DE10045374A1 - Mikroteilchen mit verzögerter Freisetzung und Verfahren zur Herstellung derselben - Google Patents

Abstract

Verfahren zur Herstellung von Mikroteilchen unter Verwendung eines Multiemulsionsverfahrens, mit folgenden Schritten: Lösen oder Dispergieren eines Wirkstoffes in jedem von wenigstens zwei Ölen, um wenigstens zwei primäre Ölphasen oder Emulsionen zu ergeben, die jede ein biologisch abbaubares Polymer enthalten; Dispergieren der wenigstens zwei primären Ölphasen oder Emulsionen in einer wäßrigen Phase, gleichzeitig oder nacheinander; und Entfernen der organischen Lösungsmittel aus der Lösung mit dispergiertem Wirkstoff, um Mikroteilchen herzustellen.

Description

Die Erfindung betrifft eine Zubereitung, die eine physiologisch wirksame Substanz über lange Zeiträume freisetzt.

Um Wirkstoffzuführungssysteme (Drug-Delivery-Systeme, DDS) mit verzögerter Freisetzung herzustellen, werden üblicherweise unterschiedliche Verfahren verwendet, einschließlich Koazervation, Emulsionsphasentrennung, sprühtrocknungsabhängige Enkapsulierung und Lösungsmittelverdampfung in organischer oder wäßriger Phase. Von diesen ist die Lösungs­ mittelverdampfung in wäßriger Phase die am häufigsten verwendete, die grob in zwei Techni­ ken unterteilt wird: W/O/W(Wasser/Öl/Wasser)-Doppelemulgierung und O/W(Öl/Wasser)- Einfachemulgierung.

Die W/O/W-Technik wird üblicherweise für die Enkapsulierung wasserlöslicher Wirkstoffe, wie etwa Peptide oder Proteine, verwendet. Bei dieser Technik wird ein wasserlöslicher Wirkstoff in Wasser gelöst und diese wäßrige Phase wird in einer organischen Phase disper­ giert, die ein biologisch abbaubares Polymer enthält, um eine Primäremulsion (Wasser-in-Öl) zu ergeben. Diese Primäremulsion wird erneut in Wasser dispergiert. Die O/W-Technik, die üblicherweise verwendet wird, um lipidlösliche Wirkstoffe zu enkapsulieren, kann durchge­ führt werden durch Lösen eines Wirkstoffs und eines biologisch abbaubaren polymeren Hilfs­ stoffes in einer organischen oder anorganischen Lösungsmittelmischung und Dispergieren der Lösung in einer wäßrigen Phase. In beiden Fällen nimmt die Löslichkeit des Polymers ab, wenn das organische Lösungsmittel durch Extraktion oder Verdampfung im Verlauf der Dis­ persion einer Ölphase des Polymers in einer wäßrigen Phase entfernt wird. Als ein Ergebnis wird sich das Polymer verfestigen, um Mikroteilchen zu bilden. Im allgemeinen sind die mit der W/O/W-Technik erhaltenen Mikroteilchen, verglichen mit denjenigen, die mit der O/W- Technik erhalten werden, von poröserer Struktur mit höheren Oberflächen, so daß sie eine hohe anfängliche Freisetzungsrate der Wirkstoffe zeigen.

Der Freisetzungszeitraum solcher Mikroteilchen mit verzögerter Freisetzung wird hauptsäch­ lich durch die physikalischen und chemischen Eigenschaften der Polymere, die Zusammen­ setzungen der Lösungsmittel und die Arten und Konzentrationen der Emulgatoren bestimmt. Von diesen determinierenden Faktoren sind die wichtigsten die physikalischen und chemi­ schen Eigenschaften der Polymere, einschließlich chemische Zusammensetzungen, Moleku­ largewichte und Hydrophilie. Poly(lactid-co-glycolid) (PLGA), ein Polymer, das aus Lactid und Glycolid mit einem unterschiedlichen Molverhältnis zwischen diesen besteht, wird z. B. mit niedrigen Raten abgebaut, wenn das Lactid im Molverhältnis oder Molekulargewicht er­ höht wird. In diesem Fall führen Polymere, die einen höheren Lactidgehalt oder ein höheres Molekulargewicht aufweisen, zu längeren Freisetzungszeiträumen. Wenn das Polymer jedoch über einen längeren Zeitraum abgebaut wird, setzt das Mikroteilchen seinen enkapsulierten Wirkstoff an einigen Stellen des frühen oder mittleren Stadiums kaum frei. Daher erfordert die Verwendung eines Polymers für die Herstellung von Mikroteilchen mit verzögerter Frei­ setzung, die in der Lage sind, Wirkstoffe kontinuierlich über gewünschte Zeiträume freizuset­ zen (z. B. einen, zwei, drei, sechs Monate oder länger), umfangreiche Anstrengungen und Zeit. Aufgrund dieses Problems hat sich die Forschung auf den Einsatz von Kombinationen von schnell und langsam abbaubaren Polymeren bei der Enkapsulierung von Wirkstoffen konzen­ triert. Aus der Menge der aus den Mikroteilchen, die aus den kombinierten Polymeren herge­ stellt sind, freigesetzten Wirkstoffe kann die Freisetzungsrate des Wirkstoffs aus den Mikro­ teilchen jedoch nicht genau bestimmt werden. Bei der Koexistenz von wenigstens zwei unter­ schiedlichen Polymeren in einem Mikroteilchen neigt das langsamer abbaubare Polymer auf grund der Abbauprodukte des schneller abbaubaren Polymers dazu, mit einer schnelleren Rate abgebaut zu werden, als wenn es allein vorläge. Im Ergebnis wird auch die Freisetzungsrate des Wirkstoffs im Körper durch das schneller abbaubare Polymer beeinflußt und ist somit unterschiedlich vom Mittelwert der Freisetzungsraten der Wirkstoffe, wenn sie in den einzel­ nen Polymeren enkapsuliert sind. Um dieses Problem zu umgehen, werden dieselben Wirk­ stoffe in wenigstens zwei einzelnen Polymeren enkapsuliert, die in ihren Abbauraten unter­ schiedlich voneinander sind, und die Mikrokapseln werden in geeigneten Verhältnissen kom­ biniert, um eine Mikrokapsel-Dosisformulierung zu ergeben, die die Wirkstoffe über einen gewünschten Zeitraum freisetzen kann, wie offenbart in U. S.-Patent Nr. 4,897,268. Diese Technik ist jedoch deswegen umständlich, weil zwei oder mehr Mikrokapsel-Typen für eine Wirkstoffdosisform benötigt werden, und somit wirtschaftlich ungünstig.

Es ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren zur Herstellung einer Formu­ lierung zur verzögerten Freisetzung von Wirkstoffen zur Verfügung zu stellen, die aus ver­ schiedenen Mikroteilchen besteht, die ihrer Wirkstofffreisetzungseigenschaften in ihrer Inte­ grität beibehalten, wodurch der Freisetzungszeitraum der Formulierung leicht vorhergesagt und durch verschiedene Zusammensetzungen und Molekulargewichte der Polymere, Zusam­ mensetzungen und Konzentrationen der Lösungsmittel und Arten und Mengen der Zusatzstof­ fe gesteuert werden kann.

Es ist eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine Formulierung zur verzögerten Freisetzung von Wirkstoffen zur Verfügung zu stellen, die die interessierenden Wirkstoffe über einen gewünschten Zeitraum freisetzen kann.

Gemäß der vorliegenden Erfindung kann eine Formulierung zur verzögerten Freisetzung von Wirkstoffen unter Verwendung eines Multiemulsionsverfahrens hergestellt werden, das die folgenden Schritte umfaßt: Lösen oder Dispergieren eines Wirkstoffs in jedem von wenig­ stens zwei Ölen, um wenigstens zwei primäre Ölphasen oder Emulsionen zu ergeben, die jede ein biologisch abbaubares Polymer enthalten; Dispergieren der wenigstens zwei primären Ölphasen oder Emulsionen in einer wäßrigen Phase, gleichzeitig oder nacheinander; und Ent­ fernen der organischen Lösungsmittel aus der Lösung mit dispergiertem Wirkstoff, um Mi­ kroteilchen herzustellen.

In der vorliegenden Erfindung können LHRH-Analoge in einem Hilfsstoff enkapsuliert wer­ den, der aus einem biologisch abbaubaren aliphatischen Polyester hergestellt ist und über ei­ nen gewünschten Zeitraum kontinuierlich in vivo freigesetzt werden.

Die obigen und andere Aufgaben, Merkmale und weiteren Vorteile der vorliegenden Erfin­ dung werden aus der folgenden detaillierten Beschreibung, die in Zusammenhang mit den beigefügten Zeichnungen zu sehen ist, klarer verständlich werden. Dabei zeigt:

Fig. 1a eine optische Fotografie von Mikroteilchen, hergestellt gemäß Beispiel I;

Fig. 1b eine optische Fotografie von Mikroteilchen, hergestellt gemäß Vergleichsbeispiel 1A;

Fig. 1c eine optische Fotografie von Mikroteilchen, hergestellt gemäß Vergleichsbeispiel 1B;

Fig. 1d eine optische Fotografie von Mikroteilchen, hergestellt gemäß Vergleichsbeispiel 1C;

Fig. 2a eine Rasterelektronenmikrofotografie von Mikroteilchen, hergestellt gemäß Beispiel IIA, in 100-facher Vergrößerung;

Fig. 2b eine Rasterelektronenmikrofotografie von Mikroteilchen, hergestellt gemäß Beispiel IIA, in 800-facher Vergrößerung;

Fig. 3 ein Diagramm, das die in-vitro-Freisetzungstestergebnisse verschiedener Mikroteilchen zeigt, einschließlich Leuplin (--) und Mikroteilchen, die hergestellt sind gemäß. Vergleichs­ beispiel IIA (-∆-), Vergleichsbeispiel IIB (-∇-), Beispiel IIA (-○-) und Beispiel IIB (-◊-);

Fig. 4 ein Diagramm, das die in-vivo-Freisetzungstestergebnisse verschiedener Mikroteilchen zeigt, einschließlich Leuplin (--) und Mikroteilchen, die hergestellt sind gemäß Beispiel IIA (-○-) und Beispiel IIB (-∆-); und

Fig. 5 ein Diagramm, das die in-vivo-Testosteron-Unterdrückungswirkungen von einer Kon­ trollprobe (-○-), Leuplin (--) und Mikroteilchen, die gemäß Beispiel IIA (-∆-) und Beispiel IIB (-∇-) hergestellt sind, zeigt.

Die vorliegende Erfindung betrifft die gleichzeitige oder aufeinanderfolgende Dispersion ver­ schiedener primärer Ölphasen oder Emulsionen in einer wäßrigen Phase, um eine Mischung von Mikroteilchen herzustellen, bei denen deren einzelne Freisetzungseigenschaften intakt bleiben, und erlaubt somit die Herstellung eines Wirkstoffzuführungssystems, das in der Lage ist, Wirkstoffe über einen längeren Zeitraum kontinuierlich freizusetzen. Gegenüber her­ kömmlichen Verfahren hat die vorliegende Erfindung den Vorteil, daß sie für den Freiset­ zungszeitraum relevante Faktoren leicht steuern kann, insbesondere die anfängliche Freiset­ zungsrate, ohne Veränderung des gesamten Freisetzungszeitraumes.

Durch die vorliegende Erfindung wird ein Verfahren der Steuerung der Zusammensetzungen und Molekulargewichte geeigneter Polymere, der Zusammensetzungen und Konzentrationen von Lösungsmitteln und Zusatzstoffen auf mehreren Niveaus eingeführt, was zur Herstellung von Mikroteilchen mit verzögerter Freisetzung führt, welches in den folgenden drei Schritten zusammengefaßt werden kann:
Erster Schritt: Wenigstens zwei primäre Ölphasen (Öl) oder Emulsionen (Wasser-in-Öl) wer­ den hergestellt, die wenigstens in zwei der folgenden Merkmale unterschiedlich sind: Arten, Zusammensetzungen und Konzentrationen der Wirkstoffe und biologischen Polymere.
Zweiter Schritt: Die primären Öle oder Wasser-in-Öl-Emulsionen werden in einer wäßrigen Phase (Wasser) dispergiert.
Dritter Schritt: Das anorganische Lösungsmittel wird aus der Dispersion entfernt, um Mikro­ teilchen zu ergeben.

Im Hinblick auf die Dispersion des zweiten Schrittes werden die zwei oder mehr primären Ölphasen oder Emulsionen nacheinander in einer wäßrigen Phase dispergiert. Alternativ wird zunächst eine der primären Ölphasen oder Emulsionen in einer wäßrigen Phase dispergiert, die man anschließend eine Veränderung ihrer physikalischen oder chemischen Faktoren durchlaufen läßt, gefolgt von der Dispersion der anderen Ölphase(n) in der wäßrigen Phase. Der Begriff "physikalisch oder chemische Faktoren", wie er hierin verwendet wird, bedeutet Mischergeschwindigkeiten, Mengen der wäßrigen Phase und Konzentrationen der Emulgato­ ren oder Zusatzstoffe, die in der wäßrigen Phase enthalten sind.

Konkrete, aber nicht-beschränkende Beispiele für die biologisch abbaubaren Polymere, die zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung geeignet sind, schließen Celluloseacetat, Celluloseacetatpropionat, Cellulosebutyrat, Cellulosepropionat, Cellulosevalerat, Cumaron-In­ den-Polymer, Dibutylaminohydroxypropylether, Ethylcellulose, Ethylen-Vinylacetat- Copolymer, Glyceroldistearat, Hydroxypropylmethylcellulosephthalat, 2-Methyl-5- vinylpyridinmethacrylat-Methacrylsäure-Copolymer, Polyaminosäuren, Polyanhydride, Poly­ caprolacton, Polycarbonat, Polybutadien, Polyester, aliphatische Polyester, Polybutadien, Polyhydroxybuttersäure, Polymethylmethacrylat, Polymethacrylsäureester, Polyolester, Poly­ propylen, Polysaccharide, wie etwa Alginsäure, Chitin, Chitosan, Chondroitin, Dextrin, Dex­ tran, Hyaluronsäure, Heparin, Keratansulfat, Stärke, etc., Polystyrol, Polyvinylacetaldiethyl­ aminoacetat, Polyvinylacetat, Polyvinylalkohol, Polyvinylbutyral, Polyvinylformal, Proteine, wie etwa Albumin, Casein, Collagen, Fibrin, Fibrinogen, Gelatine, Haemoglobin, Transferin, Zein, etc., Vinylchlorid-Propylen-Vinylacetat-Copolymer, Vinylchlorid-Vinylacetat-Polymer, Wachse, wie etwa Rindertalg, Walwachs, Bienenwachs, Paraffinwachs, Castorwachs, etc. und höhere Lipidsäuren wie etwa Myristinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, Behensäure, etc. ein, mit einer Bevorzugung aliphatischer Polyester. Bevorzugter sind Polylactide, Polyglycolide und Copolymere derselben (PLGA).

Eine detailliertere Beschreibung der vorliegenden Erfindung wird im Hinblick auf PLGA an­ gegeben werden.

