DE2931481A1

DE2931481A1 - Antihypertensive 5-substituierte 2-pyrrolidincarbonsaeuren

Info

Publication number: DE2931481A1
Application number: DE19792931481
Authority: DE
Inventors: Takehisa Chiba; Tadashi Iso; Jun-Ichi Iwao; Eishin Kato; Yoichi Kawashima; Hiroshi Masuda; Masayuki Oya
Original assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1978-08-02
Filing date: 1979-08-02
Publication date: 1980-02-21
Also published as: IT7924811A0; FR2433515A1; US4264620A; JPS584711B2; IT1122379B; JPS5520751A; GB2027025B; SE430604B; GB2027025A; SE7906533L; CH641776A5

Description

SANTEN PHAEMACEUTICAL CO. LTD., Osaka / Japan

Ant!hypertensive 5-substituierte 2-Pyrrolidincarbonsäuren

Beschreibung

Me Erfindung betrifft Derivate von 5-substituierten 2-Pyrrolidincarbonsäuren und deren Salze, die als antihypertensive Mittel verwendbar sind. Diese Verbindungen werden durch die allgemeine Formel I

CO₂H

veranschaulicht, worin

R Phenyl oder Hydroxyphenyl ist;

R kann hierbei sein: Mercapto-Niedrigalkyl, Acylmercapto-Niedrigalkyl, HÖheralkyl, Höheralkenyl, Cycloalkyl, Aralkyl, Aralkenyl, Furyl, Thienyl, ImidazoIyI, Pyridyl, Naphthyl, Benzofuryl, Benzothienyl, Indolyl, substituiertes HÖheralkyl, substituiertes Höheralkenyl, substituiertes Cycloalkyl, substituiertes Aralkyl, substituiertes Aralkenyl, substituiertes Phenyl, substituiertes Puryl, substituiertes Thienyl, substituiertes Imidazolyl, substituiertes Pyridyl, substituiertes Naphthyl, substituiertes Benzofuryl, substituiertes Benzothienyl oder substituiertes Indolyl, wobei der Substituent bzw. die Substituenten Niedrigalkyl, Hydroxy-Niedrigalkyl, Hydroxy, Mercapto, Niedrigalkoxy, Niedrigalkylendioxy, Acyloxy, Acylmercapto, Halogen, Nitro, Amino, Niedrigalkylamino, Acylamino oder Carboxy mit Ausnahme von Hydroxyphenyl

sind;
ρ

R Wasserstoff oder Benzoyl bedeutet;

Q geradkettiges oder verzweigtes Alkylen mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen (z.B. -CH₂-, -CH(CH₅)-, -CH₂CH₂-, ist;

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"" 2 "™

in der Formel I "bedeutet

Niedrigalkyl ,-alkenyl oder-alkylen eine gesättigte oder ungesättigte gerade oder verzweigte Kette mit 1 "bis 6 Kohlenstoffatomen;

Höheralkyl oder-alkenyl "bedeutet eine gesättigte oder ungesättigte gerade oder verzweigte Kette mit 7 "bis 20 Kohlenstoffatomen;

Acyl bedeutet Acetyl, Pivaloyl, substituiertes oder unsubstituiertes Benzoyl, Benzyloxycarbonyl usw.; Aralkyl bedeutet Benzyl usw.;
das Gleiche soll für die nachstehenden Ausführungen gelten.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I sind Mercaptoacylaminosauren und S-substituierte Mercaptoacylaminosäuren. Mercaptoacylaminosäuren besitzen eine inhibierende Wirkung gegenüber Angiotensin-umwandeIndem Enzym und sind daher als antihypertensive Mittel verwendbar. S-substituierte Mercaptoacylaminosäuren setzen Mercaptoacylaminosäuren durch enzymatische und/oder chemische Spaltung bei ihrer Verabreichung an den Menschen oder an Tiere frei.

Die Verbindungen der Formel I können nach den folgenden Methoden hergestellt werden.

Man.setzt eine Säure der Formel II

CO₂H
NH

R¹

mit einem funktionellen Alkansäurederivat der Formel III

R³S-Q-CO₂H (III)

nach einem der bekannten Verfahren um, bei dem die Verbindung III durch Bildung eines gemischten Anhydrids, symmetrischen Anhydrids,

030008/076T

SäureChlorids, aktiven Esters usw. vor der Umsetzung mit der Säure II zur Bildung von Verbindungen der Formel I aktiviert wird. Die erhaltene Verbindung kann dann in die Verbindung der Formel I₁ worin R Wasserstoff bedeutet, durch Hydrolyse oder Reduktion (z.B. Säurebehandlung mit Chlorwasserstoffsäure, p-Toluolsulfonsäure usw.; Alkalibehandlung mit Natriumhydroxyd, Ammoniak usw.; katalytische Reduktion mit Palladium-Kohlenstoff usw.; Behandlung mit Alkalimetall in flüssigem Ammoniak) übergeführt werden.

Auf einem anderen Weg werden die Verbindungen der Formel I gebildet, indem man eine Säure der Foi^.el II mit einem funktioneilen Haloalkansäurederivat der Formel IV

X-Q-CO₂H (IV)

umsetzt, und indem man die erhaltene Halosäure der Formel V

\/ ^NCO-Q-X
R¹

(V)

mit Thiobenzoesäure oder Benzylmercaptan umsetzt. Die erhaltene Verbindung kann dann in die Verbindung der Formel I, in der

ρ
R Wasserstoff bedeutet, durch Hydrolyse oder Reduktion wie vorstehend beschrieben übergeführt werden.

In den Formeln III, IV und V bedeutet

3 3
Έτ Benzoyl; R kann Benzyl, Alkyl- oder Phenylcarbamoyl sein;

1 3
oder es können R und R unabhängig Benzoyl, Benzyl, Alkyl- oder Phenylcarbamoyl sein;

X ist Halogen (z.B. Brom oder Chlor).

Die nach den vorstehenden Verfahren synthetisierten Verbindungen der Formel I können herkömmliche allgemein als Arzneimittel verwendete Salze bilden, wie das Natriumsalz, Kaliumsalz, CaI- " ciumsalz, Aluminiumsalz, Ammoniumsalz, Diäthylaminsalz, Tri-

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äthanolaminsalz usw.

Die Verbindungen der Formel I "bilden aufgrund ihrer asymmetrischen Kohlenstoffatome Stereomere, die in den Bereich der Erfindung fallen. .

Die folgende-i Beispiele erläutern die Erfindung*

Beispiel 1

1-[(2S) -S-Benzoyl-3-mer capt o-2-methylpropano;yl ] -5-phenyl 2-pyrrolidincarbonsäure

Man löst 22,8 g 5-£henyl-2-pyrrolidincarbonsäurehydrochlorid und 41,7"ml Triäthylamin in 700 ml wasserfreiem Aceton. Zu dieser Lösung gibt man 24,3 g (2S)-S-Benzoyl-3-mercapto-2-methylpropanoylchlorid tropfenweise unter Rühren und unter Eiskühlung. Nach der Zugabe wird die Mischung unter Eiskühlung 1 Std. gerührt und eine weitere Std. bei Raumtemperatur gerührt. Zu der Mischung gibt man 5*7 ml Essigsäure und entfernt den Niederschlag durch Filtrieren. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und das gebildete öl wird in 500 ml Athylacetat gelöst. Die organische Schicht wird mit Wasser gewaschen und mit Natriumchloridlösung gesättigt, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt, um 53»8 g öl zu ergeben. Das öl wird durch Silicagelsäulenchromatographie gereinigt,um die Titelverbindung zu ergeben. Ausbeute JO,2 g (76 %), Χ*]ψ -4-5,6° (c = 1,0, Methanol). IR (CHCl₅," cm"¹) 1725, 1650, 1580, 910.

Beispiel 2

1-E(2S)-3-Mercapto-2-methylpropanoyl3-5-phenyl-2-pyrrolidin carbonsäure

Man. löst 20 g 1-[(2S)-S-Benzoyi-3-mercapto-2-methylpropanoyl]-5-phenyi-*2-pyrrolidincarbonsäure in 50 ml Methanol. Zu dieser Lösung gibt man .100 ml konzentrierten Ammoniak und rührt die Mischung 1,5 Stdn. bei Raumtemperatur. Man entfernt überschüssigen Ammoniak und überschüssiges Methanol im Vakuum und

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293U81

■ - 8 -

wäscht den Bückstand mit Äthylacetat. Die wäßrige Schient wird- . mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und mit Ithylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird mit gesättigter Hatriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt, um die Titelverbindung zu ergeben. Ausbeute 8,5 g (58$), F. = 138,0 - 14-2,5°C (Äthylacetat), CoÜj⁹ -29,4° (c = 1,0, Methanol). IE (Nujol, cm"¹, wenn nicht anders angegeben, nachfolgend verwendet) 2650, 174-0, 1600, 750, 705.

Beispiel 3

öl- und ß-1-(S~Benzoyl-3-mercaptopropanoyl)«-5-(2-hydro3cy phenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure

Man löst 12,2 g 5-(2-Hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäurehydrochlorid und 9»6 g Natriumcarbonat in 200 ml Wasser. Zu dieser Lösung gibt man tropfenweise unter Rühren und Eiskühlung 11,4- g S-Benzoyl-3-mercaptopropanoylchlorid. Nach der Zugabe wird die Mischung 1 Std. unter Eiskühlung und eine weitere Std. bei Raumtemperatur gerührt. Diese Reaktionslösung wird mit Äthylacetat gewaschen, mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt, um Kristalle zu ergeben (c<-Säure). Die Kristalle werden auf einem Filter gesammelt, Ausbeute 9»4- g (4-7 %). Das Eil trat wird im Vakuum eingeengt und durch Silicagelsäulenchromatographie unter Erzielung der ß-Säure gereinigt, Ausbeute 2,4· g (12 %).

