BRPI0910969B1

BRPI0910969B1 - dispositivo

Info

Publication number: BRPI0910969B1
Application number: BRPI0910969A
Authority: BR
Inventors: James B. McClain; Douglas Taylor
Original assignee: Micell Technologies, Inc.
Priority date: 2008-04-17
Filing date: 2009-04-17
Publication date: 2019-12-17
Also published as: CN102083397B; AU2009251504A1; EA201001497A1; KR101221681B1; CA2721832C; BRPI0910969A2; EP2271294A4; WO2009146209A1; JP2011518005A; EA020655B1; CA2721832A1; US20170290959A1; BRPI0910969B8; KR20110009163A; US9789233B2; JP5608160B2; SG192523A1; US10350333B2; HK1259285A1; EP3360586B1

Abstract

dispositivo, método para preparar um dispositivo, e, método para tratar um paciente é aqui fornecido um dispositivo que compreende: a. stent; b. uma pluralidade de camadas sobre a dita estrutura do stent para formar o dito dispositivo; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um ou mais agentes ativos; em que pelo menos parte do agente ativo está na forma cristalina.

Description

“DISPOSITIVO”

REFERÊNCIA CRUZADA

Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório U.S. N, 61/045.928, depositado em 17 de abril de 2008 e Pedido Provisório U.S. N^s 61/104.669 depositado em 10 de outubro de 2008. Os conteúdos dos pedidos são aqui incorporados por referência em sua totalidade.

Este pedido diz respeito ao Pedido Provisório U.S. N^s60/912.408, depositado em 17 de abril de 2007, Pedido Provisório U.S. N° 60/912.394, depositado em 17 de abril de 2007, Pedido Provisório U.S. N° 60/981.445, depositado em 19 de outubro de 2007 e Pedido Provisório U.S. intitulado Stents Having Bioabsorbable Layers, Certificado do Representante N^e 32695-704-108, depositado em 17 de abril de 2009. Os conteúdos dos pedidos são aqui incorporados por referência em sua totalidade. FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Os stents de eluição de droga são usadas para tratar as desvantagens dos stents simples, a saber, tratar a restenose e promover a cicatrização dos vasos depois da abertura do bloqueio pela PCI/colocação do stent. Alguns stents de eluição de droga correntes podem ter herança física, química e terapêutica no vaso com o tempo. Outros podem ter menos herança, mas não são otimizados quanto à espessura, flexibilidade de desdobramento, acesso às lesões difíceis e minimização da invasão da parede de vaso. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção diz respeito a métodos para formar stents que compreendem um polímero bioabsorvível e um agente farmacêutico ou biológico na forma de pó sobre um substrato.

É desejável ter um stent de eluição de droga com herança física, química e terapêutica mínima no vaso depois de um período de tempo proscrito. Este período de tempo está fundamentado na cicatrização eficaz do vaso depois da abertura do bloqueio pela PCI/colocação do stent (correntemente acreditado pelos clínicos condutores ser de 6 a 18 meses).

Também é desejável ter stents de eluição de droga de espessura transversal mínima para (a) flexibilidade de desdobramento (b) acesso a vasos pequenos (c) intrusão minimizada na parede de vaso e sangue.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um ou mais agentes ativos; em que pelo menos uma porção do agente ativo está na forma cristalina.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina.

Em algumas formas de realização, o dispositivo tem pelo menos uma camada de agente farmacêutico definida por um espaço físico tridimensional ocupado pelas partículas de cristal do dito agente farmacêutico e o dito espaço físico tridimensional é livre de polímero. Em algumas formas de realização, pelo menos algumas das partículas cristalinas no dito espaço físico tridimensional que define a dita pelo menos uma camada de agente farmacêutico estão em contato com partículas poliméricas presentes em uma camada polimérica adjacente à dita pelo menos uma camada de agente farmacêutico definida pelo dito espaço tridimensional livre de polímero.

Em algumas formas de realização, a pluralidade de camadas compreende uma primeira camada polimérica que compreende um primeiro polímero bioabsorvível e uma segunda camada polimérica que compreende um segundo polímero bioabsorvível, em que a dita pelo menos uma camada que compreende o dito agente farmacêutico está entre a dita primeira camada polimérica e a dita segunda camada polimérica. Em algumas formas de realização, o primeiro e segundo polímero bioabsorvíveis são o mesmo polímero. Em algumas formas de realização, o primeiro e segundo polímero bioabsorvíveis são diferentes. Em algumas formas de realização, a segunda camada polimérica tem pelo menos um ponto de contato com pelo menos uma partícula do dito agente farmacêutico na dita camada de agente farmacêutico e a dita segunda camada polimérica tem pelo menos um ponto de contato com a dita primeira camada polimérica.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal; e a dita segunda camada polimérica tem uma segunda porção de camada polimérica ao longo do dito stent longitudinal em que a dita segunda porção de camada é livre de contato com partículas do dito agente farmacêutico. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem pelo menos uma camada de agente farmacêutico definida por um espaço físico tridimensional ocupado pelas partículas de cristal do dito agente farmacêutico e o dito espaço físico tridimensional é livre de polímero.

Em algumas formas de realização, o stent compreende pelo menos um suporte tendo um comprimento de suporte ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que a dita segunda porção de camada estende-se substancialmente ao longo do dito comprimento de suporte. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se substancialmente ao longo do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent compreende pelo menos cinco suportes, cada suporte tendo um comprimento de suporte ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que a dita segunda porção de camada estende-se substancialmente ao longo do comprimento de suporte de pelo menos dois suportes. Em algumas formas de realização, o stent compreende pelo menos cinco suportes, cada suporte tendo um comprimento de suporte ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que a dita segunda porção de camada estende-se substancialmente ao longo do comprimento de suporte de pelo menos três suportes. Em algumas formas de realização, o stent compreende pelo menos cinco suportes, cada suporte tendo um comprimento de suporte ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que a dita segunda porção de camada estende-se substancialmente ao longo do comprimento de suporte de no mínimo quatro suportes. Em algumas formas de realização, o stent compreende pelo menos cinco suportes, cada suporte tendo um comprimento de suporte ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que a dita segunda porção de camada estende-se substancialmente ao longo do comprimento de suporte de todos os ditos pelo menos cinco suportes. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estendese substancialmente ao longo do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 50 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 75 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 85 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 90 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tern um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 99 % do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o revestimento laminado tem uma espessura total e a dita segunda porção de camada polimérica tem uma espessura de cerca de 0,01 % a cerca de 10 % da espessura total do dito revestimento laminado. Em algumas formas de realização, o revestimento laminado tem uma espessura total e a dita segunda porção horizontal de camada polimérica tem uma espessura de cerca de 1 % a cerca de 5 % da espessura total do dito revestimento laminado. Em algumas formas de realização, o revestimento laminado tem uma espessura total de cerca de 5 pm a cerca de 50 pm e a dita segunda porção horizontal de camada polimérica tem uma espessura de cerca de 0,001 pm a cerca de 5 pm. Em algumas formas de realização, o revestimento laminado tem uma espessura total de cerca de 10 pm a cerca de 20 pm e a dita segunda porção de camada polimérica tem uma espessura de cerca de 0,01 pm a cerca de 5 pm.

Em algumas formas de realização, o revestimento laminado é pelo menos 25 % em volume de agente farmacêutico. Em algumas formas de realização, o revestimento laminado é pelo menos 35 % em volume de agente farmacêutico. Em algumas formas de realização, o revestimento laminado é de cerca de 50 % em volume de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, pelo menos uma porção do agente farmacêutico está presente em uma fase separada de uma ou mais fases formadas pelo dito polímero.

Em algumas formas de realização, o agente farmacêutico é pelo menos 50 % cristalino. Em algumas formas de realização, o agente farmacêutico é pelo menos 75 % cristalino. Em algumas formas de realização, o agente farmacêutico é pelo menos 90 % cristalino. Em algumas formas de realização, o agente farmacêutico é pelo menos 95 % cristalino. Em algumas formas de realização, o agente farmacêutico é pelo menos 99 % cristalino.

Em algumas formas de realização, o stent tem comprimento de stent longitudinal e o revestimento tem uma superfície externa de revestimento ao longo do dito comprimento de stent longitudinal, em que o dito revestimento compreende agente farmacêutico na forma cristalina presente no revestimento abaixo da dita superfície externa de revestimento. Em algumas formas de realização, o stent tem comprimento de stent longitudinal e o revestimento tem uma superfície externa de revestimento ao longo do dito comprimento de stent longitudinal, em que o dito revestimento compreende agente farmacêutico na forma cristalina presente no revestimento até pelo menos 1 pm abaixo da dita superfície externa de revestimento. Em algumas formas de realização, o stent tem comprimento de stent longitudinal e o revestimento tem uma superfície externa de revestimento ao longo do dito comprimento de stent longitudinal, em que o dito revestimento compreende agente farmacêutico na forma cristalina presente no revestimento até pelo menos 5 pm abaixo da dita superfície externa de revestimento.

Em algumas formas de realização, o revestimento exibe um espectro de raio X mostrando a presença do dito agente farmacêutico na forma cristalina. Em algumas formas de realização, o revestimento exibe um espectro de Raman mostrando a presença do dito agente farmacêutico na forma cristalina. Em algumas formas de realização, o revestimento exibe uma curva de Calorimetria por varredura Diferencial (DSC) mostrando a presença do dito agente farmacêutico na forma cristalina. O dispositivo de acordo com as reivindicações de 36 a 38, em que o dito revestimento exibe espectro de Dispersão de raio X de Ângulo Amplo (WAXS) mostrando a presença do dito agente farmacêutico na forma cristalina. Em algumas formas de realização, o revestimento exibe um espectro de dispersão de radiação de ângulo amplo mostrando a presença do dito agente farmacêutico na forma cristalina. Em algumas formas de realização, o revestimento exibe um espectro de infravermelho (IR) mostrando a presença do dito agente farmacêutico na forma cristalina.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal ao stent ao longo substancialmente do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal ao stent ao longo de pelo menos 75 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal ao stent ao longo de pelo menos 85 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal ao stent ao longo de pelo menos 90 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal ao stent ao longo de pelo menos 95 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal ao stent ao longo de pelo menos 99 % do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e uma pluralidade de suportes ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal a pelo menos no mínimo 50 % dos ditos suportes. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e uma pluralidade de suportes ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal a pelo menos no mínimo 75 % dos ditos suportes. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e uma pluralidade de suportes ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal a pelo menos no mínimo 90 % dos ditos suportes. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e uma pluralidade de suportes ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal a pelo menos no mínimo 99 % dos ditos suportes. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que uma exame pela microscopia eletrônica do dispositivo mostra que o dito revestimento é conformai ao dito stent ao longo de pelo menos 90 % do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento tem um espessura substancialmente uniforme ao longo substancialmente do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento tem uma espessura substancialmente uniforme ao longo de pelo menos 75 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento tem uma espessura substancialmente uniforme ao longo de pelo menos 95 % do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento tem uma espessura média determinada por uma média calculada a partir de valores de espessura de revestimento medidos em uma pluralidade de pontos ao longo do dito eixo de stent longitudinal; em que uma espessura do revestimento medida em qualquer ponto ao longo eixo de stent longitudinal é de cerca de 75 % a cerca de 125 % da dita espessura média. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento tem uma espessura média determinada por uma média calculada a partir de valores de espessura de revestimento medidos em uma pluralidade de pontos ao longo do dito eixo de stent longitudinal; em que uma espessura do revestimento medida em qualquer ponto ao longo eixo de stent longitudinal é de cerca de 95 % a cerca de 105 % da dita espessura média.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent, em que uma primeira camada compreende um primeiro polímero bioabsorvível, uma segunda camada compreende um agente farmacêutico, uma terceira camada compreende um segundo polímero bioabsorvível, uma quarta camada compreende o agente farmacêutico e uma quinta camada compreende um terceiro polímero bioabsorvível, em que o agente farmacêutico é selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo e em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina.

Em algumas formas de realização, pelo menos dois do dito primeiro polímero bioabsorvível, do dito segundo polímero bioabsorvível e do dito terceiro polímero bioabsorvível são o mesmo polímero. Em algumas formas de realização, o primeiro polímero bioabsorvível, o segundo polímero bioabsorvível e o terceiro polímero bioabsorvível são o mesmo polímero. Em algumas formas de realização, pelo menos dois do dito primeiro polímero bioabsorvível, do dito segundo polímero bioabsorvível e do dito terceiro polímero bioabsorvível são polímeros diferentes. Em algumas formas de realização, o primeiro polímero bioabsorvível, o dito segundo polímero bioabsorvível e o dito terceiro polímero bioabsorvível são polímeros diferentes.

Em algumas formas de realização, a terceira camada tem pelo menos um ponto de contato com partículas do dito agente farmacêutico na dita segunda camada; e a dita terceira camada tem pelo menos um ponto de contato com a dita primeira camada.

Em algumas formas de realização, pelo menos dois do primeiro polímero, do segundo polímero e do terceiro polímero são o mesmo polímero e em que o dito mesmo polímero compreende um copolímero de PLGA. Em algumas formas de realização, o terceiro polímero tem um taxa de dissolução in vitro mais alta do que a taxa de dissolução in vitro do primeiro polímero. Em algumas formas de realização, o terceiro polímero é copolímero de PLGA com uma razão de cerca de 40:60 a cerca de 60:40 e o primeiro polímero é um copolímero de PLGA com uma razão de cerca de 70:30 a cerca de 90:10. Em algumas formas de realização, o terceiro polímero é copolímero de PLGA tendo um peso molecular de cerca de 10 kD e o segundo polímero é um copolímero de PLGA tendo um peso molecular de cerca de 19 kD.

Em algumas formas de realização, a medição da taxa de dissolução in vitro dos ditos polímeros compreende contatar o dispositivo com o meio de eluição e determinar a perda de peso do polímero em um ou mais pontos de tempo selecionados. Em algumas formas de realização, a medição da taxa de dissolução in vitro dos ditos polímeros compreende contatar o dispositivo com o meio de eluição e determinar a perda de peso do polímero em um ou mais pontos de tempo selecionados.

E aqui fornecido um dispositivo, que compreende: um stent; e um revestimento sobre o dito stent que compreende um primeiro polímero bioabsorvível, um segundo polímero bioabsorvível; e agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina e em que o primeiro polímero tem um taxa de dissolução in vitro mais alta do que a taxa de dissolução in vitro do segundo polímero.

Em algumas formas de realização, o primeiro polímero é copolímero de PLGA com uma razão de cerca de 40:60 a cerca de 60:40 e o segundo polímero é um copolímero de PLGA com uma razão de cerca de 70:30 a cerca de 90:10. Em algumas formas de realização, o primeiro polímero é copolímero de PLGA tendo um peso molecular de cerca de 10 kD e o segundo polímero é um copolímero de PLGA tendo um peso molecular de cerca de 19 kD. Em algumas formas de realização, a medição da taxa de dissolução in vitro dos ditos polímeros compreende contatar o dispositivo com o meio de eluição e determinar a perda de peso do polímero em um ou mais pontos de tempo selecionados.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um primeiro polímero bioabsorvível, pelo menos uma das ditas camadas compreende um segundo polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um ou mais agentes ativos; em que pelo menos uma porção do agente ativo está na forma cristalina e em que o primeiro polímero tem um taxa de dissolução in vitro mais alta do que a taxa de dissolução in vitro do segundo polímero.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um primeiro polímero bioabsorvível, pelo menos uma das ditas camadas compreende um segundo polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina e em que o primeiro polímero tem um taxa de dissolução in vitro mais alta do que a taxa de dissolução in vitro do segundo polímero.

Em algumas formas de realização, o primeiro polímero é copolímero de PLGA com uma razão de cerca de 40:60 a cerca de 60:40 e o segundo polímero é um copolímero de PLGA com uma razão de cerca de 70:30 a cerca de 90:10. Em algumas formas de realização, o primeiro polímero é copolímero de PLGA tendo um peso molecular de cerca de 10 kD e o segundo polímero é um copolímero de PLGA tendo um peso molecular de cerca de 19 kD. Em algumas formas de realização, a medição da taxa de dissolução in vitro compreende contatar o dispositivo com o meio de eluição e determinar a perda de peso do polímero em um ou mais pontos de tempo selecionados.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível, pelo menos uma das ditas camadas compreende um primeiro agente ativo e pelo menos uma das ditas camadas compreende um segundo agente ativo; em que pelo menos uma porção do primeiro e/ou segundo agentes ativos está na forma cristalina.

Em algumas formas de realização, o polímero bioabsorvível é selecionado do grupo de PLGA, PGA poli(glicolídeo), LPLA poli(l-lactídeo), DLPLA poli(dl-lactídeo), PCL poli(e-caprolactona) PDO, poli(dioxolano) PGA-TMC, 85/15 DLPLG p(dl-lactídeo-co-glicolídeo), 75/25 DLPL, 65/35 DLPLG, 50/50 DLPLG, TMC poli(carbonato de trimetila), p(CPP:SA) poli(ácido l,3-bis-p-(carboxifenóxi)propano-co-sebácico). Em algumas formas de realização, o polímero compreende uma mistura íntima de dois ou mais polímeros.

Em algumas formas de realização, o primeiro e segundo agentes ativos são independentemente selecionados de agentes farmacêuticos e agentes biológicos ativos.

Em algumas formas de realização, o stent é formado de material de aço inoxidável. Em algumas formas de realização, o stent é formado de um material que compreende uma liga de cobalto-cromo. Em algumas formas de realização, o stent é formado de um material que compreende as seguintes porcentagens em peso: de cerca de 0,05 a cerca de 0,15 de C, de cerca de 1,00 a cerca de 2,00 de Mn, cerca de 0,04 de Si, cerca de 0,03 de P, cerca de 0,3 de S, cerca de 19,0 a cerca de 21,0 de Cr, cerca de 9,0 a cerca de 11,0 de Ni, cerca de 14,0 a cerca de 16,00 de W, cerca de 3,0 de Fe e Bal. Co. Em algumas formas de realização, o stent é formado de um material que compreende no máximo as seguintes porcentagens em peso: cerca de 0,025 de C, cerca de 0,15 de Mn, cerca de 0,15 de Si, cerca de 0,015 de P, cerca de 0,01 de S, de cerca de 19,0 a cerca de 21,0 de Cr, de cerca de 33 a cerca de 37 de Ni, de cerca de 9,0 a cerca de 10,5 de Mo, cerca de 1,0 de Fe, cerca de 1,0 de Ti e Bal. Co. Em algumas formas de realização, o stent é formado de um material que compreende a liga L605.

Em algumas formas de realização, o stent tem uma espessura de cerca de 50 % a cerca de 90 % de uma espessura total do dito dispositivo. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem uma espessura de cerca de 20 pm a cerca de 500 pm. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem uma espessura de cerca de 90 pm ou menos. Em algumas formas de realização, o revestimento laminado tem uma espessura de cerca de 5 pm a cerca de 50 pm. Em algumas formas de realização, o revestimento laminado tem uma espessura de cerca de 10 pm a cerca de 20 pm. Em algumas formas de realização, o stent tem uma espessura de cerca de 50 pm a cerca de 80 pm.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent, em que o stent é formado de um material que compreende as seguintes porcentagens em peso: de 0,05 a 0,15 de C, de 1,00 a 2,00 de Mn, 0,040 de Si, 0,030 de P, 0,3 de S, de 19,00 a 21,00 de Cr, de 9,00 a 11,00 de Ni, de 14,00 a 16,00 de W, 3,00 de Fe e Bal. Co; e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent, em que uma primeira camada compreende um primeiro polímero bioabsorvível, uma segunda camada compreende um agente farmacêutico, uma terceira camada compreende um segundo polímero bioabsorvível, uma quarta camada compreende o agente farmacêutico e uma quinta camada compreende um terceiro polímero bioabsorvível, em que o agente farmacêutico é selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo, em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina e em que pelo menos um do dito primeiro polímero, segundo polímero e terceiro polímero compreende um copolímero de PLGA.

Em algumas formas de realização, o dispositivo tem um teor de agente farmacêutico de cerca de 0,5 pg/mm a cerca de 20 pg/mm. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem um teor de agente farmacêutico de cerca de 8 pg/mm a cerca de 12 pg/mm. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem um teor de agente farmacêutico de cerca de 5 pg a cerca de 500 pg. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem um teor de agente farmacêutico de cerca de 100 pg a cerca de 160 pg. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem um teor de agente farmacêutico de cerca de 100 pg a cerca de 160 pg.

E aqui fornecido um método de preparar um dispositivo que compreende um stent e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; o dito método compreendendo: (a) fornecer um stent; (b) formar uma pluralidade de camadas sobre o dito stent para formar o dito revestimento laminado sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um ou mais agentes ativos; em que pelo menos uma porção do agente ativo está na forma cristalina.

E aqui fornecido um método de preparar um dispositivo que compreende um stent e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; o dito método compreendendo: (a) fornecer um stent; (b) formar uma pluralidade de camadas para formar o dito revestimento laminado sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina.

E aqui fornecido um método de preparar um dispositivo que compreende um stent e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; o dito método compreendendo: (a) fornecer um stent; (b) formar uma pluralidade de camadas para formar o dito revestimento laminado sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina, em que o dito método compreende formar pelo menos uma camada de agente farmacêutico definida por um espaço físico tridimensional ocupado pelas partículas de cristal do dito agente farmacêutico e o dito espaço físico tridimensional é livre de polímero.

E aqui fornecido um método de preparar um dispositivo que compreende um stent e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; o dito método compreendendo: (a) fornecer um stent; (b) descarregar pelo menos um agente farmacêutico e/ou pelo menos um agente biológico ativo na forma de pó seco através de um primeiro orifício; (c) formar uma solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico que compreenda pelo menos um solvente de fluido supercrítico e pelo menos um polímero e descarregar a dita solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico através de um segundo orifício sob condições suficientes para formar partículas sólidas do polímero; (d) depositar as partículas de polímero e agente farmacêutico e/ou agente biológico ativo sobre o dito substrato, em que um potencial elétrico é mantido entre o substrato e as partículas de polímero e agente farmacêutico e/ou agente biológico ativo, formando deste modo o dito revestimento; e (e) sinterizar o dito polímero sob condições que não modifique substancialmente uma morfologia do dito agente farmacêutico e/ou atividade do dito agente biológico.

Em algumas formas de realização, a etapa (b) compreende descarregar um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pródroga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina. Em algumas formas de realização, a etapa (c) compreende formar partículas sólidas de um polímero bioabsorvível.

Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende formar uma camada polimérica tendo um comprimento ao longo um eixo horizontal do dito dispositivo em que a dita camada polimérica tem uma porção de camada ao longo do dito comprimento, em que a dita porção de camada é livre de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende contatar o dito polímero com um fluido densificado. Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende contatar o dito polímero com um fluido densificado por um período de tempo em uma temperatura de cerca de 5°C e 150°C e uma pressão de cerca de 10 psi (69 kPa) a cerca de 500 psi (3450 kPa). Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende contatar o dito polímero com um fluido densificado por um período de tempo em uma temperatura de cerca de 25°C e 95°C e uma pressão de cerca de 25 psi (172,5 kPa) a cerca de 100 psi (690 kPa). Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende contatar o dito polímero com um fluido densificado por um período de tempo em uma temperatura de cerca de 50°C a 85°C e uma pressão de cerca de 35 psi (241,5 kPa) a cerca de 65 psi (448,5 kPa).

E aqui fornecido um método de preparar um dispositivo que compreende um stent e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; o dito método compreendendo: (a) fornecer um stent; (b) formar uma solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico que compreende pelo menos um solvente de fluido supercrítico e um primeiro polímero, descarregar a dita solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico sob condições suficientes para formar partículas sólidas do dito primeiro polímero, depositar as ditas primeiras partículas poliméricas sobre o dito stent, em que um potencial elétrico é mantido entre o stent e o primeiro polímero e sinterizar o dito primeiro polímero; (c) depositar partículas do agente farmacêutico na forma de pó seco sobre o dito stent, em que um potencial elétrico é mantido entre o stent e as ditas partículas do agente farmacêutico; e (d) formar uma solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico que compreenda pelo menos um solvente de fluido supercrítico e um segundo polímero e descarregar a dita solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico sob condições suficientes para formar partículas sólidas do dito segundo polímero, em que um potencial elétrico é mantido entre o stent e o segundo polímero e sinterizar o dito segundo polímero.

Em algumas formas de realização, a etapa (c) e a etapa (d) são repetidas pelo menos uma vez. Em algumas formas de realização, a etapa (c) e a etapa (d) são repetidas de 2 a 20 vezes.

Em algumas formas de realização, o agente farmacêutico é selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina. Em algumas formas de realização, o primeiro e segundo polímeros são bioabsorvíveis.

Em algumas formas de realização, a etapa (d) compreende formar uma camada polimérica tendo um comprimento ao longo de um eixo horizontal do dito dispositivo em que a dita camada polimérica tem uma porção de camada ao longo do dito comprimento, em que a dita porção de camada é livre de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, sinterizar o dito primeiro e/ou sinterizar o dito segundo polímeros compreende contatar o dito primeiro e/ou segundo polímeros com um fluido densificado.

Em algumas formas de realização, a etapa de contatar é realizada por um período de cerca de 1 minuto a cerca de 60 minutos. Em algumas formas de realização, a etapa de contatar é realizada por um período de cerca de 10 minutos a cerca de 30 minutos.

Em algumas formas de realização, manter o dito potencial elétrico entre as ditas partículas poliméricas e ou partículas do agente farmacêutico e o dito stent compreende manter uma voltagem de cerca de 5 kvolts a cerca de 100 kvolts. Em algumas formas de realização, manter o dito potencial elétrico entre as ditas partículas poliméricas e ou partículas do agente farmacêutico e o dito stent compreende manter uma voltagem de cerca de 20 kvolts a cerca de 30 kvolts.

E aqui fornecido um dispositivo preparado por um processo que compreende um método como aqui descrito.

E aqui fornecido um método de tratar um paciente que compreende liberar um dispositivo como aqui descrito em um lúmen corporal do paciente.

E aqui fornecido um método de tratar um paciente que compreende liberar no corpo do paciente um dispositivo que compreende: um stent, em que o stent é formado de um material que compreende as seguintes porcentagens em peso: de 0,05 a 0,15 de C, de 1,00 a 2,00 de Mn, 0,040 de Si, 0,030 de P, 0,3 de S, de 19,00 a 21,00 de Cr, de 9,00 a 11,00 de Ni, de 14,00 a 16,00 de W, 3,00 de Fe e Bal. Co; e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent, em que uma primeira camada compreende um primeiro polímero bioabsorvível, uma segunda camada compreende um agente farmacêutico, uma terceira camada compreende um segundo polímero bioabsorvível, uma quarta camada compreende o agente farmacêutico e uma quinta camada compreende um terceiro polímero bioabsorvível, em que o agente farmacêutico é selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo, em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina e em que pelo menos um do dito primeiro polímero, segundo polímero e terceiro polímero compreende um copolímero de PLGA.

Em algumas formas de realização, o dispositivo tem um teor de agente farmacêutico de cerca de 0,5 pg/mm a cerca de 20 pg/mm. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem um teor de agente farmacêutico de cerca de 8 pg/mm a cerca de 12 pg/mm. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem um teor de agente farmacêutico de cerca de 100 pg a cerca de 160 pg. Em algumas formas de realização, o dispositivo tem um teor de agente farmacêutico de cerca de 120 pg a cerca de 150 pg.

Em algumas formas de realização, o dispositivo tem uma quantidade de agente farmacêutico inicial e a quantidade de agente farmacêutico liberada pelo dito dispositivo ao tecido da parede de vaso do dito paciente é mais alta do que a quantidade de agente farmacêutico liberada por um stent de eluição de droga convencional tendo o mesmo teor inicial de agente farmacêutico como o teor inicial de agente farmacêutico do dito dispositivo. Em algumas formas de realização, a quantidade de agente farmacêutico liberada pelo dito dispositivo ao tecido da parede de vaso do dito paciente é pelo menos 25 % maior do que a quantidade de agente farmacêutico liberada ao tecido da parede de vaso do dito paciente pelo dito stent de eluição de droga convencional. Em algumas formas de realização, o método compreende tratar restenose em um vaso sanguíneo do dito o paciente. Em algumas formas de realização, o paciente é selecionado de um porco, um coelho e um ser humano.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição de agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 5 % a cerca de 25 % do agente farmacêutico são eluídos um dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de 15 % a cerca de 45 % do agente farmacêutico são eluídos 7 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 25 % a cerca de 60 % do agente farmacêutico são eluídos 14 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 35 % a cerca de 70 % do agente farmacêutico são eluídos 21 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; e de cerca de 40 % a cerca de 100 % do agente farmacêutico são eluídos 28 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 7 % a cerca de 15 % do agente farmacêutico são eluídos um dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de 25 % a cerca de 35 % do agente farmacêutico são eluídos 7 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 35 % a cerca de 55 % do agente farmacêutico são eluídos 14 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 45 % a cerca de 60 % do agente farmacêutico são eluídos 21 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; e de cerca de 50 % a cerca de 70 % do agente farmacêutico são eluídos 28 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

É aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que pelo menos 5 % do agente farmacêutico são eluídos um dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; pelo menos 15 % do agente farmacêutico são eluídos 7 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; pelo menos 25 % do agente farmacêutico são eluídos 14 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; pelo menos 30 % do agente farmacêutico são eluídos 21 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; pelo menos 40 % do agente farmacêutico são eluídos 28 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 10 % do agente farmacêutico são eluídos um dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; cerca de 30 % do agente farmacêutico são eluídos 7 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; cerca de 45 % do agente farmacêutico são eluídos 14 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; cerca de 50 % do agente farmacêutico são eluídos 21 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; cerca de 60 % do agente farmacêutico são eluídos 28 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 10 % a cerca de 75 % do agente farmacêutico são eluídos na semana 1 depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição, cerca de 25 % a cerca de 85 % do agente farmacêutico são eluídos na semana 2 e cerca de 50 % a cerca de 100 % do agente farmacêutico são eluídos na semana 10.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição de agente farmacêutico in vitro mostrado na Figura 5.

Em algumas formas de realização, o perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro é determinado por um procedimento que compreende: (i) contatar o dispositivo com um meio de eluição que compreende 5 % de etanol em volume em que o pH do meio é de cerca de 7,4 e em que o dispositivo é contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C; (ii) opcionalmente agitar o meio de eluição durante a etapa de contatar em (i); (iii) remover o meio de eluição em pontos de tempo designados; e (iv) ensaiar o meio de eluição removido para determinar o teor de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, o perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro é determinado por um procedimento que compreende: (i) contatar o dispositivo com um meio de eluição que compreende 5 % de etanol em volume, em que o pH do meio é de cerca de

7,4 e em que o dispositivo é contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C; (ii) opcionalmente agitar o meio de eluição durante a etapa de contatar em (i); (iii) remover o dito dispositivo do meio de eluição em pontos de tempo designados; e (iv) ensaiar o meio de eluição para determinar o teor de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, o perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro é determinado na ausência de agitação.

Em algumas formas de realização, o procedimento compreende ainda: (v) determinar a perda de peso do polímero comparandose o peso do dispositivo antes e depois da etapa de contatar e ajustar quanto a quantidade de agente farmacêutico eluído no meio de eluição como determinado na etapa (iv). Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 50 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por 90 dias ou mais. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 75 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por 90 dias ou mais.

Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 85 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por 90 dias ou mais. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 50 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 75 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 85 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 95 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que até 100 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição de agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 1 % a cerca de 35 % do agente farmacêutico são eluídos uma hora depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de 5 % a cerca de 45 % do agente farmacêutico são eluídos 3 horas depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 30 % a cerca de 70 % do agente farmacêutico são eluídos 1 dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 40 % a cerca de 80 % do agente farmacêutico são eluídos 3 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 50 % a cerca de 90 % do agente farmacêutico são eluídos 10 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 55 % a cerca de 95 % do agente farmacêutico são eluídos 15 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; e de cerca de 60 % a cerca de 100 % do agente farmacêutico são eluídos 20 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição de agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 5 % a cerca de 25 % do agente farmacêutico são eluídos uma hora depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de 5 % a cerca de 35 % do agente farmacêutico são eluídos 3 horas depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 30 % a cerca de 65 % do agente farmacêutico são eluídos 1 dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 45 % a cerca de 70 % do agente farmacêutico são eluídos 3 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 55 % a cerca de 85 % do agente farmacêutico são eluídos 10 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição de cerca de 65 % a cerca de 85 % do agente farmacêutico são eluídos 15 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; e de cerca de 75 % a cerca de 100 % do agente farmacêutico são eluídos 20 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição de agente farmacêutico in vitro mostrado na Figura 9.

Em algumas formas de realização, o perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro é determinada por um procedimento que compreende: (i) contatar o dispositivo com um meio de eluição que compreende etanol e solução salina tamponada com fosfato em que o pH do meio é de cerca de 7,4 e em que o dispositivo é contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C; (ii) opcionalmente agitar o meio de eluição durante a etapa de contatar em (i); (iii) remover o meio de eluição em pontos de tempo designados; e (iv) ensaiar o meio de eluição removido para determinar o teor de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, o perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro é determinado por um procedimento que compreende: (i) contatar o dispositivo com um meio de eluição que compreende etanol e solução salina tamponada com fosfato em que o pEl do meio é de cerca de 7,4 e em que o dispositivo é contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C; (ii) opcionalmente agitar o meio de eluição durante a etapa de contatar em (i); (iii) remover o dito dispositivo do meio de eluição em pontos de tempo designados; e (iv) ensaiar o meio de eluição para determinar o teor de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, o procedimento compreende ainda: (v) determinar a perda de peso do polímero comparandose o peso do dispositivo antes e depois da etapa de contatar e ajustar quanto a quantidade de agente farmacêutico eluído no meio de eluição como determinado na etapa iv. O dispositivo de acordo com a reivindicação 160 em que a etapa v mostra que pelo menos 50 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por 90 dias ou mais.

Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 75 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por 90 dias ou mais. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 85 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por 90 dias ou mais. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 50 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 75 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 85 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 95 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, éster e um sal do mesmo e um polímero em que o revestimento tem uma quantidade de agente farmacêutico inicial; em que quando o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal de um paciente o agente farmacêutico é liberado em um tecido da parede de vaso do paciente como segue: de cerca de 0,1 % a cerca de 35 % da quantidade de agente farmacêutico inicial são liberados no tecido da parede de vaso do paciente uma semana depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; e de cerca de 0,5 % a cerca de 50 % da quantidade de agente farmacêutico inicial são liberados no tecido da parede de vaso do paciente duas semanas depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente.

Em algumas formas de realização, a quantidade liberada ao lúmen do paciente é obtida pela adição do agente farmacêutico presente sozinho no dito tecido da parede de vaso do paciente e agente farmacêutico liberado junto com o dito polímero. Em algumas formas de realização, o paciente é um ser humano.

Em algumas formas de realização, o paciente é um porco e a quantidade de agente farmacêutico liberada no tecido da parede de vaso do paciente é determinada como segue: liberar o dispositivo no lúmen do vaso sanguíneo do porco; eutanizar o porco em período predeterminado de tempo depois que o dispositivo é liberado no lúmen do vaso sanguíneo do porco e explantar o dispositivo; medir a quantidade de agente farmacêutico liberada no tecido da parede de vaso.

Fornecido aqui, um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo e um polímero bioabsorvível em que o revestimento tem um teor inicial de agente farmacêutico de cerca de 1 pg/mm a cerca de 15 pg/mm; em que o dito dispositivo fornece uma área sob uma curva (AUC) para o teor de agente farmacêutico liberado no tecido da parede de vaso de um paciente com o tempo como segue: de cerca de 0,05 (pg/mm)*dia a cerca de 1 (pg/mm)*dia quando AUC é calculada a partir do tempo em que o dispositivo é liberado em um corpo do paciente até um dia depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; de cerca de 5 (pg/mm)*dia a cerca de 10 (pg/mm)*dia quando a AUC é calculada partindo depois da primeira semana em que o dispositivo é liberado no corpo do paciente até a segunda semana depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; de cerca de 10 (pg/mm)*dia a cerca de 20 (pg/mm)*dia quando a AUC é calculada partindo depois da segunda semana em que o dispositivo é liberado no corpo do paciente até a quarta semana depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; e uma AUCfinal de cerca de 40 (pg/mm)*dia a cerca de 60 (pg/mm)*dia.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo e um polímero bioabsorvível em que o revestimento tem uma quantidade de polímero inicial; em que quando o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal de um paciente cerca de 75 % do polímero são liberados do dispositivo 90 dias ou mais depois que o dispositivo é liberado no lúmen corporal do paciente.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo e um polímero bioabsorvível em que o revestimento tem uma quantidade de polímero inicial; em que quando o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal de um paciente cerca de 85 % do polímero são liberados do dispositivo cerca de 90 dias depois que o dispositivo é liberado no lúmen corporal do paciente.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo e um polímero bioabsorvível em que o revestimento tem uma quantidade de polímero inicial; em que quando o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal de um paciente pelo menos cerca de 75 % do polímero são liberados do dispositivo cerca de 90 dias depois que o dispositivo é liberado no lúmen corporal do paciente.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo e um polímero bioabsorvível em que o revestimento tem uma quantidade de polímero inicial; em que quando o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal de um paciente cerca de 100 % do polímero são liberados do dispositivo cerca de 90 dias depois que o dispositivo é liberado no lúmen corporal do paciente.

Em algumas formas de realização, o paciente é um ser humano. Em algumas formas de realização, o paciente é um porco e a quantidade de polímero liberada do dispositivo é determinada como segue: liberar o dispositivo no lúmen do vaso sanguíneo do porco; eutanizar o porco em período predeterminado de tempo depois que o dispositivo é liberado no lúmen do vaso sanguíneo do porco e explantar o dispositivo; e medir a quantidade de polímero liberada do dispositivo.

Em algumas formas de realização, medir a quantidade de polímero liberada do dispositivo compreende medições de LC/MS/MS. Em algumas formas de realização, medir a quantidade liberada do dispositivo compreende a medição de perda de peso. Em algumas formas de realização, medição de perda de peso compreende a medição de uma quantidade de polímero que permanece no dispositivo e subtrair a dita quantidade que permanece da quantidade inicial presente no dispositivo antes de liberar o dispositivo ao lúmen do vaso sanguíneo do porco.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo, em que o dispositivo tem um teor inicial de agente farmacêutico de cerca de 1 pg/mm a cerca de 15 pg/mm; em que quando o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal de um paciente o dito dispositivo fornece uma concentração sanguínea dentro de 60 minutos da liberação do dito dispositivo ao lúmen corporal do paciente que é de cerca de

I % a cerca de 50 % da concentração sanguínea fornecida por um stent de eluição de droga convencional liberada ao paciente sob condições similares.

II % a cerca de 20 % da concentração sanguínea fornecida por um stent de eluição de droga convencional liberada ao paciente sob condições similares.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e revestimento sobre o dito stent; em que o dito revestimento compreende um polímero bioabsorvível e um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo, em que o dispositivo tem um teor inicial de agente farmacêutico de cerca de 1 pg/mm a cerca de 15 pg/mm; em que quando o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal de um paciente o dito dispositivo fornece cerca da mesma concentração sanguínea nas primeiras 72 horas de liberação do dito dispositivo ao lúmen corporal do paciente.

Em algumas formas de realização, a concentração sanguínea durante as primeiras 72 horas da liberação do dito dispositivo ao lúmen corporal do paciente permanece entre 75 % e 125 % de uma concentração sanguínea média calculada nas primeiras 72 horas da liberação do dito dispositivo ao lúmen corporal do paciente. Em algumas formas de realização, a concentração sanguínea média é de cerca de 0,05 ng/ml a cerca de 0,5 ng/ml. Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece uma AUC para a concentração sanguínea em um período de 72 horas depois que o dispositivo é liberado ao lúmen corporal do paciente de cerca de 2 (ng/ml)*hora a cerca de 20 (ng/ml)*hora.

Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece uma AUC para a concentração sanguínea em um período de 72 horas depois que o dispositivo é liberado ao lúmen corporal do paciente de cerca de 4 (ng/ml)*hora a cerca de 10 (ng/ml)*hora. Em algumas formas de realização, pelo menos parte do agente farmacêutico está na forma cristalina. Em algumas formas de realização, o agente farmacêutico é fornecido em uma dose reduzida comparada a um stent de eluição de droga convencional. Em algumas formas de realização, pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero de PLGA bioabsorvível.

Em algumas formas de realização, o agente farmacêutico no dito dispositivo tem uma estabilidade em prateleira de pelo menos 12 meses.

Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro comparável às cinéticas de primeira ordem.

Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece concentração tecidual de agente farmacêutico pelo menos duas vezes a concentração tecidual fornecida por um stent convencional. Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece uma concentração tecidual de agente farmacêutico pelo menos 5 vezes maior do que a concentração tecidual fornecida por um stent convencional. Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece uma concentração tecidual de agente farmacêutico pelo menos 25 vezes maior do que a concentração tecidual fornecida por um stent convencional. Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece uma concentração tecidual de agente farmacêutico pelo menos 100 vezes maior do que a concentração tecidual fornecida por um stent convencional.

Em algumas formas de realização, cerca de 50 % do dito polímero é reabsorvido dentro de 45 a 90 dias depois de um procedimento de angioplastia em que o dito dispositivo é liberado em um corpo do paciente. Em algumas formas de realização, cerca de 75 % do dito polímero é reabsorvido dentro de 45 a 90 dias depois de um procedimento de angioplastia em que o dito dispositivo é liberado em um corpo do paciente. Em algumas formas de realização, cerca de 95 % do dito polímero é reabsorvido dentro de 45 a 90 dias depois de um procedimento de angioplastia em que o dito dispositivo é liberado em um corpo do paciente.

Em algumas formas de realização, 99 % do dito polímero é reabsorvido dentro de 45 a 90 dias depois de um procedimento de angioplastia em que o dito dispositivo é liberado em um corpo do paciente.

Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece inflamação reduzida durante o curso de ressorção de polímero comparada a um stent convencional.

E aqui fornecido um método de tratar um paciente que compreende liberar um dispositivo como aqui descrito em um lúmen corporal.

E aqui fornecido um método de tratar um paciente que compreende liberar no corpo do paciente um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo e um polímero em que o revestimento tem uma quantidade de agente farmacêutico inicial; em que o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal do paciente e o agente farmacêutico é liberado em um tecido da parede de vaso do paciente como segue: i. de cerca de 0,05 % a cerca de 35 % da quantidade de agente farmacêutico inicial é liberada no tecido da parede de vaso do paciente uma semana depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; e ii. de cerca de 0,5 % a cerca de 50 % da quantidade de agente farmacêutico inicial é liberada no tecido da parede de vaso do paciente duas semanas depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente.

Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece inflamação reduzida durante o curso de ressorção de polímero.

Em algumas formas de realização, a presença de cristalinidade é mostrada por pelo menos um de XRD, Espectroscopia de Raman, Métodos analíticos de infravermelho e DSC.

Em algumas formas de realização, o revestimento em uma superfície abluminal do dito stent tem uma espessura maior do que o revestimento em uma superfície luminal do dito stent. Em algumas formas de realização, a razão de revestimento sobre a superfície abluminal para o revestimento sobre a superfície luminal do dispositivo é de 80:20. Em algumas formas de realização, a razão de revestimento sobre a superfície abluminal para o revestimento sobre a superfície luminal do dispositivo é de 75:25. Em algumas formas de realização, a razão de revestimento sobre a superfície abluminal para o revestimento sobre a superfície luminal do dispositivo é de 70:30. Em algumas formas de realização, a razão de revestimento sobre a superfície abluminal para o revestimento sobre a superfície luminal do dispositivo é 60:40.

Em algumas formas de realização, o stent é um stent coronário, um stent vascular, um stent periférico, stent biliar e stent intercraniano.

INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA

Todas as publicações e pedidos de patente mencionados neste relatório descritivo são aqui incorporados por referência no mesmo grau como se cada publicação ou pedido de patente individuais fossem específica e individualmente indicados como sendo incorporados por referência.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

As novas características da invenção são apresentadas com particularidade nas reivindicações anexas. Um melhor entendimento das características e vantagens da presente invenção será obtido por referência à seguinte descrição detalhada que apresenta formas de realização ilustrativas, em que os princípios da invenção são utilizados e os desenhos anexos dos quais:

Figura 1: Teste de bioabsorbabilidade de formulações de revestimento de polímero de PLGA-grupo final de éster 50:50 (PM 19 kD) em stents pela determinação de Mudanças de pH com Degradação da Película Polimérica em etanol a 20 %/Solução salina tamponada com fosfato como apresentado no Exemplo 3 aqui descrito.

Figura 2: Teste de bioabsorbabilidade de formulações de revestimento de polímero de PLGA-grupo final de carboxilato 50:50 (PM 10 kD) PLGA em stents pela determinação de Mudanças no pH com Degradação de Película Polimérica em etanol a 20 %/Solução salina tamponada com fosfato como apresentado no Exemplo 3 aqui descrito.

Figura 3: Teste de bioabsorbabilidade de formulações de revestimento de polímero de PLGA 85:15 (85 % de ácido láctico, 15 % de ácido glicólico) em stents pela determinação de Mudanças no pH com Degradação da Película Polimérica em etanol a 20 %/Solução salina tamponada com fosfato como apresentado no Exemplo 3 aqui descrito.

Figura 4: Teste de bioabsorbabilidade de várias formulações de película de revestimento polimérico de PLGA pela determinação de Mudanças no pH com Degradação da Película Polimérica em etanol a 20 %/Solução salina tamponada com fosfato como apresentado no Exemplo 3 aqui descrito.

Figura 5: Perfil de eluição da rapamicina de stents revestidos (revestimentos de PLGA/Rapamicina) onde o perfil de eluição foi determinado por um meio de eluição estático de EtOH a 5 %/água, pH 7,4, 37°C por intermédio do método de teste UV-Vis como descrito no Exemplo 1 lb de stents revestidos nele descritos.

Figura 6: Perfil de eluição da rapamicina de stents revestidos (revestimentos de PLGA/Rapamicina) onde o perfil de eluição foi determinado por meio de eluição estático de EtOH 5 %/água, pH 7,4, 37°C por intermédio de um método de teste UV-Vis como descrito no Exemplo 1 lb de stents revestidos nele descritos. A Figura 6 descreve AS1 e AS2 como tendo perfis de eluição estatisticamente diferentes; AS2 e AS2b têm perfis estatisticamente diferentes; AS1 e ASlb não são estatisticamente diferentes; e AS2 e AS 1(213) começam a convergir em 35 dias. A Figura 6 sugere que a espessura do revestimento não afeta as taxas de eluição do polímero 3095, mas não afeta as taxas de eluição do polímero 213.

Figura 7: Taxas de Eluição da Rapamicina de stents revestidos (revestimentos de PLGA/Rapamicina) onde o perfil de eluição estática foi comparado com o perfil de eluição agitada por um meio de eluição de EtOH a 5 %/água, pH 7,4, 37°C por intermédio de um método de teste de UV-Vis como descrito no Exemplo 1 lb de stents revestidos nele descritos. A Figura 7 descreve que a agitação em meio de eluição aumenta a taxa de eluição para os stents AS2, mas não é de modo estatisticamente significante diferente para os stents AS 1. Os perfis são fundamentados em duas amostras de stent.

Figura 8: Perfil de eluição da rapamicina de stents revestidos (revestimentos de PLGA/Rapamicina) onde o perfil de eluição pelo tampão de eluição de EtOH a 5 %/água, pH 7,4, 37°C foi comparado com o perfil de eluição usando solução salina tamponada com fosfato pH 7,4, 37°C; ambos os perfis foram determinados por um método de teste de UV-Vis como descrito no Exemplo 1 lb de stents revestidos nele descritos. A Figura 8 descreve que agitar o stent em meio de eluição aumenta a taxa de eluição em solução salina tamponada com fosfato, mas o erro é muito maior.

Figura 9: Rapamicina Perfil de eluição of stents revestidos (PLGA/Rapamicina revestimentos) onde o perfil de eluição foi determinada por um tampão de eluição de EtOH a 20 %/solução salina tamponada com fosfato, pH 7,4, 37°C e um método de teste de HPLC como descrito no Exemplo 11c nele descrita, em que o tempo de eluição (eixo x) é linearmente expressado.

Figura 10: Perfil de eluição da rapamicina de stents revestidos (revestimentos de PLGA/Rapamicina) onde o perfil de eluição foi determinado por um tampão de eluição de EtOH a 20 %/solução salina tamponada com fosfato, pH 7,4, 37°C e um método de teste de HPLC como descrito no Exemplo 11c de nele descritas, em que o tempo de eluição (eixo x) é expressado na escala logarítmica (isto é, log(tempo)).

Figura 11: Tecido da parede de vaso mostrando vários elementos próximos ao lúmen.

Figura 12: Seções transversais em ampliação baixa de implantes de stent na artéria coronária porcina (ASÍ, AS2 e stent de controle de metal simples) em 28 dias após a implantação como descrito no Exemplo 25.

Figura 13: Seções transversais em ampliação baixa de implantes de stent na artéria coronária porcina (AS 1, AS2 e stent de controle de metal simples) em 90 dias após a implantação como descrito no Exemplo 25.

Figura 14: Seções transversais em ampliação baixa de implantes de stent na artéria coronária porcina representando depósitos de droga AS1 e AS2 como descritos no Exemplo 25.

Figura 15: Seções transversais em ampliação baixa de implantes de stent AS 1 na artéria coronária porcina em 90 dias representando depósitos de droga como descritos no Exemplo 25.

Figura 16: Níveis de Sirolimus Médios (n = 3) no Tecido

Arterial a Seguir das Implantações de Stent AS1 e Cypher em Artérias Coronárias Suínas expressadas como nível de tecido absoluta (eixo y) versus tempo (eixo x) a seguir do teste como descrito no Exemplo 25. Os resultados para AS1 apresentados na Figura 16 foram coletados de um estudo separado como os resultados para os stents Cypher apresentados na Figura 16. Ambos os estudos foram realizados como descritos no Exemplo 25 e os dados foram similarmente coletados, entretanto, os dados dos dois estudos foram combinados nesta Figura para mostrar os resultados relativos de AS1 para os stents Cypher.

Figura 17: Níveis de Sirolimus Médios (n = 3) no Tecido Arterial a Seguir das Várias Implantações de Stent em Artérias Coronárias Suínas expressadas como nível de tecido absoluta (eixo y) versus tempo (eixo x) a seguir do teste como descrito no Exemplo 25.

Figura 18: Concentrações de Tecido Arterial (eixo y) versus o tempo (eixo x) para os stents AS1 e AS2 a seguir do teste como descrito no Exemplo 25.

Figura 19: Níveis de Sirolimus Médios (n = 3) no Tecido Arterial a Seguir das Várias Implantações de Stent em Artérias Coronárias Suínas expressadas como nível de stent (eixo y) versus tempo (eixo x) a seguir do teste como descrito no Exemplo 25.

Figura 20: Níveis de Sirolimus Médios (n = 3) que permanece nos stents a seguir das Implantações de Stent AS1 e Cypher em Artérias Coronárias Suínas expressadas como nível de stent (eixo y) versus tempo (eixo x) a seguir do teste como descrito no Exemplo 25. Os resultados para AS1 apresentados na Figura 20 foram coletados de um estudo separado como os resultados para os stents Cypher apresentadas na Figura 20. Ambos os estudos foram realizados como descrito no Exemplo 25 e os dados foram coletados similarmente, entretanto, os dados dos dois estudos foram combinados nesta Figura para mostrar os resultados relativos de AS1 para os stents Cypher.

Figura 21: Liberação de Sirolimus Fracional (eixo y) versus o tempo (eixo x) em Tecido Arterial para stents AS1 e AS2 a seguir do teste como descrito no Exemplo 25.

Figura 22: Concentração sanguínea de Sirolimus a seguir do Implante de Stent Simples expressada em Concentração sanguínea (ng/ml) (eixo y) versus tempo (eixo x) a seguir do teste como descrito no Exemplo 25.

Figura 23: Concentração Sanguínea Média (Stent simples normalizada) Imediatamente após o implante (entre 15 minutos e 1 hora, tipicamente 30 minutos) expressada como Concentrações Sanguíneas (ng/ml) (eixo y) para um stent Cypher e stents tendo revestimentos como aqui descritos (AS21, AS1, AS23, AS24 são dispositivos que compreendem revestimentos como aqui descritos) a seguir do teste como descrito no Exemplo 25.

DESCRIÇÃO DETALHADA

A presente invenção é explicada em maiores detalhes abaixo. Esta descrição não é intencionada a ser um catálogo detalhado de todos os modos diferentes em que a invenção pode ser implementada ou todas as características que podem ser adicionadas à presente invenção. Por exemplo, características ilustradas com respeito a uma forma de realização podem ser incorporadas em outras formas de realização e características ilustradas com respeito a uma forma de realização particular podem ser deletadas desta forma de realização. Além disso, numerosas variações e adições às várias formas de realização aqui consideradas estarão evidentes a aqueles habilitados na técnica considerando-se a presente divulgação, que não diverge da presente invenção. Consequentemente, o seguinte relatório descritivo é intencionado a ilustrar formas de realização selecionadas da invenção e não especificam exaustivamente todas de suas permutações, combinações e variações.

Definições

Como usadas no presente relatório descritivo, as seguintes palavras e frases são no geral intencionadas a ter os significados como apresentados abaixo, exceto até o grau em que o contexto no qual são usadas indique de outro modo.

“Substrato” como aqui usado, refere-se a qualquer superfície na qual é desejável depositar um revestimento que compreende um polímero e um agente farmacêutico ou biológico, em que o processo de revestimento não modifique substancialmente a morfologia do agente farmacêutico ou a atividade do agente biológico. Implantes biomédicos são de interesse particular para a presente invenção; entretanto a presente invenção não é intencionada a ser restringida a esta classe de substratos. Aqueles de habilidade na técnica avaliarão substratos alternativos que beneficiar-se-iam do processo de revestimento aqui descrito, tal como núcleos de tablete farmacêutico, como parte de um aparelho de ensaio ou como componentes em um kit de diagnóstico (por exemplo, uma tira de teste).

“Implante biomédico” como aqui usado refere-se a qualquer implante para a inserção no corpo de um paciente humano ou animal, incluindo mas não limitado o stents (por exemplo, stents coronários, stents vasculares incluindo stents periféricos e stents de enxerto, stents do trato urinário, stents uretrais/prostáticos, stent retal, stent esofágico, stent biliar, stent pancreático), elétrodos, cateteres, guias, marcapasso implantável, carcaças de cardioversor ou desfibrilador, juntas, parafusos, varetas, implantes oftálmicos, pinos femorais, placas ósseas, enxertos, dispositivos anastomóticos, coberturas perivasculares, suturas, grampos, desvios para hidrocefalia, enxertos de diálise, dispositivos de fixação de bolsa de colostomia, tubos de drenagem auricular, guias para marcapassos e cardioversores e desfibriladores implantáveis, discos vertebrais, pinos ósseos, âncoras de sutura, barreiras hemostáticas, pinças, parafusos, placas, clipes, implantes vasculares, adesivos de tecido e selantes, armações de tecido, vários tipos de curativos (por exemplo, curativos de ferimento), substitutos ósseos, dispositivos intraluminais, suportes vasculares, etc.

Os implantes podem ser formados a partir de qualquer material adequado, incluindo mas não limitado a polímeros (incluindo polímeros estáveis ou inertes, polímeros orgânicos, copolimeros orgânicos-inorgânicos, polímeros inorgânicos e polímeros biodegradáveis), metais, ligas metálicas, materiais inorgânicos tais como silício e seus compósitos, incluindo estruturas em camadas com um núcleo de um material e um ou mais revestimentos de um material diferente. Os substratos fabricados de um material condutor facilitam a captura eletrostática. Entretanto, a invenção considera o uso de captura eletrostática, como descrito abaixo, em conjunção com substrato tendo baixa condutividade ou que não são condutivos. Para realçar a captura eletrostática quando um substrato não condutivo é utilizado, o substrato é processado por exemplo enquanto mantém um campo elétrico forte na vizinhança do substrato.

Pacientes em que implantes biomédicos da invenção podem ser aplicados ou inseridos incluem tanto pacientes humanos (incluindo pacientes do sexo masculino e feminino e pacientes bebês, crianças jovens, adolescentes, adultos e geriátricos) assim como pacientes animal (incluindo mas não limitados a porco, coelho, camundongo, cão, gato, cavalo, macaco, etc.) para propósitos veterinários e/ou pesquisa médica.

Em uma forma de realização preferida o implante biomédico é um enxerto ou stent vascular intraluminal expansível (por exemplo, que compreende um tubo de malha de arame) que pode ser expandido dentro de um vaso sanguíneo por um balão de angioplastia associado com um cateter para dilatar e expandir o lúmen de um vaso sanguíneo, tal como descrito na Patente US N° 4.733.665 concedida a Palmaz.

“Agente farmacêutico” como aqui usado refere-se a qualquer um de uma variedade de drogas ou compostos farmacêuticos que podem ser usados como agentes ativos para prevenir ou tratar uma doença (significando qualquer tratamento de uma doença em um mamífero, incluindo prevenir a doença, isto é, fazendo com que os sintomas clínicos da doença não se desenvolva; inibindo a doença, isto é, detendo o desenvolvimento de sintomas clínicos; e/ou aliviando a doença, isto é, causando a regressão dos sintomas clínicos). E possível que os agentes farmacêuticos da invenção também possam compreender dois ou mais drogas ou compostos farmacêuticos. Os agentes farmacêuticos, incluem mas não são limitados aos agentes antirestenóticos, antidiabéticos, analgésicos, agentes antiinflamatórios, antireumáticos, agentes antiipotensivos, agentes antiipertensivos, drogas psicoativos, tranquilizantes, antieméticos, relaxantes musculares, glicocorticóides, agentes para tratar colite ulcerativa ou doença de Crohn, antialérgicos, antibióticos, antiepilépticos, anticoagulantes, antimicóticos, antitussivos, remédios para a arteriosclerose, diuréticos, proteínas, peptídeos, enzimas, inibidores de enzima, remédios para a gota, hormônios e seus inibidores, glicosídeos cardíacos, agentes imunoterapêuticos e citocinas, laxantes, agentes que diminuem lipídeo, remédios contra a enxaqueca, produtos minerais, otológicos, agentes anti parkinson, agentes terapêuticos da tireóide, espasmolíticos, inibidores da agregação de plaquetas, vitaminas, citostáticos e inibidores da metástase, produtos fitofarmacêuticos, agentes quimioterapêuticos e aminoácidos. Os exemplos de ingredientes ativos adequados são acarbose, antígenos, bloqueadores do receptor beta, drogas antiinflamatórias não esteroidais [NSAIDs], glicosídeos cardíacos, ácido acetilsalicílico, virustáticos, aclarrubicina, aciclovir, cisplatina, actinomicina, alfa-e beta-simpatomiméticos, (dmeprazol, alopurinol, alprostadil, prostaglandinas, amantadina, ambroxol, amlodipina, metotrexato, ácido Saminossalicílico, amitriptilina, amoxicilina, anastrozol, atenolol, azatioprina, balsalazida, beclometasona, betahistina, bezafibrato, bicalutamida, diazepam e derivados de diazepam, budesonida, bufexamac, buprenorfina, metadona, sais de cálcio, sais de potássio, sais de magnésio, candesartan, carbamazepina, captopril, cefalosporinas, cetirizina, ácido chenodeoxicólico, ácido ursodesoxicólico, teofilina e derivados de teofilina, tripsinas, cimetidina, claritromicina, ácido clavulânico, clindamicina, clobutinol, clonidina, cotrimoxazol, codeína, cafeína, vitamina D e derivados de vitamina D, colestiramina, ácido cromoglícico, coumarina e derivados de coumarina, cisteína, citarabina, ciclofosfamida, ciclosporina, ciproterona, citabarina, dapiprazol, desogestrel, desonida, diidralazina, diltiazem, alcalóides de ergot, dimenhidrinato, sulfóxido de dimetila, dimeticona, domperidona e derivados de domperidan, dopamina, doxazosin, doxorrubizina, doxilamina, dapiprazol, benzodiazepinas, diclofenaco, antibióticos glicosídeos, desipramina, econazol, inibidores de ACE, enalapril, efedrina, epinefrina, epoetina e derivados de epoetina, morfinanas, antagonistas de cálcio, irinotecan, modafinil, orlistat, antibióticos peptídicos, fenitoína, riluzóis, risedronato, sildenafil, topiramato, antibióticos de macrolídeo, estrogênio e derivados de estrogênio, progestogênio e derivados de progestogênio, testosterona e derivados de testosterona, androgênio e derivados de androgênio, etenzamida, etofenamato, etofibrato, fenofibrato, etofilina, etoposida, fanciclovir, famotidina, felodipina, fenofibrato, fentanil, fenticonazol, inibidores de girase, fluconazol, fludarabina, fluarizina, fluorouracila, fluoxetina, flurbiprofeno, ibuprofeno, flutamida, fluvastatina, folitropina, formoterol, fosfomicina, furosemida, ácido fusídico, galopamil, ganciclovir, genfibrozil, gentamicina, ginkgo, erva de Saint John, glibenclamida, derivados de uréia como antidiabéticos orais, glucagon, glicosamina e derivados de glicosamina, glutationa, glicerol e derivados de glicerol, hormônios do hipotálamo, goserelina, inibidores da girase, guanetidina, halofantrina, haloperidol, heparina e derivados de heparina, ácido hialurônico, hidralazina, hidroclorotiazida e derivados de hidroclorotiazida, salicilatos, hidroxizina, idarrubicina, ifosfamida, imipramina, indometacina, indoramina, insulina, interferons, iodo e derivados de iodo, isoconazol, isoprenalina, glucitol e derivados de glucitol, itraconazol, cetoconazol, cetoprofen, cetotifen, lacidipina, lansoprazol, levodopa, levometadona, hormônios da tireóide, ácido lipóico e derivados do ácido lipóico, lisinopril, lisurida, lofepramina, lomustina, loperamida, loratadina, maprotilina, mebendazol, mebeverina, meclozina, ácido mefenâmico, mefloquina, meloxicam, mepindolol, meprobamato, meropenem, mesalazina, mesuximida, metamizol, metformina, metotrexato, metilfenidato, metilprednisolona, metixeno, metoclopramida, metoprolol, metronidazol, mianserina, miconazol, minociclina, minoxidil, misoprostol, mitomicina, mizolastina, moexipril, morfina e derivados de morfina, prímula da noite, nalbufina, naloxona, tilidina, naproxen, narcotina, natamicina, neostigmina, nicergolina, nicetamida, nifedipina, ácido niflúmico, nimodipina, nimorazol, nimustina, nisoldipina, adrenalina e derivados de adrenalina, norfloxacina, novamina sulfona, noscapina, nistatina, ofloxacina, olanzapina, olsalazina, omeprazol, omoconazol, ondansetron, oxaceprol, oxacilina, oxiconazol, oximetazolina, pantoprazol, paracetamol, paroxetina, penciclovir, penicilinas orais, pentazocina, pentifilina, pentoxifilina, perfenazina, petidina, extratos vegetais, fenazona, feniramina, derivados do ácido barbitúrico, fenilbutazona, fenitoína, pimozida, pindolol, piperazina, piracetam, pirenzepina, piribedil, piroxicam, pramipexol, pravastatina, prazosin, procaína, promazina, propiverina, propranolol, propifenazona, prostaglandinas, protionamida, proxifilina, quetiapina, quinapril, quinaprilat, ramipril, ranitidina, reproterol, reserpina, ribavirin, rifampicina, risperidona, ritonavir, ropinirol, roxatidina, roxitromicina, ruscogenina, rutosida e derivados de rutosida, sabadila, salbutamol, salmeterol, escopolamina, selegilina, sertaconazol, sertindol, sertralion, silicates, sildenafil, sinvastatina, sitoesterol, sotalol, ácido espaglúmico, esparfloxacina, espectinomicina, espiramicina, espirapril, espironolactona, estavudina, estreptomicina, sucralfato, sufentanil, sulbactam, sulfonamidas, sulfasalazina, sulpirida, sultamicilina, sultiam, sumatriptano, cloreto de suxametônio, tacrina, tacrolimus, taliolol, tamoxifeno, taurolidina, tazaroteno, temazepam, teniposida, tenoxicam, terazosin, terbinafina, terbutalina, terfenadina, terlipressina, tertatolol, tetraciclina, terizolina, teobromina, teofilina, butizina, tiamazol, fenotiazinas, tiotepa, tiagabina, tiaprida, derivados do ácido propiônico, ticlopidina, timolol, tinidazol, tioconazol, tioguanina, tioxolona, tiropramida, tizanidina, tolazolina, tolbutamida, tolcapona, tolnaftato, tolperisona, topotecano, torasemida, antiestrogênios, tramadol, tramazolina, trandolapril, tranilcipromina, trapidil, trazodona, triancinolona e derivados de triacinolona, triamtereno, trifluperidol, trifluridina, trimetoprim, trimipramina, tripelennamina, triprolidina, trifosfamida, tromantadina, trometamol, tropalpina, troxerutina, tulobuterol, tiramina, tirotricina, urapidil, ácido ursodesoxicólico, ácido cenodesoxicólico, valaciclovir, ácido valpróico, vancomicina, cloreto de vecurônio, Viagra, venlafaxina, verapamil, vidarabina, vigabatrin, viloazina, vinblastina, vincamina, vincristina, vindesina, vinorrelbina, vinpocetina, viquidil, warfarina, nicotinato de xantinol, xipamida, zafirlucast, zalcitabina, zidovudina, zolmitriptan, zolpidem, zoplicona, zotipina e outros. Ver, por exemplo, a Patente US N² 6.897.205; ver também a Patente US Νθ 6.838.528; Patente US N~ 6.497.729.

Os exemplos de agentes terapêuticos utilizados em conjunção com a invenção incluem, rapamicina, 40-O-(2-Hidroxietil)rapamicina (everolimus), 40-O-Benzil-rapamicina, 40-0-(4’-Hidroximetil)benzilrapamicina, 40-O-[4’-(l ,2-Diidroxietil)]benzilrapamicina, 40-0- Alilrapamicina, 40-O-[3 ’-(2,2-Dimetil-1,3-dioxolan-4(S)-il)-prop-2’-en-1 ’-il] rapamicina, (2’:E,4’S)-40-O-(4’,5’-Diidróxi-pent-2’-en-r-il)-rapamicina 40O-(2-Hidróxi)etoxicarbonilmetil-rapamicina, 40-0-(3-Hidróxi)propilrapamicina 40-O-(6-Hidróxi)hexil-rapamicina 40-O-[2-(2-Hidróxi)etóxi]etil46 rapamicina 40-O-[(3S)-2,2-Dimetildioxolan-3-il]metil-rapamicina, 40-0[(2S)-2,3-Diidroxiprop-1 -il]-rapamicina, 40-O-(2-Acetóxi)etil-rapamicina 40O-(2-Nicotinoilóxi)-etil-rapamicina, 40-O-2-(N-Morfolino)acetóxi]etilrapamicina 40-O-(2-N-Imidazolilacetóxi)etil-rapamicina, 40-O-[2-(N-MetilN’-piperazinil)-acetóxi]etil-rapamicina, 39-0-Desmetil-39,40-0,0-etilenorapamicina, (26R)-26-Diidro-40-O-(2-hidróxi)etil-rapamicina, 28-O-Metilrapamicina, 40-O-(2-Aminoetil)-rapamicina, 40-0-(2-Acetaminoetil)rapamicina 40-O-(2-Nicotinamidoetil)-rapamicina, 40-O-(2-(N-Metilimidazo-2 ’ -ilcarbetoxamido)etil)-rapamicina, 40-O-(2-Etoxicarbonilaminoetil)-rapamicina, 40-O-(2-Tolilsulfonamidoetil)-rapamicina, 40-O-[2(4’,5’-Dicarboetóxi-l’,2’,3’-triazol-l’-il)-etil]-rapamicina, 42-Epi(tetrazolil)rapamicina (tacrolimus) e 42-[3-hidróxi-2-(hidroximetil)-2metilpropanoato]rapamicina (tensirolimus).

Os agentes farmacêuticos, se desejado, também podem ser usados na forma de seus sais ou derivados farmaceuticamente aceitáveis (significando sais que retêm a eficácia biológica e propriedades dos compostos desta invenção e que não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis) e no caso de ingredientes ativos quirais é possível utilizar tanto os isômeros opticamente ativos e racematos ou misturas de diastereoisômeros. Também, o agente farmacêutico pode incluir uma pró-droga, um hidrato, um éster, um derivado ou análogos de um composto ou molécula.

Um “sal farmaceuticamente aceitável” pode ser preparado para qualquer agente farmacêutico tendo uma funcionalidade capaz de formar um sal, por exemplo uma funcionalidade de ácido ou base. Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser derivados de ácidos e bases orgânicos ou inorgânicos. O termo “sais farmaceuticamente aceitáveis” nestes casos refere-se aos sais de adição de base relativamente não tóxicos, inorgânicos e orgânicos dos agentes farmacêuticos.

“Pró-drogas” são compostos derivados pela adição de um grupo que favorece solubilidade maior para o composto desejado a ser liberado. Uma vez no corpo, a pró-droga é tipicamente solicitada por uma enzima, por exemplo, uma esterase, amidase ou fosfatase, para gerar o composto ativo.

“Estabilidade” como aqui usado refere-se à estabilidade da droga em um revestimento de polímero depositado em um substrato na sua forma de produto final (por exemplo, estabilidade da droga em um stent revestido). O termo estabilidade definirá 5 % ou menos de degradação da droga na forma de produto final.

“Agente biológico ativo” como aqui usado refere-se a uma substância, originalmente produzida pelos organismos vivos, que pode ser usada para prevenir ou tratar uma doença (significando qualquer tratamento de uma doença em um mamífero, incluindo prevenir a doença, isto é, fazer com que os sintomas clínicos da doença não se desenvolvam; inibir a doença, isto é, deter o desenvolvimento de sintomas clínicos; e/ou aliviar a doença, isto é, causar a regressão de sintomas clínicos). E possível que os agentes biológicos ativos da invenção também possam compreender dois ou mais agentes biológicos ativos ou um agente biológico ativo combinado com um agente farmacêutico, um agente estabilizante ou entidade química ou biológica. Embora o agente biológico ativo possa ter sido originalmente produzido pelos organismos vivos, aqueles da presente invenção também podem ter sido sinteticamente preparado ou pelos métodos que combinam isolação biológica e modificação sintética. Por via de um exemplo não limitante, um ácido nucléico pode ser isolado de uma fonte biológica ou preparado pelas técnicas tradicionais, conhecidas por aqueles habilitados na técnica da síntese de ácido nucléico. Além disso, o ácido nucléico pode ser modificado ainda para conter porções que não ocorrem naturalmente. Os exemplos não limitantes de agentes biológicos ativos incluem peptídeos, proteínas, enzimas, glicoproteínas, ácidos nucléicos (incluindo polímeros de desoxirribonucleotídeo ou ribonucleotídeo na forma de filamento único ou duplo e a menos que de outro modo limitado, abrange análogos conhecidos de nucleotídeos naturais que hibridizam para ácidos nucléicos em uma maneira similar aos nucleotídeos que ocorrem naturalmente), os ácidos nucléicos de anti-sentido, ácidos graxos, antimicrobianos, vitaminas, hormônios, esteróides, lipídeos, polissacarídeos, carboidratos e outros. Estes incluem ainda, mas não são limitados a, agentes anti-restenóticos, antidiabéticos, analgésicos, agentes antiinflamatórios, antirreumáticos, agentes antiipotensivo, agentes antiipertensivos, drogas psicoativas, tranquilizantes, antieméticos, relaxantes musculares, glicocorticóides, agentes para tratar colite ulcerativa ou doença de Crohn, antialérgicos, antibióticos, antiepilépticos, anticoagulantes, antimicóticos, antitussivos, remédios contra a arteriosclerose, diuréticos, proteínas, peptídeos, enzimas, inibidores de enzima, remédios contra a gota, hormônios e seus inibidores, glicosídeos cardíacos, agentes imunoterapêuticos e citocinas, laxantes, agentes que diminuem lipídeo, remédios contra a enxaqueca, produtos minerais, otológicos, agentes anti parkinson, agentes terapêuticos da tireóide, espasmolíticos, inibidores da agregação de plaqueta, vitaminas, citostáticos e inibidores de metástase, produtos fitofarmacêuticos e agentes quimioterapêuticos. Preferivelmente, o agente biológico ativo é um peptídeo, proteína ou enzima, incluindo derivados e análogos de peptídeos, proteínas e enzimas naturais. O agente biológico ativo também pode ser um hormônio, terapias de gene, RNA, siRNA, e/ou terapias celulares (para exemplo não limitante, células tronco ou células T).

“Agente ativo” como aqui usado refere-se a qualquer agente farmacêutico ou agente biológico ativo como aqui descrito.

“Atividade” como aqui usado refere-se à capacidade de um agente farmacêutico ou biológico ativo para prevenir ou tratar uma doença (significando qualquer tratamento de uma doença em um mamífero, incluindo prevenir a doença, isto é, fazendo com que os sintomas clínicos da doença não se desenvolvam; inibindo a doença, isto é, detendo o desenvolvimento de sintomas clínicos; e/ou aliviando a doença, isto é, causando a regressão dos sintomas clínicos). Assim a atividade de um agente farmacêutico ou biológico ativo deve ser de valor terapêutico ou profilático.

“Estrutura secundária, terciária e quaternária” como aqui usado é definido como segue. Os agentes biológicos ativos da presente invenção tipicamente possuirão algum grau de estrutura secundária, terciária e/ou quaternária, no que a atividade do agente depende. Como um exemplo ilustrativo, não limitante, as proteínas possuem estrutura secundária, terciária e quaternária. A estrutura secundária refere-se ao arranjo espacial de resíduos de aminoácido que são próximos um do outro na sequência linear. A hélice alfa e o filamento β são elementos de estrutura secundária. A estrutura terciária refere-se ao arranjo espacial de resíduos de aminoácido que são muito distantes na sequência linear e ao padrão de ligações de dissulfeto. As proteínas contendo mais do que uma cadeia de polipeptídeo exibem um nível adicional de organização estrutural. Cada cadeia de polipeptídeo em uma tal proteína é chamada de uma subunidade. A estrutura quaternária refere-se ao arranjo espacial de subunidades e à natureza de seus contatos. Por exemplo a hemoglobina consiste de duas cadeias α e duas β. E bem conhecido que a função da proteína surge da sua conformação ou arranjo tridimensional de átomos (uma cadeia de polipeptídeo estendida é destituída de atividade). Assim um aspecto da presente invenção é manipular agentes biológicos ativos, enquanto se é cuidadoso para manter a sua conformação, de modo a não perder a sua atividade terapêutica.

“Polímero” como aqui usado, refere-se a uma série de unidades monoméricas de repetição que foram reticuladas ou polimerizadas. Qualquer polímero adequado pode ser usado para realizar a presente invenção. E possível que os polímeros da invenção também possam compreender dois, três, quatro ou mais polímeros diferentes. Em algumas formas de realização, da invenção apenas um polímero é usado. Em algumas formas de realização preferidas uma combinação de dois polímeros é usada. Combinações de polímeros podem estar em razões variáveis, para fornecer revestimentos com propriedades diferentes. Aqueles de habilidade na técnica da química do polímero estarão familiarizados com as propriedades diferentes de compostos poliméricos.

“Copolímero” como aqui usado refere-se a um polímero que é composto de dois ou mais diferentes monômeros. Um copolímero também pode e/ou altemativamente refere-se aos copolímeros aleatórios, de bloco, de enxerto, conhecidos por aqueles de habilidade na técnica.

“Biocompatível” como aqui usado, refere-se a qualquer material que não causa lesão ou morte para o animal ou induz uma reação adversa em um animal quando colocado em contato íntimo com os tecidos do animal. As reações adversas incluem, por exemplo, inflamação, infecção, formação de tecido fibrótico, morte da célula ou trombose. Os termos “biocompatível“ e “biocompatibilidade” quando aqui usado são reconhecidos na técnica e significam que o referente não é por si só tóxico a um hospedeiro (por exemplo, um animal ou ser humano), nem degrada (se o mesmo degrada) a uma taxa que produz subprodutos (por exemplo, subunidades monoméricas ou oligoméricas ou outros subprodutos) em concentrações tóxicas, cause inflamação ou irritação ou induza uma reação imune no hospedeiro. Não é necessário que qualquer composição objeto tenha uma pureza de 100 % a ser julgada biocompatível. Consequentemente, uma composição objeto pode compreender 99 %, 98 %, 97 %, 96 %, 95 %, 90 % 85 %, 80 %, 75 % ou ainda menos de agentes biocompatíveis, por exemplo, incluindo polímeros e outros materiais e excipientes aqui descritos e ainda ser biocompatível.

Para determinar se um polímero ou outro material é biocompatível, podem ser necessário conduzir uma análise de toxicidade. Tais ensaios são bem conhecidos na técnica. Um exemplo de um tal ensaio pode ser realizado com células de carcinoma vivas, tais como células de tumor GT3TKB, na seguinte maneira: a amostra é degradada em NaOH 1 M a 37 graus C até que a degradação completa seja observada. A solução é depois neutralizada com HC1 1 M. Cerca de 200 microlitros de várias concentrações dos produtos de amostra degradada são colocados em placas de cultura de tecido de 96 reservatórios e semeados com células de carcinoma gástrico humano (GT3TKB) em densidade de 104/reservatório. Os produtos de amostra degradada são incubados com as células GT3TKB por 48 horas. Os resultados do ensaio podem ser plotados como % de crescimento relativo vs. concentração de amostra degradada no reservatório de cultura de tecido. Além disso, polímeros e formulações da presente invenção também podem ser avaliados pelos testes in vivo bem conhecidos, tais como implantações subcutâneas em ratos para confirmar que eles não causam níveis significantes de irritação ou inflamação nos sítios de implantação subcutânea.

Os termos “bioabsorvíveis,” “biodegradáveis,” “bioerodíveis,” e “biorreabsorvíveis,” são sinônimos reconhecidos na técnica. Estes termos são aqui usados intercambiavelmente. Polímeros bioabsorvíveis tipicamente diferem de polímeros não bioabsorvíveis em que os primeiros podem ser absorvidos (por exemplo, degradados) durante o uso. Em certas formas de realização, tal uso envolve o uso in vivo, tal como terapia in vivo e em outras de certas formas de realização, tal uso envolve o uso in vitro. No geral, a degradação atribuível à biodegradabilidade envolve a degradação de um polímero bioabsorvível nas suas subunidades componentes ou digestão, por exemplo, por um processo bioquímico, do polímero em subunidades menores, não poliméricas. Em certas formas de realização, a biodegradação pode ocorrer pela mediação enzimática, degradação na presença de água (hidrólise) e/ou outra espécie química no corpo ou ambos. A bioabsorbabilidade de um polímero pode ser mostrado in vitro como aqui descrito ou pelos métodos conhecidos por uma pessoa habilitada na técnica. Um teste in vitro quanto a bioabsorbabilidade de um polímero não requer células vivas ou outros materiais biológicos para mostrar propriedades de bioabsorção (por exemplo, degradação, digestão). Assim, reabsorção, ressorção, absorção, erosão também podem ser usados como sinônimos com os termos “bioabsorvível,” “biodegradável,” “bioerodível,” e “bioreabsorvível.” Mecanismos de degradação de um polímero bioabsorbível pode incluir, mas não são limitados à degradação volumosa, erosão de superfície e combinações destes.

Como aqui usado, o termo “biodegradação” abrange ambos os tipos gerais de biodegradação. A taxa de degradação de um polímero biodegradável frequentemente depende em parte de uma variedade de fatores, incluindo a identidade química da ligação responsável por qualquer degradação, o peso molecular, cristalinidade, bioestabilidade e grau de reticulação de tal polímero, as características físicas (por exemplo, forma e tamanho) do implante e o modo e localização de administração. Por exemplo, quanto maior o peso molecular, maior o grau de cristalinidade, e/ou maior a bioestabilidade, a biodegradação de qualquer polímero bioabsorvível é usualmente mais lenta.

“Morfologia terapeuticamente desejável” como aqui usado refere-se à forma e estrutura grosseira do agente farmacêutico, uma vez depositado sobre o substrato, de modo a fornecer condições ideais para a armazenagem ex vivo, preservação in vivo e/ou liberação in vivo. Tais condições ideais podem incluir, mas não são limitadas a vida de prateleira aumentada, estabilidade in vivo aumentada, boa biocompatibilidade, boa biodisponibilidade ou taxas de liberação modificadas. Tipicamente, para a presente invenção, a morfologia desejada de um agente farmacêutico seria cristalina ou semi-cristalina ou amorfa, embora isto possa variar amplamente dependendo de muitos fatores incluindo, mas não limitado à natureza do agente farmacêutico, da doença a ser tratada/prevenida, das condições de armazenagem intencionadas para o substrato antes do uso ou da localização dentro do corpo de qualquer implante biomédico. Preferivelmente pelo menos 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou 100 % do agente farmacêutico está na forma cristalina ou semi-cristalina.

“Agente de estabilização” como aqui usado refere-se a qualquer substância que mantenha ou realce a estabilidade do agente biológico. Idealmente estes agentes de estabilização são classificados como materiais No geral Considerados Como Seguros (GRAS) pelo US Food and Drug Administration (FDA). Os exemplos de agentes de estabilização incluem, mas não são limitados às proteínas carregadoras, tais como albumina, gelatina, metais ou sais inorgânicos. Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis que podem estar presentes podem ser encontrados ainda na literatura relevante, por exemplo no Handbook of Pharmaceutical Additives: A International Guide to More Than 6000 Products by Trade Name, Chemical, Function, and Manufacturer; Michael e Irene Ash (Eds.); Gower Publishing Ltd.; Aidershot, Hampshire, Inglaterra, 1995.

“Fluido comprimido” como aqui usado refere-se a um fluido de densidade apreciável (por exemplo, >0,2 g/cc) que é um gás na temperatura e pressão padrões. “Fluido supercrítico”, “fluido quase crítico”, “fluido quase supercrítico”, “fluido crítico”, “fluido densificado” ou “gás densificado” como aqui usado refere-se a um fluido comprimido sob condições em que a temperatura é de pelo menos 80 % da temperatura crítica do fluido e a pressão é de pelo menos 50 % da pressão crítica do fluido, e/ou uma densidade de +50 % da densidade crítica do fluido.

Exemplos de substâncias que demonstram comportamento supercrítico ou quase crítico adequadas para a presente invenção incluem, mas não são limitados a dióxido de carbono, isobutileno, amônia, água, metanol, etanol, etano, propano, butano, pentano, éter dimetílico, xenônio, hexafluoreto de enxofre, materiais halogenados e parcialmente halogenados tais como clorofluorocarbonos, hidrocloro-fluorocarbonos, hidrofluorocarbonos, perfluorocarbonos (tais como perfluorometano e perfuoropropano, clorofórmio, triclorofluorometano, diclorodifluorometano, diclorotetrafluoroetano) e misturas destes. Preferivelmente, o fluido supercrítico é hexafluoropropano (FC-236EA) ou 1,1,1,2,3,3hexafluoropropano. Preferivelmente, o fluido supercrítico é hexafluoropropano (FC-236EA) ou 1,1,1,2,3,3-hexafhioropropano para o uso em revestimentos de polímero de PLGA.

“Sinterizar” como aqui usado refere-se ao processo pelo qual partes do polímero ou o polímero inteiro toma-se contínuo (por exemplo, formação de uma película polimérica contínua). Como debatido abaixo, o processo de sinterização é controlado para produzir um polímero totalmente conformai contínuo (sinterização completa) ou para produzir regiões ou domínios de revestimento contínuo enquanto produz vazios (descontinuidades) no polímero. Também, o processo de sinterização é controlado tal que alguma separação de fase é obtida ou mantida entre polímeros diferentes (por exemplo, polímeros A e B) e/ou para produzir separação de fase entre partículas poliméricas separadas. Através do processo de sinterização, as propriedades de adesão do revestimento são melhoradas para reduzir descascamento do descolamento do revestimento do substrato durante a manipulação em uso. Como descrito abaixo, em algumas formas de realização, o processo de sinterização é controlado para fornecer a sinterização incompleta do polímero. Em formas de realização que envolvem sinterização incompleta, um polímero é formado com domínios contínuos e vazios, intervalos, cavidades, poros, canais ou, interstícios que fornecem espaço para sequestro de um agente terapêutico que é liberado sob condições controladas. Dependendo da natureza do polímero, do tamanho das partículas poliméricas e/ou outras propriedades poliméricas, um gás comprimido, um gás densificado, um fluido quase crítico ou um fluido super-crítico podem ser utilizados. Em um exemplo, dióxido de carbono é usado para tratar um substrato que foi revestido com um polímero e uma droga, usando pó seco e processos de revestimento eletrostático RESS. Em um outro exemplo, isobutileno é utilizado no processo de sinterização. Em outros exemplos uma mistura de dióxido de carbono e isobutileno é utilizada. Em um outro exemplo, 1,1,2,3,3-hexafluoro-propano é utilizado no processo de sinterização.

Quando um material amorfo é aquecido a uma temperatura acima da sua temperatura de transição vítrea ou quando um material cristalino é aquecido a uma temperatura acima de uma temperatura de transição de fase, as moléculas que compreendem o material são mais móveis, que por sua vez significa que eles são mais ativos e assim mais propensos às reações tais como oxidação. Entretanto, quando um material amorfo é mantido em uma temperatura abaixo da sua temperatura de transição vítrea, as suas moléculas são substancialmente imobilizadas e assim menos propensas às reações. Do mesmo modo, quando um material cristalino é mantido em uma temperatura abaixo da sua temperatura de transição de fase, as suas moléculas são substancialmente imobilizadas e assim menos propensas às reações. Consequentemente, processar componentes de droga em condições brandas, tais como as condições de deposição e sinterização aqui descritas, minimiza reações cruzadas e degradação do componente de droga. Um tipo de reação que é minimizada pelos processos da invenção diz respeito à capacidade para se evitar solventes convencionais que por sua vez minimiza a oxidação da droga, quer na forma amorfa, semi-cristalina ou cristalina, pela redução da sua exposição a radicais livres, solventes residuais, materiais próticos, materiais próticos polares, iniciadores de oxidação e iniciadores de autoxidação.

“Expansão Rápida de Soluções Supercríticas” ou “RESS” como aqui usado envolve a dissolução de um polímero em um fluido comprimido, tipicamente um fluido supercrítico, seguida pela expansão rápida em uma câmara em pressão mais baixa, tipicamente próxima às condições atmosféricas. A expansão rápida da solução de fluido supercrítico através de uma abertura pequena, com a sua diminuição acompanhante em densidade, reduz a capacidade de dissolução do fluido e resulta na nucleação e desenvolvimento de partículas poliméricas. A atmosfera da câmara é mantida em um estado eletricamente neutro mantendo-se uma “névoa” de isolação de gás na câmara. Dióxido de carbono, nitrogênio, argônio, hélio ou outro gás apropriado são utilizados para prevenir que a carga elétrica seja transferida do substrato para o ambiente circundante.

“Propriedades de volume” propriedades de um revestimento incluindo um produto farmacêutico ou um agente biológico que podem ser realçadas através dos métodos da invenção incluem por exemplo: adesão, maciez, conformalidade, espessura e mistura composicional.

“Eletrostaticamente carregado” ou “potencial elétrico” ou “captura eletrostática” como aqui usados referem-se à coleta das partículas produzidas por pulverização em um substrato que tem um potencial eletrostático diferente do que as partículas pulverizadas. Assim, o substrato está em um potencial eletrônico atraente com respeito às partículas que saem, que resulta na captura das partículas sobre o substrato. Isto é, o substrato e as partículas são opostamente carregados e o transporte das partículas através do meio gasoso do vaso de captura sobre a superfície do substrato é realçado por intermédio da atração eletrostática. Isto podem ser obtido carregando-se as partículas e aterrando-se o substrato ou ao contrário carregando-se o substrato e aterrando-se as partículas, carregando-se as partículas a um potencial (por exemplo, carga negativa) e carregando-se o substrato a um potencial oposto (por exemplo, carga positiva) ou por algum outro processo, que seria facilmente considerado por uma pessoa de habilidade na técnica da captura eletrostática.

“Mistura íntima” como aqui usado, refere-se a dois ou mais materiais, compostos ou substâncias que são uniformemente distribuídas ou dispersadas juntos.

“Camada” como aqui usado refere-se a uma cobertura material de uma superfície ou formação de uma parte ou segmento sobrejacente. Duas camadas diferentes podem ter porções sobrepostas por meio das quais o material de uma camada pode estar em contato com o material de uma outra camada. O contato entre materiais de camadas diferentes pode ser medido determinando-se uma distância entre os materiais. Por exemplo, a Espectroscopia de Raman pode ser utilizada na identificação de materiais de duas camadas presentes em proximidade imediata entre si.

Embora camadas definidas pela espessura uniforme e/ou forma regular sejam aqui consideradas, várias formas de realização descritas abaixo dizem respeito a camadas tendo espessuras variáveis e/ou forma irregular. O material de uma camada pode se estender para dentro do espaço amplamente ocupado pelo material de uma outra camada. Por exemplo, em um revestimento tendo três camadas formadas em sequência como uma primeira camada polimérica, uma camada de agente farmacêutico e uma segunda camada polimérica, o material da segunda camada polimérica que é depositado no final nesta sequência pode se estender para dentro do espaço amplamente ocupado pelo material da camada de agente farmacêutico por meio do que o material da segunda camada polimérica pode ter contato com o material da camada farmacêutica. Também é considerado que o material da segunda camada polimérica pode se estender através da camada inteira amplamente ocupada pelo agente farmacêutico e o contato material da primeiro camada polimérica.

Deve ser mencionado entretanto que o contato entre o material da segunda camada polimérica (ou da primeira camada polimérica) e o material da camada de agente farmacêutico (por exemplo, uma partícula cristalina de agente farmacêutico ou uma porção desta) não necessariamente implica na formação de uma mistura entre o material da primeira ou segunda camadas poliméricas e o material da camada de agente farmacêutico. Em algumas formas de realização, uma camada pode ser definida pelo espaço físico tridimensional ocupado pelas partículas cristalinas de um agente farmacêutico (e/ou agente biológico). É considerado que tal camada pode ser contínua ou não visto que o espaço físico ocupado pelas partículas cristalinas de agentes farmacêuticos pode ser interrompido, por exemplo, pelo material polimérico de uma camada polimérica adjacente. Uma camada polimérica adjacente pode ser uma camada que está em proximidade física para ser partículas do agente farmacêutico na camada de agente farmacêutico. Similarmente, uma camada adjacente pode ser a camada formada em uma etapa de processo exatamente antes ou exatamente depois da etapa de processo em que as partículas do agente farmacêutico são depositadas para formar a camada de agente farmacêutico.

Como descrito abaixo, a deposição de material e a formação da camada aqui fornecidas são vantajosas em que o agente farmacêutico permanece amplamente na forma cristalina durante o processo inteiro. Embora as partículas poliméricas e as partículas do agente farmacêutico possam estar em contato, o processo de formação de camada é controlada para evitar a formação de uma mistura entre as partículas do agente farmacêutico e as partículas poliméricas durante a formação de um dispositivo revestido.

“Revestimento laminado” como aqui usado refere-se a um revestimento composto de duas ou mais camadas de material. Meios para criar um revestimento laminado como aqui descritos (por exemplo, um revestimento laminado que compreende polímero(s) bioabsorvível(is) e agente farmacêutico) podem incluir revestir o stent com droga e polímero como aqui descrito (e-RESS, e-DPC, sinterização com gás comprimido). O processo compreende realizar etapas de revestimento múltiplas e sequenciais (com etapas de sinterização para materiais poliméricos) em que materiais diferentes podem ser depositados em cada etapa, criando assim uma estrutura laminada com uma multidão de camadas (pelo menos 2 camadas) incluindo camadas poliméricas e camadas de agentes farmacêuticos para formar o dispositivo final (por exemplo, stent revestido laminado).

Os métodos de revestimento aqui fornecidos podem ser calibrados para fornecer uma tendência de revestimento por meio da qual a montagem de polímero e agente farmacêutico depositada na superfície abluminal do stent (superfície exterior do stent) é maior do que a quantidade de agente farmacêutico e quantidade de polímero depositadas sobre a superfície luminal do stent (superfície interior do stent). A configuração resultante pode ser desejável para fornecer eluição preferencial da droga para a parede de vaso (superfície luminal do stent) onde o efeito terapêutico de anti-restenose é desejado, sem fornecer a(s) mesma(s) droga(s) antiproliferativa(s) sobre a superfície abluminal, onde este(s) pode(m) retardar a cicatrização, que por sua vez é suspeita de ser uma causa de problemas de segurança de estágio tardio com DESs correntes.

Também, os métodos aqui descritos fornecem um dispositivo em que o revestimento sobre o stent é solicitado em favor de revestimento aumentado nas extremidades do stent. Por exemplo, um stent tendo três porções ao longo do comprimento do stent (por exemplo, uma porção central flanqueada por duas porções de extremidade) pode ter porções de extremidade revestidas com quantidades aumentadas de agente farmacêutico e/ou polímero comparada com a porção central.

A presente invenção fornece numerosas vantagens. A invenção é vantajosa em que ela permite utilizar uma plataforma combinando métodos de formação de camada com base nas tecnologias de fluido comprimido; captura eletrostática e métodos de sinterização. A plataforma resulta em stents de eluição de droga tendo propriedades terapêuticas e mecânicas realçadas. A invenção é particularmente vantajosa em que a mesma utiliza a tecnologia de polímero laminado otimizado. Em particular, a presente invenção possibilita a formação de camadas separadas de plataformas de droga específicas. Como indicado acima, a forma de uma camada separada de partículas cristalinas pode ser irregular, incluindo interrupções da dita camada pelo material de uma outra camada (camada polimérica) posicionada no espaço entre partículas cristalinas de agente farmacêutico.

Os processos convencionais para o revestimento por pulverização de stents requerem que droga e polímero sejam dissolvidos em solvente ou solvente mútuo antes que o revestimento por pulverização possa ocorrer. Na plataforma aqui fornecida os drogas e polímeros são revestidos sobre a estrutura do stent em etapas separadas, que podem ser realizadas simultânea ou altemadamente. Isto permite a deposição separada do agente ativo (por exemplo, uma droga) dentro de um polímero permitindo deste modo a colocação de mais do que uma droga em um único dispositivo médico com ou sem uma camada polimérica interveniente. Por exemplo, a presente plataforma fornece um stent de eluição de droga duplo.

Algumas das vantagens fornecidas pela invenção objeto incluem utilizar fluidos comprimidos (por exemplo, fluidos supercríticos, por exemplo métodos com base em E-RESS); metodologia de deposição livre de solvente; uma plataforma que permite processar em temperaturas mais baixas preservando deste modo as qualidades do agente ativo e do polímero; a capacidade para incorporar dois, três ou mais drogas enquanto minimiza efeitos nocivos das interações diretas entre os vários drogas e/ou seus excipientes durante a fabricação e/ou armazenagem dos stents de eluição de droga; uma deposição seca; adesão realçada e propriedades mecânicas das camadas sobre a estrutura do stent; deposição com precisão e processamento de lote rápido; e capacidade para formar estruturas intricadas.

Em uma forma de realização, a presente invenção fornece uma plataforma de liberação de droga múltiplo que produz stents de eluição de droga fortes, elásticas e flexíveis incluindo uma droga anti-restenose (por exemplo, um limus ou taxol) e droga anti-trombose (por exemplo, heparina ou um análogo desta) e polímeros bioabsorvíveis bem caracterizados. Os stents de eluição de droga aqui fornecidos minimizam o potencial para trombose, em parte, pela redução ou eliminação total dos polímeros trombogênicos e redução ou eliminação total de drogas residuais que inibiríam a cicatrização.

A plataforma fornece liberação otimizada de terapias de droga múltiplo por exemplo para tratamento em estágio precoce (restenose) e estágio tardio (trombose).

A plataforma também fornece um revestimento aderente que possibilita acesso através de lesões tortuosas sem o risco do revestimento ser comprometido.

Uma outra vantagem da presente plataforma é a capacidade para fornecer perfis de eluição altamente desejáveis.

As vantagens da invenção incluem a capacidade para reduzir ou completamente eliminar polímeros potencialmente trombogênicos assim como possivelmente drogas residuais que possam inibir a cicatrização de longa duração. Também, a invenção fornece stents vantajosos tendo resistência e elasticidade otimizadas de revestimentos que por sua vez permitem acesso às lesões complexas e reduzem ou completamente eliminam a deslaminação. As camadas laminadas de polímeros bioabsorvíveis possibilitam a eluição controlada de uma ou mais drogas.

A plataforma aqui fornecida reduz ou completamente elimina deficiências que foram associadas com os stents de eluição de droga convencionais. Por exemplo, a plataforma aqui fornecida permite ajuste muito melhor do período de tempo para o agente ativo eluir e do período de tempo necessário para o polímero reabsorver minimizando deste modo a trombose e outros efeitos nocivos associados com a liberação de droga deficientemente controlada.

A presente invenção fornece diversas vantagens que superam ou atenuam as limitações da tecnologia corrente para stents bioabsorvíveis. Por exemplo, uma limitação inerente de materiais poliméricos bioabsorvíveis convencionais diz respeito à dificuldade em formar um stent forte, flexível, deformável (por exemplo, utilizável com balão) com perfil baixo. Os polímeros no geral carecem da resistência de metais de alto desempenho. A presente invenção supera estas limitações pela criação de uma estrutura laminada no stent essencialmente polimérico. Sem desejar estar ligada por qualquer teoria ou analogia específicas, a resistência aumentada fornecida pelos stents da invenção pode ser entendida comparando-se a resistência da madeira compensada vs. a resistência de uma chapa fina de madeira.

As formas de realização da invenção que envolvem uma estrutura de stent metálica fina fornecem vantagens incluindo a capacidade para superar a elasticidade inerente da maioria dos polímeros. É no geral difícil obter uma taxa alta (por exemplo, 100 %) de deformação plástica em polímeros (comparada com a deformação elástica onde os materiais têm algumas ‘distensão’ para a forma original). Mais uma vez, sem desejar estar ligado por qualquer teoria, a estrutura de stent metálica central (que seria muito pequena e fraca para servir como um stent por si só) atuaria como arames dentro de um plástico, stent deformável, basicamente superando qualquer ‘memória elástica’ do polímero.

Uma outra vantagem da presente invenção é a capacidade para criar um stent com um perfil de eluição de droga controlado (sintonizado). Por intermédio da capacidade de ter materiais diferentes em cada camada da estrutura laminada e a capacidade para controlar a localização de droga(s) independentemente nestas camadas, o método possibilita um stent que liberaria drogas em perfis de eluição muito específicos, perfis de eluição sequenciais e/ou paralelos programados. Também, a presente invenção possibilita a eluição controlada de uma droga sem afetar a eluição de uma segunda droga (ou doses diferentes da mesma droga).

A segunda camada polimérica pode ter uma porção de camada definida ao longo de um eixo longitudinal do stent, a dita porção de camada polimérica tendo uma espessura menor do que a dita espessura máxima da dita segunda camada polimérica; em que a dita porção é livre de contato com partículas do dito agente farmacêutico.

