DE1062891B

DE1062891B - Method of obtaining antibiotics

Info

Publication number: DE1062891B
Application number: DEM37627A
Authority: DE
Inventors: Robert George Denkewalter; James Gillin
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1957-05-21
Filing date: 1958-05-09
Publication date: 1959-08-06

Description

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Die Erfindung betrifft allgemein Verfahren zur Gewinnung von Antibiotica aus Rohlösungen, insbesondere zur Gewinnung und Konzentrierung von Antibiotica aus Gärflüssigkeiten, in denen Antibiotica gebildet sind und außerdem MikrooTganismenmyzel 5 sowie geeignete Nährstoffe enthalten sind.The invention relates generally to methods for Extraction of antibiotics from raw solutions, in particular for the extraction and concentration of Antibiotics from fermentation liquids in which antibiotics are formed and also microorganism mycelium 5 and suitable nutrients are included.

Bisher wurden Antibiotica aus Gärflüssigkeiten, in welchen sie erzeugt waren, durch Lösungsmittelextraktion und mittels Ionenaustauschern isoliert und getrennt; dieser Arbeitstechnik wurden Gärflüssigkeiten, filtriert oder unfiltriert, nach der Ernte unterworfen. Heretofore, antibiotics have been made from fermentation fluids in which they were produced by solvent extraction and isolated and separated by means of ion exchangers; fermentation liquids, filtered or unfiltered, subjected to post-harvest.

Die vorliegende Erfindung richtet sich allgemein auf eine neue Arbeitsweise zum Isolieren von durch Gärungsprozesse erzeugten Antibiotica.The present invention is generally directed to a new way of isolating through Fermentation processes produced antibiotics.

Die Erfindung betrifft ein neues verbessertes Verfahren zum Trennen und Reinigen von. Antibiotica aus der Gärflüssigkeit, in welcher sie gebildet waren, die Isolierung der Antibiotica in hoher Ausbeute und ein für den Betrieb geeignetes Verfahren zur Gewinnung der antibiotischen Aktivität aus Gärflüssigkeiten, in welchen die Antibiotica entwickelt waren.The invention relates to a new improved method for separating and cleaning. Antibiotics from the fermentation liquid in which they were formed, the isolation of the antibiotics in high yield and a process suitable for their production the antibiotic activity from fermentation fluids in which the antibiotics were developed.

Andere Zweckangaben und Vorteile der Erfindung können der folgenden Beschreibung entnommen werden.Other purposes and advantages of the invention can be found in the following description will.

Es wurde gefunden, daß Antibiotica aus den Gärflüssigkeiten, in welchen sie entwickelt waren, im Zuge der Gärung isoliert werden können. Die Isolierung vollzieht sich also· während der Entwicklung des A.ntibioticums. Zu diesem Zweck setzt man ein ausgewähltes Ionenaustauschharz der Gärflüssigkeit zu und läßt die Gärung einige Zeit nach Zusatz des Harzes vor sich gehen.It has been found that antibiotics from the fermentation liquids, in which they were developed can be isolated in the course of fermentation. The isolation thus takes place during the development of the antibiotic. For this purpose one puts a selected one Ion exchange resin to the fermentation liquid and leaves the fermentation some time after the addition of the resin going on.

Es ist überraschend, daß erfindungsgemäß neben der Vereinfachung der Durchführung des Verfahrens sowie Einsparung an Arbeitszeit und Vorrichtungen die Ausbeute an dem Antibioticum erhöht wird, und zwar um etwa 25%, bezogen auf die bei der adsorptiven Behandlung geernteter Gärflüssigkeiten erhaltenen Werte. Die Ausbeuteerhöhung wird dadurch herbeigeführt, daß man die Gärung in Gegenwart eines Ionenaustauschharzes durchführt, welches das Antibioticum nach Maßgabe seiner Bildung adsorbiert, Eine weitere Steigerung der Ausbeute wird dadurch erzielt, daß die Filtration der Gärflüssigkeit vor der Weiterbehandlung unterbleibt. Weiterhin wird die Adsorption durch das Harz dadurch wirksamer, daß die Berührungszeiten von Gärflüssigkeit und Harz während der Gärung verlängert werden. Außerdem wird das Gärgefäß selbst für die Adsorption benutzt; die Gärflüssigkeit braucht also nicht mehr in ein weiteres Gefäß zur Behandlung mit dem Harz übergeführt zu werden.It is surprising that according to the invention, in addition to simplifying the implementation of the process as well as savings in labor and equipment, the yield of the antibiotic is increased, and by about 25%, based on the fermentation liquors obtained in the adsorptive treatment of harvested fermentation liquids Values. The increase in yield is brought about by fermentation in the presence an ion exchange resin, which adsorbs the antibiotic according to its formation, A further increase in the yield is achieved by filtering the fermentation liquid does not take place before further processing. Furthermore, the adsorption by the resin becomes more effective that the contact times of fermentation liquid and resin are extended during fermentation. In addition, the fermentation vessel itself is used for adsorption; so the fermentation liquid does not need more to be transferred to another vessel for treatment with the resin.

Der hohe Wirkungsgrad der Erfindung kann an Verfahren zur Gewinnung
von AntibioticaThe high efficiency of the invention can be applied to methods of extraction
of antibiotics

Anmelder:Applicant:

Merck & Co., Inc.,Merck & Co., Inc.,

Rahway, N. J. (V. St. A.)Rahway, N. J. (V. St. A.)

Vertreter: E. Maemecke, Berlin-Lichterfelde West,
und Dr. W. Kühl, Hamburg 36, Esplanade 36 a,
Patentanwälte .Representative: E. Maemecke, Berlin-Lichterfelde West,
and Dr. W. Kühl, Hamburg 36, Esplanade 36 a,
Patent attorneys.

Beanspruchte Priorität:
V. St. v. Amerika vom 21. Mai 1957Claimed priority:
V. St. v. America May 21, 1957

Robert George Denkewalter und James, Gillin,Robert George Denkewalter and James, Gillin,

Westneid, N. J. (V. St. A.),
sind als Erfinder genannt wordenWestneid, NJ (V. St. A.),
have been named as inventors

einem unbeständigen Antibioticum wie Penicillin ermessen . werden, wenn dieses nach Maßgabe seiner Bildung aus der Lösung adsorptiv entfernt wird, in der es merklich unbeständig ist und chemisch und enzymatisch abgebaut wird.a volatile antibiotic like penicillin. if this is in accordance with his Formation is adsorptively removed from the solution in which it is noticeably unstable and chemically and is enzymatically degraded.

Für die wirksame Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens ist es wesentlich, daß das Ionenaustauschharz in die Gärflüssigkeit in einem solchen Zeitpunkt eingetragen wird, daß' die Flüssigkeit in Gegenwart des Harzes vergoren werden kann. Das Harz kann schon zu Beginn der Gärung oder spätestens etwa 1 Stunde vor der Ernte der Gärflüssigkeit zugesetzt werden. Eine Stunde ist erfahrungsgemäß das Zeitminimum, um die antibiotische Aktivität aus der Gärflüssigkeit möglichst vollständig zu gewinnen. Bei einer bevorzugten Ausführungsfoirm der Erfindung wird das Ionenaustauschharz etwa 48 Stunden nach Beginn der Gärung bis zu 24 Stunden vor Ernte der Gärflüssigkeit zugegeben.It is essential that the ion exchange resin is entered into the fermentation liquid at such a time that 'the liquid in Presence of the resin can be fermented. The resin can already at the beginning of the fermentation or at the latest be added to the fermentation liquid about 1 hour before harvest. Experience has shown that one hour is the minimum time to obtain the antibiotic activity from the fermentation liquid as completely as possible. In a preferred embodiment of the invention, the ion exchange resin is used for about 48 hours After fermentation has started, the fermentation liquid is added up to 24 hours before harvest.

Das Harz wird in die Gärflüssigkeit in beliebiger Konzentration, vorzugsweise'von etwa 1 bis 5 Volumprozent, nach Maßgabe der Konzentration der in der Gärflüssigkeit entwickelten antibiotischen Aktivität eingebracht.The resin is in the fermentation liquid in any concentration, preferably from about 1 to 5 percent by volume, according to the concentration of the antibiotic activity developed in the fermentation liquid brought in.

Wesentlich ist für das erfindungsgemäße Verfahren, daß das Ionenaustauschharz während der Gärung zugesetzt und die Gärung in Gegenwart des Harzes fortgeführt wird. Einige antibiotische Gärungen sind nunIt is essential for the process according to the invention that the ion exchange resin is added during fermentation and fermentation is continued in the presence of the resin. Some antibiotic fermentations are now

909 580/390909 580/390

gegen eine Verunreinigung durch fremde Mikroorganismen empfindlich, die einen vollständigen Verlust der Ausbeute an dem erwünschten Gärprodukt, z. B. Penicillin, verursachen können. In diesem Falle wird das Ionenaustauschharz vor Zusatz in das Gärgefäß, z. B. durch Hitze oder Dampf, sterilisiert. Wenn das Harz wärmeunbeständig ist, empfiehlt sich die Verwendung eines Antisepticums, z. B. wäßrigen Alkohols.sensitive to contamination by foreign microorganisms, causing complete loss the yield of the desired fermentation product, e.g. B. penicillin, can cause. In this case if the ion exchange resin is added to the fermentation vessel, z. B. by heat or steam, sterilized. If the resin is thermally unstable, it is recommended the use of an antiseptic, e.g. B. aqueous alcohol.

Nach der Adsorption kann das Antibioticum aus dem Ionenaustauschharz in üblicher Weise isoliert werden. So werden Gärflüssigkeit und Harz beispielsweise, abgesiebt. Das abgetrennte Harz kann zur Entfernung von Spuren von Myzel oder nichtadsorbierten chemischen Verunreinigungen gewaschen und dann mit einer Lösung eluiert werden, welche sich zum Auswaschen der antibiotischen Aktivität aus dem Harz eignet. Das Eluat kann der Kristallisation, Lösungsmittelextraktion oder einem anderen Verfahren zur Gewinnung des reinen Antibioticums zugeführt werden.After adsorption, the antibiotic can be isolated from the ion exchange resin in a conventional manner will. For example, fermentation liquid and resin are sieved off. The separated resin can be removed of traces of mycelium or unadsorbed chemical impurities are washed and then eluted with a solution which is suitable for Washing out the antibiotic activity from the resin is suitable. The eluate can be subjected to crystallization, Solvent extraction or another process for the recovery of the pure antibiotic supplied will.

Das eluierte Harz kann dann mit einer geeigneten Lösung regeneriert und für die antibiotische Adsorption, gegebenenfalls zusammen mit frischem neuem Harz, in das Gärgefäß wiederaufgegeben werden. Die verbrauchte Gärflüssigkeit kann mit frischem oder regeneriertem Harz nochmals in Berührung gebracht und gemäß obigen Angaben wieder abgetrennt werden.The eluted resin can then be regenerated with a suitable solution and used for antibiotic adsorption, if necessary together with fresh new resin, can be returned to the fermentation vessel. the Used fermentation liquid can be brought into contact again with fresh or regenerated resin and be separated again according to the above information.

Die Erfindung wird nunmehr für Novobiocin als Beispiel eines Antibioticums näher erläutert.The invention will now be explained in more detail for novobiocin as an example of an antibiotic.

Ionenaustauschharze für vorliegendes Verfahren, insbesondere Novobiocin, sind besonders starkbasische polymere, Stickstoff enthaltende Anionenaustauschharze, gewöhnlich solche mit quaternären Ammonium gruppen an einem Styrol'Divinylbenzol-Kern, Die »Dowex«-Harze der Dow Chemical Co., Midland, Mich., z. B. »Dowex 1-X2«, »Dowex 1-X4« und »Dowex 2-X4«, ferner die »Amberlite«-Harze der Rohm & Haas Co., Philadelphia, Pa., z. B. »Amberlite IRA-400«, »Amberlite IRA-401« und »Amberlite XE-98«, weiter die »Duolite«-Harze der Chemical Process Co., Redwood City, Calif., ζ. B. »Duolite A-40«, »Duolite A-IOl« und »Duolite A-102«, sind Vertreter dieser Harzgruppe. Außer diesen Sorten können, andere starkbasische Ionenaustauschharze für die: Adsorption von Novobiocin benutzt werden.Ion exchange resins for the present process, especially novobiocin, are particularly strongly basic polymeric, nitrogen-containing anion exchange resins, usually those with quaternary ammonium groups on a styrene divinylbenzene core, The "Dowex" resins from Dow Chemical Co., Midland, Mich., E.g. B. "Dowex 1-X2", "Dowex 1-X4" and "Dowex 2-X4", also the "Amberlite" resins from Rohm & Haas Co., Philadelphia, Pa., Z. B. “Amberlite IRA-400 "," Amberlite IRA-401 "and" Amberlite XE-98 ”, also the“ Duolite ”resins from Chemical Process Co., Redwood City, Calif., Ζ. B. “Duolite A-40 "," Duolite A-IOl "and" Duolite A-102 "are Representatives of this resin group. In addition to these types, other strong base ion exchange resins can be used for which: adsorption of novobiocin are used.

Andere Antibiotica benötigen gegebenenfalls andere Ionenaustauschharze. Penicillin. G, ein. weiteres saures Antibioticum, kann an für ■ die Novobioeinadsorption geeigneten basischen Anionenaustauschharzen adsorbiert· werden. Für die wirksame Adsorption, basischer Antibiotica wie Streptomycin, Neomycin, Eulicin und Cytovirin wird ein saures Kationenaustauschharz benötigt. Other antibiotics may require different ion exchange resins. Penicillin. G, a. another sour Antibiotic, can be used for ■ Novobioeinadsorption suitable basic anion exchange resins are adsorbed. For effective adsorption, more basic For antibiotics such as streptomycin, neomycin, eulicin, and cytovirin, an acidic cation exchange resin is needed.

Die Teilchengröße des Harzes ist nicht entscheidend; Harze im Bereich von etwa 4 bis 80, vorzugsweise etwa 14 bis 40 Maschen eignen sich besonders gut für die Adsorption.The particle size of the resin is not critical; Resins ranging from about 4 to 80, preferably about 14 to 40 meshes are particularly suitable for adsorption.

Für die Trennung des Harzes, an welches die antibiotische Aktivität der Gärflüssigkeit adsorbiert ist, aus der verbrauchten Flüssigkeit empfiehlt es sich, zunächst die Flüssigkeit mit Wasser oder einem anderen Verdünnungsmittel zu verdünnen. Dieser Schritt ist zwar nicht unbedingt erforderlich, erleichtert aber :die Trennung der 'verbrauchten· Flüssigkeit von dem Harz. Die Abtrennung des Harzes wird durch Vermischen .'der verbrauchten Flüssigkeit, welche Mikroorganismenmyzel, unverbrauchtes Nährmittel und an-■derö feste Verunreinigungen enthält, mit der gleichen jRaummenge Wasser erleichtert.For the separation of the resin on which the antibiotic activity of the fermentation liquid is adsorbed, From the used liquid it is advisable to first wash the liquid with water or another Diluent to be diluted. This step is not strictly necessary, but it makes it easier : the separation of the 'spent liquid from the resin. The resin is separated by mixing .'of the liquid used, which contains microorganism mycelium, Contains unused nutrients and other ■ solid impurities with the same jLarge amount of water facilitated.

Die Flüssigkeit wird dann von dem Harz abgesiebt oder sonstwie getrennt. Ein Sieb, dessen Maschen das Harz zurückhalten und das Myzel durchlaufen lassen (normalerweise etwa 4 bis 80 Maschen), ist für die Trennung wirksam, ohne daß das Sieb mit Myzel oder verbrauchter Gärflüssigkeit verstopft wird. Zur Vereinfachung der Trennung verwendet man ein Schüttelsieb. Man kann sich aber auch jeder anderen Trennungsmethode, z. B. eines Flüssigkeitszyklons, geriffelter Tische oder Sichter, bedienen.The liquid is then screened off or otherwise separated from the resin. A sieve whose meshes the Holding back resin and allowing the mycelium to pass through (usually about 4 to 80 mesh) is for that Effective separation without clogging the sieve with mycelium or spent fermentation liquid. For simplification A vibrating sieve is used for separation. But you can also use any other method of separation, z. B. a liquid cyclone, corrugated tables or sifter, operate.

Zum Eluieren der adsorbierten antibiotischen Aktivität aus dem Ionenaustauschharz wird eine wäßrige elektrolythaltige Lösung benutzt. Für Novobiocin sind wäßrige saure Lösungen, welche ein. organisches Lösungsmittel für Novobiocin enthalten, z. B. wäßrige Lösungen von Salzsäure oder Essigsäure im Gemisch mit einem geeigneten, mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel wie Alkohol oder Keton, zu empfehlen. Die Konzentration der sauren. Verbindung in der Elutionslösung beträgt vorzugsweise etwa 1 bis 10 Gewichtsteile je 100 Volumteile Lösung. Die organische Phase kann sich zu etwa 70 bis 98% aus dem organischen Lösungsmittel und etwa 30 bis 2 °/o aus Wasser zusammensetzen.In order to elute the adsorbed antibiotic activity from the ion exchange resin, an aqueous one is used electrolyte solution used. For Novobiocin, aqueous acidic solutions are what a. organic Contain solvents for novobiocin, e.g. B. aqueous solutions of hydrochloric acid or acetic acid in a mixture with a suitable, water-miscible organic solvent such as alcohol or ketone, to recommend. The concentration of the acidic. Compound in the eluting solution is preferably about 1 to 10 parts by weight per 100 parts by volume of solution. The organic phase can be about 70 to 98% off the organic solvent and about 30 to 2% water.

Für andere Antibiotica als Novobiocin werden geeignete Elutionsjösungen benutzt, um die antibiotische Aktivität aus dem Ionenaustauschharz auszuwaschen. Beispielsweise verwendet man eine wäßrige Ammoniaklösung zum Eluieren von Neomycin und Cytovirin, Methanolische Salzsäure ist zum Eluieren von Eulicin und Streptomycin brauchbar.For antibiotics other than novobiocin, suitable elution solutions are used to reduce the antibiotic Leach activity from the ion exchange resin. For example, an aqueous ammonia solution is used to elute neomycin and cytovirin, methanolic hydrochloric acid is used to elute Eulicin and streptomycin are useful.

Die Elution kann in einer Kolonne oder absatzweise vor sich gehen. Bevorzugt wird der Betrieb in einer Kolonne, weil die benötigten Raummengen kleiner sind und das Eluat sich verhältnismäßig leicht periodisch analysieren sowie in Fraktionen aufteilen läßt.Elution can take place in a column or batchwise. Operation in a column because the space required is smaller and the eluate is relatively easy can be analyzed periodically and divided into fractions.

Das Eluat kann zur weiteren Reinigung weiterbehandelt werden, z. B., wenn es Novobiocin enthält, durch eine chromatographische Kolonne, etwa aus Aluminiumoxyd, geleitet werden, welches mit verdünnter Schwefelsäure und Wasser gewaschen war; das gereinigte und entfärbte Eluat wird dann mit einer sauren Lösung z. B. aus Methanol—Essigsäure zwecks Kristallisation der Novobiocinsäure behandelt. Die Kristallmasse wird filtriert und z.B. mit Wasser¹— Methanol gewaschen, filtriert und getrocknet. Gegebenenfalls werden Novobiocinsalze aus der Novobiocinsäure durch Neutralisation hergestellt.The eluate can be treated further for further purification, e.g. B., if it contains novobiocin, passed through a chromatographic column, for example made of aluminum oxide, which was washed with dilute sulfuric acid and water; the purified and decolorized eluate is then treated with an acidic solution z. B. treated from methanol-acetic acid for the purpose of crystallization of novobiocinic acid. The crystal mass is filtered and, for example, ^{washed with water 1} -methanol, filtered and dried. If necessary, novobiocin salts are produced from novobiocin acid by neutralization.

Das erfindungsgemäße Verfahren wird an den folgenden Beispielen erläutert, an deren Werte die Erfindung nicht gebunden ist. Beispielsweise können andere Antibiotica als Novobiocin, z.B. Streptomycin, Neomycin, Eulicin, Cytovirin, Penicillin, aus der Gärflüssigkeit während der Gärung im Sinne der Erfindung isoliert werden.The process according to the invention is illustrated by the following examples, the values of which illustrate the invention is not bound. For example, antibiotics other than novobiocin, e.g. streptomycin, Neomycin, eulicin, cytovirin, penicillin, from the fermentation liquid during fermentation within the meaning of the invention to be isolated.

example 1

In 29 ecm einer Novobiocin enthaltenden Gärflüssigkeit wird 1 ecm »Dowex-1-X2«-Harz (20 bis 40 Maschen) in der Chloridphase eingetragen; das Harz war zuvor mit wasserfreiem Äthanol sterilisiert. Die Gärung dauert insgesamt 168 Stunden, Das Harz wird von der verbrauchten Flüssigkeit durch ein Sieb (28 Maschen) getrennt und in eine Kolonne (1'·15αη) eingebracht, mit Methanol gewaschen und mit einer 16°/oigen wäßrigen Salzsäure in Methanol-2 n-Lösung in einer Menge von 0,2 ecm je Minute eluiert. Nach einer biologischen Prüfung enthält das EluatIn 29 ecm of a fermentation liquid containing novobiocin 1 ecm of "Dowex-1-X2" resin (20 to 40 mesh) is added to the chloride phase; the Resin was previously sterilized with anhydrous ethanol. The fermentation takes a total of 168 hours, the resin is separated from the used liquid through a sieve (28 mesh) and into a column (1'15αη) introduced, washed with methanol and with a 16% aqueous hydrochloric acid in methanol-2N solution eluted at an amount of 0.2 ecm per minute. After a biological test, the eluate contains

20000 Einheiten Novobiocinaktivität. Die Prüfung weist eine Ausbeute im Eluat von 75 %, bezogen auf einen Parallelversuch in Abwesenheit von Harz, aus.20,000 units of novobiocin activity. The exam shows a yield in the eluate of 75%, based on a parallel experiment in the absence of resin.

Die folgende Tabelle faßt die Ergebnisse von Beispiel 1 zu verschiedenen Zeitpunkten des Harzzusatzes zusammen.The following table summarizes the results of Example 1 together at different times when the resin is added.

Harzzusatz
(Stunden nach
Beimpfen)Resin addition
(Hours after
Inoculation) Ernte
(Stunden nach
Beimpfen)harvest
(Hours after
Inoculation) Gärflüssigkeit
(ecm)Fermentation liquid
(ecm) Harz
(ecm)resin
(ecm) Ausbeute im Eluat
(°/o)Yield in the eluate
(° / o) 48
144
15648
144
156 180
168
168180
168
168 3,000
378,500
2,7213,000
378,500
2.721 35+1
5,000+3
35+³ 35 + 1
5,000 + 3
35+ ³ 90+2
90+4
85+⁴ 90 + 2
90 + 4
85+ ⁴

+*' Mit Dampf sterilisiertes Harz.+ * 'Resin sterilized with steam.

+² Bezogen auf einen Parallelversuch in Abwesenheit von Harz.+ ² Based on a parallel test in the absence of resin.

+³ Das Harz wurde nicht sterilisiert.+ ³ The resin was not sterilized.

+⁴ Bezogen auf die Aktivität in der Flüssigkeit im Zeitpunkt des Harzzusatzes,+ ⁴ Based on the activity in the liquid at the time the resin is added,

Example 2

In 3000 ecm einer Neomycin enthaltenden Gärflüssigkeit werden 180 ecm »Duolite^C-25«-Harz in ao der Natriumphase eingetragen; das Harz war zuvor mit einer Lösung aus 70% Äthylalkohol und 30% Wasser sterilisiert worden. Dieses Harz ist ein hochporöses sulfoniertes Polystyrol-Divinylbenzol-Kationenaustauschharz der Chemical Process Company, Redwood City, Calif. Das Harz wird 48 Stunden nach dem Beimpfen eingetragen und die Flüssigkeit 163 Stunden nach dem Beimpfen geerntet. Das Harz wird von der verbrauchten Flüssigkeit durch ein Sieb (11 Maschen) getrennt, mit Wasser gewaschen, in eine Kolonne von 2,5 cm eingebracht und mit aufwärtsströmendem Wasser zur Entfernung der restlichen Feststoffe aus dem Gärungsprozeß gewaschen. Das Harz wird dann mit einer abwärts strömenden 1 n-Ammoniaklösung in einer Menge von 3 ecm je Minute eluiert. Die durch den biologischen Test bestimmte Aktivität des Eluates entspricht einer Ausbeute von 90%, bezogen auf einen Parallel versuch in Abwesenheit von Harz.In 3000 ecm of a fermentation liquid containing neomycin 180 ecm of "Duolite ^ C-25" resin are added to the sodium phase; the resin was before sterilized with a solution of 70% ethyl alcohol and 30% water. This resin is a highly porous sulfonated polystyrene-divinylbenzene cation exchange resin Chemical Process Company, Redwood City, Calif. The resin is after 48 hours entered after inoculation and the liquid was harvested 163 hours after inoculation. The resin is separated from the consumed liquid by a sieve (11 mesh), washed with water, in introduced a column of 2.5 cm and with upward flowing water to remove the remaining Solids washed out of the fermentation process. The resin is then poured down with a downward flow 1 N ammonia solution eluted in an amount of 3 ecm per minute. The one determined by the biological test Activity of the eluate corresponds to a yield of 90%, based on a parallel experiment in Absence of resin.

Neomycin kann auch an »Amberlite-IRC-50«-Harz der Rohm & Haas Co., Philadelphia, Pa., adsorbiert werden; dies ist ein saures Polystyrol-Divinylbenzol-Kationenaustauschharz, dessen Ionenaustauschfähigkeit im wesentlichen auf Carbonsäuregruppen zurückgeht. Außerdem können andere Harze, welche saure Kationenaustauschharze sind, benutzt werden.Neomycin can also be adsorbed on "Amberlite IRC-50" resin from Rohm & Haas Co., Philadelphia, Pa will; this is an acidic polystyrene divinylbenzene cation exchange resin, whose ion exchange capacity is essentially due to carboxylic acid groups. In addition, other resins which are acidic cation exchange resins can be used.

Claims

Patent claims:

1. Process for the extraction of antibiotics from fermentation liquids in which antibiotics-producing Microorganisms are fermented, characterized in that one is in the fermentation liquid during the fermentation process an ion exchange resin that adsorbs the antibiotic is introduced, the fermentation can proceed in the presence of the resin, the used fermentation liquid and separates the mycelium from the ion exchange resin and the adsorbed antibiotic from the ion exchange resin eluted.

2. The method according to claim 1, characterized in that the ion exchange resin in the Fermentation liquid enters the fermentation liquid from the beginning of fermentation to about 1 hour before harvesting.

3. The method according to claim 1, characterized in that the ion exchange resin in the Fermentation liquid no earlier than 48 hours after the start of fermentation and no later than 24 hours before Harvest of fermentation liquid enters.

4. The method according to claim 1 to 3, characterized in that the ion exchange resin is a basic, highly porous ammonium exchange resin or an acidic, highly porous cation exchange resin.

5. The method according to claim 1 to 4, characterized in that the ion exchange resin with the adsorbed antibiotic from the exhausted fermentation liquid and from the mycelium a sieve of such mesh size that the ion exchange resin remains on the sieve and the exhausted fermentation liquid drains through the sieve.

6. The method according to claim 1 to 5, characterized in that the sieve during the separation of the ion exchange resin is shaken from the exhausted fermentation liquid and the mycelium will.