BRPI0918268A2 - inibores de cinase e métodos para uso dos mesmos - Google Patents

Abstract

COMPOSTOS DERIVADOS DE PICOLINAMIDA, SUA COMPOSIÇÃO FARMACÊUICA E SEU USO. A presente invenção refere-se a novos compostos, composições e métodos de inibição da atividade de Integração do Pró-vírus de Maloney Quinase (PIM quínase) associada a tumorigênese em um individuo humano ou animal. Em certas modalidades, os compostos e composições são eficazes para inibir a atividade de pelo menos uma PIM quínase. Os novos compostos e composições podem ser usados sejam sozinhos ou em combinação com pelo menos um agente adicional para o tratamento de um distúrbio mediado por serina/treonina quínase ou receptor tirosina quínase, tal como um câncer.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS- TOS DERIVADOS DE PICOLINAMIDA, SUA COMPOSIÇÃO FARMACÊU- TICA E SEU USO". Referência Cruzada a Pedidos Relacionados Este pedido reivindica o benefício sob 35 U.S.C. $119(e) para o pedido provisório U.S. No. de série 61/093.666, arquivado em 02 de setem- bro de 2008, e para o pedido provisório U.S. No. de série 61/225.660, arqui- vado em 15 de julho de 2009, que são incorporados aqui no presente em ! sua totalidade por referência.

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se aos novos compostos e seus tau- tômeros e estereoisômeros, e sais, ésteres, metabólitos ou profármacos dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis, composições dos novos compostos junto com veículos farmaceuticamente aceitáveis, e usos dos novos compos- - 15 tos, sozinhos ou em combinação com pelo menos um agente terapêutico ã adicional, na profilaxia ou no tratamento de câncer. ' ANTECEDENTES Infecção com o retrovírus Maloney e integração de genoma no genoma da célula hospedeira resultam em desenvolvimento de linfomas em camundongos. A integração de Provírus de Maloney Quinase (PIM-Quinase) foi identificada como uma dos proto-oncogenes frequentes, capazes de ser transcripcionalmente ativados por este evento de integração de retrovírus (Cuypers HT et al., "Murine leukemia virus-induced T-cell Iyémphomagenesis: integration of proviruses in a distinct chromosomal region," Cell 37(1):141-50 (1984); SeltenG, etal, "Proviral activation of the putative oncogene Pim-1 in MuLV induced T-cell Iéómphomas" EMBO J 4(7):1793-8 (1985)), dessa ma- neira estabelecendo uma correlação entre superexpressão desta quinase e seu potencial oncogênico. Análise da homologia da sequência demonstrou que existem 3 Pim-Quinases altamente homólogas (Pim1, 2 & 3), sendo —Pim1 a proto-oncogene originalmente identificada pela integração de retrovi- rus. Além do mais, camundongos transgênicos superexpressando Pim1 ou | Pim2 mostram aumento da incidência de linfomas de célula T- (Breuer M et al., "Very high frequency of lIymphoma induction by a chemical carcinogen in pim-1 transgenic mice" Nature 340(6228):61-3 (1989)), enquanto que a su- perexpressão em conjunto com c-myc é associada com a incidência de lin- fomas de célula B- (Verbeek S et al., "Mice bearing the E mu-myc and E mu- pim-1 transgenes develop pre-B-cell leukemia prenatally" Mol Cell Biol 11(2):1176-9 (1991)). Dessa maneira, esses modelos de animais estabele- cem uma forte correlação entre superexpressão de Pim e oncogêneses em malignidades hematopoiéticas.

Além disso, para esses modelos de animais, a superexpressão de Pim tem sido reportada em muitas outras malignidades de ser humano.

A superexpressão de Pim1, 2 & 3 é frequentemente observada em muitas malignidades hematopoiéticas (Amson R et al., "The human protooncogene product p33pim is expressed during fetal hematopoi- esis and in diverse leukemias," PNAS USA 86(22):8857-61 (1989); Cohen AM et al., "Increased expression of the hPim-2 gene in human chronic lym- r 15 phocytic leukemia and non-Hodgkin Iymphoma," Leuk Lymph 45(5):951-5 (2004), Huttimann A et al., "Gene expression signatures separate Br-cell S chronic Iymphocytic leukaemia prognostic subgroups defined by ZAP-70 and CD38 expression status," Leukemia 20:1774-1782 (2006)) e em câncer de próstata (Dhanasekaran SM, et al., "Delineation of prognostic biomarkers in prostate câncer," Nature 412(6849):822-6 (2001); Cibull TL, et al., "Overex- pression of Pim-1 during progression of prostatic adenocarcinoma," J Clin Pathol 59(3):285-8 (2006)), enquanto que a superexpressão de Pim3 é frequentemente observada em carcinoma hepatocelular (Fujii C, et al., "Ab- errant expression of serine/threonine quinase Pim-3 in hepatocellular carci- —noma desenvolvimento and its role in the proliferação of human hepatoma cell lines," /nt J Câncer 114:209-218 (2005)) e câncer pancreático (Li YY et al., "Pim-3, a proto-oncogene with serine/threonine quinase activity, is aber- rantly expressed in human pancreatic cancer and phosphorylates bad to block bad-mediated apoptosis in human pancreatic câncer cell lines," Câncer

Res66(13):6741-7 (2006)). Pim1, 2 & 3 são Serina/Treonina quinases que normalmente funcionam na sobrevivência e proliferação de células hematopoiéticas em resposta aos fatores de crescimento e citocinas.

Citocinas que sinalizam a- través da via de Jak/Stat leva à ativação de transcrição de genes Pim e sín-

tese de proteinas.

Nenhuma modificação pós-traducional adicional é reque-

rida para a atividade de Quinase Pim.

Dessa maneira, a sinalização a jusan-

te é principalmente controlada no nível de renovação transcriício- nalitraducional e de proteina.

Substratos para Pim quinases incluem reguladores de apoptose tais como o membro da família Bcl-2, BAD (Aho T et al., "Pim-1 quinase promotes inactivation of the pro-apoptotic Bad protein by phosphorylating it on the Ser112 gatekeeper site: FEBS Letters 571: 43-

49 (2004)), reguladores de ciclos de células tais como p21Y'FAVEIP! (Wang Z, et al., "Phosphorylation of the cell cycle inhibitor p21Cip1WAF1 by Pim-1 quinase," Biochem Biophys Acta 1593:45- 55 (2002)), CDC25A (1999), C-

TAK (Bachmann M et al., "The Oncogenic Serine/Threonine Quinase Pim-1 Phosphorylates and Inhibits the Activity of Cdc25C-associated Quinase 1 (C-

- 15 TAK1). A novel role for Pim-1 at the G2/M cell cycle checkpoint," J Biol Chem 179:48319-48328 (2004)) e NUMA (Bhattacharya N, et al., "Pim-1 associates

À with protein complexes necessary for mitosis," Chromosoma 111(2):80-95 (2002)) e o regulador de síntese de proteína 4EBP1 (Hammerman PS et al.,

"Pim and AKkt oncogenes are independent regulators of hematopoietic cell growth and survival," Blood 105(11):4477-83 (2005)). Os efeitos de Pim(s) nestes reguladores são consistentes com um papel na proteção de apoptose e promoção de proliferação de crescimento de células.

Dessa maneira, a- cha-se que a superexpressão de Pim(s) em câncer desempenha um papel promovendo a sobrevivência e proliferação de células de câncer e, dessa maneira, suas inibições devem ser uma maneira eficaz de tratar cânceres em que elas estão superexpressadas.

De fato, diversos relatórios indicam que desmontar a expressão de Pim(s) com siRNA resulta em inibição de proliferação e morte das células (Dai JM, et al., "Antisense oligodeoxynu- cleotides targeting the serine/threonine quinase Pim-2 inhibited proliferation

—ofDU-145 cells," Acta Pharmacol Sin 26(3):364-8 (2005); Fujii et al. 2005; Li et al. 2006). Além do mais, acredita-se que a ativação mutacional de diver-

sos oncogenes bem conhecidos em malignidades hematopoiéticas exerce seus efeitos, pelo menos em parte, através de Pim(s). Por exemplo, a regu- lagem de expressão de Pim usada como alvo compromete a sobrevivência de células hematopoiéticas transformadas por FIt3 e BCR/ABL (Adam et al. 2006). Dessa maneira, inibidores para Pim1, 2 &3 serão úteis no tratamento dessas malignidades. Em adição a um papel em potencial no tratamento de câncer e doenças mieloproliferativas, tal inibidor poderá ser útil para contro- lar a expansão de células imunes em outras condições patológicas tais como doenças autoimunes, reações alérgicas e em síndromes de rejeição de transplante de órgãos. Esta noção é apoiada pelas descobertas de que essa diferenciação de células Th1 Helper T- por IL-12 e IFN-a resulta em indução de expressão de ambos, Pim1&2 (Aho T et al., "Expression of human Pim family genes is selectively up-regulated by cytokines promoting T helper type 1, but not T helper type 2, cell differentiation," Immunology 116: 82-88 (2005)). Além do mais, a expressão de Pim(s) é inibida em ambos os tipos - 15 de célula através de TGF-B imunossupressor (Aho et al. 2005). Este resulta- do sugere que Pim quinases estão envolvidas no processo inicial de diferen- : ciação de células Helper T-, que coordenam a resposta imunológica em do- enças autoimunes, reação alérgica e rejeição a transplante de tecido. Existe uma necessidade contínua por compostos que inibem a proliferação de capilares, inibem o crescimento de tumores, trata o câncer, modula a interrupção do ciclo da célula, e/ou inibe moléculas tais como Pim1, Pim2 e Pim3, formulações e medicamentos farmacêuticos que contêm tais compostos. Existe também uma necessidade de métodos de administrar tais compostos, formulações farmacêuticas, e medicamentos para pacientes —ouindivíduos com necessidade dos mesmos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO Novos compostos, e seus estereoisômeros, tautômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis, são providos da Fórmula |

Rs

CÁ

XT e DD o R; e (1) em que, X1, Xo, Xg e X4 são independentemente selecionados de CR, e N; desde que pelo menos um, porém não mais do que dois de X1, X2, Xg e X,sãoN, Y é selecionado de um grupo consistindo em cicloalquila, ciclo- alquila parcialmente insaturada, e heterocicloalquila, em que cada membro do dito grupo pode ser substituído com até quatro substituintes; 7Z2 e Z3 são independentemente selecionados de CR12 e N; des- . 10 dequenãomaisdo que um de Z> e Z3 pode ser N; R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -NHR;, " halo, hidroxila, alquila, ciano, e nitro; R2 e R12 independentemente em cada ocorrência são seleciona- dos do grupo consistindo em hidrogênio, halo, hidroxila, nitro, ciano, SO3H e alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, amino, cicloalquila, hetero cicloalquila substituídos ou insubstituídos, e cicloalquila parcialmente saturada; R;3 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -CO-R, e alquila, cicloalquila, heterociclila, arila e heteroarila substituídos ou insubsti- tuídos; Ra é selecionado do grupo consistindo em alquila, alquila substi- tuída, alcóxi, alcóxi substituído, amino, amino substituído e alquilamino; e Rs representa um grupo selecionado de arila substituída ou in- substituída, C3-C; cicloalquila, heteroarila, cicloalquila e alquila parcialmente insaturada, em que cada dito grupo Rs substituído pode ser substituído com até quatro substituintes selecionados de halo, ciano, amino, C14 alquila, Cas cicloalquila, alcóxi, nitro, carbóxi, carbonila, carboalcóxi, aminocarbóxi, ami- nocarbonila substituída, aminossulfonila, aminossulfonila substituída e alco-

xialquila.

Em algumas modalidades, novos compostos de Fórmula |, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos, em que X, é N e Xi, X3 e X1 são CR.

Em algumas modalidades, novos compostos de Fórmula |, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos em que R2 é selecionado de hidrogênio, metila, etila, halo, ciano.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmula |, ou um este- reoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis ! são providos em que Z, e Z; são CR12.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmula |, ou um este- reoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis são providos em que R12 é selecionado de hidrogênio, halo, metila, etile e - 15 ciano. Em outras modalidades, novos compostos, e seus estereoisô- Ç meros, tautômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis, são providos a par- tir da Fórmula 1! R5 y ' nÊÔ Ri2 |

N RW o Ri N (11) emque, Y é selecionado de um grupo consistindo em cicloexila, cicloexila parcialmente insaturada, e heterocíclo-Cs-alquila, em que cada membro do dito grupo pode ser substituído com até quatro substituintes; R: é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -NHR;, halo, hidroxita, alguila, Ca, cicloalquila, ciano, e nitro; Ri2 independentemente em cada ocorrência é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo, hidroxita, amino, nitro, ciano, SO;H e alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, amino, cicloalquila, hetero cicloalquila substituídos ou insubstituídos, e cicloalquila parcialmente saturada; R;3 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -CO-R, e alquila, cicloalquila, heterociclita, arila e heteroarila substituídos ou insubsti- tuídos; Ru é selecionado do grupo consistindo em alquila, alquila substi- tuída, alcóxi, alcóxi substituído, amino, amino substituído, e alquilamino; e Rs representa um grupo selecionado de hidrogênio e alquila substituída ou insubstituída, Ceé-cicloalquila, arila e heteroarila, em que cada umdo dito grupo Rs substituído pode ser substituído com até quatro substi- tuintes selecionados de halo, ciano, amino, C14 alquila, C3.6 cicloalquila, al- cóxi, nitro, carbóxi, carbonila, carboalcóxi, aminocarbóxi, aminocarbonila substituída, aminossulfonila, aminossulfonila substituída e alcoxialquila.

Em algumas modalidades, compostos das Fórmulas | ou Il, ou ' 15 um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos, em que Y é selecionado de um grupo consistindo em F cicloalgila substituída ou insubstituída, cicloalquenila, piperidinila e piperazi- nila, em que cada membro do dito grupo é substituído com até quatro substi- tuintes. Em algumas modalidades, Y é substituído com até quatro substituin- tes selecionados de ciano, nitro, halo, hidroxila, amino, alcóxi, amino substi- tuído, C1.4 alquila, C1.4 halo alquila e C3,4 cicloalquila. Em ainda outras moda- lidades, Y é substituído com até quatro substituintes selecionados de metila, propila, i-propila, etila, hidroxita, amino, halo, mono-halo C;.3 alquila, tri-halo C1.3 alquila e di-halo C1.3 alquila.

Em algumas modalidades, novos compostos de Fórmula Il, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos, em que Y é selecionado de um grupo consistindo em ciclo-hexila, ciclo-hexinila, e piperidinila substituídas ou insubstituídas, em que cada membro do dito grupo é substituído com até quatro substituintes.

Em aglumas modalidades, novos compostos de Fórmula Il, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos, em que Y é substituído com até quatro substituintes in-

dependentemente selecionados de hidrogênio, ciano, nitro, halo, hidroxila, amino, alcóxi, amino substituído, C14 alquila, C14 halo alquila e C3.4 cicloal- quila. Em algumas modalidades, os substituintes são independentemente selecionados de metila, propila, i-propila, etila, hidroxila, amino, halo, mono- haloC;3alquila, trichalo C1.3 alquila e di-halo C1.3 alquila.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmula Il, ou um este- reoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis são providos, em que R12 é selecionado de hidrogênio, halo, metila, etila e | ciano.

Em algumas modalidades, compostos das Fórmulas | ou 11, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos, em que Y é selecionado do grupo consistindo em ciclo- hexila substituída ou insubstituída, ciclo-hexenila, piperidinila, piperazinila, em que o dito grupo Y pode ser substituído com até três substituintes sele- . 15 cionados de metila, etila, hidroxila, amino, e metóxi; R, é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, e amino; e R12 independentemente em ca- S da ocorrência representa hidrogênio, halo, ou metila.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmula Il, ou um este- reoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis são providos, em que Y é selecionado de um grupo consistindo em ciclo- hexila substituída, ciclo-hexenila, piperidinila e piperazinila; R, é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -NH>, halo, C14 alquila, C34 cicloalquila, e -CN; Ri2 independentemente em cada ocorrência é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo, C14 alquila, e amino; e Rs é selecionado do grupo consistindo em fenila substituída ou insubstituída, ciclo-hexila, ciclo- pentila, tiazol, pirídila, pirimidila e pirazinila, em que o grupo Rs pode ser substituído com até três substituintes selecionados de halo, hidrogênio, meti- la, aminocarbonila substituída e alcóxi. Em uma modalidade representativa, compostos das Fórmulas | —oull, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceutica- mente aceitáveis são providos, selecionados do grupo consistindo em N-(4- ((1R,3R,4R,58)-3-amino-4-hid róxi-5-metilciclo-hexil)piridin-3-il)-6-(2,6-

difluorofenil)-5-fluoropicolinamida, N-(4-((1R,38,58)-3-amino-5-metilciclo- hexil)piridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida. N-(4-((3R,4R,58)- 3-amino-4-hidróxi-5-metilpiperidin-1-iN) piridin-3-11)-6-(2,6-difluorofenil)-5- fluoropicolinamida, 3-amino-N-(4-((3R,4R,58)-3-amino-4-hidróxi-S- metilpiperidin-1-il)piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)-S-fluoropicolinamida e N-(4- ((1R,3S)-3-aminociclo-hexiN)piridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-S- fluoropicolinamida, e 3-amino-N-(4-((1R,3S)-3-aminociclo-hexil)piridin-3-i1)-6- (2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida. Em outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar Integração Provirus de Maloney Quinase (PIM Quinase) relacionada a distúrbios em um sujeito animal ou ser humano com necessidade de tal tra- tamento, compreendendo administrar para o dito sujeito uma quantidade de um composto de Fórmula | ou Il eficaz para inibir a atividade de PIM no su- jeito.

. 15 Em outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar distúrbios relacionados com PIM em um sujeito ser humano ou animal com necessidade de tal tratamento, compreendendo administrar para o dito sujeito uma quantidade de um composto de Fórmula | ou Il eficaz para redu- zir ou prevenir o crescimento de tumor no sujeito.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar distúrbios relacionados a PIM em um sujeito animal ou ser huma- no com necessidade de tal tratamento, compreendendo administrar para o dito sujeito uma quantidade de um composto de Fórmula | ou Il eficaz para reduzir ou evitar crescimento de tumor no sujeito, em combinação com pelo menos um agente adicional para o tratamento de câncer.

Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê composi- ções terapêuticas compreendendo pelo menos um composto de Fórmula | ou || em combinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de câncer, como são comumente empregados em terapia de câncer.

Os compostos da invenção são úteis no tratamento de cânceres, incluindo malignidades hematopoiéticas, carcinomas (por exemplo, dos pul- mões, fígado, pâncreas, ovários, tiroide, bexiga ou cólon), melanoma, distúr-

g—— ww 10/190 bios mieloides (por exemplo, leucemia mieloide, mieloma múltiplo e eritro- leucemia), adenomas (por exemplo, adenoma do cólon viloso), sarcomas (por exemplo, osteossarcoma), doenças autoimunes, reações alérgicas e em síndromes de rejeição de transplante de órgãos.

A invenção ainda provê composições, métodos de uso, e méto- dos de preparação como descrito na descrição detalhada da invenção.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS Os aspectos anteriores e muitas das vantagens de assistente desta invenção se tornarão mais prontamente evidentes, assim como os mesmos se tornarão melhor compreendidos pela referência à descrição de- talhada a seguir, quando tomada em conjunto com os desenhos que acom- panham, em que: A figura 1 é um gráfico mostrando a eficácia do composto do Exemplo 98 a partir de uma avaliação no modelo de xenoenxerto KMS11-luc . 15 como descrito no Exemplo 144. A figura 2 é um gráfico mostrando a eficácia do composto do 7 Exemplo 70 a partir de uma avaliação no modelo de xenoenxerto KMS11- luc, como descrito no Exemplo 144. A figura 3 é um gráfico mostrando à eficácia do composto do Exemplo 96 a partir de uma avaliação no modelo de xenoenxerto KMS11- luc, como descrito no Exemplo 144.

DESCRIÇÃO DETALHADA De acordo com um aspecto da presente invenção, novos com- postos, e seus estereoisômeros, tautômeros e sais farmaceuticamente acei- táveis, são providos da Fórmula |: e.

5 Y Y ne | ?

TO “Ss e Ri db em que, o

Xi, Xo, Xa e X, são independentemente selecionados de CR, e N; desde que pelo menos um, mas não mais do que dois de X:, X2, Xs e Xa são N; Y é selecionado de um grupo consistindo em cicloalquila, ciclo- —alquila parcialmente insaturada, e heterocicloalquila, em que cada membro do dito grupo pode ser substituído com até quatro substituintes; 72 e Z3 são independentemente selecionados de CR, e N; des- de que não mais do que um de Z2 e Z3 podem ser N; R: é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -NHR3, halo, hidroxila, alguila, ciano, e nitro; R> e Ri2 independentemente em cada ocorrência são seleciona- dos do grupo consistindo em hidrogênio, halo, hidroxila, nitro, ciano, SO3H e alquila, alquenila, alquinila, alcóxi, amino, cicloalquila, hetero cicloalquila substituídos ou insubstituídos, e cicloalquila parcialmente saturada; . 15 R; é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -CO-R, e alquila, cicloalquila, heterociíclila, arila e heteroarila substituídos ou insubsti- 4 tuídos; Ru é selecionado do grupo consistindo em alquila, alquila substi- tuída, alcóxi, alcóxi substituído, amino, amino substituído, e alquilamino; e Rs representa um grupo selecionado de arila substituída ou in- substituída, C3-C; cicloalquila, heteroarila, cicloalquila parcialmente insatura- da e alquila, em que cada dito grupo Rs substituído pode ser substituído com até quatro substituintes selecionados de halo, ciano, amino, C1.4 alquila, C3.6 cicloalquila, alcóxi, nitro, carbóxi, carbonila, carboalcóxi, aminocarbóxi, ami- —nocarbonila substituída, aminossulfonila, aminossulfonila substituída e alco- xialquila.

Em algumas modalidades, novos compostos de Fórmula |, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos em que X, é N e Xi, Xs e X, são CR.

Em algumas modalidades, novos compostos de Fórmula |, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos, em que R2 é selecionado de hidrogênio, metila, etila,

halo, ciano.

Em algumas modalidades, compostos de fórmula |, ou um este- reoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis são providos, em que Z2 e Z; são CR12.

Em algumas modalidades, compostos de fórmula |, ou um este- reoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis são providos, em que R12 é selecionado de hidrogênio, halo, metila, etila e ciano.

Em outras modalidades, novos compostos, e seus estereoisô- meros, tautômeros e sais farmaceuticamente aceitáveis, são providos da Fórmula || Rs Y y nÊ Ri2 | - Ox >. Ri2 . SS, m (0) em que, Y é selecionado de um grupo consistindo em ciclohexila, ciclo- hexila parcialmente insaturada, e heterociclo-Cs-alquila, em que cada mem- bro do dito grupo pode ser substituído com até quatro substituintes; R: é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -NHRs, halo, hidroxila, alquila, Ca4 cicloalquila, ciano, e nitro; R12 independentemente em cada ocorrência é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo, hidroxila, amino, nitro, ciano, SO3H e alquila substituída ou insubstituído, alquenila, alquinila, alcóxi, amino, ciclo- alquila, hetero cicloalquila, e cicloalquila parcialmente saturado; R; é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -CO-R, e alquila substituída ou insubstituída, cicloalquila, heterociclila, arita e heteroa- rila Ru é selecionado do grupo consistindo em alquila, alquila substi- tuída, alcóxi, alcóxi substituído, amino, amino substituído, e alquilamino; e Rs representa um grupo selecionado de hidrogênio e alquila substituída ou insubstituída, Cg-cicloalquila, arila e heteroarila.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmulas | ou 1l, ou um estereoisômero, tautômero, ou um sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos, em que Y é selecionado de um grupo consistindo em — cicloalquila substituída ou insubstituída, cicloalquenila, piperidinila e pipera- zinila, em que cada membro do dito grupo é substituído com até quatro substituintes. Em algumas modalidades, compostos de Fórmulas | ou 1, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente acei- táveis são providos, em que Y é selecionado de um grupo consistindo em ciclohexila substituída ou insubstituída, ciclohexinila, e piperidinila, em que | cada membro do dito grupo é substituído com até quatro substituintes. Em algumas modalidades, Y é substituído com até quatro substituintes selecio- nados de hidrogênio, ciano, nitro, halo, hidroxila, amino, alcóxi, amino substi- tuído, C1.4 alquila, C14 halo alquila e C3.4 cicloalquila. Em ainda outras moda- - 15 lidades, Y é substituído com até quatro substituintes selecionados de metila, propila, i-propila, etila, hidroxila, amino, halo, mono-halo C1.3 alquila, tri-halo f C1.3 alquila e di-halo C1.3 alquila. Em algumas modalidades, compostos de Fórmulas | ou Il, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitá- veissão providos, em que R; é hidrogênio, amino ou flúor. Em uma modali- dade são providos compostos de Fórmula Il selecionados da Tabela | ou Tabela |l.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmulas | ou Il, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitá- veissão providos, em que Rs; é selecionado de arila substituída ou insubsti- tuída, Cs5-Cs cicloalquita, heteroarila, C5-Cs cicloalquila parcialmente insatura- da e Cy-C,a alquila, em que cada dito grupo pode ser substituído com até quatro substituintes selecionados de halo, ciano, amino, C14 alquila, Cas cicloalquila, alcóxi, nitro, carbóxi, carbonila, carboalcóxi, aminocarbóxi, ami- —nocarbonila substituída, aminossulfonila, aminossulfonila substituída e alco- xialquila. Em algumas modalidades, compostos de Fórmulas | ou Il, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitá-

veis são providos, em que Rs é fenila substituída ou insubstituída, em que o grupo fenila pode ser substituído com até quatro substituintes selecionados de hidrogênio, ciano, nitro, halo, hidroxila, amino, alcóxi, amino substituído, C14 alquila, C1.4 halo alguila e C34 cicloalquila.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmulas | ou Il, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis são providos em que R; é 2 6-difluorofenila.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmulas | ou |l, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitá- veissão providos, em que R12 é selecionado de hidrogênio, halo, metila, etila e ciano.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmulas | ou Il, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitá- veis são providos, em que Y é selecionado do grupo consistindo em ciclohe- xila substituído ou insubstituído, ciclo-hexenila, piperidinila, piperazinila, em . 15 queodito grupo Y pode ser substituído com até três substituintes seleciona- dos de metila, etila, hidroxila, amino, e metóxi; R, é selecionado do grupo É consistindo em hidrogênio, e amino; e R12 independentemente em cada o- corrência representa hidrogênio, halo, ou metila.

Em algumas modalidades, compostos de Fórmula ll, ou um este- reoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos farmaceuticamente aceitáveis são providos, em que Y é selecionado de um grupo consistindo em cíiclo- hexila substituída, ciclo-hexenila, piperidinita, e piperazinila; R: é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, -NH2 halo, C14 alquila, C3.4 cicloalquila, e -CN; R12 independentemente em cada ocorrência é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, halo, C14 alquila, e amino; e Rs é selecionado do grupo consistindo em fenila substituído ou insubstituído, ciclo-hexila, ciclo- pentila, tiazol, piridila, pirimidila e pirazinila, em que o grupo Rs pode ser substituído com até três substituintes selecionados de halo, hidrogênio, meti- la, aminocarbonila substituída e alcóxi.

Uma modalidade preferida da presente invenção é um composto de Fórmula (11), em que Y é ciclo-hexila, substituído com um a três substitu- intes, os ditos substituintes preferivelmente selecionados de hidroxila, amino,

C14 alquila ou C14 halo alquila, e mais preferivelmente, selecionados de me- tila, hidroxila, amino, e CF;3, e mais preferivelmente de metila, amino, e hi- dróxi; R, é hidrogênio, NH>, ou halo (preferivelmente, R, é hidrogênio, amino ou flúor, mais preferivelmente, R, é hidrogênio); R12 são cada um indepen- — dentemente hidrogênio ou halo (preferivelmente, cada R,2 é hidrogênio, clo- ro ou flúor); Rs é ciclo-hexila, fenila, ou piridila, em que a dita ciclo-hexila, a dita fenila e a dita piridila são cada uma independentemente substituída com até três substituintes selecionados de halo, hidroxila, C1.4 alquila, e C1,alcó- xi (preferivelmente, Rs é piridila ou fenila cada um independentemente subs- tituído com até três substitutents selecionados de halo, hidroxila, C14 alquila ou Ci, alcóxi, mais preferivelmente, R; é fenila substituída com até três substituintes selecionados de halo, hidroxila, C14 alcóxi e C14 alquila, mais preferivelmente, fenila substituída com até três substituintes selecionados de flúor, hidroxila, metila, etila, metóxi, ou propóxi, mais preferivelmente, R; é - 15 2,6-difluorofenila. Ainda outra modalidade preferida da presente invenção provê ' um composto de Fórmula |l, em que Y é piperidinila substituída com metila, hidroxila, e amino; R, é hidrogênio, NH, ou flúor; Ri2 independentemente em cada ocorrência é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e ha- lo;eRsé piridila, flúor pirídila, ciclo-hexila, ou fenila, em que a dita fenila é substituída com até três substituintes selecionados de flúor, hidroxila e meti- la, preferivelmente R; sendo diflúor fenila. Em uma modalidade preferida adicional preferivelmente Y é 3-amino-4-hidróxi-5-metilpiperidin-1-ila; R; é hidrogênio; e R; é 2,6-diflúor fenila.

Em uma modalidade representativa, compostos preferidos de Fórmulas | ou !l, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal dos mesmos far- maceuticamente aceitáveis são selecionados do grupo consistindo em N-(4- ((3S,58)-3-amino-5-metilciclo-hexil)piridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-5- fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((1R,3R,4S,58)-3-amino-4-hidróxi-5- —metilciclo-hexil)piridin-3-i)-6-(2,6-difluorofenil)picolinamida; N-(4- ((8R,A4R,58)-3-amino-4-hidróxi-5-metilpiperidin-1-il) piridin-3-11)-6-(2,6- difluorofenil)-S-fluoropicolinamida; N-(4-((38R,4R,58)-3-amino-4-hidróxi-5-

metilpiperidin-1-il)piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenit)-S-fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((3R,4R,58)-3-amino-4-hidróxi-5-metilpiperidin-1- iNpiridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; — N-(4-((3R,4R,58)-3- amino-4-hidróxi-S5-metilpiperidin-1-il) piridin-3-i1)-6-(2,6-difluoro-3-metilfenil)-5- —fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((1R,3S)-3-aminociclo-hexil) piridin-3-i1)-6- (2,6-difluorofenil)-S-fluoropicolinamida; = N-(4-((3S)-3-aminociclo-hexil)piridin- 3-11)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; N-(4-((1R,3R,4R,58)-3-amino- 4-hidróxi-5-metilciclo-hexil)piridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-5- fluoropicolinamida; N-(4-((1R,3S,58)-3-amino-5-metilciclo-hexil)piridin-3-il)-6- (2,6-difluorofenil)-S-fluoropicolinamida); N-(4-((3R,4R,58)-3-amino-4-hidróxi- S-metilpiperidin-1-il)piridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; — N- (4-((1R,38)-3-aminociclo-hexil)piridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-5- fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((3R,4R,5S)-3-amino-4-hidróxi-5- metilpiperidin-1-i) piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; e 3- . 15 amino-N-(4-((1R,3S)-3-aminociclo-hexil)piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)-5- fluoropicolinamida.

- Em outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar Integração Provirus de Maloney Quinase (PIM Quinase) relacionada a distúrbios em um sujeito humano ou animal com necessidade de tal trata- mento, compreendendo administrar para o dito sujeito uma quantidade de um composto de Fórmula | ou ll eficaz para inibir a atividade de PIM no su- jeito. Uma modalidade preferida da presente invenção provê um método pa- ra tratar uma condição através da modulação de Integração Provirus de Ma- loney Quinase (PIM Quinase) compreendendo administrar para um paciente com necessidade de tal tratamento an quantidade eficaz de um composto de Fórmula |.

Em outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tratar distúrbios relacionados a PIM em um sujeito animal ou ser humano com necessidade de tal tratamento compreendendo administrar para o dito sujeito uma quantidade de um composto de Fórmula | ou Il eficaz para redu- zZir ou prevenir o crescimento de tumor no sujeito. Em ainda outros aspectos, a presente invenção provê métodos para tartar distúrbios relacionados a PIM

MNEEEEEEEEEE—. 17/190 em um sujeito animal ou ser humano com necessidade de tal tratamento compreendendo administrar para O dito sujeito uma quantidade de um com- posto de Fórmula | ou Il eficaz para reduzir ou prevenir crescimento do tumor no sujeito, em combinação com pelo menos um agente adicional para o tra- tamento de câncer.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê composi- ções terapêuticas compreendendo pelo menos um composto de Fórmula | ou Il em combinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de câncer, como são comumente empregados na terapia de câncer. A pre- sente invenção dessa maneira provê uma composição farmacêutica com- preendendo a composto of Fórmula | or Fórmula 1l. Uma modalidade preferi- da deste aspecto provê uma composição farmacêutica compreendendo um composto selecionado de N-(4-((3S,58)-3-amino-5-metilciclo-hexil) piridin-3- i)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((1R,3R,48,58)-3- - 15 amino-4-hidróxi-S-metilciclo-hexil)pirídin-3-il)-6-(2,6-difluorofeni) picolinamida; N-(4-((3R,AR58)-3-amino-4-hidróxi-S-metilpiperidin-1-iN)piridin-3-1))-6-(2,6- difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((1R,3S)-3-aminociclo-hexil) piridin-3-I)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; N-(4-((38)-3-aminociclo- hexiN)piridin-3-iN)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; N-(4- ((R,3R4R,58)-3-amino-4-hidróxi-S-metilciclo-hexil)piridin-3-1)-6-(2,6- difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; N-(4((1 R,3S,58)-3-amino-5-metilciclo- hexil)piridin-3-i)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida); N-(4-((3R,4R,58)- 3-amino-4-hidróxi-5-metilpiperidin-1-i))piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)-5- fluoropicolinamida; N-(4-((1R,3S)-3-aminociclo-hexil)piridin-3-i))-6-(2,6- —difluorofenit)-5-fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((3R,4R,58)-3-amino-4- hidróxi-5-metilpiperidin-1-iN)pirid in-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-5- fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((1R,3S)-3-aminociclo-hexil)piridin-3-11)-6- (2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; N-(4-((3R,4R,58)-3-amino-4-hidróxi- 5-metilpiperidin-1-iN piridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fuoropicolinamida; 3- amino-N-(4-((3R4R,58)-3-amino-4-hidróxi-5-metilpiperidin-1-i) piridin-3-11)-6- (2,6-difluorofenil)-S-fluoropicolinamida; e N-(4-((3R,4R,58)-3-amino-4-hidróxi- 5-metilpiperidin-1-iN)piridin-3-iN)-6-(2,6-difluoro-3-metifenil)-S- Ea ass nt

AMI 18/190 fluoropicolinamida. Outra modalidade preferida provê uma composição far- macêutica ainda compreendendo um agente adicional para o tratamento de câncer, em que preferivelmente o agente adicional é selecionado de irinote- cano, topotecano, gemcitabina, 5-fluorouracila, leucovorina carboplatina, cis- platina, taxanos, tezacitabina, ciclofosfamida, alcaloides vinca, imatinib (Gle- evec), antraciclinas, rituximab, e trastuzumab.

Os compostos da invenção são úteis no tratamento de cânceres, incluindo malignidades hematopoiéticas, carcinomas (por exemplo, dos pul- mões, fígado, pâncreas, ovários, tiroide, bexiga e cólon), melanoma, distúr- bios mieloides (por exemplo, leucemia mieloide, mieloma múltiplo e eritro- leucemia), adenomas (por exemplo, adenoma de cólon viloso), sarcomas (por exemplo, osteossarcoma), doenças autoimunes, reações alérgicas e em síndromes de rejeição de transplante de órgão.

Em ainda outro aspecto da presente invenção é provido um uso deum composto de Fórmula | ou Fórmula || para preparar um medicamento para tratar uma condição por modulação da atividade de Integração Provirus | de Maloney Quinase (PIM Quinase). Em uma modalidade preferida deste aspecto da invenção, a condição é um câncer selecionado de carcinoma dos pulmões, pâncreas, tiroide, ovário, bexiga, mama, próstata, ou cólon, mela- noma, leucemia mieloide, mieloma múltiplo e eritro leucemia, adenoma de cólon viloso, e osteossarcoma. Í Em outro aspecto, a presente invenção refere-se aos métodos de inibir a atividade de pelo menos uma quinase selecionada do grupo con- sistindo em Pim1, Pim2 e Pim3, em um sujeito, ou tratar uma condição bio- lógica mediada por pelo menos um de Pim1, Pim2 e Pim3, em um sujeito animal ou ser humano com necessidade de tal tratamento, compreendendo administrar para o sujeito pelo menos um composto de Fórmula | ou |! em uma quantidade eficaz para inibir a quinase no sujeito. Os compostos tera- pêuticos são úteis para tratar pacientes com uma necessidade de tais inibi- dores (por exemplo, aqueles que sofrem de câncer mediado por sinalização anormal de receptor de serina/treonina quinases).

DEFINIÇÕES

A a Ni ra 19/190 "Inibidor de PIM" é usado aqui no presente para se referir a um composto que exibe um I1Cso com respeito à atividade de PIM Quinase de não mais do que cerca de 100 uM e mais tipicamente não mais do que cerca de 50 uM, como medido nos ensaios de esgotamento de PIM descritos aqui abaixo.

A frase "alquila" se refere a grupos alquila que não contêm hete- roátomos. Dessa maneira, a frase inclui grupos alquila de cadeia linear tais como metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decila, undecila, dodecila e similares. A frase também inclui isômeros de cadeia ra- mificada de grupos alquila de cadeia linear, incluindo mas não limitado a, os a seguir que são providos a título de exemplo: -CH(CHs)>, -CH(CH3(CH2CH;), -CH(CH2CHs)2, -C(CHs)s, -C(CH2CH3)s, -CH2CH(CHs)2, -CH;CH(CH;)(CH2CHs), -CHCH(CH2CH3)2, -CH2C(CH3)s, -CHC(CH2CH3)s, -CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH;s), -CH2CH2CH(CHs)2, : 15 -CHCHCH(CHs(CH2CHs), -CHICHCH(CH2CHs)2, -CHCH2C(CH3)s, -CHCH2C(CH2CH3)s, -CH(CHa3CH2CH(CHs)2, -CH(CH3)CH(CH3) CH(CH3)2, í -CH(CH2CHa)CH(CHa)CH(CHs)(CH2CHs), e outros. Dessa maneira a frase grupos alquila inclui grupos alquila primários, grupos alquila secundários e grupos alquila terciários. Grupos alquila preferidos incluem grupos alquila de cadeia linear ou ramificada tendo 1 a 12 átomos de carbono. Uma definição preferida de "alquila" se refere a grupos alquila de cadeia C14 linear tais co- mo metila, etila, n-propila, e n-butila. A definição de alquila preferida também inclui grupos alquila ramificados C35, incluindo CH(CH3)a, CH2CH(CH3)2, CH(CH3)CH2CH3, — C(CH3)s, CH(CHa3)CH2CH2CHs, CH(CH3)CH(CH3)2, CH;CH(CHs)CH2CHs, CHCHCH(CH3)2, e CH(CH2CH3)2, etc.

O termo "alquenila" se refere aos grupos alquila como definido acima, em que existe pelo menos um ponto de insaturação, isto é, em que dois átomos de carbono adjacentes são acoplados por ligação dupla. O ter- mo "alquinila" se refere aos grupos alquila em que dois átomos de carbono — adjacentes são acoplados por uma ligação tripla. O termo 'alcóxi" se refere a -OR, em que R é alquila.

Como usado aqui no presente, o termo "halogênio" ou "halo" se esses

AU —————— 20/190 refere a grupos cloro, bromo, flúor e iodo. "Haloalquila" se refere a um radi- cal alquila substituído com um ou mais átomos de halogênio. O termo "halo- alquila" dessa maneira inclui mono-halo alquila, di-halo alquila, tri-halo alqui- la e similares. Grupos mono-halo alquila representativos incluem -CHaF, - CHCl, -CHCH2F, -CH2CH2CI, -CH(F)CH3, -CH(CI)CH3; grupos alquila di- halo representativos incluem CHCL, -CHF2, -CCIGCH3, -CH(CICHZCI, - CH.CHCb, -CH2CHF>; grupos alquila tri-halo representativos incluem -CCls, - CF3, -CCLCH2CI, -CF2CHaF, -CH(CI)CHCb, -CH(F)CHFz2; e grupos alquila per-halo representativos incluem -CCla, -CF3, -CCLCCIa, -CF20F3.

"Amino" se refere, aqui no presente, ao grupo -NH>. O termo "al- quilamino" se refere, aqui no presente, ao grupo -NRR' em que R e R' são cada um, independentemente, selecionado de hidrogênio ou de uma alquila inferior. O termo "arilamino" se refere, aqui no presente, ao grupo -NRR' em que R é arila e R' é hidrogênio, uma alquila inferior, ou uma arila. O termo - 15 "“aralquilamino" se refere, aqui no presente, ao grupo -NRR' em que R é uma aralquila inferior e R' é hidrogênio, uma alquila inferior, uma arila ou um aral- a quila inferior. O termo ciano se refere ao grupo -CN. O termo nitro se refere ao grupo -NO,.

O termo "alcoxialquila" se refere ao grupo -alk,-O-alk> em que alkié alquila ou alquenila, e alk, é alquila ou alquenila. O termo "alcoxialqui- ja inferior" se refere a uma alcoxialquila em que alk, é alquita inferior ou al- quenila inferior, e alk, é alquila inferior ou alquenita inferior. O termo "ariloxi- alquila" se refere ao grupo -alquil-O-arila. O termo "aralcoxialquila" se refere ao grupo -alquilenil-O-aralquila, em que aralquila é uma aralquita inferior.

O termo "aminocarbonila" se refere, aqui no presente, ao grupo - C(O)-NH>2 . "Aminocarbonila substituída " se refere, aqui no presente, ao gru- po -C(O)-NRR' em que R é alquila inferior e R' é hidrogênio ou uma alquila inferior. Em algumas modalidades, R e R', junto com o átomo de N a eles acoplado, podem ser tomados juntos para formar um grupo "heterocicloal- — quilcarbonila”. O termo "arilaminocarbonila" refere-se, aqui no presente, ao grupo -C(O)-NRR' em que R é uma arila e R' é hidrogênio, alquila inferuior ou arila. “Aralquilaminocarbonita" refere-se, aqui no presente, ao grupo - o —

AMEE———————— 21/190 C(O)-NRR' em que R é aralquila inferior e R' é hidrogênio, alquila inferior, arila, ou aralquila inferior. "Aminossulfonila" se refere, aqui no presente, ao grupo -S(O)>- NH>2. "Aminossulfonila substituída " se refere, aqui no presente, ao grupo - — S(O)-NRR'em que R é alquila inferior e R' é hidrogênio ou uma alquila infe- rior. O termo "aralquilaminossulfonliarila" se refere, aqui no presente, ao gru- po -aril-S(O).-NH-aralquila, em que a aralquita é aralquila inferior.

"Carbonila" se refere ao grupo divalente -C(O)-. "Carbóxi" se re- fere a -C(=0)-OH. "Alcoxicarbonila" se refere a éster -C(=0)-OR em que R é alquila. "Alcoxicarbonila inferior" se refere a éster -C(=0)-OR em que R é alquila. "Cicloalquiloxicarbonila" se refere a -C(=O)-OR em que R é cicloal- quilta. "Cicloalquila" se refere a um substituinte de alquila carbocíclica, mono- ou policíclica. Grupos carbocicloalquila são grupos cicloalquila em - 15 que todos os átomos de anel são carbono. Substituintes de cicloalquila típi- cos têm de 3 a 8 cadeias principais (isto é, anel) de átomos em que cada " cadeia principal é carbono ou um heteroátomo. O termo "heterocicloalquila" se refere aqui no presente a substituintes de cicloalquila que têm de 1 a 5, e mais tipicamente de 1 a 4 heteroátomo na estrutura de anel. Heteroátomos apropriados empregados em compostos da presente invenção são nitrogê- nio, oxigênio, e enxofre. Porções representativas de heterocicloalquila inclu- em, por exemplo, morfolino, piperazinila, piperidinila e similares. Grupos car- bocicloalquila são grupos cicloalquila em que todos os átomos de anel são carbono. Quando usado em conexão com substituintes de cicloalquila, o termo "policíclico" se refere aqui no presente em estruturas cíclicas de alqui- la fundidas e não fundidas. O termo "cicloalquila parcialmente insaturada”, "cicloalquila parcialmente saturada", e "cicloalquenita" todos se referem a um grupo cicloalquila em que existe pelo menos um ponto de insaturação, isto é, em que os átomos de anel adjacentes são conectados por uma ligação du- —plaou uma ligação tripla. Exemplos ilustrativos incluem ciclo-hexinila, ciclo- hexinila, ciclopropenila, ciclobutinila e similares. Os termos "heterociclo substituído", "grupo heterocíclico" ou "he- a a

AE ————— 22/190 terocíclo”, como usados aqui no presente, se referem a qualquer anel de 3- ou 4- elementos contendo um heteroátomo selecionado de nitrogênio, oxi- gênio, e enxofre ou um anel de 5- ou 6- elementos contendo de um a três heteroátomos selecionados do grupo consistindo em nitrogênio, oxigênio, ou enxofre; em que o anel de 5- elementos tem O a 2 ligações duplas e o anel de 6- elementos tem 0 a 3 ligações duplas; em que o átomo de nitrogênio e enxofre pode estar opcionalmente oxidado; em que os heteroátomos de ni trogênio e enxofre podem estar opcionalmente quartemnizados; e incluindo qualquer grupo bicíclico em que qualquer um dos anéis heterocíclicos acima éfundidoa um anel de benzeno ou outro anel heterocíclico de 5- ou 6- ele- mentos independentemente definidos acima. O termo ou "heterocicloalquila" como usado aqui no presente se refere a um anel de 5- ou 6- elementos contendo de um a três heteroátomos selecionados do grupo consistindo em nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, em que o anel tem ligações duplas. Por e- xemplo, o termo heterociclo-Cs-alquila se refere a um anel de 6- elementos contendo 5 átomos de carbono e um heteroátomo, tal como N. O termo "he- terociclo" dessa maneira inclui anéis em que nitrogênio é o heteroátomo co- mo também anéis parcialmente e totalmente saturados. Heterociclos preferi- dos incluem, por exemplo: diazapinila, pirrila, pirrolinila, pirrolidinila, pirazoli- la, pirazolinila, pirazolidinila, imidazoil, imidazolinila, imidazotidinila, pirídila, piperidinila, = pirazinila, piperazinila, N-metila piperazinila, = azetidinila, N-metilazetidinila, pirimidinila, piridazinila, oxazolila, oxazolidinila, isoxazolila, isoazolidinila, morfolinila, tiazolila, tiazolidinila, isotiazolila, isotiazolidinila, indolila, quinolinita, isoquinolinila, benzimidazolila, benzotiazolila, benzoxazo- lila,furila, tienila, triazolila e benzotienila.

Porções heterocíclicas podem ser insubstituídas ou monossubs- tituídas ou dissubstituídas ou trissubstituídas com vários substituintes inde- pendentemente selecionados de hidróxi, halo, oxo (C=O), alquilimino (RN=, em que R é uma alquila inferior ou grupo alcóxi inferior), amino, alquilamino, — dialguilamino, acilaminoalquila, alcóxi, tioalcóxi, polialcóxi, alquila inferior, cicloalquila ou haloaiquila.

Os grupos heterocíclicos podem ser acoplados a várias posições

SS como sera evidente para aqueles tendo qualificação nas técnicas de química orgânica e médica em conjunto com a descrição aqui no presente.

Heterocíclicos representativos incluem, por exemplo, imidazolila, piridila, piperazinila, piperidinila, azetidinila, tiazolila, furanila, triazolila ben- zimidazolila, benzotiazolila, benzoxazolila, quinolinila, isoquinolinila, quinazo- linila, quinoxalinila, ftalazinila, indolila, naftpiridinila, indazolila, e quinolizinila. "Arila" se refere aos grupos aromáticos monocíclicos e policícli- cos opcionalmente substituídos tendo de 3 a 14 átomos de carbono ou hete- ro de estrutura principal, e inclui ambos, grupos arila carbocíclicos e grupos arila heterocíclicos.

Grupos arila carbocíclicos são grupos arila em que todos os átomos de anel, no anel aromático, são carbono.

O termo "heteroarilas" se refere, aqui no presente, a grupos arila tendo de 1 a 4 heteroátomos co- mo átomos de anel em um anel aromático com o restante dos átomos de anel sendo átomos de carbono.

Quando usado em conexão com substituin- . 15 tesdearila, o termo "arila policíclica" se refere, aqui no presente, a estrutu- ras cíclicas fundidas e não fundidas em que pelo menos uma estrutura cícli- 7 ca é aromática, tal como, por exemplo, benzodioxozol (que tem uma estrutu- É ra heterocíclica fundida a um grupo fenila, isto é, naftila e similares.

Porções de arila exemplares empregadas como substituintes em compostos da pre- sente invenção incluem fenila, pirídila, pirimidinila, tiazolila, indolila, imidazoli- la, oxadiazolila, tetrazolila, pirazinila, triazolila, tiofenila, furanila, quinolinila, purinila, nafítila, benzotiazolila, benzopiridila, e benzimidazolila e similares. "Opcionalmente substituído" ou "substituído" se refere à substitu- ição de um ou mais átomos de hidrogênio com um radical monovalente ou —divalente.

Grupos de substituição apropriados incluem, por exemplo, hidróxi, nitro, amino, imino, ciano, halo, tio, sulfonila, tivcamido, amidino, imidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidino, sulfonamido, carboxila, formi- la, alquila inferior, haloalquila inferior, alquilamino inferior, haloalquilamino inferior, alcóxi inferior, haloalcóxi inferior, alcoxialquila inferior, alquilcarboni- la, aminocarbonila, arilcarbonila, aralquilcarbonila, heteroarilcarbonila, hete- roaralquilcarbonila, alquittio, aminoalquila, cianoalquila, arila e similares.

O grupo de substituição pode ele próprio ser substituído.

O gru-

po substituído no grupo de substituição pode ser carboxila, halo; nitro, ami- no, ciano, hidróxi, alquila inferior, alcóxi inferior, aminocarbonila, -SR, tioami- do, -SOsH, -SO2R ou cicloalquila, em que R é tipicamente hidrogênio, hidro- xila ou alquila inferior.

Quando o substituinte substituído inclui um grupo de cadeia line- ar, a substituição pode ocorrer dentro da cadeia (por exemplo, 2- hidroxipropila, 2-aminobutila, e similares) ou na terminação da cadeia (por exemplo, 2-hidroxietila, 3-cianopropila, e similares). Substituintes substituí- dos podem ser de cadeia linear, ramificada ou disposições cíclicas do car- bono ou heteroátomos covalentemente ligados.

Entende-se que as defini- ções acima definitions não são destinadas a incluir padrões de substituição não permitidos (por exemplo, metila substituída com cinco grupos flúor ou um átomo de halogênio substituído com outro átomo se halogênio). Tais pa- drões de substituição não permitidos são bem conhecidos do técnico versa- e 15 do Também será evidente para aqueles versados na técnica que os õ compostos da invenção, ou seus estereoisômeros, como também os sais, É ésteres, metabólitos e profármacos farmaceuticamente aceitáveis de qual- . quer um deles, podem estar sujeitos à tautomerização e podem dessa ma- neira existir em várias formas tautoméricas em que um próton de um átomo de uma molécula desvia para outro átomo e as ligações químicas entre os átomos das moléculas são consequentemente rearrumados.

Ver, por exemplo, March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structures, Fourth Edition, John Wiley & Sons, páginas 69-74 (1992). Como usado aqui no presente, o termo "tautômero" se refere aos compostos pro- duzidos pelo desvio do próton, e deve ser entendido que todas as formas tautoméricas, como elas podem existir até agora, são incluídas dentro da invenção.

Os compostos da invenção, ou seus tautômeros, como também ossais, ésteres, metabólitos e profármacos farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um deles, podem compreender átomos de carbono assimetrica- mente substituídos.

Tais átomos de carbono assimetricamente substituídos o

ANE —————— 25/190 podem resultar nos compostos da invenção existentes em enantiômeros, diastereômeros, e outras formas estereoisoméricas que podem ser defini- das, em termos de estereoquímica absoluta, tal como nas formas (R)- ou (S)-. Como um resultado, todos os isômeros possíveis, estereoisômeros in- — dividuais em suas formas opticamente puras, misturas das mesmas, mistu- ras racêmicas (ou "racematos"), misturas de diastereômeros, como também diastereômeros únicos dos compostos da invenção são incluídos na presen- te invenção. Os termos da configuração "S" e "R", como usados aqui no pre- sente, são como definido pela IUPAC 1974 RECOMMENDATIONS FOR SECTION E, FUNDAMENTAL STEREOCHEMISTRY, Pure Appl. Chem. 45:13-30 (1976). Os termos a. e são empregados para posições de anéis de compostos cíclicos. O lado a- do plano de referência é aquele lado no qual o substituinte preferi- do fica na posição numerada inferior. Aqueles substituintes que ficam no la- do oposto do plano de referência são designados pelo descriptor B. Deve ser - 15 observado que esta utilização difere daquela para estereoparentes cíclicos, em que "a" significa "abaixo do plano" e denota configuração absoluta. Os D termos de configuração a e B, como usados aqui no presente, são como de- finidos pelo CHEMICAL ABSTRACTS INDEX GUIDE-APPENDIX IV (1987) paragráfo : 203.

Como usado aqui no presente, o termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" se refere os sais de metais alcalinoterrosos ou ácidos não tóxicos dos compostos de Fórmula | ou Il. Estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento e a purificação final dos compostos de Fórmula | ou !l, ou por reagir, separadamente, a base ou as funções de ácido com ácido ou base orgânico ou inorgânico respectivamente, apropriados. Sais representa- tivos incluem mas não são limitados aos seguintes: acetato, adipato, algina- to, citrato, aspartato, benzoato, benzenossulfonato, bissulfato, butirato, can- forato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropionato, dodecilsuifato, etanossulfonato, glucoeptanoato, glicerofosfato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, cloridrato, bromidrato, iodoidrato, 2-hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, metanossulfonato, nicotinato, 2-naftalenossulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, o —————

3-fenilproionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, p-toluenossulfonato e undecanoato. Também, os grupos conten- do nitrogênio básico podem ser quaternizados comtais agentes como hale- tos de alquila inferior, tais como metila, etila, propila, e cloridrato, bromidrato eiodoidrato de butila; sulfatos de dialguila como dimetila, dietila, dibutila, e sulfatos de diamila, haletos de cadeia longa tais como cloretos, brometos e iodetos de decila, laurila, miristila e estearila, haletos de aralquila como bro- metos de benzila e fenetila e outros. Água ou produtos dispersáveis ou solú- veis em óleo são, dessa maneira, obtidos.

Exemplos de ácidos que podem ser empregados para formar sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis incluem tais ácidos inorgânicos como ácido clorídrico, ácido enxofreico e ácido fosfórico, e tais ácidos orgânicos como ácido oxálico, ácido maleico, ácido metanossulfônico, ácido suceínico e ácido cítrico. Sais de adição básica podem ser preparados . 15 in situ durante o isolamento e a purificação finais dos compostos de fórmula (1), ou separadamente pela reação de porção de ácido carboxílico com uma base apropriada tal como hidróxido, carbonato ou bicarbonato de um cátion Ú de meta! farmaceuticamente aceitável ou com amônia, ou uma amina primá- ria, secundária ou terciária orgânica. Sais farmaceuticamente aceitáveis in- cluem, mas não são limitados a, cátions baseados em metais de álcali ou alcalinos terrosos, tais como os sais de sódio, lítio, cálcio, magnésio, alumi- nio e similares, como também um amônio não tóxico, amônio quaternário e cátions de amina, incluindo, mas não limitado a amônio, tetrametilamônio, tetraetilamônio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilami- naesimilares. Outras aminas orgânicas representativas úteis para a forma- ção de sais de adição de base incluem dietilamina, etilenodiamina, etanola- mina, dietanolamina, piperazina e similares.

Como usado aqui no presente, o termo "éster farmaceuticamen- te aceitável" se refere aos ésteres, que hidrolisam in vivo e inclui aqueles que prontamente se decompõem no corpo humano para deixar o composto original ou um sal do mesmo. Grupos éster apropriados incluem, por exem- plo, aqueles derivados de ácidos carboxílicos alifáticos farmaceuticamente

UNE aEE— À eÀ/ e 27/190 aceitáveis, particularmente ácidos alcanóicos, alquenóicos, cicloalcanóicos e alcanedióicos, em que cada porção de alquila ou alquenila vantajosamente têm não mais do que 6 átomos de carbono. Exemplos de ésteres particula- res incluem formiatos, acetatos, propionatos, butiratos, acrilatos e etilsucci- natos.

O termo "profármacos farmaceuticamente aceitáveis" como usa- do aqui no presente se refere àqueles profármacos dos compostos da pre- sente invenção que são, dentro do escopo de julgamento médico perfeito, apropriados para uso em contacto com os tecidos de seres humanos e de animais inferiores sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e si- milares, compatível com uma proporção de risco/benefício razoável, e eficaz para seu uso pretendido, como também as formas zwitteriônicas, quando possível, dos compostos da invenção. O termo "profármaco" se refere aos compostos que são rapidamente transformados in vivo para render o com- . 15 posto de origem da fórmula acima, por exemplo, por hidrólise no sangue. Uma discussão completa é provida em T. Higuchi e V. Stella, Pro-drugs as r Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, e em Ed- - ward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Phar- maceutical Association and Pergamon Press, 1987, ambos os quais são in- : 20 corporados aqui no presente por referência.

Qualquer fórmula dada aqui no presente é também destinada a | representar formas não marcadas como também formas marcadas isotopi- camente dos compostos. Compostos marcados isotopicamente têm estrutu- ras ilustradas pelas fórmulas dadas aqui no presente, exceto que aquele um oumais átomos são substituídos por um átomo tendo uma massa atômica selecionada ou número de massa. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, tais como 2H, *H, "C, 13, 14c, Sn, 19F 3'p, ?p, *s, *PCl, 125] respectivamente. A invenção inclui vários compostos isotopicamente marcados como definido aqui no presente, por exemplo, aqueles dentro dos quais isótopos radioativos, tais como HH, 13C, e *C, estão presentes. Tais compostos isotopicamente marcados são o úteis em estudos metabólicos (com *“C), estudos de reação cinética (com, por exemplo ?H ou *H), técnicas de detecção ou de imagem, tais como to- mografia de emissão de pósitron (PET) ou tomografia computadorizada de emissão de fóton único (SPECT) incluindo ensaios de distribuição de fárma- —cooutecidode substrato, ou em tratamento radioativo de pacientes. Em par- ticular, um *?*F ou composto marcado pode ser particularmente desejável para estudos de PET ou SPECT. Compostos isotopicamente marcados des- ta invenção e profármacos dos mesmos podem geralmente ser preparados conduzindo os procedimentos descritos nos esquemas ou nos exemplos e preparações descritas abaixo, substituindo um reagente isotopicamente marcado prontamente disponível por um reagente marcado não isotopica- mente.

Além disso, substituição com isótopos mais pesados, particular- mente deutério (isto é, ?H ou D) pode produzir certas vantagens terapêuticas - 15 resultantes de estabilidade metabólica maior, por exemplo média de vida in vivo aumentada, ou requisitos de dosagem reduzidos, ou um melhoramento é no índice terapêutico. Entende-se que deutério, neste contexto, é visto como um substituinte de um composto da fórmula (1). A concentração de tal isóto- - po mais pesado, especificamente deutério, pode ser definida prlo fator de enriqucimento isotópico. O termo "fator de enriquecimento isotópico”, como usado aqui no presente, significa a relação entre a abundância isotópica e a abundância natural do isótopo especificado. Se um substituinte em um com- posto desta invenção é denotado deutério, tal composto tem um fator de en- riquecimento isotópico para cada átomo de deutério designado de pelo me- nos 3500 (52,5% de incorporação de deutério em cada átomo de deutério designado), pelo menos 4000 (60% de incorporação de deutério), pelo me- nos 4500 (67,5% de incorporação de deutério), pelo menos 5000 (75% de incorporação de deutério), pelo menos 5500 (82,5% de incorporação de deu- tério), pelo menos 6000 (90% de incorporação de deutério), pelo menos

6333.3 (95% de incorporação de deutério), pelo menos 6466.7 (97% de in- corporação de deutério), pelo menos 6600 (99% de incorporação de deuté- rio), ou pelo menos 6633.3 (99,5% de incorporação de deutério).

A——n—— — —— 29/190 Compostos isotopicamente marcados de fórmula (1) podem ge- ralmente ser preparados pelas técnicas convencionais conhecidas daqueles versados na técnica, ou por processos análogos àqueles descritos nos E- xemplos e Preparações que acompanham usando um reagente marcado isotopicamente apropriado no lugar do reagente não marcado empregado anteriormente.

Será evidente para aqueles versados na técnica que os compos- tos da invenção, ou seus tautômeros, profármacos e estereoisômeros, como também sais, ésteres e profármacos de qualquer um deles farmaceutica- mente aceitáveis, podem ser processados in vivo através de metabolismo em um corpo ou célula de ser humano ou animal para produzir metabólitos. O termo "metabólito”, como usado aqui no presente, se refere à fórmula de qualquer derivado produzido em um sujeito depois da administração de um composto de origem. Os derivados podem ser produzidos a partir do com- r 15 —postode origem por várias transformações bioquímicas no sujeito tais como, por exemplo, oxidação, redução, hidrólise ou conjugação e incluem, por e- | xemplo, óxidos e derivados demetilados. Os metabólitos de um composto da É invenção podem ser identificados usando ténicas rotineiras conhecidas na - técnica. Ver, por exemplo, Bertolini, G. et al., J. Med. Chem. 40:2011-2016 (1997); Shan, D. etal., J. Pharm. Sci. 86(7):765-767; Bagshawe K., Drug Dev. Res. 34:220-230 (1995); Bodor, N., Advances in Drug Res. 13:224-331 (1984); Bundgaard, H., Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985); e Larsen,

1. K., Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Desenvolvimento (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Hanvood Academic Publishers, 1991). De- verá ser entendido que compostos químicos individuais que são metabólitos dos compostos de fórmula |, fórmula Il, ou seus tautômeros, profármacos e estereoisômeros, como também os sais, ésteres e profármacos de qualquer um deles farmaceuticamente aceitáveis, são incluídos dentro da invenção. O termo "câncer" se refere às doenças de câncer que podem ser —beneficamente tratadas pela inibição de Pim quinase, incluindo, por exem- plo, cânceres sólidos, tais como carcinomas (por exemplo, dos pulmões, pâncreas, tiroide, ovário, bexiga, mama, próstata ou cólon), melanomas, dis- o

A—= == = = RR« 30/190 túrbios mieloides (por exemplo, leucemia mieloide, mieloma múltiplo e eritro- leucemia), adenomas (por exemplo, adenoma do cólon viloso) e sarcomas (por exemplo, osteossarcoma).

MÉTODOS SINTÉTICOS Os compostos da invenção podem ser obtidos através de proce- dimentos conhecidos daqueles versados na técnica. Por exemplo, como mostrado no Esquema 1, ciclohexanodionas podem ser convertidos através de monotriflatos para os ésteres de ciclo-hexenonaboronato corresponden- tes que podem se submeter a formação de ligação de carbono mediada por —paládio com 4-cloro, 3-nitro pirídina para render ciclo-hexenonas | substituí- das por nitropiridina. A redução da funcionalidade de enona pode render um ciclohexenol Il que, mediante proteção de álcool, redução de nitro e alceno, amida acoplada e desproteção podem render ciclo-hexanol amidas III. Ciclo- hexeno! Il pode também se submeter a reação de Mitsunobu com ftalimida - 15 para render um aminociclohexeno IV protegido. Em seguida à redução de nitro e alceno, ftalimida protegida por aminociclo-hexila piridila aniliha Va - pode ser submetida à acoplamento e desproteção de amida, para render : amidas Vi de aminociclo-hexano. A anilina Vb de aminociclo-hexano pirídila protegida por Boc pode também ser preparada de ciclo-hexenol Il da manei- raa seguir: proteção de álcool, alceno e redução de nitro, proteção de piridil amina Cbz, desproteção de silil éter, oxidação de Dess-Martin para a ciclo- hexanona, aminação redutora com benzilamina, desproteção de Cbz e Bn e proteção de Boc de amina alitfática primária. Nos produtos de amida 11 e VI, se Ro é halo ou triflato, as amidas Ill e VI podem ainda ser modificadas pelas modificações padrão para introduzir arilas, alquilas e heteroarilas substitui- das em R2. Por exemplo, se R, é Br, pela reação com ácidos borônicos ou reagentes organometálicos, ou conversão para o éster de boronato corres- pondente e reação com haletos de arila/heteroarila ou triflatos, uma varieda- de de modificações de R, é possível.

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| LIOUÉÓÚÚoÚÔÓ«<«Ô9K»——— 31/190 Esquema 1. Nag0O, : Rr Rar TO Kons, Pótóprncia, — Rar oco dioxano, BO *C durante a noite Nos í e Mm Bora Soma — 119º 1 Neta RB Ro NE Rar Nent Boto to h Ha PAO, ACOM ant No to o ie No

1. TBDMSCL v 1. TEDMSCL ns vas ImidazaL DME. ImidazoL DIF

2.Ha, PATO, MeOH 2.Hz PAC, MeOH 1.A0id, HONT. EDC, DMF 3 Aeid, HONT, 3.cbrOSu DMAP, DOM pausa ta, ão / É Dessvíarin, DM | o

6. BnNH5 LB,

7.3: He'paC, Meon R er "O : Rar NHB00 er a SO 1. Acid, HOAT. EDO, DMF a s 226% TFA/CÍLEA, 0u 4 E NH Hciioxano o R N o mo Re ou Na vw" MES REP ' Alternativamente, como mostrado no Esquema 2, ciclohexeno! ll pode ser desidratado rendendo um ciclo-hexadieno que, mediante epoxida- - 5 ção (através da formação de bromo-hidrina e eliminação de HBr ou de - mCPBA diretamente) e abertura de epóxido de azida rende álcool VI de ci- clohexenil azida. Álcool VI de ciclo-hexenil azida pode ser convertido para anilina Vila de hidroxi amino trans protegida pela redução de azida, proteção de álcool e redução de alceno e nitro. Alternativamente, o álcool! VI ciclohe- xenil azida pode ser convertido para cis amino hidroxi anilina Vilb protegido através da redução de azida e proteção de Boc, mesilação de álcool! e cicli- zação intramolecular para o cis carbamato cíclico, seguido pela proteção de Boc e redução de alceno e nitro. As ciclo-hexilpirídil anilines Vila e VIlb resul- tantes podem ser convertidas para as piridina amidas correspondentes pela acoplagem de amida, acetato ou clivagem de carbamato cíclico e desprote- ção de Boc. Se R, é halo ou triflato, as amidas Villa e Villb podem ser ainda modificadas pelas modificações padrão para introduzir arilas, alguilas e hete- roarilas substituídas em R2, depois da formação da ligação de amida e antes da desproteção total. Por exemplo, se R2 é Br, através de reação com ácidos borônicos ou reagentes organometálicos, ou conversão para o éster de bo- ronato correspondente e reação com haletos ou triflatos de arila/heteroarila, tt

A—————= 32/190 uma variedade de modificações de R> é possível.

Esquema 2. ne RE EA Rs W &. N N " DADA ao E & Bo oo EEE a “e | A R A OS e.

NH NE) nox | & ATA A ão Nm NE o anime O E SEE ro IL a : eme a DA Vvilb Ri1=H, F ou NH; Vilb . Alternativamente, como mostrado no Esquema 3, 5-alquila, 4- hidróxi, 3-aminopiperidinas trissubstituídos podem ser preparados e modifi- r cados para render 5-alquila, 4-hidróxi, 3-aminopiperidinila piridina amidas IX trissubstituídos como a seguir.

Reação de aldeído de Garner com (R)4- benzil-3-propioniloxazolidin-2-ona seguida por proteção de TBS do álcool resultante produz o composto X.

Redução de oxazolidinona seguida pela introdução do grupo azida rende o intermediário XI.

Desproteção sob condi- ções acídicas revela o álcool amino correspondente, que mediante proteção com o grupo Boc seguida pela mesilação do álcool primário rende o inter- mediário XII.

Redução de azida produz a formação da piperidina que é sub- sequentemente reagida com 4-cloro-3-nitropiridina, reduzida para amina, acoplada com o ácido carboxílico correspondente e desprotegida para pro- ver 5-metil,4-hidróxi-3-aminopiperidinila piridina amidas IX trissubstituído.

Se R, é halo ou triflato, a amida IX pode ser ainda modificada pelas modifica- ções padrão para introduzir arilas, alquilas e heteroarilas substituídas em Ri depois da formação da ligação de amida e antes da desproteção total.

Por o

AEEE——"ÂÂ"" " 33/190 exemplo, se R, é Br, através da reação com ácidos borônicos ou reagentes organometálicos, ou conversão para o éster de boronato correspondente e reação com haletos de arila/heteroarila ou triflatos, uma variedade de modifi- cações de R, é possível. Esquema3. 2 A, Emo VS, CEE o, à af 2 TasoTE tanáina à of, 2) DK, PR, DPPA et x xo ou meme mo TETE OS nó “om — PEA, HPIOH, SPC N a ” EEE o mm. 1 5) 6) HCl a 4M em dioxano x R1=H,F ou NH, Alternativamente, como mostrado no Esquema 4, 5-metila, . 4-hidróxi, 3-aminopiperidinas trissubstituídas podem também ser preparadas e modificadas para render 5-metila, 4-hidróxi, 3-aminopiperidinila amidas XII! : 10 trissubstituidas como a seguir. Reação de ésteres de boronato de crotila Ú com SerOBn aldeído seguida pela formação de carbamato cíclico, clivagem - oxidativa de alceno e redução rende o composto XIV de hidroxila. A despro- teção de benzila seguida pela bistosilação e reação com Pp- metoxibenzilamina e desproteção de amina rende piperidina XV. Reação de piperidina XV substituída com arenos ou heteroarenos substituídos por halo nitro seguidos por proteção de carbamato, redução de nitro, acoplagem de amida, abertura e desproteção de carbamato cíclico rende 5-metila, 4- hidróxi, 3-aminopiperidinil amidas XIII trissubstituídos. Se R3 é halo ou trifla- to, a amida XV pode ser ainda modificada pelaas modificações padrão para introduzir arilas, alquilas e heteroarilas substituídas em R3. Por exemplo, se R; é Br, através da reação com ácidos borônicos ou reagentes organometá- licos, ou conversão para o éster de boronato correspondente e reação com haletos ou triflatos de arila/heteroarila, uma variedade de modificações de R3 é possível.

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Esquema 4. À Hb TE" So aNHB66 78ºCt NaHTHF Rs fe E A mA es 'oBn o 'oBn none 2 ERREI É OA EO TO 3. NHDPMB, DIEA o * 2NBH,BOLOC 10º Som Li a PAONe , xiv xv E 1. 10% Pd'C, Ho, MeOH R E IDDMAR So CN 2. ácido, HOAT, EDC, e &s CER Ea LO SD amem OX | xm . Os compostos da invenção são úteis in vitro elou in vivo por ini- bir o crescimento de células de câncer.

Os compostos podem ser usados — sozinhos ou em composições junto com um veículo ou excipiente farmaceu- ticamente aceitável.

Veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis apropriados incluem, por exemplo, agentes de processamento e modificado- res e intensificadores de distribuição de fármacos, tais como, por exemplo, fosfato de cálcio, estearato de magnésio, talco, monossacarídeos, dissacarí- deos, amido, gelatina, celulose, metil celulose, carboximetil celulose de só- dio, dextrose, hidroxipropil-B-ciclodextrina, polivinilpirrolidinona, ceras de ponto de fusão baixo, resinas de troca de íons, e similares, como também combinações de quaisquer dos dois ou mais dos mesmos.

Outros excipien- tes farmaceuticamente aceitáveis apropriados são descritos em "Reming- ton's Pharmaceutical Sciences," Mack Pub.

Co., New Jersey (1991), incorpo- rados aqui no presente por referência.

Quantidades eficazes dos compostos da invenção geralmente incluem qualquer quantidade suficiente para detectavelmente inibir a ativida- de de Pim por qualquer uma dos ensaios descritos aqui no presente, através de outros ensaios de atividade de Pim quinase conhecidos daqueles que têm conhecimento comum na técnica, ou detectando uma inibição ou alívio de sintomas de câncer.

A quantidade do ingrediente ativo que pode ser combinado com os materiais de veículo para produzir uma forma de dosa- gem única, vão variar dependendo do hospedeiro tratado e o modo particular de administração.

Ficará entendido, entretanto, que o nível de dose específi- co para qualquer paciente particular dependerá de uma variedade de fato- res, incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, peso corporal, saúde em geral, sexo, dieta, hora de administração, via de adminis- tração, taxa de excreção, combinação de fármacos, e a gravidade da doença particular sendo submetida a terapia.

A quantidade terapeuticamente eficaz & 15 para uma dada situação pode ser prontamente determinada por experimen- tação de rotina e dentro da habilidade e julgamento do clínico comum. ' É Para os propósitos da presente invenção, uma dose terapeuti- camente eficaz geralmente será uma dose diária total administrada para um . hospedeiro, em doses únicas ou divididas, pode ser em quantidades, por exemplo, de 0,001 a 1000 mg/kg de peso corporal diariamente e mais prefe- rido de 1,0 a 30 mg/kg de peso corporal diariamente.

Composições de dosa- gem unitária podem conter tais quantidades de submúltiplos das mesmas para perfazer a dose diária.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados oralmente, parenteralmente, sublingualmente, por aerossolização ou inala- ção spray, retalmente, ou topicamente em formulações de unidade de dosa- gem contendo carreadores, adjuvantes e veículos convencionais não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis como desejado.

A administração tópica pode também envolver o uso de administração transdérmica tal como emplastro transdérmico ou dispositivos de ionoforese.

O termo parenteral, como usado aqui no presente, inclui injeções subcutâneas, intravenosas, intramuscular, injeção intrasternal ou técnicas deinfusão.

Preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquosas ou oleaginosas injetáveis estéreis podem ser formuladas de acordo com o co- nhecido na técnica usando agentes dispersantes ou umidificantes apropria- dos e agentes de suspensão.

A preparação injetável estéril pode também seruma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente aceitável parenteralmente não tóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3-propanediol.

Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotônico.

Além disso, óleos estéreis, fixos convencionalmente empregados são como um solvente ou meio de suspensão.

Para este propósito qualquer óleo fixo suave pode ser empregado incluindo mono- ou di-glicerídeos sinté- ticos.

Adicionalmente, ácidos graxos, tais como ácido oléico, encontram uso na preparação de injetáveis.

Supositórios para administração retal do fármaco podem ser - 15 preparados misturando o fármaco com um excipiente não irritante apropriado tal como manteiga de cacau e polietileno glicóis, que são sólidos em tempe- S raturas comuns, porém líquidos a temperatura retal e dessa maneria serão S fundidos no reto e liberam o fármaco. : Formas de dosagem sólida para administração oral podem inclu- ir cápsulas, comprimidos, pilulas, pós e grânulos.

Em tais formas de dosa- gem sólida, o composto ativo pode ser admisturado com pelo menos um di- luente inerte tal como sacarose, lactose ou amido.

Tais formas de dosagem podem também compreender, como é prática normal, substâncias adicionais em vez de diluentes inertes, por exemplo, agentes lubrificadores tais como —estearato de magnésio.

No caso de cápsulas, comprimidos e pilulas, as for- mas de dosagem podem também compreender agentes de tampão.

Com- primidos e pílulas podem adicionalmente ser preparados com revestimentos entéricos.

Formas de dosagem líquida para administração oral podem incluir emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente acei- táveis contendo diluentes inertes comumente usados na técnica, tal como água.

Tais composições podem também compreender adjuvantes, tais como agentes de umidificação, agentes emulsificantes e de suspensão, ciclodex-

trinas, e adoçantes, flavorizantes e agentes de perfumar.

Os compostos da presente invenção podem também ser admi- nistrados na forma de lipossomas. Como é conhecido na técnica, lipossomas são geralmente derivados de fosfolipídeos ou outras substâncias lipídicas.

—Lipossomas são formados por cristais líquidos hidratados mono- ou multi- lamelares que são dispersos em um meio aquoso. Qualquer lipídeo não tóxi- co, fisiologicamente aceitável e metabolizável capaz de formar lipossomas pode ser usado. As composições presentes em forma de lipossoma podem conter, em adição a um composto da presente invenção, estabilizadores, conservantes, excipientes, e similares. Os lipídeos preferidos são os fosfoli- pídeos e fosfatidil colina (lecitinas), ambos naturais e sintéticos. Métodos para formar lipossomas são conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Pres- cott, Ed., Métodos in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.W,, p. 33 et seg. (1976).

. 15 Enquanto os compostos da invenção podem ser administrados como o único agente farmacêutico ativo, eles podem também ser usados em À combinação com um ou mais outros agentes usados no tratamento de cân- : cer. Os compostos da presente invenção são também úteis em combinação : com agentes terapêuticos conhecidos e agentes anticâncer, e combinações dos compostos presentemente descritos com outros agentes anticâncer ou quimioterápicos estão dentro do escopo da invenção. Exemplos de tais a- gentes podem ser encontrados em Câncer Principles and Practice of Onco- logy, V. T. Devita e S. Hellan (editores), 6º edição (15 de fevereiro de 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers. Uma pessoa de conhecimento co- —mum na técnica sera capaz de discernir quais combinações de agentes se- rão úteis com base nas características particulares dos fármacos e o câncer envolvido. Tais agentes anticâncer incluem, mas não são limitados ao se- guinte: moduladores de receptor de estrogênio, moduladores de receptor de androgênio, moduladores de receptor retinoide, agentes citotóxicos / citostá- ticos, agentes antiproliferativos, inibidores de transferase de proteína prenil, inibidores de redutase de HMG-CoA e outros inibidores de angiogênese, inibidores de proliferação de células e sinalização de sobrevivência, apopto-

se induzindo agentes e agentes que interferem com pontos de verificação de ciclo de células. Os compostos da invenção são também úteis quando co- administrados com radioterapia.

Dessa maneira, em uma modalidade da invenção, os compostos da invenção são também usados em combinação com agentes anticâncer conhecidos incluindo, por exemplo, moduladores de receptor de estrogênio, moduladores de receptor de androgênio, moduladores de receptor retinoide, agentes citotóxicos, agentes antiproliferativo, inibidores de transferase de prenil-proteína, inibidores de redutase de HMG-CO0oA, inibidores de protease deHIV, inibidores de transcriptase reversa e outros inibidores de angiogêne- se.

Em certas modalidades da invenção presentemente preferidas, agentes representativos úteis em combinação com os compostos da inven- ção para o tratamento de câncer incluem, por exemplo, irinotecano, topote- - 15 cano, gemcitabina, 5-fluorouracila, leucovorin carboplatina, cisplatina, taxa- nos, tezacitabina, ciclofosfamida, alcaloides vinca, imatinib (Gleevec), antra- Í ciclinas, rituximab, trastuzumab, como também outros agentes quimioterápi- D cos de câncer.

. Os compostos acima para serem empregados em combinação com os compostos da invenção serão úteis em quantidades terapêuticas como indicado no Physicians' Desk Reference (PDR) 47º Edição (1993), que é incorporado aqui no presente por referência, ou tais quantidades terapeuti- camente úteis como será conhecido da pessoa de habiidade comum na téc- nica.

Os compostos da invenção e outros agentes anticâncer podem ser administrados na dosagem clínica máxima recomendada ou em doses mais baixas. Os níveis de dosagem dos compostos ativos nas composições da invenção podem ser variados de maneira obter uma resposta terapêutica desejada, dependendo da via de administração, da gravidade da doença e da resposta do paciente. A combinação pode ser administrada como compo- sições separadas ou côo uma forma de dosagem única contendo ambos os agentes. Quando administrados como uma combinação, os agentes terapêu-

ticos podem ser formulados como composições separadas, que são dadas ao mesmo tempo ou em tempos diferentes, ou os agentes terapêuticos po- dem ser dados como uma composição única. Em uma modalidade, a invenção provê um método de inibir Pim, Pim2 ou Pim3 em um ser humano ou sujeito animal. O método inclui administrar uma quantidade eficaz de um composto, ou um sal do mesmo farmaceuticamente aceitável, de qualquer uma das modalidades dos com- postos de Fórmula | ou Il para um sujeito com necessidade do mesmo. A presente invenção sera compreendida mais prontamente pela referência aos exemplos a seguir, que são providoa a título de ilustração e não são destinados a ser limitantes da presente invenção.

EXEMPLOS Com referência aos exemplos que estão a seguir, os compostos das modalidades preferidas foram sintetizados usando os métodos descritos . 15 —aquino presente, ou outros métodos, que são conhecidos na técnica. Os compostos e/ou intermediários foram caracterizados por " cromatografia íquida de alto desempenho (HPLC) usando um sistema cro- matográfico Waters Millenium com um 2695 Separation Module (Milford, MA). As colunas analíticas foram Phenomenex Luna C18 -5 y de fase rever sa,4,6x50 mm, de Alltech (Deerfield, IL). Uma purificação de gradiente foi usada (2,5 mL/min de fluxo), tipicamente iniciando com 5% de acetonitri- la/95% de água e progredindo para 100% de acetonitrila durante um período de 10 minutos. Todos os solventes contendo 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA). Compostos foram detectados por absorção de luz ultravioleta (UV) em7220 ou254 nm. Solventes de HPLC foram os de Burdick e Jackson (Muskegan, MI), ou Fisher Scientific (Pittsburgh, PA).

Em alguns casos, a pureza foi avaliada por cromatografia de camada fina (TLC), usando placas de sílica-gel sustentadas por vidro ou plástico, tais como, por exemplo, folhas flexíveis Baker-Flex Sílica Gel 1B2-F. Os resultados de TLC foram prontamente detectados visualmente sob luz ultravioleta, ou empregando vapor de iodo bemconhecido e outras diversas técnicas de coloração.

Análise espectrométrica de massa foi realizada em um dos três instrumentos de LCMS: Um Waters System (Alliance HT HPLC e um espec- trometro de massa Micromass ZQ; Coluna: Eclipse XDB-C18, 2.1 x 50 mm; gradiente: 5-95% (ou 35-95%, ou 65-95% ou 95-95%) acetonitrila em água com0,05% de TFA durante um período de 4 min; taxa de fluxo 0,8 mL/min; variação do peso molecular 200-1500; cone Voltage 20 V; temperatura da coluna 40ºC), outro Waters System (sistema ACQUITY UPLC e um sistema ZQ 2000; Coluna: ACQUITY UPLC HSS-C18, 1,8um, 2,1 x 50mm; gradiente: 5-95% (ou 35-95%, ou 65-95% ou 95-95%) acetonitrila em água com 0,05% de TFA durante um período de 1,3 min; taxa de fluxo 1,2 mU/min; variação de peso molecular 150-850; cone Voltage 20 V; temperatura da coluna 50ºC) ou um Hewlett Packard System (Série 1100 HPLC; Coluna: Eclipse XDB-C18, 2.1 x 50 mm; gradiente: 5-95% de acetonitrila em água com 0,05% de TFA durante um período de 4 min; taxa de fluxo 0,8 mL/min; varia- - 15 çãodo peso molecular 150-850; cone Voltage 50 V; temperatura da coluna 30ºC). Todas as massas foram reportadas como aquelas de íons de origem É protonados. : Análise de ressonância magnética nuclear (NMR) foi realizada . de alguns compostos com um Varian 400 MHz NMR (Palo Alto, CA). A refe- rência espectral foi TMS ou o desvio químico conhecido do solvente.

Separações preparadoras são realizadas usando sistema de cromatografia instantânea 40 e KP-Sil, S0A (Biotage, Charlottesville, VA), ou por cromatografia de coluna instantânea usando sílica-gel (230-400 de ma- lha) material de embalagem, ou por HPLC usando um Waters 2767 Sample Manager, coluna de fase reversa C-18, 30X50 mm, fluxo de 75 mL/min.

Sol- ventes típicos empregados para o sistema Biotage Instantâneo 40 e croma- tografia de coluna instantânea são diclorometano, metanol, etil acetato, he- xano, acetona, amônia aquosa (ou hidróxido de amonio), e trietil amina.

Sol- ventes típicos empregados para a HPLC de fase reversa são concentrações variando de acetonitrila e água com 0,1% de ácido trifluoroacético.

Deverá ficar entendido que os compostos orgânicos, de acordo com as modalidades preferidas, podem exibir o fenômeno de tautomerismo.

a 41/190 Como as estruturas químicas dentro deste relatório descritivo podem repre- sentar somente uma das possíveis formas tautoméricas, deverá ficar enten- dido que as modalidades preferidas abrangem qualquer forma tautomérica da estrutura lançada.

Entende-se que a invenção não é limitada às modalidades men- cionadas aqi no presente para ilustração, mas abrange totas tais formas das mesmas como vêm dentro do escopo da descrição acima.

Os exemplos abaixo como também por todo o pedido, as abrevi- aturas a seguir têm os significados a seguir. Se não definidos, os termos têm seus significados geralmente aceitos. etilcarbodiimida Bon [Bm ER EE Hear EE EE a TERESENSE

Wo: 42/190 Paládio(ll) - diclorometano Síntese de trifluorometanossulfonato de 3-oxociclo-hex-1-enila o ç Para uma solução de ciclo-hexano-1,3-diona (equiv. 1) em DCM (0,4 M) foi adicionado NazCO; (equiv. 1,0) e refrigerado até O ºC. Adicionado TO (equiv 1,0) em DCM (5 M) em gotas durante 1 hora a temperatura am- biente sob uma atmosfera de nitrogênio. Mediante a adição, a reação foi agi 7 tada por 2 horas (solução vermelha escura). A solução foi filtrada e o filtrado foi adicionado a NaHCO; saturado (cuidadosamente), depois extraídos os ; orgânicos, secos com salmoura, depois NazSO,, e concentrada. O bruto foi : 10 usado para a etapa seguinte sem purificação adicional. Trifluorometanossul- fonato de 3-oxociclo-hex-1-enila foi obtido em 67% de rendimento. O triflato se decompõe mediante armazenamento e deverá ser usado imediatamente para a próxima reação. LC/MS=244,9/286,0 (M+H and M+CH;3CN); Rt = 0,88 min. Síntesede3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-2-enona ç 9º

AT Para uma solução de trifluorometanossulfonato de 3-oxociclo- hex-1-enila (equiv. 1,0) em dioxano desgaseificado (0,3 M) foi adicionado bi(pinacolato)diboro (equiv. 2,0), KOAc (equiv. 3,0), e Pd(dppf)CIa-DCM (e- quiv 0,05). A reação foi aquecida até 80 ºC por 2 horas, depois filtrada. À solução de dioxano foi usada para a próxima etapa sem purificação adicio-

. 43/190 nal. LC/MS = 140,9 (M+H de ácido borônico). Síntese de 3-(3-nitropiridin-4-i)ciclo-hex-2-enona o Q» | >

N Para uma solução de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2- ilciclo-hex-2-enona (equiv. 1,0) em dioxano desgaseificado e 2M NazCO; foi adicionado 4-cloro-3-nitropiridina (1,2 equiv.) e Pd(dppf)CI-DCM (0,05 e- quiv.). A reação foi aquecida em um banho de óleo a 110 ºC por 2 horas. Resfriada à temperatura ambiente, depois diluída com EtOAc, adicionado HO - solução escura, um grande número de emulsões. Filtrada para ficar livre dos sólidos, depois extraída a fase orgânica, seca com Na>SO;,, e con- centrada. O produto bruto foi purificado através de cromatografia em sílica- - gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:1) para render 3-(3-nitropiridin- 4il)ciclo-hex-2-enona (55%, 2 etapas). LC/MS = 219 (M+H), LC = 2.294 min. É Síntese de 3-(3-nitropiridin-4-i)ciclo-hex-2-enol : oH & nó Para uma solução de 3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enona (e- quiv. 1,0) foi adicionado EtOH (0,2 M) e CeCl;-7H2O (1,3 equiv.). A reação foi resfriada a O ºC, depois NaBH, (1,3 equiv.) foi adicionado em porções. Agitada por 2 h a 0 ºC, depois extinta por adição de água, concentrada para remover o EtOH, adicionado EtOAc, extraídos os produtos orgânicos, seca com salmoura, depois Na2SO,, e concentrada para render 3-(3-nitropiridin-4- iN)ciclo-hex-2-enol (99%). LC/MS = 221,1 (M+H), LC = 2,235 min. Síntese de 2-(3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enil)isoindolina-1 3-diona

. 44/190 o, O n S : NO? |

N Para uma solução de 3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enol (equiv. 1,0), trifenilfosfina (equiv. 1,5) e ftalimida (equiv. 1,5) em THF (0.3 M) a 0 ºC foi adicionado (E)-di-terc-butil diazeno-1,2-dicarboxilato (equiv. 1,5) em go- tas A reação foi agitada a 0 ºC por 2 horas. Concentrada até a secura sob vácuo, depois purificado o produto bruto através de cromatografia em coluna de sílica-gel eluindo com EtOAc e hexanos (1:1 com metanol 5%) para ren- der a 2-(3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enil)isoindolina-1,3-diona (rendimen- to de 63%). LC/MS = 350,3 (M+H), LC = 3,936 min. - 10 Síntese de 2-(3-(3-aminopiridin-4-il)ciclo-hex-2-enil)isoindolina-1,3-diona O, ? : N : Wo NH? >

N Para uma solução de 2-(3-(3-nitropiridindá-il)ciclo-hex-2- enil)isoindolina-1,3-diona (equiv. 1,0) em AcCOH (0,38 M) foi adicionado Fe (equiv. 6,0) e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 2 h. Filtrada, depois lavada com metanol e o filtrado concentrado. Para o produto bruto foram adicionados acetato de etila e NaHCO; saturado, os produtos orgâni- cos foram secos com Na7zSO,, e concentrados para dar 2-(3-(3-aminopiridin- 4il)ciclo-hex-2-enil)isoindolina-1,3-diona como uma goma espessa amarela em rendimento de 96%. LC/MS = 320,0 (M+H), LC = 2,410 min. Síntese de 2-(3-(3-aminopiridin-4-il)ciclo-hexiD)isoindolina-1,3-diona fo) 1 o RW NH2 | ê Para uma solução de 2-(3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2- eniDisoindolina-1,3-diona (equiv. 1,0) em ácido acético (0,1 M) foi adicionado Pd/C 10% (equiv. 0,2) e a reação foi agitada sob um balão de H2. Após 3 dias, a reação foi fiirada através de Celite, lavada com acetato de etila e metanol, o filtrado foi diluído com acetato de etila e lavado duas vezes com 2M NasCO; saturado.

A fase orgânica foi seca com sulfato de magnésio, fil- trada e concentrada.

O material bruto foi triturado com hexanos e acetato de etila para render 2-(3-(3-aminopiridin-4-il)ciclo-hexiN)isoindolina-1,3-diona em - 10 73% de rendimento.

LC/MS = 322,2 (M+H), temperatura ambiente = 0,64 min. : Síntese de trifluorometanossulfonato de : 5,5-dimetil-3-oxociclo-hex-1-enila Os oTf Em um balão de fundo redondo de 3 gargalos, 5,5- dimetilciclohexano-1,3-diona (eq. 1,1) foi dissolvido em DCM (0,2 M). Carbo- nato de sódio (eq. 1,1) foi adicionado e a mistura foi resfriada com agitação magnética em um banho de gelo/água salgada a - -5 ºC sob N2. Anidrido tríflico (equiv. 1,05) diluído em DCM foi adicionado em gotas através de um funil de adição durante 90 minutos.

Após a conclusão da adição, a reação foi agitada a — O ºC por 1h.

A partir de LCMS e 1H NMR, ainda havia material de partida restante.

Carbonato de sódio adicional (eq. 0,51) e anidrido tríflico (eq. 0,50) foram adicionados.

Após 2 horas, a mistura foi filtrada através de um funil de frita de vidro grosso (a torta foi lavada com DCM), transferida paraum balão Erlenmeier, extinta através de cuidadosa adição de bicarbo- nato de sódio aquoso saturado com vigorosa agitação até que o pH =7,

|— ra 46/190 transferida para um funil separador e as camadas separadas. A camada or- gânica foi lavada com salmoura, seca sobre MgSO;, filtrada e concentrada para dar trifluorometanossulfonato de 5,5-dimetil-3-oxociclo-hex-1-enila, o qual foi usado para a próxima etapa sem purificação posterior. LC/MS (m/2): MH'=273,1,Rt=1,03. Síntese de 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-2-enona

X do Todos os reagentes trifluorometanossulfonato de 5,5-dimetil-3- oxociclo-hex-1-enila (eq. 1,0), acetato de potássio (eq. 3,0) e bis(pinacolato)diboro (eq. 2,0) foram adicionados a 1,4-dioxano (0.2 M) em um balão de fundo redondo e desgaseificado por borbulhamento de N, atra- vês da mistura por 10 min. Aduto de PdCla(dppf) - DCM (eq. 0,03) foi adicio- i nado e a reação aquecida a 80 ºC equipado com um condensador de refluxo | 15 em um banho de óleo sob N2 durante a noite. A mistura foi resfriada à tem- - peratura ambiente, filtrada através de um funil de frita de vidro grosso, a torta lavada com 1,4-dioxano para dar o 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il) ciclo-hex-2-enona em 1,4-dioxano o qual foi usado para a próxima etapa sem purificação posterior. LC/MS (m/z): MH*(ácido borônico) =169,1,Rt=0,50. Síntese de 5,5-dimetil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enona S x

N O éster boronato de 5,5-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-2-enona (eq. 1,0) foi dissolvido em 1,4-dioxano em um balão de fundo redondo e desgaseíficado por borbulhamento de Nz através da solução por 30 minutos. 4-cloro-3-nitro-piridina (eq. 1,3) e 2M o

-AEE——————R— 47/190 carbonato de sódio (aq.) (eq. 2,0) foram adicionados e N> foi borbulhado por 10 minutos e depois PdCl-(dppf) - DCM (eq. 0,05) foi adicionado.

A mistura de reação foi agitada a 110 ºC por 2h.

A mistura foi adicionada a EtOAc e água.

A mistura resultante foi filtrada através de celite, a torta foi lavada com —EtOAc.A camada orgânica foi separada e a parte aquosa foi extraída com EtOAc.

As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO;,, filtradas e concentradas.

O resíduo foi purificado atra- vês de cromatografia em sílica-gel (eluída com EtOAc:Hexanos = 1:10 a 2:1) para dar 5,5-dimetil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enona (46.7% para três etapas). LC/MS (m/z): MH*=247,2, Rt=0,79. Síntese de 5,5-dimetil-3-(3-nitropiridin-4-il ciclo-hex-2-enol x“ ; Ô A NO, à. y ) Para uma solução de 5,5-dimetil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2- É enona (eq. 1,0), e CeCl3-7H2O (eq. 1,2) em MeOH (0,2 M) foi adicionado É 15 —NaBH, (eq. 1,0) a O ºC.

A solução foi agitada por 1 hora, e depois extinta . pela adição de 5 mL de água.

Os voláteis foram removidos em vácuo e o resíduo foi particionado entre EtOAc e H2O.

A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura.

A parte aquosa combinada foi extraída de volta com EtOAc e o produto orgânico foi lavado com salmoura.

Os produtos orgânicos combinados foram secos sobre MgSO,, filtrados e concentrados.

O resíduo foi purificado através de coluna (metanol 5% em 1:1 acetato de etila e hexa- nos) para dar 5,5-dimetil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enol (74%). LC/MS (m/2): MH'=249,2, Rt=0,76. Síntese de 2-(5,5-dimetil-3-(3-nitropiridin-4-il)- ciclo-hex-2-enil) isoindolina- 1,3-diona o»

M———— . . . 48/190 Ox À » " o “NO? | é Para uma solução homogênea de 5,5-dimetil-3-(3-nitropiridin-4- il) ciclo-hex-2-enol! (eq. 1,1), trifenil fosfina (eq. 1,5), e ftalimida (eq. 1,5) em THF (0.2 M) resfriada até O ºC, azodicarboxilato de ditercbutila (eq. 1,5) em —THF foiadicionado para a solução. A mistura foi agitada a O ºC por 2 horas. A reação foi concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado através de coluna (metanol 5% em 1:1 acetato de etila e hexanos) para dar 2-(5,5-dimetil-3-(3- nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enil)isoindolina-1,3-diona (99%). LC/MS (m/z): MH*=378,2, Rt=1,10. Síntese de 2-(3-(3-aminopiridin-4-il)-S5. 5-dimetil-ciclo-hex-2-enil) isoindolina- ' 1,3-diona O, ' e | o : NH ,

N Uma solução de 2-(5,5-dimetil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2- enil) isoindolina-1,3-diona (eq. 1) em ácido acético (0.1 M) foi purgada com nitrogênio por 10 min. Depois Pd/C 10% (eq. 0,10) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite sob uma at- mosfera de hidrogênio. Os sólidos foram removidos por filtração sobre celite, depois lavados com EtOAc e MeOH. O filtrado foi concentrado, diluído com EtOAc e lavado 2x com 2M Na2CO; aquoso saturado. A camada orgânica foi seca com MgSO;, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna (metanol 5% em 1:1 acetato de etila e hexanos) para dar 2-(3-(3- aminopiridin-4-i))-5,5-dimetilciclo-hex-2-enil)isoindolina-1 ,3-diona (89%). LC/MS (m/2): MH*=348,3, Rt=0,79. Síntese de 2-(5-(3-aminopiridin-4-il)-3, 3-dimetilciclo-hexil) isoindolina-1,3- o

ANN aa 49/190 diona O,

TO o A ANH? Ss ) Uma solução de 2-(3-(3-aminopiridin-4-i)-5,5-dimetilciclo-hex-2- enil) isoindolina-1,3-diona (eq. 1,0) em ácido acético (0.1 M) foi purgada com nitrogênio por 10 min. Depois Pd/C 10% (eq. 0,1) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 45 ºC, atmosfera de hidrogênio de 2,068 MPa (300 psi) em uma bomba de aço durante a noite e a 65 ºC, 2,068 MPa (300 psi) por 5 horas. Os sólidos foram removidos por filtração sobre celite, depois lavados com EtOAc e MeOH. O filtrado foi concentrado, diluído com EtOAc e lavado 2x com 2M Na2zCO; aquoso saturado. A camada orgânica foi seca . com MgSO;, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna (me- tanol 5% em 1:1 acetato de etila e hexanos) para dar 2-(5-(3-aminopiridin-4- : iN)-3,3-dimetilciclo-hexil)isoindolina-1 ,3-diona (53%). LC/MS (m/z2): : MH*=350,3, Rt=0,78. Uma 2-((1R,5R)-5-(3-aminopiridin-4-i1)-3,3-dimetilciclo- . 15 hexiDisoindolina-1,3-diona enantiomericamente pura Ee 2-((18,58)-5-(3- aminopiridin-4-il)-3,3-dimetilciclo-hexil)isoindolina-1,3-diona foram resolvidos por HPLC quiral (para análise temperatura ambiente = 7,526 min e 13,105 min respectivamente; hexanos:etanol= 80:20 (v:v), Chiralcel OJ-H 100 x 4,6 mm a 1 mLU/min. Para a preparação separativa, hexanos:etanol = 80:20 (v:v), Chiralcel OJ-H (250 x 20 mm at 20 mUmin ). 'H NMR (CDC): 5 8,04 (s, 1H), 8,00 (d, 1H), 7,82 (m, 2H), 7,71 (m, 2H), 7,08 (d, 1H), 4,54 (m, 1H), 3,71 (m, 2H), 2,89 (m, 1H), 2,23-2,44 ( m, 2H), 1,90 (m, 1H), 1,20-1,60 (m, 3H), 1,18 (s, 3H), 1,07 (s, 3H). Síntese de 4-(ciclo-hexa-1,3-dienil)-3-nitropiridina

O LU >

N NS

AEEE————"Â"ÂÂ : 50/190 Para uma solução de 3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enol (equiv. 1,0) foi adicionado dioxano (0.18 M) e p-TSA (equiv. 1,1). A solução foi a- quecida a 100 ºC por 4 h. Resfriada à temperatura ambiente, "manipulada" com NaHCO; saturado e acetato de etila, a fase orgânica foi seca com —NasSO, e concentrada. O produto bruto foi purificado através de cromatogra- fia em coluna de sílica-gel eluindo com DCM a 100% para dar 4-(ciclo-hexa- 1,3-dienil)-3-nitropiridina como um óleo amarelo (27% rendimento). LCMS (m/z): 203,1 (MH), LC temperatura ambiente = 3,53 min, *H-NMR (CDC): 9,02 (s, 1H), 8,70 (d, J=5,3, 1H), 7,30 (d, J=5,3, 1H), 6,15-6,17 (m, 1H), 6,02- 6,11(m,2H),2,35-2,38 (m, 4H). Síntese de (+1)-2-azido-4-(3-nitropiridin-4-" ciclo-hex-3-enol o! Na ( fa, ANO, né . Para uma solução de 4-(ciclo-hexa-1,3-dienil)-3-nitropiridina (e- r quiv. 1,0) em DCM (0.1 M) foi adicionado NaHCO; (equiv. 1,2) para dar uma solução amarela. Resfriada para O ºC, depois adicionado m-CPBA (equiv. E 1,0) Para uma solução de uma vez como um sólido. A reação foi agitada a O ºC por 3,5 h. Monitorado por ambos TLC e LC/MS. O produto ioniza como M+H = 237 (diol); Rt=0,41 min sobre UPLC. A reação foi extinta com NaH- CO; saturado, depois extraída com DCM (3 vezes). A fase orgânica foi ain- da seca com salmoura, depois NasSOa, filtrada e concentrada para dar o produto epóxido bruto como um óleo amarelo, o qual foi usado sem purífica- ção posterior. Para uma solução do material bruto acima em EtOH e água (3:1) (solução amarela turva) foi adicionado NaN3 (equiv. 2,0) e NHACI! (equiv. 2,0) para dar uma solução laranja clara. A reação foi agitada por 16 h, de- pois concentrada. EtOAc e água foram adicionados, a fase orgânica foi ain- da seca com MgSO, e concentrada para dar um óleo marrom. O óleo foi car- regado em sílica-gel e purificado através de cromatografia em coluna (ISCO, 0-50% EtOAc) para dar (+/)-2-azido-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enol

SS

A—NONC———— ——--—“—“—=—-—Z7== 51/190 como um óleo amarelo (44% para 2 etapas). LCMS (m/2) = 262 (MH”), LC temperatura ambiente = 2,35 min. Síntese — de +/-)-4-| 3-azido-4-(terc-butildimetilsililóxi)ciclo-hex-1-enil)-3- nitropiridina

TBS N3 <. | >

N Para uma solução de (+/-)-2-azido-4-(3-nitropiridin-4il)ciclo-hex- 3-enol (equiv. 1,0) em DCM (0.15 M) foi adicionado TBSCI (equiv. 2,0), imi- dazol (equiv. 2,0) e DMAP (equiv. 0,1) à temperatura ambiente. Após 18 h, água foi adicionada, os produtos orgânicos foram secos com salmoura, de- poisNasSO, e concentrados. O material bruto foi carregado para sílica-gel e purificado através de cromatografia em coluna (ISCO) eluindo com acetato de etila e hexanos (20%). (+/-)-4-(3-azido-4-(terc-butildimetilsililóxi)ciclo-hex- . 1-enil)-3-nitropiridina obtido como um óleo amarelo em 60% de rendimento. BR LCMS (m/2): 376,3 (MH*), LC temperatura ambiente =5,848 min. Síntese de 6-(terc-butildimetilsililóxi)-3-(3-nitropiridin-4-iN)ciclo-hex-2- " enilcarbamato de (+/-)-terc-butila

TBS NHBoc . | o Em um balão de fundo redondo foi adicionado (+/-)-4-(3-azido4- (terc-butildimetilsililóxi)ciclo-hex-1-enil)-3-nitropiridina (equiv. 1,0) e piridina (0,1M) para dar uma solução amarela. Hidróxido de amônio (10:1 piridina: hidróxido de amônio) foi adicionado seguido por PMez (equiv. 3,0). À reação tornou-se marrom escura após 10 min. Agitada à temperatura ambiente por 1,5 h. Extinta pela adição de EtOH, e concentrada. Repetida 2 vezes mais. Para o produto bruto foram adicionados NaHCO; saturado e dioxano (11, En nte

A 52/190 0,1M). Boc2O (equiv. 1,0) foi adicionado. Agitada por uma hora à temperatu- ra ambiente. Lavada com HO e EtOAc, a fase orgânica foi seca com Mg- SO;, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna de sílica-gel (ISCO, 5:1 Hex/EtOAc). Coletadas as frações puras e concentradas para dar 6-(terc-butildimetilsililóxi)-3-(3-nitropiridin-4-iN)ciclo- hex-2-enilcarbamato de (+/-)-terc-butila como uma espuma. LCMS (m/z): 450,3 (MH*), LC temperatura ambiente = 5,83 min. Síntese de 34 3-aminopiridin-4-iI)-6-(terc-butildimetilsilitóxi) ciclo-hex-2- enilcarbamato de (+/-)-terc-butila

TBS NHBoc =

N . Para uma solução de 6-(terc-butildimetilsililóxi)-3-(3-nitropiridin- 4-il)ciclo-hex-2-enilcarbamato de (+/-)-terc-butila (equiv. 1,0) em AcOH (0,18 r M) foi adicionado Fe (6,0 equiv.) e a reação foi agitada por 20 h. Manipulada í pela diluição da reação com metanol, filtrada, e o filtrado concentrado. Para o produto bruto foram adicionados acetato de etila e NaHCO; saturado, os | produtos orgânicos foram secos com sulfato de sódio e concentrados para dar 3-(3-aminopiridin-4-i)-6-(terc-butildimetilsilióxi)ciclo-hex-2-enilcarbamato (+/-)-terc-butila como um óleo amarelo em 94% de rendimento. LCMS (m/2z): 420,3 (MH), LC temperatura ambiente = 3,88 min. Síntese de 5-(3-aminopiridin-4-i1)-2-(terc-butildimetilsililóxi) ciclo- hexilcarbamato (+/-)-terc-butila

TBS NHBoc . >

N Para uma solução de 3-(3-aminopiridin-4-il)-6-(terc- butildimetilsililóxi)ciclo-hex-2-enilcarbamato de (+/-)-terc-butila (equiv. 1,0) em MeOH (0,1 M) foi adicionado Pd/C (20% em peso) e a reação foi agitada E ta tonSSRRRRRRNAS

AMNCNCEEEEEEEEEEEE——— A 53/190 sob um balão de hidrogênio por 18 h. LC/MS da reação indicou mistura de diaestereômeros, a reação foi filtrada, lavada com EtOAc e o filtrado concen- trado. O material bruto foi purificado através de prep-HPLC (em DMSO), e as frações puras foram combinadas, neutralizadas com NaHCO; sólido, extrai- dascom acetato de etila, lavadas com salmoura, secas sob Na2SO;,, e con- centradas para dar o produto A (8% de rendimento) e produto B (51% de rendimento). Produto A: LCMS (m/z): 422,4 (MH), LC temperatura ambiente =3,75 min. Produto B: LCMS (m/z): 422,4 (MH”), LC temperatura ambiente =3,94 min. Síntese de trifluorometanossulfonato de 1 A4-dioxaespiro[4.5])dec-7-en-8-ila

S : oTf - 1,4-Dioxaespiro[4.5]decan-8-ona (equiv. 1,0) foi dissolvida em , 15 éter(0,1M)e agitada a -15ºC depois 1M NaHMDS (equiv. 1,05) foi adicio- nado e agitada por 70 min depois TH2O (equiv. 1,05) adicionado e a reação ' deixada para aquecer lentamente até a temperatura ambiente. A mistura foi agitada por 28 h, lavada com NaHCO; aquoso saturado e depois água. As ' camadas aquosas combinadas e extraídas com éter. As camadas orgânicas combinadas, secas sobre MgSO,, filtradas, e concentradas. O resíduo foi purificado por coluna (éter etila : hexanos = 1 : 4) para dar trifluorometanos- sulfonato = de 1,4-dioxaspiro[4,5]dec-7-en-8-ila (65%). LC/MS (m/z): MH*=289,0, Rt=0,97. HPLC Rt=3,77. Síntese —de 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioxaespiro] 14,5]dec-7-en-8-il)-1,3,2- —dioxaborolano

S

SÊ o —

AUN— ————— : 54/190 Uma solução de triluorometanossulfonato — de 14- dioxaespiro[4,5]dec-7-en-8-ila (equiv. 1,0) em dioxano (0.5 M) foi purgada com nitrogênio por 30 min.

Depois 4,4,4' 4',5,5,5',5-octametil-2,2'-bi(1,3,2- dioxaborolano) (equiv. 1,0), KOAc (equiv. 3,0), Pd(dppf)CI2-DCM (0,2 equiv.) foram adicionados e a solução foi agitada em uma bomba lacrada a 80 ºC.

À reação foi filtrada sobre uma almofada de celite, depois ao filtrado foi adicio- nado acetato de etila, e lavada com salmoura, seca sobre MgSO;, filtrada, e concentrada.

O resíduo foi purificada por coluna (acetato de etila : hexanos = 1:11) para dar 4,4,5,5-tetrametil-2-(1 A-dioxaespiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1 3,2- dioxaborolano (95%). LC/MS (m/z): MH*=267,1, Rt=0,95. Síntese de 3-nitro-4-(1,4-dioxaespiro[4.5!] Idec-7-en-8-il)piridina do : Dra SW )

f Uma solução de DME (0.2 M) e 2M carbonato de sódio aquoso À (equiv. 1,7) foi purgada com nitrogênio por 20 min.

Depois 4-cloro-3- . 15 —nitropiridina (equiv. 1,6), 4,4,5,5-tetrametil-2-(1 4-dioxaespiro[4 5|dec-7-en-8-

iN)-1,3,2-dioxaborolano (equiv. 1,0), Pd(dppf)CI-DCM (equiv. 0,05) foram adicionados e agitados em uma bomba lacrada a 110 ºC.

A reação foi agita- da naquela temperatura por 3,5 horas.

A reação foi diluída com acetato de etila, lavada com água, seca sobre MgSO;, filtrada, e concentrada.

O resí- duo foi purificado por coluna (acetato de etila : hexanos = 1 : 1 com metanol 10%) para dar 3-nitro-4-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-7-en-8-iN)piridina (83%). LC/MS (m/z): MH'=263,2, Rt=0,71. Síntese de 4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enona D.

SS. ! A mistura de 3-nitro-4-(1,4-dioxaespiro[4.5]dec-7-en-8-iN)piridina Eat

(equiv. 1,0) em TFA a 20% em CH2Ck2 (0,2 M) foi agitada à temperatura am- biente durante a noite. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido com acetato de etila (200 mL), e lavado com NaH- CO; saturado (30mL), e NaC! saturado (3O0mL). O produto orgânico foi sêco com MgSO,, filtrada e concentrada para dar 4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3- enona (85%). O produto bruto foi usado para a próxima etapa sem purifica- ção posterior. LC/MS (m/z): MH*=218,9, Rt=0,60 Síntese de 4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enol

H D.

N Para uma solução de 4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enona (eq. 1,0) em metano! (0.2 M) foi adicionado boro-hidreto de sódio (equiv. 1,8) at O ! ºC. A mistura de reação foi agitada a 0 ºC por 2 h. Metanol foi removido sob . pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido com acetato de etila (200 mL), e .: lavado com NaCl saturado (30mL). O produto orgânico foi seco com MgSO., filtrado e concentrado para dar 4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enol (85%). o produto bruto foi usado na próxima etapa sem purificação posterior. LC/MS (m/z): MH*=221,0, Rt=0,55 Síntese de metanossulfonato de 4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enila Ms D. e. Para uma solução de 4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enol (equiv. 1,0) e DIPEA (2,5 equiv.) em CH2Cl2 (0,15 M) foi adicionado cloreto de me- tanossulfonila (equiv. 1,8) a O ºC. A mistura de reação foi agitada a 0 ºC por 1h. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (200 mL), e lavada com Nac! saturado (30 mL). O produto orgânico foi seco com MgSO:, filtra- doe concentrado para dar metanossulfonato de 4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-

. 56/190 hex-3-enila (93%). O resíduo foi usado na etapa seguinte sem purificação posterior.

LC/MS (m/z): MH*=299,0, Rt=0,70 Síntese de 4-(ciclo-hexa-1,3-dienil)-3-nitropiridina Sm o 5 Para uma solução de metanossulfonato 4-(3-nitropiridin-4- iN)ciclo-hex-3-enila (equiv. 1,0) em tetrahidrofurano (0,1 M) foi adicionado DBU (equiv. 1,8) à temperatura ambiente.

A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite.

A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (200 mL), e lavada com NaCl saturado (30mL). O produto orgânico foi seco com MgSO,, filtrado e concentrado.

O resíduo foi purífica- do por coluna (metanol 5% em 1:1 acetato de etila e hexanos) para dar 4- - (ciclo-hexa-1,3-dienil)-3-nitropiridina.

LC/MS (m/2): MH*=203,2, Rt=0,85. Síntese de 6-hidróxi-3-(3-nitropiridin-4-i)ciclo-hex-2-enilcarbamato de (+/-)- f terc-butila : oH NHBoc o z !

Para uma solução de (+/-)-2-azido-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex- 3-enol (equiv. 1,0) em Piridina e NH,OH (8:1, 0,23 M) foi adicionada trimetil- fosfina (equiv. 3,0) à temperatura ambiente.

A mistura foi agitada à tempera- tura ambiente por 3 horas.

Os solventes foram removidos.

Ao resíduo foi adicionado etanol.

Depois o etanol foi removido a vácuo para garantir a re- moção total da amônia.

O resíduo foi dissolvido em 1,4-dioxano e bicarbona- to de sódio aquoso saturado, e depois Boc2O (eq. 1,0) em THF foram adi- cionados para uma mistura.

A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas.

A mistura de reação foi diluída com acetato de etila, e

— lavada com NaCl saturado.

O produto orgânico foi seco com MgSO:, filtrado e concentrado.

O resíduo foi purificado por coluna (metanol 5% em 1:1 ace-

: 57/190 tato de etila e hexanos) para dar 6-hidróxi-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2- enilcarbamato de (+/-)-terc-butila (82%). LC/MS (m/2): MH*=336,0, Rt=0,71. Síntese de metanossulfonato de +/-)-2-(terc-butoxicarbonitamino)- 4-(3-nitropiridin-4-i)ciclo-hex-3-enila " NHBoc A NO, “o ! Para uma solução de 6-hidróxi-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2- enilcarbamato de (+/)-terc-butila (equiv. 1,0) e trietil amina (equiv. 1,5) em CH2Cl (0,2 M) foi adicionado cloreto de metanossulfonila (equiv. 1,2) a 0ºC. A mistura foi agitada por 2 horas nessa temperatura. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila, e lavada com NaCl saturado. O produto orgâni- .: co foi seco com MgSO;, filtrado e concentrado para dar metanossulfonato de (+/-)-2-(tero-butoxicarbonilamino)-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enila (85%), . o qual foi usado na etapa seguinte sem purificação posterior. LC/MS (m/2): - MH*=414,0, Rt=0,82 Síntese de (+/)5-(3-nitropiridin-4-i)-3,3a,7,7a-tetrahidrobenzo] dloxazol- : 2(6H)-ona

A

NH e Ss A mistura de metanossulfonato — de (+/-)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enila (equiv. 1,0) em piridina (0.21 M) foi agitada a 110 ºC oor 10 min em micro-ondas. A piridina foi removida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila, e lavado com NaCl! saturado. O produto orgânico foi seco com MgSO,, filtrado e concentrado para dar (+/-)-5-(3-nitropiridin-4-1)-3,3a,7,7a-tetra- hidrobenzo[djoxazol-2(6H)-ona (85%), o qual foi usado na etapa seguinte

. 58/190 sem purificação posterior. LC/MS (m/2): MH*=262,1, Rt=0,49 Síntese de 5-(3-nitropiridin-4-i)-2-0x0-3a,6,7,7a-tetra-hidrobenzo]| (dloxazol- 3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila o N-Boc e Ss Ss Para uma solução de (+/-)-5-(3-nitropiridin-4-11)-3,3a,7,7a- tetrahidrobenzo[d]oxazol-2(6H)-ona (equiv. 1,0), TEA (equiv. 1,8), e uma quantidade catalítica de DMAP em CH2Cl> (0,19 M) foi adicionado dicarbo- nato de di-terc-butila (equiv 1,2) à temperatura ambiente. A mistura de rea- ção foi agitada por 1 hora. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (100 mL), e lavada com NaCl! saturado (30mL). O produto orgânico foi À seco com MgSOs, filtrado e concentrado. O resíduo foi purificado por coluna . (metanol 5% em 1:1 acetato de etila e hexanos) para dar 5-(3-nitropiridin-4- ' 1)-2-0x0-3a,6,7,7a-tetra-hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc- butila (98%). LC/MS (m/2): MH*=306,0, Rt=0,75 * 15 Síntese de 5-(3-aminopiridin-4-iI)-2-0xo-hexa-hidrobenzo)| d]Oxazol-3(2H)- carboxilato de (+/-)-terc-butila

A N-Boc Ss Para uma solução de 5-(3-nitropiridin-4-11)-2-0x0-3a,6,7,7a-tetra- hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)-carboxilato de (+/- -terc-butila (equiv. 1,0) em me- tanole acetato de etila (1:1, 0,1 M) foi adicionado Pd/C 10% (equiv. 0,1). A mistura resultante foi agitada sob atmosfera de H, por 6 horas. O sólido foi removido por filtração. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar 5-(3-aminopiridin-4-i)-2-0xo-hexa-hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila (87%), o qual foi usado na etapa seguinte sem purificação

: 59/190 posterior. LC/MS (m/z): MH*=334,1, Rt=0,51. Síntese de 5-metil-3-oxociclo-hex-1-eniltrifluorometanossulfonato > Y o oTf Para uma solução de 5-metilciclo-hexano-1,3-diona (equiv. 1,0) em DCM (0.5M) foi adicionado Na2CO; (equiv. 1,1) e resfriada a O ºC. Adi- cionado Tf,O (equiv. 1,0) em DCM (5.0 M) em gotas durante 1ha0C sob uma atmosfera de nitrogênio. Após a adição, a reação foi agitada por 1hãàã temperatura ambiente (solução vermelho escura). A solução foi filtrada e o filtrado foi extinto por adição cuidadosa de NaHCO; saturado com vigorosa agitação até pH=7. A solução foi transferida para um funil separador e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, . seca com Na-SO;, filtrada, concentrada sob vácuo e seca sob alto vácuo por min para render trifluorometanossulfonato de 5-metil-3-oxociclo-hex-1- . enila como um óleo amarelo claro em 78% rendimento. O triflato se decom- * 15 põe durante o armazenamento e deve ser usado imediatamente para a rea- ção seguinte. LC/MS=259,1/300,1 (M+H e M+CH3CN); temperatura ambien- i te = 0,86 min, LC = 3,84 min. *H-NMR (400 MHz, CDCIs) 5 ppm: 6,05 (s, 1H),

2.70 (dd, J=17,2, 4,3, 1H), 2,53 (dd, J=16,6, 3,7, 1H), 2,48-2,31 (m, 2H), 2,16 (dd, J=16,4, 11,7, 1H), 1,16 (d, J=5,9, 3H). Síntese de 5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-2- enona

E Para uma solução de trifluorometanossulfonato de 5-metil-3- oxociclo-hex-1-enila (equiv. 1,0) em dioxano desgaseificado (0.7 M) foram adicionados bis(pinacolato)diboro (equiv. 2,0), KOAc (equiv. 3,0), e Pd(dppf)CIa-DCM (equiv. 0,03). A reação foi aquecida a 80 º C por 10 h (a-

. 60/190 quecimento inicial em resultados de larga escala na formação exotérmica de uma espuma laranja no topo da solução, o banho de aquecimento deve ser removido até que a espuma se retraia, reaquecimento a 80 º C neste ponto parece estar bem), em seguida, resfriada à temperatura ambiente e filtrada através de um funil de vidro de frita grosso. A torta foi lavada com mais dio- xano e a solução filtrada foi utilizada para a próxima etapa sem purificação adicional. LC/MS = 155,1 (M+H de ácido borônico); temperatura ambiente = 0,41 min, LC = 1,37 min. Síntese de 5-metil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enona o í "

N Para uma solução de S5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- . dioxaborolan-2-il)ciclo-hex-2-enona (equiv. 1,0) em dioxano desgaseíificado (0,5 M) e 2M NazCO; (2 equiv.) foram adicionados 4-cloro-3-nitropiridina (e- : quiv. 1,3) e Pd(dppf)Cl-DCM (equiv. 0,05). A reação foi colocada sob um À 15 condensador de refluxo e aquecida em um banho de óleo a 110º Cporih. . Resfriada à temperatura ambiente, filtrada através de uma almofada de Celi- te, lavada a almofada com acetato de etila e concentrado o filtrado sob vá- cuo. O resíduo foi ainda bombeado a 80 ºC em um evaporador rotativo por uma hora para remover os subprodutos de boronato (M+H = 101) através de sublimação. O resíduo foi particionado entre salmoura e acetato de etila, e as camadas foram separadas, a fase aquosa foi depois extraída com acetato de etila (4x), os orgânicos foram combinados, secos sobre sulfato de sódio, filtrados, e concentrados. O produto bruto foi purificado através de cromato- grafia em sílica-gel carregado em DCM e eluindo com 2-50% de acetato de etilaehexanos. As frações puras foram concentradas em vácuo para render um óleo laranja. O óleo foi colocado sob alto vácuo (-500 mtorr) com cristais de sementes durante a noite para render um sólido laranja. O sólido foi ainda purificado através de trituração em hexanos para render 5-metil-3-(3- nitropiridin-4-i)ciclo-hex-2-enona (48% 2 etapas). LC/MS = 233,2 (M+H);

temperatura ambiente = 0,69 min, LC = 2,70 min. *H-NMR (400 MHz, CdCl) ppm: 9,31 (s, 1H), 8,88 (d, J=5,1, 1H), 7,30 (d, J=5,1, 1H), 6,00 (d, J=2,4, 1H), 2,62 (dd, J=16,4, 3,5, 1H), 2,53-2,34 (m, 3H), 2,23 (dd, J=16,1, 11,7, 1H), 1,16 (d, J=6,3, 3H). 5 Síntesede cis-(+/-)-5-metil-3-(S-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enol o, OH de Sy | Para uma solução de 5-metil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2- enona (equiv. 1,0) em EtoOH (0,3 M) foi adicionado CeCl3-7H20 (1,2 equiv.). A reação foi resfriada a 0º C, depois NaBH, (1,2 equiv.) foi adicionado em porções. Agitada por 1 ha 0º C, depois extinta por adição de água, concen- trada para remover o EtOH, adicionado EtOAc, extraídos os orgânicos, lava- . da com salmoura, depois seca com Na>SO;, filtrada e concentrada para ren- der cis-(+/-)-5-metil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enol (94%). LC/MS = : 235,2 (M+H), LC = 2,62 min. ã 15 Síntesede 4-(3-Ltaro-butidimelialiáai) S-metilcicio-hex-1 -enil)-3-nitropiridina o, OO e

O Para uma solução de 5-metil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enol (equiv. 1,0) em DMF (0,5 M) foram adicionados imidazol (equiv. 4,0) e TBDMSCI (equiv. 2,5). Após agitação por 18 horas a solução foi parcionada entre EtOAce HO e separada. Após lavagem posterior com H2zO (3x) e Na- Cla), secagem sobre MgSO;, filtragem e remoção de solventes, 4-(3-(terc- butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hex-1-enil)-3-nitropiridina foi obtida (85%). LC/MS = 349,2 (M+H), LC = 5,99 min. Síntese de 4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-5-metilciclo-hex-1-enil)piridin-3-amina

À 62/190 o “Oao à e o Uma solução heterogênea de 4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-S- metilciclo-hex-1-enil)-3-nitropiridina (eq. 1,0) e ferro (eq. 6,0) em ácido acéti- co, a uma concentração de 0.4 M, foi agitada vigorosamente por 2 horas. À mistura foidepois passada através de uma almofada de celite, eluindo com MeOH. Após a remoção dos voláteis a vácuo, o resíduo foi dissolvido em EtOAc, lavado com Na2CO; sat), NaClsar), foi seco sobre MgSO;, foi filtrado e os voláteis foram removidos a vácuo rendendo 4-(3-(terc- butildimetilsililóxi)-5-metilciclo-hex-1-enil)piridin-3-amina (78%). LCMS (m/z): 319,3(MH”); LC temperatura ambiente = 3,77 min. Síntese de 4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-5-metilciclo-hexil)piridin-3-amina ”. ON

O . Ss. |) Para uma solução de 4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-5-metilciclo- hex-1-enil)-3-nitropiridina (equiv. 1,0) em metanol, a uma concentração de 01M, foi adicionado paládio sobre carbono 10% (eq. 1,0). A solução hete- rogênea resultante foi posta sob uma atmosfera de hidrogênio e foi agitada por 15 horas. Neste momento a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com metanol. Os voláteis foram removidos a vácuo renden- do — 4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hexil)piridin-3-amina — (90%). LCMS (m/z): 321,3 (MH”); LC temperatura ambiente = 3,85 min. Síntese — de 4-3-(terc-butildimetilsililóxi)-5-metilciclo-hexil) piridin-3- ilcarbamato de cis (+/-) benzila Ps Cs é so

Para uma solução de cis-(+/-)-4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-5- metilciclo-hexil)piridin-3-amina em diclorometano a uma concentração de 0,5 M foi adicionado carbonato de benzil 2,5-dioxopirrolidin-1-ila (equiv. 1,1) e DMAP (equiv. 0,05). Após agitação por 16 horas à temperatura ambiente, carbonato de benzil 2,5-dioxopirrolidin-1-ila adicional (equiv. 0,55) e DMAP (equiv. 0,03) foram adicionados. Após agitação por 24 horas adicionais à temperatura ambiente, carbonato de benzil 2,5-dioxopirrolidin-1-ila adicional (equiv. 0,1) e DMAP (equiv. 0,03) foram adicionados. Após agitação por mais 18 horas a solução foi particionada entre EtOAc e NazCOsz(sat € Sepa- rada. Após lavagem adicional com Na2COs3(sat) (2x) e NaClrat), secagem so- bre MgSO;, filtragem e remoção de solventes, 4-3-(terc-butildimetilsililóxi)-5- metilciclo-hexil)piridin-3-ilcarbamato de cis (+/-) benzila foi obtido. O material bruto foi usado desse jeito. LC/MS = 455,3 (M+H), LC = 4,39 min. Síntese de 4-(3-hidróxi-S5-metilciclo-hexil)piridin-3-ilcarbamato de cis (+/-) : 15 benzila e, O" : E - a : Uma solução de 4-3-(terc-butildimetilsililóxi)-5-metilciclo- hexil)piridin-3-ilcarbamato de cis (+/-) benzila em 1:2:1 68N HCVTHF/MeOH a uma concentração de 0.1 M foi agitada à temperatura ambiente por 6 horas.

O pH foientão ajustadp para pH=7 por adição de 6N NaOH e os voláteis foram removidos a vácuo. A camada aquosa foi extraída com EtOAc e o produto orgânico foi lavado com NaClear), seco sobre MgSO;, filtrado e após remoção dos voláteis a vácuo, 4-(3-hidróxi-5-metilciclo-hexil)piridin-3- ilcarbamato de cis (+/-) benzila foi obtido. O material bruto foi usado como é.

LC/MS=341,2(M+H), LC =2,38 min.

Síntese de 4-(3-metil-5-oxociclo-hexil)piridin-3-ilcarbamato de cis (+/)- benzila

. 64/190 oo DT.

EO Ss. ) Para uma solução 0 ºC de 4-(3-hidróxi-5-metilciclo-hexil)piridin-3- ilcarbamato de cis-(+/-)-benzila em CH2Cl> úmido a uma concentração de 0,16 M foi adicionado Dess-Martin Periodinano (equiv. 1,5) e a solução foi agitada por 18 horas enquanto aquecia até a temperatura ambiente. A solu- ção foi particionada entre EtOAc e 1:1 Na2S203 10 % / NaHCO;3(sat) E Sepa- rada. Após lavagem adicional com 1:1 Na2S2O3 10% / NaHCO;3(sat) (2x) e NaClçeat, Secagem sobre MgSO;, filtragem, remoção de solventes e purifica- ção por cromatografia em síilica-gel (75-100% EtOAc/hexanos), 4-(3-metil-5- —oxociclo-hexil)piridin-3-ilcarbamato de cis-(+/-)-benzila foi obtido como um sólido branco (53%, 5 etapas). LC/MS = 339,2 (M+H). . Síntese de 4-(-3-(benzilamino)-5-metilciclo-hexil)piridin-3-ilcarbamato de cis- (+/-)-benzila : Óo

N A solução de 4-(3-metil-5-oxociclo-hexil)piridin-3-ilcarbamato de cis-(+/-)-benzila (equiv. 1,0) e benzilamina (equiv. 3,0) em MeOH, a uma concentração de 0,25 M, foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. Após resfriamento em um banho a -78 ºC, LiBH, (equiv 1,1, 220 M em THF) foi adicionado e a solução foi deixada para aquecer até a temperatura ambi- ente com agitação durante 16 horas. À solução foi particionada entre EtOAc e NaHCO;3(sat), separada, lavada ainda com NaHCO;(sat) E NaClisat), Seca sobre MgSO,, filttada e após remoção de voláteis a vácuo, 4-(-3- (benzilamino)-5-metilciclo-hexil)piridin-3-ilcarbamato de cis-(+/-)- benzila foi Obtido como uma mistura de isômeros 4:1, com todos os cis como predomi- nantes LC/MS = 430,3 (M+H), LC = 0,62 min.

Síntese de (-3-(3-aminopiridin-4-il)-5-metilciclo-hexilcarbamato de cis (+/-)- terc-butila Za QN o NH

T Para uma solução de 4(-3-(benzilamino)-5-metilciclo- hexilpiridin-3-ilcarbamato de cis-(+/-)- benzila (equiv. 1,0) em metanol, a uma concentração de 0,07 M, foi adicionado hidróxido de paládio 20% sobre carbono (eq. 2,0). A solução heterogênea resultante foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e foi agitada por 14 horas. Neste momento a reação foi purgada com Ar, Boc2O (equiv. 1,0) foi adicionado e a solução foi agitada por8 horas. BoczO adicional (equiv. 1,0) foi adicionado e a solução foi agita- da por mais 16 horas. Nesse momento a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com metanol. Após a remoção de voláteis a vá- “ cuo, purificação através de cromatografia em sílica-gel (2,5-2,5 Me- OH/CH2Cl2z com 0,1% DIEA) e recristalização de EtOAc 10%/hexanos ren- : 15 deu (-3-(3-aminopiridin-4-il)-5-metilciclo-hexilcarbamato de cis (+/-)-terc- : butila (49%). LCMS (m/z): 306,3 (MH*), LC temperatura ambiente = 2,59 - min. Enantiômeros puros puderam ser obtidos por cromatografia quiral. Síntese de (+/-)-4-(5-metilciclo-hexa-1,3-dienil)-3-nitropiridina &

N Para uma solução de (+/-)-5-metil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex- 2-enol (equiv. 1,0) em dioxano (0.1M) foi adicionado p-TSA (equiv. 1,0), e a reação foi agitada a 100 ºC por 3 h. A solução foi resíriada à temperatura ambiente, depois passada através de uma almofada de alumina neutra elu- indo com EtOAc para render (+/-)-4-(5-metilciclo-hexa-1,3-dienil)-3- —nitropiridina como um óleo amarelo em 68% de rendimento. LC/MS = 217,1 (M+H), LC = 3,908 min. Síntese de (+/-)-2-azido-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enol oH No < Ú ê Para uma solução de (+/-) 4-(5-metilciclo-hexa-1,3-dienil)-3- nitropiridina (equiv. 1,0) em DCM (0.1 M) at 0 ºC foi adicionado m-CPBA (1.1 equiv.) e a reação foi deixada para aquecer à temperatura ambiente. Após 3 horas, a mistura foi extinta com NaHCO; saturado, extraída com DCM, e a fase orgânica foi seca com sulfato de sódio, filtrada, e concentrada para dar um óleo amarelo. O produto bruto foi dissolvido em etanol e água (3:1, 0,1 M), e azido de sódio (equiv. 2,0) e cloreto de amônio (equiv. 2,0) foram adi- cionados. A reação foi agitada por 4 horas, depois concentrada a vácuo. Pa- rao produto bruto foram adicionados acetato de etila e água, a fase orgânica foi lavada com salmoura, seca com sulfato de sódio, filtrada, e concentrada. - O material bruto foi purificado através de cromatografia em coluna de sílica- gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:1) para render (+/-)-2-azido-6- : metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enol como um óleo em 49% de rendi- mento. LC/MS = 276,1 (M+H), temperatura ambiente = 0,71 min. - Síntese de (+/-)-6-hidróxi-5-metil-3-(3-nitropiridin-4-i)ciclo-hex-2- enilcarbamato de terc-butila

OH .ANHBoc A 2 NO> :

N Para uma solução de (+/-)-2-azido-6-metil-4-(3-nitropiridin-4- ilciclo-hex-3-enol (equiv. 1,0) em piridina e hidróxido de amônio (8:1, 0,08 M) foi adicionada trimetilfosfina (equiv. 3,0) e a solução marrom foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. Etanol foi adicionado para a mistura e a solução foi concentrada sob vácuo (2x). A mistura bruta foi então dissolvida em dioxano e NaHCO; saturado (1:1, 0,08 M) e Boc2O (equiv. 1,0) foi adi- cionado. A solução foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas, depois particionada entre acetato de etila e água. A fase orgânica foi seca com sul-

fato de magnésio, filtrada, e concentrada a vácuo. O produto bruto foi purifi- cado através de cromatografia em coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:1) para render (+/-)-6-hidróxi-5-metil-3-(3-nitropiridin-4- iNciclo-hex-2-enilcarbamato de terc-butila em 69% de rendimento. LC/MS = 350,1 (M+H), temperatura ambiente = 0,76 min. Síntese de metanossulfonato de (+/-)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-6-metil-4- S3-nitropiridin-4-il) ciclo-hex-3-enila OMs -NHBoc In Para uma solução de (+/-)-B-hidróxi-5-metil-3-(3-nitropiridin-4- ilciclo-hex-2-enilcarbamato de terc-butila (equiv. 1,0) em DCM (0.09 M) foi : adicionada trietil amina (equiv. 1,5). A mistura de reação foi resfriada a 0 ºC e MsCI (equiv. 1,2) foi adicionado para a reação e agitada por 3 horas. Para - a solução foi adicionada água, a fase orgânica foi seca com sulfato de sódio, - filtrada, e concentrada. O material bruto foi purificado através de cromatogra- fiaem coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:1) para Ú dar metanossulfonato de (+/-)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-6-metil-4-(3- nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enila como uma espuma branca em 65% de ren- dimento. LC/MS = 428,2 (M+H), temperatura ambiente = 0,88 min. Síntese de 7-metil-5-(3-nitropiridin-4-11)-2-0x0-3a,6,7,7a-tetra- —hidrobenzoldloxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila o o - NBor x -NO,

NÃ Uma solução de metanossutfonato de (+/)2-(tero butoxicarbonilamino)-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-i)ciclo-hex-3-enila (equiv. 1,0) em piridina (0.2 M) em vaso de micro-onda foi aquecida a 110 ºC por 10 min.

AA solução laranja foi então concentrada até secar e manipulada por particio- namento entre acetato de etila e água. A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio, filtrada e concentrada. O material bruto foi dissolvido em DCM (0.2 M) e trietil amina (equiv. 1,8) foi adicionada para a reação, seguido por —BocrO (1.2 eqiv.). Após agitação à temperatura ambiente por 40 min, a rea- ção foi concentrada a vácuo e purificada através de cromatografia em coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:1) para dar 7-metil-5- (3-nitropiridin-4-1I)-2-0x0-3a,6,7,7a-tetra-hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)- carboxilato de (+/-)-terc-butila como uma espuma branca em 66% de rendi- mento. LC/MS = 376,0 (M+H), temperatura ambiente = 0,87 min. Síntese de 5-(3-aminopiridin-4-il)-7-metil-2-oxohexahidrobenzo[d]oxazol- 3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila

A À NBoc ss 2 NH2 : ' D Para uma solução de 7-metil-5-(3-nitropiridin-4-i)-2-0x0- - 15 3a6,7,7atetra-hidrobenzo[d]joxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila (e- quiv. 1,0) em MeOH e acetato de etila (1:1, 0,07 M) foi adicionado Pd/C 10% (equiv. 0,1) e a reação foi agitada à temperatura ambiente sob uma atmosfe- ra de hidrogênio. Após a conclusão da reação, a solução foi filtrada através de uma almofada de Celite, lavada com MeOH e acetato de etila, o filtrado foiconcentrado até secar sob vácuo para dar 5-(3-aminopiridin-4-il)-7-metil- 2-oxo-hexa-hidrobenzo[d]joxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila como um mistura de diastereômeros em >99% de rendimento. LC/MS = 348,2 (M+H), temperatura ambiente = 0,50 min. Síntese de (+/-)-6-bromo-S5-metil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enol x

OH q

N Para uma solução de 4-(5-metilciclo-hexa-1,3-dienil)-3- nitropiridina (equiv. 1,0) em THF e água (1:1, 0,13 M) foi adicionado NBS (equiv. 1,5) e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 30 min. Após a conclusão, acetato de etila e água foram adicionados para uma reação, a fase orgânica foi seca com salmoura, depois sulfato de sódio, filtrada, e con- centrada. O material bruto foi purificado através de cromatografia em coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:1) para dar (+/-)-6- bromo-5-metil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enol como um óleo amarelo em380% de rendimento. LC/MS = 315,0/313,0 (M+H), LC = 2,966 min. : Síntese de (+/-)-2-azido-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enol

A í x NO, | 2 : N Para uma solução de (+/-)-6-bromo-5-metil-3-(3-nitropiridin-4- i)ciclo-hex-2-enol (equiv. 1,0) em THF (0,1 M) foi adicionado terc-butóxido de potássio (equiv. 1,5). A reação tornou-se de laranja para preta quase i- mediatamente. Por TLC, a formação do produto está completa em 30 min. Extinta através da adição de cloreto de amônio saturado e acetato de etila. A fase orgânica foi seca com salmoura, depois sulfato de sódio, filtrada, e con- centrada. O produto bruto foi dissolvido em etanol e água (3:1, 0,1 M), e clo- reto de amônio (equiv. 2,0) e azido de sódio (equiv. 2,0) foram adicionados. A reação laranja escura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A conversão para o produto está completa como indicado por LC/MS. A rea- ção foi concentrada para remover o etanol, acetato de etila e água foram adicionados, e a fase orgânica foi seca com sulfato de sódio, filtrada, e con-

. 70/190 centrada. O material bruto foi purificado através de cromatografia em coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:1) para dar (+/-)-2- azido-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enol em 55% de rendimento. LC/MS = 276,0 (M+H), LC = 2,803 min. —Síntesede 6-hidróxi-5-metil-3-(3-nitropiridin-4-i)ciclo-hex-2-enilcarbamato de (+/-)-terc-butila oH NHBoc E»

N Para uma solução de (+/-)-2-azido-6-metil-4-(3-nitropiridin-4- iNciclo-hex-3-enol (equiv. 1,0) em piridina e hidróxido de amônio (8:1, 0.08 M) foi adicionada trimetilfosfina (equiv. 3,0) e a solução marrom foi agitada à - temperatura ambiente por 2 h. Após a conclusão, EtOH foi adicionado e a solução foi concentrada a vácuo. Mais etanol! foi adicionado e a reação foi é concentrada de novo. Dioxano e NaHCO; saturado (1:1, 0,08 M) foram adi- É cionados ao produto bruto, seguido por Boc2O (equiv. 1,0). A mistura de rea- : 15 ção foi agitada à temperatura ambiente por 2h, depois adicionados água e acetato de etila. A fase orgânica foi seca com MgSO;, e concentrada. O pro- duto bruto foi purificado através de cromatografia em coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:1) para render 6-hidróxi-5-metil-3- (3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enilcarbamato de (+/-)-terc-butila (59%). LC/MS =350,1(M+H), Rt 0,76 min. Síntese de acetato de (+/-)-2-(terc-butoxicarbonilamino: -6-metil-4-(3- nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enila QEAc NHBoc “W- NO? | o Para uma solução de 6-hidróxi-S-metil-3-(3-nitropiridin-4-il)cicio-

hex-2-enilcarbamato de (+/-)-terc-butila (equiv. 1,0) em piridina (0,1 M) foi adicionado Ac2zO (equiv. 2,0) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite.

Após a conclusão, a reação foi concentrada até secar, de- pois estimulada com acetato de etila e água.

A fase orgânica foi seca com —salmoura, depois sulfato de sódio, filtrada, e concentrada para dar acetato de (+/-)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3- enila em 94% de rendimento.

LC/MS = 392,2 (M+H), temperatura ambiente = 0,94 min.

Síntese de acetato de (+/-)-4-(3-aminopiridin-4-iI)-2-(terc- —butoxicarbonilamino)-6-metilciclo-hexila QAc NHBoc x à». - ' nó .- Para uma solução desgaseíficada de acetato de (+/-)-2-(terc- " butoxicarbonilamino)-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enila (equiv. 1,0) em MeOH e EtOAc (1:1, 0,1 M) foi adicionado Pd/C 10% (equiv. 0,1) e a re- É 15 ação foi agitada à temperatura ambiente sob um balão de hidrogênio por 3 dias.

Após a conclusão, a solução foi filtrada através de uma almofada de Celite, a almofada foi lavada com acetato de etila e o filtrado foi concentrado.

O material bruto continha cerca de 10% dos isômeros indesejados.

O produ- to bruto foi dissolvido em acetato de etila (- 20%) e hexanos e aquecida até todo dissolvido.

A solução foi deixada para sentar-se à temperatura ambien- te por 2 dias.

O precipitado foi depois coletado para dar acetato de (+/-)-4-(3- aminopiridin-4-il)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-6-metilciclo-hexilta = como o produto puro em 59% de rendimento.

LC/MS = 364,3 (M+H), temperatura ambiente = 0,63 min.

Síntese de metanossulfonato de 2-(terc-butoxicarbonilamino)-6-metil-4-(3- nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enila

OMs NHBoc e 2 NO? | :

N Para uma solução de 6-hidróxi-5-metil-3-(3-nitropiridin-4-il)ciclo- hex-2-enilcarbamato de terc-butila (equiv. 1,0) em DCM (0,09 M) foi adicio- nada trietilamina (equiv. 1,5) e a reação foi resfriada a O ºC. MsCI (1,2 e- quiv) foi adicionado para a reação e agitada por 3 h. Outro equiv. 1,0 de MSCI foi adicionado para a reação e agitado por outras 2 h. Estimulada a reação por adição de água, a fase orgânica foi seca com salmoura, sulfato de sódio, e concentrada. O produto bruto foi purificado através de cromato- grafia em coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:1) para render metanossulfonato de 2-(terc-butoxicarbonilamino)-6-metil-4-(3- : nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enila como uma espuma branca em 65% de ren- .: dimento. LC/MS = 428,2 (M+H), LC: 3,542 min. . Síntese de 7-metil-5-(3-nitropiridin-4-11)-2-0x0-3a,6,7,7a-tetra- hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila + b A NBoc À 2 NO2 ;

N Uma solugção de metanossulfonato de (+/)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-enila (equiv. 1,0) em piridina (0,2 M) foi aquecida no micro--ondas a 110 ºC por 10 min. A rea- ção laranja foi depois concentrada sob vácuo, o produto bruto foi dissolvido em acetato de etila e água, a fase orgânica foi seca com sulfato de sódio e concentrada sob vácuo. O material bruto foi dissolvido em DCM (0,2 M), trie- tilamina (equiv. 1,8) foi adicionada, seguido por Boc2O (1,2 equiv.). A reação foi agitada por 40 min, depois concentrada até secar. O material bruto foi í 73190 purificado através de cromatografia em coluna de sílica-gel eluindo com he- xano e acetato de etila (1:1) para render 7-metil-5-(3-nitropiridin-4-1)-2-0x0- 3a,6,7,7a-tetra-hidrobenzo[d]Joxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-tero-butila co- mo uma espuma branca em 66% de rendimento. LC/MS = 376,0 (M+H), LC: 3A424Mmin Síntese de 5-(3-aminopiridin-4-il)-7-metil-2-o0xo-hexa-hidrobenzo[d]oxazo!- 3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila

A NBoc A NH2 :

N Para uma solução desgaseificada de 7-metil-5-(3-nitropiridin-4- | 10 1N-2-0x0-3a,6,7,7a-tetra-hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc- . butila (equiv. 1,0) em MeOH e EtOAc (1:1, 0,1 M) foi adicionado Pd/C 10% . (equiv. 0,1). A reação foi agitada sob um balão de hidrogênio durante a noi- te. Após a conclusão, a solução foi filtrada através de uma almofada de Celi- * te e a almofada foi lavada com acetato de etila. O filtrado foi concentrada sob vácuo para dar 5-(3-aminopiridin-4-i)-7-metil-2-0x0-hexa- hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila como o produto desejado como um espuma amarela em 93% rendimento. LC/MS = 348,1 (M+H), temperatura ambiente = 0,55 min. Síntese de ((+/-)-(1R,2R,6S)-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-i)ciclo-hex-3-ene-1,2- diole(+/)-(1R,2S,6S)-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-eno-1,2-diol os O oh tt, ó oH + E NO, NO, DZ em 2 es

N N Para uma solução de (+/-)-(18,58,6S)-6-bromo-5-metil-3-(3- nitropiridin-4-il)ciclo-hex-2-enol (equiv. 1,0) em THF (0,1M) foi adicionado terc-butóxido de potássio (equiv. 1,5) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada por 10 min. A mistura de reação foi extinta com solução de NH,CI e elaborada com EtOAc lavando com água e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anídrico, filtrada, e seca a vácuo. O — produto bruto foi usado à próxima etapa sem purificação posterior. Rr = 0,5 (50% de EtOAc/Hexanos). LCMS: MH+ 251,2 (como um diol), temperatura ambiente = 0,49 min. Para uma solução de (+/-) 44((1S,5S)-S-metil-7- oxabiciclo[4.1.0Jhept-2-en-3-il)-3-nitropiridina bruta (equiv. 1,0) em 21 CH;CN/H2O (0,1 M) foi adicionado ácido acético (equiv. 0,3) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada por 16 horas à temperatura ambi- ente. Após extinta com solução de NaHCO;, a mistura de reação foi concen- trada para remover a maioria de CH;CN e o resíduo foi particionado entre EtOAc e água. A camada orgânica combinada foi lavada com água e sal- moura, seca sobre sulfato de sódio anídrico, filtrada e concentrada a vácuo. . 15 A mistura de dióis ((+/-)-(1R,2R,6S)-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3- eno-1,2-diol e (+/)-(1R,28,6S)-6-metil-4-(3-nitropiridin-4-il)ciclo-hex-3-eno- O 1,2-diol) foi obtida em 33,1% de rendimento como um sólido branco por cro- É matografia em coluna rápida. R; = 0,3 (100% de EtOAc; dióis não eram se- paráveis sobre TLC). LCMS: MH+ 251,2, temperatura ambiente = 0,49 min. Síntese de (+/)4-((3S4R,58)-34-bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo- hex-1-enil)-3-nitropiridina e +/-)-4-((3R AR,58)-3,4-bis(terc- butildimetilsililóxi)-5-metilciclo-hex-1-enil)-3-nitropiridina

TBDMS QTBDMS Ps OTBDMS — 7, ..OTBDMS . | Ee > 7 ND No Para uma solução de uma mistura de dióis (equiv. 1,0) em DMF (0,3M) foram adicionados TBDMSCI (equiv. 7,0) e imidazol (equiv. 9) à tem- peratura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Após extinta com NaHCO; saturado, a mistura de reação foi extraída com EtOAc. A camada orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, seca sobre sulfato de sódio anídrico, filtrada e concentrada a vá- cuo. A mistura foi purificada por cromatografia em coluna de sílica sequenci- al automatizada (gradiente eluindo com EtOAc e Hexanos) e fase HPLC re- versa preparativa (55% - 95% de acetonitrila em água, depois processado 5%- 95% de acetonitrla em água para render (+/-)-4-((3S,4R,58)-3,4- bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hex-1-enil)-3-nitropiridina (27,2%) e (+/-)-4-((3R,4R,58)-3 4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hex-1-enil)-3- nitropiridina (50,2%). LCMS: MH+ 479,2, temperatura ambiente = 1,60 e 1,63 min.

Síntese de 4((18,38S48,5R)-3,4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo- hexilpiridin-3-amina e de 4-((1R,3R,4R,58)-3 4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-5- metilciclo-hexil)piridin-3-amina

QTBDMS QTBDMS À 2OoTBDMS e e) OS e : A NH? SBIA ' NÔ chiral | Nº chiral i Para uma solução de (+/)4((3RAR,58S)-3,4-bis(terc- | 15 — butildimetilsililóxi)-S5-metilciclo-hex-1-enil)-3-nitropiridina (equiv. 1,0) em eta- nol/EtOAc, a uma concentração de 0,1 M, foi adicionado paládio sobre car- bono 10% (eq. 1,0). A solução heterogênea resultante foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e foi agitada por 14 horas. Neste momento a mistu- ra foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com EtOAc. Os volá- teis foram removidos a vácuo e o material bruto foi purificado por cromato- grafia em coluna de sílica automatizada (R; = 0,2, 40% de EtOAc em Hepta- no) para render o produto racêmico puro. LCMS: MH+ 451,3, temperatura ambiente = 1,35 min. O composto racêmico foi resolvido por cromatografia quiral (coluna IC, 1 mUmin, 5% de IPA em Heptano) para render 4- ((18,3S/4S,5R)-3,4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hexil)piridin-3- amina (6,01 min) e 4((1R3R4R,58)-3,4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-S- metilciclo-hexil)piridin-3-amina (8,34 min).

Síntese de 4 ((1R,3R,4S,5R)-3,4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo- hexil)piridin-3-amina e de 4-((18,38,4R,58)-3,4-bi(terc-butildimetilsililóxi)-5-

: 76/190 metilciclo-hexil)piridin-3-amina

TBDMS TBDMS TBDMSO. o or OTBDMS x | < A 2 NH A NHo > DP - Nó chiral NÚ chiral Para uma solição de (+/)4((3S,AR,5S)-3,4-bis(terc- butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hex-1-enil)-3-nitropiridina (equiv. 1,0) em eta- nol,auma concentração de 0.1 M, foi adicionado paládio sobre carbono 10% (eq. 1,0). A solução heterogênea resultante foi colocada sob uma at- mosfera de hidrogênio e foi agitada por 14 horas. Neste momento a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com etanol. Os voláteis foram removidos a vácuo e o material bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica automatizada (Rr; = 0,2, 40% de EtOAc em Heptano) pa- ra render produto racêmico puro (50,4%). LCMS: MH+ 451,3, temperatura : ambiente = 1,35 min. O composto racêmico foi resolvido por cromatografia ; quiral (coluna IC, 1 mUmin, 5% IPA em Heptano) para render 4- à. ((1R,3R,4S,5R)-3,4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hexil)piridin-3- amina (698 min) e 4((18,38,4R,58)-3,4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-5- r metilciclo-hexil)piridin-3-amina (8,67 min). Síntese de 6-(metoxicarbonil)-3-o0x0-5-(trifluorometil)ciclo-hex-1-enolato de sódio CF; O os o ONa Para uma solução recentemente preparada de (eq. 1,0) em t- BuOH de sódio (1 M) foi adicionado acetoacetato de etila (eq. 1,0) em gotas e a mistura agitada em um banho de gelo por um período adicional de 15 min. 4,4 4-trifluorocrotonato de etila (eq. 1,0) foi adicionado em gotas e a mistura agitada à temperatura ambiente por um período adicional de 30 min. Após refluxo por 2 h, a mistura foi resfriada e hexano foi adicionado. O pre- cipitado foi filtrado sem purificação posterior para dar 6-(metoxicarbonil)-3- ox0-5-(trifluorometil)ciclo-hex-1-enolato de sódio (46%). LC/MS (m/2): MH* =

253,1, temperatura ambiente = 0,70min. Síntese de 5-(trifluorometil)ciclo-hexano-1,3-diona nos o 6-(Metoxicarbonil)-3-0x0-5-(trifluorometil)ciclo-hex-1-enolato — de sódio (eq. 1,0) foi dissolvido em 1M NaOH (eq. 1,0), e a mistura refluxada por 1 h. Após resfriar à temperatura ambiente, a mistura foi acidificada com 5 M ácido sulfúrico. A mistura foi extraída com EtOAc. Após lavagem com á- gua, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar 5-(trifluorometil)ciclo-hexano-1,3- diona, a qual foi usada para a próxima etapa sem purificação posterior (98%). LC/MS (m/z): MH* = 181,1, temperatura ambiente = 0,55min. Síntese de trifluorometanossulfonato de 3-0x0-5-(trifluorometil)ciclo-hex-1- enila

BR O f oTf ' 15 Para uma suspensão de S5-(trifluorometil)ciclo-hexano-1,3-diona . (eq. 1,0) em DCM (0,23 M) foi adicionado TEA (1.2 eq) para dar uma solu- ção clara. A mistura foi resfriada a 0 ºC. E depois TfO (eq. 1,05) em DCM foi adicionado em gotas. A mistura de reação foi agitada naquela temperatura por 2 horas. A mistura de reação foi diluída com DCM, e lavada com água, —NaHCO; aquoso, salmoura, e foi seca sobre MgSO;, filtrada e concentrada para dar trifluorometanossulfonato de 3-oxo-5-(trifluorometil)ciclo-hex-1- enila, o qual foi usado para a próxima etapa diretamente. LC/MS (m/z): MH* = 313,0, temperatura ambiente = 1,02 min. Síntese de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-5-(trifluorometil)ciclo- hex2-enona o

Todos os reagentes trifluorometanossulfonato de 3-0x0-5- (trifluorometil)ciclo-hex-1-enila — (eq. 1,0) NaOAc (eq. 30) e bis(pinacolato)diboro (eq. 2,0) foram adicionados a 1,4-dioxano (0,23 M) em um balão de fundo redondo e desgaseificado borbulhando em N, através de uma mistura por 10 min. Aduto de PdCl2(dppf).CH2Cl2 (eq. 1,0) foi adiciona- do e a reação aquecida a 80 ºC equipado com um condensador de refluxo em um banho de óleo sob N, por duas horas. A mistura foi resfriada à tem- peratura ambiente, filtrada através de um funil de frita de vidro grosso, a torta enxaguada com -10mL de 1,4-dioxano para dar 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-S-(trifluorometil)ciclo-hex-2-enona em 1,4-dioxano, o qual foi usado para a próxima etapa diretamente. LC/MS (m/z): MH* = 209,1 (áci- do borônico), Rt = 0,60 min. Síntese de 3-(3-nitropiridin-4-il)-5-(trifluorometil)ciclo-hex-2-enona

FC AN NO, : Ss | O éster de boronato de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- . 2-il)-5-(trifluorometil)ciclo-hex-2-enona (eq. 1,0) foi dissolvido em 1,4-dioxano (0.14 M) em um balão de fundo redondo foi desgaseificado por borbulha- mento de N, através de uma solução por 30 minutos. 4-cloro-3-nitropiridina (1.3 eq) e NaçCO; aquoso (2M, eq. 2,0) foram adicionados e N, foi borbu- lhado através por 10 minutos e depois o aduto de PdClx(dppf).CH2Cl> (eq. 0,1) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 100 ºC por 2 horas. À mistura foram adicionados EtOAc e salmoura. A mistura resultante foi filtrada através de celite, a torta foi lavada com EtOAc. A camada orgânica foi sepa- rada, e lavada com salmoura, seca sobre MgSOA, e filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (eluido com EtoAc:Hexanos = 1:10 a 21) para dar 3-(3S-nitropiridin-4-11)-5- (trifluorometil)ciclo-hex-2-enona (73% por três etapas a partir de dicetona). LC/MS (m/z): MH* = 287,1, temperatura ambiente = 0,85 min. Síntese de cis-3-(3-nitropiridin-4-il)-5-(trifluorometil)ciclo-hex-2-enol

F3C». “OH

Q > Ne) 3-(3-Nitropiridin-4-il)-S-(trifluorometil)ciclo-hex-2-enona (eq. 1,0) foi misturada com cloreto de cério (Ill) hepta-hidrato (eq. 1,0) e etanol abso- luto (0,17) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente até todos os sólidos dissolvidos. A mistura foi resfriada em um banho de gelo e NaBH, (eq. 1,2) foi adicionado em porções. A reação foi agitada no banho de gelo por 1h. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada com água, seca so- bre MgSO:, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna (1:1 acetato de etila e hexanos) para dar cis-3-(3-nitropiridin-4-i)-5- (trifuorometil)ciclo-hex-2-enol (66%). LC/MS (m/z): MH* = 289,2, temperatu- ra ambiente = 0,72 min. - Síntese de cis-4-(3-azido-5-(trifluorometil)ciclo-hex-1-enil)-3-nitropiridina F3C», No | qo 2 . N je Para uma solução de cis-3-(3-nitropiridin-4-i1)-5- (trifluorometil)ciclo-hex-2-enol (eq. 1,0) em DCM (0,14 M) foi adicionado TEA (2,5 eq), e seguido por MsC! (eq. 1,8) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. O solvente foi remo- vido. O resíduo foi dissolvido em DMF (0,19 M), e depois à mistura foi adi- cionado azido de sódio (1,2 eq.). A mistura resultante foi agitada à tempera- tura ambiente por 1 hora. Outro eq. 1,2 de azido de sódio foi adicionado. À mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de re- ação foi diluída com acetato de etila e heptano, e lavada com NaCl saturado. O produto orgânico foi seca sobre MgSO:, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna (1:1 acetato de etila e hexanos) para dar cis-4-(3- azidoS-(trifluorometil)ciclo-hex-1-enil)-3-nitropiridina (58%). LC/MS (m/z): MH*=314,1, Rt = 0,96 min.

Síntese de 1R,3R,58)-3-(3-aminopiridin-4-il)-5-(trifluorometil)ciclo- hexilcarbamato de terc-butila a | ô A solução de cis-4-(3-azido-5-(trifluorometil)ciclo-hex-1-enil)-3- —nitropiridina (eq. 1,0) em etanol (0,13 M) foi borbulhado com N, por 20 min. depois à mistura de reação foram adicionados Boc-anidrido (eq. 1,5) e Pd/C (eq. 0,2). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente sob atmos- fera de Hz durante a noite. O sólido foi removido por filtração sobre celite e lavado com EtOH. O resíduo foi purificado por coluna (metanol 5% em 1:1 acetato de etila e hexanos) para dar cis-3-(3-aminopiridin-4-il)-5- (trifluorometil) ciclohexilcarbamato racêmico (57%). LC/MS (m/z): MH+ = . 360,2 , temperatura ambiente = 0,72 min. O (1R,3R,58)-3-(3-aminopiridin-4- iN)-5-(trifluorometil)ciclo-hexilcarbamato de terc-butila e N-(4-((18,3S,5R)-3- Ô amino-5-(trifluorometil)ciclohexil)piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)-5- É 15 fluoropicolinamida enantiomericamente puros foram resolvidos por HPLC . quiral (para análise R, = 8,14 min e 10,59 min respectivamente; hepta- no:isopropanol= 90:10 (v:v), Chiralcel IC 100 x 4,6 mm a 1 mLmin. Para preparação separativa, heptano:isopropano! = 90:10 (v:v), Chiralcel IC 250 x mm a 15 mL/min). 20 Síntese de (R)4d4-benzil-3-((2R,3R)-3-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i1)-3- hidróxi-2-metilpropanoil)oxazolidin-2-ona

LA

TEL (R)-4-benzil-3-((2R,3R)-3-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-11)-3- hidróxi-2-metilpropanoil)oxazolidin-2-ona foi preparada da maneira reportada —(Proc.Nat.Acad.Sciences, 101, 33, 2004, páginas 12042-12047) pelo com- posto enantiomérico iniciando com (R)-4-benzil-3-propioniloxazolidin-2-ona e

” z 81/190 R-gliceraldeído acetonida. Síntese de (R)4-benzil-3-((2R,3R)-3-(terc-butildimetilsililóxi)-3-((R)-2,2- dimetil-1,3-dioxolan-4-il)-2-metilpropanoil)oxazolidin-2-ona

LATO 1 (R)-4-benzil-3-((2R,3R)-3-(terc-butildimetilsililóxi)-3-((R)-2,2- dimetil-1,3-dioxolan-4-i)-2-metilpropanoil)oxazolidin-2-ona foi preparada da maneira reportada (Proc.Nat.Acad.Sciences, 101, 33, 2004, páginas 12042- 12047) para o composto enantiomérico começando com (R)-4-benzil-3- ((2R,3R)-3-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i1)-3-hidróxi-2- metilpropanoil)oxazolidin-2-ona. Síntese de (2S,3R)-3-(terc-butildimetilsililóxi)-3-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan- É 4-iI)-2-metilpropan-1-ol

TBS : NO : 2 . Para uma solução de (R)4-benzil-3-((2R,3R)-3-(terc- butildimetilsililóxi)-3-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i1)-2- metilpropanoil)oxazolidin-2-ona (equiv. 1,0) e etanol (equiv. 3,0) em THF (0,09 M) foi adicionado LiBH, (equiv. 1,0) a -40ºC. A mistura de reação foi deixada para aquecer à temperatura ambiente lentamente e agitada nessa temperatura por 12 horas. A solução foi resfriada de volta a 40 ºC e LiBH, adicional (equiv. 0,3) foi adicionado. Após aquecer novamente à temperatura ambiente e agitar por 2 horas, a solução foi depois diluída com dietil éter e 1N NaOH) foi adicionado. A mistura resultante foi extraída com acetato de etila, a camada orgânica foi separada, lavada com NaClçsat), Seca sobre sul- fato de magnésio, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de silica-gel (10-30% de EtOAc/n-heptanos) ren- dendo (2S,3R)-3-(terc-butildimetilsililóxi)-3-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)- 2-metilpropan-1-ol em (75%). LC/MS = 247,1 (M+H-cetal-H2O), temperatura

A 82/190 ambiente = 0,64 min. Síntese de 1R,28)-3-azido-1-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i1)-2- metilpropóxi)(terc-buti)dimetilsilano N$ o o sá Para uma solução de (2S,3R)-3-(terc-butildimetilsililóxi)-3-((R)- 2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)-2-metilpropan-1-0l (equiv. 1,0), DIAD (equiv. 2,0), e PPh; (equiv. 2,0) em THF (0.18 M) foi adicionado DPPA (equiv. 1,0, 1M solução em THF). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambien- te durante a noite. Mediante a remoção dos voláteis sob vácuo, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (2-3-5% EtoAc/n- heptanos) rendendo ((1R,2S)-3-azido-1-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-i)-2- metilpropóxi)(terc-butil) dimetilsilano (62%). ?H-NMR (400 MHz, CDCk): 5 4,04 - 4,10 (m, 1H), 3,94 (dd, J=8,0, 6,4, 1H), 3,72 (d, J=7,2, 1H), 3,53 (t, aJ=8,0, 1H), 3,36 (0d, J=12, 8,0, 1H), 3,19 (dd, J=12,0, 6,7, 1H), 1,52 - 1,60 É 15. (m,1H),1,41(s, 3H), 1,34 (s, 3H), 0,92 (d, J=7,2, 3H), 0,90 (s, 9 H), 0,12 (s, | 3H), 0,09 (s, SH). : Síntese de (2R,3R,4S)-5-azido-3-(terc-butildimetilsililóxi)-4-metilpentano-1,2- diol

QOTBS OX oH oH Para uma solução de ((1R,28)-3-azido-1-((R)-2,2-dimetil-1,3- dioxolan-4-i)-2-metilpropóxi)(terc-butil)dimetilsilano (equiv. 1,0) em MeOH (0,1 M) foi adicionado PPTS (equiv. 1,0) e a mistura foi agitada à temperatu- ra ambiente por 14 horas, 50 ºC por 2 horas e 80 ºC por 1 hora. Os voláteis foram removidos sob vácuo e o resíduo foi purificado através de cromatogra- fia de coluna de sílica-gel (10-25% de EtOAc/n-heptanos) rendendo (2R,3R,4S)-5-azido-3-(terc-butildimetilsililóxi)-4-metilpentano-1,2-diol (40%). Síntese de 4-metilbenzenossulfonato de (2R,3R4S)-5-azido-3-(terc- butildimetilsililóxi)-2-hidróxi-4-metilpentila

E. 83/190 .

OTBS NO IO os oH Para uma solução de (2R,3R,4S)-5-azido-3-(terc- butildimetilsililóxi)-1-hidróxi-4-metilpentan-2-ilcarbamato de terc-butila (equiv. 1,0) em piridina (0,2 M) foi adicionado pTsCI (equiv. 1,3) a O ºC. A mistura manteve nessa temperatura por 16 horas. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica-gel (10 - 15 - 20% de EtOAc/n-heptanos) rendendo 4-metilbenzenossulfonato de (2R,3R,48S)-5-azido-3-(terc-butildimetilsílilóxi)-2-hidróxi4-metilpentila. Síntese de 4-metilbenzenossulfonato de (2R,3R,4S)-5-azido-2,3-bis(terc- —butildimetilsillóxi)-4-metilpentila

TBS nO

OTBS Para uma solução de 4-metilbenzenossulfonato de (2R,3R,4S)- R 5-azido-3-(terc-butildimetilsililóxi)-2-hidróxi4-metilpentila (1,0 equiv.) e 2,6- lutidina (3,4 equiv.) foi adicionado TBDMSOTf (1,7 equiv.) a OC. A solução foi agitada por 7 horas conforme foi aquecida à ta. A solução foi diluída com ; EtOAc, lavada com 10% de CuSO,a, H2O, Na2COs(sat), NaClisat), Secada so- . bre MgSO;, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel (2,5-5-10-20% de EtOAc/n-heptanos) rendendo 4- metilbenzenossulfonato de (2R,3R,4S)-5-azido-2,3-bis(terc- butildimetilsililóxi)>—-d4-metilpentila (75%). Síntese de 4-((3R,4R,58S)-3 4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-5-metilpiperidin-1-i)- 3-nitropiridina

OTBS =

N S* . ) Uma solução de 4-metilbenzenossulfonato de (2R,3R,4S)-5- —azido-2,3-bis(terc-butildimetilsililóxi)-4-metilpentila em EtOH (0,05 M) foi des- gaseificada com argônio. DIEA (1,5 equiv.) foi adicionado, seguido por 10%

de Pd/C (0,1 equiv.). A mistura de reação foi agitada sob um balão de hidro- gênio por 3 horas. A solução foi desgaseíficada e purgada em argônio, ao mesmo tempo que 4-cloro-3-nitropiridina (1,5 equiv.) e DIEA adicional (1,5 equiv.) foram adicionados. Após agitar à ta por 15 horas, a solução foi filtra- dapararemover o Pd/C, e os voláteis foram removidos em vácuo. O resíduo foi diluído com acetato de etila e lavado com Na23COs(sat), NaClsat, Secado sobre MgSO;, filtrado e concentrado. O resíduo foi purificado por cromato- grafia de coluna em sílica-gel (10-15% de EtOAc/n-heptanos) rendendo 4- ((3R,4R,58)-3,4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilpiperidin-1-il)-3-nitropiridina (40%). LC/MS = 482,4 (M+H), R;= 1,26 min. Síntese de 4-((3R,4R,58)-3 4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilpiperidin-1- iDpiridin-3-amina

OTBS Iara

N

N ç Para uma solução de 4-((3R,4R,58)-3,4-bis(terc- butildimetilsililóxi)-S-metilpiperidin-1-il)-3-nitropiridina (1,0 equiv.) em etanol, a uma concentração de 0,05 M, foram adicionados 10% de paládio em car- bono (0,1 eq.). A solução heterogênea resultante foi colocada sob uma at- mosfera de hidrogênio e foi agitada por 14 horas. Neste momento, a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com etanol. Os voláteis foram removidos em vácuo rendendo 4-((3R,4R,5S)-3,4-bis(terc- butildimetilsililóxi)-S-metilpiperidin-1-il)piridin-3-amina. LC/MS = 452,4 (M+H), R: = 1,31 min. Síntese de 4-((1R,2R)-3-((R)-4-benzil-2-0x0-0xazolidin-3-il)-1-hidróxi-2-metil- 3-oxopropil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila o H

SE Sa seek. ó

Para uma solução de (R)-4-benzil-3-propioniloxazolidin-2-ona (1,0 equiv.) em DCM (0,13 M) foi adicionado TiCk (1,0 equiv.) a 40'C. À mistura foi agitada a 40'C por 10 min (suspensão amarela), depois DIPEA (2,5 equiv.) foi adicionado (solução vermelho-escura) e agitada a 0C por 20 ss min 4-formil-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila (1,0 e- quiv.) em DCM (0,5 M) foi então adicionado em gotas, e a mistura resultante foi agitada por 1,5 hora. A reação foi extinta pela adição de cloreto de amô- nio aquoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, secada com sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado através da cromatografia de coluna eluindo com acetato de etila e hexanos (1:4) para dar 4-((1R,2R)-3-((R)-4- benzil-2-0x0-oxazolidin-3-i)-1-hidróxi-2-metil-3-oxopropil)-2,2- Í dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila como o produto principal (5:2) em 58% de rendimento. LC/MS = 363,3 (M+H-BºC), Rt = 1,09 min.

Síntese de 4-((1R,2R)-3-((R)-4-benzil-2-0x0-0xazolidin-3-il)-1 -(terc- butildimetilsililóxi -2-metil-3-oxopropil)-2, 2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila : % O Orts ' | Re Para uma solução de 4-((1R,2R)-3-((R)-4-benzil-2-0x0- oxazolidin-3-il)-1-hidróxi-2-metil-3-oxopropil)-2,2-dimetiloxazolidina-3- carboxilato de (R)-terc-butila (1,0 equiv.) e lutidina (1,8 equiv) em DCM (0,1M) foi adicionado TBSOTf (1,4 equiv.) a 40'C. A mistura de reação foi agitada a 40'C por 2 horas. À solução foi diluída com acetato de etila e la- vada com NaHCO; saturado, NaCl saturado, secada com sulfato de magné- sio, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de co- luna em sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:4) para dar 4- ((1R,2R)-3-((R)-4-benzil-2-0x0-0xazolid in-3-i)- 1-(terc-butildimetilsililóxi)-2- metil-3-oxopropil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila como o produto principal (5:2) em 83% de rendimento. LC/MS = 577,3 (M+H), Rt =

1,33 min (Frac 65%-95% método). Síntese de 4-((1R,2S)-1- terc-butildimetilsililóxi)-3-hidróxi-2-metilpropil)-2,2- dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila

OTBS “Te BocN Para uma solução de 4-((1R,2R)-3-((R)-4-benzil-2-0x0- oxazolidin-3-il)-1-(terc-butildimetilsililóxi)-2-metil-3-oxopropil)-2,2- dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila (1,0 equiv.) e etanol (3,0 equiv.) em THF (0,09 M) foi adicionado LiBH, (3,0 equiv.) a -30'C. A mistura de reação foi deixada aquecer a 0C e agitada àquela temperatura por 3 ho- ras. A solução foi então diluída com éter dietílico, e NaOH a 1N foi adiciona- do. A mistura resultante foi extraída com acetato de etila, a camada orgânica foi separada, lavada com NaCl! saturado, secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado através da cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:4) para dar 4- ((1R,28)-1-(terc-butildimetilsililóxi)-3-hidróxi-2-metilpropil)-2,2- ! dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila como o produto principal . (razão 5:2) em 71% de rendimento. LC/MS = 304,3 (M+H-BOC), Rt = 0,95 min (Frac 65%-95% método). Síntese de 4-((1R,28)-3-azido-1-(terc-butildimetilsililóxi)- —2-metilpropil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila

TBS

ÃO BocN < Para uma solução de 4((1 R,28)-1-(terc-butildimetilsililóxi)-3- hidróxi-2-metilpropil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila (1,0 equiv.), DIAD (2,0 equiv.), e PPh; (2,0 equiv.) em THF (0,18 M) foi adi- cionado DPPA (2,0 equiv., 1M solução em THF). A mistura de reação foi agi- tada à temperatura ambiente durante a noite. Após a remoção dos voláteis sob vácuo, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:6) para dar 4-((1R,28)-3-azido-1-

(terc-butildimetilsililóxi)-2-metilpropil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)-terc-butila como o produto principal (5:2) em 86% de rendimento. LC/MS = 329,3 (M+H-BOC), Rt = 1,40 min (Frac 65%-95% método).

Síntese de (2R,3R 4S)-5-azido-3-(terc-butildimetilsililóxi)- —1-hidróxia-metilpentan-2-ilcarbamato de terc-butila

QTBS O ou NHBoc Para uma solução de 4-((1R,28)-3-azido-1-(terc- butildimetilsililóxi)-2-metilpropil)-2,2-dimetiloxazolidina-3-carboxilato de (R)- terc-butila (1,0 equiv.) em EtoOH (0,1 M) foi adicionado PPTS (1,3 equiv.) e a “mistura foi sumetida a refluxo por 2 dias. Os voláteis foram removidos sob vácuo, o resíduo foi dissolvido em DCM (0,1 M) e DIEA (1,5 equiv.) e BOCO (1,0 equiv.) foram adicionados à mistura de reação. A solução foi agitada por 3 horas à temperatura ambiente. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida, e o resíduo foi diluído com acetato de etila, lavado com água, NaHSO, aquoso, NaHCO; aquoso, NaCl saturado, a fase orgânica foi seca- . da com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado através da cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com acetato de eti- : la e hexanos (1:3) para dar (2R,3R,4S)-5-azido-3-(terc-butildimetilsililóxi)-1- hidróxi-4-metilpentan-2-ilcarbamato de terc-butila como um isômero principal (5:2) em 70% de rendimento. LC/MS = 289,3 (M+H-BOC), Rt = 0,76 min (Frac 65%-95% método). Síntese de metanossulfonato de (2R,3R,48)-5-azido-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-(terc-butildimetilsililóxi)-4-metilpentila

TBS Oo NHBoc Para uma solução de (2R,3R,48)-5-azido-3-(terc- butildimetilsililóxi)-1-hidróxic4-metilpentan-2-ilcarbamato de terc-butila (1,0 equiv.) em piridina (0,2 M) foi adicionado MsCI (1,3 equiv.) seguido por DMAP (quantidade catalítica) a OC. A mistura foi agitada àquela temperatu- ra por 1 hora. A solução foi diluída com éter e acetato de etila (4:1), lavada —com NaHSO, aquoso, NaHCO; saturado, salmoura, secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:3) para dar metanossulfonato — de (2R,3R,48)-5-azido-2-(terc-butoxicarbonitamino)-3- (terc-butildimetilsililóxi)-4-metilpentila como um isômero principal (5:2) em — 90% de rendimento. LC/MS = 367,3 (M+H-BOC), Rt = 0,81 min (Frac 65%- 95% método). Síntese de (SR,4R,5S)-4-(terc-butildimetilsililóxi)- S-metilpiperidin-3-ilcarbamato de terc-butila

OTBS ss

N Uma solução de metanossulfonato de (2R,3R,4S)-5-azido-2- (terc-butoxicarbonilamino)-3-(terc-butildimetilsililóxi)>-4-metilpentila em MeOH (0,09 M) foi desgaseificada com nitrogênio por 20 min. DIEA (2,5 equiv.) foi adicionado, seguido por 10% de Pd/C (0,1 equiv.). A mistura de reação foi agitada sob um balão de hidrogênio por 2 horas. À solução foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob vácuo para proporcionar (3R,4R,58S)-4-(terc- À butildimetilsililóxi)-5-metilpiperidin-3-ilcarbamato de terc-butila como o isôme- . ro principal (5:2) em >99% de rendimento. LC/MS = 345.2 (M+H-Boc), Rt = 0,95 e 0,99 min. Síntese de (3R4R,5S)4-(terc-butildimetilsililóxi)-5-metil-1 -(3-nitropiridin-4- —ilpiperidin-3-ilcarbamato de terc-butila

OTBS En

N W NO, Ç

N Para uma solução de (SR,4R,5S)-4-(terc-butildimetilsililóxi)-5- metilpiperidin-3-ilcarbamato de terc-butila (1,0 equiv.) em i-PrOH (0,09 M) foram adicionados DIEA (2,5 equiv.) e 4-cloro-3-nitropiridina (1,5 equiv.). À mistura de reação foi agitada a 60C por 2 horas. Os voláteis foram removi- dos sob vácuo, o resíduo foi diluído com acetato de etila e lavado com Nac! saturado. A fase orgânica foi secada com sulfato de magnésio, filtrada e

| 89/190 concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:2) para dar (38R,4R,5S)- 4-(terc-butildimetilsililóxi)-5-metil-1-(3-nitropiridin-4-iN) piperidin-3-ilcarbamato de terc-butila em 76% de rendimento. LC/MS = 467,3 (M+H), Rt = 1,09 min. Síntese de (3R4R5S)1-(3-aminopiridin-4-i)-4-(terc-butildimetilsililóxi)-5- metilpiperidin-3-ilcarbamato de terc-butila | OTBS

RO

N We NH

Ç

N Uma solução de (SR,4R,58)-4-(terc-butildimetilsililóxi)-S-metil-1- (3-nitropiridin-4-il)piperidin-3-ilcarbamato de terc-butila (1,0 equiv.) em MeOH (0,05 M) foi desgaseificada com nitrogênio por 20 min. 10% de Pd/C (0,2 equiv.) foram adicionados à mistura, e a solução foi agitada sob um balão de hidrogênio por 3 horas. À reação foi filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar (3RAR5S)-1 -(3-aminopiridin-4-i1)-4-(terc- .: butildimetilsilitóxi)-5-metilpiperidin-3-ilcarbamato de terc-butila como o produ- to desejado em 94% de rendimento. LC/MS = 437,4 (M+H), Rt = 1,08 min. . *H-RMN (300 MHz, CDCI3): 5 8.01 (s, 1H), 7.95 (d, J =6,0 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,44 (br s, 1H), 3,74 (br s, 2H), 3,59-3,55 (m, 1H), 3,25-3,13 (m, 2H), 2,47-2,35 (m, 2H), 1,89 (br s, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,04 (d J = 6,0, 3H), 0,92 (s, 9H), 0,13 (d, J=9,0, 6H). Síntese de (2R)-1-(benzilóxi)-3-hidróxi4-metil-hex-5-en-2-ilcarbamato de terc-butila

SEX e oBR Para uma solução de N-Boc, aldeído de O-benzil-D-Serina (1,0 equiv) em DCM (0,1 M) a -78'C sob uma atmosfera de Ar foi adicionado (2)- 2-(but-2-enil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,1 equiv) , e a solução clara agitada por 16 horas conforme foi aquecida à ta. À solução foi adicio-

nada ao EtOAc e foi lavada com H2O (3x), e NaClia), Secada sobre MgSO, e purificada por cromatografia em sílica-gel (15% de EtOAc/hexanos) para render (2R)-1-(benzilóxi)-3-hidróxi-4-metil-hex-5-en-2-ilcarbamato de terc- butila (54%) como uma mistura 3:1 dos isômeros como julgados por 'H —RMN.LCMS (m/2): 236,3 (MH*-Boc); LC Ri =4,37 e 4,51 min. Síntese de (4R)-4-(benziloximetil)-5-(but-3-en-2-il)oxazolidin-2-ona

A

JT Ê É 'oBn Para uma solução de (2R)-1-(benzilóxi)-3-hidróxi-4-metil-hex-5- en-2- em THF (0,1 M) foram adicionados 60% de hidreto de sódio em óleo mineral (1,5 equiv.). Após agitar por 3 dias, a reação foi extinta pela adição de NH.Clisat), E à solução foi diluída com EtOAc e lavada com NH4CIsat) E NaCleat), secada sobre MgSO, e purificada por cromatografia em sílica-gel (50% de EtOAc/hexanos) para render (4R)-4-(benziloximetil)-5-(but-3-en-2- iNoxazolidin-2-ona (89%) como uma mistura 3:1. LCMS (m/z): 262,2 (MH); : 15 LCRi=3,47 min. . Síntese de (4R)-4-(benziloximetil)-5-(1-hidroxipropan-2-il)oxazolidin-2-ona pÁ

TC no 'oBn Para uma solução de (4R)-4-(benziloximetil)-5-(but-3-en-2- iNoxazolidin-2-ona (1,0 equiv.) em 2:1 MeOH/ HsO (0,04 M) foram adiciona- 20 dos4% de tetróxido de ósmio em HzO (0,07 equiv) e periodato de sódio (3,0 equiv.). Após agitar por 3 horas, o precipitado branco foi filtrado e enxaguado com EtOAc. O filtrado combinado foi concentrado em vácuo, e o resíduo foi dissolvido em EtOAc, lavado com NaCleat), secado sobre MgSO;,, filtrado e concentrado. O aldeído bruto foi dissolvido em EtOH (0,08 M) e sob resfria- 25 mentoa0C, boridreto de sódio (2,0 equiv.) foi adicionado. Após agitar por horas e chegar à temperatura ambiente, a reação foi extinta pela adição de H2O. Após agitar por 20 minutos, o EtOH foi removido em vácuo, EtoAc foi adicionado, e a solução foi lavada com HCl a 1N, NaHCOz(sat) e NaCleat), secada sobre MgSO;,, filtrada e concentrada rendendo após a purificação por cromatografia em sílica-gel (4R)-4-(benziloximetil)-5-(1-hidroxipropan-2- iNoxazolidin-2-ona como uma mistura 3:1 de isômeros (60%). LCMS (m/z): 266,1(MH”); LCR:=2,28min. Síntese de (4R)-4-(hidroximetil)-5-(1-hidroxipropan-2-i)oxazolidin-2-ona o

ST Ho OH Para uma solução de (4R)-4-(benziloximetil)-5-(1-hidroxipropan- 2-iNoxazolidin-2-ona (1,0 equiv.) em metanol, a uma concentração de 0,1 M, foram adicionados 10% de paládio em carbono (0,1 eq.). À solução hetero- gênea resultante foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e foi agitada por 15 horas. Neste momento, a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com metanol. Os voláteis foram removidos em vácuo ren- dendo (4R)-4-(hidroximetil)-5-(1-hidroxipropan-2-il)oxazolidin-2-ona (99%). LCMS (m/2): 176,1 (MH*). Síntese de 4-metilbenzenossulfonato de 2-((4R)-2-0x0-4- (tosiloximetil)oxazolidin-5-il)-propila

Á

IX TsO oTs Para uma solução de (4R)-4-(hidroximetil)-5-(1-hidroxipropan-2- iNoxazolidin-2-o0na (1,0 equiv.) em piridina (0,15 M) a 0C foi adicionado clo- reto de p-toluenossulfonila (2,1 equiv.). A solução foi deixada aquecer à ta conforme foi agitada por 14 horas, ao mesmo tempo EtOAc foi adicionado, e a solução foi lavada com H2O(3x), CuSOa(sat) (2x), HO , Na2zCOs(sat) E Na- Cla), Secada sobre MgSO;, filtrada, concentrada e purificada por cromato- grafia em sílica-gel (75% de eluente EtOAc/hexanos) rendendo 4- metilbenzenossulfonato de 2-((4R)-2-0x0-4-(tosiloximetil)oxazolidin-5- iNpropila (68%). LCMS (m/2): 484,1 (MH*); LC R; = 4,06 min.

Síntese de (3aR,7R,7aS)-5-(4-metoxibenzil)-7-metil-hexa-hidro-oxazolo[4,5- clpiridin-2(3H)-ona “e (3aR,7S,7aR)-5-(4-metoxibenzil)-7-metil-hexa-hidro- oxazolo[4,5-c]piridin-2(3H)-ona o Á NT e, E y "

PMB PMB Uma solução de 4-metilbenzenossulfonato de 2-((4R)-2-0x0-4- (tosiloximetil)oxazolidin-5-il)propila (1,0 equiv.), di-isopropiletil amina (3,0 equiv.) e para-metoxibenzilamina (1,5 equiv.) em NMP (0,05 M) foi aquecida a 100C por 14 horas. À solução foi purificada diretamente por RP HPLC. As frações do produto foram dessalgadas pela adição de EtOAc e Na2COss), lavadas adicionalmente com NaCl(sat.), secadas sobre MgSO;, e concentra- das rendendo dois isômeros separados de (3aR,7R,7aS)-5-(4-metoxibenzil)- 7-metil-hexa-hidro-oxazolo[4,5-c]piridin-2(3H)-ona e (3aR7S,7aR)-5-(4- metoxibenzil)-7-metil-hexa-hidro-oxazolo[4,5-c]piridin-2(3H)-ona (27% e 8%). : LCMS (m/2z): 277,2 (MH*) a 0,40 e 0,42 min. Síntesede (3aR,7R,7aS)-7-metil-hexa-hidro-oxazolo[4,5-c]piridin-2, 3H)-ona ' - TV”

N

H Para uma solução de (3aR,7R,7aS)-5-(4-metoxibenzil)-7-metil- hexa-hidro-oxazolo[4,5-c]piridin-2(3H)-ona (1,0 equiv.) em metanol, a uma concentração de 0,1 M, foram adicionados 20% de hidróxido de paládio em carbono (0,3 eq.). A solução heterogênea resultante foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e foi agitada por 2 horas. Neste momento, a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com metanol. Os volá- teis foram removidos em vácuo rendendo (3aR,7R,7aS)-7-metil-hexa-hidro- oxazolo(4,5-c]piridin-2(3H)-ona (99%). LCMS (m/z): 157,1 (MH*) a 0,16 min. Síntese de 7-metil-5-(3-nitropiridin-4-il)-2-oxo-hexa-hidro-oxazolo[4,5-

clpiridina-3(2H)-carboxilato de (3aR,7R,7aS)-terc-butila o dinda

N e Uma solução de 4-cloro-3-nitropiridina (1,3 equiv) e (3aR,7R,7aS)-7-metil-hexa-hidro-oxazolo(4,5-c]piridin-2(3H)-ona (1,5 equiv.) em CHCb,auma concentração de 0,1 M, foi agitada à ta por 48 horas, a qual piperidina (0,4 equiv) foi adicionada para consumir o excesso de 4- cloro-3-nitropiridina. Após agitar por mais 2 horas, dicarbonato de di-terc- butila (2,0 equiv.) e dimetilaminopiridina (0,1 equiv.) foram adicionados. Após agitar por 4 horas, a solução foi dividida entre EtOAc e NaHCO; (sat), foi la- —vada adicionalmente com NaHCO; (sat), e NaClisat), foi secada sobre MgSO., foi filtrada e purificada por cromatografia em sílica-gel rendendo 7-metil-5-(3- nitropiridin-4-i1)-2-0x0-hexa-hidro-oxazolo[4,5-c]piridina-3(2H)carboxilato — de (3aR,7R,7aS)-terc-butila (62%). LCMS (m/z): 379,0 (MH*) a 0,58 min. Síntese de 5-(3-aminopiridin-4-il)-7-metil-2-0xo-hexa-hidro-oxazolo[4,5- —clpiridina-3(2H)-carboxilato de (3aR,7R,7aS)-terc-butila o Na

N = Para uma solução de 7-metil-5-(3-nitropiridin-4-1)-2-0x0-hexa- hidro-oxazolo[4,5-c]piridina-3(2H)-carboxilato de (3aR,7R,7aS)-terc-butila (1,0 equiv.) em metanol, a uma concentração de 0,1 M, foram adicionados 10% de paládio em carbono (0,1 eq.). A solução heterogênea resultante foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e foi agitada por 14 horas. Neste momento, a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com metanol. Os voláteis foram removidos em vácuo rendendo 5-(3- aminopiridin-4-il)-7-metil-2-0xo-hexa-hidro-oxazolo[4,5-c]piridina-3(2H)- carboxilato de (3aR,7R,7aS)-terc-butila. LCMS (m/z): 349,1 (MH); LC R; = 2,06 min. —Síntesede(3aR,7S,7aR)-7-metil-hexa-hidro-oxazolo(4,5-c] piridin-2(3H)-ona o o o, ET"

N

H Para uma solução de (3aR,7S,7aR)-5-(4-metoxibenzil)-7-metil- hexa-hidro-oxazolo[4,5-c]piridin-2(3H)-ona (1,0 equiv.) em metanol, a uma concentração de 0,1 M, foram adicionados 20% de hidróxido de paládio em carbono (0,3 eq.). A solução heterogênea resultante foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e foi agitada por 2 horas. Neste momento, a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com metanol. Os volá- teis foram removidos em vácuo rendendo (BaR,7S,7aR)-7-metil-hexa-hidro- oxazolo[4,5-c]piridin-2(3H)-ona (99%). LCMS (m/2): 157,1 (MH*) at 0,17 min. l 15 Síntese de 7-metil-5-(3-nitropiridin-4-i1)-2-0xo-hexa-hidro-oxazolo(4,5- : clpiridina-3(2H)-carboxilato de (3aR,7S,7aR)-terc-butila - o bee

N ST" so Uma solução de 4-cloro-3-nitropiridina (1,8 equiv) e (3aR,78,7aR)-7-metil-hexa-hidro-oxazolo[4,5-c]piridin-2(3H)-ona (1,5 equiv.) em CHzCb, a uma concentração de 0,1 M, foi agitada à ta por 48 horas, na qual piperidina (0,4 equiv) foi adicionada para consumir o excesso de 4 cloro-3-nitropiridina. Após agitar por mais 2 horas, dicarbonato de di-terc- butila (2,0 equiv.) e dimetilaminopiridina (0,1 equiv.) foram adicionados. Após agitar por 4 horas, a solução foi dividida entre EtOAc e NaHCO; (sat), foi la-

vada adicionalmente com NaHCO; (sat, € NaClisav), foi secada sobre MgSO,, foi filtrada e purificada por cromatografia em sílica-gel (75% de eluente EtO- Ac/hexanos) rendendo 7-metil-5-(3-nitropiridin-4-11)-2-0x0-hexa-hidro- oxazolo[4,5-c]piridina-3(2H)-carboxilato de (3aR,7S,7aR)-terc-butila (95%). LCMS(m/2):379,0 (MH”). LC Ri =2,42 min. Síntese = de 5-(3-aminopiridin-4-i)-7-metil-2-0xo-hexa-hidro-oxazolo[4,5- clpiridina-3(2H)-carboxilato de (3aR,7R,7aS)-terc-butila

A on e

N Ay Para uma solução de 7-metil-5-(3-nitropiridin-4-i1)-2-0x0-hexa- hidro-oxazolo[4,5-c]piridina-3(2H)-carboxilato de (3aR,7S,7aR)-terc-butila (1,0 equiv.) em metanol, a uma concentração de 0,1 M, foram adicionados 10% de paládio em carbono (0,1 eq.). A solução heterogênea resultante foi Y colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e foi agitada por 14 horas. Neste ' momento, a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite eluindo com metanol. Os voláteis foram removidos em vácuo rendendo 5-(3- aminopiridin-4-i)-7-metil-2-0xo-hexa-hidro-oxazolo[4,5-c]piridina-3(2H)- carboxilato de (3aR,7S,7aR)-terc-butila. LCMS (m/z): 349,1 (MH); LC R; = 2,18 min. Método 1 —Síntesede 3-amino-6-(2,6-diflurofenil)picolinato de metila z

A

O AR NH, Uma solução de 3-amino-6-bromopicolinato de metila (1,0 e- quiv.), ácido 2,6-difluorofenil-borônico (3,0 equiv), e Pd(dppf)CIa-DCM (0,1 equiv.) em 3:1 DME/ 2M NazCO; (0,5 M) foi submetida à irradiação de micro-

| 96/190 ondas a 120ºC em intervalos de 15 min. A reação foi filtrada e lavada com EtOAc. O orgânico foi dividido com H2O (25mL), foi lavada adicionalmente com NaClia, (25mL), foi secado sobre MgSO,, e os voláteis foram removi- dos em vácuo. O resíduo foi diluído em EtOAc e passados através de um — plugue de sílica-gel, e os voláteis foram removidos em vácuo rendendo 3- amino-6-(2,6-difluorofenil)picolinato de metila (47%). LCMS (m/z): 265,1 (MH); LC R; = 2,70 min Síntese de ácido 6-(2,3-difluorofenil)-5-fluoropicolínico

F SC

EO Ho. FF o Para uma solução de ácido 6-bromo-5-fluoropicolínico (1,0 e- quiv.) em DME e Na;CO; a 2M (3:1, 0,25 M) foram adicionados ácido 2,3- difluorofenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)CI-DCM (0,05 equiv.) em um frasco de micro-ondas. O frasco foi aquecido em micro-ondas a 120'C por 30 : minutos. A mistura foi diluída com acetato de etila, e NaOH a1N foi adiciona- do. A fase orgânica foi separada e extraída mais três vezes com NaOH a IN : e uma vez com NaOH a 6N. As fase aquosas combinadas foram filtradas e acidificadas a pH 1 pela adição de HCI concentrado e extraídas com acetato de etila. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada para dar ácido 6-(2,3-difluorofenil)-5-fluoropicolínico em 78%. LC/MS=254,1(M+H), Rt=0,75 min. Método 2 Síntese de ácido 3-amino-6-(2,6-difluorofenil)picolínico z ne

HO AR NHo Para uma solução de 3-amino-6-(2,6-difluorofenil)picolinato de metila (1,0 equiv) em THF (0,5 M), foi adicionado 1M LIOH (4,0 equiv). Após agitar por 4 horas a 60ºC, HCI a 1N (4,0 equiv.) foi adicionado, e o THF foi removido em vácuo. O sólido resultante foi filtrado e enxaguado com HO frio (3 x 20mL) para render ácido 3-amino-6-(2,6-difluorofenil)picolínico (90%). LCMS (m/z): 251,1 (MH*); LC R: = 2,1 min. —Síntesede ácido 3-amino-6-(2-fluoro-5-propoxifenil)picolínico

ADO

F És Ho A O NH, Método 1 foi seguido usando ácido 3-amino-6-bromopicolínico (1,0 equiv.) e ácido 2-fluoro-5-propoxifenilborônico (1,5 equiv.) e Pd(dppf)Cla- DCM (005 equi) para dar ácido —3-amino-6-(2-fluoro-5- —propoxifenil)picolínico em 75% de rendimento. LC/MS = 291,0 (M+H), Rt = 0,81 min. Síntese de ácido 3-amino-5-fluoro-6-(2-fluoro-5-propoxifenil)picolínico

ON : F y Ç : Ho. D O NH, Método 1 foi seguido usando ácido 3-amino-6-bromo-5- fluoropicolínico (1,0 equiv.) e ácido 2-fluoro-5-propoxifenilborônico (1,3 e- quiv.) e Pd(dpph)Cl-DCM (0,05 equiv.) para dar ácido 3-amino-5-fluoro-6-(2- fluoro-S-propoxifenil)picolínico em 28% de rendimento. LC/MS = 309,1 (M+H), Rt = 1,00 min. Síntese de 3-amino-5-fluoro-6-(2-fluorofenil)picolinato de metila

F

ENE O. = o NH Método 1 foi seguido usando 3-amino-6-bromo-5-fluoropicolinato de metila (1,0 equiv) e ácido 2-fluoro-fenilborônico (1,5 equiv) e Pd(dppf)Cl-DCM (0,05 equiv) para dar 3-amino-5-fluoro-6-(2- fluorofenil)picolinato de metila em >99% de rendimento. LC/MS = 265,0 (M+H), Rt = 0,77 min. Síntesede ácido 3-amino-5-fluoro-6-(2-fluorofenil)picolínico

F rs Ho À > O NH, Método 2 foi seguido usando 3-amino-5-fluoro-6-(2- fluorofenil)picolinato de metila (1,0 equiv.) e LIOH (5,0 equiv.) para dar ácido 3-amino-5-fluoro-6-(2-fluorofenil)picolínico em 90% de rendimento. LC/MS = 251,1 (M+H), Rt= 0,80 min. Síntese de 3-amino-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinato de metila

F F a AI . O NH, Método 1 foi seguido usando 3-amino-6-bromo-5-fluoropicolinato de metila (1,0 equiv.) e ácido 2,6-difluorofenilborônico (1,3 equiv) e Pd(dppf)Cl-DCM (0,05 equiv) para dar 3-amino-6-(2,6-difluorofenil)-5- fluoropicolinato de metila em 94% de rendimento. LC/MS = 283,0 (M+H), Rt = 0,76 min. Síntese de ácido 3-amino-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolínico F : F NO e Ho A oO NH, Método 2 foi seguido usando 3-amino-6-(2,6-difluorofeni!)-S- fluoropicolinato (1,0 equiv.) e LIOH (1,0 equiv.) para dar ácido 3-amino-6-

(2,6-difluorofenil)-S-fluoropicolínico em 79% de rendimento. LC/MS = 269,0 (M+H), Rt = 0,79 min. Síntese de ácido 5-fluoro-6-(2-fluorofeni)picolínico

F HO Aço o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-S-fluoropicolínico (1,0 equiv.) e ácido 2-fluorofenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)Cl-DCM (0,05 equiv.) para dar ácido 5-fluoro-6-(2-fluorofenil)picolínico em 43% de rendimento. LC/MS = 236,1 (M+H), Rt = 0,72 min. Síntese de ácido 6-(3,4-difluorofenil)-S-fluoropicolínico x F

E Ho. DZ ' 10 o : Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-S-fluoropicolínico (1,0 equiv.) e ácido 3 4-difluorofenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)Cl-DCM (0,05 equiv.) para dar ácido 6-(3,4-difluorofenil)-S-fluoropicolínico em 70% de rendimento. LC/MS = 254,1 (M+H), Rt = 0,81 min. Síntese de ácido 6-(2,5-difluorofenil)-S-fluoropicolínico F.

F x Ho. Ê o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-S-fluoropicolínico (1,0 equiv.) e ácido 2,5-difluorofenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)Cl-DCM (0,05 equiv.) para dar ácido 6-(2,5-difluorofenil)-5-fluoropicolínico em 80% de rendimento. LC/MS = 254,1 (M+H), Rt = 0,74 min. Síntese de ácido 6-(2,4-difluorofenil)-S-fluoropicolínico

F F

S Ho A o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-S-fluoropicolínico (1,0 equiv.) e ácido 2,4-difluorofenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)CI-DCM (0,05 equiv.) para dar ácido 6-(2,4-difluorofenil)-S5-fluoropicolínico em 79% de rendimento. LC/MS = 254,1 (M+H), Rt = 0,75 min. Síntese de ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-S-propoxifenil)picolínico O:

F

SE Ho. À Z o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-S-fluoropicolínico (1,0 equiv.) e ácido 2-fluoro-5-propoxifenilborônico (1,5 equiv.) e Pd(dppf)Cl2- DCM (0,05 equiv.) para dar — ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-5- propoxifenil)picolínico. LC/MS = 294,2 (M+H), Rt = 0,95 min. Síntese de ácido 6-(2-fluorofenil)picolínico

F Po Ho A o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromopicolínico (1,0 e- quiv) e ácido 2-fluorofenilborônico (1,5 equiv.) e Pd(dppf)'CIz-DCM (0,05 e- quiv.) para dar o ácido 6-(2-fluorofenil)picolínico em 93% de rendimento. LC/MS = 218,0 (M+H), Rt = 0,66 min. Síntese de ácido 6-(2,6-difluorofenil)picolínico

F F

NS Ho. ' o o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromopicolínico (1,0 e- quiv.) e ácido 2,6-difluorofenilborônico (1,5 equiv.) e Pd(dppf)CI-DCM (0,05 equiv.) para dar o ácido 6-(2,6-difluorofenil)picolínico em 38% de rendimento. LC/MS=236,0(M+H), Rt=0,87 min. Síntese de ácido 6-(2-fluoro-5-metoxifenil)picolínico o,

F fo

E o Método 1 foi seguido usando 6-bromopicolínico ácido (1,0 e- quiv.) e ácido 2-fluoro-5-metoxifenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)CI-DCM (0,15 equiv.) para dar o ácido 6-(2-fluoro-5-metoxifenil)picolínico em 95% de rendimento. LC/MS = 248,2 (M+H), Rt = 0,78 min. Síntese de ácido 6-(2-fluoro-5-propoxifenil)picolínico Ao

F o o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromopicolínico (1,0 e- quiv) e ácido 2-fluoro-5-propoxifenilborônico (1,5 equiv.) e Pd(dppf)CI-DCM (0,15 equiv.) para dar o ácido 6-(2-fluoro-5-propoxifenil)picolínico em 20% de rendimento. LC/MS = 276,0 (M+H), Rt = 0,87 min. Síntese de ácido 6-(2,6-difluoro-4-metoxifenil)picolínico

- F : F ns no À o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromopicolínico (1,0 e- quiv.) e ácido 2,6-difluoro-4-metoxifenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)Cl2- DCM (0,15 equiv.) para dar o ácido 6-(2,6-difluoro4-metoxifenil)picolínico em4d2% de rendimento. LC/MS = 266,1 (M+H), Rt = 0,75 min. Síntese de ácido 3-fluoro-6-(2-fluorofenil)picolínico

F o Ho À o rF Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-3-fluoropicolínico (1,0 equiv.) e ácido 2-fluorofenilborônico (1,5 equiv.) e Pd(dppf)Cla-DCM Ú 10 (0,05 equiv.) para dar o ácido 3-fluoro-6-(2-fluorofenil)picolínico em 81% de : rendimento. LC/MS = 236,1 (M+H), Rt = 0,72 min. Síntese de ácido 3-fluoro-6-(2-fluoro-5-metoxifenil)picolínico ô

F o Ho À o F Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-3-fluoropicolínico (1,0 equiv.) e ácido 2-fluoro-5-metoxifenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)Cl2- DCM (015 equiv) para dar o ácido 3-fluoro-6-(2-fluoro-S- metoxifenil)picolínico em 89% de rendimento. LC/MS = 266,1 (M+H), Rt = 0,79 min. Síntese de ácido 5-fluoro-6-(2-fluoro-S-metoxifenil)picolínico

Í o.

F

E Ho A o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-5-fluoropicolínico (1,0 equiv.) e ácido 2-fluoro-5-metoxifenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)Cl2- DCM (015 equiv) para dar o ácido S5-fluoro-6-(2-fluoro-5- —metoxifenil)picolínico em 86% de rendimento. LC/MS = 266,1 (M+H), Rt = 0,79 min. Síntese de ácido 6-(4-(benzilóxi)-2-fluorofenil)-5-fluoropicolínico

O Ss

O Ho. DZ o Método 1 foi seguido ácido usando 6-bromo-5-fluoropicolínico : 10 (1,0 equiv) e ácido 4(benzilóxi)-2-fluorofenilborônico (1,3 equiv) e : Pd(dppf)CI-DCM (0,15 equiv) para dar o ácido 6-(4-(benzilóxi)-2- fluorofenil)-5-fluoropicolínico em 28% de rendimento. LC/MS = 342,1 (M+H), Rt = 1,05 min. Síntese de ácido 6-(4-(benzilóxi)-2-fluorofenil)-3-fluoropicolínico

F io o F Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-3-fluoropicolínico (1,0 equiv) e ácido 4-(benzilóxi)-2-fluorofenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)CIa-DCM (0,15 equiv) para dar o ácido 6-(4-(benzilóxi)-2- fluorofeni!)-3-fluoropicolínico em 41% de rendimento. LC/MS = 342,1 (M+H), Rt=1,068min. |

Síntese de ácido 6-(2 6-difluoro-4-metoxifenil)-3-fluoropicolínico Í | F N o HO. Ú o F Método 1 foi seguido ácido usando 6-bromo-3-fluoropicolínico (1,0 equiv) e ácido 2,6-difluoro-4-metoxifenilborônico (1,3 equiv) e Pd(dppfiCI-DCM (0,15 equiv) para dar o ácido 6-(2,6-difluoro4- metoxifenil)-3-fluoropicolínico em 9% de rendimento. LC/MS = 284,0 (M+H), Rt = 0,74 min. Síntese de ácido 6-ciclo-hexenil-5-fluoropicolínico

E HO ço o : 10 Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-S-fluoropicolínico - (1,0 equiv.) e ácido ciclo-hexenilborônico (1,3 equiv.) e Pd(dppf)Cl-DCM (0,15 equiv.) para dar o ácido 6-ciclo-hexenil-5-fluoropicolínico em 61 % de rendimento. LC/MS = 222,0 (M+H), Rt = 0,52 min. Método 3 Síntese de ácido 6-ciclo-hexil-5-fluoropicolínico = Ho. D o Para uma solução desgaseificada de ácido 6-ciclo-hexenil-5- fluoropicolínico (1,0 equiv.) em MeOH (0,07M) foram adicionados 10% de Pd/C (0,1 equiv.), e a reação foi agitada sob um balão de hidrogênio durante anoite A solução foi então filtrada, enxaguada com MeOH, e o filtrado foi concentrado para proporcionar o ácido 6-ciclo-hexil-5-fluoropicolínico em

65% de rendimento.

LC/MS = 224,2 (M+H), Rt = 0,95 min.

Síntese de ácido 5-fluoro-6-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-7-en-8-i)picolínico dO & HO aço o Método 1 foi seguido usando ácido 6-bromo-S-fluoropicolínico (10 equiv) e 4,4,5,5-tetrametil-2-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)-1,3,2- dioxaborolano (2,0 equiv.) e Pd(dppf)CIz-DCM (0,2 equiv.) para dar o ácido 5-fluoro-6-(1, 4-dioxaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)picolínico.

LC/MS = 280,2 (M+H), Rt = 0,66 min.

Síntese de 5-fluoro-6-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-7-en-8-iD)picolinato de metila des " & o.

DZ o ' Para uma solução de ácido 5-fluoro-6-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-7- en-8-il)picolínico (1,0 equiv.) em DCM (0,3 M) foram adicionados EDC-HCI (1,0 equiv.), DMAP (1,0 equiv.), e MeOH (10 equiv.). A mistura de reação foi deixada agitar à temperatura ambiente por 5 dias, depois diluída com aceta- tode etila, lavada com água, salmoura, secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada.

O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com 25-50% de acetato de etila em hexanos para render 5-fluoro-6-(1,4-dioxaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)picolinato de metila como o produto desejado em 35% de rendimento.

LC/MS = 294,2 (M+H), Rt =0,79min.

Síntese de 5-fluoro-6-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-il)picolinato de metila

106/190 | du : Ss | o.

DP o Para uma solução desgaseifcada de S5-fluoro-6-(1,4- dioxaspiro[4.5]dec-7-en-8-il)picolinato de metila (1,0 equiv) em MeOH (0,07M) foram adicionados 10% de Pd/C (0,1 equiv.), e a reação foi agitada —sobum balão de hidrogênio durante a noite.

A solução foi então filtrada, en- xaguada com MeOH, e o filtrado foi concentrado para proporcionar 5-fluoro- 6-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-&-il)picolinato de metila em 91% de rendimento.

LC/MS = 296,2 (M+H), Rt = 0,83 min.

Síntese de 5-fluoro-6-(4-oxociclo-hexil)picolinato de metila : | 2 : O. rá o Para uma solução de 5-fluoro-6-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8- i)picolinato de metila (1,0 equiv.) em acetona e água (1:1, 0,04 M) foi adicio- nado deidrato de ácido oxálico (2,0 equiv.), e a mistura de reação foi agitada por 3 dias.

A solução foi então neutralizada pela adição de NaHCO; sólido, a mistura foi adicionada em acetato de etila e salmoura, a fase orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada. 5-fluoro-6-(4- oxociclo-hexil)picolinato de metila foi obtido em 98% de rendimento.

LC/MS = 252,1 (M+H), Rt = 0,68 min.

Síntese de 5-fluoro-6-(4-hidroxiciclo-hexil)picolinato de metila

H o. DZ o Para uma solução a 0 C de B5-fluoro-6-(4-0xociclo-hexil)picolinato 1 de metila (1,0 equiv.) com MeOH (0,08 M) foi adicionado NaBH;,. A solução foi deixada aquecer à temperatura ambiente durante a noite e depois dividi- daentreacetatode etila e salmoura, a fase orgânica foi secada sobre sulfato de magnésio, fitrada e concentrada para dar 5-fluoro-6-(4-hidroxiciclo- hexil)picolinato de metila como uma mistura de dois isômeros (5:1). LC/MS = 254,2 (M+H), Rt = 0,63 min. Síntese de 6-(4-(terc-butildimetilsililóxi)ciclo-hexil)-5-fluoropicolinato de metila

TBS : & 7 o. d o õ Para uma solução de 5-fluoro-6-(4-hidroxiciclo-hexil)picolinato de metila (1,0 equiv.) em DMF (0,15 M) foram adicionados imidazol (4,0 equiv.) e TBDMSCI (2,5 equiv.). A mistura de reação foi agitada à temperatura am- biente por 2 dias, depois adicionada em acetato de etila, lavada com água, —salmoura, secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada para dar 6-(4-(terc-butildimetilsililóxi)ciclo-hexil)-S-fluoropicolinato de metila em 97% de rendimento como uma mistura de isômeros (3:1). LC/MS = 368,3 (M+H), Rt=1,4e 142 min. Síntese de ácido 6-(4-(terc-butildimetilsililóxi)ciclo-hexil)-5-fluoropicolínico

OTBS Ho A o Para uma solução de 6-(4-(terc-butildimetilsililóxi)ciclo-hexil)-S- fluoropicolinato de metila (1,0 equiv.) em THF/MeOH (2:1, 0,09 M) foi adicio- nado LiOH (1,5 equiv.). A mistura de reação foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, depois HCl a 1N e acetato de etila foram adicionados, a fase orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada para dar o ácido 6-(4-(terc-butildimetilsililóxi)ciclo- hexil)-5-fluoropicolínico como uma mistura de isômeros (3:1) em 82% de rendimento.

LC/MS = 354,2 (M+H), Rt = 1,38 e 1,41 min.

Síntesede ácido 6-bromo-S-fluoropicolínico Ho.

DS Para 2-bromo-3-fluoro-6-metilpiridina (1,0 equiv.) em H2O (30 ' mL) foi adicionado permanganato de potássio (1,0 equiv.). A solução foi a- quecida a 100'C por 5 horas, ao mesmo tempo que mais permanganato de potássio (1,0 equiv.) foi adicionado.

Após aquecimento por mais 48 horas, o material foi filtrado através de celite (4 cm x 5 cm (2 polegadas)) e enxagua- do com H2O (150 mL). O aquoso combinado foi acidificado com HCI a IN para pH=4, extraído com acetato de etila (200 mL), lavado com NaCl(sat.), secado sobre MgSO;,, filtrado e concentrado para render o ácido 6-bromo- | 20 —S5-fluoropicolínico (17%) como um sólido branco.

LCMS (m/z): 221,9 (MH+); LC Rt = 2,05 min.

Método 4 Síntese de 2-(2,6-difluorofenil)-3-fluoro-6-metilpiridina

F F ; CG

DZ Para uma solução de 2-bromo-3-fluoro-6-metilpiridina (1,0 e- quiv)) em THF e Água (10:1, 0,2 M) foram adicionados ácido 2,6- difluorofenilborônico (2,0 equiv.) e fluoreto de potássio (3,3 equiv.). A reação foidesgaseificada por 10 minutos, depois Pd2(dba)s (0,05 equiv.) foi adicio- nado, seguido por tri-t-butilfosfina (0,1 equiv.). A reação foi agitada a 60 por 1 hora ponto no qual todo o material de partida foi consumido como indi- cado por LC/MS. A reação foi deixada resfriar à temperatura ambiente, divi- dida com acetato de etila e água, a fase orgânica foi secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada. O material bruto foi diluído em EtOH para 0,1 M, e 0,5 equiv. de NaBH, foi adicionado para reduzir o dba. A reação foi agi- tada por uma hora à temperatura ambiente, depois foi extinta com água e concentrada sob vácuo para remover o etanol. O produto foi extraído em éter, lavado com salmoura, os orgânicos foram secados sobre sulfato de - 15 sódio, filtrados e concentrados. O material bruto foi carregado em sílica-gel e purificado através da cromatografia de coluna (ISCO) eluindo com hexanos e ç acetato de etila (0%-10% de acetato de etila). As frações puras foram com- binadas e concentradas para render 2-(2,6-difluorofenil)-3-fluoro-6- metilpiridina como um óleo amarelo-claro em 86% de rendimento. LC/MS = 224,0 (M+H), Rt=0,84 min. Método 5 Síntese de ácido 6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolínico F : F NOS! Ho. O o Para uma solução de 2-(2,6-difluorofenil)-3-fluoro-6-metilpiridina (1,0 equiv) em água (0,05 M) foi adicionado KMnO, (2,0 equiv.), e a reação | foi aquecida a refluxo durante a noite. Outros 2,0 equiv. de KMnO, foram

110/190 | j adicionados e agitados a refluxos por mais 8 horas. A solução foi resfriada à temperatura ambiente, filtrada através de Celite e lavada com água. O filtra- do foi acidificado com HCI a 6N para pH =3, o precipitado branco foi filtrado. O filtrado foi ainda acidificado para pH = 1 e filtrado novamente. O filtrado foi extraído com acetato de etila até que não tenha mais produto na camada aquosa. A fase orgânica foi lavada com salmoura e secada sobre sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila, lavado com NaOH a 1N, a camada aquosa foi acidificada para pH=1,e os cristais brancos foram filtrados. Os produtos combinados renderam o áci- do 6-(2,6-difluorofenil)-S-fluoropicolínico em 32% de rendimento como um sólido branco. LC/MS = 254,0 (M+H), Rt = 0,71 min. Síntese de 6-(2,6-difluorofenil)-3-fluoro-2-metilpiridina F : F N Ds

D

F - Para uma solução de 6-bromo-3-fluoro-2-metilpiridina (1,0 e- quiv) em etanol e tolueno (1:1, 0,2 M) foram adicionados ácido 2,6- : difluorofenilborônico, DIEA (5 equiv.) e PA(PPh3)4 (0,2 equiv.). A reação foi aquecida em micro-ondas a 120'C por 30 min. A solução foi filtrada e enxa- guada com acetato de etila. Os voláteis foram removidos in vácuo, e o bruto foi purificado através da cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (2,5-20% de acetato de etila). Após concentração das frações puras, 6-(2,6-difluorofenil)-3-fluoro-2-metilpiridina foi isolada em 88% de rendimento. LC/MS = 224,1 (M+H), Rt = 0,87 min. Síntese de ácido 6-(2,6-difluorofenil)-3-fluoropicolínico

F F Ho A o rF Método 5 foi seguido usando 6-(2,6-difluorofenil)-3-fluoro-2-

metilpiridina (1,0 equiv.) e permanganato de potássio (6,0 equiv.) para dar o ácido 6-(2,6-difluorofenil)-3-fluoropicolínico em 30% de rendimento. LC/MS = 254,1 (M+H), Rt = 0,70 min. Síntese de 2-(2, uia os motaalica -3-fluoro-6-metilpiridina F 1 F ns E

NZ Método 4 foi seguido usando 2-bromo-3-fluoro-6-metilpiridina (1,0 equiv.) e ácido 2,6-difluoro-3-metoxifenilborônico (2,0 equiv.) para dar 2- (2,6-difluoro-3-metoxifenil)-3-fluoro-S-metilpiridina em 60% de rendimento. LC/MS = 254,1 (M+H), Rt = 0,85 min. Síntese de ácido 6-(2,6-difluoro-3-metoxifenil)-5-fluoropicolínico o F ! r ns

HO A

O - Método 5 foi seguido usando 2-(2,6-difluoro-3-metoxifenil)-3- fluoro-6-metilpiridina (1,0 equiv.) e permanganato de potássio (4,0 equiv.) para dar o ácido 6-(2,6-difluoro-3-metoxifenil)-5-fluoropicolínico em 27% de rendimento. LC/MS = 284,1 (M+H), Rt = 0,75 min. Síntese de 3-fluoro-6-metil-2-(2,3,5-trifluorofenil)piridina F. F. eo AE : o Para uma solução de 2-bromo-3-fluoro-6-metilpiridina (1,0 e- quiv.) em dioxano (0,2 M) foi adicionado ácido 2,3,5-trifluorofenilborônico e Pd(dppfCl-DCM (0,1 equiv.). Carbonato de sódio aquoso (solução 2M, 2,0 equiv.) foi adicionado, e a reação foi aquecida em micro-ondas a 120C por 15 min. A solução foi dividida ente acetato de etila e NaHCO; saturado, a fase orgânica foi lavada com salmoura, secada com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado através da cromatogra- fia de coluna em sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos (1:3) para dar 3-fluoro-6-metil-2-(2,3,5-trifluorofenil)piridina em 87% de rendimento. LC/MS=242,1(M+H), Rt=0,98 min. Síntese de ácido 5-fluoro-6-(2,3,5-trifluorofenil)picolínico ' F. F

F

N C HO. : Prá o Para uma solução de 3-fluoro-6-metil-2-(2,3,5- trifluorofenil)piridina (1,0 equiv.) em água e t-BuOH (2:1, 0,06 M) foi adicio- nado permanganato de potássio (10 equiv.), e a solução foi aquecida a 90C por 5 horas. Após resfriamento à temperatura ambiente, a solução foi filtra- da, e o filtrado foi concentrada sob pressão reduzida para render o ácido 5- fluoro-6-(2,3,5-trifluorofenil)picolínico em 89% de rendimento. LC/MS = 272,0 a (M+H), Rt = 0,80 min. « 15 Síntesede6-bromo-S-fluoropicolinato de metila . Br o. = o Para uma solução de ácido 6-bromo-S5-fluoropicolínico (1,0 e- quiv.) em metanol (0,2 M) foi adicionado H2SO, (4,2 equiv.), e a reação foi agitada à temperatura ambiente por duas horas. Após a conclusão da rea- ção conforme monitorado por LC/MS, a reação foi diluída com acetato de etila e extinta lentamente com NaHCO; aquoso saturado. A reação foi der- ramada em um funil de decantação e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi secada com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada in vacuo para fornecer 6-bromo-5-fluoropicolinato de metila como um sólido branco (>99%). LC/MS = 233,9/235,9 (M+H), Rt = 0,69 min. Método 6

Síntese de 6-(3-(benzilóxi)-2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinato de metila

F F

NOS E o. a o Para uma solução de 6-bromo-5-fluoropicolinato de metila (1,0 equiv.) em THF e água (10:1, 0,1 M) foram adicionados ácido 3-(benzilóxi)- 2,6-difluorofenilborônico (2,5 equiv.) e fluoreto de potássio (3,3 equiv.). À reação foi desgaseificada com nitrogênio, depois Pd2(dba); (0,25 equiv.) e tri-terc-butilfosfina (0,5 equiv.) foram adicionados e a reação foi aquecida a 80'C por uma hora. Análise LC/MS indicou conversão completa do material de partida do produto. A reação foi resfriada à temperatura ambiente, depois - 10 concentrada in vacuo e fundida em sílica-gel. O produto bruto foi purificado > por cromatografia rápida ISCO eluindo com acetato de etila e hexanos (0% a E 30% de acetato de etila) para fornecer 6-(3-(benzilóxi)-2,6-difluorofenil)-5- - fluoropicolinato de metila como o produto desejado como um óleo amarelo- claro em 96% de rendimento. LC/MS = 374,0 (M+H), Rt = 1,07 min. Síntesede 6-(3-(benzilóxi)-2,6-difluorofenil)picolinato de metila

F F < Orago o Método 6 foi seguido usando 6-bromopicolinato de metila (1,0 equiv.) e ácido 3-(benzilóxi)-2,6-difluorofenilborônico (2,5 equiv.) para dar 6- (3-(benzilóxi)-2,6-difluorofenil)picolinato de metila como um sólido amarelo- claroem 95% de rendimento. LC/MS = 356,2 (M+H), Rt = 1,03 min. Síntese de 6-(2,6-difluoro-4-metoxifenil)-5-fluoropicolinato de metila q“ e.

O

O D o Método 6 foi seguido usando 6-bromopicolinato de metila (1,0 equiv.) e ácido 2,6-difluoro-4-metoxifenilborônico (2,5 equiv.) para dar 6-(2,6- difluoro-4-metoxifenil)-5-fluoropicolinato de metila como um sólido branco em 85% derendimento. LC/MS = 298,0 (M+H), Rt = 0,89 min. Síntese de ácido 6-L 2, 6-difluoro-4-metoxifenil)-5-fluoropicolínico & . N Fr Ho. D r o Para uma solução de 6-(2,6-difluoro4-metoxifenil)-5- fluoropicolinato de metila (1,0 equiv.) em THF/MeOH (2:1, 0,09 M) foi adicio- . 10 nado LiOH (1,5 equiv.), e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora. A solução foi extinta com HC! a IN, extraída com acetato de etila, la- vada com salmoura, secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada pa- ra dar o ácido 6-(2,6-difluoro-4-metoxifenil)-5-fluoropicolínico em 84% de rendimento. LC/MS = 284,1 (M+H), Rt = 0,76 min. Método7 Síntese de 6-(2,6-difluoro-3-hidroxifenil)-5-fluoropicolinato de metila

OH F F

NOS E O. : c o Para uma solução de G6-(3-(benzilóxi)-2,6-difluorofenil)-S- fluoropicolinato de metila (1,0 equiv.) em metano! (0,1 M) foram adicionados 10% de Pd/C (0,1 equiv.) em acetato de etila. A reação foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e agitada por 2 horas. Após conclusão, a solução foi filtrada sobre uma almofada de Celite, a almofada foi lavada com meta- nol, o filtrado foi concentrado in vacuo para dar 6-(2,6-difluoro-3-hidroxifenil)- S-fluoropicolinato de metila como um óleo cinza em 86% de rendimento. LC/MS=284,0(M+H),Rt=0,90 min. Síntese de 6-(2,6-difluoro-3-hidroxifenil)picolinato de metila oH F : F Ds o x D o Método 7 foi seguido usando 6-(3-(benzilóxi)-2,6- difluorofenil)picolinato de metila (1,0 equiv.) para render 6-(2,6-difluoro-3- hidroxifenil)picolinato de metila como um sólido marrom-claro em 96% de à rendimento. LC/MS = 266,0 (M+H), Rt = 0,68 min. . Síntese de 6-(2-fluoro-5-formilfeni)picolinato de metila

É

F . NÓS O ação o Para uma solução de 6-bromopicolinato de metila (1,0 equiv.) em DME (0,03 M) em um frasco de micro-ondas foi adicionado Pd(dppf)Cl2- DCM (0,05 equiv.), ácido 2-fluoro-5-formilfenilborônico (1,5 equiv.) e 2M Na-sCO; (2 equiv.). Os reagentes foram aquecidos a 120'C por 20 min. Uma mistura do produto desejado e o ácido carboxílico correspondente foram de- tectados por LC/MS, a reação foi diluída com acetato de etila, lavada com HCI(pH=5),afase ácida foi extraída com acetato de etila, as camadas orgã- nicas combinadas foram secadas com sulfato de magnésio, filtradas e con- centradas in vacuo para fornecer um sólido marrom-claro. O sólido foi dis- solvido em MeOH e tratado com 3 equiv. de TMS-diazometano à temperatu- ra ambiente. Após conversão completa do ácido carboxíilico ao éster metílico correspondente, a reação foi concentrada in vácuo, e o material bruto foi pu- rificado através da cromatografia de coluna em sílica-gel (ISCO) eluindo com 30% de acetato de etila em hexanos para fornecer 6-(2-fluoro-5- formilfenil)picolinato de metila como um sólido amarelo em 58% de rendi- mento. LC/MS =260,0 (M+H), Rt=0,70 min. Síntese de 6-(2-fluoro-5S- prop-1-enilfenilipicolinato de (E)-metila

F

C o A o Para uma solução de 6-(2-fluoro-5-formilfenil)picolinato de metila (1,0 equiv.) em MeOH (0,17 M) foi adicionado brometo de etiltrifenitfosfônio (1,0 equiv.) seguido por metóxido de sódio (1,5 equiv.). A reação foi aqueci- 1 da a 65C por 5 horas, depois resfriada à temperatura ambiente e concen- . trada in vacuo. O material bruto foi purificado através da cromatografia de coluna em sílica-gel (ISCO) eluindo com 50% de acetato de etila em hexa- . nos para fornecer 6-(2-fluoro-5-(prop-1-enil)fenil)picolinato de (E)-metila co- mo um sólido branco em 81% de rendimento. LC/MS = 272,0 (M+H), Rt = 0,73 min. Síntese de 6-(2-fluoro-5-propilfenil)picolinato de metila

F

E O ação o Para uma solução de 6-(2-fluoro-5-(prop-1 -enil)fenil)picolinato de (E)-metila (1,0 equiv.) em MeOH (0,04 M) foram adicionados 10% de Pd/C (0,5 equiv.) e a reação foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e dei- xada em agitação durante a noite. A mistura foi filtrada sobre uma almofada de Celite e lavada com MeOH. O filtrado foi concentrada in vacuo para for- necer 6-(2-fluoro-5-propilfeni)picolinato de metila como um óleo cinza-claro em97% de rendimento. LC/MS = 274,2 (M+H), Rt = 0,61 min.

Etta Í 117/190 Síntese de ácido 6-(2-fluoro-5-propilfenil)picolínico

E Ns Ho À o Para uma solução de 6-(2-fluoro-5-propilfenil)picolinato de metila (1,0 equiv.) em THF foi adicionado hidróxido de lítio (10 equiv.), e a reação foiagitadaà temperatura ambiente por 1 hora. O solvente de THF foi remo- vido in vácuo, e a fase básica restante foi acidificada com HCI concentrado. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2x), a fase orgânica foi secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada para dar ácido 6-(2- fluoro-5-propilfenil)picolínico em 35% de rendimento. LC/MS = 260,2 (M+H), Rt=0,36min. Método 8 Y* Síntese de 6-(2. 6-difluoro-3-(trifluorometil-sutfonilóxi)fenil)-5-fluoropicolinato - de metila oTr F F | e e E o: x = o Para uma solução de 6-(2,6-difluoro-3-hidroxifenil)-S- fluoropicolinato de metila (1,0 equiv.) em DCM (0,2 M) foram adicionados DIEA (2,0 equiv) e 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometilsulfonil)metanos- sulfonamida (1,5 equiv.). A reação foi deixada agitar durante a noite à tem- peratura ambiente. A solução foi extinta com água, a fase orgânica foi seca- da com sulfato de sódio, e concentrada. O material bruto foi purificado atra- vês da cromatografia ISCO eluindo com acetato de etila e hexanos (0-30% de acetato de etila). As frações puras foram concentradas para dar 6-(2,6- difluoro-3-(trifluorometilsuifonilóxi)fenil)-S-fluoropicolinato de metila como o produto desejado como um óleo claro em 68% de rendimento. LC/MS = 416,1 (M+H),Rt=1,08 min. Síntese de 6-(2. 6-difluoro-3-(trifluorometilsulfonilóxi)-fenil)picolinato de metila oTf " ns o A o Método 8 foi seguido usando 6-(2,6-difluoro-3- (trifluorometilsulfonilóxi)fenil)-5-fluoropicolinato de metila (1,0 equiv.) para render 6-(2,6-difluoro-3-(trifluorometilsulfonilóxiffenil)picolinato de metila co- mo um óleo incolor em >99% de rendimento. LC/MS = 397,9 (M+H), Rt = 1,03 min. Síntese de ácido 6-(2,6-difluoro-3-metilfenil)-5-fluoropicolínico

F F We HO. x KZ o . Para uma solução de 6-(2,6-difluoro-3-(trifluorometilsulfonilóxi) fenil)-5-fluoropicolinato de metila (1,0 equiv.) em dioxano e água (10:1, 0,15 M) foram adicionados ácido metil borônico (3,0 equiv.) e carbonato de potás- sio (3,0 equiv.). A reação foi desgaseíificada com nitrogênio por 10 min, de- : pois Pd(PPh3)« (0,1 equiv.) foi adicionado à solução e aquecido a 100'C por 3 horas. LC/MS da reação neste ponto indicou conversão completa do pro- duto de ácido carboxílico (M+H = 268). Resfriado à temperatura ambiente e adicionados água e acetato de etila. As duas camadas foram separadas, a fase aquosa foi acidificada com HCI concentrado para pH =1 e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi secada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob vácuo para dar o ácido 6-(2,6-difluoro-3-metilfenil)-5- fluoropicolínico como um óleo claro em 97% de rendimento. LC/MS = 268,1 (M+H), Rt = 0,82 min. Síntese de 6-(2,6-difluoro-3-metilfenil)picolinato de metila

F F Ds o Para uma solução de 6-(2,6-difluoro-3-(trifluorometilsulfonilóxi)- fenil)picolinato de metila (1,0 equiv.) em tolueno foi adicionado Pd(dppf)Cl2- DCM (0,1 equiv.) seguido por zinco de dimetila (3 ,O equiv.). A solução tor- —nou-sede laranja para amarelo brilhante. A reação foi aquecida a 80'C por 2 horas ao mesmo tempo em que a análise de LC/MS indicou conversão com- pleta ao produto. A reação foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com acetato de etila e lavada com salmoura. À camada orgânica foi secada com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada in vacuo para fornecer 6-(2,6- difluoro-3-metilfenil)picolinato de metila como um óleo marrom em rendimen- - to quantitativo. LC/MS = 264,0 (M+H), Rt = 0,90 min. Síntese de ácido 6-(2,6-difluoro-3-metilfenil)picolínico

F F Es Ho À Oo Para uma solução de 6-(2,6-difluoro-3-metilfenil)picolinato de metila (1,0 equiv.) em THF foi adicionado hidróxido de sódio (10 equiv.), e a reação foi agitada por 2 horas. A solução foi diluída com acetato de etila e lavada com NaOH a 1N (2x). As lavagens aquosas básicas combinadas fo- ram combinadas e acidificado com HCI concentrado. A fase aquosa ácida foi extraída com acetato de etila (2x), as camadas orgânicas combinadas foram secadas com sulfato de magnésio, filtradas e concentradas in vacuo para fornecer o ácido 6-(2,6-difluoro-3-metilfenil)picolínico como um sólido branco em 85% de rendimento. LC/MS = 250,0 (M+H), Rt = 0,76 min. Síntese de ácido 6-(3-etil-2,.6-difluorofenil)picolínico

F F HO. x » o Para uma solução de 6-(2,6-difluoro-3-(trifluorometilsulfonilóxi)- fenilpicolinato de metila (1,0 equiv.) em tolueno (0,15 M) foi adicionado Pd(dppf)CIa-DCM (0,1 equiv.) seguido por zinco de dietila (3,0 equiv.). À solução tornou-se de laranja para amarelo brilhante.

A reação foi aquecida a 70'C por 2 horas ao mesmo tempo em que a análise de LC/MS indicou uma mistura de razão 1:3:1 do produto hidrolisado, produto desejado e subprodu- to desconhecido.

A reação foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com acetato de etila e lavada com NaOH a 1N (2x). A camada orgânica foi seca- da sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada in vacuo para fornecer um óleo marrom.

O óleo foi redissolvido em THF e tratado com NaOH a IN | por uma hora.

A reação foi então diluída com acetato de etila e lavada com - NaOH a 1N (2x). As lavagens básicas foram combinadas, acidificadas com | HCI concentrado e extraídas com acetato de etila (3x). A fase orgânica foi —secada com sulfato de magnésio, filtrada e concentrada in vacuo para forne- cer o ácido 6-(3-etil-2,6-difluorofenil)picolínico como um óleo marrom-claro À em >99% de rendimento.

LC/MS = 264,1 (M+H), Rt = 0,88 min.

Método 9 Uma solução homogênea de 1 eq cada amina, ácido carboxílico, HOATeEDC em DMF, a uma concentração de 0,5 M, foi deixada em espe- ra por 24 horas ao mesmo tempo em que água e acetato de etila foram adi- cionados.

A fase orgânica foi secada com sulfato de sódio e purificada atra- vês da cromatografia de coluna em sílica-gel eluindo com acetato de etila e hexanos para dar o produto de amina protegida desejado.

Alternativamente, —amistura de reação bruta foi diretamente purificada por HPLC.

Após liofiliza- ção, o sal de TFA do produto de amina protegida foi obtido.

Alternativamen- te, as frações de HPLC puderam ser adicionadas a EtOAc e NazCO; sólido, separadas e lavadas com NaCliat). Após secagem sobre MgSO;,, filtragem e remoção dos voláteis in vacuo, o produto de amina protegida foi obtido com uma base livre. Alternativamente, a mistura de reação bruta foi usada para a etapa de desproteção sem purificação adicional. Se uma amina protegida N-Boc estiver presente, ela foi removi- da pelo tratamento com excesso de 4M HCV dioxano por 14 horas ou pelo tratamento com 25% de TFA/CH2Ck por 2 horas. Após remoção dos voláteis in vacuo, o material foi purificado por RP HPLC rendendo após a liofilização, o produto de amina como o sal de TFA. Alternativamente, as frações de H- PLC puderam ser adicionadas a EtOAc e Na-sCO; sólido, separadas e lava- das com NaClsa). Após secagem sobre MgSO,, filtragem e remoção dos voláteis in vacuo, a base livre foi obtida. Após dissolver em MeCN/H2O, adi- cionar 1 eq. de HCl a 1 N e liofilizar, o sal de HCI do produto de amina foi obtido. Se um carbamato cíclico de amino álcool N-Boc1,2 estiver pre- . sente, antes da desproteção Boc, o carbamato cíclico poderia ser clivado pelo tratamento com Cs2CO; (0,5 eq) em etanol a uma concentração de 0,1 º M por três horas. Após remoção dos voláteis in vacuo, o grupo amino Boc foi desprotegido como descrito acima. í Se um grupo N-Boc, OAc estiverem presente, antes da despro- . teção Boc, o grupo acetato poderia ser clivado pelo tratamento com K2CO; (2,0 equiv) em etanol a uma concentração de 0,1 M por 24 horas.

Se um grupo N-ftalimida estiver presente, a amina foi desprote- gida pelo tratamento com hidrazina em MeOH a 65 C por três horas. Após resfriamento e filtragem do precipitado branco, o filtrado foi concentrado e purificado por RP HPLC para render o produto de amino amida.

Se um éter de TBDMS estiver presente, ele foi desprotegido an- tes da remoção de Boc pelo tratamento com HC! a 6N, THF, metanol (1:2:1) à temperatura ambiente por 12 h. Após remoção dos voláteis in vacuo, o grupo amino Boc foi desprotegido como descrito acima. Alternativamente, o éter de TBDMS e o grupo Boc puderam ser ambos desprotegidos com HCI a —6N,THF, metano! (1:2:1) se deixados à ta por 24 horas, ou ageucidos a 60c por 3 horas.

Se um grupo OMEe estiver presente, ele foi desprotegido pelo tra-

' 1221190 tamento com BBr; a 1M em DCM (2,0 equiv.) por 24 horas.

Água foi adicio- nada em gotas e os voláteis foram removidos in vacuo.

O material foi purifi- cado através da HPLC de fase reversa como descrito acima.

Se um grupo OBn estiver presente, ele foi desprotegido pelo tra- tamentocom 10% de Pd/C (0,2 equiv.) sob uma atmosfera de hidrogênio em acetato de etila e metano! (1:2). Após conclusão, a reação foi filtrada através de Celite, lavada com metanol, e o filtrado foi concentrado in vacuo.

Síntese de (+/-)-3-amino-N- (4-(3-amino-4-hidroxiciclo-hex-1-enil)piridin-3-il)- 6-(2,6-difluorofenil)picolinamida HAN : FE F nu NÓ O Nas, wo SMS Seguindo o Método 9, 3-(3-aminopiridin-4-11)-6-(terc- | butildimetilsililóxi)ciclo-hex-2-enilcarbamato de (+/-)-terc-butila e ácido 3- . amino-6-(2,6-difluorofenil)picolínico foram acoplados e desprotegidos para render (4/-)-3-amino-N-(4-(3-amino-4-hidroxiciclo-hex-1 -enil)piridin-3-il)-6- ] . 15 (2,6-difluorofenil)picolinamida como o sal de TFA.

LCMS (m/2): 438,2 (MH), LC R; = 2,00 min. | Síntese de (+/)-3-amino-N-(4-(3-amino-4-hidroxiciclo-hexil -piridin-3-i0)-6- (2,6-difluorofenil)picolinamida HAN.

Lt F E Ci dO | nó O NH Seguindo o Método 9, 5-(3-aminopiridin-4-i1)-2-(terc- butildimetilsililóxi)ciclo-hexilcarbamato de (+/-)-terc-butila e ácido 3-amino-6- (2,6-difluorofenil)picolínico foram acoplados e desprotegidos para render (+/- )-3-amino-N-(4-(3-amino-4-hidroxiciclo-hexil)piridin-3-i1)-6-(2,6- difluorofenil)picolinamida como o sal de TFA em 18% de rendimento.

LCMS (m/2) 4403 (MH*), LC Ri: = 2,04 min.

Seguindo os procedimentos do Método 9, os seguintes compos-

tos foram preparados:

TABELA LES LC/MS Exem- (M+H as Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) 6-(2,6- eta difluorofenil)-S5- AOJE OO: ú lienTaS F 38, Dé E 442,2 | 0,75 hidróxi-5- he o metilciclo- hexil)piridin-3- iDpicolinamida | N-(4-((3R,4R,58)- 3-amino-4- que hidróxi-5- : ne dr r metilpiperidin-1- 2 à" E 474,3 0,52 iNpiridin-3-i1)-6- : & o (2,6-difluoro-4- O hidroxifenil)-5- - fluoropicolinami- da - 3-amino-N-(4- (BR,4R,58)-3- ou em amino-4-hidróxi- eo DO 5-metilpiperidin- 3 WS NO) r 473,3 0,55 | 1-i)piridin-3-11)-6- Cr TX (2,6-difluorofenil)- N 2 5- fluoropicolinami- da o —

Exem- q o plo Nº Estrutura em UP. (Rfem | Nome Químico CL UPCL) N-(4- ((1R,3R,4R,5S)- à om 3-amino-4- eu hidróxi-5- He As NE: F metilciclo- 4 o O " 473,3 | 052 | pexinpiridin-3-11)- CS Y 6-(2,6-difluoro-4- hidroxifenil)-5- fluoropicolinami- da N-(4- ((1R,3R,4R,58S)- ou Ortcnra 3-amino-4- - No.

E Sao metilcíclo- . SÃO 455,3 | 055 ) pexinpiridin-3-i)- O S 5-fluoro-6-(2- : fluoro-5- hidroxife- nil)picolinamida qu cm N-(4-((1R,38)-3- aminociclo- o F hexil)piridin-3-il)- S 407,2 | 052 | gçofuoro4- DR hidroxife- nilpicolinamida " " N-(4-((1R,38)-3- “. ; pesinoddo exil)piridin-3-11)- 7 o 407,2 | 053 | gçofuoro-s- > o hidroxife- nil)picolinamida

| 125190 Exem- ita Ca Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) a N-(4-((1R,3S)-3- aminociclo- na & hexil)piridin-3-il)- a E) 425,2 0,57 6-(2,6-difluoro4- 2 o hidroxife- nil)picolinamida N-(4-((1R,38)-3- qu =. aminociclo- tu & hexil)piridin-3-i)- ne 425,2 0,53 S-fluoro-6-(2- a 2 fluoro-4- pe hidroxife- nil)picolinamida : N-(4-((1R,5R)-5- OH ca amino-3,3- .- e EN E MANSA) a E F exil)piridin-3-il)- . O EO 052,0 B5-fluoro-6-(2- fo o fluoro-4- hidroxife- ni)picolinamida N-(4-((1R,5R)-5- ng amino-3,3- ne o ; h ia, de exil)piridin-3-il)- " E At) 469,2 | O7 | g. (2 6-difluoro-3- CS o metilfenil)-5- fluoropicolinami- da N-(4-((1R,5R)-5- CH Oral amino-3,3- do FÊ dimetilcício- 12 rua É) 451,1 hexil)piridin-3-il)- e í to. 6-(2,6-difluoro-3- N metilfe- nil)picolinamida o

LC/MS Exem- à E EENS Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((3R,4R,58)- O Heua 3-amino-4- ne A : ' hidróxi-5- F metilpiperídin-1- É Edo) 454,2 | 058 | jppiridin-3-i0-6- GG o (2,6-difluoro-3- metilfe- ni) picolinamida A TA N-(4-((1R,38)-3- O aminociclo- Filr hexil)piridin-3-il)- 14 X x x 445,2 0,62 5-fluoro-6-(2,3,5- a o trifluorofe- 1 nil)picolinamida N-(4- É ((IR,3RAR,58)- m en? 3-amino-4- : TT ' hidróxi-5- ia NO 467,5 0,63 metilciclo- Er r” hexil)piridin-3-il)- | to 6-(3-etil-2,6- difluorofe- nil)picolinamida N-(4-((3R,4R,58)- o 3-amino-4- tr.

E hidróxi-5- 2 F metilpiperidin-1- 1º N N o 428,2 | 063 | jnpiridin-3-i)-6- C ciclo-hexil-5- né oO fluoropicolinami- da

Ô 1271190 LC/MS LOMS Ens Estrutura ado (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4- ((1R,3R,4S,58)- on Sou Ea 3-amino-4- He AN NH: F hidróxi-5- 17 O e 467,3 metilciclo- Or 5 = hexil)piridin-3-il)- N 6-(3-etil-2,6- difluorofe- nil)picolinamida N-(4-((1R,3R,48S)- oH en 3-amino4- E DÊ e hidroxíciclo- 18 x 453,2 hexil)piridin-3-il)- , KT 5 >º 6-(3-etil-2,6- N difluorofe- : nilpicolinamida e. N-(4-((1R,38)-3- o , : ex: aminociclo- r hexil)piridin-3-il)- 19 Te / 437,2 0,67 6-(3-eti-2,6- SO difluorofe- nilpicolinamida N-(4-((1R,38)-3- CH Oni aminociclo- na r F hhexil)piridin-3-il)- u r 441,2 6-(2,6-difluoro-3- ÊÔ n 5 be. metilfenil)-5- N fluoropicolinami- da N-(((1R,38,58)- en 3-amino-5- HC», E metilciclo- 21 a 451,2 0,7 hexil)piridin-3-il)- Er Ç” 6-(3-etil-2,6- n difluorofe- nil)picolinamida

AS

. 128/190 LC/MS Exem- (M+H CS " Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((3R,4R,58)- 3-amino-4- ou Ch era hidróxi-5- na CH.

F metilpiperidin-1- 22 Y, nm 4723 iDpiridin-3-iI)-6- CC = (2,6-difluoro-3- N metilfenil)-5- fluoropicolinami- da N-(4-((3R,4R,58)- or era 3-amino4- HAN, Ha. hidróxi-5- 23 To nÕ 422,3 0,53 metilpiperidin-1- & Se > iDpiridin-3-11)-6-(2- N fluorofe- r nil)picolinamida N-(4-((3R,4R,58)- . 3-amino-4- ou ea hidróxi-5- : nt Ha Fº metilpiperidin-1- 24 a n 458,3 0,51 i)piridin-3-i1)-6- o y (2,6-difluorofenil)- w 3- fluoropicolinami- da N-(4-((3R,4R,5S8)- e. 3-amino-4- finda DA hidróxi-5- RO e 4aos | 054 | NENE O na iDpiridin-3-i1)-5- so o fluoro-6-(2- fluorofe- nil)picolinamida

.. . 129/190 LC/MS Exem- (M+H LOS o Estrutura (Rfem |! Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((3RA4R,58)- em 3-amino4- un Pon hidróxi-5- os ON metilpiperidin-1- nO No 440,2 | 053 | nina e iDpiridin-3-11)-6- so o (2,6- difluorofe- nil)picolinamida N-(4-((1R,38,58)- CH era 3-amino-5- PROJUOO: h Sor i) de AE exiDpiridin-3-11)- 27 PF O 455,2 6-(2,6-difluoro-3- f 2 o metilfenil)-5- fluoropicolinami- r da a N-(4-((1R,38)-3- - nº r aminociclo- rd hexinpiridin-3-il)- 2º a E 423,2 | 081 | 5.02 6-difluoro-3- O OS metilfe- nil)picolinamida N-(4-((1R,38,58)- EH a 3-amino-5- “o metilciclo- 29 LA 437,2 hexilpiridin-3-il)- CT Y Ds 6-(2,6-difluoro-3- N metilfe- nil)picolinamida ra LC/MS Exem- (M+H Aa Estrutura (Rfem Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4- ((1R,3R,4R,58)- ou CH ra 3-amino4- Ra DÊ hidróxi-5- a 453,2 0,59 metilciclo- a.

Y >: hexil)piridin-3-il)- y 6-(2,6-difluoro-3- metilfe- nil)picolinamida N-(4- ((IR,3R4S,58)- ou er era 3-amino-4- sô hidróxi-5- 31 E NO 453,2 metilciclo- o.

Y fi. hexiN)piridin-3-il)- - N 6-(2,6-difluoro-3- metilfe- . nipicolinamida N-(4-((1R,38)-3- qu es aminociclo- a. e, hexil)piridin-3-il)- 32 NR 443,2 0,55 | 6-(2,6-difluoro4- Ts > hidroxifenil)-5- Nº O fluoropicolinami- da N-(4-((1R,38)-3- Ho. eat aminociclo- HAN: F hexil)piridin-3-il)- 33 à 425,2 | 0,53 5-fluoro-B-(2- ( N Y Ds fluoro-5- N hidroxife- nil)picolinamida

A—xn—A—Õ"——— ao , 131/190 « tes LC/MS Exem- (M+H o; Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((1R,38)-3- Ho. ec aminociclo- Hat F hexil)piridin-3-il)- 34 6 É 425,2 0,52 3-fluoro-6-(2- CTA fluoro-5- o! hidroxife- ni picolinamida N-(4-((1R,38,58)- Ho. tetas 3-amino-5- HN, cH; E metilciclo- 95 e Tr 421,1 0,56 | hexil)piridin-3-i1)- É ps 6-(2-fluoro-5- o hidroxife- . nil)picolinamida N-(4-((1R,38,58)- " qu om 3-amino-5- HA; Es metilciclo- ã. 36 n 439,2 0,57 | hexil)piridin-3-il)- é SS 6-(2,6-difluoro-4- : NA hidroxife- nil)picolinamida N-(4-((1R,3S,58)- quem 3-amino-5- nx en, metilciclo- 37 nº 421,1 hexil)piridin-3-i1)- Ds o) 6-(2-fluoro-4- a hidroxife- nil)picolinamida N-(4-((1R,38,58)- ou Ema 3-amino-5- metilciclo- INQÇAAeH NAr hexil)piridin-3-il)- 38 So 439,2 0,57 5-fluoro-6-(2- CI fluoro-4- ' hidroxife- nilpicolinamida nt

. Ê : 132/190 LC/MS Exem- (M+H Eos Ena Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((1R,38,58)- Di om 3-amino-5- metilciclo- MN Os & hexil)piridin-3-i1)- So a Õ 439,2 0,55 3-fluoro-6-(2- Ls o FE fluoro-4- hidroxife- nil)picolinamida N-(4- ((1R,3R,48,58S)- caga 3-amino-4- OVO vas º etilciclo- : QN) 4712 | 062 | pexinpiridin-3-i)- SS o 6-(2,6-difluoro-3- foz metilfenil)-5- fluoropicolinami- . da 1 N-(4-((1R,3R4S)- r ou Cr eniral 3-amino-4- ST hidroxiciclo- 4141 rua É) 439,2 0,57 | hhexil)piridin-3-il)- Er S .». 6-(2,6-difluoro-3- N metilfe- nil)picolinamida N-(4-((1R,3S,58)- O a 3-amino-5- & metilciclo- Ha eh F hexiN)piridin-3-il)- e Pé O 4072 0:59 6-(2,6-difluoro-4- C Ss. hidroxifenil)-3- fluoropicolinami- da

AEEEE—————=—=—— 133/190 LC/MS Exem- pa ENS o Estrutura (Rfem | Nome Químico plo N em UP- UPCL) CL) N-(4-((1R,3S,58)- nO a 3-amino-5- no, Hs metilciclo- F A iniain AA hexil)pirídin-3-il)- 43 - 9, L E 459,2 3-fluoro-6-(2- [2 o fluoro-5- hidroxife- nil)picolinamida N-(4- ((IR3RAR5S)- o ça 3-amino-4- NAO : hidróxi-5- metilciclo- 44 Fr 471,2 6: : L nu 1 1 9,62 | pexinpiridin-3-)- 2 6-(2,6-difluoro-3- - metilfenil)-5- fluoropicolinami- . da N-(4-((1R,3S,58)- - neo lia 3-amino-5- A OH metilciclo- 2 b F A nsdninae o hexil)piridin-3-il)- 45 e 453,1 6 x tn ' pe! B5-fluoro-6-(2- so fluoro-5- metoxife- nil)picolinamida N-(4-((1R,38,58)- jo. aa 3-amino-5- "” en, metilciclo-

F S APBA RA hexil)piridin-3-il)- 46 A 4391 5! 1 RO 39,1 | 056 | gfluoros-(2- so o fluoro-5- hidroxife- nil)picolinamida

IS

LC/MS Exem- (M+H Ea Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4- ((IR,3RAR,5S)- 3-amino-4- o E Pen hidróxi-5- Ff Se metilciclo- ré TZ) 487,1 hexil)pirídin-3-il)- ÇN o 6-(2,6-difluoro-3- metoxifenil)-5- fluoropicolinami- da E nem N-(4-((1R,38)-3- no, , aminociclo- hexil)pirídin-3-il)- - Db Õ 427,2 0,59 6-(2,3,5- L 2 o trifluorofe- f nil)picolinamida N-(4-((1R,5R)-5- - cna amino-3,3- ne Sr - dimetilciclo- - Sd hexil)piridin-3-il)- 49 & H o 455,2 0,63 6-(2,6- ÇS o difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da N-(4- ((IR,3RAR5S)- o 3-amino-4- e : hidróxi-5- F metilciclo- SA to 457,2 | 058 | pexinpiridin-3-1)- Ko o 6-(2,6- difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da

A—DO— — ÊÀAÀ—AAÊ€ = 135/190 /M: Exem- e Leo o Estrutura (Rfem | Nome Químico plo N em UP- UPCL) CL) 3-amino-N-(4- ((1R,38,58)-3- te amino-5- eb ll F metilciclo- 51 ur 456,1 hexilpiridin-3-i)- EXT 6-(2,6- e O MM difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da N-(4- ((18,38,4S,5R)- ou Chiral 3-amino4- | eo ; hidróxi-5- . 52 A NT 439,1 0,68 metilciclo- O Y o. hexil)piridin-3-i1)- - N 6-(2,6- difluorofe- . nil)picolinamida N-(4-((1R,38)-3- quem aminociclo- "” hexil)piridin-3-il)- 53 a 413,3 0,55 B5-fluoro-6- DS ((18,48)-4- E? hidroxiciclo- hexil)picolinamida N-(4-((1R,3S,58)- oh om 3-amino-5- metilciclo- nat do hexil)piridin-3-il)- o Fo pero 5-fluoro-6- Li é ((18,48)-4- hidroxiciclo- hexil)picolinamida —

COS LC/MS Exem- (M+H a Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((1R,3S,58)- ms 3-amino-5- ó metilciclo- na E hexil)piridin-3-il)- 55 Te qo 427,38 | 0,55 E linro-Es IS ((r4r)a- hidroxiciclo- hexil)picolinamida N-4-((1R,38)-3- qu o aminociclo- um = hexiDpiridin-3-il)- 56 ve 413,3 0,48 5-fluoro-6- Ta Y ((1r,4)-4- : ES hidroxiciclo- hexil)picolinamida : N-(4-((1R,3S,58)- Ss 3-amino-5- : no O: metilciclo- 57 é neo 4233 | 0,64 | hexilpiridin-3-il)- - E Ds B5-fluoro-6-(2- OO fluorofe- nil)picolinamida N-(4-((1R,38,5S)- e. bois 3-amino-5- HA, o, E metilciclo- 58 up NÓ 419,3 0,67 | hexiDpiridin-3-il)- E 6-(2-fluoro-5- wo metitfe- nil)picolinamida |

Exem- de Ao Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((1R,38S,58)- o q 3-amino-5- e, oh. metilciclo- à h F lina Ra hexil)piridin-3-i)-

AF x O PSA] Dr Congo: o fluoro-5- metilfe- nil)picolinamida N-(4-((1R,38,58)- FC 3-amino-5- AS teshêian il AF en ARE) 4412 | 070 23. - S o difluorofenil)-5- fluoropicolinami- : da N-(4-((1R,3S,58S)- . r. ca 3-amino-5- Ho ou metilciclo- by À . si Riâninon a hexil)piridin-3-il)- . | : AF 61 A x ] 441,2 0,68 6-(2,5- Ss o difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da N-(4-((1R,3S,5S)- es 3-amino-5- Ne Ha metilciclo- à 405,2 0,67 | hexilpiridin-3-il)- É No 6-(2- wo, fluorofe- nil)picolinamida

LCA Exem- See pesa o Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((1R,3S,5S)- en 3-amino-5- Han: He.

F metilciclo- 63 NO 423,2 hexil)piridin-3-il)- Õ | SN 6-(2,6- nN difluorofe- nil)picolinamida N-(4-((1R,3R4S)- 2 sm 3-amino-4- FA o: hidroxiciclo- & £) a 14832 | o66 | hexbpirdin-ain- ANA S-fluoro-6-(2- es o fluoro-5- . propoxife- nil)picolinamida 3-amino-N-(4- ((1R,3R,48)-3- . ou amino-4- E e NA hidroxiciclo- S 65 EN F 458,1 0,55 | hexipiridin-3-il)- Sr ses " : difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da 3-amino-N-(4- ((1R,3R,48)-3- MV NH amino-4- Co LO 4iniilios hidroxíciclo- AH Ao) : SS | nexibpiridin-3-i)- S o m S-fluoro-B-(2- fluorofe- nilpicolinamida

LC/MS LC/MS Exem- Estrut (M+H aa o ura (Rf em Nome Químico plo N em UP- UPCL) CL) 3-amino-N-(4- ((1R,3R,48)-3- ou NH, amino-4- E É hidroxiciclo- 67 a NO F 498,2 hexil)piridin-3-il)- Or S 5-fluoro-6-(2- hs o lo fluoro-5- propoxife- nil)picolinamida 3-amino-N-(4- ((1R,3R,48)-3- o. nm a: amino4- F H ici - e [OM | ema [os | IESESS, set h Si) ES TS 6-(2-fluoro-5- f propoxife- nil)picolinamida - N-(4-((1R,38,58)- ore 3-amino-5- : à e F O 2 441,3 | 0,67 x 1.) 6-2,6- so o 7 difluorofenil)-3- fluoropicolinami- da N-(4-((1R,3S,58)- ra 3-amino-5- HM et. metilciclo- 2! F hniciAio das hexil)piridin-3-il)- 70 al a Õ 441,3 | 0,70 6-(2,6- 2 difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da

Exem- E LES Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((18,3R,5R)- Sa 3-amino-5- Ho. . metilciclo- " Mer ão as hexiDpiridin-3-)- e to do : 6-(2,6- 1 or difluorofenil)-3- fluoropicolinami- da N-(4-((18,3R,5R)- a 3-amino-5- no, Fr metilciclo- o do Le 4413 | 070 | hexideiridin-s-)- cs lo ds : í 6-(2,6- . OS o difluorofeni!)-5- fluoropicolinami- - da N-(4- . ((1R,3R,48,58)- 3-amino-4- . o. & O hidróxi-5- À metilciclo- o St ao O o nesinnidiSdi Ç o 5-fluoro-6-(2- fluoro-5- metilfe- nil)picolinamida N-(4- ((1IR,3R,48,58)- ou HE en 3-amino-4- o F hidróxi-5- 74 e A Êo 435,0 metilciclo- O Y > hexil)piridin-3-il)- N 6-(2-fluoro-5- metilfe- niDpicolinamida

LC/MS Exem- (M+H LOMS Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4- ((1R,3R48,58)- ou ca 3-amino-4- O F hidróxi-5- 75 EN r 439,2 0,57 metilciclo- qua Y DS hexil)piridin-3-il)- N S-fluoro-6-(2- fluorofe- nilpicolinamida N-(4- ((1R,3R,4S,5S)- ou en. 3-amino-4- H$0, À O. hidróxi-5- : 76 1 O 439,2 0,55 metiicicio- AS hexil)piridin-3-il)- : No 6-(2,6- difluorofe- : nil)picolinamida N-(4-((1R,3S,5S)- . rom 3-amino-5- metilciclo- 77 "So 441,3 0,62 hexil)piridin-3-il)- KR O 6-(2,4- QI difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da N-(4-((1R,3R 4S)- ou ea 3-amino4- TS hidroxiciclo- 78 rá NO 425,2 0,52 hexil)piridin-3-il)- SS o N difluorofe- nil)picolinamida tons LC/MS Exem- (M+H gen, plo Nº Estrutura em UP. (Rfem | Nome Químico cy UPCL) N-(4-((1R,3S)-3- Fone aminociclo- HN, F hexiN)piridin-3-il)- 79 ' r 427,2 0,58 6-(2,3- É , difluorofenil)-5- NO fluoropicolinami- da N-(4-((1R,3S)-3- o aminociclo- HAN F Fr hexil)piridin-3-il)- 80 nu NÓ 427,2 0,54 6-(2,6- EX difluorofenil)-3- = O or fluoropicolinami- da N-(4-((1R,3S)-3- F.

E aminociclo- HN, F hexil)piridin-3-il)- . 81 no E 427,2 0,57 6-(2,5- É ns difluorofenil)-5- . ” fluoropicolinami- da N-(4-((1R,3S)-3- q em aminociclo- E É hexil)piridin-3-il)- 82 A 427,2 0,58 6-(2,4- “a SJ difluorofenil)-5- melo fluoropicolinami- da N-(4-((1R,3R48)- oH eu 3-amino-4- (1 ato F hidroxiciclo- 83 e ANN 407,1 | 0,51 | hexilpiridin-3-i))- Nº fluorofe- nil)picolinamida

E LC/MS LCMS xem- (M+H ia o Estrutura (Rfem |! Nome Químico plo N em UP- cy UPCL) N-(4-((1R,3R,48)- ou Ono 3-amino-4- Cm hidroxiciclo- e N 465,2 0,62 hexil)piridin-3-il)- O " Y > 6-(2-fluoro-5- NY propoxife- nil)picolinamida N-(4- ((IR,3R,4S,58)- ou n— SANA A do idróxi-5- 85 E S F 457,2 | 0,56 Melao A Ni) : ; hexil)piridin-3-il)- ' ÇS J 6.12,5- difluorofenil)-5- * fluoropicolinami- da : N-(4- ((1R,3R,4S,5S)- : oh e. 3-amino-4- teca Ao hidróxi-5- : : ds 457,0 |) 056 metilciclo- Lt ' : hexil)piridin-3-il)- hd 6-(2,6- difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da N-(4-((1R,3R,4S)- oH eua 3-amino-4- E. . hidroxicíclo- 87 XT ) r 425,1 0,52 hexil)piridin-3-il)- O > B5-fluoro-6-(2- N fluorofe- nil)picolinamida

L Exem- o san plo Nº Estrutura em UP- (Rfem |! Nome Químico CD UPCL) N-(4-((18,3S,4R)- ee 3-amino-4- e Ne hidroxiciclo- es O e : 1430 | 0,53 | hexbpiidin-s+D- Mass, 6-(2,6- do o difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da N-(4-(3-amino-4- oH hidróxi-5- He na, metilciclo- 89 uu F. 427,3 0,63 | hexilpiridin-3-il)- LS ita 1 » 6-ciclo-hexil-5- É x fluoropicolinami- da À 3-amino-N-(4-(3- NS TNAOA amino-4-hidróxi- 5-metilciclo- Ps e 424.2 hexil)piridin-3-il)- " Lo O NH, 6-ciclo- hexilpicolinamida N-(4-(3-amino-5- HA, CH, metilciclo- o é Le 1113 | 0.67 | hobpiidin-sil- LAUDO B-ciclo-hexil-5- 2 o fluoropicolinami- da 3-amino-N-(4- oH (trans)-3-amino- Na F FE 4-hidroxiciclo- 92 2 438,3 0,51 | hex-1-enil)piridin- (3 "“ 3-)-6-(2,6- N * difluorofe- nil)picolinamida

ES LC/MS Exem- (M+H a Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) 3-amino-N-(4- oH (cis)-3-amino-4- Na Fr F hidroxiciclo-hex- EX) à NO 438,3 1-enil)piridin-3-il)- ST ses N : difluorofe- nil)picolinamida 3-amino-N-(4-(3- ou amino-4-hidróxi- As 5-metilciclo- 94 Ta 454,1 0,54 | hexilpiridin-3-il)- ET 6-(2,6- WO Ne difluorofe- - nilpicolinamida 3-amino-N-(4-(3- . oH amino-4-hidróxi- e F S-metilciclo- : 95 ra NO 454,3 | 0,54 | hexi)piridin-3-)- DA o DÁ VOA . N : difluorofe- nil)picolinamida N-(4-((3R4R,58)- 3-amino-4- au hidróxi-5- e oe F metilpiperidin-1- QN Fr 458,1 iNpiridin-3-i)-6- Ex” e (2,6-difluorofenil)- N Ss fluoropicolinami- da

LC, Exem- í.

OMS Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) 3-amino-N-(4-(3- o cn amino-4-hidróxi- HER AN NHZ.

F 5-metilciclo- 97 Pé Yo 454,1 0,55 | hexil)piridin-3-il)- (o es 6-(2,6- nã O N4 ; difluorofe- nil)picolinamida 3-amino-N-(4-(3- or = amino-4-hidróxi- a: F 5-metilciclo- 98 r W. nO 454,1 0,54 | hexil)piridin-3-il)- E Fr 6-(2,6- We o difluorofe- » nil)picolinamida N-(4-((1R,38)-3- í es aminociclo- HAN F F hexil)piridin-3-il)- : un NOS Tr 427,2 0,55 6-(2,6- o.

No difluorofenil)-5- . Nº) fluoropicolinami- da 3-amino-N-(4- es (IR38)& o aminociclo- ao O . DO: 1422 | g59 | hexDpiridin-sl- En ; º 6-(2,6- Ei O NH, difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da Acetato de 2- a amino-4-(3-(3- MB amino-6-(2,6- 101 E) "ue o 4822 | 0,56 difluorofe- Ss Y nilpicolinamido)p N z iridin-4-il)ciclo- hexila

Exem- poste ENS o Estrutura (Rfem | Nome Químico plo N em UP- UPCL) CL) 3-amino-N-(4-(3- oH amino-4- SN hidroxíciclo- 102 A Êo 440,3 hexil)piridin-3-il)- bo * difluorofe- nil)picolinamida 3-amino-N-(4- ra ((3R,4S,5R)-3- mo : amino-4-hidróxi- 5-metilpiperidin- 105 & 2 555 | 085 | oa 2d o ns (2,6- difluorofe- nilpicolinamida É 3-amino-N-(4- ((1R,38,4S)-3- Õ HAN, x E paia idroxicício- í jo q: XD 440,2 | 052 | poinpiridin-san- 2 6 6-(2,8- difluorofe- nil)picolinamida 3-amino-6-(2,6- He. o. s diidorofeni) 105 . 438,2 2,92 (4-(3-hidróxi-S- e No A metilciclo-hex-1- hã o Nm enilpiridin-3- iDpicolinamida 3-amino-N-(4- NH ((1R,38)-3- aminociclo- da 1 S948 lo Ora ssnidin-sa- Ss o NH 6-ciclo- hexilpicolinamida

LEMOS LC/MS — Estrutura UP: (Rfem |! Nome Químico cn] Dre) 3-amino-N-(4-(3- Ná aminociclo-hex-1- 107 A, e. : 421.9 055 eco Li k .6- DZ ô difluorofe- nil)picolinamida N-(4-((1R,3R,58S)- 3-amino-5- ão à. o E (trifluorome- | : tilciclo- - DO d7ês | gor hexil)piridin-3-il)- Ç ”º 6-(2-fluoro-5- metilfe- : nil)picolinamida N-(4-((1R,3R,58)- : Mom 3-amino-5- ç (trifluorome- : 109 vt DÊ e s072 | 0.65 til)ciclo- o * ' hexil)piridin-3-il)- ' (Tx: 6-(2,6-difluoro-4- bi metoxife- niDpicolinamida 3-amino-N-(4- ((1R,3R,58)-3- enra amino-5- Fo te F E (trifluorome- A F tíl)ciclo- vo SD por hexiDpiridin-3-i0)- 1 6-2,6- difluorofenil)-5- fluoropicolinami- da

Exem- A ES ESIMS Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((1R,3R,58)- chat 3-amino-5- 5, " ci (trifluorome- til)ciclo- m So. r 652 | or hexiDpiridin-3-il)- LP o 6-ciclo-hexil-5- N fluoropicolinami- da 3-amino-N-(4- ((1R,3R,58)-3- e era amino-5- A P F (trifluorome- 112 x aC) 492,2 0,62 til)ciclo- . Ko > hexil)piridin-3-i)- No Oo N 6-(2,6- r difluorofe- nil)picolinamida . N-(4-((38,4S,5R)- 3-amino-4- . o cs hidróxi-5- HC ANH F metilpiperidin-1- 113 a P Fr 458,2 0,55 iNpiridin-3-iN)-6- Do (2,6-difluorofenil)- N 5- fluoropicolinami- da N-(4-((3R,4R,58)- OH eo 3,4-di-hidróxi-5- fes eo F metilpiperidin-1- 114 No NE Fr 4411 0,61 iDpiridin-3-i1)-5- Ex Do fluoro-6-(2- *y. o fluorofe- nil)picolinamida

Voa LC/MS Exem- (M+H Sã (Rfem | Nome Químico pero E UPOL) CL) 6-(2,6- oH en difluorofenil)-N- nergor r ((BRAR,5S)- 115 Cn NO 441,1 3,4-di-hidróxi-5- Ex” > metilpiperidin-1- Sn O iNpiridin-3- iNpicolinamida 6-(2,6- Dia difluorofenil)-N- a EaD, (4(GRARSS)- 116 ra 459,3 | 0.51 | ONA: ex” & metilpiperidin-1- SO o iDpiridin-3-iI)-5- ! fluoropicolinami- da : 6-(2,6- Difluorofenil)-N- 7 oH Chiral 4 He, Ee. r ((IR,3RAR5S)- ' 17 a NE 4532 | 0,52 | PATAS SH la metilciclo- O J hexil)piridin-3-i)- N 5- fluoropicolinami- da N-(4-((3R,AR,58)- cn 3-amino-4- e Ao O hidróxi-5- e F metilpiperidin-1- 118 IRA) Apa) OS iain-as-3- E o fluoro-2,3"- bipiridina-6- carboxamida

ES LC/MS Exem- (M+H e Estrutura (Rfem | Nome Químico plo Nº em UP- UPCL) CL) N-(4-((3R,4R,58)- 3-amino-4- o 7 hidróxi-5- O E metilpiperidin-1 de or eridin-1- 199 OS" O 441,2 | 046 | inpiridin-3-i-3,3- Neo So difluoro-2,4"- bipiridina-6- carboxamida N-(4-((3R,4R,58)- N 3-amino-4- o ” NAVY ”. " o hidróxi-5- metilpiperidin-1- 121 er E 0 Kat 4231 | 03 | ppiidin-s-n-3- . PJ O fluoro-2,4"- " bipiridina-6- : carboxamida 3-amino-6-(2,6- - difluorofenil)-N- ou Chiral a . ei Fr dE -di-hidróxi-5- 121 va NE 4731 | 0,68 | 34x & N ) metilciclo- * Ç om hexil)piridin-3-il)- 5- fluoropicolinami- da Síntese de 6-bromo-N-(4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-h-hex-1- eniDpiridin-3-il)-S-fluoropicolinamida TBDMSO.

Br 2 F = | N SS Ss O Seguindo o Método 9, 4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo- hex1-enilpiridin-3-amina e ácido 6-bromo-S5-fluoropicolínico foram acopla-

dos e seguindo a adição de EtOAc e lavando com H2O, NaCleat, E secando sobre MgSO,, 6-bromo-N-(4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-5-metilciclo-hex-1- enil)piridin-3-il)-5-fluoropicolinamida foi obtida.

LCMS (m/z): 455,3 (MH); LC R;=2,09 min.

Síntese de G6-bromo-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)- ciclo-hexil)piridin-3-il)-5-fluoropicolinamida o Es Br SW 1 o Seguindo o Método 9, 2-(3-(3-aminopiridin-4-il)ciclo- hexil)isoindolina-1,3-diona e ácido 6-bromo-5-fluoropicolínico foram acopla- dose, seguindo a adição de EtOAc e lavando com H2O, NaCleat, E secando ! sobre MgSO:, 6-bromo-N-(4-((1R,3S)-3-(1 ,3-dioxoisoindolin-2-il)ciclo- - hexil)piridin-3-il)-S-fluoropicolinamida foi obtida.

LCMS (m/2): 523,2/525,2 (MH); LC Ri: = 3,31 min. : Síntese de 3-amino-6-bromo-N-(4-((1R,38)-3-(1 3-dioxoisoindolin-2-il)ciclo- hexiDpiridin-3-i)-5-fluoropicolinamida . o o >) ) O NH Seguindo o Método 9, 2-(3-(3-aminopiridin-4-il)ciclo- hexil)isoindolina-1,3-diona e ácido 3-amino-6-bromo-5-fluoropicolínico foram acoplados e, seguindo a adição de EtOAc e lavando com H2O, NaClia) E secando sobre MgSO,, 3-amino-6-bromo-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3- dioxoisoindolin-2-il)ciclo-hexil)piridin-3-il)-5-fluoropicolinamida foi "obtida.

LCMS (m/2): 538,1/540,1 (MH*); LC Ri = 3,46 min.

Síntese de 18,3R,58)-3-(3-(6-bromo-S5-fluoropicolinamido)- piridin-4-i)-5-metilciclo-hexilcarbamato de terc-butila

AMNCCCCCCNCCECEEE—[|À" À" ..."... 153/190 BocHN er Ss o Seguindo o Método 9, (18,3R,58)-3-(3-aminopiridin-4-i)-5- metilciclo-hexilcarbamato de terc-butila e ácido 6-bromo-5-fluoropicolínico foram acoplados e, seguindo a adição de EtOAc e lavando com H2O, Na- Clay & secando sobre — MgSO., (18,3R,58)-3-(3-(6-bromo-5- fluoropicolinamido)piridin-4-i)-5-metilciclo-hexilcarbamato de terc-butila foi obtido. LCMS (m/2): 507,1/509,1 (MH), R:; = 0,90 min.

| Síntese de acetato de (1R,2R,4R,68)-4-(3-(6-bromo-5- fluoropicolinamido)piridin-4-i)-2- tterc-butoxicarbonilamino)-6-metilciclo-hexila Ao BocHN À e: . 10 “N 2 o Seguindo o Método 9, acetato de (1R2R4R6S)4-(3- . aminopiridin-4-il)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-6-metilciclo-hexila e ácido 6- bromo-5-fluoropicolínico foram acoplados e, seguindo a adição de EtOAc e ] lavando com H2O, NaClea, E secando sobre MgSO,, acetato de (1R,2R 4R 68)-4-(3-(6-bromo-5-fluoropicolinamido)piridin-4-i)-2-(tero- butoxicarbonilamino)-6-metilciclo-hexita foi obtido. LCOMS (m/z): 567,2 (MH), R:= 0,82 min. Síntese — de 5-(3-(6-bromo-B5-fluoropicolinamido)piridin-4-iN)-7-metil-2-0x0- hexa-hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila Sã; BocN, br Ss 7 Seguindo o Método 9, 5-(3-aminopiridin-4-i1)-7-metil-2-0xo-hexa- hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)-carboxilato de (+/-)-terc-butila e ácido 6-bromo-5- fluoropicolínico foram acoplados e, seguindo a adição de EtOAc e lavando

EA ms o uu aeee eee 154/190 com HO, NaClesa) & secando sobre MgSO,, 5-(3-(6-bromo-5S- fuoropicolinamido)piridin-4-i)-7-metil-2-oxo-hexa-hidrobenzold]oxazol-3(2H)- carboxilato de (+/-)-terc-butila foi obtido.

LCMS (m/z): 549,2/551,2 (MH), Re = 0,78 min.

Síntese de 5-(3-(6-bromo-5-fluoropicolinamido)pirídin-4-1)-2-0x0-hexa- hidrobenzo[dloxazol-3(2H)-carboxilato de terc-butila ã— N-Boc Br Ss. ho Seguindo o Método 9, 5-(3-aminopiridin-4-1)-2-0x0-hexa- hidrobenzo[d]oxazo!-3(2H)-carboxilato de terc-butila e ácido 6-bromo- r 10 5-fluoropicolínico foram acoplados e, seguindo a adição de EtOAc e lavando com HO, NaCl, E secando sobre —MgSOa, 5-(3-(6-bromo-5- : fluoropicolinamido)piridin-4-i)-2-oxo-hexa-hidrobenzo[d]loxazor-3(2H)- carboxilato de terc-butila foi obtido.

LCMS (m/2): 537,1 (MH); LCMS R: = | 0,71 min. : 15 Síntese de G6-bromo-N-(4-((1R,5R)-5-(1 3-dioxoisoindolin-2-i1)-3,3- dimetilciclo-hexil)piridin-3-i))-5-fluoropicolinamida “ ) o " Tr 7 N x so o Seguindo o Método 9, 24(1 R,5R)-5-(3-aminopiridin-4-11)-3,3- dimetilciclo-hexil)isoindolina-1,3-diona e ácido 6-bromo-5-fluoropicolínico foram acoplados e, seguindo a adição de EtOAc e lavando com H2O, Na- Clay € secando sobre — MgSO., 6-bromo-N-(4-((1R,5R)-5-(1,3- dioxoisoindolin-2-1)-3,3-dimetileiclo-hexi)piridin-3-iI)-5-fluoropicolinamida foi obtido.

LCMS (m/2): 551/553 (MH*), Ri = 0,95 min.

Síntese de N-(4-((1R,3R4S,5R)-3,4-bis! terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo- a —

hexil)piridin-3-i)-6-bromo-S-fluoropicolinamida

QTBS TBSO, o

O Cx N SS (| Wo Seguindo o Método 9, 4((IR3RA4S,5R)-3,4-bis(terc- butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hexil)piridin-3-amina — e ácido —6-bromo- — Sfluoropicolínico foram acoplados e, seguindo a adição de EtOAc e lavando com H2zO, NaClkea, E secando sobre MgSOs, N-(4-((1R,3R,4S,5R)-3,4- bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hexil)piridin-3-il)-6-bromo-5- fluoropicolinamida foi obtido. LCMS (m/z): 652,5, 652,4 (MH*); LC R, = 5,82 min. Síntese de N-(4-((18,38,AR,5S)-3,4-bis(terc-butildimetilsililóxi)-5-metilciclo- ' hexil)piridin-3-iI)-6-bromo-S-fluoropicolinamida

OTBS . OTBS 7

ENA . | nO Seguindo o Método 9 4((1S8,3SA4R,5S)-3,4-bis(tero- butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hexil)piridin-3-amina — e ácido —6-bromo- — S-fluoropicolínico foram acoplados e seguindo a adição de EtOAc e lavando com HzO, NaClka, E secando sobre MgSO,s, N-(4-((18,3S,4R,58)-3,4- bis(terc-butildimetilsililóxi)-S-metilciclo-hexil)piridin-3-il)-S-bromo-5- fluoropicolinamida foi obtido. LCMS (m/z): 652,5, 652,4 (MH”); LC R; = 5,83 min. Método10 Síntese de 6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoro-N-(4-(3-hidróxi-5-metilciclo-hex-1- eniDpiridin-3-iN)picolinamida

Ho. F +

AF o EA

SS PE Uma solução de G6-bromo-N-(4-(3-(terc-butildimetilsililóxi)-5- metilciclo-hex-1-enil)piridin-3-il)-S-fluoropicolinamida (1,0 equiv), ácido 2,6- difluorofenil borônico (3,0 equiv.), tetraquistrifenitfosfina (0,2 equiv.) e trieti- lamina (3,0 equiv)) em 1:1 EtoH/tolueno (0,1 M) foi aquecida a 120 ºC com irradiação de micro-ondas por 1200 segundos. Mediante resfriamento, a re- moção dos voláteis in vacuo, o produto Suzuki foi diretamente purificado por HPLC de fase reversa. A fração de produto foi liofilizada e o éter de TBDMS resultante foi desprotegido como descrito no Método 9 rendendo, após puri- õ 10 ficação e lioflização por RP HPLC, 6-(2,6-difluorofenil)-5-flúor-N-(4-(3- hidróxi-S-metilciclo-hex-1-enil)piridin-3-il)picolinamida como o sal de TFA. : LCMS (m/2z): 438,2 (MH+); LC Rt = 2,00 min. . Síntese de N-(4-((1R,38)-3-aminociclo-hexil)piridin-3-il)- 6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida H2N F F Ta Os

A Uma solução de 6-bromo-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2- i)ciclo-hexil)piridin-3-il)-5-fluoropicolinamida (1,0 equiv), ácido 2,6 difluorofenil borônico (3,0 equiv.), tetraquistrifenilfosfina (0,2 equiv.) e trieti- lamina (3,0 equiv.) em 1:1 EtOH/tolueno (0,1 M) foi aquecida a 120 ºC com irradiação de micro-ondas por 1200 segundos. Mediante resfriamento, a re- moção dos voláteis in vacuo, o produto Suzuki foi diretamente purificado por HPLC de fase reversa. A fração de produto foi liofilizada e o grupo ftalimida resultante foi desprotegido como descrito no Método 9 rendendo, após puri-

— 157/190 ficação e liofiização por RP HPLC, N-(4-((1R,38)-3-aminociclo-hexil)piridin- 3-iI)-6-(2,6-difluorofenil)-S-fluoropicolinamida como o sal de TFA. LCMS (m/2): 427,2 (MH+); LC Rt = 2,26 min. Síntese de 3-amino-N-(4-((1R 3S)-3-aminociclo-hexil) piridin-3-iN)-6-(2 6- difluorofenil)-S-fluoropicolinamida Io! F F Ts RN

FANS | ! o NH Uma solução de 3-amino-6-bromo-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3- dioxoisoindolin-2-il)ciclo-hexil)piridin-3-il)-5-fluoropicolinamida (1,0 equiv), ácido 2,6-difluorofenil borônico (3,0 equiv.), tetraquistrifenitfosfina (0,2 equiv.) etrietlamina (3,0 equiv.) em 1:1 EtoHftolueno (0,1 M) foi aquecida a 120 ºC com irradiação de micro-ondas por 1200 segundos. Mediante resfriamento, a remoção dos voláteis in vacuo, o produto Suzuki foi diretamente purificado : por HPLC de fase reversa. A fração de produto foi liofilizada e o grupo ftali- mida resultante foi desprotegido como descrito no Método 9 rendendo, após : 15 purificação e liofiização por RP HPLC, 3-amino-N-(4-((1R,38)-3-aminociclo- hexil) piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida como o sal de TFA . LCMS (m/z): 442,2 (MH+); LC Rt = 2,24 min. Síntese de N-(4-(3-amino-4-hidroxiciclo-hexil) piridin-3-iN)-6-(2,6-difluorofenil)- B5-fluoropicolinamida

H Á Hom F F gs . Ss o Uma solução de 5-(3-(6-bromo-5-fluoropicolinamido) piridin-4-il)- 2-oxo-hexa-hidrobenzo[d]oxazol-3(2H)-carboxilato de terc-butila (1,0 equiv), ácido 2,6-difluorofenil borônico (3,0 equiv.), tetraquistrifeniffosfina (0,2 equiv.) Etta e trietilamina (3,0 equiv.) em 1:1 EtoH/tolueno (0,1 M) foi aquecida a 120 ºC com irradiação de micro-ondas por 1200 segundos.

Mediante resfriamento, a remoção dos voláteis in vacuo, o produto Suzuki foi diretamente purificado por HPLC de fase reversa.

A fração de produto foi liofiizada e os grupos carbamato e Boc cíclicos resultantes foram desprotegidos como descrito no método 9 rendendo, após purificação e liofilização por RP HPLC, N-(4-(3- amino-4-hidroxiciclo-hexil) piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)-5- fluoropicolinamida como o sal de TFA . LCMS (m/z): 443,2 (MH+); LC Rt = 2,11 min.

Síntese de 5-amino-N-(4-((1R,3S)-3-aminociclo-hexil) piridin-3-i)-3,3'-diflúor- 2 4'-bipiridina-6-carboxamida i HoN Ae . a O NH r Uma solução de 3-amino-6-bromo-N-(4-((1R,3S)-3-(1,3- dioxoisoindolin-2-il)ciclo-hexil)piridin-3-il)-S-fluoropicolinamida (1,0 equiv), ácido3-fluoropiridin-4-ilborônico (3,0 equiv.), tetraquistrifenilfosfina (0,2 e- quiv.) e trietilamina (3,0 equiv.) em 1:1 EtoOH/tolueno (0,1 M) foi aquecida a 120 ºC com irradiação de micro-ondas por 1200 segundos.

Mediante resfri- amento, a remoção dos voláteis in vacuo, o produto Suzuki foi diretamente purificado por HPLC de fase reversa.

A fração de produto foi liofiizada e o grupo ftalimida resultante foi desprotegido como descrito no Método 9 ren- dendo, após purificação e liofiização por RP HPLC, 5-amino-N-(4-((1R,3S)- 3-aminociclo-hexil) piridin-3-il)-3,3'-diflúor-2,4'-bipiridina-S-carboxamida como o sal de TFA . LCMS (m/z): 425,1 (MH+); LC Rt = 2,08 min.

Síntese de N-(4-((1R,3S,58)-3-amino-S5-metilciclo-hexil) piridin-3-i1)-6-(2,6- diflior-3-hidroxifenil)-S-fluoropicolinamida

AM————————— 159/190 oH H2N F F

F ndo A 2 N ZD | o A uma solução de (18,3R,58)-3-(3-(6-bromo-5- fluoropicolinamido) piridin-4-i)-5-metilciclo-hexilcarbamato de terc-butila (1,0 equiv.) em um frasco de micro-ondas foi adicionado ácido 2,6-diflúíor-3- —hidroxifenilborônico (5,0 equiv.), KF (5,5 equiv.) e Pd2(dba)3 (0,2 equiv.) se- guido por THF e água (10:1, 0,03 M). A esta mistura foi adicionado P(t-Bu)3 (0,4 equiv.) e a reação foi aquecida em micro-ondas a 100 ºC por 30 min. À fase orgânica foi a seguir separada, a camada aquosa foi lavada com aceta- to de etila, e os produtos orgânicos foram combinados e concentrados in . 10 vacuo. A mistura bruta foi purificada por meio de prep-HPLC, as frações de produto foram liofilizadas e o grupo BOC resultante foi desprotegido como . descrito no Método 9 rendendo, após purificação e liofilização por RP HPLC, N-(4-((1 R,3S,58)-3-amino-5-metilciclo-hexil) piridin-3-il)-6-(2,6-diflúor-3- ' hidroxifenil)-5-fluoropicolinamida como o sal de TFA. LCMS (m/z): 457,2 . 15 (MH+); LC Rt=2,17 min. Os compostos a seguir foram preparados usando Método 10:

TABELA LC/M jo se LC/MS S(Rf Jo/NVP Estrutura (M+H em em Nome químico e UPCL) | UP- CL) N-(4-((1R,5R)-5- ques amino-3,3- na, Eos. r dimetilciclo- 122 neo 4T1,2 0,58 | hexilpiridin-3-iI)-6- ÍA AA (2,6-diflúor-4- se hidroxifenil)-5- fluoropicolinamida o"

o LC/M So LC/MS S (Rf plo/NVP Estrutura (M+H em em Nome químico D UPCL) UP- CL) HG onra N-(4-((1R,5R)-5- amino-3,3- HJ, Cir - dimetilcicio- 123 t ÀÁ LF 485,2 0,65 | hexilpiridin-3-1)-6- DO (2,6-diflior-4- Ê7 Y metoxifenil)-5- Nº fluoropicolinamida one N-(4-((1R,38)-3- Ho, - r . E ANSA 6 F exil)piridin-3-i1)-6- 122 L 8 XO 152 (2,6-diflóor-3- fl o hidroxifenil)-5- A fluoropicolinamida . N-(4-((1R,38,58)- orem 3-amino-5- . no Ee: F metilciclo- 125 ur F 457,2 0,57 | hexil)piridin-3-i1)-6- (S ft 2 (2,6-diflúor-3- 7 nO hidroxifenil)-S- fluoropicolinamida . N-(4- ((1R,3R,4R,58)-3- Oh BET amino-4-hidróxi-5- eo metilciclo- 126 Y NES 507,1 hexil)piridin-3-i1)-5- & So flúor-B-(2-flúor-5- We. (trifluorome- tifenil)picolinamid a N-(4- ((R3RAR,58)-3- q BETE amino-4-hidróxi-5- E F metilciclo- 127 ra 507,1 hexilpirídin-3-i1)-5- ET ao flúor-6-(2-flúor-3- W (trifluorome- tifenil)picolinamid a o jo LC/M so LC/MS S (Rf plo/NVP Estrutura (M+H em em Nome químico ID UPCL) UP- CL) N-(4-((1R,3S,58S)- À 3-amino-5- HA CH. e metilciclo- 128 ne 457,2 0,58 | hexil)piridin-3-11)-6- Ta > (2,6-diflúor-4- “p 3 hidroxifenil)-5- fluoropicolinamida N-(4-((1R,38,58)- Fora 3-amino-5- Po é F metilciclo- 129 n NÓ Fr 459,2 0,62 | hexilpiridin-3-11)-5- É Arts flúor-6-(2,3,6- so O trifluorofe- - nil)picolinamida 3-amino-N-(4-(3- : oH amino-4-hidróxi-5- ANNA F metilciclo- 130 nu NT dd 472,1 0,56 | hexil)piridin-3-i1)-6- | . O NS (2,6-difluorofenil)- nã o Ns 5- - fluoropicolinamida 3-amino-N-(4-(3- oH amino4- O F hidroxiciclo- 131 ru N r 458,0 0,57 | hexiDpiridin-3-i1)-6- DO > (2,6-difluorofenil)- nã Oo N 5- fluoropicolinamida 3-amino-N-(4-(3- oH amino-4-hidróxi-5- eo . metilciclo- 132 NO F 4721 hexil)piridin-3-i1)-6- E É (2,6-difluorofenil)- nº o Nh 5- fluoropicolinamida o LCM er Ltems | S(Rf plo/NVP Estrutura (M+H em em Nome químico UPCL) | UP- CL) 3-amino-N-(4-(3- Ros e NAS.

F Iexil)piridin-3-i1)-6- 12 Ta e 455,8 (2,6-difluorofenil)- Sy ) o nm , o . fluoropicolinamida o N-(4-(-3-amino-4- fixa A, : hidróxi-5-metilciclo- hexil)piridin-3-i)-6- 1º V es for! 957 | (,6-difuorofenil)- ça o s- " fluoropicolinamida N-(4-(3-amino4- : sã Ha, : hidróxi-5-metilcicio- hexil)piridin-3-i1)-6- . 15 x dA õ pen) (2,6-difluorofenil)- (TJ s fluoropicolinamida ' 5-amino-N-(4- e ((1R,38)-3- o" SE aminociclo- 136 a NA 425,1 0,46 | hexi)piridin-3-i)- Er E 3,3-diflúor-2,4"- Cm NE bipiridina-6- carboxamida 6-(2,6- He. on. r difluorofenil)-S- 137 4 NS o75 | fiorN-iCd nn hidróxi-5-metilciclo- (117 hex-1-enil)piridin-3- e iNpicolinamida 6-(2,6- ou — difluorofenil)-N-(4- HOR He F ((1R,3R48,5R)- 138 wu Ó 458,2 3,4-dihidróxi-5- CJ nr metilciclo- nº hexil)piridin-3-i)-5- fluoropicolinamida

Exemplo 139 Síntese de N-(4-((1R,3R,4S,58)-3-amino-4-flúor-S-metilciclo-hexil)- piridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida

F a F F

F ad |

NS A | ão A uma solução de (1R,2R,3S,5R)-5-(3-(6-(2,6-difluorofenil)-S- fluoropicolinamido)piridin-4-i1)-2-hidróxi-3-metilciclo-hexilcarbamato de terc- butila (1,0 equiv.) em DCM (0,04 M) a 0 ºC foi adicionado DAST (1,0 equiv.). A reação foi agitada por 1,5 h a 0 ºC, a seguir TFA (10 equiv.) foi adicionado à reação. Após 2 h, a reação foi concentrada in vacuo e o resíduo foi purifi- : 10 cado por meio de prep-HPLC para render N-(4-((1R,3R,48,58)-3-amino4- flúor-S-metilciclo-hexil)piridin-3-i1)-6-(2,6-'difluorofenil)-S-fluoropicolinamida . como o sal de TFA. LCMS (m/z): 459,3 (MH+); LC Rt = 2,39 min. Em adição à caracterização de LC/MS e LC, compostos repre- ] senttativos foram analisados por 1H-RMN. A seguir estão os espectros típi- cosdos compostos da invenção. | dados de *H-RMN sal de HCI, *H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 10,54 (bs, 1H), 8,80 (bs, 1H), 8,55 (d, 1H), 8,34 (dd, 1H), 8,20 (t, 1H), 8,00 50 (bs, 2H), 7,689 (m, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,34 (t, 2H), 3,10-3,0 (m, 2H), 2,83 (m, 1H), 2,03 (d, 1H), 1,76-1,59 (m, 2H), 1,40 (m, 1H), 1,31-1,21 (m, 1H), 0,92 (d, 3H). sal de HCl, *H-RMN (DMSO-d6): d 10,4 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,37 (d, 1H), 8,14-8,20 (m, 2H), 7,94 (bs, 2H), 7,86- 7,88 (m, 2H), 7,54-7,58 (m, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,22-7,26 (m, 2H), 2,09-3,02 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 1,96-1,99 (m, 1H), 1,68-1,71 (m, 1H), 1,60 (q, 1H), 1,37 (m, 1H), 1,145-1,24 (m, 1H), 0,88 (d, 3H)

sal de HCl, *H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 10,59 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,62 (d, 1H), 8,37 (dd, 1H), 8,23 (t, 1H), 8,19 70 (bs, 2H), 7,68-7,71 (m, 2H), 7,36-7,40 (m, 2H),3,01-3,10 (m, 2H), 2,01-2,05 (m, 1H), 1,94-1,97 (m, 1H), 1,72-1,76 (m, 1H), 1,46-1,53 (m, 2H), 1,01-1,13 (m, 2H), 0,89 (d, 3H) sal de HCI, *H RMN (DMSO-d6): d 10,37 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,41 (d, 1H), 8,29 (dd, 1H), 8,13 (t, 1H), 7,8 (bs, 2H), 7,69-7,61 (m, 1H), 7,34-7,28 (m, 3H), 3,061 (m, 1H), 2,86 (m, 1H), 1,76-1,63 (m, 2H), 1,53-1,47 (m, 1H), 1,4-1,34 (m, 2H), 0,82 (d, 3H). sal de HCI, *H RMN (DMSO-d6): d 10,42 (s, 1H), 8,62 (s, as 1H), 8,46 (m, 1H), 8,32 (m, 1H), 8,18 (t, 1H), 7,76 (m, 2H), 7,67 (m, 1H), 7,35 (m, 3H), 5,33 (brs, 1H), 3,108 (m, 2H), 2,88 (m, 2H), 1,65 (m, 2H), 1,48 (m, 3H). sal de HCl, *H RMN (400 MHz, CD3OD): d 9,09 (s, 1 H), 8,46 (dd, 1 H), 8,39 (dd, 1 H), 8,05 (t, 1 H), 7,57 - 7,67 (m, 1 Í H), 7,53 (d, 1 H), 7,16 - 7,25 (m, 2 H), 4,03 -4,12(m, 1H), 3,85 - 3,94 (m, 1 H), 3,20 (s, 3 H), 2,70 - 2,80 (m, 1 H), 1,67 1 - 1,79 (m, 1H), 0,83 (d, 3H). base livre, 'H RMN (CDCI3): d 9,93(s, 1H), 9,38(s, 1H), : 8,40-8,45(m, 1H), 8,40(d, 1H), 7,74-7,80(m, 1H), 7,47- 7,55(m, 1H), 7,19(d, 1H), 7,06-7,13(m, 2H), 2,68-2,83(m, í 2H), 1,97-2,05(m, 1H), 1,65-1,95(m, 5H), 1,22-1,40(m, 3H), 1,04-1,15(m, 1H). sal de HCI, *H RMN (DMSO-d6): d 10,13(s, 1H), 8,82(s, 100 1H), 8,41(d, 1H), 7,94(bs, 2H), 7,52-7,62(m, 1H), 7,36(d, 1H), 7,36 (bs, 2H), 7,20-7,31(m, 3H), 2,78-2,88(m, 2H), 1,70-2,02(m, 4H), 1,16-1,54(m, 4H). sal de HCI, '"H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 10,59 (s, 1H), oo 9,30 (s, 1H), 8,54 (d, 1H) 8,08 (br s, 3H), 7,75 (d, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,60-7,56 (m, 1H), 7,49 (d, 1H), 7,33 (t, 2H), 4,04 (br s, 1H), 3,16(br s, 2H) 3,05 (br t, 1H), 1,98-1,20 (m, 7H) sal de HCl, *H-RMN (400, d6-DMSO): d 10,47 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,33 (dd, 1H), 8,26 (dd, 1H), 8,20 (t, 1H), 7,62-7,72 116 (m, 1H), 7,30-7,35 (m, 3H), 3,82-3,92 (m, 2H), 3,18-3,22 (m, 1H), 2,84-2,91 (m, 1H), 2,69 (t, J=13,2, 1H), 1,38-1,46 (m, 1H), 0,69 (d, 3H).

(s, 1H), 8,55 (d, 1H), 8,29 (dd, 1H), 8,15 (t, 1H), 8,05 (bs, 128 2H), 7,54 (d, 1H), 6,72 (d, 2H), 3,04 - 3,10 (m, 1H), 2,92- 3,04 (m, 1H), 2,01 (d, 1H), 1,95 (d, 1H), 1,74 (d, 1H), 1,42- 1,52 (m, 2H), 0,97-1,08 (m, 2 H), 0,88 (d, 3H). Exemplo 140 Ensaio de depleção de Pim1 ATP.

A atividade de PIM1 é medida usando um reagente de detecção de ATP com base em luciferase-luciferina para quantificar a depleção de ATP resultante a partir da transferência de fosforila catalisada por quinase a um substrato de peptídeo.

Os compostos a serem testados são dissolvidos em 100% de DMSO e distribuídos diretamente para dentro de placas bran- cas de 384 poços a 0,5 ul por poço.

Para iniciar a reação, 10 ul de Pim1 qui- . nase a 5 nM e peptídeo BAD a 80 uM (RSRHSSIPAGT-OH) em tampão de ensaio (HEPES a 50 mM pH 7,5, M9aCI2 a 5 MM, DTT a 1 mM, 0,05% de . BSA) são adicionados a cada poço.

Após 15 minutos, 10 ul de ATP a 40 uM em tampão de ensaio são adicionados.

As concentrações de ensaio finais 7 são PIM1 a 2,5 nM, ATP a 20 UM, peptídeo BAD a 40 uM e 2,5% de DMSO. : A reação é realizada até aproximadamente 50% do ATP ser depletado, a seguir parado com a adição de 20 ul de solução de QuinaseGlo Plus (Pro- mega Corporation). A reação parada é incubada por 10 minutos e o ATP restante detectado por meio de luminescência sobre Victor2 (Perkin Elmer). Os compostos dos exemplos anteriores foram testados pelo ensaio de de- pleção de Pim1 ATP e verificados exibir valores de IC50 como mostrado na Tabela 3, abaixo.

ICS0, a concentração inibidora máxima média, representa a concentração de um composto de teste que é exibida por 50% de inibição do seu alvo in vitro.

Exemplo 141 Ensaio de depleção de Pim2 ATP A atividade de PIM2 é medida usando um reagente de detecção de ATP à base de luciferase-luciferina para quantificar a depleção de ATP resultante da transferência de fosforila catalisada por quinase para um subs-

trato de peptídeo. Os compostos a serem testados são dissolvidos em 100% de DMSO e diretamente distribuídos em placas brancas de 384 poços a 0,5 ul por poço. Para iniciar a reação, 10 ul de Pim2 quinase a 10 nM e peptídeo de BAD a 20 uM (RSRHSSIPAGT-OH) em tampão de ensaio (HEPES a 50 mMpH7,5, M9CI2a5S5 mM, DTT a1mM, 0,05% de BSA) é adicionada a cada poço. Após 15 minutos, 10 ul de ATP a 8 uM em tampão de ensaio são adicionados. As concentrações de ensaio finais são PIM2 a 5 nM, ATP a 4 UM, peptídeo de BAD a 10 uM e 2,5% de DMSO. A reação é realizada até aproximadamente 50% do ATP ser depletada, a seguir parade com a adição de20 yulde solução de QuinaseGlo Plus (Promega Corporation). A reação parada é incubada por 10 minutos e o ATP restante detectado por meio de luminescência sobre Victor2 (Perkin Elmer). Os compostos dos exemplos anteriores foram testados pelo ensaio de depleção de Pim2 ATP e verifica- .- dos exibirem valores de IC50 como mostrado na Tabela 3, abaixo. Exemplo 142 . Ensaio de depleção de Pim3 ATP.

A atividade de PIM3 é medida usando um reagente de detecção ' de ATP à base de luciferase-luciferina para quantificar a depleção de ATP . resultante da transferência de fosforila catalisada por quinase a um substrato de peptídeo. Os compostos a serem testados são dissolvidos em 100% de DMSO e diretamente distribuídos em placas brancas de 384 poços a 0,5 ul por poço. Para iniciar a reação, 10 ul de Pim3 quinase a 10 nM e peptídeo de BAD a 200 uM (RSRHSSIPAGT-OH) em tampão de ensaio (HEPES a 50 mM pH 7,5, MgCI2 a 5 mM, DTT a 1 mM, 0,05% de BSA) são adicionados a cada poço. Após 15 minutos, 10 ul de ATP a 80 UM em tampão de ensaio são adicionados. As concentrações de ensaio finais são PIM1 a 5 nM, ATP a 40 UM, peptídeo de BAD a 100 uM e 2,5% de DMSO. A reação é realizada até aproximadamente 50% do ATP ser depletado, a seguir parado pela adi- ção de 20 ul de solução de QuinaseGlo Plus (Promega Corporation). A rea- ção parada é incubada por 10 minutos e o ATP restante detectado por meio de luminescência sobre o Victor2 (Perkin Elmer). Os compostos dos exem- plos anteriores foram testados pelo ensaio de depleção de Pim3 ATP e veri-

ficados exibirem valores de IC50 como mostrado na Tabela 3, abaixo. Exemplo 143 Ensaio de Proliferação de Célula KMS11s (linhagem celular de mieloma humano) foram cultivados emIMDM suplementado com 10% de FBS, piruvato de sódio e antibiótico. As células foram colocadas em placas no mesmo meio em uma densidade de 2000 células por poço em placas de cultura de tecido de 96 poços, com poços externos vazios, no dia do ensaio. MM1.s (linhagem celular de mielo- ma humano), foram cultivados em RPMI1640 suplementado com 10% de FBS, piruvato de sódio e antibiótico. As células foram colocadas em placas no mesmo meio em uma densidade de 5000 células por poço em placas de cultura de tecido de 96 poços, poços externos vazios, no dia do ensaio.

Os compostos de teste supridos em DMSO foram diluídos em - DMSO a 500 vezes as concentrações finais desejadas antes da diluição em meios de cultura a 2 vezes as concentrações finais. Os volumes iguais de 2x " os compostos foram adicionados às células em placas de 96 poços e incu- bados a 37 ºC por 3 dias. ' Após 3 dias, as placas foram equilibradas até a temperatura am- . biente e o volume igual de reagente CeliTiter-Glow (Promega) foi adicionado aos poços de cultura. As placas foram agitadas brevemente e o sinal lumi- nescente foi medido com luminômetro. A inibição percentual do sinal vista nas céluals tratadas com DMSO sozinho vs. as células tratadas com com- posto de controle foi calculada e usada para determinar os valores de ECSO (isto é, a concentração de um composto de teste que é exigida para obter 50% do efeito máximo nas células) para os compostos testados, como mos- trado na Tabela 3.

Usando os procedimentos dos exemplos 140 (ensaio de deple- ção de Pim1 ATP), 141 (ensaio de depleção de Pim2 ATP), e 142 (ensaio de depleção de Pim3 ATP), a concentração IC50 dos compostos dos exemplos anteriores foi determinada como mostrado na tabela 3 a seguir.

Usando os procedimentos de Exemplo 143 (ensaio de prolifera- ção de célula ), a concentração EC50 dos compostos dos exemplos foram determinados nas células KMS11 como mostrado na Tabela 3. TABELA3 jo E Fim | Piva | ema | OS! plo/NVP Estrutura ão eia SS Ec50 ID ui pi u UM ema Ho, CHa. F 1 un NÓ É 0,001 | 0,018 | 0,006 7,6 o a LL o Qu cm ou E : 2 nº ds 0,001 0,001 | 0,07

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giu 250-350mm3 para os estudos com PK/PD, e 150-250mm* para os estu- dos de eficácia, como volumes de tumor determinados usando o software StudiDirector (StudiLog Systems, Inc.). Todo o tratamento com o composto foi administrado oralmente.

Para a modulação alvo in vivo em estudos de curso de tempo PK/PD, os camundongos portando o tumor foram administrados uma dose única de veículo ou composto em concentrações diferentes. Em 1, 8 e 24 horas após a dosagem, os tecidos do tumor e as amostras de sangue foram tomados de camundongos individuais. Os tecidos de tumor ressecados fo- ram congelados rapidamente e pulverizados usando um crioalmofariz e pilão resfriados com nitrogênio líquido. Amostras sanguíneas foram tiradas por punctura cardíaca, e plasma foi separado utilizando tubos de centrifugação contendo heparina de lítio e separador de plasma (BD Microtainer). Amos- - tras de tumor congeladas foram lisadas em tampão frio (Meso Scale Disco- very) suplementado com inibidor de protease livre de EDTA (Roche), inibido- ' res de fosfatase 1 e 2, e NaF a 1M (Sigma) de acordo com as instruções do fabricante. Após a homogeneização com um aparelho dounce ou por Mag- : NA Liser (Roche), o sobrenadante claro foi obtido seguindo a centrifugação a .: 300xg por 30 minutos a 4ºC e a concentração de proteina foi determinada —porBCA (BioRad). A modulação alvo foi determinada usando o kit de Meso escala fosfo-BadSer112/dúplex total Bad, de acordo com as instruções do fabricante. Brevemente, uma quantidade igual de proteína foi carregada em cada poço de uma placa de 96 poços de Meso escala fosfo- Serina112/dúplex total Bad (Meso Scale Discovery) e as amostras foram —incubadas por 30 minutos à temperatura ambiente ou durante a noite a 4ºC, ; agitando. As placas foram lavadas com tampão de lavagem 1x MSD, e anti- corpo de detecção Sulfo-Tag foi adicionado aos poços e incubado por 1 hora à temperatura ambiente, agitando. As placas foram lavadas novamente e o analito capturado detectado seguindo a adição de Read Buffer T aos poços. As placas foram lidas em um Instrumento SECTOR Imager 6000 (Meso Sca- le Discovery). As proporções do sinal de pBad para Bad total foram usadas para corrigir a variabilidade entre as amostras. Os dados mostrados na tabe-

la a seguir expressa o inibição percentual da fosforilação de pBadSer112 em relação à fosforilação de Bad total pelos compostos representativos da in- venção, normalizado para o grupo de controle veículo.

A extensão de modu- lação é expressa como o controle percentual relativo ao veículo (n.d., não determinado). Composto de Nº do exemplo. 1h 8h 24h 99 (50 mg/kg) 40 55 o 99 (100 mg/kg) 62 66 24 70 (25 mg/kg) 34 50 nda. 70 (50 mg/kg) 28 62 o 70 (100 mg/kg) 5 67 68 96 (25 mg/kg) o 24 nd. 96 (50 mg/kg) 44 69 16 96 (100 mg/kg) 58 71 53 - Para os estudos de eficácia, os camundongos que portam tumor foram randomizados em grupos com variação de volume de tumor equiva- ' lente variando de 150-250mm? utilizando o software StudiDirector (StudiLog Systems, Inc.). Após a randomização, os camundongos foram dosados o- : 10 ralmente diariamente ou duas vezes ao dia em concentrações múltiplas de . composto em 200yl de incipiente.

O crescimento do tumor e o peso corporal do animal foram medidos pelo menos duas vezes por semana, e observa- ções clínicas diárias foram usadas para monitorar as toxicidades potenciais relacionadas ao tratamento.

Os animais foram removidos do estudo se o volume do tumor excedeu 2500mm?, ou se a perda de peso corporal exce- deu 20% das medições iniciais.

A eficácia do composto de Exemplo 99 foi avaliada no modelo | de enxerto de KMS11-luc, com camundongos recebendo a administração oral do composto de Exemplo 99 duas vezes ao dia a 50 e 100 mg/kg, e uma vez ao diaa100 mg/kg por 14 dias.

A dosagem foi iniciada quando os tamanhos do tumor alcançaram aproximadamente 250mm?. Como mostrado na figura 1, o composto de Exemplo 99 exibiu efeitos dependentes de dose in vivo, com a inibição do crescimento do tumor observada para 50 mg/kg duas vezes ao dia (92%) e 100 mg/kg duas vezes ao dia (4% de regressão).

A administração diária uma só vez de 100 mg/kg foi menos eficaz (65%) do que quando dosado duas vezes ao dia.

Estes resultados se correlacionam com a extensão e a magnitude da modulação de pBadSer112, e sugerem que a modulação alvo extensiva e prolongada é necessária para a eficácia máxima A eficácia do composto de Exemplo 70 foi avaliada no modelo de xenoenxerto de KMS11-luc, com camundongos recebendo a administra- ção oral do composto de Exemplo 80 duas vezes ao dia a 25 e 50 mg/kg, e uma vez ao dia a 100 mg/kg por 14 dias.

A dosagem foi iniciada quando os tamanhos do tumor alcançaram aproximadamente 225mm?. Como mostrado na figura 2, o composto de Exemplo 70 exibiu efeitos dependentes de dose in vivo, com a inibição do crescimento do tumor observada para 25 mg/kg (65%) e 50 mg/kg (100%). A inibição do crescimento do tumor significante foi - também observada para 100 mg/kg uma vez diariamente (84%). A eficácia do composto de Exemplo 96 foi avaliada no modelo ' de xenoenxerto de KMS11-luc, com camundongos recebendo a administra- ção oral do composto de Exemplo 96 duas vezes ao dia a 25 e 50 mg/kg, e Ô uma vez ao dia a 100 mg/kg por 14 dias.

A dosagem foi iniciada quando os - tamanhos do tumor alcançaram aproximadamente 225mm?. Como mostrado nafigura3, o composto de Exemplo 96 exibiu efeitos dependentes de dose in vivo, com a inibição do crescimento do tumor observada com 25 mg/kg (67%), e 50 mg/kg (96%). A inibição do crescimento do tumor significante foi também observada para 100 mg/kg uma vez diariamente (88%). Embora a modalidade preferida da invenção tenha sido ilustrada edescrita, será apreciado que várias mudanças possam ser feitas nela sem se afastar do espírito e escopo da invenção.

Claims (31)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmu- la 1l, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, Rs S y nÊ R12 STO | SS, G " em que, y é ciclo-hexila, substituída com um a três substituintes; R: é hidrogênio, -NH>2, ou halo; R12 independentemente em cada ocorrência é selecionado do ' 10 grupo consistindo em hidrogênio, e halo; e - Rs é selecionado dentre ciclo-hexila, fenila, e piridila, em que a dita ciclo-hexila, a dita fenila, e a dita piridila são, cada uma, independente- .- mente substituídas com até três substituintes selecionados dentre halo, hi- droxila, C1-4 alquila, e OC144 alquila.

? 15 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe- lo fato de que y é substituído com um a três substituintes selecionados den- tre hidroxila, amino, C14 alquila, e C1-4 halo alquila.

3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pe- lo fato de que y é substituído com um a três substituintes selecionados den- tremetila, hidroxila, amino, e CF3.

4. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pe- lo fato de que R, é hidrogênio, amino, ou flúor.

5. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pe- lo fato de que Rs é piridila ou fenila.

6. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pe- lo fato de que Rs é fenila substituída com até três substituintes selecionados dentre halo, hidroxila, alcóxi, e C14 alquila.

7. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pe-

lo fato de que y é substituído com um a três substituintes selecionados den- tre metila, hidroxila, amino, e CF3; R1 é hidrogênio; e Rs é fenila substituída com até três substituintes selecionados dentre flúor, hidroxila, metila, etila, metóxi, e propóxi.

8. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pe- lo fato de que R, é 2,6-difluorofenila.

9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe- lo fato de ser selecionado dentre o grupo consistindo em: N-(4-((38,58)-3-amino-5-metilciclo-hexil)piridin-3-i)-6-(2,6- difluorofenil)-S-fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((1R,3R,4S,58)-3-amino-4-hidróxi-5-metilcíclo- hexil)piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)picolinamida; N-(4-((3R,4R,58)-3-amino-4-hidróxi-5-metilpiperidin-1-i)piridin-3- . iI)-6-(2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; 3-amino-N-(4-((1R,3S)-3-aminociclo-hexil)piridin-3-il)-6-(2,6- " difluorofenil)-5-fluoropicolinamida; e N-(4-((38)-3-aminociclo-hexil)piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)-5- : fluoropicolinamida, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal farmaceutica- - mente aceitável do mesmo.

10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindica- ções 1a9.

11. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindica- ções1aS9, em que adita composição farmacêutica compreende um agente adicional para o tratamento de câncer.

12. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o agente adicional é selecionado dentre irino- tecano, topotecano, gencitabina, 5-fluorouracila, leucovorina, carboplatina, cisplatina, taxanos, tezacitabina, ciclofosfamida, vinca alcaloides, imatinib (Gleevec), antraciclinas, rituximab, e trastuzumab.

13. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para o tratamento de uma condição pela modulação da ativi- dade de Integração de Pró-virus de Maloney Quinase (PIM Quinase).

14. Uso de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fa- tode que a condição é um câncer selecionado dentre carcinoma dos pul- mões, pâncreas, tireoide, do ovário, da bexiga, de mama, da próstata, ou do cólon, melanoma, leucemia mieloide, mieloma múltiplo e eritro leucemia, a- denoma do cólon viloso e osteossarcoma.

15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ag, caracterizado pelo fato de ser para o uso no tratamento de uma condi- ção pela modulação da atividade da Integração do Pró-vírus de Maloney Quinase (PIM Quinase).

16. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a condição é um câncer selecionado dentre carcinoma dos pulmões, pâncreas, tireoide, do ovário, da bexiga, de mama, da próstata, ou ) do cólon, melanoma, leucemia mieloide, mieloma múltiplo e eritro leucemia, adenoma do cólon viloso e osteossarcoma. :

17. Composto de Fórmula 1l, caracterizado pelo fato de ser sele- À cionado dentre a Tabela | ou a Tabela Il.

18. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fór- mula Il, ou um estereoisômero, tautômero, ou sal farmaceuticamente aceitá- vel do mesmo, Rs y ' nº Ri2 RW R1 N 1" em que, y é piperidinila substituída com metila, hidroxila, e amino; R: é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, NH7, e flúor; Ri2 independentemente em cada ocorrência é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, e halo; e Rs é selecionado dentre pirídila, fluoro piridita, ciclo-hexila, e feni- la, em que a dita fenila é substituída por até três substituintes selecionados dentre flúor, hidroxila, e metila. s

19. Composto de acordo com a reivindicação18, caracterizado pelo fato de que y representa 3-amino-4-hidróxi-5-metilpiperidin-1-ila.

20. Composto de acordo com a reivindicação 18 ou 19, caracte- rizado pelo fato de que R, é hidrogênio.

21. Composto de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelofatode que Rs é difluoro fenila.

22. Composto de acordo com a reivindicação 18 ou 19, caracte- rizado pelo fato de que Rs é 2,6-difluoro fenila.

23. Composto de acordo com a reivindicação 18, caracterizado - pelo fato de ser selecionado dentre N-(4-((3R,4R,5S)-3-amino-4-hidróxi-5- —metilpiperidin-1-il) piridin-3-i1)-6-(2,6-difluorofenil)-S-fluoropicolinamida, = 3- " amino-N-(4-((3R,4R,58)-3-amino-4-hidróxi-5-metilpiperidin-1-il) piridin-3-i1)-6- (2,6-difluorofenil)-5-fluoropicolinamida, e N-(4-((3R,4R,58)-3-amino-4-hidróxi- ' S5-metilpiperidin-1-il) piridin-3-iI)-6-(2,6-diflúor-3-metilfenil)-5- - fluoropicolinamida.

24. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido na reivindicação 18 ou 23, em que a dita composição farmacêutica compreende pelo menos um agente adicio- nal para o tratamento de câncer.

25. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que o agente adicional é selecionado do grupo consistindo em irinotecano, topotecano, gencitabina, 5-fluorouracila, leucovo- rina, carboplatina, cisplatina, taxanos, tezacitabina, ciclofosfamida, vinca al- caloides, imatinib (Gleevec), antraciclinas, rituximab, e trastuzumab.

26. Uso de um composto, como definido na reivindicação 18, ca- racterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para o tratamento de uma condição pela modulação da atividade da Integração do Pró-virus de Maloney Quinase (PIM Quinase).

27. Uso de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fa- to de que a condição é um câncer selecionado dentre carcinoma dos pul- mões, pâncreas, tireoide, do ovário, da bexiga, de mama, da próstata, ou do cólon, melanoma, leucemia mieloide, mieloma múltiplo e eritro leucemia, a- — denomado cólon viloso e osteossarcoma.

28. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 23, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento de uma con- dição pela modulação da atividade da Integração do Pró-virus de Maloney Quinase (PIM Quinase).

29. Composto de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que a condição é um câncer selecionado dentre carcinoma dos pulmões, pâncreas, tireoide, do ovário, da bexiga, de mama, da próstata, ou do cólon, melanoma, leucemia mieloide, mieloma múltiplo e eritro leucemia, - adenoma do cólon viloso e osteossarcoma.

30. Composto de Fórmula Il, caracterizado pelo fato de ser sele- " cionado dentre a Tabela | ou a Tabela !l.

31. Invenção, caracterizada por quaisquer de suas concretiza- À ções e/ou categorias de reivindicação englobadas pela matéria inicialmente 7 revelada no pedido de patente ou em seus exemplos aqui apresentados.

—e- Veículo 700 —A- 50 mg/kg b.i.d., Exemplo 99 . —V- 100 mg/kg b.i.d., Exemplo 99 o —QO 100 mg/kg q.d., Exemplo 99 600 ' U o <=! 500

E

E 400

E - . ã r 8 300 o o 8 o E 200 o

E 3 2 100 o 22 2 26 28 30 32 34 Dia após o implante " Fig.1

1000" -& veículo 900 —A- 25 mg/kg b.i.d., Exemplo 70 50 mg/kg b.i.d., Exemplo 70 : mr 800 O 100 mg/kg q.d., Exemplo 70 ) ã 700

E E 600 - o Ns iz 500 i 8 : ' os 400 2 E 300

Ê 3 200 o 1 o 17 19 21 23 25 27 29 31 Dia após o implante i Fig.2

10007 O veículo . 900 —A 25 mg/kg b.i.d., Exemplo 96 —y 50 mg/kg b.i.d., Exemplo 96 : x so04 -O 100 mg/kg aq.d., Exemplo 96 o” e 700

E E 6 2 o 2 g 500 | 3 : o 400 2 É 300 o g 200 o am o 17 19 21 23 25 27 29 31 Dia após o implante : Fig.3