TWI811118B - 中藥材萃取物及其製備方法與用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種中藥材萃取物及其製備方法與用途，中藥材萃取物包含一有效成分，有效成分由一沉香、一皂角、一角刺、一肉桂葉、一樟葉之其中任一種或其組合所組成；藉此，透過服用含有中藥材萃取物之藥劑，即可達到治療冠狀病毒相關症狀或疾病之功效。
Description
本發明係關於一種中藥材萃取物的技術領域，尤指一種中藥材萃取物及其製備方法與用途。
冠狀病毒(Coronavirus)是一種在動物與人類之間傳播的人畜共通RNA病毒，在電子顯微鏡下呈現球狀或橢圓形狀，因外觀具有囊狀膠原纖維突出，形似皇冠狀，而稱為冠狀病毒，冠狀病毒的基因組大小在26000~32000個鹼基對，是基因組規模最大的一類RNA病毒。
新型冠狀病毒SARS-CoV-2(最初經報導為COVID-19，並由冠狀病毒研究組基於親緣關係、分類學及慣例正式命名為SARS-CoV-2)為一種新病毒株，SARS-CoV-2以病毒棘蛋白(Spike Protein)與人類細胞表面受體結合，並透過自病毒基因轉錄而產生的蛋白鏈所切剪之3CLpro蛋白酶，進而產生病毒內部各個重要的蛋白質，讓病毒得以繼續感染與複製。
隨著新型冠狀病毒疫情肆虐，常見的新型冠狀病毒感染跡象包括呼吸道症狀、發燒、咳嗽、呼吸急促或是呼吸困難，更嚴重的情況下甚至會導致死亡，因此，目前迫切需要可用於治療冠狀病毒相關症狀或疾病之藥物。
為解決上述課題，本發明提供一種中藥材萃取物及其製備方法與用途，透過服用含有中藥材萃取物之藥劑，即可達到治療冠狀病毒相關症狀或疾病之功效。
本發明提供一種中藥材萃取物，其包含一有效成分，有效成分由一沉香、一皂角、一角刺、一肉桂葉、一樟葉之其中任一種或其組合所組成。
本發明另一實施例提供一種中藥材萃取物之製備方法，其包含以下步驟所製成：一萃取步驟：將含有沉香、皂角、角刺、肉桂葉、樟葉之其中任一種或其組合之一原料以及超純水以1：5至1：10之重量比進行混合，並加熱進行萃取以取得一萃取液，其中，萃取溫度介於90℃~110℃，萃取時間介於1.5小時~2.5小時；一過濾步驟：對該萃取液進行過濾；以及一乾燥步驟：對該萃取液進行真空冷凍乾燥以取得該中藥材萃取物。
本發明另一實施例提供一種以上述中藥材萃取物用於製備一治療冠狀病毒相關症狀或疾病之藥劑之用途，中藥材萃取物之所述有效成分為肉桂葉。
本發明另一實施例提供一種以上述中藥材萃取物用於製備一干預SARS-CoV-2的棘蛋白之藥劑之用途，中藥材萃取物之所述有效成分為肉桂葉。
本發明另一實施例提供一種以上述中藥材萃取物用於製備一抑制SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性之藥劑之用途，中藥材萃取物之所述有效成
分為肉桂葉。
本發明另一實施例提供一種以上述中藥材萃取物用於製備一治療冠狀病毒相關症狀或疾病之藥劑之用途。
本發明另一實施例提供一種以上述中藥材萃取物用於製備一干預SARS-CoV-2的棘蛋白之藥劑之用途。
本發明另一實施例提供一種以上述中藥材萃取物用於製備一抑制SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性之藥劑之用途。
藉此，透過服用含有中藥材萃取物之藥劑，即可有效干預冠狀病毒之棘蛋白(Spike Protein)與人類細胞表面之人體血管收縮素轉換酶(Human Angiotensin-converting Enzyme 2,hACE2)結合，並抑制冠狀病毒之3CLpro蛋白酶活性，而達到治療冠狀病毒相關症狀或疾病之功效。
S1:萃取步驟
S2:過濾步驟
S3:乾燥步驟
圖1係本發明之中藥材萃取物之萃取物之製備流程圖。
圖2係本發明第一實施例之中藥材萃取物對SARS-CoV-2棘蛋白與體外合成hACE2結合之干預分析結果。
圖3係本發明第一實施例之中藥材萃取物對SARS-CoV-2棘蛋白與體外合成hACE2結合之半抑制濃度IC50分析結果。
圖4係本發明第一實施例之中藥材萃取物對SARS-CoV-2限病毒與SmBiT-ACE2 expressing cells結合之半效應濃度EC50分析結果。
圖5係本發明第一實施例之中藥材萃取物對SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制