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293U81

Cl-Säure

ß-Säure

IR

210-211⁰C

/(Äthylacetat-Methanol) 3200, 1742, 1722, 1655, 1615. 1595, 1450, 1236, 1204, 912

DSC:

0,28

1740, 1658, 1625, 1240, 1209, 915
(rein, cm"¹)

0,38

(a) Silicagel, Benzol-lthylacetat-Essigsäure

Beispiel 4-

οι- und ß-5-(2-Hydroxyphenyl)-1-(5-mercaptopro-panoyl)-2-

•pyrrolidincarbonsäure

i) Man löst 4,0 g C*.-1-(S-Benzoyl-3-mercaptopropanoyl)-5-(2-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure, erhalten in Beispiel 3. in 50 ml Methanol. Zu dieser Lösung gibt man 50 ml konzentrierten Ammoniak und rührt die Mischung 1,5 Stdn. bei Raumtemperatur. Man entfernt überschüssigen Ammoniak und überschüssiges Methanol im Vakuum und wäscht den Rückstand mit Ithylacetat. Die wäßrige Schicht wird mit konzentrierter Salzsäure angesäuert, um (χ-Säure zu ergeben, Ausbeute 2,5 g (85 %)

ii) Man löst 2,0 g ß-1-(S-Benzoyl-3-mercaptopropanoyl)-5-(2-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure, erhalten in Beispiel 3 in 20 ml Methanol. Zu dieser Lösung gibt man 20 ml konzentrierten Ammoniak und behandelt die Mischung in der gleichen Weise wie unter (i), um ß-Säure zu erhalten, Ausbeute 1,2 g (82%).

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ORIGINAL INSPECTED

-ίο- 293U81

α-Säure ß- Säure

P. 213-124°C 209-210⁰C

(Äthylacetat-Benzol) (Äthylacetat-Benzol)

IR 3160, 1720, 1618, 1598, 3180, 1718, 1620, 1600,

1450 1450 DSO: Rf-Wert ^(b)

0,38 0,38

(b) Silicagel, Äthylacetat-Äthanol-Essigsäure (40:1:1)

Beispiel 5

(X- und ß-1-(S-Benzoyl-3-mercaptopropanoyl)-5-^-hydroxyphenyl)- 2-pyrrolidincarbonsäure

Zu der Mischung von 12,2 g 5-(4—Hydroxyphenyl)-2-pyrrοlidincarbonsäurehydrochlorid, 9,6 g Natriumcarbonat, 250 ml Wasser und 100 ml Äther gibt man tropfenweise unter Rühren und unter Eiskühlung 11,4 g S-Benzoyl-3-mercaptopropanoylchlorid. Nach der Zugabe wird die Mischung 1 Std. unter Eiskühlung und eine weitere Std. bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wird mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt, um Kristalle zu ergeben (α-Säure). Die Kristalle werden auf einem Filter gesammelt, Ausbeute 6,2 g (31 %). Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und durch Silicagelsäulenchromatographie unter Erzielung von ß-Säure gereinigt, Ausbeute 3,6 g (18 %).

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KI III) I

α-Säure β-Säure

F. 164-166°C - ' . ■

(Äthylaeetat-Methanol) ■

IR 3170, 1714, 1654, 1611, 3340, 1750, 1653, 1207,

. 12Of, 908 914 (rein, cm"¹)

DSO: Rf-Wert ^(a)

0,22 0,32

(a) Die Bedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 3·

Beispiel 6

01- und ß-5-(4-Hydroxypnenyl)-i-(5-Biercaptopropanoyl)-2»

•pyrrolidincarbonsäure

i) Man löst 4,0 g a-1-(S-Benzo7l-3-mercaptopropanoyl)-5-(4-hydroxypnenyl)-2-p3rrrolidincarbonsäure, erhalten in Beispiel 5, in 50 ml Methanol. Zu dieser Lösung gibt man 50 ml konzentrierten Ammoniak zu und behandelt die Mischung in der gleionen Weise wie in Beispiel 2, um α-Säure zu erhalten, Ausbeute 2,2 g

ii)· Man löst 2,0 g ß-^/1-(S-Benzoyl-3-mercaptopropanoyl)-5-(4-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure, erhalten in Beispiel 5i in 20 ml Methanol. Zu dieser Lösung gibt man 20 ml konzentrierten Ammoniak zu und behandelt die Mischung in der gleichen Weise wie in Beispiel 2, um ß-Säure zu erhalten, Ausbeute 0,8 g (54%).

