DE2726113A1 - Synthetische aminoglycoside und verfahren zu ihrer herstellung - Google Patents

Description

P AT E N T A M WA LT Ξ R. A. VAN DERWERTH DR. FRANZ LEDERER REINER F. MEYER DlPL-ING. (1934-1974) DIPL-CHEM/ ^DI9^7"5Ffi 1 1

8000 MÜNCHEN 80 LUCILE-GRAHN-STRASSE 22

TELEFON: (089) 472947 TELEX: 524624 LEDER D TELEGR.: LEDERERPATENT

8. Juni 1977 6251

Dr. ANTONIO CANAS-RODRIGUEZ 8 Saint Martin's Place, Canterbury, Kent CT1 1QD, England

Synthetische Aminoglycoside und Verfahren zu ihrer Herstellung

Die Erfindung betrifft synthetische Aminoglycoside und ein Verfahren zu ihrer Herstellung; insbesondere betrifft die Erfindung Pseudotrisaccharide mit antibiotischer Aktivität.

Die wohlbekannten Antibiotika vom Typ Kanamycin, Gentomycin und Apramycin sind Amino-pseudotrisaccharide. Diese bekannten Antibiotika sind gegenüber einer großen Vielzahl von Bakterien aktiv. Jedoch sind Stämme der Bakterien vorherrschend geworden, welche gegenüber diesen Arten von Antibiotika resistent sind. Dies ist ein beträchtliches Problem, da die resistenten Stämme der Bakterien zur Bildung von gefährlicheren Toxinen als die nicht-resistenten Stämme neigen. Aufgabe der Erfindung sind neue Aminoglycoside, welche eine wesentlich höhere Aktivität als die bekannten Antibiotika gegenüber solchen resistenten Mikroorganismen besitzen.

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Es wurde nun gefunden, daß durch wenigstens teilweise Substitution von Deoxyringen für die normalen Ringe in diesen Antibiotika Verbindungen erhalten werden, welche eine solche beträchtlich erhöhte Aktivität im Vergleich zu den entsprechenden, bekannten Antibiotika gegenüber solchen resistenten Mikroorganismen besitzen.

Antibiotika vom Typ Kanamycin, Gentomycin und Apramycin sind Pseudotr!saccharide, welche auf 2-Deoxystreptamin basieren:

In den Antibiotika Kanamycin und Gentomycin ist dieser Ring mit Monosaccharidringen in

der ^--Stellung and der 6-Stellung substituiert, und in Apramycin-Antibiotika ist dieser Ring

mit einem Disaccharidreat in der 4— oder 5-Stellung substituiert. In Antibiotika dieses Typs sind die glycosidischen Verknüpfungen α-Verknüpfungen und die Substituenten in den Ringen liegen äquatorial.

Bei den erfindungsgemäßen Antibiotika können die Monosaccharidreste, die von Pseudomonosaccharidatreptaminresten verschieden sind entweder in ihren D- oder L-Formen vorliegen. Im allgemeinen werden die Verbindungen in der Beschreibung aus Gründen der Einfachheit in ihren D-Formen angegeben, jedoch sei darauf hingewiesen, daß auch die L-Formen und Mischungen beider Formen wie racemische Mischungen der beiden Formen eingeschlossen sind.

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■'i

Die Erfindung liefert eine Verbindung, welche ein Pseudotri· saccharid der folgenden allgemeinen Formeln ist:

[A] [B] [C]

oder [_A] [c¹ ] [ A¹]

worin [A] eine Gruppe der folgenden Formel ist

worin R₁ - H, F, OH oder SH;

R₂ = H oder NH₂; und

R, = H oder -CH₂-R^, wobei R^ OH oder NH₂ bedeutet; mit der Maßgabe, daß wenn R_ = H ist, R, = -CH₂-NH₂ bedeutet,

wenn R, = H oder -CH₂-OH ist, R2 = NH₂ bedeutet; [A ] eine Gruppe der folgenden Formel ist:

worin R₁- = H, OH,SHoder Halogen, vorzugsweise F;

R_ß = H, OH oder NH R_ß, worin Rg H oder Me bedeutet; und

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R„ ■ H oder -CH₂-Rq, worin R_Q = H, OH.oder NH₃ bedeutet; vorausgesetzt, daß wenn Rg = H oder OH ist, R~ = bedeutet, und
wenn R^ = H oder -CH₂-OH ist, R₆ = NH Rg bedeutet;

[B] eine Gruppe der folgenden Formel ist:

worin Rp und R* dieselbe Bedeutung wie für [A] definiert besitzen;

[C] eine Gruppe der folgenden Formeln ist:

WHR,

worin R₁₀ = H oder OH ist und R₁₁ = H, CH₅ oder -CO.CHOH-CH₂- ; und

[C ] eine Gruppe der folgenden Formel ist:

NU*

worin R₁₀ und R₁₁ dieselbe Bedeutung wie für [C] definiert besitzen;

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worin beide glycosidischen Verknüpfungen bzw. Bindungen a-glycosidische Bindungen sind,

sowie die pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze hiervon.

Die Erfindung umfaßt ebenfalls ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung, wobei sich das Verfahren dadurch auszeichnet, daß in an sich für analoge Verbindungen

„ . ■ . .Vorlauf ermonosaccharide Ode

bekannter Weise entsprechende, geschützte/Vorlauferpseudomonosaccharide unter Bildung eines geschützten Pseudotrisaccharids, worin die glycosidischen Bindungen a-glycosidisch sind, umgesetzt werden, und daß anschließend die schützenden Gruppen zur Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung entfernt werden.

Dieses Verfahren kann in zwei Stufen durchgeführt werden, indem zunächst miteinander zwei geschützte Monosaccharideinheiten Bildung einer geschützten Disaccharideinheit umgesetzt werden, und anschließend diese Disaccharideinheit mit einer weiteren Monosaccharideinheitunter Bildung des geschützten Pseudotrisaccharids umgesetzt wird. Dieses Verfahren ist allgemein auf die erfindungsgemäßen Verbindungen anwendbar.

Eine weitere Möglichkeit, die insbesondere auf Analoge des Kanamycins, bei welchem die zwei endständigen Monosaccha-. _ ■ ridreste in dem eventuell geschützten Pseudotrisaccharid gleich sind, anwendbar ist, besteht darin, ein difunktionelles, geschütztes Pseudomonosaccharid, das dem mittleren Rest im Produkt entspricht, mit 2 Mol-Äquivalenten eines monofunktionellen, geschützten Monosaccharide, das den endständigen Besten entspricht, umzusetzen. Üblicherweise wird ein Überschuß der monofunktionellen Verbindungen angewandt, um die Reaktion weiter zugunsten der Trisaccharidprodukte statt der

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möglichen Disaccharidprodukte zu verschieben.

