DE20216998U1

DE20216998U1 - Kalibrierungsmittel

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Publication number: DE20216998U1
Application number: DE20216998U
Authority: DE
Original assignee: Evotec OAI AG
Current assignee: Evotec OAI AG
Priority date: 2002-11-05
Filing date: 2002-11-05
Publication date: 2004-03-18
Anticipated expiration: 2012-11-06
Also published as: DE10352123A1

Abstract

Kalibrierungsmittel zur Kalibrierung eines Messsystems, umfassend mindestens zwei Bereiche zur Aufnahme von Flüssigkeiten, dadurch gekennzeichnet, dass die mindestens zwei Bereiche je eine zur Kalibrierung des Messsystems geeignete Kalibrierungslösung enthalten.

Description

Die Erfindung betrifft ein Kalibrierungsmittel zur Kalibrierung von Messsystemen, insbesondere zur Kalibrierung optischer Detektionssysteme oder zur Kalibrierung von quantitativen Assays sowie zur Kalibrierung, d.h. zur Überprüfung, von Assay-Reagentien. Das Kalibrierungsmittel weist verschiedene Bereiche zur Aufnahme von Kalibrierungslösungen auf.
In der Biotechnologie werden beispielsweise verschiedene sogenannte Assays angewandt, die als Modellsyssteme zur Untersuchung von chemischen und/oder biologischen Wechselwirkungen dienen. Ziel dieser Assays ist u.a. die effiziente Durchmusterung chemischer Substanzen, das sogenannte Screening, zum Auffinden von Substanzen, die ein Target in der gewünschten Art und Weise beeinflussen. Targets sind beispielsweise spezifische biologische Moleküle, wie Enzyme, Rezeptoren oder Ionenkanäle, die möglicherweise für bestimmte Krankheiten und ihre Symptome von Bedeutung sind. Die meisten Wirkstoffe beeinflussen durch die Bindung an ein Target dessen biologische Funktion. Die Untersuchung solcher Assays erfolgt durch sogenannte Screening-Anlagen. Diese Screening-Anlangen sollen insbesondere die Geschwindigkeit, Genauigkeit und Effizienz der Wirkstoffforschung steigern. Aufgrund der hohen Empfindlichkeit der innerhalb dieser Screening-Anlagen eingesetzten Detektionssysteme und der oft sehr schwierigen Bestimmung der Bindung einer Substanz an ein Target ist eine genaue Kalibrierung der Detektionssysteme und/oder Assays erforderlich. Des Weiteren ist es von besonderer Bedeutung, die im Rahmen der Assays eingesetzten Assay-Reagentien beispielsweise hinsichtlich Reinheit oder Aktivität zu untersuchen.
Detektionssysteme, die der Untersuchung solcher Assays dienen, basieren in der Regel auf Radioaktivität, Kolorimetrie oder Lumineszenz, insbesondere Phosphoreszenz oder Fluoreszenz. Bei vielen Detektionssystemen, beispielsweise konfokalen Mikroskopen oder Spektrometern, die u.a. in Screening-Anlagen zur Wirkstoffsuche eingesetzt werden, werden zur Kalibierung besondere Kalibrierungslösungen verwendet, die bekannte definierte Eigenschaften aufweisen.
In der Regel werden die Kalibrierungslösungen kurz vor den jeweiligen Kalibrierungen vom Anwender selbst hergestellt. Bei der Herstellung der Kalibrierungslösungen können eine Reihe von Fehlern auftreten. Hierbei handelt es sich um fehlerhafte Verdünnungen oder Fehler bei der Auswahl der Farbstoffe, Assay-Reagentien oder Lösungsmittel. Dies führt zu einer ungenauen Kalibrierung und somit zu einer Verfälschung der Messergebnisse bzw. zu einer Verringerung der Reproduzierbarkeit der Messungen. Des Weiteren ist diese Vorgehensweise für die Herstellung der Kalibrierungslösungen sehr zeitintensiv und ist somit beispielsweise im Zusammenhang mit den vorstehend beschriebenen Screening-Anlagen nicht anwendbar.