之分析結果。
圖6係本發明第一實施例之中藥材萃取物對SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制之半抑制濃度IC50分析結果。
圖7係本發明第二實施例之中藥材萃取物對SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制之半抑制濃度IC50分析結果。
為便於說明本發明於上述發明內容一欄中所表示的中心思想，茲以具體實施例表達。
本發明提供一種中藥材萃取物及其製備方法，中藥材萃取物包含一有效成分。其中，有效成分為一沉香、一皂角、一角刺、一肉桂葉、一樟葉之其中任一種材料或其組合所組成。
在本發明之一實施例中，有效成分為沉香、皂角、角刺、肉桂葉及樟葉其中任一種單方中草藥。
在本發明之一實施例中，有效成分為沉香、皂角、角刺、肉桂葉或樟葉其中任兩種複方中草藥，係選自沉香與皂角、沉香與角刺、沉香與肉桂葉、沉香與樟葉、皂角與角刺、皂角與肉桂葉、皂角與樟葉、角刺與肉桂葉、角刺與樟葉及肉桂葉與樟葉其中任一種組合。
在本發明之一實施例中，有效成分為沉香、皂角、角刺、肉桂葉或樟葉其中任三種複方中草藥，例如沉香與皂角以及角刺之組合、沉香與皂角以及肉桂葉之組合，或是沉香與皂角以及樟葉之組合等任意組合。
在本發明之一實施例中，有效成分為沉香、皂角、角刺、肉桂葉
或樟葉其中任四種複方中草藥，例如沉香、皂角與角刺以及肉桂葉之組合，或是皂角、角刺與肉桂葉以及樟葉之組合等任意組合。
在本發明之一實施例中，有效成分為沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉所組成，沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉之重量比為1~5：1~5：1~5：1~5：1~5為佳，在本實施例中，沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉之重量比為1：1：1：1：1。
材料與材料處理方法：
1.材料
(a)沉香
沉香取自雙子葉植物藥瑞香科植物沉香或白木香含有樹脂的木材，沉香具有行氣止痛、降逆調中、溫腎納氣、通經脈安心神、鎮靜鎮痛等作用，此外，經藥理研究證實，沉香在藥理上有明顯的抗病菌作用；於本實施例中，沉香木材選自越南或台灣產之白木沉香(Aquilaria sinensis)，在其他可能的實施例中，亦可選用越南沉香(Aquilaria crassna)、或印尼沉香木(Aquilaria malaccensis)、雲南沉香(Aquilaria yunnanensis)其中任一種。
(b)皂角
皂角取自豆科植物皂莢，為皂莢(Gleditsia sinensis)之成熟的果莢，皂莢具祛頑痰，通竅開閉，祛風殺蟲之作用，皂莢內含三刺皂莢鹼(Triacanthin)，在藥理上對病菌具有抑制作用。
(c)角刺
角刺取自豆科植物皂莢，為皂莢之棘刺，角刺具消腫，拔毒，排膿，殺蟲之作用，角刺可提取出黃酮苷(Flavonoids)、酚類(Phenols)、胺基酸(Amino
Acid)，角刺萃取物在藥理上具有抑菌消毒作用。
(d)肉桂葉
肉桂葉取自樟科植物土肉桂(Cinnamomum osmophloeum)，有散寒止痛、活血、健胃之作用，肉桂葉萃取物在藥理上能夠抑制細菌滋長，而達到抑菌消毒之作用。
(e)樟葉
樟葉取自樟科植物香樟(Cinnamomum camphora)，具祛風、除濕、解毒、殺蟲之作用，樟葉萃取物在藥理具有抑菌消毒作用。
2.材料處理方法：
(a)將沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉分別洗淨，並放置一夜陰乾。
(b)接著透過烘箱將沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉烘乾，其中，沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉經烘乾後之含水量介於5%~20%為佳，沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉經烘乾後之含水量為10%為最佳。
(c)將沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉分別以打碎機打碎，其中，沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉經研磨後之粗細度介於10目~30目為佳，沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉經研磨後之粗細度為20目為最佳。
請配合參閱圖1所示，係為本發明中藥材萃取物之製備方法，其包含下列步驟：一萃取步驟S1：首先，將含有沉香、皂角、角刺、肉桂葉、樟葉之其中任一種或其組合之一原料與超純水以1：5至1：10之重量比進行混合，其中，原料與超純水以1：10之重量比為佳，將原料與超純水混合後，置於液態氮
桶中冷凍再置於室溫中融化，而進行循環凍融處理以破碎原料細胞壁，接著將原料與超純水加熱進行萃取以取得一萃取液，其中，萃取溫度介於90℃~110℃，較佳為100℃，萃取時間為1.5小時~2.5小時，較佳為2小時。
一過濾步驟S2：待萃取液冷卻後，對萃取液進行過濾；於本實施例中，以4道步驟進行過濾而取得過濾完成之萃取液，首先對萃取液進行粗過濾；接著透過離心機對粗過濾完成之萃取液進行離心，在離心完成後收集上清液，離心轉速為7,000~15,000rpm，離心時間為3~10分鐘，其中，離心轉速為10,000rpm，離心時間為5分鐘為最佳；接著以孔徑15~30μm之定性濾紙(Whatman NO.4定性濾紙)對上清液進行過濾；最後再以孔徑較細如1.2μm之玻璃纖維濾膜(MGC玻璃纖維濾膜)進行過濾，以取得過濾完成之萃取液。
一乾燥步驟S3：在過濾步驟後，將過濾完成之萃取液置於-35~-10℃環境以形成冷凍狀態，並對冷凍狀態之萃取液進行真空冷凍乾燥以取得中藥材萃取物，其中，中藥材萃取物為凍乾粉，以利於保存及應用上的配製。
於本實施例中，中藥材萃取物能夠相對於溶劑配製為不同濃度之水容液，其中，配製時使用之溶劑可為水、逆滲透水、去離子水、乙醇、甲醇、異丙醇或其他適當且刺激性較低的溶劑。
以下揭露本發明第一實施例之中藥材萃取物的分析結果；於本實施例中，中藥材萃取物的有效成分係由沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉所組成，沉香、皂角、角刺、肉桂葉以及樟葉之重量比為1：1：1：1：1；分析結果包含SARS-CoV-2棘蛋白(Spike protein)與人體血管收縮素轉換酶(Human Angiotensin-converting Enzyme 2,hACE2)結合干預的能力，以及SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制能力之詳細步驟及結果，所有分析結果內呈現的數值條為
50次重複實驗所取之平均值±標準差。
1. SARS-CoV-2全序列棘蛋白結合干預分析
SARS-CoV-2的棘蛋白對於病毒進入人類細胞的機制扮演了重要的角色，本實施例中，透過酵素結合免疫吸附分析法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)，來評估本發明之中藥材萃取物對SARS-CoV-2(武漢株)全序列之棘蛋白與hACE2結合的潛在抑制作用以及干預能力；其中，實驗所取用之hACE2為體外合成蛋白。
酵素結合免疫吸附分析法實驗步驟如下：首先，取用已稀釋於15mM碳酸鈉與35mM碳酸氫鈉，酸鹼值為pH 9.6的100μL之棘蛋白溶液(500ng/mL；CAT.GTX135972-pro,GeneTex,Taipei,Taiwan)，將棘蛋白溶液注入到96-well微量分析盤內，將微量分析盤密封並置於4℃保持過夜。接著，使用由0.05%(v/v)磷酸緩衝溶液及Tween-20所組成的沖洗緩衝溶液去沖洗已注入棘蛋白溶液的96-well微量分析盤，總共沖洗三次將無法附著於96-well微量分析盤的棘蛋白溶液去除。
接著，將含有0.5%(w/v)胎牛血清的沖洗緩衝溶液調配而成的ELISA阻斷液，加入300μL到96-well微量分析盤內，並於37℃培養1.5小時，重複清洗三次後，取用100μL本發明不同濃度(0至100000μg/mL)之中藥材萃取物或100μL抑制劑(10ug/mL；cat.GTX635791,GeneTex,Taipei,Taiwan)並加入96-well微量分析盤內，並於37℃培養1小時，並使用沖洗緩衝溶液將96-well微量分析盤清洗三次。
接著，加入100μL的ELISA訊號放大劑Streptavidin-HRP(100ng/mL；cat.GTX30949,GeneTex,Taipei,Taiwan)於37℃培養1小時。
最後，在96-well微量分析盤的每個孔洞中加入200μL的TMB呈色受質，並在避光環境中37℃培養1小時。待反應完成後，使用50μL的終止溶液以終結反應。並利用微量盤檢測儀(Microplate reader)以波長為450nm去測定吸光數值。
如圖2所示，為本發明中藥材萃取物以及抑製劑(RBD抗體)分別對SARS-CoV-2棘蛋白與hACE2結合的干預結果。其中，在未添加hACE2的情況下，僅可測得SARS-CoV-2棘蛋白塗層之背景訊號；控制組為在SARS-CoV-2棘蛋白塗層加入hACE2，SARS-CoV-2棘蛋白塗層在添加hACE2後會產生強烈的比色信號，結合效率為100%；實驗組為添加不同濃度之中藥材萃取物對SARS-CoV-2棘蛋白與hACE2結合的干預效果。
可以觀察到，當添加之中藥材萃取物濃度超過10000μg/mL時，SARS-CoV-2棘蛋白與hACE2的結合效率降到50%以下，甚至在中藥材萃取物濃度為100000μg/mL時，SARS-CoV-2棘蛋白與hACE2的結合效率降為4%，並與抑製劑(RBD抗體)抑制SARS-CoV-2棘蛋白與hACE2的效果不相上下。
進一步對本發明之中藥材萃取物對SARS-CoV-2棘蛋白與hACE2的結合效率進行非線性回歸分析，其中，經50次實驗後，本發明中藥材萃取物之半抑制濃度IC50(Half Maximal Inhibitory Concentration)值範圍介於7210~10850μg/mL，其半抑制濃度IC50較佳平均值為9024μg/mL，如圖3所示。結果顯示，本發明之中藥材萃取物呈現劑量依賴性有效地抑制棘蛋白與hACE2的結合效率。
本發明更進一步將中藥材萃取物與SARS-CoV-2限病毒進行中和測試，取用溶劑為去離子水，濃度為250mg/mL之中藥材萃取物，以下表之測試條件進行測試。
將HeLa expressing SmBiT-ACE2細胞、SARS-CoV-2假病毒與不同劑量之中藥材萃取物共同培養6小時，並以等量的PBS溶液作為對照組，培養24小時後以PBS溶液沖洗細胞兩次，最後以NanoLuc進行生物螢光檢測。
檢測結果如下表所示，下表為中藥材萃取物與SARS-CoV-2限病毒之中和數據，由結果可知，阻斷SARS-CoV-2感染細胞的中藥材萃取物最小劑量為50μg/mL，且阻斷率高達95%。
另外，如圖4所示，圖4為中藥材萃取物對SARS-CoV-2假病毒與HeLa SmBiT-ACE2 expressing cells結合之半效應濃度EC50分析結果，其中，中藥材萃取物對SARS-CoV-2假病毒表現出具劑量依賴中和活性，半效應濃度EC50(Concentration For 50% of Maximal Effect)值範圍介於20-30μg/mL，其半效應濃度EC50較佳平均值為24.5μg/mL。
2. SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制分析
SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶為參與病毒RNA合成與複製的酵素，本實施例中，藉由螢光共振能量轉移技術(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)評估本發明之中藥材萃取物對SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制能力。
螢光共振能量轉移技術分析實驗步驟如下：首先，將DABCYL-TSAVLQSGFRKMG-EDANS(Genomics,Taiwan)修飾胜肽溶解於水中與SARS CoV-2 3CLpro共同培養。
接著，使用多功能微量盤式分析儀(SPARK® multimode microplate reader,TECAN)作為試驗儀器，在37℃下進行試驗以確保蛋白活性，同時將修飾胜肽水解時的EDANS螢光強度作為時間函數，其中，發射波長為340nm以及490nm；頻寬分別為9nm以及15nm。
接著，在測試前評估測試樣品在340nm的發射波長是否會與EDANS的發射光譜重疊。最後測試本發明不同濃度(0至31.25μg/mL)之中藥材萃取物對SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性之影響，並使用GraphPad Prism 7.03(GraphPad Software,San Diego,CA,USA)進行統計分析。
如圖5所示，為本發明中藥材萃取物對SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制之分析結果。可觀察到，使用0.98μg/mL的中藥材萃取物後，SARS-CoV-2 3CLpro的相對活性降低到80%左右；使用7.81μg/mL的中藥材萃取物後，SARS-CoV-2 3CLpro的相對活性降低到70%左右。隨著中藥材萃取物的濃度增加到15.63-31.25μg/mL，SARS-CoV-2 3CLpro的相對活性會更進一步被抑制，其活性分別下降到大約60%和50%。
經50次實驗後，本發明之中藥材萃取物對SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制之半抑制濃度IC50值範圍介於26~40μg/mL，其半抑制濃度IC50較佳平均值為32.61±4.226μg/mL，如圖6所示，結果顯示，本發明中藥材萃取物具有劑量依賴性能夠將SARS-CoV-2 3CLpro的相對活性降低，顯示出本發明之中藥材萃取物具備針對SARS-CoV-2的治療潛力。
以下揭露本發明第二實施例之中藥材萃取物的分析結果；於本實施例中，中藥材萃取物的有效成分為肉桂葉；分析結果為SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制能力之結果，詳細步驟同上述第一實施例所述，於此不再贅述，所有分析結果內呈現的數值條為50次重複實驗所取之平均值±標準差。
如圖7所示，經50次實驗後，本發明之中藥材萃取物對SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性抑制之半抑制濃度IC50值範圍介於10~15μg/mL，其半抑制濃度IC50較佳平均值為13.08±0.73μg/mL。
需特別說明的是，於本實施例中，當中藥材萃取物之濃度為25μg/mL以及50μg/mL時，能夠分別抑制69%以及83%之SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性，而當中藥材萃取物之濃度為80μg/mL時，更能夠100%抑制SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性。
由上述實施例可知，肉桂葉萃取物在抑制SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性的表現較為優異，因此，本發明能夠藉由不同組成、不同比例的有效成分所產生之藥理效應，透過單方、複方之調配而針對冠狀病毒相關症狀或疾病，依據症狀輕重而增強以及擴展療效，進而達到最佳的治療效果。
舉例來說，若病患正處於罹患冠狀病毒的前期階段，由於此時病患體內的病毒量仍較高，因此可以採用肉桂葉之重量比例較高的配方以有效抑制病毒的增加，並降低病毒的綜合效率，肉桂葉相較於沉香、皂角、角刺、以及樟葉之重量比可為1.5：1：1：1：1，或者是2：1：1：1：1，或者是2.5：1：1：1：1，或者是3：1：1：1：1，或者是3.5：1：1：1：1，或者是4：1：1：1：1，或者是4.5：1：1：1：1，或者是5：1：1：1：1。
另如前述，沉香具有行氣止痛、降逆調中、溫腎納氣、通經脈安心神、鎮靜鎮痛等作用，莢具祛頑痰，通竅開閉，祛風殺蟲之作用；角刺具消腫，拔毒，排膿，殺蟲之作用；樟葉具祛風、除濕、解毒、殺蟲之作用，因此在病患處於罹患冠狀病毒的中、後期階段，由於此時病患體內的病毒量已有降低，因此可以採用肉桂葉之重量比例較低，而沉香、皂角、角刺、以及樟葉之重量比例較高的配方以提高例如鎮痛、祛痰、消腫、除濕等效果。
另外，本發明中藥材萃取物可用於製備一治療冠狀病毒相關症狀或疾病之藥劑之用途，其中，藥劑包含本發明之中藥材萃取物以及一醫學上可接受之載劑。
依據本發明，前述「載劑」係指醫藥領域常規選用的藥物載體，例如填充劑、黏合劑、稀釋劑、賦形劑、接受體或類似物，其為製造醫藥品技術中之一般技術者所熟知。
於本實施例中，藥劑之劑型包括漱口水、口鼻吸入劑或口服膠囊，但不限於此。其中，透過使用含中藥材萃取物之漱口水，可以將口腔喉嚨中的殘留病毒做結合並藉由吐掉的動作來移除冠狀病毒；而使用含中藥材萃取物之口鼻吸入劑能夠利用鼻腔的微血管或肺部微血管吸收中藥材萃取物以消滅冠狀病毒；而服用含中藥材萃取物之口服膠囊，中藥材萃取物可通過胃部直接被人體吸收、利用而消滅冠狀病毒。
依據本發明，中藥材萃取物所製備之藥劑可根據患者年齡、體重、健康狀況、疾病的進展等因素，由相關醫療人員依該技術領域中共通知識決定投予劑量。前述之中藥材萃取物製備之藥劑亦可單獨投予或與其他藥劑共同投予，投予療程應依據醫師或相關人士依藥學上例行方法實施。
藉此，透過服用含有中藥材萃取物之藥劑，即可有效干預SARS-CoV-2冠狀病毒之棘蛋白(Spike Protein)與hACE2結合，並抑制SARS-CoV-2冠狀病毒之3CLpro蛋白酶活性，而達到治療冠狀病毒相關症狀或疾病之功效。
以上所舉實施例僅用以說明本發明而已，非用以限制本發明之範圍。舉凡不違本發明精神所從事的種種修改或變化，俱屬本發明意欲保護之範疇。
Claims (14)
- 一種中藥材萃取物，其包含一有效成分，該有效成分由一沉香、一皂角、一角刺、一肉桂葉及一樟葉所組成其中，該沉香、該皂角、該角刺、該肉桂葉以及該樟葉之重量比為1~5：1~5：1~5：1~5：1~5。
- 如請求項1所述之中藥材萃取物，其中，該沉香、該皂角、該角刺、該肉桂葉以及該樟葉之重量比為1：1：1：1：1。
- 一種如請求項1所述之中藥材萃取物之製備方法，其包含以下步驟所製成：一萃取步驟：將含有該沉香、該皂角、該角刺、該肉桂葉、該樟葉之其中任一種或其組合之一原料以及超純水以1：5至1：10之重量比進行混合以及循環凍融處理後，加熱進行萃取以取得一萃取液，其中，萃取溫度介於90℃~110℃，萃取時間介於1.5小時~2.5小時；一過濾步驟：對該萃取液進行過濾；以及一乾燥步驟：對該萃取液進行真空冷凍乾燥以取得該中藥材萃取物。
- 如請求項3所述之製備方法，其中，當該原料為該沉香、該皂角、該角刺、該肉桂葉以及該樟葉所組成，該沉香、該皂角、該角刺、該肉桂葉以及該樟葉之重量比為1~5：1~5：1~5：1~5：1~5。
- 如請求項4所述之製備方法，其中，該沉香、該皂角、該角刺、該肉桂葉以及該樟葉之重量比為1：1：1：1：1。
- 一種以如請求項1所述之中藥材萃取物用於製備一治療冠狀病毒相關症狀或疾病之藥劑之用途，該中藥材萃取物之所述有效成分為該肉桂葉。
- 一種中藥材萃取物用於製備一抑制SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶 活性之藥劑之用途，該中藥材萃取物之有效成分為肉桂葉。
- 如請求項7所述之中藥材萃取物之用途，其中，該藥劑之半抑制濃度IC50值範圍介於10~15μg/mL。
- 一種以如請求項1所述之中藥材萃取物用於製備一治療冠狀病毒相關症狀或疾病之藥劑之用途。
- 一種以如請求項1所述之中藥材萃取物用於製備一干預SARS-CoV-2的棘蛋白之藥劑之用途。
- 如請求項10所述之中藥材萃取物之用途，其中，該藥劑之半效應濃度EC50值範圍介於20~30μg/mL。
- 一種以如請求項1所述之中藥材萃取物用於製備一抑制SARS-CoV-2 3CLpro蛋白酶活性之藥劑之用途。
- 如請求項12所述之中藥材萃取物之用途，其中，該藥劑之半抑制濃度IC50值範圍介於26~40μg/mL。
- 如請求項6、7、9或10中任一項所述之中藥材萃取物之用途，其中，該藥劑之劑型包括漱口水、口鼻吸入劑或口服膠囊。
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 期刊 Silva JKRD, Figueiredo PLB, Byler KG, Setzer WN Potential of Essential Oils to Treat SARS-CoV-2 Infection: An In-Silico Investigation Int J Mol Sci 2020/05/12; * |
| 網路文獻 楊子頡 恆春皂莢枝葉之化學成分與生物活性研究 2019/06/30 * |
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