CN102145006A - 人参皂甙Ppt的抗抑郁用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种人参皂甙Rg1的代谢物人参皂甙Ppt在制备预防、治疗抑郁症药物中的新应用。试验证明，人参皂甙Ppt抗抑郁的疗效显著，见效快、毒副作用小、是一种安全、高效、稳定的抗抑郁药物，适于工业化生产，易于推广。本发明为预防和治疗抑郁症及其并发的疾病、障碍或病症提供了一种新的药物来源。
Description
技术领域
本发明涉及一种预防、缓解和/或治疗情感性精神障碍神经系统疾病的药物或保健食品，特别涉及一种抗抑郁药物或保健食品。
背景技术
抑郁症(depression)是情感性精神障碍(mood disorders)的主要类型，是一种以显著而持久的心境低落为主要特征的综合症。抑郁症是危害人类身心健康的常见病、多发病，是一个全球性的主要精神疾患。
抑郁症主要表现为情绪低落，兴趣减低，悲观，思维迟缓，缺乏主动性，自责自罪，饮食、睡眠差，担心自己患有各种疾病，感到全身多处不适，严重者可出现自杀念头和行为。
抑郁症是精神科自杀率最高的疾病。抑郁症发病率很高，几乎每5个成年人中就有1个抑郁症患者，因此它被称为精神病学中的感冒。抑郁症目前已成为全球疾病中给人类造成严重负担的第二位重要疾病，对患者及其家属造成的痛苦，对社会造成的损失是其他疾病所无法比拟的。造成这种局面的主要原因是社会对抑郁症缺乏正确的认识，偏见使患者不愿到精神科就诊。在中国，仅有5％的抑郁症患者接受过治疗，大量的病人得不到及时的诊治，病情恶化，甚至出现自杀的严重后果。另一方面，由于民众缺乏有关抑郁症的知识，对出现抑郁症状者误认为是闹情绪，不能给予应有的理解和情感支持，对患者造成更大的心理压力，使病情进一步恶化。
抑郁症流行趋势的日益严重性，患者因精神障碍所致心理素质的下降和对社会功能的损害，已引起世界各国的普遍重视。世界范围内对抗抑郁药品的需求量日益增大，近年来该类药品全球市场销售量每年以16.2％的速度增长。抑郁症的防治和抗抑郁新药的研制，已成为当今国际医药界前沿热点研究课题之一。
抑郁症的治疗方法很多，如心理治疗、睡眠剥夺治疗、光疗和电痉挛治疗等， 但目前仍以药物治疗为主，同时辅以心理治疗。目前的抗抑郁主流药物基本有五大类：选择性的五羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)，去甲肾上腺素与特定五羟色胺再摄取抑制剂(NaSSA)，三环类抗抑制剂(TCAs)，单胺氧化酶抑郁剂(MAOIs)和五羟色胺与去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNARI)。这些药物均有不同程度的不良反应，如嗜睡、视物模糊、高血压、惊厥和性欲低下等，影响其广泛推广使用，而且这些药物由于其自身缺陷所限，存在抗抑郁谱较窄、毒副作用较大、价格高昂、停药后易复发、不适宜进行调理性治疗等问题，故严重影响了它们的临床使用。
近年来从传统药中提取具有高效抗抑郁的单体药物研究日益增多，已经成为国际制药业开发抗抑郁药物的一种趋势，例如德国研发的圣约翰草(贯叶连翘)提取物金丝桃素，现已列入欧美等国家的抗抑郁主流药物，但其只适用于治疗轻度和中度抑郁症，对重度抑郁症的疗效不显，也存在着一些安全隐患。
发明人在研究人参皂甙Rg1抗抑郁功能的过程中发现：人参皂甙Rg1的代谢物人参皂甙Ppt更容易通过血脑屏障产生显著的抗抑郁功效，而且药效稳定，副作用小，用其制备的抗抑郁药物和保健食品具有更好的质量可控性和普适性，对于严重的抑郁症也有确切疗效。
人参皂甙Ppt是人参皂甙Rg1的代谢产物，其分子式为C30H52O4，分子量为476.73，分子结构如式(I)所示。
现代药理研究表明人参皂甙Rg1的代谢物人参皂甙Ppt具有抗认知、学习功能障碍的用途，可用于制备改善认知功能和学习记忆功能的药物和保健食品，但有关人参皂甙Ppt在制备预防和治疗抑郁症药物中的应用至今还未见报道。
发明内容
本发明的首要目的是针对上述现有技术存在的问题，提供人参皂甙Ppt、人参皂甙Ppt组合物抗情感性精神障碍，特别是抗抑郁的性能和功效，并提供人参皂甙Ppt或其药学上可接受的盐或其溶剂化物或是含有效量人参皂甙Ppt的组合物新的药用用途，即在治疗、调理和预防抑郁症的药物、保健食品中的新应用。
