DE2038926A1

DE2038926A1 - Mikrobiologische Reduktion

Info

Publication number: DE2038926A1
Application number: DE19702038926
Authority: DE
Inventors: Kuang-Chao Wang
Original assignee: Roche Palo Alto LLC
Current assignee: Roche Palo Alto LLC
Priority date: 1969-08-22
Filing date: 1970-08-05
Publication date: 1971-03-04
Also published as: BR6915378D0; FR2060121A1; NL7012270A

Description

PATENTANWÄLTE

DR. W. SCHALK· DJPL.-ING. P. WlRTH · DIPL.-ING. G. DAN N EN BERG DR. V. SCHMIED-KOWARZIK · DR. P. WE! NHOLD · DR. D. GUDEL

6 FRANKFURT AM MAIN

Ott. ESCHENHEIMER ITRAfSE 39

Syntex Corix>ration Apartado Postal 7386 Panama / Panama

ΟΛ/ΟΛ

Mikrobiologische Reduktion

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf die Reduktion oxo-haltiger Verbindungen durch mikrobiologische Maßnahmen. Sie bezieht sich insbesondere auf die selektive mikrobiologische Reduktion symmetrischer Dioxocycloalkane zu den entsprechenden, optisch aktiven Oxohydroxycycloalkanen.

Die Verwendung von Mikroorganismen zur Erzielung der Reduktion einer Oxogruppo i3t nicht neu. So richtet sich z.B. die US-Patentschrift 3 432 393 auf die mikrobiologische Reduktion symmetrischer Cycloalkan-l^-dione.

Es v/urrle nun gefunden, daß symmetrische Uioxocycloalkane in guten und verbesserten Ausbeuton mittels einer neuen und unterschiedlichen Reihe von Mikroorganismen selektiv reduziert wcrdon können, tirfindungsgemäid erfolgt die selektive Reduktion dor Uioxocycloalkane durch Verwendung der Spezies des genus Schizosaccharomycea zur Krzielung der entsprechenden üxohydroxycycloalkana.

109810/2251 bad original

Die im erfindungsgenäi3en Verfahren verwendbaren Kulturen der Spezies von genus Scnizosaccharomyoes sind aus den bekannten Quellen erhältlich, wie z.B. American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, Maryland; the Northern Utilization Research and Development Branch, US Department of Agriculture (NRKL)₁ Peoria, 111.; und Centraalbureau voor Schimmelcultures (CBS)₁ Baarn, Holland. Die folgenden Spezies sind typisch für die aus diesen Quellen verfügbaren Materialien sind sind repräsentativ für diejenigen, die im erfindungsgemäiäen Verfahren verwendet werden können.

japonicus	ATCC	10660
octosporus	ATCC ATCC	2479 42ü6
pombe	ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC	2476 2478 14548 16491 16979
versatilis	ATCC	9987

Besonders wichtig sind die Stämme Schizosaccharomyces pombe ATCC 24?6 und ATCC 2478.

Geeignete Substrate für das erfindungsgemäße Verfahren sind eine Vielzahl symmetrischer 1,3-Dioxocycloalkane, wie sie z.B. in der US-Patentschrift 3 432 393 definiert sind, und insbesondere solche der folgenden Formel:

_Rl0

0'

in welcher
R für Methylen oder Äthylen stehtj

R Methyl oder Äthyl bedeutet?

ο ·

R für uine aliphatische Gruppe mit 3-18 Kohlenstoffatomen oder eine carbo-

oyolischo Gruppe der Teilformel:

109810/2251 ^BAD

(2)

steht, und Derivate derselben, in welchen die aliphatische Gruppe und carbocyclische Gruppe wahlweise substituiert und ungesättigt sind. Diese wahlweisen Substituenten sind im Fall der aliphatischen Gruppe z.B. Oxo, Carboxy, Carboalkyloxy, Hydroxy, Acyloxy, Alkyloxy, Alkyl, Aryl, Cycloalkyl oder Halogen, und im Fall der carbocyclischen Gruppe Oxo, Hydroxy, Acyloxy, Alkyloxy ^ Alkyl oder Halogen. Die wahlweise Ungesättigtheit ist als eine oder mehrere Doppelbindungen (olefinische Ungesättigtheit) anwesend, die in den aliphatischen oder carbocyclischen Gruppen vorliegen.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann durch die folgende Gleichung dargestellt werden:

1°

12
in welcher R, R und R jeweils die oben angegebene Bedeutung haben.

Das Verfahren besteht im Reduzieren eines 1,3-Dioxocycloalkans mit einer Spezies von genus Schizosaccharomyces zur Erzielung des entsprechenden lß-Hydroxy-3-oxocycloalkans.

109810/2251

_ Ii- _

Das erfindungsgemäße Verfahren ist besonders geeignet zur Herstellung von lß-Hydroxy-3-oxocyclopentanen (R = Methylen) in einer ersten Gruppe, die

eine 2ß-Methyl- oder -Äthylgruppe (dargestellt durch R ) enthalten, und - als

2 zweite Gruppe - solchen Verbindungen der ersten Gruppe, in welchen R die

folgende Bedeutung haben kann:

2-C arboalkyloxyäthyl,

3-Oxo-n-butyl

3-Oxo-n-pentyl,

3-Οχο-ό-carboalkyloxy-n-hexyl,

3,7-Dioxo-n-octanyl,

3,7-Dioxo-n-nonanyl und

in welcher
3
Ir für niedrig Alkyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl oder einen niedrigen carboxylischen Kohlenwasserstoffacylrest steht und

12 3
Z , Z und Z jeweils eine Kohlenstoff -Kohlenstoff -i'Jinfachbindung oder eine

2 Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung bedeuten, vorausgesetzt, daß Z und Z

1 1

Einfachbindungen sind, wenn Z eine Doppelbindung ist, und wenn Z eine

2 3 ?

Einfachbindung, äst,Z und Z jeweils für eine Einfachbindung stehen oder Z"

3 2

und Z jeweils eine Doppelbindung bedeuten, oder Z eine Doppelbindung und

Z^ eine Einf achbindung ist.

BAD ORIGINAL

10981n/?251

Die lI3-Hydroxy-3-oxocycloalkanprodukte des erfindungsgemäßen Verfahrens sind wertvolle Zwischenprodukte zur Herstellung bekannter und wertvoller Steroid-

rotalverbindungen nach bekannten/Syntheseverfahren. Aufgrund dieser nügnung

wird der Cycloalkanring als Hing D des Steroidkernes bestimmt, weshalb die

12
durch K , und insbesondere durch R , dargestellten Substituenten entsprechend der Herstellung der wertvollen Grundsteroidverbindungen ausgewählt werden. Die oben genannte US-Patentschrift sowie zahlreiche weitere Patentschriften und Veröffentlihungen zeigen die bekannte Synthesefolge, in welcher die erfindungsgemäßen Produkte geeignet sind. M

Ein wichtiger Gesichtspunkt bei diesen Syntheseverfahren besteht in der Verwendung eines optisch aufgetrennten l-Hydroxy-3-oxocycloalkans. Die vorliegende 3rfindung ermöglicht die Erzielung besonders zweckmäßiger optischer Isomerer, die zur weiteren Ausarbeitung bei der Synthesefolge zur Herstellung eines Steroidkernes mit der richtigen Stereochemie besonders geeignet sind.

Erfindungsgemäß erfolgt die mikrobiologische Reduktion, indem man ein 1,3-Dioxocycloalkan mit einer Spezies von genus Schizosaccharomyces in Berührung bringt. Diese Reduktion erfolgt bei Temperaturen zwischen etwa 20-35 C. für eine zur Erzielung der Reduktion ausreichende Dauer, vorzugsweise zwischen etwa 2**~120 Stunden. Die Reduktion erfolgt zweckmäliig in einem Nährmedium, das eine Quelle für Kohlenstoff, Mineralien, Stickstoff und Vitamine enthält. Das Medium hat einrm solchen eingestellten pH-Wert oder eine ionische Stärke, daiJ us mit dem Mikroorganismus isotonisch ist. Die Bebrütung erfolgt weiterhin unter aeroben Bedingungen.