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293148t

α-Säure β-Säure

Ρ· 154~157°C - ·

(Äthylacetat-Benzol)

IR 330O₇ 1746, 1594, 1239, 3240, 1710, 1610, 1210 1188 (rein, cm"¹)

DSC: Rf-Wert ^(a)

0,21 0,19

(a) Die Bedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 3·

Beispiel 7

tX- und ß-1-[(2S)-S-Benzoyl-3-merca-pto-2-methylpropanoyl3-5-· (2-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure

Man löst 12,2 g 5-(2-Hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarl3onsäurehydrochlorid und 9,6 g Natriumcarbonat in 200 ml Wasser. Zu dieser Lösung gibt man tropfenweise unter Rühren und Eiskühlung 12,1 g (2S)-i3--Benzoyl-3-mercapto-2-methylpropanoylchlorid. Nach der Zugabe wird die Mischung 1 Std. unter Eiskühlung und eine weitere Std. bei Raumtemperatur gerührt. Diese Reaktionslösung wird mit Äthylacetat gewaschen, mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt, um Kristalle zu ergeben (0(-Säure). Die Kristalle werden auf einem Filter gesammelt, Ausbeute 9»2 g (44 %). Das FiI-trat wird im Vakuum eingeengt und durch Silicagelsäulenchromatographie unter Erzielung von ß-Säure gereinigt, Ausbeute 2,6 g (13 %).

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α-Säure

3-Säure

1*1

2 S

204-205⁰C (Ä'thylacetat-Benzol)

-16,5°

(C=I₁O, Methanol) 3310, 1713, 1668, 1621, 1598, 1446, 1209, 907

DSO: Rf-Wert

0,60

(b)

-41,6° (c=l,0, Methanol) 1739, 1655, 1620, 1600, 1450, 1208, 915 (rein, cm"¹)

0,68

(b) Die Bedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 4-,

Beispiel 8 K- und ß-3-(2-Hydroxyr)henyl)-1-C(2S)-5-mercapto--2-methyl-

propanoyl]-2-pyrrolidincarbonsäure

i) Man löst 4,1 g c^-1-[(2S)-S-Benzoyl-3-mercapto-2-methylpropanoyl3-5-(2-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure, erhalten in Beispiel 7» in $0 ml Methanol. Zu dieser Lösung gibt man. 50 ml konzentrierten Ammoniak und behandelt die Mischung in der gleichen Weise wie in Beispiel 4-, um die Ok-Säure zu erhalten, Ausbeute 2,8 g (90%).

ii) Man löst 2,1 g ß-1-C(2S)-S-Benzoyl-3-mercapto-2-methylpropanoyl]-5-(2-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure, erhalten in Beispiel 7» in 25 ml Methanol. Zu dieser Lösung gibt man 25 ml konzentrierten Ammoniak zu und behandelt die Mischung in der gleichen Weise wie in Beispiel 4, um die ß-Säure zu erhalten, Ausbeute 1,1 g (71 ⁰Jo).

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ORIGINAL INSPECTED

293H81

α-Säure ß-Säure

F 241-242°C 233-234°C

(Äthylacetat-Methanol) (Äthylacetat-Benzol)

[ο]" -22,0° -56,8°

(c=l_Y0, Methanol) (c=l,0, Methanol)

IR 3310, 1720, 1613, 1599, 3320, 1723, 1616, 1600,

1460 1462
DSC: Rf-Wert *^b)

0,54 0,55

(b) Die Bedingungen sind die gleichen wie in Beispiel 4.

Beispiel 9

ou-, ß-i-, ctp- und ß2-l-(S-Benzoyl-3-mercaptopropanoyl )-5-

(2-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure

Man setzt 35,8 g (_)-2-(2-Hydroxyphenyl)-5-pyrrolincarbonsäure mit 34,5 g (-)-l,2-Diphenyläthylamin um, um das Diastereomerer.-salz zu erhalten. Das Salz wird fraktioniert aus Äthanol umkristallisiert, um das (-)-2-(3-Hydroxyphenyl)-5-pyrrolincarbonsäure-(-)-l,2-diphenyläthylaminsalz zu erhalten. Ausbeute 20,0 g (57 %), F = 193 bis 194°C, [α]^⁶ -90,0° (c = 1,0, Methanol). Das in dem Filtrat verbliebene Salz wird fraktioniert aus Chloroform umkristallisiert, um das (+)-2-(2-Hydroxyphenyl)-5-pyrrolincarbonsäure-(-)-l,2-diphenyläthylaminsalz zu erhalten, Ausbeute 18,0 g (51 %), F = 138 bis 140°C, [a]^⁶-2O,3° (c = 1,2, Methanol).

Jedes Salz wird mit Natriumhydroxid behandelt, um Natrium-(-)-2-(2-hydroxyphenyl)-5-pyrrolincarboxylat, Ausbeute 10,6 g, F= 25O°C und darüber (Zers.), [a]^⁷ -249,5° (c =0,6, Wasser) und Natrium-( + )-2-(2-hydroxyphenyl.)-5-pyrrolincarboxylat, Ausbeute 7,9 g, F e 25O°C und darüber (Zers.), [a]^⁶ +249,4°

(c = 0,6, Wasser) zu ergeben.