Aufgabe der Erfindung ist es daher, Kalibrierungsmittel bereitzustellen, die eine einfache, reproduzierbare und schnelle Kalibierung von Messsystemen, insbesondere von Detektionssystemen, quantitativenr Assays oder Assay-Reagentien, ermöglichen.
Die Lösung der Aufgabe erfolgt erfindungsgemäß durch ein Kalibrierungsmittel mit den Merkmalen von Anspruch 1.
Das erfindungsgemäße Kalibrierungsmittel weist mindestens zwei Bereiche zur Aufnahme von Flüssigkeiten auf. Die mindestens zwei Bereiche enthalten jeweils mindestens eine zur Kalibrierung des Systems geeignete Kalibrierungslösung. Durch das erfindungsgemäße Kalibrierungsmittel ist es möglich, mit einer hohen Reproduzierbarkeit, konstanter Qualität und sehr guter Handhabbarkeit eine Vielzahl unterschiedlicher Messsysteme in kurzer Zeit zu kalibrieren. Messysteme in erfindungsgemäßen Sinne sind beispielsweise Detektionssysteme, quantitative Assays oder Assay-Reagentien.
Die mindestens zwei Bereiche des Kalibrierungsmittels enthalten vorzugsweise identische oder unterschiedliche Kalibrierungslösungen. Die Verwendung unterschiedlicher Kalibrierungslösungen in Zusammenhang mit einem Kalibrierungsmittel ist bevorzugt, um eine schnelle Kalibrierung einer Vielzahl unterschiedlicher Parameter und/oder eine Aufnahme kompletter Eichkurven zu ermöglichen.
Bei den Kalibrierungslösungen handelt es sich vorzugsweise um wässrige Lösungen eines oder mehrerer Kalibrierungsstoffe. Bei diesen Kalibrierungsstoffen handelt es sich vorzugsweise um Farbstoffe, die von vorne herein die zu detektierenden Eigenschaften aufweisen oder um Stoffe, die erst nach einer (i) Komplexierung, d.h. insbesondere einer Anlagerung, (ii) Interkalation oder (iii) Reaktion an andere Komponenten die zu detektierenden Eigenschaften erhalten. Die Kalibrierungsstoffe können dem Kalibrierungsmittel als fertige Kalibrierungsstoffe zugegeben oder erst in den Bereichen des Kalibrierungsmittels selbst hergestellt werden.
Die Verwendung von mehreren Kalibrierungsstoffen in einer Kalibrierungslösung ist insbesondere bei Mehr-Farben-Anwendungen, beispielsweise Mehr-Farben-Fluoreszenzmessungen relevant.
Die Farbstoffe bzw. Stoffe können als freie Farbstoffe bzw. Stoffe oder als an andere Moleküle oder Partikel gebundene Farbstoffe bzw. Stoffe, d.h. in der Form von Konjugaten, verwendet werden. Bei solchen Molekülen oder Partikeln handelt es sich beispielsweise um Antikörper, Peptide, Proteine, Oligonukleotide oder synthetische Partikel (sogenannte Beads).
Bei den Farbstoffen handelt es sich beispielsweise um UV-, VIS-, Infrarot-, Phosphoreszenz- und/oder Fluoreszenz-Farbstoffe. Beispiele für Fluoreszenzfarbstoffe sind Coumarine, Xanthene (Rhodamine, Oxazine) oder Cyanine. Für Phosphoreszenzmessungen sind insbesondere Seltenerdmetall-Komplex-Farbstoffe geeignet. Für Absorptionsmessungen können insbesondere UV-, VIS- oder Infrarot-Farbstoffe verwendet werden.
Beispiele für Stoffe, die beispielsweise durch Komplexierung, Interkalation oder Reaktion die zu detektierenden Eigenschaften erhalten sind bei Proteinbestimmungen Coomassie Brillant Blue, Bicinchininic Acid, Biuret Reagenz und o-Phthalaldehyd. Beispiele für Stoffe, die in Nukleinsäurebestimmungen eingesetzt werden können sind beispielsweise Hoechst Farbstoffe, PicoGreen, OliGreen, RiboGreen, TOTO, JOJO und Ethidiumbromid. Beispiele für Stoffe, die für Kationenbestimmungen geeignet sind, sind Calcein, Calcium Green, Fluo-3, Newport Green und APTRA-BTC.
