CZ20022147A3 - Polypeptid příbuzný humánní heparanáze, polynukleotid, který ho kóduje, a jejich použití - Google Patents
Polypeptid příbuzný humánní heparanáze, polynukleotid, který ho kóduje, a jejich použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20022147A3 CZ20022147A3 CZ20022147A CZ20022147A CZ20022147A3 CZ 20022147 A3 CZ20022147 A3 CZ 20022147A3 CZ 20022147 A CZ20022147 A CZ 20022147A CZ 20022147 A CZ20022147 A CZ 20022147A CZ 20022147 A3 CZ20022147 A3 CZ 20022147A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- polypeptide
- polynucleotide
- polypeptides
- diseases
- sequence
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 106
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 105
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 104
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 59
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 59
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims abstract description 59
- 108010037536 heparanase Proteins 0.000 title abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 34
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 30
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 29
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 23
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 23
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 20
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 18
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 12
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 10
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 7
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 5
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 claims description 5
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims 4
- 230000008733 trauma Effects 0.000 claims 4
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims 3
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 208000037896 autoimmune cutaneous disease Diseases 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 102100024025 Heparanase Human genes 0.000 abstract description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 5
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 4
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 4
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 2
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 2
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- -1 e.g. Proteins 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108700031361 Brachyury Proteins 0.000 description 1
- 108091016585 CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 208000010228 Erectile Dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000023117 embryonic morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 201000001881 impotence Diseases 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 206010073095 invasive ductal breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000013371 ovarian adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01166—Heparanase (3.2.1.166)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01139—Alpha-glucuronidase (3.2.1.139)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Polypeptid příbuzný humánní heparanáze, polynukleotid, který ho kóduje, a jejich použití
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká nově identifikovaných polynukleotidů polypeptidů kódovaných takovými polynuklěotidy, použití těchto polypeptidů, a také přípravy takových polynukleotidů a polypeptidů. Konkrétně, polypeptid podle předkládaného vynálezu je endoglukuronidáza příbuzná heparanáze. Předkládaný vynález se dále týká vektorů a hostitelských buněk obsahujících polynukleotid podle vynálezu. A dále, vynález se týká protilátek namířených proti polypeptidu podle předkládaného vynálezu, a dále farmaceutických přípravků a diagnostických činidel obsahujících takové protilátky, polypeptidy nebo polynuklěotidy. Předkládaný vynález se dále týká způsobu změny, modifikace nebo jiné modulace hladiny exprese endoglukuronidázy příbuzné heparanáze v buňce nebo v organismu. Dalším aspektem vynálezu jsou testovací systémy užitečné pro identifikaci modulátorů, např. agonistů nebo antagonistů těchto polypeptidů.
Dosavadní stav techniky
Proteiny extracelulární matrix (ECM) a bazální membrány (BM) jsou vnořeny do vláknité sítě sestávající zejména z proteoglykanů heparansulfátu (HSPG). HSPG jsou výjimečné sloučeniny vyskytující se v krevních cévách (subendotelová bazální membrána), které podporují endotelové buňky a stabilizují strukturu stěn kapilár. Exprese heparanázy, f ·» ·· ·· ti · · · · · · ti · • ti ti · tititi ti ti ti • titi titi titi ti·· ti ti • titi·· ti·· endo-p-D-glukuronidázy, v destičkách, trofoblastech placenty a v leukocytech ukazují na to, že normální funkcí heparanázy je při embryonální morfogeneze, hojení ran, reparaci tkání a zánětech. V souladu s ECM-štěpícími proteázami heparanáza dovoluje buňkám procházet bazální membránou a uvolňovat růstové faktory vázající heparin (jako např. bFGF, VEGF), které jsou akumulovány v ECM (Finkel et al., Science 285 (1999), 33-34; Eccles, Nátuře Med. 5 (1999), 735-736).
Heparanáza, která byla v současnosti klonována nezávisle čtyřmi výzkumnými skupinami (Vlodavsky et al., Nátuře Med. 5 (1999), 793-802; Hulett et al., Nátuře Med. 5 (1999), 803-809; Toyoshima and Nakajima, J. Biol. Chem. 274 (1999); 2415324160; Kussie et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 261 (1999), 183-187), je exprimována jako prekurzorový protein velikosti 65 kDa, který je N-koncově opracován na aktivní enzymy velikosti 50 kDa. Rekombinantní exprese aktivního enzymu byla demonstrována v buňkách CHO, NIH 3T3 a COS-7. Ačkoliv již dříve bylo popsána několik zjevně odlišných heparanázových aktivit, 4 skupiny, které klonovaly heparanázovou cDNA z různých zdrojů (normální a nádorové buňky) publikovali identické cDNA sekvence.
Existuje řada důkazů, které ukazují, že ECM degradující glukuronidázy se podílejí na růstu nádorů a vytváření metastáz: (1) Bylo ukázáno, že heparanáza je přednostně exprimována v podobě mRNA a proteinu v humánních nádorových tkáních ve srovnání s odpovídající zdravou tkání, např. při invazivním duktálním karcinomu prsu, hepatocelulárním karcinomu, adenokarcinomu ovárií, skvamózním karcinomu krčku, adenokarcinomu tlustého střeva (Vlodavsky et al., supra). (2) Zvýšená hladina heparanázy byla zjištěna v séru a v moči zvířat s metastázujícími nádory i u pacientů s rakovinou
99
9 9 9
9 9
9«
99
9 9
9 999
9 9
99
9999 (Vlodavsky et al., supra). (3) Exprese mRNA heparanázy a enzymová aktivita koreluji s metastázujicim potenciálem u buněčných linii z karcinomu prsu u lidi i laboratorních potkanů (Vlodavsky et al., supra; Hulett et al., supra). (4) Slabě metastázující nádorové buněčné linie získají silně metastázující fenotyp po transfekci heparanázovou cDNA; jak bylo např. ukázáno na myším T lymfomu L5178Y a myším melanomu B16-F1 (Vlodavsky et al., supra). (5) Sulfatovaný oligosacharid PI-88 (fosfomanopentóza-SOJ, který inhibuje aktivitu heparanázy, inhibuje růst primárních nádorů, vytváření mestastáz a vaskularizaci nádorů (Parish et al., Cancer Res. 59 (1999), 3433-3441).
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje novou izolovanou molekulu nukleové kyseliny obsahující kódující sekvenci nukleotidů nebo sekvenci komplementární k sekvenci kódující polypeptid mající enzymatickou aktivitu endoglukuronidázy nebo její fragment.
Předkládaný vynález se dále týká polypeptidu kódovaného polynukleotidem nebo jeho funkčního fragmentu, funkčního derivátu nebo funkčního analogu.
Další aspekt předkládaného vynálezu se týká způsobu přípravy takových polypeptidů nebo polynukleotidů.
A ještě další aspekt předkládaného vynálezu se týká rekombinantních vektorů obsahujících takový polynukleotid, výhodně operativně spojený kontrolní expresní sekvencí (tj. sekvencí řídící expresi), a dále se týká hostitelských buněk transformovaných takovým rekombinantním vektorem.
• 0 • 0 0
0 0 • 00 • 000
0
0 0 0 0
00 0 0
000 <0 « 0 0 0 0 00 ·0
Navíc se předkládaný vynález týká dále způsobu změny, modifikace nebo jiné modulace hladin exprese těchto polypeptidů nebo polynukleotidů v buňce nebo v organismu.
Další aspekt předkládaného vynálezu se týká způsobu diagnózy, který využívá polynukleotid podle vynálezu, nebo jeho fragment nebo derivát, nebo polypeptid podle vynálezu, nebo jeho fragment nebo derivát.
A dále se předkládaný vynález týká protilátek specificky rozpoznávajících a vázajících se na takové polypeptidy, a dále se týká diagnostických způsobů, které užívají protilátky podle vynálezu.
Kromě toho se předkládaný vynález týká farmaceutických přípravků obsahujících polynukleotidy nebo polypeptidy nebo protilátky podle vynálezu nebo jejich fragmenty, a dále se týká léčení, kdy se podává polynukleotid nebo polypeptid nebo protilátka podle vynálezu nebo jejich fragment.
A ještě další aspekt předkládaného vynálezu se týká způsobu identifikace látky schopné aktivitu polypeptidů podle vynálezu, získaných způsobem podle vynálezu.
modulovat biologickou a dále se týká látek
Předkládaný vynález především poskytuje izolovanou molekulu nukleové kyseliny, která obsahuje kódující nukleotidovou sekvenci nebo sekvenci komplementární k sekvenci kódující polypeptid, který má enzymatickou aktivitu endoglukuronidázy.
Ve výhodném provedení předkládaného vynálezu je izolovaná molekula nukleové kyseliny taková molekula nukleové kyseliny, která obsahuje (a) alespoň úsek kódující protein z nukleotidové sekvence uvedené zde jako sekvence id. č. 1, «Φ φφ »* • · φ · * φ φ φ φφφφ φ φ φ φ <
• φ ·· φφ φφ φφ φ φ φ φ φ · φ • φ φ φφφ φφ φφφφ (b) nukleotidovou sekvenci odpovídající sekvenci v (a) s ohledem na degeneraci genetického kódu, nebo (c) nukleotidovou sekvenci hybridizujici za stringentnich podmínek s nukleotidovou sekvencí (a) a/nebo (b).
Předkládaný vynález dále molekulou nukleové kyseliny Výhodně polypeptid obsahuje uvedenou zde jako sekvence id. sekvenci mající alespoň 70% identitu a ještě výhodn s aminokyselinovou sekvencí (a) poskytuje polypeptid kódovaný podle předkládaného vynálezu, (a) aminokyselinovou sekvenci č. 2, nebo (b) aminokyselinovou identitu, výhodné alespoň 85% šji alespoň 95% identitu
Kromě nukleotidové sekvence uvedené zde jako sekvence id. č.l a odpovídajících sekvencí s ohledem na degeneraci genetického kódu předkládaný vynález zahrnuje také nukleotidové sekvence, které hybridizují za stringentnich podmínek s jednou ze sekvencí definovaných výše. Termín hybridizace/hybridizovat za stringentnich podmínek je ve smyslu předkládaného vynálezu definován ve shodě se Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), 1.101-1.104. Výhodně hybridizace za stringentnich podmínek znamená, že po promývání 1 hodinu v 1 x SSC a 0,1% SDS při 50°C, výhodně 55°C, výhodněji 62 °C a nejvýhodněji při 68 °C, a zejména 1 hodinu ve 0,2 x SSC a 0,1% SDS při 50°C, výhodně 55°C, výhodněji 62°C a nejvýhodněji při 68°C, je pozorován pozitivní hybridizační signál. Nukleotidová sekvence, která hybridizuje za výše uvedených promývacích podmínek s nukleotidovou sekvencí uvedenou zde jako sekvence id. č. 1 nebo s nukleotidovou sekvencí, která jí odpovídá s ohledem na degeneraci genetického kódu, je také předmětem předkládaného vynálezu.
• · 9 9 · · 999 • 99 9* 9* *9 9* 9999
Výhodně je nukleotidové sekvence podle vynálezu DNA, tedy např. cDNA, genomová DNA nebo syntetická DNA, a může být jednořetězcová nebo dvoj řetězcová, přitom v případě jednořetězcové molekuly se může jednat o kódující řetězec nebo nekódující (anti-sense) řetězec. Může to být také RNA, např. mRNA, pre-mRNA a syntetická RNA, a to buďto kódující řetězec nebo nekódující (anti-sense) řetězec, a nebo analog nukleové kyseliny jako je např. peptidová nukleová kyselina. Zvláště výhodná nukleotidové sekvence podle vynálezu obsahuje část nukleotidové sekvence id. č. 1 kódující protein nebo sekvenci, která má se sekvencí id. č. 1 identitu vyšší než 70 %, výhodně vyšší než 85 % a zvláště výhodně vyšší než 95 %, nebo část této sekvence, která je dlouhá výhodně alespoň 20 nukleotidů, výhodněji alespoň 30 nukleotidů a nejvýhodněji alespoň 50 nukleotidů.
Identita je stanovena pokud jde o nukleotidovou sekvenci nebo protein (aminokyselinovou sekvenci) následujícím způsobem:
I = n : L, kde I je identita vyjádřená v procentech, n představuje počet nukleotidů nebo aminokyselin, které se liší mezi testovanou sekvencí a základní sekvencí, kterou je buďto nukleotidové sekvence id. č. 1 nebo aminokyselinová sekvence id. č. 2 nebo jejich úseky, a
L je délka základní sekvence srovnávaná s testovanou sekvencí
Polynukleotid podle předkládaného vynálezu může být získán ze savce, např. z humánních buněk nebo z cDNA knihovny *0 • 0 «0 • · 000 · • ·β
0* • 0 • ··· · ·
0 · • · 1 • · • · • ·
0000 nebo genomové knihovny připravené ze savce, např. s humánních buněk. Konkrétně je možné polynukleotid popsaný v předkládané přihlášce izolovat z cDNA knihoven (PENCNOT07, BLADNOT09, PROSTUT08, BRSTNOT27, MIXDNOPOl, ESOGNOT04, PENCNOT03), které jsou komerčně dostupné od firmy Incyte lne. cDNA inzert uvedený zde jako sekvence id. č. 1 má délku 3943 párů baží (bp) a obsahuje otevřený čtecí rámec kódující protein o velikosti 492 aminokyselin. Predikovaná aminokyselinová sekvence polypeptidu podle vynálezu sdílí 38% identitu aminokyselin s humánní heparanázou (Obrázek 1). 5'-konec cDNA podle vynálezu je neúplný, predikovaný zralý (maturovaný) protein je úplný, jak vyplývá z homologie s humánní heparanázou. Z elektronická analýzy exprese (Northern) vyplynulo, že polynukleotid podle předkládaného vynálezu je přednostně exprimován v nervovém systému a tkáních samčích genitálií (Obrázek 2).
Předkládaný vynález se dále týká variant zde popsaných polynukleotidů, které kódují fragmenty, analogy a deriváty polypeptidu majícího dedukovanou aminokyselinovou sekvenci id. č. 2. Předkládaný vynález se také týká polynukleotidových sond konstruovaných z polynukleotidové sekvence id. č. 1 nebo segmentu sekvence id. č. 1. K variantám zde popsaných polynukleotidů patří deleční varianty, substituční varianty, adiční a nebo inzerční varianty.