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i) Man löst 6,82 g Natrium-(-)-2-(2-hydroxyphenyl)-5-pyrrolincarboxylat in 120 ml 0,5n-Salzsäure und hydriert mit 300 mg Platinoxid, um das (-)-5-(2-Hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincari)onsäure-hydrochlorid zu erhalten.

Man löst das ganze auf diese Weise erhaltene Produkt in einer Mischung voa 10,62 g Triäthylamin, 300 ml Aceton und 15 ml Wasser. Zu der Reaktionsmischung gibc man tropfenweise 6,9 g S-Benzoyl-S-mercaptopropanoylchlorid unter Rühren xmd unter Eiskühlung. Nach der Zugabe wird die Mischung 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt und mit Salzsäure angesäuert. Man entfernt das Aceton und extrahiert dann die Mischung mit Äthylacetat. Die organische Schicht wird mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und zu einem Öl eingedampft. Das Öl wird durch Säulenchromatographie getrennt und gereinigt, um α^-Säure zu ergeben, Ausbeute 5,91 g.

Eine weitere Fraktion wird mit Dicyclohexylamin umgesetzt, um das ß^-Säure-dicyclohexylaminsalz zu ergeben, Ausbeute 0,48 g.

cti-Säure ß^-Säure-dicyclohexylaminsals

P 89-92⁰C (Zers.) [σ]J⁵ +47,4°

(.c=l»Ö, Methanol) IR 3400, 1750, 1660, 1575,

1200, 1175, 905 DSC: Rf-Wert ^(a)

0,59 0,57

(a) Silicägel, Äthylacetat-Chloroform-Essigsäure (7:5:1), die nachfolgend angev;andt werden.

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ORlGiNAL INSPECTED

191-192⁰C	O
-11,2	5, Methanol)
(c=0,	1655, 1630, 1555,
3300,	1195, 910
1400,

il) Man behandelt 6,82 g Natrium-(+)-2-(2-hydroxyphenyl)-5-pyrro linear boxy 1 at in der gleichen Weise v/ie unter i), um iXp-Säure, Ausbeute 4,7 g, und ßp-Säure-dicyclohexylaminsalz, Ausbeute 0,15 g, zu ergeben.

Ct₂- Säure ßp-Säure-dicyclohexylaminsalz

P 91-93^CC (Zers.) . 192-193,5°C

Ia]*^s -49,8° (0=0.9, Methanol'» +11,6° (0=0,5, Methanol)

IR 3400, 1750, 1660, 1575, 3300, 1655, 1630, 1555,

1200, 1175, 905 1400, 1195, 910 DSC: Rf-Wert ^ia)

0,59 0,57

Beispiel 10

α,,- und a₂-5-(2-Hydroxyphenyl)-l-(3-mercaptopropanoyl)-

2-pyrrolidincarbonsäure

i) Man löst 1,0 g a^-l-CS-Benzoyl)-3-mercaptopropanoyl)-5-(2-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure in 10 ml konzentriertem Ammoniak. Die Mischung wird 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Man entfernt das Ammoniak und wäscht dann die Mischung mit Äthylacetat. Die wäßrige Schicht wird mit Salzsäure angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wird mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft, um α ..-Säure zu ergeben, Ausbeute 0,58 g.

ii) Man behandelt 1,0 g cXp-l-(S-Benzoyl-3-mercaptopropanoyl )-5-(2-hydroxyphenyl)-2-pyrrolidincarbonsäure in der gleichen Weise wie unter i), um oCp-Säure zu erhalten, Ausbeute 0,58 g.

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ORIGINAL INSPECTED

293H81

Oi-Säure

- Säure

F 197-198⁰C (Zers.) (Äthylacetat—Cyclohexan)

£«J*³ +34,7°

(c=0,5, Methanol)

IR 3360, 1720, 1685, 1605, 1585, 1280, 1165, 760

DSC: Rf-wert ^(a) 0,58

198-199°C (Zers.) (Äthylacetat-Cyclohexan) -35,3°

(c=0,5, Methano1) 3360, 1720, 1685, 1605, 1585, 1280, 1165, 760

0,58

i _

Die !starke antihypertensive Wirkung der erfindungsgeinäßen Verbindungen (I) und von deren Salzen wird bei einem Vergleich der pharmakoIogischen Aktivität zwischen der bekannten Verbindung und den erfindungsgemäßen Verbindungen wie nachstehend erläutert klar ersichtlich. Der Inhibitor des Angiotensinumwandelnden Enzyms, das biologisch inaktives Decapeptid, Angiotensin I, in aktives Octapeptid, Angiotensin II, umwandelt, erweist sich als für die Verwendung als antihypertensives Arzneimittel geeignet. In Anbetracht des Vorstehenden wurden die pharmakologischen Aktivitäten der erfindungsgemäßen Verbindungen hinsichtlich ihrer inhibierenden Wirkung gegenüber dem Enzym untersucht.

PharmakoIogiseher Test 1 ·

Als Meßmethode für die Aktivität des Angiotensin-umwandelnden Enzyms sind ein Bioversuch für die Kontraktionsreaktion der isolierten glatten Muskulatur oder die Druckreaktion normaler Tiere und ein biochemischer Versuch für das aus der Lunge oder anderen Organen von Tieren isolierte Enzym bekannt. Der erstere erwies sich gegenüber dem letzteren hinsichtlich der Untersuchung der Umwandlung von Angiotensin I in Angiotensin II in vivo als vorteilhafter.

030008/0767

Bei der vorliegenden Untersuchung wurde daher der Bioversuch' für die Kontraktionsreaktion von isoliertem Meerschweinchen-Ileum in bezug auf Angiotensin I angewandt.

Messung der inhibierenden Aktivität des Anqiotensin-umwandeln den Enzyms

Man suspendierte isoliertes Meerschweinchen-Ileum in einem Organbad, das 20 ml Tyrode-Lösung von 30°C, begast mit 95 % O + 5 % COp enthielt. Die durch Zugabe von Angiotensin I (0_t1 pg/ml) in Zeitabständen von 10 Minuten herbeigeführte Kontraktion wurde an einem Recticorder (Nihon Koden) für 90 Sekunden unter Verwendung eines "FD pick up" (ST-IT-H, Nihon Koden) aufgezeichnet.

Die Testverbindungen wurden dem Bad 5 Minuten vor der Zugabe des Angiotensin I zugegeben.

Die inhibierende Aktivität des Angiotensin-umwandelnden Enzyms wurde nach der folgenden Formel berechnet:

χ !00

A: Kontraktionsintensität von Angiotensin I vor der Zugabe der Verbindung

B: Kontraktionsintensität von Angiotensin I nach der Zugabe der Verbindung

Auf Grund der Tatsache, daß Kininase II, das Bradykinin mit Kontraktionswirkung im Hinblick auf isoliertes Meerschweinchen Ileum zerstört, als identisch mit dem Angiotensin-umwandelnden Enzym angesehen wird, wurde die Erhöhung der Kontraktionsreaktion unter Bezug auf Bradykinin durch die Testverbindungen unter Verwendung von Bradykinin (0,005 pg/ml) anstelle von Angio tensin I gemäß der vorstehenden Methode untersucht.

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ORIGINAL INSPECTED

293H81

is -

Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle angegeben. Sämtliche Testverbindungen inhibierten die Kontraktionsreaktion in bezug auf Angiotensin I, während sie die Reaktion in bezug auf Bradykinin verstärkten.

Pharmakologi scher Test 2

Die Aktivität des Angiotensin-umwandelnden Enzyms wurde spektrophotometrisch gemäß der in Biochem.Pharmacol., 2O₁, 1637 (1971} beschriebenen Methode gemessen. Dementsprechend wurde die Absorption von Hippursäure gemessen, die durch Inkubieren von Hippuryl-L-histidyl-L-leucin (HKL) als Substrat in Anwesenheit von aus Kaninchenlunge isoliertem Angiotensin-umwandenlnden Enzym, freigesetzt wird.

Messung der inhibierenden Aktivität von Angiotensin-umwandelndem Enzym :

Die Reaktionsmischung war wie folgt:

100 mM Phosphatpuffer (pH 8,3) 300 mM Natriumchlorid

5 mM HHL

ΙΟ"³ bis 10~⁹ Mol Enzyminhibitor 5 mE Enzym -

Man inkubierte 0,25 ml der obigen Mischung 30 Minuten bei 37 C und brach die Reaktion durch Zugabe von 0,25 ml ln-Salzsäure ab. Zu dieser Lösung gab man 1,5 ml Äthylacetat, um die Hippur- _säure zu extrahieren. Man sammelte 1,0 ml Äthylacetatschicht, dampfte zur Trockne ein und löste den erhaltenen Rückstand in 1,0 ml Wasser. Die Absorption dieser Lösung wurde bei 228 nm gemessen.

Die inhibierende Aktivität von Angiotensin-umwandelndem Enzym wurde nach der folgenden Formel berechnet:

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A — B Prozentuale Inhibierung = -—■ χ 100

A: Absorption der Reaktionslösung vor Zugabe der Verbindung

B: Absorption der Reaktionslösung nach Zugabe der Verbindung

Konzentration der eine 50%-iqe Inhibierunq des Anqiotensinumwand&r.nden Enzyms (ICc₀ ) herbeiführenden Verbindung

_3

Die die Verbindungen in einer Konzentration von 1 χ 10 Mol bis 1 χ 10 Mol enthaltende Lösung wurde inkubiert, und man berechnete die prozentuale Inhibierung bei jeder Konzentration gemäß der obigen Formel, und danach v/urde IC₅₀, die Konzentration der eine 50%-ige Inhibierung der Enzymaktivität herbeiführenden Verbindung bestimmt.

Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle angegeben.

Die bei diesen Tests untersuchten Verbindungen sind die folgenden:

Erfindungsgemäße Verbindungen:

Verbindung A: oc-5-(2-Hydroxyphenyl)-l-(3-mercaptopropanoyl)-2-pyrrolidincarbonsäure

Verbindung B: oc-5-(4-Hydroxyphenyl )-l-(3-mercaptopropanoyl )-2-pyrrolidincarbonsäure

Verbindung C: oc-5-(2-Hydroxyphenyl)-l-[ (2S)-3-mercapto-2-methylpropanoyl]-2-pyrrolidincarbonsäure

Verbindung D: ß-5-(2-Hydroxyphenyl)-!-[(2S)-3-mercapto-2-methylpropanoyl]-2-pyrrolidincarbonsäure

Verbindung E: a^-5-(2-Hydroxyphenyl)-l-(3-mercaptopropanoyl)-2-pyrrolidincarbonsäure

Bekannte Verbindung:

Verbindung Z: (4R)-3-[(2S)-3-Hercapto-2-methylpropanoyl]-4-thiazolidincarbonsäure

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Tabelle Inhibierende Aktivität gegenüber Angiotensin-umwandelndem Enzym

Angiotensin-

Angiotensin I Bradykinin umwandelndes Verbindung IC_5o*(Mol) AC₅₀**(Mol) Enzym

	1,7	X	ΙΟ"'	1,8.	X	10"	9	IC₅	o*** (Mot)	10"
A	- 4,8	X	ΙΟ"'	9,8	X	10"	9	;. 5,6	X	10"
B	1,6	X	ΙΟ"'	2,0	X	10"	9	4,4	X	10'
C	1_?5	X	ΙΟ"'	2,6	X	10"	9	1,1	X	10'
D	7,6	X	ΙΟ"⁸	9,5	X	io-	1 0	1,2	X	10*
j E	1,7	X	ΙΟ"'■	2,6	X	10".	9	6,5	X	10"
							2,6	X	-7
	-7
-6
-6
-8
■7

* Konzentration der eine 50%-ige Inhibierung der Kontraktionswirkung von Angiotensin Γ beim Meerschweinchen-Ileurn herbeiführendenVerbindung

** Konzentration der eine 50%-ige Erhöhung der Kontraktionswirkung von Bradykinin beim Meerschweinchen-Ileum herbeiführenden Verbindung

*** Konzentration der eine 50%-ige Inhibierung gegenüber Angiotensin-umwandelndem Enzym herbeiführenden Verbindung

Toxizitätstest

Die akute Toxizität der Verbindung A ist niedrig, d.h. der LD₅₀-Wert beträgt 1000 bis 1250 mg/kg.

(Versuchstiere)

Man brachte männliche Mäuse vom DDY-STD-Stamm (4'Wochen"alt, Gewicht 19 bis 21 g) in einen Brutraum mit konstanter Temperatur und Feuchtigkeit (23 - 1°C, 55 ί 5 %) und führte eine freie Pelletdiät (CE-2, Clea Japan Inc.) und Wasser ad libitum während einer Woche zu. Man wählte die ein normales Wachstum

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aufweisenden Mäuse für die Untersuchung aus.

(Verabreichungsmethode)

Die Testverbindungen wurden in 0,5%-iger Tragantlösung suspendiert und intraperitoneal in einer Dosis von 0,5 ml, bezogen auf 20 g Körpergewicht, verabreicht.

Aus den vorstehenden pharmakologischen Untersuchungen ergab sich, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen I als antihypertensive Mittel verwendbar sind. Die Verbindungen können in Kombination mit Diuretika verabreicht werden,ebenso wie im allgemeinen andere antihypertensive Mittel vorliegen können. Die Dosisformen sind Tabletten, Kapseln, Granulate, Pulver, Suppositorien, Injektionen etc. Bei der Behandlung von Hypertension können diese Präparate im allgemeinen nicht nur allgemein übliche Excipienten enthalten, sondern auch andere antihypertensive Mittel, wie Reserpin, a-Methyldopa, Guanethidin, Clonidin, Hydralazin etc.. Die Dosis wird in Abhängigkeit von den Symptomen, der Dosisform etc. eingestellt. Jedoch beträgt die übliche Tagesdosis 1 bis 5000 mg, vorzugsweise 10 bis 1000 mg, in einer Dosis oder in wenigen aufgeteilten Dosen.

Im folgenden werden Formulierungsbeispiele gegeben.

(1) Oraler Wirkstoff
a) Tablette

Verbindung A 30 mg

Lactose ■_■_.-■ 150 mg

kristalline Cellulose 50 mg

CaIciumcarb'oxymethylcellulose 7 mg

Magnesiumstearat 3 mg

insgesamt 240 mg

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Verbindung A 150 mg

Lactose 60 mg

kristalline Cellulose 30 mg

Calciumcarboxymethylcellulose 7 mg

Magnesiumstearat 3 mg

insgesamt 25C ing

Verbindung E 50 mg

Lactose 120 mg

kristalline Cellulose 60 mg

Calciumcarboxymethylcellulose 7 mg

Magnesiumstearat 3 mg

insgesamt 240 mg

Verbindung E 100 mg

Lactose 95 mg

kristalline Cellulose 45 mg

Calciumcarboxymethylcellulose . 7 mg

Magnesiumstearat 3 fng

insgesamt . 250 mg

Die Tabletten können mit üblichen Filmübersugsmitteln
und mit Zuckerüberzugsmitteln behandelt werden·

b) Granulat

Verbindung A 30 mg

Polyvinylpyrrolidon ' 25 mg

Lactose 385 mg

Hydroxypropylcellulose 50 mg

Talk 10 mg

insgesamt · 500 mg

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Verbindung E Polyvinylpyrrolidon Lactose Hydroxypropylcellulose Talk

150 rag 20 mg

280 mg 40 mg IO mg

insgesamt

c) Pulver

Verbindung A Lactose Stärke kolloidales Siliciumdioxid 500 mg

30 mg 500 mg 440 mg

30 mg

j insgesamt

Verbindung A Lactose Stärke kolloidales Siliciumdioxid mg

300 mg 230 mg 440 mg

30 mg

insgesamt

Verbindung E Lactose Stärke kolloidales Siliciumdioxid mg

250 mg 240 mg 480 mg

30 mg

insgesamt

d) Kapsel

Verbindung A Lactose kristalline Cellulose kolloidales Siliciumdioxid mg

30 mg 102 mg

56 mg

2 mg

insgesamt 190 mg

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Verbindung E 100 mg

Lactose 60 mg

kristalline Cellulose . 38 mg

kolloidales Siliciumdioxid 2 mg

insgesamt 200 mg

Verbindung A 200 mg

Glycerin 179,98mg

Butyl-p-hydröxybenzoat 0,02 mg

insgesamt 380 mg

Verbindung E 30 mg

Glycerin 349,98 mg

j Butyl-p-hydroxybenzoat 0,02 mg

■ insgesamt 380 mg

(2) Injektion

a) Es sind 1 bis 30 mg Verbindung A oder E in 1 ml der

wäßrigen Lösung (pH 6,5 bis 7,0) entnalten.

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Claims

PATENTANWÄLTE

80OO München 2 · Bräuhausstraße 4 - Telefon Sammel-Nr. 22 53 41 - Telegramme Zumpat - Telex 529

Case SAN-10

Pat ent an Sprüche

Λ/ 2-Pyrrolidincarbonsä\irederivate der Formel I

CO₂H

(I)

^NCO-Q-SR²

worm

1 ■·""■"

R Phenyl oder Hydroxyphenyl bedeutet;

ρ
R Wasserstoff oder Benzoyl bedeutet; Q geradkettiges oder verzweigtes Alkylen mit Λ bis Kohlenstoffatomen ist;
und deren Salze.
2. Verbindung gemäß Anspruch 1, worin R Phenyl, 2-Hydroxyphenyl oder 4-Hydroxyphenyl bedeutet.
3. Verbindung gemäß Anspruch 1, worin R Wasserstoff oder Benzoyl bedeutet.
4. Verbindung gemäß Anspruch 1, worin Q -CH₂-, -CH₂CH₂- oder -CH(CH₅)CH₂- bedeutet.
5. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend eine Verbin-

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dung gemäß Anspruch 1 in einer für die Blutdrucksenkung ausreichenden" Menge und einen oder mehrere pharmazeutisch annehmbare Exzipienten·
6. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I

-CO₂H

CO-Q-SR²

dadurch gekennzeichnet, daß man eine Säure der Formel II

CO₂H
NH (ID

mit einem funktionell en Derivat einer Alkansäure der Formel HZ

R³S-Q-CO₂H (III)

umsetzt und gegebenenfalls die erhaltene Verbindung einer Hydrolyse oder Ammonolyse unterzieht, wobei in den vorstehenden Formeln

E Phenyl oder Hydroxyphenyl bedeutet;

ρ
R Wasserstoff oder Benzoyl bedeutet;

Ή/ Benzoyl bedeutet;

Q geradkettiges oder verzweigtes Alkylen mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen ist.

7· Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I

-CO₃H

-R*

N (I)

^VCO-Q-SR²

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dadurch g e k e η η ζ e i c hn e t, daß man eine Säure^ der Formel II

CO₂H

NH

R¹

mit einem funktioneilen Derivat einer Haloalkansäure der Por mel IV

X-Q-COaH

umsetzt und gegebenenfalls die erhaltene Verbindung der Formel V

CO₂H

N ^NCO-Q-X

R¹

einer Umsetziu.\g mit Thiobenzoesäure unterzieht und/oder die erhaltene Verbindung einer Hydrolyse oder Reduktion unterzieht, wobei in den vorstehenden Formeln

1
E Phenyl oder Hydroxyphenyl bedeutet;

ρ
R Wasserstoff oder Panzoyl bedeutet;

R"^ Benzoyl bedeutet;

Q geradkettiges oder verzweigtes Alkylen mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen ist;
X Halogen bedeutet.

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