Die erfindungsgemäßen Kalibrierungsmittel eignen sind insbesondere für die Kalibrierung von Detektionssystemen. Dabei müssen zum einen optische Parameter, wie beispielsweise die Fokusgeometrie oder zum anderen Parameter, d.h. Eigenschaften, verschiedener zu messender Analyten oder Komponenten, wie beispielsweise Proteinen, Nukleinsäuren, Anionen, Kationen oder Rezeptor-Ligand-Komplexen, kalibriert werden. Beispiele für solche Parameter sind Fluoreszenintensität, Fluoreszenzpolarisation, Fluoreszenzlebensdauer, Rotationskorrelationszeit, translationale Diffusion, Kreuzkorrelationsintensität, Teilchenzahlen) oder Konzentrationen) des (der) Kalibrierungsstoffe(s). Des Weiteren kann beispielsweise die Absorption der Kalibrierungsstoffe gemessen werden.
Kalibrierungsmittel sind beispielsweise auch für die Kalibrierung quantitativer Assays, wie Protein- oder Nukleinsäurebestimmungen, von großer Bedeutung. Des Weiteren können Kalibrierungslösungen zur Kalibrierung intra-und extrazellulärer Anionen wie Chlorid, Nitrit, Phosphat, sowie von Kationen verwendet werden. Bei den Kalibrierungslösungen handelt es sich in diesen Fällen vorzugsweise um wässrige Pufferlösungen. Diese enthalten den zu bestimmenden Analyten, wie beispielsweise das Protein oder die Nukleinsäure, sowie das (die) zur Quantifizierung notwendige Reagenz (Reagentien). Die Verwendung von Kalibrierungslösungen mehrerer Analytkonzentrationen innerhalb eines Kalibrierungsmittels ist hierbei zur Aufnahme der kompletten Eichkurve relevant. Der Analyt und das (die) Reagenz (Reagentien) bilden beispielsweie einen Komplex, der in Abhängigkeit von der Analytkonzentration unterschiedliche kolorimetrische oder fluorimetrische Signale ergibt.
Beispiele für in solchen Fällen untersuchte Signale sind Fluoreszenintensität, Fluoreszenzpolarisation, Fluoreszenzlebensdauer, Rotationskorrelationszeit, translationale Diffusion, Kreuzkorrelationsintensität, Teilchenzahlen) oder Konzentration(en). Des Weiteren können beispielsweise die Absorptionen gemessen werden.
Die Bestimmung der Konzentration eines Analyten unbekannter Konzentration erfolgt dann durch den Vergleich des erhaltenen Messwertes mit der Kalibrierungskurve. Wie bereits vorstehend beschrieben, werden vorzugsweise Farbstoffe, die die zu detektierenden Eigenschaften von vorne herein aufweisen oder Stoffe, die erst nach einer Komplexierung, d.h. insbesondere einer Anlagerung, Interkalation oder Reaktion an andere Komponenten die zu detektierenden Eigenschaften erhalten, eingesetzt.
Die erfindungsgemäßen Kalibrierungslösungen können des Weiteren auch zur Qualitätskontrolle von Assay-Reagentien verwendet werden. Bei diesen Kalibrierungslösungen handelt es sich vorzugsweise um wässrige Pufferlösungen. Diese enthalten beispielsweise das Rezeptorprotein, einen mit einem Farbstoff markierten Liganden und bei Bedarf auch Kompetitoren oder Inhibitoren. Die Verwendung von Kalibrierungslösungen mehrerer Rezeptor-/Ligandkonzentrationen ist hierbei zur Aufnahme der Bindungskurve relevant. Der markierte Ligand bindet an das Rezeptorprotein und bildet einen Rezeptor-Ligand-Komplex, der in Abhängigkeit der Rezeptor-/Ligandkonzentration beispielsweise unterschiedliche kolorimetrische oder fluorimetrische Signale ergibt. Die Bestimmung der Qualität von Assay-Reagentien erfolgt dann durch den Vergleich des erhaltenen Messwertes mit der Bindekurve.
Die Kalibrierungslösungen können neben den Farbstoffen bzw. den Quantifizierungsreagentien verschiedene Zusätze enthalten, die insbesondere zur Stabilisierung der Lösungen dienen. Vorzugsweise handelt es sich bei solchen Zusätzen um Photostabilisatoren, Fungizide, anti-bakerielle Verbindungen (ein Beispiel für einen Zusatz ist Natriumazid) oder Detergentien. In verschiedenen Anwendungen kann es des Weiteren bevorzugt sein, Zusätze zu verwenden, die die optische Eigenschaften der Kalibrierungslösungen verändern oder solche, die zur Angleichung an die unterschiedlichen Messmedien dienen.
Für die einzelnen Kalibrierungen kann es erforderlich sein, bestimmte pH-Werte in den einzelnen Kalbrierungslösungen einzustellen. Dies erfolgt in der Regel durch die Verwendung verschiedener Puffer. Welcher Puffer verwendet wird, hängt von dem Farbstoff und dem angestrebten pH-Wert ab. Generell können alle kommerziell erhältlichen Puffer, die die Wirkung der Farbstoffe nicht oder nur in gewünschter Weise beeinflussen verwendet werden. Beispiele für solche Puffer umfassen PBS-, HEPES-, Phosphat-, Citrat- sowie Acetat-Puffer.
Die Stabilität bzw. Handhabbarkeit der einzelnen Kalibrierungslösungen kann weiter erhöht bzw. verbessert werden, indem das Kalibrierungsmittel mittels einer Abdeckung verschlossen wird. Vorzugsweise erfolgt durch die Abdeckung ein im Wesentlichen luftdichter Abschluss der Kalibrierungslösungen gegenüber der Außenluft. Vorzugsweise handelt es sich bei der Abdeckung um eine luftdichte Folie oder um einen festen, massiven Deckel aus Kunststoff. Als Kunststoffmaterial ist insbesondere Polypropylen geeignet.
Je nach verwendetem Farbstoff kann die Abdeckung transparent, d.h. durchsichtig, oder nicht transparent ausgebildet sein. Durch die Verwendung einer nicht transparenten Abdeckung kann bei verschiedenen Farbstoffen die Stabilität weiter erhöht werden, da die Kalibrierungslösungen in geringerem Masse dem Außenlicht ausgesetzt sind.
Das Kalibrierungsmittel kann Bereiche aufweisen, die keine Kalibrierungslösungen enthalten. Dies ist insbesondere relevant bei der Durchführung individueller Assays. Insbesondere bei der Durchführung quantitativer Assays und bei der Kalbrierung, d.h. Überprüfung von Assay-Ragentien unter Einsatz des Kalibrierungsmittels, ermöglicht dies aufgrund identischer Versuchsbedingingen einen optimalen Vergleich der Messdaten.
Bei dem Kalibrierungsmittel handelt es sich beispielsweise um eine Glasplatte, die so ausgestaltet ist, dass es sich bei den mindestens zwei Bereichen zur Aufnahme der Kalibrierungslösungen um durch die Kalibrierungslösungen benetzbare Flächen handelt. Die Umgebung dieser Flächen ist derart ausgestaltet, dass die jeweiligen Kalibrierungslösungen diese nicht benetzen. Die einzelnen Bereiche können beispielsweise durch eine entsprechende Oberflächenbehandlung der Glasplatte erhalten werden. Im Falle einer Glasplatte als Kalibrierungsmittel handelt es sich bei der Abdeckung vorzugsweise um einen festen, massiven Deckel, der luftdicht auf die Glasplatte aufgesetzt wird.
Des Weiteren kann es sich bei dem Kalibrierungsmittel um eine Titerplatte handeln. Diese Titerplatte weist üblicherweise eine Basisplatte mit durchgehenden Vertiefungen auf, die durch eine Bodenplatte, beispielsweise eine Glasplatte, verschlossen werden. Bei solchen Titerplatten sind die einzelnen Vertiefungen vorzugsweise in regelmäßigen Abständen angeordnet, um in die einzelnen Vertiefungen, Kalibierungslösungen mit Hilfe eines automatisierten Prozesses einführen und anschließend vermessen zu können. Insbesondere handelt es sich bei den Vertiefungen um solche mit einem Volumen im μl-Bereich oder darunter. Im Falle einer Titerplatte erfolgt der luftdichte Verschluß der Vertiefungen vorzugsweise über eine Kunststofffolie, die die Titerplatte auf der der Bodenplatte gegenüberliegenden Seite verschließt. Der luftdichte Abschluß wird in diesem Falle dadurch erreicht, dass die Abdeckung und die Titerplatte miteinander verschweißt werden.
Bei der Bodenplatte handelt es sich vorzugsweise um eine durchsichtige Glasplatte oder eine durchsichtige Kunststofffolie.
Die Basisplatten der Kalibrierungmittel werden vorzugsweise aus einem inerten Material, vorzugsweise einem inerten Kunststoff oder Glas, hergestellt. Beispiele für bevorzugte Kunststoffe umfassen Polyproplyen oder Polystyrol.
Zur Erhöhung der Stabilität des Kalibrierungmittels kann in die Basisplatte ein die Vertiefungen umgebender Trägerkern aus höherschmelzendem Material eingebettet werden. Das Kalibrierungmittel kann somit bei automatisierten Kalibrierungen nicht so leicht verbogen werden. Dies hat den Vorteil, dass die Postionen der einzelnen Vertiefungen nicht durch die Einwirkung von äußeren Kräften beeinträchtigt werden. Somit können Verfälschungen der Kalibrierungen durch verbogene Titerplatten vermieden werden. Vorzugsweise handelt es sich bei dem Trägerkern um eine Metallplatte mit zu den Vertiefungen korrespondierenden Öffnungen. Des Weiteren ist es bevorzugt, dass jede Vertiefung von dem Trägerkern umgeben ist. Die Öffnungen des Trägerkerns sind vorzugsweise in ihren Abmessungen geringfügig größer als die Vertiefungen der Basisplatte.
Wenn es sich bei der Bodenplatte um eine Glasplatte handelt, wird diese vorzugsweise aufgeklebt. Werden als Bodenplatte Kunststofffolien verwendet, erfolgt die Befestigung vorzugsweise durch Aufschweißen.
Die Basisplatten weisen beispielsweise 24, 96, 384, 1536 oder 2080 Vertiefungen auf. Besonders bevorzugt weist die Basisplatte 24, 96 oder 384 Vertiefungen auf. Ganz besonders bevorzugt weist die Basisplatte 24 Vertiefungen auf, die mit Kalibrierunglösungen befüllt werden können.
Hochempfindliche Messgeräte wie sie beispielsweise in den vorstehend beschriebenen Untersuchungen verwendet werden, erfordern oft mehrstufige Kalibrierungsverfahren. Beispielsweise kann in einer ersten Stufe mit bestimmten Kalbrierungslösungen eine Vorkalibrierung vorgenommen werden. In einer zweiten Stufe kann anschließend mit anderen Kalibrierungslösungen eine Feinkalibrierung vorgenommen werden. Dieser mehrstufige Prozess ist mit den herkömmlichen Kalibrierungsmitteln nur mit sehr hohem Zeitaufwand durchführbar. Die Art und die Konzentrationen der Farbstoffe, insbesondere der Fluoreszenfarbstoffe, in den Kalibrierungslösungen ist in dem erfindungsgemäßen Kalibrierungsmittel so ausgewählt, dass für jede zu kalibrierende Wellenlänge mindestens eine Kalibrierungslösung zur Vorkalibrierung und mindestens eine Kalibrierungslösung zur Feinkalibrierung geeignet ist. Vorzugsweise liegen die Konzentrationen der Fluoreszenzfarbstoffe für die Vorkalibrierung im Bereich von 100 μM – 1 mM und die Konzentrationen der Fluoreszenzfarbstoffe für die Feinkalibrierung im nanomolaren Bereich. Für Feinkalibrierungen werden Fluoreszenzfarbstoffe mit einer Konzentration im Bereich von 0,1 nM – 5 nM verwendet. Die tatsächlichen Konzentrationen sind abhängig von den zu kalibrierenden Parametern.
