CN115779007A - 覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，属于中药技术领域。本发明从覆盆子干燥果实中分离得到覆盆子提取物，通过实验发现，覆盆子提取物对幽门螺杆菌抗生素敏感株和耐药株具有很强的抑制作用，可用于抗幽门螺杆菌产品的制备中；且覆盆子为药食同源的中药提取物，具有益肾养肝明目作用，作用温和，耐药发生率低，不良反应少，患者服药依从性好，尤其适用于幽门螺杆菌感染者。本发明拓宽了药食同源中药覆盆子的应用领域，为幽门螺杆菌的治疗提供了新方向。

Description

覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种螺旋状的、微需氧的革兰氏阴性杆菌，较强的感染能力使其在全球感染率高达50％，Hp感染与慢性活动性胃炎、胃十二指肠溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、胃癌等多种消化系统疾病密切相关。目前，针对Hp感染的常规治疗是抗生素三联或四联疗法，但随着国内外抗生素的滥用，Hp对抗生素的耐药率不断升高。由于Hp感染治疗的常规抗生素疗法根除率不断下降、不良反应越来越多，寻找非抗生素的替代疗法迫在眉睫，而中药逐渐成为Hp感染治疗的研究热点。

覆盆子为蔷薇科植物华东覆盆子(Rubus chingii Hu)的干燥果实。夏初果实由绿变绿黄时采收，除去梗、叶，置沸水中略烫或略蒸，取出，干燥。《中国药典》记载其味甘、酸，性温。归肝、肾、膀胱经。益肾固精缩尿，养肝明目。传统用于遗精滑精，遗尿尿频，阳痿早泄，目暗昏花。覆盆子是国家卫健委批准的药食同源物质。许多研究报道覆盆子具有降血糖、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤和抗炎等作用，但目前没有关于其抗幽门螺杆菌的作用。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提出了一种覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，经过大量实验证实覆盆子提取物对幽门螺杆菌抗生素敏感株和耐药株均具有很强的抑制作用。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

本发明从覆盆子干燥果实中分离得到覆盆子提取物，通过实验发现，覆盆子提取物对幽门螺杆菌抗生素敏感株和耐药株具有很强的抑制作用，可用于抗幽门螺杆菌产品的制备中。

作为本发明优选的实施方式，所述覆盆子提取物通过如下方法制备而得：

S1、将覆盆子果实打碎至粉末状，称取适量的覆盆子粉末加入8～12倍量的水中浸泡30～60min；

S2、将含有覆盆子的水浸液置于80～100℃下水浴回流提取0.5～3h，重复提取2～5次，合并滤液；

S3、将滤液旋转蒸发浓缩至浸膏状，冷冻干燥至固体粉末，即得。

进一步优选的，所述覆盆子果实为覆盆子干燥果实。

进一步优选的，步骤S1中粉末状覆盆子果实过30～50目筛后水浸。

作为本发明优选的实施方式，所述抗幽门螺杆菌产品为药物或预防保健品。

进一步优选的，所述药物为药学领域可接受的任一剂型，所述剂型为粉剂、颗粒剂、注射液、胶囊、片剂或口服液。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明的覆盆子提取物具有多成分、多途径、多靶点的作用，对幽门螺杆菌抗生素敏感株和耐药株均具有很强抑制作用，且覆盆子为药食同源的中药提取物，具有益肾养肝明目作用，作用温和，耐药发生率低，不良反应少，患者服药依从性好，尤其适用于幽门螺杆菌感染者，能够补充或替代目前治疗幽门螺杆菌普遍的抗生素三联疗法。本发明拓宽了药食同源中药覆盆子的应用领域，为幽门螺杆菌的治疗提供了新方向。通过本发明的制备方法制得的覆盆子提取物无有机溶剂残留，含有较多有效成分，简单易得。

附图说明

图1为本发明所述的覆盆子提取物的高效液相色谱图；

图2为本发明所述的混合标准品的高效液相色谱图；

图3为覆盆子提取物抗菌的药时曲线图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

本发明从覆盆子干燥果实中分离得到覆盆子提取物，通过实验验证覆盆子提取物对幽门螺杆菌抗生素敏感株和耐药株具有很强的抑制作用，可用于抗幽门螺杆菌产品的制备中。其中，抗幽门螺杆菌产品为药物或预防保健品；药物为药学领域可接受的任一剂型，所述剂型为粉剂、颗粒剂、注射液、胶囊、片剂或口服液。