Wie dem Fachmann ohne weiteres ersichtlich, sind einige der erfindungsgemäßen Verbindungen in andere Verbindungen gemäß der Erfindung umwandelbar. Insbesondere können OH-Gruppen in NH₂- oder SH-Gruppen oder auch Halogenatome nach an sich bekannten Arbeitsweisen umgewandelt werden. Ebenfalls können Verbindungen, welche direkt den erfindungsgemäßen Verbindungen entsprechen jedoch OH-Gruppen an einigen Stellen aufweisen, an denen die erfindungsgemäßen Verbindungen NH^-Gruppen besitzen, nach an sich bekannten Arbeitsweisen in erfindungsgemäße Verbindungen umgewandelt werden. In diesem Fall werden die OH-Gruppen für die Zwecke der Erfindung als schützende Gruppen angesehen.

Die Analogen des Kanamycins gemäß der Erfindung, welche an der NHp-Gruppe in der 3"-Stellung besitzen, können in Analoge des Gentomycins durch N-Methylierung dieser Aminogruppe nach an sich bekannten Arbeitsweisen umgewandelt werden. Die erfindungsgemäßen Verbindungen, in denen der Rest R.,. eine andere Bedeutung als Wasseri.toff besitzt, können ebenfalls aus den entsprechenden, freien Aminoverbindungen nach bekannten Methoden hergestellt werden.

Wie aus den zuvor angegebenen Formeln ersichtlich, enthalten die erfindungsgemäßen Verbindungen minimal 4 Aminogruppen und maximal 6 Aminogruppen. Die bevorzugten Verbindungen gemäß der Erfindung besitzen 5 Aminogruppen. Insbesondere ist in der Gruppe A der Rest R,- besonders bevorzugt eine Aminogruppe.

Die am meisten bevorzugten, erfindungsgemäßen Verbindungen sind im folgenden aufgeführt:

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NH R.,,

nhR.,1

NH,

R_R, R₀ und R^^ entsprechend der zuvor angegebenen Bedeutung,

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Cc]

MH₁

-[O

-Λ )—°-Ccj

0-[Cj

wie zuvor definiert

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"Ζ"

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können nach allgemeinen synthetischen Arbeitsweisen hergestellt werden, die auf dem Gebiet der Kohlehydratchemie an sich bekannt sind. Zahlreiche der als Zwischenprodukte verwendeten Verbindungen werden als neue Verbindungen angesehen. Die Synthesewege können als aus zwei Teilen bestehend angesehen werden, nämlich erstens der Synthese der Zwischenproduktmonosaccharide oder -pseudomonosaccharide und zweitens der Reaktion dieser Verbindungen zur Herstellung der erfindungsgemäßen Pseudotrisaccharide. In beiden Abschnitten der GesamtSynthesen ist es erforderlich oder vorteilhaft, stereoselektiv verschiedene der reaktionsfähigen Gruppen im Molekül zu schützen, damit andere der Gruppen unzweideutig reagieren können. Wie auf dem Fachgebiet bekannt, müssen während der Synthese verwendete Schutzgruppen in der Lage sein, die reaktionsfähige Gruppe, an welche sie gebunden sind, angemessen zu maskieren, und sie müssen ebenfalls unter relativ milden Bedingungen entfernt werden können, insbesondere solchen Bedingungen, welche die glycosidische Bindung nicht beeinflussen, z. B. durch alkalische Hydrolyse, Hydrogenolyse (Wasserstoffspaltung) oder sehr milde Säurebehandlung.

Geeignete Gruppen zum Schützen von Hydroxylfunktionen umfassen die folgenden Gruppen: Acetyl-, Benzoyl-, Trifluoracetyl-, 2-Chloracetyl-, Methoxycarbonyl-, 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl-, Benzylgruppen und beliebige am Hing substituierte Benzylgruppen, Methyl-thio-methyl- und Allylgruppen.

Geeignete Gruppen zum Schutz von Aminof unktionen umfassen die folgenden Gruppen (einschließlich des Aminostickstoffatome bezeichnet): Ν,Ν-Dibenzyl-, N-Benzyl-N-alkoxycarbonyl-, vorzugsweise ist die Alkylgruppe Methyl, Benzyl oder 2,2,2-Trichloräthyl; N-Phthalimido-, N-Succinimido-, N-o-Benzoyloxymethylbenzoyl-

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N-Acetyl-, N-2,2,2-Trifluoracetyl-, N-Benzyloxycarbonyl- und N-2,2,2-Trichloräthoxycarbonylgruppen.

Für vicinale Diolgruppen oder a-Aminoalkoholfunktionen umfassen geeignete Schutzsysteme die Bildung eines cyclischen Carbonates oder Carbamates oder eines 1,3-Dioxolanringes, d. h. eines Cyclohexyliden- oder Isopropylidensystems, wobei letzteres besonders wegen der Leichtigkeit bevorzugt ist, mit welcher es unter milden, sauren Bedingungen hydrolysiert werden kann und auch wegen der leichten Zugänglichkeit des Reagens, nämlich 2,2-Dimethoxypropan.

Wie dem Fachmann auf dem Gebiet ohne weiteres ersichtlich, sind die einzelnen Reaktionen der folgenden Schemata an sich bekannt. Weiterhin zeigen die weiter unten angegebenen Schemata die Herstellung der wesentlichen Verbindungen, sind jedoch nicht erschöpfend. Äquivalente Reaktionen für zahlreiche der Stufen sind dem Fachmann auf dem Gebiet an sich geläufig und wurden nicht im einzelnen angegeben, um die Beschreibung nicht übermäßig auszudehnen.

Das allen erfindungsgemäßen Verbindungen gemeinsame Ringsystem ist der Deoxystreptaminring, entweder in Form von 2-Depxystreptamin oder 2,5-Dideoxystreptamin. Für glycosidische Kupplung werden diese Verbindungen so angeliefert, daß nur die 4-, 5-(falls vorhanden) oder 6-HydroxyIgruppe nicht geschützt zurückbleibt. Diese Verbindungen können aus 2-Deoxystreptamin selbst oder aus es als Rest enthaltenden Verbindungen, z. B. Kanamycin oder Neomycin, synthetisiert werden.

Ein geeignet geschütztes 4—Hydroxy-2-deoxystreptamin kann aus der bekannten Verbindung 5»6-C—Cyclohexyliden-tetra-N-methoxycarbonylenamin durch die im folgende angegebene und in Schema 1a

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■ύ

gezeigte Reaktionsfolge hergestellt werden. Diese Verbindung ergibt bei der Oxidation mit Perjodat einen Dialdehyd, der durch Alkali, z. B. Alkali- oder Erdalkali-metallalkoholat, z. B. NaOMe oder Triäthylamin unter Bildung eines substituierten 2-Deoxystreptamins abgebaut werden kann, wobei dieses aus dem Reaktionsgemisch durch Säulenchromatographie auf Kieselerdegel mit Äthylacetat/Chloroform, die ca. 1 % Triäthylamin enthalten, isoliert werden kann. Die Hydrolyse mit einem Alkalimetallhydroxid oder Erdalkalimetallhydroxid oder mit 90 %igem Hydrazinhydrat entfernt die N-Methoxycarbonylgruppen.

Die zwei Aminogruppen in dieser Verbindung können durch Umsetzung mit N-Äthoxycarbonylphthalimid in Anwesenheit von Triäthylamin oder wäßrigem Natriumcarbonat geschützt werden. Das Produkt ist 5»6-0-Cyclohexyliden-2-deoxy-1,3-diphthalimidostreptamin. Eine alternative Methode besteht darin, das Produkt der Abbaureaktion zu benzylieren statt zu hydrolysieren, z.B. mittels Benzylbromid-Natriumhydrid in Dimethylformamid mit anschließender, milder Hydrogenolyse (Pd-Holzkohle, 1 atm), wobei 5»6-0-Cyclohexyliden-i,3-di-N-benzyl-2-deoxy-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin erhalten wird.

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Schema 1a

CHiN H co, ne

' ο. / ο

NHCO₂ tie

NHCO₂Me \ O

H COj

«a

X ar

PbK -a

NHCO₁Me

2—O

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Es kann schwierig sein, die Cyclohexylidenschutzgruppe in den Endprodukten zu entfernen. Sie kann in die stärker labile Isopropylidengruppe durch milde, saure Hydrolyse und anschließende Behandlung mit 2,2-Dimethoxypropan und katalytischen Mengen an Toluol-p-sulfonsäure umgewandelt werden. Bei dieser fieaktionsfolge sollte die 4~HydroxyIgruppe geschützt werden, z. B. durch Benzylierung. Sie Benzylgruppe kann durch katalytische Hydrierung nach dem Austausch der Schutzgruppen entfernt werden.

Geeignet geschützte 4- und 6-Hydroxy-2-deoxystreptamine können nach der im folgenden beschriebenen und im Schema 1b gezeigten Folge hergestellt werden. Diese Reaktionsfolge startet mit 2-Deoxystreptamin, das an jedem Stickstoffatom monobenzyliert wird und dann methoxycarbonyliert wird, z. B. mit Methylchlorformiat. Das erhaltene Produkt wird mit 1,1-Dirnethoxycyclohexan umgesetzt. Das erhaltene, racemische Gemisch kann durch Arbeitsweisen der fraktionierten Kristallisation, z. B. unter Verwendung von optisch aktiven Impfkristallen aus ätherischer Lösung gespalten werden. Die Wiederholung der fraktionierten Kristallisation ergibt eine zufriedenstellende Trennung der 4-Hydroxy- und 6-Hydroxy-isomeren.

Die Synthese von geschütztem 5-Hydroxy-2-deoxystreptamin kann nach der im folgenden beschriebenen und im Schema 1c wiedergegebenen Reaktionsfolge erreicht werden. Diese Reaktionsfolge beginnt mit 2-Deoxystreptamin, das mit Benzaldehyd unter reduzierenden Bedingungen, z. B. unter Verwendung von Natriumborhydrid,Natriumcyanoborhydrid, Wasserstoff und Palladiumauf-Holzkohle, Wasserstoff und Raney-Nickel usw. unter Bildung des di-N-benzylierten Streptaminproduktes umgesetzt wird. Diese Verbindung wird in ein dicyclisches Carbamat durch Reaktion mit Phosgen, Phenylchlorformiat, ρ-Nitrophenylchiοrformiat oder Methylchlorformiat in Anwesenheit einer Base wie

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eines Ionenaustauschers in der OH~-Form (Amberlite 400), Natrium- oder Kaliumcarbonat, Alkalimetallalkoholaten oder Natriumhydrid umgewandelt. Dieses Zwischenprodukt, nämlich 2-Deoxy-1,3-di-N-benzylstreptamin-1,6:3,4-dicärbamat ist ein Schlüsselzwischenprodukt für die Synthese von 5-0-glycosidischen Bindungen mit 2-Deoxystreptamin.

Schema 1b

HHBn

HHBn

Spaltung

OH

RACE »AM«tf

₂Me / S₁

COOK

Z : CycLOHilXyupsN _; i

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-yS-

Schema 1o

MUx

HU₁

FK-CHO

OH

MHCW₁TK

OH

ν— co_ari«

OH

R ν -CH_xPh oder_

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Dieses cyclische Dicarbamat kann ebenfalls bei der Synthese von anderen Zwischenprodukten verwendet werden, wie dies in den Eeaktionsschemata 1d und 1e dargestellt ist. In Schema 1d wird das cyclische Dicarbamat mit einem Halogenierungsmittel, vorzugsweise Brom oder Jod in Anwesenheit einer Verbindung des 3-werti'jen Phosphors wie Triphenylphosphin oder eines Trialkylphosphites umgesetzt. Die erhaltene 5-Halogenverbindung (die 5-Bromverbindung ist dargestellt) kann reduziert werden, z. B. durch katalytische Hydrierung in Anwesenheit einer Base, wobei ein durch cyclisches Dicarbamat geschütztes 2,5-Dideoxystreptamin erhalten wird. In Schema 1e wird die 5-Hydroxygruppe in dem cyclischen Dicarbamat benzyliert oder allyliert, um die 5-Hydroxylgruppen zu schützen. Das in den Schemata 1d und 1e erhaltene Zwischenprodukt in Form des cyclischen Dicarbamates kann einer Ringöffnung (wie dargestellt) durch Reaktion mit Natriummethoxid in Methanol oder vorzugsweise durch Verseifung mit anschließender Methoxycarbonylierung oder Benzoxycarbonylierung unterworfen werden. Die Produkte dieser beiden Polgen sind 4,6-Dihydroxy geschützte Streptamine. Das Produkt der Reaktionsfolge 1d ist wichtig, da es ein 2,5-Dideoxystreptamin ist. Falls die diesen Produkten entsprechenden 4~ oder 6-Monohydroxyderivate erhalten werden sollen, d. h. mit geschützter 4- bzw. 6-Hydroxylgruppe, können diese durch übliche Schutzreaktionen, z. B. Benzylierung, und anschließende Spaltung der Isomeren oder Veränderung einer der N-Schutzgruppen in eine cyclische Gruppe zusammen mit der benachbarten Hydroxylgruppe, z. B. ein cyclisches Carbamat, mit anschließender Spaltung der Isomeren erhalten werden. Die Synthese der restlichen bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Pseudosaccharide erforderlichen Zwischenprodukte kann aus bekannten Verbindungen nach ähnlichen Methoden, wie sie zuvor für die Herstellung der den 2-Deoxy- oder 2,5-Dideoxystreptaminring enthaltenden Zwischenprodukte beschrieben wurden, erfolgen. In dem folgenden Reaktionsschema 2 ist zusammengefaßt eine Reihe von Reaktionsschemata zur Synthese einiger dieser Zwischenprodukte zusammengestellt. Geeignete Reagentien und Reaktionsbedingungen sind dem Fachmann auf dem Gebiet an sich geläufig.

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Schema 2

CH_ZOH

/ ο.

O\ /o

Ho

one

PhCoS

CH₂H₃

PhCOO

H Br

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-y-

Die Kupplungsreaktion für die Synthese von a-Glycosiden aus den monocyclischen Zwischenprodukten kann in einfacher Weise mit ausgezeichneten Ausbeuten über zwei an sich bekannte Arbeitsweisen erreicht werden. Die erste Arbeitsweise nützt die Reaktion aus, durch welche Glycale Alkohole durch die katalytische Einwirkung von Bortrifluoridätherat in einem inerten Lösungsmittel mit niedriger Dielektrizitätskonstante, wie Benzol, Kohlenstofftetrachlorid oder Chloroform, addieren kämen .Während dieses Reaktionstyps müssen irgendwelche Aminofunktionen durch Gruppen wie die Phthaloyl-, Succinyl- oder Alkyloxy-carbonylgruppe geschützt werden, wobei z. B. die Gruppierung

^COOR

erhalten wird. Falls sekundäre oder tertiäre Amine, sekundäre Amide oder sekundäre Carbamate vorliegen, reagiert der Katalysator mit ihnen unter Bildung von unlöslichen Nebenprodukten, und es kann kein Glycosid isoliert werden. Die Reaktionsteilnehmer sollten in den oben erwähnten Lösungsmitteln (Benzol, CCl^, CHCl,) löslich sein. Die Reaktion zwischen Glycalen und Alkoholen verläuft rasch (in 5 bis 15 Minuten) und erfolgt bei Zimmertemperatur, wobei der Anteil der ß-Glycoside vernachlässigbar ist.

Die zweite Arbeitsweise ist eine modifizierte Königs-Knorr-Glycosylierungsreaktion zwischen einem Glycosylhalogenid und einer Alkoholfunktion, welche die nicht teilnehmende Nachbargruppe am Kohlenstoff 2, benachbart zu dem Reaktionszentrum (anomeres Kohlenstoffatom) ausnutzt. Der verwendete Katalysator kann Silberoxid oder Silbercarbonat sein, jedoch ist es vorzugsweise ein Gemisch aus Quecksilber(II)-cyanid und Quecksilber(II)-bromid oder ein quaternäres Ammoniumbromid wie Tetrabutylbromid oder ein Ionenaustauscher in der Br"*-Form (Amberlite IR-400) oder ein Sulfid (Tetrahydrothiophen) und ein Protonenakzeptor

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wie 2,6-Lutidin, Quecksilber(II)-cyanid, wasserfreies Natriumbicarbonat oder ein Ionenaustauscher in der CN~-Form (Amberlite IR-400), welcher den Anteil des erhaltenen a-Glycosides auf Kosten des ß-Anomeren erhöht. Die Bildung von Pseudotrisacchariden von 2-Deoxystreptamin kann stufenweise, durch die Zugabe von einer Glycosyleinheit zu einem Zeitpunkt, d. h. zuerst Bildung eines Disaccharides mit einem geschützten 2-Deoxystreptamin, und dann Umsetzung einer anderen Glycosyleinheit mit dem bereits gebildeten Disaccharid, wie zuvor angegeben, erreicht werden, wobei X ein Halogenid ist oder die reaktionsfähige 1:2-Doppelbindung eines Glycals darstellt.

Schema 3

^{1 L} ßn

[B]X t hoV>

COHe

[Ά]Χ t C

Z = Cyclohexyliden oder Isopropyliden

[¹A]+ [¹B] sind [A] + [B] entsprechende, geschützte Reste,

wie zuvor definiert,

Bn - Benzyl

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-rl

Alternativ kann das Trisaccharid durch Umsetzung eines Disaccharidderivates, [A] —.- [Bl - X, mit einem geeignet geschützten 2-Deoxystreptamin entsprechend dem folgenden Reaktionsschema 4 synthetisiert werden.

Schema 4

HO

Sobald einmal geschützte Trisaccharide erhalten wurden, bezwecken die nachfolgenden Eeaktionsfolgen die Entfernung der Schutzgruppen des Trisaccharides, wodurch die Amino- und HydroxyIfunktionen freigesetzt werden.

In den folgenden Reaktionsschemata 5 und 6 sind einige der möglichen Wege zur Synthese der 4-0- und 5-0-Glycoside von 2-Deoxystreptamin zusammengestellt.

Wenn die Glycosylierung gleichzeitig an den Kohlenstoffatomen 4 und 6 des Aminocyclitolringes durchgeführt wird, gleichgültig ob die Glycal- oder Glycosylhalogenid-methode angewandt wird, und trotz des Vorliegens eines Überschusses von glycosylierendem Mittel, bleibt ein kleiner Prozentsatz der gebildeten Disaccharide nicht umgesetzt am Ende der Reaktionsperiode zurück. Ihre Abtrennung von den Trisacchariden kann jedoch in einfacher

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Weise durch Filtration über Kieselerdegel und Elution mit Lösungsmitteln erreicht werden. Diese Disaccharide, 4-0-Glycosid und 6-0-Glycosid von entweder 2-Deoxystreptamin oder 2,5-Dideoxystreptamin, die bis zu einer maximalen Menge von 15 bis 20 % der Gesamtreaktionsprodukte vorliegen, können, sobald sie einmal von den Trisacchariden abgetrennt sind, erneut zur Herstellung von weiteren Trisacchariden glycosyliert werden.

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CH₂OAc

0.S

Schema_5 '_

Il

Bn

HO\O

Il

AcO

K-Bn

OH

OH

Bn : Benzyl

, METHYL

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Schema 6'

CH₁OAc

Bn

AcoXoAc /7 Ho\o

CH₂N₃

HO

CH₂N₃

■ OH

Benzyl

Cyclohexyliden, Isopropyliden

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Die auf diese Weise erhaltenen, vollständig geschützten Trisaccharide werden dann einer Eeihe von chemischen, zur Entfernung der Schutzgruppen vorgesehenen Operationen unterworfen, wodurch das Trisaccharid freigesetzt wird. Die Entfernung von"* Ester-, Carbamat- und Amidfunktionen wird durch alkalische Hydrolyse mit Hydroxiden von Alkali- oder Erdalkalimetallen oder vorzugsweise mit 80 bis 90 %igem Hydrazinhydrat in einem geeigneten Lösungsmittel wie Methanol, Äthanol oder Propanol durchgeführt. N- und O-Benzylgruppen werden durch katalytisch« Hydrierung über einem Katalysator aus Palladium-auf-Aktivkohle oder Raney-Nickel entfernt. Irgendwelche vorliegenden Azidofunktionen werden gleichzeitig zu Aminogruppen während dieses Vorganges reduziert.