Das erfindungsgemäße Kalibrierungsmittel eignet sich insbesondere für die Kalibrierung von absoluten Parametern. Beispiele für absolute Parameter, die mit dem erfindungsgemäßen Kalibrierungsmittel kalibriert werden können, sind Fluoreszenintensität, Fluoreszenzpolarisation, Fluoreszenzlebensdauer, Rotationskorrelationszeit, translationale Diffusion, Kreuzkorrelationsintensität, Teilchenzahlen) bzw. Konzentrationen) des (der) Kalibrierungsfarbstoffe(s), sowie die Bestimmung der Fokusgeometrie. Durch die Verwendung dieser Parameter ist eine absolute Kalibrierung der Messgeräte möglich, da die entsprechenden Parameter der Moleküle bekannt oder mit anderen Methoden zuvor ermittelt wurden. Solche absoluten Kalibrierungen ermöglichen wesentlich aussagekräftigere Messungen als relative Kalibrierungen.
Die erfindungsgemäßen Kalibrierungsmittel können auch Justiermarkierungen zur Orientierung der Kalibrierungsmittel in Bezug auf die Messgeräte aufweisen. Die Justiermarkierungen sind beispielsweise punkt- oder kreuzförmige Ausnehmungen auf der Unter- und/oder Oberseite der Kalibrierungsmittel.
Anschließend wird die Erfindung anhand einer bevorzugten Ausführungsform unter Bezugnahme auf die anliegende Zeichnungen näher erläutert.
Es zeigen:
1 eine schematisch perspektivische Ansicht einer bevorzugten Ausführungsform des Kalibrierungsmittels in Form einer Titerplatte von unten ohne Bodenplatte,
2 eine Schnittansicht entlang der Linie II – II in 1 mit Bodenplatte und Abdeckung auf der der Bodenplatte gegenüberliegenden Seite der Basisplatte der Titerplatte.
Die in 1 dargestellte Basisplatte 10 eines Kalibrierungsmittels ist ohne Bodenplatte 12 (2), bei der es sich beispielsweise um eine Glasplatte handelt, dargestellt. Die Basisplatte 10 weist einen in diese eingebetteten Trägerkern 14, in Form einer Metallplatte, auf. Die Metallplatte 14 weist dieselbe Länge wie die Basisplatte 10 auf. Im mittleren Bereich der Basisplatte sind die Vertiefungen 16 zur Aufnahme der Kalibrierungslösungen vorgesehen. Die Vertiefungen 16 erstrecken sich über die gesamte Höhe der Basisplatte 10. Es handelt sich somit um durchgehende Vertiefungen 16. Dementsprechend weist die Metallplatte 14 zu den Vertiefungen 16 korrespondierende Öffnungen 18 (2) auf. Der Durchmesser der kreisrunden Öffnungen 18 ist geringfügig größer als der Durchmesser der Vertiefungen 16. Hierdurch weisen die Vertiefungen 16 im Bereich der Metallplatte 14 eine dünne Wandung 20 auf. Die Vertiefungen 16 sowie die korrespondierenden Öffnungen 18 können auch eine andere, beispielsweise achteckige Form haben. Ebenso können die Vertiefungen 16 und die Öffnungen 18 konisch ausgebildet sein. Die Wandstärke der Wandung 20 ist hierbei möglichst stets gleich dick.
Die Vertiefungen 16 sind regelmäßig angeordnet. Im dargestellten Ausführungsbeispiel handelt es sich um vier Zeilen mit jeweils sechs Vertiefungen 16, so dass das dargestellte Ausführungsbeispiel des Kalibrierungsmittels vierundzwanzig Vertiefungen aufweist. Sämtliche Vertiefungen weisen denselben Durchmesser auf.
Zum Verschließen der Vertiefungen 16 ist auf der Unterseite 22 der Basisplatte 10 eine Glasplatte 12 angebracht. Das Befestigen der Glasplatte 12 auf der Unterseite 22 erfolgt beispielsweise durch Aufkleben. Zur genauen Lagebestimmung der Glasplatte 12 sind an den Rahmenteilen 24, die an den Längskanten der Trägerplatte 10, vorgesehen sind, Ansätze 26 vorgesehen. Hierdurch ist ein Verrutschen der Glasplatte 12 beim Aufkleben vermieden, so dass die Glasplatte im Bereich der Vertiefungen 16 nicht durch Klebstoff verunreinigt wird.
Die Höhe der Rahmenteile 24 ist so gewählt, dass die Rahmenteile auch bei eingeklebter Glasplatte über diese vorstehen. Hierdurch ist es möglich, mehrere Kalibrierungsmittel aufeinander zu stapeln, ohne dass eine Glasplatte ein darunter liegendes Kalibrierungsmittel berührt und hierbei beschädigt werden könnte. Zur seitlichen Fixierung gestapelter Kalibrierungsmittel weist die den Rahmenteilen 24 gegenüberliegende Seite, d.h. die Oberseite der Kalibrierungsmittel eine geringere Breite auf, so dass beim Aufeinanderstapeln die einzelnen Titerplatten ineinanderrutschen. Um ein Berühren der Glasplatte 12 zu vermeiden, sind zusätzlich zu den Ansätzen 26, zwischen denen die Glasplatte liegt, Ansätze 28 vorgesehen. Bei aufeinander gestapelten Kalibrierungsmitteln liegt das benachbarte Kalibrierungsmittel jeweils auf der Oberseite der Ansätze 26 und 28 auf.
Der sich über die gesamte Länge der Basisplatte 10 erstreckende Trägerkern 14 ist nicht notwendigerweise vollständig mit Kunststoff umspritzt, sondern weist an beiden Endbereichen jeweils eine Kontaktfläche 30 auf. Über die Kontaktfläche 30 kann in den Trägerkern, beispielsweise eine Metallplatte 14, Wärme zur Erwärmung zugeführt oder zur Kühlung abgeführt werden. Zur Lagefixierung der Kalibrierungsmitteln sind in den Kontaktflächen 30 zusätzlich Ausrichtbohrungen 32 vorgesehen.
Ferner kann die Basisplatte 10 im Bereich der Ausnehmungen 16 Homogenisierungsausnehmungen 34 aufweisen. Dies Homogenisierungsausnehmungen 34 sind zwischen den Vertiefungen 16 derart angeordnet, dass jede Vertiefung 16 zu mindestens einer Homogenisierungsausnehmung 34 benachbart ist. Homogenisierungsausnehmungen 34 erstrecken sich nicht durch die gesamte Basisplatte. Dies bedeutet, dass die Metallplatte keine korrespondierenden Öffnungen aufweist (2). Den in 1 dargestellten Homogenisierungsausnehmungen 34 ist jeweils eine weitere Homogenisierungsausnehmung 34 gegenüberliegend zugeordnet. Die Homogenisierungsausnehmungen dienen insbesondere bei der Erwärmung des Kalbrierungsmittels zum Ausgleich der Dehnungen des Kunststoffs der Basisplatte.
Zusätzlich weist die Metallplatte 14 seitlich neben dem Bereich, an dem die Vertiefungen 16 bzw. die korrespondierenden Öffnungen 18 vorgesehen sind Öffnungen auf, die beim Umspritzen der Metallplatte 14 vollständig mit Kunststoff gefüllt werden. Diese Öffnungen dienen zur formschlüssigen Fixierung der Kunststoffhülle an der Metallplatte 14.
Die der Bodenplatte 12 gegenüberliegende Seite der Basisplatte 10 der als Kalibrierungsmittel dienenden Titerplatte kann bei der vorstehend beschriebenen Ausführungsform durch eine Abdeckung, vorzugsweise eine Kunststofffolie 36, die durch Verschweißen aufgebracht wird, luftdicht verschlossen werden.

Claims

Kalibrierungsmittel zur Kalibrierung eines Messsystems, umfassend mindestens zwei Bereiche zur Aufnahme von Flüssigkeiten, dadurch gekennzeichnet, dass die mindestens zwei Bereiche je eine zur Kalibrierung des Messsystems geeignete Kalibrierungslösung enthalten.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die mindestens zwei Bereiche identische Kalibrierungslösungen enthalten.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die mindestens zwei Bereiche unterschiedliche Kalibrierungslösungen enthalten.
Kalibrierungsmittel nach mindestens einem der Ansprüche 1–3, dadurch gekennzeichnet, dass das Kalibrierungsmittel einen oder mehrere Bereiche) aufweist, der (die) kein Kalibrierungslösungen enthält (enthalten).
Kalibrierungsmittel nach mindestens einem der Ansprüche 1–4, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den Kalibrierungslösungen um wässrige Lösungen eines oder mehrerer Kalibrierungsstoffe(s) handelt.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den Kalibrierungsstoffen um einen Farbstoff, ausgewählt aus der Gruppe der UV-, VIS-, Infrarot-, Phosphoreszenz- oder Fluoreszenzfarbstoffe, handelt.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den Kalibrierungsstoffen um einen Stoff handelt, der erst durch Komplexierung, Interkalation oder Reaktion seine zu detektierende(n) Eigenschaften) erhält.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den Fluoreszenzfarbstoffen um Xanthene, insbesondere Rhodamine oder Oxazine oder um Cyanine handelt.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei dem Stoff um einen Hoechst Farbstoff, PicoGreen, OliGreen, RiboGreen, TOTO, JOJO und Ethidiumbromid, Calcein, Calcium Green, Fluo-3, Newport Green oder APTRA-BTC handelt.
Kalibrierungsmittel nach mindestens einem der Ansprüche 5–9, dadurch gekennzeichnet, dass die Kalibrierungsstoffe dem Kalibrierungsmittel als fertige Kalibrierungsstoffe zugegeben oder erst in den Bereichen hergestellt werden.
Kalibrierungsmittel nach mindestens einem der Ansprüche 1–10, dadurch gekennzeichnet, dass die Kalibrierungslösungen mindestens einen Zusatz ausgewählt aus der Gruppe von Fungiziden, Detergentien, Photostabilisatoren oder Verbindungen mit anti-bakerieller Wirkung enthalten.
Kalibrierungsmittel nach mindestens einem der Ansprüche 1–11, dadurch gekennzeichnet, dass das Kalibrierungsmittel mittels einer Abdeckung verschlossen wird.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Abdeckung um eine luftdichte Folie aus Kunststoff handelt.
Kalibrierungsmittel nach mindestens einem der Ansprüche 1–13, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den mindestens zwei Bereichen um durch die Kalibrierungslösungen benetzbare Flächen oder um durch eine Basisplatte durchgehende Vertiefungen handelt.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass sich die benetzbaren Flächen auf einer Glasplatte befinden.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, die Basisplatte aus Kunststoff ausgebildet ist und eine durchsichtige Glasplatte aufweist, die Vertiefungen auf einer Seite verschliesst.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, es sich bei dem Kunststoff der Basisplatte um Polypropylen oder Polystyrol handelt.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass in die Basisplatte ein die Vertiefungen umgebender Trägerkern aus höherschmelzendem Material eingebettet ist.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass der Trägerkern eine Metallplatte mit zu den Vertiefungen korrespondierenden Öffnungen ist.
Kalibrierungsmittel nach mindestens einem der Ansprüche 16–19, dadurch gekennzeichnet, dass das Kalibrierungsmittel 24, 96 oder 386 Vertiefungen aufweist.
Kalibrierungsmittel nach einem der Ansprüche 16–20, dadurch gekennzeichnet, dass die Vertiefungen auf der der Glasplatte gegenüberliegenden Seite der Basisplatte durch eine Kunststofffolie luftdicht verschlossen werden, die durch Verschweißen aufgebracht wird.
Kalibrierungsmittel nach mindestens einem der Ansprüche 1–21, dadurch gekennzeichnet, dass die Art und die Konzentrationen der Fluoreszenzfarbstoffe in den Kalibrierungslösungen so ausgewählt ist, dass mindestens eine Kalibrierungslösung zur Vorkalibrierung und mindestens eine Kalibrierungslösung zur Feinkalibrierung geeignet ist.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentrationen der Fluoreszenzfarbstoffe für die Vorkalibrierung im Bereich von 100 μM – 1mM liegen.
Kalibrierungsmittel nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentrationen der Fluoreszenzfarbstoffe für die Feinkalibrierung im Bereich von 1 nM – 5 nM liegen.