DE1069831B

DE1069831B - Process for the production of vaccines from tissue cultures against infectious pig paralysis

Info

Publication number: DE1069831B
Application number: DENDAT1069831D
Authority: DE
Inventors: Tübingen Dr. Anton Mayr
Original assignee: Dr. Rentschier (S. Co., Fabrik chemisch-pharmazeutischer und technischer Präparate, Laupheim (Württ.)
Publication date: 1959-11-26

Description

Verfahren zur Herstellung von Impfstoffen aus Gewebekulturen gegen die ansteckende Schweinelähmung Die ansteckende Schweinelähmung (Teschener Krankheit der Schweine, Poliomyelitis suum) ist eine der spinalen Kinderlahmung ähnliche Erkrankung der Schweine. Sie wird durch ein sehr kleines Virus hervorgerufen, das eine besondere Affinität zum Zentralnervensystem hat und unter natürlichen Verhaltnissen bisher nur beim Schwein angetroffen wurde. Der Lähmungsform, die eine klinisch und histologisch gut umschriebene Krankheitseinheit darstellt, stehen sehr viel zahlreichere, klinisch inapparente Infektionen gegenüber. Process for the preparation of vaccines from tissue cultures against the infectious pig paralysis The infectious pig paralysis (Teschener disease pigs, poliomyelitis suum) is a disease similar to child spinal paralysis the pigs. It is caused by a very small virus that is a special one Has affinity to the central nervous system and so far under natural conditions was only found in pigs. The form of paralysis, which is a clinical and histological one represents a well-defined disease unit, there are much more numerous, clinical ones opposite to inapparent infections.

Seit 1940 gehört die ansteckende Schweinelähmung in Deutschland zu den anzeigepflichtigen Tierseuchen. Infectious pig paralysis has been a part of Germany since 1940 the notifiable animal diseases.

Sie unterliegt den gleichen veterinärpolizeilichen Maßnahmen wie die Schweinepest. Ihre Bekämpfung stellt die befallenen Länder vor große Schwierigkeiten.It is subject to the same veterinary measures as the Swine fever. Combating them poses great difficulties for the affected countries.

Das Bundesgebiet wird durch die Seuche vom Osten her bedroht. Osterreich, die Tschechoslowakei und Polen sind verseucht. Auch die von England seuchenhaft auftretende » Talfan-diseasez der Schweine wurde als ansteckende Schweinelähmung erkannt. In jüngster Zeit brach die Seuche in Deutschland in der Gegend von Freilassing aus.The federal territory is threatened by the epidemic from the east. Austria, Czechoslovakia and Poland are contaminated. Also those of England are plague Occurring »Talfan diseasez in pigs was called infectious pig paralysis recognized. The epidemic recently broke out in Germany in the Freilassing area the end.

Zur aktiven Immunisierung der Schweine gegen die ansteckende Schweinelähmung werden bis jetzt die Formalinadsorbatvaccine nach Traub (Totvaccine) oder Modifikationen davon verwendet. Das Virus stammt aus dem Zentralnervensvstem künstlich intracerebral infizierter Jungschweine. Es wird an Aluminiumhydroxyd adsorbiert und mit Formalin inaktiviert. Eine Lebendvaccine gegen die ansteckende Schweinelähmung ist his jetzt nicht bekannt. For the active immunization of pigs against infectious pig paralysis up to now the formalin adsorbate vaccine according to Traub (Totvaccine) or modifications of which used. The virus is artificially intracerebral from the central nervous system infected young pigs. It is adsorbed on aluminum hydroxide and with formalin inactivated. A live vaccine against contagious pig paralysis is up to now not known.

Nachdem uns die Züchtung des Virus in Schweinenierenkulturen gelungen ist. bot sich eine Impfstoffherstellung aus Gewebekulturen an. Die Kulturvaccinen lösen eine Reihe technischer Probleme, mit denen Tiervaccinen belastet sind. Ihre Produktion ist in Kulturgefäßen im Labor möglich und nicht von dem Ankauf empfänglicher und gesunder Tiere abhängig, sie haben ein konstantes Zuchtmilieu, die vechselnden Einflüsse des Wirtsorganismus sind herabgesetzt, unspezifische Eiweiß-und Begleitstoffe sind geringer, vor allem aber besteht bei ihnen nicht so sehr die Gefahr, daß verunreinigende Viren, die im impfstoff im Sinne einer stummen, latenten oder klinisch inapparenten Infektion anwesend sind, in den impfstoff gelangen. Für die alte Gehirnvaccine werden in der Regel Händlerschweine benutzt. Sind zufällig schweinepestinfizierte Tiere mit einer klinisch inapparenten Infektion oder im Stadium der Inkubation darunter, so kann der Gehirnimpfstoff neben dem wirksamen Teschenvirus als Verunreinigung auch das Schweinepestvirus enthalten. After we succeeded in breeding the virus in pig kidney cultures is. a vaccine production from tissue cultures offered itself. The culture vaccines solve a number of technical problems afflicting animal vaccines. Her Production is possible in culture vessels in the laboratory and is not more susceptible to purchase and healthy animals, they have a constant breeding environment, the changing ones Influences of the host organism are reduced, unspecific protein and accompanying substances are lower, but above all there is not so much the danger of contaminating them Viruses in the vaccine in the sense of being silent, latent or clinically inapparent Infection are present, get into the vaccine. For the old brain vaccine usually used dealer pigs. They happen to be swine fever infected animals with a clinically inapparent infection or at the stage of incubation below it, so the brain vaccine can be an impurity alongside the effective Teschen virus also contain the swine fever virus.

Das Grundprinzip einer Züchtung von Viren in Gewebekulturen auf Glas (Monolavers), z. B. in Schweinenierenkulturen und eine Impfstoffherstellung hieraus ist erfinderisch nicht neu. Da die einzelnen Viren jedoch auf Grund ihrer biologisch unterschiedlichen Eigenschaften zu ihrer Reproduktion ganz unterschiedliche Zellsysteme benötigen, ist es notwendig, für jedes einzelne Virus die zu seiner Vermehrung in vitro geeignete Zellart experimentell zu suchen. Nur für eine ganz beschränkte Viruszahl sind inzwischen geeignete Gewebekulturarten gefunden worden, in denen sich diese Erreger optimal vermehren. Das Virus der ansteckenden Schweinelähmung lieB sich bisher nur in seinem natürlichen Wirt züchten. Es wurde erstmals nachgewiesen, da. es sich auch außerhalb des Schweines in Gewebekulturen aus Schweinenieren in vitro vermehrt. Diese Tatsache war seither nicht bekannt, entsprechend war es bisher auch nicht möglich, aus Schweinenierenkulturen Impfstoffe gegen die ansteckende Schweinelähmung herzustellen. The basic principle of growing viruses in tissue cultures on glass (Monolavers), e.g. B. in pig kidney cultures and a vaccine production therefrom inventive is not new. As the individual viruses, however, due to their biological different properties for their reproduction very different cell systems need, it is necessary for each individual virus that is responsible for its reproduction in experimentally to search for suitable cell types in vitro. Only for a very limited number of viruses suitable tissue cultures have now been found in which these Optimally multiply pathogens. The infectious pig paralysis virus was eliminated so far only breed in its natural host. It was first proven since. it is also found outside the pig in tissue cultures from pig kidneys in vitro increased. This fact has not been known since, and it has been the case up to now It is not possible to obtain vaccines against infectious pig paralysis from pig kidney cultures to manufacture.

Bei einer lsontinuierlichen Reihenpassierung von Viren in bestimmten Zellkulturen entdeckte man, daß cinzelne Viren in ihrer Virulenz abgeschwächt werden und für ihren natiirlichen Wirt nicht mehr pathogen sind. Auch dieses Verfahren ist nicht neu. Es handelt sich hierbei jedoch nicht um ein allgemeines biologisches Prinzip. Viele Viren schwachen sich nämlich durch Passagen nicht ab. Auch in diesem Verhalten muß jedes einzelne Virus gesondert untersucht werden. In the case of a continuous series passage of viruses in certain In cell cultures it was discovered that individual viruses are weakened in their virulence and are no longer pathogenic for their natural host. This procedure too is not new. However, this is not a general biological one Principle. Many viruses do not weaken themselves through passage. Also in this Behavior must be examined each individual virus separately.

Der Nachweis, da8 das Virus der ansteckenden Schweinelähmung nach zahlreichen Passagen in Gewebekulturen seine Pathogenität für das Schwein ver- hart. ist erstmals durch uns gefuhrt worden. Wir wiesen weiterhin nach, daß bei Verwendung eines geeigneten. antigenstarken Ausgangs-Virusstammes der Erreger nach einer bestinunten Passagezahl zwar Ncine Virulenz für das Schwein verlicrt, seine immunisierende Kraft aber selbst dann noch beibehalt, wenn er mit Formalin inaktiviert wird. Es ist hisher bei keiner Virusart gelungen, aus in Gewebekutturen abgeschwächten Erregern Formalinimpfstoffe herzustellen. da die abgeschwächten Viren durch das Formalin so geschädigt wurden. daß sie auch ihre immunisierenden Eigenschaften verloren. Formalinimpfstoffe aus abgeschwächten Erregern stellen jedoch eine besonders große Sicherheit bei einer Impfung dar, da auch bei einer eventuellen Reaktivierung des inaktivierten Erregers im Wirt das abgeschwächte Virus keine Erkrankung mehr hervorrufen kann.Evidence that the virus reproduces the infectious pig paralysis numerous passages in tissue cultures its pathogenicity for the pig hard. has been guided through us for the first time. We also demonstrated that when used a suitable one. antigen-strong parent virus strain of the pathogen according to a determined Passage number although Ncine loses virulence for the pig, its immunizing power but still retained even when inactivated with formalin. It is up to now Formalin vaccines from pathogens weakened in tissue cutures did not succeed in any type of virus to manufacture. because the weakened viruses were so damaged by the formalin. that they also lost their immunizing properties. Formalin vaccines weakened pathogens, however, represent a particularly high level of security in a Vaccination, because also in the event of a reactivation of the inactivated pathogen the weakened virus can no longer cause disease in the host.

Ausgehend von diesen neuen Entdeckungen, Züchtung des Schweinelähmungsvirus in Schweinenierenl ; ulturen, Abschwächung des Virus durch zahlreiche Kulturpassagen, Möglichkeit. das abgeschwächte Virus mit Formalin zu inaktivieren. Möglichkeit das Virus in der Kultur so weit abzuschwächen, dad es auch ohne Formalininaktivierung gefahrlos als Lel) endimpfstoff verwendet werden kann-wurden nun erstmals gegen die ansteckende Schweinelähmung Impfstoffe aus Gewebekulturen entwickelt. Im Verlaufe der Entwicklungsarbeiten einer Schweinelähmungsvaccine aus Gewebekulturen haben sich daneben auch neue Gesichtspunkte für einzelne Produktionsstufen ergeben, die die neue Kulturvaccine besonders charakterisieren. Based on these new discoveries, breeding of the swine paralysis virus in pork kidney; cultures, weakening of the virus through numerous culture passages, Opportunity. inactivating the attenuated virus with formalin. Possibility that Attenuates the virus in the culture to such an extent that it can also be used without formalin inactivation can be used safely as a Lel) final vaccine-were now for the first time against the infectious pig paralysis developed vaccines from tissue cultures. During of the development work of a pig paralysis vaccine from tissue cultures there are also new aspects for individual production stages that particularly characterize the new culture vaccine.

Die Erfindung der Herstellung von Impfstoffen aus Schweinenierenkulturen gegen die ansteckende Schweinelähmung betrifft deshalb 1. ein Verfahren zur Herstellung einer Formalinvaccine aus einem in Schweinenierenkulturen abgeschwächten, modifizierten Kulturvirus, 2. ein Verfahren zur Herstellung einer Lebendvaccine aus einem in Schweinenierenkulturen so weit abgeschwächten Kulturvirus, daB es die Impflinge nicht mehr krank macht. The invention of making vaccines from pig kidney cultures against infectious pig paralysis therefore 1. a method of manufacture a formalin vaccine from a modified one attenuated in pig kidney cultures Culture virus, 2. A process for the production of a live vaccine from one in pig kidney cultures culture virus weakened to such an extent that it no longer makes the vaccinees sick.

Die Grundprinzipien werden im folgenden kurz beschrieben : 1. Güte, Wirksamkeit und Unschädlichkeit von Virusantigenimpfstoffen sind primär sind dey fur die Vaccineproduktion verwendeten Virusstamm verankert. Im Idealfalle ist das Impfvirus bei einer Formalinvaccine für den Impfling nur schwach pathogen, verfügt nach Inaktivierung über eine hohe antigene und immunisierende Kraft und läßt sich leicht, regelmäßig und mit hohem Ertrag züchten. Das Impfvirus für eine Lebendvaccine muß für den Impfling vollkommen ungefährlich sein, daneben aber noch gut immunisieren. Jederlmpfstoffherstellunggehtdeshalb die Suche nach dem Idealvirus voraus. Dabei ist von entscheidender Bedeutung, ob der Erreger in der Natur in Typen und Varianten auftritt, die immunologisch differieren. The basic principles are briefly described below: 1. Quality, The effectiveness and harmlessness of viral antigen vaccines are primarily dey virus strain used for vaccine production. Ideally, that is Vaccine virus in a formalin vaccine is only slightly pathogenic for the vaccinee after inactivation has a high antigenic and immunizing power and can be easy, regular and high yielding. The vaccine virus for a live vaccine must be completely harmless to the person being vaccinated, but also immunize well. Every vaccine production is therefore preceded by the search for the ideal virus. Included is of crucial importance whether the pathogen in nature in types and variants occurs which differ immunologically.

Das Virus der Poliomvelitis des Schweines ist immunologisch einheitlich. Die Herstellung eines Impfstoffes gegen die ansteckende Schweinelähmung ist deshalb nicht mit dem Tvpen-und Varianteproblem helastet. Für die Herstellung einer Formalinvaccine aus Gewebekulturen blieb iibrig das Suchen nach einem für das Schwein schwach pathogenen, aber antigenstarken Stamm, der sich in der Gewebekultur konstant vermehrt. und für die Herstellung einer Lebendvaccine das Suchen nach einem für das Schwein vollkommen unschädlichen Virusstamm. Der in ahlreichen. kontinuierlichen Gewebekulturpassagen gezücktete Taschen-Kulturstamm Konratice erfullt beide Voraussetzungen in idealer Weise. Mit steigenden Kutturpassagen nahm die Pathogenität des Kulturvirus für das Schwein ab. Von der 90. his 9l. Passage an konnte mit Kulturvirus weder intracerebrat noch durch Verfütterung eine paralytische Erkrankung beim Schwein erzeugt werden. Die immunisierende)) Eigenschaften veränderten sich jedoch durch die Kutturpassagen nicht. Mit dem modirixierten Ku) turvirus fassen sich deshalb sowohl formalinadsorbatals auch Lebendvaccinen herstellen. In niedrigeren Kutturpassagen (80. bis 120.) eignet sich das Virus für eine Totvaccine. in höheren Passagen (al) 300) fii eine Lebendvaccine. The swine poliomvelitis virus is immunologically uniform. The production of a vaccine against the contagious pig paralysis is therefore not with the type and variant problem. For the production of a formalin vaccine from tissue cultures the search for a weakly pathogenic but with a strong antigenic strain that reproduces constantly in tissue culture. and for making a live vaccine looking for one for the pig perfect harmless virus strain. Of the in abundance. continuous tissue culture passages The pocket culture line Konratice ideally fulfills both requirements Way. With increasing Kutturpassagen the pathogenicity of the culture virus for the Pig off. From the 90th to the 9th Passage on could neither intracerebrat with culture virus nor can a paralytic disease be produced in pigs through feeding. The immunizing)) properties, however, changed through the Kutturpassagen not. Both formalin adsorbate and also make live vaccines. Suitable in lower cut passages (80th to 120th) the virus for a dead vaccine. in higher passages (al) 300) for a live vaccine.

2. Bei der Herstellung von Virusformalinimpfstotfen auf der Basis einer Formalininaktivierung kommt der Filtration der Virusausgangssuspensionen eine große Bedeutung zu. Die Auffassungen über die Vorteile und Nachteile des Filtrationsprozesses gehen auseinander. Eine Übereinstimmung besteht lediglich dariiber. daß eine Filtration unerläßlich ist. Sie soll Zellreste, Aggregate, Verklumpungen und andere Stoffe, die eine optimale Formalininaktivierung stören können, aus den Virusernten zurückhalten. Die Filtration erfolgt durch Seitz-, EK-Filter oder Glasfilter verschiedener Porenweite. Durch eine ungeeignete Filtration kann es zu einem Verlust an infektiösem Virus, dann aber auch zu einer Verminderung der Antigenitat der wirksamen Viruspartikelchen kommen. 2. In the manufacture of virus formalin vaccines based on Formalin inactivation is followed by filtration of the virus starting suspensions great importance too. The views on the advantages and disadvantages of the filtration process diverge. There is only agreement about this. that a filtration is essential. It should cell debris, aggregates, clumps and other substances, which can interfere with optimal formalin inactivation, withhold from the virus harvests. Filtration takes place through Seitz, EK filters or glass filters of various pore sizes. Inappropriate filtration can lead to a loss of infectious virus, but then also to a reduction in the antigenicity of the effective virus particles come.

Um diese Nachteile zu vermeiden, wird die Filtration durch eine chloroformbehandlung (10%) der Virusernten ersetzt. Die Chloroformbehandlung hat folgende Vorteile : Sie fallut aus dem Impfstoffgemisch von Virusmoleküien, Aggregaten, Proteinen und Zellresten einen GroBteil der bei einer Formalininaktivierung strittigen Substanzen aus und löst aus den Virusernten weitgehendst Fette und Fettsäuren heraus. Dieser Vorgang unterstützt die nachfolgende Virusinaktivierung. Die Virusinfektiosität und-antigenität leidet durch das Chloroform nicht. Es kommt sogar zu einer Titersteigerung, die wahrscheinlich durch Entfernen infektionshemmender Begleitstoffe oder Auflösung von Virusaggregaten bedingt ist. Das Chloroform tötet in dem benutzten Konzentrationsbereich schließlich noch Bakterien, Pilze und Hefen ab. Da man bei einer routinemäßigen Impfstoffherstellung aus Gewebekulturen gelegentlich mit verunreinigenden Luftkeimen. I'ilzen und Hefen. zu rechnen hat, erhöht eine Chloroformbehandlung die Sicherheit der Sterilität. In order to avoid these disadvantages, the filtration is carried out by a chloroform treatment (10%) of virus crops replaced. Chloroform treatment has the following advantages: It falls out of the vaccine mixture of virus molecules, aggregates, proteins and Cell remains represent a large part of the substances that are controversial in formalin inactivation and removes most of the fats and fatty acids from the virus harvests. This Operation supports the subsequent virus inactivation. The viral infectivity and antigenicity does not suffer from the chloroform. There is even an increase in titer, probably by removing infection-inhibiting accompanying substances or dissolving them is caused by virus aggregates. The chloroform kills in the concentration range used and finally bacteria, fungi and yeasts. Since you are on a routine Tissue culture vaccine production occasionally with airborne contaminants. Molds and yeasts. has to be expected, a chloroform treatment increases safety of sterility.

Auch bei der Herstellung der Lebendkulturvaccine wird die Chloroformbehandlung zu Beginn des Produktionsverfahrens eingebaut. Chloroform treatment is also used in the production of live culture vaccines installed at the beginning of the production process.

Die Chloroformbehandlung der Virusausgangsmaterialien an Stelle der Filtration ist bei Impfstoffen gegen die ansteckende Schweinelähmung neu. The chloroform treatment of the virus raw materials in place of the Filtration is new to vaccines against infectious pig paralysis.

An Stelle von Chloroform kann eine ganze Anzahl von höheren halogenierten Kohlenwasserstoffen benutzt werden. Wirksam sind Trichlorãthylen, Trichloräthylen+Heptan und Perchloräthylen, sowie Perchloräthylen+ Heptan. Instead of chloroform, a number of higher halogenated Hydrocarbons are used. Trichlorethylene, trichlorethylene + heptane are effective and perchlorethylene, as well as perchlorethylene + heptane.

3. Die in der Tiermedizin bei Antigenimpfstoffen übliche Zugabe von Aluminiumhydroxyd wird bei der Kulturvaccine gegen die ansteckende Schweinelähmung beibehalten, ebenso die Inaktivierung des Virus durch den Formaldehyd. 3. The usual addition of antigen vaccines in veterinary medicine In the culture vaccine, aluminum hydroxide is used against infectious pig paralysis as well as the inactivation of the virus by the formaldehyde.

4. Der Kultur-Lebendimpfstoff wird als Trinkwasservaccine oder als Parenteralvaccine (subkutan) hergestellt. Im letzteren Falle enthält die Vaccine Aluminiumhydroxyd (1% aluminiumoxyd), das dem chloroformgereinigten Virusausgangsmaterial zu gleichet) Tei) en zugesetzt wird. 4. The live culture vaccine is used as a drinking water vaccine or as a Parenteral vaccine (subcutaneous) manufactured. In the latter case contains the vaccine aluminum hydroxide (1% aluminum oxide) purified by chloroform Virus starting material is added in equal parts.

Beispiel tiir die Herstettung eines Chtoroform-Formalin-AdsorhatimpFstoffes aus Schweinenierenkulturen gegen die ansteckende Schweinelähmung Chloroformgereinigte Virusernte . . 495.0 I liumbiphosphatpuffer. pH 7.3 .. 247,5 Aluminiumhydroxyd. pa7. 3 (2°/oAl4O) 247 5 1:25 mit Aqua dest. verdünntes Formalin 10. 0 1000. 0 Ais Hnpfvirus dient der Stamm Konratice in der 80. bis 120. Kulturpassage. In diesen Passagen ist die Antigenität des Virus sicher erhatten. Die Schweinenierenkulturen, in Rouxschalen geziichtet. werden beimpft, sobald sie 100°lo dicht sind. Das Impfmedium ist reine Rinderamnionflüssigkeit. Geerntet wird nach totaler Kulturzerstörung. Bis zur Verarbeitung lagern die Virusernten bei-20° C. Example of the production of a chloroform-formalin adsorber substance Purified chloroform from pig kidney cultures against infectious pig paralysis Virus harvest. . 495.0 I lium bisphosphate buffer. pH 7.3 .. 247.5 aluminum hydroxide. pa7. 3 (2 ° / oAl4O) 247 5 1:25 with distilled water. diluted formalin 10. 0 1000. 0 Ais The Konratice strain is used in the 80th to 120th culture passage. In these Passages, the antigenicity of the virus is certain. The pig kidney cultures, drawn in roux bowls. are inoculated as soon as they are 100 ° lo dense. The inoculation medium is pure bovine amniotic fluid. It is harvested after the culture has been totally destroyed. The virus harvests are stored at -20 ° C until processing.

Brauchbar sind Ernten mit Titern über 107'3, bezogen auf 1. 0 ml. Da die Lagerung dem Virus nicht schadet, lassen sich größere Vorräte anlegen.Harvests with titers above 107-3, based on 1.0 ml, can be used. Since storage does not harm the virus, larger stocks can be created.

Die Impfstoffherstellung beginnt mit der Chloroformreinigung. Dem Virusausgangsmaterial setzt man 10*/e Chloroform zu und schiittelt es 60 Minuten bei Zimmertemperatur. Nach 24stündigem Aufenthalt bei , 4° C wird das Gemisch 10 Minuten bei 7000 UpM zentrifugiert. Vaccine manufacturing begins with chloroform purification. To the Virus starting material is added to 10% of chloroform and shaken for 60 minutes at room temperature. After staying at .4 ° C. for 24 hours, the mixture becomes 10 Centrifuged at 7000 rpm for minutes.

Zu dem chloroformgereinigten Virus kommen gleiche Teile 1 : 2 mit Boratpuffer verdünnten Aluminiumhvdroxvds (Pa 7, 3). Nach der Adsorption wird bei 37° C 48 Stunden lang mit einer Formalin- endkonzentration von 1 : 2500 inaktiviert. Der fertige Impfstoff lai bei+4°C. The chloroform-purified virus comes with equal parts 1: 2 Borate buffer diluted aluminum hvdroxvds (Pa 7, 3). After adsorption, will be at 37 ° C for 48 hours with a formalin final concentration of 1: 2500 inactivated. The finished vaccine lay at + 4 ° C.

Bei einer Großproduktion lassen sich die einzelnen Arbeitsgange auf einen Rührautolilav und eine Durchlaufzentrifuge verlagern. In the case of large-scale production, the individual work processes can be opened relocate a stirring autolilav and a continuous centrifuge.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. Process for the manufacture of vaccines for Immunization of pigs against contagious pig paralysis by means of a Virus weakened by numerous passages in the tissue, characterized in that that the culture strain Konratice used, the erhalène \ 'irus harvest with chloroform is treated and made into a vaccine.

2. The method according to claim 1, characterized in that for production a formalin adsorbate vaccine for the culture virus after 80 to 120 culture passages Use comes, with the chloroform-cleaned virus in the usual way aluminum hydroxide and formalin is added for inactivation.

3. The method according to claim 1, characterized in that for production a live vaccine the virus only after at least 300 culture passages of the chloroform treatment and processing is subjected, wherein an inactivation does not take place.

4. The method according to claim 1, characterized in that in place halogenated hydrocarbons higher than chloroform, such as trichlorethylene, perchlorethylene or mixtures thereof with heptane can be used.

Publications considered: German Patent No. 959 048; German regulations No. 1 024 678, 1 044 362.