Einige der erfindungsgemäßen Trisaccharide können außer nach der allgemeinen Methode der Glycosylierung mit dem geeigneten Glycosylhalogenid oder Glycal auch über chemische Umwandlung der Zwischenprodukte 4,6-Di-0-(2,3-dideoxy-oc-D-erythro-hexopyranosyl)-2-deoxy-1,3-di-N-benzyl-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin und 4,6-Di-0-(2,3-dideoxy-<x-D-erythro-hexopyranosyl)-1,3-di-N-benzyl-2,5-dideoxy-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin erhalten werden. Wenn eines dieser beiden Trisaccharide mit KohlenstofftetraChlorid, Hexamethylphosphortriamid und Natriumazid umgesetzt wird, wird der Ersatz der primären Alkoholfunktionen durch die Azidogruppe an den Kohlenstoffatomen 6* und 6ⁿ erreicht. Diese Umwandlungen mit anschließender Entfernung der die Trisaccharid schützenden Gruppen führt zur Gewinnung von 4,6-Di-0-(6-amino-2,3*6-trideoxy-a-D-erythro-hexopyranosyl)-2-deoxystreptamin und 4-,6-Di-0-(6-amino-2,3i6-trideoxya-D-erythro-hexopyranosyl)-2,5-dideoxystreptamin.

Ein alternativer Weg zu den oben angegebenen Verbindungen wird durch die folgende Reaktionsfolge verkörpert: selektive Tosylierung der primären Alkoholfunktionen in den partiell geschützten

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Trisacchariden, d. h. [4,6-Di-0-(2,3-dideoxy-a-D-erythrohexopyranosyl)-1,3-di-N-benzyl-2,5-dideoxy-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin (a) und 4,6-Di-0-(2,3-diedeoxy-oc-A-erythrohexopyrano syl)-2-deoxy-1,3-di-N-methoxycarbony1-1-N,3-N,5-0-tribenzylstreptamin (b) ], und anschließend nukleophiler Ersatz der Tosylgruppe durch Natriumazid, wobei die geschützten 6¹,6^W-Diazidotrisaccharide erhalten werden. Diese werden dann unter Verseifungsbedingungen in Äthanol oder Propanol (80/90 %iges Hydrazinhydrat, Natrium-, Kalium- oder Bariumhydroxid) zur Entfernung der N-Methoxycarbonylgruppen behandelt, anschließend einer Hydrierung (Wasserstoff, Katalysator Palladium-auf-Aktivkohle) zur Reduktion der Azidofunktionen zu Amino funkt ionen unter gleichzeitiger Hydrogenolyse der N-Benzylgruppen unterworden.

Der Nachteil dieses Weges zu den Azidozwischenprodukten liegt darin, daß während der selektiven Tosylierungsstufe die Abtrennung der Nebenprodukte schwierig ist, wodurch es unmöglich wird, größere Ausbeuten als 60 bis 65 % des ditosylierten Derivates zu erhalten.

In einer ähnlichen Weise können 4,6-Di-0[4,6-diamono-2,3»4,6-tetradeoxy-a-D-(threo- oder erythro)-hexopyranosyl]-2-deoxystreptamin oder 4,6-Di-0-[4-,6-diamino-2,3»4»6-tetradeoxy-a-D-(threo- oder erythro)-hexopyranosyl]-2,5-dideoxystreptamin aus den oben genannten Zwischenprodukttrisacchariden (a) und (b) durch Permesylierung der vier Hydroxylfunktionen, Ersatz der Mesylgruppen durch Azidogruppen in Dimethylformamid oder Hexamethylphosphortriamid, Verseifung der Schutzgruppen (N-COOMe) und anschließende Hydrierung über einen Katalysator aus Palladium-auf-Aktivkohle erhalten werden. Die Reaktionsschemata 7 und 8 illustrieren die Folge der Stufen bei der Herstellung einiger der erfindungsgemäßen Trisaccharide.

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Schema 7

Bn

^C¥a

OH

H₁Br

modifizierte Königs-Knorr-Glycosylierung

HO

MeO₁C'

Abtrennung und Entfernung der Schutzgruppen

CH HM₁

_y - Sco Ph ,-H ,

-H , -UH₁

-u

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Schema 8

CH₁OAc

AcD\oAc ^ HO

CH_xOAc

CH₁OH

MeP₁C'

OH

AcO-AcOCH₂-O. * V=5/

Bn CO₂Me

CH OH

_/ P(MMe₃),

Nr¹

CH₁NHt

I L/ NH_x-NM /Pj-C ; U; H₁ /Pj

Bn :

_=My.OM

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Die erfindungsgemäßen Pseudotrisaccharide besitzen ausgezeichnete, antibakterielle Aktivität, welche in einigen Fällen selbst größer als diejenige von Kanamycin A zu sein scheint. In der folgenden Tabelle I sind die Werte für die minimale Hemmkonzentration (MIC) von Kanamycin A zusammen mit denjenigeα eines der synthetisierten Trisaccharide (Beispiel I) gegenüber einer Vielzahl von gram-positiven und gram-negativen Bakterien zusammengestellt, welche nach der Agar-Verdünnungsmethode von Steers an einem Müller-Hinton-Agarmedium erhalten wurden.

Tabelle I

HIC (juq/ml)

Micrococcus pyogenes aurcus 6539 P Staphylococcus pyogenos Smith A Eschcrichia coli R 1513 Salmonolla tiphymurium Proteus rnirabilis PsDudomonas aeruginosa s.p. Pscudomonas aeruginosa I.A. Salmonolla sui-pestifer Pseudocionas aeruginosa D 15 Protous rcttgeri Proteus inorganic

In-vitro-Aktivität von Kanamycin A und Verbindung (Beispiel L1)$ MC-Werte in Müller-Hinton-Nährflüssigkeit, pH = 7,2.

Kanamycin A	Bsp. LI
0,8	0,4
0,8	0»4
100	32
100	32
2	0,4
100	16
100	32
32	32
25	8
0,4	0,2
0,8	0,2

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-A-

Darüber hinaus sind die erfindungsgemäßen Pseudotrisaccharide weniger empfindlich gegenüber einer Entaktivierung durch Bakterien, welche gegenüber Kanamycin und Apramycin resistent sind, und sind daher gegenüber diesen wirksam.

Säuren, mit denen pharmazeutisch annehmbare Additionssalze der erfindungsgemäßen Verbindungen hergestellt werden können, sind Säuren, welche nicht-toxische Additionssalze, die pharmazeutisch annehmbare Anionen enthalten, bilden, z. B. die Hydrochloride, Hydrobromid-, Hydrojodid-, Sulfat- oder Bisulfat-, Phosphatoder sauren Phosphat-, Acetat-, Maleat-, Fumarat-, Lactat-, Tartrat-, Citrat-, Gluconat-, Saccharat- oder p-Toluolsulfonatsalze.

Sie erfindungsgemäßen Verbindungen können für sich alleine appliziert werden, Jedoch werden sie im allgemeinen in Mischung mit einem pharmazeutischen Träger appliziert, der im Hinblick auf den beabsichtigten Applikationsweg und die übliche pharmazeutische Praxis ausgewählt wird. Beispielsweise können sie oral in Form von Tabletten, die solche Verdünnungsmittel wie Stärke oder Lactose enthalten, oder in Kapseln entweder alleine oder in Mischung mit Verdünnungsmitteln, oder in Form von Elixieren oder Suspensionen, welche Geschmacksstoffe und Farbstoffe enthalten, appliziert werden. Ebenso können sie parenteral, z. B. intramuskulär oder subkutan _t injiziert werden. Für die parenterale Applikation werden sie am besten in Form einer sterilen, wäßrigen Lösung verwendet, die andere gelöste Stoffe enthalten kann, z. B. ausreichend Salze oder Glucose zur isotonischen Einstellung der Lösung.

