BE831947A - Nouvel ether polycyclique antibiotique - Google Patents

Description

   <EMI ID=1.1> 

  
groupe comprenant les éthers polycycliques acides antibiotiques,

  
catégorie de composés caractérisés biologiquement par leur effet

  
sur le transport des cations dans la mitochondrie. Cette famille d'antibiotiques comprend la monensine (J. Amer. Chem. Soc.,

  
89:5737, 1967) ; la nigéricine (Biochem. Biophys. Res. Comm.,

  
33:29, 1968) ; la grisorixine (J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1421,

  
 <EMI ID=2.1> 

  
Soc. Chem. Commun. , 967, 1972) ; X-206 (J. Chem. Soc. Chem.

  
Commun., 927, 1971) ; et A204A (J. Amer. Chem. Soc., 95:3399,

  
1973).

  
Les éthers polycyliques antibiotiques indiqués précédemment

  
sont actifs contre les bactéries gram-positives les champignons

  
et les protozoaires. Ils présentent une puissante activité anticoccidienne. 

  
Le brevet des E.U.A. N[deg.] 3.839.557 décrit un procédé d'amélioration de l'utilisation des aliments tant par des ruminants

  
que par des animaux à un seul estomac, que l'on alimente avec

  
des matières végétales fibreuses et auxquels on administre de la

  
 <EMI ID=3.1> 

  
éther polycyclique antibiotique.

  
Cette invention concerne Le composé 38.295, antibiotique de formule :

  

 <EMI ID=4.1> 


  
L'antibiotique est produit par la croissance aérobie en

  
immersion de Streptomyces hygroscopicus ATCC 31050 dans un milieu

  
nutritif aqueux. L'antibiotique et ses sels cationiques sont des  <EMI ID=5.1> 

  
diostats et promoteurs de croissance chez les animaux.

  
Le microorganisme utile dans la préparation de l'antibioti-

  
 <EMI ID=6.1> 

  
sol provenant du Japon. Il a été cultivé sur un certain nombre de milieux utilisés pour l'identification de ce genre et on a conclu qu'il est tout à fait similaire à la description faite pour Streptomyces hygroscopicus.

  
La culture (Pfizer F.D. 23604) a été comparée, en ce qui concerne un certain nombre de caractéristiques sur plusieurs milieux, à une culture de Streptomyces hygroscopicus 482.48 que l'on s'est procuré à la collection publique de cultures des PaysBas, Centraalbureau voor Schimnelcultures (CBS). Des comparaisons et des déterminations ont été faites sur la base des caractéristiques des espèces telles que décrites dans Applied Microbiology, 4:243-250, 1956. La comparaison des deux cultures est la suivante :

  
Morphologie de la chaine de spores : des chaînes de Pfizer F.D. 23604 en spirales enroulées sur 6 à 10 tours ou moins sur différents milieux ressemblent aux chaînes décrites de Streptomyces hygroscopicus CBS représentées sur la figure 1 de l'article auquel on s'est référé ci-dessus. Des spores de Pfizer F.D. 23604, examinées sous un microscope à balayage d'électrons, ressemblent exactement à celles de la souche CBS

  
de S. hygroscopicus illustrée dans Applied Microbiology, 18:695-
696, 1969, où les spores sont décrites comme ayant une surface rugueuse, consistant en nombreux petits trous bordés de nervures constituées par le matériau des parois des spores. Des lames teintéesdes spores des deux cultures semblent identiques.

  
Couleur de la colonie : le mycélium aérien apparaît gris sur la plupart des milieux mais la teinte exacte est quelque peu différente pour les deux cultures. Pfizer F.D. 23604, sur de la gélose au saccharose de Czapek, donne une culture blanche, tirant

  
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souche CBS de S. hygroscopicus donne une culture plate, fine et grise. La souche Pfizer F.D. 23604 donne sur de la farine

  
 <EMI ID=8.1> 

  
jaune dans le mycélium aérien préalablement gris. Sur de la gélose d'extrait de levure et d'extrait de malt, Pfizer F.D.
23604 donne des taches jaunes de croissance dans le mycélium gris. 