Von PLGA, das letztendlich in vivo zu Milchsäure und Glycolsäure abgebaut wird, ist be­ kannt, daß es biologisch verträglich und für den Körper harmlos ist. Angesichts dieses Vor­ teils wird PLGA, das die Genehmigung der FDA für seine Verwendung im Körper erhalten hat, für Langzeitwirkstoffzuführungssysteme für LHRH-Analoge (LHRH = Lutropinfreiset­ zungshormon) angewendet, die bei der Behandlung von Prostatakrebs verwendet werden, und für menschliches Wachstumshormon, das Patienten verabreicht wird, die an infantilem Na­ nismus leiden. PLGA, das in verschiedenen Formen existiert, in Abhängigkeit von seinen physikalischen Eigenschaften, die etwa Verhältnisse zwischen den konstituierenden Monome­ ren Milchsäure und Glycolsäure, Molekulargewicht und Hydrophilie, wird in vivo über einen Zeitraum von zwei Wochen bis zu mehreren Monaten abgebaut.

Im ersten Schritt des Verfahrens gemäß der vorliegenden Erfindung werden wenigstens zwei primäre Ölphasen oder Emulsionen hergestellt. Diese Ölphasen oder Emulsionen sind unter­ schiedlich in den physikalischen und chemischen Eigenschaften von PLGA. Eine der primä­ ren Ölphasen oder Emulsionen kann z. B. hergestellt werden durch Lösen eines Wirkstoffs und eines PLGA, das in einem relativ kurzen Zeitraum in vivo abgebaut wird, in einem Öl. Solch ein schnell abbaubares PLGA kann hergestellt werden aus einer Mischung aus z. B. 50 : 50 Milchsäure : Glycolsäure. Hoch hydrophiles PLGA, z. B. PLGA, das endständige Car­ boxylreste enthält, wie etwa RG502H und RG503H (Boehringer Ingelheim), und niedermole­ kulares PLGA zeigen hohe Abbauraten. Für die Herstellung einer weiteren oder der weiteren primären Phase oder Emulsion kann andererseits derselbe Wirkstoff und ein relativ langsam abbaubares PLGA eingesetzt werden. Das relativ langsam abbaubare PLGA kann z. B. aus einer Mischung von 75 : 25 Milchsäure : Glycolsäure hergestellt werden. PLGA mit niedriger Hydrophilie, z. B. PLGA, dessen endständige Carboxylgruppen durch Dedecyl ersetzt sind, wie etwa RG502 und RG503 (Boehringer Ingelheim), und hochmolekulares PLGA zeigen niedrige Abbauraten. Wenn ein wasserlöslicher Wirkstoff verwendet wird, wird er in einer wäßrigen Phase gelöst und anschließend in den Ölphasen emulgiert, die entsprechende Poly­ mere enthalten, wodurch wenigstens zwei primäre Emulsionen erzeugt werden. Auch können die Ölphasen oder Emulsionen unterschiedlich im Hinblick auf die Wirkstoffe sein, die sie enthalten, während dasselbe Polymer eingesetzt werden kann. Wenn z. B. LHRH als ein Wirk­ stoff verwendet wird, können zwei unterschiedliche Ölphasen erhalten werden, indem ein antagonistisches LHRH-Analog in einer Ölphase und ein agonistisches LHRH-Analog in ei­ nem weiteren primären Öl gelöst wird.

Zusätzlich können wenigstens zwei physikalisch oder chemisch unterschiedliche primäre Öl­ phasen oder Emulsionen unter Verwendung von nicht-unterschiedlichen Arten von Wirkstof­ fen oder Polymeren, sondern einem Wirkstoff und einem Polymer hergestellt werden. In die­ sem Fall schließen die Parameter, die den Unterschied in den physikalischen und/oder chemi­ schen Eigenschaften zwischen zwei oder mehr primären Ölphasen oder Emulsionen bestim­ men, das Gewichtsverhältnis von Wirkstoff zu Polymer, das Gewichtsverhältnis von Wirk­ stoff oder Polymer zu organischem Lösungsmittel, das Gewichtsverhältnis zwischen organi­ schen Lösungsmitteln (wenn zwei oder mehr organische Lösungsmittel verwendet werden) und das Gewichtsverhältnis eines organischen Lösungsmittels zu einem wäßrigen Lösungs­ mittel (wenn der Wirkstoff wasserlöslich ist, d. h. wenn W/O/W verwendet wird) ein. Die mit unterschiedlichen Parametern hergestellten Mikroteilchen sind voneinander in Struktur und Morphologie sowie in der Wirkstofffreisetzungsrate unterschiedlich. Wenn z. B. das Ge­ wichtsverhältnis des Polymers zum organischen Lösungsmittel erhöht wird, besitzt die primä­ re Ölphase oder Emulsion eine erhöhte Viskosität und zeigt somit eine verbesserte Enkapsu­ lierungsleistung, was zur Erzeugung vergrößerter Mikroteilchen führt. In dem Fall, daß der Wirkstoff - als ein weiteres Beispiel - wasserlöslich ist, neigt die Freisetzungsrate dazu anzu­ steigen, wenn der Gehalt des Wirkstoffs ansteigt. Andererseits hat die Freisetzungsrate von lipidlöslichen Wirkstoffen eine Tendenz abzunehmen, wenn der Gehalt des Wirkstoffs an­ steigt.

Unterschiedliche chemische und physikalische Eigenschaften können auch aus der Verwen­ dung einer Mischung unterschiedlicher Lösungsmittel resultieren. Da unterschiedliche Lö­ sungsmittel Unterschiede in der Wasserlöslichkeit sowie im Siedepunkt voneinander zeigen, werden Lösungsmittel mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten aus der Emulsion entfernt oder verdampft, die in der sekundären wäßrigen Phase dispergiert ist. Im Ergebnis zeigen die Mikroteilchen ausreichend unterschiedliche Eigenschaften, um ihre Wirkstofffreisetzungsra­ ten zu beeinflussen.

Im zweiten Schritt des Verfahrens gemäß der vorliegenden Erfindung werden die zwei oder mehr primären Ölphasen oder Emulsionen, die oben hergestellt sind, in einer wäßrigen Phase dispergiert. Die Dispersion der primären Ölphasen oder Emulsionen kann gleichzeitig oder nacheinander durchgeführt werden. Im letzteren Fall kann die sekundäre Ölphase kurz nach dem Dispergieren der ersten primären Ölphase oder Emulsion in einer wäßrige Phase disper­ giert werden. Diese Dispersionstechniken müssen eine so ausreichende Menge der wäßrigen Phasen verwenden, um das in der primären Ölphase oder Emulsion vorhandene organische Lösungsmittel zu extrahieren oder zu verdampfen. Das nacheinander erfolgende Dispergieren der primären Ölphasen oder Emulsionen kann zusätzlich variiert werden durch Einführung des Schrittes der Veränderung der physikalischen und chemischen Faktoren der wäßrigen Phase zwischen den Dispersionsschritten der ersten primären Ölphase oder Emulsion und der zweiten primären Ölphase oder Emulsion.

