CH376931A - Procédé de fabrication de sels d'oxytocine - Google Patents

Description

  
 



  Procédé de fabrication de sels d'oxytocine
 La présente invention concerne un procédé de préparation de sels d'oxytocine caractérisé en ce que   l'on    fait réagir l'oxytocine avec un acide polycarboxylique.



   Les sels d'oxytocine obtenus selon l'invention présentent en général une grande stabilité et une forte activité;
 ils sont généralement acceptables du point de vue pharmaceutique, et peuvent tre isolés facilement sous forme solide et gardent une forte activité sous la forme solide dans des conditions défavorables de stockage et d'application.



   Ces sels peuvent tre administrés par voie sublinguale ou par voie buccale; on obtient ainsi l'effet oxytocique désiré par absorption à travers les muqueuses.



   Comme exemples d'acides polycarboxyliques, on peut citer les acides hydrocarbonés polycarboxyliques comme les acides succinique, maléique, glutarique,   citlaconique    et   glutaconique;    les acides hydroxyhydrocarbonés polycarboxyliques comme les acides malique, tartrique et citrique; les acides aminohydrocarbonés polycarboxyliques comme les acides aspartique et glutamique; et d'autres acides polycarboxyliques substitués. Les acides polycarboxyliques utilisés pour la formation du sel sont de préférence non toxiques. Cependant, comme l'oxytocine est   biologi-    quement active à des doses extrmement faibles, un acide polycarboxylique qui est modérément toxique à forte dose peut éventuellement tre utilisé.



   On peut employer   l'oxytoeine    [alpha-hypophamine] isolée des glandes pituitaires des animaux d'abattoir, ou un produit synthétique préparé par synthèse de polypeptides. L'oxytocine utilisée en médecine clinique est généralement un extrait glandulaire fractionné d'activité biologique reproductible et n'est pas un composé chimiquement pur. De mme, il est avantageux de fabliquer et d'appliquer les sels obtenus par le procédé selon l'invention sous une forme incomplètement purifiée, suivant une normalisation par bio-essai. Le degré de pureté chimique du sel obtenu correspond à celui de l'oxytocine utilisée comme matière première, et   l'on    obtient un sel pur lorsque   l'on    emploie de l'oxytocine pure.



   L'oxytocine naturelle ou synthétique est généralement obtenue dans une solution aqueuse contenant de l'acide acétique et des sels minéraux. Par évaporation de cette solution à siccité, l'acide acétique se volatilise et le pH de la solution atteint le côté basique de la neutralité, conditions dans lesquelles l'oxytocine se décompose graduellement.



   On peut employer comme matière première, dans le procédé selon l'invention de l'oxytocine obtenue par extraction de solutions aqueuses faiblement acides d'oxytocine brute ou du commerce au moyen d'un mélange solvant contenant un composé phénolique et un hydrocarbure chloré. Conviennent à cet effet les composés phénoliques tels que le phénol, un crésol ou un xylénol; et un solvant chloré comme le chloroforme, le chlorure de méthylène ou le dichlorure d'éthylène. Après lavage éventuel de cet extrait au solvant organique au moyen d'une petite quantité d'eau dont on se débararrasse, on le dilue au moyen de 1 à 10 volumes d'un éther aliphatique, d'éther de pétrole ou d'un mélange de ces solvants et on l'extrait à l'eau, ce qui fait passer l'oxytocine dans la phase aqueuse.

   On sépare de faibles quantités de phénol de la phase aqueuse par extraction à l'éther ou au moyen d'un solvant hydrocarboné.



   On traite alors la solution aqueuse restante au moyen d'environ un équivalent en poids de l'acide choisi par équivalent en poids de l'oxytocine. Etant donné la nature polyfonctionnelle des acides utilisés pour former ces sels, on obtient aussi un sel possédant  les degrés désirés de stabilité et d'activité lorsqu'on a recours à moins d'un équivalent d'acide; inversement, on peut appliquer un excès d'acide, auquel cas le produit isolé contient un peu d'acide libre.



   La solution est ensuite portée à siccité par exemple par séchage sous vide à l'état congelé. Le résidu obtenu est le sel désiré qui, à la différence de l'oxytocine et de ses sels avec des acides   volatiles,    présente un degré de stabilité élevé.



   Le procédé selon l'invention peut également tre mis en oeuvre en concentrant jusqu'à siccité la solution aqueuse d'oxytocine restant après l'extraction, en titrant rapidement une solution ou une suspension du résidu avec environ un équivalent en poids de l'acide choisi (ou en titrant jusqu'à un pH d'environ   3,5-4,5)    et en séchant la solution acidifiée, de préférence à l'état congelé. On peut aussi mettre en oeuvre le procédé en employant comme matière première de l'oxytocine plus hautement purifiée ou un sel d'oxytocine et d'un acide volatil.



   Pour l'application pharmaceutique d'un sel obtenu par le procédé selon l'invention, on peut le dissoudre dans de l'eau. On peut normaliser la solution aqueuse et l'adsorber sur des rondelles de papier. Ces rondelles, après séchage, constituent une forme appropriée pour l'administration sublinguale. Suivant une variante, on peut préparer des pastilles ou comprimés convenant pour l'administration par voie sublinguale et contenant un véhicule comme le lactose ou le glucose, en ajoutant la solution aqueuse ou le sel solide au mélange servant à la préparation des pastilles ou comprimés.



   Un autre avantage des sels d'acides polycarboxyliques obtenus par le procédé selon l'invention réside dans le fait qu'ils présentent la caractéristique d'tre très solubles dans l'eau et qu'ils agissent rapidement après avoir été administrés. Ce point les différencie des sels insolubles d'oxytocine qui ne présentent de l'intért, le cas échéant, que pour des applications dans lesquelles on désire une action retardée.



   Exemple   1   
 On extrait un échantillon de 133   ml    de concentré d'alpha-hypophamine titrant 250 unités oxytociques et 3 unités d'hypertenseur par ml., au moyen de 40   ml    au total d'un mélange de phénol et de chloroforme utilisé en quatre portions égales. On prépare le mélange solvant appliqué dans la proportion de 4 parties en poids de phénol pour 3 parties en poids de chloroforme. On lave l'extrait combiné au moyen de 4   ml    d'eau distillée puis on le dilue au moyen de 100   ml    d'éther.

   On extrait la solution éthérée au moyen de 30   ml    au total d'eau distillée en six portions égales et on lave l'extrait aqueux combiné (qui contient la fraction désirée), à trois reprises au moyen de portions de 10   ml    d'éther, on le décolore partiellement au moyen de charbon de bois activé et on le filtre.



  Au filtrat on ajoute 20 mg d'acide citrique hydraté, et on lyophilise la solution. Le produit résiduel obtenu sous la forme d'une poudre est le citrate d'oxytocine d'activité biologique élevée. La reconstitution d'une solution aqueuse en dissolvant ce produit dans de l'eau donne une solution ayant un pH d'environ 3,6.



   On peut démontrer la stabilité de cette préparation de citrate d'oxytocine sous des conditions de stockage défavorables en imprégnant une rondelle de papier filtre au moyen de la solution reconstituée et en mesurant la retention de l'activité au bout d'un certain temps. Par ce procédé on montre que les rondelles de papier filtre prévues pour contenir 10 unités d'oxytocine active par rondelle, retiennent au moins 90 % de cette activité après un stockage pendant 500 heures à 450 C.



     Exeiîiple    2
 On extrait à cinq reprises une fraction de 53   ml    d'une solution d'oxytocine titrant 230 unités oxytociques par ml, au moyen de portions de 5   ml    d'une solution contenant des parties égales en volume de phénol et de chloroforme. On lave l'extrait combiné de phénol-chloroforme, à deux reprises au moyen de fractions de 2   ml    d'eau puis on le fractionne en le mélangeant avec 50   ml    d'éther, 50   ml    d'heptane et 5   ml    d'eau.



   On conserve la phase aqueuse et la combine avec deux extraits aqueux supplémentaires de 5   ml    de la solution éthérée. On lave cet extrait aqueux combiné (qui contient la fraction désirée) à deux reprises au moyen de fractions de 15   ml    d'éther, on chasse les traces d'éther en agitant sous pression réduite et on traite au moyen de 3   ml    d'une solution aqueuse contenant 1,5 mg d'acide succinique par ml. On congèle la solution et on la sèche dans cet état, ce qui donne 47,5 mg d'une poudre chargée électriquement, friable et non-hydroscopique. Ce produit est le succinate d'oxytocine titrant 216 unités oxytociques par mg. La reconstitution d'une solution aqueuse par dissolution du produit dans 10   ml    d'eau distillée donne une solution présentant un pH d'environ 4,2.



   Exemple 3
 On extrait à cinq reprises, au moyen de portions de 5   ml    d'une solution contenant des parties égales en volume de phénol et de chloroforme, une portion de 51   ml    d'une solution d'oxytocine titrant 230 unités oxytociques par millilitre. On lave à deux reprises l'extrait au solvant organique au moyen de portions de 2   ml    d'eau, dont on se débarrasse. On ajoute ensuite 100   ml    d'un mélange prépalé à partir de volumes égaux d'éther et d'éther de pétrole et on extrait la solution résultante à trois reprises au moyen de portions de 5   ml    d'eau.

   On lave les extraits aqueux combinés (qui contiennent la fraction désirée), à deux reprises au moyen de portions de 15   ml    d'éther, on élimine les traces d'éther sous vide et on traite au moyen de 2,9   ml    d'une solution contenant 1,4 mg par   ml    d'acide   malique    dans l'eau distillée. On lyophilise la solution, ce qui donne environ 48 mg d'une préparation de   l-malate    d'oxytocine qui présente un titre biologique de 220 unités oxytociques  par mg. La reconstitution d'une solution en dissolvant ce produit dans 10   ml    d'eau distillée donne une solution aqueuse présentant un pH d'environ 4,15.



   Exemple 4
 On extrait une portion de 50   ml    d'une solution d'oxytocine titrant 230 unités oxytociques par   ml    au moyen de 25   ml    au total, en cinq portions égales, d'une solution contenant des parties égales en volume de phénol et de chloroforme. On lave l'extrait à deux reprises au moyen de portions de 2 ml d'eau, dont on se débarrasse, puis on le dilue au moyen de 50 ml d'éther et de 50 ml d'heptane. On extrait la solution à trois reprises au moyen de portions de 5 ml d'eau et on lave les extraits combinés (qui contiennent la fraction désirée) à deux reprises au moyen de portions de 15 ml d'éther, puis on agite sous pression réduite pour achever l'élimination de l'éther de la phase aqueuse.

   A la solution aqueuse restante on ajoute 3   ml    d'une solution aqueuse contenant 2 mg. d'acide glutamique par ml. On congèle la solution et on la sèche sous vide dans cet état, ce qui donne 42 mg d'une préparation de glutamate d'oxytocine.



  Lorsqu'on dissout ce produit dans 10   ml    d'eau distillée, la solution ainsi reconstituée a un pH d'environ 4,4.



   Exemple 5
 On traite un mélange agité de 100   ml    d'eau et de 50 mg d'oxytocine fraîchement préparée et purifiée (le produit synthétique convient) au moyen de 12 mg d'acide citrique hydraté. On lyophilise la solution résultante, ce qui donne un résidu de citrate d'oxytocine. On reconstitue une solution aqueuse de ce sel en le dissolvant comme dans l'exemple 1.



   Exemple 6
 On traite une solution de 45 mg d'oxytocine fraîchement préparée et putifiée dans 10   ml    d'acide acétique à 0,05 % dans de l'eau distillée, avec 4,4 ml d'une solution contenant 1,4 mg/ml d'acide   malique    dans de l'eau distillée. Par lyophilisation de cette solution, on obtient un résidu de   l-malate    d'oxytocine sous la forme d'une poudre présentant une activité d'environ 330 unités oxytociques par mg. Une solution aqueuse préparée en dissolvant 150 mg de ce sel dans 5   ml    d'eau distillée contient environ 1.000 unités oxytociques actives par ml.
  

Claims (1)

1. REVENDICATION Procédé de fabrication de sels d'oxytocine, caractérisé en ce que l'on fait réagir l'oxytocine avec un acide polycarboxylique.

   SOUS-REVENDICATIONS 1) Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que la réaction est effectuée dans un milieu aqueux.

   2) Procédé selon la sous-revendication 1 caractérisé en ce que le sel d'oxytocine est isolé par évaporation de l'eau du milieu aqueux réactionnel.

   3) Procédé selon la revendication, caractérisé en ce que l'acide polycarboxylique est l'acide citiique, l'acide succinique, l'acide malique ou l'acide glutamique.

   4) Procédé selon la revendication, caractérisé en ce qu'on utilise environ un équivalent en poids de l'acide polycarboxylique par équivalent en poids d'oxytocine.