  
 <EMI ID=9.1> 

  
tures ne produisent de mélanine sur une gélose de peptone et de fer.

  
Utilisation du carbone : (Méthode de Pridham et Gottlieb, J. Bact., 56:107-114, 1948), Pfizer F.D. 23604 utilise le glucose, le L-arabinose, la dextrine, le D-fructose, le D(+)-galactose,

  
le glycérol, l'inositol, l'inuline, le lactose, le maltose, le D-mannitol, le raff inose salin, le rhamnose, l'acétate de sodium, le D-sorbitol, le sorbose, l'amidon, la saccharose, le tréhalose et le D-xylose ; le dulcitol n'est pas utilisé. Ces résultats

  
 <EMI ID=10.1> 

  
hygroscopicus dans Applied Microbiology, 15:637-639, 1967 et la

  
 <EMI ID=11.1> 

  
10:183-221, 1969, à l'exception que la souche CBS n'utilise pas l'inositol.

  
 <EMI ID=12.1> 

  
deux cultures, sur des cultures en tubes inclinés sur gélose de peptone et de fer, avec des bandes de papier imprégnées d'acétate de plomb.

  
Lait : On obtient des résultats identiques pour les deux cultures ; il n'y a pas de coagulation, l'hydrolyse est complète ou presque en 12 jours ; on obtient un pigment soluble, brun jaune.

  
Gélatine : Les cultures sont identiques en croissance, couleur et vitesse modérée de liquéfaction.

  
Caractéristiques particulières : La souche CBS de 2. hygroscopicus donne des zones hygroscopiques noires en trois semaines sur une gélose de glucose et d'asparagine, de la farine

  
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de malt, alors que la souche Pfizer F.D. 23604 présente des taches noires seulement sur la gélose d'extrait de levure et d'extrait de malt. Une incubation supplémentaire pendant une semaine et la conservation de quelques cultures en boîtes de

  
 <EMI ID=14.1> 

  
cissement de la souche Pfizer F.D. 23604. Sur de la farine d'avoine gélosée, de la gélose de saccharose de Czapek et de la gélose d'extrait de levure et d'extrait de malt, la souche

  
Pfizer F.D. 23604 produit une odeur ressemblant à celle de l'oignon sauvage ou de l'ail avec une certaine odeur terreuse, alors que la souche S. hygroscopicus CBS produit seulement l'odeur  <EMI ID=15.1> 

  
ayant l'odeur d'oignon sauvage. La souche Pfizer F.D. 23604 de

  
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 <EMI ID=17.1> 

  
ne le fait pas, et que la production de cet antibiotique n'a pas

  
 <EMI ID=18.1> 

  
Cette culture (F.D. 23604) a été déposée à The American Type

  
 <EMI ID=19.1> 

  
collection sous la référence ATCC 31050.

  
La culture de Streptomyces hygroscopicus ATCC 31050 a lieu de préférence dans un milieu nutritif aqueux, à une température de 28 à 36[deg.]C, et des conditions aérobies en immersion avec agitation. Les milieux nutritifs qui sont utilisables dans de tels buts comprennent une source de carbone assimilable comme les sucres, les amidons et le glycérol ; une source d'azote organique comme la caséine, le produit de digestion enzymatique de la caséine, de la farine de soja, de la farine de coton, de la farine d'arachide, du gluten de blé, de la fleur de soja, de la farine de viande et de la farine de poisson.

   Une source de substances permettant la croissance comme les matières solubles provenant de grains et l'extrait de levure ainsi que des sels comme le chlorure de sodium et le carbonate de calcium et des oligoéléments comme le fer, le magnésium, le zinc, le cobalt et le manganèse, peuvent également être utilisés avec des résultats avantageux. S'il se produit une nousse excessive pendant la fermentation, on peut ajouter au milieu de fermentation des agents anti-moussants comme des huiles végétales ou des silicones. L'aération du milieu dans les réservoirs permettant la croissance en immersion est de préférence maintenue à un débit d'environ

  
1/2 à 2 volumes d'air libre par volume de bouillon par minute. L'agitation peut être maintenue à l'aide d'agitateurs connus de manière générale par les techniciens de l'industrie de la fermentation. Des conditions aseptiques doivent évidemment être mainte.Rt nues pendant le transfert de l'organisme/pendant sa croissance.

