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DE20251T1 - Dns-transfer-vektor, damit transformierter wirt, impfstoff und ihre herstellung. - Google Patents

Dns-transfer-vektor, damit transformierter wirt, impfstoff und ihre herstellung.

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DE20251T1
DE20251T1 DE198080400722T DE80400722T DE20251T1 DE 20251 T1 DE20251 T1 DE 20251T1 DE 198080400722 T DE198080400722 T DE 198080400722T DE 80400722 T DE80400722 T DE 80400722T DE 20251 T1 DE20251 T1 DE 20251T1
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DE
Germany
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protein
virus
transfer vector
amino acid
thr
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DE198080400722T
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Howard Michael Howard Michael San Francisco California 94127 Goodman
William J. William J. San Francisco California 94131 Rutter
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University of California Berkeley
Original Assignee
University of California Berkeley
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Publication date
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Claims (30)

Deutsche Übersetzung der Ansprüche der veröffentlichten Anmeldung
1. Ein DNA-Transfer-Vektor, umfassend mindestens einen Teil des Genoms eines NP-Virus.
2. Ein DNA-Transfer-Vektor, wie in Anspruch 1, worin der Transfer-Vektor angepasst ist, eine Wirtzelle, in der der Transfer-Vektor repliziert wird, zu transformieren, und mindestens ein Teil des geclonten Genomteils durch Transkription dargestellt wird.
3. Der Transfer-Vektor nach Anspruch 2, worin mindestens ein Teil des geclonten Genomteils durch Translation dargestellt wird.
4. Der Transfer-Vektor nach Anspruch 1, worin das NP-Virus Hepatitis B Virus ist.
5. Der Transfer-Vektor nach Anspruch 2, worin der Vektor ein Plasmid und der Wirt ein Bakterium ist.
6. Der Transfer-Vektor nach Anspruch 4, worin der Transfer-Vektor ein Plasmid und der Wirt Escherichia coli ist.
7. Der Transfer-Vektor nach Anspruch 6, worin der Vektor pEco-63 und der Wirt E. coli HB-101 ist.
8. Eine Methode zur Aufrechterhaltung, Replikation
-1-
und Darstellung mindestens eines Teils des Genoms eines NP-Virus, umfassend:
Isolieren des genetischen Materials, das mindestens einen Teil des Genoms des NP-Virus oder ein cDNA-Transkript davon enthält, . .......
Rekombinieren des genetischen Materials mit einem DNA-Transfer-Vektor, unter Bildung eines rekombinierenden Transfer-Vektors,
Transformation einer Wirtzelle mit dem rekombinierenden Transfer-Vektor, :
Wahl eines Wirtzellstammes, geeignet zur Aufrechterhaltüng, Replikation und Darstellung des rekombinierenden Transfer-Vektors, und
Züchten der ausgewählten Wirtzelle unter Bedingungen, die ihre Proliferation begünstigen, wodurch mindestens ein Teil des Genoms des darin getragenen NP-Virus aufrechterhalten, repliziert und dargestellt wird.
9. Die Methode nach Anspruch 8, bei der das NP-Virus Hepatitis B Virus ist.
10. Die Methode nach Anspruch 9, bei der der Transfer-Vektor ein Plasmid und der Wirt Escherichia coli ist.
11· Eine Vaccine gegen ein NP-Virus, umfassend ein steriles, physiologisch brauchbares Verdünnungsmittel und ein Antigen, das einen immunologisch aktiven Proteinbestandteil des Virus umfasst, dargestellt durch einen Mikroorganismus, der durch einen DNA-Transfer-Vektor, umfassend eine Nukleotidsequenz, die das Protein codiert, transformiert wurde, und wobei der transformierte Mikroorganismus zur Darstellung der Nukleotid-
-2-
sequenz geeignet ist.
12. Eine Vaccine nach Anspruch 11, worin das NP-Virus Hepatitis B Virus ist.
13. Eine Vaccine nach Anspruch 11, worin das Protein einen immunologisch aktiven Proteinbestandteil des Oberflächenantigens von Hepatitis B Virus umfasst.
14. Eine Vaccine nach Anspruch 13, worin das Protein das S-Protein umfasst.
15. Eine Vaccine nach Anspruch 14, worin das S-Protein zusätzlich die n-endständige Aminosäuresequenz Met-Gln-Thr-Gln-Lys-Pro-Thr-Pro-Ser-Leu-Ala-Arg-Thr-Gly- Asp-Pro-Val-Thr-Asn- umfasst.
16. Eine Methode zur Herstellung einer Vaccine gegen ein NP-Virus, umfassend die Stufen von
a. Transformation eines Mikroorganismus mit einem DNA-Transfer-Vektor, umfassend eine Nukleotidsequenz, die ein Protein des Virus codiert, wobei die Nukleotidsequenz in ein Gebiet des Transfer-Vektors, gesteuert durch ein darstellbares Operon, eingeführt ist, in der Ablese-Rahmen-Phase und Orientierung, derart, dass die Translationsdarstellung des Operons zur Translationsdarstellung der Nukleotidsequenz führt,
b. Züchten des Mikroorganismus unter Wachstumsbedingungen, die eine Darstellung des Operons ermöglichen, wodurch ein Protein erzeugt wird, das die Aminosäuresequenz des Proteins des Virus umfasst,
c. Reinigen des in der Stufe b hergestellten Proteins, und,
-3-
-4- 00202c
d. Mischen des gereinigten Proteins mit einem sterilen, physiologisch brauchbaren Verdünnungsmittel, zur Bereitung einer Vaccine gegen ein NP-Virus.
17. Die Methode nach Anspruch 16, worin das NP-Virus Hepatitis B Virus ist.
18. Die Methode nach Anspruch 16, worin das Protein des Virus einen immunologisch aktiven Proteinbestandteil des Oberflächenantigens von Hepatitis B Virus umfasst.
19. Die Methode nach Anspruch 18, worin das Protein das S-Protein umfasst.
20. Die Methode nach Anspruch 19, worin das das S-Protein umfassende Protein zusätzlich die n-endständige Aminosäuresequenz umfasst: Met-Gln-Thr-Gln-Lys-Pro-Thr-Pro-Ser-Leu-Ala-Arg-Thr-Gly-Asp-Pro-Val-Thr- Asn-.
21. Ein antigenes Protein, codiert durch das Genom eines NP-Virüs, synthetisch hergestellt durch einen Mikroorganismus und geeignet zum Auffinden von Antikörpern, die cross-reaktionsfähig mit einer immunologisch reaktiven Komponente des NP-Virus sind.
22. Das Protein nach Anspruch 21, codiert durch das Genom des Hepatitis B Virus.
23. Das Protein nach Anspruch 22, umfassend die Aminosäuresequenz des S-Proteins von Hepatitis B Virus.
24. Ein Mikroorganismus, enthaltend und replizierend einen DNA-Transfer-Vektor, umfassend mindestens einen Teil des HBV-Genoms.
-4-
25. Ein Mikroorganismus nach Anspruch 24, umfassend den Bakterienstamm Escherichia coli HBlOlpEcoöS.
26. Ein Protein, umfassend die Aminosäuresequenz: 5
M GluAsnlleThrSerGlyPheLeuGlyProLeuLeuValLeuGlnAla GlyPhePheLeuLeuThrArglleLeuThrlleProGlnSerLeuAsp SerTrpTrpThrSerLeuAsnPheLeuGlyGlySerProValCysLeu GlyGlnAsnSerGlnSerProThrSerAsnHisSerProThrSerCys ProProIleCysProGlyTyrArgTrpMetCysLeuArgArgPhelle IlePheLeuPhelleLeuLeuLeuCysLeuIlePheLeuLeuValLeu LeuAspTyrGlnGlyMetLeuProValCysProLeuIleProGlySer ThrThrThrSerThrGlyProCysLysThrCysThrThrProAlaGln GlyAsnSerMetPheProSerCysCysCysThrLysProThrAspGly AsnCysThrCysIleProIleProSerSerTrpAlaPheAlaLysTyr LeuTrpGluTrpAlaSerValArgPheSerTrpLeuSerLeuLeuVal ProPheValGlnTrpPheValGlyLeuSerProThrValTrpLeuSer AlalleTrpMetMetTrpTyrTrpGlyProSerLeuTrySerlleVal SerProPhelleProLeuLeuProIlePhePheCysLeuTrpValTyrlle
27. Ein Protein mit der Formel
H O
X-N-S-C-Y
worin S die Aminosäuresequenz des S-Proteins ist,
X H oder eine Aminoschutzgruppe oder eine Aminosäure oder ein Peptid ist, umfassend mindestens den C-endständigen Teil der Aminosäuresequenz:
-5-
M GlyGlyTrpSerSerLysProArgLysGly.M GlyThrAsnLeuSer ValProAsnProLeuGlyPhePheProAspHisGlnLeuAspProAla PheGlyAlaAsnSerAsnAsnProAspTrpAspPheAsnProValLys AspAspTrpPröAlaAlaAsnGlnValGlyValGlyAlaPheGlyPro ArgLeuThrProProHisGlyGlylleLeuGlyTrpSerProGlnAla GlnGlylleLeuThrThrVälSerThrlleProProProAläSerThr AsnArgGlhSerGlyArgGlnProThrProIleSerProProLeuArg AspSerHisProGlnAla,M ,GlnTrpAsnSerThrAlaPheHisGln ThrLeuGlnAspProArgValArgGlyLeuTyrLeuProAlaGlyGly SerSerSerGlyThrValAsnProAlaProAsnlleAlaSerHisIle SerSerlleSerAlaArgThrGlyAspProValThr
oder ein Peptid von weniger als etwa 4 Aminosäuren länge, umfassend in statistischer Sequenz Aminosäuren, ausgewählt aus der Gruppe von Tyrosin, Phenylalanin und Tryptophan, und
Y OH oder eine Cärboxylschutzgruppe oder eine Aminosäure oder ein Peptid mit weniger als etwa 4 Aminosäuren länge, umfassend in statistischer Sequenz Aminosäuren, ausgewählt aus der Gruppe von Tyrosin, Phenylalanin und Tryptophan, ist.
28. Eine Zusammensetzung, enthaltend ein Protein nach Anspruch 27, in einem physiologisch brauchbaren Medium.
29. Ein Protein nach Anspruch 27, mit einem Molekulargewicht grosser als 25398.
30. Ein Protein nach Anspruch 27, worin mindestens ein Asparaginrest in der Aminosäuresequenz -Asn-M-(Ser) oder (Thr)- glykosyliert ist, worin M eine beliebige Aminosäure ist.
-6-
DE198080400722T 1979-05-24 1980-05-23 Dns-transfer-vektor, damit transformierter wirt, impfstoff und ihre herstellung. Pending DE20251T1 (de)

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