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DE2459291B2 - Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrom-bin-Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen - Google Patents

Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrom-bin-Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen

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DE2459291B2
DE2459291B2 DE2459291A DE2459291A DE2459291B2 DE 2459291 B2 DE2459291 B2 DE 2459291B2 DE 2459291 A DE2459291 A DE 2459291A DE 2459291 A DE2459291 A DE 2459291A DE 2459291 B2 DE2459291 B2 DE 2459291B2
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Biotest Serum Institut GmbH
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Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrombin-Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man als Ausgangsmaterial ein gefrorenes Ionenaustauscherplasma verwendet, das bei Temperaturen von 2—8° C wieder aufgetaut wird und aus dem die überstehende Plasmaflüssigkeit von dem Faktor-VIII-enthaltenden Proteinniederschlag abgetrennt und dieses Kryoprazipitat in an sich bekannter Weise zu einem Faktor-VHI-Konzentrat aufgearbeitet wird, während die Plasmaflüssigkeit durch Adsorption über handelsüblichem Tricalciumphosphat von den Faktoren II, VH, IX und X befreit wird, und anschließend aus der Plasmaflüssigkeit über kolloidaler Kieselsäure mit einer spezifischen Oberfläche von 50 bis m2/g die noch im Plasma vorliegenden Gerinnungsfaktoren und andere unstabile Proteine adsorbiert werden und eine Lösung von lagerstabilen Serumproteinen zurückbleibt
Der große Bedarf an Hurnanproteinen macht es notwendig, Humanplasma in einer Weise aufzuarbeiten, durch die möglichst quantitativ sämtliche Plasmaproteine bei der Fraktionierung gewonnen werden. Als Fraktioniermethode hat sich die sogenannte Cohn-Fraktionierung (E. J. Coh η u.a„ A system for the separation of the components of human blood: Quantitative procedure for the separation of the protein components of human plasma. J. Amer. chem. Soc, Bd.
72 [1950], S. 465) weitgehend durchgesetzt, obwohl viele Plasmaproteine dabei so verändert beziehungsweise denaturiert werden, daß sie nicht mehr infusionsfähig sind oder aber bei der Aufarbeitung völlig verloren gehen. Die Ausbeuten an den gewünschten Produkten sind daher nur gering. Außerdem wird das im Ausgangsmaterial vorhandene Gammaglobulin zerstört, so daß es nicht intravenös anwendbar ist
Bei der heute am häufigsten verwendeten veränderten Cohn-Fraktionierung (P. Kistler jnd H. Nitschmann, Large Scale Production of Human Plasma Fractions. Vox Sang, Bd. 7 [1962], S. 414-424) werden lediglich drei Produkte aus dem Plasma gewonnen, nämlich Albumin, Gammaglobulin und gerinnbares Fibrinogen. Dabei wird oder kann aus Gründen der Hepatitisgefahr die Fraktion I, die das Fibrinogen enthält, nur aus kleinen Plasmapools hergestellt werden. Der bei diesen Fraktionierungen verwendete Alkohol wirkt als organisches Lö^ungsmittel denaturierend auf die Plasmaproteine (W. Kauzmann, Advan. Protein Chem, Bd. 14 [1959J S. 37). Die für die Struktur und Stabilität der Proteine wichtigen Bindungen zwischen den hydrophoben Proteinresten werden durch den bei der Fraktionierung verwendeten Alkohol gesprengt, was zur Denaturierung wie auch Aggregatbildung der Proteine führt Derart aggregierte und denaturierte Proteine liegen zum Beispiel in den auf diese Weise erhaltenen Standard-Gammaglobulin-Präparaten vor, die deshalb nicht für eine intravenöse Anwendung geeignet sind. Es hat daher nicht an Versuchen gefehlt Proteine ohne Anwendung von Fällungsmitteln zu isolieren.
Aus Nature, Bd. 203 (1964), Seite 312 ist ein Verfahren bekannt nach dem Citrat-Plasma, d. h. ein mit Citrat stabilisiertes Plasma, eingefroren wurde und sodann daraus nach dem Auftauen bei 0—8°C eine geringe Menge eines Proteinniederschlages erhalten wurde, der Faktor-VIlI-Aktivität, das heißt antihämophiles Globulin A enthielt Der Faktor-VIH-Anteil dieser Fraktion war zwar groß genug, um daraus klinisch anwendbares Faktor-VIII-Konzentrat herstellen zu können; das Verfahren hatte jedoch den Nachteil, daß die auf Kryoprazipitat aufzuarbeitenden Blute mit Citrat stabilisiert sein mußten, so daß anschließend die Citrat enthaltenden Plasmen entweder nach der Cohnschen unzulänglichen Fraktioniermethode aufgearbeitet werden mußten oder das Citrat durch Dialyse aus dem Plasma entfernt werden mußte, was im großtechnischen Maßstab noch nicht realisierbar ist.
Zu dem sogenannten »Prothrombin-Komplex« oder den »Vitamin-K-abhängigen Gerinnungsfaktoren«, die alle in der Leber synthetisiert werden, gehört der Faktor IX zusammen mit den Faktoren II, VII und X. In Journal ot Laboratory and Clinical Medicine, Bd. 53 (1959), Seite 322 wurde über ein klinisch anwendbares Prothrombin-Komplex-Präparat berichtet. Zur Herstellung dieses Prothrombin-Komplex-Präparates wurde Plasma verwendet, das aus über Ionenaustauscher stabilisiertem Blut gewonnen und anschließend in eine citrathaltige
Lösung aufgenommen wurde.
Zur Reinigung des Prothrombin-Komplexes wurde von der Eigenschaft der Faktoren FI, VJI, IX und X Gebrauch gemacht, an anorganische Adsorbentien oder Ionenaustauscher-Cellulose adsorbierbar zu sein. Der Prothrombin-Komplex wurde direkt aus dem vorstehenden Plasma an Bariumsulfat oder Calciumphosphat adsorbiert. BaSO« ergab jedoch toxische Endprodukte (J. L T u 11 i s u. aM Clinical use of human prothrombin
complexes. New England Journal of Medicine, Bd. 273 [1965], Seite 667) und konnte deshalb nicht verwendet werden.
Nach Souiier u.a. (Pathol. Biologie 1959, Seite 2477) ließ sich die vorstehende Methode jedoch nur unter Verwendung von mit Ethylendiamin-tetraessigsäure stabilisierten Plasmen in einem größeren Maßstab durchführen. Diese Methode erhielt jedoch dadurch einen entscheidenden Nachteil, daß die Blutzellen nicht mehr zu Tranisfusionszwecken verwendet werden ι ο durften. Ethylendiamin-tetraessigsäure als Stabilisator für therapeutisch zu verwendende Plasmen ist in vielen Ländern verboten.
Von Bruning und Lo el ige r wurde in British Journal of Haematology, Bd. 21 (1971), Seite 377 ein Verfahren unter Verwendung von AI(OH)3 beschrieben, nach dem ein Prothrombiii-Komplex-Konzentrat aus mit Citrat stabilisierten Plasmen gewonnen wurde, aus denen bi-reits das Kryopräzipitat entfernt worden war. Dieses Verfahren hatte jedoch entscheidende Nachteile: (1.) Das Verfahren war für größere Plasmamengen ungeeignet Es konnten nur kleine Plasmapools aufgearbeitet werden, da das Citrat durc' Dialyse entfernt werden mußte, damit der Prothrombin-Komplex adsorbierbar und eluierbar war. (2.) Das verwendete Aluminiumhydroxid in Gegenwart von Citrat konnte zu erhöhten Aluminiumkonzentrationen durch Chelatbildung führen. (3.) Bei diesem Verfahren war es nur unter Anwendung der herkömmlichen und sehr verlustreichen Fraktioniermethoden möglich, weitere therapeutisch verwendbare Proteinfraktionen zu gewinnen. Es wurde schließlich auch bereits beschrieben, wie man den Prothrombin-Komplex aus Plasma, das mit Citronensäure und Dextrose stabilisiert wurde, unter Verwendung von Diethylaminoethyl-cellulose als Adsorptionsmittel gewinnen kann. Bei diesem Verfahren mußte das Plasma jedoch mit einem gleichen Volumen Wasser verdünnt werden, um die Citratkonzentrationen vor der Adsorption zu verdünnen. Dadurch entstanden erhebliche Schwierigkeiten bei der weiteren Fraktionierung. Allen bekannten Methoden zur Gewinnung des Prothrombin-Komplexes haften daher erhebliche Nachteile an.