  
L'inoculum permettant la préparation de l'antibiotique peut être obtenu en utilisant la production d'une culture sur tubes inclinés. La culture peut être utilisée pour inoculer des flacons agités ou des réservoirs à inoculum, ou bien les réservoirs à inoculum peuvent être ensemencés à partir des flacons agités. La

  
 <EMI ID=20.1>   <EMI ID=21.1> 

  
en immersion sera, généralement, à la période la plus favorable

  
 <EMI ID=22.1> 

  
importante dans l'étape finale en fermenteur, en approximativement 3 à 5 jours. Les taux en antibiotiques varient de 50 à 500 mg par litre.

  
Le processus de production d'antibiotique est commodément suivi pendant la fermentation par essai biologique du bouillon, en utilisant une souche sensible de Staphylococcus aureus ou de Bacillus subtilis. On utilise la technique classique d'essai

  
sur plaque dans laquelle la zone d'inhibition entourant un disque de papier filtre saturé de bouillon est utilisée comme une mesure de la puissance antibiotique.

  
La chromatographie sur couche mince utilisant le gel de silice est un outil utile pour analyser l'antibiotique produit dans les milieux de fermentation et pour déterminer la composition des matériaux bruts et purifiés extraits des bouillons de fermentation. Après développement avec l'acétate d'éthyle, on pulvérise sur les chromatogrammes sur couche mince 3 % de vanilline dans de l'acide sulfurique éthanolique (98,5:1,5 %, v/v) puis on chauffe à 60-80[deg.]C pendant quelques minutes. L'antibiotique forme une tache rouge-rosâtre, brillante, sur un fond blanc.

  
On peut séparer et recueillir le composé antibiotique

  
38295 à partir du bouillon de fermentation clarifié, en l'extrayant avec un solvant organique comme le chloroforme,

  
 <EMI ID=23.1> 

  
plus importante de l'antibiotique est contenue dans le mycélium séparé, et en est commodément extraite en mettant le mycélium en suspension dans un solvant soluble dans l'eau comme le méthanol.

  
Le procédé préféré de séparation et de récupération du composé antibiotique 38.295 est le suivant :

  
Le bouillon de fermentation entier (non filtré) est extrait

  
 <EMI ID=24.1> 

  
L'extrait au solvant est concentré sous vide jusqu'à un résidu huileux que l'on met ensuite en suspension dans un mélange de chloroforme et d'hexane (1:1) que .l'on place sur une colonne de gel de silice (de préférence un lit de gel de silice 60 recouvert d'une couche de gel de silice PF254, disponibles tous deux chez

  
 <EMI ID=25.1> 

  
est successivement développée avec de l'hcxane, un mélange  <EMI ID=26.1> 

  
biotique principale est éluée avec de l'acétate d'éthyle. On concentre l'éluat sous vide, on le reprend dans de l'acétone et on agite pendant environ 30 à 60 minutes avec du charbon activé
(Darco G 60) . On. élimine le charbon par filtration, on concentre la solution à un petit volume sous vide, on ajoute une petite quantité d'eau et on ajuste le pH avec de l'hydroxyde de sodium à 8,0-8,5. On recueille par filtration le matériau cristallisé qui se sépare, on le lave à l'eau et on le sèche.

  
L'antibiotique que l'on isole à ce moment est un sel mélange de sodium et de potassium du composé 38295, formé avec les ions sodium et potassium présents ou amenés dans le bouillon de fermentation et l'hydroxyde de sodium ajouté. Des chromatogrammes sur couche mince de ce matériau peuvent présenter des traces d'au moins deux autres antibiotiques plus polaires qui, comme le composé 38295, donnent une tache rouge-rosâtre caractéristique lorsqu'on pulvérise de la vanilline dans de l'acide sulfurique éthanolique.

  
Le composé 38295 peut être obtenu sous forme d'un seul pro-

  
 <EMI ID=27.1> 

  
fermée dans l'hexane. On ajoute les sels mélangés de sodium et de potassium sous forme d'une solution dans l'acétate d'éthyle ou le chloroforme et l'on développe la colonne sous 5,6 kg/cm<2>, avec de l'hexane contenant des quantités croissantes d'acétate d'éthyle. On suit le progrès de la séparation par chromatographie sur couche mince. On réunit les fractions appropriées, on les évapore sous vide et on cristallise l'antibiotique dans un mélange d'acétone et d'eau.

  
On peut obtenir l'acide libre du composé 38295 à partir du sel mélangé de sodium et de potassium en ajustant le pH d'une solution dans l'acétate d'éthyle ou le chloroforme à 4,5 avec de l'acide phosphorique dilué. On sèche la couche organique sur sulfate de sodium anhydre, on l'évaporé sous vide et on cristallise le résidu dans un mélange de chloroforme et d'hexane.

  
On peut obtenir le sel de sodium du Composé 38295 en ajustant le pH d'une solution de l'acide libre dans l'acétate d'éthyle ou le chloroforme à 8,5 avec de l'hydroxyde de sodium.
(IN). On cristallise le produit dans l'acétone aqueuse. On obtient de même le sel de potassium cristallisé en utilisant

  
 <EMI ID=28.1>  

  
 <EMI ID=29.1> 

  
de nitrate d'argent aqueux à une solution éthanolique de sel mélangé de sodium et de potassium du Composé 38295. D'autres composés que l'on peut obtenir facilement sont les sels de cuivre, de zinc, d'ammonium, de calcium, de magnésium et de lithium du Composé 38295.

  
En raison de son usage final pour la prévention et le traitement de la coccidiose chez la volaille, on peut amener à siccité (de préférence par séchage par pulvérisation) le bouillon de

  
 <EMI ID=30.1> 

  
dans les aliments pour volailles de manière à obtenir le degré de puissance antibiotique désiré.

  
Le Composé 38295 présente une activité inhibitrice vis-à-vis de la croissance d'un certain nombre de microorganismes (Tableau I). L'organisme d'essai est inoculé dans une série de tubes à essai contenant un milieu nutritif et diverses concentrations du Composé 38295, pour déterminer la concentration minimale de l'antibiotique en &#65533;g/ml qui inhibe la croissance de l'organisme en 24 heures.

TABLEAU I

  

 <EMI ID=31.1> 


  
Le composé 38295 et ses sels présentent une excellente activité contre les infections du type coccidiose chez la

  
 <EMI ID=32.1>   <EMI ID=33.1> 

  
lutte contre des infections dues à un seul des organismes

  
 <EMI ID=34.1> 

  
sieurs de ces organises.

  
Les données d'efficacité du Composé 38295 et de ses sels vis-à-vis des infections du type coccidiose chez les poulets sont obtenues de la manière suivante. On alimente des lots de

  
 <EMI ID=35.1> 

  
pâtée contenant le Composé 38295 ou l'un de ses sels dispersé uniformément dans la pâtée. Lorsque le poulet a été nourri de cette manière pendant environ 24 heures, on lui inocule par voie orale des oocystes de l'espèce particulière de Eimeria testée.

  
On infecte de la même manière d'autres lots de poussins nourris

  
à l'aide d'une pâtée dépourvue d'antibiotique et ils servent de témoins infectés. Des poussins non infectés auxquels on n'a pas donné de médicament servent de témoins normaux. Les résultats

  
du traitement sont déterminés après 5 jours dans le cas de

  
E. acervulina, et après 6 jours pour les autres espèces d'Eimeria.

  
Le Tableau II illustre les résultats obtenus avec les sels mélangés de sodium et de potassium du Composé 38295. 

TABLEAU TT

  

 <EMI ID=36.1> 


  
* Le critère utilisé pour mesurer l'activité anticoccidienne

  
consiste à affecter selon le nombre de lésions un chiffre de 0 à 4 pour E. tenella (J.E. Lynch, Am. J. Vet. Res. 22:324-
326, 1961) et de 0 à 3 pour les autres espèces (J. Johnson et W.H. Reid, Exp. Parasit., 23:30-36, L970) . On établit un rapport constant en divisant le nombre obtenu pour chaque groupe traité par le nombre obtenu pour le groupe témoin infecté.

  
 <EMI ID=37.1> 

  
second nombre aux lésions caecales. 

  
 <EMI ID=38.1> 

  
l'acide libre, le sel de potassium ou le milieu de fermentation séché contenant le Composé 38295, dans l'alimentation au taux donnant la puissance antibiotique désirée.

  
Les propriétés d'amélioration de la croissance que fournit le Composé 38295 sont illustrées par les essais suivants sur le bétail.

  
On place de manière aléatoire dans des enclos des génisses Angus, cinq génisses par enclos, et on leur administre le Composé
38295 par voie orale à l'aide de bols, dans l'eau de boisson, etc. Cependant, le composé est avantageusement et facilement administré, sur la base de son activité, en l'incorporant dans des compositions alimentations riches en matières non digestibles, à des taux de 11 à 33 ppm. Le Composé 38295 peut être sous diverses formes comme l'acide libre, le sel de sodium, le sel de potassium, les sels mélangés de sodium et de potassium, ou le bouillon de fermentation séché produit par Streptomyces hygroscopicus ATCC 31050.

  
Les compositions alimentaires ne comportant pas de médicament et celles comportant le Composé 38295 sont administrées aux animaux d'essai à volonté. La composition alimentaire est un aliment d'engraissement du bétail 12,5 % de protéine - cône :
matières non digestibles 75:25, contenant du mais, de la farine de soja, de la farine de luzerne, du phosphate de calcium, de la mélasse, des vitamines et des traces de minéraux. Le Composé

  
 <EMI ID=39.1> 

  
minéraux et des vitamines. 

ALIMENT DE BASE 

  
(Aliment d'engraissement de bétail 12,5 % de protéine - Conc :
matières non digestibles 75:25)

  

 <EMI ID=40.1> 


  
* Mélasses de canne à sucre sur un support de morceaux d'épis

  
de mais . pas moins de 3 % de protéine brute, pas plus de
15 % de fibre, pas moins de 42 % de sucre inerte, 6 % maximum d'eau. 

  
 <EMI ID=41.1> 

  
par million : manganèse 10 ; fer 6,25 ; cuivre 1,25 ;

  
iode 0,025 ; cobalt 0,86 ; zinc 45.

  
 <EMI ID=42.1> 

  
Vitamine A 3294 U.I. ; Vitamine D 440 U.I. ;

  
Vitamine E 55 U.I.

PREMELANGE

  

 <EMI ID=43.1> 


  
Un kilo de prëmélange pour deux tonnes d'aliment complet donne un taux final de 11 ppm en Composé 38295.

  
Le Tableau III illustre les résultats d'un essai de 28 jours, obtenus avec deux lois trois lots de 5 génisses par lot, pesant approximativement au départ 180 kg chacune. 

TABLEAU III

  
(Sels mélangés de sodium et de potassium du Composé 38295)

  

 <EMI ID=44.1> 


  
* Gain quotidien moyen

  
** Nourriture quotidienne moyenne

  
***kg de nourriture par kg de gain 

  
On peut obtenir pratiquement les mêmes résultats avec l'acide libre, le sel de sodium, le sel de potassium ou le bouillon de fermentation séché contenant le Composé 38295.

  
On peut obtenir des résultats comparables avec d'autres ruminants comme les moutons, ou avec des animaux à un seul estomac comme les chevaux, les porcs et les lapins.

  
Le composé actif 38295 peut être administré dans un aliment ou une boisson pour animal ou dans un prémélange que l'on introduira dans l'aliment ou la boisson de l'animal. On peut préparer un prémélange concentré antibiotique liquide aux concentrations appropriées, que l'on peut ajouter à l'eau de boisson pour améliorer le rendement alimentaire chez les animaux, en dissolvant le composé 38295 dans un solvant approprié, comme l'éthanol ou le propylène glycol.

PREMELANGE LIQUIDE CONCENTRE

  
On peut préparer un prémélange concentré antibiotique liquide aux concentrations désirées, convenant pour l'addition à l'eau de boisson destinée à des animaux, en dissolvant dans un solvant approprié cornue l'éthanol ou le propylëne glycol l'antibiotique comprenant le Composé 38295.

  
EXEMPLE 1

  
On prépare un milieu aqueux stérile ayant la composition suivante : 

  
 <EMI ID=45.1> 
 <EMI ID=46.1> 
 On transfère des cellules provenant d'une culture sur tubes inclinés de Streptomyces hygroscopicus ATCC 31050 dans une série de flacons de 300 ml contenant chacun 50 ml de ce milieu stérile, et on agite sur un agitateur rotatif pendant 3 à 4 jours à 28-
30[deg.]C. On transfère de manière aseptique des parties aliquotes de 5 ml de cet inoculum cultivé dans des flacons de 300 ml contenant 100 ml de milieu stérile tel que décrit précédemment. Après agitation pendant 3 à 4 jours à 28-30[deg.]C, on transfère l'inoculum cultivé dans des fermenteurs de 4 litres contenant 2 litres du milieu stérile suivant :

  

 <EMI ID=47.1> 


  
pH - 6,6

  
On effectue la fermentation pendant 90-120 heures à 28-36[deg.]C, en agitant à 1700 tours par minute et avec une aération d'environ

  
un volumed'air par volume de bouillon par minute. De grands fermenteurs contenant de 300 à 38.000 litres de milieu peuvent être inoculés avec environ 2 % de cette culture. La fermentation est effectuée jusqu'à ce qu'on obtienne une puissance antibiotique d'au moins 50 mg par litre (90 à 120 heures).

  
On extrait deux fois 100 litres du bouillon de fermentation entier, non filtré, avec 20 litres de méthylisobutylcétone. On concentre l'extrait de solvant séparé sous vide jusqu'à un résidu huileux (769 g) que l'on disperse sur gel de silice en l'ajoutant en solution dans 2 litres de chloroforme à 1 kg de gel de silice

  
 <EMI ID=48.1> 

  
résultant en suspension dans 2 litres d'un mélange chloroforme:
hexane (1:1) et on l'ajoute à un lit de 300 g de gel de silice 60 recouvert d'une couche de 300 g de gel de silice PF254- On lave ensuite le gel de silice successivement avec 7,5 litres d'hexane, 7,5 litres d'un mélange chloroforme:hexane (1:1) et 7,5 litres de chloroforme. On élue l'antibiotique avec 3,78 1 d'acétate d'éthyle. On chasse l'acétate d'éthyle sous vide et on dissout

  
 <EMI ID=49.1> 

  
 <EMI ID=50.1>   <EMI ID=51.1>  .environ 40 g de charbon activé (Darco G 60). La filtration est suivie d'une concentration à environ 200 ml et d'une dilution <EMI ID=52.1> 

  
mélangé de sodium et de potassium par ajustement du pH à 8,5 avec NaOH 1,ON. On dissout le matériau cristallisé (13,8 g) dans de l'acétate d'éthyle et on le chromatographie sur une colonne

  
 <EMI ID=53.1> 

  
colonne sous 5,6 kg/cm2 avec de l'hexane contenant des quantités croissantes d'acétate d'éthyle. On suit le progrès de la séparation par chromatographie sur couche mince. On réunit les fractions appropriées, on les évapore sous vide et on recristallise le composé pur dans un mélange d'acétone et d'eau.

  
Le sel mélangé sodium/potassium cristallisé pur du Composé
38295 a un point de fusion de 200[deg.]C et un pouvoir rotatoire de

  
 <EMI ID=54.1> 

  
 <EMI ID=55.1> 

  
rique, l'analyse donne en moyenne pour le carbone 60,58 % et pour l'hydrogène 8,56 %.

  
Le composé est soluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, le chloroforme, le chlorure de méthylène, l'éther diéthylique, l'acétate d'éthyle et la méthylisobutylcétone ; partiellement soluble dans l'hexane ; et insoluble dans l'eau.

  
Le sel mélangé sodium/potassium du Composé 38295 ne possède aucun diagramme caractéristique d'absorption de la lumière ultraviolette.

  
Le spectre infrarouge du sel mélangé sodium/potassium est représenté sur la figure 1. Un granulé de KBr donne une absorption caractéristique dans la région infrarouge aux longueurs d'onde suivantes en microns : 2,92 ; 3,40 ; 6,27 ; 6,85 ; 7,22 ; 8,40 ; 9,00 ; 9,15 ; 9,25 ; 9,48 ; 9,98 ; 10,45 ; 10,68 et 11,45. EXEMPLE 2 

  
 <EMI ID=56.1> 

  
bouillon de fermentation clarifié au lieu du bouillon de fermentation non filtré entier.

  
EXEMPLE 3

  
On met le mycélium, séparé du bouillon de fermentation clari-

  
 <EMI ID=57.1> 

  
on concentre l'extrait méthanolique sous vide et on traite le résidu par le procédé de l'Exemple 1. 

  
 <EMI ID=58.1> 

  
EXEMPLE 4

  
On répète le processus de fermentation du procédé de l'Exemple 1 en utilisant un milieu de fermentation ayant la composition suivante :

  

 <EMI ID=59.1> 


  
pH 6,6 - 6,7

  
A la fin du cycle de fermentation, on amène à siccité par séchage par pulvérisation le bouillon de fermentation non filtré entier.

  
EXEMPLE 5

  
On dissout dans de l'acétate d'éthyle le sel mélangé sodium/ potassium du Composé 38295 et on ajuste le pH à 4,5 avec de l'acide phosphorique dilué. On sèche la couche de solvant sur sulfate de sodium anhydre, on l'évapore sous vide et on cristallise le résidu dans un mélange de chloroforme et d'hexane pour obtenir l'acide cristallisé qui a un point de fusion de 135-138[deg.]C

  
 <EMI ID=60.1> 

  
 <EMI ID=61.1> 

  
à 70[deg.]C, sur anhydride phosphorique, la composition moyenne en poids est 61,65 % de carbone, 8,94 % d'hydrogène et 29,41 % d'oxygène (par différence). L'acide libre du Compose 38295 ne possède pas de diagramme caractéristique d'absorption de la lumière ultra-violette.

  
Le spectre infrarouge de l'acide libre du Composé 38295

  
est donné sur la figure 2. Un granulé de KBr donne une absorption caractéristique dans la région infrarouge aux longueurs d'onde suivantes en microns : 2,92 ; 3,43 ; 5,74 ; 6,85 ; 7,25 ; 7,53 ; 8,28 ; 8,60 ; 8,80 ; 9,00; 9,15 ; 9,80 ; 10,10 ; 10,45 ; 10,68 ;
10,92 et 11,13.

  
L'analyse par rayons X d'un cristal du sol d'argent du 'Compose 38295 établit la formule développée/ représentée ci-dessous:

  

 <EMI ID=62.1> 


  
EXEMPLE 6

  
On obtient le sel de sodium du Composé 38295 par addition de NaOH 1,ON jusqu'à un pH de 8,5 à une solution d'acétate d'éthyle de l'acide libre de l'Exemple 5. Le matériau cristallisé dans un mélange d'acétone et d'eau a un point de fusion de

  
 <EMI ID=63.1> 

  
tration de 1,03:dans le méthanol. Après séchage sous vide pendant une nuit ) 70[deg.]C sur anhydride phosphorique, le sel de sodium titre 60,28 % de carbone et 8,76 % d'hydrogène.

  
Le spectre infrarouge du sel de sodium du Composé 38295

  
 <EMI ID=64.1> 

  
absorption caractéristique dans la région infrarouge aux longueurs d'onde suivantes en microns : 2,94 ; 3,40 ; 6,25 ; 6,85 ; 7,20 ;

  
 <EMI ID=65.1> 

  
11,13 et 11,47.

  
EXEMPLE 7

  
On prépare le sel de potassium du Composé 38295 par le procédé de l'Exemple 6 en utilisant l'hydroxyde de potassium au lieu de l'hydroxyde de sodium. Le matériau cristallisé dans de l'acétone aqueuse a un point de fusion de 196-198[deg.]C et un pouvoir

  
 <EMI ID=66.1> 

  
 <EMI ID=67.1> 

  
anhydride phosphorique, le composé titre 60,53 % de carbone et 8,70 &#65533; % d'hydrogène.

&#65533;LL 

  
 <EMI ID=68.1> 

  
est donné sur la figure 4. Un granulé de KBr présente une absorption caractéristique dans la région infrarouge aux longueurs d'onde suivantes en microns : 2,94 ; 3,42 ; 6,27 ; 6,84 ; 7,20 ; 8,75 ; 9,00 ; 9,14 ; 9,30 ; 9,45 ; 10,45 ; 10,92 ; 11,15 et 11,47. EXEMPLE 8

  
On prépare le sel d'argent du Composé 38295 par addition

  
du nitrate d'argent aqueux à une solution éthanolique du sel mélangé sodium/potassium de l'Exemple 1. On cristallise dans le méthanol le solide qui se sépare. Il a un point de fusion de

  
 <EMI ID=69.1> 

  
tration de 0,982 %.dans le méthanol. La composition moyenne d'un échantillon séché pendant une nuit sous vide à 7C[deg.]C sur anhydride phosphorique et 55,95 % de carbone et 7,89 % d'hydrogène. Le poids moléculaire du sel d'argent cristallisé du Composé 38295, déterminé d'après les données par rayons X, est 1060 - 4 unités de masse atomique. 

  
 <EMI ID=70.1> 

  
1. Composé 38295, antibiotique de formule :

  

 <EMI ID=71.1> 


  
et ses sels cationiques.

Claims (1)

1. 2. Composé selon la revendication 1, où le sel cationique est le sel de sodium, le sel de potassium ou les sels mélangés de sodium et de potassium.

   3. Procédé de production du Composé antibiotique 38295 selon la revendication 1, qui consiste à cultiver le microorganisme Streptomyces hygroscopicus ATCC 31050 à une température <EMI ID=72.1>

   source assimilable de carbone, d'azote et des sels minéraux, dans des conditions aérobies en immersion, jusqu'à ce qu'on obtienne un taux d'au moins 50 mg par litre dudit antibiotique.

   4. Procédé selon la revendication 3, où ledit Compose antibiotique 38295 est séparé du bouillon de fermentation par extraction dudit bouillon, sans ajustement de pH, à l'aide d'un solvant organique non miscible à l'eau, et par séparation audit antibiotique par chromatographie sur colonne de gel de silice

   de l'extrait au solvant concentré.

   5. Procédé selon la revendication 3, où le bouillon de fermentation entier contenant l'antibiotique est amené à siccité sans ajustement de pH.

   6. Méthode permettant de lutter contre la coccidiose chez la volaille, qui consiste à administrer à ladite volaille le

   <EMI ID=73.1> <EMI ID=74.1>

   le sel de sodium, le sel de potassium ou les sels mélangés de sodium et de potassium du Composé 38295.

   8. Méthode selon la revendication 6, où ledit composé est contenu dans le bouillon de fermentation séché selon la revendication 3.

   9. Méthode permettant d'améliorer le rendement alimentaire chez les ruminants et les animaux à un seul estomac, qui consiste à administrer auxdits animaux le composé selon la revendication 1, à un taux de 11 à 33 ppm.

   10. Méthode selon la revendication 9, où ledit composé est le sel de sodium, le sel de potassium, ou les sels mélangés de sodium et de potassium du Composé 38295.

   11. Méthode selon la revendication 9, où ledit composé est contenu dans le bouillon de fermentation séché selon la revendication 3.

   12. Méthode selon la revendication 9, où lesdits animaux ruminants sont du bétail ou des moutons.

   13. Méthode selon la revendication 9, où lesdits animaux

   <EMI ID=75.1>

   14. Composition destinée à être administrée à des animaux, comprenant comme ingrédient actif au moins un composé 38295 tel que défini ici et un support acceptable, comprenant un aliment, une boisson ou un prémélange pour animaux.

   15. Méthode permettant d'augmenter la croissance des animaux, qui consiste à administrer auxdits animaux un aliment ou une boisson contenant comme ingrédient actif au moins un Composé 38295.