具体地，本发明的覆盆子提取物通过如下方法制备而得：

S1、将覆盆子干燥果实打碎至粉末状，过30～50目筛后称取适量的覆盆子粉末加入8～12倍量的水中浸泡30～60min；

S2、将含有覆盆子的水浸液置于80～100℃下水浴回流提取0.5～3h，重复提取2～5次，合并滤液；

S3、将滤液旋转蒸发浓缩至浸膏状，冷冻干燥至固体粉末，即得。

实施例1：

覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，覆盆子提取物通过如下方法制备而得：

S1、将覆盆子干燥果实打碎至粉末状，过40目筛后称取适量的覆盆子粉末加入10倍量的水中浸泡30min；

S2、将含有覆盆子的水浸液置于100℃下水浴回流提取1h，重复提取3次，合并滤液；

S3、将滤液旋转蒸发浓缩至浸膏状，冷冻干燥至固体粉末，即得。

对本实施例所制得的覆盆子提取物和混合标准品(没食子酸、鞣花酸和补骨脂素的混合物)进行高效液相实验，结果如图1和图2所示。

如图1和图2所示，本实施例所制得的覆盆子提取物按照高效液相色谱法检测得到共14个化合物，其中鞣花酸含量为覆盆子提取物的0.37％，没食子酸含量为覆盆子提取物的0.19％。

实施例2：

覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，覆盆子提取物通过如下方法制备而得：

S1、将覆盆子干燥果实打碎至粉末状，过40目筛后称取适量的覆盆子粉末加入8倍量的水中浸泡45min；

S2、将含有覆盆子的水浸液置于80℃下水浴回流提取3h，重复提取3次，合并滤液；

S3、将滤液旋转蒸发浓缩至浸膏状，冷冻干燥至固体粉末，即得。

实施例3：

覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，覆盆子提取物通过如下方法制备而得：

S1、将覆盆子干燥果实打碎至粉末状，过40目筛后称取适量的覆盆子粉末加入12倍量的水中浸泡60min；

S2、将含有覆盆子的水浸液置于90℃下水浴回流提取2h，重复提取5次，合并滤液；

S3、将滤液旋转蒸发浓缩至浸膏状，冷冻干燥至固体粉末，即得。

一、覆盆子提取物抗菌实验

通过微量肉汤稀释法实验检测实施例1所制得的覆盆子提取物对幽门螺杆菌标准菌株(ATCC 43504/ATCC 700392/SS1)和临床菌株(CS01、Hu-2、QYZ-001、QYZ-003、QYZ-004、ICDC11101)的最小抑菌浓度(MIC)，同时以克拉霉素作为阳性对照，具体试验方法如下：

称取10.24mg覆盆子提取物粉末，加入2mL脑心浸出液溶解混匀，12000rpm离心3min，上清液过0.22μm水系滤膜，得5.12mg/mL储备液。取500μL储备液+500μL脑心浸出液按二倍稀释法配制2560、1280、640、320、160、80μg/mL等多个浓度梯度药液，抗生素用二甲基亚砜(DMSO)溶解配制成2560μg/mL储备液，使用时稀释成多个浓度梯度(DMSO含量≤1％)，将上述配制好的药液吸取50μL加入96孔板，每个药物浓度至少设置3个复孔，设置阴性对照孔(只含药物、不接种菌株)、生长对照孔(不含药物、只接种菌株)。从培养箱取出菌株，用润湿的灭菌棉签刮取菌苔至脑心浸出液中，用含20％ FBS的脑心浸出液调节菌悬液浊度为1McF，稀释10倍后，每孔接种50μL于上述含药96孔板中(最终在96孔板中的菌悬液浊度约为1×106CFU/mL)，将96孔板置于培养箱，37℃微需氧条件、150rpm振荡培养72h后取出观察结果。当生长对照呈现纽扣状或明显浑浊时结果才可用，肉眼观察澄清孔的最小药物浓度即为MIC。每次实验均以克拉霉素作为阳性对照，MIC值测定重复3次。

结果如表1所示。

表1覆盆子体外对多种幽门螺杆菌菌株最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)

R表示耐药，S表示敏感。MTZ:甲硝唑，CLR：克拉霉素，LEF:左氧氟沙星，AMO：阿莫西林

由表1可知，覆盆子提取物对幽门螺杆菌标准菌株和临床菌株均有一定的抑杀作用，在对QYZ-003、004和Hu-2的MIC更是小于对标准菌株的MIC。含有覆盆子提取物的MIC在320～640μg/mL之间，MBC为2～4MIC，表现为杀菌效应。

二、覆盆子提取物抗菌的药时曲线

通过测定菌液OD₆₀₀ nm绘制覆盆子提取物的时间-抑菌曲线，具体试验方法如下：

按二倍稀释法配制MIC、1/2MIC、1/4MIC等多个浓度梯度覆盆子提取物药液，不含药脑心浸出液作为生长对照组。以ATCC 700392为代表，从培养箱取出菌株，用润湿的灭菌棉签刮取菌苔至脑心浸出液中，用含20％ FBS的脑心浸出液调节菌悬液浊度为1McF。以菌悬液：药液/不含药脑心浸出液为1：1的比例，每孔2mL接种于6孔板，放置于三气培养箱中，37oC、微需氧环境、150rpm振荡培养，在0、8、12、24、28、36、48、60、72h吸取100μL培养液于96孔板中测定OD600 nm，吸光度值越大则代表细菌数量越多，药物的抑菌效果越差。结果如图3所示。

由图3可知，12～36小时为幽门螺杆菌的快速生长期，在36小时覆盆子提取物的抑菌效果与生长对照组相比最显著。覆盆子提取物在1/4～1MIC范围内均能抑制幽门螺杆菌生长，抑菌效果呈现剂量依赖性。

三、覆盆子提取物与抗生素联用效果

采用棋盘稀释法测定覆盆子提取物分别与临床常用于治疗幽门螺杆菌感染的抗生素联用效应，具体实验步骤如下：

按二倍稀释法配制80～640μg/mL的覆盆子提取物药液，同法配制不同浓度的抗生素[阿莫西林(AMO)0.01～1μg/mL、克拉霉素(CLR)0.004～0.125μg/mL、甲硝唑(MTZ)0.2～6.4μg/mL、左氧氟沙星(LEF)0.2～6.4μg/mL]。以ATCC 700392为代表，按照微量肉汤棋盘稀释法，菌悬液：提取物药液：抗生素为2：1：1的比例，每孔共120μL接种于96孔板，放置于三气培养箱中，37℃、微需氧环境、150rpm振荡培养72h，以肉眼观察明显澄清时的孔为最小联合抑菌浓度。

联合抑菌指FICI＝MIC QGAE/QGEAE(联用)/MIC QGAE/QGEAE(单用)+MIC抗生素(联用)/MIC抗生素(单用)。

FICI≤0.5时提示协同效应，0.5<FICI≤1为相加效应，1<FICI≤2为无关效应，FICI>2为拮抗效应。

结果如表2所示。

表2覆盆子提取物与抗生素联用的最小联合抑菌浓度

由表2可知，覆盆子提取物与临床上用于治疗幽门螺杆菌的感染的抗生素均不产生抑制作用。

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (6)

1.覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，其特征在于：所述覆盆子提取物通过如下方法制备而得：

S1、将覆盆子果实打碎至粉末状，称取适量的覆盆子粉末加入8～12倍量的水中浸泡30～60min；

S2、将含有覆盆子的水浸液置于80～100℃下水浴回流提取0.5～3h，重复提取2～5次，合并滤液；

S3、将滤液旋转蒸发浓缩至浸膏状，冷冻干燥至固体粉末，即得。

3.根据权利要求2所述的覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，其特征在于：所述覆盆子果实为覆盆子干燥果实。

4.根据权利要求2所述的覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，其特征在于：步骤S1中粉末状覆盆子果实过30～50目筛后水浸。

5.根据权利要求1所述的覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，其特征在于：所述抗幽门螺杆菌产品为药物或预防保健品。

6.根据权利要求1所述的覆盆子提取物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用，其特征在于：所述药物为药学领域可接受的任一剂型，所述剂型为粉剂、颗粒剂、注射液、胶囊、片剂或口服液。

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