Die begrenzte Verwendbarkeit von durch Antikoagulantien stabilisiertem Blut zeigte sich auch bei der Gewinnung von Kryopräzipitat Da es zur Gewinnung von Faktor-VIII wünschenswert wir, möglichst alle Plasmaphorese-Plasmen auf Kryopräzipitat hin aufzuarbeiten, war man bisher praktisch auf Citrat als Stabilisator angewiesen.
Bisher war kein Verfallen bekannt, bei dem man aus einem Plasma ohne Stabilisatorzusatz nach Abtrennung eines Kryopräzipitates au? dem Plasmarest ein Prothrombin-Komplex-Konzentrat gewinnen konnte.
Bisher bestand die üblichste Methode zur Serumgewinnung in der Spontangerinnung von Blut, das in Behältern aufgefangen wurde, die keine Stabilisatoren enthielten. Andere Verfahren zur Serumgewinnung gingen von Citratplasma aus, das durch Calciumzugabe zur Gerinnung gebracht wurde. Das hierbei gewonnene Serum war jedoch durch den Citratgehalt für therapeutische Zwecke ungeeignet Der Nachteil dieser Methode bestand offenkundig darin, daß die wertvollen Gerinnungsfaktoren beim Gerinnungsvorgang verbraucht wurden und verlorengingen.
Fs wurde nun überraschenderweise gefunden, daß man therapeutisch verwendbares, Faktor-VIII-cnthaltendes Kryopräzipitat neben einem hepatitissicheren Konzentrat der Gerinnungsfaktoren II, VII, IX und X ohne Verwendung von Alkohol wie bei der Cohn-Frak-, tionierung, und außerdem noch stabile, hepatitissichere und lagerfähige Serumproteine nebeneinander aus einem besonderen Ausgangsmaterial gewinnen kann.
Im erfindungsgemäßen Verfahren wird ein antihämophiles Globulin A enthaltendes Konzentrat neben einem Prothrombin-Komplex, der Prothrombin, Proconvertin, Stuart-Prower-Faktor und antihämophiles Globulin B enthält, und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen hergestellt Dabei wird als Ausgangsmaterial ein gefrorenes Ionenaustauscherplasma verwendet, das bei 2 bis 8° C wieder aufgetaut wird und aus dem die überstehende Plasmaflüssigkeit von dem Faktor-VlIlenthaltenden Proteinniederschlag abgetrennt und dieses Kryopräzipitat in an sich bekannter Weise zu einem Faktor-VIII-Konzentrat aufgearbeitet wird, während die Plasmaflüssigkeit durch Adsorption über handelsüblichem Tricalciumphosphat von den Faktoren II, VII, IX und X befreit wird, und anschließend werden aus der Plasmaflüssigkeit über kolloidaler Kieselsäure mit einer spezifischen Oberfläche von 50 bis 406 m^/g die noch im Plasma vorliegenden Gerinnungsfaktoren und andere unstabile Proteine adsorbiert, und es bleibt eine Lösung von lagerstabilen Serumproteinen zurück.
Die Serumgewinnung macht am deutlichsten, wie bei den üblichen Herstellungsverfahren wertvolle Proteine verlorengingen. Nach der sogenannten Kaskaden-Theorie der Gerinnung läßt sich der bekannte Gerinnungsablauf mit einer ungezügelten Explosion vergleichen. Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren der Serumherstellung aus gefrorenem Ionenaustauscherplasma wird diese ungezügelte Explosion jedoch in einen kontrollierten Ablauf gebracht, in dem Schritt für Schritt die Gerinnungsfaktoren aus dem Blut unter Erhalt ihrer Aktivität isoliert werden. Zuerst werden Fibrinogen und Faktor VIII in Form von Kryopräzipitat aus dem Ionenaustauscherplasma isoliert, danach werden die Faktoren II, VII, IX und X in Form des Prothrombin-Komplexes isoliert Auf diese Weise erhält man eine Proteinlösung, die nicht mehr als Plasma bezeichnet werden kann, da die wichtigsten Plasmagerinnungsfaktoren entfernt wurden. Diese Lösung kann aber auch noch nicht als Serum bezeichnet werden, da noch Plasmagerinnungsfaktoren wie z. B. die Faktoren I und V in geringen Konzentrationen enthelten sind. Erst durch die Behandlung mit kolloidaler Kieselsäure werden auch diese Faktoren entfernt.
Das verwendete Ionenaustauscherplasma soll nicht älter als 4 Tage, vorzugsweise nicht älter als 48 Stunden sein, wenn es gefroren wird. Es wird vorteilhaft bei etwa —400C eingefroren und sodann bei Temperaturen von 2 bis 80C wieder aufgetaut. Man erhält nach den. Auftauen einen bei niedrigen Temperaturen unlöslichen, an Factor VIII reichen Proteinniederschlag, der in Analogie zu dem Kryopräzipitat aus mit Ci'.rat stabilisiertem Plasma ebenfalls als Kryopräzipitat bezeichnet wird. Das von dem Kryopräzipitat befreite Plasma enthält noch alle Faktoren des Prothrombin-Komplexes. Der v-rbleibende Plasmaüberstand läßt sich mit handelsüblichem Tricalciumphosphat adsorbieren, wobei die Faktoren des Prothrombin-Komplexes entfernt werden. Nach der Behandlung mit der kolloidalen Kieselsäure entsteht ohne einen spontanen Gerinnungsablauf ein stabilisatorfreies Produkt. Dieses Verfahrensschema, des in der Zeichnung gezeigt ist und bei dem therapeutisch anwendbare Gerinnungstherapeutika und Humanserum gewonnen werden, hat
folgende Vorteile gegenüber der Plasmaverarbeitung nach bekannten Verfahren:
I.) Es werden keine Stabilisatorzusätze benötigt.
2.) Die Erythrozyten sind durch einfaches Aufschlämmen in Kochsalz infusionsfähig.
3.) Man gewinnt ein Kryopräzipitat, wie es sonst nur aus mit Citrat stabilisiertem Plasma gewonnen wird, das in an sich bekannter Weise auf antihämophiles Globulin A aufgearbeitet wird.
4.) Der Prothrombin-Komplex läßt sich in an sich bekannter Weise an die üblichen anorganischen Adsorbentien und an hochmolekulare Zucker- und Cellulose- Ionenaustauscher adsorbieren.
5.) Das von Kryopräzipitat und Prothrombin-Komplex befreite, stabilisatorfreie »Plasma« entspricht [Ί in seiner Zusammensetzung fast einem Serum. Durch die weitere Adsorption, mit der auch die Lipide entfernt werden, gewinnt man eine Lösung von lagerstabilen Serumproteinen, die in etwa folgende Zusammensetzung hat:
Fraktion: Al- <r|-Glo- £72-Glo- ./f-Glo- y-Glo-
bumin bulin bulin bulin bulin
%-Gehalt
relativ
64
16
Die Erfindung wird durch die nachstehenden Beispiele näher erläutert:
35
Beispiel
A) Herstellung von antihämophiles Globulin A
enthaltendem Konzentrat
(erstes Verfahrensprodukt)
Spender-Venenblut wurde über einen Polystyrol-Sulfonat-Kationenaustauscher in der Na+-Form entnommen. Das Blut wurde möglichst bald nach der Blutentnahme zentrifugiert, und die in physiologischer Kochsalzlösung aufgeschlämmten Erythrozyten wurden dem Spender reinfundiert Das Plasma wurde spätestens innerhalb von 48 Stunden, vorzugsweise bei -40° C, eingefroren.
Für die nachstehend beschriebene Weiterverarbeitung wurden folgende Reagenzien verwendet:
Puffer: 0,02 M Tri-(hydroxymethyl)-aminomethan, mit 1 N HCI auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt
Citratlösung: 0,5 M Trinatriumcitrat Citronensäure: 0,02 M Citronensäurelösung.
Gepuffertes Waschwasser: 0,02 M Lösung von Tri-(hydroxyrnethyl)-aminomethan, pH 7,0, die 8% Ethanol enthielt
Pufferlösung für Faktor-VIII: 5,88 g Trinatriumcitrat und 2.42 g Tri-(hydroxymethyl)-aminomethan in einem Liter destilliertem H2O. Der pH 7,0 wurde mit 19,0 ml 1 N HCl eingestellt Dazu wurde ein Liter 0,45%ige Kochsalzlösung gegeben. Pro Liter der 1 :1-Mischung eo der beiden Lösungen wurden 15 g Glycin zugefügt Der pH-Wert der Gesamtmischung schwankte zwischen pH-Werten von 6,8 bis 7,0.
Das gefrorene Plasma wurde bei einer Temperatur unter +4"C aufgetaut Es wurde vorzugsweise im kontinuierlichen Fluß oder durch Einzelgefäßzentrifugierung zentrifugiert Die erhaltene Kälteausfällung (Kryopräzipitat) wurde bei der weiteren Fraktionierung zu einem Faktor-VIII-Konzentrat und das Restplasma für die Gewinnung des Prothrombin-Komplex-Konzentrates und der Lösung der lagerstabilen Serumproteine weiterverwendet.
Das Kryopräzipitat wurde in der Wärme (Raumtemperatur, nicht über 30°C) mit einer Pufferlösung von Tri-(hydroxymethyl)-aminomethan gelöst. Anschließend wurde durch Zentrifugieren und/oder Filtrieren von ungelösten Proteinbestandteilen geklärt. Das gelöste Kryopräzipitat wurde bei Raumtemperatur mit AI(OH)3-GeI verrührt. Der Überstand nach Entfernung des Adsorptionsmittels wurde durch Zugabe von 0,5 M Trinatriumcitratlösung (das Trinatriumcitrat kann auch in fester Form bzw. anderen Konzentrationen zugegeben werden) 0,02 M an Trinatriumcitrat gemacht und mit 0,02 M Citronensäure auf einen pH-Wert von 6,1 eingestellt. (Die Citronensäure kann auch in fester Form bzw. anderen Konzentrationen zugegeben werden wobei der einzustellende pH-Wert bei 6,1 optimal ist *.!*«··· A..nk »».nU nUnn *,r%A ■■»*«»»· tnweinUan Unnm ·Λ AnU
sich ein Bereich von pH 5,7 bis 7,8 ergibt) Danach wurde die Lösung mit Polyethylenglykol mit einem mittlerer Molekulargewicht von 4000 in fester Form in einet solchen Menge versetzt, bis seine Konzentration maximal 5%, vorzugsweise 3% betrug. Nach der anschließenden Zentrifugation wurde der Niederschlag verworfen. Zu dem Oberstand wurde kolloidale Kieselsäure bis zu einer Konzentration von 5 vorzugsweise 3 Gewichtsprozent gegeben. Besonders gute Ergebnisse wurden erhalten, wenn man die Mischung bei Raumtemperatur 2 Stunden leicht rührte Anschließend wurde zentrifugiert Durch Erhöhung dei Konzentration des PolyethylenaSykols im Oberstand aul maximal 12, vorzugsweise 10%, wurde das antihämophi Ie Globulin A ausgefällt und danach abzentrifugiert.