BAD ORIGINAL

10981D/2251

Bei der Durchführung des Reduktionsverfahrens werden Mikroorganismus und Substrat in Berührung gebracht und in jeder, in raikrobialen Fermentationsverfahren üblichen Reihenfolge oder Weise zusammen gehalten.Die Reaktionsteil-•nehmer werden in einem geeigneten Nährmedium innerhalb eines gegebenen Temperaturbereiches und für eine zur Bildung der Reduktion ausreichende Zeit in Berührung gehalten. Nach beendeter Reduktion wird die Mischung in üblicher V/eise zur Isolierung und Gewinnung des Produktes behandelt, wie z.B. Filtration, Dekantieren, Extraktion, Eindampfen, Chromatographie usw.

Als Kohlenstoffquelle werden die verschiedenen bekannten und üblichen Materialien verwendet, die einen höhen Kohlehydratgehalt haben, wie Zucker, Stärken und niedrige organische Kohlenwasserstoffe.

Mineralien werden durch Zugabe anorganischer Salze zugeführt. Oft sind ausreichende Mengen an Mineralien in den anderen, das Fermentationsmedium für das erfindungsgemäi3e Verfahren darstellenden Bestandteilen anwesend.

Als StickstoffqiäLle kann man z.B. Pepton, Sojamehl, Maismehl, Hefeextrakt, Kasein, Hydrolysat usw. verwenden.

Vitaminquellen sind im allgemeinen die zur Zufuhr der anderen notwendigen Nährstoffe verwendeten Quellen, wobei Hefeextrakt eine besonders geeignete Vitaminquelle ist.

Der pH-Wert des verwendeten Mediums wird zweckmäßig auf oder um den neutralen Wert, d.h. etwa 7» eingestellt. Dies stellt sicher, dal3 das Medium mit dem verwendeten Mikroorganismus isotonisoh ist. Die Einstellung des isotonischen Systems kann durch Verwendung von Salzen oder Puffern, wie Amraoniundihydroorthophopshat, CaIcLumcarbonat, Alkalimetallphosphate usw._t erfolgen.

109810/2251 _{BAD 0RlelNAL}

Das erfindungsgemäße Verfahren erfolgt zweckmäßig, indem man zuerst den Mikroorganismus in einem geeigneten, ausreichend Kohlenstoff-, Mineral-, Stickstoff- und Vitaminnährstoffe enthaltenden Medium züchtet. Das Kulturmedium wird zweckmäßig unter sterilen, aeroben Bedingungen und für etwa 12-^-8 Stunden auf etwa 20-35°C. gehalten. Während dieser Zeit wird das Medium zweckmäßig gerührt.

Nach der Züchtungszeit wird die Kultur, vorzugsweise unter sterilen Bedingungen, zur Bebrüntung in ein Medium derselben oder unterschiedlichen NährzusammenSetzung übergeführt. Die Kultur wird vorzugsweise etwa 8-20 Stunden W in diesem Medium weiterwachsen gelassen. Nach dieser zusätzlichen Zeit kann gegebenenfalls das Substrat zugefügt und die erhaltene Mischung unter aeroben Bedingungen innerhalb des gegebenen Temperatur- und Zeitbereiches gerührt werden. Danach kann das Produkt durch Kolonnenchromatographie mit einem entsprechenden Eluierungsmittel oder durch andere übliche Maßnahmen isoliert werden.

Ein eäner Ausführungsform wird die Kultur von Agarplatten, auf denen sie gehalten worden war, in ein vorbereitetes Nährmedium obiger Definition übergeführt. Die Kultur wird in diesem Medium bei etwa derselben Temperatur und Vorzugs- ™ weise unter Rühren wachsen gelassen. Nach der Züchtungsperiode wird die Kultur zum Beimpfen eines Nährmediums derselben oder unterschiedlichen Zusammensetzung verwendet. Die Kultur wird vorzugsweise nach der Beimpfung im neuen Medium weiterwachsen gelassen.

10981Π/2251

Nachdem die Kultur ein zufriedenstellendes Wachstumsstadium erreicht hat, wird dem Medium das Substrat, vorzugsweise als Lösung in einem organischen Lösungsmittel, zugegeben und die Bebrütung wird fortgesetzt. Geeignete Lösungsmittel umfassen Aceton, Methylethylketon, Methanol, Äthanol, Propanol, Diäthyläther, Dioxan, Tetrahydrofuran, Dimethylsulfoxyd, Dimethylformamid usw. und Mischungen derselben. Die Bebrütimg kann durch Anwendung von Dünnschicht- oder Papierchromatographie aliquoter Proben verfolgt werden. Zur Trennung und Reinigung des Produktes nach beendeter Reaktion wird vorzugs- ^ weise Kolonnenchromatographie angewendet.

Die folgenden Beispiele veranschaulichen die vorliegende Erfindung, ohne sie ■ zu beschränken.

Beispiel 1

Eine Kultur von Schizosaccharomyces pombe (ATCG ?Λ7β\ NRMj Y-Io^) wurde 5 Tage auf Agarplatten der folgenden Zusammensetzung auf einer Temperatur

zwischen 23-28 G. gehalten:
Maltose ^Q g

Proteose Peptone Nr 3 15 E

Agar 20 g

dest. Wasser 1000 ecm

. Die Kultur wurde von den Agarplatten mittel Verdünnung mit dest. Wasser und Abkratzen in ein Nährbrühe/De::tro£e41edium der folgenden Zusammensetzung

übergeführt:

Nährbrühe, Difco 8g

Dextrose (Cerelose) 20 g

dest. Wasser 1000ecm

1 C 9 8 1 0 / 1 2 S 1

Die Mischung vmrde durch 15 Minuten langen Erhitzen auf 121⁰C, unter 1,05 'i-'/⁰¹* ν sterilisiert, dann wurde die Kultur aerob 30 Stunden bei 25°C. in einem rotierenden Schüttelapparat (250 Umdr./mini 2,5 cm Ausschlag) im Nährbrühe/ Dextrose-Medium wachsen gelassen. Danach wurde die Kultur entfernt und als Impfstoff für ein getrennten Nährbrühe/Dextrose-Medium derselben Zusammensetzung zur Schaffung von 10,28 1 einer Nährmischung mit 1,028 1 oder 10 # Impfstoff verwendet. Nach dem Beimpfen wurde die Kultur aerob weitere 16 Stunden wachsen gelassen. Danach wurden dem Medium 3iO8 g l,3-Dioxo-2-(2'-carboraethoxyäthyl)-2-methylcyclopentan, in 30,8 ecm Aceton gelöst, zugefügt, und die Bebrü-tung wurde unter Schütteln wie oben bei 22-26⁰C. fortgesetzt.

Die Bebrütung wurde in dieser Weise fortdauern gelassen, während von Zeit zu Zeit Aliquote von der beimpften Mischung zwecks Bestimmung des Maßes und der Geschwindigkeit der Reduktion entnommen wurden. Bei dieser Bestimmung wurde das entsprechende Aliquot mit Eisessig angesäuert und die angesäuerte Mischung mit Chloroform geschüttelt. Die Chloroformextrakte wurden durch Dünnschicht-Chromatografhie an Kieselsäure unter Verwendung eines 80:20-(VoI./Vol.)-Lösungsmittelsystems aus Chloroform und Aceton und die übliche Festgtellungsmethode unter Verwendung eines Sprühmaterials mit 3 $ Uori——— sulfat in 3N-Schwofelsäurelösung und Erhitzen auf 110 C. getrennt..

Nach 24-stündigor Bebrütung wurde die gesamte Mischung auf einer Kieselaüuregelkolonne (0,05-0,2 mm Teilchengröße) Chromatographiert, wobei mit Chloroform/ Methanol (95i5sO,5 Vol./Vol.) eluiert wurde* so erhielt man lß«Hydroxy-2i(-(2¹-carbcmethoxyiithyl)-2i3-methyl-3-oxocyclopentan ale Produkt«

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Beispiel

Es wurden *IOO ecm eines Mährbrühe-Dextrose-Mediums der in Beispiel 1 genannten Zusammensetzung hergestellt und mit Scliizosaccharomyces pomte(ATCC 2478; NRRL y-9) beimpft. Nach 16- bis 10-stündigen Wachsen der Kultur wurden 200 rag l,3-Dioxo-2-(o'-carbometho\yäthyl)-2-methylcyclopentan in 2 ecm Dimethylformamid zugefügt. Die Bebrütung wurde fortgesetzt und nach 8 und 2k Stunden wurden jeweils weitere 200 mg Substrat in Dimethylformamid zugefügt. Die Bebrütung wurde 96 Stunden nach der letzten Sübstratzugabe andauern gelassen. Nach dieser Zeit wurde die Mischung wird inNBeispiel 1 chromatographiert und ergab li3-Hydroxy-2(j(~( 2' -carbomethoxyäthyl) -2ß-methyl-3-oxocyclopentan als Produkt.

Beispiel 3

Beispiel 2 wurde unter Verwendung von Schizosaccharomyces pombe ATCC l64°-l anstelle von ATCC 2478 und eines Nährmediums der folgenden Zusammensetzung wiederholt:

Dextrose 10 g

Mais-Weichflüssigkeit 6 g

NH^H^PO^ 3 g

Hefeextrakt 2,3 g

CaCl₂ 2,5 g

dest. Wasser auf insgesamt 1000 ecm

Der pH-Wert wurde mit 2N-NaDH-Lb¹ sung auf 7_t0+0,l eingestellt* So erhielt man lß-Hydroxy-2(j(-(2^l -carbomethoxyäthyl)^ß-methyl-S-oxoeyciopentan als Produkt.

108810/2251

-Ii-

Beispiel

Eine Kultur von Schizosaccharomyces versatilis (ATCC 9987; NIlRL Y-3.026) wurde 7 Tage auf einer Agar-Platte auf Zimmertemperatur gehalten und dann von dieser in ein Medium der folgenden Zusammensetzung übergeführt:

Nährbrühe, Difco 16 g _

Cerelose *tO g

dest. Wasser auf insgesamt 2000 ecm

Die Kultur wurdenim Medium unter Rühren 30 Stunden bei einer Temperatur zwischen 25-3O⁰C. wachsen gelassen_tdanach entfernt und als lO-jäiger Impfstoff zu einem Medium derselben Zusammensetzung gegeben. Nach der Impf stoffzugabe wurde die Kultur weitere 16 Stunden wachsen gelassen. Nach dieser Zeit wurden 50 ecm Dimethylformamid, die 5 g l_s3-Dioxo-2-(3' -oxo-6¹-earbomethoxy-n-hexyl)-methylcyclopentan enthielten, zugegeben und die Bebrütung bei Zimmertemperatur fortdauern gelassen. Während dieser Zeit wurden ab und zu Aliquote entnommen und unter Verwendung eines Tol-uol/Propylenglykol-Lö'sungsmittelsystems sowie unter Anwendung der üblichen Feststellungsmethode mit Zimmermann-Reagenz unter anschließendem Erhitzen zur Bestimmung des Ausmaßes der Reaktion auf Papier chromatographiert. Nach 50 Stunden wurde die Bebrütungsmischung _wi_e in Beispiel 1 chromatographiert und ergab _t

lß-Hydroxy-^-iS'-oxo^ö'-carbomethoxy-n-hexylJ^ß-methyl^-oxocyclopentan als Produkt.

B eispiel ^

360 mg l,3-Dioxo-2-(3'-oxo-6¹-carbomathoxy-n-hexyl)-2-methylcyclohexan in 6 ecm Dimethylformamid wurden mit Schizosaccharomyces pombe (ATCC 2476) in 1,2 1 (zu jeweils 400 ecm in 3 2-1-Flaschen geteilt) eines Nährbrühe/Dextrose-Mediums der in Beispiel 1 genannten Zusammensetzung bei Zimmertemperatur HQ. Stunden bebrütet? so erhielt man lß-Hydroxy-2o(-(3^l-oxo-6¹-carbomethoxy-n- · hexyl)-2ß-methyl-3-oxocyclohexan als Produkt. „ ■

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Beispiel 6

Beispiel 5 wurde unter Verwendung von l,3-Dioxo-2-(3^l-oxo-6'_carbomethoxyn-hexyl)-2-äthylcyclopentan bei einer Konzentration von 300 /Ug/ccm für 72 Stunden wiederholt} so erhielt man lß-Hydroxy-2e(-(3'-oxo-6¹-carbomethoxyn-hexyl) -2ß-äthylcyclopentan als Produkt.

Beispiel 2

Das Bebrütungsverfahren von Beispiel 5 wurde mit 500 /Ug Substrat pro ecm Bebrütungsmischung wiederholt, wobei als Substrat 1,3-Dioxo-2-(3' carbomethoxy-n-hexyl)-2-methylcyelopentan in Dimethylsulfoxyd zugegeben wurde; so erhielt man lß-Hydroxy-2o(-(3^l -oxo-6¹ -carbomethoxy-n-hexyl)-2ßraethyl-3-oxocyclopentan als Produkt.
Beispiel 8_

Beispiel 5 wurde unter Verwendung eines kQO-ecm-Mediums wiederholt, wobei

als Substrat 200 mg l,3-Dioxo-2-(3' -oxo-6¹ -carbomethoxy-n-hexyl) ^-methylcyclopentan/zu Anfang und 4, 8 und 2k Stunden nach der ersten Zugabe zugefügt wurden. Die Bebrütung wurde 48 Stunden nach der letzten Zugabe fortgesetzt; bei einer endgültigen Konzentration von 2 mg Substrat pro ecm Medium erhielt man das lß-Hydroxy-2fl(-(3^l -oxo-6¹-carbomethoxy-n-hexyl)-2ß-methyl-3-oxocyclopentan als Produkt.

Beispiel 2

Das Bebrütungsverfahren von Beispiel 5 wurde in einem ΙΛΐ-1-Fermentationsgefäß für Zh Stunden bei 25°C. unter Rühren mit einer Geschwindigkeit von 250 Umdr./min wiederholt, wobei das Gefäß 10 1 eines Medium mit 5 g 1,3-Di-0x0-2-(3'-oxo-6¹-carbomethoxy-n-hexyl)-2-methylcyclopentan als dispergiertes Substrat enthielt. V/eiterhin wurde die Bebrütungsmischung während der gesamten Bebrütungsdauer bei einer Menge von 0,81 pro 1 Medium pro min belüftet; so erhielt man das lI3-Hydroxy-2oV-(3' -oxo-6¹ -carbomethoxy-n-hexyl) -2j3-metl\yl-3-oxocyclopentan als Produkt.

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Beispiel 10

Beispiel 5 wurde bei einer 16-stündigen Bebrütung bei 30 C. wiederholt, wodurch man lß-Hydroxy-20(-(3^l -oxo-6'-carbomethoxy-n-hexyl)-2i3-methyl-3-oxocyclohexan als Produkt erhielt.

Gemäi3 den obigen Verfahren erhielt man durch Bebrütung von l,3-Dioxo-2-(3'-oxo-n-butyl)-2-methylcyclopentan mit Schizosaccharomyces pombe

^ (ATCC Ik¹^Q) in einem Nährmedium de^folgenden Zusammensetzung das Il3-Hydroxy-

2et-(3'-oxo-n-butyl)-2ß-methyl-3-oxocyclopentan als Produkt:

Mais-Weichflüssigkeit . 6g ™

NH₂₁₁H₂PO^ 3g

CaCO^ 2,5 g

Sojabohnenöl 2,2 g ·

Hefeextrakt 2,5 g

Dextrose 10 g

dest. Wasser auf insgesamt 1000 ecm

Durch Bebrütung von l,3-Dioxo-2-(3'-oxo-n-butyl)-2-äthylcyclohexan mit Schizosaccharomyces pombe (ATCC 16491) in einem Nährmedium der in Beispiel 1 angegebenen Zusammenset-zung erhielt man Ii3-Hydroxy~2o(~( 3' -oxo-n-butyl) 2ß-äthyl-3-oxocyclopentan als Produkt. a