Die Erfindung wird anhand der folgenden Beispiele der Herstellung und Charakterisierung von erfindungsgemäßen Verbindungen näher erläutert. Bei diesen Beispielen wurden die organischen Lösungen über wasserfreiem Na₂SO^ getrocknet und bei 35 °C (10 mm Hg) eingeengt, und die PMR-Werte entsprechen der üblichen in

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den wissenschaftlichen Veröffentlichungen angegebenen Praxis. Zuerst wird die Stellung für ein besonderes Signal oder für besondere Signale in dem Spektrum in «Γ (ppm), bezogen auf den internen Standard Tetramethylsilan, angegeben. In den Klammern sind die Signalarten wiedergegeben, d. h. Singulett = (s), Dublett = (d), Triplett = (t), Multiplett = (m), hieran schließt sich die Anzahl der für diese Signale verantwortlichen Protonen zusammen mit der Stellung im Molekül oder der funktionellen Gruppe, deren Signale wiedergegeben sind, an.

In den Beispielen, in denen angegeben ist, daß ein Produkt isoliert wurde, wurde dieses durch Analysenmethoden einschließlich Mikroanalyse, IR-Spektrum und PMR-Spektrum identifiziert. Für die meisten der Zwischenproduktverbindungen sind diese Daten jedoch wegen der kürzeren Darstellung nicht angegeben.

Beispiel I

Ein Gemisch von 1,03 g = 1,91 mMol 5»6-0-Cyclohexyliden-2-deoxy-1 ^-di-N-benzyl-i^-di-N-methoxycarbonylstreptamin, 0,8 g -2,9 mMol Tri-O-acetyl-D-glucal und 20 ml trockenem Benzol wurde mit 0,03 ml Bortrifluoridatherat behandelt und bei 20 ⁰C für 0,5 Stunden gerührt. Es wurde 1 ml Triethylamin hinzugesetzt, und das Rühren wurde für weitere 20 Minuten fortgeführt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Wasser gewaschen, getrocknet und über 20 mg eines Katalysators von 10 % Palladium-auf-Aktivkohle bei 2 atm während 3 Stunden hydriert. Nach dem Filtrieren der Suspension und dem Waschen des Katalysators mit Methanol wurden die vereinigten, organischen Flüssigkeiten eingeengt, wobei 1»53 g glasartiges Produkt in einer Ausbeute von 85 % erhalten wurden. Dieses Produkt wurde in 20 ml Methanol aufgelöst, es wurde katalytisch mit 20 mg Natriummethoxid während 12 Stunden

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-yC.

bei 22 ⁰C deacetyliert. Nach der Neutralisation des Gemisches mit COp wurde eingeengt, wobei ein Sirup erhalten wurde, der in Chloroform extrahiert wurde. Die Extrakte wurden einmal filtriert und zu einem festen Rückstand eingeengt, dieser wurde durch Säulenchromatographie über Kieselerdegel unter Verwendung von Chloroform/Äthylacetat als Elutionsmittel gereinigt. Es wurden 1,35 g 4-0-(2,3-Dideoxy-cx-D-erythrohexopyranosyl)-5,6-0-cyclohexyliden-2-deoxy-1,3-di-N-benzyl-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin als kristallines Produkt erhalten. F. = 153-159 °C; Ca]Jp = +42,7 ° (c = 1;Chloroform).

0,64 g = 0,95 mMol dieser Verbindung wurden in 4 ml trockenem Ν,Ν-Dimethylformamid aufgelöst, und es wurden 0,5 ml Kohlenstoff tetrachlorid und 0,6 ml Hexamethylphosphortrxamid zu dieser Lösung hinzugesetzt. Das Gemisch wurde bei -45 ⁰C unter Stickstoff während 1,5 Stunden gerührt. Dann wurde 0,8 g Natriumazid hinzugesetzt, das Gemisch wurde bei 80 ⁰C für 12 Stunden gerührt, und es wurde in Eiswasser eingegossen und mit Ither extrahiert. Die Extrakte wurden mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingeengt, wobei ein glasartiger Bückstand erhalten wurde, der durch Säulenchromatographie über Kieselerdegel unter Verwendung von Benzol-Chloroformmischungen als Elutionsmittel gereinigt wurde. Der isolierte Feststoff wurde aus Petroläther umkristallisiert, wobei 0,5 g reines 4-0-(6-Azido-2,3 * 6-trideoxy-a-D-erythro-hexopyrano sy1)-5♦6-0-cyclohexyliden-2-deoxy-1,3-di-N-benzyl-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin in einer Ausbeute von 76 % erhalten wurden. F. = 105-108 ⁰C (sintert bei 79 °C); Ca]Jp= +31 ° (c = 1; Chloroform).

Ein Gemisch von 0,35 g = 0,55 mMol dieser Verbindung und 0,167 g = 0,65 mMol, d. h. 20 ^iger Oberschuß, 6-Azido-6-deoxy-3,4-di-O-acetyl-D-glucal in 15 ml trockenem Benzol wurde mit 0,05 ml Bortrifluoridätherat behandelt und 25 Minuten bei 22 ⁰C gerührt.

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Es wurden 0,5 ml Triäthylamin hinzugegeben, und das Gemisch wurde nach einem Rühren während 15 Minuten mit Wasser gewaschen, getrocknet und unter Bildung eines Feststoffes eingeengt. Dieser wurde durch Säulenchromatographie auf Kierselerdegel (Benzol-Chloroform als Elutionsmittel) gereinigt, wobei 0,46 g reines, amorphes, glasartiges 4-0-[4-0-(4-0-Acetyl-6-azido-2,3,6-trideoxyoc-D-erythro-hex-2-enopyranosyl) -6-azido-2,3,6-trideoxy-a-D-erythro-hexopyranosyl]-5,6-0-cyclohexyliden-2-deoxy-1,3-di-N-benzyl-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin in einer Ausbeute von 88 % erhalten wurden. Ca]Jp = +42,5 ° (c = 0,46; Chloroform).

Ein Gemisch von 111 mg = 0,125 mMol dieser Verbindung, 3 ml 90 %igem Hydrazinhydrat, 2 ml Isopropanol und 20 mg Katalysator in Form von 10 % Palladium-auf-Holzkohle wurde unter Stickstoff auf 110 ⁰C für 20 Stunden erhitzt. Das Gemisch wurde bei 2 mm Hg eingedampft und in 10 ml Methanol erneut aufgelöst, mit 1N HCl . neutralisiert und mit 30 mg frischem Palladiumkatalysator bei 3 atm für 7 Stunden hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert und mit Methanol gewaschen. Die vereinigten, organischen Flüssigkeiten wurden mit HCl auf pH = 4 angesäuert, eine Stunde auf 40-50 ⁰C erwärmt und dann auf Anwesenheit von Cyclohexylidenschutzgruppe durch Eindampfen einer Teilmenge der Lösung zur Trockne, Aufbringen eines Tropfens des Rückstandes auf eine Dünnschichtchromatographieplatte und Besprühen mit Anisaldehydreagens (Anisaldehyd in Essigsäure mit 5 % HJSO^) und

Erhitzen auf 110 ⁰C untersucht. Die Abwesenheit eines carminrot gefärbten Flecks zeigte, daß die Hydrolyse der Cyclohexylidengruppe erfolgt war. Die Lösung wurde eingedampft, in 1 ml Wasser aufgenommen und aus einem Ionenaustauscherharz (CG 50 Amberlite) (NH⁺) mit Wasser, dann mit 1N wäßrigem Ammoniak und 1,5N wäßrigem Ammoniak eluiert. Die Eluate wurden auf ein geringes Volumen eingeengt, mit 1N H^SO^ neutralisiert und mit 3 Volumina Methanol-Aceton (1:1) behandelt. Der Niederschlag wurde in 1 ml Wasser erneut aufgelöst und, wie zuvor beschrieben, ausgefällt.

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Mt1	.2	21	3 :	- 9	,08	%
N4O	6,	H2SC	N	= 8	,93	%
H =	6,	54;	N
H =	69;

Es wurden 50 mg 4-0-f4-0-(6-Amino-2,3,6-trideoxy-a-D-erythrohexopyrano sy1)-6-amino-2,3,6-trideoxy-a-D-erythro-hexopyrano syl] 2-deoxystreptamin-disulfat in einer Ausbeute von 65 % in Form eines amorphen, hygroskopischen Pulvers erhalten. F. = 250 ⁰C (Zers.) [a]jj = +135 ° (c = 1; Wasser).

TLC (Dünnschichtchromatographie): R_f = 0,35 (Methanol-NH₄0H,

JLquivalentgewicht (in Eisessig) berechnet 154; gefunden 153· Massenspektrum: M/e = 421

berechnet für ^ci8^H36^N4°7

Elementaranalyse auf ^₁₈H₅₁
berechnet: C = 35,06;
befunden: C = 35,42;

Beispiel II

442 mg = ImMoI i^-Di-N
carbonylstreptamin und 820 mg = 3 mMol Tri-O-acetyl-D-glucal in 25 ml Benzol wurden mit 0,1 ml Bortrifluoridätherat für 0,5 Stunden bei Zimmertemperatur unter Rühren behandelt. Es wurden 0,5 ml Triethylamin zugegeben, und das Reaktionsgemisch wurde mit Wasser gewaschen, getrocknet und unter Bildung von 1,2 g Sirup eingeengt. Dieser Sirup wurde in 20 ml Methanol aufgelöst und über 0,2 g Katalysator aus 10 % Palladium-auf-Holzkohle bei atmosphärischem Druck während 2 Stunden hydriert. Nach dem Abfiltrieren des Katalysators wurde das Reaktionsgemisch eingeengt, wobei 1,13 g Sirup erhalten wurden, diese wurden mittels Säulenchromatographie über Kieselerdegel unter Verwendung von Benzol-Chloroform (1:2) als Elutionsmittel gereinigt. Es wurden auf diese Weise drei Bestandteile getrennt (TLC: Benzol-Äthylacetat, 1:1):

a) Hauptkomponente, R„ = 0,30 (Trisaccharid)

b) Komponente in geringer Menge, R_f = 0,09 (Disaccharid)

c) Komponente in geringer Menge, R^ = 0,05 (Disaccharid).

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Die Hauptkomponente (a) wurde aus Äther-Petroläther (60-80 ⁰C) umkristallisiert, wobei 560 mg = 65 % reines 4,6-Di-0-(4,6-di-0-acetyl-2,3-dideoxy-oc-D-erythro-hexopyranosyl)-1,3-di-N-benzyl-2,5-dideoxy-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin erhalten wurden. F. = 63-65 °C

Eine Lösung von 360 mg = 0,41 mMol dieser Verbindung in 10 ml Methanol wurde mit 20 mg Natriummethoxid während 12 Stunden behandelt. Das Gemisch wurde mit CO₂ neutralisiert und eingeengt, wobei ein Peststoff erhalten wurde, der mit Chloroform extrahiert wurde. Die organischen Extrakte wurden eingedampft, und der Bückstand wurde aus Chloroform-Äther umkristallisiert, wobei 280 mg reines 4,6-Di-0-(2,3-dideoxy-oc-D-erythro-hexopyranosyl)-1,3-di-N-benzyl-2,5-dideoxy-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin in einer Ausbeute von 96 % erhalten wurden. F. = 72 ⁰C. Ca]Jp = +66 ° (c = 1,1; Chloroform).

Zu einer Lösung von 0,351 g = 0,5 mMol dieser Verbindung in 2 ml trockenem Ν,Ν-Dimethylformamid wurden 0,2 ml Kohlenstofftetrachlorid und 0,2 ml Hexamethylphosphortriamid zugesetzt, und das erhaltene Gemisch wurde bei -45 °C während 1 Stunde gerührt. Es wurden 0,26 g = 4 mMol Natriumazid hinzugegeben, und die Lösung wurde bei 80 ⁰C für 18 Stunden gerührt. Sie wurde dann in Eiswasser gegossen und mit Äther extrahiert. Die Extrakte wurden mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingeengt, wobei 0,373 g eines glasartigen Produktes erhalten wurden, das mittels Chromatographie über Kieselerdegel (Chloroform) gereinigt wurde. Das eluierte Produkt (0,26 g, 70 %) war reines, glasartiges 4,6-Di-0-(6-azido-2,3,6-trideoxy-a-D-erythrohexopyranosyl)-1,3-di-N-benzyl-2,5-dideoxy-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin. CaJp⁴'⁴ = +44,7 ° (c = 0,78; Chloroform). TLC: R_f = 0,11 (Benzol-Äthylacetat, 1:1); E_f = 0,50 (Äthylacetat),

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Ein Gemisch von 0,2 g = 0,265 mMol dieser Verbindung und 0,05 g Katalysator in Form von 10 % Palladium-auf-Holzkohle in 10 ml Methanol wurde bei atmosphärischem Druck während 20 Stunden hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert und mit Ammoniak enthaltendem Methanol gewaschen, und die organischen Flüssigkeiten wurden eingeengt, wobei 0,192 g eines glasartigen Materials erhalten wurden.
TLC: R_f = 0,25 (Chloroform-Methanol-Ammoniak, 100:30:5)

