CH386051A - Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes zur gleichzeitigen Immunisierung von Hunden oder Füchsen gegen Staupe und Hepatitis contagiosa canis - Google Patents
Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes zur gleichzeitigen Immunisierung von Hunden oder Füchsen gegen Staupe und Hepatitis contagiosa canisInfo
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Description
Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes zur gleichzeitigen Immunisierung von Hunden oder Füchsen gegen Staupe und Hepatitis contagiosa canis
Es ist ein Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes zur gleichzeitigen Immunisierung von Hunden oder Füchsen gegen Staupe und Hepatitis contagiosa canis bekannt, bei dem man ein aus Hundelebern undloder Hundemilzen durch Extraktion oder aus einer Gewebekultur gewonnenes Hepatitis contagiosa canis-Virus-haltiges Material mittels Formaldehyd inaktiviert, hierauf den freien Formaldehydanteil durch Zusatz einer Lösung von sauren Salzen der schwefligen Säure, insbesondere Natriumbisulfit, abbindet und das so gewonnene Produkt mit einer aus dem embryonierten Hühnerei gewonnenen staupevirushaltigen Suspension mischt und die Mischung gefriertrocknet.
In dem genannten Verfahren wird also neben einem gegen Hepatitis contagiosa canis wirksamen Anteil eine aus dem embryonierten Hühnerei in an sich bekannter Weise gewonnene Staupevirus-haltige Suspension verwendet.
Es wurde nun gefunden, dass man anstelle einer aus embryonierten Hühnereiern gewonnenen Staupevirus-haltigen Suspension eine solche verwenden kann, die aus einer Gewebekultur, z. B. Hundenierengewebekultur, erhältlich ist. Dabei wird das Staupevirus in wenigstens 50 aufeinanderfolgenden Passagen in einer Gewebekultur unter Verwendung einer gepufferten Nährflüssigkeit bei einem pH-Wert von 7 bis 8 gezüchtet, die so erhaltene, das modifizierte Virus enthaltende Nahrflüssigkeit abgeerntet und ge gebenenfalls lyophilisiert.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ein Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes zur gleichzeitigen Immunisierung von Hunden oder Füchsen gegen Staupe und Hepatitis contagiosa canis, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man eine aus Hundelebern oder Hundemilzen durch Extraktion oder aus Gewebekultur gewonnenes Hepatitis contagiosa canis-Virus-haltiges Material mittels Formaldehyd inaktiviert, hierauf den freien Formaldehydanteil durch Zusatz einer Lösung, die die 1, 5 bis 2fach stöchiometrische Menge an sauren Salzen der schwefligen Säure, insbesondere Natriumbisulfit, enthält, abbindet und das so gewonnene Produkt mit einer aus einer Gewebekultur gewonnenen, durch wenigstens 50 aufeinanderfolgenden Passagen modifiziertes Staupevirus enthaltenden Suspension mischt und die Mischung gefriertrocknet.
Zweckmässig geht man so vor, dass man ein Mischungsverhältnis von einem gegen Staupe wirksamen Anteil, der aus etwa 25 % eines modifizierten Staupevirus-haltigen Gewebekulturmaterials, 60 % Rinderbouillon vom pH-Wert 7, 6 und 15 % einer 50 % igen Glukoselösung besteht, mit einem annähernd gleich grossen, gegen Hepatitis contagiosa canis wirksamen Anteil, der aus etwa 90 % eines inaktivierten Hepatitis contagiosa canis-Virus-haltigen Extraktes und 10 % einer 2. % igen Aluminiumhydroxydlösung besteht, einhält.
Beispiel
1000 ml einer aus Hundenierenzellen-Gewebekultur gewonnenen, modifiziertes Staupevirus enthaltenden Suspension werden mit 1000 ml einer mit Formaldehyd und Natriumbisulfit behandelten Hepatitis contagiosa canis-Virussuspension unter Eiskühlung gemischt. Je 2 ml dieser so erhaltenen Mischung werden in Fläschchen abgefüllt, im Stehen bei einer Temperatur von-400 C eingefroren und in einer Gefriertrocknungsanlage lyophilisiert.
Die getrocknete in evakuierten Fläschchen befindliche Substanz stellt eine Vaccine gegen Staupe und Hepatitis contagiosa canis in haltbarer und lager fähiger Form dar.
Prufung auf Vertragliclakeit und Wirksamkeit und Bestimfnung der Antikorpeytiter der gemass der Erfindung hergestellten Vaccine Immunisierung:
7 für das Staupe-und das Hepatitis contagiosa canis-Virus empfängliche 8 Wochen alte Welpen eines Wurfes (Bastarde) werden in einem Isolierzwinger untergebracht. 5 der Hunde werden mit je 1 Dosis = 2 ml der erfindungsgemäss hergestellten Vaccine subkutan vacciniert. Die Vaccine besitzt einen Staupevirustiter von 102 33 TCIDÏo. Die Abkürzung TCID bedeutet Tissue Culture Infectivity Dosis. TCID ;", stellt diejenige Dosis dar, die in 50 % der Gewebekulturen einen cytopathogenen Effekt bewirkt, sie errechnet sich nach der Methode von Reed und Muench (Am. J. Hyg. 27, 493 (1938).
Die beiden unbehandelten Hunde verbleiben als Kontrollen.
Vertraglichkeit :
Alle sieben Hunde bleiben während der Beobachtungsdauer von acht Wochen gesund. Lediglich drei der vaccinierten Hunde zeigen am 4. oder 5. Tage post vaccinationem (p. v.) einem massigen, ephemeren Temperaturanstieg, jedoch ohne sonstige klinische Symptome.
Bestimmung der Antikorper gegen Staupe :
Von sämtlichen Hunden werden vor Versuchsbeginn und 3 Wochen nach der Impfung Serumproben entnommen und auf Antikörper gegen Staupe und Hepatitis contagiosa canis im Virusneutralisationstest untersucht. Alle vaccinierten Hunde besitzen post vaccinationem eine erhebliche Menge an staupevirus-neutralisierenden Antikörpern in ihrem Blutserum, während bei den unbehandelten Kontrolltieren 3 Wochen p. v. keine Staupeantikörper nachweisbar sind. Der durchschnittliche Gehalt der Antikör- per bei den vaccinierten Hunden beträgt 1317740 staupevirus-neutralisierende Dosen (Staupe-VND).
Die Staupe-VND errechnen sich wieder nach der oben zitierten Methode von Reed und Muench. Sie ergeben sich aus der Anzahl der beim Virusneutralisationstest verwendeten Virus-ID0O multipliziert mit dem reziproken 50 % igen neutralisierenden Endwert des geprüften Serums. Sie sind auf 1 ml des unverdünnten Serums bezogen (Dräger, Ackermann, Barth : Medizin und Chemie, Band VI/58 (1958), Farbwerke Hoechst AG., Verlag Chemie, Weinheim/Bergstrasse).
Bestiminung der Antikorper gegen Hepatitis contagiosa canis :
Bei der Untersuchung auf Hepatitis contagiosa canis-Antikörper werden vor der Impfung bei keinem der Hunde Hepatitis contagiosa canis-virusneutralisierende Antikörper festgestellt, drei Wochen p. v. besitzen dagegen alle vaccinierten Hunde einen befriedigenden Gehalt an Hepatitis contagiosa canis-VND.
Im Serum der nicht-vaccinierten Kontrollen lassen sich keine Hepatitis contagiosa canis-Antikörper nachweisen. Der durchschnittliche Gehalt der Serumantikörper bei den vaccinierten Hunden beträgt 987 988 Hepatitis contagiosa canis-VND. Die Errechnung der Hepatitis contagiosa canis-VND erfolgt analog der der Staupe-VND. Während die Staupe VND im embryonierten Hühnerei bestimmt wird, erfolgt die Bestimmung der Hepatitis contagiosa canis-VND in der Gewebekultur aus Hundenierenepithelgewebe.
Belastungsinfektion mit Staupe-Virus
5 Wochen p. v. werden sowohl die vaccinierten als auch die Kontrollhunde mit einem hundepathogenen Staupevirusstamm der Behringwerke AG., Marburg/ Lahn, subkutan infiziert. Der verwendete Virusstamm führt bei staupeempfänglichen Hunden zum sogenannten Virusstadium der Staupe, das charakterisiert wird durch eine zweigipfelige Fieberkurve. Auf der Höhe der 2. Fieberzacke lässt sich Staupevirus in den isolierten Organ der erkrankten Hunde durch die KBR nachweisen.
Nach der Testinfektion bleiben alle vaccinierten Hunde vollkommen gesund und fieberfrei, die beiden unbehandelten Kontrollhunde zeigen dagegen die typischen Symptome einer Staupeinfektion. Das Staupevirus wird durch die Komplementbindungs-Reaktion nachgewiesen.
Belastutagsinfektion mit Hepatitis contagiosa canis-
Vit-us :
14 Tage nach der Infektion mit dem Staupevirus werden alle vaccinierten Hunde unter Zuziehung von Infektionskontrollen auch mit einem hundepathogenen Hepatitis contagiosa canis-Virus infiziert. Alle vaccinierten Hunde bleiben danach gesund und zeigen keinerlei Symptome, die für Hepatitis contagiosa canis sprechen. Die Infektionskontrollen dagegen erkranken mit Fieber an Hepatitis contagiosa canis und verenden schliesslich. Hepatitis contagiosa canis wird bei ihnen durch den Sektionsbefund und den Nachweis des Virus in der Komplementbindungs-Reaktion festgestellt.
Praxisversuch :
Die erfindungsgemäss hergestellte Vaccine wurde unter Praxisbedingungen überprüft. Von 9 verschiedenen Prüfern wurden 292 Hunde mit je 1 Dosis subkutan vacciniert. Die Impflinge wurden auf lokale und allgemeine Verträglichkeit der Vaccine beobachtet. Ausserdem wurden von einem Teil der Impflinge vor und 4 Wochen nach der Impfung Serumproben für die Untersuchung auf virusneutralisierende Antikörper genommen.
Die Vaccine erwies sich als gut verträglich und für die Immunisierung geeignet und führte zu keinen beachtenswerten Nebenerscheinungen. Die Serumproben enthielten stets eine erhebliche Menge von staupevirusneutralisierenden Antikörpern, was die ausgezeichnete Wirksamkeit der Vaccine bestätigt.
Claims (1)
- PATENTANSPRUCH Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes zur gleichzeitigen Immunisierung von Hunden oder Füchsen gegen Staupe und Hepatitis contagiosa canis, dadurch gekennzeichnet, dass man ein aus Hundelebern oder Hundemilzen durch Extraktion oder aus Gewebekultur gewonnenes Hepatitis contagiosa canis Virus-haltiges Material mittels Formaldehyd inaktiviert, hierauf den freien Formaldehydanteil durch Zusatz einer Lösung, die die 1, 5-2-fach stöchiometrische Menge an sauren Salzen der schwefligen Säure, insbesondere Natriumbisulfit, enthält, abbindet, und das so gewonnene Produkt mit einer aus einer Gewebekultur gewonnenen, durch wenigstens 50 aufeinanderfolgende Passagen modifiziertes Staupevirus enthaltenden Suspension mischt und die Mischung gefriertrocknet.UNTERANSPRUCH Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Mischungsverhältnis von einem gegen Staupe wirksamen Anteil, der aus etwa 25 % eines modifizierten Staupevirus-haltigen Ge webekulturmaterials, 60 % Rinderbouillon vom pH Wert 7, 6 und 15 % eines 50 % igen Glucoselösung besteht, mit einem annähernd gleich grossen, gegen Hepatitis contagiosa canis wirksamen Anteil, der aus etwa 90 % eines inaktivierten Hepatitis-contagiosacanis-Virus-haltigen Extraktes und 10 % einer 2 % igen Aluminiumhydroxydlösung besteht, einhält.
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