Předkládaný vynález se dále týká polynukleotidů, kde kódující sekvence polypeptidu, nebo její segment, je fúzována ve shodném čtecím rámci s polynukleotidovou sekvencí, která napomáhá expresi nebo sekreci polypeptidu z hostitelských buněk, nebo která usnadňuje purifikaci polypeptidu podle vynálezu (jako je např. poly-histidinová značka, hemaglutininová značka nebo tzv. GST-značka).
Dalším aspektem předkládaného vynálezu je způsob přípravy polynukleotidu podle vynálezu. Tento způsob zahrnuje chemickou syntézu, techniku rekombinantní DNA, polymerázovou řetězovou reakci nebo jakoukoliv kombinaci těchto metod. Výhodně je polynukleotid podle vynálezu získán z vhodného výše uvedeného zdroje užitím amplifikační reakce, např. pomocí PCR s využitím sekvenčně-specifických oligonukleotidových primerů.
Polypeptid podle předkládaného vynálezu může být rekombinantní polypeptid, přirozený polypeptid nebo také syntetický polypeptid. Funkční fragment, derivát nebo analog polypeptidů podle vynálezu je takový polypeptid, kde jedna nebo více aminokyselin bylo substituováno jinými aminokyselinami, nebo jedna nebo více aminokyselin obsahují substituované skupiny, nebo je polypeptid fúzován s další sloučeninou (jako je např. polyethylenglykol), nebo jsou k polypeptidů navázány (fúzovány) další aminokyseliny (jako je např. tzv. vedoucí sekvence, sekretorická sekvence nebo purifikační značka).
Předkládaný vynález se také týká rekombinantního vektoru, který obsahuje polynukleotid podle vynálezu. Výhodně je tento vektor expresním vektorem, t j. vektorem obsahujícím polynukleotid podle předkládaného vynálezu operativně spojený s vhodnou expresní kontrolní sekvencí. Vektor je prokaryotický nebo eukaryotický vektor. K příkladům prokaryotických vektorů patří chromozómový vektor, jako je např. bakteriofág, a mimochromozómový vektor, jako je např. plazmid, přičemž zvláště výhodné jsou kruhové plazmidové vektory. Vhodné prokaryotické vektory byly popsány např. v Sambrook et al., supra, kapitoly 1-4. Na druhé straně se může jednat o eukaryotický vektor, jako je např. kvasinkový vektor nebo vektor vhodný pro expresi v buňkách vyšších organizmů, např.
v hmyzích buňkách, rostlinných buňkách nebo buňkách obratlovců, zejména savčích buňkách. Výhodnými příklady eukaryotických vektorů jsou plazmidové nebo virové vektory. Vhodné eukaryotické vektory byly popsány v Sambrook et al., supra, kapitola 16.
A dále se předkládaný vynález týká buňky, která obsahuje alespoň jednu heterologní kopii polynukleotidů nebo vektor, jak byly definovány výše. Polynukleotid nebo vektor jsou vloženy do buňky, a to způsoby, které jsou odborníkům známy, jako je např. transformace (tento termín zahrnuje metody jako je transfekce, elektroporace, lipofekce, infekce atd.). Buňka je eukaryotická nebo prokaryotická buňka. Způsoby transformace buněk nukleovými kyselinami jsou obecně známé, a proto není třeba je podrobné vysvětlovat. K příkladům výhodných buněk patří eukaryotické buňky, zejména buňky obratlovců a zvláště pak buňky savců.
Další aspekt předkládaného vynálezu se týká rekombinantního způsobu přípravy polypeptidů podle vynálezu, který zahrnuje kultivaci hostitelských buněk transformovaných polynukleotidem nebo vektorem, které byly popsány výše, a to za podmínek, které umožňují expresi polypeptidů, a dále zahrnuje izolaci takto exprimovaného polypeptidů z buněk nebo ze supernatantu buněčné kultury. Hostitelské buňky lze kultivovat v obvyklých živných médiích vhodně modifikovaných pro selekci transformant, amplifikaci polynukleotidů nebo vektoru nebo purifikaci polypeptidů.
Takto éxprimovaný polypeptid podle předkládaného vynálezu se izoluje a purifikuje z rekombinantních buněčných kultur způsoby k tomu určenými, které jsou odborníkům známy, jako je např. homogenizace s detergenty, chromatografie na heparin-
• 0
- 10 Sepharose, kationtová výměnná chromatografe, chromatografie na Con-A-Sepharose, gelová filtrační chromatografie, Ni-chelatační chromatografie, chromatografie na glutathionsepharose (agaróze), chromatografie s hydrofobní interakcí a afinitní chromatografie s protilátkou.
Polypeptid podle předkládaného vynálezu je purifikovaný produkt přirozeně exprimovaný z buněčné linie s vysokou expresí, nebo je to produkt chemické syntézy a nebo je produkován rekombinantní technikou v prokaryotickém nebo eukaryotickém hostiteli. V závislosti na tom, jaký hostitel byl užit pro rekombinantní produkci, polypeptid podle vynálezu může být glykosylován nebo nemusí.
Další aspekt předkládaného vynálezu se týká oligonukleotidu nebo jeho derivátu, který hybridizuje za stringentních podmínek s nukleotidovou sekvencí uvedenou zde jako sekvence id. č. 1. Takový oligonukleotid má délku např. 5, výhodně 15 až 100 nebo dokonce i několik set nukleosidových jednotek nebo jejich analogů, v závislosti na zamýšleném použití.
Oligonukleotid podle vynálezu se užívá jako klonovací primer nebo jako PCR primer nebo jako sekvenační primer nebo jako hybridizační sonda. Další použití se týká stimulace nebo inhibice exprese polypeptidu podle předkládaného vynálezu in vivo využitím sense nebo anti-sense techniky. Tato technika může být využita k řízení genové exprese protřednictvím vytváření trojšroubovicových struktur na dvojřetězcové DNA nebo anti-sense mechanismem na RNA, přičemž oba tyto způsoby jsou založeny na tom, že oligonukleotid se váže na DNA nebo RNA. Ještě další použití oligonukleotidů, zejména RNA oligonukleotidu, se týká řízení exprese užitím ribozymové technologie. Oligonukleotidy mohou být vneseny do buněk postupy, které jsou v oboru známy, buďto přímo, nebo tak, že anti-sense nebo ribozymová RNA nebo DNA jsou exprimovány in vivo, čímž je inhibována produkce polypeptidů podle předkládaného vynálezu. Anti-sense konstrukty nebo ribozymy k polynukleotidu podle vynálezu inhibují působení polypeptidů podle vynálezu a mohou se využít k léčení některých nemocí jako je např. rakovina nebo metastázy.
Dále oligonukleotidy podle vynálezu mohou být využity k detekci přítomnosti nebo absence polynukleotidu podle vynálezu a hladiny exprese tohoto polynukleotidu. A dále tyto oligonukleotidy mohou být užity k detekci mutací v genu, který kóduje polypeptid podle předkládaného vynálezu. Mutace v genu mohou korelovat s výskytem nemoci nebo s prognózou nemoci. Proto jsou tyto oligonukleotidy užitečné jako diagnostické markéry pro diagnostiku nemocí jako je rakovina, metastázy, a aberantní (nenormální) angiogeneze. Polypeptidy, jejich funkční fragmenty, deriváty nebo analogy, a nebo buňky, které je exprimují, nebo polynukleotidy nebo jejich fragmenty, mohou být využity jako imunogeny pro produkci příslušných protilátek. Takže předkládaný vynález se týká také protilátky, která specificky rozpoznává a váže polypeptid podle vynálezu.
Tyto protilátky jsou např. polyklonální nebo monoklonální protilátky. Předkládaný vynález se také týká chimérických, jednořetězových a humanizovaných protilátek, a také Fab fragmentů. Pro přípravu takových protilátek a jejich fragmentů se mohou užít různé metody, které jsou odborníkům známy.
Polyklonální protilátky lze získat imunizací experimentálních zvířat vhodným polypeptidovým nebo peptidovým antigenem, který je případně navázán na nosič, a pak izolací
- 12 protilátky z těchto imunizovaných zvířat. Monoklonální protilátky mohou být připraveny metodou hybridomů, kterou vyvinuli Kohler a Milstein. Způsoby přípravy polyklonáíních a monoklonálních protilátek jsou obecně známy a není třeba je podrobně vysvětlovat (viz např. Harlow and Lané, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988).
Tyto protilátky mohou být využity k izolaci polypeptidů z tkáně exprimující tento polypeptid. protilátka specifická k polypeptidů podle předkládaného vynálezu se dále může využít k inhibici biologického účinku polypeptidů tím, že se naváže na polypeptid. Tímto způsobem se protilátky podle vynálezu mohou využít v terapii, např. k léčení rakoviny. Léčení rakoviny lze provádět postupy, které byly popsány např. Weinerem (Semin. Oncol. 26 (1999), 41-50) nebo v publikacích, které jsou v uvedené publikaci citovány.
Dále takové protilátky mohou detekovat přítomnost nebo absenci polypeptidů podle předkládaného vynálezu a jeho koncentraci, tudíž jsou užitečné jako diagnostické markéry pro diagnostiku nemocí jako je rakovina, metastázy nebo aberantní angiogeneze.
Další aspekt předkládaného vynálezu se týká způsobu identifikace látky schopné modulovat biologickou aktivitu nebo expresi polypeptidů podle předkládaného vynálezu. Takže předkládaný vynález se týká také způsobu identifikace antagonistů a inhibitorů, a také agonistů a stimulátorů funkce nebo aktivity nebo exprese polypeptidů podle předkládaného vynálezu.
Tak např. antagonista může vázat polypeptid podle vynálezu a inhibovat tak nebo eliminovat jeho funkci. Antagonistou může být např. protilátka nebo oligonukleotid • · ··
- 13 s vysokou afinitou nebo peptide proti polypeptidů, který eliminuje glukuronidázovou aktivitu polypeptidů tím, že se na polypeptid naváže. Příkladem inhibitoru je molekula s nízkou molekulovou hmotností, která inaktivuje polypeptid navázáním na katalytická místa a jejich obsazením, čímž se katalytická místa stanou nepřístupnými pro substrát, takže biologická aktivita polypeptidů se neprojeví.
Antagonisté a inhibitory se mohou využít při léčení rakoviny, metastáz nebo aberantní angiogeneze tak, že se zabrání tomu, aby polypeptid působil rozpad heparansulfátového proteoglykanu z extracelulární matrix. Antagonisté a inhibitory identifikované způsobem výše popsaným nebo jejich deriváty mohou být využity v přípravcích společně s farmaceuticky přijatelnými nosiči.
Předkládaný vynález se konkrétně týká testů k identifikaci výše popsaných látek, např. nízkomolekulárních inhibitorů, které jsou specifické k polypeptidů podle předkládaného vynálezu a zabraňují jeho funkci nebo zabraňují jeho expresi. Buď přírodní nebo syntetické sacharidy mohou být užity jako substráty pro test endo-glukuronidázové aktivity polypeptidů.
Další aspekt vynálezu se týká polynukleotid nebo polypeptidů podle předkládaného vynálezu pro použití v lékařství. Konkrétně se vynález týká použití polypeptidů nebo polynukleotidu podle vynálezu pro výrobu farmaceutického přípravku pro léčení nemocí, které jsou důsledkem nedostatečného nebo chybějícího polypeptidů, jak byl popsán výše. Místo polynukleotidu nebo polypeptidů podle vynálezu nebo navíc k němu se může k léčení užít agonista polypeptidů nebo induktor nebo enhancer exprese tohoto polypeptidů.
·· ·· • ♦ * · • · · • · · • · « •9 ···· • ·
• · • · ·· • · · · • · » ··
- 14 Nemoci, které je možné léčit, jsou např. úrazy, autoimunitni nemoci, kožní nemoci, kardiovaskulární nemoci a nemoci nervového systému. Polynukleotidy podle předkládaného vynálezu mohou být využity také v genové terapii. Genovou terapii lze provádět postupy, které byly popsány v publikacích Beutler (Biol. Blood Marrow Transplant 5 (1999), 273-276) nebo GomezNavarro et al., (Eur. J. Cancer 35 (1999), 867-885) nebo tam citovaných publikacích.
Další aspekt vynálezu se týká protilátky podle vynálezu nebo jejího fragmentu pro použití v medicíně. Konkrétně se vynález týká použití protilátky podle předkládaného vynálezu pro výrobu farmaceutického přípravku k léčení nemocí, které jsou důsledkem nadměrné aktivity nebo nadměrné exprese (overexpression) polypeptidů podle vynálezu. Místo protilátky podle předkládaného vynálezu může být v medicíně užit antagonista nebo inhibitor nebo inhibitor exprese polypeptidů. K nemocem, které mohou být léčeny, patří rakovina, metastázy, aberantní angiogeneze a zánětlivá onemocnění včetně artritidy.
A dále se vynález týká farmaceutických přípravků vhodných pro podávání teplokrevným živočichům včetně člověka, kteří trpí nemocemi v důsledku nedostatku nebo úplné nepřítomnosti nebo inaktivace polypeptidů podle vynálezu, nebo trpí nemocí, která je důsledkem nadměrné aktivity nebo nadměrné exprese polypeptidů podle předkládaného vynálezu.
Jelikož je polynukleotid podle předkládaného vynálezu přednostně exprimován ve tkáních samčích genitálií, modulace exprese a/nebo aktivity kódovaného polypeptidů může být využito pro lékařský zásah do funkce mužských genitálií (např. při ovlivňování fertility, erektilní dysfunkci).
♦ 9 * ···
- 15 Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Identifikace polynukleotidu podle vynálezu
S využitím publikované sekvence humánní heparanázy (AAD 54941.1) byly identifikovány tři templáty od firmy Incyte (tj. soubory EST od firmy Incyte), které sdílely významnou homologií s humánní heparanázou. Některé z těchto EST každého templátu byly objednány od firmy Incyte. Stanovení nukleotidové sekvence 3'- a 5'-konce každého EST klonu odhalilo další nové sekvenční informace, které vedly k dalším dvěma souborům klonů firmy Incyte. Kombinací těchto sekvenčních informací a sekvenčních informací získaných vlastním sekvencováním těchto Incyte klonů bylo možné sestavit nový paralog humánní heparanázy, tj. polypeptid příbuzný humánní heparanáze. Tato nová sekvence obsahuje 3943 bp a identifikovaná kódující sekvence zahrnuje úsek bp 1 až 1479 (včetně STOP kodonu). 5'-konec je stále ještě otevřený, jak ukazuje analýza kódujícího úseku (provedená programem ESTSCAN) tak i homologie s humánní heparanázou.
Příklad 2
Elektronická analýza exprese
Na základě počtu EST pro danou tkáň je možné určit nebo predikovat míru in vivo exprese daného genu ve tkáni.
Elektronická northernová analýza je bioinformatická metoda, která umožňuje nejdříve identifikovat celkový počet všech EST pro danou tkáň (tzv. velikost poolu, pool-size) z této tkáně, • ·♦ ·« · · • * · · (NCBI BLAST v.
přítomných v databázi a pak počet EST odpovídající pouze zadané sekvenci.
Tato analýza se provádí programem BLAST
2.0.10; Altschul et al., Nucleic Acid Res. (1997) 25, 33893402) s využitím cDNA požadovaného genu jakožto zadanou sekvencí a jako zdroj dat se analyzovala humánní databáze EST klonů (LifeSeqGold od firmy Incyte). Prohledávací parametry byly E=le-30. Dotaz SQL v databázi poskytl pro každý vyhledaný EST informaci o zdrojové tkáni a velikosti poolu pro danou tkáň.
Obecně se věří, že tato data korelují expresní hladinou in vivo. Statistická analýza (normalizace k velikosti poolu a stanovení intervalu spolehlivosti) pomohla určit spolehlivost dat a srovnat hladiny exprese pro různé tkáně. Spolehlivost takové predikční metody se obvykle zvyšuje s počtem nálezů/tkáň a velikostí poolu pro tkáň.
Příklad 3
Exprese polynukleotidů
Kódující úsek polynukleotidů uvedeného zde jako sekvence id. č. 1 byl amplifikován pomocí PCR užitím 5’-primerů HepRl:
(5’-GAC AGG AGA CCC TTG CCT GTA GAC-3') a 3'-primerů HepR2:
(5'-ATA GTC GAG TTA TCG GTA GCG GCA GGC CAA AGC-3') a templátové DNA izolované z klonů #3207535Hl a #3385824H1 databáze LifeSeqGold od firmy Incyte Inc.
z říjen/listopad 1999. Získaný DNA fragment velikosti 1488 bp byl fosforylován užitím T4 polynukleotidkinázy a pak následovalo štěpení restriktázou Xhol. Fragment byl pak ligován ve shodě se čtecím rámcem do vektoru pISP-myc, který poskytl N-koncovou imunoglobulinovou signální sekvenci následovanou značkovacím epitopem myc-tag. Po naštěpení restriktázami HindlII a Xhol byl fragment ligován do vhodných míst expresního vektoru pCEP4 (Invitrogen), čímž byl připraven expresní vektor HepR-pCEP. HepR-pCEP byl trvale transfekován do buněčných linií karcinomu prsu MCF7, MBA-231 a MBA-468 a také do buněk CHO. Rekombinantní protein byl detekován pomocí protilátky namířené proti epitopu myc.
Pro expresi v hmyzích buňkách byl PCR-fragment vyštěpen z vektoru pISP-myc restriktázami EcoRI a Xbal. Fragment byl klonován do vektoru pVLl392 pro přenos do bakulovirů, čímž byl připraven vektor HepR-pVL a ten byl transfekován do hmyzích buněk Sf9.
Příklad 4
Produkce protilátek
Polypeptid purifikovaný z infikovaných hmyzích buněk Sf9 pomocí expresního vektoru HepR-pVL z příkladu 3 byl použit k imunizaci myší a králíků standardními postupy, které jsou odborníkům známy (Harlow and Lané, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988) .
• 9
9 • ♦
Μ ·
- 18 SEZNAM SEKVENCÍ
Sekvence id. č. 1:
Sekvence cDNA kódující polypeptid podobný humánní heparanáze
Délka: 3943 bp
Kódující úsek: 1-1476 bp
STOP kodon: 1477-1479 bp
Dvě předpokládaná polyadenylační místa jsou znázorněna podtrženými písmeny
| 1 | gacaggagac | ccttgcctgt | agacagagct | gcaggtttga | aggaaaagac |
| 51 | cctgattcta | cttgatgtga | gcaccaagaa | cccagtcagg | acagtcaatg |
| 101 | agaacttcct | ctctctgcag | ctggatccgt | ccatcattca | tgatggctgg |
| 151 | ctcgatttcc | taagctccaa | gcgcttggtg | accctggccc | ggggactttc |
| 201 | gcccgccttt | ctgcgcttcg | ggggcaaaag | gaccgacttc | ctgcagttcc |
| 251 | agaacctgag | gaacccggcg | aaaagccgcg | ggggcccggg | cccggattac |
| 301 | tatctcaaaa | actatgagga | tgacattgtt | cgaagtgatg | ttgccttaga |
| 351 | taaacagaaa | ggctgcaaga | ttgcccagca | ccctgatgtt | atgctggagc |
| 401 | tccaaaggga | gaaggcagct | cagatgcatc | tggttcttct | aaaggagcaa |
| 451 | ttctccaata | cttacagtaa | tctcatatta | acagagccaa | ataactatcg |
| 501 | gaccatgcat | ggccgggcag | taaatggcag | ccagttggga | aaggattaca |
| 551 | tccagctgaa | gagcctgttg | cagcccatcc | ggatttattc | cagagccagc |
| 601 | ttatatggcc | ctaatattgg | gcggccgagg | aagaatgtca | tcgccctcct |
| 651 | agatggatte | atgaaggtgg | caggaagtac | agtagatgca | gttacctgge |
| 701 | aacattgcta | cattgatggc | cgggtggtca | aggtgatgga | cttcctgaaa |
| 751 | actcgcctgt | tagacacact | ctctgaccag | attaggaaaa | ttcagaaagt |
| 801 | ggttaataca | tacactccag | gaaagaagat | ttggcttgaa | ggtgtggtga |
| 851 | ccacctcagc | tggaggcaca | aacaatctat | ccgattccta | tgctgcagga |
| 901 | ttcttatggt | tgaacacttt | aggaatgctg | gccaatcagg | gcattgatgt |
| 951 | cgtgatacgg | cactcatttt | ttgaccatgg | atacaatcac | ctcgtggacc |
| 1001 | agaattttaa | cccattacca | gactactggc | tctctctcct | ctacaagcgc |
| 1051 | ctgatcggcc | ccaaagtctt | ggctgtgcat | gtggctgggc | tccagcggaa |
| 1101 | accacggcct | ggccgagtga | tccgggacaa | actaaggatt | tatgctcact |
| 1151 | gcacaaacca | ccacaaecac | aactacgtte | gagggtccat | tacacttttt |
| 1201 | atcatcaact | tgcatcgakc | aagaaagaaa | atcaagctgg | ctgggactct |
| 1251 | cagagacaag | ctggttcacc | agtacctgct | gcagccctat | gggcaggagg |
| 1301 | gcctaaagtc | caagtcagtg | caactgaatg | gccagccctt | agtgatggtg |
| 1351 | gacgacggga | ccctcccaga | attgáagccc | cgcccccttc | gggccggccg |
| 1401 | gacattggtc | atccctccag | tcaccatggg | cttttatgtg | gtcaagaatg |
·· » · • ♦ ··
- 19 1451 tcaatgcttt ggcctgccgc taccgaTAAg ctatcctcac actcacggct 1501 accagtgggc ctgctgggct gcttccactc ctccactcca gtagtatcct 1551 ctgttttcag acatcctagc aaccagcccc tgctgcccca tcctgctgga 1601 atcaacacag acttgctctc caaagagact aaatgtcata gcgtgatctt 1651 agcctaggta ggccacatcc atcccaaagg aaaatgtaga catcacctgt 1701 acctatataa ggataaaggc atgtgtatag agcagaatgt ttcccttcat 1751 gtgcactatg aaaacgagct gacagcacac tcccaggaga aatgtttcca 1801' gacaactccc catgatcctg tcacacagca ttataaccac aaatccaaac 1851 cttagcctgc tgctgctgct gccctcagag gaagatgagg aaggaaaaaa 1901 actgggtgga cctacaaaaa cccatcctct cccaactcct tcttctctgc 1951 ctctttcttg ctgctgccct gagttttttg acacatctct ttccataggg 2001 gagtaatggg tgtgtcagcc ctggcctgct gggagagctg tttgtatgat 2051 ttcccggctg atgtatgagc gtgcgcatct gggttcctga cagtggcatc 2101 catcactggc agttcttctg agaagcgggt gcttcaaaag taaaattaca 2151 atcacactcc agatttggta agaaggttct attcctctgt gaatccagat 2201 tcccccagag ttgtaatggg agtcaagtaa caatattcat tgagtggaga 2251 gcagtttatt aggcacaaca aaaagtaatc atcattcttc atgttgctat 2301 gagggagagt ttgagtacaa agagaaagca tactgaaaca tcaggtacac 2351 acacacaccc caactggaca aagcaaatta gacctctcca aaattaagag 2401 aatattaggg gctctatagg gtaagccttt aattgtttgg ttaactcaaa 2451 tcattatttt taaaaaagaa gaaaaaagtg tgaatcaagg tcatcactgg 2501 aagacacaac tgaatctaac ctttttgcct cttcccaagt agcctatttg 2551 agctagaaca aaactttgtt agccattttg ggagagaata gggaatctag 2601 agaatgaaga tctgcccaaa actatggaat ggtaggtagg aagcttctga 2651 gttgggcagg tgtgaagtgg gggatgagga cgttctatat gattcaaggg 2701 gcatgagggt ctttgccaat gagctacagc tgaaatgact ttcttttctg 2751 gggatgtgat tttctttctc aggataaatg acaggaatga tgcttttgtt 2801 agaaggagga gagatttgac actgttccaa gtgagacagt gatacaattt 2851 ctgctgtttg tgaaaggaca ggaatggggy gggggcaagg cagggttgcc 2901 tagggcagag actagggagg ctgcctaaga cgcacacgga gttaaggatt 2951 tgggccaagt ctgcaaagtg agagatggaa gggagattag accaaagagg 3001 agggagagaa ttctgagctt ggagaacggt ggatttggga gagggaagct 3051 gactacctaa ttccaggaag cgaggggacc gggttttgac atgcttatca 3101 ttaagcacag gaggaacagc atacagcaga tgtactacag cgagcaagaa 3151 agggagagcc cgaggaccag gctgcaccag gtcagtggct gtgctcagca 3201 tggaagcaac tggagagaga ggggcagacc ctgagacygc cctgcaaggc 3251 tgcccagaag ggacccgttt ctctgggacc aggcacctcc cactgaggct *· *♦ « ♦ · * • * * • » * ·· » · » » ···
- 20 3301
3351
3401
3451
3501
3551
3601
3651
3701
3751
3801
3851
3901 tcagctctga gagggcagga aagtgaagta ccaagatggg ggcggggcgg ggggtaggaa ataagagaaa gaagaaacag attgacaggc caaagtgagg aaaagagagg aaaagagaaa tgagactaaa aggtcgttcc cccaactgtt. aaaaatgtgt gcagatatca acgtctcttc tacatactgg tacaggtgcg actgcagggc cccctgatat aacaagagta accaaaggtc cctaagagcc tggccctggg gacctatggt ttgctttgcg tccttagtaa ccccatgata aaggggtact actgttatcc ccatttttcc tacgaggcat ggagaggatc catggctcgc cccaggggca cccggggaaa tgggttgccg agcgcgaaat aatccagagc ctgcccactc agccacaagg ctcagcggct ccacaggtcc agacacctcc ttcacatctt tgtaggttct gctcattcag aacagccaga actccactca aacacacttt ctctaaataa gtgttgattt ttttttacta aaccttgcag aatatgggta attcctgctt cttttatctt tctctgtgta ttaaatgctg ctctcačgag atttaagttt tgtttatttt tta • a a a •
• 4«* aa a ♦ a · a · a ·
- 21 • a ♦
• · • · • a ♦ ♦ aa •
aaa • a a a a a
Sekvence id. č. 2
Aminokyselinová sekvence polypeptidu příbuzného humánní heparanáze
Translační produkt
| Délka: | 492 |
| 1 | DRRPLPVDRA AGLKEKTLIL |
| 51 | LDFLSSKRLV TLARGLSPAF |
| 101 | YLKNYEDDIV RSDVALDKQK |
| 151 | FSNTYSNLIL TEPNNYRTMH |
| 201 | LYGPNIGRPR KNVIALLDGF |
| 251 | TRLLDTLSDQ IRKIQKWNT |
| 301 | FLWLNTLGML ANQGIDWIR |
| 351 | LIGPKVLAVH VAGLQRKPRP |
| 401 | IINLHRXRKK IKLAGTLRDK |
| 451 | DDGTLPELKP RPLRAGRTLV |
LDVSTKNPVR TVNENFLSLQ LDPSIXHDGW LRFGGKRTDF LQFQNLRNPA KSRGGPGPDY GCKIAQHPDV MLELQREKAA QMHLVLLKEQ GRAVNGSQLG KDYIQLKSLL QPIRIYSRAS MKVAGSTVDA VTWQHCYIDG RWKVMDFLK YTPGKKIWLE GWTTSAGGT NNLSDSYAAG HSFFDKGYNH LVDQNFNPLP DYWLSLLYKR GRVIRDKLRI YAHCTNHKNH NYVRGSITLF LVHQYLLQPY GQEGLKSKSV QLNGQPLVMV IPPVTMGFYV VKNVNALACR YR
Claims (21)
1. Polynukleotid kódující polypeptid, který má biologickou aktivitu endo-glukuronidázy, obsahující (a) sekvenci uvedenou v seznamu sekvencí jako sekvence id. č.l nebo alespoň její část kódující protein, (b) nukleotidovou sekvenci odpovídající sekvenci podle bodu (a) s ohledem na degeneraci genetického kódu, nebo (c) nukleotidovou sekvenci hybridizující za stringentních podmínek se sekvencí podle bodu (a) a/nebo (b).
2. Rekombinantní vektor obsahující alespoň jednu kopii polynukleotidu podle nároku 1.
3. Vektor podle nároku 2, který je expresním expresním vektorem.
4. Buňka transformovaná polynukleotidem podle nároku 1 nebo vektorem podle kteréhokoliv z nároků 2 až 3.
5. Polypeptid kódovaný polynukleotidem podle nároku 1.
6. Polypeptid podle nároku 5, který má aktivitu endoglukuronidázy, obsahující (a) aminokyselinovou sekvenci uvedenou v seznamu sekvencí jako sekvence id. č. 2, nebo • to ·· to · · · ·· · • · ♦ • · to ·· ·♦*♦ • ♦ · ♦ to * to • · · • ♦·· * • · ··♦ ♦* ♦ ♦ *· • · * to * ··· • ·· · to · · · «· toto (b) aminokyselinovou sekvenci mající alespoň s aminokyselinovou sekvencí podle bodu (a).
70% identitu
7. Polypeptid podle nároku 6, který je schopen indukovat tvorbu specifických protilátek.
8. Způsob přípravy polypeptidů podle kteréhokoliv z nároků 6 až 7 vyznačující se tím, že zahrnuje chemickou syntézu, technologii rekombinantní DNA nebo kombinaci těchto způsobů.
9. Způsob přípravy polynukleotidu podle nároku 1 vyznačující se tím, že zahrnuje zahrnuje chemickou syntézu, technologii rekombinantní DNA, polymerázovou řetězovou reakci nebo kombinaci těchto způsobů.
10. Protilátka nebo oligopeptid nebo odpovídající oligonukleotid, které specificky rozpoznávají a váží se na polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 5 až 7.
11. Polynukleotid podle nároku 1 nebo polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 5 až 7 pro použití jako léčivo.
12. Použití polynukleotidu podle nároku 1 nebo polypeptidů podle kteréhokoliv z nároků 5 až 7 pro výrobu farmaceutického přípravku pro léčení rakoviny a rakovinných metastáz, angiogeneze, zánětů, artritidy, úrazů, autoimunitních onemocnění, kožních nemocí, kardiovaskulárních nemocí a onemocnění nervového systému.
k 0«
0 0
0 *·» « 0
0« 000· ··
- 24
13. Způsob léčení rakoviny a rakovinných metastáz, angiogeneze, zánětů, artritidy, úrazů, autoimunitních onemocnění, kožních nemocí, kardiovaskulárních nemocí a onemocnění nervového systému vyznačující se tím, že zahrnuje podávání vhodného množství polynukleotidu podle nároku 1 nebo polypeptidů podle kteréhokoliv z nároků 5 až 7.
14. Způsob angiogeneze, onemocnění, léčení rakoviny a rakovinných metastáz, zánětů, artritidy, úrazů, autoimunitních kožních nemocí, kardiovaskulárních nemocí a onemocnění nervového systému vyznačující se tím, že zahrnuje podávání vhodného množství protilátky nebo oligopeptidu nebo odpovídajícího oligonukleotidu jak jsou definovány v nároku 1.
15. Způsob identifikace látky schopné modulovat v buňce biologickou aktivitu nebo expresi polypeptidů podle kteréhokoliv z nároků 5 až 7 vyznačující se tím, že zahrnuje krok, kdy se přivede do kontaktu polypeptid nebo jeho funkční derivát, funkční fragment nebo funkční analog, nebo buňka schopná exprimovat tento polypeptid, s alespoň jednou sloučeninou nebo činidlem, jejichž schopnost modulovat biologickou aktivitu nebo expresi polypeptidů, jeho funkčního derivátu, funkčního fragmentu nebo funkčního analogu je testována, a kdy se stanoví změna biologické aktivity nebo exprese polypeptidů, jeho derivátu, fragmentu nebo analogu způsobená látkou.
16. Způsob podle nároku 15 vyznačující se tím, že dále zahrnuje formulaci farmaceutického přípravku, který obsahuje φφ φ* φ» « φ • · « φφφ • · ·· · ·♦ φφ »» φ· • · · • φφφφ • · · · • φ * · »· φφ φφ φ φ φ • φ φ φ φ φ φφφφ jako účinnou složku takovou látku, která byla identifikována jako modulátor, nebo její derivát.
17. Testovací systém pro testování látky na její schopnost vázat se na polypeptid podle kteréhokoliv z nároků 5 až 7 nebo ho funkčně ovlivnit vyznačující se tím, že obsahuje polypeptid nebo jeho funkční analog nebo buňku schopnou exprimovat polypeptid nebo jeho funkční analog, a volitelné dále obsahuje prostředky ke stanovení reakce způsobené látkou.
18. Látka získaná způsobem podle kteréhokoliv z nároků 15 nebo 16, která je agonistou nebo antagonistou polypeptidů podle kteréhokoliv z nároků 5 až 7.
19. Použití polynukleotidu podle nároku 1 při modulaci exprese polypeptidů podle kteréhokoliv z nároků 5 až 7 v buňce.
20. Použití polynukleotidu podle nároku 1 při genové terapii.
21. Použití protilátky nebo oligopeptidu nebo odpovídajícího oligonukleotidu nebo jejich derivátu podle nároku 10 nebo polynukleotidu podle nároku 1 při diagnostice rakoviny a rakovinných metastáz, angiogeneze, zánětů, artritidy, úrazů, autoimunitních onemocnění, kožních nemocí, kardiovaskulárních nemocí a onemocnění nervového systému.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99125831 | 1999-12-23 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20022147A3 true CZ20022147A3 (cs) | 2002-09-11 |
Family
ID=8239724
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20022147A CZ20022147A3 (cs) | 1999-12-23 | 2000-12-18 | Polypeptid příbuzný humánní heparanáze, polynukleotid, který ho kóduje, a jejich použití |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040161745A1 (cs) |
| EP (1) | EP1244778A2 (cs) |
| JP (1) | JP2003518381A (cs) |
| KR (1) | KR20020062375A (cs) |
| CN (1) | CN1413249A (cs) |
| AU (1) | AU3013901A (cs) |
| BG (1) | BG106842A (cs) |
| BR (1) | BR0016703A (cs) |
| CA (1) | CA2392703A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20022147A3 (cs) |
| EE (1) | EE200200353A (cs) |
| HU (1) | HUP0203724A2 (cs) |
| IL (1) | IL149506A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA02005077A (cs) |
| NO (1) | NO20023015D0 (cs) |
| PL (1) | PL362867A1 (cs) |
| RU (1) | RU2002119561A (cs) |
| SK (1) | SK8882002A3 (cs) |
| WO (1) | WO2001048161A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200205852B (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001072973A2 (en) * | 2000-02-24 | 2001-10-04 | Bayer Aktiengesellschaft | Regulation of human heparanase-like enzyme |
| GB0008912D0 (en) * | 2000-04-11 | 2000-05-31 | Janssen Pharmaceutica Nv | Mammalian heparanase |
| US20040171535A1 (en) * | 2000-04-20 | 2004-09-02 | Heinrikson Robert Leroy | Heparanase II, a novel human heparanase paralog |
| WO2002004645A2 (en) * | 2000-07-12 | 2002-01-17 | Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw | A second human heparanase, and splice variants thereof, with a predominant expression in skeletal muscle, heart and pancreas |
| FR2818131B1 (fr) * | 2000-12-14 | 2005-02-11 | Oreal | Composition cosmetique comprenant de l'heparanase |
| CN101311188B (zh) * | 2007-05-21 | 2010-12-29 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 | 人乙酰肝素酶的小分子多肽抑制剂 |
| CN101670115B (zh) * | 2009-07-31 | 2011-07-27 | 中国人民解放军第三军医大学 | 乙酰肝素酶与热休克蛋白的复合物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6177545B1 (en) * | 1997-09-02 | 2001-01-23 | Insight Strategy & Marketing Ltd. | Heparanase specific molecular probes and their use in research and medical applications |
| US6242238B1 (en) * | 1997-10-28 | 2001-06-05 | The Australian National University | Isolated nucleic acid molecule encoding mammalian endoglucuronidase and uses therefor |
| CN1370178A (zh) * | 1999-06-25 | 2002-09-18 | 洞察战略及销售有限公司 | 多核苷酸及其编码的与乙酰肝素酶同源较远的多肽 |
| CA2387695A1 (en) * | 1999-09-23 | 2001-03-29 | Klaus Ducker | A novel member of the heparanase protein family |
-
2000
- 2000-12-18 WO PCT/EP2000/012909 patent/WO2001048161A2/en not_active Ceased
- 2000-12-18 BR BR0016703-7A patent/BR0016703A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-12-18 AU AU30139/01A patent/AU3013901A/en not_active Abandoned
- 2000-12-18 HU HU0203724A patent/HUP0203724A2/hu unknown
- 2000-12-18 MX MXPA02005077A patent/MXPA02005077A/es unknown
- 2000-12-18 RU RU2002119561/13A patent/RU2002119561A/ru unknown
- 2000-12-18 KR KR1020027008186A patent/KR20020062375A/ko not_active Withdrawn
- 2000-12-18 EP EP00990789A patent/EP1244778A2/en not_active Withdrawn
- 2000-12-18 EE EEP200200353A patent/EE200200353A/xx unknown
- 2000-12-18 CN CN00817680A patent/CN1413249A/zh active Pending
- 2000-12-18 CZ CZ20022147A patent/CZ20022147A3/cs unknown
- 2000-12-18 SK SK888-2002A patent/SK8882002A3/sk unknown
- 2000-12-18 JP JP2001548674A patent/JP2003518381A/ja active Pending
- 2000-12-18 PL PL00362867A patent/PL362867A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-12-18 CA CA002392703A patent/CA2392703A1/en not_active Abandoned
- 2000-12-18 US US10/168,795 patent/US20040161745A1/en not_active Abandoned
- 2000-12-18 IL IL14950600A patent/IL149506A0/xx unknown
-
2002
- 2002-06-19 BG BG106842A patent/BG106842A/xx unknown
- 2002-06-21 NO NO20023015A patent/NO20023015D0/no not_active Application Discontinuation
- 2002-07-22 ZA ZA200205852A patent/ZA200205852B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL362867A1 (en) | 2004-11-02 |
| IL149506A0 (en) | 2002-11-10 |
| EP1244778A2 (en) | 2002-10-02 |
| NO20023015L (no) | 2002-06-21 |
| EE200200353A (et) | 2003-10-15 |
| RU2002119561A (ru) | 2004-02-10 |
| BR0016703A (pt) | 2002-09-24 |
| BG106842A (en) | 2003-05-30 |
| SK8882002A3 (en) | 2002-11-06 |
| NO20023015D0 (no) | 2002-06-21 |
| ZA200205852B (en) | 2003-10-22 |
| US20040161745A1 (en) | 2004-08-19 |
| WO2001048161A3 (en) | 2002-02-14 |
| HUP0203724A2 (hu) | 2003-03-28 |
| WO2001048161A2 (en) | 2001-07-05 |
| CA2392703A1 (en) | 2001-07-05 |
| AU3013901A (en) | 2001-07-09 |
| KR20020062375A (ko) | 2002-07-25 |
| MXPA02005077A (es) | 2002-11-07 |
| JP2003518381A (ja) | 2003-06-10 |
| CN1413249A (zh) | 2003-04-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2011172588A (ja) | Ｄｐ７５をコードするｄｎａおよびその使用のためのプロセス | |
| JP2002510462A (ja) | 哺乳類のエンドグルクロニダーゼをコードする単離された核酸分子およびその使用 | |
| CZ20022147A3 (cs) | Polypeptid příbuzný humánní heparanáze, polynukleotid, který ho kóduje, a jejich použití | |
| JP5704722B2 (ja) | 細胞接着阻害剤およびその用途 | |
| US20090232815A1 (en) | Antibodies that bind to pleiotrophin growth factor receptor | |
| AU2001266876A1 (en) | Pleiotrophin growth factor receptor for the treatment of proliferative, vascular and neurological disorders | |
| JP2002502611A (ja) | ヒトヘパラナーゼポリペプチドおよびｃＤＮＡ | |
| JP2002355056A (ja) | 脈管形成を伴う障害の診断及び治療のための組成物及び方法 | |
| US20060094054A1 (en) | Fibulin-3 and uses thereof | |
| EP1765375A1 (en) | Method for inhibiting angiogenesis and/or lymphangiogenesis | |
| EA005853B1 (ru) | N-ацетилглюкозамин-6-фосфатдеацетилаза человека, взаимодействующая с каспазой-8, и способы ее применения | |
| EP1773879B1 (en) | Inhibitors of l1 and adam10 for the treatment of carcinomas | |
| JPWO2006093337A1 (ja) | 癌の予防・治療剤 | |
| US20040171535A1 (en) | Heparanase II, a novel human heparanase paralog | |
| US20100305025A1 (en) | Rnase a peptides, fragments and uses thereof | |
| JPH119288A (ja) | 新規ｈａｓ２スプライシング変種ｈｏｅｆｃ１１：慢性腎不全、炎症性疾患および心筋虚血における標的 | |
| JPWO2005061704A1 (ja) | 癌の予防・治療剤 | |
| KR20050085881A (ko) | 신규 단백질 및 그 용도 | |
| CN1993467B (zh) | 与前列腺疾病相关的基因及其编码的多肽以及它们的应用 | |
| JPH11505130A (ja) | 新規な細胞表面タンパク質化合物 | |
| JP2004026692A (ja) | Ｍｅｐｅの新規用途 | |
| HK1176628A (en) | Biological materials and uses thereof | |
| HK1176628B (en) | Biological materials and uses thereof | |
| JP2008523068A (ja) | 有機化合物の使用 | |
| JP2002355062A (ja) | サバイビン類似ポリペプチドおよびそのｄｎａ |