DE4017766A1

DE4017766A1 - Neue saponine

Info

Publication number: DE4017766A1
Application number: DE19904017766
Authority: DE
Inventors: Denise Frechet; Bruno Christ; Du Sorbier Bertrand Monegier; Hartmut Fischer; Marc Vuilhorgne
Original assignee: A Natterman und Cie GmbH
Current assignee: A Natterman und Cie GmbH
Priority date: 1990-06-01
Filing date: 1990-06-01
Publication date: 1991-12-05

Description

Die Erfindung betrifft neue Saponine aus den Wurzeln von Gypsophila paniculata und Gypsophila arrostii sowie Verfahren zu ihrer Gewinnung und ihre Verwendung in pharmazeutischen Präparaten.

Saponine sind im allgemeinen pflanzliche Glykoside, die in Wasser seifenartige, kolloidale Lösungen bilden. Sie werden nach der Art ihrer Aglykone (Sapogenine) in Triterpen- und Steroid-Saponine unterschieden.

Die Triterpen-Saponine sind in der Natur am weitesten verbreitet und können aus den verschiedensten Pflanzen gewonnen werden, zu denen auch die Gypsophila-Arten gehören. Aus Gypsophila paniculata und Gypsophila arrostii konnten jedoch bisher lediglich Gypsosid, ein triterpenoides Saponin, das Gypsogenin und neun Zuckereinheiten enthält, isoliert werden.

Überraschenderweise wurde nun bei der Extraktion der Wurzel von Gypsophila paniculata und Gypsophila arrostii und der anschließenden Bestimmung mittels verschiedener Analysenmethoden vier neue Triterpen- Saponine gefunden, die bisher in der Literatur nicht beschrieben wurden.

Durch Vergleich der mittels Massenspektrometrie , ¹H-NMR und ¹³C-NMR erhaltenen Spektren in Kombination mit den aus der Dünnschichtchromatographie und Hochleistungs flüssigkeitschromatographie (HPLC) erhaltenen Ergebnissen konnten für die neuen Verbindungen die in der Abb. 1 angegebenen Strukturen sichergestellt werden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können nach an sich bekannten Verfahren aus den Wurzeln von Gypsophila paniculata und Gypsophila arrostii erhalten werden, etwa durch Extraktion der getrockneten Wurzeln mit einem Alkohol/Wasser-Gemisch und der anschließenden Aufarbeitung des Extraktes durch Säulenchromatographie. Durch entsprechende Fraktionierung und einem geeigneten Laufmittel (Methanol) lassen sich Fraktionen sammeln, in denen die erfindungsgemäßen Verbindungen nachgewiesen werden können.

Die neuen Verbindungen können leicht zu pharmazeutischen Präparaten verarbeitet werden, indem eine wirksame Menge der Substanzen zusammen oder im Gemisch mit organischen oder anorganischen, festen oder flüssigen, pharmazeutisch verwendbaren Trägerstoffen, die sich enteral verabreichen lassen, gemischt werden. Die Substanzen können auch als Flüssigpräparat verabreicht werden.

So verwendet man Tabletten oder Gelatinekapseln, welche den Wirkstoff zusammen mit Verdünnungsmitteln, wie z. B. Lactose, Dextrose, Sucrose, Mannitol, Sorbitol, Cellulose und/oder Glycerin und Schmiermittel, z. B. Kieselerde, Talg, Stearinsäure oder Salze davon, wie Magnesium- und Calciumstearat und/oder Polyethylenglykol aufweisen. Tabletten enthalten ebenfalls Bindemittel, wie z. B. Magnesium, Aluminiumsilikat, Stärke wie Mais, Weizen, Reis, Gelatine, Methylcellulose, Carboxymethylcellulose und/oder Polyvinylpyrolidon, sowie weiterhin Brausemischungen, Absorptionsmittel, Farb- und Geschmacksstoffe sowie Süßmittel.

Die pharmazeutischen Präparate können in an sich bekannter Weise, etwa mittels konventioneller Misch-, Granulier-, Dragier-, Lösungs- oder Lyophilisierungs verfahren, hergestellt werden.

Beispiel 1

Ausgangsmaterial sind kommerziell erhältliche Seifenwurzeln der Arten Gypsophila paniculata und Gypsophila arrostii. Hiervon werden 100 g in getrockneter und gepulverter Form mit 200 ml Ethanol/Wasser (1 : 1) unter Rühren 24 Stunden extrahiert und anschließend das Pflanzenmaterial abfiltriet. Der Extrakt wird im Vakuum auf 20 ml eingeengt und mit 10 ml Wasser versetzt. 3-ml-Protionen des Extrakts werden an einer RP-18-Säule während 8 Stunden (linearer Gradient 30-100% Methanol) chromatographiert. 3,5 Stunden nach Start des Gradienten werden 20-ml-Fraktionen gesammelt und mittels HPLC (Nucleosil^R 100-C18, linearer Gradient in 25 Min. von 28% auf 35% Acetronil ansteigend) analysiert. Man erhält vier, den erfindungsgemäßen Verbindungen entsprechende Fraktionen. Das Methanol wird im Vakuum entfernt, die Glykoside in Wasser (mit 20% Acetonitril) gelöst und mittels semi-präparativer HPLC gereinigt. Die Reinheit der Proben wurde durch Dünnschichtchromatographie bestätigt. Hierfür wurde als Laufmittelsystem Chloroform/Methanol/Wasser/Essigsäure (64 : 50 : 10 : 2) verwendet.

Neben den Massenspektren und ¹H-NMR- und ¹³C-NMR- Aufnahmen wurden die Proben durch folgende Daten charakterisiert:

Verbindung A:
3-O-β-galactopyranosyl-(1→2)-[β-D- xylopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucuronopyranosyl quillajasäure 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)- [β-D-xylopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl- (1→2)-β-D-fucopyranosid.
Weißes, amorphes Pulver mit Schmp. 210-213°C.
R_f-Wert: 0,22. Beim Besprühen mit Vanillin- Schwefelsäure-Reagenz zeigt sich ein bräunlicher Fleck.

Verbindung B:
3-O-β-galactopyranosyl-(1→2)-[β-D- xylopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucuronopyranosyl quillajasäure 28-O-β-D-arabinopyranosyl-(1→4)- β-D-arabinopyranosyl-(1→3)-[β-D-xylopyranosyl- (1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D- fucopyranosid.
Weißes, amorphes Pulver mit Schmp. 213-215°C.
R_f-Wert: 0,18. Beim Besprühen mit Vanillin- Schwefelsäure-Reagenz zeigt sich ein bräunlicher Fleck.

Verbindung C:
3-O-β-glucopyranosyl-(1→2)-β-D- glucuronopyranosyl gypsogenin 28-O-β-D- glucopyranosyl-(1→3)-[β-D-xylopyranosyl- (1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D- fucopyranosid.
Weißes, amorphes Pulver mit Schmp. 207-211°C.
R_f-Wert: 0,32. Beim Besprühen mit Vanillin- Schwefelsäure-Reagenz zeigt sich ein grünlicher Fleck.

Verbindung D:
3-O-β-xylopyranosyl-(1→3)-[β-D- galoctopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucurono pyranosyl gypsogenin 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[β-D- xylopyranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl- (1→2)-β-D-fucopyranosid.
Weißes, amorphes Pulver mit Schmp. 207-211°C.
R_f-Wert: 0,28. Beim Besprühen mit Vanillin- Schwefelsäure-Reagenz zeigt sich ein grünlicher Fleck.

Claims

1. Neue Saponine aus den Wurzeln von Gypsophila paniculata und Gypsophila arrostii.

2. 3-O-β-galactopyranosyl-(1→2)-[β-D- xylopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucuronopyranosyl quillajasäure 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)- [β-D-xylopyranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl- (1→2)-β-D-fucopyranosid.

3. 3-O-β-D-galactopyranosyl-(1→2)-[β-D- xylopyranosyl-(1→3)]-β-D-glucuronopyranosyl quillajasäure 28-O-β-D-arabinopyranosyl-(1→4)- β-D-arabinopyranosyl-(1→3)-[β-D-xylopyranosyl- (1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D- fucopyranosid.

4. 3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-β-D- glucuronopyranosyl gypsogenin 28-O-β-D- glucopyranosyl-(1→3)-[β-D-xylopyranosyl- (1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D- fucopyranosid.

5. 3-O-β-D-xylopyranosyl-(1→3)-[β-D- galoctopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucuronopyranosyl gypsogenin 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[β-D- xylopyranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl- (1→2)-β-D-fucopyranosid.

6. Verfahren zur Herstellung der Saponine der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß man die erfindungsgemäßen Verbindungen in an sich bekannter Weise aus den Wurzeln von Gypsophila paniculata und Gypsophila arrostii extrahiert und durch Chromatographie an Umkehrphasen einzelne Fraktionen erhält, die die Verbindungen der Ansprüche 2 bis 5 enthalten.

7. Arzneimittel, die die Verbindungen der Ansprüche 2 bis 5 neben den üblichen Hilfs- und Trägerstoffen enthalten.