Wie oben erwähnt schließen die physikalischen und chemischen Faktoren der wäßrigen Phase Mischergeschwindigkeiten, Mengen der wäßrigen Phase und Konzentrationen der Emulgato­ ren oder Zusatzstoffe, die in der wäßrigen Phase enthalten sind, ein. Insgesamt verringert die Erhöhung der Mischgeschwindigkeit die Größe der emulgierten Micellen, was zu einer Ab­ nahme in der Größe der Mikroteilchen führt. Eine große Menge der wäßrigen Phase ermög­ licht es, daß die organischen Lösungsmittel mit einer hohen Rate aus der Emulsion extrahiert werden, was eine hohe Geschwindigkeit der Verfestigung des biologisch abbaubaren Poly­ mers mit sich bringt. Im Ergebnis werden große Mikroteilchen gebildet. Die Temperatur der wäßrigen Phase muß auch berücksichtigt werden, weil sie einen Einfluß auf die Verdamp­ fungsrate der organischen Lösungsmittel hat. Wenn die Temperatur ansteigt, wird die Ver­ dampfung schneller. Als ein Ergebnis bestimmen die Verfestigungsrate des biologisch abbau­ baren Polymers und die Größe der Mikroteilchen die Wirkstofffreisetzungsrate. Nach dem Dispergieren der ersten primären Ölphase oder Emulsion in einer wäßrigen Phase führt das Erhöhen der Menge oder Temperatur der wäßrigen Phase zur Extraktion einer ausreichenden Menge des organischen Lösungsmittels, das enthalten ist in der zweiten primären Ölphase oder Emulsion. Beim Dispergieren von wenigstens zwei primären Ölphasen oder Emulsionen in einer wäßrigen Phase müssen daher die Art und Menge des in jeder der primären Ölphasen oder Emulsionen vorhandenen organischen Lösungsmittels sowie die Menge und Temperatur der wäßrigen Phase berücksichtigt werden.

Als Beispiele, aber nicht hierauf beschränkt, schließen Wirkstoffe, die zur Verwendung bei der vorliegenden Erfindung geeignet sind, physiologisch wirksame Peptide und/oder Proteine, Antikrebsmittel, Antibiotika, Fiebermittel, Acesodyne, entzündungshemmende Mittel, Ex­ pektorantien, Abirritantien, Muskelrelaxantien, Epilepsiemittel, geschwürhemmende Mittel, antihypochondrische Mittel, antiallergische Mittel, Herzmittel, antiarrhytmische Mittel, ge­ fäßerweiternde Mittel, Hypotensiva, Diabetesmittel, Hyperlipämiemittel, gerinnungshemmen­ de Mittel, haemolytische Mittel, Antituberkulosemittel, Hormone, anästhetische Antagoni­ sten, osteoklastische Suppressoren, osteogene Promotoren, Angiogenese-Suppressoren und Mischungen derselben ein.

Bestehend aus wenigstens zwei Aminosäuren, liegen die Molekulargewichte der physiolo­ gisch wirksamen Peptide und/oder Proteine in einem Bereich von 200 bis 100.000. Beispiele sind menschliches Wachstumshormon, Wachstumshormonfreisetzungshormon, Wachstums­ hormonfreisetzungspeptid, Interferon, Kolonie-stimulierende Faktoren, Interleukin, Makro­ phagen-aktivierende Faktoren, Makrophagenpeptid, B-Zellfaktoren, T-Zellfaktoren, Protein A, Allergierepressoren, Zellnekroseglycoproteine, Immunotoxine, Lymphotoxine, Tumorne­ krosefaktoren, Tumorrepressionsfaktoren, Metastasewachstumsfaktoren, α-1-Antitrypsin, Albumin und seine Polypeptidfragmente, Apolipoprotein-E, Erythropoietin, Faktor VII, Fak­ tor VIII, Faktor IX, Plasminogen-aktivierende Faktoren, Urokinase, Streptokinase, Protein C, C-reaktive Proteine, Reninsuppressoren, Collagenasesuppressoren, Superoxiddismutase, Pla­ telet-derived-Wachstumsfaktoren, Epidermiswachstumsfaktoren, osteogene Wachstumsfakto­ ren, osteogene Promotionsproteine, Calcitonin, Insulin, Atriopeptin, Catilledge- Induktionsfaktoren, Bindegewebe-aktivierende Faktoren, Follikel-stimulierendes Hormon, Lutropin, Lutropinfreisetzungshormon, Nervenwachstumsfaktoren, Parathyroidhormon, Rela­ xin, Secretin, Somatomedin, insulinähnliche Wachstumsfaktoren, adrenocorticotropes Hor­ mon, Glucagone, Cholecystokinin, Pancreaspolypeptide, Gastrinfreisetzungshormon, Corti­ cotropinfreisetzungsfaktoren, Thyroid-stimulierende Hormone, mono- und polyklonale Anti­ körper gegen verschiedene Viren, Bakterien und Toxine, verschiedene virusabgeleitete Impf­ stoffe und Mischungen derselben.

Nicht-beschränkende, konkrete Beispiele für Antikrebsmittel schließen Bleomycin, Me­ thotrexat, Actinomycin D, Mitomycin C, Binblastinsulfat, Bincrystinsulfat, Daunorubicin, Adriamycin, Neocartinostatin, Cytosinarabinosid, Fluoruracil, Tetrahydrofuryl-5-fluoruracil, Krestin, Picibanil, Lentinan, Levamisol, Bestatin, Azimexon, Glycyrrhizin, und Polyle wie etwa Polyl : C, PolylA : U und PolylCLC ein.

Konkrete Beispiele für Antibiotika, die bei der vorliegenden Erfindung nützlich sind, schlie­ ßen Gentamicin, Dibekacin, Kanendomycin, Lividomycin, Tobramycin, Amikacin, Fra­ diomycin, Sisomycin, Tetracyclin-Hydrochlorid, Oxytetracyclin-Hydrochlorid, Rolitetracy­ clin, Doxycyclin-Hydrochlorid, Ampicillin, Peperacillin, Ticarcillin, Ceflothin, Cefaloridin, Cefotiam, Cefsulodin, Cefmenoxim, Cefmetazol, Cefazolin, Cefotaxim, Cefoperazon, Cefti­ zoxim, Mochisalctam, Thienamycin, Sulfazecin und Asetreonam ein.

Beispiele für Fiebermittel, die für die vorliegende Erfindung anwendbar sind, sind Schmerz­ mittel, Salicylsäure enthaltende entzündungshemmende Mittel, Sulpyrin, Flufenaminsäure, Diclofenac, Indomethacin, Morphin, Pethidin-Hydrochlorid, Levorphanoltartrat und Oxymor­ phon ein, ohne Beschränkung auf diese.

Nicht-beschränkende, konkrete Beispiele für Acesodyne, die in der vorliegenden Erfindung nützlich sind, schließen Ephedrin-Hydrochlorid, Methylephedrin-Hydrochlorid, Noscapin- Hydrochlorid, Codeinphosphat, Dihydrocodeinphosphat, Allocramid-Hydrochlorid, Clofeda­ nol-Hydrochlorid, Picoperidamin-Hydrochlorid, Chloperastin, Protokylol-Hydrochlorid, Iso­ proterenol-Hydrochlorid, Sulbutamolsulfat und Terbutalinsulfat ein.

Beispiele für Abirritantien sind Chlorpromazin, Prochlorperazin, Trifluoperazin, Atropinsulfat und Methylscopolaminbromid.

Beispiele für Muskelrelaxantien sind Pridinolmethansulfonat, Tubocurarinchlorid und Pancu­ roniumbromid.

Beispiele für Epilepsiemittel sind Phenytonin-enthaltende Antiepileptika, Ethosuximid, Ace­ tazolamid, Chlordiazepoxid.

Beispiele für geschwürhemmende Mittel schließen Metoclopramid und Histidin-Hydrochlorid ein.

Beispiele für antihypochondrische Mittel schließen Imipramin, Clomipramin, Noxiptilin und Phenerdinsulfat ein.

Beispiele für antiallergische Mittel schließen Diphenhydramin-Hydrochlorid, Chlorphenira­ minmaleat, Tripelenamin-Hydrochlorid, Methdilazin-Hydrochlorid, Clemizol-Hydrochlorid, Diphenylpyralin-Hydrochlorid und Methoxyphenamin-Hydrochlorid ein.

Beispiele für Herzmittel sind trans-Paioxocampher, Theophyllol, Aminophyllin und Etilefrin- Hydrochlorid.

Beispiele für antiarrhytmische Mittel sind Propanol, Alprenolol, Bufetolol und Oxprenolol.

Beispiele für gefäßerweiternden Mittel, die in der vorliegenden Erfindung nützlich sind, schließen Oxyfedrin-Hydrochlorid, Diltiazem, Tolazolin-Hydrochlorid, Hexobendin und Ba­ methansulfat ein.

Beispiele für Hypotensiva schließen Hexamethoniumbromid, Pentolinium, Mecamylamin- Hydrochlorid, Ecarazin-Hydrochlorid und Clonidin ein.

Beispiele für Diabetesmittel sind Glymidin-Natrium, Glipizid, Fenformin-Hydrochlorid, Buformin-Hydrochlorid und Metformin.

Beispiele für Hyperlipämiemittel sind Pravastatin-Natrium, Simvastatin, Clinofibrat, Clofi­ brat, Simfibrat und Bezafibrat.

Nützlich als gerinnungshemmendes Mittel ist Heparin-Natrium.

Beispiele für haemelytische Mittel schließen Thromboplastin, Thrombin, Menadion- Natriumhydrogensulfit, Acetomenaphthon, Transexaminsäure, Carbozochrom- Natriumfulfonat und Adrenochrom-Monoaminoguanidinmethansulfonat ein.

Beispiele für Antituberkulosemittel schließen Isoniazid, Ethambutol und p-Aminosalicylsäure ein.

Verfügbar als Hormone für die vorliegende Erfindung sind Predonisolon, Predonisolon- Natriumphosphat, Dexamethason-Natriumsulfat, Betamethason-Natriumphosphat, Hexestrol­ phosphat, Hexestrolacetat und Methimazol.

Beispiele für anästhetische Antagonisten sind Levallorphantartrat, Nalorphin-Hydrochlorid und Naloxon-Hydrochlorid.

Als ein osteoklastischer Suppressor kann Ipriflavon in der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden. Für die vorliegende Erfindung verfügbare osteogene Promotoren sind Peptide wie BMP, PTH, TGF-beta und IFG-1.

Beispiele für Angiogenese-Suppressoren schließen Steroide, Fumagillin und Fumagillol ein.

Die obigen physiologisch wirksamen Wirkstoffe können in pharmazeutisch anwendbaren Salzformen vorliegen. Zum Beispiel werden für die physiologisch wirksamen Wirkstoffe, die basische Reste enthalten, wie etwa Amingruppen, anorganische Säuren verwendet, wie etwa Salzsäure, Schwefelsäure und Salpetersäure, und organische Säuren, wie etwa Kohlensäure und Bernsteinsäure. Wenn die physiologisch wirksamen Wirkstoffe saure Reste enthalten, wie etwa Carbonsäuren, sind anorganische Salze, wie etwa Natrium und Kalium, und basische organische Verbindungen, wie etwa Triethylamin und Arginin, nützlich, um die interessieren­ den Wirkstoffe in pharmazeutisch annehmbare Salze umzuwandeln.

Ein besseres Verständnis der vorliegenden Erfindung kann im Lichte der folgenden Beispiele erhalten werden, die zur Veranschaulichung angegeben sind, nicht aber, um die vorliegende Erfindung zu beschränken.

BEISPIEL I Herstellung einer Mischung aus Brillantblau-enkapsulierenden Mikroteilchen und Rhodamin­ enthaltenden Mikroteilchen (1 : 1) durch Doppelemulgierung

0,1 g Brillantblau wurden in 1,5 g Methanol gelöst und in einer Lösung von 0,5 g RG502H (Boehringer Ingelheim) in 2,0 g Methylenchlorid dispergiert, um eine primäre Emulsion DP 1 zu ergeben. Getrennt davon wurde eine Lösung von 0,1 g Rhodamin in 1,5 g Methanol in 2,0 g Methylenchlorid dispergiert, die 0,5 g RG502H enthielten, um eine primäre Emulsion DP2 zu ergeben. Die primären Emulsionen DP1 und DP2 wurden nacheinander in 250 ml einer 0,5% igen Polyvinylalkohollösung in Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Nachdem das Rüh­ ren bei 3.000 UPM für zusätzliche 15 min fortgesetzt worden war, um eine Emulsion zu erge­ ben, wurde das organische Lösungsmittel bei 40°C über eine Stunde verdampft, um verfe­ stigte Mikroteilchen zu erzeugen. Diese sind in der optischen Mikrofotografie von Fig. 1a gezeigt.

VERGLEICHSBEISPIEL I A: Herstellung von Brillantblau-enkapsulierenden Mikroteilchen

0,1 g Brillantblau wurden in 1,5 g Methanol gelöst und in einer Lösung von 1 g RG502H (Boehringer Ingelheim) in 2,0 g Methylenchlorid dispergiert, um eine primäre Emulsion zu ergeben. Die primäre Emulsion wurde in 250 ml einer 0,5%igen Polyvinylalkohollösung in Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Nachdem das Rühren bei 3.000 UPM für zusätzliche 15 min fortgesetzt worden war, um eine Emulsion zu ergeben, wurde das organische Lösungs­ mittel bei 40°C über eine Stunde verdampft, um verfestigte Mikroteilchen zu erzeugen. Fig. 1b ist eine optische Mikrofotografie der Mikroteilchen.

B: Herstellung von Rhodamin-enkapsulierenden Mikroteilchen.

0,2 g Rhodamin wurden in 3 g Methanol gelöst und in einer Lösung von 1 g RG502H (Boeh­ ringer Ingelheim) in 2,0 g Methylenchlorid dispergiert, um eine primäre Emulsion zu ergeben. Die primäre Emulsion wurde in 250 ml einer 0,5%-igen Polyvinylalkohollösung in Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Ver­ wendung eines Homogenisators. Nachdem das Rühren bei 3.000 UPM für zusätzliche 15 min fortgesetzt worden war, um eine Emulsion zu ergeben, wurde das organische Lösungsmittel bei 40°C über eine Stunde verdampft, um verfestigte Mikroteilchen zu ergeben. Fig. 1c ist eine optische Mikrofotografie der Mikroteilchen.

C: Herstellung von Brillantblau/Rhodamin(1 : 1)-enthaltenden Mikroteilchen mit einem Poly­ mermischverfahren

Zusammen mit 0,1 g Brillantblau wurden 0,1 g Rhodamin in 3 g Methanol gelöst, gefolgt von Dispersion der Methanollösung in einer Polymerlösung von 1 g RG502H in 2,0 g Methylen­ chlorid, um eine primäre Emulsion zu ergeben. Die primäre Emulsion wurde in 250 ml einer 0,5%igen Polyvinylalkohollösung in Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Nachdem das Rühren bei 3.000 UPM für zusätzliche 15 min fortgesetzt worden war, um eine Emulsion zu ergeben, wurde das organische Lösungsmittel bei 40°C über eine Stunde verdampft, um ver­ festigte Mikroteilchen zu erzeugen. Fig. 1d ist eine optische Mikrofotografie der Mikroteil­ chen.

Wie in den entsprechenden optischen Mikrofotografien der Fig. 1a bis 1d für Beispiel I und Vergleichsbeispiele 1A bis 1C gezeigt, sind die Mikroteilchen, die in Beispiel I hergestellt sind, eine Mischung gleicher Mengen derjenigen, die in den Vergleichsbeispielen 1A und 1B hergestellt sind, während die Mikroteilchen, die mit dem Polymermischverfahren von Ver­ gleichsbeispiel 1C hergestellt sind, eine Mischfarbe der zwei angenommen haben.

BEISPIEL II Herstellung von Leuprolidacetat-enkapsulierenden biologisch abbaubaren Mikroteilchen mit kontiniuerlicher Wirkstofffreisetzungskapazität für 28 Tage oder länger

A-Typ: In 0,28 g Methanol wurden 62,5 mg Leuprolidacetat gelöst. Diese methanolische Lö­ sung wurde in 1,125 g Methylenchlorid dispergiert, die 0,438 g eines PLGAs enthielten (RG502H, Boehringer Ingelheim), das ein Molekulargewicht von 8,600 aufweist, mit einem Verhältnis Lactid : Glycolid von 50 : 50, um eine primäre Emulison DP1 zu ergeben. Getrennt davon wurden 62,50 mg Leuprolidacetat in 0,37 g Methanol gelöst, gefolgt von einer Disper­ sion der methanolischen Lösung in 1,313 g Methylenchlorid, die 0,438 g eines PLGAs ent­ hielten (RG503H, Boehringer Ingelheim), das ein Molekulargewicht von 33.000 aufweist, mit einem Verhältnis Lactid : Glycolid von 50 : 50, um eine primäre Emulsion DP2 zu ergeben. Die primären Emulisonen DP1 und DP2 wurden nacheinander in 250 ml einer 0,3%igen Po­ lyvinylalkohollösung in Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rüh­ ren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Nachdem das Rühren bei 3.000 UPM für zusätzliche 15 min fortgesetzt worden war, um eine Emulsion zu ergeben, wurde das organische Lösungsmittel bei 40°C über zwei Stunden verdampft, um verfestigte Mikroteilchen zu erzeugen.

Die Mikroteilchen sind in den Rasterelektronenmikrofotografien von Fig. 2 gezeigt, in 100- facher Vergrößerung (a) und 800facher Vergrößerung (b). In der Rasterelektronenmikrofoto­ grafie von Fig. 2b ist zu sehen, daß das rechte Mikroteilchen Poren aufweist, die sich von dem 502H-Polymer der Emulsion DP1 ableiten, während das linke Mikroteilchen nicht-porös ist, abgeleitet vom 503H der Emulsion DP2.

B-Typ: 75 mg Leuprolidacetat wurden in 0,27 g Methanol gelöst und in 1,093 g Methylen­ chlorid dispergiert, das 0,425 g RG502H enthielt, um eine primäre Emulsion DP1 zu ergeben. Getrennt davon wurde eine Lösung von 75 mg Leuprolidacetat in 0,36 g Methanol in einer Polymerlösung von 0,425 g RG503H in 1,275 g Methylenchlorid dispergiert, um eine primäre Emulsion DP2 zu ergeben. Danach wurden Mikroteilchen unter Befolgung der restlichen Vorgehensweise für den A-Typ von Beispiel II hergestellt.

VERGLEICHSBEISPIEL II A: Herstellung von Leuprolidacetat-enkapsulierenden RG502H-Mikroteilchen

62,5 mg Leuprolidacetat wurden in 0,28 g Methanol gelöst und in 1,125 g Methylenchlorid dispergiert, die 0,438 g RG502H enthielten, um eine primäre Emulsion zu ergeben. Die pri­ märe Emulsion wurde in 125 ml einer 0,3%igen Polyvinylalkohollösung in Wasser disper­ giert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Danach wurden Mikroteilchen unter Befolgung der restlichen Vorge­ hensweise für den A-Typ von Beispiel II hergestellt.

B: Herstellung von Leuprolidacetat-enkapsulierenden RG503H-Mikroteilchen

62,5 mg Leuprolidacetat wurden in 0,378 g Methanol gelöst und in 1,313 g Methylenchlorid dispergiert, die 0,438 g RG503H enthielten, um eine primäre Emulsion zu ergeben. Die pri­ märe Emulsion wurde in 125 mg einer 0,3%igen Polyvinylalkohollösung in destilliertem Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Danach wurden Mikroteilchen durch Befolgung der rest­ lichen Vorgehensweise für den A-Typ von Beispiel II hergestellt.

C: Herstellung von Leuprolidacetat-enkapsulierenden RG502HIRG503H(1 : 1)-Mikroteilchen

In 0,65 g Methanol wurden 125 mg Leuprolidacetat gelöst, die anschließend in einer Lösung von 0,438 g RG502H und 0,438 g RG503H in 2,438 g Methylenchlorid dispergiert wurden, um eine primäre Emulsion zu erhalten. Diese Emulsion wurde in 250 ml einer 0,3%igen Polyvinylalkohollösung in destilliertem Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Danach wurden Mikroteilchen durch Befolgung der restlichen Vorgehensweise für den A-Typ von Beispiel II hergestellt.

TESTBEISPIEL I in-vitro-Wirkstofffreisetzung von Mikroteilchen

Die biologisch abbaubaren Mikroteilchen, hergestellt in Beispiel II und Vergleichsbeispiel II, wurden, zusammen mit kommerziell verfügbarem Leuplin (Takeda, Japan) als einer Kontroll­ substanz, auf in-vitro-Wirkstofffreisetzung wie folgt getestet. Jeweils 5 mg der gefrierge­ trockneten Mikroteilchen wurden in 35 Ampullen dispergiert, die jeweils einen 0,033 M Phosphatpuffer (pH 7) enthielten. Die Wirkstofffreisetzung erfolgte bei 37°C. Am Tag des Testes und am 1. Tag, 4. Tag, 7. Tag, 14. Tag, 21. Tag und 28. Tag nach dem Test wurde je­ weils eine Testprobe aus 5 Ampullen entnommen und zentrifugiert. Die so erhaltenen Mikro­ teilchen wurden mit einem Methylenchlorid/Acetat(1 : 1, v/v)-Puffer extrahiert und das Leu­ prolid, das in die Acetatphase überführt wurde, wurde durch HPLC bei 280 nm quantifiziert, mit einer mobilen Phase aus einer wäßrigen 28%igen Acetonitrillösung, die 0,1% Trifluo­ ressigsäure enthielt, bei einer Durchflußrate von 1,0 ml/min. Die Ergebnisse sind in Fig. 3 dargestellt.

TESTBEISPIEL II Gehalt von Leuprolelin in Blut

Die biologisch abbaubaren Mikroteilchen, hergestellt in Beispiel II, wurden, zusammen mit kommerziell verfügbarem Leuplin (Takeda, Japan) als einer Kontrollsubstanz, auf in-vivo- Wirkstofffreisetzung wie folgt getestet. Zur Bestimmung der Wirkstofffreisetzungskapazität wurden die Leuprolelin-Gehalte in Blut quantifiziert. 10 männliche SD-Ratten wurden für diesen Test verwendet. Die Mikroteilchen, hergestellt in Beispiel II, wurden S der männlichen SD-Ratten über intramuskuläre Injektion zugeführt, während Leuplin in weitere S Ratten in­ tramuskulär injiziert wurde. Die Mikroteilchen wurden in einer Dosis von 0,9 mg pro Ratte verabreicht. Blutproben wurden aus einer Schwanzvene jeder der Ratten einen Tag, drei Tage, sieben Tage, 14 Tage, 21 Tage, 28 Tage und 35 Tage nach der Injektion entnommen und auf Leuprolelin-Gehalt gemessen. Die Ergebnisse sind in Fig. 4 dargestellt.

TESTBEISPIEL III Gehalt von Testosteron in Blut

Die biologisch abbaubaren Mikroteilchen, hergestellt in Beispiel II, wurden, zusammen mit kommerziell verfügbarem Leuplin (Takeda, Japan) als einer Kontrollsubstanz, auf in-vivo- Wirkstoffaktivität wie folgt getestet. Zur Bestimmung der Wirkstoffaktivität wurden die Testosterongehalte in Blut quantifiziert. 10 männliche SD-Ratten wurden für diesen Test ver­ wendet. Die Mikroteilchen, hergestellt in Beispiel II, wurden 5 der männlichen SD-Ratten über intramuskuläre Injektion zugeführt, während Leuplin in weitere 5 Ratten intramuskulär injiziert wurde. Die Mikroteilchen wurden in einer Dosis von 0,9 mg pro Ratte verabreicht.

Blutproben wurden aus einer Schwanzvene jeder der Ratten einen Tag, drei Tage, sieben Ta­ ge, 14 Tage, 21 Tage, 28 Tage und 35 Tage nach der Injektion abgenommen und auf Testoste­ rongehalt gemessen. Die Ergebnisse sind in Fig. 5 dargestellt.

BEISPIEL III Herstellung von Adriamycin-enkapsulierenden biologisch abbaubaren Mikroteilchen mit kontinuierlicher Wirkstofffreisetzungskapazität von zwei Monaten oder mehr

In 0,563 g Methanol wurden 20 mg Adriamycin gelöst. Diese Methanollösung wurde in 2,253 g Methylenchlorid dispergiert, die 0,875 g RG502H enthielten, um eine primäre Emulsion DP1 zu ergeben. Getrennt davon wurden 15 mg Adriamycin in 0,735 g Methanol gelöst, ge­ folgt von einer Dispersion der Methanollösung in 2,624 g Methylenchlorid, die 0,875 g eines PLGA (RG502H, Boehringer Ingelheim) enthielten, das ein Molekulargewicht von 14.500 aufwies, mit einem Verhältnis Lactid : Glycolid von 50 : 50, um eine primäre Emulsion DP2 zu ergeben.

Die primären Emulsionen DP1 und DP2 wurden gleichzeitig in 500 ml einer 0,3%igen Po­ lyvinylalkohollösung in Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rüh­ ren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Danach wurden Mikroteilchen unter Befolgung der restlichen Vorgehensweise für den A-Typ von Beispiel II hergestellt.

BEISPIEL IV Herstellung von Leuprolidacetat-enkapsulierenden biologisch abbaubaren Mikroteilchen mit kontinuierlicher Wirkstofffreisetzungskapazität von drei Monaten oder mehr

A-Typ: In 0,282 g Methanol wurden 62,5 mg Leuprolidacetat gelöst. Diese Methanollösung wurde in 1,127 g Methylenchlorid dispergiert, die 0,438 g RG502H enthielten, um eine pri­ märe Emulsion DP1 zu ergeben. Getrennt davon wurden 187,5 mg Leuprolidacetat in 0,492 g Methanol gelöst, gefolgt von einer Dispersion der Methanollösung in 1,97 g Methylenchlorid, die 1,3 g Polylactid (PLA0015, Wako, Japan) enthielten, das ein Molekulargewicht von 15.000 aufwies, um eine primäre Emulsion DP2 zu ergeben. Die primären Emulsionen DP1 und DP2 wurden nacheinander in 500 ml einer 0,3%igen Polyvinylalkohollösung in Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden war, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Ver­ wendung eines Homogenisators. Danach wurden Mikroteilchen unter Befolgung der restli­ chen Vorgehensweise für den A-Typ von Beispiel II hergestellt.

B-Typ: 125 mg Leuprolidacetat wurden in 0,328 g Methanol gelöst und in 1,3 g Methylen­ chlorid dispergiert, die 0,875 g PLA0015 enthielten, um eine primäre Emulsion zu ergeben. Die Hälfte der primären Emulsion wurde in 125 ml einer 0,1%igen Polyvinylalkohollösung in destilliertem Wasser unter Rühren bei 3.500 UPM mit Hilfe eines Homogenisators disper­ giert. Zu dieser Dispersion wurden 125 ml einer 0,3%igen Polyvinylalkohollösung in destil­ liertem Wasser langsam zugegeben, woraufhin die Temperatur auf 25°C eingestellt und die andere Hälfte der primären Emulsion dispergiert wurde. Danach wurden Mikroteilchen durch Befolgung der restlichen Vorgehensweise für den A-Typ von Beispiel II hergestellt.

BEISPIEL V Herstellung von Leuprolidacetat-enkapsulierenden biologisch abbaubaren Mikroteilchen mit kontinuierlicher Wirkstofffreisetzungskapazität von vier Monaten oder mehr

In 0,282 g Methanol wurden 62,5 mg Leuprolidacetat gelöst. Diese Methanollösung wurde in 1,127 g Methylenchlorid dispergiert, die 0,438 g RG502H enthielten, um eine primäre Emul­ sion DP1 zu ergeben. Getrennt davon wurden 187,5 mg Leuprolidacetat in 0,492 g Methanol gelöst, gefolgt von einer Dispersion der Methanollösung in 1,97 g Methylenchlorid, die 1,3 g eines PLGA (RG502, Boehringer Ingelheim) enthielten, das ein Molekulargewicht von 14.500 aufwies, mit einem Verhältnis Lactid : Glycolid von 50 : 50, um eine primäre Emulsion DP2 zu ergeben. Die primären Emulsionen DP1 und DP2 wurden nacheinander in 500 ml einer 0,3%igen Polyvinylalkohollösung in Wasser dispergiert, die auf 25°C vorgewärmt worden waren, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Da­ nach wurden Mikroteilchen durch Befolgung der restlichen Vorgehensweise für den A-Typ von Beispiel II hergestellt.

BEISPIEL VI Herstellung von Leuprolidacetat-enkapsulierenden biologisch abbaubaren Mikroteilchen mit kontinuierlicher Wirkstofffreisetzungskapazität von sechs Monaten oder mehr

In 0,328 g Methanol wurden 125 mg Leuprolidacetat gelöst. Diese Methanollösung wurde in 1,313 g Methylenchlorid dispergiert, die 0,875 g PLA0015 enthielten, um eine primäre Emul­ sion DP1 zu ergeben. Getrennt davon wurden 125 mg Leuprolidacetat in 0,735 g Methanol gelöst, gefolgt von einer Dispersion der Methanolllösung in 2,624 g Methylenchlorid, die 0,875 g eines PLGAs (RG858, Boehringer Ingelheim) enthielten, das ein Molekulargewicht von 220.000 aufwies, mit einem Verhältnis Lactid : Glycolid von 85 : 15, um eine primäre Emulsion DP2 zu ergeben. Die primären Emulsionen DP1 und DP2 wurden nacheinander in 500 ml einer 0,3%igen Polyvinylalkohollösung in Wasser dispergiert, die auf 25°C vorge­ wärmt worden war, unter Rühren bei 3.500 UPM durch Verwendung eines Homogenisators. Danach wurden Mikroteilchen durch Befolgung der restlichen Vorgehensweise für den A-Typ von Beispiel II hergestellt.

BEISPIEL VII Herstellung von biologisch abbaubaren Mikroteilchen mit unterschiedlichen enkapsulierenden Polymeren

Primäre Emulsionen wurden unter Verwendung von biologisch abbaubaren Polymeren erhal­ ten, wie in der Tabelle unten angegeben, und verwendet, um Mikroteilchen in der gleichen Art und Weise herzustellen, wie fizr den A-Typ von Beispiel II beschrieben.

In den obigen Beispielen wurden Kombinationen von zwei primären Emulsionen, die in ihren physikalischen und chemischen Eigenschaften voneinander verschieden waren, in vorbe­ stimmten Verhältnissen kombiniert, um Mikroteilchen herzustellen, die über gewünschte Zeit­ räume kontinuierlich Wirkstoffe freisetzen konnten.

In der Tabelle unten finden sich die zusammengefaßten theoretischen Kombinationen von zwei Emulsionen, die in der Lage sind, über längere Zeiträume kontinuierlich Wirkstoffe frei­ zusetzen, im Hinblick auf Polymere (Molekulargewicht, Hydrophilie, Polymer/organisches Lösungsmittel und Lactid/Glycolid), Wirkstoffe und Zusatzstoffe.

Die primären Emulsionen können in verschiedenen Fällen kombiniert werden. Zum Beispiel können vier Emulsionen, die ein großes Molekulargewicht, ein kleines Molekulargewicht, ein nicht-ausgeglichenes Verhältnis zwischen Polymeren bzw. einen Zusatzstoff aufwiesen, in Kombinationen gleichzeitig oder nacheinander dispergiert werden, um Mikroteilchen auf der Basis von organischem Lösungsmittel mit geeigneten Freisetzungszeiträumen herzustellen.

Wie zuvor beschrieben, können Mikroteilchenkombinationen, in denen die konstituierenden Mikroteilchen ihre Wirkstofffreisetzungseigenschaften in ihrer Integrität beibehalten, in ei­ nem einfachen Verfahren mit der vorliegenden Erfindung hergestellt werden. Eine geeignete Kombination der Mikroteilchen kann daher Wirkstoffe wirksam über einen gewünschten Zeit­ raum freisetzen.

Die vorliegende Erfindung ist in einer veranschaulichenden Art und Weise beschrieben wor­ den, und man sollte verstehen, daß die verwendete Terminologie deskriptiv und nicht be­ schränkend sein soll. Viele Modifikationen und Variationen der vorliegenden Erfindung sind im Lichte der obigen Lehren möglich. Man sollte daher verstehen, daß die Erfindung inner­ halb des Schutzumfangs der beigefügten Ansprüche in anderer Weise in die Praxis umgesetzt werden kann, als spezifisch beschrieben.

Claims (11)

1. Verfahren zur Herstellung von Mikroteilchen unter Verwendung eines Multiemulsions­ verfahrens, mit folgenden Schritten:
Lösen oder Dispergieren eines Wirkstoffes in jedem von wenigstens zwei Ölen, um we­ nigstens zwei primäre Ölphasen oder Emulsionen zu ergeben, die jede ein biologisch ab­ baubares Polymer enthalten;
Dispergieren der wenigstens zwei primären Ölphasen oder Emulsionen in einer wäßrigen Phase, gleichzeitig oder nacheinander; und
Entfernen der organischen Lösungsmittel aus der Lösung mit dispergiertem Wirkstoff, um Mikroteilchen herzustellen.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Schritt der Dispersion der primären Ölphasen oder Emulsionen in einer wäßrigen Phase so durchgeführt wird, daß eine der primären Ölphasen in einer wäßrigen Phase und anschließend unmittelbar die an­ dere der primären Ölphasen in der wäßrigen Phase dispergiert wird oder daß eine der pri­ mären Ölphasen in einer wäßrigen Phase dispergiert wird, die physikalischen und/oder chemischen Faktoren in der wäßrigen Phase verändert werden und die andere der primä­ ren Ölphasen in der wäßrigen Phase dispergiert wird.

3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Verändern der physikali­ schen und/oder chemischen Faktoren dadurch durchgeführt wird, daß die wäßrige Phase mit einer Geschwindigkeit von 100 bis 5.000 UPM gerührt wird, die wäßrige Phase auf das 20- bis 1.000fache der primären Ölphasen oder Emulsionen vergrößert wird, ein Emulgator in einer Menge von 1 bis 10% zur wäßrigen Phase zugegeben wird, wobei der Emulgator ausgewählt ist aus der Gruppe, die aus Polysorbat und Polyvinylalkohol be­ steht, ein Zusatzstoff in einer Menge von 0,1 bis 5% zur wäßrigen Phase zugegeben wird, wobei besagter Zusatzstoff ausgewählt ist aus der Gruppe, die aus Gelatine, Carboxyme­ thylcellulose und Calcium besteht, und/oder die Temperatur der wäßrigen Phase im Be­ reich von 5 bis 40°C eingestellt wird.

4. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die primären Ölphasen oder Emulsionen mit einem Wasser/Öl/Wasser- Doppelemulgierverfahren, bei dem eine wäßrige Lösung mit gelöstem Wirkstoff in einem organischen Lösungsmittel dispergiert wird, das ein biologisch abbaubares Polymer ent­ hält, und anschließend in einer wäßrigen Phase, oder mit einem Öl/Wasser- Einzelemulgierverfahren, bei dem ein Wirkstoff und ein biologisch abbaubares Polymer zusammen in einem organischen Lösungsmittel oder einer Mischung von organischen Lö­ sungsmitteln gelöst und in einer wäßrigen Phase dispergiert wird, hergestellt werden.

5. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das biologisch abbaubare Polymer ausgewählt ist aus der Gruppe, die aus Polylactid, Polygly­ colid, Poly(lactid-co-glycolid) und Mischungen derselben besteht.

6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß das biologisch abbaubare Polymer ausgewählt wird aus der Gruppe, die aus Celluloseacetat, Cellulosea­ cetatpropionat, Cellulosebutyrat, Cellulosepropionat, Cellulosevalerat, Cumaron-Inden- Polymer, Dibutylaminohydroxypropylether, Ethylcellulose, Ethylen-Vinylacetat- Copolymer, Glyceroldistearat, Hydroxypropylmethylcellulosephthalat, 2-Methyl-5- vinylpyridinmethacrylat-Methacrylsäure-Copolymer, Polyaminosäuren, Polyanhydriden, Polycaprolacton, Polycarbonat, Polybutadien, Polyestern, aliphatischen Polyestern, Poly­ butadien, Polyhydroxybuttersäure, Polymethylmethacrylat, Polymethacrylsäureester, Po­ lyolester, Polypropylen, Polysacchariden, Polystyrol, Polyvinylacetaldiethylaminoacetat, Polyvinylalkohol, Polyvinylbutyral, Polyvinylformal, Proteinen, Vinylchlorid-Propylen- Vinylacetat-Copolymer, Vinylchlorid-Vinylacetat-Polymer, Wachsen und höheren Li­ pidsäuren besteht.

7. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Wirkstoff in einer Salzform vorliegt, ausgewählt aus der Gruppe, die aus physiologisch aktiven Peptiden und/oder Proteinen, Antikrebsmitteln, Antibiotika, Fiebermitteln, Acesodyne, entzündungshemmende Mittel, Expektorantien, Abirritantien, Muskelre­ laxantien, Epilepsiemittel, geschwürhemmende Mittel, antihypochondrische Mittel an­ tiallergische Mittel, Herzmittel, antiarrhythmische Mittel, gefäßerweiternde Mittel, Hy­ potensiva, Diabetesmittel, Hyperlipämiemittel, gerinnungshemmende Mittel, haemolyti- Mitel, Antituberkulosemittel, Hormone, anästhetische Antagonisten, osteoklastische Suppressoren, osteogene Promotoren, Angiogenese-Suppressoren und Mischungen der­ selben besteht.

8. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß jede der primären Ölphasen oder Emulsionen einen Wirkstoff in einer Menge von 1 bis 50% und ein Polymer in einer Menge von 5 bis 50% umfaßt.

9. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Wirkstoff ausgewählt ist aus der Gruppe, die aus Goserelinacetat, Nafarelinacetat, Buse­ relinacetat, Leuprolelinacetat und Mischungen derselben besteht.

10. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die biologisch abbaubaren Po­ lymere jeweils ein Molekulargewicht im Gewichtsmittel von 600 bis 10.000 und 25.000 bis 35.000 aufweisen, mit einem Molverhältnis von Lactid : Glycolid in einem Bereich von 45 : 55 bis 55 : 45, und in der wäßrigen Phase gleichzeitig oder nacheinander dispergiert werden, wodurch die Mikroteilchen über längere Zeiträume Wirkstoffe freisetzen können.

11. Mikroteilchen mit verzögerter Freisetzung, herstellbar mit einem Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche.