CN101801958B - 作为蛋白质激酶抑制剂的杂环酰胺化合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及如本文公开的式I杂环酰胺化合物：

Description

作为蛋白质激酶抑制剂的杂环酰胺化合物

发明领域

本发明涉及可作为蛋白质激酶抑制剂、调节剂或调制剂使用的化合物，含有此类化合物的医药组合物，以及使用此类化合物与组合物的治疗各种疾病方法，所述疾病例如：癌症、炎症、关节炎、病毒疾病、神经变性疾病例如阿耳滋海默氏疾病、心血管疾病及真菌疾病。

背景技术

蛋白质激酶为一种酶家族，其会催化蛋白质的磷酰化作用，特别是蛋白质中的特定酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的羟基。蛋白质激酶是许多种细胞过程的调节的枢纽，所述细胞过程包括新陈代谢作用、细胞增生、细胞分化及细胞存活。不受控制的增生为癌细胞的标志，且可以两种方式之一通过细胞分裂周期的失调来证明-造成刺激性基因活动过度或抑制性基因失活。蛋白质激酶抑制剂、调节剂或调制剂会改变激酶的功能，例如周期素依赖性激酶(CDK)、有丝分裂原活化蛋白质激酶(MAPK/ERK)、糖原合成酶激酶3(GSK3β)、检查点(Chk)激酶(例如CHK-1、CHK-2等)、AKT激酶、PDK-1、JNK等。蛋白质激酶抑制剂的实例在WO 02/22610A1中，以及由Y.Mettey等人于J.Med.Chem.，46：222-236(2003)中描述。

周期素依赖性激酶为丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶，其是细胞循环与细胞增生背后的驱动力。CDK功能的错误调节在许多重要的实体肿瘤中以高频率发生。个别CDK，例如CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6及CDK7、CDK8等，在细胞循环进展中发挥出独特的作用，并且可被分类为是G1S或G2M期酶。CDK2与CDK4是特别令人感兴趣的，因其活性频繁地在许多种人类癌症中被错误调节。CDK2活性是经过细胞循环的G1至S期的进程所需要的，并且CDK2为G1检查点的关键成份之一。检查点用以保持细胞循环事件的正确顺序，并允许细胞对侵入或对增生信号有响应，然而癌细胞中适当的检查点控制的丧失会助长肿瘤发生。CDK2途径会在肿瘤抑制基因功能(例如p52、RB及p27)与致癌基因活化作用(周期素E)的水平影响肿瘤发生。许多报告已证实，CDK2的共活化剂周期素E与抑制剂p27，两者分别过度或不足地表达于乳房癌、结肠癌、非小细胞肺癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌、非霍奇金氏淋巴瘤、卵巢癌及其它癌症中。它们的经改变的表达已被证实与增加的CDK2活性程度及不良总体存活相互关联。此项观察使得CDK2及其调节途径成为癌症治疗药品开发中引人注目的靶标。

许多腺苷5′-三磷酸(ATP)竞争性小有机分子以及肽已在文献中报道作为癌症潜在治疗的CDK抑制剂。U.S.6,413,974的第1栏第23行-第15栏第10行提供了各种CDK及其与各种癌症类型的关系的良好描述。黄酮吡啶醇(Flavopiridol，下文所示)为一种非选择性CDK抑制剂，其目前正在进行人类临床试验，A.M.Sanderowicz et al.，J.Clin.Oncol.16：2986-2999(1998)。

CDK的其它已知抑制剂，包括例如奥罗莫星(olomoucine)(J.Veselyet al.，Eur.J.Biochem.，224：771-786(1994))与洛斯可维汀(roscovitine)(l.Meijer et al.，Eur.J.Biochem.，243：527-536(1997))。U.S.6,107,305描述了某些作为CDK抑制剂的吡唑并[3，4-b]吡啶化合物。一种得自′305专利的说明性化合物为：

K.S.Kim et al.，J.Med.Chem.45：3905-3927(2002)和WO 02/10162公开了某些作为CDK抑制剂的氨基噻唑化合物。

另一系列蛋白质激酶是在细胞循环进展中扮演一项作为检查点的重要角色的那些。检查点会防止细胞循环在不适当时间下进展，例如响应DNA伤害，以及当细胞被遏制时保持细胞的新陈代谢平衡，而在一些情况中，当检查点的要求条件尚未被满足时，可导致细胞凋亡(程序性细胞死亡)。检查点控制可发生在G1期(在DNA合成之前)和在G2中，在进入有丝分裂中之前。

一系列检查点会监控基因组的完整性，而在感测DNA伤害时，此类″DNA伤害检查点″会在G₁和G₂期中阻断细胞循环进展，并减缓经过S期的进展。此作用使得DNA修补过程能够在发生基因组的复制及此基因物质的后续分离至新子代细胞中之前完成其工作。CHK1的失活已被证实会转导来自DNA-伤害感觉复合物的信号，以抑制周期素B/Cdc2激酶的活化作用，其会促进有丝分裂进入，以及消除因抗癌剂或内源DNA伤害所诱发的施加的DNA伤害所导致的G₂遏制，以及会造成优先杀死所形成检查点缺损细胞。参阅，例如，Peng et al.，Science，277：1501-1505(1997)；Sanchez et al.，Science，277：1497-1501(1997)，Nurse，Cell，91：865-867(1997)；Weinert，Science，277：1450-1451(1997)；Walworth et al.，Nature，363：368-371(1993)；和AI-Khodairy et al.，Molec.Biol.Cell.，5：147-160(1994)。

在癌细胞中检查点控制的选择性操控，可在癌症化学治疗与放射疗法使用法中提供广泛的应用，并且可另外提供人类癌症″基因组不稳定性″的共同标志，其是欲被开发作为癌细胞摧毁的选择性基础。多种因子将CHK1放置于DNA-伤害检查点控制中的中枢靶标上。此种及功能性上相关激酶例如CDS1/CHK2(一种最近发现会与CHK1合作调节S期进展的激酶)(参阅Zeng et al.，Nature，395：507-510(1998)；Matsuoka，Science，282：1893-1897(1998))的抑制剂的说明可提供有价值的新颖的癌症治疗实体。

另一组激酶为酪氨酸激酶。酪氨酸激酶可以是受体类型(具有胞外、跨膜及胞内功能部位)或非受体类型(完全为胞内)。受体类型酪氨酸激酶包含大量的跨膜受体，具有各种各样的生物学活性。事实上，受体类型酪氨酸激酶的约20种不同亚族已被确认。一种称为HER亚族的酪氨酸激酶亚族包含EGFR(HER1)、HER2、HER3及HER4。至目前为止经确认的此受体亚族的配位体包括上皮生长因子、TGF-α、双向调节因子、HB-EGF、β细胞素(betacellulin)及遗传素(heregulin)。此类受体类型酪氨酸激酶的另一亚族为胰岛素亚族，其包括INS-R、IGF-IR、IR和IR-R。PDGF亚族包括PDGF-α与β受体、CSFIR、c-kit及FLK-II。FLK家族包含激酶插入功能部位受体(KDR)、胎儿肝脏激酶-1(FLK-1)、胎儿肝脏激酶-4(FLK-4)以及似fms酪氨酸激酶-1(flt-1)。关于受体类型酪氨酸激酶的详细讨论，可参阅Plowman et al.，DN&P 7(6)：334-339，1994。

据认为至少一种非受体蛋白质酪氨酸激酶，意即LCK，会介导来自细胞表面蛋白质(Cd4)与交联抗-Cd4抗体交互作用的信号在T-细胞中的转导。非受体酪氨酸激酶的更详细讨论提供于Bolen，致癌基因，8：2025-2031(1993)中。酪氨酸激酶的非受体类型亦包含许多亚族，包括Src，Frk，Btk，Csk，Abl，Zap70，Fes/Fps，Fak，Jak，Ack和LIMK。各此类亚族进一步再分成不同受体。例如，Src亚族为最大的一种，并且包括Src，Yes，Fyn，Lyn，Lck，Blk，Hck，Fgr和Yrk。酶的Src亚族已被连结至系到肿瘤生成。关于酪氨酸激酶的非受体类型的更详细讨论，可参阅Bolen，致癌基因，8：2025-2031(1993)。

除了蛋白质激酶在细胞循环控制中的作用以外，其亦在血管生成中扮演一项决定性作用，其为通过从现有血管形成新微血管的机制。当需要时，此血管系统具有产生新微血管网络的可能性，以保持组织与器官的适当功能。但是，在成人中，血管生成相当地有限，仅发生在伤口愈合的过程，以及在月经期间子宫内膜的新血管生成作用中。另一方面，不期望的血管生成为数种疾病的标志，所述疾病例如视网膜病、牛皮癣、类风湿性关节炎、与老化有关的斑点变性及癌症(实体肿瘤)。已被证实涉及血管生成过程的蛋白质激酶，包括生长因子受体酪氨酸激酶家族的三个成员；VEGF-R2(血管内皮生长因子受体2，亦称为KDR(激酶插入功能部位受体)与FLK1)；FGF-R(成纤维细胞生长因子受体)；及TEK(亦称为Tie-2)。

仅被表达于内皮细胞上的VEGF-R2会结合有效血管原生长因子VEGF，且经过其胞内激酶活性的活化作用，介导后续信号转导。因此，预期VEGF-R2激酶活性的直接抑制，将会造成降低血管生成，即使在外源性VEGF存在下亦如此(参阅Strawn et al，Cancer Res.，56：3540-3545(1996))，其已以VEGF-R2的突变种证实，其未能介导信号转导。Millauer et al，Cancer Res.，56：1615-1620(1996)。此外，VEGF-R2显示在成人中，除了介导VEGF的血管生成活性之外，不具有功能。因此，预期VEGF-R2激酶活性的选择性抑制剂会显示极低的毒性。

同样地，FGFR会结合血管原生长因子aFGF与bFGF，且介导后续胞内信号转导。最近，已有人指出生长因子，例如bFGF，可在已达到一定大小的实体肿瘤中，在导致血管生成中扮演一个关键角色。Yoshiji et al.，Cancer Research，57：3924-3928(1997)。但是，与VEGF-R2不同，FGF-R在全身被表达于多种不同细胞类型中，并且可以或可以不在成人的其它正常生理过程中扮演重要角色。虽然如此，FGF-R激酶活性的小分子抑制剂的全身施用已被报告，在小鼠中阻断bFGF所导致的血管生成，不具有明显的毒性。Mohammad et al.，EMBOJournal，17：5996-5904(1998)。

TEK(亦称为Tie-2)为另一种仅被表达于内皮细胞上的受体酪氨酸激酶，其已被证实在血管生成中扮演一项角色。因子血管生成素-1的结合会造成TEK的激酶功能部位的自磷酰化作用，并且会造成信号转导过程，其显示会介导内皮细胞与周围内皮支持细胞的交互作用，从而帮助新形成血管的成熟。在另一方面，因子血管生成素-2显示会拮抗血管生成素-1对于TEK的作用，并瓦解血管生成。Maisonpierre et al.，Science，277：55-60(1997)。

激酶JNK归属于有丝分裂原活化蛋白质激酶(MAPK)超家族。JNK在炎性应答、应激应答、细胞增生、细胞凋亡及肿瘤发生上扮演一项决定性角色。JNK激酶活性可通过各种刺激而被活化，包括致炎细胞因子(TNF-α与白细胞介素-1)、淋巴细胞共刺激受体(CD28与CD40)、DNA-伤害性化学品、辐射及Fas发出信号。得自JNK被剔除小鼠的结果显示JNK涉及细胞凋亡诱发与T辅助细胞分化。

Pim-1为小的丝氨酸/苏氨酸激酶。Pim-1的高表达程度已在淋巴样与髓样恶性病症中被检出，并且在最近，Pim-1经确认为在前列腺癌中的预后标记物。K.Peltola，“Signaling in Cancer：Pim-1 Kinase and itsPartners”，Annales Universitatis Turkuensis，Sarja-Ser.D Osa-Tom.616，(2005年8月30日)，http://kirjasto.utu.fi/julkaisupalvelut/annaalit/2004/D616.html。Pim-1充作细胞存活因子，并且可防止恶性细胞中的细胞凋亡。K.Petersen Shay etal.，Molecular Cancer Research 3：170-181(2005)。

极光体激酶(极光体-A、极光体-B、极光体-C)为丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶，其与人类癌症例如结肠癌、乳房癌及其它实体肿瘤有关。据认为极光体-A(有时亦被称为AIK)与调节细胞循环的蛋白质磷酰化事件有关。具体地说，极光体-A可在有丝分裂期间，在控制染色体的精确分离上扮演一项角色。细胞循环的错误调节可能会导致细胞增生及其它异常。在人类结肠癌组织中，已发现极光体-A、极光体-B、极光体-C被过度表达(参阅Bischoff et al.，EMBO J.，17：3052-3065(1998)；Schumacher et al.，J.Cell Biol.143：1635-1646(1998)；Kimura et al.，J.Biol.Chem.，272：13766-13771(1997))。

c-Met是一种原致癌基因，它们编码肝细胞生长因子/分散因子(HGF/SF)的酪氨酸激酶受体。c-Met蛋白主要在上皮细胞中表达，并且由于其功能，其亦称为肝细胞生长因子受体或HGFR。当HGF/SF活化c-Met时，后者依次可活化许多激酶通路，包括从Ras至Raf至Mek至分裂素活化的蛋白质激酶ERK1至转录因子ETS1的通路。Met发信号已涉及人类癌症的病因学和恶性进程(参见Birchmeier et al.，NatureReviews Molecular Cell Biology，4：915-925(2003)；Zhang et al.，Journalof Cellular Biochemistry，88：408-417(2003)；以及Paumelle et al.，致癌基因，21：2309-2319(2002))。

激酶的AGC亚族在丝氨酸和苏氨酸残基处磷酸化它们的底物，并且参与许多公知的发信号过程，包括但不限于环磷腺苷发信号、对胰岛素的响应、细胞凋亡保护、二酰基甘油发信号、和蛋白质翻译的控制(Peterson et al.，Curr.Biol.1999，9，R521)。该亚族包括PKA，PKB(c-Akt)，PKC，PRK1，2，p70^S6K和PDK。

AKT(亦称为PKB或Rac-PKβ)，一种丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶，已经显示它在若干类型的癌症中过表达，并且是正常细胞功能的调节剂[(Khwaja，A.，Nature 1999，401，33-34)；(Yuan，Z.Q.，et al.，致癌基因2000，19，2324-2330)；(Namikawa，K.，et al.，J.Neurosci.2000，20，2875-2886，)]。AKT包含N-末端普列克底物蛋白同源(pleckstrinhomology，PH)区域、激酶区域和C-末端″尾部″区域。人AKT激酶的三种亚型(AKT-1、-2和-3)到目前为止已经被报道[(Cheng，J.Q.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1992，89，9267-9271)；(Brodbeck，D.et al.，J.Biol.Chem.1999，274，9133-9136)]。PH区域结合3-磷酸肌醇，其是在生长因子刺激时由磷脂酰肌醇3-激酶合成，所述生长因子例如磷脂酰肌醇(PDGF)、神经生长因子(NGF)和胰岛素样生长因子(IGF-1)[(Kulik et al.，Mol.Cell.Biol.，1997，17，1595-1606)；(Hemmings，B.A.，Science，1997，275，628-630)]。与PH区域结合的脂质促进了AKT易位到胞质膜，并且促进了由含有另一PH-区域的蛋白质激酶的磷酸化，对于AKT亚型1、2和3分别在PDK1的Thr308、Thr309和Thr305处。其次，仍然不清楚的是，为了产生完全活化的AKT酶，对于分别在AKT-1、-2和-3的C-末端尾部中，Ser473、Ser474或Ser472和磷酸化需要激酶。

一旦集中到膜上，AKT会在细胞中介导若干功能，包括胰岛素的代谢作用(Calera，M.R.et al.，J.Biol.Chem.1998，273，7201-7204)、分化和/或增生的诱导、蛋白合成和应激响应(Alessi，D.R.et al.，Curr.Opin.Genet.Dev.1998，8，55-62)。

在损伤和疾病中均显示有改变的AKT调节的证据，最重要的作用在癌症中。AKT的第一说明是与人卵巢癌有关，其中AKT的表达有15％病例的增加(Cheng，J.Q.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1992，89，9267-9271)。还发现在12％的胰腺癌中有过表达(Cheng，J.Q.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1996，93，3636-3641)。已证实，AKT-2在12％的卵巢癌中过表达，并且在50％的未分化肿瘤中AKT的增加非常常见，表明AKT还可能与肿瘤侵袭有关(Bellacosa，et al.，Int.J.Cancer 1995，64，280-285)。

PKA(亦称为cAMP-依赖性蛋白质激酶)已显示调节许多生命功能，包括能量代谢、基因转录、增生、分化、复制功能、分泌、神经活动、记忆、伸缩性和活动力(Beebe，S.J.，Semin.Cancer Biol.1994，5，285-294)。PKA是一种四聚体全酶，它含有与同二聚体调节亚单位(其发挥抑制催化亚单位的作用)结合的两个催化亚单位。在结合cAMP时(酶活化)，该催化亚单位上从调节亚单位分离，产生活化的丝氨酸/苏氨酸激酶(McKnight，G.S.et al.，Recent Prog.Horm.Res.1988，44，pp.307)。该催化亚单位的三种亚型(C-α、C-β和C-γ)迄今已有报道(Beebe，S.J.et al.，J.Biol.Chem.1992，267，25505-25512)，C-α亚单位为研究最为广泛的，主要是由于它在原发性和转移性黑素瘤中的高表达(Becker，D.et al.，Oncogene 1990，5，1133)。到目前为止，调节C-α亚单位活性的策略包括使用抗体、通过靶向调节二聚体来阻断PKA活性的分子以及反义寡核苷酸表达。

核糖体蛋白质激酶p70^S6K-1和-2也是蛋白质激酶的AGC亚族的成员，并且催化该核糖体蛋白S6的磷酸化和后续活化，该核糖体蛋白S6与编码蛋白合成结构的组分的mRNA的翻译性上调节有关。这些mRNA在它们的5′转录起始位点含有寡嘧啶(oligopyrimidine)通道，称为5′TOP，其已显示对于它们在翻译水平的调节是必需的(Volarevic，S.et al.，Prog.Nucleic Acid Res.Mol.Biol.2001，65，101-186)。p70^S6K依赖性S6磷酸化在对多种主要通过PI3K通路的激素和生长因子响应中受到刺激(Coffer，P.J.et al.，Biochem.Biophys.Res.Commun，1994 198，780-786)，其可能在mTOR的调节以下，因为雷帕霉素发挥抑制p70^S6K活性并阻断蛋白质合成的作用，特别是由于这些编码核糖体蛋白的mRNA的翻译的下调节(Kuo，C.J.et al.，Nature 1992，358，70-73)。

体外PDK1催化了p70催化域的激活环中的Thr252的磷酸化，该p70催化域对于p70活化是必不可少的(Alessi，D.R.，Curr.Biol.，1998，8，69-81)。雷帕霉素的应用以及来自果蝇属的dp70S6K和来自小鼠的dp70S6K的基因缺失研究已经确立了p70在细胞生长和增生发信号中的重要作用。

3-磷酸肌醇-依赖性蛋白质激酶-1(PDK1)在调节许多属于蛋白质激酶的AGC亚族的激酶的活性中发挥关键作用(Alessi，D.et al.，Biochem.Soc.Trans 2001，29，1)。这些包括蛋白质激酶B亚型(PKB，亦称为AKT)、p70核糖体S6激酶(S6K)(Avruch，J.et al.，Prog.Mol.Subcell.Biol.2001，26，115)、和p90核糖体S6激酶(Frodin，M.et al.，EMBO J.2000，19，2924-2934)。PDK1介导的发信号在对胰岛素和生长因子的响应中被活化，造成细胞与细胞外基质附着(整联蛋白发信号)。一旦被活化，这些酶通过使关键调节蛋白磷酸化来介导许多不同的细胞性活动，所述调节蛋白在控制例如细胞存活、生长、增生和葡萄糖调节的进程中发挥重要作用[(Lawlor，M.A.et al.，J.Cell Sci.2001，114，2903-2910)、(Lawlor，M.A.et al.，EMBO J.2002，21，3728-3738)]。PDK1是一种556个氨基酸的蛋白，具有N-末端催化域和C-末端普列克底物蛋白同源(PH)区域，其通过在它们的活化环使这些激酶磷酸化而活化它的底物(Belham，C.et al.，Curr.Biol.1999，9，R93-R96)。许多人类癌症包括前列腺癌和NSCL已经提高了PDK1发信号通道功能，所述功能起因于许多不同的遗传事件，例如PTEN突变和某些关键调节蛋白的过表达[(Graff，J.R.，Expert Opin.Ther.Targets 2002，6，103-113)、(Brognard，J.，et al.，Cancer Res.2001，61，3986-3997)]。作为一种潜在机制以治疗癌症的PDK1抑制作用已由PTEN负性人癌细胞系(U87MG)与定向抑制PDK1的反义寡核苷酸的转染所证实。PDK1蛋白水平上引起的减小导致细胞增生和存活的减少(Flynn，P.，et al.，Curr.Biol.2000，10，1439-1442)。因此，在其它治疗中，PDK1的ATP结合位点抑制剂的设计为癌症化学治疗提供了引人注目的靶标。

不同范围的癌细胞基因型已被归因于细胞生理学中的以下六种基本改变的表现型式：在生长发信号中的自给自足、细胞凋亡的逃避、对生长抑制发信号不敏感、无限复制的可能性、持续的血管生成、以及引起转移的组织侵袭(Hanahan，D.et al.，Cell 2000，100，57-70)。PDK1是PI3K发信号通道的关键调节剂，其调节包括生长、增生和存活的许多细胞功能。结果，对于癌症进程而言，此通道的抑制作用可能影响该六种定义的需求的四种或更多。这样，预期PDK1抑制剂将会影响非常宽范围内的人类癌症的生长。

特别地，P13K通道活性的水平增加直接与许多人类癌症的发展、侵袭性抗拒状态(对化学治疗的获得性耐受)的进程、和预后不良有关。这种增加的活性已被归因于一系列的关键事件，包括负性通道调节剂例如磷酸酯酶PTEN的活性降低、正性通道调节剂例如Ras的活化突变、以及通道本身组分例如PKB的过表达，实例包括：脑(神经胶质瘤)、乳腺、结肠、头和颈、肾、肺、肝、黑素瘤、卵巢、胰腺、前列腺、肉瘤、甲状腺[(Teng，D.H.et al.，Cancer Res.，1997 57，5221-5225)、(Brognard，J.et al.，Cancer Res.，2001，61，3986-3997)、(Cheng，J.Q.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.1996，93，3636-3641)、(Int.J.Cancer 1995，64，280)、(Graff，J.R.，Expert Opin.Ther.Targets 2002，6，103-113)、(Am.J.Pathol.2001，159，431)]。

另外，通过该通道的基因敲除、基因敲打(knockdown)、显性负相研究和小分子抑制剂而降低的通道功能已被证实会逆转许多体外的癌症表型(某些研究还被证实在体内有相似作用)，例如在一系列细胞系中阻断增生、减小存活率和使癌细胞对已知化学治疗敏感，代表性的有以下癌症：胰腺癌[(Cheng，J.Q.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.1996，93，3636-3641)，(Neoplasia 2001，3，278)]、肺癌[(Brognard，J.et al.，CancerRes.2001，61，3986-3997)，(Neoplasia 2001，3，278)]、卵巢癌[(Hayakawa，J.et al.，Cancer Res.2000，60，5988-5994)，(Neoplasia 2001，3，278)]、乳腺癌(Mol.Cancer Ther.2002，1，707)、结肠癌[(Neoplasia 2001，3，278)，(Arico，S.et al.，J.Biol.Chem.2002，277，27613-27621)]、颈部癌(Neoplasia 2001，3，278)、前列腺癌[(Endocrinology 2001，142，4795)，(Thakkar，H.et al.J.Biol.Chem.2001，276，38361-38369)，(Chen，X.etal.，Oncogene 2001，20，6073-6083)]和脑癌(成胶质细胞瘤)[(Flynn，P.etal.，Curr.Biol.2000，10，1439-1442)]。

分裂素-活化的-蛋白质激酶-活化的蛋白质激酶2(MAPKAP K2或MK2)介导多重p38 MAPK-依赖性细胞应答。MK2是一种重要的细胞内细胞因子生成的调节剂，该细胞因子例如肿瘤坏死因子α(TNFa)、白细胞介素6(IL-6)和干扰素γ(IFNg)，它们与许多急性和慢性炎性疾病例如类风湿性关节炎和炎性肠病有关。MK2位于非刺激细胞的核中，并且在刺激时，它易位于细胞质，并且磷酸化和活化马铃薯球蛋白(tuberin)和HSP27。MK2还与心力衰竭、脑局部缺血损伤、应激抗性调节和TNF-α的生成有关(参见Deak et al.，EMBO.17：4426-4441(1998)；Shi et al.，Biol.Chem.383：1519-1536(2002)；Staklatvala.，Curr.Opin.Pharmacol.4：372-377(2004)；以及Shiroto et al.，J.Mol.CellCardiol.38：93-97(2005))。

国际公开WO 2005/115146涉及哌嗪衍生物以及它们在控制害虫中的用途。

国际公开WO 2004/002948涉及酰胺化合物，它们在2型辅助T细胞中可有效抑制白细胞介素-4产生，可用作缓激肽(bradykinin)B1受体拮抗作用。国际公开WO 2003/045921涉及作为载脂蛋白B抑制剂的杂环酰胺化合物。均于2006年10月31日提交的美国临时申请序列号60/855,421和60/855,422涉及苯胺基哌嗪衍生物及其使用方法。于2007年6月5日提交的美国申请序列号11/758,243涉及作为蛋白质激酶抑制剂的咪唑并吡嗪类。

为了治疗或预防与异常细胞增生有关的疾病状态，需要有有效的蛋白质激酶的抑制剂。此外，具有针对靶激酶的高亲和力以及对其它蛋白质激酶高选择性的激酶抑制剂是令人期待的。可以容易合成并且是细胞增生的有效抑制剂的小分子化合物是例如以下的那些，它们是一种或多种蛋白质激酶的抑制剂，该激酶例如CHK1、CHK2、VEGF(VEGF-R2)、Pim-1、PDK-1、CDKs或CDK/细胞周期蛋白复合物以及受体和非受体酪氨酸激酶。

发明概述

在许多实施方案中，本发明提供了新颖种类的杂环酰胺化合物，包含一种或多种此类化合物的医药组合物，以及使用此类化合物治疗或预防增生疾病、抗增生病症、炎症、关节炎、神经学或神经变性疾病、心血管疾病、秃发症、神经疾病、局部缺血损伤、病毒疾病或真菌疾病的方法。

为此，在一个方面，本发明提供了式(I)化合物：

式I

或其药学可接受的盐或酯；其中：

环A选自芳基和杂芳基，其中当各个所述的芳基和杂芳基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基可任选与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元芳基、杂环基、杂环烯基或杂芳基环；

M是N或者N-氧化物；

X、Y和Z独立地选自N、N-氧化物和C(R)，条件是X、Y和Z中仅有不超过1个可以是N或N-氧化物；

T是O、S或-NR⁴；

各个R独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、杂环烯基、芳基、杂芳基、-NR⁴R⁵、羟基、烷氧基、-SR⁴、-S(＝O)R⁴、-S(＝O)₂R⁴、-C(＝O)R⁴、-C(＝O)OR⁴、-C(＝O)NR⁴R⁵、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂R⁴、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂R⁴、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵、-S(＝O)₂R⁴R⁵、-S(＝O)R⁴R⁵、-S(＝O)₂NR⁴R⁵、-S(＝O)₂OR⁴、-NR⁴C(＝O)NR⁴R⁵、-NR⁴C(＝O)R⁴、-NR⁴C(＝O)OR⁴、-NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵、-NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵C(＝O)NR⁴R⁵、-NR⁴OR⁴和-NR⁴NR⁴R⁵；

R¹选自-C(＝O)N(R⁴)芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂环基、-C(＝O)N(R⁴)杂环烯基、-N(R⁴)C(＝O)芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂环基、-N(R⁴)C(＝O)杂环烯基、-N(R⁴)C(＝O)N(R⁴)芳基、芳基、杂环基、杂环烯基和杂芳基，其中各个R¹杂环基、杂环烯基和杂芳基含有至少一个氮环原子，并且其中当各个R¹杂环基、杂环烯基、芳基、杂芳基，以及-C(＝O)N(R⁴)芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂环基、-C(＝O)N(R⁴)杂环烯基、-N(R⁴)C(＝O)芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂环基和-N(R⁴)C(＝O)杂环烯基的该“杂环基”、“杂环烯基”、“芳基”和“杂芳基”部分在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基可任选与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂环烯基或杂芳基环；

R²是H或烷基；

R³选自杂环基、杂环烯基、芳基、杂芳基、-OR⁴、-SR⁴、-S(＝O)R⁴、-S(＝O)₂R⁴和-NR⁴R⁵；

各个R⁴和R⁵独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、杂环烯基、芳基和杂芳基；

条件是当R¹是吗啉基时，R不同于任选取代的烷氧基或者任选取代的-N(烷基)₂。

在另一方面，本发明提供了式(I)化合物：

式I

或其药学可接受的盐或酯；其中：

环A选自芳基和杂芳基，其中当各个所述的芳基和杂芳基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基可任选与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元芳基、杂环基、杂环烯基或杂芳基环；

M是N或者N-氧化物；

X、Y和Z独立地选自N、N-氧化物和C(R)，条件是X、Y和Z中仅有不超过1个可以是N或N-氧化物；

T是O、S或-NR⁴；

各个R独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、杂环烯基、芳基、杂芳基、-NR⁴R⁵、羟基、烷氧基、-SR⁴、-S(＝O)R⁴、-S(＝O)₂R⁴、-C(＝O)R⁴、-C(＝O)OR⁴、-C(＝O)NR⁴R⁵、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂R⁴、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂R⁴、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵、-C(＝O)NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵、-S(＝O)₂R⁴R⁵、-S(＝O)R⁴R⁵、-S(＝O)₂NR⁴R⁵、-S(＝O)₂OR⁴、-NR⁴C(＝O)NR⁴R⁵、-NR⁴C(＝O)R⁴、-NR⁴C(＝O)OR⁴、-NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵、-NR⁴S(＝O)₂NR⁴R⁵C(＝O)NR⁴R⁵、-NR⁴OR⁴和-NR⁴NR⁴R⁵；

R¹选自-C(＝O)N(R⁴)芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂环基、-C(＝O)N(R⁴)杂环烯基、-N(R⁴)C(＝O)芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂环基、-N(R⁴)C(＝O)杂环烯基、芳基、杂环基、杂环烯基和杂芳基，其中各个R¹杂环基、杂环烯基和杂芳基含有至少一个氮环原子，并且其中当各个R¹杂环基、杂环烯基、芳基、杂芳基，以及-C(＝O)N(R⁴)芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂环基、-C(＝O)N(R⁴)杂环烯基、-N(R⁴)C(＝O)芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂环基和-N(R⁴)C(＝O)杂环烯基的该“杂环基”、“杂环烯基”、“芳基”和“杂芳基”部分在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基可任选与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂环烯基或杂芳基环；

R²是H或烷基；

R³选自杂环基、杂环烯基、芳基、杂芳基、-OR⁴、-SR⁴、-S(＝O)R⁴、-S(＝O)₂R⁴和-NR⁴R⁵；

各个R⁴和R⁵独立地选自H、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、杂环烯基、芳基和杂芳基；

条件是当R¹是吗啉基时，R不同于任选取代的烷氧基或者任选取代的-N(烷基)₂。

在一个方面，式I化合物可作为蛋白质激酶抑制剂使用。

在另一方面，式I化合物可用于治疗或预防增生疾病、抗增生病症、炎症、关节炎、神经学或神经变性疾病、心血管疾病、秃发症、神经疾病、局部缺血损伤、病毒疾病或真菌疾病(分别为一种“病情”)。

在另一方面，本发明提供了医药组合物，其包含至少一种式I化合物和药学可接受的载体。该组合物可用于治疗或预防患者的病情。

在再另一方面，本发明提供了治疗患者的病情的方法，该方法包括给患者施用有效量的至少一种式I化合物。

在另一方面，本发明提供了治疗患者癌症的方法，该方法包括给患者施用有效量的至少一种式I化合物和至少一种不为式I化合物的另外的抗癌剂。

发明详述

在一个实施方案中，本发明提供了式(I)化合物和/或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯和前药。式I化合物可用于治疗或预防患者的病情。

当使用于上文及整个本公开内容时，下列术语，除非另有指出，否则应明了具有下述意义：

″患者″包括人类与动物两者。

″哺乳动物″表示人类及其它哺乳动物。

″烷基″表示脂族烃基，其可为直链或支链，且包含约1至约20个碳原子在此链中。优选的烷基含有约1至约12个碳原子在此链中。更优选的烷基含有约1至约6个碳原子在此链中。支链表示一个或多个低级烷基，例如甲基、乙基或丙基，被连接至线性烷基链。″低级烷基″表示具有约1至约6个碳原子的基团在此链中，其可为直链或支链。″烷基″可未被取代，或任选被一个或多个可为相同或不同的取代基取代，各取代基独立地选自卤素、烷基、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基、氰基、羟基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)、-N(烷基)₂、-O-C(O)-烷基、-O-C(O)-芳基、-O-C(O)-环烷基、羧基及-C(O)O-烷基。适当烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正-丙基、异丙基及叔丁基。

″烯基″表示含有至少一个碳-碳双键的脂族烃基，且其可为直链或支链，并包含约2至约15个碳原子在此链中。优选的烯基具有约2至约12个碳原子在此链中；且更优选的为约2至约6个碳原子在此链中。支链表示一个或多个低级烷基，例如甲基、乙基或丙基，被连接至线性烯基链。″低级烯基″表示约2至约6个碳原子在此链中，其可为直链或支链。″烯基″可未被取代，或任选被一个或多个可为相同或不同的取代基取代，各取代基独立地选自卤素、烷基、杂环基、杂芳基、芳基、环烷基、氰基、烷氧基及-S(烷基)。适当烯基的非限制性实例包括乙烯基、丙烯基、正-丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正-戊烯基、辛烯基及癸烯基。

″亚烷基″表示通过从上文所定义的烷基移除一个氢原子所获得的双官能性基团。亚烷基的非限制性实例包括亚甲基、亚乙基及亚丙基。

″炔基″表示含有至少一个碳-碳叁键的脂族烃基，且其可为直链或支链，并包含约2至约15个碳原子在此链中。优选的炔基具有约2至约12个碳原子在此链中；且更优选的为约2至约4个碳原子在此链中。支链表示一个或多个低级烷基，例如甲基、乙基或丙基，被连接至线性炔基链。″低级炔基″表示约2至约6个碳原子在此链中，其可为直链或支链。适当炔基的非限制性实例包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基及3-甲基丁炔基。″炔基″可未被取代，或任选被一个或多个可为相同或不同的取代基取代，各取代基独立地选自烷基、芳基及环烷基。

″芳基″表示芳族单环状或多环状环系统，包含约6至约14个碳原子，优选的为约6至约10个碳原子。芳基可任选被一个或多个″环系统取代基″取代，其可为相同或不同，且均如本文定义。适当芳基的非限制性实例包括苯基与萘基。

″杂芳基″表示芳族单环状或多环状环系统，包含约5至约14个环原子，优选的为约5至约10个环原子，其中一个或多个环原子为碳以外的元素，例如氮、氧或硫，单独或并用。优选的杂芳基含有约5至约6个环原子。″杂芳基″可任选被一个或多个″环系统取代基″取代，其可为相同或不同，且均如本文定义。杂芳基字根名称前的前缀氮杂、氧杂或硫杂，表示至少一个氮、氧或硫原子分别作为环原子存在。杂芳基的氮原子可任选被氧化成其相应的N-氧化物。″杂芳基″亦可包括经稠合至如上文定义芳基的如上文定义杂芳基。适当杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶酮(包括N-取代的吡啶酮)、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喔啉基、酞嗪基、羟吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并噻唑基等。″杂芳基″一词亦指部分饱和的杂芳基部分基团，例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基等。

″芳烷基″或″芳基烷基″表示芳基-烷基-基团，其中芳基与烷基均如前文所述。优选的芳烷基包含低级烷基。适当芳烷基的非限制性实例包括苄基、2-苯乙基及萘基甲基。与母体部分基团的键连接是通过烷基。

″烷基芳基″表示烷基-芳基-基团，其中烷基与芳基均如前文所述。优选的烷基芳基包含低级烷基。适当烷基芳基的非限制性实例为甲苯基。与母体部分基团的键连接是通过芳基。

″环烷基″表示非芳族单-或多环状环系统，包含约3至约10个碳原子，优选的为约5至约10个碳原子。优选的环烷基环含有约5至约7个环原子。环烷基可任选被一个或多个″环系统取代基″取代，其可为相同或不同，且均如上文定义。适当单环状环烷基的非限制性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。适当多环状环烷基的非限制性实例包括1-十氢萘基、降冰片基、金刚烷基等。

″环烷基烷基″表示如上文定义的环烷基部分基团，通过烷基部分基团(上文定义)连结至母体核心。适当环烷基烷基的非限制性实例包括环己基甲基、金刚烷基甲基等。

″环烯基″表示非芳族单或多环状环系统，包含约3至约10个碳原子，优选的为约5至约10个碳原子，其含有至少一个碳-碳双键。优选的环烯基环含有约5至约7个环原子。环烯基可任选被一个或多个″环系统取代基″取代，其可为相同或不同，且均如上文定义。适当单环状环烯基的非限制性实例包括环戊烯基、环己烯基、环庚-1，3-二烯基等。适当多环状环烯基的非限制性实例为降冰片烯基。

″环烯基烷基″表示如上文定义的环烯基部分基团，通过烷基部分基团(上文定义)连结至母体核心。适当环烯基烷基的非限制性实例包括环戊烯基甲基、环己烯基甲基等。

″卤素″表示氟、氯、溴或碘。优选的为氟、氯及溴。

″环系统取代基″表示连接至芳族或非芳族环系统的取代基，其例如置换环系统上的有效氢。环系统取代基可为相同或不同，各独立地选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基芳基、杂芳烷基、杂芳烯基、杂芳基炔基、烷基杂芳基、羟基、羟烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰基、芳酰基、卤素、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷硫基、芳基硫基、杂芳基硫基、芳烷硫基、杂芳烷基硫基、环烷基、杂环基、-C(＝N-CN)-NH₂、-C(＝NH)-NH₂、-C(＝NH)-NH(烷基)、Y₁Y₂N-、Y₁Y₂N-烷基-、Y₁Y₂NC(O)-、Y₁Y₂NSO₂-和-SO₂NY₁Y₂，其中Y₁与Y₂可为相同或不同，且独立地选自氢、烷基、芳基、环烷基及芳烷基。″环系统取代基″亦可表示单一部分基团，其同时在环系统的两个相邻碳原子上，置换两个有效氢(在每一个碳上的一个H)。此种部分基团的实例为亚甲二氧基、亚乙二氧基、-C(CH₃)₂-等，其形成例如以下部分基团：

″杂芳烷基″表示如上文定义的杂芳基部分基团，通过烷基部分基团(上文定义)连结至母体核心。适当杂芳基的非限制性实例包括2-吡啶基甲基、喹啉基甲基等。

″杂环基″表示非芳族饱和单环状或多环状环系统，包含约3至约10个环原子，优选的为约5至约10个环原子，其中在此环系统中的一个或多个原子为碳以外的元素，例如氮、氧或硫，单独或并用。没有相邻氧和/或硫原子存在于此环系统中。优选的杂环基含有约5至约6个环原子。在杂环基字根名称前的前缀氮杂、氧杂或硫杂，表示至少一个氮、氧或硫原子分别作为环原子存在。杂环基环中的任何-NH可以被保护成例如-N(Boc)、-N(CBz)、-N(Tos)等而存在；此种保护亦被视为本发明的一部分。杂环基可任选被一个或多个″环系统取代基″取代，其可为相同或不同，且均如本文定义。杂环基的氮或硫原子可任选被氧化成其相应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。适当单环状杂环基环的非限制性实例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、噻唑烷基、1，4-二氧六环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、内酰胺、内酯等。″杂环基″亦可表示单一部分基团(例如羰基)，其系同时置换环系统的相同碳原子上的两个有效氢。此种部分基团的实例为吡咯烷酮：

″杂环基烷基″表示如上文定义的杂环基部分基团，通过烷基部分基团(上文定义)连结至母体核心。适当杂环基烷基的非限制性实例包括哌啶基甲基、哌嗪基甲基等。

″杂环烯基″表示非芳族单环状或多环状环系统，包含约3至约10个环原子，优选的为约5至约10个环原子，其中在此环系统中的一个或多个原子为碳以外的元素，例如氮、氧或硫原子，单独或并用，且其含有至少一个碳-碳双键或碳-氮双键。没有相邻氧和/或硫原子存在于此环系统中。优选的杂环烯基环含有约5至约6个环原子。在杂环烯基字根名称前的前缀氮杂、氧杂或硫杂，表示至少一个氮、氧或硫原子分别作为环原子存在。杂环烯基可任选被一个或多个环系统取代基取代，其中″环系统取代基″如上文定义。杂环烯基的氮或硫原子可任选被氧化成其相应的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。适当杂环烯基的非限制性实例包括1，2，3，4-四氢吡啶基、1，2-二氢吡啶基、1，4-二氢吡啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、1，4，5，6-四氢嘧啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、2-咪唑啉基、2-吡唑啉基、二氢咪唑基、二氢噁唑基、二氢噁二唑基、二氢噻唑基、3，4-二氢-2H-吡喃基、二氢呋喃基、氟二氢呋喃基、7-氧杂双环并[2.2.1]庚烯基、二氢噻吩基、二氢硫代吡喃基等。″杂环烯基″亦可表示单一部分基团(例如羰基)，其同时置换环系统的相同碳原子上的两个有效氢。此种部分基团的实例为吡咯烷酮：

″杂环烯基烷基″表示如上文定义的杂环烯基部分基团，通过烷基部分基团(上文定义)连结至母体核心。

应注意的是，在本发明含杂原子的环系统中，没有羟基在邻近N、O或S的碳原子上，以及没有N或S基团在邻近另一个杂原子的碳上。因此，例如在以下环中：

没有-OH直接连接至标示为2与5的碳。

亦应注意的是，互变异构形式，例如以下部分基团：

在本发明的某些实施方案中，被认为是相等的。

″炔基烷基″表示炔基-烷基-基团，其中炔基与烷基均如前文所述。优选的炔基烷基含有低级炔基与低级烷基。与母体部分基团的键连接是通过烷基。适当炔基烷基的非限制性实例包括炔丙基甲基。

″杂芳烷基″表示杂芳基-烷基-基团，其中杂芳基与烷基均如前文所述。优选的杂芳烷基含有低级烷基。适当芳烷基的非限制性实例包括吡啶基甲基与喹啉-3-基甲基。与母体部分基团的键连接是通过烷基。

″羟烷基″表示HO-烷基-基团，其中烷基如前文定义。优选的羟烷基含有低级烷基。适当羟烷基的非限制性实例包括羟甲基与2-羟乙基。

″酰基″表示H-C(O)-、烷基-C(O)-或环烷基-C(O)-基团，其中各种基团均如前文所述。与母体部分基团的键连接是通过羰基。优选的酰基含有低级烷基。适当酰基的非限制性实例包括甲酰基、乙酰基及丙酰基。

″芳酰基″表示芳基-C(O)-基团，其中芳基如前文所述。与母体部分基团的键连接是通过羰基。适当基团的非限制性实例包括苯甲酰基与1-萘甲酰基。

″烷氧基″表示烷基-O-基团，其中烷基如前文所述。适当烷氧基的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基及正-丁氧基。与母体部分基团的键连接是通过醚氧。

″芳氧基″表示芳基-O-基团，其中芳基如前文所述。适当芳氧基的非限制性实例包括苯氧基与萘氧基。与母体部分基团的键连接是通过醚氧。

″芳烷氧基″表示芳烷基-O-基团，其中芳烷基如前文所述。适当芳烷氧基的非限制性实例包括苄氧基与1-或2-萘甲氧基。与母体部分基团的键连接是通过醚氧。

″烷硫基″表示烷基-S-基团，其中烷基如前文所述。适当烷硫基的非限制性实例包括甲硫基与乙硫基。与母体部分基团的键连接是通过硫。

″芳基硫基″表示芳基-S-基团，其中芳基如前文所述。适当芳基硫基的非限制性实例包括苯硫基与萘基硫基。与母体部分基团的键连接是通过硫。

″芳烷硫基″表示芳烷基-S-基团，其中芳烷基如前文所述。适当芳烷硫基的非限制性实例为苄硫基。与母体部分基团的键连接是通过硫。

″烷氧羰基″表示烷基-O-CO-基团。适当烷氧羰基的非限制性实例包括甲氧羰基与乙氧羰基。与母体部分基团的键连接是通过羰基。

″芳氧基羰基″表示芳基-O-C(O)-基团。适当芳氧基羰基的非限制性实例包括苯氧基羰基与萘氧基羰基。与母体部分基团的键连接是通过羰基。

″芳烷氧基羰基″表示芳烷基-O-C(O)-基团。适当芳烷氧基羰基的非限制性实例为苄氧羰基。与母体部分基团的键连接是通过羰基。

″烷基磺酰基″表示烷基-S(O₂)-基团。优选的基团为其中烷基为低级烷基者。与母体部分基团的键连接是通过磺酰基。

″芳基磺酰基″表示芳基-S(O₂)-基团。与母体部分基团的键连接是通过磺酰基。

″被取代″一词表示在所指定原子上的一个或多个氢被选自所指示的基团取代，其条件是，不会超过所指定原子在存在情况下的正常价键，且此取代会产生稳定化合物。取代基和/或变量的组合，只有在此种组合会产生稳定化合物下才可允许。所谓″稳定化合物″或″稳定结构″，是指化合物足够强健而从反应混合物中留存着，分离至有用纯度，以及调配成有效治疗剂。

″任选被取代″一词表示以特定基团、原子团或部分基团的可选择取代。

关于化合物的″纯化的″、″呈纯化形式″或″呈分离和纯化形式″术语，是指该化合物在从合成方法(例如自反应混合物)或天然来源或其组合分离后的物理状态。因此，关于化合物的″纯化的″、″呈纯化形式″或″呈分离与纯化形式″术语，是指该化合物在得自纯化方法或本文中所述或本领域技术人员公知的方法(例如色谱层析、重结晶作用等)后的物理状态，其有足够纯度，可通过本文中所述或本领域技术人员公知的标准分析技术特征鉴定。

亦应注意的是，在本文的上下文、方案、实施例及表格中，任何具有未满足价键的碳以及杂原子，被假定为具有足够数目的氢原子，以满足该价键。

当化合物中的官能基被称为″保护的″时，这表示该基团呈经修饰的形式，以在化合物接受反应时，排除该保护的位置处的不想要副反应。适当保护基将由本领域技术人员以及参考标准教科书而明了，例如T.W.Greene et al，Protective Groups in organic Synthesis(1991)，Wiley，New York。

当任何变数(例如芳基、杂环、R²等)在任何组成或式I-VI中出现超过一次时，其在各存在处的定义与其在每一个其它存在处的定义无关。

在本文中使用的″组合物″一词，意欲涵盖一种以特定量包含特定成份的产物，以及直接或间接由特定成份以特定量组合所形成的任何产物。

本发明化合物的前药与溶剂合物亦意欲被涵盖于本文。前药的讨论提供于T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)A.C.S.论集系列之14，以及在Bioreversible Carriers in DrugDesign，(1987)Edward B.Roche编著，美国医药协会与Pergamon出版社。″前药″一词表示会在活体内转变而产生式(I)化合物或此化合物的药学可接受的盐、水合物或溶剂合物的化合物(例如药物前体)。此转变可通过各种机制(例如通过代谢或化学过程)发生，例如在血液中经过水解作用。前药用途的讨论，由T.Higuchi和W.Stella，“Pro-drugs as NovelDelivery Systems”，A.C.S.论集系列的第14卷，以及在BioreversibleCarriers in Drug Design，Edward B.Roche编著，美国医药协会与Pergamon出版社，1987中提供。

例如，若式(I)化合物或此化合物的药学可接受的盐、水合物或溶剂合物含有羧酸官能基，则前药可包括通过以一种基团置换该酸基的氢原子所形成的酯，该基团例如(C₁-C₈)烷基、(C₂-C₁₂)烷酰氧基甲基、具有4至9个碳原子的1-(烷酰氧基)乙基、具有5至10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰氧基)-乙基、具有3至6个碳原子的烷氧羰基氧基甲基、具有4至7个碳原子的1-(烷氧羰基氧基)乙基、具有5至8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧羰基氧基)乙基、具有3至9个碳原子的N-(烷氧羰基)氨基甲基、具有4至10个碳原子的1-(N-(烷氧羰基)氨基)乙基、3-酞基、4-巴豆内酯基、γ-丁内酯-4-基、-N，N-(C₁-C₂)烷氨基(C₂-C₃)烷基(例如β-二甲氨基乙基)、氨甲酰基-(C₁-C₂)烷基、N，N-二(C₁-C₂)烷基氨甲酰基-(C₁-C₂)烷基，以及哌啶基-、吡咯烷在-或吗啉基(C₂-C₃)烷基等。

同样地，若式(I)化合物含有醇官能基，则前药可通过以一种基团置换该醇基的氢原子而形成，该基团例如(C₁-C₆)烷酰氧基甲基、1-((C₁-C₆)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C₁-C₆)烷酰氧基)乙基、(C₁-C₆)烷氧羰基氧基甲基、N-(C₁-C₆)烷氧羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C₁-C₆)烷酰基、α-氨基(C₁-C₄)烷基、芳基酰基及α-氨酰基或α-氨酰基-α-氨酰基，其中各α-氨酰基独立的选自天然生成的L-氨基酸类、P(O)(OH)₂、-P(O)(O(C₁-C₆)烷基)₂或糖基(由于移除碳水化合物半缩醛形式的羟基所形成的基团)等。

同样地，若式(I)化合物含有醇官能基，则前药可通过以一种基团置换该醇基的氢原子而形成，该基团例如(C₁-C₆)烷酰氧基甲基、1-((C₁-C₆)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C₁-C₆)烷酰氧基)乙基、(C₁-C₆)烷氧羰基氧基甲基、N-(C₁-C₆)烷氧羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C₁-C₆)烷酰基、α-氨基(C₁-C₄)烷基、芳基酰基及α-氨酰基或α-氨酰基-α-氨酰基，其中各α-氨酰基独立的选自天然生成的L-氨基酸类、P(O)(OH)₂、-P(O)(O(C₁-C₆)烷基)₂或糖基(由于移除碳水化合物半缩醛形式的羟基所形成的基团)等。

若式(I)化合物并入胺官能基，则前药可通过以一种基团置换该胺基团中的氢原子而形成，该基团例如R-羰基、RO-羰基、NRR′-羰基，其中R与R′各独立为(C₁-C₁₀)烷基、(C₃-C₇)环烷基、苄基，或R-羰基为天然α-氨酰基或天然α-氨酰基、-C(OH)C(O)OY¹，其中Y¹为H、(C₁-C₆)烷基或苄基，-C(Oy²)Y³，其中Y²为(C₁-C₄)烷基，且Y³为(C₁-C₆)烷基、羧基(C₁-C₆)烷基、氨基(C₁-C₄)烷基或单-N-或二-N，N-(C₁-C₆)烷氨基烷基，-C(Y⁴)Y⁵，其中Y⁴为H或甲基，且Y⁵为单-N-或二-N，N-(C₁-C₆)烷氨基吗啉基、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基等。

一种或多种本发明化合物可以未溶剂化合形式存在，以及以溶剂化合形式存在，具有药学可接受的溶剂例如水、乙醇等，且本发明意欲包含溶剂化合与未溶剂化合形式两者。″溶剂合物″表示本发明化合物与一个或多个溶剂分子的物理缔合作用。此物理缔合作用涉及不同程度的离子性与共价键合，包括氢键。在某些情况中，溶剂合物能够分离，例如，当一个或多个溶剂分子被掺入结晶性固体的晶格中时。″溶剂合物″涵盖溶液相与可分离的溶剂合物。适当溶剂合物的非限制性实例包括乙醇合物、甲醇合物等。″水合物″为溶剂合物，其中溶剂分子为H₂O。

一种或多种本发明化合物可任选被转化成溶剂合物。溶剂合物的制备一般是已知的。因此，例如，M.Caira et al，J.Pharmaceutical Sci.，93(3)，601-611(2004)描述抗真菌剂氟康唑在乙酸乙酯中以及从水中制备溶剂合物。溶剂合物、半溶剂合物、水合物等的类似制备，由E.C.vanTonder et al，AAPS PharmSciTech.，5(1)，论文12(2004)；以及A.L.Bingham et al，Chem.Commun.，603-604(2001)描述。一种典型非限制方法涉及使本发明化合物在高于环境温度下溶于所需量的所需溶剂(有机或水或其混合物)中，并使溶液在足以形成结晶的速率下冷却，然后通过标准方法分离。分析技术，例如I.R.光谱学，显示溶剂(或水)存在于结晶中作为溶剂合物(或水合物)。

″有效量″或″治疗有效量″意欲描述本发明化合物或组合物有效抑制上文所指疾病的量，且因此产生所需要的治疗、改善、抑制或预防作用。

式I-VI化合物可形成盐，其亦在本发明的范围内。本文对式I-VI化合物的指称，应明了的是，除非另有指出，否则包括指称其盐。当在本文中采用时，″盐″一词表示以无机和/或有机酸类形成的酸性盐，以及以无机和/或有机碱类形成的碱性盐。此外，当式I-VI化合物含有碱性部分基团例如但不限于吡啶或咪唑，以及酸性部分基团例如但不限于羧酸两者时，则可形成两性离子(″内盐″)，并且包含在如本文中使用的″盐″一词内。药学可接受的(意即无毒性、生理学上可接受)的盐为优选的，尽管其它盐亦可使用。式I-VI化合物的盐可例如通过使式I-VI化合物与某一定量的酸或碱，例如等量，在例如盐会沉淀于其中的那些介质中或在水性介质中反应，接着冷冻干燥而形成。

举例的酸加成盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、酸性硫酸盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、反丁烯二酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、甲烷磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate)(亦称为甲苯磺酸盐(tosylate))等。此外，一般认为适用于从碱性医药化合物形成药学上可使用盐的酸类，是例如由P.Stahlet al，Camille G.(eds.)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)Zurich：Wiley-VCH；S.Berge et al，Journal ofPharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.ofPharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson et al，The Practice ofMedicinal Chemistry(1996)，Academic Press，New York；以及在TheOrange Book(Food&Drug Admini stration，Washington，D.C.在其网站上)所讨论的。此类公开内容并入本文供参考。

举例的碱性盐，包括铵盐，碱金属盐，例如钠、锂及钾盐，碱土金属盐，例如钙与镁盐，以及有机碱(例如有机胺类)的盐，该碱类例如二环己基胺类、叔丁基胺类，及与氨基酸的盐，该氨基酸例如精氨酸、赖氨酸等。碱性含氮基团可以用试剂季铵化，该试剂例如低级烷基卤化物(例如甲基、乙基及丁基的氯化物、溴化物及碘化物)、硫酸二烷基酯(例如二甲基、二乙基及二丁基的硫酸酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基及硬脂基的氯化物、溴化物及碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基与苯乙基溴化物)及其它。

所有此类酸盐与碱盐意欲成为本发明范围内的药学可接受的盐，且对本发明的目的而言，所有酸与碱盐被认为相当于相应化合物的游离形式。

本发明化合物的药学可接受的酯类包括下列组：(1)通过羟基的酯化作用所获得的羧酸酯类，其中酯基团群的羧酸部分的非羰基部分基团选自直链或支链烷基(例如乙酰基、正-丙基、叔丁基或正丁基)、烷氧烷基(例如甲氧基甲基)、芳烷基(例如苄基)、芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)、芳基(例如，苯基，其任选被例如卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基或氨基取代)；(2)磺酸酯类，例如烷基-或芳烷基磺酰基(例如甲烷磺酰基)；(3)氨基酸酯类(例如L-异缬草氨酰基或L-异白氨酰基)；(4)膦酸酯类，及(5)单-、二-或三磷酸酯类。磷酸酯类可进一步被例如C_1-20醇或其反应性衍生物，或被2，3-二(C_6-24)酰基甘油酯化。

式I-VI化合物，以及其盐、溶剂合物、酯及前药，可以其互变异构形式存在(例如作为酰胺或亚氨基醚)。所有此种互变异构形式意欲被涵盖在本文中，作为本发明的一部分。

式(I)化合物可含有不对称或手性中心，因此以不同立体异构形式存在。所希望的是，式(I)化合物的所有立体异构形式以及其混合物包括外消旋混合物构成本发明的一部分。此外，本发明包括所有几何与位置异构体。例如，若式(I)化合物并入双键或稠合环，则顺式-与反式-形式两者以及混合物被包含在本发明的范围内。

非对映异构混合物可以其物理化学差异为基础，通过本领域技术人员公知的方法，例如通过色谱层析和/或分级结晶，被分离成其各个非对映异构体。对映异构体可通过使对映异构体混合物转化成非对映异构体混合物而被分离，其方式是与适当光学活性化合物(例如手性辅助剂，例如手性醇或Mosher氏氯酰)反应，分离非对映异构体，再使各个非对映异构体转化(例如水解)成其相应的纯对映异构体。一些式(I)化合物亦可为阻转异构体(例如取代的联芳基类)，且被认为是本发明的一部分。对映异构体亦可利用手性HPLC柱分离。

式(I)化合物亦可以不同互变异构形式存在，且所有此类形式被包含在本发明的范围内。例如，化合物的所有酮-烯醇与亚胺-烯胺形式，亦被包含在本发明中。

本发明化合物(包括该化合物的盐、溶剂合物、酯及前药，以及该前药的盐、溶剂合物及酯)的所有立体异构体(例如几何异构体、光学异构体等)，例如可由于不同取代基上的不对称碳所致而存在的那些，包括对映异构形式(其甚至可在不对称碳不存在下存在)、旋转异构形式、阻转异构体及非对映异构体形式，意欲被涵盖在本发明的范围内，例如位置异构体(例如4-吡啶基与3-吡啶基)。(例如，若式(I)化合物并入双键或稠合环，则顺式-与反式-形式两者以及混合物被包含在本发明的范围内。例如，该化合物的所有酮-烯醇与亚胺-烯胺形式，亦被包含在本发明中)。本发明化合物的各个立体异构体可例如基本上不含其它异构体，或可例如经混合成为外消旋物，或与所有其它或其它经选择的立体异构体混合。本发明的手性中心可具有如由IUPAC 1974建议所定义的S或R构型。术语″盐″、″溶剂合物″、″酯″、″前药″等的使用，意欲同样地适用于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体、位置异构体、外消旋物或前药的盐、溶剂合物、酯及前药。

本发明亦包括以同位素方式标识的本发明化合物，其与本文中所述的那些相同，但以下情况除外，即一个或多个原子被一个具有原子质量或质量数不同于通常在天然上所发现的原子质量或质量数的原子所置换。可被并入本发明化合物中的同位素实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟及氯的同位素，例如分别为²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。

某些以同位素方式标识的式(I)化合物(例如以³H与¹⁴C标识的)可用于化合物和/或底物组织分布检测中。氚化(意即³H)和碳-14(意即¹⁴C)同位素是特别优选的，因其易于制备和可检测性。此外，以较重质同位素例如氘(意即²H)取代，可提供由于较高代谢稳定性所造成的某些治疗利益(例如，增加活体内半生期或降低剂量需要量)，因此在一些情况中可能优选的。以同位素方式标识的式(I)化合物一般可按照类似下文方案和/或实例中所公开的程序制成，其方式是以适当同位素方式标识的试剂取代未以同位素方式标识的试剂。

式I-VI化合物的多晶形式，以及式I化合物的盐、溶剂合物、酯类及前药的多晶形式，将包含在本发明中。

下列缩写在下文使用，并且具有以下含义：

Boc是叔丁氧基羰基，dba是二苯亚甲基丙酮，DMF是N，N-二甲基甲酰胺，DMSO是二甲基亚砜，EtOAc是乙酸乙酯，LCMS是液相色谱质谱法，MeOH是甲醇，NMR是核磁共振，PBS是磷酸盐缓冲盐水，SPA是闪烁迫近分析法，Tf是三氟甲基磺酸酯/盐，TFA是三氟乙酸以及Xantphos是9，9-二甲基-4，5-双(二苯基膦)夹氧杂蒽。Me4Si是四甲基甲硅烷，DIEA是二异丙基乙胺，SGC是硅胶柱，TMSCHN2是三甲基甲硅烷基重氮甲烷，BBr3是三溴硼烷，m-CPBA是间氯过氧苯甲酸，CDI是羰二咪唑，HATU是2-(1H-氮杂苯并三唑-1-基-1，13，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，NaH是氢化钠，SiO2是二氧化硅，CBZ是苯甲氧基羰基，Tos是对甲苯磺酰基，CH3CN是乙腈。

本发明的杂环酰胺化合物

本发明提供了式I化合物：

式I

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；其中环A、M、X、Y、Z、T、R¹、R²和R³如上文针对式(I)的定义。

在一个实施方案中，在式I中，环A除了显示的取代基-NR²C(＝T)-(包含M、X、Y和Z的环)和R³以外还可任选具有所述5-至6-元芳基、杂环基、杂环烯基或杂芳基环，任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、氰基、羟基、烷氧基、芳氧基、烷基、-NR⁴R⁵、卤代烷基、卤代烷氧基、硝基、芳基、-C(＝O)R⁴、-C(＝O)OR⁴、-C(＝O)NR⁴R⁵、-OC(＝O)R⁴和-NR⁴C(＝O)R⁴。

在另一实施方案中，在式I中，各个R¹芳基、杂环基、杂环烯基和杂芳基，以及-C(＝O)N(R⁴)芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂芳基、-C(＝O)N(R⁴)杂环基、-C(＝O)N(R⁴)杂环烯基、-N(R⁴)C(＝O)芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂芳基、-N(R⁴)C(＝O)杂环基和-N(R⁴)C(＝O)杂环烯基的的该“杂环基”、“杂环烯基”、“芳基”和“杂芳基”部分任选具有所述5-至6-元环烷基、环烯基、芳基、杂环基、杂环烯基或杂芳基环，任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、羟基、烷氧基、芳氧基、烷基、-NR⁴R⁵、卤代烷基、卤代烷氧基、硝基、芳基、杂芳基、-C(＝O)R⁴、-C(＝O)OR⁴、-C(＝O)NR⁴R⁵、-OC(＝O)R⁴、-NR⁴C(＝O)R⁴、-O-烷基-O-烷基、-O-烷基-O-烷基-O-烷基、-O-烷基-杂环基、-S-R⁴、杂环基和-S(＝O)₂-R⁴。

在另一实施方案中，在式I中，X、Y和Z是C(R)。

在另一实施方案中，在式I中，T是O。

在另一实施方案中，在式I中，环A是杂芳基。

在另一实施方案中，在式I中，环A是吡啶基。

在另一实施方案中，在式I中，R是H。

在另一实施方案中，在式I中，R²是H。

在再另一实施方案中，在式I中，R³是杂环基。

在另一实施方案中，式I化合物表示为以下式II

式II

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，其中：

Z¹是CH或N；

Z²是CH₂或NH

R⁶和R⁷独立地选自H、杂芳基、-C(＝O)芳基和-C(＝O)杂芳基，并且，或者R⁶和R⁷与显示与它们连接的氮原子一起为杂环基，其中当所述杂环基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基；

R⁸选自烷基、-NH₂、-NH(烷基)和-N(烷基)₂；和

n是0、1或2。

在另一实施方案中，在式II中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的-NR⁶R⁷杂环基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：烷氧基、-O-烷基-O-烷基、-O-烷基-O-烷基-O-烷基、-O-烷基-杂环基、-S-烷基、杂环基、-C(＝O)OH、-C(＝O)O烷基、-S(＝O)₂-杂环基、卤素和烷基。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是N。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是CH。

在另一实施方案中，在式II中，Z²是CH₂。

在另一实施方案中，在式II中，Z²是NH。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是N，并且Z²是NH。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是N并且Z²是CH₂。

在进一步的实施方案中，在式II中，Z¹是CH并且Z²是CH₂。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是N，Z²是NH，并且n是0。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是N并且Z²是CH₂，并且n是1。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是CH并且Z²是CH₂，并且n是1。

在另一实施方案中，在式II中，R⁸是-NH₂。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是N并且Z²是CH₂，n是1，并且R⁸是-NH₂。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是CH并且Z²是CH₂，以及n是1，并且R⁸是-NH₂。

在另一实施方案中，在式II中，-NR⁶R⁷是-NHC(＝O)芳基。

在另一实施方案中，在式II中，-NR⁶R⁷是-NHC(＝O)芳基，其中所述-NHC(＝O)芳基的该“芳基”任选被1个或多个选自以下的取代基取代：烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤代烷基和卤素。

在另一实施方案中，在式II中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR⁶R⁷杂环基是任选与苯或吡啶环稠合的杂环基。

在另一实施方案中，在式II中，-NR⁶R⁷是-NH(2-吡嗪基)。

在另一实施方案中，在式II中，-NR⁶R⁷选自：

它们的每个是任选被取代的。

在另一实施方案中，在式II中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR⁶R⁷杂环基是任选与苯或吡啶环稠合的杂环基，其中具有所述任选稠合的苯或吡啶环的所述5-至6-元杂环基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：甲基、甲氧基、4-哌啶基、-C(＝O)OH、-C(＝O)OCH₃、-S(＝O)₂-吡咯烷基、氟、氯、-CH₂CH₂-(1-吗啉基)、-OCH₂CH₂-(1-吗啉基)、-CH₂CH₂-N(CH₃)₂和-OCH₂CH₂-N(CH₃)₂。

在另一实施方案中，在式II中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR⁶R⁷杂环基是任选与苯或吡啶环稠合的杂环基，其中具有所述任选稠合的苯或吡啶环的所述5-至6-元杂环基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：甲基、甲氧基、4-哌啶基、-C(＝O)OH、-C(＝O)OCH₃、-S(＝O)₂-吡咯烷基、氟、氯、-CH₂CH₂-(1-吗啉基)、-OCH₂CH₂-(1-吗啉基)、-CH₂CH₂-N(CH₃)₂、-OCH₂CH₂OCH₃和-OCH₂CH₂-N(CH₃)₂。

在另一实施方案中，式II化合物选自：

或其药学可接受的盐或酯。

在另一实施方案中，式I化合物表示为以下式IIA：

式IIA

其中：

Z¹是CH或N；

Z²是CH₂或NH

各个R²独立地是H或烷基；

R^6a选自芳基或杂芳基；

R⁸选自烷基、-NH₂、-NH(烷基)和-N(烷基)₂；和

n是0、1或2。

在另一实施方案中，在式II中，Z¹是N。

在另一实施方案中，在式IIA中，Z¹是CH。

在另一实施方案中，在式IIA中，Z²是CH₂。

在另一实施方案中，在式IIA中，Z²是NH。

在另一实施方案中，在式IIA中，Z¹是N，并且Z²是NH。

在另一实施方案中，在式IIA中，Z¹是N并且Z²是CH₂。

在进一步的实施方案中，在式IIA中，Z¹是CH并且Z²是CH₂。

在另一实施方案中，在式IIA中，Z¹是N，Z²是NH，并且n是0。

在另一实施方案中，在式IIA中，Z¹是N并且Z²是CH₂，并且n是1。

在另一实施方案中，在式IIA中，Z¹是CH并且Z²是CH₂，并且n是1。

在另一实施方案中，在式IIA中，R^6a是芳基。

在另一实施方案中，在式IIA中，R^6a芳基是苯基。

在另一实施方案中，在式IIA中，R^6a苯基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：甲氧基、三氟甲基、氟和氯。

在另一实施方案中，式IIA化合物选自：

或其药学可接受的盐或酯。

在另一实施方案中，式I化合物表示为以下式III：

式III

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，其中在式III中：

Z³是CH或N；

Z⁴是CH₂或NH；

R⁹是-C(＝O)NH(芳基)、芳基或杂芳基，其中所述R⁹芳基或杂芳基通过碳原子与吡啶环连接，其中当所述芳基或杂芳基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基可任选与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基；

R¹⁰选自烷基、-NH₂、-NH(烷基)和-N(烷基)₂；和

m是0、1或2。

在另一实施方案中，在式III中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述R⁹芳基或杂芳基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：杂环基、烷氧基、芳基和烷基。

在另一实施方案中，在式III中，Z¹是N。

在另一实施方案中，在式III中，Z¹是CH。

在另一实施方案中，在式III中，Z¹是CH₂。

在另一实施方案中，在式III中，Z²是NH。

在另一实施方案中，在式III中，Z¹是N，并且Z²是NH。

在另一实施方案中，在式III中，Z¹是N并且Z²是CH₂。

在另一实施方案中，在式III中，Z¹是CH并且Z²是CH₂。

在另一实施方案中，在式III中，Z¹是N，Z²是NH，并且n是0。

在另一实施方案中，在式III中，Z¹是N并且Z²是CH₂，并且n是1。

在另一实施方案中，在式III中，Z¹是CH，Z²是CH₂，并且n是1。

在另一实施方案中，在式III中，R⁹是-C(＝O)NH芳基。

在另一实施方案中，在式III中，R⁹是-C(＝O)NH芳基，其中-C(＝O)NH芳基的所述芳基任选被1个或多个选自以下的取代基取代：卤素、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基和烷基。

在另一实施方案中，在式III中，R⁹是芳基或杂芳基，并且选自：苯基、4-吡啶基、2-(6-(1-哌嗪基))吡啶基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并(二氢)呋喃基、3-吡啶基、2-噻吩基、3-噻吩基、5-嘧啶基、苯并吡咯基、苯并吗啉基、苯并吡啶基、苯基、3-吡咯基和噁唑基，其各自是任选被取代的。

在另一实施方案中，在式III中，R⁹是芳基或杂芳基，并且选自：苯基、4-吡啶基、2-(6-(1-哌嗪基))吡啶基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并(二氢)呋喃基、3-吡啶基、2-噻吩基、3-噻吩基、5-嘧啶基、苯并吡咯基、苯并吗啉基、苯并吡啶基、苯基、3-吡咯基和噁唑基，其各自是任选被取代的，其中所述R⁹苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并(二氢)呋喃基、苯并吡咯基、苯并吗啉基和苯并吡啶基选自：

它们的每个是任选被取代的。

在另一实施方案中，在式III中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述R⁹芳基或杂芳基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：1-哌嗪基、甲氧基、甲基、1-吗啉基、-CH₂-(1-吗啉基)和苯基。

在另一实施方案中，式III化合物选自：

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药。

在另一实施方案中，式I化合物表示为以下式IV：

式IV

或其药学可接受的盐或酯，其中：

Z⁵是CH或N；

Z⁶是CH₂或NH；

R¹¹和R¹²独立地是H和烷基，其中所述烷基任选被芳基取代，或者其中R¹¹和R¹²与显示与它们连接的氮原子一起为杂环基，其中当所述杂环基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基可任选与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基；

R¹³选自烷基、-NH₂、-NH(烷基)和-N(烷基)₂；和

p是0、1或2。

在另一实施方案中，在式IV中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR¹¹R¹²杂环基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：烷氧基、卤素、烷基、杂环基和芳基。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是N。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是CH。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是CH₂。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是NH。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是N，并且Z⁶是NH。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是N并且Z⁶是CH₂。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是CH并且Z⁶是CH₂。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是N，Z⁶是NH，并且p是0。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是N，Z⁶是CH₂，并且p是1。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是CH，Z⁶是CH₂，并且p是1。

在另一实施方案中，在式IV中，R¹³是-NH₂。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是N，Z⁶是CH₂，p是1，并且R¹³是-NH₂。

在另一实施方案中，在式IV中，Z⁵是CH，Z⁶是CH₂，p是1，并且R¹³是-NH₂。

在另一实施方案中，在式IV中，R¹¹和R¹²独立地是H和烷基。

在另一实施方案中，在式IV中，所述R¹¹和R¹²烷基独立地是烷基-芳基。

在另一实施方案中，在式IV中，所述R¹¹和R¹²烷基独立地是烷基-芳基，其中所述烷基-芳基的“芳基”部分任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素和烷氧基。

在另一实施方案中，在式IV中，R¹¹和R¹²独立地选自：H、甲基、-CH₂-(3-氟苯基)、-CH₂-(3-甲氧基苯基)、-CH₂-苯基、-CH₂CH₂-苯基、-CH₂CH₂-(3-甲氧基苯基)和-CH₂CH₂-(3-氟苯基)。

在另一实施方案中，在式IV中，所述-NR¹¹R¹²选自：吡咯烷基、哌啶基、

其各自是任选被取代的。

在另一实施方案中，在式IV中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR⁹R¹⁰杂环基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：甲氧基、氟、氯、-CH₂CH₂N(CH₃)₂、-OCH₂CH₂-(1-吗啉基)、2-甲氧基苯基、苯基和1-吡咯烷基。

在另一实施方案中，式IV化合物选自：

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药。

在另一实施方案中，式I化合物表示为以下式IV(A)：

式IV(A)

或其药学可接受的盐或酯，其中在式III中：

Z³是CH或N；

Z⁴是CH₂或NH；

R^9a是-N(R²)-C(＝O)-N(R²)-芳基、芳基或杂芳基，其中各个R²独立地是H或烷基，其中所述R^9a芳基或杂芳基通过碳原子与嘧啶环连接，其中当在任一前述R^9a基团中的各个所述“芳基”和“杂芳基”在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基可任选与它们连接的碳原子一起形成第一5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基；其中当所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基可任选与它们连接的碳原子一起形成第二5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基；

R¹⁰选自烷基、-NH₂、-NH(烷基)和-N(烷基)₂；和

m是0、1或2。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，R^9a芳基或杂芳基，或者任选具有所述第一和第二5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-N(R²)-C(＝O)N(R²)-芳基的该“芳基”部分，任选被一个或多个选自以下的取代基取代：杂环基、杂芳基、烷氧基、烷基、芳氧基、二烷基氨基、卤素、-S(＝O)₂烷基、-S-烷基、-C(＝O)烷基、-NHC(＝O)烷基、-O-烷基-环烷基、-C(＝O)N(烷基)₂、-NHC(＝O)NH(烷基)和-C(＝O)NH(烷基)。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z¹是N。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z¹是CH。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z²是CH₂。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z²是NH。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z¹是N，并且Z²是NH。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z¹是N并且Z²是CH₂。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z¹是CH并且Z²是CH₂。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z¹是N，Z²是NH，并且n是0。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z¹是N，Z²是CH₂，并且n是1。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，Z¹是CH，Z²是CH₂，并且n是1。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，R^9a芳基或杂芳基，或者任选具有所述第一和第二5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-N(R²)-C(＝O)R²-芳基的该“芳基”部分选自：苯基、吲哚基、呋喃基、吗啉基、吡啶基、吲唑基、嘧啶基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并吡啶基、苯并噻唑基、异吲哚基、苯并咪唑基、噁唑基、

其各自是任选被取代的。

在另一实施方案中，在式IV(A)中，R^9a芳基或杂芳基

，或者任选具有所述第一和第二5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-N(R²)-C(＝O)NR²-芳基的该“芳基”部分，任选被一个或多个选自以下的取代基取代：1-吡咯烷基、甲氧基、1-吗啉基、-N(CH₃)₂、溴、氟、苯氧基、-S(＝O)₂CH₃、-S-CH₃、甲基、异丙氧基、-C(＝O)OCH₃、-NH-C(＝O)-CH₃、-O-CH₂-环丙基、-C(＝O)-N(CH₂CH₃)₂、-NH-C(＝O)NHCH₂CH₃和-C(＝O)NCH₃。

在另一实施方案中，式IV(A)化合物选自：

或其药学可接受的盐。

在另一实施方案中，式I化合物表示为以下式V：

式V

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，其中：

Z⁷是CH或N；

Z⁸是CH₂或NH；

R¹⁴和R¹⁵与显示与它们连接的氮原子一起为杂环基，其中当所述杂环基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基；

R¹⁶选自烷基、-NH₂、-NH(烷基)和-N(烷基)₂；和

q是0、1或2。

在另一实施方案中，在式V中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR¹⁴R¹⁵杂环基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：烷氧基、卤素、烷基和芳基。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是N。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是CH。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁸是CH₂。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁸是NH。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是N，并且Z⁸是NH。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是N并且Z⁸是CH₂。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是CH并且Z⁸是CH₂。

在另一实施方案中，在式V中，q是0。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是N，Z⁸是NH，并且q是0。

在另一实施方案中，在式V中，q是1。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是N，Z⁸是CH₂，并且q是1。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是CH，Z⁸是CH₂，并且q是1。

在另一实施方案中，在式V中，R¹⁶是-NH₂。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是N，Z⁸是CH₂，q是1，并且R¹⁶是-NH₂。

在另一实施方案中，在式V中，Z⁷是CH，Z⁸是CH₂，q是1，并且R¹⁶是-NH₂。

在另一实施方案中，在式V中，-NR¹⁴R¹⁵是苯并稠合的吡咯烷，其是任选被取代的。

在另一实施方案中，式V化合物是

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药。

在另一实施方案中，式I化合物表示为以下式VI：

式VI

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，其中：

Z⁹是CH或N；

Z¹⁰是CH₂或NH；

R¹⁷和R¹⁸与显示与它们连接的氮原子一起为杂环基，其中当所述杂环基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基；

R¹⁹选自烷基、-NH₂、-NH(烷基)和-N(烷基)₂；和

r是0、1或2。

在另一实施方案中，在式VI中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR¹⁴R¹⁵杂环基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：烷氧基、卤素、烷基和芳基。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是N。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是CH。

在另一实施方案中，在式VI中，Z¹⁰是CH₂。

在另一实施方案中，在式VI中，Z¹⁰是NH。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是N，并且Z¹⁰是NH。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是N并且Z¹⁰是CH₂。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是CH并且Z¹⁰是CH₂。

在另一实施方案中，在式VI中，q是0。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是N，Z¹⁰是NH，并且q是0。

在另一实施方案中，在式VI中，q是1。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是N，Z¹⁰是CH₂，并且q是1。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是CH，Z¹⁰是CH₂，并且q是1。

在另一实施方案中，在式VI中，R¹⁹是-NH₂。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是N，Z¹⁰是CH₂，q是1，并且R¹⁹是-NH₂。

在另一实施方案中，在式VI中，Z⁹是CH，Z¹⁰是CH₂，q是1，并且R¹⁹是-NH₂。

在另一实施方案中，在式VI中，-NR¹⁷R¹⁸选自：

其各自是任选被取代的。

在另一实施方案中，在式VI中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR¹³R¹⁴杂环基任选被一个或多个烷氧基取代基取代。

在另一实施方案中，在式VI中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR¹³R¹⁴杂环基任选被一个或多个烷氧基取代基取代，其中所述烷氧基是甲氧基。

在另一实施方案中，式VI化合物选自：

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药。

在另一实施方案中，式I化合物表示为以下式VII：

式VII

或其药学可接受的盐，其中：

Z¹⁰是CH或N；

Z¹¹是CH₂或NH；

R¹⁸和R¹⁹与显示与它们连接的氮原子一起为杂芳基，其中当所述杂环基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基；

R²⁰选自烷基、-NH₂、-NH(烷基)和-N(烷基)₂；和

s是0、1或2。

在另一实施方案中，在式VII中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR¹⁷R¹⁸杂芳基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：杂芳基和芳基。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹⁰是N。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹¹是CH。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹¹是CH₂。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹¹是NH。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹⁰是N，并且Z¹¹是NH。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹⁰是N并且Z¹¹是CH₂。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹⁰是CH并且Z¹¹是CH₂。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹⁰是N，Z¹¹是NH，并且s是0。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹⁰是N，Z¹¹是CH₂，并且s是1。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹⁰是CH，Z¹¹是CH₂，并且s是1。

在另一实施方案中，在式VII中，在另一实施方案中，在式VII中，Z¹⁰是N，Z¹¹是CH₂，s是1，并且R¹⁹是-NH₂。

在另一实施方案中，在式VII中，Z¹⁰是CH，Z¹¹是CH₂，s是1，并且R¹⁹是-NH₂。

在另一实施方案中，在式VII中，-NR¹⁸R¹⁹是吡唑基，其是任选被取代的。

在另一实施方案中，在式VII中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述-NR¹³R¹⁴杂芳基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：任选取代的噻吩基和任选取代的芳基。

在另一实施方案中，式VII化合物选自：

或其药学可接受的盐。

在另一实施方案中，式I化合物表示为以下式VIII：

式VIII

或其药学可接受的盐，其中：

Z¹¹是CH或N；

Z¹²是CH₂或NH；

各个R²¹独立地是H或烷基；

R²²是芳基，其中当所述芳基在相邻碳原子上具有两个取代基时，所述取代基与它们连接的碳原子一起形成5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基；

R²³选自烷基、-NH₂、-NH(烷基)和-N(烷基)₂；和

t是0、1或2。

在另一实施方案中，在式VIII中，任选具有所述5-至6-元杂环基、芳基或杂芳基的所述R²²芳基任选被卤素取代。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹¹是N。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹²是CH。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹²是CH₂。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹²是NH。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹¹是N，并且Z¹²是NH。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹¹是N并且Z¹²是CH₂。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹¹是CH并且Z¹²是CH₂。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹¹是N，Z¹²是NH，并且t是0。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹¹是N，Z¹²是CH₂，并且t是1。

在另一实施方案中，在式VIII中，Z¹¹是N，Z¹²是CH₂，并且t是1。

在另一实施方案中，在式VIII中，R²²是苯基，其是任选被取代的。

在另一实施方案中，式VIII化合物是：

或其药学可接受的盐。

制备本发明化合物的方法

一般方法

商业获得的溶剂、试剂和中间体是以收货状态使用的。不是商业获得的试剂和中间体以下文所述方式制备。¹H NMR光谱是在VarianAS-400(400MHz)上获得，并以距Me₄Si低磁场的ppm作报告，其中质子数、多重性及偶合常数(以Hz表示)是以括号方式指示。在提出LC/MS数据的情况下，分析使用Applied Biosystems API-100质谱仪和Shimadzu SCL-10A LC柱进行：Altech铂C18，3微米，33mmx7mm ID；梯度液流量：0min-10％CH₃CN，5min-95％CH₃CN，7min-95％CH₃CN，7.5min-10％CH₃CN，9min-终止。使用Agilent TechnologiesLC/MSD SL或者1100系列LC/MSD质谱仪获得MS数据。通过制备型LC纯化最终产物，使用Varian Pursuit XRs C1810u 250x21.2mm的柱子，以及流动相A和B的洗脱液混合物。流动相A组成为0.1％TFA的H₂O溶液，流动相B组成为CH₃CN(95％)/H₂O(5％)/TFA(0.1％)。流动相A和B的混合物在室温下以20mL/min的流速通过柱子洗脱。所有最终分离的化合物的纯化是通过LCMS使用Higgins Haisil HLC185u150x4.6mm柱以及流动相A和B的洗脱液混合物来检测的，其中流动相A组成为0.1％TFA的H₂O溶液，流动相B组成为CH₃CN(95％)/H₂O(5％)/TFA(0.1％)。在60℃的温度下以3mL/min的流速洗脱柱子。中间体化合物表征是通过LCMS，使用Higgins Haisil HL C185u 50x4.6mm柱子以及流动相A和B的洗脱液混合物，其中流动相A组成为0.1％TFA的H₂O溶液，流动相B组成为CH₃CN(95％)/H₂O(5％)/TFA(0.1％)。在60℃的温度下以3mL/min的流速洗脱柱子。

用于制备式I-VI化合物的方法在不同方法中说明如下

方案1说明了制备式4的中间体胺化合物的方法。

方案1

其中X^a是F或Cl，并且R³以及环A如上文针对式(I)化合物的定义。

在二异丙基乙胺(DIEA)存在下，加热或者通过使用微波辅助过程，式1的硝基取代的芳基或杂芳基衍生物可以与式2的哌嗪化合物偶合，得到偶合的化合物3。然后可以将式3的硝基化合物使用适宜的方法还原，得到式4的中间体胺化合物。

实施例-制备中间体6：

方案2

中间体5：

使3-硝基-4-氯吡啶(10mmol)溶解于二氯甲烷(25mL)，再将二乙基异丙基胺(20mmol)接着将Boc哌嗪(10mmol)加至上述溶液中，同时在0℃下冷却，并使反应混合物在室温下搅拌过夜。将二氯甲烷在真空下蒸发。使所得固体萃取到二氯甲烷中，再用枸橼酸和盐水溶液洗涤。蒸发二氯甲烷，得到黄色固体4-(3-硝基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯，其未经纯化即被用于下一步骤。

中间体6：

使3-硝基-4-boc哌嗪基吡啶溶解于乙酸乙酯中，再加入数滴乙酸。使所得溶液经受Pd/C(10％，10mol％)，并保持在氢气氛和室温下。搅拌过夜并监测反应进程，直到反应完毕。使反应溶液通过硅藻土过滤，浓缩，得到产物4-(3-氨基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯，产率良好(80％)。

中间体7：

方案3

将4-(3-氨基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.9g，21.2mmol)，6-溴-吡啶-2-甲酸(19.3g，95.5mmol)，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(12.1g，31.8mmol)，二异丙基乙胺(11.1ml，63.6mmol)在DMF(106ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。在真空下除去溶剂，将所得油置于乙酸乙酯中。有机层用稀盐酸、稀氢氧化钠接着用盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥。除去溶剂，得到粘稠油状物，将其通过柱色谱法纯化(SiO2，10％甲醇/二氯甲烷)，得到化合物5(8.3g的浅褐色固体，85％)。HPLC-MS t_R＝3.25min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₀H₂₄BrN₅O₃，462.34，实测的LCMS m/z 462&464(M+H)。

制备苯并内酰胺衍生物的方法

实施例-制备中间体10：

方案4

中间体8(部分A)：

将2-溴-5-甲氧基芳基羧酸甲酯(81.61mmol)、三甲基硼氧六环(13.36mL，97.93mmol)、Pd(dppf)Cl₂(1.0g，1.36mmol)、二噁烷(350mL)、水(50mL)和Cs₂CO₃(22.5g，163mmol)在110℃(油浴)下在氮化下搅拌16小时。冷却之后，通过过滤除去固体。将该溶液浓缩，再通过SGC纯化(10∶1EtOAc/己烷)，得到8。

中间体9：

使化合物8(4.4g，24.2mmol)溶解于四氯化碳(80mL)，加入N-溴代琥珀酰亚胺(4.48g，24.2mmol)和过氧化苯甲酰(276mg，1.13mmol)。使反应混合物在回流下搅拌3小时，然后过滤固体，再用醚洗涤。将合并的有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到需要的产物9)。

中间体10：

将化合物9(124.0mmol)溶解于7M氨/MeOH(150mL)中，再在密封耐压瓶中在60℃下搅拌过夜。使反应混合物冷却，再在减压下除去溶剂。将残余物混悬于乙酸乙酯，再搅拌30分钟。将固体过滤，再溶解于二氯甲烷。将该二氯甲烷用水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到需要的产物10。

实施例-制备中间体13：

方案5

中间体11：

将2-溴-5-甲氧基苯甲酸甲酯(20.0g，81.61mmol)、三甲基硼氧六环(13.36mL，97.93mmol)、Pd(dppf)Cl₂(1.0g，1.36mmol)、二噁烷(350mL)、水(50mL)和Cs₂CO₃(22.5g，163mmol)在110℃(油浴)下在氮气下搅拌16小时。冷却之后，通过过滤除去固体。将该溶液浓缩，再通过SGC纯化(10∶1EtOAc/己烷)，得到11(12.1g，80％)。针对下式的质量计算值：C₁₀H12NO₃，180.20，实测的LCMS m/z 181.20(M+H).NMR(H¹)；2.35(3H，CH3)3.73(3H，-OCH3)，3.88(3H，CO2-CH3)，6.86-7.5(m，3H，芳香族的)

中间体12：

化合物11(4.4g，24.2mmol)溶解于四氯化碳(80mL)，再加入N-溴代琥珀酰亚胺(4.48g，24.2mmol)和过氧化苯甲酰(276mg，1.13mmol)。将反应混合物在回流下搅拌3小时，然后过滤固体，再用醚洗涤。将合并的有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到需要的产物12(6.1g，98％)。针对下式的质量计算值：C₁₀H₁₁BrO₃259.10，实测的LCMS m/z 260(M+H)，NMR(H¹)；4.50(2H，CH2-Br)3.73(3H，-OCH3)，3.88(3H，CO2-CH3)，6.86-7.5(m，3H，芳香族的)

中间体13：

使化合物12(32.0g，124.0mmol)溶解于7M氨/MeOH(150mL)，再在密封耐压瓶中在60℃下搅拌过夜。使反应混合物冷却，在减压下除去溶剂。使残余物混悬于乙酸乙酯，再搅拌30分钟。将固体过滤，再溶解于二氯甲烷。将该二氯甲烷用水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到需要的产物13(13.5g，67％)。针对下式的质量计算值：C₉H₉NO₂，163.17，实测的LCMS m/z 164.2(M+H)，NMR(H¹)；4.20(2H，CH2)3.73(3H，-OCH3)，3.88，6.86-7.5(m，3H，芳香族的)，8.0(NH)

表-1中的化合物14-19可通过基本上遵循上文实施例所述类似试验操作来合成。

表1

中间体20：

方案6

向2-甲基-5-甲基硫烷基-苯甲酸(250mg，1.37mmol)在10ml的1∶1苯/甲醇混合物中加入2.74mmol的TMSCHN2。使反应在室温下搅拌0.5hr。除去溶剂，得到250mg的化合物20为黄色油(93％)。该物质未经进一步纯化即被使用。NMR(H¹)；2.48(s，3H，CH3)2.54(s，3H，SCH3)，3.88(s，3H，CO2-CH3)，7.10-7.8(m，3H，芳香族的)

中间体21：

方案7

向20(1.034g，5.27mmol)在四氯化碳(15ml)中的溶液中加入N-溴代琥珀酸酰胺(0.935g，5.27mmol)和过氧化苯甲酰(47mg，0.19mmol)。将混合物在回流下加热过夜。溶液用冰冷却，滤出固体。除去溶剂，得到黄色油，使其在过量7M NH₃/甲醇中高压容器中在70℃下搅拌过夜。除去溶剂，再将所得粗物质在快速柱上纯化(SiO2，乙烷/乙酸乙酯)，得到化合物21为灰白色固体(158mg，17％).NMR(H¹)；2.51(s，3H，SCH3)，4.3(s，2H，-CH2)，7.44-7.5(m，3H，芳香族的)。

实施例22：

方案8

向化合物20(40mg，0.223mmol)在5ml的DCM中的溶液中加入0.223mg的MCPBA。反应混合物在室温下搅拌3小时。将粗品用水洗涤，有机物在真空下浓缩；针对下式的质量计算值：C9H9NO2S 195.04，实测的LCMS m/z 196.42(M+H)产物未经进一步纯化即被使用。

中间体24：

方案9

中间体23：

使实施例化合物13(150mg，0.92mmol)溶解于DCM(20mL)，再冷却至-78℃。向此混合物中，滴加BBr₃(1M，1.2mL)。1小时之后，使该混合物温热至室温，再搅拌另外2小时。然后加入另一份的BBr₃(1M，1.2mL)，再将所得混合物加热至回流，搅拌过夜。冷却至室温后，加入EtOAc(100mL)，有机物用水、盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，该残余物未经进一步纯化即被用于下一步骤。HPLC-MS t_R＝0.58min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₈H₇NO₂149.0，实测的LCMS m/z 150.1(M+H)。

中间体24：

将实施例化合物23(50mg，0.33mmol)加至Cs₂CO₃(326mg，1.0mmol)、2-二甲基氨基乙基氯化物(HCl盐，50mg)在DMF(5mL)中的混合物中。将所得混合物加热至60℃，搅拌过夜。冷却至室温后，通过过滤除去碱，再用浓缩除去溶剂。残余物过柱(硅胶，DCM/MeOH＝95∶5至DCM/MeOH/Et3N＝90∶5∶5)，得到产物24(53mg)为微黄色固体。HPLC-MS t_R＝0.56min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₆N₂O₂220.1，实测的LCMS m/z 221.1(M+H)。

中间体25

表2中的化合物25是用上文针对中间体24的操作中所述相同操作制备的。

表2

中间体28

方案10

中间体26：

将2-氟硝基氧苯胂(2-fluoronitroarene，6g，43mmol)溶解于有K₂CO₃(12g，86mmol)中的干燥的THF(80mL)。将该混合物冷却至0℃，再加入胺(4.6g，88mmol)。将所得混合物温热至室温，再搅拌24小时。再将该混合物通过硅藻土过滤，浓缩。该残余物未经进一步纯化即被用于下一步骤。

中间体27：

使硝基化合物26(7.8g，粗物质)溶解于THF(50mL)，再在氩气下加入Pd/C(10％，1g)。将该混合物用H₂(40psi)处理，再搅拌2小时。再将该混合物通过硅藻土过滤，在真空下浓缩，得到粗产物27，其未经任何进一步纯化即被用于下一步骤。

中间体28：

将化合物27(7.0g，粗物质)溶解于DMF(20mL)和CDI(6.5g，40mmol)。将该混合物加热至110℃，再搅拌2小时。冷却至室温后，在减压下通过浓缩除去DMF。残余物用柱纯化(硅胶，DCM/MeOH＝95∶5至DCM/MeOH/Et₃N＝90∶5∶5)，得到产物28(5.2g)为微黄色固体

制备中间体31：

方案11

中间体29：

将2-氟硝基苯(6g，43mmol)溶解于含有K₂CO₃(12g，86mmol)的干燥THF(80mL)中。将该混合物冷却至0℃，加入胺(4.6g，88mmol)。将所得混合物温热至室温，再搅拌24小时。再将该混合物通过硅藻土过滤，浓缩。该残余物未经进一步纯化即被用于下一步骤。HPLC-MSt_R＝0.77min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₀H₁₅N₃O₂209.1，实测的LCMS m/z 210.1(M+H)。

中间体30：

使硝基-化合物29(7.8g，粗物质)溶解于THF(50mL)，再在氩气下加入Pd/C(10％，1g)。将该混合物用H₂(40psi)处理，再搅拌2小时。再将该混合物通过硅藻土过滤，在真空下浓缩，得到粗产物30，其未经任何进一步纯化即被用于下一步骤。HPLC-MS t_R＝0.39min(UV_{254 nm})；针对下式的质量计算值：C₁₀H₁₇N₃179.1，实测的LCMS m/z 180.1(M+H)。

中间体31：

使化合物30(7.0g，粗物质)溶解于DMF(20mL)和CDI(6.5g，40mmol)中。将该混合物加热至110℃，再搅拌2小时。冷却至室温后，在减压下通过浓缩除去DMF。残余物用柱纯化(硅胶，DCM/MeOH＝95∶5至DCM/MeOH/Et₃N＝90∶5∶5)，得到产物31(5.2g)为微黄色固体HPLC-MS t_R＝0.57min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₁H₁₅N₃O205.1，实测的LCMS m/z 206.1(M+H)。

表3中的化合物32是用如中间体31所述相同操作制备的。

表3

中间体33：

方案12

向2-氧代-2，3-二氢-1H-吲哚-5-磺酰基氯化物(800mg，3.45mmol)在5mL DCM中的溶液中加入三乙胺(0.97mL，6.90mmol)，接着加入吡咯烷(0.34mL，4.14mmol)。反应混合物在室温下搅拌2小时。将形成的固体过滤，再用DCM洗涤。在真空下收集并除去有机层。使所得油溶解于乙酸乙酯，再用水和盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。除去溶剂，得到黄色固体，其纯度足以达到原样使用。HPLC-MS t_R＝1.05min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₄N₂O₃S，266.32，实测的LCMS m/z 267.30(M+H)。

中间体34：

方案13

向1-哌啶-4-基-1，3-二氢-苯并咪唑-2-酮的溶液(1.0g，4.6mmol，在10mL中)中加入二碳酸二叔丁酯(1.26mL)和二异丙基乙胺(1.6mL)在10ml DCM中的溶液。将该混合物在室温下搅拌1小时。将该混合物用水洗涤，再用无水硫酸钠干燥。除去溶剂得到白色固体，纯度良好(95％)。HPLC-MS t_R＝1.61min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₇H₂₃N₃O₃S，317.38，实测的LCMS m/z 340.20(M+Na)。

中间体35：

方案14

向1，3-二氢-1-(1，2，3，6-四氢-4-吡啶基)-2H-苯并咪唑-2-酮(4.6mmol，在10mL中)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(1.26mL)和二异丙基乙胺(1.6mL)在10ml DCM中的溶液。将混合物在室温下搅拌1小时。将该混合物用水洗涤，再用无水硫酸钠干燥。除去溶剂得到白色固体，纯度良好(95％)。HPLC-MS t_R＝1.68min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₇H₂₁N₃O₃S，315.38，实测的LCMS m/z 316.20(M+H)。

中间体41：

方案-15

部分A：

使3，4-二羟基-邻苯二甲酸二乙酯(1.77g，7.8mmol)溶解于DMF(10mL)，再加入Cs₂CO₃(2.55g，7.8mmol)。向该混合物中，加入MeI(1.2g，8.6mmol)，再将所得混合物在室温下搅拌过夜。将该混合物用EtOAc稀释，再用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，将粗产物用柱纯化(硅胶，15％至30％EtOAc/乙烷)，得到产物36(698mg)为棕色固体，回收起始物质(369mg)。HPLC-MS tR＝1.12min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₁H₁₂O₆240.1，实测的LCMS m/z 241.1(M+H)。

部分B：

使化合物36(390mg，1.6mmol)溶解于THF(10mL)。将2-甲氧基乙醇(152mg，2.0mmol)和PPh₃(525mg，2.0mmol)加至该混合物中，再将所得混合物冷却至0℃。滴加DIAD(404mg，2.0mmol)。使该混合物温热至室温，搅拌过夜。加入醚(50mL)，滤出固体。在减压下除去溶剂，再将残余物用柱纯化(硅胶，30％EtOAc/乙烷)，得到产物37(288mg)为棕色固体。HPLC-MS tR＝1.60min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₄H₁₈O₇298.1，实测的LCMS m/z 299.2(M+H)。

部分C：

使化合物37(288mg，0.966mmol)溶解于THF(15mL)，再冷却至0℃。加入LiAlH₄(1M in THF，4.0mL)。使该混合物温热至室温，然后回流过夜。冷却至室温后，小心加入H₂O(152uL)，再加入15％NaOH(152uL)和H₂O(456uL)。将该混合物搅拌另外30min，滤出固体，再用THF洗涤。在真空下将该有机物浓缩，再用柱纯化(硅胶，EtOAc～2％MeOH/EtOAc)，得到产物38(155mg)。HPLC-MS tR＝1.00min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₈O₅242.1，实测的LCMS m/z 225.1(M-OH)。

部分D：

使化合物38(155mg，0.64mmol)溶解于THF(15mL)，再加入PPh₃(504mg，1.92mmol)。将该混合物冷却至0℃，再加入CBr₄(467mg，1.4mmol)。使所得混合物温热至室温，再搅拌2小时。滤出固体，再在真空下除去溶剂。残余物用柱纯化(硅胶，15％EtOAc/乙烷)，得到产物39(192mg)。

部分E：

使二溴化合物39(192mg，0.52mmol)溶解于DMF(5mL)。加入DIEA(260uL，1.5mmol)和三苯基甲基胺(148mg，0.57mmol)，再将该混合物加热至60℃，再搅拌2小时。在真空下除去DMF，再将该残余物置于EtOAc(60mL)中。有机物用水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，残余物用柱纯化(硅胶，30％EtOAc/乙烷)，得到产物40(211mg)。

部分F：

使化合物40(211mg，0.45mmol)溶解于MeOH/CHCl₃(5mL/5mL)的混合物中，再冷却至0℃。小心加入TFA(10mL)。在0℃下5min之后，使该混合物温热至室温，再搅拌另外30min。浓缩之后，使残余物置于醚和1N HCl中。水相用醚萃取，然后用4N NaOH碱化至pH～10。将该混合物用DCM(40mLx3)萃取。使合并的有机相干燥，浓缩。该粗产物41(95mg)直接用于下一步骤而未进一步纯化。HPLC-MS tR＝0.78min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₇NO₃223.1，实测的LCMS m/z 224.2(M-OH)。

实施例46

部分A：

化合物42是使用实施例1部分B中描述的相同条件制备的，部分B of实施例1部分B，该制备开始于化合物3，4-二羟基-邻苯二甲酸二酯。HPLC-MS tR＝1.45min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₆H₂₂O₈342.1，实测的LCMS m/z 343.1(M+H)。

部分B：

化合物43是使用实施例41部分C中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物42。HPLC-MS tR＝0.90min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₄H₂₂O₆286.1，实测的LCMS m/z 269.2(M-OH)。

部分C：

化合物44是使用实施例41部分D中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物43。

部分D：

化合物45是使用实施例41部分E中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物44。

部分E：

化合物46是使用实施例41部分F中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物45。HPLC-MS tR＝0.80min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₄H₂₁NO₄ 267.1，实测的LCMS m/z 268.1(M+H)。

实施例51：

部分A：

使化合物36(240mg，1.0mmol)溶解于DMF(5mL)。加入Cs₂CO₃(325mg，1.0mmol)。将该混合物冷却至0℃，再吹入BrCHF₂达5min。使所得混合物温热至室温，搅拌过夜。加入EtOAc(60mL)，然后用水和盐水洗涤，再用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，残余物用柱纯化(15～30％EtOAc/乙烷)，得到产物47(271mg)。HPLC-MS tR＝1.69min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₂F₂O₆290.1，实测的LCMS m/z 291.1(M+H)。

部分B：

化合物48是使用实施例41部分C中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物xxx。HPLC-MS tR＝1.06min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₀H₁₂F₂O₄234.1，实测的LCMS m/z 257.0(M+Na)。

部分C：

化合物49是使用实施例41部分D中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物48。

部分D：

化合物50是使用实施例41部分E中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物49

部分E：

化合物51是使用实施例41部分F中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物50。HPLC-MS tR＝0.98min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₀H₁₁F₂NO₂215.1，实测的LCMS m/z 216.1(M+H)。

实施例52

通过制备实施例46中给出的相同操作法，可以制备表4栏2中给出的化合物52，该制备开始于3，4-二羟基-邻苯二甲酸二乙酯和BrCHF₂。

表4

实施例55：

部分A

在0℃下使苯并间二氧杂环戊烯(2.66mL，20mmol)与多聚甲醛(2.83g，94mmol)在33％HBr/HOAc(27mL)中混合。使该混合物温热至室温，再搅拌过夜。在真空下除去溶剂，将残余物用柱纯化(硅胶，15％EtOAc/乙烷)，得到产物53(4.5g)为白色固体。

部分B：

化合物54是使用实施例41部分E中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物53。

部分C：

化合物55是使用实施例41部分F中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物54。HPLC-MS tR＝0.54min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₉H₉NO₂163.1，实测的LCMS m/z 164.1(M+H)。

实施例59

部分A：

向3，4-二甲氧基苯基乙酰氯(5.0g，23.29mmol)在DCM(30mL)中的溶液中在0℃下加入Et₃N(3.24mL，23.29mmol)，接着加入氨基乙醛二甲基乙缩醛(2.51mL，23.9mmol)。使该混合物温热至室温，再搅拌1小时。加入EtOAc(300mL)，再将该有机物用水、盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，该粗产物56(6.5g)未经进一步纯化即被用于下一步骤。

部分B：

使来自最后步骤的粗产物56溶解于HOAc(30mL)，再加入浓HCl(30mL)。将该混合物在室温下搅拌过夜。在减压下除去酸。加入水(100mL)，再经过滤收集固体(化合物57)，在空气中干燥(4.4g)。HPLC-MStR＝1.05min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₃NO₃219.1，实测的LCMS m/z 220.1(M+H)。

部分C：

使化合物57(4.4g)溶解于HOAc(100mL)，在氮气下加入10％Pd/C(1g)。在室温下将该混合物在氢气(5bar)下搅拌过夜。滤出Pd/C，浓缩滤液。该残余物58(3.5g)直接用于下一步骤而未进一步纯化。HPLC-MS tR＝0.91min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₅NO₃221.1，实测的LCMS m/z 222.1(M+H)。

部分D：

使内酰胺58(3.5g，15.8mmol)溶解于THF(100mL)，再将该溶液加热至45℃。小心加入LiAlH₄(1N，在THF中，32mL)，使所得混合物回流20小时。冷却至室温后，小心加入H₂O(1.2mL)，再加入15％NaOH(1.2mL)和H2O(3.6mL)。针该混合物搅拌另外30min，滤出固体，再用THF洗涤。将该有机物在真空下浓缩，该粗产物59(2.13g)未经进一步纯化即被用于反应中。HPLC-MS tR＝0.62min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₇NO₂207.1，实测的LCMS m/z 208.1(M+H)。

实施例62：

部分A：

在氩气下，使化合物2，3-二甲吡嗪(216mg，2.0mmol)溶解于CCl₄(10mL)中，加入2，2′-偶氮双(2-甲基丙腈)(33mg，0.2mmol)和NBS(356mg，2.0mmol)。使该混合物回流16小时。将该混合物过滤，再用CCl₄洗涤，浓缩该滤液，再用柱纯化(硅胶，EtOAc)，得到产物60(457mg)为黄色固体。HPLC-MS tR＝1.34min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₆H₆Br₂N₂263.9，实测的LCMS m/z 264.9(M+H)。

部分B：

化合物61是使用实施例41部分E中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物69。

部分C：

化合物62是使用实施例41部分F中描述的相同条件从化合物61制备的。HPLC-MS tR＝0.22min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₆H₇N₃121.1，实测的LCMS m/z 122.1(M+H)。

实施例65

部分A：

在氩气下，将在DMF(20mL)中的化合物N-Boc-3-吡咯烷酮(370mg，2.0mmol)在80℃下搅拌10分钟。然后加入DMF-DMA(29.9ml)。将以上混合物在相同温度下搅拌12小时。除去有机溶剂，再将该残余物通过柱子纯化，得到化合物63。

部分B：

在氩气下，使氨基甲酸甲酯(514mg，4.65mmol)和NaOEt(21％，在EtOH中，2.02mL)搅拌15分钟。然后加入化合物63(372mg，1.55mmol)。将该混合物在85℃下搅拌3.5小时。将反应混合物通过5％枸橼酸猝灭，再蒸发至干燥。将该残余物溶解于EtOAc，再用饱和NaHCO₃溶液、盐水洗涤，干燥。浓缩之后，将该残余物通过柱子纯化，得到化合物64。HPLC-MS tR＝1.48min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₇N₃O₃251.1，实测的LCMS m/z 252.1(M+H)。

部分C：

化合物64溶解于在1，4-二噁烷中的4N HCl中，再在室温下搅拌15分钟。浓缩之后，该残余物65直接用于下一步骤而未进一步纯化。HPLC-MS tR＝0.27min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₂H₁₇N₃O₃151.1，实测的LCMS m/z 152.1(M+H)。

中间体68：

方案15

其中R¹如上文针对式(I)化合物的定义。(在以上方案6中当R¹连接于氮时，在一个实施方案中，其具有如式II的R⁶和R⁷，式IV的R¹¹和R¹²，式V的R¹⁴和R¹⁵以及式VI的R¹⁷和R¹⁸的相同含义)

2-溴杂芳基-6-羧酸乙酯(65)可以与下列反应：(i)式66的硼酸化合物、(ii)式67的硼酸2，3-二甲-2，3-丁二醇酯化合物、或者(iii)式68的溴化锌化合物或(iv)胺(40)，其中使用适宜的钯偶合条件或者Cu催化剂与二胺(Buchwald/Hartwig反应条件，以制备式69的2-取代的杂芳基-6-酯中间体。然后可以使用LiOH使式60化合物水解，例如得到式71的2-取代的杂芳基-6-羧酸化合物。

实施例74

以下方案16说明了制备式(I)化合物的方法。

方案16

其中R¹、R²、R³和环A如上文针对式(I)化合物的定义。

在N，N-二异丙基乙胺的存在下，使用2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)，2-溴-杂芳基-6-羧酸可以与式65的胺化合物偶合，得到式72的酰氨基中间体。然后式72化合物可以使用上文方案所述的钯催化过程与R¹基团偶合，得到式73化合物。使用酸例如TFA或者甲酸从式73化合物中除去Boc保护基团，得到式(I)的苯胺基哌嗪衍生物。

实施例-制备中间体74：

方案17

使用方案中描述的HATU-介导的偶合方法，可以使式71的2-取代的-杂芳基-6-羧酸与胺偶合，得到结构74的化合物。

方案18

将4-{3-[(6-溴-吡啶-2-羰基)-氨基]-吡啶-4-基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(xxx，100mg，0.22mmol)、6-甲氧基-2，3-二氢-异吲哚-1-酮，1.2当量、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(20mg，0.02mmol)、Xantphos(26mg，0.04mmol)、磷酸钾(139mg，0.66mmol)在5ml的二噁烷中的混合物加热至85℃达16小时。使所得混悬液通过滤器以除去不溶解的固体。在真空中浓缩有机层。将该粗制化合物通过制备型LC纯化，得到化合物76。HPLC-MS tR＝3.84min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₉H₃₂N₆O₅，544.17，实测的LCMS m/z 545.20。

基本上根据以上制备中间体76所述的操作法，可以制备以下表5所给的化合物77-124。

表5

化合物125：

方案19

使化合物76(0.1mmol)冷却0℃，加入在二噁烷中的4N HCl，再在室温下搅拌30min。在真空下除去二噁烷，重新溶解于水-乙腈中，冷冻并低压干燥，得到化合物125为粉末。HPLC-MS tR＝0.75min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₄H₂₄N₆O₃，444.20.17，实测的LCMS m/z 445.20

化合物126-186

基本上根据中间体91所述的操作法，可以合成表6中的化合物。

表6

表7中所示的化合物187-199基本上使用使用方案-16中描述的类似操作制备。

表-7

中间体200：

方案20

使4-{3-[(6-溴-吡淀-2-羰基)-氨基]-吡啶-4-基}-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.15mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯并呋喃(0.3mmol)、1，1′-双(二苯基膦)二茂络铁钯(II)氯化物(0.075mmol)、磷酸钾(0.45mmol)在5mL的二噁烷中的混合物在密闭容器中在90℃下加热过夜。使该粗制混合物通过滤器。收集有机层，在真空下浓缩。粗物质通过制备型LC纯化，得到化合物200，其MH+m/z为500.22，保留时间为3.88min。HPLC-MS tR＝3.84min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₈H₂₉N₅O₄，499.22，实测的LCMS m/z 500.22

中间体201-248

表8所给的实施例201-222可以基本了根据实施例95中描述的操作来合成。

表8

化合物223：

方案21

使中间体200(0.1mmol)冷却0℃，再加入在二噁烷中的4N HCl，再在室温下搅拌30min。在真空下除去二噁烷，重新溶解在水-乙腈中，冷冻干燥，低压冻干，得到化合物223为粉末。HPLC-MS tR＝2.62min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₃H₂₁ N₅O₂，399.17，实测的LCMS m/z 400.20

表9列出的化合物224-248可以基本上根据化合物223的制备(方案-21)所述的操作法合成。

表9

化合物251：

方案22

化合物249：

使化合物2-氯嘧啶-4-甲酸(317mg，2.0mmol)溶解于DMF(5mL)，在室温下加入DIEA(350uL，2.0mmol)和HATU(760mg，2.0mmol)，接着添加4-(3-氨基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(556mg，2.0mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。将该混合物用EtOAc稀释，再用水、盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，将粗产物用柱纯化(硅胶，EtOAc)，得到产物249(620mg)为棕色固体。HPLC-MS t_R＝1.18min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₉H₂₃ClN₆O₃418.2，实测的LCMSm/z 419.2(M+H)。

化合物250：

使2-氯嘧啶衍生物249(50mg)和异二氢吲哚(50mg)溶解于乙腈(5mL)中，再将该混合物加热至80℃，再搅拌1小时。通过浓缩除去溶剂，再将残余物通过制备型LC纯化，得到化合物250。HPLC-MS t_R＝1.63min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₉H₃₅N₇O₅561.3，实测的LCMS m/z 562.3(M+H)。

化合物251：

使化合物250溶解于10％TFA/DCM，再在室温下搅拌过夜。浓缩之后，将残余物通过制备型LC纯化，得到化合物251。HPLC-MS t_R＝0.89min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₄H₂₇N₇O₃461.2，实测的LCMS m/z 462.2(M+H)。

化合物252-288：

基本上针对化合物252-288的制备所给出的相同操作，可以从化合物2-氯-嘧啶-4-羧酸制备化合物252-288(描述于以下表10)。

表10

制备化合物290：

方案23

化合物289：

向25ml圆底烧瓶中装入化合物249(84mg，0.2mmol)、内酰胺(49mg，0.3mmol)、Pd₂(dba)₃(18mg，0.02mmol)、Xant-phos(23mg，0.04mmol)和K₃PO₄(106mg，0.5mmol)，加入二噁烷(5mL)。通过使烧瓶交替连接到真空和氩气将该混合物充分脱气。然后将该所得混合物在80℃下加热过夜，通过EtOAc(40ml)稀释，再用盐水洗涤。浓缩之后，将该残余物用制备型LC纯化，得到产物289。HPLC-MS t_R＝1.45min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₈H₃₁N₇O₅545.2，实测的LCMSm/z 546.3(M+H)。

化合物290：

将化合物289(10mg)用HCl(4N，在二噁烷中，4mL)处理，并在室温下搅拌10min。浓缩之后，将该残余物用低压冻干干燥，得到化合物290。HPLC-MS t_R＝0.85min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₃H₂₃N₇O₃445.2，实测的LCMS m/z 446.1(M+H)。

实施例291-295：

基本上根据针对化合物290所述的相同操作，可以从化合物249制备化合物291-295(描述于以下表11)。

表11

制备化合物297：

方案24

化合物296：

使苯并咪唑(24mg，0.2mmol)和NaH(9.6mg，2.4mmol，60％)溶解于DMF(5mL)中，再将该混合物搅拌10分钟。然后将化合物249(84mg，0.2mmol)加至以上溶液中。将该混合物在50℃下搅拌10分钟以上。通过浓缩除去溶剂，再将残余物通过制备型LC纯化，得到化合物296。HPLC-MS t_R＝1.58min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₉H₃₅N₇O₅500.2，实测的LCMS m/z 501.2(M+H)。

化合物297：

使用以上制备化合物290所述相同条件制备化合物297。化合物297的HPLC-MS：t_R＝0.85min(UV_254m)；针对下式的质量计算值：C₂₃H₂₃N₇O₃400.2，实测的LCMS m/z 401.2(M+H)。

化合物298-309：

基本上根据针对制备化合物297所述的相同操作，可以从化合物249制备化合物298-309(描述于以下表12)。

表12

化合物310：

表-13中的化合物可以基本上从中间体249和相应的脲制备。

表-13

化合物312：

方案-25

化合物311：

向10mL微波瓶中装入化合物249(100mg，0.24mmol)、苯并呋喃-2-二羟基甲硼烷(58mg，0.36mmol)、Pd(dppf)Cl₂(19mg，0.024mmol)、三乙胺(73mg，0.72mmol)和甲醇(1mL)。将该混合物在120℃下辐射30分钟，然后浓缩，再用短硅胶柱使用乙酸乙酯洗脱，得到粗制化合物311。HPLC-MS t_R＝0.93min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₂H₂₀N₆O₂：500.2；实测的m/z：501.2(M+H)。

化合物312：

使该粗制中间体311溶解于10％TFA/DCM中，再在室温下搅拌2小时，此时将它浓缩，再通过制备型LC纯化，得到化合物312。HPLC-MS t_R＝1.61min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₂H₂₀N₆O₂：400.2；实测的m/z：401.2(M+H)。

化合物313-350：

通过制备实施例311中给出的相同操作法，可以从化合物249制备表14栏2中给出的化合物313-353。

表14

化合物354-397：

基本上通过制备实施例312(部分B)中给出的相同操作法，可以从化合物249制备表15栏2中给出的化合物354-397。

表15

方案-26

化合物405：

化合物403：

向10mL微波瓶中装入化合物249(100mg，0.17mmol)、4-碘吡唑(66mg，0.34mmol)、三乙胺(52mg，0.51mmol)和乙腈(1mL)。使该混合物在120℃下辐射30分钟，然后浓缩，再通过硅胶色谱法纯化(100％乙酸乙酯)，得到中间体403为无色固体。HPLC-MS t_R＝1.63min(UV_{254 nm})；针对下式的质量计算值：C₂₂H₂₅IN₈O₃：576.2；实测的m/z：577.2(M+H)。

化合物404：

向10mL微波瓶中装入化合物403(98mg，0.17mmol)、4-甲氧基苯基二羟基甲硼烷(51mg，0.34mmol)、Pd(dppf)Cl₂(14mg，0.017mmol)、三乙胺(52mg，0.51mmol)和甲醇(1mL)。使该混合物在120℃下辐射30分钟，然后浓缩，再用短硅胶柱使用乙酸乙酯洗脱，得到中间体化合物404。HPLC-MS t_R＝1.58min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₉H₃₂N₈O₄：556.2；实测的m/z：557.2(M+H)。

化合物405：

使中间体化合物404溶解于10％TFA/DCM，再在室温下搅拌2小时，此时将其浓缩，再通过制备型LC纯化，得到化合物405。HPLC-MSt_R＝2.66min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₄H₂₄N₈O₂：456.2；实测的m/z：457.2(M+H)。

化合物406-408：

基本上通过制备实施例405(部分B)中给出的相同操作法，可以从化合物100制备表16栏2中给出的化合物406-408。

表16

化合物409-412：

基本上通过制备实施例405(部分B)中给出的相同操作法，可以从化合物249制备表17栏2中给出的化合物409-412。

表17

方案-27：

化合物417：

化合物417

化合物412：

向含有化合物1H-吡唑-4-甲胺(1g，10.3mmol)和二氯甲烷(50mL)的烧瓶中加入二碳酸二叔丁酯(2.25g，10.3mmol)。使溶液搅拌过夜，脱去溶剂，最终通过硅胶色谱法纯化(50∶50EtOAc/乙烷)，得到化合物412为无色固体。HPLC-MS t_R＝1.16min  (ELSD)；针对下式的质量计算值：C₉H₁₅N₃O₂：197.1；实测的m/z：198.1(M+H)。

化合物413：

向含有在DMF(30mL)中的4-氯-3-硝基吡啶(1g，6.3mmol)和化合物412(1.24g，6.3mmol)的烧瓶中加入氢化钠(60％，混悬于矿物油中，277mg，6.9mmol)。使反应搅拌过夜，然后用饱和NaHCO₃溶液猝灭，再用EtOAc萃取。将该有机萃取物浓缩，再通过硅胶色谱法纯化(50∶50EtOAc/乙烷)，得到化合物413为无色固体。HPLC-MS t_R＝1.55min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₄H₁₇N₅O₄：319.1；实测的m/z：320.2(M+H)。

化合物414：

使化合物413(2g，6.3mmol)在乙醇(100mL)中的溶液以鼓吹Ar脱气，然后装入10％Pd/C(200mg)，再在H₂(1atm)下搅拌8小时。使反应用N₂鼓泡清洗，再用硅藻土过滤。浓缩反应，得到化合物414为蜡状固体。HPLC-MS t_R＝0.91min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₄H₁₉N₅O₂：289.2；实测的m/z：290.2(M+H)。

化合物415：

使化合物2-氯嘧啶-4-甲酸(317mg，2.0mmol)与化合物414(578mg，2.0mmol)和HATU(760mg，2.0mmol)混合，然后溶解于DMF(5mL)和DIEA(350uL，2.0mmol)中。将该混合物在室温下搅拌一夜，然后用水稀释，再用EtOAc萃取。将该有机萃取物浓缩，再通过硅胶色谱法纯化(50∶50EtOAc/乙烷)，得到化合物415为黄色固体。HPLC-MS t_R＝0.234min(ELSD)；针对下式的质量计算值：C₁₉H₂₀ClN₇O₃：429.9；实测的m/z：430.9(M+H)。

化合物416：

在10mL微波管中，使化合物415(100mg，0.23mmol)与5，6-二甲氧基异二氢吲哚(42mg，0.23mmol)、三乙胺(69mg，0.69mmol)和乙腈(2mL)混合。在100℃下使该溶液辐射30分钟，然后用EtOAc稀释，再用短硅胶柱过滤，用EtOAc清洗，得到中间体化合物416。HPLC-MS t_R＝1.71min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₄H₂₄N₈O₃：572.3；实测的m/z：573.3(M+H)。

化合物417：

使化合物416溶解于10％TFA/DCM。搅拌2小时后，使反应浓缩，然后通过制备型LC纯化，得到化合物417。HPLC-MS t_R＝3.00min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₄H₂₄N₈O₃：472.3；实测的m/z：473.3(M+H)。

化合物418：

方案-28：

化合物418：

向10mL微波瓶中装入5-溴苯并噻唑(214mg，1mmol)、双(频那醇)二硼(bis(pinacolato)diboron，381mg，1.5mmol)、Pd(ddpf)Cl₂(40mg，0.05mmol)、乙酸钾(490mg，5mmol)和DMSO(5mL)。在100℃下使该反应辐射并搅拌30分钟。使反应在水和EtOAc之间分配。将有机相分离，浓缩，然后通过硅胶色谱法纯化(1∶9EtOAc/乙烷)，得到化合物418为蜡状固体。HPLC-MS t_R＝2.01min(ELSD)；针对下式的质量计算值：C₁₃H₁₆BNO₂S：261.1；实测的m/z：262.1(M+H)。

化合物419-421：

基本上通过制备实施例418中给出的相同操作法，可以制备表18栏2中给出的化合物419-421。

表18

制备化合物426：

方案29

化合物423：

用实施例250所用相同的胺化条件合成化合物423，该制备开始于2-氯-4-甲氧基嘧啶-6-甲酸甲酯。HPLC-MS t_R＝1.87min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₇H₁₉N₃O₅345.1，实测的LCMS m/z 346.1(M+H)。

化合物424：

使化合物423(20mg)与浓HCl(1.5mL)混合，再使该混合物回流1小时。在真空下浓缩除去溶剂，该粗产物424未经任何进一步纯化即被用于下一步骤。HPLC-MS t_R＝0.87min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₅H₁₅N₃O₅317.1，实测的LCMS m/z 318.1(M+H)。

化合物425：

化合物424是使用实施例251中所述条件制备的，该制备开始于化合物424。HPLC-MS t_R＝1.27min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₉H₃₅N₇O₆577.3，实测的LCMS m/z 578.2(M+H)。

化合物426：

化合物426是使用方案22部分B中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物425。HPLC-MS t_R＝0.74min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₄H₂₇N₇O₄477.2，实测的LCMS m/z 478.1(M+H)。

制备化合物431：

方案30

化合物427：

使二氯嘧啶(298mg，2.0mmol)溶解于干燥的含有Et₃N(280uL，2.0mmol)的THF(10mL)中。将该混合物冷却至0℃，再加入异二氢吲哚(380mg，2.1mmol)。将所得混合物温热至室温，再搅拌3小时。加入EtOAc以稀释该混合物，再将该有机物用水、盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，残余物用柱纯化(硅胶，EtOAc/乙烷＝30∶70)，得到产物427(311mg)为淡黄色固体。HPLC-MS t_R＝1.49min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₄H₁₄ClN₃O₂291.1，实测的LCMS m/z 292.1(M+H)。

化合物428：

使化合物427(100mg，0.34mmol)溶解于DMF(5mL)中，再加入KCN(100mg)。将该混合物加热至150℃，搅拌过夜。冷却至室温后，加入EtOAc以稀释该混合物，再将该有机物用水、盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，残余物用柱纯化(硅胶，EtOAc/乙烷＝30∶70)，得到产物428(69mg)为淡黄色固体。HPLC-MS t_R＝1.56min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₅H₁₄N₄O₂282.1，实测的LCMS m/z 283.1(M+H)。

化合物429：

使化合物428(28mg，0.1mmol)与15％NaOH(2mL)混合，再将该混合物加热至回流，再搅拌2小时。冷却至室温后，加入6N HCl以调节pH至5～6。过滤收集该固体(429)，并将其用于于下一步骤而未经任何进一步纯化。HPLC-MS t_R＝0.76min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₁₅H₁₅N₃O₄301.1，实测的LCMS m/z 282.2(M+H)。

化合物430：

用针对制备化合物250(方案-22)的实施例所述相同条件制备化合物430。HPLC-MS t_R＝1.22min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₉H₃₅N₇O₅561.3，实测的LCMS m/z 562.2(M+H)。

化合物431：

化合物431是使用方案22部分B(制备化合物251)中描述的相同条件制备的，该制备开始于化合物430。HPLC-MS t_R＝0.75min(UV_{254 nm})；针对下式的质量计算值：C₂₄H₂₇N₇O₃461.2，实测的LCMS m/z 462.3(M+H)。

制备化合物432：

方案31

向化合物6-乙基硫基吡嗪-2甲酸(184mg，1mmol)在DMF(4ml)中的溶液中加入HATU(1.2当量)。反应混合物在室温下搅拌10分钟，然后加入胺，4-(3-氨基-吡啶-4-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(333.6mg，1.2当量)和二异丙基乙胺(3当量)。使反应混合物在室温下搅拌12小时。使反应混合物在真空下浓缩，再通过柱色谱法纯化(SiO2，乙烷/乙酸乙酯)，得到化合物432为固体(310mg，70％产率)。HPLC-MS tR＝1.25min(UV254nm)；针对下式的质量计算值：C21H28N6O3S 444.19，实测的LCMS m/z 445.15(M+H)。

化合物433：

方案32：

将化合物432(93mg，0.210mmol)和m-CPBA(51mg，77％，1.1mmol)在DCM(3mL)中的混合物在室温下搅拌30min，再用EtOAc(100mL)稀释。将该有机物用NaHCO₃(饱和水溶液，20mlx2)、盐水洗涤，再用Na₂SO₄干燥。浓缩之后，该粗产物433(90mg，93％)直接用于下一步骤而未进一步纯化。HPLC-MS t_R＝0.95min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₁H₂₈N₆O4S 460.19，实测的LCMS m/z 461.2(M+H)。

化合物434：

方案33

在室温下将化合物6-甲氧基-2，3-二氢-异吲哚-1-酮(2当量)在DMSO(1mL)中的溶液用NaH(60％，混悬在油中，2当量)处理15分钟。然后在室温下将化合物433(1当量)加至此溶液中，再将此溶液在室温下搅拌16小时。LCMS分析显示反应完全。将反应混合物用饱和氯化铵(0.5mL)和乙腈(0.5mL)猝灭。通过制备型LC纯化，得到化合物434。HPLC-MS t_R＝3.56min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₈H₃₁N₇O₅545.24，实测的LCMS m/z 546.2(M+H)。

化合物435：

方案34

将来自制备型LC的化合物434在真空下浓缩，再将残余物溶解于二噁烷(2mL)。向此溶液中加入4N HCl/二噁烷(2mL)，再搅拌1小时。反应完全后(LCMS分析)，浓缩，低压冻干，得到化合物435为固体。HPLC-MS t_R＝0.9min(UV_254nm)；针对下式的质量计算值：C₂₃H23N₇O₃445.19，实测的LCMS m/z 446.2(M+H)。

以下表19列出的化合物436和437是通过基本上使用针对化合物432至435描述的试验细节合成的。

表19

表20列出的化合物438基本上是根据化合物432至435所述信息的操作法合成的。

表-20

检测

CHK1SPA检测

利用表达于杆状病毒表达系统的重组His-CHK1作为酶源以及基于CDC25C生物素化肽作为底物(生物素-RSGLYRSPSMPENLNRPR)开发体外检测法。

材料和试剂：

1)CDC25C Ser 216C-称为生物素化肽底物(25mg)，保存于-20℃，研究遗传委托合成(Custom Synthesis by Research Genetics)：生物素-RSGLYRSPSMPENLNRPR 2595.4MW

2)His-CHK1 In House lot P976，235μg/mL，保存于-80℃。

3)D-PBS(无CaCl和MgCl)：GIBCO，Cat.#14190-144

4)SPA珠：Amersham，Cat.#SPQ0032：500mg/瓶

将10mL的D-PBS添加至500mg的SPA珠中以制备50mg/mL的工作浓度。保存于4℃。水合之后2周内使用。

5)96-孔白色微量板，有结合的GF/B滤器：Packard，Cat.#6005177

6)顶密封-96孔粘性膜：Perkin Elmer，Cat.#6005185

7)96-孔非结合白色聚苯乙烯板：Corning，Cat.#6005177

8)MgCl2：Sigma，Cat.#M-8266

9)DTT：Promega，Cat.#V3155

10)ATP，保存于4℃：Sigma，Cat.#A-5394

11)γ³³P-ATP，1000-3000Ci/mMol：Amersham，Cat.#AH9968

12)NaCl：Fisher Scientific，Cat.#BP358-212

13)H₃PO₄85％Fisher，Cat.#A242-500

14)Tris-HCL pH 8.0：Bio-Whittaker，Cat.#16-015V

15)十字孢碱(Staurosporine)，100μg：CALBIOCHEM，Cat.#569397

16)Hypure细胞培养级水，500mL：HyClone，Cat.#SH30529.02

反应混合物：

1)激酶缓冲液：50mM Tris pH 8.0；10mM MgCl₂；1mM DTT

2)His-CHK1，In House Lot P976，MW～30KDa，保存于-80℃。

要求6nM以得到～5,000CPM的阳性对照。对于1板(100rxn)：使8μL的235μg/mL(7.83μM)贮备液稀释于2mL激酶缓冲液中。将其制备成31nM混合物。加入20μL/孔。将其制备成6nM的最终反应浓度。

3)CDC25C生物素化肽。

将CDC25C稀释成1mg/mL(385μM)贮备液，保存于-20℃。对于1板(100rxn)：将10μL的1mg/mL肽贮备液稀释于2mL激酶缓冲液中。由此得到1.925μM混合物。加入20μL/rxn。将其制备成385nM的最终反应浓度。

4)ATP Mix。

对于1板(100rxn)：将10μL的1mM ATP(冷)贮备液和2μL新鲜P33-ATP(20μCi)稀释于5mL激酶缓冲液。由此得到2μM ATP(冷)溶液；加入50μL/孔以启动反应。最终体积为100μL/rxn，由此最终反应浓度为1μM ATP(冷)和0.2μCi/rxn。

5)终止溶液：

对于1板加入：向10mL清洗缓冲液2(2M NaCl 1％H₃PO₄)中：1mL SPA珠浆液(50mg)；加入100μL/孔

6)清洗缓冲液1：2M NaCl

7)清洗缓冲液2：2M NaCl，1％H₃PO₄

检测操作：

^*检测的总反应体积。^**反应终点的最终反应体积(添加终止溶液后)。

1)将化合物在水/10％DMSO中稀释至需要的浓度-这会得到在rxn中的1％的最终DMSO浓度。将10μL/rxn分配到适宜孔中。添加10μL 10％DMSO至阳性(CHK1+CDC25C+ATP)和阴性(CHK1+ATP仅)对照孔中。

2)在冰上融化酶-在激酶缓冲液中将酶稀释至适当浓度(参见反应混合物)并分配20μL至各孔中。

3)在冰上融化生物素化底物，再稀释于激酶缓冲液(参见反应混合物)。除了阴性对照孔以外添加20μL/孔。此外，添加20μL激酶缓冲液到这些孔中。

4)在激酶缓冲液中将ATP(冷)和P33-ATP稀释(参见反应混合物)。添加50μL/孔以启动反应。

5)使反应在室温下进行2小时。

6)通过添加100μL的SPA珠/终止溶液(参见反应混合物)终止反应，收集之前孵育15分钟。

7)将空白Packard GF/B滤板置于真空过滤装置(Packard板收集器)中，吸入200mL水通过以润湿该系统。

8)取出该空白板并放入Packard GF/B滤板。

9)抽吸反应通过该滤板。

10)洗涤：200mL每一次洗涤；1X用2M NaCl；1X用2M NaCl/1％H₃PO₄

11)使滤板干燥15min。

12)放置顶封-粘附在滤板的顶部。

13)滤板在Top Count中进行计数

设置：数据模式：CPM

放射核素：手动SPA：P33

闪烁器：Liq/plast

能量范围：低

IC ₅₀ 测定：从抑制剂化合物的8个点的连续稀释液，根据生成的抑制数据绘制剂量响应曲线，一式双份。化合物的浓度对％激酶活性绘图，该％激酶活性由处理样品的CPM除以未处理样品的CPM计算。为了生成IC₅₀值，然后将剂量响应曲线拟合成标准S形曲线，通过非线性回归分析导出IC₅₀值。

CDK2检测

杆状病毒构建：通过PCR细胞周期蛋白E克隆到pVL1393(Pharmingen，La Jolla，California)中，在氨基末端添加5个组氨酸残基，以镍树脂上纯化。表达的蛋白大约为45kDa。通过PCR使CDK2克隆到pVL1393中，在羧基末端添加血红细胞凝集素(haemaglutinin)附加表位(YDVPDYAS)。表达的蛋白大小大约为34kDa。

酶产生：以相同的多重感染使表达细胞周期蛋白E和CDK2的重组杆状病毒共感染到SF9细胞(MOI＝5)，达48小时。通过以1000RPM离心10分钟收集细胞，然后以5倍沉淀物体积的溶胞缓冲液使沉淀物在冰中溶胞达30分钟，该缓冲液含有50mM Tris pH 8.0，150mM NaCl，1％NP40，1mM DTT和蛋白酶抑制剂(Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany)。以15000RPM使溶胞产物旋转10分钟，保留上清液。将5mL镍珠(对于1升的SF9细胞)在溶胞缓冲液中洗涤3次(Qiagen GmbH，Germany)。将咪唑加至杆状病毒上清液中，使最终浓度为20mM，然后在4℃下与镍珠孵育45分钟。用溶胞缓冲液洗脱蛋白质，该溶胞缓冲液含有250mM咪唑。在2升激酶缓冲液中使洗脱液透析过夜，该激酶缓冲液含有50mM Tris pH 8.0，1mM DTT，10mM MgCl₂，100μM原钒酸钠和20％甘油。在-70℃下使酶分份保存。

体外细胞周期蛋白E/CDK2激酶检测

在低蛋白结合96-孔板(Corning Inc，Corning，New York)中进行细胞周期蛋白E/CDK2激酶检测。在激酶缓冲液中将酶稀释成50μg/mL的最终浓度，该激酶缓冲液含有50mM Tris pH 8.0，10mM MgCl₂，1mMDTT，和0.1mM原钒酸钠。用于这些反应的底物为得自组蛋白H1(来自Amersham，UK)的生物素化肽。使底物在冰上融化，再在激酶缓冲液中稀释成2μM。使化合物在10％DMSO中稀释至需要的浓度。对于每一激酶反应，使20μL的50μg/mL酶溶液(1μg的酶)和20μl的2μM底物溶液混合，然后与10μL稀释的化合物在每个用于测试的孔中合并。通过添加50μL of 2μM ATP和0.1μCi of 33P-ATP(来自Amersham，UK)来启动该激酶反应。使反应在室温下进行1小时。通过添加200μL终止缓冲液来终止反应，该缓冲液含有0.1％Triton X-100，1mM ATP，5mM EDTA和5mg/mL streptavidine涂渍的SPA珠(来自Amersham，UK)for 15分钟。然后使用Filtermate通用收集器(Packard/Perkin ElmerLife Sciences.)，将SPA珠收集到96-well GF/B滤板(Packard/PerkinElmer Life Sciences)中。通过用2M NaCl洗涤该珠2次，然后用含有1％磷酸的2M NaCl洗涤该珠2次，以清除非特异性信号。然后使用TopCount 96孔液体闪烁计数器(来自Packard/Perkin Elmer LifeSciences)测定放射信号。

IC ₅₀ 测定：从抑制剂化合物的8个点的连续稀释液，根据生成的抑制数据绘制剂量响应曲线，一式双份。化合物的浓度对％激酶活性绘图，该％激酶活性由处理样品的CPM除以未处理样品的CPM计算。为了生成IC₅₀值，然后将剂量响应曲线拟合成标准S形曲线，通过非线性回归分析导出IC₅₀值。

MEK1激酶检测

通过Hi-Five细胞的杆状病毒感染使全长活化磷酸化MEK1表达为6X组氨酸标记蛋白(His₆-MEK1)，该Hi-Five细胞与表达未标记的组成上活化的Raf-1的杆状病毒共感染。然后将若干毫克的活化His₆-MEK1通过Ni-NTA亲和色谱纯化，接着通过凝胶过滤色谱纯化。具有在亚区域II中突变成精氨酸的赖氨酸的全长鼠催化的非活化ERK2KR用作底物。从载体pET32aRC在IPTG-诱导的BL21D3大肠杆菌中使ERK2KR表达为生物素化6X组氨酸硫氧还蛋白标记的融合蛋白，再通过Ni-NTA亲和色谱纯化，接着通过Mono Q离子交换色谱纯化。在25℃下，在96孔板中以双份进行激酶反应达15min，每孔33μL，并且该激酶反应的组成为20nM His₆-MEK1、2μM ERK2KR、2μM ATP、10μCi/μL[γ-³³P]-ATP、10mM MgCl₂、0.01％β-辛基葡糖苷、1mM DTT、20mM HEPES pH 7.5、3％DMSO和范围为20μM降至0.08nM的测试化合物。通过添加30μL的1.5％o-磷酸来终止激酶反应，转染到Millipore Multiscreen-PH板中，再孵育5分钟使ERK2KR结合。根据预孵育反应来估计非特异性活性，其中将30μL的1.5％o-磷酸添加到每个孔中，然后添加酶。通过用0.75％o-磷酸真空过滤将终止板洗涤3次，接着用100％乙醇洗涤2次，再风干。将50μL的闪烁混合液(cocktail)加至每个孔中，再使用Wallac Microbeta 1450JET闪烁计数器检测掺入到ERK2KR中的³³P。使用ActivityBase软件计算百分抑制率、IC₅₀和Hill斜率值。

针对MEK1TdF检测的一般操作

在白色96-孔PCR板中，使1μM蛋白与在20μl检测缓冲液(25mMHEPES，pH 7.4，300mM NaCl，1mM DTT，2％DMSO，Sypro Orange 5x)中的微摩尔浓度(通常1-50μM)的化合物混合。通过清洁条带将板密封，再置于热循环仪(Chromo4，BioRad)上。在从25℃至95℃熔化期间以每0.5℃增量监测荧光强度。将数据输出到excel表，再经过自定义曲线拟合算法得到TdF Kd值。所有TdF Kd值具有的误差限为～50％，原因是结合的热含量变化所致的不确定性。

体外极光体TdF检测

极光体A检测

极光体A激酶检测是在低蛋白质结合的384-孔板(Corning公司)中进行。使全部试剂在冰上融化。将测试化合物在100％DMSO中稀释至需要的浓度。各反应物包含8nM酶(极光体A，Upstate目录#14-511)、100nM Tamra-PKAtide(分子装置，5TAMRA-GRTGRRNSICOOH)、25μM ATP(Roche)、1mM DTT(Pierce)及激酶缓冲剂(10mM Tris，10mM MgCl2，0.01％Tween 20)。对于各反应，将含有TAMRA-PKAtide、ATP、DTT及激酶缓冲剂的14μL，与1μL稀释的化合物合并。通过添加5μL稀释的酶，使激酶反应开始。使反应在室温下进行2小时。通过添加60μL IMAP珠粒(1∶400珠粒在递增性(94.7％缓冲剂A：5.3％缓冲剂B)1X缓冲剂，24mM NaCl中)使反应停止。在另外的2小时后，使用分析器AD(分子装置公司)测定荧光偏极化。

极光体B检测

极光体A激酶检测是在低蛋白质结合的384-孔板(Corning公司)中进行。使全部试剂在冰上融化。将化合物在100％DMSO中稀释至需要的浓度。各反应物包含26nM酶(极光体B，Invitrogen目录#pv3970)、100nM Tamra-PKAtide(分子装置，5TAMRA-GRTGRRNSICOOH)、50μM ATP(Roche)、1mM DTT(Pierce)及激酶缓冲剂(10mM Tris，10mM MgCl₂，0.01％Tween 20)。对于各反应，将含有TAMRA-PKAtide、ATP、DTT及激酶缓冲剂的14μL，与1μL稀释的化合物合并。通过添加5μL稀释的酶，使激酶反应开始。使反应在室温下进行2小时。通过添加60μL  IMAP珠粒(1∶400珠粒在递增性(94.7％缓冲剂A：5.3％缓冲剂B)1X缓冲剂，24mM NaCl中)使反应停止。在另外的2小时后，使用分析器AD(分子装置公司)测定荧光偏极化。

IC₅₀测定

剂量-响应曲线是从测试化合物的8点连续稀释液，从各重复产生的抑制数据作图。将化合物的浓度对激酶活性作图，该激酶活性是通过荧光偏极化度计算而得。为了产生IC₅₀值，接着使剂量-响应曲线拟合成标准S状曲线，并通过非线性回归分析导出IC₅₀值。

本发明化合物具有的Chk1 IC₅₀值的范围为约1nM至约50μM或更高，Chk2IC₅₀值的范围为约0.8μM至约50μM或更高，CDK2IC₅₀值的范围为约2.3μM至约50μM或更高，以及Chk1EC₅₀值的范围为约0.15μM至约1.5μM或更高。

本发明化合物可用于治疗或预防增生疾病，例如癌症；自身免疫疾病；病毒疾病；真菌疾病；神经学或神经变性病症(例如，阿耳滋海默氏疾病或帕金森氏病)；关节炎；炎症；局部缺血损伤；抗增生病症(例如眼部视网膜病)；神经疾病；秃发症；或心血管疾病。可通过施用至少一种本发明化合物治疗的特定疾病和病症包括但不限于美国专利No.6,413,974中公开的那些，其通过引用并入本文。

本发明化合物具有药理学性质。在一个实施方案中，本发明化合物(即式I-VI的那些)可以是蛋白质激酶的抑制剂、调节剂或调制剂。因此，本发明化合物可用于治疗或预防与一种或多种蛋白质激酶的活性相关的疾病和病症。可通过本发明化合物抑制、调节或调制的蛋白质激酶的非限制性实例包括周期素依赖性激酶(CDK)，例如CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6和CDK7、CDK8；极光体激酶例如极光体-A、极光体-B和极光体-C；有丝分裂原活化蛋白质激酶(MAPK/ERK)；糖原合成酶激酶3(GSK3β)；c-Met激酶，例如c-Met；Pim-1激酶；检查点激酶，例如Chk1和Chk2；酪氨酸激酶，例如HER亚族(包括例如，EGFR(HER1)、HER2、HER3和HER4)，胰岛素亚族(包括例如INS-R、IGF-IR、IR和IR-R)，PDGF亚族(包括例如PDGF-α与β受体、CSFIR、c-kit及FLK-II)，FLK家族(包括例如激酶插入功能部位受体(KDR)、胎儿肝脏激酶-1(FLK-1)、胎儿肝脏激酶-4(FLK-4)及似fms酪氨酸激酶-1(flt-1))；非受体蛋白质酪氨酸激酶，例如LCK、Src、Frk、Btk、Csk、Abl、Zap70、Fes/Fps、Fak、Jak、Ack和LIMK；以及生长因子受体酪氨酸激酶，例如VEGF-R2、FGF-R、TEK、AKT激酶等。

本发明化合物可用于抑制编码蛋白质激酶的致癌基因。此类致癌基因的非限制性实例包括C-Met。

本发明化合物可用于治疗或预防增生疾病。可以根据本发明方法治疗或预防的增生疾病的说明性实例包括但不限于癌症、动脉粥样硬化、关节炎、牛皮癣、特发性肺纤维化、硬皮症和肝硬化。

由于CDK在调节细胞增生中总体上的关键作用，抑制剂可以作为可逆的细胞生长抑制剂，其可用于治疗特征为异常细胞增生的任何疾病过程，例如，良性前列腺增生、家族性腺瘤息肉病、多发性神经纤维瘤、动脉粥样硬化、肺纤维化、关节炎、牛皮癣、肾小球肾炎、血管成形术或血管外科后的再狭窄、肥厚性瘢痕形成、炎性肠病、移植排斥、内毒素性休克和真菌感染。

本发明化合物亦可用于治疗阿耳滋海默氏疾病，如由CDK5参与τ蛋白质磷酰化作用的最近发现所指出的(J.Biochem，(1995)117，741-749)。

本发明化合物可诱发或抑制细胞凋亡。细胞凋亡应答在多种人类疾病中迷行。作为细胞凋亡的调制剂的本发明化合物将可用于治疗癌症(包括但不限于上文所提及的类型)、病毒感染(包括但不限于疱疹病毒(herpevirus)、痘病毒、EB病毒、Sindbis病毒及腺病毒)、预防HIV感染的个人中的AIDS发展、自身免疫疾病(包括但不限于全身性红斑狼疮、全身性红斑狼疮(erythematosus)、自身免疫所介导的肾小球肾炎、类风湿性关节炎、牛皮癣、炎性肠疾病及自身免疫糖尿病)、神经变性病症(包括但不限于阿耳滋海默氏疾病、AIDS相关的痴呆症、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、色素性视网膜炎、脊柱肌肉萎缩及小脑退化)、脊髓发育不良综合征、再生障碍性贫血、与心肌梗塞形成有关的缺血性损伤、中风与再灌注损伤、节律不齐、动脉粥样硬化、毒素诱发的或酒精相关的肝病、血液学疾病(包括但不限于慢性贫血与再生障碍性贫血)、肌骨系统的变性疾病(包括但不限于骨质疏松症与关节炎)、阿司匹林敏感性鼻窦炎、囊性纤维病、多发性硬化、肾脏疾病及癌症疼痛。

作为CDK抑制剂的本发明化合物可调制细胞RNA与DNA合成的水平。因此，此类药剂可用于治疗病毒感染(包括但不限于HIV、人类乳头状瘤病毒、疱疹病毒、痘病毒、EB病毒、Sindbis病毒及腺病毒)。

本发明化合物亦可用作其它蛋白质激酶的抑制剂，例如蛋白质激酶C、her2、raf1、MEK1、MAP激酶、EGF受体、PDGF受体、IGF受体、PI3激酶、wee1激酶、Src、Abl，并因此有效治疗与其它蛋白质激酶有关的疾病。

因此，本发明的一个方面是治疗患者疾病或病症的方法，其中该疾病或病症与一种或多种蛋白质激酶有关，该方法包括给所述患者施用治疗有效量的至少一种本发明化合物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药。

在特别的实施方案中，本发明化合物可用于治疗或预防多种癌症及其转移灶，包括(但不限于)下列：癌瘤，包括膀胱癌，乳癌，结肠癌，肾癌，肝癌，肺癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌，头部与颈部癌，食道癌，胆囊癌，卵巢癌，胰脏癌，胃癌，子宫颈癌，甲状腺癌，前列腺癌及皮肤癌，包括鳞状细胞癌；淋巴系造血肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、毛样细胞淋巴瘤、外膜细胞淋巴瘤、骨髓细胞瘤及Burkett氏淋巴瘤；骨髓系造血肿瘤，包括急性与慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和前骨髓细胞白血病；间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和周围神经系统肿瘤，包括脑瘤例如星细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤(例如多形性成胶质细胞瘤)或神经鞘瘤；以及其它肿瘤，包括黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、异皮着色(xenoderoma pigmentosum)、角质棘皮瘤(keratoctanthoma)、甲状腺滤胞癌及卡波西氏肉瘤。本发明化合物可用于治疗原发性肿瘤和/或转移性肿瘤。

本发明化合物亦可用于癌症的化学预防。化学预防被定义为是通过阻断起始致突变事件，或通过阻断已经遭受侵入的前恶性细胞的进展，而抑制侵入性癌症的发展，或抑制肿瘤复发。

本发明化合物亦可用于抑制肿瘤血管生成与转移。

本发明化合物亦可并用(一起或相继施用)一种或多种抗癌治疗法，例如放射疗法，和/或至少一种不同于本发明化合物的抗癌剂。本发明化合物可存在于相同剂量单位中作为抗癌剂，或在分离的剂量单位中作为抗癌剂。

本发明的另一方面为治疗一种或多种与细胞周期蛋白依赖性激酶有关的疾病的方法，其包括对需要此种治疗的患者施用一定量的第一化合物，其为式I-VI化合物，或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；以及一定量的至少一种第二化合物，该第二化合物为不同于本发明化合物的抗癌剂，其中第一化合物与第二化合物的量会产生治疗效果。

适用于与本发明化合物并用的另外的抗癌剂的非限制性实例(亦称为抗肿瘤剂)包括细胞生长抑制剂、细胞毒素剂(例如但不限于DNA干扰剂(例如顺铂或阿霉素))；紫杉烷类(例如泰索帝(taxotere)、红豆杉醇)；拓扑异构酶II抑制剂(例如依托泊苷或替尼泊苷)；拓扑异构酶I抑制剂(例如依立替康(或CPT-11)、camptostar、或托泊替康)；微管蛋白干扰剂(例如紫杉醇、多西他赛(docetaxel)或艾波希酮类(epothilones))；激素剂(例如他莫西芬)；胸苷酸(thymidilate)合成酶抑制剂(例如5-氟尿嘧啶)；抗代谢剂(例如甲氨喋呤(methoxtrexate))；烷化剂(例如替莫唑胺(TEMODAR^TM，得自Schering-Plough Corporation，Kenilworth，New Jersey)、环磷酰胺)；法呢基蛋白质转移酶抑制剂(例如，SARASAR^TM(4-[2-[4-[(11R)-3，10-二溴-8-氯-6，11-二氢-5H-苯并[5，6]环庚[1，2-b]吡啶-11-基]-1-哌啶基]-2-氧代乙基]-1-哌啶甲酰胺，或者SCH 66336，得自Schering-Plough Corporation，Kenilworth，New Jersey)、tipifarnib(

或R115777，得自Janssen Pharmaceuticals)、L778，123(法呢基蛋白质转移酶抑制剂，得自Merck&Company，Whitehouse Station，New Jersey)、BMS 214662(法呢基蛋白质转移酶抑制剂，得自Bristol-Myers Squibb Pharmaceuticals，Princeton，NewJersey)；信号转导抑制剂(例如，Iressa(得自Astra ZenecaPharmaceuticals，England)、Tarceva(EGFR激酶抑制剂)、EGFR的抗体(例如，C225)、GLEEVEC^TM(C-abl激酶抑制剂，得自NovartisPharmaceuticals，East Hanover，New Jersey)；干扰素类例如，intron(得自Schering-Plough Corporation)、Peg-Intron(得自Schering-PloughCorporation)；激素治疗组合法；芳香酶组合法；ara-C、阿霉素、环磷酰胺和吉西他滨。

其它有用的另外的抗癌剂包括但不限于尿嘧啶氮芥、氮芥、异磷酰胺(异磷酰胺)、美法仓、苯丁酸氮芥、双溴丙基哌嗪(Pipobroman)、三乙烯三聚氰胺、ara-C、阿霉素、环磷酰胺、氯苯吩嗪(

得自Genzyme Oncology，Cambridge，Massachusetts)、克拉屈滨(

得自Janssen-Cilag Ltd.)、aphidicolon、B细胞单克隆抗体(B细胞单克隆抗体)(得自Genentech/Biogen Idec)、sunitinib(

得自Pfizer)、dasatinib(或BMS-354825，得自Bristol-Myers Squibb)、tezacitabine(得自Aventis Pharma)、Sml1、氟达拉滨(得自Trigan Oncology Associates)、喷司他丁(得自BC Cancer Agency)、triapine(得自VionPharmaceuticals)、didox(得自Bioseeker Group)、trimidox(得自ALSTherapy Development Foundation)、amidox、3-AP(3-氨基吡啶-2-甲酰硫代半卡巴腙)、MDL-101，731((E)-2’-脱氧-2’-(氟亚甲基)胞啶)和吉西他滨。

其它有用的另外的抗癌剂包括但不限于三乙烯硫代磷胺、白消安、卡莫司汀、环己亚硝脲、链唑霉素、氮烯咪胺、氟尿嘧啶脱氧核苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫基鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、奥沙利铂、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂(ELOXATIN^TM，得自Sanofi-SynthelaboPharmaceuticals，France)、喷司他丁、长春碱、长春新碱、长春地辛、博来霉素、更生霉素、柔红霉素、阿霉素、表柔比星、去甲氧基柔红霉素(Idarubicin)、光神霉素、脱氧共间型霉素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、替尼泊苷、17α-炔雌二醇、已烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟羟甲睾酮、丙酸甲雄烷酮、睾内酯、乙酸甲地孕酮、甲基氢化泼尼松、甲基睾酮、氢化泼尼松、氟羟脱氢皮质甾醇、三对甲氧苯氯乙烯、羟孕甾酮、氨基导眠能、雌氮芥、甲孕酮乙酸酯、亮丙瑞林、氟他米特、托瑞米芬、戈舍瑞林、顺铂、卡铂、奥沙利铂、Aroplatin、羟基脲、安沙吖啶、甲基苄肼、米托坦(Mitotane)、米托蒽醌、左旋四咪唑、诺维本、阿那曲唑(Anastrazole)、来曲唑(Letrazole)、卡培他滨、雷洛昔芬、屈洛昔芬、六甲密胺、Avastin、Herceptin、Bexxar、Velcade、Zevalin、三氧化二砷(Trisenox)、希罗达(Xeloda)、长春瑞滨、卟菲尔钠(Profimer)、Erbitux、微脂粒(Liposomal)、噻替哌、六甲密胺、美法仓、曲妥单抗、Lerozole、氟维司群、依西美坦、氟维司群、Ifosfomide、利妥昔单抗、C225和Campath。

若被调配成固定剂量，则此种组合产物采用在本文所述剂量范围内的本发明化合物，以及在其剂量范围内的其它医药活性剂或治疗药物。例如，已发现CDC2抑制剂欧洛姆新(olomucine)会在诱发细胞凋亡上，与已知细胞毒剂产生协同作用(J.Cell Sci.，(1995)108，2897)。当组合配方不适当时，本发明化合物亦可与已知抗癌剂或细胞毒剂相继施用。本发明并不限制施用的顺序；本发明化合物可以在已知抗癌剂或细胞毒剂施用的前或的后施用。例如，周期素依赖性激酶抑制剂黄酮吡啶醇(flavopiridol)的细胞毒活性受到与抗癌剂一起施用的顺序所影响。Cancer Research，(1997)57，3375。此种技术是在本领域技术人员以及从业医生的技术范围内。

因此，在一个方面，本发明包括用于治疗患者癌症的方法，该方法包括给所述患者施用一定量的至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，以及一种或多种其它抗癌治疗形式，其中本发明化合物/其它治疗形式的量会产生需要的治疗效果。在一个实施方案中，该至少一种本发明化合物和该一种或多种其它治疗形式起协同作用。在一个实施方案中，该至少一种本发明化合物和该一种或多种其它治疗形式起增效作用。

在一个实施方案中，该其它治疗形式是手术。

在另一实施方案中，该其它治疗形式是放射治疗。

在另一实施方案中，该其它治疗形式是生物疗法，例如激素疗法或抗癌疫苗疗法。

在另一实施方案中，本发明提供了在有需要的患者中抑制一种或多种检查点激酶的方法，其包括给该患者施用治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。

本发明的另一方面是在有需要的患者中治疗与一种或多种检查点激酶有关的疾病或延缓该疾病进展的方法，其包括施用治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。

本发明的再另一方面是治疗一种或多种与检查点激酶有关的疾病的方法，其包括给有此治疗需要的患者施用至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；以及至少一种另外的抗癌剂，其中该至少一种本发明化合物和该至少一种抗癌剂的量产生治疗效果。

本发明的另一方面是在有需要的患者中治疗与一种或多种检查点激酶有关的疾病或延缓该疾病进展的方法，其包括施用治疗有效量的医药组合物，该医药组合物包含至少一种药学可接受的载体和至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体的组合。

在以上方法中，要抑制的检查点激酶可以是Chk1和/或Chk2。

本发明的另一方面是在有需要的患者中抑制一种或多种酪氨酸激酶的方法，其包括给该患者施用治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。

本发明的再另一方面是在有需要的患者中治疗与一种或多种酪氨酸激酶有关的疾病或延缓该疾病进展的方法，其包括施用治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。

本发明的另一方面是治疗一种或多种与酪氨酸激酶有关的疾病的方法，其包括给有此治疗需要的患者施用至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；以及至少一种另外的抗癌剂，其中该至少一种本发明化合物和该至少一种抗癌剂的量产生治疗效果。

本发明的另一方面是在有需要的患者中治疗与一种或多种酪氨酸激酶有关的疾病或延缓该疾病进展的方法，其包括施用治疗有效量的医药组合物，该医药组合物包含至少一种药学可接受的载体和至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体的组合。

在以上方法中，该酪氨酸激酶可以是VEGFR(VEGF-R2)、EGFR、HER2、SRC、JAK和/或TEK。

本发明的另一方面是在有需要的患者中抑制一种或多种Pim-1激酶的方法，其包括给该患者施用治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。

本发明的再另一方面是在有需要的患者中治疗与一种或多种Pim-1激酶有关的疾病或延缓该疾病进展的方法，其包括施用治疗有效量的至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体。

本发明的另一方面是治疗一种或多种与Pim-1激酶有关的疾病的方法，其包括给有此治疗需要的患者施用至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；以及至少一种另外的抗癌剂，其中该至少一种本发明化合物和该至少一种抗癌剂的量产生治疗效果。

本发明的另一方面是在有需要的患者中治疗与一种或多种Pim-1激酶有关的疾病或延缓该疾病进展的方法，其包括施用治疗有效量的医药组合物，该医药组合物包含至少一种药学可接受的载体和至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体的组合。

本发明的另一方面是治疗一种或多种与极光体激酶有关的疾病的方法，其包括给有此治疗需要的患者施用至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体；以及至少一种另外的抗癌剂，其中该至少一种本发明化合物和该至少一种抗癌剂的量产生治疗效果。

本发明的另一方面是在有需要的患者中治疗与一种或多种极光体激酶有关的疾病或延缓该疾病进展的方法，其包括施用治疗有效量的医药组合物，该医药组合物包含至少一种药学可接受的载体和至少一种本发明化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体的组合。

本发明化合物的药理学性质可通过多种药理学检测法确认。后文描述的举例性的药理学检测法已经用根据本发明的化合物及其盐、溶剂合物、酯或前药进行。

本发明还涉及医药组合物，其包含至少一种本发明化合物，或该化合物的药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，以及至少一种药学可接受的载体。

对于从本发明所述的化合物制备医药组合物而言，惰性的、药学可接受的载体可以是固体或液体。固体形式制剂包括粉末剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂及栓剂。粉末剂与片剂可包含约5至约95百分比的活性成份。适当固体载体为本领域已知的，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖或乳糖。片剂、粉末剂、扁囊剂及胶囊剂可作为适于口服施用的固体剂型使用。药学可接受的载体的实例及各种组合物的制法，可参阅A.Gennaro(ed.)，Remington’s PharmaceuticalSciences，18^th Edition，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。

液体形式制剂包括溶液、悬浮液及乳液。以下作为实例，可指出水或水-丙二醇溶液用于非经肠注射，或添加增甜剂与遮光剂，以用于口服溶液、悬浮液及乳液。液体形式制剂亦可包括供鼻内施用的溶液。

适用于吸入的气溶胶制剂可包括溶液及呈粉末形式的固体，其可并用药学可接受的载体，例如惰性压缩气体，例如氮。

亦包括固体形式制剂，其意欲在使用的前不久，被转化成液体形式制剂，供口服或非经肠施用。此种液体形式包括溶液、悬浮液及乳液。

本发明化合物亦可以经皮方式传输。经皮组合物可采取乳膏、洗剂、气溶胶和/或乳液的形式，并可被包含在基质或储器型的经皮贴片中，其是本领域为此目的常规方式。

本发明化合物亦可以皮下方式传输。

化合物优选以经口方式或者静脉内或者鞘内或者它们的某些适宜组合的方式施用。

此医药制剂优选呈单位剂型。在此种形式中，制剂被再分成适当大小的单位剂量，其含有适当量的活性成份，例如达到所需目的有效量。

活性化合物在单位剂量制剂中的量可以改变或调整为约0.001mg至约500mg。在一个实施方案中，活性化合物在单位剂量制剂中的量为约0.01mg至约250mg。在另一实施方案中，活性化合物在单位剂量制剂中的量为约0.1mg至约100mg。在另一实施方案中，活性化合物在单位剂量制剂中的量为约1.0mg至约100mg。在另一实施方案中，活性化合物在单位剂量制剂中的量为约1.0mg至约50mg。在再另一实施方案中，活性化合物在单位剂量制剂中的量为约1.0mg至约25mg。

所采用的实际剂量可依患者的需要量及被治疗症状的严重性而改变。确定对于特定状况的适当剂量服法是在本领域技能范围内。为方便起见，可以根据需要将总日服剂量区分，并在一天期间内分次施用。

本发明化合物和/或其药学可接受的盐的施用量与频率根据主治医生的判断作调整，其中考虑到一些因素，例如患者的年龄、症状及大小以及被治疗病征的严重性。对口服施用的典型建议每日剂量服法可涵盖从约0.01mg/天至约2000mg/天的范围的本发明化合物。在一个实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约1mg/天至1000mg/天。在另一实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约1mg/天至500mg/天。在另一实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约100mg/天至500mg/天。在另一实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约1mg/天至250mg/天。在另一实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约100mg/天至250mg/天。在再另一实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约1mg/天至100mg/天。在再另一实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约50mg/天至100mg/天。在进一步的实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约1mg/天至50mg/天。在另一实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约25mg/天至50mg/天。在进一步的实施方案中，口服施用的每日剂量服法为约1mg/天至25mg/天。每日剂量可以在单一剂量中施用，或者可以分成2至4个分剂量施用。

在一个方面，本发明提供了一种药盒，其包含治疗有效量的至少一种本发明化合物或者所述化合物的药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，以及药学可接受的载体、介质或稀释剂。

在另一个方面，本发明提供了一种药盒，其包含一定量的至少一种本发明化合物或者所述化合物的药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药，以及一定量的上文罗列的至少一种抗癌疗法和/或另外的抗癌剂，其中该两种或多种成份的量会产生需要的治疗效果。

本发明不限于实施例所公开的具体实施方案的范围，这些实施例将作为本发明一些方面的说明，并且并且在功能上相当的任何实施方案均落入本发明范围内。事实上，除了本文所示和描述的那些以外，本发明的许多修饰对于相关领域的技术人员而言是显而易见的，并且将落入所附的权利要求范围内。

已经引用了许多参考文献，它们的全部公开内容以其整体并入本文。

Claims (2)

1.下式所示化合物或其药学可接受的盐：

2.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学可接受的盐，以及至少一种药学可接受的载体。