CN116407590A - 一种中药材萃取物及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种中药材萃取物及其制备方法与用途，中药材萃取物包括一有效成分，有效成分由一沉香、一皂角、一角刺、一肉桂叶、一樟叶的其中任一种或其组合所组成；借此，通过服用含有中药材萃取物的药剂，即可达到治疗冠状病毒相关症状或疾病的功效。

Description

一种中药材萃取物及其制备方法与用途

技术领域

本发明是关于一种中药材萃取物的技术领域，尤指一种中药材萃取物及其制备方法与用途。

背景技术

冠状病毒(Coronavirus)是一种在动物与人类之间传播的人畜共通RNA病毒，在电子显微镜下呈现球状或椭圆形状，因外观具有囊状胶原纤维突出，形似皇冠状，而称为冠状病毒，冠状病毒的基因组大小在26000～32000个碱基对，是基因组规模最大的一类RNA病毒。

新型冠状病毒SARS-COV-2(最初经报导为COVID-19，并由冠状病毒研究组基于亲缘关系、分类学及惯例正式命名为SARS-COV-2)为一种新病毒株，SARS-COV-2以病毒棘蛋白(Spike Protein)与人类细胞表面受体结合，并通过自病毒基因转录而产生的蛋白链所切剪的3CLpro蛋白酶，进而产生病毒内部各个重要的蛋白质，让病毒得以继续感染与复制。

随着新型冠状病毒疫情肆虐，常见的新型冠状病毒感染迹象包括呼吸道症状、发烧、咳嗽、呼吸急促或是呼吸困难，更严重的情况下甚至会导致死亡，因此，目前迫切需要可用于治疗冠状病毒相关症状或疾病的药物。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种中药材萃取物及其制备方法与用途，通过服用含有中药材萃取物的药剂，即可实现治疗冠状病毒相关症状或疾病的功效。

本发明提供一种中药材萃取物，其包括一有效成分，有效成分由一沉香、一皂角、一角刺、一肉桂叶、一樟叶的其中任一种或其组合所组成。

进一步的，本发明另一实施例提供一种中药材萃取物的制备方法，其包括以下步骤所制成：一萃取步骤：将含有沉香、皂角、角刺、肉桂叶、樟叶的其中任一种或其组合的一原料以及超纯水以1：5至1：10的重量比进行混合，并加热进行萃取以取得一萃取液，其中，萃取温度介于90℃～110℃，萃取时间介于2.5小时～3.5小时；一过滤步骤：对该萃取液进行过滤；以及一干燥步骤：对该萃取液进行真空冷冻干燥以取得该中药材萃取物。

进一步的，本发明另一实施例提供一种以上述中药材萃取物用于制备一治疗冠状病毒相关症状或疾病的药剂的用途。

进一步的，本发明另一实施例提供一种以上述中药材萃取物用于制备一干预SARS-COV-2的棘蛋白的药剂的用途。

进一步的，本发明另一实施例提供一种以上述中药材萃取物用于制备一抑制SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性的药剂的用途。

借此，通过服用含有中药材萃取物的药剂，即可有效干预冠状病毒的棘蛋白(Spike Protein)与人类细胞表面的人体血管收缩素转换酶(Human Angiotensin-converting Enzyme 2,hACE2)结合，并抑制冠状病毒的3CLpro蛋白酶活性，而实现治疗冠状病毒相关症状或疾病的功效。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是本发明的中药材萃取物的萃取物的制备流程图；

图2是本发明中药材萃取物对SARS-COV-2棘蛋白与hACE2结合的干预分析结果；

图3是本发明中药材萃取物对SARS-COV-2棘蛋白与hACE2结合的半抑制浓度IC₅₀分析结果；

图4是本发明中药材萃取物对SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制的分析结果；

图5是本发明中药材萃取物对SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制的半抑制浓度IC₅₀分析结果。

图中：S1、萃取步骤；S2、过滤步骤；S3、干燥步骤。

具体实施方式

为便于说明本发明于上述发明内容中所表示的中心思想，下面结合本发明实施例中的附图1-5，以具体实施例表达。

本发明提供一种中药材萃取物及其制备方法，中药材萃取物包括一有效成分。其中，有效成分为一沉香、一皂角、一角刺、一肉桂叶、一樟叶的其中任一种材料或其组合所组成。

在本发明的一实施例中，有效成分为沉香、皂角、角刺、肉桂叶及樟叶其中任一种单方中草药。

在本发明的一实施例中，有效成分为沉香、皂角、角刺、肉桂叶或樟叶其中任两种复方中草药，选自沉香与皂角、沉香与角刺、沉香与肉桂叶、沉香与樟叶、皂角与角刺、皂角与肉桂叶、皂角与樟叶、角刺与肉桂叶、角刺与樟叶及肉桂叶与樟叶其中任一种组合。

在本发明的一实施例中，有效成分为沉香、皂角、角刺、肉桂叶或樟叶其中任三种复方中草药，例如沉香与皂角以及角刺的组合、沉香与皂角以及肉桂叶的组合，或是沉香与皂角以及樟叶的组合等任意组合。

在本发明的一实施例中，有效成分为沉香、皂角、角刺、肉桂叶或樟叶其中任四种复方中草药，例如沉香、皂角与角刺以及肉桂叶的组合，或是皂角、角刺与肉桂叶以及樟叶的组合等任意组合。

在本发明的一实施例中，有效成分为沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶所组成，沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶的重量比为1～5：1～5：1～5：1～5：1～5为佳，在本实施例中，沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶的重量比为1：1：1：1：1。

材料与材料处理方法：

1.材料

(a)沉香

沉香取自双子叶植物瑞香科植物沉香或白木香含有树脂的木材，沉香具有行气止痛、降逆调中、温肾纳气、通经脉安心神、镇静镇痛等作用，此外，经药理研究证实，沉香在药理上有明显的抗病菌作用。

(b)皂角

皂角取自豆科植物皂荚，为皂荚的成熟的果荚，皂荚具祛顽痰，通窍开闭，祛风杀虫的作用，皂荚内含三刺皂荚碱(Triacanthin)，在药理上对病菌具有抑制作用。

(c)角刺

角刺取自豆科植物皂荚，为皂荚的棘刺，角刺具消肿，拔毒，排脓，杀虫的作用，角刺可提取出黄酮苷(Flavonoids)、酚类(Phenols)、胺基酸(Amino Acid)，角刺萃取物在药理上具有抑菌消毒作用。

(d)肉桂叶

肉桂叶取自樟科植物肉桂，有散寒止痛、活血、健胃的作用，肉桂叶萃取物在药理上能够抑制细菌滋长，而达到抑菌消毒的作用。

(e)樟叶

樟叶取自樟科植物樟，具有祛风、除湿、解毒、杀虫的作用，樟叶萃取物在药理上具有抑菌消毒作用。

2.材料处理方法：

(a)将沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶分别洗净，并放置一夜阴干。

(b)接着通过烘箱将沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶烘干，其中，沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶经烘干后的含水量介于5％～20％为佳，沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶经烘干后的含水量为10％为最佳。

(c)将沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶分别以打碎机打碎，其中，沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶经研磨后的粗细度介于10目～30目为佳，沉香、皂角、角刺、肉桂叶以及樟叶经研磨后的粗细度为20目为最佳。

请配合参阅图1所示，为本发明中药材萃取物的制备方法，其包含下列步骤：

一萃取步骤S1：首先，将含有沉香、皂角、角刺、肉桂叶、樟叶的其中任一种或其组合的一原料与超纯水以1：5至1：10的重量比进行混合，并加热进行萃取以取得一萃取液，其中，萃取温度介于90℃～110℃，较佳为100℃，萃取时间为2.5小时～3.5小时，较佳为3小时。

一过滤步骤S2：待萃取液冷却后，对萃取液进行过滤；于本实施例中，以4道步骤进行过滤而取得过滤完成的萃取液，首先对萃取液进行粗过滤；接着通过离心机对粗过滤完成的萃取液进行离心，在离心完成后收集上清液，其中，离心转速为7,000～15,000rpm，离心时间为3～10分钟；接着以孔径15～30μm的定性滤纸(Whatman NO.4定性滤纸)对上清液进行过滤；最后再以孔径较细如1.2μm的玻璃纤维滤膜(MGC玻璃纤维滤膜)进行过滤，以取得过滤完成的萃取液。

一干燥步骤S3：在过滤步骤后，将过滤完成的萃取液置于-35～10℃环境以形成冷冻状态，并对冷冻状态的萃取液进行真空冷冻干燥以取得中药材萃取物，其中，中药材萃取物为冻干粉，以利于保存及应用上的配制。

于本实施例中，中药材萃取物能够相对于溶剂配制为不同浓度的水容液，其中，配制时使用的溶剂可为水、逆渗透水、去离子水、乙醇、甲醇、异丙醇或其他适当且刺激性较低的溶剂。

以下实施例中分别公开本发明的中药材萃取物的SARS-COV-2棘蛋白(Spikeprotein)与人体血管收缩素转换酶(Human Angiotensin-converting Enzyme 2,hACE2)结合干预的能力，以及SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制能力的详细步骤及结果，所有分析结果内呈现的数值条为50次重复实验所取的平均值±标准差。

1.SARS-CoV-2全序列棘蛋白结合干预分析

SARS-COV-2的棘蛋白对于病毒进入人类细胞的机制扮演了重要的角色，本实施例中，通过酵素结合免疫吸附分析法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)，来评估本发明的中药材萃取物对SARS-COV-2(武汉株)全序列的棘蛋白与hACE2结合的潜在抑制作用以及干预能力；其中，实验所取用的hACE2为体外合成蛋白。

酵素结合免疫吸附分析法实验步骤如下：

首先，取用已稀释于15mM碳酸钠与35mM碳酸氢钠，酸碱值为pH 9.6的100μL的棘蛋白溶液(500ng/mL；CAT.GTX135972-pro,GeneTex,Taipei,Taiwan，China)，将棘蛋白溶液注入到96-well微量分析盘内，将微量分析盘密封并置于4℃保持过夜。接着，使用由0.05％(v/v)磷酸缓冲溶液及Tween-20所组成的冲洗缓冲溶液去冲洗已注入棘蛋白溶液的96-well微量分析盘，总共冲洗三次将无法附着于96-well微量分析盘的棘蛋白溶液去除。

接着，将含有0.5％(w/v)胎牛血清的冲洗缓冲溶液调配而成的ELISA阻断液，加入300μL到96-well微量分析盘内，并于37℃培养1.5小时，重复清洗三次后，取用100μL本发明不同浓度(0至100000μg/ml)的中药材萃取物或100μL抑制剂(10ug/ml；cat.GTX635791,GeneTex,Taipei,Taiwan，China)并加入96-well微量分析盘内，并于37℃培养1小时，并使用冲洗缓冲溶液将96-well微量分析盘清洗三次。

接着，加入100μL的ELISA信号放大剂Streptavidin-HRP(100ng/ml；cat.GTX30949,GeneTex,Taipei,Taiwan，China)于37℃培养1小时。

最后，在96-well微量分析盘的每个孔洞中加入200μL的TMB呈色受质，并在避光环境中37℃培养1小时。待反应完成后，使用50μL的终止溶液以终结反应。并利用微量盘检测仪(Microplate reader)以波长为450nm去测定吸光数值。

如图2所示，为本发明中药材萃取物以及抑制剂(RBD抗体)分别对SARS-COV-2棘蛋白与hACE2结合的干预结果。其中，在未添加hACE2的情况下，仅可测得SARS-COV-2棘蛋白涂层的背景信号；控制组为在SARS-COV-2棘蛋白涂层加入hACE2，SARS-COV-2棘蛋白涂层在添加hACE2后会产生强烈的比色信号，结合效率为100％；实验组为添加不同浓度的中药材萃取物对SARS-COV-2棘蛋白与hACE2结合的干预效果。

可以观察到，当添加的中药材萃取物浓度超过10000μg/mL时，SARS-COV-2棘蛋白与hACE2的结合效率降到50％以下，甚至在中药材萃取物浓度为100000μg/mL时，SARS-COV-2棘蛋白与hACE2的结合效率降为4％，并与抑制剂(RBD抗体)抑制SARS-COV-2棘蛋白与hACE2的效果不相上下。

进一步对本发明的中药材萃取物对SARS-COV-2棘蛋白与hACE2的结合效率进行非线性回归分析，其中，经50次实验后，本发明中药材萃取物的半抑制浓度IC₅₀(Half MaximalInhibitory Concentration)值范围介于7210～10850μg/mL，其半抑制浓度IC₅₀较佳平均值为9024μg/mL，如图3所示。结果显示，本发明的中药材萃取物呈现剂量依赖性有效地抑制棘蛋白与hACE2的结合效率。

2.SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制分析

SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶为参与病毒RNA合成与复制的酵素，本实施例中，通过荧光共振能量转移技术(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)评估本发明的中药材萃取物对SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制能力。

荧光共振能量转移技术分析实验步骤如下：

首先，将DABCYL-TSAVLQSGFRKMG-EDANS(Genomics,Taiwan，China)修饰胜肽溶解于水中与SARS CoV-2 3CLpro共同培养。

接着，使用多功能微量盘式分析仪(

multimode microplate reader,TECAN)作为试验仪器，在37℃下进行试验以确保蛋白活性，同时将修饰胜肽水解时的EDANS荧光强度作为时间函数，其中，发射波长为340nm以及490nm；频宽分别为9nm以及15nm。

接着，在测试前评估测试样品在340nm的发射波长是否会与EDANS的发射光谱重叠。最后测试本发明不同浓度(0至31.25μg/ml)的中药材萃取物对SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性的影响，并使用GraphPad Prism 7.03(GraphPad Software,San Diego,CA,USA)进行统计分析。

如图4所示，为本发明中药材萃取物对SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制的分析结果。可观察到，使用0.98μg/mL的中药材萃取物后，SARS-CoV-2 3CLpro的相对活性降低到80％左右；使用7.81μg/mL的中药材萃取物后，SARS-CoV-2 3CLpro的相对活性降低到70％左右。随着中药材萃取物的浓度增加到15.63～31.25μg/mL，SARS-CoV-2 3CLpro的相对活性会更进一步被抑制，其活性分别下降到大约60％和50％。

经50次实验后，本发明的中药材萃取物对SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制的半抑制浓度IC₅₀值范围介于26～40μg/mL，其半抑制浓度IC₅₀较佳平均值为32.61±4.226μg/mL，如图5所示，结果显示，本发明中药材萃取物具有剂量依赖性能够将SARS-CoV-23CLpro的相对活性降低，显示出本发明的中药材萃取物针对SARS-CoV-2的治疗潜力。

另外，本发明中药材萃取物可用于制备一治疗冠状病毒相关症状或疾病的药剂的用途，其中，药剂包含本发明的中药材萃取物以及一医学上可接受的载剂。

依据本发明，前述“载剂”指医药领域常规选用的药物载体，例如填充剂、黏合剂、稀释剂、赋形剂、接受体或类似物，其为制造医药品领域技术人员所熟知。

于本实施例中，药剂的剂型包括漱口水、口鼻吸入剂或口服胶囊，但不限于此。其中，通过使用含中药材萃取物的漱口水，可以将口腔喉咙中的残留病毒做结合并通过吐掉的动作来移除冠状病毒；而使用含中药材萃取物的口鼻吸入剂能够利用鼻腔的微血管或肺部微血管吸收中药材萃取物以消灭冠状病毒；而服用含中药材萃取物的口服胶囊，中药材萃取物可通过胃部直接被人体吸收、利用而消灭冠状病毒。

依据本发明，中药材萃取物所制备的药剂可根据患者年龄、体重、健康状况、疾病的进展等因素，由相关医疗人员依该技术领域公知常识决定投予剂量。前述的中药材萃取物制备的药剂也可单独投予或与其他药剂共同投予，投予疗程应依据医师或相关人士依药学上例行方法实施。

借此，通过服用含有中药材萃取物的药剂，即可有效干预SARS-CoV-2冠状病毒的棘蛋白(Spike Protein)与hACE2结合，并抑制SARS-CoV-2冠状病毒的3CLpro蛋白酶活性，而实现治疗冠状病毒相关症状或疾病的功效。

以上所举实施例仅用以说明本发明而已，非用以限制本发明的范围。举凡不违本发明精神所从事的种种修改或变化，均属本发明意欲保护的范畴。

Claims (12)

1.一种中药材萃取物，其包括一有效成分，其特征在于：该有效成分由一沉香、一皂角、一角刺、一肉桂叶、一樟叶的其中任一种或其组合所组成。

2.如权利要求1所述的中药材萃取物，其特征在于：当该有效成分为该沉香、该皂角、该角刺、该肉桂叶以及该樟叶所组成，该沉香、该皂角、该角刺、该肉桂叶以及该樟叶的重量比为1~5：1~5：1~5：1~5：1~5。

3.如权利要求2所述的中药材萃取物，其特征在于：该沉香、该皂角、该角刺、该肉桂叶以及该樟叶的重量比为1：1：1：1：1。

4.一种如权利要求1所述的中药材萃取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤所制成：

一萃取步骤：将含有沉香、皂角、角刺、肉桂叶、樟叶的其中任一种或其组合的一原料以及超纯水以1：5至1：10的重量比进行混合，并加热进行萃取以取得一萃取液，其中，萃取温度介于90℃~110℃，萃取时间介于2.5小时~3.5小时；

一过滤步骤：对该萃取液进行过滤；以及

一干燥步骤：对该萃取液进行真空冷冻干燥以取得该中药材萃取物。

5.如权利要求4所述的中药材萃取物的制备方法，其特征在于：当该原料为该沉香、该皂角、该角刺、该肉桂叶以及该樟叶所组成，该沉香、该皂角、该角刺、该肉桂叶以及该樟叶的重量比为1~5：1~5：1~5：1~5：1~5。

6.如权利要求5所述的中药材萃取物的制备方法，其特征在于：该沉香、该皂角、该角刺、该肉桂叶以及该樟叶的重量比为1：1：1：1：1。

7.一种以如权利要求1所述的中药材萃取物用于制备一治疗冠状病毒相关症状或疾病的药剂的用途。

8.一种以如权利要求1所述的中药材萃取物用于制备一干预SARS-COV-2的棘蛋白的药剂的用途。

9.如权利要求8所述的中药材萃取物的用途，其特征在于：该药剂的半抑制浓度IC₅₀值范围介于7210~10850 μg/mL。

10.一种以如权利要求1所述的中药材萃取物用于制备一抑制SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性的药剂的用途。

11.如权利要求10所述的中药材萃取物的用途，其特征在于：该药剂的半抑制浓度IC₅₀值范围介于26~40 μg/mL。

12.如权利要求7、8或10所述的中药材萃取物的用途，其特征在于：该药剂的剂型包括漱口水、口鼻吸入剂或口服胶囊。

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