Durch BebrUtung von l,3-üioxo-2-(3'-oxo-6'-carboäthoxy-n-hexyl)-2-äthylcyclopentan mit Schizosaccharomyces pombe (ATCC 16979) in einem Nährmedium der folgenden Zusammensetzung erhielt man lÜ-iIydroxy-2^-(3'-oxo-ö'-carboäthoxy-n-hexyl)~2i3-äthyl-3-oxocyclopentan als Produktt

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Glucose 3,0 g

KH₂PO^ 0,1 g

Mais-Weichflüssigkeit ²»0 ecm

0,05 g

NaNO₃ 0,2 g

0,002 g 0,2 g

KCl 0,005 g

dest. Wasser auf insgesamt 1000 ecm

Durch Bebrütung von l^
pentan mit Schizosaccharomyces japonicus (ATCC 1O66O) in einem Nährmedium der in Beispiel 1 genannten Zusammensetzung erhielt man iß-Hydroxy-2ot-(3'-chlorbut-2'-enyl)-2Ji-n-propyl-3-oxocyclopentan als Produkt.

Durch Bebrütung von 3-Methoxy-8,l^-secoö'stra-l,3i5(10) ,9(ll)-tetraen-14-,17-dion mit Schizosaccharomyces octosporus (ATCC 2479) erhielt man 3-Methoxy-8,l4-secoöstra-l,3,5(10),9(ll)-tetraen-17i3-ol-l4-on als Produkt.

Durch Bebrütung von 3-Methoxy-8,l4-secoöstra-l,3t5i(10) lo^- dion'mit Schizosaccharomyces octosporus.in einem Nährmedium der folgenden Zusammensetzung erhielt man 3-Methoxy-8,l4~secoö'stra-l,3_f5(10),6,8-pentaen-17ί3-ο1-1Λ-οη als Produkt:

Mais-Weichflüssin;keit	6g
Glucose	35 g
Pepton	20 g
dest. Wasser auf insgesamt	1000 ecm

109310/2251

Durch Bebrütung von 8,lA-Secoöstra-l,3»5(10),8-tetraen-3~ol-l4-,17-dion mit Schizosaccharomyces pombe (ATCC 2476) in. einem Nährmedium der in Beispiel 1 genannten Zusammensetzung erhielt man 8,lA-Secoöstra-l,3i5(10)_f8-tetraen-3ß|17ß-diol-lA-on als Produkt.

Durch BebrUtung von 3-Äthoxy-8,l4-seco-östra-t_t3»5(10)-trien-lA,17-dion mit Schizosaccharomyces pombe (ATGC 2^78) in einem Nährmedium der in Beispiel 1 genannten Zusammensetzung erhielt man 3-Äthoxy-8_tl4-secoöstra-I»3i5(l0)-trien-17ß-ol-l4-on als Produkt.

Durch Bebrütung von l,3-Dioxo-2-(2^l-carbopropoxyäthyl)-2-äthylcyclohexan mit Schizosaccharomyces pombe (ATCC Ih^d) in einem Nährmedium der in Beispiel 1 genannten Zusammensetzung erhielt man lß-Hydroxy-2e(-(2^l-carbopropoxyäthyl)-Zß-äthylcyclohexan als Produkt.

Erfindungsgeraäß können u.a. die folgenden Produkte hergestellt werden:

lß-Hydroxy-2c(-.( 3¹ -oxo-n-butyl) -2ßHmethyl-3-oxocyclopentan; lß-Hydroxy-2c4-( 3¹ -oxo-n-butyl) -2ß-äthyl-3-oxocyclopentanj lß-Hydroxy^^-C 3' -oxo-n-butyl) -2ß-äthyl-3-oxocyclohexan^

lß-Hydroxy-2i(-( 3' -oxo-n-pentyl) -2ß-methyl-3-oxocyclopentan; ä

lß-Hydroxy-2fl(-( 3' -oxo-6 · -carboäthoxy-n-hexyl) -2ß-me thyl-3-oxocyclopentanj' lß-Hydroxy-2fl(-( 3¹ -oxo-6¹ -carboäthoxy-n-hexyl) -2ß-äthyl-3-oxocyclopentan; lß-Hydroxy-2»(-(3^l -oxo-6¹ -carboäthoxy-n-hexyl) -2ß-methyl-3-oxocyclohexan} lß-Hydroxy-2((-( carbomethoxyäthyl) -2ß-methyl-3-oxocyclopentan{ lß-Hydroxy-2fl{-( carboäthoxyäthyl) -2ß-äthyl-3-oxocyclopentan·, ^lß-Hydroxy^pKcarboäthoxyäthylJ^ß-äthyl-S-oxocyclohexan; " lß-Hydroxy-2(jt-(3^l _f7^l-dioxo-n-octanyl)-2ß-metlTyl-3-oxocyclopentanj ' '

T09810/2251

lß-Hydroxy-^(3' _t7' -dioxo-n-octanyl) ^fS-methyl^-oxocyclohexan; lß-Hydroxy-2el-(3' ,7' -dioxo-n-nonanyl)-2ß-metlTyl-3-oxocyclopentan; H3-Hydroxy-2ct-(3' , 7' -dioxo-n-nonanyl) -2ß-methyl-3-oxocyclohexan und iß-Hydroxy-2ol-(3' ,7' -dioxo-n-octanyl)^ii-äthyl^-oxocyclopentan.

1 ο 9 8 1 η / ? -y β

Claims

Patentansprüche

(ll~ Verfahren zur Reduktion eines l^-Dioxocycloalkans mit einer b'pezies vom genus Schizosaccharorayces zur Bildung des entsprechenden liä-Hydroxy-3-oxocycloalkans.

2,- Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daJ3 das 1,3-Dioxocycloalkan die folgende Formel:

0
und das Produkt li3-Hydroxy-3-oxocycloalkan die i'oxtael:

hat, in welchen

R für Methylen oder Äthylen steht,

R Methyl oder Äthyl bedeutet,

2 C §

R eine aliphatische Gruppe mit 3-1B Kohlenstoffatomen oder eine carbocyc- ~

lische Gruppe der Formel

CO

ist» und Derivate derselbon, in welchen die aliphatische Qruppe und carbocyolisohe üruppe wahlweiao eubatituiort und ungesättigt sind.

BAD ORIQlNM-109810/2251

203B926

3.- Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß H für Methylen

1 2

steht, H Methyl oder Äthyl bedeutet und R

2-Garboalkyloxyäthyl,
3-Oxo-n-butyl,
3-Oxo-n-pentyl,

3-Oxo-6-carboalkyloxy-n-hexyl,
3,7-Dioxo-n-octanyl
3,7-Üioxo-n-nonanyl oder

3
bedeutet, wobei H für eine niedrige Alkyl-, Cyclopentyl-, Cydohexyl-oder

12

niedrige carboxylische Kohlenwasserstoffacylgruppe steht und Z , Z und Z jeweils eine Kohlenstoff-Kohlenstoff-^infachbindung oder eine Kohlenstoff-Kohlenstoff -Doppelbindung bedeuten, vorausgesetzt, daß, wenn Z eine Doppel-

2 3

bindung ist, Z und Z jeweils für eine ϊinfachbindung stehen, und, wenn

1 2 3 2

Z eine Einfachbindung ist, Z und Z jeweils eine Einfachbindung oder Z

3 2

und Z jeweils eine Doppalbindung sind . oder Z für eine Doppelbin-

3
dung und Z für eine Sinfachbindung steht.

**.- Verfahren nach Anspruch 1 bis 3i dadurch gekennzeichnet, daß als Spezies vom genus Schizosaccharoncyces Schizosaccharomyces poraba verwendet wird.

5.- Verfahren nach Anspruch 2 bis h_t dadurch gekennzeichnet, daß H für Mothyl oder Äthyl steht.

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- 19 - .

6.- Verfahren nach Anspruch 1 bis 5» dadurch gekennzeichnet, daß als Schizosaccharoiqyces porabe ein Material aus der Gruppe von Schizosaccharomyces pombe ATCC 24?6_f ATCC 24-78 oder ATCC 1^5^8 verwendet wird.

Der Patentanwalt

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