Dieses Produkt wurde 48 Stunden mit 2 ml eines Gemisches aus lthanol-90 %igem Hydrazinhydrat (1:3) tinter Bückfluß erhitzt, und das Gemisch wurde dann zur Trockne eingedampft. Die Chloroformextrakte des Rückstandes ergaben nach dem Eindampfen 0,148 g eines glasartigen Produktes von reinem 4,6-Di-0-(6-amino-2,3,6-trideoxy-a-D-erythro-hexopyranosyl)-1,3-di-N-benzyl-2,5-dideoxystreptamin in einer Ausbeute von 95 %-[α] *j* ₌ +54,2 ° (c = 0,166; Methanol) TLC: R_f = 0,10 (Chloroform-Äthanol-Ammoniak, 100:30:5); Rf = 0,55 (Methanol-Ammoniak, 8:1)

Ein Gemisch von 0,23 B = 0,39 mMol dieser Verbindung und 65 mg Katalysator in Form von 10 % Palladium-auf-Holzkohle in 25 ml Methanol wurde bei atmosphärischem Druck für 16 Stunden hydriert. Nach dem Abfiltrieren des Katalysators und dem Einengen der klaren Lösung wurden 0,16 g eines glasartigen Rückstandes von reinem 4,6-Di-0-( 6-amino-2,3,6-trideoxy-oc-D-erythrο-hexopyranosy 1) 2,5-dideoxystreptamin in einer Ausbeute von 100 % erhalten.

Ca]|⁴ = +139,3 ° (c = 0,37; Methanol).

TLC: R_f = 0,48 (Methanol-Ammoniak, 4:1); TLC für Kanamycin A:

B_f = 0,25);

Papierchromatographxe: R_ci_ucosani:i_n ^: 0,26 (n-Butanol-Pyridin-Wasser-

Essigsäure, 6:4:3:1)

PMR-Werte (D₃O): S 1,10 - 2,20 (bm, H-2eq H-5ax 2 H-2¹, 2 H-2",

2 H-3¹ und 2 H-3"), 2,70 - 3,05 (m, 4 H, H-6¹,6',6" ,6"), 3,30 - 3,7 (m, 8H, Skelettprotonen), 5,04 (m, 1 H, H-1"a), 5,06 (m, 1 H, Η-1'α

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Elementaranalyse auf ^^.βΗ,^Ν^Ο^:

berechnet: C = 53,45; H = 8,97; N = 13,85 % gefunden: C = 53,16; H = 8,74; N = 13,90 %

Beispiel III

Dieses Beispiel zeigt eine Alternativmethode zum Abschluß der Synthese gemäß Beispiel II.

Ein Gemisch von 0,7 g = 1 mMol 4,6-Di-0-(6-azido-2,3,6-trideoxya-D-erythro-hexopyranosyl)-1,3-di-N-benzyl-2,5-dideoxy-1,3-di-N-methoxycarbonylstreptamin, 3 ml 90 %igem Hydrazinhydrat, 50 mg Katalysator in Form von 10 % Palladium-auf-Holzkohle und 2 ml Äthanol wurde unter Rückfluß für 6 Stunden erhitzt. Nach dem Eindampfen des Gemisches wurden 10 ml Äthanol und weitere 50 mg Palladiumkatalysator hinzugesetzt und die Suspension wurde bei 25 ⁰C und 2 atm während 6 Stunden hydriert. Das Gemisch ergab nach der Filtration und dem Einengen 0,4 g eines glasartigen Rückstandes von reinem 4,6-Di-0-(6-amino-2,3»6-trideoxy-a-D-erythro-hexopyranosyl)-2,5-dideoxystreptamin in einer Ausbeute von 99 %·
[a]|⁴ = +139 ° (c = 0,5; Methanol)

TLC: B_f = 0,47 (Methanol-Ammoniak, 4:1); TLC für Kanamycin A: E_f = 0,25)·

Das PMR-Spektrum dieser Verbindung war mit demjenigen des in Beispiel II hergestellten Produktes identisch.

Elementaranalyse auf ^eie^H36^N4⁰6^:

berechnet: C = 53,45; H = 8,97; N = 13,85 % gefunden: C = 53,56; H = 9,09; N = 13,76 %

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Claims (5)

Patentansprüche

1. Verbindung in Form eines Pseudotrisaccharids der folgenden allgemeinen Formeln:

[A] [B] [C]

oder [A] [C¹] [A¹]

worin [A] eine Gruppe der folgenden Formel ist:

R₁ worin: R^ = H, F, OH oder SH; Rp = H oder NIi₂; und

R, = H oder -CH₂-R₄, wobei R^ = OH oder NH₃ bedeutet; vorausgesetzt daß, wenn R2 = H ist, R, = -CH₂-KH₂ bedeutet, und daß wenn R, = H oder -CH₂-OH ist, R₂ = NH₃ bedeutet;

[A ] eine Gruppe der folgenden Formel ist:

709851/1069 ORIGINAL INSPECTED

worin: R₁. = H, OH, SH oder Halogen; R_c = H, OH oder NH R₀, worin R_Q = H oder Me bedeutet;

fi„ = H oder -CH₂-R₀, worin R_Q = H, QH oder NH₂ bedeutet; vorausgesetzt, daß wenn R^ = H oder OH ist, R~ = -CH₂NH₂ bedeutet, und daß wenn Rj = H oder -CH₂-OH ist, R,- = NH R_fl bedeutet;

[B] eine Gruppe der folgenden Formel ist:

worin Rp und R, die für [A] gegebene Definition besitzen; [C] eine Gruppe der folgenden Formeln ist:

oder

OH

worin R₁₀ = H oder OH ist und R₁₁ = H, CH, oder CH₂-NH₂ ist; und

[C ] eine Gruppe der folgenden Formel ist:

CO.CHOH-CH₂-

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-A-

worin R^₀ und R^₁ die für [C] gegebene Definition besitzen, worin beide glycosidische Bindungen ct-glycosidische Bindungen sind, λ sowie die pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze hiervon.

2. Verbindung nach Anspruch 1 der folgenden Formel:

CA]-[B] CC]

worin: R. = H oder OH ist;

Rp = H oder NHp ist; und
R, = CH₂NH₂ ist.

3. Verbindung nach Anspruch 1 der folgenden Formel:

[A] [C¹] CA¹]

worin:

^ß1 = H oder oder OH ist, 2 ist; und ^R2 = H oder , NHp NH₂ ist, ₂0H ist. ^R3 = CH₂NH₂ = -CH₂NH ist, ^E5 = H OH ist, ^R6 = H₁ oder NHCH R_{7 2} oder -CH

4. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 3« dadurch gekennzeichnet, daß in an sich bekannter Weise die entsprechenden, geschützten Vorläufer-

.-pseud©monosaccharide monosaccharide oder/unter Bildung eines geschützten Fseudotrisaccharids miteinander umgesetzt und die Schutzgruppen anschließend entfernt sowie gegebenenfalls die erhaltenen Pseudotrisaccharide in ein Säureadditionssalz überführt warden.

5. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt eines Pseudotrisaccharids nach einem der Ansprüche Λ bis 3·

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