[go: up one dir, main page]

DE1768215C3 - Verfahren zur Herstellung von 1,4-Androstadien-3,17-dlon und 4-Androsten-3,17-dion durch mikrobiologischem Abbau - Google Patents

Verfahren zur Herstellung von 1,4-Androstadien-3,17-dlon und 4-Androsten-3,17-dion durch mikrobiologischem Abbau

Info

Publication number
DE1768215C3
DE1768215C3 DE1768215A DE1768215A DE1768215C3 DE 1768215 C3 DE1768215 C3 DE 1768215C3 DE 1768215 A DE1768215 A DE 1768215A DE 1768215 A DE1768215 A DE 1768215A DE 1768215 C3 DE1768215 C3 DE 1768215C3
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
dione
ions
androstadiene
steroids
inhibitor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
DE1768215A
Other languages
English (en)
Other versions
DE1768215A1 (de
DE1768215B2 (de
Inventor
Auf Nichtnennung Antrag
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DSM Delft BV
Original Assignee
Koninklijke Nederlandsche Gist en Spiritusfabriek BV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from NL6513718A external-priority patent/NL6513718A/xx
Application filed by Koninklijke Nederlandsche Gist en Spiritusfabriek BV filed Critical Koninklijke Nederlandsche Gist en Spiritusfabriek BV
Publication of DE1768215A1 publication Critical patent/DE1768215A1/de
Publication of DE1768215B2 publication Critical patent/DE1768215B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE1768215C3 publication Critical patent/DE1768215C3/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00—Preparation of steroids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/84—Brevibacterium
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/863—Mycobacterium
    • Y10S435/866—Mycobacterium smegmatis

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Gegenstand des Patents 15 68 932 ist ein Verfahren deren Α-Ring einen oder mehrere Substituenten enthält. Eur Herstellung von l,4-Androstadien-3,17-dion und Die Menge des zuzusetzenden Inhibitors hängt von
4-Andro.sten-3,17-dion durch mikrobiologischen Ab- den Umständen ab. Wenn die Konzentration zu niedrig bau von Steroiden mit einer gesättigten oder unge- 25 ist, werden die Steroide vollständig zu Verbindungen sättigten aliphatischen Seitenkette mit mindestens mit niedrigem Molekulargewicht abgebaut. Ist die 8 Kohlenstoffatomen in 17-Steilung unter Verwendung Konzentration zu hoch, so wird die Umwandlung des eines Mikroorganismus der Gattung Mycobacterium, Steroids erheblich inhibiert, und die Mikroorganismen das dadurch gekennzeichnet ist, daß man als Ausgangs- werden abgetötet. Bei Verwendung von NiSO4 · 7 H2O Steroide Cholesterin oder ein Derivat von Cholesterin, 30 genügt im allgemeinen eine Konzentration von 10 bis ^-Sitosterin oder ein Derivat von /S-Sitosterin, Stigma- 1000 mg pro Liter. Bei Verwendung von Kobalt- »terin oder ein Derivat von Stigmasterin, 4-Cholesten- chlorid, Cadmiumsulfat oder Natriumselenit liegt die 3-on oder 5-Chlorcholestanol oder ein Derivat von Konzentration ebenfalls im vorgenannten Bereich.
5-ChlorchoIestanol einsetzt und die mikrobiologische Das Verfahren der Erfindung wird vorzugsweise
Umwandlung in Gegenwart eines anorganischen Inhi- 35 folgendermaßen ausgeführt:
bitors durchführt. Der Mikroorganismus wird in einem Nährmedium
Es wurde nun gefunden, daß dieses Verfahren nicht gezüchtet, das anorganische oder organische Sticknur mit Bakterien der Gattung Mycobacterium durch- stoffquellen enthält, wie Aminosäuren, Ammoniumgeführt werden kann, sondern auch mit anderen salze, Alkalinitrate oder Erdalkalinitrate. Peptone, Mikroorganismen. 40 Maisquellwasser, Hefeextrakte, Baumwollsaatmehl,
Es ist bekannt, daß beim mikrobiologischen Abbau Soyabohnenmehl oder lösliche Rückstände der Alkovon Cholesterin mit einer Nocardia Art in Gegenwart holherstellung können ebenso mit Vorteil verwendet Von 8-Hydroxychinolin 3-Ketobisnor-4-cholensäure, werden. Die Nährmedien brauchen keine assimilierbare J-Ketonbisnor-1,4-choIadiensäure sowie geringe Kohlenstoffquelle, wie Zucker, Stärke oder mehr-Mengen von l,4-Androstadien-3,17-dion und 4-An- 45 wertige Alkohole, enthalten, deren Anwesenheit im <lrosten-3,17-dion entstehen, vgl. Biochemical Journal übrigen keine nachteilige Wirkung auf den Verlauf Bd. 90 (1964), S. 23 P. des Verfahrens ausübt.
Aus der NL-OS 65 02 883 bzw. der entsprechenden Ein für das Verfahren der Erfindung geeignetes
FR-PS 14 34 426 ist ein Verfahren zur Herstellung von Nährmedium enthält vorzugsweise außerdem die üb-4-Androsten- ur.d l,4-Androstadien-3,17-dion auf 50 liehen Mengen von Salzen, wie Phosphate, Sulfate, fermentativem Wege mit Hilfe von Mirkoorganismen Alkalichloride und Erdalkalichloride. Die erforder- I. B. der Gattungen Arthrobacter und Nocardia be- liehen Spurenelemente sind in hinzureichenden Mengen kannt, bei dem Sterine oder deren im Ring A dehy- dann vorhanden, wenn Leitungswasser verwendet wird, drierte Derivate in Gegenwart eines Eisen- und/oder Wenn als natüniche Stickstoffquelle ein kompli-
Kupferchelatbildners in einer Konzentration von 10-'- 55 ziertes Gemisch wie Maisquellwasser verwendet wird, fcis 10-'molarer fermentiert werden. Als Eisen- und/ so kann der Zusatz von Mineralsalzen meist unter- <frder Kupferchelatbildner werden vorzugsweise 2,2'-Di- bleiben.
pyridyl, 1,10-Phenanthrolin, 5-Nitro-l,10-phenanthro- Die Nährmedien werden in üblicher Weise sterili-
lin, 8-Hydroxychinolin, Pyridin-2-aldehyd, Isoni- siert unJ auf einen pH-Wert von 4,0 bis 8,5 eingestellt, cotinsäurehydrazid, 2-Hydroxymethylpyridin, o-Ami- 60 Ein pH-Wert von etwa 7 ist in den meisten Fällen nobenzoesäure, o-Phenylendiamin, m-Phenylen- bevorzugt.
diamin, p-Phenylendiamin, Alizarinblau S, 8-Hy- Wenn die Bakterien unter konstanter Belüftung in
droxychinolin-5-sulfonsäure, 8-Hydroxychinolinsulfat, dem Nährmedium sich hinreichend vermehrt haben, Natriumdiäthyldithiocarbamat, Ammonium - nitroso- kann das Ausgangssteroid, z. B. Cholesterin oder phenylhydroxylamin oder Chinolin-2-carbonsäure ver- 65 /?-Sitosterin, zugegeben werden, entweder gelöst in wendet· einem geeigneten Lösungsmittel, wie N,N-Dimethyl-
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Her- formamid, oder in Form einer feinen wäßricen Susstellung von l,4-Androstadien-3,17-dion und 4-An- pension.
pas Ausgangssteroid wird 0 bis 72 Stunden nach i«er Beimpfung zugegeben; auch bei späterer Zugabe «irfen recht gute Resultate erreicht. Die Zugabe des Steroids wird vorzugsweise 24 bis 48 Stunden nach der Seimpfung des Nährmediums vorgenommen, wenn jje Mikroorganismen sich hinreichend vermehrt . Eine sehr frühe Zugabe, z. B. unmittelbar nach ist ebenfalls möglich und ergibt gute
Die so konzentrierten Mikroorganismen sind nach dem Züchten in einem geeigneten Nährmedium in der Lage, die Ausgangssteroide, wie Cholesterin oder /ϊ-Sitosterin abzubauen. Wenn dieser mikrobiologische Abbau in Gegenwart eines anorganischen Inhibitors vor sich geht, wird ein Steroid mit 19 Kohlenstoffatomen gebildet.
Au/ die vorstehend geschilderte Weise ist es möglich,
Resultate. e'ne große Anzahl von Stämmen geeigneter Mikro-
pie Umwandlung des Steroids findet im allgemeinen io Organismen zu isolieren, z.B. Arthrobacter, Stamm hei konstanter Belüftung bei Temperaturen von 20 bis CBS Nr. 220.67, Arthrobacter, Stamm CBS Nr. 221.67, 450C statt; das Verfahren verläuft jedoch auch bei Arthrobactei, Stamm CBS Nr. 222.67, Arthrobacter, höheren oder niedrigeren Temperaturen. Die Umwand- Stamm CBS Nr. 223.67 und Nocardia, Stamm CBS lung läßt man vorzugsweise bei einer Temperatur vor Nr. 226.67 (CBS = Centraal Bureau voor Schimmelsich gehen, die die Optimaltemperatur für den be- 15 cultures in Baarn, Niederlande).
d Mikroorganismus ist Diese Temperatur Fs ist nicht notwendig, die Mikroorganismen in
dieser Weise zu konzentrieren und zu isolieren. Es ist auch möglich, die Mikroorganismen z. B. aus Erde zu isolieren und dann festzustellen, ob sie die gewünschten Eigenschaften besitzen. So wurden wäßrige Suspensionen von Erde auf einen geeigneten Nährboden, wie Stärke-Agar oder Asparagin-Agar, aufgestrichen. Zur
Unterdrückung des normalen Wachstums von Pilzen
Die Umwandlung de g wurde ein fungizides Antibiotikum zugegeben, z. B.
in Anspruch; im allgemeinen nimmt die Menge des 25 15 μ£ Primaricin pro ml. Bei vorhergehender Verdün-Endproduktes nach drei Tagen nicht merklich zu. nung der Suspension können gesonderte Kolonien von
Wenn als Ausgangssteroide Verbindungen verwen- ii ili d Di Mikorga
det werden, die im Α-Ring keine weiteren Substituenten
enthalten, entsteht als Hauptprodukt 1,4-Androstadien-3,17-dion zusammen mit geringen Mengen 4-An- 30 geprüft, Steroide abzubauen, die in 17-Stellung einen droste'n-3,17-dion. Das relative Mengenverhältnis die- gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenser Produkte hängt unter anderem von der Belüftung ab. 8 Khltfftome
Die gebildeten Produkte können aus der Kulturflüssigkeit gewonnen und nach üblichen Methoden gase
weiter gereinigt werden. Nach Vollendung der Fermen- 35 Verfahren durchgeführt, so wird der Abbau des Ringtierung können sie aus der Kulturflüssigkeit mit einem systemsdesSteroidsunterdrückt undl,4-Androstadien-
Wi d Anzahl
sich g
treffenden Mikroorganismus ist. Diese Temperatur liegt im allgemeinen bei etwa 3O0C. Es ist nicht notwendig, daß Wachstum und Umwandlung bei der deichen Temperatur vor sich gehen. So kann z. B. der Mikroorganismus zuerst während 24 Stunden bei 26°C gezüchtet werden, und nach Zugabe des Steroids und des Inhibitors wird die Temperatur auf 30GC erhöht.
Die Umwandlung des Steroids nimmt 1 bis 7 Tage lli i di M d
nung der Suspension können geso Mikroorganismen isoliert werden. Diese Mikroorganismen können dann in einem Nährmedium gezüchtet werden. Die erhaltene Kultur wird auf ihre Fähigkeit
wasserstoffrest mit mindestens 8 Kohlenstoffatomen enthalten. Wird der Abbau in Gegenwart eines anorganischen Inhibitors nach dem erfindungsgemaßen
id d Abb d Rng
tierung können sie aus der Kulturflüssigk organischen Lösungsmittel, wie Methylisobutylketon, Äthylacetat Mel hylenchlorid oder Chloroform, extrahiert werden Diese Extrakte werden zur Trockne einkd id i it
systemsdesSteroidsunterdrückt , 3,17-dion erhalten. Auf diese Weise wurde eine Anzahl von Nocardia-Spezies isoliert, die in der Lage si no. Cholesterin abzubauen. Besonders bevorzugt sind
hiert werden Diese Extrakte werden z
eedampft Der Rückstand wird aus einem geeigneten 40 Nocardia, Stamm CBS Nr. 224.67 und Nocardia,
Löittl umkristallisiert oder wenn nötig z B CBS Nr. 225.67. Diese Stämme haben sich fur das
eep
Lösungsmittel umkristallisiert oder wenn nötig z. B. durch Chromatographie und nachfolgende Kristallisation in seine Komponenten getrennt.
Die für das erfinduiigsgemäße Verfahren geeigneten Mikroorganismen werden aus natürlichen Quellen, wie Erde Dung oder Oberflächenwasser, isoliert. Zu diesem Zweck wird ein Nährmedium verwendet, das Cholesterin als einzige Kohlenstoffquelle zusammen mit f id
CBS Nr
erfindungsgemäße Verfahren als besonders geeignet
erwiesen.
Die Beispiele erläutern die Erfindung.
B e i s ρ i e 1 1
Eine Anzuchtkultur von Nocardia Stamm CBS Nr. 225.67 w.rd hergestellt durch Übenmpfen einer Kultur dieses Mikroorganismus auf Peptor.-Glucose-
d d T b 30 Cm
sterin a g q
η gen Salzen fnthält. Das Nährmedium wird z. B. Kultur dieses Mikroorganismus auf Peptor.-Glucose-S Gartenerde oder Dung beimpft und bei einer ge- 50 Agar und Inkub.eren wahrend drei Tagen bei 30 Cm
Nährmedium, das aus einer Losung von lüg
Gartenerde oder Dung beimpft g
eieneten Temperatur, z. B. bei 10 bis 400C, inkubiert. em Nährmedium, das aus einer g
äStur £n auf einer Vibrier- oder Drehschütte.- Hefeextrakt in 1 Liter^eUungswasser vom ρΗΛ*^t 6 8
maschine geschüttelt werden. Man kann auch einen besteht, das vorher 30 Minuten be, OC sterihsiert
ha bfesten Nährboden 'Agar-Agar) verwenden und worden ist Das Nahrmed.um befindet schm 50m die gewünschten Mikroorganismen in Petri-Schalen 55 fassenden Kolben: jeder Kolben enthalt 100 ml Nähr
ki E k tilhft sein die Erde einige medium. hei 30°C auf einer
die gewünschten Mikroorg
konzentrieren. Es kann vorteilhaft sein, die Erde einige
mit verbrauchtem Schmieröl gemischt war. Das für das Konzentrieren verwendete Nahrmed.um kann z. B. die folgende Zusammensetzung haben.
·. ♦ 1 „/Ι iter
Ammoniumn.trat
S2HPO, j
SS
Das ^^^^n'3 J Maäsquellwasserflüssigkeit Rechnet als Trockensubstanz) mit Leitungswasser 65 auf 1 Liter, Auflösen von 3 g Glucose in der Flussig-5 J™ 1^ Einstellen der Flüssigkeit auf einer, pH-Wert von 7 mk verdünnter Natronlauge. Das Nahrmed.um wird in 2 Liter fassende Kolben abgefüllt und 30 M.nu-
ten bei HO0C sterilisiert. Die Kolben enthalten jeweils 1 Liter Nährmedium. Es werden 12 Kolben verwendet. Die Kolben werden nun mit der Anzuchtkultur beimpft. Es werden jeweils fO ml in jeden Kolben gegeben. Die Konzentration der Anzuchtkultur beträgt also 5%.
Hierauf werden die Kolben 24 Stunden be; 30°C geschüttelt. I η jeden der Kolben werden 1 g Cholesterin in Form einer wäßrigen Suspension gegeben, die durch Vermählen des Steroids unter Zugabe von Wasser erhalten wurde, das 0,1 % eines nichtionischen Netzmittel enthielt. Ferner wird jeder Kolben mit einer sterilen wäßrigen Lösung von 500 mg CoCl2 · 6 H2O (125 mg Kobaltionen pro Liter) versetzt. Anschließend werden die Kolben unter den gleichen Bedingungen geschüttelt. 12 bis 24 Stunden nach der Zugabe des Cholesterins läßt sich im Dünnsjhichtchromatogramm l,4-Androstadien-3,17-dion und 4-Androsten-3,17-dion nachweisen. Zu diesen Zweck werden einige Milliliter der Kulturflüssigkeit mit dem gleichen Volumen Äthylacetat extrahiert, und der Extrakt wird an Silikagel G Chromatographien. Als Lösungsmittel wird ein Gemisch von Chloroform und Äthylacetat im Volumverhältnis 100:6 verwendet. Nach dreitägigem Schütteln wird der Inhalt der 12 Kolben vereinigt. Die Flüssigkeit wird dreimal mit 20% seines Volumens mit Methylisobutylketon extrahiert. Der Extrakt wird unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit 8 ml siedendem Methanol extrahiert. Es hinterbleiben 5,2 g Cholesterin. Der Methanolextrakt enthält das 1,4-Androstadien-3,17-dion. Nach dem Eindampfen zur Trockne wird der Rückstand in 30 ml Benzol aufgenommen. Die Lösung wird säulenchromatographisch an 150 g Aluminiumoxid (Al2O3 nach Woelm, neutral, Aktivität III) gereinigt.
Als Lösungsmittel wird ein Gemisch von Benzol und Aceton (100: 1) verwendet. Die 1,4-Androstadien-3,17-dion enthaltenden Fraktionen werden durch Dünnschichtchromatographie ermittelt. Diese Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Der Rückstand (710 mg) wird aus einem Gemisch von Aceton und Heptan (1:3) umkristallisiert. Ausbeute 640 mg reines Produkt vom F. 139,5 bis 140,50C. Der Mischschmelzpunkt mit einer authentischen Probe zeigt keine Erniedrigung. Die Infrarotspektren der beiden Proben sind identisch. Die Ausbeute, bezogen auf eingesetztes Cholesterin, beträgt 12,9% der Theorie.
Beispiel 2
Gemäß Beispiel 1 wird eine Anzuchtkultur von Arthrobacter Stamm CBS Nr. 220.67 hergestellt.
Die Umsetzung wird in drei 500 ml fassenden Kolben mit je 100 ml Nährmedium durchgeführt. Auch hier entspricht die Menge der Anzuchtkultur 5 % des Volumens des Hauptfermentationsmediums. Die Kolben werden in üblicher Weise bei 3O0C geschüttelt. Jeder Kolben wird 24 Stunden nach dem Beimpfen mit 200 mg Chloesterin und 50 mg NiSO4 · 7 H2O versetzt. Danach werden die Kolben weitergeschüttelt. Nach einer Inkubation von 3 bis 4 Tagen beträgt die Gesamtmenge an l,4-Androstadien-3,17-dion in den Kolben 70,2 bis 112 mg. In den meisten Fällen werden auch geringe Mengen 4-Androsten-3,17-dion gebildet. Im allgemeinen verschwindet jedoch der größte Teil dieser Verbindung nach einigen Tagen Schütteln.
Die Ausbeute beträgt zwischen 16 und 25,6%, bezogen auf eingesetztes Cholesterin.
Beispiel 3
Gemäß Beispiel 2 wird eine Anzuchtkultur Arthrobacter Stamm CBS Nr. 221.67 verwendet.
Jeder Kolben wird mit 400 mg Cholesterin und 50 mg CoCI2-OH2O versetzt. Nach viertägigem Schütteln bei 300C können 52mg ],4-Androstadien-3,17-dion aus jedem Kolben auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise isoliert werden. Die Menge an ge-
bildetem 4-Androsten-3,17-dion ist vernachlässigbar gering. Die Menge an nichtumgesetztem Cholesterin beträgt in jedem Kolben 290 mg. Es werden also 110 mg Cholesterin in jedem Kolben umgewandelt, woraus sich theoretisch 80 mg 1,4-Androstadien-3,17-dion bilden können. Die Umwandlung verläuft also in einer Ausbeute von 65%, bezogen auf umgesetztes Cholesterin, und 17,8%, bezogen auf eingesetztes Cholesterin.
Beispiel 4
Gemäß Beispiel 3 wird Arthrobacter Stamm CBS Nr. 222.67 verwendet. Isolierung und Reinigung gemäß Beispiel 1 ergibt 29 mg l,4-Androstadien-3,17-dion in jedem Kolben nach viertägigem Schütteln. Die Ausbeute beträgt 10%, bezogen auf eingesetztes Cholesterin.
Beispiel 5
Das Verfahren des Beispiels 4 wird unter Verwen-3ü dung von Arthrobacter Stamm CBS Nr. 222.67 wiederholt, jedoch werden in jeden Kolben 50mg NiSO4 · 7 H2O zugegeben. 24 Stunden nach der Zugabe von Cholesterin und Inhibitor kann durch Dünnschichtchromatographie, wie in Beispiel 1 beschrieben, 1,4-Androstadien-3,17-dion und 4-Androsten-3,17-dion nachgewiesen werden.
Beispiel 6
Das Verfahren des Beispiels 4 wird unter Verwendung von Arthrobacter Stamm CBS Nr. 221.67,
Arthrobacter Stamm CBS Nr. 223.67 bzw. Nocardia Stamm CBS Nr. 225.67 wiederholt. Bei Verwendung von NiSO4 ■ 7 H2O als Inhibitor wird 1,4-Androstadien-
3,17-dion in Mengen von 24 bis 38 mg pro Kolben erhalten. Die Ausbeute, bezogen auf eingesetztes Cholesterin, beträgt 8,2 bis 13%.
Beispiel 7
Gemäß Beispiel 1 wird eine Anzuchtkultur von Nocardia Stamm CBS Nr. 224.67 hergestellt. Das Hauptfermentationsmedium besteht aus einer Lösung von 5 g Maisquellwasserflüssigkeit (als Feststoff berechnet) pro Liter Wasser mit 1 g Hefeextrakt. Das Nährmedium wird mit verdünnter Natronlauge auf einen pH-Wert von 7 eingestellt und 30 Minuten bei 1100C sterilisiert. Die 500 ml fassenden Kolben enthalten jeweils 100 ml dieses Nährmediums. Die Konzentration der Anzuchtkultur im Nährmedium beträgt 5%.
Nach 24stündigem Schütteln wird jeder Kolben mit 200 mg Cholesterin in Form einer wäßrigen Suspension und einer wäßrigen Lösung von 50 mg CoCl2 · 6 H2O versetzt. Nach dreitägigem Schütteln werden aus jedem Kolben 32 mg l,4-Androstadicn-3J7-dion nach dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren isoliert. Die Ausbeute beträgt 22%, bezogen auf eingesetztes Cholesterin.
Beispiel 8
Gemäß Beispiel 7 wird eine Anzuchtkultur von Nocardia Stamm CBS Nr. 224.67 hergestellt. Jeder Kolben wird mit 200 mg Cholesterin und 15 mg CdSO4 versetzt. Nach 24stündigem Schütteln kann durch Dünnschichtchromatographie, wie in Beispiel 1 beschrieben, l,4-Androstadien-3,17-dion nachgewiesen werden.
Beispiel 9
Eine Anzuchtkultur vor. Nocardia Stamm CBS Nr. 224.67 oder Nocardia Stamm CBS Nr. 225.67 wird auf die in Beispiel 7 beschriebene Weise hergestellt. Jeder Kolben wird mit 200 mg Cholesterin und Natriumselinit in einer Menge von 3 bis 10 mg pro Kolben (30 bis 100 mg/Liter) versetzt. Nach 24stündigem Schütteln kann durch Dünnschichtchromatographie, wie in Beispiel 1 beschrieben, ein Gemisch von l,4-Androstadien-3,17-dion und 4-Androsten-3,17-dion in nachgewiesen werden.
Beispiel 10
Gemäß Beispiel 2 wird eine Anzuchtkultur von Arthrobacter Stamm CBS Nr. 221.67 hergestellt. An Stelle von Cholesterin werden 200 mg /J-Sitosterin verwendet. Der Inhibitor ist NiSO4 · 7 H2O. Nach 3 Tagen enthalten die Kolben l,4-Androstadien-3,17-dion in einer Menge von 19 bis 24 mg pro Kolben. Die Ausbeuie beträgt etwa 15%, bezogen auf eingesetztes /J-Sitosterin. Das im Handel erhältliche /?-Sitosterin enthält eine Anzahl von Steroiden praktisch gleicher Struktur, so daß eine exakte Bestimmung der Ausbeute nicht möglich ist.
Beispiel 11
Das Beispiel 10 wird mit folgenden Kulturen wiederhol;·. Arthrobacter Stamm CBS Nr. 222.67 bzw. ίο Nocardia Stamm CBS Nr. 226.67. In beiden Fällen kann nach 3 Tagen im Dünnschichtchromatogramm, wie im Beispiel 1 beschrieben, 1,4-Androstadien-3,17-dion nachgewiesen werden.
Beispiel 12
Gemäß Beispiel 2 wird eine Kultur Nocardia Stamm CBS Nr. 225.67 in 4 jeweils 100 ml Nährmedium enthaltenden Kolben hergestellt. Jeder Kolben wird mit 50 mg CoCl2 · 6 H2O versetzt. Der Inhalt der 4 Kolben wird mit wäßrigen Suspensionen von
a) Cholesten-3-on,
b) Stigmasterin,
c) 5t\-Chlorcholestanol bzw.
d) einer Lösung von Cholesterylbetainchlorid
versetzt. In allen Fällen beträgt die Menge des einge setzten Steroids 100 mg. Nach 2 Tagen läßt sich irr Dünnschichtchromatogramm, wie im Beispiel 1 be schrieben, l,4-Androstadien-3,17-dion nachweisen.

Claims (1)

  1. <l drosten-3,17-dion durch mikrobiologischen Abbau von
    Patentanspruch: Steroiden der gleichen Grundstruktur mit einer Oxo-,
    Hydroxy-, Alkoxy- oder Acylo>:ygruppe in 3-Stellung
    Verfahren zur Herstellung von 1,4 Androstadien- und einer /^-orientierten Kohlen wasserstoff gruppe mit 3,17-dion und 4-Androsten-3,17-dion durch mikro- 5 mindestens 8 Kohlenstoffatomen in 17-Steilung mit biologischen Abbau von Steroiden der gleichen Mikroorganismen der Gattung Nocardia oder Arthro-Grundstruktur mit einer Oxo-, Hydroxy-, Alkoxy- bacter in Gegenwart eines Inhibitors, das dadurch ge- oder Acyloxygruppe in 3-Stellung und einer kennzeichnet ist, daß man als Inhibitor Nickelionen, /3-orientierten Kohlenwasserstoffgruppe mit min- .Kobaltionen, Cadmiumionen oder Selenitionen verdestens 8 Kohlenstoffatomen in 17-StelIung mit io wendet.
    Mikroorganismen der Gattung Nocardia oder Die im erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten
    Arthrobacter in Gegenwart eines Inhibitors, d a- Mikroorganismen haben die Fähigkeit, die Ausgangsdurch gekennzeichnet, daß man als steroide in Abwesenheit des Inhibitors vollständig Inhibitor Nickelionen, Kobaltionen, Cadmium- abzubauen.
    ionen oder Selenitionen verwendet. 15 Spezielle Beispiele für die im erfindungsgemäßen
    Verfahren verwendbaren Ausgangssteroide sind Cholesterin,/S-Sitosterin, Stigmasterin, 4-Cholesten-3-on und Campesterol. Auch Derivate dieser Sterine können verwendet werden, z. B. Cholesterylbetainchlorid, 20 Cholesterylacetat, Cholesterylhemisuccinat oder substituierte Sterine, wie 5a-Chlorcholestanol oder Stcrin,
DE1768215A 1965-10-22 1968-04-16 Verfahren zur Herstellung von 1,4-Androstadien-3,17-dlon und 4-Androsten-3,17-dion durch mikrobiologischem Abbau Expired DE1768215C3 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL6513718A NL6513718A (de) 1965-10-22 1965-10-22
NL6705450A NL6705450A (de) 1965-10-22 1967-04-18

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DE1768215A1 DE1768215A1 (de) 1971-09-02
DE1768215B2 DE1768215B2 (de) 1975-05-07
DE1768215C3 true DE1768215C3 (de) 1975-12-18

Family

ID=26643950

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE1768215A Expired DE1768215C3 (de) 1965-10-22 1968-04-16 Verfahren zur Herstellung von 1,4-Androstadien-3,17-dlon und 4-Androsten-3,17-dion durch mikrobiologischem Abbau

Country Status (7)

Country Link
US (1) US3684656A (de)
BE (1) BE713881A (de)
DE (1) DE1768215C3 (de)
DK (1) DK129701B (de)
FR (1) FR94658E (de)
GB (1) GB1208078A (de)
NL (1) NL6705450A (de)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2313395A1 (fr) * 1975-06-06 1976-12-31 Mitsubishi Chem Ind Procede d'oxydation microbiologique de steroides
US4101378A (en) * 1975-06-06 1978-07-18 Mitsubishi Chemical Industries Limited Process for the microbiological oxidation of steroids
DE2558090C2 (de) * 1975-12-19 1985-05-30 Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen Verfahren zur Herstellung von 4-Androsten-3,17-dion-Derivaten
DE2558089C2 (de) * 1975-12-19 1985-05-30 Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen Verfahren zur Herstellung von Androstan-3,17-dion-Derivaten
DE2558088C2 (de) * 1975-12-19 1985-05-30 Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen Verfahren zur Herstellung von 4-Androsten-3,17-dion-Derivaten
US4293645A (en) * 1976-03-01 1981-10-06 The Upjohn Company Process for preparing androsta-1,4-diene-3,17-dione and androst-4-ene-3,17-dione
CA1093990A (en) * 1976-05-18 1981-01-20 Pasquale Zaffaroni Method for the microbiological conversion of steroids
DE2632677A1 (de) * 1976-07-16 1978-01-26 Schering Ag Verfahren zur herstellung von androstan-17-on-derivaten und deren verwendung
US4345030A (en) * 1976-10-22 1982-08-17 The Upjohn Company Microorganism mutant conversion of sterols to androsta-4-ene-3,17-dione
US4212940A (en) * 1978-12-19 1980-07-15 Schering Aktiengesellschaft Process for the preparation of 21-hydroxy-20-methylpregnane derivatives
JPS57500226A (de) * 1980-02-22 1982-02-12
ATE18257T1 (de) * 1980-12-23 1986-03-15 Schering Ag Verfahren zur herstellung von 11-beta,21dihydroxy-2'-methyl-5'-beta-h-1,4-pregnadien(16,17)-oxazol-3,20-dion.
US5298398A (en) * 1987-12-23 1994-03-29 Gist-Brocades Nv Preparation of 9-α-hydroxy-17-keto steroids using Mycobacterium species CBS 482.86
JP2719377B2 (ja) * 1987-12-23 1998-02-25 ルーセル ウクラーフ ９α―ヒドロキシ―１７―ケトステロイドの微生物学的製法

Also Published As

Publication number Publication date
DE1768215A1 (de) 1971-09-02
BE713881A (de) 1968-10-18
FR94658E (fr) 1969-10-03
GB1208078A (en) 1970-10-07
DK129701B (da) 1974-11-11
DE1768215B2 (de) 1975-05-07
DK129701C (de) 1975-04-21
NL6705450A (de) 1968-10-21
US3684656A (en) 1972-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE1768215C3 (de) Verfahren zur Herstellung von 1,4-Androstadien-3,17-dlon und 4-Androsten-3,17-dion durch mikrobiologischem Abbau
EP0004913B1 (de) Verfahren zum selektiven Seitenkettenabbau von Steroidverbindungen und zur Herstellung hierzu geeigneter Mikroorganismen-Defektblockmutanten sowie neue Mikroorganismenstämme (I)
DE3876769T2 (de) Mikrobiologische herstellung von 9-alpha-hydroxy-17-keto-steroiden.
DE3739017C2 (de) Mycobacterium-roseum sp. nov. NCAIM B(P) 000339 und Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von 9alpha-(Hydroxy)-4-androsten-3,17-di-(on)
EP0014991B1 (de) Mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung 7-alpha-hydroxylierter Steroide
DE2703645C3 (de) Verfahren zur Herstellung eines Gemischs aus Androsta-1,4-dien-3,17-dion und Androst-4-en-3,17-dion
DE2660114C2 (de) Verfahren zur Herstellung neuer 7 a ß-Methylhexahydro-l,(5&gt;-indan (di)on-Verbindungen unter Verwendung von Mikroorganismus-Mutanten
DE2746323C2 (de) Verfahren zur Herstellung von 3a &amp;alpha;-H-4&amp;alpha;-[3&#39;-Propionsäure]-7a &amp;beta;-methylhexahydro-1,5-indandion
DE69222092T2 (de) Mikrobielle Umwandlung von Gallensäuren
DE1568932C (de) Verfahren zur Herstellung von 1,4-Androstadien-3,17-dion und 4-Androsten-3,17dion durch mikrobiologischen Abbau
CH385204A (de) Verfahren zur Herstellung von Steroidverbindungen
DE1618582C3 (de) Verfahren zur Herstellung von 17-Ketosteroiden der Androstanreihe aus den entsprechenden Steroiden mit einer Seitenkette in 17-Stellung durch mikrobiologischen&#39; Abbau
DE2746383C2 (de) Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von Androst-4-en-3,17-dion
AT254407B (de) Herstellung von Retrosteroiden
DE2038926A1 (de) Mikrobiologische Reduktion
DD145280A5 (de) Verfahren zur herstellung von androst-4-en-3,17-dion
AT212498B (de) Verfahren zur mikrobiologischen Oxydation von Steroiden
DE1128854B (de) Verfahren zur Herstellung von 11-hydroxylierten Steroiden der Pregnanreihe
CH505800A (de) Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von 17-Oxo-steroiden
DE1909152A1 (de) Verfahren zur Herstellung von 11 alpha-Hydroxy-3-oxo-delta?-Steroiden der Pregnan- und Androstanreihe mittels Mischfermentation
AT216685B (de) Verfahren zur Herstellung von Steroiden der Δ&lt;1,4&gt;-Pregnadienreihe
DE2921052A1 (de) Bei aerober gaerung zur einfuehrung einer 12 beta -hydroxygruppe in den aglykonteil von 12-desoxyherzglykosiden faehiger aus waldboeden erhaeltlicher mikroorganismenstamm und verfahren zur herstellung von 12 beta -hydroxycardenolidverbindungen
DE1027667B (de) Verfahren zur Herstellung polyoxigenierter Pregnane
DE1618848A1 (de) Verfahren zur Herstellung von 3-alpha,5-Cyclo-6ss,19-oxido-5alpha-androstan-17-on
CH338827A (de) Verfahren zur Herstellung von Polyhydroxysteroiden mittels hydroxylierender Enzyme verschiedener Arten von Mikroorganismen

Legal Events

Date Code Title Description
C3 Grant after two publication steps (3rd publication)
E77 Valid patent as to the heymanns-index 1977