Der Niederschlag wurde mit kaltem (beispielsweise 2°C) gepuffertem Waschwasser gewaschen, der Wasch puffer dann abdekantiert und der Niederschlag untei leichtem Rühren in wenig, zum Beispiel 1/100 des Ausgangsplasma-Volumens, Pufferlösung für Faktoi VIII aufgelöst Die Lösung wurde anschließend in einei Rotations-Durchflußapparatur (Dill-Apparatur) ultra violett bestrahlt Die Strahlungsintensität betrug maxi mal 2 mWatt/Min. χ cm2 bei einer Wellenlänge vor 254 nm, vorzugsweise 1 mWatt/Min. Die LTV-bestrahltc Lösung wurde in an sich bekannter Weise sterilfiltriert Die gewonnene Proteinlösung enthielt antihämophiles Globulin-A-Konzentrat hoher Wirksamkeit und lie£ sich ohne Aktivitätsverlust gefriertrocknen. Wurde es ir der Hälfte des abgefüllten Volumens mit Wasser gelöst so enthielt es eine 10- bis 20fache Faktor-VlII-Aktivitäi gegenüber einem Normalplasma, bei einer Prot'inkon zentration, die nur ein Zwanzigstel der Proteinmeng« enthält, die Plasma mit dem gleichen Gehalt ar antihämophiler Globulin-A-Aktivität aufweist Da-Konzentrat ließ sich intravenös an Patienten mi' fehlender Faktor-VIII-Aktivität (Hämophile) verabrei chen.
B) Herstellung des Prothrombin-Komplexes
(zweites Verfahrensprodukt)
Der Prothrombin-Komplex, auch P. P. S. B. bezeich net, en .hält
P = Prothrombin (Faktor II) P = Proconvertin (Faktor VTI) S = Stuart-Prower-Faktor (Faktor X) und B = antihämophiles Globulin B (Faktor IX).
Reagenzien:
Natronlauge: I n-NaOH-Lösung.
/f-Propiolacton: Frisch destilliertes0-Propiolacton. Tricalciumphosphat: Geeignet sind Präparate verschiedener Hersteller (Merck, Riedel de Haen und andere).
Citratlösung: 0,05 M Trinatriumcitratlösung.
Essigsäure: 2 n-Essigsäurelösung.
lonenaustauscherplasma, aus dem durch das vorstehend beschriebene Verfahren das Kryopräzipitat entfernt worden war, wurde bei Raun temperatur mit /i-Propiolacton bis zu einer Konzentration von 0,05% bis maximal 0,3%, vorzugsweise 0,25% versetzt. Es wurde eine Stunde bei Zimmertemperatur gerührt und während dieser Zeit durch kontinuierliche Zugabe von NaOH der pH-Wert bei Werten zwischen 6,5 und 8,0, vorzugsweise bei 7,2 gehalten. Nach UV-Bestrahlung in einer Dill-Apparatur wurde die Hydrolyse des /?-Propio-
Konstanthaltung des pH-Wertes zu Ende geführt, bis eine pH-Konstanz ohne weitere NaOH-Zugabe erreicht war. Das mit /3-Propiolacton behandelte und bestrahlte lonenaustauscherplasma wurde dann bei Raumtemperatur bis zu einer Konzentration von 0,8 Gew.-% an Tricalciumphosphat adsorbiert, vorzugsweise mit mindestens 0,1 Gew.-%. Höhere Anteile oder mehrfache Behandlung mit dem Tricalciumphosphat können angewendet werden, bringen aber keine Vorteile. Anschließend wurde zentrifugiert und der Niederschlag zur Gewinnung des P. P. S. B.-Konzentrats weiter vf '-arbeitet, während der Überstand als Ausgangsmaterial für die Herstellung des dritten Verfahrensproduktes diente. Der Niederschlag wurde mit einer Citratlösung eluiert, dann mit frischer Citratlösung ein zweites Mal eluiert, und die vereinten Eluate wurden mit kolloidaler Kieselsäure bis zu einer Konzentration von maximal 3, vorzugsweise 0,5 Gew.-% behandelt. Nach der Adsorption und Entfernung des Kieselsäureniederschlages wurde der pH-Wert des Überstandes mit Essigsäure auf einen pH-Wert von 6,8 eingestellt. Vorteilhafterweise wurde die Lösung dann mit einem Ultrafiltrationsgerät auf etwa '/j bis Vs ihres Volumens ankonzentriert, anschließend sterilfiltriert und gefriergetrocknet.
Wird das gefriergetrocknete P. P. S. B.-Konzentrat in Wasser gelöst, so enthält es eine etwa 25fache Aktivität der P. P. S. B.-Faktoren gegenüber einem Normalplasma. Das Konzentrat ist zur Therapie von Mangelzuständen wie Hämophilie D geeignet.
C) Herstellung der Lösung von stabilen
Serumproteinen (drittes Verfahrensprodukt)
,VIJIVIIVIIU
UVIUt.ll
Verfahrerisstufen behandeltes lonenaustauscherplasma wurde mit kolloidaler Kieselsäure bis zu einer Konzentration von 3 Gew.-% adsorbiert, zentrifugiert und sterilfiltriert. Es können auch I bis 5 Gew.-% Kieselsäure angewendet werden.
Beispiel 2
Die Arbeitsweise von Beispiel 1 wurde bis zur Stufe des Auflösens des zweiten Polyethylenglykolniederi'i Schlages wiederholt, wobei dem Faktor-VIII-Lösungsmittel jedoch Heparin zugesetzt wurde, um leichter eine Stabilisierung der in Lösung vorliegenden Proteine zu erreichen und die Sterilfiltration zu erleichtern.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims (3)

Patentansprüche:
1. Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrombin-Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen, dadurch gekennzeichnet, daß man als Ausgangsmaterial ein gefrorenes Ionenaustauscherplasma verwendet, das bei Temperaturen von 2—8°C wieder aufgetaut wird und aus dem die fiberstehende Plasmaflüssigkeit von dem Faktor-VIII-enthaltenden Proteinniederschlag abgetrennt und dieses Kryoprazipitat in an sich bekannter Weise zu einem Faktor-VIII-Konzentrat aufgearbeitet wird, während die Plasmaflüssigkeit durch Adsorption über handelsüblichem Tricalciumphosphat von den Faktoren II, VlI, IX und X befreit wird, und anschließend aus der Plasmaflüssigkeit über kolloidaler Kieselsäure mit einer spezifischen Oberfläche von 50 bis 400 mVg die noch im Plasma vorliegenden Gerinnungsfaktoren und andere unstabile Proteine adsorbiert werden und eine Lösung von lagerstabilen Serumproteinen zurückbleibt
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das verwendete Ausgangsmaterial nicht älter als 4 Tage, vorzugsweise nicht älter als 48 Stunden ist, wenn es gefroren-wird.
3. Verfahren nach Ansprüchen 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, daß man das gelöste Kryoprazipitat über Al(OH)3-GeI adsorbiert und nach Entfernung des Adsorptionsmittel mit Trinatriumcitrat auf eine Molarität von 0,005 bis 0,04, vorzugsweise 0,02, und einen pH-Wert von 5,7 bis /,8, vorzugsweise 6,1, einstellt
DE2459291A 1974-12-14 1974-12-14 Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrombin- Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen Expired DE2459291C3 (de)

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DE2459291A DE2459291C3 (de) 1974-12-14 1974-12-14 Verfahren zur Herstellung eines antihämophiles Globulin A enthaltenden Konzentrats neben einem Prothrombin- Komplex und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen
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