CN102167732A - 蛋白类杀藻化合物及其制备方法 - Google Patents
蛋白类杀藻化合物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102167732A CN102167732A CN2010105828867A CN201010582886A CN102167732A CN 102167732 A CN102167732 A CN 102167732A CN 2010105828867 A CN2010105828867 A CN 2010105828867A CN 201010582886 A CN201010582886 A CN 201010582886A CN 102167732 A CN102167732 A CN 102167732A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- arg
- protein
- algicidal
- gly
- ser
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 230000002353 algacidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000002101 electrospray ionisation tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims abstract 3
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims abstract 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 claims abstract 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 17
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 17
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 14
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- MSILNNHVVMMTHZ-UWVGGRQHSA-N Arg-His-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CN=CN1 MSILNNHVVMMTHZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 6
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 3
- OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N Ala-Thr-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N 0.000 claims description 3
- WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- LYJXHXGPWDTLKW-HJGDQZAQSA-N Arg-Thr-Gln Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O LYJXHXGPWDTLKW-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims description 3
- SPCONPVIDFMDJI-QSFUFRPTSA-N Asn-Ile-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SPCONPVIDFMDJI-QSFUFRPTSA-N 0.000 claims description 3
- AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N Asp-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O AXXCUABIFZPKPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- LDGUZSIPGSPBJP-XVYDVKMFSA-N Asp-His-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N LDGUZSIPGSPBJP-XVYDVKMFSA-N 0.000 claims description 3
- GURIQZQSTBBHRV-SRVKXCTJSA-N Gln-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GURIQZQSTBBHRV-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 3
- LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N Glu-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N 0.000 claims description 3
- CLODWIOAKCSBAN-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLODWIOAKCSBAN-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 3
- LOEANKRDMMVOGZ-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LOEANKRDMMVOGZ-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 3
- ABPRMMYHROQBLY-NKWVEPMBSA-N Gly-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)C(=O)O ABPRMMYHROQBLY-NKWVEPMBSA-N 0.000 claims description 3
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SVHKVHBPTOMLTO-DCAQKATOSA-N His-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SVHKVHBPTOMLTO-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 3
- NHJKZMDIMMTVCK-QXEWZRGKSA-N Ile-Gly-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NHJKZMDIMMTVCK-QXEWZRGKSA-N 0.000 claims description 3
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 3
- XWEVVRRSIOBJOO-SRVKXCTJSA-N Leu-Pro-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O XWEVVRRSIOBJOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 3
- IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N 0.000 claims description 3
- GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N Lys-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 3
- DNWBUCHHMRQWCZ-GUBZILKMSA-N Lys-Ser-Gln Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O DNWBUCHHMRQWCZ-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 3
- WXHHTBVYQOSYSL-FXQIFTODSA-N Met-Ala-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WXHHTBVYQOSYSL-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 3
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 claims description 3
- OSBADCBXAMSPQD-YESZJQIVSA-N Phe-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N OSBADCBXAMSPQD-YESZJQIVSA-N 0.000 claims description 3
- RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Lys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N 0.000 claims description 3
- GPLWGAYGROGDEN-BZSNNMDCSA-N Phe-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GPLWGAYGROGDEN-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims description 3
- SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)[C@H]2NCCC2)CCC1 SBVPYBFMIGDIDX-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 3
- SEZGGSHLMROBFX-CIUDSAMLSA-N Pro-Ser-Gln Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O SEZGGSHLMROBFX-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 3
- QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 3
- XWCYBVBLJRWOFR-WDSKDSINSA-N Ser-Gln-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O XWCYBVBLJRWOFR-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 3
- JEHPKECJCALLRW-CUJWVEQBSA-N Ser-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JEHPKECJCALLRW-CUJWVEQBSA-N 0.000 claims description 3
- QJKPECIAWNNKIT-KKUMJFAQSA-N Ser-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O QJKPECIAWNNKIT-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 3
- UYLKOSODXYSWMQ-XGEHTFHBSA-N Ser-Thr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O UYLKOSODXYSWMQ-XGEHTFHBSA-N 0.000 claims description 3
- BCAVNDNYOGTQMQ-AAEUAGOBSA-N Ser-Trp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)NCC(O)=O BCAVNDNYOGTQMQ-AAEUAGOBSA-N 0.000 claims description 3
- IMULJHHGAUZZFE-MBLNEYKQSA-N Thr-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O IMULJHHGAUZZFE-MBLNEYKQSA-N 0.000 claims description 3
- MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N 0.000 claims description 3
- VGNLMPBYWWNQFS-ZEILLAHLSA-N Thr-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N)O VGNLMPBYWWNQFS-ZEILLAHLSA-N 0.000 claims description 3
- AZGZDDNKFFUDEH-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AZGZDDNKFFUDEH-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims description 3
- SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N Val-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N 0.000 claims description 3
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 claims description 3
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 claims description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 claims description 3
- 108010016686 methionyl-alanyl-serine Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 claims description 3
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 108010058119 tryptophyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims description 3
- 241000519582 Pseudoalteromonas sp. Species 0.000 claims description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 6
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 claims 2
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 3
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 abstract 1
- 238000011268 retreatment Methods 0.000 abstract 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 55
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 39
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 12
- CHADEQDQBURGHL-UHFFFAOYSA-N (6'-acetyloxy-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3'-yl) acetate Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(OC(C)=O)C=C1OC1=CC(OC(=O)C)=CC=C21 CHADEQDQBURGHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000200029 Alexandrium tamarense Species 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 239000005955 Ferric phosphate Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229940032958 ferric phosphate Drugs 0.000 description 2
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 2
- WBJZTOZJJYAKHQ-UHFFFAOYSA-K iron(3+) phosphate Chemical compound [Fe+3].[O-]P([O-])([O-])=O WBJZTOZJJYAKHQ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229910000399 iron(III) phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206761 Bacillariophyta Species 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 241000199914 Dinophyceae Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 101710089384 Extracellular protease Proteins 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 description 1
- 239000003619 algicide Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 1
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- MAOWVPKZJNZMEY-UYSZGSBFSA-N dhq 5 Chemical compound NC(=O)OC1C(C)\C=C(C)\C(OC(N)=O)C(OC)CC\C=C(C)\C(=O)NC2=CC(O)=CC3=C2C1(OC)CC(C)C3O MAOWVPKZJNZMEY-UYSZGSBFSA-N 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000000119 electrospray ionisation mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000013370 mutualism Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 nitrogenous compound Chemical class 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
蛋白类杀藻化合物及其制备方法，涉及一种杀藻化合物。所述化合物从假单胞交替菌DHQ25分离获得。将DHQ25活化后培养离心，取上清过滤后无菌检验得DHQ25的无菌培养滤液，收集超滤液；超滤后上清液经分离纯化，收集其中的8个组分，各组分冻干成粉，杀藻活性检测，取具有杀藻活性的3个组分P5、P6和P7，检测蛋白条带数，P7显示出一条带，再将P7的冻干粉处理，共分离出两个峰，记为P71和P72，再处理后杀藻检测，P71具有杀藻活性，经处理后显示P71一条带，经原位PAGE鉴定是单条带的纯蛋白；P71经ESI-MS/MS鉴定分析，得知分子式为C610H971N209O181S2。
Description
技术领域
本发明涉及一种杀藻化合物，尤其是涉及一种蛋白类杀藻化合物及其制备方法。
背景技术
赤潮的频繁发生在造成海洋生态系统巨大破坏的同时，也给各国经济带来巨大损失。由于物理和化学方法治理赤潮存在难以大面积施用及易造成二次污染等原因，利用生物相互之间的生态作用来治理赤潮已成为当前研究热点。
近年来，围绕海洋细菌在赤潮生消过程中的作用，科学家做了大量关于菌藻关系的研究。研究表明，海洋细菌同赤潮藻类之间存在错综复杂关系：一方面表现为互利共生，细菌吸收藻类产生的有机物质，并为藻类的生长提供营养盐和必要的生长因子，从而调节藻类的生长；另一方面表现为特异性抑制甚至杀灭，细菌可以通过直接或间接的作用抑制藻类的生长，甚至裂解藻细胞，从而表现为杀藻效应。藻菌共培养的研究结果表明，杀藻细菌的作用方式可以归结为两种：一是细菌同藻细胞直接接触、导致藻细胞死亡的直接杀藻作用；二是细菌不同藻细胞直接接触，而通过释放某种化学物质导致藻细胞死亡的间接杀藻作用。
对于需要同目标藻直接接触才能表现杀藻作用的细菌，目前尚未见有关对其杀藻物质的研究报道，有可能是一些胞外酶如纤维素酶、蛋白酶、酯酶等，细菌通过释放胞外酶，破坏藻细胞细胞壁、细胞膜，从而杀死藻细胞([1]杨小茹.海洋高效杀藻菌及其活性物质的研究[M].厦门：厦门大学出版社，2008；[2]Su JQ，Yang XR，Zheng TL.Isolation and characterizationof a marine algicidal bacterium against a toxic algae.Harmful Algae，2007，6(6)：799-810)。
对于不需要同目标藻直接接触而表现杀藻作用的细菌，目前所发现的杀藻细菌多数属于该类，其一般是通过分泌溶解性杀藻物质杀死藻细胞，这些胞外活性物质包括胞外酶、表面活性剂、抗生素等([3]苏建强.海洋高效杀藻菌及其活性物质的研究[M].厦门：厦门大学出版社，2006)。
如Lee等([4]Lee，S.O.，Kato，J.，Takiguchi，N.，Kuroda，A.，Ikeda，T.，Mitsutani，A.，Ohtake，H. Involvement of an extracellular protease in algicidal activity of the marine bacteriumPseudoaltero
随着对海洋认识的提高，现代生物技术的飞速发展，研究中深度与广度的结合，使得近年来海洋活性蛋白多肽的实际应用体系得到良好建构与改进。由于来源丰富、结构新颖、活性独特，因此逐步实现了海洋蛋白在工业养殖业、医药卫生、环境保护等领域中的应用。
至今为止，大多数筛选到的杀藻细菌是通过分泌特异的具有杀藻活性的物质来起杀藻作用的。已经报道的杀藻活性物质包括：色素、多肽、氨基酸、抗生素、含氮化合物等其他尚未定性的杀藻化合物。通过筛选高效、专一、能够生物降解的杀藻活性物质成为开发杀藻剂用于赤潮治理的一个新思路。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蛋白类杀藻化合物及其制备方法。
所述蛋白类杀藻化合物是从一株海洋细菌假单胞交替菌DHQ25(Pseudoalteromonassp.DHQ25)分离获得，所述假单胞交替菌DHQ25(Pseudoalteromonas sp.DHQ25)已于2010年8月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2010210，中国典型培养物保藏中心的地址为中国武汉武汉大学。
所述假单胞交替菌DHQ25是由来自长江口海水样品中筛选得到。
所述蛋白类杀藻化合物的制备方法包括以下步骤：
1)将假单胞交替菌DHQ25活化后，接种于液体培养基中培养，将培养液离心，取上清过滤后，进行无菌检验，得到假单胞交替菌DHQ25的无菌培养滤液，再进行超滤处理，收集超滤液；
在步骤1)中，所述液体培养基可采用2216E液体培养基；所述培养的条件可为25℃180rpm培养24h；所述培养液离心，可采用8000g离心10min；所述过滤，可采用0.22μm微孔滤膜过滤；所述无菌培养滤液的pH值可为8.1～8.4。
2)超滤后上清液经分离纯化，收集其中的8个组分，各组分冻干成粉，分别对各组分进行杀藻活性检测，取具有杀藻活性的3个组分，记为P5、P6和P7，检测各组分中的蛋白条带数，其中P7经SDS-PAGE检测，显示出一条带，再将P7的冻干粉重溶，透析除盐，进HPLC重新分离纯化；
在步骤2)中，所述分离纯化，可采用Varian C18-HPLC分离纯化，以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为洗脱剂；所述对各组分进行杀藻活性检测，可以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为空白对照；所述P7的冻干粉重溶，可以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为溶解液，所述透析除盐，可用20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为透析液。
3)P7再进行分离纯化，共分离出两个峰，记为P71和P72，冻干处理，重新溶解，透析除盐，进行杀藻检测，其中P71具有杀藻活性，经SDS-PAGE还原和非还原处理后都显示是P71一条带，P71经原位PAGE鉴定是单条带的纯蛋白；
在步骤3)中，所述分离纯化，可采用Agilent C18-HPLC分离纯化，以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为洗脱剂；所述重新溶解，可用20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl重新溶解，控制浓度10mg/L；所述透析除盐，可用20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为透析液；所述杀藻检测，可以20mmolL-1pH 8.0Tris-HCl为空白对照；所述蛋白是一个的单链蛋白，分子量大小为14.5kD，说明P71里不存在同分异构体，其所在的峰是一个纯峰。
4)P71经ESI-MS/MS鉴定分析，得知分子式为C610H971N209O181S2，其氨基酸序列如下：
Met Ala Ser Gln Lys Arg Pro Ser Gln Arg His Gly Ser Lys Tyr Leu
1 5 10 15
Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg His Gly Phe Leu Pro Arg
20 25 30
His Arg Asp Thr Gly Ile Leu Asp Ser Ile Gly Arg Phe Phe Ser Gly
35 40 45
Asp Arg Gly Ala Pro Lys Arg Gly Ser Gly Lys Asp Ser His Thr Arg
50 55 60
Thr Thr His Tyr Gly Ser Leu Pro Gln Lys Ser Gln Arg Thr Gln Asp
65 70 75 80
Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro Arg Thr
85 90 95
Pro Pro Pro Ser Gln Gly Lys Gly Arg Gly Leu Ser Leu Ser Arg Phe
100 105 110
Ser Trp Gly Gly Arg Asp Ser Arg Ser Gly Ser Pro Ile Ala Arg Arg
115 120 125
本发明应用活体荧光染色剂荧光素双醋酸酯FDA对活体塔玛亚历山大藻细胞进行染色，进行杀藻活性试验，以杀藻效率为导向进行杀藻活性物质的提取纯化和制备。方法是：塔玛亚历山大藻于三角瓶中培养至指数期，然后分装到12孔细胞培养板中，每孔分装4mL均匀藻细胞悬液，适应生长1～2d，进行杀藻活性试验。根据以下公式计算杀藻效率：杀藻率(％)＝(Nc-Nt)/Nc×100(Nc表示加入2216E藻细胞培养基对照组的活藻细胞数，Nt表示加入无菌培养滤液对照组或不同处理方式无菌培养滤液实验组的活藻细胞数)。
本发明通过超滤和反相高效液相两种手段从海洋细菌DHQ25中分离纯化得到一种蛋白类杀藻化合物，利用电喷雾质谱、ESI-MS/MS质谱等鉴定，经Mascot检索发现其一级结构与髓磷脂碱性蛋白(MBP)有最高的匹配度，这也是首次发现蛋白类化合物对塔玛亚历山大藻具有杀藻活性。
本发明联合运用超滤体系和高效液相色谱分离体系(依次用Varian C18-HPLC高效液相和Agilent C18-HPLC高效液相)来进行制备。
附图说明
图1为Varian C18-HPLC高效液相图。在图1中，A为液相谱图，横坐标为时间(min)，纵坐标为OD值(280nm)(mAU)；各谱峰从左至右依次为P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8；B为P7和超滤液的SDS-PAGE图，其中，“原”表示超滤液。
图2为Agilent C18-HPLC高效液相图。在图2中，横坐标为时间(min)，纵坐标为OD值(280nm)(mAU)；其中2个谱峰为P7再进行分离纯化所得，记为P71和P72。
图3为P71SDS-PAGE电泳图谱。在图3中，M表示标准分子量，1表示还原处理后P71，2表示非还原处理后P71。
图4为P71的原位PAGE电泳图谱。在图4中，箭头指向为P71。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明。
1)海洋细菌DHQ25活化后，接种于2216E液体培养基中，25℃180rpm培养24h，培养液8000g离心10min，上清经0.22μm微孔滤膜过滤后，平板涂布进行无菌检验，可得到DHQ25无菌培养滤液，其pH值为8.1～8.4。对该无菌培养滤液进行超滤处理，收集超滤液4℃保存。所有操作均在4℃下进行。
2)超滤后上清液经Varian C18-HPLC分离纯化(以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为洗脱剂)，收集其中的8个组分(对应于图1A中的谱峰P1，P2，P3，P4，P5，P6，P7，P8)，各组分冻干成粉，分别对各组分进行杀藻活性检测，发现P5、P6和P7有杀藻活性(以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为空白对照)，其余各峰未检测到活性或活性较低。SDS-PAGE检测各峰中的蛋白条带数，P7显示出一条带(如图1B)，而原位PAGE表征后发现P7含有两个条带，P7的冻干粉重溶(以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为溶解液)，透析除盐(用20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为透析液)，进HPLC重新分离纯化。
3)P7再经Agilent C18-HPLC进行分离纯化(以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为洗脱剂)，共分离出2个峰(参见图2)，收集这两个峰，冻干处理，并用20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl重新溶解(控制浓度10mg/L)，透析除盐(用20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为透析液)，进行杀藻检测(共培养一天后检测，以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为空白对照)。其中P71具有杀藻活性，经还原和非还原处理后都显示是P71一条带(参见图3)，说明该蛋白是一个的单链蛋白，分子量大小为14.5kD；P71经原位PAGE鉴定是单条带的纯蛋白，说明P71里不存在同分异构体，其所在的峰是一个纯峰(如图4)。
4)P71经ESI-MS/MS鉴定分析，得知分子式为C610H971N209O181S2，氨基酸序列如下：
Met Ala Ser Gln Lys Arg Pro Ser Gln Arg His Gly Ser Lys Tyr Leu
1 5 10 15
Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg His Gly Phe Leu Pro Arg
20 25 30
His Arg Asp Thr Gly Ile Leu Asp Ser Ile Gly Arg Phe Phe Ser Gly
35 40 45
Asp Arg Gly Ala Pro Lys Arg Gly Ser Gly Lys Asp Ser His Thr Arg
50 55 60
Thr Thr His Tyr Gly Ser Leu Pro Gln Lys Ser Gln Arg Thr Gln Asp
65 70 75 80
Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro Arg Thr
85 90 95
Pro Pro Pro Ser Gln Gly Lys Gly Arg Gly Leu Ser Leu Ser Arg Phe
100 105 110
Ser Trp Gly Gly Arg Asp Ser Arg Ser Gly Ser Pro Ile Ala Arg Arg
115 120 125
以下给出具体实施例。
1.菌种、藻种
菌种：DHQ25来源于厦门大学资源与环境微生物研究所于2003年赤潮973项目MC2003-2航次从长江口及其毗邻海域海水样品中(包括表层、中层和底层)分离，是一株具有杀藻作用的弧菌。
藻种：Alexandrium tamarense(AT)无菌株，藻种购自暨南大学水生生物研究所，经本申请人无菌藻技术除菌得到的塔玛亚历山大藻无菌株。藻类所用培养液为f/2培养液。藻类置于室内三角瓶中培养，温度为20±1℃，光照条件为12h光照，12h黑暗。
2.培养基
培养基(2216E)：蛋白胨(Peptone)5g，酵母提取物(YeastExtract)1g，磷酸高铁0.1g，琼脂粉10g(固体培养基)，pH7.6～7.8，陈海水定容到1L。
实施例1：荧光素双醋酸酯FDA的藻细胞染色与杀藻效率计算
将荧光素双醋酸酯FDA溶于丙酮中，配成浓度为5mg/mL的溶液，置于4℃冰箱中避光保存。染色时，取200μL样品(不同处理均匀藻细胞培养液)于1.5mL离心管中；加入荧光素双醋酸酯FDA 4μL，使其终浓度为100μg/mL，室温静置染色5min后，放入冰盒避光待镜检；染色样品混匀后，取20μL于藻细胞计数板，用荧光显微镜在蓝光激发光下(495nm)和可见光下分别进行观察计数，发出亮绿色荧光的细胞为活细胞，计数3次，取平均值。根据以下公式计算杀藻效率：
杀藻率(％)＝(Nc-Nt)/Nc×100
其中Nc表示加入2216E对照组的活藻细胞数，Nt表示加无菌培养滤液对照组或不同处理方式无菌培养滤液实验组的活藻细胞数。
实施例2：蛋白类活性物质杀藻谱的研究
P71杀藻谱(参见表1)表现出一定的特质(共培养一天后检测，以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为空白对照)，它在Dinoflagellata和Bacillariophyta中起作用较大，而在另外两个属中，则没有检测到杀藻活性。
表1P71杀藻谱
实施例3：活性蛋白浓度依赖性分析
当P71稀释2倍时，活性迅速降至5％，基本无活性，这个数据显示该蛋白的活性具有明显的浓度依赖性特性(共培养一天后检测，以20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为空白对照)。
表2浓度依赖性分析
以下给出假单胞交替菌DHQ25的筛选方法：
1)将从长江口海域海水样品中(包括表层、中层和底层)分离获得的13株能够杀灭有毒赤潮藻Alexandrium tamarense的细菌作为出发菌株，培养14～18h到稳定期，离心获得培养上清液；采用的培养基(2216E)的配方为：蛋白胨(Peptone)5g，酵母提取物(Yeast Extract)1g，磷酸高铁0.1g，琼脂粉10g(固体培养基)，pH7.6-7.8，陈海水定容到1L。
2)取步骤1)所得的部分培养上清液孵化后进行杀藻活性检测，得到6株具有杀藻活性的细菌，分别记为HH2、DHY3、DHY11、DHY20、DHY36、DHQ28；所述孵化的条件为在100～110℃下孵化30～40min。
进行杀藻活性检测的藻株Alexandrium tamarense(AT)购自暨南大学水生生物研究所，经本申请人无菌藻技术除菌得到的塔玛亚历山大藻无菌株(参见中国专利CN1887353)。藻类所用培养液为f/2培养液。藻类置于室内三角瓶中培养，温度为20±1℃，光照条件为12h光照，12h黑暗。
3)取步骤1)所得的另一部分培养上清液经超滤，取超滤后的上清液进行杀藻活性检测，得到6株具有杀藻活性的细菌，分别记为HH5、DHY3、DHY28、DHQ5、DHQ19、DHQ25；所述超滤采用超滤离心管5000g下超滤离心1.5h，所述超滤离心管选用3kD超滤离心管(参见表3)。
4)挑选出具有杀藻活性的细菌DHQ25，即为假单胞交替菌DHQ25(Pseudoalteromonassp.DHQ25)。
DHQ25在超滤处理后保留了杀藻活性，在100℃高温处理后失去了杀藻活性，而超滤液在蛋白质特征反应(茚三酮试剂反应)中呈阳性特性，显示是蛋白/多肽/氨基酸类物质，表明DHQ25是一株能产胞外杀藻活性蛋白的海洋细菌。
表3
DHQ25培养液杀藻活性的检测如下：
荧光素双醋酸酯(FDA)配成浓度为5mg/mL的溶液，置于4℃冰箱中避光保存。染色时，取200μL样品(不同处理均匀藻细胞培养液)于1.5mL离心管中；加入荧光素双醋酸酯FDA4μL，使其终浓度为100μg/mL，室温静置染色5min后，放入冰盒避光待镜检；染色样品混匀后，取20μL于藻细胞计数板，用荧光显微镜在蓝光激发光下(495nm)和可见光下分别进行观察计数，发出亮绿色荧光的细胞为活细胞，发出红色荧光的细胞为死细胞，计数活细胞3次，取平均值。根据以下公式计算杀藻效率：
杀藻率(％)＝(Nc-Nt)/Nc×100
其中，Nc表示加入2216E对照组的活藻细胞数，Nt表示加无菌滤液对照组或不同处理方式无菌滤液实验组的活藻细胞数。
Claims (10)
1.蛋白类杀藻化合物，其特征在于是从假单胞交替菌DHQ25(Pseudoalteromonassp.DHQ25)分离获得，所述假单胞交替菌DHQ25(Pseudoalteromonas sp.DHQ25)已于2010年8月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2010210。
2.如权利要求1所述的蛋白类杀藻化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)将假单胞交替菌DHQ25活化后，接种于液体培养基中培养，将培养液离心，取上清过滤后，进行无菌检验，得到假单胞交替菌DHQ25的无菌培养滤液，再进行超滤处理，收集超滤液；
2)超滤后上清液经分离纯化，收集其中的8个组分，各组分冻干成粉，分别对各组分进行杀藻活性检测，取具有杀藻活性的3个组分，记为P5、P6和P7，检测各组分中的蛋白条带数，其中P7经SDS-PAGE检测，显示出一条带，再将P7的冻干粉重溶，透析除盐，进HPLC重新分离纯化；
3)P7再进行分离纯化，共分离出两个峰，记为P71和P72，冻干处理，重新溶解，透析除盐，进行杀藻检测，其中P71具有杀藻活性，经SDS-PAGE还原和非还原处理后都显示是P71一条带，P71经原位PAGE鉴定是单条带的纯蛋白；
4)P71经ESI-MS/MS鉴定分析，得知分子式为C610H971N209O181S2，其氨基酸序列如下：
Met Ala Ser Gln Lys Arg Pro Ser Gln Arg His Gly Ser Lys Tyr Leu
1 5 10 15
Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg His Gly Phe Leu Pro Arg
20 25 30
His Arg Asp Thr Gly Ile Leu Asp Ser Ile Gly Arg Phe Phe Ser Gly
35 40 45
Asp Arg Gly Ala Pro Lys Arg Gly Ser Gly Lys Asp Ser His Thr Arg
50 55 60
Thr Thr His Tyr Gly Ser Leu Pro Gln Lys Ser Gln Arg Thr Gln Asp
65 70 75 80
Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ile Val Thr Pro Arg Thr
85 90 95
Pro Pro Pro Ser Gln Gly Lys Gly Arg Gly Leu Ser Leu Ser Arg Phe
100 105 110
Ser Trp Gly Gly Arg Asp Ser Arg Ser Gly Ser Pro Ile Ala Arg Arg
115 120 125。
3.如权利要求2所述的蛋白类杀藻化合物的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述液体培养基采用2216E液体培养基。
4.如权利要求2所述的蛋白类杀藻化合物的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述培养的条件为25℃180rpm培养24h。
5.如权利要求2所述的蛋白类杀藻化合物的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述培养液离心，是采用8000g离心10min。
6.如权利要求2所述的蛋白类杀藻化合物的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述过滤，是采用0.22μm微孔滤膜过滤；所述无菌培养滤液的pH值为8.1～8.4。
7.如权利要求2所述的蛋白类杀藻化合物的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述分离纯化，是采用Varian C18-HPLC分离纯化，以20mmol L-1 pH 8.0Tris-HCl为洗脱剂；所述对各组分进行杀藻活性检测，是以20mmol L-1 pH 8.0Tris-HCl为空白对照。
8.如权利要求2所述的蛋白类杀藻化合物的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述P7的冻干粉重溶，是以20mmol L-1 pH 8.0Tris-HCl为溶解液，所述透析除盐，是用20mmol L-1pH 8.0Tris-HCl为透析液。
9.如权利要求2所述的蛋白类杀藻化合物的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述分离纯化，是采用Agilent C18-HPLC分离纯化，以20mmol L-1 pH 8.0Tris-HCl为洗脱剂。
10.如权利要求2所述的蛋白类杀藻化合物的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述重新溶解，用20mmol L-1 pH 8.0Tris-HCl重新溶解，控制浓度10mg/L；所述透析除盐，用20mmol L-1 pH 8.0Tris-HCl为透析液；所述杀藻检测，以20mmol L-1 pH 8.0Tris-HCl为空白对照；所述蛋白是一个的单链蛋白，分子量大小为14.5kD。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010582886 CN102167732B (zh) | 2010-12-10 | 2010-12-10 | 蛋白类杀藻化合物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010582886 CN102167732B (zh) | 2010-12-10 | 2010-12-10 | 蛋白类杀藻化合物及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102167732A true CN102167732A (zh) | 2011-08-31 |
| CN102167732B CN102167732B (zh) | 2013-08-21 |
Family
ID=44489072
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201010582886 Expired - Fee Related CN102167732B (zh) | 2010-12-10 | 2010-12-10 | 蛋白类杀藻化合物及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102167732B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107114401A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-09-01 | 岳阳云秋珍珠科技有限公司 | 一种蓝藻清除剂及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997019179A1 (en) * | 1995-11-17 | 1997-05-29 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Pseudomonas exotoxin - myelin basic protein chimeric proteins |
| CN102168039A (zh) * | 2010-12-10 | 2011-08-31 | 厦门大学 | 产胞外杀藻蛋白海洋细菌的筛选方法 |
-
2010
- 2010-12-10 CN CN 201010582886 patent/CN102167732B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997019179A1 (en) * | 1995-11-17 | 1997-05-29 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Pseudomonas exotoxin - myelin basic protein chimeric proteins |
| CN102168039A (zh) * | 2010-12-10 | 2011-08-31 | 厦门大学 | 产胞外杀藻蛋白海洋细菌的筛选方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| A.M.LOBELL ET AL: "CAA10804", 《GENBANK》, 11 February 1999 (1999-02-11), pages 1 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107114401A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-09-01 | 岳阳云秋珍珠科技有限公司 | 一种蓝藻清除剂及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102167732B (zh) | 2013-08-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11459593B2 (en) | Dendrobium officinale endophytic fungus strain and extracellular polysaccharide produced thereby, and extraction method and application of extracellular polysaccharide | |
| WO2022111287A1 (zh) | 降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇的菌株及应用 | |
| CN107828665B (zh) | 一种竹叶兰内生真菌的分离纯化方法及其应用 | |
| WO2021135544A1 (zh) | 一种普洱茶树叶片内生芽孢杆菌及其应用 | |
| CN107502581A (zh) | 一株粘质沙雷氏菌株 | |
| CN104871830B (zh) | 以豆虫为载体种植蛹虫草的方法 | |
| CN112438277A (zh) | 一种炭角菌科真菌sj18及其在松材线虫防治上的应用 | |
| CN111019838B (zh) | 一株内生真菌及其提取物与用途 | |
| CN102167732B (zh) | 蛋白类杀藻化合物及其制备方法 | |
| CN106520635A (zh) | 一株蜡样芽孢杆菌njsz‑13及其应用 | |
| CN103952359A (zh) | 一株短波单胞菌及其应用 | |
| CN103918724B (zh) | Lasiodiplodia pseudotheobromae或其发酵产物在防治小麦白粉病菌中的应用 | |
| CN102168039B (zh) | 产胞外杀藻蛋白海洋细菌的筛选方法 | |
| CN114703066A (zh) | 一种栅藻、其活性成分的提取方法与应用 | |
| JP5956078B2 (ja) | ペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラスｇｐｐ１１０１ｂ菌株及びこれを用いた製剤 | |
| CN103408550A (zh) | 来源于产酶溶杆菌的2,5-二酮哌嗪类二肽及其制备和应用 | |
| CN103451109B (zh) | 海洋桔青霉抗真菌蛋白PcPAF及其制备方法 | |
| CN103936827B (zh) | 一种韭菜籽抗菌三肽及其制备方法与应用 | |
| CN114752509B (zh) | 一种增效复配微生物制剂及其制备方法与在薇甘菊防治上的应用 | |
| CN102731612B (zh) | 一种防治松墨天牛的胞外全蛋白提取液的制备方法 | |
| CN102408998B (zh) | 一种具有神经退行性疾病防治活性的海洋红树耐盐性内生真菌 | |
| CN103409326B (zh) | 烟曲霉r9抗菌蛋白及其制备方法 | |
| CN102250775A (zh) | 具毒杀植物线虫活力的生防真菌Gloeotinia的制备方法 | |
| Shebany | Antimicrobial activity of endophytic fungi isolated from Avicennia marina plant, Red Sea, Egypt | |
| CN106010981A (zh) | 一株亚硝酸盐降解菌 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20130821 Termination date: 20201210 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |