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CN101993485B - 促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途 - Google Patents

促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途 Download PDF

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CN101993485B CN200910104650XA CN200910104650A CN101993485B CN 101993485 B CN101993485 B CN 101993485B CN 200910104650X A CN200910104650X A CN 200910104650XA CN 200910104650 A CN200910104650 A CN 200910104650A CN 101993485 B CN101993485 B CN 101993485B
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Abstract

本发明涉及促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的制备方法及其用途。促胰岛素分泌肽类似物通过C末端的半胱氨酸残基形成由二硫键或者聚乙二醇偶联而成的二聚体，有降低血糖和促进胰岛素分泌的功能，可作为一种糖尿病的治疗药物。

Description

促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途
技术领域
本发明涉及促胰岛素分泌肽同源二聚体的制备及用途，属于生物技术及药物领域。 
背景技术
胰高血糖素类似肽(Glucagon-like peptide，GLP)是人体分泌的一种肠道激素，由胰高血糖素原分子经肠道蛋白水解酶裂解而成，产生二种胰高血糖素类似肽GLP-1和GLP-2。其中GLP-1有二种活性形成，即GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)酰胺形式，在体内具有相同的促进胰岛素分泌的作用，故又称促胰岛素分泌肽(Incretin或Insulinotropic peptide)(NegarSadrzadeh et.al.，Pharmaceutical Sciences，Vol.96，1925-1954(2007))。 
Exendin-4是在毒蜥的唾液分泌物中发现的蛋白多肽，由39个氨基酸组成。其氨基酸序列与GLP家族中数个成员有序列的相似性，其中与GLP-1(7-36)有53％的同源性(Eng J et.al.，J Biol Chem，1992，267：7402-7405)。作为一种GLP-1R的强激动剂，Exendin-4同样在体内外被证实促进胰岛素的分泌，因此也可以称为一种促胰岛素分泌肽。GLP-1(7-36)和Exendin-4的氨基酸序列如下： 
GLP-1(7-36)： 
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 
Exendin-4： 
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 
由于Exendin-4的第二位氨基酸Gly不同于GLP-1的Ala，可以有效抵抗二肽酰基肽酶IV的降解。此外，Exendin-4的C末端中多出的(PSSGAPPS)氨基酸序列，除可防止肽链内切酶降解外，尚可增强与GLP-1受体的亲和力。因此，Exendin-4在体内的降血糖能力比GLP-1强千倍左右。针对Exendin-4的改进而成的新型类似物众多，如在C末端增加5个KKKKK的类似物ZP10(Petersen JS，Diabetologia，2002，45：A147)；将其20位的Lys替换成Arg或His，25位的Trp替换Phe，将其14位Met替换成Leu或Ile。将Exendin-4从C末端缺失形成Exendin-4(1-28)或Exendin-4(1-30)以及相应的酰胺形式( 
Figure GSB00001026724600011
T，DiabetesCare，2007，30：1608-1610.)。 
GLP-1(7-36)和Exendin-4通过上述的序列改造，包括一个或多个氨基酸替换，或者C末端的氨基酸缺失或添加成截短的或延长的类似物。 
GLP(7-36)和Exendin-4在体内半衰期分别为2min和2小时左右，为实现延长体内半衰期的目的，众多公开文献和专利报了将其与人血白蛋白、人Ig的Fc片段，转铁蛋白等的融合形式(如GLP-1-HSA，GLP-1-Fc，GLP-1-Transferrin，Exendin4-HAS，Exendin4-Fc等)(US7271149，US 2007/0036806A1，US 2007/0060512A1，US 2006/0293232A1，US2007/0161087A1)。该类融合形式的GLP-1或Exendin-4主要通过基因工程重组技术表达和制备而实现，其表达宿主包括大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞(Xiaopu Yin，et.al.，Protein Expressionand Purification 41(2005)259-265；Jin Zhou，et.ai.，Biotechnol Lett(2008)30：651-656；FehmannHC，et.al.，Peptides.1994；15(3)：453-456)。 
在另外的公开文献和专利中报道由PEG修饰的GLP-1或Exendin-4的偶联物，主要偶联位点位于Lys上的氨基或C末端的COOH上(US 6284727，US9/561,226)。同样实现延长体内半衰期的目的。 
通过体外对GLP-1的脂肪链化学修饰(如Liraglutide)，或通过专一的氨基酸(Lys34)化学链修饰(如CJC-1131)，形成体内与白蛋白的结合，实现每日给药一次(半衰期达11-15hr)的目的(Kim，JG，Diabetes，2003Mar；52(3)：751-759)。 
GLP-1和Exendin-4除了采用化学固相肽合成制备外，采用重组DNA的方法进行重组表达制备也有相应的文献和专利报道。如在大肠杆菌中重组表达(Xiaopu Yin，et.al.，ProteinExpression and Purification 41(2005)259-265)，在Pichia酵母中重组表达(JinZhou，et.ai.，Biotechnol Lett(2008)30：651-656)。此外，有将Exendin-4用串联的方式表达形成二聚体的报道(Lina Yin，et.al.，Protein&Peptide Letters，2006，13，823-827)。 
GLP-1或Exendin-4具有多重的生物作用，主要包括：(1)与胰岛β细胞作用后，促进胰岛素的分泌和释放；(2)抑制胰岛α细胞的胰岛血糖素释放，促进糖原合成；(3)提高胰岛素的敏感性和糖耐量；(4)改善胰岛β细胞的功能，促进其增殖防止凋亡；(5)降低胃排空的速度；(6)抑制食欲和降低能量摄取量。因此，Exendin-4(商品名Byatta)和Liraglutide已被批准作为治疗II型糖尿病的多肽药物，相关的研究已成为该领域的热点。 
本发明提供了一种衍生于GLP-1或Exendin-4的促胰岛素分泌类似肽的同源二聚体，该同源二聚体通过位于C末端的半胱氨酸巯基还原共价而成。本发明人经研究发现，同源二聚体形式的促胰岛素分泌类似肽具有更好的体内稳定性和生物活性，并可实现体内血液中半衰期的延长。可作为一种新型治疗糖尿病的药物或药物组合物。 
发明内容：
本发明的目的是提供一类促胰岛素分泌肽类似物的同源二聚体，以及实现同源二聚体的制备方法，可用于制备降血糖的药物。 
本发明中促胰岛素分泌肽类似物的氨基酸序列具有以下特征，分别衍生于GLP-1和Exendin-4。 
序列SEQ ID NO：1(GLP-1(Gly87-34)的衍生物)： 
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala
Trp Leu Val Lys Xaa Cys-OH(或NH2) 
序列SEQ ID NO：2(Exendin-4(1-28)的衍生物)： 
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile
Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-OH(或NH2) 
其中的Xaa特征为： 
A：(GlyGlySer)n，或(GlyGlyPro)n，其中n是1至5的整数； 
B：(Gly)n，或(Gly)n Ser，其中n是4至20的整数； 
C：A或B的任意组合。 
此外，技术人员可按本领域常规方法设计Xaa序列，而不影响本专利的实现。 
本发明提供的促胰岛素分泌肽类似物序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的特征是C末端氨基酸残基是半胱氨酸。 
本发明提供的促胰岛素分泌肽类似物序列SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的另一特征是C末端可以是酰胺化形式。 
促胰岛素分泌肽类似物除SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的序列外，还包含由此经一个或多个氨基酸替换、缺失或添加而成的衍生物，与SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2序列具有50％同源性并保留了促胰岛素分泌和降血糖作用的类似肽。促胰岛素分泌肽类似物可以是酰胺化形式。 
本发明的另一目的提供制备促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的制备方法和实施过程。通过类似物多肽C末端的半胱氨酸上的游离巯基(或称硫代基团)在一定反应条件下还原成二硫键而成。 
本发明实施的另一方案是通过双活化的聚乙二醇分子作为偶联物，与类似物多肽C末端的游离巯基在一定反应条件下还原成共价的聚乙二醇偶联同源二聚体，具以下特征： 
GLP-1-Cys-PEG-Cys--GLP-1或Exendin4-Cys-PEG-Cys-Exendin4。 
双活化的聚乙二醇分子(PEG)包括双活化的马来酸PEG，特征为MAL-PEG-MAL；或包括双活化的巯基PEG，特征为SH-PEG-SH。或包括双活化的邻二硫吡啶(ortho-pyridyldisulfite)PEG，特征为OPSS-PEG-OPSS。 
用于本发明中促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的聚乙二醇分子可是小分子或是大分子，分子量范围从500至40,000道尔顿。通过分子量大于5000的PEG分子作为二聚体偶联物可实现将促胰岛素分泌肽类似物二聚体在体内半衰期的显著延长。优选的PEG分子大小是10KD-40KD之间。 
本发明的另一目的是提供了用于制备促胰岛素分泌肽类似物的化学固相合成或重组DNA技术的方法。重组DNA技术指应用表达载体插入编码促胰岛素分泌肽类似物cDNA基因片段后，转化宿主细胞。再经发酵或培养，纯化制备相对应重组多肽的技术过程。 
本发明的另一目的，提供了分离和纯化促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的方法，包括众所周知的离子交换色谱、亲和色谱、疏水层析以及反相层析色谱、分子排阻色谱和超滤等技术手段。 
本发明的另一目的，提供了促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体的促胰岛分泌作用以及降血糖的作用，可作为治疗糖尿病或高血糖相关的代谢综合症的药物或药物组合物。 
作为一种药物组合物，它包括药学上可接受的载体或赋形剂或稀释剂，以及有效剂量的本发明所述的同源二聚体多肽。 
本发明中所用“同源二聚体”，是指通过共价结合键将氨基酸序列和组成完全相同的促胰岛素分泌肽类似物在C末端共价结合而形成的二聚体。 
本发明中所用“聚乙二醇偶联”，是指由不同大小分子量的聚乙二醇在二端分别与一个促胰岛素分泌肽类似物的C末端共价相连而成的聚乙二醇化同源二聚体。 
本发明中所用“宿主细胞”，是指大肠杆菌或酵母。 
本发明中所用“表达载体”，是指含有表达启动子包括T7、Tac、Trp、lac的大肠杆菌表达载体，或含有α分泌因子以及AOX或GAP表达启动子的酵母表达载体。 
至此已对本发明进行了详细的描述，通过参考下列实例，能够对本发明有更清晰的理解。 
说明书附图说明： 
附图1：源于GLP-1(Gly87-34)的促胰岛素分泌肽类似物氨基酸序列(SEQ ID NO：1)和源于Exendin-4(1-28)的促胰岛素分泌肽类似物氨基酸序列(SEQ ID NO：2)的序列比较。 
附图2：Ex4C的氨基酸序列(SEQ ID NO：3)和GLP-G8C的氨基酸序列(SEQ ID NO： 4)的序列比较。 
附图3：Ex4C-PEG35K-Ex4C的SDS-PAGE电泳(A)和RP-HPLC(B)。 
附图4：Ex4C和Ex4C-Ex4C的RP-HPLC分析比较，其中A图为Ex4C单体，B图为Ex4C-Ex4C同源二聚体。 
附图5：Ex4C-PEG5k-Ex4C，Ex4C-PEG35k-ExC、Ex4C-Ex4C和Exendin-4(WT)在小鼠体内的降血糖实验结果。 
附图6：Ex4C-PEG5k-Ex4C，Ex4C-PEG35k-Ex4C和Ex4C-Ex4C和Exendin-4(WT)在小鼠体内的促胰岛素分泌作用实验结果。 
下述实例仅为说明目的而并不旨在对本发明的限制。 
具体实施方式
实例1、Ex4C和GLP-G8C的化学固相合成 
Ex4C和GLP-G8C的氨基酸序列如下： 
Ex4C(SEQ ID NO：3)： 
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe
Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Ser Gly Gly Ser Cys 
GLP-G8C(SEQ ID NO：4)： 
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe 
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly Gly Ser Cys 
当C末端为羧基时，选择王树脂进行二种多肽的化学固相合成。合成结束后，将得到的侧链保护基的多肽树脂进行裂解，Ex4C或GLP-G8C的C末端从树脂上断裂下来形成羧基。当多肽C末端为酰胺时，选择Fmoc-PAL-PEG-PS树脂进行二种多肽的化学固相合成。合成结束后，将得到的侧链保护基的多肽树脂进行裂解，Ex4C或GLP-G8C的C末端从树脂上断裂下来形成酰胺。 
以上固相合成是在ABI公司的多肽合成仪上进行。首先将C末端的半胱氨酸连接树脂，然后一个一个的氨基酸从C端向N端进行。待合成结束后，脱保护基和从树脂上断裂后，用反向HPLC层析(Waters公司，C18制备柱)对Ex4C或GLP-G8C多肽进行纯化。纯化条件为A相含0.5％(V/V)乙酸的水溶液，B相为含80％乙腈和0.5％(V/V)乙酸的水溶液，0-100％B液梯度洗脱。收集目的多肽，经冻干成干粉。经质谱分析，Ex4C-NH2的分子量为4019.39，GLP-G8C-NH2的分子量为3521.87，与理论值一致。 
实例2、Ex4C在大肠杆菌中的重组制备 
根据实例1中Ex4C的氨基酸序列(SEQ IDNO：3)，采用大肠杆菌偏爱密码子设计其cDNA序列，由大连宝生物公司全基因人工合成。 
Ex4C的cDNA序列(SEQ ID NO：5) 
ggtaccgacg acgacgacaa gcatggcgaa ggcaccttta ccagcgatct gagcaaacag 60 
atggaagaag aagcggtgcg tctgtttatt gaatggctga aaaatggcgg cagcggcggc 120 
agctgctagg aattc                                                  135 
将合成的cDNA片段(插入pMD-18质粒中)，用KPN I和EcoRI双酶切后回收，将pET32a(NOVAGEN公司)质粒同样双酶切后回收大片段。在T4连接酶作用下，将Ex4C基因片段和pET32a片段连接后转化DH5α菌。筛选出含插入Ex4C基因的重组质粒命名为pET32a-Ex4C。再用CaCl2法转化表达宿主菌BL21(DE3-plys)中。经0.5mMol/LIPTG诱导表达产生TRX-EK-Ex4C的融合蛋白。融合蛋白经Ni-Sepharose层析纯化后，用肠激酶酶切除去TRX(硫还氧蛋白)，重组Ex4C用C18反相柱纯化回收，再冻干成干粉。 
实例3、Ex4C-Ex4C同源二聚体的制备 
将实例1制备的纯度大于98％的Ex4C(NH2)多肽，溶于50mMol/LTris-Cl(pH8.5)缓冲中，多肽终浓度为1～2.0mg/ml。在4℃反应过夜或室温反应4-6小时，通过RP-HPLC分析90％的Ex4C形成二聚体，即Ex4C-Ex4C。加入1％的TFA终止反应，用C18柱纯化分离二聚体。Ex4C-Ex4C经冻干后成干粉保存，质谱测定分子量为8036.68，与理论值一致。 
实例4、GLP-G8C同源二聚体的制备 
将实例1制备的纯度大于98％的GLP-G8C多肽，溶于50mMol/L Tris-Cl 1(pH8.5)缓冲中，多肽终浓度为1～2.0mg/ml。在4℃反应过夜或室温反应4-6小时，通过RP-HPLC分析90％的GLP-G8C形成二聚体，即Di-GLP-G8C。加入1％的TFA终止反应，用C18柱纯化分离二聚体。Di-GLP-G8C经冻干后成干粉保存。 
实例5、Ex4C-PEG5K-Ex4C二聚体的制备 
将SH-PEG5K-SH(北京健凯公司)按20.0mg/ml溶于100mMol/L磷酸钠缓冲中(pH6.5)，室温或4℃搅拌条件下，逐渐加入Ex4C多肽至两者的摩尔浓度达到PEG5K∶Ex4C为1∶2～4。反应4-12小时后，用RP-HPLC经ESD(蒸发光)检测PEG偶联二聚体达到85％以上。加入1％的TFA终止反应，用C18柱纯化分离除去未修饰的Ex4C和PEG修饰的单链PEG5K-Ex4C，纯化后的二聚体Ex4C-PEG5K-Ex4C冻干成干粉保存。 
实例6、Ex4C-PEG35K-Ex4C二聚体的制备 
将MAL-PEG35K-MAL(北京健凯公司)按20.0mg/ml溶于100mMol/L磷酸钠缓冲中(pH6.5)，室温或4℃搅拌条件下，逐渐加入Ex4C多肽至两者的摩尔浓度达到PEG35K∶Ex4C 为1∶2～4。反应4-12小时后，用RP-HPLC经ESD(蒸发光)检测PEG偶联二聚体达到85％以上。加入1％的TFA终止反应，用C18柱纯化分离除去未修饰的Ex4C和PEG修饰的单链PEG35K-Ex4C，纯化后的二聚体Ex4C-PEG35K-Ex4C冻干成干粉保存。 
实例7、四种不同大小的促胰岛素分泌肽类似物二聚体在小鼠体内降血糖作用 
取Balb/c小鼠(重庆医科大学试验动物中心)，体重20-25克，每组10只，分成6组，禁食过夜。对照组为生理盐水组，实验组为Exendin-4(成都迅捷公司)组、Ex4C-Ex4C组、Di-GLP-G8C组、Ex4C-PEG5K-Ex4C组和Ex4C-PEG35K-Ex4C组，每组样品用10mMol/L磷酸钠缓冲(pH6.5)溶解配成相同摩尔浓度即10nMol/L。分别按每只小鼠腹腔注射100μl各组药物，同时腹腔注射40％的葡萄糖溶液200μl。于注射后30、60、120、180分钟取血测定血糖(LifeScan，Inc血糖仪测定)。于给药后24小时、48小时、72小时和96小时，再分别腹腔注射40％的葡萄糖溶液200μl，给予葡萄糖后30、60分钟取血测定血糖(LifeScan，Inc血糖仪测定)。 
实验结果见图5。结果证明同源二聚体(Ex4C-Ex4C和Di-GLP-G8C)给药后3小时依然具有明显降血糖作用，24小时后无降血糖作用；而Ex4C-PEG5K-Ex4C和Ex4C-PEG35K-Ex4C二聚体可维持降血糖作用，分别达到24小时和96小时。 
实例8、四种不同分子量大小的促胰岛素分泌肽类似物二聚体体内促胰岛素分泌作用 
取Balb/c小鼠(重庆医科大学试验动物中心)，体重20-25克，每组10只，分成6组，禁食过夜。对照组为生理盐水组，实验组为Exendin-4组、Ex4C-Ex4C组、Di-GLP-G8C组、Ex4C-PEG5K-Ex4C组和Ex4C-PEG35K-Ex4C组，每组样品用10mMol/L磷酸钠缓冲(pH6.5)溶解配成相同摩尔浓度即10mMol/L，分别按每只小鼠腹腔注射100μl各组药物。 
测定方法：每组动物腹腔注射40％的葡萄糖溶液100μl后，同时给予注射相同体积各组药物。于注射后10和30分钟取血20μl(眼眶取血)，加入20μl 1％的EDTA离心管中，离心取血清用胰岛素测定试剂盒(北方同位素公司)测定血中胰岛素水平。 
从图6中可清晰证明四种不同分子量大小的促胰岛素分泌肽类似物二聚体在给药后的10分钟内可明显促进小鼠体内胰岛素的分泌肽。 
序列表 
<110>重庆富进生物医药有限公司 
<120>促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体及其用途 
<160>5 
<170>PatentIn version 3.3 
<210>1 
<211>30 
<212>PRT 
<213>人工序列(Artificial Sequence) 
<220><221>xaa 
<221>xaa 
<222>(29)..(29) 
<223>Xaa can be(GlyGlySer)n，(GlyGlyPro)n，(Gly)n 
or(Gly)nSer， 
<400>1 
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 
1        5            10           15 
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys 
       20           25            30 
<210>2 
<211>30 
<212>PRT 
<213>人工序列(Artificial Sequence) 
<220> 
<221>xaa 
<222>(29)..(29) 
<223>Xaa can be(GlyGlySer)n，(GlyGlyPro)n，(Gly)n 
or(Gly)nSer 
<400>2 
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 
1        5            10           15 
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys 
       20           25            30 
<210>3 
<211>35 
<212>PRT 
<213>人工序列(Artificial Sequence) 
<400>3 
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 
1        5            10           15 
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Ser Gly 
       20           25            30 
Gly Ser Cys 
     35 
<210>4 
<211>35 
<212>PRT 
<213>人工序列(Artificial Sequence) 
<400>4 
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 
1        5            10          15 
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly 
       20           25           30 
Gly Ser Cys 
   35 
<210>5 
<211>135 
<212>DNA 
<213>人工序列(Artificial Sequence) 
<220> 
<221>Other information 
<222>(1)..(135) 
<223>Systhetic cDNA for Ex4C 
<400>5 
ggtaccgacg acgacgacaa gcatggcgaa ggcaccttta ccagcgatct gagcaaacag   60 
atggaagaag aagcggtgcg tctgtttatt gaatggctga aaaatggcgg cagcggcggc  120 
agctgctagg aattc                                                   135 

Claims (11)

1.促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体，其特征是通过在促胰岛素分泌肽类似物的羧基末端半胱氨酸残基共价而成的同源二聚体，其中所述促胰岛素分泌肽类似物的序列选自
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln AlaAla Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys-OH，
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln AlaAla Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys-NH2，
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-OH，或
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-NH2，
其中Xaa选自：
A：(GlyGlySer)n，或(GlyGlyPro)n，其中n是1至5的整数；或
B：(Gly)n，或(Gly)n Ser，其中n是4至20的整数。
2.根据权利要求1的促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体，其特征是由羧基末端的半胱氨酸巯基经还原成二硫键而成的同源二聚体。
3.促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体，其特征是通过在促胰岛素分泌肽类似物的羧基末端半胱氨酸的巯基与SH-PEG-SH经还原形成PEG化的同源二聚体，其中所述促胰岛素分泌肽类似物的序列选自
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln AlaAla Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys-OH，
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln AlaAla Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys-NH2，
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-OH，或
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-NH2，
其中Xaa选自：
A：(GlyGlySer)n，或(GlyGlyPro)n，其中n是1至5的整数；或
B：(Gly)n，或(Gly)n Ser，其中n是4至20的整数。
4.根据权利要求3的促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体，其中所述PEG分子量为500-40000道尔顿。
5.促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体，其特征是通过在促胰岛素分泌肽类似物的羧基末端半胱氨酸的巯基与Mal-PEG-Mal经还原形成PEG化的同源二聚体，其中所述促胰岛素分泌肽类似物的序列选自
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln AlaAla Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys-OH，
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln AlaAla Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys-NH2，
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-OH，或
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-NH2，
其中Xaa选自：
A：(GlyGlySer)n，或(GlyGlyPro)n，其中n是1至5的整数；或
B：(Gly)n，或(Gly)n Ser，其中n是4至20的整数。
6.根据权利要求5的促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体，其中所述PEG分子量为500-40000道尔顿。
7.促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体，其特征是通过在促胰岛素分泌肽类似物的羧基末端半胱氨酸的巯基与OPSS-PEG-OPSS经还原形成PEG化的同源二聚体，其中所述促胰岛素分泌肽类似物的序列选自
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln AlaAla Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys-OH，
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln AlaAla Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Cys-NH2，
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-OH，或
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys-NH2，
其中Xaa选自：
A：(GlyGlySer)n，或(GlyGlyPro)n，其中n是1至5的整数；或
B：(Gly)n，或(Gly)n Ser，其中n是4至20的整数。
8.根据权利要求7的促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体，其中所述PEG分子量为500-40000道尔顿。
9.权利要求1-8之任一的促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体在制备具有促进胰岛素分泌的作用的药物中的应用。
10.权利要求1-8之任一的促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体在制备具有降低血糖的作用的药物中的应用。
11.权利要求1-8之任一的促胰岛素分泌肽类似物同源二聚体在制备治疗糖尿病的药物中的应用。
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Families Citing this family (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102718858B (zh) * 2011-03-29 2014-07-02 天津药物研究院 胰高血糖素样肽-1类似物单体、二聚体及其制备方法与应用
MX349869B (es) 2011-07-01 2017-08-17 Ngm Biopharmaceuticals Inc Composiciones, usos y metodos para tratamiento de trastornos y enfermedades metabolicas.
CN102949730A (zh) * 2011-09-16 2013-03-06 西藏海思科药业集团股份有限公司 特异结合glp-1受体的药物融合体
CN102949731A (zh) * 2011-09-16 2013-03-06 西藏海思科药业集团股份有限公司 与glp-2受体特异性结合的药物融合体
UY34347A (es) * 2011-09-26 2013-04-30 Novartis Ag Proteínas de función dual para tratar trastornos metabólicos
CN103087174B (zh) * 2011-11-03 2015-11-18 华东师范大学 一种glp-1衍生物dlg3312及其固相化学合成方法
AU2012356219B2 (en) * 2011-12-22 2016-03-31 Covx Technologies Ireland Limited Anti-diabetic compounds
TW201420606A (zh) 2012-08-22 2014-06-01 Lilly Co Eli 同源二聚體蛋白
CA2880929A1 (en) * 2012-09-07 2014-03-13 Sanofi Fusion proteins for treating a metabolic syndrome
EP3395358B1 (en) 2012-09-26 2019-11-06 Indiana University Research and Technology Corporation Insulin analog dimers
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
HK1214832A1 (zh) 2012-11-28 2016-08-05 恩格姆生物制药公司 用於代謝病症和疾病治療的組合物和方法
US9290557B2 (en) 2012-11-28 2016-03-22 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising variants and fusions of FGF19 polypeptides
AR099912A1 (es) 2012-12-21 2016-08-31 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas dobles de glp1 / gip o triples de glp1 / gip / glucagon
US9273107B2 (en) 2012-12-27 2016-03-01 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Uses and methods for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
MX383664B (es) 2012-12-27 2025-03-14 Ngm Biopharmaceuticals Inc Uso de un péptido para modular la homeostasis de los ácidos biliares o tratamiento de una enfermedad relacionada con los ácidos biliares.
CN104277113B (zh) * 2013-07-08 2017-09-26 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 抑制hiv感染的二价多肽
MX377380B (es) 2013-10-28 2025-03-10 Ngm Biopharmaceuticals Inc Modelos de cáncer y métodos asociados.
TW201609796A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 非醯化之艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
TW201609797A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
EP3080150B1 (en) 2013-12-13 2018-08-01 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
EP3738981A1 (en) 2014-01-24 2020-11-18 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Antibodies binding beta klotho domain 2 and methods of use thereof
MX2016009858A (es) 2014-02-21 2017-01-26 Medimmune Llc Fusiones anti proteína convertasa subtilisina/kexina tipo 9 (anti-pcsk9)n péptido 1 similar a glucagón (glp-1) y métodos de uso.
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
CN105017408B (zh) * 2014-04-30 2019-11-05 重庆派金生物科技有限公司 聚乙二醇化血小板生成素模拟肽同源四聚体及其用途
CN105085661A (zh) * 2014-05-04 2015-11-25 重庆派金生物科技有限公司 人胰高血糖素类似肽2（glp-2c）聚乙二醇化同源二聚体及其用途
US10398758B2 (en) 2014-05-28 2019-09-03 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Compositions comprising variants of FGF19 polypeptides and uses thereof for the treatment of hyperglycemic conditions
US10456449B2 (en) 2014-06-16 2019-10-29 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods and uses for modulating bile acid homeostasis and treatment of bile acid disorders and diseases
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
CN104311656B (zh) * 2014-10-14 2017-04-05 哈尔滨博翱生物医药技术开发有限公司 cFGF‑21蛋白及其在治疗类风湿关节炎中的应用
WO2016065106A1 (en) 2014-10-23 2016-04-28 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising peptide variants and methods of use thereof
CN104558150B (zh) * 2014-11-04 2017-12-15 广东药学院 一类生长激素释放激素类似肽及其在制备治疗不孕不育药物中的应用
US10434144B2 (en) 2014-11-07 2019-10-08 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods for treatment of bile acid-related disorders and prediction of clinical sensitivity to treatment of bile acid-related disorders
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
TW201706291A (zh) 2015-07-10 2017-02-16 賽諾菲公司 作為選擇性肽雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之新毒蜥外泌肽（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）衍生物
WO2017019957A2 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Binding proteins and methods of use thereof
KR102670157B1 (ko) * 2015-10-28 2024-05-29 주식회사유한양행 이중 작용 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물
KR102668200B1 (ko) 2015-10-28 2024-05-23 주식회사유한양행 지속형 fgf21 융합 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물
CA3003616C (en) 2015-11-09 2020-07-28 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods for treatment of bile acid-related disorders
KR20170080526A (ko) * 2015-12-31 2017-07-10 한미약품 주식회사 Fgf21 아날로그, fgf21 결합체, 및 이의 용도
EP3402811B1 (en) 2016-01-13 2022-03-30 Novo Nordisk A/S Egf(a) analogues with fatty acid substituents
CN107561168A (zh) * 2016-06-30 2018-01-09 山东新时代药业有限公司 一种聚乙二醇化促胰岛素分泌肽类似物的分析检测方法
CA3034399A1 (en) 2016-08-26 2018-03-01 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods of treating fibroblast growth factor 19-mediated cancers and tumors
BR112019009581A2 (pt) 2016-11-10 2019-10-08 Yuhan Corp composição farmacêutica para evitar ou tratar hepatite, fibrose hepática, e cirrose hepática que compreende proteínas de fusão
CN108226362B (zh) * 2016-12-21 2021-05-25 鲁南制药集团股份有限公司 一种聚乙二醇化促胰岛素分泌肽类似物中间体的分析检测方法
US10583174B2 (en) 2016-12-22 2020-03-10 Sanofi FGF21 compound / GLP-1R agonist combinations with optimized activity ratio
EP3592758A4 (en) * 2017-03-06 2021-04-14 Synvitrobio, Inc. PROCESSES AND SYSTEMS FOR CELL-FREE BIO-DISCOVERY OF NATURAL PRODUCTS
MX2019012331A (es) 2017-04-21 2020-01-23 Yuhan Corp Metodo para producir proteinas de doble funcion y sus derivados.
CN107253985B (zh) * 2017-06-23 2021-03-09 中国药科大学 一类长效化降糖肽的设计及其应用
AR112760A1 (es) 2017-07-19 2019-12-11 Novo Nordisk As Compuestos bifuncionales que comprenden un análogo de glp-1 y un análogo de egf(a)
MX2020003211A (es) * 2017-09-21 2020-09-21 Merck Patent Gmbh Proteina de fusion que comprende una porcion de fgf-18.
CN109836504B (zh) * 2017-11-24 2022-08-02 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的多结构域活性蛋白
CA3092860A1 (en) * 2018-03-06 2019-09-12 Pepvax, Inc. Nucleic acid molecules and methods of using the same
WO2019243557A1 (en) * 2018-06-21 2019-12-26 Sanofi Fgf21 compound / glp-1r agonist combinations with optimized activity ratio
CN111234000B (zh) * 2018-11-28 2023-05-26 鲁南制药集团股份有限公司 艾塞纳肽类似物
CN112898406B (zh) * 2019-10-12 2023-11-10 深圳纳福生物医药有限公司 不同构型的glp-1类似肽修饰二聚体及其制备方法在治疗ii型糖尿病中的应用
CN113728013B (zh) 2020-01-11 2022-06-14 北京质肽生物医药科技有限公司 Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物
CN115286705B (zh) * 2021-12-30 2024-05-10 长江大学 一种黄鳝成纤维细胞因子21重组蛋白及其制备方法和应用
WO2024123812A1 (en) 2022-12-05 2024-06-13 Shattuck Labs, Inc. Fusion proteins for the treatment of cardiometabolic diseases

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1925843A (zh) * 2003-12-02 2007-03-07 细胞免疫科学公司 生产单克隆抗体的方法和组合物
CN1960766A (zh) * 2004-04-15 2007-05-09 尼克塔治疗公司 新的g－csf轭合物
WO2009058734A1 (en) * 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6284727B1 (en) 1993-04-07 2001-09-04 Scios, Inc. Prolonged delivery of peptides
CN101712722A (zh) 2000-12-07 2010-05-26 伊莱利利公司 Glp-1融合蛋白
US7176278B2 (en) 2001-08-30 2007-02-13 Biorexis Technology, Inc. Modified transferrin fusion proteins
EP1997829A1 (en) 2001-12-21 2008-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US20070060512A1 (en) 2003-03-04 2007-03-15 Homayoun Sadeghi Dipeptidyl-peptidase protected protein
US20070161087A1 (en) 2003-05-29 2007-07-12 Wolfgang Glaesner Glp-1 fusion proteins
US7452966B2 (en) 2003-06-12 2008-11-18 Eli Lilly And Company GLP-1 analog fusion proteins
EP1641483B1 (en) 2003-06-12 2008-02-13 Eli Lilly And Company Fusion proteins
US8076288B2 (en) 2004-02-11 2011-12-13 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Hybrid polypeptides having glucose lowering activity
AP2081A (en) * 2004-06-18 2010-01-04 Ipf Pharmaceuticals Gmbh Oligomeric peptides and their use for the treatment of HIV infections
DE602005016946D1 (de) 2004-09-02 2009-11-12 Lilly Co Eli Muteine des fibroblasten-wachstumsfaktors 21
US7442682B2 (en) * 2004-10-19 2008-10-28 Nitto Denko Corporation Transepithelial delivery of peptides with incretin hormone activities
JP2008533104A (ja) * 2005-03-18 2008-08-21 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ Ｇｌｐ−１受容体の二量体ペプチドアゴニスト
PT1881850E (pt) 2005-05-13 2010-11-26 Lilly Co Eli Compostos peguilados de glp-1
DK1767545T3 (da) 2005-09-22 2010-03-15 Biocompatibles Uk Ltd GLP-1 (Glucagon-lignende peptid-1)-fusionspolypeptider med forøget peptidaseresistens
TWM317024U (en) 2006-07-25 2007-08-11 Longtech Systems Corp Brightness improved structure of lateral backlight for LCD
AU2008216265B2 (en) * 2007-02-15 2014-04-03 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
US8012931B2 (en) 2007-03-30 2011-09-06 Ambrx, Inc. Modified FGF-21 polypeptides and their uses
CA2693504A1 (en) * 2007-08-03 2009-02-12 Eli Lilly And Company Treatment for obesity
CN100587073C (zh) * 2008-03-24 2010-02-03 吉林农大生物反应器工程有限公司 人成纤维细胞生长因子-21的重组表达
JOP20190083A1 (ar) * 2008-06-04 2017-06-16 Amgen Inc بولي ببتيدات اندماجية طافرة لـfgf21 واستخداماتها

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1925843A (zh) * 2003-12-02 2007-03-07 细胞免疫科学公司 生产单克隆抗体的方法和组合物
CN1960766A (zh) * 2004-04-15 2007-05-09 尼克塔治疗公司 新的g－csf轭合物
WO2009058734A1 (en) * 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity

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