A porção de camada polimérica pode ser uma subcamada que, pelo menos em parte, estende-se ao longo da superfície abluminal do stent ao longo do eixo longitudinal do stent (onde o eixo longitudinal do stent é o eixo central do stent ao longo do seu comprimento tubular). Por exemplo, quando um revestimento é removido da superfície abluminal do stent, tal como quando o stent é cortado ao longo do seu comprimento, achatada e o revestimento é removido pela raspagem do revestimento usando um bisturi, faca ou outra ferramenta afiada, o revestimento que é removido (a despeito de ter um padrão compatível com o padrão do stent) tem uma camada que pode ser mostrada ter as características aqui descritas. Isto pode ser mostrado pela amostragem de localizações múltiplas do revestimento que é representativo do revestimento inteiro.

Alternativa e/ou adicionalmente, visto que os stents são no geral compreendidos de uma série de suportes e vazios. Os métodos aqui fornecidos vantajosamente permitem revestimentos que se estendem em tomo de cada suporte, as camadas de revestimento são do mesmo modo disposto em tomo de cada suporte. Assim, uma porção de camada polimérica pode ser uma camada que, pelo menos, estende-se em tomo de cada suporte uma distância do dito suporte (embora a distância possa variar onde a espessura do revestimento sobre a superfície abluminal é diferente da espessura do revestimento na luminal e/ou paredes laterais). [00194]Em algumas formas de realização, o stent compreende pelo menos um suporte tendo um comprimento de suporte ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que a dita segunda porção de camada estende-se substancialmente ao longo do dito comprimento de suporte. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se substancialmente ao longo do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 50 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 75 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 85 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 90 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal e a dita segunda porção de camada estende-se ao longo de pelo menos 99 % do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o revestimento laminado tem pelo menos 25 % em volume de agente farmacêutico. Em algumas formas de realização, o revestimento laminado é pelo menos 35 % em volume de agente farmacêutico. Em algumas formas de realização, o revestimento laminado é de cerca de 50 % em volume de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformai à stent ao longo substancialmente do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal ao stent ao longo de pelo menos 75 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformai à stent ao longo de pelo menos 85 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformai à stent ao longo de pelo menos 90 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformai à stent ao longo de pelo menos 95 % do dito comprimento de stent. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformai à stent ao longo de pelo menos 99 % do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e uma pluralidade de suportes ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal a pelo menos no mínimo 50 % dos ditos suportes. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e uma pluralidade de suportes ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal a pelo menos no mínimo 75 % dos ditos suportes. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e uma pluralidade de suportes ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal a pelo menos no mínimo 90 % dos ditos suportes. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e uma pluralidade de suportes ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento é conformal a pelo menos no mínimo 99 % dos ditos suportes. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que um exame pela microscopia eletrônica do dispositivo mostra que o dito revestimento é conformai à dito stent ao longo de pelo menos 90 % do dito comprimento de stent.

Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento tem uma espessura média determinada por uma média calculada de valores de espessura de revestimento medidos em uma pluralidade de pontos ao longo do dito eixo de stent longitudinal; em que uma espessura do revestimento medida em qualquer ponto ao longo eixo de stent longitudinal é de cerca de 75 % a cerca de 125 % da dita espessura média. Em algumas formas de realização, o stent tem um eixo de stent longitudinal e um comprimento de stent ao longo do dito eixo de stent longitudinal, em que o dito revestimento tem uma espessura média determinada por uma média calculada a partir de valores de espessura de revestimento medidos em uma pluralidade de pontos ao longo do dito eixo de stent longitudinal; em que uma espessura do revestimento medida em qualquer ponto ao longo eixo de stent longitudinal é de cerca de 95 % a cerca de 105 % da dita espessura média.

Em algumas formas de realização, pelo menos dois do primeiro polímero, do segundo polímero e do terceiro polímero são o mesmo polímero e em que o dito mesmo polímero compreende um copolímero de PLGA. Em algumas formas de realização, o terceiro polímero tem uma taxa de dissolução in vitro mais alta do que a taxa de dissolução in vitro do primeiro polímero. Em algumas formas de realização, o terceiro polímero é copolímero de PLGA com uma razão de cerca de 40:60 a cerca de 60:40 e o primeiro polímero é um copolímero de PLGA com uma razão de cerca de 70:30 a cerca de 90:10. Em algumas formas de realização, o terceiro polímero é copolímero de PLGA tendo um peso molecular de cerca de 10 kD e o segundo polímero é um copolímero de PLGA tendo um peso molecular de cerca de 19 kD.

Em algumas formas de realização, o polímero bioabsorvível é selecionado do grupo de PLGA, PGA poli(glicolídeo), LPLA poli(l-lactídeo), DLPLA poli(dl-lactídeo), PCL poli(ecaprolactona) PDO, poli(dioxolano) PGA-TMC, 85/15 DLPLG p(dl-lactídeo-co-glicolídeo), 75/25 DLPL, 65/35 DLPLG, 50/50 DLPLG, TMC poli(carbonato de trimetila), p(CPP: SA) poli(ácido l,3-bis-p-(carboxifenóxi)propano-co-sebácico). Em algumas formas de realização, o polímero compreende uma mistura íntima de dois ou mais polímeros.

Em algumas formas de realização, o stent é formado de material de aço inoxidável. Em algumas formas de realização, o stent é formado de um material que compreende um liga de cobalto-cromo. Em algumas formas de realização, o stent é formado de um material que compreende as seguintes porcentagens em peso: de cerca de 0,05 a cerca de 0,15 de C, de cerca de 1,00 a cerca de 2,00 de Mn, cerca de 0,04 de Si, cerca de 0,03 de P, cerca de 0,3 de S, de cerca de 19,0 a cerca de 21,0 de Cr, de cerca de 9,0 a cerca de 11,0 de Ni, de cerca de 14,0 a cerca de 16,00 de W, cerca de 3,0 de Fe e Bal. Co. Em algumas formas de realização, o stent é formado de um material que compreende no máximo as seguintes porcentagens em peso: cerca de 0,025 de C, cerca de 0,15 de Mn, cerca de 0,15 de Si, cerca de 0,015 de P, cerca de 0,01 de S, de cerca de 19,0 a cerca de 21,0 de Cr, de cerca de 33 a cerca de 37 de Ni, de cerca de 9,0 a cerca de 10,5 de Mo, cerca de 1,0 de Fe, cerca de 1,0 de Ti e Bal. Co. Em algumas formas de realização, o stent é formado de um material que compreende a liga L605.

Teor é aqui expressado em unidades de pg/mm, entretanto, isto pode ser simplesmente convertido para pg/mm² ou uma outra quantidade por área (por exemplo, pg/cm ).

Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende formar uma camada polimérica tendo um comprimento ao longo de um eixo horizontal do dito dispositivo em que a dita camada polimérica tem uma porção de camada ao longo do dito comprimento, em que a dita porção de camada é livre de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende contatar o dito polímero com um fluido densificado. Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende contatar o dito polímero com um fluido densificado por um período de tempo em uma temperatura de cerca de 5°C e 150°C e uma pressão de cerca de 10 psi (69 kPa) a cerca de 500 psi (3450 kPa). Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende contatar o dito polímero com um fluido densificado por um período de tempo em uma temperatura de cerca de 25°C e 95°C e uma pressão de cerca de 25 psi (172,5 kPa) a cerca de 100 psi (690 kPa). Em algumas formas de realização, a etapa (e) compreende contatar o dito polímero com um fluido densificado por um período de tempo em uma temperatura de cerca de 50°C e 85°C e uma pressão de cerca de 35 psi (241,5 kPa) a cerca de 65 psi (448,5 kPa).

É aqui fornecido um método de preparar um dispositivo que compreende um stent e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent; o dito método compreendendo: (a) fornecer um stent; (b) formar uma solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico que compreende pelo menos um solvente de fluido supercrítico e um primeiro polímero, descarregar a dita solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico sob condições suficientes para formar partículas sólidas do dito primeiro polímero, depositar as ditas primeiras partículas poliméricas sobre o dito stent, em que um potencial elétrico é mantido entre o stent e o primeiro polímero e sinterizar o dito primeiro polímero; (c) depositar partículas do agente farmacêutico na forma de pó seco sobre o dito stent, em que um potencial elétrico é mantido entre o stent e as ditas partículas do agente farmacêutico; e (d) formar uma solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico que compreenda pelo menos um solvente de fluido supercrítico e um segundo polímero e descarregar a dita solução de fluido supercrítico ou quase supercrítico sob condições suficientes para formar partículas sólidas do dito segundo polímero, em que um potencial elétrico é mantido entre o stent e o segundo polímero e sinterizar o dito segundo polímero.

Em algumas formas de realização, sinterizar o dito primeiro e/ou sinterizar o dito segundo polímero compreende contatar o dito primeiro e/ou segundo polímero com um fluido densifícado.

E aqui fornecido um método de tratar um paciente que compreende liberar no corpo do paciente um dispositivo que compreende: um stent, em que o stent é formado de um material que compreende as seguintes porcentagens em peso: de 0,05 a 0,15 de C, de 1,00 a 2,00 de Mn, 0,040 de Si, 0,030 de P, 0,3 de S, de 19,00 a 21,00 de Cr, de 9,00 a 11,00 de Ni, de 14,00 a

16,00 de W, 3,00 de Fe e Bal. Co; e uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o dito stent, em que uma primeira camada compreende um primeiro polímero bioabsorvível, uma segunda camada compreende um agente farmacêutico, uma terceira camada compreende um segundo polímero bioabsorvível, uma quarta camada compreende o agente farmacêutico e uma quinta camada compreende um terceiro polímero bioabsorvível, em que o agente farmacêutico é selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo, em que pelo menos uma porção do agente farmacêutico está na forma cristalina e em que pelo menos um do dito primeiro polímero, segundo polímero e terceiro polímero compreende um copolímero de PLGA.

Em algumas formas de realização, o dispositivo tem uma quantidade de agente farmacêutico inicial e a quantidade de agente farmacêutico liberada pelo dito dispositivo ao tecido da parede de vaso do dito paciente é mais alta do que a quantidade de agente farmacêutico liberada por um stent de eluição de droga convencional tendo o mesmo teor inicial de agente farmacêutico como o teor inicial de agente farmacêutico do dito dispositivo. Em algumas formas de realização, a quantidade de agente farmacêutico liberada pelo dito dispositivo ao tecido da parede de vaso do dito paciente é pelo menos 25 % maior do que a quantidade de agente farmacêutico liberada ao tecido da parede de vaso do dito paciente pelo dito stent de eluição de droga convencional. Em algumas formas de realização, o método compreende tratar a restenose em um vaso sanguíneo do dito o paciente. Em algumas formas de realização, o paciente é selecionado de um porco, um coelho e um ser humano.

“Tecido da parede de vaso” como aqui usado é mostrado na Figura 11, que representa o tecido que circunda o lúmen de um vaso, incluindo o endotélio, neoíntima, túnica média, IEL (lâmina elástica interna), EEL (lâmina elástica externa) e a túnica adventícia.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 5 % a cerca de 25 % do agente farmacêutico são eluídos um dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de 15 % a cerca de 45 % do agente farmacêutico são eluídos 7 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 25 % a cerca de 60 % do agente farmacêutico são eluídos 14 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 35 % a cerca de 70 % do agente farmacêutico são eluídos 21 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; e de cerca de 40 % a cerca de 100 % do agente farmacêutico são eluídos 28 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que pelo menos 5 % do agente farmacêutico são eluídos um dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; pelo menos 15 % do agente farmacêutico são eluídos 7 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; pelo menos 25 % do agente farmacêutico são eluídos 14 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; pelo menos 30 % do agente farmacêutico são eluídos 21 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; pelo menos 40 % do agente farmacêutico são eluídos 28 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 10 % a cerca de 75 % do agente farmacêutico são eluídos na semana 1 depois que o dispositivo é contatado com meio de eluição, de cerca de 25 % a cerca de 85 % do agente farmacêutico são eluídos na semana 2 e de cerca de 50 % a cerca de 100 % do agente farmacêutico são eluídos na semana 10.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro mostrado na Figura 5.

Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 85 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por 90 dias ou mais. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 50 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 75 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 85 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra que pelo menos 95 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias. Em algumas formas de realização, a etapa (v) mostra até 100 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por cerca de 90 dias.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 1 % a cerca de 35 % do agente farmacêutico são eluídos uma hora depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de 5 % a cerca de 45 % do agente farmacêutico são eluídos 3 horas depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 30 % a cerca de 70 % do agente farmacêutico são eluídos 1 dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 40 % a cerca de 80 % do agente farmacêutico são eluídos 3 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 50 % a cerca de 90 % do agente farmacêutico são eluídos 10 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 55 % a cerca de 95 % do agente farmacêutico são eluídos 15 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; e de cerca de 60 % a cerca de 100 % do agente farmacêutico são eluídos 20 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo;, em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro em que o dito perfil de eluição mostra que cerca de 5 % a cerca de 25 % do agente farmacêutico são eluídos uma hora depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de 5 % a cerca de 35 % do agente farmacêutico são eluídos 3 horas depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 30 % a cerca de 65 % do agente farmacêutico são eluídos 1 dia depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 45 % a cerca de 70 % do agente farmacêutico são eluídos 3 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 55 % a cerca de 85 % do agente farmacêutico são eluídos 10 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; de cerca de 65 % a cerca de 85 % do agente farmacêutico são eluídos 15 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição; e de cerca de 75 % a cerca de 100 % do agente farmacêutico são eluídos 20 dias depois que o dispositivo é contatado com o meio de eluição.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e uma pluralidade de camadas sobre o dito stent; em que pelo menos uma das ditas camadas compreende um polímero bioabsorvível e pelo menos uma das ditas camadas compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo; em que o dito dispositivo fornece um perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro mostrado na Figura 9.

Em algumas formas de realização, o perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro é determinado por um procedimento que compreende: (i) contatar o dispositivo com um meio de eluição que compreende etanol e solução salina tamponada com fosfato em que o pH do meio é de cerca de 7,4 e em que o dispositivo é contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C; (ii) opcionalmente agitar o meio de eluição durante a etapa de contatar em (i); (iii) remover o meio de eluição em pontos de tempo designados; e (iv) ensaiar o meio de eluição removido para determinar o teor de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, o perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro é determinado por um procedimento que compreende: (i) contatar o dispositivo com um meio de eluição que compreende etanol e solução salina tamponada com fosfato em que o pH do meio é de cerca de 7,4 e em que o dispositivo é contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C; (ii) opcionalmente agitar o meio de eluição durante a etapa de contatar em (i); (iii) remover o dito dispositivo do meio de eluição em pontos de tempo designados; e (iv) ensaiar o meio de eluição para determinar o teor de agente farmacêutico.

Em algumas formas de realização, o procedimento compreende ainda: (v) determinar a perda de peso do polímero comparandose o peso do dispositivo antes e depois da etapa de contatar e ajustar quanto a quantidade de agente farmacêutico eluído no meio de eluição como determinado na etapa iv. O dispositivo de acordo com a reivindicação 160 em que etapa v mostra que pelo menos 50 % do polímero são liberados no meio depois que o dispositivo é contatado com o meio por 90 dias ou mais.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, éster e um sal do mesmo e um polímero em que o revestimento tem uma quantidade de agente farmacêutico inicial; em que quando o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal de um paciente o agente farmacêutico é liberado em um tecido da parede de vaso do paciente como segue: de cerca de 0,1 % a cerca de 35 % da quantidade de agente farmacêutico inicial é liberada no tecido da parede de vaso do paciente uma semana depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; e de cerca de 0,5 % a cerca de 50 % da quantidade de agente farmacêutico inicial é liberada no tecido da parede de vaso do paciente duas semanas depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente.

Em algumas formas de realização, a quantidade liberada ao lúmen do paciente é obtida pela adição do agente farmacêutico presente sozinho no dito tecido da parede de vaso do paciente e o agente farmacêutico liberado junto com o dito polímero. Em algumas formas de realização, o paciente é um ser humano.

Em algumas formas de realização, o paciente é um porco e a quantidade de agente farmacêutico liberada no tecido da parede de vaso do paciente é determinada como segue: liberar o dispositivo no lúmen do vaso sanguíneo do porco; eutanizar o porco em período predeterminado de tempo depois que o dispositivo é liberado no lúmen do vaso sanguíneo do porco e explantar o dispositivo; medir a quantidade de agente farmacêutico liberado no tecido da parede de vaso.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo e um polímero bioabsorvível em que o revestimento tem um teor inicial de agente farmacêutico de cerca de 1 pg/mm a cerca de 15 pg/mm; em que o dito dispositivo fornece uma área sob uma curva (AUC) para o teor de agente farmacêutico liberado no tecido da parede de vaso de um paciente com o tempo como segue: de cerca de 0,05 (pg/mm)*dia a cerca de 1 (pg/mm)*dia quando a AUC é calculada a partir do tempo em que o dispositivo é liberado em um corpo do paciente até um dia depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; de cerca de 5 (pg/mm)*dia a cerca de 10 (pg/mm)*dia quando a AUC é calculada partindo depois da primeira semana em que o dispositivo é liberado no corpo do paciente até a segunda semana depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; de cerca de 10 (pg/mm)*dia a cerca de 20 (pg/mm)*dia quando a AUC é calculada partindo depois da segunda semana em que o dispositivo é liberado no corpo do paciente até a quarta semana depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; e uma AUCfinal de cerca de 40 (pg/mm)*dia a cerca de 60 (pg/mm)*dia.

Em algumas formas de realização, medir a quantidade de polímero liberada do dispositivo compreende medições de LC/MS/MS. Em algumas formas de realização, medir a quantidade liberada do dispositivo compreende a medição de perda de peso. Em algumas formas de realização, a medição de perda de peso compreende a medição de uma quantidade de polímero que permanece no dispositivo e subtrair a dita quantidade que permanece da quantidade inicial presente no dispositivo antes de liberar o dispositivo ao lúmen do vaso sanguíneo do porco.

E aqui fornecido um dispositivo que compreende um stent; e revestimento sobre o dito stent; em que o dito revestimento compreende um polímero bioabsorvível e um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo, em que o dispositivo tem um teor inicial de agente farmacêutico de cerca de 1 pg/mm a cerca de 15 pg/mm; em que quando o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal de um paciente o dito dispositivo fornece cerca da mesma concentração sanguínea nas primeiras 72 horas da liberação do dito dispositivo ao lúmen corporal do paciente.

Em algumas formas de realização, cerca de 50 % do dito polímero são reabsorvidos dentro de 45 a 90 dias depois de um procedimento de angioplastia em que o dito dispositivo é liberado em um corpo do paciente. Em algumas formas de realização, cerca de 75 % do dito polímero são reabsorvidos dentro de 45 a 90 dias depois de um procedimentode angioplastia em que o dito dispositivo é liberado em um corpo do paciente. Em algumas formas de realização, cerca de 95 % do dito polímerosão reabsorvidos dentro de 45 a 90 dias depois de um procedimentode angioplastia em que o dito dispositivo é liberado em um corpo do paciente.

Em algumas formas de realização, 99 % do dito polímero são reabsorvidos dentro de 45 a 90 dias depois de um procedimento de angioplastia em que o dito dispositivo é liberado em um corpo do paciente.

Em algumas formas de realização, o dispositivo fornece inflamação reduzida durante o curso de ressorção de polímero comparado a um stent convencional.

E aqui fornecido um método de tratar um paciente que compreende liberar no corpo do paciente um dispositivo que compreende: um stent; e um revestimento que compreende um agente farmacêutico selecionado de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster e um sal do mesmo e um polímero em que o revestimento tem uma quantidade de agente farmacêutico inicial; em que o dito dispositivo é liberado em um lúmen corporal do paciente e o agente farmacêutico é liberado em um tecido da parede de vaso do paciente como segue: i. de cerca de 0,05 % a cerca de 35 % da quantidade de agente farmacêutico inicial são liberados no tecido da parede de vaso do paciente uma semana depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente; e ii. de cerca de 0,5 % a cerca de 50 % da quantidade de agente farmacêutico inicial são liberados no tecido da parede de vaso do paciente duas semanas depois que o dispositivo é liberado no corpo do paciente.

Em algumas formas de realização, a presença da cristalinidade é mostrada por pelo menos um de XRD, Espectroscopia de Raman, métodos analíticos de Infravermelho e DSC.

Em algumas formas de realização, o revestimento em uma superfície abluminal do dito stent tem uma espessura maior do que o revestimento em uma superfície luminal do dito stent. Em algumas formas de realização, a razão de revestimento sobre a superfície abluminal para o revestimento sobre a superfície luminal do dispositivo é de 80:20. Em algumas formas de realização, a razão de revestimento sobre a superfície abluminal para o revestimento sobre a superfície luminal do dispositivo é de 75:25. Em algumas formas de realização, a razão de revestimento sobre a superfície abluminal para o revestimento sobre a superfície luminal do dispositivo é de 70:30. Em algumas formas de realização, a razão de revestimento sobre a superfície abluminal para o revestimento sobre a superfície luminal do dispositivo é de 60:40.

Exemplos

Os seguintes exemplos são fornecidos para ilustrar as formas de realização selecionadas. Estes não devem ser considerados como limitando o escopo da invenção, mas meramente como sendo ilustrativos e representativos deste. Para cada exemplo listado abaixo, técnicas analíticas múltiplas podem ser fornecidas. Qualquer técnica isolada das técnicas múltiplas listadas podem ser suficientes para mostrar o parâmetro e/ou característica que é testada ou qualquer combinação de técnicas podem ser usadas para mostrar tal parâmetro e/ou característica. Aqueles habilitados na técnica estarão familiarizados com uma ampla faixa de técnicas analíticas para a caracterização de revestimentos de droga/polímero. As técnicas aqui apresentadas, mas não limitadas a estas, podem ser usadas para de modo adicional e/ou altemativamente caracterizar propriedades específicas dos revestimentos com variações e ajustes utilizados que estariam óbvios para aqueles habilitados na técnica.

Preparação de Amostra

Falando no geral, os revestimentos sobre stents, sobre platinas ou amostras preparadas para modelos in vivo são preparadas como abaixo. Não obstante, modificações para um dado método analítico são apresentadas dentro dos exemplos mostrados, e/ou estaria óbvio para uma pessoa que tivesse habilidade na técnica. Assim, numerosas variações, mudanças e substituições ocorrerão agora a aqueles habilitados na técnica sem divergir da invenção. Deve ser entendido que várias alternativas para as formas de realização da invenção aqui descritas e exemplos fornecidos podem ser utilizados na prática da invenção e mostrando os parâmetros e/ou características descritas.

Revestimentos sobre Stents

Os stents revestidos como aqui descritos e/ou fabricados por um método aqui divulgado são preparados. Em alguns exemplos, os stents revestidos têm uma espessura alvejada de ~ 15 microns (~ 5 microns de agente ativo). Em alguns exemplos, o processo de revestimento é PDPDP (Polímero, sinterização, Droga, Polímero, sinterização, Droga, Polímero, sinterização) usando a deposição de droga na forma de pó seco e deposição de partículas poliméricas pelos métodos RESS e equipamento aqui descritos. Nas ilustrações abaixo, os stents revestidos resultantes podem ter uma camada revestimento tripla que compreende polímero (por exemplo, PLGA) na primeira camada, droga (por exemplo, rapamicina) em uma segunda camada e polímero na terceira camada, onde uma porção da terceira camada é substancialmente livre de droga (por exemplo, uma sub-camada dentro da terceira camada tendo uma espessura igual a uma fração da espessura da terceira camada). Como a camada descrita, a camada intermediária (ou camada de droga) pode ser sobreposta com uma ou tanto a primeira (polímero) quanto a terceira (polímero) camadas. A sobreposição entre a camada de droga e as camadas poliméricas é definida pela extensão de material polimérico no espaço físico amplamente ocupado pela droga. A sobreposição entre a droga e as camadas poliméricas pode dizer respeito ao empacotamento parcial das partículas de droga durante a formação da camada de droga. Quando partículas de droga cristalinas são depositadas no topo da primeira camada polimérica, vazios e ou intervalos podem permanecer entre as partículas cristalinas secas. Os vazios ou intervalos estão disponíveis para serem ocupados pelas partículas depositadas durante a formação da terceira camada(polímero). Algumas das partículas da terceira camada (polímero) podem situar-se na vizinhança das partículas de droga na segunda camada (droga). Quando a etapa de sinterização é completada para a terceira camada (polímero), as partículas da terceira camada polimérica fundem-se para formar uma película contínua que forma a terceira camada (polímero). Em algumas formas de realização, a terceira camada (polímero) entretanto terá uma porção ao longo do eixo longitudinal do stent por meio da qual a porção é livre de contato entre o material polimérico e as partículas de droga. A porção da terceira camada que está substancialmente em contato com as partículas de droga podem ser tão finas quanto 1 nanômetro.

Os stents revestidos com polímero tendo revestimentos que compreendem polímero, mas sem droga, são fabricados por um método aqui divulgado e são preparados tendo uma espessura alvejada, por exemplo, de ~ 5 microns. Um processo de revestimento de exemplo é PPP (PLGA, sinterização, PLGA, sinterização, PLGA, sinterização) usando métodos RESS e equipamento aqui descritos. Estes stents revestidos com polímero podem ser usados como amostras de controle em alguns dos exemplos, infra.

Em alguns exemplos, os stents são fabricados de uma liga de cobalto-cromo e são de 5 a 50 mm no comprimento, preferivelmente 10 a 20 mm no comprimento, com suportes de espessura entre 20 e 100 microns, preferivelmente de 50 a 70 microns, a medição de uma superfície abluminal para uma superfície luminal ou medição de uma parede lateral para uma parede lateral. Em alguns exemplos, o stent pode ser cortado longitudinalmente e aberto para ficar plana para ser visualizada e/ou ensaiada usando a técnica analítica particular fornecida.

O revestimento pode ser removido (por exemplo, para a análise de uma faixa de revestimento e/ou revestimento em um suporte, e/ou revestimento sobre a superfície abluminal de um stent planificado) raspandose o revestimento fora usando um bisturi, faca ou outra ferramenta afiada. Este revestimento pode ser fatiada em seções que podem ser viradas 90 graus e visualizadas usando as técnicas de composição de superfície aqui apresentadas ou outras técnicas conhecidas no ramo para a análise de composição de superfície (ou outras características, tais como cristalinidade, por exemplo). Deste modo, o que foi uma análise da composição de revestimento através de uma profundidade quando o revestimento foi sobre o stent ou como removida do stent (isto é, uma profundidade da superfície abluminal do revestimento até a superfície do revestimento removido que uma vez contatou o suporte ou uma porção deste), toma-se uma análise de superfície do revestimento que pode, por exemplo, mostrar as camadas na fatia de revestimento, em resolução muito mais alta. O revestimento removido

100 do stent pode ser tratado do mesmo modo e ensaiado, visualizado, e/ou caracterizado como aqui apresentado usando as técnicas descritas e/ou outras técnicas conhecidas por uma pessoa de habilidade na técnica.

Revestimentos sobre Platinas

Em alguns exemplos, as amostras compreendem platinas de vidro, metal, por exemplo, cobalto-cromo ou outra substância que são preparados com revestimentos como aqui descrito, com uma pluralidade de camadas como aqui descrito, e/ou fabricados por um método aqui divulgado. Em alguns exemplos, os revestimentos compreendem polímero. Em alguns exemplos, os revestimentos compreendem polímero e agente ativo. Em alguns exemplos, as platinas revestidas são preparadas tendo uma espessura alvejada de ~ 10 microns (com ~ 5 microns de agente ativo) e têm camadas de revestimento como descritas para as amostras de stent revestido, infra. Preparação de Amostra para Modelos In Vivo

Dispositivos que compreendem stents tendo revestimentos aqui divulgados são implantados nas artérias coronárias porcinas de porcos (suínos domésticos, porcos de fazenda jovens ou suíno miniatura de Yucatan). A colocação de stent coronário porcino é explorada aqui visto que tal modelo produz resultados que são comparáveis a outras investigações que ensaiam a hiperplasia neoíntima em pacientes humanos. Os stents são expandidos em uma razão de balão para artéria de 1:1,1. Em pontos de tempo múltiplos, os animais são eutanizados (por exemplo, t = 1 dia, 7 dias, 14 dias, 21 dias e 28 dias), os stents são explantados e ensaiados.

Os dispositivos que compreendem stents tendo revestimentos aqui divulgados altemativamente são implantados nas artérias ilíacas comuns de coelhos brancos New Zealand. Os stents são expandidos a uma razão de balão:artéria de 1:1,1. Em pontos de tempo múltiplos, os animais são eutanizados (por exemplo, t = 1 dia, 7 dias, 14 dias, 21 dias e 28 dias), os stents são explantados e ensaiados.

101

Exemplo 1.

Este exemplo ilustra formas de realização que fornecem um stent coronário revestida, que compreende: uma matriz de stent e um revestimento de rapamicina-polímero em que pelo menos parte da rapamicina está na forma cristalina e o revestimento de rapamicina-polímero compreende um ou mais polímeros reabsorvíveis.

Nestes experimentos dois polímeros diferentes foram utilizados:

Polímero A: -50:50 PLGA-Grupo Final de Éster, PM-19 kD, taxa de degradação ~ 1 a 2 meses

Polímero B: -50:50 PLGA-Grupo Final de Carboxilato, PM-10 kD, taxa de degradação ~28 dias

Os stents metálicos foram revestidos como segue:

AS 1: Polímero A/Rapamicina/Polímero

A/Rapamicina/Polímero A

AS2: Polímero A/Rapamicina/Polímero

A/Rapamicina/Polímero B

AS1 (B) ou AS 1(213): Polímero B/Rapamicina/Polímero

B/Rapamicina/Polímero B

ASlb: Polímero A/Rapamicina/Polímero

A/Rapamicina/Polímero A

AS2b: Polímero A/Rapamicina/Polímero

A/Rapamicina/Polímero B

Exemplo 2. Cristalinidade

A presença e ou quantificação da cristalinidade do agente ativo podem ser determinadas a partir de vários métodos de caracterização conhecidos na técnica, mas não limitados a, XRPD, espectroscopia vibracional (FTIR, NIR, Raman), microscopia ótica polarizada, calorimetria, análise térmica e RMN de estado sólido.

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Difração de Raio X para Determinar a Presença e/ou Quantificação da Cristalinidade de Agente Ativo

Agente ativo e substratos proxi revestidos com polímero são preparados usando platinas de aço inoxidável 316L para as medições de difração para raio X em pó (XRPD) para determinar a presença da cristalinidade do agente ativo. O revestimento sobre as platinas é equivalente ao revestimento sobre os stents aqui descritos. Platinas de outros materiais aqui descritos, tais como ligas de cobalto-cromo, podem ser similarmente preparados e testados. Do mesmo modo, substratos tais como stents ou outros dispositivos médicos aqui descritos podem ser preparados e testados. Onde um stent revestido é testado, o stent pode ser cortado longitudinalmente e aberta para ficar plana em um suporte de amostra.

Por exemplo, análises de XRPD são realizadas usando um difratômetro para raio X em pó (por exemplo, um difratômetro de raio X Bruker D8 Advance) usando radiação Cu Ka. Difratogramas são tipicamente coletados entre 2 e 40 graus 2 teta. Onde requerido suportes de amostra XRPD de fundo baixo são utilizados para minimizar o ruído de fundo.

Os difratogramas do agente ativo depositado são comparados com difratogramas de agentes ativos cristalizados conhecidos, por exemplo sirolimus cristalino micronizado na forma de pó. Os padrões de XRPD de formas cristalinas mostram picos de difração fortes ao passo que as amorfas mostram padrões difusos e não distintos. A cristalinidade é mostrada em unidades de intensidade arbitrárias.

Uma técnica analítica relacionada que também pode ser usada para fornecer detecção de cristalinidade é a dispersão de ângulo amplo de radiação (por exemplo, Dispersão de Raio X de Ângulo Amplo ou WAXS), por exemplo, como descrito em F. Unger, et al., “Polyethylene carbonate): A thermoelastic and biodegradable biomaterial for drug eluting stent coatings?” Journal of Controlled Release, Volume

103

117, Issue 3, 312 a 321 (2007) para o qual as técnicas e variações das técnicas específicas para uma amostra particular seriam óbvias a uma pessoa de habilidade na técnica.

Espectroscopia de Raman

Espectroscopia de Raman, uma técnica de espectroscopia vibracional, podem ser úteis, por exemplo, na identificação química, caracterização de estruturas moleculares, efeitos de união, identificação da forma de estado sólido, ambiente e estresse em uma amostra. Os espectros de Raman podem ser coletados de um volume muito pequeno (< 1 pm³); estes espectros permitem a identificação de espécies presentes neste volume. A informação química espacialmente resolvida, pelo mapeamento ou formação de imagem, os termos frequentemente usados intercambiavelmente, podem ser obtidos pela microscopia de Raman.

Espectroscopia de Raman e outras técnicas analíticas tais como descrito em Balss, et al., “Quantitative spatial distribution of sirolimus and polymers in drug-elution stents using confocal Raman microscopy” J. of Biomedical Materials Research Parte A, 258-270 (2007), incorporada aqui na sua totalidade por referência, e/ou descrita em Belu et al., “ThreeDimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporado na sua totalidade por referência podem ser usados.

Por exemplo, para testar uma amostra usando microscopia de Raman e em particular a microscopia de Raman confocal, é entendido que para se obter tempo de aquisição suficientes de espectros de Raman de alta resolução apropriados, energia de laser, comprimento de onda de laser, tamanho da etapa de amostra e objetiva de microscópio precisam ser otimizados. Por exemplo uma amostra (um stent revestido) é preparada como aqui descrito. Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método. Mapas são coletados sobre o revestimento usando a microscopia de

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Raman. Um microscópio Raman confocal por varredura WITec CRM 200 usando um laser Nd: YAG a 532 nm é aplicado no modo de formação de imagem de Raman. A luz de laser é focalizada na amostra usando uma objetiva seca 100^x (abertura numérica 0,90) e o ponto de laser finamente focalizado é escaneada na amostra. Conforme o laser varre a amostra, em cada intervalo de 0,33 micron um espectro de Raman com alto sinal para ruído é coletado usando 0,3 segundo de tempo de integração. Cada imagem de seção transversal confocal dos revestimentos demonstra uma região de 70 pm de largura por 10 pm de profundidade e resulta do ajuntamento de 6300 espectros com um tempo de formação de imagem total de 32 min.

A análise multivariada usando espectros de referência das amostras de rapamicina (amorfas e cristalinas) e polímero são usadas para desenvolver os conjuntos de dados espectrais, para fornecer mapas químicos da distribuição. Espectroscopia de Infravermelho (IR) para o Teste In Vitro

Espectroscopia de Infravermelho (IR) tal como FTIR e ATRIR são técnicas bem utilizadas que podem ser aplicadas para mostrar, por exemplo, o teor de droga quantitativo, a distribuição da droga no revestimento de amostra, o teor de polímero quantitativo no revestimento e a distribuição de polímero no revestimento. A Espectroscopia de Infravermelho (IR) tal como FTIR e ATR-IR pode ser similarmente usada para mostrar, por exemplo, cristalinidade de droga. A seguinte tabela (Tabela 1) lista os materiais IR típicos para várias aplicações. Estes materiais de IR são usados para as janelas de IR, diluentes ou cristais de ATR.

Tabela 1

Material	NaCl	KBr	Csl	AgCl	Ge	ZnSe	Diamante
Faixa de Transmissão	40.000	40.000	40.000	25.000	5.500	20.000	40.000
(cm-1)	-625	-400	-200	-360	-625	-454	-2.500 & 1667-33
Sol em Água (g/100g, 25°C)	35,7	53,5	44,4	Insol.	Insol.	Insol.	Insol.

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Materiais de ataque	Solventes Úmidos	Solventes Úmidos	Solventes Úmidos	Sais de Amônio	h₂ SO₄, agua régia	Ácidos, Álcalis fortes, Solventes clorados	K₂Cr₂O_s, H2SO4 conc.

Em um teste, uma platina de ZnSe cristalino é revestida pelos processos aqui descritos, criando um revestimento em camada de PDPDP (Polímero, Droga, Polímero, Droga, Polímero) que é de cerca de 10 microns de espessura. A platina revestida é analisada usando FTIR. O espectro 5 resultante mostra droga cristalino como determinado pela comparação com o espectro obtido para a forma cristalina de um padrão de droga (isto é, um espectro de referência).

Calorimetria por varredura Diferencial (DSC)

A DSC pode fornecer evidência qualitativa da cristalinidade da droga (por exemplo, rapamicina) usando técnicas de DSC padrão óbvias a uma pessoa de habilitada na técnica. Fusões cristalinas podem ser mostradas usando este método analítico (por exemplo, fusão de rapamicina cristalina -de cerca de 185 graus C a 200 graus C e tendo um calor de fusão a ou em tomo de 46,8 J/g). O calor de fusão diminui com a cristalinidade percentual. Assim, o grau de cristalinidade pode ser determinado em relação a uma amostra pura ou versus uma curva de calibração criada a partir de uma amostra de droga amorfo reforçado e testado pela DSC com quantidades conhecidas de droga cristalino. A presença (pelo menos) de droga cristalino em um stent pode ser medida removendo-se (raspando ou descascando) um pouco da droga do stent 20 e testando o revestimento usando o equipamento de DSC para determinar a temperatura de fusão e o calor de fusão da amostra quando comparada a um padrão e/ou curva padrão conhecidos.

Exemplo______________Determinação_______da_______taxa_______de

Bioabsorbabilidade/Bioressorbabilidade/Dissolução de um Revestimento de 25 Polímero de um Dispositivo

Determinação da Perda de Peso In Vivo pela Cromatografia de Permeação em

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Gel

Métodos padrão conhecidos na técnica podem ser aplicados para determinar a perda de peso do polímero, por exemplo cromatografia de permeação em gel e outras técnicas analíticas tal como descrito em Jackson et al., “Characterization of perivascular poly(lactic-co-glycolic acid) films containing paclitaxel” Mt. J. of Pharmaceutics, 283: 97-109 (2004), aqui incorporado na sua totalidade por referência.

Por exemplo, modelos in vivo de coelho como descritos acima são eutanizados em pontos de tempo múltiplos (t = 1 dia, 2 dias, 4 dias, 7 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias, 35 dias n = 5 por ponto de tempo). Altemativamente, modelos in vivo de porco como descrito acima são eutanizados em pontos de tempo múltiplos (t = 1 dia, 2 dias, 4 dias, 7 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias, 35 dias n = 5 por ponto de tempo). Os stents são explantados e secos abaixo de 30°C sob uma corrente de gás até a secura completa. Um stent que não foi implantada no animal é usada como um controle para nenhuma perda de polímero.

O polímero remanescente nos stents explantadas é removida usando um solvente de solubilização (por exemplo clorofórmio). As soluções contendo os polímeros liberados para cada ponto de tempo são filtrados. A análise GPC subsequente é usada para a quantificação da quantidade de polímero que permanece no stent em cada ponto de tempo de explante. O sistema, por exemplo, compreende uma bomba Shimadzu LC-10 AD HPLC, um detector de índice reffativo Shimadzu RID-6A ligado a uma coluna Hewlett Packard Pl-Gel de 50 Â. Os componentes de polímero são detectados pela detecção de índice refrativo e as áreas de pico são usadas para determinar a quantidade de polímero que permanece nos stents no ponto de tempo de explante. Um gráfico de calibração de log do peso molecular versus tempo de retenção é estabelecido para a coluna de Pl-Gel de 50 Â usando padrões de poliestireno com pesos moleculares de 300, 600, 1,4 k, 9 k, 20 k e 30 k g/mol.

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As diminuições nas áreas de pico do polímero nos pontos de tempo subsequentes do estudo são expressadas como porcentagens em peso relativas ao dia 0 do stent.

Teste de Cromatografia de Permeação em Gel In Vitro

A cromatografia de permeação em gel (GPC) também pode ser usada para quantificar a bioabsorbabilidade/biorresorbabilidade, taxa de dissolução e/ou biodegrabilidade do revestimento polimérico. O ensaio in vitro é um teste de degradação onde a concentração e pesos moleculares dos polímeros podem ser avaliados quando liberados dos stents em uma solução aquosa que imita ambientes fisiológicos. Ver por exemplo, Jackson et al., “Characterization of perivascular poly(lactic-co-glycolic acid) films containing paclitaxel” Mt. J. of Pharmaceutics, 283: 97-109 (2004), aqui incorporado na sua totalidade por referência.

Por exemplo os stents (n = 15) aqui descritas são expandidas e depois colocados em uma solução de 1,5 ml de solução salina tamponada com fosfato (pH = 7,4) com 0,05 % em peso de Tween20 ou na alternativa 10 mM de Tris, 0,4 % em peso de SDS, pH 7,4, em um banho a 37°C com rotação de banho a 70 rpm. Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método. A solução é depois coletada nos seguintes pontos de tempo: 0 min., 15 min., 30 min., 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas, 48 horas e diariamente até 70 dias, por exemplo. A solução é substituída pelo menos em cada ponto de tempo, e/ou periodicamente (por exemplo, a cada quatro horas, diariamente, semanalmente ou mais logo para pontos de tempo posteriores) para prevenir a saturação, a solução removida é coletada, preservada e ensaiada. As soluções contendo os polímeros liberados para cada ponto de tempo são filtrados para reduzir o entupimento do sistema GPC. Para pontos de tempo acima de 4 horas, as soluções múltiplas coletadas são reunidas juntas para a extração de líquido.

108 ml de Clorofórmio é adicionado às soluções salinas tamponadas com fosfato e agitados para extrair os polímeros liberados da fase aquosa. A fase de clorofórmio é depois coletada para ensaiar por intermédio de GPC.

O sistema compreende uma bomba Shimadzu LC-10 AD HPLC, um detector de índice refrativo Shimadzu RID-6A (RI) ligado a uma coluna Hewlett Packard Pl-Gel de 50 Â. A fase móvel é clorofórmio com uma taxa de fluxo de 1 ml/min. O volume de injeção da amostra de polímero é de 100 μΐ de uma concentração de polímero. As amostras são conduzidas por 20 minutos em uma temperatura ambiente.

Para a determinação das concentrações de polímero liberadas em cada ponto de tempo, gráficos de calibração quantitativa são primeiro feitos usando soluções contendo concentrações conhecidas de cada polímero em clorofórmio. As soluções de estoque contendo cada polímero em 0 a 5 mg/ml de faixa de concentração são primeiro analisadas pela GPC e as áreas de pico são usadas para criar curvas de calibração separadas para cada polímero.

Para os estudos de degradação de polímero, um gráfico de calibração de peso molecular em log versus o tempo de retenção é estabelecido por uma coluna Pl-Gel de 50 Â (Hewlett Packard) usando padrões de poliestireno com pesos moleculares de 300, 600, 1,4 k, 9 k, 20 k e 30 k g/mol. Na alternativa, um detector de dispersão de luz de múltiplo (MALS) pode ser ajustado para avaliar diretamente o peso molecular dos polímeros sem a necessidade de padrões de poliestireno.

Para realizar uma dissolução in vitro acelerada dos polímeros biorresorvíveis, um protocolo é adaptado do Padrão ISO 13781 “Poly(Llactide) resides and fabricated a accelerated froms for surgical implants -in vitro degradation testing” (1997), aqui incorporado na sua totalidade por referência. Em resumo, o tampão de eluição que compreende 18 % v/v de

109 uma solução de estoque de 0,067 mol/L de KH₂PO₄ e 82 % v/v de uma solução de estoque de 0,067 mol/L de Na₂HPO4 com um pH de 7,4 é usado. Os stents aqui descritos são expandidos e depois colocados em 1,5 ml de solução desta eluição acelerada em um banho a 70°C com rotação a 70 rpm. As soluções são depois coletadas nos seguintes pontos de tempo: 0 min., 15 min., 30 min., 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas e 48 horas. Tampão de eluição acelerado fresco é adicionado periodicamente a cada duas horas para substituir os tampões incubados que são coletados e preservados de modo a prevenir a saturação. As soluções contendo os polímeros liberados para cada ponto de tempo são filtrados para reduzir o entupimento do sistema GPC. Para pontos de tempo acima de 2 horas, as soluções coletadas múltiplas são reunidas juntas para a extração de líquido pelo clorofórmio. A extração em clorofórmio e a análise de GPC são realizadas na maneira descrita acima.

Teste de Microscopia Eletrônica por varredura (SEM) com Moagem por Feixe de íon Focalizado (FIB) In Vitro

O feixe de íon focalizado FIB é uma ferramenta que permite secionamento, moagem e depósito específicos de sítio precisos de materiais. FIB podem ser usados em conjunção com SEM, nas condições ambientes ou crio, para produzir o secionamento in situ seguido pela formação de imagem de alta resolução. FIB-SEM pode produzir uma imagem transversal da camada poliméricas no stent. A imagem pode ser usada para quantificar a espessura das camadas para revelar a taxa de biorressorbabilidade de polímeros únicos ou múltiplos assim como mostrar se existe uniformidade da espessura de camada na fabricação e em pontos de tempo depois da colocação do stent (ou depois da eluição in vitro em vários pontos de tempo).

Por exemplo, o teste é realizado em pontos de tempo múltiplos. Os stents são removidos do meio de eluição e secos, o stent seco é visualizado usando FIB-SEM para mudanças no revestimento.

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Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método.

Os stents (n = 15) aqui descritos são expandidos e depois colocados em solução a 1,5 ml de solução salina tamponada com fosfato (pH = 7,4) com 0,05 % em peso de Tween20 em um banho a 37°C com rotação de banho a 70 rpm. Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método. A solução de salina tamponada com fosfato é periodicamente substituída com solução fresca em cada ponto de tempo e/ou a cada quatro horas para prevenir a saturação. Os stents são coletados nos seguintes pontos de tempo: 30 min, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8, horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas, 48 horas, 60 h e 72 h. O stents são secos abaixo de 30°C sob uma corrente de gás para completar a secura. Um stent que não foi submetido a estas condições é usado como um controle t = 0.

Um sistema FEI Dual Beam Strata 235 FIB/SEM é uma combinação de um feixe de íon de Ga finamente focalizado (FIB) acelerado por 30 kV com um feixe de elétron de emissão de campo em um instrumento de microscópio por varredura eletrônica e é usado para formar imagem e secionar os stents. Ambos os feixes focalizam no mesmo ponto da amostra com um diâmetro de stent de menos do que 10 nm. O FIB também pode produzir seções afinadas para a análise TEM.

Para prevenir o dano da superfície do stent com ions incidentes, um revestimento de Pt é primeiro depositado por intermédio da deposição auxiliada por feixe de elétron e deposição de feixe de elétron antes do secionamento por FIB. Para o secionamento de FIB, o feixe de íon de Ga é acelerado a 30 kV e o processo de secionamento é de cerca de 2 h em duração. A conclusão do secionamento por FIB permite que se observe e quantifique pelo SEM a espessura das camadas poliméricas que são deixadas sobre o stent conforme elas são absorvidas.

Teste de Espectroscopia de Raman In Vitro

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Como debatido no exemplo 2, a Espectroscopia de Raman podem ser aplicada para caracterizar a estrutura química e concentrações relativas de revestimentos de droga e polímero. Isto pode também ser aplicado para caracterizar revestimentos de polímero testado in vitro sobre stents ou outros substratos.

Por exemplo, a espectroscopia/microscopia Raman confocal podem ser usadas para caracterizar a razão de droga para polímero relativa no ~ 1 pm externo da superfície revestida como uma função de tempo exposta ao meio de eluição. Além disso, a microscopia Raman confocal x-z ou z (mapas ou varredura em linha) pode ser aplicada para caracterizar a razão de droga para polímero relativa como uma função da profundidade no tempo t depois da exposição ao meio de eluição.

Por exemplo uma amostra (um stent revestido) é preparada como aqui descrita e colocada em meio de eluição (por exemplo, 10 mM de tris(hidroximetil)aminometano (Tris), 0,4 % em peso de dodecil sulfato de sódio (SDS), pH 7,4 ou 1,5 ml de solução salina tamponada com fosfato (pH = 7,4) com 0,05 % em peso de Tween20) em um banho a 37°C com rotação de banho a 70 rpm. Imagens Raman Confocais são tiradas no revestimento antes da eluição. Em pelo menos quatro ponto de tempo de eluição dentro de um intervalo de 48 dia, (por exemplo, 0 min., 15 min., 30 min., 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8, horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas e 48 horas) a amostra é removida da eluição e seca (por exemplo, em uma corrente de nitrogênio). O stent seco é visualizado usando a Espectroscopia de Raman quanto as mudanças no revestimento. Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método. Depois da análise, cada um é retomado para o tampão para outra eluição.

Espectroscopia de Raman e outras técnicas analíticas tais como descritas em Balss, et al., “Quantitative spatial distribution of sirolimus and polymers in drug elution stents using confocal Raman microscopy” J. of

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Biomedical Materials Research Parte A, 258-270 (2007), aqui incorporado na sua totalidade por referência, e/ou descritas e Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência podem ser usadas.

Por exemplo um microscópio Raman por varredura confocal WITec CRM 200 usando um laser Nd: YAG a 532 nm é aplicado no modo de formação de imagem de Raman para gerar um mapa x-z. A amostra é colocada em uma mesa piezoeletricamente acionada, a luz do laser é focalizada na amostra usando uma objetiva seca de lOOx (abertura numérica de 0,90) e o ponto de laser fmamente focalizado é escaneado na amostra. Conforme o laser varre a amostra, em cada 0,33 micron de intervalo em um espectro de Raman com alto sinal para ruído é coletada usando 0,3 segundo de tempo de integração. Cada imagem transversal confocal dos revestimentos demonstra uma região de 70 pm de largura por 10 pm de profundidade e resulta do ajuntamento de 6300 espectros com um tempo de formação de imagem total de 32 min.

Teste de SEM In Vitro

O teste é realizado em pontos de tempo múltiplos (por exemplo, 0 min., 15 min., 30 min., 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8, horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas e 48 horas). Os stents são removidos do meio de eluição (descritos supra) e secas nestes pontos de tempo. O stent seco é visualizado usando SEM para mudanças no revestimento.

Por exemplo as amostras são observadas por SEM usando um

Hitachi S-4800 com uma voltagem de aceleração de 800V. Várias ampliações são usadas para avaliar a integridade do revestimento, especialmente em regiões de alta tensão. A mudança no revestimento com o tempo é avaliada para visualizar a bioabsorção do polímero com o tempo.

113

Teste de Espectroscopia de fotoelétron de raio X (XPS) In Vitro

XPS podem ser usada para determinar quantitativamente espécies elementares e ambientes de ligação química nos 5 a 10 nm externos da superfície da amostra. As técnicas podem ser operadas no modo de espectroscopia ou formação de imagem. Quando combinada com uma fonte de ejeção, a XPS pode ser utilizada para dar a caracterização química do perfil de profundidade.

O teste de XPS pode ser usado para caracterizar a razão de droga para polímero na superfície do revestimento acabado de uma amostra. Adicionalmente o teste de XPS pode ser conduzido em intervalo de tempo para detectar mudanças na composição. Assim, em um teste, as amostras são testadas usando XPS em pontos de tempo múltiplos (por exemplo, 0 min., 15 min., 30 min., 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8, horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas e 48 horas). Os stents são removidos do meio de eluição (por exemplo, 10 mM de Tris, 0,4 % em peso de SDS, pH 7,4 ou 1,5 ml de solução salina tamponada com fosfato (pH = 7,4) com 0,05 % em peso de Tween20) em um banho a 37°C com rotação a 70 rpm e secos nestes pontos de tempo.

XPS (ESCA) e outras técnicas analíticas tais como descritas em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coating Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência podem ser usadas.

Por exemplo, a análise XPS é realizada usando um Physical Electronics Quantum 2000 Scanning ESCA. A fonte Al Ka é operada a 15 kV com uma energia de 4,5 W. A análise é realizada em um ângulo de remoção de 45°. Três medições são tomadas ao longo do comprimento de cada stent com a área de análise de ~ 20 microns no diâmetro. Elétron de energia baixa e fluxos de íon Ar são usados para compensar a carga.

114

Espectrometria de Massa De íon Secundário em Tempo de Voo (TOF-SIMS)

TOF-SIMS pode ser usada para determinar espécies moleculares nos 1 a 2 nm externos de superfície de amostra quando operada sob condições estáticas. A técnica pode ser operada no modo de espectroscopia ou formação de imagem na resolução espacial alta. Quando operada sob condições experimentais dinâmicas, conhecidas na técnica, a caracterização química de perfil de profundidade pode ser obtida.

O teste de TOF-SIMS pode ser usado para caracterizar a presença de polímero e ou droga na superfície mais externa do revestimento de uma amostra. Adicionalmente o teste de TOF-SIMS pode ser conduzido em intervalo de tempo para detectar mudanças na composição. Assim, em um teste, as amostras são testadas usando TOF-SIMS em pontos de tempo múltiplos (por exemplo, 0 min., 15 min., 30 min., 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8, horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas e 48 horas). Os stents são removidos do meio de eluição (por exemplo, 10 mM de Tris, 0,4 % em peso de SDS, pH 7,4 ou 1,5 ml de solução salina tamponada com fosfato (pH = 7,4) com 0,05 % em peso de Tween20) em um banho a 37°C com rotação a 70 rpm e secos nestes pontos de tempo.

Por exemplo, para analisar apenas a superfície mais externa, condições estáticas (por exemplo um ToF-SIMS IV (lonToF, Munster)) usando uma fonte de íon primário 25Kv Bi mantida abaixo de 10¹² íons por cm são usadas. Onde necessário uma pistola de fluxo de elétron de baixa energia (0,6 nA DC) é usada para compensar a carga de amostras isolantes.

A Espectrometria de Massa de íon Secundário em Grupo, pode ser utilizada para o perfil de profundidade como descrito Belu et al., “ThreeDimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coating Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

Por exemplo, um stent como aqui descrita é obtida. O stent é

115 preparado para a análise de SIMS cortando-a longitudinalmente e abrindo-a com pinças. O stent é depois prensado em camadas múltiplas de folha de índio com o diâmetro externo para fora.

Os experimentos de perfil de profundidade de TOF-SIMS são realizados usando um instrumento íon-TOF IV equipado com fontes de grupo de feixe de íon primário tanto de Bi quanto SF5+. O perfil de profundidade ejeção é realizado no modo de feixe duplo, enquanto se preserva a integridade química da amostra. Por exemplo, a fonte de análise é uma fonte de íon de grupo de bismuto pulsado de 25-keV, que bombardeou a superfície em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. A corrente alvo é mantida na corrente pulsada de -0,3 pÂ (+10 %) com um tamanho de raster de 200 microns x 200 microns para todos os experimentos. Os íons secundários tanto positivos quanto negativos são extraídos da amostra em um espectrômetro de massa de tempo de vôo do tipo reflectron. Os íons secundários são depois detectados por um detector de placa de microcanal com uma energia de pós aceleração de 10 kV. Uma pistola de fluxo de elétron de baixa energia é utilizada para a neutralização de carga no modo de análise.

A fonte de ejeção usada é uma fonte de grupo 5-keV SF5+ também operada em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. Para amostras de modelo fino em Si, a corrente SF5+ é mantida a 2,7 nA com um raster de 750 microns x 750 microns. Para as amostras espessas nas platinas e para as amostras nos stents, a corrente é mantida a 6 nA com um raster de 500 microns x 500 microns. Todas as correntes de feixe primário são medidas com um copo de Faraday tanto antes quanto depois do perfil de profundidade.

Todos os perfis de profundidade são adquiridos no modo não intrelaçado com uma pausa de 5 ms entre ejeção e análise. Cada espectro é calculado em média em um período de tempo de 7,37 segundos. A análise é imediatamente seguida por 15 segundos de ejeção SF₅. Para os perfis de

116 profundidade apenas das regiões de superfície e subsuperfície, o tempo de ejeção foi diminuído para 1 segundo para a amostra de 5 % de agente ativo e 2 segundos para as amostras tanto de 25 % quanto de 50 % de agente ativo. Os perfis de profundidade controlados em temperatura são obtidos usando uma platina de temperatura variável com controlador de temperatura Eurotherm Controls e software IPSG V3.08. As amostras são primeiro colocadas na câmara de análise na temperatura ambiente. As amostras são levadas à temperatura desejada sob condições de vácuo ultra alto e são deixadas estabilizar por 1 minuto antes da análise. Todos os experimentos de perfil de profundidade são realizados a -100 graus C e 25 graus C. Espectroscopia de Infravermelho (IR) para o Teste In Vitro

A Espectroscopia de Infravermelho (IR) tal como, mas não limitado a, FTIR, ATR-IR e micro ATR-IR são técnicas bem utilizadas que podem ser aplicadas para mostrar o teor de polímero quantitativo no revestimento e a distribuição de polímero no revestimento.

Por exemplo usando FTIR, uma platina de ZnSe cristalino é revestida pelos processos aqui descritos, criando um revestimento em camadas de PDPDP (Polímero, Droga, Polímero, Droga, Polímero) que é de cerca de 10 microns de espessura. No tempo = 0 e em pelo menos quatro pontos de tempo de eluição dentro de um intervalo de 48 dias (por exemplo, 0 min., 15 min., 30 min., 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8, horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas e 48 horas), a amostra (cristal revestido) foi testada pela FTIR quanto ao teor de polímero. A amostra foi colocada em um meio de eluição (por exemplo, 10 mM de Tris, 0,4 % em peso de SDS, pH 7,4 ou 1,5 ml de solução salina tamponada com fosfato (pH = 7,4) com 0,05 % em peso de Tween20) em um banho a 37°C com rotação de banho a 70 rpm e em cada ponto de tempo, a amostra é removida do meio de eluição e seca (por exemplo, em uma corrente de nitrogênio). A espectrometria de FTIR foi usada para quantificar o polímero na amostra.

117

Depois da análise, cada uma é retomada para o tampão para outra eluição.

Em um outro exemplo usando FTIR, meio de eluição da amostra em cada ponto de tempo foi testado quanto ao teor de polímero. Neste exemplo, um stent revestido foi preparado que foi revestida pelos processos aqui descritos, criando um revestimento em camada de PDPDP (Polímero, Droga, Polímero, Droga, Polímero) que é de cerca de 10 microns de espessura. O stent revestido foi colocado em um meio de eluição (por exemplo, 10 mM de Tris, 0,4 % em peso de SDS, pH 7,4 ou 1,5 ml de solução salina tamponada com fosfato (pH = 7,4) com 0,05 % em peso de Tween20) em um banho a 37°C com rotação a 70 rpm. e em cada ponto de tempo (por exemplo, 0 min., 15 min., 30 min., 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8, horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas e 48 horas), uma amostra do meio de eluição é removida e seca sobre uma janela de ZnSe cristalina (por exemplo, em uma corrente de nitrogênio). Em cada ponto de tempo de eluição, o meio de eluição da amostra foi testado pelo FTIR quanto ao teor de polímero.

Microscopia de Força Atômica (AFM)

AFM é uma técnica de caracterização de superfície de alta resolução. AFM é usada na técnica para fornecer formação de imagem topográfica, além disso, quando utilizado no Tapping Mode® pode formar imagem de material e ou propriedades químicas da superfície. A técnica pode ser usada sob condições ambientes, em solução, umidificadas ou controladas em temperatura. Outros modos de operação são bem conhecidos e podem ser facilmente utilizados aqui por aqueles habilitados na técnica. As imagens de topografia de AFM podem ser conduzidas em lapso de tempo para caracterizar a superfície como uma função do tempo de eluição. Imagens tridimensionalmente renderizadas mostram a superfície de um stent revestido, que pode mostrar furos ou vazios do revestimento que podem ocorrer conforme o polímero é absorvido e a droga é eluído com o tempo.

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Um stent como aqui descrito é obtido. AFM é usada para determinar a distribuição polímero de droga. A AFM pode ser utilizada como descrito em Ranade et al., “Physical characterization of controlled release of paclitaxel from the TAXUS Express2 drug elution stent” J. Biomed. Mater. Res. 71(4): 625 a 634 (2004) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

Por exemplo uma AFM de multi-modo (Digital Instruments/Veeco Metrology, Santa Barbara, CA) controlada com aparelhos eletrônicos Nanoscope Illa e NanoScope Extender é usada. As amostras são examinadas no estado seco usando AFM antes da eluição da droga (por exemplo, rapamicina). As amostras também são examinadas em pontos de tempo selecionados através de um período de eluição (por exemplo, 48 horas) usando-se uma ponta de stent de AFM e platina de fluxo direto construído para permitir a análise de amostras úmidas. As amostras úmidas são examinadas na presença do mesmo meio de eluição usado para a análise de liberação de droga de cinética in vitro (por exemplo, PBS-Tween20 ou 10 mM de Tris, 0,4 % em peso de SDS, pEl 7,4). A saturação da solução é prevenida pela troca frequente do meio de liberação com vários volumes de meio fresco. A formação de imagem da AFM no Tapping Mode® pode ser usada para mostrar a topografia (uma projeção em espaço real da microestrutura da superfície do revestimento) e mudanças de fase de ângulo da AFM em relação à área da amostra para contrastar diferenças no material e estrutura física.

Tomografía Computadorizada de Nano Raio X

Uma outra técnica que pode ser usada para visualizar a estrutura física de um dispositivo em 3-D é a Tomografía Computadorizada de Nano Raio X (por exemplo, tal como feita pelo SkyScan), que pode ser usada em um teste de eluição e/ou teste de bioabsorbabilidade, como aqui descrita para mostrar a estrutura física do revestimento que permanece sobre

119 os stents em cada ponto de tempo, quando comparada a uma varredura anterior à eluição/bioabsorção.

Teste de pH

A bioabsorbabilidade de PLGA de um stent revestido pode ser mostrada testando-se o pH de um meio de eluição (EtOH/PBS, por exemplo) em que o stent revestido é colocado. Com o tempo, um stent revestido com PLGA bioabsorvível (com ou sem a droga) mostrará um pH diminuído até que o PLGA seja totalmente bioabsorvido pelo meio de eluição.

Um teste foi realizado usando apenas stents revestidos com PLGA, stents revestidos com PLGA e rapamicina, películas de PLGA e películas de PLGA contendo rapamicina. As amostras foram colocadas em meio de eluição de 20 % de EtOH/PBS a 37°C. O meio de eluição foi testado em intervalos múltiplos de 0 a 48 dias. Na Figura 1, 2 e 3, os stents tendo revestimentos como aqui fornecidos foram testadas quanto ao pH com o tempo de acordo com este método. A Figura 4 mostra resultados das películas de PLGA (com e sem rapamicina) testadas de acordo com este método. O meio de eluição de controle foi conduzido em triplicata junto com as amostras e os resultados deste teste de pH foi calculado em média e está apresentado como “AVE de Controle” em cada uma das Figuras de 1 a 4.

Na Figura 2, a linha “30D2Rapa stents ave” representa um stent tendo revestimento de acordo com AS 1(213) do Exemplo 1 (PDPDP) com Polímero B (50:50 de PLGA-Grupo final de Carboxilato, PM —10 kD) e rapamicina, onde o revestimento foi removido do stent e testado em triplicata quanto as mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada. A linha “30D2 Stents ave” representa um stent tendo revestimento de apenas Polímero B (50:50 PLGA-Grupo final de Carboxilato, PM -10 kD) (nenhuma rapamicina), onde o revestimento foi removido do stent e testado em triplicata quanto as mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada.

120

Na Figura 1, a linha “óODRapa stents ave” representa um stent tendo revestimento de acordo com AS1 do Exemplo 1 (PDPDP) com Polímero A (50:50 de PLGA-Grupo final de éster, PM ~19 kD) e rapamicina, onde o revestimento foi removido do stent e testado em triplicata quanto as Mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada. A linha “60D Stents ave” representa um stent tendo revestimento apenas de Polímero A (50:50 de PLGA-Grupo final de éster, PM -19 kD) (nenhuma rapamicina), onde o revestimento foi removido do stent e testado em triplicata quanto as Mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada.

Na Figura 3, a linha “85: 15Rapa stents ave” representa um stent tendo revestimento de acordo com PDPDP com um PLGA que compreende 85 % de ácido láctico, 15 % de ácido glicólico e rapamicina, onde o revestimento foi removido do stent e testado em triplicata quanto a Mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada. A linha “85: 15 Stents ave” representa um stent tendo revestimento apenas de PLGA que compreende 85 % de ácido láctico, 15 % de ácido glicólico (nenhuma rapamicina), onde o revestimento foi removido do stent e testado em triplicata quanto a Mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada.

Na Figura 4, a linha “30D Ave” representa uma película polimérica que compreende o Polímero B (50:50 de PLGA-Grupo final de Carboxilato, PM ~10 kD) (nenhuma rapamicina), onde a película foi testada em triplicata quanto a Mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada. A linha “30D2 Ave” também representa uma película polimérica que compreende Polímero B (50:50 de PLGA-Grupo final de Carboxilato, PM —10 kD) (nenhuma rapamicina), onde a película foi testada em triplicata quanto a Mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada. A linha “60D Ave” representa uma

121 película polimérica que compreende Polímero A (50:50 de PLGA-Grupo final de éster, PM ~19 kD) (nenhuma rapamicina), onde a película foi testada em triplicata quanto a Mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada. A linha “85:15 Ave” representa uma película polimérica que compreende PLGA que compreende 85 % de ácido láctico, 15 % de ácido glicólico (nenhuma rapamicina), onde a película foi testada em triplicata quanto a Mudanças no pH com o tempo no meio de eluição, a média da qual é apresentada. Para criar as películas poliméricas na Figura 4, os polímeros foram dissolvidos em cloreto de metileno, THF e acetato de etila. As películas que foram testadas tiveram as seguintes espessuras e massas médias, 30D -152,4 um, 12,0 mg; 30D2 -127,0 um, 11,9 mg; 60D -50,8 um,

12,4 mg; 85:15 - 127 um, 12,5 mg.

Exemplo 4: Visualização de Camadas de Polímero/Agente Ativo que Revestem um Dispositivo

Espectroscopia de Raman

Como debatido no exemplo 2, a Espectroscopia de Raman pode ser aplicada para caracterizar a estrutura química e concentrações relativas de revestimentos de droga e polímero. Por exemplo, a Espectroscopia/microscopia de Raman confocal podem ser usadas para caracterizar a razão de droga para polímero relativa no externo de ~ 1 pm da superfície revestida. Além disso, a microscopia de Raman confocal x-z ou z (mapas ou varreduras lineares) pode ser aplicada para caracterizar a razão de droga para polímero relativa como uma função da profundidade. Adicionalmente amostras transversais podem ser analisadas. A espectroscopia de Raman e outras técnicas analíticas tais como descritas em Balss, et al., “Quantitative spatial distribution of sirolimus and polymers in drug elution stents using confocal Raman microscopy” J. of Biomedical Materials Research Parte A, 258-270 (2007), aqui incorporada na sua totalidade por referência, e/ou descritas em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional

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Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência podem ser usadas.

Uma amostra (um stent revestido) é preparada como aqui descrito. Imagens são tomadas sobre o revestimento usando a Espectroscopia de Raman. Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método. Para testar uma amostra usando a Microscopia de Raman e em particular a Microscopia de Raman confocal, é entendido que para se obter espectros de Raman de alta resolução apropriados tempo de aquisição suficiente, energia de laser, comprimento de onda de laser, tamanho da etapa de amostragem e objetiva de microscópio necessitam ser otimizados.

Por exemplo um Microscópio de Raman confocal por varredura WITec CRM 200 usando um laser de Nd: YAG a 532 nm é aplicado no modo de formação de imagem de Raman para dar mapas x-z. A amostra é colocada em uma mesa piezoeletricamente acionada, a luz do laser é focalizada na amostra usando uma objetiva seca lOOx (abertura numérica de 0,90) e o ponto de laser finamente focalizado é escaneado na amostra, conforme o laser escaneia a amostra, em cada intervalo de 0,33 micron um espectro de Raman com sinal para ruído alto é coletado usando 0,3 segundos de tempo de integração. Cada imagem transversal confocal do revestimentos demonstra uma região de 70 pm de largura por 10 pm de profundidade e os resultados do ajuntamento de 6300 espectros com um tempo de formação de imagem total de 32 min. a análise multivariada usando espectros de referência de amostras de rapamicina e polímero são usadas para desenvolver os conjuntos de dados espectrais, para fornecer mapas químicos da distribuição.

Em um outro teste, os perfis de profundidade espectral (mapas x-z) de amostras são realizados com um sistema de microscópio CRM200 da WITec Instruments Corporation (Savoy, IL). O instrumento é equipado com um Laser Nd:YAG de frequência dupla (532 de excitação), um

123 monocromador único (Acton) utilizando um retículo de 600 ranhuras/mm e uma câmara de CCD de arranjo de 1024 por 128 pixéis termoeletricamente esfriada (Andor Technology). O microscópio é equipado com óticas de coleção apropriada que incluem um filtro de rejeição de passagem de faixa de laser holográfico (Kaiser Optical Systems Inc.) para minimizar a dispersão de Raileigh no monocromador. A luz dispersada de Raman é coletada com uma fibra ótica de 50 microns. Usando o modo de “Formação de Imagem Espectral de Raman” do instrumento, as imagens espectrais são obtidas varrendo-se a amostra na direção x, z com uma platina por varredura de xyz piezo acionada e coletando um espectro em cada pixel. Os tempos de integração típicos são de 0,3 s por pixel. As imagens espectrais são 4800 espectros no total correspondendo a uma dimensão por varredura física de 40 por 20 microns. Para a apresentação dos dados de Raman confocais, as imagens são geradas com base em propriedades únicas dos espectros (isto é, a integração de uma faixa de Raman, intensidade de altura de faixa ou largura de faixa). A platina do microscópio é modificada com um suporte de amostra feito de encomenda que posicionou e girou os stents em tomo do seu eixo primário. A direção x é definida como a direção que segue paralela ao comprimento do stent e a direção z refere-se à direção que penetra através do revestimento da interface ar-revestimento para a revestimento-metal. A energia de laser típica é < 10 mW na platina de amostra. Todos os experimentos podem ser conduzidos com uma objetiva acromática plana, 100 x NA = 0,9 (Nikon).

A amostras (n = 5) que compreendem stents fabricados de L605 (de 0,05 a 0,15 % de C, de 1,00 a 2,00 % de Mn, 0,040 % máximo de Si, 0,030 % máximo de P, 0,3 % máximo de S, de 19,00 a 21,00 % de Cr, de 9,00 a 11,00 % de Ni, de 14,00 a 16,00 % de W, 3,00 % de Fe e Bal. Co) e tendo revestimentos como aqui descritos e/ou produzidos pelos métodos aqui descritos podem ser analisadas. Para cada amostra, três localizações são

124 selecionadas ao longo do comprimento de stent. Os três locais são localizados dentro de porções de um terço dos stents de modo que o comprimento do stent inteiro seja representado nos dados data. O stent é depois girado a 180 graus em tomo da circunferência e um adicional de três localizações é amostrado ao longo do comprimento. Em cada caso, os dado são coletados da porção de suporte do stent. Seis localizações espaciais aleatórias também são pródepositadas sobre amostras de platina revestidas fabricadas de L605 e tendo revestimentos como aqui descritos e/ou produzidos pelos métodos aqui descritos. Os espectros de Raman de cada componente individual presente nos revestimentos também são coletados para comparação e referência. Usando o software do instrumento, os espectros médios dos dados de imagem espectral são calculados selecionando-se os pixéis da imagem espectral que são exclusivos a cada camada. Os espectros médios são depois exportados no software GRAMS/AI v. 7.02 (Thermo Galactic) e as faixas de Raman apropriadas são ajustadas a uma função de Voigt. As áreas de faixa e as posições de mudança são registradas.

O espectro de componente puro para cada componente do revestimento (por exemplo, droga, polímero) também é coletado a 532 e 785 nm de excitação. Os espectros a 785 nm de excitação são coletados com um microscópio Raman confocal (WITec Instruments Corp. Savoy, IL) equipado com um laser de diodo de 785 nm, as óticas de coleta apropriadas e uma câmara de CCD de arranjo de 1024 x 128 pixéis retro-iluminada termoeletricamente esfriada otimizada para os comprimentos de onda visíveis e infravermelho (Andor Technology).

Espectroscopia de fotoelétron de raio X (XPS)

XPS pode ser usado para determinar quantitativamente espécies dementais e ambientes de ligação química no externo de 5 a 10 nm da superfície da amostra. A técnica pode ser operada no modo de espectroscopia ou formação de imagem. Quando combinada com uma fonte

125 de ejeção XPS pode ser utilizado para dar a caracterização química de perfil de profundidade. XPS (ESCA) e outras técnicas analíticas tais como descritas em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência podem ser usadas.

Por exemplo, em um teste, uma amostra que compreende um stent revestido pelos métodos aqui descritos e/ou um dispositivo como aqui descrito é obtido. A análise de XPS é realizada em uma amostra usando um Physical Electronics Quantum 2000 Scanning ESCA. A fonte monocromáticas Al Κα é operada a 15 kV com uma energia de 4,5 W. A análise é feita em um ângulo de remoção de 45°. Três medições são tomadas ao longo do comprimento de cada amostra com a área de análise de ~ 20 microns no diâmetro. Elétron de energia baixa e fluxos de íon Ar⁺ são usados para a compensação de carga.

Tempo de Vôo de Espectrômetros de Massa de íon Secundário (TOF-SIMS)

TOF-SIMS pode ser usado para determinar espécies moleculares (droga e polímero) nos 1 a 2 nm externos da superfície da amostra quando operado sob condições estáticas. A técnica pode ser operada no modo de espectroscopia ou formação de imagem em alta resolução espacial. Adicionalmente amostras de seção transversal podem ser analisadas. Quando operada sob condições experimentais dinâmicas, conhecidas na técnica, a caracterização química de perfil de profundidade pode ser obtida.

Por exemplo, para analisar apenas a superfície mais externa, condições estáticas (por exemplo um ToF-SIMS IV (lonToF, Munster)) usando uma fonte de íon primário de 25Kv BU mantido abaixo de 10¹² íons por cm são usadas. Onde necessário uma pistola de fluxo de elétron de baixa energia (0,6 nA DC) é usada para carregar amostras de isolação compensadas.

Espectroscopia de Massa de íon Secundário em Grupo, podem

126 ser utilizados para o perfil de profundidade como descrito em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

Por exemplo, um stent como aqui descrito é obtido. O stent é preparado para a análise de SIMS cortando-a longitudinalmente e abrindo-a com pinças. O stent é depois prensado em camadas múltiplas de folha de índio com o diâmetro externo voltado para fora.

Os experimentos de perfil de profundidade TOF-SIMS são realizados usando um instrumento Ιοη-TOF IV equipado com fintes de grupo de feixe de íon primário tanto de Bi quanto de SFS+. O perfil de profundidade Ejeção é realizado no modo de feixe duplo, enquanto preserva a integridade química da amostra. A fonte de análise é uma fonte de íon de grupo de bismuto pulsado de 25 keV, que bombardeou a superfície em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. A corrente alvo é mantida na corrente pulsada a -0,3 pÂ (+10 %) com um tamanho de raster de 200 um x 200 um para todos os experimentos. Os íons secundários tanto positivos quanto negativos são extraídos da amostra em um espectrômetro de massa de tempo de vôo tipo reflectron. Os íons secundários são depois detectados por um detector de placa de microcanal com uma energia de pós aceleração de 10 kV. Uma pistola de fluxo de elétron de energia baixa é utilizada para a neutralização de carga no modo de análise.

A fonte de ejeção usada é uma fonte de grupo SF5+ de 5 keV também operada em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. Para amostras de modelo fino na de Si, a corrente de SF5+ é mantida a -2,7 nÂ com um raster de 750 um x 750 um. Para as amostras espessas nas platinas e para as amostras nos stents, a corrente é mantida a 6 nÂ com um raster de 500 um x 500 um. Todas as correntes de feixe primário são medidas com um copo de Faraday tanto antes quanto depois do perfil de

127 profundidade.

Todos os perfis de profundidade são adquiridas no modo não intrelaçado com uma pausa de 5 ms entre ejeção e análise. Cada espectro é calculado em média em um período de tempo de 7,37 segundos. A análise é imediatamente seguida por 15 segundos de ejeção de SF₅ ⁺. Para perfis de profundidade apenas das regiões de superfície e subsuperfície, o tempo de ejeção foi diminuído para 1 segundo para a amostra de agente ativo a 5 % e 2 segundos para as amostras de agente ativo tanto de 25 % quanto de 50 %. Os perfis de profundidade controlados por temperatura são obtidos usando uma platina de temperatura variável com controlador de temperatura da Eurotherm Controls e software IPSG V3.08. As amostras são primeiro colocadas na câmara de análise na temperatura ambiente. As amostras são levadas até a temperatura desejada sob condições de vácuo ultra alto e são deixadas estabilizar por 1 minuto antes da análise. Todos os experimentos de perfil de profundidade são realizados a -100C e 25C.

Microscopia de Força Atômica (AFM)

AFM é uma técnica de caracterização de superfície de alta resolução. AFM é usada na técnica para fornecer a formação de imagem topográfica, além disso, quando utilizada no Tapping Mode® pode formar imagem de material e ou propriedades químicas da superfície. Adicionalmente amostras de seção transversal podem ser analisadas. A técnica pode ser usada sob condições ambientes, de solução, umidificadas ou controladas em temperatura. Outros modos de operação são bem conhecidos e podem ser facilmente aqui utilizados por aqueles habilitados na técnica.

Um stent como aqui descrito é obtido. AFM é usada para determinar a estrutura das camadas de droga polímero. AFM pode ser utilizada como descrito em Ranade et al., “Physical characterization of controlled release of paclitaxel from the TAXUS Express2 drug elution stent” J. Biomed. Mater. Res. 71(4): 625 a 634 (2004) aqui incorporada na sua

128 totalidade por referência.

As morfologias de polímero e droga, composição de revestimento, pelo menos podem ser determinadas usando a análise pela microscopia de força atômica (AFM). Uma AFM de modo múltiplo (Digital Instruments/Veeco Metrology, Santa Barbara, CA) controlada com aparelhos eletrônicos Nanoscope Illa e NanoScope Extender é usada. As amostras são examinadas no estado seco usando AFM antes da eluição da droga (por exemplo, rapamicina). As amostras também são examinadas em pontos de tempo selecionados através de um período de eluição (por exemplo, 48 horas) pelo uso de uma ponta de stent de AFM e platina de fluxo direto construído para permitir a análise de amostras úmidas. As amostras úmidas são examinadas na presença do mesmo meio de eluição usado para a análise de liberação de droga de cinética in vitro (por exemplo, PBS-Tween20 ou 10 mM de Tris, 0,4 % em peso de SDS, pH 7,4). A saturação da solução é prevenida pela troca frequente do meio de liberação com vários volumes de meio fresco. A formação de imagem pela AFM TappingMode® pode ser usada para mostrar a topografia (uma projeção em tempo real da microestrutura da superfície do revestimento) e mudanças de fase-ângulo da AFM em relação à área de amostra para contrastar diferenças nas propriedades dos materiais. As imagens de topografia de AFM podem ser tridimensionalmente renderizadas para mostrar a superfície de um stent revestidos, que pode mostra furos ou vazios do revestimento que possam ocorrer conforme o polímero é absorvido e a droga é eluído com o tempo, por exemplo.

Microscopia Eletrônica por varredura (SEM) com Moagem de Feixe de íon Focalizado (FIB)

Os stents como aqui descritos e ou produzidos pelos métodos aqui descritos são visualizadas usando SEM-FIB. Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método. O feixe de íon focalizado FIB

129 é uma ferramenta que permite o secionamento, moagem e deposição específicos de sítio precisos de materiais. FIB pode ser usado em conjunção com SEM, nas condições ambientes ou crio, para produzir secionamento in situ seguido pela formação de imagem de alta resolução. FIB-SEM podem produzir uma imagem transversal das camadas de polímero e droga sobre o stent. A imagem pode ser usada para quantificar a espessura das camadas e a uniformidade da espessura da camada na fabricação e em pontos de tempo depois da colocação do stent (ou depois da eluição in vitro em vários pontos de tempo).

Um sistema de FIB/SEM FEI Dual Beam Strata 235 é uma combinação de um feixe de íon Ga (FIB) fmamente focalizado acelerado por 30 kV com um feixe de elétron de emissão de campo em um instrumento de microscópio eletrônico por varredura e é usado para formar imagem e secionar os stents. Ambos os feixes focalizam no mesmo ponto da amostra com um diâmetro de stent menor do que 10 nm. O FIB também pode produzir seções afinadas para análise TEM.

Para prevenir danificar a superfície do stent com ions incidentes, um revestimento de Pt é primeiro depositado por intermédio da deposição auxiliada por feixe de elétron e deposição de feixe de elétron antes do secionamento de FIB. Para o secionamento de FIB, o feixe de íon Ga é acelerado a 30 kV e o processo de secionamento é de cerca de 2 h em duração. A conclusão do secionamento de FIB permite que se observe e quantifique pelo SEM a espessura das camadas poliméricas que são, por exemplo, deixadas sobre o stent conforme elas são absorvidas.

Exemplo 5: Análise da Espessura de um Revestimento de Dispositivo

A análise pode ser determinada pela análise in situ ou a partir de amostras de seção transversal.

Espectroscopia de fotoelétron de raio X (XPS)

130

XPS pode ser usada para determinar quantitativamente a presença de espécies elementares e ambientes de ligação química nos 5 a 10 nm externos da superfície da amostra. A técnica pode ser operada no modo de espectroscopia ou formação de imagem. Quando combinada com uma fonte XPS de ejeção pode ser utilizada para dar a caracterização química de perfil de profundidade. XPS (ESCA) e outras técnicas analíticas tais como descritas em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência podem ser usadas.

Assim, em um teste, uma amostra que compreende um stent revestido pelos métodos aqui descritos e/ou um dispositivo como aqui descrito é obtida. A análise XPS é feita em uma amostra usando um Physical Electronics Quantum 2000 Scanning ESCA. A fonte de Al Ka monocromática é operada a 15 kV com uma energia de 4,5 W. A análise é feita em um ângulo de remoção de 45°. Três medições são tomadas ao longo do comprimento de cada amostra com a área de análise -20 microns no diâmetro. Elétron de energia baixa e fluxos de íon Ar⁺ são usados para a compensação de carga.

Espectrometria de Massa de íon Secundário de Tempo de Vôo

TOF-SIMS pode ser usada para determinar espécies moleculares (droga e polímero) nos 1 a 2 nm externos da superfície da amostra quando operado sob condições estáticas. A técnica pode ser operada no modo de espectroscopia ou formação de imagem em alta resolução espacial. Adicionalmente amostras de seção transversal podem ser analisadas. Quando operadas sob condições experimentais dinâmicas, conhecidas na técnica, a caracterização química de perfil de profundidade pode ser obtida.

Por exemplo, sob condições estáticas (por exemplo um ToFSIMS IV (lonToF, Munster)) usando uma fonte de íon primário de Bi ' de 25

131 • · 12 r Ί.

Kv mantidos abaixo de 10 ions por cm é usada. Onde necessário uma pistola de fluxo de elétron de baixa energia (0,6 nA DC) é usada para compensar a carga de amostras isolantes.

A Espectroscopia de Massa de íon Secundário em Grupo, pode ser utilizada para o perfil de profundidade como descrito em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

Um stent como aqui descrito é obtido. O stent é preparado para a análise SIMS cortando-a longitudinalmente e abrindo-a com pinças. O stent é depois prensado em camadas múltiplas de folha de irídio com o diâmetro externo voltado para fora.

Experimentos TOF-SIMS são realizados em um instrumento Ιοη-TOF IV equipado com fontes de grupo de feixe de íon primário tanto de Bi quanto de SF5+. O perfil de profundidade Ejeção é realizado no modo de feixe duplo. A fonte de análise é uma fonte de íon de grupo do bismuto de 25keV pulsada, que bombardeou a superfície em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. A corrente alvo é mantida a corrente pulsada de ~0,3 pÂ (+10 %) com um tamanho de raster de 200 um x 200 um para todos os experimentos. íons secundários tanto positivos quanto negativos são extraídos da amostra em um espectrômetro de massa de tempo de vôo tipo reflectron. Os íons secundários são depois detectados por um detector de placa de microcanal com uma energia de pós aceleração de 10 kV. Uma pistola de fluxo de elétron de energia baixa é utilizada para a neutralização de carga no modo de análise.

A fonte de ejeção usada é uma fonte de grupo SF5+ de 5-keV também operada em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. Para amostras de modelo fino no de Si, a corrente de SF5+ é mantida a ~2,7 nÂ com um raster de 750 um x 750 um. Para as amostras

132 espessas nas platinas e para as amostras sobre os stents, a corrente é mantida em 6 nÂ com um raster de 500 um x 500 um. Todas as correntes de feixe primário são medidas com um copo de Faraday tanto antes quanto depois do perfil de profundidade.

Todos os perfis de profundidade são adquiridos no modo não entrelaçado com uma pausa de 5 ms entre ejeção e análise. Cada espectro é calculado em média em um período de tempo de 7,37 segundos. A análise é imediatamente seguida por 15 segundos de ejeção SF₅ ⁺. Para perfis de profundidade apenas das regiões de superfície e subsuperfície, o tempo de ejeção foi diminuído para 1 segundo para a amostra de 5 % de agente ativo e 2 segundos para as amostras de agente ativo tanto de 25 % quanto de 50 %. Perfis de profundidade controlados em temperatura são obtidos usando uma platina de temperatura variável com controlador de temperatura da Eurotherm Controls e o software IPSG V3.08. As amostras são primeiro colocadas na câmara de análise na temperatura ambiente. As amostras são levadas para a temperatura desejada sob condições de vácuo ultra alto e são deixadas estabilizar por 1 minuto antes da análise. Todos os experimentos de perfil de profundidade são realizados a -100C e 25C.

Microscopia de Força Atômica (AFM)

AFM é uma técnica de caracterização de superfície de alta resolução. AFM é usada na técnica para fornecer formação de imagem topográfica, além disso, quando utilizada no Tapping Mode® pode formar imagem de material e ou propriedades químicas da superfície. Adicionalmente amostras de seção transversal podem ser analisadas.

Um stent como aqui descrito é obtido. AFM pode ser altemativamente utilizada como descrito em Ranade et al., “Physical characterization of controlled release of paclitaxel from the TAXUS Express2 drug elution stent” J. Biomed. Mater. Res. 71(4): 625-634 (2004) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

133

As morfologias de polímero e droga, composição de revestimento e espessura transversal pelo menos podem ser determinadas usando a análise de microscopia de força atômica (AFM). Uma AFM de modo múltiplo (Digital Instruments/Veeco Metrology, Santa Barbara, CA) controlada com aparelhos eletrônicos Nanoscope Ma e NanoScope Extender é usada a formação de imagem de AFM TappingMode® pode ser usada para mostrar a topografia (uma projeção da microestrutura de superfície de revestimento em espaço real) e mudanças de ângulo de fase da AFM em relação à área de amostra para contrastar diferenças nas propriedades de materiais. As imagens de topografia AFM podem ser tridimensionalmente renderizadas para mostrar a superfície de um stent ou seção transversal revestidas. Os stents de Microscopia Eletrônica por varredura (SEM) com Feixe de íon Focalizado (FIB) como aqui descritas e ou produzidas pelos métodos aqui descritos são visualizadas usando a análise de SEM-FIB. Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método. O feixe de elétron focalizado FIB é uma ferramenta que permite secionamento, moagem e deposição específicas de sítio precisas de materiais. FIB pode ser usada em conjunção com SEM, em condições ambientes ou crio, para produzir secionamento in situ seguido pela formação de imagem de alta resolução. FIB-SEM pode produzir uma imagem transversal das camadas poliméricas sobre o stent. A imagem podem ser usada para quantificar a espessura das camadas assim como mostram se existe uniformidade da espessura da camada na fabricação e em pontos de tempo depois da colocação do stent (ou depois da eluição in vitro em vários pontos de tempo).

Um sistema de Feixe Duplo de FEI Strata 235 FIB/SEM é uma combinação de um feixe de íon Ga finamente focalizado (FIB) acelerado por kV com um feixe de elétron de emissão de campo em um instrumento de microscópio por varredura eletrônica e é usada para formar imagem e secionar os stents. Ambos os feixes focalizam no mesmo ponto da amostra

134 com um diâmetro de stent de menos do que 10 nm. O FIB também pode produzir seções afinadas para a análise TEM.

Para impedir danificar a superfície do stent com ions incidentes, um revestimento de Pt é primeiro depositado por intermédio da deposição auxiliada pelo feixe de elétron e deposição de feixe de íon antes do secionamento FIB. Para o secionamento FIB, o feixe de íon Ga é acelerado a 30 kV e o processo de secionamento é de cerca de 2 h de duração. A conclusão do secionamento de FIB permite que se observe e quantifique pela SEM a espessura das camadas poliméricas que são, por exemplo, deixadas no stent conforme elas são absorvidas.

Interferometria

A interferometria pode ser adicional e/ou altemativamente usada para determinar a espessura do revestimento como mencionado em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência podem ser usadas.

Elipsometria

A elipsometria é uma técnica de medição sensível para a análise de revestimento em uma platina. A mesma usa luz polarizada para usar stent nas propriedades dielétricas de uma amostra. Através de uma análise do estado da polarização da luz que é refletida da amostra a técnica permite a caracterização acurada da espessura e uniformidade da camada. As determinações de espessura variando de uns poucos ângstroms a dezenas de microns são possíveis para camadas únicas ou sistemas de camada múltipla. Ver, por exemplo, Jewell, et al., “Release of Plasmid DNA from Intravasculars Stents Coated with Ultrathin Mulyikayered Polielectrolyte Films” Biomacromolecules. 7: 2483-2491 (2006) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

135

Exemplo 6: Análise da Espessura de um Dispositivo Microscopia de Eletrônica por varredura (SEM)

Uma amostra de stent revestido aqui descrita é obtida. A espessura do dispositivo pode ser avaliado usando esta técnica analítica. A espessura de suportes múltiplos foram tomadas para garantir a reprodutibilidade e para caracterizar o revestimento e stent. A espessura do revestimento foi observada pela SEM usando um Hitachi S-4800 com uma voltagem de aceleração de 800V. Várias ampliações são usadas. SEM pode fornecer imagens de cima para baixo e corte transversal em várias ampliações. Tomografía Computadorizada de Nano Raio X

Uma outra técnica que pode ser usada para visualizar a estrutura física de um dispositivo em 3-D é a Tomografía Computadorizada de Nano Raio X (por exemplo, tal como feita pelo SkyScan).

Exemplo 7: Determinação do Tipo ou Composição de um Revestimento Polimérico de um Dispositivo

Ressonância Magnética Nuclear (RMN)

A composição das amostras de polímero antes e depois da eluição podem ser determinadas pela espectrometria de 'H RMN como descrito em Xu et al., “Biodegradation of poly(l-lactide-co-glycolide tube stentes in bile” Polymer Degradation and Stability. 93: 811-817 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência. As composições de amostras de polímero são determinadas por exemplo usando um espectrômetro 300M Bruker com d-clorofórmio como solvente na temperatura ambiente. Espectroscopia de Raman

FT-Raman ou microscopia de Raman confocal podem ser utilizadas para determinar a composição.

Por exemplo, uma amostra (um stent revestido) é preparada como aqui descrito. As imagens são tomadas sobre o revestimento usando a Espectroscopia de Raman. Altemativamente, uma platina revestida pode ser

136 testada neste método. Para testar uma amostra usando a Microscopia de Raman e em particular a Microscopia de Raman confocal, é entendido que para se obter espectros de Raman de alta resolução apropriados, tempo de aquisição suficiente, energia de laser, comprimento de onda de laser, tamanho de etapa de amostra e objetiva de microscópio necessitam ser otimizados. A espectroscopia de Raman e outras técnicas analíticas tais como descritas em Balss, et al., “Quantitative spatial distribution of sirolimus and polymers in drug-eluting stents using confocal Raman Microscopy” J. of Biomedical Materials Research Parte A, 258-270 (2007), aqui incorporada na sua totalidade por referência, e/ou descritas em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência podem ser usadas.

Por exemplo um Microscópio de Raman confocal por varredura WITec CRM 200 usando um laser de Nd: YAG a 532 nm é aplicado no modo de formação de imagem de Raman. A amostra é colocadas em uma mesa piezoeletricamente acionada, a luz do laser é focalizada na amostra usando uma objetiva seca lOOx (abertura numérica de 0,90) e o ponto de laser finamente focalizado é escaneado na amostra. Conforme o laser escaneia a amostra, em cada intervalo de 0,33 micron um espectro de Raman com sinal para ruído alto é coletado usando 0,3 segundos de tempo de integração. Cada imagem de corte transversal confocal do revestimento demonstra uma região 70 pm de largura por 10 pm profundidade e os resultados do ajuntamento de 6300 espectros com um tempo de formação de imagem total de 32 min. A análise multivariada usando espectros de referência de amostras de rapamicina (amorfa e cristalina) e referências de polímero são usadas para desenvolver os conjuntos de dados espectrais, para fornecer mapas químicos da distribuição.

Em um outro teste, os perfis de profundidade espectral das

137 amostras são realizadas com um sistema de microscópio CRM200 da WITec Instruments Corporation (Savoy, IL). O instrumento é equipado com uma frequência de laser duplicado Nd YAG (532 de excitação), um monocromador único (Acton) utilizando um retículo de 600 ranhuras/mm e uma câmara CCd de arranjo de 1024 por 128 pixéis termoeletricamente esfriada (Andor Technology). O microscópio é equipado com óticas de coleção apropriada que incluem um filtro de rejeição de passagem de faixa de laser holográfico (Kaiser Optical Systems Inc.) para minimizar a dispersão de Raileigh no monocromador. A luz dispersa por é coletada com uma fibra ótica de 50 microns. Usando o modo de “Formação de Imagem Espectral de Raman” do instrumento, imagens espectrais são obtidas varrendo-se a amostra na direção x, z com uma platina por varredura xyz piezo acionada e coletando um espectro em cada pixel. O tempos de integração típicos são de 0,3 s por pixel. As imagens espectrais são 4800 espectros totais que correspondem a uma dimensão por varredura física de 40 por 20 microns. Para a apresentação dos dados de Raman confocais, imagens são geradas com base nas propriedades únicas dos espectros (isto é, integração de uma faixa de Raman, intensidade de altura de faixa ou largura de faixa). A platina do microscópio é modificada com um suporte de amostra feita de encomenda que posicionou e girou os stents em tomo do seu eixo primário. A direção x é definida como a direção que corre paralela ao comprimento do stent e a direção z refere-se à direção que penetra através do revestimento a partir da interface ar-revestimento para a revestimento-metal. A energia do laser típica é de < 10 mW sobre a platina de amostra. Todos os experimentos podem ser conduzidos com uma objetiva acromática plana, 100 x NA = 0,9 (Nikon). [00405]As amostras (n = 5) que compreendem os stents feitos de L605 e tendo revestimentos como aqui descritos e/ou produzidos pelos métodos aqui descritos podem ser analisadas. Para cada amostra, três localizações são selecionadas ao longo do comprimento de stent. As três localizações estão

138 localizadas dentro de uma terço das porções dos stents de modo que o comprimento inteiro do stent são representados nos dados. O stent é depois girado 180 graus em tomo da circunferência e um adicional de três localizações são amostradas ao longo do comprimento. Em cada caso, os dados são coletados da porção de suporte do stent. Seis localizações espaciais aleatórias também são perfilados sobre as amostras de platina revestidas fabricadas de L605 e tendo revestimentos como aqui descritos e/ou produzidos pelos métodos aqui descritos. Os espectros Raman de cada componente individual presente nos revestimentos também são coletados para comparação e referência. Usando o software do instrumento, os espectros médios dos dados de imagem espectral são calculados selecionando-se os pixéis de imagem espectral que são exclusivos a cada camada. Os espectros médios são depois exportados no software GRAMS/AI v. 7.02 (Thermo Galactic) e as faixas Raman apropriadas são ajustadas a uma função de Voigt. As áreas de faixa e posições de mudança são registradas.

O espectro de componente puro para cada componente do revestimento (por exemplo, droga, polímero) também é coletado a 532 e 785 nm de excitação. Os espectros de 785 nm de excitação são coletados com um microscópio Raman confocal (WITec Instruments Corp. Savoy, IL) equipado com um laser de diodo de 785 nm, ópticas de coleção apropriada e uma câmara de CCd de arranjo de 1024 x 128 pixéis retroiluminada termoeletricamente esfriada otimizada para os comprimentos de onda visível e infravermelho (Andor Technology).

Espectrometria de Massa de íon Secundário de Tempo de Vôo

TOF-SIMS podem ser usados para determinar espécies moleculares (droga e polímero) nos 1 a 2 nm externos da superfície da amostra quando operado sob condições estáticas. A técnica pode ser operada no modo de espectroscopia ou formação de imagem em resolução espacial alta. Adicionalmente as amostras de seção transversal podem ser analisadas.

139

Quando operada sob condições experimentais dinâmicas, conhecidas na técnica, a caracterização química de perfil de profundidade pode ser obtida.

Por exemplo, sob condições estáticas (por exemplo um ToFSIMS IV (lonToF, Munster)) usando uma fonte de íon primário de Bi⁺⁺ de 25 Kv mantida abaixo de 10 íons por cm é usada. Onde necessário uma pistola de fluxo de elétron de baixa energia (0,6 nA DC) é usada para compensar a carga de amostras isolantes.

A Espectroscopia de Massa de íon Secundário em Grupo, pode ser utilizada como descrito Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

Um stent como aqui descrito é obtido. O stent é preparado para análise de SIMS cortando-a longitudinalmente e abrindo-a com pinças. O stent é depois prensado em camadas múltiplas de folha de irídio com o diâmetro externo voltado para fora.

Os experimentos TOF-SIMS são realizados em um instrumento Ιοη-TOF IV equipado com fontes de grupo de feixe de íon primário tanto de Bi quanto de SFS+. Perfil de profundidade de ejeção é realizada no modo de feixe duplo. A fonte de análise é uma fonte de íon de grupo de bismuto de 25 keV pulsado, que bombardeou a superfície em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. A corrente alvo é mantido em corrente pulsada de ~0,3 pÂ (+10 %) com um tamanho de raster de 200 um x 200 um para todos os experimentos. Os íons secundários tanto positivos quanto negativos são extraídos da amostra em um espectrômetro de massa de tempo de vôo tipo reflectron. Os íons secundários são depois detectados por um detector de placa de microcanal com uma energia de pós aceleração de 10 kV. Uma pistola de fluxo de elétron de energia baixa é utilizada para a neutralização de carga no modo de análise.

140

A fonte de ejeção usada é uma fonte de grupo de SFS+ de 5 keV também operados em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. Para amostras de modelo fino no de Si, a corrente de SFS+ é mantida a -2,7 nÂ com um raster de 750 um x 750 um. Para as amostras espessas sobre platinas e para as amostras sobre stents, a corrente é mantida a 6 nÂ com um raster de 500 um x 500 um. Todas as correntes de feixe primário são medidos com um copo de Faraday tanto antes quanto depois do perfil de profundidade.

Todos os perfis de profundidade são adquiridos no modo não integrado com uma pausa de 5 ms entre ejeção e análise. Cada espectro é calculado em média em um período de tempo de 7,37 segundos. A análise é imediatamente seguida por 15 segundos de ejeção de SF₅ ⁺. Para os perfis de profundidade da superfície e regiões subsuperfície apenas, o tempo de ejeção foi diminuído para 1 segundo para a amostra de agente ativo a 5 % e 2 segundos para as amostras de agente ativo tanto de 25 % quanto de 50 %. Os perfis de profundidade controlados pela temperatura são obtidos usando uma platina de temperatura variável com controlador de temperatura da Eurotherm Controls e o software IPSG V3.08. As amostras são primeiro colocadas na câmara de análise na temperatura ambiente. As amostras são levadas até a temperatura desejada sob condições de vácuo ultra alto e são deixadas estabilizar por 1 minuto antes da análise. Todos os experimentos de perfil de profundidade são realizados a -100°C e 25°C.

Microscopia de força atômica (AFM)

AFM é uma técnica de caracterização de superfície de alta resolução. AFM é usada na técnica para fornecer formação de imagem topográfica, além disso, quando utilizada em Tapping Mode® pode formar imagem de material e ou propriedades químicas da superfície. Adicionalmente amostras de seções transversais podem ser analisadas. A composição de revestimento pode ser determinada usando a análise de microscopia de força atômica (AFM) no Tapping

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Mode®. Outros modos de operação são bem conhecidos e podem ser aqui utilizados por aqueles habilitados na técnica.

Um stent como aqui descrito é obtido. AFM pode ser utilizada como descrito em Ranade et al., “Physical characterization of controlled release of paclitaxel from the TAXUS Express2 drug elution stent” J. Biomed. Mater. Res. 71(4): 625 a 634 (2004) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

As morfologias de polímero e droga, composição de revestimento, pelo menos podem ser determinadas usando a análise de microscopia de força atômica (AFM). Uma AFM de modo múltiplo (Digital Instruments/Veeco Metrology, Santa Barbara, CA) controlada com aparelhos eletrônicos Nanoscope Illa e NanoScope Extender é usada. A formação de imagem de AFM no TappingMode® pode ser usada para mostrar a topografia (uma projeção de espaço real da microestrutura da superfície do revestimento) e mudanças de ângulo de fase da AFM em relação à área de amostra para contrastar diferenças nas propriedades de materiais.

Espectroscopia de Infravermelho (IR) para Teste In Vitro

Espectroscopia de Infravermelho (IR) usando FTIR, ATR-IR ou micro ATR-IR podem ser usadas para identificar composição polimérica pela comparação com os espectros de referência de polímero padrão.

Exemplo 8: Determinação da Bioabsorbabilidade de um Dispositivo

Em algumas formas de realização do dispositivo o substrato revestidas por si só é fabricado de um material bioabsorvível, tal como os polímeros bioabsorvíveis aqui apresentados ou um outro material bioabsorvível tal como magnésio e, assim, o dispositivo inteiro é bioabsorvível. As técnicas apresentados com respeito à mostrar a Bioabsorbabilidade de um revestimento polimérico podem ser usadas para mostrar adicional e/ou altemativamente a bioabsorbabilidade de um

142 dispositivo, por exemplo, pelo teste de GPC In Vivo, Teste de HPLC In Vivo, Teste de GPC In Vitro, Teste de HPLC In Vitro, teste de SEM-FIB, Espectroscopia de Raman, SEM e XPS como aqui descritos com variações e ajustes que seriam óbvios para aqueles habilitados na técnica. Uma outra técnica para visualizar a estrutura física de um dispositivo em 3-D é Tomografia de Computador de Nano Raio X (por exemplo, tal como feita pelo SkyScan), que pode ser usado em um teste de eluição e/ou teste de bioabsorbabilidade, como aqui descrito para mostrar a estrutura física do revestimento que permanece sobre os stents em cada ponto de tempo, quando comparada a uma varredura antes da eluição/bioabsorção.

Exemplo 9: Determinação da Presença de Estruturas Secundárias de um Agente Biológico

Espectroscopia de Raman

FT-Raman ou microscopia de Raman confocal podem ser utilizadas para determinar a estrutura secundária de um agente biológico. Por exemplo, o ajuste das regiões de Amida I, II ou III do espectro de Raman pode elucidar as estruturas secundárias (por exemplo, hélices alfa, folhas beta). Ver, por exemplo, Iconomidou, et al., “Secondary Structure of Chorion Proteins of the Teleosetan Fish Dentex dentex by ATR FR-IR e FT-Raman Spectroscopy” J. of Structural Biology, 132, 112 a 122 (2000); Griebenow, et al., “On Protein Denaturation in Aqueous-Organic Mixtures but Not in Pure Organic Solvents” J. Am. Chem. Soc., Vol 118, N² 47, 11695 a 11700 (1996). Espectroscopia de Infravermelho (IR) para Teste In Vitro

A espectroscopia de infravermelho, por exemplo FTIR, ATRIR e micro ATR-IR podem ser utilizadas para determinar a estrutura secundária de um agente biológico. Por exemplo o ajuste das regiões de Amida I, II ou III do espectro de infravermelho pode elucidar estruturas secundárias (por exemplo, hélices alfa, folhas beta).

Exemplo 10: Determinação da Microestrutura de um Revestimento em um

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Dispositivo Médico

Microscopia de força atômica (AFM)

AFM é uma técnica de caracterização de superfície de alta resolução. AFM é usada na técnica para fornecer formação de imagem topográfica, além disso, quando utilizada em Tapping Mode® pode formar imagem de material e ou propriedades químicas da superfície. Adicionalmente as amostras de seção transversal podem ser analisadas. A técnica pode ser usada sob condições ambientes, de solução, umidificadas ou controladas em temperatura. Outros modos de operação são bem conhecidos e podem ser facilmente utilizados aqui por aqueles habilitados na técnica.

Um stent como aqui descrito é obtido. AFM é usada para determinar as microestruturas do revestimento. Um stent como aqui descrito é obtido. AFM pode ser utilizada como descrita em Ranade et al., “Physical characterization of controlled release of paclitaxel from the TAXUS Express2 drug elution stent” J. Biomed. Mater. Res. 71(4): 625 a 634 (2004) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

Por exemplo, as morfologias de polímero e droga, composição e estrutura física de revestimento podem ser determinadas usando a análise de microscopia de força atômica (AFM). Uma AFM de modo múltiplo (Digital Instruments Neeco Metrology, Santa Barbara, CA) controlada com aparelhos eletrônicos Nanoscope Ma e NanoScope Extender é usada. As amostras são examinadas no estado seco usando AFM antes da eluição da droga (por exemplo, rapamicina). As amostras também são examinadas em pontos de tempo selecionados através de um período de eluição (por exemplo, 48 horas) usando-se uma ponta de stent de AFM e platina de fluxo direto construída para permitir análise de amostras úmidas. As amostras úmidas são examinadas na presença do mesmo meio de eluição usado para a análise de liberação de droga de cinéticas in vitro (por exemplo, PBS-Tween20 ou 10 mM de Tris, 0,4 % em peso de SDS, pH 7,4). A saturação da solução é prevenida pelas trocas

144 frequentes do meio de liberação com vários volumes de meio fresco. A formação de imagem de AFM no TappingMode® pode ser usada para mostrar a topografia (uma projeção de espaço real da microestrutura da superfície do revestimento) e mudanças de fase-ângulo da AFM na área de amostra para contrastar diferenças nas propriedades de materiais. As imagens de topografia AFM podem ser tridimensionalmente para renderizadas mostrar a superfície de um stent revestido, que pode mostrar furos ou vazios do revestimento que pode ocorrer conforme o polímero é absorvido e a droga é liberada do polímero com o tempo, por exemplo.

Tomografía Computadorizada de Nano Raio X

Uma outra técnica que podem ser usadas para visualizar a estrutura física de um dispositivo em 3-D é a Tomografía Computadorizada de Nano Raio X (por exemplo, tal como feita pelo SkyScan), que pode ser usada em um teste de eluição e/ou teste de bioabsorbabilidade, como aqui descritos para mostrar a estrutura física do revestimento que permanece sobre os stents em cada ponto de tempo, quando comparada a uma varredura antes da eluição/bioabsorção.

Exemplo 11: Determinação de um Perfil de Eluição

In vitro

Exemplo 11a: Em um método, um stent aqui descrita é obtida. O perfil de eluição é determinado como segue: os stents são colocados em tubos de teste de 16 ml e 15 ml de PBS a 10 mM (pH 7,4) é pipetado no topo. Os tubos são tampados e incubados a 37°C com rotação extremidade sobre extremidade a 8 rpm. Soluções são depois coletadas nos pontos de tempo designados (por exemplo, Id, 7d, 14d, 21d e 28d) (por exemplo, 1 semana, 2 semanas e 10 semanas) e reabastecidas com 1,5 ml de soluções frescas em cada ponto de tempo para impedir a saturação. Um ml de DCM é adicionada à amostra coletada de tampão e os tubos são tampados e agitados por um minuto e depois centrifugados a 200 x G por 2 minutos. O sobrenadante é

145 descartado e a fase de DCM é evaporada até a secura sob aquecimento suave (40°C) e gás de nitrogênio. A DCM seca é reconstituída em 1 ml de acetonitrilazágua 60:40 (v/v) e analisada pela HPLC. A análise de HPLC é realizada usando o sistema Waters HPLC (fase móvel 58:37:5 acetonitrila:água: metanol 1 ml/min, injeção de 20 pL, coluna Cl8 Novapak Waters com detecção a 232 nm).

Exemplo 11b: Em um outro método, o perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro é determinado por um procedimento que compreende contatar o dispositivo com um meio de eluição que compreende etanol (5 %) em que o pH do meio é de cerca de 7,4 e em que o dispositivo é contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C. O meio de eluição contendo o dispositivo é opcionalmente agitado no meio de eluição durante a etapa de contatar. O dispositivo é removido (e/ou o meio de eluição é removido) pelo menos em pontos de tempo designados (por exemplo, 1 h, 3 h, 5 h, 7 h, 1 d e diariamente até 28 d) (por exemplo, 1 semana, 2 semanas e 10 semanas). O meio de eluição é depois ensaiado usando um UV-Vis para a determinação do teor de agente farmacêutico. O meio de eluição é substituído em cada ponto de tempo com meio de eluição fresco para evitar a saturação do meio de eluição. Os padrões de calibração contendo quantidades conhecidas de droga também foram mantidas em meio de eluição para as mesmas durações como as amostras e usadas em cada ponto de tempo para determinar a quantidade de droga eluído neste tempo (em quantidade absoluta e como uma quantidade de eluído acumulativa).

Em um teste, os dispositivos foram testados revestidos usando este método. Nestes experimentos dois polímeros diferentes foram utilizados: Polímero A: -50:50 de PLGA-Grupo final de éster, PM ~19 kD, taxa de degradação ~70 dias; Polímero B: -50:50 de PLGA-Grupo final de Carboxilato, PM ~10 kD, taxa de degradação ~28 dias. Stents metálicos foram revestidos como segue: AS1: (n = 6) Polímero A/Rapamicina/Polímero

146

A/Rapamicina/Polímero A; AS2: (η = 6) Polímero A/Rapamicina/Polímero A/Rapamicina/Polímero B; AS1 (213): (n = 6) Polímero

B/Rapamicina/Polímero B/Rapamicina/Polímero B; ASlb: (n = 6) Polímero A/Rapamicina/Polímero A/Rapamicina/Polímero A; AS2b: (n = 6) Polímero

A/Rapamicina/Polímero A/Rapamicina/Polímero Β. O perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro foi determinado contatando-se cada dispositivo com um meio de eluição que compreende etanol (5 %) em que o pH do meio é de cerca de 7,4 e em que o dispositivo foi contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C. O meio de eluição foi removido do 10 contato com o dispositivo pelo menos em 1 h, 3 h, 5 h, 7 h, 1 d e em pontos de tempo adicionais até 70 dias (Ver as Figuras de 5 a 8). O meio de eluição foi depois ensaiado usando um UV-Vis para a determinação do teor de agente farmacêutico (em quantidade absoluta e quantidade acumulativa de eluído). O meio de eluição foi substituído em cada ponto de tempo com meio de eluição 15 fresco para evitar a saturação do meio de eluição. Padrões de calibração contendo quantidades conhecidas de droga também foram mantidas no meio de eluição para as mesmas durações como a amostras e ensaiadas pela UVVis em cada ponto de tempo para determinar a quantidade de droga eluído neste tempo (em quantidade absoluta e como uma quantidade acumulativa de 20 eluído), comparada a um branco que compreende etanol de grau

Espectroscópico. Perfis de eluição como mostrados nas Figuras 5 a 8, mostrando a quantidade média de rapamicina eluída em cada ponto de tempo (média de todas os stents testados) em microgramas. A Tabela 2 mostra para cada conjunto de stents (n = 6) em cada grupo (AS1, AS2, AS(213), ASlb, 25 AS2b), a quantidade média de rapamicina em pg carregada nos stents, a quantidade média de polímero em pg carregada nos stents e a quantidade total de rapamicina e polímero em pg carregada nos stents.

Tabela 2

Revestimento de Stent

Rapamicina Média, pg

Polímero Médio, pg

Massa Total Média, pg

147

AS1	175	603	778
AS2	153	717	870
AS1(213)	224	737	961
ASlb	171	322	493
AS2b	167	380	547

Exemplo 11c: Em um outro método, o perfil de eluição do agente farmacêutico in vitro é determinado por um procedimento que compreende contatar o dispositivo com um meio de eluição que compreende etanol (20 %) e solução salina tamponada com fosfato (80 %) em que o pH do meio é de cerca de 7,4 e em que o dispositivo é contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C. O meio de eluição contendo o dispositivo é opcionalmente agitado no meio de eluição durante a etapa de contatar. O dispositivo é removido (e/ou o meio de eluição é removido) pelo menos em pontos de tempo designados (por exemplo, 1 h, 3 h, 5 h, 7 h, 1 d e diariamente até 28 d) (por exemplo, 1 semana, 2 semanas e 10 semanas). O meio de eluição é substituído periodicamente (pelo menos em cada ponto de tempo, e/ou diariamente entre pontos de tempo posteriores) para prevenir a saturação; os médios coletados são reunidos juntos para cada ponto de tempo. O meio de eluição é depois ensaiado quanto à determinação do teor de agente farmacêutico usando HPLC. O meio de eluição é substituído em cada ponto de tempo com meio de eluição fresco para evitar a saturação do meio de eluição. Padrões de calibração contendo quantidades conhecidas de droga também são mantidos em meio de eluição para as mesmas durações como as amostras e usados em cada ponto de tempo para determinar a quantidade de droga eluído neste tempo (em quantidade absoluta e como uma quantidade acumulativa de eluído). Onde o método de eluição muda a droga com o tempo, resultando em picos múltiplos presentes para a droga quando testado, o uso destes padrões de calibração também mostraram esta mudança e permitir adicionar todos os picos para dar a quantidade de droga eluído neste período de tempo (em quantidade absoluta e como uma quantidade acumulativa eluída).

148

Em um teste, dispositivos (η = 9, stents revestidos laminados) como aqui descritos foram revestidos e testados usando este método. Nestes experimentos um único polímero foi utilizado: Polímero A: 50:50 PLGAGrupo final de éster, PM ~19 kD. Os stents de metal (aço inoxidável) foram 5 revestidas como segue: Polímero A/Rapamicina/Polímero

A/Rapamicina/Polímero A e a quantidade média de rapamicina em cada stent foi de 162 pg (desvio padrão 27 pg). Os stents revestidos foram contatados com um meio de eluição (5,00 ml) que compreende etanol (20 %) e solução salina tamponada com fosfato em que o pH do meio é de cerca de 7,4 10 (ajustado com solução de carbonato de potássio -1 g/100 ml de água destilada) e em que o dispositivo é contatado com o meio de eluição em uma temperatura de cerca de 37°C +/-0,2°C. O meio de eluição contendo o dispositivo foi agitado no meio de eluição durante a etapa de contatar. O meio de eluição foi removido pelo menos em pontos de tempo de 1 h, 3 h, 5 h, 7 h, 15 Ide diariamente até 28 d. O meio de eluição foi ensaiado quanto a determinação do teor de agente farmacêutico (rapamicina) usando HPLC. O meio de eluição foi substituído em cada ponto de tempo com meio de eluição fresco para evitar a saturação do meio de eluição. Padrões de calibração contendo quantidades conhecidas de droga também foram mantidas no meio 20 de eluição para as mesmas durações como as amostras e ensaiadas em cada ponto de tempo para determinar a quantidade de droga eluído neste tempo (em quantidade absoluta e como uma quantidade acumulativa de eluído). Os picos múltiplos presentes para a rapamicina (também presentes nos padrões de calibração) foram adicionados para dar a quantidade de droga eluído neste 25 período de tempo (em quantidade absoluta e como uma quantidade acumulativa de eluído). A análise de HPLC é realizada usando sistema de HPLC Waters, montada e conduzida em cada amostra como fornecido na Tabela 3 abaixo usando um volume de injeção de 100 μΐ.

Tabela 3

Ponto de

% Acetonitrila

% de Acetato de Amônio

Taxa de

149

tempo (minutos)		(0,5 %), pH 7,4	Fluxo (ml/min)
0,00	10	90	1,2
1,00	10	90	1,2
12,5	95	5	1,2
13,5	100	0	1,2
14,0	100	0	3
16,0	100	0	3
17,0	10	90	2
20,0	10	90	0

Os perfis de eluição da Figura 9 resultaram, mostrando a quantidade média acumulativa de rapamicina eluído em cada ponto de tempo (média de n = 9 stents testados) em microgramas. A Figura 10 também expressa o mesmo perfil de eluição, colocado em gráfico em uma escala logarítmica (o eixo x é log(tempo)).

Exemplo lld: Para obter um perfil de eluição in vitro acelerado, um tampão de eluição acelerado que compreende 18 % v/v de uma solução de estoque de 0,067 mol/L de KH2PO e 82 % v/v de uma solução de estoque de 0,067 mol/L de Na2HPO4 com um pH de 7,4 é usado. Os stents aqui descritos são expandidos e depois colocados em 1,5 ml de solução desta eluição acelerada em um banho de 70°C com rotação a 70 rpm. As soluções são depois coletadas nos seguintes pontos de tempo: 0 min., 15 min., 30 min., 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 16 horas, 20 horas, 24 horas, 30 horas, 36 horas e 48 horas. Tampão de eluição acelerado fresco é adicionado periodicamente pelo menos em cada ponto de tempo para substituir os tampões incubados que são coletados e preservados de modo a prevenir a saturação. Para os pontos de tempo onde meio de eluição múltiplo é usado (renovados entre pontos de tempo), as soluções coletadas múltiplas são reunidas juntas para a extração líquida pelo diclorometano. A extração com diclorometano e análise de HPLC são realizadas na maneira anteriormente descrita.

In vivo

Exemplo lie: Modelos in vivo de coelho como descritos acima

150 são eutanizados em pontos de tempo múltiplos. Os stents são explantados dos coelhos. Os stents explantados são colocados em tubos de teste de 16 ml e 15 ml de PBS a 10 mM (pH 7,4) são pipetados no topo. Um ml de DCM é adicionado ao tampão e os tubos são tampados e agitados por um minuto e depois centrifugados a 200 x G por 2 minutos. O sobrenadante é descartado e a fase de DCM é evaporada até a secura sob aquecimento suave (40°C) e gás nitrogênio. O DCM seco é reconstituído em 1 ml de acetonitrila:água 60:40 (v/v) e analisado pela HPLC. A análise de HPLC é realizada usando o sistema de HPLC Waters (fase móvel 58:37:5 acetonitrila:água:metanol 1 ml/min, 20 μΐ de injeção, coluna Cl8 Novapak Waters com detecção a 232 nm).

Exemplo 12: Determinação da Conformabilidade (Conformalidade) de um Revestimento de Dispositivo

A capacidade para revestir uniformemente stents arteriais com composição e espessura controladas usando captura eletrostática em uma expansão rápida de solução supercrítica (RESS) séries experimentais foram demonstradas.

Microscopia de Eletrônica por varredura (SEM)

Os stents são observados pela SEM usando um Hitachi S-4800 com uma voltagem de aceleração de 800 V. Várias ampliações são usadas para avaliar a integridade, especialmente em regiões de alta tensão. SEM pode fornecer imagens de cima para baixo e em seção transversal em várias ampliações. A uniformidade e espessura de revestimento também podem ser ensaiadas usando esta técnica analítica.

Stents de pré- e pós-expansões são observados pela SEM usando um Hitachi S-4800 com uma voltagem de aceleração de 800V. Várias ampliações são usadas para avaliar a integridade das camadas, especialmente em regiões de alta tensão.

Microscopia Eletrônica por varredura (SEM) com Feixe de íon Focalizado (FIB) Os stents como aqui descritos e ou produzidos pelos

151 métodos aqui descritos são visualizadas usando a análise SEM-FIB. Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método. O feixe de íon focalizado FIB é uma ferramenta que permite secionamento específico de sítio preciso, moagem e depósito de materiais. FIB pode ser usada em conjunção com SEM, em condições ambientes ou crio, para produzir secionamento in situ seguido pela formação de imagem em alta resolução. Imagens FIB em corte transversal podem ser adquiridos, por exemplo, na ampliação de 7000x e/ou 20000x. Um revestimento uniforme de espessura compatível é visível.

Microscopia Ótica

Um microscópio ótico pode ser usado para criar e inspecionar os stents e para empiricamente analisar o revestimento do substrato (por exemplo, uniformidade de revestimento). Nanopartículas da droga e/ou do polímero podem ser observadas nas superfícies do substrato usando este método analítico. A seguir da sinterização, os revestimentos podem ser observados usando este método para visualizar a conformabilidade do revestimento e quanto à evidência de cristalinidade da droga.

Exemplo 13: Determinação do Teor Total do Agente Ativo

A determinação do teor total do agente ativo em um stent revestido pode ser testada usando técnicas aqui descritas assim como outras técnicas óbvias a uma pessoa de habilidade na técnica, por exemplo usando técnicas de GPC e HPLC para extrair a droga do stent revestido e determinar o teor total de droga na amostra.

UV-VIS pode ser usado para determinar quantitativamente a massa de rapamicina revestida sobre os stents. Um espectro UV-Vis de

Rapamicina pode ser mostrado e uma curva de calibração de Rapamicina pode ser obtida, (por exemplo, λ @ 277 nm em etanol). A Rapamicina é depois dissolvida do stent revestido em etanol e a concentração e massa de droga calculadas.

152

Em um teste, a quantidade total de rapamicina presente em unidades de microgramas por stent é determinada pela cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa com detecção UV (RP-HPLC-UV). A análise é realizada com modificações dos métodos de HPLC com base na literatura para rapamicina que seriam óbvias para uma pessoa de habilidade na técnica. O teor de droga médio das amostras (n = 10) dos dispositivos que compreendem stents e revestimentos como aqui descritos, e/ou métodos aqui descritos é testado.

Exemplo 14: Determinação do Grau de Agregação de um Agente Ativo Espectroscopia de Raman

A Microscopia de Raman Confocal pode ser usada para caracterizar a agregação de droga pelo mapeamento na direção x-y ou x-z. Adicionalmente amostras de seção transversal podem ser analisadas. A Espectroscopia de Raman e outras técnicas analíticas tais como descritas em Balss, et al., “Quantitative spatial distribution of sirolimus and polymers in drug elution stents usando confocal Raman microscopy” J. of Biomedical Materials Research Parte A, 258-270 (2007), aqui incorporado na sua totalidade por referência, e/ou descritos em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coating Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência podem ser usadas.

Uma amostra (um stent revestido) é preparada como aqui descrita. Imagens são tomadas do revestimento usando a Espectroscopia de Raman. Altemativamente, uma platina revestida pode ser testada neste método. Um Microscópio de Raman confocal por varredura WITec CRM 200 usando um laser de NiYAG a 532 nm é aplicado no modo de formação de imagem de Raman. A amostra é colocada em uma mesa piezoeletricamente acionada, a luz do laser é focalizada na amostra usando uma objetiva seca lOOx (abertura numérica de 0,90) e o ponto de laser finamente focalizado é

153 escaneado na amostra. Conforme o laser escaneia a amostra, em cada intervalo de 0,33 micron um espectro de Raman com sinal para ruído alto é coletado usando 0,3 segundos de tempo de integração. Cada imagem de seção transversal confocal dos revestimentos demonstra uma região de 70 pm de largura por 10 pm de profundidade e os resultados do ajuntamento de 6300 espectros com um tempo de formação de imagem total de 32 min. Para desconvoluir os espectros e obter imagens separadas do agente ativo e do polímero, todos os dados espectrais (6300 espectros na região espectral inteira 500 a 3500 cm'¹) são processados usando um algoritmo dos quadrados mínimos clássicos aumentados (Eigenvector Research, Wenatchee WA) usando espectros de base obtidos das amostras de rapamicina (amorfo e cristalino) e polímero. Para cada amostra, várias áreas são medidas pelo Raman para garantir que os resultados sejam reprodutíveis e para mostrar a formação de camada de droga e polímero através do revestimento. A Espectroscopia de Raman Confocal pode traçar o perfil micron por micron, pode mostrar a composição do revestimento através da espessura do revestimento.

Espectrômetros de Massa de íon Secundário e Tempo de Vôo

TOF-SIMS podem ser usados para determinar a agregação de droga nos 1 a 2 nm externos da superfície de amostra quando operado sob condições estáticas. A técnica pode ser operada no modo de espectroscopia ou formação de imagem em alta resolução espacial. Amostras de seção transversal adicionalmente podem ser analisadas. Quando operadas sob condições experimentais dinâmicas, conhecidas na técnica, a caracterização química de perfil de profundidade pode ser obtida.

Por exemplo, sob condições estáticas (por exemplo um ToFSIMS IV (lonToF, Munster)) usando uma fonte de íon primário de Bi* de

25Kv mantida abaixo de 10 íons por cm é usada. Onde necessário uma pistola de fluxo de elétron de baixa energia (0,6 nA DC) é usada para

154 compensar a carga de amostras isolantes.

A Espectroscopia de Massa de íon Secundário em Grupo, pode ser utilizada como descrito em Belu et al., “Three-Dimensional Compositional Analysis of Drug Eluting Stent Coatings Using Cluster Secondary Ion Mass Spectroscopy” Anal. Chem. 80: 624-632 (2008) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

Um stent como aqui descrito é obtido. O stent é preparado para a análise de SIMS cortando-a longitudinalmente e abrindo-a com pinças. O stent é depois prensado em camadas múltiplas de folha de irídio com o diâmetro externo voltado para fora.

Por exemplo experimentos de TOF-SIMS são realizados em um instrumento Ιοη-TOF IV equipado com fontes de grupo de feixe de íon primário tanto de Bi quanto de SFS+. O perfil de profundidade de ejeção é realizado no modo de feixe duplo. A fonte de análise é uma fonte de íon de grupo do bismuto de 25 keV pulsada, que bombardeou a superfície em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. A corrente alvo é mantida a ~0,3 pÂ (+10 %) de corrente pulsada com um tamanho de raster de 200 um x 200 um para todos os experimentos. Os íons secundários tanto positivos quanto negativos são extraídos da amostra em um espectrômetro de massa de tempo de vôo tipo reflectron. Os íons secundários são depois detectados por um detector de placa de microcanal com uma energia de pós aceleração de 10 kV. Uma pistola de fluxo de elétron de energia baixa é utilizada para a neutralização de carga no modo de análise.

A fonte de ejeção usada é uma fonte de grupo de SFS+ de 5 keV também operada em um ângulo incidente de 45° em relação à normal da superfície. Para amostras de modelo fino no de Si, a corrente de SFS+ é mantida a ~2,7 nÂ com um raster de 750 um x 750 um. Para as amostras espessas sobre platinas e para as amostras sobre os stents, a corrente é mantida em 6 nÂ com um raster de 500 um x 500 um. Todas as correntes de

155 feixe primárias são medidas com um copo de Faraday tanto antes quanto depois do perfil de profundidade.

Todos os perfis de profundidade são adquiridos no modo não integrado com uma pausa de 5 ms entre ejeção e análise. Cada espectro é calculado em média em um período de tempo de 7,37 segundos. A análise é imediatamente seguida por 15 segundos de ejeção de SFS+. Para os perfis de profundidade da superfície e regiões de subsuperfície apenas, o tempo de ejeção foi diminuído para 1 segundo para o agente ativo de 5 % de amostra e 2 segundos tanto para as amostras de 25 % quanto de 50 % de agente ativo.

Os perfis de profundidade controlados em temperatura são obtidos usando uma platina de temperatura variável com controlador de temperatura da Eurotherm Controls e software IPSG V3,08. As amostras são primeiro colocadas na câmara de análise na temperatura ambiente. As amostras são levadas à temperatura desejada sob condições de vácuo ultra altas e são deixadas estabilizar por 1 minuto antes da análise. Todos os experimentos de perfil de profundidade são realizados a -100C e 25C. Microscopia de força atômica (AFM)

AFM é uma técnica de caracterização de superfície de alta resolução. AFM é usada na técnica para fornecer formação de imagem topográfica, além disso, quando utilizada no Tapping Mode® pode formar imagem de material e ou propriedades químicas por exemplo formar imagem de droga em um estado agregado. Adicionalmente as amostras de seção transversal podem ser analisadas.

Um stent como aqui descrito é obtido. AFM pode ser utilizada como descrito em Ranade et al., “Physical characterization of controlled release of paclitaxel from the TAXUS Express2 drug elution stent” J.

Biomed. Mater. Res. 71(4): 625 a 634 (2004) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

As morfologias de polímero e droga, composição de

156 revestimento, pelo menos podem ser determinadas usando a análise de microscopia de força atômica (AFM). Uma AFM de modo múltiplo (Digital Instruments/Veeco Metrology, Santa Barbara, CA) controlada com aparelhos eletrônicos Nanoscope Illa e NanoScope Extender é usada. A formação de imagem em AFM TappingMode® pode ser usada para mostrar a topografia (uma projeção em espaço real da microestrutura da superfície do revestimento) e mudanças de ângulo de fase da AFM na área de amostra para contrastar diferenças nas propriedades dos materiais.

Exemplo 15: Determinação da Concentração Sanguínea de um Agente Ativo

Este ensaio pode ser usado para demonstrar a eficácia relativa de um composto terapêutico liberado de um dispositivo da invenção para não entrar na corrente sanguínea e pode ser usado em conjunção com um ensaio de penetração de droga (tal como é descrito na PCI7US2006/010700, aqui incorporado na sua totalidade por referência). Em pontos de tempo predeterminados (por exemplo, 1 d, 7 d, 14 d, 21 d e 28 d ou por exemplo, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 2 d, 3 d, 5 d, 7 d, 8 d, 14 d, 28 d, 30 d e 60 d), as amostras de sangue dos pacientes que têm dispositivos que foram implantados são coletadas por qualquer método aceito na técnica, incluindo venipuntura. As concentrações sanguíneas dos compostos terapêuticos carregados são determinadas usando qualquer método aceito na técnica de detecção, incluindo imunoensaio, cromatografia (incluindo método espectrométrico de massa em tandem de HPLC de extração de líquido/líquido (LC-MS/MS) e ensaios de atividade. Ver, por exemplo, Ji, et al., “96-Well liquid-liquid extraction liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the quantitative determination of ABT-578 in human blood samples” Journal of Chromatography B. 805: 67-75 (2004) aqui incorporada na sua totalidade por referência.

Em um teste, as amostras de sangue são coletadas pela

157 venipuntura em tubos de coleta evacuados contendo ácido edítico (EDTA) (n = 4). As concentrações sanguíneas do agente ativo (por exemplo, rapamicina) são determinadas usando um método espectrométrico de massa de passagem em tandem de HPLC de extração de líquido/líquido (LC-MS/MS) validado (Ji et al., et al., 2004). Os dados são calculados em média e plotados com o tempo sobre o eixo x e a concentração sanguínea da droga é representada no eixo dos y em ng/ml.

Exemplo 16. Preparação de solução supercrítica que compreende poliíácido láctico-co-glicólico) (PLGA) em hexafluropropano.

Uma célula de visualização na temperatura ambiente (sem nenhum calor aplicado) é pressurizado com 1,1,1,2,3,3-Hexafluoro-propano filtrado até que ela esteja cheia e a pressão atinja 4500 psi (3450 kPa). Poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) é adicionado à célula para uma concentração final de 2 mg/ml. O polímero é agitado para dissolver por uma hora. O polímero é totalmente dissolvido quando a solução é clara e não exista nenhum sólido sobre as paredes ou janelas da célula.

Exemplo 17. Revestimento de rapamicina em pós seco em uma platina de metal de como cobalto L605 eletricamente carregada.

Uma platina de metal de como cobalto L605 de 1 cm x 2 cm que serve como um substrato alvo para o revestimento de rapamicina é colocada em um vaso e ligada a um elétrodo de alta voltagem. Altemativamente, o substrato pode ser um stent ou um outro dispositivo biomédico como aqui descrito, por exemplo. O vaso (V), de aproximadamente 1500 cm de volume, é equipado com dois bocais separados através dos quais a rapamicina ou polímeros podem ser seletivamente introduzidos no vaso. Ambos os bocais são aterrados. Adicionalmente, o vaso (V) é equipado com um orifício separado foi disponível para a purga do vaso. A montante de um bocal (D) está um vaso de pressão pequeno (PV) de aproximadamente 5 cm³ em volume com três

158 orifícios a serem usados como entradas e saídas. Cada orifício é equipado com uma válvula que pode ser atuada aberta ou fechada. Um orifício, o orifício (1) usado como uma entrada, é um orifício de adição para a rapamicina em pó seco. O orifício (2), também uma entrada é usado para o gás, líquido ou fluido supercrítico pressurizados alimentados no PV. O orifício (3), usado como uma saída, é usado para conectar o vaso de pressão (PV) com o bocal (D) contido no vaso primário (V) com a platina alvo.

Rapamicina em pó seco obtida do LC Laboratories em um estado sólido predominantemente cristalino, 50 mg moídos a um tamanho de partícula médio de aproximadamente 3 microns, é carregada no (PV) através do orifício (1) depois que o orifício (1) é atuado para a posição fechada. A platina de metal é depois carregada a +7,5 kV usando uma fonte de energia de alta voltagem Glassman Series EL. O bocal de droga no orifício tem uma voltagem ajustada de -7,5 kV. Depois de aproximadamente 60 segundos, a droga é injetada e a voltagem é eliminada. Na inspeção visual da platina usando um microscópio ótico, a área de superfície inteira da platina é examinada quanto à distribuição relativamente uniforme de material em pó. A difração de raio X (XRD) é realizada como aqui descrita para confirmar que o material em pó é amplamente cristalino por natureza como depositado sobre a platina de metal. As espectroscopias de UV-Vis e FTIR são realizadas como aqui descritas para confirmar que o material depositado sobre a platina é rapamicina.

Exemplo 18. Revestimento de polímero em uma platina L605 eletricamente carregada usando a expansão rápida de um gás liquefeito.

Um aparelho de revestimento como descrito no exemplo 17 acima é usado no exemplo precedente. Neste exemplo o segundo bocal, (P), é usado para partículas poliméricas precipitadas alimentadas no vaso (V) para revestir uma platina L605. Altemativamente, o substrato pode ser um stent ou um outro dispositivo biomédico como aqui descrito, por exemplo. O bocal (P)

159 é equipado com um aquecedor e controlador para minimizar a perda de calor devido à expansão de gases liquefeitos. A montante do bocal (P) está uma pressão vaso, (PV2), com aproximadamente 25 cm³ de volume interno. O vaso de pressão (PV2) é equipado com orifícios múltiplos a serem usados para entradas, saídas, termopares e transdutores de pressão. Adicionalmente, (PV2) é equipado com um aquecedor e um controlador de temperatura. Cada orifício é conectado às válvulas apropriadas, válvulas de medição, reguladores de pressão ou tampões para garantir o controle adequado de material dentro e fora do vaso de pressão (PV2). Uma saída de (PV2) é conectada a uma válvula de medição através do tubo nominal de pressão que foi depois conectado ao bocal (P) localizado no vaso (V). No experimento, 150 mg de poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) são adicionados ao vaso de pressão (PV2). 1,1,1,2,3,3-hexafluropropano é adicionada ao vaso de pressão (PV2) através de uma válvula de entrada. O vaso de pressão (PV2) é ajustado na temperatura ambiente sem nenhum calor aplicado e a pressão é de 4500 psi (3450 kPa). O bocal (P) é aquecido a 150°C. Uma platina de L605 de 1 cm x 2 cm é colocada dentro do vaso (V), ligada a um condutor elétrico e aquecida por intermédio de um bloco térmico a 110°C. O bocal (P) é ligado à terra. A voltagem é ajustada no bocal de pulverização de polímero e um béquer de emissor=par para se obter uma corrente maior do que ou igual a 0,02 mAmps usando uma fonte de energia de alta voltagem de Glassman ponto no qual a válvula de medição é aberta entre (PV2) e bocal (P) no vaso de pressão (PV). O polímero dissolvido no gás liquefeito e é alimentado a uma pressão constante de 200 psig (320 kPa) no vaso (V) mantido na pressão atmosférica através do bocal (P) em uma taxa aproximada de 3,0 cm³/min. Depois de aproximadamente 5 segundos, a válvula de medição é fechada descontinuando a alimentação de polímero-solvente. O vaso (V) é gás nitrogênio por 30 segundos para deslocar o fluorocarbono. Depois de aproximadamente 30 segundos, a válvula de medição é mais uma vez aberta

160 por um período de aproximadamente 5 segundos e depois fechada. Este ciclo é repetido cerca de 4 vezes. Depois de um adicional de 1 minuto da voltagem aplicada à platina foi descontinuado e a platina foi removida do vaso de pressão (V). Na inspeção pelo microscópio ótico, um revestimento de polímero é examinado quanto a distribuição uniforme sobre todas as superfícies não mascaradas da platina.

Exemplo 19. Revestimento duplo de uma platina de metal com rapamicina cristalina e poli (ácido láctico-co-glicólico) (PLGA).

Um aparelho descrito no exemplo 17 e descrito ainda no exemplo 18 é usado no exemplo precedente. Na preparação para o experimento de revestimento, 25 mg de rapamicina em pó cristalina com um tamanho de partícula médio de 3 microns são adicionados ao (PV) através do orifício (1), depois o orifício (1) foi fechado. Em seguida, 150 mg de poli(ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) são adicionados ao vaso de pressão (PV2). 1,1,1,2,3,3-hexafluropropano é adicionado ao vaso de pressão (PV2) através de uma válvula de entrada. O vaso de pressão (PV2) é mantido na temperatura ambiente sem nenhum calor aplicado com a pressão dentro do vaso isolado (PV2) aproximadamente 4500 psi (3450 kPa). O bocal (P) é aquecido a 150°C. Uma platina de L605 de 1 cm x 2 cm é adicionada ao vaso (V) e conectada a um condutor de energia de alta voltagem. Ambos os bocais (D) e (P) são aterrados. Para começar, a platina é carregada a +7,5 kV depois do que o orifício (3) que conecta (PV) contendo rapamicina ao bocal (D) carregado a -7,5 kV é aberto permitindo a ejeção de rapamicina dentro do vaso (V) mantido na pressão ambiente. Altemativamente, o substrato pode ser um stent ou um outro dispositivo biomédico como aqui descrito, por exemplo. Depois de fechar o orifício (3) e aproximadamente 60 segundos, a válvula de medição que conecta (PV2) com o bocal (P) dentro do vaso (V) é aberta permitindo a expansão de gás liquefeito para uma fase gasosa e introdução de partículas poliméricas precipitadas dentro do vaso (V) enquanto se mantém o

161 vaso (V) na pressão ambiente. Depois de aproximadamente 15 segundos em uma taxa de alimentação de aproximadamente 3 cm³/min., a válvula de medição é fechada enquanto a platina permaneceu carregada. A adição sequencial de droga seguido pelo polímero como descrito acima é opcionalmente repetida para aumentar o número de camadas de drogapolímero depois do que o potencial aplicado é removido da platina e a platina foi removida do vaso. A platina é depois examinada usando um microscópio ótico para determinar se um revestimento compatível é visível sobre todas as superfícies da platina exceto onde a platina foi mascarada pelo condutor elétrico.

Exemplo 20, Revestimento duplo de uma platina de metal com rapamicina cristalina e poliíácido láctico-co-glicólico) (PLGA) seguida pela Sinterização de Hexafluropropano Supercrítico.

Depois da inspeção da platina criada no exemplo 19, a platina revestida (ou outro substrato revestido, por exemplo, stent revestido) é cuidadosamente colocada em um vaso de sinterização que está em uma temperatura de 75°C. 1,1,1,2,3,3-hexafluropropano em um vaso separado a 75 psi (518 kPa) é lentamente adicionado à câmara de sinterização para se obter uma pressão de 23 a 27 psi (159 a 186 kPa). Este processo de sinterização com hexafluropropano é feito para realçar as propriedades físicas da película sobre a platina. A platina permanece no vaso sob estas condições por aproximadamente 10 min depois que o hexafluropropano supercrítico é lentamente ventilado do vaso de pressão e depois a platina foi removida e reexaminada sob um microscópio óptico. O revestimento é observado nas propriedades conformai, compatível e semi-transparente como oposto ao revestimento observado e relatado no exemplo 19 sem tratamento com hexafluropropano denso. A platina revestida é depois submetida à análise de difração de raio x (XRD), por exemplo, como aqui descrito para confirmar a presença de rapamicina cristalina no polímero.

162

Exemplo 21. Revestimento de um stent cardiovascular metálico com rapamicina cristalina e polifácido láctico-co-glicólico) (PLGA)

O aparelho descrito nos exemplos 17, 18 e 20 é usado no exemplo precedente. O stent de metal usada é fabricado de liga de cobaltocromo de um tamanho nominal de 18 mm no comprimento com suportes de 63 microns na medição de espessura de uma superfície abluminal para uma superfície luminal ou medição de uma parede lateral para uma parede lateral. O stent é revestido em uma maneira alternada por meio da qual a primeira camada de revestimento de droga é seguida por uma camada de polímero. Estas duas etapas, chamadas de um ciclo de droga/polímero, são repetidas duas vezes de modo que haja seis camadas em uma orientação de drogapolímero-droga-polímero-droga-polímero. Depois da conclusão de cada etapa de revestimento de polímero e antes da aplicação da etapa de revestimento de droga seguinte, o stent é primeiro removida do vaso (V) e colocada em um vaso de pressão pequeno onde é exposta ao hexafluropropano supercrítico como descrito acima no exemplo 20.

Exemplo 22. Revestimento em camada de um stent cardiovascular com um produto terapêutico anti-restenose e polímero em camadas para controlar as características de eluição de droga.

Um stent cardiovascular é revestido usando os métodos descritos nos exemplos 10 e 11 acima. O stent é revestido em tal modo que a droga e polímero estão em camadas alternadas. A primeira aplicação ao stent nu é uma camada fina de um polímero não reabsorvedor, de aproximadamente 2 microns de espessura. A segunda camada é um agente terapêutico com indicação anti-restenose. Aproximadamente 35 microgramas são adicionados nesta segunda camada. Uma terceira camada de polímero é adicionada a aproximadamente 2 microns de espessura, seguida por uma quarta camada de droga que é composta de cerca de 25 microgramas do agente anti-restenose. Uma quinta camada polimérica, de aproximadamente 1 micron de espessura é

163 adicionada ao stent, seguida pela sexta camada que inclui o agente terapêutico de aproximadamente 15 microgramas. Finalmente, uma camada polimérica final é adicionada a uma espessura de cerca de 2 microns. Depois do procedimento de revestimento, o stent é recozido usando dióxido de carbono como descrito no exemplo 16 acima. Neste exemplo um stent de eluição de droga (DES) é descrito com propriedades de “erupção” de droga inicial baixa em virtude de uma processo de “cobertura de droga sequestrado”, não possível em processos de revestimento com base em solvente convencional. Adicionalmente, em virtude de uma concentração mais alta de droga na ‘intercamada’ do stent o perfil de eluição é esperado atingir como liberação terapêutica prolongada em um período de tempo mais longo.

Exemplo 23. Revestimento em camada de um stent cardiovascular com um produto terapêutico anti-restenose e um produto terapêutico anti-trombótico em um polímero.

Um stent cardiovascular é revestido como descrito no exemplo 11 acima. Neste exemplo, depois de uma primeira camada polimérica de aproximadamente 2 microns de espessura, uma droga com indicação antitrombótica é adicionada em uma camada de menos do que 2 microns em espessura. Uma terceira camada consistindo do polímero não reabsorvedor é adicionada a uma espessura de cerca de 4 microns. Em seguida uma outra camada de droga é adicionada, um produto terapêutico diferente, com uma indicação anti-restenose. Esta camada contém aproximadamente 100 microgramas do agente anti-restenose. Finalmente, uma camada polimérica de aproximadamente 2 microns em espessura é adicionada ao stent. Depois do que o revestimento do stent é tratado como descrito no exemplo 20 para a sinterização do revestimento usando hexafluropropano.

Exemplo 24. Revestimento de stent com Rapamicina e polifácido láctico-coglicólico) (PLGA)

A Rapamicina micronizada é adquirida da LC Laboratories.

164

50:50 PLGA (PM — —90) são adquiridos da Aldrich Chemicals. Stents de CoCr Eurocor (7 células) são usados. Os stents são revestidos pela captura eletrostática seca seguida pela sinterização de fluido supercrítico, usando 3 stents/revestimento conduzidos e 3 conjuntos de rodada/dados. A análise dos stents revestidos é realizada pelas técnicas múltiplas tanto em stents quanto em platinas com experimentos de controle relevantes aqui descritos.

Neste exemplo, PLGA é dissolvido em 1,1,1,2,3,3Hexafluoropropano com as seguintes condições: a) temperatura ambiente, sem nenhum calor aplicado; b) 4500 psi (3450 kPa); e c) a 2 mg/ml de concentração. A linha de pulverização é ajustada a 4500 psi (3450 kPa), 150°C e temperatura de bocal a 150°C. O solvente (Hexafluoropropano) é rapidamente vaporizado quando sai do bocal (a 150°C). Uma voltagem negativa é ajustada no bocal de pulverização de polímero para se obter uma corrente de mais do que ou igual a 0,02 mAmps. O stent é carregado e o polímero é pulverizado por 15 segundos para criar um primeiro revestimento de polímero.

O stent é depois transferido a uma câmara de sinterização que está a 75°C. O solvente, neste exemplo 1,1,2,3,3-hexafluropropano, lentamente entra na câmara de sinterização para criar uma pressão de 23 a 27 psi (159 a 186 kPa). Os stents são sinterizados nesta pressão por 10 minutos.

11,5 mg de Rapamicina são carregados no orifício de injeção de droga. A pressão de injeção é ajustada a 280 psi (1932 kPa) com +7,5 kV para o suporte do stent e -7,5 kV para o bocal de injeção de droga. Depois que a voltagem é ajustada por 60 s, a droga é injetado dentro da câmara para criar um primeiro revestimento de droga.

Um segundo revestimento de polímero é aplicado com duas pulverizações de 15 segundos de polímero dissolvido com as condições de revestimento do primeiro polímero acima. O segundo revestimento é também subsequentemente sinterizado da mesma maneira.

165

Um segundo revestimento de droga é aplicado com os mesmos parâmetros como o primeiro revestimento de droga. Por último, a camada polimérica externa é aplicada com três pulverizações de 15 segundos de polímero dissolvido com as condições de revestimento de polímero acima e subsequentemente sinterizado.

Exemplo 25. Histologia de modelos de stent porcina in vivo e preparação para estudos farmacocinéticos

O stent coronário foi aplicada aos modelos de animal porcino como descrito anteriormente. Uma angiografia foi realizada em cada animal antes da eutanásia. Depois da angiografia pré-necrópsia, cada animal foi eutanizado por intermédio de uma dose excessiva de solução de eutanásia ou solução de cloreto de potássio, IV de acordo com o Procedimento Operacional Padrão da Instalação de Teste e foi realizadas de acordo com a “AVMA Guidelines on Euthanasia” da American Veterinary Medical Association aceita (Junho de 2007; acessado em http: /./www.avma.org/issues/animal welfare/euthansia.pdf).

Uma necropsia limitada consistindo de exame do coração foi realizada em todos os animais. As observações das descobertas macroscópicas foram registradas. Qualquer evidência de descobertas macroscópicas, foram processadas para a exame histológico. Independentemente, todos os corações foram coletados para o processamento e avaliação histológicos.

Os corações foram fixados por perfusão a -100 mmHg com Solução de Ringer Lactada até depurados de sangue seguido por formalina tamponada neutra a 10 % (NBF). Os corações fixados foram colocados em um recipiente cheio de NBF e rotulado como apropriado.

As radiografias de coração integral foram tiradas para documentar a localização e morfologia do stent in situ. Além disso, cada stent explantada foi radiografada em duas vistas (incidências perpendiculares ou ortogonais) ao longo do seu plano longitudinal para ajudar na avaliação da

166 morfologia de expansão, dano e/ou áreas de descontinuidade de stent (por exemplo, fraturas de suporte).

Os vasos com stent fixados foram cuidadosamente dissecados do miocárdio, deixando vaso suficiente tanto proximal quanto distai à porção com stent. A menos que de outro modo estabelecido ou requerido, todos os tecidos/seções foram processados de acordo com os procedimentos de operação padrão CBSET. Em particular, seções transversais de vaso Sem stent foram obtidas dentro de aproximadamente 1 a 3 mm das extremidades proximal e distal do stent (isto é, vaso sem stent) e das regiões proximal, intermediária e distal do vaso sem stent. Todas as seções de vaso foram tingidas com hematoxilina e eosina e uma mancha de elastina de tecido (por exemplo, Verhoeffs).

O miocárdio remanescente foi depois transversalmente secionado (isto é, “pão de forma”) do eixo para a base (~1 cm separadamente) para avaliação adicional quanto a evidência de reações adversas (por exemplo, infartação). Se descobertas grosseiras foram presentes elas foram coletadas e processadas para microscopia de luz. O tecido miocárdico remanescente foi armazenado até a finalização do estudo tempo no qual, o mesmo foi descartado de acordo com os procedimentos de operação padrão da Instalação de Teste, enviado para o Patrocinador ou arquivado por requisição e às custas do Patrocinador.

A análise morfométrica quantitativa foi realizada nas seções histológicas de cada artéria com stent. Para cada seção histológica, os parâmetros listados na Tabela 4 foram diretamente medidos usando microscopia de luz padrão e sistemas de medição de imagem auxiliados por computador.

Tabela 4

Parâmetros de Morfometria

Parâmetro	Abreviação	Cálculo	Unidade
Área de Lúmen	La	Diretamente medidos	mm²

167

Camada Elástica Interna (IEL) Área Ligada	IEL_a	diretamente medidos	mm²
Área de Stent	Sa	diretamente medidos	mm²
Camada Elástica Externa (EEL) Área Ligada	EELa	diretamente medidos	mm²

A partir destas medições diretas, todos os outros parâmetros histomorfológicos foram calculados.

Os parâmetros, fórmulas e unidades medidos e calculados de medida são dados na Tabela 5.

Tabela 5

Parâmetros de Morfometria Calculados e Unidades de Medida

Parâmetro	Abreviação	Cálculo	Unidade
Medições de Área
Área Neoíntima	N_a	IELa -L_a	mm²
Área Mediana	M_a	EELa -IELa	mm²
Área de Artéria	A_a	L_a + N_a + M_a	mm²
Medições de Comprimento
Diâmetro do Lúmen	Ld	2 x ^(La/π)	mm
Diâmetro de IEL	IEL_d	2 x L_a + Naj/π	mm
Diâmetro de Stent	s_d	2 x V(Sa/K)	mm
Diâmetro Arterial	Ad	2 x ^(Aa/π)	mm
Razões
Lúmen/Artéria	L:A	L_a/A_a	NA*
Áreas
Áreas da Neoíntima/Média	N:M	Na/M_a	NA
Áreas de EEL/IEL	EEL_a: IEL_a	A_a/(L_a+Na)	NA
Áreas de IEL/Stent	IEL_a: S_a	IELa/Sa	NA
Parâmetros de Restenose
% da Área de Oclusões)	% AO	N_a/(N_a+L_a) X 100 %	%
Espessura da Neoíntima	Νμπι	Nmm x 10000 (pm/mm)	pm
Espessura da Neoíntima	Nmm	(IEL_d-L_d)/2	mm

Histopatologia -Vasos Com stent & Sem stent Adjacentes

Contagem histopatológica por intermédio da microscopia de luz também foi usada para graduar vários parâmetros que refletem o grau e 10 extensão do processo de resposta/reparo de hospedeiro para o tratamento. Estes parâmetros incluíram, mas não foram limitados a, lesão, inflamação,

168 endotelialização e deposição de fibrina. Quando um ponto final microscópico listado abaixo não está/é presente/observado, a contagem 0 foi dada.

A contagem das seções transversais arteriais foi realizada como segue:

A contagem de lesão para segmentos arteriais com stent é dependente daquela porção da parede arterial que é rompida pelo stent e/ou resposta de tecido associada. A lesão foi contada em uma base por suporte e o mediano e a média calculadas por plano (isto é, proximal, intermediário, distal) e stent. A contagem de polímero para lesão em cada suporte é listada na Tabela 6.

Tabela 6

Contagem de lesão por polímero

Contagem	Valor
0	IEL intacto
1	Rompimento de IEL
2	Rompimento de túnica média
3	Rompimento de túnica adventícia

A contagem de inflamação depende do grau de inflamação e extensão de inflamação em uma base por suporte como esboçado na Tabela 7. A inflamação foi contada em uma base por suporte e a média foi calculada por plano e stent.

Tabela 7

Contagem de inflamação por Polímero

Contagem	Valor
0	Ausente
1	Infiltrados celulares dispersos associados com suporte
2	Infiltrados celulares notáveis associados com suporte
3	Infiltrados celulares que circunscrevem o suporte

A contagem de fibrina da neoíntima depende do grau de deposição de fibrina na neoíntima como esboçado na Tabela 8.

169

Tabela 8

Contagem de Fibrina da Neoíntima por Polímero

Contagem	Valor
0	Ausente
1	Localização não frequente de fibrina
2	Deposição mais pesada de fibrina
3	Deposição pesada de fibrina que transpõem entre suportes

A contagem de endotelialização depende do grau da circunferência do lúmen arterial mostrando coberto com células endoteliais como esboçado na Tabela 9.

Tabela 9

Contagem de Endotelialização por Polímero

Contagem	Valor
0	Ausente
1	< 25 %
2	25 % a 75 %
3	> 75 %
4	100 %, confluente

A contagem de fibrose adventícia depende da gravidade da resposta e circunferência da artéria afetada como esboçado na Tabela 10. Tabela 10

Contagem de Fibrose Adventícia por Polímero

Contagem	Observação
0	Ausente
1	Presença mínima de tecido fibroso
2	Tecido fibroso notável em 25 % a 50 % da circunferência das artérias
3	Tecido fibroso notável em > 50 % da circunferência das artérias

A maturação neoíntima depende da celularidade e organização da neoíntima como esboçado na Tabela 11.

Tabela 11

Contagem de Maturação Neoíntima por Polímero

Contagem	Observação
0	Ausente
1	Imaturo, predominantemente tecido vascular de fibrina
2	Transicional, predominantemente organização de músculo liso

170 |3 Maduro, músculo liso organizado generalizado |

A seção histológica da artéria também foi examinada quanto a outros parâmetros histológicos incluindo, mas não limitado a, hemorragia, necrose, fibrose média, tipo e quantidades relativas de infiltrados de célula inflamatória (por exemplo, neutrófilos, histiócitos, linfócitos, células gigantes multinucleadas), mineralização, má justaposição de suporte, trombose e/ou vascularidade neoíntima ou outros como julgado apropriado pelo patologista. A menos que de outro modo estabelecido nos dados/relatos de patologia, descobertas adicionais foram graduadas como segue: 0 = Ausente; 1 — Presente, nas traço mínimo; 2 = traço notável; 3 = Traço devastador.

As seções das porções proximal e distai Sem stents das artérias com stents, foram similarmente avaliadas e contadas quanto aos parâmetros histológicos como acima (excluindo a fibrina neoíntima) mas foram avaliados quanto a histomorfometria.

Um estudo histológico de acordo com a descrição acima foi realizado usando os grupos e stents revestidos (artigos de teste) como mencionado na Tabela 12 que foram revestidas de acordo com os métodos aqui fornecidos, e/ou dispositivos tendo revestimentos como aqui descritos (por exemplo, em AS 1, AS2 ou uma outra combinação de revestimento como aqui descrito) quando comparado a um stent metálico nu de controle (BMS, AS3). Os animais foram porcos Yucatan, que foram administrados com um regime anticoagulação do Dia 1: ASA 650 mg + Plavix 300 mg, manutenção de: ASA 81 mg + Plavix75 e de rotina: ACT -250 s. A classificação excessiva por tamanho foi de ~10 a 20 %.

Tabela 12

Grupo	Artigo de Teste	Número de Dispositivos de Teste	Ponto de tempo de Necrópsia
1	AS1	N = 6	Dia 28
N = 6	Dia 90
2	AS2	N = 6	Dia 28
N = 6	Dia 90
3	AS3 (stent	N = 6	Dia 28

171

metálico nu)

N = 6

Dia 90

Um segundo estudo de histologia também de acordo com a descrição acima foi realizado e comparado com um controle de stent CYPHER. Nestes estudos, AS21, AS23 e AS24 foram testadas juntas com o stent CYPHER. AS21, AS23 e AS24 foram designadas com revestimentos que compreendem Polímero B como descrito acima, com cerca de metade da carga de polímero de AS 1. AS23 e AS24 teve cerca de metade da quantidade de rapamicina como AS1, enquanto que AS21 foi designada com uma carga de rapamicina alvo que foi de cerca da mesma como AS1, como anteriormente descrito.

Os resultados de estudos de histologia realizados de acordo com os métodos descritos acima estão apresentados nas Figuras 12 a 23. As Figuras 12 e 13 representam seções transversais de ampliação baixa de implantes de stent de artéria coronária porcina (AS1, AS2 e Controle de stent metálica nua) em 28 dias e 90 dias após a implantação. As Figuras 14 e 15 mostram depósitos de droga em seções transversais de ampliação baixa de implantes de stent de artéria coronária porcina. A Figura 16 mostra os níveis de sirolimus médios (n = 3 em tecido arterial a seguir da implantação de stent AS1 e Cypher. Os resultados para AS1 apresentados na Figura 16 foram tirados de um estudo separado como os resultados para os stents Cypher apresentados na Figura 16. Ambos os estudos foram realizadas como descritos acima e os dados foram coletados similarmente, entretanto, os dados para os dois estudos foram combinados nesta Figura para ilustrar uma comparação para resultados obtidos para o stent ASI com os resultados obtidos para o stent Cypher em um estudo separado, mas similar. A Figura 17 mostra níveis de sirolimus médios em tecido arterial a seguir de várias implantações de stent. A Figura 18 mostra concentrações de tecido arterial (eixo y) versus o tempo (eixo x) para implantações de stents ASI e AS2 em artérias coronárias suínas expressadas como nível de tecido absoluto (eixo y)

172 versus o tempo (eixo x). A Figura 19 representa níveis de sirolimus médios (n = 3) que permanecem sobre o stent a seguir de várias implantações de stent em artérias coronárias suínas expressados como nível de stent (eixo y) versus tempo (eixo x). a Figura 20 representa níveis de sirolimus médios (n = 3) que permanecem sobre o stent a seguir das implantações de stent AS1 e Cypher em artérias coronárias suínas expressados como nível de stent (eixo y) versus o tempo (eixo x). Os resultados para AS1 apresentados na Figura 20 foram tirados de um estudo separado como os resultados para os stents Cypher apresentadas na Figura 20. Ambos os estudos foram realizados como descrito acima e os dados foram similarmente coletados, entretanto, os dados dos dois estudos foram combinados nesta Figura para mostrar uma comparação de resultados obtidos para stent AS1 e os resultados obtidos para o stent Cypher em um estudo separado, mas similar. A Figura 21 é a Liberação de Sirolimus Fracionária (eixo y) versus tempo (eixo x) em Tecido Arterial para stents AS1 e AS2. A Figura 22 é a concentração sanguínea de sirolimus a seguir do implante de stent único expressada em concentração sanguínea (ng/ml) (eixo y) versus tempo (eixo x). Os porcos foram implantados com stents revestidos como descrito acima. O sangue foi tirado em tempos pré-determinados e ensaiado para determinar a concentração de rapamicina. Os ensaios foram fundamentados na tecnologia conhecida a uma pessoa de habilidade comum na técnica. A Figura 23 mostra a concentração sanguínea média (stent único normalizada) imediatamente após o implante expressada como concentrações sanguíneas (ng/ml) (eixo y) para um stent Cypher e stents tendo revestimentos como aqui descritos (AS21, AS1, AS23, AS24 são dispositivos que compreendem revestimentos como aqui descritos).

O precedente é ilustrativo da presente invenção e não deve ser interpretando como sua limitação. Embora formas de realização da presente invenção tenham sido mostradas e aqui descritas, estará óbvio para aqueles habilitados na técnica que tais formas de realização são fornecidas apenas por

173 via de exemplo. Numerosas variações, mudanças e substituições agora ocorrerão a aqueles habilitados na técnica sem divergir da invenção. Deve ser entendido que várias alternativas para as formas de realização da invenção aqui descritas podem ser utilizadas na prática da invenção. É intencionado que 5 as seguintes reivindicações definam o escopo da invenção e que os métodos e estruturas dentro do escopo destas reivindicações e seus equivalentes seja abrangidos por meio deste.

Claims

1. Dispositivo, caracterizado pelo fato de que compreende

a. um stent; e

b. uma pluralidade de camadas que formam um revestimento laminado sobre o referido stent; em que a referida pluralidade de camadas compreende uma primeira camada de polímero compreendendo um primeiro polímero bioabsorvível, uma segunda camada de polímero compreendendo um segundo polímero bioabsorvível, e uma camada de agente ativo compreendendo um ou mais agentes ativos selecionados de rapamicina, uma pró-droga, um derivado, um análogo, um hidrato, um éster, e um sal do mesmo, em que a referida uma camada compreendendo o referido agente ativo está entre a referida primeira camada de plímero e a referida segunda camada de polímero; em que o agente ativo está na forma cristalina, em que a referida segunda camada de polímero possui um ponto de contato com uma partícula do referido agente ativo na referida camada de agente ativo e a referida segunda camada de polímero possui um ponto de contato com a referida primeira camada de polímero e em que a referida pluralidade de camadas é preparada por múltiplas e sequenciais etapas de revestimento, em que cada uma das referidas camadas de polímero é aplicada através de descarga de uma solução fluída comprimida compreendendo o referido fluído comprimido e o referido polímero sob condições para formar partículas sólidas do referido polímero e depositar as referidas partículas sólidas no referido stent, as partículas ativas são depositadas em forma de pó seco no referido stent, em que para os polímeros e agente ativo um potencial elétrico é mantido entre o referido stent e as partículas, e em que uma etapa de revestimento para um material de polímero inclui uma etapa de sinterização.

2. Dispositivo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cada uma das referidas camadas de polímero é aplicada por descarga de uma solução fluída supercrítica ou quase supercrítica

Petição 870190079382, de 15/08/2019, pág. 10/13 compreendendo um fluído supercrítico ou quase supercrítico e o referido polímero.

3. Dispositivo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido stent possui um eixo longitudinal do stent, e a referida segunda camada de polímero possui uma porção da segunda camada de polímero ao longo do referido eixo longitudinal do stent, em que a referida porção da segunda camada está livre de contato com as partículas do referido agente ativo.

4. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido dispositivo tem uma camada de agente ativo definida por um espaço físico tridimensional ocupado por partículas de cristal do referido agente ativo e o referido espaço físico tridimensional é livre de polímero.

5. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido stent compreende um suporte que tem um comprimento de suporte ao longo do referido eixo longitudinal do stent, em que a referida porção da segunda camada se prolonga ao longo do referido comprimento de suporte.

6. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido stent tem um comprimento de stent ao longo do referido eixo longitudinal de stent e a referida porção da segunda camada se estende ao longo do referido comprimento de stent.

7. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido stent compreende cinco suportes, cada suporte tendo um comprimento de suporte ao longo do referido eixo longitudinal de stent, em que a referida porção da segunda camada se estende ao longo do comprimento do suporte de dois suportes.

8. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido stent compreende cinco suportes, tendo cada

Petição 870190079382, de 15/08/2019, pág. 11/13 suporte um comprimento de suporte ao longo do referido eixo longitudinal do stent, em que a referida porção da segunda camada se estende ao longo do comprimento do suporte de três suportes.

9. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido stent compreende cinco suportes, tendo cada suporte um comprimento de suporte ao longo do referido eixo longitudinal do stent, em que a referida porção da segunda camada se estende ao longo do comprimento do suporte de quatro suportes.

10. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido stent compreende cinco suportes, tendo cada suporte um comprimento de suporte ao longo do referido eixo longitudinal do stent, em que a referida porção da segunda camada se estende ao longo do comprimento do suporte de todos os referidos cinco suportes.

11. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido stent tem um comprimento de stent ao longo do referido eixo longitudinal de stent e a referida porção da segunda camada se estende ao longo do referido comprimento de stent.

12. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido stent tem um comprimento de stent ao longo do referido eixo longitudinal de stent e a referida porção da segunda camada se estende ao longo de 50% do referido comprimento de stent.

13. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido stent tem um comprimento de stent ao longo do referido eixo longitudinal de stent e a referida porção da segunda camada se estende ao longo de 75% do referido comprimento de stent.

14. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido revestimento laminado tem uma espessura total e a referida porção da segunda camada de polímero tem uma espessura de 0,01% a 10% da espessura total do referido revestimento laminado.

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15. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido revestimento laminado tem uma espessura total e a referida porção da segunda camada de polímero horizontal tem uma espessura de 1% a 5% da espessura total do referido revestimento laminado.

16. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido revestimento laminado tem uma espessura total de 5 pm a 50 pm e a referida porção da segunda camada de polímero horizontal tem uma espessura de 0,001 pm a 5 pm.

17. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que em que o referido revestimento laminado tem uma espessura total de 10 a 20 e a referida porção da segunda camada de polímero tem uma espessura de 0,01 pm a 5 pm.

18. Dispositivo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que em que o revestimento em uma superfície abluminal do referido stent tem uma espessura maior do que o revestimento em uma superfie luminal do referido stent.

19. Dispositivo de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que em que uma proporção de revestimento na superfície abluminal para revestimento na superfície luminal do dispositivo é de 80:20.

20. Dispositivo de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que em que uma razão de revestimento na superfície abluminal para revestimento na superfície luminal do dispositivo é 70:30; ou em que uma razão de revestimento na superfície abluminal para revestimento na superfície luminal do dispositivo é 60:40.