为实现上述目的，本发明一方面提供一种人参皂甙Ppt在制备预防、缓解和/或治疗情感性精神障碍疾病药物或保健品中的应用。
其中，所述的情感性精神障碍疾病主要为抑郁症。
其中，本发明人参皂甙Rg1的代谢物人参皂甙Ppt可通过市售或已知方法制备得到。
其中，所述的人参皂甙Ppt纯度≥50％，优选为≥80％，进一步优选为≥90％。
其中，所述的人参皂甙Ppt的含量≥50％，优选为≥80％，进一步优选为≥90％。
其中，所述药物由人参皂甙Ppt和药学上可接受的载体或是与其它抗抑郁的化合物组成。
特别是，药学上可接受的载体通常被保健专家认可用于这一目的且作为药剂的非活性成分。有关药学上可接受的载体的汇编可以在《药物赋形剂手册》(Handbook of Pharmaceutical excipients，第2版，由A.Wade和P.J.Weller编辑；American Pharmaceutical Association出版，Washington and ThePharmaceutical Press，London，1994)等工具书中找到。
尤其是，所述的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁等；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘结剂，如预胶化淀粉、糊精等；甜味剂；抗氧化剂；防腐剂、矫味剂、香料等；
其中，所述药物是通过经胃肠道给药和非经胃肠道给药途径给药。
特别是，所述的非经胃肠道给药途径选择注射给药、呼吸道给药、皮肤给药、粘膜给药或腔道给药。
其中，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂、贴剂等形式存在。
其中，非经胃肠道给药药剂选择注射剂、喷雾剂、气雾剂、贴剂等。
特别是，所述的经胃肠道给药制剂选择片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂或糖浆剂等。
本发明另一方面提供一种人参皂甙Ppt组合物在制备预防、缓解和/或治疗情感性精神障碍疾病药物或保健品中的应用。
其中所述的情感性精神障碍疾病为抑郁症。
其中，所述的人参皂甙Ppt组合物选择药学上人参皂甙Ppt可接受的盐、人参皂甙Ppt的溶剂化物。
其中，所述的人参皂甙Ppt组合物可以是人参皂甙Ppt与其它抗抑郁的化合物组成，优选人参皂甙Rg1和/或人参皂甙Rh1。
本发明又一方面提供一种包括人参皂甙Ppt的药物组合物在制备预防、缓解和/或治疗情感性精神障碍疾病药物或保健品中的应用。
其中所述的情感性精神障碍疾病为抑郁症。
本发明再一方面提供一种用于预防抑郁症和/或缓解抑郁症症状的营养剂和保健食品，其特征在于包括人参皂甙Ppt。
本发明还提供了一种治疗抑郁症的方法，包括向受试者给予治疗有效量的人参皂甙Ppt和/或人参皂甙Ppt的药物组合物，其治疗有效量为人参皂甙Ppt0.5～4mg/kg·d，优选为人参皂甙Ppt0.1～3mg/kg·d，进一步优选为人参皂甙Ppt01.5～2mg/kg·d。
除非另外说明，本文所用的术语“治疗有效量”为需要产生有效作用的药物的用量；“治疗有效量”是可以调整和变化的，最终由医务人员确定，其所考虑的因素包括给药途径和制剂的性质、接受者的体重、年龄等一般情况以及所治疗疾病的性质和严重程度。
与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：
1、本发明发掘了人参皂甙Rg1的代谢物人参皂甙Ppt或其药学上可接受的盐或其溶剂化物新的药用价值，将其用于抗抑郁症，并可制备成预防、调理和/或治疗抑郁症的药物或保健食品。
2、本发明研究证明人参皂甙Ppt系受体后抗抑郁药物，通过激活cAMP-PKA通路，促进脑区CREB的磷酸化和上调BDNF的表达，预防和治疗抑郁症。实验证明人参皂甙Ppt可以显著缩短小鼠悬尾不动时间和强迫游泳不动时间，提示人参皂甙Ppt的抗抑郁功效可能强于阳性药帕罗西汀。
3、本发明人参皂甙Ppt安全性好，适宜长期服用，可以对抑郁症进行调理性治疗。
4、本发明人参皂甙Ppt既可采用单一成分制备预防和治疗抑郁症的药物，又可与其它活性成分(例如与芍药苷、芍药内酯苷、甘草酸等化合物)共同组方，制备多靶点抗抑郁的复方药物。
附图说明
附图1为人参皂甙Ppt对PC12神经细胞磷酸化CREB的影响
附图2为人参皂甙Ppt对PC12神经细胞BDNF的影响
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。
以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括了本发明药物的药效学试验。
实施例1人参皂甙Ppt对小鼠悬尾实验的影响
1.1实验材料
ICR小鼠，雄性，体重18～20g，由维通利华动物实验中心提供，合格证编号：SCXK(京)2007-0003。
人参皂甙Ppt(纯度＞98％)，吉林农业大学华迪生物科技有限公司提供；
帕罗西汀，中美天津史克制药有限公司(批号：08030078)；
JZ型300g张力换能器(高碑店市新航积淀设备有限公司)；
Medlab生物信号采集处理系统(南京易美)
1.2实验方法及结果
将正常小鼠按体重随机分成5个组，每组20只，即模型组、阳性药帕罗西汀(3.5mg/kg/d)，人参皂甙Ppt高(10mg/kg/d)、低(5mg/kg/d)剂量组。各组均按0.2ml/10g体重灌胃给药，连续给药2天。
于第2天给药1h之后将小鼠尾端(在距尾尖2cm处)用胶布固定在100g张力换能器的连线上，使其呈倒悬状态，头部离实验台约15cm，每次同时测试2只动物，相互之间用纸板隔开。换能器连接到Medlab生物信号采集处理系统，适应2min后，记录4min之内的结果，将不动状态换算成时间(s)。
实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS11.5统计软件(购自美国SPSS公司)进行方差分析。实验结果见表1。
表1人参皂甙Ppt对小鼠悬尾不动时间的影响(x±s)
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
实验结果表明：
人参皂甙Ppt高、低剂量组及阳性药帕罗西汀组均能显著缩短小鼠悬尾不动时间(与模型组比较，P＜0.01)，提示人参皂甙Ppt具有良好的抗抑郁功能。
实施例2、人参皂甙Ppt对小鼠强迫游泳实验的影响
2.1实验材料
ICR小鼠，雄性，体重18～20g，由维通利华动物实验中心提供，合格证编号：SCXK(京)2007-0003。
人参皂甙Ppt(纯度＞98％)，吉林农业大学华迪生物科技有限公司提供；
帕罗西汀，中美天津史克制药有限公司(批号：08030078)；
温度计，秒表，玻璃缸，柏拉图数码摄像头，笔记本电脑。
2.2实验方法
将正常小鼠按体重随机分成5个组，每组20只，即模型组、阳性药帕罗西汀(3.5mg/kg/d)，人参皂甙Ppt高(10mg/kg/d)、低(5mg/kg/d)剂量组。各组均按0.2ml/10g体重灌胃给药，连续给药2天，空白对照组给去离子水。
于第2天给药1h之后将小鼠单个放入高20cm、直径18cm、水深10cm、水温23±2℃的水缸中，观察6min，适应2min，记录后4min内累计不动时间(s)。
数据以x±s表示，以SPSS13.0统计软件处理，用One-Way ANOVA方法，方差齐性用LSD和SNK检验。实验结果见表2。
表2人参皂甙Ppt对小鼠强迫游泳不动时间的影响(x±s)
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
实验结果表明：人参皂甙Ppt高、低剂量组及阳性药帕罗西汀组均能明显缩短小鼠强迫游泳不动时间(与模型组比较，P＜0.01)，显示人参皂甙Ppt具有较强的抗抑郁作用。
实施例3人参皂甙Ppt对慢性应激大鼠脑内单胺类神经递质的影响
3.1实验材料
受试药：人参皂甙Ppt(纯度＞98％)，吉林农业大学华迪生物科技有限公司供；
阳性药：盐酸氟西汀(Fluoxetine，Prozac百忧解)，礼来苏州制药有限公司，批号：国药准字J20030017，大鼠用量为2.5mg/kg。
去甲肾上腺素(NE，Serva公司)；多巴胺(DA，Fluka公司)；5-羟色胺(5-HT，Sigma公司)；3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC，Sigma公司)；3，4-二羟苄胺(DHBA，Sigma公司)，二正丁胺(上海化学试剂厂)，D-8离子对试剂(天津化学试剂二厂)，甲醇(优级纯，北京化工厂)，其它试剂均为国产分析纯。
SD大鼠，雄性，体重220～240g。由维通利华动物实验中心提供，合格证编 号：2007-0001。
Waters510泵，M464电化学检测器DL-822色谱工作站(大连化物所色谱中心)，MSE150型超声粉碎器
3.2实验方法
3.2.1分组和给药
SD大鼠，24h禁水不禁食后，给予1％蔗糖水，测定1h内的消耗量。根据蔗糖水消耗量随机分成6个组，每组12只，即正常对照组、模型组、阳性药盐酸氟西汀组(2.5mg/kg/d)、人参皂甙Ppt高(8.6mg/kg/d)、低(4.3mg/kg/d)剂量组。造模同时灌胃给药，每日一次，连续给药21天。各组均按1.0ml/100g体重给药，每周称一次体重。
3.2.2造模
正常对照组6只/笼饲养，正常饮食饮水，不给任何刺激。
其他五个组，1只/笼饲养，并接受21天的不可预知的应激刺激，包括：冰水游泳，热烘，夹尾，潮湿饲养，昼夜颠倒，禁食，禁水等。每组每天随机给予一种刺激。
每种应激的具体操作方法：
(1)冰水游泳：将动物放入盛有4℃冷水(冰水混合)的桶中，水深15cm，大鼠的足尖刚能触及桶底，5min后将动物取出。
(2)热烘：烘箱温度调至45℃固定，将动物放入烘箱中，5min后将动物取出。
(3)夹尾：将大鼠放入固定笼中，露出尾巴，用止血钳夹住距尾根部1cm处(用力不要过大，使大鼠发出哀号即可)，持续1min。
(4)潮湿饲养：早上8点，往鼠笼中加入200ml水，至次日早8点换掉。
(5)昼夜颠倒：早上8点，将大鼠放入黑暗箱中，晚上8点打开灯照明，至次日早8点。
(6)禁食：24h断料。
(7)禁水：24h断水。
3.2.3样品制备及检测
动物断头处死，迅速在冰上剥离大脑，取前额皮质，称重后置组织冷冻管中 用液氮快速冷冻后，放入-70℃冰箱保存至测定。
根据脑组织的重量，加入预冷的0.1mol/L过氯酸(内含0.3mM EDTA二钠和0.5mM亚硫酸钠)，2μg/ml DHBA，配制成800μL，超声匀浆，11000rpm离心10min，上清液用于神经递质测定。
采用高效液相色谱-电化学检测器系统(HPLC-ECD)进行测定，色谱条件为：色谱柱为4×150mm，Nova-pak Cl8，5μm(大连色谱中心填装)；流动相为50mM柠檬酸-乙酸钠缓冲液PH3.5(内含1.0mM B-8离子对试剂，1.8mM二正丁胺，0.3mM EDTA二钠，4％甲醇)，流速1.0mL/min，玻璃碳工作电极，检测池电压为+0.75V；3，4-二羟苄胺DHBA为内标物，样品中各主要组分用内标法进行定量。
检测数据以x±s表示，以SPSS 13.0软件处理，用One-Way ANOVA方法，检测结果见表9、10。
表3人参皂甙Ppt对慢性应激大鼠脑内去甲肾上腺素的影响(x±s)
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表4人参皂甙Ppt对慢性应激大鼠脑内五羟色胺的影响(x±s)
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表3、4中的实验数据表明，连续给药21天后，与空白组比较模型组大鼠脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素、5-羟色胺含量明显降低(P＜0.05)；与模型组比较人参皂甙Ppt高剂量组和阳性药盐酸氟西汀组大鼠脑内单胺类神经递质去甲肾上腺素、5-羟色胺含量明显升高(P＜0.05)。
脑内单胺类递质，如去甲肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺等功能不足，导致抑郁症发病。利血平降压的同时引发抑郁症的原因就是由于利血平使突触前膜囊泡中的去甲肾上腺素耗竭所致。本实验研究显示慢性应激大鼠脑内5-羟色胺、去甲肾上腺素含量明显降低，人参皂甙Ppt能显著提高脑内5-羟色胺、去甲肾上腺素的含量。提示以上作用可能是人参皂甙Ppt的抗抑郁作用的重要机制之一。
实施例4人参皂甙Ppt对PC12细胞磷酸化CREB的影响实验
4.1实验材料
细胞培养：PC12细胞购于中国医学科学院基础医学研究所细胞中心，在RPMI1640培养基内培养，其中添加体积分数为10％的马血清和体积分数为5％的胎牛血清，于37℃，5％CO2培养箱中培养。
人参皂甙Ppt：由吉林农业大学华迪生物科技有限公司提供，纯度＞98％(配置为水溶液，贮存于4℃冰箱中备用)；
单克隆P-CREB Ser133抗体(Cell Signaling Technology公司)；
ECL超敏发光液为北京普利莱基因公司产品；
电泳仪和电泳槽(北京六一仪器厂)；电转仪(Bio-Rad)；酶标仪(EL311sBIO-TEK INSTRUMENTS Inc.)；Milli Q plus超纯水系统(Millipore)；匀浆器(Polytran，Sweden)；ECL检测系统(日本富士)。
4.2实验方法：
4.2.1PC12细胞给药方案：取对数生长期PC12细胞以107密度接种于6孔板，待24小时贴壁后给予人参皂甙Ppt刺激，48小时后提取细胞蛋白制备蛋白样品储存于-20℃待用。
4.2.2人参皂甙Ppt对PC12细胞P-CREB的影响：采用western blot方法对PC12细胞P-CREB水平进行检测。
4.3实验结果：
人参皂甙Ppt对PC12神经细胞磷酸化CREB的影响，见附图1。
实验结果表明：人参皂甙Ppt可促进PC12细胞内磷酸化CREB的表达。
实施例5人参皂甙Ppt对PC12细胞BDNF的影响实验
5.1实验材料
细胞培养：PC12细胞购于中国医学科学院基础医学研究所细胞中心，在RPMI1640培养基内培养，其中添加体积分数为10％的马血清和体积分数为5％的胎牛血清，于37℃，5％CO2培养箱中培养。
人参皂甙Ppt：由吉林农业大学华迪生物科技有限公司提供，纯度＞98％(配置为水溶液，贮存于4℃冰箱中备用)；
多克隆BDNF抗体，β-Actin抗体和抗兔IgG二抗(Santa Cruz Biotechnology公司)；
ECL超敏发光液为北京普利莱基因公司产品；
电泳仪和电泳槽(北京六一仪器厂)；电转仪(Bio-Rad)；酶标仪(EL311sBIO-TEK INSTRUMENTS Inc.)；Milli Q plus超纯水系统(Millipore)；匀浆器(Polytran，Sweden)；ECL检测系统(日本富士)。
5.2实验方法：
5.2.1PC12细胞给药方案：取对数生长期PC12细胞以107密度接种于6孔板，待24小时贴壁后给予人参皂甙Ppt刺激，48小时后提取细胞蛋白制备蛋白样品储存于-20℃待用。
5.2.2人参皂甙Ppt对PC12细胞BDNF的影响：采用western blot方法对PC12细胞BDNF水平进行检测。
5.3实验结果：
人参皂甙Ppt对PC12神经细胞BDNF的影响，见附图2。
实验结果显示人参皂甙Ppt可促进PC12神经细胞内BDNF的表达。
Claims (5)
1.人参皂甙Rg1的代谢物人参皂甙Ppt在制备用于预防、缓解和/或治疗情感性精神障碍疾病或症状的药物或保健品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的精神疾病为抑郁症。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物由人参皂甙Ppt和药学上可接受的载体组成。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂、贴剂等形式存在。
5.一种预防、缓解和/或治疗抑郁症疾病的药物或保健品，其特征在于包括人参皂甙Ppt或是人参皂甙Ppt的组合物。
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| WO2008155998A1 (ja) * | 2007-06-21 | 2008-12-24 | Nagase & Co., Ltd. | 抗不安抗うつ剤 |
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