hydrazin
d) Oxidation von Dihydropyrazol zu Pyrazol (Verwendung von Luft in DMSO RT-150 °C oder in der Gegenwart von Luft und Base (Cs₂CO₃/DMF)). Schema 3 Alternatives Schema, wenn R³ von H verschieden ist
a) Lawesson-Reagenz (eine bekannte Reaktion für die meisten Substitutionen)
f) Reaktion mit R³-CHO in der Gegenwart einer Base, vorzugsweise Diazabicycloundecan oder 2,2,6,6-Tetramethylpiperidin.
g) Dehydrierung durch Behandlung mit schwacher Säure (Pyridinium-p-toluolsulfonat, Pyridiniumacetat, usw) oder mit Chlortrimethylsilan in Pyridin unter Rückfluss.
d) Reaktion mit Hydrazin
e) Oxidation von Dihydropyrazol zu Pyrazol (Verwendung von Luft in DMSO RT- 150 °C oder in der Gegenwart von Luft und Base (Cs₂CO₃/DMF). Schema 4 Überwandlung der funktionellen Gruppen R¹ oder R³
worin R^1' eine der Optionen für R¹, wie oben definiert, sein kann und ähnlich R^3' eine der Optionen für R³, wie oben definiert, sein kann.
Mehrere Substitutionen können durch chemische Modifikation bestehender funktioneller Gruppen unter Verwendung bekannter Verfahren, wie in Schema 4 oben beispielhaft ausgeführt, erhalten werden. Wenn z.B. das gewünschte R¹ = NH₂ ist, kann diese Substitution erhalten werden durch die Reduktion der entsprechenden Nitrogruppe. Ähnlich, wenn das gewünschte R¹ = NHR' (worin R' = -COR¹², -SO₂R¹³ oder -R¹⁰R¹¹ist), kann diese Substitution durch Reaktion der entsprechenden R¹ = NH₂-Verbindung mit einem Säurehalogenid oder -anhydrid erreicht werden. Wenn das gewünschte R¹ = CONRR" (worin R = Wasserstoff oder niederes Alkyl und R" = niederes Alkyl), kann diese Substitution erhalten werden durch Reaktion der entsprechenden Verbindung, worin R¹ = I, mit Kohlenmonoxid und einem primären oder sekundären Amin in der Gegenwarf eines Palladiumkatalysators.
Zusätzlich, wenn R³ im Ausgangsmaterial CO₂Et ist, können chemische Standardmodifizierungen verwendet werden, um Verbindungen herzustellen, die die folgenden entsprechenden R³-Gruppen aufweisen:
CH₂OH (Reduktion; CHO (teilweise Reduktion); CH₂NMe₂ (reduktive Aminierung des Aldehyds; CH₂OMe (Alkylierung des Alkohols); CH=CH₂ (Olefinierung des Aldehyds); CONRR" (worin R = H oder niederes Alkyl und R" = H oder niederes Alkyl, Aminolyse mit dem entsprechenden Amin HNRR", worin R = H oder niederes Alkyl und R" = H oder niederes Alkyl); CONHNHR (worin R=H, niederes Alkyl oder Aryl) (Hydrazinolyse – Reaktion mit Hydrazin); CN (Dehydrierung des Amids CONH₂).
In den vorhergehenden Schemata ist Verbindung 1 entweder kommerziell erhältlich, z.B. von Sigma, oder kann leicht durch in der Technik bekannte Verfahren synthetisiert werden. So wird Verbindung 2 aus dem entsprechenden Lactam (Verbindung 1) durch das Verfahren von Sternbach et al., J. Org. Chem. 29:231 (1964) oder durch Reaktion mit Lawesson-Reagenz hergestellt.
Zusammensetzungen/Formulierungen
In einer alternativen Ausführungsform ist die vorliegende Erfindung auf pharmazeutische Zusammensetzungen gerichtet, umfassend mindestens eine Verbindung der Formel I oder eine Wirkstoffvorstufe davon oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz einer Verbindung der Formel I oder eine Wirkstoffvorstufe einer solchen Verbindung.
Diese pharmazeutischen Zusammensetzungen können oral verabreicht werden, z.B. in der Form von Tabletten, beschichteten Tabletten, Dragees, harten oder weichen Gelatinekapseln, Lösungen, Emulsionen oder Suspensionen. Sie können auch rektal verabreicht werden, z.B. in der Form von Suppositorien, oder parenteral, z.B. in der Form von Injektionslösungen.
Diese pharmazeutischen Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung, die Verbindungen der Formel I, Wirkstoffvorstufen solcher Verbindungen oder die Salze davon umfassen, können auf eine ähnliche Art, welche in der Technik bekannt ist, hergestellt werden, z.B. durch herkömmliche Misch-, Einkapselungs-, Lösungs-, Granulier-, Emulgier-, Einschluss-, Drageeherstellungs- oder Lyophilisierungsverfahren. Diese pharmazeutischen Präparate können mit therapeutisch inerten, anorganischen oder organischen Trägern formuliert werden. Lactose, Getreidestärke oder Derivate davon, Talk, Stearinsäure oder ihre Salze können als solche Träger für Tabletten, beschichtete Tabletten, Dragees und harte Gelatinekapseln verwendet werden. Geeignete Träger für weiche Gelatinekapseln umfassen Pflanzenöle, Wachse und Fette. In Abhängigkeit von der Natur der aktiven Substanz sind im Allgemeinen keine Träger erforderlich im Falle von weichen Gelatinekapseln. Geeignete Träger zur Herstellung von Lösungen und Sirupen sind Wasser, Polyol, Saccharose, Invertzucker und Glucose. Geeignete Träger zur Injektion sind Wasser, Alkohole, Polyole, Glycerin, Pflanzenöle, Phospholipide und oberflächenaktive Mittel. Geeignete Träger für Suppositorien sind natürliche oder gehärtete Öle, Wachse, Fette und halbflüssige Polyole.
Die pharmazeutischen Präparate können ebenfalls Konservierungsmittel, Solubilisierungsmittel, Stabilisierungsmittel, Benetzungsmittel, Emulgiermittel, Süßungsmittel, färbende Mittel, Aromamittel, Salze zum Verändern des osmotischen Drucks, Puffer, Beschichtungsmittel oder Antioxidantien enthalten. Sie können auch andere therapeutisch wertvolle Substanzen enthalten, einschließlich zusätzliche aktive Bestandteile, die von denjenigen der Formel I verschieden sind.
Dosierungen
Wie oben angegeben, sind die Verbindungen der Formel I, Wirkstoffvorstufen davon und ihre Salze und Zusammensetzungen, die diese Verbindungen enthalten, geeignet bei der Behandlung oder Bekämpfung von Zellproliferationsstörungen, im Besonderen onkologischen Störungen. Diese Verbindungen und Formulierungen, die diese Verbindungen enthalten, sind besonders geeignet bei der Behandlung oder Bekämpfung fester Tumore, wie etwa z.B. Brust- und Darmtumore.
Eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung gemäß dieser Erfindung bedeutet eine Menge der Verbindung, die wirkungsvoll ist, um Symptome der Krankheit zu verhindern, zu lindern oder zu verbessern oder das Überleben des zu behandelnden Patienten zu verlängern. Die Bestimmung einer therapeutisch wirksamen Menge ist innerhalb des Fachwissens in der Technik.
Die therapeutisch wirksame Menge oder Dosis einer Verbindung der Formel I kann innerhalb weiter Grenzen liegen und wird auf die individuellen Anforderungen in jedem speziellen Fall eingestellt. Im Allgemeinen sollte im Falle von oraler oder parenteraler Verabreichung an erwachsene Menschen mit einem Gewicht von ungefähr 70 kg eine Tagesdosis von etwa 10 mg bis etwa 10.000 mg, vorzugsweise von etwa 200 mg bis etwa 1000 mg geeignet sein, wenngleich die obere Grenze bei Indikation überschritten werden kann. Die Tagesdosis kann als eine Einzeldosis oder in Teildosen verabreicht werden oder kann bei parenteraler Verabreichung als eine kontinuierliche Infusion verabreicht werden.
Beispiele
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können entsprechend bekannter Techniken, wie etwa z.B. den allgemeinen oben angegebenen Schemata, hergestellt werden. Die folgenden Beispiele zeigen bevorzugte Verfahren zum Synthetisieren der Verbindungen und Formulierungen der vorliegenden Erfindung.
In den folgenden Beispielen werden die NMR-Daten in ppm relativ zu Tetramethylsilan in dem angegebenen Lösungsmittel und bei der angegebenen Spektrometerfrequenz bereitgestellt.
Beispiel 1 : Pyrazole, die gemäß Schema 1 hergestellt werden
Schritt a: Reaktion von Lactam (Verbindung 1) mit Lawesson-Reagenz um Thiolactam (Verbindung 2) zu bilden:
1.1 Verbindung A1: R¹ = H, R² = F, R⁴ = H
Zu einer Lösung von 5,085 g (20 mmol) Lactam 1 (worin R¹ = H, R² = F und R⁴ = H) in 50 ml Dimethoxyethan wurden bei 75 °C 8,9 g (22 mmol) Lawesson-Reagenz (2,4-bis(4-Methoxyphenyl)-1,3-dithia-2,4-diphosphetan-2,4-disulfid gegeben; Pedersen, B.S.; Scheibye, S.; Nilsson, N.H.; Lawesson, S.-O., Bull. Soc. Chim. Belg., 1978, 87:223). Das Gemisch wurde für 30 Minuten gerührt, gekühlt und dann in 10 %-ige Natriumbicarbonatlösung (wässrig) gegossen. Das wässrige Gemisch wurde mit Methylenchlorid extrahiert und die Extrakte mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wurde aus Methylenchlorid-Methanolumkristallisiert, um 4,0 g Verbindung A1 (Thiolactam 2) zu ergeben.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,56 (s, 1H, NH), 7,10–7,65 (m, 8H), 4,59 (s, 2H).
1.2 Verbindung A2: R¹ = F, R² = R⁴ = H
Verbindung A2 wurde auf dieselbe Art wie oben für Verbindung A1 beschrieben, hergestellt.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,50 (s, 1H, NH), 7,37–7,56 (m, 7H), 7,06 (dd, J = 3,9 Hz, 1H), 4,60 (br s, 2H).
Schritt b: Reaktion von Thiolactam 2 mit DMF-Acetal, um Dimethylaminomethylenderivat 3 zu bilden:
1.3 Verbindung A3: R¹ = Cl, R² = Cl, R⁴ = H
Eine Lösung von 0,999 g (3,1 mmol) Thiolactam 2 (R¹ = Cl, R² = Cl, R⁴ = H), 10 ml trockenem Tetrahydrofuran und 10 ml Dimethylformamiddiethylacetal wurden bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt. Flüchtige Bestandteile wurden unter verringertem Druck entfernt, wobei ein rot-oranger Feststoffrückstand zurückblieb. Kristallisation aus Hexan-Ethylacetat ergab 0,716 g von Verbindung A3 (Derivat 3, worin R¹ = Cl, R2 = Cl, R⁴ = H) als ein roter Feststoff, Schmp. 196–198 °C.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 10,21 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,43–7,56 (m, 4H), 7,32 (dd, J = 3,9 Hz, 1 H), 7,00 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 3 Hz, 1H), 3,27 (s, 6H).
Schritt c: Umsetzung des Dimethylaminomethylenderivats 3 in Pyrazol 4:
1.4 Verbindung A4: R¹ = Cl, R² = Cl, R³ = R4 = H
5-(2-Chlorphenyl)-7-chlorpyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
Zu einer Lösung von 0,265 g (0,71 mmol) in 10 ml trockenem Methylenchlorid wurden ca. 39,8 Mikroliter (1,27 mmol) wasserfreies Hydrazin gegeben. Das Gemisch wurde unter einer Argonatmosphäre für 85 min gerührt und dann in Methylenchlorid aufgenommen und mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert, um 0,219 g Verbindung A4 (Pyrazol 4, worin R1 = Cl, R² = Cl, R⁴ = H) als einen gelbbraunen Feststoff zu erhalten. Die Analysenprobe wurde durch ein kurzes Silikagelbett filtriert, wobei mit Ethylacetat eluiert wurde, und dann aus Ethylacetat umkristallisiert. Schmp. > 300 °C.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 12,07 (s, 1H, NH), 8,03 (s, 1H, NH), 7,58 (s, 1H), 7,4–7,5 (m, 4H), 7,17 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,25 (s, 1H).
Die folgenden Pyrazole (Verbindung 4) wurden gemäß Schema 1 und wie in den Schritten a–c oben beschrieben, hergestellt:
1.5 Verbindung A5: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR:: (DMSO-d6, 300 MHz) 9,16 (s, 1H, NH), 7,90 (dd, J = 2,8 Hz, 1H), 7,4-7,6 (m, 5H), 7,08 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 8 Hz, 1H).
1.6 Verbindung A6: R¹ = Cl, R² = H, R³ = H, R⁴ = H
5-Phenyl-7-chlor-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 200 MHz) 7,97 (s, 1H, NH), 7,62 (s 1H), 7,35–7,60 (m, 5H), 7,29 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 2 Hz, 1H).
1.7 Verbindung A7: R¹ = Cl, R²= F, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Fluorphenyl)-7-chlor-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 12,10 (s, 1H, NH), 8,01 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,18–7,33 (m, 3H), 6,83 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H).
1.8 Verbindung A8: R¹ = Cl, R² = Cl, R³ = H, R⁴ = Cl
5-(2,4-Dichlorphenyl)-7-chlor-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 12,09 (s, 1H, NH), 8,05 (s, 1H, NH), 7,68 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,52 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 10 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,27 (d, J = 2 Hz, 1H).
1.9 Verbindung A9: R¹ = H, R² = H, R³ = H, R⁴ = H
5-Phenyl-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,04 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,32- 7,47 (m, 5H), 7,22 (dt, J = 2,8 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 8 Hz, 1H),6,67 (dd, J = 1,8 Hz, 1H).
1.10 Verbindung A10: R¹ = H, R² = F, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Fluorphenyl)-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 200 MHz) 12,00 (s, 1H, NH), 7,79 (s, 1H), 7,32–7,56 (m, 3H), 7,00–7,32 (m, 3H), 6,78 (d, J = 6 Hz, 1H), 6,64 (t, J = 6 Hz, 1H), 6,48 (d, J = 6 Hz, 1H).
1.11 Verbindung A11: R¹ = F, R² = F, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Fluorphenyl)-7-fluor-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 200 MHz) 12,10 (s, 1H, NH), 7,85 (s, 1H), 7,4–7,7 (m, 3H), 7,18–7,39 (m, 2H), 7,05 (m, 1H), 6,86 (m, 1H), 6,26 (br d, J = 8 Hz, 1H).
1.12 Verbindung A12: R¹ = CH₃O, R² = Cl, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Chlorphenyl)-7-methoxy-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 200 MHz) 12,00 (s, 1H, NH), 7,35–7,60 (m, 5H), 6,81 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 8 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 3,46 (s, 3H).
1.13 Verbindung A13: R¹ = NO₂, R² = F, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Fluorphenyl)-7-nitro-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,14 (s, 1H, NH), 89,06 (s, 1H, NH), 7,89 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,4–7,5 (m, 2H), 6,76 (d, J = 9 Hz, 1H).
1.14 Verbindung A14: R¹ = CH₃SO₂, R² = H, R³ = H, R⁴ = H
5-Phenyl-7-methansulfonyl-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 12,18 (s, 1H), NH), 8,54 (s, 1H, NH), 7,72 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,43 (m, 5H), 7,14 (d, J = 2, Hz, 1H), 7,06 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,01 (s, 3H).
1.15 Verbindung A15: R¹ = CN, R² = F, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Fluorphenyl)-7-cyano-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,16, (s, 1H, NH), 8,63 (s, 1H, NH), 7,59 (s, 1H), 7,4–7,58 (m, 3H), 7,2–7,37 (m, 2H), 6,82 (dd, J = 2,8 Hz, 1H), 6,78 (s, 1H).
1.16 Verbindung A16: R¹ = NO₂, R² = H, R³ = H, R⁴ = H
5-Phenyl-7-nitro-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 12,19 (s, 1H, NH), 8,96 (s, 1H, NH), 8,03 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,35–7,5 (m, 6H), 6,94 (d, J = 9 Hz, 1H).
1.17 Verbindung A17: R¹ = NO₂, R² = CF₃, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Trifluormethylphenyl)-7-nitro-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,12 (s, 1H, NH), 9,18 (s, 1H, NH), 7,45–7,9 (m, 6H), 7,00 (s, 1H), 6,71 (d, J = 9 Hz, 1H).
1.18 Verbindung A18: R¹ = CO₂CH₃, R² = H, R³ = H, R⁴ = H
5-Phenyl-7-carbomethoxy-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,15 (s, 1H, NH), 8,42 (s, 1H, NH), 7,78 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,35–7,45 (m, 5H), 7,29 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H).
1.19 Verbindung A19: R¹ = 1, R² = F, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Fluorphenyl)-7-jod-pyrazol[,3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 mMHz) 12,09 (s, 1H, NH), 7,99 (s, 1H, NH), 7,58 (s, 1H), 7,4–7,55 (m, 3H), 7,19–7,35 (m, 2H), 6,76 (s, 1H), 6,62 (d, J = 8 Hz, 1H).
1.20 Verbindung A20: R¹ = CO₂Et, R² = F, R³ = H, R⁴ =H
5-(2-Fluorphenyl)-7-carboethoxy-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,08 (s, 1H, NH), 8,50 (s, 1H, NH), 7,62 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,4–7,5 (m, 2H), 7,18–7,35 (m, 2H), 7,14 (s, 1H), 6,80 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,15 (q, J = 6 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 6 Hz, 3H).
1.21 Verbindung A21: R¹ = H, R² = Cl, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Chlorphenyl)-pyrazol[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,95 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,38–7,48 (m, 4H), 7,09 (t, J = 8 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,61 (t, J = 8 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 8 Hz, 1H).
Beispiel 2: Umsetzung von Thiolactam 2 in das substituierte Pyrazol 7 gemäß den Schemata 2 und 3
2.1 Verbindung B1: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = 2-Pyrrolyl, R⁴ = H;
Schema 2
3-(2-Pyrrolyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
Ein Gemisch von 0,995 g (3 mmol) Thiolactam 2 (R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = 2-Pyrrolyl, R⁴ = H), 0,571 g (6 mmol) Pyrrol-2-carboxaldehyd, 0,383 g (4,5 mmol) (Aldrich) Piperidin und 10 ml Dimethoxyethan wurde unter Argon für 2 Stunden gerührt. Das Gemisch wurde in Ethylacetat aufgenommen und aufeinanderfolgend mit 0,1 M Schwefelsäure, Wasser und dann Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Das entsprechende Olefin 5 wurde durch Silikagelchromatographie (Elution mit Hexan/Ethylacetat (1:1)) als ein roter Feststoff (0,309 g) isoliert und direkt im nächsten Schritt verwendet. Olefin 5 (0,309 g) wurde in 6 ml Dimethylsulfoxid gelöst und mit 72,5 mg (2,2 mmol) Hydrazin unter einer Argonatmosphäre umgesetzt. Nach 20 min. wurde das Gemisch in Ethylacetat aufgenommen und aufeinanderfolgend mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert, um ein Gemisch der Dihydropyrazole 6 (0,296 g) zu ergeben. Das Gemisch von 6 wurde in Dimethylsulfoxid gelöst und in der Gegenwart von Luft bei 130 °C für 2 Stunden erhitzt, gekühlt, in Ethylacetat aufgenommen und aufeinanderfolgend mit Wasser und dann Salzlösung gewaschen. Der Extrakt wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Das Produkt 7, Verbindung B1, wurde durch Silikagelchromatographie gereinigt (Elution mit Hexan-Ethylacetat 25/75).
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12, 12 (s, 1H, NH), 10,39 (s, 1H, NH), 9,07 (s, 1H, NH), 7,96 (dd, J = 2,8 Hz, 1H), 7,4–7,65 (m, 4H), 7,15 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,79 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,12 (d, J = 2 Hz, 1H).
2.2 Verbindung B2: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CO₂Et, R⁴ = H;
Schema 3
3-Carboethoxy-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4Jbenzodiazepin Ein Gemisch von 5,0 g (15,1 mmol) Thiolactam 2 (R¹ = NO₂, R² = Cl), 6 ml einer 50 %-igen Lösung von Ethylglyoxylat in Toluol, 4,5 ml (31 mmol) Diazabicycloundecan und 100 ml Dimethoxyethan wurde unter einer Argonatmosphäre für 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wurde mit 0,005 M H₂SO₄ angesäuert, mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Das Aldoladdukt 8 wurde als ein Gemisch von Diastereomeren (5,6 g) durch Silikagelchromatographie (Elution mit Hexan-Ethylacetat 60/40) erhalten.
Ein Gemisch von 4,7 g (10,8 mmol) des Aldoladdukts 8, das wie oben erhalten wurde, 100 ml Pyridin und 6,9 ml (54,4 mmol) Chlortrimethylsilan wurde für 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und dann bei 120 °C für 1,5 Stunden erhitzt. Das Gemisch wurde gekühlt, in 1 l Ethylacetat aufgenommen und aufeinanderfolgend mit Wasser und Salzlösung gewaschen und die Ethylacetatschicht über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach Filtration und Verdampfen der flüchtigen Bestandteile unter verringertem Druck wurde der rohe Rückstand durch Silikagel filtriert, wobei mit Hexan-Ethylacetat (1:1) eluiert wurde, um 4,3 g Olefin 5 zu erhalten.
Eine Lösung von 4,3 g des oben erhaltenen Olefins 5 in 210 ml Dichlormethan wurde mit 0,68 ml (21,6 mmol) wasserfreiem Hydrazin für 30 min gerührt. Das Gemisch wurde dann mit Wasser aufgetrennt und die wässrige Phase mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand, welcher ein Gemisch von Dihydropyrazolen 6 enthielt, wurde in 50 ml Dimethylsulfoxid gelöst und bei 130 °C in der Gegenwart von Luft für 3 Stunden erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde gekühlt, in Ethylacetat aufgenommen und mit Wasser gewaschen. Die organische Schicht wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Das Produkt wurde durch Silikagelchromatographie isoliert, wobei mit Hexan-Ethylacetat (40/60) eluiert wurde, um 0,580 g Verbindung B2 (R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CO₂Et, R⁴ = H) zu erhalten.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 13,33 (s, 1H), 9,15 (s, 1H), 8,02 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,46–7,55 (m, 4H), 7,18 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 9 Hz, 1H), 4,25 (q, J = 7 Hz, 2H), 1,27 (t, J = 7 Hz, 3H).
Die folgenden Pyrazole (Verbindung 7) wurden gemäß Schema 2 oder 3 wie oben beschrieben hergestellt:
2.3 Verbindung B3: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,85 (s, 1H, NH), 9,04 (s, 1H, NH), 7,83 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,39–7,52 (m, 4H), 7,05 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 9 Hz, 1H), 1,98 (s, 3H).
2.4 Verbindung B4: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₂CH₃, R⁴=H (Schema 2)
3-Ethyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,91 (s, 1H, NH), 9,05 (s, 1H, NH), 7,85 (dd, J = 2,8 Hz, 1H), 7,35–7,58 (m, 4H), 7,04 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 8 Hz, 1H), 2,41 (q, J = 7 Hz, 2H), 1,06 (t, J = 7 Hz, 3H).
2.5 Verbindung B5: R¹ = NO₂, R²= Cl, R³ = CH₂CH₂Ph, R⁴ = H (Schema 2)
3-(2-Phenylethyl)-5-(2-chlorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 200 MHz) 11,95 (s, 1H, NH), 9,05 (s, 1H, NH), 7,82 (dd, J = 2,8 Hz, 1H), 7,05–7,60 (m, 10H), 6,70 (d, J = 8 Hz, 1H), 2,82 (m, 2H), 2,64 (m, 2H).
2.6 Verbindung B6: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = i-Pr, R⁴ = H (Schema 2)
3-(1-Methylethyl)-5-(2-chlorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,90 (s, 1H, NH), 9,02 (s, 1H, NH), 7,84 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,35–7,55 (m, 4H), 7,04 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 9 Hz, 1H), 2,86 (sept., J = 9 Hz, 1H), 1,14 (d, J = 9 Hz, 6H).
2.7 Verbindung B7: R¹ = CN, R² = F, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carbonitril
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,05 (s, 1H, NH), 8,55 (s, 1H, NH), 7,45 (m, 3H), 7,25 (m, 2H), 6,78 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,71 (s, 1H), 2,03 (s, 3H).
2.8 Verbindung B8: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₂Ph, R⁴ = H (Schema 2)
3-(Phenylmethyl)-5-(2-chlorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,08 (s, 1H, NH), 9,08 (s, 1H), 7,85 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,40–7,56 (m, 4H), 7,16–7,34 (m, 5H), 7,06 (br s, 1H), 6,71 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,71 (s, 2H).
2.9 Verbindung B9: R¹ = CO₂Et, R² = F, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-7-carboethoxy-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,81 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,59 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,39–7,51 (m, 2H), 7,16–7,31 (m, 2H), 7,09 (s, 1H), 6,74 (d, J = 9 Hz, 1H), 4,08 (q, J = 7 Hz, 2H), 2,04 (s, 3H), 1,12 (t, J = 7 Hz, 3H).
2.10 Verbindung B10: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = 5-(4-Me)-pyrazolyl, R⁴ = H (Schema 2)
3-(4-Methylpyrazol-5-yl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 12,58 (s, 1H), 9,26 (s, 1H), 8,75 (br s, 1H), 7,95 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,42–7,6 (m, 5H), 7,12 (s, 1H), 6,81 (d, J = 8 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H).
2.11 Verbindung B11: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₂-iPr, R⁴ = H (Schema 2)
3-(2-Methylpropyl)-5-(2-chlorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 11,91 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,87 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,4–7,56 (m, 4H), 7,08 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 9 Hz, 1H), 2,28 (d, J = 7 Hz, 2H), 1,89 (n, J = 7 Hz, 1H), 0,88 (d, J = 7 Hz, 6H).
2.12 Verbindung B12: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CF₃, R⁴ = H (Schema 3)
3-Trifluormethyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (CDCl₃+DMSO-d6, 300 MHz) 7,98 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,2–7,6 (m, 6H), 7,02 (br s, 1H), 6,62 (d, J = 9 Hz, 1H).
2.13 Verbindung B13: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = 1-Thiazolyl, R⁴ = H (Schema 3)
3-(1-Thiazolyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 13,08 (s, 1H), 9,21 (s, 1H), 7,88–7,92 (m, 2H), 7,84 (d, J = 3 Hz, 1H), 7,42–7,62 (m, 4H), 7,12 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 8 Hz, 1H).
2.14 Verbindung B14: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = 4-Imidazolyl, R⁴ = H (Schema 2)
3-(4-Imidazolyl)-5-(2-chlorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 12,33 (s, 1H), 12,29 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 7,90 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,44–7,63 (m, 4H), 7,35 (s, 1H), 7,11 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 9 Hz, 1H).
2.15 Verbindung B15: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = 2-Pyrazolyl, R⁴ = H (Schema 2)
3-(2-Pyrazolyl)-5-(2-chlorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 13,11 (s, 1H), 12,48 (s, 1H), 9,12 (s, 1H), 7,93 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,39–7,60 (m, 4H), 7,11 (s, 1H), 6,78 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,59 (s, 1H).
2.16 Verbindung B16: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = 3-Pyrazolyl, R⁴ = H (Schema 2)
3-(3-Pyrazolyl)-5-(2-chlorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 13,09 (s, 1H), 12,31 (s, 1H), 9,13 (s, 1H), 7,80-8,05 (m, 4H), 7,40–7,62 (m, 3H), 7,13 (s, 1H), 6,78 (d, J = 9 Hz, 1H).
2.17 Verbindung B17: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH(Me)CH₂Me, R⁴ = H (Schema 2)
3-(1-Methylpropyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,90 (s, 1H), 9,04 (s, 1H), 7,85 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,38–7,55 (m, 4H), 7,05 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 9 Hz, 1H), 2,65 (m, 1H), 1,52 (m, 2H), 1,13 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,79 (t, J = 8 Hz, 3H).
2.18 Verbindung B18: R¹ = MeO, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-7-methoxy-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,69 (s, 1H), 7,34–7,50 (m, 5H), 6,77 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,86 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,86 (d, J = 2 Hz, 1H), 3,44 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).
2.19 Verbindung B19: R¹ = Cl, R² = H, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-phenyl-7-chlor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 11,85 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,46–7,52 (m, 2H), 7,39–7,44 (m, 3H), 7,29 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 2 Hz, 1H), 2,16 (s, 3H).
2.20 Verbindung B20: R¹ = Cl, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-chlorophenyl)-7-chlor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,78 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,38–7,55 (m, 4H), 7,17 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 2 Hz, 1H), 2,03 (s , 3H).
2.21 Verbindung B21: R¹ = H, R² = F, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,75 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,36–7,52 (m, 2H), 7,04–7,30 (m, 3H), 6,77 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,63 (t, J = 8 Hz), 6,50 (d, J = 8 Hz, 1H), 2,07 (s, 3H).
2.22 Verbindung B22: R¹ = F, R² = H, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-phenyl-7-fluor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,85 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,46–7,55 (m, 2H), 7,35–7,43 (m, 2H), 7,11 (dt, J = 3,9 Hz, 1H), 6,92 (dd, J = 5,9 Hz, 1H), 6,41 (dd, J = 3,10 Hz, 1H), 2,14 (s, 3H).
2.23 Verbindung B23: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = Phenyl, R⁴ = H (Schema 2)
3-Phenyl-5-(2-chlorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 12,65 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 7,95 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,32–7,63 (m, 7H), 7,14 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 9 Hz, 1H).
2.24 Verbindung B24: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = n-Propyl, R⁴ = H (Schema 2)
3-Propyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 11,91 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,86 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,41–7,53 (m, 4H), 7.08 (s, 1H), 6,72 (d, J = 8 Hz, 1H), 2,38 (t, J = 8 Hz, 2H), 1,54 (tq, J = 8,7 Hz, 2H), 0,88 (t, J = 7 Hz, 3H).
2.25 Verbindung B25: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = Cyclopropyl, R⁴ = H (Schema 2)
3-Cyclopropyl-5-(2-chlorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 11,72 (s, 1H), 9,05 (s, 1H), 7,87 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,41–7,55 (m, 4H), 7,08 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 9 Hz,1H), 1,79 (p, J = 7 Hz, 1H), 0,88 (d, J = 7 Hz, 4H).
2.26 Verbindung B26: R¹ = F, R² = F, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-fluorophenyl)-7-fluoro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,82 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,41–7,58 (m, 2H), 7,18–7,35 (m, 2H), 7,05 (dt, J = 3,9 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 6,9 Hz, 1H), 6,25 (dd, J = 3,9 Hz, 1H), 2,08 (s, 3H).
2.27 Verbindung B27: R¹ = NO₂, R² = N, R³ = CH3, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-phenyl-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
2.28 Verbindung B28: R¹ = H, R² = H, R¹ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-phenyl-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,78 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,39 (m, 3H), 7,20 (dt, J = 1,8 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,75 (t, J = 8 Hz, 1H), 6,68 (dt, J = 1,8 Hz, 1H), 2,14 (s, 3H).
2.29 Verbindung B29: R¹ = I, R² = F, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-fluorophenyl)-7-jod-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,81 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,39–7,57 (m, 3H), 7,18–7,36 (m, 2H), 6,75 (s, 1H), 6,59 (d, J = 9 Hz, 1H), 2,07 (s, 3H).
2.30 Verbindung B30: R¹ = H, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-chlorophenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
2.31 Verbindung B31: R¹ = NO₂, R²=F, R³=CH₃, R⁴=H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-fluorophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,90 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 7,87 (dd, J = 3,9 Hz, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,18–7,32 (m, 3H), 6,73 (d, J = 9 Hz, 1H), 2,02 (s, 3H).
2.32 Verbindung B32: R¹=Cl, R²=F, R³=CH₃, R⁴=H (Schema 2)
3-Methyl-5-(2-fluorophenyl)-7-chlor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,81 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,40–7,55 (m, 2H), 7,17–7,32 (m, 3H), 6,79 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,42 (s, 1H), 2,08 (s, 3H).
2.33 Verbindung B33: R1=I, R2=H, R3=CH₃, R4=H (Schema 2)
3-Methyl-5-phenyl-7-jod-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,82 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,36–7,55 (m, 6H), 6,91 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 9 Hz, 1H), 2,15 (s, 3H).
2.34 Verbindung B34: R¹=Br, R²=H, R³=CH₃, R⁴=H (Schema 2)
3-Methyl-5-phenyl-7-brom-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 7,89 (s, 1H), 7,49 (m, 2H), 7,38 (m, 4H), 6,85 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 2 Hz, 1H), 2,15 (s, 3H).
2.35 Verbindung B35: R¹ = CN, R² = F, R³ = CH₂OH, R⁴ = H (Schema 3)
3-Hydroxymethyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carbonitril.
Beispiel 3: Modifikation der funktionellen Gruppe gemäß Schema 4
Wie oben unter Bezugnahme auf Schema 4 angegeben, können bestimmte Verbindungen leicht erhalten werden durch Umwandlung bestehender funktioneller Gruppen. Mehrere dieser Umwandlungen sind weiter unten beispielhaft ausgeführt.
A. Substitution von Jod durch Carbonyl: R¹ = I zu R¹ = CONRR'
3.1 Verbindung C1: R¹ = CON(-CH₂CH₂-O-CH₂-CH₂-), R² = F, R³=H, R⁴=H
5-(2-Fluorphenyl)-7-morpholinylcarbonyl-pyrazolo[3,4)[1,4]benzodiazepin
Ein Gemisch von 0,0712 g (0,17 mmol) Pyrazol 4 (R¹ = I, R² = F, R³ = H, R⁴ = H), 0,0082 g (0,0012 mmol) Bis-triphenylphosphonin-Palladiumdichlorid-Katalysator, 1 ml Morpholin wurde gerührt und unter einer Kohlenmonoxidatmosphäre für 90 Minuten erhitzt (75 °C). Das Gemisch wurde gekühlt und dann durch Chromatographie auf reverse Phase-Silikagel gereinigt (Gradientenelution mit Wasser-Acetonitril) um 0,06 g Verbindung C1 zu ergeben (Pyrazol 4, worin R¹ = CON(-CH₂CH₂-O-CH₂-CH₂-), R² = F, R³ = H, R⁴ = H).
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,05 (s, 1H, NH), 8,18 (s, 1H, NH), 7,59 (s, 1H), 7,4–7,5 (m, 2H), 7,18–7,35 (m, 3H), 6,84 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,25 (m, 8H).
Die folgenden Verbindungen wurden unter Verwendung des obigen Verfahrens A hergestellt:
3.2 Verbindung C2: R¹ = CONHCH₂CH₂OH, R² = F, R³ = H, R⁴ = H
N-(2-Hydroxyethyl)-5-(2-fluorophenyl)-pyrazolo[3,4][1,4jbenzodiazepin-7-carboxamid
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,08, (s, 1H, NH), 8,20 (s, 1H, NH), 8,16 (m, 1H, NH), 7,61 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,4–7,5 (m, 2H), 7,14–7,3 (m, 2H), 7,11 (s, 1H), 6, 89 (d, J = 9 Hz, 1H), 4,63 (m, 1H, OH), 3,40 (m, 2H), 3,18 (m, 2H).
3.3 Verbindung C3: R¹ = CON(CH₂CH₂OH)₂, R² = F, R³ = H, R⁴ = H
N,N-bis-(2-Hydroxyethyl)-5-(2-fluorophenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carboxamid
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,10 (s, 1H, NH), 8,11 (s, 1H, NH), 7,59 (s, 1H), 7,4–7,52 (m, 2H), 7,15–7,3 (m, 3H), 6,80 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,65 (m, 2H, OH), 3,30 (m, 8H).
B. Reduktion von Nitro zu Amino: R¹ = NO₂ zu R¹ = NH₂
3.4 Verbindung C4: R¹ = NH₂, R² = Cl, R³= CH₃, R⁴ = H
3-Methyl-5-(2-chlorophenyl)-7-amino-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
Eine Lösung von 0,20 g (0,57 mmol) Pyrazol 7 (R1 = NO2, R2 = Cl, R3 = CH₃, R4 = H) in 8 ml Ethanol wurde bei Raumtemperatur unter einer Wasserstoffatmosphäre mit Raney-Nickel (0,5 ml einer 50 %-igen Aufschlämmung in Wasser, gewaschen mit Ethanol unmittelbar vor der Anwendung) gerührt. Nach 4 Stunden wurde das Gemisch filtriert und unter verringertem Druck konzentriert, um 0,177 g Verbindung C4 (Aminoderivat 7, worin R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H) zu ergeben. Schmp. 260–263 °C.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,62 (s, 1H), 7,38–7,47 (m, 4H), 7,07 (s, 1H), 6,53 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,38 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 5,74 (d, J = 2 Hz, 1H), 4,52 (s, 2H), 2,06 (s, 3H).
Die folgenden Verbindungen wurden unter Verwendung des obigen Verfahrens B hergestellt:
3.5 Verbindung C5: R¹ = NH₂, R² = Cl, R³ = H, R⁴ = H
5-(2-Chlorphenyl)-7-amino-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR:(CD₃OD, 300 MHz) 7,35–7,55 (m, 5H), 6,72 (dd, J = 3,7 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 7 Hz, 1H), 6,13 (d, J = 3 Hz, 1H).
3.6 Verbindung C6: R¹ = NH₂, R² = Cl, R³ = i-Pr, R⁴ = H
3-(1-Methylethyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-amino-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,65 (s, 1H), 7,38–7,4 (m, 4H), 7,08 (s, 1H), 6,75 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,39 (dd, J = 2,8 Hz, 1H), 5,74 (d, J = 2 Hz, 1H), 2,98 (sept, J = 7 Hz, 1H), 1,18 (d, J = 7 Hz, 6H).
C. Derivatisierung von Aminoverbindungen: R¹ = NH₂ zu R¹ = NHR' (wie oben in Schema 4) definiert
3.7 Verbindung C7: R¹ = NHAc, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H
N-(3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazipin-7-yl)-acetamid
Eine Suspension von 0,323 g (1 mmol) Pyrazol 7 (R¹ = NH₂, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H) in 20 ml Dichlormethan wurde mit 0,112 g (1,1 mmol) Essigsäureanhydrid unter einer Inertatmosphäre bei Raumtemperatur für 2 Stunden umgesetzt. Das Gemisch wurde dann mit Ethylacetat verdünnt und aufeinanderfolgend gewaschen mit Wasser und Kochsalzlösung. Die wässrigen Schichten wurden mit Ethylacetat extrahiert und die vereinigten Extrakte über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Das Produkt wurde durch Silikagelchromatographie unter Elution mit Hexan-Ethylacetat (30/70) isoliert, um 0,175 g Verbindung C7 zu ergeben.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,71 (s, 1H), 9,56 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,38-7,57 (m, 5H), 6,67 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,57 (d, J = 2 Hz, 1H), 2,05 (s, 3H), 1,83 (s, 3H).
Die folgenden Verbindungen wurden analog Verbindung C7 gemäß obigem Verfahren C hergestellt:
3.8 Verbindung C8: R¹ = AcryloylNH, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H
N-(3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)-2-propenamid
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,71 (s, 1H), 9,78 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,52 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,35–7,50 (m, 4H), 6,71 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,23 (dd, J = 10, 18 Hz, 1H), 6,08 (dd, J = 2,18 Hz, 1H), 5,60 (dd, J = 2,10 Hz, 1H), 2,05 (s, 3H).
3.9 Verbindung C9: R¹ = CH₃SO₂NH, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H
N-(3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)-methansulfonamid
Ein Gemisch von 0,323 g (1 mmol) Pyrazol 7 (R¹ = NH2, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴ = H), 0,122 g (1 mmol) 4-Dimethylaminopyridin und 5 ml Tetrahydrofuran wurde unter einer Inertatmosphäre bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt. Das Gemisch wurde mit Ethylacetat verdünnt und aufeinanderfolgend gewaschen mit Wasser und Salzlösung, unter Reextraktion der wässrigen Phasen mit Ethylacetat. Die kombinierten Ethylacetatextrakte wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Das Produkt wurde durch Silikagelchromatographie isoliert, unter Elution mit Hexan-Ethylacetat (10/90), um 0,244 g Verbindung C9 (Pyrazol 7, worin R¹ = CH₃SO₂NH, R² = Cl, R³ = CH₃, R⁴= H) (Umkristallisation aus Ethylacetat) mit
Schmp. 196–198 °C zu ergeben.
¹H-NMR:(DMSO-d6, 300 MHz) 11,74 (s, 1H), 9,12 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,36-7,46 (m, 4H), 6,94 (dd, J = 2, 8 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,31 (d, J = 2 Hz, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).
D. Aminolyse von R³ = CO₂Et zu R³ = CONRR'
3.10 Verbindung C10: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CONH₂, R⁴ = H
5-(2-Chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-3-carboxamid
0,15 g (0,36 mmol) Pyrazol 7 (R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CO₂Et, R⁴ = H) wurden mit einer Lösung von Ammoniak (15 ml) in Ethanol (50 ml) bei Raumtemperatur über 48 Stunden gerührt. Flüchtige Bestandteile wurden unter verringertem Druck entfernt und das Produkt durch Silikagelchromatographie gereinigt. Elution mit Ethylacetat-Isopropanol (95/5) ergab 0,074 g Verbindung C10 (Pyrazol 7', worin R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CONH₂, R⁴ = H) als ein Feststoff mit Schmp. > 340 °C (Umkristallisation aus Ethylacetat).
¹H-NMR: (DMSO-d6, 400 MHz) 12,95 (br s, 1H), 9,23 (br s, 1H), 7,92 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,81 (s, 1 H), 7,45–7,61 (m, 4H), 7,21 (s, 1 H), 7,08 (s, 1H), 6,75 (d, J = 8 Hz, 1H).
Die folgenden Verbindungen wurden analog Verbindung C10 unter Verwendung des obigen Verfahrens D hergestellt:
3.11 Verbindung C11: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CONMe₂, R⁴ = H
N,N-Dimethyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4jbenzodiazepin-3-carboxamid
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,65 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 7,91 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,41-7,55 (m, 4H), 7,08 (s, 1H), 6,75 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,01 (s, 3H), 2,88 (s, 3H).
3.12 Verbindung C12: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CONHNH₂, R⁴ = H
N-Amino-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-3-carboxamid
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 13,02 (s, 1H), 9,19 (s, 1H), 8,58 (t, J = 5 Hz, 1H), 7,91 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,41–7,62 (m, 4H), 7.09 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 9 Hz, 1H), 4,54 (d, J = 5 Hz, 2H).
E. Reduktion von R³ = CO₂Et zu R³ = CHO und R³ = CH₂OH
3.13 Verbindung C13: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CHO, R⁴ = H; und Verbindung C14 R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₂OH, R⁴ = H
Ein Gemisch von 0,48 g (1,17 mmol) Pyrazol 7 (R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CO₂Et, R⁴ = H) und 30 ml Tetrahydrofuran wurde bei –15 °C unter einer Inertatmosphäre mit 1,52 ml einer 1 M Lösung von Lithiumaluminiumhydrid in Tetrahydrofuran für 30 Minuten behandelt. Das Gemisch wurde dann mit Ethylacetat verdünnt und aufeinanderfolgend mit wässriger Natriumkaliumsulfatlösung und Kochsalzlösung gewaschen, wobei die organischen Waschphasen mit Ethylacetat reextrahiert wurden. Die kombinierten Ethylacetatextrakte wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Reinigen durch Silikagelchromatographie unter Elution mit Hexan-Ethylacetat ergab 0,21 g Verbindung C13 (Pyrazol 7', worin R1 = NO2, R2 = Cl, R3 = CHO, R4 = H) als einen roten Feststoff und 0,11 g Verbindung C14 (Pyrazol 7', worin R¹ = NO₂, R² = Cl, R³= CH₂OH, R⁴ = H), ebenfalls als einen roten Feststoff.
Verbindung C13:
5-(2-Chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-3-carboxaldehyd
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 13,29 (s, 1H), 9,66 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 7,96 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,45–7,59 (m, 4H), 7,13 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 9 Hz, 1H).
Verbindung C14:
3-Hydroxymethyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,11 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 7,85 (dd, J = 2, 9 Hz, 1H), 7,42–7,50 (m, 4H), 7,06 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 9 Hz, 1H), 5,23 (t, J = 5 Hz, 1H), 4,27 (d, J = 5 Hz, 2H).
F. Reduktive Aminierung eines Aldehyds: R³ = CHO zu R³ = CH₂NR²
3.14 Verbindung C15: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₂NMe₂, R⁴ = H
3-(N,N-Dimethylaminomethyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
Eine Suspension von 0,142 g (0,39 mmol) Pyrazol 7 (R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CHO, R⁴ = H), 0,0631 g (0,78 mmol) Dimethylaminhydrochlorid, 0,11 ml (0,78 mmol) Triethylamin, 0,165 g (1 mmol) Natriumtriacetoxyborhydrid, 0,2 g eines 4 Å-Molekularsiebes und 20 ml Dichlormethan wurden unter einer Inertatmosphäre für 3 Stunden gerührt. Das Gemisch wurde filtriert, mit Ethylacetat verdünnt und aufeinanderfolgend mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, wobei Reextraktion der wässrigen Phasen mit Ethylacetat erfolgte. Die kombinierten Ethylacetatextrakte wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Reinigung durch reverse Phase- Silikagelchromatographie (Gradientenelution mit Wasser-Acetonitril-Trifluoressigsäure) ergab 0,147 g Verbindung C15 (Pyrazol 7', worin R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₂NMe₂, R⁴ = H) als das Trifluoracetatsalz.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 12,54 (s, 1H), 9,92 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 7,91 (dd, J = 2, 8 Hz, 1H), 7,45–7,55 (m, 4H), 7,10 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 8 Hz, 1H), 4,08 (s, 2H), 2,75 (s, 6H).
G. Alkylierung von Alkoholen: R³ = CH₂OH zu R³ = CH₂OCH₃
3.15 Verbindung C16: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₂OCH₃, R⁴ = H
3-Methoxymethyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
Ein Gemisch von 0,075 g (0,2 mmol) Pyrazol 7 (R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₂OH, R⁴ = H) 0,2 g Silikagel und 20 ml Tetrahydrofuran wurde mit einer Lösung von Diazomethan in Ether (50 ml, ca. 9,2 mmol) gerührt. Nach 2 Stunden wurde das Gemisch filtriert, unter verringertem Druck konzentriert. Das Produkt wurde durch Chromatographie auf Silikagel gereinigt, wobei mit Hexan-Ethylacetat eluiert wurde, um Verbindung C16 (Pyrazol 7', worin R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CH₂OCH₃, R⁴ = H) als einen roten Feststoff zu erhalten.
¹H-NMR (DMSO-d6, 300 MHz) 12,27 (s, 1H), 9,11 (s, 1 H), 7,86 (dd, J = 2, 9 Hz, 1H), 7,43–7,50 (m, 4H), 7,06 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 9 Hz, 1H), 4,20 (s, 2H), 3,25 (s, 3H).
H. Methylenierung von Aldehyd: R³ = CHO zu R³ = CHCH₂
3.16 Verbindung C17: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CHCH₂, R⁴ = H
3-Ethenyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin
Zu einer Lösung von Methylentriphenylphosphoran, hergestellt durch Reaktion von 0,109 g (0,31 mmol) Methyltriphenylphosphoniumbromid in 5 ml Tetrahydrofuran und 0,29 ml einer 1 M Lösung Kaliumtert.-butoxid in Tetrahydrofuran wurden bei –78 °C unter einer Ineratmosphäre 0,080 g (0,22 mmol) Pyrazol 7 (R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CHO, R⁴ = H) gegeben. Das Gemisch wurde auf Rückfluss erwärmt und über Nacht gerührt, wonach das Gemisch auf Raumtemperatur gekühlt, mit Ethylacetat verdünnt und aufeinanderfolgend mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen wurde. Der Ethylacetatextrakt wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Reinigung durch Silikagelchromatographie, unter Elution mit Hexan-Ethylacetat (70/30) ergab 0,043 g Verbindung C17 (Pyrazol 7', worin R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CHCH₂, R⁴ = H) als einen roten Feststoff.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz)12,33 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 7,88 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,40–7,50 (m, 4H), 7,08 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,40 (dd, J = 12, 18 Hz, 1H), 5,85 (d, J = 18 Hz, 1H), 5,36 (d, J = 12 Hz, 1H).
I. Dehydratisierung von Amid: R³ = CONH₂ zu R³ = CN
3.16 Verbindung C18: R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CN, R⁴ = H
5-(2-Chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-3-carbonitril
Ein Gemisch von 0,47 g (1,23 mmol) Pyrazol 7 (R² = NO₂, R² = Cl, R³ = CONH₂, R⁴ = H), 0,34 g (2,46 mmol) Kaliumcarbonat, 0,94 g (6,15 mmol) Phosphoroxychlorid und 20 ml Acetonitril wurde auf Rückfluss für 4 Stunden unter einer Inertatmosphäre erhitzt. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur gekühlt, mit Ethylacetat verdünnt und aufeinanderfolgend mit gesättigter wässriger Natriumbicarbonatlösung, Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, wobei die wässrigen Phasen mit Ethylacetat extrahiert wurden. Die kombinierten Ethylacetatextrakte wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Der Rückstand wurde auf Silikagel unter Elution mit Hexan-Ethylacetat eluiert (70/30), um 0,24 g Verbindung C18 (Pyrazol 7', worin R¹ = NO₂, R² = Cl, R³ = CN, R⁴ = H) als einen orange-farbenen Feststoff (Umkristallisation aus Dichlormethan) zu erhalten. Schmp. = 193–196 °C.
IR (KBr) 2240 cm^–1. ¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 9,36 (s, 1H), 7,96 (dd, J = 2, 9 Hz, 1H), 7,48–7,58 (m, 4H), 7,11 (d, J = 2 Hz, 1 H), 6,77 (d, J = 9 Hz, 1H).
J. Nitrilhydrolyse R¹ = CN zu R³ = CONH₂
3.18 Verbindung C19: R¹ = CONH₂, R² = F, R³ = CH₃, R⁴ = H
3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carboxamid
Zu einer Lösung von 0,5 g (1,6 mmol) Pyrazol 7 (R¹ = CN, R² = F, R³ = CH₃, R4 = H) in 79 ml Dimethylsulfoxid wurden 47 ml eiskaltes Wasserstoffperoxid (30 %-ige wässrige Lösung) und 24 ml 1 M Natriumhydroxid gegeben. Nachdem die Reaktion abgeschlossen war, wurde das Gemisch mit Ethylacetat extrahiert und die Extrakte aufeinanderfolgend mit Wasser, Kochsalzlösung gewaschen und dann über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Gemisch wurde filtriert und unter verringertem Druck konzentriert. Reinigung durch Silikagelchromatographie (Elution mit Ethylacetat/Methanol) (95:5)) ergab 0,5 g Verbindung C19 (Pyrazol 7, worin R¹ = CONH₂, R² = F, R³ = CH₃, R⁴ = H) als gelben Feststoff. Schmp. 323–324 °C.
¹H-NMR: (DMSO-d6, 300 MHz) 11,79 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,58 (dd, J = 2,9 Hz, 1H), 7,38–7,52 (m, 2H), 7,02–7,30 (m, 4H), 6,73 (d, J = 9 Hz, 1H), 2,05 (s, 3H).
Zusätzliche Verbindungen, die nicht im Speziellen in den Beispielen 1 bis 3 oben aufgeführt sind, wurden unter Verwendung der oben beschriebenen Verfahren hergestellt. Diese Verbindungen, die als "D" bezeichnet sind, sind in den nachstehenden Tabellen I–IV enthalten.
Beispiel 4: Antiproliferative Wirkung
Die antiproliferative Wirkung bzw. Antiproliferationswirkung der Verbindungen der Erfindung wird unten gezeigt. Diese Wirkungen zeigen, dass die Verbindungen der vorliegenden Erfindung geeignet sind bei der Behandlung von Krebs, im Besonderen festen Tumoren, wie etwa Brust- und Darmtumoren.
CDK2 FlashPlate Assay
Zum Bestimmen der Inhibierung der CDK2-Aktivität wurde gereinigtes rekombinantes Retinoblastom (Rb)-Protein auf FlashPlatten (FlashPlates) mit 96 Vertiefungen (New England Nuclear, Boston, MA) beschichtet. Rb ist ein natürliches Substrat zur Phosphorylierung durch CDK2 (Herwig und Strauss Eur. J. Biochem., Vol. 246 (1997) S. 581–601 und darin zitierte Literaturstellen). Rekombinante aktive humane Cyclin E/CDK2-Komplexe wurden teilweise gereinigt aus Extrakten von Insektenzellen. Das aktive Cyclin E/CDK2 wurde zu den Rb-beschichteten FlashPlates zusammen mit ³³P-ATP und Verdünnungen von Testverbindungen gegeben. Die Platten wurden 25 Minuten bei Raumtemperatur unter Schütteln inkubiert, dann gewaschen und in dem Topcount-Szintillationszähler (Packard Instrument Co., Downers Grove, IL) gezählt. Verdünnungen der Testverbindungen wurden mehrfach in jedem Assay getestet. Die prozentuale Inhibierung von Rb-Phosphorylierung, welche ein Maßstab der Inhibierung der CDK2-Aktivität ist, wurde gemäß der folgenden Formel bestimmt:
worin "Testverbindung" sich auf die mittleren Zählungen pro Minute der Testduplikate bezieht, "nicht spezifisch" die mittleren Zählungen pro Minute betrifft wenn kein Cyclin E/CDK2 zugegeben wurde, und "total" die mittleren Zählungen pro Minute betrifft, wenn keine Verbindung zugegeben wurde.
Die Ergebnisse der vorstehenden in vitro-Versuche sind in den Tabellen IA bis 1C unten angegeben.
TABELLE IA Inhibierung von Cdk2 - IC₅₀- Bereich 0,01–0,99 µM
Im Rest der Tabellen sind die Positionen der substituierten R¹, R², R³ und R⁴ wie in Tabelle IA oben angegeben.
TABELLE IB Inhibierung von Cdk2 - IC₅₀-Bereich 1–9,99 µM
TABELLE IC Inhibierung von Cdk2 – IC₅₀-Bereich 10–30 µM
Assays auf Zellbasis
Die Östrogen-Rezeptor-negativen Epithelialbrustkarzinomlinie (MDA-MB-435) wurde von der American Type Cell Cultur Collection (ATCC; Rockwell, MD) bezogen und wurde in dem gemäß ATCC erforderlichen Medium gezüchtet. Für die Analyse der Wirkung der Testverbindungen auf das Wachstum dieser Zellen wurden die Zellen bei 2000 Zellen pro Vertiefung in einer Gewebekulturplatte mit 96 Vertiefungen plattiert und wurden über Nacht bei 37 °C mit 5 % CO₂ inkubiert. Am nächsten Tag wurden die Testverbindungen in 100 % Dimethylsulfoxid (DMSO) gelöst, um 10 mM Stammlösung zu erhalten. Jede Verbindung wurde mit sterilem Medium auf 1 mM in einer ausreichenden Menge verdünnt, um eine Endkonzentration von 120 µm zu ergeben. Die Verbindungen wurden dann reihenverdünnt in einem Medium mit 1,2 % DMSO. Ein Viertel des Endvolumens der verdünnten Verbindungen wurde in Platten mit 96 Vertiefungen übergeführt.
Testverbindungen wurden doppelt untersucht. DMSO wurde zu einer Reihe von "Kontrollzellen" gegeben, sodass die Endkonzentration von DMSO in jeder Vertiefung 0,3 % war. Vertiefungen, in welche keine Zellen gegeben wurden, dienten als "Blindwert". Vertiefungen, in welche kein Inhibitor gegeben wurde, dienten als "Inhibitor-freie Kontrolle". Die Platten wurden in den Inkubator zurückgegeben und wurden 5 Tage nach Zugabe der Testverbindung wie unten beschrieben, analysiert.
3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-Tetrazoliumbromid (Thiazolyl Blau; MTT) wurde in jede Vertiefung gegeben, um eine Endkonzentration von 1 mg/ml zu ergeben. Die Platten wurden dann bei 37 °C für 3 Stunden inkubiert. Die Platten wurden bei 1000 UpM für 5 Minuten vor dem Absaugen des MTT-enthaltenden Mediums zentrifugiert. Das MTT-enthaltende Medium wurde dann entfernt und 100 µl 100 %-iges Ethanol wurde in jede Vertiefung gegeben, um den resultierenden Formazan-Metaboliten zu lösen. Um vollständige Lösung sicherzustellen, wurden die Platten für 15 Minuten bei Raumtemperatur geschüttelt. Absorptionen wurden in einem Mikrotiterplattenlesegerät (Molecular Dynamics) bei einer Wellenlänge von 570 nm mit einer 650 nm-Referenz ausgelesen. Die prozentuale Inhibierung wurde berechnet durch Abziehen der Absorption der Blindwertvertiefungen (keine Zelle) von allen Vertiefungen, dann Subtrahieren der Division der mittleren Absorption von jedem doppelten Test durch das Mittel der Kontrolle von 1.00. Inhibierungskonzentrationen (IC₅₀) wurden aus der linearen Regression einer Auftragung des Konzentrations-Logarithmus gegen die prozentuale Inhibierung bestimmt.
Die Ergebnisse des vorstehenden auf MDA-MB-435-Zellen basierenden Assays sind in den Tabellen IIA–IIC unten angegeben.
TABELLE IIA Assay der Antiproliferationsaktivität von MDA-MB435 (Brust) – IC₅₀-Bereich 0,01–1 µM
TABELLE IIB Assay der Antiproliferationsaktivität von MDA-MB435 (Brust) – IC₅₀-Bereich 1,1–9,99 µM
TABELLE IIC Assay der Antiproliferationsaktivität von MDA-MB435 (Brust) – IC₅₀-Bereich 10–30 µM
Die Darm-Adenokarzinomlinie SW480 und die Darmkarzinomlinie HCT-116 wurden ebenfalls von der ATCC erhalten und wurden gemäß dem gleichen Protokoll, das oben für den auf MDA-MB-435-Zellen basierenden Assay angegeben ist, unter den folgenden Modifikationen durchgeführt. Die Zelllinie SW480 wurde mit 1000 Zellen pro Vertiefung plattiert und 6 Tage nach Zugabe der Testverbindung analysiert. Die Zelllinie HCT-116 wurde mit 1000 Zellen pro Vertiefung plattiert und 4 Tage nach Zugabe der Testverbindung analysiert.
Die Ergebnisse der vorstehenden auf SW480 (Darm) und HCT-116 (Darm) basierenden Assays sind in den Tabellen IIIA–IIIC bzw. IVA–IVC angegeben.
TABELLE IIIA Assay der antiproliferativen Aktivität von SW480 (Darm)- IC₅₀-Bereich 0,01-1 µM
TABELLE IIIB Assay der Antiprolieferationsaktivität von SW480 (Darm)- IC₅₀-Bereich 1,1-99,9 µM
TABELLE IIIC Assay der Antiproleferationsaktivität von SW480 (Darm)- IC₅₀-Bereich 10–30 µM
TABELLE IVA Assay der Antiprolieferationsaktivität von HCT 116 (Darm)- IC₅₀-Bereich 0,01–1µM
TABELLE IVB Assay der Antiprolieferationsaktivität von HCT 116 (Darm)- IC₅₀-Bereich 1,1-99,9 µM
TABELLE IVC Assay der Antiprolieferationsaktivität von HCT 116 (Darm)- IC₅₀-Bereich 10-30 µm
Beispiel 5: Tablettenformulierung
Herstellungsverfahren:

1. Mischen der Position 1, 2 und 3 in einem geeigneten Mischer für 15 Minuten.
2. Granulieren des Pulvergemisches aus Schritt 1 mit 20 % Povidone K30-Lösung (Position 4).
3. Trocknen des Granulats aus Schritt 2 über 50 °C.
4. Führen des Granulats aus Schritt 3 durch eine geeignete Mahlausstattung.
5. Zugeben der Position 5 zu dem gemahlenen Granulierungsschritt 4 und Mischen für 3 Minuten.
6. Komprimieren des Granulats aus Schritt 5 auf einer geeigneten Presse.

Beispiel 6: Kapselformulierung
Herstellungsverfahren:

1. Mischen der Positionen 1, 2 und 3 in einem geeigneten Mischer für 15 Minuten.
2. Zugeben der Positionen 4 & 5 und Mischen für 3 Minuten.
3. Füllen in eine geeignete Kapsel.

Beispiel 7: Injektionslösung/Emulsionspräparat
Herstellungsverfahren:

1. Lösen von Position 1 in Position 2.
2. Zugeben der Positionen 3, 4 und 5 zu Position 6 und Mischen bis zur Dispersion, dann Homogenisieren.
3. Zugeben der Lösung aus Schritt 1 zu dem Gemisch aus Schritt 2 und Homogenisieren bis die Dispersion durchscheinend ist.
4. Sterilfiltration durch einen 0,2 µm Filter und Füllen in Gläschen.

Beispiel 8: Injektionslösung/Emulsionsherstellung
Herstellungsverfahren:

1. Lösen von Position 1 in Position 2.
2. Zugeben der Positionen 3, 4 und 5 zu Position 6 und Mischen bis zur Dispersion, dann Homogenisieren.
3. Zugeben der Lösung aus Schritt 1 zu dem Gemisch aus Schritt 2 und Homogenisieren bis die Dispersion durchscheinend ist.
4. Sterilfiltration durch ein 0,2 µm Filter und Füllen in Gläschen.

Während die Erfindung unter Bezugnahme auf spezifische und bevorzugte Ausführungsformen veranschaulicht worden ist, wird der Fachmann in der Technik erkennen, dass Variationen und Modifikationen durch Routineversuche und die Praxis der Erfindung durchgeführt werden können.

Claims

Verbindung mit der Formel:
worin R¹ Wasserstoff, -NO₂, -CN, -Halogen, -OR⁵, -R⁶OR⁷, -COOR⁷, -CONR⁸R⁹, -NR¹⁰R¹¹, -NHCOR¹², -NHSO₂R¹ ³ oder geradkettiges C_1-6-Alkyl, das optional durch -Hydroxy und/oder Halogen substituiert ist, ist; R² und R⁴ jeweils unabhängig Wasserstoff, -Halogen, -NO₂, -CF₃ oder geradkettiges C_1-6-Alkyl sind; R³ Wasserstoff, C_3-8-Cycloalkyl, eine aromatische Gruppe mit 5–10 Atomen und bestehend aus 1 oder 2 Ringen, eine 3- bis 10-gliedrige nicht-aromatische, teilweise oder vollständig gesättigte Kohlenwasserstoffgruppe, die einen oder zwei Ringe und mindestens ein Heteroatom enthält, eine aromatische Gruppe mit 5 bis 10 Atomen, einem oder zwei Ringen und einem oder mehreren Heteroatmen; -COOR⁷, -CN, -Alkenyl, -CONR⁸R⁹, -Alkinyl oder C_1-6-Alkyl, das optional durch Hydroxy, -OR⁹, F und/oder eine aromatische Gruppe mit 5 bis 10 Atomen und bestehend aus 1 oder 2 Ringen substituiert ist, ist; R⁵ C_1-6-Alkyl ist, das optional mit Halogen substituiert ist; R⁶ C_1-6-Alkyl ist; R⁷ Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl ist; R⁸ und R⁹ jeweils unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl sind, welches optional substituiert ist durch Hydroxy und/oder -NH₂; wobei R⁸ und R⁹ alternativ einen 5- oder 6-gliedrigen Heterocyclus bilden können, der optional durch Hydroxy, -NH₂ und/oder C_1-6-Alkyl substituiert ist; R¹⁰, R¹¹ und R¹ ² jeweils unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl sind; R¹³ C_1-6-Alkyl ist, das optional durch Halogen und/oder NR¹ ⁴R¹⁵ substituiert ist; und R¹ ⁴ und R¹⁵ jeweils unabhängig Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl sind, optional substituiert durch Halogen, oder alternativ ist NR¹ ⁴R¹ ⁵ eine 3- bis 10-gliedrige nichtaromatische, teilweise oder vollständig gesättigte Kohlenwasserstoffgruppe, die einen oder zwei Ringe und mindestens ein Heteroatom enthält; und die pharmazeutisch verträglichen Salze der vorhergehenden Verbindungen.
Verbindung nach Anspruch 1, worin R¹ Wasserstoff, NO₂, CN, CONH₂, Halogen oder C_1-6-Alkyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, worin R¹ NO₂, CN oder CONH₂ ist.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin R² an der 2'-Position ist und Wasserstoff oder Halogen ist.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin R³ C_1-6-Alkyl, Hydroxy-C_1-6-alkyl, C_3-8-Cycloalkyl, eine 3- bis 10-gliedrige, nichtaromatische, teilweise oder vollständig gesättigte Kohlenwasserstoffgruppe ist, die einen oder zwei Ringe und mindestens ein Heteroatom enthält, oder eine aromatische Gruppe mit 5 bis 10 Atomen ist, mit einem oder zwei Ringen und einem oder mehreren Heteroatomen.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin R³ Methyl, Ethyl oder Hydroxymethyl ist.
Die Verbindung 3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitropyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin.
Die Verbindung 3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carbonitril.
Die Verbindung 3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carboxamid.
Die Verbindung 3-Hydroxymethyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carbonitril.
Verbindung mit der Formel I nach Anspruch 1, welche 5-(2-Chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Chlorphenyl)-7-amino-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-Phenyl-7-chlor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Fluorphenyl)-7-chlor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Chlorphenyl)-7-chlor- pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2,4-Dichlorphenyl)-7-chlor-yrazolo(3,4][1,4]benzodiazepin, 5-Phenyl-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Fluorphenyl)-7-fluor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Chlorphenyl)-7-methoxy-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Fluorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-Phenyl-7-methansulfonyl-pyrazolo(3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Fluorphenyl)-7-cyano-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-Phenyl-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(3-nitrophenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Trifluormethyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-Phenyl-7-carbomethoxy-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, (5-Phenyl-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)carbonsäurenatriumsalz, 5-(2-Fluorphenyl)-7-iod-pyrazolo(3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Fluorphenyl)-7-carboethoxy-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, N-(2-Hydroxyethyl)-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4](1,4]benzodiazepin-7-carboxamid, 5-(2-Fluorphenyl)-7-morpholinylcarbonyl-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, N,N-bis-(2-Hydroxyethyl)-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carboxamid, (5-(2-Fluorphenyl)pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)carbonsäure, 5-(2-Fluorphenyl)pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carboxamid oder 5-(2-Chlorphenyl)pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin ist.
Verbindung mit der Formel I nach Anspruch 1, welche 3-Ethyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Phenylethyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4](1,4]benzodiazepin, 3-(1-Methylethyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(1-Methylethyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-amino-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(Phenylmethyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo(3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-7-carboethoxy-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Methylpropyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Trifluormethyl-5-(2- chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Hydroxymethyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, N-(2-Hydroxyethyl)-3-methyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carboxamid, 3-(N,N-Dimethylaminomethyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(1-Methylpropyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methoxymethyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Ethenyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-7-methoxy-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-7-amino-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-phenyl-7-chlor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-7-chlor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, N-(3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)acetamid, N-(3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)methansulfonamid, N-(3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)-2-propenamid, 3-Methyl-5-phenyl-7-fluor- pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-phenyl-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-7-iod-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-7-morpholinylcarbonyl-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-phenyl-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-7-chlor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-trifluormethylphenyl)-7-nitropyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, N'-(3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)-4-N,N-dimethylaminsulfonamid, N'-(3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)-4-N-chlormethylaminsulfonamid, N'-(3-Methyl-5-(2-chlorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-yl)-4-morpholinsulfonamid, N-[2-(4-Morphlinyl)ethyl]-3-methyl-5-(2-fluorphenyl)-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-7-carboxamid, 3-Methyl-5-phenyl-7-iod-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-phenyl-7-brom-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Methyl-5-(2-fluorphenyl)-7-fluor-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Cyclopropyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin oder 3-Propyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin ist.
Verbindung mit der Formel I nach Anspruch 1, welche 3-Carboethoxy-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 5-(2-Chlorphenyl)-7-nitropyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-3-carboxamid, N,N-Dimethyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-3-carboxamid, N-Amino-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-3-carboxamid, 5-(2-Chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-3-carboxaldehyd oder 5-(2-Chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin-3-carbonitril ist.
Verbindung mit der Formel I nach Anspruch 1, welche 3-(4-Methylphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(4-Dimethylaminophenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Cyanophenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-Phenyl-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Methylphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Nitrophenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Trifluormethylphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Trifluormethylphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(1-Naphthyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Methoxyphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(4-(Methylthio)phenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(4-Trifluormethoxyphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(4-Hydroxy-2-methoxyphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Hydroxyphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-((1,1'-Biphenyl)-4-yl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Naphthyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Nitrophenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Phenoxyphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Cyanophenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Ethoxyphenyl)-5-(2- chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Methylphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin oder 3-(2-Fluorphenyl)-5-phenyl-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin ist.
Verbindung mit der Formel I nach Anspruch 1, welche 3-(4-Methylpyrazol-5-yl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(1-Thiazolyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(1,3,4-Oxadiazol-2-yl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(4-Imidazolyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Pyrazolyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Pyrazolyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Thienyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Furanyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Methylthien-2-yl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(Indol-2-yl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(1-Methyl-1H-pyrrol-2-yl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Pyridinyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(4-Pyridinyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(4-(1-Pyrrolyl)phenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Pyrrolyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(4-Isochinolyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Benzofuranyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Thienyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(5-Methylthien-2-yl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2-Imidazolyl)-5-phenyl-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(3-Pyridinyl)-5-phenyl-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(1,3-Benzodioxol-5-yl)-5-phenyl-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin-6-yl)-5-phenyl-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin, 3-(2,3-Methylendioxyphenyl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin oder 3-(5-Ethylfuran-2-yl)-5-(2-chlorphenyl)-7-nitro-pyrazolo[3,4][1,4]benzodiazepin ist.
Verbindung mit den Formeln
oder
worin R¹ bis R⁴ wie in Anspruch 1 sind.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend als einen aktiven Bestandteil eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 15 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder ein pharmazeutisch verträgliches Hilfsmittel.
Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 15 zur Verwendung als Medikamente.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 15 bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung oder Bekämpfung von Brust-, Darm-, Lungen- und Prostata-Tumoren.