DE1617899A1

DE1617899A1 - Lydimycin und Verfahren zu seiner Gewinnung

Info

Publication number: DE1617899A1
Application number: DE19661617899
Authority: DE
Inventors: Bergy Malcolm Edward; Coats John Henry; Hanka Ladislav James
Original assignee: Upjohn Co
Current assignee: Pharmacia and Upjohn Co
Priority date: 1965-02-23
Filing date: 1966-02-12
Publication date: 1970-04-09
Also published as: CH467859A; FR1466881A; GB1125323A; NL6602307A; BR6677232D0; ES322985A1; US3395220A; DK111482B; BE676933A; SE332263B

Description

DR. JUR. DIPL-CHEM. WALTER BEIL -

ALFREDHOEPFENER

DR. JUR. DiPL-CHEM. H.-J. WOLFP ^: -,

CiR. IUR.-HAM'S Cr\S. BEIL '

Oi ο FRAN SC Ft; ST AM MAIN-HQCHST

ADEtONS)UnSSE 58

Unsere Dir. 12 552

The Upjohn Company Kalamazo ο (Mich.-, V. S t ,A.)

Lydimycin und "Verfahren zu seiner Gewinnung -

Gegenstand der Erfindung ist das neue Antibiotikum Lydimycin und ein Verfahren zu seiner Gewinnung.

Dieses Verfahren besteht darin, daß man den bekannten, den Actinomyceten angehörenden Mikroorganismus Streptomyces lydicus BURL 2433 in einem wässrigen, assimilierbare Kohlehydrate und assimilierbaren Stickstoff enthalten Nährmediüm unter aeroben Bedingungen züchtet, das Kulturmedium vom Mycel befreit, das gebildete Lydimycin auf einem oberflächenaktiven Mittel adsorbiert, es eluiert, es gegebenenfalls weiter reinigt und es gegebenenfalls in Alkalimetall-, Erdalkalimetall-, Ammoniumsalze oder Salze mit Aminen überführt.

Der Streptomyces lydicus HRRL 2433 ist in der US-Patentschrift 3 160 560 im Zusammenhang mit der Herstellung des Antibiotikums Streptolydigin beschrieben.

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Lydimyein hemmt das Wachstum von Nocardia asteroides, Blastomyces dermatitidis, Geotrichum sp._y Phialophora yerrucosa, Oryptoooccus neoformans, Histoplasma capsulatum und Trichophyton mentagrophytes. Es kann daher allein oder zusammen mit anderen fungiziden Mitteln oder Antibiotika zur Verhinderung oder Beeinträchtigung des Wachstums darauf ansprechender Mikroorganismen verwendet werden, mit denen Pflanzen, Tiere, einschließlich Säugetieren, Vögeln, Fischen, Reptilien)und auch Menschen befallen sein.können, Lydimycin eignet sich ferner für sanitäre Waschlösungen, z.B. zum Händewaschen und Reinigen von G-eräten, Böden oder Möbeln infizierter Räume oder ideologischer Laboratorien. Es ist ferner als fungizides Mittel in industriellen Konservierungsmitteln, z.B. als fungizides Spülmittel für gewaschene Kleidung oder Wäsche und zum Imprägnieren von Papier und Geweben sowie aur Unterdrückung des Pilzwachstums darauf ansprechender Mikroorganismen in Plattenkulturen und anderen biologischen Medien brauchbar, Von anderen Antibiotika unterscheidet es sich durch sein charakteristisches IR-Spektrum, s. Fig. 1,sein charakteristisches Papierchromatogramm, s^:. Fig. 2, sein Molekulargewicht, .seine Elementaranalyse, optische Drehung, Löslichkeit und sein antibiotisches Spektrum. . ·

Die Herstellung des Lydimyeins erfolg-t wie erwähnt durch ■-Züchtung des Streptomyces lydicus MRRL 2433 in einem wäss-: rigen Hährmediumunter aeroben Bedingungen, wobei für die Herstellung begrenzter Mengen auch Oberflächenkulturen, in Kolben verwendet werden können. Das Nährmedium enthält eine Kohlenstoffquelle, z.B* ein assimilierbares Kohlehydrat, und eine Stickstoffquelle, ζ,B. eine assimilierbare Stickstoffverbindung oder ein proteinhaltiges Material» Bevorzugte. Kohlenstoffquellen sind u.a. Glucose, brauner Zucker, Saccharose j G-lycerin, Stärke, Maisstärke , Lactose , Dextrin, Melasse und ähnliche Kohlehydratquellen. Bevor-

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zugte Stickstoffquellen sind z.B. Baumwollsaatmehl, Hefe, autolysierte Brauereihefe mit Milchfeststoffen, pankreatischee Kaseinhydrolysat, lösliche Destillatrückstände aus der Alkoholdestillation, tierische Peptonflüssigkeiten, Fleisch- und Knochenresteund ähnliche stickstoffhaltige Quellen. Es können auch Kombinationen dieser Kohlenstoff- und Stickstoffquellen angewendet werden. Spurenmetalle, z.B. Zink, Magnesium, Mangan, Kobalt, Eisen und dgl. brauchen dem Nährmedium nicht zugesetzt zu werden, da als Komponenten des Nährmediums Leitungswasser und ungereinigte Bestandteile verwendet werden.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann bei jeder beliebigen Temperatur, die ein zufriedenstellendes Wachstum des Mikrooganismue ermöglicht, z.B. zwischen etwa 18 und 40° C, vorzugsweise zwischen etwa 26 und 35° C, durchgeführt werden. Gewöhnlich wird eine optimale Bildung der Verbindung in etwa 2 bis 10 Tagen erreicht. Während der Fermentation bleibt das Medium normalerweise nahezu neutral oder sauer. Der endgültige pH-Wert hängt z.T* von den vorhandenen Puffersubstanzen und z.T. vom Anfangs-pH-Wert des Kulturmediums ab, das vor der Sterilisierung vorteilhaft auf einen pH-Wert von etwa 6 bis 8 eingestellt wird*

Wenn die Fermentation in großen Behältern durchgeführt wird, beimpft man vorzugsweise mit der vegetativen Form und nicht mit Sporen des Mikroorganismus, um eine Verzögerung bei der Bildung des Antibiotikums und damit eine unwirtschaftliche Ausnutzung der Anlage zu vermeiden. Zweckmäßig stellt man ein vegetatives Impfmaterial her, indem man ein geeignetes Nährmedium mit einer Boden- oder Schrägnährbodenkultur impft» Wenn man auf diese Weise einen Jungen aktiven vegetativen Impfstoff hergestellt hat, wird "er aseptisch in die großen Behälter übergeführt. Das für die Herstel-

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lung des vegetativen Impfstoffs verwendete Nährmedium kann das gleiche Nährmedium sein, wie es für die Herstellung des Antibiotikums verwendet wird. Es kann auch von ihm verschieden sein, solange es so beschaffen ist, däß es ein gutes Wachstum des Mikroorganismus ermöglicht.

Das erfindungsgemäß erhältliche neue Antibiotikum Lydimycin stellt eine saure Substanz dar, aus deren Elementaranalyse sich die empirische Formel C-._QH^ .NpO^S ergibt. Lydimycin ist etwas löslich in Chloroform, Methylenchlorid und ähnlichen halogenieren Kohlenwasserstoffen, Methanol, Äthanol und ähnlichen Alkoholen, Äthylacetat, Amylacetat, Butylacetat und ähnlichen aliphatischen Estern, und Aceton, Methyläthylketon, Isopropyl-butyl-keton und ähnlichen niederen Alkanonen. In Wasser löst es sich in einer Menge von etwa 1 mg/cm . In Wasser vom o pH-Wert etwa 6,0 oder darüber löst es sich wesentlich besser.

Für die Isolierung und Reinigung von Lydimycin können zahlreiche Verfahren angewendet werden, z.B. Lösungsmitbelextraktionen, Flüssigkeits-Flüsslgkeits-Verteilung in einer Craig-Vorrichtung, die Verwendung von Adsorptionsmitteln und die Kristallisation aus Lösungsmitteln. Vorzugsweise verwendet man für die Gewinnung von Lydimycin oberflächenaktive Adsorptionsmittel, z.B. Entfärbungskohle oder Entfärbungsharze und eluiert das adsorbierte Antibiotikum mit einem Lösungsmittel. Hierfür kann jedes der vorstehend erwähnten Lösungsmittel verwendet werden. Ein geeignetes Entfärbungeharz ist Permutit DR (US-Patent 2 702 263). Zweckmäßig entfernt man zunächst das Mycel in üblicher Weise, z.B. durch Filtrieren oder Zentrifugieren des Kulturmediums. Die geklärte Flüssigkeit wird dann durch eine Säule aus Aktivkohle geführt und die Säule mit einem Lösungsmittelsystem aus Wasser und verschiedenen Mengen eines niederen Alkanons (Aceton wirddfcei bevorzugt) eluiert. Das Eluat

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wird zu einer wässrigen lösung eingeengt und dann gefriergetrocknet. Das auf diese Weise erhaltene trockene lydimycin kann für Verwendungszwecke, für die keine hochgradige Reinheit des fungiziden Mittels erforderlich ist, mit anderen Antibiotika vermischt werden. ■ '

Für die Gewinnung des Lydimycins aus dem Kulturmedium kann auch ein stark basisches; Anionenaustauscherharz verwendet werden. Geeignete Anionenaustauscherharze werden erhalten, wenn man nach dem von Kunin in "Ion Exchange Resins", 2. Auflage (1958), John Wiley and Sons, Inc., auf den Seiten 88 und 97 beschriebenen Verfahren gegebenenfalls mit Divinylbenzol vernetztes Polystyrol chlormethyliert, und anschließend mit Trimethylamin oder Dirnethyläthanolamin quaternisiert. Anionenaustauscherharze, dieses Typs werden unter den Handelsbezeichnungen Dowex-1, Döwex-2, Dowex—5, Amberlite IR-400, Duolite A-102 und Permutlt S-1 vertrieben. Das -adsorbierte Antibiotikum kann dann auf die vorstehend beschriebene Weise eluiert und das Bluat wie oben eingeengt und gefriergetrocknet werden.

Wenn ein Lydimycin höherer Reinheit erwünscht ist, kann das gefriergetrocknete Präparat einer weiteren Behandlung unterworfen werden, vorteilhaft einer VerteilungsChromatographie und Lösungsmittelextraktion. Nach einem bevorzugten Reinigungsverfahren wird das gefriergetrocknete wässrige Lydimycin in einem geeigneten Lösungsmittelsystem aus den oben angegebenen Lösungsmitteln gelöst und durch eine chromatographische Verteilungskolonne geführt:. Die aus der Kolonne austretenden Fraktionen werden auf Lydimycin untersucht* Die stark wirksamen Fraktionen werden vereinigt und zu einer wässrigen Lösung eingeengt,- aus der Kristalle auszufallen beginnen. Die Lydimycinkristalle können abfiltriert und getrocknet werden. Diejenigen Fraktionen, aus denen keine Kristalle ausfallen, können zur weiteren

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Reinigung und Bildung von Lydimycinkristallen in einer Craig-Verteilungsvorrichtung unter Verwendung der oben angegebenen lösungsmittel verteilt werden. Die auf d;Le vorstehende Weise erhaltenen Lydimycinkristalle können aus Methanol umkristallisiert werden und ergeben dann sehr asLnes kristallines lydimycin.

Die Salze des Lydimycins können aus der freien Säure und einer anorganischen oder organischen Base hergestellt werden, z.B. indem man die freie Säure in Wasser löst, eine verdünnte Base zusetzt, bis der pH-Wert der Lösung etwa 7 bis 8 beträgt, und die Lösung gefriertrocknet, so daß man einen trockenen Rückstand erhält, der aus dem Lydimycinsalz besteht. Auf diese Weise lassen sich das Ammonium-, Natrium-, Kalium- und Calciumsalz des Lydimycins herstellen. Andere Lydimycinsalze, einschließlich solcher mit organischen Basen wie primären, sekundären und tertiären Monoaminen sowie mit Polyaminen können auf die gleiche oder in anderer üblicher Weise hergestellt werden. Wertvolle Salze werden ferner mit therapeutisch wirksamen Basen erhalten, die den Salzen zusätzliche therapeutische Eigenschaften verleihen. Solche Basen sind z.B. die Purinbasen, wie Theophyllin., Theobromin, Kaffein oder deren Derivate; Antihistaminbasen, die mit schwachen Säuren Salze zu bilden vermögen; Pyridinverbindungen, wie Nikotinsäureamid, Isonikotinsäurehydrazid und dgl.j Phenylalkylamine, wie Adrenalin, Ephedrin und dgl.} .Cholin u.a. Die Lydimycinsalze können für die' gleichen biologischen Zwecke verwendet werden wie die freie Säure.

Lydimycin hat die in Tabelle I dargestellte fungizide Wirkung. Das fungizide Spektrum wurde durch einen ■Verdünnungstest mit Agarplatten ermittelt.

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Tabelle I ' Fungizide Wirkung dee Lydlmyclns

Teetorganlsmus Kleinste hemmende Konzen

tration in S/ecm

Nocardia asteroidee 100

Blaetomyces dermatltidie 1000

Coccidioidee immi-fcis . 1000

öeotriohum sp. 100

Phialophora verrucoaa 100

CryptococcuB neoiormane TOOO

Histoplasma capsulatum iOOO

Sporotrlchuia echenckii Ϊ000

Monoeporitun apiospermum ■ 1000

Trichophyton rubrum 1000

Candida albicans JLBBOTO? 100

Trichophyton violaceum TOOO

Trichophyton asteroideβ 100

Trichophyton mentagrophytea TOO

Dae in Tabelle II gezeigte antibakterielle Spektrum des Lydimyeine v/urd& mit dem Agarplatten-DiffuBionstest unter Verwendung von Platten mit einem Durchmeseer von 13 mm ermittelt.

Tabdle II

Antibakterielle Wirkung von Lydimycin
TestorganiBmuB Zonengröße (mm)

σ BacilluB subtilie 16 (Schleier)

^ Sarcina lutea 24 (Schleier)

^m Staphylococcus aureus 40

cn Streptococcus faecalis 22

2^v Hycobacterium phlei 28

^ Salmonellagallinarum 21

-α Rhodopaeudomonas apherOldes 33

Chromobacteriuitt violaceum 25 (Schleier)

lydimycin ist auch wirksam gegen die fadenförmigen Fungi Grlomerella sp. und Penicilllum oxalicum und die Hefepilze Sacoharomyces cerevisiae, Saccharomyces pastorianus und Trigonopsis variabilis.

Lydimycin kann daher zur Bekämpfung der fadenförmigen Fungi Glomorella sp. verwendet werden, die bekanntlich die Bitterfäule "bei Äpfeln (Malus), das Welken der Zweigspitzen und die Fleckenbildung bei den Früchten der Apfelsine (Citrus) und die Anthracnose bei Mango (Mangifera) und Avocado (Persea) bewirken. Lydimycin kann auch zur Pilzbekämpfung in den im US-Patent 3 130 505 beschriebenen Schuhoberledern verwendet werden, ferner zur Bekämpfung von S. gallinarum bei Nutzvieh und Geflügel und von S. aureus bei gewaschenem und gestapeltem Geschirr usw.

Das folgende Beispiel erläutert das erfindungsgemäße Verfahren. Sofern nichts anderes angegeben ist, beziehen sieh die Prozentsätze auf das Gewicht und die Lösungsmittelmengen auf das Volumen«

Beispiel

A Fermentation

Eine Bodenkultur von Streptomyces lydicue. NRRL 2453, wurde zum Beimpfen einer Reihe von 500 cnr Erlenmeyerkolben verwendet, die 100 g eines Nährmediums aus den folgenden Bestandteilen enthielten:

Glucosemonohydrat 25 g
Pharmamedia* 25 g

Leitungswasser 11

* Pharmamedia ist Baumwollsaatmehl technischer Reinheit, das von der Trades Oil Mill Co., Fort Worth, Texas, hergestellt wird.

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Der Impfstoff wurde 2."läge..bei 28° 0 auf einem Gump Dreh-Schüttler kultiviert, der mit 250 Umdrehungen Je Minute betrieben wurde.

5 cnr des vorstehend beschriebenen Impfstoffes wurden zur

■ 5 " '""■"■ Beimpfung eines 500 cnr Erlenmeyer-Kolbens verwendet, der

■x · ■■■'■'

100 cm des folgenden sterilen Fährmediums enthielt:

Clucosemonohydrat	10 g
Dextrin	20 g
Pabsthefe*	10 g
Baumwollsaatmehl	10 g
Speeköl	1 cm⁵
ieitungwwass er	11

* Brauereihefe, die von der Pabst Brewing Co. bezogen wurde.

-.. ■ ■ ■ ■ * -

Die Fermentation im Kolben wurde 144 Stunden bei 52⁰O. auf einem Gump Dreh-Schüttler durchgeführt, der mit 250 Umdrehungen je Minute betrieben wurde. Fach Beendigung der !Fermentation zeigte die Gärflüssigkeit gegen Sv pastorianus eine Vfirksamkeit von 19,2 Bioeinheiten/cm^. "■-'...

Eine Bioeinheit ist vorliegend diejenige Menge eines Antibiotikums, die gelöst in 0,88 ecmder Testlösung bei Anwendung auf eine 12,;7 mm"Scheibe unter den Standardbedingungen des Plattenversuchs eine Hemmzone von 20 cnr ergibt.

B Gewinnung ■

Die Gärflüssigkeit von einer Reihe von Gärkolben (920 cm⁵, mit einer Wirksamkeit von 9,4 Biοeinheiten Lydimycin/em gegen S. pastorianus) wurde mit Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 4,0 eingestellt und mit Hilfe yon Diatomeenerde filtriert. Der Filterkuchen wurde mit dem 0,1-fachen Plüssigkeitsvolumen an Wasser gewaschen und verworfen.

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- ίο -

Die filtrierte Gärlösung wurde; dann mit einer Geschwindigkeit von etwa 3,5 cnr/Minute durch eine Kolonne geführt, die 27,1 g (3 # Gew./Vol.) granulierte aktivierte Holzkohle (Pittsburgh Coke and Chemical Company, Pittsburgh, Pa.) enthielt. Die Kohle wurde mit 60 cm entionisiertem Wasser gewaschen und die austretende Flüssigkeit verworfen. Die Kohlekolonne wurde mit einem abgestuft gemischten Lösungsmittelsystem aus 400 g 50 ^igern wässrigen Aceton und 400 g Aceton eluiert. Hierbei wurde das 50 #ige wässrige Aceton zuerst mit dem Kohlenstoff in Berührung gebracht. Die Fließgeschwindigkeit während der Elution betrug 4 cnr/ Minute. Bs wurden Fraktionen von 20 cnr aufgefangen. Die Fraktionen 64 bis 100 wurden vereinigt, durch Vakuumdestillation zu einer wässrigen Lösung eingeengt und gefriergetrocknet. Man erhielt 490 mg Lydimycin mit einer Wirksamkeit von 12,0 Bioeinheiten/mg gegen S. pastorjanus.

C Verteilungschromatographie des Lydimycinpräparats

Das für die chromatographische Verteilung verwendete Lösungsmittelsystem bestand aus Äthylacetat : Cyclohexan : Mcllvaine's Puffer vom pH-Wert 3,0 (16x4x1)· Für die Füllung der Kolonne wurden 1000 g mit Schwefelsäure gewaschene Diatomeenerde in der oberen Phase aufgeschlämmt und mit 400 cnr der unteren Phase homogenisiert. Die Mischung wurde in eine chromatographische Glassäule mit einem Innendurchmesser von 76,2 mm gegossen und unter Anwendung eines Überdruckes von 0,14 bis 0,21 kg/cm bis zu einer konstanten Höhe von 762 mm gepakt. 130 g des oben hergestellten Lydimycins wurden in 100 cm der unteren Phase gelöst. Die Lösung wurde mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Werij von 3,0 eingestellt und mit 200 g Diatomeenerde und einer zur Bildung einer fließenden Mischung ausreichenden Menge der oberen Phase homogenisiert. Diese Mischung wurde auf das obere Ende der Kolonne gegeben. Frische obere Phase

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des Lösungsmittelsystems wurde züge se tat und die^f Kolonne mit eine* Fließgeschwindigkeit von etwa 200-400 öm-/Minute entwickelt. Es wurden Fraktionen von jeweils 1 .1 aufgefangen undihre Wirksamkeit·gegen S, pastorjanus mntersuclit* Diejenigen Fraktionen mit einer Wirksamkeit von über 50 Bioeinheiten Lydimycin/mg wurden vereinigt»zu. einer wässrigen lösung von 50 cnr (pH-Wert 2*5-3,01 eingeengt,und einen Tag bei 4»4° C aufbewahrt. Die Irydimycinsäurekristalle wurden abfiltriert und im Vakuum getrocknet. Die Ausbeute betrug 160 mg mit einer Wirksamkeit von 1617 Biöeinheiten/mg gegen S. pastorianus. Die Kristalle wurden umkristallisiert, indem man 15t mg Kristalle in 90 cm' siedendem Methanol löste» die Lösung filtrierte und dann auf ein Volumen von 20 cm einkochte. Das Konzentrat wurde zwei Stunden auf 0° C gekühlt! die iydimycinkristalle wurden abfiltriert und getrocknetι Ausbeute 125 mg mit einer Wirksamkeit von 1917 Bioeinheiten/mg gegen S. pastorjanus.

Nicht kristalline, auf die vorstehend beschriebene Weise aus der chromatographischen Verteilungssäule erhaltene Lydimvcinpräparate können durch Verteilung in einer Craig Gegenstrom-Verteilungsvorrichtung unter Verwendung eines Lösungsmittelsystems aus 1-Butanol : Methylethylketon : Wasser (1:T:2) in kristalliner Form erhalten werden. Der Inhalt derjenigen Rohre, welche die Hauptmenge an Lydimycin enthalten, wird vereinigt und im Vakuum bei unter 50° G zu einer wässrigen Lösung eingeengt. Der pH-Wert der wässrigen Lösung wird auf 3,0 eingestellt und die Lösung bei Raumtemperatur 2 Stunden stehen gelassen. Die Lydimycinkristalle werden abfiltriert und bis izur Erreichung eines konstanten Gewichts im Vakuum bei 4O^Ö G getrocknet.

Ammoniumsalz des Lydimγ3ins

18,85 mg freie Lydimyclnsäure wurden in 5 cm Wasser gelöst« Der Lösung wurde konzentriertes Ammoniumhydrpxid

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bis zur Erreichung eines pH-Wertes von 8,0 zugesetzt. Die lösung wurde dann gefriergetrocknet und ergab 13,9 mg Ammoniumsalz des Lydimycins, das gegen S. pastorianus eine Wirksamkeil; von 1612 Bioeinheiten/mg hatte.

Chemische und physikalische Eigenschaften des Lydimycins

iyi?stal lines Lydimycin hat die folgenden physikalischen und chemischen Eigenschaften:

Farbe:

Elementaranalyse!

empirische Formel; optische Drehung:

Molekulargev/icht:

Titration;
Äquivalenzgewicht: Ultraviolettspektrumj

Infrarotspektrum:

weiß C= 49,68| H = 6,04} 0 = 20,01; If = 11,38j & = 12,84

ψ = 92° (c = 0,70 in 0,1 m PO₄, pH 7,0 Puffer)

242, ermittelt durch Massenspektroskopie

pKa¹ = 4,32

244, ermittelt durch Titration

Lydimycin zeigt zwischen 220 und 400 mil keine Absorptionsmaxima in saurer, neutraler oder basischer wässriger Lösung

Das Infrarotabsorptionsspektrum von Lydimycin in Mineralöl ist in Fig. 1 wiedergegeben. Lydimycin zeigt Ballen bei den folgenden Wellenlängen in cm~ :

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3320	(M	- mittel)	1444	(M)	1060	(B)
3290	(S	- schwach)	1430	(M)	1035	(B)
2950	(M)	(Öl)	1413	(M)	1010	(M)
2920	(S)	(öl)	1378	(B) (öl)	982	(M)
2850	(M)	(Öl)	1335	(M)	949	(B)
2640	(B	- breit)	1515	(S)	910	(B)
2500	(B)		1308	(M)	890	(B)
2400	(B)		1294	(M)	867	(B)
2510	(B)	-	1283	(S)	852	(B)
1910	(B)		1273	(S)	841	(M)
17.11	(S)		1238	(B) .	810	(B)
1695	(S)		1203	(B)	760	(B)
1654	(M)		1165	(B)	743	(M)
1645	(S)		1142	(B)	690	(M)
1590	(M)		11 1:8.	(B)	683	(M)
1479	(M)		TC>93	(B)	655	(M)
1465	(H)		1077	(B)

X)ie Bandenintensitäten sind mit ^tlS^!% ^l!M^lr bzw« '⁸B" angegeben und stellen hinsichtlich der Bandeniritensität Näherungswerte dar. Die "S"-Banden sind Banden' schwacher Intensität., die "M'*-Banden sind Banden mittlerer Intensität und die ^ttB"~Banden sind Banden breiter Intensität-

Lydimycin-weist ein charakteristisches,Papierchramatograami auf, das in Mg, II dargestellt ist und bei Terwendung der folgenden Lösungsmittelsysteme erhalten wurdes -.

I* 1-Üutanolj, Wasser (86516) 16 Stunden

II» l-Aitano!, Wasser (.84:16) plus 0,25 ^p-Toluolsulf011-■-, säure, 16 Stunden ;

III« .!«.Butanol ₉ Essigsäure., Wasser (2ι1ϊ1), 16 Stunden

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IV. 2 $, Piperidin (Vol./Vol.) in 1-Butanol, Wasser (84:16), 16 Stunden

V. 1-Butanol, Wasser (4:96), 5 Stunden

VI. 1-Butanol, Wasser (4:96), plus 0,25 i» p-Toluolsulfonsäure, 5 Stunden

Oil y Ö 1 ;i ·■ 1 ■! ^!J ;

Claims

Patentansprüche

1. Lydimycin, das im wesentlichen frei von Streptolydigin und

a) in niederen Alkoholen, Aceton, Äthylacetat und chlorierten Kohlenwasserstoffen schwerlöslich ist§

b) in Form der im' wesentlichen reinen? freien Säure di® Slementaranalyae G = 49,68§ H - 6₅ö4l 0 = 20,01| N « 11,38| S - 12,84?

c) die empirische Formel C₁₀H₁₄I₂O^Si

d) die optische Drehung [oQ^⁵ = 92° ( c * OJO In 0,1 u

₂PO₄₅ pH 7

e) den pKa⁸-Wert 4,32;

f) ein durch Massenspektroskorie e?iaitteltes Molekulargewicht von 242 und

g) zwischen 220 und 400 πμι keine Ultraviolett-Absorptionsmaxiea aufweist.

2. Lydimycin in im wesentlichen reiner kristalliner Form.

3. Alkalimetall-,- Erdalkalimetall- und Ammoniumsalze des Lydimycins sowie Salze des Lydimycins mit Aminen.

4. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1-3, dadurch gekennzeichnet, daß man S. lydicus IiRRL 2433 in einem wässrigen, assimilierbare Kohlehydrate und assimilierbaren Stickstoff enthaltenden Nährmedium unter aeroben Bedingungen züchtet, das Kulturmedium vom

0098 15/1907 * BAD GKiSSNAL

Mycel befreit, das gebildete Lydimycin auf einem oberflächenaktiven Mittel adsorbiert, es eluiert, es gegebenenfalls weiter reinigt und es gegebenenfalls in Alke: lime tall-, Erdalkalimetall-, Ammoniumsalze oder talse jiiit Aoinen überführt.

Für

The Upjohn Company . Kalamazoo (Hich., V.St.A.)

^u.

Rechtsanwalt

BAD CRiGiNAL 09815/1907

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