CZ422598A3 - Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace - Google Patents
Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace Download PDFInfo
- Publication number
- CZ422598A3 CZ422598A3 CZ984225A CZ422598A CZ422598A3 CZ 422598 A3 CZ422598 A3 CZ 422598A3 CZ 984225 A CZ984225 A CZ 984225A CZ 422598 A CZ422598 A CZ 422598A CZ 422598 A3 CZ422598 A3 CZ 422598A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- protein
- lys
- ala
- glu
- thr
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/635—Externally inducible repressor mediated regulation of gene expression, e.g. tetR inducible by tetracyline
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Virology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pulmonology (AREA)
Description
(54) Název přihlášky vynálezu:
Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace (57, Anotace:
Protein, který inhibuje buněčný protein p27, a tím ruší inhibici buněčné proliferace zásobovanou p27. Mutanty tohoto proteinu s dominantně interferujícím charakterem, odpovídající nukleové kyseliny, a také použití proteinu a nukleové kyseliny pro profylaxi a léčení nemocí. Konstrukt nukleové kyseliny obsahující uvedenou nukleovou kyselinu, vhodný pro genovou terapii nemocí.
• ·
Rlbur-V
K.
176 668/KB
Protein inhibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace
Oblast techniky
Předkládaná přihláška se týká proteinu, který inhibuje buněčný protein p27, a tím ruší inhibici buněčné proliferace způsobenou p27, jeho mutanty s částečně dominantně interferujícím charakterem, příslušné nukleové kyseliny kódující takové proteiny a také použití proteinu a nukleové kyseliny k profylaxi a léčení nemocí.
Dosavadní stav techniky
A) Úvod
Buněčný cyklus eukaryotické buňky je řízen kinázami závislými na cyklinu („cyclin-dependent kinase = cdk), což jsou kinázy, které pro svou aktivitu potřebují jednu regulační podjednotku (cyklin). Různé procesy v buněčném cyklu (gako např. replikace, vstup do mitózy) jsou řízeny různými druhy cdk (Morgan, Nátuře 374, 1312, 1995). Přitom aktivita kináz závislých na cyklinu je vysoce regulovaná. Existují vnitřní řídicí mechanismy, které zabraňují např. vstupu do mitózy, dokud není DNA úplně replikována. Řízení vnějšími faktory, jako jsou např. růstové faktory, existuje výlučně na začátku replikace DNA, kdy je replikace iniciována aktivním komplexem „cyklin E/cdk2.
Kromě množství cyklinu na kinázové podjednotce je aktivita kináz závislých na cyklinu regulována ještě malým ínhibitorovým proteinem (Sherr a Roberts, Gene Dev. 9, 1149,
1995). Pro komplex „cyklin E/cdk2 se rozeznávají dva «
Β Β * ♦ · 1 « « « »Β Β · Β • Β Β ΒΒΒΒ « · · · I • · «4 · 1
V buňkách,
| V | mne ha 11ds kýoh | nádore; |
| rusn | načneme expr: | imovany |
| kons-11 | utivně (Sherr, | Science |
| reoulát | orv isou často mutovány | |
| et al., | Cell 8 5, 73 3, | 1936). |
| tax uapr. v mnonyen naoorecn | ||
| gerču; cy | klinu Dl. Z toho | v/^hc^. |
| cvkli nu | bv mohly být | c í lov |
| * X -*· | ||
| novýcn, | selektivně úči | nných, |
| látek. |
;značují podle své velikosti p2i a p27, rámují vysoké množství p27, je kináza „cvklin E/cdk2 normálně inaktivní a tím je vstup do fáze replikace DNA blokován.
:h jsou pozitivní regulátory nebo alespoň exprmcvány 2 7-1, 1572, 1996) , negativní nebe exprimovány s1Existuje specifické se ziišfuje nadměrná exprese e kinázy závislé na .i při hledání účinných, antiproliterativně působících
Gen pro protein p27 je znám již několik let (K. Poivak a je přístupný v databázi í naděje, ze a;
| c L 31 , , | Cell | 73, |
| Ge nočiiik | (myš í | P27 |
| K 10906/ | . : p | řes |
| ΓίΊ' ί Γ'. α C S | v oe: | cu |
preuvapivej intenzivní hledat t27 v lidských nebyly dosud nalezeny nádorech. To je tím ze myši, u Kterycn je gen p27 ma.K
j. v e v --i 11 vvkuzu i enotyp s recetnou dysp_azii a zvýšeným výskytem nádorů (ero et al . , Cell 85, 73 3, 1996, Kiyokawa et al . , Cell, S5, 72 1, 1995) . Místo toho je zřejmě funkce p27 v podstatě regulována postranskripčně.
Protein p27 je proteolyticky odbouráván, což se děje také v normálních buňkách na začátku replikace. Schopnost proteolyticky odbourávat p27 je v mnohých nádorech zvýšena ve srovnání s normálními buňkami, a toto zvýšení vykazuje přímou korelaci s nepříznivou prognózou (Loda et al. , Nátuře Med. 3, 231, 1997).
Ale musí existovat ještě další mechanismy, které mohou vést k inaktivaci p27. Např. po transformaci buněk' onkogonem • « * · «» · · ·♦ • ·« ·
| myc je p27 | nejdříve funkčně |
| na komplex | „cykl1n/cdk), ale |
| Posud n n ' | j a sně , proč např . |
| exprimováno | vysoké množství |
| naoo r v ve j. π | 1 i rychle r0stou. |
| p27 v těcbt | 0 buňkách jsou dos; |
| Proč. Nati. | Acad. Sci. USA 34, |
v jedné řadě r.ádorů prsu je iroteinu p27, a přesto tyto Mechanismy, které inaktivují neznámé ÍFredersdorf ez a:..
V odborném světě je tudíž velký zájem, aby byly objeveny mechanismy, popřípadě látky, které jsou zodpovědné za inaktivaci p27 v nádorech. Pomocí předkládaného vynálezu je tento problém řešen. Protein plS3, popsaný v přihlášce předkládaného vynálezu, může vázat p27, inhibovat funkci p27 a vést k proteolýze p27 v cytoplazmě.
Podstata vvnálezu
B) Obecný popis vynálezu
1’ Protein pló3 a příslušná sekvence nukleová kyseliny
Předmětem vynálezu je nový protein zvaný p!53, k váže p27, a tím inhibuje jeho funkci a vede k proteo v cytcplazme. Sekvence aminokyselin tohoto proteinu s f a n o v e n z Protein pí 63 se specificky váže na p27, aniž by v a z a x na j i ne ρ r o t. e i u y j ano jsou 11a o i . /n v c, max, lcj. prc t hy mo 3 in - ci.
Předmětem vynálezu je dále sekvence nukleové kysel která kóduje protein pl63. Tato sekvence je stanovena myší protein p!63 a prostřednictvím srovnání sekvencí pro lidský protein pl63.
c o
1, pro l ak^ • * ·
I · · · · · • · ♦ • ♦ · « « · b « V · ·
21 Dor.ir.án:ní negativní analogy pl63
Předmětem předkládaného vynálezu jsou také nukleotidové sekvence, které kódují částečný peptid z p!63 a/nebo analogu pló3, což je negativně působící protein, tj . protein, který inhibuje vazbu přirozeného proteinu pl63 na protein p27, narušilo vazbu orotemu p27 na
Dodstatr.·;
a. trn DoaminenoG mniDici komcmexu také použiti servence nuk^í aniž by to bylo „cyklin E/cdk2, „cyklin E/cdk2.
Předmětem vvnálezu kyseliny, která kóduje dominantní negativní mutantní pI33 nebo jeho částečné sekvence, přičemž použití obsahuje zavedení této sekvence nukleové kyseliny do cílové buňky a inhibici vazby mezi vlastním proteinem pl63 této buňky a vlastním proteinem p27 této buňky, takže proliferace uéto cílové buňky je ínhibována volným vlastním proteinem p27.
| funkci plř3 | . Patří | sem prot | e my | nebo pept ií |
| na vazebné | místo | proteinu | p!6 3 | pro prot |
| vazebné mís | to prot | einu p!63 | pro | ran (Lceb < |
3) Peptidy inhibující pl63
Předmětem předkládaného vynálezu jsou také nukleotidové sskver.ce, které kódují proteiny nebo peptidy, které inhibuji idy, ktere se vaz· i p2 7 nebo na al . , Mo] . Ce 11.
3iol . 4, 2C9-222, 1 993) , a tím inhibují vnitřní buněčný protein pl63 .
K takovým proteinům patří peptidy, které odpovídají vazebnému místu proteinu p27 nebo proteinu ran pro protein p!63. K těmto proteinům patří také protilátky nebo fragmenty protilátek, jako např. F(ab)2, Fv a s.c.Fv se specifitou proti proteinu p!63, zvláště pak proti jeho vazebnému místu pro protein p27.
Předmětem vynálezu je dále použití sekvence nukleové kyseliny kódující takové inhibiční proteiny nebo peptidy, • 9 · · * * * * * « * t * · · * * • · * · * pr;ce;‘2 ocsanuje zaveíem těchto sekvenci nuK.eove kyseliny do cílové buňky a inhibici vazby mezi vlastním buněčným proteinem p!63 a vlastním buněčným proteinem p27 neoo ústním buněčným proteinem ran, takže proliferaci cílové buňrO, .nhibovana voiuvm buněčným Droteinem o;
i; Použití p’i63 oro stimulaci buněčného dělení
Předmětem předkládaného vynálezu je dále použití nukleotidové sekvence kóduiící protein ρ·163 nebo samotného proteinu p!63 pro inhibici vnitřního buněčného proteinu p27, a cím ke stimulaci buněčného dělení cílové buňky.
5) Inhibice transkripce a translace pl63
Předmětem předkládaného vynálezu je také sekvencí transkrioci a/nebo nukleové kyseliny nu.cleové kyseliny, která i vlastní buněčné i nnibuj e sekvence kódující p!63, a tím vede k výskytu volného proteinu p27, což způsobuje inhibici proliferace cílové buňky. Takové sekvence nukleové kyseliny podle cředkládaného vynálezu může představovat např. antisense triplex DNA (trojsroubovícová DNA s orientací proti smyslu transkripce), antisense RNA (RNA. s orientací proti smyslu transkripce) a/nebo ribozymy/.
testovací systémy k vyhledávání inhibitorů pl63
Předmětem vynálezu je dál
OOUZitl SČKVĚÍÍC včelíny kódující protein pi63 nebo jeho částečné sekvence oro tes;
;y sterny, 'e kterých so vyhledávací inhibitory vazby mezi proteinem pl.63 a proteinem p27 nebo proteinem ran a také použití inhibitorů proteinu pl63, nalezených v těchto systémech, pro inhibici proliferace cílové buňky.
• · · v · · • » · · • · · • v « · ·
7) Detekce pl63 pro účely diagnostiky onemocnění
Předmětem vynálezu je dále použití konstruktů nukleové kyseliny kódujících protein p!63 nebo částečné sekvence proteinu plS3 nebo p< proteinových sekvenc:
. í sekvencí nukleové k’· icrera ςο na /sei my
C / L.
nukleové kyseleny pro protein pl53, nebo proteinů, které se váží na protein pl53, k detekci nukleové kyseliny kódující plil nebo k detekci proteinu p!63 v buňce nebo tkáni nebo tělesné tekutině pro účely stanovení proiiferaČníhc stavu buňky nebo tkáně nebo pro diagnózu stavu onemocnění.
Příklady provedeni vynálezu
C) Podrobnější popis vynálezu formou příkladů
1) Charakterizace proteinu pl63 a sekvence nukleové kyseliny kódující protein pl63
Protein p!63 byl objeven pomocí metody dvou hybridů („ Tvo-hybridtechnology, Fields a Song, Náturo 340, 245,
1933) jako partnerský protein proteinu p27 . Celá kódující ctecim ramen faktoru GAL 4.
Mate hrna k e r T wc sekvence myšího proteinu p27 byla klonována pomocí kvasinkového vektoru pG3T10 (Clontech) i? DNA - vči 7. dorr.enou LzTcinsKylc-Ční Ne
Kvasinkový kmen HÍ7c {Clontech Heidelberg
Hybrid, K 1605-1) byl transformován tímto vektorem, kolonie auxocrožní na tryptofan byly izolovány a exprese správného iúzního proteinu byla prokázána westernovým přenosem pomocí specifických protilátek proti C-AL 4 a p27.
Tento kmen byl· ve druhé transformaci transformován cDNA-kmhovnou z myšího embrya označenou VP16 (Vojtek et al., Cell 74, 205, 1993). 400 kolonií, které byly auxotrofni na histidm v přítomnosti 15nM aminotriazolu, bylo nadále » * • · »»*·** «· «· anriiyzovar.o .
K O Ci C \r Cl i V 27 LI Z partneři p2 7 těchto klonů bylo sekvenccván klony byly úpí V j edné cyklmy typu D, což jsou známí int
Pomocí Southernova přenosu bylo prokázrezistentních klonů kódovalo D-cykliny. iů (číslo 163 í kódová y shodný protein, s o k v e n o o v á n y .
knihovně λΖΑΡ-cDKA připravené }alb/c-3T3 bylo identifikováno několik klonů, ktt k p!63. Sekvenční analýza ukázala jeden ur.oiogni 'A
Evo a
čtecí rámec, který byl využit také v chiméře VP1-5 z ·knihovny. Oba původní klony kódovaly aminokyseliny 121 252 tohoto čtecího rámce. Kionv pi63 charakterizovány pomocí reportérového β-galaktosidázu v kvasinkách.
Jak ukazuje tab. 1, kódovaný protein v kvasinkách reagoval specificky s p27, avšak nikoliv s jinými proteiny jako např. myc, max, bel-6 nebo prothymosin-a. Tab. 1 je také první vymezení domény p27, ve které dochází pI63. Tato data ukazují na to, že pl63 sc vážná stejnou doménu p27 jako kinázy závislé na cyklinu (Russo et al., Nátuře 362, 325, 1995). To ukazuje, že pi63 a kinázy ia p 2 7 . Dome na p 15 3 ,
D'/U/ cenu mo uk ;a cyklinu kompetují o vazbu cterá vstupuje do interakce s iminokyselinami 121 až 252.
póž j- v y~ / j- 'ri 27 b V V 3 Σ Ó KLI Z d2 7 .
VV!
Κ V Li 31Π KO ·/té OO 3 v S byl exprimovaný rekombinantní pl63 (exprimovaný jako fúzní protein s glutaf hiontrar.sf erázou GST) navázán na kolonu a pak pomocí afinitní chromatografie s proteinem p27 označeným ''S na této koloně vyčištěn. Použitím fúzníhc proteinu pl63 s glutathiontransferázou (GST) bylo možné používat pro tyto experimenty jednotnou matrix {tzv.
• · * ' · · t · · · » * · · :o£
Proč. Nat aca<
přestavc λ ;
9:
tv experimenty byl čtecí ranec z kvasinkového klonu do vektoru pGEX (Pharmacia, Freiburg :nrmericky protein noci ΐορτ kontroiou promoto
3tejnym zpusocer také dialvzována,
DGEX-27, č. 27-4301-01), který kóduj' s glutatbion-S-transferázou (GST TAC i ndu kováte i né ho IPTG v E. coli (Smith a Johnson, Gene 67, 31, 1933}. Chimérický protein z indukovaných kultur
E. coli byl přečištěn pomocí afinitni chromatografie na glutafhion-agaróze (Smith a Johnson, 1933) a pak dialyzovár. proti rozteku: lOOmM Tris-KCl, pH 7,5, lOOmM KCl, 2 0mM EDTA, 10% glycerol, 0,lmM PMSF. Pro kontrolu byl přečištěna glutathion-S-transferáza, čisté proteiny pak byly uloženy při -30 °C.
Následně bylo 10 pg obou proteinů inkubováno s 10 pg 3SA a 20 mg nasáklé C-ST-agarózy po 2 hodiny při 4 °C, poté byla agaróza odstředěna a dvakrát promyta v diaiyzačním pufru. Jako kontrola pro vazbu proteinu byl alikvotní díl· agarózy přímo ve zkušebním pufru povařen a navázané proteiny byly prokázány SDS-gelovou elektroforézou. Protein p27 označeny ' 'S-methionmem byl prioraven m vitro translaci (nedle nokynů výrobce: Proměna Mannheim, „TNT coupied / ·' ,4610) mkuboval se azanou agarózou 2 hodiny při 43C v celkovém objemu 2 00 μΐ v diaiyzačním pufru s 0,li NP-40, Agaróza rap byla čtyřikrát promyta diaiyzačním pufrem s 0,1% NP-40 a nakonec povařena ve zkušebním pufru s SOS. Navázané proteiny pak byly prokázány SDS gelovou elektroforézou a fluorografií.
V tab. 2 jsou uvedeny výsledky těchto pokusu. Ty dokládají, že rekombinantní p27, syntetizovaný in vitro a označený 3 5S, se váže na kolonu, naplněnou chimérickým fúzním proteinem GST-pl63, ale neváže se na kolonu, která je * · · « « · t · · « · · , · · · množstvím samotné GS. Tab. 2 také zeno extra.· váže neúčinně na GČT extraktu je totiž p27 vázán na komple;
závislé na cyklinu. Krátké 7. takových komplexů a dovolí působení teplem uvolní p27 pak vazbu na ol63. To dokládá,
N<
:avi na cyklinu komnatu’
T1 r7
Nukleotidová sekvence podle předkládaného νγη,ί která kóduje myší protein plS3, je uvedena v tab. 3
K této istuie nomcioc v dataoazi, n 2 ÍNup2) kvasinky. Nup2 j rr λ-Q tý nembrány, který se podílí na vytváření jaderného proteinu i na transportu proteinů z jádra a do jádra. Nup2 se i kvasinkách podílí asi především na exportu.
Více funkčních domén je konzervativních, ačkoliv ;sikové homoiogie není nijak vysoká (viz tab. 4) . Tak např. je mezi ran-vazebným proteinem (R3?-l), Nu?-2 a pl63 (viz rab. 5) konzervováno vazebné místo pro regulátorový protein protein), který remiki j aaerný stejně tak krátká jolyklcnáln
Aby se prokázalo, že v případě p!63 se bezpochyby jedná uk’! eopcrin, bylo připraveno a afmitně přečištěno antisérum proti proteinu (histidin-pl63, 121 az 252). Toto sérum zcela nesporně ozeznávající nukieoporin, bylo v i mu r.o f luorescenční m testu iditclné jako typické zabarvení jaderných pórů (obarvené tečky na povrchu a v periferii jádra).
K prokázání mtracelul ární ho spojení mezi pi63 nebo ůp2 a p27 byly oba proteiny přechodně exprimovány v buňkách eLa pomocí CMV-vektoru, po 48 hodinách byly buňky lyžovány vyšetřovány na možné interakce obou proteinů pomocí • φ φ · imunocrecipitace a westernového přenosu (Peukert et al. , EMBO J. , 16, 5572, 1997) . Asociace p27 a Nup2 byla prokázána pomocí polyklonálních protilátek proti Nup2 a proti myšímu p27. Protein p27 precipitoval dobře jen tehdy, byl-li exprimován pi63 (viz tab. 7) . To je průkaz toho, že Nup2 a p2 7 se mohou navzájem asociovat v HeLa buňkách in vivo.
srovnáváni sekvenci •ohledávání databáze lidských :lonů EST vedlo k identifikaci sekvence idského proteinu p!63. Vazebná doména pro ran pvi·; sekvenci AA1S1285 v nožicích 175 až nukleové kyseliny bx az r i 5 , vazeona nesněna sekvence R52312 a další fragment z pI63 je v sekvenci THC199124 v pozici 348 až 435.
Aby se podrobněji definovalo, které aminokyseliny z p2 7 se účastní interakce s Nup2-pl63, byl v kvasinkách vyhledán mutant, který již nereagoval s pl53. Pro tento účel se cDNA kódující p27 podrobila PCR-reakei, která záměrně indukovala ohyby (podmínky pro PCR byly dle „PCR Technology, Principles and
S L C C '< Γ. Ο Ω P171 :or DMA
Amp11ficac ions, výsledné klony, obsahující náhodné chyby, byly testovány na interakci s Nup2 a pro kontrolu také s cyklínem Di. Pokud se nodmínky PCR lišil v cd publikace, pak byly následující: 40 vk
T?!''' j . τ ΠΊ (Μ ,··“ί q ! 1_ Tj T/rnrr - JýQ 1 Γ*Λ T7 *'/ C-ΣΞ^Ό cl 0 1 ''
Získané fragmenty cDNA byly prostřednictvím vektoru byl linearizován SamHT a EcoRI a vyčištěn, . C i. V l.J
| ko transformovány | do ke | nasinkov |
| Transf ormované | kolonie | byly |
| s chybějícím Leu | a Trp | (-Leu-T: |
na me a i u jednotlivých kolonií, které se vysely opět na selektivní médium (-heu-HisTrp) selektivním médiu, β-galaktosidázový test
S klony, které nerostly na tomto byl proveden ještě další coby druhý test interakce. Negativní «· · klony byly identifikovány a z nich byl izolován piazmid pG3T10-p27. Takto získané plazmidy byly nejprve retransformovány pomocí kvasinkového expresního plazmidu, který exprimoval p!63/Nup2 jako chiméru s transakrivační doménou .v oro kot rolu retrans formovány clazmidem.
který exprimoval cyklin Dl jako chiméru s transakr. ivační doménou. Získaly se tak tři klony, které selektivně již nadále nereagovaly s Nup2, ale zato reagovaly s cyklir.em Dl, Tyto plazmidy byly společně s kontrolami sekvencovány.
Souhrnný přehled získaných fenotyoů je uveden v tab. 13. V tomto pokuse se projevuje interakce jako růst histidinu (-Trp-Leu-His, selektivní), (-Trp-Leu, neselektivní), ukazuje, že oba proteiny jsou v kvasinkách exprimovány. Z celkového počtu 1000 klonů byly nalezeny 3, které specificky nereagují s pl63-Mup2, zatímco reagují s cykimem Dl·. Sekvence jsou uvedeny v tab. 14. Všechny tři klony, na rozdíl od řady v nepřítomnosti zatímco kontrola
| kontrcln | ícn klonů, | , nesou stejnou mutaci | v amine ky se11 ně |
| argini nu | 90 (mutován na glycin) . Sekvence | také ukazuj ί , že | |
| klony vz | nikl’/ nezá | visle, neboť nesou další, | rozdílné mutace. |
| T ί ΩΊ S 6 | zřetelně | definoval argmin 9Q | jako centrální |
| erninokys | elina při | vzájemném působení p27 | a Nup2. Mutanty |
| j sou k | dispozici | pro ověření biologické | relevance této |
interak;
2) Nukleotidové sekvence pro dominantní negativně působící analogy proteinu p!63
Funkčními analýzami popsanými v předchozím textu byly poznány dvě domény proteinu p!63, které jsou rozhodující pro jeho funkci.
Jedna doména je specifická doména (aminokyseliny 121 až
52) pro vazbu na p27. Druhou doménou je doména • · • » t « · · « • · · · · · · .anir-OKysí
307 -457.1 pro vazbu na ran, GŮP prccem, Který reguluje transportní funkci.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou proto i sekvence nukleové kyseliny pro protein pl63 nebo části tohoto proteinu, přičemž tyto sekvence nukleové kyseliny vykazují mutace ve vazebné doméně pro p27 a/nebo vazebné doméně pro ran, takže vazba exprimovaného mutovaného proteinu s p27 nebo ran je drasticky snížena. Takové analogy p!63 zavedené do buňky inhibuji funkční buněčný protein pl63 . Tím zůstává p27 volný, což vede k inhibici buněčného dělení. Příklady takových dominantních negativních mutantú pí63 jsou uvedeny v t.ab. 8 a 9, Tab. 8 ukazuje p!63 s deleoí vazebné domény pro p27, tab. 9 ukazuje pl63 bez vazebné domény pro ran.
Předmětem vynálezu je také použití dominantních negativních analogů plo3 v buňce s cílem proliteraci této buňky.
a vazeona aomena pro ran Dalším příkladem protilátek jako F (,oí.1d} ·,, oi63, zviasté oak na
3) Nukleotidové sekvence proteinů nebo peptidů, které se váží na vazebné domény p!63
Popsaným způsobem zkoumání byla určena vazebná doména proteinu pl63 pro p27 v úseku aminokyselin 121 až 252 úseku aminokyselin 307 až 467. jsou protilátky nebo fragmenzy
Fab, Fv nebo s.c.Fv, které se váží na vazennou doménu pi63 pro p2/ něco vazebnou doménu pro ran. Takové protilátky se mohou získat např. imunizací zvířat vazebnou doménou pi63 pro p27 nebo vazebnou doménou pro ran. Tyto domény jsou znázorněny v tab. 5 (ran-vazebná doména) nebo tab. 10 (p27-vazebná doména).
4· · ♦ · » · · · · * · · · · · · · • · · · « ···«··· ··
4) Mukleotidové sekvence pl63 prc stimulaci buněčného dělení
Zavedení nukleotidové sekvence pro pl63 nebo samotného proteinu pl63 dc buňky vede k inhibici intracelulárního p27.
Tím je komplex „cyklin E/cdk2 (který je inhibován p27) volný, což iniciuje buněčné dělení.
♦ · 4 * • · · • · · * * · · • « · · ·
5j Nukleotidové sekvence pro inhibici transkripce a/nebo translace proteinu pl63
Znalost nukleotidové sekvence proteinu plS3 poskytuje možnost připravit oligonukleotidy, jimiž může být specificky inhibována transkripce nebo translace pl63. K takovým, nukleovým kyselinám typu antisense patří oligonukleotidy, antisense triplex DNA, ribozymy nebo antisense RNA. Způsob přípravy triplexových oligonukleotidů DNA je podrobně popsán v Frank-Kamenetski a Mirkm, Ann· Rev. Biochem. 64, 65, 1995 a způsob přípravy antisense oligonukleotidů je popsán v Neckers et al . , Crit. Rev. Oncogen 3, 175, 1992, Carter a Lemoi:
Br. J. Cancer 67, 859, 1993, Mukhdopadhyay a Roth, Crit. Rev. Oncogen 7, 151, 1996 a Merccia a Cohen, Cancer Gene Ther. 2, 47, 1995.
Výhodné podle vynálezu je použití triplexové DNA nebo a antisense RNA oligonukleotidů, které s nukleotidovými sekvencemi pl63, a které částečně íoménu pro protein p27 (celkový úsek aminok v cl z tt O i l t.;...
Z Ώ Z > LXUU vazebnou domém úsek aminokyselin 307 až 467).
K nukleotidovým sekvencím, které inhibují transkripci a/nebo translaci pl63, patří dále ribozymy specifické pro oblast nukleotidové sekvence proteinu pl63. Způsob přípravy ribozymů je podrobně popsán v Burke, Nucl. Acids Mol. Biol. 8, 105, 1994, Chnstoffersen a Marr, J. Med. Chem, 38, 2023,
1995 a Scott et al . , Science 274, 2065, 1996. Výhodné jsou t* · · . · • · · · pca.e vyna-eza rmozymy, Ktere r.ycriQizu; i s nukieotídovymi sekvencemi ρ!63, které leží v rozmezí nukleotiaové sekvence vazebné domény pro protein p27 (aminokyseliny 121 až 252) nebo vazebné domény pro protein ran (aminokyseliny 307 až d. c c ' i átelnvcl nuxieot icovycn sexvenc; ribozymy jsou uvedeny v tab. 11.
Triplexová DNA, antiscnse RNA nebo ribozymy podat jako oligonukleotidy (připravené 'ní DNázami popřípadě RNázami způsoby oaoornikov viz v/še citovaná literacura) buďto m vitro do [KOALOU a chráněné proti i b- T r η ηη’/'Π i
| kyseliny | do buňky s |
| RNA nebo | ribozymu |
| který by | inhibeval |
| uskutečni | t zoůsobem |
cílových buněk nebe také in vivo injekcí nebo lokální aplikací.
Předmětem vynálezu je také zavedení konstruktu nukleové ílem, aby v buňce transkripcí antiscnse xnikl oligonukleotid podle vynálezu, oliferaci této buňky. Zavedení se může rf způsobem in vitro stejné jako in vivo.
Konstrukt nukleové kyseliny se do buňky zavede jako holá DNA nebo prostřednictvím nevirového vektoru nebo oomccí virového vektoru zoůsobem odborníkovi známým.
:stovaoí systémy pro Objevení proteinu
-1 - ϊξ 2... l L·1 .i 1 a C J Z... a j a vyhledávání inhibitorů pl63 p!63 a jeho vzájemného působ hledat inhibitory tohoto vzájsmn stovaci systémy, ve a proteinem p!63 být prostřednictvím působení. Proto jsou zapotřebí taková te kterých je vazba mezi proteinem p27 inhibována, a přitom tato inhibice může indikátoru sledována.
Je známo mnoho metod. Jedním z příkladů takové metody je test sledování dvou hybridů „two hybrid sereen assay” (viz oddíl Cl a tab. 1) .
• 0 « · I * « 4 9 · ·
I · · iemsqu ννι a: r: i r s;
(výhodně vazebná doména pro p27, /Alternativně se může ke systém, kde p!63 aminokyseliny 121 až 252) je navázán na pevnou fázi, inkubuje se s testovanou látkou a vazba testované látky se stanovuje prostřednictvím inhibice vazby označené vazebné partnerské molekuly pro p27 vazebnou doménu proteinu p!63. Tímto označeným vazebným partnerem. může proti látka specificky se vážící na vazebnou domén pló3 pro p27Stejným způsobem jako pro inhibitory vazby mezi ni 53 a p27 se mohou vytvořit testovací systémy pro inhibitory vazby mezi p!63 a ran, které lze pak využít pro testování.
Předmětem vynálezu je proto také použití sekvence nukleové kyseliny kódující protein. pl63 nebo část proteinu p!63 nebo použití proteinu p!53 nebo části tohoto proteinu pro vyhledávání inhibitorů p!63 .
/l pz / něco croteinu
7) Použití sekvence nukleové kyseliny pro p!63 nebo proteinové sekvence p!63 pro diagnostiku proliteračního stadia buňky nebo stavu onemocnění
Jak již bylo uvedeno v úvodu v oddíle A) , celá řada nádorů vykazuje zvýšenou mtracelulární koncentraci p27. Základem skutečnosti, že tyto nádory přesto proliferují, je to, Se funkce zvýšeného p27 je. inhibována. Ve smyslu tohoto vynálezu p!f>3 je specifickým inhibitorem p27. Průkaz tohoto inhibitoru v buňce umožňuje usuzovat na proliferační stav buňky. Toto usuzování může být velmi důležité, neboť, se např. může týkat určení malignity nádorové buňky nebo tkáno. Buněčnou smrtí dochází k uvolnění proteinu pl63. Průkaz plál v tělesných tekutinách dovoluje také soudit na proliferační a/nebo buněčnou smrtí začínající, tj . např. zánětlivé v procesy těle. Průkaz proteinu pl63 se muže uskutečnit fe fe • · v · · fe « · • · · fefe • fe · fefe · · • fefe · « « fe » fe • · • fefe · » « · »· * znacenc na vazcy prost: recrn: η:ν-τ
K Lakovým, specificky se vážícím látkám patří např, protein p27, protein ran a protilátky, např. protilátky získané imunizací zvířete proteinem pl63 nebo částečnou sekmeneí t cho co o ro t e i nu.
Průkaz mRNA oro pl63 v buňce nebo tkám je možné provést hybridizací sekvence nukleové kyseliny kódující pl63 s odpovídající mRNA. Zvýšení citlivosti takového průkazu je možné dosáhnout pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR·, která je odborníkům známa, a kterou lze amplifikovac (zmnožit) několik kopií hledané sekvence nukleové kyseliny pomocí tzv. páru oligonukleotidových primerů.
Příklady oligonukleotidových párů vhodných pro ampliřikaci a k prokázání sekvence nukleové kyseliny kódující pI63 jsou uvedeny v tab. 12a, 12b a 12c.
Průkaz RNA kódující pl63 je možný také např. fluorescenční hybridizací in sítu způsobem, který publikoval von Gussoni et al., Nátuře Biotechnol. 14, 1012, 1996.
Předmětem předkládaného vynálezu je také průkaz sekvence nukleové kyseliny kódující p!63 nebo proteinu p!63 pro určení prol i f eračrií ho stavu buňky nebo tkáně nebo pro průkaz proliřeračních nebo buněčnou smrži zahájených změn v z i v v m s ci v c z .
Předmět předkládaného vynálezu muže být stručně shrnut v následujících bodech:
l-Rrozein, který inhibuje ρ27, a tím ruší inhibici buněčné proliferace způsobovanou proteinem p27.
2)Protein podle bodu 1, který obsahuje sekvenci aminokyselin pl63 uvedenou v tab. 6 (sekvence identifikačního čísla 16) nebo její části.
t* » ' • ·· • · · t · ' • · · · ·
I « ·· • · · · * ·
a · *· • » * ···· * · ·· vidle bodu 2, kde části aminokyselinové sekvence
u. vybrány ze skupiny obsahující peptidy se i
sexvenci ancncKyselm v polonacn č. 2), v polohách 137 až 196 až 2 4 (sekvence id. (sekvence id. č. 4), v pohodách 215 až 265 (sekvence id. č. 6), v polohách 23:
Id v Dolohách 39:
(sekvence id. č. 10) a v polohách 307 až 469 (sekvence id. č. 12), vztaženo k číslování poloh podle tab. 6.
4} Protein, který se muže z proteinu, podle bodu 2. odvodit delecí funkčních domén, a ve kterém je ze sekvence id. č. 16 podle tab. 6 deletována (odstraněna, vazebná doména pro p27 nebo vazebná doména pro ran.
5) Protein podle bodu 4, který po delecí vazebné domény p27 poskytne protein s aminokyselinovou sekvencí podle tab. 8 (sekvence id. č. 13) a delecí vazebné domény ran poskytne protein s aminokyselinovou sekvencí podle tab. 9 (sekvence 1 d . č . 19).
6) Protein, který se může odvodit z proteinu podle bodu 2 delecí všech aminokyselinových sekvencí kromě úseku vazebné domény p27.
7) Protein podle bodu 6, který obsahuje sekvenci aminokyselin uvedenou v tab. 10 (sekvence id. č. 20),
3) Protein podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 7, přičemž se jedná o odpovídající homologický protein nebo jdcovídaiící čas a sice clovei
9) Protein podle bodu 3, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci lidského homologu pl63.
10) DNA., která kóduje protein podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 9.
11) DNA podle bodu 10, která
a) obsahuje nukleotidovou sekvenci uvedenou v tab. 3 · · ♦ ·
9 9
9
909 99·· • 9 9 * • 9 · »99 · · »· ♦ · • · · (sekvence id. č. 1) nebo její část, b) hybridizuje se sekvencí uvedenou v bode a) za stringentních (přísných) podmínek, nebo c! jeve srovnání se sekvencí uvedenou v a) změněna způsobem odpovídajícím degeneraci genetického kódu, .·: přesto kóduje stejnou aminokyselinovou sekvenci.
bodu 11 pro použití jako prime i DMA todl pro PCR, pricemz nukleoticcva sekver™ uifr.eru pro PCR y
1 a z ig.
id.
ze skupiny ocsanujici sekvence ra. c. uvedené v tab. 12a, sekvence id. č. uvedené v tab. 12b a sekvence id. č. uvedené v tab. 12c.
13) Použití DNA podle bodu 10 nebo 11 k prokázání a/nebo kvantifikaci p!63 mRNA v buňce a/nebo tkáni.
14) Použití podle bodu 13, kde se prokázání kvantifikace provede r.orthernovým přenosem.
a z
3 až
4:
a/nebo
15) Použití podle bodu 13, kde kvantifikace provede pomocí PCR.
16) Použití podle bodu 15, kde se prokázání a/nebo použije pro PCR prime podle bodu 12.
17) Použití podle bodu 13, kde kvantifikace provede pomocí hybricli zace .
13)Použití proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 9 pro přípravu protilátky, která se na tento protein váže .
19) Protilátka a fragment této protilátky, které se váží na vazebnou doménu pro protein p27 proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 9.
20) Protilátka a fragment této protilátky, které se váží na vazebnou doménu pro protein ran proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 9.
;e prokázáni in a/nebo
Šitu »« « · •
ft* « «· · *··· lS nebo 2 0
21) Použití protilátky podie bodu proteinu podle jednoho nebo několika bodů 1 nebo v buňce, tkáni nebo tělní tekutině.
22) Antisense nukleová kyselina, která je komplementárn k části DNA podle bodu 1G nebo 11, přičemž tato část lež v úseku nukleotidů kódujícím aminokyseliny 121 až 467.
23) Antisense nukleová kyselina podle bodu 22, která j vybrána ze skupiny obsahující tripletní DNA, syntetick oligonukleotidy, antisense RNA a ribozymy.
neoo D ato buňka ~e antisense nukleové kyseliny podle bodu 2 pro mnioici proliferace ounky, pricemz s antisense nukieovou kyselinou v kontaktu in vitro nebo i n v i vo.
25) Konstrukt nukleové kyseliny kódující antisense nukieovou kyselinu podle bodu 22 nebo 23 pro inhibici proliferace buňky, kde DNA kódující antisense sekvenci nukleové kyseliny je spojena alespoň s jednou aktivační sekvencí, a pak je zavedena do cílové buňky jako holá DNA, nebo tako DNA vložená do nevirového vektoru nebo do virového vektoru.
26) Použití proteinů podle jednoho nebo několika bodů z bodů i až. 9, kdy se pro vyhledávání inhibitorů využije vzájemné působení mezi uvedeným proteinem a buněčným vazebným partnerem.
27) Použití podle bodu 26, kdy se využije systém dvou hybridů („ t wo - h y b r i d - s y s t e m ) .
28) Použití podie bodu 26, kdy se využije afinitní systém, ve kterém se na pevnou fázi váže pl63 nebo jeho vazebná doména pro p27, pevná fáze se pak inkubuje se zkoušenou látkou a nakonec se prostřednictvím proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až S stanoví inhibice vazby vazebného partnera s uvedeným proteinem.
·« · · » # · · ft« · ft 4 » · • · * ·
29)Použití podle bodu 23, kde vazebný partner ie vybrán ze skupiny obsahující p27 a ran.
30}Použití proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 3 až 9 jako inhibitoru funkce proteinu podle jednoho nebo několiku bodů z bodů 1, 2, 8 a 9.
31) Použití protilátky podle bodu 19 nebo 20 jako inhibitoru funkce proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1, 2, 3 a 9.
32) Konstrukt nukleové kyseliny obsahující DNA podle bodu 10 nebo 11 operativně spojenou s aktivační sekvencí, která umožňuje expresi proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů i až 9 v buňce.
33) Použití konstruktu nukleové kyseliny podle bodu 32 pro stimulaci buněčné proliferace.
• « * * * • * · · · »
Tabulka 1
| DNA- | Partner. | Partner. | Aktivační | Aktivita | |||
| vazebná | molekula | molekula | doména | galakto- | |||
| doména (GA14) | I | II | (VP16) | sidázy | |||
| p27 (1-198) | - | - | - | ||||
| + | p27 (1-198) | - | + | - | |||
| + | p27 (1-198) | p163 | + | +++ | |||
| 4- | - | p163 | + | - | |||
| + | Myc 262439 | p163 | + | - | |||
| -i- | Max | p163 | + | - | |||
| 4- | p163 | + | - |
Prothymosí
| + | n | p163 | h | - |
| + | LAZ3/Bcl6 | p163 | + | +++ |
| + | p27 (1-178) | p163 | 4- | + |
| + | p27 (1-94) | p163 | 4~ | +++ |
| + | p27 (69- | p163 | + | n.d. |
| + | 198) p27 (69-94) | p163 (121 252) | +++ |
p27 (1-193) > 0 · · • · · ·
0 ' 0* ·*
Tabulka 2
| Na kolor; | u naneseno: | Vazba na kolonu | af m.itn.í navázaným ·. | |
| hromatograřie s | ||||
| R | úzn.í pro tem | G1 u t a t h i o n - | ||
| d | iutathion- | trans feráza | ||
| r | ransteráza - | |||
| p | 16 3 | |||
| rekotrhin | an.tní p2 7 (značený | ř + - | a | |
| J'ě) | ||||
| buněčný· | extrakt | U) | - | |
| (RAT1 -Mv | c RR) , obsahující | |||
| Oz7 | ||||
| buněčný | extrakt | |||
| (RATl-My | o ER), obsahující | τ T | - | |
| o27 (zah | řátý 95 cC, 2 mm) | |||
| cdk-2 | - | |||
| (buněčný | extrakt) | |||
| cdk- 4 | ||||
| (buněčný | extrakt) |
β · ·
| Tabulka 3 | ’ ,-y „ 1 r | 3 ~c~--· | cifikačním číslem 1 | ) | ||
| tcgaattggg | CACCGGGCCC | CCCCTCGAGG | . C ί ’ i c c., | CCATAAGCTT | G A x AT C G AAT | 60 |
| TCGCGGCCGC | T C G A Gi TACA | AGATGGCGGC | CCCGGGCGCT | CTCTTCACCG | TTCTGTAGCA | 120 |
| GCTTCGGGCT | GAGCGGATGT | CTCTTCTTGT | CCTCAGTC-TC | GG ACT CAGAG | ACACACGGCT | ISO |
| CCCGAGTTCT | GCTGATCACG | AAGTTCCCGG | AGGCGCTCGA | CGCACCGGAA | TCTCCCAGCG | 240 |
| GCCGCGACCG | CCGCCTCGGC | CCTGCTCGCC | GCGGCGCCGG | GACTCCAGC.G | TGATCGGCGG | 30C |
| CGGCAGTCAA | GGi iCACAAA | AATGGCGAAG | AGAGTTGCGG | AG.-_-iG - AG - x | Gactgacagg | 3SC |
| AACTGGGATG | AGGAACACGA | AGTTGAAGAG | A. GGGAAuriT | TCTCAGTGGC | CAGTGAGGAA | 420 |
| GTC AiG A.AGA | ACAGAGCCGT | AAAGAAGGCA | AAGCGCAGAA | ACGTxGGAx x | TGAATCTGAT | 4£2 |
| rtG CuG z\k_'G G | CCTTTAAAGG | TTTCAAAGGT | TTGGTTGTGC | CTTCTGGAGx, | A.GGAGGGTTT | 540 |
| TCTGGATTTG | GTGGCTCTGG | AGGAAAGCCT | CTGGAAGC-AC | 7GAC.AAATCG | AAACAGCACA | 6 DO |
| GACAATGCCA | CGCCCTTCTC | CAA7GTAA.AG | ACAGCAC-CAG | AC-CCCAAGGC | AGCCTTTGGT | ·’ Ct 33 J |
| TCTTTTGCTG | TC-AATGGCCC | TACTACCTTG | G T G G f·. i / \ A A* G | TTTCAAATCC | AAAAACTAAT | 720 |
| GGGGACAGCA | ATCAGCCGCC | CTCCTCCGGC | CCTGC7TCCA | G7ACCGCCTG | CCCTGGG.AAT | 730 |
| GCCTATCACA | AGCAGCTGGC | TGGCTTGAAC | TGCTCCGTCC | GCGATTGGAT | AGTGAAGCAC | 840 |
| GTG AACA C AA | ACCCGCTTTG | TGACCTGACT | CCCATTTTTA | AAGACTATGA | GAGATACTTG | 900 |
| GCGACGATCG | AGAAGCAGCT | GAGAATGGA | GGCGGCnGCA | G± i CiGAG η G | CCrtGACAGAC | 960 |
| AGGGCGACGG | CTGGAATGGA | GCCTCCTTCC | CTTTTTGGTT | CAACAAAACT | ACAGCAAGAG | 1020 |
| TCACCATTTT | CATTTCATGG | CAACAAAGCG | GAGGACACAT | CTGAAAAGGT | GGAGTTTACA | 1030 |
• · · • · • · * · · * *·«· »· • ·» ** * · • ·« *««
| GCAGAAAAGA | AA i C G G A. C G C | A G C A. C ř A. G G A | G C .u.A C AAG . G |
| A/\AA . - GAGA | CCTCGGCTTT | C-GGCTCGTTA | AGCTCTGGCT |
| * C. GCTGGA.A | GCTCCAGCTT | G i T G G T AA_A | GATGCTGCCC |
| CTGTTCTCTG | CTAAAGCATC | Ο;, AG.-.u i CCG | CCAGG.AGGCG |
| GGTCAACAAG | AGGAGAATGA | CG.-l'. j C nC CC | .AA G l? i A. G i G l· j |
| GATGCTTTCT | ACTCCAAAAA | ATGTAAACTA | Ti TTA CAAGA |
| AAGGGTGi GG | GGACCCTGCA | TTTAAAACCC | AC.AGC.AACTC |
| CGGGCAGACA | CCAACCTAGG | CAACATACTG | CTG.AATGTTC |
| TGCACCCGCA | CAGGAAAGAA | CAACGTCCTT | A i CG T C i G i G |
| GAGAAGCAGC | CCACTCTCCC | GGCCACCATG | CTGATCCGGG |
| GATGAATTGC | ACAAGATTTT | A CTG GAG.AAA | Aja G G i G C C i |
| GCATGTTC-CC | ACGTTGCTGC | TTCCCCTCCG | TCCCTAACTT |
| TACTGTGACA | TTCTGAGAAC | TTCTAGGTAA | CTTGAACTTT |
| ATAAATCCTT | TCAGTGGCGG | CCGCC-AATTC | CTGCAGCCCG |
| GCGGCCGCCA | CCGCGGTGGA | GCTCCAGCTT | TTGGGAGA |
CCTCGTTTAG
CCCTAACTGG
AGAG T AAAGC
GCAGCAGCGA
TGACCGAAGT
AAGACAACGA
AGAAGACCCA
TGATCGCCCC
TCCCCAACCC i G AA G .A CG A G m,-,C i G?iC
AGTCACATTC
TGTGACGAAC
GGGGATCCAC
TTTCGGCAAC
GTTTTCATTC
AGCCTCTTCG
GTGCAGAGAT
AAA G G .-.A OG
ATTTAAAGAG
GCTCTTGGTG
CΆ.-ΛCA .GCCG
CCCACTCGAT
CGAGGATGCC
GCTGACCAAG
TTTCCTCTTC
ATTAAGGCCA
TAGTTCTAGA
1140
1200
60
1320
80
4 O
1500
1Ξ5Ο
1680
1740
1300
1350
1920
1953 • · · • · · • · · • · · ·
Tabulka 4 pl 63:
YNua2:
flAKRYAEKFLTCP.NWLEEDEYEEM 2 4 MA.KRVA + ++ O + + +
MAXAVADAQlCRFTyGSNESDOOV 2 4
P163:
YN’uc2 :
7 N Q ? ? S S G P A S S 7 A C ? G Ν A Υ Η X Q L A G L N C S N+ + G A ? + +L LN
1 N RAD G i G £ A Q V υ N S ? T 7 X S N S 3 L KA L N L Q • · ·
.. d. č . 2 i .d. č. 3) ? 1 6 3 :
YNuo2 vrdwivkrvntnplcdltpifkdyerylati 19 5 T-r 4- v ?L DL P-F ΥΞ Y* i FKAKVDDLVLGKPLADLRPLFTRYELYIKNI 130 ibCX. 10, C.
215 ATAGMFPPSLFGSTKLQQESPFSFXGNKAF.DT A + ? 5 7 + ?? G+ +
535 ANSS7SPAPSIPSTGFKFSLPFEQKGSQTTTN
SEKVFFTAFKKSDAAQGAT 265 K Ξ T E + +Q AT
DSKEESTTEATGNESQDA? 535 ' c_u.
1O. c. 7)
P163: 239 HGNKAEOTSEXVEFTAEKXSDAAQCATSASFSFG 272 +G + + + 4-D+ + +A + + AT +FSFG
YNuc2: 444 NGSSSKDSDK?SL?3AVDGENDKKEAIX?AFSFG 477 (Sek. id. č. 3)
c. 9)
P163 :
YNuo2 :
399 LGNILLNVTIAPNHPCTRTGXN^/LIVCVPNPPLDEXQPT 433 (Sek. id. Č. 10' +G N + L L N + + N + + ? DK T
5 MG NOT L Ν A 7 VO S F K Υ Ξ P LA? G N C N L KA ? 7 V A A □G KL VT 6 3· \ - V • fe · fefe · fefefe fe ·
Tabulka 5
?.?.?! (myš) 5
R3?l (člověk) 5 :rj?2p (kvasinka) sso pl63 (myš) 307
DSHADH27S7---Er,'A3£ST7H?--QFE?_L7S7?E---3 S Η A 3 X £ 7 S 7 Ξ Ν Λ 3 £ SIi 3 ? - - Q r E ?2. V S V Ρ E---SQ777N'LSXE---ES7T£A7GNESQDATX2DAT?EESXP
QSKAASSLFSAXA5E SPAGGGSSECP_3GEEEEh'3E??K7
R3P1 \ - 'V =
P3^1 t z ' ‘ · ·* ayc;
NL’?2o ' I .X v Ξ1 plfi 3 r j ,
R3 Ρ1
R3P1 NU?2p (kv: P1 6 3 1' r-fiV;
<2 ELXTLEZD Ε Ξ Ξ L F XXRAKLERFA S Ξ N 3 L ? Ξ δΥΕ ? RH G 3VYLLKH X <2 ΕIX 7 L EE3 Ε Ξ Ξ L F KMRAKLE RZA 5 Ξ N D L Ρ Ε XYk£? G 7 G 3 VKLLKH X ΐ N L Q G ££3 Ε V AL F 5 Q KA ÍCLM T EN A - - Ξ T X Ξ YL S R G 7 G Ξ MYLLX XXD W7EVK—EEDAFYSKXCKLEYXXDNEF----YZXG7G7LHL-KP7Ε X G 7 1 PT.T.RK3D K T LK_L - c ΑΝ?: Υ IT P M.u. £ L X ? - N A G S D RA '<Γη Ν 7 H 7 3
EXG7 ZALLERRDKTLKI-CANHΥ1TPMXELKP-NAGSLRAMVWNTHTD
D S Ρ X V £LL C R S DG M G VY - L L N A 7 W’ 3 S Ε X Υ Ξ ? L A ? G ? J 3 N LIXA ? 7 V AA
ATQK7QLLYRAD7NLGNILLNVLIAPNMPCTR7GKNNVLIVCVPNP--
| R3P1 | (myš) | FAOEC?--X?ELLAIRELNAENAQKFKTX?EECRK£I | (Sek. | Ϊ Q | č. | 12 |
| RBP1 | ( Č 1 OV2 .<) | FADECP—X?ELLAIRZLNASNAQKFX7KFEECRK£r | (Sek. | id . | /-1 v | 13 |
| NUP2p | (kvasinka) | DG-------XL VTΥIVZXQXLEG RS F7XAIS 3 ΑΧΧΞΜ | (Sek. | J- l_i . | c . | Ί Z |
| p!53 | í mv š' | ? L 3 E XQ ? 7 L ? A 7 MLIR 7X 7 S E D AD ELHX13 L E XXD AA | (Sek. | ' G . | c > | 15 |
• · • · * · « * · * • » · « · « «··· · • · * · · · ·
Tabulka 6
| pl63 (myš; | ; í S A k | ver. | OS 5 | idsr.t. | 1 f 1 k | ačním čísl | 16) | |
| Met Ala Lys | Arg Val | Ala | Glu | Lys Glu | Leu | Thr Asp Arg | Asn | Trp Asp |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||
| Glu Glu .'is'j | Glu Val | Glu | Glu | Met Gly | Thr | Phe Ser Val | Ala | Ser Glu |
| 20 | 25 | 30 | ||||||
| Glu Val Met | Lys Asn | Arg | A1 a | Val Lys | Lys | Ala Lys Arg | MjTCj | A s η V a 1 |
| 35 | 40 | 45 | ||||||
| Gly Phe Glu | Ser Asp | Ser | Gly | Gly Ala | Phe | Lys Gly Phe | Lvs | Gly Leu |
| 50 | 55 | 60 | ||||||
| Val Val Pro | Ser Gly | Gly | Gly | Gly Phe | Ser | Gly Phe Gly | Gly | Ser Gly |
| 6 5 | 70 | 75 | 30 | |||||
| Gly Lys Pro | Leu Glu | Gly | Leu | Thr Asn | cly | Asn Ser Thr | Asp | Asn Ala |
| 8 5 | 90 | 95 | ||||||
| Thr Pro Phe | Ser Asn | Val | Lys | Thr Ala | Ala | Glu Pro Lys | Ala | Ala Phe |
| 100 | 105 | 110 | ||||||
| Gly Ser Phe | Ala Val | Asn | Gly | Pro Thr | Thr | Leu Val Asp | Lys | Val Ser |
| 115 | 120 | 125 | ||||||
| Asn Pro Lys | Thr Asn | Gly | Asn | Ser Asn | Gin | Pro Pro Ser | Ser | Gly Pro |
| 130 | 135 | 140 | ||||||
| Ala Ser Ser | Thr Ala | Cys | Pro | Gly Asn | * 1 - | Tyr His Lys | Gin | Leu Ala |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||
| Gly Leu Asn | Cys Ser | Val | Arg | Asp Trp | Ile | Val Lys His | Val | Asn Thr |
| 15 5 | 170 | 17 5 | ||||||
| Asn Pro Leu | Cys Asp | Leu | Thr | Pro Ile | Phe | . ,ys Asp Tyr | Glu | Arg Tyr |
| 130 | 185 | ISO | ||||||
| Leu Ala Thr | Ile Glu | Lys | Gin | Leu Glu | Asn | Gly Gly Gly | Ser | Ser Ser |
| 195 | 200 | 205 | ||||||
| Glu Ser Gin | Thr Asp | Arg | Ala | Thr Ala | Gly | Met Glu Pro | Pro | Ser Leu |
| 210 | 215 | 220 | ||||||
| Phe Gly Ser | Thr Lys | Leu | Gin | Gin Glu | Ser | Pro Phe Ser | Phe | Mis Gly |
| 225 | 230 | 235 | 240 | |||||
| Asn Lys Ala | Glu Asp | Thr | Ser | Glu Lys | Va 1 | Glu Phe Thr | Ala | Glu Lys |
| 245 | 250 | 255 |
Lys Ser Asp Ala Ala Gin Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser Phe Gly · φ φ φφφ φ φ * ·
ΦΦ φ · ··*· • Φ φφ · φ φ ··· ·
260 265 270
| Lys | Lys | Ile | Glu | Ser | Ser | Ala | Len | Gly | Ser | Leu | Ser | Ser | Gly | Ser | Len |
| 275 | 2S0 | 22 5 | |||||||||||||
| Thr | Gly | Phe | Ser | Phe | Ser | Ala | Gly | Ser | Ser | Ser | Leu | Phe | cly | Lys | Asp |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Ala | Ala | Gin | Ser | Lys | Ala | Ala | Ser | Ser | Leu | Phe | Ser | Ala | Lys | Ala | Ser |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Glu | Ser | Pro | Ala | Gly | Gly | Gly | Ser | Ser | Glu | Cys | Arg | Asp | Gly | Glu | Glu |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| G i u | Glu | Asn | Asp | Glu | Pro | Pro | Lys | Val | Val | Val | Thr | Glu | Val | Lys | Glu |
| 340 | 3 4 5 | 350 | |||||||||||||
| Glu | A5 Ό | Ala | Phe | Tyr | Ser | Lys | Lys | Cys | Lys | Leu | Pne | i yr | Lys | Lys | Asp |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Asn | Glu | Phe | Lys | Glu | Ly 3 | Gly | Val | cly | T n -· | Leu | His | Leu | Lys | Pro | i - l K |
| 3 7 0 | 3 7 5 | 330 | |||||||||||||
| Ala | Thr | Gin | Lys | Thr | Gin | Leu | Len | Val | Arg | Ala | Asp | Thr | Asn | Leu | Gly |
| 32 5 | 390 | 3 9 5 | 400 | ||||||||||||
| Asr. | Ile | Leu | Leu | Asn | Val | Leu | Ile | Ala | Pro | Asn | Met | Pro | Cys | Thr | Arg |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| Thr | Gly | Lys | Asn | Asn | Val | Leu | Ile | Val | Cys | Val | Pro | Asn | Pro | Pro | Leu |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| Asp | Glu | Lys | Gin | Pro | Thr | Leu | Pro | Ala | Thr | Meh | Leu | Ile | Arg | Val | Ij V 2¾ |
| 43 5 | 440 | 445 | |||||||||||||
| Ser | Glu | Asp | Ala | Asn | Glu | Leu | His | Lys | Ile | Len | Leu | Glu | Lys | Lvs | |
| * | |||||||||||||||
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| Asp | Ala | ||||||||||||||
| 4 6 5 |
| NUP2 / | η V n S | inka) i | ÍSeKver: | C Ξ | ič+nt | i f i) | C Ώ. | £n | čísl | β | 17) |
| Met Ala | L y s | Arg Val | Ala Asp | Ala | Gin Ile | Gin | Arg | Glu | Thr | Tyr | Asp |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||
| Ser Asn | Glu | Ser Asp | Asp Asp | V a x | Thr Pro | Ser | Thr | Lys | Val | Ala | Ser |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||
| Ser Ala | Val | Met Asn | Arg Arg | Lys | Ile Ala | Met | Pro | Lys | Arg | Arg | Met |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||
| Ala Phe | Lys | Pro Phe | Gly Ser | Ala | Lys Ser | Asp | Glu | Thr | Lys | Gin | Ala |
• ·« · » · ♦ * * ’ * « · * ♦
Ser Ser Phe Ser Phe Loj
70 n i .. rt r U r, .a rt s D « · * · » * · * » 4 • 9 « « · · ·
Glv Thr Civ Glu Ala Gin
Val Asp Asn Ser Pro Thr Thr Glu Ser Asn Ser Arg Leu Lys Ala Leu
Asn Leu Gin Phe
100
Ala
50 ys Val Asp Asp
105
Leu Ala Asp Leu Arg Pro Leu Phe Thr Arg
115
120
Leu Val Leu Gly Lys Pro
110
Tyr Glu Leu Tyr Ile Lys 12Ξ
Asn Ile Leu Glu Ala Pro Val Lvs Phe Ile Glu Asn Pro Thr Gin
130
135
140
Lys Gly Asn Asp Ala Lys Pro Ala Lys Val Glu Asp Val Gin Lys Ser
145
150
155
150
Ser Asp Ser Ser Ser Glu Asp Glu Val Lys Val Glu Gly Pro Lys Phe 165 170 175
Thr Ile Asn Ala Lvs Pro Pro Ile Ser Aso Ser Val Phe Ser Phe Glv
ISO
Pro Lys Lys Glu Asn Arg L' 195 y 5 r,td
200
190
Glu Ser Asp Ser Glu Asn
205 :le Glu Ile Lys Gly Pro Glu Phe Lys Phe Ser Gly Thr Val Ser Ser
210
215
20
Asn Val Phe Lvs Leu Asn Pro Ser Thr Asr> Lvs Asn Glu Lvs Lvs Thr
225
230
235
Glu Thr Asn Ala Lvs Pro Phe Ser Phe Ser Ser
240 ?hr Ser Thr Thr z 4s
Glu Gin Thr Lys Ser I 2 50 :50 ys Asn Pro Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Lys
265
270
Thr Asn Val Aso Asn Asn Ser Lva Ala Glu Ala Ser Phe Thr Phe Glv
275
2S0
285
Thr Lys His Ala Ala Asp Ser Gin Asn Asn Lys Pro Ser Phe Val Phe
290
295 iOO
Gly Gin Ala Ala Ala Lys Pro Ser Leu Glu Lys Ser Ser Phe Thr Phe
305
310
Gly Ser Thr Thr Ile Glu Lys Lys Asn Asp Glu Asn Se:
325
330
320
5ěí' Asn
335
Ser Lys Pro Glu Lvs Ser Ser Asd Ser Asn Aso Ser Asn Pro Ser Phe
340
345
350
Ser Phe Ser Ile Pro Ser Lys Asn Thr Pro Asp Ala Ser Lys Pro Se:
355
50
365
Phe Asn Phe Gly Val Pro Asn Ser Ser Lys Asn Glu Thr Ser Lys Pro • · • * *
370
375
360
Β* »·
Val Phe Ser Phe Gly Ala Ala Thr Pro Ser Ala Lys Glu Ala Ser Gin
335 390 395 400
Glu Arr Asp Asn Asn Asn Val Glu Lys Pro Ser Ser Lys Pro Ala Phe
405 410 415
Asn Phe Ile Ser Asn Ala Gly Thr Glu Lys Glu Lys Glu Ser Lys Lys
420 425 430
Asp Ser Lys Pro Ala Phe Ser Phe Gly Ile Ser Asn Gly Ser Glu Ser
435 440 445
Ly3 Asp Ser Asp Lys Pro Ser Leu Pro Ser Ala Val Asp Gly Glu Asn
450 455 460
Asp Lys Lys Glu Ala Thr Lys Pro Ala Phe Phe Gly Ile Asn Thr Asn
465 470 475 4 S 0
Thr Thr Lys Thr Ala Asp Thr Lys Ala Pro Thr Phe Thr Phe Gly Ser
4S5 490 495
Ser Ala Leu Ala Asp Asn Lys Glu Asp Val Lys Lys Pro Phe Ser Phe
500 505 510
Gly Thr Ser Gin Pro Asn Asn Thr Pro Ser Phe Ser Phe Gly Lys Thr
515 520 525
Thr Ala Asn Leu Pro Ala Asn Ser Ser Thr Ser Pro Ala Pro Ser Ile
530 535 540
Pro Ser Thr Gly Phe Lys Phe Ser Leu Pro Phe Glu Gin Lys Gly Ser
545 550 555 560
Gin Thr Thr Thr Asn Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala Thr
565 570 575
Gly Asn Glu Ser Gin Asp Ala Thr Lys Val Asp Ala Thr Pro Glu Glu
580 535 590
Ser Lys Pro Ile Asn Leu Gin Asn Gly Glu Glu Asp Glu Val Ala Leu
595 600 605
Phe Ser Lys Ala Lys Leu Met Thr Phe Asn Ala Glu Thr Lys Ser Tyr
610 615 620
Asp Ser Arg Gly Val Gly Glu Met Lys Leu Leu Lys Lys Lys Asp Asp 625 630 635 640
Pro Ser Lys Val Arg Leu Leu Cys Arg Ser Asp Gly Met Gly Asn Val 645 650 655
Leu Leu Asn Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys Tyr Glu Pro Leu Ala 660 665 670 • · *·«- * · · · «»«· · ··»»«»» »»« · · «··
I « « · · ······· ·· ··
| Pro | Gly | Asn 6 7 5 | Asp | A 5 n | L g u Ile | Lys 630 | Ala | Pro | Thr | Val | Ala Ala 6S 5 | Asp | Gly |
| Lys | Thr | T, . >- | Zle | V a 1 | Lys Pne | Lys | Gin | Ly s | Glu | Glu | Gly Arg | Ser | Phe |
| 650 | 59 5 | 7 00 | |||||||||||
| Thr | Lys | Ala | Ile | Glu | Asp Ala | Lys | Lys | Glu | Lys | ||||
| 705 | 710 | 715 |
Tabulka 7
Průkaz asociace mezi p27 a p!63 v buňkách HeLa
| 3-V λ γ -q o {-pir-b trans rekovo | i Lrt. 1 -- Q ’ Γ ρ ρ Q iných s: | T-, r“ q j- p 1 -n 1J Γ7 | ci=: τ =1 n: j ρ n y | |
| Precipitace | CMV-p27 | CMV-p27 | - | - |
| C’ | 4 | |||
| CMV-Nap | CMV -Mop | - | ||
| Prot11 útkami | ||||
| spéci f ickým. i | - | r | - | - |
| 3ΙΌ Mao2 | ||||
| Protilátkami | ||||
| specii ickými | - | -- | - | - |
| pro p27 |
» Β ·
Β «
3> /.,
Tabulka 8 (Sekvence s id'
Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys
5
Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu .Met
Glu Val Met Lys Asn Arg Ala Val 35 40
Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Glv 50 55
Val Val ?ro Ser Gly Gly Gly Gly 55 70
Gly Lys Pra Leu Glu Gly Leu Thr S5
Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr 100
Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro 115 120
Ala Ala Gin Gly Ala Thr Ser Ala 130 135
Glu Ser Ser Ala Leu Gly Ser Leu
145 150
Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser
165
Ser Lys Ala Ala Ser Ser Len Phe ISO
Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys 155 200
Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val 210 215
Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu
225 230
Lys Glu Lys Gly Val Gly Thr Leu 245
Lys Thr Gin Leu Leu Val Arg Ala 260
Leu Asn Val Leu Ile Ala Pro Asn 275 290 intifikaččím číslem 13)
Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp 10 15
Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu
30
Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val
Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu 60
Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly 75 80
Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala 5 0 5 5
Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe
105 110
Phe Thr Ala Glu Lys Lys Ser Asp
125
Ser Phe Ser Phe Gly Lys Lys Ile 140
Ser Ser Gly Ser Leu Thr Gly Phe 155 ISO
Leu Phe Gly Lys Asp Ala Ala Gin 170 175
Ser Ala Lys Ala Ser Gin Ser Pro
185 190
Arg Asp Gly Glu Glu Glu Glu Asn
205
Thr Glu Val Lys Glu Glu Asp Ala
220
Phe Tyr Lys Lys Asp Asn Glu Phe 235 240
His Leu Lys Pro Thr Ala Thr Gin 250 255
Asp Thr Asn Leu Gly Asn Ile Leu
265 270
Met Pro Cys Thr Arg Thr Gly Lys
285 «· * • · v 3 « · * * • « ♦ · *
| Asn | A s π V a 1 29 0 | Leu | Ile | Val· | Cys 2 5 5 | Val | Pro | A s n | Pro | Pro 3C0 | Leu Asp Glu | Lys | ||
| Gin | Pro Thr | Leu | Pro | Ala | Th r | yp* | Leu | Ile | Arg | Val | Lys | Ser | Glu | |
| 305 | 2 10 | 315 | 320 | |||||||||||
| Asp | Ala Asp | Cl-j | Leu | H i Ξ | Lys | 2 ie | Leu | Leu | Glu | Lys | Lys | Asp | Ala | |
| 325 | 330 | 335 |
| Tabulka 9 | f ·~ ~ | S 1 | Lir | f V | ním | čísle’ | i 19 | \ | |||||||
| Met | Ala | Lys | Arg | Val | Ala | Glu | T », ~ * j | Glu | Leu | Thr | Asp | Arg | Asn | Trp | Asp |
| I | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Glu | Glu | Asp | Glu | Val | Glu | Glu | G i v | Thr | Phe | Ser | Val | Ale | Ser | Glu | |
| 20 | 2 5 | 30 | |||||||||||||
| Glu | Va 1 | Met | Lys | Asn | Arg | Ala | Val | L y s | Lys | Ala | Lys | Arg | Asn | Val | |
| 3 5 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Gly | Phe | Glu | Ser | Asp | Ser | Gly | Gly | Ala | phe | Lys | Gly | Phe | Lys | cly | Leu |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Val | Val | Pro | Ser | Gly | Gly | Gly | Gly | Phe | Ser | ciy | Phe | Gly | Giy | Ser | Gly |
| 65 | 70 | 75 | SO | ||||||||||||
| Gly | Lys | Pro | Leu | Glu | Gly | Leu | Thr | Asn | Gly | Asn | Ser | Thr | A s o | Asn | Ala |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Thr | Pro | Phe | Ser | Asn | Val | Lv 3 | Thr | Ala | A13 | Glu | Pro | Lys | Ala | Ala | Phe |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Gly | Ser | Phe | Ala | V a í. | Asn | oly | Pra | Thr | μ Ti 1 1 L | Leu | Val | Asp | Lys | Val | Ser |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Asn | Pro | Lys | Thr | Asn | Gly | π 5 O | Ser | Asn | Gin | Pro | Pro | Ser | Ser | Gly | Pro |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Ala | Ser | Ser | Thr | Ala | Cys | Pro | Gly | Asn | Ala | Tyr | H 1 Ξ | Lys | Gin | Leu | Ala |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Gly | Leu | Asn | Cys | Ser | Val | Arg | Asp | Trp | Ile | Val | Lys | His | Val | Asn | I le |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Asn | Pro | Leu | Cys | Asp | Leu | Thr | Pro | Ile | Phe | Lys | As o | Tyr | Glu | Arg | Tyr |
| ISO | 185 | 190 | |||||||||||||
| Leu | Ala | Thr | Ile | Glu | Lys | Gin | Leu | Glu | Asn | Gly | Gly | Gly | Ser | ser | Ser |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Clu | Ser | Gin | Thr | Asp | Arg | Ala | Thr | Ala | Gly | Met | Glu | Pro | Pro | Ser | Leu |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Phe | Gly | Ser | Thr | Lys | Leu | Gin | Gin | Glu | Ser | Pro | Phe | Ser | Pne | His | Gly |
| TJ | 4 | • 4 4 4 4 4 · 4 | 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 | 4 4 | • 4 • | ||||||||||
| 225 | 230 | 2 35 | 240 | ||||||||||||
| /\ ΰ τ'. | Lys | Ala | Glu | Asp | Thr | Ser | G u | Ly s | Val | Glu | Phe | Thr | Ala | Glu | Lys |
| 24 5 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Lv 3 | Ser | Asp | Ala | Ala | Gin | Gly | Ala | Th r | Ser | Aid | Ser | Phe | Ser | Phe | Gly |
| 260 | 2 6 5 | 270 | |||||||||||||
| Lys | Lys | Ile | Glu | Ser | Ser | Ala | Leu | Gly | Ser | Leu | Ser | Ser | Gly | Ser | Leu |
| 275 | 2S0 | 235 | |||||||||||||
| Thr | Gly | Phe | Ser | Phe | Ser | Ala | cly | Ser | Ser | Ser | Leu | Phe | Gly | Lys | Asp |
| 290 | 2 9 5 | 300 | |||||||||||||
| Ala | Ala | Glu | Lys | Glu | Leu | ||||||||||
| 305 | 310 |
| Tabulka 10 ( | Sekver.c | o c; | ident. | fík | achi | rn čísl | em 2 0) |
| Thr Thr Leu Val | Asp Lys | Val | Ser Asn | Pro | Lys | Thr Asn | Gly Asp Ser |
| 5 | 10 | 15 | |||||
| Asn Gin Pro Pro | Ser Ser | Gly | Pro Ala | Ser | Ser | Thr Ala | Cys Pro Gly |
| 20 | 25 | 30 | |||||
| Asn Ala Tyr His | Ly3 Gin | Leu | Ala Gly | Leu | Asn | Cys Ser | Val Arg Asp |
| 35 | 40 | 4 5 | |||||
| Trp Ile Val Lys | His Val | Asn | Thr Asn | Prc | Leu | Cys Asp | Leu Thr Pro |
| 50 | 5 5 | 60 | |||||
| Ile Phe Lys Asp | Tyr Glu | *1 - Λ* | Tyr Leu | A13 | Thr | Ile Glu | Lys Gin Leu |
| 65 | 70 | 75 | SO | ||||
| Glu Asn Gly Gly | Gly Ser | Ser | Ser Glu | Ser | Gin | Thr Asp | Arg Ala Thr |
| S 5 | 90 | 95 | |||||
| Ala Gly Met Glu | Pro Pro | Ser | Leu Phe | Gly | Ser | Thr Lys | Leu Gin Gl.n |
| 100 | 105 | 110 | |||||
| Glu Ser Pro Phe | Ser Phe | H i s | Gly Asn | Lys | Ala | Glu Asp | Thr Ser Glu |
| lis | 120 | 125 |
Lys Val Glu Phe
130 « a
5
Tabulka 11
Sekvence GUC v pl63
Pozice nukleotidů Sekvence
| 422-424 | GGAA | GTC | ATG A | |
| 813-820 | CTCC | GTC | CGCG | |
| 1021-1023 | AAGA | GTC | ACCA | |
| 1287-1289 | GAG A | GTC | CGGC | |
| 1586-1538 | CAAC | GTC | CTTA | |
| 1595-1597 | TATC | GTC | TG TG | |
| 1601-1603 | CTGT | GTC | CCCA | |
| v EST 62312 | (lidský) | |||
| Pozice nukleotidů | Sekvence | |||
| aminokyselin | ||||
| 212-214 | GACT | GTC | GAA 7 | 87 |
| 353-360 | GACA | GTC | AGC A | 136 |
| 4 0 z — 4 0 4 | TTG | GTC | GGA. A | 150 |
ragující domény obsahují aminokyseliny 121-252 myší
----, na Kterou se číslování vztahuje. Tomu odpovídají etidy 635-1078 myší sekvence.
• *
Tabulka 12a vybraných párů primerů
| Skóre | Délka | GC % | Pozice | Jméno | 5' 3' | |
| 5.8 | 108 | 43.5 | 122. | . 143 | Horní: | AGAAAGCAAAGCGCAGAAATGT |
| (Sek. id. č. 21) | ||||||
| 229. | .209 | Dolní: | CAAATCCAGAAAAGCGTCCTC | |||
| (Sek. id. č. 22) | ||||||
| 6.7 | 119 | 42.0 | 104. | .127 | Horní·. | TGAAGAATAGAGCCATAAAGAAAG |
| (Sek. id. č. 23) | ||||||
| 240. | .220 | Dolní: | AGAAAAGCGTCCTCCTCCAGA | |||
| (Sek. id. č. 24) | ||||||
| 23.3 | 137 | 43.8 | 104. | . 127 | Horní: | TGAAGAATAGAGCCATAAAGAAAG (Sek. id. č. 25) |
| 204. | .220 | Dolní: | agcgccactaaccaaatccaga | |||
| (Sek. id. č. 26) | ||||||
| 25.7 | 100 | 44.0 | 122. | . 143 | Horní; | AGAAAGCAAAGCGCAGAAATGT (Sek. id. č. 27) |
| 221. | . 200 | Dolní: | GAAAAGCGTCCTCCTCCAGAAG | |||
| (Sek. id. č. 28) | ||||||
| 48.7 | 122 | 46.7 | 123. | . 144 | Horní: | GAAAGCAAAGCGCAGAAATGTT |
| (Sek. id. č. 29) | ||||||
| 244. | . 224 | Dolní: | CTCCAGCGCCACTACCAAATC |
• * 4 « · • · · ·
| 37 | • · · « · · · · 4 » · · · · · | |||
| Tabulka 12b | ||||
| Vybraný pár primerú | ||||
| Skóre Délka | GC % | Pozice | Jméno | 5' 3' |
| 51.3 193 | 52.S | 34. .53 | Horní: | CCCGCACGGAGCAGTTCAAG |
(Sek. s id, č. 31) 226. .205 Dolní: gcagcggcagatcccaaggtag (Sek. s id, č. 32)
Tabulka 12c
Vybraný pár primerú
| Skóre | Délka GC | % | Pozice | Jméno | 5' 3' | ||
| 2.4 | 136 | 45.6 | 4 | . .20 | Horní: | GGCATCCTTTTTCTCCA | |
| Dolní: | (Sek. id. č. | 33) | |||||
| 139 | . . 120 | CGTTCTTATCGTCTCTGTGTTC | |||||
| (Sek. id. Č. | 34) | ||||||
| 2.5 | 120 | 45.0 | 5 | . .23 | Horní: | GCATCCTTTTTCTCCAGTA | |
| (Sek. id. č. | 35) | ||||||
| 139 | . .119 | Dolní: | TGTTCCAAATCCACCAAT | ||||
| (Sek. id. č. | 36) | ||||||
| 2.7 | 100 | 48.0 | 40 | . .58 | Horní: | GTCTGCATCCTCGCTGGTT | |
| (Sek. id. Č. | 37) | ||||||
| 139 | . .119 | Dolní: | CGTTCTTATCGTCTGTGTTCC | ||||
| (Sek. id. č. | 38) | ||||||
| 50.0 | 105 | 44.8 | 57 | . .75 | Horní: | TTTTACCCGAATCAACAT (Sek. id. č. | 39 |
| 161 | . .141 | Dolní: | GTACGCGAACAGGGAAGAATA | ||||
| - | (Sek. id. č. | 40) |
• · · * • · «· » »·· * *
Tabulka 13
Shrnutí růstových pokusů
Cyklin Dl Nup2 neselektivní selektivní neselektivní selektivní
| wt p27 | + + + | +++ | + + + | +++ |
| Mut 106 | +++ | +++ | +++ | + + + |
| Mut 152 | +++ | + | +++ | + |
| Mut 294 | +++ | +++ | +++ | - |
| Mut 660 | +++ | +++ | + + + | - |
| Mut 687 | +++ | - | +++ | |
| Mut 826 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| Mut 850 | +++ | +++ | +++ | - |
· · • 0
A)
Tabulka 14
Sekvence mutovaného proteinu p27 ve srovnání s divokým typem
- - -rvsngspslermdarOADHPKPSAC p v s h g s většina
TR3LEKHCRDMEEASQRKWNFDFQNHKPLEGRYEWQEVE — - — -j----I £0
J
EO
KlcnílDS Protein Klor.í'52 Protein Klo.oí2S4 Protein Kloní660 Protein Klonem Protein Kloní626 Protein KloníESO Protein Myší p27 AS většina
| 16 | L T R | D | L E Κ H | C R D M | E E A S 0 E K | W N F D F o N | HKPLEGRYEW | 0 E | V E | KlonílC6 | Protein |
| 37 | LIR | D | LEKU | C R D M | E E A £ 0 0K | Η K F D F 0 N | H 0? L E G R ϊ E H | Q E | V E | Kloní 152 | Protein |
| 37 | L T R | D | LEKU | C R 3 M | E E A S Q R K | W N F D F 0 N | HKPLEGRYEW | Q E | V E | Kloní2S4 | Protein |
| 36 | L T R | D | LEKU | C R 3 M | E E A S Q R K | Κ Ϊ1 F D F 0 K | HKPLEGRYEW | 0 E | V £ | KloníE60 | Protein |
| 36 | ls l τ | R | D L E K | H C R 3 | h|e |e A S 0 S | K W řl F D F Q | NHKPLEGRYE | WJi | E V | Klcr.í667 | Protein |
| 16 | L T R | D | LEKU | c IíJd m | E E A S fl S K | W A' F O F Q N | HKPLEGRYEW | 0 E | V E | Klonř6I6 | Protein |
| 26 | L T R | D | LEKU | C R 3 M | E E A £ 0 R K | W N F 3 F 0 N | HKPLEGRYEW | 0 E | V E | Kloníeso | Protejn |
| 41 | L T R | D | L E Κ H | C R D K | E Ξ A S 0 R K | W N F 3 F 0 N | HKPLEGRYEW | 0 E | V Ξ | Myší p27 AS | |
| R G S | L | P E F Y | Y R ? ? | R ? ? K S A C | Κ V L A 0 E £ | 03VSGERQAV | P L | I G | |||
| J | “Ί-1- | l | * | vetsma | |||||||
| 90 1 | 100 ! | 110 T | 120 l | ||||||||
| Ě6 | R G S | k | ? E F Y | Y R P P | U? ? X S A C | Κ V L A 0 E S | Q3VSGSRQAV | P L | I G | Kloní 106 | Protein |
| 77 | R G S | L | P Ξ F Y | Y S P P | R p p K S A C | Κ V L A 0 Ξ S | Q3VSGSRQAV | P L | I G | Klor.ílí2 | Protein |
| 77 | R G S | L | P E F Y | yHp ? | R ? ? X S A C | Κ V L A Q E S | Q 3 V El· S R Q A V | ? L | I G | Kloní:54 | Protein |
| 76 | R G S | L | P Ξ F Y | Y GJ? P | R ? ? K S A C | Κ V L A o E S | ODVSGSRQAV | ? L | I G | Kloní 6c 0 | Protein |
| 7Θ | |e r g | S | L ? E F | Y [y]r p | F R }? F K £ A | C Κ V ? A Q E | SODVSGSRQA | V ? | γγί | Kloní£67 | Protetn |
| 66 | R G Ξ | L | P E F Y | Y R ? P | R ? P K S A C | X V L A Q E £ | (JDVSGSRQAV | P L | I G | KloníS26 | Protein |
| 66 | R G £ | L | P E F Y | γ a? p | R ? ? K S A C | Κ V L A 0 E S | qdvsgsrqav | P L | I G | Kloníf50 | Protein |
| 61 | R G S | L | P Ξ F Y | Y R P p | R P ? K S A C | Κ V L A Q E S | 03VSGSRQAV | P L | I G Myši p27 AS | ||
| £ 0 A | s | S E 3 R | H L V 3 | 0 M ? 3 3 S 3 | !! 0 A G L A S | OCPGMRKRPA | A Ξ | 3 S | |||
| —|- | 1 | 1 | vetsma | ||||||||
| 130 i | 140 i | 150 t | 160 ϊ | ||||||||
| 106 | S 0 A | Jí | £ E 3 R | H L V 3 | 0 Μ P 3 £ S 3 | N Q A G L A E | OCPGMRKRPA | A E | 3 S | Kloní 106 | Protein |
| 117 | Ξ 0 A | Jí | S E 3 R | H L V 3 | 0 Η P 3 S S 3 | N 0 A G L A E | OCPGMRKRPA | A E | 3 S | Klon#152 | Protein |
| 117 | S Q A | H | S E 3 R | H L V 3 | 0 Κ ? 3 S S 3 | S 0 A G L A E | OCPGMRKRPA | A E | 3 £ | Kloní 2 54 | Protein |
| 116 | £ Q A | N | Ξ E 3 R | H L V 3 | Q M p 3 S S 3 | NO A G L A E | OCPGMRKRPA | A E | 3 £ | KloníířO | Protein |
| 118 | Ig S 0 A | N S E 3 | R H L V | D g H ? 31$ ls | 3 N 0 A G L A | EOCPGKRKRP | k k | £ D I | KloníES? | Protein | |
| 106 | S Q A | N | S E 3 R | H L V 3 | 0 M ? 3 S S 3 | N Q A G L A E | OCPGMRKRPA | A E | 3 £ | Kloní626 | Protein |
| 106 | £ 0 A | N | S E D R | H L V D | Q H ? 3 £ S D | 00 A G L A E | o c P 1-...... | J | KlonS650 | Frotein | |
| 121 | S 0 A | N | S E 3 R | H L V D | 0 Μ P 3 S S 3 | N 0 A G L A E | OCPGMRKRPA | A n | 3 S | Myší p27 AS | |
| £ S Q | I | K R A N | R 7 E E | Ν V S 3 G S P | M A G T V E Q | TPKKPGLRRQ | T R | - - | Vcíf- σ ί | τη Λ |
ISO —i
R A
170 ISO
-1-_!-!-KSANSTtENVSO5S?SAGTVEÍT?KKPGLRt KRAKRTE2NVE3GSPNAGTVEQTPKKPG [j?. S Q T R KRANRTEENVS3G£PNAGTVEQTPKKPGLRRQTRR A K R T E E H V S O G 5 ? NAGTVEQTPXKP G L R R O I R Kloní 106
Kloní 152 KlonS294
Protein
Protein
Protein
R A N R T~|e |e W V S_
N R TEENVS3GSPNAGTV agtveqtpík k
T P K K P G ryč-
ΓΓρ RANRTEENVSDGSPNAGTVEQTPKKPGLRRQT
Kloní66 0 Protein Kloní6S7 Protein KloníS26 Protein KloníE50 Protein Myší p27 AS
VDLOP-S-FRAN-F
Většina
| Sekvence | Sek |
| většina | 41 |
| Klon / 106 | 42 |
| Klon / 152 | 43 |
| Klon / 294 | 44 |
| Klon / 660 | 45 |
| Klon # 687 | 46 |
| Klon # 826 | 47 |
| Klon / 850 | 48 |
| p27 (myš) | 49 |
i • · ·
SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 1958 páru baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA; jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...1958 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 1:
| TCGAATTGGG | TACCGGGCCC | CCCCTCGAGG | TCGACGGTAT | CGATAAGCTT | GATATCGAAT | 60 |
| TCGCGGCCGC | TCGAGTTACA | AGATGGCGGC | CCCGGGCGCT | CTCTTCACCG | TTCTGTAGCA | 120 |
| GCTTCGGGCT | GAGCGGATG? | CTCTTCTTGT | CCTCAGTGTC | GGACTCAGAG | ACACACGGCT | 180 |
| CCCGAGTTCT | GCTGATCACG | AAGTTCCCGG | AGGCGCTCGA | CGCACCGGAA | TCTCCCAGCG | 240 |
| GCCGCGACCG | CCGCCTCGGC | CCTGCTCGCC | GCGGCGCCGG | GACTCCAGCG | TGATCGGCGG | 300 |
0
| 0 < | 0 0 | 0 0*0 | ||||
| 0 0 | 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 | ||||
| 42 | 0 0 0 0 0 0· | 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 | 0 0 0 0 0 0 0 | |||
| CGGCAGTCAA | GGTTCACAAA | AATGGCGAAG | AGAGTTGCGG | AGAAGGAGTT | GACTGACAGG | 360 |
| AACTGGGATG | AGGAAGACGA | AGTTGAAGAG | ATGGGAACAT | TCTCAGTGGC | CAGTGAGGAA | 420 |
| GTCATGAAGA | ACAGAGCCGT | AAAGAAGGCA | AAGCGCAGAA | ACGTTGGATT | TGAATCTGAT | 480 |
| AGCGGAGGAG | CCTTTAAAGG | TTTCAAAGGT | TTGGTTGTGC | CTTCTGGAGG | AGGAGGGTTT | 540 |
| TCTGGATTTG | GTGGCTCTGG | AGGAAAGCCT | CTGGAAGGAC | TGACAAATGG | AAACAGCACA | 600 |
| GACAATGCCA | CGCCCTTCTC | CAATGTAAAG | ACAGCAGCAG | AGCCCAAGGC | AGCCTTTGGT | 660 |
| TCTTTTGCTG | TGAATGGCCC | TACTACCTTG | GTGGATAAAG | TTTCAAATCC | AAAAACTAAT | 720 |
| GGGGACAGCA | ATCAGCCGCC | CTCCTCCGGC | CCTGCTTCCA | GTACCGCCTG | CCCTGGGAAT | 780 |
| GCCTATCACA | AGCAGCTGGC | TGGCTTGAAC | TGCTCCGTCC | GCGATTGGAT | AGTGAAGCAC | 840 |
| GTGAACACAA | ACCCGCTTTG | TGACCTGACT | CCCATTTTTA | AAGACTATGA | GAGATACTTG | 900 |
| GCGACGATCG | AGAAGCAGCT | TGAGAATGGA | GGCGGCAGCA | GTTCTGAGAG | CCAGACAGAC | 960 |
| AGGGCGACGG | CTGGAATGGA | GCCTCCTTCC | CTTTTTGGTT | CAACAAAACT | ACAGCAAGAG | 1020 |
| TCACCATTTT | CATTTCATGG | CAACAAAGCG | GAGGACACAT | CTGAAAAGGT | GGAGTTTACA | 1080 |
| GCAGAAAAGA | AATCGGACGC | AGCACAAGGA | GCAACAAGTG | CCTCGTTTAG | TTTCGGCAAG | 1140 |
| AAAATTGAGA | GCTCGGCTTT | GGGCTCGTTA | AGCTCTGGCT | CCCTAACTGG | GTTTTCATTC | 1200 |
| TCTGCTGGAA | GCTCCAGCTT | GTTTGGTAAA | GATGCTGCCC | AGAGTAAAGC | AGCCTCTTCG | 1260 |
| CTGTTCTCTG | CTAAAGCATC | CGAGAGTCCG | GCAGGAGGCG | GCAGCAGCGA | GTGCAGAGAT | 1320 |
| GGTGAAGAAG | AGGAGAATGA | CGAGCCACCC | AAGGTAGTGG | TGACCGAAGT | AAAGGAAGAG | 1380 |
| GATGCTTTCT | ACTCCAAAAA | ATGTAAACTA | TTTTACAAGA | AAGACAACGA | ATTTAAAGAG | 1440 |
| AAGGGTGTGG | GGACCCTGCA | TTTAAAACCC | ACAGCAACTC | AGAAGACCCA | GCTCTTGGTG | 1500 |
| CGGGCAGACA | CCAACCTAGG | CAACATACTG | CTGAATGTTC | TGATCGCCCC | CAACATGCCG | 1560 |
| TGCACCCGGA | CAGGAAAGAA | CAACGTCCTT | ATCGTCTGTG | TCCCCAACCC | CCCACTCGAT | 1620 |
| GAGAAGCAGC | CCACTCTCCC | GGCCACCATG | CTGATCCGGG | TGAAGACGAG | CGAGGATGCC | 1680 |
| GATGAATTGC | ACAAGATTTT | ACTGGAGAAA | AAGGATGCCT | GAGCACTGAG | GCTGACCAAG | 1740 |
| GCATGTTGCC | ACGTTGCTGC | TTCCCCTCCG | TCCCTAACTT | AGTCACATTC | TTTCCTCTTC | 1800 |
| TACTGTGACA | TTCTGAGAAC | TTCTAGGTAA | CTTGAACTTT | TGTGAGGAAG | ATTAAGGCCA | 1860 |
| ATAAATCCTT | TCAGTGGCGG | CCGCGAATTC | CTGCAGCCCG | GGGGATCCAC | TAGTTCTAGA | 1920 |
GCGGCCGCCA CCGCGGTGGA GCTCCAGCTT TTGGGAGA
1958 • * ·«« I · • · · v · ♦ · • · ·
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...24 (Xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 2:
Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn 15 10
Asp Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...24 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 3:
Met Ala Lys Arg Val Ala Asp Ala Gin Ile Gin Arg Glu Thr 15 10
Asp Ser Asn Glu Ser Asp Asp Asp Val
Trp
Tyr (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 60 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein
Β Β
Β Β * «
Β « • · · (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...60
| (XÍ | ) POPIS | ; SE | KVENCE; | SE | KVENCE | ID. | C. | 4 : | |||||||
| Asn | Gin | Pro | Pro | Ser | ser | Gly | Pro | Ala | Ser | Ser | Thr | Ala | Cys | Pro | Gly |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Asn | Ala | Tyr | His | Lys | Gin | Leu | Ala | Gly | Leu | Asn | Cys | Ser | Val | Arg | Asp |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Trp | Ile | Val | Lys | His | Val | Asn | Thr | Asn | Pro | Leu | Cys | Asp | Leu | Thr | Pro |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Ile | Phe | Lys | Asp | Tyr | Glu | Arg | Tyr | Leu | Ala | Thr | Ile | ||||
| 50 | 55 | 60 |
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 60 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární
| (ii) | TYP MOLEKULY: protein | |
| ( ix) | ZNAKY: (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...60 | |
| (xi) | POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. | 5 |
| Asn | Arg | Ala | Asp | Gly | Thr | Gly | Glu | Ala | Gin | Val | Αερ | Asn | ser | Pro | Thr |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Thr | Glu | Ser | Asn | Ser | Arg | Leu | Lys | Ala | Leu | Asn | Leu | Gin | Phe | Lys | Ala |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Lys | Val | Asp | Asp | Leu | Val | Leu | Gly | Lys | Pro | Leu | Ala | Asp | Leu | Arg | Pro |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Leu | Phe | Thr | Arg | Tyr | Glu | Leu | Tyr | Ile | Lys | Asn | Ile | ||||
| 50 | 55 | 60 |
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 51 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein ·
(ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...51 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 6:
| Ala | Thr | Ala | Gly | Met | Glu | Pro | Pro | Ser | Leu | Phe | Gly | Ser | Thr | Lys | Leu |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Gin | Gin | Glu | Ser | Pro | Phe | Ser | Phe | His | Gly | Asn | Lys | Ala | Glu | Asp | Thr |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ser | Glu | Lys | Val | Glu | Phe | Thr | Ala | Glu | Lys | Lys | Ser | Asp | Ala | Ala | Gin |
| 35 | 40 | 45 |
Gly Ala Thr 50 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 51 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (li) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...51 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 7:
Ala Asn Ser Ser Thr Ser Pro Ala Pro Ser Ile Pro Ser Thr Gly Phe 15 10 15
Lys Phe Ser Leu Pro Phe Glu Gin Lys Gly Ser Gin Thr Thr Thr Asn 20 25 30
Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala Thr Gly Asn Glu Ser Gin
| 35 | 40 | 45 |
| Asp Ala Thr | ||
| 50 | ||
| INFORMACE PRO SEKVENCI | S IDENTIFIKAČNÍM | ČÍSLEM |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 34 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární fc · • · · fc ·fc fcfc * » · «fc fc · fc··· a • *fc« • « · fcfc fc· (ii) TYP MOLEKULY: protein (ÍX) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...34
| (xi) | POPIS SEKVENCE | : SEKVENCE | ID | . č. | . 8 : |
| His Gly | Asn Lys Ala Glu | Asp Thr Ser | Glu | Lys | Val Glu Phe Thr Ala |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||
| Glu Lys | Lys Ser Asp Ala | Ala Gin Gly | Aid | Thr | Ser Ala Ser Phe Ser |
| 20 | 25 | 30 |
Phe Gly (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 9:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 34 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...34 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 9:
Asn Gly Ser Glu Ser Lys Asp Ser Asp Lys Pro Ser Leu Pro Ser Ala 15 10 15
Val Asp Gly Glu Asn Asp Lys Lys Glu Ala Thr Lys Pro Ala Phe Ser 20 25 30
Phe Gly (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 10;
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 40 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein
··· «· « · • «β * » · • · • · ♦ • · • fc « ·*· 4 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...40
| (xi | ) POPIS SEKVENCE | : SEKVENCE | ID. | . Č. | 10: |
| Leu | Gly Asn Ile Leu Leu | Asn Val Leu | Ile | Ala | Pro Asn Met Pro Cys |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||
| Thr | Arg Thr Gly Lys Asn | Asn Val Leu | Ile | Val | Cys Val Pro Asn Pro |
| 20 | 25 | 30 |
Pro Leu Asp Glu Lys Gin Pro Thr 35 40 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 11:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 40 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...40 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 11:
| Met Gly Asn Val 1 | Leu 5 | Leu Asn | Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys | Tyr | |
| 10 | 15 | ||||
| Glu Pro Leu Ala | Pro | Gly Asn | Asp Asn Leu Ile Lys Ala | Pro Thr | Val |
| 20 | 25 | 30 | |||
| Ala Ala Asp Gly | Lys | Leu Val | Thr | ||
| 35 | 40 | ||||
| (2) INFORMACE PRO | SE | KVENCI | S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 12: |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 157 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...157 φ · · φ · φ·φ φφ φφφφ*·· (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 12;
| Asp | Ser | His | Ala | Asp | His | Asp | Thr | Ser | Thr | Glu | Asn | Ala | Asp | Glu | Ser |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Thr | Thr | His | Pro | Gin | Phe | Glu | Pro | Ile | Val | Ser | Val | Pro | Glu | Gin | Glu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ile | Lys | Thr | Leu | Glu | Glu | Asp | Glu | Glu | Glu | Leu | Phe | Lys | Met | Arg | Ala |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Lys | Leu | Phe | Arg | Phe | Ala | Ser | Glu | Asn | Asp | Leu | Pro | Glu | Trp | Lys | Glu |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Pro | Arg | His | Gly | Asp | Val | Lys | Leu | Leu | Lys | His | Lys | Glu | Lys | Gly | Thr |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Ile | Arg | Leu | Leu | Met | Arg | Arg | Asp | Lys | Thr | Leu | Lys | Ile | Cys | Ala | Asn |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| His | Tyr | Ile | Thr | Pro | Met | Met | Clu | Leu | Lys | Pro | Asn | Ala | Gly | Ser | Asp |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Arg | Ala | Trp | Val | Trp | Asn | Thr | His | Thr | Asp | Phe | Ala | Asp | Glu | Cys | Pro |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Lys | Pro | Glu | Leu | Leu | Ala | Ile | Arg | Phe | Leu | Asn | Ala | Glu | Asn | Ala | Gin |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Lys | Phe | Lys | Thr | Lys | Phe | Glu | Glu | Cys | Arg | Lys | Glu | Ile | |||
| 145 | 150 | 155 | |||||||||||||
| (2) INFORMA | .CE | PRO | SEK | VEN' | Cl S ID | έντ: | IFIKAČN | ÍM | ČÍSLEM | 13 : |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 157 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKYj (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...157 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 13:
Asp Ser His Ala Asp His Asp Thr Ser Thr Glu Asn Ala Asp Glu Ser 15 10 15
Asn His Asp Pro Gin Phe Glu Pro Ile Val Ser Val Pro Glu Gin Glu 20 25 30 «« · · · · * * · ·» · « ·· « « «·«» «· · · · » · * · · · ♦ • a* · · »♦····· ·· a·
| Ile Lys | Thr 35 | Leu Glu Glu | Asp | Glu 40 | Glu | Glu | Leu | Phe | Lys 45 | Met | Arg | Ala | |||
| Lys | Leu | Phe | Arg | Phe | Ala | Ser | Glu | Asn | Asp | Leu | Pro | Glu | Trp | Lys | Glu |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Arg | Gly | Thr | Gly | Asp | Val | Lys | Leu | Leu | Lys | His | Lys | Glu | Lys | Gly | Thr |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Ile | Arg | Leu | Leu | Met | Arg | Arg | Asp | Lys | Thr | Leu | Lys | Ile | Cys | Ala | Asn |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| His | Tyr | Ile | Thr | Pro | Met | Met | Glu | Leu | Lys | Pro | Asn | Ala | Gly | Ser | Asp |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Arg | Ala | Trp | Val | Trp | Asn | Thr | His | Thr | Asp | Phe | Ala | Asp | Glu | Cys | Pro |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Lys | Pro | Glu | Leu | Leu | Ala | Ile | Arg | Phe | Leu | Asn | Ala | Glu | Asn | Ala | Gin |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Lys | Phe | Lys | Thr | Lys | Phe | Glu | Glu | Cys | Arg | Lys | Glu | Ile |
145 150 155 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 14;
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 158 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1. . , 158
| (xi) POPIS SEKVENCE | : SEKVENCE | ID | . Č. | 14 : |
| Ser Gin Thr Thr Thr Asn 1 5 | Asp Ser Lys | Glu 10 | Glu | Ser Thr Thr Glu Ala 15 |
| Thr Gly Asn Glu Ser Gin 20 | Asp Ala Thr 25 | Lys | Val | Asp Ala Thr Pro Glu 30 |
| Glu Ser Lys Pro Ile Asn 35 | Leu Gin Asn 40 | Gly | Glu | Glu Asp Glu Val Ala 45 |
| Leu Phe Ser Gin Lys Ala 50 | Lys Leu Met 55 | Thr | Phe | Asn Ala Glu Thr Lys 60 |
| Ser Tyr Asp Ser Arg Gly 65 70 | Val Gly Glu | Met | Lys 75 | Leu Leu Lys Lys Lys 80 |
* * • · ·· · · · ♦ · · f « · « · · · « · I ·· «····«· «· ··
| Asp Asp Ser Pro Lys Val Arg Leu Leu Cys Arg Ser Asp Gly Met Gly | |||
| 85 | 90 | 95 | |
| Asn Val Leu | Leu Asn Ala | Thr Val Val Asp Ser Phe Lys | Tyr Glu Pro |
| 100 | 105 | 110 | |
| Leu Ala Pro | Gly Asn Asp | Asn Leu Ile Lys Ala Pro Thr | Val Ala Ala |
| 115 | 120 125 | ||
| Asp Gly Lys | Leu Val Thr | Tyr Ile Val Phe Lys Gin Lys | Leu Glu Gly |
| 130 | 135 140 | ||
| Arg Ser Phe | Thr Lys Ala | Ile Glu Asp Ala Lys Lys Glu | Met |
| 145 | 150 | 155 | |
| INFORMACE | PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 15: | ||
| (i) CHARAKTERISTIKA | SEKVENCE: | ||
| (A) | DÉLKA: 160 | aminokyselin | |
| (B> | TYP: aminokyselina | ||
| (C) | TYP VLAKNA | : j ednoduché | |
| (D) | TOPOLOGIE: | 1ineární | |
| (ii) TYP | MOLEKULY: ; | protein |
(ix) ZNAKY:
| (A) (B) | JMÉNO/OZNAČENÍ: protein | |||
| POZICE: | 1 . | . . 160 | ||
| (xi) POPIS SEKVENCE | : SEKVENCE ID. Č. 15: | |||
| Gin Ser | Lys | Ala Ala | Ser | Ser Leu Phe Ser Ala Lys Ala Ser Glu Ser |
| 1 | 5 | 10 15 | ||
| Pro Ala | Gly | Gly Gly | Ser | Ser Glu Cys Arg Asp Gly Glu Glu Glu Glu |
| 20 | 2S 30 | |||
| Asn Asp | Glu | Pro Pro | Lys | Val Val Val Thr Glu Val Lys Glu Glu Asp |
| 35 | 40 45 | |||
| Ala Phe | Tyr | Ser Lys | Lys | Cys Lys Leu Phe Tyr Lys Lys Asp Asn Glu |
| 50 | 55 60 | |||
| Phe Lys | Glu | Lys Gly | Val | Gly Thr Leu His Leu Lys Pro Thr Ala Thr |
| 65 | 70 | 75 80 | ||
| Gin Lys | Thr | Gin Leu | Leu | Val Arg Ala Asp Thr Asn Leu Gly Asn Ile |
| 85 | 90 95 | |||
| Leu Leu | Asn | Val Leu | Ile | Ala Pro Asn Met Pro Cys Thr Arg Thr Gly |
| 100 | 105 110 | |||
| Lys Asn | Asn | Val Leu | Ile | Val Cys Val Pro Asn Pro Leu Asp Glu Lys |
| 115 | 120 125 | |||
| Gin Pro | Thr | Leu Pro | Ala | Thr Met Leu Ile Arg Val Lys Thr Ser Glu |
| 130 | 135 140 |
• « ol ys Lys Asp Ala Ala
160
Asp Ala Asp Glu Leu His Lys Ile Leu Leu Glu 145 150 155 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 16:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 466 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:, (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...466
| (x. | i) POPI | S S! | EKVENCE | : SEKVENCE | ID | . C. | 1 | 6 : |
| Met 1 | Ala Lys | Arg | Val Ala 5 | Glu Lys Glu | Leu 10 | Thr | Asp | Arg Asn Trp Asp 15 |
| Glu | Glu Asp | Glu 20 | Val Glu | Glu Met Gly 25 | Thr | Phe | Ser | Val Ala Ser Glu 30 |
| Glu | Val Met 35 | Lys | Asn Arg | Ala Val Lys 40 | Lys | Ala | Lys | Arg Arg Asn Val 45 |
| Gly | Phe Glu 50 | Ser | Asp Ser | Gly Gly Ala 55 | Phe | Lys | cly 60 | Phe Lys Gly Leu |
| Val 65 | Val Pro | Ser | Gly Gly 70 | Gly Gly Phe | Ser | Gly 75 | Phe | Gly Gly Ser Gly 80 |
| Gly | Lys Pro | Leu | Glu Gly 85 | Leu Thr Asn | Gly 90 | Asn | Ser | Thr Asp Asn Ala 95 |
| Thr | Pro Phe | Ser 100 | Asn Val | Lys Thr Ala 105 | Ala | Glu | Pro | Lys Ala Ala Phe 110 |
| Gly | Ser Phe 115 | Ala | Val Asn | Gly Pro Thr 120 | Thr | Leu | Val | Asp Lys Val Ser 125 |
| Asn | Pro Lys 130 | Thr | Asn Gly | Asp Ser Asn 13S | Gin | Pro | Pro 140 | Ser Ser Gly Pro |
| Ala 145 | Ser Ser | Thr | Ala Cys 150 | Pro Gly Asn | Ala | Tyr 155 | His | Lys Gin Leu Ala 160 |
| Gly | Leu Asn | Cys | Ser Val 165 | Arg Asp Trp | Ile 170 | Val | Lys | His Val Asn Thr 175 |
| Asn | Pro Leu | Cys 180 | Asp Leu | Thr Pro Ile 185 | Phe | Lys | Asp | Tyr Glu Arg Tyr 190 |
· • « « · · ♦ · · • * « · * · · · * 9 · • · · « · · · • · · ««··«·· · » * *
| Leu Ala | Thr 195 | Ile Glu | Lys | Gin | Leu Glu Asn Gly Gly Gly Ser | Ser | Ser | |
| 200 | 205 | |||||||
| Glu Ser 210 | Gin | Thr Asp | Arg | Ala 215 | Thr | Ala Gly Met Glu Pro Pro 220 | Ser | Leu |
| Phe Gly 225 | Ser | Thr Lys | Leu 230 | Gin | Gin | Glu Ser Pro Phe Ser Phe 235 | His | Gly 240 |
| Asn Lys | Ala | Glu Asp 245 | Thr | Ser | Glu | Lys Val Glu Phe Thr Ala 250 | Glu 255 | Lys |
| Lys Ser | Asp | Ala Ala 260 | Gin | Gly | Ala | Thr Ser Ala Ser Phe Ser 26S 270 | Phe | Gly |
| Lys Lys | Ile 275 | Glu Ser | Ser | Ala | Leu 280 | Gly Ser Leu Ser Ser Gly 285 | Ser | Leu |
| Thr Gly 290 | Phe | Ser Phe | Ser | Ala 295 | Gly | Ser Ser Ser Leu Phe Gly 300 | Lys | Asp |
| Ala Ala 305 | Gin | Ser Lys | Ala 310 | Ala | Ser | Ser Leu Phe Ser Ala Lys 315 | Ala | Ser 320 |
| Glu Ser | Pro | Ala Gly 325 | Gly | Gly | Ser | Ser Glu Cys Arg Asp Gly 330 | Glu 335 | Glu |
| Glu Glu | Asn | Asp Glu 340 | Pro | Pro | Lys | Val Val Val Thr Glu Val 345 350 | Lys | Glu |
| Glu Asp | Ala 355 | Phe Tyr | Ser | Lya | Lys 360 | Cys Lys Leu Phe Tyr Lys 365 | Lys | Asp |
| Asn Glu 370 | Phe | Lys Glu | Lys | Gly 375 | Val | Gly Thr Leu His Leu Lys 380 | Pro | Thr |
| Ala Thr 385 | Gin | Lys Thr | Gin 390 | Leu | Leu | Val Arg Ala Asp Thr Asn 395 | Leu | Gly 400 |
| Asn Ile | Leu | Leu Asn 405 | Val | Leu | Ile | Ala Pro Asn Met Pro Cys 410 | Thr 415 | Arg |
| Thr Gly | Lys | Asn Asn 420 | Val | Leu | Ile | Val Cys Val Pro Asn Pro 425 430 | Pro | Leu |
| Asp Glu | Lys 435 | Gin Pro | Thr | Leu | Pro 440 | Ala Thr Met Leu Ile Arg 445 | Val | Lys |
| Thr Ser 450 Asp Ala 465 | Glu | Asp Ala | Asp | Glu 455 | Leu | His Lys Ile Leu Leu Glu 460 | Lys | Lys |
| (2} INFORMACE PRO SEKVENCI £ | 1 IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM | 17 : |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 715 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární {ii} TYP MOLEKULY: protein (ix). ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1..715 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 17:
| Met 1 | Ala Lys Arg | Val 5 | Ala | Asp | Ala Gin | Ile Gin Arg Glu Thr Tyr | Asp | ||||||||
| 10 | 15 | ||||||||||||||
| ser | Asn | Glu | Ser | Asp | Asp | Asp | Val | Thr | Pro | Ser | Thr | Lys | Val | Ala | Ser |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| ser | Ala | Val | Met | Asn | Arg | Arg | Lys | Ile | Ala | Met | Pro | Lys | Arg | Arg | Met |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Ala | Phe | Lys | Pro | Phe | Gly | Ser | Ala | Lys | Ser | Asp | Glu | Thr | Lys | Gin | Ala |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Ser | Ser | Phe | Ser | Phe | Leu | Asn | Arg | Ala | Asp | Gly | Thr | Gly | Glu | Ala | Gin |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Val | Asp | Asn | Ser | Pro | Thr | Thr | Glu | Ser | Asn | Ser | Arg | Leu | Lys | Ala | Leu |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Asn | Leu | Gin | Phe | Lys | Ala | Lys | Val | Asp | Asp | Leu | Val | Leu | Gly | Ly3 | Pro |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Leu | Ala | Asp | Leu | Arg | Pro | Leu | Phe | Thr | Arg | Tyr | Glu | Leu | Tyr | Ile | Lys |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Asn | Ile | Leu | Glu | Ala | Pro | Val | Lys | Phe | Ile | Glu | Asn | Pro | Thr | Gin | Thr |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Lys | Gly | Asn | Asp | Ala | Lys | Pro | Ala | Lys | Val | Glu | Asp | Val | Gin | Lys | Ser |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ser | Asp | Ser | Ser | Ser | Glu | Asp | Glu | Val | Lys | Val | Glu | Gly | Pro | Lys | Phe |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Thr | Ile | Asp | Ala | Lys | Pro | Pro | Ile | Ser | Asp | Ser | Val | Phe | Ser | Phe | Gly |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Pro | Lys | Lys | Glu | Asn | Arg | Lys | Lys | Asp | Glu | Ser | Asp | Ser | Glu | Asn | Asp |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ile | Glu | Ile | Lys | Gly | Pro | Glu | Phe | Lys | Phe | Ser | Gly | Thr | Val | Ser | Ser |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Asp | Val | Phe | Lys | Leu | Asn | Pro | Ser | Thr | Asp | Lys | Asn | Glu | Lys | Lys | Thr |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Glu | Thr | Asn | Ala | Lys | Pro | Phe | Ser | Phe | Ser | Ser | Ala | Thr | Ser | Thr | Thr |
| 245 | 250 | 255 |
4 • *
| Glu | Gin | Thr | Lys 260 | Ser | Lys | Asn | Pro | Leu 265 | Ser | Leu | Thr | Glu | Ala 270 | Thr | Lys |
| Thr | Asn | Val | Asp | Asn | Asn | Ser | Lys | Ala | Glu | Ala | Ser | Phe | Thr | Phe | Gly |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Thr | Lys | His | Ala | Ala | Asp | Ser | Gin | Asn | Asn | Lys | Pro | Ser | Phe | Val | Phe |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Gly | Gin | Ala | Ala | Ala | Lys | Pro | Ser | Leu | Glu | Lys | Ser | Ser | Phe | Thr | Phe |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Gly | Ser | Thr | Thr | Ile | Glu | Lys | Lys | Asn | Asp | Glu | Asn | Ser | Thr | Ser | Asn |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Ser | Lys | Pro | Glu | Lys | Ser | Ser | Asp | Ser | Asn | Asp | Ser | Asn | Pro | Ser | Phe |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Ser | Phe | Ser | Ile | Pro | Ser | Lys | Asn | Thr | Pro | Asp | Ala | Ser | Lys | Pro | Ser |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Phe | Asn | Phe | Gly | Val | Pro | Asn | Ser | Ser | Lys | Asn | Glu | Thr | Ser | Lys | Pro |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| Val | Phe | Ser | Phe | Gly | Ala | Ala | Thr | Pro | Ser | Ala | Lys | Glu | Ala | Ser | Gin |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| Glu | Asp | Asp | Asn | Asn | Asn | Val | Glu | Lys | Pro | Ser | Ser | Lys | Pro | Ala | Phe |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| Asn | Phe | Ile | Ser | Asn | Ala | Gly | Thr | Glu | Lys | Glu | Lys | Glu | Ser | Lys | Lys |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| Asp | Ser | Lys | Pro | Ala | Phe | Ser | Phe | Gly | Ile | Ser | Asn | Gly | Ser | Glu | Ser |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| Lys | Asp | Ser | Asp | Lys | Pro | Ser | Leu | Pro | Ser | Ala | Val | Asp | Gly | Glu | Asn |
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| Asp | Lys | Lys | Glu | Ala | Thr | Lys | Pro | Ala | Phe | Phe | Gly | Ile | Asn | Thr | Asn |
| 465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
| Thr | Thr | Lys | Thr | Ala | Asp | Thr | Lys | Ala | Pro | Thr | Phe | Thr | Phe | Gly | Ser |
| 485 | 490 | 495 | |||||||||||||
| Ser | Ala | Leu | Ala | Asp | Asn | Lys | Glu | Asp | Val | Lys | Lys | Pro | Phe | Ser | Phe |
| 500 | 505 | 510 | |||||||||||||
| Gly | Thr | Ser | Gin | Pro | Asn | Asn | Thr | Pro | Ser | Phe | Ser | Phe | Gly | Lys | Thr |
| 515 | 520 | 525 | |||||||||||||
| Thr | Ala | Asn | Leu | Pro | Ala | Asn | Ser | Ser | Thr | Ser | Pro | Ala | Pro | Ser | Ile |
| 530 | 535 | 540 | |||||||||||||
| Pro | Ser | Thr | Gly | Phe | Lys | Phe | Ser | Leu | Pro | Phe | Glu | Gin | Lys | Gly | Ser |
545
550
555
560
Gin Thr Thr Thr Asn Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala Thr 565 570 575 • · φ Φ Φ Β · ♦ · Φ · • * ·· Φ Φ Φ · · · φ · φ · · Φ Φ φφφ ·Φ« »» «ΦΦΦΦΦΦ Φ» ΦΦ
| Gly Asn Glu | Ser Gin Asp Ala Thr 580 | Lys 585 | Val | Asp | Ala | Thr | Pro 590 | Glu | Glu |
| Ser Lys Pro | Ile Asn Leu Gin Asn | Gly | Glu | Glu | Asp | Glu | Val | Ala | Leu |
| 595 | 600 | 605 | |||||||
| Phe Ser Lys | Ala Lys Leu Met Thr | Phe | Asn | Ala | Glu | Thr | Lys | Ser | Tyr |
| 610 | 615 | 620 | |||||||
| Asp Ser Arg | Gly Val Gly Glu Met | Lys | Leu | Leu | Lys | Lys | Lys | Asp | Asp |
| 625 | 630 | 635 | 640 | ||||||
| Pro Ser Lys | Val Arg Leu Leu Cys | Arg | Ser | Asp | Gly | Met | Gly | Asn | Val |
| 645 | 650 | 655 | |||||||
| Leu Leu Asn | Ala Thr Val Val Asp | Ser | Phe | Lys | Tyr | Glu | Pro | Leu | Ala |
| 660 | 665 | 670 | |||||||
| Pro Gly Asn | Asp Asn Leu Ile Lys | Ala | Pro | Thr | Val | Ala | Ala | Asp | Gly |
| 675 | 680 | 685 | |||||||
| Lys Thr Tyr | Ile Val Lys Phe Lys | Gin | Lys | Glu | Glu | Gly | Arg | Ser | Phe |
| 690 | 695 | 700 | |||||||
| Thr Lys Ala | Ile Glu Asp Ala Lys | Lys | Glu | Lys | |||||
| 705 | 710 | 715 | |||||||
| (2) INFORMACE | PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM < | ČÍSLEM | 18 : |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 335 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární
| (li) | TYP MOLEKULY: protein | |
| (ix) | ZNAKY: (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...335 | |
| (xi) | POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. | 18 |
| Met | Ala | Lys | Arg | Val | Ala | Glu | Lys | Glu | Leu | Thr | Asp | Arg | Asn | Trp | Asp |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Glu | Glu | Asp | Glu | Val | Glu | Glu | Met | Gly | Thr | Phe | Ser | Val | Ala | Ser | Glu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Glu | Val | Met | Lys | Asn | Arg | Ala | Val | Lys | Lys | Ala | Lys | Arg | Arg | Asn | Val |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Gly | Phe | Glu | Ser | Asp | Ser | Gly | Gly | Ala | Phe | Lys | Gly | Phe | Lys | Gly | Leu |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Val | Val | Pro | Ser | Gly | Gly | Gly | Gly | Phe | Ser | Gly | Phe | Gly | Gly | Ser | Gly |
| 65 | 70 | 75 | 80 |
• 0 0 ·
| Gly | Lys | Pro | Leu | Glu | Gly | Leu | Thr | Asn | Gly Asn | Ser | Thr | Asp Asn | Ala |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||
| Thr | Pro | Phe | Ser | Asn | Val | Lys | Thr | Ala | Ala Glu | Pro | Lys | Ala Ala | Phe |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||
| Gly | Ser | Phe | Ala | Val | Asn | Gly | Pro | Phe | Thr Ala | Glu | Lys | Lys Ser | Asp |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||
| Ala | Ala | Gin | Gly | Ala | Thr | ser | Ala | Ser | Phe Ser | Phe | Gly | Lys Lys | Ile |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||
| Glu | Ser | Ser | Ala | Leu | Gly | Ser | Leu | Ser | Ser Gly | Ser | Leu | Thr Gly | Phe |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
| Ser | Phe | Ser | Ala | Gly | Ser | Ser | Ser | Leu | Phe Gly | Lys | Asp | Ala Ala | Gin |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||
| Ser | Lys | Ala | Ala | Ser | Ser | Leu | Phe | Ser | Ala Lys | Ala | Ser | Glu Ser | Pro |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||
| Ala | Gly | Gly | Gly | Ser | Ser | Glu | Cys | Arg | Asp Gly | Glu | Glu | Glu Glu | Asn |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||
| Asp | Glu | Pro | Pro | Lys | Val | Val | Val | Thr | Glu Val | Lys | Glu | Glu Asp | Ala |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||
| Phe | Tyr | Ser | Lys | Lys | Cys | Lys | Leu | Phe | Tyr Lys | Lys | ASp | Asn Glu | Phe |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||
| Lys | Glu | Lys | Gly | Val | Gly | Thr | Leu | His | Leu Lys | Pro | Thr | Ala Thr | Gin |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||
| Lys | Thr | Gin | Leu | Leu | Val | Arg | Ala | Asp | Thr Asn | Leu | Gly | Asn Ile | Leu |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||
| Leu | Asn | Val | Leu | Ile | Ala | Pro | Asn | Met | Pro Cys | Thr | Arg | Thr Gly | Lys |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||
| Asn | Asn | Val | Leu | Ile | Val | Cys | Val | Pro | Asn Pro | Pro | Leu | Asp Glu | Lys |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||
| Gin | Pro | Thr | Leu | Pro | Ala | Thr | Met | Leu | Ile Arg | Val | Lys | Thr Ser | Glu |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||
| Asp | Ala | Asp | Glu | Leu | His | Lys | Ile | Leu | Leu Glu | Lys | Lys | Asp Ala | |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||
| (2) INFORMACE | PRO | SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM 1 | ČÍSLEM 19: |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 310 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (i i) TYP MOLEKULY: protein • fc fc fc • · • · • * • fc (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...310 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 19:
| Met Ala 1 | Ly9 Arg | Val Ala 5 | Glu | Lys | Glu | Leu 10 | Thr Asp Arg Asn | Trp 15 | Asp | ||||||
| Glu | Glu | Asp | Glu | Val | Glu | Glu | Met | Gly | Thr | Phe | Ser | Val | Ala | Ser | Glu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Glu | Val | Met | Lys | Asn | Arg | Ala | Val | Lys | Lys | Ala | Lys | Arg | Arg | Asn | Val |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Gly | Phe | Glu | Ser | Asp | Ser | Gly | Gly | Ala | Phe | Lys | Gly | Phe | Lys | Gly | Leu |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Val | Val | Pro | Ser | Gly | Gly | Gly | Gly | Phe | Ser | Gly | Phe | Gly | Gly | Ser | Gly |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Gly | Lys | Pro | Leu | Glu | Gly | Leu | Thr | Asn | Gly | Asn | Ser | Thr | Asp | Asn | Ala |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Thr | Pro | Phe | Ser | Asn | Val | Lys | Thr | Ala | Ala | Glu | Pro | Lys | Ala | Ala | Phe |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Gly | Ser | Phe | Ala | Val | Asn | Gly | Pro | Thr | Thr | Leu | Val | Asp | Lys | Val | Ser |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Asn | Pro | Lys | Thr | Asn | Gly | Asp | Ser | Asn | Gin | Pro | Pro | Ser | Ser | Gly | Pro |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Ala | Ser | Ser | Thr | Ala | Cys | Pro | Gly | Asn | Ala | Tyr | His | Lys | Gin | Leu | Ala |
| 145 | ISO | 155 | 160 | ||||||||||||
| Gly | Leu | Asn | Cys | Ser | Val | Arg | Asp | Trp | Ile | Val | Lys | His | Val | Asn | Ile |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Asn | Pro | Leu | Cys | Asp | Leu | Thr | Pro | Ile | Phe | Lys | Asp | Tyr | Glu | Arg | Tyr |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Leu | Ala | Thr | Ile | Glu | Lys | Gin | Leu | Glu | Asn | Gly | Gly | Gly | Ser | Ser | Ser |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Glu | Ser | Gin | Thr | Asp | Arg | Ala | Thr | Ala | Gly | Met | Glu | Pro | Pro | Ser | Leu |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Phe | Gly | Ser | Thr | Lys | Leu | Gin | Gin | Glu | Ser | Pro | Phe | Ser | Phe | His | Gly |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Asn | Lys | Ala | Glu | Asp | Thr | Ser | Glu | Lys | Val | Glu | Phe | Thr | Ala | Glu | Lys |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Lys | Ser | Asp | Ala | Ala | Gin | Gly | Ala | Thr | Ser | Ala | Ser | Phe | Ser | Phe | Gly |
| 260 | 265 | 270 |
• * • · · · · « φ ·· · · »·· ·· · · · ··« ·· ·«· ·«·« ·· ··
| Lys | Lys | Ile 275 | Glu | Ser | Ser | Ala | Leu 200 | Gly | Ser | Leu | Ser | Ser 285 | Gly | Ser | Leu |
| Thr | Gly | Phe | ser | Phe | Ser | Ala | Gly | Ser | Ser | Ser | Leu | Phe | Gly | Lys | Asp |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Ala | Ala | Glu | Lys | Glu | Leu |
305 310 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 20:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 132 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKYj (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...132 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 20:
| Thr Thr Leu Val 1 | Asp Lys Val 5 | Ser | Asn | Pro 10 | Lys | Thr Asn | Gly | Asp 15 | Ser | ||||||
| Asn | Gin | Pro | Pro | Ser | Ser | Gly | Pro | Ala | Ser | Ser | Thr | Ala | Cys | Pro | Gly |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Asn | Ala | Tyr | His | Lys | Gin | Leu | Ala | Gly | Leu | Asn | Cys | Ser | val | Arg | Asp |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Trp | Ile | Val | Lys | His | Val | Asn | Thr | Asn | Pro | Leu | Cys | Asp | Leu | Thr | Pro |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Ile | Phe | Lys | Asp | Tyr | Glu | Arg | Tyr | Leu | Ala | Thr | Ile | Glu | Lys | Gin | Leu |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Glu | Asn | Gly | Gly | Gly | Ser | Ser | Ser | Glu | Ser | Gin | Thr | Asp | Arg | Ala | Thr |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Ala | Gly | Met | Glu | Pro | Pro | Ser | Leu | Phe | Gly | Ser | Thr | Lys | Leu | Gin | Gin |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Glu | Ser | Pro | Phe | Ser | Phe | His | Gly | Asn | Lys | Ala | Glu | Asp | Thr | Ser | Glu |
115 120 125
Lys Val Glu Phe 130 *· · • · · · · • · · · * • · ··· · · • · · · · • •v·*· · · · · (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 21:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 21:
AGAAAGCAAA GCGCAGAAAT GT 22 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 22:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ií) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xí) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 22:
CAAATCCAGA AAAGCGTCCT C 21 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 23:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...24 (Xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 23:
TGAAGAATAG AGCCATAAAG AAAG ··« · • · • · 1 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 24:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 páru baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 24:
AGAAAAGCGT CCTCCTCCAG A 21 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 25:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...24 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 25:
TGAAGAATAG AGCCATAAAG AAAG 24 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 26:
AGCGCCACTA ACCAAATCCA GA « Β • · · · · · · · ·
Β Β Β Β Β* »· · Β » · Β I»»Β * · · · V · Β Β
Β· · ΒΒ »·»·»·» «Β ♦ Β (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 27:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 páru baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 27:
AGAAAGCAAA GCGCAGAAAT GT 22 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 28:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 28:
GAAAAGCGTC CTCCTCCAGA AG 22 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 29:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 29:
GAAAGCAAAG CGCAGAAATG TT (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3 0:
*«· (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 30:
CTCCAGCGCC ACTACCAAAT C 21 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI Ξ IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 31:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 20 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE; lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...20 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 31:
CCCGCACGGA GCAGTTCAAG 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 32:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (íi) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 32:
GCAGCGGCAG ATCCCAAGGT AG • * • * a · · • « (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 33:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 17 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (íx) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1 ... 17 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 33:
GGCATCCTTT TTCTCCA 17 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 34:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 34:
CGTTCTTATC GTCTCTGTGT TC 22 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 35:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 19 párů bázi (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...19 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 35:
GCATCCTTTT TCTCCAGTA v v * 9 • a a a a n a » < «4 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 36:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 18 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...18 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 36:
TGTTCCAAAT CCACCAAT 18 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 37:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 19 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...19 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 37:
GTCTGCATCC TCGCTGGTT 19 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 38:
(í) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (íi) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 38:
CGTTCTTATC GTCTGTGTTC C (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 39:
«·0 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 18 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...18 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 39:
TTTTACCCGA ATCAACAT 18 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 40:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 40:
GTACGCGAAC AGGGAAGAAT A 21 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S jEM 41 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 212 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...212
| (xi) POPIS | SEKVENCE: | SEKVENCE | ID. | Č. | 41 : | |
| Arg Val | Ser Asn Gly | Ser Pro Ser | Leu | Glu | Arg Met Asp Ala Arg Gin | |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||
| Ala Asp | His Pro Lys | Pro Ser Ala | Cys | Arg | Asn Leu Phe Gly Pro Val | |
| 20 | 25 | 30 | ||||
| * | Asn His | Gly Glu Leu | Thr Arg Asp | Leu | Glu | Lys His Cys Arg Asp Met |
| 35 | 40 | 45 | ||||
| Glu Glu | Ala Ser Gin | Arg Lys Trp | Asn | Phe | Asp Phe Gin Asn His Lys | |
| 50 | 55 | 60 | ||||
| Pro Leu | Glu Gly Arg | Tyr Glu Trp | Gin | Glu | Val Glu Arg Gly Ser Leu | |
| 65 | 70 | 75 80 | ||||
| Pro Glu | Phe Tyr Tyr | Arg Pro Pro | Arg | Pro | Pro Lys Ser Ala Cys Lys | |
| 85 | 90 | 95 | ||||
| Val Leu | Ala Gin Glu | Ser Gin Asp | Val | Ser | Gly Ser Arg Gin Ala Val | |
| 100 | 105 | 110 | ||||
| Pro Leu | Ile Gly Ser | Gin Ala Asn | Ser | Glu | Asp Arg His Leu Val Asp | |
| 115 | 120 | 125 | ||||
| Gin Met | Pro Asp Ser | Ser Asp Asn | Gin | Ala | Gly Leu Ala Glu Gin Cys | |
| 130 | 135 | 140 | ||||
| Pro Gly | Met Arg Lys | Arg Pro Ala | Ala | Glu | Asp Ser Ser Ser Gin Ile | |
| 145 | 150 | 155 160 | ||||
| Lys Arg | Ala Asn Arg | Thr Glu Glu | Asn | Val | Ser Asp Gly Ser Pro Asn | |
| 165 | 170 | 175 | ||||
| Ala Gly | Thr Val Glu | Gin Thr Pro | Lys | Lys | Pro Gly Leu Arg Arg Gin | |
| v | 180 | 185 | 190 | |||
| Thr Arg | Val Asp Leu | Gin Pro Ser | Phe | Arg | Ala Asn Phe Leu Phe Met | |
| 195 | 200 | 205 | ||||
| Ile Phe | Ile Lys | |||||
| 210 | ||||||
| (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 42; |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 183 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein • ♦ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...183
| (xi Met 1 | ) POPIS SEKVENCE: | : SEKVENCE | ID. Lys 10 | C. Pro | 42 : | |||||||
| Asp | Ala Arg Gin Ala 5 | Asp | His | Pro | Ser | Ala | Cys | Arg 15 | Asn | |||
| Leu | Phe | Gly Pro Val Asn | His | Gly | Glu | Leu | Thr | Arg | Αερ | Leu | Glu | Lys |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||
| His | Cys | Arg Asp Met Glu | Glu | Ala | Ser | Gin | Arg | Lys | Trp | Asn | Phe | Asp |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||
| Phe | Gin | Asn His Lys Pro | Leu | Glu | Gly | Arg | Tyr | Glu | Trp | Gin | Glu | Val |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||
| Glu | Arg | Gly Ser Leu Pro | Glu | Phe | Tyr | Tyr | Arg | Pro | Pro | Cys | Pro | Pro |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||
| Lya | Ser | Ala Cys Lys Val | Leu | Ala | Gin | Glu | Ser | Gin | Asp | Val | Ser | Gly |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||
| Ser | Arg | Gin Ala val Pro | Leu | Ile | Gly | Ser | Gin | Ala | Asn | Ser | Glu | Asp |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||
| Arg | His | Leu Val Asp Gin | Met | Pro | Asp | Ser | Ser | Asp | Asn | Gin | Ala | Gly |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||
| Leu | Ala | Glu Gin Cys Pro | Gly | Met | Arg | Lys | Arg | Pro | Ala | Ala | Glu | Asp |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||
| Ser | Ser | Ser Gin Ile Lys | Arg | Ala | Asn | Arg | Thr | Glu | Glu | Asn | Val | Ser |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||
| Asp | Gly | Ser Pro Asn Ala | Gly | Thr | Val | Glu | Gin | Thr | Pro | Lys | Lys | Pro |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||
| Gly | Leu | Arg Arg Gin Thr | Arg | |||||||||
| 180 | ||||||||||||
| 2) INFORMACE PRO SEKVENCI S | IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 43: |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 199 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ; protein (J3) POZICE: 1...199 (xí) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 43:
| Arg Val 1 | Ser Asn | Gly 5 | Ser | Pro | Ser | Pro Glu 10 | Arg | Met | Asp | Ala | Arg 15 | Gin |
| Ala Asp | His Pro | Lys | Pro | Ser | Ala | Cys Arg | Asn | Leu | Phe | Gly | Pro | Val |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||
| Asn His | Gly Glu | Leu | Thr | Arg | Asp | Leu Glu | Lys | His | Cys | Arg | Asp | Met |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||
| Glu Glu | Ala Ser | Gin | His | Lys | Trp | Asn Phe | Asp | Phe | Gin | Asn | His | Arg |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||
| Pro Leu | Glu Gly | Arg | Tyr | Glu | Trp | Gin Glu | Val | Glu | Arg | Gly | Ser | Leu |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||
| Pro Glu | Phe Tyr | Tyr | Arg | Pro | Pro | Arg Pro | Pro | Lys | Ser | Ala | Cys | Lys |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||
| Val Leu | Ala Gin | Glu | Ser | Gin | Asp | Val Ser | Gly | Ser | Arg | Gin | Ala | Val |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||
| Pro Leu | Ile Gly | Ser | Gin | Ala | Asn | Ser Glu | Asp | Arg | His | Leu | Val | Asp |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||
| Gin Met | Pro Asp | Ser | Ser | Asp | Asn | Gin Ala | Gly | Leu | Ala | Glu | Gin | Cyg |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||
| Pro Gly | Met Arg | Lys | Arg | Pro | Ala | Ala Glu | Asp | Ser | Ser | Ser | Gin | Ile |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||
| Lys Arg | Ala Asn | Arg | Thr | Glu | Glu | Asn Val | Ser | Asp | Gly | Ser | Pro | Asn |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||
| Ala Gly | Thr Val | Glu | Gin | Thr | Pro | Lys Lys | Pro | Gly | Pro | Arg | Arg | Gin |
| 180 | 185 | 190 | ||||||||||
| Thr Arg | Val Asp | Leu | Gin | Pro | ||||||||
| 195 | ||||||||||||
| 2) INFORMACE PRO | SEKVENCI S | IDENTIFIKAČN | ÍM ČÍSLEM | 44 : |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 199 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ÍX) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...199 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 44:
| Arg Val 1 | Ser | Asn | Gly 5 | Ser Pro | Ser Leu | Glu 10 | Arg | Met | Asp | Ala | Arg 15 | Gin | ||
| Ala | Asp | His | Pro | Lys | Pro Ser | Ala | Cys | Arg | Asn | Leu | Phe | Gly | Pro | Val |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||
| Asn | His | Gly | Glu | Leu | Thr Arg | Asp | Leu | Glu | Lys | His | Cys | Arg | Asp | Met |
| 35 | 40 | 45 | ||||||||||||
| Glu | Glu | Ala | Ser | Gin | Arg Lys | Trp | Asn | Phe | Asp | Phe | Gin | Asn | His | Lys |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||
| Pro | Leu | Glu | Gly | Arg | Tyr Glu | Trp | Gin | Glu | Val | Glu | Arg | Gly | Ser | Leu |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||
| Pro | Glu | Phe | Tyr | Tyr | Gly Pro | Pro | Arg | Pro | Pro | Lys | Ser | Ala | Cys | Lys |
| 85 | 90 | 95 | ||||||||||||
| Val | Leu | Ala | Gin | Glu | Ser Gin | Asp | Val | Gly | Gly | Ser | Arg | Gin | Ala | Val |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||
| Pro | Leu | Ile | Gly | Ser | Gin Ala | Asn | Ser | Glu | Asp | Arg | His | Leu | Val | Asp |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||
| Gin | Met | Pro | Asp | Ser | Ser Asp | Asn | Gin | Ala | Gly | Leu | Ala | Glu | Gin | Cys |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||
| Pro | Gly | Met | Arg | Lys | Arg Pro | Ala | Ala | Glu | Asp | Ser | Ser | Ser | Gin | Ile |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||
| Lys | Arg | Ala | Asn | Arg | Thr Glu | Glu | Asn | Val | Ser | Asp | Gly | Ser | Pro | Asn |
| 165 | 170 | 175 | ||||||||||||
| Ala | Gly | Thr | Val | Glu | Gin Thr | Pro | Lys | Lys | Pro | Gly | Leu | Arg | Arg | Gin |
| 180 | 185 | 190 | ||||||||||||
| Thr | Arg | Val | Asp | Leu | Gin Pro |
5 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 45:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 199 aminokyselin (B) TYP.- aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...199 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 45:
Val Ser Asn Gly Ser Pro Ser Leu Glu Arg Met Asp Ala Arg Gin Ala 15 10 15 • 9 9 9 • · ·· · ·
| 70 | · fc | • · • * fcfcfcfc | • « • * | • • fc | |||||||||
| « »« · · | • | ||||||||||||
| Asp | His | Pro | Lys | Pro | Ser | Ala | Cys | Arg | Asn Leu | Phe | Gly Pro | Val | Asn |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||
| His | Gly | Glu | Leu | Thr | Arg | Asp | Leu | Glu | Lys His | Cys | Arg Asp | Met | Glu |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||
| Glu | Ala | Ser | Gin | Arg | Lys | Trp | Asn | Phe | Asp Phe | Gin | Asn His | Lys | Pro |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||
| Leu | Glu | Gly | Arg | Tyr | Glu | Trp | Gin | Glu | Val Glu | Arg | Gly Ser | Leu | Pro |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||
| Glu | Phe | Tyr | Tyr | Gly | Pro | Pro | Arg | Pro | Pro Lys | Ser | Ala Cys | Lys | Val |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||
| Leu | Ala | Gin | Glu | Ser | Gin | Asp | Val | Ser | Gly Ser | Arg | Gin Ala | Val | Pro |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||
| Leu | Ile | Gly | Ser | Gin | Ala | Asn | Ser | Glu | Asp Arg | His | Leu Val | Asp | Gin |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||
| Met | Pro | Asp | Ser | Ser | Asp | Asn | Gin | Ala | Gly Leu | Ala | Glu Gin | Cys | Pro |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||
| Gly | Met | Arg | Lys | Arg | Pro | Ala | Ala | Glu | Asp Ser | Ser | Ser Gin | Ile | Lys |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
| Arg | Ala | Asn | Arg | Thr | Glu | Glu | Asn | Val | Ser Asp | Gly | Ser Pro | Asn | Ala |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||
| Gly | Thr | Val | Glu | Gin | Thr | Pro | Lys | Lys | Pro Gly | Leu | Arg Arg | Gin | Thr |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||
| Arg | Val | Asp | Leu | Gin | Pro | Ser | |||||||
| 195 | |||||||||||||
| (2) INFORMACE PRO | SEKVENCI S | IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 46: |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 220 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...220
| (xi | ) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE | ID. Č. | 46 | |||||
| Asn | Val Arg Val | Ser Asn Gly Ser Pro | Ser Leu | Glu | Arg | Met | Asp | Ala |
| 1 | c | 10 | 15 | |||||
| Arg | Gin Ala Asp | His Pro Pro Ser Ala | Cys Arg | Asn | Leu | Phe | Gly | Pro |
| 20 | 25 | 30 |
| 71 | 4 * | • · • · | • | • • * | * · | • · 4 · 4 « | 4 • | ||||||||
| • 4 | |||||||||||||||
| Val | Asn | His 35 | Gly | Glu | Leu | Thr | Arg 40 | Asp | Leu | Glu | Lys | His 45 | Cys | Arg | Asp |
| Met | Glu 50 | Glu | Ala | Ser | Gin | Arg 55 | Lys | Trp | Asn | Phe | Asp 60 | Phe | Gin | Asn | His |
| Lys 65 | Pro | Leu | Glu | Gly | Arg 70 | Tyr | Glu | Trp | Gin | Glu 75 | Val | Glu | Arg | Gly | Ser 80 |
| Leu | Pro | Glu | Phe | Tyr 85 | Tyr | Arg | Pro | Pro | Arg 90 | Pro | Pro | Lys | Ser | Ala 95 | Cys |
| Lys | Val | Pro | Ala 100 | Gin | Glu | Ser | Gin | Asp 105 | Val | Ser | Gly | Ser | Arg 110 | Gin | Ala |
| Val | Pro | Leu 115 | Ile | Gly | Ser | Gin | Ala 120 | Asn | Ser | Glu | Asp | Arg 125 | His | Leu | Val |
| Asp | Gin 130 | Met | Pro | Asp | Ser | Ser 135 | Asp | Asn | Gin | Ala | Gly 140 | Leu | Ala | Glu | Gin |
| Cys 145 | Pro | Gly | Met | Arg | Lys 150 | Arg | Pro | Ala | Ala | Glu 155 | Asp | Ser | Ser | Ser | Gin 160 |
| Ile | Lys | Arg | Ala | Asn 165 | Arg | Thr | Glu | Glu | Asn 170 | Val | Ser | Asp | Gly | Ser 175 | Pro |
| Asn | Ala | Gly | Thr 180 | Val | Glu | Gin | Thr | Pro 185 | Lys | Lys | Pro | Gly | Leu 190 | Arg | Arg |
| Gin | Thr | Arg 195 | Val | Asp | Leu | Gin | Pro 200 | Ser | Phe | Arg | Ala | Asn 205 | Phe | Leu | Phe |
| Met | Ile 210 | Phe | Ile | Ile | Lys | Val 215 | Ile | Lys | Lys | Ile | Ser 220 |
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI Ξ IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 47:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 183 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...183
| (xi | ) POPIS SEKVENCE | : SEKVENCE | ID. | C. | 47 : |
| Met | Asp Ala Arg Gin Ala | Asp His Pro | Lys | Pro | Ser Ala Cy3 Arg Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||
| Leu | Phe Gly Pro Val Asn | His Gly Glu | Leu | Thr | Arg Asp Leu Glu Lys |
| 20 | 25 | 30 |
| His | Cys Gin Asp 35 | Met Glu | Glu Ala Ser Gin Arg 40 | Lys | Trp 45 | Asn | Phe | Asp |
| Phe | Gin Asn His | Lys Pro | Leu Glu Gly Arg Tyr | Glu | Trp | Gin | Glu | Val |
| 50 | 55 | 60 | ||||||
| Glu | Arg Gly Ser | Leu Pro | Glu Phe Tyr Tyr Arg | Pro | Pro | Arg | Pro | Pro |
| 65 | 70 | 75 | 80 | |||||
| Lys | Ser Ala Cys | Lys Val | Leu Ala Gin Glu Ser | Gin | Asp | Val | Ser | Gly |
| 85 | 90 | 95 | ||||||
| Ser | Arg Gin Ala | Val Pro | Leu Ile Gly Ser Gin | Ala | Asn | Ser | Glu | Asp |
| 100 | 105 | 110 | ||||||
| Arg | His Leu Val | Asp Gin | Met Pro Asp Ser Ser | Asp | Asn | Gin | Ala | Gly |
| 115 | 120 | 125 | ||||||
| Leu | Ala Glu Gin | Cys Pro | Gly Met Arg Lys Arg | Pro | Ala | Ala | Glu | Asp |
| 130 | 135 | 140 | ||||||
| Ser | Ser Ser Gin | Ile Lys | Arg Ala Asn Arg Thr | Glu | Glu | Asn | Val | Ser |
| 145 | 150 | 155 | 160 | |||||
| Asp | Gly Ser Pro | Asn Ala | Gly Thr Val Glu Gin | Thr | Pro | Lys | Lys | Pro |
| 165 | 170 | 175 | ||||||
| Gly | Leu Arg Arg | Gin Thr | Arg | |||||
| 180 | ||||||||
| 2) INFORMACE PRO | SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM | ČÍSLEM | 48 : |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 138 aminokyselin (B) TYP; aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein
| (B) | poz: | ICE: | 1 . | . . i: | 38 | ||||||||||
| (x: | i) : | POPI | S SEKVENCE | : S] | EKVENCE | ID | č | 4 | 8 : | ||||||
| Met | Asp | Ala | Arg | Gin | Ala | Asp | His | Pro | Lys | Pro | Ser | Ala | Cys | Arg | Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Leu | Phe | Gly | Pro | Val | Asn | His | Gly | Glu | Leu | Thr | Arg | Asp | Leu | Glu | Lys |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| His | Cys | Arg | Asp | Met | Glu | Glu | Ala | Ser | Gin | Arg | Lys | Trp | Asn | Phe | Asp |
| 35 | 40 | 45 |
Phe Gin Asn His Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gin Glu Val 50 55 60 ♦ · * 4 Μ • φ · ♦ · ««« · ·
| Glu 65 | Arg | Gly Ser | Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Gly Pro Pro Arg Pro | Pro 80 | |
| 70 | 75 | ||||
| Lys | Ser | Ala Cys | Lys Val Leu | Ala Gin Glu Ser Gin Asp Val Ser | Gly |
| 85 | 90 95 | ||||
| Ser | Arg | Gin Ala | Val Pro Leu | Ile Gly Ser Gin Ala Asn Ser Glu | Asp |
| ' 100 | 105 110 | ||||
| Arg | His | Leu Val | Asp Gin Met | Pro Asp Ser Ser Asp Ser Gin Ala | Gly |
| 115 | 120 125 | ||||
| Leu | Ala | Glu Gin | Cys Pro Gly | Met Arg Lys | |
| 130 | 135 | ||||
| «z v »* | |||||
| INFORMACE PRO | SEKVENCI £ | 5 IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 49.· |
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 197 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina.
(C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (íí) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: .protein (B) POZICE: 1...197 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 49:
| Met | Ser | Asn | Val | Arg | Val | ser | Asn | Gly | Ser | Pro | Ser | Leu | Glu | Arg | Met |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| ASp | Ala | Arg | Gin | Ala | Asp | His | Pro | Lys | Pro | Ser | Ala | Cys | Arg | Asn | Leu |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Phe | Gly | Pro | Val | Asn | His | Glu | Glu | Leu | Thr | Arg | Asp | Leu | Glu | Lys | His |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Cys | Arg | Asp | Met | Glu | Glu | Ala | Ser | Gin | Arg | Lys | Trp | Asn | Phe | Asp | Phe |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gin | Asn | His | Lys | Pro | Leu | Glu | Gly | Arg | Tyr | Glu | Trp | Gin | Glu | Val | Glu |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Arg | Gly | Ser | Leu | Pro | Glu | Phe | Tyr | Tyr | Arg | Pro | Pro | Arg | Pro | Pro | Lys |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Ser | Ala | Cys | Lys | Val | Leu | Ala | Gin | Glu | Ser | Gin | Asp | Val | Ser | Gly | Ser |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Arg | Gin | Ala | Val | Pro | Leu | Ile | Gly | Ser | Gin | Ala | Asn | Ser | Glu | Asp | Arg |
| 115 | 120 | 125 |
t?
,1
%) • ** • · « · • · · ··· ·· • · · » ·· • v · ·«·· · * · · · ·
999 9999 99 99
| Híb | Leu 130 | val | Asp | Gin | Met | Pro 135 | Asp | Ser | Ser | Asp | Asn 140 | Gin | Ala | Gly | Leu |
| Ala 145 | Glu | Gin | Cys | Pro | Gly 150 | Met | Arg | Lys | Arg | Pro 155 | Ala | Ala | Glu | Asp | Ser 160 |
| Ser | Ser | Gin | Asn | Lys 165 | Arg | Ala | Asn | Arg | Thr 170 | Glu | Glu | Asn | Val | Ser 175 | Asp |
| Gly | Ser | Pro | Asn | Ala | Gly | Thr | Val | Glu | Gin | Thr | Pro | Lys | Lys | Pro | Gly |
180 185 190
Leu Arg Arg Gin Thr 195
• · · * · 9 0 9 9 • 9 · ft·*· · ftft · · · •ftft···· ·· ·· 75 ipíH
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (33)
1. Protein, který inhibuje p27, a tím ruší inhibici buněčné proliferace způsobovanou proteinem p27.
2. Protein podle nároku 1, který obsahuje sekvenci aminokyselin pl63 uvedenou v tab. 6 (sekvence identifikačního čísla 16) nebo její části.
3. Protein podle nároku 2, kde části sekvence aminokyselin pl63 jsou vybrány ze skupiny obsahující peptidy se sekvencí aminokyselin v polohách 1 až 24 (sekvence id. č. 2), v polohách 137 až 196 (sekvence id. č. 4), v polohách 215 až 265 (sekvence id. č, 6), v polohách 239 až 272 (sekvence id. č. 8), v polohách 399 až 438 (sekvence id. č. 10) a v polohách 307 až 469 (sekvence id. č. 12), vztaženo k číslování poloh podle tab. 6.
4. Protein, který se může z proteinu podle nároku 2 odvodit delecí funkčních domén, a ve kterém je ze sekvence id. č. 16 podle tab. 6 deletována (odstraněna) vazebná doména pro p27 nebo vazebná doména pro ran.
5. Protein podle nároku 4, který po delecí vazebné domény p27 poskytne protein s aminokyselinovou sekvencí podle tab. 8 (sekvence id. č. 18) a delecí vazebné domény ran poskytne protein s aminokyselinovou sekvencí podle tab. 9 (sekvence id. č. 19).
6. Protein, který se může odvodit z proteinu podle nároku 2 delecí všech aminokyselinových sekvencí kromě úseku vazebné domény p27.
« · a * a t · a <
• · 4 a a · · • v • « a · ·
7. Protein podle nároku 6, který obsahuje sekvencí aminokyselin uvedenou v tab. 10 (sekvence id. č. 20).
8. Protein podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 7, přičemž se jedná o odpovídající homologický protein nebo jeho odpovídající část, a sice člověka nebo jiného druhu savce.
9. Protein podle nároku 8, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci lidského homologů pl63.
10. DNA, která kóduje protein podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9.
11. DNA podle nároku 10, která
a) obsahuje nukíeotidovou sekvenci uvedenou v tab. 3 (sekvence id. č. 1) nebo její část,
b) hybridi zuje se sekvencí uvedenou v odstavci a) za stringentních (přísných) podmínek, nebo
c) je ve srovnání se sekvencí uvedenou v odstavci a) změněna způsobem odpovídajícím degeneraci genetického kódu, a přesto kóduje stejnou aminokyselinovou sekvenci.
12. DNA podle nároku 11 pro použití jako primer pro PCR, přičemž nukleotidová sekvence primerů pro PCR je vybrána ze skupiny obsahující sekvence id. č. 21 až id. č. 3 0 uvedené v tab. 12a, sekvence id. č. 31 až id. č. 32 uvedené v tab. 12b a sekvence id. č. 33 až id. č. 40 uvedené v tab. 12c.
13. Použití DNA podle nároku 10 nebo 11 k prokázání a/nebo kvantifikaci pl63 mRNA v buňce a/nebo tkáni.
• * « 0 00
0 0 * 0000 0
0 0 0 0 0
0000000 00 00 • 0
0 0 9 1
0 0 0 00 0 · ·
14. Použití podle nároku 13, kde se prokázání a/nebo kvantifikace provede northernovým přenosem.
15. Použití podle nároku 13, kde se prokázání a/nebo kvantifikace provede pomocí PCR.
*
16. Použití podle nároku 15, kde se pro PCR použije primer podle nároku 12.
17. Použití podle nároku 13, kde se prokázání a/nebo kvantifikace provede pomocí fluorescenční hybridizace in šitu.
18. Použití proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9 pro přípravu protilátky, která se na tento protein váže.
19. Protilátka a fragment této protilátky, které se váží na vazebnou doménu pro protein p27 proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9.
t
20. Protilátka a fragment této protilátky, které se váží na vazebnou doménu pro protein ran proteinu podle jednoho nebo 1 několika nároků z nároků 1 až 9.
21. Použití protilátky podle nároku 19 nebo 20 k prokázání proteinu podle jednoho nebo několika nároků 1 nebo 2 v buňce, tkáni nebo tělní tekutině.
• ♦* • 4 · < · 4
4 · · ·«·· » • · · · · «·«·«·· · * » 4
22. Antisense nukleová kyselina, která je komplementární k části DNA podle nároku 10 nebo 11, přičemž tato část leží v úseku nukleotidů kódujícím aminokyseliny 121 až 467.
23. Antisense nukleová kyselina podle nároku 22, která je vybrána ze skupiny obsahující triplexovou DNA, syntetické oligonukleotidy, antisense RNA a ribozymy.
24. Použití antisense nukleové kyseliny podle nároku 22 nebo 23 pro inhibici proliferace buňky, přičemž tato buňka je s antisense nukleovou kyselinou v kontaktu in vitro nebo in vivo.
25. Konstrukt nukleové kyseliny kódující antisense nukleovou kyselinu podle nároku 22 nebo 23 pro inhibici proliferace buňky, kde DNA kódující antisense sekvenci nukleové kyseliny je spojena alespoň s jednou aktivační sekvencí, a pak je zavedena do cílové buňky jako holá DNA, nebo jako DNA vložená do nevirového vektoru nebo do virového vektoru.
26. Použití proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9, kdy se pro vyhledávání inhibitorů využije vzájemné působení mezi uvedeným proteinem a buněčným vazebným partnerem.
27. Použití podle nároku 26, kdy se využije systém dvou hybridů („two-hybrid-system}.
28. Použití podle nároku 26, kdy se využije afinitní systém, ve kterém se na pevnou fázi váže pl63 nebo jeho vazebná doména pro p27, pevná fáze se pak inkubuje se zkoušenou látkou a nakonec se prostřednictvím značeného vazebného φ φ • · φ φ · φ · * partnera proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9 stanoví inhibice vazby vazebného partnera s uvedeným proteinem.
·»
29. Použití podle nároku 28, kde vazebný partner je vybrán ze skupiny obsahující p2 7 a ran.
30. Použití proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 3 až 9 jako inhibitoru funkce proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1, 2, 8 a 9.
31. Použití protilátky podle nároku 19 nebo 20 jako inhibitoru funkce proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1, 2, 8 a 9.
32. Konstrukt nukleové kyseliny obsahující DNA podle nároku 10 nebo 11 operativně spojenou s aktivační sekvencí, která umožňuje expresi proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9 v buňce.
33. Použití konstruktu nukleové kyseliny podle nároku 32 pro
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19756975A DE19756975A1 (de) | 1997-12-20 | 1997-12-20 | Bindungspartner für Inhibitoren von cyclinabhängigen Kinasen und ihre Verwendung zur Suche nach Inhibitoren, zur Diagnose oder zur Therapie einer Erkrankung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ422598A3 true CZ422598A3 (cs) | 1999-07-14 |
Family
ID=7852804
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ984225A CZ422598A3 (cs) | 1997-12-20 | 1998-12-18 | Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace |
| CZ984223A CZ422398A3 (cs) | 1997-12-20 | 1998-12-18 | Konstrukty nukleové kyseliny, jejichž aktivita je ovlivněna inhibitory kináz závislých na cyklinu, způsob přípravy takových konstruktů a jejich použití pro přípravu léčiva |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ984223A CZ422398A3 (cs) | 1997-12-20 | 1998-12-18 | Konstrukty nukleové kyseliny, jejichž aktivita je ovlivněna inhibitory kináz závislých na cyklinu, způsob přípravy takových konstruktů a jejich použití pro přípravu léčiva |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6265562B1 (cs) |
| EP (2) | EP0926237A3 (cs) |
| JP (2) | JPH11308997A (cs) |
| KR (2) | KR19990063285A (cs) |
| CN (2) | CN1225367A (cs) |
| AR (2) | AR016436A1 (cs) |
| AU (2) | AU758030B2 (cs) |
| BR (2) | BR9805151A (cs) |
| CA (2) | CA2255141A1 (cs) |
| CZ (2) | CZ422598A3 (cs) |
| DE (1) | DE19756975A1 (cs) |
| HU (1) | HUP9802961A3 (cs) |
| ID (2) | ID21534A (cs) |
| PL (2) | PL330452A1 (cs) |
| TR (2) | TR199802648A3 (cs) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19751587A1 (de) * | 1997-11-21 | 1999-07-29 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Onkogen- oder virusgesteuerte Expressionssysteme |
| GB9727512D0 (en) * | 1997-12-31 | 1998-02-25 | Adprotech Plc | Fuzzy genes and their application in molecular adjuvants |
| DE19831420A1 (de) * | 1998-07-14 | 2000-01-20 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Expressionssysteme enthaltend chimäre Promotoren mit Bindungsstellen für rekombinante Transkriptionsfaktoren |
| GB0008582D0 (en) * | 2000-04-08 | 2000-05-31 | Adprotech Plc | DNA immunization vectors |
| GB0025229D0 (en) * | 2000-10-14 | 2000-11-29 | Adprotech Ltd | Veterinary immunisation vectors |
| WO2003048311A2 (en) * | 2001-11-29 | 2003-06-12 | Institutes For Pharmaceutical Discovery, Llc | Regulated expression of recombinant dna |
| JP5976986B2 (ja) * | 2005-10-01 | 2016-08-24 | チャールズ スタウト， | 調節可能な融合プロモーター |
| BRPI0721630A2 (pt) | 2007-05-02 | 2013-10-15 | Merial Ltd | Plasmídeo de dna tendo expressão e estabilidade aperfeiçoadas |
| EP2550362B1 (en) | 2010-03-25 | 2017-01-04 | Oregon Health&Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| SI2691530T1 (en) | 2011-06-10 | 2018-08-31 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| US20130189754A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-07-25 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
| EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| EP3069730A3 (en) | 2015-03-20 | 2017-03-15 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| WO2018129007A1 (en) * | 2017-01-03 | 2018-07-12 | Bioatla Llc | Protein therapeutics for treatment of senescent cells |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0455424A3 (en) * | 1990-05-02 | 1992-04-29 | Merck & Co. Inc. | Mammalian inducible promoter cascade system |
| US5866755A (en) * | 1993-06-14 | 1999-02-02 | Basf Aktiengellschaft | Animals transgenic for a tetracycline-regulated transcriptional inhibitor |
| US5464758A (en) * | 1993-06-14 | 1995-11-07 | Gossen; Manfred | Tight control of gene expression in eucaryotic cells by tetracycline-responsive promoters |
| DE19524720A1 (de) | 1995-07-12 | 1997-01-16 | Hoechst Ag | Zellspezifische Gentherapie mit Hilfe eines neuen Promotors für den "Tissue Inhibitor of Metalloproteinasn-3" |
| GB9506466D0 (en) | 1994-08-26 | 1995-05-17 | Prolifix Ltd | Cell cycle regulated repressor and dna element |
| DE19605279A1 (de) | 1996-02-13 | 1997-08-14 | Hoechst Ag | Zielzellspezifische Vektoren für die Einschleusung von Genen in Zellen, Arzneimittel enthaltend derartige Vektoren und deren Verwendung |
| DE19605274A1 (de) | 1996-02-13 | 1997-08-14 | Hoechst Ag | Nukleinsäurekonstrukte für die zellzyklusregulierte Expression von Genen, derartige Konstrukte enthaltende Zellen sowie deren Verwendung zur Herstellung von Heilmitteln |
| DE19751587A1 (de) * | 1997-11-21 | 1999-07-29 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Onkogen- oder virusgesteuerte Expressionssysteme |
-
1997
- 1997-12-20 DE DE19756975A patent/DE19756975A1/de not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-12-12 EP EP98123709A patent/EP0926237A3/de not_active Withdrawn
- 1998-12-12 EP EP98123708A patent/EP0926236A1/de not_active Withdrawn
- 1998-12-17 AR ARP980106444A patent/AR016436A1/es unknown
- 1998-12-17 AR ARP980106445A patent/AR017887A1/es unknown
- 1998-12-18 TR TR1998/02648A patent/TR199802648A3/tr unknown
- 1998-12-18 CZ CZ984225A patent/CZ422598A3/cs unknown
- 1998-12-18 TR TR1998/02649A patent/TR199802649A2/xx unknown
- 1998-12-18 CN CN98125351A patent/CN1225367A/zh active Pending
- 1998-12-18 AU AU97205/98A patent/AU758030B2/en not_active Ceased
- 1998-12-18 CA CA002255141A patent/CA2255141A1/en not_active Abandoned
- 1998-12-18 HU HU9802961A patent/HUP9802961A3/hu unknown
- 1998-12-18 AU AU97204/98A patent/AU747246B2/en not_active Ceased
- 1998-12-18 CA CA002255143A patent/CA2255143A1/en not_active Abandoned
- 1998-12-18 CZ CZ984223A patent/CZ422398A3/cs unknown
- 1998-12-18 ID IDP981648A patent/ID21534A/id unknown
- 1998-12-18 US US09/215,221 patent/US6265562B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-18 ID IDP981651A patent/ID21582A/id unknown
- 1998-12-18 CN CN98125350A patent/CN1227871A/zh active Pending
- 1998-12-19 PL PL98330452A patent/PL330452A1/xx unknown
- 1998-12-19 KR KR1019980056993A patent/KR19990063285A/ko not_active Withdrawn
- 1998-12-19 PL PL98330451A patent/PL330451A1/xx unknown
- 1998-12-19 KR KR1019980056992A patent/KR19990063284A/ko not_active Withdrawn
- 1998-12-21 JP JP10376131A patent/JPH11308997A/ja active Pending
- 1998-12-21 BR BR9805151A patent/BR9805151A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-12-21 BR BR9805152A patent/BR9805152A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-12-21 JP JP10376132A patent/JPH11313686A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL330451A1 (en) | 1999-06-21 |
| US6265562B1 (en) | 2001-07-24 |
| EP0926236A1 (de) | 1999-06-30 |
| CZ422398A3 (cs) | 1999-07-14 |
| EP0926237A2 (de) | 1999-06-30 |
| CN1227871A (zh) | 1999-09-08 |
| PL330452A1 (en) | 1999-06-21 |
| HUP9802961A3 (en) | 2000-04-28 |
| EP0926237A3 (de) | 2000-01-05 |
| AU747246B2 (en) | 2002-05-09 |
| DE19756975A1 (de) | 1999-06-24 |
| AR016436A1 (es) | 2001-07-04 |
| CA2255143A1 (en) | 1999-06-20 |
| JPH11308997A (ja) | 1999-11-09 |
| BR9805151A (pt) | 2000-03-21 |
| AU9720498A (en) | 1999-07-08 |
| KR19990063285A (ko) | 1999-07-26 |
| JPH11313686A (ja) | 1999-11-16 |
| AR017887A1 (es) | 2001-10-24 |
| TR199802649A3 (tr) | 1999-07-21 |
| TR199802649A2 (xx) | 1999-07-21 |
| HUP9802961A2 (hu) | 1999-07-28 |
| BR9805152A (pt) | 2000-03-21 |
| ID21582A (id) | 1999-06-24 |
| CN1225367A (zh) | 1999-08-11 |
| KR19990063284A (ko) | 1999-07-26 |
| TR199802648A2 (xx) | 1999-07-21 |
| AU758030B2 (en) | 2003-03-13 |
| CA2255141A1 (en) | 1999-06-20 |
| HU9802961D0 (en) | 1999-02-01 |
| AU9720598A (en) | 1999-07-08 |
| TR199802648A3 (tr) | 1999-07-21 |
| ID21534A (id) | 1999-06-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mochizuki et al. | Identification and cDNA cloning of a novel human mosaic protein, LGN, based on interaction with Gαi2 | |
| Sharp et al. | The vaccinia virus E3L gene product interacts with both the regulatory and the substrate binding regions of PKR: implications for PKR autoregulation | |
| Epstein et al. | Two independent and interactive DNA-binding subdomains of the Pax6 paired domain are regulated by alternative splicing. | |
| CZ422598A3 (cs) | Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace | |
| Mermelstein et al. | Requirement of a corepressor for Dr1-mediated repression of transcription. | |
| Polte et al. | Interaction between focal adhesion kinase and Crk-associated tyrosine kinase substrate p130Cas. | |
| Harrison et al. | A leucine zipper domain of the suppressor of Hairy-wing protein mediates its repressive effect on enhancer function. | |
| Harper et al. | The p21 Cdk-interacting protein Cip1 is a potent inhibitor of G1 cyclin-dependent kinases | |
| Adams et al. | Pax-5 encodes the transcription factor BSAP and is expressed in B lymphocytes, the developing CNS, and adult testis. | |
| Klemenz et al. | Alpha B-crystallin is a small heat shock protein. | |
| Su et al. | Cloning and characterization of the Xenopus cyclin-dependent kinase inhibitor p27XIC1. | |
| US6071700A (en) | Heterologous polypeptide production in the absence of nonsense-mediated MRNA decay functions | |
| US5863757A (en) | Transcription factor DP-1 | |
| JPH08509118A (ja) | Ｍａｘとの相互作用蛋白質並びに関連分子および方法 | |
| Schepens et al. | The neuronal nitric oxide synthase PDZ motif binds to-G (D, E) XV* carboxyterminal sequences | |
| Grueneberg et al. | Sequence-specific targeting of nuclear signal transduction pathways by homeodomain proteins | |
| Ayté et al. | The Schizosaccharomyces pombe MBF complex requires heterodimerization for entry into S phase | |
| Sawa et al. | YEAF1/RYBP and YAF-2 are functionally distinct members of a cofactor family for the YY1 and E4TF1/hGABP transcription factors | |
| Hirano et al. | ROM7/BEM4 encodes a novel protein that interacts with the Rho1p small GTP-binding protein in Saccharomyces cerevisiae | |
| Rao et al. | Δelk-1, a Variant of Elk-1, Fails to Interact with the Serum Response Factor and Binds to DNA with Modulated Specificity | |
| Wang et al. | Drosophila Enhancer of zeste protein interacts with dSAP18 | |
| US6825034B2 (en) | Human RRN3 and compositions and methods relating thereto | |
| Haggag et al. | Selective inhibition of T2AA for human PCNA over PCNA homolog in Trypanosoma brucei. | |
| US5770717A (en) | Nucleic acid encoding a stress-responsive subunit of human RNA polymerase II | |
| US7186530B1 (en) | Protein associated with cell stress response |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |